JPS6260071B2 - - Google Patents

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JPS6260071B2
JPS6260071B2 JP59195933A JP19593384A JPS6260071B2 JP S6260071 B2 JPS6260071 B2 JP S6260071B2 JP 59195933 A JP59195933 A JP 59195933A JP 19593384 A JP19593384 A JP 19593384A JP S6260071 B2 JPS6260071 B2 JP S6260071B2
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JP
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tray
signal
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JP59195933A
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Hiroyasu Funakubo
Shinichi Myake
Yoshikazu Nishiwaki
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Sumitomo Electric Industries Ltd
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Sumitomo Electric Industries Ltd
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Publication of JPS6260071B2 publication Critical patent/JPS6260071B2/ja
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    • C12M23/12Well or multiwell plates
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Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は分泌物例えば抗体を産生する抗体産生
細胞のうち、増殖力が強く、抗体産生力の強い細
胞の選別に用いる分泌物産生検出装置に関するも
のである。
従来の技術 分泌物例えば単クローン抗体は、抗体化学、抗
原化学における研究に、薬理学におけるホルモ
ン、神経伝達物質の受容体の研究に、その他ウイ
ルス学、寄生虫学、細菌学において利用される。
また診断において、免疫不全症の分子生化学的解
析或は抗原(悪性腫瘍等)の検出などに、更に治
療においては、臓器移殖(組織適合性)への応
用、受動免疫(抗体の注射)、悪性腫瘍に対する
治療などに広く使用される。
単クローン抗体等の分泌物はその産生細胞から
得られるものであるが、従来、単クローン抗体産
生細胞を選別する方法として、例えば以下の方法
が採られている。
脾細胞(2,5×108個)、腫瘍細胞(2,5×
107個)などをポリエチレングリコールを融合促
進剤として細胞融合し、遠心後融合液を捨てて、
HAT培養液(Hypoxanthine Aminopferin及び
Thymidineを含む培養液)を加えて細胞を分散さ
せる。然る後、分散して得られた細胞液をトレイ
に複数設けられたウエルに各々例えば0,2mlず
つ分注し、次いでCO2インキユベータ(培養器)
内に2週間培養する。この培養によつて、融合し
ていない細胞は死滅し、融合細胞は増殖される。
融合細胞が増殖しているかどうかは、顕微鏡下に
トレイの各ウエルを置き、コロニーの有無を観察
することによつて判断される。融合細胞が増殖し
ていると認められたウエルについて、その培養液
の上清液をマイクロピペツトによつて分取して、
抗体検出用のトレイの各ウエルに分注する。各ウ
エルが培養上清液によつて満たされた抗体検出用
のトレイを抗体検出部に装着して、上清液に含ま
れる複数量を測定する。この測定は通常エライザ
(ELISA:Enzyne linked immuno sorbent
assay)により行われ、各ウエルに含まれていた
細胞の抗体産生量を知ることができる。このと
き、前記細胞液が分注されたウエルが例えば480
個であつたものが、目的の抗体を産生しているの
は、通常、5ウエル程度になる。
発明が解決しようとする問題点 培養後のトレイの各ウエルを一々顕微鏡下に置
いて、細胞コロニーを観察し、また培養液の上清
液も一々マイクロピペツトによつて分取し、抗体
検出用のトレイの各ウエルに分注し、そのトレイ
を抗体検出部に装着して、上清液に含まれる抗体
量を測定するという従来の抗体産生検出方法では
その作業に高度の技術と膨大な手間が必要であり
無菌環境外の外気に触れ雑菌混入の危険性が大き
く、培養に用いたトレイの各ウエルと抗体検出用
のトレイの各ウエルとを対応ずけることが繁雑で
あつた。
問題点を解決するための手段 本発明は、上述の問題点を解決するために為さ
れたもので、トレイ搬送部、分取分注部、コロニ
ー観察部、アツセイ部及びコントローラから成る
分泌物産生能検出装置であつて、前記トレイ搬送
部は複数のウエルが設けられたトレイを乗せるト
レイ台と該トレイ台を前記分取分注部、コロニー
観察部及びアツセイ部における各所定位置に搬送
するための駆動手段からなり、前記分取分注部は
ピペツトを把持し該ピペツトを前記トレイ台上の
