CN111051316A

CN111051316A - 五环化合物

Info

Publication number: CN111051316A
Application number: CN201880053052.1A
Authority: CN
Inventors: 大桥芳章; 乘岭吉彦; 星川环; 吉田融; 小林义久; 佐藤信裕; 萩原幸司
Original assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 2017-09-07
Filing date: 2018-09-05
Publication date: 2020-04-21
Anticipated expiration: 2038-09-05
Also published as: RS62796B1; WO2019049869A1; IL272652A; JP6557441B1; PT3680243T; RU2754557C1; SI3680243T1; EP3680243A4; KR20200051585A; HRP20220019T1; DK3680243T3; TWI707859B; CY1125355T1; HUE056791T2; AU2018330578A1; MX2020001786A; ZA202000970B; ES2903172T3; MD3680243T2; EP3680243A1

Abstract

本发明提供了由式(I)至(VI)表示的化合物或其药学上可接受的盐：

Description

五环化合物

技术领域

本发明涉及一种具有胆碱能神经元活化作用和/或神经保护作用的五环化合物或其药学上可接受的盐、及其药物用途。本发明还涉及包含以上化合物作为活性成分的药物组合物。

背景技术

释放乙酰胆碱作为递质的胆碱能神经元在前脑中从基底前脑的Meynert基底核和隔核广泛投射到海马体、杏仁核、和大脑皮层中，并且参与记忆、学习、认知、和注意力的调节(非专利文献1)。此外，脑干的脑桥脚被盖核和背外侧被盖核中的胆碱能神经元被投射在纹状体、伏隔核、黑质和丘脑中，并被认为参与控制动机和警觉(非专利文献2至4)。

具体地，已经通过使用许多动物模型(如损伤模型)进行分析，更加阐明了胆碱能神经元在基底前脑中的作用。特别地，胆碱能神经元机能障碍与记忆和学习下降之间的相关性已经显示于动物模型中(非专利文献5至7)，并且已经显示通过使用胆碱酯酶抑制剂增加乙酰胆碱的量以及增强胆碱能神经元的功能，改善了认知表现(非专利文献8至12)。

据报道，神经生长因子(NGF)在表现出胆碱能神经元的缺失的动物模型中显示对胆碱能神经元的神经保护作用。(非专利文献13至15)。

特别是对于阿尔茨海默病(AD)，从AD的早期发现胆碱能神经元的缺失，并且其是AD的病理特征之一。由淀粉样蛋白β的沉积而造成的老年斑的积累和由τ蛋白聚集造成的神经原纤维缠结也是AD的病理特征，并且特别地已知神经原纤维缠结随着疾病状态的进展而增加并且引起神经元死亡。神经原纤维缠结在来自AD早期的Meynert基底核和内嗅皮层中发现。其中，据报道，早期发现τ蛋白聚集导致Meynert基底核中胆碱能神经元的缺失，并且认知功能评分的丧失与降低之间存在相关性(非专利文献16和17)。与AD类似，在具有P301S突变的经基因修饰的小鼠中发现τ蛋白的高度磷酸化和异常积累，所述P301S突变已在家族性额颞叶痴呆(人τP301S转基因小鼠)中发现。因此，形成神经原纤维缠结(AD的病理特征)(非专利文献18)并且通过突触损伤、神经变性和神经元的缺失引起认知功能障碍。基于这些发现，人τP301S转基因小鼠被广泛用作AD样动物模型(非专利文献19-22)，并且通过抑制人τP301S转基因小鼠中的AD样病变可以预期阿尔茨海默病中认知衰退的改善和疾病状态进展的抑制。

此外，使用经基因修饰的小鼠和障碍的动物模型进行的多重分析表明轴突运输缺陷是胆碱能神经元缺失的原因之一(非专利文献23-25)。其中，从隔区向海马体投射的胆碱能神经元的轴突在穹窿海马伞损伤模型中受损，并且涉及存活和功能的分子的逆向运输受损引起神经元缺失(非专利文献26-28)。在经基因修饰的小鼠中也发现了逆向运输的损伤(非专利文献23和24)，并且由穹窿海马伞损伤造成的胆碱能神经元的缺失反映了疾病状态的一个方面。因此，通过在该障碍模型中抑制或改善胆碱能神经元的缺失可以预期阿尔茨海默病中认知衰退的改善和疾病状态进展的抑制。

路易体痴呆(DLB)和帕金森病(PD)是进行性神经退行性障碍，其中主要由α突触核蛋白组成的异常包涵体(路易体)出现在神经元中并引起神经元的变性和缺失。如果路易体主要分布在大脑皮层中，则会导致认知功能障碍进展，并且如果路易体主要分布在脑干中，则会导致帕金森症进展。除此之外，还会导致精神症状，例如幻视、幻觉和妄想、睡眠障碍和自主症状进展。如果痴呆出现在帕金森症发作之前或之后一年内，则诊断为路易体痴呆，并且如果帕金森症在痴呆发作前一年或更长时间出现，则诊断为帕金森病痴呆(PDD)。路易体痴呆、帕金森病痴呆和帕金森病是病理相同的疾病，并且综合称为路易体病(LBD)，尽管这些在认知功能障碍以及帕金森症的出现顺序和程度上是不同的。在路易体痴呆和帕金森病痴呆中，与阿尔茨海默病类似，Meynert基底核(胆碱能神经起源的核)的神经元退化并缺失，并且据报道，海马体和皮层中出现严重的胆碱能神经元障碍(非专利文献29-31)。此外，胆碱能神经元障碍的进展与认知功能障碍之间存在相关性(非专利文献29)，并且已经证明胆碱酯酶抑制剂可改善认知功能。基于这些发现，认知功能通过改善胆碱能神经元的功能而得到改善，并且与阿尔茨海默病类似，通过抑制或改善若干种障碍模型中胆碱能神经元的缺失可以预期路易体痴呆和帕金森病痴呆中认知衰退的改善和疾病状态进展的抑制。

因此，基于这些发现，对由胆碱能神经元机能障碍引起的认知表现的下降的改善可以通过在临床实践中实现对胆碱能神经元的功能性活化和/或神经保护作用来预期。

除了以上疾病，还已经报道了在认知功能降低与胆碱能神经元机能障碍之间存在关联的疾病的实例，包括亨廷顿氏舞蹈病、唐氏综合征、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、重性抑郁、精神***症等。

引证文献清单

非专利文献

[非专利文献1]Everitt BJ et al.″Central cholinergic systems andcognition.″Annu.Rev.Psychol.48(1997)649-684.

[非专利文献2]Gulledge AT.et al.″Cholinergic inhibition of neocorticalpyramidal neurons.″J.Neurosci.25(2005)10308-20.

[非专利文献3]Daniel Dautan D.et al.″A major external source ofcholinergic innervation of the striatum and nucleus accumbens originates inthe brainstem.″J.Neurosci.34(2014)4509-18.

[非专利文献4]M Steriade M.et al.″Neuronal activities in brain-stemcholinergic nuclei related to tonic activation processes in thalamocorticalsystems.″J.Neurosci.10(1990)2541-59.

[非专利文献5]Fischer W.et al.″Progressive decline in spatial learningand integrity of forebrain cholinergic neurons in rats during aging.″Neurobiol.Aging 13(1992)9-23.

