WO2013117120A1

WO2013117120A1 - 2-芳基苯并呋喃-7-甲酰胺类化合物、其制备方法及用途

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Publication number: WO2013117120A1
Application number: PCT/CN2013/070410
Authority: WO
Inventors: 杨春皓; 缪泽鸿; 丁健; 王猛; 贺金雪; 谭村; 陈奕
Original assignee: 中国科学院上海药物研究所
Priority date: 2012-02-09
Filing date: 2013-01-14
Publication date: 2013-08-15
Also published as: US20150018542A1; RU2583900C2; CA2863988A1; EP2813495B1; JP5926821B2; BR112014019402B1; BR112014019402A2; CN103242273B; JP2015511942A; EP2813495A1; RU2014132159A; CA2863988C; US9533965B2; CN103242273A; BR112014019402A8; EP2813495A4

Abstract

本发明提供了一种如通式Ⅰ所示的2-芳基苯并呋喃-7-甲酰胺化合物或其药理或生理上可接受的盐，其制备方法及它们在制备抗肿瘤药物中的用途，其中，R₁和R₂各自独立地为氢、C₁-C₄的直链或支链烷基、C₃-C₄的环烷基或者含有氧或氮的饱和五元或六元杂环基；或者R₁和R₂与N形成含有至少一个杂原子的未取代或取代的饱和的五元或六元杂环基，其中，所述杂原子为O、N和S，所述取代基为在N上的甲基；R₃为氢原子或氯原子；R₄为氢原子或氟原子；X为CH、CF或N；Y为CH、CF或N。

Description

2-芳基苯并呋哺 -7-甲酰胺类化合物、其制备方法及用途

技术领域

本发明属于药物化学和药物治疗学领域。具体涉及一类 2-芳基苯并呋喃 -7-甲酰胺类化合物或其药理或生理上可接受的盐，其制备方法及它们在制备治疗与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶相关的疾病如恶性肿瘤的药物中的应用。

背景技术

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（Poly(adenosine diphosphate [ADP] -ribose) polymerase, PARP)是一类存在于多数真核细胞中的细胞核酶。它的主要功能是以烟酰胺腺嘌吟二核苷酸（Nicotinamide adenine dinucleotide, NAD⁺) 为底物合成聚 ADP核糖体 (Poly ADP-ribose), PAR)并将其转移至受体蛋白，调控蛋白的功能。（参考文献： Schreiber, V.; Dantzer, R; Ame, J. C; de Murcia, G. Poly(ADPribose)： novel functions for an old molecule. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006, 7, 517-528. )。 PARP家族已经有 16种同系物被发现，但就严格的结构和功能标准来讲仅有 6 个成员具有聚 ADP 核糖聚合酶的作用，分别是： PARPl , PARP2, PARP3 , PARP4 (VPARP) , Tankyrasel禾口 Tankyrase2，而其它家族成员很可能是作为单 ADP核糖转移酶发挥作用（参考文献: Rouleau, Μ·; Patel, A.; Hendzel, M. J.; Kaufmann, S. H.; Poirier, G. G. PARP inhibition: PARPl and beyond. Nat. Rev. Cancer 2010, 10, 293-301. )。在 PARP家族中，仅 PARPl和 PARP2能够被 DNA链的断裂激活并介导聚 ADP核糖化，经由碱基切除修复（Base-excision repair, BER)途径参与 DNA单链断裂损伤的修复。聚 ADP核糖化引起损伤部位的染色质解聚，启动修复机制，加速 DNA损伤的修复，从这一方面讲 PARP1和 PARP2在整个过程中起着检测 DNA损伤和信号传感器的双重作用。人类 PARP1是一条分子量为 113 kDa的多肽链，包含 3个功能性结构域。位于 N-末端的 DNA结合结构域 (DNA binding domain, DBD)包含两个锌指 (Zinc finger), 识别 DNA单链和双链断裂。自修饰结构域 (Automodification domain)位于中间部分， PARP1通过该区与 ADP核糖基结合，发生 PARP 自身聚腺苷二磷酸核糖基化。 C-末端为催化结构域 (Catalytic domain), 是把 NAD⁺转化为 ADP核糖的基础，是 PARP 1发挥作用的活性结构。人类 PARP2是一条分子量为 62 kDa的多肽链。 PARP2的 DNA结合结构域与 PARP1有所不同，相应地它的主要功能是识别损伤链上由于核苷酸丢失而形成的空隙。 PARP2 C-末端的催化结构域与 PARP1 的催化结构域基本相似，但其结构上细微的差别还是反应出它们所催化的目标蛋白的差异。 PARP1和 PARP2通过碱基切除修复在 DNA损伤修复、基因组稳定性、细胞凋亡调节方面发挥重要作用，使其成为近年来最受关注的抗肿瘤药物研究靶点之一。 (参考文献： Yelamos, J.; Farres, Jordi.; Llacuna, L.; Ampurdanes, C; Caballero, J. M. PARP-1 and PARP-2: New players in tumour development. Am. J. Cancer Res. 2011, 1(3), 328-346. )。此外 PARP在炎症发生、缺血再灌注等过程中发挥重要作用表明其在除恶性肿瘤之外疾病（如糖尿病、心血管疾病等）的治疗中也有潜在的应用价值。（参考文献： Peralta-Leal, A.; Rodriguez- Vargas, J. Μ·; Aguilar-Quesada, R.; Rodriguez, M. I.; Linares, J. L.; de Almodovar, M. R.; Oliver, F. J. PARP inhibitors: new partners in the therapy of cancer and inflammatory diseases. Free Radical Biol. Med. 2009, 47, 13 - 26·)。

2005年， Nature杂志报道了单独使用 PARP 1/2抑制剂对 BRCA1/2缺失的乳腺细胞有显著抑制作用（参考文献： Bryant, H. E.; Schultz, N.; Thomas,H. D.; Parker, K. Μ·; Flower, D.; Lopez, E.; Kyle, S.; Meuth, M.; Curtin, N. J.; Helleday, T. Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase. Nature 2005, 434, 913 - 917·禾口 Farmer, H.; McCabe, N.; Lord, C. J.; Tutt, A. N.; Johnson, D. A.; Richardson, T. B.; Santarosa, M.; Dillon, K. J.; Hickson, I.; Knights, C; Martin, N. M.; Jackson, S. P.; Smith, G. C; Ashworth, A. Targeting the DNA repair defect in BRCA mutant cells as a therapeutic strategy. Nature 2005, 434, 917 - 921.)，成为 PARP 1/2抑制剂单独应用于抗肿瘤治疗的突破性研究进展。 DNA是不稳定的；暴露于恶劣的环境

(例如：紫外辐射、离子辐射等）、正常的细胞代谢副产物、一些 DNA化学键的断裂都会导致 DNA损伤。为了维持基因组的完整稳定性，正常的人体细胞每天要进行成千上万次因各种因素造成的 DNA 损伤的修复。主要的 DNA修复途径包括碱基切除修复、核苷酸切除修复（Nucleotide-excision repair, NER )、同源重组（Homologous recombination, HR ) 及非同源末端连接

(Nonhomologous end joining, NHEJ)。其中 PARP 1/2参与的 BER是最主要的 DNA单链断裂修复途径， HR是最主要的 DNA双链断裂修复途径。（参考文献： Hoeij makers, J. H. Genome maintenance mechanisms for preventing cancer. Nature 2001, 411, 366 - 74· )。 BRCAl/2是著名的抑癌基因，是 HR途径的关键修复因子。 BRCA1/2缺陷增加 DNA的不稳定性，导致恶性肿瘤的发生；这种细胞难以通过 HR途径进行 DNA双链断裂的修复，断裂最终导致细胞死亡。在 BRCA1/2缺陷的肿瘤细胞中，抑制 PARP1/2将导致 DNA单链断裂蓄积增加；当于行进中的复制叉碰撞时， DNA单链断裂将被转化为致死性双链断裂，最终导致细胞死亡。 BRCA1/2缺陷与 PARP1/2抑制共同杀伤细胞的这种现象称为协同致死（synthetic lethality) , 利用协同致死现象为恶性肿瘤的治疗提供了新策略和新思路，并因此开启了 PARP1/2抑制剂作为高选择性新型抗肿瘤药物研发的新时代（参考文献： Kaelin, W. G, Jr. The concept of synthetic lethality in the context of anticancer therapy. Nat. Rev. Cancer 2005, 5, 689 - 698； He JX, Yang CH, Miao ZH. PARP inhibitors as promising cancer therapeutics. Acta Pharmacol. Sin. 2010, 31, 1172-1180· )。

