BG61477B1 - Peptides of organoprotective activity, method for their preparation and their therapeutical use - Google Patents
Peptides of organoprotective activity, method for their preparation and their therapeutical use Download PDFInfo
- Publication number
- BG61477B1 BG61477B1 BG98426A BG9842694A BG61477B1 BG 61477 B1 BG61477 B1 BG 61477B1 BG 98426 A BG98426 A BG 98426A BG 9842694 A BG9842694 A BG 9842694A BG 61477 B1 BG61477 B1 BG 61477B1
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- pro
- peptide
- gly
- seq
- leu
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Virology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Изобретението се отнася до нови пептиди с висока биологична активност от типа на известни природни съединения ВРС, но с покъси аминокиселинни последователности.
Ниво на изобретението
В ЕРО 432 400 и в публикацията на P.Sikiric etal, Exp.Clin.Gastroenterol., 1, 15-26 р, 1991, е описан биологично активен протеин, изолиран от хора и животни и означен като ВРС /Body Protecting Compaund/. Той е с високо молекулно тегло - от около 40 000 i 5 000 Далтона и с частично определена структура. Това съединение има много широк спектър на биологична активност - защита против язви и хепатити, антивирусна защита, антидерматоидна, общо антивъзпалителна активност, антималигнена активност и други. То може да се използва за лечение на посочените заболявания, при заболявания и нарушения на нервната система, нарушения с допаминергична етиология, в хирургията, стоматологията, при лечение на стерилност и във ветеринарната медицина. Този широк спектър на биологична активност може би е следствие от неопределена структура или от недостатъчната чистота или хомогенност на изолираното съединение ВРС.
Общо за изобретението
Открити са синтетични пептиди само с 8 до 15 аминокиселинни остатъка във верига с молекулно тегло от 900 до 1600 Далтона, които имат биологична активност на природното съединение ВРС, но с повишена селективност. Новите пептиди се получават по-икономично и по-рядко са обект на въздействието на странични реакции, поради това че съдържат по-малко аминокиселинни остатъка от ВРС.
Описание на изобретението
Съгласно един аспект от настоящото изобретение са създадени клас от синтетични пептиди, които проявяват изненадващо висока биологична активност, по-специално при защитата на тялото. При всички случаи тези синтетични съединения с добре определена структура имат огромно предимство в 5 сравнение с частично определеното високо молекулно съединение ВРС, което може да бъде получено само чрез много сложна процедура от съмнителни природни източници.
По-специално изобретението се отнася до нов клас биологични високоактивни пептиди, включващи от 8 до 15 аминокиселинни остатъка, които са представени от следващата основна структурна формула, като се използват трибуквеният аминокиселинен код и номерата 15 под всеки аминокиселинен остатък, отнесен към позицията на остатъка в пептидната верига: Хаа Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp
5 10
Zaa Ala Xaa Xaa Xaa,
15 където един или повече аминокиселинни остатъка са заместени.
Заместителите Xaa, Yaa u Zaa, които могат да се използват, са показани в таблица 1. 25
Таблица 1
Остатък Заместител
| 30 | Xaa | неутрална алифатна аминокиселина: |
| Yaa | Ala, вА1а, Leu, lie, Gly, Vai, Nle, Nva основна аминокиселина: | |
| Zaa | Lys, Arg, Orn, His кисела аминокиселина | |
| 35 | Glu, Asp, Aad, Apm |
Предпочитаните пептиди са както следва:
Sed. Id. No: 1
Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp
5 10
Asp Ala Leu Gly Vai
Seq. No : 2
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp
5 10 .Ala Gly Leu Vai
Seq. Id. No : 3
Leu Gly Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp
5 10
Ala Leu Gly Vai
В съответствие с друг аспект на изобретението са създадени аналогични пептиди в амидо- или карбокситерминирана форма при С-края, имащи посочената структурна формула където поне един или най-много 7 аминокиселинни остатъка са пропуснати в областта 1-15 и поне един от останалите аминокиселинни остатъка могат да бъдат заместени съобразно описаната схема на заместване в таблица 1.
Предпочитаните пептиди са както следва:
Seq. Id. NO : 4
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala 1 5 10
Leu Gly Vai
Seq. Id. No : 5
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala
5 10
Gly Leu Vai
Seq. Id. No : 6
Gly Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala
58
Seq. Id. No : 7
Asp Pro Pro Pro lie Arg Pro Ala Asp 1 59
Seq. Id. No : 8
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp
59
Съгласно друго изпълнение пептидите имащи описаната структурна формула, където поне един аминокиселинен остатък може да бъде пропуснат и поне един от останалите аминокиселинни остатъци може да е заместен както е означено на таблица 1, са трансформирани в циклични чрез образуване на нова връзка CO-NH между първия и последния аминокиселинен остатък в молекулата. Получените пептиди са както следва:
Seq. Id. No : 9
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Vai 2 5 10 15
Seq. Id. No : 10
Gly Gly Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp
5 9
Установено е, че когато се използват описаните пептиди, те проявяват биологична активност, която е еднаква или по-висока or тази на изходните ВРС протеини.
Проведени са фармакологични изследвания на описаните пептиди по общоизвестните in vitro u in vivo методи, при което са установени следващите фармакологични свойства.
