WO1986001824A1 - Installation de triage de cellules - Google Patents

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WO1986001824A1
WO1986001824A1 PCT/JP1985/000519 JP8500519W WO8601824A1 WO 1986001824 A1 WO1986001824 A1 WO 1986001824A1 JP 8500519 W JP8500519 W JP 8500519W WO 8601824 A1 WO8601824 A1 WO 8601824A1
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tray
cell
dispensing
culture
cells
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PCT/JP1985/000519
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Hiroyasu Funakubo
Shinichi Miyake
Yoshikazu Nishiwaki
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Sumitomo Electric Industries, Ltd.
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    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
    • G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
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    • Y10T436/11—Automated chemical analysis
    • Y10T436/113332—Automated chemical analysis with conveyance of sample along a test line in a container or rack

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing a target cell or metastasis from a group of cells or a group of lytic organisms containing a species of Pama or Okina, and force is strong, the strong antibody production force Hoso ⁇ , or single. produced ⁇ 3 ⁇ 4 Sen ⁇ of such minute secretions of clone antibody, to a cell selection separately apparatus. for single ⁇ 0
  • the supernatant of the culture medium was also collected using a microphone sigma pipette, and separated into each well of the tray for antibody detection. Note that each well is for the culture supernatant. Attach the filled antibody detection tray to the antibody detection plate, and measure the anti-inhibition contained in the above. This measurement is usually performed using an ELISA (ELISA. 'Enzyne linked' immunosorbent assay), and the amount of antibody production of the cells contained in each cell can be determined. At this time, the cells in which the cells were dispensed were, for example, 480 yen in profit, but the production of the target antibody was tight, about 5 levels.
  • the culture supernatant in the well in which the fusion cells are found to have increased upon colony observation is dispensed and dispensed.
  • Monoclonal antibodies obtained in this way can be used to study molecular structures and genes in antibody chemistry and anti-chemical chemistry, as well as research on these genes and hormones.
  • monoclonal antibodies have a wide range of applications.
  • the target cells or organisms with a target are exposed to a certain composition.
  • Monoclonal antibody production has been separated, but the desired monoclonal antibody has a low probability of obtaining viable cells, and the obtained cells have low stability (ie, are easily killed)
  • Si is selected.
  • An object of the present invention is to reduce the risk of contamination by neat bacteria during the sorting operation by using manual labor as much as possible in the selection of pongee, and to efficiently and stably transfect cells. Is what you do.
  • the present invention provides a transit device comprising a dispensing dispenser, a tray feeder, and a controller.
  • the vehicle comprises a visitor, a manipulator for gripping the bit, and a pump for sucking and discharging a predetermined amount of the body by the pipe.
  • the tray is a tray base on which the tray is also mounted. And the tray base is also dispensed from the dispensing and dispensing means and from a driving means for transporting to a predetermined position in the cell defect part Becomes, the accordance controller over La operating conditions of the respective portions with the input if Shimese said at Bro click view the ⁇ present invention to provide a cell ⁇ device to Toku ⁇ that the device for Sei ⁇ each ⁇ , It looks like Figure I.
  • the present invention is composed of a dispensing / dispensing ⁇ ⁇ , a tray transport 3 ⁇ 4JB, a controller 3D and a selection, and the controller D usually uses a computer in which the working conditions of other parts are programmed.
  • a control signal SS which also indicates the operation of each of the manipulator and the pump that constitutes the dispensing / dispensing, is transmitted.
  • the content of the “Suiwei-go” may include a mayubulator, an operation procedure, and a work direction.
  • the gum control signal contains the amount of suction and discharge in the dispensing / dispensing section, the timing of suction and discharge, and the like.
  • the operation of the stitching motor and the tray chuck constituting the tray scar B is performed. , Transport order, tray chuck operation, etc.).
  • Section ⁇ ⁇ Arrest 31! Is a platform that transfects only spliced cells from the HI group, which is a fusion treatment of spleen cells and heel ulcers, by HAT culture. In other words, in the case of screening, it is composed of a culture section and a cone planning section.
  • the operation unit in the present invention is assumed to be asey, and the ⁇ knee, which is caused by the propagation of the fused cells, is observed. If you want to observe the presence or absence of colonies before giving out the antibody, you can set up a -Ronnie observation section in addition to the atsey section as ⁇ ⁇ ; ⁇ ⁇ .
  • the cell sorting apparatus of the present invention includes a cell count unit and a cell sculpture unit.
  • a monoclonal antibody is produced in a large amount and cultured to produce a monoclonal antibody, it is composed of the cell selection device of the present invention, a culture section, an atsey section, and a single cell. .
  • the invention's effect :
  • the cell; Another example is that by simply setting the conditions in each car and opening the operation of encasement, it is possible to easily perform special advanced techniques without having to spin down, and to reduce the labor force to a large amount. In addition, there is no danger of contaminating bacteria, and the amount of treatment can be increased.
  • FIG. 1 is a block diagram also showing the flow of signals in the cell sorting device of the present invention.
  • Fig. 2 shows the case where the Secretary 5 consists of a culture broth and a colony observation unit. An oblique view showing an actual example (actual satiation).
  • FIG. 3 is a plan view (a) and a side view ( ⁇ ) of the tray base in the tray ⁇ culture. .
  • FIG. 4 is a block diagram of the first embodiment.
  • Fig. 5 is an operation flow diagram of Example I.
  • FIG. 6 is a perspective view showing an example of a proposal (Example 2) in a case where the third stage consists of a key portion.
  • Fig. 7 is a block diagram of the project J2 ⁇ .
  • Fig. 8 is the ⁇ -figure of the actuation example of the practical example '2.
  • Fig. 9 is a perspective view also showing an example of a case where the cell arrest 31J part consists of a cell count unit and a cell difficulty part (actually, j 3).
  • FIG. 10 is a cross-sectional view of a single cell dispensing cell. .
  • FIG. 11 is a block diagram of the third embodiment.
  • FIG. 12 is an operation flow chart of the trial case 3.
  • FIG. 14 is a schematic diagram showing an example of the means for moving the tray. If the first 5 Fig, approximate skeleton diagram t first 6 shows another example of ⁇ means Torei transport wax block diagram of an ⁇ 4.
  • FIG. 17 is an operation flowchart of the fourth embodiment.
  • FIG. 18 is a perspective view of a container handler.
  • Fig. 19 is a plan view of the chuck of the container handler.
  • FIG. 20 is a perspective view of a pipetator.
  • the screening device shown in FIG. 2 is a device consisting of a preparative dispensing device, a tray feeding device, a culture unit, a colony observation device, and a controller.
  • the system comprises a magnilator 3 holding the pit 4 and a pump 5 for sucking and discharging a predetermined amount of liquid from the pit 4, and the tray feeding section 7 is provided with a plurality of tools.
  • the transfer tray 8 on which the tray 6 is to be placed.
  • the tray stand 8 and the tray i are observed in the dispensing and dispensing section, the culture section i2, and the knives.
  • the medium 12 comprises a tray stock for storing a plurality of trays 6 and an incubator 14 for moving the tray stock.
  • the incubator 14 having moving means and the tray 6 are transported to the tray stock.
  • ⁇ Culture section tray table 13 to be sent, controller is input and operating conditions of each section Therefore a device for Sei ⁇ the respective parts as shown in FIGS. 4 and 5.
  • ⁇ group or teaching organism group and culture solution container 1 container handler 2 Decca Mi such NyuTsuta ⁇ tube, the tip of the c container handler 2 for moving the ⁇ tube to the location of the manipulator 3, air - An automatic or motor-operated chuck is attached, and when the ⁇ - manipulator 3 holding the test tube is activated by this, the bead “not 4” held by the manipulator 3 is inserted into the test tube, and the pump 5 Introduce dissolution.
  • the container may be directly placed at a position where the bet 4 can be inserted without using the container handler 2.
  • bit 4 is also moved to a position above the well of tray 6, and a certain amount of molten metal is discharged into the well by bomb 5. :
  • Fg moving means for feeding to a predetermined position in each of the fractionating / dispensing part, the culture section and the key observation part, which is composed of, for example, a stepping motor 9 and a feed screw (ball! 10.
  • the tray position is determined by the number of pulses input to the stage nobbing motor 9.
  • Other driving means may be wire-driven or driven by an arm.
  • the tray 6 dispensed to each well is previously gripped and set by the tray chuck IS provided on the delivery tray stand 8, and the tray 6 after dispensing is then transferred to the tray tray. Due to the movement of 8, it is moved in front of the culture compartment tray table 13 provided for the culture 12 a.
  • the dispensing is performed at a predetermined position of the culture unit 12 (for example, the culture unit tray. (Near the front of the transport) It may be.
  • the tray 6 into which the dissolution method has been dispensed is delivered from the transport tray 8 to the culture tray 13 and further to the tray i 5 in the CO incubator 14 that constitutes the culture 12 .
  • the different operation of ray 6 above is described below.
  • the tray chuck: ⁇ ⁇ , 1 e * is opened and closed by the motor or air.
  • FIG. 3 (a) is a plan view of the tray base, (c?) Is a side view, 17 is a motor, 18 is a ball screw, and 19 is a vinyl rack.
  • the tray chuck 16 of the culture section tray stand 13 is located below the upper surface of the tray stand 13.
  • the tray 6 grasps the tray 6, further moves in the X direction, and moves the tray 1 Insert into 5.
  • tray 6 is operated in reverse. Tray tray 5 in CCU incubator 14 Moved to 8 above.
  • the cells provided with the manipulator 3 were used to culture each well. Aspirate the liquid, discard it, and inject a certain amount of new culture medium 20 using a bitmapper 3 and a pump 5. 0 At this time, culture each cell culture medium and cell culture medium. To prevent contamination of a new culture, replace the tip of bit 4 with a spare bit 21.
  • the tip of the bit 4 is a one-piece or a pneumatically driven chuck (not shown) that can be opened and closed to open and close the pipette tip. it can. ⁇
  • the tray 6 to which the new culture medium 20 has been added can be stored in the tray 0 15 again in the incubator 14 at C 0 according to ⁇ 7.
  • the tray stock .15 in the culture medium I2 is moved up and down or left and right by the S worker ⁇ to temporarily store a plurality of trays 8.
  • the drive means of the tray stock 15 comprises, for example, a feed screw 22 and a drive motor 23.
  • the completed tray 6 is moved from the cultivation tray 12 to the feeding tray tray 8 with the number of trays ⁇ 7 by reverse operation, and the tray 6 well is placed below the colony observation 24. Will be sent to you.
  • Each ⁇ : 3 views of Ronnie --Observation by a TV camera is used to determine the number of colonies and the number of large colonies. Alternatively, the variety degree may be determined by measuring the permeation light intensity * of the solution.
  • the controller 25 is a device composed of an input device 26 and a control portion 27.