[非专利文献6]Leanza G.et al.″Selective lesioning of the basalforebrain cholinergic system by intraventricular 192IgG-saporin：behavioural，biochemical and stereological studies in the rat.″Eur.J.Neurosci.7(1995)329-43.

[非专利文献7]Leanza G.et al.″Selective immunolesioning of the basalforebrain cholinergic system disrupts short-term memory in rats.″Eur.J.Neurosci.8(1996)1535-44.

[非专利文献8]Ogura H.et al.″Donepezil，a centrally actingacetylcholinesterase inhibitor，alleviates learning deficits inhypocholinergic models in rats.″Methods Find Exp Clin Pharmacol.22(2000)89-95.

[非专利文献9]Spowart-Manning L.et al.″Spatial discrimination deficitsby excitotoxic lesions in the Morris water escape task.″Behav Brain Res.156(2005)269-76.

[非专利文献10]Bruce AP.et al.″Choline acetyltransferase activity andcognitive domain score of Alzheimer′s patients.″Neurobiol.Aging.21(2000)11-17.

[非专利文献11]Rogers SL.et al.″The efficacy and safety of donepezilin patients with Alzheimer’s disease：results of a US Multicentre，Randomized，Double-Blind，Placebo-Controlled Trial.The Donepezil Study Group.″Dementia.7(1996)293-303.

[非专利文献12]Mori E.et al.″Donepezil for dementia with Lewy bodies：arandomized，placebo-controlled trial.″Ann Neurol.72(2012)41-52.

[非专利文献13]Mufson EJ.et al.″Human cholinergic basal forebrain：chemoanatomy and neurologic dysfunction.″J.Chem.Neuroanat.26(2003)233-242.

[非专利文献14]Mufson EJ.et al.″Cholinergic system during theprogression of Alzheimer’s disease：therapeutic implication.″Expert.Rev.Neurother.8(2008)1703-1718.

[非专利文献15]Schliebs R.et al.″The significance of the cholinergicsystem in the brain during aging and in Alzheimer’s disease.″J.Neural.Transm113(2006)1625-1644.

[非专利文献16]Vana L et al.″Progression of tau pathology incholinergic Basal forebrain neurons in mild cognitive impairment andAlzheimer’s disease.″Am J Pathol.179(2011)2533-2550.

[非专利文献17]Gómez-Isla T et al.″Neuronal loss correlates with butexceeds neurofibrillary tangles in Alzheimer’s disease.″Ann Neurol.41(1997)17-24.

[非专利文献18]Lee VM et al.″Neurodegenerative tauopathies.″Annu.Rev.Neurosci.24(2001)1121-1159.

[非专利文献19]Allen B et al.″Abundant tau filaments and nonapoptoticneurodegeneration in transgenic mice expressing human P301S tau protein.″J.Neurosci.22(2002)9340-9351.

[非专利文献20]Xu H et al.″Memory deficits correlate with tau andspine pathology in P301S MAPT trarnsgenic mice.″Neuropathol.Appl.Neurobiol.40(2014)833-43.

[非专利文献21]Yoshiyama Y et al.″Synapse loss and microglialactivation precede tangles in a P301S tauopathy mouse model.″Neuron.53(2007)337-351.

[非专利文献22]Hoffmann NA et al.″Impaired plasticity of corticaldendritic spines in P301S tau transgenic mice.″Acta Neuropathol Commun.1(2013)82.

[非专利文献23]Salehi A et al.″Increased App Expression in a MouseModel of Down’s Syndrome Disrupts NGF Transport and Causes Cholinergic NeuronDegeneration″Neuron 51(2006)29-42.

[非专利文献24]Onishi T et al.″Early-onset cognitive deficits andaxonal transport dysfunction inP301S mutant tau transgenic mice″NeuroscienceResearch 80(2014)76-85.

[非专利文献25]Xu W et al.″Amyloid precursor protein-mediatedendocytic pathway disruption induces axonal dysfunction andneurodegeneration″J.Clin.Invest.126(2016)1815-33.

[非专利文献26]Lapchak PA et al.″Effect of recombinant human nervegrowth factor on presynaptic cholinergic function in rat hippocampal slicesfollowing partial septohippocampal lesions：measures of[³H]acetylcholinesynthesis，[³H]acetylcholine release and choline acetyltransferase activity″Neuroscience 42(1991)639-49.

[非专利文献27]Gilmor ML et al.″Coordinate expression of the vesicularacetylcholine transporter and choline acetyltransferase followingseptohippocampal pathway lesions″J.Neurochem.71(1998)2411-20.

[非专利文献28]Gu H et al.″Recombinant human NGF-loaded microspherespromote survival of basal forebrain cholinergic neurons and improve memoryimpairments of spatial learning in the rat model of Alzheimer’s disease withfimbria-fornix lesion″Neurosci.Lett.453(2009)204-9.

[非专利文献29]Shimada，H.et al.，″Mapping of brain acetylcholinesterasealterations in Lewy body disease by PET″Neurology，vol.73，pp.273-278，2009.

[非专利文献30]Tiraboschi，P.et al.，″Cholinergic dysfunction indiseases with Lewy bodies″Neurology 54(2000)407-411.

[非专利文献31]Perry，E.K.et.al.，″Neocortical cholinergic activitiesdifferentiate Lewy body dementia from classical Alzheimer’s disease″，NeuroReport，vol.5，PP.747-749(1994).

发明内容

技术问题

本发明的一个目标是提供一种具有胆碱能神经元活化作用和/或神经保护作用以及具有用于阿尔茨海默病、路易体痴呆和帕金森病痴呆的治疗剂的潜在应用的化合物或其药学上可接受的盐。

问题的解决方案

作为解决上述问题的广泛研究的结果，本发明的诸位发明人找到了一种具有胆碱能神经元活化作用和或神经保护作用的五环化合物或其药学上可接受的盐。

即，本发明涉及以下<1>至<26>。

<1>一种化合物或其药学上可接受的盐，该化合物选自由以下组成的组：

3-氟-6，11-二甲基-6，7，10，11，12，13-六氢苯并[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-5，14-二酮：

5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[2，3-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮：

5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[3，2-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮：

(3aS，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮：

(3aR，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮：

以及

(3aS，14aS)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮：

<2>3-氟-6，11-二甲基-6，7，10，11，12，13-六氢苯并[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-5，14-二酮或其药学上可接受的盐：

<3>5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[2，3-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮或其药学上可接受的盐：

<4>5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[3，2-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮或其药学上可接受的盐：

<5>(3aS，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

<6>(3aR，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

<7>(3aS，14aS)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

<8>一种药物组合物，该药物组合物包含根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的添加剂。

<9-1>根据<8>所述的药物组合物，该药物组合物是一种神经元活化剂。

<9-2>根据<8>所述的药物组合物，该药物组合物是一种神经元保护剂。

<10>根据<8>所述的药物组合物，用于治疗认知功能障碍。

<11>一种针对认知功能障碍的治疗剂，该治疗剂包含根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<12>一种治疗认知功能障碍的方法，该方法包括向患者给予根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<13>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗认知功能障碍。

<14>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于认知功能障碍的治疗剂。

<15>一种针对阿尔茨海默病的治疗剂，该治疗剂包含根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<16>一种治疗阿尔茨海默病的方法，该方法包括向患者给予根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<17>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗阿尔茨海默病。