第一代的 PARP1/2抑制剂产生于 30年前，大多为烟酰胺类似物，但缺乏选择性和有效性。第二代的 PARP1/2抑制剂发展于 20世纪 90年代，建立了明确的构效关系，由此使 PARP1/2抑制剂有了更明确的结构特征。这些特征包括电荷丰富的芳环结构；至少含有一个游离氢的甲酰胺基团利于形成氢键；相对于甲酰胺药效团的 3-位必须存在一个不易断裂的化学键等等。（参考文献： Zaremba, Τ·; Curtin, N. J. PARP inhibitor development for systemic cancer targeting. Anti-Cancer Agents Med. Chem. 2007, 7, 515 - 523. )。目前至少已有 7种 PARP1/2抑制剂作为新型抗肿瘤药进入临床试验，并在进一歩进行中。（参考文献： C. Toulmondel, U. M.; Bonnefoi, H. A review of PARP inhibitors: from bench to bedside. Annals of Oncology 2011, 22(2), 268-79; Ferraris, D. V. Evolution of Poly(ADP-ribose) Polymerase- 1 (PARP- 1 ) Inhibitors. From Concept to Clinic. J. Med. Chem. 2010, 53, 4561-4584; 禾口 He JX, Yang CH, Miao ZH. PARP inhibitors as promising cancer therapeutics. Acta Pharmacol. Sin. 2010, 31, 1172-1180. )，但这些抑制剂依然存在许多缺点，如口服生物利用度较低，对除 PARP1/2以外的 PARP亚型缺乏选择性等。

众所周知， 2-芳基苯并呋喃类化合物在天然产物中广泛存在，由于具有良好的生物活性和潜在的药用价值，一直以来受到科研工作者的密切关注。一方面天然产物学家不断从天然产物中提取分离出结构新颖的 2-芳基苯并呋喃类化合物，并对其生物活性进行考察开发（参考文献： Halabalaki, M.; Aligiannis, Ν·; Papoutsi, Ζ·; Mitakou, S.; Moutsatsou, P.; Sekeris, C; Skaltsounis, A.-L. Three New Arylobenzofurans from Onobrychis ebenoides and Evaluation of Their Binding Affinity for the Estrogen Receptor. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1672-1674；和 Tsai, I. L.; Hsieh, C.-R; Duh, C.-Y. Additional Cytotoxic Neoligants From Perseaobovatifolia. Phytochemistry 1998, 48,1371-1375. )，另一方面化学家投入极大的精力发展优化一系列构建 2-芳基苯并呋喃类化合物的方法 (参考文献： Ziegert, R. Ε·; Torang, J. Knepper, K.; Brase, S. The Recent Impact of Solid-Phase Synthesis on Medicinally Relevant Benzoannelated Oxygen Heterocycles. J. Comb. Chem. 2005, 7, 147-169·禾 Π Chen, C. Y.; Dormer, P. G. Synthesis of Benzo [b] furans via Cul-Catalyzed Ring Closure. J. Org. Chem. 2005, 70, 6964-6967·和 Liang, Z. D.; Hou, W. Z.; Du, Y. R; Zhang, Y. L.; Pan, Y.; Mao, D.; Zhao, K. Oxidative Aromatic C-0 Bond Formation: Synthesis of 3-Functionalized Benzo [b] furans by FeCl₃-Mediated Ring Closure of a -Aryl Ketones. Org. Lett. 2009, 21, 4978-4981.等）。已报道的 2-芳基苯并呋喃类化合物显示了多种活性，例如视黄酸受体（retinoic acid receptor, RAR) 的激动剂

(参考文献： Santin, E.P.; Khanwalkar Η·; Voegel, J.; Collette, P.; Mauvais, P.; Gronemeyer, H.; A. R. de Lera. Highly Potent Naphthofuran-Based Retinoic Acid Receptor Agonists. ChemMedChem. 2009, 4, 780-791· )、微管蛋白聚合（Tubulin Polymerization) 的抑制齐 (J (参考文献： Flynn, B. L.; Hamel Ε·; Jung, M. K. One-Pot Synthesis of Benzo [bjfuran and Indole Inhibitors of Tubulin Polymerization. J. Med. Chem. 2002, 45, 2670-2673. )、金属蛋白酶

(Metalloproteinase)的抑制齐 (J (参考文献： Nakatani, S.; Ikura, Μ·; Yamamoto, S.; Nishita, Y.; Itadani, S.; Habashita, H.; Sugiura, T.; Ogawa, K.; Ohno, H.; Takahashi, K.; Nakai, H.; Toda, M. Design and synthesis of novel metalloproteinase inhibitors. Bioorg. Med. Chem. 2006, 14, 5402-5422. ) 以及抗菌齐 (J (参考文献： Emirdag-Oztiirk, S.; Karayildirim, Τ·; Anil, H. Synthesis of egonol derivatives and their antimicrobial activities. Bioorg. Med. Chem. 2011, 18, 1179-1188. ) 等等。其中一些化合物由于其良好的生物活性和潜在的巨大医药市场价值，已被申请知识产权保护，例如治疗***素 E2 受体

(prostaglandin E2 receptor) 相关疾病的用途（专利号： WO 2008/098978)、治疗***受体（cannabinoid receptor ) 相关疾病的用途（专利号： WO 2011/022679)、治疗***受体（estrogen receptor) 相关疾病的用途（专利号： WO 2009/124968)、抗细菌和真菌感染的用途（专利号： WO 2005/047275)、治疗膀胱肌肉反射性收缩疾病的用途（专利号： EP 0306226A2) 等等。以上所述已报道的 2-芳基苯并呋喃均未覆盖和涉及本发明所述的化合物及其作为 PARP1/2抑制剂的内容。

基于以上原因，发明人设计合成了一类新型高选择性 2-芳基苯并呋喃 -7- 甲酰胺类 PARP1/2抑制剂。本发明所涉及化合物具有明确的构效关系，部分化合物如 5b对 PARP1/2具有高度的选择性，而且有很好的生物利用度 (大鼠灌胃给予 5b 10 mg/kg后的绝对生物利用度为 58.9%，而 II期临床试验化合物 AZD2281 的大鼠口服生物利用度仅为 11.1%)。该类新型 PARP1/2抑制剂有望成为新型抗肿瘤药物。

发明内容

本发明的目的是提供一类通式 I所示的 2-芳基苯并呋喃 -7-甲酰胺化合物或其药理或生理

其中，

R1和 R2各自独立地为氢、 C1-C4的直链或支链烷基、 C3-C4的环烷基或者含有氧或氮的饱和五元或六元杂环基；

或者 R1和 R2与 N形成含有至少一个杂原子的未取代或取代的饱和的五元或六元杂环基，其中，所述杂原子为 0、 N和 S，所述取代基为在 N上的甲基；

R3为氢原子或氯原子；

R4为氢原子或氟原子；

X为 CH、 CF或 N; Y为 CH、 CF或 N，

优选地，

Rl为氢、甲基、乙基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基; R2为氢、甲基、乙基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基; 或者 R1和 R2与 N形成未取代或取代的吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基或四氢吡咯基，其中，所述取代基为在 N上的甲基；

R3为氢原子；

R4为氟原子；

X为 CH、 CF或 N;

Y为 CH、 CF或 N,

更优选地，

R1为氢或甲基；

R2为甲基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基；

或者 R1和 R2与 N形成未取代或取代的吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基或四氢吡咯基，其中，所述取代基为在 N上的甲基；

R3为氢原子；

R4为氟原子；

X为 CH、 CF或 N;

Y为 CH、 CF或N。

最优选地，本发明提供了如下表 1所示的化合物：

优选的，所述药理或生理上可接受的盐为盐酸盐。

本发明的另一目的是提供通式 I所示化合物的制备方法，合成路线如方 1所示：

方案 1 a) 使 5-位取代的水杨酸 1发生酯化反应生成化合物 2;

b) 使化合物 2发生碘代反应生成化合物 3;

c) 使化合物 3与化合物取代芳香炔 8先发生 Sonogashira反应再关环生成化合物 4;

d) 使化合物 4发生 ¾代反应生成化合物 6;

e) 使化合物 4或 6发生氨解反应分别生成化合物 5或 1(或 7);所述歩骤 a)的条件为：催化量酸存在下如浓硫酸存在下以甲醇为溶剂回流；

所述歩骤的条件为：以 Ν,Ν-二甲基甲酰胺为溶剂，与 Ν-碘代丁二酰亚胺氮气保护下室温搅拌至薄层色谱法检测反应完全；

所述歩骤 c)的条件为：以 Ν,Ν-二甲基甲酰胺为溶剂，二氯二三苯基膦钯、碘化亚铜为催化剂，二异丙基乙胺做碱，氮气保护下先室温反应 2-3小时，再在 50〜90°C反应至薄层色谱法检测反应完全；

