UA125940C2 - Пентациклічна сполука - Google Patents

Abstract

У даному винаході передбачені сполуки, представлені формулами (I)-(VI), або їхні фармацевтично прийнятні солі: , (I) , (II) , (III) , (IV) , (V) (VI).

Description

Галузь техніки

Даний винахід стосується пентациклічної сполуки або її фармацевтично прийнятної солі, яка має активувальну здатність щодо холінергічних нейронів та/або нейропротективний ефект, і її фармацевтичного застосування. Даний винахід також стосується фармацевтичних композицій, які містять вищенаведену сполуку як активний інгредієнт.

Рівень техніки

Холінергічні нейрони, які забезпечують вивільнення ацетилхоліну як трансмітеру, значною мірою розповсюджені у передньому мозку від базального ядра Мейнерта і ядра перегородки базального відділу переднього мозку до гіпокампа, мигдалини і кори головного мозку і залучені до модуляції пам'яті, навчання, пізнання і уваги (непатентне літературне джерело 1). До того ж, холінергічні нейрони у педункулопонтійному тегментальному ядрі та латеродорсальному тегментальному ядрі стовбуру головного мозку розповсюджені у смугастому тілі, прилеглому ядрі, чорній речовині та таламусі, і вважається, що вони залучені до регуляції мотивації та неспання (непатентні літературні джерела 2-4).

Зокрема, роль холінергічних нейронів у базальному відділі переднього мозку стала більш зрозумілою за допомогою аналізу із застосуванням багатьох тваринних моделей, таких як модель ураження. Зокрема, кореляція між функціональним порушенням холінергічних нейронів і погіршенням пам'яті та здатності до навчання була показана на тваринних моделях (непатентні літературні джерела 5-7), і було показано, що когнітивна діяльність поліпшується за рахунок збільшення кількості ацетилхоліну під час застосуванням інгібітора холінестерази і посилення функції холінергічних нейронів (непатентні літературні джерела 8-12).

Повідомлялося, що фактор росту нервів (МОЕ) демонструє нейропротективний ефект щодо холінергічних нейронів на тваринній моделі з втратою холінергічних нейронів. (Непатентні літературні джерела 13-15).

Зокрема, у випадку хвороби Альцгеймера (АБ) втрата холінергічних нейронів виявляється на ранній стадії АО і є одним з патологічних проявів АЮ. Накопичення сенільних бляшок у наслідок відкладень бета-амілоїду і нейрофібрилярних клубків у наслідок агрегації тау-білка також є патологічними проявами АЮ, і, зокрема, відомо, що нейрофібрилярні клубки збільшуються з розвитком патологічного стану і це призводить до загибелі нейронів.

Зо Нейрофібрилярні клубки виявлені у базальному ядрі Мейнерта та енторинальній ділянці кори з ранньої стадії АЮ. У тому числі повідомляється, що втрата холінергічних нейронів у базальному ядрі Мейнерта за рахунок агрегації тау-білка виявляється на більш ранній стадії, і що існує кореляція між втратою і зменшенням показника когнітивної функції (непатентні літературні джерела 16 і 17). Як і у випадку з АО, гіперфосфорилювання і аномальне накопичення тау-білка виявляється у генетично модифікованих мишей з мутацією РЗО15, яка була виявлена у разі спадкової лобно-скроневої деменції (трансгенні миші з мутацією РЗО15, які експресують тау- білок людини). Отже, утворюються нейрофібрилярні клубки, які є патологічним проявом АЮ (непатентне літературне джерело 18), і вони спричиняють когнітивну дисфункцію через синаптичні порушення, нейродегенерацію і втрату нейронів. На основі таких результатів трансгенні миші з мутацією РЗО15, які експресують тау-білок людини, широко застосовувані як

АЮр-подібні тваринні моделі (непатентні літературні джерела 19-22), і можна очікувати поліпшення щодо зниження когнітивних здібностей і пригнічення розвитку патологічного стану у разі хвороби Альцгеймера шляхом пригнічення АЮ-подібних патологічних змін у трансгенних мишей з мутацією РЗ3О15, які експресують тау-білок людини.

Крім того, численні аналізи із застосуванням генетично модифікованих мишей і тваринних моделей порушень дозволяють припустити, що дефіцит аксонального транспорту є однією з причин втрати холінергічних нейронів (непатентні літературні джерела 23-25). У тому числі аксон холінергічних нейронів, який виступає з ділянки перегородки у гіпокамп, має порушення у моделі ураження бахромок гіпокампа і склепіння головного мозку, і при цьому порушення ретроградного транспорту молекул, пов'язаних із виживанням і функціонуванням, призводить до втрати нейронів (непатентні літературні джерела 26-28). Порушення ретроградного транспорту також виявлене у генетично модифікованих мишей (непатентні літературні джерела 23 і 24), і втрата холінергічних нейронів у наслідок ураження бахромок гіпокампа та склепіння головного мозку відображає один аспект патологічного стану. Таким чином, можна очікувати поліпшення щодо зниження когнітивних здібностей і пригнічення розвитку патологічного стану у разі хвороби

Альцгеймера шляхом пригнічення або поліпшення щодо втрати холінергічних нейронів у даній моделі порушення.

Деменція з тільцями Леві (ОІВ) і хвороба Паркінсона (РО) являють собою прогресуючі нейродегенеративні порушення, під час яких патологічні тільця включення (тільця Леві), що в бо основному складаються з альфа-синуклеїну, утворюються всередині нейронів і призводять до дегенерації і втрати нейронів. Когнітивна дисфункція розвивається, якщо тільця Леві в основному розподілені у корі головного мозку і паркінсонізм розвивається, якщо тільця Леві в основному розподілені у стовбурі головного мозку. На додаток до цього також розвиваються психіатричні симптоми, такі як зорова галюцинація, галюцинація і маячення, порушення сну та вегетативні симптоми. Діагноз являє собою деменцію з тільцями Леві, якщо деменція з'являється до або протягом одного року від початку паркінсонізму, і діагноз являє собою хворобу Паркінсона з деменцією (РОБ), якщо паркінсонізм з'явився до одного року або більше від початку деменції. Деменція з тільцями Леві, хвороба Паркінсона з деменцією і хвороба

Паркінсона є патологічно однаковими захворюваннями і загалом називаються хворобою тілець

Леві (ВО), хоча вони відмінні за когнітивною дисфункцією, і черговістю виникнення, і ступенем паркінсонізму. У разі деменції з тільцями Леві та хвороби Паркінсона з деменцією, як і у випадку з хворобою Альцгеймера, нейрони базального ядра Мейнерта, яке являє собою ядро, що є джерелом холінергічного нерва, дегенерують і гинуть, і повідомляється, що виникає тяжке порушення холінергічних нейронів у гіпокампі та корі головного мозку (непатентні літературні джерела 29-31). Крім того, існує кореляція між розвитком порушення холінергічних нейронів і когнітивною дисфункцією (непатентне літературне джерело 29), і було продемонстровано, що інгібітори холінестерази поліпшують когнітивну функцію. На основі цих результатів когнітивна функція поліпшується внаслідок поліпшення функції холінергічних нейронів і, як і у випадку з хворобою Альцгеймера, можна очікувати поліпшення щодо зниження когнітивних здібностей і пригнічення розвитку патологічного стану у разі деменції з тільцями Леві і хвороби Паркінсона з деменцією шляхом пригнічення або поліпшення щодо втрати холінергічних нейронів у декількох моделях порушення.

Отже, на основі таких результатів можна очікувати поліпшення щодо зниження когнітивної діяльності, обумовленого дисфункцією холінергічних нейронів, шляхом досягнення функціональної активації тал"або нейропротективного ефекту щодо холінергічних нейронів у клінічній практиці.

На додаток до вищенаведених захворювань приклади захворювань, для яких повідомлялося про зв'язок між зниженням когнітивної функції і дисфункцією холінергічних нейронів, включають хорею Хантігтона, синдром Дауна, бічний аміотрофічний склероз (АЇ 5),

Зо велику депресію, шизофренію тощо.

Список використаної літератури

Непатентна література

ІНепатентне літературне джерело 1| Емегпй В.) еї аЇ. "Сепіга! споїїпегдіс вувієтв апа содпіоп." Аппи. Неу. Рзуспої!. 48 (1997) 649-684.

ІНепатентне літературне джерело 2| СшиПедде АТ. еї а. "Споїїпегаїс іппірйіоп ої пеосопііса ругатіда! пеигопв." У). Мешговсі. 25 (2005) 10308-20.

ІНепатентне літературне джерело З3| ЮОапієї Шашап О. еї а). "А та)|ог ехівта! в5ошгсе ої споїїпегдіс іппегмайоп ої Ше взіпйашт апа писієн5 асситбрепв5 огідіпаїе5 іп Ше Бгаіпбівт." /.

Мешговзсі. 34 (2014) 4509-18.

ІНепатентне літературне джерело 4| М 5(егіаде М. еї аІ. "Мешгопаї! асіїміцев іп Бгаіп-5іїєт споїїпегдіс писієї геїаїва то юпіс асіїманйоп ргосе55зе5 іп ШаІатосопіса! вубіетв5." ). Мешговсі. 10 (1990) 2541-59.

ІНепатентне літературне джерело 5) Різспег МУ. еї аї. "Ргодгез5іме аесіїпе іп 5раїйаї! Ісатіпд апа іпівдпу ої тогебгаїп споїїпегдіс пешгопзв іп гаї дитіпа адіпд." Мешгобіо!. Адіпа 13 (1992) 9-23.

ІНепатентне літературне джерело 6) І єапла С.еї аї!. "ЗеІесіїме Іевіопіпу ої їїПе Ббазаї тюгебгаїп споїїпегдіс зузіет Бу іпігамепігісціаг 192 Іда-варогіп: репаміоцга!ї, Біоспетіса! апа віегеоіодісаї віцаїез іп Ше гаї." Єшиг. У. Мешговсі. 7 (1995) 329-43.

ІНепатентне літературне джерело 7| І еапла 0. еї аї. "ЗеІєсіїме іттипоїіезіопіпу ої Те Бавгзаї

Ттогергаїп споїїпегдіс зувієт адівгирів 5поп-їепт тетогу іп гаїв." Єшг. У. Мешговсі. 8 (1996) 1535-44.

ІНепатентне літературне джерело 8)| Одига Н. еї аїЇ. "Оопереії, а сепіганйу асіїпа асеїуІспоїїпевзієгазе іпрірйог, аІПеміатез Ісатіпд аеїїсії5 іп пуроспоїїпегдіс тоае!5 іп гаїв." Меїтйоав5

Ріпа Ехр Сіїп Рпаттасої. 22 (2000) 89-95.

ІНепатентне літературне джерело 9| Зроугагі-Маппіпд Г. єї а. "Зрайа! адівспітіпайоп аеїїсіїв

Бу ехсіюгохіс Іезіопо іп Те Моїті5 маїег езсаре їа5К." Вепам Вгаїп Невз. 156 (2005) 269-76.