<18>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于阿尔茨海默病的治疗剂。

<19>一种针对路易体痴呆的治疗剂，该治疗剂包含根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<20>一种治疗路易体痴呆的方法，该方法包括向患者给予根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<21>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗路易体痴呆。

<22>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于路易体痴呆的治疗剂。

<23>一种针对帕金森病痴呆的治疗剂，该治疗剂包含根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<24>一种治疗帕金森病痴呆的方法，该方法包括向患者给予根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

<25>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗帕金森病痴呆。

<26>根据<1>至<7>中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制造用于帕金森病痴呆的治疗剂。

发明的有利效果

根据本发明的式(I)至(VI)所示的五环化合物(下文称为“化合物(I)至(VI)”)或其药学上可接受的盐具有神经元活化作用和/或神经保护作用，如在稍后提供的药理学测试实例中的活性数据中所显示的。本发明的化合物(I)至(VI)导致由于其神经元活化和/或神经保护作用所造成的认知表现的改善，并且因此具有作为用于阿尔茨海默病、路易体痴呆和帕金森病痴呆的治疗剂的潜在用途。

具体实施方式

下文将详细地描述本发明的内容。

在本说明书中，为方便起见，这些化合物的结构式可表示特定异构体；然而，本发明可以包括旋转异构体和互变异构体连同异构混合物，不限于为了方便起见所描述的化学式，并且可以是任何异构体或含有任何比例的异构体的混合物。

此外，还可能存在多态晶体；然而，本发明也不限于它们中的任何一个，并且可以是单晶型或其混合物。此外，本发明还包括非晶形形式，并且根据本发明的化合物包括脱水物和溶剂化物(特别是水合物)。

本发明还包括化合物(I)至(VI)的同位素标记的化合物。同位素标记的化合物与化合物(I)至(VI)相同，除了一个或多个原子被具有不同于通常在自然界中发现的那些的原子质量或质量数的一个或多个原子所代替。可以合并到本发明的化合物的同位素的实例包括以下同位素：氢、碳、氮、氧、氟、磷、硫、碘和氯，并且具体地包括²H、³H、¹¹C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁸F、³²P、³⁵S、¹²³I、¹²⁵I等。

以上同位素标记的化合物，例如其中掺入了放射性同位素(如³H和/或¹⁴C)的化合物，可用于进行药物和/或底物的组织分布测定。³H和¹⁴C因其容易制备和检测而被认为可用。同位素¹¹C和¹⁸F被认为可用于PET(正电子发射断层扫描)，同位素¹²⁵I被认为可用于SPECT(单光子发射计算机化断层扫描)，并且所有这些同位素都可用于脑成像。被更重的同位素(如²H)代替导致一些类型的治疗优势，包括体内半衰期增加或由于更高的代谢稳定性导致的所需剂量降低，并且因此被认为在某些情形下是有用的。可以通过执行以下实例中披露的程序，使用容易使用的同位素标记的试剂代替没有用同位素标记的试剂，来类似地制备以上同位素标记的化合物。

本说明书中的“药学上可接受的盐”没有特别限制，只要它们是用根据本发明的化合物形成的盐，并且具体实例包括酸加成盐，如无机酸盐、有机酸盐、和酸性氨基酸盐。

除非有任何特别限制性描述，本说明书中的“药学上可接受的盐”是以合适的比率形成的任何盐，并且形成的盐中的每个化合物的分子的酸分子的数目没有特别限制；然而，可优选的是，每个化合物的分子的酸分子的数目是约0.5至约2，并且更可优选的是，每个化合物的分子的酸分子的数目是约0.5、约1、或约2。

无机酸盐的可优选实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、以及磷酸盐；并且有机酸盐的可优选实例包括乙酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、硬脂酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、以及苯磺酸盐。

酸性氨基酸盐的可优选实例包括天冬氨酸盐和谷氨酸盐。

当根据本发明的化合物(I)至(VI)以游离形式获得时，它们可以根据常规方法转化成可以由化合物(I)至(VI)形成的盐或其水合物。

当根据本发明的化合物(I)至(VI)以化合物(I)至(VI)的盐或化合物(I)至(VI)的水合物获得时，它们可以根据常规方法转化成化合物(I)至(VI)的游离形式。

此外，获得自根据本发明的化合物(I)至(VI)的各种异构体(例如旋光异构体、旋转异构体、立体异构体等)可以通过一般分离手段被纯化和分离，如重结晶、非对映体盐方法、酶拆分方法、以及各种色谱技术(例如薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱法等)。

[药物制剂]

根据本发明的药物组合物可以通过将药学上可接受的添加剂与一种化合物混合来生产，该化合物选自化合物(I)至(VI)或其药学上可接受的盐的组。根据本发明的药物组合物可以通过已知方法来生产，例如，在Japanese Pharmacopoeia Seventeenth Edition[日本药典，第十七版]的General Rules for Preparations[制剂的通用规则]中所描述的方法。

根据本发明的药物组合物可以取决于其剂型适当地给予至患者。

根据本发明的化合物(I)至(VI)或其药学上可接受的盐的剂量取决于症状的严重性、年龄、性别、体重、剂型、盐的类型、疾病的具体类型、以及其他条件而变化；然而，一般而言，成年人每天口服给予的剂量是约30μg至10g，优选100μg至5g，并且更优选100μg至1g；成年人每天注射给予的剂量是约30μg至1g，优选100μg至500mg，并且更优选100μg至300mg；并且以上剂量被给予一次或若干次。

本发明的化合物可以作为用于捕获生物活性低分子量化合物的靶蛋白的化学探针来使用。这就是说，使用例如在J.Mass Spectrum.Soc.Jpn.Vol.51，No.5，2003，pp.492-498[日本质谱学会杂志，第51卷，第5期，2003年，第492-498页]、WO 2007/139149或类似文献中所描述的方法，通过将标记基团、连接物或类似物引入到与化合物的活性发展所必需的结构部分不同的部分中，可以将本发明的化合物转化为亲和色谱探针、光亲和探针等。

用于化学探针中的标记基团、连接物等的实例包括由以下(1)到(5)组成的组中所显示的基团：

(1)蛋白质标记基团，如光亲和标记基团(例如，苯甲酰基、二苯甲酮基、叠氮基、羰基叠氮基、二氮丙啶基、烯酮(enone)基、重氮基、硝基等)以及化学亲和基团(例如，其中α碳原子被卤素原子代替的酮基、氨基甲酰基、酯基、烷硫基、迈克尔受体如α，β-不饱和酮或酯、以及环氧乙烷基)；

(2)可裂解的连接物，如-S-S-、-O-Si-O-、单糖(葡萄糖基、半乳糖基等)，或二糖(乳糖等)；以及通过酶反应可裂解的寡肽连接物；

(3)采捕标签(fishing tag)基团，如生物素和3-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4H-3a，4a-二氮杂-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙酰基；

(4)放射性标记基团，如¹²⁵I、³²P、³H、和¹⁴C；荧光标记基团，如荧光素、罗丹明、丹酰、伞形酮、7-硝基呋咕基、以及3-(4，4-二氟-5，7-二甲基-4H-3a，4a-二氮杂-4-硼-s-苯并二茚-3-基)丙酰基；化学发光基团，如荧光素和鲁米诺；以及能够检测重金属离子(如镧系元素金属离子和镭离子)的标志物；或