1. Стомашна язва, индуцирана от принудителен стрес
Плъхове от породата Албино Вистар / мъжки/ /180-200 g/ се обездвижват лежащи по гръб за 48 h на стайна температура. Незабавно след това се убиват и уврежданията се измерват. Пептидите Seq. Id.No : 4, 6 u 2 се прилагат в доза 10 μ% или 10 ng/kg b.w., i.p., или i.g. 1 h преди процедурата на увреждане.
Както i.g., така и i.p. приложенията, дори в такива ниски дози като 10 ng/kg, са силно протективни.
2. Цистеаминен модел на язва
Женски плъхове от породата Албино Вистар /180-200 g/ се третират с разтворен във вода /дестилирана/ цистеаминов хидрохлорид в доза 400 mg/kg b.w., s.c. 24 h по-късно се прилагат пептиди в доза 1,0 /zg, 100 ng u 50 ng/kg b.w., i.p. u i.g.. Получена е e силно зависеща от дозата защита. Същата активност е установена и за i.p. и за интрагастралният път на приложение.
3. Индуцирани с терпентин букални едеми /едем на бузата/
Животни: Мъжки плъхове от порода Вистар /180-240 g/, N=10 във всяка група. Терпентинът се прилага интрамускулно 0,02 ml на плъх. Контрола: 0,9 % солен разтвор интрамускулно /0,02 ml на всеки плъх, 2 х /. Пептиди със Seq.Id.No 2 u 4 се прилагат в дози lQug и 10 ng/kg, i.p. u i.d., 1 h преди терпентина. Букалните едеми се измерват 24 h след индуцирането им. Статистически анализ: тестване по Mann-Whitney. Изследваните пептиди са ефективни в дози 10 /zg/kg.
4. Хирургия : ефект при инцизиви
Мъжки плъхове порода Албино /10 за всеки експеримент, с 200-250 g телесно тегло/ се подлагат на следното изследване. Плъховете с кожни рани се поставят в отделни клетки. Под лека етерна анестезия на всяко животно се прави З-cm срязване на кожата на гърба и успоредно, независимо от коя страна, се прави друго с големина 1,5 cm. След това едната рана се захваща с два хирургически клипса, а другата се оставя необработена. Непосредствено след нараняването, между двете рани интрадермално се прилага пептид Seq.Id.No 4, разтворен във физиологичен разтвор, в дози 5 1,0 pg и 1,0 ng/kg телесно тегло или само физиологичен разтвор като контрола.
Проява на оздравителен ефект се наблюдава и при двете рани - както при тази, в която са използвани хирургически клипсове, така и 10 при другата без хирургична намеса. След пет дни третираните групи показват по-малък брой възпалени клетки и значително по-добре развиват ретикулинови фибри, отколкото тези в контролата. 15
5. Въздействие върху експериментални изгаряния
За нуждите на експеримента се използват мъжки бели плъхове, порода Вистар /N = 10, 200-250 g живо тегло/. Под леката етерна 20 анестезия назалната мукоза се обгаря с пламтящ каутер в продължение на 5 s. Пептидът Seq.Id.No:4 се използва в доза 10 pg/kg телесно тегло, i.p. 1 h преди предизвиканото нараняване. Контрола : 5,0 ml/kg телесно тегло 25 физиологичен разтвор, i.p. Приложената процедура предизвиква обикновено подпухване на муцуната, което винаги е фатално за контролите /но не за лекуваните с пептида животни/ в рамките на девет дни след 30 нараняването. Обратно на контролите се наблюдават само леки посттравматични подувания на муцуната. Впоследствие нормалната назална респирация е само леко увредена и оздравяването е непрекъснато. 35
6. Въздействие за заздравяване на счупвания
Мъжки бели плъхове, порода Вистар / 270-300 g телесно тегло/ се подлагат на мануално счупване на лявата тибия в средната 40 част на костта под етерна анестезия. Не се използва обездвижване и животните се оставят да се движат свободно в клетките, след което ги убиват на 5-ия, 8-ия, 12-ия и 30-ия ден след индуцираното нараняване. 45
Пептид Seq.Id.No 4 се дава в доза 10,0 pg/ kg живо тегло, i.p., 1 h преди нараняването и впоследствие веднъж дневно /последната апликация е 24 h преди умъртвяването/. Контролните групи получават успоредно еднакъв обем физиологичен разтвор /0,9%, 5,0 ml/kg живо тегло, i.p./. Значително повишен оздравителен ефект се наблюдава у всички третирани животни при всеки от изследваните интервали. Забележителен е фактът, че всички третирани животни показват постоянен по-нисък локален посттравматичен хематом в сравнение с контролните животни и че възстановяват своите нарушени функции твърде скоро.
7. Антивирусна активност
Антивирусната активност се изследва върху новородени мишки, линия BALB-C, на възраст 24 h от двата пола.
ARBO - вирусите: ТВЕ / = Tick Borne Encephalitis/Bhanis Dengue 1,2,3,4, Sinbis, WestNile, Calovo, Hepatitis A, LCM /Limphatic choriomeningitis/ u Herpes тип I, се прилагат във вид на вирусна суспензия в разреждане 10 2(0,02 ml на мишка/ както е общоприето и се инжектират i.c. или p.o./Hepatitis А/. С цел диференциране на вирулентността дозите се довеждат до такива стойности, че да е възможно сравняването им по отношение на L[00 в 0,02 ml i.c. /или р.о., Hepatitis А/ инокулум при разреждане 10'2. По този начин става възможно да се сравнява ходът на различните вирусни инфекции, без да се взима предвид възможното инокулиране с различни концентрации вирус.
