UA119532C2 - Варіант hppd та спосіб його застосування - Google Patents

Варіант hppd та спосіб його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA119532C2
UA119532C2 UAA201503416A UAA201503416A UA119532C2 UA 119532 C2 UA119532 C2 UA 119532C2 UA A201503416 A UAA201503416 A UA A201503416A UA A201503416 A UAA201503416 A UA A201503416A UA 119532 C2 UA119532 C2 UA 119532C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
amino acid
avr
rgo
sequence
rpe
Prior art date
Application number
UAA201503416A
Other languages
English (en)
Inventor
Фабієн Поре
Фабиен Порэ
Фолькер Хайнріхс
Фолькер Хайнрихс
Гудрун Ланге
Бернд Лабер
Бэрнд Лабер
Шеріл Пітерс
Шэрил Питэрс
Лаура Шоутен
Лаура Шоутэн
Original Assignee
Байєр Кропсайєнс Лп
Байер Кропсаенс Лп
Байєр Кропсайєнс Аг
Байер Кропсаенс Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байєр Кропсайєнс Лп, Байер Кропсаенс Лп, Байєр Кропсайєнс Аг, Байер Кропсаенс Аг filed Critical Байєр Кропсайєнс Лп
Publication of UA119532C2 publication Critical patent/UA119532C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N35/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical
    • A01N35/06—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having two bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. aldehyde radical containing keto or thioketo groups as part of a ring, e.g. cyclohexanone, quinone; Derivatives thereof, e.g. ketals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/34—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • A01N43/40—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom six-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/56—1,2-Diazoles; Hydrogenated 1,2-diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/713—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with four or more nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
    • A01N43/80—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms five-membered rings with one nitrogen atom and either one oxygen atom or one sulfur atom in positions 1,2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
    • A01N43/82—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms five-membered rings with three ring hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8209—Selection, visualisation of transformants, reporter constructs, e.g. antibiotic resistance markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0069—Oxidoreductases (1.) acting on single donors with incorporation of molecular oxygen, i.e. oxygenases (1.13)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y113/00—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13)
    • C12Y113/11—Oxidoreductases acting on single donors with incorporation of molecular oxygen (oxygenases) (1.13) with incorporation of two atoms of oxygen (1.13.11)
    • C12Y113/11027—4-Hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (1.13.11.27)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Винахід стосується ферменту 4-гідроксифенілпіруват деоксигенази (HPPD), а саме рекомбінантної молекули нуклеїнової кислоти, яка кодує HPPD, де вказана молекула нуклеїнової кислоти кодує амінокислотну послідовність SEQ ID NО:1 і vf’ амінокислотні заміщення в положеннях 335, 336, 339 та 340, де вказаний HPPD фермент є толерантним до гербіциду - HPPD інгібітора.

Description

Перехресне посилання на споріднені заявки
Дана заявка заявляє пріоритет за попередніми заявками США, реєстраціний Мо 61/701,037, поданою 14 вересня 2012 року; реєстраціний Мо 61/766,057, поданою 18 лютого 2013 року та реєстраціний Мо 61/790,404, поданою 15 березня 2013 року, зміст яких включено у даний документ за допомогою посилання у всій їх повноті.
Перелік послідовностей
Дана офіційна копія переліку послідовностей була представлена електронно через систему подачі документів ЕБЕЗ-МУер. Доданий файл у форматі АЗСІЇ, який має назву "2912939 19973001 ЕС ІТ, і який був створений 12 вересня 2013 і має об'єм 237 кБ, було подано одночасно із описом. Перелік послідовностей, який міститься у доданому документі формату АЗСІЇ є частиною опису і його наведено у даному документі за допомогою посилання у всій його повноті.
Галузь винаходу
Винахід стосується молекулярної біології рослин, зокрема, нових НРРО поліпептидів, які надають підвищеної стійкості до гербіцидів - інгібіторів НРРО.
Суть винаходу 4-гідроксифенілпіруват діоксигенази (НРРО) являють собою ферменти, що каталізують реакцію, в якій пара-гідроксифенілпіруват (скорочено тут як НРР), продукт деградації тирозину, трансформується в гомогентизат (скорочено тут як Но), прекурсор токоферолу та пластохінону у рослинах (Стоисп М.Р. еї аІ. (1997), Темгапейдгоп, 53, 20, 6993-7010, Еге еї а. (2004), Ріапі
Рпузіоюду 134:1388-1400). Токоферол діє як мембрано-асоційований антиоксидант.
Пластохінон, спочатку діє як носій електронів між РБІЇ та цитохромним Бб6/ комплексом, а, по- друге, являє собою окисно-відновний кофактор для фітоїндесатурази, яка бере участь в біосинтезі каротиноїдів.
До цього часу понад 1000 послідовностей нуклеїнової кислоти з різних організмів, представлені в базі даних МСВІ, були аннотовані як кодуючі для передбачуваного білка, що має
НРРО домен. Але для більшості з них не було доведено, що білок матиме НРРО ферментативну активність, ні при дослідженні іп міїго, ні при дослідженні іп ріапіа, ні що такий
НРРО білок надає стійкості до гербіцидів - інгібіторів НРРО, коли експресується в рослині.
Зо Декілька НРРО білків та їхні первинні послідовності були описані в найсучасніших публікаціях, зокрема НРРО білки бактерій, таких як Рхоендотопах (Каеївбспі еї аї., Єиг. У. Віоспет., 205, 459- 466, 1992, УМО 96/38567), Когадіа (М/О2011076889), Зупеспососси5 (УМО2011076877), та
АпПодососсив /(ММО2011076892), найпростіших, таких як Віерпагізта (МО2011076882),
Ешигуагопаеєеоїа, таких як Рісгорпйи5 (ММО2011076885), рослин, таких як Агарідорзі5 (МО 96/38567,
СЕМВАМКФ АРГО047834), морква (МО 96/38567, СЕМВАМКО 87257), Амепа займа (МО 02/046387,
УМО 11/068567), пшениця (УМО 02/046387), Вгаспіагіа ріатурпуйа (МО 02/046387), Сепснгив5 еспіпайи5 (МО 02/046387), І оїїшт гідідит (М/О 02/046387), Ревішса агипаіпасєа (МО 02/046387), зЗеїапа Тарегі (МО 02/046387), ЕІвивіпе іпаїса (МО 02/046387), Богупит (МО 02/046387, МО 12/021785), кукурудза (МО 12/021785), Соссісоїде5 (ЗЕМВАМКФ СОЇІТЕР), Сорії5 |(аропіса (МО 06/132270), Сп(аатудотопаз геіппагаці (Е5 2275365) / ММО2011/145015, чи ссавців, таких як миша або свиня.
Інгібування НРРО приводить до "розімкненості" фотосинтезу, недостатності спряжених додаткових світлозбиральних пігментів, і, найважливіше, до деструкції хлорофілу УФф- опроміненням та активними сполуками кисню (втрата кольору (знебарвлення)) через втрату фотопротекції, яку зазвичай забезпечують каротиноїди (Моїтіб5 еї а. (1995), Ріапі Сеїї 7: 2139- 2149). Втрата кольору (знебарвлення) фотосинтетичних тканин призводить до уповільнення росту та загибелі рослин.
Було доведено, що деякі молекули, які інгібують НРРО, і які інгібують трансформацію НРР в гомогентизат, зв'язуючись специфічно з ферментом, є дуже ефективними гербіцидами.
В даний час, більшість комерційно доступних гербіцидів - НРРО інгібіторів, належать до цих родин хімічних сполук: 1) трикетони, напр., сулькотріон (тобто 2-(2-хлоро-4-(метилсульфоніл)бензоїл|-1,3- циклогександіоні, мезотріон (тобто 2-(4-(метилсульфоніл)-2-нітробензоїл|-1,3-циклогександіоні|; темботріон (гобто 2-(2-хлоро-4--(метилсульфоніл)-3-(2,2,2,-три-фторетокси)метилі бензоїл|-1,3- цикло-гександіоні; тефурилтріон тобто /2-(2-хлоро-4-(метилсульфоніл)-3-|(тетрагідро-2- фураніл)метокси|метилібензоїл|-1,3-циклогександіоні|; біциклопірон Ігобто 4-гідрокси-3-(2-(2- метоксиетокси)метил|-6-«(трифторметил)-3-піридинілІікарбоніл|біцикло|3.2.1|окт-3-єн-2-оні; бензобіциклон (гобто 3-(2-хлоро-4-мезилбензоїл)-2-фенілтіобіцикло/3.2.1|окт-2-єн-4-оні; 2) дикетонітрили, напр., 2-ціано-3-циклопропіл-1-(2-метилсульфоніл-4-трифторметилфеніл)- бо пропан-1,3-діон і 2-ціано-1-(4--(«метилсульфоніл)-2-трифторметилфеніл|-3-(1-
метилциклопропіл)пропан-1,3-діон; 3) ізоксазоли, напр., ізоксафлутол |гобто (5-циклопропіл-4-ізоксазоліл)(2-(метилсульфоніл)- 4-(трифторметил)феніл|метані|І. У рослин, ізоксафлутол швидко метаболізує в ОКМ, сполуку дикетонітрилу, яка виявляє властивості інгібітора НРРО; 4) піразолінати, тобто, топрамезон |гобто І3-(4,5-дигідро-3-ізоксазоліл)-2-метил-4- (метилсульфоніл) феніл)|(5-гідрокси-1-метил-1 Н-піразол-4-їл)метані, і пірасульфотол |гобто (5- гідрокси-1,3-диметилпіразол-4-їл(2-мезил-4-трифторметилфеніл)метані; піразофен Ігобто 2-|А- (2,4-дихлорбензоїл)-1,3-диметилпіразол-5-їлоксиЇацетофеноні; 5) М-(1,2,5-оксадіазол-3-їл)бензаміди (МО 2011/035874); та б) М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)яуарилкарбоксаміди (М/О2012/028579).
Ці НРРО-інгібуючі гербіциди можуть бути використані проти злаків та/л"або широколистяних бур'янів у посівах сільськогосподарських рослин, які виявляють метаболічну толерантність, таких як кукурудза (7еа таувх), рис (Огула займа) та пшениця (Тгййсит аевіїмит), у яких вони швидко деградують (спиці? єї аїІ. (1993), РЕВ5 ІеЦег5, 318, 162-166; Міїснеї! еї аї. (2001), Реві
Мападетепі 5сіепсе, Мої 57, 120-128; Сагсіа єї аї. (2000), Віоснет., 39, 7501-7507; Раїїей еї аї. (2001), Резі Мападетепі 5сієпсе, Мої! 57, 133-142). Для того щоб розширити межі застосування цих НРРО-інгібуючих гербіцидів, було зроблено декілька спроб, для того щоб надати рослинам, зокрема, рослинам без метаболічної толерантності або з недостатньою толерантністю, рівня толерантності, прийнятного за агрономічних польових умов.
Крім намагання подолати НРРО-опосередковане утворення гомогентизату (05 6,812,010), була здійснена гіперекспресія чутливого ферменту, для того щоб продукувати кількості цільового фермента у рослин, які є достатніми для гербіцида (М/096/38567). Гіперекспресія
НРРО призвела до кращої досходової толерантності до дикетонітрильних похідних (ОКМ) ізоксафлутолу (ІЄТ), однак толерантність не була достатньою для післясходової обробки (Маїіпде евї а!. (2005), Реві Мападетепі бсієпсе 61: 269-276).
Третя стратегія полягала в тому, щоб отримати мутацію НРРО, для того щоб отримати цільовий фермент, який, зберігаючи здатність каталізувати трансформацію НРР в гомогентизат, є менш чутливим до НРРО інгібіторів, ніж нативний НРРО до мутації.
Ця стратегія була успішно застосована для виробництва рослин, стійких до 2-ціано-3-
Зо циклопропіл-1-(2-метилсульфоніл-4-трифторметилфеніл)-пропан-1,3-діону та до 2-ціано-1-|4- (метилсульфоніл)-2-трифторметилфеніл|-3-(1-метилциклопропіл)упропан-1,3-діону (ЕР496630), двох НРРО-інгібуючих гербіцидів, які належать до родини дикетонітрилів (М/О 99/24585).
Рго215іеи, сСіІуз3босїІш, сІуЗзЗ3бІПе, і більш конкретно сїуЗЗ3бТгр (положення мутованих амінокислот показано відносно НРРО Рхепдотопах) були ідентифіковані як мутації, відповідальні за підвищену стійкість до обробки цими дикетонітрильними гербіцидами.
Пізніше було показано, що введення гена НРРО Рхеидотопах у пластидний геном тютюну та сої є більш ефективним, ніж ядерна трансформація, надаючи стійкості до післясходового застосування ізоксафлутолу (Ошоигтанпівїі еї аї. (2007), Ріапі Віотесппої У.5(1):118-33).
У УМО 04/024928 заявники намагались підвищити біосинтез пренілхінону (напр., синтез пластохінонів, токоферолів) в клітинах рослин шляхом підвищення надходження НРР прекурсору в клітини цих рослин. Це було зроблено внаслідок зв'язування синтезу вказаного прекурсора з "шикиматним шляхом" за допомогою надекспресії РОН фермента. Вони також відзначили, що трансформація рослин з геном, який кодує РОН фермент, та геном, який кодує
НРРО фермент, робить можливим підвищення стійкості вказаних рослин до НРРО інгібіторів.
У заявці на Патент УМО 2009/144079 були розкриті нуклеотидні послідовності, що кодують гідроксифенілпіруват деоксигеназу (НРРОБ), зі специфічними мутаціями у положенні 336 в НРРО білку у Рзейидотопах Пиогезсеп5, та їх використання для отримання рослин, стійких до гербіцидів - інгібіторів НРРО.
В УМО 2002/046387, було ідентифіковано декілька доменів НРРО білків, що походять з рослин, які можуть бути відповідальними за надання стійкості до різних гербіцидів -- інгібіторів
НРРОБ, однак ні рослини, ні біохімічні дані не були представлені, для того щоб підтвердити вплив описаних функцій доменів.
В УМО 2008/150473, комбінація двох відмінних механізмів толерантності - модифікований ген Амепа заїїма, який кодує мутантний НРРО фермент і СУР450 монооксигеназа кукурудзи (п511 ген) - була наведена, для того щоб отримати підвищену стійкість до гербіцидів - інгібіторів
НРРОБ, однак жодні дані не були розкриті, які б свідчили про синергічний ефект, виходячи з комбінації цих обох білків.
Далі, в 0520110173718, розкривається спосіб створення рослин, стійких до НРРО інгібіторів, за допомогою надекспресії не лише гена, який кодує толерантний НРРО, як, наприклад, з Амепа 60 займа, однак також у комбінації з декількома рослинними генами, які кодують НТ білок
(гомогентизат соланезилтрансферазу). Однак рівень толерантності до деяких обраних гербіцидів - НРРО інгібіторів був досить обмеженим.
У МО2011094199 та О0520110185444 було оцінено толерантність декількох сотень ліній сої дикого типу до НРРО інгібітора - ізоксафлутолу. Дуже мало ліній виявили прийнятний рівень
Б толерантності до гербіцидів. Був ідентифікований передбачуваний ОСТІ (локус кількісної ознаки), відповідальний за толерантність. У цій ділянці генома був ідентифікований ген, який кодує АВС транспортер, як основну ознаку, відповідальну за підвищену стійкість до гербіциду -
НРРО інгібітора, яка була виявлена. Однак, трансгенні рослини, які експресують ідентифіковані гени, не виявили жодного покращення у стійкості до досліджуваних гербіцидів - НРРО інгібіторів.
В УМО2010/085705, розкрито декілька мутантів НРРО у Амепа заїїма. Було показано, що деякі варіанти виявляють підвищену толерантність іп міго до трикетону "мезотріон", однак, лише поодинокі мутанти експресувались в рослинах тютюну. Крім того, жодна з рослин тютюну, які експресують ці мутанти, не виявила підвищеної стійкості до мезотріону чи ізоксафлутолу у порівнянні з рослинами тютюну, які експресують ген "дикого типу" НРРО у Амепа заїїма. 5 2012/0042413 описує поліпептиди, що мають НРРО активність, однак також виявляють певну нечутливість до щонайменше одного інгібітора НРРО, а також пропонує декілька наборів мутацій у різних положеннях НРРО ферментів, і остаточно розкриває біохімічні дані, а також рівні стійкості рослин, які містять декілька таких мутованих НРРО.
У ЕР 21453012, було описано декілька мутантів НРРО, однак підвищеної толерантності описаних мутантів не було продемонстровано іп ріапіа у порівнянні з декількома гербіцидами -
НРРО інгібіторами.
Суть винаходу
Пропонуються композиції та способи для надання стійкості до гербіцидів - інгібіторів НРРО.
Композиції включають НРРО поліпептиди, що є толерантними до гербіцидів - інгібіторів НРРО, та ізольовані, рекомбінантні або химерні молекули нуклеїнової кислоти, які кодують такі поліпептиди, вектори та клітини-господарі, які включають ці молекули нуклеїнової кислоти.
Композиції також включають антитіла до цих поліпептидів. Нуклеотидні послідовності можуть бути використані в конструкціях ДНК або в експресійних касетах для трансформації та експресії в організмах, включаючи мікроорганізми та рослини. Нуклеотидні послідовності можуть бути синтетичними послідовностями, які були створені для експресії в організмі, включаючи, але не обмежуючись ними, мікроорганізми та рослини.
Композиції включають молукули нуклеїнової кислоти, які кодують поліпептиди стійкості до гербіцидів, включаючи молекули нуклеїнової кислоти, що кодують НРРО білок, який має одне або більше амінокислотних заміщень у положеннях, що відповідають положенням амінокислот 188, 189, 215, 335, 336, 339 та 340 в послідовності ІЮ Мо:1, включаючи НРРО білок, представлені в будь-якій послідовності І Мо:1, 2, 63, 64 або 65, де було введене одне або більше амінокислотних заміщень у положеннях, що відповідають положенням амінокислот 188, 189, 215, 335, 336, 339 та 340 в послідовності ІЮ Мої, і включаючи будь-яку нуклеотидну послідовність, що кодує амінокислотні послідовності, представлені в будь-якій послідовності ІЮ
Мо:3-59, а також її варіанти та фрагменти. Винахід також включає білок НРРО стійкості до гербіцидів, закодований молекулами нуклеїнової кислоти, а також композиції, що включають
НРРО білок.
Композиції також містять трансформовані бактерії, рослини, рослинні клітини, тканини та насіння, що є стійкими до гербіцидів - НРРО інгібіторів внаслідок введення нуклеотидної послідовності винаходу в геном бактерій, рослин, рослинних клітин та насіння. Якщо організм є рослиною, введення послідовності дозволяє застосовувати гербіциди - НРРО інгібітори до рослин для селективного знищення бур'янів, чутливих до НРРО інгібіторів чи інших нетрансформованих рослин, але не стосовно трансформованих організмів. Послідовності бути додатково використані як маркери для селекції рослинних клітин, які ростуть у присутності одного або більше гербіцидів - НРРО інгібіторів.
Додатково забезпечуються способи для ідентифікації НРРО фермента з активністю стійкості до НРРО інгібітора.
Композиції та способи винаходу використовуються для отримання організмів з підвищеною стійкістю до гербіцидів - інгібіторів НРРО. Ці організми та композиції, які включають організми, є бажаними для використання у сільському господарстві. Рослини та насіння, які включають нуклеотидну послідовність винаходу, можуть вирощуватись у полі та збиратись для отримання рослинного продукту. Композиції винаходу також використовуються для генерування змінених або покращених білків, які мають стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора, або для детекції присутності білка, толерантного до гербіциду - інгібітора НРРО або нуклеїнових кислот у бо продуктах чи організмах.
Короткий опис креслень
Фігура 1 представляє вирівнювання амінокислотної послідовності НРРО з мікроорганізмів та видів рослин, включаючи Рзейдотопав Пиогезсеп5 (ЗЕО ІЮ Ме:1), Амепа займа (ЗЕО ІЮО Мо:63), варіант НРРО з Амепа займа (5ЕО ІЮО Мо:6б4), 7еа тау5 (ЗЕО ІЮ Мо:65), зігеріотусез амегтійіїй5 (ЗЕО ІЮ Мо:69), Агарідорзіз (пайапа (ЗЕО ІО Мо:6б6), Ногдецшт миЇдаге (ЗЕО ІО Мо:67), баийисив5 сагоїа (ЗЕО ІО Мо:68), МусозрпаєгеївПа дгатіпісоїа (ЗЕО ІО Ме:70) та Соссісоїде5 іттіі5 (ЗЕО ІЮ
Мо: 71).
Докладний опис винаходу
Дані винаходи зараз будуть описані більш повно з посиланням на супроводжуючі креслення, в яких представлені деякі, але не всі втілення винаходів. Дійсно, ці винаходи можуть бути втілені в багатьох різних формах і не повинні тлумачитись як обмежуючі стосовно втілень, наведених тут; швидше, ці втілення забезпечуються для того, щоб це розкриття задовольнило застосовувані юридичні вимоги. Схожі номери відповідають схожим елементам (в усьому тексті).
Багато модифікацій та інших втілень винаходів, наведених тут, спадуть на думку досвідченому фахівцеві в галузі, якої ці винаходи стосуються, отримуючи переваги від представлених вище ідей та пов'язаних з ними креслень. Відповідно, має бути зрозумілим, що ці винаходи не обмежуються специфічними розкритими втіленнями, і що модифікації та інші втілення можуть бути включені з межах формули винаходу, що додається. Не зважаючи на специфічні терміни, використані тут, вони використовуються лише у загальному та описовому сенсі і не мають на меті обмеження.
Загальний огляд
Було зроблено декілька спроб, для того щоб надати рослинам агрономічно-прийнятного рівня толерантності до широкого спектру гербіцидів - НРРО інгібіторів, включаючи вирішення проблеми НРРО-опосередкованого утворення гомогентизату (05 6,812,010), надекспресію чутливого ензима, для того щоб продукувати кількості цільового фермента в рослині, які є достатніми по відношенню до гербіциду (М/096/38567), мутування НРРО, для того щоб отримати цільовий фермент, який, зберігаючи свою здатність каталізувати трансформацію НРР в гомогентизат, є менш чутливим до НРРО інгібіторів, ніж був нативний НРРО до мутації.
Зо Незважаючи на ці успіхи, отримані при створенні рослин, які виявляють толерантність до декількох гербіцидів - НРРО інгібіторів, описаних вище, ще існує проблема у створенні та/або покращенні толерантності рослин до нового або декількох різних НРРО інгібіторів, зокрема,
НРРО інгібіторів, які належать до класів трикетонів (напр., сулькотріон, мезотріон, темботріон, бензобіциклон та біциклопірон), піразолінатів (напр., топрамезон і пірасульфотол), М-(1,2,5-
Оксадіазол-З-їл)бензамідів (МО 2011/035874), і М-(тетразол-4-їл)у. або М-(тріазол-3- їл/уарилкарбоксамідів (М/О2012/028579).
Таким чином, цей винахід забезпечує покращені композиції та способи для регулювання стійкості до гербіцида - НРРО інгібітора. Гербіциди - НРРО інгібітори, подібні до класу М-(1,2,5- оксадіазол-З3-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)іарилкарбоксамідів, таких як 2- хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-Хлоро-3- (метоксиметил)-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону, має надзвичайну гербіцидну активність проти широкого спектру економічно важливих однодольних і дводольних одорічних шкідливих рослин. Активні речовини також діють ефективно на багаторічні шкідливі рослини, які утворюють пагони на кореневищах, дерев'янистих стеблах або інших багаторічних органах і які важко контролювати. Серед значень цього винаходу, "гербіцид" тлумачиться як гербіцидно активна речовина сама по собі, або така речовина, що комбінується з домішками, що змінюють її ефективність, такими як, наприклад, засоби, які підвищують її активність (синергічні агенти) або які обмежують її активність (захисні засоби). Гербіцид може також включати тверді або рідкі ад'юванти чи носії, які зазвичай використовують у технології приготування препарату (напр., природні чи регенеровані мінеральні речовини, розчинники, диспергуючі речовини, змочуючі засоби, речовини для підвищення клейкості, емульгатори, регулятори росту тощо), а також один або більше додаткових гербіцидів та/або один або більше пестицидів (напр., інсектициди, віруциди, мікробоциди, пестициди, фунгіциди, бактеріоциди, нематоциди, молюскоциди тощо).
Методи включають трансформування організмів за допомогою нуклеотидної послідовності, що кодує ген толерантності до НРРО інгібітора винаходу або у інший спосіб вводячи такі гени бо стійкості до НРРО інгібітора в організми, які їх не містять (напр., шляхом схрещування, злиття клітин або схрещування організмів, які містять інтродукований ген стійкості до НРРО інгібітора винаходу, з організмами, які його не містять, та отримання потомства, яке містить такий ген).
Нуклеотидні послідовності винаходу є корисними для отримання рослин, які виявляють відвищену стійкість до гербіцидів - інгібіторів НРРО, зокрема, підвищену стійкість до гербіцидів - інгібіторів НРРО класу М-(1,2,5-оксадіазол-З-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3- їл)арилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5- їл)бензамід і 2-Хлоро-3-(метоксиметил)-4-"«метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5- їл)/бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон та мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол та топрамезон, зокрема, відібраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону. Ген стійкості до гербіцидів - НРРО інгібіторів винаходу може також виявляти стійкість до "гербіцидів на основі похідних кумарону" (описаний в
МО2009/090401, УХО2009/090402, М/О2008/071918, М/О2008/009908). У цьому відношенні будь- який ген стійкості до гербіцидів НРРО інгібіторів винаходу також може бути експресований в рослині, яка також експресує химерний ген гомогентизат соланезил трансферази (Н5Т) або мутований НЗТ ген, як описано в УМО2011/145015, УМО2013/064987, УМО2013/064964, або
ММО2010/029311, для отримання рослин, стійких до гербіцидів - інгібіторів НТ. Як тут використовується, терміни "гербіциди на основі похідних кумарону" або "гербіциди - НОТ інгібітори" охоплюють сполуки, які належать за ІОРАС номенклатурою до 5Н-тіопірано (|4,3-
Б|піридин-8-ол, 5Н-тіопірано 1ІЗ,4-бБ|піразин-8-ол, оксатіїно І5,6-Б|Іпіридин-4-ол і оксатіїно|5, 6-
БІпіразин-4-ол.
Таким чином, під геном "стійкості до гербіцида - НРРО інгібітора" винаходу розуміють ген, який кодує білок, що надає клітині чи організму здатність витримувати вищу концентрацію гербіциду - НРРО інгібітора, ніж така клітина чи організм, які не експресують білок, або витримувати певну концентрацію гербіцида -- інгібітора НРРО протягом довшого часу, ніж така клітина чи організм, які не експресують білок, або які надають клітині чи організму здатність здійснювати фотосинтез, ріст та/або репродукцію з найменшими ушкодженнями чи уповільненням росту, які спостерігаються, ніж клітини чи організм, які не експресують такий білок. "Білок стійкості до НРРО інгібітора" включає білок, який надає клітині чи організму
Зо здатність витримувати вищу концентрацію гербіциду - інгібітора НРРО, ніж така клітина чи організм, які не експресують білок або витримувати певну концентрацію гербіциду - інгібітора
НРРО протягом довшого періоду часу, ніж така клітина чи організм, які не експресують білок або які надають клітині чи організму здатність здійснювати фотосинтез, ріст та/або репродукцію з меншими ушкодженнями чи уповільненням росту, яке спостерігається, ніж такі клітини чи організм, які не експресують такий білок. Під "витримує" або "толерантність" розуміють або виживання після застосування конкретного гербіцида - НРРО інгібітора, або здатність виконувати важливі клітинні функції, такі як фотосинтез, синтез білка або дихання та репродукція у спосіб, який нелегко відрізнити від необроблених клітин чи організмів, або здатність не мати істотних відмінностей урожайності або навіть покращену урожайність для рослин, оброблених гербіцидом - НРРО інгібітором, у порівнянні з такими рослинами, не обробленими таким гербіцидом (але де бур'яни були видалені чи їх поява була попереджена механізмами, іншими, ніж застосування гербіцида - НРРО інгібітора, такими як способи, описані в ММО2011/100302, що включені тут у їх повному обсязі шляхом посилання).
Крім надання клітині стійкості до НРРО інгібітора, нуклеотидна послідовність НРРО винаходу кодує поліпептиди, що мають НРРО активність, тобто, каталізують реакцію, в якій пара- гідроксифенілпіруват (РНРР) трансформується в гомогентизат. Преференційно, каталітична активність НРРО білка цього винаходу при тестуванні іп міїго, не відрізняється від каталітичної активності референсного НРРО білка більше, ніж на 90 95, більше, ніж на 70 95 або більше, ніж на 5095, при тестуванні за ідентичних умов і при відсутності гербіцидів - інгібіторів НРРО, описаних вище. В деяких втіленнях, каталітична активність покращена у порівнянні з референсним НРРО білком. Каталітична активність НРРО фермента може бути визначена за допомогою різних методів, що є загальновідомими з рівня теніки. ШО 2009/144079 описує різні прийнятні методи скринінгу.
НРРО ферменти, які виявляють підвищену стійкість до гербіцидів - інгібіторів НРРО, можуть робити це, виявляючи, порівняно з референсним НРРО: а) вище значення Кт для природного субстрату, 4-гідроксифенілпірувату; Б) нижче значення Ксаї для конвертації /4- гідроксифенілпірувату до гомогентизату; с) нижчі значення константи асоціації, Коп, регулюючи утворення комплексу фермент: гербіцид - НРРО інгібітор; 4) підвищені значення константи дисоціації, Коїї, регулюючи дисоціацію комплексу фермент: гербіцид - НРРО інгібітор; та/ або є) бо як результат, зміни одного з них або обох с) та а), підвищені значення константи рівноваги, Кі
(називається також як Ка), регулювання дисоціації комплексу фермента:гербіцида -- інгібітора
НРРО.
Ферментативна активність НРРО білків може бути визначена за допомогою будь-якого методу, що робить можливим або вимірювання зменшення кількості НРР чи О»5» субстратів або визначення акумулювання будь-якого продукту, що походить з ферментативної реакції, тобто гомогентизату або СО». Зокрема, НРРО активність може бути визначена за допомогою способу, описаного в ММО2009/144079; Сагсіа еї а!. (1997), Віоспет. .). 325, 761-769; Сагсіа еї аї. (1999),
Ріапі РНузіо!. 119, 1507-1516; або в УУМО2012/021785, які включені тут шляхом посилання.
Для мети цього винаходу, "референсний" НРРО білок (або ген НРРО)) являє собою будь- який НРРО білок або нуклеїнову кислоту, з якими НРРО білок або НРРО нуклеїнова кислота винаходу порівнюються. Цей референсний НРРО може бути НРРО нативної рослини, бактеріальним або тваринним НРРОБ, або може бути мутованим НРРО, відомим з рівня техніки.
Такі референсні НРРО можуть бути використані для визначення, чи має НРРО білок або нуклеїнова кислота винаходу конкретну властивість, що становить інтерес (напр., покращену, порівнянну або знижену стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора чи НРРО ферментативну активність; покращену, порівнянну або знижену експресію в клітині-господарі; покращену, порівнянну або знижену стабільність білка, тощо).
У різних втіленнях тут, нуклеїнова кислота толерантного гербіциду - НРРО інгібітора (включаючи ізольований, рекомбінантний або химерний гени, що включають цю нуклеїнову кислоту; вектори, клітини-господарі, рослини, частини рослин та насіння, які включають нуклеїнову кислоту, насіння, що включає нуклеїнову кислоту, НРРО поліпептиди та їх композиції, закодовані нуклеїновою кислотою, а також способи використання нуклеїнової кислоти для підвищення толерантності рослин до гербіцидів - інгібіторів НРРО, зокрема, підвищення толерантності до гербіцидів - інгібіторів НРРО класу М-(1,2,5-оксадіазол-3- їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)уарилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3- етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-Хлоро-3-(метоксиметил)-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон та мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, особливо, відібраних серед темботріону, сулькотріону,
Зо топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону) кодує НРРО білок, який був модифікований шляхом введення одного або більше амінокислотних заміщень, включаючи 2, 3, 4, 5, 6 або 7 амінокислотних заміщень, в положеннях, що відповідають положенням амінокислот 188, 189, 215, 335, 336, 339 та/або 340 в послідовності ІЮ Ме:1. Під "відповідне" стосується положення нуклеотиду або аміноксилоти порівняно з їх положенням в
ЗЕО ІЮО Мо:/1, коли дві (або більше) послідовності вирівнюються з використанням стандартних алгоритмів вирівнювання, описаних тут. Характерне вирівнювання послідовності ІЮ Ме:1 з НРРО амінокислотними послідовностями з різних видів мікроорганізмів та рослин представлене на
Фігурі 1. Наприклад, положення амінокислот 188, 189, 215, 335, 336, 339 та 340 у послідовності
ІО Ме:1 відповідає положенню амінокислот 241, 242, 271, 412, 413, 416 та 417, відповідно, НРРО з Амепа займа (ЗЕО ІЮО Мо63); положенню амінокислот 235, 236, 265, 406, 407, 410 та 411, відповідно, НРРО з Ногдешйт миЇдаге (ЗЕО 1О Мо:67) і положенню амінокислот 242, 243, 272, А13, 414, 417 та 418, відповідно, НРРО із 7еа тау5 (ЗЕБО ІЮ Моб5). Таким чином, залежно від довжини НРРО амінокислотної послідовності, що становить інтерес, яка має або додаткові чи менше залишків, ніж послідовність в ЗЕО ІЮ Ме:1, відповідне положення може бути розташоване в положенні, відмінному від положень 188, 189, 215, 335, 336, 339 та 340 в такому НРРО білку, який становить інтерес.
В одному втіленні, НРРО цього винаходу був модифікований включенням одного або більше амінокислотних заміщень, обраних з групи, яка включає: (а) триптофан, гліцин або серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності ІЮ Мо:1; (Б) серин, цистеїн або аргінін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 189 в послідовності ІЮ Мо:1; (с) пролін, серин, гістидин, аланін, гліцин чи глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ІЮ Мое:1; (4) серин чи триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (є) треонін, аланін чи серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (Ї) глутамін, аланін, валін чи глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що 60 відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ЗЕО ІЮ Мео:1; та
(9) лейцин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 215 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО було модифіковано, для того щоб включити амінокислотні заміщення: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ЗЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо:1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
У специфічних втіленнях, НРРО винаходу має щонайменше 53 9о, щонайменше 55 95,
Зо щонайменше 60 о, щонайменше 65 96, щонайменше 7095, щонайменше 75905, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як 5ЕО ІЮ Мо:1, де НРРО було модифіковано включенням амінокислотних заміщень: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:/1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1. бо В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 53 956, щонайменше 55 9о, щонайменше
6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 9о, щонайменше 90 96, щонайменше 91 956, щонайменше 92 965, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як 5ХЕО ІЮО Мо:/1, і де вказаний НРРО включає амінокислотні заміщення: (а) триптофан в амінокислотному положенні 188 і триптофан в амінокислотному положенні 336; або (Б) пролін в амінокислотному положенні 335.
У ще іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 5390, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Мое:63, де НРРО був модифікований включенням амінокислотного (них) заміщення (нь): (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (Б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності «ЕС
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мео:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕОО ІЮО Мо:1, і серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:/1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо:1, і глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
У ще іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 5390, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 9о, щонайменше 94 956, щонайменше 95 956, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Мо:6б4, де НРРО було модифіковано введенням амінокислотних заміщень: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (Б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, і глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в 60 послідовності 5ЕОО ІЮО Мо:1, і серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо:1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
У ще іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 5390, щонайменше 55 95, щонайменше 60 95, щонайменше 65 95, щонайменше 70 95, щонайменше 75 95, щонайменше 80956, щонайменше 8595, щонайменше 9095, щонайменше 9195, щонайменше 92 95, щонайменше 93 95, щонайменше 94 95, щонайменше 95 95, щонайменше 96 9565, щонайменше 97 96, щонайменше 98 95 або щонайменше 99 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Мох6б5, де НРРО було модифіковано включенням амінокислотних заміщень: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (Б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮО Мо:1, і треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮ Мо:/1, ії аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО ІЮО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 53 95, щонайменше 55 9565, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 91 95, щонайменше 92 9565, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Ме:57, або кодується нуклеотидною послідовністю, що має щонайменше 60956, щонайменше 65905, щонайменше 7095, щонайменше 75 95, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 91 9565, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до нуклеотидної послідовності, представленої тут як ХЕО ІЮ Мо:60. НРРО цього втілення можуть також включати амінокислотні заміщення: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, і глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню 60 амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1;
(4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мое:1; аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 53 95, щонайменше 55 9565, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 85 9о, щонайменше 90 96, щонайменше 91 956, щонайменше 92 965, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як 5ЕО ІЮ Мое:58, або кодується нуклеотидною послідовністю, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 75 965, щонайменше 80 9о, щонайменше 85 956, щонайменше 90 956, щонайменше 91 96, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до нуклеотидної послідовності, представленої тут як ХЕО ІЮ Мо:61. НРРО цього втілення можуть також включати амінокислотні заміщення: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ФЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зХЕО ІО Мео:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕСО ІО Мо:1; аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 53 95, щонайменше 55 9565, щонайменше 6096, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 7595, щонайменше 80 95, щонайменше 8595, щонайменше 90 95, щонайменше 91 95, щонайменше 92 9565, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 9695, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Мое:59, або кодується нуклеотидною послідовністю, яка має щонайменше 6095, щонайменше 6595, щонайменше 7095, щонайменше 75 965, щонайменше 80 95, щонайменше 85 95, щонайменше 90 95, щонайменше 91 9565, щонайменше 9295, щонайменше 9395, щонайменше 9495, щонайменше 9595, щонайменше 96 95, щонайменше 97 95, щонайменше 98 95, щонайменше 99 95 або 100 95 ідентичності послідовності до нуклеотидної послідовності, представленої тут як ХЕО ІЮ Мо:62. НРРО цього втілення можуть бо також включати амінокислотні заміщення:
(а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, і глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мое:1; аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 85 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ЗЕО ІЮ Ме:1, де НРРО було модифіковано включенням амінокислотних заміщень: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності «ЕС
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мое:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:/1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ЗЕО
ІО Мео:1; та () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 85 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як 5ЕО ІЮ Мо:1, і де вказаний НРРО включає амінокислотні заміщення: (а) триптофану в амінокислотному положенні 188 та триптофану в амінокислотному положенні 336; або (Б) проліну в амінокислотному положенні 335.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 85 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ХЕО ІЮ Мо:57. НРРО цього втілення може бо також включати амінокислотні заміщення:
(а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ЗЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мое:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:/1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ФЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 85 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як ХЕО ІЮ Мо:58. НРРО цього втілення можуть також включати амінокислотні заміщення: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:/1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зБЕО ІЮ Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:/1, аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕ 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
В іншому втіленні, НРРО винаходу має щонайменше 85 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої тут як БЕО ІО Ме:59. НРРО цього втілення можуть також включати амінокислотні заміщення: (а) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (б) серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню 60 амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО Мо:1, треонін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕСО 10 Мо, і глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мео:1; (с) триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 188 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1, і триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності 5ЕО ІЮ Мо:1; (4) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЗЕ ІЮО Мо:1, серин в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІЮ Мо, і глутамінова кислота в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності зЗЕО ІО Мо:1; (є) пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності БЕО ІЮ Мое:1, триптофан в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕ ІЮО Мое:1; аланін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності ЗЕО 10 Мо, їі глутамін в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО
ІО Мое:1; або () пролін в амінокислотному положенні, яке відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності зЕО ІЮ Мо:1.
Будь-яка НРРО послідовність може бути модифікована введенням одного або більше заміщень, розкритих тут. Наприклад, НРРО винаходу також охоплює будь-які природні бактеріальні, рослинні або тваринні НРРО ферменти, які були модифіковані введенням одного або більше заміщень, описаних 5ирга.
Для отримання НРРО білка цього винаходу, вихідна амінокислотна послідовність існуючого білка має бути модифікована людиною шляхом заміщення щонайменше однієї амінокислоти, як визначено у цій заявці, що найлегше зробити за допомогою модифікації ДНК, кодуючої такий білок, заміщуючи певний кодон іншим кодоном, який кодує іншу амінокислоту.
Типові послідовності НРРО, які можуть бути модифіковані згідно 3 цим винаходом, включають послідовності з бактерій, наприклад, виду Р5епдотопаб5 5р., наприклад
Реєндотопавз Пиогезсепо, або, у противному випадку, ціанобактерій роду Зупеспосубії5.
Послідовність може також мати рослинне походження, зокрема, походити від дводольних рослин, зонтичних рослин, або - від однодольних рослини. Кращі приклади, які можна навести, - це рослини, такі як тютюн, Агарідорзі5, Оаиси5 сагоїа, 7еа тауз (кукурудза), пшениця, ячмінь,
Амепа заїїма, Вгаспіагіа ріатурпуПа, Сепсйигив еспіпагшв, Гоїїшт гідідит, Ревійса агипаїіпасєа,
Зеїагіа їабегі, ЕІеивіпе іпаіса, богаопит, Сепснгив еспіпаїшв5, Тевіиса агпипаіпасеа. Кодуючі послідовності, спосіб їх виділення та клонування, є відомі з рівня техніки або описані тут в іншому місці (напр., зЗЕО ІЮ Ме:63-76). У конкретному втіленні винаходу, НРРО, який може бути модифікований згідно з цим винаходом, має бактеріальне походження, зокрема, з Рхоендотопа» 5р., більш конкретно з Рзепдотопах5 Пиогезсеп5, КПодососси5 5р., Віерпагізта |іаропісит, бЗупеспососси5 5р., Рісгорпйи5 оггіди5, Когаїа аїдісіда або має рослинне походження, включаючи, з Агабідорзіз ІПаійапа, Зогупйшит бБісоїог абоула заїїма, Тийсит аевзіїмит, Ногдеит мУцідаге, І оїїшт гідідит або Амепа заїїма.
Для досягнення мети цього винаходу, НРРО винаходу може також включати наступні модифікації, наприклад, при яких деякі амінокислоти (напр., від 1 до 10 амінокислот) були заміщені, вставлені або видалені з метою клонування, для злиття транзитного пептиду, і т.п., які зберігають НРРО активність, тобто властивість каталізувати перетворення пара- гідроксифенілпірувату до гомогентизату, або може бути будь-який НРРО, який може далі бути покращений. Наприклад, НРРО, який додатково може бути покращений в результаті модифікацій, описаних тут, може бути варіантом НРРО, що походить від Рзхейдотопа5
Пиогезсеп5, наведеним тут як ЗЕО ІЮО Ме:2, варіантом НРРО з Амепа заїїма, наведеним тут як
ЗЕО ІЮО Мое:64, варіантом послідовності НРРО, представленої в будь-якій послідовності ЗЕО ІЮ
Мо:3-326, 383-389, 393, 395 та 397-459 в ММО2012/021785, які включені тут у їх повному обсязі шляхом посилання; послідовності НРРО, представлені в будь-якій послідовності ЗЕО ІЮ Мо:2-14 та 20-50 ММО2011/068567, які включені тут у їх повному обсязі шляхом посилання; послідовності
НРРО, представлені в будь-якій послідовності 5ЕО ІЮО Мое:15-26 заявки М/О2010/085705, які включені тут у їх повному обсязі шляхом посилання; НРРО, що має одне або більше заміщень, описаний в УМО09/144079 або в Патенті США 6,245,968, кожен з яких включений тут у їх повному обсязі шляхом посилання; НРРО, що має одне або більше заміщень, описаних в
Таблицях 1, 2, 5 або 6 УМО2010/085705; та/"або НРРО, що має одне або більше заміщень, описаних в Таблиці 1 ММО2011/068567. 60 У деяких втіленнях нуклеотидна послідовність винаходу (включаючи їх ізольовані,
рекомбінантні та химерні гени, вектори, клітини-господарі, рослини, частини рослин та насіння, які включають нуклеотидну послідовність, амінокислотні послідовності та композиції з них, закодовані нуклеотидною послідовністю, а також способи використання послідовності нуклеїнової кислоти для підвищення стійкості рослин до гербіцидів - інгібіторів НРРО, зокрема, підвищення стійкості до гербіцидів - інгібіторів НРРО класу М-(1,2,5-оксадіазол-3-їл)бензамідів,
М-(тетразол-4-їл)- або /М-(тріазол-3-їл)уарилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3-етокси-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід та 2-Хлоро-3-(метоксиметил)-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, відібраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону) кодує амінокислотну послідовність, наведену в будь-якій одній серед послідовностей ЗЕО ІЮ Мо:3-59, та її фрагменти і варіанти, що кодують стійкість до поліпептиду - гербіциду - НРРО інгібітора. Таким чином, в цьому втіленні, НРРО винаходу включає амінокислотну послідовність, представлену в будь-якій послідовності ЗЕО ІЮ Мо:3-59, та її фрагменти і варіанти, які надають стійкості до гербіцидів - інгібіторів НРРО клітині-господарю.
А. Способи для визначення стійкості до НРРО інгібітора
Будь-який прийнятний спосіб для визначення толерантності до гербіцидів - інгібіторів НРРО може бути використаний для з'ясування послідовності НРРО винаходу. Стійкість може бути визначена шляхом моніторингу здатності клітин чи організму виживати після застосування конкретного гербіциду - НРРО інгібітора, або здатності здійснювати важливі клітинні функції, такі як фотосинтез, синтез білка чи дихання і репродукція у спосіб, який практично не можна відрізнити від необроблених клітин чи організмів, або здатності не мати істотної відмінності врожайності або навіть покращену врожайність для рослин, які було оброблено гербіцидом -
НРРО інгібітором, у порівнянні з такими рослинами, не обробленими таким гербіцидом (або де бур'яни були видалені або їх поява була попереджена за допомогою механізму, який є іншим, ніж застосування гербіциду - НРРО інгібітора). В деяких втіленнях, стійкість може бути визначена за візуальними фенотиповими ознаками клітини чи організму, трансформованих за допомогою нуклеїнової кислоти, яка включає ген, що кодує відповідний НРРО білок, або в
Зо дослідженні НРРО білка іп мійго, у присутності різних концентрацій різних НРРО інгібіторів.
