NL9201440A - Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing. - Google Patents

Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing. Download PDF

Info

Publication number
NL9201440A
NL9201440A NL9201440A NL9201440A NL9201440A NL 9201440 A NL9201440 A NL 9201440A NL 9201440 A NL9201440 A NL 9201440A NL 9201440 A NL9201440 A NL 9201440A NL 9201440 A NL9201440 A NL 9201440A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
group
glycoside
formula
residue
compound
Prior art date
Application number
NL9201440A
Other languages
English (en)
Original Assignee
Univ Leiden
Nl Hartstichting
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univ Leiden, Nl Hartstichting filed Critical Univ Leiden
Priority to NL9201440A priority Critical patent/NL9201440A/nl
Priority to AU48355/93A priority patent/AU674160B2/en
Priority to AT93921124T priority patent/ATE168694T1/de
Priority to PCT/NL1993/000169 priority patent/WO1994004545A1/en
Priority to DE69319912T priority patent/DE69319912T2/de
Priority to ES93921124T priority patent/ES2122041T3/es
Priority to JP6506123A priority patent/JPH08502726A/ja
Priority to EP93921124A priority patent/EP0655070B1/en
Priority to US08/382,022 priority patent/US5885968A/en
Priority to DK93921124T priority patent/DK0655070T3/da
Publication of NL9201440A publication Critical patent/NL9201440A/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C07H15/08—Polyoxyalkylene derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0088—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing unsubstituted amino radicals