(5)与固相载体附接的基团，这些固相载体如玻璃珠、玻璃床、微量滴定板、琼脂糖珠、琼脂糖床、聚苯乙烯珠、聚苯乙烯床、尼龙珠、以及尼龙床。

通过以上文献或类似文献中描述的方法，通过将选自由以上(1)至(5)组成的组中的标记基团引入本发明的化合物而制备的探针可以用作化学探针以鉴定可用于搜寻新颖的药物设计靶标等的标记蛋白。

实例

本发明的化合物(I)至(VI)可以通过例如以下实例中所描述的方法来生产，并且这些化合物的效果可以通过以下测试实例中所描述的方法来确认。然而，这些仅是实例，并且本发明无论如何不限于以下具体实例并且可以在不偏离本发明范围的范围内被修改。

用文献名等描述的化合物表示这些化合物是根据这些文献等生产的。

此外，本说明书中使用的缩写是本领域技术人员熟知且常见的。在本说明书中，使用以下缩写。

DCE：1，2-二氯乙烷

DCM：二氯甲烷

DIPEA：N，N-二异丙基乙胺

DMT-MM：4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉鎓氯化物

DMSO：二甲亚砜

EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐

HATU：O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐

HOBT：1-羟基苯并***

n-：正

NMM：N-甲基吗啉

t-：叔

TBD：1，3，4，6，7，8-六氢-2H-嘧啶并[1，2-a]嘧啶

TBME：叔丁基甲醚

TEA：三乙胺

THF：四氢呋喃

¹H-NMR：质子核磁共振光谱测定法

MS：质谱法

HPLC：高效液相色谱法

以下实例和生产实例中的术语“室温”通常是指约10℃至约35℃。除非另外说明，％是指重量百分数。

质子核磁共振光谱中的化学位移以相对于四甲基硅烷的δ单位(ppm)表示，并且偶联常数以赫兹(Hz)记录。将图谱指定为s：单峰，d：双峰，t：三重峰，q：四重峰，m：多重峰，br：宽峰，br.s：宽单峰。

对于化合物的光学拆分，使用由拜泰齐公司(Biotage)生产的Parallex Flex^TM(柱：由大赛璐公司(DAICEL)生产的

AD-H，IA、IB和IC中的一个；以及由大赛璐公司生产的

OD-H和OJ-H)。

在使用生产实例、参考实例、以及实例中的微波反应器的反应中，使用由拜泰齐公司生产的Initiator^TM或Initiator+^TM。

对于色谱法，作为硅胶，使用由默克公司(Merck)生产的硅胶60(70-230目或230-400目ASTM)或由富士硅化学有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)生产的PSQ60B，或使用预填充柱{柱：由山善株式会社(YAMAZEN)生产的Hi-Flash(TM)柱(硅胶)，尺寸：S(16x60mm)、M(20x75mm)、L(26x100mm)、2L(26x150mm)、和3L(46x130mm)中的一个；或使用由拜泰齐公司生产的Biotage(TM)SNAP Ultra Silica柱体，尺寸：10g、25g、和50g中的一个}。

作为NH硅胶，使用由富士硅化学有限公司(Fuji Silysia Chemical Ltd.)生产的CHROMATOREX NH-DM2035，或使用预填充柱{柱：山善株式会社(YAMAZEN)生产的Hi-Flash(TM)柱(Amino)，尺寸：S(16x60mm)、M(20x75mm)、L(26x100mm)、2L(26x150mm)、和3L(46x130mm)中的一个；或使用由和光纯药工业株式会社(Wako Pure ChemicalIndustries，Ltd.)生产的Presep(TM)(Luer Lock)NH2(HC)，尺寸：M型(14g/25mL)、L型(34g/70mL)、2L型(50g/100mL)、和3L型(110g/200mL)中的一个}。

作为以下所示化合物的名称，除了通常使用的试剂之外，使用“E-Notebook[E-手册]”第12版(珀金埃尔默公司(PerkinElmer))中所示的那些。

产生实例1

乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯的合成

在室温下，将TEA(61.6mL，442mmol)添加到1-甲基-4-哌啶酮(CAS号1445-73-4)(51.5mL，442mmol)、氰乙酸乙酯(CAS号105-56-6)(47.2mL，442mmol)、硫(CAS No.7704-34-9)(14.2g，442mmol)和乙醇(800mL)的混合物中。将反应混合物在40℃搅拌15小时，并且然后在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(NH硅胶，乙酸乙酯)进行纯化。将获得的浓缩残余物用乙酸乙酯进行研磨。通过过滤收集沉淀物，用乙酸乙酯洗涤，并且在减压下干燥，以产生标题化合物(58.4g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.33(t，J＝7.0Hz，3H)，2.44(s，3H)，2.62-2.70(m，2H)，2.79-2.88(m，2H)，3.37(t，J＝2.0Hz，2H)，4.26(q，J＝7.3Hz，2H)，5.97(br.s，2H)。

MS(ESI)m/z：241[M+H]⁺

产生实例2

7-氟-4-甲基-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

在室温下，将肌氨酸(CAS号107-97-1)(5.16g，58.0mmol)添加到6-氟-1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(CAS号321-69-7)(10.0g，55.2mmol)在吡啶(100mL)中的溶液中，并且将反应混合物在100℃搅拌8小时。将该反应混合物冷却至室温。通过过滤收集沉淀物并且用二***洗涤。将获得的固体在减压下干燥，以产生标题化合物(5.34g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：3.30(s，3H)，3.90(s，2H)，6.97(dd，J＝8.8，4.5Hz，1H)，7.20(ddd，J＝8.6，7.6，2.9Hz，1H)，7.67(dd，J＝9.0，3.1Hz，1H)，7.99(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：209[M+H]⁺

产生实例3

4-甲基-3，4-二氢-1H-噻吩并[3，2-e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

将1H，2H，4H-噻吩并[3，2-d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(CAS号78756-28-2)(300mg，1.77mmol)、肌氨酸(395mg，4.43mmol)和水(10mL)的混合物在回流下加热2小时。将该反应混合物冷却至0℃。通过过滤收集沉淀物，并且顺序地用水和二***进行洗涤。将获得的固体在减压下干燥，以产生标题化合物(165mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：3.24(s，3H)，4.00(s，2H)，6.72(d，J＝5.3Hz，1H)，7.52(d，J＝5.3Hz，1H)，7.96(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：197[M+H]⁺

产生实例4

4-甲基-3，4-二氢-1H-噻吩并[2，3-e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

将1H，2H，4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-2，4-二酮(CAS号103979-54-0)(600mg，3.55mmol)添加到肌氨酸(790mg，8.87mmol)在水(12mL)中的溶液中。将该反应混合物在回流下加热1.5小时。将该反应混合物冷却至室温。将氯仿添加到该反应混合物中，并且将有机层分离。将水层用氯仿(两次)和乙酸乙酯(3次)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并且过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将获得的固体进行干燥，以产生标题化合物(430mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：3.23(s，3H)，3.99(s，2H)，6.90(d，J＝5.9Hz，1H)，7.29(d，J＝5.7Hz，1H)，8.39(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：197[M+H]⁺

产生实例5

(5aS，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

(1)甲基2-((1S，2R)-2-((叔丁氢基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯的合成

