WO2020196437A1 - 腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム - Google Patents

腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム Download PDF

Info

Publication number
WO2020196437A1
WO2020196437A1 PCT/JP2020/012807 JP2020012807W WO2020196437A1 WO 2020196437 A1 WO2020196437 A1 WO 2020196437A1 JP 2020012807 W JP2020012807 W JP 2020012807W WO 2020196437 A1 WO2020196437 A1 WO 2020196437A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
serine
amount
excretion rate
asparagine
blood
Prior art date
Application number
PCT/JP2020/012807
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
真史 三田
池田　達彦
友則 木村
Original Assignee
Kagami株式会社
国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kagami株式会社, 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 filed Critical Kagami株式会社
Priority to US17/442,069 priority Critical patent/US20220170945A1/en
Priority to JP2021509407A priority patent/JPWO2020196437A1/ja
Priority to CN202080022905.2A priority patent/CN113631923A/zh
Publication of WO2020196437A1 publication Critical patent/WO2020196437A1/ja

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6806—Determination of free amino acids
    • G01N33/6812—Assays for specific amino acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/15—Medicinal preparations ; Physical properties thereof, e.g. dissolubility
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/493—Physical analysis of biological material of liquid biological material urine
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/70—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving creatine or creatinine
    • G—PHYSICS
    • G16—INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR SPECIFIC APPLICATION FIELDS
    • G16H—HEALTHCARE INFORMATICS, i.e. INFORMATION AND COMMUNICATION TECHNOLOGY [ICT] SPECIALLY ADAPTED FOR THE HANDLING OR PROCESSING OF MEDICAL OR HEALTHCARE DATA
    • G16H50/00—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics
    • G16H50/20—ICT specially adapted for medical diagnosis, medical simulation or medical data mining; ICT specially adapted for detecting, monitoring or modelling epidemics or pandemics for computer-aided diagnosis, e.g. based on medical expert systems
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/34—Genitourinary disorders
    • G01N2800/347—Renal failures; Glomerular diseases; Tubulointerstitial diseases, e.g. nephritic syndrome, glomerulonephritis; Renovascular diseases, e.g. renal artery occlusion, nephropathy