Залежність "доза-ефект" та відносне зміщення цієї залежності, асоційоване з цими показниками фенотипу (утворення коричневого кольору, уповільнення росту, втрата кольору (знебарвлення), гербіцидний ефект тощо) традиційно виражаються в термінах, наприклад, СК50 (концентрація для 50 95 уповільнення росту) або МІС (мінімальна концентрація інгібітора) значеннями, де зростання значень відповідає зростанню властивої толерантності експресованого НРРО, у звичайний спосіб, виходячи з ушкодження рослини, симптомів меристематичного знебарвлення, тощо в інтервалі різних концентрацій гербіцидів. Ці дані можуть бути представлені в термінах, наприклад, СК50 значення походить від кривої залежності доза/ефект, на якому значення "дози" відкладені на осі Х, а значення "відсоток знищених", "гербіцидний ефект", "кількість зелених рослин, що з'являються" тощо, відкладені на осі У, де підвищені ЗК5О0 значення відповідають підвищеним рівням толерантності, властивим експресованому НРРО.
Гербіциди можуть відповідним чином бути застосовані перед появою сходів або після їх появи.
У різних втіленнях скринінг рівня толерантності нуклеїнової кислоти або гена, що кодують
НРРО білок згідно з винаходом, або НРРО білка винаходу може бути здійснений через трансгенез, регенерацію, схрещування, тестове обприскування досліджуваних рослин, таких як тютюн або сільськогосподарські культури, такі як соя чи бавовник. Відповідно до результатів, отриманих внаслідок такого скринінгу, такі рослини є більш толерантними, бажано толерантними до щонайменше у 2 рази більшої від нормальної дози, рекомендованої для застосування у польових умовах, навіть більш переважно толерантними до 4 разів більшої від нормальної дози, рекомендованої для застосування у польових умовах, до НРРО інгібіторів (напр., гербіцидів - НРРО інгібіторів класу М-(1,2,5-оксадіазол-3-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-тллуарилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1- метил-1Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-Хлоро-3-(метоксиметил)-4--(«метилсульфоніл)-М-(1-метил- 1Н-тетразол-5-І)бензамід, трикетонів, такі як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону), ніж такі рослини, що не містять будь-якого екзогенного гена, який кодує НРРО білок, або ніж рослини, які містять ген, що несе референсну
НРРО-кодуючу ДНК, наприклад, НРРО-кодуючу ДНК Агабідорбзіз (Паїйапа, під контролем того ж 60 промотора, що й нуклеїнова кислота, яка кодує НРРО білок винаходу. Відповідно, термін
"здатний підвищувати толерантність рослин до щонайменше одного гербіциду, який діє на
НРРО", означає толерантність рослини, яка експресує НРРО винаходу до щонайменше 2х, або
Зх, або 4х, або більше, нормальної польової дози гербіцида - НРРО інгібітора у порівнянні з рослиною, яка лише експресує ендогенний НРРОБ, або з рослиною, яка експресує референсний
НРРО фермент. У цьому відношенні, термін "гербіцид, який діє на НРРО" не обмежений речовинами, які відомі та/або використовуються як гербіциди, а стосується будь-яких речовин, що інгібують каталітичну активність НРРО білків.
Альтернативно, при кількісному рівні дані типу ріво (рісо-величина означає од значення концентрації інгібітора, необхідного для інгібування 50 95 активності фермента в молярній концентрації) можуть бути отримані для НРРО білка винаходу у порівнянні з послідовністю референсного НРРО у присутності чи за відсутності будь-якого відповідного гербіцида -- інгібітора НРРО.
Специфічним, але необмежуючим, типом кількісного аналізу, що може бути використаний, для того щоб оцінити послідовності НРРО винаходу, є колориметричний аналіз. У цьому аналізі, культуральне середовище УТ-Бргоїй-їуре з 1 95 агарози, 5мММ І-тирозину та 42мМ сукцинату, що містить селективний агент для вектора роЕ420 (Іпмігодеп, Карлсрує, Німеччина) або модифіковану версію рОЕ420 (р5Е420О9(КІ)МХ), розливали в глибокі планшети з комірками.
Культура Е. соїї у фазі експоненціального росту, що містить вектор рРЗЕ420-НРРОХ (НРРОХ означає будь-який ген, який кодує очікуваний НРРО фермент/білок), додається до кожної комірки. Через 16 годин при 37 "С, комірки, які не містять культурального середовища, і ті комірки, до яких додавали культуру Е. соїї, що містить "пустий" вектор рЗЕ420, є прозорими, або ті, до яких додавали культуру Е. соїї, що містить вектор рР5Е420-НРРОХ, що містить ген, який кодує неактивний НРРО, є прозорими; натомість комірки, до яких додавали культуру Е. сої, яка містить вектор рРЗЕ420-НРРОХ, кодуючий активний НРРО, стають коричневими. Раніше було показано, що цей тест відображає НРРО активність, яким би не було походження цієї активності, і дозволяє ідентифікувати НРРО активність (05 6,768,044), тобто на кількісному рівні.
В. Способи введення мутацій в послідовності НРРО
У мутованому НРРО білку, закодованому нуклеїновою кислотою винаходу, щонайменше
Зо одна амінокислота була заміщена, як визначено вище.
Заміщення може бути здійснене у послідовності нуклеїнової кислоти, яка кодує референсний НРРО, як визначено вище, за допомогою будь-яких засобів, що прийнятні для заміщення, у вказаній послідовності, кодон, який кодує амінокислоту, для того щоб бути заміщеним на кодон, який відповідає амінокислоті, що повинна замістисти його, за допомогою вказаних кодонів, широко описана в літературі і добре відома кваліфікованому фахівцеві.
Декілька молекулярно-біологічних методів можуть бути використані для здійснення цього заміщення. Метод для отримання мутованої послідовності нуклеїнової кислоти згідно з винаходом та відповідного білка включає застосування сайт-спрямованого мутагенезу щодо кодонів, які кодують одну або більше амінокислот, обраних заздалегідь. Методи для отримання мутацій із застосуванням сайт-спрямованого мутагенезу добре відомі для кваліфікованих фахівців і широко описані в літературі (зокрема: Оігесієїй Мшиадепебвів: А Ргасіїса! Арргоаси, 1991, Еайей Бу М.). МеРНЕКБОМ, ІК РКЕБ55), або це способи, для яких можна використовувати комерційні набори (наприклад, набір для сайт-спрямованого мутагенезу
ОШІКСНАМСОЕ "М, від Оіадеп). Після сайт-спрямованого мутагенезу, корисно відібрати клітини, які містять мутований НРРО, що є менш чутливим до НРРО інгібітора, з використанням відповідних засобів для скринінгу. Прийнятні методи скринінгу для досягнення цього були описані вище.
Альтернативно, послідовність ДНК, що кодує референсну НРРО, може бути модифікована іп 5ійсо для кодування НРРО білка, який має одне або більше заміщень, викладених тут, і після цього синтезований де помо. Нуклеотидна послідовність, що кодує мутований НРРО білок, може бути введена в клітину-господар, яка тут описується в іншому місці.
А. Ізольовані полінуклеотиди, їх варіанти та фрагменти
У деяких втіленнях, цей винахід включає ізольовані або рекомбінантні полінуклеотиди. "Ізольований" або "рекомбінантний" полінуклеотид чи поліпептид/білок або біологічно активна його частина, як тут визначено, більше не присутня в її оригінальному, нативному організмі, натомість міститься в гетерологічній клітині-осподарі або в трансгенній рослинній клітині, насінні чи рослині. В одному втіленні, "ізольований" полінуклеотид є вільний від послідовностей (наприклад, послідовностей, які кодують білок, чи регуляторних послідовностей), які у природі фланкують нуклеїнову кислоту (тобто, послідовностей, розташованих на 5 і 3'-кінцях бо нуклеїнової кислоти) в геномній ДНК організму, з якого походить полінуклеотид. Термін
"рекомбінантний" охоплює полінуклеотиди чи поліпептиди, з якими відбулись маніпуляції порівняно з нативним полінуклеотидом чи поліпептидом, в результаті чого полінуклеотид або поліпептид відрізняється (напр., за хімічним складом чи структурою) від того, що зустрічається в природі. В іншому втіленні, "ізольований" або "рекомбінантний" полінуклеотид є вільним від внутрішніх послідовностей (тобто інтронів), які у природі мають місце в геномній ДНК організму, з якого полінуклеотид походить. Типовим прикладом такого полінуклеотиду є так звана комплементарна ДНК (кДНК). Наприклад, в різних втіленнях ізольований полінуклеотид, який кодує стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора, може містити менше, ніж приблизно 5 т.п.н., 4 т.п.н., З т.п.н., 2 т.п.н., 1 т.п.н., 0,5 т.п.н. або 0,1 т.п.н. нуклеотидної послідовності, яка природньо фланкує полінуклеотид у геномній ДНК клітин, з яких полінуклеотид походить. Молекули нуклеїнової кислоти винаходу включають ті молекули нуклеїнової кислоти, що кодують НРРО винаходу, включаючи, наприклад, нуклеотидні послідовності, представлені в будь-якій послідовності зЕО ІЮ Мо:60-62.
Цей винахід також передбачає варіанти і фрагменти будь-якої нуклеотидної послідовності, що кодує амінокислотні послідовності, представлені в будь-якій послідовності ЗЕО ІЮ Мо:3-59. "Фрагмент" полінуклеотиду може кодувати біологічно активну частину полінуклеотиду, або він може бути фрагментом, який може бути використаний як гібридизаційний зонд або ПЛР- праймер за допомогою методів, розкритих тут в іншому місці. Полінуклеотиди, які є фрагментами полінуклеотиду, включають щонайменше приблизно 15, 20, 50, 75, 100, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150 суміжних нуклеотидів, або кількість нуклеотидів, присутніх у нативному (повному) поліпептиді, розкритому тут, залежно від призначення використання (напр., НРРО нуклеїнової кислоти, розкритої тут).
Під "суміжними" нуклеотидами розуміють нуклеотидні залишки, які безпосередньо прилеглі один до одного.
Фрагменти полінуклеотидів цього винаходу загалом кодуватимуть поліпептидні фрагменти, які зберігають біологічну активність непроцесованого білка стійкості до гербіциду - НРРО інгібітора; тобто, гербіцидо-толерантну активність. Під "зберігає активність стійкості до гербіциду" розуміють, що фрагмент матиме щонайменше приблизно 3095, щонайменше приблизно 50 95, щонайменше приблизно 7095, щонайменше приблизно 80 95, 85 95, 90 Об,
Зо 9596, 100 95, 110 95, 125 95, 150 95, 175 95, 200 95, 250 9565, щонайменше приблизно 300 95 або більше активності стійкості до гербіциду непроцесованого білка - НРРО інгібітора, розкритого тут як ЗЕО ІЮ Ме:2. Способи для визначення активності стійкості до гербіциду добре відомі з рівня техніки, тут розкриваються типові способи. У необмежуючому прикладі, фрагмент винаходу буде стійким до тієї ж самої дози гербіциду - інгібітора НРРО, або стійким до 2х, Зх, 4х, або вищої дози гербіциду -- інгібітора НРРО, або фрагменти будуть настільки ж стійкими або більш стійкими, виходячи з рібБо або Кі між фрагментом та 5ЕО ІО Мо:2.
Фрагмент полінуклеотиду, який кодує біологічно активну частину полінуклеотиду винаходу, кодуватиме щонайменше приблизно 150, 175, 200, 250, 300, 350 суміжних амінокислот, або навіть загальну кількість амінокислот, присутніх у повному (непроцесованому) полінуклеотиді винаходу. У необмежуючому прикладі, фрагмент полінуклеотиду, який кодує біологічно активну частину полінуклеотиду винаходу, включає одне або більше положень амінокислот 188, 189, 215, 335, 336, 339 та 340 у послідовності БЕО ІЮ Мо:2.
Винахід також охоплює варіанти полінуклеотидів, які описані зирга. "Варіанти" полінуклеотида також включають ті послідовності, які кодують НРРО винаходу, але які відрізняються консервативно через виродженість генетичного коду, а також ті, що є значною мірою ідентичними. Варіанти цього винаходу зберігатимуть ферментативну активність НРРО та стійкість до гербіцидів - інгібіторів НРРО. Термін "значною мірою ідентичний" означає поліпептид або полінуклеотидну послідовність, яка має щонайменше приблизно 60 95 або 65 95 ідентичності послідовності, приблизно 70 95 або 75 95 ідентичності послідовності, приблизно 80 95 або 85 95 ідентичності послідовності, приблизно 90 95, 91 Ор, 92 9», 93 У, 94 Фо, 95 9, 96 9, 97 У, 98 95 або 99 9» ідентичності послідовності при порівнянні з контрольною послідовністю за допомогою однієї з програм вирівнювання з використанням стандартних параметрів. Будь-який фахівець з досвідом роботи зрозуміє, що ці значення можуть бути належним чином пристосовані для визначення відповідної ідентичності поліпептидів, закодованих двома полінуклеотидами, беручи до уваги ввиродженість кодону, амінокислотну подібність, розташування рамки зчитування, тощо.
Бактеріальні гени досить часто мають множинні кодони ініціації метионіну, розташовані близько до стартового кодону відкритої рамки зчитування. Часто ініціація трансляції в одному або більше з цих стартових кодонів приводить до утворення функціонального білка. Ці стартові 60 кодони можуть включати АТО кодони. Однак, бактерії, такі як Васійи5 5р., також розпізнають
СТО кодон як стартовий кодон, і білки, які ініціюють трансляцію в (ТО кодонах, містять метионін як першу амінокислоту. Крім того, часто а ргіогі не визначено, який з цих кодонів використовується в природі у бактерій. Таким чином, зрозуміло, що використання одного з альтернативних кодонів метионіну може призвести до генерування варіантів, які надають стійкості до гербіцидів. Ці стійкі до гербіцидів білюи охоплені цим винаходом і можуть бути використані у способах цього винаходу. Алельні варіанти, які трапляються у природі, можуть бути ідентифіковані за допомогою загальновідомих молекулярно-біологічних методик, таких полімеразно-ланцюгова реакція (ПЛР) та методики гібридизації, як описано нижче. Варіанти полінуклеотидів також включають синтетичні полінуклеотиди, які бути отримані, наприклад, за допомогою сайт-спрямованого мутагенезу або інших статегій мутагенезу, які, однак, кодують поліпептид, що має бажану біологічну активність.
Досвідчений фахівець також має збагнути, що зміни можуть бути введені подальшими мутаціями в полінуклеотидах винаходу, що в результаті призводить до додаткових змін в амінокислотній послідовності закодованих поліпептидів, без зміни біологічної активності поліпептидів. Таким чином, варіанти ізольованих поліпептидів можуть бути створені шляхом введення одного або більшої кількості додаткових нуклеотидних заміщень, вставок або делецій у відповідний поліпептид, що кодує НРРО винаходу, таких як 1-5, 1-10 або 1-15 амінокислотних заміщень, вставок або делецій або 1,2, 3,4, 5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 чи 15 амінокислотних заміщень, вставок або делецій, вводяться у закодований поліпептид. Також мутації можуть бути введені за допомогою стандартних методик, таких як сайт-спрямований мутагенез (сайт- специфічний мутагенез) і ПЛР-опосередкований мутагенез або методик "перетасування" генів.
Такі варіанти полінуклеотидів також охоплені цим винаходом.
Варіанти полінуклеотидів можуть бути отримані шляхом введення мутацій, випадково розташованих уздовж всієї або частини кодуючої послідовності, за допомогою насичуючого мутагенезу або пермутаційного мутагенезу; може бути проведений скринінг отриманих мутантів на здатність надавати активності стійкості до гербіцидів, для ідентифікації мутантів, що зберігають активність.
Додаткові методи для отримання варіантів включають піддавання клітини, яка експресує білок, розкритий тут (або їх бібліотеки), специфічним умовам, що створюють стрес для
Зо активності білка. Специфічні умови можуть включати (але не обмежені ними) зміни температури, зміни рнН та зміни концентрацій субстратів або інгібіторів. Білкова бібліотека може піддаватись цим умовам упродовж часу експресії білка (напр., у Е. соїї або іншому господареві) або наступного створення білкового екстракту, або наступної очистки білка.
Функціональна або ферментативна активність "білкових бібліотек", які піддавались стресовим умовам, можуть після цього порівнюватись з референсним білком, для того щоб ідентифікувати білки з покращеними властивостями. Порівняння активності може бути здійснене як частина скринінгу росту або альтернативно як частина ферментативного аналізу, який кількісно оцінює активність білка. Властивості, що можуть бути ідентифіковані як покращені, включають стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора, зміни кінетичних констант (включаючи Кт, Кі, Мтах), стабільність білка, термостабільність білка або температурного оптимуму білка.
С. Ізольовані білки та їх варіанти і фрагменти
Поліпептиди стійкості до гербіциду також охоплені цим винаходом. Поліпептид стійкості до гербіциду включає препарати поліпептидів, що мають менше, ніж приблизно 30 95, 20 бо, 10 95 або 5 95 (від сухої ваги) поліпептиду, що не має стійкості до гербіцидів (також тут називається як "контамінуючий білок"). У цьому винаході, "білок стійкості до гербіциду" означає розкритий тут
НРРО поліпептид. Забезпечуються також фрагменти, біологічно активні частини та їх варіанти, які можуть бути використані при застосуванні на практиці способів цього винаходу.
Терміни "фрагменти" або "біологічно активні частини" включають фрагменти поліпептидів, що несуть частини амінокислотної послідовності, яка кодує білок стійкості до гербіциду і який зберігає активність стійкості до гербіциду. Біологічно активна частина білка стійкості до гербіциду може являти собою поліпептид, який має, наприклад, 10, 25, 50, 100 або більше амінокислот у довжину. Такі біологічно активні частини можуть бути отримані за допомогою рекомбінантних методик та оцінені щодо стійкості до гербіциду.
Під "варіантами" розуміють білки або поліпептиди, що мають амінокислотну послідовність, яка є щонайменше приблизно на 60 95, 65 95, приблизно 70 95, 75 95, приблизно 80 95, 85 Об, 9096, 91 95, 9295, 9396, 94 95, 9595, 9695, 97 95, 9895 або 9995 ідентичною до будь-якої послідовності зЕО ІЮ Мо:3-59, де вказаний варіант має стійкість до НРРО фермента і стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора. Будь-який досвідчений фахівець в галузі збагне, що ці значення 60 можуть бути належним чином узгоджені для визначення відповідної ідентичності поліпептидів,
закодованих двома полінуклеотидами, беручи до уваги виродженість кодону, подібність амінокислот, положення рамки зчитування, тощо.
Наприклад, консервативні амінокислотні заміщення можуть бути здійснені за одним або більше несуттєвими амінокислотними залишками. "Несуттєвий" амінокислотний залишок - це залишок, який може бути змінений в референсній послідовності поліпептиду без зміни біологічної активності, натомість "незамінний" амінокислотний залишок потрібен для біологічної активності. "Заміщення консервативних амінокислот" полягає в тому, що один амінокислотний залишок заміщується амінокислотним залишком, який має подібний бічний ланцюг. Родини амінокислотних залишків, які мають подібні бічні ланцюги, були визначені з рівня техніки. Такі родини включають амінокислоти з основними бічними ланцюгами (напр., лізин, аргінін, гістидин), кислотними бічними ланцюгами (напр., аспарагінова кислота, глутамінова кислота), незарядженими полярними бічними ланцюгами (напр., гліцин, аспарагін, глутамін, серин, треонін, тирозин, цистеїн), неполярними бічними ланцюгами (напр., аланін, валін, лейцин, ізолейцин, пролін, фенілаланін, метионін, триптофан), бета-розгалуженими бічними ланцюгами (напр., треонін, валін, ізолейцин) та ароматичними бічними ланцюгами (напр., тирозин, фенілаланін, триптофан, гістидин). Амінокислотні заміщення можуть бути здійснені в неконсервативних ділянках, які зберігають функцію. Загалом, такі заміщення не повинні б здійснюватись для консервативних амінокислотних залишків або для амінокислотних залишків в межах консервативного мотиву, де такі залишки є незамінними для поліпептидної активності.
Однак, кожен фахівець в галузі має зрозуміти, що функціональні варіанти можуть мати незначні консервативні або неконсервативні зміни консервативних залишків.
Антитіла до НРРО цього винаходу або до їх варіантів чи фрагментів також охоплені винаходом. Способи отримання антитіл добре відомі в галузі з рівня техніки (див., наприклад,
Напом апа ІГапе (1988) Апііродієв: А І арогаїютгу Мапиаї, Со ріпу Нагбог І арогаюгу, Соїа
Зргіпу Натбог, МУ; Патент США Мо. 4,196,265).
Таким чином, один аспект винаходу стосується антитіл, одноланцюгових антигензв'язуючих молекул або інших білків, які специфічно зв'язуються з однією або більше білковими або пептидними молекулами винаходу та їх гомологами, гібридними (злитими) молекулами або їх фрагментами. У конкретному кращому втіленні, антитіло специфічно зв'язується з білком, який
Зо має амінокислотну послідовність, представлену в ЗЕО ІЮО Мо:3-59, або його фрагментом. В іншому втіленні, антитіло специфічно зв'язується з гібридним білком, що включає амінокислотну послідовність, обрану з амінокислотної послідовності, наведеної в 5ЕО ІЮО Мо:3-59, або його фрагментом.
Антитіла винаходу можуть бути використані для кількісного або якісного виявлення молекул білка або пептиду винаходу, або виявлення посттрансляційних модифікацій білків. Як тут використовується, говорять, що антитіло або пептид "специфічно зв'язується" з білковою чи пептидною молекулою винаходу, якщо таке зв'язування конкурентно не інгібується присутністю неспоріднених молекул. р. Генне "пакетування"
У комерційному виробництві сільськогосподарських культур бажано елімінувати за допомогою надійного пестицидного менеджменту небажані рослини (тобто, "бур'яни") з поля, на якому вирощуються сільськогосподарські рослини. Ідеальною була б обробка, яка б застосовувалась до цілого поля, але б знищувала лише небажані рослини, при цьому рослини сільськогосподарських культур залишались невраженими. Така система обробки повинна була б залучати використання сільськогосподарських рослин, які є толерантними до гербіциду, внаслідок чого гербіцид розбризкується на полі сільськогосподарських рослин, які є толерантними до дії гербіцидів, сільськогосподарські рослини продовжували б процвітати, натомість нетолерантні до дії гербіцидів бур'яни знищуються або серйозно пошкоджуються. В ідеалі такі системи обробки мали б переваги при різних властивостях гербіцидів, внаслідок чого система захисту рослин могла б забезпечити найкращу можливу комбінацію гнучкості та економічності. Наприклад, окремі гербіциди мають різну тривалість життя у польових умовах, деякі гербіциди зберігаються і є ефективними протягом відносно тривалого часу, після того як вони застосовувались; натомість інші гербіциди швидко розпадаються на інші та/або неактивні сполуки. Ідеальна система обробки забезпечувала б використання різних гербіцидів, внаслідок чого виробники сільськогосподарської продукції могли б узгодити вибір гербіцидів для конкретної ситації.
Оскільки низка гербіцидотолерантних сільськогосподарських рослин наразі є комерційно доступною, питання, що виникло для багатьох комерційних гербіцидів і комбінацій гербіцид / сільськогосподарська культура, полягає в тому, що окремі гербіциди здебільшого мають бо неповний спектр активності проти видів бур'янів. Для багатьох окремих гербіцидів, які використовувались протягом певного часу, популяції видів бур'янів, резистентних до гербіцидів, стали більш розповсюдженими (див., напр., Тгапеї апа Мугіднї (2002) Меєйд бсіепсе 50: 700-712;
Омеп апа 7еіауа (2005) Резі Мапад. сі. 61: 301-311). Були описані трансгенні рослини, що є толерантними більше, ніж до одного гербіцида (див., напр., УМО2005/012515). Однак, покращення кожного аспекту виробництва сільськогосподарських рослин, вибір засобів захисту рослин, розширення залишкової боротьби з бур'янами та покращення врожайності сільськогосподарських культур є постійно необхідними.
НРРО білок або нуклеотидна послідовність винаходу переважно комбінуються в рослинах з іншими генами, які кодують білки, або молекулами РНК, які надають корисних агрономічних властивостей таким рослинам. Серед генів, які кодують білки або РНК, що надають корисних агрономічних властивостей трансформованим рослинам, слід згадати послідовності ДНК, що кодують білки, які надають стійкості до одного або більше гербіцидів, які, згідно з їхньою хімічною структурою, відрізняються від гербіцидів - інгібіторів НРРО, та інші, які надають стійкості до певних комах, тим, що надають толерантність до певних захворювань, ДНК, що кодує РНК, яка забезпечує боротьбу з нематодою або комахами-шкідниками, тощо.
Такі гени зокрема описані в опублікованих Заявках на Патент УМО 91/02071, і УМО95/06128 та
Патентах США 7,923,602 та опублікованій Заявці на Патент США Мо 20100166723, кожна з яких включена тут у їх повному обсязі шляхом посилання.
Серед послідовностей ДНК, які кодують білки, що надають стійкості до деяких гербіцидів трансформованим рослинним клітинам або рослинам, слід згадати ген баг або РАТ ген або ген
Зігеріотусев соеїїсоЇог, описані в М/О02009/152359, які надають стійкості до гербіцидів глюфосинатів, ген, який кодує прийнятний ЕРЗР5, який надає стійкості до гербіцидів, для яких
ЕРЗРЗ є мішенню, таких як гліфосат та його солі (05 4,535,060, 05 4,769,061, 05 5,094,945, 5 4,940,835, 005 5,188,642, 05 4,971,908, 005 5,145,783, 05 5,310,667, 005 5,312,910, 005 5,627,061, 5 5,633,435), ген, який кодує гліфосат-п-ацетилтрансферазу (наприклад, 05 8,222,489, 5 8,088,972, 005 8,044,261, 05 8,021,857, 005 8,008,547, 05 7,999,152, 05 7,998,703, 05 7,863,503, 5 7,714,188, 05 7,709,702, 05 7,666,644, ОБ 7,666,643, 05 7,531,339, 05 7,527,955, та 05 7,405,074), або ген, який кодує гліфосатоксидоредуктазу (наприклад, О5 5,463,175).
Серед послідовностей ДНК, що кодують прийнятний ЕРБ5Р5, який надає стійкості до
Зо гербіцидів, що мають ЕРБР5 як мішень, посилання більш конкретно має бути зроблено на ген, що кодує рослинний ЕРБР5, зокрема, ЕРБРЗ кукурудзи, зокрема ЕРБРО кукурудзи, який включає дві мутації, зокрема, мутацію в амінокислотному положенні 102 і мутацію в амінокислотному положенні 106 (МО 2004/074443), і який описаний в Заявці на Патент США 6566587, далі названий як подвійний мутант кукурудзи ЕРБР5 або 2пЕРЗРЗ5Б, або ген, який кодує ЕРБРБ5, виділений з Адгорасіегішт і який описується послідовністю І! Мо. 2 і послідовністю ІЮ Мо. З Патенту США 5,633,435, названий також СРА.
Серед послідовностей ДНК, які кодують прийнятні ЕРОР5, що забезпечують стійкість до гербіцидів, що мають ЕРО5Р5 як мішень, посилання більш конкретно має бути зроблено на ген, що кодує ЕР5РЗ ОКО23 з Агпіпгобасіег діобітогтів, за винятком мутантів ОКО23 АСЕ1, СКО23
АСЕ2 або СКО23 АСЕЗ, зокрема мутантів або варіантів ОКО23, описаних в М/О2008/100353, таких як ЧНОСаЗ(асе3)Н173ЗК в послідовності зЕО ІО Мо. 29 в УМО2008/100353.
У випадку послідовностей ДНК, що кодують ЕРБР5, і більш конкретно, кодують вищезазначені гени, послідовності, яка кодує ці ферменти, передує послідовність, що кодує транзитний пептид, зокрема "оптимізований транзитний пептид", описаний в Патенті США 5,510,471 або 5,633,448.
Типові характерні особливості стійкості до гербіцидів, які можуть комбінуватись з послідовністю нуклеїнової кислоти винаходу, додатково включають щонайменше один інгібітор
АІ 5 (ацетолактатсинтази) (МО 2007/024782); мутований ген АЇ 5/АНАЗ у Агабрідорзі5 (Патент
США 6,855,533); гени, що кодують 2,4-Ю-монооксигеназу, що надає стійкості до 2,4-Ю0 (2,4- дихлорфеноксиоцтової кислоти) в результаті метаболізації (Патент США 6,153,401); і, гени, які кодують Дикамба-монооксигенази, що визначають стійкість до Дикамби (3,б-дихлоро-2- метоксибензойної кислоти) внаслідок метаболізації (США 2008/0119361, і США 2008/0120739).
У різних втіленнях, НРРО винаходу "складається" з одним або більше генами толерантності, включаючи один або більше генів толерантності до гербіцидів - НРРО інгібіторів, та/або один або більше генів толерантності до гліфосату та/або глюфосинату. В одному втіленні, НРРО винаходу комбінується з генами 2тЕРБ5БРЗ5Б та баг.
Серед послідовностей ДНК, що кодують білки, які забезпечують властивості стійкості до комах, на особливу увагу заслуговують білки Ві, широко описані в літературі і добре відомі досвідченим фахівцям у галузі. На увагу також заслуговують білки, екстраговані з бактерій, 60 таких як Рпоїютараив (МО 97/17432 8. МО 98/08932).
Серед таких послідовностей ДНК, що кодують білки винаходу, які надають нових властивостей стійкості до комах, більш конкретно слід згадати Ві Сгу або МІР білки, широко описані в літературі та добре відомі фахівцям з досвідом роботи у галузі. Вони включають
СтуїЕ білок або гібридні білки, які походять від Сту1Е білка (напр., гібридні білки СтутА-СтуїЕ, описані в О5 6,326,169; 05 6,281,016; 05 6,218,188, або їх токсичні фрагменти), білки СтутА- типу або їх токсичні фрагменти, переважно Стгу1Ас білок або гібриди, які походять від СтутАс білка (напр., гібридний СтгутАр-СтуТАс білок, описаний в 05 5,880,275) або СтутАБ чи ВІ2 білок або його інсектицидні фрагменти, описані в ЕР451878, Сту2Ае, Сгу2Аї або СтгугАд білки, описані в М/О02/057664 або їх токсичні фрагменти, СтутА.105 білок, описаний в М/О 2007/140256 (5ЕО
ІЮ Мо. 7) чи їх токсичні фрагменти, МІРЗзАа19 білок з МСВІ інвентарним номером АВО20428,
МІРЗАа20 білок з МОВІ інвентарним номером АВО20429 (5ЕБО ІЮО Мо. 2 в УМО 2007/142840),
МІРЗА білки, що продукуються в бавовнику у подіях СОТ202 СОТ203 (ММО 2005/054479 і УМО 2005/054480, відповідно), Сту білки, описані в М/О01/47952, МІРЗАа білок або його токсичний фрагмент, описаний Евзігисп еї а). (1996), Ргос Майї! Асай 5сі ОБА. 28:93(11):5389-94 та 05 6,291,156, інсектицидні білки із Хепоппарадив (як описано в М/О98/50427), беїтайа (зокрема, з 5. епіоторнйа) або штамів видів Ріоїогпардив, таких як То-білки з Рпоїогпардив, як описано в
УМУО098/08932 (напр., УМаїтегпей еї аї.,, 2001, Аррі Епмігоп Місгобіої. 67(11):5017-24; Рігепен-
Сопвіапі апа Вомеп, 2000, Се! Мої І їе 5сі.; 57(5):828-33). Тут також включений будь-який варіант або мутант будь-якого з цих білків, які відрізняються декількома (1-10, переважно 1-5) амінокислотами з будь-якої з вищезазначених послідовностей, зокрема, з послідовності їх токсичного фрагмента, або які злиті з транзитним пептидом, таким як пластидний транзитний пептид або інший білок чи пептид.
В різних втіленнях, послідовність НРРО винаходу може бути комбінована в рослинах з одним або більше генами, які несть бажані властивості, такі як толерантність до гербіцидів, толерантність до комах, стійкість до посухи, боротьби з нематодою, ефективність використання води, ефективність використання азоту, підвищене харчове значення, резистентність до захворювань, підвищений фотосинтез, підвищена якість волокна, толерантність до стресу, покращене розмноження тощо.
Особливо корисні події генетичної трансформації, які можна комбінувати з генами цього
Ко) винаходу у рослинах того ж виду (напр., шляхом схрещування або ретрансформації рослини, що містить іншу подію генетичної трансформації, за допомогою химерного гена винаходу), включають Подію 531/РУ-ЗНВКО4 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, описана в
УМО2002/040677), Подію 1143-14А (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в М/О 06/128569); Подію 1143-5188 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в МО 06/128570); Подію 1445 (бавовник, толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в Ш5-А 2002-120964 або УМО 02/034946 Подію 17053 (рис, толерантність до гербіцидів депонована як РТА-9843, описана в М/о 10/117737); Подію 17314 (рис, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-9844, описана в УМО 10/117735); Подію 281-24- 236 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як
РТА-6233, описана в УМО 05/103266 або Ш5-А 2005-216969); Подію 3006-210-23 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-6233, описана в И5-А 2007-143876 або УМО 05/103266); Подію 3272 (кукурудза, кількісна характеристика, депонована як РТА-9972, описана в МУО 06/098952 або О5-А 2006-230473);
Подію 33391 (пшениця, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-2347, описана в
УМО2002/027004), Подію 40416 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-11508, описана в УМО 11/075593); Подію 43А47 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА- 11509, описана в МУО 11/075595); Подію 5307 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як АТСС РТА-9561, описана в УМО 10/077816); Подію АБК-368 (польовиця, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-4816, описана в О5-А 2006-162007 або
МО 04/053062); Подію В16 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в
И5Б-А 2003-126634); Подію ВРБЗ-СМ127-9 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як
МСІМВ Мо 41603, описана в УМО 10/080829); Подію ВІ К1 (олійний ріпак, відновлення чоловічої стерильності, депонована як МСІМВ 41193, описана в У/О2005/074671), Подію СЕ43-67В (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як О5БМ АСС2724, описана в О5-А 2009-217423 або УМО 06/128573); Подію СЕ44-690 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в 05-А 2010-0024077); Подію СЕ44-690 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в УМО 06/128571); Подію СЕ46-02А (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в М/О 06/128572); Подію СОТ102 60 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в Ше-А 2006-130175 або
УМО 04/039986); Подію СОТ202 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в 05-А 2007-067868 або М/О 05/054479); Подію СОТ203 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в УУО 05/054480)3; Подію ОА521606-3 / 1606 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11028, описана в МУМО2012/033794), Подію радза40278 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-10244, описана в
УМО 11/022469); Подію ЮА5-44406-6 / ррдівВ8264.44.06.1 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11336, описана в М/О2012/075426), Подію ОА5З-14536-7 /РАВВ8291.45.36.2 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11335, описана в МО2012/075429), Подію радБ-59122-7 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСОС РТА 11384, описана в Ш5-А 2006-070139); Подію ОА5-59132 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в УМО 09/100188); Подію ЮА568416 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА- 10442, описана в МО 11/066384 або М/О 11/066360); Подію ОР-098140-6 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-8296, описана в Ш5-А 2009-137395 або
УМО 08/112019); Подію ОР-305423-1 (соя, кількісна характеристика, не депонована, описана в
И5Б-А 2008-312082 або УМО 08/054747); Подію ОР-32138-1 (кукурудза, система гібридизації, депонована як АТСС РТА-9158, описана в О5-А 2009-0210970 або УМО 09/103049); Подію ОР- 356043-5 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-8287, описана в О5-А 2010-0184079 або МО 08/002872); Подію ЕЕ-1 (баклажан, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в УМО 07/091277); Подію РІ117 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 209031, описана в О5-А 2006-059581 або МО 98/044140); Подію ЕС72 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11041, описана в М/МО2011/063413), Подію
СА21 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 209033, описана в Ш5-А 2005-086719 або УМО 98/044140); Подію (050525 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 209032, описана в Ш5-А 2005-188434 або МО 98/044140); Подію СНВ119 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС
РТА-8398, описана в УМО 08/151780); Подію СНВО614 (бавовник, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-6878, описана в О5-А 2010-050282 або УМО 07/017186); Подію (3911 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 209030, описана в Ш5Б-А 2005-
Зо 188434 або УМО 98/044140); Подію М 213 (цукровий буряк, резистентність до вірусів, депонована як МСІМВ-41601, описана в УМО 10/076212); Подію ІН7-1 (цукровий буряк, толерантність до гербіцидів, депонована як МСІМВ 41158 або МСІМВ 41159, описана в О5-А 2004-172669 або УМО 04/074492); Подію ООРІІМІ (пшениця, стійкість до захворювань, не депонована, описана в 05-А 2008-064032); Подію 11/27 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як МСІМВ41658, описана в МО 06/108674 або О5-А 2008-320616); Подію 1 І 55 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як МСІМВ 41660, описана в УМО 06/108675 або О5-А 2008-196127); Подію ІІ сойоп25 (бавовник, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС
РТА-3343, описана в УМО 03/013224 або И5-А 2003-097687); Подію І1ІКІСЕОб (рис, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 203353, описана в 05 6,468,747 або УМО 00/026345); Подію ГІ КІСЕб62 (рис, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС 203352, описана в УМО2000/026345), Подію ГІ КІСЕбОЇ (рис, толерантність до гербіцидів, депонована як
АТОСС РТА-2600, описана в О5-А 2008-2289060 або УМО 00/026356); Подію І М038 (кукурудза, кількісна характеристика, депонована як АТСС РТА-5623, описана в ШВ-А 2007-028322 або УМО 05/061720); Подію МІК162 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як РТА- 8166, описана в О5-А 2009-300784 або УМО 07/142840); Подію МІКбО4 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в Ш5В-А 2008-167456 або УМО 05/103301); Подію
МОМ15985 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як АТСС РТА-2516, описана в Ш5-А 2004-250317 або МО 02/100163); Подію МОМ810 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в Ш5-А 2002-102582); Подію МОМ863 (кукурудза,
БО боротьба з комахами-шкідниками, депонована як АТСС РТА-2605, описана в МО 04/011601 або
И5Б-А 2006-095986); Подію МОМ87427 (кукурудза, контроль запилення, депонована як АТОС
РТА-7899, описана в УМО 11/062904); Подію МОМ87460 (кукурудза, стресотолерантність, депонована як АТСС РТА-8910, описана в УМО 09/111263 або 0О5-А 2011-0138504); Подію
МОМ87701 (соя, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як АТСС РТА-8194, описана в
И5Б-А 2009-130071 або УМО 09/064652); Подію МОМ87705 (соя, кількісна характеристика - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-9241, описана в 5-А 2010-0080887 або
МО 10/037016); Подію МОМ87708 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА- 9670, описана в УМО 11/034704); Подію МОМ87 712 (соя, врожайність, депонована як РТА-10296, описана в УМО2012/051199), Подію МОМ87 754 (соя, кількісна характеристика, депонована як 60 АТОСС РТА-9385, описана в МО 10/024976); Подію МОМ87769 (соя, кількісна характеристика,
депонована як АТСС РТА-8911, описана в Ш5-А 2011-0067141 або МО 09/102873); Подію
МОМ88017 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-5582, описана в Ш5-А 2008-028482 або УМО 05/059103); Подію
МОМ88913 (бавовник, толерантність до гербіцидів, депонована як АТС РТА-4854, описана в
МО 04/072235 або 05-А 2006-059590); Подію МОМ88302 (олійний ріпак, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-10955, описана в УМО2011/153186), Подію МОМ88701 (бавовник, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11754, описана в М/02012/134808), Подію
МОМ89034 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, депонована як АТСС РТА-7455, описана в МО 07/140256 або 05-А 2008-260932); Подію МОМ89788 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як АТОС РТА-6708, описана в О5-А 2006-282915 або УМО 06/130436);
Подію М511 (олійний ріпак, контроль запилення - толерантність до гербіцидів, депонована як
АТОСС РТА-850 або РТА-2485, описана в УМО 01/031042); Подію М58 (олійний ріпак, контроль запилення - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-730, описана в МО 01/041558 або 05-А 2003-188347); Подію МКбОЗ (кукурудза, толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-2478, описана в О5-А 2007-292854); Подію РЕ-7 (рис, боротьба з комахами-шкідниками, не депонована, описана в МО 08/114282); Подію КЕЗ (олійний ріпак, контроль запилення - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-730, описана в УМО 01/041558 або Ш5-А 2003-188347); Подію КТ7З (олійний ріпак, толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в УМО 02/036831 або 05-А 2008-070260); Подію 5УНТОНІ2 / 5УМ-000Н2-5 (соя, толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11226, описана в МУО2012/082548), Подію
Т227-1 (цукровий буряк, толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в М/О 02/44407 або 0О5-А 2009-265817); Подію Т25 (кукурудза, толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в И5-А 2001-029014 або УМО 01/051654); Подію 7304-40 (бавовник, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-8171, описана в
И5Б-А 2010-077501 або УМО 08/122406); Подію Т342-142 (бавовник, боротьба з комахами- шкідниками, не депонована, описана в М/О 06/128568); Подію ТС1507 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, не депонована, описана в Ш5-А 2005- 039226 або УМО 04/099447); Подію МІР1034 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як АТСС РТА-3925, описана в УМО 03/052073), Подію
Зо 32316 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11507, описана в УМО 11/084632), Подію 4114 (кукурудза, боротьба з комахами- шкідниками - толерантність до гербіцидів, депонована як РТА-11506, описана в МО 11/084621),
Подію ЕЕ-СМЗ / ЕО72 (соя, толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо РТА-11041,
УМО2011/063413А2), Подію ОА5-68416-4 (соя, толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо
РТА-10442, УМО2011/066360А1), Подію ЮСА5-68416-4 (соя, толерантність до гербіцидів, АТСС
Інвентарний Ме РТА-10442, У/О2011/066384А1), подію ЮР-040416-8 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, АТСС Інвентарний Мо РТА-11508, М/О2011/075593А1), подію ОР-043А47-
З (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, АТСС Інвентарний Мо РТА-11509,
УМО2011/075595А1), подію ЮОР-004114-3 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, АТСС
Інвентарний Ме РТА-11506, УМО2011/084621А1), подію ЮР-032316-8 (кукурудза, боротьба з комахами-шкідниками, АТСС Інвентарний Мо РТА-11507, УМО2011/084632А1), подію МОМ-88302- 9 (олійний ріпак, толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо РТА-10955,
МО2011/153186А1), подію ОА5-21606-3 (соя, толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо
РТА-11028, УМО2012/033794А2), подію МОМ-87712-4 (соя, кількісна характеристика, АТСС
Інвентарний Мо. РТА-10296, УМО2012/051199А2), подію ОБАБ5-44406-6 (соя, "пакетована" толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо. РТА-11336, ММО2012/075426А1), подію ЮСАЗ- 14536-7 (соя, "пакетована" толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний Мо. РТА-11335,
МО2012/075429А1), подію 5'ЄМ-000Н2-5 (соя, толерантність до гербіцидів, АТСС Інвентарний
Мо. РТА-11226, М/02012/082548А2), подію ОР-061061-7 (олійний ріпак, толерантність до гербіцидів, Мо депозиту відсутній, ММО2012071039А1), подію ОР-073496-4 (олійний ріпак, толерантність до гербіцидів, Мо депозиту відсутній, О52012131692), подію 8264.44.06.1 (соя, "пакетована" толерантність до гербіцидів, Інвентарний Мо РТА-11336, УМО2012075426А2), подію 8291.45.36.2 (соя, "пакетована" толерантність до гербіцидів, Інвентарний Мо РТА-11335,
УМО2012075429А2), подію 5УНТОН2 (соя, АТСС Інвентарний Мо. РТА-11226,
УМО2012/082548А2), подію МОМ88701 (бавовник, АТСС Інвентарний Мо РТА-11754,
УММО2012/134808А1), подію КК179-2 (люцерна АТСС Інвентарний Мо /РТА-11833,
УММО2013003558А1), подію рраАВ8264.42.32.1 (соя, "пакетована" толерантність до гербіцидів,
АТСС Інвентарний Мо РТА-11993, УМ/О2013010094А1), подію М2ОТО9М (кукурудза, АТСС
Інвентарний Ме РТА-13025, МО2013012775А1). бо Е. Полінуклеотидні конструкції
Полінуклеотиди, які кодують НРРО поліпептиди цього винаходу, можуть бути модифіковані отриманням або посиленням експресії в рослинних клітинах. Полінуклеотиди, які кодують ідентифіковані тут поліпептиди, можуть бути забезпечені в експресійних касетах для експресії в рослині, яка становить інтерес. "Касета для експресії в рослині" включає конструкцію ДНК, включаючи конструкцію рекомбінантної ДНК, яка здатна призводити до експресії полінуклеотида в клітині. Касета може включати в 5-3 напрямку транскрипції, ділянку ініціації транскрипції (тобто, промотор, зокрема, гетерологічний промотор), функціонально зв'язану з одним або більше полінуклеотидами винаходу, та/або ділянку термінації транскрипції і трансляції (тобто, ділянку термінації), функціональну в рослинах. Касета додатково може містити щонайменше один додатковий полінуклеотид для введення в організм, такий як ген маркера селекції.
Альтернативно, додатковий полінуклеотид (и) може бути забезпечений в декількох касетах для експресії. Така експресійна касета забезпечується з багатьма рестрикційними сайтами для інсерції полінуклеотида (ів) під транскрипційною регуляцією регуляторних ділянок.
У наступному втіленні цей винахід стосується химерного гена, який включає кодуючу послідовність, що містить гетерологічну нуклеїнову кислоту винаходу, функціонально зв'язану з промотором, який експресується в рослині, та необов'язково з ділянкою термінації транскрипції та полі«аденилювання. "Гетерологічний", як правило, стосується полінуклеотиду або поліпептиду, який не є ендогенним для клітини або не є ендогенним стосовно локалізації нативного геному, в якому він присутній, і додавався до клітини шляхом інфекції, трансфекції, мікроін'єкції, електропорації, мікропроекції тощо. Під "функціонально зв'язаний" розуміють функціональний зв'язок між двома полінуклеотидами. Наприклад, якщо промотор функціонально зв'язується з послідовністю ДНК, промоторна послідовність ініціює та скеровує транскрипцію послідовності ДНК. Було з'ясовано, що функціонально зв'язані полінуклеотиди можуть бути суміжними або ні, при посиланні на з'єднання двох ділянок кодуючих поліпептидів, поліпептиди експресуються в тій же рамці зчитування.
