KR101953072B1 - 신규한 락토바실러스 가세리 skb1102 균주 또는 이를 함유하는 안티폴루션 기능이 있는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주에 관한 것으로서, 상기 균주는 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 효능, 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 효능 등의 복합기능을 나타내어, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이의 추출물 등은 피부상태 개선과 관련된 화장료 조성물로 용이하게 이용될 수 있다.

Description

신규한 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주 또는 이를 함유하는 안티폴루션 기능이 있는 화장료 조성물 {Novel lactic acid bacteria Lactobacillus gasseri SKB1102, or Cosmetic composition comprising the same for anti-pollution}

본 발명은 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 기능이 있는 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주 또는 이를 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 균주 또는 이를 포함하는 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 기능이 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부표피는 화학물질이 침입하는 것과 몸 안의 수분이 증발하는 것을 막는 장벽이다. 각질층은 10~25%의 수분을 함유하고 있으며 표피층은 70%의 수분을 함유하고 있다. 피부의 pH 또한 표면의 경우, 5.0~6.0의 약산성을 나타내나, 피부 속 진피층의 pH는 체액과 유사한 중성을 나타낸다. 한편 연령 및 체질에 따라 피부노화의 진행이나 겨울철 또는 잦은 일반 비누 세정으로 인한 피부건조의 영향으로 각질층 수분의 함량이 10% 이하가 되면 피부 탄력도 및 윤기의 저하, 잔주름과 피부 갈라짐 현상이 일어난다. 또한 사람의 피부는 미세먼지 및 자외선에 노출됨으로써 피부 주름, 탄력저하, 색소침착 등으로 인해 노화단계를 거치게 되고 피부장벽의 손상으로 인하여 수분감소, 각질유발, 건선, 여드름 등이 발생하게 된다.

근래에 주목받고 있는 피부의 손상원인 중 하나인 미세먼지(Fine dust) 또는 초미세먼지는 지름이 2.5~10 ㎛ 오염물질(pollution material, PM)이나 2.5 ㎛ 이하의 오염물질을 의미하며, 직접적으로 피부 장벽기능을 손상시키고 피부염의 악화를 유발시킨다. 미세먼지의 입자 크기는 매우 작기 때문에 모낭을 통해 피부 밑까지 침투할 수 있다. 따라서 아토피나 알레르기 질환자 또는 민감성 피부를 가진 환자가 아니라도 영향을 미칠 수 있다. 미세먼지가 피부에 침투하게 되면 활성산소를 생산하여 우리 피부의 미토콘드리아에 손상을 주어 콜라겐 합성을 감소시키고 분해를 증가시키고 멜라닌 세포를 자극하여 색소침착을 유발하기 때문에 색소침착 및 주름 모공확장 등의 피부노화 현상이 심해질 수 있다.

미세먼지는 피부에 침투했을 때 활성산소를 발생시켜 피부에 영향을 미치므로 미세먼지로부터 피부를 보호하기 위해서는 활성산소 생산을 줄이고 미치는 영향을 막을 수 있는 항산화제가 포함된 기초화장품을 사용하는 것이 좋다. 또한 미세먼지 자체가 피부장벽기능을 감소시킬 수 있기 때문에 수분을 충분히 섭취해주고 보습제 사용을 생활화 하는 것이 도움이 될 수 있다.

코스메슈티컬(Cosmeceutical)이란 단어는 화장품 성분과 의약성분이 합성된 제품을 의미하는 말로 화장품 전문가들에 의해 1990년대부터 사용되기 시작했다. 앨버트 클리그만 박사에 의해 코스메슈티컬 개발이 시작되었다고 한다. 클리그만 박사는 비타민 A의 골격을 가진 화합물을 칭하는 레티노이드가 우리 피부에 탁월한 효과가 있음을 발견하였다. 코스메슈티컬 화장품은 성형보형물인 필러나 미백, 보습 등 의학적으로 검증된 기능성 성분을 통해 기능성화장품의 역할을 하도록 사용된다. 주로 여드름성 피부의 피지 분비량 조절, 각질케어, 피부장벽 강화기능 등을 담은 세럼, 크림, 오일, 립, 에센스 등 부위에 맞게 특화된 타입으로 판매된다.