トレイに設けられた複数の各ウエル上方に位置せ
しめるマニピユレータと前記ピペツトより液体を
一定量吸引吐出するためのポンプからなり、コロ
ニー観察部は顕微鏡付撮象部と撮象された画象デ
ータから増殖度を算出する処理装置からなり、コ
ントローラは培養用トレイを置いたトレイ台を前
記顕微鏡付撮象部の下方の位置に移動する信号を
トレイ搬送部に発信する手段と、ピペツトの先端
を前記処理装置により増殖度を決定した培養用ト
レイの各ウエルの培養上清液中及び検出用トレイ
に対応する各ウエルの上方に移動する信号をマニ
ピユレータに発信する手段と、ピペツトに溶液を
注入及び吐出する信号を前記ポンプに発信する手
段と、検出用トレイをアツセイ部内に移動する信
号をアツセイ部駆動手段に発信する手段と、アツ
セイ部で測定された抗体量とコロニー観察部で測
定された増殖度から抗体産生能を算出する手段か
らなる装置であつて、入力された各部の作動条件
に従い前記各部を制御する装置であることを特徴
とする分泌物産生能検出装置に存する。
発明の作用 本発明の作用を、図面に従つて説明する。第1
図は本発明の実施例を示す斜視図である。細胞液
が各ウエル1に入れられ、CO2インキユーベータ
で培養された後のトレイ2をトレイ搬送部3のト
レイ台4上に置く。コロニーの数、大きさを観察
するためにコロニー観察部6を設け、トレイ搬送
部3の駆動手段5により、トレイ台4をトレイ2
に設けた各ウエル1がコロニー観察部6の顕微鏡
付撮象部下方に位置するように移動させる。トレ
イ搬送部3の駆動手段5は第1図に示すようにス
テツピングモータ7,7′、送りねじ8及び基礎
部材9から構成され、ステツピングモータ7への
入力パルス数で培養に用いたトレイ(培養用トレ
イ)2の位置を決定する。駆動手段5としてエア
駆動或はワイヤ駆動を用いることもできる。トレ
イ台4上にはトレイ2を把持するトレイチヤツク
10を設けてもよく、該トレイチヤツク10は、
第2図(イはトレイ台の平面図、ロはトレイ台の
側面図)に示すように、モータ駆動によりθ方向
の開閉動作、x,z方向の移動が可能である。モ
ータ駆動に代りエア駆動を用いることもできる。
尚、第2図において11,11′はモータ、12
はボールねじ、13はピーオンラツクである。
コロニー観察部6における処理装置により各ウ
エル1内のコロニーの数、大きさを観察し、各々
の増殖度を決定する。コロニー観察部6は溶液透
過光の強度を測るものであつて、増殖度を決定す
ることができる。コロニー観察部6における処理
装置は通常コントローラ内における手段を用い
る。
細胞の増殖度が決定された培養用トレイ2上の
各ウエルの培養上清液は、分取分注部14におけ
るピペツトマニピユレータ15により移動された
ピペツト25によつて一定量分取され、抗体検出
用トレイの対応する各ウエルに分注される。ピペ
ツトマニピユレータ15は、水平多関節型アー
ム、直交型アーム等が使用できる。ポンプ16は
圧力、加圧時間により吸入量、吐出量をコントロ
ーラする。培養上清液の分取に際し、ピペツト1
6の先端はコンタミネーシヨンを避けるため、一
度使用し、液に触れたものは、ピペツト交換部1
7の位置までピペツトマニピユレータ15によつ
て移動させ、脱着を行うことによつて、新たなピ
ペツトと交換する。
培養用トレイ2の各ウエルから採取され、対応
する各ウエルに分注された抗体検出用トレイは、
アツセイ部18におけるトレイ台19に置かれ、
駆動モータによつて動作する送りねじ21から成
る駆動手段或はエア駆動からなる駆動手段によつ
て、アツセイ部18の内部の抗体検出位置まで搬
送され、各々のウエルの上清液中に含まれる抗体
量が測定される。アツセイ部18における検出装
置としてエライザ測定装置又は液体クロマトグラ
フなどを用いることができる。
コントローラ22は、例えば入力装置23と制
御装置24からなる装置で、入力装置23により
入力された上記各部及び各部間の作動条件に従
い、各部を制御するものである。
本発明における信号系を示すブロツク図および
作動フロー図は、それぞれ第3図および第4図に
示す。
第3図および第4図において、制御信号S1はト
レイ搬送部5におけるステツピングモータ9を作
動する信号であり、コントローラにより発信され
る制御信号S2はトレイ搬送部におけるトレイチヤ
ツク16の作動(第2図におけるモータ11,1
1′の駆動によるθ方向の開閉、xおよびy方向
の移動)を制御する信号である。
制御信号S2に従い、培養用トレイ2をトレイチ
ヤツクによりトレイ台に設置し、制御信号S1によ
り培養用トレイ2をコロニー観察部における顕微
鏡付TVカメラの下方の位置に移動する。
コロニー観察部において、顕微鏡付TVカメラ
により観察されたコロニーの撮像(ウエル中の細
胞コロニーの数、大きさ、輝度を画像処理した値
を内容とする)が測定信号T1としてコントロー
ラ22に送られ、コントローラ22において、測
定信号T1を画像処理し、コロニーの全画面中に
占める生細胞の割合を算出する。
次に、信号S3によりマニピユレータ15が作動
し、ピペツト4を細胞の増殖度が決定されたトレ
イ2上に設けた複数のウエルのうちの一つの上方
の位置まで移動する。
制御信号S4によりポンプ16が作動され、ピペ
ツト25によつて各ウエルの培養上清液を一定量
分取され、再び制御信号S3により、抗体検出用ト
レイ20における対応する各ウエルに移動し、制
御信号S4によりピペツト25中の培養上清液を抗
体検出用トレイ20の各ウエルに分注する。
制御信号S3及びS4により、細胞培養上清液と抗
体検出用トレイの各ウエルに分注する毎にピペツ
ト交換する。
抗体検出用トレイ上の全ウエルに細胞培養上清
液の分注が終了すると、制御信号S1及びS2により