  • the work conditions of each of the above-mentioned portions input by the input device 26 (handling / dispensing by dispensing / dispensing). Volume, operating procedure of the manipulator, etc., the transport position S of the feeding unit tray in the tray section, transport procedure, tray chuck operation, etc., culture conditions in the culture section, time, CO, resources, etc.) Movement, cultivation (tray stand operation, colony-observation section juice, etc.) and the operation of each section described above will be controlled by control.
  • FIG. 4 and FIG. 5 show a process diagram and an operation flow diagram of execution example 1, respectively.
  • the control signal S e is, for example, an opening / closing signal of a tray chuck
  • S s is, for example, a setting degree, a CO i amount (opening / closing of a valve;), a humidity (in the incubator).
  • Water tray Mizunoura ⁇ , etc. Toki closed steam valve) also Ru signal der whose content ⁇
  • the control signal S i transmitted by the controller is a signal for controlling the opening and closing of the chuck in the container handler, the cultivation and raising and lowering of the container handler, and the control signal S 2 is a signal for controlling the driving data in the manipulator. Then, the container handler 1 and the manipulator 3 are activated by the signals S i and S s, and the dilute solution is collected by the pin 4 of the container 1 or 2.
  • control unit & in the tray group 7 is activated by the control signal S + , and the tray 6 is also moved in a complicated manner by the level on the tray, and then the above operation of the manipulator 3 is performed. return.
  • CO t halo CO, opening and closing of the valve provided in Kyoawase tube
  • humidity far queue beta provided water tray water Ino ⁇ , etc. opening and closing of the steam pulp
  • tray 6 is transferred to Koguchi-Oburo by the reverse operation of the control signals S s , S e S and S. .
  • an image of the co-sigma observed by the TV camera with the teaching spear is sent to the controller 25 as a measurement signal, and the controller 25 performs image processing of the measurement signal Tt and performs image processing on the entire screen of the co-sigma.
  • the target type of cell lysate or cell lysate containing lysate or lysate, which is sprayable to the culture medium used, is selected. You can automatically perform training or teaching creatures.
  • the secretory production ability detection device shown in FIG. 6 is a device allocation comprising a tray feeder, a preparative dispensing and dispensing device, and an controller in the assembly section.
  • the dispensing and dispensing section is provided with a bead.
  • the controller is a device for controlling each of the 15 parts as shown in FIGS. 7 and 8 according to the input work conditions of each part. Tray 8 is put into each well 31 and cultured in a CO-incubator.
  • Tray 8 is also placed on tray base 8 of tray transfer section 7.
  • a colony observation ⁇ 36 can be provided.
  • the tray 31 having the tray table 8 mounted on the tray 6 is driven by the driving means 9 of the tray transfer section 7. Move so that it is located below the colony observation part 36.
  • the cells are moved up by the pit manipulator 3 in the dispensing and dispensing section 41, as well as by the visitor 4.
  • An aliquot is aliquoted and dispensed into each well of the antibody detection tray.
  • a horizontal articulated arm, an orthogonal arm, or the like can be used as the pipette manipulator 3.
  • the pump 42 controls the suction amount and the discharge amount depending on the pressure and the pressurization time.
  • the tip of bit 4 is used once: to use the nutrient solution, it is used once. It is moved by the manipulator 3 and detached, thereby exchanging with a new pit.
  • the detected antibody detection tray 47 is connected to a tray table 45 in Atsushiro 44, and is driven by a driving screw 46 which is driven by a motor. By means of the moving means, the antibody is transported to the anti-detection position of ⁇ in the assembly 44 and the amount of antibody contained in the supernatant of each well is measured.
  • ⁇ and the like can be used Eraiza measurement Sokomu or liquid chromatograph as detection instrumentation g in ⁇ Si 4
  • Fig. 7 and Fig. 8 show the work diagram and operation diagram of the second embodiment, respectively.
  • the measurement signal contains the number and size of the cell colonies in the wells, and the luminance: the intensity of the processed image, and the measurement signal 2 contains the amount of antibody contained in the supernatant. ⁇ of the amount of the antibody, in controller ports ⁇ La is serial billion, that to calculate the antibody-producing ability of ⁇ included from this ⁇ in each of Ueru ⁇
  • tray 6 for trays is tray-chucked Set on the table, and the culture tray 6 is also moved to the position g below the TV camera with a spear in the colony II inspection section by the control signal
  • the measurement signal T 3 from the colony observation unit, the signal S 3 for controlling the operation of the manipulator, and the control signal for operating the bomb for dispensing and dispensing the cells in the cell culture are the same as in the first embodiment. and the content signal, and a control signal S 8 S beauty S *, to pipetted replaced every dispensing into each of the tray detection cell culture supernatants with an antibody Ueru ⁇
  • the antibody detection tray is moved to the tray stand 45 of the air-receiving part by the anti-perfusion signals S and S.
  • Measurement signal T 2 The antibody content in the cell lysate supernatant determined in the assay section was used as the content, and the antibody production ability of the cells in the control ⁇ was measured. ).
  • the bladder is used not only for detecting antibody production, but also for antibody detection. By exchanging part a with another detection device, it can be used also in the detection of the target asset viability of the target that secretes the target.
  • FIG. 9 shows an embodiment in which the cell sorter of the present invention comprises a cell number counting section and a cell unit.
  • the dispensing dispenser consisted of a manipulator that also grips the pipet and a pump that sucks and discharges a fixed amount of liquid by the front IB bit, and the trays are provided with multiple wells.
  • the JS measuring unit 56 includes, for example, a cutting mirror 54, a TV camera 55, an input device 26 also having a function as a cone monitor of the control circuit 25, and a preparator. 5 and a brevarate fine transfer section 52.
  • the original cannon solution is dispensed into the dilute container 81 using a pit 4 and a bitmup "3.
  • the diluent determined by the number is added by using the diluting unit 62 and selected.
  • the diluted fine solution can be sucked by the simple dispensing unit 63 and the e-simultaneous dispensing is configured as shown in FIG. 10, for example.
  • the change in the voltage plant to be measured is used to detect the difference. ⁇
  • the tray transport section 7 on which the tray 65 is also placed moves, and the detected 1 1 piece 1 Li is dispensed into the various wells You.
  • 68 is a cell
  • 67 is an electrode
  • 68 is an ammeter
  • Reference numeral 69 denotes a well provided on the tray S5.
  • Fig. 11 and Fig. 12 show the block diagram and the operation flow chart of the execution decision 3, respectively.
  • the control signal S s and the start and stop of the tar motor in the preparation transmission unit are shown.
  • the measurement signal is the cell signal
  • the size, color, brightness, and content of the cell group determined in several parts
  • the number of values that can be seen in the field of view on the slide is measured, and the degree of harboring in the cell is calculated.
  • the diluting signal S » is used to add diluent according to the cell density to make the cell density during cell lysis appropriate for single-cell dispensing of cells.
  • the measurement signal is a signal indicating that the diluted cell has passed through the detection position of the cell lysis channel of the cell-injection dispensing.
  • the control signal S Due to 3 the transportation of the tray is moved by the distance of the lure on the tray.
  • Figure 12 shows. .
  • Manipulator 3 is also actuated by the control Moved to one of the wells on the tray for the 4th culture II, and the pump was operated by the control number S, and the cell solution in the well was collected. Then, the manipulator 3 is actuated by the control signal S i to move the bipet 4 to a position above the brevarat 5 1, and the control signal is used to prepare the saturated liquid in the pipette 5. Drip on one.
  • the measurement signal contains the content of the network ⁇ , and its value is also calculated by the controller at the ⁇ ⁇ ⁇ angle in the ⁇ ⁇ . If the temperature is above a certain level, control signal-.
  • the control ⁇ signal s 2 By the Weru containing the cells ⁇ of its ⁇ move the piperidines bets Mayubyureta 3, the control ⁇ signal s 2, to prep the ⁇ the pump to operate Sasebipe' DOO . Next, the bit from which the saturating liquid is collected is controlled.
  • the signal is transferred to the rare container by the wholesale signal S, and the control signal S is obtained by pouring the cell into the dilution container by the control signal S s .
  • the diluted cell lysate is inhaled into the cell-separated cell compartment 63, 2 g
  • the measurement signal T When passing through 6, the measurement signal T, is emitted.
  • cells with 1 Li 1 value can be isolated from the satiate group.
  • the obtained antibody is a monoclonal antibody.
  • multiplication can be performed. Since there is no need to repeat, the monoclonal antibody can be returned in a short time.
  • FIG. 13 shows an embodiment in which the cell suturo in Takaaki Honaki consists of a culture unit, a colony observation unit, and an assay cell.
  • the cell selection 3lj device shown in Fig. 13, Fig. 14 and Fig. 15 can be used for preparative dispensing, tray scarring, cultivation, atsie, and simple dispensing.
  • the dispensing and dispensing unit holds a bit and the bit. It is composed of a manipulator and a pump for sucking and discharging a certain amount of body from the previous bit.
  • the trays are provided with a tray table on which the tray is mounted, and the tray table with the preparative dispensing and culturing. It is composed of driving means for transporting to the new stereotaxy in the isolation and dispensing process in the capital and city area.
  • the S-controller is a device for controlling the above-mentioned parts as shown in FIGS. 18 and 17 according to the above-mentioned respective operating conditions.
  • Container 1 such as a test tube containing fusion and culture cells is also inserted in container handler 2, and container 1 is also moved to a pit brewer 3.
  • the container handler 2 is formed by a conventional technique, and specific examples thereof are shown in FIG. 18.
  • the container handler 2 is provided with chucks 79 and 79 ′ driven by a motor 77.
  • Fig. 19 is a new view of the chuck ⁇ , and the chucks 7 9, 7 9 ′ are combined with the motor 7 7 with feed screws 80 which are threaded in opposite directions.
  • the opening / closing is controlled by the rotation direction of the motor 7.
  • the rotation of the container handler 2 is controlled by the motor 78.
  • the dotted line in the container handler 2 in Fig. I3 moves to the position g of the pit manipulator 3. --It is a virtual ⁇ when it moves.
  • the bit manipulator 3 is also configured by the conventional technology, and its specific example is shown in FIG. 8 1, 8 2 are motors, which also provide rotation around the $ t sleeve, -axis. Further, Manipi Correlator foot 8 3 Nihomo - data Contact Yopi pinion / La click is housed, a those Sei ⁇ moving controls the entire manipulator Z sleeves direction, carried out by Supetetsu controller 2 5 It is.
  • the pump 5 is, for example, a peristaltic pump.
  • the pump 5 controls the suction amount when the pump is rotated by the controller CJ-25.
  • the drive ⁇ & motors 8 1, 8 2 are rotated, and the manipulator 3 is also controlled, so that the tip 4 is moved to the position of the well where the tower tray 6 is located.
  • Discharge a certain amount of hot water into the well with. Discharge can be performed by circulating the peristaltic pump 5 in the reverse direction at the time of suction, and the discharge amount is controllable by rotation when the pump 5 rotates.
  • Tray's Senduro 7 is a general X-Y moving mechanism, and a tray chuck 16 is installed.
  • the transported tray 8 is moved to an arbitrary position on the XY plane.