Пептидът Seq.Id.No 4 се използва в концентрации 20,0 pg/m\ в 0,9 % физиологичен разтвор и се прилага само еднократно в доза 2,0 g/kg живо тегло, i.c. или i.p.:
а/ 2 h преди вирусната апликация /-2Ь/. в/ едновременно с инфекцията /0/.
Контрола: същият обем физиологичен разтвор i.c. или i.p.
Резултатите са обобщени в таблица 2, в която числата обозначават дните, докато всички инфектирани с вирус мишки в третираните с пептид или физиологичен разтвор групи се поддадат на инфекцията.
Таблица 2
ТРЕТИРАНЕ
Вирусни Физиологичен разтвор Синтетичен фрагмент №4
| инфекции | -2kx | ox i.p. | -2h’ | 0* i.c. | |||||
| i.p. | i.c. | i.c. | i.p. | i.c. | i.p. | ||||
| ТВЕ | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Bhania | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 1 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 2 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 3 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | nld. | n.d. | 20 | 20 |
| Dengue 4 | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Siribis | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| WestNile | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| Calovo | a | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 15 | 15 |
| Hepatitis | A+ | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 |
| LCM | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | . 20 - | >20 | |
| Herpes typel | 5 | 5 | 5 | 5 | n.d. | n.d. | 20 | 20 | |
| None (Healthy) | n | .d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. | n.d. |
n.d. - неопределени: животните са наблюдавани по продължение на 40 дни след вирусната апликация. Не са забелязани мъртви.
а - ARBO - вируси + - перорална вирусна апликация х-животните са третирани 2 h преди вирусната апликация /-2h/ или едновременно с въвеждането на вируса /0/.
Ovs физиологичен разтвор р<0,001; 8 мишки за всяка група
8. Антидепресираща активност
За установяване на антидепресиращата активност се използва теста за принудително плуване по Porsolt et al., Eur. J.Pharm., 47, 379-391, 1978.
За този експеримент се използват мъжки плъхове от порода Вистар /180-240 g телесно тегло/. Изследваният пептид Seq.Id.No 4 се дава първия ден след предтестовата готовност и втория ден - 1 h преди експеримента /i.p./.
Контролна група: физиологичен разтвор, i.p.
Животните се наблюдават 5 min. Времето на неподвижност се измерва /Т./.
Т в контролната група е около 150 s, а в третираната с пептид група е само 60-70 s. Този ефект има голяма продължителност: след 45 16 дни все още се наблюдава.
Дози на които се отговаря: 10 /rg до 10 ng/kg пълен ефект pg/kg: ефектът още се наблюдава, 1 pg/kg: ефектът е на изчезване.
9. Ефект на модел на болестта на Паркинсон
За изследване на добре познатите модели на Паркинсоновата болест се използват / Karakola s. et al., Pharmacol. Toxicol., 67, 95100, 1990/: резерпинов модел и МРТР модел.
NMRI - Хановер модел /за МРТР модел/ или мишки от двата пола /за резерпиновия модел/.
а/ МРТР се прилага в доза от mg/kg телесно тегло, i.p., веднъж дневно за шест последователни дни, и след това за следващите четири дни в по-висока доза от 50 mg/kg телесно тегло. Изследваният пептид Seq.Id.No 4 се прилага в доза 1,5 μ% и 15,0 ng/kg b.W.,
i.p., 15 min преди всяко въвеждане на МРТР или 15 min след всяко въвеждане на МРТР.
в/ Резерпинът се прилага в доза 5 mg/ kg телесно тегло, i.p. Тестуваният пептид се прилага в доза 10 μ% или 10 ng/kg телесно тегло, i.p., 15 min преди резерпина или 24 h след резерпиновото въвеждане в същата доза.
Контроли: еднакъв обем физиологичен разтвор 5 ml/kg телесно тегло, i.p.
След повторното третиране с пептида се наблюдава забележимо редуциране на хипокинезията, ригидността /каталепсията/ и тремора.
В МРТР моделът повторното третиране с този пептид спира развитието на каталепсията и намалява акинезията и тремора.
Третирането след 15 min категорично предотвратява по-нататъшното развитие на каталепсия и забележимо намалява акинезията и тремора. Обикновено висока смъртност / 50%/ се забелязва само след едно аплициране на МРТР, но след повторното му въвеждане силно намалява.
10. Ефект на пептидното въвеждане при хеморагичен шок
Във всички експерименти са използвани възрастни мъжки бели плъхове /150-180 g/.
Ефектът при хеморагичен шок е изследван в две серии експерименти.
а/ Животните се обезкръвяват (1 ml над 3 min, 2 min за останалото) до тяхната смърт. Отстраненият обем кръв, предизвикващо фаталния изход, се оценява чрез претретиране на животните с пептид Seq.Id.No:4 /10,Ομξ или 10 ng/kg телесно тегло, i.p./ или физиологичен разтвор. Значително по-високи загуби на кръв в сравнение с контролния обем кръв се отчита в групата, третирана с по-висока доза от пептида.