코스메슈티컬 화장품의 소재가 되는 미생물군에는 유산균이 있다. 일반적으로 유산균은 경구섭취 후, 장 점막에 존재하는 면역세포와의 상호작용에 의해 인체 내에서 면역증강효과 등을 나타낸다. 프로바이오틱스로 대표되는 유산균은 대부분 그람 양성세균으로 세포막 외부에 세포벽이 존재하며 세포벽은 펩티도글리칸, 지질단백질, 테이코익산의 복합적인 층 구조를 이루고 있다. 이 세포벽 구성성분들은 인간의 장내 점막에서 발현되는 PRR (pattern recongnition receptor)에 의해 MAMP와 결합하여 면역반응을 일으킨다. 이러한 외부 상재균총과의 상호작용을 매개하는 수용체는 장 점막뿐만 아니라 피부에도 존재하고 있어 유산균 소재를 일부 피부 화장품에 사용하고 있다. 그러나 이러한 유산균 소재를 코스메슈티컬 소재의 바르는 화장품 성분으로 사용하기 위해서는 과학적 입증을 해야하나 아직까지는 발효화장품 또는 유산균 발효액 수준의 낮은 단계로 적용하고 있으며, 단순히 제품 하나의 효과만을 위해서 사용하고 있는 실정이다. 따라서 피부의 손상상태에 따라 각 단계를 모두 해결하는 3중 효과를 가진 제제가 요구된다.

해마다 반복되는 중국발 황사와 산업화에 따른 공기오염물질인 미세먼지는 노출된 피부의 민감성 증가(1단계)-피부장벽의 손상에 따른 보습력 저하(2단계)-피부수분함량 감소에 따른 탄력저하(3단계)의 피부노화 캐스케이드(cascade)를 나타나게 된다.

이에 본 발명자들은 피부민감도의 가속화 원인물질인 미세먼지가 피부장벽에 미치는 원인을 분석하여 피부층에 적용시, 미세먼지 제거효과-피부보습-피부탄력으로 이어지는 안티폴루션 캐스케이드 효과를 모두 갖추고 있는 코스메슈티컬 소재로서의 3-in-1 제제의 개발을 프로바이오틱스 제제인 락토바실러스 가세리 SKB1102를 통해 입증하여 본 발명을 최종 완성하였다.

대한민국 공개특허 제10-2014-0128675호 (발명의 명칭 : 피부 주름 개선 및 보습 효능을 갖는 신규의 락토바실러스 가세리 ＨＹ７０２５ 유산균 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품, 출원인 : (주)주식회사한국야쿠르트, 공개일 : 2014년11월06일) 대한민국 공개특허 제10-2016-0038864호 (발명의 명칭 : 비배당체가 세포내에 축적되어 있는 미생물 제제의 제조방법 및 이에 의해 제조된 미생물 제제, 출원인 : 주식회사 알엔에이, 공개일 : 2016년04월07일) 대한민국 공개특허 제10-2010-0054428호 (발명의 명칭 : 인삼 또는 인삼추출물로부터 유산균인 락토바실러스 가세리ＫＣＴＣ 3163 발효에 의한 당항상성 개선용 추출물 및 그의 제조방법, 출원인 : 한국식품연구원, 공개일 : 2010년05월25일) 대한민국 등록특허 제10-1614141호 (발명의 명칭 : 발효인삼종자 오일의 수율을 증가시키는 방법, 출원인 : 한국식품연구원, 등록일 : 2016년04월14일)

본 발명의 목적은 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 기능이 있는 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주 또는 이를 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 데에 있다. 또한 본 발명의 목적은 상기 균주 또는 이를 포함하는 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 기능이 있는 화장료 조성물을 제공하는 데에 있다.

본 발명은 안티폴루션 기능을 갖는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주에 관한 것이다.

상기 균주는 대기 중에 포함된 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 기능이 있는 것을 특징으로 한다.

상기 균주는 피부자극 완화 효능을 가질 수 있다.

상기 균주는 환경 유해인자로 인해 증가된 CYP1A1(Cytochrome P450, family 1, member A1), 인터루킨-8 및 인터루킨-1β로 이루어진 군 중에서 선택되는 유전자의 발현을 저해하는 효능을 가질 수 있다.

상기 균주는 인간섬유아세포 또는 인간각질형성세포 중 1종 이상 선택되는 피부 세포의 증식 효능이 있는 것을 특징으로 한다.

상기 균주는 피부보습 효능이 있는 것을 특징으로 한다.

상기 균주는 아쿠아포린-3(Aquaporin-3) 및 CD-44 중 선택되는 보습인자의 발현을 증강시킬 수 있다.

상기 균주는 피부의 탄력개선 효능이 있는 것을 특징으로 한다.

상기 균주는 피부 탄력 관련 인자인 제1형 콜라겐(Collagen type I)의 생성을 증진시킬 수 있다.

본 발명은 또한 상기 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주의 균체, 이의 배양액 또는 이를 추출한 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 안티폴루션 기능, 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 기능이 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

상기 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 그룹에서 선택되는 제형을 가질 수 있다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명의 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주는 MRS 아가배지 또는 MRS 액체배지에서 배양할 수 있으며, 25~40℃, pH 4.0~6.5, 16시간~2일 동안 배양가능하다.