Definitions

  • the present invention relates to a method for assisting the evaluation of renal pathology, a renal pathological evaluation system, and a renal pathological evaluation program.
  • the kidney is an important organ that maintains the homeostasis of the biological environment by excreting and absorbing internal components, and has the function of excreting waste products, regulating blood pressure, adjusting body fluid volume and ions, and producing blood and bones. Is responsible for.
  • GFR glomerular filtration rate
  • the glomerular filtration rate represents the amount of liquid that is filtered from the blood by the glomerulus in one minute, and the measurement of inulin clearance is regarded as the international standard (gold standard).
  • the measurement of inulin clearance requires continuous infusion of inulin for 2 hours and multiple times of urine collection and blood collection, which imposes a heavy burden on the subject and the practitioner.
  • inulin clearance measurements are only performed in limited circumstances such as donors during living-donor kidney transplantation and are replaced by measurements of other markers such as creatinine.
  • Inulin clearance is also difficult to apply when the renal condition changes in a short time such as acute kidney injury.
  • the values of many markers have a large deviation from the actual glomerular filtration rate such as inulin clearance, which is the gold standard, and hinder the accurate diagnosis of kidney disease.
  • Creatinine is universally measured in clinical practice as an index of renal function. Creatinin is the final metabolite of creatin required for muscle contraction. Creatin produced in the liver is taken up by muscle cells, partly metabolized to creatinine, transported to the kidneys via blood, filtered by glomerule, and then in the urine without being reabsorbed by the tubules. Is excreted in. It is used to evaluate renal function because it impairs excretion when the glomerular filtration capacity decreases and stays in the blood to increase the value, which is a useful index for urinary toxin accumulation. However, the amount of creatinine in the blood does not show a clear abnormal value unless the GFR decreases by 50% or more, and it cannot be said to be a sensitive marker.
  • Cistatin C is a protein with a molecular weight of 13.36 kDa produced from nucleated cells throughout the body at a constant rate. All of it is filtered by glomerule, reabsorbed by tubules, and then decomposed by the kidneys. It is considered that it is removed from the blood according to the above, and the amount in the blood is an index of GFR.
  • the increase in the amount of cystatin C in blood slows down, making accurate evaluation of renal function difficult in end-stage renal disease.
  • Non-Patent Document 1 Non-Patent Document 2, Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 4).
  • amino acids selected from the group consisting of D-serine, D-threonine, D-alanine, D-asparagin, D-alosleonine, D-glutamine, D-proline and D-phenylalanine are the pathological index values of kidney disease.
  • Patent Document 2 urinary LFABP, blood NGAL, urinary KIM-1, and the like have been developed as markers for kidney disease, but they are not related to glomerular filtration capacity.
  • the present inventors focused on the dynamics of filtration, reabsorption, and excretion of D-serine and D-asparagine in the kidney, and analyzed the relationship between the excretion rate and the renal pathological condition, which contributed to the evaluation and determination of the renal pathological condition. We have found that various pathological information can be obtained, and have reached the present invention.
  • the present invention relates to the following: [1] Evaluation of renal pathology using the combination of the rate of reabsorption and excretion of D-serine and / or D-asparagin in the target kidney and the amount of D-serine and / or D-asparagin in the blood as an index. How to assist. [2] Item 1 in which the ratio is the excretion rate of D-serine into the urine of the subject (target D-serine excretion rate) and / or the excretion rate of D-asparagine (target D-asparagine excretion rate). The method described.
  • the excretion rate of D-serine is based on the following formula: [During the ceremony, UD-Ser represents the amount of D-serine in the urine. PD-Ser represents the amount of D-serine in the blood. U cre represents the amount of creatinine in the urine P cre represents the amount of creatinine in the blood. ] And / or the excretion rate of the D-asparagin is calculated from the following formula: [During the ceremony, UD-Asn represents the amount of D-asparagine in urine.
  • PD-Asn represents the amount of D-asparagine in the blood.
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • Urinary excretion rate of D-serine in multiple non-kidney disease subjects (D-serine excretion rate in non-kidney disease subjects) and / or D-asparagin excretion rate (D-asparagin excretion rate in non-kidney disease subjects) and blood
  • the renal pathology is evaluated from the relationship between the first target coordinate and the first criterion by comparing the first criterion calculated from the non-renal disease coordinates in which the medium D-serine amount and / or the D-asparagin amount are plotted.
  • Process to do The method according to any one of items 2 to 8, which comprises.
  • the step of evaluating the renal condition is to evaluate the target kidney disease or its risk of morbidity when the first target coordinate is not included in the first criterion, or to induce or induce kidney disease. 9. The method of item 9, wherein the prognosis is predicted.
  • the kidney disease is chronic kidney disease, myeloma kidney, diabetic nephropathy, IgA nephropathy, interstitial nephritis or multiple cystic kidney, or systemic erythematosus, primary aldosteronism, prostatic hypertrophy, The method of item 10, wherein the kidney disease is caused by Fabry's disease or microvariant nephrotic syndrome.
  • the second target coordinates plotting the amount of medium D-serine and / or the amount of D-asparagine, D-serine excretion rate in log-converted urine in multiple non-kidney disease subjects (D-serine LN excretion rate in non-kidney disease subjects) and / or D-asparagin excretion rate (D-asparagin in non-kidney disease subjects) LN excretion rate) and logarithmicized blood D-serine amount and / or D-asparagin amount are compared with the second criterion calculated from the plotted non-kidney disease coordinates, and the second target coordinate and the second criterion are compared.
  • the step of evaluating the renal pathological condition is to evaluate the kidney disease of the subject or the risk of suffering from the kidney disease when the second target coordinate is not included in the second criterion, or to induce or induce the kidney disease.
  • the kidney disease is chronic kidney disease, myeloma kidney, diabetic nephropathy, IgA nephropathy, interstitial nephritis or multiple cystic kidney, or systemic erythematosus, primary aldosteronism, prostatic hypertrophy, The method of item 17, wherein the kidney disease is caused by Fabry's disease or microvariant nephrosis syndrome.
  • the second criterion is a range of mean ⁇ standard deviation ⁇ coefficient Z of the plot of non-kidney disease coordinates.
  • the coefficient Z is a value between 1.0 and 3.0.
  • the excretion rate of D-serine into the urine of the subject (target D-serine excretion rate) and / or the excretion rate of D-asparagin (target D-asparagin excretion rate), the amount of D-serine in the blood, and /
  • the amount of D-asparagin is measured over time, and the fluctuation of the target D-serine excretion rate and / or the target D-asparagin excretion rate and the blood D-serine amount and / or the D-asparagin amount is used as an index. , How to monitor renal pathology.
  • the amount of D-serine and / or D-asparagine in the blood was measured over time, and the target D-serine excretion rate and / or the target D-asparagine excretion rate and the blood D-serine amount and / or D- A method of monitoring the therapeutic effect of renal pathology using fluctuations in asparagine levels as an index.
  • the kidney disease is chronic kidney disease, myeloma kidney, diabetic nephropathy, IgA nephropathy, interstitial nephritis or multiple cystic kidney, or systemic erythematosus, primary aldosteronism, prostatic hypertrophy, 26.
  • the method of item 28 which assists in assessing renal pathology due to renal disease resulting from type nephrotic syndrome.
  • An evaluation system for renal pathology which includes a storage unit, an input unit, an analysis measurement unit, a data processing unit, and an output unit.
  • the storage unit stores the threshold value input from the input unit and the formula for calculating the D-serine excretion rate into the urine and / or the formula for calculating the D-asparagin excretion rate.
  • the analysis and measurement unit quantifies the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in the blood sample and / or the urine sample.
  • the data processing unit has an element containing the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin in the quantified blood sample and / or urine sample, and the calculation formula and / of the excretion rate of D-serine stored in the storage unit. Alternatively, calculate the urinary D-serine excretion rate and / or the D-asparagine excretion rate generated from the formula for calculating the D-asparagin excretion rate.
  • the data processing unit sets the threshold value described in the storage unit and the combination of the D-serine excretion rate and / or D-asparagine excretion rate in urine and the amount of D-serine and / or D-asparagine in blood.
  • the output unit outputs the evaluation result of the target renal condition, An evaluation system characterized by that.
  • the D-serine excretion rate is based on the following formula: [During the ceremony, UD-Ser represents the amount of D-serine in the urine. PD-Ser represents the amount of D-serine in the blood. U cre represents the amount of creatinine in the urine P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • UD-Asn represents the amount of D-asparagine in urine.
  • PD-Asn represents the amount of D-asparagine in the blood.
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • the evaluation system according to item 31. [33] A program that causes an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to evaluate a renal pathological condition.
  • a storage unit that stores the threshold value for evaluating the renal condition input from the input unit, the formula for calculating the D-serine excretion rate in urine and / or the formula for calculating the D-asparagin excretion rate, and the variables required for the calculation.
  • Variables are stored in the storage unit In the data processing unit, a formula for calculating the excretion rate of D-serine into urine and / or a formula for calculating the excretion rate of D-asparagin stored in the storage unit in advance, and the blood sample stored in the storage unit. And / or the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in the urine sample and the formula for calculating the excretion rate of D-serine and / or the excretion rate of D-asparagine in the urine by calling the variable.
  • the threshold value stored in the storage unit the D-serine excretion rate and / or the D-asparagine excretion rate in the urine, and the combination of the D-serine amount and / or the D-asparagine amount in the blood.
  • the formula for calculating the D-serine excretion rate is as follows: [During the ceremony, UD-Ser represents the amount of D-serine in the urine. PD-Ser represents the amount of D-serine in the blood. U cre represents the amount of creatinine in the urine P cre represents the amount of creatinine in the blood. ] And / or The formula for calculating the D-asparagine excretion rate is as follows: [During the ceremony, UD-Asn represents the amount of D-asparagine in urine. PD-Asn represents the amount of D-asparagine in the blood. U cre represents the amount of creatinine in the urine P cre represents the amount of creatinine in the blood. ] 33. The program according to item 33.
  • Analysis of the renal kinetics (reabsorption, excretion rate) of D-serine and / or D-asparagine of the present invention is more extensively and accurately compared to previously known renal disease markers in subjects.
  • a method for determining renal pathology is provided.
  • FIG. 1 shows the D-serine excretion rate and the D-asparagine excretion rate of non-kidney disease subjects, and their logarithmic values.
  • FIG. 2 shows the D-serine excretion rate and the D-asparagine excretion rate of kidney disease subjects, and their logarithmic values.
  • FIG. 3 is a logarithmic histogram of the D-serine excretion rate calculated from the amounts of D-serine and creatinine in blood and urine measured in the subject.
  • FIG. 4 is a log plot of the amount of D-serine and the excretion rate of D-serine in blood measured in non-kidney disease subjects and kidney disease patients.
  • FIG. 1 shows the D-serine excretion rate and the D-asparagine excretion rate of non-kidney disease subjects, and their logarithmic values.
  • FIG. 2 shows the D-serine excretion rate and the D-asparagine exc
  • FIG. 5 is a logarithmic histogram of the D-asparagine excretion rate calculated from the amounts of D-asparagine and creatinine in blood and urine measured in the subject.
  • FIG. 6 is a logarithmic plot of the amount of D-asparagine and the excretion rate of D-asparagine in blood measured in non-kidney disease subjects and kidney disease patients.
  • FIG. 7 is a logarithmic plot of the amount of D-serine and the excretion rate of D-serine in blood measured in non-kidney disease subjects and kidney disease patients.
  • FIG. 8 is a logarithmic plot of the amount of D-asparagine and the excretion rate of D-asparagine in blood measured in non-kidney disease subjects and kidney disease patients.
  • FIG. 9 is a chart showing the treatment and medication contents of systemic lupus erythematosus patients and their progress.
  • FIG. 10 is a diagram plotting the amount of D-serine and the excretion rate of D-serine in blood measured over time before and after the intervention of treatment in patients with systemic lupus erythematosus.
  • FIG. 11 shows a configuration diagram of the evaluation system for renal pathology of the present invention.
  • FIG. 11 shows a configuration diagram of the evaluation system for renal pathology of the present invention.
  • FIG. 12 is a flowchart showing an example of an operation for evaluating a renal pathological condition according to the program of the present invention.
  • FIG. 13 is a plot of the amount of D-serine and the excretion rate of D-serine in blood measured in a patient diagnosed with kidney disease.
  • the present invention relates to a method for determining a renal pathological condition by analyzing the dynamics (reabsorption, excretion) of D-serine and / or D-asparagin in the kidney.
  • the present inventors have found that the kinetics (reabsorption, excretion) of D-serine and D-asparagine in the kidney reflect the renal pathological condition, respectively, and can be used for determining the renal pathological condition in the subject. Therefore, the present invention may be a method for determining renal pathology by analyzing the dynamics (reabsorption, excretion) of D-serine in the kidney, and the kidney by analyzing the dynamics (reabsorption, excretion) of D-asparagin in the kidney.
  • It may be a method for determining a pathological condition, or may be a method for determining a renal pathological condition by analyzing the dynamics (reabsorption, excretion) of D-serine and D-asparagin in the kidney.
  • a renal pathological condition by analyzing the dynamics (reabsorption, excretion) of D-serine and D-asparagin in the kidney.
  • the excretion rate of D-serine in the urine of a subject may be referred to as “the excretion rate of D-serine in the subject", and “D in the urine in a non-kidney disease subject”.
  • the excretion rate of serine may be expressed as” D-serine excretion rate for non-kidney diseases ", and even if they are interchanged with each other, they have the same meaning.
  • the excretion rate of D-asparagin in the urine of a subject may be expressed as "the excretion rate of D-asparagin in the subject", and “to the urine in a non-kidney disease subject”.
  • D-Asparagin excretion rate is sometimes referred to as "D-asparagin excretion rate for non-kidney diseases", and even if they are interchanged with each other, they have the same meaning.
  • the “log-converted target D-serine excretion rate” may be referred to as the “subject D-serine LN excretion rate”, and the “urinary D-serine excretion rate in a non-kidney disease subject” may be expressed.
  • the logarithmic value of the excretion rate may be expressed as the "D-serine LN excretion rate for non-kidney diseases", and even if they are interchanged with each other, they have the same meaning.
  • the "logarithmically converted target D-asparagin excretion rate" may be expressed as “target D-asparagin LN excretion rate", and "D-in urine in a non-kidney disease subject”.
  • the logarithmically converted value of the asparagine excretion rate may be expressed as the "non-kidney disease target D-asparagine LN excretion rate", and even if they are interchanged with each other, they have the same meaning.
  • kidney disease subject simply refers to all mammals, preferably humans, regardless of the presence or absence of kidney disease.
  • non-kidney disease subject refers to a subject who does not have kidney disease or has never been diagnosed with kidney disease, for example, suffering from kidney disease and other diseases that induce renal damage. Targets that are not are preferred.
  • the present invention uses a combination of the rate of reabsorption and excretion of D-serine and / or D-asparagin in the target kidney and the amount of D-serine and / or D-asparagin in the blood as an index.
  • the rate of reabsorption and excretion of D-serine and D-asparagin is determined by quantifying the amount of D-serine and D-asparagin in the blood and the amount of D-serine and D-asparagin in the urine, respectively. Can be calculated.
  • the "rate of reabsorption and excretion of D-serine and / or D-asparagin in the subject's kidney” in the present invention is the "rate of excretion of D-serine into the subject's urine" (" Subject D-serine excretion rate ") and / or" subject urinary excretion rate of D-asparagin "(" subject D-asparagin excretion rate ”) may be used.
  • the excretion rate is an index indicating how much of the target component filtered by the glomerulus is excreted in the urine through the regulation function of the tubules such as reabsorption and secretion. Yes, it is expressed in any unit other than percentage and percentage.
  • a value excluding the effects of water reabsorption and concentration can be calculated by correction with a correction factor, and is sometimes expressed as a partial excretion rate (FE). Since urine may have a non-constant concentration rate, a "corrector factor" that corrects the urine concentration rate is used to correct the rate of reabsorption and excretion of D-serine and / or D-asparagine in the target kidney. You may.
  • the subject D-serine excretion rate and / or the subject D-asparagin excretion rate may be corrected by a correction factor derived from blood and / or urine.
  • the excretion rate is most simply expressed as the ratio obtained by dividing the amount of the target component in urine by the amount of glomerular filtration of the target component, and the amount of glomerular filtration obtained from inulin clearance, etc., the actually measured urine volume, and blood.
  • the amount of the target component in medium and / or urine may be used.
  • the amount of L-amino acid in urine (preferably the amount of L-serine and / or L-asparagine) can be used as a urine volume correction factor for calculating the D-amino acid excretion rate.
  • a correction factor creatinine clearance calculated from the amount of creatinine in urine or the amount of creatinine in blood can be used.
  • the excretion rate of D-serine is expressed by the following formula. This may be multiplied by 100 and expressed as a percentage (%).
  • U D-Ser represents the amount of D- serine in urine
  • P D-Ser represents the amount of D- serine in the blood
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • the excretion rate of D-asparagin is expressed by the following formula. This may be multiplied by 100 and expressed as a percentage (%).
  • U D-Asn represents the amount of D- asparagine in the urine
  • P D-Asn represents the amount of D- asparagine in blood
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • Pcre represents the amount of creatinine in the blood.