б/ Кръвното налягане се понижава чрез контролирано отстраняване на кръвен обем, след което се поддържа на 30-35 mm Hg стълб за период от 5 min.
След това се прилага i.p. пептид Seq.ld.No :4 (10,0 /zg или 10,0 ng/kg телесно тегло) или физиологичен разтвор (като контрола, 3,0 ml/kg телесно тегло). В противовес на контролите, у третираните животни се наблюдава значително повишаване на стойностите на кръвното налягане и задържането им на едно ниво, както и пълното отсъствие на смъртност.
Поради това се счита, че изследваните пептиди, в случая Seq.ld.No 4, са високоефективни при подобряване на последствията от загуби на кръв.
11. Влияние върху леталната радиация
За експеримента се използват мишки Хановер, NMRI, на възраст 5-6 седмици, от двата пола /18-22 g телесно тегло/. Прилага се синтетичен пептид Seq.ld.No: 4 в доза 20 /zg/kg живо тегло, i.p., 1 h преди или след облъчване. Контролните животни получават едновременно еднакви обеми физиологичен разтвор 0,9% i.p. /5,0 ml/kg/. Обикновени здрави животни, държани в обичайни условия, неподлагани на въздействие на лекарства или облъчване, служат като здрава контрола.
Облъчване: Титрон 80 /Со 60, 2200 Ci/ . Неанестезирани животни в клетки, по 16 в група, се подлагат на облъчване на цялото тяло със супралетални дози от 9 Gy в радиационна област от 20 х 20 cm, на разстояние 80 cm.
Облъчването се провежда двукратно на ден в период от 30 дни.
Всички контролни животни умират в рамките на 7-12 дни /LD100/12/.
Не са наблюдавани смъртни случаи при здравите-необлъчвани, контроли.
В съответствие с данните от контролата не се наблюдават различия в групите, третирани с пептид 1 h след облъчването. Значителна степен на оцеляване обаче се наблюдава, когато съединението се прилага 1 h преди радиацията. Може да се установи до 70 % повишение в LD]00 в сравнение с контролата.
12. Влияние върху индуцирана малформация
Възрастни женски мишки Хановер, NMRI/двумесечни/, които не са били оплождани преди това, с тегло 25 g, се използват във всички експерименти. Женските мишки във фазата на еструс се кръстосват със зрели здрави мишки от мъжки пол цяла нощ. На двадесетият ден от бременността мишките се умъртвяват.
Прилага се витамин А в доза 15700 U/ kg телесно тегло, i.m., на десетия ден от бременността /0,05 ml/kg телесно тегло/. Едновременно с това се дава пептид Seq.Ig.No;4 в доза 10 pg или 10 ng/kg телесно тегло, i.p.
Контрола: физиологичен разтвор 5,0 ml/ kg телесно тегло, i.p.
Животните, нетретирани с витамин А, получили по същото време i.p. физиологичен разтвор или пептид № 4 в същата доза, служат като здрава контрола.
Не са установени малформации у здравите /с физиологичен разтвор/ или третираните с пептид групи.
Резултатите са сумирани на таблица 3. Те показват изненадващо значително, зависещо от дозата, защитно въздействие върху изследваните животни посредством пептида и срещу индуцираните от витамин А малформации.
Таблица 3
Макроскопско изследване
| Третиране Общ брой | Брой на малформира- | |
| фетуси | ните фетуси | |
| Контролна | ||
| група | ||
| /физиол. | ||
| разтвор/ | 55 | 0 |
| Витамин А | 54 | 36 |
| Витамин А | ||
| и пептид | ||
| №4-10 ng/kg | 36 | 13 |
| Витамин А и | ||
| пептид | ||
| №4-10^<g/kg | 18 | 1 |
13. Остра токсичност
Остра токсичност за синтетични пептиди се определя върху женски мишки /с тегло са .20 g/. Формират се групи от по 6 животни за всеки експеримент и контрола.
Пептиди Seq.Id.No : 2,3,4 и 6 се прилагат в дози 8, 25 и 50 mg/kg телесно тегло, i.v. Контролните групи се третират с физиологичен разтвор /0,9 %, 5,0 ml/kg телесно тегло/. Животните се изследват за проява на токсичност през следващите 15 дни.
Не се наблюдават сигнали за отравяне или смърт при прилаганите дози. Наблюдава се интересен феномен на повишен мотилитет и жизненост в продължение на 2 h след прилагането на пептиди.
Следвайки резултатите от тези изследвания, пептидите проявяват активност в смисъл, че предпазват организма от стрес и заболявания, най-общо за нормализиране функциите на този организъм.
Тяхното приложение следва да е също ефективно за предотвратяване и терапия на множество различни заболявания и неразположения на човека и животните. По-специално, тези съединения биха могли да бъдат използвани за лечение на:
-стрес, индуциращ неразположения и заболявания
-гастроинтестинални язви с различна етиология
-възпаления и едеми с различен произход -травми, изгаряния, фрактури на костите и общо в хирургията
-вирусни инфекции
-шокове
- болестта на Паркинсон
-за защита от радиация
-за защита от малформации
Най-общо, описаните пептиди могат също да бъдат използвани в широк кръг фармацевтични състави с нетоксични фармацевтични носители или вехикулуми като пълнители, нетоксични буфери или физиологичен разтвор. Такива фармацевтични състави могат да се използват локално или в системи и могат да бъдат в каквато и да е подходяща форма като течна, твърда, полутвърда, инжекционна, мехлеми, лосиони, капсули и други подобни.