ІНепатентне літературне джерело 10) Вгисе АР. еї аї. "Споїїпе асеїуйгапвіегазе асіїміу апа содпійме дотаїп 5соге ої АІ2пеітег5 раїепів." Мепйгобіої!. Адіпд. 21 (2000) 11-17

ІНепатентне літературне джерело 11) Кодегз 51... еї аІ. "Те еПісасу апа заїеїу ої доперед?ії іп раїепів м/йй АІ2Неітегв аізеазе: гезиййв5 ої а 5 Мийісепіте, Вапдотіейа, Юоицбріє-Віїпа, Ріасебо-

Сопігоїїєй Ттіаі. Тне Ропере?гії зішау Стоир." Оетепійа. 7 (1996) 293-303

ІНепатентне літературне джерело 12) Могі Е. еї аІ. "Попере?лії! ог детепіа ул І еугу родієв:а гапдотігеад, ріасеро-сопігоїПеа Міаї!." Апп Мешгої. 72 (2012) 41-52

ІНепатентне літературне джерело 13| Миїзоп Е.). еї аІ. "Нитап споїїпегдіс Базаї! тогебгаїп: спетоапаюту апа пешгоіодіс дузтипсіоп." У. Спет. Мешгоапаї. 26 (2003) 233-242

ІНепатентне літературне джерело 14| Миїзоп Е.. еї аЇ. "СПоїїпегаіс зувієт ашШгіпд Ше ргодгезвіоп ої АІ2Пеїтегв дізеазе: Іпегарешііс ітріїсайоп." Ехреп. Нем. МешйгоїПпег. 8 (2008) 1703- 1718

ІНепатентне літературне джерело 15) Зспіїер5 К. еї аіІ. "Пе відпіїсапсе ої Ше сПоїїпегдіс вубвівт іп Ше бБгаїп дигіпд адіпд апа іп АІ2гНеітег5 дізеазе." У. Мешга!І. Тктапот 113 (2006) 1625- 1644

ІНепатентне літературне джерело 16) Мапа І! еї аї. "Реодгезвіоп ої їай раїпоіоду іп споїїпегдіс

Ваза! тогебгаїп пешигоп5 іп тій содпійме ітраіптепі апа АІг2Неїтег"5 аізевазе" Ат .) Раїної. 179 (2011) 2533-2550.

ІНепатентне літературне джерело 17| Соте?-Івіа Т єї аЇ. "Мепгопа! Іо55 соїтеїаїє5 м/йй риї ехсеєд5 пешгоїрпПагу Тапдіез іп АІ2Пеітег5 дізеазе." Апп Мешгої. 41 (1997) 17-24.

ІНепатентне літературне джерело 18) ее УМ еї аїЇ. "Меигодедепегаїме гапйораїйіе5." Аппи.

Не. Мешговсі. 24 (2001) 1121-1159.

ІНепатентне літературне джерело 19) Айеп В еї аІ. "Абипаапі їаи Патепів апа попароріоїіс пешгодедепегаїйоп іп ігапздепіс тісе ехргеззіпд питап РЗО15 їай ргоївїп." У). Мешгозсі. 22 (2002) 9340-9351.

ІНепатентне літературне джерело 201 Хи Н еї а). "Метогу аеїісії5 согтеїаїе м/п їай апа 5ріпе рашоіоду іп РЗО15 МАРТ ігапздепіс тісе." Мегтораїної. Аррі. Мешигобіо!. 40 (2014) 833-43.

ІНепатентне літературне джерело 21| Мо5Ппіуата М еї а). "Зупарзе о55 апа тісгоаііа! асіїмайноп ргесєде їапдієз іп а РЗО15 їіапораїйу тоизе тоде!." Мецгоп. 53 (2007) 337-351.

ІНепатентне літературне джерело 22| Нойтапп МА еї аї. "Ітраїксей ріавіїсйу ої сопісаї! депагтйіс 5ріпев іп РЗО15 гай Мапздепіс тісе." Асіа МешгораїноїЇ Соттип. 1 (2013) 82.

ІНепатентне літературне джерело 23) заїепі А еї аї. "Іпстеазей Арр Ехргезвіоп іп а Моизе

Моаве! ої бом Зупаготе бівзгиріє МСЕ Тгапгероп апа Сайзез Споїїпегдіс Мешйгоп Редепегаїйоп"

Мешгоп 51 (2006) 29-42.

Зо ІНепатентне літературне джерело 24) Опізвпі Т еї аї. "Гапу-опзеї содпіїме аеїїсії5 апа ахопаї! іапзрогі аузішпсіп іп РЗОТ5 тшапі гай ігапздепіс тісе" Мешгозсієпсе Везвагсй 80 (2014) 76-85.

ІНепатентне літературне джерело 25| Хи УМ еї аїІ. "Атуїоій ргесиїзог ргоївіп-теаіаїва епдосуїйс раїпугау дізгиріїп іпдисез ахопаї! аузтшпсійп апа пеигодедепегаїййоп" У). Сіїй. Іпмеві. 126 (2016) 1815-33.

ІНепатентне літературне джерело 26) Гарспак РА еї аї. "ЕПесі ої гесотбріпапі питап пегує доми Тасіог оп ргезупаріїс сПоїїпегдіє Типсіоп о іп гаї Ппірросатра! в5іїсе5 ТоПоміпу рапіа! зеріопірросатраї! Іезіоп5: теавзигев ої ("НІасеїуісНоїїпе 5зупіпевзів, (НІасеїуІсноїїпе геІеазе апа споїїпе асеїуйгапвіегазе асіїмну" Мецгозсівпсе 42 (1991) 639-49.

ІНепатентне літературне джерело 27| Сіїтог МІ. еї а. "Соогаїпаїе ехргезвіоп ої Ше мевісшаг! асеїуЇспоїїпе ігапзропег апа споїїпе асеїуйгапвіегазе оПоміпд зеріопірросатра! раїпулау Іевіопв"

У. Мешигоспет. 71 (1998) 2411-20.

ІНепатентне літературне джерело 28| Си Н еї а). "Несотбріпапі питап Маг-Іоадеа тістовзрпеге5 рготоїє б5игміма! ої База! їТогергаійп сПпоїїпегдіс пешгопо апа ітргоме тетогу ітраіптенпів ої 5райа! Ієатіпад іп Ше гаї тоаеї! ої АІ2леітег"5 адізеазе мій Ятбріа-тотіх Іевіоп"

Мешпгобвсі. І ей. 453 (2009) 204-9.

ІНепатентне літературне джерело 29| ЗНітада, Н. єї аЇ, "Марріпд ої /Бгаїп асеуїІспоїїпевієгазе апегайопз5 іп І ему роду дізеазе Бу РЕТ" Мепо!оду, мої!.73, рр. 273-278, 2009.

ІНепатентне літературне джерело З0)| Тігабозсні, Р. єї аї., "Споїїпегдіс дузіипсіоп іп аізеазев5 мій Гемжу родієв" Мешигоіоду 54 (2000) 407-411.

ІНепатентне літературне джерело 31) Рету, Б. К. еї. аї., "Меосопіса! споїїпегуіс асіїмніеб аіегепіане І ему роду детепійа тот сіазвіса! АІ2пеїтег5 дізеазе", МешгоВероті, мо!.5, рр.747-749 (1994).

Стислий опис винаходу

Технічна проблема

Метою даного винаходу є забезпечення сполуки або її фармацевтично прийнятної солі, яка має активувальну здатність щодо холінергічних нейронів та/(або нейропротективний ефект, і яка має потенційне застосування як терапевтичний засіб для лікування хвороби Альцгеймера, деменції з тільцями Леві та хвороби Паркінсона з деменцією.

Вирішення проблеми

У результаті обширних досліджень, спрямованих на розв'язання вищенаведених проблем, автори даного винаходу виявили пентациклічну сполуку або її фармацевтично прийнятні солі, які мають активувальну здатність щодо холінергічних нейронів і/або нейропротективний ефект.

Тобто даний винахід стосується наступних пунктів «1»-«265. «1» Сполука, вибрана з групи, що складається з

З-фтор-6,11-диметил-б6,7,10,11,12,13- гексагідробензо|піридо(4", 3" 45 гієно|2',374,5|піримідо|1,2-а1(11,4|діазепін-5,14-діону:

Е

(в) шт / М

Ж Й

- 5 М М х (), 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3":4,5гієно|(2,374,5|піримідо|1,2-а)гієно|2,3-

ПІ1,4діазепін-4,13-діону: й о 5 шт ще / М

Ж Й

- і; (1), 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3":4,5гієно|(2,374,5|піримідо|1,2-а)гієноїЇ3,2-

ПІ1,4діазепін-4,13-діону: о 85 шт шен / М

Ж Й

- (11), (Зав, 14ан8)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5гієно|2',3:4,5|піримідо|/1,2-а|11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону: "жна -- ї Її / М

Ж Й

- 5 М М (М), (зав, 14ан)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Цпіридо|4",3":4",5гієно(2',37:4,5|піримідо|/1,2-а|11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону: а:

Шк ї / М

Ж Й

-

М

(М), та

(Зав, 14а5)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5гієно|2',3:4,5|піримідо|/1,2-а|11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону: (в)

Шк Х й М о (МІ), або її фармацевтично прийнятна сіль. «2» З-Фтор-6,11-диметил-6б,7,10,11,12,13- гексагідробензо|піридо(4", 3" 45 гієно(2',374,5|піримідо|1,2-а1(11,4|діазепін-5,14-діон або його фармацевтично прийнятна сіль:

Е

(в)

Ше / М о у; (І) «3» 5,10-Диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3"4,5гієно|(2",374,5|піримідо|1,2- а|)гієно(2,3-ЧП,4)діазепін-4,13-діон або його фармацевтично прийнятна сіль: 7У-ИУмх о 5

Ше ші / М

Ж Й

- 5 М М

В; (1) «4» 5,10-Диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3"4,5гієно|(2",374,5|піримідо|1,2- а|)гієно|3,2-ЧП,4)діазепін-4,13-діон або його фармацевтично прийнятна сіль: о 5

Ше дн / М

Ж Й

- 5 М М (ПВ). «5» (Заб5, 14ан)-5,10-Диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль: о т

Шк ї ї й М о (ІМ). «65 (зан, 14а8)-5,10-Диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль:

о: / М

ДЖ й (М). «7» (Зав, 14а5)-5,10-Диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль: о - ве / М