Description

Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassingGebied van de uitvinding
De uitvinding heeft betrekking op triantennaire cluster¬glycosiden, d.w.z. verbindingen die een cluster van driesuikergroepen bevatten en daardoor herkend kunnen worden doorbepaalde in het menselijk of dierlijk lichaam aanwezigereceptoren.
Dergelijke triantennaire clusterglycosiden kunnen voorverschillende doeleinden worden gebruikt, bijv., indien hettriantennaire clusterglycoside een cholesterol-rest of eenalternatieve lipofiele groep omvat, voor het in vivo uit hetbloed verwijderen van lipoproteinen en lipide-vesicles in hetkader van een therapeutische behandeling van hyperlipidemie.
Stand van de Techniek
Al eerder is naar wegen gezocht om lipoproteinen enlipide-vesicles via een geschikte route naar de lever teloodsen. Dit enerzijds om een transport vehikel te creërendat drugs specifiek naar de lever stuurt en anderzijds om hetatherogene lage dichtheids-lipoproteine (LDL) uit de bloed¬baan te verwijderen.
Er zijn glycolipiden ontwikkeld, die leveropname vanlipide-vesikels of lipoproteinen via de asialoglycoproteinereceptor op de parenchymcel van de lever kunnen inducerenzoals cholesterylglycosiden (refs. 1-4), lactosylcerebrosidenen gangliosiden (refs. 5-9) en chemisch gemodificeerdephospholipiden (refs. 10-11).
De desbetreffende verbindingen bevatten een ligand datherkend wordt door de asialoglycoproteine receptor op deparenchymcel van de lever. Deze receptor vertegenwoordigt eenopnamesysteem met hoge capaciteit en een unieke lokalisatieop de parenchymcel van de lever. De receptor kan cluster- suikers en glycoproteinen met eindstandige galactosegroepenherkennen, waarbij hij een duidelijke voorkeur heeft vooroligoantennaire suikers.
De bovenstaand genoemde verbindingen omvatten voorts eenstructuur die voor een associatie van het ligand met lipide-vesikels dan wel lipoproteinen zorgt. De stoffen zijn daartoevoorzien van een lipide-deel dat zich spontaan associeert metlipide-vesikels of lipoproteinen.
Een nadeel van deze bekende glycolipiden is onder anderedat ze niet wateroplosbaar zijn hetgeen de in vivo toepassingvan deze stoffen bemoeilijkt.
Door onze groep is onderzoek verricht aan een water¬oplosbaar geclusterd galactosolipide: tris-gal-chol metformule 22 (refs. 12-15). Ons onderzoek toonde aan dat dezeverbinding in staat is om irreversibel cholesterol uit debloedbaan te verwijderen en opname van cholesterol door delever te induceren.
Er zijn echter diverse nadelen verbonden aan het gebruikvan tris-gal-chol als hypolipidemisch middel. Ten eerste iszijn potentie laag: hoge doses van tris-gal-chol zijn nodigvoor een significante verlaging van het LDL niveau in debloedbaan (ref. 15). Daarnaast wordt het LDL na injectie vantris-gal-chol niet verwijderd via de asialoglycoproteinereceptoren op hepatocyten maar via de eveneens galactose-specifieke Fuc/Gal-receptoren op hepatische Kupffer cellen.Verwijdering door het eerstgenoemde type cellen is zeer teprefereren boven een verwijdering door het laatstgenoemdetype cellen, aangezien alleen hepatocyten in staat zijn omcholesterol uit LDL om te zetten tot galzuren en uit tescheiden in de gal.
Korte samenvatting·van de uitvinding
De uitvinding betreft nu de introductie van een lange,flexibele en hydrofiele keten die een suikergroep binnen eenclusterglycoside verbindt met het vertakkingspunt van decluster. De introductie van een dergelijke keten resulteert voor clusterglycosiden met eindstandige galactosegroepen ineen sterk verhoogde affiniteit en dus specificiteit voor degalactose-specifieke asialoglycoproteine receptoren op dehepatische parenchymcellen. Ter illustratie, een verlengingvan deze keten voor een triantennaire galactoside van 3.7 tot19.5 A verhoogt zijn affiniteit voor deze receptor met eenfactor 2000. Naar verwachting leidt een combinatie van eenhoge graad van clustering van het glycoside en een verlengingvan de spacer ook voor andere suikertypen tot een ligand meteen hoge affiniteit voor de corresponderende suiker-receptoren.
Een clusterglycoside met een verhoogde affiniteit enspecificiteit voor bepaalde suiker-receptoren kan, nakoppeling aan een lipide onder vorming van een glycolipide,gebruikt worden voor het bewerkstelligen van een verhoogdeopname van lipoproteinen en lipide-vesicles door organenwaarin deze receptoren gelocaliseerd zijn. Dit biedt dusperspectieven voor de ontwikkeling van zowel een effectiefhypolipidemisch geneesmiddel als een orgaanspecifieke drug-carrier. Herkenning van suikerstructuren in antennairestructuren speelt tevens een rol bij de binding van bloed¬cellen aan pathologisch weefsel d.m.v. adhesie-eiwitten. Debeoogde clusterglycosiden kunnen door interferentie met dit systeem leiden tot anti-inflammatoire toepassingen bijv. bij rheumatische arthritis.
Uitgebreide beschrijving van de uitvinding
De uitvinding voorziet in een triantennair cluster¬glycoside, waarin elke glycoside-rest door een glycosidespacermet een ketenlengte van ten minste 4 atomen in de keten isverbonden met het koolstofatoom dat het vertakkingspunt van decluster is.
Verder voorziet de uitvinding in een toepassing van deonderhavige nieuwe verbindingen, en wel in een farmaceutischpreparaat dat een triantennair clusterglycoside volgens de uitvinding, alsmede ten minste één farmaceutisch aanvaardbaredrager omvat.
Bij voorkeur is de ketenlengte van de glycosidespacerlanger dan 4 atomen in de keten, zoals 6 of meer, bij voorkeur8 of zelfs 10 of meer atomen in de keten. Het verdient daarbijaanbeveling dat de keten van de glycosidespacer ten minste éénalkyleengroep en ten minste één hydrofiele groep omvat. Hoewelin beginsel elke hydrofiele groep in aanmerking komt, wordt dehydrofiele groep bij voorkeur gekozen uit -O-, -CO-, -NH-,-CONH-, -NHCO-, -OCO- en -COO-.
Zeer geschikt is een triantennair clusterglycoside waarinde glycosidespacer beantwoordt aan formule 2, waarinR1, R2 en R3 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of eenalkylgroep van 1-4 koolstofatomen voorstellen, n, p, en qonafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6 voorstellen,en r een geheel getal van 0-6 voorstelt.
Het heeft de voorkeur dat R1, R2 en R3 in formule 2 elkeen waterstofatoom voorstellen, en dat n een geheel getal van2-4 is, p een geheel getal van 2-3 is, q een geheel getal van1-3 is en r een geheel getal van 1-5 is.
Hoewel de glycoside-resten (suiker-resten) in beginselvrij kunnen worden gekozen in afhankelijkheid van de beoogdereceptor, worden ze volgens de uitvinding bij voorkeur gekozenuit β-D-galactosyl, 2-acetamido-2-deoxy-galactopyranosyl,lactosvl, β-L-fucosyl, a-D-mannosyl en NeuAca2,2-Gaipi, 4-(Fucal,3)-GlcNAc.
In een bijzondere uitvoeringsvorm van een triantennairclusterglycoside volgens de uitvinding is aan hetkoolstofatoom, dat het vertakkingspunt van de cluster is, eeneindgroepspacer met een ketenlengte van ten minste 4 atomen inde keten gebonden.
Ook hiervoor geldt dat de ketenlengte bij voorkeur langeris dan 4 atomen in de keten, zoals ten minste 6, bij voorkeurten minste 8 of zelfs 10 of meer atomen in de keten. Het heeftde voorkeur dat de keten van de eindgroepspacer ten minste éénalkyleengroep en ten minste één hydrofiele groep omvat, waarin de hydrofiele groep liefst wordt gekozen uit -0-, -CO-, -NH-,-CONH-, -NHCO-, -0C0- en -COO-.
Zeer geschikt is een triantennair clusterglycoside waarinde eindgroepspacer beantwoordt aan formule 3, waarinR4, r5 en R^ onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of eenalkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstellen, s, t en uonafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6 voorstellen,en v en w onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 0-4voorstellen.
Het heeft de voorkeur dat R4, R5 en R6 in formule 3 elkeen waterstofatoom voorstellen, en dat v een geheel getal van1-2 is, w een geheel getal van 0-2 is en s, t en uonafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-4 voorstellen.
In een bijzondere voorkeursuitvoeringsvorm van eentriantennair clusterglycoside volgens de uitvinding is aan deeindgroepspacer een eindgroep gebonden, gekozen uit eeneventueel beschermde reactieve groep, een lipofiele groep, eendrug-rest en een drugcarrier-rest. Liefst omvat de eindgroepeen hydroxylgroep, een alkoxygroep met 1-4 koolstofatomen, eenaminogroep, een 3p-cholesterol-rest, een Na,Ne-dioleoyllysine-rest, een 5p-cholanic acid-3a-ol oleaat-rest, een 5-cholenicacid-3p-ol oleaat-rest, een 5p-cholanic acid-3a,12a-dioldioleaat-rest, of een lipoproteine-rest, bovenal echter eencholesterol-rest.
Een geschikt triantennair clusterglycoside volgens deuitvinding kan worden weergegeven door formule 1, waarinGO- de glycoside-rest, χΐ de glycosidespacer, X^ de eindgroep¬spacer en Z de eindgroep voorstellen.