Промотором може бути будь-яка полінуклеотидна послідовність, яка виявляє транскрипційну активність в обраних рослинних клітинах, частинах рослин або рослинах.
Промотор може бути нативним або аналогічним, чи чужорідним або гетерологічним щодо рослини-господаря та/або послідовності ДНК винаходу. Якщо промотор є "нативним" або
Зо "аналогічним" щодо клітини-господаря, це означає, що промотор виявлений у природній рослині, в яку промотор вводиться. Якщо промотор є "чужорідний" або "гетерологічний" стосовно послідовності ДНК винаходу, це означає, що промотор не є природним або таким, що трапляється у природі промотором, для функціонально зв'язаних послідовностей ДНК винаходу. Промотори можуть бути індуцибельними або конститутивними. Вони можуть бути природними, можуть складатись із частин різних промоторів, які зустрічаються у природі, або можуть бути частково або повністю синтетичними. Інструкція для конструювання промоторів забезпечується дослідженнями структури промоторів, такими як Нагіеу апа Кеупоїд5 (1987)
Мисієїс Асідб5 Ве5. 15:2343-2361. Положення промотора може також бути оптимізоване по відношенню до сайту ініціації транскрипції. Див., напр., Кобегів еї аї. (1979) Ргос. Маї!. Асай. 5бі.
ИБА, 76:760-764. Багато прийнятних промоторів для використання у рослинах є добре відомі з рівня техніки у галузі.
Наприклад, прийнятні конститутивні промотори для використання у рослинах включають: промотори від вірусів рослин, такі як промотор каулімовірусу хлоротичної строкатості арахісу (РСІЗМ) (0.5. Раї. Мо. 5,850,019); 355 промотор з вірусу мозаїки цвітної капусти (Саму) (сбаві! єї а!. (1985) Маїшге 313:810-812); промотори генів метилтрансферази вірусу СпіогеПа (0.5. Раї. Мо. 5,563,328) та повний (непроцесований) промотор транскрипції вірусу мозаїки ранника (ЕММ) (0.5. Раї. Мо. 5,378,619); промотори з таких генів, як ген актину рису (МеЕїЇгоу еї аї. (1990) Ріапі
Сеї! 2:163-171, і Патент США 5,641,876); убіквітину (Спгібіепзеп еї аІ. (1989) Ріапі Мої. Віої!. 12:619-632 апа СнНгізієпзеп еї аї. (1992) Ріапі Мої. Вісі. 18:675-689); РЕМИ (І аві єї аї. (1991)
ТАиеог. Аррі. Сепеї. 81:581-588); МА5 (Мепцеп еї аї. (1984) ЕМВО 4. 3:2723-2730 і Патент США 5,510,474); гістону НЗ кукурудзи (І ереїй еї а!. (1992) Мої. Сеп. Сепеї. 231:276-285 і Агапаззома еї а!. (1992) Ріапі 9. 2(3):291-300); Вгаззіса пари АГ 53 (РСТ арріїсайоп УМО 97/41228); гену малої субодиниці рибулозо-біросфаткарбоксилази/оксигенази (КиВізСО); цирковірусу (ХО 689 311) або вірусу мозаїки жилок маніока (касави) (СЄММУМ, 05 7,053,205); і промотори різних генів Адгобасієегішт (див. Патенти США МоМо 4,771,002; 5,102,796; 5,182,200; апа 5,428,147).
Прийнятні індуцибельні промотори для використання у рослинах включають: промотор з
АСЕ1 системи, системи, що реагує на мідь (Мей еї аІ. (1993) РМАБ5 90:4567-4571); промотор гена Іп2 кукурудзи, який реагує на сафенери до бензол-сульфонамідного гербіциду (НегеПеу еї а. (1991) Мої. Сеп. Сепеїйсв 227:229-237 апа Саї» еї аї. (1994) Мої. Сеп. Сепеїйсв 243:32-38); та бо промотор Теї-репресора з Тп10 (Саї; еї а). (1991) Мої. беп. Сепеї. 227:229-237). Інший індуцибельний промотор для використання у рослинах - це промотор, який відповідає на індукуючий чинник, на який рослини зазвичай не реагують. Типовий індуцибельний промотор цього типу являє собою промотор гена стероїдного гормона, транскрипційна активність якого індукується глюкокортикостероїдним гормоном (5спепа еї аї. (1991) Ргос. Май. Асад. Зсі. ОБА 88:10421) або остання заявка на химерний активатор транскрипції, ХМЕ, для використання в естроген-індуцибельній системі експресії в рослинах, яка активується естрадіолом (2ц0о еї аї. (2000) Ріапі 9., 24:265-273). Інші індуцибельні промотори для використання у рослинах описані в
ЕР 332104, РСТ УМО 93/21334 та РСТ УМО 97/06269, які включені тут шляхом посилання у повному обсязі. Промотори складаються з частин інших промоторів; також можуть бути використані частково або повністю синтетичні промотори. Див. напр., Мі еї аї. (1995) Ріапі .. 7:661-676 та РСТ УМО 95/14098, які описують такі промотори для використання у рослинах.
В одному втіленні цього винаходу, послідовність промотора, специфічна для конкретних ділянок або тканин рослин, може бути використана для експресії НРРО білків винаходу, таких як промотори, специфічні для насіння (ОЮОайа, К. еї аї., 1997, Віоїесппоіоду Апп. Кеум. 3, 269-296), насамперед промотор гена напіну (ЕР 255 378 Ат), промотор гена фазеоліну, промотор гена глютеніну, промотор гена геліантину (МО 92/17580), промотор гена альбуміну (М/О 98/45460), промотор гена олеосину (МО 98/45461), БАТ1 промотор або ЗАТЗ промотор (РСТ/О598/06978).
Також може бути використаний індуцибельний промотор, переважно обраний з фенілаланін- амоній-ліази (РАГ), НМОа-СоА редуктази (НМ), хітинази, глюканази, інгібітора протеїнази (РІ), гена родини РК, нопалінсинтази (по5) та м5рВ промоторів (5 5 670 349, Таблиця 3), НМО2 промотора (05 5 670 349), промотор бета-галактозидази яблука (АВОС1) та промотор аміноциклопан-карбоксилат-синтази яблука (АСС синтази) (МО 98/45445). Численні промотори можуть бути використані в конструкціях винаходу, включаючи їх розташування у певній послідовності (підряд).
Промотори можуть включати або бути модифіковані включенням одного або більше енхансерних елементів. У деяких втіленнях, промотор може включати багато енхансерних елементів. Промотори, які містять енхансерні елементи, забезпечують вищі рівні транскрипції у порівнянні з промоторами, які їх не включають. Прийнятні енхансерні елементи для використання у рослинах включають РСІЗМ енхансерний елемент (Патент США Мо 5,850,019),
Самм 355 енхансерний елемент (Патент США МоМо 5,106,739 і 5,164,316) і ЕММ енхансерний елемент (Маїйї еї аІ. (1997) Тгтапздепіс Не5. 6:143-156); активатор трансляції вірусу мозаїки тютюну (ТММ), описаний в Заявці УМО 87/07644, або вірусу "гравірування" тютюну (ТЕМ), описаний Сагтіпдіоп 8. Ргеєа 1990, 9. МігоІ. 64: 1590-1597, наприклад, або інтрони, такі як аан!1 інтрон кукурудзи або інтрон 1 гену актину рису. Див. також РСТ УМО 96/23898, ММО2012/021794,
УМО2012/021797, ММО2011/084370 ії ММО2011/028914.
Часто такі конструкції можуть містити 5- та 3' нетрансльовані ділянки. Такі конструкції можуть містити "сигнальну послідовність" або "лідерну послідовність", для того щоб сприяти котрансляційному або посттрансляційному транспорту пептиду винаходу до певних внутрішньоклітинних структур, таких як хлоропласт (чи інші пластиди), ендоплазматичний ретикулум, або апарат Гольджі, або забезпечити секрецію. Наприклад, конструкція може бути сконструйована таким чином, що включає сигнальний пептид, для того щоб сприяти перенесенню пептиду до ендоплазматичного ретикулуму. Під "сигнальною послідовністю" розуміють послідовність, що є відомою або, як очікується, такою, що призведе до котрансляційного або посттрансляційного пептидного транспорту через клітинну мембрану. В еукаріотів це типово включає секрецію в апарат Гольджі, тоді як у деяких випадках це призводить до глікозилювання. Під "лідерною послідовністю" розуміють будь-яку послідовність, що при трансляції призводить до утворення амінокислотної послідовності, достатньої для ініціації котрансляційного транспорту пептидного ланцюга до субклітинних органел. Таким чином, це включає лідерні послідовності, які ініціюють транспорт та/або глікозилювання шляхом перенесення в ендоплазматичний ретикулюм, перенесення до вакуолей, пластид, включаючи хлоропласти, мітохондрії тощо. Більш бажаним було сконструювати рослинну експресійну касету, яка містить інтрон, такий як мРНК, процесинг інтрона потрібний для експресії.
Під "З-ч-етрансльованою ділянкою" розуміють полінуклеотид, розташований нижче рамки зчитування кодуючої послідовності ("даунстрім"). Сигнальні послідовності поліаденілювання та інші послідовності, які кодують регуляторні сигнальні послідовності, здатні впливати на сигнальні послідовності поліаденілювання та інші послідовності, які кодують регуляторні сигнальні послідовності, здатні впливати на додавання частин поліаденілової кислоти до 3'- кінців прекурсора мРНК, являють собою 3'-нетрансльовані ділянки. Під "5" нетрансльованою ділянкою розуміють полінуклеотид, розташований вище рамки зчитування кодуючої бо послідовності ("апстрім").
Інші "апстрім" або "даунстрім" нетрансльовані елементи включають енхансери. Енхансери - це полінуклеотиди, які діють для того, щоб підвищити експресію промоторної ділянки.
Енхансери добре відомі в галузі та включають, але не обмежені ними, енхансерну ділянку 5М40 та енхансерний елемент 355.
Ділянка термінації транскрипції може бути нативною з ділянкою ініціації транскрипції, може бути нативною з послідовністю цього винаходу, або може бути похідною з іншого джерела.
Традиційно ділянки термінації є доступними з Ті-плазмід А. шптегасіеп5, таких як ділянки термінації октопінсинтази або нопалінсинтази. Див. також Спцегіпеаи еї аі). (1991) Мої. сеп.
Сепеї. 262:141-144; Ргоцагтоої (1991) Сеї! 64:671-674; Запіасоп еї а. (1991) Сепев5 Оем. 5:141- 149; Модеп евї а). (1990) Ріапі СеїІ 2:1261-1272; Мипговє вї а. (1990) Сепе 91:151-158; ВаїІаз єї аї. (1989) Мисівіс Асід5 Невз. 17:7891-7903; Чдов5пі єї аї. (1987) Мисієїс Асій Не5. 15:9627-9639; та
Європейську Заявка на Патент ЕР 0 633 317 А1.
В одному втіленні винаходу, синтетичні послідовності ДНК створюються для заданого поліпептиду, такого як поліпептиди винаходу. Експресія відкритої рамки зчитування синтетичної послідовності ДНК в клітині призводить до утворення поліпептиду винаходу. Синтетичні послідовності ДНК можуть використовуватись для простого видалення небажаних сайтів ендонуклеазної рестрикції, для того щоб сприяти стратегії клонування ДНК, для того щоб змінювати чи видаляти будь-який потенційний кодон біа5, змінювати або покращувати вміст С, видаляти або змінювати альтернативні рамки зчитування, та/"або змінювати або видаляти інтрон /«екзон сплайсингу сайтів розпізнавання, сайти поліаденілювання, послідовності Шайн-
Далгарно, небажані елементи промотора, і т.п., які можуть бути присутні в нативній послідовності ДНК. Також можливо, що синтетичні послідовності ДНК можуть бути використані для введення інших покращень в послідовність ДНК, таких як введення інтрону, створення послідовності ДНК, яка експресується як білок, злитий з цільовими послідовностями органел, такими як хлоропластні транзитні пептиди, цільові пептиди апопласту/вакуоль або пептидні послідовності, які призводять до утримування отриманого петиду в ендоплазматичному ретикулумі. Синтетичні гени можуть також бути синтезовані за допомогою кодонів, які надають преференції певному типу клітин-господарів для покращеної експресії або можуть бути синтезовані з використанням кодонів з частотою використання кодонів, які надають преференції
Зо певному типу клітин-господарів. Див., наприклад, СатррбеїЇ апа Сом/гі (1990) Ріапі Рпузіої. 92:1- 11; Патент США МоМо 6,320,100; 6,075,185; 5,380,831; апа 5,436,391, опубліковані заявки на
Патент США МоМо 20040005600 та 20010003849, та Миггау еї аїЇ. (1989) Мисіеїс Асіаз Кезв. 17:477-498, включені тут у вигляді посилань.
В одному втіленні, полінуклеотиди, які становлять інтерес, скеровуються до хлоропласту для експресії. У такий спосіб, коли полінуклеотид винаходу безпосередньо не вставляється у хлоропласт, експресійна касета додатково має містити полінуклеотид, який кодує транзитний пептид для спрямування цільового нуклеотиду до хлоропластів. Такі транзитні пептиди відомі в галузі з рівня техніки. Див., наприклад, Моп Неїпе сеї аї. (1991) Ріапі Мої. Віої. Кер. 9:104-126;
Сіатк еї а)ї. (1989) У). Віої. Снет. 264:717544-17550; ОеМПа-Сіорра еї а. (1987) Ріапі Рнпузіої. 84:965- 968; Вотег еї аї. (1993) Віоспет. Віорпуз. Не5. боттип. 196:1414-1421; і пап еї аї. (1986)
Зсіепсе 233:478-481.
Полінуклеотиди, які становлять інтерес, для доставки до хлоропластів, можуть бути оптимізовані для експресії в хлоропластах, для того щоб врахувати відмінності у використанні кодону між ядром рослини та цими органелами. У такий спосіб полінуклеотиди, які становлять інтерес, можуть бути синтезовані за допомогою кодонів хлоропластів. Див., наприклад, Патент
США Мо 5,380,831, включений тут шляхом посилання.
Ця рослинна експресійна касета може бути вставлена у вектор для трансформації рослин.
Під "вектором для трансформації" розуміють молекулу ДНК, яка робить можливою трансформацію клітини. Така молекула може складатись з однієї або більше експресійних касет, і може утворювати структуру більше ніж з однією молекулою векторної ДНК. Наприклад, бінарні вектори являють собою вектори для трансформації рослин, які використовують два несуміжні ДНК вектори, для того щоб кодувати всі необхідні цис- і трансактивуючі функції для трансформації рослинних клітин (НеПеп5 апа Миїїпеаих (2000) Тгепаз іп Ріапі Зсіепсе 5:446- 451). "Вектор" стосується полінуклеотидної конструкції, сконструйованої для перенесення між різними клітинами-господарями. "Експресуючий вектор" стосується вектора, який має здатність вбудовувати, інтегрувати та експресувати гетерологічні послідовності ДНК або їх фрагменти в чужорідну клітину.
Вектор для трансформації рослин включає один або більше ДНК векторів для здійснення трансформації рослин. Наприклад, це загальна практика в галузі - використання векторів для бо трансформації рослин, які включають більше, ніж один суміжний сегмент ДНК. У галузі ці вектори часто називаються як бінарні вектори. Бінарні вектори, а також вектори з хеллперними плазмідами найчастіше використовуються для Адгорасіегіит-опосередкованої трансформації, де розмір та складність сегментів ДНК, які потрібні для досягнення ефективної трансформації, сегменти ДНК, потрібні для досягнення ефективної трансформації, є досить великими, тому має переваги розділення функцій між окремими молекулами ДНК. Бінарні вектори, як правило, містять плазмідний вектор, який містить сіб5-активні послідовності, потрібні для перенесення Т-
ДНК (таких як лівосторонні і правосторонні), селективний маркер, який конструюється, для того щоб бути здатним для експресії в рослинній клітині, та "полінуклеотид винаходу" (полінуклеотид, сконструйований для експресії в рослинній клітині, для якої бажана генерація (розмноження) трансгенних рослин). Також у цьому плазмідному векторі присутні послідовності, потрібні для бактеріальної реплікації. Сіб-активні послідовності розташовані у спосіб, який робить можливим ефективне перенесення в рослинні клітини та експресію в них. Наприклад, послідовність селективного маркера та послідовність винаходу локалізуються між лівим та правим краями. Часто другий плазмідний вектор містить трансактивуючі чинники, які опосередковують перенесення Т-ДНК від Адгобасіегішт до рослинних клітин. Ця плазміда часто несе вірулентні функції (Міг гени), які дозволяють інфікування рослинних клітин Адгобасіегіипт, і перенесення ДНК за допомогою розщеплення в крайніх послідовностях та міг-опосередковане перенесення ДНК, як зрозуміло з рівня техніки (НеїПеп5 апа Миїїпеаих (2000) Тгепаз іп Ріапі
Зсіепсе, 5:446-451).
Для трансформації рослин можуть бути використані декілька типів штамів Адгобасіегійт (напр., ВА4404, 5МУ3101, ЕНАТО1, ЕНАТ0О5, тощо). Другий плазмідний вектор не є необхідним для введення полінуклеотидів в рослини за допомогою інших способів, таких як мікроїін'єкція, мікропроекція, електропорація, поліетиленгліколь-опосередкована трансформація, тощо. 1.1 ГЕ. Трансформація рослин
Способи винаходу стосуються введення нуклеотидної конструкції в рослину. Під "введенням" розуміють надання рослині нуклеотидної конструкції у такий спосіб, що конструкція отримує доступ до внутрішньої частини рослинної клітини. Способи винаходу не потребують використання конкретного способу введення рослині нуклеотидної конструкції, лише якщо нуклеотидна конструкція отримує доступ до внутрішньої частини щонайменше однієї клітини
Зо рослини. Способи введення нуклеотидних конструкцій в рослини відомі в галузі техніки, включаючи, але не обмежуючись, способи стабільної трансформації, способи тимчасової трансформації та вірус-опосередковані способи.
Див., наприклад, способи для трансформації рослинних клітин та регенерації рослин, описані в: О5 4,459,355, 05 4,536,475, 05 5,464,763, 05 5,177,010, 005 5,187,073, ЕР 267,159 А1,
ЕР 604 662 АТ, ЕР 672 752 АТ, 05 4,945,050, 005 5,036,006, 05 5,100,792, 05 5,371,014, 05 5,478,744, 005 5,179,022, 05 5,565,346, 05 5,484,956, 05 5,508,468, 05 5,538,877, 05 5,554,798, 5 5,489,520, 05 5,510,318, 05 5,204,253, 05 5,405,765, ЕР 442 174 АТ, ЕР 486 233 АТ, ЕР 486 234 А1, ЕР 539 563 А1, ЕР 674 725 А1, УМО 91/02071, МО 95/06128, та МО2011/095460, кожен з яких включений тут шляхом посилання, зокрема, стосовно методів трансформації, описаних тут.
Загалом, способи трансформації рослин передбачають перенесення гетерологічної ДНК в рослинні клітини-мішені (напр., незрілі та зрілі зародки, суспензійні культури, недиференційований калус, протопласти тощо), після чого за допомогою застосування максимального порогового рівня прийнятної селекції (залежно від гена-маркера селекції) відновлюють трансформовані рослинні клітини з нетрансформованої клітинної маси. Експланти, як правило, переносяться на свіжу порцію того ж середовища і культивуються звичайним способом. Внаслідок цього трансформовані рослини диференціюють пагони після перенесення на середовище для регенерації, доповнене максимальним пороговим рівнем селективної речовини. Пагони після цього переносять на селективне середовище для укорінення для отримання укорінених пагонів чи рослинок. Трансгенні рослинки після цього виростають у дорослі рослини і дають фертильне насіння (е.9. Нієї єї аІ. (1994) Те Ріапі УуЧошттаї 6:271-282;
Ібпіда єї аї. (1996) Маїшге Віотесппоіоду 14:745-750). Експланти, як правило, переносяться на свіжу порцію того ж самого середовища і культивуються, як належить. Загальний опис методик та способів для генерування трансгенних рослин наведено у Ауге5 апа Рагк (1994) Стіісаї
Веміему5 іп Ріапі бсіепсе 13:219-239 та Воттіпепі апа дашнаг (1997) Мауаїса 42:107-120.
Оскільки трансформований матеріал містить багато клітин; як трансформовані, так і нетрансформовані клітини присутні в кожному шматочку калюсу або тканини чи групи клітин.
Здатність знищувати нетрансформовані клітини та дозволяти трансформованим клітинам проліферувати призводить до створення культури трансформованої рослини. 60 Часто здатність видаляти нетрансформовані клітини становить обмеження для швидкого виділення трансформованих клітин та успішного розмноження трансгенних рослин.
Молекулярні та біохімічні методи можуть бути використані для підтвердження присутності інтегрованого гетерологічного гена винаходу у геном трансгенної рослини.
Отримання трансгенних рослин може бути здійснене за допомогою одного з декількох методів, включаючи, але не обмежуючись ними, введення гетерологічної ДНК з використанням
Адгорасіеєгішт в рослинні клітини (Адгобрасіегішт-опосередкована трансформація), бомбардування рослинних клітин гетерологічною чужорідною ДНК, прикріпленою до часточок, та різних інших методів, не опосередкованих перенесенням чужорідної ДНК з часточками (напр., Нієї єї аї. (1994) Те Ріапі доигпа! 6:271-282; Івпіда єї аї. (1996) Машге Віоїтесппоіоду 14:745-750; Ауге5 апа Раїк (1994) Стііса! Веміемув іп Ріапі Зсієпсе 13:219-239; Воттіпепі апа
Уашипаг (1997) Маудіса 42:107-120).
Способи трансформації хлоропластів відомі в галузі. Див., наприклад, 5маб еї аї. (1990)
Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 87:8526-8530; 5маб апа Маїїда (1993) Ргос. Маї!. Асад. сі. ОБА 90:913- 917; 5маб апа Маїїда (1993) ЕМВО 3. 12:601-606. Спосіб оснований на доставці за допомогою генної пушки ДНК, що містить селективний маркер, і цільової ДНК у пластидний геном через гомологічну рекомбінацію. Крім того, пластидна трансформація може бути здійснена шляхом трансактивації мовчазного пластидного трансгена за допомогою тканинної експресії закодованої в ядрі та пластидної РНК-полімерази. Така система викладена в МеВгіде еї аї. (1994) Ргос. Маї)!. Асад. сі. ОБА 91:7301-7305.
Із трансформованих клітин можуть бути вирощені рослини згідно з традиційними методами.
Див., наприклад, МеоСогптісК еї аїІ. (1986) Ріапі Сеї! Керогі5 5:81-84. Після цього такі рослини вирощуються і запилюються або пилком того ж трансформованого штаму, або пилком інших штамів, після чого ідентифікуються отримані гібриди, що мають конститутивну експресію бажаних фенотипових ознак. Два або більше поколінь можуть бути вирощені, для того щоб гарантувати, що експресія бажаної фенотипової ознаки стабільно підтримується та успадковується, і що здатність зібраного насіння забезпечувати експресію бажаної фенотипової ознаки підтримується. У такий спосіб, цей винахід забезпечує трансформоване насіння (також називається як "трансгенне насіння"), яке несе нуклеотидну конструкцію винаходу, наприклад, експресійну касету винаходу, стабільно вбудовану в його геном. У різних втіленнях, насіння
Зо може бути вкрите щонайменше одним фунгіцидом та/або щонайменше одним інсектицидом, щонайменше одним гербіцидом та/або щонайменше однією захисною речовиною або будь- якою їх комбінацією. б. Оцінка трансформації рослини
Після введення гетерологічної чужорідної ДНК в рослинні клітини, трансформація або інтеграція гетерологічного гена в рослинний геном підтверджується різними методами, такими як аналіз нуклеїнових кислот, білків та метаболітів, асоційованих з інтегрованим геном.
ПЛР-аналіз - це швидкий спосіб скринінгу трансформованих клітин, тканин або пагонів на присутність інкорпорованого гена на ранній стадії до висадки в грунт (ЗзатбгооК апа КигззеїЇ (2001) МоїІесшіаг Сіопіпа: А І арогаїогу Мапиаї! (Сода ріпу Натог І абогаюгу Ргезв5, Соїй брііпд
Нагрог, МУ)). ПЛР виконується за допомогою олігонуклеотидних праймерів, специфічних стосовно гена винаходу, або вектора на основі Адгобасієгічт, тощо.
Трансформація рослин може бути підтверджена на допомогою Саузерн-блот аналізу геномної ДНК (ЗатбргооК апа Киззеї! (2001) 5ирга). Загалом, тотальна ДНК екстрагується із трансформантів, розщеплюється за допомогою відповідних рестриктаз, фракціонується в агарозному гелі та переноситься на нітроцелюлозні або нейлонові мембрани. Мембрана або "блот" можуть після цього бути зондовані за допомогою, наприклад, радіоміченого 32рР фрагмента-мішені ДНК, для того щоб підтвердити інтеграцію введеного гена в геном рослини згідно зі стандартними методиками (ЗатрьгоокК апа Киззеїї, 2001, зирга).
При Нозерн-блоттингу РНК ізолюється зі специфічної тканини трансформанта, фракціонується в формальдегід-агарозному гелі і наноситься на нейлоновий фільтр згідно зі стандартними методиками, які широко застосовуються в галузі (Затргоок апа Киззеї! (2001) зирга). Експресія РНК, закодованої нуклеотидними послідовностями винаходу, тестується шляхом гібридизації фільтра з радіоактивним зондом, що походить з ОС, за допомогою загальновідомих методів (затьгоок апа Киззеї (2001) зирга)
Вестерн-блоттинг, ЕГІ5А, тестування латерального потоку, біохімічні дослідження тощо можуть бути проведені на трансгенних рослинах, для того щоб виявити присутність білка, закодованого геном стійкості до гербіцидів з використанням стандартних методик (Затргоок апа КиззеїЇ (2001) 5!ирга), використовуючи антитіла, які зв'язуються з одним або більше епітопами, присутніми на білку стійкості до гербіциду. бо В одному втіленні винаходу, гени НРРО, описані тут, використовуються як маркери дял оцінювання трансформації бактеріальних чи рослинних клітин.
Н. Використання маркера для трансформації
Винахід також пов'язаний з використанням у способах для трансформації рослин нуклеїнової кислоти, що кодує НРРО згідно з винаходом, як маркерного гена або як кодуючої послідовності, яка робить можливим надання рослині стійкості до гербіцидів, що є НРРО інгібіторами, і використання одного або більше НРРО інгібітора (ів) на рослинах, які включають нуклеїнову послідовність, що кодує НРРО згідно з винаходом. Див., наприклад, Патент США 6,791,014, який включений тут у його повному обсязі шляхом посилання.
У цьому втіленні НРРО інгібітор може бути введений в культуральне середовище компетентних рослинних клітин, для того щоб знебарвити вказані клітини перед етапом трансформації. Знебарвлені компетентні клітини після цього трансформуються за допомогою гена, що несе толерантність до НРРО інгібіторів, як селективного маркера, і трансформовані рослини, які інтегрували вказаний селекційний маркер у свій геном, стали зеленими, що сприяло їх відбору. Такий процес робить можливим зменшення часу, потрібного для відбору трансформованих рослин.
Таким чином, одне втілення цього винаходу включає спосіб для трансформації рослинних клітин за допомогою введення гетерологічного гена у вказані рослинні клітини з геном толерантності до НРРО інгібіторів як селективного маркера, де спосіб полягає в отриманні компетентних рослинних клітин, здатних отримувати гетерологічний ген у прийнятному середовищі та введенні прийнятної кількості НРРО інгібітора у прийнятне культуральне середовище компетентних рослинних клітин. Після цього компетентні клітини трансформуються за допомогою гетерологічного гена та селективного маркера, і трансформовані рослини, які містять гетерологічний ген, вирощуються на прийнятному середовищі, і з-поміж них відбираються трансформанти. Після цього з трансформованих рослин можуть бути регенеровані фертильні трансформовані рослини.
Ї. Рослини та частини рослин
Під терміном "рослина" розуміють цілі рослини, органи рослин (напр., листки, стебла, корені тощо), насіння, рослинні клітини, пропагули, зародки і їх потомство. Рослинні клітини можуть бути диференційовані або недиференційовані (напр., калус, суспензійна клітинна культура,
Зо протопласти, клітини листка, клітини кореня, флоемні клітини, пилок). Цей винахід може бути використаний для введення полінуклеотидів у будь-який вид, включаючи, але не обмежуючись ними, однодольні та дводольні. Приклади рослин винаходу включають, але не обмежені ними, кукурудзу (маїс), сорго, пшеницю, соняшник, помідори, хрестоцвіті, перці, картоплю, бавовник, рис, сою, цукрові буряки, цукрову тростину, тютюн, ячмінь та ріпак, Вгазвіса 5р., люцерну, жито, просо, соняшник, арахіс, батат (солодка картопля), кассава (маніок), каву, кокос, ананас, цитрусові дерева, какао, чай, банани, авокадо, інжир, гуайяву, манго, оливи, папайю, кешью, макадамію, мигдаль, овес, овочі, декоративні рослини та шпилькові.
Овочеві культури включають, але не обмежені ними, помідори, салат, зелені боби, лімську квасолю, горох та представників роду Сиситів, такі як огірок, мускусна диня (диня-канталупка).
Декоративні рослини включають, але не обмежені ними, азалію, гортензію, гібіскус, троянди, тюльпани, гладіолуси, петунію, гвоздику, пуансетію і хризантему. Сільськогосподарські рослини також становлять інтерес, включаючи, наприклад, кукурудзу, сорго, пшеницю, соняшник, томати, хрестоцвіті, перець, картоплю, бавовник, рис, сою, цукровий буряк, цукрову тростину, тютюн, ячмінь, озимий ріпак тощо.
Винахід прийнятний для будь-якого представника класу однодольних, включаючи, але не обмежуючись ними, кукурудзу, рис, ячмінь, овес, пшеницю, сорго, жито, цукрову тростину, ананас, ямс, цибулю, банан, кокос та фініки.
У. Способи для підвищення врожайності рослин
Забезпечуються способи для підвищення врожайності. Методи включають забезпечення рослини, що полягає у введенні в рослину або рослинну клітину, полінуклеотиду, що містить нуклеотидну послідовність, яка кодує НРРО винаходу, вирощування рослини або її насіння у польових умовах, та отримання врожаю із вказаної рослини та насіння. Як тут визначається, термін "урожай" рослини стосується кількості та/або якості біомаси, утвореної рослиною. Під "біомасою" розуміють будь-який виміряний рослинний продукт. Підвищення біомаси являє собою будь-яке покращення виходу виміряного рослинного продукту. Підвищення врожайності рослин має декілька аспектів комерційного застосування. Наприклад, підвищення біомаси листків рослин може підвищити врожайність листкових овочів для споживання людиною чи твариною. Крім того, підвищення біомаси листків може бути використане для підвищення виробництва рослинних фармацевтичних і промислових продуктів. Підвищення врожайності 60 може включати будь-яке статистично достовірне підвищення, включаючи, але не обмежуючись ними, щонайменше 1595 підвищення, щонайменше З 95 підвищення, щонайменше 5 95 підвищення, щонайменше 10 95 підвищення, щонайменше 20 95 підвищення, щонайменше 30 95, щонайменше 50 95, щонайменше 70 95, щонайменше 100 95 або більше підвищення.
У специфічних способах, рослина, яка включає НРРО послідовність винаходу, обробляється ефективною концентрацією НРРО гербіциду, такого як один або більше гербіцидів -- інгібіторів
НРРО, обраних з групи, яка складається з гербіцидів - НРРО інгібіторів класу М-(1,2,5- оксадіазол-З3-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)іарилкарбоксамідів, таких як 2- хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-Хлоро-3- (метоксиметил)-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон та мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлютол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних із темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлютолу та мезотріону, де застосування приводить до підвищеної врожайності рослин.
Забезпечуються способи для надання стійкості до гербіцидів рослинам або частинам рослин. У таких способах, нуклеотидна послідовність, що кодує НРРО винаходу, вводиться в рослину, де експресія полінуклеотиду призводить до стійкості до гербіцида - НРРО інгібітора.
Рослини, отримані з використанням цього методу, можуть бути оброблені ефективною концентрацією гербіциду (такого як один або більше гербіцидів - НРРО інгібіторів, обраних серед групи, яка складається з гербіцидів - НРРО інгібіторів класу М-(1,2,5-оксадіазол-3- їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)уарилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3- етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-Хлоро-3-(метоксиметил)-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу і мезотріону) і виявляють підвищену толерантність до гербіциду. "Ефективна концентрація" гербіциду в цій заявці являє собою кількість, достатню для того, щоб уповільнити або зупинити ріст рослин або частин рослин, які не мають природної стійкості чи вважаються толерантними до гербіциду.
К. Способи контролю бур'янів у польових умовах
Зо Цей винахід відповідно стосується стособу контролю небажаних рослин або регулювання росту рослин у сільськогосподарських культурах рослин, які включають нуклеотидну послідовність, що кодує НРРО згідно з винаходом, де один або більше гербіцидів - НРРО інгібіторів, наприклад, один або більше гербіцидів - НРРО інгібіторів, обраних з класу М-(1,2,5- оксадіазол-З3-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3-їл)іарилкарбоксамідів, таких як 2- хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід і 2-хлоро-3- (метоксиметил)-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних з темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу або мезотріону, застосовуються щодо рослин (наприклад, шкідливих рослин, таких як однодольні або дводольні бур'яни або небажані сільськогосподарські культури), щодо насіння (наприклад зерна, насіння або вегетативних пропагул, таких як бульби або пагони рослин з бруньками) або щодо площі, на якій рослини ростуть (наприклад, площі під культивуванням). У цьому контексті, ефективна концентрація одного або більше гербіцидів - інгібіторів НРРО, наприклад, одного або більше більше гербіцидів -- інгібіторів НРРО, обраних з групи, що включає гербіциди - НРРО інгібітори класу М-(1,2,5-оксадіазол-З3-їл)бензамідів, М-(тетразол-4-їл)- або М-(тріазол-3- їл)арилкарбоксамідів, таких як 2-хлоро-3-етокси-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5- їл)бензамід і 2-хлоро-3-(метоксиметил)-4-(метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5- їл)/бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол, або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу і мезотріону, можуть бути застосовані, наприклад, перед посадкою (якщо прийнятно, також шляхом внесення в грунт), перед появою сходів або після їхньої появи, та можуть бути комбіновані із застосуванням інших гербіцидів, до яких сільськогосподарська культура має природну стійкість, або до яких вона резистентна завдяки експресії одного або більше інших трансгенів резистентності до гербіцидів. Див., напр., Заявку на Патент США Мо 2004/0058427 і
РСТ Арр. Рир. Мо МО 98/20144. Під "ефективна концентрація" розуміють концентрацію, яка контролює ріст або розповсюдження бур'янів чи інших трансформованих рослин без істотного впливу на рослини або насіння рослин, які є толерантними до НРРО інгібіторів. Особи з бо досвідом роботи в галузі мають зрозуміти, що застосування гербіцидів може мати багато різних форм та мати місце в різний час до та/або протягом висаджування насіння та упродовж процесу росту. "Передсходова" обробка стосується гербіциду, який застосовується щодо площі, яка становить інтерес (напр., поля або площі під культивуванням) перед появою рослин, які видно з грунту. "Післясходове" застосування стосується гербіциду, який застосовується щодо площі після появи рослин, які видно з грунту. У деяких випадках, терміни "передсходова" та "післясходова" використовуються з посиланням на бур'яни на площі, яка становить інтерес, і у деяких випадках ці терміни використовуються з посиланням на сільськогосподарську рослину на площі, яка становить інтерес. При використанні з посиланням на бур'яни, ці терміни можуть застосовуватись до конкретного типу бур'янів чи видів бур'янів, які присутні, або очікується, що вони будуть присутні на площі, яка становить інтерес. "Передпосівне включення" гербіциду включає введення сполук в грунт перед посадкою.
Таким чином, цей винахід включає спосіб контролю бур'янів у польових умовах, який полягає у висадженні в полі рослини або її насіння, що включають НРРО винаходу, та застосування до вказаної рослини або площі, яка оточує вказану рослину, ефективної концентрації одного або більше гербіцидів - НРРО інгібіторів.
В одному втіленні цього винаходу, поле, на якому мають бути висаджені рослини (такі як рослини сої, бавовника, кукурудзи або пшениці, тощо), що містять нуклеотидну послідовність
НРРО винаходу, може бути оброблене гербіцидом - інгібітором НРРО, таким як ізоксафлутол (ІТ), перед тим, як рослини висаджуються, або насіння висівається, який очищує поле від бур'янів, що знищуються НРРО інгібітором, що дозволяє нульовий обробіток, з подальшим висадженням чи висівом рослин на цьому ж попередньо обробленому полі (суцільна обробка із застосування з використанням гербіциду - інгібітора НРРО). Залишкова активність ІЕТ також захищатиме рослини, що з'являються та ростуть, від конкуренції з бур'янами на ранніх стадіях росту. Коли рослини сягають певного розміру, бур'яни з'являються знову, глюфосинат або гліфосат або НРРО інгібітор чи суміш НРРО інгібітора з іншим гербіцидом, таким як гліфосат, можуть бути застосовані як післясходовий гербіцид по поверхні рослин, якщо такі рослини є толерантними до вказаних гербіцидів.
В іншому втіленні цього винаходу, поле, на якому насіння, що містить НРРО нуклеотидну послідовність винаходу, було висіяне, може бути оброблене гербіцидом - інгібітором НРРО,
Зо таким як ІЕТ, перед появою рослин, але після висіву насіння (поле може бути очищене від бур'янів перед посівом насіння за допомогою інших засобів, як правило, традиційних способів обробітку грунту, таких як оранка, з використанням чизельного плуга, або передсходова обробка насіння), де залишкова активність буде утримувати поле вільним від бур'янів, знищених гербіцидом, в результаті чого рослини, які будуть з'являтись та рости, не будуть конкурувати з бур'янами (передпосівне застосування гербіциду - НРРО інгібітора). Коли рослини досягнуть певного розміру, бур'яни з'являтимуться знову, глюфосинат або гліфосат чи НРРО інгібітор або суміш НРРО інгібітора з іншим гербіцидом, таким як гліфосат, може бути застосований як післясходовий гербіцид по поверхні рослин, якщо такі рослини є толерантними до вказаних гербіцидів.
В іншому втіленні цього винаходу, рослини, що містять НРРО нуклеотидну послідовність винаходу, можуть бути оброблені гербіцидом - інгібітором НРРО, поверх рослин, які з'явились з насіння, що було висіяно, який очистить поле від бур'янів, убитих НРРО інгібітором, який може бути застосований разом з (напр., у баці робочого розчину), до обробки або після обробки гліфосатом або глюфосинатом як післясходовий гербіцид поверх рослин (післясходове застосування гербіциду - НРРО інгібітора (з гліфосатом або без гліфосату)), якщо такі рослини є толерантними до таких гербіцидів.
Приклади окремих представників однодольних та дводольних бур'янів, які можна контролювати за допомогою гербіциду -- інгібітора НРРО, включають:
Однодольні шкідливі рослини родів: Аедііор5, Адгоругоп, Адговії5, АІоресиги5, Арега, Амепа,
Вгасніапа, Вготив, Сепспгиб5, Соттеїїпа, Суподоп, Сурегиз5, Оасіуіосієпішт, Оіднапа,
ЕсПіпоспіІоа, ЕіІеосНагі5, ЕІвивзіпе, Егадгобії5, Епоспіоа, ЕРевіиса, Рітриі5іуїйв5, Неїегапінега,
Ітрегаїа, Ізспаеєтит, І ерюоспіса, І от, Мопоспогіа, Рапісит, Разра!шт, РНаїагі5, Рпієит, Роа,
Войбоеіа, Ззадіната, осігрив, Зеїагіа, 5огапит.
Дводольні бур'яни родів: Арційоп, Атагаптаким чином, Атрговзіа, Апода, Апіпетів, Арпапев, Апетівіа, Айірієх, Веїїз, Відепо5, СарзеПа, Сагдцив, Савзвзіа, Сепіаштеа, Спепородійт, Сігвішт,
Сопмоїмшив5, Оаїшйга, ЮОевтодійт, Етех, Егузітит, Еирпогбіа, СаІєорвів5, Саїїпзода, Сайт,
Нівізсив, Іротоєа, Коспіа, І атіит, І еріаіїшт, І іпдетіа, Майсага, Мепіпа, Мегситпіаїй5, Миїчоо,
Муобзоїї5, Рарамег, РНагтбії5, Ріапіадо, Розудопит, Ропйшіаса, Напипсшив, Нарпапив, Вогірра,
Воїаіа, Витех, Заї!5оїа, Зепесіо, Зезрапіа, біда, бЗіпарі5, Зоїапит, Бопсепив, Зрпепосієа, Є1еПІага, бо Тагахасит, ГНіазврі, ТийоЇїйшт, Опіса, Мегопіса, Міоїа, Хапіпійт.
Зо
Гербіциди - НРРО інгібітори, які використовуються у цьому винаході, включають, але не обмежуючись, гербіциди - інгібітори НРРО класу М-(1,2,5-оксадіазол-З3-їл)бензамідів, -М- (тетразол-4-їл)у- або /М-(тріазол-З-їллуарилкарбоксамідів, таких як /2-хлоро-3-етокси-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід та 2-хлоро-3-(метоксиметил)-4- (метилсульфоніл)-М-(1-метил-1 Н-тетразол-5-їл)бензамід, трикетонів, таких як темботріон, сулькотріон і мезотріон, класу ізоксазолів, таких як ізоксафлутол або класу піразолінатів, таких як пірасульфотол і топрамезон, зокрема, обраних серед темботріону, сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу та мезотріону, можуть бути розроблені різними способами, залежно від превалюючих біологічних та/або фізико-хімічних параметрів. Прикладами можливих препаратів є порошки, що змочуються (М/Р), водорозчинні порошки (5Р), водорозчинні концентрати (ВРК), концентрати, що емульгуються (ЕС), емульсії (ЕМІ/), такі як емульсії олія-у-воді та вода-в-олії, аерозольні розчини, концентрат суспензії (С), водні або масляні дисперсії, жиророзчинні розчини, капсульні суспензії (С5), дусти (порошки тонкого помелу) (ОР), продукти для передпосівної обробки насіння (інкрустація насіння), гранули для застосування шляхом розкидання та на грунті, гранули (СК) у вигляді мікрогранул, аерозольні гранули, вкриті гранули та адсорбційні гранули, вододисперсійні гранули (М/С), водорозчинні гранули (55), ШІ М препаративні форми, мікрокапсули та воски.
Ці індивідуальні типи препаративних форм відомі в принципі та описуються, наприклад, у:
М/іппасКег!-Каиспіег, "Спетізспе Тесппоїодіє" (Спетіса! ТесппоїЇоду), моїште 7, С. Напзег Мепад
Мипісн, 4 Еа. 1986; М/аде мап МаІКеприго, "Ревіїсіде Готтиїайопв", Магсе! ОеккКег, М.МУ., 1973; К.
Мапепзв, "Зргау Огуіпд" Напабсок, Зга Еа. 1979, Сх. Соодмі/іп І ЮК). І опдоп.
Препаративні форми потребують допоміжних речовин, таких як інертні матеріали, сурфактанти, розчинники або додаткові аддитивні речовини, також відомі та описані, наприклад, у: Умаїкіп5, "НапаросокК ої Іпзесіїсіде рибі Ойшепів апа Саттієтв", 2пй Еа., бапапа
Воок5, Саїідмеї! М.., Н.м. ОІрнеп, "Іпігодисійп іо Сіау СоПоїд Спетівігу"; 2па Еа., 9. УММіеу б 5опв,
М.У.; С. Магхзаеп, "Розчинники Сспіде"; 2па Еа., Іпіегосіепсе, М.У. 1963; МеСшспеоп'5 "Оєїегдепів апа Етиївінієтз Аппцуаі!" МО Рибі. Согр., Віддежоой М.9У.; бБізІеу апа М/о, "Епсусіоредіа ої зМуипасе Асіїме Адепібє", СПпет. Рибі. Со. Іпс., М.М. 1964; 5спбпіеЇді "сСгеп2Ппаспепакіїме
Атуїепохідадацке" (Іпіегпасе-асіїме еіпуієпе охіде адаисів), М/із5. Мепадздезеїї., біиндагл 1976;
Зо М/іппасКег!-Каиспіег, "Спетізспе Тесппоїодіє" (Спетіса! ТесппоїЇоду), моїште 7, С. Напзег Мепад
Мипісн, А Еа. 1986.
Основуючись на цих препаративних формах, можна також приготувати комбінацію з іншими пестицидно активними речовинами, такими як, наприклад, інсектициди, акарициди, гербіциди, фунгіциди, сафенери, з добривами та/або регуляторами росту, наприклад у вигляді готової суміші або у баці з робочим розчином.
І. Способи введення гена винаходу в іншу рослину
Тут також пропонуються способи введення НРРО нуклеотидної послідовності винаходу в іншу рослину. НРРО нуклеотидна послідовність винаходу, або її фрагмент, може бути введена в іншу рослину за допомогою рекурентної селекції, зворотного схрещування, селекційного розведення (покращення сорту), лінійного розведення, масової селекції, мутаційної селекції та/або селекції з використанням генетичного маркера.
Таким чином, в одному втіленні, способи винаходу включають схрещування першої рослини, яка включає НРРО нуклеотидну послідовність винаходу, з другою рослиною для отримання рослин потомства 1 та відбору рослин потомства Е1, які є толерантними до гербіцидів - інгібіторів НРРО, або які включають НРРО нуклеотидну послідовність винаходу.
