WO2019054800A1 - 바실러스 화진포엔시스의 배양물 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents

바실러스 화진포엔시스의 배양물 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물 Download PDF

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bacillus
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명길선
고재영
김용진
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(주)아모레퍼시픽
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus

Definitions

  • the present invention discloses a composition for skin whitening comprising as an active ingredient an extract of Bacillus virginaceus strain, a disruption thereof, a culture thereof, or a strain, a lysate or a culture thereof.
  • the skin color of a person is determined by carotene, amount of melanin, hemoglobin, etc., and melanin plays the most important role.
  • Melanin is a kind of pigment that is related to the color of hair and eyes as well as the color of skin.
  • Ultraviolet light acts as a main factor for inducing melanin overgrowth through promoting activity of melanocyte, melanocyte, promoting secretion of melanin biosynthesis stimulating hormone, promoting melanin oxidation or promoting tyrosinase activity.
  • Bacillus hwajinpoensis strain is one of the marine microorganisms and has been known as a new species by the researchers of Korea Biotechnology Research Institute in 2004 and there is no known application method.
  • the present disclosure is directed to providing a new use of the Bacillus hwajinpoensis strain.
  • the present disclosure aims to provide a strain of Bacillus hwajinpoensis SNC 135 having excellent skin whitening activity.
  • the techniques disclosed herein include Bacillus hwajinpoensis strains; Disruption thereof; A culture thereof; Or a composition for skin whitening comprising an extract of said strain, lysate or culture as an active ingredient.
  • the strain may be a Bacillus virginaceus SNC 135 with the accession number KCCM 12051P.
  • the strain may be one having 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the culture may be cultured in a culture medium containing at least one selected from the group consisting of starch, yeast extract, peptone and sea salt.
  • the extract may be an ethyl acetate fraction.
  • the active ingredient may be included in an amount of 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
  • the composition may inhibit melanin production or inhibit tyrosinase activity.
  • the composition may be a cosmetic composition.
  • the technique disclosed herein provides a strain of Bacillus hwajinpoensis SNC133 with accession number KCCM12051P, which has a skin whitening function.
  • the strain may be isolated from a coral.
  • the technique disclosed herein has the effect of providing a skin whitening raw material of an environmentally friendly material.
  • the techniques disclosed herein have the effect of providing a skin whitening application of Bacillus hwajinpoensis strains.
  • the strain has an effect of inhibiting melanin production in melanin-producing cells.
  • the techniques disclosed herein are effective in providing a strain of Bacillus hwajinpoensis SNC 135 with excellent skin whitening activity.
  • Figure 1 shows the 16s rDNA sequence (SEQ ID NO: 1) of the Bacillus hwajinpoensis SNC 135 strain with accession number KCCM12051P according to the present specification.
  • Figure 2 shows skin cell safety of Bacillus hwajinpoensis strain according to one embodiment of the present invention.
  • FIG. 3 shows the melanin production inhibitory effect of Bacillus hwajinpoensis strain according to one embodiment of the present invention.
  • the techniques disclosed herein include Bacillus hwajinpoensis strains; Disruption thereof; A culture thereof; Or a composition for skin whitening comprising an extract of said strain, lysate or culture as an active ingredient.
  • the techniques disclosed herein include an amount of Bacillus hwajinpoensis strain effective to enhance skin whitening; Disruption thereof; A culture thereof; Or an extract of said strain, lysate or culture, to a subject in need thereof.
  • the techniques disclosed herein include Bacillus hwajinpoensis strains for skin whitening enhancement of a subject; Disruption thereof; A culture thereof; Or an extract of said strain, lysate or culture.
  • the techniques disclosed herein include Bacillus hwajinpoensis strains for skin whitening enhancement of a subject; Disruption thereof; A culture thereof; Or non-therapeutic uses of the extracts of the strains, lysates or cultures.
  • the techniques disclosed herein are directed to a Bacillus hwajinpoensis strain for the preparation of a composition for enhancing skin whitening; Disruption thereof; A culture thereof; Or an extract of said strain, lysate or culture.
  • the techniques disclosed herein provide a strain of Bacillus hwajinpoensis SNC 135 with accession number KCCM 12051P .
  • the extract of the strain, lysate or culture may be applied to a subject, or administered or applied in the form of a composition such as a skin external composition or a cosmetic composition.