  • the tray transport section 7 was also controlled, and each well was moved directly below the pipe 4.
  • the pump was controlled at the same time so that a predetermined number of wells in the tray were used. ⁇ ⁇ is discharged at a constant rate.
  • the operation of the tray transporter 7 can be performed by using a driving means such as a motor drive as shown in FIG. 14 or a gear drive as shown in FIG. In FIG.
  • 7 1 is a feed screw (ball screw), 7 2 is a pulse * ta, and the pulse is also rotated by one turn;
  • the g control is performed by the number of pulsed motor pulses.
  • 73 is an air cylinder
  • 74 is an electromagnetic brake
  • 75 is a potentiometer
  • cylinders are controlled by controlling pulp of 76 and 76'.
  • the transport ⁇ tray base 8 moved Mizu ⁇ and ⁇ its position by the potentiometer 7 5, after moving to a predetermined position, stopped by the electromagnetic Bed 'lake 7 4.
  • Kisel p first The moving mechanism is formed by placing the tower of FIG. 4 or FIG. 15 orthogonally.
  • Ho culture II tray 6 was dispensed, 0 0 2 I It is stored in the tray stock 15 in the incubator 14 and is kept in the cell culture for a certain period of time.
  • a tray chuck 16. ⁇ ⁇ shown in FIG. 3 is attached to the carrying tray 8 and the tray stand 13. If described with reference to FIG. 13, the tray S 15 In order to store 6, the culture tray 6 is first moved to a position where it comes into contact with the tray base 13 by the tray transport 7. Next, after lowering the tray chuck 16 'of the tray base 13 below the upper surface of the tray base, the tray chuck 16 is moved in the X direction in FIG. Send. Further, the tray ⁇ is removed from the tray chuck 16 and the tray chuck I ⁇ is returned to the upper tray tray S. Next, the tray charger 16 ′ is raised, and the tray 6 is gripped. Then, move the tray 6 'and insert the tray 6 into one of the trays 15.
  • the incubator 14 is equipped with a conventional open / close door 14 ′ as indicated by the dotted line in FIG. The door opens and closes when Tray 6 is inserted / exited.
  • the tray stock] L5 is composed of a feed screw 22 for moving up and down, and an automatic motor 23.
  • the culture tray 6 held for a period of time in the culture environment in the CO i incubator 14 is moved to the tray transport 3 ⁇ 4 57 by the reverse operation to that when it was inserted into the tray stock 15, and Ronnie observation was performed. ⁇ Transfer each well to the culture tray 6 at the position of 24 and detect whether a knee is growing or not.
  • This ⁇ 2-observation ⁇ 24 consists of an image input ⁇ ⁇ consisting of a TV camera with a key and an image processing ⁇ which is a computer. Perform image processing to detect colonies.
  • the binarization method uses the fact that the raw gun part is of a high degree of fierceness, the binarization method also detects raw fines, and from the rate at which the raw material occupies the entire screen, Colonies can be extracted.
  • the core was repelled.
  • the pipe 4 transferred by the pipe manipulator 3 from each well on the culture tray 6 caused the water to be removed from the top. And discharge into the detection tray well. Do this for every cell.
  • the solution supernatant is added to the well on the detection tray 47 containing the attest reagent 48, and a fixed amount is added thereto.
  • the detection tray 47 is moved into the attachment section 44 to detect whether or not the target substance is contained in the cell solution upper slide put in each well of the detection tray 47.
  • isme section 4 4 includes Eliza. It was detected that the target substance was contained in the cell lysate, that is, Lazy that the cells in step 6 are producing the desired substance. A part of the cell lysate that produces the largest amount of the target substance among the wells of the tower tray 6 that produces the target substance is shaken with a bite meter 3 '. Dispense onto the preparation of the garbage part 52, and dispense this into a number of cell juices: 56. Measure the number of cells contained in the cell solution on the preparation by the ⁇ . It is the same as the bit manipulator 3, 3 f , and has a pit 4 ′ and a peristaltic bomb connected to it at the tip.
  • the pre-valet transfer section 52 is a linear moving mechanism composed of a rotary motor and a feed screw, and is cut in advance on a moving stage by a slide 51.
  • the fine cell counting unit 56 is composed of an image input unit consisting of a TV camera with lysin and an image processing unit which is a computer. Like the colony observation unit 2, the number of live cells is counted by digital processing. measure. Since the position g of the preparation when dispensing the S solution in the culture tray 6 onto the Breparate 5 I and the position of the preparation when measuring with the puffer number counting unit 56 are different, This is controlled by the Prepared Carrier 52.
  • the cell culture number Based on the number of cells measured by the f was also calculated, and the dilution rate was determined to dilute it to the desired concentration at which single pipetting was possible, and the gel manipulator 3 "was used to determine the cell density of the gel.
  • a predetermined amount of the solution is dispensed into the dilution vessel 61, and a predetermined amount of greed is added and diluted with the dilution ⁇ 2 so that the desired port degree is obtained.
  • the amount of cell lysate raft and the amount of sampling on the preparation 51 are kept constant, and it is calculated from the number of cells on the brevart by calculating the volume ratio back. It is composed of a tank and a pump, and controls the discharge of rare ⁇ by the sword of the pump.
  • the diluted phlegm solution is inhaled by simple dispensing.
  • Simple dispensing Miro has a cross-section as shown in Fig. 10.
  • the diluent as the electrolyte flows through the capillary ⁇ 4 and flows between the electrodes 67. Utilizing the fact that the resistance of the electrolytic cell is different from the case with and without the plane, the cell is detected by the change in the electric current. .
  • a light-emitting part and a light-receiving part are provided so as to sandwich the ⁇ tube, and the light from the light-emitting part from the light-emitting part due to the passage of cells can also be detected by the light-receiving part. Can be performed.
  • the single dispensing system 63 consists of an induction pump 86 and the cell detectors 67 and 68 described above.If no cells are detected, the diluted solution is discarded and the cells are removed. If detected, the culture tray 6 is moved by the tray transport unit 7 in synchronization with the fine detection signal, and the cells in the culture tray 6 that have not been used as towers are collected. Dispense the profit cell.
  • the culture tray into which one piece of ⁇ ⁇ was dispensed is again CO: incubator -8-
  • colony detection and target substance detection are performed in the same manner as described above, and the target cells are selected by the above process.
  • FIGS. 14 and 15 a block diagram and a flowchart of the fourth embodiment are shown in FIGS. 14 and 15, respectively.
  • the container ⁇ ⁇ is gripped by the container handler 2, the container 1 is moved by the pit manipulator 3, and then a certain amount of lysed lysate is discharged into each well by the pit.
  • the control is performed by the same control signals S i to S as in the first embodiment.
  • the measurement signal from the colony observation (2) is the same signal as in the implementation (1).
  • the pipette 4 is moved to the well where the colony is not observed by the manipulator 3, and the operation is repeated until the cell solution supernatant is aspirated and then discharged to each well of the detection tray 47.
  • the cell value counting section calculates the number of saturations in each cell in the cell list, and the cell counting section calculates the number of cells until a single cell is collected for each cell.
  • the different operation is the same as the control signal (S Similar contents: signal (3 3, 3 7-3 8> are controlled I Nyo.
  • the present invention relates to a method for selecting an objective or consequent organism, for example, a monoclonal antibody-producing cell, from a conjugate or a biological solution containing several species of lysate or lysate. It is necessary to arrest large cells.
  • a large amount of tooth culture that cannot be processed as it was obtained contains strong and strong antibodies and viable antibodies in a short time. It is possible to reliably detect the level of the fuel cell. Also, ⁇ Saturation is handled in a sterile environment, Saga, so there is little danger of contamination by bacteria. The cells of interest can be stably detected, and the cells can be recovered.

