TWI827585B

TWI827585B - 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法

Info

Publication number: TWI827585B
Application number: TW108108864A
Authority: TW
Inventors: 卡蒂亞金克; 正一汪; 芳葆伍; 羅倫瑞尼亞; 三瓶全次郎; 幸兒古
Original assignee: 日商中外製藥股份有限公司; 新加坡科技研究局
Priority date: 2018-03-15
Filing date: 2019-03-15
Publication date: 2024-01-01
Also published as: TW202003557A; CN112119090A; WO2019177543A1; CN116327926A; EP3765494A1; PH12020551492A1; IL277375A; JP7508368B2; US20210017256A1; MX2020009296A; JP2021518343A; RU2020133003A; US11891432B2; SG11202009010RA; EP3765494A4; CN112119090B; KR20200132938A; TW202413402A; US20240190948A1; CA3093729A1

Abstract

本揭露提供對ZIKV具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及製造及使用該抗體的方法。該抗-DENV抗體具有包括治療或預防ZIKV感染的用途。

Description

對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法

本發明係關於對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其使用方法。

登革熱是世界上最常見的節肢動物媒介病毒疾病。引起登革的病毒(或本文中指稱為DENV)可分為四種不同感染血清型，如DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4。登革感染的症狀包括發熱、肌肉痛、頭痛、低血小板數及低白血球數、凝血功能障礙、出血及可導致登革休克症狀的血管滲漏。當人於前次登革感染後後暴露於登革病毒，抗病毒抗體可增強病毒涉攝入至宿主細胞且該患者處於較高風險於發展嚴重型之登革。然而，登革的嚴重形式亦可發生於第一次感染期間。

同時為最常見的節肢動物媒介病毒疾病，至今，沒有可用於治療登革熱的藥物。關於作為疾病的登革熱方案主要朝向預防感染及/或治療以緩解症候群。

目前正開發疫苗及抗體療法以預防及治療病毒感染。然而，以抗體為主的治療並非無風險。該等風險之一者為抗體-依賴性增強(ADE)，其發生於當未中和抗病毒抗體有助於病毒進入宿主細胞時，造成於細胞中增加的感染力(Expert Rev Anti Infect Ther(2013)11,1147-1157)。ADE最常見的機制為經由於細胞表面之抗體的Fc部分與Fc受體(FcRs)的病毒-抗體複合物的交互作用。正常溫和的病毒感染可藉由ADE變成威脅生命的疾病。已報導於Fc區具有突變而預防結合至FcγR的抗-DENV抗體無法增強DENV感染(WO2010/043977)。然而，對於不增加感染的抗體-依賴性增強風險的抗體治療仍有需求。

DENV-特異性抗體對茲卡病毒的交叉反應性已有報導於文獻[JCI Insight.2017；2(8).doi：10.1172/jci.insight.92428.]。也展現DENV-特異性Abs可增強茲卡感染[Nature.2016；536(7614)：48-53.doi：10.1038/nature18938,Nat Immunol.2016；17(9)：1102-8.]。

本發明提供抗-DENV抗體、含有變體Fc區的多肽及使用該等之方法。

一些實施例中，本發明的經單離抗-DENV抗體結合至DENV E蛋白質。一些實施例中，本發明的抗-DENV抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)，(ii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D，S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)，及(iii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)；(b)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，及(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G, D或L(SEQ ID NO：42)；(c)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)，(iv)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(v)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(vi)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D,S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)；或(d)(i)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(ii)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(iii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D，S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)。一些實施例中，本發明的抗體不為包含下述者之抗體：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明的經單離抗-DNVE抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列，及(iii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(c)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(d)(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；或(e)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

一些實施例中，本發明的抗體不為包含下述者之抗體：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體進一步包含重鏈可變域框架FR1，其包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO：33或34的胺基酸序列；FR4，其包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列。一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV 抗體進一步包含輕鏈可變域框架FR1，其包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；FR4，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體包含(a)與SEQ ID NOs：2-6之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；(b)與SEQ ID NOs：8-10之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(c)SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列及SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；或(d)SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列及SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體為單株抗體。一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體為結合至DENV或DENV E蛋白質的抗體片段。一些實施例中，本發明之經單離的抗-DENV抗體為全長IgG抗體。

一些實施例中，本發明的抗-DENV抗體的Fc區根據EU編號包含Ala於位置234及Ala於位置235。一些實施例中，本發明的抗-DENV抗體的Fc區可選自本文所揭示的變體Fc區。

本發明也提供編碼本發明的抗-DENV抗體的經單離核酸。本發明也提供包含本發明的核酸的宿主細胞。本發明也提供製造抗體的方法，包含培養本發明的宿主細胞以便製造抗體。

本發明也提供包含本發明的抗-DENV抗體及醫藥可接受載體的醫藥調配物。

本發明的抗-DENV抗體可使用於醫藥。一些實施例中，本發明的抗-DENV抗體可使用於治療DENV感染。

本發明的抗-DENV抗體可使用於醫藥之製造。一些實施例中，該醫藥用於治療DENV感染。

本發明也提供治療具有DENV感染的個體的方法。一些實施例中，該方法包含對該個體投予有效量之本發明的抗-DENV抗體。一些實施例中，該方法進一步包含對該個體投予額外的治療劑，例如下文所述。

一些實施例中，本發明的變體Fc區包含至少一個胺基酸變化於親代Fc區。進一步的實施例中，當相較於親代Fc區時，變體Fc區具有實質上減低的FcγR-結合活性。進一步的實施例中，當相較於親代Fc區時，變體Fc區不具有實質上減低的C1q-結合活性。

一些實施例中，本發明的變體Fc區包含Ala於位置234，Ala於位置235，根據EU編號。進一步的實施例中，變體Fc區包含下述(a)-(c)之任一者的胺基酸變化：(a)位置267、268及324，(b)位置236、267、268、324及332，以及(c)位置326及333；根據EU編號。

一些實施例中，本發明的變體Fc區包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Glu於位置267，(b)Phe於位置268，(c)Thr於位置324，(d)Ala於位置236，(e)Glu於位置332，(f)Ala、Asp、Glu、Met或Trp於位置326，及(g)Ser於位置333；根據EU編號。

一些實施例中，本發明的變體Fc區進一步包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Ala於位置434，(b)Ala於位置434，Thr於位置436，Arg於位置438，及Glu於位置440，(c)Leu於位置428，Ala於位置434，Thr於位置436，Arg於位置438，及Glu於位置440，及(d)Leu於位置428，Ala於位置434，Arg於位置438，及Glu於位置440；根據EU編號。

一些實施例中，本發明的變體Fc區包含任何胺基酸變化，單獨或組合，如表4所述。一些實施例中，於本發明所述的親代Fc區係衍生自人類IgG1。本發明提供多肽，其包含SEQ ID NOs：51-59任一者的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽為抗體。進一步的實施例中，抗體為抗-病毒抗體。進一步的實施例中，抗體包含衍生自本文所述的抗-DENV抗體的可變區。

進一步的實施例中，抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(ii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列，及(iii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列；(b)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；(c)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；或(d)(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

進一步的實施例中，抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列，及(iii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(d)(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；或(e)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

本發明也提供編碼本發明之包含變體Fc區的多肽的經單離核酸。本發明也提供包含本發明的核酸的宿主細胞。本發明也提供製造包含變體Fc區的多肽的方法，該方法包含培養本發明的宿主細胞以便製造該多肽。

本發明也提供包含多肽及醫藥可接受載體的醫藥調配物，該多肽包含本發明的變體Fc區。

本發明之包含變體Fc區的多肽可用於作為醫藥之用途。一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽可用於在治療病毒感染之用途。

本發明之包含變體Fc區的多肽可使用於醫藥之製造。一些實施例中，該醫藥係用於治療病毒感染。

本發明也提供治療患有病毒感染的個體的方法。一些實施例中，該方法包含對該個體投予有效量之本發明之包含變體Fc區的多肽。

本發明也提供本文所揭示之抗-DENV抗體，進一步包含本發明之包含變體Fc區的多肽。

一態樣中，本發明提供用於治療或預防茲卡病毒感染的方法。

一些實施例中，本發明之用於治療或預防茲卡病毒感染的方法包含投予結合至茲卡病毒的抗體。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)，(ii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D,S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)，及(iii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)；(b)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，及(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)；(c)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)，(iv)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(v)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(vi)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D,S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)；或(d)(i)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(ii)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(iii)HVR-L3，其包含胺基酸序列 QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D,S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)。一些實施例中，本發明的抗體不為包含下述者之抗體：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體進一步包含重鏈可變域框架FR1，其包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO：33或34的胺基酸序列；FR4，其包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列。一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體進一步包含輕鏈可變域框架FR1，其包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列；FR2，其包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列；FR3，其包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列；FR4，其包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含(a)與SEQ ID NOs：2-6之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；(b)與SEQ ID NOs：8-10之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(c)SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列及SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；或(d)SEQ ID NOs：2-6之任一者的VL序列。

本發明也提供治療茲卡感染的方法。一些實施例中，該方法幫韓對個體投予有效量的本發明之抗-茲卡抗體。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區包含Ala於位置234、Ala於位置235，根據EU編號。進一步的實施例中，變體Fc區包含下述(a)至(c)之任一者的胺基酸變化：(a)位置267、268及324，(b)位置236、267、268、324及332，及(c)位置326 and 333；根據EU編號。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Glu於位置267，(b)Phe於位置268，(c)Thr於位置324，(d)Ala於位置236，(e)Glu於位置332，(f)Ala、Asp、Glu、Met或Trp於位置326，及(g)Ser於位置333；根據EU編號。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區進一步包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Ala於位置434，(b)Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440，(c)Leu於位置428、Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440，及(d)Leu於位置428、Ala於位置434、Arg於位置438及Glu於位置440；根據EU編號。

本發明提供多肽，其包含SEQ ID NOs：51-59之任一者的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(ii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列，及(iii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列；(b)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；(c)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；或(d)(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(ii)HVR-L2，其包含 SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含選自下述所成群組的VH變體序列：3CH1047(SEQ ID NO：6)，及3CH1049(SEQ ID NO：95)，具有選自下述所成群組的人類IgG1 CH序列：SG182(SEQ ID NO：46)、SG1095(SEQ ID NO：54)及SG1106(SEQ ID NO：59)；及選自下述所成群組的VL變體序列：3CL(SEQ ID NO：7)及3CL633(SEQ ID NO：98)，具有人類CL序列SK1(SEQ ID NO：60)。

圖1(A)至(D)顯示抗-DENV抗體3C及3Cam朝向DENV-1 E蛋白質(A)、DENV-2 E蛋白質(B)、DENV-3 E蛋白質(C)及DENV-4 E蛋白質(D)的BIACORE^®傳感圖，如實施例2所述。

圖2顯示具有不同Fc變體朝向人類C1q的抗體的結合親和性，如實施例4所述。結合親和性係藉由ELISA測量。測試的Fc變體為：WT、LALA+KWES、LALA+EFT+AE、LALA+EFT及LALA。

圖3顯示具有不同Fc變體朝向人類C1q的抗體的結合親和性，如實施例4所述。結合親和性係藉由ELISA測量。測試的Fc變體為：WT、LALA、LALA+KWES、LALA+KAES、LALA+KDES、LALA+KEES及LALA+KMES。

