UA119643C2 - Антисмисловий олігомер та кон'югат, направлений на пропротеїн конвертазу субтилізин/кексин типу 9 (pcsk9) - Google Patents
Антисмисловий олігомер та кон'югат, направлений на пропротеїн конвертазу субтилізин/кексин типу 9 (pcsk9) Download PDFInfo
- Publication number
- UA119643C2 UA119643C2 UAA201600243A UAA201600243A UA119643C2 UA 119643 C2 UA119643 C2 UA 119643C2 UA A201600243 A UAA201600243 A UA A201600243A UA A201600243 A UAA201600243 A UA A201600243A UA 119643 C2 UA119643 C2 UA 119643C2
- Authority
- UA
- Ukraine
- Prior art keywords
- group
- oligomer
- conjugate
- nucleotides
- dna
- Prior art date
Links
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 title claims abstract description 51
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 363
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 295
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 164
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims abstract description 102
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims abstract description 70
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 55
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims abstract description 51
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 50
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 206010045261 Type IIa hyperlipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 40
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 claims abstract description 39
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 claims abstract description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 25
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 18
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 201000005577 familial hyperlipidemia Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 164
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 51
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 49
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 49
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 46
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 41
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 40
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 38
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 31
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 27
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 23
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 claims description 22
- 208000000563 Hyperlipoproteinemia Type II Diseases 0.000 claims description 21
- 201000001386 familial hypercholesterolemia Diseases 0.000 claims description 21
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 20
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 19
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 19
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 16
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 14
- 229940121710 HMGCoA reductase inhibitor Drugs 0.000 claims description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 201000001376 Familial Combined Hyperlipidemia Diseases 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 claims description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 2
- 241001387976 Pera Species 0.000 claims 2
- WLNBMPZUVDTASE-HXIISURNSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-amino-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal;sulfuric acid Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.O=C[C@H]([NH3+])[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO.O=C[C@H]([NH3+])[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO WLNBMPZUVDTASE-HXIISURNSA-N 0.000 claims 1
- CWPWAQJHDDRCKP-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-trimethyl-2-(2,4,6-trimethylphenyl)benzene Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1C1=C(C)C=C(C)C=C1C CWPWAQJHDDRCKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101100102516 Clonostachys rogersoniana vern gene Proteins 0.000 claims 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 claims 1
- 241000283014 Dama Species 0.000 claims 1
- NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN NVGBPTNZLWRQSY-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims 1
- 241001291562 Martes pennanti Species 0.000 claims 1
- 241000468053 Obodhiang virus Species 0.000 claims 1
- 241001424341 Tara spinosa Species 0.000 claims 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims 1
- 238000003870 depth resolved spectroscopy Methods 0.000 claims 1
- JNSGIVNNHKGGRU-JYRVWZFOSA-N diethoxyphosphinothioyl (2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetate Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC(=O)C(=N/OC)\C1=CSC(N)=N1 JNSGIVNNHKGGRU-JYRVWZFOSA-N 0.000 claims 1
- 208000009743 drug hypersensitivity syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 244000145841 kine Species 0.000 claims 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 claims 1
- 229910052754 neon Inorganic materials 0.000 claims 1
- GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N neon atom Chemical compound [Ne] GKAOGPIIYCISHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102100038955 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Human genes 0.000 abstract description 5
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 101001098868 Homo sapiens Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 abstract 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 145
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 129
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 124
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 82
- -1 cholesterol Chemical class 0.000 description 61
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 41
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 29
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 26
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 26
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 24
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 24
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 22
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 22
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 21
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 19
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 19
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 18
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 18
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 18
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 17
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 16
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 14
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 13
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 12
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000002256 galaktoses Chemical class 0.000 description 12
- 125000002743 phosphorus functional group Chemical group 0.000 description 12
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 11
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 11
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 11
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 11
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 10
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 10
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 9
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 9
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 9
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 9
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 8
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 8
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 8
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 8
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 8
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 8
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 8
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 8
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 8
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 8
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 7
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 7
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 7
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 7
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 7
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 6
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 6
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 6
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 6
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 6
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N methyl dihydrogen phosphate Chemical compound COP(O)(O)=O CAAULPUQFIIOTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 6
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 6
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 6
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 6
- OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N (22E)-(24xi)-24-methylcholesta-5,22-dien-3beta-ol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)C=CC(C)C(C)C)C1(C)CC2 OILXMJHPFNGGTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 7-Dehydrostigmasterol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CC(CC)C(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 OQMZNAMGEHIHNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N Lys-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WBSCNDJQPKSPII-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 5
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 5
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 5
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 5
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical group COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 4
- 125000004400 (C1-C12) alkyl group Chemical group 0.000 description 4
- 102000018616 Apolipoproteins B Human genes 0.000 description 4
- 108010027006 Apolipoproteins B Proteins 0.000 description 4
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 4
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 4
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 4
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 4
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 4
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 4
- 125000005699 methyleneoxy group Chemical group [H]C([H])([*:1])O[*:2] 0.000 description 4
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 4
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 4
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 4
- RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N (22E)-cholesta-5,7,22-trien-3beta-ol Natural products C1C(O)CCC2(C)C(CCC3(C(C(C)C=CCC(C)C)CCC33)C)C3=CC=C21 RQOCXCFLRBRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000006710 (C2-C12) alkenyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000006711 (C2-C12) alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000000882 C2-C6 alkenyl group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003601 C2-C6 alkynyl group Chemical group 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000003780 Clusterin Human genes 0.000 description 3
- 108090000197 Clusterin Proteins 0.000 description 3
- 101000616562 Danio rerio Sonic hedgehog protein A Proteins 0.000 description 3
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 3
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 3
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 102100034459 Hepatitis A virus cellular receptor 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710185991 Hepatitis A virus cellular receptor 1 homolog Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 3
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 3
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N alpha-cholestanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 QYIXCDOBOSTCEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 3
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 102000014823 calbindin Human genes 0.000 description 3
- 108060001061 calbindin Proteins 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 3
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 3
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 3
- DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N ergosterol Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H](CC[C@]3([C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]33)C)C3=CC=C21 DNVPQKQSNYMLRS-SOWFXMKYSA-N 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 3
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 3
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 3
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 3
- 150000003527 tetrahydropyrans Chemical class 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N (10S)-3c-Acetoxy-4.4.10r.13c.14t-pentamethyl-17c-((R)-1.5-dimethyl-hexen-(4)-yl)-(5tH)-Delta8-tetradecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren Natural products CC12CCC(OC(C)=O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C BQPPJGMMIYJVBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N (3beta,5alpha)-4,4-Dimethylcholesta-8,24-dien-3-ol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21 CHGIKSSZNBCNDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N (3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthrene-3-thiol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](S)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 QGVQZRDQPDLHHV-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 11-dehydrocorticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 FUFLCEKSBBHCMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 description 2
- XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 14alpha-methylzymosterol Natural products CC12CCC(O)CC1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C XYTLYKGXLMKYMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 2-aminopurine Chemical compound NC1=NC=C2N=CNC2=N1 MWBWWFOAEOYUST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBJGQJWNMZDFKL-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-7h-purin-6-amine Chemical compound NC1=NC(Cl)=NC2=C1NC=N2 HBJGQJWNMZDFKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 2
- FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-lanostan Natural products C1CC2C(C)(C)C(O)CCC2(C)C2C1C1(C)CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 FPTJELQXIUUCEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRNGLYHKYPNTEA-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumylcyclohexane-1-carboxylate Chemical compound NC1CCC(C(O)=O)CC1 DRNGLYHKYPNTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 5α-Androsterone Chemical compound C1[C@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 QGXBDMJGAMFCBF-HLUDHZFRSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 7h-purine-2,8-diamine Chemical compound NC1=NC=C2NC(N)=NC2=N1 VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 2
- 241001342895 Chorus Species 0.000 description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N Cortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 2
- MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N Cortisone Natural products O=C1CCC2(C)C3C(=O)CC(C)(C(CC4)(O)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 MFYSYFVPBJMHGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017788 Cydonia oblonga Nutrition 0.000 description 2
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 description 2
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 2
- 101150018489 DNA-C gene Proteins 0.000 description 2
- 235000008247 Echinochloa frumentacea Nutrition 0.000 description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 description 2
- QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N Etiocholanolone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC21 QGXBDMJGAMFCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N Gluanol Natural products CC(C)CC=CC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(O)C(C)(C)C4CC3 BKLIAINBCQPSOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710197836 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Proteins 0.000 description 2
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 2
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 2
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 2
- LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N Lanosterol Natural products CC(CCC=C(C)C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 LOPKHWOTGJIQLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 description 2
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091027974 Mature messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 2
- CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N Nerifoliol Natural products CC12CCC(O)C(C)(C)C1CCC1=C2CCC2(C)C(C(CCC=C(C)C)C)CCC21C CAHGCLMLTWQZNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000989950 Otolemur crassicaudatus Hemoglobin subunit alpha-A Proteins 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 240000004072 Panicum sumatrense Species 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001282135 Poromitra oscitans Species 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 101710180553 Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 Proteins 0.000 description 2
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N Tetrahydropyran Chemical compound C1CCOCC1 DHXVGJBLRPWPCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N UNPD88870 Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)=CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 HZYXFRGVBOPPNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N Vitamin D2 Natural products C1CCC2(C)C(C(C)C=CC(C)C(C)C)CCC2C1=CC=C1CC(O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010048232 Yawning Diseases 0.000 description 2
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940061641 androsterone Drugs 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N beta-Sitostanol Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCC(CC)C(C)C)C1(C)CC2 LGJMUZUPVCAVPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 2
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- QYIXCDOBOSTCEI-NWKZBHTNSA-N coprostanol Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-NWKZBHTNSA-N 0.000 description 2
- 229960004544 cortisone Drugs 0.000 description 2
- HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N cyprodinil Chemical compound N=1C(C)=CC(C2CC2)=NC=1NC1=CC=CC=C1 HAORKNGNJCEJBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 description 2
- RGLYKWWBQGJZGM-ISLYRVAYSA-N diethylstilbestrol Chemical compound C=1C=C(O)C=CC=1C(/CC)=C(\CC)C1=CC=C(O)C=C1 RGLYKWWBQGJZGM-ISLYRVAYSA-N 0.000 description 2
- 229960000452 diethylstilbestrol Drugs 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N dihydrolanosterol Natural products CC(C)CCCC(C)C1CCC2(C)C3=C(CCC12C)C4(C)CCC(C)(O)C(C)(C)C4CC3 QBSJHOGDIUQWTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002061 ergocalciferol Drugs 0.000 description 2
- 239000000686 essence Substances 0.000 description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 2
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 description 2
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 description 2
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000008275 galactosamines Chemical group 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002314 glycerols Chemical class 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 2
- 239000002471 hydroxymethylglutaryl coenzyme A reductase inhibitor Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 2
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940058690 lanosterol Drugs 0.000 description 2
- CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N lanosterol Chemical compound C([C@]12C)C[C@@H](O)C(C)(C)[C@H]1CCC1=C2CC[C@]2(C)[C@H]([C@H](CCC=C(C)C)C)CC[C@@]21C CAHGCLMLTWQZNJ-RGEKOYMOSA-N 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 2
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical compound CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 2
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 229940032091 stigmasterol Drugs 0.000 description 2
- HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N stigmasterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)/C=C/[C@@H](CC)C(C)C)[C@@]1(C)CC2 HCXVJBMSMIARIN-PHZDYDNGSA-N 0.000 description 2
- 235000016831 stigmasterol Nutrition 0.000 description 2
- BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N stigmasterol Natural products CCC(C=CC(C)C1CCCC2C3CC=C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(C)C BFDNMXAIBMJLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N vitamin D2 Chemical compound C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)/C=C/[C@H](C)C(C)C)=C\C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C MECHNRXZTMCUDQ-RKHKHRCZSA-N 0.000 description 2
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 2
- 239000011653 vitamin D2 Substances 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- DTOSIQBPPRVQHS-UHFFFAOYSA-N α-Linolenic acid Chemical compound CCC=CCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N (+)-borneol Chemical group C1C[C@@]2(C)[C@@H](O)C[C@@H]1C2(C)C DTGKSKDOIYIVQL-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJYXSKVOTDPOAT-LMVFSUKVSA-N (2r,3r,4r)-2-fluoro-3,4,5-trihydroxypentanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](F)C=O NJYXSKVOTDPOAT-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- AMNXBQPRODZJQR-DITALETJSA-N (2s)-2-cyclopentyl-2-[3-[(2,4-dimethylpyrido[2,3-b]indol-9-yl)methyl]phenyl]-n-[(1r)-2-hydroxy-1-phenylethyl]acetamide Chemical compound C1([C@@H](C=2C=CC=C(C=2)CN2C3=CC=CC=C3C3=C(C)C=C(N=C32)C)C(=O)N[C@@H](CO)C=2C=CC=CC=2)CCCC1 AMNXBQPRODZJQR-DITALETJSA-N 0.000 description 1
- RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O RRBGTUQJDFBWNN-MUGJNUQGSA-N 0.000 description 1
- ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M (3R,5S)-fluvastatin sodium Chemical compound [Na+].C12=CC=CC=C2N(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 ZGGHKIMDNBDHJB-NRFPMOEYSA-M 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N (5alpha)-cholestan-3beta-ol Chemical compound C([C@@H]1CC2)[C@@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]2(C)CC1 QYIXCDOBOSTCEI-QCYZZNICSA-N 0.000 description 1
- 125000000008 (C1-C10) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004642 (C1-C12) alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004169 (C1-C6) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole-4,5-dicarbonitrile Chemical compound N#CC=1N=CNC=1C#N XGDRLCRGKUCBQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTKUMLVTGQESJF-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihexoxytridecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCC(OCCCCCC)C(CO)OCCCCCC UTKUMLVTGQESJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOZKAJLKRJDJLL-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminotoluene Chemical group CC1=CC=C(N)C=C1N VOZKAJLKRJDJLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOORTMKYJOOIHM-UHFFFAOYSA-N 2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)-4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoic acid Chemical compound O=C1CCC(=O)N1C(C(=O)O)CCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O SOORTMKYJOOIHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTAKZNRDSPNOAU-UHFFFAOYSA-M 2-(chloromethyl)oxirane;hydron;prop-2-en-1-amine;n-prop-2-enyldecan-1-amine;trimethyl-[6-(prop-2-enylamino)hexyl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.[Cl-].NCC=C.ClCC1CO1.CCCCCCCCCCNCC=C.C[N+](C)(C)CCCCCCNCC=C VTAKZNRDSPNOAU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QUBNFZFTFXTLKH-UHFFFAOYSA-N 2-aminododecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(N)C(O)=O QUBNFZFTFXTLKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 2-cyanobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1C#N TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BKUKXOMYGPYFJJ-UHFFFAOYSA-N 2-ethylsulfanyl-1h-benzimidazole;hydrobromide Chemical group Br.C1=CC=C2NC(SCC)=NC2=C1 BKUKXOMYGPYFJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILPUOPPYSQEBNJ-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-2-phenoxypropanoic acid Chemical class OC(=O)C(C)(C)OC1=CC=CC=C1 ILPUOPPYSQEBNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 9-(5-phosphoribofuranosyl)-6-mercaptopurine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=S)=C2N=C1 ZKRFOXLVOKTUTA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009304 Acute Kidney Injury Diseases 0.000 description 1
- 235000001270 Allium sibiricum Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001053401 Arabidopsis thaliana Acid beta-fructofuranosidase 3, vacuolar Proteins 0.000 description 1
- XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N Atorvastatin Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-KAYWLYCHSA-N 0.000 description 1
- XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N Atorvastatin Natural products C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000566113 Branta sandvicensis Species 0.000 description 1
- QFEYMVZMBINZAX-UHFFFAOYSA-N C(CCCCC)C(C(C(O)CCCCCCCCCC)O)(O)CCCCCC Chemical group C(CCCCC)C(C(C(O)CCCCCCCCCC)O)(O)CCCCCC QFEYMVZMBINZAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004648 C2-C8 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004649 C2-C8 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006519 CCH3 Chemical group 0.000 description 1
- 101100310222 Caenorhabditis briggsae she-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 102100040428 Chitobiosyldiphosphodolichol beta-mannosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920001268 Cholestyramine Polymers 0.000 description 1
- 208000036086 Chromosome Duplication Diseases 0.000 description 1
- KPSRODZRAIWAKH-JTQLQIEISA-N Ciprofibrate Natural products C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1[C@H]1C(Cl)(Cl)C1 KPSRODZRAIWAKH-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- 229920002905 Colesevelam Polymers 0.000 description 1
- 229920002911 Colestipol Polymers 0.000 description 1
- 208000031288 Combined hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N D-Mannose-6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 125000000824 D-ribofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000012625 DNA intercalator Substances 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 102100035092 ER membrane protein complex subunit 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102100030013 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010093099 Endoribonucleases Proteins 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical group C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N Gemfibrozil Chemical compound CC1=CC=C(C)C(OCCCC(C)(C)C(O)=O)=C1 HEMJJKBWTPKOJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034951 Genetic Translocation Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000877400 Homo sapiens ER membrane protein complex subunit 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000702691 Homo sapiens Zinc finger protein SNAI1 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021711 Ileal sodium/bile acid cotransporter Human genes 0.000 description 1
- 241001580033 Imma Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100042271 Mus musculus Sema3b gene Proteins 0.000 description 1
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101000870363 Oryctolagus cuniculus Glutathione S-transferase Yc Proteins 0.000 description 1
- 101001035650 Otolemur crassicaudatus Hemoglobin subunit alpha-B Proteins 0.000 description 1
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 description 1
- 235000016787 Piper methysticum Nutrition 0.000 description 1
- 240000005546 Piper methysticum Species 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N Pravastatin Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 208000033626 Renal failure acute Diseases 0.000 description 1
- 206010062237 Renal impairment Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N SJ000286063 Natural products C12C(OC(=O)C(C)(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006614 SLC10A2 Proteins 0.000 description 1
- 206010041235 Snoring Diseases 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010031374 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010005246 Tissue Inhibitor of Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102000005876 Tissue Inhibitor of Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 235000018936 Vitellaria paradoxa Nutrition 0.000 description 1
- 102100030917 Zinc finger protein SNAI1 Human genes 0.000 description 1
- KNDHRUPPBXRELB-UHFFFAOYSA-M [4-[3-(4-ethylphenyl)butyl]phenyl]-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(CC)=CC=C1C(C)CCC1=CC=C([N+](C)(C)C)C=C1 KNDHRUPPBXRELB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 201000011040 acute kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 125000005073 adamantyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)* 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003158 alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical group C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000005122 aminoalkylamino group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002344 aminooxy group Chemical group [H]N([H])O[*] 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 150000001454 anthracenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000001458 anti-acid effect Effects 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940111121 antirheumatic drug quinolines Drugs 0.000 description 1
- 101150090235 aroB gene Proteins 0.000 description 1
- 125000005129 aryl carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005161 aryl oxy carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 229960005370 atorvastatin Drugs 0.000 description 1
- 125000000852 azido group Chemical group *N=[N+]=[N-] 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 229960000516 bezafibrate Drugs 0.000 description 1
- IIBYAHWJQTYFKB-UHFFFAOYSA-N bezafibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1CCNC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 IIBYAHWJQTYFKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 108091022863 bile acid binding Proteins 0.000 description 1
- 102000030904 bile acid binding Human genes 0.000 description 1
- 229920000080 bile acid sequestrant Polymers 0.000 description 1
- 230000008238 biochemical pathway Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 229960005110 cerivastatin Drugs 0.000 description 1
- SEERZIQQUAZTOL-ANMDKAQQSA-N cerivastatin Chemical compound COCC1=C(C(C)C)N=C(C(C)C)C(\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)=C1C1=CC=C(F)C=C1 SEERZIQQUAZTOL-ANMDKAQQSA-N 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N chloroform;phenol Chemical compound ClC(Cl)Cl.OC1=CC=CC=C1 YTRQFSDWAXHJCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N cholanoic acid Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]1(C)CC2 RPKLZQLYODPWTM-KBMWBBLPSA-N 0.000 description 1
- 230000001906 cholesterol absorption Effects 0.000 description 1
- 239000002812 cholic acid derivative Substances 0.000 description 1
- 150000001842 cholic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960002174 ciprofibrate Drugs 0.000 description 1
- KPSRODZRAIWAKH-UHFFFAOYSA-N ciprofibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(O)=O)=CC=C1C1C(Cl)(Cl)C1 KPSRODZRAIWAKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001214 clofibrate Drugs 0.000 description 1
- KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N clofibrate Chemical compound CCOC(=O)C(C)(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 KNHUKKLJHYUCFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035071 co-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229960000674 colesevelam hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N colestipol Chemical compound ClCC1CO1.NCCNCCNCCNCCN GMRWGQCZJGVHKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002577 colestipol hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 150000003983 crown ethers Chemical class 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 229960001767 dextrothyroxine Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-MDZDMXLPSA-N elaidic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-MDZDMXLPSA-N 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000009164 estrogen replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000720 eyelash Anatomy 0.000 description 1
- OLNTVTPDXPETLC-XPWALMASSA-N ezetimibe Chemical compound N1([C@@H]([C@H](C1=O)CC[C@H](O)C=1C=CC(F)=CC=1)C=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(F)C=C1 OLNTVTPDXPETLC-XPWALMASSA-N 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002194 fatty esters Chemical class 0.000 description 1
- 229960002297 fenofibrate Drugs 0.000 description 1
- YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N fenofibrate Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C(=O)OC(C)C)=CC=C1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 YMTINGFKWWXKFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940125753 fibrate Drugs 0.000 description 1
- 150000002220 fluorenes Chemical class 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229960003765 fluvastatin Drugs 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010230 functional analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002243 furanoses Chemical group 0.000 description 1
- 125000003843 furanosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 229960003627 gemfibrozil Drugs 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- CNKHSLKYRMDDNQ-UHFFFAOYSA-N halofenozide Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)N(C(C)(C)C)NC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CNKHSLKYRMDDNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 125000005223 heteroarylcarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005553 heteroaryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005226 heteroaryloxycarbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 239000011539 homogenization buffer Substances 0.000 description 1
- VDBLBOMHLNXRLR-UHFFFAOYSA-N hydrazinylphosphonous acid Chemical compound NNP(O)O VDBLBOMHLNXRLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000871 hypocholesterolemic effect Effects 0.000 description 1
- 229950005809 implitapide Drugs 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002537 isoquinolines Chemical class 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002634 lipophilic molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 1
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 description 1
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 description 1
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 125000002960 margaryl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 description 1
- 229940023607 myristic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000001196 nonadecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 1
- 150000002888 oleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid group Chemical group C(CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(=O)O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 1
- PBLZLIFKVPJDCO-UHFFFAOYSA-N omega-Aminododecanoic acid Natural products NCCCCCCCCCCCC(O)=O PBLZLIFKVPJDCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 description 1
- 125000001820 oxy group Chemical group [*:1]O[*:2] 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N palmitic acid group Chemical group C(CCCCCCCCCCCCCCC)(=O)O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002987 phenanthrenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000001644 phenoxazinyl group Chemical class C1(=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3NC12)* 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000003017 phosphorus Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000004032 porphyrins Chemical class 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960002965 pravastatin Drugs 0.000 description 1
- TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N pravastatin Chemical compound C1=C[C@H](C)[C@H](CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O)[C@H]2[C@@H](OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@H](O)C=C21 TUZYXOIXSAXUGO-PZAWKZKUSA-N 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N probucol Chemical compound C=1C(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=CC=1SC(C)(C)SC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 FYPMFJGVHOHGLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003912 probucol Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 210000005084 renal tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 229960000672 rosuvastatin Drugs 0.000 description 1
- BPRHUIZQVSMCRT-VEUZHWNKSA-N rosuvastatin Chemical compound CC(C)C1=NC(N(C)S(C)(=O)=O)=NC(C=2C=CC(F)=CC=2)=C1\C=C\[C@@H](O)C[C@@H](O)CC(O)=O BPRHUIZQVSMCRT-VEUZHWNKSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 231100000873 signs of neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229960002855 simvastatin Drugs 0.000 description 1
- RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N simvastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)C(C)(C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 RYMZZMVNJRMUDD-HGQWONQESA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- CYFLXLSBHQBMFT-UHFFFAOYSA-N sulfamoxole Chemical group O1C(C)=C(C)N=C1NS(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 CYFLXLSBHQBMFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 125000004962 sulfoxyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940065721 systemic for obstructive airway disease xanthines Drugs 0.000 description 1
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 1
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010061115 tetralysine Proteins 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- WJCNZQLZVWNLKY-UHFFFAOYSA-N thiabendazole Chemical compound S1C=NC(C=2NC3=CC=CC=C3N=2)=C1 WJCNZQLZVWNLKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000002948 undecyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 238000002562 urinalysis Methods 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/545—Heterocyclic compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/554—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being a steroid plant sterol, glycyrrhetic acid, enoxolone or bile acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
- C12N2310/3231—Chemical structure of the sugar modified ring structure having an additional ring, e.g. LNA, ENA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/34—Spatial arrangement of the modifications
- C12N2310/341—Gapmers, i.e. of the type ===---===
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/35—Nature of the modification
- C12N2310/351—Conjugate
- C12N2310/3515—Lipophilic moiety, e.g. cholesterol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/30—Production chemically synthesised
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Botany (AREA)
- Virology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Винахід стосується кон'югата антисмислового олігонуклеотиду, який містить антисмисловий олігомер з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини, де зазначений антисмисловий олігомер являє собою LNA гепмер і щонайменше одне кон'югатне угрупування, направлене на рецептор асіалоглікопротеїнів, ковалентно приєднане до олігомера. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, яка містить вказаний кон’югат, застосуванню кон’югата антисмислового нуклеотиду як лікарського засобу, такого як засіб для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, вибраного з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в PCSK9, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛПВЩ)/ліпопротеїнів низької щільності (ЛПНЩ), дисліпідемій, наприклад сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарної артеріальної хвороби (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС); та способу інгібування PCSK9 in vitro в клітині, експресуючій PCSK9.
Description
атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в РОБ5КОУ, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛОІВЩ)//ліпопротеїнів низької щільності (ЛІПНЩ), дисліпідемій, наприклад сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарної артеріальної хвороби (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС); та способу інгібування РОКУ /п
Ууйго в клітині, експресуючій РОБКОУ.
ОБЛАСТЬ ВИНАХОДУ
Даний винахід відноситься до олігомерних сполук та їх кон'югатів, направлених на мРНК пропротеїну конвертази субтилізин/кексин типу 9 (РСБКУ) в клітині, що призводить до пониженої експресії РСЗКУ. Зниження експресії РСЗКУ корисно для ряду захворювань, таких як гіперхолестеринемія і споріднені розлади.
ПОПЕРЕДНІЙ РІВЕНЬ ТЕХНІКИ
Пропротеїн конвертаза субтилізин/кексин типу 9 (РСЗКУ) став відомий як терапевтична мішень для зниження холестерину ліпопротеїнів низької щільності (холестерину ЛЛНЩ). РСОЗКО збільшує розпад рецептора ЛЛНЩ, що призводить в результаті до високого вмісту холестерину
ЛІИНЩ у індивідів з високою активністю РОКУ.
У статті Гіпапоїт еї аї., МоіІесшаг Тпегару (2012); 20 2, 376-381 описано два антисмислові нуклеотиди замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК), направлених на РОБКО, які забезпечують пролонговане зниження холестерину ЛІНЩ у нелюдиноподібних приматів після насичуючої дози (20 мг/кг) і чотирьох щотижневих підтримувальних доз (5 мг/кг). Вживані сполуки були 14- мер 5РО5001 (5ЕО ІО МО 1) і 13-мер 5РС4061. 5РОС5001 також розкрито в УМО 2011/009697.
Ефективність цих інгібіторів РОЗКОУО пов'язана з їх малою довжиною (Кгієед еї аї., МоїІесшіаг
Тпегару Мисівїс Асіаз (2012) 1, еб).
У МО 2007/146511 описані короткі біциклічні (ЗНК) гепмерні антисмислові олігонуклеотиди, які, очевидно, є ефективнішими і менш токсичнішими, ніж сполуки більшої довжини. Виявилось, що ілюстративні сполуки мають довжину 14 нуклеотидів (нт).
Згідно із статтею мап Роеїдеебві еї аї. (Атегісап Уошигпаї ої Кідпеу Різеазе, 2013 Осі; 62(4): 796-800) введення антисмислового олігонуклеотиду ЗНК 5РО5001 в клінічних випробуваннях на людині може привести в результаті до гострого ушкодження нирок.
Згідно з публікаціями ЕР 198438181, Зеїй еї а!., Мисівіс Асіа5 Зутровішт Зегіеєх 2008 Мо. 52 553-554 і Бмлау;7е еї аї., Мисієїс Асій Кезеагсп 2007, мо! 35, рр. 687-700 олігонуклеотиди ЗНК викликають значну гепатотоксичність у тварин. Згідно УМО 2007/146511 токсичності олігонуклеотидів ЗНК можна уникнути шляхом використання гепмерів ЗНК, настільки коротких, як 12-14 нуклеотидів у довжину. У ЕР 198438181 рекомендовано використання 6'-заміщених біциклічних нуклеотидів для зменшення гепатотоксичного потенціалу олігонуклеотидів ЗНК.
Згідно із статтею Надедогп еї аї., Мисіеіс Асі Тпегарешіс5 2013, гепатотоксичний потенціал антисмислового олігонуклеотиду можна передбачити на основі його послідовності і патерну модифікації.
Олігонуклеотидні кон'югати широко оцінювали на використання в малих інтерферуючих РНК (міР НК), де їх вважали істотними для одержання достатньої ефективності іп мімо. Наприклад,
УМО 2004/044141 відноситься до модифікованих олігомерних сполук, які модулюють генну експресію за допомогою біохімічного шляху РНК-інтерференції. Олігомерні сполуки включають одне або більше кон'югатних угрупувань, які можуть модифікувати або посилити фармакокінетичні і фармакодинамічні властивості приєднаної олігомерної сполуки.
У УМО 2012/083046 описано угрупування, що направляє фармакокінетичний модулятор кластера галактози, для мігРНК.
Навпаки, одноланцюгові антисмислові олігонуклеотиди зазвичай вводять терапевтично без кон'югації або включення в препарат. Основними тканинами-мішенями для антисмислових олігонуклеотидів є печінка і нирки, хоча широкий ряд інших тканин також доступний для антисмислового методу, включаючи лімфатичний вузол, селезінку і кістковий мозок.
МО 2005/086775 відноситься до направленого доставлення терапевтичних засобів в конкретні органи з використанням терапевтичного хімічного угрупування, відщеплюваного лінкера і міченого домена. Відщеплюваний лінкер може бути, наприклад, дисульфідною групою, пептидом або олігонуклеотидним доменом, що розщеплюється ферментом рестрикції.
МО 2011/126937 відноситься до направленого внутрішньоклітинного доставлення олігонуклеотидів за допомогою кон'югації з низькомолекулярними лігандами.
УМО 2009/025669 відноситься до полімерних (поліетиленгліколевих) лінкерів, що містять піридилдисульфідні угрупування. Див. також 2пао еї а!., Віосопіцдасе Спет. 2005 16 758-766.
У статті Спайіп еї аї.,, Віосопіпдагє Спет. 2005 16 827-836 описані модифіковані холестерином моно-, ди- і тетрамірні олігонуклеотиди, використовувані для включення антисмислових олігонуклеотидів в катіонні ліпосоми з одержанням дендримерної системи доставлення. Холестерин кон'югують з олігонуклеотидами за допомогою лізинового лінкера.
Інші нерозщеплювані холестеринові кон'югати використані для направлення міРнНК і антагомирів в печінку, див., наприклад, зоцї5спеск еї аї., Майшге 2004 мої. 432 173-178 і Кгтеїді еї аї., Маїште 2005 мої 438, 685-689. Виявлено, що для частково фосфоротіолованих міРНК і антагомирів застосування холестерину як направляючої молекули печінки істотно для активності іп мімо.
ОБ'ЄКТ ВИНАХОДУ
Таким чином, існує необхідність в антисмислових сполуках, направлених на РОБКУО, які є такими ж ефективними, як 5РОС5БО0О1, але мають понижений ризик токсичності, зокрема, понижену ниркову токсичність.
Згідно із даним винаходом ця мета досягнута шляхом ідентифікації нових послідовностей
РСОБКОУО людини, які частково ефективні для направлення з використанням антисмислового методу (5ЕО ІЮ МО 33 і 5БЕО ІЮ МО 34), а також більш довгих варіантів послідовності ЗРС5001, які зберігають значну ефективність або мають поліпшену ефективність в порівнянні з ЗРС5001 без проблем токсичності. Антисмислові нуклеотиди за винаходом можуть бути додатково вдосконалені шляхом застосування кон'югатів, для яких виявлено, що вони значно посилюють терапевтичний індекс антисмислових олігонуклеотидів ЗНК.
Сполуки за даним винаходом є сильними і нетоксичними інгібіторами РО5КО, корисними при лікуванні гіперхолестеринемії і споріднених розладів.
СУТЬ ВИНАХОДУ
Олігомер за винаходом може містити від 10 до 22, наприклад, від 12 до 18 нуклеотидів в довжину, які являють собою або а) послідовність з 10-16 суміжних нуклеотидів, яка комплементарна відповідній довжині ЗЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45, або Б) послідовність з 16 суміжних нуклеотидів, яка комплементарна відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 31.
У винаході запропонований кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, що містить олігомер, згідно з винаходом і щонайменше одне угрупування, що відрізняється від нуклеотиду або відрізняється від полінуклеотиду, ковалентно приєднане до олігомеру.
У винаході також запропоновано кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, олігомер (А), що містить, згідно з винаходом і щонайменше одне угрупування, що відрізняється від нуклеотиду або відрізняється від полінуклеотиду, ковалентно приєднане до олігомеру, (С), необов'язково за допомогою лінкерної ділянки (В та/або МУ), розташованої між безперервною нуклеотидною послідовністю олігомеру і кон'югатним угрупуванням.
У деяких овтіленнях у винаході також запропоновано кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, що містить олігомер з 10-22, наприклад, з 12-18 нуклеотидів в довжину, де олігомер містить а) послідовність з 10-16 суміжних нуклеотидів, яка комплементарна відповідній довжині ЗЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45 або Б) послідовність з 16 суміжних нуклеотидів, яка комплементарна відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮ МО 31.
У винаході також запропоновано сполуку, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 17, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23 і 24.
У винаході запропонована фармацевтична композиція, яка містить олігомер або кон'югат згідно з винаходом і фармацевтично прийнятний розчинник, носій, сіль або ад'ювант.
У винаході запропоновані олігомер або кон'югат або фармацевтична композиція згідно з винаходом, вживані як лікарський засіб, наприклад, для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в РОБКОУ, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛІПВщЩ)/у/ліпопротеїнів низької щільності (ЛЛНЩ), дисліпідемії, наприклад, сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарній артеріальній хворобі (КАХ) та ішемічній хворобі серця (ІХС).
У винаході запропоновано застосування олігомеру або кон'югата або фармацевтичної композиції за винаходом для одержання лікарського засобу для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в РОБКО, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛІПВщЩ)/у/ліпопротеїнів низької щільності (ЛЛНЩ), дисліпідемії, наприклад, сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарної артеріальної хворобі (КАХ) таішемічної хворобі серця (ІХС).
У винаході запропоновано спосіб лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в РОБКОУ, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛІИВЩ)/У/ліпопротеїнів низької щільності (ЛОНЩ), 60 дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарній артеріальній хворобі (КАХ) та ішемічній хворобі серця (ІХС).
У винаході запропоновано спосіб інгібування іп мімо або іп міго РСБКОУ в клітині, експресуючій РОЗКО, де спосіб включає введення олігомеру або кон'югата або фармацевтичної композиції згідно з винаходом в клітину так, щоб інгібувати РОЗКУ в клітині.
У винаході також запропоновано олігомер згідно з винаходом, такий як олігомер ЗНК, що містить ділянку з 10-22, наприклад, з 12-18, наприклад, 13, 14, 15, 16 або 17 суміжних нуклеозидів, зв'язаних фосфоротіоатним зв'язком (тобто ділянка А, яка в характерному випадку комплементарна відповідній ділянці послідовності-мішені, такої як 5ЕО ІЮ МО 46), і що додатково містить від 1 до б нуклеозидів ДНК, що примикає до олігомеру ЗНК, де міжнуклеозидні зв'язки між ДНК та/або нуклеозидом (нуклеозидами), що примикає до ДНК, фізіологічно лабільні, як і фосфодіефірні зв'язки. Такий олігомер ЗНК може знаходитися у формі кон'югата, як розкрито в цьому документі, або може бути, наприклад, проміжною сполукою для використання на наступній стадії кон'югації. При кон'югації кон'югат може, наприклад, бути або містити стерин, такий як холестерин або токоферол, або може бути або містити (не нуклеотидний) вуглевод, наприклад, кон'югат саїІМАс або інший кон'югат, як розкрито в цьому документі.
У винаході також запропоновано гепмерний олігомер, що містить щонайменше один нуклеотид СЕТ, такий як (5)-СЕТ, з 10-22, наприклад, 12-18, наприклад, 13, 14, 15, 16 або 17 нуклеотидів в довжину, який направлений (тобто має послідовність, комплементарну відповідній ділянці) на РОСБКУ людини.
КОРОТКИЙ ОПИС ГРАФІЧНИХ МАТЕРІАЛІВ
Фіг. 1: Приклади кон'югатів три-саіІМАс, які можна застосовувати. Кон'югати 1-4 ілюструють 4 відповідні угрупування кон'югатів саїІМАс, а кон'югати Та-4а відносяться до тих же кон'югатів з додатковим лінкерним угрупуванням (У), яке використовують для зшивання кон'югата з олігомером (ділянкою А або з біо-відщеплюваним лінкером, таким як ділянка В). Хвиляста лінія є ковалентним зв'язком з олігомером.
Фіг. 2: Приклади холестеринового і токоферольного кон'югатних угрупувань. Кон'югати 5а і ба відносяться до тих же кон'югатів з додатковим лінкерним угрупуванням (У), яке
Зо використовують для зшивання кон'югата з олігомером (ділянкою А або з біо-відщеплюваним лінкером, таким як ділянка В). Хвиляста лінія є ковалентним зв'язком з олігомером.
Фіг. З: Конкретні сполуки ЗНК. Бета-О-окси-ЗНК ідентифіковані надрядковим знаком (осКкей) після букви, підрядковий знак 5 є фосфоротіоатним зв'язком, надрядковим знаком Ме, передуючим заголовній букві С, позначає 5-метилцитозин-ЗНК, не-ЗНК нуклеотиди є нуклеотидуми ДНК (без надрядкового знаку І).
Фіг. 4: Приклади холестеринових кон'югатів сполук ЗНК. Бета-О-окси-ЗНК ідентифіковані надрядковим знаком "- (ІосКеа) після букви, підрядковий знак є є фосфоротіоатним зв'язком, надрядковим знаком Ме, передуючим заголовній букві С, позначає 5-метилцитозин-ЗНК, не-ЗНК нуклеотиди є нуклеотидуми ДНК (без надрядкового знаку І).
Фіг. 5: Приклади кон'югатів саіМмМАс сполук ЗНК. Кон'югати по суті відповідають Соп|2а на фігурі де хвиляста лінія замінена олігомером ЗНК. Бета-О-окси-ЗНК ідентифіковані надрядковим знаком - (ІосКеа) після букви, підрядковий знак 5 є фосфоротіоатним зв'язком, надрядковим знаком Ме, передуючим заголовній букві С, позначає 5-метилцитозин-ЗНК, не-ЗНК нуклеотиди є нуклеотидуми ДНК (без надрядкового знаку Г).
Фіг. БА: Детальна структура ЗЕО ІО МО 18.
Фіг. 58: Детальна структура ЗЕО ІО МО 19.
Фіг. 6: Приклад кон'югатної групи ЕАМ.
Фіг. 7: Кон'югати ЗНК-РАМ з розщеплюваними фосфодіефірними зв'язками і без них. Бета-О- окси-ЗНК ідентифіковані надрядковим знаком - (ІосКеа) після букви, підрядковий знак в є фосфоротіоатним зв'язком, надрядковим знаком Ме, передуючим заголовній букві С, позначає 5- метилцитозин-ЗНК, не-ЗНК нуклеотиди є нуклеотидуми ДНК (без надрядкового знаку І).
Фіг. 8: Гепмери проти РОКУ, ранжовані за активністю іп міїго.
Фіг. 9: Вибрані гепмери проти РОБКО, ранжовані за активністю іп міїго.
Фіг. 10: Активність вибраних сполук проти РОЗКУ іп міїго і обчислення ІСбо.
Фіг. 11: Дані АЇ Т іп мімо для вибраних кон'югатів проти РЕСЗКОУ.
Фіг. 12: Необмежуюча ілюстрація сполук за винаходом. Міжнуклеозидний зв'язок Ї може бути, наприклад, фосфодіефірним, фосфоротіоатним, фосфородитіоатним, боранофосфатним або метилфосфатним, наприклад, фосфодіефірним. РО є фосфодіефірним зв'язком. Сполука а) має ділянку В з однією ДНК (або РНК), де зв'язок між першою і другою ділянкою є Ро. бо Сполука Бр) має дві ДНК/РНК (таких як ДНК) нуклеозиду, пов'язаних фосфодіефірним зв'язком.
Сполука с) має три ДНК/РНК (таких як ДНК) нуклеозиду, пов'язаних фосфодіефірними зв'язками. У деяких втіленнях винаходу ділянка В може бути додатково подовжена додатковими фосфодіефірними ДНК/РНК (такими як нуклеозиди ДНК). Кон'югатна група (Магкеа Х, інакше в цьому документі ділянка С) проілюстрована на лівій стороні кожної сполуки (наприклад, холестерин, СаїІМАс, Соп)1-4, Та-4а і 5 або 6) і може бути необов'язково ковалентно приєднана до кінцевого нуклеозиду ділянки В за допомогою фосфорної нуклеозидної зв'язуючої групи, такої як фосфодіефірна, фосфоротіоатна, фосфородитіоатна, боранофосфатна або метилфосфатна, або може бути пов'язана за допомогою альтернативного зв'язку, наприклад, тіазольного зв'язку (див. І. в сполуках 4), е) і М.
Фіг. 13. Необмежуюча ілюстрація сполук за винаходом, де сполуки містять необов'язковий лінкер (У) між третьою (кон'югатною) ділянкою (Х) і другою ділянкою (ділянкою В).
Номенклатура така ж, як на фіг. 12. Відповідні лінкери розкриті в цьому документі і включають, наприклад, алкільні лінкери, наприклад, С6 лінкери. У сполуках а), Б) і с) лінкер між Х і ділянкою
В приєднаний до ділянки В за допомогою фосфорної нуклеозидної зв'язуючої групи, такої як фосфодіефірна, фосфоротіоатна, фосфородитіоатна, боранофосфатна або метилфосфатна, або може бути пов'язана за допомогою альтернативного зв'язку, наприклад, триазольного зв'язку (1). У цих сполуках Гі є міжнуклеозидним зв'язком між першою (А) і другою ділянками (В). Сполуки 4), е) і УЖ додатково містять лінкер (У) між ділянкою В і кон'югатною групою, і ділянка У може бути пов'язана з ділянкою В за допомогою, наприклад, фосфорної нуклеозидної зв'язуючої групи, такої як фосфодіефір, фосфоротіоат, фосфородитіоат, боранофосфат або метилфосфат, або в деяких втіленнях триазольного зв'язку. На додаток або альтернативно Х може бути активуючою групою або реакційною групою. Х може бути ковалентно приєднаний до ділянки В за допомогою фосфорної нуклеозидної зв'язуючої групи, такої як фосфодіефір, фосфоротіоат, фосфородитіоат, боранофосфат або метилфосфат, або може бути пов'язана за допомогою альтернативного зв'язку, наприклад, триазольного зв'язку.