  • the Bacillus hwajinpoensis strain; Disruption thereof; A culture thereof; Or the extract of the strain, lysate or culture may be applied to the skin of the subject.
  • the strain is Bacillus hwajinpoensis SNC 135 with accession number KCCM 12051P .
  • the strain may be one having 16S rDNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the Bacillus hwajinpoensis SNC 135 strain may be one having a skin whitening function.
  • active ingredient refers to a component that can exhibit the desired activity alone, such as a carrier that exhibits the desired activity alone or is itself inactive.
  • Microbial resources are advantageous as sustainable resources in that they can be reproduced unlike petroleum and water.
  • the strain may be used by preparing a lyophilized powder form by culturing a strain, centrifuging the culture, washing with sterile physiological saline, dispersing the same in a solvent such as sterilized oil, and lyophilizing.
  • the lysate of the strain may mean a product obtained by breaking the strain itself by chemical or physical force.
  • the culture of the strain may refer to a substance including some or all of the substances contained in the medium in which the strain has been cultured regardless of the form of the culture.
  • a substance containing metabolites or secretions resulting from the culture of the strain Or the lysate thereof, and the strain itself may be contained in the culture.
  • the culture may be cultured in a culture medium containing at least one selected from the group consisting of starch, yeast extract, peptone and sea salt.
  • the extract may be a product obtained by extracting, isolating or fractionating the strain itself, the disruption of the strain, the culture of the strain, or a mixture thereof regardless of the extraction method, the extraction solvent, the extracted component or the form of the extract, Is a broad concept that includes all materials that can be obtained by extraction or processing or processing in other ways.
  • the extract may be an ethyl acetate fraction of a Bacillus subtilis culture.
  • the Bacillus hwajinpoensis strain; Disruption thereof; A culture thereof; Or the extract of the strain, lysate or culture may be contained in an amount of 0.001 to 30% by weight based on the total weight of the composition.
  • the Bacillus hwajinpoensis strain; Disruption thereof; A culture thereof; Or extracts of said strains, lysates or cultures may be present in an amount of at least 0.001% by weight, at least 0.01% by weight, at least 0.1% by weight, at least 0.5% by weight, at least 1% by weight, at least 1.5% by weight or at least 2% But not more than 30% by weight, not more than 25% by weight, not more than 20% by weight, not more than 15% by weight, not more than 10% by weight or not more than 5% by weight.
  • a strain of Bacillus hwajinpoensis according to the present invention Disruption thereof; A culture thereof; Or extracts of the above strains, lysates or cultures, or compositions for skin whitening comprising the same effectively inhibit melanin production, thereby preventing, ameliorating and / or treating symptoms or diseases due to melanin overproduction.
  • the symptom or disorder due to melanin overproduction is selected from the group consisting of spots, freckles, black spots, epidermal melanocytic lesions, cafe's au lait macules, Becker's Nevus of Ota, Acquired bilateral otalbia, Nevus spiral, Nevus spilus, Lentigines, Dermal melanocytic lesions, Mongolian spot, Nevus of Ota, (nevus of Ito), Blue nevus, Melanocytic nevus, Junctional nevus, Compound nevus, Dermis nevus, It has been reported that intradermal nevus, Halo nevus, Congenital nevocytic nevus, Spitz nevus, Dysplastic nevus, Melanoma, Malignant melanoma (Lentigo maligna melanoma), It has been reported that a number of different types of melanoma have been reported, including superficial spreading mel
  • the Bacillus hwajinpoensis strain; Disruption thereof; A culture thereof; Or extracts of the strains, lysates or cultures, or compositions comprising them, may be to prevent, improve and / or treat skin pigmentation.
  • the Bacillus hwajinpoensis strain; Disruption thereof; A culture thereof; Or extracts of the above-mentioned strains, lysates or cultures or compositions containing them may be used for the treatment of skin diseases such as spots, freckles, black spots, nevi, melanoma, drug-induced pigmentation, inflammation-induced pigmentation And / or treatment of at least one skin pigmentation selected from the group consisting of pigmentation by pigmentation, pigmentation by pigmentation, and pigmentation by dermatitis.
  • the composition may be a skin external composition.
  • the composition for external application for skin may contain, in addition to the active ingredient according to the present specification, preservatives, stabilizers, wettable or emulsifying accelerators, pharmaceutical adjuvants such as salts and / or buffers for controlling osmotic pressure and other therapeutically useful substances And may be formulated into various parenteral dosage forms according to conventional methods.
