RU2575069C2 - Биологически активный пептид и иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция - Google Patents
Биологически активный пептид и иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция Download PDFInfo
- Publication number
- RU2575069C2 RU2575069C2 RU2013141485/10A RU2013141485A RU2575069C2 RU 2575069 C2 RU2575069 C2 RU 2575069C2 RU 2013141485/10 A RU2013141485/10 A RU 2013141485/10A RU 2013141485 A RU2013141485 A RU 2013141485A RU 2575069 C2 RU2575069 C2 RU 2575069C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- peptides
- val
- gln
- ser
- Prior art date
Links
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 230000000840 anti-viral Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 230000002519 immonomodulatory Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 7
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 abstract description 4
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 abstract description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 abstract description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 abstract description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract description 2
- 108010019182 Alloferon Proteins 0.000 abstract 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 abstract 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 abstract 1
- XCAPMVINJNSTAF-WXPUDEETSA-N 2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-amino-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]acetyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]ac Chemical compound C([C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CN=CN1 XCAPMVINJNSTAF-WXPUDEETSA-N 0.000 description 16
- 101700076678 AFN Proteins 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 description 9
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 4
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 3
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 3
- 229960000329 Ribavirin Drugs 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 3
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4S)-5-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2R)-1-[[2-[[2-[[(1S)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010026422 allostatin-1 Proteins 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor Effects 0.000 description 2
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 2
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 2
- 235000021271 drinking Nutrition 0.000 description 2
- 230000004634 feeding behavior Effects 0.000 description 2
- 125000003372 histidine group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 2
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 101710004799 sm-amp-x Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010059193 Acute hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 241000269328 Amphibia Species 0.000 description 1
- IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N Fluorenylmethyloxycarbonyl chloride Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)Cl)C3=CC=CC=C3C2=C1 IRXSLJNXXZKURP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 210000003491 Skin Anatomy 0.000 description 1
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 description 1
- UQYZFNUUOSSNKT-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium;hexafluorophosphate Chemical compound F[P-](F)(F)(F)(F)F.C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 UQYZFNUUOSSNKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 1
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 200000000003 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000000286 interferogenic Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 230000001665 lethal Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 1
- 108010091886 peptide V Proteins 0.000 description 1
- 101710043201 phtx2 Proteins 0.000 description 1
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 1
- 239000005723 virus inoculator Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к синтетическим пептидам с иммуностимулирующими свойствами, и может быть использовано в медицине. Синтезирован ряд пептидов, отличающихся по химической структуре от известных биологически активных пептидов Аллоферонов и Аллостатинов. Отличие состоит в том, что в положении 6 структуры His-Gly-Val-Ser-Gly-Х-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly вместо гистидина или триптофана, характерных для этих пептидов, находятся другие аминокислоты алифатического и ароматического рядов, а также их химические модификации. Полученные пептиды используются в составе иммуномодулирующей и противовирусной фармацевтической композиции. Изобретение позволяет получить пептиды, эффективно индуцирующие выработку интерлейкина-18 и интерферона гамма. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.
Description
Изобретение относится к белкам и биологически активным пептидам с иммуномодулирующей и противовирусной активностью.
Известна биологическая активность низкомолекулярных пептидов. Описан ряд пептидов, которые обладают прямым противовирусным или противоопухолевым действием [Акияма Н., Хиджиката М., Кобаяси А., Ямори Т., Цуруо Т., Натори С. Противораковое воздействие N-β-аланил-5-S-глютатионил диоксифенилаланина (5-S-GAD), новое антибактериальное вещество, получаемое из насекомых. Противораковое исследование, 2000, Т. 20, стр. 357-362].
Особое место в этом ряду занимают пептиды земноводных и насекомых [Булет П., Хетру К., Диамарк Дж., Хоффман Д. Противомикробные пептиды в насекомых: структура и функция. Разв. Срав. Иммунол., 1999. Т. 23, стр. 329-344, Чинчар В.Г., Ванг Дж., Мурти Г., Кейри К., Роллинг-Смит Л. Инактивация вируса 3 лягушек и вируса проточного сома ескулентином-2Р и ранатуерином-2Р, двумя противомикробными пептидами, выделенными из кожи лягушек. Вирология, 2001. Т. 288, стр. 351-357].