Фіг. 14. Сайленсинг мРНК РОБ5КО кон'югатами з холестерином іп мімо. Мишам ін'єктували одноразову дозу 10 мг/кг некон'югованого антисмислового олігонуклеотиду ЗНК (540) або еквімолярні кількості антисмислових олігонуклеотидів ЗНК, кон'югованих з холестерином з різними лінкерами, і убивали на добу 1, 3, 7 і 10 після дозування. РНК виділяли з печінки і нирок
Зо і піддавали РОСБКОУ-специфічної кількісної полімеразної ланцюгової реакції із зворотною транскрипцією (ЗТ-ДПЛР) А. Кількісне визначення мРНК РСОБКУЗ із зразків печінки нормалізовано за ВАСТ і показано у вигляді відсотка середнього значення еквівалентних контролів з фізіологічним розчином В. Кількісне визначення мРНК РОБЗКУ із зразків нирок нормалізовано за
ВАСТ і показано у вигляді відсотка середнього значення еквівалентних контролів з фізіологічним розчином.
Фіг. 15. Експресія Кіт-1 з дослідження безпеки на щурах (див. Приклад 5).
Фіг. 16: РОБЗКУ в сироватці і холестерин ЛИНЩ в зразках від яванських макак, ін'єктованих чотири рази (одна ін'єкція/тиждень) 0,5 або 1,5 мг/кг/"тиждень ЗЕО ІО 2 і 18.
Фіг. 17. РОБЗКУ в сироватці і холестерин ЛІИНЩ в зразках від яванських макак, ін'єктованих чотири рази (одна ін'єкція/тиждень) 0,5 або 1,5 мг/кг/"тиждень ЗЕО І З і 19.
ВІДОМОСТІ, ЩО ПІДТВЕРДЖУЮТЬ МОЖЛИВІСТЬ ЗДІЙСНЕННЯ ВИНАХОДУ
Далі розкриті різні елементи винаходу під окремими заголовками. Зрозуміло, що для одержання сполуки за винаходом втілення винаходу з одного елементу можна комбінувати з втіленнями винаходу з інших елементів (наприклад, як проілюстровано на Фіг. 12 і 13).
Олігомер (ділянка А)
Термін "олігомер" або "олігонуклеотид" в контексті даного винаходу відноситься до молекули, утвореної за допомогою ковалентного зв'язку двох або більше нуклеотидів (тобто до олігонуклеотиду). У цьому документі окремий нуклеотид (ланка) може бути також позначений як мономер або ланка. У деяких втіленнях винаходу терміни "нуклеозид", "нуклеотид", "ланка" і "мономер" використовують взаємозамінно. Зрозуміло, що при посиланні послідовність з нуклеотидів або мономерів, на яку посилаються, є послідовність з основ, таких як А, Т, б, С або у.
Олігомер за винаходом може містити від 10 до 22, наприклад, від 12 до 22 нуклеотидів, наприклад, від 12 до 18 нуклеотидів в довжину. Олігомер містить або а) послідовність з 10-16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45, або р) послідовність з 16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 31.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить безперервну нуклеотидну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО 26, 27, 28, 29 і 44.
Сполука (наприклад, олігомер або кон'югат) за винаходом направлена на РОКУ і сама по собі здатна до знижуючої регуляції експресії або до інгібування РО5КО, такого як РОБКУ у людини або в клітині, експресуючій РОЗКОУ.
У деяких втіленнях винаходу міжнуклеозидні зв'язки послідовності з 10-16 суміжних нуклеотидів, комплементарній відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45, можуть бути фосфоротіоатними зв'язками.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить послідовність або складається з безперервної нуклеотидної послідовності, вибраної з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ї 40. В одному втіленні винаходу олігомер містить послідовність або складається з послідовності, вибраної з а) ЗЕО ІЮ МО 2 або 3, або 5) 5ЗЕО ІЮО МО 4, 5 або 6, або с) ЗЕО ІЮ МО 7 або 8, або 4) ЗЕО ІЮ МО 40.
У деяких втіленнях винаходу олігомер містить 10-16 нуклеозидів, зв'язаних фосфоротіоатним зв'язком.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить послідовність з щонайменше 10-16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45, або послідовність з 16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини ЗЕО І МО 31, де безперервна нуклеотидна послідовність містить аналоги нуклеотидів. Переважно аналоги нуклеотидів являють собою посилюючі спорідненість аналоги нуклеотидів.
У деяких втіленнях винаходу аналоги нуклеотидів є нуклеотидами з модифікованим цукром, такими як нуклеотиди з модифікованим цукром, незалежно або залежно вибрані з групи, що складається з: ланок замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК); ланок 2'-О-алкіл- РНК, ланок 2'-ОМе-
РНК, ланок 2'-аміно-ДНК і ланок 2'-фтор-ДНК.
У деяких втіленнях винаходу аналоги нуклеотидів містять або являють собою ланки замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК).
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить або являє собою гепмер, такий як гепмерний олігонуклеотид ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу гепмер утримує на кожній стороні (5'ї 3) сегмент-крило з аналогів нуклеотидів в кількості від 2 до 4, переважно аналогів ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить послідовність з 13, 14, 15 або 16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮО МО 33 або 34 або 45, або послідовність з 16 суміжних нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 31, і може необов'язково містити додаткові 1-6 нуклеотидів, які можуть утворювати або містити біорозщеплювану ділянку з нуклеотидів, таку як нуклеотидфосфатний лінкер. Доцільно ця біорозщеплювана ділянка з нуклеотидів утворена коротким фрагментом (наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6) з нуклеотидів, що являється фізіологічно лабільним. Це може бути досягнуто шляхом використання фосфодіефірних зв'язків з ДНК/РНК нуклеозидами, або, якщо його фізіологічна лабільність може зберігатися, можна використовувати інший нуклеозид.
Фізіологічну лабільність можна виміряти, використовуючи екстракт печінки, як проілюстровано в прикладі 6.
Олігомер за винаходом може, таким чином, складатися з послідовності з 10-16 суміжних нуклеотидів (нт) в довжину, комплементарної відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 33 або 34 або 45, або з послідовності з 16 суміжних нуклеотидів, комплементарною відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮ МО 31 (перша ділянка або ділянка А). Олігомер за винаходом може містити додаткову ділянку з нуклеотидів. У деяких втіленнях винаходу додаткову ділянку з нуклеотидів містить біорозщеплювану ділянку з нуклеотидів, таку як послідовність нуклеотидфосфатів (друга ділянка, ділянка В), яка може ковалентно зв'язувати ділянку А з ненуклеотидним угрупуванням, такою як кон'югатна група (третя ділянка або ділянка С). У деяких втіленнях винаходу безперервна нуклеотидна послідовність олігомеру за винаходом (ділянка А) ковалентно пов'язана безпосередньо з ділянкою С. У деяких втіленнях винаходу ділянка С є біорозщеплюваною.
Олігомер складається з послідовності або містить послідовність суміжних нуклеотидів з 12- 22, наприклад, з 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 нуклеотидів в довжину, наприклад, з 14-16 нуклеотидів в довжину, наприклад, з 15 або 16 нуклеотидів в довжину. Олігомер може, таким чином, відноситися до об'єднаної довжини ділянки А і ділянки В, наприклад, ділянки А (10-16 нт) і ділянки В (1-6 нт).
У різних втіленнях винаходу сполука за винаходом не містить РНК (ланок). У деяких втіленнях винаходу сполука згідно з винаходом, перша ділянка або перша і друга ділянки разом (наприклад, у вигляді єдиної безперервної нуклеотидної послідовності) є лінійною молекулою бо або синтезуються у вигляді лінійної молекули. Олігомер може, таким чином, бути одноланцюговою молекулою. У деяких втіленнях винаходу олігомер не містить короткі ділянки з, наприклад, щонайменше 3, 4 або 5 суміжних нуклеотидів, які комплементарні еквівалентним ділянкам в межах того ж олігомеру (тобто дуплексів). Олігомер в деяких втіленнях винаходу може бути не (по суті) дволанцюговим. У деяких втіленнях винаходу олігомер по суті є не дволанцюговим, наприклад, являє собою не міРНК.
Послідовності олігомеру
У наведеній нижче таблиці приведені олігомери і кон'югати олігомерів за винаходом і послідовностей-мішеней РОБКОУ за винаходом.
Таблиця 1 . . Положення на гені
Бо Послідовноть Ро слово саме | сок ЕОМ я 1 |ТОСівсаваассСА. | | 777777/71777717171717171717171010117111113643-3656 Г-:ШИ 2 |ААТосійвсаавассСА.Г | | (:::Б | (ХЬ ////////// | 3643-3658. Г7-:ИОЧ
З |ААТосійсаадвассСА./ | | (ЇЇ 77777701 3643-3658 ГГ: 4 |бСюююдадсвай | | 7777/1771 3251-3265 ГГ: 5 |ТОсюююадстої | | (ЇЇ 77777777777777777710/0177111 3251-3266 .Ш-:И 6 (|тоСюююадетої | | (ОО Ї777777777771717171717171710101771111 3251-3266 .ШЧ:ИЬ 7 |ТССюдеюютос | ЇЇ 77777Ї17777771717171С1717111 о 3373-3388..ЙШЧ:У((И 8 |тССюдеюювс | | 77777/71777771717171717171011711113373-3388..ЙШЧ:У(И 9 |ТОСіасааваасССА |такітак//| 77777777 171111 3643-3656 Г-:М ло |ААТосійсаавасССА |такітак/// | 77777777 17111 3643-3658 Г-:ШМ 11 ТААТосіайсаадвассСА |такітак// | 77777777 171111 3643-3658 Г-:ШМ 12 |бСюююаоснос 0 |такітак///| 77717171 171111 3251-3265 ШГ-:ШИ 13 |ТОсіюююадсітос |такітак///| 77171717 171111 3251-3266 .-:ИКО 14 |ТОСюююадсітос 0 |такітак////| 77171717 171111 3251-3266 .-:ИКО 15 Ц|ТССюдеюютосС 0 |такітак///| 77717717 17111 3373-3388..ЙШ:УЯ) 16 |ТССюдеююнос 00 |такітак////| 77717177 17111 3373-3388..ЙШ:УЯ 17 |ТОСіасаваассСА. | | --/-/ 0Їтак | 3643-3656 Щщ( 18 ЩфААТосійсаавассСА. | | (так | 3643-3658 Г-:ШЬ 19 ЩААТосійсаадвассСА.// | | (так | 3643-3658 Г-:ШИ 20 Ц|ССюююадснас | | --( (так | 3251-3265 ШЩГ-:Ш 21 |ТОсюююадсітої | | --( (так | 3251-3266 Г-:ШИ 22 |ТОСюююадстос | | -( (так | 3251-3266 Г-:ШМ 23 |ТССюдеюютосС | | (| (так | 3373-3388..Ш:У 24 |ТССюдеююнос | | --( (так | 3373-33988...:У(Ї) 40 (|Стсююдаався.ї///// | | 7777777 17777171 171111ло0о5-1о1С 41 |Стсююдааєся, | (так | 77777777 177111 л1о005-1017.7СЧС 42 |СТсююдааєсс (так ітак//| 77777771 177111 л1005-1017.7ШЧ 43 |СТсююдаабсс (так ітак//| 77777771 177111 л1005-1017.7ШЧС 25 |Юсійсаавассса.//-/-:/ | | (Г|:::И ЇЇ ЮК 7777/1777 3643-3656 З: 26 |аашюсіясаадвассса.ї/// | | (Г(::К(ЯЇ 7777Ю7Ю7Ю7ю7юЮюЮюЮю/юю///0/0171111о3643-3658 ГГ: 29 Посіюдієюютос | ЇЇ 77777777 171111 3373-3388..ЙШЧ:УЯі 44 |дсююдавдс//// | | 77777711 171111 л1005-1017СЩС зо (ссср рдасСА | | С/ЮСЮСЛЇ17777777ю7юЮюЮСЮ1771111 3643-3656 Г-:ШИ
АЮ 111 32 |ССААОСОСАСАСАВС | | -: ОЇ 7777777777//сссс0000177111 3251-3265 ГГ:
З |ССААОСОСАСАСАОСА|. | || 3251-3266 .-:ШЬО 34 Ц|СОААСАСАСАССАСОА|. | (| 77777701 3373-3388..ЙШ:УС
І 45 |СОСООССАСАВАСЄ | | (|:НОЇ 0/1 лооб-лот
ЗЕО ІО МО 25-29 і 44 являють собою мотиви послідовностей нуклеотидних основ.
ЗЕО ІЮ МО 30-34 і 45 являють собою послідовності-мішені РНК, присутні в МРНК РОБКО людини.
ЗЕО ІЮ МО 1 являють собою 5РО5001.
ЗЕО ІЮ МО 1-24 і 40-43 являють собою олігомери, що містять аналоги нуклеотидів, такі як гепмерні олігомери ЗНК, де рядкові букви є ланками ДНК (нуклеозид/нуклеотид), де прописні букви є ланками ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу усі ЗНК С являють собою 5-метилцитозин. У деяких втіленнях винаходу усі ланки ЗНК являють собою бета-О-окси-ЗНК. У деяких втіленнях винаходу усі міжнуклеозидні зв'язки між нуклеозидами 5ЕБЕО І МО 1-24 і 40-43 являють собою фосфоротіоатні зв'язки.
ЗЕО І МО 9-16 і 41-43 містять олігомер (як вказано 5ЕО ІД), а також холестерин кон'югат, який може бути ковалентно пов'язаний з олігомером на 5' або 3' кінці олігомеру, необов'язково за допомогою біорозщеплюваного лінкера, такого як нуклеозидфосфатний лінкер. У деяких втіленнях винаходу холестериновий кон'югат зв'язаний з 5'- кінцем олігомеру.
ЗЕО ІЮ МО 17-24 містять олігомер (як вказано 5ЕО Ід), а також кон'югат саїІМАс, який може бути ковалентно зв'язаний з олігомером на 5' або 3'-кінці олігомеру, необов'язково за допомогою біорозщеплюваного лінкера, такого як нуклеозидфосфатний лінкер або розщеплюваний пептидний лінкер. У деяких втіленнях винаходу кон'югат саЇІМАс зв'язаний на 5'- кінці олігомеру.
Конкретні олігомери і кон'югати, використовувані в цьому документі, проілюстровані на Фіг. З (олігомери), Фіг. 4 (холестеринові кон'югати), Фіг. 5 (кон'югати заіІМАс). Інші приклади кон'югатів, які можна використовувати з олігомером за винаходом, проілюстровані на Фіг. 1 і 2 і описані в розділі Кон'югатні угрупування заїЇМАс.
У таблиці 2 приведені конкретні комбінації олігомеру і кон'югатів.
Таблиця 2
Комбінації олігомер/кон'югат 7 1боп |Сопі2 |Сопіз |Сопій |Сопла |Сопіга |Сопіза |Сопіда:Ч/ 6 1040 |б41 |б42 0сС43 |б44 0сб45 046 |б47 Щщ і 8 Іс60 |с61 |Сб2 |с63 |с64 |с656 |с66 |Сс67 щ 11111111 Їбопіб ////////// |Сопб///////// |Сопіга ///// |Сопіба./77/7/7//7/СЧУУ 776 Щ|048 77777 16497777 1078. 1с79СС 7868 Щ|068 06977777 (06827777 18871
Усі ці комбінації можна візуалізувати шляхом заміщення хвилястої лінії на Фіг. 1 або 2 послідовністю олігомеру. На Фіг. 5 показана комбінація Сопіга з вказаними вище номерами ЗЕО
ІО. Фіг. 5А і 5В являють собою два детальні приклади сполук на Фіг. 5. Слід зазначити, що біорозщеплюваний лінкер (В) може бути присутнім або не бути присутнім між кон'югатним угрупуванням (С) і олігомером (А). Для Сопі!ї-4 і їа-4а сам кон'югат саМАс є біорозщеплюваним, застосування пептидного лінкера в кластері самАс і як такий
Зо біорозщеплюваний лінкер (В) можна використовувати або не використовувати. Проте, попередні дані вказують на те, що включення біорозщеплюваного лінкера (В), такого як нуклеотидфосфатні лінкери, розкриті в цьому документі, може посилити активність таких олігомерних кон'югатів з кластером СаїЇМАс. На фіг. 4 показана комбінація Сопібза з вказаними вище номерами ЗЕО ІО з біорозщеплюваним лінкером (В), що складається з двох мономерів
ДНК С ї А, пов'язаних фосфодіефірним зв'язком. Оскільки при застосуванні з Соп)5 і Соп|б використання біорозщеплюваного лінкера значно посилює активність сполуки, рекомендовано включення біорозщеплюваного лінкера (В), такого як нуклеотидфосфатні лінкери, розкриті в цьому документі.
Терміни "відповідний" і "відповідає" відноситься до порівняння між нуклеотидною послідовністю олігомеру (тобто послідовністю нуклеотидних основ або основ) або безперервною нуклеотидною послідовністю (першою ділянкою/ділянкою А) і зворотним комплементом нуклеїнової кислоти-мішені або його піддільницею (наприклад, 5ЕО ІЮ МО 31, 32, 33, 34 або 45). Аналоги нуклеотидів порівнюють безпосередньо з їх еквівалентом або відповідними нуклеотидами. У переважному втіленні винаходу олігомери (або їх перша ділянка) комплементарні, наприклад, повністю комплементарні ділянці-мішені або її піддільниці (наприклад, 5ЕО ІО МО 31, 32, 33, 34 або 45).
Терміни "зворотний комплемент", "зворотньо комплементарний" і "зворотня комплементарність" при використанні в цьому документі є взаємозамінними з термінами "комплемент", "комплементарний" і "комплементарність".
Термін "комплементарний" означає, що дві послідовності комплементарні у тому випадку, коли послідовність однієї може зв'язуватися з послідовністю іншої в зустрічно-паралельному напрямі, причому 3'-кінець кожної послідовності зв'язується з 5'-кінцем іншої послідовності, а потім кожен А, Т()), о ї С однієї послідовності вирівнюють з Т()), А, С і 5 іншої послідовності відповідно. Зазвичай комплементарна послідовність олігонуклеотиду має щонайменше 9095, переважно 9595, прийнятніше 10095 комплементарність певної послідовності.
Під терміном "відповідний аналог нуклеотиду" і "відповідний нуклеотид" мають на увазі вказівку на те, що нуклеотид в аналозі нуклеотиду і нуклеотид, що зустрічається в природі, ідентичні. Наприклад, коли 2-дезоксирибозна ланка нуклеотиду зв'язана з аденіном, "відповідний аналог нуклеотиду" містить пентозну ланку (що відрізняється від 2-дезоксирибози) зв'язану з аденіном.
Термін "нуклеотидна основа" відноситься до угрупування нуклеотиду, що є основою, і охоплює як такі, що зустрічаються в природі, варіанти, і такі, що не зустрічаються в природі.
Таким чином, "нуклеотидна основа" охоплює не лише відомі пуринові і піримідинові гетероцикли, але також їх гетероциклічні аналоги і таутомери. Зрозуміло, що ДНК- або РНК- нуклеозиди ділянки В можуть мати таку, що зустрічається в природі та/або таку, що не зустрічається в природі нуклеотидну основу (основи).
Приклади нуклеотидних основ включають без обмежень аленін, гуанін, цитозин, тимідин,
Зо урацил, ксантин, гіпоксантин, 5-метилцитозин, ізоцитозин, псевдоізоцитозин, 5-бромурацил, 5- пропінілурацил, б-амінопурин, 2-амінопурин, інозин, діамінопурин ії 2-хлор-6-амінопурин. У деяких втіленнях винаходу нуклеотидні основи можуть бути незалежно вибрані з групи, що складається з аденіну, гуаніну, цитозину, тимідину, урацилу, 5-метилцитозину. У деяких втіленнях винаходу нуклеотидні основи можуть бути незалежно вибрані з групи, що складається з аденіну, гуаніну, цитозину, тимідину і 5-метилцитозину.
У деяких втіленнях винаходу щонайменше одна з нуклеотидних основ, присутніх в олігомері, є модифікованою нуклеотидною основою, вибраною з групи, що складається з 5- метилцитозину, ізоцитозину, псевдоіїзоцитозину, 5-бромурацилу, 5-пропінілурацилу, 6- амінопурину, 2-амінопурину, інозину, діамінопурину і 2-хлор-6-амінопурину.
Мішень
Доцільно олігомер за винаходом здатний до модуляції експресії гена РОБКУ. Переважно олігомер здатний до знижуючої регуляції експресії гена РОКУ. В цьому відношенні олігомер за винаходом може впливати на експресію РОЗКО, в характерному випадку в клітини ссавця, такої як клітина людини, наприклад, клітина печінки. У деяких втіленнях винаходу олігомери за винаходом зв'язуються з нуклеїновою кислотою-мішенню, та їх дією на експресію є її зниження щонайменше на 1095 або 2095 в порівнянні з нормальним рівнем експресії (наприклад, з рівнем експресії клітини тварини або людини, обробленої фізіологічним розчином), прийнятніше щонайменше 3095, 4095, 5095, 6090, 7095, 8095, 9095 або 9595 інгібування в порівнянні з нормальним рівнем експресії. У деяких втіленнях винаходу таку модуляцію спостерігають при використанні приблизно від 0,04 до 25 нМ, наприклад, від 0,8 до 20 нМ концентрації сполуки за винаходом. У деяких втіленнях винаходу таку модуляцію спостерігають при використанні від 0,01 до 15 мг/кг, наприклад, від 0,05 до 10 мг/кг, наприклад, від 0,1 до 7,5 мг/кг, наприклад, від 0,25 до 5 мг/кг, наприклад, концентрації 0,5 і 2,5 мг/кг сполуки за винаходом. У тому ж або в іншому втіленні винаходу інгібування експресії складає менше 10095, як, наприклад, менше 9895 інгібування, менше 9595 інгібування, менше 9095 інгібування, менше 8095 інгібування, наприклад, менше 7095 інгібування. Модуляцію рівня експресії можна визначити шляхом виміру рівнів білку, наприклад, способами, такими як електрофорез в поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію (ДСН-ПААГ) з наступним Вестерн-блотингом з використанням відповідних антитіл, що індукуються проти білку-мішені. Альтернативно модулювання рівнів бо експресії можна визначити шляхом виміру рівнів МРНК, наприклад, за допомогою Нозерн-
блотинга або кількісної полімеразної ланцюгової реакції із зворотною транскрипцією (ЗТ-ПЛР).
При виміюванні за допомогою рівнів мРНК рівень знижуючої регуляції при використанні належного дозування, наприклад, концентрації від 0,04 до 25 нМ, наприклад, від 0,8 до 20 нМ, в деяких втіленнях винаходу в характерному випадку складає рівень до 10-2095 від нормальних рівнів у відсутність сполуки за винаходом.
Таким чином, у винаході запропоновано спосіб знижуючої регуляції або інгібування експресії білку та/"або мРНК РОЗКУ в клітині, експресуючій білок та/"або мРНК РОБЗКУО, де згаданий спосіб включає введення в клітину олігомеру або кон'югата згідно з винаходом для знижуючої регуляції або інгібування експресії білку талабо мРНК РОБЗКОУ в клітині. Доцільно клітина є клітиною ссавця, такою як клітина людини. Введення в деяких втіленнях винаходу можна здійснювати іп міго. Введення в деяких втіленнях винаходу можна здійснювати іп мімо.
Термін "нуклеїнова кислота-мішень" при використанні в цьому документі відноситься до ДНК або РНК, що кодує поліпептид РО5КОУ ссавця, такий як РОЗКУ людини, такий як номер доступу
Національного центру біотехнологічної інформації (МСВІ; Майопа! Сепіег тог ВіоїесппоЇоду
Іптогтаїіоп) ММ 174936 5ЕО ІЮО МО: 46. Нуклеїнові кислоти, кодуючі РОЗКОУ або його варіанти, що зустрічаються в природі, і утворені з них РНК-нуклеїнові кислоти, переважно мРНК, таку як пре-мРНК, хоча переважно зрілу мРНК. У деяких втіленнях винаходу, наприклад, при використанні в дослідженні або діагностиці, "нуклеїнова кислота-мішень" може бути кКДНК або синтетичним олігонуклеотидом, утвореним з вищезгаданих ДНК- або РНК-нуклеїнових кислот- мішеней. Олігомер згідно з винаходом переважно здатний до гібридизації з нуклеїновою кислотою-мішенню. Повинно бути зрозуміло, що 5ЕО ІЮ МО: 46 являє собою послідовність
КДНК, і як така відповідає послідовності зрілої мРНК-мішені, хоча урацил в послідовностях кДНК замінений тимідином.
Термін "його варіант, що зустрічається в природі" відноситься до варіантів поліпептидної або нуклеїново-кислотної послідовності РСБКУ, існуючої в природі в межах певної таксономічної групи, такої як ссавець, наприклад, миша, мавпа і переважно людина. У характерному випадку при посиланні на «варіанти, що зустрічаються в природі» полінуклеотиду термін може також охоплювати будь-який алельний варіант ДНК генома, кодуючою РОБКО, яка знаходиться на хромосомі 4 в локусі 4 С7, в результаті хромосомної транслокації або дуплікації,
Зо і утворену від нього РНК, таку як мРНК. «Варіанти, що зустрічаються в природі», можуть також включати варіанти, утворені в результаті альтернативного сплайсингу мРНК РОЗКОУ. При посиланні на конкретну поліпептидну послідовність, термін, наприклад, також включає форми білку, що зустрічаються в природі, які можуть, таким чином, зазнавати процесинг, наприклад, за допомогою ко- або посттрансляційних модифікацій, таких як відщеплення сигнального пептиду, протеолітичне розщеплювання, глікозилювання і т.д.
У деяких втіленнях винаходу олігомер (або його ділянка з суміжних нуклеотидів) вибраний з однієї з послідовностей або містить одну з послідовностей, вибраних з групи, що складається з
ЗЕО І МО: 28 або 29 або 44 або її підпослідовність з щонайменше 10 суміжних нуклеотидів, де олігомер (або його ділянка з суміжних нуклеотидів) може необов'язково містити одне, два або три помилкові спаровування в порівнянні з послідовністю.
У деяких втіленнях винаходу послідовність-мішень вибрана з послідовностей, або містить послідовності або складається з послідовностей, вибраних з групи, що складається з ЗЕО ІЮ
МО 31, 32, 33, 34 або 45, або підпослідовності з щонайменше 10 суміжних нуклеотидів 5ЕО ІЮ
МО: 33, 34 або 45.
У деяких втіленнях винаходу підпослідовність може складатися з 11, 12, 13, 14, 15 або 16 суміжних нуклеотидів, наприклад, від 12 до 16 нуклеотидів. Доцільно в деяких втіленнях винаходу підпослідовність має таку ж довжину, як безперервна нуклеотидна послідовність олігомеру за винаходом (необов'язково за винятком ділянки В, коли ділянка В не комплементарна мішені).
Проте визнано, що в деяких втіленнях винаходу нуклеотидна послідовність олігомеру може містити додаткові 5' або 3' нуклеотиди, наприклад, незалежно 1, 2, 3, 4, 5 або 6 додаткових нуклеотидів на 5 та/або 3 кінці, які не комплементарні послідовності-мішені, і такі некомплементарні олігонуклеотиди можуть формувати ділянку В. В цьому відношенні олігомер за винаходом в деяких втіленнях винаходу може містити безперервну нуклеотидну послідовність, фланковану на 5' та/або 3' кінці додатковими нуклеотидами. У деяких втіленнях винаходу додаткові 5' або 3' нуклеотиди є нуклеотидами, що зустрічаються в природі, такими як
ДНК або РНК. У деяких втіленнях винаходу додаткові 5' або 3' нуклеотиди можуть являти собою ділянку 0, на яку посилаються в контексті гепмерних олігомерів в цьому документі.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕБЕО ІЮ МО: 27 або її підпослідовність з щонайменше 10 або 12 нуклеотидних основ.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕБЕО ІЮ МО: 28 або її підпослідовність з щонайменше 10 або 12 нуклеотидних основ. У переважному втіленні винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до ЗЕО ІЮО МО: 5 або 6. В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат олігомеру згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 13 або 14 або 21 або 22.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕБЕО ІЮ МО: 29 або її підпослідовність з щонайменше 10 або 12 нуклеотидних основ. У переважному втіленні олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 7 або 8. В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат олігомеру згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 15 або 16 або 23 або 24.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕБЕО ІЮ МО: 44 або її підпослідовність з щонайменше 10 або 12 нуклеотидних основ. У переважному втіленні винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до ЗЕ ІЮ МО: 40. В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат олігомеру згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 41, 42 або 43.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 26. У переважному втіленні винаходу олігомер згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до 5ЕО ІЮ МО: 2 або 3. В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат олігомеру згідно з винаходом складається з нуклеотидної послідовності або містить нуклеотидну послідовність відповідно до ЗЕО ІЮ МО: 10 або 11 або 18 або 19.
Довжина
Олігомери можуть містити послідовність або складатися з безперервної нуклеотидної послідовності сумарної довжини 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 або 22 суміжних нуклеотидів. Відрізки довжини можуть включати, наприклад, ділянку А або ділянку А і В.
У деяких втіленнях винаходу олігомери містять або складаються з безперервної нуклеотидної послідовності сумарної довжини 10-22, наприклад, 12-18, наприклад, 13-17 або 12-16, наприклад, 13, 14, 15, 16 суміжних нуклеотидів. Переважно олігомер ділянки А містить або складається з безперервної нуклеотидної послідовності з 14 суміжних нуклеотидів в довжину, прийнятніше з 15 суміжних нуклеотидів в довжину і найприйнятніше з 16 суміжних нуклеотидів в довжину.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом складається з не більше 22 нуклеотидів, наприклад, не більше 20 нуклеотидів, наприклад, не більше 18 нуклеотидів, наприклад, 15, 16 або 17 нуклеотидів. У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом містить менше 20 нуклеотидів.
Аналоги нуклеотидів
Термін "нуклеотид" при використанні в цьому документі відноситься до глікозиду, що містить цукрове угрупування, угрупування основи і ковалентно зв'язану групу, таку як фосфатна або фосфоротіоатна міжнуклеотидна зв'язуюча група, і охоплює як нуклеотиди, що зустрічаються в природі, такі як ДНК або РНК, нуклеотиди, і такі що не зустрічаються в природі, які містять модифіковані цукрові угрупування та/або угрупування основ, які також називають в цьому документі "аналогами нуклеотидів". У цьому документі окремий нуклеотид (ланка) може також називатися мономером або нуклеїново-кислотною ланкою.
В області біохімії термін "нуклеозид" широко використовують як такий, що відноситься до глікозиду, який містить цукрове угрупування і угрупування основи. Ковалентний зв'язок між двома нуклеозидами може називатися міжнуклеозидним зв'язком. Альтернативно термін міжнуклеозидний зв'язок може використовуватися для характеризації зв'язку між нуклеотидами олігомеру.
Як має бути зрозуміло звичайному фахівцю в цій області техніки, 5' нуклеотид бо олігонуклеотиду не містить 5' міжнуклеотидну зв'язуючу групу, хоча може містити або не містити кінцеву групу, таку як фосфодіефір або фосфоротіоат, для кон'югації лінкера (В або У або кон'югатне угрупування).
Нуклеотиди, що не зустрічаються в природі, включають нуклеотиди, що мають модифіковані цукрові угрупування, такі як біциклічні нуклеотиди або 2'-модифіковані нуклеотиди, такі як 2'- 5 заміщені нуклеотиди. "Аналоги нуклеотидів" є варіантами природних нуклеотидів, таких як ДНК- або РНК- нуклеотиди, в результаті модифікацій в цукрових угрупуваннях та/або угрупуваннях основ.
Аналоги можуть бути такими, що в принципі виключно "мовчать" або "еквівалентними" природним нуклеотидум в контексті олігонуклеотиду, тобто не мають функціональної дії на той шлях, за допомогою якого олігомер інгібує експресію гена-мішені. Такі "еквівалентні" аналоги можуть бути, проте, корисними, якщо, наприклад, вони можуть бути простіше і дешевше одержані або стабільніші в умовах зберігання або одержання, або є кінцевою міткою або міткою.
Переважно, проте, щоб аналоги мали функціональну дію на шлях, за допомогою якого олігомер інгібує експресію гена-мішені; наприклад, шляхом одержання підвищеної зв'язуючої спорідненості (посилення спорідненості) до мішені та/або підвищеній стійкості до внутрішньоклітинних нуклеаз та/або підвищеній легкості транспортування в клітину. Конкретні приклади аналогів нуклеозидів описані, наприклад, в статтях Егеіег 55 Айтапп; Мисі. Асій Кезв., 1997, 25, 4429-4443 і ОпІтапп; Сиїт. Оріпіоп іп Огид ЮОемеІюортенпі, 2000, 3(2), 293-213, і на схемі 1:
Схема 1 б г В б - В В- В ь- В чо Шк ран Її ох БА : ї Н х 9 пов йо бо гази чі а ї х санях о тя оно Оу Хе Онр-о
Фосфоротіввх ХО -Метня Ф-МО 1-0 -Фусв з « ї ден Ї х їх ев В ге в м Ще в В х гул ви У и
В; і А ан ке о ДО ви: сер їу й їн я з ана а
У х я
МН
2УАР яма СеМА пНк 2 : з т
В. щем, В - 228 з в.8 5 еВ сіті, З У М.
Ех оче у оо Серго ні 7 Й зн
Морфрозіне 2 -Е-АМК З'явихирорачідае
Ж (З рідвеаков нумо я в ул осно а сереВНу
Бориса
Олігомер може, таким чином, містити просту послідовність або складатися з простої послідовності нуклеотидів, що зустрічаються в природі - переважно 2'-дезоксирибонуклеотидів (як правило, званої в цьому документі "ДНК"), але також, можливо, рибонуклеотидів (як правило, званої в цьому документі "РНК") або комбінації таких нуклеотидів, що зустрічаються в природі, і одного або більше нуклеотидів, що не зустрічаються в природі, тобто аналогів нуклеотидів. Такі аналоги нуклеотидів можуть відповідним чином посилювати спорідненість олігомеру до послідовності-мішені. Приклади відповідних і переважних аналогів нуклеотидів наведені в М/О 2007/031091 або приведені в цьому документі за допомогою посилання.
Включення в олігомер аналогів, що посилюють спорідненість, нуклеотидів, таких як ЗНК або 2'-заміщені цукри, може дати можливість зменшення розміру олігомеру, що специфічно зв'язується, а також може зменшити верхню межу розміру олігомеру, до якого відбувається неспецифічне або аберантне зв'язування.
У деяких втіленнях винаходу олігомер містить щонайменше 2 аналоги нуклеотидів. У деяких втіленнях винаходу олігомер містить 3-8 аналогів нуклеотидів, наприклад, б або 7 аналогів нуклеотидів.
Приклади аналогів нуклеотидів включають модифікацію цукрового угрупування з одержанням 2'-заміщеної групи або з одержанням біциклічної структури, яка посилює зв'язуючу спорідненість, а також може забезпечити підвищену стійкість до нуклеаз.
У деяких втіленнях винаходу аналоги нуклеотидів, присутні всередині антисмислового олігомеру за даним винаходом (наприклад, в ділянках Х' і М", згаданих в розділі "Конструкція гепмера"), незалежно вибрані з, наприклад: ланок 2'-О-алкіл- РНК, ланок 2-ОМе-РНК, ланок 2'-
О-алкіл-ДНК, ланок 2'-аміно-ДНК, ланок 2'-фтор-ДНК, ланок ЗНК, ланок арабінонуклеїнової кислоти (АНК), ланок 2'-фтор-АНК, ланок НМА, ланок ІНК (інтеркалуючій нуклеїнової кислоти -
СНгізіепзеп, 2002. Мисі. Асіа5. Ве5. 2002 30: 4918-4925, включена в цей документ за допомогою посилання) і ланок 2'МОЕ.
У деяких втіленнях винаходу аналоги нуклеотидів являють собою 2'-О-метоксиетил-РНК (2'МОЕ), мономери 2'"-фтор-ДНК або аналоги нуклеотидів ЗНК, і антисмисловий олігонуклеотид за даним винаходом може сам по собі містити аналоги нуклеотидів, незалежно вибрані з цих трьох типів аналога, або може містити тільки один тип аналога, вибраний з трьох типів. У деяких втіленнях винаходу щонайменше один з аналогів нуклеотидів являє собою 2'-МОБ-РНК, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 ланок нуклеотидів 2'-«МОБ-РНК. У деяких втіленнях винаходу щонайменше один з аналогів нуклеотидів є 2'-фтор-ДНК, наприклад, 2, 3,4,5,6, 7, 8, 9 або 10 ланок нуклеотидів 2'-фтор-ДНК.
Переважним аналогом нуклеотиду є ЗНК, наприклад, окси-ЗНК (наприклад, бета-О-окси-ЗНК і альфа-Ї-окси-ЗНК) та/або аміно-«ЗНК (наприклад, бета-О-аміно-ЗНК ї альфа-ї -аміно-ЗНК) та/або тіо-ЗНК (наприклад, бета-О-тіо-ЗНК ї альфа-Ї -тіо-ЗНК) та/(або ЕМА (наприклад, бета-О-
ЕМА і альфа-І-ЕМА). Найбільш прийнятна бета-О-окси-ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу в антисмисловому олігонуклеотиді за даним винаходом або в його безперервній нуклеотидній послідовності присутній тільки один з описаних вище типів аналогів нуклеотидів.
У деяких втіленнях винаходу антисмисловий олігонуклеотид за даним винаходом містить щонайменше одну ланку замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК), наприклад, 1, 2, 3,4,5,6, 7 або 8 ланок ЗНК, наприклад, від З до 7 або від 4 до 8 ланок ЗНК. У безумовно найбільш прийнятних втіленнях винаходу щонайменше один з аналогів нуклеотидів є замкненою нуклеїновою кислотою (ЗНК); наприклад, щонайменше 3, або щонайменше 4, або щонайменше 5, або щонайменше б, або щонайменше 7 або 8 з аналогів нуклеотидів можуть бути ЗНК. У деяких втіленнях винаходу всі аналоги нуклеотидів можуть бути ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу антисмисловий олігонуклеотид за даним винаходом може містити і аналоги нуклеотидів (переважно ЗНК), і ланки ДНК. Переважно сума об'єднаних аналогів нуклеотидів (переважно ЗНК) і ланок ДНК складає 10-25, наприклад, 10-24, переважно 10-20, наприклад, 10-18, навіть прийнятніше 12-16. У деяких втіленнях винаходу нуклеотидна послідовність антисмислового олігонуклеотиду за даним винаходом, наприклад, безперервна нуклеотидна послідовність, складається з щонайменше одного аналога нуклеотиду (переважно
ЗНК), а інші нуклеотидні ланки є ланками ДНК. У деяких втіленнях винаходу антисмисловий олігонуклеотид за даним винаходом містить тільки аналоги нуклеотидів ЗНК і нуклеотиди (такі як РНК або ДНК, найприйнятніше нуклеотиди ДНК), що зустрічаються в природі, необов'язково з модифікованими міжнуклеотидними зв'язками, такими як фосфоротіосат.
Зрозуміло, що при посиланні на переважний мотив нуклеотидної послідовності або переважну нуклеотидну послідовність, що складаються тільки з нуклеотидів, олігомери за винаходом, які визначені цією послідовністю, можуть включати відповідний аналог нуклеотиду замість одного або більше нуклеотидів, присутніх в цій послідовності, таких як ланки ЗНК або інші аналоги нуклеотидів, які підвищують стабільність дуплексу/температуру плавлення (Тт) дуплексу олігомер/мішень (тобто аналогів нуклеотидів, що посилюють спорідненість).
Аналіз Тт: Дуплекси олігонуклеотид: олігонуклеотид і РНК-мішень (РО) розводять до З ММ в 500 мл води без РНК-аз і змішують з 500 мл 2х Тт-буфера (200 мМ Масі, 0,2 мМ етилендіамінтетраоцтова кислота (ЕДТА), 20 мМ фосфат Ма, рН 7,0). Розчин нагрівають до 95"С протягом З хв, а потім дають можливість відпалу при кімнатній температурі протягом 30 хв.
Температури плавлення (Тят) дуплексів вимірюють на спектрофотометрі Гатрда 40 ОМ/ЛЛ/5, обладнаному пристроєм програмування температури Пельтьє РТРб, з використанням програми бо РЕ Тетріаб (Регкіп ЕІтег). Температуру різко піднімають з 207С до 957С, а потім різко знижують до 25"С, реєструючи поглинання при 260 нм. Для оцінки Тт дуплексу використовують першу похідну і локальні максимуми і плавлення, і відпалу.
У деяких втіленнях винаходу які-небудь помилкові спаровування між нуклеотидною послідовністю олігомеру і послідовністю-мішенню переважно виявляються в ділянках зовні від аналогів нуклеотидів, що посилюють спорідненість, таких як ділянка У, на яку посилаються в розділі "Конструкція гепмера", та/л"або в положенні немодифікованих нуклеотидів, наприклад,
ДНК, в олігонуклеотиді та/або в ділянках, що знаходяться в 5' або 3' положенні до безперервної нуклеотидної послідовності.
ЗнНК
Термін "ЗНК" відноситься до біциклічного аналога нуклеозиду, який містить місточковий зв'язок між 2" і 4" положенням в рибозному кільці (2'-4" біциклічний аналог нуклеотиду) і відомий як "замкнена нуклеїнова кислота"). В літературі на ЗНК іноді посилаються як на місточкову або біциклічну нуклеїнову кислоту (ВМА; Бгіддеа писієїс асій або бБісусіїс писієїс асіа), і ці два терміни можна використовувати взаємозамінно. Термін ЗНК може відноситися до мономеру ЗНК або при використанні в контексті "олігонуклеотид ЗНК" ЗНК відноситься до олігонуклеотиду, що містить один або більше таких біциклічних аналогів нуклеотидів. У деяких аспектах біциклічні аналоги нуклеозидів є нуклеотидами ЗНК, ї ці терміни можна, таким чином, використовувати взаємозамінно, і вони є такими втіленнями винаходу, які характеризуються також присутністю лінкерної групи (такої як місточкова група) між С2'ї С4" рибозного цукрового кільця.
У деяких втіленнях винаходу антисмисловий олігонуклеотид за даним винаходом може містити обидві з бета-О-окси-ЗНК і одної або більше наступних ланок ЗНК: тіо-ЗНК, аміно-ЗНК, окси-ЗНК, 5'-єметил-ЗНК та/або ЕМА або в бета-О, або в альфа-Ї конфігураціях або їх комбінацій. У деяких втіленнях винаходу усі цитозинові ланки ЗНК є 5'-метил-цитозином. У деяких втіленнях винаходу щонайменше одним аналогом нуклеозиду, присутнім в першій ділянці (Х), є біциклічний аналог нуклеозиду, наприклад, щонайменше 2, щонайменше 3, щонайменше 4, щонайменше 5, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8 (за винятком нуклеозидів ДНК та/або РНК ділянки У) аналогів нуклеозидів з модифікованим цукром, наприклад, біциклічних аналогів нуклеозидів, таких як ЗНК, наприклад, бета-0О-Х-ЗНК або альфа-їЇ -Х-ЗНК (де Х є окси, аміно або тіо) або інші ЗНК, розкриті в цьому документі, включаючі
Ко) без обмеження СЕТ, СМОЕ або 5'-Ме-ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу ЗНК, використовувана в олігонуклеотидних сполуках за винаходом, переважно має структуру загальної формули ІІ: мк я я я кофе кт Ден
ХК р
І ва Щ й ж пеня формула |Ї де М вибраний з групи, що складається з -0-, -СНгО-, -5-, -МН-, М(Не) та/або -СНо-; 27 і 2" незалежно вибрані з міжнуклеотидного зв'язку, КМ, кінцевої групи або захисної групи; В становить угрупування природної або синтетичної нуклеотидної основи (нуклеотидну основу), і
В" вибраний з атома водню і С.-4-алкілу; 2, Ве, Ве, ВУ і Ве не обов'язково незалежно вибрані з групи, що складається з атома водню, не обов'язково заміщеного Сі-12-алкілу, не обов'язково заміщеного Сг-12-алкенілу, не обов'язково заміщеного Сг-12-алкінілу, гідрокси, С:-12-алкокси, С2-12- алкоксиалкілу, Сг-іг-алкенілокси, карбокси, Сі-12-алкоксикарбонілу, Сі-12-алкілкарбонілу, формілу, арилу, арилокси-карбонілу, арилокси, арилкарбонілу, гетероарилу, гетероарилокси- карбонілу, гетероарилокси, гетероарилкарбонілу, аміно, моно- і ди(С:-в-алкіл)аміно, карбамоїлу, моно- і ди(С:-в-алкіл)-аміно-карбонілу, аміно-С:-6-алкіл-амінокарбонілу, моно- і ди(Сі-6- алкіл)аміно-С.і-в-алкіл-амінокарбонілу, Сі-в-алкіл-карбоніламіно, карбамідо, С:-в-алканоїлокси, сульфоно, С:-в-алкілсульфонілокси, нітро, азидо, сульфанілу, С:-в-алкілтіо, атома галогену, інтеркаляторів ДНК, фотохімічно активних груп, термохімічно активних груп, хелатуючих груп, груп-репортерів і лігандів, де арил і гетероарил можуть бути не обов'язково заміщеними, і де два приєднаних до одного і того ж атому замісника Ка і БЕ? разом можуть означати не обов'язково заміщений метилен («СНг); і Е" вибраний з атома водню і С:-4-алкілу. В деяких втіленнях винаходу Ра, НЄ, Ве, ВЗ і 22 не обов'язково незалежно вибрані з групи, що складається з атома водню і Сі-є алкілу, такого как метил. Для всіх хіральних центрів асиметричні групи можуть знаходитися або в К, або в 5 орієнтації, наприклад, два ілюстративні стереохімічні ізомери включають бета-0О і альфа-1!. ізоформи, які можна проілюструвати таким чином:
Ж Ж
Ша ЩІ
Конкретні ілюстративні ланки ЗНК показані нижче: іч КЗ ря хз пісок ЗНК з: ВС секев- ЗК 2 й в й в у сто Унтної ж Й гак й о КІ !