所述歩骤的条件为：以四氢呋喃为溶剂，与 N-氯代丁二酰亚胺氮气保护下室温搅拌至薄层色谱法检测反应完全；

所述歩骤的条件为：以氨气的饱和甲醇溶液做溶剂，封管 70〜120°C 反应过夜；也可直接与浓氨水封管 70〜120°C反应搅拌过夜；

其中所涉及化合物取代 8的结构式如下：

其中， Rl、 R2、 R3、 R4、 X和 Y的定义如上所述。

本发明提供了化合物取代芳香炔 8不同的制备方法，合成路线为如下所的路线一或路线二：

路线二

f) 使化合物 9发生胺取代反应生成化合物 10;

g) 使化合物 10或 12发生 Sonogashira反应分别生成化合物 11或 13 ; h) 使化合物 11或 13脱去保护基分别生成化合物 8或 14;

i) 使化合物 14发生还原胺化分别生成化合物 8;

所述歩骤 f)的条件为：以 C1-C4的烷基胺或者含有一个杂原子 (氧 /氮 /硫:) 的五元或六元仲胺的饱和醇溶液作溶剂室温搅拌；

所述歩骤 g)的条件为：以四氢呋喃为溶剂，二氯二三苯基膦钯、碘化亚铜为催化剂，二异丙基乙胺做碱，氮气保护下与三甲基硅乙炔回流反应；所述歩骤 h)的条件为：以甲醇做溶剂，碳酸钾做碱室温搅拌反应；所述歩骤 0的条件为：以甲醇做溶剂，氰基硼氢化钠做还原剂，与不同的胺室温搅拌反应；

其中， Rl、 R2、 X和 Y的定义如上所述。

本发明的再一目的是提供通式 I所示化合物或其药理或生理上可接受的盐在制备抗肿瘤、抗炎等与 PARP相关疾病药物上的用途。具体实施方式

下面结合实施例对本发明所涉及化合物的结构和制备方法及体内外抑制

PARP1/2的活性作进一歩阐述，但不限制本发明。

所有实施例中， 5-氟水杨酸由上海毕得（书亚）医药科技有限公司供应，二氯二三苯基膦钯由上海奥普迪诗化学科技有限公司供应，三甲基硅基乙炔由大连化工研究设计院供应， 4-溴苯甲醛由上海邦成化工有限公司供应， N- 碘代丁二酰亚胺由上海达瑞化学有限公司供应，除特殊说明外的起始试剂、溶剂、材料均为国药试剂集团供应；微波反应使用 CEM NULL型微波反应仪进行； 1HNMR由 BrucherAM-400型或 GEMINI-300型核磁共振仪记录，化学位移以 δ (ppm) 表示；质谱由 Finnigan MAT-95 质谱仪或者 Agilent 1200-6110型单四极杆液相色谱质谱联用仪记录。熔点用 Buchi 510熔点仪测定，温度未经校正。分离用硅胶为青岛海洋化工厂生产 200-300 目柱层析硅胶。其中英文缩写所代表的化学试剂如下：

NBS N-溴代丁二酰亚胺

S N-碘代丁二酰亚胺

NCS N-氯代丁二酰亚胺

DMF N， N-二甲基甲酰胺

DIPEA二异丙基乙胺

THF 四氢呋喃化合物的制备与合成

实施例 1

5-氟水杨酸甲酯（化合物 2a) 的制备：

250毫升圆底烧瓶，加入搅拌磁子。将 10克（0.064 mol) 5-氟水杨酸溶解于 60 mL甲醇置于其中，冰浴下滴加浓硫酸 5 mL, 滴毕于 80°C油浴锅冷凝回流反应过夜。次日降至室温，旋转蒸发仪减压蒸去甲醇，加入乙酸乙酯 60 mL, 有机层分别用饱和碳酸氢钠溶液 50 mL、饱和氯化钠溶液 50 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =150: 1 ) 分离得浅色液体 10.0克，油泵抽净后固化为条形结晶状固体，收率 92%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 10.51 (s, 1Η), 7.50 (dd, J = 3.3, 8.7 Hz, 1H), 7.22-7.15 (m, 1H), 6.94 (q, J= 4.5Hz, 1H), 3.96 (s, 3H); MS (EI) M⁺:m/z (%) 170 (50)。

5-氟 -3-碘水：

100毫升圆底烧瓶，加入搅拌磁子。将 7克（0.041mol) 5-氟水杨酸甲酯 (化合物 2a) 溶解于 40mL DMF 置于其中，加入 11.1克（0.049 mol， 1.2 当量) NIS，氮气保护下室温搅拌反应过周末。反应完毕，加入乙酸乙酯 80 mL，有机层用饱和氯化钠溶液 50 mL洗两次，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =150: 1 ) 分离得白色絮状固体 10.8克，收率 89%。

ifi-NMR (300 MHz, CDC1₃) δ 11.37 (s, 1Η), 7.70 (dd, J= 3.3, 7.8 Hz, 1H), 7.56 (dd, J = 3.3, 8.7 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 297.0 (55)。

实施例 2

Ν,Ν-二甲 -l-(4-碘苯基)甲胺（化合物 10a) 的制备：

250毫升圆底烧瓶，加入 100 mL二甲胺水溶液，分三批加入 12 g (40 mmol) 对碘苄基溴（化合物 9)，室温搅拌过夜。次日乙酸乙酯萃取三次，有机层用无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =5:1 ) 分离得黄色液体 8.4克，收率 80%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.63 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.05 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.35 (s, 2H), 2.22 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 262.0 (100)。

N,N-二甲基 -l-{4- [(三甲基硅基)乙炔基]苯基 } -甲胺（化合物 11a)的制备：

250毫升圆底烧瓶，加入 9.03 g ( 34.5 mmol) Ν,Ν-二甲基 -l-(4-碘苯基) 甲胺（化合物 10a)、 6.86 g ( 70 mmol) 三甲基硅乙炔、 300 mg (0.35 mmol) 二氯二三苯基膦钯、 133 mg(0.7 mmol)碘化亚铜、 10 mL三乙胺、 100 mL THF, 抽真空换氮气三次后， 80°C油浴回流反应过夜。次日降至室温，旋转蒸发仪减压蒸去大部分溶剂，直接加硅胶拌样柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =5:1 ) 分离得棕色油状物 6.8克，收率 85%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.44 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.22 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.39 (s, 2H), 2.21 (s, 6H)， 0.24 (s, 9H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 232.0 (100)。

-二甲基 -l-(4-乙炔基苯基) -甲胺（化合物 8a) 的制备：

250毫升圆底烧瓶，将 8 g ( 34.6mmol) Ν,Ν-二甲基 -1-{4- [(三甲基硅基) 乙炔基]苯基甲胺（化合物 11a) 溶于甲醇 80 mL置于其中、加入 2.46 g ( 17.3mmol) 碳酸钾，抽真空换氮气三次后，室温反应两小时。反应毕旋转蒸发仪减压蒸去大部分溶剂，加入乙酸乙酯 80 mL，有机层用饱和氯化钠溶液 50 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =2:1 ) 分离得黄色液体 4.8克，收率 87%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.46 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.25 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.05 (s, 1H)， 2.21 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 160.2 (100)。

2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4a)的制备：

100毫升两口圆底烧瓶，加入 3.4 g (21.4 mmol) Ν,Ν-二甲基 -1-(4-乙炔基苯基) -甲胺（化合物 8a)、 3.16 g ( 10.7 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a)、 750 mg ( 1.07 mmol) 二氯二三苯基膦钯、 203 mg ( 1.07 mmol)碘化亚铜、 2.16 g (21.4 mmol) 三乙胺、 lO mL DMF, 抽真空换氮气三次后，先室温反应两小时,再 70°C油浴反应过夜。次日加入乙酸乙酯 60 mL，有机层用饱和氯化钠溶液 50 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析 (二氯甲烷 /甲醇 =60: 1 ) 分离得棕色油状物 1.7克，收率 48%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.90 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.64 (dd, J = 3.0, 9.3 Hz, 1H), 7.54 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.43 (dd, J= 3.0, 8.1 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.73 (s, 2H), 2.44 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 328.2 (100)。