Een bijzonder geprefereerd triantennair clusterglycosidevolgens de uitvinding beantwoordt aan formule 4, waarin q eengeheel getal van 1-3 is, GO- een galactose-rest voorstelt en-Ochol een cholesterol-rest voorstelt.
Het clusterglycoside volgens de uitvinding onderscheidtzich van de bekende clusterglycosiden door de eigenschap, datde suikergroep via een flexibele, hydrofiele keten (X1),welke kan zijn samengesteld uit een alkyleendiol al dan niet verlengd met een oligomere keten van eenheden van ethyleen-of propyleenglycol, is verbonden met-het vertakkingspunt vande cluster. Op zijn beurt is het vertakkingspunt via een bijvoorkeur 10 tot 15 A lange peptide-achtige keten (X2)verbonden met de eindgroep Z, waarvan de samenstellingafhangt van de uiteindelijke toepassing die men voor ogenstaat.
Indien specifieke hoge-affiniteits binding aan deasialoglycoproteine receptor wordt nagestreefd, dan bestaatde suikergroep uit een galactosyl, een 2-acetamido-2-deoxy-p-D-galactopyranosyl, dan wel een lactosyl groep. Dedesbetreffende clustergalactosiden hebben als voordeel bovende clusterglycosidè component van het eerder beschreven tris-gal-chol dat hun affiniteit en specificiteit voor deasialoglycoproteine receptor veel hoger is (tot 2000x).
Wanneer beoogd wordt een glycolipide met een hoge hypo-lipidemische potentie, dan omvat de eindgroep Z een sterklipofiele groep zoals 3P~cholesterol, Na,Ne-dioleoyllysine,5p-cholanic acid-3a-ol oleaat, 5-cholenic acid-^-ol oleaat,5p-cholanic acid-3a,12a-diol dioleaat. Als gevolg van de hogeaffiniteit van de clusterglycosidè component voor deasialoglycoproteine receptor, is de hypolipidemische potentievan dit glycolipide erg hoog en wordt de opname van lipide-vesicles of lipoproteinen door de hepatische parenchymcelsterk bevorderd.
Wanneer beoogd wordt de clusterglycosidè structuur tegebruiken voor de sturing van antisense DNA naar de lever-parenchymcel, dan omvat de eindgroep Z een oligonucleotide-keten die met de vrije fosfaatgroep aan het 5'-einde via eenzuur-labiele fenolester of fosfamide band gekoppeld is aan deX2-groep van het clusterglycosidè. Door sturing van antisenseDNA naar de lever kan eventueel een remming worden bereiktvan de biosynthese van een ongewenst genprodukt.
Indien antisense remming van de synthese van het sterkatherogene lipoproteine (a) [lp(a)] beoogd wordt, dan zou de eindgroep Z de basepaar-sëquentie 51-CGTCGTGGACTGTTTCG kunnen bevatten. Deze sequentie bindt uiterst specifiek aan het mRNAdat codeert voor het apolipoproteine^a), de eiwit-componentvan lp(a) .
Wanneer een antisense remming van de replicatie van hethepatitis B virus wordt nagestreefd, dan bevat de eindgroep Zde basepaar-sequentie 5'-GTTCTCCATGTTCGG. Deze sequentieherkent uiterst specifiek het mRNA dat codeert voor hethepatitis B virus antigeen (ref. 21).
Wanneer beoogd wordt de clusterglycoside structuur tegebruiken voor de sturing van antivirale middelen naar delever, dan omvat de eindgroep Z een verbinding met antiviralewerking. Koppeling van een antiviraal therapeuticum aan groepX2 kan geschieden via een zuur-labiele phosphamide band.
Mogelijke antivirale middelen, welke voor derivatiseringmet het clusterglycoside in aanmerking komen, zijn; 5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine en 2'-fluoro arabinofuranosyl-5-iodo cytosine, beide potente remmers van het hepatitis B DNApolymerase. Deze verbindingen kunnen na fosforyleringgekoppeld worden aan de hydroxylgroep van tyrosine (X2) of devrije ε-aminogroep van lysine (X2).
Indien beoogd wordt de clusterglycoside structuur tegebruiken voor het sturen van drugs dan wel drugcarriers[ (lipo)proteïnen] naar de fucose/galactose receptor op dehepatische Kupffer cel (ref. 19), dan bestaat de suikergroepuit een β-L-fucosyl eenheid.
Indien beoogd wordt de clusterglycoside structuur tegebruiken voor het sturen van drugs dan wel drugcarriers[ (lipo)proteïnen] naar de zogenaamde mannose receptor op demacrofaag, dan bestaat de suikergroep uit een a-D-mannosyleenheid. Specifieke sturing van drugs dan wel drugcarriersvia de mannose receptor naar de macrofaag is van belang voorde ontwikkeling van een therapie tegen Leishmaniasis en AIDS.
Als therapeuticum tegen Leishmaniasis kan gedacht wordenaan primaquine dat via zijn vrije, voor werking nietessentiële, carboxylgroepen eenvoudig gekoppeld kan wordenaan x2 van het glycoside. Derivatisering van het cluster- glycoside met azidothymidine resulteert in een drug metspecifiek HIV-1 replicatie remmende werking.
Indien beoogd wordt de clusterglycoside structuur voorde remming van de binding van cel-adhesie moleculen (d.w.z.geglycosyleerde membraaneiwitten die als herkennende groepo.a. het gesialyleerde Lewis-X oligoglycoside bevatten) op deneutrofiel aan het endotheliale lectine ELAM-1 te gebruiken,dan dient de suikergroep uit een NeuAca2,2-Gaipi, 4-(Fucal,3)-GlcNAc eenheid (gesialyleerd Lewis-X) te bestaan. De bindingvan neutrofielen via deze celadhesie moleculen aan de ELAM-1receptor op het vaatendotheel speelt een cruciale rol inontstekingsreacties. Remming van de cel-adhesie kan wenselijkzijn bij de bestrijding van chronische ontstekingsreacties,die optreden bij onder andere rheumatische arthritis.
Indien enkel remming van de ontstekingsreactie wordtnagestreefd, dan is het effect van het desbetreffendeclusterglycoside onafhankelijk van de samenstelling van groepZ. Wordt daarentegen geopteerd voor een selectieve afgiftevan drugs in de ontstekingshaard, dan zou groep Z kunnenbehelzen een ontstekingsremmer of, in het geval van een"carcinoom ontsteking", een activator van natural killercellen dan wel een cytostaticum (zoals metotrexaat) .
De triantennaire clusterglycosiden volgens de uitvindingkunnen volgens op zichzelf bekende werkwijzen worden bereid.
De bereiding van de nieuwe triantennaire clusterglycosiden iseen onderwerp dat door de uitvinding wordt omvat.
De uitvinding voorziet bijv. in een werkwijze voor hetbereiden van een triantennair clusterglycoside met formule 5,waarin GO- een glycoside-rest is, X2 een eindspacer is, Z eeneindgroep is, R^R3 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoomof een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstellen,n, p en q onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6zijn en r een geheel getal van 0-6 voorstelt, waarbij een verbinding met formule 6, waarin G'O- de rest vaneen beschermd glycoside voorstelt, in reactie wordt gebrachtmet een verbinding met formule 7, waarin Z’ staat voor de eindgroep Z of een door de eindgroep Z te vervangen groep,de groep Z' in de verkregen verbinding, indien deze een doorde eindgroep Z te vervangen groep voorstelt, wordt vervangendoor de eindgroep Z en daarvoor of daarna de glycoside-restenvan de verkregen verbinding worden ontschermd.
De omzetting van de verbinding met formule 6 met deverbinding met formule 7 wordt bij voorkeur uitgevoerd integenwoordigheid van N-iodosuccinimide en trifluormethaan-sulfonzuur.
Tijdens de reactie worden de glycoside-resten beschermd,bijvoorbeeld door hydroxylbeschermende benzoylgroepen, dielater verwijderd kunnen worden door behandeling met kalium-tert.butylaat.
Bij deze werkwijze kan Z' in formule 7 bijvoorbeeld eenbeschermde reactieve groep zijn, die na ontscherming wordtvervangen door een eindgroep Z, gekozen uit een lipofielegroep, een drug-rest en een drugcarrier-rest.
Ook verschaft de uitvinding een werkwijze voor hetbereiden van een triantennair clusterglycoside met formule 8,waarin GO- een glycoside-rest is, Z een eindgroep is, R^-R3onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of een alkylgroepmet 1-4 koolstofatomen voorstellen, n, p en q onafhankelijkvan elkaar een geheel getal van 1-6 voorstellen, r een geheelgetal van 0-6 is en X3 een eindgroepspacer voorstelt,waarbij een verbinding met formule 6, waarin G'O- de rest vaneen beschermd glycoside voorstelt, in reactie wordt gebrachtmet een verbinding met formule 9, waarin Q staat voor eenaminobeschermende groep, de aminogroep in de verkregen verbinding wordt ontschermd ende daarbij verkregen vrije aminogroep wordt omgezet in eengroep -NH-X3-Z, en daarvoor of daarna de glycoside-resten vande verkregen verbinding worden ontschermd.
De verbinding met formule 6, die bij deze werkwijzen alsuitgangsmateriaal wordt gebruikt, wordt bij voorkeur bereiddoor een verbinding met formule 10 met een verbinding metformule 11 te laten reageren.
De omzetting van de verbinding met formule 10 met deverbinding met formule 11 wordt bij voorkeur uitgevoerd integenwoordigheid van N-iodosuccinimide en trifluormethaan-sulfonzuur.
Een voorbeeld van een werkwijze volgens de uitvinding iseen werkwijze die de volgende stappen omvat: a) l-methyl-6-succinimidyladipate (formule 12) wordt op eenop zich bekende wijze bereid uit 1-methyladipinezuur doorreactie met N-hydroxysuccinimide in aanwezigheid van N,N'-dicyclohexylcarbodiimide.