본 발명의 화장료 조성물에는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주의 균체, 상기 균체를 포함하는 배양액, 상기 균체가 제외된 배양액 또는 이들의 추출물이 포함될 수 있는데, 상기 추출물은 추출용 시료를 각각 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 프로필렌글리콘, 부틸렌글리콜, 글리세린 또는 이들의 혼합액을 추출용매로 하여 추출할 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 4의 저급알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

상기 추출물의 제조시 사용되는 추출용매는 혼합물 사용 중량 기준 1~40배 부피(1kg 기준 1~40ℓ)를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 5~40배 부피를 사용할 수 있다. 상기 추출물의 추출조건은 20~100℃에서 1분~48시간일 수 있다. 상기 과정은 1~4번까지 반복할 수 있다.

또한, 당분야의 통상적인 방법으로서 상기 추출물을 물에 녹인 후에 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 추가적으로 분획하여 분획물로 제조할 수 있다. 또한 상법에 따라, 유기용매(알코올, 에테르, 아세톤, 헥산, 메틸렌클로라이드, 초산에틸 등)에 의한 추출, 헥산, 부탄올 등의 유기용매와 물의 분배, 칼럼크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용하여 분획 또는 정제하여 사용할 수 있다.

상기 추출물의 제조온도는 20 내지 100℃일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 추출 시간은 특별히 제한되는 것은 아니나, 10분 내지 2일 이내에 추출하는 것이 바람직하며, 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다.

상기 추출물 제조시, 추출액을 여과할 때, 상기 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체 입자를 제거하는 과정으로 면, 나일론, 종이 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 이용할 수 있으나 이에 제한되지 않는다.

상기 추출물 제조시의 추출 방법은 특별히 제한되지 않고 추출물의 종류와 추출하는 방법에 따라 예를 들어, 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 상온 추출, 열수 추출 등을 이용할 수 있다.

이렇게 제조된 추출물은 열풍건조, 감압건조, 동결건조, 진공건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수 있다.

또한, 상기 추출물은 칼럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수 있다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 엘에이취-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.

본 발명의 균주 또는 이를 포함하는 화장료 조성물은 대기 중에 포함된 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 효능을 갖는 것을 특징으로 하는데, 이 때, 상기 중금속은 비중이 4 이상인 금속류로서 수은(13.5), 카드뮴(8.7), 납(11.3), 구리(8.9) 등의 최대 23의 비중을 갖는 것일 수 있다.

본 발명은 상기 락토바실러스 가세리 SKB1102을 함유하는 화장료 조성물이 제공되는데, 상기 조성물에는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주, 이의 배양액, 또는 이의 추출물이 0.1~20 중량%가 포함될 수 있다.

상기 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 그룹에서 선택될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 성분이 추가로 포함될 수 있다.

수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.

유용성 비타민으로서는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.

고분자 펩티드로서는 화장료에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.

고분자 다당으로서는 화장료 조성물에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.

스핑고 지질로서는 화장료 조성물에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.

해초 엑기스로는 화장료 조성물에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에는 또한 통상의 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수도 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.

에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.

탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.

실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.

불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.

동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.

보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.

수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.

지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.

수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.

지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.

에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.

계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE(폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP(폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.

음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.

양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.

양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.

유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.

유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.

자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.

살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.

산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.

pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.

알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.

또한 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 내지 5 중량%, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 중량%로 배합될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명은 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102) 균주에 관한 것으로서, 상기 균주는 미세먼지, 황사, 차량 배기가스, 다이옥신, 벤조피렌 및 중금속으로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 환경 유해인자에 대한 안티폴루션 효능, 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 효능 등의 복합기능을 나타내어, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이의 추출물 등은 피부상태 개선과 관련된 코스메슈티컬 소재의 화장료 조성물로 용이하게 이용될 수 있다. 대한민국 공개특허 제10-2014-0128675호에도 락토바실러스 가세리 HY7025 균주가 주름개선 및 보습효능이 있다고 공지되어 있기는 하지만, 상기 균주가 본 발명의 균주와 같은 안티폴루션 효능이 있음은 전혀 암시 또는 개시된 바 없다.

도 1은 본 발명의 락토바실러스 가세리 SKB1102의 morphology를 나타내는 현미경 사진이다.
도 2는 본 발명의 락토바실러스 가세리 SKB1102의 유전학적 위치를 나타내는 계통수 그림이다.

이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.

<실시예 1. 균주의 유전학적/생리학적 특징 확인>

본 발명자들은 안티폴루션 효능이 있는 화장료에 적용가능한 유산균 또는 이의 배양물을 찾기 위해, 미세먼지 원인물질 제거(removal)-손상피부수복(regeneration)-회복피부방어(defense) 효과를 나타내는 군 중에 상대활성이 가장 우수한 SKB1102 균주를 선별하였다(이 균주의 활성은 실시예 2 내지 6에 개시되어 있고, 선별과정에서 확인된 다른 균주들과 이를 종합적으로 비교한 결과는 실시예 7에 나타내었다).