2- 4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5- -7-甲酰胺（化合物 5a)的制备:

100毫升封管，加入 1.65 g ( 5 mmol) 2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4a) 和氨气的饱和甲醇溶液 50 mL, 80°C油浴反应过夜。次日降至室温，静置待析出针状结晶过滤，甲醇洗，得浅黄色针状结晶固体 1.18克，收率 75%。

ifiNMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 7.98-7.60 (m, 3Η), 7.89 (br s, 1H), 7.66 (dd, J= 3.0, 8.7 Hz, 1H), 7.49-7.43 (m, 4H), 3.45 (s, 2H)， 2.17 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 313.2 (100)。

实施例 3

_N-甲基 -l-(4-碘苯基)甲胺（化合物 10b) 的制备：

9 10b

20 g ( 67 mmol) 对碘苄基溴（化合物 9 ) 为原料，参照化合物 10a制备过程得黄色液体 13.8克，收率 83%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.63 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.06 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.68 (s, 2H), 2.43 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 248 (61)。

-甲基 -l-{4- [(三甲基硅基)乙炔基]苯基 } - ) 的制备：

13 g ( 52.6 mmol) N-甲基 -1 -(4-碘苯基)甲胺（化合物 10b)为原料，参照化合物 11a制备过程得棕色固体 9.1克，收率 80%。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 218.2 (87)。

N-甲基 -l-(4-乙炔基苯基) -甲胺（化合物 8b) 的制备：

8 g (36.8 mmol) N-甲基 -l-{4- [(三甲基硅基)乙炔基]苯基甲胺（化合物 l ib) 为原料，参照化合物 8a制备过程得棕色液体 4.6克，收率 86%。

ifiNMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 7.41 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.1Hz, 2H), 4.10 (s, 1H)， 3.64 (br s, 2H), 2.24 (br s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 146.1 (10)。

2-{4- [(甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯 (化合物 4b)的制备：

19 g (22 mmol) N-甲基 -l-(4-乙炔基苯基) -甲胺（化合物 8b)、 5.92 g (20 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状物 3.2克，收率 51%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.86 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.62 (dd, J = 2.7, 9.6 Hz, 1H), 7.44-7.41 (m, 3H), 7.00 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.82 (s, 2H)， 3.48 (s, 1H)， 2.49 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 314.1 (30)。

2-{4- [(甲 -5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5b) 的制备：

2.7 g ( 8.6 mmol) 2-{4- [(甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4b) 为原料，参照化合物 5a制备过程得米黄色粒状固体 1.81克，收率 70%。

ifiNMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 7.97-7.94 (m, 3Η), 7.88 (br s, 1H), 7.64 (dd, J = 2.7, 8.4 Hz, 1H), 7.50-7.42 (m, 4H), 3.70(s, 2H)， 2.28 (s, 3H); MS (EI) (M): m/z (%) 298 (100)。

实施例 4

N-甲基 -l-(4-乙炔基苯基) -甲胺（化合物 8b) 的制备：

100毫升圆底烧瓶，将 238 mg( 1.5 mmol)4-乙炔基苯甲醛溶于甲醇 10 mL 置于其中，加入 lOl mg ( 1.5 mmol) 甲胺盐酸盐、 142 mg (2.25 mmol)氰基硼氢化钠，室温反应三小时。反应毕加水用稀氢氧化钠溶液调 PH至 10，加入乙酸乙酯 50 mL萃取，有机层用饱和氯化钠溶液 30 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（石油醚 /乙酸乙酯 =1 : 1 ) 分离得棕色液体 133毫克，收率 61%。

实施例 5

2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5 ：苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 6a) 的制备：

100毫升两口圆底烧瓶，将 500 mg ( 1.53 mmol) 2-{4- [(二甲氨基）甲基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4a)溶于 20 mL四氢呋喃，冰浴下滴加 350 mg (2.6 mmol) NCS的四氢呋喃溶液 20 mL, 十五分钟滴毕后抽真空换氮气三次，室温反应过夜。次日加入乙酸乙酯 50 mL，有机层用饱和碳酸氢钠溶液 50 mL洗，饱和硫代硫酸钠溶液 50 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（二氯甲烷 /甲醇 =80:1 ) 分离得黄色粉末 170毫克，收率 31%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.12 (ά, J = 8.1 Hz, 2Η), 7.70 (dd, J = 2.7, 9.3 Hz, 1H), 7.47-7.44 (m, 3H), 4.04 (s, 3H), 3.50 (s, 2H), 2.27 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 362.1 (100), 364.1 (33)。

2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟 -3-氯苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 7a) 的制备：

50 mg ( 0.14 mmol) 2-{4- [(二甲氨基）甲基]苯基 }-5-氟 -3-氯苯并呋喃 -7- 甲酸甲酯(化合物 6a)为原料，参照化合物 5a制备过程得米白固体粉末 38 mg, 收率 79%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.99 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 7.84 (dd, J=2.1, 9.6 Hz, 1H), 7.47 (d, J= 8.7 Hz, 2H), 743 (dd, J= 2.7, 7.2 Hz, 1H) 6.28 (s, 1H), 3.50 (s, 2H), 2.28 (s, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 347.1 (100), 349.1 (33)。

实施例 6 ^: 關

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82 mg (0.56 mmol) N-甲基 -l-(5-乙炔基 -2-吡啶基)甲胺（化合物 8c)、 166 mg (0.56 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a 制备过程得浅黄色粉末 10毫克，收率 5.7%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 9.07 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 7.66 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.42 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.94 (s, 2H), 2.51 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 315.1 (100)。

2-{6- [(甲氨基)甲基] -3-吡啶基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5c) 的制备：

10 mg (0.032 mmol) 2-{6- [(甲氨基）甲基] -3-吡啶基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4c) 为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 5毫克，

^!HNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 9.09 (s, 1Η), 8.32 (dd, J = 2.1, 8.1 Hz, 1H), 7.58-7.51 (m, 3H), 7.44 (s, 1H), 3.96 (s, 2H), 2.49 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 300.1 (100)。

实施例 7

6- [(三甲基硅基:)乙炔基]吡啶 -3-甲醛（化合物 13b) 的制备：

279 mg ( 1.5 mmol) 6-溴 -吡啶 -3-甲醛为原料，参照化合物 11a制备过程得黄色粉末 222毫克，收率 73%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 10.09 (s, 1Η), 9.01 (s, 1H), 8.12 (dd, J = 1.2, 8.1 Hz, 1H), 7.59(d, J = 1.2 Hz, 1H), 0.28 (s, 9H); MS (ESI) (M+H)十： m/z (%) 204.1 (22)。

6-乙

304 mg ( 1.5 mmol) 6- [(三甲基硅基)乙炔基]吡啶 -3-甲醛（化合物 13b) 为原料，参照化合物 8a制备过程得白色絮状固体 175毫克，收率 89%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 10.12 (s, 1Η), 9.04 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.15 (dd, J= 2.1, 8.1 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 8.1 Hz, 1H), 3.39 (s,lH); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 132.1 (59)。

N-甲基 -l- 6-乙炔基 -3-吡啶基)甲胺（化

196 mg ( 1.5 mmol) 6-乙炔基-吡啶 -3-甲醛 (化合物 14b) 为原料，参照实施例 4制备过程得棕色油状物 76毫克，收率 35%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.52 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.65 (dd, J = 2.1, 8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.12 (s,lH)， 2.45 (s,3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 147.1 (100)。

2-{5- [(甲氨基)甲基] -2-吡啶基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4d) 的制

73 mg ( 0.50 mmol) N-甲基 -1-(6-乙炔基 -3-吡啶基)甲胺（化合物 8d)、 148 mg (0.50 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a 制备过程得棕色粉末 71毫克，收率 45%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.62 (s, 1Η), 7.99 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 1.8, 7.1 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 2.7, 9.6 Hz, 1H), 7.49(dd, J= 2.4, 8.7 Hz, IH), 7.44 (s, IH), 4.05 (s,3H), 3.84 (s, 2H), 2.49 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)十: m/z (%) 315.1 (100)。

2-{5- [(甲氨基)甲基] -2-吡啶基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5d) 的制备：