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Description

明 細 ： 書
発明の名称 ：
钿跑還钊裟屢 '
発明の関連する技術分野 ：
本発明は、 铰種の钿跑まおは翁生物を含む細胞群または渙生钧群の中 から目的とする钿胞または後生钧、 判えば、 抗钵を産生する抗体産生钿 岿のうち、 増殖力が強く、 抗体産生力の強い細跑を、 あるいは単.クロー ン抗体の如き分秘物の産生钿跑 ¾選别し、 単雜する.ための細胞選别装置 に関するものである 0
背景技術 ：
(ί) 例えば、 胖钿跑と腫癢钿跑を融合処理した钿胞群の中から、 黥 合した钿跑のみを H A T培養によって選択的に增齄きせる場合 （スクリ 一二ングと称せられている）、
(ii) 单クローン抗体等の分秘钧はその産生細飽から得られるもので あるが、 その単クローン抗体產生钿胞を遘別する場合、 さらに
(i ll) IS界希釈法と称せられる抗体等の分秘物を產生する細胞を逮别 し単雜する場合、
(iv) 単クロ ン抗体產生铂飽も達釗し、 生康する場合は、 それぞれ 徒来から以下の方法が採られていた。
(i)の場合
脾钿胞（2 . 5 X 1 0，個）と踵鎮細跑（2 . 5 X 1 0 7儲)をポリエチレ ングリコ-ルを融合促進剤とし、 細跑融合し、 違心後融合狻を jfてて、 H A T培養液（Hypoxanthine Amino ferin および T hymidine を含 む培養法；） も加えて钿^を分教させる。 然る後、 分散して得られた細胞 ¾をトレイに複数設けられた各ゥエルに、 判えばひ. 2 fd ずつ分注し、 次いて'、 C O， インキュベータ内に 2週藺培釜する。 こ:の培養によって、 敏合しない钿飽は死 ¾し、 融合細胞は増殖される。 融合钿跑が増殖して. いるかどうかは、 コロニーの有無を観察することによって判新される。
(ii)の場合
(0 場合に引き続いそ、 融合钿胞が増殖してい と認められたゥ エルについて、 その培 ¾浚の上清铉もマイク σピペ トによって分取し、 抗体検出用のトレイの各ゥエルに分注する。 各ゥエルが培養上清 ¾によつ て満された抗体検出用のトレィを抗体検出茚に装着して、 上淸铼に含ま れる抗律 ¾を測定する。 この剷定は通常ェライザ（E L I S A .' E nzyne linked ' i uno sorbent assay) により行われ、 各ゥ.エルに含まれ ていた轴胞の抗体產生量を知ることができる。 このとき、 前記細胞浚が: 分注されたゥエルが、 例えば 4 8 0儲であったものが、 目的の抗体を產 生しているのは、 逼常、 5ゥェル程度になる。
(iii)の場合
(i)の場合に引き铳いて、 コロニー観察して融合紬胞が増逋してい ると認められるゥェル中の培養上清狻を分取分注し、 ェライザ—によつ て培養上清 中に目的の抗体が含まれているかどうかを検出する。 次い で、 目的の抗 を産生している钿跑液に、 顕教鏡によって儕数がカウン トできる程度に希釈 ¾を加え、 一様に細胞を分散させ、 然る後、 融合細 胞健数も計測する。 計測は、 潁渙鏡観察によって細胞儲数をカウントし, 钿跑袂中に含まれる全钿 敎も箅出して行われる。
次いで、 得られた钿胞儲数より、 3ゥエルに 1儷が分注されるように '希^ tる。 これは単クローンとするため、 1 ゥェルに 2個以上 の細 Sが分注されないよう確率^髙める必要があるからである'。 希 ¾さ れ分注された钿胞が増殖するように抗^産生力のない胸腺細胞も如えた 後、 希！ ¾一分注一培養の操作を锋り返すことによって単クローンである 確率 ^高め、 華クローン抗体産生钿鵃を単雜する。
(iv)の場合 ：
(noの場合に引き铙いて、 その後、 軔跑が増殖するためには、 あ る程度まとまった敎であることが必要であることから、 抗体產生カのな い胸腺钿胞が加えられる。
以上の续作 （H A T培養狻を加え細胞を分散さ 、 その細胞铉をゥェ ； ルへ分注してから胸藤铂跑の添加までの操作、 このー逮の操作をリミツ チ ング ·ディル ジ sンと称せられる） を 2回綠り返して、 単タロー ンである確率を高め、 得られた単クローン抗体産生細跑を大量培養し、' 単クコ一ン抗体を大量に生産する。
この様にして得られる単クロ ^ン抗体は、 抗体化学、 抗頗化学におけ る分子構造、 遣伝子あるいはこれらの機龍の研究に、 薬理学におけるホ ル乇ン、 神柽伝達物質の受容体の研究に、 その f&.ウィルス学、 寄生虫学、 ' 钿菌学に利用されるものである。 また、 診断において、 免疫.不全症の分 子生化学的解狞あるいは抗廪 (惠性趫嬪等）の検出などにも使用され、 さ らに治療においては、 醵器移植 (靼織違合性)への ¾用、 受動免疫 （抗体 の注射）、 惠性踵瘍に対する治療などにおいて使用きれる。
上述のように、 単クローン抗体は応用分野が広筠にわたつている。 ところが、 従来は、 上述のように、 人手によって数種の細胞または漤 生物が混在する钿雎群または翁生钧群から、 ある培養铉組成に対し、 射 のある目的の細泡または澳生物、 .例えば単ク.ローン抗体産生钿跑の遘 別が行われているが、 目的の単クローン抗体產生細胞が得られる確率が 低いこと、 得られた細胞の安定性が低いこと（即ち、 死滅しやすい）、 お よぴ逮釗作業中に繞菌が凝入する危険性があるなどの問犀点があり、 高 い活性をもつ単クロ一ン抗体を大量に産生する細胞を選 Siしようとする と、 瀵大な数の融合钿 saから逮別していく必要がある。 このように、 い ずれの場合も、 多くの手閽と時間が必要である。
更にまた、 この選钊作業には高度の技術が必要であり、 この技術を取 得するためには通常 1〜 2年の教育期間が必要なため、 単クローン抗体 產生钿 の遂钊がて'きる技術者は極めて少数である。 このため、 一違の 実驗によって抜える钿捣の敦は隅られてしまい、 目的の単クローン抗体 産生钿跑が得られる確率は低く、 また得られても抗体產生能が低いとい う結果しか得られず、 単クローン抗体応用における阻害要因となってい る。
技術的譁題 ：
本発明は、 紬跑の選到作業において極力人手作業を威して、 選別作業 中に楚菌が混入する危険倥を少なく し、 かつ、 効率よく安定して細胞を 違别することを目的とするものである。
尧明の解決方法 ：
本発明は、 この目的^； 成するために分取分注郎、 トレィ掇送茚、 コ ントローラおょぴ細^違别茚から成る钿跑遷钊装鼴であって、 前記分取 分注 ϋはビぺジ トと該ビぺッ トを把持するマニピュレータと筘記ピぺッ トにより铉体を一定量吸引吐出するためのポンプからなり、 前記トレィ 遴逞茚は前記トレィも乗せるトレイ台と該トレイ台も前記分取分注茚、 および前記钿胞違别部における所定位置に搬送するための駆動手段から なり、 前記コント ーラは入力された前記各部の作動条件に従い、 前記 各茚を制镩する装置であることを特徵とする細胞逮钊装置を提供する β 本発明をブロ ク図で示せば、 第 I図のようになる。 本発明は、 分取 分注 ^Α、 トレイ搬送 ¾JB、 コン トローラ 3Dおよび钿跑選 から構 成され、 コン トローラ Dは通常他の各部の作業条件がブ口グラムされた コンピュータを用いる。
コン ト ーラ Dから分取分注茚 Aへは、 分取分注郞を構戎するマユピュ レータとポンプのそれぞれの.作動も搢示するための制镩信号 S S ,が .. 発信される。 制镩偉号 は例えば、 マユビユレータと作動顒序、 作勤 方向等を内容とする。 制齦信号 は、 分取分注部での吸引吐出量、 吸 引吐出のタイミ ングなどを内容とする。
コントローラ Dからトレィ锒送 ¾5 Bへは， トレィ瘢送部 Bを構成する スチ ビングモータと ト レイチャックのそれ れの作動、 （冽えば、 ト イ擞送茚でのトレィ台の锒送位氩、 搬送頼序、 トレイチャック搮作等） も搢示する信号 が発信される。
コントローラ！)から钿跑逮 SIJ茚 Cへは、 細胞逮别茚の構成に応じ、 複 教の制御信号 S 5 S nが発信され、 細跑邁刖郎 Cからコントローラ Dへ は、 他の各部への作動信号を制镩する測定信号 Τ , ^ Τ ηが発せられる。 本穽明において、 钿腚逮 31!節は、 脾細胞と踵瘍钿飽を融合処理した钿 HI群の中から、 融合した钿跑のみを H A T培養によって遷^的に增鏟す る場台、 すなわち、 スクリーニングする場合にあっては、 培養部および コ c?ニー観案部からなる。
增薙した融合細^の抗体を検出し、 その抗体産生量を知る場合は、 本 発明における紬跑運釗部はア セィ都とし、 融合細胞の增殖によるつ σ ニーが篛察されるゥエルについて還用することができ、 抗体挨出前にコ ロニーの有無を観察したい場合には、 钿跑； 别茚としてアツセィ部の他 に-ロニー観察部を設けることができる。
1値 1個の钿跑を単離して、 各ゥエルに分ける場合においては、 本発 明における細胞選別装置は、 钿胞儸数計数部と钿胞単雕部から構成され る。 単.クローン抗体鹰生钿跑を大量に培養し、 単クローン抗体を生達す る場合は、 本発明の細跑選钊装置ほ、 培養部、 アツセィ部および細胞単 雌郎から構成される。 . 発明の効果 ：
本発明によれば、 细胞の;！別は、 各郯における条件を設定して装蒙の 操作も開给するだけで、 特釗の高度な技術を脊しなくとも容易に行うこ とができ、 労働力も大慯に玆少させることができる また、 雑菌の混入 する危険性がなく、 処 S量も大きくできるので、 常に安定して、 単ク C7 . 一ン抗体產生钿胞などの斩望の钿跑を逮別し、 効率より得ることができ る
更に、 徒来ほ一つの単ク σ―ン抗体産生轴胞を得るのに 2 3力月要 していたが、 本装鼴 iこより単クローン抗体産生細胞の增齄まで含んで約 1力月で得ることができ、 この間敎種の単クローンを連続的に同時に処 理することができる。
実施例の説明 ：
次に本発明を図面に基づいて詳細に 1¾明する。
第 1図は、 本発明の細胞選別装置 ίこおける信号の流れも示すブロ ク · 図。
第 2図は、 钿跑遘釗 ¾5が培養郎およびコロニー観察部からなる場合の 実沲例 (実飽判〖）も示す斜棟図。
第 3図は、 トレイ锒送茚まおほ培養 におけるトレイ台の平面図（ィ） および側面図（σ )。 .
第 4図は、 実施例 1のブロ ク図。
第 5図は、 実旛例 Iの作動フロー図。
第 6図ほ、 轴跑遂 3¾茚がァ yセィ部からなる場合の案施.例（実施例 2 ) を示す斜撬図。
第 7図ほ、 実施伊 J 2·のプ aック図。
第 8図は、 実旛例' 2の作動フ σ -図。
第 9図は、'铂胞逮 31J部が細胞餾数計数部および钿胞単難部からなる場 会の実旌例（実拖伊 j 3 )も示す斜視図。
第 1 0図は、 韧胞単雜分注茚の断面図。 .