먼저, 선발된 SKB1102 균주의 동정을 위해 16S rRNA 유전자 서열비교를 통한 계통유전학적 분석(phylogenetic analysis)을 수행하였다. 블라스트 유사성 조사 프로그램(Blast similarity search program: National Institute of Biotechnology Information)을 이용하여 SKB1102 균주의 16S rRNA(서열번호 1)와 락토바실러스 가세리 표준균주인 ATCC 33323의 16S rRNA의 염기서열을 비교하였다. 그 결과, 두 균주간에 99%의 높은 상동성을 나타내었다. 또한 GenBank에 등록된 동일 계열의 균주들(Strains)의 16S rRNA 유전자 서열들과 함께 각각 다중 서열 정렬을 진행한 후, 계통수(phylogenetic tree)에서의 위치를 판별하였다. 계통수 상에서 SKB1102 균주의 16S rRNA 유전자는 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri)에 가장 가까운 위치에 배치되었다.

상기와 같이 SKB1102 균주를 분자생물학적으로 동정한 결과, 이 균주는 락토바실러스 가세리로 분류되었다. 따라서 안티폴루션의 3-캐스케이드 작용을 하는 상기 균주를 '락토바실러스 가세리 SKB1102'로 명명하고 이를 한국미생물보존센터(Korean Culture Center of Microorganisms, KCCM, http://www.kccm.or.kr/)에 수탁하였다(수탁번호: KCCM12342P).

한편, 이 외의 상기 락토바실러스 가세리 SKB1102의 특성은 다음과 같다. 균주의 형태학적 특성을 확인하기 위해, MRS 한천평판배지에서 37℃ 조건에서 1일간 배양했을 때, 세포의 형태는 간균(연쇄상)이며, 운동성은 없는 것으로 확인된다. 균주의 포자형성능은 확인되지 않으며, 그람(Gram) 양성의 균주이다. 균주 균락의 형태는 반투명 회색빛을 띠는 원형의 매끄러운 균락을 짓는 것이 확인된다. 균주의 생리학적 특성을 확인하였을 때, 25~40℃에서 배양가능하고, 최적 생육온도는 37℃이다. 생육가능한 pH는 4.0~6.5 이고, 최적 생육 pH는 6.0~6.5인 것으로 나타났다. 최적 생육시간은 18 시간이며 최소 16시간, 최대 2일 동안 배양가능하다. 통성혐기성 균주로서 가스는 생성하지 않은 것을 확인하였다.

<실시예 2. 락토바실러스 가세리 SKB1102의 인간섬유아세포에 대한 세포독성 확인>

락토바실러스 가세리 SKB1102를 MRS 액상배지(pH 4.5)에 접종하고 37℃, 150 rpm에서 30 시간 배양한 뒤, 600 nm 흡광도 5.5에 맞춘 배양액을 3000 rpm, 10분간 원심분리하여 균체를 제거한 상등액만 취하여 이후 실험들의 시료로 사용하였다

24-well cell culture plate에 Human fibroblast(ATCC)를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%) 배양한 뒤 Serum-free 배지로 교체하였다. 24시간 뒤, 상기 배양액의 상등액 시료를 농도별로 처리하여 24시간 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였으며, 배양이 끝난 후 세포에 2.5 ㎎/㎖의 MTT 용액을 10배 희석시킨 배지로 교체하여 반응시킨 후 배지를 제거하였다. 다음으로 DMSO를 넣어 생성된 MTT formazan 결정체를 용해시키고 540 nm에서 흡광도를 측정하였으며 이에 대한 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

락토바실러스 가세리 SKB1102가 인간섬유화세포에 미치는 세포독성 확인
Sample	Concentration (%, v/v)	Expression rate (%)	Stdev.	p-value
Control		100.00	4.48	1.0000
SKB1102	0.1	99.49	0.82	0.8553
	0.5	107.46	2.01	0.0580
	1.0	101.98	8.53	0.7465
	1.5	101.52	3.54	0.6683
	2.0	99.83	2.82	0.9581
	3.0	111.45	2.27	0.0168
	5.0	108.11	7.65	0.1882

그 결과, [표 1]에서 보는 바와 같이, 0.1(v/v)% 내지 5.0(v/v)% 로 락토바실러스 가세리 SKB1102를 인간섬유아세포에 처리하여 세포독성을 평가하였을 때, 모든 농도구간에서 독성을 나타내지 않았으며 3.0(v/v)% 이상의 농도에서는 세포가 더 성장하여 세포재생효과도 있는 것으로 확인된다.