  • the partial sodium excretion rate is used to determine whether it is due to dehydration or renal damage.
  • the partial potassium excretion rate and the partial excretion rate of urea nitrogen are also used clinically as indicators for determining the pathological condition.
  • the excretion rate is understood by the principle of homeostasis that the amount of excretion in urine increases when the amount of intake or biosynthesis of the target component is large, and decreases when the amount of intake is small and the amount of biodegradation is large. Therefore, disorders and pathological changes in the kidneys, which control the major homeostasis of biological components, can affect changes in the excretion rate.
  • kidney disease marker creatinine is all excreted and cystatin C is all reabsorbed
  • D-serine and D-asparagin are tightly regulated for excretion and reabsorption in the renal tubules as well as electrolytes. I thought that it might be a more sensitive and accurate pathological marker.
  • D-serine and D-asparagine used in the analysis are optical isomers of L-serine and D-asparagine, which are amino acids constituting proteins.
  • the amount of D-serine and D-asparagine is strictly controlled in each tissue and body fluid by metabolic enzymes and transporters such as serine racemase and D-amino acid oxidase, but when renal damage occurs, The amount of D-serine and D-asparagin in blood and urine fluctuates.
  • the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in blood / urine refers to the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in a specific blood volume / urine volume. It may also be expressed in terms of concentration.
  • the amount of D-serine and / or D-asparagine in blood / urine is measured as the amount in the collected blood / urine sample that has been centrifuged, precipitated, or pretreated for analysis. ..
  • the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin in blood / urine excludes the amount in blood samples derived from blood such as collected whole blood, serum, and plasma, whole urine, solid components / proteins, etc. It can be measured as an amount in a urine sample derived from urine.
  • the amount of D-serine contained in a predetermined amount of blood / urine is represented by a chromatogram, and the peak height, area, shape, and size can be compared with the standard product. It can be quantified by analysis by calibration.
  • the concentration of D-serine and / or D-asparagine in blood and urine is measured by comparing with a sample in which the concentration of D-serine and / or D-asparagine is known, and it is possible to measure the concentration of D-serine and / or D-asparagine in blood and urine.
  • the concentration of D-serine and / or D-asparagine in blood and urine can be used.
  • the amino acid concentration can be calculated by quantitative analysis using a standard calibration line.
  • the amount of D and L-amino acids can be measured by any method, for example using chiral column chromatography or enzymatic methods. It can be quantified by an immunological method using a monoclonal antibody that identifies the optical isomers of amino acids.
  • the measurement of the amount of D-serine and L-serine in the sample in the present invention may be carried out by any method well known to those skilled in the art. For example, chromatography and enzyme methods (Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238., A.
  • the optical isomer separation analysis system in the present invention may combine a plurality of separation analyzes. More specifically, a step of separating a sample containing a component having an optical isomer through a first column filler as a stationary phase together with a first liquid as a mobile phase to separate the component of the sample. A step of individually holding each of the components of the sample in the multi-loop unit, each of the components of the sample individually held in the multi-loop unit as a stationary phase together with a second liquid as a mobile phase. A step of supplying the second column filler having the optically active center of the sample through a flow path to divide the optical isomer contained in each of the components of the sample, and the optical isomer contained in each of the components of the sample.
  • the amount of D- / L-amino acids in a sample can be measured by using a method for analyzing optical isomers, which comprises a step of detecting a body (Patent No. 4291628).
  • D- and L-amino acids are previously derived with fluorescent reagents such as o-phthalaldehyde (OPA) and 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxadazole (NBD-F). It may be converted or diasteremericized using N-tert-butyloxycarbonyl-L-cysteine (Boc-L-Cys), etc. (Kenji Hamase and Kiyoshi Zaitsu, Analytical Chemistry, Vol.
  • D by immunological techniques using monoclonal antibodies that identify the optical isomers of amino acids, such as monoclonal antibodies that specifically bind to D-serine, L-serine, D-asparagin, L-asparagin, etc. -Amino acids can be measured. Further, when the total amount of D-form and L-form is used as an index, it is not necessary to analyze the D-form and L-form separately, and the amino acid can be analyzed without distinguishing between D-form and L-form. Even in that case, it can be separated and quantified by an enzyme method, an antibody method, GC, CE, or HPLC.
  • the amount of D-serine and D-asparagine in the blood strongly correlates with the glomerular filtration rate as compared with the conventional marker creatinine. This is because the amount of creatinine in the blood is strongly affected by muscle mass, so it shows high values in athletes, patients with locomotive syndrome, and when a large amount of meat is ingested. It is derived from the fact that it cannot reflect accurate renal function because it shows low values in patients with sarcopenia, locomotive syndrome, implantation, and when protein intake is restricted. In healthy individuals with no prevalence, the amount of D-serine in the blood is kept in a very small range of about 1-2% of the total amount of serine in the urine, as opposed to 30 in the urine. There are amounts ranging from ⁇ 60%.
  • the excretion rate of D-serine and D-asparagine proposed in the present invention does not correlate with the glomerular filtration rate unlike the amount of D-serine and D-asparagine in blood, which is a multivariate of chiral amino acid metabolomics and related parameters. Shown by analysis (OPLS). Since it was suggested that the optical isomers of serine and D-asparagin have tightly regulated reabsorption in the renal tubules, respectively, the purpose of investigating the physiological significance of D-serine and D-asparagin is to investigate. In order to analyze the excretion rate of D-serine and D-asparagin in non-kidney disease subjects, 15 healthy volunteers were hired as a study population.
  • Non-renal disease subjects average age 44, male ratio of 80%, average height 1.70m, average body weight 68.9kg, average BSA1.80m 2, average BMI22.6kg / m 2, the population of the average serum creatinine 0.75mg / dL Met.
  • the average excretion rate of D-serine was 62.76%, and the average logarithmic value was calculated to be 4.12.
  • the average excretion rate of asparagine was 64.12%, and the average logarithmic value was calculated to be 4.16 (Fig. 1).
  • U D-Ser represents the amount of D- serine in urine
  • P D-Ser represents the amount of D- serine in the blood
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • U D-Asn represents the amount of D- asparagine in the urine
  • P D-Asn represents the amount of D- asparagine in blood
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • Pcre represents the amount of creatinine in the blood.
  • the analysis was used to classify the severity of chronic kidney disease (CKD) (G1-5) as defined by the guidelines of the Japanese Society of Nephrology. Although it has been shown to be applicable, the D-serine excretion rate analyzed by adding the amount of D-serine in urine and the D-asparagin excretion rate analyzed by adding the amount of D-asparagin in urine are the glomerular filtration rates. Since it can assist the evaluation of renal pathology from a completely different mechanism that does not correlate with, it is highly clinically useful in differentiation, pathology, and prognosis diagnosis, which was difficult with conventional markers.
  • CKD chronic kidney disease
  • the present invention The first target coordinates obtained by plotting the target D-serine excretion rate and / or the target D-asparagine excretion rate and the blood D-serine amount and / or the D-asparagine amount in the target.
  • Urinary excretion rate of D-serine in multiple non-kidney disease subjects (D-serine excretion rate in non-kidney disease subjects) and / or D-asparagin excretion rate (D-asparagin excretion rate in non-kidney disease subjects) and blood compare the amount of medium D-serine and / or the amount of D-asparagin with the first criterion calculated from the plotted non-kidney disease coordinates, and evaluate the renal condition from the relationship between the first target coordinates and the first criterion. Process to do, It may provide a method including.
  • the first target coordinates obtained by plotting the target D-serine excretion rate and the blood D-serine amount in the target, and The first criterion calculated from non-kidney disease coordinates plotting the urinary excretion rate of D-serine in multiple non-kidney disease subjects (D-serine excretion rate in non-kidney disease subjects) and the amount of D-serine in blood.
  • the first target coordinates obtained by plotting the target D-asparagine excretion rate and the blood D-asparagine amount in the target and The first criterion calculated from the non-kidney disease coordinates in which the excretion rate of D-asparagin in urine in multiple non-kidney disease subjects (D-asparagin excretion rate in non-kidney disease subjects) and the amount of D-asparagin in blood are plotted.
  • D-asparagin excretion rate in non-kidney disease subjects the amount of D-asparagin in blood are plotted.
  • evaluate the renal pathology from the relationship between the first target coordinates and the first criterion It may provide a method including.
  • the method of the first embodiment and the method of the second embodiment may be used in combination.
  • the accuracy of the evaluation of the renal pathological condition is improved, but also the accuracy of the evaluation of the renal pathological condition is improved. False positives and false negatives can also be determined.
  • first criterion refers to the urinary excretion rate of D-serine in a plurality of non-kidney disease subjects (D-serine excretion rate in non-kidney disease subjects) and / or the excretion rate of D-asparagin. (D-Asparagin excretion rate for non-kidney disease) and coordinates obtained by plotting the amount of D-serine and / or D-asparagin in blood (referred to as "non-kidney disease coordinates"), and calculated from the target kidney.
  • non-kidney disease coordinates A standard used to evaluate a pathological condition.
  • the first criterion that can be used in the present invention is the urinary excretion rate of D-serine in a plurality of non-kidney disease subjects (D-serine excretion rate in non-kidney disease subjects) and blood D-serine. It may be calculated from the non-kidney disease coordinates in which the amount is plotted. In one embodiment, the first criterion that can be used in the present invention is the urinary excretion rate of D-asparagin in a plurality of non-kidney disease subjects (D-asparagin excretion rate in non-kidney disease subjects) and blood D.
  • -It may be calculated from non-kidney disease coordinates in which the amount of asparagine is plotted.
  • the number of "non-kidney disease subjects" used to calculate the first criterion is preferably sufficient to calculate a statistically significant criterion, eg, 3, 5, 10, 15 , 20, 30, 50, 100 or more can be adopted in the present invention.
  • the "first target coordinate" refers to the target D-serine excretion rate and / or the target D-asparagin excretion rate and the blood D-serine amount and / or D-asparagin in the subject for which the renal condition is evaluated.
  • the coordinates where the quantity is plotted may be a coordinate that plots the target D-serine excretion rate and the blood D-serine amount in the target for which the renal pathological condition is evaluated.
  • the first target coordinates that can be used in the present invention may be coordinates obtained by plotting the target D-asparagine excretion rate and the blood D-asparagine amount in the target for which the renal pathological condition is evaluated. Good.
  • the renal pathological condition in a subject can be evaluated by comparing the first target coordinates with the first criterion.
  • the first criterion in the present invention may be in the range of mean ⁇ standard deviation ⁇ coefficient Z of the plot of non-kidney disease coordinates.
  • the "coefficient Z" is a coefficient used to calculate a confidence interval used in statistics, for example, a value between 1.0 and 3.0 is preferable, and 1.96 is more preferable. preferable.
  • the first criterion is preferably in the range of 0.4 to 0.9.
  • the step of assessing the renal pathology included in the present invention is to assess the subject's kidney disease or its risk of morbidity when the first subject coordinates are not included in the first criterion, or kidney disease. It may be to predict the induction or prognosis of.
  • kidney diseases that can be assessed in the present invention include, for example, chronic kidney disease, myeloma kidney, diabetic nephropathy, IgA nephropathy, interstitial nephritis or multiple cystic kidney, or systemic erythematosus. It may be a kidney disease caused by primary aldosteronism, prostatic hypertrophy, Fabry's disease or microvariant nephrotic syndrome.
  • the present invention may provide a method of assisting the evaluation of renal pathology from the relationship between the regression equation calculated by the regression analysis of the plot of non-renal disease coordinates and the target coordinates. ..
  • the regression equation calculated by the regression analysis of the plot of non-renal disease coordinates and the target coordinates. ..
  • the present invention describes: Logarithmically converted target D-serine excretion rate (target D-serine LN excretion rate) and / or logarithmically converted target D-asparagine excretion rate (target D-asparagine LN excretion rate) and logarithmically converted blood D-serine amount and / Or the second target coordinates plotting the amount of D-asparagine, D-serine excretion rate in log-converted urine in multiple non-kidney disease subjects (D-serine LN excretion rate in non-kidney disease subjects) and / or D-asparagin excretion rate (D-asparagin in non-kidney diseases) LN excretion rate) and logarithmicized blood D-serine amount and / or D-asparagin amount are compared with the second reference calculated from the plotted non-kidney disease coordinates, and the second target coordinate and the second reference The process of
  • the second target coordinates obtained by plotting the logarithmicized target D-serine excretion rate (target D-serine LN excretion rate) and the logarithmicized blood D-serine amount.
  • Non-kidney disease coordinates that plot the log-converted urinary excretion rate of D-serine (D-serine LN excretion rate for non-kidney disease subjects) and the log-converted blood D-serine level in multiple non-kidney disease subjects.
  • the present invention is: A second target coordinate that plots the logarithmicized target D-asparagine excretion rate (target D-asparagine LN excretion rate) and the logarithmicized blood D-asparagine amount, and Non-kidney disease coordinates plotting the logarithmicized urinary excretion rate of D-asparagin (D-asparagin LN excretion rate for non-kidney disease) and the logarithmicized blood D-asparagin level in multiple non-kidney disease subjects.
  • the method of the first embodiment and the method of the second embodiment may be used in combination.
  • the accuracy of the evaluation of the renal pathological condition is improved, but also the accuracy of the evaluation of the renal pathological condition is improved. False positives and false negatives can also be determined.
  • the "logarithm-converted value” means a value obtained by converting a target value into a logarithm, but may be, for example, a value obtained by converting a target value into a natural logarithm, which is a common logarithm. Etc., it may be a value obtained by converting the target value using an arbitrary base.
  • the “second criterion” refers to the logarithmically converted target D-serine excretion rate (target D-serine LN excretion rate) and / or the logarithmically converted target D-asparagine excretion rate (subject D-asparagine LN excretion). It is calculated from the coordinates (referred to as "non-renal disease coordinates") in which the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in the logarithmically converted blood is plotted (referred to as "non-renal disease coordinates"), and is used to evaluate the renal condition of the subject. The standard used.
  • a second criterion that can be used in the present invention is a non-kidney disease plotting log-converted subject D-serine excretion rate (subject D-serine LN excretion rate) and log-converted blood D-serine amount. It may be calculated from the coordinates. Further, in one embodiment, the second criterion that can be used in the present invention is a logarithmically converted target D-asparagine excretion rate (target D-asparagine LN excretion rate) and a logarithmically converted blood D-asparagine amount. It may be calculated from the kidney disease coordinates.
  • the number of "non-kidney disease subjects" used to calculate the second criterion is preferably sufficient to calculate a statistically significant criterion, eg, 3, 5, 10, 15 , 20, 30, 50, 100 or more can be adopted in the present invention.
  • the second criterion that can be used in the present invention may be the range of mean ⁇ standard deviation ⁇ coefficient Z of the plot of non-kidney disease coordinates.
  • the coefficient Z is preferably a value between 1.0 and 3.0, more preferably 1.96.
  • the second criterion is preferably in the range of 3.5 to 5.0.
  • the second criterion that can be used in the present invention is that the distance from the average value of the plot of non-kidney disease coordinates can be 0.6 or less.
  • the step of assessing the renal pathology of the present invention is to assess the subject's kidney disease or its risk of morbidity if the second subject coordinates are not included in the second criterion, or to induce kidney disease. Alternatively, it may be by predicting the prognosis.
  • the present invention relates to a regression equation calculated by a regression line of a plot of non-kidney disease coordinates based on logarithmically transformed values and a target coordinate based on logarithmically transformed values.
  • It may be a method of assisting the evaluation of renal pathology.
  • it is possible to evaluate the fluctuation of D-serine and / or D-asparagine dynamics in non-kidney disease patients. For example, if the excretion rate axis fluctuates to the plus side, excretion is enhanced, and if it fluctuates to the minus side, reabsorption is promoted, and the greater the distance, the greater the degree. Can be determined.
  • the treatment policy can be determined based on it.
  • the treatment method can be appropriately selected according to each pathological condition.
  • the first target coordinate or the second target coordinate described above is a reference range of a non-kidney target (for example, a range of the first standard or the second standard described above). ) May be controlled while monitoring over time.
  • Treatment interventions include lifestyle improvement, dietary guidance, blood pressure control, anemia control, electrolyte control, urinary toxin control, blood glucose level control, immune control, lipid control, etc., independently or in combination.
  • lifestyle improvement it is recommended to quit and reduce the BMI value to less than 25. Dietary guidance includes salt reduction and protein restriction.
  • blood pressure control can be treated by medication.
  • Blood pressure is controlled so as to be 130/80 mmHg or less, and a hypertension therapeutic agent can be administered in some cases.
  • Antihypertensive agents include diuretics (siazide diuretics such as trichloromethiazide, ventilhydrochlorothiazide, hydrochlorothiazide, siazide-like diuretics such as methiclan, indabamid, tribamide, mefluside, loop diuretics such as frosemid and potassium retention.