Тези пептиди трябва да се въвеждат в дози от 105 до IO'2 mg/kg телесно тегло, когато се прилагат със система. Когато се прилагат локално, трябва да са в по-високи концентрации например 0,1 до 0,5%.
Много удобно е това, че няма никакви прояви на токсичност до дози от 50 mg/kg телесно тегло и така също добрата активност на съединенията при перорално въвеждане / интрагастрално/.
Описаните тук пептиди могат да бъдат синтезирани с помощта на поетапна кондензация на защитени аминокиселини в хомогенни течни системи или за предпочитане, използвайки твърдо фазов метод. За получаване 5 на циклични пептиди, частично защитени линеарни пептиди с желана дължина се получават както с алкил естерна група при Скрая, който се превръща в азид, с последващо удвояване и разрушаване на защитеността. 10 Обратно, частично защитен линеарен пептид със свободни крайни групи може да бъде циклизиран посредством дифенилфосфорилазид в много разреден разтвор.
Изобретението ще бъде описано пое- 15 редством следващите примерни изпълнения, които обаче не ограничават неговия обхват.
Пример 1.
Пептиден синтез с помощта на Восметодика 20
Синтезата на пептида се провежда, като се започва със 100 mg Boc-Val-PAM каучук за получаване на С-крайна карбокси пептидна верига /РАМ закупена от Appl.Biosystem, заместване 0,56 meg/g е амино-ацил-4-/ 25 оксиметил/-фенилоцетно кисело производно на аминополистирена. Вос аминокиселини /Вос=терц.-бутоксикарбонил-/ се кондензират една след друга върху полимерен носител с помощта на диизопропилкарбодиимид /DIPC/ 30 като кондензационен реагент. На всеки етап Вос-групата се отстранява с 50% разтвор на трифлуорооцетна киселина /TFA/ в дихлорометан. Аминогрупата след това се депротонизира с диизопропилетиламин. 35
Конверсията във всеки етап следва да е по-висока от 99,5%. Ако не е, кондензацията се повтаря. След пълната синтеза, се провежда разграждане с помощта на HF процедура /2 h при 0°С/. В качеството на поглъщащ 40 карбониевите йони агент се използва анизол. HF се изпарява в поток от азот. Суровият пептид се получава чрез отливане на мастния остатък в сух етер.
След това суровият пептид се пречиства 45 чрез обратно фазова HPLC с помощта на колона 5 х 150 mm запълнена със силикагел RP-18, градиентна елуация с разтворима система: 0,1 % TFA във вода /ацетонитрил/. Откриване: ултравиолетова абсорбция при 225 nm. 50
Синтезата на пептида със Seq.Id.N0:4 се илюстрира с фигура 1.
Пример 2. Пептиден синтез с помощта на Fmoc-методика
За синтеза се използват стандартни Fmocзащитени аминокиселини /Fmoc = 9флуоренилметилокси-карбонил-/. Страничноверижните функции са защитени като 0-терц. бутилови естери /Asp, Apm, Glu, Aad/ и като производни на Вос /Lys/. Първата аминокиселина /Vai/ е свързана към полимерна смола в качеството й на носител-ВНА /ВНА = бензхидриламино смола/ с помощта на диизопропилкарбодиимид в качеството на куплиращ агент. На всеки етап Fmoc протективната група се отстранява с пиперидин. Поради това втората и т.н.следващи аминокиселини се въвеждат по същия начин до завършване на синтезата. Разцепването се осъществява с помощта на смес от TFA/TFMSA/ анизол=2:17:52 /обем/обем/.
След това пептидът се пречиства с помощта на HPLC метода, описан в пример 1.
Синтезата на пептида със Seq. Id.No:2 е илюстрирана на фиг.2.
Пример 3. Пептиден синтез с помощта на Ddz методика
Всички аминокиселини, които са използвани, са защитени при тяхната а -амино функция посредством Ddz / =а , а -диметил3,5-диметоксибензилоксикарбонил-/. Страничните функции са защитени чрез Z-rpyna / =бензилоксикарбонил-/ за лизин и O-t-Buгрупа /t-бутилестер/ за аспарагинова и глутаминова киселина.
Повърхност Мерифиелд свързан кръстосано хлорметилиран полистиренов гел /с капацитет от 1,4 mmol/g се използва за свързване на първата Ddz-аминокиселина чрез нейната цезиева сол. След кондензация с дициклохексилкарбодиимид /DDC/. Ddz протективната група се отстранява на всеки етап с 5% TFA в дихлорметан, последвано от промиване с 10% триетиламин в дихлорметан. След депротонизиране следващата стъпка на куплиране се медиира чрез същия метод. Тези етапи на куплиране се повтарят до получаване на крайната аминокиселина/пептидна последователност.