<실시예 3. 락토바실러스 가세리 SKB1102의 인간피부각질세포에 대한 세포독성 확인>

24-well cell culture plate에 normal human keratinocyte (gibco)를 접종하여 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료(실시예2와 동일)를 농도별로 처리하여 24시간 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였으며, 배양이 끝난 후 세포에 2.5 ㎎/㎖의 MTT 용액을 10배 희석시킨 배지로 교체하여 반응시킨 후 배지를 제거하였다. 이후, DMSO를 넣어 생성된 MTT formazan 결정체를 용해시키고 흡광도를 측정하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다.

락토바실러스 가세리 SKB1102가 인간각질형성세포에 미치는 세포독성 확인
Sample	Concentration (%, v/v)	Expression rate (%)	Stdev.	p-value
Control		100.00	0.64	1.0000
SKB1102	0.1	117.08	1.17	0.0000
	0.5	117.58	5.85	0.0066
	1.0	118.88	3.84	0.0011
	1.5	114.79	3.19	0.0014
	2.0	115.20	2.76	0.0008
	3.0	112.28	1.43	0.0002
	5.0	112.20	0.68	0.0000

그 결과, [표 2]에서 보는 바와 같이, 0.1(v/v)% ~5.0(v/v)% 농도구간으로 락토바실러스 가세리 SKB1102를 인간각질형성세포에 처리하여 세포독성을 평가하였을 때, 모든 농도구간에서 독성을 나타내지 않았으며 모든 처리군에서 인간각질형성세포가 성장하여 이 세포에서도 피부재생효과가 있음을 확인할 수 있다.

<실시예 4. 락토바실러스 가세리 SKB1102의 미세먼지 PM2.5로 인한 민감성 감소효과 확인>

6-well plate에 Immortalized human keratinocyte를 6 x 10⁵ seeding하여 37℃, CO₂ 5% 24시간 배양하였다. 24시간 뒤, HBSS 로 washing 후, PM2.5(공기중에서 수집된 2.5㎛ 크기 내외의 미세먼지 또는 황사 등의 표준 물질) 10 ㎍/㎖을 포함한 serum free 배지로 교체 및 시료(실시예2와 동일)를 농도 별(1%, 2%, 2.5%)로 처리여 1일 동안 배양하였다. 배양 후, 세포를 TRIzol로 모아 RNA를 분리한 후, 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 ㎍의 RNA로 cDNA를 합성하여 표 3의 프라이머 서열을 이용하여 Real-time PCR을 실시하였고, 이에 대한 결과는 표 4 내지 표 6에 나타내었다.

피부 민감도 관련 단백질의 mRNA 발현 확인용 프라이머 염기서열
구분		염기서열
CYP1A1	Forward	5’- GGG ACC AGT CGG AAG GGA T-3’
	Reverse	5’- CAC AGA TGG ACA GGC TGC CT-3’
IL-8	Forward	5’- CTG GCC GTG GCT CTC TTG-3’
	Reverse	5’- CCT TGG CAA AAC TGC ACC TT-3’
IL-1β	Forward	5’-ACG AAT CTC CGA CCA CCA CT-3’
	Reverse	5’-TCC ATG GCC ACA ACA ACT GA-3’
β-Actin	Forward	5’-GGC ACC CAG CAC AAT GAA G -3’
	Reverse	5’-CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG -3’

CYP1A1 mRNA 발현 확인 결과
Sample		Expression rate(%)	Stdev.	P-value
Control		4.49	0.24	0.0000
PM 2.5	10 ㎍/㎖	100.00	0.00	1.0000
PM 2.5 + Resveratrol	20 μM	67.67	0.44	0.0000
PM 2.5 + SKB1102	1.0(v/v)%	105.55	5.62	0.1624
	2.0(v/v)%	99.84	2.16	0.9021
	2.5(v/v)%	69.12	0.42	0.0000

인터루킨-8 (IL-8) mRNA 발현 확인 결과
Sample		Expression rate(%)	Stdev.	P-value
Control		4.49	0.24	0.0000
PM 2.5	10 ㎍/㎖	100.00	0.00	1.0000
PM 2.5 + Resveratrol	20 μM	67.67	0.44	0.0000
PM 2.5 + SKB1102	1.0(v/v)%	107.44	3.84	0.0285
	2.0(v/v)%	99.76	3.87	0.0389
	2.5(v/v)%	72.36	1.11	0.0001

인터루킨-1β mRNA 발현 확인 결과
Sample		Expression rate(%)	Stdev.	P-value
Control		46.73	2.02	0.0000
PM 2.5	10 ㎍/㎖	100.00	0.00	1.0000
PM 2.5 + Resveratrol	20 μM	74.39	0.52	0.0000
PM 2.5 + SKB1102	1.0(v/v)%	105.29	1.82	0.0073
	2.0(v/v)%	95.28	7.15	0.0674
	2.5(v/v)%	80.26	12.02	0.1373

상기 표 4 내지 6의 CYP1A1, 인터루킨-8, 인터루킨-1β는 피부세포가 미세먼지 등의 자극으로 인해 민감성이 증가하여 나타나는 각종 안티폴루션 관련 인자로서, 표 4의 CYP1A1 mRNA 발현 결과를 참고하면, 락토바실러스 가세리 SKB1102를 1.0~2.5 (v/v)% 처리시, 2.5 (v/v)% 에서 양성대조군과 유사한 30.88% 민감성 개선효과를 나타내는 것이 확인된다.