ДЖ й х (МІ). «8» Фармацевтична композиція, яка містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль відповідно до будь-якого з «1»-«7» і одну або декілька фармацевтично прийнятних добавок. «9-1» Фармацевтична композиція відповідно до «8», яка є засобом, що активує нейрони. «9-2» Фармацевтична композиція відповідно до «8», яка є засобом, що захищає нейрони. «10» Фармацевтична композиція відповідно до «8» для лікування когнітивної дисфункції. «11» Терапевтичний засіб для лікування когнітивної дисфункції, який містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль відповідно до будь-якого з «1»-«7». «12» Спосіб лікування когнітивної дисфункції що включає введення сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «12-«7» пацієнту. «13» Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль відповідно до будь-якого з «12-«7» для застосування у лікуванні когнітивної дисфункції. «14» Застосування сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «1»-«7» для виготовлення терапевтичного засобу для лікування когнітивної дисфункції. «15» Терапевтичний засіб для лікування хвороби Альцгеймера, який містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль відповідно до будь-якого з «12-«7». «16» Спосіб лікування хвороби Альцгеймера, що включає введення сполуки або її фармацевтично прийнятної сіль відповідно до будь-якого з «1»5-«7» пацієнту. «17» Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль відповідно до будь-якого з «1»5-«7» для застосування у лікуванні хвороби Альцгеймера. «18» Застосування сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «1»-«7» для виготовлення терапевтичного засобу для лікування хвороби Альцгеймера. «19» Терапевтичний засіб для лікування деменції з тільцями Леві, який містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль відповідно до будь-якого з «125-«7». «20» Спосіб лікування деменції з тільцями Леві, що включає введення сполуки або її

Зо фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «1»5-«7» пацієнту. «21» Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль відповідно до будь-якого з «1»5-«7» для застосування у лікуванні деменції з тільцями Леві. «22» Застосування сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «1»-«7» для виготовлення терапевтичного засобу для лікування деменції з тільцями Леві. «23» Терапевтичний засіб для лікування хвороби Паркінсона з деменцією, який містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль відповідно до будь-якого з «1»-«7». «24» Спосіб лікування хвороби Паркінсона з деменцією, що включає введення сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «1»-«7» пацієнту. «25» Сполука або її фармацевтично прийнятна сіль відповідно до будь-якого з «1»5-«7» для застосування у лікуванні хвороби Паркінсона з деменцією. «26» Застосування сполуки або її фармацевтично прийнятної солі відповідно до будь-якого з «15-«7» для виготовлення терапевтичного засобу для лікування хвороби Паркінсона з деменцією.

Корисні результати винаходу

Пентациклічні сполуки, представлені формулами (1)-(МІ) (далі у даному документі називані "сполуки (1)-(М)"), або їхні фармацевтично прийнятні солі відповідно до даного винаходу мають активувальну здатність щодо нейронів та/або нейропротективний ефект, як показано у даних стосовно активності у прикладах фармакологічних тестів, наведених нижче. Сполуки (1І)-(М1І) за даним винаходом забезпечують поліпшення когнітивної діяльності за рахунок їхньої активувальної здатності щодо нейронів та/або нейропротективного ефекту і, таким чином, мають потенційне застосування як терапевтичні засоби для лікування хвороби Альцгеймера, деменції з тільцями Леві і хвороби Паркінсона з деменцією.

Опис варіантів здійснення

Далі у даному документі буде докладно описаний зміст даного винаходу.

У даному описі для зручності структурні формули сполук можуть являти собою конкретні ізомери; проте даний винахід може включати поворотні ізомери і таутомери, а також суміші ізомерів без обмеження формулами, описаними для зручності, і може являти собою будь-який із ізомерів або суміш, яка містить ізомери у будь-якому співвідношенні.

Крім того, можуть також існувати поліморфні кристали; проте даний винахід також не обмежений будь-яким із них і може являти собою монокристалічну форму або їх суміш. До того ж даний винахід також включає аморфні форми, і сполуки відповідно до даного винаходу включають ангідриди і сольвати (зокрема, гідрати).

Даний винахід також включає мічені ізотопом сполуки зі сполук (1)-(МІ). Мічені ізотопом сполуки є такими ж, як сполуки (1)-(МІ), за винятком того, що один або декілька атомів замінені одним або декількома атомами з атомною масою або масовим числом, відмінними від тих, які зазвичай зустрічаються у природі. Приклади ізотопів, які можуть бути включені у сполуки за даним винаходом, включають ізотопи водню, вуглецю, азоту, кисню, фтору, фосфору, сірки, йоду і хлору і, зокрема, включають 2Н, ЗН, "С, 140, 15М, 180, 18, з2р, 3555, 123|, 125| тощо.

Вищенаведені мічені ізотопом сполуки, наприклад, сполуки, у які включені радіоактивні ізотопи, такі як ЗН та/або "С, придатні для аналізу розподілу у тканині лікарських препаратів та/або субстратів. ЗН і 77 вважаються придатними через легкість їх одержання і виявлення.

Ізотопи "С і ї8Е вважаються придатними для РЕТ (позитронно-емісійної томографії), ізотоп 7251 вважається придатним для 5РЕСТ (однофотонної емісійної комп'ютерної томографії), і всі вони придатні для візуалізації головного мозку. Заміна на важчі ізотопи, такі як "Н, забезпечує деякі терапевтичні переваги, включаючи збільшення періоду напіввиведення іп мімо або зменшення необхідної дози внаслідок вищої метаболічної стабільності і, отже, вважається придатною у певних ситуаціях. Вищенаведені мічені ізотопом сполуки можна подібним чином одержувати шляхом здійснення процедур, розкритих у наступних прикладах, із застосуванням простих у застосуванні реагентів, мічених ізотопами, замість реагентів, які не мічені ізотопами. "Фармацевтично прийнятні солі" у даному описі конкретно не обмежені за умови, що вони являють собою солі, утворені зі сполуками відповідно до даного винаходу, і конкретні приклади включають солі приєднання кислоти, такі як солі неорганічних кислот, солі органічних кислот і солі кислих амінокислот. "Фармацевтично прийнятна сіль" у даному описі являє собою будь-яку сіль, утворену у придатному співвідношенні, за винятком будь-якого конкретного обмежувального опису, і число молекул кислоти на одну молекулу сполуки в утвореній солі конкретно не обмежено; проте переважно, щоб число молекул кислоти на одну молекулу сполуки становило від приблизно 0,5 до приблизно 2, і більш переважно, щоб число молекул кислоти на одну молекулу сполуки становило приблизно 0,5, приблизно 1 або приблизно 2.

Переважні приклади солей неорганічних кислот включають гідрохлорид, гідробромід, сульфат, нітрат і фосфат, а переважні приклади солей органічних кислот включають ацетат, сукцинат, фумарат, малеат, тартрат, цитрат, лактат, стеарат, бензоат, метансульфонат, п- толуолсульфонат і бензолсульфонат.

Переважні приклади солей кислих амінокислот включають аспартат і глутамат.

Якщо сполуки (1І)-(МІ) відповідно до даного винаходу одержують у вільній формі, їх можна перетворити у солі, які можуть бути утворені сполуками (1)-(МІ) або їхніми гідратами відповідно до загальноприйнятого способу.

Якщо сполуки (1)-«МІ) відповідно до даного винаходу одержують у вигляді солей сполук (1)- (МІ) або гідратів сполук (І)-(МІ), то їх можна перетворити у вільні форми сполук (1)-(МІ) відповідно до загальноприйнятого способу.

До того ж, різні ізомери (наприклад, оптичні ізомери, поворотні ізомери, стереоізомери тощо), одержані зі сполук (1)-"МІ) відповідно до даного винаходу, можна очистити і виділити за допомогою загальних способів розділення, таких як перекристалізація, спосіб з одержанням діастереоіїзомерної солі, спосіб ферментативного розділення, і різних хроматографічних методик (наприклад, тонкошарової хроматографії, колонкової хроматографії, газової бо хроматографії тощо).

ІФармацевтичний препараті

Фармацевтична композиція відповідно до даного винаходу може бути одержана шляхом змішування фармацевтично прийнятних добавок зі сполукою вибраною з групи сполук (1І)-(МІ), або її фармацевтично прийнятними солями. Фармацевтична композиція відповідно до даного винаходу може бути одержана за допомогою відомого способу, наприклад, способу, описаного у розділі "Загальні правила одержання" у Японській фармакопеї, сімнадцяте видання.

Фармацевтичну композицію відповідно до даного винаходу можна відповідним чином вводити пацієнту залежно від її лікарської форми.

Доза сполук (1)-(МІ) відповідно до даного винаходу або їхніх фармацевтично прийнятних солей змінюється залежно від тяжкості симптомів, віку, статі, ваги тіла, лікарської форми, типу солі, конкретного типу захворювання та інших умов; проте загалом добова доза для дорослої людини у випадку перорального введення становить від приблизно 30 мкг до 10 г, переважно від 100 мкг до 5 г і більш переважно від 100 мкг до 1 г; добова доза для дорослої людини у випадку введення за допомогою ін'єкції становить від приблизно 30 мкг до 1 г, переважно від 100 мкг до 500 мг і більш переважно від 100 мкг до 300 мг; і при цьому вищенаведену дозу вводять один або декілька разів.

Сполуки за даним винаходом можна застосовувати як хімічні зонди для захоплення цільових білків біологічно активних низькомолекулярних сполук. Тобто сполуки за даним винаходом можна перетворити на зонди для афінної хроматографії, фотоафінні зонди тощо шляхом введення груп-міток, лінкерів тощо у фрагмент, відмінний від структурного фрагменту, необхідного для прояву активності сполук із застосуванням способу, описаного, наприклад, у ..

Мазз бресігит. 5ос. Урп. Мої. 51, Мо. 5, 2003, рр. 492-498, ММО2007/139149 або подібному.

Приклади груп-міток, лінкерів тощо, застосовуваних у хімічних зондах, включають групи, показані у групі, яка складається з наступних (1)-(5): (1) групи-мітки для білків, такі як фотоафінні групи-мітки (наприклад, бензоїльна група, бензофенонова група, азидна група, карбонілазидна група, діазиридинова група, енонова група, діазогрупа, нітрогрупа тощо) і хімічні афінні групи (наприклад, кетонна група, у якій альфа-атом вуглецю замінений атомом галогену, карбамоїльна група, естерна група, алкілтіогрупа, акцептор Міхаєля, такий як а,З-ненасичений кетон або естер та оксиранова група);

Зо (2) відщеплювані лінкери, такі як -5-5-, -0-51-0-, моносахариди (глюкозна група, галактозна група тощо) або дисахариди (лактоза тощо); а також олігопептидні лінкери, відщдеплювані за допомогою ферментативної реакції; (3) групи з міткою для флуоресцентної гібридизації іп 5йи, такі як біотин і 3-(4,4-дифтор-5,7- диметил-4Н-За, 4а-діаза-4-бора-5-індацен-З3-іл)/пропіонільна група; (4) радіоактивні групи-мітки, такі як 1251, з2рР, ЗН ї 1иС; флуоресцентні групи-мітки, такі як флуоресцеїн, родамін, дансил, умбеліферон, 7-нітрофуразаніл і 3-(4,4-дифтор-5,7-диметил-4Н-

За, 4а-діаза-4-бора-5-індацен-З-ілупропіонільна група; хемілюмінесцентні групи, такі як люциферин і люмінол; а також маркери, які забезпечують виявлення іонів важких металів, таких як іони металів-лантаноїдів та іони радію; або (5) групи для приєднання до твердих носіїв, таких як скляні кульки, скляні пластини, титрувальні мікропланшети, агарозні гранули, агарозні шари, полістирольні гранули, полістирольні шари, нейлонові гранули і нейлонові шари.