Накрая пептидът се разцепва /отделя/ от полимерния носител с помощта на смес НВг /TFA/ анизол. След изпаряване на летливата част току що полученият пептид се преципитира със сух етер и се изсушава. След това суровият пептид се пречиства по HPLC метода, както е описано в пример 1. Синтезата на пептида със Seq.ld.No:6 е илюстрирано на фиг.З.
Пример 4. Синтез на циклопептид Пептид с частично защитена форма: OBzl NO, OBzl
I I I
Gly-Glu-Pro-Pro-Pro-Gly-Arg-Pro-Ala-Asp-OH е предварително получен c помощта на метода, описан в примери 1 или 2.
0,0005 моларен разтвор от този пептид в диметилформамид се циклизира след добавяне на дифенилфосфорилазид и триетиламин при 20°С за 12 h.
След това сместа се хидрогенира с хидроген/паладиево въглероден катализатор при 25°С за 8 h.
Разтворителят внимателно се изпарява и суровият продукт се пречиства с помощта на HPLC метода, описан в пример 1.
Циклопептидът, който има Seq.Id.No:10, е с формула
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp
3 I 10 и се получава като 10 %-ен добив.
Пример 5. Синтез на линеарни и циклопептиди с помощта на Ddz методика
Същата методика с Ddz защитни групи се използва за получаване на линеарни и циклични пептиди. Страничните функции са защитени от Z-група /лизин/ и с 0-бензил естерни групи-OBzl-/глутаминова и аспарагинова киселина/.
Полимерен носител е НУСЯАМ*смола/ запазена марка на ORPEGEN, Хайделберг4 , Германия/, която е 4-бромокротонил-^-аланиламидометил-полистирен. Първата аминокиселина /Ddz-валин/ е свързана върху полимерен носител посредством неговата цезиева сол.
След това Ddz групата се отстранява с помощта на трифлуорооцетна киселина /5 % / в дихлорометан и аминогрупа, депротонизирана с диизопропилетиламин.
В следващия етап Ddz-глицин се присъединява към валинов остатък в полимерната матрица с помощта на диизопропилкарбодиимид /D1PC/ в присъствието на 1-хидроксибензотриазол.
Тези етапи се повтарят до пълното завършване на пептидната верига. Синтезираният пептид в защитена форма след това внимателно се отделя от HYCRAM* носителя с тетракис-/трифенилфосфино/паладий /0/, разтворен в безводен тетрахидрофуран в отсъствие на кислород. В качеството на адитив се използва морфолин като акцептор на молекули за алилови групи.
Полимерният носител се филтрира и промива с тетрахидрофуран. След това разтворът на пептида се филтрира през къса колона на силикагел за отстраняване на паладиевия катализатор.
Елуата, който съдържа частично защитения пептид 4а, се изсушава след изпаряването на разтворителя под вакуум.
Синтез на линеарен пептид със Seq. Id.No:4
Частично протектираният пептид 4а се разтваря в 2,2,2-трифлуороетанол и се хидрогенира в присъствие на паладий върху въглерод /10%/ с водороден газ при 30°С. Катализаторът се филтрира и разтворителят се изпарява под вакуум. Суровият остатък след това се пречиства с помощта на HPLC метода, както е описано в пример 1. След пречистване се получава пептидът със Seq.Id.No 4. Продуктът се идентифицира като идентичен със съединението, получено в пример 1.
Синтез на цикличен пептид със Seq.Id.No:9
Частично защитеният продукт /пептид 4а/ се разтваря в диметилформамид /дихлорметан/1:1/ за получаване на 0,001 моларен разтвор. За циклизиране се добавят DIPC и HOt и се оставят на 20°С за 10 h. След това разтворът се концентрира до малък обем, разрежда се с 2,2,2-трифлуороетанол и се пречиства чрез прекарване през колона, запълнена със Сефадекс LH-20. Фракции, съдържащи частично защитеният цикличен пептид 9а, се събират и хидрогенират с паладиум върху въглероден /10%/ катализатор на 30°С чрез продухване с водород и интензивно разклащане за 8 h.
След това катализаторът се отстранява чрез филтриране и разтвора се изсушава чрез изпаряване на разтворителя под вакуум. Суровият пептид допълнително се пречиства чрез HPLC с помощта на описаните методи в пример 1. Полученият чист цикличен пептид се идентифицира като пептид със Seq.Id.No:9. Синтезата върху НУСКАМ*полимерен носител с помощта на Ddz методика и циклизирането се илюстрират с фиг.4 и 5. Всички синтезирани пептиди се проверяват за тяхната 5 чистота чрез HPLC метода с помощта на колона със силикагел RP-18 /октадецил-силанизиран/ , елуиран със смес от разтворители, състоящи се от вода /ацетонитрил/трифлуорооцетна киселина, в обичайно съотношение. Във всички 10 случаи чистотата е по-висока от 95%.
Пептидите са охарактеризирани чрез аминокиселинен анализ /стойностите са в рамките на или ”10% теоретично/, на секвенционен анализ, молекулно тегло, определено 15 чрез масова -FAB спектрофотометрия, ултравиолетов и инфрачервен спектър /фиг.6 и 7/.
Въпреки описаните същински варианти на изобретението в специфичните им детайли, за специалиста в областта е очевидно, че могат 20 да се проведат и много други специфични варианти и да се направят много изменения, които да са в духа на изобретението и в обхвата на приложените патентни претенции.