또한, 표 5의 인터루킨-8 mRNA 발현 결과를 참고하면, 락토바실러스 가세리 SKB1102를 1.0~2.5 (v/v)% 처리시, 2.5 (v/v)% 에서 비처리군 대비 27.64% 민감성 개선효과를 나타내고, 표 6의 인터루킨-1β mRNA 발현 결과를 참고하면, 락토바실러스 가세리 SKB1102를 1.0~2.5 (v/v)% 처리시, 2.5 (v/v)% 에서 비처리군 대비 19.74% 민감성 개선효과를 나타내는 것을 알 수 있다.

이와 같은 결과들은 본 발명의 락토바실러스 가세리 SKB1102가 피부자극의 완화 효능이 있음을 제시한다.

<실시예 5. 락토바실러스 가세리 SKB1102의 보습효과 확인>

60 mm culture dish에 Normal human keratinocyte (gibco)를 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료(실시예 2와 동일)를 농도별로 처리하여 24시간동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 제조사의 방법에 따라 RNA를 분리하였고, 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 ㎍의 RNA로 cDNA를 합성하여 보습관련 인자인 Aquaporin-3 및 CD-44에 대해 표 7의 프라이머를 이용하여 Real-time PCR을 실시하였으며, 이에 대한 결과는 표 8 및 표 9에 나타내었다.

보습관련 단백질의 mRNA 발현 확인용 프라이머 염기서열
구분		염기서열
Aquaporin-3	Forward	5’- GGG ACC AGT CGG AAG GGA T-3’
	Reverse	5’- CAC AGA TGG ACA GGC TGC CT-3’
CD-44	Forward	5’- GCT ATT GAA AGC CTT GCA GAG-3’
	Reverse	5’- CGC AGA TCG ATT TGA ATA TAA CC-3’
β-Actin	Forward	5’-GGC ACC CAG CAC AAT GAA G -3’
	Reverse	5’-CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG -3’

CD-44 mRNA 발현 확인 결과
Sample	Concentration (%, v/v)	Expression rate (%)	Stdev.	p-value
Control		100.00	0.00	1.0000
SKB1102	1.0	104.92	7.13	0.29766
	2.0	110.84	4.16	0.00117
	2.5	114.86	8.25	0.00644
Retinoic acid	100 nM	138.40	12.35	0.00575

Aquaporin-3 mRNA 발현 확인 결과
Sample	Concentration (%, v/v)	Expression rate (%)	Stdev.	p-value
Control		100.00	0.00	1.0000
SKB1102	1.0	118.19	16.89	0.01587
	2.0	124.76	16.93	0.01524
	2.5	130.34	11.59	0.00109
Retinoic acid	100 nM	229.17	6.75	0.00005

그 결과, 표 8을 참고하면, Keratinocyte에 존재하며 보습효과를 매개하는 CD-44의 발현에 관여하는 유전자 수준이 락토바실러스 가세리 SKB1102 2.5(v/v)% 처리할 때, 비처리군 대비, 14.86% 증가하는 보습효과를 나타낸다.

또한, 표 9를 참고하면, Membrane pore protein으로 물분자의 이동에 관여하는 단백질인 AQP-3의 발현에 관여하는 유전자 수준이 락토바실러스 가세리 SKB1102 2.5(v/v)%가 처리될 때, 비처리군 대비 30.34% 증가하여 뛰어난 보습효과를 갖는 것을 알 수 있다.

<실시예 6. 락토바실러스 가세리 SKB1102의 탄력효능 확인>

60 mm culture dish에 human fibroblast (ATCC)를 1일 (37℃, CO₂ 5%)배양한 뒤 Serum-free 배지로 교체하였다. 24시간 뒤, 시료(실시예2와 동일)를 농도별로 처리하여 24시간동안 37℃, CO₂ 5% incubator에 배양하였다. 배양 후 세포를 TRIzol로 모아 RNA를 분리하였으며, 분리된 RNA를 정량한 뒤 1 ㎍의 RNA로 cDNA를 합성하고 피부탄력 또는 주름개선 관련 인자인 Collagen-I에 대한 표 10의 프로이머를 이용하여 Real-time PCR을 실시하였다. 이에 대한 결과는 표 11에 나타내었다.