В-р-то-ЗНК ЯМА 2 їх В
Дня. бро
З ЩА рама ЗНЕ
Термін "тіо-ЗНК" включає замкнений нуклеотид, в якому У в приведеній вище загальній формулі вибраний з З або -СНо-5-. Тіо-ЗНК може знаходитися і в бета-О-, і в альфа-ї- конфігурації.
Термін "аміно-ЗНК" включає замкнений нуклеотид, в якому У в приведеній вище загальній формулі вибраний з -М(Н)-, М(В)-, СН»-М(Н)- ї -СН»-М(В)-, де К вибраний з атома водню і Сч1.-4- алкілу. Аміно-ЗНК може знаходитися і в бета-О-, і в альфа-І -конфігурації.
Термін "окси-ЗНК" включає замкнений нуклеотид, в якому ХУ в приведеній вище загальній формулі є -О-. Окси-ЗНК може знаходитися і в бета-О-, і в альфа-Ї -конфігурації.
Термін "ЕМА" включає замкнений нуклеотид, в якому М в приведеній вище загальній формулі є - СНо-О- (де атом кисню -СН»-О- приєднаний в 2'-положенні відносно основи В). Ке позначає атом водню або метил.
У деяких ілюстративних втіленнях винаходу ЗНК вибрана з бета-О-окси-ЗНК, альфа-Ї -окси-
ЗНК, бета-О-аміно-ЗНК і бета-О-тіо-ЗНК, зокрема, бета-О-окси-ЗНК.
При використанні в цьому документі "біциклічні нуклеозиди" відносяться до модифікованих нуклеозидів, що містять біциклічне цукрове угрупування. Приклади біциклічних нуклеозидів включають без обмеження нуклеозиди, що містять місточковий зв'язок між 4 і 2' атомами рибозильного кільця. У деяких втіленнях винаходу сполуки, запропоновані в цьому документі, включають один або більше біциклічних нуклеозидів, де місток містить 4-2 біциклічні нуклеозиди. Приклади таких 4-2" біциклічних нуклеозидів включають без обмежень одну з формул: 4-(СН»ег)-О-2" (ЗНК); 2-(СН2г)-5-2; 4-(СНег)2-0-2" (ЕМА); 4-СН(СНз)-0О-2 і 42-СН(СН2ОСН)-
Ко) О-2 та їх аналоги (див. патент О5 7,399,845, опублікований 15 липня 2008 р.); 4-С(СНз)(СНз)-О- 2" та її аналоги (див. опубліковану міжнародну заявку на патент РСТ МО 2009/006478, опубліковану 8 січня 2009 р.); 4-СН»АМ(ОСНЗ)-2' та її аналоги (див. опубліковану міжнародну заявку на патент РСТ УМО 2008/150729, опубліковану 11 грудня 2008 р.); 4-СНо-О-М(СНз)-2" (див. опубліковану заявку на патент 05 2004/0171570, опубліковану 2 вересня 2004); 4-СНе-
М(2К)-О-27, де К позначає Н, Сі-Сіо алкіл або захисну групу (див. патент 05 7,427,672, опублікований 23 вересня 2008 р.); 4-СНо-С(НуСНЗз)-2 (див. Спайорайднуауа, еї аї, 9. Огу. Снет., 2009, 74, 118-134); ії 4-СНо-С(-СН»г)-2" та її аналоги (див. опубліковану міжнародну заявку на патент РСТ УМО 2008/154401, опубліковану 8 грудня 2008 р.). Також див., наприклад, статті: зЗіпдой єї аі., Спет. Соттип., 1998, 4, 455-456; КовнкКіп еї а!., Темапеагоп, 1998, 54, 3607-3630;
Ууапіезівдії сеї аї., Ргос. Маї). Асад. осі. 0.5. А., 2000, 97, 5633-5638; Китаг еї аї., Віоогд. Мед.
Спет. І еїї., 1998, 8, 2219-2222; Зіпднп еї аї!., У. Огу. Спет., 1998, 63, 10035-10039; бііїмавіама єї аІ,, У. Ат. Спет. бос, 129(26) 8362-8379 (ди. 4, 2007); ЕІауаді еї аї., Сит. Оріпіоп Іпуепв. Югидв, 2001, 2, 558-561; Вгаазсн евї а!., Спет. Віої, 2001, 8, 1-7; Огат єї аї, Ст. Оріпіоп Мої. Тнег., 2001, 3, 239-243; патенти ОБ МоМо 6,670,461, 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 7,399,845; опубліковані міжнародні заявки РСТ УМО 2004/106356, УМО 94/14226, УМО 2005/021570 ї УМО 2007/1 34181; публікації патентів О5 МоМо 05 2004/0171570, 005 2007/0287831 і 05 2008/0039618; і патенти 05 серійні МоМо 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998, 61/056,564, 61/086,231, 61/097,787 і 61/099,844; і міжнародні заявки РСТ /МоМо
РСТ/О52008/064591, РСТ/О52008/066154 і РСТ/О52008/068922. Кожен з вказаних вище біциклічних нуклеозидів може бути одержаний так, що він має одну або більше стереохімічних конфігурацій цукру, що включають, наприклад, а-І -рибофуранозу і бета-О-рибофуранозу (див. міжнародну заявку РСТ ЮКО8/00393, опубліковану 25 березня 1999 як УМО 99/14226).
У деяких втіленнях винаходу біциклічні цукрові угрупування нуклеозидів ЗНК включають без обмежень сполуки, що мають щонайменше один місточковий зв'язок між 4 і 2" положенням пентозофуранозильного цукрового угрупування, де такі місточкові зв'язки незалежно містять 1 або від 2 до 4 зв'язаних груп, незалежно вибраних з -ІСіВаХНь)|-, -С(Ва)-С(Аь)-, -С(Ва)-М-, - 20. Фб(-МВа)-, -С(-0)-, -С(-5)-, -О-, -5І(Ва)2-, -5(-0)х- і -М(Ва)-; де: х дорівнює 0, 1 або 2; п дорівнює 1,2, З або 4; кожний Ка і Кь незалежно позначає Н, захисну групу, гідроксил, С1-С:2 алкіл, заміщений С1-Сі2 алкіл, С2-С12 алкеніл, заміщений С2-С:12 алкеніл, С2-С:12 алкініл, заміщений С2-
Сі2 алкініл, С5-Сго арил, заміщений С5-Сго арил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, гетероарил, заміщений гетероарил, С5-С7 аліциклічний радикал, заміщений С5-С7 аліциклічний радикал, атом галогену, 09:, Мт, 51, Мз, СО0У)ї, ацил (С(50)-
Н), заміщений ацил, СМ, сульфоніл (5(-0)2-)1) або сульфоксил (5(-0)-)1); і кожний «1 і 92 незалежно позначає Н, С:-Сє алкіл, заміщений С1-С:2 алкіл, Сг-С1і2 алкеніл, заміщений С2-С12 алкеніл, С2-С:і2 алкініл, заміщений С2-С:і2 алкініл, Се-Сго арил, заміщений С5-Сго арил, ацил (С(-О0)-Н), заміщений ацил, гетероциклічний радикал, заміщений гетероциклічний радикал, Сі-
Сі2 аміноалкіл, заміщений С1-С:12 аміноалкіл або захисну групу.
У деяких втіленнях винаходу місточковий зв'язок циклічного цукрового угрупування являє собою -ІС(НахАБ-, -ІС(Ва)хАь)н-О-, -С(НаНь)-М(Н)-О- або -С(ВаНь)-О-М(В)-. У деяких втіленнях винаходу місточковий зв'язок являє собою 4-СНе2-2, 4-(СНг)»-2,. 4-(СН2г)з-2, 4-СНо-О-2, 4- (СНг)2-0-2, 4-СНо-О-М(В)-2 ії 4-СНоАМ(В)-О-2-, де кожний К незалежно позначає Н, захисну групу або С.:-Сі2 алкіл.
У деяких втіленнях винаходу біциклічні нуклеозиди додатково визначені ізомерною конфігурацією. Наприклад, нуклеозид, що містить місточковий зв'язок 4'-2'-метилен-окси, може знаходитися в а-Ї конфігурації або в бета-О конфігурації. Раніше а-І -метиленокси (4-СНег-0О-2')
ВМА включали в антисмислові олігонуклеотиди, які проявляли антисмислову активність (Егіедеп еїаї, Мисівіс Асід5 Незеагси, 2003, 21, 6365-6372).
У деяких втіленнях винаходу біциклічні нуклеозиди включають без обмежень (А) а-і-
Метиленокси (4-СНг2-0-2)3 ВМА, (В) бета-О-Метиленокси (4-СНг2-0-2) ВМА, (С) Етиленокси (4"- (СНг)2-0О-2) ВМА, (0) Аміноокси (4"-СН2-О-М(А)-2) ВМА, (Е) Оксиаміно (4-СН2-М(А)-О-2) ВМА, (Р)
Метил(метиленокси) (4-СН(СНз)-0О-23 ВМА, (б) метилен-тіо (4-СНг-5-23 ВМА, (Н) метилен- аміно (4-СНо-М(Н)-2) ВМА, (І) метилкарбоциклічну (4-СНо.-СН(СНаз)-2) ВМА і (9 пропіленкарбоциклічну (4-(СН?г)з-2) ВМА, як зображено нижче.
ше ни ши то в У о ше и д- 7 ;
Е е Та ема, лек, »
І-ї ФІ о ї-о мах закл 2 : ; : ; ше щи: Е КК ВХ ши кут ху ку и т 7 т тра о ге (в) ов ов
ФО ї- пу" еф де Вх позначає угрупування основи, і КЕ незалежно позначає Н, захисну групу або С1-С2 алкіл. 5 У деяких втіленнях винаходу біциклічний нуклеозид визначений формулою І:
Тато В
ШО вх
СО Зн г ше в і, де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи; -Фа-О5-Ос- позначає -СН2-М(АНе)-СНе-, -С(-0)-М(Ае)-СНе-, -СН»-О-М(Вс)-, -СН»-М(Вс)-О- або -
М(Ас)-О-СНе;
Ве позначає С.1-Сі2 алкіл або аміно-захисну групу; і
Та ії Ть кожен незалежно позначає Н, гідрокси-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія.
У деяких втіленнях винаходу біциклічний нуклеозид визначений формулою ІІ:
Ето о, дх цс; а г тео і
Ть Й де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Та ії Ть кожен незалежно позначає Н, гідрокси-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія; 7а позначає С:і-Св алкіл, Се-Сє алкеніл, Со-Св алкініл, заміщений С:1-Сє алкіл, заміщений С2-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкініл, ацил, заміщений ацил, заміщений амід, тіол або заміщений тіол.
У деяких втіленнях винаходу кожна із заміщених груп незалежно є моно- або полізаміщеною групами замісників, незалежно вибраними з атома галогену, оксо, гідроксилу Ос, Ма, Бус, Мз,
С(-Хує ії МОеС(-Х)Мусуа, де кожен с, Уа і де незалежно позначає Н, С1-Сє алкіл або заміщений
С:-Свалкіл, і Х позначає О або Мус.
У деяких втіленнях винаходу біциклічний нуклеозид визначений формулою ПП: ї, о хору"
Фото і ї НН де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Та і Ть кожен незалежно позначає Н, гідроксил-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія;
Ва позначає С1-Св алкіл, Со-Св алкеніл, С2-Сє алкініл, заміщений С.1-Свє алкіл, заміщений С2-
Св алкеніл, заміщений С2-Св алкініл або заміщений ацил (С(-0)-).
У деяких втіленнях винаходу біциклічний нуклеозид визначений формулою ІМ:
За щі о
Т.О Кк їк- «ВХ отв) ее
М їУ
Ов де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Та і Ть кожен незалежно позначає Н, гідроксил-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія;
Ва позначає С:-Свє алкіл, заміщений С1-Св алкіл, Се-Св алкеніл, заміщений С2-Сє алкеніл, С2-
Св алкініл, заміщений С2-Свє алкініл; кожний дь, дс і діа незалежно позначає Н, атом галогену, С1-
Св алкіл, заміщений С:-Сє алкіл, Со-Свє алкеніл, заміщений С2-Свє алкеніл, Со-Св алкініл або заміщений С2-Св алкініл, Сі--Сє алкоксил, заміщений С2о-Св алкоксил, ацил, заміщений ацил, С1-
Св аміноалкіл або заміщений С.1-Свє аміноалкіл.
Зо У деяких втіленнях винаходу біциклічний нуклеозид визначений формулою У:
Че ху е
ТОК --ч нх
А О-ТЬ/
Я
ЧЕ "
Ох де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Та і Ть кожен незалежно позначає Н, гідроксил-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія;
Да, дЧь, Дс і дєкожний незалежно позначає атом водню, атом галогену, С1-Сі12 алкіл, заміщений С1-
Сі» алкіл, Со-С12 алкеніл, заміщений С2-Сі2 алкеніл, С2-С12 алкініл, заміщений С2-Сі2 алкініл, С1-
Сі2г5 алкокси, заміщений С1-С12 алкокси, Оу, 59), 50), Оггі, Мк, Мз, СМ, С(-0303)), С(-О)МО Мк,
Фб(-09), О-б(-0)М9ОЮк, М(Н)С(-МН)ІМУЮЮ М(НС(-О)МОЮкю або М(Н)С(-5)МУ Кк; або де і де разом позначають -С(до)(дн); до і дн кожний незалежно позначає Н, атом галогену, Сі- Сі» алкіл або заміщений С-:-Сі2 алкіл.
Синтез і одержання мономерів метиленокси (4-СН2-0-2)3 ВМА аденіну, цитозину, гуаніну, 5- метил-цитозину, тиміну і урацилу в поєднанні з їх властивостями олігомеризації і розпізнавання нуклеїнових кислот описані (див., наприклад, статтю Кознпкіп еї аї., Темгапеагоп, 1998, 54, 3607- 3630). ВМА та їх одержання також описані в документах УМО 98/39352 ії УМО 99/14226.
Аналоги метиленокси (4-СНг-0О-23 ВМА, метиленокси (4-СНг-О-2") ВМА ії 2'-тід-ВМА також одержані (див., наприклад, статтю Киптаг еї аї., Вісогд. Мей. Спет. І ей., 1998, 8, 2219-2222).
Одержання замкнених аналогів нуклеозидів, що містять олігодезоксирибонуклеотидні дуплекси, як субстрати для полімераз нуклеїнових кислот також описано (див., наприклад, Умепдеї еї аї.,
МО 99/14226). Крім того, на рівні техніки описаний синтез 2'-аміно-ВМА, нового конформаційно- обмеженого аналога олігонуклеотиду з високою спорідненістю (див., наприклад, 5іпоп еї аї.,..
Ог9. Спет., 1998, 63, 10035-10039). Крім того, раніше описані 2'-аміно- і 2'-метиламіно-ВМА і термостабільність їх дуплексів з комплементарними РНК і ДНК.
У деяких втіленнях винаходу біциклічні нуклеозиди визначені формулою МІ: » З
ГО ; ра о яВх са ді м щі
Фо де:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Та і Ть кожен незалежно позначає Н, гідроксил-захисну групу, кон'югатну групу, реакційну фосфорну групу, фосфорне угрупування або ковалентне приєднання до іммобілізуючого носія; кожен ді, ду, дк і ді незалежно позначає Н, атом галогену, С1-С12 алкіл, заміщений С1-Сі2 алкіл,
С2-Сі2 алкеніл, заміщений С2-С1і2 алкеніл, С2-С12 алкініл, заміщений С2-С12 алкініл, С1-С12 алкоксил, заміщений С2- Сі2 алкоксил, 03), 59, 50), 5О2), Мк, Ма, СМ, С(-0)09), С(-О)Мук,
Зо Фб(-09), О-С(-О)МОЮКк, М(Н)ІС(Т-МНІМОЮЮ М(НС(-О)МмМОЮкю або (НС(-5)МОУЮК і ді др або дії дк разом позначають -С(до) (дю), де До і дн кожен незалежно позначає Н, атом галогену, С1-Сі2 алкіл або заміщений С.-Св алкіл.
Описані інші карбоциклічні біциклічні нуклеозиди, що мають місточковий зв'язок 4"-(СН?г)з-2, і алкенільний аналог, місточковий зв'язок 4-СН-СН-СНе-2' (див., наприклад, Егеїег еї аї, Мисієїс
Асіаз Везєагсі, 1997, 25(22), 4429-4443 і АІраєек еї аї, 9. Огд. Спет., 2006, 71, 7731-77 40).
Синтез і одержання карбоциклічних біциклічних нуклеозидів у поєднанні з їх олігомеризацією і біохімічними дослідженнями також описані (див., наприклад, Згімавіама еї аї, У. Ат. Спет. 50б. 2007, 129(26), 8362-8379).
При використанні в цьому документі "4-2 біциклічний нуклеозид" або "4-2 біциклічний нуклеозид" відноситься до біциклічних нуклеозидів, що містять кільце фуранози, що містить місток, що сполучає 2" атом вуглецю і 4" атом вуглецю.
При використанні в цьому документі "моноциклічні нуклеозиди" відносяться до нуклеозидів, що містить модифіковані цукрові угрупування, що є не біциклічними цукровими угрупуваннями.
У деяких втіленнях винаходу цукрове угрупування або аналог цукрового угрупування нуклеозиду може бути модифіковане або заміщене в будь-якому положенні.
При використанні в цьому документі "2'-модифікований цукор" означає фуранозильний цукор, модифікований в 2" положенні. У деяких втіленнях винаходу такі модифікації включають замісники, вибрані з: галогеніду, що включає без обмежень заміщений і незаміщений алкокси, заміщений і незаміщений тіоалкіл, заміщений і незаміщений аміноалкіл, заміщений і незаміщений алкіл, заміщений і незаміщений аліл і заміщений і незаміщений алкініл. У деяких втіленнях винаходу 2" модифікації вибрано із замісників, що включають без обмежень:
ОКСНе)О|тптСнНз, О(СНег),МН», О(СНег),СН», Оо(СнНУ,ОМН»,, осно -ОМ(Н)СНз і о(СнНУОМ(СНег)пСНзі|г, де п і т дорівнюють від 1 до приблизно 10. Інші 2'-групи замісників також можуть бути вибрані з: С1-С12 алкілу; заміщеного алкілу; алкенілу; алкінілу; алкарилу; аралкілу; О-алкарилу або О-аралкілу; ЗН; ЗСНз; ОСМ; СІ; Вг; СМ; СЕз; ОСЕз; 5БОСН»; 502СНз;
ОМО»; МО»; Ма; МН»:; гетероциклоалкіл; гетероциклоалкарил; аміноалкіламіно; поліалкіламіно; заміщеного силілу; КЕ; відщеплювану групу; групу-репортер; інтеркалятор; групу для поліпшення фармакокінетичних властивостей і групу для поліпшення фармакодинамічних властивостей антисмислової сполуки, а також інші замісники, що мають подібні властивості. У деяких втіленнях винаходу модифіковані нуклеозиди містять бічний ланцюг 2'-МОЕ (див., наприклад,
ВакКег еї аї., 9. Віої. Спет., 1997, 272, 1 1944-12000). Описано, що таке заміщення 2'-МОЕ має поліпшену зв'язуючу спорідненість в порівнянні з немодифікованими нуклеозидами і з іншими модифікованими нуклеозидами, такими як 2'-О-метил-, О-пропіл- і О-амінопропіл-. Також показано, що олігонуклеотиди, що мають замісник 2'-МОЕ, є антисмисловими інгібіторами експресії генів з перспективними ознаками для застосування іп мімо (див., наприклад, Магіп, Р.,
Не/у. Спіт. Асіа, 1995, 78, 486-504; Аптапп еї аї., Снпітіа, 1996, 50, 168-176; Айптапп еї аї.,
Віоспет. бос. Тгапз., 1996, 24, 630-637; і Айтапп еї аї., Мисіеозіде5 Мисіеоїіде5, 1997, 16, 917- 926).
При використанні в цьому документі "тетрагідропірановий модифікований нуклеозид" або "ТТ модифікований нуклеозид" означає нуклеозид, тетрагідропірановий "цукор", що має, заміщуючий пентафуранозильний залишок в звичайних нуклеозидах (сурогат цукру).
Модифіковані ТГП нуклеозиди включають нуклеозиди, на які посилаються в цій області техніки як на гекситолову нуклеїнову кислоту (НМА, Ппехйо! писієїс асід), анитолову нуклеїнову кислоту (АМА, апійої! писієїс асід), манитолову нуклеїнову кислоту(див. статтю ІГештапп, С. Віоогд. апа
Мед. Спет. (2002) 10:841- 854), фтор-НМА (Б-НМА) або сполуки, визначені формулою Х: ча з де -
Че я -еДВХ й я В 5 ї,
Фосмуза Х де незалежно для кожного із згаданих щонайменше одного тетрагідропіранового аналога нуклеозиду формули Х:
Вх позначає гетероциклічне угрупування основи;
Тз і Та кожен незалежно позначає міжнуклеозидну зв'язуючу групу, що зв'язує тетрагідропірановий аналог нуклеозиду з антисмисловою сполукою, або один з Тз і Т4 позначає міжнуклеозидну зв'язуючу групу, що зв'язує тетрагідропірановий аналог нуклеозиду з антисмисловою сполукою, а інший з Тз і Т4 позначає Н, захисну групу гідроксилу, групу, пов'язану з кон'югатом, або 5' або 3'-кінцеву групу; ді д2 Яз да д5, де і д7 кожний незалежно позначає Н, С:-Свє алкіл, заміщений Сі-Свє алкіл, Се-Сє алкеніл, заміщений С2-Св алкеніл, С2-Св алкініл або заміщений С2-Св алкініл; і один з К: і Ко позначає атом водню, а інший вибраний з атома галогену, заміщеного або незаміщеного алкокси, Муї9г, 51, Мз, ОС(-Х)Уї, ОС(-Х)МУ о»,
МозС(-Х)МУ 1» ії СМ, де Х позначає О, 5 або М;, і кожен «., 9» і дз незалежно позначає Н або С.1-
Св алкіл.
У деяких втіленнях винаходу запропоновані модифікованні ТГП нуклеозиди формули Х, де
Дт, Чи, Ор, Дь ДО», де і ди кожен позначає Н. У деяких втіленнях винаходу щонайменше один з дт,
Оп, Ор, Де, З», дк і Ди відрізняється від Н. У деяких втіленнях винаходу щонайменше один з дт, Оп,
Ор, аг, д5, ді ди позначає метил. У деяких втіленнях винаходу запропоновані ТГП нуклеозиди формули Х, де один з Кі і К» позначає РЕ. У деяких втіленнях винаходу Кі позначає атом фтору, а Ко позначає Н, К: позначає метокси, а Ко позначає Н, і Кі позначає метоксиетокси, а Ко позначає Н.
При використанні в цьому документі "2'-модифікований" або "2'--заміщений" відноситься до нуклеозиду, що містить цукор, який містить замісник в 2' положенні, що відрізняється від Н або
ОН. 2'-Модифіковані нуклеозиди включають без обмеження нуклеозиди з не місточковими 2'- замісниками, такими як аліл, аміно, азидо, тіо, О-аліл, О-С1-С1о алкіл, -ОСЕз, О-(СНг)2-О-СН»з, 2'-
О(СНг»СН», О-(СНг)2-О-М(Ат) (Ви) або О-СНо-С(-0)-М(Ат)(Ни), де кожний Кт і Ки незалежно позначає Н, або заміщений або незаміщений С1-С:о алкіл. 2-Модифіковані нуклеозиди можуть додатково містити інші модифікації, наприклад, в інших положеннях цукру та/або в нуклеотидній основі.
При використанні в цьому документі "2'-Е" відноситься до цукру, що містить групу фтор в 2- положенні.
При використанні в цьому документі "2'-ОМе" або "2-ОСНз" або "2'-О-метил" кожен відноситься до нуклеозиду, що містить цукор, який містить групу, -ОСНз в 2'-положенні цукрового кільця.
При використанні в цьому документі "олігонуклеотид" відноситься до сполуки, що містить безліч зв'язаних нуклеозидів.
У деяких втіленнях винаходу один або більше з безлічі нуклеозидів модифікований. У деяких втіленнях винаходу олігонуклеотид містить один або більше рибонуклеозидів (РНК) та/або дезоксирибонуклеозидів (ДНК).
У цій області техніки також відомо багато інших біциклічних і трициклічних кільцевих систем сурогатів цукрів, які можна використовувати для модифікації нуклеозидів для включення в антисмислові сполуки (див., наприклад, оглядову статтю І ештапп, 9.С., Віоогдапіс апа Медісіпаї!
Спетівігу, 2002, 10, 841-854). Такі кільцеві системи можуть зазнавати різні додаткові заміщення для посилення активності. Способи одержання модифікованих цукрів також відомі фахівцям в цій області техніки. У нуклеотидів, що мають модифіковані цукрові угрупування, зберігаються угрупування нуклеотидних основ (природні, модифіковані або їх комбінації) для гібридизації з відповідною нуклеїновою кислотою-мішенню.
У деяких втіленнях винаходу антисмислові сполуки містять один або більше нуклеотидів, що мають модифіковані цукрові угрупування. У деяких втіленнях винаходу модифіковане цукрове угрупування є 2-МОБ. У деяких втіленнях винаходу модифіковані 2'--МОЕ нуклеотиди сконструйовані у вигляді гепмерного мотиву. У деяких втіленнях винаходу модифіковане цукрове угрупування є сСЕї У деяких втіленнях винаходу модифіковані СсЕї нуклеотиди сконструйовані за допомогою сегментів-крил гепмерного мотиву.
У деяких втіленнях винаходу в ЗНК В" і 2? разом означають бірадикал -О-СН(СНгОСНЗ)- (2'О-метоксиетил-біциклічні нуклеїнові кислоти - 5еїй аї аї., 2010, 9. Огд. Спет) або в К-, або в з-конфігурації.
Зо У деяких втіленнях винаходу в ЗНК В" і 2? разом означають бірадикал -0- СН(СНоСН5З)- (2'О-етил-біциклічні нуклеїнові кислоти - Зеїй аї аї.,, 2010, 9. Огд. Спет) або в Е-, або в 5- конфігурації.
У деяких втіленнях винаходу в ЗНК К" і К? разом означають бірадикал -0О-СН(СНз)- або в В- , або в 5-конфігурації. У деяких втіленнях винаходу КЕ" і В- разом означають бірадикал -О- СНе-
О-Сно- (Зепт аг а!., 2010, 9. Огу. Снет).
У деяких втіленнях винаходу в ЗНК К" і ЕК? разом означають бірадикал -0О-МАВ-СНз- (Беїй аї а!., 2010, 9. Огу. Спет).
У деяких втіленнях винаходу ланки ЗНК мають структуру, вибрану з наступної групи: г 5 50 СНз о | В о | в о | в (Ф) о) в)
З Н З
(К,5)-СЕї (К,5)-СМОЕ (К,5)-5'-Ме-І МА
Включення аналогів нуклеотидів, що посилюють спорідненість, в олігомер, такий як ЗНК або 2'-заміщені цукри, може дати можливість зменшення розміру олігомеру, що специфічно зв'язується, і може також зменшити верхню межу розміру олігомеру, до якого відбувається неспецифічне або аберантне зв'язування.
Автори винаходу оцінили нефротоксичність сполуки СЕТ (використовуючи (5)-СЕТ з послідовністю (Сполука ІЮ 6/411847 МО 2009/12495 і порівняльна сполука бета-О-окси-ЗНК (6/392063 УМО 2009/12495) і виявили, що сполуки СЕТ викликають несподівано високу нейротоксичність в порівнянні з контролем бета-О-окси-ЗНК. Дослідження було дослідженням однієї дози з умертвінням через З доби (методологію див. в прикладі 41 ЕР1984381, хоча автори винаходу використовували мишей ММК). Нефротоксичність була підтверджена гістологічним аналізом. Зокрема, ознаки нейротоксичності автори винаходу спостерігали при нижчих дозах сполуки СЕТ в порівнянні з дозами, при яких була відмічена сироваткова аланінамінотрансфераза (АТ), що вказує на те, що нефротоксичність сполук СЕТ може бути особливою проблемою. Таким чином, застосування кон'югатів за даним винаходом, таких як тривалентні кон'югати заїІМАс, у високій мірі корисно при зменшенні нефротоксичності сполук
ЗНК, таких як сполуки СЕТ.
У деяких втіленнях винаходу олігомер містить щонайменше 1 аналог нуклеозиду. У деяких втіленнях винаходу олігомер містить щонайменше 2 аналоги нуклеотиду. У деяких втіленнях винаходу олігомер містить 3-8 аналогів нуклеотидів, наприклад, 6 або 7 аналогів нуклеотидів. У безумовно найбільш прийнятних втіленнях винаходу щонайменше один з аналогів нуклеотидів є замкненою нуклеїновою кислотою (ЗНК); наприклад, щонайменше 3, або щонайменше 4, або щонайменше 5, або щонайменше 6, або щонайменше 7 або 8 з аналогів нуклеотидів може бути
ЗНК. У деяких втіленнях винаходу всі аналоги нуклеотидів можуть бути ЗНК.
Повинно бути зрозуміло, що при посиланні на переважний мотив нуклеотидної послідовності або нуклеотидну послідовність, яка складається тільки з нуклеотидів, олігомери за винаходом, які визначені цією послідовністю, можуть містити відповідний аналог нуклеотиду замість одного або більше нуклеотидів, присутніх в згаданій послідовності, таких як ланки ЗНК або інші аналоги нуклеотидів, які підвищують стабільність дуплексу/І т дуплексу олігомер/мішень (тобто аналоги нуклеотидів, що посилюють спорідненість).
Переважний аналог нуклеотиду є ЗНК, такою як окси-ЗНК (такою як бета-О-окси-ЗНК і альфа-ї -окси-ЗНК) та/або аміно-ЗНК (такою як бета-О-аміно-ЗНК і альфа-ї -аміно-ЗНК) та/або тіо-ЗНК (такою як бета-О-тіо-ЗНК і альфа-Іі -тіо-ЗНК) та/або ЕМА (такою як бета-О- ЕМА і альфа-
ІЇ-ЕМА).
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом, такий як ділянка А, може містити ланки
ЗНК та інші аналоги нуклеотидів. Додаткові аналоги нуклеотидів, присутні в межах олігомеру за винаходом, незалежно вибрані, наприклад, з: ланок 2'-О-алкіл-РНК, ланок 2"- аміно-ДНК, ланок 2"-фтор-ДНК, ланок ЗНК, ланок арабінонуклеїнової кислоти (АНК), ланок 2'- фтор-АНК, ланок
НМА, ланок ІМА (інтеркалуючої нуклеїнової кислоти - стаття Спгібїепзеп, 2002. Мисі. Асіа5. Кев. 2002 30: 4918-4925, включена в цей документ за допомогою посилання) і ланок 2"'"МОЕ. У деяких втіленнях винаходу в олігомері за винаходом, наприклад, в першій ділянці, або в безперервній нуклеотидній послідовності присутній тільки один тип аналогів нуклеотидів.
У деяких втіленнях винаходу олігомер згідно з винаходом (ділянка А) може, таким чином, містити щонайменше одну ланку замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК), наприклад, 1, 2, 3, 4, 5,6, 7 або 8 ланок ЗНК, наприклад, 3-7 або 4-8 ланок ЗНК або 3, 4, 5, 6 або 7 ланок ЗНК. У деяких втіленнях винаходу всі аналоги нуклеотидів є ЗНК. У деяких втіленнях винаходу олігомери можуть містити обидві з бета-О-окси-ЗНК і одну або більше наступних ланок ЗНК: тіо-ЗНК, аміно-ЗНК, окси-ЗНК та/або ЕМА або в бета-0, або в альфа-їЇ. конфігураціях або їх комбінації. У деяких втіленнях винаходу усі цитозинові ланки ЗНК є 5'-метил-цитозином. У деяких втіленнях винаходу олігомер (такий як перші і необов'язково другі ділянки) може містити обидві ланки ЗНК і ДНК. У деяких втіленнях винаходу сума комбінованих ланок ЗНК і ДНК складає 10-25, наприклад, 10-24, переважно 10-20, наприклад, 10-18, наприклад, 12-16. У деяких втіленнях винаходу за винаходом нуклеотидна послідовність олігомеру, його першої ділянки, така як безперервна нуклеотидна послідовність, складається з щонайменше однієї ланки ЗНК, а інші нуклеотидні ланки є ланками ДНК. У деяких втіленнях винаходу олігомер або його перша ділянка містить тільки ЗНК, аналоги нуклеотидів і нуклеотиди (такі як нуклеотиди РНК або ДНК, найприйнятніше ДНК), що зустрічаються в природі, необов'язково з модифікованими міжнуклеотидними зв'язками, такими як фосфоротіоат.
Рекрутинг РНКази
Відомо, що олігомерна сполука може функціонувати за допомогою розщеплювання мРНК- мішені, не опосередкованої РНКазою, наприклад, шляхом стеричного утруднення трансляції або іншими способами. У деяких втіленнях винаходу олігомери за винаходом здатні до рекрутингу ендорибонуклеази (РНКази), такої як РНКаза Н.
Переважно, щоб такі олігомери, такі як ділянка А або безперервна нуклеотидна послідовність, що містять ділянку з щонайменше 4, наприклад, щонайменше 5, наприклад, щонайменше б, наприклад, щонайменше 7 послідовних нуклеотидних ланок, наприклад, щонайменше 8 або щонайменше 9 послідовних нуклеотидних ланок (залишків), що включають 7,8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 або 16 послідовних нуклеотидів, які при формуванні в дуплексі з комплементарною РНК-мішенню здатні до рекрутингу РНКази (таких як ланки ДНК).
Безперервна послідовність, здатна до рекрутингу РНКази, може бути ділянкою У", на яку посилаються в контексті гепмера, як розкрито в цьому документі. У деяких втіленнях винаходу розмір безперервної послідовності, здатної до рекрутингу РНКази, такий як ділянка У", може бути більше, наприклад, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нуклеотидних ланок.
У ЕР 1222309 запропоновані способи визначення активності РНКази Н іп міїго, які можна використовувати для визначення здатності до рекрутингу РНКази Н. Олігомер вважають здатним до рекрутингу РНКази Н, якщо при забезпеченні комплементарної РНК-мішені він має початкову швидкість реакції, виміряної в пікомоль (пмоль)/л/хв, складовій щонайменше 195, наприклад, щонайменше 595, наприклад, щонайменше 1095 або більше 2095 від початкової швидкості реакції, визначеної з використанням тільки ДНК-олігонуклеотиду, що має таку ж послідовність основ, але що містить тільки ДНК-мономери без 2'-заміщень з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між усіма мономерами в олігонуклеотиді, використовуючи методологію, запропоновану в прикладах 91-95 ЕР 1222309.
У деяких втіленнях винаходу олігомер вважають по суті нездібним до рекрутингу РНКази Н, якщо при забезпеченні комплементарної РНК-мішені він має початкову швидкість реакції, виміряної в пмоль/л/хв, менше 195, наприклад, менше 595, наприклад, менше 1095 або менше 20965 початкової швидкості реакції, визначеної при використанні тільки ДНК-олігонуклеотиду без 2'-заміщень з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між усіма мономерами в олігонуклеотиді, використовуючи методологію, запропоновану в прикладах 91-95 ЕР 1222309.
В інших втіленнях винаходу олігомер вважають здатним до рекрутингу РНКази Н, якщо при забезпеченні комплементарної РНК-мішені і РНКази Н початкова швидкість реакції РНКази Н, виміряна в пмоль/л/хв, складає щонайменше 2095, наприклад, щонайменше 4095, наприклад, щонайменше 6095, наприклад, щонайменше 8095 від початкової швидкості реакції при використанні тільки ДНК-олігонуклеотиду без 2'-заміщень з фосфоротіоатними зв'язуючими групами між усіма мономерами в олігонуклеотиді, використовуючи методологію, запропоновану в прикладах 91-95 ЕР 1222309.
У характерному випадку ділянка олігомеру, яка формує послідовні нуклеотидні ланки, які при формуванні в дуплекс з комплементарною РНК-мішенню здатні до рекрутингу РНКази, складається з нуклеотидних ланок, які формують ДНК/РНК-подібний дуплекс з РНК-мішенню.
Олігомер за винаходом, такий як перша ділянка, може містити нуклеотидну послідовність, що містить і нуклеотиди, і аналоги нуклеотидів, і можуть набувати форми, наприклад, гепмера.
Зо Конструкція гепмера
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом, такий як перша ділянка, містить або являє собою гепмер. Гепмерний олігомер є олігомером, що містить безперервний відрізок з нуклеотидів, здатний до рекрутингу РНКази, такий як РНКаза Н, наприклад, ділянка з щонайменше 6 або 7 ДНК-нуклеотидів, на який в цьому документі посилаються як на ділянку (У), де ділянка У фланкована з 5' і 3' кінців ділянками з аналогів нуклеотидів, що посилюють спорідненість, наприклад, 1-6 аналогів нуклеотидів в 5'і 3' напрямі до безперервного відрізку нуклеотидів, здатних до рекрутингу РНКази, де на ці ділянки посилаються як на ділянки Х'(Х) і 2 (2) відповідно. Ділянки Х'і 2" можуть бути також позначені терміном "сегменти-крила" гепмера. Гепмерні ділянки розкриті в документах МО 2004/046160, УМО 2008/113832 і УМО 2007/146511.
У деяких втіленнях винаходу мономери, здатні до рекрутингу РНКази, вибрані з групи, що складається з мономерів ДНК, мономерів альфа-Ї -ЗНК, С4"-алкілованих мономерів ДНК (див. документи РСТ/ЕР2009/050349 і Мезієг єї аї., Віоогд. Мед. Спет. Гей. 18 (2008) 2296-2300, включені в цей документ за допомогою посилання) і нуклеотидів незамкненої нуклеїнової кислоти (ОМА; ипійпКей писівїс асій) (див. статтю РБіийег еї аї., Мої. Віозувзі., 2009, 10, 1039, включену в цей документ за допомогою посилання). ОМА є незамкненою нуклеїновою кислотою, де, як правило, С-С зв'язок С2-С3 рибози видалений з утворенням незамкнутого залишку "цукру". Переважно гепмер містить (полі)нуклеотидну послідовність формули (5'- 3) Х- У- 2, де ділянка Х (Х) (5 ділянка) складається з щонайменше одного або містить щонайменше один аналог нуклеотиду, наприклад, щонайменше одна ланка ЗНК, наприклад, від 1-6 аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК, і ділянка У" (У) складається з щонайменше чотирьох або містить щонайменше чотири або щонайменше п'ять послідовних нуклеотидів, здатних до рекрутингу РНКази (при формуванні в дуплекс з комплеменарною молекулою РНК, такою як
МРНК-мішень), таких як нуклеотиди ДНК, і ділянка 2 (2) (3' ділянка) складається з щонайменше одного або містить щонайменше один аналог нуклеотиду, наприклад, щонайменше одна ланка
ЗНК, наприклад, від 1-6 аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу ділянка Х' складається з 1, 2, 3, 4, 5 або 6 аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК, наприклад, від 2-5 аналогів нуклеотидів, таких як 2-5 ланок ЗНК, наприклад,
З або 4 аналоги нуклеотидів, таких як З або 4 ланки ЗНК; та/або ділянка 2 складається з 1, 2, 3,
4, 5 або 6 аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК, наприклад, від 2-5 аналогів нуклеотидів, таких як 2-5 ланок ЗНК, наприклад, З або 4 аналоги нуклеотидів, таких як З або 4 ланки ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу У" складається з або містить 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 або 12 послідовних нуклеотидів, здатних до рекрутингу РНКази, або від 4-12, або від 6-10, або від 7-9, наприклад, 8 послідовних нуклеотидів, здатних до рекрутингу РНКази. У деяких втіленнях винаходу ділянка У складається з щонайменше одної або містить щонайменше одну нуклеотидну ланку ДНК, наприклад, 1-12 ланок ДНК, переважно від 4-12 ланок ДНК, прийнятніше від 6-10 ланок ДНК, наприклад, від 7-10 ланок ДНК, прийнятніше 8, 9 або 10 ланок
ДНК.
У деяких втіленнях винаходу ділянка Х' складається з З або 4 або містить З або 4 аналоги нуклеотидів, таких як ЗНК, ділянка Х' складається з 7, 8, 9 або 10 ланок ДНК, їі ділянка 7 складається з З або 4 аналогів нуклеотидів, таких як ЗНК. Такі конструкції включають (Х'- У- 2 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, А-7-3. У переважному втіленні винаходу гепмер являє собою гепмер 3-9-4, навіть прийнятніше гепмер являє собою гепмер 3-10-3.
Додаткові гепмерні конструкції розкриті в документі УМО 2004/046160, включеному в цей документ за допомогою посилання. МО 2008/113832, яка просить пріоритет відносно попередньої заявки 5 60/977,409, включена в цей документ за допомогою посилання, відноситься до "короткомірних гепмерних олігомерів. У деяких втіленнях винаходу олігомери, представлені в цьому документі, можуть бути такими короткомірними гепмерами.
У деяких втіленнях винаходу олігомер, наприклад, ділянка Х", складається з безперервної нуклеотидної послідовності з сумарно 10, 11, 12, 13 або 14 нуклеотидних ланок, де безперервна нуклеотидна послідовність включає або має формулу (5- 3) Х- У- 7, де: Х' складається з 1, 2 або 3 ланок аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК; У" складається з 7, 8 або 9 суміжних нуклеотидних ланок, здатних до рекрутингу РНКази при формуванні в дуплекс з комплементарною молекулою РНК (такою як мРНК-мішень); і 2" складається з 1, 2 або 3 аналогів нуклеотидів, таких як ланки ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу Х' складається з 1 ланки ЗНК. У деяких втіленнях винаходу Х' складається з 2 ланок ЗНК. У деяких втіленнях винаходу Х' складається з З ланок ЗНК. У деяких втіленнях винаходу 2" складається з 1 ланки ЗНК. У деяких втіленнях винаходу 2 складається з 2 ланок ЗНК. У деяких втіленнях винаходу 2" складається з З ланок ЗНК. У деяких втіленнях винаходу У" складається з 7 нуклеотидних ланок. У деяких втіленнях винаходу У складається з 8 нуклеотидних ланок. У деяких втіленнях винаходу У" складається з 9 нуклеотидних ланок. У деяких втіленнях винаходу ділянка У складається з 10 нуклеозидних мономерів. У деяких втіленнях винаходу У" складається з 1-10 або містить 1-10 мономерів ДНК. У деяких втіленнях винаходу У" містить від 1-9 ланок ДНК, наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або 9 ланок ДНК. У деяких втіленнях винаходу У складається з ланок ДНК. У деяких втіленнях винаходу У містить щонайменше одну ланку ЗНК, що знаходиться в альфа-! -конфігурації, наприклад, 2, 3,4,5,6, 7, 8 або 9 ланок ЗНК в альфа-Ї! -конфігурації. У деяких втіленнях винаходу У" містить щонайменше одну ланку альфа-Ї -окси-ЗНК, або де всі ланки ЗНК в альфа- І -конфігурації є ланками альфач-і - окси-ЗНК. У деяких втіленнях винаходу число нуклеотидів, присутніх в Х'- У"- 7, вибране з групи, що складається з (ланки аналогів нуклеотидів - ділянка У" - ланки аналогів нуклеотидів): 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, або; 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9- 3, 3-9-2, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4, або; 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1, 2-10-3, 3-10-2.