Методи можуть також включати схрещування відібраних рослин-нащадків з першою рослиною, що включає НРРО нуклеотидну послідовність винаходу для отримання рослин, нащадків від зворотного схрещування та відбору рослин, нащадків від зворотного схрещування, які є толерантними до гербіцидів - інгібіторів НРРО, або які включають НРРО нуклеотидну
БО послідовність винаходу. Способи для оцінки стійкості до гербіцида - НРРО інгібітора забезпечуються тут в іншому місці. Методи можуть також включати повтори цих етапів один або більше разів у послідовності, для того щоб отримати друге або вище потомство рослин від зворотного схрещування, які є толерантними до гербіцидів - інгібіторів НРРО або які включають
НРРО нуклеотидну послідовність винаходу.
Будь-який метод схрещування, який включає селекцію рослин на бажаний фенотип, може бути використаний у способах цього винаходу. В деяких втіленнях, рослини ЕТ можуть бути самозапилені для отримання покоління Е2, яке розщеплюється (сегрегує). Окремі рослини, які представляють бажаний фенотип (напр., стійкість до гербіцида - НРРО інгібітора), можуть бути відібрані у кожному поколінні (БЕЗ, 4, Е5 тощо) до того часу, поки ознаки не стануть бо гомозиготними або не будуть закріплені у селекційній популяції.
Друга рослина може бути рослиною, яка має бажану властивість, таку як толерантність до гербіцидів, стійкість до комах, стійкість до посухи, стійкість до нематоди, ефективність використання води, ефективність використання азоту, покращене поживне значення, резистентність до захворювань, підвищений фотосинтез, покращена якість волокон, стрестолерантність, покращена репродукція тощо. Друга рослина може бути елітною подією, як описано тут в іншому місці.
У різних втіленнях, частини рослин, цілі рослини, органи рослин (напр., листки, стебла, корені тощо), насіння, рослинні клітини, пропагули, зародки, і т.п.) можуть бути зібрані з отриманих гібридів і або розмножені чи зібрані для подальшого використання (такого як продовольчі продукти, корми для тварин, біопаливо, олія, борошно, борошно крупного помелу, тощо).
М. Способи отримання рослинного продукту
Цей винахід також стосується процесу отримання товарного продукту, який включає збір та/або перемелювання зерна сільськогосподарських культур, які включають НРРО послідовність винаходу, для отримання товарного продукту. Агрономічно або комерційно важливі продукти та/або їх композиції включають, але не обмежуються ними, корми для тварин, предмети споживання і рослинні продукти, побічні продукти, які призначені для використання у вигляді харчових продуктів для споживання людиною, або для використання у композиції, і предметів споживання, які призначені для споживання людиною, насамперед, девіталізоване насіння/зернові продукти, включаючи (напів)оброблені продукти, виготовлені з таких зернових продуктів /насіння, де вказаний продукт являє собою або містить ціле чи перероблене насіння або зерно, корми для тварин, кукурудзяне чи соєве борошно крупного помелу, кукурудзяне або соєве борошно, кукурудзу, кукурудзяний крохмаль, соєве борошно, пластівці, соєвий білковий концентрат, соєвий білковий ізолят, текстуризований соєвий білковий концентрат, косметику, продукти для догляду за волоссям, олію із соєвого насіння, натто, темпех, гідролізований соєвий білок, збиті вершки, шортенінг, лецитин, їстівну цільну сою (сиру, смажену або зелені соєві боби), соєвий йогурт, соєвий сир, тофу, юба, а також варену, шліфовану, приготовлену на пару, печене або оброблене паром зерно, тощо, знаходять в межах цього винаходу, якщо ці продукти або їх композиції містять кількості нуклеотидних та/або амінокислотних
Зо послідовностей, які можна виявити, представлених тут як діагностичних для будь-якої рослини, що містить такі нуклеотидні послідовності.
Наступні приклади представлені у вигляді ілюстрацій, а не для обмеження.
Експериментальна частина
Приклад 1. Приготування НРРО мутантного (зЗ3З3бУМ (РІЗЗЗ6М) Рзхейдотопах Пиогезсепз та кінетична характеристика НРРО ферментів.
Нуклеотидна послідовність нативного НРРО Рзейдотопав Пиогезсеп5з (РІНРРО, 1077 Бр, описаного в М/О2009144079), що кодує амінокислотну послідовність, наведену тут як ЗЕО ІЮ
Мо:1, і описану в УМО2009144079, УМО 96/38567, і у КОеївспі еї аї. (Єшиг. 9. Віоспет., 205, 459-466, 1992), була спочатку клонована в унікальному Мсо!Ї сайті експресуючого вектора рккК233-2 (Ріагтасіа), який забезпечує старт-кодон.
На 5--кінці, безпосередньо "даунстрім' АТО, була вставлена послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує амінокислоту аланін та послідовність нуклеїнової кислоти, яка кодує М- термінальний НІЗб-Тад (бх НІ5, закодований: саї сас саї сас саї сас (5ЕО ІЮО Мо:77). "Апстрім"
АТО додали дві додаткові пари цистеїнових основ, для того щоб отримати послідовність, яка відповідає сайту розпізнавання ферментів рестрикції Мсої, а "даунстрім" від стоп-кодону додали послідовності, які відповідають сайтам розпізнавання рестриктази Хвраї. Послідовність ДНК, що відповідає гену, включаючи послідовність, яка кодує НІЗ-ТАС, була відрізана рестрикційними ферментами Мсо!Ї та Хбраї, і після цього клонована в модифікований експресуючий вектор рОЕ42О(ВІ)МХ (5261 Бр).
Клонуючий та експресуючий вектор рРЗЕ42О(КІ)МХ (5261 Бр) базується на плазміді рЗЕ420 від фірми Іпмігодеп (Карлсрує, Німеччина). Модифікації цього вектора включають додавання прі гена (неоміцин фосфотрансфераза; ЗатбгооК апа КиззеїЇ, 2001, МоіІесшаг Сіопіпд: а
Іабогаюгу тапиаї! (Тніга едійоп)), що надає стійкості до антибіотика канаміцину і який відсутній у більшості суперлінкерних ділянок (множинних сайтів клонування).
Плазміда несе ігр-Іас (гс) промотор і Іасіч ген, який забезпечує Іас репресор у кожному штамі клітини-господаря Е. соїї. І ас репресор зв'язується з Іас оператором (ІасО) і обмежує експресію цільового гена; це інгібування може бути послаблене індукцією за допомогою ізопропіл В-О-1- тіогалактопіранозиду (ІРТО).
Отриманий вектор був названий роЕ420(КІ)МХ-РІНРРО і о використаний / для бо трансформування клітин ВІ 21 Езспегіспіа соїї (МегоеК, Дармштадт, Німеччина).
До плазміди рЕ42О(КІ)МХ-РІНРРО застосували ПЛР-опосередкований мутагенез, для того щоб змінити визначений кодон у відповідних сайтах РІНРРО гена. Кодон, який кодує гліцин (С) у положенні 336, був заміщений кодоном, що кодує триптофан (ММ). Отриманий мутант був названий РІСЗЗбМУ, а отриманий вектор - РЕ42О(ВІ)МХ-РІСЗЗбМУ.
Експресію НРРО проводили в клітинах ВІ 21 Е. соїї К-12, які містять рРЗЗЕ420(КІ)МХ-РІНРРО або рЗЕ429(КІ)МХ-РІЗ3З36МУ. Клітини вирощували до досягнення значення оптичної щільності, яке становило 0,5; після чого була ініційована експресія з Ігр-Іас (ге) промотора шляхом індукції з використанням 1 мМ ІРТО, який зв'язується з Іас репресором і викликає його дисоціацію з їІас оперону. Експресію проводили протягом понад 15 год. при 28 "С.
Для того щоб приготувати престартерну культуру, 2 мл ТВ середовища (100 мкг"мл" карбеніциліну) інокулювали 50 мкл вихідного розчину ЕЕ. соїї К-12 ВІ21 у гліцерині.
Престартерну культуру інкубували при 37 "С на шейкері при 140 об/хв протягом 15 год. 200мкл престартерної культури було використано для ініціації стартерної культури (б5мл ТВ, з додаванням 100 мкг"л"), яку інкубували протягом З год. при 37 "С.
Для того щоб приготувати основну культуру, 400 мл ТВ середовища (100 мкг"мл" карбеніциліну) інокулювали 4 мл стартерної культури. Стартерну культуру інкубували при 37 "С при струшуванні 140 об/хв до досягнення ОЮвоо, що становило 0,5. Після цього експресію рекомбінантного білка індукували за допомогою 400 мкл 1М розчину ІРТО. Клітини вирощували протягом додаткової години за цих же умов, після чого температуру знижували до 28 "С, а культуру струшували при 140 об/хв протягом 15 год. Клітини збирали центрифугуванням при 6000 х д протягом 15 хв при 4 "С. Після цього клітинні пелети зберігали при -80 "С.
Виділення та очищення Нівзхв-РІНРРО та Нізв-РІЗЗЗбУМ у нативному вигляді
Лізис клітин
Лізис клітин проводили за допомогою лізоциму, ферменту, який викликає розщеплення 1,4-
В-зв'язків між залишками М-ацетилмурамової кислоти та М-ацетил-О-глюкозаміну в пептидоглікані, який утворює клітинні стінки у бактерій. Клітинні мембрани після цього руйнувались під внутрішнім тиском бактеріальних клітин. Крім того, буфер для лізису містив
Вепгопазе? нуклеазу, ендонуклеазу, яка гідролізує всі форми ДНК та РНК без ушкодження білків і, таким чином, значно зменшує в'язкість клітинного лізату. Лізис за природніх умов
Зо виконували на кризі. Для очищення Нізв-мічених білків був використаний набір ОіАехргев52 Мі-
МТА Раві Зіагі Кії згідно з рекомендаціями виробника.
Очищення Нізв-мічених білків за допомогою афінної хроматографії з імобілізованими іонами металу (ІМАС)
Очищений клітинний лізат (10 мл), отриманий після центрифугування реакційної лізисної суміші, завантажували в колонку Мі-МТА Раві аг Соїштп з ОІАехрге55? Мі-МТА Раві єїап Кії (Оіадеп, Ніідеп, Німеччина); очищення проводили згідно з інструкціями виробника. Нізхв-мічений білок елюювали 2,5 мл елюційного буферу.
Знесолення НРРО розчинів гель-фільтрацією
Розчини НРРО, елюйовані з колонки Мі-МТА Равзі еФагй СоІштп з використанням 2,5 мл елюційного буферу, наносили на Зерпадех 5-25 РО-10 колонку (ЗЕ Неайсаге, Фрайбург,
Німеччина), згідно з інструкціями виробника. Після того, як весь зразок пройшов гелевий шар, було проведено елюювання за допомогою 3,5 мл накопичувального буферу.
Розчини НРРО, елюйовані із знесолюючої колонки, заморожували при -80"С в 1 мл аліквотах.
Визначення концентрації НРРО білка за допомогою аналізу білка Бредфорда
Концентрацію білка визначали за допомогою стандартної методики Бредфорда (Вгай'тога, (1976), Апа! Віоспет 72: 248-254).
Визначення чистоти розчинів НРРО за допомогою 50О5-РАСЕ
Цілісність елюйованого білка перевіряли за допомогою 5О5-РАСЕ гель-електрофорезу з використанням гелю МОРАСЕ? Момех 4-12 95 Вів-Тгі5 сеї5 (Іпмігодеп, Карлсрує, Німеччина); було завантажено приблизно 10 мкг білка. Десять мкл І аеттії Затріеє буферу додавали до 1- 10 мкл розчину білка, суміш інкубували при 90 "С протягом 10 хв. Після короткого етапу центрифугування всю суміш завантажували в касету в 505 гелі, попередньо зафіксовану в гелевій камері ХСеї! БигеГоск"М Момех Міпі-СеїЇї, заповненій проточним буфером МиРАСЕ?
МОРБ 505 (розведеним із 20 х-розчину з використанням води). Після цього до гелевої камери подавалась напруга 150 протягом 1 год. Для забарвлювання білкових смуг гель занурювали в забарвлюючий розчин Кумассі діамантового блакитного К-250. Для знебарвлення поліакриламідного гелю, його занурювали у знебарвлюючий розчин Кумассі діамантового блакитного К-250 доти, поки білкові смуги на ставали блакитними на білому гелі. бо Приклад 2. Кінетична характеристика та оцінювання толерантності до НРРО інгібіторів
НРРО ферментів РІНРРО та РІСЗЗбМУ.
НРРО активність було досліджено за допомогою стандартного спектрофотометричного аналізу (який описується в УМО 2009/144079, включеному тут у повному обсязі у вигляді посилання).
Визначення кінетичних властивостей НРРО іп міго
Значення Кт, Мтах, та Кса для різних препаратів НРРО ферментів та Кі, Кі-Коп, та К:/-Кок для різних НРРО інгібіторів визначали або вони могли бути визначені за допомогою НРІ С аналізу для визначення НРРО активності. Досліджувані суміші містили в об'ємі 1 мл 150 мМ Ттгів-НСІ буферу при рН 7,8, 10 мм аскорбату натрію, 650 одиниць бичачої каталази (бЗідта С30 (Зідта-
Аїдгісп, Мюнхен, Німеччина), 34 мг білка/мл, 23,000 одиниць/мг), та відповідну кількість НРР, очищеного НРРО фермента та НРРО інгібіторів. Для визначення Кт, Мтах, та Кса: значень, концентрація НРР у досліджуваній суміші варіювала від 10 до 400 мкМ. Для визначення К;,,
Кі-Коп, та К.-Кок значень, 2 ММ НРР були використані або можуть бути використані. Всі тести розпочинали додаванням НРРО ферменту до досліджуваної суміші і зупиняли в серіях різних проміжків часу між 0 та 240 сек додаванням 200 мкл реакційної суміші до пробірок із реакційними сумішами, що містять 20 мкл 1095 (пер)хлорної кислоти. Осаджений білок пелетували 5-хвилинним центрифугуванням при 10,000 д. 100 мкл супернатанту завантажували в 250х4мм Кпацег (Берлін, Німеччина) Ецигозрпег 100-5 С18-колонку, урівноважену за допомогою 10 95 метанолу, 0,1 95 трифтороцтової кислоти (буфер А). Колонку елюювали також зі швидкістю 1,5 мл/хв, використовуючи 4-хвилинне промивання буфером А, з подальшим 3- хвилинним промиванням 9595 метанолом, далі - з 2-хвилинним промиванням буфером А.
Моніторинг елюювання НОеА (гомогентизинової кислоти) та НРР (Ггідроксифенілпірувату) здійснювали при 292 нм. НОА елюювали протягом приблизно 5 хвилин, а НРР - довше. Був використаний стандартний набір концентрацій НОСА для побудови стандартної кривої, для того щоб калібрувати пік поглинання НОА при 292 нм залежно від концентрації НОСА.
Для визначення значень Кт та Мтах, початкові значення швидкості НРРО реакції при різних концентраціях субстрату визначали за графіками залежності НОА від часу та узгоджували з рівнянням Міхаєліса-Ментен для односубстратних ферментативних реакцій за допомогою пакету програмного забезпечення І Вибіпеб55 ЗоіІшіоп5 а. (мли. сот) Хі. Для
Зо визначення значення Кі, Кі-Коп, та К--Кої, протікання в часі НРРО реакції при різних концентраціях інгібітора узгоджували з рівняннями для механізму А, конкрентного інгібування, для інгібіторів щільного зв'язку (Спа, 5. (1975) Тідні-Біпаіїпу іппіБіог5 - І. Кіпеїїс БеНаміоиг.
Віоспетіса! Рнаптасоіоду 24, 2177-2185) за допомогою пакету програмного забезпечення ІЮ
Визіпез5 боІшіопвз І а. ХІ тії.
Таблиця 1: Кінетична характеристика НРРО ферментів (РЕ НРРО та РІСЗЗбУМ).
У наведеній нижче Таблиці 1, "Кт" (константа Міхаєліса-Ментен) означає кінетичний параметр, який використовується для характеристики ферментативних реакцій; він визначається як концентрація субстрату, при якій швидкість реакції дорівнює половині максимальної. Кт також визначається як концентрація субстрату, при якій швидкість реакції досягає свого максимального значення (Мптах/2), де Мтах - максимальна швидкість реакції.
Коп-Кі дорівнює константі швидкості асоціації зв'язування фермент-субстратного комплексу, а Ко-Кі дорівнює швидкості дисоціації фермент-субстратного комплексу. Кі визначає константу інгібування. Для визначення специфічної активності ферментів, зразки інкубували, реакцію зупиняли через 24 хв. Специфічну активність оцінювали за кількістю мкг білка.
Таблиця 1 11111101 НРР | НРРО | Специфічнаактивність
Кт АЕ/24хв 1 | кас | ода
Таблиця 1 свідчить, що кінетичні параметри Кт і Ксаї бактеріального НРРО (РІНРРО) "дикого типу" і мутантного НРРО (РІЗЗ3ЗЗ36УМУ) не виявляли істотних відмінностей. Однак, специфічна активність була істотно нижчою у мутанта у порівнянні з білком "дикого типу".
Визначення НРРО активності у присутності декількох НРРО інгібіторів
У цьому сенсі, ріго-значення означає од значення концентрації інгібітора, необхідної для 50 95 інгібування ферментативної активності в молярній концентрації. ріго-значення для НРРО інгібіторів визначали з графіка залежності доза-реакція НРРО активності залежно від концентрації інгібітора за допомогою тесту, докладно описаного в УМО 2009/144079, при фіксованій - 2 мМ - концентрації НРР і фіксованій тривалості інкубування - З хвилини - з використанням пакету програмного забезпечення ІЮ Вивзіпе55 ЗоЇшіоп5 Іа. ХІ Я.
Значення ріБО РІНРРО ота РІЗЗЗ36М/ ферментів визначали з використанням спектрофотометричного методу. Було визначено стійкість до декількох, перелічених нижче
НРРО інгібіторів, - темботріону, дикетонітрилу, мезотріону. Символ "»" означає, що значення були значно вищими, ніж було встановлено будь-яким, однак вони не могли бути точно підраховані в інтервалі протестованих концентрацій інгібітора (5,0х105, 1,0х105, 2,5х105, 4,0х105, 7,0х105, 1,0х109, 2,0х105 та 5,0х102 М). У цьому експерименті, зняття даних проводили через 24 хв після початку експерименту. Результати представлені в Таблиці 2.
Таблиця 2 11111111 Темботрон, | Дикетонтрил. | Мезотріон./
Значення різО НРРО ферментів також було визначено за допомогою НРІ С методу. Була визначена стійкість до НРРО інгібіторів - темботріону, дикетонітрилу та мезотріону. У цьому експерименті, визначення було проведено через З хв після початку експерименту. Результати представлені в Таблиці 3.
Таблиця З 11111111 Темботрон, | Дикетонтрил. | Мезотріон./
В альтернативному методі вимірювання НРРО активності та НРРО стійкості до НРРО інгібіторів, НРРО активність визначали при кімнатній температурі додаванням відповідних кількостей НРРО до розчину 200 мМ Тгтгі5-НСІ рН 7,6, 10 мМ аскорбату, 20 мкМ Резо», 650 одиниць каталази, 8 мкг НОА деоксигенази (НОСА: гомогентизат) та 10-1400 мкМ НРР у загальному об'ємі 1 мкл. Початкову швидкість реакції визначали від підвищення поглинання при 318 нм завдяки утворенню малеїлацетацетату (єзів-11,900 М" см"). Значення Кт та Мтах визначали узгодженням початкової швидкості перетворення НРР, визначеної при різних концентраціях НРР, з рівнянням Міхаєліса-Ментен за допомогою пакету програмного забезпечення Моде! 350 ІЮ Вивіпе55 ЗоЇшіоп5 (а ХІй, версія 5.1.0.0. Цей метод називається
НО аналізом.
Значення ріІ5ХО НРРО ферментів визначали за допомогою спряженого аналізу НРРО (НОЮ;
Зо РІНРРО та РІСЗЗбУМ) та їх відповідної стійкості до НРРО інгібіторів темботріону, дикетонітрилу та мезотріону. Результати представлені в Таблиці 4.
Таблиця 4 11111111 | 1 Темботрон | Дикетонтрил. | Мезотріон./
РЗЗ3ЄМ ЇЇ 77777771717176077777711171Ї1771111711153111 11111153. ЮщД "
На Таблицях 2, З і 4, чітко видно, що мутація в положенні 336 фермента НРРО від
Рзейдотопавх Пиогезсепз істотно підвищила стійкість НРРО до декількох НРРО інгібіторів.
Приклад 3. Бібліотека точкових мутацій першого покоління.
РІСЗЗб6УУ мутант був далі мутагенізований у 16 положеннях. Рандомізація цих положень була виконана з використанням набору ОШІКСНАМСЕФ Іідніпіпуд КИ. Теоретичне різноманіття бібліотеки становило 300. Мутанти були зібрані та трансформовані в клітинах ОНзЗаїрна Е. соїї.
Був проведений скринінг 600 окремих клонів на толерантність до темботріону (ТВТ) - НРРО інгібітора. Клони вирощували на ЇВ середовищах з додаванням канаміцину при 37 С на шейкері до досягнення оптичної щільності 00600 нм, яке становило 0,3. Після цього культури переводили на 30 "С та інкубували протягом додаткових 17 годин. Культури центрифугували, клітинний конгломерат ресуспендували в 10 мМ Нере5з/КкКОН рН 7,6, 4 мМ МосІ2, 1 мм ОТ.
Лізис клітин проводили за допомогою "бісерного млинка" (Веад-Веаїег), а розчинні клітинні екстракти були отримані після центрифугування.
Мутанти були проаналізовані з використанням "тестування на коричневий колір". Конкретно, екстракти НРРО аналізували у 96-коміркових планшетах на стійкість НРРО інгібітора нанесенням на тверді середовища, які містять І В-агар, канаміцин, 5 мМ тирозин, 42 мМ сукцинат та НРРО інгібітор. При первинному скринінгу, 20 мкл екстракту наносили у трикратній повторності на планшети, що містять 250 мкМ темботріону. Планшети накривали повітропроникною плівкою та інкубували при 37 "С. Через 24 годин було здійснено візуальне порівняння утворення коричневого пігменту у порівнянні зі зразком, що містить РІСЗЗбУУ.
Варіанти, які виявляли підвищене утворення пігменту у присутності ТВТ, були повторно досліджені на 250 мкМ ТВТ та 250 мкМ дикетонітрилу (ОКМ) активної сполуки ізоксафлутолу (ІРТ). Ті варіанти, які знову виявили покращену толерантність до інгібітора, знову експресували, а екстракт титрували на 250 мкМ ТВТ та 250 мкм ОКМ, для того щоб визначити ступінь покращення. Зразки екстрактів аналізували за допомогою 5О5-РАСЕ; в результаті чого було встановлено, що екстракти містять однакові кількості НРРО білка.
Титрування показало, що варіант РІНРРОЕЄмМо33 (5ЕО ІО Мо:б) має 4х покращену стійкість до
ТВТ та ОКМ у порівнянні з РІЕЗЗЗбМУ. Цей варіант мав заміщення проліну на глутамінову кислоту в положенні 335 відносно РІЗЗЗ6МУ. Ця мутація локалізується на с-термінальній альфа-спіралі, що діє як вхідні ворота до активного сайту.
Приклад 4. Скринінг бібліотеки пермутацій у другому поколінні.
Послідовності варіантів першого покоління, які показали найкращі результати, були проаналізовані; була генерована бібліотека пермутацій другого покоління в ділянці, яка об'єднує положення 335, 336, 339, 340. Теоретична різноманітність бібліотеки становила 640. Скринінг було проведено, як описано в Прикладі 3. Була генерована інша бібліотека пермутацій другого покоління, націлена на положення 188, 189 та 190; кількісне визначення було проведено за допомогою тестування коричневого кольору.
Дані титрування показали, що варіант РІНРРОЕмМо36б (З5ЕО ІЮО Мо:7) мав 16х покращену стійкість до ТВТ та ОКМ у порівнянні з РІЗЗбМУ. Він має 4х покращену стійкість у порівнянні з
РІНРРОЄЕмо33. Експресію білка аналізували з використанням 505-РАСЕ; було виявлено, що варіанти експресують однакові кількості НРРО білка. РІЕНРРОЕмо36б має заміщення серину на
Зо глутамінову кислоту в положенні 335, серину на триптофан у положенні 336, треоніну на лізин у положенні 339, глутаміну на аланін у положенні 340 по відношенню до РІЕЗЗЗбУУ.
Дані титрування показали, що варіант РІНРРОЄЕЄмо37 (5ЕО ІО Ме:3) мав покращену стійкість до ТВТ та ОКМ у порівнянні з РІЗЗЗ6МУУ. РІНРРОЕЄмМо37 має заміщення триптофану на аланін у положенні 188 порівняно з РІЗ3ЗбУУ. Був проведений 505-РАСЕ аналіз, який не виявив відмінностей в рівнях НРРО експресії між варіантами.
Наведені нижче дані титрування свідчать, що варіант РІНРРОЕЄмо40 (5ЕО ІО Мо:8) мав покращену стійкість до ТВТ і ОКМ у порівнянні з РІБЗЗбУУ. Був проведений 505-РАСЕ аналіз, який не виявив відмінностей в рівні НРРО експресії між варіантами.
Варіанти бли протестовані, шляхом нанесення цілих клітин Е. сої, які експресують НРРО, на середовища, які містять різні НРРО інгібітори. Для цих експериментів, ОНбаїрна клітини, які містять плазміди, що експресують НРРО, вирощували на середовищі їж канаміцин до досягнення ОЮОбООнм -0,5. Серійні розведення клітин були отримані в ЇВ середовищі ж канаміцин, що відповідає 00600 значенню, що становить 0,016, 0,008, 0,004 та 0,002. Десять мікролітрів кожного розведення наносили у трикратній повторності на планшети, які не містять
НРРО інгібітора, містять 250 мкм ТВТ, 250 мкм ОКМ та 250 мкМ мезотріону (М5Т). Планшети інкубували протягом 18 годин при 37 градусах С. Був проведений 505-РАСЕ аналіз; жодних відмінностей в рівнях експресії НРРО між варіантами виявлено не було.
РІНРРОЕмо40 та РІНРРОЕмо41 (5ЕО ІЮО Ме:16) виявили підвищену толерантність до ТВТ і
М5Т у цьому дослідженні у порівнянні з РІЗЗЗбУУ.
Приклад 5. Ферментативний аналіз пермутаційних мутантів.
Кінетичну активність (РІНРРО фермента порівняли з декількома пермутаційними мутантами, результати представлені в Таблиці 5 нижче. "Кт" (константа Міхаєліса-Ментен) означає кінетичний параметр, який використовується для характеристики ферментативних реакцій; він визначається як концентрація субстрату, при якій швидкість реакції дорівнює половині максимальної. Кт також визначається як концентрація субстрату, при якій швидкість реакції досягає свого максимального значення (Мтах/2), де Мтах має значення максимальної швидкості реакції.
Для визначення специфічної активності ферментів, зразки інкубували, а реакцію зупинилли через 24 хв. Специфічну активність оцінювали за мкг білка. (510)
Таблиця 5 11111111 НРР 17777171 НРР | ЕОМ 11111111 | Камкму 77777 Ксайсеку.ї7/Г/ | 77777771 со23ЕЄ | 77174247 |17777777171711716911117 11111114 огні! | 77777887 ї7777171717171711710817 11111115 6Ж Ж Ж БРсЗ КГ ЖЩ (
РІНРРОЄМОЗЗЇ | 581777 17717171 231111 11111116 Су
РІНРРОЄМОО | 7 509.77.ЙЮЙї.ЙЮ7777717171717327 |..77777171718 С согтовто | 77717 ї777777717117114777/ |Ї77777171711719 сОгаюв777/ | 77771717297...ї.7.717171717109 |... св45.77777777|7717171177156777 17717171717171717171710871111117 11111112
Специфічну активність НРРО з Рзхейдотопах Поогезсеп5 НРРО (РІНРРБ) та його мутантів отримували за допомогою спектрофотометричного методу. Зразки інкубували, реакцію зупиняли через 24 хв. Специфічну активність оцінювали за мкг білка.
Таблиця 6
Специфічна активність (Дельта-абсорбція / 24хв / мкг білка)
РІНРРОЕМмОЗЗ | ///С/СсСсСсссссссссссс7711717171п025111111111111111111111116
РІНРРОЄМОО | ///С/СсСсСс/7/го771111111110о42111111111111111111111111118 соговто | 77777771717171717171043111111111111111111111111ї19 бо2гзара | 77777Иий.7.7/ь/. «н«Н100611111111111111111111111111111111в
Таблиця 6
Специфічна активність (Дельта-абсорбція / 24хв / мкг білка)
Як показано в Таблиці 6, не було відмічено істотної відмінності в активності між білком "дикого типу" та більшістю мутантів фермента. Відповідно, очевидно, виявлену толерантність можна пояснити внутнішніми властивостями ферменту, а не дисфункцією або уповільненням активності при конвертації 4-гідроксифенілпірувату в гомогентизат.
Стійкість до дикетонітрилу (активна форма ізоксафлутолу) та мезотріону також визначали спектрофотометрично. Значення, представлені як рібБО. "5", означають, що це значення знаходиться поза інтервалом вимірів цього тесту (напр., фермент є більш чутливим, ніж значення, наведені після цього).
Таблиця 7 ої
РІНРРОЕМОЗЇЄ ///7777777711171171111111111111117145111111111111111717171снвсСсС
Таблиця 7
Толерантність до темботріону, дикетонітрилу (активна форма ізоксафлутолу) та мезотріону визначали за допомогою НРІ С аналізу. Значення, представлені як рібБоО. "»", означають, що значення знаходиться поза інтервалом вимірів цього тесту (напр., фермент є чутливішим, ніж значення, наведені після цього).
Таблиця 8 11711111 НРІЄ 17171711 НРІС 177777 РІС
РІНРРОЕМОЗЯЇ 7 /Ї77777717171717441111111171711111111713611111117117171снв со23ЕЄ 7777777 Ї7771717171717171743111111111711111111117135.1771717171снвщ боганії 7 Ї777717171717171714811777111171711711111171401111111711171снв
РІНРРОЕМОЗЯЇЇ 7 /Ї77777717171171527777777717171111111173611111111711171снвС
РІНРРОЕМОЗЇЄ 7 /Ї777777171711715277771177111111111421111117111171снв
РІНРРОЕМОО ////Ї777771717171175011117171711717171111111113211711117171снв
СОгтовмо 7777/1775 777777171717171717171717135911111117111717171снв
СО2іав 77777 Ї177717171717171717481777111171711711117117138111111711171снв
РІНРРОЕМОЇЇЇ 7 Ї7777717171717171491777711117171111111713411111117111171снв
Таблиця 8 ббо2зара777777711111С1Ї11171717171нв/177171717171711нв17717171717171снвсСС богздАЯ7777777711С1СЇ111111115011117171717171717171717171717171снві/171717171717171снвсСС боаз35Ев 777777771Ї7711117171171507777171717171717171717171717171нв/171717171717171снвсСС
Пелех сту ВД ПО т: ПО ПО ТО НО ти ббаз3бНЯ 11Ї1711111111715И1111171171111111снві171717171717171снвсСС
Согз3бЕВ 77777777 Ї77771717171717171749111111171711711711171717171нв 171717171717171снвсСС богадрао///7771Ї7771717171717171748111117111711717171717171711нв/ 171717171717171снвсС (Согадрта 7777771 Ї77717171717171717174911111111171171171717171нв. 17771717 нв
Як свідчить Таблиця 8, декілька НРРО мутантів виявили підвищену стійкість до кожного темботріону, дикетонітрилу (ізоксафлутол) та мезотріону.
Толерантність до темботріону, дикетонітрилу та мезотріону відібраних НРРО мутантів була також визначена за допомогою аналізу спряження НРРО (описаний в Прикладі 2). Значення представляють ріБо.
Таблиця 9 . . . ЗЕО І 111111 нар 171 наб 17777 нер | 771 рРЗЗЄМ | 60 1777117153 17771155 Щ | м 2
РІНРРОмМОЗ3 | (62 7177771746777771777111755 ЮщЩщ | 58 | 6
РІНРРОЕМОО | (62177742 17777748 | 509. .ЙДШБ З 8
Як показано в Таблиці 9, НРРО мутанти є більш толерантними до будь-якого НРРО протестованого інгібітора, у порівнянні з НРРО ферментом "дикого типу". Таким чином, цей винахід включає мутантний фермент НРРО, який виявляє істотно покращену стійкість до декількох НРРО інгібіторів в той же час.
Стійкість до інших НРРО інгібіторів цього класу описана в УМО2012/028579 (який включений тут у його повному обсязі шляхом посилання, однак насамперед стосовно сполук, описаних тут в Таблиці 10), однак також була визначена для НРРО ферментів, перелічених в Таблиці 10.
Стійкість оцінювали іп міго за допомогою аналізу спряження НРРО (НОЮ), описаного вище.
Значення становили рібо.
Таблиця 10 11111111 ріБо(Ноаналі)////////77777777С1С
НИ ПЕ всі Пі акті
МО 2012/028579 МО 2012/028579 рРЗЗІВМ 1 1777777711111111116б21111111111111111111111111111116611ссСсСсСсСс2С
Таким чином, відібрані мутанти виявляють стійкість до широкого спектру гербіцидів - НРРО інгібіторів.
Приклад 6. Аналіз толерантності НРРО інгібітора іп ріапіа.
Рослини сої, які експресують фермент, толерантний до НРРО інгібітора цього винаходу, разом з геном, що надає стійкості до гліфосату, та геном, що надає стійкості до до глюфосинату, були протестовані на толерантність до темботріону. Причіпний обприскувач ремгіе5 Тгаскег Зргауег калібрували перед кожним обприскуванням. Хімічною сполукою, яку використовували для тестування темботріону, була композиція ГАОБІЗФ С. Тестові обприскування були проведені з використанням 184 грамів/гектар; 34,5 95 ТВТ. Толерантність оцінювали через тиждень після обприскування. Оцінку "я" ставили рослинам, у яких тканини, що активно росли, були повністю знебарвлені. Оцінку "-- ставили рослинам, які мали незначну толерантність, тобто, найновіші рослинні тканини були дещо зеленими, а не повністю знебарвленими. Оцінку "н-- ставили рослинам, які виявили дуже легкий вплив від обприскування, тобто, деякий хлороз або було присутнє дуже незначне знебарвлення.
Результати цих тестів представлені в Таблиці 11.
Таблиця 11
РІНРРОєМОО | -////////0/о2гої111111111111 1601165 | щ-(хБ 314 :ГС
Т1 подій, що експресують РІБЗЗбУУ та РІНРРОЕмМо41 (кожен також експресує ген, який надає стійкості до гліфосату, і ген, який надає стійкості до глюфосинату), оцінювали у польових дослідах. Рослини були обприскані на м2-м3 стадіях їх глюфосинатом. Через п'ять днів після обробки, рослини, які вижили, були обприскані 2х темботріоном, 2х мезотріоном або 2х ізоксафлутолом; оцінка фітотоксичності була проведена через 7 днів. Дев'ять з-поміж 18 подій, що експресують РІНРРОЕМмоОЯ411, і 0 з-поміж 18 подій, що експресують РІБЗЗбУУ, виявили меншу, або рівну 20 95 середню фітотоксичність в результаті післясходового застосування темботріону при 200 га... /га.
У польових дослідженнях в Аргентині, 5 з-поміж 10 Т2 РІНРРОЕмоя411, і 1 з-поміж З РІСУУЗЗ36б подій виявили меншу або рівну 18 95 максимальну фітотоксичність в результаті післясходового застосування ізоксафлутолу при 210 г а.р. /га.
У польових дослідженнях, проведених в США (Міннесота), 7 із 7 Т2 РІНРРОЕМмоО41, і 1 із 11
РІСУУЗ33б6 подій виявили меншу або рівну 25 95 максимальну фітотоксичність в результаті післясходового застосування темботріону при 200 г а.р. /га.
Приклад 7: Генерування мутантів інших НРРО ферментів.
Штами АТХ22717 та АТХ1974 були ідентифіковані за допомогою аналізу, який зв'язує НРРО активність з утворенням рожевого /жовто-гарячого кольору, який можна виявити візуально.
Включення засобів "гасіння" хінону було використано, для того щоб покращити чутливість тесту іп міго. Для "гасіння" хінону було використано МВТН або 3-метил-2-бензотріазолін гідразин. Як фенолоксидази, так і НРРО, є діоксигеназами, які утворюють хінонову сполука як проміжний продукт; ці хінони після цього зазнають швидких та спонтанних електронних перебудов, які приводить до утворення "даунстрім" продукту, що є більш стійким, такого як меланін (у випадку
Зо фенолоксидаз) або гомогентизат (у випадку НРРОБ)), та нерозчинним. При утворенні комплексу з хіноном, МВТН-хіноновий продукт утворює рожевий /жовто-гарячий колір. Додавання МВТН агента, який "гасить", підвищує чутливість тесту приблизно у 5 разів.
Штами вирощували на ІВ агарі упродовж приблизно 24 годин. Клітини пелетували за допомогою центрифугування, ресуспендували в 72 об'ємі 20п7М НЕРЕ5 буферу, рН 711, і лізували за допомогою "бісерного млинка". 5Х0мкл екстракту штаму додавали до 150мкл МВТН тестової суміші у 96-комірковому планшеті з конічним дном. Кінцева тестова суміш містила 10УМ МВТН, 0 або 1мМ гідроксифеніл пірувату (НРР), 20мММ НЕРЕЗ буферу, рН 7.1, і або 0, 10мкМ, або 1мМ темботріону (ТВТ). 96-комірковий аналітичний планшет струшували після цього при 200об/хв на напольному шейкері, 30 градусах С упродовж приблизно 22 годин перед проведенням підрахунку. Було показано, що штами АТХ22717 та АТХ1974 є толерантними до
ТВТт.
Штам АТХ22717 - це штам Рзейдотопах аегидіпоза, виділений із зразка грунту, зібраного в
Північній Кароліні, США.
Штам АТХ1974 - це штам Рзхепдотопах адагісі, виділений із зразка грунту, зібраного в
Північній Кароліні, США.
Гени НРРО були ідентифіковані серед штамів за допомогою наступних етапів: - Приготування тотальної ДНК зі штаму. Тотальна ДНК містить як геномну ДНК, так і екстрахромосомну ДНК. Екстрахромосомна ДНК містить суміш деяких або всіх наступних елементів: плазміди різного розміру; фагові хромосоми; інші неохарактеризовані екстрахромосомні молекули. - Секвенування ДНК. Тотальна ДНК секвенується із застосуванням методів Мехі-Ссепегайоп зЗедиепсіпд. - Збирання послідовності ДНК за допомогою різних пакетів програмного забезпечення, включаючи Мем/ріег, рпигеаРНгарт та СІ С. - Ідентифікація НРРО генів з використанням алгоритмів гомології ДНК та білка.
Ахті30О5Н було ідентифіковано зі штаму АТХ22717. Нуклеотидна послідовність, що кодує
АхтіЗзО5Н, наводиться в ЗЕО ІЮО Мое:б0, а амінокислотна послідовність наводиться в ЗЕО І
Мо:57. АхітіЗО5Н поділяє 99,7 95 ідентичності до ЗЕО ІЮ Мо:29696 в Опублікованій заявці на
Патент США Ме 20070020624.
Ахіті3з09Н було ідентифіковано зі штаму АТХ1974. Нуклеотидна послідовність, що кодує
Ахтіз09Н, наводиться в ЗЕО ІЮО Ме:61, і амінокислотна послідовність наводиться в 5ЕО І
Мо:58. АхтіЗО9Н поділяє 99,7 95 ідентичності з ЗЕМВАМКФО Інвентарний Мо УР 348648.
Штам Сотатопавх іевіовіегопі було відібрано як потенційне джерело для ферментативно сприятливого НРРО, тому що було встановлено, що він продукує піомеланін, похідну сполуку гомогентизинової кислоти, яка є продуктом НРРО активності (Тигіск єї аї., 2005, Місгобіа!
Меїабоїїе Рієїй Оеріоутепі Верогі. МУЗАОС-ТВ8-2005-00455).
Пошук загальнодоступних баз даних ВІ АБТ свідчив, що існує дві різні форми НРРО, представлені у видів бактерій Сотатопавз іезіозіегопі, один має 362 амінокислоти у довжину, а інший - 373 амінокислоти завдовжки. Геномна ДНК Сотатопав5 їевіозіегопі ОМА (АТССФ каталожний номер 700441) була ампліфікована за допомогою ПЛР з використанням праймерів, сконструйованих для обох НРРО генів, виходячи з відомої нуклеотидної послідовності штамів
Сотатопаз іезіозієгопі СМВ-2, КЕ-1, і 544, виявлених в базі даних ВІ А5Т.
ПЛР продукти були розщеплені за допомогою В5рнІ та Хба І і клоновані у рЗЕ420, відрізані за допомогою Місої! та хваї.
Нуклеотидна та похідна амінокислотна послідовність НРРО, що має 373 амінокислоти у довжину, не є ідентичною до будь-якої описаної послідовності СоттатопаФх їевіозіегопі НРРО, як показано в пошуку ВІ А5Т. Вона на 99 95 подібна до Сотатопав іевіо5іегопі 544. Ця нова послідовність зараз називається як Ахіті428Н. Нуклеотидна послідовність, що кодує Ахіті428Н, наводиться в 5ЕО ІЮ Мо:62, і амінокислотна послідовність наводиться в 5ЕО ІЮ Мо:59.
Активний НРРО фермент продукуватиме коричневий пігмент, піомеланін, оскільки він
Зо конвертує гідроксифенілпіруват до фенілпірувату і до гомогентизинової кислоти. Утворення цього пігмента може бути візуалізовано. Клітини ОНзЗаїрпа, які експресують Ахіті428Н білок, вирощували до насичення на середовищі І В, а після цього 1Омкл насиченої культури наносили на 10О0мкл ЇВ агарові пластини, що містять 0, 0,5, 1,0 та 2,0мМ темботріону. Лунки фотографували приблизно через 16 годин додаткового вирощування при 37 градусах С.
Ахті428Н також характеризували кінетично за допомогою кінетичного аналізу іп міго, який пов'язує утворення гомогентизинової кислоти з ферментом гомогентизат 1,2-деоксигеназою (НО). НОО конвертує гомогентизинову кислоту до малеїлацетоацетату, моніторинг якого проводиться, оскільки він поглинається строго при 321нм. Моніторинг утворення продукту проводився постійно в режимі реального часу у 96-комірковому планшеті-спектрофотометрі у присутності варіюючих концентрацій субстрату, від лімітуючої до насичуючої, що робило можливим визначення Кт ферменту за допомогою стандартної кінетики Міхаєліса-Ментен. Кі може бути визначена за допомогою побудови графіка зміни цього Кт у присутності змінних кількостей інгібітора темботріону.
Для цього дослідження, Ахіті428Н фермент отримували шляхом вирощування трансформованих ЮОНбаїірпа клітин струшуванням при 250 об/хв при 37 "С до досягнення культурою 00600, що становила 0,6-0,7. Температуру після цього знижували до 30"С, а культури продовжували струшувати протягом приблизно 20 годин. Клітинні культури пелетували за допомогою центрифугування та ресуспендували в 1/20 об'ємі 20мММ НЕРЕЗ5, рН 7,0, 50мМ масі буферу. Лізис клітин здійснювали додаванням І УЗОМАЗБЕ "М (Момадеп) протягом 45 хв при кімнатній температурі та заморожували при -20 градусах С протягом щонайменше 1 години. Клітинні екстракти розморожували безпосередньо перед тестуванням, освітлювали центрифугуванням та тестували на активність присутності варіюючих рівнів субстрату та інгібітора з надлишком НОО фермента. Аналіз кінетичних даних дав кінетичні константи, наведені в таблиці нижче. Ахіті428Н має подібний рівень толерантності до темботріону, що й мутований РІСЗЗбУУ ген; обидва виявляють вищу толерантність, ніж природний НРРО у сої.
Таблиця 12
Мутації, представлені в деяких мутантних НРРО ферментах, описаних тут, були інтродуковані у відповідні положення інших нативних НРРО ферментів, включаючи АхтізЗо5нН,
АхтізО09Н та Ахті428Н з намаганням покращити толерантність цих ферментів.
Таблиця 13 свідчить про ідентичність послідовності між різними НРРО білками.
Вирівнювання було виконано за допомогою АЇЇдпХ.
Таблиця 13 77111111. | РЮЗЗБМУ | Ахтізбон | Ахті428Н. | АхтізоБНЩГ
Набір для сайт-спрямованого мутагенезу ОШІКСНАМСЕФ І ідпіпіпд був використаний для сайт-спрямованого мутагенезу генів у векторі рР5Е420. Мутанти, отримані за допомогою цього підходу, трансформували в ВІ21-ОЕЗ" клітинах і вирощували до насичення на І В середовищах.
Аліквоти після цього наносили на І В агарові пластини, які містять різні кількості темботріону.
Згідно з цим методом, активний НРРО фермент утворює коричневий пігмент через, приблизно, 24 години росту на планшеті. За допомогою цього дослідження було показано, що всі генеровані мутанти мали НРРО активність, яка була значно резистентнішою до інгібування темботріоном.
Визначали толерантність мутантів до темботріону, дикетонітрилу (ізоксафлутолу) та мезотріону, використовуючи метод спряження. Результати, представлені в Таблиці 14 як "»».", означають, що вони знаходяться поза інтервалом вимірювання, але є значно вищими, ніж числа, наведені нижче.
Таблиця 14 00111111... | рію Темботріон ірісоДикетонітрил| рісоМезотрон | Кт(мкм) |(
Ахтізо5Н-ЕМод!ї | 68 2 щ((Г 50 2 ЮЩ(| 52 | 86 б
Дані, наведені в Таблиці 14, свідчать, що мутації або комбінації мутацій, ідентифікованих тут, є ефективно відповідальними за покращення стійкості до НРРО інгібіторів, незалежно від природи НРРО білка, в який вони вводяться.
Приклад 8. Клонування НРРО генів в рослинних експресійних касетах.