50 mg (0.16 mmol) 2-{5- [(甲氨基)甲基] -2-吡啶基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4d) 为原料，参照化合物 5a制备过程得浅棕色粉末 37毫克，收率 78%。

ifiNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.63 (s, IH), 8.06 (d, J = 8.4 Hz, IH), 7.94 (dd, J = 1.8, 8.1 Hz, IH), 7.67-7.58 (m, 3H), 3.82 (s, 2H), 2.43 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 300.1 (100)。

实施例 8

4- [(三甲基硅基)乙炔基 ]-2-氟苯甲醛（化合物 13c) 的制备：

l g (4 mmol) 3-氟 -4-碘苯甲醛为原料，参照化合物 11a制备过程得棕色油状物 495毫克，收率 56%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 10.32 (s, IH), 7.79 (t, J = 7.8 Hz, IH), 7.32 (d, J= 7.8 Hz, IH), 7.24 (m, IH), 0.26 (s, 9H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 221.0 (10)。

4-乙炔基 -2-氟苯甲醛（化合物 14c) 的制备：

440 mg (2 mmol) 4- [(三甲基硅基)乙炔基 ]-2-氟苯甲醛（化合物 13c) 为原料，参照化合物 8a制备过程得黄色固体 208毫克，收率 70%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 10.34 (s, 1Η), 7.83 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 3.34 (s, 1H)。

208 mg ( 1.4 mmol) 4-乙炔基 -2-氟苯甲醛（化合物 14c)为原料，参照化合物实施例 4制备过程得黄色油状物 95毫克，收率 42%。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 164.1 (38)。

2-{4- [(甲氨基)甲基] -3-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4e) 的

3a 8e

95 mg (0.58 mmol) N-甲基 -l-(4-乙炔基 -2-氟苯基)甲胺（化合物 8e)、 156 mg (0.52 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a 制备过程得黄色粘稠液体 58毫克，收率 34%。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 332.1 (100)。

2-{4- [(甲氨基)甲基] -3-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5e) 的制备：

58 mg (0.17 mmol) 2-{4- [(甲氨基)甲基] -3-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4e) 为原料，参照化合物 5a制备过程得浅黄色粉末 24毫克，收率 43%。

ifiNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.83-7.76 (m, 2Η), 7.64 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.57-7.50 (m, 2H), 7.41 (s, 1H), 4.22 (s, 2H), 2.71 (s, 3H); MS (ESI) I+H) m/z (%) 317.2 (100)。

实施例 9 l-(4-乙炔基苄基)四氢吡咯（化合物 80 的制备：

50毫升圆底烧瓶，将 130 mg ( 1 mmol) 4-乙炔基苯甲醛溶于甲醇 10 mL 置于其中，加入 71 mg ( 1 mmol) 四氢吡咯、 126 mg (2 mmol) 氰基硼氢化钠、 120 mg (2 mmol) 冰醋酸，室温反应三小时。反应毕加水用稀氢氧化钠溶液调 PH至 10，加入乙酸乙酯 50 mL萃取，有机层用饱和氯化钠溶液 30 mL 洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（二氯甲烷 /甲醇 =30: 1 ) 分离得无色液体 130毫克，收率 70%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.44 (d, J= 7.5 Hz, 2H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.04 (s, 1H)， 2.51 (m, 4H), 1.79(m, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 186.2 (100)。

2-{4-[(l-四氢吡咯基)甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 40 的制：

105 mg (0.57 mmol) l-(4-乙炔基苄基)四氢吡咯（化合物 80、 168 mg ( 0.57 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状物 14毫克，收率 7%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.85 (d, J = 6.3 Hz, 2H), 7.62 (dd, J = 2.1, 7.1Hz, 1H), 7.45-7.41 (m, 3H), 7.00 (s, 1H), 4.05 (s,3H), 3.67 (s, 2H), 2.54 (m, 4H), 1.80 (m, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 354.2 (100)。 2-{4-[(l-四氢吡咯基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 80 的制备：

12 mg ( 0.03 mmol) 2-{4-[(l-四氢吡咯基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4f) 为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 6毫克，收率 52%。

ifiNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.92 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.47-7.56 (m, 4H), 7.30 (s, 1H), 3.73 (s, 2H), 2.62 (m, 4H)， 1.86-1.82 (m, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 339.2 (100)。

实施例 10 l-(4-乙炔基苄基) -4-甲基哌嗪（化合物 8g) 的：

156 mg ( 1.2 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 120 mg ( 1.2 mmol) N-甲基哌嗪为原料，参照化合物 8f制备过程得黄色液体 175毫克，收率 68%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.49 (s, 2H), 3.05(s, 1H)， 2.44(br s, 8H), 2.28(s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 215.2 (100)。

₂-_{4-[(4-甲基 -1-哌嗪基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4g)

83 mg ( 0.39 mmol) l-(4-乙炔基苄基) -4-甲基哌嗪（化合物 8g)、 115 mg (0.39 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状物 14毫克，收率 9.4%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.84 (ά, J = 8.4 Hz, 2Η), 7.62 (dd, J = 2.4, 9.6 Hz, 1H), 7.44-7.40 (m, 3H), 7.00 (s, 1H), 4.05(s,3H), 3.56(s, 2H), 2.50(br s, 8H), 2.30(s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 383.2 (100)。

2-{4-[(4-甲基 -1-哌嗪基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5g) 的制备：

10 mg (0.03 mmol) 2-{4-[(4-甲基 -1-哌嗪基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7- 甲酸甲酯（化合物 4g)为原料，参照化合物 18制备过程得白色粉末 7毫克，收率 73%。

ifiNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 7.90 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.56-7.45 (m, 4H), 7.29 (s, 1H), 3.58 (s, 2H), 2.52 (br s, 8H)， 2.28(s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 368.2 (100)。

实施例 11

-(4-乙炔基苄基)哌啶（化合物 8h) 的制备:

156 mg ( 1.2 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 102 mg ( 1.2 mmol) 哌啶为原料，参照化合物 8f制备过程得黄色液体 138毫克，收率 58%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.27 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.04 (s, 1H)， 2.36 (m, 4H), 1.60-1.53(m, 4H), 1.46-1.40(m, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 200.2 (100)。

2-{4-[(l-哌啶基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4h)的制备： °%98 ^ ςζζ m^ mm^ ^ ^^m 翁

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0ll70.0/Cl0ZN3/X3d οζΐ.ΐΐ/εΐοζ OA ^!HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.42 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.30 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.04 (s, IH), 2.71-2.57 (m, 8H), 2.35 (s, 3H), 1.84-1.78 (m, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 229.2 (100)。

2-{4-[(4-甲基 -1-高哌嗪基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4i)

198 mg (0.87 mmol) 1-(4-乙炔基苄基)高哌嗪（化合物 8i)、 257 mg (0.87 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状物 22毫克，收率 6.4%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.84 (ά, J = 8.1 Hz, 2H), 7.62 (dd, J = 2.4, 9.3 Hz, IH), 7.54-7.40 (m, 3H), 6.99 (s, IH), 4.04 (s,3H), 3.68(s, 2H), 2.71-2.57 (m, 8H), 2.41 (s, 3H), 1.84-1.78 (m, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 397.2 (100)。

₂-_{4-[(4-甲基 -1-高哌嗪基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5i) 的制备：

15 mg (0.04 mmol) 2-{4-[(1-四氢吡咯基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4i) 为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 11毫克，收率 76%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.78-7.72 (m, 3H), 7.47-7.36 (m, 4H), 7.02 (s, IH), 6.66 (br s, IH)， 3.68 (s, 2H), 2.76-2.64 (m, 8H), 2.38 (s, 3H), 1.88-1.80 (m, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 382.2 (100)。

实施例 13

l-(4-乙炔基苄基)吗啉（化合物 8j ) 的制备：

156 mg ( 1.2 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 104 mg ( 1.2 mmol) 吗啉为原料，参照化合物 8f制备过程得黄色液体 138毫克，收率 57%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.43 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.28 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 5.1 Hz, 4H), 3.48 (s, 2H), 3.05 (s, 1H), 2.43 (t, J=4.8 Hz, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 202.1 (100)。

₂-{4-[(l-吗啉基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4j ) 的制备：

113 mg (0.56 mmol) 1-(4-乙炔基苄基)吗啉（化合物 8j )、 166 mg ( 0.56 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 135毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 370.2 (100)。

₂-{4-[(l-吗啉基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5j )的制备：

110 mg 2-{4-[(1-吗啉基)甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4j ) 混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 15毫克，两歩为收率 9.2%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.80-7.68 (m, 3Η), 7.47-7.33 (m, 4H), 7.05 (s 1H), 6.31 (s, 1H), 3.73 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 3.56 (s, 2H), 2.47 (t, J = 4.8Hz, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 355.2 (100)。实施例 14