  • Diuretics / aldosterone antagonists such as triamterene, spironolactone, eprelenone, etc., calcium antagonists (dihydropyridines, such as nifedipine, amlogipin, ehonidipine, silnidipine, nicardipine, nisoldipine, nitrenjipin, nirvazipin, balnidipine, ferrodipine, nilvazipin, balnidipine, ferrodipine, benidipine Alanidipine, benzothiazepines, zircyazem, etc.), angiotensin converting enzyme inhibitors (captopril, enalapril, acerapril, derapril, shirazapril, ricinopril, benazepril, imidapril, temocapril, kinapril, tremcapril, quinapril,
  • Receptor antagonists angiotensin II receptor antagonists such as rosaltan, candesartan, balsartan, thermisartan, olmesartan, ilbesartan, azil sartane, etc.
  • sympathetic blockers ⁇ blockers such as atenolol, bisoprolol, betaxolol, metprolol, aseptrol
  • Seriprolol Proplanolol, Nadrol, Carteolol, Pindrol, Nipradilol, Amoslalol, Arotinolol, Carvegirol, Labetarol, Bevantrol, Urapidil, Terrazosin, Brazocin, Doxazosin, Bunazosin, etc.
  • an erythropoietin preparation an iron preparation, a HIF-1 inhibitor and the like are used.
  • Calcium receptor agonists sinacalcet, etelcalcetide, etc.
  • phosphorus adsorbents are used as electrolyte regulators.
  • Activated charcoal or the like is used as a urinary toxin adsorbent.
  • the blood glucose level is controlled to be less than Hba1c 6.9%, and a hypoglycemic drug is optionally administered.
  • SGLT2 inhibitors ipragriflozin, dapagliflozin, luseogliflozin, tohogliflozin, canagriflozin, empagliflozin, etc.
  • DPP4 inhibitors citagliptin phosphate, chanaglycin, saxagliptin, allogliptin, linagliptin, tenerigliptin , Anagliptin, omaligliptin, etc.
  • sulfonylurea drugs torbutamide, acetohexamide, chlorpropamide, glycopyramide, glibenclamid, glycrazide, glymepyrid, etc.
  • thiazolidine drugs pioglycazone, etc.
  • biguanide drugs methformin, buformin, etc.
  • ⁇ -Glucosidase inhibitors Acarbose, Boglib
  • immunosuppressive agents steroids, tacrolimus, anti-CD20 antibody, cyclohexamide, mycophenolate mofetil (MMF), etc.
  • lipid management LDL-C is controlled to be less than 120 mg / dL, and in some cases, therapeutic agents for dyslipidemia, such as statins (rosuvastatin, pitabastatin, atrubastatin, serivastatin, fluvasstatin, simvastatin, pravastatin, robastatin, mevasstatin, etc.), Fibrates (clofibrates, bezafibrates, phenofibrate, clinofibrate, etc.), nicotinic acid derivatives (tocholerol nicotinate, nicomol, fisseritrol, etc.), cholesterol transporter inhibitors (ezetimib, etc.), PCSK9 inhibitors (evolocab, etc.) EPA Formulations and the like are used.
  • statins rosuvastatin, pitaba
  • the dosage form of each drug may be a single agent or a combination agent.
  • renal replacement therapies such as peritoneal dialysis, hemodialysis, continuous hemodialysis, blood apheresis (plasma exchange, plasma adsorption, etc.) and kidney transplantation are performed.
  • the present invention includes the excretion rate of D-serine in the urine of the subject (subject D-serine excretion rate) and / or the excretion rate of D-asparagine (subject D-asparagine excretion rate).
  • the amount of D-serine and / or D-asparagine in the blood was measured over time, and the target D-serine excretion rate and / or the target D-asparagine excretion rate and the blood D-serine amount and / or D- It may be a method of monitoring renal pathology using fluctuations in the amount of asparagine as an index.
  • the present invention measures the excretion rate of D-serine in the urine of a subject (subject D-serine excretion rate) and the amount of D-serine in blood over time, and the subject D.
  • -A method of monitoring renal pathology using the fluctuation of the serine excretion rate and the amount of D-serine in blood as an index may be used.
  • the present invention describes D-in the urine of a subject.
  • the excretion rate of asparagine (target D-asparagin excretion rate) and the amount of D-asparagin in blood are measured over time, and the fluctuation of the target D-asparagin excretion rate and the amount of D-asparagin in blood is used as an index. It may be a method of monitoring the renal condition, or a method of monitoring the renal condition in combination of both.
  • the present invention presents a urinary excretion rate of D-serine (subject D-serine excretion rate) and / or D-asparagin excretion rate before and after intervention in a subject with kidney disease.
  • (Target D-serine excretion rate) and blood D-serine amount and / or D-asparagin amount are measured over time, and the target D-serine excretion rate and / or target D-asparagin excretion rate and the blood It may be a method of monitoring the therapeutic effect of renal pathology using fluctuations in the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin as an index.
  • the present invention determines the urinary excretion rate of D-serine (subject D-serine excretion rate) and the amount of D-serine in blood before and after intervention in a subject having kidney disease. It may be a method of monitoring the therapeutic effect of renal pathological conditions using the fluctuation of the target D-serine excretion rate and the blood D-serine amount as an index, for example, in one embodiment.
  • the excretion rate of D-asparagin in urine (subject D-asparagin excretion rate) and the amount of D-asparagin in blood of a subject having kidney disease before and after intervention are measured over time, and the subject D is described.
  • -A method of monitoring the therapeutic effect of renal pathology using the fluctuation of asparagine excretion rate and the amount of D-asparagin in blood as an index may be used, or a method of monitoring the therapeutic effect of renal pathology in combination. May be good.
  • kidney disease in a subject such as chronic kidney disease, myeloma kidney, diabetic nephropathy, IgA nephropathy, interstitial nephritis or multiple cystic kidney, or systemic erythematosus, primary Kidney diseases caused by sex aldosteronism, prostatic hypertrophy, Fabry's disease, or microvariant nephrosis syndrome can be assessed.
  • the present invention provides a method for assisting the evaluation of renal pathology using the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagine in the blood of a subject whose urine cannot be collected as an index.
  • the "subjects from which urine cannot be collected” are, for example, chronic renal failure or acute renal failure for which renal function is extremely reduced and renal replacement therapy (dialysis, plasma exchange, renal transplantation, etc.) is indicated. Refers to a certain object.
  • the present invention provides a method for assisting the determination of systemic lupus erythematosus when the amount of D-serine in the blood of the subject is 9 nmol / mL or more.
  • FIG. 11 is a block diagram of the evaluation system for renal pathology of the present invention.
  • the sample analysis system 10 shown in FIG. 11 is configured so that a method for assisting the evaluation of the renal pathological condition of the present invention can be implemented.
  • Such a sample analysis system 10 includes a storage unit 11, an input unit 12, an analysis measurement unit 13, a data processing unit 14, and an output unit 15 to analyze a blood sample and / or a urine sample. The calculated excretion rate and pathological condition information can be output.
  • the storage unit 11 was calculated from the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin in the blood sample and / or urine sample input from the input unit 12.
  • the combination of the excretion rate, the amount of D-serine in the blood and / or the amount of D-asparagin, and the reference value / pathological information correspondence table or graph are stored, and the analysis / measurement unit 13 stores the D- in the blood sample and / or the urine sample.
  • Serine and / or D-asparagin are separated and quantified, and the data processing unit 14 determines the excretion rate and the amount of D-serine and / or D-asparagin in the blood calculated from the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin.
  • the pathological condition can be determined and the output unit 15 can output the pathological condition information by substituting it into the formula obtained from the reference value / pathological condition information or reading it from the correspondence table or graph.
  • the storage unit 11 stores the reference value input from the input unit 12, and the data processing unit 14 separates and quantifies the amount of D-serine and the amount of D-serine. It may further include a step of comparing the combination of the excretion rate calculated from the amount of / or the amount of D-asparagin and the amount of D-serine and / or the amount of D-asparagin in the blood with the reference value.
  • the output unit 15 causes kidney disease. Output the suspicion of.
  • the storage unit 11 includes a memory device such as RAM, ROM, and flash memory, a fixed disk device such as a hard disk drive, or a portable storage device such as a flexible disk and an optical disk.
  • the storage unit stores data measured by the analysis and measurement unit, data and instructions input from the input unit, calculation processing results performed by the data processing unit, computer programs used for various processing of the information processing device, a database, and the like.
  • the computer program may be installed via a computer-readable recording medium such as a CD-ROM or a DVD-ROM, or via the Internet.
  • the computer program is installed in the storage unit using a known setup program or the like.
  • the storage unit stores data on a formula, a correspondence table, or a graph calculated from the combination of the D-serine excretion rate and the amount of D-serine in the blood previously input from the input unit 12 and the pathological condition. It is also possible to memorize the classification of renal pathology according to the excretion rate.
  • the input unit 12 is an interface or the like, and includes an operation unit such as a keyboard or a mouse. As a result, the input unit can input the data measured by the analysis measurement unit 13, the instruction of the arithmetic processing performed by the data processing unit 14, and the like. Further, for example, when the analysis / measurement unit 13 is located outside, the input unit 12 may include an interface unit capable of inputting measured data or the like via a network or a storage medium, in addition to the operation unit.
  • the analysis and measurement unit 13 performs a step of measuring D-serine and / or D-asparagine in a blood sample and / or a urine sample. Therefore, the analysis / measurement unit 13 has a configuration that enables separation and measurement of the D-form and the L-form of amino acids. Amino acids may be analyzed one by one, but some or all types of amino acids can be analyzed together.
  • the analytical measurement unit 13 is not intended to be limited to the following, but is, for example, a chiral chromatography system including a sample introduction unit, an optical resolution column, and a detection unit, preferably a high performance liquid chromatography system. You may.
  • the analysis / measurement unit 13 may be configured separately from the renal pathological condition evaluation system, and the measured data or the like may be input via the input unit 12 using a network or a storage medium.
  • the data processing unit 14 calculates the excretion rate from the measured D-serine amount and / or D-asparagine amount, and from the relationship with the excretion amount and the combination of the D-serine amount and / or the D-asparagine amount in the blood. Renal pathology can be evaluated and judged by substituting it into the calculated formula or by reading it from the correspondence table or graph.
  • the formula, correspondence table or graph calculated from the relationship between the D-serine excretion rate and / or the D-asparagine excretion rate and the combination of the D-serine amount and / or the D-asparagine amount in the blood is still another correction value. For example, when age, weight, gender, height, etc.
  • the data processing unit can calculate the excretion rate and pathological condition information by calling such information and substituting it into an equation or reading it from a correspondence table or graph.
  • the data processing unit 14 can also determine the kidney disease or the renal pathological condition classification from the determined excretion rate, the amount of D-serine in the blood and / or the amount of D-asparagin, and the pathological condition information.
  • the data processing unit 14 executes various arithmetic processes on the data measured by the analysis measurement unit 13 and stored in the storage unit 11 according to the program stored in the storage unit.
  • the arithmetic processing is performed by the CPU included in the data processing unit.
  • This CPU includes a functional module that controls an analysis measurement unit 13, an input unit 12, a storage unit 11, and an output unit 15, and can perform various controls. Each of these parts may be composed of independent integrated circuits, microprocessors, firmware, and the like.
  • the output unit 15 is configured to output a combination of an excretion rate, a blood D-serine amount and / or a D-asparagine amount, which is the result of arithmetic processing performed by the data processing unit, and pathological condition information.
  • the output unit 15 may be a display device such as a liquid crystal display that directly displays the result of arithmetic processing, an output means such as a printer, or an interface unit for outputting to an external storage device or outputting via a network. There may be.
  • FIG. 12 is a flowchart showing an example of an operation for determining the excretion rate and pathological condition information by the program of the present invention.
  • the program of the present invention is a program that causes an information processing device including an input unit, an output unit, a data processing unit, and a storage unit to evaluate a renal pathological condition.
  • the program of the present invention is as follows: A storage unit that stores the threshold value for evaluating the renal condition input from the input unit, the formula for calculating the D-serine excretion rate in urine and / or the formula for calculating the D-asparagin excretion rate, and the variables required for the calculation.
  • the program of the present invention may be stored in a storage medium or may be provided via a telecommunication line such as the Internet or LAN.
  • the analysis measurement unit inputs the values from the blood sample and / or the urine sample. It may include a command for causing the information processing apparatus to perform measurement and storage in the storage unit.
  • Sample preparation from human plasma and urine was performed as follows: Twenty-fold volume of methanol was added to the plasma and mixed thoroughly. After centrifugation, 10 ⁇ L of the supernatant obtained from methanol homogenate was transferred to a brown tube and dried under reduced pressure. To the residue, 20 ⁇ L of 200 mM sodium borate buffer (pH 8.0) and 5 ⁇ L of fluorescent labeling reagent (40 mM 4-fluoro-7-nitro-2,1,3-benzoxaziazole (NBD-) in anhydrous MeCN). F)) was added and then heated at 60 ° C. for 2 minutes. The reaction was stopped by adding 75 ⁇ L of 0.1% TFA aqueous solution (v / v) and 2 ⁇ L of the reaction mixture was subjected to two-dimensional HPLC.
  • Amino acid optical isomers were quantified using the following two-dimensional HPLC system. NBD derivatives of amino acids were subjected to mobile phase (5-35% MeCN, 0-20% THF, and 0.05%) using a reverse phase column (KSAA RP, 1.0 mmid ⁇ 400 mm; Shiseido Co., Ltd.). It was separated and eluted with TFA). The column temperature was set to 45 ° C. and the mobile phase flow rate was set to 25 ⁇ L / min. The separated amino acid fractions were fractionated using a multi-loop valve and continuously optically resolved by a chiral column (KSAACSP-001S, 1.5 mmid ⁇ 250 mm; Shiseido).
  • NBD-amino acids were fluorescently detected at 530 nm using excitation light at 470 nm.
  • the retention time of NBD-amino acids was identified by a standard amino acid optical isomer and quantified by a calibration curve.
  • UD-Ser represents the amount of D-serine in the urine.
  • PD-Ser represents the amount of D-serine in the blood.
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • UD-Asn represents the amount of D-asparagine in urine.
  • PD-Asn represents the amount of D-asparagine in the blood.
  • U cre represents the amount of creatinine in the urine
  • P cre represents the amount of creatinine in the blood.
  • the logarithmic conversion value of the amount of D-serine in the blood of the kidney disease subject and the non-kidney disease subject and the logarithmic conversion value of the D-serine excretion rate were plotted on the two-axis coordinates.
  • the non-kidney disease group formed a cluster, and the logarithmic mean value of the amount of D-serine in blood was 0.40, and the logarithmic mean value of the excretion rate of D-serine was 4.12.
  • the reference range of the distance from the average can be 0.558 from the average value ⁇ 1.96 standard deviation.
  • the logarithmic conversion values of the blood D-asparagine amount and the D-asparagine excretion rate of the kidney disease subjects and the non-kidney disease subjects were also plotted on the two-axis coordinates (Fig. 6).
  • the non-kidney disease group formed a cluster, and the logarithmic average value of D-asparagin level in blood was -1.95, and the logarithmic average value of D-asparagine excretion rate was 4.16.
  • the reference range of the distance from the average can be 0.515 from the average value ⁇ 1.96 standard deviation.
  • IGN was within the reference range, but PA, MGRS, and DM were outside the reference range.
  • the D-serine excretion rate of IGN administered ARB for high blood pressure fluctuated from 64.56% to 25.73%, which was below the standard value (Fig. 2).
  • the D-asparagine excretion rate of IGN administered with ARB also fluctuated from 45.71% to 35.39%, which is below the standard value (Fig. 2).
  • Subject Information A 36-year-old woman admitted to Osaka University Hospital with systemic lupus erythematosus was given blood and urine over time after obtaining written informed consent under the ethical approval of the university. Serum creatinine level 0.57 mg / dL to 11.68 mg / dL 90 days before admission, urinary protein concentration rapidly deteriorated from 0.5 g / g Cre to 4.0 g / g Cre, blood pressure 122/65 mmHg, heartbeat The number is 64 bpm, the percutaneous arterial oxygen saturation is 100% (room air), and the body temperature is 36.5 ° C. Mouse ulcers, hair loss, and retinal bleeding were noted, but no abnormal lung sounds, heart sounds, or lower limb edema were observed.
  • the interstitial region showed moderate diffuse infiltration of inflammatory cells, but with little fibrillation. Tubular atrophy was localized and mild. Immunofluorescent staining was positive for granular overall glomerular capillary wall positives for IgG, IgA, IgM, C3, C4 and C1q.
  • Crescent-shaped glomerulonephritis which is potentially associated with ANCA, and lupus nephritis class V were diagnosed.
  • Prednisolone pulse therapy (1 g for 3 days) was followed by oral prednisolone (40 mg / day), intermittent pulse intravenous cyclophosphamide therapy (500 mg / m 2 ) and mofetil mycophenolate (MMF, 500 mg / day).
  • D-serine excretion rate The collected blood and urine samples were prepared and quantified in the same manner as in Example 1, and then the D-serine excretion rate was calculated.
  • the blood D-serine concentration of SLE patients immediately after admission is 17.06 nmol / mL, which is an order of magnitude higher than the value of the non-kidney group, and the pathological condition may differ even with this value alone.
  • the D-serine excretion rate and blood are used to assist in the pathological / differential diagnosis, evaluation, and treatment policy determination of whether the excretion of D-serine is in a state of counteracting the risk and damage of the disease or in a state of sedation.
  • the usefulness of monitoring a biaxial plot of medium D-serine levels was confirmed (Fig. 4). This information can also be used for research aimed at elucidating the pathological / pharmacological mechanism and drug discovery / treatment.
  • D-serine excretion rate The collected blood and urine samples were adjusted and quantified in the same manner as in Example 1, and then the D-serine excretion rate was calculated.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Data Mining & Analysis (AREA)
  • Databases & Information Systems (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Primary Health Care (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本発明は、対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収及び***の割合と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量との組み合わせを指標とする、腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラムを提供する。また、本発明は、腎病態をモニタリングする方法及び腎臓病の治療効果をモニタリングする方法も提供する。