Для кожного НРРО гена, описаного тут, відкрита рамка зчитування (ОКЕ) може бути ампліфікована за допомогою ПЛР з непроцесованої (повної) матриці ДНК. Сайти рестрикції Ніпа
Зо ЇЇ можуть бути введені до кожного кінця відкритих рамок зчитування у процесі ПЛР. Додатково, нуклеотидна послідовність АСС може бути вставлена безпосередньо в 5'-кінці до старт-кодону гена, для того щоб підвищити ефективність трансляції (Когак (1987) Мисієїс Асіа5 Кезеагсп 15:8125-8148; дозі (1987) Мисієїс Асід5 Везеєагсп 15:6643-6653). Продукт ПЛР може бути клонований та секвенований за допомогою методик, загальновідомих з рівня техніки, для того щоб пересвідчитись, що в процесі ПЛР не була введена жодна мутація.
Плазміда, яка містить ПЛР-продукт, може бути розщеплена Ніпа І, а фрагмент, який містить інтактну ВРЗ, може бути виділений. Цей фрагмент може бути клонований в сайті Ніпа ПІ плазміди, такої як рАХ2О00, в рослинний експресуючий вектор, який містить промотор актину рису (МеЕїЇгоу еї аї. (1991) Моїес. Сеп. Сепеї. 231:150-160) і Ріпі! термінатор (Ап еї аї. (1989) Те
Ріапі Сеї! 1:115-122). Фрагмент промотор - ген - термінатор із цієї проміжної плазміди можуть бути після цього субклоновані в плазміду рОВ11 (дарап Тобассо, Іпс.) для створення остаточної роВ11-основаної плазміди. Ці реВ11-основані плазміди типово організовані так, що фрагмент
ДНК, який містить конструкцію промотор - ген - термінатор може бути вирізаний в результаті подвійного розщеплення за допомогою ферментів рестрикції, таких як Крп І та Рте |, і використані для трасформації в рослинах за допомогою аерозольної ін'єкції (аегозоїЇ Ббеат іпіесіоп). Структура отриманих клонів, основаних на реВ11, може бути верифікована шляхом рестрикційного розщеплення та гель-електрофорезу, і за допомогою секвенування через різні клонуючі з'єднання.
Плазміда може бути перенесена в штам Адгобасіегішт ішпеїасіеєп5 І! ВА4404, який також несе плазміду рО5ВІ! (дарап Тобрассо, Іпс.), з використанням методики трипарентального схрещування, загальновідомої в галузі, і висаджуванням на середовища, які містять спектиноміцин. Клон на основі р5В11 плазміди несе ген стійкості до спектиноміцину, однак плазміда має вузький спектр господарів і не може бути реплікована в Адгобасієгішт.
Резистентні до спектоміцину колонії виникають, коли плазміди на основі реВ11 інтегрують в плазміду рОВІ1 із широким колом господарів, шляхом гомологічної рекомбінації. Коіїнтегрований продукт рЗВІ і плазміди на основі рЗВ11 може бути верифікований за допомогою Саузерн-блот гібридизації. Штам АдгоБрасіегішт, який несе коінтеграт, може бути використаний для трансформації кукурудзи за допомогою методів, відомих з рівня техніки, таких як, наприклад, метод РигеїЇпіго (дарап Тобрассо).
Приклад 9. Трансформація сої.
Трансформацію сої здійснюють за допомогою загальновідомих методів, таких як метод
Адгорасієгйт їштеїасіеп5е-опосередкованої трансформації з використанням експлантів у вигляді сім'ядолей сої, описаний Ра? еї аї. (2006), Ріапі сеї! Кер. 25:206. Трансформанти були ідентифіковані з використанням ізоксафлутолу чи темботріону як селективних маркерів. Була відмічена поява зелених пагонів, що було відзначено як індикатор стійкості до гербіцидів ізоксафлутолу або темботріону. Стійкі трансгенні пагони виявлятимуть нормальне позеленіння, порівнянне з пагонами сої дикого типу, необробленими ізоксафлутолом чи темботріоном, в той час як пагони сої "дикого типу", оброблені тією ж кількістю ізоксафлутолу чи темботріону, будуть повністю знебарвленими. Це свідчить, що присутність НРРО білка обумовлює стійкість до гербіцидів - інгібіторів НРРО, типу ізоксафлутолу чи темботріону.
Стійкі зелені пагони переносили на середовище для укорінення або прищеплювали.
Укорінені рослинки повинні бути перенесені до теплиць після періоду акліматизації. Рослини, що містять трансген, після цього обприскуються гербіцидами - НРРО інгібіторами, як, наприклад, темботріоном в концентрації 100г а.і. /га. Через 10 днів після обробки оцінюються симптоми, викликані застосуванням гербіциду, та порівнюються 3 симптомами, що спостерігались на рослинах дикого типу за тих же умов.
Приклад 10: Укорінення та селекція рослин бавовника ТО.
Трансформація бавовника здійснюється за допомогою загальновідомих в галузі методів, особливо хороший метод описаний в опублікованому Патенті РСТ УМО 00/71733. Розмножені рослини переносяться до теплиці. Після періоду акліматизації рослини, які достатньо підросли, обприскуються гербіцидами - НРРО інгібіторами, як, наприклад, темботріоном, еквівалентним 100 г а/га, доповненим сульфатом амонію і метиловим ефіром ріпакової олії. Через сім днів після обприскування оцінювали симптоми, які виникли через застосування гербіциду у порівнянні з симптомами, що спостерігались у рослин бавовника "дикого типу", які піддавали тій же обробці за тих же умов.
Приклад 11. Трансформація клітин рослин кукурудзи шляхом Адгорасієегійт- опосередкованої трансформації.
Найкращий час для збору початків - 8-12 днів після запилення. Зародки ізолювали з початків; зародки, розміри яких становили 0,8-1,5 мм, були кращими для використання при трансформації. Зародки розташовували щитком догори на прийнятному |інкубаційному бо середовищі та інкубували протягом ночі при 25 "С у темряві.
Однак, не є необхідним рег 5е інкубувати зародки протягом ночі. Зародки приводять у контакт зі штамом Адгобасіегішт, який містить відповідні вектори, що мають нуклеотидну послідовність цього винаходу для перенесення за допомогою Ті- плазміди протягом приблизно 5-10 хв, і після цього переносять на середовища для співкультивування протягом приблизно З днів (25 "С у темряві). Після сумісного культивування, експланти переносять на середовища для відновлювального періоду приблизно на п'ять днів (при 25 "С у темряві). Експланти інкубуються на селективному середовищі протягом до восьми тижнів, залежно від природи та особливостей конкретного селективного середовища, яке використовується. Після періоду селекції, отриманий калюс переноситься на середовище для дозрівання зародків, до того часу, коли спостерігається утворення зрілих соматичних зародків. Отримані зрілі соматичні зародки після цього поміщають за умов низької інтенсивності освітлення та ініціюють процес регенерації, як відомо з рівня техніки. Отримані пагони укорінюють на середовищах для укорінення, а отримані рослини переносять у горщики та розмножують як трансгенні рослини.
Всі публікації та заявки на патент, згадані у цьому описі, свідчать про рівень кваліфікації осіб, що є фахівцями в галузі, якої цей винахід стосується. Всі публікації та заявки на патент, включені тут шляхом посилання тією ж мірою, якби кожна публікація чи заявка на патент була специфічно та індивідуально включена шляхом посилання.
Хоча вищезгаданий винахід був описаний з певними деталями шляхом ілюстрацій та прикладів з метою чіткого розуміння, є очевидним, що певні зміни та модифікації можуть практикуватись в межах формули винаходу, яка додається.
Перелік послідовностей «1105 БАЙЄР КРОПСАЄНС ЛП
БАЙЄР КРОПСАЄНС АГ
ПОРІ, Фабьєн
ХАЙНРІХС, Фолькер
ЛАНГЕ, Гудрун
Зо ЛАБЕР, Бернд
ПІТЕРС, Шеріл
СХОУТЕН, Лаура «1205 ВАРІАНТИ НРРО ТА СПОСОБИ ІХ ЗАСТОСУВАННЯ «1305 2912939-19973М001 «1505 61/766,057 «1515 2013-03-15 «1505 2 61/790,404 «1515 2013-02-18 «1505 61/707,037 «1515 2012-09-14 «1605 77 «1705 патент, версія 3.5 «2105 1 «2115 358 «2125 РЕТ «2135 Рвепдотопав ЕЄ1цогевсепв «4005 1
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 60 1 в; 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Зо Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій Аза Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
З5
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув с1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! Гу ТПг Тгр Авр Аїа Іей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Акд пуб б1у АвБр Авр с1у Рпе с1у бій Щ1У 325 330 335 (516) Авп о Рпе пув Аїа Те Рпе сій бек І1е бій Агд Авр біп Уаії Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр «2105 2 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - РІСЗЗОМ «4005 2
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рое с1ц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тем Туг Агуд біп с1у бій Іїе Авп Гей І1е Гей Ап Авп біц Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Зо Месє Азїа Рпе Акуд Уа1і пув Авр бек сбіп пув Аза Туг Авп Агуд Аїа ТІецй 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
З5
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув б1у І1е с1у б1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаії сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Рпе Агуд бій Аза Агд Туг Робе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240 (516) Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Ар Гей Уаії Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 сі Меє еп біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів сіу бій Ркго Уаї АвБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп І1їе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у сій Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 З «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - РЕНРРОЕУОо37 «4005 З
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе
З5 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 40 Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо 45 зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 50 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110 55 АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140 60
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі с1іу Аїа сіу Гей пув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Робе Агуд бій Тгр Агуд Тук Робе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! Гув ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 сі Меє Гец біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів с1у бій Рго Уаі Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Зо
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у сій Тгр
З5 325 330 335
Авп о Рпе пув Аїа ІТецш Рпе бій бек Іїе бій Агуд Авр біп Уаі Агд Агд 340 345 350 40 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 4 45 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» 50 «223» НРРО мутант - СО2З4АЕб «4005 4
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 55 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 (516) Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго
Зо 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе сіу Бек Тгр 325 330 335
Авп о Рпе пув Аїа Те Рпе сій бек І1їе бій Агуд АвБр біп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 60
«2105 Мм5 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО24НІ11 «4005 5
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рое с1ц
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 20 Тем Туг Агуд біп с1у бій Іїе Авп Гей І1е Гей Ап Авп біц Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 25
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аїа Туг АвБп Агуд Аїа Іецй 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей
Зо 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув б1у І1е с1у б1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125 35 Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160 40 Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Рпе Агуд бій Аза Агд Туг Робе Авр 180 185 190 45
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1ї1е Агд І1е Іїецп Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 50 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг Авр Авр Гей Уаі Гпув ТПг Тер Авр Аїа Іей 55 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 (516) сі Меє еп біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів сіу бій Ркго Уаї АвБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у сій Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 6 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - РЕНРРОЕХУОЗЗ «4005 6
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
Зо
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
З5 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175 (516) Авп о Рпе Тук бій Гуз Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій А1їа Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек ПГув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! пуб ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів біу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Авп о Рпе пув Аїа ІТецш Рпе бій бек Іїе бій Агуд Авр біп Уаі Агд Агд
Зо 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355
З5 «2105 7 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність 40 «220» «223» НРРО мутант - РЕНРРОЕУОЗб «4005 7 45 Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 50
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 з9 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 60 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Зо
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп
З5 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1іу Бек 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг біп Тїец Рпе бій бег І1е б1цп Агуд Авр сіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 8 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220»
Гс10) «223» НРРО мутант - РЕНРРОЕМХО40
«4005 8
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рое с1іц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АБп бій Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аза Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у с1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Зо Тем біц сб1у Маї бій Акуд Авоп о Рго Уаї сіу Аїа с1іу Ге Ппув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
З5
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Рпе Агуд бій Аза Агд Туг Робе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр ІТец Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї (516) 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Ап оРпе пув біц Іецп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 19 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СсСОо210а10 «4005 9
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп
Зо 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 35 Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110 40
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 45 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гей Ппув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Ап Рпе Агд бій Аза Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у А1а 210 215 220 60 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! Гув ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 сі Меє Гец біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів с1у бій Рго Уаії Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг Аїа Іїец Рпе бій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 10
Зо «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО212Е3З «4005 10
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо 50 зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 55 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 60 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій Аза Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Зо Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
З5
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр АБр с1у Рпе с1у с1у Тгр 325 330 335
Авп о Рпе пув Уаії Іец Рпе бій бег І1е б1цп Агуд Авр сіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 11 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - Сб644 «4005 11
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе с1ц 20 25 30 60
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп Авп бій Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Месє Азїа Рпе Акуд Уа1і пув Авр бек сбіп пув Аза Туг Авп Агуд Аїа ТІецй 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув б1у І1е с1у б1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Рпе Агуд бій Аза Агд Туг Робе Авр 180 185 190
Зо
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рібе Гей ТПг Авр Ар Тей Уаї пуб ТпПг Тер Авр А1а Геий 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр АвБр сб1іу Рпе с1у І1е Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 60 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр «2105 12 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - С645 «4005 12
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 25 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Зо Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
З5
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 40 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 45 Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Ап Рпе Агд бій Аза Агуд Тук Рпе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240 (516) Нів Маі Аїа Рібе Гей ТПг Авр Ар Тей Уаї пуб ТпПг Тер Авр А1а Геий 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів біу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рре бек сій ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Акд пуб б1у АвБр АвБвр с1у Рпе с1у Іе 0Щ1У 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бек І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 13 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - сСО218А5
Зо «4005 13
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
З5
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140 (516) Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій Аза Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! Гув ТПг Тгр АБр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Зо
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Ап о Рпе Аїа Аїа Іецш Рпе бій бег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд
З5 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 40 «2105 14 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність 45 «220» «223» НРРО мутант - С0О216С06 «4005 14 50
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 55 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів (516) Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220
Зо сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
З5
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Авп о Рпе ТПг Аїа Іецш Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 15 «211» 358 60 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність
«223» НРРО мутант - сО213Н10 «4005 15
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сб1у Гей Меє с1у Рпе сій Ре 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТПг Нів Акуд бек Гпув Авп Уаі1ї! Нів 35 40 45
Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Ту Рпе Аї1а Аза сій Нів сіу Рго бек Уаї Сув 01У 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг біу Ркго Меє сі Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Зо Авр Агуд Рпе сбіу біц сіу бек бек І1е Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
З5
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285 (516) Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр АвБр сб1іу Рпе с1у Нів Тгр 325 330 335
Авп оРпе ТПг біп Тецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 16 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - РЕНРРОЕУОї1 «4005 16
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Зо
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уаі1ї! Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп
З5 50 з9 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа сіц Нів б1у Рго Бек Уаї Сув 01У 65 70 75 80 40 Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг сіу Ркго Меє сі Гей 100 105 110 45
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТіПг Нів Авп о Уаі Тук Агуд б1у Агуд Меє Уа1 Туг Тгр Аїа 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190 60
І1е пув бі1у біц Тук ТПпг сі1у Гей ТПг Бек пув Аза Мес бег Аї1а Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рбе АвБп б1у бі б1у Ше сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд їув с1у Авр Авр б1іу Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Ап о Рпе Аїа біп Іїецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350
Зо сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 17 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО022809 «4005 17
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 (516) Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1і Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпе Агд бій Аза Агуд І1їе Роіе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Ггув А1ї1а Меє бек Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп чІ1е біц сій Рбе Гей Меє сбіп Рбе АвБп сіу біц о1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Зо
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго АвБр ТПг Туг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп
З5 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Гей Гей Авр сіу бек бек Уаі бій с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр сіу Рое с1і1у біц Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 18 «211» 358 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - С023202 60 «4005 18
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Зо
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Робе Агуд бій Тгр бек Тук Ропе Авр
З5 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320 (516) Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр АвБр б1іу Рпе с1у бій Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 19 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО234А4 «4005 19
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 в) 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТПг Гей сій Рго І1е Рое с1іц 20 25 30
Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у бі Іїе Авп Гец І1е Гец АвБп АБп бій Рго Авп бо
Зо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95
З5 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у Іїе с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 40 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140 45 Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175 50
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 55 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 (516) сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр АБвр с1у Рпе с1у Аїа Тгр 325 330 335
Авп оРпе бек біп гейш Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 20 «211» 358 «212» РЕТ «213» штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО235Е6 «4005 20
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1їе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТБг Тей сбіц Рго І1їе Рпбе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АБп бій Рго АвБп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 50 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 55 січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у сС1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125 60
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаії сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Гуз Гей Рпе Азп Рпбе Агуд біц Аза Акуд Тук Роре Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр ІТец Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Зо
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр АБр с1у Рпе с1у Аїа 5ег 325 330 335
Авп оРпе бек біп гейш Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 21 «211» 358 «212» РЕТ «213» штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО2352 «4005 21
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15 (516) Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі с1іу Аїа сіу Гей пув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Ап Рпе Агд бій Аза Агуд Тук Робе Авр
Зо 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек ПГув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маії Аїа Рібе Гей ТПг Авр Авр Гей Уаії Пув ТпПг Тер Авр А1а Геий 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів сбіу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у бек 5ег 325 330 335
Авп о Рпе бек біп Іїец Рпе бій бек Іїе бій Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 60 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр «2105 122 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО236Н7 «4005 щД 22
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 25 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Зо Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
З5
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 40 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 45 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 60 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей біп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї1ї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе сіу Бек Тгр 325 330 335
Авп о Рпе пув бій Гей Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 23 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО2З6ЕВ8
Зо «4005 23
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Ркго Меє сб1у Гей Меє с1у Рпе сій Ре 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТПг Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аї1а Аза біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 60
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Зо
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр АБр с1у Рпе с1у Аїа 5ег 325 330 335
Авп оРпе ТПг біп Тецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд
З5 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 40 «2105 24 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність 45 «220» «223» НРРО мутант - СО24002 «4005 24 50
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє сб1у Рпе сій Ре 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 55 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТП Нів Агуд Бек пуб Авп Уаі1ї! Нів (516) Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа сіц Ні сіу Ркго бек Уаї Сув 01У 65 70 75 80
Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг біу Ркго Меє сі Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек Іїе Туг Авр Іїе Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТіПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Агуд Меє Уа1 Туг Тгр А1їа 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг сі1у Гей ТПг Бек Гув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа
Зо 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр АвБр сб1іу Рпе с1у Аза Тгр 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 60 «2105 25 «211» 358
«212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО0240012 «4005 25
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг сіу Рго Меє сіц Іецй 100 105 110
Зо АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек І1е Туг Авр І1е Авр Рпе Уаі1ї! Туг 130 135 140
З5
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уаї Туг Тгр А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Ггув Аїа Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рпе АвБп б1у бі б1у Ше сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго АвБр ТПг Туг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 60 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Гей Гей Авр біу бек бек Уаі бій с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агкд Ппув с1у Авр Авр сіу РоПе сіу бек в5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг бій Ге Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 26 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО24204 «4005 26
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
Зо Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 40
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 45 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125 50 Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 55 Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190 60
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Ггецй Гей Авр сіу Бек бек Уаї сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд Ппув с1у Авр Авр сб1і1у Рпе сіу Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350
Зо сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 27 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО244А2 «4005 Д 27
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 з9 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 60 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій с1у Сув Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Зо
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп
З5 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Ап оРпе пув Аза Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 28 «211» 358 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО244Е5 60 «4005 28
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг ІТеп сій Рго І1е Рое с1іц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тем Туг Агуд біп с1у бій Іїе Авп Тей Іїе Гей АБп АБп о біц Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп ув Азїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув сб1у Іїе сіу с1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Зо
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Рпе Агд бій с1у Агуд Тук Ропе Авр
З5 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гей Авп бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Пув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320 (516) Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг Аїа Іецш Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 29 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - С02478В6 «4005 29
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо
Зо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Іецй
З5 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110 40 АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув с1іу Іїе сіу с1у Аїа Рго Гей Туг ІГецшп Те 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140 45
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі с1іу Аїа сіу Гей Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175 50
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Авп Роре Агуд бій бек Агуд Тук Робе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 55 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп о біц бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 (516) сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гей Уаії Ппув ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів біу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Робе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у біп б5ег 325 330 335
Ап оРпе пув біц Іецп Рпе бій бек Іїе бій Агуд Авр сбіп Уаі Агд Аг4д 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 30 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність
Зо «220» «223» НРРО мутант - СО247Н7 «4005 30
З5
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 40 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 45 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 50
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 55 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125 (516) Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Робе Агуд бій Тгр бек Тук Ропе Авр 180 185 190
Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 сі Меє Гец біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів сіу бій Ркго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Зо пув Агуд Гецп Гецп Гей біп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї1! 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1іу Бек 5ег 325 330 335
З5
Авп о Рпе ТПг біц Тецп Рпе бій бег І1е б1цп Агуд Авр сіп Уаії Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 31 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО252БЕ11 «4005 31
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Ркго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 60 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Робе Агуд бій бек Сув Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Зо Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Авп оРпе ТПг біп Тецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 32 60 «211» 358 «212» РЕТ
«2135 штучна послідовність «223» НРРО мутант - С0255812 «4005 32
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТП Нів Акуд бек пуб Авп Уаі1ї! Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа сій Нів сіу Рго бек Уаї Сув 01У 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 сі Гей б1у Аза сбіп Рго І1їе Нів Іїе Авр ТПг сіу Рго Меє сі Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Зо
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек Іїе Туг Авр Іїе Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд сб1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Рпбе Агуд бій Тгр Сув Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг сі1у Гей ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі сій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285 (516) Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 33 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО0255С1 «4005 33
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц
Зо 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 40
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг сіу Рго Меє сі Гей 45 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125 50 Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр РіПе Уа1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 55
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уаї Туг Тгр А1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій с1у Сув Тук Ропе Авр 60 180 185 190
І1е пув бі1у біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек пув Аза Мес бег Аї1а Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рбе АвБп б1іу бі б1у Ше сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго АвБр ТПг Туг Туг 260 265 270 сі Меє еп біц с1у Акд Гей Рго Авр Нів сіу бій Ркго Уаї АвБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Гей Гей Авр біу бек бек Уаі бій с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд пув с1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг біц Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350
Зо сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 34 «2115 357 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО0255С3 «4005 34
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 (516) січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Туг Туг 260 265 270
Зо бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Ггецй Гей Авр сіу Бек бек Уаії біц с1Уу Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1і1у Рібе сіу бек 5ег 325 330 335
Ап о Рпе сій Гец Роре біц бек І1е біц Агд Авр біп Уаі Агд Агд Щ1У 340 345 350
Уаї Гей ТПг Аа Авр 355 «2105 35 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «2205 «223» НРРО мутант - СО2551Е6 «4005 35 (516) Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у бійш Іїе Авп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Зо
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Роре Агуд бій бек Бек Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго
З5 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335 60
Авп о Рпе ТПг біц Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 36 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО255Е10 «4005 36
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго І1е Рое с1іц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гец АвБп АБп бій Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ
Зо 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп ув Азїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув сб1у Іїе сіу с1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Робе Агуд бій бек Сув Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп (516) 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг Аїа Іецш Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 37 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність
Зо «220» «223» НРРО мутант - СО25681 «4005 37
З5
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 40 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 45 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 50
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 55 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у Азїа Рго Гей Тугк Гей І1е 115 120 125 (516) Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі с1іу Аїа сіу Гей Гув Уаі Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз ІТец Рпе Авп Рпбе Агд бій сіу Сув Тук Робе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп о біц бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рібе Гей ТПг Авр Авр Гей Уаї пуб ТпПг Тер Авр А1а Геий 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів біу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр
Зо 290 295 300
Тпув Агд Теп Гей Гей біп Іїе Робе бек біц ТБПг Іїец Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у бій 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг біц Іецшп Рпе бій бек Іїе бій Агуд Авр сбіп Уаі Агд Аг4д 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 38 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «2205 «223» НРРО мутант - СО256011 «4005 38
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 60
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Азїа Рпе Агуд Уа1і пув Авр бек біп пув Аза Туг АБп Агуд Аїа Іец 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Роре Агуд бій бек Бек Тук Ропе Авр 180 185 190
Зо Іїе пув с1у бій Тук ТПК с1іу Гей ТПг бек Гуз Аза Меє бег Аза Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаії АвБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей біп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї1! 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1іу Бек 5ег 325 330 335
Авп о Рпе пув біп Тец Рпе бій бег І1е б1цп Агуд АвБр сіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 60 355
«2105 39 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО256Н4 «4005 39
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Ркго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 20 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 25
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей
Зо 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 35 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 40 Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій с1у Сув Тук Ропе Авр 180 185 190 45
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 50 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240 55 Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 60 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе бек біц Іец Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Аг4д 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 40 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО0257С5 «4005 40
Зо Меє Аза Авр Гей Туг бій АБп Рго Месє сіу Гей Меєсє с1у Рпе бій Ріре 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
З5
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТПг Нів Акуд бек Гпув Авп Уаі1ї! Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо 40 зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа сій Нів сіу Рго бек Уаї Сув 01У 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 45 85 90 95 бі еп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг біу Ркго Меє сі Гей 100 105 110 50 АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек Іїе Туг Авр Іїе Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140 55