圖4顯示具有不同Fc變體朝向人類C1q的抗體的結合親和性，如實施例4所述。結合親和性係藉由ELISA測量。測試的Fc變體為：WT、LALA、LALA+ACT3、LALA+ACT5、LALA+KAES、LALA+ACT3+KAES及LALA+ACT5+KAES。

圖5顯示具有不同Fc變體朝向人類C1q的抗體的結合親和性，如實施例4所述。結合親和性係藉由ELISA測量。測試的Fc變體為：WT、LALA、LALA+ACT3、 LALA+ACT5、LALA+KAES、LALA+ACT3+KAES及LALA+ACT5+KAES。

圖6(a)-(h)顯示Fc變體結合至人類FcγRs的Biacore分析，如實施例5所述。測試的Fc變體為：WT(圖中記載為WT IgG)、KWES、EFT+AE、EFT、KAES、LALA+KWES、LALA+EFT+AE、LALA+EFT、LALA、LALA+ACT3、LALA+ACT5、LALA+KAES、LALA+KAES+ACT3及LALA+KAES+ACT5。該等Fc變體經測試對於結合至FcγRs包括：(a)人類FcγR1a，(b)人類FcγR2a對偶基因變體167H，(c)人類FcγR2a對偶基因變體167R，(d)人類FcγR2b，(e)人類FcγR3a對偶基因變體158F，(f)人類FcγR3a對偶基因變體158V，(g)人類FcγR3b對偶基因變體NA1，及(h)人類FcγR3b對偶基因變體NA2。各Fc變體係以具有Fc變體的抗體單獨形式(記載為Ab單獨)以及以具有抗體與三聚體CD154抗原的免疫複合物形式(記載為CD154 IC)二者予以評估。

圖7(a)-(d)顯示對於結合至小鼠FcγRs的Fc變體的Biacore分析，如實施例5所述。測試的Fc變體為：WT(圖中記載為WT IgG)、KWES、EFT+AE、EFT、KAES、LALA+KWES、LALA+EFT+AE、LALA+EFT、LALA、LALA+ACT3、LALA+ACT5、LALA+KAES、LALA+KAES+ACT3及LALA+KAES+ACT5。該等Fc變體經測試對於結合至FcγRs包括：(a)小鼠FcγR1，(b)小鼠FcγR2b，(c)小鼠FcγR3，及(d)小鼠FcγR4。各Fc變體係以具有Fc變體的抗體單獨形式(記載為Ab單獨)以及以具有抗體與三聚體CD154抗原的免疫複合物形式(記載為CD154 IC)二者予以評估。

圖8顯示對於結合至人類FcRn的Fc變體的Biacore分析，如實施例5所述。測試的Fc變體為：WT(圖中記載為hIgG1)、LALA、LALA+ACT3、LALA+ACT5、LALA+KAES、LALA+KAES+ACT3及LALA+KAES+ACT5。各Fc變體係以具有Fc變體的抗體單獨形式(記載為Ab單獨)以及以具有抗體與三聚體CD154抗原的免疫複合物形式(記載為CD154 IC)二者予以評估。

圖9顯示於AG129小鼠在DENV-2病毒感染後第3日的病毒血症，如實施例6所述。抗-DENV抗體3C及3Cam與WT(記載為hIgG1)、LALA及LALA+KAES的Fc變體組合，或與作為陰性對照的PBS組合，係於病毒感染後第2日投予。

圖10顯示於AG129小鼠在DENV1-4病毒感染後第3日的病毒血症，如實施例6所述。抗-DENV抗體3C及3Cam與相同的Fc變體(LALA+KAES)或與作為陰性對照的P1緩衝液的組合，係於病毒感染後第2日投予。LOD：偵測極限。各符號表示來自一小鼠的病毒血症。使用單向ANOVA測試計算群間的差異。

圖11顯示於AG129小鼠DENV2病毒感染後第3日的病毒血症，如實施例6所述。抗-DENV抗體3Cam2-LALA及3Cam2-LALA+KAES或作為陰性對照的P1緩衝液係於病毒感染後第2日投予。

圖12(A)-(D)顯示抗-DENV抗體3C及3Cam2朝向DENV-1 E蛋白質(A)、DENV-2 E蛋白質(B)、DENV-3 E蛋白質(C)及DENV-4 E蛋白質(D)的BIACORE^®傳感圖，如實施例2所述。

圖13(A)-(B)顯示利用BHK-21-DC-SIGN細胞的茲卡病毒中和測試。使用茲卡病毒株KF993678。各數據點係來自一個測定。於第一試驗(A)中，近似NT50對於3Cam2-LALA+KAES+ACT5為0.33μg/mL且對於3C-LALA+KAES+ACT5為5.33μg/mL。於第二試驗(B)中，近似NT50對於3Cam2-LALA+KAES+ACT5為0.93μg/mL。

圖14(A)-(B)顯示對於茲卡病毒的K562細胞ADE測試。使用茲卡病毒株KF993678。A)對於野生型版本的3Cam2可觀察到增強，但對於其Fc變體3Cam2-LALA+KAES及3Cam2-LALA+KAES+ACT5則否。INFECTED：無抗體添加。顯示n=2的平均±誤差(範圍)。B)利用新批次的3Cam2-LALA+KAES+ACT5重複試驗，利用野生型版本的3Cam2作為對照。顯示n=2的平均±誤差(範圍)。

圖15顯示針對茲卡病毒感染的活體內效力。小鼠利用茲卡病毒i.p.感染且於感染後二日利用100μg的3Cam2-LALA+KAES+ACT5(3Cam2-SG1106)或3C-LALA+KAES+ACT5(3C-SG1106)i.v.處理。使用P1緩衝液作為對照。各點表示一小鼠，及顯示平均±SD。使用Kruskal Wallis測試顯著性，*：p<0.05,**：p<0.005。

圖16顯示經茲卡病毒感染的IFNAR小鼠於抗體處理後的存活。小鼠利用茲卡病毒i.p.感染且於感染後二日利用100μg的3Cam2-LALA+KAES+ACT5或3C-LALA+KAES+ACT5 i.v.處理。使用P1緩衝液作為對照。各群的存活百分比係顯示感染後40日。

圖17顯示3C、3C-LALA及3Cam2-LALA+KAES+ACT5單株抗體對於ZIKV的結合活性。結合ELISA曲線基於經純化的ZIKV病毒體。

圖18顯示3C、3C-LALA及3Cam2-LALA+KAES+ACT5人類抗體針對ZIKV的活體外中和活性。顯示為病毒與抗體培養，相較於僅病毒單獨的相對感染性。使用二的不同批次的3C及3C-LALA(舊及新)。

圖19(A)至(B)顯示抗體處理於IFNαR KO小鼠預防ZIKV-誘發的先天性發育不良。(A)來自模擬感染小鼠的代表性胎兒(a)，利用同位素抗體投予的ZIKV-感染小鼠(b)，利用3C-LALA處理的ZIKV-感染小鼠(c)，及利用3Cam2-LALA+KAES+ACT5處理的ZIKV-感染小鼠(d)。(B)各群(n)中的胎兒重量：全身重(a)及頭重(b)。各點表示1胎兒。

圖20(a)-(d)顯示抗體處理顯著地降低由母體至胎兒的ZIKV傳輸。病毒負載於羊水(a)、胎盤(b)、胎兒腦(c)及胎兒肝(d)。各點表示1胎兒，各群中n

7。

本文所記載或參照的技術及過程一般為所屬技術領域中具有通常知識者所習知且通常利用慣用方法，如，例如，揭示於下述者知廣泛使用方法：Sambrook et al.,Molecular Cloning：A Laboratory Manual 3d edition(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.；Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel,et al.,eds.，(2003))；the series Methods in Enzymology(Academic Press,Inc.)：PCR 2：A Practical Approach(M.J.MacPherson,B.D.Hames and G.R.Taylor eds.(1995)),Harlow and Lane,eds.(1988)Antibodies,A Laboratory Manual，and Animal Cell Culture(R.I.Freshney,ed.(1987))；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait,ed.,1984)；Methods in Molecular Biology,Humana Press；Cell Biology：A Laboratory Notebook(J.E.Cellis,ed.,1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney),ed.,1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather and P.E.Roberts,1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture：Laboratory Procedures(A.Doyle,J.B.Griffiths，and D.G.Newell,eds.,1993-8)J.Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir and C.C.Blackwell,eds.)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller and M.P.Calos,eds.,1987)；PCR：The Polymerase Chain Reaction，(Mullis et al.,eds.,1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coligan et al.,eds.,1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons,1999)；Immunobiology(C.A.Janeway and P.Travers,1997)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies：A Practical Approach(D.Catty.,ed.,IRL Press,1988-1989)；Monoclonal Antibodies：A Practical Approach(P.Shepherd and C.Dean,eds.,Oxford University Press,2000)；Using Antibodies：A Laboratory Manual(E.Harlow and D.Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1999)；The antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra,eds.,Harwood Academic Publishers,1995)；及Cancer：Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVita et al.,eds.,J.B.Lippincott Company,1993)。

I. 定義

除非另行指明，本文所使用的技術用語及科學用語具有與所屬技術領域中具有通常知識者所習知者為相同意義。Singleton et al.,Dictionary of Microbiology and Molecular Biology 2nd ed.,J.Wiley & Sons(New York,N.Y.1994)，及March,Advanced Organic Chemistry Reactions,Mechanisms and Structure 4th ed.,John Wiley & Sons(New York,N.Y.1992)，提供所屬技術領域中具有通常知識者對於本申請案所使用的許多用語的通常指引。本文所引用的所有參考文獻，包括專利申請案及公開案，皆以引用方式併入本文做為參考。

用於解釋本說明書的目的，應用下述定義且當合適時，以單數使用的用語也將包括多數，反之亦然。應了解本文使用的用語僅係用於記載特定實施例的目的，且不意圖用於限制。在下文的任何定義與藉由引用併入本文的任何文件衝突的情況，以下文的定義為準。

用於本文目的之「接受體人類框架」為一框架，其包含衍生自人類免疫球蛋白框架或人類共有框架的胺基酸序列輕鏈可變域(VL)框架或重鏈可變域(VH)框架，如下文所述。「衍生自」人類免疫球蛋白框架或人類共有框架的受體人類框架可包含其相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列改變。一些實施例中，胺基酸變化的數目為10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少、或2或更少。一些實施例中，VL接受體人類框架為序列一致於VL人類免疫球蛋白框架序列或人類共有框架序列。

「親和性」意指分子(例如，抗體)的單一結合位點與其結合伴侶(例如，抗原)之間的非共價交互作用的總和強度。除非另行指明，如使用於本文，「結合親和性」意止於結合對(例如，抗體及抗原)之數目之間反映1：1交互作用的固有結合親和性。分子X對於其伴侶Y的親和性通常可藉由解離常數(Kd)表示。親和性可藉由所屬技術領域習知的方法測定。測定結合親和性的具體說明及例示性實施例係記載於下文。