  • the parenteral dosage form may be a transdermal dosage form and may be, for example, an injection, ointment, lotion, gel, cream, spray, suspension, emulsion, patch, But is not limited thereto.
  • the composition for external application for skin may be a topical application agent having a pharmaceutical use for a disease associated with melanin production.
  • the composition may be a cosmetic composition.
  • the cosmetic composition may further comprise ingredients included in the functional additive and common cosmetic composition in addition to the active ingredient according to the present specification.
  • the functional additives may include water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymeric polysaccharides, sphingolipids and seaweed extracts.
  • the other ingredients that can be included in the composition include humectants, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbents, preservatives, bactericides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, Accelerators, coolants, antiperspirants, purified water, and the like.
  • the formulation of the cosmetic composition is not particularly limited and may be appropriately selected according to the purpose.
  • skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutritional cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, pack, soap, cleansing But is not limited to, any one or more formulations selected from the group consisting of foam, cleansing lotion, cleansing cream, body lotion and body cleanser.
  • the carrier component may include animal fibers, plant fibers, waxes, paraffins, starches, tracans, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, Or zinc oxide may be used.
  • lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as the carrier component when the formulation of the present invention is a powder or a spray, Propellants such as chlorofluorohydrocarbons, propane / butane or dimethyl ether.
  • the solvent, solubilizing agent or emulsifying agent is used as the carrier component in the case of the formulations of the present invention in the form of solutions or emulsions, and examples include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, Benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan.
  • the carrier component when the formulation of the present invention is a suspension, may include water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester, and polyoxyethylene sorbitan ester
  • a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol
  • ethoxylated isostearyl alcohol such as ethanol or propylene glycol
  • polyoxyethylene sorbitol ester ethoxyethylene sorbitol ester
  • polyoxyethylene sorbitan ester ethoxyethylene sorbitol ester
  • polyoxyethylene sorbitan ester ethoxyethylene sorbitan ester
  • the same suspending agent, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracant, etc. may be used.
  • the carrier component is selected from the group consisting of aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyltaurate , Fatty acid amide ether sulfate, alkylamido betaine, aliphatic alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, linolenic derivative, or ethoxylated glycerol fatty acid ester can be used.
  • the collected scleractinia was heat treated at 60 °C for 10 minutes to remove Gram - negative bacteria on the surface of the coral, and microorganisms existing on the surface of the coral were separated using physiological saline (0.85% NaCl).
  • physiological saline solution was diluted with physiological saline at a ratio of 10-fold and 100-fold, and then the culture broth (10 g / L starch, 4 g / L yeast extract, 2 g / L peptone , 16 g / L agar, 34.75 g / L sea salt).
  • the inoculated medium was cultivated at 27 °C for 7 days to 30 days, and strains showing microorganism colonies were subcultured at least 2 times to 4 times to isolate a single strain.
  • the isolated strains were identified by 16S rRNA sequencing using 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3 ', SEQ ID NO: 2) and 1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3', SEQ ID NO: 3) primers.
  • the genomic sequence of the isolate was identified as Bacillus hwajinpoensis strain SW-72 by Gene Bank.
  • the isolate was identified as Bacillus hwajinpoensis strain SW-72 and was named as Bacillus hwajinpoensis SNC 135.
  • the strain was identified on June 27, 2017 (KCCM), which is a depository organization, and has been granted deposit number KCCM12051P.
  • the Bacillus virginaceus SNC 135 strain identified in Example 1 was inoculated in a culture medium (10 g / L starch, 2 g / L starch extract, 4 g / L peptone, 34.75 g / L sea salt) Lt; / RTI > culture medium to obtain a culture of Bacillus virginiensis strain.
  • a culture medium (10 g / L starch, 2 g / L starch extract, 4 g / L peptone, 34.75 g / L sea salt) Lt; / RTI > culture medium to obtain a culture of Bacillus virginiensis strain.
  • Example 3 Bacillus sp. Bacillus hwajinpoensis ) Confirmation of the skin cell safety of the strain
  • the extract of Bacillus japonica isolate isolated from the coral obtained in Example 2 was dissolved in DMSO (Dimethyl Sulfoxide), and then treated with skin cells (HaCaT) to determine whether the cell viability was affected.
  • the skin cells at a concentration of 2 ⁇ 10 5 cells / mL were dispensed in a 96-well cell culture plate in an amount of 100 ⁇ L each, and cultured for 24 hours.