Description

腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム
　本発明は、腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラムに関する。
　腎臓は、体内成分の***や吸収により生体環境の恒常性（ホメオスタシス）を維持する重要な臓器であり、老廃物の排出、血圧の調節、体液量・イオンの調整に加え血液や骨をつくる機能を担っている。腎機能を表す代表的な指標として糸球体濾過量（Ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ　Ｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　Ｒａｔｅ：ＧＦＲ）がある。糸球体濾過量は、糸球体で血液から１分間に濾過される液量を表し、イヌリンクリアランスの測定はその国際的な標準（ゴールドスタンダード）とされている。しかしながら、イヌリンクリアランスの測定は、２時間にわたるイヌリンの持続点滴、及び複数回にわたる採尿及び採血が必要であり、被験者及び実施者の負担が大きい。したがって、日常臨床においてイヌリンクリアランスの測定は生体腎移植の際のドナーのような限られた状況でのみ実施されるに留まっており、クレアチニンのような他のマーカーの測定で代替される。また、イヌリンクリアランスは急性腎障害のような短時間に腎病態が変化する場合は適用が困難である。多くのマーカーの値はゴールドスタンダードであるイヌリンクリアランス等の実際の糸球体濾過量との乖離が大きく、腎臓病の正確な診断の障害となっている。
　クレアチニンは、腎機能の指標として臨床現場で汎用的に測定される。クレアチニンは筋肉の収縮に必要なクレアチンの最終代謝物である。肝臓で生成されたクレアチンは筋細胞に取り込まれ、一部が代謝されてクレアチニンとなり、血液を介して腎臓へ運ばれ、糸球体で濾過された後、尿細管で再吸収されることなく尿中へ***される。糸球体濾過能力が低下した場合に排出が障害され、血液中に留まって数値が上昇することで尿毒素蓄積の有益な指標となるため、腎機能の評価に利用される。しかし、血液中のクレアチニン量は、ＧＦＲが５０％以上低下しないと明らかな異常値を示さず、鋭敏なマーカーとはいえない。
　シスタチンＣは全身の有核細胞から一定の割合で産生される分子量１３．３６ｋＤａのタンパク質で、すべて糸球体で濾過された後に尿細管での再吸収を経て腎臓で分解されることから、濾過量に応じて血液中から除去されると考えられ、血液中の量がＧＦＲの指標となる。しかし、腎機能が高度に低下した時には血液中のシスタチンＣ量の上昇は鈍化し、末期の腎臓病では正確な腎機能評価が困難である。
　以上のように、被験者・患者に大きな負担をかけることなく、非侵襲で採取できる検体や血液のみで早期から末期の広いレンジで個別患者の正確な腎病態を測定したいという臨床現場の要求に十分応えることのできるバイオマーカーは存在していなかった。
　従来、哺乳類の生体内には存在しないと考えられていたＤ－アミノ酸が、様々な組織に存在し、生理機能を担うことが明らかにされてきている。血液中のＤ－セリン、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－グルタミン酸、Ｄ－アスパラギン酸の量が、腎不全患者で変動し、クレアチニンと相関することから腎不全のマーカーになり得ることが示されている（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。さらに、Ｄ－セリン、Ｄ－スレオニン、Ｄ－アラニン、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アロスレオニン、Ｄ－グルタミン、Ｄ－プロリン及びＤ－フェニルアラニンからなるグループから選択されるアミノ酸が、腎臓病の病態指標値とすることについて開示されている（特許文献１）。また、尿中のＤ－セリン、Ｄ－ヒスチジン、Ｄ－アスパラギン、Ｄ－アルギニン、Ｄ－アロ－スレオニン、Ｄ－グルタミン酸、Ｄ－アラニン、Ｄ－プロリン、Ｄ－バリン、Ｄ－アロ－イソロイシン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｄ－リジンが腎障害により鋭敏に変動し、それらのアミノ酸に関するパラメータを腎臓病の病態指標値とすることについて開示されている（特許文献２）。なお、近年、腎臓病のマーカーとして、尿中ＬＦＡＢＰ、血液中ＮＧＡＬ、尿中ＫＩＭ－１等が開発されてきているが、それらは糸球体濾過能力と関連するものではない。
国際公開第２０１３／１４０７８５号 特許第５７４０５２３号公報
Ｆｕｋｕｓｈｉｍａ，Ｔ．ら、Ｂｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ．　１８：　１１３０（１９９５） Ｎａｇａｔａ．Ｙ　Ｖｉｖａ　Ｏｒｉｇｉｎｏ　Ｖｏｌ．１８（Ｎｏ．２）　（１９９０）第１５回学術講演会講演要旨集 Ｉｓｈｉｄａら、北里医学　２３：５１～６２　（１９９３） Ｙｏｎｇ　Ｈｕａｎｇら、Ｂｉｏｌ．　Ｐｈａｒｍ．　Ｂｕｌｌ．　２１：（２）１５６-１６２（１９９８）
　現在までに知られている腎臓病マーカーと比較して、より広い範囲で正確に、被験者の腎病態を評価・判定する方法が望まれている。
　本発明者らは、腎臓におけるＤ－セリン及びＤ－アスパラギンの濾過・再吸収・***の動態に着目し、その***率と腎病態の関係を解析したところ、腎病態の評価・判定に資する新たな病態情報が得られることを見出し、本発明に至った。
　そこで、本発明は下記に関する：
［１］　対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収及び***の割合と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量との組み合わせを指標とする、腎病態の評価を補助する方法。
［２］　前記割合が、前記対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）である項目１に記載の方法。
［３］　前記Ｄ－セリンの***率及び／又はＤ－アスパラギンの***率が、血液及び／又は尿由来の補正因子を用いて補正して算出される、項目２に記載の方法。
［４］　前記補正因子が、糸球体濾過量、尿量からなる群から選択される１又は複数の補正因子である、項目３に記載の方法。
［５］　前記補正因子が、イヌリンクリアランス、クレアチニンクリアランスからなる群から選択される１又は複数の補正因子である、項目３に記載の方法。
［６］　前記補正因子が、クレアチニン量、Ｌ－アミノ酸量からなる群から選択される１又は複数の補正因子である、項目３に記載の方法。
［７］　前記補正因子が、Ｌ－セリン及び／又はＬ－アスパラギンである、項目３に記載の方法。
［８］　前記Ｄ－セリンの***率が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000007
 　［式中、
　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
から算出され、及び／又は
　前記Ｄ－アスパラギンの***率が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000008
 　［式中、
　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
から算出される、項目２又は３に記載の方法。
［９］　前記対象における前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率並びに前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第１対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第１基準と
を比較し、前記第１対象座標と前記第１基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む、項目２～８のいずれか１項に記載の方法。
［１０］　前記腎病態を評価する工程が、前記第１対象座標が、前記第１基準に含まれない場合に、前記対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することである、項目９に記載の方法。
［１１］　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、項目１０に記載の方法。
［１２］　前記第１基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲である、項目９～１１のいずれか１項に記載の方法。
［１３］　前記係数Ｚが１．０～３．０の間の値である、項目１２に記載の方法。
［１４］　前記係数Ｚが、１．９６である、項目１２又は１３に記載の方法。
［１５］　前記非腎臓病座標のプロットの回帰分析により算出される回帰式と、対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法。
［１６］　対数変換した前記対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又は対数変換した前記対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第２対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における、対数変換した尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第２基準と
を比較し、前記第２対象座標と前記第２基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む、項目２～８のいずれか１項に記載の方法。
［１７］　前記腎病態を評価する工程が、前記第２対象座標が、前記第２基準に含まれない場合に、前記対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することである、項目１６に記載の方法。
［１８］　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、項目１７に記載の方法。
［１９］　前記第２基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲である、項目１６～１８のいずれか１項に記載の方法。
［２０］　前記係数Ｚが１．０～３．０の間の値である、項目１９に記載の方法。
［２１］　前記係数Ｚが１．９６である、項目１９又は２０に記載の方法。
［２２］　前記第２基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値からの距離が０．６以下である、項目１６に記載の方法。
［２３］　前記対数変換された値を基にした非腎臓病座標のプロットの回帰直線により算出される回帰式と、対数変換された値を基にした対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法。
［２４］　対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態をモニタリングする方法。
［２５］　慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病による腎病態をモニタリングする、項目２４に記載の方法。
［２６］　腎臓病を有する対象の、治療介入前後における尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態の治療効果をモニタリングする方法。
［２７］　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病、もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、項目２６に記載の方法。
［２８］　尿が採取できない対象の血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を指標とする、腎病態の評価を補助する方法。
［２９］　慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病による腎病態の評価を補助する、項目２８に記載の方法。
［３０］　対象の血液中Ｄ－セリン量が９ｎｍｏｌ／ｍＬ以上である場合に、全身性エリテマトーデスとする判定を補助する方法。
［３１］　記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含む、腎病態の評価システムであって、
　記憶部が、入力部から入力された閾値及び尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出式を記憶し、
　分析測定部が、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を定量し、
　データ処理部が、定量された血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を含む要素と、記憶部に記憶されたＤ－セリンの***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式とから生成される尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率を算出し、
　データ処理部が、記憶部に記載された閾値と、前記尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの比較に基づいて、腎病態を評価し、
　出力部が、対象の腎病態の評価結果を出力する、
ことを特徴とする、評価システム。
［３２］　前記Ｄ－セリン***率が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000009
 　［式中、
　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
であり、及び／又は、
　前記Ｄ－アスパラギン***率の算出式が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000010
 　［式中、
　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
である、項目３１に記載の評価システム。
［３３］　入力部と、出力部と、データ処理部と、記憶部とを含む情報処理装置に、腎病態を評価させるプログラムであって、以下：
　入力部から入力された腎病態を評価するための閾値と、尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出式と、算出に必要な変数とを記憶部に記憶させ、
　前記入力部から入力された、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出に必要な変数を記憶部に記憶させ、
　データ処理部に、前記記憶部に予め記憶された前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式と、前記記憶部に記憶された前記血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに前記変数を呼び出させて前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式に代入して、Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率を算出させ；
　データ処理部に、記憶部に記憶された前記閾値と、前記尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの比較に基づいて、腎病態を評価させ；
　出力部に対象の腎病態の評価結果を出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、プログラム。
［３４］　前記Ｄ－セリン***率の算出式が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000011
 　［式中、
　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
であり、及び／又は、
　前記Ｄ－アスパラギン***率の算出式が、以下の式：
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000012
 　［式中、
　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
である、項目３３に記載のプログラム。
　本発明のＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***率）の解析は現在までに知られている腎臓病マーカーと比較して、より広い範囲で正確に、被験者の腎病態を判定する方法を提供する。
図１は非腎臓病対象のＤ－セリン***率及びＤ－アスパラギン***率と、その対数値である。 図２は腎臓病対象のＤ－セリン***率及びＤ－アスパラギン***率と、その対数値である。 図３は、対象において測定された血液中及び尿中のＤ－セリン量及びクレアチニン量から算出されたＤ－セリン***率の対数のヒストグラムである。 図４は、非腎臓病被験者及び腎臓病患者において測定された血液中のＤ－セリン量及びＤ－セリン***率の対数のプロット図である。 図５は、対象において測定された血液中及び尿中のＤ－アスパラギン量及びクレアチニン量から算出されたＤ－アスパラギン***率の対数のヒストグラムである。 図６は、非腎臓病被験者及び腎臓病患者において測定された血液中のＤ－アスパラギン量及びＤ－アスパラギン***率の対数のプロット図である。 図７は、非腎臓病被験者及び腎臓病患者において測定された血液中のＤ－セリン量及びＤ－セリン***率の対数のプロット図である。 図８は、非腎臓病被験者及び腎臓病患者において測定された血液中のＤ－アスパラギン量及びＤ－アスパラギン***率の対数のプロット図である。 図９は、全身性エリテマトーデス患者の治療や投薬内容とその経過を示したチャートである。 図１０は、全身性エリテマトーデス患者の、治療介入前後に経時的に測定した血液中のＤ－セリン量及びＤ－セリン***率をプロットした図である。 図１１は、本発明の腎病態の評価システムの構成図を示す。 図１２は、本発明のプログラムによる腎病態を評価するための動作の例を示すフローチャートである。 図１３は、腎臓病を有すると診断された患者において測定された血液中のＤ－セリン量及びＤ－セリン***率のプロット図である。
　本発明は、Ｄ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）の解析による腎病態の判定方法に関する。本発明者らは、Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）が、それぞれ腎病態を反映しており、対象における腎病態の判定に用いることができることを見出した。従って、本発明は、Ｄ－セリンの腎臓における動態（再吸収、***）の解析による腎病態の判定方法であってもよく、Ｄ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）の解析による腎病態の判定方法であってもよく、Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）の解析による腎病態の判定方法であってもよい。Ｄ－セリン又はＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）のぞれぞれの解析結果を用いて、腎病態を判定することもできるが、Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの腎臓における動態（再吸収、***）の両者の解析結果を用いることにより、評価精度が高くなり、また、偽陰性及び偽陽性の判定も可能となる。
　本明細書において、「第１」「第２」・・・等の用語は、１つの要素をその他の要素と区別するために用いており、例えば、第１の要素を第２の要素と表現し、同様に第２の要素を第１の要素と表現してもよく、これによって本発明の範囲を逸脱するものではない。
　本明細書において、「対象の尿中へのＤ－セリンの***率」は、「対象Ｄ－セリン***率」と表記されることがあり、また、「非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率」は「非腎臓病対象Ｄ－セリン***率」と表記されることがあり、それぞれ相互に入れ替えても同一の意味を示す。また、本明細書において、「対象の尿中へのＤ－アスパラギンの***率」は、「対象Ｄ－アスパラギン***率」と表記されることがあり、また、「非腎臓病対象における尿中へのＤ－アスパラギンの***率」は「非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率」と表記されることがあり、それぞれ相互に入れ替えても同一の意味を示す。
　本明細書において、「対数変換した対象Ｄ－セリン***率」は「対象Ｄ－セリンＬＮ***率」として表記されることがあり、また、「非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率を対数変換した値」は「非腎臓病対象Ｄ－セリンＬＮ***率」と表記されることがあり、それぞれ相互に入れ替えても同一の意味を示す。また、本明細書において、「対数変換した対象Ｄ－アスパラギン***率」は「対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率」として表記されることがあり、また、「非腎臓病対象における尿中へのＤ－アスパラギンの***率を対数変換した値」は「非腎臓病対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率」と表記されることがあり、それぞれ相互に入れ替えても同一の意味を示す。
　本明細書において、単に「対象」という場合は、腎臓病の有無に拘わらず、全ての哺乳動物、好ましくはヒトを指す。本明細書において、「非腎臓病対象」とは、腎臓病を有さない、又は腎臓病と診断されたことがない対象をいい、例えば、腎臓病及び腎障害を誘発するその他の疾患に罹患していない対象が好ましい。
　一実施態様において、本発明は、対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収及び***の割合と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量との組み合わせを指標とする、腎病態の評価を補助する方法を提供する。Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの再吸収と***の割合は、血液中のＤ－セリン及びＤ－アスパラギンの量と、尿中のＤ－セリン及びＤ－アスパラギンの量とを定量することによって、それぞれ算出することができる。従って、一実施態様において、本発明における「対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収と***の割合」は、「対象の尿中へのＤ－セリンの***率」（「対象Ｄ－セリン***率」）及び／又は「対象の尿中へのＤ－アスパラギンの***率」（「対象Ｄ－アスパラギン***率」）であってもよい。
　本発明において、***率（ｅｘｃｒｅｔｉｏｎ）は対象成分について糸球体で濾過された量のうち、再吸収・分泌という尿細管の調節機能を経て、どの程度が尿中に***されるかを示す指標であり、割合や百分率の他、任意の単位で表される。また、補正因子による補正により水の再吸収や濃縮の影響を排除した値を算出することができ、部分***率（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｅｘｃｒｅｔｉｏｎ：ＦＥ）と表されることもある。尿は濃縮率が一定でない場合があるため、尿の濃縮率を補正する「補正因子」を用いて、対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収と***の割合を補正してもよい。例えば、本発明の一実施態様において、対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率は、血液及び／又は尿由来の補正因子で補正してもよい。***率は、最も単純には尿中の対象成分量を対象成分の糸球体濾過量で除した割合で表され、計算にイヌリンクリアランス等より得られる糸球体濾過量や実計測した尿量、血液中及び／又は尿中の対象成分量を用いてもよい。Ｄ－アミノ酸***率の算出には、尿量補正因子として尿中のＬ－アミノ酸量（好ましくは、Ｌ－セリン量及び／又はＬ－アスパラギン）を用いることができる。補正因子として尿中のクレアチニン量や血液中のクレアチニン量で算出されるクレアチニンクリアランスを用いることができ、例えばＤ－セリンの***率は下記の式で表される。これに１００を乗じてパーセント（％）で表してもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000013
 ［式中、ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
　また、例えばＤ－アスパラギンの***率は下記の式で表される。これに１００を乗じてパーセント（％）で表してもよい。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000014
 　［式中、ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
　腎臓病においては脱水によるものか、腎障害によるものかを判別するためにナトリウム部分***率が利用されている。その他、カリウム部分***率や尿素窒素部分***率も病態判定の指標として臨床で用いられている。一般的に、***率は対象成分の摂取量や生合成量が多ければ尿中の***量は増加し、摂取量が少なく生分解量が多ければ低下するというホメオスタシスの原則により理解されている。そのため、生体内成分の主要なホメオスタシスを司っている腎臓の障害や病態変化が、***率の変化に影響を与え得る。従来の腎臓病マーカーであるクレアチニンはすべて***され、シスタチンＣはすべて再吸収されることに対し、Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンは電解質と同様に尿細管で***と再吸収について厳密に調整されていると考えられ、より鋭敏で精度の高い病態マーカーになるのではないかと想到した。
　本発明において、解析に用いられるＤ－セリン及びＤ－アスパラギンは、タンパク質を構成するアミノ酸であるＬ－セリン及びＤ－アスパラギンの光学異性体である。Ｄ－セリン量及びＤ－アスパラギン量は、セリンラセマーゼやＤ－アミノ酸オキシダーゼ等の代謝酵素や輸送体によって、各組織や体液中で厳密に制御されている一方で、腎障害が生じた場合には血液中・尿中のＤ－セリン量及びＤ－アスパラギン量が変動する。
　本発明において「血液中・尿中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量」とは、特定の血液量・尿量中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量のことを指してもよく、濃度で表されてもよい。血液・尿中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量は、採取された血液・尿において、遠心分離、沈降分離、あるいは分析のための前処理が行われた試料における量として測定される。したがって、血液・尿中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量は、採取された全血、血清、血漿等の血液に由来する血液試料における量、全尿、固形成分・タンパク質等を除いた尿に由来する尿試料における量として測定され得る。一例として、ＨＰＬＣを用いた分析の場合、所定量の血液・尿に含まれるＤ－セリン量は、クロマトグラムで表され、ピークの高さ・面積・形状・大きさについて標準品との比較やキャリブレーションによる解析によって定量され得る。Ｄ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン濃度が既知のサンプルとの比較により、血液・尿中のＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン濃度を測定することが可能であり、血液・尿中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量として、血液・尿中のＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン濃度を用いることができる。また、酵素法では、標準品の検量線を用いた定量解析により、アミノ酸濃度を算出可能である。
　Ｄ及びＬ－アミノ酸量、例えばＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン並びにＬ－セリン及び／又はＬ－アスパラギン量は、任意の方法によって測定することができ、例えばキラルカラムクロマトグラフィーや、酵素法を用いた測定、さらにはアミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によって定量することができる。本発明における試料中のＤ－セリン及びＬ－セリン量の測定は、当業者に周知ないかなる方法を用いて実施しても構わない。例えば、クロマトグラフィー法や酵素法（Y. Nagata et al., Clinical Science, 73 (1987), 105. Analytical Biochemistry, 150 (1985), 238.,A. D'Aniello et al., Comparative Biochemistry and Physiology Part B, 66 (1980),319. Journal of Neurochemistry, 29 (1977), 1053., A. Berneman et al., Journal of Microbial & Biochemical Technology, 2 (2010), 139., W. G. Gutheil et al., Analytical Biochemistry, 287 (2000), 196., G. Molla et al., Methods in Molecular Biology, 794 (2012), 273., T. Ito et al., Analytical Biochemistry, 371 (2007), 167.等）、抗体法（T. Ohgusu et al., Analytical Biochemistry, 357 (2006), 15.,等 ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）（H. Hasegawa et al., Journal of Mass Spectrometry, 46 (2011), 502., M. C. Waldhier et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 394 (2009), 695., A. Hashimoto, T. Nishikawa et al., FEBS Letters, 296 (1992), 33., H. Bruckner and A. Schieber, Biomedical Chromatography, 15 (2001), 166., M. Junge et al., Chirality, 19 (2007), 228., M. C. Waldhier et al., Journal of　Chromatography A, 1218 (2011), 4537. 等）、キャピラリー電気泳動法（ＣＥ）（H. Miao et al., Analytical Chemistry, 77 (2005), 7190., D. L. Kirschner et al., Analytical Chemistry, 79 (2007), 736., F. Kitagawa, K. Otsuka, Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3078., G. Thorsen and J. Bergquist, Journal of Chromatography B, 745 (2000), 389. 等）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（N. Nimura and T. Kinoshita, Journal of Chromatography, 352 (1986), 169., A. Hashimoto et al., Journal of Chromatography, 582 (1992), 41., H. Bruckner et al., Journal of Chromatography A, 666 (1994), 259., N. Nimura et al., Analytical Biochemistry, 315(2003), 262., C. Muller et al., Journal of Chromatography A, 1324 (2014), 109.,S. Einarsson et al., Analytical Chemistry, 59 (1987), 1191., E. Okuma and H. Abe, Journal of Chromatography B, 660 (1994), 243., Y. Gogami et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3259., Y. Nagata et al., Journal of Chromatography, 575 (1992), 147., S. A. Fuchs et al., Clinical Chemistry, 54 (2008), 1443., D. Gordes et al., Amino Acids, 40 (2011), 553., D. Jin et al., Analytical Biochemistry, 269 (1999), 124., J. Z. Min et al., Journal of Chromatography B, 879 (2011), 3220., T. Sakamoto et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 517., W. F. Visser et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 7130., Y. Xing et al., Analytical and Bioanalytical Chemistry, 408 (2016), 141., K. Imai et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 106., T. Fukushima et al., Biomedical Chromatography, 9 (1995), 10., R. J. Reischl et al., Journal of Chromatography A, 1218 (2011), 8379., R. J. Reischl and W. Lindner, Journal of Chromatography A, 1269 (2012), 262., S. Karakawa et al., Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 115 (2015), 123., 等）がある。
　本発明における光学異性体の分離分析系は、複数の分離分析を組み合わせてもよい。より具体的に、光学異性体を有する成分を含む試料を、移動相としての第一の液体と共に、固定相としての第一のカラム充填剤に通じて、前記試料の前記成分を分離するステップ、前記試料の前記成分の各々をマルチループユニットにおいて個別に保持するステップ、前記マルチループユニットにおいて個別に保持された前記試料の前記成分の各々を、移動相としての第二の液体と共に、固定相としての光学活性中心を有する第二のカラム充填剤に流路を通じて供給し、前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を分割するステップ、及び前記試料の成分の各々に含まれる前記光学異性体を検出するステップを含むことを特徴とする光学異性体の分析方法を用いることにより、試料中のＤ－／Ｌ－アミノ酸量を測定することができる（特許第４２９１６２８号）。ＨＰＬＣ分析では、予めｏ－フタルアルデヒド（ＯＰＡ）や４－フルオロ－７－ニトロ－２，１，３－ベンゾキサジアゾール（ＮＢＤ－Ｆ）のような蛍光試薬でＤ－及びＬ－アミノ酸を誘導体化したり、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチルオキシカルボニル－Ｌ－システイン（Ｂｏｃ－Ｌ－Ｃｙｓ）等を用いてジアステレオマー化する場合がある（浜瀬健司及び財津潔、分析化学、５３巻、６７７－６９０（２００４））。代替的には、アミノ酸の光学異性体を識別するモノクローナル抗体、例えばＤ－セリン、Ｌ－セリン、Ｄ－アスパラギン、又はＬ－アスパラギン等に特異的に結合するモノクローナル抗体を用いる免疫学的手法によってＤ－アミノ酸を測定することができる。また、Ｄ体及びＬ体の合計量を指標とする場合、Ｄ体及びＬ体を分離して分析する必要はなく、Ｄ体及びＬ体を区別せずにアミノ酸を分析することもできる。その場合も酵素法、抗体法、ＧＣ、ＣＥ、ＨＰＬＣで分離及び定量することができる。
　血液中のＤ－セリン量及びＤ－アスパラギン量は、従来マーカーであるクレアチニンと比較して糸球体濾過量に強く相関する。これは血液のクレアチニン量は、筋肉量の影響を強く受けるため、スポーツ選手、先端巨大症の患者や肉の大量摂取時には高値を示し、神経筋疾患（筋ジストロフィー等）や羸痩、長期臥床、フレイル、サルコペニア、ロコモーティブシンドローム、anputationのある患者やタンパク質摂取制限時には低値を示すため、正確な腎機能を反映できないことに由来する。有病所見のない健常人において、血液中のＤ－セリン量はで総セリン量に対して約１～２％という非常に小さな範囲に保たれていることとは対照的に、尿中では３０～６０％に及ぶ量が存在する。興味深いことに、Ｌ－セリンの約９９％が尿細管で再吸収されることとは異なり、Ｄ－セリンは約５０～８０％も***されている。また、有病所見のない健常人において、血液中のＤ－アスパラギン量はで総アスパラギン量に対して約０．１～０．６％という非常に小さな範囲に保たれていることとは対照的に、尿中では２０～５０％に及ぶ量が存在する。興味深いことに、Ｌ－アスパラギンの約９９％が尿細管で再吸収されることとは異なり、Ｄ－アスパラギンは約５０～８０％も***されている。
　本発明において提唱するＤ－セリン及びＤ－アスパラギンの***率は、血液中のＤ－セリン量及びＤ－アスパラギン量と異なり糸球体濾過量とは相関しないことがキラルアミノ酸メタボロミクスや関連パラメータの多変量解析（ＯＰＬＳ）により示されている。セリン及びＤ－アスパラギンの光学異性体はそれぞれ腎臓の尿細管での再吸収が厳密に制御されていることが示唆されたため、Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの生理学的な意義を検討する目的で、非腎臓病被験者におけるＤ－セリン及びＤ－アスパラギンの***率を解析するために、調査母集団として健常ボランティアを１５名採用した。試験プロトコルは、国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。非腎臓病被験者は平均年齢４４、男性割合８０％、平均身長１．７０ｍ、平均体重６８．９ｋｇ、平均ＢＳＡ１．８０ｍ２、平均ＢＭＩ２２．６ｋｇ／ｍ２、平均血清クレアチニン０．７５ｍｇ／ｄＬ の集団であった。
　被験者の血液・尿中Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの定量分析値から下記の式を用いるとＤ－セリンの平均***率６２．７６％、その平均対数値は４．１２と算出され、Ｄ－アスパラギンの平均***率６４．１２％、その平均対数値は４．１６と算出された（図１）。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000015
 　　［式中、ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］