第 1 1図は、 実施例 3のプロ ク図。
第 1 2図は、 実施判 3の作動フロー図。
第 i 3図ほ、 細跑違别郞が培養郞、 コ σニー観察部、 アツセィ郞およ - ぴ钿跑単齄部から成る場合の実 ¾例（実旅例 4 )を示す斜視 ®6 - - 第 1 4図は、 トレイ ¾送茚の ©動手段の例も示す概略 。 第 1 5図ば、 トレィ搬送郎の靼動手段の他の例を示す概格図 t 第 1 6図は、 実施^ 4のブロック図。
第 1 7図は、 実施例 4の作動フロー図。
第 1 8図は、 容器ハン ドラの斜視図。
第 1 9図は、 容器ハン ドラのチャ ッ クの平面図。
第 2 0図は、 ピペ トマ ビュレータの斜視図である。
発明を実施するための最良の形態を各実施列について説明する， 実旌判 1
本 明における細胞選別部が培戔郎およびコロニー観察茚からなる場 合の実旌剁も第 2図に従い、 以下に説明する。
第 2図に示すスクリーニング装置は分取分注郞、 トレィ镲送茚、 培養 部、 コロニー観察茚及びコン cーラからなる装置であって、 前記分取 分注茚はピべッ ト 4と該ピ ッ ト 4を ¾持するマ ビユレータ 3と前記; ビぺ ト 4より液体を一定量吸引吐出するためのポンプ 5からなり、 ト レィ遒送部 7は複数のゥ ルが設けられ.たトレィ 6を乗せる镲送節トレ . ィ台 8と該トレイ台 8を前記分取分注部、 培養部 i 2及ぴコ σニー観察. 郁における各新定位翬に锇 するための鞣動手段 9 , 1 0からなり、 培 ¾郜 1 2は複数のトレイ 6を収納するトレイストツクと該トレイスト . クを移動する ©動手段を具饍するインキユーベータ 1 4及び前記トレィ 6を前記トレイスト クへ缀送する培養部トレィ台 1 3からなり、 コン トロ一ラーは入力されお前記各部の作動条件に従い第 4図及び第 5図に 示す如く前記各部を制镩する装置である。 铂跑群または教生物群および培養液が入つた弑袋管などの容器 1を容 器ハンドラ 2でっかみ、 試耪管をマニピュレータ 3の場所に移動させる c 容器ハンドラ 2の先端には、 エア—铤動またはモータ憨動のチャックが 取付けられ、 これで試験管を把持する β マニピュレータ 3が作動すると 該マニピュレータ 3に 持されたビぺ"ノ ト 4が試験管内に掙入され、 ポ ンブ 5で溶 を咴入する。
なお、 本発明においてほ、 容器ハンドラ 2を用いずに、 直接容器をビ' ペッ ト 4が揷入きれる位置に橐いても-よい。 ，
マユビユレ—夕 3はビぺヅ ト 4もトレイ 6のゥエルの上方の位戴まで 移動させ、 ボンブ 5で一定量の溶泫もゥエル内に吐出する。 ：
トレイ搌逸茚 7の移動またはマニピュレータ 3の移動によりビぺ ト を别のゥエル上に移勤し、 同様に 定量の.溶铉をゥエル内に吐出する t これらの操作を錄り返し、 各ゥエル内に溶法を分注する。 ビぺ"ノ トマ二 ビュレータ 3にほ、 水苹多関節型ア ム、 直交型アーム等が使用できる t ポンプ 5は、 圧力億、 加圧時間により吐出量をコントロールする。 トレ. ィ搬送^ 7はトレイ 6杏棄せる紫送郐トレイ合 8と該搬送部トレイ台も' 前記分取分注部、 培養節およびコ αュ-観察部における各所定位覼に琅 送するための fg動手段、 判えばステッピングモータ 9と送りねじ （ボー ルね！；） 1 0で構成され、 ステ"ノビング ータ 9への入力パルス数でト レイの位 g法めを行う。 動手段としてその他にワイヤ駆動あるいはェ ァ駆勤?こよって動作するものであってもよい。 溶法が各ゥエルに分注さ れたトレイ 6は、 予め锒逹茚トレィ台 8に設けられたトレイチャ ク IS によって把持阛定されており、 分注が終ったトレイ 6は、 次いで、 镞送 茚トレイ台 8の移動によって、 培棻郐 1 2に具備する培養郭トレイ台 13 の前方に幾遑される a また、 分注を培養部 1 2の斩定位置 （例えば、 培 養部トレイ合.1 3の前方近く） において行った場合は、 搬送郐トレイ台: 8の移動を特に行わなくてもよい。
溶法が分注されたトレイ 6は、 搬送茚トレイ台 8から培養部トレイ台 1 3へ、 さらに培義荜 1 2を構成する C O ィンキュベータ 1 4内のト ' レイストツク i 5に权納される。 上記 レイ 6の一違の作動.を以下に説 明する。 一 - 第 3図に示すように、 锇送郅トレィ台 8と培養部トレイ台 1 3にはそ ' れぞれトレイチャック 1 6、 1 6' が設けられている。 該トレイチャッ : ク ΐ δ、 1 e* はモータ ¾勐あるいはエア^動により 方向の開閉動作，
X , ϋ 方向の移動が可能である。 なお、 第 3図において、 （ィ）はトレイ 台の平面図、 （c?)は側面図で、 1 7はモータ、 1 8はボールねじ、 1 9 はビニ才ンラ クである。
¾送茚トレイ台 8の ト レイチャ ック 1 6で把持固定され、 各ゥエルに 溶 ¾分注きれたトレイ 6は、 レイチヤ ク 1 6 X方向に移勤し.、 培 養茚トレイ台 1 3の上へ镲送する。 このとき， 培養部トレイ台 1 3のト レイチャック 1 6， は該トレイ台 1 3の上面の下方に位置している。 ト レイ 6が培養茚ト.レイ台 1 3上の新定位置に采ると、 トレイチャ ク . 1 6' ほ ζ方向に移動し、 トレイ 6も把持し、 さらに X方向に移動し、 トレイストツク 1 5内に挿入する。
第 2図において、 CO, インキ ベ-"夕 1 4内で一定期閭絰過した後、 トレイ 6は逆操作により. CCU インキュベータ 1 4内のトレイスト ク ί 5から出て、 锒送節トレイ台 8上.に移動される。
次いで、 マニピュレータ 3 設けたビぺ トにて、 各ゥエルの培養上 清 ¾をー瑯吸入し、 棄却し、 新しい培戔¾ 2 0を一定量ビぺ トマ ビュ レータ 3およぴポンプ 5を用いて注入する 0 このとき、 各ゥエルの培養 铉閩、 ゥェルの培戔¾一新しい培養铉閬のコンタミネージョ ンを防ぐた め、 ビぺ ト 4の先端は予镜ピぺッ ト先皭 2 1 と交換を行う。 ビぺッ ト. 4の先绻取付茚ほ ¾一タ驥勳またはエア駆動により作勣するチヤック (図示せず） になっており、 これを開閉することによりピペッ ト先端を - 着脱させることができる。 ·
このようにして、 新しい培義铉 2 0を加えたトレイ 6は、 再度， トレ； ィ镲) §茚 7によって C 0， インキュベータ 1 4内のトレィストック 1 5 に収鈉きれ、 培養が繞けられる。 なお、 第 2図 おいて、 培赛茚 I 2に. - おけるトレイスト ク.1 5は S勤手^によつて上下または左右に移動し、 ： 複数のトレイ 8を頮次収納する。 トレイスト ク 1 5の^動手段は第 2 図のように、 ^えば送りねじ 2 2と駆動モータ 2 3からなる。
培荬 *終了したトレィ 6は、 逆操作で培養茚 1 2からトレイ幾送 Φ 7 の锒送部トレイ台 8に移動され、 さらに、 トレイ 6のゥエルがコロニー 観察茚 2 4の下方に位冕するように掇送される。 各ゥエルを: 3ロニー観 - - 察郅 2 4を構成する列えば T Vカメラによって観察し、 コロニーの数、 大ききを計数することにより、 增殖度を决定する。 あるいは溶液の透遏 光強度 *測定することによって增鑪度を决定してもよい。
なお、 以上の C 0 2 インキュべ—タ 1 4はもちろん上記構成郞分は全 て、 無菌とした気体 *常時淹せるように、 外装で覆うことによって、 全 て無菌環境下で搡作することができる。
コント口—ラ 2 5は、 入力装蠹 2 6と制御部 2 7からなる装鼸で、 入 カ装橐 2 6により入力された上記各部の作業条件 （分取分注茚での扱引 吐出量、 マニピュレータの作動頫序等、 トレィ漱 部での接送部トレイ 台の搬送位 S、 搬送頫序、 トレイチャ ク操作等、 培養部での培養条件 度、 時間、 C O , 資など）、 トレイストツクの移動、 培案郞トレイ台 の作動等、 コロニ-観察部め汁数等） および上記各部閽の作動条伴に従 い、 制镩茚により制钿させる。
実沲例 1のプロ Vク図および動作フロー図をそれぞれ第 4図および第 5図に示す。 制镩信号 S e は例えばトレイチャ クの開閉信号、 S s は， 例えば設定籮度、 C O i 量（バルブの開閉;)、 湿 ¾ (インキュベータ内の 水トレイの水の浦辁、 水蒸気バルブの鬨閉など） も内容とする信号であ る β
コントーラにより発信される制御信号 S iは容器ハンドラにおけるチヤ ックの開閉、 容幕ハンドラの回耘及び上げ下げを制御する信号であり、 制御信号 S 2はマニピュレータにおける駆動乇ータを制痴する信号であ 信号 S iおよび S sにより容器ハンドラ 1 とマニピュレータ 3が作動し、 容器 1か¾のピぺ'ソ ト 4によって細飽溶液が分取される。
次に、 信号 S 2によりマニビ ^レータ 3が作動し、 ピぺッ ト 4をトレ ィ 6上に設けた镜数のゥヱルのうちの一つの上方の位置まで移動する。 制攧信号 S 3によりポンプ 5が作動され、 ピぺツ ト 4に入っている钿 跑溶铉をゥエルに注ぐ。
次いで、 制痴信号 S +により トレイ班送茚 7におけるステ "ノビング ¾ —タ &を作動さ て、 トレイ 6もトレイ上のーゥエル分の钜雑移動させ た後、 マニピュレータ 3の上記作動を锞り返す。
トレイ 6上の全ゥエルに細砲溶 ¾の分注を終了すると、 制御僂号 トレィ搬送茚における トレイチャ ク 1 6の作動（第 3図における S方 向の開閉、 X および y 方向の移動） を制卸する信号 S5、 培養部におけ るトレイチャ ク 1 S' の作動を制痴する信号 Sa、 ¾ぴィンキューべ タ 1 4における |ΐ勤モータの作動も制卸する信号 S 7が、 ントーラ 2 5から各部に発信されてトレイ 6は CO,インキュ一ベータへ移動さ . れ、 トレイスト ク 1 5内に収納される。
培養部 おいて、 C02 インキユーべ タ 1 4の扉の開閉、 培養温度、 培棻時間、 COt 暈（CO, 供袷管に設けたバルブの開閉)、 及び湿度（ィ ンキューベータ内に設けた水トレイの水の祷耠、 水蒸気パルプの開閉な ど） 内容とする制卸信号 Saによって、 予め設定された培赛条件が保持 される。
培養終了後、 制卸信号 Ss、 SeSび S,による逆操作によってト レイ 6はコ口 —観察郎へ移勤される。 .