「親和性成熟的」抗體意指相較於不具有該等變化的親代抗體，於一個或多個高可變區(HVR)中具有一個或多個變化的抗體，該等變化造成抗體對於抗原的親和性改良。

用語「抗-DENV抗體」及「結合至DENV的抗體」意指能以充分的親和性結合DENV的抗體，使得該抗體有用於作為靶定DENV的診斷劑及/或治療劑。抗體可結合至DENV的E蛋白質。用語「抗-DENV E蛋白質抗體」及「結合至DENV E蛋白質的抗體」意指能以充分的親和性結合DENV E蛋白質的抗體，使得該抗體有用於作為靶定DENV的診斷劑及/或治療劑。一實施例中，抗-DENV E蛋白質對於不為DENV E蛋白質的非相關蛋白質的結合程度，係小於約該抗體對於DENV E蛋白質的結合的10%，例如，藉由放射免疫檢測(RIA)。一些實施例中，結合至DENV及/或DENV蛋白質的抗體具有解離常數(Kd)1μM或更少、100nM或更少、10nM或更少、1nM或更少、0.1nM或更少、0.01nM或更少、或0.001nM或更少(例如，10^-8M或更少，例如由10^-8M至10^-13M，例如由10^-9M至10^-13M)。一些實施例中，抗-DENV抗體結合至保留於來自不同血清型的DENV中的DENV的抗原決定基。一些實施例中，抗-DENV E蛋白質抗體結合至保留於來自不同血清型的DENV E蛋白質中的DENV E蛋白質的抗原決定基。

用語「抗茲卡病毒抗體」、「抗茲卡抗體」、「抗-ZIKV抗體」及「結合至茲卡病毒的抗體」意指能以充分的親和力結合茲卡病毒的抗體而使得該抗體有用於作為靶定茲卡病毒的診斷、預防及/或治療劑。用語「抗-ZIKV抗體」及「抗-DENV抗體」可交換使用而意指能結合ZIKV病毒及DENV二者的抗體。

本文中用語「抗體」係以最寬廣的用意使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)及抗體片段，只要其等展現所期望的抗原-結合活性。

「抗體-依賴性細胞媒介細胞毒性」或「ADCC」意指細胞毒性的形式，其中經分泌的Ig結合至呈現於一些細胞毒性細胞(例如，NK細胞、嗜中性球及巨噬細胞)的Fc受體(FcRs)，使得該等細胞毒性起效子細胞特異性地結合抗原-附載標靶細胞及後續地利用細胞毒素殺死標靶細胞。用於媒介ADCC的初代細胞，NK細胞，僅表現FcγRIII，而單核球表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。造血幹細胞的FcR表現係總結於Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9：457-92(1991)第464頁表3。為了評估感興趣分子的ADCC活性，可進行活體外ADCC測試，如記載於美國專利第5,500,362號或第5,821,337好或美國專利第6,737,056號(Presta)。對該等測試有用的起效子細胞包括PBMC細胞及NK細胞。替代地，或額外地，感興趣分子的ADCC活性可於活體內評估，例如，於動物模型中，如揭示於Clynes et al.PNAS(USA)95：652-656(1998)者。

「抗體片段」意指不是完整抗體的分子而包含完整抗體結合至抗原的完整抗體的部分。抗體片段的實例包括但不限於Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙鏈抗體(diabodies)；線性抗體；單鏈抗體分子(例如，scFv)；及由抗體片段形成的多特異性抗體。

作為對照抗體的「結合至相同抗原決定基的抗體」意指於競爭測試中阻斷對照抗體對其抗原的結合的抗體，及相反地，對照抗體於競爭測試中阻斷抗體對其抗原的結合。例示性競爭測試提供於本文中。

「C1q」為包括對於免疫球蛋白Fc區的結合位點的多肽。C1q與二種絲胺酸蛋白酶，C1r及C1s，一起形成複合體C1，為補體依賴性細胞毒性(CDC)途徑的第一個組分。人類C1q可由商業購得，例如由Quidel,San Diego,CA購得。

用語「嵌合」抗體意指一抗體其中重鏈及/或輕鏈之一部分係衍生自一特定來源或品種，而剩餘之重鏈及/或輕鏈來自不同來源或品種。

抗體的「類別」意指恆定域或由其重鏈所具有的恆定域的類型。有五種抗體的主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，及數種該等可進一步衍生的亞類別(同型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA及IgA2。對應於免疫球蛋白不同類別的重鏈恆定域係分別稱為α、δ、ε、γ及μ。

「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」意指於捕體存在下之標靶細胞的裂解。典型的補體途徑的活化藉由補體系統的第一組分(C1q)對(合適的亞類別)抗體的結合而起始，該抗體結合至其同源抗原。為了評估補體活化，可進行CDC測試，例如記載於Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202：163(1996)。具有經改變的Fc區胺基酸序列的多肽變體(具有變體Fc區的多肽)以及增加或減少的C1q結合能力係記載於，例如，美國專利第6,194,551 B1號及WO 1999/51642。也參照，例如，Idusogie et al.J.Immunol.164：4178-4184(2000)。

如使用於本文之用語「細胞毒性劑」意指抑制或預防細胞功能及/或引起細胞死亡或毀壞的物質。細胞毒性劑包括，但不限於，放射活性同位素(例如，²¹¹At、¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、₁₅₃Sm、²¹²Bi、³²P、²¹²Pb及Lu的放射活性同位素)；化療劑或藥物(例如，甲胺蝶呤(methotrexate)、阿黴素(Adriamycin)、長春花生物鹼類(vinca alkaloids)(長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、依託泊苷(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素(mitomycin)C、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、道諾黴素(daunorubicin)或其他嵌入劑)；生長抑制劑；酵素及其片段如溶核劑；抗生素；毒素如細菌、真菌、植物或動物起源的小分子毒素或或酵素活化毒素，包括其片段及/或變體；及下文所記載之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。

「起效子功能」意指有助於抗體的Fc區的生物活性者，其與抗體同型變化。抗體起效子功能的實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體-依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體 (例如，B細胞受體)的下調；及B細胞活化。

劑，例如醫藥調配物的「有效量」，意指例如，在劑量及必要的時間期間，有效於達成所期望的治療或預防結果的量。

用語「抗原決定基」包括能為抗體所結合的任何決定區。抗原決定基為靶向抗原的抗體所結合的抗園區，且包括直接接觸抗體的特定的胺基酸。抗原決定區可包括分子的化學性表面基團如胺基酸、糖鏈、磷酸基或磺醯基，且可具有特異的三維結構特性，及/或特異的電荷特性。一般而言，特異於特別標靶抗原的抗體於蛋白質及/或巨分子的複合體混合物中將優先地辨識標靶抗原的抗原決定基。

「Fc受體」或「FcR」記載結合至抗體的Fc區的受體。一些實施例中，FcR為天生的人類FcR。一些實施例中，FcR為結合IgG抗體者(γ受體)且包括受體之FcγRI、FcγRII及FcγRIII亞類別，包括該等受體之等位基因變體及替代的剪切形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，其具有類似的胺基酸序列而差異主要在於其細胞質域。活化受體FcγRIIA於其細胞質域含有免疫受體酪胺酸系活化模體(ITAM)。抑制受體FcγRIIB於其細胞質域含有免疫受體酪胺酸系抑制模體(ITIM)。(參照，例如，Daëron,Annu.Rev.Immunol.15：203-234(1997).)FcRs，例如，經評論於Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-92(1991)；Capel et al.,Immunomethods 4：25-34(1994)；及de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126：330-41(1995)。其他FcRs，包括於未來被鑑定者，係涵蓋於本文的用語「FcR」。

用語「Fc受體」或「FcR」也包括新生兒受體，FcRn，其係負責轉移母體IgG至胎兒(Guyer et al.,J.Immunol.117：587(1976)及Kim et al.,J.Immunol.24：249(1994))以及調節免疫球蛋白的體內恆定。測量結合至FcRn的方法係為已知(參照，例如，Ghetie and Ward.,Immunol.Today 18(12)：592-598 (1997)；Ghetie et al.,Nature Biotechnology 15(7)：637-640(1997)；Hinton et al.,J.Biol.Chem.279(8)：6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton et al.)。可測試人類FcRn高親和性結合多肽的活體內結合至人類FcRn以及血清半衰期，例如，對於基因轉殖小鼠或表現人類FcRn的經轉染人類細胞株，或對於靈長類人類以具有變體Fc區的多肽投予。世界專利WO 2000/42072(Presta)記載具有改良的或減少的結合至FcRs的抗體變體。亦參照，例如，Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。

本文中用語「Fc區」係使用於定義含有至少恆定區的一部分免疫球蛋白重鏈的C-終端區。用語包括天生的序列Fc區及變體Fc區。一實施例中，人類IgG重鏈Fc區由Cys226或由Pro230，延伸至重鏈的羧基-終端。然而，Fc區的C-終端離胺酸(Lys447)或甘胺酸-離胺酸(殘基446-447)可或可不存在。本文中除非特別指明，Fc區或恆定區中的胺基酸殘基的編號係根據EU編號系統，也稱為EU指數，如記載於Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991。

用語「Fc區-包含抗體」意指包含Fc區的抗體。Fc區的C-終端離胺酸(殘基447)或甘胺酸-離胺酸(殘基446-447)可經移除，例如，於抗體純化期間或藉由編碼該抗體的核酸的重組工程。因此，根據本發明之包含具有Fc區的抗體的組成物，可包含具有G446-K447的抗體、具有G446且不具有K447的抗體、具有所有G446-K447經移除的抗體、或上述三種類型抗體的混合物。

「框架」或「FR」意指高可變區(HVR)殘基以外的可變域殘基。可變域的FR通常由四種FR域所組成：FR1、FR2、FR3及FR4。因此，HVR序列及FR序列於VH(或VL)中通常呈現下述序列：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。

用語「全長抗體」、「完整抗體」及「全抗體」於本文中交換使用以指稱具有結構實質上類似於天生的抗體結構的抗體或具有含有本文所定義的Fc區的重鏈的抗體。

「功能性Fc區」擁有天生的序列Fc區的「起效子功能」。例示性「起效子功能」包括C1q結合；CDC；Fc受體結合；ADCC；吞噬作用；細胞表面受體(例如，B細胞受體；BCR)的下調等。該等起效子功能通常需要與結合域(例如，抗體可變域)組合的Fc區且可使用各種測試予以評估，如所記載，例如，本文的定義。

用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」交換使用且意指其中經導入異源核酸的細胞，包括該等細胞之繼代。宿主細胞包括「轉形株」及「轉形細胞」，其包括初代轉形細胞及自其衍生的繼代而不論其傳代數。繼代可不為核酸內容物完全相同於親代細胞，但可含有突變。如經篩選或選擇對於其原始轉形細胞具有相同功能或生物活性的突變繼代也包括於本文。

「人類抗體」為具有對應於由人類或由人類細胞或由利用人類抗體庫或其他人類抗體-編碼序列之衍生自非人類來源所產生的抗體的胺基酸序列者。人類抗體的定義特異性地排除包含非人類抗原-結合殘基的人源化抗體。

「人類共有框架」為其代表於人類免疫球蛋白VL或VH框架序列的選擇中最常可見發生的胺基酸殘基的框架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列的選擇係來自可變域的亞群。一般而言，序列的亞群為如述於Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,NIH Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),vols.1-3之亞群。一實施例中，對於VL，亞群為Kabat et al.，中之亞群kappaI，如上文所述。一實施例中，對於VH，亞群為Kabat et al.，中之亞群III，如上文所述。

「人源化」抗體意指包含來自非人類HVR的胺基酸殘基及來自人類FR的胺基酸殘基的嵌合抗體。一些實施例中，人源化抗體將實質上包含所有至少一種，典型的二種可變域，其中所有或實質上所有的對應於非人類抗體者的HVR(例如，CDR)，及所有或實質上所有對應於人類抗體者的FR。人源化抗體視需要地可包含衍生自人類抗體的抗體恆定區的至少一部分。抗體的「人源化形式」，例如，非人類抗體，意指具有歷經人源化的抗體。