Зонди, одержані за допомогою введення у сполуки за даним винаходом груп-міток тощо, вибраних з групи, яка складається з вищенаведених (1)-(5), за допомогою способів, описаних у вищенаведених документах або подібних їм, можна застосовувати як хімічні зонди для ідентифікації мічених білків, придатних для пошуку мішеней нового лікарського засобу в розробці тощо.

Приклади

Сполуки (1)-(МІ) за даним винаходом можна одержувати, наприклад, за допомогою способів, описаних у наступних прикладах, і ефекти сполук можна підтверджувати за допомогою способів, описаних у наступних тестових прикладах. Проте це лише приклади, і даний винахід у будь-якому випадку не обмежений наступними конкретними прикладами і може бути модифікований у межах, які не відходять від обсягу даного винаходу.

Сполуки, описані з назвами документів тощо, означають, що сполуки одержували відповідно до документів тощо.

До того ж скорочення, застосовувані у даному описі, добре відомі і зрозумілі фахівцю у даній галузі. У даному описі застосовують наступні скорочення.

ОСЕ: 1,2-дихлоретан

ОСМ: дихлорметан 60 ПІРЕА: М, М-діїзопропілетиламін

ОМТ-ММ: 4-(4,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-іл)-4-метилморфолінію хлорид

ОМ5О: диметилсульфоксид

ЕОС: 1-етил-3-(З-диметиламінопропіл)карбодіїміду гідрохлорид

НАТИ: О-(7-азабензотриазол-1-іл)-М, М.,М'/М'-тетраметилуронію гексафторфосфат

НОВТ: 1-гідроксибензотріазол н-: нормальний

МММ: М-метилморфолін трет-: третинний

ТВО: 1,3,4,6,7,8-гексагідро-2Н-піримідо/1,2-а|піримідин

ТВМЕ: третинний бутилметиловий етер

ТЕА: триетиламін

ТНЕ: тетрагідрофуран

І"Н-ЯМР: спектрометрія на основі протонного ядерного магнітного резонансу

М5: мас-спектрометрія

НРІ С: високоефективна рідинна хроматографія

Термін "кімнатна температура" у наступних прикладах і прикладах одержання загалом стосується інтервалу від приблизно 10 "С до приблизно 35 20. 95 стосується вагового відсотку, якщо не вказано інше.

Хімічні зсуви на спектрах протонного ядерного магнітного резонансу позначені у одиницях б (рріт) відносно тетраметилсилану, а константи взаємодії реєструються у герцах (Гц).

Позначення мультиплетності позначаються як 5: синглет, й: дублет, ї: триплет, д: квартет, т: мультиплет, бг: широкий, Ббг.5: широкий синглет.

Для розділення оптичних ізомерів сполуки застосовували Рагаїех Ріех (ТМ), виготовлений

Віоїаде (колонка: одна з СНІКАГ РАК (К) АО-Н, А, ІВ та ІС, виготовлена САЇСЕЇ : і СНІКАГ СЕ (8) О0-Н і 03-Н, виготовлена ОАІСЕЇ).

Для реакцій із застосуванням мікрохвильового реактора з прикладів одержання, довідкових прикладів і прикладів застосовували Іпйайог (ТМ) або Іпйаїйог-- (ТМ), виготовлений Віоїаде.

Стосовно хроматографії, як силікагель застосовували силікагель 60, виготовлений Мегск (70-230 меш або 230-400 меш АЗТМ), або РБОБбОВ, виготовлений Еції Зйубзіа Спетіса! Ч., або

Зо застосовували попередньо упаковану колонку (колонка: колонка Ні-Ріазп (ТМ) (силікагель), виготовлена ХАМА2ЕМ, розмір: один з 5 (16 х 60 мм), М (20 х 75 мм), І. (26 х 100 мм), 2. (26 х 150 мм) і ЗІ (46 х 130 мм); або Віоїаде (ТМ) 5МАР Шкга 5іїїса Сапгідде, виготовлена Віоїаде, розмір: один з 10 г, 25 гі 50 г).

Як МН-силікагель застосовували СНКОМАТОКЕХ МН-ЮОМ2035, виготовлений Еціі Зйувзіа

Спетісаї Ча., або застосовували попередньо упаковану колонку (колонка: колонка Ні-Ніазп (ТМ) (модифікований аміногрупами силікагель), виготовлена МАМА2ЕМ, розмір: один з 5 (16 х 60 мм), М (20 х 75 мм), І (26 х 100 мм), 21 (26 х 150 мм) і ЗІ (46 х 130 мм); або Ргезер (ТМ) (І ег

ГосК) МНІ(НС), виготовлена М/ако Риге Спетісаї Іпаизігіе5, Ч., розмір: один з типу М (14 г/25 мл), типу Г. (34 г/70 мл), типу 2. (50 г/100 мл) і типу ЗІ. (110 г/200 мл)).

Як назви сполук, показаних нижче, за винятком зазвичай застосовуваних реагентів, застосовували назви, показані у "Е-Моїтероок" версії 12 (РегкіпЕІтег).

Приклад одержання 1

Синтез етил-2-аміно-б-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно|2,3-с|Іпіридин-3-карбоксилату (о) ут (в) що -к Ге) вки кон ---- З 9 З МН.

ТЕА (61,6 мл, 442 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші 1-метил-4- піперидону (СА Мо 1445-73-4) (51,5 мл, 442 ммоль), етилціаноацетату (САБ Ме 105-56-6) (47 2 мл, 442 ммоль), сірки (СА Ме 7704-34-9) (14 2 г, 442 ммоль) і етанолу (800 мл). Реакційну суміш перемішували за 402С протягом 15 годин і потім концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (МН-силікагель, етилацетат). Одержаний концентрований залишок розтирали з етилацетатом. Осади збирали шляхом фільтрації, промивали за допомогою етилацетату і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної у заголовку сполуки (58,4 г). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») 6 (рріт): 1,33 (І, 9У-7,0 Гц, ЗН), 2,44 (5, ЗН), 2,62-2,70 (т, 2Н), 2,79- 2,88 (т, 2Н), 3,37 (І, 9У-2,0 Гц, 2Н), 4,26 (а, 9У-7,3 Гц, 2Н), 5,97 (бБг. 5, 2Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 241 МАНІ:

Приклад одержання 2

Синтез 7-фтор-4-метил-3,4-дигідро-1Н-бензо(Ге|П1 4|діазепін-2,5-діону (в) (о);

Е їМЖХО Е / о нм М

А ші сг - ть -лшшьь /

М (в)

Н М о щі о

Саркозин (САБ Мо 107-97-1) (5,16 г, 58,0 ммоль) додавали за кімнатної температури до розчину б-фтор-1Н-бензоїа|(1,3|оксазин-2,4-діону (САЗ Мо 321-69-7) (10,0 г, 55,2 ммоль) у піридині (100 мл) і реакційну суміш перемішували за 10022 протягом 8 годин. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури. Осади збирали шляхом фільтрації і промивали за допомогою діетилового етеру. Одержану тверду речовину висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної у заголовку сполуки (5,34 г). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 3,30 (5, ЗН), 3,90 (5, 2Н), 6,97 (да, 9У-8,8, 4,5 Гц, 1Н), 7,20 (ада, у-8,6, 7,6, 2,9 Гц, 1Н), 7,67 (да, 9У-9,0, 3,1 Гц, 1Н), 7,99 (бБг. 5, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 209 МАНІ"

Приклад одержання З

Синтез 4-метил-3,4-дигідро-1 Н-тієноЇ3,2-е|/1,4Ідіазепін-2,5-діону

З (в) 5 в) , нм | р от е - -5(5 -- - М-- н-К НМ о (в) (в)

Суміш ТН, 2Н, 4Н-тієно|З,2-4|(11,З|оксазин-2,4-діону (СА Ме 78756-28-2) (300 мг, 1,77 ммоль), саркозину (395 мг, 4,43 ммоль) і води (10 мл) нагрівали зі зворотним холодильником протягом 2 годин. Реакційну суміш охолоджували до 0 С. Осади збирали шляхом фільтрації та послідовно промивали за допомогою води та діетилового етеру. Одержану тверду речовину висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної у заголовку сполуки (165 мГг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІз) б (ррт): 3,24 (5, ЗН), 4,00 (в, 2Н), 6,72 (0, 9-5,3 Гц, 1Н), 7,52 (й, у-5,3 Гц, 1Н), 7,96 (Бе. 5, 1Н).

М5 (ЕІ) маса/заряд: 197 (МАНІ

Приклад одержання 4

Синтез 4-метил-3,4-дигідро-1 Н-тієно|2,3-е|/1,4Ідіазепін-2,5-діону (в)

Й НМ р ) о ші г - 565 65:-4 ЩА4 -З5м» З М н-К НМ о (в) (в) 1Н, 2Н, 4Н-Тієно(2,3-4|И1,З|оксазин-2,4-діон (САЗ Мо 103979-54-0) (600 мг, 3,55 ммоль) додавали до розчину саркозину (790 мг, 8,87 ммоль) у воді (12 мл). Реакційну суміш нагрівали зі

Зо зворотним холодильником протягом 1,5 години. Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури. До реакційної суміші додавали хлороформ і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували хлороформом (двічі) і етилацетатом (3 рази). Об'єднаний органічний шар висушували над безводним сульфатом натрію та фільтрували і фільтрат концентрували за зниженого тиску. Одержану тверду речовину висушували з одержанням вказаної у заголовку сполуки (430 мг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ»з) б (ррт): 3,23 (5, ЗН), 3,99 (5, 2Н), 6,90 (й, 9-5,9 Гц, 1Н), 7,29 (4, 9-5,7 Гц, 1Н), 8,39 (рег. 5, 1Н).