コロニー観察部において、 顕教鎗付 TVカメラにより観察されたコ σ ニーの撮像が測定信号 としてコントーラ 2 5に送られ、 コントーラ 25において、 測定信号 Ttを画像処理し、 コ σニーの全画面中に占め — —
る生钿跑の割合を算出する。
以上のプロセス奁轻て、 钕種の钿跑または渙生物を含む钿胞溶 ¾また は翁生钩溶被の中から、 用いた培養液に対して射性のある、 目的とする 種類の細跑または教生物を自動的に遂别することができる。
実旌冽 2 ：
本究明における钿胞選 sij郞が、 ア せィ部からなる場合ほ第 δ図に示 すもので、 その作用は以下のようになる。
第 6図に示す分泌物産生能検出装鬵はトレィ锒送茚、 分取分注都、 ア セィ部 ¾ぴコントローラから成る装蠹であって、 前記トレィ擻送都は複 - 钕のゥエルが設けられたトレィを乗せる トレイ台と該トレイ台を前記分 取分注 Φ及びアツセィ郑における各所定位鼸に鷇送するための憨動手段'. からなり、 前記分取分注部はビぺッ ト奁把持し該ビぺ トを前 iaトレイ . 台上のトレイに設けられた複数の各ゥエル上方に位置せしめるマニビュ レ一タと前記ビぺ トよ.り泫^を一定虽吸引吐出するためのポンプから なり、 コント ーラは入力された前記各部の作勤条件に従い第 7図及び- 第 8図に示す如く前 15各部を制镩する装 §である。 钿飽 が各ゥエル 3 1に入れられ、 C O - インキュベータで培養され. た後のトレイ 8もトレィ接送部 7のトレイ台 8上に く。 コロニーの数 大ささを観察したい場合は、 特に、 コロニー観察茚 3 6 ^設けることが でき、 トレイ搬送'部 7 .の駆動手段 9により、 トレィ台 8をトレイ 6に設 けた各ゥエル 3 1がコロニー観察部 3 6の下方に位鬵するように移動さ せる。
钿胞の增薙度が决定された培戔用トレイ 6上の各ゥエルの培養上滑泫 ほ、 分取分注部 4 1におけるピぺッ トマニピュレータ 3により移動され たビぺジ ト 4によって一定量分取され、 抗体検出用トレイの対応する各 ゥエルに分注され.る。 ピペッ トマニピュレータ 3は、 水平多関節型ァー ム、 直交型アーム等が使用できる。 ポンプ 4 2は圧力、 加圧時間により 吸入量、 吐出量をコントロールする。 培篓上清泫の分取に際し、 ビぺ ト 4の先端は：^ンタミネ 'ンヨンを遒けるため、 一度使用し、 液に蝕れ たものほピぺ ト交渙茚 4 3の位置までビぺヅトマニピュレータ 3によ て移動させ、 脱着を行うことによって、 新たなピぺ トと交換する。 培戔用トレイ βの各ゥエルから採取され、 対応する各ゥエルに分注さ れた抗体検出用トレイ 4 7は、 アツセィ郎 4 4における トレィ台 4 5に 鬵かれ、 铤動も-タによって勤作する送りねじ 4 6から成る駆動手段あ るいは.エア騾動からなる铤動手段にょゥて、 アツセィ郐 4 4の内 Φの抗 検出位置まで徼送され、 各々のゥエルの上清浚中に含まれる抗体量^ 測定される。 ァ セィ 4における検出装 gとしてェライザ測定装蒙 または液体クロマトグラフなどを用いることができる β
以上のプロセスを轻て、 各ゥエルの钿跑增殖度と抗体量を測定し、 こ れらの値から各々のゥエルに含まれる钿跑の抗体產生能 （-抗钵量劉定. 遒 /増殖度測定镇） を自動的に検出する。
実施 2のブ ク図および作動プロ一図は、 それぞれ第 7図およぴ- 第 8図に示す。 測定信号 はゥエル中の钿胞コロニ-の数、 大きさ、 ： 輝度も画像処理した癘を内容とし、 測定信号 Τ 2. は钿跑上清铉中に含ま れる抗体の量も内容とする。 抗体量の镱は、 コント口 ^ラにおいて記億 され、 この镇から各々のゥエル中に含まれる钿跑の抗体産生能を算出す る β
制锭信号 S，に従い、 培戔用トレイ 6をトレイチャックにより トレィ 台に設置し、 制翻信号 により培養用トレイ 6もコロニ II察部にお ける顕徼鎗付 T Vカメラの下方の位 gに移動する
以降、 コロニー観察部からの測定信号 T " マニピュレータの作動を 制御する信号 S 3、 細胞培養上潦泫を分取分注するためのボンブを作動 する制镩信号 は実施例 1の場合と同様の信号を内容とし、 又、 制御 信号 S 8Sび S *により、 細胞培養上清液と抗体検出用トレイの各ゥエル に分注する毎にピぺッ ト交換する β
抗体検出用トレイ上の全ゥエルに钿跑培養上淸铉の分注が終了すると, 制痴信号 S，及び S，により抗体検出用トレィをア せィ部のトレィ台 4 5に移動する。
次いで、 制瑯信号 S 5に従い、 トレィ台 4 5上郞に抗体検出用トレイ が駆動手段の作動 よりアツセィ部内に入る。 測定信号 T 2ほア せィ 部において绚定された縐胞溶梭上清 ¾に含まれる抗体萤を内容とし、 コ ント σ ラにおいて細胞の抗体産生能 Ο抗体量測定値/増殖度測定嫿). を算出する。
この袋冕は、 抗体產生餱の検出に用いることは勿論であるが、 抗体検 a部を他の検出装藿に交換することにより、 目的钧赏が分泌される瀵生'. 物の目的物資産生能の検出においても用いることが可餱である。
実旌例 3
本発明における細胞選別茚が、 細胞個数計数部お'よぴ細胞単齄郞から なる場合の実施例を第 9図に示す。
第 9図及び第 1 0図に示す細跑単雜装置は、'分取分注茚、 トレィ絷送 郐、 钿胞儸数^数郐、 単難分注部及びコント口 ラからなる装蠢であつ て、 筘記分取分注茚はピベジ トも把持するマニピュレータと前 IBビぺッ トにより液体も一定量吸引吐出するためのポンプからなり、 トレイ锒達 は複数のゥエルが設けられたトレィを乗せるトレイ台と該トレイ台を前 記分取分注茚、 細胞個数計数部及び単蘼分注部における各所定位翯に锒 送するための憨勐手段からなり、 コントローラほ入力された 記各郅の 作動条件に従い第 1 1図及び第 ί 2図の如く前記各萆も制御する装置で あな。 - 細^が増殖-している細鹰培養トレィ 6上の目的のゥエルから、 一部細 III溶 を、 ピペ^ トマニピュレータ 3によって移動させられたピぺヅ ト 4により分取され、： ブレパラート 5 1上に滴下される。 細胞溶袪が滴下 されおプレパラート 5 1はブレパラート¾送部 5 2の铤勤乇-タ 5 3に よって顕教镜 5 4下の位氨まで移動する 0 顕教繞 5 4 よって観察され た像は T Vカメラ 5 5を速して制御回路 2 &に送られ細胞儕数を計数す る。 ここに钿 JS橱敎計敎部 5 6は、 例えば顥截鏡 5 4、 T Vカメラ 5 5 , 制镩回路 2 5の檨錐のー郞モニターとしての檨能も有する入力装置 2 6、 プレパラー ト 5 1およびブレバラ-ト緻送部 5 2から構成されたもので ある。 その紬跑鶴数がある一定倬以上の場合は、 もとの細砲溶液を希^ 容器 8 1内にピぺッ ト 4およびビぺッ トマュピユレ ""タ 3.を用いて分注 し、 钿跑饀数から决められた萤の希釈液を希釈部 6 2を使用して加えて 希択する。 希釈された細 溶 ¾は钿跑単雜分洤部 6 3により吸入きれる e 単雜分注茚は例えば第 1 0図のような構成になっており、 細管 6 4内を 電解 ¾である希択液が流れており、 電極聞を流れる電解 ¾の抵抗億が钿 胞がある場合とない場合とで異なることを利用し、' 測定する電圧植の変 化で钿 を檢出する。 铂跑検出信号に同期してトレイ 6 5も乗せたトレ ィ搬送部 7が移動し、 検出された钿跑 1個 1儷を値々のゥエルに分注す る。 なお、 第 1 0図において、 6 8は細胞、 6 7は電極、 6 8は電流計、
6 9はトレイ S 5に設けたゥエルである。
実施判 3のブ σ ク ¾および作動フロー図をそれぞれ第 1 1図および . 「 第 1 2図に示す。 制御信号 S s ほ、 プレパラー ト镦送部における靼動乇 ータの起動、 停止を制卸する信号である。 測定信号 は、 細胞摑教 I†
数部で剷定された細胞群の大きさ、 彩状、 輝度^内容とし、 コント a—
ラにおいて演笄処理して、 プレパラ— ト上の視野内に見える貓跑の値数 も I十測し、 これにより钿胞缡浚中の钿跑港度を算出する。
希釈部において、 制芻信号 S » により、 細胞翁度に応じ希釈泫も加え、 細胞溶 ¾中の紬胞溴度を細跑の単艙分注に適当な漠度にする。
測定信号 は、 希釈された紬胞獰铉中の紬跑が細胞単雜分注茚の钿 胞溶 ¾通路の検出位 ¾を通過したという信号で、 この信号と同期して、 制钿信号 S 3 により トレィ搬逮茚がトレイ上のゥエル藺隔分移動する。
つぎに実旌例 3のブロ ク図及びフロー図はそれぞれ第 1 1図 ¾ぴ第
1 2図に示す。 .