b) N-(2-Hydroxy-l,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)-glycinamide(formule 13, waarin R = H en Q1 = H) wordt op een op zichzelfbekende wijze bereid door een reactie van 2-amino-2-hydroxy-methyl-1,3-propaandiol met benzyloxycarbonylglycine inaanwezigheid van NrN'-dicyclohexylcarbodiimide, waarna debeschermende benzyloxycarbonylgroep op een op zichzelfbekende wijze verwijderd wordt door reactie met H2 bijaanwezigheid van Pd/koolstof als katalysator.
c) N-(2-Hydroxy-l,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)-Να-(1- (6-methyl)adipyl)glycinamide (formule 13, waarin R = H en Q1 =-CO (CH2)4COOCH3) wordt op een op zichzelf bekende wijze bereiddoor een reactie van onder (b) verkregen verbinding met hetonder (a) verkregen l-methyl-6-succinimidyladipate.
d) N-[Tris[[(methylthiomethyl)oxy]methyl]methyl]-Να-(1-(6-methyl)adipyl)glycinamide (formule 13, waarin R = -CH2SCH3 enQ1 = -CO (CH2) 4COOCH3) wordt op een op zichzelf bekende wijzebereid door een reactie van de onder (c) verkregen verbindingmet dimethylsulfide in aanwezigheid van benzoylperoxide.
e) Ethyl 2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-l-thio-p-D-galacto-pyranoside (formule 14, waarin R' = benzoyl en R" = -SC2H5)wordt op een op zichzelf bekende wijze bereid uit 1,2,3,.4,6-penta-O-acetyl-p-D-galactopyranoside door achtereenvolgens tereageren met ethaanthiol in aanwezigheid van tin(IV)chloride,kalium-tert.butylaat en tenslotte benzoylchloride.
f) 2-hydroxyethyl 2,3,4,ö-tetra-O-benzoyl-p-D-galacto-pyranoside (verbinding 14b met formule 14, waarin R' = Bzl en R" = -0(CH2)20H), 3-hydroxypropyl 2,3, 4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranoside (verbinding 14c met formule 14, waarin R' =Bzl en R" = -0(CH2)30H), 5-hydroxy-3-oxapentaan 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-p-D-galactopyranoside (verbinding 14d met formule14, waarin R' = Bzl en R" = -0 [ (0¾) 2O]2^) en 11-hydroxy-3,6,9-trioxaundecaan 2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galacto-pyranoside (verbinding 14e met formule 14, waarin R* = Bzl enR" = -0[ (CH2) 2O] 4^) worden op een op zichzelf bekende wijzebereid door een reactie van de onder (e) verkregen verbindingmet ethyleenglycol, propaandiol, diethyleenglycol dan weltetraethyleenglycol bij aanwezigheid van N-iodosuccinimide entrifluormethaansulfonzuur.
g) N—[Tris-0-(oligo-oxaalkyl—β-D—galactopyranosyl) methoxy- methyl]methyl-Na-(1-(6-methyl)adipyl)glycinamide (formule 15bt/m 15e) wordt op een op zichzelf bekende wijze bereid dooreen van de verbindingen 14b t/m 14e samen te brengen met deonder (d) verkregen verbinding bij aanwezigheid van trifluor-methaansulfonzuur en N-iodosuccinimide en daarna het productte behandelen met kalium-tert.butylaat.
Een tweede voorbeeld van een werkwijze volgens deuitvinding voor de bereiding van clusterglycosiden met eenverlengde keten tussen het glycoside en het vertakkingspuntvan de cluster is een werkwijze die de volgende stappenomvat: a) 1-nitro 4-hydroxy-l,1-bis(hydroxypropyl)butaan (formule16 waarin R = H en R' = NO2) wordt op een op zichzelf bekendewijze gereduceerd middels Zn/HCl dan wel LXAIH4 tot 1-amino4-hydroxy-l,1-bis(hydroxypropyl)butaan (formule 16 waarin R =H en R' = NH2) . De aminogroep van deze verbinding wordtvervolgens op een op zichzelf bekende wijze beschermd met eentrifluoracetylgroep door een reactie met trifluorazijnzuuranhydride in aanwezigheid van een equivalente hoeveelheiddiisopropylethanolamine onder vorming van 1-N-(4-hydroxy-l,1-bis (hydroxypropyl)butyl)trifluoracetamide (formule 16 waarinR = H en R' = -NHCOCF3).
b) N-[tris [[(methylthiomethyl)oxy]propyl]methyl]-2,2,2-trifluoracetamide (formule 16 waarin-R = -CH2SCH3 en R' =-NHCOCF3) wordt op een op zichzelf bekende wijze bereid doorde onder (a) verkregen verbinding met dimethylsulfide telaten reageren in aanwezigheid van benzoylperoxide.
c) Derivatisering van de onder (b) verkregen verbinding met .het alkanol ll-hydroxy-3,6,9-trioxaundecaan 2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranoside (verbinding 14e) vindt plaats opeen op zichzelf bekende wijze door reactie bij aanwezigheidvan N-iodosuccinimide en trifluormethaansulfonzuur. Eendebenzoylering van het gevormde product door middel van eenbehandeling met kalium-tert.butylaat levert een verbindingmet formule 17, waarin R = H en Q1 = -COCF3, op.
d) Na verwijdering van de beschermende trifluoracetylgroepdoor behandeling van de onder (c) verkregen verbinding metpiperidine in waterige oplossing kan de ontschermde amino-groep gederivatiseerd worden met een eindgroep Z via.eenoligopeptide-achtige spacer X3 met lengte 10 tot 15 A.
De uitvinding zal nader worden toegelicht aan de handvan de volgende voorbeelden.
Voorbeeld 1
De verbindingen werden bereid via de volgende stappen(de genoemde uitgangsstoffen zijn handelsproducten van p.a.kwaliteit): a) l-Methyl-6-succinimidyladipate (formule 12).
Aan een oplossing van 1.6g (100 mmol) 1-methyladipate in100 ml aceton werd 11.6g (100 mmol) N-hydroxysuccinimidetoegevoegd. Vervolgens werd de koppeling geïnitieerd doortoevoeging van 22.8g (110 mmol) N,N'-dicyclohexylcarbodiimidein 100 ml aceton. Na 2 uur roeren bij 20°C werd het neerslagverwijderd via filtratie. Het filtraat werd drooggedampt engechromatografeerd over een 150 ml kieselgel kolom met 5%methanol in dichloormethaan als eluens. Fracties die hetbeoogde product bevatten, werden samengevoegd en het oplos¬ middel werd verwijderd. Opbrengst: 24.3g zuiver l-methyl-6-succinimidyladipate (94 mmol; 94%) . .
b) N-(Hydroxy-1,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)-Na-(benzyloxy-carbonyl) glycinamide (formule 13 waarin R = H en Q1 = BOC).
Aan een oplossing van 1.8g (tris-O-hydroxymethyl)amino-methaan (15 mmol) en 3.15g (15 mmol) N-benzyloxycarbonyl-glycine in 50 ml dimethylformamide werd 3.7g (17 mmol)Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimide toegevoegd en de suspensie werdgedurende 2 dagen bij 20°C geroerd. Na de reactie werd desuspensie gefilterd en werd het oplosmiddel door afdampenverwijderd. Na zuivering van het residue over een kieselgelkolom (150g) met 10% methanol in dichloormethaan als eluens,werden 2.25g (7.1 mmol, 47%) witte kristallen van detitelverbinding geoogst.
c) N-(2-Hydroxy-l,1-bis(hydroxymethyl)ethyl)-Να-(1-(6-methyl)adipyl)glycinamide (verbinding met formule 13, waarin R = Hen Q1 = -CO(CH2)4COOCH3) .
De beschermende N-benzyloxycarbonylgroep van de onder(b) verkregen verbinding werd verwijderd middels reductievehydrogenolyse. Daartoe werd 15.6g (50 mmol) van de onder (b)verkregen verbinding opgelost in 200 ml van een ethanol/methanol mengsel (1/1, v/v) en werd de oplossing met N2gedispercreerd. Vervolgens werd 200 mg Pd/C toegevoegd en werdde oplossing bij 20°C en atmosferische druk verzadigd met H2gedurende 2 uur. Na reductie werd het palladium/koolstofweggefilterd en het oplosmiddel afgedampt.
Het ruwe reactieproduct (formule 13 waarin R = Q1 = H)werd direct gebruikt voor derivatisering met formule 12. Vandeze verbindingen met formules 12 en 13 werd 12.4g (50 mmol)opgelost in 100 ml dimethylformamide en geincubeerd gedurende3 uur bij 20°C, waarna de suspensie gedurende 18 uur werdweggezet bij 4°C. Het precipitaat werd verwijderd middelsfiltratie en het filtraat ingedampt. Het residu werd over eenkieselgel kolom (200 g) met 20% methanol in dichloormethaan gezuiverd. Het product elueerde van de kolom direct na de N-hydroxysuccinimidyl piek. Na verwijdering van het oplosmiddelrestte 12.8g wit, amorf poeder (40 mmol, 80%).
d) Thiomethylering van het triol tot N-[Tris [[(methylthio-methyl)oxy]methyl]methyl]-Να-(1-(6-methyl)adipyl)glycinamide(formule 13 waarin R = -CH2SCH3 en Q1 = -CO (CH2) 4COOCH3) .
Thiomethylering werd verricht volgens de methode vanMedina et al. (ref. 16). Aan 0.96g (3 mmol) van de onder (c)verkregen verbinding, opgelost in 20 ml ijskoude acetonitril,werd toegevoegd 4.6 ml (54 mmol) dimethylsulfide en 6.5g(27 mmol) benzoylperoxide. Na incubatie gedurende 3 uur bij0°C werd 20 ml ethylacetaat toegevoegd en werd de oplossingtwee keer geextraheerd met 25 ml 0.1 N NaOH. De organischefasen werden verzameld, gedroogd met MgS04 en ingedampt. Hetproduct werd vervolgens gescheiden door chromatografie overB.en LH20 column (70x2.5 cm) en chromatografie over eenkieselgel kolom (200g) met dichloormethaan als eluens.Kristallisatie vanuit ether/petroleum-ether (60°-40°) leverde1.03g witte kristallen (2.0 mmol, 67%) op.
e) Ethyl 2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-l-thio-p-D-galactopyranoside(formule 14 waarin R’ = Bzl en R" = -SC2H5) .