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 60 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у Гецп ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Зо
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр
З5 355 «2105 41 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО26бОВЕ11 «4005 41
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 55 бо (516) зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аза сій Нів біу Рго Бек Уаі Сув щЩ1Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 сі Гей б1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПг с1іу Ркго Меє сі Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек І1е Туг Авр І1е Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уаї Туг Тгр А1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій сб1у Агд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув бі1у біц Тук ТПпг с1у їец ТПг Бек пув Аза Мес бег Аї1а Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рбе АвБп б1у бі б1у Ше сіп
Зо 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Рбе Мес ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тук Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Гей Гей Авр біу бек бек Уаі бій с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд пув с1у Авр Авр с1іу Рпе сіу Бек 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг бій Ге Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 42 «211» 358 «212» РЕТ
Гс10) «213» штучна послідовність
«223» НРРО мутант - СО260С06 «4005 42
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Зо Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
З5
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Роре Агуд бій бек Бек Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рпе А5хп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Туг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Ггецй Гей Авр сіу Бек бек Уаі бій с1у Авр (516) 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Акуд пув б1у Авр Авр сіу Робе сіу бек 5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг біц Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сіу Уаї теп ТПг Аїа Авр 355 «2105 43 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО0262С4 «4005 43
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
Зо Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо
З5 зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 40 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110 45 АвБп о Гей Рго Аза І1е Ппув5 сіу Іїе сіу с1і1у Аїа Рго Гей Туг Іецй І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 50 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 55 Авр Нів Гей ТПг Нів Авп о Уаі! Тук Акуд с1іу Акуд Меєсє Уаї Туг Тер А1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій с1у Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190 60
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Робе І1е сбіп Акуд пув с1у Авр АвБр б1іу Рпе с1у бій Тгр 325 330 335
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350
Зо сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 44 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО262БЕЕ11 «4005 44
Месє А1ї1а Авр Гей Тук бій АБп о Рго Меєсє сіу Гей Меє с1у Рпе сій Ріе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТПг Гей сій Рго І1е Рое с1іц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у бі Іїе Авп Гец І1е Гец АвБп АБп бій Рго Авп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр бек біп ув Азїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 60 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у Іїе сіу б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Зо
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп
З5 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1іу Бек 5ег 325 330 335
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 45 «211» 358 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО26387 60 «4005 45
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1їе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТБг Тей сбіц Рго І1їе Рбе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп бій Рго АвБп 50 55 бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 січ Геп сб1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПкг с1іу Ркго Меє сій Гей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув б1у І1е с1у б1у А1а Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа с1у Іейп Гув Уаі Ше
Зо 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Гуз Гей Рпе АвБп Рпбе Агуд біц Аїа Сув Тук Рре Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг Авр Авр Гей Уаі Гпув ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї (516) 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Авп оРпе ТПг біп Тецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 46 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО263012 «4005 46
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Зо Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
З5
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 40 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125 45 Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 50
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тец Рпе Ап Рпе Агд бій Аза Агуд Тук Рпе Авр 55 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205 (516) Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув С1у А1їа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг АвБр Авр Гец Уаі! пуб ТПг Тер Авр Аїа Іей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авр Нів сіу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей біп І1е Рбе бек бій ТПг Гей Мес с1іу Рго Уаї1! 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у сбіп Тгр 325 330 335
Авп о Рпе бек біц Іец Рпе бій бег Іїе бій Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 47 «211» 358
Зо «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО261Н2
З5 «4005 47
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо 50 зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 55 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 60 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Ап Рпбе Агд бій Аза Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр
Зо 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд пув с1у Авр Авр сб1іу Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе бек Аза Іецш Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Аг4д 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 48 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «2205 «223» НРРО мутант - СО26405 «4005 48
Меє Аза Авр Гей Тук бій АБп Рго Меє сіу Гей Меєсє с1у Рпе бій Ріре 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 60
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі АзТа ТПг Нів Акуд бек пуб Авп Уаі1ї! Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп 50 з9 бо зек Іїе Аїа бек Ту Рпе Аїа Аза сій Ні б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агкуд Рпе сіу біц бі1іу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тем біц сб1у Маї сій Акуд Авоп о Рго Уаії с1у Аїа с1іу Темп Гув Уаі Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1 Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе Авп Робе Агуд бій Бек Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє бБег Аїа Рго
Зо 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Бек бек Уаї біц с1у Авр 290 295 300 пув Агуд Гецп Гецп Гей сіп І1е Рбе бек біш ТПг Гей Меє с1у Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у біп б5ег 325 330 335
Авп о Рпе ТПг біц Іецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 60 355
«2105 149 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО26407 «4005 49
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє сб1у Рпе сій Ре 1 5 10 15
Іїе бій Рбе Аза бек Рго ТПг Рго с1іу ТБг Тей біц Рго І1їе Рібе с1ци
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аза ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уаі1ї! Нів 20
Тец Ту Акуд сіп с1у біш Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго АвБп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа сіц Нів б1у Рго бек Уаї Сув 01У 25 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95
Зо сі Гей б1у Аза сіп Рго Іїе Нів І1їе АвБр ТПг сбіу Рго Меє сі Гей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
З5
Авр Акуд Рпе сіу біц біу бек бек І1е Туг Авр Іїе Авр Ріе Уаі1ї! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 40 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп оУаії Туг Агуд с1у Акуд Меє Уаї Туг Тгр А1а 165 170 175 45 Авп о Рпе Тук бій Ппув Гей Рпе Авп Рпе Акуд бій бек Агуд Тук Рібе Авр 180 185 190
І1е пув бі1у біц Тук ТПпг сі1у Гей ТПг Бек пув Аза Мес бег Аї1а Рго 195 200 205 50
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рбе АвБп б1у бі б1у Ше сіп 55 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тгр АвБр Аза Гей 245 250 255 (516) пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Рбе Мес ТрПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тен біп А1ї1а Агуд с1у І1їе ІТей Гей Авр сі1у бек бек Уаі1і! сбіц с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе пув біп ІТецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 «2105 50 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - СО26бА11 «4005 50
Зо
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц
З5 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 40 Тем Туг Агуд біп с1іу бій І1їе Авп Гей І1е Гей Ав5п АвБп бій Рго Авп бо зек Іїе Аїа бек Туг Рпе Аза Аїа біцш Нів б1у Рго Бек Уаі Сув ЩУ 65 70 75 80 45
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Теп с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе Авр ТпПг сіу Рго Меєсє сіц Іей 50 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125 55 Авр Агуд Рпе сіу біц сіу бек бек І1їе Туг Авр І1е Авр Рпе Уа1! Туг 130 135 140
Тец бі с1у Уаі бій Агуд Авп о Рго Уаі сіу Аїа сіу Гец пув Уаї І1е 145 150 155 160 60
Авр Нів Гей ТПг Ніб Авп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Уа1ї Туг Тгр А1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій сіу Бек Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув бі1у біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Гув Аза Меє бег Аїа Рго 195 200 205
Авр сіу Меє І1їе Агуд Іїе Рго Гецп Ап бій бій бек бек пув б1у А1а 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сій сій Рпе Гей Меє сіп Рпе Азхп сіу бі б1у Ше сіп 225 230 235 240
Нів Маі Аїа Рпбе їей ТПг Авр Авр Гецп Уаі Ппув ТПг Тгр Авр Аїа Гей 245 250 255
Туз Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аза Рго Рго АвБр ТПг Туг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго Авр Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец бі1іп Аза Акуд с1іу Іїе Ггецй Гей Авр біу бек бек Уаі бій с1у Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Зо Рпе Рпе бій Рбе І1е сбіп Агуд Пув б1іу АвБр Авр с1іу Рібе сіу Рго 5ег 325 330 335
Авп оРпе ТПг біп Тецшп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350
З5 сі1у Маї Іейп ТПпг Аза Авр 355 40 «2105 51 «2115 357 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність 45 «220» «223» НРРО мутант - Ахті3О5Н-Еуо40 «4005 ч406м51 50 Месє АБп Аза Уаії Аїа пув І1е сій сбіп Нів Ав5п Рго І1е с1у ТПг Авр 1 5 10 15 сб1у Рпе бій Рпе Уаі бій Рпе ТПг Аза Рго Авр Аза Ппув с1у І1е б1ц 20 25 30 55 біп Гей Агкуд сбіп Гей Рпе Авхп Меє Меє сіу Рбе ТПг біц ТБПг А1тїа Гу
Нів Агуд бек пув біц Уаії Рбе Гей Робе біп біп АвБп АвБр І1е АБп Пе 60 50 55 бо
Уаї гей Авп сіу Бек Рго ТПг сіу Нів Уа1 Нів сіц Рбе Аїа Іецй Гув 65 70 75 80
Нів сіу Ркго Бек Аїа Сув Аїа Меє Аза Рібе Агд Уаії Гув АБп Азїа 5ег 85 90 95 біп Азї1а Аза Аза Туг Аїа бій бек сбіп сіу Аїа Ппув Гей Уаї сіу бег 100 105 110
Нів Аза Ап Рібе сіу сбіц Гей АБп о І1е Рго бек Те сбіц с1у І1е с1Уу 115 120 125 бі1у бек Геп Гей Тук Ге Уаі1і Авр Агуд Тук с1у Авр Агд бек І1е Туг 130 135 140
Авр Уаі1 Авр Робе біцш Рпе І1е біц сб1у Агкд бек Аза Авп Авр Авп бег 145 150 155 160
Ууаї с1у Гей ТПг Тук Іїе Авр Нів Гей ТПг Нів Авп Уа! Гув Акд Щ1У 165 170 175 біп Меє Авр Уаі Тгр Бек с1і1у Рпе Ту бій Агуд І1їе Аїа Авп Робе Агд 180 185 190 бі І1е Акуд Тук Рпе Авр Іїе сій с1іу Ппув Гей ТПг сіу Пец Рібе 5ег 195 200 205
Акуд Аза Месє ТПг Аза Рго Сув біу їув І1е Агд І1е Рго Іїе Ап сіц 210 215 220
Зо зек Аїа Авр Авр ТПг бек сіп І1е сій бій Рпбе І1їе Агуд сі Тук Нів 225 230 235 240 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей ТПг ТПг Авр Авр І1е Туг А1а 245 250 255
ТпЕ Маії Агкуд Пув тей Агуд Авр АБп о біу Уаі Пув РіПе Мес бек ТПг Ркго 260 265 270
Авр ТПг Тук Тук біц Гуз Маї Авр ТПг Агуд Уа! Аза с1у Нів сі1у сіц 275 280 285
Рго Гец біц біп Тец Агуд бій Тец АвБп Тецй Те Іїе АвБр о1у Аїа Рго 290 295 300 б1у Авр Авр сі1у Іїе Гей Гей сбіп Іїе Рпе ТПг Ар ТПг Уаї І1е 01У 305 310 315 320
Рго І1їе Робе Робе біцш І1е І1е сіп Агд Гув б1у АБп сбіп с1у Рбе 01Уу 325 330 335
Рго Бек Авп Рпе Ппувз бій Гей Рпе сій бек І1е сбіц бій Авр сіп І1е 340 345 350
Акуд Агуд с1іу Уаї І1е 355 «2105 52 «2115 357 «212» РЕТ
Гс10) «213» штучна послідовність
«223» НРРО мутант - Ахті30О5Н-ЕУуо41 «4005 Д 52
Меє Авп Аїа Уаі Аза пув І1е біш сіп Нів АвБп Рго І1е с1у ТПг Авр 1 5 10 15 сб1у Рпе бій Рпе Уаі бій Рпе ТПг Аїа Рго Авр Аза пув с1у І1е б1ц 20 25 30 біп Гей Агкуд сбіп Гей Рпе Авхп Меє Меє сіу Рбе ТПг біц ТБПг А1тїа Гу 35 40 45
Нів Агд бек Пув біц Маї Рре гейш Рпе сіп сбіп АвБп Авр І1е Ап І1е 50 55 бо
Уаї гей Авп сіу Бек Рго ТПг сіу Нів Уа1 Нів сіц Рбе Аїа Іецй Гув 65 70 75 80
Нів б1іу Рго бек Аїа Сув Аза Мес Аза Рпе Акуд Уа! Гуз АвБп Аїа 5ег 85 90 95 біп Азї1а Аза Аза Туг Аїа бій бек сбіп сіу Аїа Ппув Гей Уаї сіу бег 100 105 110
Нів Аїа Авп Рпе сіу біц ІТец Авп І1е Рго бек Те сій С1у ІШе Щ1У 115 120 125 бі1у бек Геп Гей Тук Ге Уаі1і Авр Агуд Тук с1у Авр Агд бек І1е Туг
Зо 130 135 140
Авр Уаі1 Авр Робе біцш Рпе І1е біц сб1у Агкд бек Аза Авп Авр Авп бег 145 150 155 160
Уаї б1у Гешп ТпПКг Тук Іїе Авр Нів Ге ТПг Нів Авп Уаії пув Агд 1У 165 170 175 біп Меє Авр Уаі Тгр Бек с1і1у Рпе Ту бій Агуд І1їе Аїа Авп Робе Агд 180 185 190 січ І1ї1е Агуд Тук Рпе Авр І1е бій сіу Ппув Гецп ТПг с1у Гей Роре 5ег 195 200 205
Акуд Аза Месє ТПг Аза Рго Сув біу їув І1е Агд І1е Рго Іїе Ап сіц 210 215 220 зек Аїа Авр АвБр ТПг бек біп І1е бій бій Рпе І1ї1е Агдуд сій Тук Нів 225 230 235 240 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей ТПг ТПг Авр Авр І1е Туг А1а 245 250 255
ТпПг Уаі1 Акуд пуб Гец Агд АвБр Авп о сіу Уаії пуб РрПе Меє бек ТПг Рго 260 265 270
Авр ТПг Тук Тук біц Ппув Уаі Авр ТПг Акуд Уаії Аїа с1у Нів с1у с1іц 275 280 285
Рго Гец біц біп Тец Агуд бій Тец АвБп Тецй Те Іїе АвБр с1у Аїа Рго 290 295 300 60 б1у Авр Авр сі1у Іїе Гей Гей сбіп Іїе Рпе ТПг Ар ТПг Уаї І1е 01У 305 310 315 320
Рго І1їе Рпбе Робе біцш І1е І1е сіп Агд Гув б1у АБп сбіп б1у Рпе 0Щ1У 325 330 335
Рго Тгр АБп Рпе Аза біп Гей Робе біц бек І1е сій бій Ар сбіп Те 340 345 350
Агуд Агуд с1у Уа1ї І1е 355 «2105 53 «211» 358 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - Ахті305Н-Еуо40 «4005 53
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1е біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те бій Рго І1е Рое с1іц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів
Зо 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у Аїа Іїе АвБп Гей Іїе Іец АБп АБп бій Рго Нів 50 55 бо зек Уаі Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп ув Азїа Туг АвБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 бі Тепй с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе бій ТПг сіу Ркго Меє сіц Іей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув сб1у Іїе сіу с1у Аза Рго Гей Тукг Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц б1і1у бек бек І1е Туг Авр І1їе Авр Рпе Уа1 Ріє 130 135 140
Тец бі сб1у Уаі Авр Агуд Авп Рго Уаі сіу Аїа с1у Іїейп Гув Ше Ше 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів АвБп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Аїа Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп о Рпе Тук бій Гуз Гей Рпе Авзп Рбе Агуд біц І1їе Акд Тук Роре Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє ТПг Аза Рго 195 200 205 60
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гей АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сбі1у бі1іп І1е сі бій Рпе Гей Меє сіп Рпе Авхп сіу сіц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тер АБр сіп Гей 245 250 255 пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго АвБп о Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец біп бек Агкуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Аїа бек Авр Гув бій Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гуз б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго 5ег 325 330 335
Ап оРпе пув біц Іецп Рпе бій бБег І1е б1п Агуд Авр сбіп Уаі Агд Агд 340 345 350 сі1у УМаії тей Аза ТПг с1іц
Зо 355 «2105 ч54 «211» 358 «2125 РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - Ахті30О5Н-ЕУуо41 «4005 54
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 1 5 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго біу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30
ІІе Месє с1і1у Рре ТПг Гув Уаі Аїа ТП Нів Агуд Бек Гув Авп Уа1ї Нів 35 40 45
Тец Ту Акуд сіп с1у Аїа Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп біц Рго Нів 50 55 бо зек Уаі Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Агкуд Уа1 Ппув Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аїа Гей 85 90 95 60 бі Тепй с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе бій ТПг сіу Ркго Меє сіц Іей 100 105 110
Авп о Гей Рго Аїа І1е Гув б1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Туг Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц б1і1у бек бек І1е Туг Авр І1їе Авр Рпе Уа1 Ріє 130 135 140
Тем біц б1у Маії Авр Акуд АвБп о Рго Уаї с1у Аїа с1у Те Ппув І1е І1е 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів АвБп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Аїа Туг Тер Аї1а 165 170 175
Авп оРпе Тук біц Гуз ІТец Рпе Ап Рпе Агуд бій Іїе Агд Тук Робе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє ТПг Аза Рго 195 200 205
Авр с1іу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АвБп бій бій бек бек пув С1у А1а 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аїа Рібе Гец ТПг Авр Авр Гей Уаі Ппув ТПг Тер Авр сіп Іей 245 250 255
Зо пув Ппув І1е сб1іу Меє Акуд Робе Меє ТПг Аза Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє тей сі с1у Агд Гей Рго Авп о Нів біу біц Рго Уаі АБр сіп 275 280 285
З5
Тец біп бек Агкуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Аїа бек Авр Гув бій Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Робе бек бій ТПг Гец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд ув б1у Авр Авр с1у Рпе с1у Рго Тгр 325 330 335
Авп о Рпе Аїа біп Гей Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у УМаії тей Аза ТПг с1іц 355 «2105 щМО55 «2115 373 «212» РЕТ «213» штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - Ахті3О5Н-Еуо40 60 «4005 55
Меє Авп АТа Рго Гей ТПг біп бек Авп Аза бБег біп Рпе біп ТПг Тгр 1 5 10 15
Авр Авп о Рго Месє б1і1у ТПг Авр біу Рпе бій Рпе Уаі сій Туг Аза Аї1а 20 25 30
Рго Авр Рго Уаі А1їа Меє сі1у біп Іїецшп Рпе бій Агкуд Меє с1у Ропе сіп 35 40 45
А1ї1а чІ1е Аїа Туз Нів Агуд Агуд Ппув Ап Уа1! ТПг Гей Туг Агд сбіп с1Уу 50 55 бо бі І1е АБп Рпе І1їе Іїе А5п Аза бій Рго Авр бек Роіе Аза сіп Агд 65 70 75 80
Рпе Аїа Агд Іец Ні б1у Рго бек Уа! Сув Аза І1е Аїа І1їе Агк9д Уаї 85 90 95
Ап о Авр Аза пуб Туг Аї1а Туг біц Агуд Азї1а ТПг о бБег Геш с1у Аїа Тгр 100 105 110 сі1у Тук Аїа сіп сбіп Аїа Аза Рго сіу бій Гей бек І1ї1е Рго Аза І1е 115 120 125 пув бі1у І1е б1у Авр бек Тей І1їе Туг Рпбе І1е Авр Гуз Тгр Агд Щ1У 130 135 140
Тув Авп обіу Аїа Гпув Авр с1іу Авр Гей с1у Авп І1е бек Рібе Робе Авр 145 150 155 160
Зо
Уаї Авр Рпе бій Ркго Гей Рго сбіу Аза Авр Гец Ніб Рго біцп с1Уу Іецй 165 170 175 сб1у Гецп ТПг Туг Іїе Авр Нів Гей ТПг Авп Ап Уа1 Туг Агд с1у Аг4д 180 185 190
З5
Меє Аза бій геш Аза сій Рбе Тук сій Агуд І1е Робе АБп Рпе Агд сіцй 195 200 205
І1е Акуд Туг Робе АвБр І1е сій сбіу біп А1ї1а ТПпг сіу Уа1 Ппув бек Гув 210 215 220
Аза Меє ТПг бек Рго Сув б1у Ппув І1е Агд І1е Рго І1е А5Бп бій сіц 225 230 235 240 с1у АвБп Авр Гпув Аїа с1іу біп І1е сбіп сбіц Тук Гей Авр Меє Тугк Агд 245 250 255 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей сіу бек ТПг Авп Гец Туг Авр 260 265 270
ТПг Уаі1 Авр сіу Пец біп Меє Авп сіу І1е Гув Гей Гей Авп ТПг 5ег 275 280 285 бі ТП Тук Тук бій Гей Гей Рго Ппув Агуд І1їе Рго Авр Гец сСіп бій 290 295 300
Рго І1їе Рго біц Іец Те Аза Агд АБп І1е Гей Уа1і Авр с1у біп Рго 305 310 315 320 (516) сіу бій Гецп Гецп Гей сбіп І1е Рібе бек бі Авп сіп Те с1у Рго Те 325 330 335
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Акуд пув с1у Авп бек сіу Робе с1іу Рго 5ег 340 345 350
Авп о Рпе пув бій Гецп Рпе сій ТПг Меє бій тей Авр біп Меє Агд Агд 355 3З6о 365 сі1у Уаї Іеп Гпув ТПг 370 «2105 56 «2115 373 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220» «223» НРРО мутант - Ахті30О5Н-ЕУуо41 «4005 МЯ56
Меє Авп АТа Рго Гей ТПг біп бек Авп Аза бБег біп Рпе біп ТПг Тгр 1 5 10 15
Авр Авп о Рго Меє с1у ТПг Авр сб1іу Рпе бійц Рпбе Уаії сій Туг Аза А1а 20 25 30
Рго Авр Рго Уаі А1їа Меє сі1у біп Іїецшп Рпе бій Агкуд Меє с1у Ропе сіп
Зо
А1їа чІ1е Аїа пуб Ні Агуд Агуд ув Авп Уа! ТПг ІТеий Туг Агд біп Щ1У бо бі І1е АБп Рпе І1їе Іїе А5п Аза бій Рго Авр бек Роіе Аза сіп Агд 35 65 70 75 80
Рпе Аїа Агд Іец Ні б1у Рго бек Уа! Сув Аза І1е Аїа І1їе Агк9д Уаї 85 90 95
Ап о Авр Аза пуб Туг Аї1а Туг біц Агуд Азї1а ТПг о бБег Геш с1у Аїа Тгр 40 100 105 110 сі1у Тук Аїа сіп сбіп Аїа Аза Рго сіу бій Гей бек І1ї1е Рго Аза І1е 115 120 125 45 пув бі1у І1е б1у Авр бек Тей І1їе Туг Рпбе І1е Авр Гуз Тгр Агд Щ1У 130 135 140
Тув Авп обіу Аїа Гпув Авр с1іу Авр Гей с1у Авп І1е бек Рібе Робе Авр 145 150 155 160 50
Уаї Авр Рпе бій Ркго Гей Рго сбіу Аза Авр Гец Ніб Рго біцп с1Уу Іецй 165 170 175 сб1у Гешп ТПг Туг Іїе Авр Нів Гей ТПг Авп Ап Уа1! Туг Агд с1у Агд 55 180 185 190
Меє Аза бій геш Аза сій Рбе Тук сій Агуд І1е Робе АБп Рпе Агд сіцй 195 200 205 (516) І1їе Акуд Туг Робе АБр чІ1е сій сіу сбіп Аїа ТПг сіу Уа1ї Пув бек Гув 210 215 220
Аза Меє ТПг бек Рго Сув б1у Ппув І1е Агд І1е Рго І1е А5Бп бій сіц 225 230 235 240 с1у АвБп Авр Гпув Аїа с1іу біп І1е сбіп сбіц Тук Гей Авр Меє Туг Агд 245 250 255 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей сіу бек ТПг Авп Гец Туг Авр 260 265 270
ТПЕ Маі Авр с1у Іїей сбіп Меє АБп сіу Іїе Пув Гей Гей Авп ТПг 5ег 275 280 285 бі ТП Тук Тук бій Гей Гей Рго Ппув Агуд І1їе Рго Авр Гец сСіп бій 290 295 300
Рго І1їе Рго біц Іец Іецп Аза Агд АБп І1е Іїей Уаі АвБр с1у сбіп Рго 305 310 315 320 сбі1у бій Гей Гей Гей біп І1їе Рпе бек бій Авп біп Гец с1іу Рго І1е 325 330 335
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Агуд Гпув б1у АБп бек с1у Рпе с1у Рго Тгр 340 345 350
Авп о Рпе Аїа біп Гей Рпе сій ТПг Меє бій тей Авр біп Меє Агкд Агд 355 3З6о 365 сі1у Уаї Іеп Гпув ТПг 370
Зо «2105 557 «2115 357 «212» РЕТ «213» Рвецпдоштопаз аегидіпова «4005 57
Меє Авп Аїа Уаі Аза пув І1е біш сіп Нів АвБп Рго І1е с1у ТПг Авр 1 5 10 15 сб1у Рпе бій Рпе Уаі бій Рпе ТПг Аза Рго Авр Аза Ппув с1у І1е б1ц 20 25 30 біп Гей Акуд сіп Гей Рпе Азп Меє Меє сіу Рпе ТПг біц ТБПг Аїа Гув 35 40 45
Нів Агуд бек пув біц Уаії Рбе Гей Робе біп біп АвБп АвБр І1е АБп Пе бо 50 Уаї Гей АвБп о сіу бек Ркго ТПг біу Нів Маії Нів сій Ррбе А1їа Геч Тув 65 70 75 80
Нів сіу Ркго Бек Аїа Сув Аїа Меє Аза Рібе Агд Уаії Гув АБп Азїа 5ег 85 90 95 55 біп Азї1а Аза Аза Туг Аїа бій бек сбіп с1іу Аїа Ппув Гей Уаії с1у 5бег 100 105 110
Нів Аїа Авп Рпе сіу біц ІТец Авп І1е Рго бек Те сій С1у ІШе Щ1У 60 115 120 125 бі1у бек Геп Геип Тук Ге Уаі Авр Агуд Ту с1у Авр Акд бек І1е Туг 130 135 140
Авр Уаі1 Авр Робе біцш Рпе І1е біц сб1у Агкд бек Аза Авп Авр Авп бег 145 150 155 160
Ууаї с1у Гей ТПг Тук Іїе Авр Нів Гей ТПг Нів Ап Уаі Ггув Агд Щ1У 165 170 175 сіп Месє Авр Уа! Тер бек біу Рбе Туг бій Агд І1їе Аїа АвБп Роре Агд 180 185 190 бі І1е Акуд Тук Рпе Авр Іїе сій сіу Ппув Гец ТПг б1у Гей Рпе 5ег 195 200 205
Агуд Аїа Меє ТіПг Аза Рго Сув с1іу Ппув І1е Агуд І1е Рго І1е АБп с1іц 210 215 220 зек Аїа Авр АвБр ТПг бек біп І1е бій біш Рбе І1е Акд сіц Туг Нів 225 230 235 240 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей ТПг ТПг Авр Авр І1е Туг А1а 245 250 255
ТПг Уаі1 Акуд пуб Гец Агд АвБр о Авп обіу Уаії Ппув Рпе Меє бек ТПг Рго 260 265 270
Авр ТПг Тук Тук біц Гуз Маї Авр ТПг Агуд Уа! Аза с1у Нів сі1у сіц 275 280 285
Зо Рго Гей бі біп Гецш Агуд сій Тей АвБп о Тей ІТей Іїе АвБр с1у Аза Рго 290 295 300 б1у Авр Авр сі1у Іїе Гей Гей сбіп Іїе Рпе ТПг Ар ТПг Уаї І1е 01У 305 310 315 320
З5
Рго І1їе Рбе Робе біцш І1е І1е сіп Агд Гув б1у АБп сбіп б1у Рпе 0Щ1У 325 330 335 40 сі б1у АвБп Рпе Ппув Аїа Тей Рбе сій бек Іїе сій бій АвБр сбіп Пе 340 345 350
Акуд Агуд с1іу Уаї І1е 355 45 «2105 58 «211» 358 «212» РЕТ 50 «213» Рвецпдотопаз адагісі «4005 58
Меє АзТа Авр Гей Тук бій Авп Рго Меє сіу Пец Меє с1у Рпе сій РБПе 55 1 в) 10 15
І1Іе біц Рре Аза бек Рго ТПг Рго сіу ТПг Те сій Рго Іїе Рпе сіц 20 25 30 (516) Іїе Меє с1у Рпбе ТПг Ппув Уаі Аїа ТПг Нів Агуд бек Ппув Авп Уаї Нів
Тецп Ту Агуд сіп с1у Аїа Іїе АвБп Гей Іїе Гей Авп АвБп о біц Рго Нів 50 55 бо зек Уаі Аїа бек Туг Рпе Аїа Аїа сій Нів сбіу Рго бек Уаі Сув 01Уу 65 70 75 80
Меє Аза Рпе Акуд Уа1 пуб Авр Бек біп пув Аїа Туг АБп Агуд Аза Гей 85 90 95 бі Тепй с1у Аза сбіп Рго Іїе Нів Іїе бій ТПг сіу Ркго Меє сіц Іей 100 105 110
Авп оТецй Рго Аїа І1е Гув с1у І1е с1у б1у А1їа Рго Гей Тук Іец І1е 115 120 125
Авр Агуд Рпе сіу біц б1і1у бек бек І1е Туг Авр І1їе Авр Рпе Уа1 Ріє 130 135 140
Тем біц б1у Маії Авр Акуд АвБп о Рго Уаї с1у Аїа с1у Темп Гув І1е Пе 145 150 155 160
Авр Нів Гей ТПг Нів АвБп Уа! Туг Агуд б1у Акуд Меє Аїа Туг Тер Аї1а 165 170 175
Ап оРпе Тук біц Гуз Тецй Рпе АвБп Рпбе Агд бій Іїе Агуд Тук Ропе Авр 180 185 190
І1е пув біу біц Тук ТПпг с1у їец ТПг бек Ггув Аза Меє ТПг Аза Рго
Зо 195 200 205
Авр сіу Месє І1е Агд І1е Рго Гец АБп біц бій бек Бек Ппув С1у Аїа 210 215 220 сіу біп І1е бій сій Рбе Гей Меє сбіп Рпбе Ап сіу біц с1у І1е сіп 225 230 235 240
Нів Уаі Аза Рбе Гец ТБг АвБр Авр Гей Уаї пуб ТПг Тер АБр сіп Гей 245 250 255
Тпув Ггув І1ї1е сіу Меє Агуд Рпе Меє ТПг Аїа Рго Рго Авр ТПг Тукг Туг 260 265 270 бі Меє гей сі с1у Агкд Гей Рго АвБп о Нів сіу бій Рго Уаї Авр сіп 275 280 285
Тец біп бек Агкуд с1у Іїе Гей Гей Авр сіу Аїа бек Авр Гув бій Авр 290 295 300
Туз Агд Теп Гей Гей біп Іїе Рпе бек бій ТПг Ггец Месє сі1іу Рго Уаї 305 310 315 320
Рпе Рпе біц Рре І1е бі1іп Акд пуб б1у АвБр Авр с1у Рпе с1у бій Щ1У 325 330 335
Авп о Рпе пув Аїа тей Рпе сій бек І1їе бій Агуд Авр біп Уаі Агкд Агд 340 345 350 сі1у УМаії тей Аза ТПг с1іц 355 60
«2105 59 «2115 373 «212» РЕТ «2135 Сошаштопав бевгбовсегопі «4005 59
Меє Авп АТа Рго Гей ТПг біп бек Авп Аза бБег біп Рпе біп ТПг Тгр 1 5 10 15
Авр Авп о Рго Месє б1і1у ТПг Авр біу Рпе бій Рпе Уаі сій Туг Аза Аї1а 20 25 30
Рго Авр Рго Уаі А1їа Меє сі1у біп Іїецшп Рпе бій Агкуд Меє с1у Ропе сіп 35 40 45
А1їа чІ1е Аїа пуб Ні Агуд Агуд ув Авп Уа! ТПг ІТеий Туг Агд біп Щ1У 50 55 бо сій І1їе АБп Рпе Іїе Іїе АБп Аїа бій Рго Авр бек Робе Аза сіп Агд 65 70 75 80
Рпе Аїа Агд Іец Ні б1у Рго бек Уа! Сув Аза І1е Аїа І1їе Агк9д Уаї 85 90 95
Авп о Авр Аїа Туз Туг Аза Тук біц Агуд Аїа ТПг бек Геп с1у Аїа Тгр 100 105 110 сі1у Тук Аїа сіп сбіп Аїа Аза Рго сіу бій Гей бек Іїе Рго Аїа Ше 115 120 125
Зо пув б1у І1ї1е с1у Авр Бек Гей Іїе Туг Рпе Іїе Авр Гпуб5 Тгр Агд 01У 130 135 140
Тпув Авп обіу Аїа пув Авр с1іу Авр Гей б1у Авп І1е бек Рпе РпПпе Авр 145 150 155 160
Уаї Авр Рпе бій Ркго Гей Рго сбіу Аза Авр Гец Ніб Рго біцп с1Уу Іецй 165 170 175 с1у Гей ТПг Тук Іїе Авр Нів Гей ТПг АБп Авп Уаі Туг Агд с1у Аг4д 180 185 190
Меє Аза бій геш Аза сій Рбе Тук сій Агуд І1е Робе АБп Рпе Агд сіцй 195 200 205
І1їе Акуд Тук Робе АБр чІ1їе сій сіу сіп Аїа ТПк сіу Маї Ппув Бек Гув 210 215 220
Аза Меє ТПг бек Рго Сув б1у Ппув І1е Агд І1е Рго І1е А5Бп бій сіц 225 230 235 240 б1у АвБп Авр ув Аїа сбіу біп І1е сіп біц Тук ІТецй Авр Меє Туг Аг4д 245 250 255 сі1у б1п с1у І1е сіп Нів Іїе Аза Гей сіу бек ТПг Авп Гец Туг Авр 260 265 270
ТПг Уаі1 Авр сіу Пец біп Меє Авп сіу Іїе Гпув Гей Гей Авп ТПг 5ег 275 280 285 (516) бі Тк Тук Тук бій Гей Гей Ркго Гув Агуд І1їе Рго Авр Іецйц сіп сі1ц 290 295 300
Рго І1їе Рго біц Іец Іїецп Аза Агуд АвБп Іїе Гей Уа1і Авр с1у біп Рго 305 310 315 320 сіу бій Гецп Гецп Гей сбіп І1е Рібе бек бі Авп сіп Те с1у Рго Те 325 330 335
Рпе Ропе біц Рре І1е біп Агд Гпув с1у Авп бек сіу Рбе сСіу сбіц с01Уу 340 345 350
Авп о Рпе пув Аза Іецшп Рпе бій ТПг Меє б1цп ІТей Авр сбіп Меє Агд Агд 355 360 365 сі1у Уаї Іеп Гпув ТПг 370 «2105 6560 «2115 1071 «2125 ДНК «213» Рвецдоштопав аекидіпова «4005 60 аєдаасдссд Єддссаадає сдаасадсас аассссаєсдд дсассдасдуча асссдаасес (216) чЧЕСсСЧдадесєса ссдсссссда содссаадддс ассдадсадс бдсдссадсеєс деЕссаасаєд 120 аєдддсеЕсєса ссдааассдс саадсаєсєсддсє сСссааддаад ССЕСссгдЕс ссадсадаас 180 чаєаєсааса ЄсдЕдсеЕсаа соддсадссса ассдддсаєд Сссаєсєдааєсс сдсссессаад 240
Зо сасддсссда дсдссгдсдс сасддесесс содддєдаада асдсесссса ддссдссдсс Зоо
Басдссдаає сссадддсдс саадссддсд ддсадссасуд ссаасессдд счдадсеєдаас 3З6о ассссссссс годдааддсає сододсоддеЕєссуа сЕдссдваєс ссдЕсдассд сеасодсдас 420 сдсадсаєссс асдасдссда ссссдадесс ассдааддсес дсадсдссаа сдасаасеісд 480
ЧдЕСддссЕда ссрасаєсда ссассссасс сасаасудсса адсдсддсса дасддасдЕс 540
БЕддЕСсСсоЯдЕЄ єСвбасдадсу саєсдссаас ссссодасдада Сссддасстассс сдасаєсдаа 60 чдасаадсеєса ссоуддссЕдЕеЕсЄ сеЕсссдсдсс асдассдсас сЕсдсддааа даєсссдсаєс 6бо ссчдаєссаасу адесддссда сддабассеєсуд садаєсдадуа аасссаєссу сдаасассає 720 часдааддса Ессадсасає сдссссдасс ассдасдаса Естаєдссас сдрдсдсаад 78о0 седсдсдаса асддсдсдаа дсссардс,суд ассссуддаса сстасграсда дааддесдас 840 асссдсдєсд ссоддодсаєдда сдадссдссс дадсаассдс дсдаассдаа сседсесдаєс 900 часддсдссс содддсдасда соддсасєссод ссдсадасєсє сСсассдасас ддеєдаєссддас 960 ссдаєсеЕеєсеЕ єсдадаєсає ссадсдсаад ддсаассадд дсЕссддасда доадсаассес 1020 ааддсссвдЕ Єсдадессає сдаддаадас садаєсєсудсс дсддсаєдає с 1071 60 «2105 61 «2115 1074
«2125 ДНК «213» Рвецдоштопав адагісі «4005 61 асдодасадаєс гасасудаааа сссааєдддс ссдаєдддсс ЕсдадеЕссає сдадсеєсдса (210)
Есдссдасес седдсасссе ддадссдаєс сЕСЯдадаєса Єдоддссеєсас сааддеЕсддсд 120 асссассдєє ссаадаасудє дсасссдсбає сдссадддсуд сдаєсаассо даєсссеісаас 180 аасдаасссс асадсудеєєдс єЕєСЧЯдвасессс дсоддссдаас асддсссаєс сЯасссдсоадс 240 аєддсдЕєсєсс доадеЕСаадда єссоосадаад дсссасаасс дсдсассдда асссддсдсс Зоо садссдаєсєсс асаєсдааас аддсссдасд дадсеєдаасс гдссддсдає саааддсасе 3З6о чдасддсдсдс сасеєдбассе даєсдассЯдс сссддсдаад дсадсссдає стаєдасаєс 420 часеЕєсЧдвєдЕ ЕСсСсЕСЧСаадуд сдЕєдассдс аасссудесуд деЕдссуддсесе даадаєсаєс 480 чассассеєда сссасаасЧдє деаєсдсддс сдасаєсддесо ассдддссаа сЕссСгсасзад 540 аадсеєдеЕєса асеЕсссодсда даєссдсстас сссдасаєса ааддсдааса сассддсессгд 60 ассЕсдааад счдаєсдассудс ассуддасддс аєдаєсссдса Ссссусесаа сдаадааєссд 6бо
Есдаадддеєд ссодддсадає сдаачадссс ссодаєсдсадс Ссаасддсда аддсаєсссад 720 сасдсддсдс Сссссассда сдассрддес аадассрддд ассадесдаа даадаєсддес 78о0
Зо аєдсЧдЕєсєсєса єдассдсдсс дссодасасс бассасдааа Сдсссдаадд ссдссгдссд 840 аассасддсуд адссоддеєдда Єсаасєдсаа Єсдсодсддса Сссгдсссда соддесдсдаєссд 900 чаєааадаад асаадсЧдєсеЕ дсеЕдссдсад асссссссдд ааассссдає дддсссдадагд 960 вЕСЕєСсСдаає ссаєссадсу Єаааддсдає дасддЕсссу дадааддсаа ссЕсаададсе 1020 сЕдЕєсдаає сдаєсдадсуд Єдассадудєд сдЕсСдЕддс ЕдсеЕсдстас сад 1074 «2105 562 «2115 1122 «2125 ДНК «2135 Сошаштопав бевгбовсегопі «4005 62 аєдаасдссс сдєєдассса аадсаасдсс адссадсссс адасссддда саассссаєд (216) чдасасоддасуд дсЕєЄсдадеє саєсддаасас дсддсссссд ассссдсбддс саєсдддесад 120 срдеЕссдадс дсасдддсессс сСсаддссасс дссаадсасс дссдсаадаа сдєдассстд 180
Баєсдссадуд дсдадаєсаа сеЕєсаєсаєс аасдссдаас ссдасадссс сдсссадсдао 240
Ессоосдсуєс гдсасоуадссс садсдеєссудс дссассоуусса Сссоусдесаа сдасодссаад Зоо
Басдссраєд адсдсдссас сеЕсдссдоддс дсссдодддсс ардсссадса ддссдссссс 3З6о часдаасєеєда дсаєєсссос саєсаадддс ассддсдассі ссседаєсста ссссаєсдас 420 бо аааєддсдсуд дсаадааєдда содссааддас ддадсєдаєссссу дсаасаєсад сЕссеЕссдас 480 чЧЕддасеЕсєса адссеЕСсСЕдсс соодедссдає ссдсаєсссд адддсссддд сседасстає 540 аєсдассасс Єдассаасаа садєссассдс ддссдсаєсдда ссдадссддс сдадесстас 60 чадсдсаєсеЕ Єсаасеєєсєсс сдадасєссдс бассссдаса Ссдааддсса ддссасаддс 6бо
ЧдЕСаададса аддссаєдас садссссодс ддсаадаєссс дсаєсссссає саасдаддаа 720 дадсаасдаса аддссоддсса даєссаддад сбаєсєддаса гдсассдсдд сдааддсаса 78о0 садсасаєсєсд сдссдддаєсєс дассааєсес гасдасассуд гддасуддеЕст дсадаєдаас 840 чдасаєсаадс ЄдсЕеєдаасас садсдадасс бассасдадс сдссдсссаа дсдсаєсссд 900 чассеєдсадд аасссаєєсс сдаадссдссд дсдсдсааса Ссссдсдда сддссадссос 960 часчдадседс ЄдсеЕдсадає ссссадсдаа аассадседудч дЕсСссассеєв сегсдадесес 1020 аєссадсдса адддасаасад сддсЕсЕдас дадоадсаасе ЕЄсааддсессЕ дсссддадасс 1080 аєддаасесд ассадаєсдсуд ссдсуддсдед сеЕсаадасся да 1122 «2105 563 «2115» 440 «2125 РЕТ «2135 Ауепа васіуа
Зо «4005 63
Ме Рго Рго ТПг Рго Аза ТПг Аза ТПг сіу Аїа Аїа Аза Аза А1а Уаї 1 в) 10 15
ТПЕ Рго бій Нів Аза Аза Агуд Бек Рре Рго Акуд Уа1і! Уаії Агд Уа1ї Авп 20 25 30
Рго Агд Бек Авр Агуд Рпе Рго Уаі! Іецй бек Рпе Нів Нів Уа1 сій Гей 35 40 45
Тгр Сув Аза Авр Аїа Аїа бек Аї1а Аза с1іу Акуд Рібе бек Рре Аїа Гей 50 з9 (210) б1у А1ї1а Рго Гешп Аїа Аїа Агкуд Бек Авр Гей бек ТПг с1у АвБп бек А1а 65 70 75 80
Нів Аїа бек Гей Ггец Гец Агд бек сіу Аїа їец Аїа Рпе Іїецп Рпе ТПг 85 90 95
Аза Рго Туг Аза Рго Рго Рго біп біц Аза Аза ТПг Аза Аза Аза ТЕГ 100 105 110
Аза бек І1їе Рго бек Рпе бек Аїа АвБр Аї1а Аї1а Агуд ТПг Рпе Аза Аї1а 115 120 125
Аза Нів сіу Гец Аїа Уаі Агуд бек Уаі бі1у Уаі Агкуд Уаі Аїа Авр Аї1а 130 135 140
Аза сій Аза Рібе Агуд Уаії бек Уаі Аїа с1у сб1у Аза Агуд Рго Аїа Ріє 145 150 155 160 (516) А1Та Рго Аза Авр Гей сіу Нів сіу Рпе сіу Тїей Аї1а сій Уаї січ Іецй 165 170 175
Тук б1у Авр Уаї Уаї Гец Агд Рбе Уаї бек Туг Рго Авр бій ТПг Авр 180 185 190
Пес Рго Рпе Гей Рго сіу Рпбе бій Агуд Уаі бек бек Рго с1у Аїа Уаї 195 200 205
Авр Тук с1і1у Пец ТБПг Агуд Рпе Авр Нів Уаі! Уаї сб1у Авп Уаі Рго сій 210 215 220
Меє АзТа Рго Уаі Іїе Авр Тук Меє пув сіу Рібе Гец б1у Рпе Нів сіцй 225 230 235 240
Рпе Аїа біц Рре ТПг Аза бій Авр Уаії б1у ТПг ТПпг бі бек С1Уу Іей 245 250 255
Авп бек Уаії Уа1і! Ггец Аза Авп Авп бек біц Аїа Уаії Гей Гей Рго Іецй 260 265 270
Авп обіц Ркго Уа1і! Нів сі1іу ТпПкК Ппув Агуд Акуд бек біп І1е біп ТПг Туг 275 280 285
Тец б1іцп Тук Нів сіу сб1іу Рго сіу Уаі сбіп Нів І1їе Аза Гец Аїа 5ег 290 295 300
Авп о Авр оУаії Ггец Агд ТПг Іей Агд біц Меє Агуд Аза Агд Тс Рго Меє 305 310 315 320 сбі1у б1у Рпе сій Рпе Меє Аза Рго Рго сбіп Аїа Ппув Туг Ту біц с1У
Зо 325 330 335
Уаї Агкуд Агуд Іїе Аза сіу Авр Уаі Ггецй бек бій бій сбіп Іїе Ппув сіц 340 345 350
Сув біп біц Гецп с1іу Уаі Гей Уаі Авр Агуд Авр Авр біп сіу Уаї Гей 355 3З6о 365
Тец біп І1їе Рпе ТПг пув Рго Уа1 с1у Авр Агд Рго ТПг Рпе РПе Гей 370 375 380 бі Меє І1е сіп Агуд чІ1е сіу Сув Меє бій пув Авр біц Уаї с1у сіп 385 390 395 400 бі Тук бі1іп пув с1у сб1у Сув сіу с1іу Робе сіу Гуз б1у АвБп Рпе 5ег 405 410 415 біш Геп Рпе Ппув Бек Іїе сій Авр Ту бій Ппув бек Гец біц Уаї Гув 420 425 430 сіп бек Уаії Уаі Аїа сіп Гув 5бег 435 440 «2105 64 «211» 439 «212» РЕТ «2135 штучна послідовність «220»
Гс10) «223» НРРО мутант - Ауепа взабіуйют де1есіоп мутант
«4005 64
Ме Рго Рго ТПг Рго Аза ТПг Аза ТПг сіу Аїа Аїа Аза Аза А1а Уаї 1 5 10 15
ТПЕ Рго біц Нів Аза Аза Агд бек РіПе Рго Агд Уаі Уаі Агд Уа1їі Авп 20 25 30
Рго Агд Бек Авр Агуд Рпе Рго Уаі! Іецй бек Рпе Нів Нів Уа1 сій Гей 35 40 45
Тер Сув Аза Авр Аїа Аза б5ег Аїа Аза сіу Агд РоПе бек Рпе Аза Гей 50 55 бо с1у Аїа Рго Геш Аїа Аза Агуд бек Авр Гей бек ТПг с1у АБп бек Аї1а 65 70 75 80
Нів Аїа бек Гей Ггец Гец Агд бек сіу Аїа їец Аїа Рпе Іїецп Рпе ТПг 85 90 95
Аза Рго Туг Аза Рго Рго Рго біп біц Аза Аза ТПг Аза Аза ТіПг А1а 100 105 110 зек Іїе Рго бек Роре бек Аза АБр Аї1а А1ї1а Агуд ТПг Рпе Аза Аза Аї1а 115 120 125
Нів сі1у Гей Аза Уаії Агкд бек Уаі1 сіу Уаі Агд Уаі Аїа Ар Аза Аї1а 130 135 140
Зо сі Азїа Рпбе Агуд Уаі бек Уаії Аїа сі1у сб1у Аїа Агуд Рго Аїа Рпбе Аїа 145 150 155 160
Рго Аїа Авр Іец біу Нів сі1у Рпе с1у Іїецп Аї1а сій Уаї сі Іец Туг 165 170 175
З5 б1у Авр Уаї Уаі Гей Агуд Рпе Уаії Бек Тук Рго Авр бій ТПг АвБр Іей 180 185 190
Ркго РібПе Гец Рго біу Рпе бій Агд Уаі! бек бек Рго сіу Аїа Уа1і Авр 195 200 205
Тук б1у Гей ТБПг Агуд Робе Авр Нів Уаії Уаї сб1у Авп Уаі Рго сі Меє 210 215 220
А1Тїа Рго Уаі Іїе Авр Тук Меє пув сіу Рпе Гецп сіу Рібе Нів сій РБГе 225 230 235 240
Аза сій Робе ТБПг Аза б1цш Авр Уаї сбі1іу ТПг ТПпг бій Бек о1у Гей Авп 245 250 255 зек Уаї Уаї Гей Азїа Авп Авп бек бій А1їа Уаї Гей Гей Рго Гей Авп 260 265 270 біц Рко Уаї Нів с1іу ТПг Гпув Агуд Агуд Бек біп І1е сіп ТПг Тук Іей 275 280 285 бі Тук Нів сіу с1у Рго сіу Уа1 сіп Нібв І1е Аза Іїец Аза бек Авп 290 295 300
Авр Уаі1 гей Агд ТПг Іец Агуд біц Месє Агуд Аза Агуд ТпПс Рго Меє Щ1У (516) 305 310 315 320 сб1у Рпе бій Рпе Меє Аїа Рго Рго сбіп Аїа Ппув Тукг Тук біц с1у Уаї 325 330 335
Акуд Агуд ч11е Аїа с1і1у Авр Уаі Гей бек біц біц бі1іп І1е Гпув сій Сув 340 345 350 біп бій Гей сіу Уаі гейш Уаі Авр Агуд Авр Авр сбіп сіу Уаї Іец Іей 355 3З6о 365 сіп І1їе Рпе ТПг о Ппув Ркго Маї с1у Авр Агуд Рго ТПг Рібе Рібе Гей сіц 370 375 380
Меє І1ї1е сбіп Агуд чІ1їе сіу Сув Меє сій пув Авр біц Уаі с1у сб1іп сі 385 390 395 400
Тук біп пув сіу сіу Сув біу с1іу Рпе сіу Ппув б1у АвБп Рпе бек сі1ци 405 410 415
Тецп Рпе Гпув Бек Іїе бій Авр Тук бій Ппув бек Гей сіц Уаї пув сіп 420 425 430 зек Уаії Уаії Аїа біп Гув бег 435 «2105 65 «211» 444 «212» РЕТ «213» йеа шаув
Зо «4005 65
Мен с1у Рго ТПг Рго ТПг Аза Аза Аза Аїа сСіу Аї1а А1ї1а Уаі Аза Аза 1 5 10 15
З5
Аза Бек Аїа Аїа біц біп Аза Аза Рбе Агд Іїецп Уаі с1у Нів Агд Авп 20 25 30
Рпе УМаії Агд Рбе Авп о Рго Агуд бБег Авр Агуд Рпе Нів ТПг Гей Аїа Ріє 35 40 45
Нів Нів Уа1 сій Гец Тгр Субв Аза Авр Аїа Аза б5ег Аї1а Аї1а сС1у Аг4д 50 55 бо
Рпе бек Ріпе сіу Геш с1іу Аза Рго Гей Аїа Аїа Агуд бек Авр Іец 5ег 65 70 75 80
ТПг б1у Авп бек Аїа Нів Аїа бек Гей Гец їец Агд бек біу бек Ієецй 85 90 95 зек Рпе Гец Робе ТПг Аза Рго Туг Аїа Ні5 с1у Аза АБр Аїа Аза ТЕГ 100 105 110
Аза Аза Гей Рго бек Ррпе бег Аїа Аї1а Аї1а Аї1а Агуд Агуд Рпе Аза Аї1а 115 120 125
Авр Нів сі1у Гец Аїа Уаі Агуд Аї1а Уаі Аза Гей Агуд Уаі Аїа Авр Аї1а 130 135 140 бі Авр Аї1а Рпе Агу Аїа бек Уаі Аза Аїа с1у Аза Агуд Рго Аїа РіПе (516) 145 150 155 160 б1у Рко Уаії Авр Гей б1іу Акуд сіу Рпе Агд Гей Аїа сіц Уаї сій Іей 165 170 175
Тук б1у Авр Уаї Уаї Гец Агд Тук Уаї бек Туг Рго АБвр сС1у Аза Аїа 180 185 190 б1у бій Ркго Рпе Гей Рго сіу Рпе сбіш сіу Уаі1 Аїа бек Рго с1у А1а 195 200 205
А1а Авр Тук біу Гей Бек Агкуд Рпе Ар Нів І1е Уаі с1у Авп Уа1! Рго 210 215 220 бі Теп Аза Рго Аїа Аза Аїа Тук Рпе Аїа сіу Робе ТПг с1у РоПе Нів 225 230 235 240 бі Рпе Аїа сій Рпе ТПг ТпПг бій Авр Уаі с1у ТБПг Аза сіц бек 01У 245 250 255
Тем Авп бек Меє Уаі Гей Аза Авп Авп бек бій Ап Уа1ї Іецй Гей Рго 260 265 270
Тец АвБп бій Рго Уаі Нів сіу ТПг пув Агуд Агуд бБег біп І1е сіп Тс 275 280 285
Рпе Гей Авр Нів Нів сіу сіу Рго сіу Уаі1і! сбіп Нів Меє Аїа Іецйц А1а 290 295 300 зек Авр Авр Уаі Іец Агуд ТПг Іец Агд бій Меє сіп Аза Агуд бек Аї1а 305 310 315 320
Зо
Меє сіу с1у Рпе сій Рбе Мес Аза Рго Рго ТПг бек Авр Тукг Туг Авр 325 330 335 бі1у Маі Агуд Агуд Агуд Аїа сіу Авр Уаі Гей ТПг сіц Аза сіп І1е Гу
З5 340 345 350 бі Сув біп сій Геш с1іу Уаі1і Гей Уаі Авр Агуд Авр Авр біп с1і1у Уаї 355 3З6о 365