-(4-乙炔基苄基)硫代吗啉（化合物 8k) 的制备:

156 mg ( 1.2 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 124 mg ( 1.2 mmol)硫代吗啉为原料，参照化合物 8f制备过程得黄色液体 145毫克，收率 56%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.43 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.26 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.50 (s, 2H), 3.05(s, 1H), 2.67(br s, 8H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 218.1 (100)。

2-{4-[(l-硫代吗啉基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4k) 的制

120 mg ( 0.55 mmol) 1-(4-乙炔基苄基)硫代吗啉（化合物 8k)、 164 mg ( 0.55 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 170毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 386.1 (100)。

2-{4-[(l-硫代吗啉基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5k)的制备：

145 mg2-{4-[(l-硫代吗啉基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4k)混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 16毫克，两歩为收率 9.2%。 ^!HNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.81-7.68 (m, 3H), 7.48-7.39 (m, 4H), 7.05 (s IH), 6.28 (br s, IH), 3.57 (s, 2H), 2.74-2.68 (m, 8H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 371.1 (100)。

实施例 15

-[(4-乙炔基苄基)氨基] -1-哌啶基甲酸叔丁酯（化合物 81) 的制备：

156mg ( 1.2mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 240mg ( 1.2 mmol) 4-氨基 -1-哌啶基甲酸叔丁酯为原料，参照化合物 8f 制备过程得黄色液体 330毫克，收率 85%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.44 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.26 (d, J= 9.3 Hz, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.05 (s, IH), 2.79 (t, J = 10.8 Hz, 2H), 2.64 (m, IH), 1.83 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.28 (m, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 315.2 (54)。

4-[4-(7-甲氧羰基 -5-氟 -2-苯并呋喃基)苄基氨基] -1-哌啶基甲酸叔丁酯（化合物

181 mg (0.58 mmol) 4-[4-(7-甲氧羰基 -5-氟 -2-苯并呋喃基)苄基氨基] -1- 哌啶基甲酸叔丁酯（化合物 81)、 170 mg ( 0.58 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯 (化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 44毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 483.3(95)。

4-[4-(7-氨基甲酰基 -5-氟 -2-苯并呋喃基)苄基氨基] -1-哌啶基甲酸叔丁酯 (化合物 51a) 的制备：

30 mg4-[4-(7-甲氧羰基 -5-氟 -2-苯并呋喃基)苄基氨基] -1-哌啶基甲酸叔丁酯（化合物 41)混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 15毫克，两歩为收率 8.1%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.79-7.74 (m, 3Η), 7.46-7.38 (m, 4H), 7.04 (s: IH), 6.31 (br s, IH), 4.04 (br s, 2H), 3.89 (s, 2H), 2.81 (t, J= 8.7Hz, 2H), 2.70 (m_; IH), 1.88 (m, 2H), 1.45 (s, 9H), 1.32 (m, 2H); MS (ESI) (M-99)⁺: m/z (%) 368.2 (100)。

₂_{4-[(4-哌啶基)氨基甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 51) 的制备：

15 mg ( 0.03 mmol) 4-[4-(7-氨基甲酰基 -5-氟 -2-苯并呋喃基)苄基氨基] -1- 哌啶基甲酸叔丁酯（化合物 51a) 置于 10毫升反应瓶，加入 2 mL二氯甲烷和 0.5 mL三氟乙酸，室温搅拌两小时后旋转蒸发仪旋干溶剂，加水后用稀氢氧化钠溶液调 PH至 10，加入乙酸乙酯 50 mL萃取，有机层用饱和氯化钠溶液 30 mL洗，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪蒸干，硅胶柱层析（二氯甲烷 / 甲醇 =10:1 ) 分离得白色粉末 6毫克，收率 51%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.79-7.68 (m, 3Η), 7.46-7.37 (m, 4H), 7.04 (s_: IH), 6.52 (br s, IH), 3.88 (s, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.61 (m, 3H), 1.92 (m, 2H), 1.32 (br s, 2H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 368.2 (100)。

实施例 16

( ：

130 mg ( 1 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 124 mg ( 1 mmol) (R)-3-氨基四; 喃为原料，参照实施例 4制备过程得黄色油状物 108毫克，收率 54%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.44 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 7.28 (d, J= 6.0 Hz,

2H), 3.92 (m, 1H)， 3.81-3.74 (s, 4H), 3.61 (m, IH), 3.41 (m, 1H)， 3.06 (s, IH),

2.10 (m, IH), 1.74 (m, IH); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 202.1 (95)。

(R)-2- {4-[(3-四氢呋喃基氨基)甲基]苯基 } -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物

98 mg (0.49 mmol) (R)-N-(4-乙炔基苄基) -3-氨基四氢呋喃（化合物 8m)、 144 mg (0.49 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 100毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺:m/z (%) 370.2 (95)。

(_R)-₂-{4-[(3-四氢呋喃基氨基：)甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5m) 的制备：

90 mg(R)-2-{4-[(3-四氢呋喃基氨基)甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4m)混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 7毫克，两歩为收率 4.5%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.80-7.74 (m, 3Η), 7.45 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.40 (m, 2H), 7.04 (s, IH), 6.37 (s, IH), 4.00-3.92 (m, IH), 3.85-3.75 (m, 4H), 3.69-3.64 (m, IH), 3.50-3.43 (m, IH), 2.20-2.08 (m, IH), 1.85-1.78 (m,lH); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 355.2 (100)。

实施例 17

N-(4-乙炔基苄基)环丙胺（化合物 8n) 的制备：

253 mg ( 1.95 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 111 mg ( 1.95 mmol)环丙胺为原料，参照化合物 8f制备过程得无色液体 272毫克，收率 79%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.44 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.26 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.05 (s, IH), 2.16-2.09 (m, IH), 0.46-0.33 (m, 4H) MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 172.2 (30)。

2-[4- (环丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4η) 的制备：

83 mg (0.49 mmol) N-(4-乙炔基苄基)环丙胺（化合物 8n)、 144 mg (0.49 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 95毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 340.2 (60)。

2-[4- (环丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5η) 的制备:

95 mg2-[4- (环丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4n) 混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 12 毫克，两歩为收率 7.6%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃/CD₃0D) δ 7.75-7.68 (m, 3Η), 7.41-7.35 (m, 3H), 7.02 (s, IH), 3.84 (s, 2H), 2.16-2.09 (m, IH), 0.48-0.35 (m, 4H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 325.2 (52)。

实施例 18 -(4-乙炔基苄基)异丙胺（化合物 8ο) 的制备:

260 mg (2 mmol) 4-乙炔基苯甲醛、 120 mg (2 mmol) 环丙胺为原料，参照化合物 8f制备过程得无色液体 272毫克，收率 79%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.43 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 7.26 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.04 (s, IH)， 2.89-2.78 (m, IH), 1.08 (d, J= 6.3 Hz, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 174.2(73)。

2-[4- (异丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4ο) 的制备：

110 mg (0.63 mmol) N-(4-乙炔基苄基)异丙胺（化合物 8o)、 188 mg (0.63 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a制备过程得棕色油状混合物 165毫克。

MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 342.2 (100)。

2-[4- (异丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5ο) 的制备:

160 mg2-[4- (异丙胺基甲基)苯基] -5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4ο) 混合物为原料，参照化合物 5a制备过程得白色粉末 13毫克，两歩为收率 6%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.74-7.72 (m, 3Η), 7.43-7.35 (m, 4H), 7.02 (s IH), 6.36 (s, IH), 3.82 (s, 2H), 2.85 (m, IH), 1.09(d, J=6.3Hz, 6H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 327.(100)o

实施例 19 4- [(三甲基硅基)乙炔基 ]-3-氟苯甲醛（化合物 13d) 的制备:

101 mg (0.5 mmol) 3-氟 -4-溴苯甲醛为原料，参照化合物 11a制备过程得黄色固体 102毫克，收率 92%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 9.96 (d, J = 1.2, IH), 7.61-7.54 (m, 3H), 0.28 (s, 9H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 221.1 (100)。

4-乙炔基 -3-氟苯甲醛（化合物 14d) 的制备：

440 mg (2 mmol) 4- [(三甲基硅基)乙炔基 ]-3-氟苯甲醛（化合物 13d) 为原料，参照化合物 8a制备过程得白色絮状固体 260毫克，收率 88%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 9.97 (s, IH), 7.68-7.57 (m, 3H), 3.57 (s, IH); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 149.1 (10)。