在冰冷却下，将TEA(22.2mL，159mmol)、HOBT/一水合物(11.7g，76.3mmol)和EDC(14.6g，76.3mmol)顺序地添加到(1S，2R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)环戊烷-1-甲酸(CAS号137170-89-9)(14.6g，63.6mmol)、肌氨酸甲酯盐酸盐(CAS号13515-93-0)(10.7g，76.3mmol)和THF(150mL)的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌15小时之后，添加乙酸乙酯和水，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层顺序地用饱和碳酸氢钠水性溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将获得的残余物通过柱色谱法(硅胶，25％-30％乙酸乙酯/正庚烷)纯化两次，以产生标题化合物(16.1g)。

MS(ESI)m/z：337[M+Na]⁺

(2)(5aS，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

在冰冷却下，将4N氯化氢/1，4-二噁烷溶液(160mL，640mmol)添加到甲基2-((1S，2R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯(16.1g，51.3mmol)中。将反应混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后在室温下搅拌45分钟，并且在减压下浓缩。在水冷却下，将TBD(8.57g，61.6mmol)添加到残余物在甲醇(130ml)中的溶液中。在水冷却下，将反应混合物搅拌3小时，并且然后冷却至0℃。将所得固体通过过滤收集，用冰冷却的甲醇洗涤3次，并且在减压下干燥以产生标题化合物(5.22g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.41-1.59(m，2H)，1.78-1.98(m，2H)，2.00-2.15(m，1H)，2.36-2.53(m，1H)，3.08(s，3H)，3.18-3.32(m，1H)，3.49(dd，J＝15.5，1.7Hz，1H)，3.91-4.04(m，1H)，4.51(d，J＝15.4Hz，1H)，5.54(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：183[M+H]⁺

产生实例6

(5aR，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

(1)叔丁基2-((1R，2R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯的合成

在室温下，将DIPEA(1.81mL，10.5mmol)和HATU(1.99g，5.23mmol)顺序地添加到(1R，2R)-叔丁氧基羰基-2-氨基环戊烷甲酸(CAS号245115-25-7)(1.00g，4.36mmol)、肌氨酸叔丁酯盐酸盐(CAS号136088-69-2)(872mg，4.80mmol)、和DCM(10mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，并且然后通过柱色谱法(硅胶，30％-50％乙酸乙酯/正庚烷)直接纯化，以产生标题化合物(1.61g)。

MS(ESI)m/z：357[M+H]⁺

(2)(5aR，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

在室温下，将4N氯化氢/1，4-二噁烷溶液(16mL，64mmol)添加到叔2-((1R，2R)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯(1.61g，4.52mmol)中，并且将混合物搅拌20小时。将该反应混合物在减压下浓缩。在室温下，将碳酸氢钠(0.911g，10.8mmol)、甲醇(24mL)、NMM(0.099mL，0.90mmol)、和DMT-MM(12.3％H₂O，1.80g，5.70mmol)顺序地添加到残余物中，并且将混合物搅拌20小时。将该反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物用DCM洗涤。将经洗涤的液体在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法(硅胶，5％-20％甲醇/乙酸乙酯)进行纯化，以产生标题化合物(745mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.56-1.88(m，3H)，1.91-2.02(m，1H)，2.13-2.23(m，1H)，2.26-2.39(m，1H)，3.07(s，3H)，3.08-3.16(m，1H)，3.51-3.62(m，1H)，3.79(d，J＝18.0Hz，1H)，4.58(d，J＝18.0Hz，1H)，6.76(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：183[M+H]⁺

产生实例7

(5aS，8aS)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

(1)叔丁基2-((1S，2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯的合成

在室温下，将HATU(1.99g，5.23mmol)添加到(1S，2S)-叔丁氧基羰基-2-氨基环戊烷甲酸(CAS号143679-80-5)(1.00g，4.36mmol)、肌氨酸叔丁酯盐酸盐(872mg，4.80mmol)、DIPEA(1.81mL，10.5mmol)、和DCM(10mL)的混合物中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并且然后通过柱色谱法(硅胶，30％-50％乙酸乙酯/正庚烷)直接纯化，以产生标题化合物(1.55g)。

MS(ESI)m/z：357[M+H]⁺

(2)(5aS，8aS)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮的合成

在室温下，将4N氯化氢/1，4-二噁烷溶液(16mL，64mmol)添加到叔丁基2-((1S，2S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-N-甲基环戊烷甲酰胺)乙酸酯(1.55g，4.35mmol)中，并且将混合物搅拌16小时。将该反应混合物在减压下浓缩。在室温下，将碳酸氢钠(0.877g，10.4mmol)、甲醇(24mL)、NMM(0.096mL，0.87mmol)、和DMT-MM(12.3％H₂O，1.73g，5.48mmol)顺序地添加到残余物中，并且将混合物搅拌3小时。将该反应混合物在减压下浓缩，并且将残余物用DCM洗涤。将经洗涤的液体在减压下浓缩，并且将残余物通过柱色谱法(硅胶，0％-20％甲醇/乙酸乙酯)进行纯化，以产生标题化合物(753mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.55-1.88(m，3H)，1.91-2.02(m，1H)，2.11-2.22(m，1H)，2.25-2.40(m，1H)，3.07(s，3H)，3.07-3.16(m，1H)，3.51-3.62(m，1H)，3.78(d，J＝18.0Hz，1H)，4.57(d，J＝18.0Hz，1H)，6.54(br.s，1H)。

MS(ESI)m/z：183[M+H]⁺

实例1

3-氟-6，11-二甲基-6，7，10，11，12，13-六氢苯并[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并 [2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-5，14-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(4.65mL，49.9mmol)添加到在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(6.00g，25.0mmol)、在生产实例2中获得的7-氟-4-甲基-3，4-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(5.20g，25.0mmol)、和DCE(300mL)的混合物中。将该反应混合物在80℃下搅拌20小时。在冰冷却下搅拌的同时，将乙醇钠(在乙醇中的20％溶液，80mL，207mmol)添加到反应混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌20分钟。将饱和碳酸氢钠水性溶液和乙酸乙酯添加到该反应混合物中，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层经硫酸镁干燥，并且过滤，并却将滤液在减压下浓缩。将残余物顺序地通过柱色谱法(NH硅胶，50％-100％乙酸乙酯/正庚烷)和柱色谱法(硅胶，0-50％甲醇/乙酸乙酯)进行纯化。将获得的固体用TBME研磨，并且通过过滤收集沉淀物。将获得的固体用TBME洗涤并且在减压下干燥以产生标题化合物(4.56g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：2.51(s，3H)，2.66-2.76(m，1H)，2.77-2.88(m，1H)，3.04-3.18(m，2H)，3.25(s，3H)，3.57-3.75(m，2H)，4.09(d，J＝15.2Hz，1H)，4.47(d，J＝14.8Hz，1H)，7.25-7.31(m，1H)，7.60-7.64(m，1H)，7.67(dd，J＝9.0，4.7Hz，1H)。

MS(ESI)m/z：385[M+H]⁺

实例2

5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[2，3-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(0.157mL，1.68mmol)添加到在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(303mg，1.26mmol)、在生产实例3中获得的4-甲基-3，4-二氢-1H-噻吩并[3，2-e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(165mg，0.841mmol)、和1，4-二噁烷(10mL)的混合物中。将反应混合物在70℃搅拌2小时，并且然后在90℃搅拌5小时。将乙醇钠(在乙醇中的20％溶液，2.60mL，6.73mmol)添加到冷却至室温的该反应混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌40分钟。将乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水性溶液添加到该反应混合物中，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，50％甲醇/乙酸乙酯)进行纯化，以产生标题化合物(90.0mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：2.51(s，3H)，2.66-2.87(m，2H)，3.07-3.20(m，2H)，3.26(s，3H)，3.56-3.74(m，2H)，4.21(d，J＝15.0Hz，1H)，4.56(d，J＝15.0Hz，1H)，7.54(d，J＝5.3Hz，1H)，7.59(d，J＝5.3Hz，1H)。