Claims (13)
1. Нов клас биологично високоактивни пептиди, характеризиращи се с това, че обхващат от 8 до 15 аминокиселинни остатъка 30 и са с обща формула:
Xaa Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa 1 5 10
Ala Xaa Xaa Xaa
15 35 в която:
Xaa означава неутрални алифатни аминокиселинни остатъци като Ala, вА1а, Leu, lie, Gly, Vai, Nle, NVa; Yaa означава основен аминокиселинен остатък като Lys, Arg, Om, His; 40 Zaa означава кисел аминокиселинен остатък като Glu, Asp, Aad или Apm; където поне един от остатъците Хаа или Zaa може да бъде пропуснат.
2. Пептид съгласно претенция 1, където 45 молекулата е циклизирана чрез амидна връзка между първия и последния аминокиселинен остатък.
3. Пептид със Seq.Id.No:l с формулата
Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp 50 1 510
Ala Leu Gly Vai
4. Пептид със Seq.Id.No:2 c формулата
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp 1 510
Ala Gly Leu Vai
5. Пептид със Seq.Id.No:3 c формулата
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp 1 510
Ala Leu Gly Vai
6. Пептид със Seq.Id.No:4 c формулата
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala 1 510
Leu Gly Vai
7. Пептид със Seq.Id.No:5 c формулата
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala 1 510
Gly Leu Vai
8. Пептид със Seq.Id.No:6 c формулата
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala
1 58
9. Пептид със Seq.Id.No:9 c формулата
Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Vai
2 S 1013 I
10. Пептид със Seq.ld.No:10 c формулата
Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp 12 59
11. Пептид със Seq.Id.No:l 1 c формулата
Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp
1 59
12. Терапевтичен състав, съдържащ едно или повече ст съединенията съгласно която и да е от претенциите от 1 до 11 в примес с фармацевтично подходящ твърд или течен вехикулум.
13. Приложение на новите пептиди съгласно претенции от 1 до 11 за лекуване на индуцирани от стрес заболявания или неразположения, възпаления, едеми, травми, обгаряния, вирусни инфекции, заболявания на имунната система, нарушения на централната нервна система, гастроинтестинални язви с различна етиология, фрактури на костите, шок и общо хирургично, церебрални нарушения и депресии, болест на Паркинсон за предпазване от радиационни увреждания и малформации, индуцирани с химични агенти и най-общо като предпазващи тялото съединения.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP92109145A EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1992-05-30 | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
| PCT/EP1993/001352 WO1993024521A1 (en) | 1992-05-30 | 1993-05-28 | Bpc peptides, their preparation and use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG98426A BG98426A (bg) | 1995-02-28 |
| BG61477B1 true BG61477B1 (en) | 1997-09-30 |
Family
ID=8209663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG98426A BG61477B1 (en) | 1992-05-30 | 1994-01-28 | Peptides of organoprotective activity, method for their preparation and their therapeutical use |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6211151B1 (bg) |
| EP (2) | EP0572688B1 (bg) |
| JP (1) | JP2783681B2 (bg) |
| KR (1) | KR0180256B1 (bg) |
| AT (2) | ATE152734T1 (bg) |
| AU (1) | AU4319693A (bg) |
| BG (1) | BG61477B1 (bg) |
| CA (1) | CA2114313C (bg) |
| CZ (1) | CZ284972B6 (bg) |
| DE (2) | DE69219590T2 (bg) |
| DK (2) | DK0572688T3 (bg) |
| ES (2) | ES2103854T3 (bg) |
| FI (1) | FI120454B (bg) |
| GR (2) | GR3024379T3 (bg) |
| HK (1) | HK1001004A1 (bg) |
| HU (1) | HU224073B1 (bg) |
| NO (1) | NO310027B1 (bg) |
| PL (1) | PL176208B1 (bg) |
| RO (1) | RO112506B1 (bg) |
| RU (1) | RU2111214C1 (bg) |
| SK (1) | SK278507B6 (bg) |
| UA (1) | UA32523C2 (bg) |
| WO (1) | WO1993024521A1 (bg) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1997-05-07 | Predrag Dr.Sc. Sikiric | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
| CZ285155B6 (cs) * | 1992-11-16 | 1999-05-12 | Predrag Dr. Csc. Sikiric | Peptidy s organoprotektivním účinkem, způsob jejich výroby a farmaceutické prostředky s jejich obsahem |
| ATE277948T1 (de) | 1997-05-23 | 2004-10-15 | Predrag Sikiric | Bpc peptid salze mit organ-schützender aktivität, deren herstellung und therapeutische verwendung |
| US6844315B2 (en) | 1998-05-20 | 2005-01-18 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Immunoregulator |
| US20030220258A1 (en) | 2001-12-21 | 2003-11-27 | Robbert Benner | Treatment of ischemic events |
| US8680059B2 (en) | 1998-05-20 | 2014-03-25 | Biotempt B.V. | Oligopeptide acetate and formulations thereof |
| EP1138692A1 (en) | 2000-03-29 | 2001-10-04 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Fragments of human chorionic gonadotropin (hcg) as immunoregulator |
| US7358330B2 (en) | 2001-03-29 | 2008-04-15 | Biotempt B.V. | Immunoregulatory compositions |
| EP1300418A1 (en) * | 2001-10-04 | 2003-04-09 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Gene regulation by oligopeptides |