Figure JPOXMLDOC01-appb-M000016
 　［式中、ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
　Ｄ－セリンに関し、得られた対数値データを６分位でヒストグラムを作成したところ正規分布様の形状が観察されたため（図３）、このデータに対してＳｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ　Ｎｏｒｍａｌｉｔｙ　Ｔｅｓｔを実施し、Ｐ＝０．３９５の値を得たため、帰無仮説は棄却されず、正規分布である可能性が支持された。従って、これら非腎臓病被験者の基準値は平均値±１．９６標準偏差から４２．４６～８９．６６％、その対数値は３．７５～４．５０と算出され、この範囲から外れる対象は腎臓病、腎障害の病態やそのリスクもしくは予後を予測することを補助できる。
　また、Ｄ－アスパラギンに関し、得られた対数値データを６分位でヒストグラムを作成したところ正規分布様の形状が観察されたため（図５）、このデータに対してＳｈａｐｉｒｏ－Ｗｉｌｋ　Ｎｏｒｍａｌｉｔｙ　Ｔｅｓｔを実施し、Ｐ＝０.２４３の値を得たため、帰無仮説は棄却されず、正規分布である可能性が支持された。従って、これら非腎臓病被験者の基準値は平均値±１．９６標準偏差から５１．６５～７８．７４％、その対数値は３．９５～４．３７と算出され、この範囲から外れる対象は腎臓病、腎臓病の病態やそのリスクもしくは予後を予測することを補助できる。
　血液中Ｄ－セリン量及びＤ－アスパラギン量は糸球体濾過量と強く相関するため、その解析により日本腎臓学会ガイドラインにて定義された慢性腎臓病（ＣＫＤ）の重症度分類（Ｇ１～５）に適用できることが示されているが、それに尿中Ｄ－セリン量を加えて解析するＤ－セリン***率や、尿中Ｄ－アスパラギン量を加えて解析するＤ－アスパラギン***率は、糸球体濾過量に相関しないという全く異なる機構から腎病態の評価を補助することができるため、従来マーカーでは困難であった鑑別・病態・予後診断における臨床上の有用性が高い。
　一実施態様において、本発明は、
　前記対象における前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率並びに前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第１対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第１基準と
を比較し、前記第１対象座標と前記第１基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　従って、例えば、上記発明の第１の実施態様において、
　前記対象における前記対象Ｄ－セリン***率並びに前記血液中Ｄ－セリン量をプロットした第１対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第１基準と
を比較し、前記第１対象座標と前記第１基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　また、例えば、上記発明の第２の実施態様において、
　前記対象における前記対象Ｄ－アスパラギン***率並びに前記血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした第１対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第１基準と
を比較し、前記第１対象座標と前記第１基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　また、腎病態を評価するために、上記の第１の実施態様の方法と第２の実施態様の方法を併用してもよく、この場合、腎病態の評価の精度が向上するのみならず、偽陽性及び偽陰性も判定することもできる。
　本明細書において、「第１基準」とは、複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした座標（「非腎臓病座標」という。）から算出されるものであり、対象の腎病態を評価するために用いられる基準をいう。一実施態様において、本発明で用いられ得る第１基準は、複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量をプロットした非腎臓病座標から算出されるものであってもよい。また、一実施態様において、本発明で用いられ得る第１基準は、複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出されるものであってもよい。第１基準を算出するために採用する「非腎臓病対象」の数は、統計学的に有意な基準を算出するのに十分な数であることが好ましく、例えば、３、５、１０、１５、２０、３０、５０、１００又はそれ以上の数を本発明において採用することができる。
　本明細書において、「第１対象座標」とは、腎病態を評価する対象における、対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした座標をいう。例えば、一実施態様において、本発明で用いられ得る第１対象座標は、腎病態を評価する対象における、対象Ｄ－セリン***率並びに血液中Ｄ－セリン量をプロットした座標であってもよい。また、例えば、一実施態様において、本発明で用いられ得る第１対象座標は、腎病態を評価する対象における、対象Ｄ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした座標であってもよい。本発明では、第１対象座標と第１基準とを比較することによって、対象における腎病態を評価することができる。
　一実施態様において、本発明における第１基準は、非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲であってもよい。本明細書において、「係数Ｚ」は、統計学で用いられる信頼区間を算出するのに用いられる係数であり、例えば、１．０～３．０の間の値が好ましく、１．９６がより好ましい。また、一実施態様において、第１基準は、０．４～０．９の範囲であることが好ましい。
　一実施態様において、本発明に含まれる腎病態を評価する工程は、第１対象座標が、第１基準に含まれない場合に、対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することであってもよい。
　一実施態様において、本発明で評価され得る腎臓病は、例えば、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病であってもよい。
　他の実施態様において、本発明は、非腎臓病座標のプロットの回帰分析により算出される回帰式と、対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法を提供するものであってもよい。解析対象のプロットと回帰式との座標上の位置や距離により、非腎臓病患者に対するＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン動態の変動評価が可能となる。例えば、***率軸がプラス側に変動していれば***が亢進し、マイナス側に変動していれば再吸収が亢進している腎病態であり、距離が離れているほどその程度が大きいと判定することができる。
　他の実施態様において、本発明は、以下：
　対数変換した対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又は対数変換した対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第２対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における、対数変換した尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第２基準と
を比較し、前記第２対象座標と前記第２基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　従って、例えば、上記発明の第１の一実施態様において、
　対数変換した対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）並びに対数変換した前記血液中Ｄ－セリン量をプロットした第２対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における、対数変換した尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第２基準と
を比較し、前記第２対象座標と前記第２基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　また、例えば、上記発明の第２の一実施態様において、本発明は、
　対数変換した対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした第２対象座標と、
　複数の非腎臓病対象における、対数変換した尿中へのＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第２基準と
を比較し、前記第２対象座標と前記第２基準との関係から、腎病態を評価する工程、
を含む方法を提供するものであってもよい。
　また、腎病態を評価するために、上記の第１の実施態様の方法と第２の実施態様の方法を併用してもよく、この場合、腎病態の評価の精度が向上するのみならず、偽陽性及び偽陰性も判定することもできる。
　本明細書において、「対数変換した値」とは、対象となる値を、対数に変換した値をいうが、例えば、対象となる値を自然対数に変換した値であってもよく、常用対数等、任意の底を用いて対象となる値を変換した値であってもよい。
　本明細書において、「第２基準」とは、対数変換した対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又は対数変換した対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした座標（「非腎臓病座標」という。）から算出されるものであり、対象の腎病態を評価するために用いられる基準をいう。一実施態様において、本発明で用いられ得る第２基準は、対数変換した対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量をプロットした非腎臓病座標から算出されるものであってもよい。また、一実施態様において、本発明で用いられ得る第２基準は、対数変換した対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出されるものであってもよい。第２基準を算出するために採用する「非腎臓病対象」の数は、統計学的に有意な基準を算出するのに十分な数であることが好ましく、例えば、３、５、１０、１５、２０、３０、５０、１００又はそれ以上の数を本発明において採用することができる。
　一実施態様において、本発明で用いられ得る第２基準は、非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲であってもよい。この場合、係数Ｚは、１．０～３．０の間の値が好ましく、１．９６がより好ましい。また、一実施態様において、第２基準は、３．５～５．０の範囲であるの範囲であることが好ましい。
　一実施態様において、本発明で用いられ得る第２基準は、非腎臓病座標のプロットの平均値からの距離が０．６以下であり得る。
　一実施態様において、本発明の腎病態を評価する工程は、第２対象座標が、第２基準に含まれない場合に、対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することでであってもよい。
　他の実施態様において、本発明は、対数変換された値を基にした非腎臓病座標のプロットの回帰直線により算出される回帰式と、対数変換された値を基にした対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法であってもよい。解析対象のプロットと回帰式との座標上の位置や距離により、非腎臓病患者に対するＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギン動態の変動評価が可能となる。例えば、***率軸がプラス側に変動していれば***が亢進し、マイナス側に変動していれば再吸収が亢進している腎病態であり、距離が離れているほどその程度が大きいと判定することができる。
　本発明の方法により病態が判定されると、それに基づき治療方針を決定することができる。各病態に応じて治療方法は適宜選択することができ、例えば、上記の第１対象座標又は第２対象座標が、非腎臓対象の基準範囲（例えば、上記の第１基準又は第２基準の範囲）に入るように経時的にモニタリングしながらコントロールしても良い。治療介入は、生活習慣改善、食事指導、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理、及び脂質管理等が、独立に又は組み合わせて指導される。生活習慣改善としては、禁煙及びＢＭＩ値の２５未満への減量等が推奨される。食事指導としては、減塩及びタンパク質制限が行われる。この中でも特に、血圧管理、貧血管理、電解質管理、尿毒素管理、血糖値管理、免疫管理、脂質管理については、投薬による治療が行われ得る。血圧管理としては、１３０／８０ｍｍＨｇ以下となるように、管理され、場合により高血圧治療薬が投与され得る。高血圧治療薬としては、利尿薬（サイアザイド系利尿薬、例えばトリクロルメチアジド、ベンチルヒドロクロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、サイアザイド系類似利尿薬、例えばメチクラン、インダバミド、トリバミド、メフルシド、ループ利尿薬、例えばフロセミド、カリウム保持性利尿薬・アルドステロン拮抗薬、例えばトリアムテレン、スピロノラクトン、エプレレノン等）、カルシウム拮抗薬（ジヒドロピリジン系、例えばニフェジピン、アムロジピン、エホニジピン、シルニジピン、ニカルジピン、ニソルジピン、ニトレンジピン、ニルバジピン、バルニジピン、フェロジピン、ベニジピン、マニジピン、アゼルニジピン、アラニジピン、ベンゾチアゼピン系、ジルチアゼム等）、アンジオテンシン変換酵素阻害薬（カプトプリル、エナラプリル、アセラプリル、デラプリル、シラザプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、イミダプリル、テモカプリル、キナプリル、トランドラプリル、ベリンドプリルエルブミン等）、アンジオテンシン受容体拮抗薬（アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、例えばロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、オルメサルタン、イルベサルタン、アジルサルタン等）、交感神経遮断薬（β遮断薬、例えばアテノロール、ビソプロロール、ベタキソロール、メトプロロール、アセプトロール、セリプロロール、プロプラノロール、ナドロール、カルテオロール、ピンドロール、ニプラジロール、アモスラロール、アロチノロール、カルベジロール、ラベタロール、ベバントロール、ウラピジル、テラゾシン、ブラゾシン、ドキサゾシン、ブナゾシン等）等が用いられ得る。貧血治療薬としてはエリスロポエチン製剤、鉄剤、ＨＩＦ－１阻害剤等が用いられる。電解質調整薬としてカルシウム受容体作動薬（シナカルセト、エテルカルセチド等）、リン吸着剤が用いられる。尿毒素吸着剤として活性炭等が用いられる。血糖値は、Ｈｂａ１ｃ６．９％未満になるように管理され、場合により血糖降下薬が投与される。血糖降下薬として、ＳＧＬＴ２阻害薬（イプラグリフロジン、ダパグリフロジン、ルセオグリフロジン、トホグリフロジン、カナグリフロジン、エンパグリフロジン等）、ＤＰＰ４阻害薬（シタグリプチンリン酸、ビルダグリプチン、サキサグリプチン、アログリプチン、リナグリプチン、テネリグリプチン、トレラグリプチン、アナグリプチン、オマリグリプチン等）、スルホニル尿素薬（トルブタミド、アセトヘキサミド、クロルプロパミド、グリクロピラミド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリメピリド等）、チアゾリジン薬（ピオグリタゾン等）、ビグアナイド薬（メトホルミン、ブホルミン等）、α―グルコシダーゼ阻害薬（アカルボース、ボグリボース、ミグリトール等）、グリニド薬（ナテグリニド、ミチグリニド、レパグリニド等）インスリン製剤、ＮＲＦ２活性化剤（バルドキソロンメチル等）等が用いられる。免疫管理としては、免疫抑制剤（ステロイド類、タクロリムス、抗ＣＤ２０抗体、シクロヘキサミド、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）等）が用いられる。脂質管理では、ＬＤＬ－Ｃ１２０ｍｇ／ｄＬ未満となるよう管理され、場合により脂質異常症治療薬、例えばスタチン系薬剤（ロスバスタチン、ピタバスタチン、アトルバスタチン、セリバスタチン、フルバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、ロバスタチン、メバスタチン等）、フィブラート系薬剤（クロフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラート、クリノフィブラート等）、ニコチン酸誘導体（ニコチン酸トコレロール、ニコモール、ニセリトロール等）、コレステロールトランスポーター阻害剤（エゼチミブ等）、ＰＣＳＫ９阻害剤（エボロクマブ等）ＥＰＡ製剤等が用いられる。いずれの薬剤も剤形は単剤でも合剤でもよい。腎機能の低下の度合いによっては、腹膜透析、血液透析、持続的血液濾過透析、血液アフェレーシス（血漿交換、血漿吸着等）や腎移植のような腎代替療法が施される。
　従って、一実施態様において、本発明は、対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態をモニタリングする方法であってもよい。例えば、一実施態様において、本発明は、対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）と、血液中Ｄ－セリン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率と前記血液中Ｄ－セリン量の変動を指標とする、腎病態をモニタリングする方法であってもよく、例えば、一実施態様において、本発明は、対象の尿中へのＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と、血液中Ｄ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態をモニタリングする方法であってもよく、両者を組み合わせて腎病態をモニタリングする方法であってもよい。
　また、他の実施態様において、本発明は、腎臓病を有する対象の、治療介入前後における尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態の治療効果をモニタリングする方法であってもよい。例えば、一実施態様において、本発明は、腎臓病を有する対象の、治療介入前後における尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）と血液中Ｄ－セリン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率と前記血液中Ｄ－セリン量の変動を指標とする、腎病態の治療効果をモニタリングする方法であってもよく、例えば、一実施態様において、本発明は、腎臓病を有する対象の、治療介入前後における尿中へのＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と血液中Ｄ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態の治療効果をモニタリングする方法であってもよく、両者を組み合わせて腎病態の治療効果をモニタリングする方法であってもよい。
　本発明の方法を用いることにより、対象における腎臓病、例えば、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病、もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病を評価することができる。
　他の実施態様において、本発明は、尿が採取できない対象の血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を指標とする、腎病態の評価を補助する方法を提供する。本明細書において、「尿が採取できない対象」とは、例えば、腎機能が極端に低下し、腎代替療法（透析、血漿交換、腎移植等）が適応となる慢性腎不全や急性腎不全である対象をいう。
　他の実施態様において、本発明は、対象の血液中Ｄ－セリン量が９ｎｍｏｌ／ｍＬ以上である場合に、全身性エリテマトーデスとする判定を補助する方法を提供する。
　本発明の別の態様では、上記の腎病態の評価を補助する方法を実行するシステム及びプログラムに関していてもよい。図１１は、本発明の腎病態の評価システムの構成図である。図１１に示す試料分析システム１０は、本発明の腎病態の評価を補助する方法を実施することができるように構成される。このような試料分析システム１０は、記憶部１１と、入力部１２、分析測定部１３と、データ処理部１４と、出力部１５とを含んでおり、血液試料及び／又は尿試料を分析し、算出された***率と病態情報を出力することができる。
　より具体的に、本発明の試料分析システム１０において、記憶部１１は、入力部１２から入力された血液試料中及び尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とから算出された***率及び血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせと、基準値・病態情報対応表又はグラフを記憶し、分析測定部１３は、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンを分離定量し、データ処理部１４は、Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量から算出された***率及び血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を、基準値・病態情報から得られた式に代入するか、又は対応表やグラフから読み出すことで、病態を判定し、出力部１５が病態情報を出力することができる。
　さらに好ましい態様では、本発明の腎病態の評価システムは、記憶部１１が、入力部１２から入力された基準値を記憶する工程、及びデータ処理部１４が、分離定量されたＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量から算出された***率及び血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせと、基準値とを比較する工程をさらに含んでもよい。この場合、Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせが、基準範囲から外れている場合に、出力部１５は、腎臓病の疑いを出力する。
　記憶部１１は、ＲＡＭ、ＲＯＭ、フラッシュメモリ等のメモリ装置、ハードディスクドライブ等の固定ディスク装置、又はフレキシブルディスク、光ディスク等の可搬用の記憶装置等を有する。記憶部は、分析測定部で測定したデータ、入力部から入力されたデータ及び指示、データ処理部で行った演算処理結果等の他、情報処理装置の各種処理に用いられるコンピュータプログラム、データベース等を記憶する。コンピュータプログラムは、例えばＣＤ－ＲＯＭ、ＤＶＤ－ＲＯＭ等のコンピュータ読み取り可能な記録媒体や、インターネットを介してインストールされてもよい。コンピュータプログラムは、公知のセットアッププログラム等を用いて記憶部にインストールされる。記憶部は、予め入力部１２から入力されたＤ－セリン***率及び血液中Ｄ－セリン量の組み合わせと、病態との関連から算出された式、対応表又はグラフについてのデータを記憶する。また、***率に応じた腎病態分類を記憶することもできる。
　入力部１２は、インターフェイス等であり、キーボード、マウス等の操作部も含む。これにより、入力部は、分析測定部１３で測定したデータ、データ処理部１４で行う演算処理の指示等を入力することができる。また、入力部１２は、例えば分析測定部１３が外部にある場合は、操作部とは別に、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を介して入力することができるインターフェイス部を含んでもよい。
　分析測定部１３は、血液試料及び／又は尿試料におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの測定工程を行う。したがって、分析測定部１３は、アミノ酸のＤ体及びＬ体の分離及び測定を可能にする構成を有する。アミノ酸は、１つずつ分析されてもよいが、一部又は全ての種類のアミノ酸についてまとめて分析することができる。分析測定部１３は、以下のものに限定されることを意図するものではないが、例えば試料導入部、光学分割カラム、検出部を備えたキラルクロマトグラフィーシステム、好ましくは高速液体クロマトグラフィーシステムであってもよい。特定のアミノ酸量のみを検出する観点では、酵素法や免疫学的手法による定量を実施してもよい。分析測定部１３は、腎病態の評価システムとは別に構成されていてもよく、測定したデータ等をネットワークや記憶媒体を用いて入力部１２を介して入力してもよい。
　データ処理部１４は、測定されたＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量から、***率を算出し、***量及び血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの関連から算出された式に代入することで、又は対応表又はグラフから読み出すことで腎病態を評価・判定することができる。Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの関連から算出された式、対応表又はグラフが、さらに他の補正値、例えば年齢、体重、性別、身長等を必要とする場合、そのような情報は、予め入力部より入力されて、記憶部に記憶される。データ処理部は、***率、病態情報を算出する際に、かかる情報を呼び出し、式に代入するか、又は対応表又はグラフから読み出すことで、***率、病態情報を算出することができる。データ処理部１４は、決定した***率、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量、病態情報から、腎臓病や腎病態分類を決定することもできる。データ処理部１４は、記憶部に記憶しているプログラムに従って、分析測定部１３で測定され記憶部１１に記憶されたデータに対して、各種の演算処理を実行する。演算処理は、データ処理部に含まれるＣＰＵにより行われる。このＣＰＵは、分析測定部１３、入力部１２、記憶部１１、及び出力部１５を制御する機能モジュールを含み、各種の制御を行うことができる。これらの各部は、それぞれ独立した集積回路、マイクロプロセッサ、ファームウェア等で構成されてもよい。
　出力部１５は、データ処理部で演算処理を行った結果である***率及び血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせと、病態情報を出力するように構成さる。出力部１５は、演算処理の結果を直接表示する液晶ディスプレイ等の表示装置、プリンタ等の出力手段であってもよいし、外部記憶装置への出力又はネットワークを介して出力するためのインターフェイス部であってもよい。糸球体濾過能力と併せて、又は独立して、Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量、並びに／あるいは腎病態分類を出力することもできる。
　図１２は、本発明のプログラムによる***率、病態情報を決定するための動作の例を示すフローチャートである。具体的に、本発明のプログラムは、入力部、出力部、データ処理部、記憶部とを含む情報処理装置に腎病態を評価させるプログラムである。本発明のプログラムは、以下の：
　入力部から入力された腎病態を評価するための閾値と、尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出式と、算出に必要な変数とを記憶部に記憶させ、
　前記入力部から入力された、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出に必要な変数を記憶部に記憶させ、
　データ処理部に、前記記憶部に予め記憶された前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式と、前記記憶部に記憶された前記血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに前記変数を呼び出させて前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式に代入して、Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率を算出させ；
　データ処理部に、記憶部に記憶された前記閾値と、前記尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの比較に基づいて、腎病態を評価させ；
　出力部に対象の腎病態の評価結果を出力させる
ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む。本発明のプログラムは、記憶媒体に格納されてもよいし、インターネット又はＬＡＮ等の電気通信回線を介して提供されてもよい。
　情報処理装置が、分析測定部を備える場合、入力部からＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の値を入力させる代わりに、分析測定部が、血液試料及び／又は尿試料から当該値を測定し記憶部に記憶させることを情報処理装置に実行させるための指令を含んでもよい。
　本明細書において言及される全ての文献はその全体が引用により本明細書に取り込まれる。
　以下に説明する本発明の実施例は例示のみを目的とし、本発明の技術的範囲を限定するものではない。本発明の技術的範囲は特許請求の範囲の記載によってのみ限定される。本発明の趣旨を逸脱しないことを条件として、本発明の変更、例えば、本発明の構成要件の追加、削除及び置換を行うことができる。
調査母集団
　診断及び／又は治療目的のために大阪大学医学部付属病院腎臓内科（Ｄｅｐａｒｔｍｅ
ｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｐｈｒｏｌｏｇｙ，Ｏｓａｋａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｈｏｓｐｉｔ
ａｌ））に、２０１６年～２０１７年の間に入院した腎臓病患者からなるコホートから、原発性アルドステロン症（ＰＡ）、骨髄腫腎（ＩＧＡＮ）、糖尿病性腎症（ＤＭ）、ＩｇＡ腎症（ＩＧＡＮ）の患者について、後ろ向き研究に用いた。ＩｇＡ腎症の被験者は血圧が基準範囲を超えていたため、降圧剤としてアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（ＡＲＢ）を投与した。それとは別に、前述した国立医薬基盤・健康・栄養研究所では１５名の健常ボランティアを非腎臓病対象として採用した。試験プロトコルは、各施設における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。
血液中及び尿中Ｄ－セリン及びＤ－アスパラギンの測定
サンプル調製
　ヒト血漿及び尿からのサンプル調製を、下記のとおり行った：
　２０倍体積のメタノールを血漿に添加し、完全に混合した。遠心後、メタノールホモジネートから得られた上清の１０μＬを褐色チューブに移し、減圧乾燥させた。残渣に、２０μＬの２００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ８．０）及び５μＬの蛍光標識試薬（無水ＭｅＣＮ中に４０ｍＭの４－フルオロ―７－ニトロ－２，１，３－ベンゾオキサジアゾール（ＮＢＤ－Ｆ））を添加し、次いで６０℃で２分加熱した。７５μＬの０．１％ＴＦＡ水溶液（ｖ／ｖ）を加えて反応を止め、そして２μＬの反応混合液を２次元ＨＰＬＣに供した。
２次元ＨＰＬＣによるアミノ酸光学異性体の定量
　アミノ酸光学異性体を、以下の２次元ＨＰＬＣシステムを用いて定量した。アミノ酸の
ＮＢＤ誘導体を、逆相カラム（ＫＳＡＡ　ＲＰ、１．０ｍｍｉ．ｄ．　×４００ｍｍ；株
式会社資生堂）を用い移動相（５～３５％ＭｅＣＮ、０～２０％ＴＨＦ、及び０．０５％
ＴＦＡ）で分離、溶出した。カラム温度は４５℃、移動相の流速は２５μＬ／分に設定した。分離したアミノ酸の画分を、マルチループバルブを用いて分取し、連続的にキラルカラム（ＫＳＡＡＣＳＰ－００１Ｓ，１．５ｍｍｉ．ｄ．×２５０ｍｍ；資生堂）で光学分割した。移動相として、アミノ酸の保持に応じて、クエン酸（０～１０ｍＭ）又はギ酸（０～４％）含むＭｅＯＨ－　ＭｅＣＮの混合用液を用いた。ＮＢＤ－アミノ酸は４７０ｎｍの励起光を用い、５３０ｎｍで蛍光検出した。ＮＢＤ－アミノ酸の保持時間は、アミノ
酸光学異性体の標準品により同定し、検量線により定量した。
Ｄ－セリン***率及びＤ－アスパラギン***率の計算
　血液中・尿中Ｄ－セリン量、血液中・尿中Ｄ－アスパラギン量及びクレアチニン量を下記式に代入して算出した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-M000017
 　［式中、
　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］