MS(ESI)m/z：373[M+H]⁺

实例3

5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[3，2-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(1.43mL，15.3mmol)添加到在生产实例4中获得的4-甲基-3，4-二氢-1H-噻吩并[2，3-e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(1.00g，5.10mmol)、在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(1.84g，7.64mmol)、和1，4-二噁烷(30mL)的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌5分钟，并且在90℃搅拌2小时。经5分钟，将乙醇钠(在乙醇中的20％溶液，21.7mL，56.1mmol)添加到冷却至室温的该反应混合物中。在室温下将该反应混合物搅拌1.5小时。将乙酸乙酯、饱和碳酸氢钠水性溶液、和水顺序地添加到该反应混合物中，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸镁干燥，并且过滤，并且将滤液在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(硅胶，20％-50％甲醇/乙酸乙酯)进行纯化。将获得的固体用乙醇研磨，并且通过过滤收集沉淀物。将获得的固体用乙醇洗涤并且在减压下干燥以产生标题化合物(712mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：2.52(s，3H)，2.71-2.87(m，2H)，3.05-3.30(m，5H)，3.59-3.75(m，2H)，4.23(d，J＝14.8Hz，1H)，4.57(d，J＝14.8Hz，1H)，7.35(d，J＝6.2Hz，1H)，7.39(d，J＝5.9Hz，1H)。

MS(ESI)m/z：373[M+H]⁺

实例4

(3aS，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″， 3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(7.93mL，85.1mmol)添加到在生产实例5-(2)中获得的(5aS，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(3.10g，17.0mmol)、在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(8.18g，34.0mmol)、和DCE(300mL)的混合物中。将该反应混合物在80℃下搅拌14.5小时。在0℃下，将饱和碳酸氢钠水性溶液添加到该反应混合物中，将混合物在室温下搅拌3.5小时，并且然后将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层顺序地用饱和碳酸氢钠水性溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤，并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(NH硅胶，30％-60％乙酸乙酯/正庚烷)进行纯化。将获得的浓缩残余物用TBME研磨，并且通过过滤收集沉淀物。将获得的固体用TBME洗涤3次并且在减压下干燥以产生标题化合物(3.70g)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.51-1.73(m，2H)，1.94-2.18(m，2H)，2.30-2.41(m，1H)，2.44-2.59(m，4H)，2.71-2.82(m，2H)，3.04-3.19(m，5H)，3.42-3.54(m，1H)，3.64(s，2H)，4.17(d，J＝15.6Hz，1H)，4.75(d，J＝15.6Hz，1H)，5.69-5.82(m，1H)。

MS(ESI)m/z：359[M+H]⁺比旋光度：[α]_D ²⁰-146.0(c 0.50，CHCl₃)

通过HPLC进行分析：

(分析条件)柱：CHIRALPAK IB(由大赛璐化学工业有限公司(Daicel ChemicalIndustries，Ltd.)生产)(0.46cm

x15cm)，40℃，洗脱液：乙醇/己烷＝20/80(v/v)，流速：1ml/min.，检测：UV(254nm)。

(分析结果)当在以上分析条件下分析该标题化合物时，保留时间为10.38分钟，光学纯度为＞98％ee，并且旋光度为(-)。通过使用外消旋混合物作为起始材料类似地合成的产物确认了对映体的保留时间。

实例5

(3aR，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″， 3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(0.793mL，8.51mmol)添加到在生产实例6-(2)中获得的(5aR，8aR)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(310mg，1.70mmol)、在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(613mg，2.55mmol)、和DCE(16mL)的混合物中。将该反应混合物在70℃搅拌2.5小时，并且然后恢复到室温，并且添加乙酸乙酯(15mL)和饱和碳酸氢钠水性溶液(30mL)。将反应混合物在室温下搅拌5天，添加乙酸乙酯，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(NH硅胶，50％-70％乙酸乙酯/正庚烷)进行纯化。将获得产物用二***洗涤3次，然后用TBME洗涤，并且在减压下干燥，以产生标题化合物(143mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.29-1.49(m，1H)，1.68-1.83(m，1H)，1.82-2.21(m，3H)，2.50(s，3H)，2.76(t，J＝5.7Hz，2H)，2.98-3.23(m，6H)，3.40-3.54(m，1H)，3.57-3.68(m，2H)，4.17-4.34(m，2H)，5.30(d，J＝17.4Hz，1H)。

MS(ESI)m/z：359[M+H]⁺

通过HPLC进行分析：

(分析条件)柱：CHIRALPAK IC(由大赛璐化学工业有限公司(Daicel ChemicalIndustries，Ltd.)生产)(0.46cm

x15cm)，40℃，洗脱液：乙醇，流速：1mL/min.，检测：UV(254nm)

(分析结果)该标题化合物的保留时间为6.64分钟，光学纯度为>99％ee，并且旋光度为(-)。

实例6

(3aS，14aS)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″， 3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮的合成

在室温下，将三氯氧磷(0.859mL，9.22mmol)添加到在生产实例7-(2)中获得的(5aS，8aS)-4-甲基八氢环戊[e][1，4]二氮杂卓-2，5-二酮(336mg，1.84mmol)、在生产实例1中获得的乙基2-氨基-6-甲基-4，5，6，7-四氢噻吩并[2，3-c]吡啶-3-甲酸酯(665mg，2.77mmol)、和DCE(17mL)的混合物中。将该反应混合物在60℃搅拌3.5小时，并且然后恢复到室温。将乙酸乙酯(15mL)和饱和碳酸氢钠水性溶液(30mL)添加至反应混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌5天之后，添加乙酸乙酯，并且将有机层分离。用乙酸乙酯萃取水层。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过柱色谱法(NH硅胶，40％-80％乙酸乙酯/正庚烷)进行纯化。将获得的产物用二***洗涤3次，并且在减压下干燥，以产生标题化合物(166mg)。

¹H-NMR(400MHz，CDCl₃)δ(ppm)：1.31-1.50(m，1H)，1.69-1.83(m，1H)，1.84-1.97(m，1H)，1.97-2.20(m，2H)，2.50(s，3H)，2.73-2.80(m，2H)，3.02-3.23(m，6H)，3.41-3.55(m，1H)，3.57-3.69(m，2H)，4.19-4.34(m，2H)，5.30(d，J＝17.2Hz，1H)。

MS(ESI)m/z：359[M+H]⁺

x15cm)，40℃，洗脱液：乙醇，流速：1mL/min.，检测：UV(254nm)