| USRE43279E1 (en) | 2000-03-29 | 2012-03-27 | Biotemp B.V. | Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration |
| US7786084B2 (en) * | 2001-12-21 | 2010-08-31 | Biotempt B.V. | Treatment of burns |
| US7517529B2 (en) * | 2003-04-08 | 2009-04-14 | Biotempt B.V. | Treatment of type I diabetes |
| US20090227505A1 (en) * | 2004-01-07 | 2009-09-10 | Biotempt B.V. | Methods and uses for protein breakdown products |
| SG163567A1 (en) | 2005-07-05 | 2010-08-30 | Biotempt Bv | Treatment of tumors |
| EP1864692A1 (en) | 2006-06-07 | 2007-12-12 | Biotempt B.V. | Use of peptides for the control of radiation injury |
| CN101443080B (zh) * | 2006-03-07 | 2015-01-14 | 比奥滕普特公司 | 肽在控制辐射损伤中的用途 |
| PL2120991T3 (pl) * | 2007-02-12 | 2014-07-31 | Biotempt Bv | Leczenie urazów krwotocznych krótkimi oligopeptydami |
| SI24318A (sl) | 2013-03-13 | 2014-09-30 | Diagen D.O.O. | Nove stabilne soli pentadekapeptida, postopek za njihovo pripravo, njihova uporaba za izdelavo farmacevtskih pripravkov in njihova uporaba v terapiji |
| CN113683663A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-11-23 | 杭州信海医药科技有限公司 | 一种机体保护多肽粗品的纯化方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8717300D0 (en) * | 1987-07-22 | 1987-08-26 | Nat Res Dev | Cyclosporins |
| CA1337781C (en) * | 1987-08-21 | 1995-12-19 | Takanori Nakamura | Polypeptide from horseshoe crab exhibiting affinity for lipopolysaccharide and method of preparation |
| YU176089A (sh) * | 1989-09-12 | 1992-09-07 | Sikirić, Predrag | Postupak za pripremu supstancije bpc i supstancija bpc |
| EP0572688B1 (en) | 1992-05-30 | 1997-05-07 | Predrag Dr.Sc. Sikiric | Peptides with organo-protective activity, the process for preparing them and their use in therapy |
-
1992
- 1992-05-30 EP EP92109145A patent/EP0572688B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 DK DK92109145.0T patent/DK0572688T3/da active
- 1992-05-30 DE DE69219590T patent/DE69219590T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-05-30 AT AT92109145T patent/ATE152734T1/de active
- 1992-05-30 ES ES92109145T patent/ES2103854T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-05-28 HU HU9400252A patent/HU224073B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 RO RO94-00101A patent/RO112506B1/ro unknown
- 1993-05-28 UA UA93003868A patent/UA32523C2/uk unknown
- 1993-05-28 ES ES93912825T patent/ES2107033T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 WO PCT/EP1993/001352 patent/WO1993024521A1/en active IP Right Grant
- 1993-05-28 AU AU43196/93A patent/AU4319693A/en not_active Abandoned
- 1993-05-28 JP JP6500207A patent/JP2783681B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 AT AT93912825T patent/ATE155485T1/de active
- 1993-05-28 US US08/185,883 patent/US6211151B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-05-28 EP EP93912825A patent/EP0601154B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 DE DE69312232T patent/DE69312232T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 PL PL93302304A patent/PL176208B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 CA CA002114313A patent/CA2114313C/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-05-28 CZ CZ94205A patent/CZ284972B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 SK SK96-94A patent/SK278507B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 RU RU94041224A patent/RU2111214C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-05-28 DK DK93912825.2T patent/DK0601154T3/da active
-
1994
- 1994-01-26 FI FI940375A patent/FI120454B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-01-27 KR KR1019940700258A patent/KR0180256B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-01-28 NO NO940299A patent/NO310027B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-01-28 BG BG98426A patent/BG61477B1/bg unknown
-
1997
- 1997-08-07 GR GR970402020T patent/GR3024379T3/el unknown
- 1997-10-01 GR GR970402552T patent/GR3024905T3/el unknown
- 1997-12-29 HK HK97102674A patent/HK1001004A1/xx not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-12-02 US US09/203,921 patent/US6268346B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| BG61477B1 (en) | Peptides of organoprotective activity, method for their preparation and their therapeutical use | |
| CA2153584C (en) | Cytokine restraining agents | |
| JPH10509428A (ja) | 活性依存性神経栄養因子の神経栄養ペプチド | |
| DE69012901T2 (de) | Hämoregulierende Peptide. | |
| JPH02502826A (ja) | 免疫欠損状態の治療のための医薬製剤 | |
| US20040014673A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide | |
| US5776900A (en) | Hemoregulatory peptides | |
| AU694701B2 (en) | Peptides with organo-protective activity, their preparation and use | |
| RU2116311C1 (ru) | Пептиды, обладающие органозащитной активностью, фармакологически активная композиция | |
| AU678917B2 (en) | Peptides with organo-protective activity, their preparation and use | |
| IE903420A1 (en) | Novel CNS-active hexapeptides with an antiamnesic effect |