У деяких втіленнях винаходу число нуклеотидів в Х'"- У"- 2" вибране з групи, що складається 3: 2- 7-1,1-7-2, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4 і 4-7-3. У деяких втіленнях винаходу кожна з ділянок Х і
У складається з трьох мономерів ЗНК, і ділянка У" складається з 8, або 9, або 10 нуклеозидних мономерів, переважно мономерів ДНК. У деяких втіленнях винаходу обоє з Х' і 2" складаються з двох ланок ЗНК кожен, і У" складається з 8 або 9 нуклеотидних ланок, переважно ДНК ланок. У різних втіленнях винаходу інші гепмерні конструкції включають конструкції, де ділянки Х' та/або 2 складаються з 3, 4, 5 або 6 аналогів нуклеозидів, таких як мономери, що містять цукор 2-0- метоксиетил-рибозу (2'-МОЕ), або мономери, що містять цукор 2- фтор-дезоксирибозу, і ділянка У" складається з 8, 9, 10, 11 або 12 нуклеозидів, таких як мономери ДНК, де ділянки Х'-
У- 2 мають 3-9-3, 3-10-3, 5-10-5 або 4-12-4 мономерів. Додаткові гепмерні конструкції розкриті в документі УМО 2007/146511А2, включеному в цей документ за допомогою посилання.
Гепмери ЗНК: гепмер ЗНК є гепмерним олігомером (ділянка А), що містить щонайменше один нуклеотид ЗНК. 5ЕО ІО МО 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 і 40 є гепмерними олігомерами ЗНК.
Олігомери з безперервною послідовністю з 10-16 нуклеотидів, яка комплементарна відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮО МО 33 або 34 або 45, можуть також бути гепмерними бо олігомерами, такими як гепмери ЗНК.
Міжнуклеотидні зв'язки
Нуклеозидні мономери олігомерів (наприклад, перша і друга ділянки), описані в цьому документі, з'єднують разом за допомогою міжнуклеозидних зв'язуючих груп. Доцільно кожен мономер зв'язують з 3- примикаючими мономерами за допомогою зв'язуючої групи.
Звичайному фахівцеві в цій області техніки повинно бути зрозуміло, що в контексті даного винаходу 5'-мономер на кінці олігомеру не утримує 5'-зв'язуючу групу, хоча він може містити або не містити 5'-кінцеву групу або зв'язуючу групу для кон'югації.
Терміни "зв'язуюча група" або "міжнуклеозидний зв'язок" призначені для позначення групи, здатної до ковалентного зв'язування разом двох нуклеотидів. Конкретні і переважні приклади включають фосфатні групи і фосфоротіоатні групи. Міжнуклеозидний зв'язок можна використовувати взаємозамінно з міжнуклеотидним зв'язком.
Нуклеотиди олігомеру за винаходом або його безперервну нуклеотидную послідовність сполучають разом за допомогою зв'язуючих груп. Доцільно кожен нуклеотид зв'язують з 3'- примикаючими нуклеотидами за допомогою зв'язуючої групи.
Відповідні міжнуклеотидні зв'язки включають зв'язки, перераховані в межах об'єму УМО 2007/031091, наприклад, міжнуклеотидні зв'язки, перераховані в першому параграфі сторінки 34 документи МО 2007/031091 (включеного в цей документ за допомогою посилання). У деяких втіленнях винаходу, де вони є зв'язками, що відрізняються від фосфодіефірного зв'язку (зв'язків) ділянки В (де вона присутня), переважно модифікувати міжнуклеотидний зв'язок з її нормального фосфодіефіру з одержанням зв'язку, стійкішого до дії нуклеаз, такого як фосфоротіоат або боранофосфат, де ці два зв'язки здатні розщеплюватися РНКазою Н, що також дає можливість антисмислового інгібування при зниженні експресії гена-мішені.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за даним винаходом містить один або більше нуклеозидних зв'язків, вибраних з групи, що складається 3 фосфоротіоатного, фосфородитіоатного і боранофосфатного зв'язків.
Переважними можуть бути міжнуклеотидні зв'язки, які запропоновані в цьому документі, що містять сірку (5), такі як фосфоротіоат або фосфородитіоат. Фосфоротіоатні міжнуклеотидні зв'язки також переважні, зокрема, для першої ділянки, наприклад, в гепмерах, міксмерах, антимирних олігомерах, що перемикають сплайсинрг, і тоталмерах.
Зо Термін "міксмер" відноситься до олігомерів, що містять як такі, що зустрічаються в природі, нуклеотиди, і такі, що не зустрічаються в природі, де, в протилежність гепмерам, тейлмерам і хедмерам, відсутня безперервна послідовність із понад 5, а в деяких втіленнях винаходу не більше ніж 4 послідовних, наприклад, не більше трьох послідовних нуклеотидів, що зустрічаються в природі, таких як ланки ДНК.
Термін "тоталмер" відноситься до однониткового олігомеру, який містить тільки такі, що не зустрічаються в природі нуклеозиди, такі як аналоги нуклеозидів з модифікованим цукром.
Для гепмерів міжнуклеотидні зв'язки в олігомері можуть бути, наприклад, фосфоротіоатним або боранофосфатним, щоб дати можливість розщеплювання РНК-мішені РНКазою Н.
Фосфоротіоат переважний для поліпшеної стійкості до нуклеаз і з інших причин, таким як простота одержання.
В одному аспекті, за винятком фосфодіефірного зв'язку між першою і другою ділянкою і необов'язково усередині ділянки В, інші міжнуклеотидні зв'язки олігомеру за винаходом, нуклеотиди та/або аналоги нуклеотидів зв'язані один з одним за допомогою фосфоротіоатних груп. У деяких втіленнях винаходу щонайменше 5095, наприклад, щонайменше 7095, наприклад, щонайменше 8095, наприклад, щонайменше 9095, наприклад, усі міжнуклеозидні зв'язки між нуклеозидами в першій ділянці відрізняються від фосфодіефіру (фосфату), наприклад, вибрані з групи, що складається з фосфоротіоатної, фосфородитіоатної або боранофосфатної. У деяких втіленнях винаходу щонайменше 5095, наприклад, щонайменше 7095, наприклад, щонайменше 8095, наприклад, щонайменше 9095, наприклад, усі міжнуклеозидні зв'язки між нуклеозидами в першій ділянці є фосфоротіоатом.
МО 09124238 відноситься до олігомерних сполук, що мають щонайменше один біциклічний нуклеозид, приєднаний до 3' або 5' кінця за допомогою нейтрального міжнуклеозидного зв'язку.
Олігомери за винаходом можуть, таким чином, мати щонайменше один біциклічний нуклеозид, приєднаний до 3' або 5' кінця нейтральним міжнуклеозидним зв'язком, таким як один або більше фосфотриефір, метилфосфонат, ММІ, амід-3, формацеталь або тіоформацеталь. Інші зв'язки можуть бути фосфоротіоатом.
Кон'югати олігомерів (ділянка С)
Наступний аспект винаходу являє собою кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, олігомер, що містить, за винаходом і щонайменше одне ненуклеотидне або неполінуклеотидне бо угрупування (С), ковалентно приєднане до олігомеру (А), необов'язково за допомогою лінкерної ділянки, розташованої між безперервною послідовністю олігомеру і кон'югатним угрупуванням (В та/або хХ).
Репрезентативні кон'югатні угрупування, які використані з олігонуклеотидами, можуть включати ліпофільні молекули (ароматичні і неароматичні), включаючи стероїдні молекули; білки (наприклад, антитіла, ферменти, сироваткові білки); пептиди; вітаміни (водорозчинні або жиророзчинні); полімери (водорозчинні або жиророзчинні); малі молекули, що включають лікарські засоби, токсини, молекули-репортери і ліганди рецепторів; вуглеводні комплекси; комплекси, що розщеплюють нуклеїнові кислоти; хелатори металів (наприклад, порфірини, тексафірини, краун-ефіри і т.д.); інтеркалятори, включаючи гібридні фотонуклеази/нтеркалятори; зшиваючі агенти (наприклад, фотоактивні, окисно-відновно- активні) та їх комбінації і похідні. Різні відповідні кон'югатні угрупування, їх одержання і зв'язок з олігомерними сполуками запропоновані, наприклад, в М/О 93/07883 і в патенті 5 Мо 6,395,492, причому кожен з документів повністю включений в цей документ за допомогою посилання.
Кон'югати олігонуклеотидів та їх синтези також описані у вичерпних оглядах Мапопйагап,
Апіізепзе Огид Тесппоіоду, Ргіпсірієв5, Бігаіедієв, апа Арріїсайопв, 5.Т. СтоокКе, єд., Сн. 16, Магсеї
ОеккКег, Іпс., 2001, ії Мапопагап, Апіїзепхе апа Мисівїс Асій Огид ЮОемеІортепі, 2002, 12, 103, кожен з яких повністю включений в цей документ за допомогою посилання.
У деяких втіленнях винаходу олігомер за винаходом направлений на печінку, тобто після системного введення сполуки накопичується в клітинах печінки (таких як гепатоцити). Напрямок на печінку можна значно посилити шляхом приєднання кон'югатного угрупування (С). Проте з метою одержання максимальної ефективності олігомеру часто бажано, щоб кон'югатне (або напрямне угрупування) було пов'язано з олігомером за допомогою біорозщеплюваного лінкера (В), такого як нуклеотидфосфатний лінкер. Таким чином, бажано використовувати кон'югатне угрупування, що посилює захоплення і активність в гепатоцитах. Посилення активності може бути наслідком посиленого захоплення, або може бути наслідком посиленої ефективності сполуки в гепатоцитах.
У деяких втіленнях винаходу олігомерна сполука є олігомером ЗНК, таким як гепмер, або, наприклад, антисмисловий олігомер ЗНК (на який в цьому документі можуть посилатися як на ділянку А), що містить антисмисловий олігомер, необов'язково біорозщеплюваний лінкер, такий
Зо як ділянка В, і вуглеводний кон'югат (на який можуть посилатися як на ділянку С).
Антисмисловий олігомер ЗНК може складати 7-30, наприклад, 8-26 нуклеозидів в довжину, і він містить щонайменше одну ланку (нуклеозид) ЗНК.
У деяких втіленнях винаходу кон'югат являє собою або може містити вуглевод, або містить вуглеводну групу. У деяких втіленнях винаходу вуглевод вибраний з групи, що складається з галактози, лактози, н-ацетилгалактозаміну, манози і манозо-б6-фосфату. У деяких втіленнях винаходу кон'югатна група являє собою або може містити манозу або манозо-6-фосфат.
Вуглеводні кон'югати можна застосовувати для посилення доставлення або активності у ряді тканин, таких як печінка та/або м'язи. Див., наприклад, ЕР 1495769, УМО 99/65925, Мапод еї аї.,
Віосопіцщд Спет (2009) 20(2): 213-21, 7аїверіп 6. ОгеїзКауа Спет Віодімегв. (2004) 1(10): 1401-17.
У деяких втіленнях винаходу вуглеводне угрупування є нелінійним вуглеводним полімером.
У деяких втіленнях винаходу олігомерна сполука є олігомером ЗНК, наприклад, антисмисловим олігомером ЗНК (на який в цьому документі можуть посилатися як на ділянку А), що містить антисмисловий олігомер, ділянку В, як визначено в цьому документі, і кон'югатне угрупування, направлене на рецептор асіалоглікопротеїну, таке як угрупування сзаМАс (на яке можуть посилатися як на ділянку С). Вуглеводне угрупування може бути мультивалентним, як, наприклад, 2, 3, 4 або 4 ідентичних або неідентичних вуглеводних угрупування можуть бути ковалентно сполучені з олігомером, необов'язково за допомогою лінкера або лінкерів (таких як ділянка У).
Кон'югатні угрупування саіМмАс
У деяких втіленнях винаходу вуглеводне угрупування є нелінійним вуглеводним полімером.
Вуглеводне угрупування може бути, проте, мультивалентним, як, наприклад, 2, 3, 4 або 4 ідентичних або неідентичних вуглеводних угрупування можуть бути ковалентно зв'язані з олігомером, необов'язково за допомогою лінкера або лінкерів. У деяких втіленнях у винаході запропонований кон'югат, олігомер за винаходом, що містить, і вуглеводне кон'югатне угрупування. У деяких втіленнях у винаході запропонований кон'югат, олігомер за винаходом, що містить, і кон'югатне угрупування, направлене на угрупування рецептора асіалоглікопротеїну, таке як угрупування СЗаіМАс, яке може формувати частину додаткової ділянки (на яке посилаються як на ділянку С).
У винаході також запропоновані антисмислові олігонуклеотиди ЗНК, кон'юговані з бо угрупуванням, направленим на рецептор асіалоглікопротеїну. У деяких втіленнях винаходу кон'югатне угрупування (таке як третя ділянка або ділянка С) містить угрупування, направлене на рецептор асіалоглікопротеїну, таке як галактоза, галактозамін, М-форміл-галактозамін, М- ацетилгалактозамін, М-пропіоніл-галактозамін, М-н-бутаноїл-галактозамін і М- ізобутаноїлгалактозамін. У деяких втіленнях винаходу кон'югат містить галактозний кластер, такий як тример М-ацетилгалактозаміну. У деяких втіленнях винаходу кон'югатне угрупування містить саїіМАс (М-ацетилгалактозамін), такий як моновалентний, двовалентний, тривалентний або чотиривалентний сСаіМАс. Тривалентні кон'югати (сзамАс можна застосовувати для направлення сполуки в печінку. Кон'югати (замАс використані з метилфосфонатом і антисмисловими олігонуклеотидами пептидної нуклеїнової кислоти (ПНК) (наприклад, 05 5,994517 і Наподеїапа еї аї!., Віосопіцд Спет. 1995 Мом - ЮОес;6(6):695- 701) і вІРНК (наприклад,
УМО 2009/126933, МО 2012/089352 і МО 2012/083046). Посилання на СаїІМАс і на конкретні кон'югати, використовувані там, включені в цей документ за допомогою посилання. У УМО 2012/083046 розкриті 5іРНК з кон'югатними угрупуваннями саіМАс, що містять розщеплювані фармакокінетичні модулятори, які підходять для застосування в даному винаході, де переважні фармакокінетичні модулятори є С16 гідрофобними групами, такими як пальмітоїл, гексадец-8- еноїл, олеїл, (9Е,12Е)-октадека-9,12-діеноїл, діоктаноїл і С16-С20 ацил. Розщеплювані фармакокінетичні модулятори "046 можуть також бути холестерином.
Направляючі угрупування (кон'югатні угрупування) можуть бути вибрані з групи, що складається з: галактози, галактозаміну, М-форміл-галактозаміну, М-ацетилгалактозаміну, М- пропіонілгалактозаміну, М-н-бутаноїл-галактозаміну, М-ізобутаноїлгалактозаміну, галактозного кластера і тримера М-ацетилгалактозаміну, і можуть мати фармакокінетичний модулятор, вибраний з групи, що складається з: гідрофобної групи, що має 16 або більше атомів вуглецю, гідрофобної групи, що має 16-20 атомів вуглецю, пальмітоїлу, гексадец-8-еноїлу, олеїлу, (9Е,12Е)-октадека-9,12-діеноїлу, діоктаноїлу, С16-С20 ацилу і холестерину. Деякі кластери саіМмАс, розкриті в "046, включають: (Е)-гексадец-в-еноїлу (С16), олеїлу (С18), (9Е,12Е)- октадека-9,12-діеноїлу (С18), октаноїлу (С8), додеканоїлу (С12), С-20 ацилу, С24 ацилу, діоктаноїлу (2хС8). Направне угрупування - направне угрупування фармакокінетичного модулятора може бути пов'язане з полінуклеотидом за допомогою фізіологічно лабільного зв'язку, або, наприклад, дисульфідного зв'язку, або поліетиленгліколевого (ПЕГ) лінкера.
Зо Винахід також відноситься до застосування фосфодіефірних лінкерів між олігомером і кон'югатной групою (у цьому документі на них посилаються як на ділянку В, і доцільно вони розташовані між олігомером ЗНК і вуглеводною кон'югатною групою).
Для направлення на гепатоцити в печінці переважний направляючий ліганд є галактозним кластером.
Галактозний кластер містить молекулу, яка має, наприклад, таку, що містить від двох до чотирьох кінцевих похідних галактози. При використанні в цьому документі термін "похідна галактози" включає і галактозу, і похідні галактози, що мають спорідненість до рецептора асіалоглікопротеїну, рівну або більшу, ніж спорідненість галактози. Кінцева похідна галактози приєднана до молекули за допомогою її С-1 атома вуглецю. Рецептор асіалоглікопротеїну (АБОРІ) експресується, в основному, на гепатоцитах і зв'язує розгалужені глікопротеїни з кінцевою галактозою. Переважний галактозний кластер має три кінцевих галактозаміни або похідні галактозаміну, кожна з яких має спорідненість до рецептора асіалоглікопротеїну.
Прийнятніший галактозний кластер має три кінцевих М-ацетил-галактозаміну. Інші терміни, загальноприйняті в цій області техніки, включають трьохантенну галактозу, тривалентну галактозу і тример галактози. Відомо, що кластери трьохантенної похідної галактози зв'язуються з АБОРІ з більшою спорідненістю, ніж похідна галактози, такою, що має двохантенну і одноантенну структуру (Ваепгідег апа Рієїє, 1980, СеїІ, 22, 611-620; СоппоїПу єї а)ї., 19821. Віо!.
Спет., 257,939-945). Для досягнення нМ спорідненості потрібна мультивалентність. Згідно МО 2012/083046 приєднання одної похідної галактози, що має спорідненість до рецептора асіалоглікопротеїну не забезпечує функціональне доставлення полінуклеотиду РНКі в гепатоцити іп мімо при спільному введенні з полімером доставлення.
Галактозний кластер може містити дві або переважно три похідні галактози, кожна з яких пов'язана з центральною точкою розгалуження. Похідні галактози приєднані до центральної точки розгалуження за допомогою С-1 атомів вуглецю сахаридів. Похідна галактози переважно пов'язана з точкою розгалуження за допомогою лінкера або спейсера. Переважний спейсер є гнучким гідрофільним спейсером (патент 5 5885968; Віеззеп еї аї!. У. Мей. Спегп. 1995 Мої. 39 р. 1538-1546). Переважний гнучкий гідрофільний спейсер є ПЕГ спейсером. Переважний ПЕГ спейсер є ПЕГЗ спейсером. Точка розгалуження може бути будь-якою малою молекулою, яка дає можливість приєднання трьох похідних галактози і додатково дає можливість приєднання 60 точки розгалуження до олігомеру. Ілюстративною групою точки розгалуження є ди-лізин.
Молекула ди-лізину містить три групи амінів, за допомогою яких можуть бути приєднані три похідних галактози і карбоксильна реакційна група, за допомогою якої ди-лізин може бути приєднаний до олігомеру. Приєднання точки розгалуження до олігомеру може відбуватися за допомогою лінкера або спейсера. Переважний спейсер є гнучким гідрофільним спейсером.
Переважний гнучкий гідрофільний спейсер є ПЕГ спейсером. Переважний ПЕГ спейсер є ПЕГЗ спейсером (три етиленові ланки). Галактозний кластер може бути приєднаний до 3' або 5' кінця олігомеру з використанням способів, відомих в цій області техніки.
Переважна похідна галактози є М-ацетил-галактозаміном (саїІМАс). Інші сахариди, що мають спорідненість до рецептора асіалоглікопротеїну, можуть бути вибрані з переліку, що містить: галактозамін, М-н-бутаноїлгалактозамін і М-ізо-бутаноїлгалактозамін. Значення спорідненості різних похідних галактози до рецептора асіалоглікопротеїну вивчено (див., наприклад: Чорвбї, 5.Т. апа Огіскатег, К.ОВ.С. 1996, 271, 6686) або легко визначається з використанням способів, характерних в цій області техніки.
Одне втілення галактозного кластера ан
Її
Ноя
З я ех наб Усе Що на Му ху м дн їх ге -й й ЕЙ нано Ї о
Й се є М хек В ниж шк и з Й за Бу У
З я з і: їх г хе ночі зе я т хх ще Кк х ви ший,
Б й г
Одне вубуеня туману со кисетерах ще ру Метр В, щ й Я їм й дич
Б. ї во ї хто рухому тату ї ? не фоетанфт ов
Щ ж В
І ї 7 де З х дей шко ШЕУ с: КЗ
НК федри рев І
МЕ М
Ме
Галактозний кластер з ПЕГ спейсером між точкою розгалуження і нуклеїновою кислотою
Додаткові приклади кон'югата за винаходом проілюстровані нижче:
А, а нич ни не и чо Ї вже і: пе в ко і і і ї я
Со і: й , ? в ше;
Н я НІ ве Ко ИЙ не отит мать 1 з йешек я ак А І і Пенн
Ї « Не Днтисмисловий опігомуюлестеа НК
ІД ; Н і
КУ п ан ан ак й очи, йняе Х
ВВ у ши зе Ї Я угрупування (
Ки хе 2 Ех Й Ї. ї ве Долота ур ке : М с - 5 Е й ой ее ве і: а. ккд конячку кдкункна яку дня
Й Ї я НКж тис мний ОЛІКОНуклеетя ЯН ще М. оедечий ритодет о ний во 1 що и р йо че
Бже і. '" у МШодатвовий хензютни покори тоди ори кни Й ше гу ру ій є В і АНТМОМНоЛЮВИИ пло
Ше е а й | с і ж т ру ни кр с йнае
ПИВ Ко о В у вв шин ОпИОНуклЕОТИА ЯК он он чат шшшшшк; ; аку са С :
І ох Ши В нак ни й Н охе-ено ен денМ о в Енн є і: Ку х он г де і 4
Жещог В хатні ери | ге М
Бан ща й її
НО рем ев м я денв й б а ьо
Е рин з Же а: г й Кос ох прі В фо ж ме з -
Не рлитькту Н дЕНЯ Я
При використанні в описаних вище кон'югатах кластера саіМАс гідрофобне або ліпофільне (або додаткове кон'югатне) угрупування (тобто фармакокінетичні модулятори) є необов'язковим при використанні олігомерів ЗНК, таких як антисмислові олігонуклеотиди ЗНК.
На фігурах показані конкретні кластери СсСаїЇІМАс, використовувані в даному дослідженні, Соп 1,2, 3, 4 і Соп/та, 2а, За і 4а (які показані з необов'язковим лінкером Сб, що з'єднує кластер саїІМАс в олігомері).
У переважному втіленні винаходу кон'югатне угрупування кон'югата антисмислового олігонуклеотиду містить або складається з Сопі 1, 2, 3, 4 і Соп/1а, 2а, За і 4а. Найприйнятніше кон'югатне угрупування містить або складається з Сопі| 2а.
В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат антисмислового олігонуклеотиду вибраний з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 і 24.
Кожне вуглеводне угрупування кластера саіМАс (наприклад, СаіМАс) може бути, таким чином, сполучене з олігомером за допомогою спейсера, такого як (полі)етиленгліколевий (ПЕГ) лінкер, такий як ди-, три-, тетра-, пента-, гексаетиленгліколевий лінкер. Як показано вище, ПЕГ угрупування формує спейсер між галактозним цукровим угрупуванням і пептидним (показаний трилізин) лінкером.
У деяких втіленнях винаходу кластер сафмМАс містить пептидний лінкер, наприклад, трипептид Туг-Азр(Азр) або дипептид Азр(Азхр), який приєднаний до олігомеру (або до ділянки У або ділянки В) за допомогою бірадикального лінкера, наприклад, кластера саіІМАс, який може містити наступні бірадикальні лінкери: ні сн во то, ке
НО НК поети вв, З ре о
С ІФ во ЯМ в З і що ОН щем З
Ще (чик: г Оу ї, а бо не цщ в аз АКА кр
КЕ оинитних ЯК но намодюв олив
Бнае г. м нм и я почне «Мн й г пк 7 Ве
В' позначає бірадикал, переважно вибраний з -С2На-, -СзНе-, -СаНв-, -С5Ніо-, -СеНіг-, 1,4- циклогексилу (-СвН:о-), 1,4-фенілу (-СвеНа-), -С2НаОСегНа-, -СаНаОС2На)2- або -С2НаОСегНа)з-,
Фс(оОсСНне-, -ФК(0)С2НА-, -С(0)ОзНе-, -С(О)СаНв-, -С(О)С5Ніо-, -С(О)СевНі2г-, 1,4-циклогексилу (-
С(О)СвНіо-), 1,4-фенілу (-(0)СеНа-), -С(0)С2НаОС2На-, -Ф(0)С2На(ОС2На)»- або -
Ф(0СНаОС»На)з-.
В деяких втіленнях винаходу К!' позначає бірадикал, переважно вибраний з -С2На-, -СзіНе-, - баНв-, -Сб5Ніо-, -СвНіг-, 1,4-циклогексилу (-СвНіо-), 1,4-фенілу (-СвНа-), -С2НАаОСоНаА, -
СгнЯОСс»НаІ)26- або -С2НаОСег На) з-.
Вуглеводний кон'югат (наприклад, (замМмАс) або вуглеводне лінкерне угрупування
Зо (наприклад, угрупування вуглевод-ПЕГ) можуть бути ковалентно сполучені (зв'язані) з олігомером за допомогою групи точки розгалуження, таким як амінокислота або пептид, який доцільно містить дві або більше амінних груп (наприклад, 3, 4 або 5), таких як лізин, ди-лізин, або три-лізин або тетра-лізин. Молекула три-лізину містить чотири групи амінів, за допомогою яких можуть бути приєднані три вуглеводні кон'югатні групи, такі як похідні галактози (наприклад, СсаіМАс), і додатковий кон'югат, такий як гідрофобне або ліпофильне угрупування/група, і карбоксильну реакційну групу, за допомогою якої три-лізин може бути приєднаний до олігомеру. Додатковий кон'югат, такий як ліпофильне/гідрофобне угрупування, може бути приєднаний до залишку лізину, приєднаного до олігомеру.
Фармакокінетичні модулятори
Сполука за винаходом може додатково містити одне або більше додаткових кон'югатних угрупувань, з яких особливий інтерес представляють ліпофильні або гідрофобні угрупування, наприклад, коли кон'югатна група є вуглеводним угрупуванням. Такі ліпофильні або гідрофобні угрупування можуть діяти як фармакокінетичні модулятори і можуть бути ковалентно зв'язані або з вуглеводним кон'югатом, або з лінкером, що зв'язує вуглеводний кон'югат з олігомером, або з лінкером, що зв'язує множинні вуглеводні кон'югати (мультивалентні кон'югати), або з олігомером, необов'язково за допомогою лінкера, такого як біорозщеплюваний лінкер.
Таким чином, олігомер або кон'югатне угрупування можуть, таким чином, містити фармакокінетичний модулятор, такий як ліпофільні або гідрофобні угрупування. Такі угрупування розкриті в контексті кон'югатів БіРНК в УМО 2012/082046. Гідрофобне угрупування може містити С8-С3б жирну кислоту, яка може бути насиченою або ненасиченою. У деяких втіленнях винаходу можна використовувати С10, С12, С14, С16, С18, 220, 022, С24, С26, С28,
Сс30, 32 і С34. Гідрофобна група може мати 16 або більше атомів вуглецю. Ілюстративні відповідні гідрофобні групи можуть бути вибрані з групи, що містить: стерин, холестерин, пальмітоїл, гексадек-8-еноїл, олеїл, (9Е,12Е)-октадека-9,12-діеноїл, діоктаноїл і С16 С20 ацил.
Згідно УМО'346 гідрофобних груп, що мають менше 16 атомів вуглецю, менш ефективні при посиленні спрямованості полінуклеотиду, але їх можна використовувати в безлічі копій (наприклад, 2х, наприклад, 2х С8 або С10, С12 або С14) для посилення ефективності.
Фармакокінетичні модулятори, корисні як угрупування, що направляють полінуклеотид, можуть бути вибрані з групи, що складається з: холестерину, алкільної групи, алкенільної групи, алкінільної групи, арильної групи, аралкільної групи, аралкенільної групи і аралкінільної групи, кожна з яких може бути нормальною, розгалуженою або циклічною. Фармакокінетичні модулятори переважно є вуглеводнями, що містять тільки атоми вуглецю і водню. Проте можуть бути допустимі заміщення або гетероатоми, що зберігають гідрофобність, наприклад, атом фтору.
Ліпофільні кон'югати
У деяких втіленнях винаходу кон'югатна група є або може містити ліпофільне угрупування, таке як стерин (наприклад, холестерин, холестерил, холестанол, стигмастерин, холанову кислоту і ергостерин). У деяких втіленнях винаходу кон'югат являє собою або містить токоферол (прикладами є Сопі 6 і Соп) ба на Фіг. 2). У деяких втіленнях винаходу кон'югат являє собою або може містити холестерин (прикладами є Сопі 5 і Сопі 5а на фіг. 2).
У деяких втіленнях винаходу кон'югат являє собою або може містити ліпід, фосфоліпід або ліпофільний спирт, такий як катіонний ліпід, нейтральний ліпід, сфінголіпід, і жирну кислоту, таку як стеаринова, олеїнова, елаїдинова, лінолева, ліноленелаїдинова, ліноленова і міристинова кислота. У деяких втіленнях винаходу жирна кислота містить С4-С30 насичений або ненасичений алкільний ланцюг. Алкільний ланцюг може бути нормальним або розгалуженим.
Ліпофільні кон'югатні угрупування можна використовувати, наприклад, для вимірювання гідрофільної природи олігомерної сполуки і посилення проникнення в клітину.
Ліпофільні угрупування включають, наприклад, стерини, станоли і стероїди і споріднені сполуки, такі як холестерин (патент 5 Мо 4,958,013 і І еі5іпдег еї аї., Ргос. Маї!. Асайд. 5сі. ОБ5А, 1989, 86, 6553), тіохолестерин (Обегпаизег еї аїЇ, Мис! Асід5 Кевз., 1992, 20, 533), ланостерин, копростанол, стигмастерин, ергостерин, кальциферол, холева кислота, дезоксихолева кислота, естрон, естрадіол, естратриол, прогестерон, стильбестрол, тестостерон, андростерон, дезоксикортикостерон, кортізон, 17-гідроксикортикостерон, їх похідні і тому подібне. У деяких втіленнях винаходу кон'югат може бути вибраний з групи, що складається з холестерину, тіохолестерину, ланостерину, копростанолу, сигмастерину, ергостерину, кальциферолу, холевої кислоти, дезоксихолевої кислоти, естрону, естрадіолу, естратриолу, прогестерону, стильбестролу, тестостерону, андростерону, дезоксикортикостерону, кортизону і 17- гідроксикортикостерону. Інші ліпофільні кон'югатні угрупування включають аліфатичні групи, такі як, наприклад, прямоланцюгові, розгалужені і циклічні алкіли, алкеніли і алкініли. Аліфатичні групи можуть мати, наприклад від 5 до приблизно 50, від 6 до приблизно 50, від 8 до приблизно 50 або від 10 до приблизно 50 атомів вуглецю. Приклади аліфатичних груп включають ундецил, додецил, гексадецил, гептадецил, октадецил, нонадецил, терпени, борніл, адамантил, їх похідні і тому подібне. У деяких втіленнях винаходу один або більше атомів вуглецю в аліфатичній групі можуть бути заміщені гетероатомом, таким як О, 5 або М (наприклад, геранілоксигексил).
Додаткові відповідні ліпофільні кон'югатні угрупування включають аліфатичні похідні гліцерину, такі як алкілгліцерини, біс(алкіл)гліцерини, трис(алкіл) гліцерини, моногліцериди, дигліцериди і тригліцериди. У деяких втіленнях винаходу ліпофільний кон'югат є ди-гексилдецил-рац- гліцерином або 1,2-ди-О-гексилдецил-рац-гліцерином (Мапопйагап еї аї., Теїігапейдгоп Гек., 1995, 36, 3651; ЗПпеа, еї аїЇ., Мисі. Асій5 Кев5., 1990, 18, 3777) або їх фосфонатами. Насичені і ненасичені жирні функціональні групи, такі як, наприклад, жирні кислоти, жирні спирти, жирні складні ефіри і жирні аміни, можуть також служити як ліпофільні кон'югатні угрупування. У деяких втіленнях винаходу жирні функціональні групи можуть містити від приблизно 6 атомів вуглецю до приблизно 30 або від приблизно 8 до приблизно 22 атомів вуглецю. Приклади жирних кислот включають капринову, каприлову, лауринову, пальмітинову, міристинову, стеаринову, олеїнову, лінолеву, ліноленову, арахідонову, ейкозенову кислоти і тому подібне.
У додаткових втіленнях винаходу ліпофільні кон'югатні групи можуть бути поліциклічними ароматичними групами, що мають від 6 до приблизно 50, від 10 до приблизно 50 або від 14 до приблизно 40 атомів вуглецю. Ілюстративні поліциклічні ароматичні групи включають пірени, пурини, акридини, ксантини, флуорени, фенантрени, антрацени, хіноліни, ізохіноліни, бо нафталіни, їх похідні і тому подібне. Інші відповідні ліпофільні кон'югатні угрупування включають
Зо ментоли, тритили (наприклад, диметокситритил (ОМТ)), феноксазини, ліпоєву кислоту, фосфоліпіди, прості ефіри, тіоефіри (наприклад, гексил-5-тритилтіол), їх похідні і тому подібне.
Одержання ліпофільних кон'югатів олігомерних сполук широко описано в цій області техніки, наприклад, в статтях Заізоп-Вентоагаз єї аі, ЕМВО ., 1991, 10, 1111; Карапом єї а!., РЕВЗ І ей., 1990, 259, 327; Зміпагспик еї аї, Віоспітіє, 1993, 75, 49; Мівнга єї аї., Віоспіт. Віорнув. Асіа, 1995, 1264, 229 і Мапопагап еї аї., Техгапеагоп ГГ ей., 1995, 36, 3651.
Олігомерні сполуки, що містять кон'югатні угрупування, мають спорідненість до ліпопротеїну низької щільності (ЛІЛНЩ), можуть сприяти забезпеченню ефективної системи направленої доставки. Високі рівні експресії рецепторів ЛОНІЩ на пухлинних клітинах робить. ЛИНЩ привабливим носієм для селективного доставлення лікарських засобів в ці клітини (Киптр еї аї.,
Віосопіндаїє Спет., 1998, 9, 341; Рігевіопе, Віосопіпдаїє Спет., 1994, 5, 105; Мівнга, єї аї.,
Віоспіт. Віорпу5. Асіа, 1995, 1264, 229). Угрупування, що мають спорідненість до ЛІИНЩЦ, включають багато ліпофільних груп, таких як стероїди (наприклад, холестерин), жирні кислоти, їх похідні і комбінації У деяких втіленнях винаходу кон'югатні угрупування, що мають спорідненість до ЛІИПНЩ, можуть бути діолеїловими ефірами холевих кислот, таких як хенодезоксихолева кислота і литохолева кислота.
У деяких втіленнях винаходу ліпофільні кон'югати можуть бути або можуть включати біотин.
У деяких втіленнях винаходу ліпофільні кон'югати можуть бути або можуть містити гліцерид або складний ефір гліцериду.
Ліпофільні кон'югати, такі як стерини, станоли і станини, такі як холестерин або такі, як розкрито в цьому документі, можна використовувати для посилення доставлення олігонуклеотиду, наприклад, в печінку ("у характерному випадку в гепатоцити).
У переважному втіленні винаходу кон'югатне угрупування кон'югата антисмислового олігонуклеотиду містить або складається з Соп| 5, Ба, 6 або ба. Прийнятніше кон'югатне угрупування містить або складається з Сопі 5а.
В іншому переважному втіленні винаходу кон'югат антисмислового олігонуклеотиду вибраний з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 41, 42 і 43.
Приведені нижче посилання також відносяться до застосування ліпофільних кон'югатів:
Кобуїапека еї а!., Асіа Віоспіт Рої. (1999); 46(3): 679-91. ЕРеїІрег сеї аї,. Віотагїегіа!5 (2012) 33(25): 599-65); Спіамо єї а!., У Ога Снет (2010) 75(20): 6806-13. Кошакі єї а)І., Сит Мей Спет (2009) 16(35): 4728-42. Содеаиц єї а! 9). Мед. Спет. (2008) 51(15): 4374-6.
Лінкери (наприклад, ділянка В або ХУ)
Зв'язок або лінкер є сполукою між двома атомами, яка зв'язує одну потрібну хімічну групу або сегмент з іншою потрібною хімічною групою, або сегментом за допомогою одного або більше ковалентних зв'язків. Кон'югатні угрупування (або направляючі або блокуючі угрупування) можуть бути приєднані до олігомерної сполуки безпосередньо або за допомогою зв'язуючого угрупування (лінкерного або прив'язуючого), лінкера. Лінкери є біфункціональними угрупуваннями, що служать для ковалентного сполучення третьої ділянки, наприклад, кон'югатного угрупування, з олігомерною сполукою (наприклад, з ділянкою А). У деяких втіленнях винаходу лінкер містить ланцюгову структуру олігомеру з ланок, що повторюються, таких як етиленгліколеві або амінокислотні ланки. Лінкер може мати щонайменше дві функціональні групи, одну для приєднання до олігомерної сполуки, а іншу для приєднання до кон'югатного угрупування. Приклади функціональних груп лінкера можуть бути електрофільними для взаємодії з нуклеофильними групами на олігомері або кон'югатного угрупування або нуклеофільними для взаємодії з електрофільними групами. У деяких втіленнях винаходу функціональні групи лінкера включають аміно, гідроксил, карбонову кислоту, тіол, фосфорамідат, фосфоротіоат, фосфат, фосфіт, ненасичені зв'язки (наприклад, подвійні або потрійні зв'язки) і тому подібне. Деякі приклади лінкерів включають 8-аміно-3,6б-діоксаоктанову кислоту (АБО), сукцинимідил-4-(М-малеімідометил)циклогексан-І-карбоксилат (ЗМО), 6- аміногексанову кислоту (АНЕХ або АНА), б-аміногексилокси, 4-аміномасляну кислоту, 4- аміноциклогексилкарбонову кислоту, сукцинімідил-4-(М-малеімідометил)циклогексан-І-карбокси- (с5МСС), сукцинімідил-мета-малеімідо-бензоїлат (МВ5), сукцинімідил-М-е-малеїімідо- капроїлат (ЕМС5), сукцинімідил-6-(бета-малеімідо-пропіонамідо)гексаноат (5МРН), сукцинімідил-М-(а-малеіїмідоацетат) (АМА5), сукцинімідил-4-(пара-малеімідофеніл)бутират (ЗМРВ), бета-аланін (реїа-АГ А), фенілгліцин (РНО), 4-аміноциклогексанову кислоту (АСНС), бета-(циклопропіллуаланін (бета-СУРК), амінододеканову кислоту (АОС), алілендіоли, полієтиленгліколи, амінокислоти і тому подібне.
У цій області техніки відома широка різноманітність додаткових лінкерних груп, які можуть бути корисні при приєднанні кон'югатних угрупувань до олігомерних сполук. Огляд багатьох з бо корисних лінкерних груп можна знайти, наприклад, в кн. Апіїзепзе Кезеагсіп апа Арріїсайопв, 5.
Т. СтооКе апа В. Герієи, Едз., САС Ргезв5, Воса Наїйоп, Ніа., 1993, р. 303-350. Дисульфідний зв'язок використаний для зв'язування 3'-кінця олігонуклеотиду з пептидом (Согеу, еї аї., Зсіепсе 1987, 238, 1401; исКегтапп, еї аї, У Ат. Спет. 5ос. 1988, 110, 1614; і Согеу, еї аї.,, У Ат. Снет. зоб. 1989, 111, 8524). У статті Меї5оп, еї аї., Мисі. Асіда5 Кев5. 1989, 17, 7187 описаний зв'язуючий реагент для приєднання біотину до 3'-кінця олігонуклеотиду. Цей реагент М-Етос-0О-ОМТ-3- аміно-1,2-пропандіол є у продажу від компанії Сіопіеспй Іарогаїгіезє (Пало Алто, штат
Каліфорнія) під назвою 3'-Атіпе. Він також є у продажу під назвою 3'-Атіпо-Модійег Кеадепі від компанії (зІіеп Кезеагспй Согрогайоп (Стерлінг, штат Вірджинія). Цей реагент також використовували для зв'язування пептиду з олігонуклеотидом, як описано в статті Уцау, еї аї.,
Теїгапейдгоп І ецег5 1991, 32, 879. Подібний комерційний реагент для зв'язування з 5'-кінцем олігонуклеотиду є 5'-Атіпо-Модійег Сб. Ці реагенти є у продажу від компанії Сіеп Кезеагсп
Согрогайоп (Стерлінг, штат Вірджинія). Ці або подібні сполуки були використані дослідниками
Кгієд, еї аї, Апіїзепзе Кезеагсп апа ЮОемеІортепі 1991, 1, 161, для зв'язування флуоресцеїну з 5'- кінцем олігонуклеотиду. Інші сполуки, такі як акридин, приєднані до 3'-кінцевій фосфатній групі олігонуклеотиду за допомогою поліметиленового зв'язку (Ав5зеїїпе, еї аї!., Ргос. Май. Асай. 5бі.
БА 1984, 81, 3297). Будь-які з описаних вище груп можна використовувати у вигляді окремого лінкера або в комбінації з одним або більше додаткових лінкерів.
Лінкери та їх застосування при одержанні кон'югатів олігомерних сполук запропоновано на рівні техніки, наприклад, в документах МУМО 96/11205 і УМО 98/52614 і патентах О5 МоМо 4,948,882; 5,525,465; 5,541,313; 5,545,730; 5,552,538; 5,580,731; 5,486,603; 5,608,046; 4,587,044; 4,667,025; 5,254,469; 5,245,022; 5,112,963; 5,391,723; 5,510475; 5,512,667; 5,574,142; 5,684,142; 5,770,716; 6,096,875; 6,335,432 і 6, 335,437, МО 2012/083046, кожен з яких повністю включений за допомогою посилання.
При використанні в цьому документі фізіологічно лабільний зв'язок є лабільним зв'язком, який є розщеплюваним в умовах, що зустрічаються в норм, або аналогічних тим, що зустрічаються в організмі ссавця (також званим розщеплюваним лінкером, проілюстрованим як ділянка В на Фіг. 12 ї 13). Фізіологічні лабільні зв'язуючі групи вибрані з груп, що зазнають хімічного перетворення (наприклад, розщеплювання) при знаходженні в певних фізіологічних умовах. Внутрішньоклітинні умови ссавців включають хімічні умови, такі як рН, температура,
Зо окислювальні або відновні умови або агенти, і концентрацію солі, що виявляються або аналогічні тим, що зустрічаються в клітинах ссавців. Внутрішньоклітинні умови ссавців також включають наявність ферментативної активності, в нормі присутньої в клітині ссавця, наприклад, активності протеолітичних або гідролітичних ферментів. У деяких втіленнях винаходу розщеплюваний лінкер чутливий до нуклеази (нуклеазам), яка може, наприклад, експресуватися в клітині-мішені, ії як такий, що детально описано в цьому документі, лінкер може бути короткою ділянкою (наприклад, 1-10) нуклеозидів, пов'язаних фосфодіефірними зв'язками, такими як нуклеозиди ДНК.