  • the extract of Bacillus virginiensis strain was treated at a concentration of 10 to 100 ⁇ g / mL And cultured for an additional 24 hours. The experiment was repeated three times for each concentration. Cell viability was compared using MTT assay, and the viability of the extract - treated group was shown when the viability of the untreated group was taken as 100%.
  • Example 4 Bacillus thuringiensis ( Bacillus hwajinpoensis ) Identification of skin whitening effect of strain
  • the skin whitening effect of Bacillus virginiensis strain was tested as follows.
  • the extract of Bacillus virginiensis strain isolated from the coral obtained in Example 2 was treated with melanocytes (B16 melanoma cell) to evaluate the whitening effect.
  • the melanin-producing cells were seeded in a 24-well cell culture plate at a concentration of 4 ⁇ 10 4 cells / well and cultured for 24 hours.
  • ⁇ -MSH ⁇ -Melanocyte-stimulating hormone
  • the extract of Bacillus japonica isolate was treated at 10 to 50 ⁇ g / mL concentration.
  • the experiment was repeated three times for each concentration.
  • the incubation was continued for another 72 hours and the absorbance was measured at 405 nm to compare the melanin content in the medium.
  • the absorbance of the group inducing melanin production was regarded as 100%, the degree of induction of melanogenesis in the group treated with the extract was expressed as%.
  • compositions according to one aspect of the present disclosure are described below, but are applicable to various other formulations, which are not intended to be limiting, but rather to illustrate only specifically.
  • the culture of Bacillus virginaceus cultured in Example 2 containing 3 wt% of glycerin, 2 wt% of butylene glycol, 2 wt% of propylene glycol, 0.1 wt% of carboxyvinyl polymer, 10 wt% of ethanol, 0.1 wt% of triethanolamine, , Trace pigment, trace flavor and trace amount of purified water were mixed and prepared according to a conventional method for producing a softened long-lived water.
  • the culture medium of Example 2 containing 0.01% by weight of Bacillus subtilis culture, 4% by weight wax, 1.5% by weight of polysorbate 60, 0.5% by weight of sorbitan sesquioleate, 5% by weight of liquid paraffin, 5% by weight of squalane, 5 parts by weight of capric triglyceride, 3 parts by weight of glycerin, 3 parts by weight of butylene glycol, 3 parts by weight of propylene glycol, 0.1 part by weight of carboxyvinyl polymer, 0.2 part by weight of triethanolamine, the remaining preservative, trace pigment, Purified water was mixed and prepared according to a conventional method of producing a nutritional lotion.
  • Example 2 The culture medium of Example 2 containing 0.01% by weight of Bacillus subtilis culture, 10% by weight wax, 1.5% by weight of polysorbate 60, 0.5% by weight of sorbitan sesquioleate, 10% by weight of liquid paraffin, 5% by weight of squalane, 5% by weight of capric triglyceride, 5% by weight of glycerin, 3% by weight of butylene glycol, 3% by weight of propylene glycol, 0.2% by weight of triethanolamine and the remaining preservative, trace pigment, trace flavor, Cream. ≪ / RTI >
  • a mixture of 0.01% by weight of the Bacillus subtilis culture medium of Example 2, 13% by weight of polyvinyl alcohol, 0.2% by weight of sodium carboxymethyl cellulose, 0.1% by weight of allantoin, 5% by weight of ethanol, 0.3% by weight of nonylphenyl ether, Pigment, trace flavor and trace amount of purified water were mixed and prepared according to a conventional pack preparation method.

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Abstract

본 명세서에는 바실러스 화진포엔시스 균주, 이의 파쇄물, 이의 배양물, 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물이 개시된다. 또한, 본 명세서에는 피부 미백 기능을 가지는 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주가 개시된다.

Description

바실러스 화진포엔시스의 배양물 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물
본 명세서에는 바실러스 화진포엔시스 균주, 이의 파쇄물, 이의 배양물, 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물이 개시된다.