N-甲基 -l-(4-乙炔基 -3-氟苯基)甲胺（化合物 8p) 的制备：

14d ⁸P

222 mg ( 1.5 mmol) 4-乙炔基 -3-氟苯甲醛（化合物 14d) 为原料，参照实施例 4制备过程得黄色油状物 182毫克，收率 74%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 7.42 (ά, J = 7.8 Hz, IH), 7.09-7.04(m, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.27 (s,lH), 2.43 (s,3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 164.1 (26)。

2-{4- [(甲氨基)甲基] -2-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4p) 的制

82 mg ( 0.50 mmol) N-甲基 -l-(4-乙炔基 -3-氟苯基)甲胺（化合物 8p)、 148 mg (0.50 mmol) 5-氟 -3-碘水杨酸甲酯（化合物 3a) 为原料，参照化合物 4a 制备过程得棕色粉末 15毫克，收率 9%。

ifiNMR (300 MHz, CDC1₃) δ 8.05 (t, J= 7.8 Hz, 1H), 7.64 (dd, J= 2.7, 9.3 Hz, 1H), 7.44 (dd, J = 2.7, 8.1 Hz, 1H), 7.24-7.12 (m, 3H), 4.04 (s,3H), 3.80 (s, 2H), 2.47 (s, 3H); MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 332.1 (10)。

2-{4- [(甲氨基)甲基] -2-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5p) 的制备：

10 mg (0.03 mmol) 2-{4- [(甲氨基)甲基] -2-氟苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酸甲酯（化合物 4p) 为原料，参照化合物 5a制备过程得浅棕色粉末 6毫克，收率 63%。

ifiNMR (300 MHz, CD₃OD) δ 8.03 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.55 (m, 2H), 7.34-7.24 (m, 3H), 3.77 (s, 2H), 2.40 (s, 3H; MS (ESI) (M+H)⁺: m/z (%) 317.2 (50)。

实施例 20

2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺盐酸盐的制备：

250毫升反应瓶，置入 937 mg (3 mmol) 2-{4- [(二甲氨基)甲基]苯基 }-5- 氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5a)，室温搅拌加甲醇至溶解。溶解后滴入 235.5 mg ( 3 mmol)乙酰氯，搅拌半小时后旋干溶剂得白色粉末 1.02克，收率 98%，熔点 232-234 °C。 ^!HNMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 10.96 (br s, 1H), 8.09 (d, J= 8.1 Hz, 2H)_: 7.95 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.76-7.68 (m, 3H), 7.61 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 2.4 9.9Hz, 1H), 4.33 (d, J= 5.4Hz, 2H), 2.70 (d, J= 4.8Hz, 6H)。

实施例 21

2-{4- [(甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺盐酸盐的制备：

298 mg ( 1 mmol) 2-{4- [(甲氨基)甲基]苯基 }-5-氟苯并呋喃 -7-甲酰胺（化合物 5b)，室温搅拌加甲醇至溶解。溶解后滴入 78.5 mg ( 1 mmol) 乙酰氯，搅拌半小时后旋干溶剂得米黄色粉末 330毫克，收率 98%，熔点 286-288°C。

ifiNMR (300 MHz, d₆-DMSO) δ 9.42 (br s, 2H), 8.07 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.94 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.72-7.67 (m, 3H), 7.59 (s, 1H), 7.50 (dd, J =2.1, 9.9 Hz, 1H), 4.17 (t, J= 5.4 Hz, 2H), 2.70 (d, J= 5.1 Hz, 3H)。

实验例 1

分子水平 PARPl酶活性抑制实验：

实验方法：酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA) (参照 Decker R 发表文献记载的酶联免疫吸附法；参考文献： Decker P, Miranda EA, de Murcia G, Muller S. An improved nonisotopic test to screen a large series of new inhibitor molecules of Poly(ADP-ribose) Polymerase activity for therapeutic applications. Clinical Cancer Research, 5: 1169-1172, 1999. )。其原理是将底物组蛋白包被在吸附性的 96孔板上，加入 PARP1重组酶、底物 NAD⁺、激活的 DNA使 PARPl发生酶反应，使组蛋白生成产物 PAR (聚腺苷二磷酸核糖），然后加入抗 PAR (anti-PAR) 的抗体，检测 96孔板上所包被的组蛋白上的产物 PAR的强度，就可以反映出 PARP酶的活性。

具体方法如下：

1. 组蛋白是 PARP1公认的重要底物。将其用无钾离子的 PBS( 10 mM 磷酸钠缓冲液， 150mMNaCl,pH7.2-7.4)包被 96孔酶标板，置 37°C摇床过夜；弃去孔中液体。用 120 μ L/孔的 T-PBS (含 0.1%Tween-20的 PBS)洗板 5次。于 37°C烘箱中干燥。

2.加入 NAD+ (终浓度 8μΜ/孔）， DNA (lOOng/孔）， PARP1 (10ng/孔） (用 PARP1酶反应缓冲液稀释，缓冲液含 50mMTris (三羟甲基氨基甲烷）， 2mM MgCl₂, pH 8.0), 每孔加入一定稀释浓度 (终浓度从 10 μ M开始， 10倍稀释 6 个梯度 )10 L 的抑制剂（阳性对照化合物为 AZD2281, 商品名 Olaparib, 购自 LC Laboratories公司），每个浓度设置 2个重复，反应体系共 100 L/?L (用前述 PARP1酶反应缓冲液补足）， 37°C摇床反应 l h，设置空白、阳性、阴性对照（以不加酶孔为空白对照孔，不加抑制剂孔为阴性对照孔，以加入阳性抑制剂孔为阳性对照孔）。启动反应，置 37°C摇床反应 1小时。

3.用 PBS-T 洗板三遍，加入一抗 anti-PAR MAbl0H( 1:4000, 用含 5 μ g/mL BSA的 PBS-T稀释）， 100 μ L/孔， 37°C摇床孵育 lh;

4.用 PBS-T 洗板三遍，加入过氧化物酶标记的二抗（抗小鼠抗体） (1:2000, 用含 5 μ g/mL BSA的 PBS-T稀释）， 100 μ L /孔， 37°C摇床反应 30 分钟；

5·力口入 2 mg/mL 的 OPD ( O-Phenylenediamine Dihydrochloride ) 显色液 100 μΙ7孔（用含有 0.03%H₂O₂ 的 0.1 M柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液 (pH=5.4) 稀释）， 25°C避光反应 15分钟（OPD溶解时需用超声，显色液需现配现用）。

6·用 50 μ L/孔的 2Μ H₂S0₄终止反应，用 Molecular Devices酶标仪（购自美国分子仪器公司（MDC),型号为 SpectraMax 190 Microplate Reader (90V to 240V))读数，波长 490nm测 OD值。

按照以下公式计算药物对 PARP酶活性的抑制程度：抑制率（％) = (OD 对照孔 -OD给药孔） I OD对照孔 X100%，并据此按 Logit法计算达到 50 % 抑制率时的药物浓度，即 IC_5Q值。实验重复三次，计算平均值和标准差。

实验例 2 体外细胞增殖抑制实验：

细胞株：中国仓鼠肺成纤维细胞株 VC8 (BRCA2--)和野生型细胞株 V79 (由荷兰莱顿大学 Malgorzata Z. Zdzienicka教授赠送）。

实验方法： MTT比色法 (参照 MosmanT. 发表的 MTT比色法，参考文献： Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival application to proliferation and cytotoxicity assasys. Journal of Immunological Methods 65(1-2): 55-63, 1983·)。 MTT全称为 3-(4， 5-二甲基噻唑 -2)-2， 5-二苯基四氮唑盐 (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium bromide)。其原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan) 并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在一定细胞数范围内， MTT结晶形成的量与细胞数成正比。三联液能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在 570 nm波长处可间接反映活细胞数量，从而计算细胞抑制率。

具体方法如下：将处于对数生长期的细胞按 V79细胞 2000个 /孔， VC8 细胞 4000个 /孔的密度接种至 96孔培养板，每孔 100 L, 培养过夜后，加入不同浓度 (终浓度从 10 μΜ开始， 5倍稀释 6个梯度：)的药物作用 72 h，每个浓度设三复孔，并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。作用结束后，加入 20 L MTT ( 5 mg/mL) , 于 37° C 培养 4 h后加入 100 L 三联液（10% SDS-5%异丁醇 -0.01 M HC1)， 37°C放置过夜， 570 nm波长下测定 OD值。按照以下公式计算药物对细胞增殖抑制程度：抑制率（％) = (OD 对照孔 -OD给药孔） /OD对照孔 X 100%，并据此按 Logit法计算达到 50 %抑制率时的药物浓度，即 IC_5Q值。实验重复三次，计算平均值和标准差。