使用於本文之用語「高可變區」或「HVR」意指於序列中為高可變的抗體可變域(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成結構性定義的環(「高可變環」)及/或含有抗原-接觸殘基(「抗原接觸」)的區個者。一般而言，抗體包含六種HVR：三種於VH(H1、H2、H3)，及三種於VL(L1、L2、L3)。本文中例示性HVR包括：(a)高可變環發生於胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；(b)CDR發生於胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1),50-65(H2)及95-102(H3)(Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；(c)抗原接觸發生於胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)及93-101(H3)(MacCallum et al.J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)、及/或(c)的組合，包括HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)及94-102(H3)。

除非指明，可變域中的HVR殘基及其他殘基(例如，FR殘基)本中係經編號根據Kabat et al.，如上文所述。

「免疫接合物」為經接合一種或多種異源分子的抗體，該異源分子包括但不限於細胞毒性劑。

「個體」或「對象」為哺乳動物。哺乳動物包括，但不限於，家畜動物(例如，牛、羊、貓、犬及馬)、靈長類(例如，人類及非人類靈長類，如猴)、兔、及齧齒類(例如，小鼠及大鼠)。一些實施例中，該個體或對象為人類。

「經單離的」抗體為已由其天然環境的組成經分離者。一些實施例中，抗體係經純化至大於95%或99%純度，如藉由，例如，電泳(例如，SDS-PAGE、等電點聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如，離子交換或逆相HPLC)所測定。對於用於抗體純度的評估的方法的評論，參照，例如，Flatman et al.,J.Chromatogr.B 848：79-87(2007)。

「經單離的」核酸意指已由其天然環境的組成經分離的核酸分子。經單離的核酸包括於習知含有核酸分子的細胞中所含有的核酸分子，但該核酸分子係存在於染色體外或位於不同於其天然的染色體位置的染色體位置。

「編碼抗體的經單離核酸」意指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)的一種多種核酸分子，包括於單一載體或不同載體中的核酸分子，及於宿主細胞中存在於一種或多種位置的該等核酸分子。

本文中使用的用語「單株抗體」意指由實質上同質的抗體族群所獲得的抗體，亦即，包含族群為同一的及/或結合相同抗原決定基的個別抗體，除可能的變體抗體外，例如，含有天然發生的突變或於單株抗體製備中發生的，該等變體通常少量存在。相對於多株抗體製備，其典型地包括直接針對不同決定基(抗原決定基)的不同抗體，單株抗體製備之各單株抗體習直接針對抗原的單一決定基。因此，修飾者「單株」指稱因由抗體的實質上同質的族群所獲得的抗體的特性，且不構築為藉由任何特別方法製造抗體所需。舉例而言，根據本發明欲使用的單株抗體可藉由各種技術製造，包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法及利用含有該人類免疫球蛋白基因座之全部或部分的基因轉殖動物的方法，用於製造單株抗體的該等方法及其他例示性方法係記載於本文。

「裸抗體」意指抗體其未接合至異源部分(例如，細胞毒性部分)或放射標記。裸抗體可存在於醫藥調配物。

「天生的抗體」意指天然發生的具有改變結構的免疫球蛋白分子。舉例而言，天生的IgG抗體為約150,000道耳頓的異四聚體醣蛋白，由經雙硫鍵結的二個相同的輕鏈及二個相同的重鏈所組成。由N-終端至C-端，各重鏈具有可變區(VH)，也稱為可變重域或重鏈可變域，接著有三個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，由N-終端至C-終端，各輕鏈具有可變區(VL)，也稱為可變輕域或輕鏈可變域，接著有恆定輕(CL)域。抗體的輕鏈可指定為二種類型之一者，稱為kappa(κ)及lambda(λ)，根據其恆定域的胺基酸序列。

「天生的序列Fc區」包含胺基酸序列相同於天然可見的Fc區的胺基酸序列。天生的序列人類Fc區包括天生的序列人類IgG1Fc區(非-A及A種異型)；天生的序列人類IgG2Fc區；天生的序列人類IgG3Fc區；及天生的序列人類IgG4Fc區以及其天然發生的變體。

用語「包裝***文件」係用於意指包括於治療產品的商業包裝物中的照例說明書，其含有關於該等治療產品的適應症、用法、用量、投予、組合療法、禁忌症及/或警語的相關資訊。

相對於對照多肽的「胺基酸序列同一性的百分比(%)」係定義為在對準序列及導入間隙後，與對照多肽序列中的胺基酸殘基為同一的候選序列中的胺基酸殘基的百分比，必要時，達成最大百分比序列同一性，且不考慮任何保留性取代作為該序列同一性的一部分。對於測定百分比胺基酸序列同一性的對準可以習知於所屬技術領域的各種方法達成，例如，使用公眾可取得的電腦軟體如BLAST、BLAST-2、ALIGN、Megalign(DNASTAR)軟體或GENETYX(註冊商標)(Genetyx Co.,Ltd.)。所屬技術領域中具有通常知識者可決定用於對準序列的合適參數，包括於所比較的全長序列中達成最大對準所需的演算法。

ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.所授權，且原始碼已由使用者文件存檔於U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559，其係註冊於U.S.Copyright Registration No.TXU510087。ALIGN-2程式為公眾可由Genentech,Inc.,South San Francisco,California取得或可由原始碼編譯。ALIGN-2程式應由使用於UNIX操作系統編譯，包括數位UNIX V4.0D。所有的序列比較參數係由ALIGN-2程式設定且不改變。在ALIGN-2係應用於胺基酸序列比較的情況，規定的胺基酸序列A對於、具有或針對規定的胺基酸序列B(其可替代地表達為具有或包含某百分比胺基酸序列同一性對於、具有或針對規定的胺基酸序列B的規定的胺基酸序列A)的胺基酸序列同一性%係如下述計算： 100乘以分數(fraction)X/Y

其中X為於A及B的程式對準中藉由序列對準程式ALIGN-2的同一比對胺基酸殘基給分的數，及其中Y為B中胺基酸殘基的總數。應了解其中胺基酸序列A的長度不等於胺基酸序列B的長度，A對於B的胺基酸序列同一性%不等於B對A的胺基酸序列同一性%。除非特別另行指明，本文所使用的所有胺基酸序列同一性%係使用緊接於前一段落所記載ALIGN-2電腦程式獲得。

用語「醫藥調配物」意指製劑其為允許該製劑中所含有的活性成分的生物活性為有效的形式，且其不含有對於該調配物將投予的對象為不可接受毒性的額外成分。

「醫藥可接受載體」意指醫藥調配物中，活性成分以外的成分，其對於對象為非毒性。醫藥可接受載體包括，但不限於緩衝液、賦形劑、安定劑或防腐劑。

用語「DENV E蛋白質」，如使用於本文，意指來自任何DENV血清型的任何天生的DENV E蛋白質，包括DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4，除非另行指明。DENV基因組編碼三種結構蛋白質(殼體(C)，前-膜/膜(prM/M)，及外膜(E))及七種非結構蛋白質(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B及NS5)。E蛋白質為接近55kDa的醣蛋白，於病毒體成熟前存在為具有PrM蛋白質的異二聚體。E蛋白質的包外結構域的X-ray結晶圖像研究已解明藉由α螺旋桿錨及二個反平行穿膜域而連接至病毒膜的三種不同β-桶狀域。域III(EDIII)採用類免疫球蛋白摺疊且已建議於受體交互作用中扮演重要角色。域II(EDII)為由二個長的類指結構所組成且於尖部含有高度保留的13個胺基酸融合環(EDII-FL)，及涉及E蛋白質的膜融合及二聚體化。中央域(域I；EDI)為分別藉由一個及四個可撓性連結子連接至EDIII及EDII的九股β-桶。E蛋白質對於病毒的生命爭其間的病毒組裝、受體附接、進入、病毒融合及可能的免疫逃避為重要的，且因此，係於病毒顆粒採用數種不同的構型及安排所需要的動態蛋白質。用語涵蓋「全長」未處理的DENV E蛋白質以及於細胞中處理所造成的DENV E蛋白質的任何形式。用語也DENV E蛋白質的天然發生的變體，例如，血清型變體或類種(quasispecies)。

「茲卡(Zika)病毒(ZIKV)」，如使用於本文，為病毒家族黃病毒科的成員。其藉由日間活動的白線蚊，如埃及斑蚊(A.aegypti)及白線斑蚊(A.albopictus)傳播。ZIKV基因組編碼3419胺基酸的單一多肽，其藉由病毒絲胺酸及細胞孚林(furin)蛋白質酶裂解為功能性域：殼體(C)、膜前驅物(prM)、外膜(E)及7個非結構蛋白質(NS)。

如使用於本文知片語「實質上減少」、「實質上增加」或「實質上不同」，意指二個數值(通常一個與分子相關且另一個與對照/比較分子相關) 之間差異的程度充分的高而使得所屬技術領域中具有通常知識者考慮該二數值之間的差異係於藉由該等數值(例如，Kd值)所測量的生物特徵的範圍內為統計顯著的。

如使用於本文，「治療(treatment)」(以及其文法變形如「treat」或「treating」)意指臨床介入以企圖改變欲治療個體的自然病程，且可進行用於預防或於臨床病理的過程期間。所期望的治療效果包括，但不限於，預防疾病的發症或復發、症狀的減輕、疾病的任何直接或間接病理後續的消減、預防惡性轉移、降低疾病進展速率、疾病狀態的改善或緩和、及緩和或改良的預後。一些實施例中，本發明的抗體係使用於延遲疾病的發展或減緩疾病的進展。

用語「可變區」或「可變域」意指抗體重鏈或輕鏈的域，其係涉及結合抗體至抗原。天生的抗體的重鏈及輕鏈的可變域(分別為VH及VL)通常具有類似的結構，以各域包含四種保留的框架區(FR)及三種高可變區(HVR)。(參照，例如，Kindt et al.Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007)。)單一的VH域或VL域可為足以賦予抗原-結合特異性。再者，結合特別抗原的抗體可使用來自結合該抗原的抗體的VH域或VL域而經單離以分別篩選互補VL域或VH域的庫。參照，例如，Portolano et al.,J.Immunol.150：880-887(1993)；Clarkson et al.,Nature 352：624-628(1991)。

「變體Fc區」包含胺基酸序列，其藉由至少一個胺基酸修飾(改變)，較佳地為一個或多個胺基酸取代，而不同於天生的序列Fc區的胺基酸序列。較佳地，相較於天生的Fc區或親代多肽的Fc區，變體Fc區具有至少一個胺基酸取代，例如，於天生的Fc區或親代多肽的Fc區由約一個至約十個胺基酸取代，且較佳地由約一個至約五個胺基酸取代。本文中變體Fc區將較佳地與於天生的Fc區及/或親代多肽的Fc區具有至少約80%同源性，且最佳地具有至少約90%同源性，及更佳地具有至少約95%同源性。

用語「載體(vector)」，如使用於本文，意指能傳播另一核酸至其所連結者的核酸分子。用語包括做為自行複製核酸結構的載體以及併入其經導入之宿主細胞的基因組的載體。一些載體能指引對其經操作性連接的核酸表現。該等載體於本文中亦指稱為「表現載體」。