(分析结果)该标题化合物的保留时间为8.34分钟，光学纯度为＞99％ee，并且旋光度为(+)。

药理学测试实例

使用实例1至6的化合物进行以下药理学测试。

在NGF存在下测量大鼠原代隔区神经元培养***中乙酰胆碱(ACh)的释放

(1)大鼠原代隔区神经元培养

从胎龄18天的斯普拉格-道利(Sprague-Dawley，SD)大鼠(查尔斯河实验室日本公司(Charles River Laboratories Japan，Inc.))中分离隔区，并且培养。具体地，在异氟烷麻醉下，将胎儿无菌地从妊娠大鼠中取出。从每个胎儿中提取大脑，并且浸入冰冷却的L-15培养基(11415-064，赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific))中。在立体显微镜下，从提取的大脑解剖出隔区。在37℃下，使解剖的隔区在含有0.25％胰蛋白酶(15050-065，赛默飞世尔科技公司)和0.01％DNA酶(D5025-150KU，西格玛公司)的酶溶液中经受酶处理持续30分钟，从而使细胞分散。在这种情况下，通过添加灭活的马血清(26050-088，赛默飞世尔科技公司)来终止该酶反应。将酶处理的溶液以1000rpm离心3分钟，并且去除上清液。将10mL的量的培养基添加到获得的细胞团块中。所使用的培养基为补充有N2补充剂(17502-048，赛默飞世尔科技公司)、1mM丙酮酸钠(11360-070，赛默飞世尔科技公司)和青霉素-链霉素(15140-1221，赛默飞世尔科技公司)的杜氏改良的伊格尔氏培养基(044-29765，和光公司(WAKO))。通过轻柔移液使添加该培养基的细胞团块的细胞再分散，并且然后以1000rpm再离心3分钟，并且去除上清液。将10mL的量的培养基添加到获得的细胞团块中，并且通过40μm尼龙网(细胞过滤网)过滤细胞分散液以去除细胞团块，从而获得神经元细胞悬浮液。用培养基稀释神经元细胞悬浮液，并且添加10％灭活牛血清(26140-079，赛默飞世尔科技公司)和10％灭活马血清。此后，将100μL/孔的悬浮液接种在预涂有聚-D-赖氨酸的96孔板(354461，康宁公司(CORNING))中，使得初始培养密度为1.4x105个细胞/cm²。在将接种的细胞在37℃培养箱中在5％CO₂-95％空气下培养2天之后，用120μL新鲜培养基代替整个培养基，并且随后培养细胞持续5天。

(2)化合物添加

在培养的第7天，以下列方式添加化合物。用培养基稀释测试化合物在DMSO中的溶液，使得浓度比最终浓度高10倍。以0.3ng/mL制备NGF(450-01，派普泰克公司(PEPRO TECH，INC.))。将这两种溶液各自以15μL/孔的量添加，并且将混合物充分混合。最终的DMSO浓度为0.1％或更低。此外，仅将DMSO和NGF添加到对照组中。

(3)ACh释放测量

在化合物添加后一天，通过HPLC以下列方式测量ACh释放量。在消除培养基之后，将温热的缓冲液以100μL/孔添加到孔中，并且立即去除缓冲液。此后，以120μL/孔添加缓冲液，该缓冲液添加有10μM胆碱、10μM毒扁豆碱、和6mM KCl。该缓冲液通过添加125mM NaCl、25mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸、1.2mM KH₂PO₄、1.2mM MgSO₄、2.2mM CaCl₂(2H₂O)和10mM葡萄糖至灭菌水来制备，并且该溶液的最终pH设定为7.4。在将添加了缓冲液的96孔板在37℃培养箱中在5％CO₂-95％空气下孵育40分钟之后，收集80μL的缓冲液。将内标溶液IPHC(5x10^-7M)以6μL的量添加到收集的缓冲液中，并将缓冲液转移到用于HPLC测量的管中并且进行HPLC测量。结果通过各化合物的效果表示为对照组缓冲液中ACh浓度的百分比(对照的％)，并且显示比对照组缓冲液中ACh浓度增加20％的化合物浓度显示于以下表1中。

[表1]

大鼠隔区中胆碱乙酰基转移酶(ChAT)mRNA表达水平的测量

(1)化合物给予

在该研究中，使用体重为约250g至350g的SD雄性大鼠(查尔斯河实验室日本公司(Charles River Laboratories Japan，Inc.))。将化合物溶解在0.01mol/L盐酸中，并且口服给予。

(2)取样

在给予化合物后24小时，在戊巴比妥麻醉下收集全脑组织。在冰上从全脑分离内侧隔核并用液氮冷冻，并且然后在-80℃储存。

(3)ChAT mRNA表达水平的测量

对于RNA纯化，在该研究中使用RNeasy Plus迷你试剂盒(#74136：凯杰公司(QIAGEN))。通过该试剂盒中描述的方法进行RNA纯化。RNA纯化之后，通过使用QIAxpert仪器(凯杰公司)测量总RNA浓度。使用

VILO(TM)cDNA合成试剂盒(#11754：赛默飞世尔科技公司)合成cDNA。通过该试剂盒中描述的方法进行cDNA的合成。将合成的cDNA用无RNA酶的水稀释4倍，并且将稀释的cDNA溶液用作样品。将Taqman通用PCR预混合液(#4304437：赛默飞世尔科技公司)、

基因表达测定，INVENTORIED(#4331182：赛默飞世尔科技公司)、无RNA酶的水、以及该cDNA溶液各自以10μl、1μl、4μl、和5μl的量混合，并且将所得混合物用作测量样品溶液。通过荧光探针法，使用ABI

7900HT(赛默飞世尔科技公司)进行定量聚合酶链式反应(qPCR)。通过SDS 2.4(赛默飞世尔科技公司)进行分析。通过相比载体给予组中ChAT mRNA表达水平的量增加的化合物给予组中ChAT mRNA表达水平的量的百分比来计算结果。结果显示于下表2中。

[表2]

测量大鼠脑脊液(CSF)中的乙酰胆碱(ACh)

(1)背景

通过对啮齿动物的研究揭示了脑内神经递质的增加和减少与脑脊液(CSF)中神经递质的增加和减少之间的相关性，并且在人类中也观察到该相关性(Lowe S等人Psychopharmacology[精神药理学]219(2012)959-970)。因此，测量CSF中乙酰胆碱的变化以确定由测试化合物引起的脑内乙酰胆碱的变化。

(2)化合物给予

在该研究中，使用体重为约150g至250g的Fischer344雄性大鼠(查尔斯河实验室日本公司(Charles River Laboratories Japan，Inc.))。将测试化合物以10mg/kg每天一次口服给予大鼠，持续三天。所使用的载体是0.01mol/L的盐酸。

(3)取样

在给予载体和测试化合物后24小时，在戊巴比妥麻醉下，在含有AchE抑制剂的试管中从小脑延髓池收集CSF。在3500x g下在4℃将收集的CSF离心10分钟，并收集上清液。将收集的上清液用液氮冷冻，然后在-80℃储存。

(4)通过LC-MS测量Ach

向10μL的CSF中添加50μL的终浓度为0.34nmol/L的乙酰胆碱-d9氯化物(ACh-d9)作为内标。对混合物进行移液并在1200x g下在4℃离心10分钟。收集上清液并进行LC/MS(NexeraX2(MS)，TSQ Altis(HPLC))，并且Ach在m/z 146.050处被检测为前体离子且在m/z87.071处被检测为产物离子，并且ACh-d9作为内标在m/z155.088处被检测为前体离子且在m/z 87.000处被检测为产物离子。结果显示为相对于载体给予组中的百分比(对照的％)，测试化合物给予组中CSF中的ACh浓度增加的百分比的计算结果。结果示于表3中。

[表3]