Van β-D-galactopyranosyl pentaacetaat werd 7.8 g opgelostin 50 ml dichloorethaan. Het oplosmiddel werd verwijderd, hetresidu werd opgenomen in 75 ml dichloorethaan en 1.63 ml(22 mmol) ethaanthiol werd toegevoegd. De oplossing werd opijs gezet en 0.35 ml (3 mmol) tin(IV)chloride werd druppels¬gewijze toegevoegd. De oplossing werd gedurende 1 uurgeincubeerd. Na volledige omzetting werd het incubaatgeëxtraheerd met achtereenvolgens 2 maal 50 ml 1M kalium-fluoride en 10% (v/v) NaHC03 in water. De organische fasewerd gedroogd met behulp van MgS04 en vervolgens afgedampt.Vervolgens werd residue opgelost in 100 ml methanol waaraantoegevoegd 0.5g kaliumbutylaat. De suspensie werd geroerdgedurende 1 uur bij 20°C en geneutralizeerd door toevoeging van Dowex/pyridine. Na filtratie van de Dowex werd hetoplosmiddel afgedampt. Het residu werd opgenomen in 50 mlpyridine en acylering werd gestart via toevoeging van 12.5 ml(120 mmol) benzoylchloride. Na reactie gedurende 1 uur bij20°C werd het excessieve benzoylchloride geïnactiveerd doortoevoeging van H2O waarna het oplosmiddel afgedampt werd. Hetolieachtige residu werd, na oplossing in 50 ml dichloor-methaan, gewassen met 50 ml H2O en 50 ml 10% (v/v) NaHCC>3 inwater. De organische fase werd gefilterd over MgSC>4 enafgedampt, hetgeen 10.3g (16 mmol; 81%) ethyl-2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-l-thio-p-D-galactopyranoside opleverde.
f) Koppeling van alkyleendiolen aan ethyl-2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-l-thio-p-D-galactopyranoside.
De derivatisering van de onder (e) verkregen verbindingmet alkyleendiolen (ethyleenglycol, propaandiol, diethyleen-glycol en tetraethyleenglycol) onder vorming van 1-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranosyl)-2-ethanol (80%, verbinding 14b), 1-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranosyl)-3-propanol (83%, verbinding 14c), 1-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranosyl)-3-oxapentaan-5-ol (90%, verbinding 14d) en 1-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranosyl)-3,6,9- trioxaundecaan-ll-ol (93%, verbinding 14e), werd verrichtvolgens de procedure van Flügeli et al. (ref. 18) .
g) Koppeling van β-D-galactosyl derivaten aan N-[Tris [[(methylthiomethy1)oxy]methyl]methyl]-Na-(1-(6-methy1)adipyl)glycinamide.
100 mg (0.2 mmol) van de onder (d) verkregen verbindingen 0.72 mmol van een van de onder (f) verkregen verbindingenwerden opgelost in 4 ml dichloorethaan/tetrahydrofuraan (1/1,v/v). Molsieves (4A) werden toegevoegd en de suspensie werdgedurende 15 min geroerd onder doorleiden van N2. De reactiewerd geïnitieerd door toevoeging van 8.5 ml dichloorethaan/ tetrahydrofuraan (1/1) waarin opgelost 170 mg (0.75 mmol)N-iodosuccinimide en 12 mg (0.075 mmol) trifluormethaan-sulfonzuur. Na de reactie werd pyridine toegevoegd, werd deoplossing afgefilterd en geëxtraheerd met 25 ml 1M Na2S2Ü3 en10% (v/v) NaHCC>3 in water. De producten werden geïsoleerdmiddels gel-exclusie over een LH20 kolom gevolgd door eenkieselgel kolom. Opbrengst: 24-53% voor de diverse ω-hydroxy-alkyl 2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-p-D-galactopyranosiden.
Debenzoylering van de beschermde clusterglycosiden vondals volgt plaats. Aan 50 μπιοί van het desbetreffende cluster-glycoside in 10 ml methanol/1,4-dioxaan (3/1) werd 60 mgkaliumbutylaat toegevoegd. De oplossing werd gedurende 4 uurgeroerd bij 20°C. Na de reactie werd de oplossing m.b.v.Dowex-pyridine geneutraliseerd en werd de organische faseafgedampt. Het residu werd opgenomen in water en gevries¬droogd. Na een gel exclusie over een SlOO-kolom werd hetzuivere product met formule 15b t/m 15e geïsoleerd.
Voorbeeld 2
Van de aldus bereide verbindingen is het mogelijk deoptimale molecuulstructuur te berekenen middels minimale-mechanische energie berekeningen. Dit stelt ons in staat deruimtelijke afstand van de naburige suikergroepen binnen dedesbetreffende clusterglycosiden te berekenen. De resultatenvan een dergelijke berekening voor de bereide cluster¬glycosiden staan in de onderstaande tabel vermeld:
Tabel 1: Effect van de spacer X1 op de afstand van naburigesuikergroepen binnen een clusterglycoside.
Verbinding Lengte* Afstand**
15a TG{4A) 3.7 A 5.9 A
15b TG(9A) 9.2 A 14.2 A
15c TG(10A) 10.4 A 16.5 A
15d TG(13A) 12.6 A 19.4 A
15e TG(20A) 19.5 A 31.5 A
*) Maximale ketenlengte, gedefinieerd als de afstand tussenhet anomere centrum van de suiker en-het vertakkingspunt vanhet clusterglycoside.
**) Afstand tussen twee naburige suikergroepen binnen eenclustersuiker molecuul.
Duidelijk blijkt uit de tabel dat bij een toename van delengte van de keten waarmee de suiker aan het vertakkingspuntvan de clusterglycoside geïmmobiliseerd zit, de maximaalrealiseerbare afstand tussen 2 naburige suikergroepen binneneen cluster toeneemt. Tevens blijkt dat met name bij degrootste ketenlengten (TG(13A) en TG(20A)) de flexibiliteitvan de keten erg groot is met als gevolg dat de suikergroepenelke theoretisch toelaatbare plaats in de ruimte kunnenbereiken. Dit is, zoals in voorbeeld 3 wordt aangetoond, vangroot belang voor het realiseren van een optimale binding vande clusterglycosiden aan de asialoglycoproteine receptor.
Voorbeeld 3
De affiniteit van clusterglycosiden kan geverifieerdworden aan de hand van bindingsstudies. Hierin wordt bekekenin hoeverre de verbindingen in staat zijn de binding van hetradioisotopisch gemerkte asialoorosomucoid aan uit rattelevergeïsoleerde parenchymcellen te remmen volgens een eerderbeschreven procedure (ref. 17). De concentratie van de suikerwaarbij remming optreedt is een maat voor de affiniteit.
Een idee van de specificiteit van clusterglycosiden voorde asialoglycoproteine receptor op de hepatische parenchymcelkan verkregen worden door de affiniteit voor deze receptor tevergelijken met de affiniteit voor de eveneens galactoseherkennende Fuc/Gal-receptor op de hepatische Kupffer cel.Deze laatste kan worden bepaald aan de hand van bindings¬studies waarbij wordt onderzocht in hoeverre de verbindingende binding van gelactosyleerd en radioisotopisch gemerktlage-dichtheidslipoproteine (125I-Lac-LDL) aan Kupffer cellen(1-1.5 x 106 cellen/ml) remmen. Daartoe worden Kupffer cellenin DMEM medium, gesupplementeerd met 2% BSA en 2 mM CaCl2, bij 4°C gedurende 2 uur geïncubeerd met 3 μρ/πιΐ 125I-Lac-LDLin afwezigheid of aanwezigheid van de verbinding, in eenconcentratierange van 1 nM tot 300 μΜ. Na de incubatie wordtde binding van 125I-Lac-LDL aan de Kupffer cellen bepaald opeen wijze die identiek is aan die voor ASOR binding aan lever-parenchymcellen.
Tabel 2: Affiniteit van verschillende clusterglycosiden voorde asialoglycoproteine receptor op de hepatische parenchym-cel. De affiniteit is gedefinieerd als de reciproke van deinhibitieconstante Ki.
Verbinding Asialoglycoproteine Fuc-Gal (formule) receptor receptor
Ki (μΜ) pKi (± S.E.) Κι (μΜ) pKi 15a TG(4A) 390 3.41 ± 0.08 »30 «4.5 15b TG (9A) 19 4.72 + 0.12 »100 «4.0 15c TG(10A) 1.2 5.91 + 0.09 »100 «4.0 15d TG (13Ά) 11 4.95 ± 0.26 »100 «4.0 15e TG (20A) 0.2 6.68 ± 0.14 »100 «4.0
Uit figuur 1 blijkt dat een toename van de lengte van deglycoside-spacer resulteert in een dramatische verschuivingvan de verdringingscurve naar links (lagere concentratie).
Dit wijst op een enorme toename in de potentie waarmee hetclusterglycoside in staat is asialoorosomucoid van de ASGPrte verdringen. Met andere woorden: de affiniteit, uitgedruktals de reciproke van de inhibitieconstante Ki neemt enorm toe(tabel 2). Zo heeft TG(20A), met een ketenlengte van 19.5 A,een 2000 maal hogere affiniteit voor de asialoglycoproteinereceptor dan TG(4A), (het clusterglycoside deel van tris-gal-chol) met een ketenlengte van 3.7 Ά. Daarnaast kan uit tabel2 geconcludeerd worden dat de ketenlengte niet de enigeparameter is die de affiniteit voor de ASGPr bepaald. TG(10A)heeft een iets hogere affiniteit dan TG(13A). Indien zich inde directe omgeving van de galactose groep een hydrofobere groep bevindt, resulteert dit kennelijk in een hogereaffiniteit voor de ASGPr. De studies-van Connolly et allijken dit te bevestigen (ref. 20).
Uit figuur 2 blijkt dat een toename in de ketenlengteniet resulteert in een significante verandering van deaffiniteit voor de hepatische fuc/gal receptor op de Kupffercel. Dit betekent dat, tegelijk met de affiniteit, ook despecificiteit voor de receptor op parenchymcellen toeneemtbij een toename in de ketenlengte.
Het clusterglycoside met de langste spacer, TG(20A), isgezien zijn hoge affiniteit en specificiteit voor de asialo-glycoproteine receptoren op de parenchymcellen van de levereen veelbelovende ligand voor functionalisatie tot een hypo-lipidemisch therapeuticum of tot een hepatische drugcarrier.
Voorbeeld 4
De bereiding van een mogelijk glycolipide uitgaande vanhet clusterglycoside TG(20A): a) N-[tris-O-(3,6,9-trioxaundecanyl-p-D-galactopyranosyl)methyl) methyl-Na-l-(adipyl)glycinamide (formule 18).