Figure JPOXMLDOC01-appb-M000018
 　［式中、
　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
病態の評価・判定
　腎臓病被験者と非腎臓病被験者の血液中Ｄ－セリン量の対数変換値とＤ－セリン***率の対数変換値を２軸の座標にプロットした。非腎臓病群は一塊のクラスターを形成しており、血液中Ｄ－セリン量の対数平均値は０．４０、Ｄ－セリン***率の対数平均値は４．１２であった。このとき平均からの距離の基準範囲は、平均値±１．９６標準偏差から０．５５８とすることができる。腎臓病患者群においてＩＧＡＮは基準範囲内であったが、ＰＡ、ＭＧＲＳ、ＤＭは基準範囲を外れていた。ＤＭは血液中Ｄ－セリン量が基準範囲と良く分離され、鑑別に有用であることが示された（図４）。また、この２軸プロットにおいて非腎臓病群は相関係数Ｒ２＝０．６０１と高い直線性を有しており、回帰分析が病態解析に利用できることが示された（図７）。今後、病態のバリエーションや被験者数を増加させ解析精度を向上させる必要はあるが、血液中Ｄ－セリン量とＤ－セリンの腎臓における再吸収及び***の割合の組合せを指標とすることについて、病理機構解明や創薬・治療を目的とする研究、さらには臨床における病態・鑑別診断の補助において有用性が確認された。対数変換した値も等価の結果を得ることができた。
　腎臓病被験者と非腎臓病被験者の血液中Ｄ－アスパラギン量の対数変換値とＤ－アスパラギン***率の対数変換値についても、２軸の座標にプロットした（図６）。非腎臓病群は一塊のクラスターを形成しており、血液中Ｄ－アスパラギン量の対数平均値は－１．９５、Ｄ－アスパラギン***率の対数平均値は４．１６であった。このとき平均からの距離の基準範囲は、平均値±１．９６標準偏差から０．５１５とすることができる。腎臓病患者群においてＩＧＡＮは基準範囲内であったが、ＰＡ、ＭＧＲＳ、ＤＭは基準範囲を外れていた。ＤＭは血液中Ｄ－アスパラギン量が基準範囲と良く分離され、鑑別に有用であることが示された（図６）。また、この２軸プロットにおいて非腎臓病群は相関係数Ｒ２＝０．０００２と高い直線性を有しており、回帰分析が病態解析に利用できることが示された（図８）。今後、病態のバリエーションや被験者数を増加させ解析精度を向上させる必要はあるが、血液中Ｄ－アスパラギン量とＤ－アスパラギンの腎臓における再吸収及び***の割合の組合せを指標とすることについて、病理機構解明や創薬・治療を目的とする研究、さらには臨床における病態・鑑別診断の補助において有用性が確認された。対数変換した値も等価の結果を得ることができた。
治療効果のモニタリング
　高血圧のためにＡＲＢを投与されたＩＧＡＮのＤ－セリン***率は、６４．５６％から２５．７３％へと基準値を下回る値へ変動した（図２）。また、ＡＲＢを投与されたＩＧＡＮのＤ－アスパラギン***率も、４５．７１％から３５．３９％へと基準値を下回る値へ変動した（図２）。薬剤投与等の治療介入において、血圧降下のような病態変化が***率に影響を与えていることが示唆され、薬理機構解明や創薬を目的とする研究、さらには治療介入時の効果のモニタリングにおいて、治療の継続・中断等の方針決定の補助におけるＤ－セリン***率及びＤ－アスパラギン***率の有用性が示された。
被験者情報
　大阪大学病院に全身性エリテマトーデスで入院した３６歳の女性で、同大学の倫理承認下で書面によるインフォームドコンセントを取得後に経時的に血液・尿を採取した。入院９０日前の血清クレアチニンレベル０．５７ｍｇ／ｄＬから１１．６８ｍｇ／ｄＬへ、尿中タンパク濃度は０．５ｇ／ｇＣｒｅから４．０ｇ／ｇＣｒｅへと急激に悪化し、血圧は１２２ ／ ６５ｍｍＨｇ、心拍数は６４ｂｐｍ、経皮的動脈酸素飽和度は１００％（室内空気）、体温は３６．５℃。マウス潰瘍、脱毛、網膜出血が指摘されたが、異常な肺音、心音、下肢浮腫は観察されなかった。臨床検査では、血中ヘモグロビンは４．６ｇ／ｄＬ、正常レベルの補体はＣ３：８８ｍｇ／ｄＬ、Ｃ４：２１ｍｇ／ｄＬ、陽性抗ｄｓＤＮＡ抗体は１３．０ＩＵ／ｍＬ1、及びＰ－ＡＮＣＡは１８２．０Ｕ ／ ｍＬで、急速進行性糸球体腎炎が疑われたため、血漿交換（ＰＥ）のセッションが続き、腎生検が実施された。糸球体の７９％が細胞性三日月形を示し、１３％が細胞性線維性三日月形を示し、糸球体毛細血管は泡立ちとスパイクで肥厚したが、糸球体硬化症は観察されなかった。間質領域は炎症性細胞の中等度のびまん性浸潤を示したが、細動はわずかしかなかった。管状萎縮は限局性かつ軽度であった。免疫蛍光染色は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｃ３、Ｃ４及びＣ１ｑについての顆粒状の全体的糸球体毛細血管壁陽性であった。ＡＮＣＡと潜在的に関連する三日月形の糸球体腎炎、及びループス腎炎クラスVが診断された。プレドニゾロンパルス療法（３日間１ｇ）、続いて経口プレドニゾロン（４０ｍｇ／日）、間欠パルス静注シクロホスファミド療法（５００ｍｇ／ｍ２）及びミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ、５００ｍｇ／日で治療された。さらに、８シリーズ血漿交換を行った。これらの治療に反応して、血清クレアチニンレベルは０．７２ｍｇ ／ ｄＬに低下したが、尿中タンパク質レベルは持続した。フォローアップ腎生検は、糸球体の細胞の三日月の後退を示したが、糸球体の30％が全体的に硬化し、毛細血管肥厚が持続した。
Ｄ－セリン***率
　採取された血液・尿試料は、実施例１と同様に調製、定量の後にＤ－セリン***率が算出された。
病態の評価・判定、治療効果のモニタリング
　ＳＬＥ患者の入院直後の血液中Ｄ－セリン濃度は、１７．０６ｎｍｏｌ／ｍＬと非腎臓群の値と一桁オーダー高く、この値のみでも病態が異なることが判定できる。治療開始直後０（基準以下）、８日後０（基準以下）、１２日後０（基準以下）、１６日後０（基準値以下）、２２日後０（基準値以下）、２９日後５８．９％（基準内）、３４日後８７．６％（基準越え）、４８時間後４１．７％（基準内）となった。治療によりクレアチニンレベルが正常域に戻る中、Ｄ－セリン***率は一過性に上昇し、実施例１で算出した基準内に収まった。
　全身性エリテマトーデスによる腎障害において、Ｄ－セリンは急性の腎障害の進行・後退の間に基準範囲を通過して基準範囲以上に***率が上昇する現象が観察された（図１０）。これは、腎臓が何らかの原因によるリスク、ダメージに対して***率を制御して生体防御を行っている過程であること示唆しているが、その病態や経過、あるいは好転・悪化の評価の精度をさらに高めるために、血液中Ｄ－セリン量の情報を参照した。これにより、Ｄ－セリンの***が疾患のリスク、ダメージに対抗している状態か、鎮静化している状態かという病態・鑑別診断、評価、治療方針決定の補助において、Ｄ－セリン***率と血液中Ｄ－セリン量の２軸プロットのモニタリングの有用性が確認された（図４）。また、この情報は病理・薬理機構解明や創薬・治療を目的とする研究にも利用することができる。
　診断及び／又は治療目的のために大阪大学医学部付属病院腎臓内科に、２０１６年～２０１７年の間に入院した腎臓病患者からなるコホートから、間質性腎炎（ＴＩＮ）、前立腺肥大（ＢＰＨ）、ファブリー病（Ｆａｂｒｙ）、微小変化型ネフローゼ症候群（ＭＣＮＳ）の患者について、後ろ向き研究に用いた。試験プロトコルは、大阪大学における倫理委員会により承認され、かつすべての被験者から書類によるインフォームドコンセントを取得した。
Ｄ－セリン***率
　採取された血液・尿試料は、実施例１と同様に調整、定量の後にＤ－セリン***率が算出された。
病態の評価・判定・鑑別
　各被験者の血液中Ｄ－セリン量とＤ－セリン***率を、実施例１の腎臓病被験者とともに２軸の座標にプロットした（図１３）。各病態血液中Ｄ－セリン量、Ｄ－セリン***率それぞれの情報のみよりもプロットの分離能が高くなっており、原因の鑑別や病勢の評価・判定の補助に有用であることが示された。