II. 組成物及方法

一態樣中，本發明係基於，部分基於，抗-DENV抗體及其用途。一些實施例中，提供結合至DENV及/或DENV E蛋白質的抗體。本發明的抗體有用於，例如DENV感染的診斷或治療。

一態樣中，本發明係基於，或部分基於，包含變體Fc區的多肽及其用途。一些實施例中，提供具有實質上減低的FcγR-結合活性之包含變體Fc區的多肽。一些實施例中，提供不具有實質上減低的C1q-結合活性之包含變體Fc區的多肽。特別的實施例中，本發明的多肽為抗體。本發明之包含變體Fc區的多肽係有用於，例如，病毒感染的診斷或治療。

一態樣中，本發明係基於，或部分基於，抗-ZIKV抗體及其用途。一些實施例中，提供結合ZIKV的抗體。一些實施例中，提供對DENV具有交叉反應性的抗-ZIKV抗體。

一態樣中，本發明係基於，或部分基於，用於治療或預防茲卡感染的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。一態樣中，本發明係基於，或部分基於，用於抑制由妊娠母體至胎兒之茲卡病毒傳遞，包含投予結合至ZIKV的抗體。一態樣中，本發明係基於，或部分基於，用於預防先天性茲卡症候群的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。一態樣中，本發明係基於，或部分基於，用於抑制減低胎兒體重(例如，全身、頭等)的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。

一實例中，用語「先天性茲卡症候群」意指出生缺陷的不同型態，其獨特於出生前受到茲卡感染的胎兒及嬰兒。如所屬技術領域中具有通常知識者所理解，具有先天性茲卡症候群的對象可顯現症狀如，但不限於，先天性發育缺陷、小腦症、嚴重小腦症其中頭骨部分坍塌、具有特定類型腦損傷之減少的腦組織，包括皮質下鈣化、對於眼後的損傷，包括黃斑部瘢痕及視焦色素視網膜斑駁、先天性攣縮、如內翻足或關節攣縮、出生後很快的張力亢進限制身體動作等。咸信投予如本所記載的抗體將預防先天性茲卡症候群的至少一種(或至少二種，或至少三種，或至少四種，或全部)症狀。舉例而言，如所記載的抗體預防胎兒或嬰兒出生前的茲卡病毒感染而藉此抑制胎兒體重(如全身、頭等)降低。

一態樣中，記載於此段落(II.組成物及方法)的用語「抗-DENV抗體」可使用於意指能結合ZIKV的抗體(「抗-ZIKV抗體」)只要該抗體可結合DENV及ZIKV二者。一態樣中，本發明提供用於治療或預防茲卡感染的方法，包括投予結合茲卡病毒的抗體(「抗-ZIKV抗體」)。一態樣中，本發明提供用於抑制由妊娠母體對胎兒傳遞茲卡病毒的方法，包括投予結合茲卡病毒的抗體。

A. 例示性抗-DENV抗體及包括變體Fc區的多肽

一態樣中，本發明提供結合至DENV及/或DENV E蛋白質之經單離抗體。一些實施例中，抗-DENV抗體阻斷DENV及/或DENV E蛋白質對宿主細胞的結合。一些實施例中，抗-DENV抗體抑制DENV進入宿主細胞。一些實施例中，抗-DENV抗體結合至全DENV顆粒。進一步的實施例中，抗體結合至全DENV顆粒較佳於單體性DENV E蛋白質。一些實施例中，本發明的抗-DENV抗體結合至及/或中和至少一種、至少二種、至少三種或所有四種選自DENV血清型1(DENV-1)、DENV血清型2(DENV-2)、DENV血清型3(DENV-3)及DENV血清型4(DENV-4)所成群組的DENV血清型。一些實施例中，抗-DENV抗體結合至及/或中和衍生自至少一種、至少二種、至少三種或所有四種選自DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4所成群組的DENV血清型的DENV E蛋白質。「血清型」意指於病毒種內的個別變異。

一態樣中，本發明提供結合至ZIKV之經單離抗體。一些實施例中，抗-ZIKV抗體阻斷ZIKV對宿主細胞的結合。一些實施例中，抗-ZIKV抗體抑制ZIKV進入宿主細胞。一些實施例中，抗-ZIKV抗體對DENV具有交叉反應性。一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VH HVR序列的抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列；以及HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列；HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列；以及HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VH HVR序列的抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；以及HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列；以及HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VH HVR序列的抗體：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；及HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；以及HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列；以及HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；以及及HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列。進一步的實施例中，抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；以及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VL HVR序列的抗體：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VL HVR序列的抗體：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VL HVR序列的抗體：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。一實施例中，抗體包含(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列；以及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列；以及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列，及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：42的胺基酸序列；及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列，及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：20的胺基酸序列；及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列，及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：20的胺基酸序列；及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列，(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：40的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：41的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：42的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：43的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：44的胺基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：45的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；以及(f)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

一些實施例中，上述所提供的抗-DENV抗體之任何一個或多個胺基酸係於下數HVR為至經取代：(a)HVR-H1(SEQ ID NO：11)中，於位置2及4；(b)HVR-H2(SEQ ID NO：13)中，於位置9及10；(c)HVR-H3(SEQ ID NO：16)中，於位置3、14及16；(d)HVR-L1(SEQ ID NO：21)中，於位置5及8；(e)HVR-L2(SEQ ID NO：24)中，於位置4及7；以及(f)HVR-L3(SEQ ID NO：27)中，於位置4及5。

一些實施例中，抗-DENV抗體的一個或多個胺基酸取代為保留性取代，如本文所提供。一些實施例中，下述取代之任一者或多者可以任何組合製得：(a)HVR-H1(SEQ ID NO：11)中，N2Y；I4M；(b)HVR-H2(SEQ ID NO：13)中，T9R；A10R；(c)HVR-H3(SEQ ID NO：16)中，R3E；R14F；G16D或L；(d)HVR-L1(SEQ ID NO：21)中，D5E；K8Q；(e)HVR-L2(SEQ ID NO：24)中，N4E；T7F；以及(f)HVR-L3(SEQ ID NO：27)中，D4S或E；D5A。

上述取代之所有可能組合係分別由對於HVR-H1、HVR-H2、HVR-H3、HVR-L1、HVR-L2HVR-L3之SEQ ID NOs：40、41、42、43、44及45的共有序列所涵蓋。

進一步的實施例中，本發明之抗-DENV抗體不為包含下述者的抗體(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，以及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種、三種、四種、五種或六種HVR的抗-DENV抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VH HVR序列的抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列。一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；以及HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；以及HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列。進一步的實施例中，抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列。

一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VH HVR序列的抗體：(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列。一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列。另一實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；以及HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列。進一步的實施例中，抗體包含HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；以及HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列。進一步的實施例中，抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VL HVR序列的抗體：(a)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(b)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；以及(c)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。一實施例中，抗體包含(a)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(b)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；以及(c)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明提供包含選自下述至少一種、二種或所有三種VL HVR序列的抗體：(a)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(b)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；以及(c)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列。一實施例中，抗體包含(a)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(b)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；以及(c)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列.

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列，(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列，及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；以及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列，(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列，及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列，(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列，及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列。

另一態樣中，本發明的抗體包含(a)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VH HVR序列的VH域：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；以及(b)包含選自下述至少一種、至少二種或所有三種VL HVR序列的VL域：(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8-10之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2-6之任一者的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；以及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列。

另一態樣中，本發明提供抗體包含(a)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(d)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；(e)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；及(f)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

進一步的實施例中，本發明之抗-DENV抗體不為包含下述者之抗體：(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：1的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列，及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

上述實施例之任一者中，抗-DENV抗體可經人源化。一實施例中，抗-DENV抗體包含如上述實施例之任一者的HVR，及進一步包含接受體人類框架，例如人類免疫球蛋白框架或人類共有框架。另一實施例中，抗-DENV抗體包含如上述實施例之任一者的HVR，及進一步包含VH或VL，其包含FR序列。進一步的實施例中，抗-DENV抗體包含下述重鏈及/或輕鏈可變域FR序列：對於重鏈可變域，FR1包含SEQ ID NO：31的胺基酸序列，FR2包含SEQ ID NO：32的胺基酸序列，FR3包含SEQ ID NO：33或34的胺基酸序列，FR4包含SEQ ID NO：35的胺基酸序列。對於輕鏈可變域，FR1包含SEQ ID NO：36的胺基酸序列，FR2 包含SEQ ID NO：37的胺基酸序列，FR3包含SEQ ID NO：38的胺基酸序列，FR4包含SEQ ID NO：39的胺基酸序列。

另一態樣中，抗-DENV抗體包含對於SEQ ID NOs：2-6之任一者的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-DENV抗體仍有能力結合至DENV。一些實施例中，SEQ ID NOs：2-6之任一者中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-DENV抗體包含SEQ ID NOs：2-6之任一者中的VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VH包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NOs：11-12之任一者的胺基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NOs：13-15之任一者的胺基酸序列，及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NOs：16-20之任一者的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，抗-DENV抗體包含對於SEQ ID NO：6的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-DENV抗體仍有能力結合至DENV。一些實施例中，SEQ ID NO：6中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-DENV抗體包含SEQ ID NO：6中的VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VH包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-DENV抗體，其中抗體包含對於SEQ ID NOs：8-10之任一者的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-DENV抗體仍有能力結合至DENV。一些實施例中，SEQ ID NOs：8-10之任一者中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-DENV抗體包含SEQ ID NOs：8-10之任一者中的VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VL包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NOs：21-23之任一者的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NOs：24-26之任一者的胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NOs：27-30之任一者的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-DENV抗體，其中抗體包含對於SEQ ID NO：10的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的VL序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-DENV抗體仍有能力結合至DENV。一些實施例中，SEQ ID NO：10中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-DENV抗體包含SEQ ID NO：10中的VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VL包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：23的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：26的胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：30的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-DENV抗體，其中抗體包含上述實施例之任一者中的VH，及上述實施例之任一者中的VL。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NOs：2-6之任一者中的VH序列及SEQ ID NOs：8-10之任一者中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NOs：2-6之任一者中的VH序列及SEQ ID NOs：7中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-DENV抗體，其中抗體包含上述實施例之任一者中的VH，及上述實施例之任一者中的VL。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO：6中的VH序列及SEQ ID NO：10中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO：6中的VH序列及SEQ ID NO：7中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

進一步的態樣中，本發明提供與本文所提供的抗-DENV抗體結合至相同抗原決定基的抗體。一些實施例中，提供結合至包含選自下述所成群組之至少一個、至少二個、至少三個、至少四個、至少五個、至少六個、至少七個或所有之胺基酸的抗原決定基的抗體：DENV-2 E蛋白質之G100、W101、K122、I162、S274、K310、W391及F392。一些實施例中，提供結合至包含選自下述所成群組之至少一個、至少二個或所有之胺基酸的抗原決定基的抗體：DENV-2 E蛋白質之K122、I162及S274。一些實施例中，提供結合至包含選自下述所成群組之至少一個胺基酸的抗原決定基的抗體：G100、W101、K310、W391及F392，當該抗原決定基包含至少一個、至少二個或所有之選自下述所成群組的胺基酸：K122、I162及S274。