Известна группа противовирусных пептидов, выделенных из насекомых с общим названием Аллофероны, описываемая общей формулой: X1-His-Gly-X2-His-Gly-Val-X3 или их фармацевтически приемлемые соли, где X1 отсутствует либо содержит не менее 1 аминокислоты, Х2 содержит не менее 1 аминокислоты либо представляет собой пептидную связь; Х3 отсутствует либо содержит не менее 1 аминокислоты, причем указанные аминокислоты выбраны из групп: алифатической, ароматической или гетероциклической. (Патент РФ №2172322, МПК С07К 7/06, С07К 7/08, А61К 38/08, А61К 38/10, А61Р 37/02, опубл. 20.08.2001 г.).
На основе пептида Аллоферона-1 разработано и производится лекарственное средство «Аллокин-альфа» - лиофилизат для подкожных инъекций, применяемое при лечении герпеса, острого гепатита В и папилломовирусных инфекций.
Близкой к Аллоферонам по строению и свойствам является группа пептидов под общим названием Аллостатины с общей формулой: X1-Trp-Gly-Gln-X2 (Патент РФ №2267496, МПК С07К 7/06, А61К 38/08, А61К 38/10, опубл. 10.01.2006).
Аллостатин-1, отличающийся от Аллоферона-1 наличием двух остатков триптофана (Trp), замещающих гистидин (His) и валин (Val), обладает не только высокой противовирусной активностью, но и противоопухолевым действием.
Данный пример показывает, что замена аминокислотных остатков в молекулах указанных пептидах может существенно изменить их биологические свойства.
Аллофероны являются наиболее близкими аналогами предлагаемого изобретения по химической структуре и механизму действия.
Кроме того, ранее методом компьютерного моделирования пространственной структуры молекулы Аллоферона-1 была показана важнейшая роль остатков гистидина в конформации молекулы пептида. Причем наиболее важный вклад вносят остатки гистидина, находящиеся в положениях 6 и 9. (Патент РФ №2470031, МПК С07К 7/06 А61К 38/08, А61К 38/10, опубл. 20.12.2012).
Наличие других аминокислот в этих положениях существенно изменяет конформацию молекул и, соответственно, их биологическую активность.
Технической задачей, на решение которой направлено заявляемой изобретение, является создание новых пептидов, обладающих повышенной биологической активностью, которые могут быть использованы для создания лекарственных препаратов для лечения и профилактики вирусных и микробных инфекций.
Поставленная техническая задача решена тем, что синтезирован биологически активный пептид:
His-Gly-Val-Ser-Gly-Tyr-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид I), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Ala-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид II), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Arg-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид III), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид IV), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид V), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-OMet)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид VI), или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-Cl)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly (Пептид VII),
обладающий повышенной индукцией гамма-интерферона и интерлейкина-18.
Поставленная техническая задача решена также тем, что получена иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция, содержащая один или несколько пептидов, приведенных выше, или их фармацевтически приемлемых солей в эффективном количестве в сочетании со стандартными вспомогательными веществами.
Синтезированные пептиды отличаются наличием различных аминокислот алифатического и ароматического рядов в положении 6. Для данных пептидов определена биологическая активность синтезированных пептидов.
Технический результат состоит в получении пептидов с повышенной индукцией гамма-интерферона и интерлейкина-18 по сравнению с Аллофероном-1, что обуславливает повышенную иммуномодулирующую и противовирусную активность, что будет подтверждено примерами.
Следует отметить, что сходство химической структуры полученных пептидов I-VII с Аллофероном-1 и Аллостатином-1 является чисто внешним. Они не укладываются в формулы этих групп пептидов.
Синтез пептидов произведен по стандартной Fmoc-процедуре твердофазным способом. Удаление защиты производилось 20%-м раствором пиперидина в диметилформамиде. Реакцию сочетания проводили с помощью HBTU в присутствии HOBt и NMM в течение 2 часов при комнатной температуре. Финишное отделение пептидов проводили с помощью TFA, EDT и воды (95:2,5:2,5) в течение 2 часов при комнатной температуре.
Сырые пептиды промывались холодным диэтиловым эфиром, растворялись в воде и лиофилизовались. Очистка пептидов производилась методом HPLC с использованием колонок TOSOH Bioscience С18 (21,5 мм × 300 мм) (Tosoh, Japan) с UV-детектором 210/240 нм. Процесс проводили в градиенте вода - ацетонитрил, содержащий 0,1% TFA при скорости потока 7 мл/мин. Очищенные лиофилизованные пептиды имели чистоту более 95%.
Финишная стадия получения пептидов - лиофилизация из раствора в 50% уксусной кислоте.