500 mg (0.35 mmol) TG(20A) (formule 15e) werd opgelostin 9.75 ml van een 1,3-dioxane :Η2<9 mengsel (77:23) en 0.25 ml4N natriumhydroxyde werd toegevoegd. De oplossing werd 15 minbij kamertemperatuur geroerd waarna de base geneutraliseerdwerd met azijnzuur. Vervolgens werd het oplosmiddel afgedampten het residu gechromatografeerd over een Sephacryl S100-HiLoad kolom. Opbrengst: 340 mg (72%).
b) Glycine-(5-cholesten-3p-ylester) -hydrotrifluoroacetate(formule 19).
3.87g (10 mmol) cholesterol werd toegevoegd aan eenoplossing van 890 mg (5 mmol) N-benzyloxycarbonyl-glycine en1.03 g (5 mmol) N,N-dicyclohexylcarbodiimide in 100 mldichloorethaan. De reactie werd gestart door toevoeging van een katalytische hoeveelheid van 120 mg (1 mmol) N,N-dimethylaminopyridine. Na 3 uur incubatie bij 50°C werd het precipitaat afgefilterd en het filtraat geextraheerd metachtereenvolgens 2 maal 100 ml 10% NaHCC>3 en water. Deorganische fase werd gedroogd boven natriumsulfaat en hetoplosmiddel werd verwijderd. Vervolgens werd het residugechromatografeerd over een kieselgel-60 kolom met 20%methanol in dichloormethaan als eluens. Het product werdtenslotte gekristalliseerd vanuit ether/water. Opbrengst: 2.23 g (82%) N-benzyloxycarbonyl-glycine-(5-cholesten-3p-ylester). De benzyloxycarbonyl groep van deze verbinding(0.55 g; 1 mmol) werd verwijderd door een behandeling met10 ml 20% trifluorazijnzuur in dichloormethaan gedurende30 min bij 20°C. Na deprotectie werd tolueen toegevoegd enhet oplosmiddel afgedampt. Het zuivere product werdgekristalliseerd uit een ethanol/dichloormethaan mengsel alshet trifluoracetaat zout. Opbrengst: 520 mg (92%) van deverbinding met formule 19.
c) Bereiding van N-[Tris-O-(3,6,9-trioxaundecanyl-p-D-galacto-pyranosyl)methyl)methyl-Na-(1-(6-(5-cholesten-3p-yloxy)glycyl)adipyl)glycinamide (formule 20).
340 mg (0.24 mmol) van de verbinding met formule 18, 80 μΐ (0.5 mmol) diisopropylethylamine (0.5 mmol, 80 μΐ) en230 mg (0.5 mmol) van de verbinding met formule 19 werdenopgelost in 7 ml dimethylacetamide. De koppeling werd gestartmet toevoeging van 100 mg (0.25 mmol) BOP reagens. Na 30 minincubatie bij 20°C werd het oplosmiddel afgedampt, het residuopgenomen in water en de oplossing gevriesdroogd. Het ruweproduct werd gezuiverd d.m.v. chromatografie over een LH20kolom met methanol als eluens, gevolgd door een kieselgel 60kolom met methanol als eluens. Opbrengst: 201 mg van deverbinding met formule 20 (46%; TG(2θΑ)-chol).
Voorbeeld 5
De aldus bereide verbinding TG(20A)-chol (formule 20)kan gebruikt worden ter verlaging van het serum cholesterolniveau.
Dit werd als volgt geverifieerd. Mannelijke ratten(250-300g) werden geanaesthiseerd m.b.v. ether waarna 500 μΐPBS, met daarin opgelost 0.56 mg, 0.18 mg, 0.056 mg of 0 mgTG(20A)-chol (formule 20) dan wel 0.56 mg tris-glu-chol(formule 21), werd geïnjecteerd in de vena penis. Op de infiguur 3 aangegeven tijdstippen werden bloedmonsters van300 μΐ genomen middels orbitale punctie. De bloedmonsterswerden gecentrifugeerd (5 min; 1500g) en het serum werdgebruikt voor een cholesterol bepaling m.b.v. de CHOD-PAP kitvan Boehringer Mannheim. 24 Uur na injectie werd de ratontbloed. Het bloed werd gecentrifugeerd waarna het serumwerd afgepipetteerd. Vervolgens werd het serum onderworpenaan gradiënt-dichtheids-ultracentrifugatie en werden dediverse lipoproteïne-fracties geïsoleerd: HDL (1.21<d<l.05),LDL (1.050<d<l.019), IDL (1.019<d<l.006) enVLDL (d<1.006).Van deze lipoproteïne-fracties werd tenslotte de totalecholesterol concentratie bepaald m.b.v. de CHOD-PAP kit.
Uit figuur 3 blijkt dat als gevolg van injectie vanTG(20A)-chol het totale serumcholesterolniveau daalt. Dezedaling is dosis-afhankelijk. Het totale cholesterolgehalte inde sera van de controle rat, geïnjecteerd met een placebo, isconstant over de gemeten tijdspanne. Injectie met tris-glu-chol (formule 21) heeft eveneens geen verandering van hetcholesterolniveau tot gevolg, hetgeen de galactose-specificiteit van de cholesterol verwijdering uit het serumaantoont. De potentie is in vergelijking met het voorheenontwikkelde tris-gal-chol (formule 22), met tenminste eenfactor 25 toegenomen (ref.15).
Opmerkelijk is daarnaast de persistentie van de dalingin het cholesterolniveau. Zelfs 24 uur na eenmaligetoediening van 0.56 mg TG(20A)-chol is de cholesterolspiegelniet op de controle waarde teruggekeerd.
De daling van het totale cholesterolniveau zoals na 24hnog aangetroffen, wordt weerspiegeld in een daling van hetserum HDL-niveau (zie figuur 4). Het HDL-niveau daalt dosis- afhankelijk en significant na injectie van TG(20A)-chol. HetLDL niveau is op dit tijdstip eveneens verlaagd na toedieningvan TG(20A)C. De concentraties van de overige lipoproteïnenworden niet significant benvloed door TG(20A)-chol. Men moet2ich bij een intrapolatie van deze gegevens wel rekenschapgeven van het feit dat het geteste tijdstip niet optimaal is,dat het HDL bij de rat het meest prominente lipoproteine is(65-70%), waardoor accumulatie van TG(20A)-chol vooral plaatszal hebben in het HDL.
Voorbeeld 6
Tevens kan de aldus bereide verbinding TG(20A)-chol(formule 20) gebruikt worden ter sturing van LDL naar dehepatische parenchymcel.
Om dit te onderzoeken werd geïsoleerd lage-dichtheids-lipoproteine opgeladen met TG(20A)-chol volgens een opzichzelf bekende procedure en werd het in-vivo gedrag van hetdeeltje bestudeerd. LDL (50 μ5) in PBS werd gedurende 30 minbij 20°C geincubeerd met 0, 5, 15 en 50 μg TG(20A)-chol. Dezebelading leidde tot een veranderd gedrag van het LDL naintraveneuze injectie in ratten. Dit wordt geïllustreerd infiguur 5. Terwijl de onbeladen LDL deeltjes (gemerkt met 125I)na intraveneuze toediening slechts langszaam uit de bloedbaanverdwijnen, en slechts in zeer geringe mate door de leveropgenomen worden, worden de deeltjes, beladen met TG(20A)-chol, veel sneller geklaard en in de lever opgenomen. Wegensde hoge hydrofiliciteit van TG(20A)-chol vindt heel snel eenuitwisseling van deze verbinding plaats tussen LDL en overigelipoproteïnen en lipidcompartimenten. Dit leidt dan tot eenstabilisatie van de LDL spiegel in de bloedbaan na enkeleminuten.
Opstapeling van TG(20A)-chol in LDL verandert dus hetfysiologische gedrag van LDL. Het complex wordt opgenomendoor de lever via een galactose-specifieke route. De leverbezit echter twee galactose-specifieke receptoren. Nu kanworden geverifieerd of het complex wordt opgenomen door de parenchymcel of door de Kupffer cel op de lever. Figuur 6laat zien dat het als gevolg van oplading met TG(20A)-choldoor de lever opgenomen LDL zich grotendeels in deparenchymcel bevind. Het door de lever opgenomen, onbeladenLDL bevindt zich voornamelijk in de Kupffer cel. Blokkade vande asialoglycoproteine receptor middels preinjectie van50 mg/kg asialofetuine, 1 min voor de injectie van hetTG(20A)-chol/LDL complex, resulteert in een significanteremming van de opname door de leverparenchymcel. Dit wijsterop dat oplading met deze verbinding leidt tot leveropnamevia de asialoglycoproteine receptor in de parenchymcel.
Dit is van groot belang voor eventuele toepassing vanTG(20A) (formule 15e) of TG(20A)-chol (formule 20) als hypo-lipidemisch therapeuticum of als middel om drugcarriers naarde hepatische parenchymcel te leiden.
Referenties: 1) Chabala en Shen, Carbohydr. Res. 67: 55-63 (1978).
2) Ponpipom et al.. Can. J. Chem. 58: 214-220 (1979).
3) Slama en Rando, Carbohydr. Res. 88: 213-221 (1981).
4) Roeien et al., J. Med. Chem. 34: 1036-1041 (1991).
5) Bussian en Wriston, Biochim. Biophys. Acta 471: 336-340 (1977) .
6) Jonah et al., Biochim. Biophys. Acta 541: 321-333 (1978) .
7) Surolia en Bacchawat, Biochim. Biophys. Acta 497: 760-765 (1977).
8) Hoekstra et al., Biochim. Biophys. Acta 603: 336-346(1980).
9) Spanjer en Scherphof, Biochim. Biophys. Acta 734: 40-47(1983) .
10) Gosh en Bacchawat, Biochim. Biophys. Acta 632: -562-572(1980).
11) Gosh et al., Arch. Biochem. Biophys. 206:454-457 (1981).
12) Kempen, et al., J. Med. Chem. 27: 1306-1312 (1984).
13) Van Berkel et al., J. Biol. Chem. 260: 2694-2699 (1985).
14) Van Berkel et al., J. Biol. Chem. 260: 12203-12207 (1985).
15) Kempen et al., J. Lipid Res. 28: 659-666 (1987).
16) Medina et al., Tetr. Letters 29: 3773-3776 (1988).
17) Biessen et al., in "Mechanisms of Hepatic Endocytosis",ed. Windier, (1992), in press.
18) Flügeli, P., Garegg, P.J., Löhn, H. and Norberg, T.(1987), Glycoconjugate J. 4: 97.
19) Lehrmann, M.A. and Hill, R.L. (1981), J.Biol.Chem. 261:7419-7420.
20) Connolly, D.T., Townsend, R.R., Kawaguchi, K., Bell, W.R. and Lee, Y.C. (1982), J. Biol. Chem. 257: 939-945.
21) Goodarzi, G., Gross, S.C., Tewari, A. and Watabe, K.,(1990), J. Gen. Virol. 71: 3021-3025.