М5 (ЕІ) маса/заряд: 197 (МАНІ:

Приклад одержання 5

Синтез (5аб5, вак)-4-метилоктагідроциклопента|Це)/1,4|діазепін-2,5-діону и рач ? а:

МО0И- ЩО) 05 7 гх - г А ВХ -- ХК оутен - Ху 0-57 - - - у (в) о о Ме Км (в) о ьо (1) Синтез метил-2-((15, 28)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату

ТЕА (22,2 мл, 159 ммоль), НОВТ/моногідрат (11,7 г, 76,3 ммоль) і ЕОС (14,6 г, 76,3 ммоль) послідовно додавали під час охолодження льодом до суміші (15, 2Н8)-2-(трет- бутоксикарбоніл)аміно)циклопентан-1-карбонової кислоти (САЗ Мо 137170-89-9) (14,6 г, 63,6 ммоль), гідрохлориду метилового естеру саркозину (СА Мо 13515-93-0) (10,7 г, 76,3 ммоль) і

ТНЕ (150 мл). Потім реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 15 годин, додавали етилацетат і воду і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар промивали послідовно насиченим водним розчином гідрокарбонату натрію і насиченим розчином хлориду натрію, висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Одержаний залишок очищували двічі за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 25-30 96 етилацетат/н- гептан) з одержанням вказаної у заголовку сполуки (16,1 г).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 337 |М--Маї|" (2) Синтез (5а5, вак)-4-метилоктагідроциклопентаЦе/|/1,4|діазепін-2,5-діону 4 н. розчин суміші хлороводень/1,4-діоксан (160 мл, 640 ммоль) додавали під час охолодження льодом до метил-2-(15, 28)-2-«(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату (16,1 г, 51,3 ммоль). Реакційну суміш перемішували за тієї ж температури протягом 30 хвилин, потім перемішували за кімнатної температури протягом 45 хвилин і концентрували за зниженого тиску. ТВО (8,57 г, 61,6 ммоль) додавали під час охолодження водою до розчину залишку в метанолі (130 мл). Реакційну суміш перемішували під час охолодження водою протягом З годин і потім охолоджували до 02С. Одержану тверду речовину збирали шляхом фільтрації, промивали З рази за допомогою охолодженого льодом метанолу і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної в заголовку сполуки (5,22 г). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 1,41-1,59 (т, 2Н), 1,78-1,98 (т, 2Н), 2,00-2,15 (т, 1Н), 0 2,36-2,53 (т, 1Н), 3,08 (5, ЗН), 3,18-3,32 (т, 1Н), 3,49 (ай, 9-15,5, 1,7 Гц, 1Н), 3,91-4,04 (т, 1Н), 4,51 (а, 9-15,4 Гц, 1Н), 5,54 (бБг. 5, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 183 (МАНІ

Приклад одержання 6

Синтез (зак, вак)-4-метилоктагідроциклопента!|е)/1,4|діазепін-2,5-діону ще ву Сов.

УА. Док де он МН М

Ге) Ге) У о М Ко о (1) Синтез трет-бутил-2-(18, 28)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату

ПІРЕА (1,81 мл, 10,5 ммоль) і НАТИ (1,99 г, 5,23 ммоль) послідовно додавали за кімнатної температури до суміші (18, 2А)-трет-бутоксикарбоніл-2-аміноциклопентанкарбонової кислоти (САЗ Мо 245115-25-7) (1,00 г, 4,36 ммоль), гідрохлориду трет-бутилового естеру саркозину (СА5

Мо 136088-69-2) (872 мг, 4,80 ммоль) і ОСМ (10 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1 години і потім безпосередньо очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 30-50 96 етилацетат/н-гептан) з одержанням вказаної в заголовку сполуки (1,61 г).

М5 (ЕІ) маса/заряд: 357 (МАНІ: (2) Синтез (зак, вак)-4-метилоктагідроциклопента|е|/1,4|діазепін-2,5-діону 4 н. розчин суміші хлороводень/1,4-діоксан (16 мл, 64 ммоль) додавали за кімнатної температури до трет-бутил-2-((18, 28)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату (1,61 г, 4,52 ммоль) і суміш перемішували протягом 20 годин. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Гідрокарбонат натрію (0,911 г, 10,8 ммоль), метанол (24 мл), МММ (0,099 мл, 0,90 ммоль) і ОМТ-ММ (12,3 95 НО, 1,80 г, 5,70 ммоль) послідовно додавали до залишку за кімнатної температури і суміш перемішували протягом 20 годин. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску і залишок промивали за допомогою ОСМ. Промивну рідину концентрували за зниженого тиску і залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 5-20 96 метанол/етилацетат) з одержанням вказаної в заголовку сполуки (745 мг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІв) б (ррт): 1,56-1,88 (т, ЗН), 1,91-2,02 (т, 1Н), 2,13-2,23 (т, 1Н), 2,26-2,39 (т, 1Н), 3,07 (5, ЗН), 3,08-3,16 (т, 1Н), 3,51-3,62 (т, 1Н), 3,79 (й, 9-18,0 Гц, 1Н), 4,58 (а, 9-18,0 Гу, 1Н), 6,76 (бБг. 5, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 183 (МАНІ

Приклад одержання 7

Синтез (5а5, ваб5)-4-метилоктагідроциклопента(е|П,4|діазепін-2,5-діону о)

УА. А око й-я он МН М (о) Ге) - о М й (1) Синтез трет-бутил-2-(15, 25)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату

НАТИ (1,99 г, 5,23 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші (15, 25)-трет- бутоксикарбоніл-2-аміноциклопентанкарбонової кислоти (САЗ Мо 143679-80-5) (1,00 г, 4,36 ммоль), гідрохлориду трет-бутилового естеру саркозину (872 мг, 4,80 ммоль), ОІРЕА (1,81 мл, 10,5 ммоль) і ОСМ (10 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом ночі та потім безпосередньо очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 30- 50 95 етилацетат/н-гептан) з одержанням вказаної в заголовку сполуки (1,55 г).

М5 (ЕІ) маса/заряд: 357 (МАНІ (2) Синтез (5а5, ваб5)-4-метилоктагідроциклопентаЦе)/1,4|діазепін-2,5-діону 4 н. розчин суміші хлороводень/1,4-діоксан (16 мл, 64 ммоль) додавали за кімнатної температури до трет-бутил-2-(15, 25)-2-(трет-бутоксикарбоніл)аміно)-М- метилциклопентанкарбоксамід)ацетату (1,55 г, 4,35 ммоль) і суміш перемішували протягом 16 годин. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску. Гідрокарбонат натрію (0,877 г, 10,4 ммоль), метанол (24 мл), МММ (0,096 мл, 0,87 ммоль) і ОМТ-ММ (12,3 95 НО, 1,73 г, 5,48

Зо ммоль) послідовно додавали до залишку за кімнатної температури і суміш перемішували протягом З годин. Реакційну суміш концентрували за зниженого тиску і залишок промивали за допомогою ОСМ. Промивну рідину концентрували за зниженого тиску і залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 0-20 96 метанол/етилацетат) з одержанням вказаної в заголовку сполуки (753 мгГ). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІв) б (ррт): 1,55-1,88 (т, ЗН), 1,91-2,02 (т, 1Н), 2,11-2,22 (т, 1Н), 2,25-2,40 (т, 1Н), 3,07 (5, ЗН), 3,07-3,16 (т, 1Н), 3,51-3,62 (т, 1Н), 3,78 (й, 9-18,0 Гц, 1Н), 4,57 (а,

У-18,0 Гц, 1Н), 6,54 (бБг. 5, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 183 (МАНІ

Приклад 1

Синтез З-фтор-6,11-диметил-б,7,10,11,12,13- гексагідробензо|піридо|4",3":4",5гієно|2",37:4,5|піримідо|1,2-а111,4діазепін-5,14-діону

Е в) (9) / о --кі Е м ото - 05 з мн, м / | ЖК о Ф н о З МУ М

М

Оксихлорид фосфору (4,65 мл, 49,9 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші етил-2-аміно-б-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно(2,3-с|Іпіридин-З-карбоксилату (6,00 г, 25,0 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, 7-фтор-4-метил-3,4-дигідро-1Н-бензої(е|(/1,4діазепін-2,5- діону (5,20 г, 25,0 ммоль), одержаного у прикладі одержання 2, і ОСЕ (300 мл). Реакційну суміш перемішували за 80 "С протягом 20 годин. Під час перемішування із охолодженням льодом до реакційної суміші додавали етоксид натрію (2095 розчин у етанолі, 80 мл, 207 ммоль).

Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 20 хвилин. До реакційної суміші додавали насичений водний розчин гідрокарбонату натрію й етилацетат і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар висушували над сульфатом магнію та фільтрували і фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок послідовно очищували за допомогою колонкової хроматографії (МН-силікагель, 50-100 Фо етилацетат/н-гептан) і колонкової хроматографії (силікагель, 0-50 95 метанол/етилацетат). Одержану тверду речовину розтирали з ТВМЕ й осади збирали шляхом фільтрації. Одержану тверду речовину промивали за допомогою ТВМЕ і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної в заголовку сполуки (4,56 г). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 2,51 (5, ЗН), 2,66-2,76 (т, 1Н), 2,77-2,88 (т, 1Н), 3,04-3,18 (т, 2Н), 3,25 (5, ЗН), 3,57-3,75 (т, 2Н), 4,09 (й, 9-15,2 Гц, 1Н), 4,47 (а, 9У-14,6 Гу, 1Н), 7,25-7,31 (т, 1Н), 7,60-7,64 (т, 1Н), 7,67 (аа, У-9,0, 4,7 Гц, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 385 (МАНІ:

Приклад 2

Синтез 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3"74,5гієно|2",374,5|піримідо|1,2- а)гієно(2,3-ЧЦП1,4|діазепін-4,13-діону о 5 (в) о я -кК ш-е- аа ово 5 МН ше ет 4 | Ж. о (9

З М ко (9)

Оксихлорид фосфору (0,157 мл, 1,68 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші етил-2-аміно-б-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно|2,3-с|Іпіридин-3-карбоксилату (303 мг, 1,26 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, 4-метил-3,4-дигідро-1 Н-тієноЇ3,2-е|(1,4)діазепін-2,5-діону (165 мг, 0,841 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, 4-метил-3,4-дигідро-1 Н-тієно|3,2- е|1,4Ідіазепін-2,5-діону (165 мг, 0,841 ммоль), одержаного у прикладі одержання 3, і 1,4- діоксану (10 мл). Реакційну суміш перемішували за 702С протягом 2 годин і потім перемішували за 902С протягом 5 годин. Етоксид натрію (20 95 розчин у етанолі, 2,60 мл, 6,73 ммоль) додавали до реакційної суміші, охолодженої до кімнатної температури. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 40 хвилин. До реакційної суміші додавали етилацетат і насичений водний розчин гідрокарбонату натрію і відділяли органічний шар.

Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар висушували над

Зо безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 50 96 метанол/етилацетат) з одержанням вказаної в заголовку сполуки (90,0 мг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 2,51 (5, ЗН), 2,66-2,87 (т, 2Н), 3,07-3,20 (т, 2Н), 3,26 (в,

ЗН), 3,56-3,74 (т, 2Н), 4,21 (а, 9-15,0 Гц, 1Н), 4,56 (а, 9-15,0 Гц, 1Н), 7,54 (а, 9-5,3 Гу, 1Н), 7,59 (а, 9-5,3 Гц, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 373 МАНІ

Приклад З

Синтез 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3"74,5гієно|2',374,5|піримідо|1,2- а)гієноЇ3,2-ЦП1,4|діазепін-4,13-діону (І - й о 8 -М ш-Не- з ото де -к м 5 ше 8-0 / | Ж о

Мн, з М о о

Оксихлорид фосфору (1,43 мл, 15,3 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші 4- метил-3,4-дигідро-1Н-тієно(|(2,3-е|/1,4|діазепін-2,5-діону (1,00 г, 5,10 ммоль), одержаного у прикладі одержання 4, етил-2-аміно-6-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно(2,3-с|Іпіридин-3- карбоксилату (1,84 г, 7,64 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, і 1,4-діоксану (30 мл).

Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 5 хвилин і перемішували за 902С протягом 2 годин. Етоксид натрію (20 95 розчин у етанолі, 21,7 мл, 56,1 ммоль) додавали протягом 5 хвилин до реакційної суміші, охолодженої до кімнатної температури. Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 1,5 години. До реакційної суміші послідовно додавали етилацетат, насичений водний розчин гідрокарбонату натрію й воду і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар висушували над безводним сульфатом магнію та фільтрували і фільтрат концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (силікагель, 20 5-50 96 метанол/етилацетат). Одержану тверду речовину розтирали з етанолом й осади збирали шляхом фільтрації. Одержану тверду речовину промивали за допомогою етанолу і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної в заголовку сполуки (712 мгГг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІз) б (рріт): 2,52 (5, ЗН), 2,71-2,87 (т, 2Н), 3,05-3,30 (т, 5Н), 3,59-3,75 (т, 2Н), 4,23 (а, 9У-14,8 Гц, 1Н), 4,57 (а, 9У-14,8 Гу, 1Н), 7,35 (а, 9У-6,2 Гц, 1Н), 7,39 (а, У-5,9 Гц, 1Нн).

М5 (ЕІ) маса/заряд: 373 (МАНІ:

Приклад 4

Синтез (За5, 14ак)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5гієно|2',3:4,5|піримідо/1,2-а|11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону -М А- паші ззаанвосннозов хи зве ши 5 Мн, о М 5 М М х

Оксихлорид фосфору (7,93 мл, 85,1 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші (баб, ваВ)-4-метилоктагідроциклопентаЦе)|/1 4|діазепін-2,5-діону (3,10 г, 17,0 ммоль), одержаного у прикладі одержання 5-(2), етил-2-аміно-6-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно|2,3-с|Іпіридин-3- карбоксилату (8,18 г, 34,0 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, і ОСЕ (300 мл).

Реакційну суміш перемішували за 80 С протягом 14,5 години. Насичений водний розчин гідрокарбонату натрію додавали до реакційної суміші за 02С, суміш перемішували за кімнатної температури протягом 3,5 години і потім відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар промивали послідовно насиченим водним розчином гідрокарбонату натрію і насиченим розчином хлориду натрію, висушували над безводним сульфатом магнію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (МН-силікагель, 30-60 96 етилацетат/н-гептан). Одержаний концентрований залишок розтирали з ТВМЕ й осади збирали шляхом фільтрації. Одержану тверду речовину промивали З рази за допомогою ТВМЕ і висушували за зниженого тиску з

Зо одержанням вказаної в заголовку сполуки (3,70 г). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІв) б (ррт): 1,51-1,73 (т, 2Н), 1,94-2,18 (т, 2Н), 2,30-2,41 (т, 1Н), 2,44-2,59 (т, 4Н), 2,71-2,682 (т, 2Н), 3,04-3,19 (т, 5Н), 3,42-3,54 (т, 1Н), 3,64 (5, 2Н), 4,17 (а, 915,6 Гу, 1Н), 4,75 (а, 915,6 Гу, 1Н), 5,69-5,82 (т, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 359 МАНІ"

Питоме обертання: (с) о20-146,0 (с 0,50, СНО з)

Аналіз за допомогою НРІ С: (Умови аналізу) Колонка: СНІКАГ РАК ІВ (виготовлена Оаїсе! Спетісаї! Іпаивігіеє5, а.) (0,46 см ф х 15 см), 402С, елюент: етанол/гексан - 20/80 (об./06.), витрата: 1 мл/хв., виявлення: УФ (254 нм). (Аналіз результатів) Коли вказану в заголовку сполуку аналізували за вищенаведених умов аналізу, час утримування становив 10,38 хвилини, оптична чистота становила 298 965 ее і обертання площини поляризації було (-). Час утримування енантіомеру підтверджували за допомогою продукту, синтезованого подібним чином, із застосуванням рацемічної суміші як вихідного матеріалу.

Приклад 5

Синтез (зак, 14ак)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5гієно|2',3:4,5|піримідо/1,2-а|11,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону (Фо) о І и х : (9) й -ХМ М нова ще а -- 925 о в Мн, Кот З Ж о М і:

Оксихлорид фосфору (0,793 мл, 8,51 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші (бай, Вав)-4-метилоктагідроциклопентаї|е|(1,4|діазепін-2,5-діону (310 мг, 1,70 ммоль), одержаного у прикладі одержання 6-(2), етил-2-аміно-б-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно|2,3- сІпіридин-3-карбоксилату (613 мг, 2,55 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, і ОСЕ (16 мл). Реакційну суміш перемішували за 702С протягом 2,5 години і потім забезпечували її охолодження до кімнатної температури і додавали етилацетат (15 мл) і насичений водний розчин гідрокарбонату натрію (30 мл). Реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 5 днів, додавали етилацетат і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (МН-силікагель, 50-70 96 етилацетат/н-гептан). Одержаний продукт промивали З рази за допомогою діетилового етеру, потім промивали за допомогою ТВМЕ і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної в заголовку сполуки (143 мг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 1,29-1,49 (т, 1Н), 1,68-1,83 (т, 1Н), 1,82-2,21 (т, ЗН), 2,50 (5, ЗН), 2,76 (Ї, 95,7 Гц, 2Н), 2,98-3,23 (т, 6Н), 3,40-3,54 (т, 1Н), 3,57-3,68 (т, 2Н), 4,17-4,34 (т, 2Н), 5,30 (й, 9-17,4 Гц, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 359 МАНІ"

Аналіз за допомогою НРІ С: (Умови аналізу) Колонка: СНІКАГ РАК ІС (виготовлена Оаїсе! Спетісаї Іпаивігіє5, а.) (0,46 см ф х 15 см), 402С, елюент: етанол, витрата: 1 мл/хв., виявлення: УФ (254 нм). (Аналіз результатів) Час утримування вказаної в заголовку сполуки становив 6,64 хвилини, оптична чистота становила 299 95 ее, і обертання площини поляризації було (-).

Приклад 6

Синтез (За5, 14а5)-5,10-диметил-3,За, 5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5гієно(2",3":4,5|піримідо/1,2-а|/1,4|діазепін-4,13-(2Н, 14аН)діону (в) Ге х (в) А -М м 8 Мн, Кт з Жах о і: і:

Оксихлорид фосфору (0,859 мл, 9,22 ммоль) додавали за кімнатної температури до суміші (баб, ваб)-4-метилоктагідроциклопентаЦ(е)|П1,4|діазепін-2,о-діону (336 мг, 1,84 ммоль), одержаного у прикладі одержання 7-(2), етил-2-аміно-б-метил-4,5,6,7-тетрагідротієно|2,3- сІпіридин-3-карбоксилату (665 мг, 2,77 ммоль), одержаного у прикладі одержання 1, і ОСЕ (17 мл). Реакційну суміш перемішували за 602С протягом 3,5 години і потім забезпечували її охолодження до кімнатної температури. До реакційної суміші додавали етилацетат (15 мл) і насичений водний розчин гідрокарбонату натрію (30 мл). Після того, як реакційну суміш перемішували за кімнатної температури протягом 5 днів, додавали етилацетат і відділяли органічний шар. Водний шар екстрагували етилацетатом. Об'єднаний органічний шар висушували над безводним сульфатом натрію, фільтрували та концентрували за зниженого тиску. Залишок очищували за допомогою колонкової хроматографії (МН-силікагель, 40-80 Фо етилацетат/н-гептан). Одержаний продукт промивали З рази за допомогою діетилового етеру і висушували за зниженого тиску з одержанням вказаної в заголовку сполуки (166 мгГг). "Н-ЯМР (400 МГц, СОСІ») б (ррт): 1,31-1,50 (т, 1Н), 1,69-1,83 (т, 1Н), 1,84-1,97 (т, 1Н), 1,97-2,20 (т, 2Н), 2,50 (5, ЗН), 2,73-2,80 (т, 2Н), 3,02-3,23 (т, 6Н), 3,41-3,55 (т, 1Н), 3,57-3,69 (т, 2Н), 4,19-4,34 (т, 2Н), 5,30 (а, 9-17,2 Гу, 1Н).

М5 (ЕБ5І) маса/заряд: 359 МАНІ" (Умови аналізу) Колонка: СНІКАГ РАК ІС (виготовлена Оаїсе! Спетісаї Іпаивігієв, їча.) (0,46 см ф х 15 см), 402С, елюент: етанол, витрата: 1 мл/хв., виявлення: УФ (254 нм). (Аналіз результатів) Час утримування вказаної в заголовку сполуки становив 8,34 хвилини, оптична чистота становила »99 95 ее, і обертання площини поляризації було (тк).

Приклади фармакологічних тестів

Наступні фармакологічні тести проводили із застосуванням сполук з прикладів 1-6.

Вимірювання вивільнення ацетилхоліну (АС) у системі первинної культури нейронів перегородки пацюків у присутності МОЄ (1) Первинна культура нейронів перегородки пацюків

Ділянку перегородки виділяли у пацюків Спрег-Доулі (50) (Спагіез Кімег І арогайгієз Ударап,

Іпс.) у гестаційному віці 18 днів і культивували. Зокрема, плоди за стерильних умов видаляли у вагітних пацюків під анестезією ізофлураном. Головний мозок вилучали з кожного плода і занурювали у охолоджене льодом середовище 1-15 (11415-064, ТНепто Рівпег Зсієпійіс).

Ділянку перегородки вирізали з вилученого головного мозку під стереоскопічним мікроскопом.