Химическая идентификация пептидов была подтверждена методом масс-спектрометрии с использованием масс-спектрометра типа Microflex LT MALDI-TOF (Bruker Daltonics GmbH).
Возможность достижения цели изобретения подтверждается следующими примерами.
Пример 1. Изучение влияния биологически активных пептидов I-VII на индукцию IL-18
Индукция осуществлялась путем введения подкожно Аллоферона-1 и биологически активных пептидов I-VII однократно в дозе 2 мг на кг веса лабораторных животных. Для эксперимента использовались мыши линии BALB/C, самки, массой 16-22 грамма, возраста 14 недель, полученные из питомника лабораторных животных и прошедшие необходимый карантин. Температура окружающей среды была 22±2°C, относительная влажность 60±5%, содержание аммиака составляло 10 ррм, углекислого газа - не превышало 0,15% к объему воздуха, кратность воздухообмена составляла 10-15 крат/час при скорости движения воздуха - 0,3 м/с. Фильтрование воздуха обеспечивали с помощью фильтров грубой фильтрации. Кормили мышей гранулированным комбикормом, изготовленным в соответствии со стандартами приготовления кормов для лабораторных животных. Корм предварительно стерилизовали в автоклаве с использованием вакуума при 121°C и 1,2 атм в течение 20 мин. Кормление проводили 1 раз в сутки из расчета 8,0 г на одну мышь, после чистки клеток. Питьевую воду заливали в бутылки-поилки вместимостью 200 мл и стерилизовали при 121 С и 1,2 атм в течение 45 мин, пробки автоклавировали отдельно. Поилки ежедневно заменяли на новые. Определялся уровень интерлейкина-18 (IL-18) в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, с использованием специфических антител. Количество IL-18 в сыворотке определяли на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 16, 24, 32, 40, 48, 56 час после введения препаратов.
Параллельно изучалось «фоновое» количество IL-18, присутствующее в сыворотке крови исследуемых животных. Для этой цели использовалось 14 мышей в качестве контрольной группы, которые получали подкожную инъекцию физиологического раствора. В опытной группе использовалось 336 животных. В случае контрольной группы доверительный интервал рассчитывался по измерениям разведения одного и того же образца. В опытной группе доверительный интервал вычислялся относительно трех образцов от трех животных на каждую измеряемую точку.
Через 3-4 часа после введения у всех пептидов наблюдается небольшой достоверный пик увеличения концентрации IL-18. Через 24 часа наблюдается второй пик значительного увеличения содержания IL-18 в сыворотке крови опытной группы животных, который длится около 20 часов. Наличие первого пика на 3-4 часу возможно обусловлено не специфической индукцией. Значительное повышение IL-18 на 2-3-й день эксперимента свидетельствует о специфической способности препаратов индуцировать изучаемый цитокин.
Результаты испытания препарата приведены в таблице 1.
Введение как Аллоферона-1, так и пептидов I-VII, вызвало индукцию ИЛ-18, которая длилась до 3 суток. Максимальная концентрация ИЛ-18 достигается спустя 30 часов после однократного введения пептидов. Характер индукции - интенсивность и временной диапазон - для пептидов одинаков.
Для всех изученных пептидов зафиксирована индукция интерлейкина-18, уровень которой превышает величину, достигаемую Аллофероном-1. Максимальный уровень интерлейкина-18 через 32 часа (410 пг/мл) был зафиксирован для пептида I. Фоновый уровень в среднем в группе контрольных животных составил 200 пг на мл.
Пример 2. Изучение интерфероногенной активности изучаемых пептидов I-VII
Активность определялась путем введения подкожно изучаемых пептидов однократно в дозе 1 мг на кг веса лабораторных животных. Для эксперимента использовались мыши линии BALB/C, самки, массой 16-22 грамма, возраста 18 недель, содержавшиеся в соответствии с протоколом, изложенным выше в примере 1. Определялся уровень интерферона гамма в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, с использованием специфических антител. Количество интерферона в сыворотке определяли на 3, 6, 12, 16, 24, 32, 40 и 48 час после введения препарата.
Параллельно изучалось «фоновое» количество интерферона гамма, присутствующее в сыворотке исследуемых животных. Для этой цели использовалось 8 мышей в качестве контрольной группы, которые получали подкожную инъекцию физиологического раствора. Среднее значение по контрольной группе на 5% уровне значимости составило 29±8 пг/мл исследуемой сыворотки. В каждой опытной группе также использовались по 8 мышей, которые получали подкожную инъекцию препаратов в дозе 25 мкг с изучаемыми пептидами I-VII, а также Аллофероном-1. Результаты испытания препаратов представлены в таблице 2.