Collagen-I 단백질의 mRNA 발현 확인용 프라이머 염기서열
구분		염기서열
Collagen type I	Forward	5’- AGC AAG AAC CCC AAG GAC AA-3’
	Reverse	5’- CGA ACT GGA ATC CAT CGG TC-3’
β-Actin	Forward	5’-GGC ACC CAG CAC AAT GAA G -3’
	Reverse	5’-CCG ATC CAC ACG GAG TAC TTG -3’

Collagen-I mRNA 발현 확인 결과
Sample	Concentration (%, v/v)	Expression rate (%)	Stdev.	p-value
Control		100.00	0.00	1.0000
Vitamin C 100 ㎍/㎖		123.11	5.42	0.0018
SKB1102	1.0	120.91	2.42	0.0000
	2.0	128.95	3.08	0.0000
	3.0	135.41	0.16	0.0001

표 11을 참고하면, 락토바실러스 가세리 SKB1102 3.0(v/v)% 처리하였을 때, 피부탄력과 관련된 Collagen-I 단백질의 mRNA 발현율이 현저하게 증가되는 것이 확인된다.

<실시예 7. 락토바실러스 가세리 SKB1102 선별과정 중 확인된 비교균주의 효능>

실시예 2 내지 실시예 6의 결과를 바탕으로 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주를 선별하는 과정에서 비교측정된 각 유산균들의 효능을 하기 표 12에 나타내었다. 이 때 표 2의 결과는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주의 효능을 100% 기준으로 하여 나타내었다.

Strain	3-in-1 antipollution cascade effects
	민감성 완화효과 (Relative activity, %)	보습작용 (Relative activity, %)	탄력효능 (Relative activity, %)
SKB1093	55	64	60
SKB1094	<50	53	<50
SKB1211	58	67	76
SKB1233	70	<50	66
SKB1192	64	58	82
SKB1234	55	77	76
SKB1281	78	<50	69
SKB1212	82	78	80
SKB2031	67	72	82
SKB1121	59	<50	54
SKB1081	78	66	<50
SKB4031	69	67	77
SKB1213	<50	58	65
SKB3041	66	78	66
SKB3031	82	<50	88
SKB1261	76	69	58
SKB1021	69	80	<50
SKB3021	<50	82	78
SKB1291	79	54	72
SKB1262	67	72	89
SKB3032	61	<50	56
SKB1101	82	72	78
SKB1235	89	64	<50
SKB1236	75	53	64
SKB1022	<50	67	78
SKB3022	58	82	76
SKB1263	64	<50	89
SKB5031	66	82	78
SKB4032	78	89	<50
SKB1082	<50	73	66
SKB4033	71	<50	82
SKB1083	<50	66	68
SKB1102	100	100	100
SKB5041	<50	62	<50
SKB1023	62	<50	88
SKB1095	88	77	75
SKB1237	85	82	80
SKB2032	74	89	80
SKB3033	<50	65	59
SKB5042	<50	<50	<50

<화장료 제형예 1. 유연 화장수의 제조>

하기 표 13의 조성과 같이, 락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액(균체 제외 후 멸균)을 함유한 유연 화장수(스킨, 100g)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액	3.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
폴리옥시에칠렌(60)경화 피마자유	1.0
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔량

<화장료 제형예 2. 영양 화장수의 제조>

락토바실러스 가세리 SKB1102의 균체를 70(v/v)% 에탄올 수용액으로 추출한 후 용매를 제거한 농축액을 얻고, 이 농축액을 표 14와 같이 함유한 영양 화장수(로션, 100g)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102 균체의 농축액	1.0
시토스테롤	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세테아레스	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	10.0
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.3
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

<화장료 제형예 3. 영양크림의 제조>

하기 표 15의 조성과 같이, 락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액(균체 제외 후 멸균)을 함유한 영양크림(100g)을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액	5.0
시토스테롤	4.0
폴리글리세릴 2-올레이트	3.0
세라마이드	0.7
세테아레스-4	2.0
콜레스테롤	3.0
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	22.0
카르복시비닐폴리머	0.5
트리에탄올아민	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

<화장료 제형예 4. 에센스의 제조>

하기 표 16의 조성과 같이, 락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액(균체 제외 후 멸균)을 함유한 에센스(100g)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액	1.0
시토스테롤	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세테아레스-4	2.0
콜레스테롤	3.0
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
선플라워오일	22.0
카르복시비닐폴리머	0.5
트리에탄올아민	0.5
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

<화장료 제형예 5. 파운데이션의 제조>

하기 표 17의 조성과 같이, 락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액(균체 제외 후 멸균)을 함유한 파운데이션(100g)을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액	1.0
밀납	2.0
사이클로메치콘	2.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	5.0
스테아린산	2.0
친유성 모노스테아린산 글리세린	3.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	4.0
프로필렌글리콜	3.0
부틸렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	1.0
알루미늄마그네슘실리케이트	0.5
안료	12.0
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