사람의 피부색은 카로틴, 멜라닌의 양, 헤모글로빈 등에 의해 결정되는데, 이중 멜라닌이 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 피부색뿐만 아니라 머리카락과 눈동자의 색에 관련된 색소의 일종이며 사람의 피부 보호 작용의 역할을 한다. 하지만 과도한 자외선 노출, 대기오염, 스트레스 등 외부 환경에 의해 과다하게 피부 내에 생성되면 색소 침착 현상이 일어나게 되어 피부가 검게 되거나 기미, 주근깨 등의 원인이 된다. 자외선은 멜라닌 생성 세포인 멜라노사이트의 활성 촉진, 멜라닌 생합성 자극 호르몬 분비 촉진, 멜라닌의 산화 촉진 또는 티로시나아제 활성 촉진 등을 통해 멜라닌 과다 생성을 유도하는 주요 요인으로 작용한다.
한편, 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주는 해양 미생물 중 하나로서 2004년에 한국생명공학연구원 연구진에 의해 신종으로 밝혀지고 난 이후 그 활용 방안에 대해 알려진 바가 없다.
[선행기술문헌]
[특허문헌]
한국 등록특허공보 제10-0812922호
일 측면에서, 본 명세서는 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주의 새로운 용도를 제공하는 것을 목적으로 한다.
다른 측면에서, 본 명세서는 우수한 피부 미백 활성을 갖는 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주를 제공하는 것을 목적으로 한다.
일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 SNC 135인 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 배양물은 전분, 효모 추출물, 펩톤 및 해염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상을 포함하는 배양 배지에서 배양한 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 추출물은 에틸아세테이트 분획물일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 유효성분은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 30 중량%로 포함되는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제 또는 티로시나아제 활성을 억제하는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 피부 미백 기능을 가지는 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주를 제공한다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 산호에서 분리된 것일 수 있다.
일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 친환경 소재의 피부 미백 원료를 제공하는 효과가 있다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주의 피부 미백 용도를 제공하는 효과가 있다. 상기 균주는 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌 생성을 억제하는 효과가 있다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 우수한 피부 미백 활성을 갖는 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주를 제공하는 효과가 있다.
도 1은 본 명세서에 따른 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주의 16s rDNA 시퀀스 (서열번호 1)를 나타낸 것이다.
도 2는 본 명세서의 일 실시예에 따른 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주의 피부 세포 안전성을 나타낸 것이다.
도 3은 본 명세서의 일 실시예에 따른 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주의 멜라닌 생성 억제 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
일 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 피부 미백 증진에 유효한 양의 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 이를 필요로 하는 대상에게 적용하는 것을 포함하는 피부 미백 증진 방법을 제공한다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 대상의 피부 미백 증진을 위한 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 대상의 피부 미백 증진을 위한 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물의 비치료적 용도를 제공한다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 피부 미백 증진용 조성물을 제조하기 위한 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물의 용도를 제공한다.
다른 측면에서, 본 명세서에 개시된 기술은 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주를 제공한다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물은 조성물, 예컨대 피부 외용제 조성물 또는 화장료 조성물의 형태로 대상에게 적용하거나, 또는 투여하거나 또는 도포하는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물은 대상의 피부에 적용하는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135인 것이 바람직할 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주는 피부 미백 기능을 가지는 것일 수 있다.
본 명세서에서 "유효성분"은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.
미생물 자원은 석유, 물 등과 달리 재생산할 수 있다는 점에서 지속 가능한 자원으로 활용할 수 있는 이점이 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 균주는 균주를 배양하여 배양액을 원심분리한 다음, 멸균된 생리식염수로 세척한 후 용매, 예컨대 멸균유에 분산시키고 동결건조하여 동결건조분말 형태로 제조하여 사용될 수 있다.
상기 균주의 파쇄물이란, 균주 자체를 화학적 또는 물리적 힘에 의하여 파쇄하여 얻은 산물을 의미할 수 있다.
상기 균주의 배양물이란, 배양물의 형태를 불문하고 균주를 배양한 배지 내에 포함되어 있는 일부 또는 모든 물질을 포함하는 물질을 의미할 수 있으며, 예컨대 균주 배양의 결과물인 대사물 또는 분비물을 포함하는 물질 또는 그 파쇄물을 의미할 수 있고, 균주 자체도 배양물 내에 포함되어 있을 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 배양물은 전분, 효모 추출물, 펩톤 및 해염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상을 포함하는 배양 배지에서 배양한 것일 수 있다.