Пес Гей сбіп Іїе Рпе ТПг Пув Рко Уаї сб1у Авр Агд Ркго ТПг Гей Ріе 370 375 380
Теч б1п Ії1е І1е сіп Агуд Іїе с1у Сув Меє бій пув Авр біц пув 01У 385 390 395 400 біп бій Тук біп пув сбіу с1у Сув с1іу с1у Рпе сіу Ппув б1у Авп РПе 405 410 415 зек біп Гец Робе Гув бек І1ї1е біц Авр Тук бій Ппув Бек Гей сій Аї1а 420 425 430 пув бі1іп Аза Аза Аїа Аїа Аза Аза Аза сбіп с1іу б5ег 435 440 «2105 6б66 «211» 445 «212» РЕТ «213» Агарідорвів Епаі1їіїапа 60 «4005 66
Мен сі1у Нів біп Ап Аза Аза Уа1і бек біц Авп о біп АвБп о Нів Авр Авр 1 5 10 15 б1у А1ї1а Аза бек Бек Рго сіу Рпе Ппув Гей Уа1 сіу Рібе бек Кув РБПе 20 25 30
Уаї Агкд Ппув Авп Рго Ппув бек Авр Пув Рпе Ппув Уаї пув Агд РПе Нів 35 40 45
Нів Іїе бій Рбе Тер Сув б1у Авр Аїа ТПг Авп Уаії А1ї1а Агд Ага Ріє 50 55 бо зек Тер біу Іїец біу Меє Агуд Робе бек Аза Гув Бек Авр Гей бек ТЕПг 65 70 75 80 б1у Авп Меє Уаі Нів Аїа бек Тук Гей Гей ТПг бек с1у Авр Іец Агд 85 90 95
Рпе Гей Рбе ТПг Аза Рго Туг бек Рго бек Гей бБег Аїа с1у бій Те 100 105 110
Тув Ркго ТПг ТПг ТБПг Аїа бек Іїе Рго бек Рібе Авр Нів сіу бек Сув 115 120 125
Агдуд Бек Рпе Ріе бек бек Нів сіу Гей сіу Уаі Агуд Аїа Уаі Аїа І1е 130 135 140 бі Маї бій Авр Аїа бій бек Аза Рпе бБег Іїе Бек Уа1і Аїа АБп 01Уу 145 150 155 160
Зо
А1їа І1е Рго бек бек Рго Рго Іїе Уаі Гей АБп сбіц Аїа Уаії Тібг І1е 165 170 175
А1їа сій Уаї Ппув Іец Тук б1у Авр Уаії Уаї Гей Агуд Тук Уа1і Бек Туг
З5 180 185 190 пу Азї1а бій Авр ТпПг бій пув бек бій Рпе Гей Рго сіу Робе сій Агд 195 200 205
Уаї біц Авр Аїа бек бек Рре Рго Гей Авр Туг біу І1е Агд Агд Іец 210 215 220
Авр Нів Аїа Уаї! сб1у Авп Уаії Рго біцш ІТец б1у Рго Аїа Гей ТПг Туг 225 230 235 240
Ууаї Аза с1у Рпе ТПкг сіу Робе Нів сіп Рбе Аїа біц Рпе ТПг Аза Авр 245 250 255
Авр Уаі1 сі1у ТБг Аза біцп бек біу ІТец АвБп бек Аза Уаі Гей Аїа 5ег 260 265 270
Авп о Авр обіц Меєсє Уаї Іец Гей Рго І1е АБп бій Рго Уаі Нів с1у ТЕГ 275 280 285 цув Агуд пуб бек біп І1е сбіп ТбПг Туг Ге бій Нів АвБп сбіц с1у А1а 290 295 300 сб1у Гей біп Нів Гей Аїа Гецй Меє бек бій Авр І1е Рібе Агд ТіПг Іей 305 310 315 320 60
Акуд бій Месє Агуд Ту Агуд бек бБег І1е б1у б1у Рпе Авр Рпе Меє Рго 325 330 335
Бек Рго Ркго Рго ТПг Тук Тук біп Авп Тей Гуз пуб Агуд Уа1і с1у Авр 340 345 350
Уаї Гей Бек Авр Авр сіп І1е пув сій Сув біц біц Іец сб1у І1е Гей 355 3З6о 365
Уаї Авр Агуд Авр Авр сбіп біу ТпПг Гей Гец біп І1е Рпе ТПг Гув Рго 370 375 380
Тец б1у Авр Агуд Рго ТПг Іїе Рпе Ії1е сій І1е І1е сіп Агкд Уа1 щЩ1У 385 390 395 400
Сув Меє Меє пув Авр біц сіц с1у пув Аїа Тук сбіп бек біу с1у Сув 405 410 415 сіу б1у Рпе сб1іу Ппув с1у Авп Рібе бек біц Гецп Рпе Пув бек І1е с1и 420 425 430 бі Тук бій Ппув ТПг Гей сій Аїа пув біп Гец Уаї с1У 435 440 445 «2105 67 «211» 434 «212» РЕТ
Зо «213» Ногдецт учпідаге «4005 67
Ме Рго Рго ТПг Рго ТПг ТБг Рго Аза Аїа ТПг с1у Азї1а Аза Аза Аза
З5 1 в) 10 15
Ууаї ТПпгЕ Рго біш Нів Аза Агуд Рго Нів Агкуд Мес Уаі Агд Рпе АБп Рго 20 25 30 40 Агдуд Бек Авр Акуд Рпе Нів ТПг Гей бек Рібе Нів Нів Уаії сій Рібе Тгр
Сув А1а Авр Аїа Аза бБег Аїа Аза с1іу Агуд Рпе Аза Рібе Аїа Гец 01Уу бо 45
Аза Рго Ггец Аїа Аза Агд бек Авр Гец бек ТПг б1у АБп бек Аїа Нів 65 70 75 80
Аза бек біп Гец Іец Агуд бек біу бек ІТецп Аї1а Рпе Гей Рпе ТПг Аїа 50 85 90 95
Рго Тут Аза АБп о біу Сув Авр Аї1а Аза ТПг Аза бек Гей Рго Бек Ріє 100 105 110 55 зек Аїа Авр Аї1а А1ї1а Агуд Акуд Рпе бек Аза АБр Ні с1іу І1е А1їа Уаї 115 120 125
Акуд Бек Уаі Аїа Іецй Акд Уаії Аї1а АБр Аї1а Аї1а сій Аза Рпе Агуд Аї1а 130 135 140 60 ек Агуд Агд Агуд біу А1ї1а Агуд Рго Аї1а Рпе А1ї1а Рго Уаі Ар гейш 0Щ1У 145 150 155 160
Акуд с1у Рбе Аїа Робе Аї1а бій Уаї біцш Іїец Тук с1у Авр Уа1ї! Уаі1ї Ієец 165 170 175
Акуд Рпе Уаї бек Нів Рго Авр біу ТПг Авр Уаії Рго Рпе Гей Рго с01У 180 185 190
Рпе сіц сіу УМаії ТБПг Авп о Рго Авр Аза Уаї Авр Тук с1у Гей ТПг Аг4д 195 200 205
Рпе Авр Нів Уаії Уа1ї б1у Авп Уаі Рго бій їейп Аза Рго Аїа Аза Аї1а 210 215 220
Тук Іїе Аїа с1у Робе ТПг сіу Рпбе Ніз сій Рбе Аїа сі Рре ТПг Аї1а 225 230 235 240 бі Авр Уаї сіу ТПг ТпПг бій бек с1у Гей Ап бек Уаї Уаї Іецй А1а 245 250 255
Авп о Авп обект біц біу Маії Іецйп Гец Рго ІТец АБп бій Рго Уаі Нів Щ0Щ1У 260 265 270
ТПг пув Агуд Агуд бег біп І1е сіп Тс Рбе їец сій Нів Нів с01у щу 275 280 285
Рго сіу Уаії біп Ні І1їе Аза Уаії Аза бек бек Авр Уаі Гей Агд ТЕГ 290 295 300
Зо Тем Агуд пув Меє Агуд Аза Агуд бек Аїа Месє сіу с1і1у Рібе Авр РБре Гейий 305 310 315 320
Ркго Рго Рго Тец Рго Гув Тук Тук біц б1у Маі Агд Агд гейш Аїа щЩ1У 325 330 335
З5
Авр Уаі1і Ггец бек біцшц Аза сбіп І1е Гуз б1п Сув біп бі Гей сіу Уаї 340 345 350
Тец Маії Авр Агуд Авр Авр сіп сіу Уаі Гей Гей сіп І1е Робе ТПг Гув 355 3З6о 365
Ркго Уаії б1і1у Авр Агд Рго ТПг Іец Рпе Іїейп бій Меє І1е сіп Агд Те 370 375 380 сіу Сув Меє біц пув Авр бій Акуд б1іу бі бій Тук біп Гув б1у СО1У 385 390 395 400
Сув б1у б1у Рпе с1у Ппув с1іу Авп Рпе бек бій Гей Рбе пуб бек Ше 405 410 415 бі Авр Тук сій пув Бек Гей сі Аза Гпув біп бек Аїа Аза Уа1ї сіп 420 425 430 сіу вег «2105 68 «211» 442 60 «2125 РЕТ «2135 Райсив сакгкоїга
«4005 68
Мен с1у Ппув Ппув біп бек біц Аїа сій І1їе Гец бек бек АвБп бек 5бег 1 в) 10 15
АвпоТПг бек Рго Аїа ТПг Рпе Гпув Іец Уаї с1у Рпе Авп Ап Ріе Уаї 20 25 30
Агуд Аза Авп о Рго Гув бек Авр Ні Рпе Аїа Уа! Гуз Агд РПе Нів Нів 35 40 45
І1Іе сбіц Рре Тгр Сув б1у Авр Аїа ТПг АБп о ТПг о бБег Агуд Агуд Робе б5ег 50 55 бо
Тер б1у Гей сіу Меєсє Рго Іїец Уаії Аза Гув бек Авр Гей бБег ТПг щ1У 65 70 75 80
АвпобБек Уаії Нів А1їа бек Тук Гец Уаі Агуд бек Аза Авп Гей бек Ріе 85 90 95
Уаї Рпе ТПг АТїа Ркго Тук бек Рго бек ТПг ТПг ТПг бек бек б1у бег 100 105 110
А1ї1а Аза І1їе Рго бек Рре бек Аза бек сбіу Робе Нів бек Рпе Аїа А1а 115 120 125 пув Нів сі1у гейш Аїа Уаі Агуд Аїа Іїе Аїа Гей сіц Уаї А1їа Авр Уаї 130 135 140
Зо
Аза Аза Аїа Рібе біц Аза бек Уаі Аза Агкгуд сб1у Аза Агуд Рго Аїа 5ег 145 150 155 160
Аза Ркго Уаії біц Іец Авр Авр біп Аїа Тер Теп Аза сі Уа1і сі Гей
З5 165 170 175
Тук б1у Авр Уаї Уаї Іец Агд Рібе Уаі! бек Рпе б1у Агда бі бі с01Уу 180 185 190
Пес Рібе Гей Рго с1іу Рбе бій Аїа Уаї сбіц с1іу ТПг Аїа бек Роре Рго 195 200 205
Авр Гей Авр Туг бі1іу І1е Агд Акд Тец Авр Нів Аїа Уа1 с1у Авп Уаї 210 215 220
ТПгЕ біц Гей сіу Рго Уаї Уаї сій Тук Ії1е пув б1у Рпе ТПпг с1у РПе 225 230 235 240
Нів біш Рпе Аїа біц Роре ТПг Аза біц Авр Уаії с1у ТБПг Ггец сіц 5ег 245 250 255 б1у Гей Авп бек Уаі Уаі гей Аза Авп Авп біц сій Меєсє Уаї Іец Іей 260 265 270
Рго Гей Авп бій Рго Уаії Тук с1іу ТПг Пув Агуд пув бек біп І1е сіп 275 280 285
ТПг Тук Ггец сіц Ні Авп о біц сіу Аїа сіу Уаії біп Ні Іецп Аза Гей 290 295 300 60
Уаї Бек бій Авр Іїе Рбе Агуд ТПг Гей Агд бій Меє Агуд Ггув Агуд бег 305 310 315 320
Сув Геп сб1у с1у Рпе бій Рпе Ме Рго Бек Рго Рго Рго ТПг Тук Туг 325 330 335
Тув Авп о Гей пув Авп Агуд Уа1і! с1іу Авр Уаії Іец б5ег АвБр бій сбіп Ше 340 345 350 пув бій Сув бій Авр Гей сіу І1е Тїей Уаі Авр Агд Авр АвБр сбіп 1У 355 3З6о 365
ТПЕ Гей гей сіп І1е Робе ТПг Гув Рго Уаі с1у Авр Агуд Рго ТПг Іей 370 375 380
Рпе Іїе біц І1е І1е бі1іп Акуд Уаї с1у Сув Меє Гей Ггув Авр Авр Аїа 385 390 395 400 сбі1у біп Меє Ту сбіп пув сіу сіу Сув біу б1у Рпе б1у Гув С1Уу Авп 405 410 415
Рпе бек біц Іїец Ропе Гуз бек І1е біцп б1іцп Тук сій Ппув ТПг Гей с1іц 420 425 430
А1ї1а пув сіп І1е ТПг с1іу бек Аїа Аза Аїа 435 440 «2105 659
Зо «211» 380 «212» РЕТ «213» вЕгерсошусев ауектієсїі1їі5 «4005 69
З5
Меє ТПпг біп ТпПг ТБк Нів Нів ТпПг Рго Авр ТБПг Аза Агд бі1іп Азїа Авр 1 5 10 15
Рко РіпПе Рго Уаі пув б1у Меє Авр Аїа Уаії Уаі Рпе Аїа Уаі1і с01Уу Авп 40 20 25 30
А1їа пув сбіп Аїа Аза Ні Тук бек ТПг Аза Рпе сіу Меє сіп Гей Уаї 45 А1їа Тук бек біу Рго бій Авп сіу бек Акуд бій ТПг Аза бек Тук Уаї бо
Тецп ТПпг Авп о сіу Бек Аїа Акуд Рпе Уаі Гей ТПг бек Уаї І1е Гу5 Рго 65 70 75 80 50
Аза ТПг Рго Тгр сбіу Нів Рпе Гец Аза Авр Ніз Уаі Аза бі Нів Щ1У 85 90 95
Авр сіу Уаї Уаії Авр їец Аї1а І1е біц Уаї Рго АвБр Аїа Агу Аза Аї1а 55 100 105 110
Нів Аїа Туг Аза І1е сіц Ні5 сіу Аїа Агкд бек Уаі Аї1а б1й Рго Туг 115 120 125 (516) січ Гей Ппув Авр сій Нів сіу ТБг Уаї Уаії Геп Аза Аза І1ї1е Аз1а Тіг 130 135 140
Тук сб1у Ппув ТБг Агуд Ні ТПг о Гец Уаі Авр Агуд ТПпг с1у Туг АБр Щ1У 145 150 155 160
Рго Тук Гем Рго сбі1у Тук Уаі Аїа Аза Аза Рго І1їе Уаі сій Рго Рго 165 170 175
Аза Нів Агкуд ТБг Роре біп А1ї1а І1е АвБр Ні Сув Уаі с1у Авп Уа1 сіц 180 185 190
Тец б1у Акуд Меє Авп бій Тер Уаі сіу Рпе Тукг Авп пув Уаї Меє с1У 195 200 205
Рпе ТБг Авп о Меє Гуз бій Рпе Уаії сб1у АвБр АБр І1е Аза ТПг сій Туг 210 215 220 зек Аїа Гец Меєсє бек Гув Уаії Уаі Аза Авр сіу ТПг Гей Ппув Уа1ї! Гпув 225 230 235 240
Рпе Рго І1їе АБп біц Рго Аза Іїецшц Аїа Гув Гпув Ппув Бек біп І1е Авр 245 250 255 бі Тук Гей сій Рпе Тугк сіу с1у Аїа сіу Уаі1і сіп Ні І1ї1е Аїа Іецй 260 265 270
Ап оТпг с1у Авр І1е Уаі бій ТБг Уаі Агд ТПпг Меє Агуд Аза Аза 1У 275 280 285
Ууаї біп Рпе Гей Авр ТПг Рго Авр бек Тукг Тут Авр ТПг Іец с1у сіц 290 295 300
Зо Тер Маії с1у Авр ТПг Агуд Уаї Рго Уаії Авр ТБПг ІТей Агд сій Геч Туз 305 310 315 320
Іїе гец Аза АБр Агд АвБр бій Авр б1іу Тук Іеп Гей сіп І1е Робе ТЕПг 325 330 335
З5
Тпув Ркго Уаі сіп Авр Агуд Рго ТПг о Уаі Рпе Рпе сій Ії1е І1е сіц Агд 340 345 350
Нів сіу бек Меє сіу Рпе б1у Ппув бі1у Авп Рпе пув Аза Гей Робе сій 355 360 365
Аза чІ1е сбіц Агкд бі біп бій Гпубв Агуд б1у Авп Гей 370 375 380 «2105 70 «211» 419 «212» РЕТ «213» Мусоврпіаегке1ї1а дгаштіпісоїа «4005 70
Меє Аза Рго сіу Аза Гей Гец Уа1і ТПг бек біп АвБп б1у Агд ТпПгс 5ег 1 5 10 15
Ркго Гец Тут Авр бек Авр сі1у Тук Маі Рго Аза Рго Аїа Аїа Іецй Уаї 20 25 30
Ууаї с1у сб1у біц Уаі1 Авп Туг Агуд сіу Тукг Нів Ніб5 Аїа бій Тгр Тгр 60 35 40 45
Ууаї б1у Авп Аїа пув сіп Уаі Аїа сіп Робе Туг І1е ТПг Агд Меє ШУ 50 55 бо
Рпе бій Ркго Уаі Аза Ні пув б1у Те бій ТПпг сіу Бек Агд Рпе Ріє 65 70 75 80
Аза бек Нів Уаії Уаії біп Авп Авп біу УМаі Агкуд Рпе Уаі Ропе ТПг 5ег 85 90 95
Рго Уаі Акуд бек бек Аза Агкуд біп ТПг ІТейш Гуз Аза Аза Рго Іец А1а 100 105 110
Авр сбіп Азїа Агкд Тец Авр бій Меєсє Туг Авр Нів Іецп Авр Гув Нів 0Щ1У 115 120 125
Авр о с1іу Уаії пув Авр Уаі Азїа Робе біцш УМаї Авр Авр Уаі1і Гей Аїа Уаї 130 135 140
Тук бішц Авп Аза Уаії Аза АвБп о сіу Аїа біц бек Уаї бек бек Рго Нів 145 150 155 160
ТПЕ Авр Бек Сув Авр біц б1і1у Авр Уаії І1їе б5ег Аїа Аї1а І1е Гув ТПг 165 170 175
Тук б1у Авр ТПг ТіПг Нів ТП Робе І1е біп Агуд ТПгс ТпПгс Тує ТПгЕ щ1У 180 185 190
Рко РіПе Гец Рго біу Тук Агуд бек Суб ТПг ТПг Уаі Авр бБег Аїа Авп 195 200 205
Тпув Рпе Гей Рго Рго Уаі Ап Гей сі Аза Іїе Авр Нів Сув Уаі 01У
Зо 210 215 220
Авпобіп Авр о Тгр Авр біц Меє бБег Авр Аї1а Сув Авр Рпе Туг бій Аг4д 225 230 235 240
Сув Гей б1у Рпе Нів Акуд Рібе Ткгр бек Уаі Авр Авр Тув АБр І1е Сув 245 250 255
ТПг бі Рбе бек Аїа Гец пуб бек І1їе Уаї Мес бек бек Рго АБп сіп 260 265 270
Уаї Уаї Ппув Меє Рго І1їе Авп бі Рго Аза Нів сіу пуб КГув Ппув бБег 275 280 285 біп тІ1е бій сі Тук Уаі1 Авр Рпе Туг Ап сіу Рго біу Уаї біп Нів 290 295 300
І1е Аїа Гец Агуд ТПг Рго АБп о Т1е І1е б1п Аза Уаї Бек Авп Гей Агд 305 310 315 320 зек Акад сіу Маї сбіш Рпе І1їе бек Уаі Рго Авр ТПг Тук Тук біч Авп 325 330 335
Меє Агд гейш Агуд Гей пув Аїа Аїа сіу Меє пув Гец біц бій бек Ре 340 345 350
Ар І1е І1їе біп губ ІТец АБп І1е Іїец І1е АБр Рпе АБр бі с1у Щ1У 355 3З6о 365
Тук Гей гей сіп Гец Робе ТПг Ппув Рго Пец Месє Авр Агуд Рго ТПг Уаї (516) 370 375 380
Рпе Іїе біц І1е І1е бі1іп Агд АБп о АБп Рбе АвБр с1у Рпе с1у Аїа щЩ1У 385 390 395 400
Авп о Рпе пуб бекг Іец Рпе б1п Аїа І1е б1п Агд бій сбіп Авр Гей Агд 405 410 415 б1у Авп Гей «2105 71 «2115 399 «212» РЕТ «2135 Соссісоїдев іштісів «4005 71
Меє Аза Рго Аїа Аза Авр бек Рго ТПг Гей біп Рго Аїа біп Рго 5ег 1 5 10 15
Авр Гей Авп о біп Туг Агкд б1у Туг Авр Ні Уаї Нів Тгр Туєк Уа1 Щ1У 20 25 30
Авп Аїа пув біп Аї1а Аза ТПг Туг Тук Уаі ТПг Агкуд Меє с1у Рпе сіц 35 40 45
Акуд Уаі1 Аїа Туг Агкуд б1у Іїеп біц ТПг б1у бек Гпув Аза Уаі Аїа 5ег 50 55 бо
Нів Уаі1 Уаі1 Агуд Авп біу АвБп І1е ТПг Робе І1е Гей ТПг бек Рго Гей
Зо 65 70 75 80
Акуд Бек Уаі біц біп А1ї1а бек Агуд Робе Рго бій АвБр сі Аїа Гей Іецй 85 90 95
Тпув бі1ш І1їе Нів АїТа Нів Гей сій Агуд Нів сб1у Авр сіу Уаї пув Авр
З5 100 105 110
Ууаї Аза Рпе бі Уаі1 Авр Сув Уаі бій Бек Уа1! Рібе бег Аза А1а Уаї 115 120 125
Агуд Авп с1іу Аїа біц Уаії Уаії Бек Авр Уаі Агу ТПг Уа1і бій АБр б1ц 130 135 140
Авр с1у біп І1е Гуз Меє Аз1а ТПг І1е Агуд ТПг Туєк сС1у бій Тпкг Тк 145 150 155 160
Нів ТпПг Гей І1е біц Агд бек сіу Тут Агкд б1у с1і1у Рбе Меє Рго с1Уу 165 170 175
Туг Акуд Меє сіц бег Авп Аза Авр Аза ТПг бек Гув Рпе Гей Рго Гув 180 185 190
Уаї Уаї гейш біш Акуд І1е Авр Нів Сув Уаі! б1у АвБп біп Авр Тер Авр 195 200 205 сій Меє біц Агуд Уаії Сув Авр Туг Тук біш Ппув І1їе Тей с1у РБре Нів 210 215 220
Акуд Рпе Тер бек Уаі Авр Авр Пув Авр І1ї1е Сув ТПг бій Рібе б5ег А1а 225 230 235 240 60
Тецп Кпув Бек Іїе Уаі Меє Аїа бек Рго Авп Авр І1е Уаї Ппув Меє Рго 245 250 255
І1е Авп біц Рго Аїа Гув с1у Ппув Ппув біп бек біп І1е сбіц сіц Туг 260 265 270
Уаї Авр Рпе Туг Авп сіу Аїа сіу Уаі1 сіп Ніб5 І1е Аза ей Агд ТПг 275 280 285
АвБп о Авп о І1е І1е АБр Аза І1їе ТПг АвБп Тец пуз Аїа Акуд сбіу ТЕ сіц 290 295 300
Рпе Іїе Ппув Уаі Ркго бій ТПг Тук Тук бій Авр Меє Гпув Іїе Аг9д Іец 305 310 315 320 пуб Агкд біп с1іу Геш Уаі гей Авр біц Авр Рпе сій ТБПг Ггец Гпув бег 325 330 335
Тец Авр І1е Гей Іїе Авр Рпе АвБр бій Ап сіу Тук Гей Гец сіп Іей 340 345 350
Рпе ТПг пув Нів ІТец Меє Авр Агд Рго ТПпг Уаі Рпе І1е сій І1е Пе 355 3З6о 365 біп Агуд Авп о Авп Рпе бек сіу Рпе сіу Аїа сіу Авп Рібе Агуд Аїа Іей 370 375 380
Рпе сбіц Аза І1е б1п Акд бій біп Аза Тейп Агуд с1у ТПг Гей Те
Зо 385 390 395 «2105 72 «211» 350 «2125 РЕТ «213» Зупеспососсоїдеае врр. «4005 72
Месє АБп о Рго бек І1їе Агу І1е Уаї сбіп с1іу Іїе Нів Нів Гец Нів РБПе 1 5 10 15
Тук Гей Тер Авр Гец Рго Агд Тер Агуд біц Ні Роре Суб Агуд Уа1ї Тгр 20 25 30 б1у Рпе Акуд Уаі Аза Бек Авр Аза сіу Ап ТПг Гей сій Те сі сіп 35 40 45 бі1у бек Гей Агуд Гей Агуд Гей бек біп Рго Аіїа Агуд Аїа с1у АБр бій 50 з9 бо
Уаї Авр Агуд Нів Гей сіп Агуд Нів сіу Рго біу Уа1і Уаі1і Авр Уа1 Аї1а 65 70 75 80
Тем Аїа Уаії с1у бій біп бій Гей Рго Аї1а Гецп Аїа сій Іей Гей Агд 85 90 95 сб1у Акуд с1у Аза сбіп гейш Аза Тгр І1їе Рго Аї1а Азї1а А1а Аза Гей Сув 100 105 110 60
Тецп Нів ТПг Рго Тук с1у Іїе Акуд Нів Бек Гей Іїе Рго с1іу Рго Іей 115 120 125
Авр Аза Аза Рго Аї1а бі1іцп Аза сіу Гей Рпе бек Нів Тгр Авр Нів Уаї 130 135 140
Уаї гей Авп Уаі сій сіп сіу Бек Гей сіп Аїа Аза Аза АБр Тгр Туг 145 150 155 160 с1у Акуд Уаії Гецп с1у Тер Агуд Агкуд Гей Тук Акуд Туг бек Іїе с1Уу ТЕГ 165 170 175
Аза ТПг бек біу Іїец біц бек Уаії Уаї Уаі б1у АвБр Рго бій Аїа 0Щ1У 180 185 190
І1е сбіп Тгр Аїа І1е АБп бій Рго ТПг Сув Аїа Аза бек біп І1е сіп 195 200 205 біц Рпе Гей Нів Аїа Нів сіу сіу Рго с1і1у Іїе сіп Ні Аза Аїа Іей 210 215 220
Нів Бек бек Авр І1е Уаі Аза бек Гей Агд Агкд Те Агуд сбіп б01у щу 225 230 235 240
Уа1 Авр Рпе Гей сіп УМаі Аза Рго сбіп Тук Тук ТіПг бек Гецп бій Агд 245 250 255 біш ТГецп с1у гейш Аза Гей Агуд бек Аїа Гей сіу сіп Аїа І1е бег Тгр 260 265 270
Зо сіп Авр еп Уаї сій сбіп сбіп І1е Гей Гей Авр Аїа Тібг Іецй Рго Аїа 275 280 285 зек Авр біу біп Авр Агуд Рго Іїец Іец ІТецй біп ТПг Рпе ТПг сіп Рго 290 295 300
З5 теп Рпе сб1у Акд Рго ТПг Рпе Рпе Рпе бі Уаі Іїе сіп Агкд ГІец с01Уу 305 310 315 320 сб1у Аї1а ТПпг сіу Рпе сіу бій Аза Авп Рпе сіп Аза Гей Робе сіц А1а 325 330 335
Тец 611 Агд сбіп біп Агуд біп Агуд Нів біп Аза Гей ТПг Рго 340 345 350 «2105 73 «211» 368 «212» РЕТ «213» Рісгорпіїцв боггідив «4005 73
Ме Тук с1у Ппув Авп Гей І1е Бек бій Гец Агд біцш Гув бій І1е РБПе 1 5 10 15 пуб Агд Теп Нів Нів Уа1 сій Рпе Туг Уа1і бек бек Аїа пуб ТПг Тгр 20 25 30 зек Тук РбПе Месє Авп Агуд с1у Іїец б1і1у Рпе Гуз ТПг Уаі Аїа Туг Аї1а 60 35 40 45 б1у Ркго бій ТпПг с1у Іїе Агуд Авр Гпув Іїе Бек Тук Уа1! Меє бек сіп 50 55 бо бі1у Тпг Аза Агуд чІ1їе Бек Рпе ТПг бБег Бек Меє Авп Авр Авр бег Туг 65 70 75 80
ІТІе Бек Авп Нів Уаї Гув Ппув Ні б1у Авр сі1у Уаі пуб Авр І1е А1а 85 90 95
Тем біц Маії Авр Авр Гей Авр біц Аїа Ппувз бек Гей І1їе сій Гпув Туг 100 105 110 сбі1у ТПпг Гпув Уаії Бек Ппув Іїе АБп бій Іїе пуб Авр б1у АБп с1УуУ Гув 115 120 125
І1е Агкуд ТБг Аза б1іцп І1е Гпув ТПг Тук б1у бій ТпПг Уаї Нів ТПг Гей 130 135 140
Іїе сбіц ТП б1у Авр Тук Авп біу Уаі Рпе Меє Рго сіу Тук біц бій 145 150 155 160 зек біц І1їе АвБп бек Гув АБп ТПг б1у І1е Гув Ппув Іїе Авр Нів ІТПе 165 170 175
Уа1ї1 б1у Авп Уаі Тук біц сб1у бій Меє Авр бек Тгр Уаії Авп Ріе Туг 180 185 190
І1Іе сіц пув Тец бі1у Рпе сій Нів Іец І1е ТПг Рпе Авр Авр Гув Авр 195 200 205
Зо
І1е Акуд ТБг Авр о Туг бек Азїа Гей Агуд Бек Ппув Уа1! Уаї Ппув ТУукг Авп 210 215 220
Авр Авр І1е Уаії Рібе Рго І1е АвБп біц Рго Аїа Гув с1у Гей Агд Гув 225 230 235 240
З5 зек біп І1е біц біцп Тук Гей Авр Туг Туг Агуд Бек біц сіу Уаії сіп 245 250 255
Нів Іїе Аїа Гей Гец ТБПг АвБр Авр І1е І1е Гуз ТПг Уаї бек Меє Меє 260 265 270 бі бій АвБп с1іу І1їе бій Рпе Гей пуб ТПг Рго сіу бек Тук Тук бій 275 280 285 зек Гей бек бек Агуд Іїе сіу бек І1їе Авр бій Авр Гей Ап бій І1е 290 295 300 бі гув Нів Авп чІ1їе Гей Уаі Авр Агуд Авр бій Авп сіу Тук Іец Іей 305 310 315 320 біп І1е Рпе ТПг пув Рго Уа1і ТПг Авр Агуд Рго ТПг Робе Робе Робе с1ц 325 330 335
УуУаї ІШе сбіп Агуд пув с1іу Аїа Агуд Бек Рпе с1іу Авп біу Авп РпПе Гу 340 345 350
А1їа гей Робе сбіц Аза І1е б1п Акд біц біп Аза ув Агуд б1у Авп Гей 355 3З6о 365 60 «2105 174
«2115 387 «212» РЕТ «213» Котгхаїа а1ідісіадаа «4005 74
Меє Аза Аїа бій Іїе пув Авп Гей Гпув Авр Гей біп АБп ТПпг бій Туг 1 5 10 15 с1у Гей Ппув пуб Гей Рбе Авр бій Аїа біцш Авр Рпе Гей Рго Гей Іец 20 25 30 бі1у ТПпг Авр Тугк Уаі бій Гей Ту Уаі с1у Авп Аїа пуб біп бек А1а 35 40 45
Нів Рпе Тук Ппув ТПг Аза Рпе сіу Робе біп бек бій Аза Туг Аїа с1Уу 50 55 бо
Те б1іп ТпПг с1іу Гей ТПг Авр Агуд Уа1ї Бек Тук Уа1і! Ггец пув біп Авр 65 70 75 80
Тпув І1е Акд Гей Уаії Гей ТПг ТПг Рго Ге сіу ув б1у С1у сб1и Ше 85 90 95
Авп обі Нів Іїе Авр Гешп Нів с1іу Авр сіу Маї Ппувз Уаї Уаї Аїа Гей 100 105 110
Тер Уаі1 бій Авр Аза ТПг їув Аза Рбе сій бій ТПг ТБг пуб Агд с1Уу 115 120 125
Зо
А1їа Ппув Рго Тук Меє біцш Рго ТПг Туз б1п бій Авр бій АвБп сб1у Туг 130 135 140
Ууаї І1їе Агуд Бек сіу І1їе Тук ТПг Тук б1у бій ТПпг Уа1і Нів Уа1 Ре 145 150 155 160
Ууаї бій Агуд пув Авп оТуг Авп о біу Уа1 Рпе Гец Рго бі1у Тук бі1іп Аг4д 165 170 175
ТЕр біц Бек Нів Тукг Авп Рго біц Ркго Уаї сіу Гей Гпув Рпе І1їе Авр 180 185 190
Нів Меє Уаі1 с1іу Авп Уаії сі1у Тер сіу біц Меє Гуз б1цп Тер Сув с1и 195 200 205
Рпе Туг Аїа Ппув Уаії Меє сіу Рбе Аїа сіп чІ1е І1їе бек Роре ТПг Авр 210 215 220
Авр Авр І1е бек ТПг Авр Рпе ТПг Аїа Іїецй Меє бек Ппув Уа1 Меє 5ег 225 230 235 240
Ап ос1у Авп біу Агд І1е Гув Рпе Рго І1е АБп бій Рго Аїа бій Щ1У 245 250 255
Тпув Кпув Кпув бек біп Іїе біц сій Ту Гей Авр Робе Туг Авп біу бег 260 265 270 сі1у Маї біп Нів Іїе Аїа Уаі1і Аза ТПг Авр Ав5п І1е І1ї1е АвБр ТПг Уаї 275 280 285 зек біп Месє Агд б1іцп Акуд сб1іу Уаі біцш Рре Гей Тугк Уа1і Рго Авр ТЕГ (516) 290 295 300
Тук Тук Авр Авр Гец Гец біц Агкуд Уаі сі1у Авр І1е АвБр бій Авр Уаї 305 310 315 320 бі бій Геп Ппув Ппув Нів с1іу Іїе Гей Іїе АвБр Агд Авр сбіц сбіц с01Уу 325 330 335
Тук Гей гей сіп Гец Робе ТПг пуб ТБПг І1е Уаі Авр Агд Рго ТПг Меє 340 345 350
Рпе Рпе сій УМаї І1е сбіп Акуд пув с1іу Аїа сбіп бек Рпе сіу Уа1 01Уу 355 3З6о 365
Авп о Рпе пув Аїа Іешп Рпе бій Аїа І1е б1п Агд сій сбіп Аїа Аїа Агд 370 375 380 сбі1у ТпПг Гей 385 «2105 175 «211» 382 «212» РЕТ «213» Віерпагівша Заропісцт «4005 75
Меє ТПпг Тук Тук Авр пуб біп біц ТБг Агуд Рго Авр Тец б1у сій РБПе 1 5 10 15
Зо Тук б1у Рпе Нів Нів Уаі Агуд Рпе Тук Уаі бек АвБп бек біц сіп А1а 20 25 30
Аза бек РіПе Туг ТПг бек Агуд Робе біу Рпе бек Рго Уаі Аїа Тук сіц
З5 сб1у Гей бій ТП с1у Авп біп пув Рпе Сув ТПг Авп Уаї Уаї Агд 5ег бо
АвпоНів Уаї Уаії І1їе А1ї1а Рпе ТПг б5екг Аза їГецп ТПг Рго бій Авр Авп 65 70 75 80 40 бі Маї Авп Агуд Нів Уа1 с1іу Ппув Нів Бек Авр сіу Уаї біп АвБр І1е 85 90 95
Аза Ріпе бек Уа! бек Авр А1ї1а Акуд сСіу Меє Туєк сій гув Аїа Ії1е Аї1а 45 100 105 110 пув б1у Сув Ппув Бек Рпе Агуд бій Рго біп Уаі Гей сбіп Авр біп РБе 115 120 125 50 сіу бек УМаії Іїе Іїе Аїа бек Іїейп біп ТПг Тук с1у Авр ТПг Уаї1ї Нів 130 135 140
ТПг Ггеш Уа1! сіп Авп Уаії Авр о Тук ТПг біу Ркго Робе ІТецй Рго с1у РІПе 145 150 155 160 55
Акуд Аза І1е ТБПг Тубв Авр о Авр Рго Тец АБп бек Аїа Рпе Рго сіп Уаї 165 170 175
АвпоТуг Авр о І1е І1е АБр Нів Уаії Уаії б1у АБп сбіп Рго б1у с1у Авр 60 180 185 190
Ме ТПг Рго ТПг Уа1! сій Тер Тук сій пув Тук Гец б1іцш Рпе Нів Аг4д 195 200 205
Тук Тер Бек Аза Авр біц бек Уаі1 Іїе Нів ТПг Авр Тугк бек Аза Гей 210 215 220
Акуд Бек Уаї Уаї Уаії Аза Авр Тгр АвБр б1іп Уаї І1їе Ппув Меє Рго те 225 230 235 240
АвБп обіц Рго Аїа Авр с1іу Гей Агуд Пув бек біп Іїе сіп сій Тук Уаї 245 250 255 бі Тук Тук сі1у с1у Аїа сіу Уаі сіп Нів Іїе Аїа Гей пуб Уаі Авп 260 265 270
Авр І1ї1е І1їе бек Уаі І1е бек ТБПг Іец Агуд Аї1а Агуд с1іу Уаі1і сій Ріе 275 280 285
Те біц Маї Ркго Рго Ппув Тук Туг Авр Бек Гей Агуд Губв Агд Іецй А1а 290 295 300
Нів Бек Аїа Уа1! сіп І1е сбіц сій Авр Гец Гув Агд І1е б1п АБр Гей 305 310 315 320
Нів Іїе Гей Уа1і Авр Рпе Авр АвБр Агуд сіу Туг Іецй Гей сбіп І1е Ріе 325 330 335
ТПЕ Ппув Ркго Уа1і сбіц Авр Агд Рго ТПг Гец Рое Ту б1п І1е Ше сіп 340 345 350
Зо
Акуд Нів Авп о Авп о Авп обіу Рпе сіу І1е б1у Авп Рпе Гпув Аїа Гей Ріе 355 3З6о 365 бі бек Гей бі біп бій біп бій Агуд Агуд с1у Авп Іецй І1е 370 375 380 «2105 76 «211» 401 «212» РЕТ «213» ВПподососсив вр. «4005 76
Меє ТЕ Іїе сій сбіп ТБПг Гей ТБг Авр о пув бій Агкд Тец Аза с1Уу Геч 1 5 10 15
Авр Гей с1і1у біп Іїец біц біп Гей Уаі с1у Іїейп Уаі сій Туг АвБр 0Щ1У 20 25 30
ТПгЕ Агуд Авр Рго РіПе Рго Уаі! бек сіу Тгр АвБр А1ї1а Уаї Уаї Тгр Уаї 35 40 45
Ууаї б1у АвБп Аїа ТПг сіп ТБг Аїа Нів Тукг Робе біп б5ег Аї1а Рпе ШУ 50 з9 бо
Меє ТПпг Ге Уаі Аїа Тук бек с1у Рго ТПг ТПг с1у АБп Агд АвБр Нів 65 70 75 80 (516) Нів Бек Рпе Уа1! Гей сіц бек сіу Аїа Уаі Акуд Рпе Уаї І1е пув 01У 85 90 95
А1їа Уа1і1 Авп о Рго Авр бек Рго Гец І1е АвБр Ні Нів Агуд ТП Нів 0Щ1У 100 105 110
Авр сіу Уаії Уа1 Авр І1е Аза еп Аза Уаії Ркго Авр Уаі Авр ГПув Сув 115 120 125
І1їе Аїа Ніб5 Аза Агуд А1ї1а сіп сб1у А1ї1а ТПг Уаії Гей Ар бій Рго Нів 130 135 140
Авр Уа1 ТБЕгЕ Авр Авр о Нів б1у ТБПг Уаі Агд Теп Аза Аза І1е Аза ТЕГ 145 150 155 160
Тук б1у Авр ТПг Агуд Ні ТП о Гец Уаі Авр Агуд бек Нів Тугє ТП щ1У 165 170 175
Ркго Тук Гец Рго біу Туг ТПг Аза Агуд ТПг бек с1у Нів ТПг Гпув Агд 180 185 190
Авр сб1у Аїа Ркго Пув Агд Гей Рпе сіп Аїа тей Авр Ні Уаі Уа1і с1Уу 195 200 205
Ап оУа1 сіц Гец с1і1у Гуз Меє Авр Ні Тгр Уаії Авр Рпе Туг Авп Агд 210 215 220
Ууаї Меє с1у Рпе ТПг Авзп Месє Аїа сій Рібе Уаі с1у б1п АвБр ІШе Аїа 225 230 235 240
ТПгЕ Авр Тук бек Аїа Гец Меєсє бек пуб Уаї Уаії бек АБп с1у Авп Нів
Зо 245 250 255
Акуд Уа1 пуб Рібе Рго Іїец АБп о біц Рго Аїа Іїеп Аза Ппув Гпув Агд б5ег 260 265 270 сіп І1е АвБр бій Тук Гей Авр Рбе Туг Агуд с1іу Рго б1іу Аїа сіп Нів 275 280 285
Тец А1ї1а Гей Аза ТПг А5п Ар І1їе Гей ТПг Аза Уа1і Авр біп Гей ТЕПг 290 295 300
Аа сіц сі1у Уаії біцш Рре Гей Аза ТПг Рго Авр бек Туг Тук бій Авр 305 310 315 320
Рго біц Гец Агд А1ї1а Агуд І1е с1у АБп Уаі Агд Аза Рго Іїе Аза с1іц 325 330 335
Тец біп Гув Агкуд с1у Іїе Гецшц Уаі Авр Агд Авр бій Авр с1іу Тук Іей 340 345 350 ем біп І1е Рпе ТПг о Ппув Рго Гей Уаії Авр Агуд Рго ТіПг Уаї Рре Ріе 355 36о0 365 бішц Теп І1е сій Агуд Нів сіу Бек Ге с1іу Рпе сіу І1е с1у Авп РБе 370 375 380 пу Аї1а теп Рпе сій Аїа І1ї1е сій Агуд бій біп Аза Аза Агд с1у АвБп 385 390 395 400
Рпе 60
«2105 177 «2115 18 «2125 МА «2135 штучна послідовність «220» «223» ПпівБбідадіпе гад
«4005 М/ЛЯ77 саєсассаєс ассаєсас 18

Claims (13)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти, яка кодує фермент 4-гідроксифенілпіруват деоксигеназу (НРРО), де вказана молекула нуклеїнової кислоти кодує амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності до З5ЕО ІЮ МО:1 і амінокислотні заміщення: заміщення глутаміну проліном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЕС 10 МО: 1, заміщення гліцину триптофаном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності ЗЕО ІО МО:1, заміщення лізину аланіном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності 5ЕБО 10 МО:1, і заміщення аланіну глутаміном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності ЗЕО ІО МО:1; де вказаний НРРО фермент є толерантним до гербіциду - НРРО інгібітора.
2. Рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти за п. 1, де вказана нуклеотидна послідовність кодує амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої в послідовності 5ЕО ІЮ МО:16.
3. Рекомбінантна молекула нуклеїнової кислоти за п. 1 або 2, де: а) вказана нуклеотидна послідовність була оптимізована для експресії в рослині; та/або Б) вказана нуклеотидна послідовність функціонально зв'язана з промотором, здатним спрямовувати експресію нуклеотидної послідовності в рослинній клітині.
4. Конструкція, що містить молекулу нуклеїнової кислоти за будь-яким з пп. 1-3, краще додатково містить молекулу нуклеїнової кислоти, що кодує гетерологічний поліпептид.
5. Клітина-хазяїн, що містить рекомбінантну молекулу нуклеїнової кислоти за будь-яким з пп. 1-3 і краще являє собою бактеріальну клітину-хазяїна або рослинну клітину-хазяїна.
6. Трансгенна рослина, що містить рекомбінантну молекулу нуклеїнової кислоти за п. 1, де краще вказана рослина вибрана з групи, що складається з кукурудзи, сорго, пшениці, соняшнику, томатів, хрестоцвітих, перців, картоплі, бавовнику, рису, сої, цукрового буряку, цукрової тростини, тютюну, ячменю та олійного ріпаку.
7. Трансгенне насіння, що містить рекомбінантну молекулу нуклеїнової кислоти за будь-яким з пп. 1-3.
8. Рекомбінантний поліпептид, що містить НРРО фермент, де вказаний НРРО фермент є толерантним до гербіциду - НРРО інгібітора, і де вказаний поліпептид має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності до ЗЕО ІЮО МО:1 і включає амінокислотні заміщення: заміщення глутаміну проліном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 335 в послідовності ЕС 10 МО:1, заміщення гліцину триптофаном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 336 в послідовності хЕО ІО МО:1, заміщення лізину аланіном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 339 в послідовності 5ЕБО ОО МО: 1, і заміщення аланіну глутаміном в амінокислотному положенні, що відповідає положенню амінокислоти 340 в послідовності 5ЕО ІО МО:1.
9. Рекомбінантний поліпептид за п. 8: а) де вказана амінокислотна послідовність має щонайменше 90 95 ідентичності послідовності до амінокислотної послідовності, представленої в послідовності 5ЕО ІЮ МО:16; 60 р) де вказаний гербіцид - НРРО інгібітор вибраний із групи, яка складається з М-(тетразол-4-іл)- або //М-(триазол-З-іллуарилкарбоксаміду, /- М-(1,2,5-оксадіазол-З-іл)/бензаміду, темботріону,
сулькотріону, топрамезону, біциклопірону, тефурилтріону, ізоксафлутолу, пірасульфотолу та мезотріону; та/або с) рекомбінантний поліпептид додатково містить гетерологічну амінокислотну послідовність.
10. Спосіб одержання поліпептиду з активністю, що визначає толерантність до гербіциду - НРРО інгібітора, який включає культивування клітини-хазяїна за п. 5 за умов, коли експресується молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид.
11. Рослина, частина рослини або її насіння, що мають стабільно інкорпоровану в їх геном конструкцію ДНК, де вказана конструкція містить промотор, функціонально зв'язаний з нуклеотидною послідовністю за п. 1 або 2.
12. Рослина, частина рослини або насіння за п. 11, де вказана рослина, частина рослини або насіння вибрані з групи, яка складається із: (а) рослинної клітини, рослинної тканини і насіння рослини; та/або (Б) кукурудзи, сорго, пшениці, соняшнику, томатів, хрестоцвітих, перців, картоплі, бавовнику, рису, сої, цукрового буряку, цукрової тростини, тютюну, ячменю та олійного ріпаку.
13. Застосування нуклеотидної послідовності за будь-яким з пп. 1-3 для надання рослині толерантності до одного або більше гербіциду(ів) - НРРО інгібітора(ів). Блецйссевопах Кіцекезсеве: МАООЖЕНРМОДМОа------- тт - - - У КЕ 3 дсепа ваїіта МЕРТЕАТ«АТОААЛАЛАМТРЕНАВАВО се КВУ ВУМРЕБОКЕКУТБЕНН 45 дчепа вайіта МЕРТРАТ-АТОААВАВИТРЕНААНО ее ЕРКУУКУПРВВОВЕРУТЕЕНН 45 жів ел МРРІРТААААСААХАЛАЗАВЕОВАКВІУСНЕМЕЗВЕМЕВОЗОВЕНТІАЕННО ВО Бітеріотусез вчектіс1і11ї: МЕТОТЕННІРОТАКОАСРЕв- сн УЕОМОдД Я БбтІввійорвів ЕБаїїяапа МОНнОМААУВЕНОМННИГОСвАБОКОЕКІИС«КЕБКЕЗКЕМНРЕЗСКЕКУКВЕНН ЯЗ Ногаєчи тухідаке МРЕТЕРТТРААТОАВАНУТЕЕНАВР------НЕМУВЕНРВЕОВЕНІЗЕНН 44 Пахлісиз еаковя МВОККЕ-ОБЕАЕТЬЕЗМНаЗНІЗЕАТЕКІУО-ЕНМЕУВАНЕКООСНЕАУКНЕНН Я В Мусовгріаєкеіїїа дгатіпісоїв МАРСА УТЕОМНСВЕТЕРЬТООНО УВА се ААУ УССЕНУВСЖНН 44 Сесоісоїаен змтіків МАРААВІРТСОВАОВЯОЬМ------------------------ОЖВЕЖОН 26 Ж Ргепдовопає Бідогевсевпв ТЕЕАОРЕІРІЦЕРІЕБІМОЕТВУАТНЕЗКН-------УНОУВОСЕЕМЬХЬ 59 дуєпа ватіта УЕІМСАОвАЗААСВЕВЕВЬСЯРЬАВВВООЕХсМОАНАяЬСЬНІСАЦВЕСЕ 95 Ачуепа вабіта ЧЕМСАОААЗААСЕЕБЕАЬСАРЬАВЕЕОІБІОМЗАНАЗЬСЬНОСАТАЕЬЕ 95 їев шах а УКІМСВОЛАСААСЕЕВЕСТСАРЬААКОрЬшЖсМоАНАВВОСВОСсВОКОЕ 300 Зттеріопусез атектікіїіх УУКАУОНАКОМА-ВУБІАРСМОБУАУООРЕМНСЗАВТАНУТЬТМОВАВЕУЬ 74 вгавічоргів Енаїїавпа ІБЕМВСОПАТИУЧАВЕЕлсясЬСМеЕЗАКВОБЕТОНМУНАНІВЬТВОВівЕгЕ Нокавит тоїдаке УЕРЕМСАОААОААСККАКАБСАРЬААВООІТСМВАНАЛОБЬКОСВІАКОЕ 94 Огисяв сакоба ТІЕРМСОРАТНТОВЕКонСсЬсМРЬУАКЗОБОТОМОУНАСХОУКЗАНОВЕУЕ ЗВ Мусозрпавгеіїа дкамівісоїа АЕМОУСНАКОТАОКУТІВМОВЕРУАНЕССЕХОІВЕЕАВНУУОМНОУВЕУЕ 94 Соссіссійев іштібі1в ТУНЕУСМАКОВАТУУУТВМОСКЕВКЗАХВСІЕТССКАУАаНУЧВМОМЕТКІЕ Егвидовопах Еіцогезсепв МЕЕЕМО стиля ІДОЖЕААЕНСЕОУСЯМАКВУКОВ 88 Атека нвакєіта ТАРЖАРЕРОКА»АТ»ААТАВІРЗЕСАПАВВТЕАлЛАНОСЬАУВосУВУвоВ 14 Ачела васіта ТАРХАРРРОБА-АТАААТАБІРБЕВАРААЕТЕАААНСЬУВВУСУВУАрА 144 та КВ ТАРУАнН- - - - - ЩАПААТАВЬРОЖБААААВЕКЕААПНЯЬАСнА!АсАьнУАСА 344 ЗЕхертоюмусее атектійіїй8 ТОУІКРАТРМНО---НЕВА------------ОНУАЕНеОСУТЬВЬАТЕУВОВ 10 Акерідоргів сваїїанва ТАРУБРОБЖАСЕІКРІТТАВІРБЕОНОВСКІЕЕВВНсСЬСІВАТАТВУВОВ 149 Ноти ЗіЧаке ТАРХАн-А- - - - ОСОАВТАБЬРБЖБЗАПААВКЕБАОНОтТАХВБУАЬЕУАСА 3138 Пелсцдя сакока ТАРУБРОТТТ»- -е"ВВОЯЗААІРЕЕВАВСЕНОКАВКНОЬАУВАТАЬЕУАВМ 344 Мусогріаєекеіїїа цкаміпісоїа ТаРУКЕВАКОТ---ЬКАДРСВОСАВОРЕМТОНІОКНООСУКОСВЕЕУЮОМ 141 Соссіссійев ситі і5 ТЕРНУ ЕОАВ--еВКЕЕ---РЕАТІКЕХНАНОСЕВНСПСУКОСАКЕСОСМ 32 ж ж я Ж Еземсістогкваз й іпокевсегп ОКАУМЕАПЕПВАОР----ІНІЮТСРМЕТ МІЕАТКОСІСОАРЕЬТЬІСНЕСВО 33 Втепа ваїіча АЕВЕНУСЧАСВОАВВАКАРАКСесе НЕСВІТ ОпУУЬНЕВЕЖвИКЕ 390 дхмепа вакіча ВЕДЕВЧБУАССАВЕАКАВАЄЬСЯ-НОЕСІАЕЧЕСХСПТТЬКЕУВУРОВТ 191 час ЕЛ ЕБАЕКЕВАБМААСАВЕЕАЕСВУЮЗ Я -- ВБЕВІАКЕУВІ ОУЕН А 393 бітеріошусез атектіс11ї: МНААНАХАТЕНСАВОУАЕРУЕВКОЕНСКУУТААТАТІСКІННТЬОВТСХВ 359 Акавідорзіз сваїіапа ЕОАКЗІВУАМНОАТЕВВЕЕІУЬМ- --ЕАУКІАЕУКОУСОУТЬнЕУВЕКАКО 195 Ногаєит Уаздаке ВЕАЕБАБЕКЕСАКЕАКАВТЮЬС---ВЕРЕАКАЕУВСУЗОУТЬНЕУЗНеОсТ 185 Пазлісмв «акока АААКЕДЕУАКБАКРАЗАРУБЬО-- -ПОАДКОАЕМЕСТЧСУУТЬВЕУБЕСВЕВЕ 191 Мусозрпаєекеїїа скаміпісоїа АМУКНАУАМСАКОУуВаРНТрИСрЕСЮрУХОАМІКТУСОТТНТКІОКТКХХ 193 Сессіссідез іпшібї ЕБВБУЕВАКУКМНОАЕУУВОУВІКОКРООІКМАТІКТУСЕТНТЬІВВОСУК 170 - жк к ж я Фіг А
Езгепіотопав Ккіцокезсепа ее БЕХ Есе УВА УЄСАМОКУВОНОТНМУХРавмМУКНАМЕХ Те дека варіта Б--ПРЕПЕСЕЕКМО-----БЕСАУрЖСІТКЕОНУУОСМ МРЕМАВЧІШЯМ 231 Бдлевпа вавіча Ве ПРЕГЕСЕЕВМО а ен БЕСАУВУСІТВЕОНУУМ ее УВЕМАВТІ ПМ 23 ев тата Ае-ЕКЕВЕОЕЕеиА ---- ВЕсАВЕСсЬВВЕвНІУс УКВЬАЕЛАВЕК Ж Збтгертснирсе атехтісі1ї15 ---ЕХПЕЗІМАААРІЧЕЕРАНЕ---КЕОАІПНОУОМУБЬСВММНЕМИОЕХ 203 БтавВідорзіз ЕБпаїїапа ТЕКБЕЕПЕСЕЕКЕЛА--ЗБЕВ-ТЮЖОІВКВІОНАМОМ--МЕВБЬСвАЕЕУ 241 Нохченв Уулідаке Б--УВЕБРОКЕСУТ- ----МРЕЮАДМУВУСЬТЕЕЙНУМОаМ- - УТВЕБАРАААЖЕ ав Озасия свроева ---ОШЕПЕОЕЕАЧЕСТ- -АБЕРОЬОЖО ЗБК ОНАУЄМ - УТВЬСрРИЧЕЕХ 234 Мусоврйастгаїта щптатігпісс ж 5---РБЕПЕЗУІБОСТІЧОБАМКЕСРРУМІ ЕАТПНСУСМООНОЕМОрАСОЕХ 238 сСоссіссоїаев ші ія бе ен СЕМЕНОВ КЕзЕиКУх евро, вЕвиСОоКХ КА 4 ч а а ж жк - а. Евгвцаостопан Єзпогезсепа ЕКЕГЕМЕНЕАКУЕ «ПІКЕТ ТОКАМБАРОСМІКІЕІМЛЕ--ЕВЕВВКОВ Й2 й вчтепа зайїачта КСЕБСЕНВЕАВЕТАВИУ СТ ТВО АВМ ЕАУСЬРЬМВР УНК «3 Атепа вакіча КСЕМЗЕНЕКАКЕТАВІКАЛяТ ТЕЗУ ЧАН ЕАЬЬРІММЕЕУНОСТККЕ 2582 пев лав АСЕТСЕНЕЕКЕАВЕТТЕСУСІАЕССІМОМУТАМВБЕВНУБЬКОМЕРУНОСТЕВА 283 ЗЕхкерістусев азУектієіЩїї5 МЕУМІхЕЖНМКЕКУСПОТАТЕХОАЦНЕКУУАООТЬКУКЕРІМЕВАЬАЕКе В я дАкаврічораіїв спаіїалпа ЕКО АВЕ ТАЙСОН ОАУАЗНИЕМУЬЬКІМВЕ МНК «і Нотавит тчіЧаке АСЕЖТСЕНЕЕАЕЕТАВИСТТЕБО МОУ АНКВЕСУЬЬЕЬМЧЕрУНОСТКвВ Те Пасов сакоїа КСЕТБЕНЕЕВЕАЕКТАКТИСТІВОСІ МОУ АМНЕКНМУЄЬВІМЕрУХСІКвВАи ва Мусовгрізекеївта цкапіпісоа. ЕВЕСТЗЕНКЕчИМОНКРІЯТЕЕ ЗАКО УМВСУ УКМиНЕРАНЕКК-В еВ Соссіссісдев ішнпібіз ЕКІТІСЕНКЕМІЗУВОКРІСТЕЕБАТКБЕУМАЯЕНОІМЕМРІМВРАКОКК-О 286 в.з Кл п ож ки т «ож ж Езамастовпаз КА покезсега СОХЕБЕКІМОКМОЕСІСНнУАВЬТОрОрЬУКТМОАТККІС- ---МЕЕМІАВРОХ 270 вдеека.нвакіта БОТОКХІЕХНЕСЕСУСНІАМЬАОНИОСІАТІВЕМКАКТЕМОСЕБЕМАРРОАК 331 втепа набіта Зоо ЖхвЕхНавиауаніАВМОУ ШК КЕМЕАКТВМОСЕЕЕМАКРОАК 332 пед па БОХОКЕГПОКНОЗЕСУСНМАСАНОБУТ ЕТ КЕМОАЕБАМОСЕБЕМАВЕТЕО 333 дітертопусев ачектієї31ї1ї: БОХОЕЧЦЕЕКТСОСАСУЄНІВІМТСОІУЕТУВЕТМЕАД осв ВЕ Я Акхазрідчореїв рпаїїапа зохажхеиЕнМЕеАсЬСНовіОВоЕЕКТвКЕМЕККоЗІосЕрЕМеВеЕеХ 34 Нохаєми мадоаке ЗОБажЕСЕННОСЕаУОНІАВВВОТЬКУеКМКАКЗАМОасЕОЕеевОК За Палсив, сакова БОХОЕЗТЕКМНЕСАСТУОНЬВОКРІЕВТІВЕЕМЕКЕОСЬСОСКЕЕМРОРВрКТ 334 Мусовріпаекеізіа чкатіпісоїа ВОХВБТМОЕХНератоОнНІВСВТЕМІ АВ НОКОЕк носу Е ше Е ЗЕ Соссіссісез ваті БОТЕЕУМОЕТМСАЯМОНІАСНІММЧІтрАТТНОКАК- - --ЗТБЕІКУР-ЕБЕЖ 311 «їжі Ії ж кужктІх, її її. І :: ЖЕ х Егемасвопа: Еімпокезсеве ЖЖЕМОСЕЗЕСРІНО----ЕЕлЛюЮГБОВЕОСЗІІроББУВООКвВЬБОТЕБЕТІ, 316 длекава звайачта їйхеЕБУКАТАСОУрО--ЕЕОТКЕСОБІУПУП- - -- ВООЗ УЬЬОТЕТЕРИ ЗТ Вдлепа вавіча УЕСУКЕТАСОУСОеЕКБОІКЕСОКБІОМ УП нн ВОК ЬЬОТЕТКРМ ЗТ ев пах ЖЕрОУЕККАЗИУЬТ- -ЕдОХКЕСОВОСОУВ- - -- ОО КИ З Збгвріснирсво певкЕтієс31ї15 жжхркізЕНУЗОТ---- КУРТКА - КОЕПОСХЬЬОТЕТКРУ 359 Атавіцорзіз ЕБпаіїїяпа ОМ ЕККУСНУС ан ПРОТ КЕСКВІЗІ УП ее ВОГО УТЬЬБОТЕТКРІ, 385 Нокдент туаідахе ЖЕСМЕКСМаОУВа- - ВАМ ІКЕСОвІЯ У - - - КОКО У Зо Пам сакотя ЖК КНЕУзпУЄВ- ОВО КЕСЕрІйІ МО - - З -- ВПІ ТЬСОТЕТКРУ 378 Мусозрбачзкеіїя чкатіпісстів ЖЖЕНМВІВІКАНМЕСЕВОКЕІІОКІМІ110----ЕПЕСЗІЬСОБЕТАРІ, 378 сессфссїдев щі ЕЕ КОКСУ вОВИвЕ ТЕО - -ЕПЕМеХОСЬООЄТЕНІ 357 ж ж У ай - Каже ь ш
Фіг.18
ЕвейЗощшомпа Сіцогезоепх МО--ЕУЕЕЕЕІОВКк-------------- ЛтфО3РОи5ЕЗЕЗМЕКАВЕВБІННКОО 349 Ахепв вала СПВЕТЕКГЕМІСКІССМЕКОЕУСОККОКОВСОСВЕЗКОМЕБЕБЕКВІВНОЖЕ 428 Лтепа зайкча шОВРТКЕЦЕМІОВІВСНЕКВЕ зов ОК ЕсКОМЕаКьЕКиАВОКЕ Я ев пат шОВРЕСЕСЕТІОВІОСМЕКОСЕКсСОВУОКСОСОЗЕОКОМЕЗОБЕКВІВОХЕ 487 ЗфітерЕстуєсво ачект3і 1115 ООВРЕМЕЕКЕБІТЕКН-- Я З - А - - ----5ОМОЕЗКОМЕКАЛЕЕЛІЕНЕО 374 Ахавідорзхів Ераїїала СОВРЕЗЕТЕТТОВМОСМИКОоВЕЗКАХОТ ОСС КаМЕЗЕБЕКВІЕКУЕ 435 Некдчент тлічаюе ОРЕ БЕвЕНІОКІЗСМЕКОВВО ВЕ ЕОКісяЕаКОМЕаВЕКІВОЕ Я Пам евро СОІЕРІТГЕТЕІТОВУОСМЬКорАНОМЖОКОсСОСЕЗКОМЕЗЕБЕКЗІВБЕЖЕ 488 Мусоврраєкеїїа дкеатіпісоіїв МОБРЕЕУКТЕ ЇЇ ТОВ хх ло м ля юю мя лю мя лючленя ло ВЕ ТЗЕСАСМККНВБЕЕАТЕВЕС 413 Сесесісстідез Янка МОКРЕЧЕТЕТІОКИ-------------- ши 53ЕсаМЕКАБЕБАТЕККО 35 ' псибужіІжіІЖ ' жеж ЖЖ жк : Езепастопаз біпокезсевз ЧЕКОМ ЖАТ ссесаюсжєсасся ЗВ Ачтепа забхбіта КвЬЕУКОВБУЧАСКОЇ-- 43 Атуепа вагкта КБІВБУКОВУМАДКо- ня 440 пев шахт КЕПЕАКОАЛАнАлАвСЮЄЯ 444 Зіхерістшусея ачектігіїії8 ЕКВОМВІ-------2-- 380 АгзБідЗорзів ЕБаїз3апа ЕТОЕАКОГУФ------- 445 Нохтаващ тпідаке КБІБАКОСААУСОб ня 434 памшема сакева ЕТГЕАКОТІОБАдА--- 445 МусозрНаєгеїіїа цпкатіпіст1в ровом ----------- 415 Соссіссідез іштісіз АГАТ іястенттнннях 395
Фіг. 1С
UAA201503416A 2012-09-14 2013-09-13 Варіант hppd та спосіб його застосування UA119532C2 (uk)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261701037P 2012-09-14 2012-09-14
US201361766057P 2013-02-18 2013-02-18
US201361790404P 2013-03-15 2013-03-15
PCT/US2013/059598 WO2014043435A1 (en) 2012-09-14 2013-09-13 Hppd variants and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA119532C2 true UA119532C2 (uk) 2019-07-10

Family

ID=49237696

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201503416A UA119532C2 (uk) 2012-09-14 2013-09-13 Варіант hppd та спосіб його застосування

Country Status (19)

Country Link
US (1) US10793872B2 (uk)
EP (3) EP3683307A3 (uk)
JP (1) JP6557142B2 (uk)
KR (1) KR20150070148A (uk)
CN (1) CN104736699B (uk)
AR (1) AR092564A1 (uk)
AU (1) AU2013315385B2 (uk)
BR (1) BR112015005674B1 (uk)
CA (1) CA2884895C (uk)
CL (1) CL2015000640A1 (uk)
EA (1) EA037938B1 (uk)
IL (1) IL237689B (uk)
MX (2) MX369284B (uk)
MY (1) MY196630A (uk)
PH (1) PH12015500549A1 (uk)
UA (1) UA119532C2 (uk)
UY (1) UY35035A (uk)
WO (1) WO2014043435A1 (uk)
ZA (1) ZA201502503B (uk)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20150070148A (ko) 2012-09-14 2015-06-24 바이엘 크롭사이언스 엘피 Hppd 변이체들 및 사용 방법들
WO2014177999A2 (en) * 2013-04-30 2014-11-06 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
US10159249B2 (en) 2013-11-28 2018-12-25 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Use of 2-chloro-3-(methylsulfanyl)-N-(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-4-(trifluoromethyl)benzamide or its salts for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to HPPD inhibitor herbicides
BR112016020569A2 (pt) 2014-03-11 2017-10-03 Bayer Cropscience Ag Uso de n-(1,3,4-oxadiazol-2-il)arilcarboxamidas ou sais das mesmas para controlar plantas indesejadas em áreas de plantas transgênicas de cultura que são tolerantes a herbicidas inibidores de hppd
CA2942171C (en) 2014-03-11 2023-05-09 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
CN108884470B (zh) * 2015-09-11 2023-07-25 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 Hppd变体及使用方法
WO2017128302A1 (zh) * 2016-01-29 2017-08-03 四川天豫兴禾生物科技有限公司 筛选抗hppd抑制剂类除草剂基因的方法及应用
WO2018098214A1 (en) 2016-11-23 2018-05-31 Bayer Cropscience Lp Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use
AU2017382333B2 (en) 2016-12-22 2024-02-15 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Elite event EE-GM5 and methods and kits for identifying such event in biological samples
AU2017382305A1 (en) 2016-12-22 2019-07-18 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of CRY14 for the control of nematode pests
CN110312804A (zh) 2016-12-22 2019-10-08 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 原种事件ee-gm4及在生物样品中用于鉴定该事件的方法和试剂盒
WO2018136611A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Bayer Cropscience Lp Use of bp005 for the control of plant pathogens
BR112019014727A2 (pt) 2017-01-18 2020-04-07 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico, vector, célula, planta, semente, polipeptídeo, composição, métodos para o controle de uma população de pragas, para matar uma praga, para produzir um polipeptídeo, para proteger uma planta e para aumentar o rendimento em uma planta, uso do ácido nucleico e produto de base
WO2018162329A1 (en) * 2017-03-07 2018-09-13 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Hppd variants and methods of use
CA3055389A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
US11708565B2 (en) * 2017-03-07 2023-07-25 BASF Agricultural Solutions Seesi US LLC HPPD variants and methods of use
CA3055396A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
CN107794263B (zh) * 2017-09-30 2019-10-11 河北大学 一种提高黑色素产率的基因及其应用
US11279944B2 (en) 2017-10-24 2022-03-22 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean
BR112020008096A2 (pt) 2017-10-24 2020-11-03 Basf Se método para conferir tolerância a um herbicida e planta de soja transgênica
US11952582B2 (en) * 2017-11-23 2024-04-09 Cas Center For Excellence In Molecular Plant Sciences Herbicide-resistance gene and application thereof in plant breeding
MX2020012704A (es) * 2018-05-25 2021-04-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plantas que contienen el evento elite ee-gm4, y metodos y kits para identificar dicho evento en muestras biologicas, y tratamiento de estas.