评估人τP301S转基因小鼠

(1)化合物给予

在该研究中，每天一次将测试化合物口服给予人τP301S转基因小鼠，从四月龄至七月龄，持续三个月。所使用的载体是0.01mol/L的盐酸。

(2)取样

在给予的最初一天(四月龄)和最后一次给予的第二天，将载体给予组和测试化合物给予组的小鼠在戊巴比妥(50mg/kg，腹膜内给予)下麻醉并用PBS灌注。灌注后，收集包含内侧隔区的前脑并用4％多聚甲醛固定。

(3)制备脑冠状冷冻切片

将收集的包含内侧隔区的前脑浸入4％多聚甲醛中并振荡过夜。用7.5％蔗糖溶液替换该浸渍溶液。将其浸入7.5％蔗糖溶液中并振荡过夜，并用15％蔗糖溶液替换该浸渍溶液，并且将其浸入并振荡过夜。用30％蔗糖溶液替换该浸渍溶液，并将其浸入并振荡过夜。通过使用切片机(莱卡公司(Leica)，SM2000R)从包含内侧隔区的前脑制备具有30μm厚度的脑冠状冷冻切片。

(4)胆碱乙酰基转移酶(ChAT)阳性细胞的免疫组织化学

使用ChAT抗体(圣克鲁斯公司(Santa Cruz)，SC-20672)作为第一抗体，用DAB(DAB过氧化物酶底物试剂盒(维克多公司(Vector)，SK-4100))对制备的脑冠状冷冻切片进行染色。通过一体化荧光显微镜(基恩士公司(KEYENCE)，BZ-X710)拍摄包含内侧隔区的切片图像，如“The mouse Brain in stereotaxic coordinates[立体定位坐标中的小鼠的脑]”(COMPACT THIRD EDITION[合同第三版]，Keith B.J.Franklin&George Paxinos)中所示，并且通过BZ分析软件(基恩士公司)对内侧隔区长轴周围的ChAT阳性细胞进行计数。结果显示为载体给予组和测试化合物给予组中ChAT阳性细胞数相对于初次给予时(四月龄)的ChAT阳性细胞数的百分比。数据表示为平均值±SEM。通过非配对t检验来分析初次给予时的组与载体处理组之间的差异(显著性：*)，并且还通过非配对t检验来分析载体处理组和化合物处理组之间的差异(显著性：#)。P＜0.05的值被认为具有统计学意义。使用GraphPadPrism版本7.02进行统计学分析。结果示于表4中。

[表4]

使用穹窿海马伞损伤的大鼠模型，胆碱能神经元的神经保护和恢复作用

(1)制备穹窿海马伞损伤的大鼠模型

在该研究中，使用体重为约250g至350g的斯普拉格-道利雄性大鼠(查尔斯河实验室日本公司(Charles River Laboratories Japan，Inc.))。在三种药物：咪达***(2mg/kg，皮下)、盐酸美托咪定(0.15mg/kg，皮下)和酒石酸布托啡诺(2.5mg/kg，皮下)的组合下将大鼠进行麻醉，并用脑立体定向装置(成重有限公司(Narishige Co.，Ltd.))固定。暴露颅骨，并从前囟后侧2mm处的中线在头骨中钻出一个5mm宽的孔。将宽度为4mm的剃刀以5.5mm深度刺入前囟中以切割穹窿海马伞。止血后，缝合头皮。手术后，将大鼠带回笼中并使其从麻醉中恢复。在假手术组中，从前囟后侧2mm处的中线在头骨中钻出一个5mm宽的洞，但没有刺入剃刀。

(2)化合物给予

在手术后五天至九天(实例1：10mg/kg)或手术后七天至十四天(实例3：3mg/kg)，将测试化合物每天一次口服给予大鼠。所使用的载体是0.01mol/L的盐酸。在假手术组中，与测试化合物给予组类似地每天一次口服给予载体。

(3)取样

将大鼠在戊巴比妥下进行麻醉并用冰冷的PBS经心脏灌注。灌注后，收集包含内侧隔区的前脑并用4％多聚甲醛浸没并振荡过夜。用7.5％蔗糖溶液替换该浸渍溶液。将其浸入7.5％蔗糖溶液中并振荡过夜，并用15％蔗糖溶液替换该浸渍溶液，并且将其浸入并振荡过夜。用30％蔗糖溶液替换该浸渍溶液，并将其浸入并振荡过夜。通过使用切片机(莱卡公司(Leica)，SM2000R)从包含内侧隔区的前脑制备具有30μm厚度的脑冠状冷冻切片。

(4)胆碱乙酰基转移酶(ChAT)阳性细胞和囊泡乙酰胆碱转运蛋白(VAChT)的免疫组织化学

使用ChAT抗体(圣克鲁斯公司，SC-20672)或VAChT抗体(默克密理博公司(MerckMillipore)，ABN100)作为第一抗体，用DAB(DAB过氧化物酶底物试剂盒(维克多公司，SK-4100))对制备的脑冠状冷冻切片进行染色。通过一体化荧光显微镜(基恩士公司，BZ-X710)拍摄包含内侧隔区或海马体的切片图像，如“The mouse Brain in stereotaxiccoordinates[立体定位坐标中的小鼠的脑]”(COMPACT THIRD EDITION[合同第三版]，Keith B.J.Franklin&George Paxinos)中所示，并且通过BZ分析软件(基恩士公司)测量内侧隔区中的ChAT阳性细胞或海马体VAChT中的光密度(OD)。结果显示为载体给予组和测试化合物给予组中的内侧隔区中ChAT阳性细胞数或海马体VAChT中的OD相对于假手术组中的内侧隔区中ChAT阳性细胞数或海马体VAChT中的OD的百分比。数据表示为平均值±SEM。通过非配对t检验来分析载体处理组和化合物处理组之间的差异(显著性：#)。P＜0.05的值被认为具有统计学意义。使用GraphPad Prism版本7.02进行统计学分析。结果示于表5和6中。

[表5]

[表6]

Claims

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，该化合物选自由以下组成的组：

以及

2.3-氟-6，11-二甲基-6，7，10，11，12，13-六氢苯并[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-5，14-二酮或其药学上可接受的盐：

3.5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[2，3-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮或其药学上可接受的盐：

4.5，10-二甲基-5，6，9，10，11，12-六氢吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a]噻吩并[3，2-f][1，4]二氮杂卓-4，13-二酮或其药学上可接受的盐：

5.(3aS，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

6.(3aR，14aR)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

7.(3aS，14aS)-5，10-二甲基-3，3a，5，6，9，10，11，12-八氢-1H-环戊[f]吡啶并[4″，3″：4′，5′]噻吩并[2′，3′：4，5]嘧啶并[1，2-a][1，4]二氮杂卓-4，13(2H，14aH)-二酮或其药学上可接受的盐：

8.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、以及一种或多种药学上可接受的添加剂。

9.一种针对阿尔茨海默病的治疗剂，该治疗剂包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

10.一种治疗阿尔茨海默病的方法，该方法包括向患者给予根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。

11.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗阿尔茨海默病。

12.一种针对路易体痴呆的治疗剂，该治疗剂包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

13.一种治疗路易体痴呆的方法，该方法包括向患者给予根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。

14.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗路易体痴呆。

15.一种针对帕金森病痴呆的治疗剂，该治疗剂包含根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。

16.一种治疗帕金森病痴呆的方法，该方法包括向患者给予根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐。

17.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，用于治疗帕金森病痴呆。