<화장료 제형예 6. 헤어샴푸의 제조>

하기 표 18의 조성과 같이, 락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액(균체 제외 후 멸균)을 함유한 헤어샴푸(100g)를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

원료	함량 (g)
락토바실러스 가세리 SKB1102의 배양액	3.0
아라키딜 글루코사이드	4.5
에탄올	2.0
부틸렌글리콜	2.0
시트르산	0.1
페녹시에탄올	0.02
정제수	잔량

[수탁기관]

수탁기관명 : 한국미생물보존센터

수탁번호 : KCCM12342P

수탁일자 : 20181016

<110> SK bioland Co., Ltd. <120> Novel lactic acid bacteria Lactobacillus gasseri SKB1102, or Cosmetic composition comprising the same for anti-pollutio <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1503 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Lactobacillus gasseri <400> 1 cgaacgctgg cggcgtgcct aatacatgca agtcgagcga gcttgcctag atgaatttgg 60 tgcttgcacc aaatgaaact agatacaagc gagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt 120 aacctgccca agagactggg ataacacctg gaaacagatg ctaataccgg ataacaacac 180 tagacgcatg tctagagttt aaaagatggt tctgctatca ctcttggatg gacctgcggt 240 gcattagcta gttggtaagg taacggctta ccaaggcaat gatgcatagc cgagttgaga 300 gactgatcgg ccacattggg actgagacac ggcccaaact cctacgggag gcagcagtag 360 ggaatcttcc acaatggacg caagtctgat ggagcaacgc cgcgtgagtg aagaagggtt 420 tcggctcgta aagctctgtt ggtagtgaag aaagatagag gtagtaactg gcctttattt 480 gacggtaatt acttagaaag tcacggctaa ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag 540 gtggcaagcg ttgtccggat ttattgggcg taaagcgagt gcaggcggtt caataagtct 600 gatgtgaaag ccttcggctc aaccggagaa ttgcatcaga aactgttgaa cttgagtgca 660 gaagaggaga gtggaactcc atgtgtagcg gtggaatgcg tagatatatg gaagaacacc 720 agtggcgaag gcggctctct ggtctgcaac tgacgctgag gctcgaaagc atgggtagcg 780 aacaggatta gataccctgg tagtccatgc cgtaaacgat gagtgctaag tgttgggagg 840 tttccgcctc tcagtgctgc agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga gtacgaccgc 900 aaggttgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa 960 ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc agtgcaaacc taagagatta 1020 ggagttccct tcggggacgc tgagacaggt ggtgcatggc tgtcgtcagc tcgtgtcgtg 1080 agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aacccttgtc attagttgcc atcattaagt 1140 tgggcactct aatgagactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg acgtcaagtc 1200 atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtgctacaat ggacggtaca acgagaagcg 1260 aacctgcgaa ggcaagcgga tctctgaaag ccgttctcag ttcggactgt aggctgcaac 1320 tcgcctacac gaagctggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcacgccgcg gtgaatacgt 1380 tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca ccatgagagt ctgtaacacc caaagccggt 1440 gggataacct ttataggagt cagccgtcta aggtaggaca gatgattagg gtgaatctaa 1500 aag 1503

Claims (12)

1. 미세먼지에 대한 안티폴루션 기능 및 피부자극 완화 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102(Lactobacillus gasseri SKB1102, 수탁번호: KCCM12342P) 균주.
2. 삭제
3. 삭제
4. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 환경 유해인자로 인해 증가된 CYP1A1(Cytochrome P450, family 1, member A1), 인터루킨-8 및 인터루킨-1β로 이루어진 군 중에서 선택되는 유전자의 발현을 저해하는 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
5. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 인간섬유아세포 또는 인간각질형성세포 중 1종 이상 선택되는 피부 세포의 증식 효능이 있는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
6. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 피부보습 효능이 있는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
7. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 아쿠아포린-3(Aquaporin-3) 및 CD-44 중 선택되는 보습인자의 발현을 증강시키는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
8. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 피부의 탄력개선 효능이 있는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
9. 제1항에 있어서,
   상기 균주는 피부 탄력 관련 인자인 제1형 콜라겐(Collagen type I)의 생성을 증진시키는 기능이 있는 것을 특징으로 하는 락토바실러스 가세리 SKB1102 균주.
10. 제1항의 균주의 균체, 이의 배양액 또는 이를 추출한 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 안티폴루션 기능이 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
11. 제10항에 있어서,
    상기 조성물은 피부자극 완화 효능, 피부세포의 증식 효능 또는 피부보습 기능이 있는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
12. 제10항 또는 제11항에 있어서,
    상기 조성물은 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 파운데이션, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 이루어진 그룹에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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