制 ¾偉号 S〖によりマニピュレータ 3も作動してマニピュレータに把 持されたビぺ" ト 4 ^培 II用トレイ上の狻敎のゥエルの一つに移動し、 制钿儅号 S ,によりポンプが作動され、 ゥェルに人っている細胞'溶液を 分取する。 然る後、 制衡倌号 S iによりマニピュレータ 3を作動してビ ペ^ 4をブレバラート 5 1上の位鬵に移動させ、 制镩信号 により、 ピペ ト 4中の钿飽溶 をプレパラート 5 1の上に滴下する。
- 制钿信号 S 5によりプレパラート 5 1を顛漦鏡 5 4の下方に移動させ、 铂胞倨数計数部において、 钿胞溶 中の铀胞値数奁計数する。測定信号 は、 網 儸敎を内容にして、 その値はコントローラにおいて， 钿腚 淳浚中の δ跑麄度も算出する。 钿跑瀵度が一定植以上の場合は制御信号-. S！によりそ 钿鷉瀵度の細胞痹铉の入ったゥェルにマユビュレータ 3 のピぺ トを移動させ、 制 ϋ信号 s 2によって、 ポンプを作動させビぺッ トにその钿跑溶袂を分取する。 次に、 钿飽溶祛を分取したビぺ トを制. 卸信号 S ,により希^容器に移動せしめ、 制淘信号 S sによって、 细胞翁 珐を希釈容器内に注いで制镩信号 S eにより、 希釈 ¾を希択容器に加え - て一定濃度以下に希釈させる。
希釈された钿胞溶铉は、 钿胞単雜分齄茚 6 3に吸入され、 網飽が細管 2 g
6 4を通逸するとき、 測定信号 T ,を発信する。
この钿跑検出の測定信号と同期して、 制 信号 S 3及び S *により トレ ィ粱送茚を作動し送液管 7 0の出口においてトレイ上のゥエル間の钜雜 だけ铵動させる。 ：
本発明の钿胞遂别装肇による以上のプロせスを経て、 钿飽群の中から， 1儷 1値の細胞を単薙することができる。
この装翯を用いること よって、 得られお抗体が単クローンであると いう保証が得られ、 また、 限界希釈法によって単クローン抗体産生钿跑 を選别するのと異り、 何度も增殖を辏り返す必荽がないため、 短時閎の うちに単クローン抗体钿跑を還别す:ることが可能となる。
実施例 4
本堯明における細胞遂釗郎が培養部、 コロニー観察部、 ア セィ茚お よぴ擗胞単雜茚から成る場合の実施例を第 1 3図 示す。
第 1 3図、 第 1 4図、 第 1 5図に示す钿胞選 3lj装置は、 分取分注郞、 トレィ瘢送郜、 培桀茚、 アツセィ郞、 単難分注茚 Sぴコントローラから 成る装置であって、 前記分取分注部はビぺ トと該ビべ トを ffi持す.る マニピュレータと前 g己ビぺッ ト より ¾体を一定量吸引吐出するための ポンプからなり、 前記トレィ锒達茚は前記トレィを乗せるトレイ台と該 トレィ台を前記分取分注郎、 培 ¾都、 ァ セィ部 ぴ単離分注茚におけ る新定位齷に锒送するための駆動手段からなり、 前纪培養郎は筘記トレ · ィを複数収衲するトレィスト クも具備し、 前 Sコントロ^-ラは入力さ れぉ前記各郎め作動条件に従い第 1 8図、 第 1 7図に示す如く前記各部 を制翁する装橐である。
融合 ¾跑¾び培養 ¾が入った例えば.試袅管などの容器 1も容器ハンド ラ 2で籯み、 容器 1もピぺ トマュビユレ一タ 3の場新に移動させる。 容器ハンドラ 2は、 従来技術で構成され、 その具体例を第 1 8図に示 す容器ハンドラ 2の先靖 はモータ 7 7で ©動されるチヤ ク 79 , 79' が取り付けられている。 第 1 9図はチヤック郞分の新面図であり、 チヤ V ク 7 9 , 7 9 ' は互いに逆向きのネジが切られた送りネジ 8 0で乇ータ 7 7と繪合しており、 ¾ータ 7 7の回転方向により開閉制卸される。 ま お、 モータ 7 8により、 容器ハンドラ 2は回転制镩される。 第 i 3図の 容器ハンドラ 2における点線は、 ピぺッ トマニピュレータ 3の位 gに移 - - 動した時の仮想锒である。
ビぺッ トマニピュレータ 3も従来技術で構成され、 その具体^を第 20 図示す。 8 1 , 8 2はモータであり、 $ t袖， -軸のまわりに回転も与え る。 また、 マニピ レータ足部 8 3にほも—タおよぴピニオン/ラ ク が収納され、 マニピュレータ全体を Z袖方向に移動制御する a これらの 制镞は、 すぺてつントローラ 2 5によって行なわれる。
マニピュレータ足邵 8 3の *—タを回転しピぺッ トマニピュレータ 3 も降下させ、 先绻に取り付けられたピぺッ ト 4を容器 1内に揷入しポン ブ 5で钿胞溶袪を.吸引する。 ポンプ 5は^えば、 ペリスタポンプであり、 コント CJ—ラ 2 5によるポンプの回転時閭制卸により吸引量をコントロ ルする。 次に駆動 ^ &ータ 8 1 , 8 2を回転させ、 マニピュレータ 3も 制卸することにより、 先端のピぺッ ト 4を塔養用トレイ 6のあるゥェル • の位置まで移動させ、 ポンプ 5で一定量の钿跑溶铉をゥエル内に吐出す る。 吐出は、 ペリスタポンプ 5を、 吸引時に逆方向に回耘さ ^ることで 可能であり、 吐出量はポンプ 5の回転時藺により制御可錐である。 トレ' ィ¾送郎 7は、 一般の X - Y移動機構で'あり、 トレイチャ ク 1 6が設' けられた搬送郎トレイ台 8を X - Y平面の任意の位蠹に移動制镩する。 このトレイ搬送部 7も制卸し、 各ゥエルをピぺッ ト 4の直下に移動した. ¾、 同様に、 ポンプを時閻制御し、 トレイ内の予め決められた数のゥェ ルに钿跑蒗 ¾を一定 S吐出する。 トレイ搬送茚 7の動作は、 例えば、 第 1 4図に示すようなモータ ¾動や第 1 5図に示すようなギア^動などの 動手段を用いる：:とができる。 第 1 4図において、 7 1は送りねじ（ボ ールねじ）、 7 2はパルス * タであり、 パルスも一タ奁回転させる；： とにより、 搬送部トレイ合 8 «¾r水平に移動し， その位 g制镩は、 パルス モータの铤動パルス数で行なう。 第 1 5図において 7 3は、 エアシリン ダ、 7 4は、 電磁ブレーキ、 7 5はポテンショメータ、 7 6 , 7 6 ' は 電磁パルプであり 7 6 , 7 6 ' のパルプをコントロールすることにより、 シリンダ内に-エアを入れ、 搬送 ^トレイ台 8を水苹移動し、 ポテンショ メータ 7 5によりその位置を換出し、 所定の位置に移動した後、 電磁ブ' レーキ 7 4.により停止きせる p 第 1 4図又は第 1 5図の樓構も直交させ て載置させることにより、 移動機構が溝成される。
溶泫が分注された培 II用トレイ 6ほトレイ台 1 3を介して、 0 0 2ィ ンキュベータ 1 4内のトレイスト ク 1 5に収納され、 一定期間細胞培 . 赛璋境にて保持される。
搬 ϋ郯トレイ合 8およびトレィ台 1 3には、 第 3図に示す、 トレイチャ ク 1 6 . ί が取り付けられている， 第 1 3図により説明すれば、 トレイスト ク 1 5に培 S用トレイ 6を収納するためには、 まず， トレ ィ搬送却 7により培養用トレイ 6をトレイ台 1 3に接する位置まで移動 させる。 次にトレィ台 1 3のトレイチャ ク 1 6 ' もトレイ台上面より 下に降下せしめた後、 トレイチャック 1 6を第 3図における X方向に移 動し、 トレイ 6もトレイ合 1 3上に ¾送する。 さらに、 トレイチャック 1 6からトレイ δをはずし、 トレイチャック I δを锒逞部トレイ台 S上戻す。 次に、 トレイチャジク 1 6 ' を上昇させ、 トレイ 6を把持する。 さらに、 トレイチ ク ί 6 ' を移動せしめトレィ 6をトレイストツク 1 5の 1つの榭の.中に挿入する。 トレイチャジク 1 6 ' から トレィ 6 ¾ はずし、 トレイチャック 18' を後退せしめることにより トレイ Sの C O s インキュベータ 1 4への収納ほ完了する。 C 0 2.インキュベータ 1 4に は、 第 2図の点箨で示す捸に従来技術による開閉扉 1 4 ' が取り付けら れており、 トレイ 6の截入/出に伴い扉を開閉する。 トレィストック ]L5 は、 权钠櫬とこれも上下移動するための送りねじ 2 2と铤動モータ 2 3 とで構成される。
C O i ンキュベ タ 1 4内の钿跑培赛環境に一定期閽保持された培 ¾铕トレイ 6は、 トレイストツク 1 5に挿入した時と逆の操作により ト レイ搬送 ¾5 7に移動し、 ロニー観察茚 2 4の位置に培養用トレイ 6上 め各ゥエルを移勤させ、 コ σニーが増殖しているかどうか杏検出する。 このコ σ二—観察茚 2 4は、 顕 鍵付 T Vカメラから成る画像入力 φ · とコンピュータである画像^理 φから構成され、 入力部で.掾像きれた拡 大像に対してディジタル処理にて画像処理を行ない、 コロニーの検出を · 行なう。 画像処理の方法としてほ、 生钿砲の部分の獰度が大きいことを 利用して 2値化法 より生細跑も検出し全画面の中に占める生钿跑が占' める割合から、 コロニーの撿出が可能である。 トレイ δのすぺてのゥェ ル 封して =Jロニーが検出きれなかつお場合には、 ピぺ トマニピユレ. ータ 3によって移動せられたピぺッ ト 4によって、 細胞溶欲の上清桀す. なわち古くなつた培養铢を吸引し、 さらにピぺッ トマニピュレータ 3を - - 移動し、 吸引した培養法を排¾槽8 5に麋棄する。 次に同様に、 ピぺ トマニピュレータを移動し、 新しい培養液を培養液槽 8 4から吸引し、 古い培 ¾¾が吸引されたゥエルに吐 ¾することにより培養 ¾の交換を行 なう。 以上の動作を培養中のすべてのゥエルに対して行ない再び、 記述 の動作により トレイ 6を C 0 2インキュべ タ 1 4内のトレイストヅク 1 5に接入し一定期闉、 培養を持続する。 一方、 コ ーが揆出された. 場合は、 培養用トレイ 6上の各ゥエルから、 ピぺッ トマニピュレータ 3 よって移勐せられたピぺツ ト 4によって、 钿跑溶铉の上潸铉を扱入し， 検出用トレイのゥエルに吐出する。 これを、 すぺてのゥエルに対して行- なう。 さらに、 ピペッ トマニピュレータ 3を使用して钿 溶液上清液が: 入った検出用トレイ 4 7上のゥエルにアツセィ試薬 4 8を一定量ずつ加 え、 従来技術による 一タ驩動?こより、 検出用トレィ 4 7をアツせィ部 4 4内に移動し、 目的の钧質が検出用トレイ 4 7の各ゥエルに入れられ た細胞溶液上滑浚に含まれ'ているかどうかを検出する。
アツセィ部 4 4として、 ェライザがある。 目的の物質が轴胞溶铉上潸 泫に含まれていることが検出されたことは、 即ち、 もとの培戔用トレイ 6のゥエル中の钿胞が目的物質を生産していることを怠珠する。 目的物 質を生産している塔養用トレイ 6のゥエルの中で最大量の目的物貧を生 産する钿胞溶泫に対してその一部をビぺツ トマ ビユレ一タ 3 ' でブレ パラ一ト褸逸部 5 2のプレパラート上に分注し、 これを钿胞摑数汁数部: 5 6によりプレパラート上の細胞溶液に含まれた钿跑個数を計測する β . ビぺツ トマ ヒ'ユレ一夕 3 f ほ、 ビぺ トマニピュレータ 3と同じ钧で あり、 先端にピぺ ト 4 ' および、 これにつながるペリスタボンブが取 り付けられている。 プレバラート搬送部 5 2は、 輊動モータと送りねじ ·· で構成される直線移動機構であり、 あらかじめ、 移動ステージ上にプレ パラ一ト 5 1で截饔されている。 細跑個数計数郐 5 6は、 顯渙镜付 T V カメラから成る画像入力部とコンピュータである画像処理茚から構成き れ、 コロニー観察部 2 と同様にディ ジタル処理にて生細胞の健数を計 測する。 培養用 トレイ 6の钿 S溶铳をブレパラート 5 I上に分注する時 のプレパラ一トの位 gと紬跑値数計数部 5 6で計測する時のプレパラ一 トの位氩は異なるため、 これはプレパラート搬達郞 5 2で制镧する。 钿胞僳数 f数部 5 6によって計測きれた钿跑個数よりもとの培養用ト レイ 8上のゥェルの钿臈溶狭の細胞 ¾度も算出し単艤分注ができる目的 の瀵度にまで希釈するための希 ^率 决定し、 ピぺッ トマニピュレータ 3 " によってゥェルの細胞溶液を一定量希釈容器 6 1に分注し、 目的港 度となるように希釈茚 δ 2によって所定量の希 ^欲を加え、 希^する。 钿遨澳度は、 次の方法で算出する。 つまり、 ゥェル內の細胞溶筏量お よびプレパラート 5 1上のサンプリング量を一定にしており、 ブレバラ ト上の细胞儷数から容镜比で逆算して算出する。 希釈郎 6 2は、 希釈 泫槽とポンプから構成され、 ポンプの時闊劍钿により、 希^^の吐出量 制痴を行なう。 .