Claims (26)

1. Triantennair clusterglycoside, waarin elke glycoside-restdoor een glycosidespacer met een ketenlengte van ten minste 4atomen in de keten is verbonden met het koolstofatoom dat hetvertakkingspunt van de cluster is.
2. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 1, waarinde keten van de glycosidespacer ten minste één alkyleengroepen ten minste één hydrofiele groep omvat.
3. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 2, waarinde hydrofiele groep wordt gekozen uit -O-, -CO-, -NH-, -CONH-,-NHCO-, -0C0- en -C00-.
4. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 3, waarinde glycosidespacer beantwoordt aan formule 2, waarin R1, R2 en R3 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of eenalkylgroep van 1-4 koolstofatomen voorstellen,n, p, en q onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6voorstellen, en r een geheel getal van 0-6 voorstelt.
5. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 4, waarinR1, R2 en R3 in formule 2 elk een waterstofatoom voorstellen.
6. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 4 of 5,waarbij in formule 2, n een geheel getal van 2-4 is, p eengeheel getal van 2-3 is, q een geheel getal van 1-3 is en reen geheel getal van 1-5 is.
7. Triantennair clusterglycoside volgens een of meer van deconclusies 1-6, waarin de glycoside-resten worden gekozen uitβ-D-galactosyl, 2-acetamido-2-deoxy-galactopyranosyl, lactosyl,β-L-fucosyl, a-D-mannosyl en NeuAca2,2-Ga^l, 4-(Fucal, 3) -GlcNAc.
8. Triantennair clusterglycoside volgens een of meer van deconclusies 1-7, waarin aan het koolstofatoom, dat hetvertakkingspunt van de cluster is, een eindgroepspacer met eenketenlengte van ten minste 4 atomen in de keten is gebonden.
9. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 8, waarinde keten van de eindgroepspacer ten minste één alkyleengroepen ten minste één hydrofiele groep omvat.
10. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 9, waarinde hydrofiele groep wordt gekozen uit -0-, -CO-, -NH-, -CONH-,-NHCO-, -OCO- en -COO-.
11. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 10,waarin de eindgroepspacer beantwoordt aan formule 3, waarinR4, R5 en R6 onafhankelijk van elkaar een waterstofatoom of eenalkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstellen, s, t en u onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6voorstellen, en v en w onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 0-4voorstellen.
12. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 11,waarin R4, R5 en R6 in formule 3 elk een waterstofatoomvoorstellen.
13. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 11 of 12,waarbij in formule 3, v een geheel getal van 1-2 is, w eengeheel getal van 0-2 is en s, t en u onafhankelijk van elkaareen geheel getal van 1-4 voorstellen.
14. Triantennair clusterglycoside volgens een of meer van deconclusies 8-13, waarin aan de eindgroepspacer een eindgroepis gebonden, gekozen uit een eventueel beschermde reactievegroep, een lipofiele groep, een drug-rest en een drugcarrier-rest.
15. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 14,waarin de eindgroep een hydroxylgroep, een alkoxygroep met 1-4koolstofatomen, een aminogroep, een 3p-cholesterol-rest, eenNa,Ne-dioleoyllysine-rest, een 53-cholanic acid-3a-ol oleaat-rest, een 5-cholenic acid-3p-ol oleaat-rest, een 5p-cholanicacid-3a,12a-diol dioleaat-rest, of een lipoproteine-restomvat.
16. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 15,waarin de eindgroep een cholesterol-rest omvat.
17. Triantennair clusterglycoside volgens een of meer van deconclusies 1-16, dat beantwoordt aan- formule 1, waarin GO- deglycoside-rest, X1 de glycosidespacer, X2 de eindgroepspacer enZ de eindgroep voorstellen.
18. Triantennair clusterglycoside volgens conclusie 17, datbeantwoordt aan formule 4, waarin q een geheel getal van 1-3is, GO- een galactose-rest voorstelt en -Ochol eencholesterol-rest voorstelt.
19. Farmaceutisch preparaat, omvattende een triantennairclusterglycoside volgens een of meer van de conclusies 1-18,alsmede ten minste één farmaceutisch aanvaardbare drager.
20. Werkwijze voor het bereiden van een triantennair cluster¬glycoside met formule 5, waarin GO- een glycoside-rest is, X2een eindspacer is, Z een eindgroep is, R^—R3 onafhankelijk vanelkaar een waterstofatoom of een alkylgroep met 1-4 koolstof-atomen voorstellen, n, p en q onafhankelijk van elkaar eengeheel getal van 1-6 zijn en r een geheel getal van 0-6voorstelt, waarbij een verbinding met formule 6, waarin G'O- de rest vaneen beschermd glycoside voorstelt, in reactie wordt gebrachtmet een verbinding met formule 7, waarin Z' staat voor deeindgroep Z of een door de eindgroep Z te vervangen groep,de groep Z' in de verkregen verbinding, indien deze een doorde eindgroep Z te vervangen groep voorstelt, wordt vervangendoor de eindgroep Z en daarvoor of daarna de glycoside-restenvan de verkregen verbinding worden ontschermd.
21. Werkwijze volgens conclusie 20, waarbij de omzetting vande verbinding met formule 6 met de verbinding met formule 7wordt uitgevoerd in tegenwoordigheid van N-iodosuccinimide entrifluormethaansulfonzuur.
22. Werkwijze volgens conclusie 20 of 21, waarin deglycoside-resten beschermd worden door hydroxylbeschermendebenzoylgroepen, die later verwijderd worden door behandelingmet kalium-tert.butylaat.
23. Werkwijze volgens een of meer van de conclusies 20-22,waarin Z’ in formule 7 een beschermde reactieve groep is, die na ontscheming wordt vervangen door een eindgroep Z, gekozenuit een lipofiele groep, een drug-rest en een drugcarrier-rest.
24. Werkwijze voor het bereiden van een triantennair cluster-glycoside met formule 8, waarin GO- een glycoside-rest is, zeen eindgroep ia, R^—R3 onafhankelijk van elkaar een waterstof¬atoom of een alkylgroep met 1-4 koolstofatomen voorstellen, n, p en q onafhankelijk van elkaar een geheel getal van 1-6voorstellen, r een geheel getal van 0-6 is en X3 een eindgroep-spacer voorstelt, waarbij een verbinding met formule 6, waarin G’O- de rest vaneen beschermd glycoside voorstelt, in reactie wordt gebrachtmet een verbinding met formule 9, waarin Q staat voor eenaminobeschermende groep, de aminogroep in de verkregen verbinding wordt ontschermd ende daarbij verkregen vrije aminogroep wordt omgezet in eengroep -NH-X3-Z, en daarvoor of daarna de glycoside-resten vande verkregen verbinding worden ontschermd.
25. Werkwijze volgens een of meer van de conclusies 20-24,waarbij de verbinding met formule 6 wordt bereid door eenverbinding met formule 10 met een verbinding met formule 11 telaten reageren.
26. Werkwijze volgens conclusie 25, waarbij de omzetting vande verbinding met formule 10 met de verbinding met formule 11wordt uitgevoerd in tegenwoordigheid van N-iodosuccinimide entrifluormethaansulfonzuur.
NL9201440A 1992-08-11 1992-08-11 Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing. NL9201440A (nl)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL9201440A NL9201440A (nl) 1992-08-11 1992-08-11 Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
AU48355/93A AU674160B2 (en) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennary cluster glycosides, their preparation and use
AT93921124T ATE168694T1 (de) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennar cluster glykoside, ihre herstellung und verwendung
PCT/NL1993/000169 WO1994004545A1 (en) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennary cluster glycosides, their preparation and use
DE69319912T DE69319912T2 (de) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennar cluster glykoside, ihre herstellung und verwendung
ES93921124T ES2122041T3 (es) 1992-08-11 1993-08-11 Glicosidos triantenarios aglomerados, su preparacion y utilizacion.
JP6506123A JPH08502726A (ja) 1992-08-11 1993-08-11 ３分枝性クラスタグリコシドの調製およびその用途
EP93921124A EP0655070B1 (en) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennary cluster glycosides, their preparation and use
US08/382,022 US5885968A (en) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennary cluster glycosides, their preparation and use
DK93921124T DK0655070T3 (da) 1992-08-11 1993-08-11 Triantennære klusterglycosider, deres fremstilling og anvendelse