Хімічне перетворення (розщеплювання лабільного зв'язку) може бути ініційоване шляхом додавання в клітину фармацевтично прийнятного агента або може відбуватися спонтанно, коли молекула, що містить лабільний зв'язок, досягає відповідного внутрішньо- та/або позаклітинного оточення. Наприклад, рН-лабільний зв'язок може розщеплюватися при проникненні молекули в підкислену ендосому. Таким чином, рН-лабільний зв'язок можна розглядати як ендосомно розщеплюваний зв'язок. Ферментативні розщеплювані зв'язки можуть розщеплюватися під дією ферментів, наприклад, присутніх в ендосомі, або в лізосомі, або в цитоплазмі. Дисульфідний зв'язок може розщеплюватися при проникненні молекули в більшою мірою поновлююче середовище клітинної цитоплазми. Таким чином, дисульфід можна розглядати як цитоплазматично розщеплюваний зв'язок. При використанні в цьому документі рН-лабільний зв'язок є лабільним зв'язком, який селективно розщеплюється в кислих умовах (рН менше 7).
Такі зв'язки можуть також називатися ендосомно лабільними зв'язками, оскільки клітинні ендосоми і лізосоми мають рН менше 7.
Біорозщеплювані кон'югати, пов'язані з олігомером
Олігомерна сполука може необов'язково містити другу ділянку (ділянка В), розташовану між олігомером (на який посилаються як на ділянку А) і кон'югатом (на який посилаються як на ділянку С) (ілюстрації див. на Фіг. 12 і 13). Ділянка В може бути лінкером, таким як розщеплюваний лінкер (на який також посилаються як на фізіологічно лабільний зв'язок).
Чутливі до нуклеаз фізіологічно лабільні зв'язки: В деяких втіленнях винаходу олігомер (на який також посилаються як на олігомерну сполуку) за винаходом (або кон'югат) містить три ділянки: і) перша ділянка (ділянка А), що містить 10-18 суміжних нуклеотидів; ії) друга ділянка (ділянка В), що містить біорозщеплюваний лінкер;
ії) третя ділянка (С), що містить кон'югатне угрупування, направляюче угрупування, активаційне угрупування, де третя ділянка ковалентно пов'язана з другою ділянкою.
У деяких втіленнях винаходу ділянка В може бути нуклеотидфосфатним лінкером.
Наприклад, такі лінкери можна використовувати, коли кон'югат є ліпофільними кон'югатами, такими як ліпід, жирна кислота, стерин, такий як холестерин або токоферол.
Нуклеотидфосфатні лінкери можна також використовувати для інших кон'югатів, наприклад, вуглеводних кон'югатів, таких як заіІМАс.
Пептидні лінкери
У деяких втіленнях винаходу біорозщеплюваний лінкер (ділянка В) є пептидом, таким як трилізиновий пептидний лінкер, який можна використовувати в полібсаІМАс кон'югаті, такому як трисСаїІМАс кон'югаті. Див. також пептидні бірадикали, згадані в цьому документі.
Інші лінкери, відомі в цій області техніки, які можна використовувати, включають дисульфідні лінкери.
Нуклеотидфосфатні лінкери
У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить 1-6 нуклеотидів, ковалентно пов'язаних з 5' або 3- нуклеотидом першої ділянки, наприклад, за допомогою міжнуклеозидної зв'язуючої групи, такої як фосфодіефірний зв'язок, де або а. міжнуклеозидний зв'язок між першою і другою ділянкою є фосфодіефірним зв'язком, а нуклеозид другої ділянки, (наприклад, безпосередньо) що примикає до першої ділянки, є або
ДНК, або РНК; та/або р. щонайменше 1 нуклеозид другої ділянки є зв'язаним фосфодіефірним зв'язком нуклеозид
ДНК або РНК;
У деяких втіленнях винаходу ділянка А і ділянка В формують одну безперервну нуклеотидну послідовність з 12-22 нуклеотидів в довжину.
У деяких аспектах міжнуклеозидний зв'язок між першою і другою ділянками можна розглядати як частину другої ділянки.
У деяких втіленнях винаходу між другою і третьою ділянкою знаходиться зв'язуюча группа, що містить фосфор. Фосфорна зв'язуюча група може, наприклад, бути фосфатною (фосфодіефірною), фосфоротіоатною, фосфородитіоатною або боранофосфатною групою. У
Зо деяких втіленнях винаходу ця зв'язуюча группа, що містить фосфор, розташована між другою ділянкою і лінкерною ділянкою, яка приєднана до третьої ділянки. У деяких втіленнях винаходу фосфатна група є фосфодіефіром.
Таким чином, в деяких аспектах олігомерна сполука містить щонайменше дві фосфодіефірні групи, де щонайменше одна є групою відповідно до приведеного вище викладу суті винаходу, а інша розташована між другою і третьою ділянками, необов'язково між лінкерною групою і другою ділянкою.
У деяких втіленнях винаходу третя ділянка є активаційною групою, такою як активаційна група для застосування при кон'югації. У цьому аспекті у винаході також запропоновані активовані олігомери, що містять ділянку А і В і активаційну групу, наприклад, проміжну сполуку, яка підходить для наступного зв'язування з третьою ділянкою, наприклад, відповідною для кон'югації.
У деяких втіленнях винаходу третя ділянка є реакційною групою, такою як реакційна група для застосування при кон'югації. У цьому аспекті у винаході також запропоновані олігомери, що містять ділянку А ії В ії реакційну групу, наприклад, проміжну сполуку, яка підходить для наступного зв'язування з третьою ділянкою, наприклад, відповідною для кон'югації. Реакційна група може в деяких втіленнях винаходу містити амін спиртової групи, такий як група аміну.
У деяких втіленнях винаходу ділянка А містить щонайменше один, наприклад, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або 21 міжнуклеозидний зв'язок, що відрізняється від фосфодіефірного, такого як міжнуклеозидні зв'язки, які (необов'язково незалежно) вибрані з групи, що складається з фосфоротіоатного, фосфородитіоатного і боранофосфатного, і метилфосфатного, такого як фосфоротіоатний. У деяких втіленнях винаходу ділянка А містить щонайменше один фосфоротіоатний зв'язок. У деяких втіленнях винаходу щонайменше 50965, наприклад, щонайменше 7595, наприклад, щонайменше 9095 міжнуклеозидних зв'язків, наприклад, усі міжнуклеозидні зв'язки в межах ділянки А відрізняються від фосфодіефірних, наприклад, є фосфоротіоатними зв'язками. У деяких втіленнях винаходу усі міжнуклеозидні зв'язки в ділянці А відрізняються від фосфодіефірних.
У деяких втіленнях винаходу олігомерна сполука є антисмисловим олігонуклеотидом, таким як кон'югат антисмислового олігонуклеотиду. Антисмисловий олігонуклеотид може бути або може містити першу ділянку і необов'язково другу ділянку. У цьому аспекті в деяких втіленнях бо винаходу ділянка В може формувати частину безперервної послідовності нуклеотидних основ,
комплементарної (нуклеїновокислотної) мішені. В інших втіленнях винаходу в ділянці В може бути відсутнім комплементарність мішені.
Альтернативно в деяких втіленнях у винаході запропоновано олігонуклеотид (наприклад, антисмисловий олігонуклеотид), зв'язаний не фосфодіефірним зв'язком, таким як фосфоротіоатний зв'язок, який має щонайменше один кінцевий (5' та/або 3) нуклеозид ДНК або
РНК, пов'язаний з примикаючим нуклеозидом олігонуклеотиду за допомогою фосфодіефірного зв'язку, де кінцевий нуклеозид ДНК або РНК додатково ковалентно пов'язаний з кон'югатним угрупуванням, направляючим угрупуванням або блокуючим угрупуванням, необов'язково за допомогою лінкерного угрупування.
У деяких втіленнях винаходу олігомерна сполука містить антисмисловий олігонуклеотид, такий як кон'югат антисмислового олігонуклеотиду. Антисмисловий олігонуклеотид може бути або може містити першу ділянку і необов'язково другу ділянку. У цьому аспекті в деяких втіленнях винаходу ділянка В може формувати частину безперервної послідовності нуклеотидних основ, комплементарної (нуклеїновокислотної) мішені. У інших втіленнях винаходу в ділянці В може бути відсутнім комплементарність мішені.
У деяких втіленнях винаходу щонайменше два послідовних нуклеозиду другої ділянки є нуклеозидами ДНК (наприклад, щонайменше 3 або 4 або 5 послідовних нуклеотидів ДНК).
У такому втіленні винаходу олігонуклеотид за винаходом може бути описаний згідно з наступною формулою:
Б5-А-РО-В (У)Х-3' або 3'-А-РО-В (М)Х-5' де А є ділянкою А, РО є фосфодіефірним зв'язком, В є ділянкою В, У є необов'язковою зв'язуючою групою, і Х є кон'югатною, направляючою, блокуючою групою або реакційною або активаційною групою.
У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить 3'- 5' або 5'- 3": ї) фосфодіефірний зв'язок з 5'- або 3- нуклеозидом ділянки А, ії) нуклеозид ДНК або РНК, такий як нуклеозид ДНК, і її) додатковий фосфодіефірний зв'язок 5-А-РО-В-РО-3 або 3'-А-РО-В-РО-5'
Додатковий фосфодіефірний зв'язок зв'язує нуклеозид ділянки В з одним або більше додаткових нуклеозидів, таких як один або більше нуклеозидів ДНК або РНК, або може
Зо зв'язуватися з Х (являє собою кон'югатну, направляючу або блокуючу групу або реакційну або активаційну групу), необов'язково за допомогою зв'язуючої групи (У).
У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить 3-5' або 5-3": ї) фосфодіефірний зв'язок з 5' або 3'-нуклеозидом ділянки А, ії) 2-10 зв'язаних фосфодіефірним зв'язком нуклеозидів ДНК або
РНК, таким як нуклеозид ДНК, і необов'язково ії) додатковий фосфодіефірний зв'язок: 5-А-ІРО-В|п--(М|-Х 3 або 3'-А-І(РО-ВІп -(К-Х 5" 5-А-І(РО-В|п-РО-Г(М|-Х 3' або 3-А--РО-В|п-РО -ГМ|-Х 5 де А є ділянкою А, ІРО - ВіІп є ділянкою В, де п дорівнює 1-10, наприклад, 1,2,3,4, 5,6, 7, 8, 9 або 10, РО є необов'язковою фосфодіефірною зв'язуючою групою між ділянкою В і Х (або У, якщо присутня).
У деяких втіленнях винаходу у винаході запропоновані сполуки відповідно до однієї з (або такі, що містять одну з) наступних формул: 5 |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ 3" -У-Х 5 |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ-РО 3 -У-Х 5 |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ 3 - Х 5 |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ-РО 3-Х
З |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ 5" -У-Х
З |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ-РО 5'-У-Х
З |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ 5 - Х
З |Ділянка АІ-РО-|ділянка ВІ-РО 5 - Х
Ділянка В може, наприклад, містити або складатися з: 5 ДНК 3
З ДНК 5 5 ДНК-РО-ДНК 3"
З ДНК-РО-ДНК 5" 5 ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 3" 3 ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 5" 5 ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 3' 3" ДНК-"О-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 5" 5 ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 3" 60 3" ДНК-"О-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК-РО-ДНК 5'
Повинно бути зрозуміло, що в пов'язаних фосфатним зв'язком біорозщеплюваних лінкерах можна використовувати нуклеозиди, що відрізняються від ДНК і РНК. Біорозщеплювані нуклеотидні лінкери можуть бути ідентифіковані з використанням аналізів в прикладі 6.
У деяких втіленнях винаходу сполука за винаходом містить біорозщеплюваний лінкер (на який також посилаються як на фізіологічно лабільний лінкер, чутливі до нуклеаз фізіологічно лабільні зв'язки або чутливий до нуклеаз лінкер), наприклад, нуклеотидфосфатний лінкер (такий як ділянка В) або пептидний лінкер, який зв'язує олігомер (або безперервну нуклеотидну послідовність або ділянку А) з кон'югатним угрупуванням (або ділянкою С).
Чутливість до розщеплювання в аналізах, показаних в прикладі 6, можна використовувати для визначення, чи є лінкер біорозщеплюваним або фізіологічно лабільним.
Біорозщеплювані лінкери згідно із даним винаходом відносяться до лінкерів, чутливих до розщеплювання в тканині-мішені (тобто фізіологічно лабільним), наприклад, в печінці та/або нирці. Переважно, щоб швидкість розщеплювання, спостережувана в тканині-мішені, була вища, ніж виявляється в сироватці крові. Відповідні способи визначення рівня (95) розщеплювання в тканині (наприклад, в печінці або нирці) і в сироватці можна знайти в прикладі 6. У деяких втіленнях винаходу біорозщеплюваний лінкер (на який також посилаються як на фізіологічно лабільний лінкер або чутливий до нуклеаз лінкер), такий як ділянка В, в сполуці за винаходом розщеплюється щонайменше приблизно на 2095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 3095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 4095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 5095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 6095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 7095, наприклад, розщеплюється щонайменше приблизно на 7595 в аналізі гомогенату печінки або нирки прикладу 6. У деяких втіленнях винаходу розщеплювання (950) в сироватці, використовуване в аналізі прикладу 6, складає менш ніж приблизно 3095, менш ніж приблизно 2095, менш ніж приблизно 1095, менш ніж приблизно 595, менш ніж приблизно 195.
У деяких втіленнях винаходу, які можуть бути однаковими або різними, біорозщеплюваний лінкер (на який також посилаються як на фізіологічно лабільний лінкер або чутливий до нуклеаз лінкер), такий як ділянка В, в сполуці за винаходом чутливий до розщеплювання нуклеазою 51.
Чутливість до розщеплювання 51 можна оцінювати, використовуючи 51 нуклеазний аналіз,
Зо показаний в прикладі 6. У деяких втіленнях винаходу біорозщеплюваний лінкер (на який також посилаються як на фізіологічно лабільний лінкер або чутливий до нуклеазам лінкер), такий як ділянка В, в сполуці за винаходом розщеплений щонайменше приблизно на 3095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 4095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 5095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 6095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 7095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 8095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 9095, наприклад, розщеплений щонайменше приблизно на 9595 після 120 хв інкубації з нуклеазою 51 згідно з аналізом, використовуваним в прикладі 6.
Вибір послідовності в другій ділянці:
У деяких втіленнях винаходу ділянка В не формує комплементарну послідовність при вирівнюванні ділянки А і В олігонуклеотиду з комплементарною послідовністю-мішенню.
У деяких втіленнях винаходу ділянка В не формує комплементарну послідовність при вирівнюванні ділянки А і В олігонуклеотиду з комплементарною послідовністю-мішенню. У цьому аспекті ділянка А і В разом можуть формувати одну безперервну послідовність, комплементарну послідовності-мішені.
У деяких втіленнях винаходу послідовність основ в ділянці В вибрана так, щоб забезпечити оптимальний сайт розщеплювання ендонуклеазою на основі переважаючих ферментів ендонуклеазного розщеплювання, присутніх в тканині або клітині-мішені або в субклітинному компартменті. У цьому аспекті шляхом виділення клітинних екстрактів з тканин-мішеней і тканин, що не є мішенями, послідовності для ендонуклеазного розщеплювання для застосування в ділянці В можуть бути вибрані на основі переважної розщеплюючої активності в бажаній клітині-мішені (наприклад, в печінці/гепатоцитах) в порівнянні з клітиною, що не є мішенню (наприклад, в нирці). У цьому аспекті ефективність сполуки для цільової знижуючої регуляції можна оптимізувати для бажаної тканини/клітини.
У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить динуклеотидні послідовності АА, АТ, АС, АОС,
ТА, ТТ, ТС, ТО, СА, СТ, СС, СО, СА, СТ, С або со, де С може бути 5-метилцитозином, та/або
Т може бути заміщений О. У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить тринуклеотидні послідовності ААА, ААТ, ААС, ААС, АТА, АТТ, АТС, АТО, АСА, АСТ, АСС, АСО, АСА, АСТ, дасС, Ас, ТАА, ТАТ, ТАС, ТАС, ТТА, ТТ, ТС, ТАС, ТСА, ТСТ, ТОС, Тба, ТаА, тат, та, 60 ТОаа, САА, САТ, САС, САС, СТА, Ста, СТО, СТТ, ССА, ССТ, ССС, ССО, сала, сат, бас, бас,
САА, САТ, САС, САС, СТА, ТТ, ТС, СТО, ОСА, ОСТ, ОСС, СО, БА, ОСТ, СОС і БО, де
С може бути 5-метилцитозином та/або Т може бути замінений Ц. У деяких втіленнях винаходу ділянка В містить тетрануклеотидні послідовності АААХ, ААТХ, ААСХ, ААОХ, АТАХ, АТТХ,
АТСХ, АТаХ, АСАХ, АСТХ, АССХ, АСОахХ, АСАХ, ДИТХ, ДОСХ, АСОИХ, ТААХ, ТАТХ, ТАСХ, тТАахХ,ТТАХ, ТТТХ, ТТОХ, ТАОХ, ТСАХ, ТСТХ, ТОСХ, ТСахХ, ТаАХ, ТатХ, Тасх, ТааХ, СААХ,
САТХ, САСХ, САСХ, СТАХ, СТИХ, СТОХ, СТІХ, ССАХ, ССТХ, СССХ, ССаХ, СОАХ, СОИТХ, сасх, СсахХ, аААХ, АТХ, САСХ, САаХ, атАХ, аТтТХх, аь;ТоХх, атах, асСАХ, аСТХ, аССХ,
ССОХ, ОБАХ, СОТХ, БОСХ і БООХ, де Х може бути вибраний з групи, що складається з А, Т,
У, б, С та їх аналогів, де С може бути 5-метилцитозином та/або Т може бути замінений |.
Повинно бути зрозуміло, що при посиланні на (такі, що зустрічаються в природі) нуклеотидні основи А, Т, ШО, б, С вони можуть бути заміщені аналогами нуклеотидних основ, що функціонують як еквіваленти природних нуклеотидних основ (наприклад, пара основ з комплементарним нуклеозидом). У деяких втіленнях винаходу ділянка В не містить Т або |).
Аміноалкільні проміжні сполуки
У винаході додатково запропоновані проміжні олігомери ЗНК, що містять антисмисловий олігомер ЗНК, що містить (наприклад, кінцевий, 5' або 3) аміноалкільний лінкер, такий як С2-
С36 аміноалкільна група, наприклад, С6-С12 аміноалкільна група, що включає, наприклад, Сб і
С12 аміноалкільні групи. Аміноалкільну групу можна приєднати до олігомеру ЗНК як частину олігонуклеотидного синтезу, наприклад, використовуючи (наприклад, захищений) аміноалкілфосфорамідит. Зв'язуюча група між аміноалкілом і олігомером ЗНК може бути, наприклад, фосфоротіоат або фосфодіефір, або одну з інших груп нуклеозидного зв'язку, наприклад, на які посилаються в цьому документі. Аміноалкільна група може бути ковалентно зв'язана, наприклад, з 5' або 3-кінцем олігомеру ЗНК, наприклад, за допомогою групи нуклеозидного зв'язку, такого як фосфоротіоатний або фосфодіефірний зв'язок.
У винаході також запропонований спосіб синтезу олігомеру ЗНК, що включає послідовний синтез олігомеру ЗНК, такий як твердофазний олігонуклеотидний синтез, що включає стадію приєднання аміноалкільної групи до олігомеру, як, наприклад, протягом першого або останнього раунду олігонуклеотидного синтезу. Спосіб синтезу може додатково включати стадію взаємодії кон'югата з аміноалкіл-олігомером ЗНК (стадію кон'югації). Кон'югат може містити відповідні
Зо лінкери та/або групи точки розгалуження і необов'язково додаткові кон'югатні групи, такі як гідрофобні або ліпофільні групи, як описано в цьому документі. Стадію кон'югації можна виконувати в той час, коли олігомер пов'язаний з твердим носієм (наприклад, після олігонуклеотидного синтезу, але до елюювання олігомеру з твердого носія), або послідовно (тобто після елюювання). У винаході запропоновано застосування аміноалкільного лінкера при синтезі олігомеру за винаходом.
Спосіб одержання/синтезу
У винаході запропонований спосіб синтезу (або одержання) олігомерної сполуки, такої як олігомерна сполука за винаходом, де спосіб включає або: а) стадію забезпечення носія (гвердофазного| олігонуклеотидного синтезу Ігтретьої ділянки), до якої приєднують одне з наступного: ї) лінкерної групи (-У-), ії) групи, вибраної з групи, що складається з кон'югата, направлюючої групи, блокуючої групи, реакційної группи (наприклад, амінної або спиртової) або активаційної групи (Х-), ії) групи -Х-Х, і
БЮ) стадію |послідовного| олігонуклеотидного синтеза ділянки В с подальшим синтезом ділянки А, та/або: с) стадію (послідовного| олігонуклеотидного синтеза першої ділянки (А) і другої ділянки (В), де за стадією синтеза слідує а) стадія приєднання третьої ділянки |їІКлЛючення фосфорамідиту) ї) лінкерної групи (-У-), ії) групи, вибраної з групи, що складається з кон'югата, направлюючої групи, блокуючої групи, реакційної группи (наприклад, амінної або спиртової) або активаційної групи (Х-), ії) групи -Ж-Х з подальшим е) відщепленням олігомерної сполуки від (гтвердофазного| носія, де необов'язково зазначений спосіб додатково включає додаткову стадію, вибрану із стадій:
І де третя группа позначає активаційну групу, стадії активації активаційної групи з одержанням реакційної групи з подальшим приєднанням кон'югата, блокуючої або направлюючої групи до реакційної групи, необов'язково за допомогою лінкерної групи (У); 9) де третя ділянка позначає реакційну групу, стадії приєднання кон'югата, блокуючої або направлюючої групи до реакційної групи, необов'язково за допомогою лінкерної групи (У).
Р) де третя ділянка позначає лінкерну групу (У), стадії приєднання кон'югата, блокуючої або направлюючої групи до лінкерної групи (У), де стадії Її), 9) або п) виконують або до, либо після відщеплення олігомерної сполуки від носія олігонуклеотидного синтеза. У деяких втіленнях винаходу спосіб може бути виконаний з використанням стандартної фосфорамідитної хімії, і сама по собі ділянка Х та/або ділянка Х або ділянка Х і М може бути одержана до включення в олігомер у вигляді фосфорамідиту. Будь ласка, див. Фіг. 5-10, які ілюструють необмежувані аспекти способу за винаходом.
У винаході запропонований спосіб синтезу (або одержання) олігомерної сполуки, такої як олігомерна сполуки за винаходом, де спосіб включає: а) стадію послідовного олігонуклеотидного синтезу першої ділянки (А) і другої ділянки (В), де за стадією синтезу йде стадія приєднання третьої ділянки, що містить фосфорамідит ділянки Х (на який також посилаються як на ділянку С) або У, такої як ділянка, що містить групу, вибрану з групи, що складається з кон'югатної групи, направлюючої групи, блокуючої групи, функціональної групи, реакційної групи (наприклад, амінною або спиртовою) або активаційної групи (Х), або групу -У-Х з наступним відщепленням олігомерної сполуки від (гтвердофазного носія.
Проте визнано, що ділянка Х або Х-ху може бути приєднана після відщеплення від твердого носія. Альтернативно спосіб може включати стадії синтезу першої (А) і необов'язково другої ділянки (В) з наступним відщепленням олігомеру від носія і з наступною стадією приєднання третьої ділянки, такої як група Х або Х-У в олігомері. Приєднання третьої ділянки може бути досягнуте, наприклад, шляхом приєднання амінофосфорамідитної ланки на кінцевій стадії синтезу олігомеру (на носії), який після відщеплення від носія використовують для сполучення з групою Х або Х-У, необов'язково за допомогою активаційної групи на групі Х або У (коли присутня). У втіленнях винаходу, де розщеплюваний лінкер є ненуклеотидною ділянкою,
З0 ділянка В може бути ненуклеотидним розщеплюваним лінкером, наприклад, пептидним лінкером, який може формувати частину ділянки Х (на який також посилаються як на ділянку С) або бути ділянкою У (або його частиною).
У деяких втіленнях способу ділянка Х (така як С) або (Х-ХУ), така як кон'югат (наприклад, кон'югат саіМАс) містить активаційну групу (активовану функціональну групу), і в способі синтезу активований кон'югат (або ділянку Х, або Х-У) приєднують до першої і другої ділянкам, таким як аміно-зв'язаний олігомер. Аміногрупу можна приєднувати до олігомеру за допомогою стандартної фосфорамідитної хімії, наприклад, як кінцеву стадію синтезу олігомеру (що в характерному випадку приведе в результаті до аміногрупи на 5' кінці олігомеру). Наприклад, протягом останньої стадії олігонуклеотидного синтезу використовують аміно- алкілфосфорамідит, наприклад, ТЕА-аміно-Сб-фосфорамідит (6-(трифторацетиламіно)-гексил- (2-ціаноетил)-(М, М-діїзопропіл)-фосфорамідит).
Ділянку Х (або ділянку С, на яку посилаються в цьому документі), таку як кон'югат (наприклад, кон'югат саіМАс), можна активувати складноефірним М-гідроксисукцинімидним (МН5) способом, а потім приєднати аміно-зв'язаний олігомер. Наприклад, М-гідроксисукцинімид (МН5) можна використовувати як активуючу групу для ділянки Х (або ділянки С, такої як кон'югат, наприклад, кон'югатне угрупування сзаїІМАСс).
У винаході запропоновано олігомер, одержаний способом за винаходом.
У деяких втіленнях винаходу ділянка Х та/або ділянка Х або ділянка Х і М можуть бути ковалентно сполучені (зв'язані) з ділянкою В за допомогою нуклеозидфосфатного зв'язку, такого як описано в цьому документі, включаючи фосфодіефір або фосфоротіоат, або за допомогою альтернативної групи, такої як триазольна група.
У деяких втіленнях винаходу міжнуклеозидний зв'язок між першою і другою ділянкою є фосфодіефір, зв'язаний з першим (або єдиним) нуклеозидом ДНК або РНК другої ділянки, або ділянка В містить щонайменше один нуклеозид ДНК або РНК, зв'язаний фосфодіефірним зв'язком.
Друга ділянка в деяких втіленнях винаходу може містити додаткові нуклеозиди ДНК або
РНК, які можуть бути зв'язані фосфодіефірним зв'язком. Друга ділянка додатково ковалентно зв'язана з третьою ділянкою, яка може, наприклад, являти собою кон'югат, направляючу групу, реакційну групу та/або блокуючу групу.
У деяких аспектах даний винахід заснований на забезпеченні лабільної ділянки, другої ділянки, зв'язуючої першу ділянку, наприклад, антисмисловий олігонуклеотид, і кон'югат або функціональну групу, наприклад, направляючу або блокуючу групу. Лабільна ділянка містить щонайменше один нуклеозид, зв'язаний фосфодіефірним зв'язком, таким як нуклеозид ДНК або
РНК, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 нуклеозидів, пов'язаних фосфодіефірним зв'язком, таким як ДНК або РНК. У деяких втіленнях винаходу олігомерна сполука містить розщеплюваний (лабільний) лінкер. У цьому аспекті розщеплюваний лінкер переважно присутній в ділянці В (або в деяких втіленнях винаходу між ділянкою А і В).
Альтернативно в деяких втіленнях винаходу у винаході запропоновано олігонуклеотид (наприклад, антисмисловий олігонуклеотид), зв'язаний не фосфодіефірним зв'язком, наприклад, фосфоротіоатним зв'язком, що має щонайменше один кінцевій (5' та/або 3' нуклеозид) ДНК або
РНК, зв'язаний з примикаючим нуклеозидом олігонуклеотиду за допомогою фосфодіефірного зв'язку, де кінцевий нуклеозид ДНК або РНК додатково ковалентно зв'язаний з кон'югатним угрупуванням, направляючим угрупуванням або блокуючим угрупуванням, необов'язково за допомогою лінкерного угрупування.
Композиції
Олігомер або кон'югати олігомеру за винаходом можна застосовувати у фармацевтичних препаратах і композиціях. Доцільно такі композиції містять фармацевтично прийнятний розчинник, носій, сіль або ад'ювант. У документі УМО 2007/031091, включеному за допомогою посилання, запропоновані відповідні і переважні фармацевтично прийнятні розчинник, носій і ад'юванти. Відповідні дози, препарати, шляхи введення, композиції, дозовані форми, комбінації з іншими терапевтичними засобами, пролікарські препарати також запропоновані в документі
УМО 2007/031091, також включеному в цей документ за допомогою посилання.
Застосування
Олігомери або кон'югати олігомерів за винаходом можна застосовувати в якості експериментальних реагентів, наприклад, діагностичних, терапевтичних і профілактичних.
При дослідженнях такі олігомери можна застосовувати для специфічного інгібування синтезу білью»а РО5БКОУ (у характерному випадку шляхом розпаду або інгібування мРНК і за допомогою цього запобігання формуванню білку) в клітинах і у піддослідних тварин, таким
Зо чином, сприяючи функціональному аналізу мішені або оцінці її корисності як мішені для терапевтичного втручання.
У діагностиці такі олігомери можна застосовувати для виявлення і кількісного визначення експресії РОЗКОУ в клітині і тканинах за допомогою Нозерн-блотинга, гібридизації іп-зйи або подібних методів.
Для терапевтичних застосувань тварину або людину, підозрювану на наявність захворювання або розладу, який можна лікувати шляхом модуляції експресії РОЗКОУ, лікують шляхом введення олігомерних сполук відповідно до цього винаходу. Додатково запропоновані способи лікування ссавця, наприклад, лікування людини, підозрюваної на наявність захворювання або стану або схильність до нього, пов'язаної з експресією РСОБКОУ, шляхом введення терапевтично або профілактично ефективної кількості одного або більше олігомерів або композицій за винаходом. Олігомер, кон'югат або фармацевтичну композицію згідно з винаходом в характерному випадку вводять в ефективній кількості.
У винаході також запропоновано застосування сполуки або кон'югата згідно з винаходом, як описано в цьому документі, для одержання лікарського засобу для лікування розладу, на яке посилаються в цьому документі, або для способу лікування розладу, на який посилаються в цьому документі.
У винаході також запропоновано спосіб розладу, на який посилаються в цьому документі, що включає введення пацієнтові, що потребує цього, сполуки згідно з винаходом, як описано в цьому документі, та/або кон'югата згідно з винаходом та/або фармацевтичної композиції згідно з винаходом.
Медичні свідчення
Олігомери, кон'югати олігомерів та інші композиції згідно з винаходом можна застосовувати для лікування станів, пов'язаних з надекспресією або з експресією мутованого варіанту РОБКО.
У винаході додатково запропоновано застосування сполуки за винаходом при одержанні лікарського засобу для лікування захворювання, розладу або стану, на який посилаються в цьому документі.
У загальних рисах один аспект винаходу відноситься до способу лікування ссавця, що страждає або підозрюваного на наявність станів, пов'язаних з аномальними рівнями та/або активністю РСБКОУ, де спосіб включає введення ссавцеві терапевтично ефективної кількості 60 олігомеру або кон'югата олігомеру, направленого на РОЗКО, що містить одну або більше ланки
ЗНК. Олігомер, кон'югат або фармацевтичну композицію згідно з винаходом в характерному випадку вводять в ефективній кількості.
Захворювання або розлад, на який посилаються в цьому документі, в деяких втіленнях винаходу може бути пов'язано з мутацією в гені РОЗКОУ або в гені, білковий продукт якого асоційований або взаємодіє з РОЗКУ. Таким чином, в деяких втіленнях винаходу мРНК-мішень є мутованою формою послідовності РСБКО.
Аспект потрібного винаходу відноситься до застосування олігомеру (сполуки), як визначено в цьому документі, або кон'югата, як визначено в цьому документі, для одержання лікарського засобу для лікування захворювання, розладу або стану, на який посилаються в цьому документі.
Способи за винаходом переважно застосовують для лікування або профілактики захворювань, викликаних аномальними рівнями та/або активністю РОЗКОУ.
Альтернативно в деяких втіленнях винаходу винахід додатково відноситься до способу лікування аномальних рівнів та/(або активності РСБКОУ, де цей спосіб включає введення олігомеру за винаходом, або кон'югата за винаходом, або фармацевтичної композиції за винаходом пацієнтові, що потребує цього.
Винахід також відноситься до олігомеру, композиції або кон'югата, як визначено в цьому документі, для застосування як лікарського засобу.
Винахід додатково відноситься до застосування сполуки, композиції або кон'югата, як визначено в цьому документі, для одержання лікарського засобу для лікування аномальних рівнів та/або активності РО5КОУ або експресії форм мутантів РОКУ (таких як алельні варіанти, наприклад, пов'язані з одним із захворювань, на які посилаються в цьому документі).
Крім того, винахід відноситься до способу лікування суб'єкта, що страждає на захворювання або стан, таким як ті, на які посилаються в цьому документі.
Пацієнт, що потребує лікування, є пацієнтом, що страждає або ймовірно страждає на захворювання або розлад.
У деяких втіленнях винаходу термін "лікування при використанні в цьому документі відноситься як до лікування існуючого захворювання (наприклад, захворювання або розладу, на який посилаються в цьому документі), так і до запобігання захворюванню, тобто профілактики.
Таким чином, добре відомо, що лікування, на яке посилаються в цьому документі, в деяких втіленнях винаходу може бути профілактичним.
В одному втіленні винахід відноситься до сполук або композицій, що містять сполуки, для лікування гіперхолестеринемії і споріднених розладів або до способів лікування (із застосуванням таких сполук або композицій лікування гіперхолестеринемії і споріднених розладів, де термін "споріднені розлади" при посиланні на гіперхолестеринемію відноситься до одного або більше із станів, вибраних з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, накопичення функціональних мутацій в РОБ5КОУ, дисбалансу ЛІОВЩ/ЛІПНЩ холестерину, дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (СКГ) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин- резистентної гіперхолестеринемії, хворобі коронарних артерій (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХО).
Комбіновані терапії
У деяких втіленнях винаходу сполука за винаходом призначена для застосування при комбінованому лікуванні з іншим терапевтичним засобом. Наприклад, інгібітори НМОСсСоОА- редуктази, такі як, наприклад, статини, широко застосовують при лікуванні метаболічного захворювання (див. МО 2009/043354, включений в цей документ за допомогою посилання як прикладів комбінованого лікування). Види комбінованого лікування можуть бути іншими гіпохолестеринемичними сполуками, такі як сполука, вибрана з групи, що складається із смол- секвестрантів жовчних кислот (наприклад, холестираміну, колестиполу і гідрохлориду колесевеламу), інгібіторів НМОСоА-редуктази (наприклад, ловастатину, церивастатину, правастатину, аторвастатину, симвастатину, розувастатину і флувастатину), нікотинової кислоти, похідних фібринової кислоти (наприклад, клофібрату, гемфіброзилу, фенофібрату, безафібрату і ципрофібрату), пробуколу, неоміцину, декстротироксину, складних ефірів рослинних станолів, інгібіторів абсорбції холестерину (наприклад, езетимібу), імплитапіду, інгібіторів транспортерів жовчної кислоти (апікальних натрійзалежних транспортерів жовчної кислоти), регулювальників печінкового СУР7а, засобів замісної терапії естрогеном (наприклад, тамоксифену) і протизапальних засобів (наприклад, глюкокортикоїдів). Комбінації із статинами можуть бути особливо переважними.
КОНКРЕТНІ ВТІЛЕННЯ ВИНАХОДУ бо 1. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, що містить а. антисмисловий олігомер (А) з 12-22 нуклеотидів в довжину, що містить безперервну послідовність з 10-16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО 0 МО 30 або 31 або 32 або 33 або 34 або 45, і р. щонайменше одне ненуклеотидне або неполінуклеотидне кон'югатне угрупування (С), ковалентно приєднане до олігомеру (А). 2. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 1, де антисмисловий олігомер містить безперервну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО 25, 26, 27, 28, 29 і 44. 3. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1 або 0, де антисмисловий олігомер направлений на РОБКО. 4. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з 1-3, де антисмисловий олігомер містить аналоги нуклеотидів, що посилюють спорідненість. 5. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 1, де аналоги нуклеотидів є нуклеотидами з модифікованим цукром, такими як нуклеотиди з модифікованим цукром, незалежно або залежно вибрані з групи, що складається з: ланок замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК); ланок 2'-
О-алкіл-РНК, ланок 2'-ОМе-РНК, ланок 2'-аміно-ДНК і ланок 2'-фтор-ДНК. 6. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 4 або 5, де аналоги нуклеотидів містять або є ланками замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК). 7. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-6, де антисмисловий олігомер є гепмером. 8. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 7, де гепмер утримує сегмент-крило на кожній стороні (5' і 3) з аналогів нуклеотидів, переважно аналогів ЗНК, в кількості від 2 до 4. 9. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 7 або 8, де конструкція гепмера вибрана з групи, що складається з 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-2, 2-8-4, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 3-9-3, 3-9-4, 4-9- 3, 2-10-2, 2-10-3, 3-10-2, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 2-11-2, 2-11-3, 3-11-2, 3-11-3, 3-11-4, 4-11-3 і 4-11- 4. 10. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 7-9, де конструкція гепмера вибрана з групи, що складається з 2-8-3, 3-8-3, 3-9-4, 3-10-3, 2-11-2, 2-11-3 і 3-11-2. 11. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-10, де олігомер містить безперервну послідовність з 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів. 12. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-11, де олігомер містить один або більше нуклеозидних зв'язків, вибраних з групи, що складається з фосфоротіоатної, фосфородитіоатної і боранофосфатної. 13. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-12, де олігомер містить або складається з фосфоротіоатних нуклеозидних зв'язків. 14. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-13, де олігомер містить безперервну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕОІЮО МО 1,2,3,4,5,6,718. 15. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-14, де кон'югатне угрупування (С) вибране з групи, що складається з вуглеводу, такого як саіМАс або кластер саіМмАс, ліпофільна група, така як ліпід, жирна кислота; стерин, такий як холестерин або токоферол; або статин. 16. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-15, де кон'югатне угрупування (С) посилює доставлення та/або захоплення в клітини печінки. 17. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-16, де кон'югатне угрупування (С) містить стерин, такий як токоферол, холестерин, наприклад, кон'югати, показані як Сопі 5, Сопі 5а, Сопі 6 або Сопі ба. 18. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 1-17, де кон'югатне угрупування (С) містить вуглевод, наприклад, заіМАс або тривалентних СаїЇМАс, наприклад, кон'югати, показані як Сопі 1, 2, З або 4, або Та, 2а, За або 4а. 19. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 18, де кон'югатне угрупування (С) містить Соп) 2а. 20. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-19, вибраний з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 і 24. 21. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-20, де антисмисловий олігомер (А) кон'югований з кон'югатним угрупуванням (С) за допомогою лінкерної ділянки, розташованої між безперервною послідовністю олігомеру і кон'югатним угрупуванням (В та/або х). 22. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 21, де лінкер вибраний з групи, що складається з аміноалкільних лінкерів, нуклеотидфосфатних лінкерів і пептидних бо лінкерів.
23. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 21 або 22, де лінкер вибраний з С6-С12 аміноалкільних груп. 24. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 21 або 22, де лінкер є біорозщеплюваним нуклеотидфосфатним лінкером, що містить від 1 до 6 нуклеотидів. 25. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким з втілень 21-24, де лінкер (В) є фосфодіефірним нуклеотидним зв'язком, що містить один або більше суміжних нуклеотидів ДНК, пов'язаних фосфодіефірним зв'язком, наприклад, 1, 2, 3, 4, 5 або 6 суміжних нуклеотидів ДНК, пов'язаних фосфодіефірним зв'язком, які є суміжними з 5' або 3' кінцем безперервної послідовності олігомеру, і які можуть формувати або не формувати спаровування комплементарних основ з послідовністю-мішенню РОКУ. 26. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду згідно з втіленням 24 або 25, де фосфодіефірний нуклеотидний зв'язок (або біорозщеплюваний лінкер) містить 1, 2 або З нуклеотиди ДНК, пов'язані фосфодіефірним зв'язком, наприклад, два нуклеотиди ДНК, пов'язані фосфодіефірним зв'язком, наприклад, динуклеотид 5' СА 3". 27. Олігомер з 12-22 нуклеотидів в довжину, який містить або а. безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО 31, або р. безперервну послідовність з 10-16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮО МО 33 або 34 або 45. 28. Олігомер згідно з втіленням 27, який містить безперервну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮО МО 26, 27, 28, 29 і 44. 29. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27 або 28, де олігомер направлений на
РОКУ. 30. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27-29, де безперервна послідовність містить аналоги нуклеотидів, що посилюють спорідненість. 31. Олігомер згідно з втіленням 30, де аналоги нуклеотидів є нуклеотидами з модифікованим цукром, такі як нуклеотиди з модифікованим цукром, незалежно або залежно вибрані з групи, що складається з: ланок замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК); ланок 2'-О-алкіл-
РНК, ланок 2'-ОМе-РНК, ланок 2'-аміно-ДНК і ланок 2'-фтор-ДНК. 32. Олігомер згідно з втіленням 30 або 31, де аналоги нуклеотидів включають або є ланками замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК). 33. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 30-32, що являє собою гепмер, такий як гепмерний олігонуклеотид замкненої нуклеїнової кислоти. 34. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 33, де гепмер утримує сегмент-крило на кожній стороні (5' і 3) з 2-4 аналогів нуклеотидів, переважно аналогів ЗНК. 35. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з втіленням 32 або 33, де конструкція гепмера вибрана з групи, що складається з 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-2, 2-8-4, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 3-9-3, 3-9-4, 4-9- 3, 2-10-2, 2-10-3, 3-10-2, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 2-11-2, 2-11-3, 3-11-2, 3-11-3, 3-11-4, 4-11-3 і 4-11- 4. 36. Кон'югат олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 33-35, де конструкція гепмера вибрана з групи, що складається з 2-8-3, 3-8-3, 3-9-4, 3-10-3, 2-11-2, 2-11-3 і 3-11-2. 37. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27-36, де олігомер містить безперервну послідовність з 13, 14, 15 або 16 нуклеотидів. 38. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27-37, де олігомер містить один або більше нуклеозидних зв'язків, вибраних з групи, що складається з фосфоротіоатного, фосфородитіоатного і боранофосфатного. 39. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27-38, де олігомер містить фосфоротіоатні нуклеозидні зв'язки або складається з них. 40. Олігомер згідно з будь-яким одним з втілень 27-39, який містить безперервну
БО послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕОІЮ МО2, 3,4,5,6, 718. 41. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат олігомеру або антисмислового олігонуклеотиду згідно з будь-яким одним з втілень 1-40 і фармацевтично прийнятний розчинник, носій, сіль або ад'ювант. 42. Кон'югат олігомеру або антисмислового олігонуклеотиду або фармацевтична композиція згідно з будь-яким одним з втілень 1-40 для застосування як лікарського засобу, наприклад, гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, накопичення функціональних мутацій в РСОСБКУ, дисбалансу ЛІВЩ/ЛІПНЩ холестерину, дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (СКГ) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, хворобі коронарних артерій (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС). 43. Застосування кон'югата олігомеру або антисмислового олігонуклеотиду або фармацевтичної композиції згідно з будь-яким одним з втілень 1-40 для одержання лікарського засобу для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, накопичення функціональних мутацій в РО5КОУ, дисбалансу
ЛИВЩ/ЛІПНЩ холестерину, дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (СКГ) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, хворобі коронарних артерій (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС). 44. Спосіб лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, накопичення функціональних мутацій в РСОБ5КОУ, дисбалансу
ЛИВЩ/ЛІПНЩ холестерину, дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (СКГ) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, хворобі коронарних артерій (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС), де спосіб включає введення ефективної кількості кон'югата олігомеру або антисмислового олігонуклеотиду або фармацевтичної композиції згідно з будь-яким одним з втілень 1-40 пацієнтові, що страждає або ймовірно страждає гіперхолестеринемією або спорідненим розладом. 45. Спосіб інгібування РОЗКО іп мімо або іп міго в клітині, експресуючій РОБ5КО, де спосіб включає введення в клітину кон'югата олігомеру або антисмислового олігонуклеотиду або фармацевтичної композиції згідно з будь-яким одним з втілень 1-40 так, щоб інгібувати РОЗКОУ в цій клітині.