一態樣中，本發明提供用於治療或預防茲卡病毒感染的方法。一態樣中，本發明提供用於抑制茲卡病毒由妊娠母體傳遞至胎兒的方法。一態樣中，本發明提供用於預防先天性茲卡症候群(例如，先天性發育缺陷、小腦症等)的方法。一態樣中，本發明提供用於抑制減低胎兒體重(例如，全身、頭等)的方法。

一些實施例中，本發明之用於治療或預防茲卡病毒感染的方法包含投予結合至茲卡病毒的抗體。一些實施例中，用於抑制茲卡病毒由妊娠母體傳遞至胎兒的方法包含投予結合至茲卡病毒的抗體。一些實施例中，用於預防先天性茲卡症候群(例如，先天性發育缺陷、小腦症等)的方法包含投予結合至茲卡病毒的抗體。一些實施例中，本發明之用於抑制減低胎兒體重(例如，全身、頭等)的方法包含投予結合至茲卡病毒的抗體。一實例中，用語「先天性茲卡症候群」意指出生缺陷的不同型態，其獨特於出生前受到茲卡感染的胎兒及嬰兒。如所屬技術領域中具有通常知識者所理解，具有先天性茲卡症候群的對象可顯現症狀如，但不限於，先天性發育缺陷、小腦症、嚴重小腦症其中頭骨部分坍塌、具有特定類型腦損傷之減少的腦組織，包括皮質下鈣化、對於眼後的損傷，包括黃斑部瘢痕及視焦色素視網膜斑駁、先天性攣縮、如內翻足或關節攣縮、出生後很快的張力亢進限制身體動作等。咸信投予如本文所記載的抗體將預防先天性茲卡症候群的至少一種(或至少二種，或至少三種，或至少四種，或全部)症狀。舉例而言，如所記載的抗體預防胎兒或嬰兒出生前的茲卡病毒感染而藉此抑制胎兒體重(如全身、頭等)降低。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體對於登革病毒具有交叉反應性。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為帶電荷胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，X₃為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，(ii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，及(iii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸；(b)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為極性胺基酸，X₂為疏水性胺基酸，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，及(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為帶電荷胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，X₃為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸；(c)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為極性胺基酸，X₂為疏水性胺基酸，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為疏水性胺基酸或帶電荷胺基酸，(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為帶電荷胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，X₃為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸，(iv)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為帶電荷胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或極性胺基酸；(v)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為極性胺基酸或疏水性胺基酸；及(vi)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸；或(d)(i)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為帶電荷胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或極性胺基酸；(ii)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為極性胺基酸或帶電荷胺基酸，X₂為極性胺基酸或疏水性胺基酸；及(iii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為帶電荷胺基酸或極性胺基酸，X₂為帶電荷胺基酸或疏水性胺基酸。

如所屬技術領域中具有通常知識者所理解，帶電荷胺基酸包括精胺酸(R,Arg)、離胺酸(K,Lys)、天冬胺酸(D,Asp)及麩胺酸(E,Glu)；極性胺基酸包括麩胺醯胺(Q,Gln)、天冬醯胺(N,Asn)、組胺酸(H,His)、絲胺酸(S,Ser)、蘇胺酸(T,Thr)、酪胺酸(Y,Tyr)、半胱胺酸(C,Cys)及色胺酸(W,Trp)；疏水性胺基酸包括丙胺酸(Ala,A)、異白胺酸(Ile,I)、白胺酸(Leu,L)、甲硫胺酸(Met,M)、 ***酸(Phe,F)、纈胺酸(Val,V)、脯胺酸(Pro,P)及甘胺酸(Gly,G).

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G,D或L(SEQ ID NO：42)，(ii)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D、S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)，及(iii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)；(b)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，及(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G、D或L(SEQ ID NO：42)；(c)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SX₁YX₂H，其中X₁為N或Y，X₂為I或M(SEQ ID NO：40)，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列VINPRGGSX₁X₂SAQKFQG，其中X₁為T或R，X₂為A或R(SEQ ID NO：41)，(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列GGX₁ALFYDSYTTPX₂DX₃GSWWFDP，其中X₁為R或E，X₂為R或F，X₃為G、D或L(SEQ ID NO：42)，(iv)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(v)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(vi)HVR-L3，其包含胺基酸序列QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D,S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)；或(d)(i)HVR-L1，其包含胺基酸序列QASQX₁IRX₂YLN，其中X₁為D或E，X₂為K或Q(SEQ ID NO：43)；(ii)HVR-L2，其包含胺基酸序列DASX₁LKX₂，其中X₁為N或E，X₂為T或F(SEQ ID NO：44)；及(iii)HVR-L3，其包含胺基酸序列 QQFX₁X₂LPIT，其中X₁為D、S或E，X₂為D或A(SEQ ID NO：45)。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，(ii)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：27，及(iii)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15，及(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20；(c)(i)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，(ii)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15，(iii)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，(iv)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(v)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(vi)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：27；或(d)(i)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(ii)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(iii)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：27。

一些實施例中，本發明的抗體不為包含下述者之抗體：(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列，(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列，及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(ii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列，及(iii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列；(b)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列； (c)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；(d)(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的VL序列；或(e)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含(a)對於SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VH序列；(b)對於SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的胺基酸序列具有至少95%序列同一性的VL序列；(c)SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列及SEQ ID NOs：8、9或10之任一者VL序列；或(d)SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的VH序列及SEQ ID NOs：7之任一者的VL序列。

另一態樣中，抗-ZIKV抗體包含對於SEQ ID NOs：2-6之任一者的胺基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。一些實施例中，具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-ZIKV抗體仍有能力結合至ZIKV。一些實施例中，SEQ ID NOs：2-6之任一者中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-ZIKV抗體包含SEQ ID NOs：2-6之任一者中的VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VH包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，抗-ZIKV抗體包含對於SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的重鏈可變域(VH)序列。一些實施例中，具有至少95%、96%、97%、98% 或99%同一性的VH序列相對於參考序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-ZIKV抗體仍有能力結合至ZIKV。一些實施例中，SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-ZIKV抗體包含SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者中的VH序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VH包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(c)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-ZIKV抗體，其中抗體包含對於SEQ ID NOs：8、9或10之任一者的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。一些實施例中，具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的VL序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-ZIKV抗體仍有能力結合至ZIKV。一些實施例中，SEQ ID NOs：8、9或10之任一者中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-ZIKV抗體SEQ ID NOs：8、9或10之任一者中的VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VL包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-ZIKV抗體，其中抗體包含對於SEQ ID NO： 10的胺基酸序列具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%序列同一性的輕鏈可變域(VL)。一些實施例中，具有至少95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性的VL序列含有取代(例如，保守性取代)、***或刪除，但包含該序列的抗-ZIKV抗體仍有能力結合至ZIKV。一些實施例中，SEQ ID NO：10中，總計1至10個胺基酸經取代、***及/或刪除。一些實施例中，取代、***或刪除發生於HVR外側區(亦即，FR中)。視需要地，抗-ZIKV抗體包含SEQ ID NO：10中的VL序列，包括該序列之轉譯後修飾。特別的實施例中，VL包含選自下述之一種、二種或三種HVR：(a)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-ZIKV抗體，其中抗體包含上述實施例之任一者中的VH，及上述實施例之任一者中的VL。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者中的VH序列及SEQ ID NOs：8、9或10之任一者中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NOs：2、3、4、5或6之任一者中的VH序列及SEQ ID NOs：7的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

另一態樣中，提供抗-ZIKV抗體，其中抗體包含上述實施例之任一者中的VH，及上述實施例之任一者中的VL。一實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO：6中的VH序列及SEQ ID NO：7中的VL序列，包括該等序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於重鏈或輕鏈之N-終端的麩胺醯胺或麩胺酸藉由焦麩胺醯胺化成為焦麩胺酸的修飾。

一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：59的恆定重(亦即，CH)序列。一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO：60的恆定輕(亦即，CL)序列。一些實施例中，抗體分別包含SEQ ID NO：59的恆定重序列及SEQ ID NO：60的恆定輕序列。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體為單株抗體。一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體為人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體為全長IgG抗體。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的Fc區包含Ala於位置234及Ala於位置235根據EU編號。一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的Fc區可選自本文中所記載的變體Fc區。

本發明也提供包含本發明的抗-茲卡抗體及醫藥可接受載體的醫藥調配物。

本發明之抗-茲卡抗體可用於作為醫藥之用途。一些實施例中，本發明之抗-茲卡抗體可用於治療或預防茲卡感染之用途。

本發明之抗-茲卡抗體可使用於醫藥之製造。一些實施例中，該醫藥係用於茲卡感染的治療或預防。

本發明也提供治療具有茲卡感染的個體的方法。一些實施例中，該方法包含對個體投予有效量之本發明的抗-茲卡抗體。一些實施例中，該方法進一步包含對個體投予額外的治療劑，例如，如下文所述。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區包含至少一個胺基變化於親代Fc區中。進一步的實施例中，當相較於親代Fc區時，變體Fc區具有實質上減低的FcγR-結合活性。進一步的實施例中，當相較於親代Fc區時，變體Fc區不具有實質上減低的C1q-結合活性。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區包含Ala於位置234、Ala於位置235，根據EU編號。進一步的實施例中，變體Fc 區包含下述(a)-(c)之任一者的胺基酸變化：(a)位置267、268及324，(b)位置236、267、268、324及332，及(c)位置326及333；根據EU編號。

一些實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體的變體Fc區包含胺基酸變化之任一者，單獨或組合，如表4所記載。一些實施例中，本發明所記載之親代Fc區係衍生自人類IgG1。本發明提供多肽，其包含SEQ ID NOs：51-59之任一者的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(ii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列，及(iii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列；(b)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；(c)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；或(d)(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；(e)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：12的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：15的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：20的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含：(a)(i)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列，及(iii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(d)(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；或(e)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含(i)VH，其包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列，(ii)VL，其包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列，(iii)CH，其包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列及(iv)CL，其包含SEQ ID NO：60的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體包含選自下述所成群組之VH變體序列：3CH1047(3Cam2-LALA+KAES+ACT5的VH；SEQ ID NO：6)，及3CH1049(SEQ ID NO：95)具有選自下述所成群組之人類IgG1 CH序列：SG182(WT；SEQ ID NO：46)、SG1095(SEQ ID NO：54)及SG1106(3Cam2-LALA+KAES+ACT5的CH；SEQ ID NO：59)；及選自下述所成群組之VH序列：3CL(3Cam2-LALA+KAES+ACT5的VL；SEQ ID NO：7)及3CL633(SEQ ID NO：98)，具有人類CL序列SK1(3Cam2-LALA+KAES+ACT5的CL；SEQ ID NO：60)。表2及表4係引用及詳述存在的變體及突變體的序列。

一些實例中，本發明之結合至茲卡病毒的抗體係例舉於本揭露之實施例段。舉例而言，本文記載的抗體可為揭示於實施例7的抗體，如，但不限於下述變體，(a)3Cam2，其為DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG182(SEQ ID NO：46)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)，(b)3Cam2-LALA+KAES，其為DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG1095(SEQ ID NO：54)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)，(c)3Cam2-LALA+KAES+ACT5,，其為DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG1106(SEQ ID NO：59)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)，(d)3C，其為DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG182(SEQ ID NO：46)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)，(e)3C-LALA，其為DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG192(SEQ ID NO：47)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)，(e)3C-LALA+KAES+ACT5，其為DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG1106(SEQ ID NO：59)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)等。