希釈された紬胞瘩液は、 単雜分注茚 6 3により吸入される。 単雜分注: 郎は第 1 0図に示す様な断面搆遣を有し、 単雜分注茚では細管 β 4内を 電解液である希釈液が流れており、 電極 6 7間を流れる電解铉の抵抗值 が轭鉋がある場合とない場合では異なる事を利用し、 電流嫿の変化で钿 胞を検出する。 .
钿 'の検出には'、 電樺に代わり、 钿管を挟むように発光部と受光郞を- 設け、 細胞の通通による発光郎からの先の遽¾?も受光茚で感知すること により行なうことができる。
単鏟分注邦 6 3は、 硖引ポンプ 8 6と、 上纪の铀胞検出茚 6 7 , 6 8 から構成され、 細胞が検出されない場合は、 希釈溶液を廃棄し、 钿跑が ·. 検出された場合ほ、 この細鸪検出信号に同調して培養用トレィ 6をトレ. ィ搬送部 7によって移動させ、 培養用トレイ 6の中で塔戔に使用しなかつ た各ゥエルに一儲一儲の钿胞を分注する。
これは、 網 揆出茚からゥェルまでの逵液管 7 0の容量も、 ゥ.エルの- ，容律より小さい億に Ιδ定し、 钿跑検出信号が得られた時点で、 単雜分注.
3の咴引ポンプ^一旦、 停止する。 そして、 トレィ琅達 7を粜動- し、 次に細胞を分注する予定のゥェルも送液管の直下に移動した後、 吸 引ポンプを再起動し、 細胞をゥエルに分注する。 この場合、 钿胞検出邾 からゥエルまでの送液管内に 2値以上の钿跑が存在すると、 Iつのゥェ ルに 1つの ¾胞も分注できないので、 その様な情況が発生しない様に、 希^容器 8 1で、 必要十分な値まで希！ ¾する。 この値は、 'あらかじめ、 実驗的に決めておく。 ·
儲一個の钿跑を分注した培養用トレィは再度 C O :インキュベ タ - 8 -
1 4内のトレイスト ク 2 0に収納して钿胞を培戔する。
さらに前述したのと同様にして、 コロニ ^検出、 目的钧質の検出を行 ない、 以上のプロセスによって目的の钿胞も選別する。
つぎに、 実施例 4のブロック図およびフロー図もそれぞれ第 1 4図お よび第 1 5図に示す。
容器ハン ドラ 2で容器 ίを把持し、 容器 1をピぺッ トマニピュレータ 3で場新も移動してから、 钿跑溶渙をピぺッ トによって一定量各ゥエル 内に吐出するまで、 ¾び
トレイ银送茚 7で培養用トレイ 8を培:戔部 ;:おける トレイ台 1 3に接 する位置まで移動させてから、 培養が終了し、 コロニー観察茚の位置ま で、 移動きせるまでは、 実施例 1 と同様の制镩信号 S iないし S によつ て制御される。 コロニー観察茚からの測定信号 も実施剁 1 と同様の 信号である。
次いで、 マニピュレータ 3でピペッ ト 4をコロニーの観察ざれたゥェ ルに移動し、 その細胞溶液上清铉を吸引してから検出用トレイ 4 7の各 ゥエルに吐出するまでの镍り返しの操作は， 分取分注 ¾5·のマニピユレ一. タ及ぴポンプを制钿する信号 s^sぴ s3、 トレイ锒逸郎を制卸する信号
S 4及び S，により行なわ る。
然る後、 換出用トレイ ·47のゥエルにア せィ試蕖 ^吐出するまでの 一連の操作は、 実施例 2における制 ϋ信号 Ssと同様の内容の信号（S, - 〜SS)により制籂される。
更に、 細胞値数計数部において、 各ゥエルの細跑濬泫中の钿飽饀数奁 算出し、 紬胞単雜部において、 一儘一儲の細胞を各ゥエル毎に単雜する までの一違の操作は実施例 3における制钿信号（S
Figure imgf000041_0001
と同様の内容: の信号（33,37〜38〉にょって制御される。
崖業上の利用可能性 ：
本発明は、 数種の钿跑または渙生物を含む钿抱溶袪または徵生物溶液 の中から、 目的とする または後生物、 例えば単クローン抗体産生钿 胞を選釗する場合、 抗体產生饞の大きい細胞を逮ぶことが必要である。 - •本発明の装 gによって、 入手によっていたのでは処理できない澎大な量 · の钿齒の培養^から、 短時間のうちに增¾度の強い、 また抗体產生力の 強い钿跑が含まれるゥエルを確実に検出することが可能である。 また、 · 钿飽の取扱いが無菌琼境である裟鼸内で行われるため、 雑菌混入の危険: 性ほ少なく、 安定に目的とする細胞も検出でき、 それにより還别するこ とが可能である。
以上より、 単クローン抗体が効率よく得られるようになり、 単ク π— ン抗体のお用に大きく寄与することは明らかである。

Claims

讃 求 の 範 囲
(1) 分取分注茚、 トレイ搬達郞、 コントローラ sび細胞遷刖 |ϊから 成る細跑逮釗装置であって、 前 E分取分注郎はピぺツ トと該ビぺツ トを 把持するマニピュレータと前記ピペッ トにより痃体を一定量吸引吐出す るためのポンプからなり、 筘記トレイ搬送茚は前記トレィも棻せるトレ. ィ台と該トレイ台を前記分取分注茚、 培篓部および前記紬飽 S釗都にお ける所定位 gに搬送するための ¾動手^:からなり、
前記: 3ントローラは入力された前記各部の作動条件に従い、 前記各部 を制御する装鬵であることを特徵とする細胞選钊装蠹 έ
(2) 細胞 a刖部が、 培養部およびコロニー観察部からなる請求の is 囲第（ 1 )項記載の細胞選別装翬。
(S) 培 ¾都が複数のトレィを収納するトレイズトゥクと該トレイス トックを移動する铤動手^を具備するインキュベータおよび前 βトレイ を前記トレィストツクべ搬送する培釜部トレィ台からなる請求の範囲第 (2)項記载の钿胞選别装置。
(4) コロニー観察郎が、 TVカメラと該 TVカメラに受像したコ口 4
—42—
ニーのしめる面積を電気信号に変渙する制卸回珞とからなる讃求の範囲 第（2)項記載の細胞; gSlj装蠹。
(5) 钿跑 SSljiPが、 アツセィ部からなる讃求の筘囲第（1)項記截の 钿跑選釗装鼴 0
(6) ァ Vセィ茚が、'酵索抗体法による発色度の検出装翬と該発色度 を電気信号に変換する制钿回瑢からなる赣求の範囲第（5)項記載の細胞 逮剌装鱟。
C7) 検出装.置が、 ェライザ-アナライザ'一でなる睛求の範囲'第（δ) 項記載の钿飽逮^装.魔。
(8) 検出装 gが、 液体クロマトグラフである請求の範囲第（6)項記 截の铀 選别装置。
(9) 钿跑選钊部が、 細跑儸钕計数茚と钿跑単雜部からなり、 前 IS細 胞僑数計数茚は、 细跑培養トレイのゥエルから細胞溶 ¾を分取し、 プレ パラート上に滴下するピぺジ トを移動するピペッ トマニビュレートと、 前記プレパラ - トも紬跑渰液を滴下するピぺッ トの下方位蠹からブレパ ラ - ト上の網胞溶袂を観察する穎'微鏡の ϋ察位置に移動するブレパラー - 8 - ト搬送 と、 顕教鐘に'よって観察された像を T Vカメラを通じて钿胞徨 敎を計数する制御回路とからなり、
前 IH钿跑単雜部は、 前記钿胞儘数計数 からコン トローラ^介して撸. 定された一定以上の钿胞個数を有する細胞培養トレイのゥエルから钿跑 溶 ¾が分取分注部により、 分取され、 注入される箝^容器と、 該希 ^容. 器から希! ¾された紬胞溶泫が吸入される細胞溶 逋路を有し、 該邁路に 細胞換出郁も設けてなる細胞単雜分注部とからなり、
トレイ紫送茚が、 前記細跑換出部からの细胞検出信号と（コン トロ - ラを介して）同期して、 前記钿跑溶痃通路出口において、 各ゥエル間隔 づっトレイも移動する請求の範囲第（1)項記載の細胞逮别装置。
(10) 上 IB钿跑検出茚が钿飽溶法逋铬を挟む一対の電棰からなる請求 の範囲第（ 9：)項記載の钿跑選別装鬵 ώ ·
(11) 上記紬齒検出郎が钿跑溶液通路を抉んで設けられた発光部と受 光部とからなる請求の转囲第（9)項に記載の細胞選釗装置。
(12) 細胞選^部が、 培養部、 ア せィ茚および細跑単雜都からなり、 前記培 ¾郎は.、 複数のトレィも収鈉するトレイストツクと該トレイス ト クを移動する IE動手 ¾も具傭するインキュベータおよび前記トレィ を前 IBトレイスドックへ搬送する培荽部トレイ台からなり、
前 Eア セィ部は、 酵素抗体法による穽色度の検出装鼸と該発色度を 電気信号に変換する制卸回路からなり、
前 IB钿跑旱雜茚は、 細胞培養トレイのゥエルから細胞溶袪が分取分注 部によって分取され、 注入される希^容器と、 該希択容器から希 |¾され た細跑溶液が扱入される钿胞溶铉通路を有し、 該道路に钿飽検出茚を設 けてなる钿跑単雜分注部からなり、 .
トレィ敏達郎が、 前記細胞換出部からの細胞検出信号と （コント o - . ' ラも介しで） 同期して、 前記細胞溶浚通路出口において、 各ゥエル間隔. づっトレ.ィを移動する請求の筘园第（1 )項記載の細跑遂別装襞。
(13) 上記钿膨検出部が钿跑溶 ¾通路'を挟む一対の電極からなる請求 の筠 ffi第（12)項記載の紬跑還釗装置。
(14) 上 § 钿跑検出茚が钿飽溶铉通路を挟んで設けられた発光部と受 光部とからなる請求の範囲第（12)項纪载の钿胞遂別装翯。 要 約 書
ビペッ トと該ピペッ トを把持するマニピュレータと、 ビぺ トにより 法体も一定量吸引吐出するためのポンプからなる分取分注都と、 トレイ も桑せるトレイ台と ¾トレイ台も前記分取分注茚、 培養部および钿胞選 Slj茚.における所定位置に紫 するための ¾動手段からなるトレイ裟送郐 と， 入力された前記各部の作動条件に徙ぃ、 前記各部を制钿する: 3ント a —ラとからなることを特徵とする钿^別装置を新規に創作して、 人. 手によっていたのでは処理できない澎大な萤の細胞の培養袂から、 短時 閽のうちに增殖度の強い、 また抗体產生力の強い細胞が含まれるゥエル を確実に検出することも可能とし、 また、 钿胞の取扱いが無菌環境であ る装霞内で行われるため、 雑菌凝入の危険性は少なく、 安定に目的とす る細胞も検出でき、 効率よく選別する::とも可能にしたものである。
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