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NL9201440 1992-08-11
NL9201440A NL9201440A (nl) 1992-08-11 1992-08-11 Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NL9201440A true NL9201440A (nl) 1994-03-01

Family

ID=19861173

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL9201440A NL9201440A (nl) 1992-08-11 1992-08-11 Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.

Country Status (10)

Country Link
US (1) US5885968A (nl)
EP (1) EP0655070B1 (nl)
JP (1) JPH08502726A (nl)
AT (1) ATE168694T1 (nl)
AU (1) AU674160B2 (nl)
DE (1) DE69319912T2 (nl)
DK (1) DK0655070T3 (nl)
ES (1) ES2122041T3 (nl)
NL (1) NL9201440A (nl)
WO (1) WO1994004545A1 (nl)

Families Citing this family (74)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1996030386A1 (fr) * 1995-03-31 1996-10-03 Drug Delivery System Institute, Ltd. Derives d'amidite et derives d'oligonucleotides
US5855911A (en) 1995-08-29 1999-01-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal phosphodiester, phosphorothioate, and P-ethoxy oligonucleotides
DE19631189A1 (de) * 1996-08-02 1998-02-05 Max Delbrueck Centrum Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer
US6977244B2 (en) 1996-10-04 2005-12-20 Board Of Regents, The University Of Texas Systems Inhibition of Bcl-2 protein expression by liposomal antisense oligodeoxynucleotides
US7704962B1 (en) 1997-10-03 2010-04-27 Board Of Regents, The University Of Texas System Small oligonucleotides with anti-tumor activity
US7285288B1 (en) 1997-10-03 2007-10-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Inhibition of Bcl-2 protein expression by liposomal antisense oligodeoxynucleotides
GB2372502B (en) * 2000-12-12 2004-10-13 Imperial College Carbohydrate compounds containing cholesterol and their use
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
MX2012009178A (es) 2010-02-24 2012-11-30 Arrowhead Res Corp Composiciones para liberacion dirigida de arnsi.
EP3766975A1 (en) 2010-10-29 2021-01-20 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
KR20130132475A (ko) 2010-12-17 2013-12-04 애로우헤드 리서치 코오포레이션 ｓｉＲＮＡ의 갈락토오스 클러스터-약동학적 조절제 표적 물질
WO2013032829A1 (en) 2011-08-26 2013-03-07 Arrowhead Research Corporation Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
US20140100178A1 (en) * 2012-10-04 2014-04-10 Aslam Ansari Composition and methods for site-specific drug delivery to treat malaria and other liver diseases
MY173826A (en) 2012-11-15 2020-02-24 Roche Innovation Ct Copenhagen As Oligonucleotide conjugates
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
BR112015018161A2 (pt) 2013-01-30 2017-08-22 Hoffmann La Roche Conjugado de oligômeros antisense de lna, composição farmacêutica e uso de um conjugado de oligômeros antisense de lna
CN112263682A (zh) 2013-06-27 2021-01-26 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 靶向pcsk9的反义寡聚体和缀合物
GB201408623D0 (en) 2014-05-15 2014-07-02 Santaris Pharma As Oligomers and oligomer conjugates
TW201620526A (zh) 2014-06-17 2016-06-16 愛羅海德研究公司 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法
MX2017011422A (es) 2015-03-17 2017-11-10 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para inhibir la expresion del gen del factor xii.
CA2991639A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai therapy for hepatitis b virus infection
JOP20210043A1 (ar) 2015-10-01 2017-06-16 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
CN113797348A (zh) 2016-03-07 2021-12-17 箭头药业股份有限公司 用于治疗性化合物的靶向配体
AU2017235278C1 (en) 2016-03-14 2022-03-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Oligonucleotides for reduction of PD-L1 expression
EP3228326A1 (en) 2016-04-05 2017-10-11 Silence Therapeutics GmbH Nucleic acid linked to a trivalent glycoconjugate
MA45496A (fr) 2016-06-17 2019-04-24 Hoffmann La Roche Molécules d'acide nucléique pour la réduction de l'arnm de padd5 ou pad7 pour le traitement d'une infection par l'hépatite b
JOP20170161A1 (ar) 2016-08-04 2019-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل RNAi للعدوى بفيروس التهاب الكبد ب
EP3506913A4 (en) * 2016-09-02 2020-06-10 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. TARGETING LIGANDS
WO2018132432A1 (en) 2017-01-10 2018-07-19 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Alpha-1 antitrypsin (aat) rnai agents, compositions including aat rnai agents, and methods of use
EP3385272A1 (en) 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Further novel oligonucleotide-ligand conjugates
EP3550022A1 (en) 2018-04-05 2019-10-09 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
EP3385381A1 (en) 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
PL3607068T3 (pl) 2017-04-05 2023-03-20 Silence Therapeutics Gmbh Hamowanie TMPRSS6 mediowane interferencją RNA
WO2018185253A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Silence Therapeutics Gmbh Ligand modified double-stranded nucleic acids
EP3385380A1 (en) 2017-04-05 2018-10-10 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
EP3483269A1 (en) 2017-11-13 2019-05-15 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
WO2018185252A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acid conjugates
RS63836B1 (sr) 2017-04-05 2023-01-31 Silence Therapeutics Gmbh Proizvodi i sastavi
EP4029942A1 (en) 2017-04-05 2022-07-20 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
SG11201912178VA (en) 2017-09-11 2020-01-30 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Rnai agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein c-iii (apoc3)
CN117701562A (zh) 2017-09-14 2024-03-15 箭头药业股份有限公司 用于抑制血管生成素-样3(ANGPTL3)的表达的RNAi剂和组合物以及使用方法
CN111511914B (zh) 2017-10-16 2023-11-17 豪夫迈·罗氏有限公司 减少PAPD5和PAPD7 mRNA的核酸分子用于治疗乙型肝炎感染
US11492624B2 (en) 2017-10-17 2022-11-08 Arrowheads Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents and compositions for inhibiting expression of Asialoglycoprotein receptor 1
EP3483270A1 (en) 2017-11-13 2019-05-15 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
LT3710586T (lt) 2017-11-13 2023-02-27 Silence Therapeutics Gmbh Nukleorūgštis, skirta slopinti lpa raišką ląstelėje
JP7461886B2 (ja) 2017-11-13 2024-04-04 サイレンス・セラピューティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 標的遺伝子の発現を抑制するためのジチオリン酸結合を含む核酸
WO2019092282A1 (en) 2017-11-13 2019-05-16 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of aldh2 in a cell
EP3550021A1 (en) 2018-04-05 2019-10-09 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions for inhibiting expression of a target gene
EP3775207A1 (en) 2018-04-05 2021-02-17 Silence Therapeutics GmbH Sirnas with vinylphosphonate at the 5' end of the antisense strand
CR20210058A (es) 2018-07-03 2021-03-22 Hoffmann La Roche Oligonucleótidos para modular la expresión de tau
EP3598995A1 (en) 2018-07-26 2020-01-29 Silence Therapeutics GmbH Products and compositions
CN113728102A (zh) 2018-08-28 2021-11-30 罗氏创新中心哥本哈根有限公司 使用剪接调节化合物进行新抗原工程化
JP7245328B2 (ja) 2018-11-13 2023-03-23 サイレンス・セラピューティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 細胞におけるｌｐａの発現を抑制するための核酸
EP3730617A1 (en) 2019-04-26 2020-10-28 Silence Therapeutics GmbH Nucleic acids for inhibiting expression of c3 in a cell
CA3119234A1 (en) 2018-11-23 2020-05-28 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of c3 in a cell
WO2020163747A1 (en) 2019-02-07 2020-08-13 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Rnai agents for hepatitis b virus infection
EP3931348B1 (en) 2019-02-26 2023-08-09 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oligonucleotide formulation method
CA3135958A1 (en) 2019-05-07 2020-11-12 Universitat Bern Nucleic acids for inhibiting expression of pros1 in a cell
CN114340664A (zh) 2019-06-18 2022-04-12 爱尔兰詹森科学公司 乙型肝炎病毒(HBV)疫苗和靶向HBV的RNAi的组合
CN114981430A (zh) 2019-08-27 2022-08-30 赛伦斯治疗有限责任公司 用于抑制细胞中的c3表达的核酸
JP2023509872A (ja) 2019-12-24 2023-03-10 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｈｂｖを標的とする抗ウイルス剤及び／又はｈｂｖの処置のための免疫調節剤の医薬組合せ
MX2022007908A (es) 2019-12-24 2022-07-21 Hoffmann La Roche Combinacion farmaceutica de un oligonucleotido terapeutico que actua sobre hbv y un agonista de tlr7 para el tratamiento de hbv.
US20210301294A1 (en) 2020-03-26 2021-09-30 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi Agents For Inhibiting Expression Of PNPLA3, Pharmaceutical Compositions Thereof, And Methods Of Use
AU2021281511A1 (en) 2020-05-27 2023-01-05 Asociación Centro de Investigación Cooperativa en Biociencias- CIC bioGUNE Nucleic acids for inhibiting expression of CNNM4 in a cell
AU2021345026A1 (en) 2020-09-15 2023-05-11 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Methods for the reduction of z-aat protein levels
WO2022096424A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Universität Bern Nucleic acids for inhibiting expression of pros1 in a cell
WO2022184852A1 (en) 2021-03-03 2022-09-09 Silence Therapeutics Gmbh Conjugated nucleic acids comprising a phosphorodithioate for inhibiting gene expression in a cell
WO2022223557A1 (en) 2021-04-20 2022-10-27 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of xdh in a cell
EP4329876A1 (en) 2021-04-27 2024-03-06 Silence Therapeutics GmbH Sirna targeting tmprss6 for the treatment of myeloproliferative disorders
US11629349B2 (en) 2021-06-21 2023-04-18 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents for inhibiting expression of xanthine dehydrogenase (XDH), pharmaceutical compositions thereof, and methods of use
AU2022336157A1 (en) 2021-09-02 2024-03-14 Silence Therapeutics Gmbh Nucleic acids for inhibiting expression of complement factor b (cfb) in a cell
WO2023233290A1 (en) 2022-05-31 2023-12-07 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Rnai agents targeting pd-l1

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US751219A (en) * 1904-02-02 Leaf-turner
US4751219A (en) * 1985-02-05 1988-06-14 Nederlandse Centrale Organisatie Voor Toegepast-Natuur-Wetenschappelijk Onderzoek Synthetic glycolipides, a process for the preparation thereof and several uses for these synthetic glycolipides
FR2637185A1 (fr) * 1988-10-05 1990-04-06 Ire Celltarg Sa Vecteurs synthetiques de faible poids moleculaire, utilisation en therapie ciblee et en imagerie medicale et procedes de preparation
PT649854E (pt) * 1993-09-01 2000-07-31 Akzo Nobel Nv Bisconjugados compreendendo dois sacaridos e um espacador

Also Published As

Publication number Publication date
EP0655070B1 (en) 1998-07-22
US5885968A (en) 1999-03-23
ATE168694T1 (de) 1998-08-15
DK0655070T3 (da) 1999-04-26
WO1994004545A1 (en) 1994-03-03
EP0655070A1 (en) 1995-05-31
AU674160B2 (en) 1996-12-12
AU4835593A (en) 1994-03-15
DE69319912D1 (de) 1998-08-27
ES2122041T3 (es) 1998-12-16
DE69319912T2 (de) 1999-04-15
JPH08502726A (ja) 1996-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL9201440A (nl) Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
AU681010B2 (en) Substituted lactose derivatives as cell adhesion inhibitors
EP0811011B1 (en) Carbohydrate conjugated bio-active compounds
US5354853A (en) Phospholipid-saccharide conjugates
HUT74506A (en) Sialyl lewis-x analogues as inhibitors of cellular adhesion
JPH10507742A (ja) シアル酸／フコースベースの医薬
US20050187171A1 (en) Glycomimetic antagonists for both E-and P-selectins
CA2160100A1 (en) Carbohydrate conjugates as inhibitors of cell adhesion
EP1763533B1 (en) Specific antagonist for both e- and p-selectins
WO1993010796A1 (en) Substituted lactose and lactosamine derivatives as cell adhesion inhibitors
AU678373B2 (en) Substituted lactose derivatives as cell adhesion inhibitors
AU595987B2 (en) Disaccharide derivatives
Marinier et al. Novel mimics of sialyl Lewis X: design, synthesis and biological activity of a series of 2-and 3-malonate substituted galactoconjugates
JP2535048B2 (ja) 新規ジサッカライド誘導体及びその塩
EP1549658B1 (en) Glucose-based compounds with affinity to p-selectin
JP2774429B2 (ja) 糖骨格を有する分枝鎖型誘導体
WO1999010359A2 (en) Liposomic based sialyl lewis x mimetics
JP2951975B2 (ja) 抗腫瘍剤
JPH06199884A (ja) 新規糖脂質誘導体
WO1998055149A1 (fr) Utilisation de vecteurs medicamenteux pour produire des medicaments migrants dans les ganglions lymphatiques
WO1991008748A1 (en) Synthesis of rotavirus receptor saccharides
IKAMI et al. Synthetic studies on sialoglycoconjugares. Part CVII. Synthetic Studies on Selectin Ligands/Inhibitors. Synthesis and Biological Evaluation of Sulfated and Phosphorylated. BETA.-D-Galacto-and Lactopyranosides Containing Fatty-Alkyl Residues of Different Carbon Chain Lengths.
JPH10152498A (ja) 糖脂質誘導体、それを有効成分とする免疫抑制剤およびその製造用中間体
Wright Synthesis of glycoconjugates affecting cell adhesion

Legal Events

Date Code Title Description
A1B A search report has been drawn up
BV The patent application has lapsed