Вирізану ділянку перегородки піддавали ферментативній обробці у ферментному розчині, який містить 0,25 95 трипсину (15050-065, Тпепто Різпег Зсіепійіс) і 0,01 95 ДНКази (05025-150КИ,

Зідта), за 372С протягом 30 хвилин, таким чином забезпечуючи диспергування клітин. У даному випадку ферментативну реакцію зупиняли за допомогою додавання інактивованої конячої сироватки (26050-088, Тпегпто Рібєпйег Зсіепійс). Оброблений ферментами розчин центрифугували за 1000 об./хв. протягом З хвилин і надосадову рідину видаляли. До одержаної клітинної маси додавали середовище у кількості 10 мл. Застосовуване середовище являло собою середовище Ігла у модифікації Дульбекко (044-29765, М/АКО), доповнене за допомогою добавки М2 (17502-048, Тпепто Рівпег Зсієпійіс), 1 мМ пірувату натрію (11360-070, ТнНегто

Еізпег Зсіепійіс) і пеніцилін-стрептоміцину (15140-1221, Тпегто Різпег зсіепійіс). Клітини в клітинній масі, у яку додавали середовище, повторно диспергували шляхом акуратного піпетування, а потім знову центрифугували за 1000 об./хв. протягом З хвилин і надосадову рідину видаляли. Середовище у кількості 10 мл додавали до одержаної клітинної маси і дисперсію клітин фільтрували через 40 мкмнейлонову сітку (СеїЇ 5ігаійпеї-) з видаленням клітинної маси з одержанням таким чином суспензії нейронних клітин. Суспензію нейронних клітин розбавляли за допомогою середовища і 10 95 інактивованої бичачої сироватки (26140- 079, Тпепто Рі5пег Зсіепійіс) і додавали 10 95 інактивованої конячої сироватки. Після цього висівали 100 мкл/лунка суспензії у 9б-лунковий планшет (354461, СОКМІМО), попередньо покритий полі-О-лізином, таким чином, що початкова щільність культури становила 1,4 х 105 клітини/см-. Після того, як висіяні клітини культивували за 5 95 СО2-95 905 повітря у інкубаторі з температурою 372С протягом 2 днів, все середовище замінювали 120 мкл свіжого середовища і потім клітини культивували протягом 5 днів. (2) Додавання сполуки

На 7-й день культивування додавали сполуку наступним чином. Розчин тестованої сполуки у

Зо РМ5О розбавляли за допомогою середовища таким чином, щоб концентрація була у 10 разів вищою, ніж кінцева концентрація. МОЕ (450-01, РЕРКО ТЕСН, ІМС.) одержували за концентрації 0,3 нг/мл. Кожний з цих двох розчинів додавали у кількості 15 мкл/лунка і суміш добре змішували. Кінцева концентрація ОМ5О становила 0,1 95 або менше. До того ж, лише ОМ5О і

МОБ додавали до контрольної групи. (3) Вимірювання вивільнення АСп

Через день після додавання сполуки кількість вивільненого АСП вимірювали за допомогою

НРІС наступним чином. Нагрітий буфер додавали за 100 мкл/лунка у лунку після того, як середовище забирали, і буфер негайно видаляли. Після цього додавали буфер, у який були додані 10 мкм холіну, 10 мкм фізостигміну і 6 мМ КСІ, за 120 мкл/лунка. Буфер одержували шляхом додавання 125 мМ Масі, 25 мМ 4-(2-гідроксиетил)-1-піперазинетансульфонової кислоти, 1,2 мМ КНеРох, 1,2 мМ Мо5о», 2,2 мМ Сасі» (2Н2О) і 10 мм глюкози до стерилізованої води і кінцеве значення рН розчину регулювали до 7,4. Після того, як 96-лунковий планшет, у який додавали буфер, інкубували за 5 95 СО2-95 95 повітря у інкубаторі з температурою 3720 протягом 40 хвилин, збирали 80 мкл буфера. Розчин внутрішнього стандарту ІРНС (5 х 10-77 М) додавали у кількості 6 мкл до зібраного буфера і буфер переносили у пробірку для вимірювання за допомогою НРІ С і піддавали вимірюванню за допомогою НРІ С. Результати відображають ефект кожної сполуки у вигляді відсотка (95 контролю) концентрації АСП у буфері контрольної групи, і значення концентрації сполуки, які демонструють збільшення на 20 95 порівняно з концентрацією АС у буфері контрольної групи, показані у наступній таблиці 1.

Таблиця 1 риклад м не : з кількістю АС у контрольній групі. 610

Вимірювання рівнів експресії ТЕМА холінацетилтрансферази (СПАТ) у ділянці перегородки пацюків (1) Введення сполуки

У даному дослідженні застосовували самців пацюків 50 (Спагпез Кімег ІГарогайогіез дарап,

Іпс.) з вагою тіла від приблизно 250 до 350 г. Сполуку розчиняли у 0,01 моль/л хлористоводневої кислоти і вводили перорально. (2) Відбір зразків

Через 24 години після введення сполуки усю тканину головного мозку збирали під анестезією пентобарбіталом. Виділяли медіальну перегородку з усього головного мозку на льоду і заморожували за допомогою рідкого азоту і потім зберігали за -8020. (3) Вимірювання рівнів експресії пПЕМА СПАТ

Для очищення РНК у даному дослідженні застосовували набір КМеазу Ріих Міпі (Ме 74136:

ОІАСЕМ). Очищення РНК проводили за допомогою способу, описаного у наборі. Після очищення РНК вимірювали загальну концентрацію РНК із застосуванням приладу О1ІАхрегі (ОІАСЕМ). Синтезували СОМА із застосуванням набору для синтезу СОМА Зирегеогірі (К) МІ'О (ТМ) (Ме 11754: Тпегто Рібпег 5сієепіййс). Синтез СОМА проводили за допомогою способу, описаного у наборі. Синтезовану СОМА розбавляли в 4 рази за допомогою води, яка не містить

РНКазу, і розведений розчин СОМА застосовували як зразок. Універсальний мастер-мікс для

ПЦР Тадтап (Ме4304437: Тпепто Ріхпег 5сіепійіс), набір для аналізу експресії генів Тадтап (К),

ІММЕМТОНМКІЕО (Ме4331182: Тпегто Різпег зЗсіепійіс), воду, яка не місить РНКазу, і розчин СОМА змішували у кількостях 10 мкл, 1 мкл, 4 мкл їі 5 мкл відповідно й одержану суміш застосовували як вимірюваний зразок розчину. Кількісну полімеразну ланцюгову реакцію (ДРСК) проводили із застосуванням АВІ РКІЗМ (К) 7900НТ (Тпепто Рібпег Зсіепійіс) за допомогою способу із застосуванням флуоресцентних зондів. Аналіз проводили за допомогою 505 2.4 (Тпепто Різпег зсіепійіс). Результати розраховували у вигляді відсоткового значення рівнів експресії тЕМА

САТ у групі з введенням сполуки, збільшеного порівняно з величиною рівнів експресії пеЕМА

САТ у групі з введенням середовища-носія. Результати показані у наступній таблиці 2.

Таблиця 2

Величина (95), на яку збільшена величина рівнів

Приклад Доза експресії ТЕМА СВАТ порівняно з групою з введенням середовища-носія 7776 Ї77111ломже ОЇ 7777777777717171111111111113201

Коо)

Вимірювання концентрації ацетилхоліну (АС) у спинномозковій рідині (С5Е) пацюків (1) Передумови

Кореляція між збільшенням і зменшенням кількості нейротрансмітерів у головному мозку і нейротрансмітерів у спинномозковій рідині (СОЕ) була виявлена у дослідженнях на гризунах, і також кореляція спостерігалась у людини (І оуге 5 еї а). Рзуспорпагтасооду 219 (2012) 959- 970). Таким чином, вимірювали зміни концентрації ацетилхоліну у С5Е, щоб визначати зміну концентрації ацетилхоліну у головному мозку за допомогою тестованих сполук. (2) Введення сполуки

У даному дослідженні застосовували самців пацюків Різспег 344 (Спапез5 Кімег Гарогайогіє5

Уарап, Іпс.) з вагою тіла від приблизно 150 до 250 г. Тестовані сполуки вводили перорально пацюкам один раз на добу за 10 мг/кг протягом трьох днів. Застосовуване середовище-носій являло собою 0,01 моль/л розчин хлористоводневої кислоти. (3) Відбір зразків

Через 24 години після введення середовища-носія і тестованих сполук збирали С5Е з мозочково-мозкової цистерни у пробірку, яка містить інгібітори АспЕ, під анестезією пентобарбіталом. Зібрану С5Е центрифугували за 3500 х д за 42С протягом 10 хвилин і збирали надосадову рідину. Зібрану надосадову рідину заморожували за допомогою рідкого азоту і потім зберігали за -8020. (4) Вимірювання концентрації Асі за допомогою І С-М5

У 10 мкл С5Е додавали 50 мкл ацетилхолін-49-хлориду (АСп-49) за кінцевої концентрації 0,34 нмоль/л як внутрішній стандарт. Суміш піпетували і центрифугували за 1500 х д за 4 протягом 10 хвилин. Надосадову рідину збирали і піддавали І С/М5 (Мехегах2 (М5), Т50 АКі5 (НРГС)) і виявляли Асі як такий, що відповідає піку іона-попередника за значення маса/заряд, яке дорівнює 146,050, і піку іона-продукту за значення маса/заряд, яке дорівнює 87,071, і виявляли АСп-49 як внутрішній стандарт, що відповідає піку іона- попередника за значення маса/заряд, яке дорівнює 155,088, і піку іона-продукту за значення маса/заряд, яке дорівнює 87,000. Результати представлені у вигляді розрахунків відсотку збільшення концентрації АС в

С5Е у групі з введенням тестованої сполуки щодо відсотку в групі з введенням середовища- носія (95 контролю). Результати представлені у таблиці 3.