抗体検出用トレイをアツセイ部のトレイ台に移動
する。
次いで、制御信号S5に従い、トレイ台19上部
に抗体検出用トレイが駆動手段の作動によりアツ
セイ部内に入る。測定信号T2はアツセイ部にお
いて測定された細胞溶液上清液に含まれる抗体量
を内容とし、抗体量の値は、コントローラ22に
おいて記憶され、この値から各々のウエル中に含
まれる細胞の抗体産生能 (=抗体量測定値/増殖度測定値) を算出する。
以上のプロセスを経て、各ウエルの細胞増殖度
と抗体量を測定し、これらの値から各々のウエル
に含まれる細胞の抗体産生能を自動的に検出す
る。
発明の効果 単クローン抗体産生細胞の選別には、抗体産生
能の大きい細胞を選ぶことが必要である。本発明
の装置によつて、人手によつていたのでは処理で
きない膨大な量の細胞の培養液から、短時間のう
ちに増殖度の強い、また抗体産生力の強い細胞が
含まれるウエルを確実に検出することが可能であ
る。また、細胞の取扱いが無菌環境である装置内
で行われるため、雑菌混入の危険性は少なく、安
定に目的とする細胞を検出でき、それにより選別
することが可能である。
以上より、単クローン抗体が効率よく得られる
ようになり、単クローン抗体の応用に大きく寄与
することは明らかである。
この装置は、抗体産生能の検出に用いることは
勿論であるが、抗体検出部を他の検出装置に交換
することにより、目的物質が分泌される微生物の
目的物質産生能の検出においても用いることが可
能である。
【図面の簡単な説明】
第1図は本発明の抗体産生能検出装置の斜視
図、第2図イはトレイ搬送部におけるトレイ台の
平面図、第2図ロはその側面図である。第3図は
本発明における信号系を示すブロツク図、第4図
は作動フロー図である。 1……ウエル、2……トレイ、3……トレイ搬
送部、4……トレイ台、5……駆動手段、6……
コロニー観察部、14……分取分注部、15……
マニピユレータ、16……ポンプ、18……アツ
セイ部、19……トレイ台、20……抗体検出用
トレイ、21……駆動手段、22……コントロー
ラ。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1 トレイ搬送部、分取分注部、コロニー観察
    部、アツセイ部及びコントローラから成る分泌物
    産生能検出装置であつて、前記トレイ搬送部は複
    数のウエルが設けられたトレイを乗せるトレイ台
    と該トレイ台を前記分取分注部、コロニー観察部
    及びアツセイ部における各所定位置に搬送するた
    めの駆動手段からなり、前記分取分注部はピペツ
    トを把持し該ピペツトを前記トレイ台上のトレイ
    に設けられた複数の各ウエル上方に位置せしめる
    マニピユレータと前記ピペツトより液体を一定量
    吸引吐出するためのポンプからなり、コロニー観
    察部は顕微鏡付撮象部と撮象された画象データか
    ら増殖度を算出するコントローラ内の処理装置か
    らなり、コントローラは培養用トレイを置いたト
    レイ台を前記顕微鏡付撮象部の下方の位置に移動
    する信号をトレイ搬送部に発信する手段と、ピペ
    ツトの先端を前記処理装置により増殖度を決定し
    た培養用トレイの各ウエルの培養上清液中及び検
    出用トレイの対応する各ウエルの上方に移動する
    信号をマニピユレータに発信する手段と、ピペツ
    トに溶液を注入及び吐出する信号を前記ポンプに
    発信する手段と、検出用トレイをアツセイ部内に
    移動する信号をアツセイ部駆動手段に発信する手
    段と、アツセイ部で測定された抗体量とコロニー
    観察部で測定された増殖度から抗体産生能を算出
    する手段からなる装置であつて、入力された前記
    各部の作動条件に従い前記各部を制御する装置で
    あることを特徴とする分泌物産生能検出装置。
JP19593384A 1984-09-18 1984-09-18 分泌物産生能検出装置 Granted JPS6173065A (ja)

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JP19593384A JPS6173065A (ja) 1984-09-18 1984-09-18 分泌物産生能検出装置
PCT/JP1985/000519 WO1986001824A1 (fr) 1984-09-18 1985-09-18 Installation de triage de cellules
DE8585904852T DE3586892T2 (de) 1984-09-18 1985-09-18 Vorrichtung zum trennen von zellen.
EP85904852A EP0195088B1 (en) 1984-09-18 1985-09-18 Apparatus for sorting cells
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JPS6173065A JPS6173065A (ja) 1986-04-15
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ID=16349383

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004094312A1 (ja) * 2003-04-21 2004-11-04 Sumitomo Titanium Corporation 金属塩の精製方法並びにチタン材の脱酸方法および製造方法

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