本發明進一步的態樣中，根據上述實施例之任一者的抗-DENV或抗-ZIKV抗體為單株抗體，包括嵌合抗體、人源化抗體及人類抗體。一實施例中，抗-DENV或抗-ZIKV抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙鏈抗體或或F(ab')₂片段。另一實施例中，抗體為全長抗體，例如，如所定義之完整的IgG1抗體或其他抗體類別或同型。

進一步的態樣中，本發明之抗-DENV或抗-ZIKV抗體具有消除抗體對Fc-γ-受體(FcγR)之結合的修飾。不希望為理論所侷限，消除抗體對Fc-γ-受體之結合的修飾可為有利的，此乃因為對FcR之減低的結合可避免感染的ADE(抗體-依賴性增強)現象，該現象被認為最為藉由與FcR的交互作用所調控。一實施例中，本發明之抗-DENV抗體的Fc區包含Ala於位置234及Ala於位置235，根據EU編號。

進一步的態樣中，根據上述實施例之任一者的抗-DENV抗體或抗-ZIKV抗體可併入，單獨或組合，如下文段落1至7所述的任何特徵；

1. 抗體親和性

一些實施例中，本文提供的抗體具有解離常數(Kd)為1μM或更少、100nM或更少、10nM或更少、1nM或更少、0.1nM或更少、0.01nM或更少、或0.001nM或更少(例如，10^-8M或更少，例如由10^-8M至10^-13M，例如由10^-9M至10^-13M)。

一實施例中，Kd係藉由經放射標記的抗原結合測試(RIA)測定。。一實施例中，RIA係利用感興趣抗體的Fab版及其抗原進行。舉例而言，對於抗原的Fab溶液結合親和性測量，係於未標記抗原的滴定系列存在下，藉由利用(¹²⁵I)標記抗原的最小濃度平衡Fab，然後利用抗-Fab抗體-被覆的盤捕捉經結合的抗原(參照，例如，Chen et al.,J.Mol.Biol.293：865-881(1999))。為了建立測試用條件，MICROTITER(註冊商標)多孔盤(Thermo Scientific)利用5μg/ml之50mM碳酸鈉(pH 9.6)中的捕捉抗-Fab抗體(Cappel Labs)被覆隔夜，及後續於室溫 (接近23℃)利用PBS中的2%(w/v)牛血清白蛋白封阻二至五小時。於非吸附盤(Nunc #269620)，100pM或26pM[¹²⁵I]-抗原與感興趣的Fab系列稀釋物混合(例如，與抗-VEGF抗體，Fab-12的評估一致，Presta et al.,Cancer Res.57：4593-4599(1997))。然後感興趣的Fab培養隔夜；然而，培養可持續較長期間(例如，約65小時)以確保達到平衡。之後，混合物轉移至捕捉盤以於室溫培育(例如，培育一小時)。然後移除溶液且利用PBS中的0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20(註冊商標))清洗8次。當盤經乾燥時，添加150μl/孔的閃爍劑(MICROSCINT-20 TM；Packard)，及盤於TOPCOUNTTMγ計數器(Packard)計數十分鐘。選擇各Fab濃度係小於或等於最大結合的20%，使用於競爭結合測試。

根據另一實施例，Kd係使用BIACORE(註冊商標)表面電漿共振測試測定。舉例而言，使用BIACORE(註冊商標)-2000或BIACORE(註冊商標)-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的測試係於25度C利用固定化抗原CM5晶片於~10回應單位(RU)進行。一實施例中，羧甲基話劇葡萄糖生物感測晶片(CM5,BIACORE,Inc.)係根據供應商指示利用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基琥珀醯亞胺(NHS)予以活化。抗原係於注射前利用10mM乙酸鈉，pH 4.8，稀釋至5μg/ml(~0.2μM)以流速5μl/分鐘達成接近10回應單位(RU)的偶合蛋白質。注射抗原後，注射1M乙醇胺以封阻未反應基團。對於動力學測量，2-倍系列稀釋的Fab(0.78nM至500nM)於25度C以接近25μl/分鐘的流速注射於具有0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑(PBST)的PBS。結合速率(kon)及解離速率(koff)係使用簡單的one-to-one Langmuir結合模型(BIACORE(註冊商標)Evaluation Software version 3.2)藉由同時擬合結合傳感圖及解離傳感圖而計算。平衡解離常數(Kd)係經計算為比例koff/kon。參照，例如，Chen et al.,J.Mol.Biol.293：865-881(1999)。如果藉由上述表面電漿共振測試的比率(on-rate)超過10⁶ M^-1 s^-1，則該比率可藉由使用螢光猝冷技術測定，該技術於25度C的20nM抗-抗原抗體(Fab型)的PBS中，pH 7.2，於如同於光譜儀中所測定的抗原濃度增加的存在下，測定螢光發射強度的增加或減少(激發295nm；發射=340nm,16nm帶通道)，如利用攪拌測光管於配備停流的分光光度計(Aviv Instruments)或8000-序列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic)。

2. 抗體片段

一些實施例中，本文所提供的抗體抗體片段。抗體片段包括，但不限於，Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv片段，及下文所述其他片段。對於一些抗體片段的總論，參照Hudson et al.Nat.Med.9：129-134(2003)。對於scFv片段的總論，參照，例如，Pluckthün,in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,vol.113,Rosenburg and Moore eds.(Springer-Verlag,New York),pp.269-315(1994)；也參照WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含救援受體結合抗原決定基殘基及具有增加的活體內半衰期的Fab片段及F(ab')₂片段的討論，參照，美國專利第5,869,046號。

雙鏈抗體為具有可為雙特異性或多特異性之二個抗原-結合位點的抗體片段。參照，例如，EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson et al.,Nat.Med.9：129-134(2003)；及Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)。三鏈抗體及四鏈抗體也揭示於Hudson et al.,Nat.Med.9：129-134(2003)。

單-域抗體為包含抗體的重鏈可變域全部或一部分或抗體的輕鏈可變域全部或一部分的抗體片段。一些實施例中，單-域抗體為人類單-域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參照，例如，美國專利第6,248,516 B1號)。

抗體片段可藉由各種技術製得，包括但不限於完整抗體的蛋白酵素分解以及藉由重組宿主細胞(例如，大腸桿菌或噬菌體)的製造，如本文所記載。

3. 嵌合抗體及人源化抗體

一些實施例中，本文所提供的抗體為嵌合抗體。一些嵌合抗體係記載於，例如，美國專利第4,816,567號；及Morrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855(1984))。一實例中，嵌合抗體包含非-人類可變區(例如，可變區衍生自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非-人類靈長類，如猴)以及人類恆定區。進一步的實例中，嵌合抗體為其中該類別或亞類別已經由親代抗體者改變的「類別轉換」抗體。嵌合抗體包括其抗原-結合片段。

一些實施例中，嵌合抗體為人源化抗體。典型地，分-人類抗體係經人源化以減低對人類的免疫原性，而維持親代非-人類抗體的特異性及親和性。一般而言，人源化抗體包含一種或多種可變域，其中HVRs，例如，CDRs，(或其一部分)係衍生自非-人類抗體，及FRs(或其一部分)係衍生自人類抗體序列。人源化抗體視需要地也將包含至少一部分的人類恆定區。一些實施例中，人源化抗體中的一些FR殘基係裡用來自於非-人類抗體的對應殘基(例如，該抗體所衍生自的HVR殘基)取代，例如，以回復或改良抗體特異性或親和性。

人源化抗體及其製造方法係總論於，例如，Almagro and Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008)，及進一步記載於，例如，Riechmann et al.,Nature 332：323-329(1988)；Queen et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033(1989)；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiriet al.,Methods 36：25-34(2005)(記載特異性決定區(SDR)接枝)；Padlan,Mol.Immunol.28：489-498(1991)(記載「重設表面(resurfacing)」)；Dall’Acqua et al.,Methods 36：43-60(2005)(記載「FR改組(shuffling)」)；及Osbourn et al.,Methods 36：61-68(2005)及Klimka et al.,Br.J.Cancer,83：252-260(2000)(記載「導引選擇」方案至FR改組)。

可使用於人源化的人類框架區包括但不限於：使用「最佳-擬合」方法的框架區選定(參照，例如，Sims et al.J.Immunol.151：2296(1993))；衍生自輕鏈或重鏈可變區之特別亞群的人類抗體的共有序列的框架區(參照，例如， Carter et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285(1992)；及Presta et al.J.Immunol.,151：2623(1993))；人類成熟(體細胞突變)框架區或人類生殖系框架區(參照，例如，Almagro and Fransson,Front.Biosci.13：1619-1633(2008))；及衍生自篩選FR酷的框架區(參照，例如，Baca et al.,J.Biol.Chem.272：10678-10684(1997)及Rosok et al.,J.Biol.Chem.271：22611-22618(1996))。

4. 人類抗體

一些實施例中，本文所提供的抗體為人類抗體。人類抗體可使用所屬技術領域習知的各種技術製造。一般而言，人類抗體係揭示於van Dijk and van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459(2008)。

人類抗體可藉由投予免疫原至已有修飾的基因轉殖動物以製造回應於抗原性挑戰的完整人類抗體或完整人類可變區。該等動物典型地含有人類免疫球蛋白基因座的全部或一部分，其置換內源性免疫球蛋白基因座，或其存在於染色體外或隨機整合至動物的染色體。該等基因轉殖小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座已經被失活。對於用於從基因轉殖動物獲得人類抗體的方法總論，參照Lonberg,Nat Biotech.23：1117-1125(2005)。也參照，例如，美國專利第6,075,181號及第6,150,584號記載XENOMOUSETM技術；美國專利第5,770,429號記載HuMab(註冊商標)技術；美國專利第7,041,870號記載K-M MOUSE(註冊商標)技術，及美國專利公開案號US 2007/0061900，記載VelociMouse(註冊商標)技術)。來自藉由該等動物所產生的完整抗體的人類可變區可進一步經修飾，例如，藉由與不同的人類恆定區組合。

人類抗體也可藉由融合瘤為主的方法製得。用於製造人類單株抗體的人類骨髓瘤細胞株及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株已被記載。(參照，例如，Kozbor J.Immunol.,133：3001(1984)；Brodeur et al.,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,pp.51-63(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner et al.,J.Immunol.,147：86(1991))。經由人類B-細胞融合瘤技術產生的人類抗體也記載於Li et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.UsA,103：3557-3562(2006)。額外的方法包括該等記載於，例如，美國專利第7,189,826號(記載來自融合瘤細胞株的單株人類IgM抗體的製造)以及Ni，Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268(2006)(記載人類-人類融合瘤)。人類融合瘤技術(Trioma technology)也記載於Vollmers and Brandlein,Histology and Histopathology,20(3)：927-937(2005)以及Vollmers and Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3)：185-91(2005)。

人類抗體也藉由單離選自人類衍生的噬菌體展示庫的Fv純株可變域序列而產生。然後該等可變域序列可與所期望的人類恆定域組合。用於選擇來自抗體庫的人類抗體的技術係記載於下文。

5. 庫(library)衍生的抗體

本發明的抗體可藉由對於具有所期望的活性或多種活性的抗體篩選組合庫而經單離。舉例而言，有多種方法已知於所屬技術領域用於生產噬菌體展示庫以及對於擁有所期望結合特徵篩選該等庫。該等方法係總論於，例如，Hoogenboom et al.in Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien et al.,ed.,Human Press,Totowa,NJ,2001)以及進一步記載於，例如，McCafferty et al.,Nature 348：552-554；Clackson et al.,Nature 352：624-628(1991)；Marks et al.,J.Mol.Biol.222：581-597(1992)；Marks and Bradbury,in Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo,ed.,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu et al.,J.Mol.Biol.338(2)：299-310(2004)；Lee et al.,J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472(2004)；及Lee et al.,J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)。