상기 추출물이란, 균주 자체, 균주의 파쇄물, 균주의 배양물 또는 이들의 혼합물을 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고 추출, 분리 또는 분획하여 얻어진 산물을 의미할 수 있으며, 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 추출물은 바실러스 화진포엔시스 배양액의 에틸아세테이트 분획물인 것이 바람직할 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 30 중량%로 포함되는 것일 수 있다. 다른 측면에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 중량% 이상, 0.01 중량% 이상, 0.1 중량% 이상, 0.5 중량% 이상, 1 중량% 이상, 1.5 중량% 이상 또는 2 중량% 이상이면서 30 중량% 이하, 25 중량% 이하, 20 중량% 이하, 15 중량% 이하, 10 중량% 이하 또는 5 중량% 이하로 포함되는 것일 수 있다.
본 명세서에 따른 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물, 또는 이를 포함하는 피부 미백용 조성물은 멜라닌 생성을 효과적으로 억제함으로써, 멜라닌 과다 생성으로 인한 증상 또는 질환을 예방, 개선 및/또는 치료하는 효과가 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 멜라닌 과다 생성으로 인한 증상 또는 질환은 기미, 주근깨, 검버섯, 잡티, 표피 멜라닌세포성 병변 (Epidermal melanocytic lesion), 밀크커피 반점 (Cafe's au lait macules), 베커 모반 (Becker's Nevus), 반문상 모반 (Nevus Spilus), 흑자 (Lentigines), 진피 멜라닌세포성 병변 (Dermal melanocytic lesions), 몽고반 (Mongolian spot), 오타 모반 (Nevus of Ota), 후천성 양측성 오타 모반양 반 (Acquired bilateral nevus of Ota-like macules), 이토 모반 (Nevus of Ito), 청색 모반 (Blue nevus), 멜라닌형성세포성 모반 (Melanocytic nevus), 경계 모반 (Junctional nevus), 복합 모반 (Compound nevus), 진피내 모반 (Intradermal nevus), 운륜모반 (Halo nevus), 선천성 멜라닌세포성 모반 (Congenital nevocytic nevus), 스피츠 모반 (Spitz nevus), 이형성 모반 (Dysplastic nevus), 흑색종 (Melanoma), 악성 흑자 흑색종 (Lentigo maligna melanoma), 표재 확장성 흑색종 (Superficial spreading melanoma), 선단 흑자성 흑색종 (Acral lentiginous melanoma), 결절성 흑생종 (Nodular melanoma), 색소성 기저세포암 (pigment basal cell carcinoma), 색소성 피부섬유종 (dermatofibromas), 색소성 피부낭종 (dermoid cyst), 색소성 켈로이드 (keloid) 및 색소성 각질극세포종 (keratoacanthomas)으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상인 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물, 또는 이를 포함하는 조성물은 피부 색소 침착을 예방, 개선 및/또는 치료하는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물, 또는 이를 포함하는 조성물은 멜라닌 생성 증가로 피부에 국소적으로 발생하는 기미, 주근깨, 흑색점, 모반, 흑색종, 약물에 의한 색소 침착, 염증에 의한 색소 침착 및 피부염에 의한 색소 침착으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상의 피부 색소 침착을 예방, 개선 및/또는 치료하는 것일 수 있다.
예시적인 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 피부 외용제 조성물은 본 명세서에 따른 유효성분 이외에 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 비경구 투여 형태로는 경피 투여형 제형일 수 있으며, 예를 들어 주사제, 연고, 로션, 겔, 크림, 스프레이, 현탁제, 유제, 패취 등의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 피부 외용제 조성물은 멜라닌 생성과 관련된 질환에 대해 약제학적 용도를 갖는 국소 도포제일 수 있다.
예시적인 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 상기 화장료 조성물에는 본 명세서에 따른 유효성분 이외에 기능성 첨가물 및 일반적인 화장료 조성물에 포함되는 성분이 추가로 포함될 수 있다. 상기 기능성 첨가물로는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분을 포함할 수 있다. 이외에 포함되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.
상기 화장료 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 제형으로 제조될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
예시적인 일 구현예에서, 본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1. 균주의 분리 및 동정
채집된 산호 (scleractinia)를 60℃에 10분간 열처리하여 산호 표면의 그람음성균을 제거한 다음, 생리식염수 (0.85% NaCl)를 이용하여 산호 표면에 존재하는 미생물을 분리하였다. 상기의 생리식염수 용액을 다시 생리식염수에 10배, 100배의 비율로 희석한 후 항생제 (Chloramphenicol 20㎍/ml)가 첨가된 분리배지 (10g/L 전분, 4g/L 효모 추출물, 2g/L 펩톤, 16g/L 한천, 34.75g/L 해염)에 접종하였다. 접종된 배지는 27℃에서 7일에서 30일까지 배양하였고, 미생물 집락 (colony)이 보이는 균주를 최소 2회에서 최대 4회까지 계대 배양하여 단일 균주를 최종 분리하였다.