Claims (34)

  1. 　対象の腎臓におけるＤ－セリン及び／又はＤ－アスパラギンの再吸収及び***の割合と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量との組み合わせを指標とする、腎病態の評価を補助する方法。
  2. 　前記割合が、前記対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）である請求項１に記載の方法。
  3. 　前記Ｄ－セリンの***率及び／又はＤ－アスパラギンの***率が、血液及び／又は尿由来の補正因子を用いて補正して算出される、請求項２に記載の方法。
  4. 　前記補正因子が、糸球体濾過量、尿量からなる群から選択される１又は複数の補正因子である、請求項３に記載の方法。
  5. 　前記補正因子が、イヌリンクリアランス、クレアチニンクリアランスからなる群から選択される１又は複数の補正因子である、請求項３に記載の方法。
  6. 　前記補正因子が、クレアチニン量、Ｌ－アミノ酸量からなる群から選択される１又は複数の補正因子である、請求項３に記載の方法。
  7. 　前記補正因子が、Ｌ－セリン及び／又はＬ－アスパラギンである、請求項３に記載の方法。
  8. 　前記Ｄ－セリンの***率が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000001
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    から算出され、及び／又は
    　前記Ｄ－アスパラギンの***率が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000002
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    から算出される、請求項２又は３に記載の方法。
  9. 　前記対象における前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率並びに前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第１対象座標と、
    　複数の非腎臓病対象における尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギン***率）並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第１基準と
    を比較し、前記第１対象座標と前記第１基準との関係から、腎病態を評価する工程、
    を含む、請求項２～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 　前記腎病態を評価する工程が、前記第１対象座標が、前記第１基準に含まれない場合に、前記対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することである、請求項９に記載の方法。
  11. 　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、請求項１０に記載の方法。
  12. 　前記第１基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲である、請求項９～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 　前記係数Ｚが１．０～３．０の間の値である、請求項１２に記載の方法。
  14. 　前記係数Ｚが、１．９６である、請求項１２又は１３に記載の方法。
  15. 　前記非腎臓病座標のプロットの回帰分析により算出される回帰式と、対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法。
  16. 　対数変換した前記対象Ｄ－セリン***率（対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又は対数変換した前記対象Ｄ－アスパラギン***率（対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした第２対象座標と、
    　複数の非腎臓病対象における、対数変換した尿中へのＤ－セリンの***率（非腎臓病対象Ｄ－セリンＬＮ***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（非腎臓病対象Ｄ－アスパラギンＬＮ***率）並びに対数変換した血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量をプロットした非腎臓病座標から算出される第２基準と
    を比較し、前記第２対象座標と前記第２基準との関係から、腎病態を評価する工程、
    を含む、請求項２～８のいずれか１項に記載の方法。
  17. 　前記腎病態を評価する工程が、前記第２対象座標が、前記第２基準に含まれない場合に、前記対象の腎臓病もしくはその罹患リスクを評価すること、又は腎臓病の誘発もしくは予後を予測することである、請求項１６に記載の方法。
  18. 　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、請求項１７に記載の方法。
  19. 　前記第２基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値±標準偏差×係数Ｚの範囲である、請求項１６～１８のいずれか１項に記載の方法。
  20. 　前記係数Ｚが１．０～３．０の間の値である、請求項１９に記載の方法。
  21. 　前記係数Ｚが１．９６である、請求項１９又は２０に記載の方法。
  22. 　前記第２基準が、前記非腎臓病座標のプロットの平均値からの距離が０．６以下である、請求項１６に記載の方法。
  23. 　前記対数変換された値を基にした非腎臓病座標のプロットの回帰直線により算出される回帰式と、対数変換された値を基にした対象座標の関連から、腎病態の評価を補助する方法。
  24. 　対象の尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と、血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態をモニタリングする方法。
  25. 　慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病による腎病態をモニタリングする、請求項２４に記載の方法。
  26. 　腎臓病を有する対象の、治療介入前後における尿中へのＤ－セリンの***率（対象Ｄ－セリン***率）及び／又はＤ－アスパラギンの***率（対象Ｄ－アスパラギン***率）と血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量とを経時的に測定し、前記対象Ｄ－セリン***率及び／又は対象Ｄ－アスパラギン***率と前記血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の変動を指標とする、腎病態の治療効果をモニタリングする方法。
  27. 　前記腎臓病が、慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病、もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病である、請求項２６に記載の方法。
  28. 　尿が採取できない対象の血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を指標とする、腎病態の評価を補助する方法。
  29. 　慢性腎臓病、骨髄腫腎、糖尿病性腎症、ＩｇＡ腎症、間質性腎炎もしくは多発性嚢胞腎、又は、全身性エリテマトーデス、原発性アルドステロン症、前立腺肥大症、ファブリー病もしくは微小変化型ネフローゼ症候群に起因する腎臓病による腎病態の評価を補助する、請求項２８に記載の方法。
  30. 　対象の血液中Ｄ－セリン量が９ｎｍｏｌ／ｍＬ以上である場合に、全身性エリテマトーデスとする判定を補助する方法。
  31. 　記憶部と、入力部、分析測定部と、データ処理部と、出力部とを含む、腎病態の評価システムであって、
    　記憶部が、入力部から入力された閾値及び尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出式を記憶し、
    　分析測定部が、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を定量し、
    　データ処理部が、定量された血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量を含む要素と、記憶部に記憶されたＤ－セリンの***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式とから生成される尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率を算出し、
    　データ処理部が、記憶部に記載された閾値と、前記尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの比較に基づいて、腎病態を評価し、
    　出力部が、対象の腎病態の評価結果を出力する、
    ことを特徴とする、評価システム。
  32. 　前記Ｄ－セリン***率が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000003
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    であり、及び／又は、
    　前記Ｄ－アスパラギン***率の算出式が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000004
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    である、請求項３１に記載の評価システム。
  33. 　入力部と、出力部と、データ処理部と、記憶部とを含む情報処理装置に、腎病態の評価させるプログラムであって、以下：
    　入力部から入力された腎病態を評価するための閾値と、尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出式と、算出に必要な変数とを記憶部に記憶させ、
    　前記入力部から入力された、血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率の算出に必要な変数を記憶部に記憶させ、
    　データ処理部に、前記記憶部に予め記憶された前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式と、前記記憶部に記憶された前記血液試料及び／又は尿試料中のＤ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量並びに前記変数を呼び出させて前記尿中へのＤ－セリン***率の算出式及び／又はＤ－アスパラギンの***率の算出式に代入して、Ｄ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率を算出させ；
    　データ処理部に、記憶部に記憶された前記閾値と、前記尿中へのＤ－セリン***率及び／又はＤ－アスパラギン***率並びに血液中Ｄ－セリン量及び／又はＤ－アスパラギン量の組み合わせとの比較に基づいて、腎病態を評価させ；
    　出力部に対象の腎病態の評価結果を出力させる
    ことを前記情報処理装置に実行させるための指令を含む、プログラム。
  34. 　前記Ｄ－セリン***率の算出式が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000005
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ｓｅｒは、尿中のＤ－セリンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ｓｅｒは、血液中のＤ－セリンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    であり、及び／又は、
    　前記Ｄ－アスパラギン***率の算出式が、以下の式：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-M000006
     　［式中、
    　　ＵＤ－Ａｓｎは、尿中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　ＰＤ－Ａｓｎは、血液中のＤ－アスパラギンの量を表し、
    　　Ｕｃｒｅは、尿中のクレアチニンの量を表し、
    　　Ｐｃｒｅは、血液中のクレアチニンの量を表す。］
    である、請求項３３に記載のプログラム。
PCT/JP2020/012807 2019-03-22 2020-03-23 腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム WO2020196437A1 (ja)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US17/442,069 US20220170945A1 (en) 2019-03-22 2020-03-23 Method for assisting evaluation of renal pathological conditions, system for evaluating renal pathological conditions and program for evaluating renal pathological conditions
JP2021509407A JPWO2020196437A1 (ja) 2019-03-22 2020-03-23
CN202080022905.2A CN113631923A (zh) 2019-03-22 2020-03-23 辅助肾病况的评价的方法、肾病况的评价***及肾病况的评价程序

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-055744 2019-03-22
JP2019055744 2019-03-22
JP2019-057357 2019-03-25
JP2019057357 2019-03-25

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020196437A1 true WO2020196437A1 (ja) 2020-10-01

Family

ID=72611044

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2020/012807 WO2020196437A1 (ja) 2019-03-22 2020-03-23 腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム

Country Status (4)

Country Link
US (1) US20220170945A1 (ja)
JP (1) JPWO2020196437A1 (ja)
CN (1) CN113631923A (ja)
WO (1) WO2020196437A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7113121B1 (ja) * 2021-06-28 2022-08-04 貞夫 吉田 骨格筋量推定システム、骨格筋量推定装置及びプログラム

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130323751A1 (en) * 2011-01-26 2013-12-05 University of Pittsburgh - of the Common-Wealth System of Higher Education Urine Biomarkers For Prediction Of Recovery After Acute Kidney Injury: Proteomics
JP2015132598A (ja) * 2013-12-11 2015-07-23 株式会社 資生堂 腎不全の早期診断マーカー
JP2017207490A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 糖尿病を判定するための血液試料の分析方法及びシステム
JP2017207489A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 腎臓病の予後予測方法及びシステム

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20220252610A1 (en) * 2019-03-22 2022-08-11 Kagami Inc. Method for assisting evaluation of condition of kidneys, system for evaluating condition of kidneys, and program for evaluating condition of kidneys

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130323751A1 (en) * 2011-01-26 2013-12-05 University of Pittsburgh - of the Common-Wealth System of Higher Education Urine Biomarkers For Prediction Of Recovery After Acute Kidney Injury: Proteomics
JP2015132598A (ja) * 2013-12-11 2015-07-23 株式会社 資生堂 腎不全の早期診断マーカー
JP2017207490A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 糖尿病を判定するための血液試料の分析方法及びシステム
JP2017207489A (ja) * 2016-05-17 2017-11-24 国立大学法人大阪大学 腎臓病の予後予測方法及びシステム

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FUKUSHIMA T. ET AL.: "Determination of D-Amino Acids in Serum from Patients with Renal Dysfunction", BIOLOGICAL AND PHARMACEUTICAL BULLETIN, vol. 18, no. 8, 1995, pages 1130 - 1132, XP008073859 *
HESAKA ATSUSH ET AL.: "Dynamics of d-serine reflected the recovery course of a patient with rapidly progressive glomerulonephritis", CEN CASE REPORTS, vol. 8, no. 4, 29 July 2019 (2019-07-29), pages 297 - 300, XP055744347 *
IWAKAWA HIDEHIRO ET AL.: "Urinary D-serine level as a predictive biomarker for deterioration of renal function in patients with atherosclerotic risk factors", BIOMARKERS, vol. 24, no. 2, 23 October 2018 (2018-10-23), pages 159 - 165 *
KIMURA TOMONORI ET AL.: "D-Amino acids and kidney diseases", CLINICAL AND EXPERIMENTAL NEPHROLOGY, vol. 24, no. 5, 29 February 2020 (2020-02-29), pages 404 - 410, XP037097103, DOI: 10.1007/s10157-020-01862-3 *
vol. 142, no. 6/7, 15 August 1987 (1987-08-15), pages 401 - 402 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7113121B1 (ja) * 2021-06-28 2022-08-04 貞夫 吉田 骨格筋量推定システム、骨格筋量推定装置及びプログラム
WO2023276948A1 (ja) * 2021-06-28 2023-01-05 貞夫 吉田 骨格筋量推定システム及びプログラム

Also Published As

Publication number Publication date
JPWO2020196437A1 (ja) 2020-10-01
CN113631923A (zh) 2021-11-09
US20220170945A1 (en) 2022-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109154621B (zh) 肾脏病的预后预测方法及***
Chou et al. Tryptophan as a surrogate prognostic marker for diabetic nephropathy
JP2016509222A (ja) インスリン抵抗性の進行に関連するバイオマーカー及びこれを使用する方法
US10852308B2 (en) Disease-state biomarker for renal disease
WO2020196436A1 (ja) 腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム
US20190271708A1 (en) Blood sample analysis method and system, for determining diabetes
JP6993654B2 (ja) 腎機能を推定する方法及びシステム
WO2020196437A1 (ja) 腎病態の評価を補助する方法、腎病態の評価システム及び腎病態の評価プログラム
WO2020080494A1 (ja) クリティカル期の腎障害を判定するためのマーカー
WO2020080491A1 (ja) 血液中のクレアチニン量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法
WO2020080482A1 (ja) 血液中のシスタチンｃ量に基づく腎機能検査結果の妥当性を検定する方法
JP7471581B2 (ja) 腎臓病の病態バイオマーカー
JP6868878B2 (ja) 糸球体濾過能力の決定方法
WO2020080488A1 (ja) クリティカル期の腎障害を判定するためのマーカー

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20778346

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2021509407

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 20778346

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1