ПРИКЛАДИ
Олігонуклеотиди синтезували на уридинових універсальних носіях з використанням фосфорамідитного методу на синтезаторі Ехреййе 8900/МО55 (МиШріеє ОіїдописіІеоїіае
Зупіпевіз бузієт) або Оїїдотакег 48 в масштабі синтезу 4 або 1 мкмоль відповідно. У кінці синтезу олігонуклеотиди відщеплювали від твердого носія з використанням водного аміаку протягом 5-16 годин при 60 "С. Олігонуклеотиди очищали за допомогою ВЕРХ з оберненою
Зо фазою (ОФ-ВЕРХ) або за допомогою твердофазних екстракцій і характеризували за допомогою надефективної рідинної хроматографії (НВЕРХ), і молекулярну масу додатково підтверджували за допомогою мас-спектрометрії з іонізацією електророзпиленням (ІЕР-МС). Додаткові подробиці див. нижче.
Елонгація олігонуклеотиду
Поєднання В-ціаноетил-фосфорамідитів (ДНК-А(В2), ДНК-С(іби), ДНК-С(В2), ДНК-Т, ЗНК-5- метил-С(В2), ЗНК-А(В2), ЗНК-С(аті), ЗНК-Т або лінкера Сб6-5-5-С6) виконують з використанням розчину 0,1 М 5-0-ЮОМТ-захищеного амідиту в ацетонітрилі і ОСІ (4,5-диціаноїмідазолу) в ацетонітрилі (0,25 М) в якості активатора. Для кінцевого циклу використовували наявний в продажі Сб-зв'язаний холестерин з фосфорамідитом при 0,1 М в ДХМ. Включення тіолових груп для введення фосфоротіоатних зв'язків виконують шляхом використання гідриду ксантану (0,01
М в суміші ацетонітрил/піридин 9:1). Фосфодіефірні зв'язки вводять з використанням 0,02 М йоду в суміші ТГФ/піридин/вода 7:21. Інші реагенти є реагентами, в характерному випадку вживані для олігонуклеотидного синтезу. Для кон'югації потім твердофазного синтезу використовують наявний в продажі Сб-амінолінкер-фосфорамідит на останньому циклі твердофазного синтезу, і після видалення захисту і відщеплення від твердого носія виділяють аміно-зв'язаний незахищений олігонуклеотид. Кон'югати вводять за допомогою активації функціональної групи з використанням стандартних способів синтезу.
Очищення за допомогою ОФ-ВЕРХ:
Неочищені сполуки очищали за допомогою препаративної ОФ-ВЕРХ на колонці Рпепотепех
Уирієг С18 10 мкм, 150х10 мм. Як буфери використовували 0,1 М ацетат амонію рН 8 і ацетонітрил при швидкості струму 5 мл/хв. Зібрані фракції ліофілізували з одержанням очищеної сполуки, в характерному випадку у вигляді білої твердої речовини.
Скорочення:
ОСІ: 4,5-Диціаноїмідазол
ДХМ: Дихлорметан
ДМФ: Диметилформамід
ДМТ: 4,4"- Диметокситритил
ТГФ: Тетрагідрофуран
В: Бензоїл 60 Іби: Ізобутирил
ОФ-ВЕРХ: Високоефективна рідинна хроматографія з оберненою фазою
Сполуки синтезували, як показано в таблиці 1, а також проілюстровано на фігурах.
Приклад 1. Відкриття нового мотиву-мішені РОБКО
Був сконструйований і синтезований 521 антисмисловий олігонуклеотид проти РОКУ, де усі вони містили три замкнуті нуклеїнові кислоти, фланкуючі десять ДНК, тобто конструкцію 16- мірного гепмера ЗНК, де олігонуклеотид специфічний до РО5КОУ людини і приматів. Лінію 15РСЗ клітин людини інкубували протягом трьох діб або з помилково-модифікованими олігонуклеотидами, або з олігонуклеотидами, модифікованими замкненою нуклеїновою кислотою, направленими на РО5КУ людини, при концентрації 0,3 мкМ. Кожен олігонуклеотид проти РСОБКУ тестували в трьох незалежних експериментах. Рівні мРНК РОБКУО кількісно визначали з екстрагованої РНК з використанням ПЛР в реальному часі, як описано, і представляли в нормалізованому вигляді за мРНК В-актином і відносно середніх рівнів в дванадцяти помилково-оброблених зразках на Фіг. 8, де підгрупа найбільш ефективних молекул детально розглянута на Фіг. 9.
Приклад 2. Нокдаун мРНК іп міїго
Лінію 15РСЗ клітин людини інкубували протягом З діб або з помилково-модифікованими олігонуклеотидами, або з олігонуклеотидами, модифікованими замкненою нуклеїновою кислотою, послідовності 5ЕО ІЮ 1-8, направленими на РСБ5БКОУО людини, при концентраціях 0,0012, 0,06, 0,3 ї 1,5 мкМ. Рівні мРНК РОБКОУ кількісно визначали з екстрагованої РНК, використовуючи ПЛР в реальному часі, як описано, і представляли відносно середніх рівнів в чотирьох помилково-оброблених зразках на Фіг. 10. Для кожного олігонуклеотиду ефективність, визначену як половинну максимальну ефективну концентрацію (ЕС5О), визначали методом найменших квадратів за відповідністю рівнянню Хілла в двохпараметричній логістичній формі з фіксованою нижньою межею 095 і фіксованою верхньою межею 10095 як ЕС5О - оцінка ж стандартне відхилення.
Приклад 3. Рівні АЇ ТТ іп мімо
Чотири самиці мишей ММК у віці чотирьох тижнів (компанія Тасопіс, Данія), що важать приблизно 20 г після прибуття, ін'єктували внутрішньовенно один раз або фізіологічним розчином, або олігонуклеотидами, модифікованими замкненою нуклетовою кислотою,
Ко) кон'югованими з холестерином, послідовностей ЗЕО ІО 9-16, направленими на РОКУ людини при дозах 7,5 і 15 мг/кг. Мишей убивали через 7 діб після введення і визначали сироваткові рівні аланінамінотрансферази (АТ) з використанням ферментативного аналізу (Ногіба АВХ
Ріадповійс5). Для кожної експериментальної групи з п'яти мишей обчислювали середні значення і стандартні відхилення і представляли на Фіг. 11 відносно середніх рівнів у мишей, оброблених фізіологічним розчином. Підйоми АЇ Т були відмічені при обох концентраціях для деяких, але не для усіх молекул, кон'югованих з холестерином. Декілька із сполук, таких як ХЕО ІЮ МО 9 і 10, клінічно значущо не збільшували АТ у мишей навіть у разі використання холестерину як кон'югата для посилення захоплення сполук в печінці.
Приклад 4: Дослідження на нелюдиноподібних приматах
Першочергова мета цього дослідження полягала у вивченні вибраних ліпідних маркерів через 7 тижнів після одноразової болюсной ін'єкції сполук ЗНК проти РСБ5КУ яванським макакам і в оцінці потенційної токсичності сполук у мавп. Сполуки, використовувані в цьому дослідженні, мали послідовності 5Е0О ІЮ МО 10 13, 18, 19, 20 і 21, приготовані в стерильному фізіологічному розчині (0,995) при початковій концентрації 0,625 і 2,5 мг/мл.
Використовували самців мавп у віці щонайменше 24 місяців і надавали їм вільний доступ до проточної води і розподіляли по 180 г збільшеного раціону МУ/М(Е) ЗОС ЗНОКТ (бієїех Егапсе, 505, Сен-Гратьєн, Франція) на тварину в добу. Сумарну кількість корму, розподілену в кожну клітину, обчислюють відповідно до числа тварин в клітині на цю добу. Крім того, кожній тварині щодоби давали фрукти або овочі. Тварин акліматизували до умов дослідження протягом періоду щонайменше 14 діб до початку експериментального періоду обробки. Протягом цього періоду проводили попередні дослідження. Тварин дозували внутрішньовенно (і.м.) в одноразовій дозі 0,25, 1,0 або 2,5 мг/кг (ЗЕО ІЮ МО 10, 13, 18 і 21) або в одноразовій дозі 1,0 або 2,5 мг/кг (ЗЕО ІО МО 19 і 20). Об'єм дози складав 0,4 мл/кг Використовували 2 тварини на групу.
Дози препаратів вводили один раз на добу 1. Тварин спостерігали протягом періоду 7 тижнів після обробки і виводили з дослідження на добу 51. Доба 1 відповідають першій добі періоду експерименту. Клінічні спостереження, масу тіла і споживання їжі (на групу) реєструють до і під час дослідження.
Забирання зразків крові і аналізи виконували в наступні моменти часу:
дослідження 1-8 |ВСР,.САро-В,РОЗКОУЗ ОА З ния іван
ОА
ВСР (тошііпе сіїпіса! раїйо!оду) - стандартна клінічна патологія,
І 5В (Іїмег загеїу ріоспетівігу) - біохімічні показники безпеки для печінки,
РК - фармакокінетика,
ОА (оїПег апа/пувів) - інші аналізи,
І (Шріав) - ліпіди.
У вказаних нижче випадках для усіх тварин, що вижили, визначали наступні параметри:
Повна біохімічна панель (повний перелік нижче) - на добу - 8, 151 50,
Безпека для печінки (тільки аспартатамінотрансфераза (АСТ), лужна фосфатаза (ЛФ), аланінамінотрансфераза (АЛТ), загальний білірубін і гамма-глутамілтрансфераза (ГІ)) - на добу 4,8, 22 і 36,
Ліпідограма (загальний холестерин, Х-ЛІВЩ, Х-ЛІПНЩ і тригліцериди) і тільки Аро-В - на добу - 1, 4, 8, 22, 29, 36 і 43.
Кров (приблизно 1,0 мл) брали в пробірки з літієм-гепарином (використовуючи біохімічний аналізатор крові АОМІА 1650): Аро-В, натрій, калій, хлорид, кальцій, неорганічний фосфор, глюкоза, Х-ЛПВЩ, Х-ЛІНЩ, сечовина, креатинін, загальний білірубін, загальний холестерин, тригліцериди, лужна фосфатаза (ЛФ), аланінамінотренсфераза (АЛТ), аспартатамінотрансфераза (АСТ), креатинінкіназа, гамма-глутамілтрансфераза (ГП), лактатдегідрогеназа, загальний білок, альбумін, відношення альбумін/глобулін.
Аналіз РОКУ в крові: Зразки крові на аналіз РО5КОУ збирали на добу -8, -1, 4, 8, 15, 22, 29, 36, 43 і 50. Венозну кров (приблизно 2 мл) збирали з відповідної вени кожної тварини в пробірку для відділення сироватки (551; Зегит Зерагайпуд Тире) і давали можливість згорнутися протягом щонайменше 60 ї- 30 хвилин при кімнатній температурі. Кров центрифугували при 1000 уд протягом 10 хвилин в умовах охолодження (встановлено на підтримку 4 "С). Сироватку переносили в З індивідуальних пробірки і зберігали при -80 "С до аналізу в компанії Спохі АВ,
Франція, використовуючи спосіб твердофазного імуноферментного аналізу (ІФА) (набір для ІФА
Сігсшех Нитап РОБКО, СУ - 8079, підтверджений для зразків від яванського макака).
Інші аналізи: В МУО 2011009697 запропоновані способи наступного аналізу: аналіз мРНК
РОЗКОУ за допомогою кількісної ПЛР (ДПЛР). Інший аналіз включав ІФА білка РОЗКОУ, аналіз
Гр(а) сироватки за допомогою ІФА (Мегсодіа Мо. 10-1106-01), аналіз олігонуклеотидів в тканині і плазмі (вміст лікарського засобу), екстракція зразків, стандартні зразки і зразки контролю якості, визначення вмісту олігонуклеотидів за допомогою ІФА.
Дані для сполук, направлених на РОБКО, приведені в наступній таблиці:
Зо
Макс. вплив Х-
Макс. ввплив РО5КОУ лИвВщ
Значення для (дані позначають (дані позначають дози 2,5 мг/кг процент від значення процент від перед дозуванням) | значення перед дозуванням)
Білок РО5КОУ доба |Білок РОЗКОУ доба
Сполука 4 (процент від 239 (процент від
ЗЕО І значення перед значення перед дозуванням дозуванням 7107 Ї77777717186 777 |777717117715 | бобв(дт5) | 87бе(029) ЩГ 719 Ї777171711755 | 60 | Боба) | во(р
Вказівки на гепатотоксичність або нефротоксичність при сполуках, направлених на РОЗКО, були відсутні. Слід зазначити, що сполуки РОСБКОУ-сСаМмАс призводили до швидкої і високоефективної знижуючої регуляції РОБКОУ, яка підтримувалася протягом тривалого періоду часу (вся тривалість дослідження), ілюструючи, що сполуки, кон'юговані з зЗаїІМАс, ефективніші, як відносно швидкого початкового нокдауну, так і відносно тривалого періоду, що вказує на те, що їх можна дозувати порівняно нечасто і в нижчій дозі, як в порівнянні з некон'югованими початковими сполуками, так і в порівнянні із сполуками, одержаними з використанням альтернативної технології кон'югації, такий як кон'югація з холестерином. 5ЕО ІЮ МО 18 призводила до швидкої і узгодженої знижуючої регуляції РОЗКУ і Х-ЛІОВЩ упродовж усього дослідження (спостережуваною на добу 34 при дозі 2,5 мг/кг при значній знижуючій регуляції
РОБКО, спостережуваній через 48 діб після введення одноразової дози 2,5 мг/кг, де рівень білка
РОБЗКУОУ в плазмі складав 7195 від рівня перед дозуванням).
Приклад 5: Оцінка печінкової і ниркової токсичності у щурів
Сполуки за винаходом можна оцінювати на їх профіль токсичності у гризунів, наприклад, у мишей або щурів. Можна використовувати наведений нижче протокол. Використовували самців щурів лінії М/ієїтаг Нап Сіті: УМ(Нап) у віці приблизно 8 тижнів. У цьому віці самці важили приблизно 250 г. Усі тварини мали вільний доступ до гранульованого збалансованого корму
ЗОМІРЕ В/М-Н (55МІБЕ БЗреліаІдійїеп ЗтЬН, Зост, Німеччина) і до проточної води (профільтрованої через фільтр 0,22 мкм), що міститься в пляшках. Використовували рівень дози 10 і 40 мг/кг/доза (підшкірне введення) і дозували на добу 1 і 8. Тварин піддавали евтаназії на добу 15. Зразки сечі і крові збирали на добу 7 і 14. Обстеження на клінічну патологію проводили на добу 14. Масу тіла визначають перед дослідженням, на першу добу введення і за 1 тиждень до аутопсії. Споживання їжі на групу визначали щодоби. Зразки крові брали з хвостової вени після 6 годин голодування. Проводили наступний аналіз зразків крові: кількість еритроцитів, середній об'єм еритроцитів, об'єм обложених еритроцитів, гемоглобін, середня концентрація гемоглобіну в клітині, кількість тромбоцитів, кількість лейкоцитів, диференціальна кількість лейкоцитів з морфологією клітини, кількість ретикулоцитів, натрій, калій, хлорид,
Зо кальцій, неорганічний фосфор, глюкоза, сечовина, креатинін, загальний білірубін, загальний холестерин, тригліцериди, лужна фосфатаза, аланінамінотрансфераза, аспартатамінотрансфераза, загальний білок, альбумін, відношення альбумін/глобулін.
Проводили анализ сечі: а-глутатіон-5 трансфераза (5571), В-2 мікроглобулін, кальбіндин, кластерин, цистатин С, КІМ-1, остеопонтин, тканинний інгібітор металлопротеїназ (ТІМР; Тіззце
Іппірйог ої МеїаїПоргоївіпазе-1), фактор роста ендотелію сосудів (МЕСЕ; мазсшіаг епаотегїаї дгоулй Тасіог) і нейтрофільний желатиназо-асоційований ліпокалін (МОАГ; пешгорпії деїайпазе- аззосіагей Іросаїйп). Сім аналітів (кальбіндин, кластерин, З5Т-а, КІМ-1, остеопонтин, ТІМР- 1,
МЕСРЕ) кількісно визначали на панелі 1 (панель 1 ниркової токсичності у щурів на магнітних мікроносіях МІН ІРГЕХ? МАР, АКТХІМАС-37К). Три аналіти (В-2 мікроглобулін, цистатин С, ліпокалін-2/МАГ) кількісно визначали на панелі 2 (панель 2 ниркової токсичності у щурів на магнітних мікроносіях МІП ІРГЕХ? МАР, АКТХІМАа-37К). Аналіз на визначення концентрації цих біомаркерів в сечі щурів була заснована на технології І штіпех хМАРУ. Мікроносії, покриті антитілами проти 0-551/Д-2 мікроглобуліну/кальбіндину/кластерину/цистацину /С/КІМ-1/ остеопонтину/ТІМР-1Л/ЕСЕ/МОАЇ, кодували за кольором двома різними флуоресцентними барвниками. Визначали такі параметри (сеча з використанням АЮМІА 1650): Білок в сечі, креатинін в сечі. Кількісні параметри: об'єм, рН (з використанням тестерних смужок 10-Мийівїїх
Зб/аналізатора сечі Сііпйек 500), питома щільність (з використанням рефрактометра).
Напівкількісні параметри (з використанням тестових смужок 10 - Мийівїїх 5С/аналізатора сечі
Сіїпйек 500): білки, глюкоза, кетон, білірубін, нітрил, кров, уробіліноген, цитологія осаду (за допомогою мікроскопічного дослідження). Якісні параметри: зовнішній вигляд, колір. Після умертвіння визначають масу тіла і масу нирок, печінки і селезінки і обчислюють відношення маси тіла до маси органів. Зразки нирок і печінки брали і або заморожували, або зберігали у формаліні. Проводили мікроскопічний аналіз. Дані для експресії Кіт-1 показані на Фіг. 15, де продемонстровано, що всі молекули за винятком 5ЕО ІЮ МО 4 мають нижчий сигнал Кіт - 1 в сечі, ніж БЕО ІЮ МО 1, що демонструє нижчу ниркову недостатність в порівнянні з оригінальною і раніше охарактеризованою некон'югованою молекулою.
Приклад 6. Аналіз розщеплюваних лінкерів
Антисмислові олігомери (АСО), мічені РАМ, з різними лінкерами ДНК/РО піддавали розщеплюванню іп міго, або в нуклеазному екстракті 51 (таблиця нижче), або в гомогенатах печінці або нирок, або в сироватці.
Ме | Зеда(5-3) | Розщеплюваний лінкер (В) | Кон'югат (С)
Заголовні букви є нуклеозидами ЗНК (такими як бета-О-окси ЗНК), рядкові букви є нуклеозидами ДНК. Нижній індекс 5 є фосфоротіоатними міжнуклеозидними зв'язками.
Цитозини ЗНК необов'язково є 5-метил цитозином. Кон'югатне угрупування ГАМ показане на
Фіг. 6, і молекули показані на Фіг. 7.
Мічені РЕАМ АСО 100 мкМ з різними лінкерами ДНКЮ/РО піддавали розщеплюванню іп міїго нуклеазою 51 в нуклеазному буфері (60 од. на 100 мкл) протягом 20 і 120 хвилин (А).
Ферментативну активність зупиняли додаванням етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА) в буферному розчині. Потім розчини піддавали аналізу за допомогою ВЕРХ АЇїЕ на приладі Сіопех
ОШітагїе 3000, використовуючи колонку біопех ОМАрас р-100 і градієнт в діапазоні від 10 мМ до 1 М перхлорату натрію при рН 7,5. Вміст розщеплених і нерозщеплених олігонуклеотидів визначали проти стандарту, використовуючи обидва детектори, детектор флуоресценції при
Зо 615 нм і детектор УФ при 260 нм. 89 1-12 штли и пох ох ПО Сто п
Висновок: Результатом включення лінкерів РО (або ділянки В, на яку посилаються в цьому документі) є відщеплення кон'югата (або групи С), і обидва параметри з довжини та/або послідовності композиції лінкера можна використовувати для модуляції чутливості до нуклеолітичного розщеплювання ділянки В. Послідовність лінкерів ДНК/РО може модулювати швидкість розщеплювання, що спостерігають після 20 хв в нуклеазному екстракті 51. Вибір послідовності для ділянки В (наприклад, для лінкера ДНК/РО) можна, таким чином, також використовувати для модуляції рівня розщеплювання в сироватці і в клітинах тканин-мішеней.
До гомогенатів печінки і нирок додавали точну кількість сполуки ЗЕО ІЮО МО 35 до концентрацій 200 мкг/г тканини. Зразки печінки і нирок, зібрані від мишей ММКІ, гомогенізували в буфері гомогенізації (0,595 Ідераї СА - 630, 25 мМ Трис рН 8,0, 100 мМ Масі, рН 8,0 (доведений 1 н. Маон). Гомогенати інкубували протягом 24 годин при 37 "С, а потім гомогенати екстрагували фенолом - хлороформом. Вміст розщеплених і нерозщеплених олігонуклеотидів в екстракті з печінки ї нирок і з сироватки визначали проти стандарту, використовуючи описаний вище спосіб ВЕРХ :
ІЮ |послідовність| з гомогенатом печінки гомогенатом нирки 24 г в сироватці
ШЕ ЕС ПО: Х ЗОН КОН Те ВО КО НО
Висновок: Результатом включення лінкерів РО (або ділянки В, на яку посилаються в цьому документі) є відщеплення кон'югата (або групи С) в гомогенаті печінці або нирок, але не в сироватці. Чутливість до розщеплювання в аналізах, показаних в прикладі б, можна використовувати для визначення, чи є лінкер біорозщеплюваним або фізіологічно лабільним.
Слід зазначити, що розщеплювання в описаних вище аналізах відноситься до розщеплювання розщеплюваного лінкера, при цьому олігомер або ділянка А повинні залишатися функціонально інтактним.
Приклад 7: Нокдаун мРНК РО5КУ кон'югатами холестерину іп мімо
РОБЗКУО - Сполуки, специфічні для миші
Ме | зед (5-3) (А)
Мишам ММК! ін'єккгували одноразову дозу фізіологічного розчину, або 10 мг/кг некон'югованого антисмислового олігонуклеотиду ЗНК (ЗЕО ІО 40), або еквівалентні кількості антисмислових олігонуклеотидів ЗНК, кон'югованих з холестерином з різними лінкерами і убивали на добу 1-10 відповідно до таблиці 5.
РНК виділяли з печінки і нирок і піддавали дДПЛР з праймерами, специфічними до РОБКУ, і зондом для аналізу нокдауну МРНК РОЗКУ. Результати показані на Фіг. 14.
Висновки: Холестерин, кон'югований з антисмисловим олігонуклеотидом ЗНК до РОКУ з лінкером, що складається з 2 ДНК з фосфодіефірним каркасом (ЗЕО ІО МО 42 і 5ЕО ІО МО 43), показав підвищений нокдаун РОБКУ в печінці (Фіг. 14) в порівнянні з некон'югованою сполукою (ЗЕО ІО МО 40), а також в порівнянні з кон'югатами холестерину із стабільним лінкером (ЗЕО ІЮ
МО 41).
Матеріали і методи:
Схема експерименту: (часігвнтв таовчня Кільнеть -СбИННестать | тіаень доз сновиви СИН МНН руля | дова дова ї пе ВИ месечеко харчування й темі дани п ПЧ ГЕ: ПДАА ттвна В | зе теарян ввення ма добу «В вік тееденнь | дорвания кобв у уееревіння ен и ни и пн и и и и в п ! їм з мелена | івідмотчний Вично - ї вва | 1 :
ШИ пиши ння пн пень у вчи ни он пон пон пня вро 3 ме шов. й знме іш "ж ШЕ і : ; ення пови она знан пи мини нн мно панові нан нн зн зи
Н і зона в : і Н Е ї зро оз 0 МНенсрая ванною І ілзвимя м вода | о рр п про риниин ПИМ мн нин пиши ни тя
Своя з 0 ЯМАОЮУюЯ | вавианне іонних ев Н х вен а п В п а и паст тварина бознкічь харчуванню рчвачь дози кнавуєь ободова ов мив, ДЖ т с: С З, тварина вд Зб колине введення) дозування доба авт ня
І ї 1 1 7 т Щи п пивний нин
В 4 Е 3 мМУнися у в 1 і Н : ї в их : 1 ММК сУСухий БОМ МОЯ оп нннк х ШИ: : в ! ТВ З хори вивімопнрна 12.7 мин Ти? вия ши о; 8. ! і : фея Кн панни ша С нн нн ння панни ви ка віх 3 ммрртачня 1аво жнно «о това з витяг | х т 8.3 з / ; дво БЕо ж МмОоЯ: | | | ' я Ж У і нив сукнй Фивімсннрме біз г 5 | З ' і шо тей вейх і | ! ї ввженттячоох ВЕСНОЮ Мона І ! і 13 | 3-х КУ НМА жсунй ахвімемарно здана Мо а раз З !
Е і хор ТАТ вве і ; ; | ! і ; | пкнадрсятьяи ек х НЕ | :
І тх ої зв 31 ММК ен унне квннолярно ДУ ва! Ох З 53 | з і ; | хор 15 я ! ' :
Н МУ - з Е! МНК рАхмй еф твчя ще : й ! 5 т - | їч Н 34 : же ! З | шен яко зно м | і ми м В ВУ | 7 ! : : хивуисктнния 1 Ба ! зорях 800 | ММНАсума ешімолярно Злам м в с НЕ а Е | : що 11 я ! ! : і; З січня 30 ВЕБ МОЯ. І і і ше в ни Не и НМ ЕК ИМЯ 5 шт
ЇЇ З хор Н 412,7 юеке І Н ; : ; | Курячий 1 ВОНО | І ! і і ! і тр яка з 1 ММКТИСУХКК 0 вріжолярна 1ді вна | м і ШОН 7 ! і І кори Е І мийку ! :
ЕД Ше ня ї відвнегізний розчин - м ва, х За щі зів зр и жом ера
Н : нуютьука 1 00 ВБО ЕМО « і : ї
КЕ зів З ММК тигра : якайаатярня ЯЗ меле їм 5) РПОЯ, ЩІ т В і | хори : 13 меж | | : ! | солдчення 0 ЗВО Ж МО ко І ї і Е
ВЕ: си ШИ Но І от в в т я п в о КА
НЕ ши і 1 вагік ! : | і шк ни: шиє уонеопеня ші | | "шишки ши
ШИ . Гора
Введення дози. Самицям тварин ММРЕЇ, приблизно 20 г після прибуття, дозували 10 мл на кг маси тіла (ВУМ) (відповідно до маси тіла (бодужмеїдні) на добу 0) внутрішньовенно (і.м.) сполуки, включеної у фізіологічний розчин, або одного фізіологічного розчину відповідно до наведеної вище таблиці.
Забирання зразків тканини печінки і нирок. Тварин анестезували 7095 СО2-3095 О» і убивали цервикальною дислокацією відповідно до таблиці 4. Половину великої частки печінки і одну нирку подрібнювали і занурювали в розчин для стабілізації РНК КМАЇїагїег.
Сумарну РНК екстрагували з максимум 10 мг тканини, гомогенізованої за допомогою шарового млина у присутності буфера для виділення РНК з тканин МадмМА Риге ІС (Коспе, Мо за каталогом 03 604 721 001), з використанням набору для виділення клітинної РНК великого об'єму МадМа Риге 96 (Коспе, Мо за каталогом 5467535001) згідно з інструкціями виробника.
Синтез першої нитки виконували, використовуючи реагенти для зворотної транскриптази від компанії Атбіоп згідно з інструкціями виробника.
Для кожного зразка 0,5 мкм сумарної РНК доводили до (10,8 мкл) НгО, що не містить РНКаз, і змішували з 2 мкл випадкових декамерів (50 мкМ) і 4 мкл суміші аМТР (2,5 мМ кожного аМТР) і нагрівали до 70 "С протягом З хв, після чого зразки швидко охолоджували на льоді. До кожного зразка додавали 2 мкл 10х буфера зворотної транскрипції (ЗТ), 1 мкл зворотної траскриптази
ММІМ (100 од./мкл) і 0,25 мкл інгібітору РНКаз (10 од./мкл) з наступною інкубацією при 427 протягом 60 хв, термічною інактивацією ферменту при 95 "С протягом 10 хв, а потім зразок охолоджували до 4 "С. Зразки кКДНК розводили 1:5 і піддавали ЗТ-ДПЛР, використовуючи основну універсальну суміш для швидкої ПЛР Тадтап 2х (компанія Арріїей Віозубіете Мо за каталогом 4364103) і аналіз експресії генів Тадтап (птРСБКУ, МпО0463738 ті і таАсіїп й43523А41Є), слідуючи протоколу виготівників, і проводили реакції в приладі компанії Арріїей
Віозузієтв ВТ- ЗРСК (7500/7900 або МіЇА7) в швидкому режимі.
Приклад 8: Дослідження на нелюдиноподібних приматах; багатократні підшкірні (5.с.) ін'єкції
Мета цього дослідження на нелюдиноподібних приматах полягала в оцінці ефективності і безпеки сполук, направлених проти РОБЗКО, в умовах багатократного введення при введенні сполук шляхом підшкірної ін'єкції (5.с.). Сполуки, використовувані в цьому дослідженні, мали послідовності БЕО ІЮ МО 2, 3, 18 ії 19, приготовані в стерильному фізіологічному розчині (0,990) при початковій концентрації 0,625 і 2,5 мг/мл.
Використовували самиць яванського макака у віці щонайменше 24 місяці і надавали їм вільний доступ до проточної води і розподіляли по 180 г збільшеного раціону МУ/М(Е) 5ОС
ЗНОКТ (Оієїех ЕРгапсе, 505, Сен-Гратьєн, Франція) на тварину в добу. Крім того, кожній тварині щодоби давали фрукти або овочі. Тварин акліматизували до умов дослідження протягом періоду щонайменше 14 діб до початку експериментального періоду обробки. Протягом цього періоду проводили попередні дослідження. Тварин дозували 5.с. один раз на тиждень протягом чотирьох тижнів в дозі 0,5 мг/кг (ЗЕО ІЮ МО 2, 3, 18 ї 19) або 1,5 мг/кг/ін'єкція (ЗЕО ІЮ МО 18 і 19), сумарно чотири ін'єкції за період чотири тижні. Об'єм дози складав 0,4 мл/кг/ін'єкція.
Використовували шість тварин на групу. Після четвертої і останньої дози тварин спостерігали протягом тижня, після чого половину тварин убивали з метою вивчення регуляції транскрипту ароВ в печінці, параметрів ліпідів, гістологічного дослідження печінки і нирок і тканинного розподілу в печінці і нирках. Доба 1 відповідає першій добі експериментального періоду. Клінічні спостереження, масу тіла і споживання їжі (на групу) реєстрували до і під час дослідження.
Зразки крові і тканин відбирали і аналізували в наступні моменти часу: 8 перед 7711118 |Дозування.:5:г: 15 перед 22 перед аутопсія видужали 43 (тварини, що видужали) видужали) видужали) видужали) видужали) реабілітаційна аутопсія
ЕСР: стандартна клінічна патологія, І 5В: біохімічні показники безпеки для печінки, РК: фармакокінетика, ОА: інші аналізи, І: ліпіди
Кров (приблизно 1,0 мл) брали в пробірки з літієм-гепарином (використовуючи біохімічний
Зо аналізатор крові АОМІА 1650): Аро-В, натрій, калій, хлорид, кальцій, неорганічний фосфор,
глюкоза, Х-ЛПВЩ, Х-ЛІНЩ, сечовина, креатинін, загальний білірубін, загальний холестерин, тригліцериди, лужна фосфатаза (ЛФ), аланинамінотренсфераза (АЛТ), аспартатамінотрансфераза (АСТ), креатинінкіназа, гамма-глутамілтрансфераза (ГП), лактатдегідрогеназа, загальний білок, альбумін, відношення альбумін/глобулін.
Аналіз крові: Зразки крові для аналізу АроВ брали тільки у тварин груп 1-16 (тобто тварин, оброблених сполуками, направленими проти АроВ) на добу -8, -1, 4, 8, 15, 22, 29, 36, 43 і 50.
Венозну кров (приблизно 2 мл) збирали з відповідної вени у кожної тварини в пробірку для відділення сироватки (551) і давали можливість згорнутися протягом щонайменше 60 ж 30 хвилин при кімнатній температурі. Кров центрифугували при 1000 д протягом 10 хвилин в умовах охолодження (встановлених на підтримку -4 С). Сироватку переносили в 3 індивідуальних пробірки і зберігали при -80 "С до аналізу білка АроВ за допомогою ІФА.
Інший аналіз: В МО 2010142805 запропоновані способи наступного аналізу: ДПЛР, аналіз
МРНК АроВ. Інші аналізи включають аналіз сироваткового І р(а) за допомогою ІФА (Мегсоаіа Мо. 10-1106-01), аналіз олігонуклеотиду в тканині і сироватці (вміст лікарського засобу), екстракцію зразків, стандартні зразки і зразки контролю якості, визначення вмісту олігонуклеотиду за допомогою ІФА.
Призначеною фармакологічною дією для олігонуклеотиду, направленого проти РОБКО, являється зниження холестерину ЛЛНЩ шляхом зменшення вмісту РО5КО в кровообігу ("РОЗК 9 в сироватці"). Кон'юговані молекули ЗаіМАс продемонстрували посилену ефективність в порівнянні з некон'югованими молекулами при дослідженні обох з РСБ5КУ в сироватці і холестерину ЛИНЩ (Фіг. 16 і Фіг. 17). На Фіг. 16 проілюстровано, що чотири щотижневі ін'єкції 0,5 мг/кгЛн'єкція некон'югованої БЕСО ІЮ МО 2 має лише незначні дії на РО5КОУ в сироватці і холестерин ЛИНЩ, тоді як кон'югати з СаіІМАс того ж гепмера ЗНК (ЗЕО ІО 18) мали сильну знижуючу дію на обидва з РО5КУ в сироватці і холестерину ЛИНЩ. Таке ж співвідношення було відмічене при порівнянні даних для багатократних ін'єкцій 5ЕО ІЮ МО З і БЕО ІО МО 19 (Фіг. 17): лише незначні дії некон'югованої молекули і сильна знижуюча регуляція РОКУ і холестерину
ЛИН в сироватці відповідним кон'югатом саіМАс (5ЕО ІЮО МО 19). Слід зазначити, що дія БЕО
ІЮО 18 ї 19 на РСБ5БКОУО в сироватці і холестерину ЛІНЩ була дозозалежною при великій тривалості дії, при цьому рівні РОЗКОУ в сироватці і холестерину ЛЛНЩ були нижче за середні
Зо базові рівні протягом щонайменше семи тижнів після останньої ін'єкції (остання ін'єкція на добу 22, дані проілюстровані для відновного періоду аж до доби 71).
Вміст олігонуклеотидів в печінці і нирках аналізували через один тиждень після останньої ін'єкції, тобто на добу 29 досліджень. Вміст олігонуклеотидів аналізували, використовуючи ІФА з гіобридизацією (по суті, як описано в статті І іпапоїт еї аїЇ, Мої Тег. 2012 Рер; 20(2): 376-81), використовуючи 5ЕО ІЮО МО 2 для одержання стандартної кривої для зразків від тварин, оброблених ЗЕО І МО 2 і 5ЕО ІЮ МО 18, після контролю, що зміни в результатах не відбувається, якщо для одержання стандартної кривої використовують (кон'юговану) ЗЕО ІЮ МО 18. Таким же шляхом використовували 5ЕО ІО МО З для одержання стандартної кривої для
ЗЕБЕО ІО МО З ії 5ЕБО ІЮ МО 19 після контролю відсутності відмінності результатів при використанні БЕО ІЮ МО 19 для одержання стандартної кривої для аналізу ІФА цих зразків.
С Вміст опігонуклестидів й тканинах через здин тиждень після останньої НЄ
Св Янка 00001101 Мирка 0000) Відношення ! (МК опігонуклертидні гмике олікомуючтестидни печінкалчирка; свіже тканини) 0000 свіжої тканини) : пн се вв се ншШ
БЕОІКОВ Яхббмою 000 ба 0 Я Я Я БО
БОШ НОВ Яма | БА У Па ВИНИ
ВЕСТ МОЯ ЯХЕМИ ОЛЯ бо в мкг нм
ЕСЕ КЕР ТО, ЯКО Миже 272 ода 15,3 І ШІ
Як проілюстровано в таблиці вище, кон'югація ЗЕО ІЮ МО 2 і ЗЕО ІЮ МО 3 призводила в результаті до більш високих відношень печінка/нирка для кон'югованих молекул (ЗЕО ІО МО 181 5О0
ЗЕО ІОЮ 19), ніж для відповідних некон'югованих молекул через один тиждень після останньої ін'єкції коли тварин ін'єктгували 5.6с. один раз на тиждень протягом чотирьох тижнів. З урахуванням того, що ознаки тубулотоксичності продемонстровані з іншими некон'югованими молекулами, направленими проти РОКУ (такими як 5ЕО ІО МО 1, як проілюстровано на Фіг. 15), ї з урахуванням того, що печінка є органом-мішенню для лікування, направленого проти
РСБКОУ, чекають, що зрушення до більш високого відношення печінка/унирки приведе в результаті до підвищеної безпеки кон'югованих ЗЕО ІЮО МО 18 і 19 в порівнянні з некон'югованими 5ЕО ІЮО МО 2 і 3.
Як проілюстровано на Фіг. 16 ії Фіг. 18, 5ЕО ІЮО МО 18 ї 19 дозували при фармакологічно релевантних рівнях. Профілі клінічної хімії одних і тих же тварин протягом експериментального періоду і фази одужання продемонстрували відсутність релевантного підвищення параметрів безпеки в печінці або нирках.
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«310» Баптаеї5 Реагта й/5 «1502 АНТИСМИСЛОВЕ СІ. гумки ТА їх кОон'югАтТи « НАПРАВЛЕННІ НА ПпРОПРОТЕЇН КОНВЕВТаЗУ сУБТИЛІЗИНКЕКСИМ ТИПУ Я СРСЗКУУ «130: 3341 «ібп» 46 «їТйе» о рахвихій мекзіолй 3,5 «йїйх З «йїїх ЗА «ї22 ДНК «213» ШТУЧНА «0 «233» вмА антисеисловий генверний олігонуклестнд «К2Ї» піс тевкуга «вах 13. (43 с, й «825» фосворотіоатні міжнуклевзидні зв'язки «ггОх «їз вс бедкикге «й» (1,13 «923» МА нуклєюзиан, МА Є пазначанть земетнло Є
КУ І Й
«ках век Теасига «йййх (12..5143 хгйїх іа нуклеозиди, МА С позначають 5-четидй С «ЩЕ 1 тастасавав сек 14 «ій» 2 «йії» 16 «дій» ДК «215» ВУЧНА «дАЦУ «ВИЗ» а антиємисяових гапйпшерням очзігюнуклевтид «20 «алі» віяс Теавиге хана 3, .016) 2, . хЕйїз фосвопоттодтні міжнуклеозидні зв'язки «ай й «авїх вієс Тека каййх С, хакі ЕММА яуклезхиди «аа І «221: тізс бвакиге какаж С33.. С І «ЗИ3» МА зуклесзиди, ЗА С позначають З-метня С «Ще 5 закостівсаа авсоса з «цк З «гі» 16 «213з ДНЕ «21їз шщТУчНА ких «Ейїх МА внтисмисновий гбепмерннй зпіговуклевтид «20»
хаеїв Мі«с тТейтнге «гвЕ» 33.38) ше «283» Фосворотіодтні міжнуклеззидні з язки «ай й «а2іїз пі 5С Тейкоге «йвйж КУ... «2аїх МА нуклерзиди «Кох | . «ві» вс. твавуме «дае (143. .46) «КТ3» МА нуклесзиди, МА С позначанть З-меткл Є «З 3 закосєтасай аассса їй «Ме я «Мі» 15 «217» днк «21їх Штучна «ТЕ й 2, «2аї» НА антисмисповий гермерний злігонуклеотид «вх «281 тів вав хлайв 0). .С и. й «гиїУ фосворотіоатні міхнуклеозидні зв'язки
Сет; М «гйї» ві5с Твакига «вав 3..18) «ЯЗ» БМА нуклеозиди, МА С позначають 5-нетмя С «бо» й «алі» тіесобеатига «ей С. КБУ «ДЗ» БА нуклепчиди «Я Щ чека совя СЕ 15 «ЕМ 5 «1 і хезем ДНЕ «3» ШТУЧНА «воцх «раї» ма антискисловий гепмерний олігонуклеотий «ва. Й кегї» тс. Театцге «вах СК «ба32 НА нуклеозиди кас й «вві трас Тезе хейй» (15045) й І «223» фесфоротісатні міжнуклеозидні зв'язки «ва «вет» с бевтшйге «йййУ С14)..516) хе» Ма нуклеозикди «НМ» Й кустосота осСЕКод Ів «Не б ха3ї» 16 «гї2х ДНК «вії» ЖТУЧНА «илох й «223» ма знтиснисловиВ геймерний олігонуклеватид каВОх й че» тісто ге кажи 1). 03 шк «25» фесфоротіодтні міжнуклеюзидні зв'язки «Бе» хееі» щівс о Теажцге «ве» К..53) «ой» МА муклеозиди, 1ЇМА Є пожначають б-метил С «ок кита» тс тватцге «дж» СА). 6 «й» МА нуклаазиди «ще в хоКЕЧЕчтав ст 15 «Ще У «я» 16 «иїйз ДНК «гії» ШТУЧНА ха «та3» А амтиємИисловий гепмерний опігонуклевтид «вах Й хиєї» зо. тваєнге «аййх СЮ. СН ше І «23» фосфоротзозтні міжнуклеозидні зв'язки ка» І і «вії» щізс Тезкнга «вай 1,3 «23» На нуклеозиди, іМЧА С позначають З-метил Є г: ВИННИЙ севіз іч. Теакцуге «аву 143... 36) «сеї» ВА нуклєозидь. МА С позначають З-метилЛ Є «ЖК 7 тестоотктя сасе 16
С
«їх ії «кий» ДНК «іх ШТУЧНА «дО» Й І «У8їх да йнтисмисловий гаевнерний олігонуклестид «кю і «вої» йт5с Тватуке «айах 31.00 ше «Ф23» феЮесвюоротіоатні міжнуклеззилні зв'язки «Ей» «виї» щіяс беатнов «Ей С.О І «Я» ЇМа муклеожиди, МА С позначають З-метил Є с ИН «лйїх щівс.Тевтиге квЕй 3. «223» МА нуклеозиди, ЧА Є позначають б-метил Є «НЮх В хестТОоціІста ат 16 «аз З «з їй «ей» ДНиК «а» ШТУЧНА «28» кайЗ» кОн'югат МА аветесмисловего гепеерного ослігонунлертиду ва й «вті» шішс. Тезкцга хвайх КІ, й «23» коплектевин-сб «а «гі» івс Тваєнке ям АК , «еаїх фосводівфірні міжнуклеозидні зв'язки «ех й «вйї» вівс Євавуке «ай» 31,45) ше І «22У» фосфоротісвтні міжнукивозидні за'язки
Банки й й «ві» ів отвакиве хай» С..05) 2738» МА нухпвозиди, іМА С пезмачає б-метил Є ха х й «їз ті5с.Тейтике «кі» МА нуклевзидни, МА С позначає З-метил Є «НО» З сасостасвя аасЕси їв «а Зо «м КЕ «й1йз ДНК «кії» ЩТУчНА «ТЕО» , «їх нон'югат МА азнтисмисяового гепмерного влігонуклезтиду «а й «22ї» щізс о тевтоге «вай СК. «23» холастерннесв «ва» пізсотватиге гени КВН Со ПИШИ , «айїх фОосфодіеірні міжнуклеозидні зв'язки «20 «лі» вівсо тема «вай 33, СВ нище й «Фй3» феосфоротісатні кіжнуклеюсзидні зв'язки «аа «21» опієс Тевтнгка «ай С. С «Кеї» вна нуклесзндяЯ «аг , Й «агії» щізкоГеасюге «гай СЮ. КВ) «айїх ма нуклеюзиди, ЩА С позначає Земетми С «ка» 10 галатстає завассєа їх «М 31 кеїїх 18 «еле ДНК каїх ШТУЧНА «ЕВ «баї» кон'югат ММА знтиємислового гепмерного олігонуклеотиду
«ТІ» жівс о Тваснге «ой» (13. «їх холестеринесе «ай І «аг» ізо, геавиге «айе БАЗ й «веЇїх осфодієфірні міжнуклаеаззидні зв'язки «20» «ейІі» пізс.Тваєнге «вол 33) ! «Її» фосвовотіоатні міжнУуклеззидні зв'язки «ах «ват» опівсОтайтвге «й КА.) свг32 іма муклвовидия «ех І «ЕЕ» пізс.Геатиге хеййх С..СІ18Х «23» МА нмуклеозиди, мА Є позначає З-матия С «пд» 31 сазакостає ааваєска їй ха» 13 «211» 47 «Ай ДНК «ев» ШТУЧНА ке» . хе» кон'ютат кА змтисмесловВого геопмерного опігонуклевтиду «31» тікс.Твасике «даю СО.