CA3098989A1 (en) * 2018-05-25 2019-11-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plants containing elite event ee-gm5 and methods and kits for identifying such event in biological samples, and treatment thereof
CN112513033A (zh) 2018-06-04 2021-03-16 拜耳公司 除草活性的双环苯甲酰基吡唑
US10947552B1 (en) 2020-09-30 2021-03-16 Alpine Roads, Inc. Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants
US10894812B1 (en) 2020-09-30 2021-01-19 Alpine Roads, Inc. Recombinant milk proteins
CA3191387A1 (en) 2020-09-30 2022-04-07 Nobell Foods, Inc. Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same
CN115406988B (zh) * 2022-08-30 2023-06-23 浙江省农业科学院 一种环境样品中环磺酮残留量检测方法

Family Cites Families (236)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4196265A (en) 1977-06-15 1980-04-01 The Wistar Institute Method of producing antibodies
US4459355A (en) 1982-07-12 1984-07-10 International Paper Company Method for transforming plant cells
US4536475A (en) 1982-10-05 1985-08-20 Phytogen Plant vector
US5094945A (en) 1983-01-05 1992-03-10 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase, production and use
US4535060A (en) 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
NL8300698A (nl) 1983-02-24 1984-09-17 Univ Leiden Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten.
US5428147A (en) 1983-04-15 1995-06-27 Mycogen Plant Science, Inc. Octopine T-DNA promoters
US5102796A (en) 1983-04-15 1992-04-07 Lubrizol Genetics, Inc. Plant structural gene expression
US5380831A (en) 1986-04-04 1995-01-10 Mycogen Plant Science, Inc. Synthetic insecticidal crystal protein gene
US4771002A (en) 1984-02-24 1988-09-13 Lubrizol Genetics, Inc. Transcription in plants and bacteria
US5100792A (en) 1984-11-13 1992-03-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5036006A (en) 1984-11-13 1991-07-30 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
BR8600161A (pt) 1985-01-18 1986-09-23 Plant Genetic Systems Nv Gene quimerico,vetores de plasmidio hibrido,intermediario,processo para controlar insetos em agricultura ou horticultura,composicao inseticida,processo para transformar celulas de plantas para expressar uma toxina de polipeptideo produzida por bacillus thuringiensis,planta,semente de planta,cultura de celulas e plasmidio
US5182200A (en) 1985-04-22 1993-01-26 Lubrizol Genetics, Inc. T-dna promoters
JP2615013B2 (ja) 1985-08-07 1997-05-28 モンサント コンパニ− グリホセート耐性キメラ遺伝子
US4940835A (en) 1985-10-29 1990-07-10 Monsanto Company Glyphosate-resistant plants
GB8613481D0 (en) 1986-06-04 1986-07-09 Diatech Ltd Translation of mrna
US5177010A (en) 1986-06-30 1993-01-05 University Of Toledo Process for transforming corn and the products thereof
US5187073A (en) 1986-06-30 1993-02-16 The University Of Toledo Process for transforming gramineae and the products thereof
NZ221259A (en) 1986-07-31 1990-05-28 Calgene Inc Seed specific transcriptional regulation
DE3629890A1 (de) 1986-08-29 1988-03-10 Schering Ag Mikroorganismen und plasmide fuer die 2,4-dichlorphenoxyessigsaeure (2,4-d)-monooxigenase - bildung und verfahren zur herstellung dieser plasmide und staemme
EP0267159A3 (de) 1986-11-07 1990-05-02 Ciba-Geigy Ag Verfahren zur genetischen Modifikation monokotyler Pflanzen
US5164316A (en) 1987-01-13 1992-11-17 The University Of British Columbia DNA construct for enhancing the efficiency of transcription
US5312910A (en) 1987-05-26 1994-05-17 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US4971908A (en) 1987-05-26 1990-11-20 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5145783A (en) 1987-05-26 1992-09-08 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-endolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthase
US5371014A (en) 1988-02-12 1994-12-06 Daicel Chemical Industries, Ltd. Process for the production of optically active 2-hydroxy acid esters using microbes to reduce the 2-oxo precursor
US5179022A (en) 1988-02-29 1993-01-12 E. I. Du Pont De Nemours & Co. Biolistic apparatus for delivering substances into cells and tissues in a non-lethal manner
PT89915B (pt) 1988-03-08 1994-10-31 Ciba Geigy Ag Processo para a preparacao de sequencias de dna regulaveis quimicamente
EP0342926B1 (en) 1988-05-17 1994-09-28 Mycogen Plant Science, Inc. Plant ubiquitin promoter system
US5565346A (en) 1988-07-27 1996-10-15 Calgene, Inc. Transformation and regeneration system for legumes
AU638438B2 (en) 1989-02-24 1993-07-01 Monsanto Technology Llc Synthetic plant genes and method for preparation
US5106739A (en) 1989-04-18 1992-04-21 Calgene, Inc. CaMv 355 enhanced mannopine synthase promoter and method for using same
US5310667A (en) 1989-07-17 1994-05-10 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthases
US20010003849A1 (en) 1989-08-07 2001-06-14 Kenneth A. Barton Expression of genes in plants
JPH05501352A (ja) 1989-08-09 1993-03-18 ディカルブ　ジェネティクス　コーポレイション 安定な形質転換稔性単子葉植物およびそれらの細胞を製造するための方法および組成物
US5550318A (en) 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
DE69033628T2 (de) 1989-10-31 2001-04-19 Monsanto Co Promotor für transgene Pflanzen
US5641876A (en) 1990-01-05 1997-06-24 Cornell Research Foundation, Inc. Rice actin gene and promoter
US5484956A (en) 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
HU220773B1 (hu) 1990-01-22 2002-05-28 Dekalb Genetics Corporation Eljárás termő transzgenikus kukoricanövények előállítására
EP0442174A1 (en) 1990-02-13 1991-08-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Stable transformation of plant cells
US5204253A (en) 1990-05-29 1993-04-20 E. I. Du Pont De Nemours And Company Method and apparatus for introducing biological substances into living cells
DK0536330T3 (da) 1990-06-25 2002-04-22 Monsanto Technology Llc Glyphosattolerante planter
US6395966B1 (en) 1990-08-09 2002-05-28 Dekalb Genetics Corp. Fertile transgenic maize plants containing a gene encoding the pat protein
US5633435A (en) 1990-08-31 1997-05-27 Monsanto Company Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases
US5932782A (en) 1990-11-14 1999-08-03 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Plant transformation method using agrobacterium species adhered to microprojectiles
NZ239977A (en) 1990-11-14 1993-08-26 Pioneer Hi Bred Int Transforming plants by the use of agrobacterium
WO1992009587A1 (en) 1990-11-26 1992-06-11 E.I. Du Pont De Nemours And Company Herbicidal oxazine ethers
GB9101659D0 (en) 1991-01-25 1991-03-06 Rhone Poulenc Agriculture Compositions of matter
FR2673643B1 (fr) 1991-03-05 1993-05-21 Rhone Poulenc Agrochimie Peptide de transit pour l'insertion d'un gene etranger dans un gene vegetal et plantes transformees en utilisant ce peptide.
IL101508A0 (en) 1991-04-08 1992-12-30 Rhone Poulenc Agrochimie Chimeric plant genes based on upstream regulatory elements of helianthinin
WO1992020809A1 (en) 1991-05-15 1992-11-26 Agracetus, Inc. Method of creating a transformed rice plant
WO1993004178A1 (en) 1991-08-23 1993-03-04 University Of Florida A novel method for the production of transgenic plants
UA48104C2 (uk) 1991-10-04 2002-08-15 Новартіс Аг Фрагмент днк, який містить послідовність,що кодує інсектицидний протеїн, оптимізовану для кукурудзи,фрагмент днк, який забезпечує направлену бажану для серцевини стебла експресію зв'язаного з нею структурного гена в рослині, фрагмент днк, який забезпечує специфічну для пилку експресію зв`язаного з нею структурного гена в рослині, рекомбінантна молекула днк, спосіб одержання оптимізованої для кукурудзи кодуючої послідовності інсектицидного протеїну, спосіб захисту рослин кукурудзи щонайменше від однієї комахи-шкідника
TW261517B (uk) 1991-11-29 1995-11-01 Mitsubishi Shozi Kk
PT637339E (pt) 1992-04-13 2002-03-28 Syngenta Ltd Construcoes de adn e plantas que as incorporam
ATE398679T1 (de) 1992-07-07 2008-07-15 Japan Tobacco Inc Verfahren zur transformation einer monokotyledon pflanze
US5563328A (en) 1992-08-19 1996-10-08 Board Of Regents, University Of Nebraska-Lincoln Promoters from chlorella virus genes providing for expression of genes in prokaryotic and eukaryotic hosts
US5389226A (en) 1992-12-17 1995-02-14 Amorphous Technologies International, Inc. Electrodeposition of nickel-tungsten amorphous and microcrystalline coatings
US6291156B1 (en) 1997-04-03 2001-09-18 Syngenta Participations Ag Plant pest control
FR2706909B1 (uk) 1993-06-25 1995-09-29 Rhone Poulenc Agrochimie
US5670349A (en) 1993-08-02 1997-09-23 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. HMG2 promoter expression system and post-harvest production of gene products in plants and plant cell cultures
DK0672752T3 (da) 1993-09-03 2004-10-04 Japan Tobacco Inc Fremgangsmåde til transformering af monocotyledoner ved anvendelse af scutella af uudviklede embryoner
JP3347736B2 (ja) 1993-11-19 2002-11-20 バイオテクノロジー・リサーチ・アンド・デイベロツプメント・コーポレイシヨン 植物中で遺伝子を発現させるためのキメラ調節領域及び遺伝子カセット
EP0815257B1 (en) 1995-01-31 2002-01-02 BioImage A/S A method of detecting biologically active substances
GB9515941D0 (en) 1995-08-03 1995-10-04 Zeneca Ltd DNA constructs
PL186091B1 (pl) 1995-04-20 2003-10-31 American Cyanamid Co Wyizolowany DNA, wektor, komórka, warianty białkaAHAS, sposób nadawania oporności na herbicydy komórce, sposób wytwarzania opornego na herbicydy białka oraz sposoby zwalczania chwastów
FR2734842B1 (fr) 1995-06-02 1998-02-27 Rhone Poulenc Agrochimie Sequence adn d'un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase et obtention de plantes contenant un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase, tolerantes a certains herbicides
FR2736926B1 (fr) 1995-07-19 1997-08-22 Rhone Poulenc Agrochimie 5-enol pyruvylshikimate-3-phosphate synthase mutee, gene codant pour cette proteine et plantes transformees contenant ce gene
HUP9900768A3 (en) 1995-11-06 2002-10-28 Wisconsin Alumni Res Found Insecticidal protein toxins from photorhabdus
AR006928A1 (es) 1996-05-01 1999-09-29 Pioneer Hi Bred Int Una molecula de adn aislada que codifica una proteina fluorescente verde como marcador rastreable para la transformacion de plantas, un metodo para laproduccion de plantas transgenicas, un vector de expresion, una planta transgenica y celulas de dichas plantas.
JP2000512851A (ja) 1996-06-20 2000-10-03 ザ スクリップス リサーチ インスティテュート キャッサバ葉脈モザイクウィルスプロモーター及びその使用
FR2751347B1 (fr) * 1996-07-16 2001-12-07 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere a plusieurs genes de tolerance herbicide, cellule vegetale et plante tolerantes a plusieurs herbicides
US5850019A (en) 1996-08-06 1998-12-15 University Of Kentucky Research Foundation Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants
SK24699A3 (en) 1996-08-29 2000-04-10 Dow Agrosciences Llc Insecticidal protein toxins from photorhabdus
WO1998020144A2 (en) * 1996-11-07 1998-05-14 Zeneca Limited Herbicide resistant plants
US6017534A (en) 1996-11-20 2000-01-25 Ecogen, Inc. Hybrid Bacillus thuringiensis δ-endotoxins with novel broad-spectrum insecticidal activity
WO1998022595A1 (en) 1996-11-20 1998-05-28 Ecogen, Inc. Broad-spectrum delta-endotoxins
DK0975778T3 (da) 1997-04-03 2007-10-08 Dekalb Genetics Corp Anvendelse af glyphostat-resistende majslinier
CA2287777A1 (en) 1997-04-09 1998-10-15 The Minister Of Agriculture Fisheries And Food In Her Britannic Majesty' S Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland Inducible plant promoters
US5977436A (en) 1997-04-09 1999-11-02 Rhone Poulenc Agrochimie Oleosin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition
US5959175A (en) 1997-04-09 1999-09-28 Thomas; Terry L. Sunflower albumin 5' regulatory region for the modification of plant seed lipid composition
TR199900552T1 (xx) 1997-05-05 1999-10-21 Dow Agrosciences Llc Xenorhabdus'dan elde edilmi� insektisid �zellikte protein toksinler.
FR2770854B1 (fr) 1997-11-07 2001-11-30 Rhone Poulenc Agrochimie Sequence adn d'un gene de l'hydroxy-phenyl pyruvate dioxygenase et obtention de plantes contenant un tel gene, tolerantes aux herbicides
US6245968B1 (en) 1997-11-07 2001-06-12 Aventis Cropscience S.A. Mutated hydroxyphenylpyruvate dioxygenase, DNA sequence and isolation of plants which contain such a gene and which are tolerant to herbicides
US6218188B1 (en) 1997-11-12 2001-04-17 Mycogen Corporation Plant-optimized genes encoding pesticidal toxins
FR2772789B1 (fr) 1997-12-24 2000-11-24 Rhone Poulenc Agrochimie Procede de preparation enzymatique d'homogentisate
US6551795B1 (en) 1998-02-18 2003-04-22 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to pseudomonas aeruginosa for diagnostics and therapeutics
US6333449B1 (en) 1998-11-03 2001-12-25 Plant Genetic Systems, N.V. Glufosinate tolerant rice
AU1336200A (en) 1998-11-03 2000-05-22 Aventis Cropscience N.V. Glufosinate tolerant rice
ES2288478T3 (es) 1999-05-19 2008-01-16 Bayer Bioscience N.V. Metodo mejorado para la transformacion de algodon, mediada por agrobacterium.
US6509516B1 (en) 1999-10-29 2003-01-21 Plant Genetic Systems N.V. Male-sterile brassica plants and methods for producing same
US6506963B1 (en) 1999-12-08 2003-01-14 Plant Genetic Systems, N.V. Hybrid winter oilseed rape and methods for producing same
JP2003518930A (ja) 1999-12-28 2003-06-17 バイエル・バイオサイエンス・エヌ・ヴェー バチルス・チューリンゲンシス由来殺虫性タンパク質
US6395485B1 (en) 2000-01-11 2002-05-28 Aventis Cropscience N.V. Methods and kits for identifying elite event GAT-ZM1 in biological samples
US6768044B1 (en) 2000-05-10 2004-07-27 Bayer Cropscience Sa Chimeric hydroxyl-phenyl pyruvate dioxygenase, DNA sequence and method for obtaining plants containing such a gene, with herbicide tolerance
BR122013026754B1 (pt) 2000-06-22 2018-02-27 Monsanto Company Molécula de dna e processos para produzir uma planta de milho tolerante à aplicação do herbicida glifosato
FR2812883B1 (fr) 2000-08-11 2002-10-18 Aventis Cropscience Sa Utilisation d'inhibiteurs d'hppd comme agents de selection dans la transformation de plantes
US6713259B2 (en) 2000-09-13 2004-03-30 Monsanto Technology Llc Corn event MON810 and compositions and methods for detection thereof
WO2002027004A2 (en) 2000-09-29 2002-04-04 Monsanto Technology Llc Glyphosate tolerant wheat plant 33391 and compositions and methods for detection thereof
US6740488B2 (en) 2000-10-25 2004-05-25 Monsanto Technology Llc Cotton event PV-GHGT07(1445) compositions and methods for detection thereof
US7306909B2 (en) 2000-10-30 2007-12-11 Monsanto Technology Llc Canola event pv-bngt04(rt73) and compositions and methods for detection thereof
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
AR035215A1 (es) 2000-11-20 2004-05-05 Monsanto Technology Llc Polinucleotido aislado, primer y segundo polinucleotido cebador, metodo para detectar el suceso vegetal de algodon 531, molecula de polinucleotido aislado obtenida por dicho metodo, equipo de deteccion de acido nucleico y metodo para determinar la cigosidad del genoma de una planta de algodon.
US7241567B2 (en) 2000-11-30 2007-07-10 Ses Europe N.V./S.A. T227-1 flanking sequence
EP2287292B1 (en) 2000-12-07 2015-04-08 Syngenta Limited Plant derived hydroxy phenyl pyruvate dioxygneases (hppd) resistant against triketone herbicides and transgenic plants containing these dioxygenases
CA2433817C (en) 2001-01-09 2012-05-22 Bayer Bioscience N.V. Bacillus thuringiensis insecticidal proteins
EG26529A (en) 2001-06-11 2014-01-27 مونسانتو تكنولوجى ل ل سى Prefixes for detection of DNA molecule in cotton plant MON15985 which gives resistance to damage caused by insect of squamous lepidoptera
US6818807B2 (en) 2001-08-06 2004-11-16 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1
AU2002361696A1 (en) 2001-12-17 2003-06-30 Syngenta Participations Ag Novel corn event
EP1490494A1 (en) 2002-04-01 2004-12-29 Walter Reed Army Institute of Research Method of designing synthetic nucleic acid sequences for optimal protein expression in a host cell
RS20050183A (en) 2002-07-29 2007-06-04 Monsanto Technology Llc., Dna sequences related to corns transformant pv-zmir 13 (mon863) plants and compositions and method for detection thereof
FR2844142B1 (fr) 2002-09-11 2007-08-17 Bayer Cropscience Sa Plantes transformees a biosynthese de prenylquinones amelioree
GB0225129D0 (en) 2002-10-29 2002-12-11 Syngenta Participations Ag Improvements in or relating to organic compounds
CA2508032C (en) 2002-12-05 2014-09-16 Monsanto Technology Llc Bentgrass event asr-368 and compositions and methods for detection thereof
BRPI0407397B1 (pt) 2003-02-12 2020-04-14 Monsanto Technology Llc métodos de produção de planta de algodão tolerante ao glifosato compreendendo evento mon 88913, de detecção de dna, de determinação de zigosidade de planta de algodão e de controle de ervas daninhas
BRPI0407592B1 (pt) 2003-02-18 2019-12-31 Monsanto Technology Llc 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintase (epsps) de classe i resistente ao glifosato, molécula de dna codificando a mesma, constructo de dna e processos de preparação de uma planta tolerante ao glifosato e de controle de ervas-daninhas
PT1597373E (pt) 2003-02-20 2012-09-27 Kws Saat Ag Beterraba açucareira tolerante a glifosato
US7335816B2 (en) 2003-02-28 2008-02-26 Kws Saat Ag Glyphosate tolerant sugar beet
JP4041417B2 (ja) 2003-02-26 2008-01-30 株式会社エヌ・ティ・ティ・ドコモ 課金情報通知システム
SG155063A1 (en) 2003-04-29 2009-09-30 Pioneer Hi Bred Int Novel glyphosate-n-acetyltransferase (gat) genes
NZ543450A (en) 2003-05-02 2008-03-28 Pioneer Hi Bred Int Insect resistant maize plant TC1507 and assays for detecting the presence of corn plant TC1507 DNA in a sample and compositions thereof
ES2275365B1 (es) 2003-07-25 2008-04-16 Universidad De Cordoba Molecula de adn que codifica una p-hidroxifenilpiruvato dioxigenasa de chlamydomonas y sus aplicaciones.
CN1886513A (zh) 2003-12-01 2006-12-27 先正达公司 昆虫抗性棉花植株及对其进行探测的方法
WO2005054480A2 (en) 2003-12-01 2005-06-16 Syngenta Participations Ag Insect resistant cotton plants and methods of detecting the same
US7157281B2 (en) 2003-12-11 2007-01-02 Monsanto Technology Llc High lysine maize compositions and event LY038 maize plants
BRPI0417592B1 (pt) 2003-12-15 2024-01-16 Monsanto Technology Llc Molécula de dna, segmento de ácido nucleico, polinucleotídeo, sonda e métodos para detecção de evento de milho e determinação de zigosidade do mesmo
GB0402106D0 (en) 2004-01-30 2004-03-03 Syngenta Participations Ag Improved fertility restoration for ogura cytoplasmic male sterile brassica and method
KR101268897B1 (ko) 2004-03-25 2013-05-30 신젠타 파티서페이션즈 아게 옥수수 이벤트 ｍｉｒ604
HUE047016T2 (hu) 2004-03-26 2020-04-28 Dow Agrosciences Llc CRY1F és CRY1AC transzgenikus gyapotvonalak és eseményspecifikus azonosításuk
US7405074B2 (en) 2004-04-29 2008-07-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Glyphosate-N-acetyltransferase (GAT) genes
EP1794308B1 (en) 2004-09-29 2013-08-28 Pioneer-Hi-Bred International, Inc. Corn event das-59122-7 and methods for detection thereof
EP1868426B1 (en) 2005-03-16 2018-02-21 Syngenta Participations AG Corn event 3272 and methods of detection thereof
BRPI0608667B1 (pt) 2005-04-08 2018-05-02 Bayer Cropscience Nv Ácido nucléico específico, pares de iniciadores, sondas, kits e métodos para identificar o evento elite a2704-12 em amostras biológicas, confirmar a pureza de sementes e analisar sementes em relação à presença do referido evento elite
ATE514792T1 (de) 2005-04-11 2011-07-15 Bayer Bioscience Nv Eliteereignis a5547-127 und verfahren und kits zur identifizierung eines solchen ereignisses in biologischen proben
AP2693A (en) 2005-05-27 2013-07-16 Monsanto Technology Llc Soybean event MON89788 and methods for detection thereof
WO2006128569A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag 1143-14a, insecticidal transgenic cotton expressing cry1ab
WO2006128570A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag 1143-51b insecticidal cotton
WO2006128568A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag T342-142, insecticidal transgenic cotton expressing cry1ab
AU2006254491A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag CE44-69D , insecticidal transgenic cotton expressing CRY1AB
WO2006128573A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag Ce43- 67b, insecticidal transgenic cotton expressing cry1ab
WO2006128572A1 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag Ce46-02a insecticidal cotton
WO2006132270A1 (ja) 2005-06-10 2006-12-14 Kyoto University 除草剤抵抗性遺伝子
US7932439B2 (en) 2005-08-08 2011-04-26 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant cotton plants and methods for identifying the same
MX2008002615A (es) 2005-08-24 2008-03-14 Pioneer Hi Bred Int Metodos y composiciones para la expresion de un polinucleotido de interes.
TR200805941T2 (tr) 2006-02-10 2009-02-23 Maharashtra Hybrid Seeds Company Limited (Mahyco) Transgenik brinjal (solanum melongena) içeren EE-1 olgusu
CN107119128B (zh) 2006-05-26 2021-03-09 孟山都技术有限公司 对应于转基因事件mon89034的玉米植物和种子及其检测和使用方法
UA95637C2 (uk) 2006-06-03 2011-08-25 Сингента Партисипейшнс Аг Послідовності унікальні для кукурудзи mir162
WO2007146678A1 (en) 2006-06-06 2007-12-21 Monsanto Technology Llc Method for selection of transformed cells
US7855326B2 (en) 2006-06-06 2010-12-21 Monsanto Technology Llc Methods for weed control using plants having dicamba-degrading enzymatic activity
EP2032598B1 (en) 2006-06-14 2012-10-17 Athenix Corporation Axmi-031, axmi-039, axmi-040 and axmi-049, a family of delta-endotoxin genes and methods for their use
US7951995B2 (en) 2006-06-28 2011-05-31 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean event 3560.4.3.5 and compositions and methods for the identification and detection thereof
GB0614471D0 (en) 2006-07-20 2006-08-30 Syngenta Ltd Herbicidal Compounds
US7928295B2 (en) 2006-08-24 2011-04-19 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant rice plants and methods for identifying same
US20080064032A1 (en) 2006-09-13 2008-03-13 Syngenta Participations Ag Polynucleotides and uses thereof
US7928296B2 (en) 2006-10-30 2011-04-19 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
US7897846B2 (en) 2006-10-30 2011-03-01 Pioneer Hi-Bred Int'l, Inc. Maize event DP-098140-6 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
BR122017006111B8 (pt) 2006-10-31 2022-12-06 Du Pont Métodos para controlar ervas daninhas
PT2087124E (pt) 2006-11-29 2011-07-29 Athenix Corp Epsp sintases grg23 melhoradas: composições e processos de utilização
GB0624760D0 (en) 2006-12-12 2007-01-17 Syngenta Ltd Herbicidal compounds
WO2008114282A2 (en) 2007-03-19 2008-09-25 Maharashtra Hybrid Seeds Company Limited Transgenic rice (oryza sativa) comprising pe-7 event and method of detection thereof
US8127325B2 (en) 2007-04-03 2012-02-28 Google Inc. Log processing to determine impression values using reliable durations
AP2993A (en) 2007-04-05 2014-09-30 Bayer Bioscience Nv Insect resistant cotton plants and methods for identifying same
BRPI0812785A2 (pt) 2007-05-30 2014-10-07 Syngenta Participations Ag Genes de citocromo p450 que conferem resistência à herbicida
AU2008261312B2 (en) 2007-06-11 2013-09-05 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Insect resistant cotton plants comprising elite event EE-GH6 and methods for identifying same
MX2010005352A (es) 2007-11-15 2010-07-02 Monsanto Technology Llc Plantas y semillas de soya correspondientes al evento transgenico mon87701 y metodos de deteccion del mismo.
GB0800856D0 (en) 2008-01-17 2008-02-27 Syngenta Ltd Herbicidal compounds
GB0800855D0 (en) 2008-01-17 2008-02-27 Syngenta Ltd Herbicidal compounds
WO2009100188A2 (en) 2008-02-08 2009-08-13 Dow Agrosciences Llc Methods for detection of corn event das-59132
US8257930B2 (en) 2008-02-14 2012-09-04 Pioneer Hi Bred International Inc Plant genomic DNA flanking SPT event and methods for identifying SPT event
WO2009102873A1 (en) 2008-02-15 2009-08-20 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87769 and methods for detection thereof
BRPI0908267B8 (pt) 2008-02-29 2019-02-05 Monsanto Technology Llc método de produção de uma planta de milho tolerante a seca
CN105368799A (zh) * 2008-04-14 2016-03-02 拜耳作物科学公司 新的突变羟基苯基丙酮酸双加氧酶，dna序列和耐受hppd抑制剂除草剂的植物分离
AU2009257375B2 (en) 2008-06-11 2016-07-07 Dow Agrosciences Llc Constructs for expressing herbicide tolerance genes, related plants, and related trait combinations
WO2010024976A1 (en) 2008-08-29 2010-03-04 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87754 and methods for detection thereof
GB0816880D0 (en) 2008-09-15 2008-10-22 Syngenta Ltd Improvements in or relating to organic compounds
CN102164476A (zh) 2008-09-29 2011-08-24 孟山都技术公司 大豆转基因事件mon87705及其检测方法
MX2011006342A (es) 2008-12-15 2011-10-06 Athenix Corp Genes que codifican toxinas contra nematodos.
EA029891B1 (ru) 2008-12-16 2018-05-31 Зингента Партисипейшнс Аг Кукурузный хромосомный сайт-мишень и способ получения трансгенного растения кукурузы
EP2367414A1 (en) 2008-12-19 2011-09-28 Syngenta Participations AG Transgenic sugar beet event gm rz13
CA2748973A1 (en) 2009-01-07 2010-07-15 Basf Agrochemical Products B.V. Soybean event 127 and methods related thereto
WO2011068567A1 (en) 2009-07-10 2011-06-09 Syngenta Participations Ag Novel hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
CA2749524C (en) 2009-01-22 2021-07-06 Syngenta Participations Ag Mutant hydroxyphenylpyruvate dioxygenase polypeptides and methods of use
US8618359B2 (en) 2009-03-30 2013-12-31 Monsanto Technology Llc Rice transgenic event 17053 and methods of use thereof
MY176497A (en) 2009-03-30 2020-08-12 Monsanto Technology Llc Transgenic rice event 17314 and methods of use thereof
BR112012003884A2 (pt) 2009-08-19 2015-09-01 Dow Agrosciences Llc Evento aad-1 das-40278-9, linhagens de milho trangênico relacionadas e identificação evento-específica das mesmas.
BR112012008106A2 (pt) 2009-09-04 2019-08-20 Syngenta Participations Ag agrupamento de elementos ativadores translacionais para aumentar a expressão de polipeptídeos em plantas
CN102596984A (zh) 2009-09-17 2012-07-18 孟山都技术公司 大豆转基因事件mon 87708及其使用方法
EP2480539B1 (de) 2009-09-25 2013-07-31 Bayer CropScience AG N-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)benzamide und ihre verwendung als herbizide
US8676753B2 (en) 2009-10-26 2014-03-18 Amazon Technologies, Inc. Monitoring of replicated data instances
US8153132B2 (en) * 2009-10-30 2012-04-10 Ms Technologies, Inc. Antibodies immunoreactive with mutant hydroxypenylpyruvate dioxygenase
CN104969853B (zh) 2009-11-23 2017-10-31 孟山都技术公司 转基因玉米事件mon87427和相对发育尺度
US9683242B2 (en) 2009-11-23 2017-06-20 M.S. Technologies, Llc Herbicide tolerant soybean plants and methods for identifying same
BR112012012494A2 (pt) 2009-11-24 2020-11-03 Dow Agrosciences Llc detecção de evento de soja aad-12 416
US8581046B2 (en) 2010-11-24 2013-11-12 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Brassica gat event DP-073496-4 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
UY33059A (es) 2009-11-24 2011-06-30 Dow Agrosciences Llc Evento 416 de aad-12, lineas de soja transgenica relacionadas y su identificación específica del evento
US20110154525A1 (en) 2009-12-17 2011-06-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-040416-8 and methods for detection thereof
WO2011075595A1 (en) 2009-12-17 2011-06-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event dp-043a47-3 and methods for detection thereof
CN113373174B (zh) 2009-12-17 2024-06-11 先锋国际良种公司 玉米事件dp-004114-3及其检测方法
US20110154524A1 (en) 2009-12-17 2011-06-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize event DP-032316-8 and methods for detection thereof
BR112012015706A2 (pt) 2009-12-23 2015-09-01 Bayer Ip Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd
WO2011076885A1 (en) 2009-12-23 2011-06-30 Bayer Cropscience Ag Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
BR112012015690A2 (pt) 2009-12-23 2015-08-25 Bayer Intelectual Property Gmbh Plantas tolerantes a herbicidas inibidores de hppd.
EP2516631B1 (en) 2009-12-23 2018-02-14 Bayer Intellectual Property GmbH Plants tolerant to hppd inhibitor herbicides
UY33143A (es) 2009-12-23 2011-07-29 Bayer Cropscience Ag Plantas tolerantes a herbicidas inhibidores de las hppd
CN102724866B (zh) 2010-01-05 2015-04-15 先正达参股股份有限公司 组成型合成植物启动子以及使用方法
WO2011094199A1 (en) 2010-01-26 2011-08-04 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Polynucleotide and polypeptide sequences associated with herbicide tolerance
CN102741415A (zh) 2010-02-02 2012-10-17 拜尔农科股份公司 使用hppd抑制剂作为选择剂的大豆转化
WO2011100302A1 (en) 2010-02-12 2011-08-18 Bayer Cropscience Lp Method of improving plant yield of soybeans by treatment with herbicides
US20130053243A1 (en) 2010-05-04 2013-02-28 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
KR101941297B1 (ko) 2010-06-04 2019-01-22 몬산토 테크놀로지 엘엘씨 유전자 이식 브라씨카의 사건 mon 88302 및 이것의 사용방법
AU2011289283B2 (en) 2010-08-13 2015-04-30 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Chimeric promoters and methods of use
EP2611785B1 (de) 2010-09-01 2014-06-04 Bayer Intellectual Property GmbH N-(tetrazol-5-yl)- und n-(triazol-5-yl)arylcarbonsäureamide und ihre verwendung als herbizide
WO2012033794A2 (en) 2010-09-08 2012-03-15 Dow Agrosciences Llc Aad-12 event 1606 and related transgenic soybean lines
CA2814532C (en) 2010-10-12 2021-07-27 Monsanto Technology Llc Soybean plant and seed corresponding to transgenic event mon87712 and methods for detection thereof
ES2588802T3 (es) * 2010-11-10 2016-11-04 Bayer Cropscience Ag Variantes de HPPD y procedimientos de uso
WO2012071039A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Pioner Hi-Bred International, Inc. Brassica gat event dp-061061-7 and compositions and methods for the identification and/or detection thereof
CN103561564B (zh) 2010-12-03 2016-11-16 陶氏益农公司 叠加的除草剂耐受性事件8264.44.06.1、相关转基因大豆系、及其检测
WO2012075429A1 (en) 2010-12-03 2012-06-07 Dow Agrosciences Llc Stacked herbicide tolerance event 8291.45.36.2, related transgenic soybean lines, and detection thereof
TWI667347B (zh) 2010-12-15 2019-08-01 瑞士商先正達合夥公司 大豆品種ｓｙｈｔ０ｈ２及偵測其之組合物及方法
EP2688407B1 (en) 2011-03-25 2015-04-22 Bayer Intellectual Property GmbH Use of n-(1,2,5-oxadiazol-3-yl)benzamides for controlling unwanted plants in areas of transgenic crop plants being tolerant to hppd inhibitor herbicides
UA111193C2 (uk) 2011-03-25 2016-04-11 Баєр Інтеллекчуел Проперті Гмбх Застосування n-(тетразол-4-іл)- або n-(триазол-3-іл)арилкарбоксамідів або їх солей для контролю небажаних рослин на площах трансгенних культур, що толерантні до гербіцидів, що є інгібіторами hppd
CN103597079B (zh) 2011-03-30 2017-04-05 孟山都技术公司 棉花转基因事件mon88701及其使用方法
BR112013033652A2 (pt) 2011-06-30 2017-01-24 Forage Genetics International Llc planta e semente de alfafa correspondentes ao evento transgênico kk 179-2 e métodos para detecção do mesmo
EP2731419A4 (en) 2011-07-13 2015-04-29 Dow Agrosciences Llc STACKED HERBIC TOLERANT EVENT 8264.42.32.1, CORRESPONDING TRANSGENIC SOYBEAN LINE AND EVIDENCE OF THIS
WO2013012643A1 (en) 2011-07-15 2013-01-24 Syngenta Participations Ag Polynucleotides encoding trehalose-6-phosphate phosphatase and methods of use thereof
CA2849060A1 (en) 2011-11-02 2013-05-10 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
JP2014534816A (ja) 2011-11-02 2014-12-25 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピアＢａｓｆ Ｓｅ 除草剤耐性の増大した植物
KR20150070148A (ko) 2012-09-14 2015-06-24 바이엘 크롭사이언스 엘피 Hppd 변이체들 및 사용 방법들
WO2014053295A1 (de) 2012-10-02 2014-04-10 Binder + Co Ag Vorrichtung und verfahren zur klassierung von polydispersem aufgabegut
WO2014177999A2 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
US10619138B2 (en) 2013-08-12 2020-04-14 Basf Se Herbicide-resistant hydroxyphenylpyruvate dioxygenases
KR20160132027A (ko) 2014-03-11 2016-11-16 바이엘 크롭사이언스 악티엔게젤샤프트 Ｈｐｐｄ 변이체 및 사용 방법

Also Published As

Publication number Publication date
IL237689B (en) 2021-05-31
CL2015000640A1 (es) 2016-07-22
US10793872B2 (en) 2020-10-06
WO2014043435A1 (en) 2014-03-20
EA037938B1 (ru) 2021-06-09
EP2895601A1 (en) 2015-07-22
CN104736699B (zh) 2020-04-14
US20150267180A1 (en) 2015-09-24
EP3683307A2 (en) 2020-07-22
JP2015528310A (ja) 2015-09-28
CA2884895C (en) 2024-05-14
PH12015500549A1 (en) 2015-05-04
KR20150070148A (ko) 2015-06-24
AR092564A1 (es) 2015-04-22
ZA201502503B (en) 2017-11-29
BR112015005674A2 (pt) 2017-08-08
AU2013315385B2 (en) 2019-07-04
AU2013315385A1 (en) 2015-04-30
BR112015005674B1 (pt) 2022-09-06
MX369284B (es) 2019-11-04
EP3173477B1 (en) 2020-02-12
JP6557142B2 (ja) 2019-08-07
EA201590367A1 (ru) 2015-12-30
EP3683307A3 (en) 2020-07-29
CN104736699A (zh) 2015-06-24
CA2884895A1 (en) 2014-03-20
UY35035A (es) 2014-04-30
IL237689A0 (en) 2015-05-31
EP3173477A1 (en) 2017-05-31
MY196630A (en) 2023-04-23
MX2015003322A (es) 2015-08-14
MX2019012949A (es) 2019-12-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA119532C2 (uk) Варіант hppd та спосіб його застосування
EP3116992B1 (en) Hppd variants and methods of use
CA2942171C (en) Hppd variants and methods of use
CN108884470B (zh) Hppd变体及使用方法
CA3055389A1 (en) Hppd variants and methods of use
CA3055396A1 (en) Hppd variants and methods of use
US11708565B2 (en) HPPD variants and methods of use
US20210254091A1 (en) Herbicide tolerant plants expressing a cyanobacterial plastoquinone biosynthetic pathway
UA118470C2 (uk) Варіант гфпд та спосіб його застосування