本发明优选化合物的分子水平和细胞水平生物活性结果见表 2。表 2: 优选化合物分子水平和细胞水平活性的活性。

ELISA VC8 细胞 V79 细胞

编号

IC₅₀ (nM) Κ₅₀(μΜ) Κ₅₀(μΜ)

5j 2.96 7.9 339 2.811 7.391 > 10 > 10

5k 1059 2062 1521 > 10 > 10 > 10 > 10

51 182 107 393 8.306 8.216 > 10 > 10

5m 49 9.5 17 1.151 1.179 > 10 > 10

5n 18 31 73 1.867 0.903 > 10 > 10

5o 32 18.8 25 1.092 0.941 > 10 > 10

5p 22 8.9 40 1.361 1.617 > 10 > 10 从表 2可以看出，本发明化合物对 PARP1有良好的抑制活性，其在分子水平上与阳性对照在同一数量级。体外细胞增殖抑制实验表明本发明化合物对中国仓鼠肺成纤维细胞株 VC8 (BRCA2- -) 具有良好的抑制活性；而对野生型无缺陷（BRCA2^+/+) 的中国仓鼠肺细胞株 V79半抑制浓度超过 ΙΟμ Μ, 表明所设计化合物对 BRCA缺陷的细胞具有高度的选择性，所测结果与其作用机制相符。

实验例 3

分子水平 PARP家族酶活性抑制实验：

实验方法：酶联免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA。其原理是将底物组蛋白包被在吸附性的 96孔板上，加入 PARP1重组酶、底物 NAD⁺、激活的 DNA使 PARP1发生酶反应，使组蛋白生成产物 PAR (聚腺苷酸核糖），然后加入抗 PAR (anti-PAR) 的抗体，检测 96孔板上所包被的组蛋白上的产物 PAR的强度，就可以反映出 PARP酶的活性。

具体方法如下：

1.将酶反应底物组蛋白用无钾离子的 PBS ( lO mM 磷酸钠缓冲液， 150 mM NaCl, pH 7.2-7.4) 包被 96孔酶标板，置 37°C摇床过夜；弃去孔中液体。用 120 μ Ι7孔的 T-PBS (含 0.1%Tween-20 的 PBS) 洗板 5次,于 37°C烘箱中干燥。

2·加入 50 μ L酶反应缓冲液（Tris.HCl, pH 8.0),含有 NAD+ (2.5 μ Μ)，生物素 NAD+ (2.5 μ Μ)，激活 DNA ( lOO ng/孔）， PARP酶（具体见表 4)，以及一定稀释浓度的（终浓度为 0.3 ηΜ- 10 μ Μ) 抑制剂，每个浓度设置 2个重复，室温反应 1 h (TNKSs反应温度为 30°C )。设置空白、阳性、阴性对照。

3.用 PBS 洗板三遍，加入 50过氧化物酶标记的亲和素（Strep-HRP)，室温孵育 30 分钟。

4.加入 100 的显色液，用微孔板酶标仪 BioTek SynergyTM 2 读荧光 ( Luminescence ) 数值。按照以下公式计算化合物对酶的抑制程度：抑制率 ( %) = ( L对照孔 -L给药孔） /L对照孔 X 100%，并据此按 Logit法计算达到 50 %抑制率时的化合物浓度，即 IC50值。实验重复三次，计算平均值和标准差。

化合物 5b针对 PARP家族 6种最主要的同工酶体外分子水平抑制结果如表 3 :

表 3: 化合物 5b对 PARP家族酶抑制作用结果。

从表 3可以看出，与阳性对照 AZD2281相比，本发明化合物 5b对除了 PARP1/2以外的亚型抑制活性较弱，对 PARP1/2与家族其他同工酶的抑制活性相差至少 400倍，说明化合物 5b对 PARP1/2具有高选择性，是 PARP1/2 的高选择性抑制剂， 5b对其他亚型的选择性优于阳性对照 AZD2281。

表 4. ELISA反应的酶和底物的浓度

25 μΜ ΝΑΌ⁺/2.5 μΜ ΝΑΌ+-生物素

PARP3 75ng

0.026 mg/mL

25 μΜ ΝΑΌ⁺/2.5 μΜ ΝΑΌ+-生物素

TNKS1 40 ng

Ν/Α

25 μΜ ΝΑΌ⁺/2.5 μΜ ΝΑΌ+-生物素

TNKS2 15ng

Ν/Α

50 μΜ ΝΑΌ⁺/2.5 μΜ ΝΑΌ+-生物素

PARP6 600 ng

0.026 mg/mL 本发明对优选化合物 5b进行了初歩的药代动力学实验，其方法和结果如下：

1.给案

健康 SD大鼠（由上海西普尔-必凯实验动物有限公司（Shanghai Sippr-BK Lab. Animal Co. Ltd) 提供，实验动物生产许可证号： SCXK (沪）），雄性，体重 200-220 g，随机分组，分别灌胃。化合物以生理盐水配制。

试验前禁食 12 h，自由饮水。给药后 2 h统一进食。

采血时间点及样品处理：灌胃给药，给药后分别在 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 5.0, 7.0, 9.0, 24h经大鼠眼球后静脉丛取静脉血 0.3 mL，置肝素化试管中， l lOOO rpm离心 5 min，分离血浆，于 -20。C冰箱中冷冻。

2.实验结果

灌胃给予 10 mg/kg化合物 5b后，大鼠体内血浆浓度达峰时间 Tmax为 3.5士 2.4 h，达峰浓度 Cmax为 92.5 ± 33.2 ng/mL, 血浆浓度 -时间曲线下面积 AUC0-t为 452 ± 103 ng · h/mL, 消除半衰期 t_1/2为 1.75士 0.94 h，平均驻留时间 MRT为 3.94 士 1.13 小时。大鼠灌胃给予 10 mg/kg化合物 5b后的绝对生物利用度为 58.9%。

表 5: 大鼠灌胃给予 10 mg/kg化合物 5b后的药动学参数。

标准差 2.4 33.2 103 90 1.13 0.94

CV (%) 68.0 35.9 22.8 19.0 28.7 53.9

3.结果分析

初歩的药代动力学实验表明化合物 5b在体内清除速度适中，生物利用度高，大鼠灌胃给予 5b 10 mg/kg后的绝对生物利用度为 58.9%，在体内吸收、分布、代谢表现良好，而 II期临床试验化合物 AZD2281 的大鼠口服生物利用度仅为 11.1%。

Claims

权利要求

1、如通式 I所示的 2-芳基-苯并呋喃 -7-甲酰胺化合物或其药理或生理上可接受的盐，

Ri和 R₂各自独立地为氢、 C C₄的直链或支链烷基、 C₃-C₄的环烷基或者含有氧或氮的饱和五元或六元杂环基；

或者和 R₂与 N形成含有至少一个杂原子的未取代或取代的饱和的五元或六元杂环基，其中，所述杂原子为 0、 N和 S，所述取代基为在 N上的甲基；

为氢原子或氯原子；

R₄为氢原子或氟原子；

X为 CH、 CF或 N;

Y为 CH、 CF或N。

2、根据权利要求 1所述的化合物或其药理或生理上可接受的盐，其中，为氢、甲基、乙基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基; R₂为氢、甲基、乙基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基; 或者和与 N形成未取代或取代的吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基或四氢吡咯基，其中，所述取代基为在 N上的甲基；

R₃为氢原子；

R₄为氟原子；

X为 CH、 CF或 N; Y为 CH、 CF或N。

3、根据权利要求 2所述的化合物或其药理或生理上可接受的盐，其中，为氢或甲基；

R₂为甲基、异丙基、环丙基、哌啶 -4-基或 (R)四氢呋喃 -3-基；

或者和与 N形成未取代或取代的吗啉基、哌嗪基、高哌嗪基、硫代吗啉基、哌啶基或四氢吡咯基，其中，所述取代基为在 N上的甲基；

R₃为氢原子；

R₄为氟原子；

X为 CH、 CF或 N;

Y为 CH、 CF或N。

4、根据权利要求 3所述的化合物或其药理或生理上可接受的盐，其中，所述化合物分别为如下所示化合物：