І «Т232 хоалестерин-сб я й «ві» тіясОТевтцее дак (МН. «г2Я3Ї» фосфодієфірні міжмуклеозидні зв'язки «ай . «Тіз пізс-Тватиге «айг» 3. що ; «23» фасфоротісатні міжнуклеознані зв'язки «ЙО» «21» тізс.Тватуге «аййж С, «23» БМмА нуУукЛЕСЗИДИ, МВА Є пезнанає б-меатини с «Тай «кові» щізс Гезкге «ла 16). СХ «-ййї» КА нуклеОзЗиИди «з 12 садстоатета азс 17 «іх 13 «11» 15 «Вії» ДНК «13» ЖТУЧНА «0 «К2ї» кон'юсат ма знтисмислового гермерного алігонуклеотиду кавц й «йаї» віз. театиге
«оо» С1КОКЮ «З» коластерин-сь «а. й «веї» піс твабуге «ай СВ єї» фосфодієфірні міжнуклесзидні зв'язки «22а» «алі» щі Єватцге «йде 33.43 «Кк» ма нуклеозиди «І Й клі» шіве Геатига «аййв 3.8 п й «ку» фосфоротіозтні міжнуклевзидні зв'язки кс «фії» тек Отака квФгех СМ. (8) «бої» МА нуклебзиди хаййх 13 скахустсуї дасте 18 «30» 16 «ії» «бій» ДНК «233» ЩТУЧНА «ад» «ейї» о кон'югат БА антисмислевого гепмернога олігонуклейтиду
СУ Й й «рі» іє Гейтига «ой» С, «ойї» холастерин-ся «а «ваї» щіжс Тедтига «ай СНАХ кеййїх дфосфодіевірні нішнуклеззидні зя азни сУечО ж «паї» тізє.Теажиге хафим (3. СА шк . «йИї» фосфоротіоатні міжнуклевзидні зв'язки «ва Й «Лі» щік Театике «айях 33.,53 «айхї» МА нуклеозиди, ММА С позначає зЗ-матия ЄС «Фг0» й «221» тівс. Резкиге «ййй» 185). «23» 1А нуклеозиВи «00» М сатастовах зазст о 18 «0» 15 «1» б «ії» ДНК «ах ШТУЧНА «ЕКО» «223» кон'югат (МА антисмаєлового гейнерного опігомукавотиду «ЕЙ «Еі» щівє Гватике «еле С3.. і «КИ» холестерин-сб «я І «а» пе хє Тезе
«Мах 03, «223» фосфодіофірні міжнуклеозидні зв'язки «икОх й сайї» Міс. гезсиге «йййх Г33..С185 Й «283» йесфороетіоатні міжнукавозидні зв'язки
ФТййь «вії» іє Твасуке «йайй» С33..53 "235 БА нуУклеозиди, СА Є пеазначає З-метил Є «йо» | й «ЕХ» щівзс Тезснге «ай С.. КІЗ «Фи3» ща нуУкЛеОВИиДди, МА С позначає зЗеметня Є «ОО» 15 сатсстоцтс ака ї18 «ах їв «їз В «лій» ДНК «Я» ВТУЧчЧНА «ек кйаї» кон'югат іМаА знтисмислового гепмернога олігонуклертиду «КЕЙУ й «айів ві5сотезкцге «й8йх 330,
ФЯйї» холестейин-сь «Нюх й «апа» тібс Тевкигке «віх СНІ й «233» фосфодіафірні міжнуклеозидні зв'язки
Се. ВИ Й кий» щіжс Теваїмка «айв (З.. СА , «323» фосфоротісатні міжнуклеозкані зв'язки «а «і» тіб5с беабцкв «их 53.5 «23 Ма нуклесзиди, їМА С позмачаю 5еметил Є ках «Ке1ї» вИзе Реатшге «вай К37)..183 й «ааї» Юа нуклеззидяи, МА С позначає 5-метил С «00» 16 кассстдвес са їв «302 17 «ії 4 «кій» ДНК «ії» ВТУЧНА «220» , «й2Ї» о нон'югат МА знтисмислевого гепрваерного зпіконУуклестиде «Ай «221» пес Театоге «вам КО. С І «ййї» ОДІМАЄ Сеп'оа «а «КИІз п вє бейтого «іа С.О шо . «кі» фосфоротісовтні міжнуклеозидані зв'язки «2»
«Феї» тівсо Теасцге «вай К.С «гі» МА нуклеозини, БА С позначає З-матнл Є «ех «ЛЕБ» отівсо Теасцуге «айва СО СІ «аї» МА муклесйзиди, МА с позначає З-метня С «0 37 тостасзааа ссса 38 ке 16 «із їй «Кї2х ДНК «2135 ШТУЧНА «ее , «ТЗ» кОн'югат МА внтисмислеавого гепмерного олігонуклевтиду «ак. «гаї» шів5с.їватиге «вію СО «ей» БщіМАЄ Сопіда «лох й Й «теж Міс Тезкиуге «каййю 03,0 ше «23» дюсіоротіоатні ніжнуклеозидні зв'язки «е , «ай» тає Теденге «ф2й» С313..13 «леї» ЩїнА нуклаозиди «а0е І «тах іс.
Театиге «кий СІ, С крайх МА нуклеозиди, МА С позначає З-метий Є «М» ТВ затастасав зассса 16 «М ІЗ «вії» б «їй» ДНК «аїЯх ШТУЧНА «ке І «23їх нен'югат МА знтисмисповогоОо гезмернего плігонукнлейтиду «аю «Зї» жівс Геаємга «ай «ТАЗ» озінАєЄ Сопіда «во «ой» вис тгвавуке «йййх (3. 15 Й Й «02ї» фосворотісатні міжнуклеозидні зв'язки «ее хайї» жіхс, Бевкоге бій (3.3 «ййї» мА нуклесознди «ВЯП Й «б2ї» щізс Теакуге «ака 345.03 «25» МА нуклерзиди, МА С позначає б-метия С «М» 19 ваатоуєтаєма зассей іб5
«210» 20 «8312: 35 чеїдйух ДНК «е3їх ШТУЧНА «820 «8253 хон'югат МА антисмислового гепмерного олігонуклеютиду «а «ейїх щіщЄ Тезснге хадй» См це «823» бвіМАЄ сопіка «Его Й «еаї» і хс Тезтнга «вай КУ. с, «беї» фосфоротіватні міжнуклЛеОоЗиДні Зв'язки
Ок й «ааї» півс.теасиге хвййм С... «таї» Ма нуклеззиди, ма Є позначає з«нетил с хайї» щік. теаруге «ай БІ). . 0153 чаеіУ на нуклевзиди «ОО 8 асіотасоза со 15 хйіз «ії» 16 «212» ДНК «2їЯ»2 ШТУЧНА хг Й «фай» Мон'юкат їМА антисенслового геймерного опігонуклевтиду еайцх | й «веї» тіяс.еашке «алею СОН «аг» БЩіМАЄ Сопіба «ве» Й «ййї» тік Гезтуге «Вей с. «23» МА нУКЛОСІВДИ «вад» й «БИїх тіхсу і вавике «дай У. 0163 ше «223» фесфоротіоатні «іжнуклеознані зв'язки «ее» «Ії» тізс о безкога «вай СІ. .СНО хакі» зма нуклеозиди хапох тастататов ассо 16 «3 й «Кїїх В «23У» ДЕ хаїїх ШТУЧНА «кгЗх окон'югат МА днтисмисловогОо гепеерного злігонуклеотяду «Ей «22ї» шівс.теакоге «вай КО кйй3» баімМАЄ Сопіса
«Та І «айї» жі Тевкуге хеве» (1. СНО о, й «пай» фосфоротіодуні ніжнуклеозидні зв'язки
Кен . й касі тс Геаиге «авт 03,03 «23» Ма нуклевзидн, ММА С позначає З-четия Є «ай «КЕ вжічс о теауцге «важ «4. 1 «віз МА чуклеззиди «Ох 25 тостетока Зстеу 15 ха 23 «г ЗВ «яЩй» ДНК кеїї» ШТУЧНА «КО «283» ком'югат ща антисмисвового гепмевного олтігозуклеотиду их: «еВіж між Тевакуте «вад С. «22ї» саїнає Сепіяа «еВ» й че тес. театиге хайй» 030. с. , «яаї» фосфероттодтні міжнуклеюзидні за'ваин касі» мтс Теакцге «22 (3. І к«леїх Ма нуклевзили, ММА С позначає З-метня С ках, «ей» віє Тевтьге «ей СМ). ЦО «2й3» МА нуклеозиди, МА С позначає 5-метий С «4005 3 состав ста ТЯ 16 «ай» 24 «ії 416 «йі1йх ДНК «2335 ШТУЧНА «ли У» кОоК'ютвт МА антисмислового гепверного олігенУклевтиду «аа» «221» вівс.Геатиге «ках СН «Її» содімає Соміза
ЕЕ Й
«АТ» шівс Гешкиге «ій 3.6) 0, о «авїх Кифоротіовятні міжнуклесзидні за'язки «ай І каві» визс Кваєнга «Вл К.С «2ЙЯ» ЩА мукласзиди. МА с позначає б-метий С ка «бої» щі Зс гвакуге чека» С.. С хі» БМА нуклеозиди, На Є позначає б-щетил Є «М а тесізацссто сус їв хе 28 «й1ї» ій «їй» ДНК сеїї» ШтТЖчнНА посведоватеявнаоєсть «вай» «22їх» мотив нуклеїнової основи «Я» тастасазна сеса за «21Ох 26 «щі» 45 чиїм ДНК «13» ШТУЧНА «ве «223» мотна нуклеїнової основи «і» ЗВ ватескасаа засесв їб «Війх 27 «32 «віх ДНК «2135 ШТУЧНА «во» «да3» Матив нуклеїновеї основи «0» 27 детуєново «Оу 15 «Й 28 «Ії» 16 «1йв ДНК «ії» ШТУЧНА «ее «й23з матна чувлеїнової основи «а й Й тастакаєоа оса і5 «ЕМ» 29 «Киї» 16 «ві» ДНК «йиАЗУ ШТУЧНА «ХК «Ягї» мотив нуклеїнової основи «0 8
Тест ста Кос Есе і6 «Це З «їх 14 «їх ВНК хаї3їмх Мото 5арієйь «Цю 30 задоаниуснец адса 14 «Ох 1 «831» 15 «азам РНК «213» нене зарієн» «ах 1 наваиецсям зусвии 15
«й 3 «312» РНК , «вій» Ношо 5ашівпе «й Ох З р сксазасмеас асаде 15 хе 33 «1їх 16 «аю РНК «еії» ото завів: «НИ» 33 ссвадсисяє всацса 15
БК
«ем» «Ві вВНк «йїЗ НОЩО завїете» «і» 34 позвсасвой совоца їв «МЕ 35 «її» 16 «212» ДНК хаіЯ» ШТУЧНА «ах «83» о кон'югат МА зитиснислоевого гсепверного олігонуклевтиду «гаце «а2і» ві5сотевтиге сх 0323), о, ккоейз фнратіоатні міжнукАавазидні зв'язки «АещЕх «Кі» іс Тезжчна «Вій 1. . «03 РАМ вон'ютат «йаОх й й «Т2і» мівс у тваатаге «фах (4,.(16 | І «вії аБМеФоротіоатні міжнукласлинні зв'язви «лей залі» Вес Театиге «вййх ЩА). . С «2Ї» МА нуклеознам. їМа Є позначає б-метнл Є «агОх Й «їз віБс тезтцаге «йййх 143. 35 «223» НА нуклевзиди, іа С позначає 5-метий с «НЮ» 35 І тсацсаткчу такса її «20» 36 «іх 15 «п1йз» ДН «саду» тична «ех «23» кон'югат їМа янтисчислоного гепмерного опігонуклеатиду «25 , «тої» щтізс Гейтс «ВЕ СВ, І «ай3» и фодієфірві міжнуклеозидні зв'язки
«а «йеї» вія Гезтуге м НВ ЕВ) «223: ВАМ кон'югат «аа й «а2їх візс Теахвке хаййж СХ, 5 ши І «223» фосфоротісвтні міжнуклеозияні зв'язни «ййїм пас. Тезєнне «дай 33..К8 «ий3» іїМа нуклеазиди, ММА С познанвя бЗ-метия Є «а. Й «гі» ис ободінге хеййх (33..15Х «вйї» Ма муклеозиди, МА С позначає 5-метиа Є «00» ЗВ сиесаєтові акоса 15 «МЮУ «21» 34 «212» ДНК хиїЗ» ШТУЧНА «25» кон'югат іа антесмесєвсового гепйпмерного олігонуклеотиду «20 й хРгїз і5с бевхиге «вах НО ; «23» фосюодієвівні міжнуклеозидні зв'язки «а Й «айї» щвівс бватьге «Кай» 3. «айЯ» КАМ кан'югат «830 й «231» візє Геакикеа «й2йз (2..С п І «23» Восворотіовтні міжнуклеозидні зв'язки «дО» «28ї» Міс тедкцка «важ КИ «223» МА нуклесзиди, їМА С нозмначає беметил С «а «23Ї» візстеатуге «Йой КАЗу,. (14) Й «й МА неУклеюзиди, БА С позначає 5-метнл С «00» 3 засатжаока тс 14 «2» В «иїїх 16 «лій ДНЕ «13» ШТУЧНА «Іо» «гй3» ков'ютат МА знтисвислового геймерного опзігонуклевтиду су: ИН ч«иаї» щіБс.театнга кааа» 513..13) оку З с довж. А км в свй У й й «еаїЯ» фосіюдієфірні міжнуклевзидні зв'язки
СУ: жи «йї» і5с Теаїтнгєе
«Ейк СМ. «ейїх КАМ вом'югат «ай» Й «2ї» вис Тежсцге «а» (43.48) «223» фосворотіоятні віжнукнеззидні зв'язки «ах І «212 віб5с безтнга «вва СР... «23» МА нуклесзиди, БЯА Є позначає 5-метипй Є «кг» й «йгії» іс Геабуга «кеай» (34)..016) «223» ММА нуклеззиди, На Є возначає 5-метнл Є «ВО» 38 чпасосаттоад тасса 15 «ій» 35 «2312 13 «їй» ДНК «2332 ШТУЧНА «330» «баї» кон'югат мА зитисмисловако гетавзрного олігенукластиду «вад» «22із пове. Гевтоге «ва» 03. . «ої» фосфоротіовтні міжнуклеозидні зв'язки с Й «ввї» піс Жеатике «вве С. «ФИЗ» КА нуклесзиди, МА С позначає 5-метня С «а, й клеї» пизсотевтика кави К.С «лйЗ» КАМ кон'югат ее «Ф2ї2 визсоТеатнге «аййх (3.03 «бе3» МА нуклеозиди, А С позначає 5-метил Є «ФО» 39 І ефаттетак са 13 «ій 40 «Ві» 13 «217» ДНК «їй» ШТУЧНА «ие «КЗ» вна антиємисловий геймерний олігонуклестий «ах «Рі» тівс безкиге «сввш С, ше й хйЗ» фосфоротісатні ніжвуклеозидні зв'язки «Та чиїм ті5соївахиге
Фев» (11. «веїх їМА нуклеозиди «ве «ай» отічс о Твакцке «ййи» 413. .0433 «ва» МА нуклевзиди, МА Є позмачнає ае«маетил Є ек С зстакоза со 13 «23іОз 4 «вії» 43 хеїйм ДНК «813» ШТУЧНА «ДИВ» «ваїх кон'югат МА зитисмислевогоОо гейпмерного олігонуклеотиду кв г» «251» щі5с, Євасиге «ВІЙ» 1.) Й «ії» хвавстеринн-св «йде й «алі» щіяс Гевтика «ай СЮ. СК шк , «йИЯ» фюосфоротіодтні міжнуклесзиані зв'язки
ВЕУ. «Е2Ох й «й5ї» піз лету» «алею СЮ. хай» БА нуклепВзиИди «о» «ві» ніяс.авкука «фай СУК. С «223 МА нухпепзиди, МА С позначає х-метий с «4005 4 Що істот ооза осо їх «30 й «кіїх «2122 НЕ «віЯх цеРуУчНА «а «їх кон'югат ЩА антисмислового гепмерного олігонукавотиду «авцх й ; «23їз візс Тезтиге «айва» (3.0 «йа3» холастеринесе «а й «221» віз Тевснгв «ай 1 й , «223» фосфодієйвні міжнуклеззиані зв'язки «а «геї» щшізс тевтцге «вра (330.0 «Кі: МА нуклеозиди «аа «айі» півсоітезтнке «ай» К33..С153 й «8223» фосфоротіватні міжнуклесвзилн зв'яаки «аг І «2їз іс Театике хай» 3)..033 «кеі» ММА нуклесозиди, МА Є позначає 5-метияй Є «400» 92 садсстотод явосу 15 «10» 33 «ві і «кій» ДНК «233 ВТУЧНА
С
«223» кон'югят ВКА антиснислового гепмерного оплігонуклевтиду «йЕОх «5і» ві«с.Гваєуке «йййх СМ..0Ю «23» хопестеркн-се «ЕЕ «пої» щізс Тейтшге «а НВ «25» фоєфодієфірні міжнуклеозидні зв'язки «ел» «а23» щіхс. бедтнев «222» К33..К8) «К23У їМмА нуклвозиди «вах «ої» пес, Тезтоге «й 3. кйї3» фосєворотіоятні міжнуклеазидні зв'язки «ве» й «2ї» тізс, Геатнгв «ай (133..6153 «3» БМА нуклеолинни, 1МА С позначає Зе-метил С «Не 4 сте статва аа їх «Ме 44 квіі1» 35 «212» ДЕ киїїУ ШТУЧНА «ках І «Вй3З2 мотив нуклеїнової основи «4002 44 зЕстатоачва ЗсО 13 «лій» 45 «ії» 13 «із ВНЕ й «13 Ноше зарзіенпе «НЮе 45 сасниссаса зас 13 хм 6 «Ме 3733 «БЕХ ДНК , «іх Кошщо зарієпть «НК» 46 зсспатова пекстдекоєю сукгоакетоє деоскссаяо соссваосве ссасасостя БО чащннтксс дсзосвасеє свадосассе атозекосвзо Ясовососся сесосесадтх 120 садапсстзя Фоствдаооя ЯасЗзадссзаа садтвасаст зпсесочосо чассодоасо 180 з реп тоса зЗсадсоЗсес ссаостессй десавоаєтє сосуєдсссс стсасосаєс 230 стестсттда асттсацеєвс ствсасанис єтссссаска сааростсяв засоассосся 300 псосерассу сесасооссї стадотсвсс тезссапває зодсвасстст сесствддесс і їсакусосвє собсавасксс аодсооксся дакчассМї оссветеста ссастостЗо 435 тоскасЕсс ЗдчтесстеВ посасссаху сосною а сззоозсвоє застасдава Б заст ассткосає тссозоажоЯ асосссоос соааоусассє дзосасопва 540 сгсасвиоскас сткссвессае ссуссваєоз азкссотауаа чЧетвссє асствсгац що їсцтєтоаа соуаодацаєє сасстсє адтсадавсо састасєсоє сасседєвод БО ссевоавстає ссоссяабой сасстсаєсв адааксстасвя Бетсі ссак осот єтс та стЯЗстстссЕ оакозадато вотоасувес тоссимасо соссстовяв стоссссвка 780 «сруасвасак сзвосводає сссжскоєст ксЯсссадая сатсссвню азсстодаде Із чавікасссс зссасодтає: созосзовко забассавсс ссссфсода озсзосеско дао опо а єстеставис зссаосатає зовуковеса ссодчозавсє паддосвоцо ав їкакочЧтсвє сзастесвач аатЗзЧсссо аадаооасоя засєссасекс сзсазасаоа 1023 ссадсавноєо сзасвоєсає досаєстаєє тудсавоаах боусаасває сооуатвсса 1058 осопсуоссяа ддотоуєсвас ахосоасвдєє тугоасдєоєє саяастоссва зозайоовоса май сувссацеоо сассстсатв посстуцаоє ттаттсовай задссауєто дсссадесто їй хдовассвся засто ста скоасссстоа сзпоєлазса саоссасєс стсавсассо 100 скстяссався сстодсозу оссооавсо тусточтсас состоассодє зассессооо 13520 асшакоссто сстстаєтесс ссадєсккво стсссозаох сатєзсявЕЄ пдодссасса 1350 зІшессвяод ссвоссаоаТу асесуаавов сво ває сачекссває сестсвкоє 1443 зестстЕтоЄє сесвацоаоао авсаскакто ббасстссав спзетосвоє асстосттка КОЮ тоаксасвово соддзсаса сапостоєта сссасотдос сувсатсЗса зссасоатає 1550 їаїстассоз чсесодаосто весен адссовоасз савастовсс састестсто 1620 ссазавзатоах сазксзатево осот стясуаєсся соч асссссавсс 1650 чавЕдасеос сскдсесссс зоасасссатв оуадсазоссо дсвостаскх тосававсто 1740 їзістсеос асастєтово секзсасевра троссасвоє сессосссеє сасоссссад 150 зЕсаззаєєїт «стос с сссазцККсх ссводватоз чесна сасовосуєя АБО теааескса аудопЗслаз стоуссосс (аоессаєза сестсщаа вага 192а тстакоскає суссвучтоє ксстостає сссапдссва стодсаусує сасасвостс їз сассанскча ззссавсако пусасесесо сосастоєка ссазсяовеє сасусесв 280 сазксосаюв стсссастоЗ бадакодачя асстораєас ссасизасся состав 230а вжосзеззов ссассссазе садізсотеЗ зссасацюя одсслосаєс сасастссх 45 зстоссатос ссслдоїско олатосазая ссваороавасх тодавссссо Зсссстсвца Тахо зоасадчтдас суєпаєстос баддаодост созссстоас тадстосааї дсосессста т28о0 поазвсетссся срсссточаЯ дестасоссоя юасвасас чо зоба 2540 зсфієвосас гасадусаос зссвосуяаЯ падссухтаас зассускоєє зЕСТастасс 2 здазсссоюся ссезукасаЗ вестсссвеЗ аоскссавзку асаессссає сосаудчакоє 2450 зІішсстобфаз аЗОотсадоо остудавсто азсктїзаза соотоссцас сіессстех ХО сесаесежс сакоцестоа сасазоацса сооодовтасЕ сссоссеКс соді 2580 здсстодссс стодетоооо садесксстЕ зсстоадаасе састсастсє зоотосстсе «230 їссссвдосв озоствссао давуєксест ссстсвстоє шроудсасееє ассастсвая «70О сацясеваде ЧЕсТсцВИ ЄНтВссЄ таскесеват Ясуссдаєок ссусосуєаз гм автоааскттї зстазастск соастссзю сазосвхїса ассстсадок сессвсєвао зви цедесазчак хскїєсссако деасавовоаво ечоссовдтао зоадстосадо овсзаасате Ко пстозозвах зафсуктоваа досассзата чссекаксї ссвоставст вгЗозоЗвас «80 ссстпадове ссестовтта атодвоостх аостеестоув зтоосатска десаавадсє КІ почзовкачеї зсосссссоЗ тозжсасяою сстосстео зсстоаза ссасстітає 30650 їстосксКтаХ оскадостеє шссзасазсв сссзазноатао ЯсстусопЗа аясеасвВсс 3520 іїззазвстовс ссордсавтах зсаставтоє зсосвстОєс ксашссаасс сестссяста ЗІ сссодсзовоа стасасаттісу свсссстаст тсзсевоазой воазазсекод авссвоазада за
Чососаксто ссааостсає асазсводаа скавуссаЗа азсосацатї ЗоскоФфкс Зо тдавакссавно сстсттсєка сітїсасссоору стдостсст сатттттасу зпатавсвата 3350 зпоассдосаз очосаасаса пассадчаня сссоосозУу затодсаоаз соус 3320 ацосатоцяд стКЕтІссуе катсасесВО осстоууастся ссоосстодє одвуаоєте зав стазвцосато пссвмюсчоза зудвссавса асо секваЗеасс адескевссе 3540 ваасвадсва асзкскатех совет фсокекстоє СасеТКЕЕЕВ саоурсвасіх зо тІстацасст оЕКІКастІї тотзасттоа арататттає стосу т отадсаттте ЕС таттваїато зісвсїкКІт азаатавава сазасавасо тсїсствас зазавзаавай 72о звазававав в 3731
Claims (1)
1. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, який містить: а) антисмисловий олігомер (А) з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮО МО: 31, і де зазначений антисмисловий олігомер являє собою І МА гепмер, і Б) щонайменше одне кон'югатне угрупування (С), направлене на рецептор асіалоглікопротеїнів, ковалентно приєднане до олігомера (А).
2. Кон'югат олігонуклеотиду за п. 1, де послідовність антисмислового олігомера (А) містить безперервну послідовність зЗЕО ІЮ МО: 26.
З. Кон'югат олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1 або 2, де послідовність антисмислового олігомера (А) містить безперервну послідовність, вибрану з групи, що складається з ЗЕО ІЮ МО:
213.
4. Кон'югат олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1-3, де кон'югатне угрупування (С) включає М- ацетилгалактозамін (саІМАс) угрупування.
5. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за будь-яким з п.п. 1-4, де кон'югатне угрупування (С) містить тривалентне сзаіІМАс угрупування.
6. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за п. 5, де три групи СаІМАс угрупувань приєднані до точки розгалуження, що являє собою дилізин, за допомогою полієтиленгліколевих (ПЕГ) спейсерів.
7. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1-6, вибраний з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 18 і 19.
8. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1-7, де антисмисловий олігомер (А) кон'югований з кон'югатним угрупуванням (С) за допомогою лінкерної ділянки, розташованої між безперервною послідовністю олігомера і кон'югатним угрупуванням.
9. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за п. 8, де лінкер вибраний з Се-Сігаміноалкільних груп або біорозщеплюваного нуклеотидфосфатного лінкера, що містить від 1 до 6 нуклеотидів. Зо 10. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1-9, де безперервна послідовність містить аналоги нуклеотидів, що посилюють спорідненість.
11. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за п. 10, де зазначені аналоги нуклеотидів є нуклеотидами з модифікованим цукром, незалежно або залежно вибрані з групи, що складається з ланок замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК); ланок 2'-О-алкіл-« РНК, ланок 2'-ОМе- РНК, ланок 2'-аміно-ДНК і ланок 2'-фтор-ДНК.
12. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за будь-яким з пп. 1-11, де олігомер містить один або більше нуклеозидних зв'язків, вибраних з групи, що складається з фосфоротіоатного, фосфородитіоатного і боранофосфатного.
13. Кон'югат антисмислового олігонуклеотиду за п. 1, де кон'югат олігонуклеотиду складається з ЗЕО ІО МО: 18 або ЗЕО ІО МО: 19 й санмАсХ й й х ер. шк КОХ АСАКОСТО ТА А А А АЦСЬ КВОСЇ МаЬ АБЗ МЕ свт - х М І и НН З х х У Би і КО ція М о З дама СМ о КО» БАКА КК о КО МЕ АК ко ція ,; де індекс - визначає бета-О-окси ЗНК ланку, мес; визначає 5-метилцитозин, індекс з визначає фосфоротіоатний міжнуклеозидний зв'язок, іде хо нн сема 7 х являє собою Сопі| 2а, направлене на кон'югатне угрупування рецептора асіалоглікопротеїну І ми чу «ум скит пути Ме ж і і ЯМ У і Моя) лах ДЕС шли ни на й й КИ ве Е Е ЖНяє р | ми ше ! Ше ше ши Геній М саду не т з ми їі -А я у Кк ще -,
14. Олігомер з 16-20 нуклеотидів в довжину, що містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІО МО: 31, де зазначений олігомер являє собою І МА гепмер.
15. Олігомер за п. 14, де безперервна послідовність містить аналоги нуклеотидів, що посилюють спорідненість, незалежно або залежно вибрані з групи, що складається з ланок замкненої нуклеїнової кислоти (ЗНК), ланок 2'-О-алкіл-РНК, ланок 2'-ОМе-РНК, ланок 2'-аміно- ДНК ії ланок 2"-фтор-ДНК.
16. Олігомер за п. 14, який містить послідовність з 16 нуклеотидів, відповідну 5ЕО ІЮ МО: 26.
17. Олігомер за будь-яким з пп. 14-16, де олігомер містить один або більше нуклеозидних зв'язків, вибраних з групи, що складається з фосфоротіоатного, фосфородитіоатного |і боранофосфатного зв'язків.
18. Олігомер за будь-яким з пп. 14-17, який містить безперервну послідовність ЗЕО ІО МО: 2 або
3. Зо 19. Фармацевтична композиція, яка містить олігомер з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО: 31, де зазначений антисмисловий олігомер являє собою І МА гепмер і фармацевтично прийнятний розчинник, носій, сіль або ад'ювант.
20. Фармацевтична композиція, яка містить кон'югат антисмислового олігонуклеотиду, що містить: а) антисмисловий олігомер (А) з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮО МО: 31, ї де зазначений антисмисловий олігомер являє собою І МА гепмер і БЮ) щонайменше одне кон'юЮгатне угрупування (С), направлене на рецептор асіалоглікопротеїнів, ковалентно приєднане до олігомера (А), і с) фармацевтично прийнятний розчинник, носій, сіль або ад'ювант.
21. Застосування олігомера з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини ЗЕО ІЮ МО: 31, де зазначений антисмисловий олігомер являє собою І МА гепмер, як лікарського засобу, такого як засіб для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, набуття функціональних мутацій в РСОСБКОУ, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛІИВЩ)/У/ліпопротеїнів низької щільності (ЛОНЩ), дисліпідемій, наприклад сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХО), набутої гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарної артеріальної хвороби (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС).
22. Застосування кон'югата антисмислового олігонуклеотиду, який містить: а) антисмисловий олігомер (А) з 16-20 нуклеотидів в довжину, який містить безперервну послідовність з 16 нуклеотидів, комплементарну відповідному відрізку довжини 5ЕО ІЮ МО: 31, і де зазначений антисмисловий олігомер являє собою І МА гепмер і БЮ) щонайменше одне кон'юЮгатне угрупування (С), направлене на рецептор асіалоглікопротеїнів, ковалентно приєднане до олігомера (А) як лікарського засобу, такого як засіб для лікування гіперхолестеринемії або спорідненого розладу, такого як розлад, вибраний з групи, що складається з атеросклерозу, гіперліпідемії, гіперхолестеринемії, сімейної гіперхолестеринемії, наприклад, придбання функціональних мутацій в РОБКОУ, дисбалансу холестерину ліпопротеїнів високої щільності (ЛІПВЩ)/у/ліпопротеїнів низької щільності (ЛІПНЩ), дисліпідемій, наприклад, сімейної гіперліпідемії (сімейної комбінованої гіперліпідемії (СКГ)) або сімейної гіперхолестеринемії (СГХС), придбаної гіперліпідемії, статин-резистентної гіперхолестеринемії, коронарної артеріальної хвороби (КАХ) та ішемічної хвороби серця (ІХС).
23. Спосіб інгібування РОКУ /л у/то в клітині, експресуючій РОЗКОУ, який включає введення в клітину олігомера або кон'югата антисмислового олігонуклеотиду або фармацевтичної композиції за будь-яким з пп. 1-20.
24. Кон'югат олігонуклеотиду за п. 4, де М-ацетилгалактозамін (сзаіМмАс) угрупування являє Зо собою моновалентне, двовалентне, тривалентне або чотиривалентне СаЇІМАс угрупування.
25. Кон'югат олігонуклеотиду за п. 6, де поліетиленгліколеві (ПЕГ) спейсери показані як Сопі 1, 2, Ла або 2а. я а т з Ак пит ут «Ада в АН |: К наз Ї Ї - 2 ЄСавііх по жит ккд? чн и я і н- нах «В п У Ії й т : поки з р; об зичу збут я кНаАє : «ря т нас й в з Ї до 5 тоттьї З. ! А оон Шия ї ших я й ЄСеві 25 | ну ту аб дять в 1 Її КШняхо ов ва щоб хитає Миття 2 и МнАг но і Ше З н п з бе тю бе че и - о дух А не А ша а а и но а УП У х ІЗ ія на А. А | ях Сапрід- Ч ода р о А ання А ї от - рити т риття че | | М- Й Мняко ов шо ито НО в: - Ні а ї р С і З ки и М; У ей не но пав - Хна Е А п од ака и о А пев в о п й п я : ще ОНА Й Шк і: од п н Ї о. ще рий дитини, Ж ря КО в ЄозрІа- ж М па з п В) г Ї й нас ан й е і - на - 4 -х Ак жокок ДА ! нот ом дя Код В - Хнаг ї
! воно го ! ни др кн щеня с З шо ї Н Кк Х ща" не а с с о а с ї й К Що і Є І: х Н Н ї КУ жк ох й КО. ; аа з вх Сані їх Її ; т вен ж й Н свв пері Нори мВ вич ня її КО. : Де В З й ї КЗ а ! й "Й Я ї ї Я Е : її с ії є ! на на ін ши : А х х й і ! Мнає ще! чит» її і ї Фо . й о І Е пов й и ши вк Н ї й ХЕ 7 " Е Вк І: Ж 1 й У 1 Е х ї і ї с Ще: А бек кв ни ень й ше щ і Мед ох М ЕЕ: сСамАсТ бою яз ї нн и зи : Н ї їн ше дня ск інн: ; 1 Во с ке со : Ех п на я і і Мне НН. Н : ї Н і Кк, і ! "вв і і В : і веж з ; А тк х Я : соізи Р вам, вин Ше ши ши ще я шк» і К и : пе ре Ка ско ММ не сн ан ї і ве Ї щи шк ! оеяН ве Н з В ! ї : се ; ко сив -х ! : неси кшШ аи Ше М
Е . соч ВМ нку Щі ін ут Ше Мо Ме: Н До Мене
Фі.
мо М Н ах і Не с а а і Мн СХ ую : і Н у і : тая і й ; ГК о 7 Свтіде ГОНООТ п. А ! Її кі осв в Н х її Кк і ння Я Я ная м щ КГ ЕТ Ме МнАс Ї т - ще А яко : ! Но Бл" в с я ! "вн те я моде ШЕ Севій щ г а | Ї Фу ї ї Я у вань ОМ 1 у, дише ши ше Ше
Не. у» нс ле ши а дити ! ннке М М Е но 1 3 І НВ ні І Ж одини . пекан ка чу І кання в. : ув У і не нях шк щ
Фіг. Е (продовження)
КІ Ще «й я Її ЩЕ ут мотиви щн ї ! ! кнає й я зи в и нь ве о : аж 5 ; і 4 З ! Й Я ї Я : нау й - ї Н серію Я ЇЇ Її -О, хе і лк й в й вини о са т хе с Ж со НА щ н о І дев І С шк ! Но ге ту З ех, ! Ко | І я чк і ще ке з ру им в пу т- р не Що КО нак еко ; Шк: й У Товт ит дин ну Н Кз У Н ї 7 Ем Е : т тя їв Її Н ке су - З о МІЗ о ЖШавіїве зу ши дет Вк КІ поля й ор ше Є І гй : Ї но і З - ; ї я і і вже М уявити "кі й Мнях о ше ї - з й в З с о я і ох ше шо: : зона ; 1 Ї й | і Серпр р ї інн Ї ші й Як З ву ана ї й п й І М Н ї ї ет яКЕА мі о о солеВ Хр я с І х Мндг ї М Й 7 ще м ян Сеедж тк Ї і а і Ті і я ди пеки кн ч сек й ни ОТ он пера тя й пе Виде п т--й фіг. 1 (продовження!
Й : ой Сов шй
М. я ща і з м . Св бе а в ов Ка м а по а г п ше ОК днини НЕ: 1 і Ка ай Х і ! Ії в ! СовібЯає Сповов у ! і ма з що Ка не ет й ся Шк оз ча : х ; Севі бах я пера щи чи Фя пе и Мер ст дух йод до дух Мері, Мер. ді. з ве й, ще я Є зва, С я С І «А ОО щі да : і. п ен иа й с й Мері ме Ма ії АКА ТС А СА А АМС МЕС МЕС. Аі-З ОО НІ АВАНС МЕС АСУ ТЕО Юр З ко мес те ГиУ ТА Ся ТИ БО ща всю а азарт и я ри тр, и. ул 5-1 СУ Ку: «АК, Ї Бей Ї АН, Ї. 1 Еш нд сот и МЕ вит з ект и ус о в со ГО АОС ОМ -Я чо 106 теме мет осо тс, голо ле ме Ммесу КО НІ?