분리된 균주의 동정은 27F (5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3', 서열번호 2)와 1492R (5'-TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3', 서열번호 3) primer를 사용하여 16S rRNA 염기서열분석을 통하여 실시하였다. 분석된 염기서열을 Gene Bank에서 검색한 결과, 분리된 균주는 Bacillus hwajinpoensis strain SW-72과 99.4%의 유사성을 갖는 것을 최종 확인하여 이를 Bacillus hwajinpoensis SNC 135로 명명하고 상기 균주를 2017년 06월 27일자로 기탁기관인 한국미생물보존센터(KCCM)에 기탁하고 기탁번호 KCCM12051P를 부여받았다.
실시예 2. 바실러스 화진포엔시스 ( Bacillus hwajinpoensis ) 균주의 배양물 및 추출물 제조
상기 실시예 1에서 동정된 바실러스 화진포엔시스 SNC 135 균주를 배양 배지 (10g/L 전분, 2g/L 효모 추출물, 4g/L 펩톤, 34.75 g/L 해염)에 접종하고 7일 동안 27℃, 120 rpm 조건에서 배양하여 바실러스 화진포엔시스 균주의 배양액을 수득하였다.
또한, 수득한 바실러스 화진포엔시스 균주의 배양액에 동량의 에틸아세테이트를 넣어 반응시키고 정치시켜 에틸아세테이트 분획물을 얻었다. 이후, 에틸아세테이트는 감압 농축기 (evaporator)를 이용하여 제거하고 추출물을 수득하였다.
실시예 3. 바실러스 화진포엔시스 ( Bacillus hwajinpoensis ) 균주의 피부 세포 안전성 확인
바실러스 화진포엔시스 균주가 피부 세포에 대해 안전성을 갖는지 여부를 하기와 같이 실험하였다.
구체적으로, 상기 실시예 2에서 수득한 산호에서 분리한 바실러스 화진포엔시스 균주의 추출물을 DMSO (Dimethyl sulfoxide)에 용해시킨 후 피부세포 (HaCaT)에 처리하여 세포의 생활성에 영향을 미치는지 확인하였다. 2 × 105 cells/mL 농도의 피부세포를 96 well cell culture plate에 각 100 μL씩 분주하고 24시간을 배양한 다음, 여기에 바실러스 화진포엔시스 균주의 추출물을 10 내지 100 μg/mL 농도로 처리하고 추가로 24시간을 배양하였다. 농도별로 3회 반복하여 실험하였다. 세포의 생활성은 MTT assay를 이용하여 비교하였고, 무처리군의 생활성을 100%로 보았을 때 추출물 처리군의 생활성을 표시하였다.
그 결과, 상기 산호에서 분리한 바실러스 화진포엔시스 균주는 피부 세포의 생장에 영향을 미치지 않아 피부 세포에 대해 안전성을 갖는 것을 확인하였다 (도 2 참조).
실시예 4. 바실러스 화진포엔시스 ( Bacillus hwajinpoensis ) 균주의 피부 미백 효과 확인
바실러스 화진포엔시스 균주의 피부 미백 효과를 하기와 같이 실험하였다.
구체적으로, 상기 실시예 2에서 수득한 산호에서 분리한 바실러스 화진포엔시스 균주의 추출물을 멜라닌 생성 세포 (B16 melanoma cell)에 처리하여 미백 효과를 평가하였다. 4 × 104 cells/well의 농도로 멜라닌 생성 세포를 24 well cell culture plate에 분주한 후, 24시간 동안 배양하여 실험에 이용하였다. 멜라닌 생성을 유도하기 위해 α-MSH (α-Melanocyte-stimulating hormone)를 1 μM로 처리하고 동시에 바실러스 화진포엔시스 균주의 추출물을 10 내지 50 μg/mL로 농도별로 처리하였다. 농도별로 3회 반복하여 실험하였다. 추가로 72시간 동안 배양하고 배지 내 멜라닌 함량을 비교하기 위해 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 생성을 유도한 군의 흡광도를 100%로 보았을 때 추출물을 처리한 군의 멜라닌 생성 유도 정도를 %로 표시하였다.