Полученные данные свидетельствуют о том, что изучаемые пептиды I-VII вызывают индукцию интерферона гамма, превышающую уровень индукции Аллоферона-1.
Пример 3. Изучение влияния биологически активных пептидов I-VII на резистентность мышей к вирусу гриппа А
Антивирусное действие биологически активных пептидов I-VII изучали на модели летальной вирусной инфекции мышей вирусом гриппа А. Суспензию вируса вводили интраназально в дозе, соответствующей 10 LD50. Аллоферон-1 и пептиды I-VII в 0,5 мл 0,9% раствора натрия хлорида вводили внутрибрюшинно за одни сутки до инокуляции вируса, затем через 1, 2, 4, 6 и 8 дней после инокуляции. Препараты испытывали в дозе 25 мкг. В контроле мышам вводили равный объем растворителя. Критерием эффективности служила выживаемость животных через 10 суток после инфицирования вирусом. Для проведения эксперимента были отобраны половозрелые белые мыши, самцы, весом 20,0-22,0 г, полученные из питомника лабораторных животных и прошедшие необходимый карантин. Содержание мышей осуществлялось по протоколу, изложенному выше в примере 1. В эксперименте были использованы 180 мышей.
Введение Аллоферона-1 и биологически активных пептидов I-VII инфицированным животным вызывало дозозависимый протекторный эффект (Таблица 3). Препараты в дозе 25 мкг вызывали значительное увеличение числа выживших в течение срока наблюдения животных. Эффект данной дозы высокодостоверен.
Таким образом, результаты примера 3 свидетельствуют о том, что биологически активные пептиды I-VII в дозе 25 мкг оказывают выраженное антивирусное действие на мышей, инфицированных вирусом гриппа А, превышающее антивирусное действие Аллоферона-1.
Пример 4. Изучение влияния биологически активных пептидов I-VII на резистентность мышей к вирусу гриппа В
Исследование влияния биологически активных пептидов I-VII на устойчивость мышей к вирусу гриппа В проводилось на 200 мышах. Для проведения эксперимента были отобраны половозрелые белые мыши, самцы, весом 20,0-22,0 г, полученные из питомника лабораторных животных и прошедшие необходимый карантин. Содержание мышей осуществлялось по протоколу, изложенному выше в примере 1. Мышей инфицировали штаммом LEE 1/40 вируса гриппа В, взятым в инфекционной дозе, соответствующих 30 ЛД50. В качестве позитивного контроля использовали специфический антивирусный препарат Рибавирин.
Аллоферон-1 и биологически активные пептиды I-VII вводили внутрибрюшинно в дозе 25 мкг за 1 сутки до инфицирования вирусом, затем через 1, 2, 4, 6 и 8 суток.
Результаты изложены в Таблице 4.
В контроле интраназальное введение вируса вызвало тяжелую пневмонию с высокой летальностью (80%). На этом фоне Рибавирин при высокой инфекционной нагрузке (30 ЛД50) в условиях данного эксперимента оказался малоэффективным. В то же время биологически активные пептиды I-VII оказали выраженное протекторное действие, превышающее антивирусное действие Аллоферона-1.
Таким образом, результаты примера 4 свидетельствуют о том, что биологически активные пептиды I-VII в дозе 25 мкг оказывают выраженное антивирусное действие на мышей, инфицированных вирусом гриппа В, существенно превышающие защитный эффект как Рибавирина, хорошо зарекомендовавшего себя антивирусного средства, а также Аллоферона-1, и могут служить основой для создания новых антивирусных препаратов.
Claims (2)
1. Биологически активный пептид
His-Gly-Val-Ser-Gly-Tyr-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Ala-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Arg-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-OMet)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-Cl)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly,
обладающий повышенной индукцией гамма-интерферона и интерлейкина-18.
His-Gly-Val-Ser-Gly-Tyr-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Ala-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Arg-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-OMet)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly, или
His-Gly-Val-Ser-Gly-Phe(p-Cl)-Gly-Gln-His-Gly-Val-His-Gly,
обладающий повышенной индукцией гамма-интерферона и интерлейкина-18.
2. Иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция, содержащая один или несколько пептидов по п. 1 или их фармацевтически приемлемых солей в эффективном количестве в сочетании со стандартными вспомогательными веществами.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013141485/10A RU2575069C2 (ru) | 2013-09-10 | Биологически активный пептид и иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция | |
| EA201401290A EA031772B1 (ru) | 2013-09-10 | 2014-12-19 | Пептиды, индуцирующие повышенное образование интерферона-гамма и il-18, и иммуномодулирующая, противовирусная фармацевтическая композиция |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2013141485/10A RU2575069C2 (ru) | 2013-09-10 | Биологически активный пептид и иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2013141485A RU2013141485A (ru) | 2015-03-20 |
| RU2575069C2 true RU2575069C2 (ru) | 2016-02-10 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2172322C1 (ru) * | 1999-12-27 | 2001-08-20 | Энтофарм Ко., Лтд. | Аллофероны-иммуномодулирующие пептиды |
| RU2267496C2 (ru) * | 2004-01-15 | 2006-01-10 | Сергей Иванович Черныш | Противоопухолевые и антивирусные пептиды |
| RU2470031C2 (ru) * | 2011-02-18 | 2012-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Аллоферон" | Биологически активные пептидные комплексы |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2172322C1 (ru) * | 1999-12-27 | 2001-08-20 | Энтофарм Ко., Лтд. | Аллофероны-иммуномодулирующие пептиды |
| RU2267496C2 (ru) * | 2004-01-15 | 2006-01-10 | Сергей Иванович Черныш | Противоопухолевые и антивирусные пептиды |
| RU2470031C2 (ru) * | 2011-02-18 | 2012-12-20 | Общество с ограниченной ответственностью "Аллоферон" | Биологически активные пептидные комплексы |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| KUCZER M. et al., New Alloferon Analogues: Synthesis and Antiviral Properties, Chem. Biol. Drug Des., 2013, v.81, p.302-309. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112020367B (zh) | 用于治疗急性呼吸道传染病的抗病毒免疫调节剂 | |
| JP3564065B2 (ja) | アロフェロン−免疫調節ペプチド | |
| JP4536918B2 (ja) | 免疫調整機能を有するγ−グルタミルとβ−アスパルチル化合物および免疫調節剤 | |
| US20210246177A1 (en) | Cath2 derivatives | |
| CN106232616B (zh) | 两亲性合成抗菌肽、其药物组合物及其用途 | |
| US11186619B2 (en) | Antimicrobial peptides based on CMAP27 | |
| NO326298B1 (no) | Anvendelse av R'-Glu-Trp-R'' dipeptider i fremstilling av medikamenter | |
| ZA200605804B (en) | Antitumoral and antiviral peptides | |
| KR101267967B1 (ko) | 면역 관련 질병을 예방 및 치료하기 위한 조성물 및 방법 | |
| CA2133569A1 (en) | Novel lipophilic oligopeptides with immunomodulating activity | |
| AU705418B2 (en) | Peptides having immunomodulatory activity | |
| EP1006124B1 (en) | Immunomodulatory materials from Calliphora vicina larvae, their preparation and use | |
| EP2030628B1 (en) | A peptide for preventing or treating liver damage and its derivant and the use | |
| RU2576830C2 (ru) | Биологически активные производные аллоферона-1 | |
| RU2575069C2 (ru) | Биологически активный пептид и иммуномодулирующая и противовирусная фармацевтическая композиция | |
| KR102609962B1 (ko) | 히스티딘 유도체를 포함하는 트라이펩타이드 및 이를 포함하는 항균 조성물 | |
| EA031772B1 (ru) | Пептиды, индуцирующие повышенное образование интерферона-гамма и il-18, и иммуномодулирующая, противовирусная фармацевтическая композиция | |
| AU2915592A (en) | Pharmaceutical lysine-containing polypeptide compositions and methods of use thereof | |
| CN110563814B (zh) | 具有免疫调节作用的多肽及其应用 | |
| ES2350039T3 (es) | Compuestos inmunomoduladores que contienen gamma-glutamilo y beta-aspartilo y métodos con ellos. | |
| RU2823074C2 (ru) | Варианты свиного g-csf и их применение | |
| CN113698460A (zh) | 一种大肠杆菌lipid A结合基元PCK及其制备方法与应用 | |
| AU2018348138A1 (en) | Porcine G-CSF variants and their uses | |
| CN117279934A (zh) | 用于抑制猪链球菌的cath2及其衍生物 | |
| US20020052321A1 (en) | Pharmaceutical lysine-containing polypeptide compositions and methods of use thereof |