к. т мере мет КЕ т со « « ї. Мф і. СЕ - «о о 8
Фі. З ев, я Сстеьсв не ке нс в Ка В: КА ни ОО яко юта пар ю-Д. з ка чкесетаєтдя Мер. Мерч. Месі. із СВОЯ но он и АН В В п о вою ері е-ї. яд в Таб ст то Ки я хе Му Ме я спонов но зе уй пи и ко о-ї. 1. Ме ще зрос ж о др: У, З че ен ана анна ну ОРОС Н З ша ке ч гак зт кед лех ад ях Кк мя З ; ко ї12 о пор ша в и а А и ема но ще «ме ке и ах 7 ові: до-ї. - зе о ДК о ШИ Спосв що я я р Пи, УК ? ко 14 о
Аев.. І. ке. Т. Му Ми, сені ж уста дя те Мухи жирі тека у СЛОВ ізе ; 4 а М г іх х іх «О, ех НА еНИй У я 4 ше Зк ща 15 еї й ТК р хх Ж, Жені, Вир, ср вч ох р ие и кох ви МЕ. Мет СсвесСе ча я пово Фк 4
Н я ЗаМмАвя й х ї в і: ме їх н ние не й я КА в А С МОЇ АЕОУ 5ЕбІві? нн Фандея У о-ї. Ку що я АБ А, ТОК у АоА у, АС ВО Му. ду щує нк Я х КБ АТАК кт х г щ й яко З 18 м Й й с Ми, рак і9) свімлсо ша д-вк У не ТЕоАК АК Т ОСТ АКА А АКА МНОМ МА ДУ КО т 3» н де, ра ща о свімАсе У і у зер щу ще що які я ЩЕ т, в, ІЙ а, та й З Кей с г Ку В у к Б ж КО 175 20 ЦЕ шк а ня ; саіМмАєЗ - ій у ре що ов РКС ТА ть КО ЕІ ї осв ен і ІЗаНЧАсВ т х в-й й ; є вс ож АН се чЕО 22 н М, Мене наве З ес з НИ у дек
Я. Тек ч де). Ми ро ру ри ру. Му Ме нн ях А що п ЕНН и ИКМКИ ку! я Ся а КО 3 23 М пакасе й 7 З де- ази що ай тк мес мере р оо Су ТУТ Му не з Ь ше и а ви и пи зи пи 5; КО о 24
Фк. 5 т Ж ЛО ит Ж уч - я жк ї КЕ х З у її ше ЖЖ жу ох КН Ваня нн ос ЗИ Ганни ЕУ «ооо Кк щу КЗ ее КУ їх М т ЖК ІК Зх З куки ЖЖ фееуіуу Я во ТЕ г Х шо їх Б ДС ко Е КЕ не шо Х об зд а а НИ ЗВУ ж- Ох де Я КУ х х СУ КУ СЕ КЗ я хх п СИНКУ КК и ШО Хату ОВУ я вх з У ї «Е -к КУ Фо ходу дк. бе бані о жк ДМ СЯ Же ОО СУ Її КУ З Ж Ох Кок 5. й х Ху Я що чу Жук еВ Же й Х ї х р: ЗШ хе р Зм Ще х х ТУ Мова о ке ще Ве Є КЗ І 3 КУ ЩЕ щ х хх пк ве щу Я х Жук КИ КК КИ КИ І КК У КИ і х ще ЖК де ОЖИХ Ж- р же не а шк ех зе Б : дк Б (ЩЕ пу ви вени Же СЕ ше Х г Й СЯ 3 ро Е хх Я хо х хо ЖХА-Є х ї КЗ в нн т ЇХ 5 Ж Х ї їй Ж Кава КИ се З х Ж ЕТ ж КЗ МК, де же дих од я З ЗИ т КУ мне Я хо Їх У Жук ЖЖ кова: ей Я ер - х Же ЖЕ 5. я пе х інн К ше о гук докху кожи ше ДК КЗ ке ї З де ях ЗЕ МЕНА печеня Ман й ОН З ак НН СЯ ех ї ОК с - Трку 535 хх дк 5 5 к СДН жене ше одн ФАХ КУ а К Мішин їз г сих М хо М їх З й ж Х хх кине и, я мое я дже Є дрож КЗ смхм ШТ З ожкнкко пем В де в КУ у БУ я К а З СІЙ х в ТУ я (5 З 5 ї х й х х шк шо У У її « З з У дей з Я и А х х Що Ко - ій ей декіх Х де Ж : Е У; ДЕЙ їх КУ Зе-е еХ Ох шо КМ ех ЦИ М А НКУ х ие З Я де х х У Ж ке Ох х Ж т ДА
ЯК. ЗА
Кей Е до Мити и о В Я БА фесу й М КЗ Фон яву ОЇ в щей КЗ СЯ з і БУ х ДИ НН х жу а Ше ШК сх Ви тож ї Б У Я пд І дере кв ване ДИ я ро Ї
Ж. Ж хх лк у Із г З У « їх ВО ..3 сла ОХ фе тр ДЕ С ення ї- З за ВСЯ З їх Й усе р З у ше Її й пгт Уженцй с м нка М иа чи ве Ф р у Ух Ї х в уеутя ше Хжий ук ще - ТУ ех е 1 Я ях її МУ х З чу Ух х її хни КІ Жоккнм Є у песню які, фонутиттяютя он нн нн нн ; 5 що МУ Жах Му ї КЗ я Же У же Ю ї уки в Ге Жду - ІЗ ш щ А як : 2 кА х їх де Хжхннтнн шо фу, т З Й Ж бе КЗ й КЗ сов ШК З п Ж зо Ж Е В У Жханкн ве ДИ ож г ке 5 йде Зять мк їЗ «ой їх Ї З ой «У хо Ме Б се дл Кк Ж. коням УНК сн яр ОТ мя їх де у ої Ж ее КЗ я У ск Яд х Ян хх й ще а се ЧИ дона сл г ОНИ КНУ 7 туккху у тк ОО У ан Бе Я З Й ї Її їх НЕ НА й с че я тк ту К ї є х їх кжк кий а Б нал ем 0 гі др оцих тк дати іслань ї й Х я че «ї Є я КЗ Ши є ко ІЗ х Ка т х х у у; х Е т Х х Х Кк п « Ж ї і п Ко Є хх Ж х х. хх ран З х с-м х Ме - й ТК х п рн, За деко ж МЕ: я ую и и а НН ре нку ше х х Ж дк й Ох х КЗ т ЖЕ фіг ЗБ ве ян Що шксов ! ж ЦІ ше «КН І р КА не в зе зх й шо Ж ди ен ЗД ШИ Я дк дю авіа ї вах чу и си се и А Сл бу, В В |. Е | : Ще І З в Кс | ї ; дев ов, ї : ЕК дЕНЕ іч ; Хе я І : Е Мк; шк я : шо З ролю, : з Е їв ї
Фіг. 6 - ї- - йо З - з о о ГУ ДІ т й - я ? Є гай - сЗ та р ; ще Х ї «ХЕ щ - ней єЯ й ж ко в - - ї- з ій - ік: ше ох рен її хв йсі Са я о чі. і « й й ЩЕ: пи 7 я ря ве т, ї- сей ще й пе це і ро - іо - та дей с вв Ко 3 щ й рий «о щш « й ГЄ ко ра бо Як) т сей м М У Б о я Х 5 х ее ; а ве ве т р З за й я т Щ -, « Є й ж «а та а КА -а З - а а св те У - то - о пе шо ге М Б й ою г В 5 5 ше В Б зи ьИ в - - їря нії в Ї Ї | ї ігх | З не: пути ре ровно кн фуд ння 00 С нні Й З ; Є й й ї Є , щі щі що є - м Я Е Ж В ; ї і: ї Кк у КЕ Ж Сет щей р ВОК вет: пвіденнех ща г ще певною ах ! ші чн «Ж Б шо в і. ев ВВ ЕВ В З Кемалли дао ли тих нити риття Н КЕ шо її ЕНН Е В Ех ! шо о
0. ! У с : Я Я К ОХ КН Я с БЖ пе ; що ЕКОН Н за ОМ Я і ОХ ох Я Н в і ШО шо п ! пе ООФКК КК Н я ! сю ! ї НКИ З ПЕВ, Я В
Я ПЇ » . вав зем наз зване
ВЕРН СКУ вро» помалкових ш ж бів шо її 6 б 5 В З Е ІІІ Е г т ВОК шЕ: Б ЗІ ї В й я В Й : БоОж ПИТИ ПИ иии ї КС 55: це МОН У З ! З ЕК х І Й Ф ЩА з мо чав: Я щі що З ж і Е й З Е ДОМ: К "8 уеоохо ен З ККУ З і Ес й і Е в У ша З Е 0 0 ШЕ 00 шк ш- 00600 Е В и | Б й й і 7Е КЗ ке т дв св
Фіг. 10
ШИ
Ї. ннненянняннншиняя З Є я ШИ т ще Н -е - Ши - БЕРУ с "БЕ сп М ж МО м ї Шо
Ж. фо по ВОК ; с са с с Кв М де чена -й (нневоі віфуєнесааї
ЩО 5 Ян . ВО со ДИМ у в. нн ша Ін КІ А х ПО КО ВИ вен ЗИТННКОХ СНІ си в і. МКК ЗЕ ІЕЕ ШНЕК ТУ ев КК й З а й кі з Бе - та ВО Коммт івчнощоу зне зн ВЕ Пн ев в. КЕКС ЗО ВАЯ СЕН в НЕК В а ОСА ве зав ев БІ Я хе С У й А Б МУК МКУ КИЯН КК о п ОККО ! А Н Мо ОВ го ОО: п Де ВИ З КВК ШЕ СОКИ А фея
Же Жаба с я КО В ; Мара яд У о сАЗЖ Пер: влямка наприжеє вв ЖК ПЕ КІН ю МВ ПОФИШЕИНИХ о. й С В В НВ ера лемки: снун Ак к В овЕ «і КУБ: КО З г х і и Я БЕ и ЗМК ВОМУ 0 ВВА ОНИ що ПИШЕ
: 5. н ; ь В А а, о ВОМ ні, ПММ КК ОН ОО "Б 553 БО 0 За В А в. о т БОБ ВІН и М ВВ ТЕ ь і і в. за Ва КС: ПИЧНКОНННННе х БАК ВК Шоу ПИПИНХ ПШПИПШИИИИКИ Й КЗ Пед ОБ АЗК ИН ооо З ь гЗ х . | й ' ща Інн ( ЗгЗгтп й А фіг, 35
: сисВресця РНК РСБКЗ в печінці З : і ж ХВ Клин кит па о В : оо Н : Ге с В ву ях ЕД МАЕ ! ; щ її ни ПЕ Инні Й ОК ІВ В їх ш Б БВ З | що. ОЇ є яки жи ижииш Бо От Віш ВІ іш Бі Ш щі жі! сі ші і п сх ит, чт, яхт, ЗЕ ЕЕ ЖЖ Н : і Н ї КН ! : І ї І Н Н ї їх ї : : Н її ! г І : й | т іх ї у ї. ї 15 ї Н Й Ї з т Й 7 Що і
ЩЕ. НЯ доваї й дебая 6 Доба? 5 0 дв неон ВК УНК кв ЗИ и нн нин он нн ! Єкспресів МРНК РОКУ в нирках : У | : Ж СУКНЯ нини нин ви мини мини оман сна в нн В ВІ Е їх З ве у ге хни нан но Па ав ко З е БІВ. Віші ші а БІБ. ВІВ М ин 18 ОБОВ й КОР: т ще 2 довая дві З дез? бод 000 ЕН
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13174092 | 2013-06-27 | ||
EP13192938 | 2013-11-14 | ||
PCT/EP2013/073858 WO2014076195A1 (en) | 2012-11-15 | 2013-11-14 | Oligonucleotide conjugates |
EP13192930 | 2013-11-14 | ||
EP14153253 | 2014-01-30 | ||
EP14168331 | 2014-05-14 | ||
PCT/EP2014/063757 WO2014207232A1 (en) | 2013-06-27 | 2014-06-27 | Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
UA119643C2 true UA119643C2 (uk) | 2019-07-25 |
Family
ID=52141126
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
UAA201600243A UA119643C2 (uk) | 2013-06-27 | 2014-06-27 | Антисмисловий олігомер та кон'югат, направлений на пропротеїн конвертазу субтилізин/кексин типу 9 (pcsk9) |
Country Status (30)
Country | Link |
---|---|
US (7) | US9879265B2 (uk) |
EP (2) | EP3591054A1 (uk) |
JP (2) | JP6255092B2 (uk) |
KR (2) | KR101931089B1 (uk) |
CN (2) | CN112263682A (uk) |
AU (1) | AU2014300981B2 (uk) |
BR (1) | BR112015032432B1 (uk) |
CA (1) | CA2915316C (uk) |
CL (1) | CL2015003728A1 (uk) |
CY (1) | CY1122738T1 (uk) |
DK (1) | DK3013959T3 (uk) |
EA (1) | EA201592215A1 (uk) |
ES (1) | ES2770667T3 (uk) |
HK (1) | HK1221740A1 (uk) |
HR (1) | HRP20200163T1 (uk) |
HU (1) | HUE048738T2 (uk) |
IL (1) | IL242875B (uk) |
LT (1) | LT3013959T (uk) |
MX (2) | MX367083B (uk) |
MY (1) | MY183049A (uk) |
NZ (1) | NZ715081A (uk) |
PE (1) | PE20160158A1 (uk) |
PH (1) | PH12015502761A1 (uk) |
PL (1) | PL3013959T3 (uk) |
PT (1) | PT3013959T (uk) |
RS (1) | RS59986B1 (uk) |
SG (2) | SG11201510656PA (uk) |
SI (1) | SI3013959T1 (uk) |
UA (1) | UA119643C2 (uk) |
WO (1) | WO2014207232A1 (uk) |
Families Citing this family (88)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2015151857A (ru) | 2008-12-02 | 2019-01-15 | Уэйв Лайф Сайенсес Джапан, Инк. | Способ синтеза модифицированных по атому фосфора нуклеиновых кислот |
AU2010270714B2 (en) | 2009-07-06 | 2015-08-13 | Wave Life Sciences Ltd. | Novel nucleic acid prodrugs and methods use thereof |
DK2620428T3 (da) | 2010-09-24 | 2019-07-01 | Wave Life Sciences Ltd | Asymmetrisk hjælpegruppe |
CN107365339A (zh) | 2011-07-19 | 2017-11-21 | 波涛生命科学有限公司 | 合成官能化核酸的方法 |
CA2879023C (en) | 2012-07-13 | 2017-03-28 | Wave Life Sciences Japan | Asymmetric auxiliary group |
CN104661664B (zh) | 2012-07-13 | 2020-07-03 | 波涛生命科学有限公司 | 手性控制 |
RU2650510C2 (ru) | 2013-05-01 | 2018-04-16 | Ионис Фармасьютикалз, Инк. | Композиции и способы модулирования экспрессии аполипопротеина c-iii |
EP3591054A1 (en) | 2013-06-27 | 2020-01-08 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9 |
JPWO2015108048A1 (ja) | 2014-01-15 | 2017-03-23 | 株式会社新日本科学 | 抗腫瘍作用を有するキラル核酸アジュバンド及び抗腫瘍剤 |
EP3095461A4 (en) | 2014-01-15 | 2017-08-23 | Shin Nippon Biomedical Laboratories, Ltd. | Chiral nucleic acid adjuvant having immunity induction activity, and immunity induction activator |
KR20230152178A (ko) | 2014-01-16 | 2023-11-02 | 웨이브 라이프 사이언시스 리미티드 | 키랄 디자인 |
BR112016024850B1 (pt) | 2014-05-01 | 2021-07-06 | Ionis Pharmaceuticals, Inc | compostos e composições para modulação da expressão de angptl3 e seus usos |
RU2724527C2 (ru) | 2014-05-01 | 2020-06-23 | Ионис Фармасьютикалз, Инк. | Композиции и способы модулирования экспрессии рецептора гормона роста |
CR20200228A (es) | 2014-05-01 | 2020-07-09 | Ionis Pharmaceuticals Inc | COMPOSICIONES Y MÈTODOS PARA MODULAR LA EXPRESIÒN DEL FACTOR B DEL COMPLEMENTO (Divisional 2016-0554) |
GB201408623D0 (en) | 2014-05-15 | 2014-07-02 | Santaris Pharma As | Oligomers and oligomer conjugates |
CA2982825C (en) | 2015-08-06 | 2023-10-17 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Processes for the preparation of galnac acid derivatives |
US20210052631A1 (en) * | 2015-09-25 | 2021-02-25 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated antisense compounds and their use |
PE20181353A1 (es) | 2015-10-09 | 2018-08-22 | Wave Life Sciences Ltd | Composiciones oligonucleotidicas y sus metodos |
WO2017068087A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotide detection method |
CN108348478A (zh) | 2015-11-06 | 2018-07-31 | Ionis 制药公司 | 调节载脂蛋白(a)表达 |
WO2017084987A1 (en) | 2015-11-16 | 2017-05-26 | F. Hoffmann-La Roche Ag | GalNAc CLUSTER PHOSPHORAMIDITE |
UA127432C2 (uk) | 2016-03-14 | 2023-08-23 | Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг | Олігонуклеотид для зниження експресії pd-l1 |
MA45478A (fr) * | 2016-04-11 | 2019-02-20 | Arbutus Biopharma Corp | Compositions de conjugués d'acides nucléiques ciblés |
JP7012033B2 (ja) | 2016-06-17 | 2022-02-10 | エフ.ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | インビトロ腎毒性スクリーニングアッセイ |
WO2017216340A1 (en) * | 2016-06-17 | 2017-12-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | In vitro nephrotoxicity screening assay |
MA45496A (fr) | 2016-06-17 | 2019-04-24 | Hoffmann La Roche | Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b |
EP3475424A1 (en) | 2016-06-22 | 2019-05-01 | ProQR Therapeutics II B.V. | Single-stranded rna-editing oligonucleotides |
CA3035534A1 (en) * | 2016-09-07 | 2018-03-15 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Modulation of liver genes |
US11400161B2 (en) | 2016-10-06 | 2022-08-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method of conjugating oligomeric compounds |
EP3568479A1 (en) | 2017-01-13 | 2019-11-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating nfkb1 expression |
WO2018130585A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating relb expression |
US20190345495A1 (en) | 2017-01-13 | 2019-11-14 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating nfkb2 expression |
US20190338286A1 (en) | 2017-01-13 | 2019-11-07 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating rel expression |
WO2018130581A1 (en) | 2017-01-13 | 2018-07-19 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligonucleotides for modulating rela expression |
CN110536964A (zh) | 2017-03-10 | 2019-12-03 | 国立研究开发法人国立成育医疗研究中心 | 反义寡核苷酸和糖原贮积病Ia型预防或治疗用组合物 |
JOP20190215A1 (ar) | 2017-03-24 | 2019-09-19 | Ionis Pharmaceuticals Inc | مُعدّلات التعبير الوراثي عن pcsk9 |
WO2018191278A2 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Arbutus Biopharma Corporation | Targeted compositions |
MX2019012083A (es) | 2017-04-13 | 2019-11-21 | Cadila Healthcare Ltd | Nueva vacuna de peptidos contra la pcsk9. |
WO2018215049A1 (en) | 2017-05-23 | 2018-11-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Process for galnac oligonucleotide conjugates |
US11273222B2 (en) | 2017-05-26 | 2022-03-15 | National Cerebral And Cardiovascular Center | Antisense nucleic acid targeting PCSK9 |
WO2019030313A2 (en) | 2017-08-11 | 2019-02-14 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF UBE3C EXPRESSION |
WO2019038228A1 (en) | 2017-08-22 | 2019-02-28 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | OLIGONUCLEOTIDES FOR MODULATION OF TOM1 EXPRESSION |
CN111226114A (zh) | 2017-10-13 | 2020-06-02 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 用部分立体限定的寡核苷酸子文库鉴定反义寡核苷酸改进的立体限定硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法 |
TWI816066B (zh) | 2017-10-16 | 2023-09-21 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 用於降低PAPD5及PAPD7 mRNA以治療B型肝炎感染之核酸分子 |
JP2021505175A (ja) | 2017-12-11 | 2021-02-18 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | Fndc3bの発現を調節するためのオリゴヌクレオチド |
WO2019115417A2 (en) | 2017-12-12 | 2019-06-20 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating rb1 expression |
EP3729095A1 (en) | 2017-12-21 | 2020-10-28 | F. Hoffmann-La Roche AG | Companion diagnostic for htra1 rna antagonists |
CA3085406A1 (en) | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage |
WO2019122282A1 (en) | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Gapmer oligonucleotides comprising a phosphorodithioate internucleoside linkage |
CN111448316A (zh) | 2017-12-22 | 2020-07-24 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 新的硫代亚磷酰胺 |
JP2021511022A (ja) | 2018-01-10 | 2021-05-06 | ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス | Pias4発現を調節するためのオリゴヌクレオチド |
EP3737760A1 (en) | 2018-01-12 | 2020-11-18 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating gsk3b expression |
CA3088112A1 (en) | 2018-01-12 | 2019-07-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antisense oligonucleotides targeting alpha-synuclein and uses thereof |
SG11202006142PA (en) | 2018-01-12 | 2020-07-29 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Alpha-synuclein antisense oligonucleotides and uses thereof |
KR20200140240A (ko) | 2018-01-12 | 2020-12-15 | 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 | 알파-시누클레인을 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 그의 용도 |
CN111615558A (zh) | 2018-01-17 | 2020-09-01 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 用于调节erc1表达的寡核苷酸 |
WO2019145386A1 (en) | 2018-01-26 | 2019-08-01 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides for modulating csnk1d expression |
SG11202007652UA (en) * | 2018-02-21 | 2020-09-29 | Bristol Myers Squibb Co | Camk2d antisense oligonucleotides and uses thereof |
EP3770256A4 (en) * | 2018-03-20 | 2021-12-22 | Tokyo Institute of Technology | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE WITH REDUCED TOXICITY |
JP7515400B2 (ja) | 2018-04-05 | 2024-07-12 | エフ. ホフマン-ラ ロシュ アーゲー | B型肝炎ウイルス感染を治療するためのfubp1阻害剤の使用 |
PE20210346A1 (es) | 2018-07-03 | 2021-02-25 | Hoffmann La Roche | Oligonucleotidos para modular la expresion de tau |
CA3106288A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-01-16 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Oligonucleotides for modulating rtel1 expression |
WO2020025563A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage |
WO2020025527A1 (en) | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligonucleotides comprising a phosphorotrithioate internucleoside linkage |
TW202102516A (zh) | 2019-02-20 | 2021-01-16 | 丹麥商羅氏創新中心哥本哈根有限公司 | 膦醯基乙酸酯間隙子寡核苷酸 |
EP3927716A1 (en) | 2019-02-20 | 2021-12-29 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Novel phosphoramidites |
CN113474633A (zh) | 2019-02-26 | 2021-10-01 | 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 | 寡核苷酸配制方法 |
CA3132178A1 (en) | 2019-04-02 | 2020-10-08 | Aliye Seda Yilmaz-Elis | Antisense oligonucleotides for immunotherapy |
BR112021019182A2 (pt) | 2019-04-03 | 2022-05-31 | Bristol Myers Squibb Co | Oligonucleotídeos angptl2 antissenso e seus usos |
CN114829601A (zh) | 2019-12-19 | 2022-07-29 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | Sbds抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途 |
WO2021122993A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of saraf inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
EP4077667A1 (en) | 2019-12-19 | 2022-10-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Use of sept9 inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
EP4077668A1 (en) | 2019-12-19 | 2022-10-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Use of scamp3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
WO2021122921A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of cops3 inhibitors for treating hepatitis b virus infection |
MX2022007908A (es) | 2019-12-24 | 2022-07-21 | Hoffmann La Roche | Combinacion farmaceutica de un oligonucleotido terapeutico que actua sobre hbv y un agonista de tlr7 para el tratamiento de hbv. |
EP4081217A1 (en) | 2019-12-24 | 2022-11-02 | F. Hoffmann-La Roche AG | Pharmaceutical combination of antiviral agents targeting hbv and/or an immune modulator for treatment of hbv |
MX2022010980A (es) | 2020-03-04 | 2022-12-02 | Verve Therapeutics Inc | Composiciones y metodos para el suministro de arn dirigido. |
WO2021185765A1 (en) * | 2020-03-16 | 2021-09-23 | Argonaute RNA Limited | Antagonist of pcsk9 |
AR122731A1 (es) | 2020-06-26 | 2022-10-05 | Hoffmann La Roche | Oligonucleótidos mejorados para modular la expresión de fubp1 |
CN116157522A (zh) | 2020-08-21 | 2023-05-23 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | A1cf抑制剂用于治疗乙型肝炎病毒感染的用途 |
CR20230308A (es) * | 2020-12-11 | 2023-09-08 | Civi Biopharma Inc | Entrega oral de conjugados antisentido que tienen por blanco a pcsk9 |
TW202246500A (zh) | 2021-02-02 | 2022-12-01 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 用於抑制 rtel1 表現之增強型寡核苷酸 |
CA3212650A1 (en) | 2021-03-08 | 2022-09-15 | Les Laboratoires Servier | Antisense oligonucleotides for inhibiting alpha-synuclein expression |
WO2023049294A2 (en) * | 2021-09-23 | 2023-03-30 | Sirius Therapeutics, Inc. | Polynucleic acid molecules targeting pcsk9 and uses thereof |
WO2023111210A1 (en) | 2021-12-17 | 2023-06-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Combination of oligonucleotides for modulating rtel1 and fubp1 |
AR128558A1 (es) | 2022-02-21 | 2024-05-22 | Hoffmann La Roche | Oligonucleótido antisentido |
US20230372508A1 (en) * | 2022-05-19 | 2023-11-23 | Olix Us, Inc. | Linkers coupling functional ligands to macromolecules |
CN117563009A (zh) * | 2023-09-01 | 2024-02-20 | 北京悦康科创医药科技股份有限公司 | 一种含有核糖环或其衍生结构的GalNAc化合物及其寡核苷酸缀合物 |
Family Cites Families (146)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2699808A (en) | 1944-10-06 | 1955-01-18 | Mark W Lowe | Apparatus for peeling tomatoes |
US2699508A (en) | 1951-12-21 | 1955-01-11 | Selectronics Inc | Method of mounting and construction of mounting for low frequency piezoelectric crystals |
JPS5927900A (ja) | 1982-08-09 | 1984-02-14 | Wakunaga Seiyaku Kk | 固定化オリゴヌクレオチド |
US4948882A (en) | 1983-02-22 | 1990-08-14 | Syngene, Inc. | Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis |
US4587044A (en) | 1983-09-01 | 1986-05-06 | The Johns Hopkins University | Linkage of proteins to nucleic acids |
US5430136A (en) | 1984-10-16 | 1995-07-04 | Chiron Corporation | Oligonucleotides having selectably cleavable and/or abasic sites |
US4914210A (en) | 1987-10-02 | 1990-04-03 | Cetus Corporation | Oligonucleotide functionalizing reagents |
US4962029A (en) | 1987-10-02 | 1990-10-09 | Cetus Corporation | Covalent oligonucleotide-horseradish peroxidase conjugate |
US5525465A (en) | 1987-10-28 | 1996-06-11 | Howard Florey Institute Of Experimental Physiology And Medicine | Oligonucleotide-polyamide conjugates and methods of production and applications of the same |
DE3738460A1 (de) | 1987-11-12 | 1989-05-24 | Max Planck Gesellschaft | Modifizierte oligonukleotide |
US5391723A (en) | 1989-05-31 | 1995-02-21 | Neorx Corporation | Oligonucleotide conjugates |
US4958013A (en) | 1989-06-06 | 1990-09-18 | Northwestern University | Cholesteryl modified oligonucleotides |
US5254469A (en) | 1989-09-12 | 1993-10-19 | Eastman Kodak Company | Oligonucleotide-enzyme conjugate that can be used as a probe in hybridization assays and polymerase chain reaction procedures |
US5486603A (en) | 1990-01-08 | 1996-01-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide having enhanced binding affinity |
US6395492B1 (en) | 1990-01-11 | 2002-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Derivatized oligonucleotides having improved uptake and other properties |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5245022A (en) | 1990-08-03 | 1993-09-14 | Sterling Drug, Inc. | Exonuclease resistant terminally substituted oligonucleotides |
US5512667A (en) | 1990-08-28 | 1996-04-30 | Reed; Michael W. | Trifunctional intermediates for preparing 3'-tailed oligonucleotides |
CA2095212A1 (en) | 1990-11-08 | 1992-05-09 | Sudhir Agrawal | Incorporation of multiple reporter groups on synthetic oligonucleotides |
ATE239484T1 (de) | 1991-10-24 | 2003-05-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Derivatisierte oligonukleotide mit verbessertem aufnahmevermögen |
NL9201440A (nl) | 1992-08-11 | 1994-03-01 | Univ Leiden | Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing. |
JPH06311885A (ja) | 1992-08-25 | 1994-11-08 | Mitsubishi Kasei Corp | C型肝炎ウイルス遺伝子に相補的なアンチセンス化合物 |
US6423489B1 (en) | 1992-09-10 | 2002-07-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of Hepatitis C virus-associated diseases |
CA2143678A1 (en) | 1992-09-10 | 1994-03-17 | Kevin P. Anderson | Compositions and methods for treatment of hepatitis c virus-associated diseases |
US6433159B1 (en) | 1992-09-10 | 2002-08-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for treatment of Hepatitis C virus associated diseases |
JPH08504559A (ja) | 1992-12-14 | 1996-05-14 | ハネウエル・インコーポレーテッド | 個別に制御される冗長巻線を有するモータシステム |
US5574142A (en) | 1992-12-15 | 1996-11-12 | Microprobe Corporation | Peptide linkers for improved oligonucleotide delivery |
JPH10503364A (ja) | 1994-05-10 | 1998-03-31 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション | C型肝炎ウイルスのアンチセンス阻害 |
US5580731A (en) | 1994-08-25 | 1996-12-03 | Chiron Corporation | N-4 modified pyrimidine deoxynucleotides and oligonucleotide probes synthesized therewith |
AU3999495A (en) | 1994-10-06 | 1996-05-02 | Buchardt, Dorte | Peptide nucleic acid conjugates |
MX9709914A (es) | 1995-06-07 | 1998-03-31 | Pfizer | Derivados de acido bifenil-2-carboxilico-tetrahidro-isoquinolin-6-ilo, su preparacion y el uso de los mismos. |
US5684142A (en) | 1995-06-07 | 1997-11-04 | Oncor, Inc. | Modified nucleotides for nucleic acid labeling |
CA2238379A1 (en) | 1995-11-22 | 1997-06-12 | The Johns-Hopkins University | Ligands to enhance cellular uptake of biomolecules |
US5656408A (en) | 1996-04-29 | 1997-08-12 | Xerox Corporation | Coated carrier particles |
WO1998023593A1 (en) | 1996-11-27 | 1998-06-04 | Pfizer Inc. | Apo b-secretion/mtp inhibitory amides |
CN1268980A (zh) | 1997-03-05 | 2000-10-04 | 华盛顿州大学 | 用于鉴定选择性抑制丙型肝炎病毒复制的试剂的新筛选方法 |
US6770748B2 (en) | 1997-03-07 | 2004-08-03 | Takeshi Imanishi | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue |
JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
US5770716A (en) | 1997-04-10 | 1998-06-23 | The Perkin-Elmer Corporation | Substituted propargylethoxyamido nucleosides, oligonucleotides and methods for using same |
GB2341390B (en) | 1997-05-21 | 2000-11-08 | Univ Leland Stanford Junior | Composition and method for enhancing transport across biological membranes |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
EP2253639A1 (en) | 1997-09-12 | 2010-11-24 | Exiqon A/S | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues |
US6096875A (en) | 1998-05-29 | 2000-08-01 | The Perlein-Elmer Corporation | Nucleotide compounds including a rigid linker |
US6300319B1 (en) | 1998-06-16 | 2001-10-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Targeted oligonucleotide conjugates |
US6335432B1 (en) | 1998-08-07 | 2002-01-01 | Bio-Red Laboratories, Inc. | Structural analogs of amine bases and nucleosides |
US6335437B1 (en) | 1998-09-07 | 2002-01-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for the preparation of conjugated oligomers |
US6410323B1 (en) | 1999-08-31 | 2002-06-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of human Rho family gene expression |
WO2000056748A1 (en) | 1999-03-18 | 2000-09-28 | Exiqon A/S | Xylo-lna analogues |
DE60029314T2 (de) | 1999-03-24 | 2007-07-12 | Exiqon A/S | Verbesserte Synthese für -2.2.1. I Bicyclo-Nukleoside |
EP1178999B1 (en) | 1999-05-04 | 2007-03-14 | Santaris Pharma A/S | L-ribo-lna analogues |
US6525191B1 (en) | 1999-05-11 | 2003-02-25 | Kanda S. Ramasamy | Conformationally constrained L-nucleosides |
US20040146516A1 (en) | 1999-06-17 | 2004-07-29 | Utah Ventures Ii L.P. | Lumen-exposed molecules and methods for targeted delivery |
US7029895B2 (en) | 1999-09-27 | 2006-04-18 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | 27411, a novel human PGP synthase |
US6617442B1 (en) | 1999-09-30 | 2003-09-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof |
JP2003511016A (ja) | 1999-10-04 | 2003-03-25 | エクシコン エ/エス | オリゴヌクレオチドを補充する高親和性rnアーゼhの設計 |
IL139450A0 (en) | 1999-11-10 | 2001-11-25 | Pfizer Prod Inc | Methods of administering apo b-secretion/mtp inhibitors |
JP2003524637A (ja) | 1999-12-23 | 2003-08-19 | エクシコン エ/エス | Lna修飾オリゴヌクレオチドの治療上の使用 |
CA2399727A1 (en) | 2000-02-07 | 2001-08-09 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Narc-1, subtilase-like homologs |
EP1334109B1 (en) | 2000-10-04 | 2006-05-10 | Santaris Pharma A/S | Improved synthesis of purine locked nucleic acid analogues |
WO2002094250A2 (en) | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Cureon A/S | Therapeutic uses of lna-modified oligonucleotides in infectious diseases |
US20070173473A1 (en) | 2001-05-18 | 2007-07-26 | Sirna Therapeutics, Inc. | RNA interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin Kexin 9 (PCSK9) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA) |
WO2003006475A2 (en) | 2001-07-12 | 2003-01-23 | Santaris Pharma A/S | Method for preparation of lna phosphoramidites |
US7407943B2 (en) | 2001-08-01 | 2008-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
US7888324B2 (en) | 2001-08-01 | 2011-02-15 | Genzyme Corporation | Antisense modulation of apolipoprotein B expression |
SI2264172T1 (sl) | 2002-04-05 | 2017-12-29 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Oligomerne spojine za modulacijo izražanja HIF-1alfa |
DE60315444T2 (de) | 2002-05-08 | 2008-04-30 | Santaris Pharma A/S | Synthese von locked nucleic acid-derivaten |
US20050069522A1 (en) | 2002-08-12 | 2005-03-31 | Richard Colonno | Combination pharmaceutical agents as inhibitors of HCV replication |
UA79300C2 (en) | 2002-08-12 | 2007-06-11 | Janssen Pharmaceutica Nv | N-aryl piperidine substituted biphenylcarboxamides as inhibitors of apolipoprotein b secretion |
US7087229B2 (en) | 2003-05-30 | 2006-08-08 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers |
AU2003291755A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-06-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomers comprising modified bases for binding cytosine and uracil or thymine and their use |
AU2003291753B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-07-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
WO2004044141A2 (en) | 2002-11-05 | 2004-05-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated oligomeric compounds and their use in gene modulation |
EP1569695B1 (en) | 2002-11-13 | 2013-05-15 | Genzyme Corporation | Antisense modulation of apolipoprotein b expression |
EP2752488B1 (en) | 2002-11-18 | 2020-02-12 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense design |
FR2848572B1 (fr) | 2002-12-12 | 2005-12-09 | Univ Joseph Fourier | Molecules inhibitrices de la synthese proteique du virus de l'hepatite c et procede de criblage desdites molecules inhibitrices |
MXPA05008319A (es) | 2003-02-10 | 2006-02-28 | Santaris Pharma As | Compuestos oligomericos para la modulacion de la expresion de survivina. |
EP1471152A1 (en) | 2003-04-25 | 2004-10-27 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Mutations in the human PCSK9 gene associated to hypercholesterolemia |
WO2004106356A1 (en) | 2003-05-27 | 2004-12-09 | Syddansk Universitet | Functionalized nucleotide derivatives |
DK1495769T3 (da) | 2003-07-11 | 2008-06-23 | Lbr Medbiotech B V | Mannose-6-phosphat-receptormedieret gentransfer til muskelceller |
EP1648914A4 (en) | 2003-07-31 | 2009-12-16 | Regulus Therapeutics Inc | OLIGOMERIC COMPOUNDS AND COMPOSITIONS USEFUL FOR MODULATING SMALL NON-CODING RNA |
US7427672B2 (en) | 2003-08-28 | 2008-09-23 | Takeshi Imanishi | Artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type |
US20050053981A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-03-10 | Swayze Eric E. | Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini |
GB2424887B (en) | 2003-11-26 | 2008-05-21 | Univ Massachusetts | Sequence-specific inhibition of small RNA function |
UA83510C2 (en) | 2003-12-09 | 2008-07-25 | Янссен Фармацевтика Н.В. | N-aryl piperidine substituted biphenylcarboxamides as inhibitors of apolipoprotein b |
AU2004303464B2 (en) | 2003-12-23 | 2009-10-01 | Santaris Pharma A/S | Oligomeric compounds for the modulation of BCL-2 |
WO2005073378A1 (en) | 2004-01-30 | 2005-08-11 | Santaris Pharma A/S | MODIFIED SHORT INTERFERING RNA (MODIFIED siRNA) |
ES2380923T3 (es) | 2004-04-07 | 2012-05-21 | Exiqon A/S | Procedimientos de cuantificación de microARN y ARN interferentes pequeños |
PL1747023T5 (pl) | 2004-05-04 | 2017-05-31 | Univ Leland Stanford Junior | Sposób i kompozycje do zmniejszania ilości genomu wirusowego HCV w komórkach docelowych |
WO2006093526A2 (en) | 2004-07-21 | 2006-09-08 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase |
US20080213891A1 (en) | 2004-07-21 | 2008-09-04 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi Agents Comprising Universal Nucleobases |
FR2873694B1 (fr) | 2004-07-27 | 2006-12-08 | Merck Sante Soc Par Actions Si | Nouveaux aza-indoles inhibiteurs de la mtp et apob |
EP1913011B1 (en) | 2004-08-04 | 2016-11-02 | Alnylam Pharmaceuticals Inc. | Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase |
CA2576233C (en) | 2004-08-10 | 2016-03-15 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Conjugate comprising an antagomir and a ligand |
PT2409713E (pt) | 2004-08-10 | 2015-10-09 | Genzyme Corp | Oligonucleótidos para utilização em modulação dos níveis de lipoproteínas e colesterol em humanos |
EP2377873B1 (en) | 2004-09-24 | 2014-08-20 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi modulation of ApoB and uses thereof |
CA2587411A1 (en) | 2004-11-17 | 2006-05-26 | Protiva Biotherapeutics, Inc. | Sirna silencing of apolipoprotein b |
US20060185027A1 (en) | 2004-12-23 | 2006-08-17 | David Bartel | Systems and methods for identifying miRNA targets and for altering miRNA and target expression |
BRPI0607555A2 (pt) | 2005-04-19 | 2009-09-15 | Surface Logix Inc | inibidores da proteìna microssomal de transferência de triglicirideo e secreção de apo-b |
WO2007031091A2 (en) | 2005-09-15 | 2007-03-22 | Santaris Pharma A/S | Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression |
AU2006291836B2 (en) | 2005-09-15 | 2012-02-23 | Santaris Pharma A/S | RNA antagonist compounds for the inhibition of Apo-Bl00 expression |
AU2007211080B9 (en) | 2006-01-27 | 2012-05-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-modified bicyclic nucleic acid analogs |
CA2649045C (en) | 2006-04-03 | 2019-06-11 | Santaris Pharma A/S | Pharmaceutical composition comprising anti-mirna antisense oligonucleotides |
ES2386578T3 (es) | 2006-05-05 | 2012-08-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos y procedimientos para modular la expresión de PCSK9 |
CN101484588B (zh) * | 2006-05-11 | 2013-11-06 | 阿尔尼拉姆医药品有限公司 | 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法 |
ES2389737T3 (es) | 2006-05-11 | 2012-10-31 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5' |
EP2052079A2 (en) | 2006-07-17 | 2009-04-29 | Sirna Therapeutics Inc. | Rna interference mediated inhibition of proprotein convertase subtilisin kexin 9 (pcsk9) gene expression using short interfering nucleic acid (sina) |
MX2009002859A (es) | 2006-09-15 | 2009-03-30 | Enzon Pharmaceuticals Inc | Enlazadores biodegradables a base de ester impedido para suministro de oligonucleotidos. |
CA2662520A1 (en) | 2006-09-15 | 2008-03-20 | Enzon Pharmaceuticals, Inc. | Polymeric conjugates containing positively-charged moieties |
EP2444494B1 (en) * | 2006-10-09 | 2016-09-28 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Rna antagonist compounds for the modulation of pcsk9 |
US20100021914A1 (en) | 2006-11-23 | 2010-01-28 | Querdenker Aps | Oligonucleotides for modulating target rna activity |
US8093222B2 (en) | 2006-11-27 | 2012-01-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
EP2453016A1 (en) | 2006-11-27 | 2012-05-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
WO2008089767A1 (en) | 2007-01-26 | 2008-07-31 | Diramo A/S | Stacking of optic sensor and microfluidic-chips with optically communication through windows |
WO2008109369A2 (en) | 2007-03-02 | 2008-09-12 | Mdrna, Inc. | Nucleic acid compounds for inhibiting tnf gene expression and uses thereof |
DK2149605T3 (da) | 2007-03-22 | 2013-09-30 | Santaris Pharma As | Korte RNA antagonist forbindelser til modulering af det ønskede mRNA |
WO2008124384A2 (en) | 2007-04-03 | 2008-10-16 | Aegerion Pharmaceuticals, Inc. | Combinations of mtp inhibitors with cholesterol absorption inhibitors or interferon for treating hepatitis c |
EP2170917B1 (en) | 2007-05-30 | 2012-06-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs |
EP2173760B2 (en) | 2007-06-08 | 2015-11-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs |
DK2176280T4 (en) | 2007-07-05 | 2015-07-20 | Isis Pharmaceuticals Inc | 6-Disubstituerede bicykliske nukleinsyreanaloge |
CN101816010A (zh) | 2007-07-19 | 2010-08-25 | 数据匙电子有限公司 | Rf令牌和接纳器***与方法 |
BRPI0721948A2 (pt) | 2007-08-20 | 2014-04-08 | Enzon Pharmaceuticals Inc | Ligantes poliméricos contendo frações dissulfeto de piridila |
WO2009043353A2 (en) | 2007-10-04 | 2009-04-09 | Santaris Pharma A/S | Micromirs |
WO2009067647A1 (en) | 2007-11-21 | 2009-05-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs |
EP2231195B1 (en) | 2007-12-04 | 2017-03-29 | Arbutus Biopharma Corporation | Targeting lipids |
WO2009090182A1 (en) | 2008-01-14 | 2009-07-23 | Santaris Pharma A/S | C4'-substituted - dna nucleotide gapmer oligonucleotides |
CA2713379A1 (en) | 2008-01-31 | 2009-11-05 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Optimized methods for delivery of dsrna targeting the pcsk9 gene |
US9290534B2 (en) | 2008-04-04 | 2016-03-22 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomeric compounds having at least one neutrally linked terminal bicyclic nucleoside |
AU2009234266B2 (en) | 2008-04-11 | 2015-08-06 | Tekmira Pharmaceuticals Corporation | Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components |
WO2009127680A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-10-22 | Santaris Pharma A/S | Pharmaceutical composition comprising anti pcsk9 oligomers |
WO2009148605A2 (en) * | 2008-06-04 | 2009-12-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating hypercholesterolemia |
BRPI0914123A2 (pt) * | 2008-07-02 | 2015-10-20 | Enzon Pharmaceuticals Inc | antagonistas de rna que alvejam hsp27 |
AT507215B1 (de) | 2009-01-14 | 2010-03-15 | Boehler Edelstahl Gmbh & Co Kg | Verschleissbeständiger werkstoff |
AU2010241567B2 (en) * | 2009-04-29 | 2013-10-31 | Amarin Pharmaceuticals Ireland Limited | Pharmaceutical compositions comprising EPA and a cardiovascular agent and methods of using the same |
JP2012529279A (ja) | 2009-06-12 | 2012-11-22 | サンタリス ファーマ アー/エス | 新規の強力な抗apobアンチセンス化合物 |
WO2011009697A1 (en) | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Santaris Pharma A/S | Antisense oligomers targeting pcsk9 |
WO2011126937A1 (en) | 2010-04-06 | 2011-10-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Targeted intracellular delivery of oligonucleotides via conjugation with small molecule ligands |
EP2633046A4 (en) | 2010-10-29 | 2015-05-06 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING PCSK9 GENES |
EP3226459B1 (en) | 2010-12-13 | 2020-11-25 | Telefonaktiebolaget LM Ericsson (publ) | Exchange of parameters relating to measurement periods |
JP2014504295A (ja) * | 2010-12-17 | 2014-02-20 | アローヘッド リサーチ コーポレイション | siRNA用ガラクトースクラスター−薬物動態調節剤標的指向部分 |
BR122020024394B1 (pt) | 2010-12-29 | 2021-05-11 | F. Hoffmann-La Roche Ag | conjugado e composição farmacêutica |
US9752142B2 (en) * | 2011-08-11 | 2017-09-05 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Gapped oligomeric compounds comprising 5′-modified deoxyribonucleosides in the gap and uses thereof |
US9984408B1 (en) | 2012-05-30 | 2018-05-29 | Amazon Technologies, Inc. | Method, medium, and system for live video cooperative shopping |
CA2893801A1 (en) | 2013-01-30 | 2014-08-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Lna oligonucleotide carbohydrate conjugates |
RU2650510C2 (ru) * | 2013-05-01 | 2018-04-16 | Ионис Фармасьютикалз, Инк. | Композиции и способы модулирования экспрессии аполипопротеина c-iii |
EP3591054A1 (en) * | 2013-06-27 | 2020-01-08 | Roche Innovation Center Copenhagen A/S | Antisense oligomers and conjugates targeting pcsk9 |
US9778708B1 (en) | 2016-07-18 | 2017-10-03 | Lenovo Enterprise Solutions (Singapore) Pte. Ltd. | Dual sided latching retainer for computer modules |
-
2014
- 2014-06-27 EP EP19183357.3A patent/EP3591054A1/en active Pending
- 2014-06-27 ES ES14739708T patent/ES2770667T3/es active Active
- 2014-06-27 MX MX2015017601A patent/MX367083B/es active IP Right Grant
- 2014-06-27 CA CA2915316A patent/CA2915316C/en active Active
- 2014-06-27 EP EP14739708.7A patent/EP3013959B1/en active Active
- 2014-06-27 KR KR1020167002216A patent/KR101931089B1/ko active IP Right Grant
- 2014-06-27 SG SG11201510656PA patent/SG11201510656PA/en unknown
- 2014-06-27 AU AU2014300981A patent/AU2014300981B2/en active Active
- 2014-06-27 KR KR1020187036311A patent/KR102226110B1/ko active IP Right Grant
- 2014-06-27 NZ NZ715081A patent/NZ715081A/en unknown
- 2014-06-27 DK DK14739708.7T patent/DK3013959T3/da active
- 2014-06-27 CN CN202010765887.9A patent/CN112263682A/zh active Pending
- 2014-06-27 PT PT147397087T patent/PT3013959T/pt unknown
- 2014-06-27 LT LTEP14739708.7T patent/LT3013959T/lt unknown
- 2014-06-27 PL PL14739708T patent/PL3013959T3/pl unknown
- 2014-06-27 CN CN201480036240.5A patent/CN105358692B/zh active Active
- 2014-06-27 HU HUE14739708A patent/HUE048738T2/hu unknown
- 2014-06-27 EA EA201592215A patent/EA201592215A1/ru unknown
- 2014-06-27 US US14/897,223 patent/US9879265B2/en active Active
- 2014-06-27 MY MYPI2015704729A patent/MY183049A/en unknown
- 2014-06-27 RS RS20200114A patent/RS59986B1/sr unknown
- 2014-06-27 UA UAA201600243A patent/UA119643C2/uk unknown
- 2014-06-27 BR BR112015032432-0A patent/BR112015032432B1/pt active IP Right Grant
- 2014-06-27 SI SI201431474T patent/SI3013959T1/sl unknown
- 2014-06-27 PE PE2015002667A patent/PE20160158A1/es unknown
- 2014-06-27 JP JP2016522547A patent/JP6255092B2/ja active Active
- 2014-06-27 SG SG10201908122X patent/SG10201908122XA/en unknown
- 2014-06-27 WO PCT/EP2014/063757 patent/WO2014207232A1/en active Application Filing
-
2015
- 2015-12-01 IL IL242875A patent/IL242875B/en active IP Right Grant
- 2015-12-10 PH PH12015502761A patent/PH12015502761A1/en unknown
- 2015-12-17 MX MX2019006284A patent/MX2019006284A/es unknown
- 2015-12-24 CL CL2015003728A patent/CL2015003728A1/es unknown
-
2016
- 2016-08-22 HK HK16109980.5A patent/HK1221740A1/zh unknown
-
2017
- 2017-12-01 JP JP2017231925A patent/JP6672245B2/ja active Active
- 2017-12-08 US US15/836,144 patent/US10443058B2/en active Active
-
2018
- 2018-05-04 US US15/971,951 patent/US10370668B2/en active Active
- 2018-05-04 US US15/971,970 patent/US10385342B2/en active Active
-
2019
- 2019-09-04 US US16/560,672 patent/US11091764B2/en active Active
-
2020
- 2020-01-31 HR HRP20200163TT patent/HRP20200163T1/hr unknown
- 2020-02-04 CY CY20201100098T patent/CY1122738T1/el unknown
-
2021
- 2021-07-16 US US17/378,528 patent/US11739332B2/en active Active
-
2023
- 2023-06-30 US US18/346,099 patent/US20240084307A1/en active Pending
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA119643C2 (uk) | Антисмисловий олігомер та кон'югат, направлений на пропротеїн конвертазу субтилізин/кексин типу 9 (pcsk9) | |
EP2920307B1 (en) | Anti apob antisense conjugate compounds | |
CN111465694A (zh) | 用于抑制细胞中lpa的表达的核酸 | |
JP2017501684A (ja) | Apobアンチセンスコンジュゲート化合物 | |
EA043736B1 (ru) | Антисмысловые олигомеры и их конъюгаты, направленные на пропротеин конвертазу субтилизин/кексин типа 9 (pcsk9) |