그 결과, 추출물을 멜라닌 생성 세포에 처리 시 농도 의존적으로 멜라닌의 생성을 억제하여 바실러스 화진포엔시스 균주가 피부 미백 효과를 가지는 것을 알 수 있었다(도 3 참조).
본 명세서의 일 측면에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제형예 1. 유연화장수
상기 실시예 2의 바실러스 화진포엔시스 배양액 0.01 중량%, 글리세린 3 중량%, 부틸렌 글리콜 2 중량%, 프로필렌 글리콜 2 중량%, 카복시비닐폴리머 0.1 중량%, 에탄올 10 중량%, 트리에탄올아민 0.1 중량% 및 잔량의 방부제, 미량 색소, 미량 향료 및 미량 정제수를 혼합하여 통상의 유연화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
제형예 2. 영양화장수
상기 실시예 2의 바실러스 화진포엔시스 배양액 0.01 중량%, 밀납 4 중량%, 폴리소르베이트 60 1.5 중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%, 유동파라핀 5 중량%, 스쿠알란 5 중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5 중량%, 글리세린 3 중량%, 부틸렌 글리콜 3 중량%, 프로필렌 글리콜 3 중량%, 카복시비닐폴리머 0.1 중량%, 트리에탄올아민 0.2 중량%, 잔량의 방부제, 미량 색소, 미량 향료 및 미량 정제수를 혼합하여 통상의 영양화장수 제조방법에 따라 제조하였다.
제형예 3. 영양크림
상기 실시예 2의 바실러스 화진포엔시스 배양액 0.01 중량%, 밀납 10 중량%, 폴리소르베이트 60 1.5 중량%, 소르비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%, 유동파라핀 10 중량%, 스쿠알란 5 중량%, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5 중량%, 글리세린 5 중량%, 부틸렌 글리콜 3 중량%, 프로필렌 글리콜 3 중량%, 트리에탄올아민 0.2 중량% 및 잔량의 방부제, 미량 색소, 미량 향료 및 미량 정제수를 혼합하여 통상의 영양크림 제조방법에 따라 제조하였다.
제형예 4. 팩
상기 실시예 2의 바실러스 화진포엔시스 배양액 0.01 중량%, 폴리비닐알콜 13 중량%, 소듐카복시메틸셀룰로스 0.2 중량%, 알란토인 0.1 중량%, 에탄올 5 중량%, 노닐페닐에테르 0.3 중량% 및 잔량의 방부제, 미량 색소, 미량 향료 및 미량 정제수를 혼합하여 통상의 팩 제조방법에 따라 제조하였다.
이상, 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 실시 태양일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의해 정의된다고 할 것이다.
[수탁번호]
기탁기관명 : 한국미생물보존센터
수탁번호 : KCCM12051P
수탁일자 : 20170627
[미생물 기탁증]
Figure PCTKR2018010855-appb-I000001
Figure PCTKR2018010855-appb-I000002

Claims (10)

  1. 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 균주는 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 SNC 135인, 피부 미백용 조성물.
  3. 제 2항에 있어서,
    상기 균주는 서열번호 1의 염기서열을 포함하는 16S rDNA를 갖는 것인, 피부 미백용 조성물.
  4. 제 1항에 있어서,
    상기 배양물은 전분, 효모 추출물, 펩톤 및 해염으로 이루어진 군에서 선택되는 1 이상을 포함하는 배양 배지에서 배양한 것인, 피부 미백용 조성물.
  5. 제 1항에 있어서,
    상기 추출물은 에틸아세테이트 분획물인, 피부 미백용 조성물.
  6. 제 1항에 있어서,
    상기 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) 균주; 이의 파쇄물; 이의 배양물; 또는 상기 균주, 파쇄물 또는 배양물의 추출물은 조성물 전체 중량을 기준으로 0.001 내지 30 중량%로 포함되는, 피부 미백용 조성물.
  7. 제 1항에 있어서,
    상기 조성물은 멜라닌 생성을 억제하는 것인, 피부 미백용 조성물.
  8. 제 1항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인, 피부 미백용 조성물.
  9. 기탁번호가 KCCM12051P인 바실러스 화진포엔시스 (Bacillus hwajinpoensis) SNC 135 균주.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 균주는 피부 미백 기능을 가지는 것인, 균주.
PCT/KR2018/010855 2017-09-15 2018-09-14 바실러스 화진포엔시스의 배양물 또는 이의 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물 WO2019054800A1 (ko)

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