Таблиця З групи з введенням середовища-носія

Оцінка в трансгенній миші з мутацією РЗО15, яка експресує тау-білок людини (1) Введення сполуки

У даному дослідженні тестовані сполуки вводили перорально один раз на добу протягом трьох місяців трансгенним мишам з мутацією РЗО15, які експресують тау-білок людини, віком від чотирьох місяців до семи місяців. Застосовуване середовище-носій являло собою 0,01 моль/л розчин хлористоводневої кислоти. (2) Відбір зразків

У перший день введення (у віці чотирьох місяців) і наступного дня після останнього введення мишей з групи з введенням середовища-носія і групи з введенням тестованої сполуки піддавали анестезії пентобарбіталом (50 мг/кг, і.р.) і перфузували за допомогою РВ5. Після перфузії передній мозок, у тому числі медіальну ділянку перегородки, збирали і фіксували за допомогою 4 95 розчину параформальдегіду. (3) Одержання коронарного зрізу замороженого головного мозку

Зібраний передній мозок, у тому числі медіальну ділянку перегородки, занурювали у 4 95 розчин параформальдегіду і струшували протягом ночі. Розчин для занурення замінювали 7,596 розчином сахарози. Одержане занурювали у 7,595 розчин сахарози і струшували протягом ночі, і розчин для занурення замінювали 1595 розчином сахарози, і одержане

Зо занурювали у нього і струшували протягом ночі. Розчин для занурення замінювали 30 95 розчином сахарози й одержане занурювали у нього і струшували протягом ночі. Коронарні зрізи замороженого головного мозку з товщиною 30 мкм одержували з переднього мозку, в тому числі медіальної ділянка перегородки, із застосуванням мікротома (І еіса, 5«М2О0ООК). (4) Імуногістохімічне дослідження клітин, позитивних щодо холінацетилтрансферази (СПАТ)

Одержані коронарні зрізи замороженого головного мозку фарбували за допомогою САВ (НАБІР З ПОАВ-СУБСТРАТОМ ПЕРОКСИДАЗИ (Месіог, 5К-4100)) із застосуванням антитіла до

СРАТ (Запіа Сти7, 50-20672) як первинного антитіла. Зображення зрізу, у тому числі медіальної ділянки перегородки, як показано у "Те тоизе Вгаїп іп 5іегеоїахіс соогаіпагез" (СОМРАСТ

ТНІВО ЕОІТІОМ, Кейн В.). Екапкіїп 5 Сеогде Рахіпо5) одержували за допомогою універсального флуоресцентного мікроскопа (КЕМЕМСЕ, В2-Х710) і СПАТ-позитивні клітини поблизу основної осі медіальної ділянка перегородки підраховували за допомогою програмного забезпечення для аналізу В (КЕМЕМСЕ). Результати представлені у вигляді відсотку числа СПАТ-позитивних клітин у групі з введенням середовища-носія і групі з введенням тестованої сполуки відносно числа СПАТ-позитивних клітин на момент початкового введення (у віці чотирьох місяців). Дані виражені у вигляді середнього значення 45ЕМ. Відмінності між групою на момент початкового введення і групою, обробленою середовищем-носієм (значущі: 7), аналізували за допомогою непарного І-критерію, а також відмінності між групою, обробленою середовищем-носієм, і групою, обробленою сполукою (значущі: 7), аналізували за допомогою непарного І-критерію.

Значення Ре«0,05 вважали статистично значущим. Статистичні аналізи проводили (із застосуванням СгарпРаай Ргіхт версії 7.02. Результати представлені у таблиці 4.

Таблиця 4

Група, яку піддавали обробці і числом під час початкового введення введення середовища-носія (доза: 10 мг/кг) (доза: 5 мг/кг)

Нейропротективний і відновлювальний ефект щодо холінергічних нейронів із застосуванням моделі ураження бахромок гіпокампа і склепіння головного мозку на пацюку (1) Одержання моделі ураження бахромок гіпокампа і склепіння головного мозку на пацюку

У даному дослідженні застосовували самців пацюків Спрег-Доулі (Спапез Кімег І арогаїогіе5

Уарап, Іпс.) з вагою тіла від приблизно 250 до 350 г. Пацюка піддавали анестезії за допомогою комбінації трьох лікарських засобів: мідазоламу (2 мг/кг, 5.с.), медетомідину гідрохлориду (0,15 мг/кг, 5.с.) і буторфанолу тартрату (2,5 мг/кг, 5.с.), і фіксували за допомогою стереотаксичного апарату для роботи з головним мозком (Магієпіде Со., 4). Оголювали череп и просвердлювали отвір шириною 5 мм у черепі від серединної лінії на 2 мм позаду брегми. Лезо шириною 4 мм вводили у брегму на глибину 5,5 мм з розрізанням бахромок гіпокампа і склепіння головного мозку. Після зупинки кровотечі скальп зашивали. Після операції пацюка повертали назад у клітку і забезпечували відновлення після анестезії. У групі з імітацією операції у черепі просвердлювали отвір шириною 5 мм від серединної лінії на 2 мм позаду брегми, але без введення леза. (2) Введення сполуки

Тестовані сполуки вводили перорально пацюкам один раз на добу від п'яти днів до дев'яти днів після операції (приклад 1: 10 мг/кг) або від семи днів до чотирнадцяти днів після операції (приклад 3: З мг/кг). Застосовуване середовище-носій являло собою 0,01 моль/л розчин хлористоводневої кислоти. У групі з імітацією операції середовище-носій вводили перорально один раз на добу аналогічно групі з введенням тестованої сполуки. (3) Відбір зразків

Пацюків піддавали анестезії за допомогою пентобарбіталу і транскардіально перфузували за допомогою льодяного РВ5. Після перфузії передній мозок, у тому числі медіальну ділянку перегородки, збирали і занурювали у 4 95 розчин параформальдегіду і струшували протягом ночі. Розчин для занурення замінювали 7,595 розчином сахарози. Одержане занурювали у 7,5 9Уо розчин сахарози і струшували протягом ночі, і розчин для занурення замінювали 15 95 розчином сахарози, і одержане занурювали у нього і струшували протягом ночі. Розчин для

Зо занурення замінювали 30 до розчином сахарози й одержане занурювали у нього і струшували протягом ночі. Коронарні зрізи замороженого головного мозку з товщиною 30 мкм одержували з переднього мозку, в тому числі медіальної ділянка перегородки, із застосуванням мікротома (І еіса, «М2О0ОВ). (4) Імуногістохімічне дослідження клітин, позитивних щодо холінацетилтрансферази (САТ), і везикулярного транспортера ацетилхоліну (МАСНТ)

Одержані коронарні зрізи замороженого головного мозку фарбували за допомогою САВ (НАБІР З ПОАВ-СУБСТРАТОМ ПЕРОКСИДАЗИ (Месіог, ЗК-4100)) із застосуванням антитіла до

СНАТ (Запіа Сти7, 50-20672) або антитіла до МАСНТ (Мегск Мійіроге, АВМ100) як первинного антитіла. Зображення зрізу, у тому числі медіальної ділянки перегородки або гіпокампа, як показано у "Пе тоизе Вгаїп іп 5іегеоїахіс соогаіпаїез" (СОМРАСТ ТНІВО ЕПІТІОМ, Кейн В...

ЕгапКіп 4 Сзеогде Рахіпо5), одержували за допомогою універсального флуоресцентного мікроскопа (КЕМЕМСЕ, В2-Х710) і кількість СПАТ-позитивних клітин медіальної ділянки перегородки або оптичну густину (00) гіпокампального МАСИТ вимірювали за допомогою програмного забезпечення для аналізу В (КЕМЕМСЕ). Результати представлені у вигляді відсотку числа СПАТ-позитивних клітин медіальної ділянки перегородки або ОО гіпокампального

МАСНПТ у групі з введенням середовища-носія і групі з введенням тестованої сполуки відносно числа СПАТ-позитивних клітин медіальної ділянки перегородки або 00 гіпокампального МАСИТ у групі з імітацією операції. Дані виражені у вигляді середнього значення «5ЕМ. Відмінності між групою, обробленою середовищем-носієм, і групою, обробленою сполукою (значущі: 7), аналізували за допомогою непарного ї-критерію. Значення Р«0,05 вважали статистично значущим. Статистичні аналізи проводили із застосуванням СгарпРай Ргізт версії 7.02.

Результати представлені у таблицях 5 і 6.

Таблиця 5

Число СПАТ-позитивних | Число СПАТ-позитивних

Число СПАТ-позитивних - о : : о .

Приклад клітин (95) під час клітин (о) у групі з клітин (Ус) у групі з Й введенням середовища- | введенням тестованої початкового введення : носія сполуки 59,946,0 43,3212,3 79,1215,7 57,057,5 38,4ж5,0 74,19, 35

Таблиця 6

ОО гіпокампального ОО гіпокампального ОО гіпокампального о ї о ї

Приклад МАСНТ (95) під час МАСНТ (Об) у групі з МАСНТ (95) у групі з Й введенням середовища- | введенням тестованої початкового введення : носія сполуки

Claims (1)

1. 35,44 4 22,8:9,5 77251465 51,72413,1 19,526,4 66,1214,27 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 10 1. Сполука, вибрана з групи, що складається з: З-фтор-6,11-диметил-б6,7,10,11,12,13- гексагідробензо|піридо(4", 3" 45 гієно|2',374,5|піримідо|1,2-а|(1,4діазепін-5,14-діону: Е (в) е--М / М Ж Й ря М М х (І) 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3":4,5гієно|(2,374,5|піримідо|1,2-а)гієно|2,3- ЦОИ1,4|діазепін-4,13-діону: Ум о 5 шт --- й М о х (1) 5,10-диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4",3":4",57тгієно(2',374,5|піримідо|1,2-а)гієноїЇ3,2- ПІ1,4діазепін-4,13-діону: о 85 шт ШОН й М о ; (11) (За5,14а8)-5,10-диметил-3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5тгієно|(2',3:4,5|піримідо/1,2-а|11,4)діазепін-4,13-(2Н,14анН)діону:

   "жна --і т с / М Ж Й М М, ; (М) (ЗанН,14ан)-5,10-диметил-3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5тгієно|(2',3:4,5|піримідо/1,2-а|11,4)діазепін-4,13-(2Н,14анН)діону: о: Ше и / М Ж Й 5 М М ; (М) 5 та (За5,14а5)-5,10-диметил-3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо|4",3":4",5тгієно|(2',3:4,5|піримідо/1,2-а|11,4)діазепін-4,13-(2Н,14анН)діону: о - - м ї / М Ж Й 5 М М ; (МІ) або її фармацевтично прийнятна сіль.

   2. З-Фтор-6,11-диметил-6б,7,10,11,12,13- гексагідробензо|Чпіридо(4", 3" 45 гієно(2',374,5|піримідо|1,2-а1(11,4|діазепін-5,14-діон або його фармацевтично прийнятна сіль: Е (в) те--М / М Ж Й 5 М М х (1).

   3. 5,10-Диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4", 374, 5гієно|2',374,5|Іпіримідо|1,2-а)гієної|2,3- ПІ ,4)діазепін-4,13-діон або його фармацевтично прийнятна сіль: й-ЬИимх о 5 шт ШОН й М Ж Й -- х (1)

   4. 5,10-Диметил-5,6,9,10,11,12-гексагідропіридо|4", 374, 5гієно|2',374,5|Іпіримідо|1,2-а)гієноїЇ3,2- ЧІИ1,4)діазепін-4,13-діон або його фармацевтично прийнятна сіль:

   о 5 -м п / М Ж Й й М М (ПП).

   5. (За5,14аН)-5,10-диметил-3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н,14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль: "жна --і т с / М Ж Й ря 5 М М, 5 (ІМ).

   б. (ЗанН,14ан)-5,10-диметил-З3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н,14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль: о: Шк и / М Ж Й ря 5 М М

   (М).

   7. (За5,14а5)-5,10-диметил-З3,За,5,6,9,10,11,12-октагідро-1 Н- циклопента|Чпіридо(4", 3": 45 гієно|2',3:4,5|піримідо(1,2-а1(11,4|діазепін-4,13-(2Н,14аН)діон або його фармацевтично прийнятна сіль: о - Шш- с / М Ж Й й 5 М М (МІ).

   8. Фармацевтична композиція, яка містить сполуку або її фармацевтично прийнятну сіль за будь-яким із пп. 1-7 і одну або декілька фармацевтично прийнятних добавок.