一些噬菌體展示方法中，VH基因及VL基因的組庫係藉由聚合酶鏈鎖反應(PCR)及隨機重組合於噬菌體庫而予以分開選殖，然後其可對於抗原-結合噬菌體篩選，如記載於Winter et al.,Ann.Rev.Immunol.,12：433-455(1994)。噬菌體典型地展示抗體片段，呈單鏈Fv(scFv)片段或呈Fab片段。來自經免疫化來源的庫對免疫原提供高親和性抗體而無須構築融合瘤。替代地，天然組庫可經選殖(例如，來自人類)以提供單一來源的抗體至廣範圍的非自我及也自我的抗原而無須任何免疫化，如記載於Griffiths et al.,EMBO J,12：725-734(1993)。最終地，天然庫也可藉由選殖來自幹細胞之未經重排的V-基因節段，及使用含有隨機序列的PCR引子以編碼高可變CDR3區且於活體外完成重排，如記載於Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.,227：381-388(1992)。記載人類抗體噬菌體庫的專利文獻包括，例如：美國專利第5,750,373號，及美國專利公開案號2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936及2009/0002360。

由人類抗體庫單離的抗體或抗體片段考慮為本文中人類抗體或人類抗體片段。

6. 多特異性抗體

一些實施例中，本文所提供的抗體為多特異性抗體，例如，雙特異性抗體。多特異性抗體為具有結合特異性針對至少二種不同位點的單株抗體。一些實施例中，結合特異性之一者係針對DENV E蛋白質以及其他係針對任何其他抗原。一些實施例中，雙特異性抗體可結合至DENV E蛋白質的二種不同抗原決定基。雙特異性抗體也可使用於定位細胞毒性劑至表現DENV E蛋白質的細胞。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。

用於製造多特異性抗體的技術包括，但不限於，具有不同特異性之二種免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表現(參照Milstein and Cuello,Nature 305：537(1983)),WO 93/08829，及Traunecker et al.,EMBO J.10：3655(1991))，及「鈕於孔中(knob-in-hole)」工程(參照，例如，美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體也可藉由工程化靜電轉向效應以製造抗體抗體Fc-雜二聚物性分子(WO 2009/089004A1)；交聯一個或多個抗體或片段(參照，例如，美國專利第4,676,980號，及Brennan et al.,Science,229：81(1985))；使用白胺酸拉鏈以製造雙-特異性抗體(參照，例如，Kostelny et al.,J.Immunol.,148(5)：1547-1553(1992))；使用「雙鏈抗體」技術用於製成雙特異性抗體片段(參照，例如，Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448(1993))；及使用單鏈Fv(scFv)二聚物(參照，例如，.Gruber et al.,J.Immunol.,152：5368(1994))；及製備三特異性抗體如記載於，例如，Tutt et al.J.Immunol.147：60(1991)。

具有三種或更多種功能性抗原結合位點的經工程化抗體，包括「章魚(Octopus)抗體」也包括於本文(參照，例如，美國專利公開案號US 2006/0025576A1)。

本文中的抗體或片段也包括「雙作用Fab」或「DAF」，其包含結合至DENV E蛋白質以及另一不同抗原的抗原結合位點(參照，US 2008/0069820，舉例而言)。

7. 抗體變體

一些實施例中，亦涵括本文所提供之抗體的胺基酸序列變體。舉例而言，其可為所期望的改良抗體的結合親和性及/或其他生物性質。抗體的胺基酸序列變體可藉由導入合適的修飾至編碼抗體的核苷酸序列製備，或藉由肽合成製備。該等修飾包括列如，由抗體的胺基酸序列內刪除、及/或殘基的***及/或取代。刪除、***及取代的任何組合可於最終構築物做成，限制條件最終構築物具有所期望的特徵，例如，抗原-結合。

a)取代、***及刪除變體

一些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代的抗體變體。針對取代性致突變的感興趣位點包括HVRs及FRs。保守性取代係示於表1的「較佳取代」標題下。更多的取代變化係提供於表1的「例示性取代」標題下且如進一步記載惟根據胺基酸側鏈類型。胺基酸取代可經導入至感興趣的抗體且針對所期望的活性篩選產物，例如，維持/改良抗原結合、減低的免疫原性或改良的ADCC或CDC。

胺基酸可根據通常的側鏈性質分群：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈定向的殘基：Gly、Pro；(6)芳香性：Trp、Tyr、Phe。

非保守性取代將針對另一類型需要交換該等類型之一成員。

取代變體的一型涉及取代親代抗體(例如，人源化抗體或人類抗體)的一或多個高可變區殘基。一般而言，選擇用於進一步研究的變體相對於親代抗體將具有修飾(例如，改良)於一些生物性質(例如，增加的親和性、減低的免疫原性)及/或將具有實質上維持的親代抗體的一些生物性質。例示性取代性變體為親和性成熟抗體，其可便利地產生，例如，使用噬菌體展示系親和性成熟技術，如本文所記載者。簡明地，一或多個HVR殘基係經突變且變體抗體展示於噬菌體並針對特別生物活性(例如，結合親和性)篩選。

替代(例如，取代)可製造於HVRs，例如，以改良抗體親和性。該等替代可製造於HVR「熱點」，亦即，由體細胞成熟過程中以高頻率進行突變的密碼子所編碼的殘基(參照，例如，Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196(2008))，及/或接觸抗原的殘基，使所得變體VH或VL經測試結合親和性者。藉由自第二庫的構築及再選擇的親和性成熟已記載於，例如，Hoogenboom et al.in Methods in Molecular Biology 178：1-37(O'Brien et al.,ed.，人類Press,Totowa,NJ，(2001))。親和性成熟的一些實施例中，分歧性係藉由各種變異方法(例如，易錯(error-prone)PCR、鏈改組或寡核苷酸導向致突變)之任一者經導入至經選擇用於成熟的可變基因。然後創造第二庫。然後該庫經篩選以鑑定具所期望親和性的人和抗體變體。導入分歧性的另一方法涉及HVR-導向方案，其中數種HVR殘基(例如，一次4至6殘基)係經隨機化。涉及抗原結合的HVR殘基可特異性地經鑑定，例如，使用丙胺酸掃描致突變或模型化。CDR-H3及CDR-L3系通常特別地經靶定。

一些實施例中，取代、***或刪除可發生於一或多的HVR中，只要該等替代不實質上減低抗體結合抗原的能力。舉例而言，不實質上減低結合親和性的保守性替代(例如，如本文所提供的保守性取代)可製造於HVR中。該等替代，舉例而言，可於接觸HVR中殘基的抗原的外側。上述提供變體VH及VL序列的一些實施例中，各HVR係未經改變，或含有不多於一、二或三個胺基酸取代。

用於鑑定可被靶定用以致突變的抗體的殘基或區的有用方法係稱為「丙胺酸掃描致突變」，如記載於於Cunningham and Wells(1989)Science, 244：1081-1085。此方法中，目標殘基(例如，帶電和殘基如arg、asp、his、lys及glu)的殘基或群組係經鑑定且藉由中性或帶負電荷胺基酸(例如，丙胺酸或多丙胺酸)置換，以決定抗體與抗原的交互作用是否受到影響。進一步的取代可經導入展現功能性敏感度的於胺基酸位置以起始取代。替代地，或額外地，抗原-抗體複合物的結晶結構可分析以鑑定抗體與抗原之間的接觸點。該接觸殘基及鄰近殘基可經靶定或清除作為候選者用以取代。變體可經篩選以決定其是否含有所期望的性質。

胺基酸序列***包括長度範圍由一個殘基至含有數百個或更多個殘基的胺基-及/或羧基-終端融合，以及單一或多個胺基酸殘基的序列內***。終端***的實例包括E具有N-終端蘇胺醯基殘基的抗體。抗體分子的其他***變體包括增加抗體的血漿半衰期的酵素(例如，對於ADEPT)或多肽至該抗體的N-或C-終端的融合物。

b)糖基化變體

一些實施例中，本文所提供的抗體係經改變以增加或減少抗體經糖基化者的含量。對抗體糖基化位點的加入或刪除可藉由改變胺基酸序列使得一或多個糖基化位點經創造或移除而便利地完成。

當抗體包含Fc區，附接至其的碳水化合物可經改變。藉由哺乳動物細胞所製造的天生的抗體典型地包含通常藉由N-鏈結附接至Fc區CH2域的Asn297的分支、二牙寡糖。參照，例如，Wright et al.TIBTECH 15：26-32(1997)。該寡糖可包括各種碳水化合物，例如，甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及附接至二牙寡糖結構的「莖桿」中的GlcNAc的岩藻糖。一些實施例中，本發明抗體中之寡糖的修飾可製造用以創造具有一些經改良的性質的抗體變體。

一實施例中，係提供具有缺乏經附接(直接或間接)至Fc區的碳水化合物結構的抗體。舉例而言，該抗體中的岩藻糖量可為由1%至80%、由1%至65%、由5%至65%或由20%至40%。岩藻糖的量係相對於藉由MALDI-TOF質譜所測量的經附接至Asn297的所有糖結構物(例如，複合物、融合物及高甘露糖結構物)的總和，藉由計算糖鏈內於Asn297的岩藻糖平均量而測定，例如，如記載於WO 2008/077546。Asn297意指於Fc區約為至297的the天冬醯胺殘基(Fc區殘基的EU編號)；然而，因抗體中微小的序列變異，Asn297也可位於位置297的約+/- 3胺基酸上游或下游，亦即，介於位置294及300之間。該岩藻糖化變體可具有經改良ADCC功能。參照，例如，美國專利公開案號US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。相關於「去岩藻糖化」或「岩藻糖缺陷」抗體變體的文獻實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki et al.J.Mol.Biol.336：1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87：614(2004)。能製造去岩藻糖化抗體的細胞株的實例包括缺陷於蛋白質岩藻糖化的Lec13 CHO細胞(Ripka et al.Arch.Biochem.Biophys.249：533-545(1986)；美國專利公開案號US 2003/0157108 A1,Presta,L；及WO 2004/056312 A1,Adams et al.，特別是實施例11)，及基因體除細胞株，如α-1,6-岩造糖轉移酶，FUT8，基因剔除CHO細胞cells(參照，例如，Yamane-Ohnuki et al.Biotech.Bioeng.87：614(2004)；Kanda,Y.et al.,Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688(2006)；及WO2003/085107)

進一步提供具有二等分的寡糖的抗體變體，例如，其中二牙寡糖經附接至藉由GlcNAc二等分的抗體Fc區。該等抗體變體可具有以降低的岩藻糖化及/或經改良的ADCC功能。該等抗體的實例經記載，例如，於WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.)；美國專利第6,602,684(Umana et al.)；及US 2005/0123546(Umana et al.)。也提供於經附接至Fc區的中具有至少一的半乳糖殘基的抗體變體。該等抗體變體可具有經改良的CDC功能。該等抗體變體係記載，例如，於WO 1997/30087(Patel et al.)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)。

c)Fc區變體

一些實施例中，一或多個胺基酸修飾可經導入至本文所提供抗體的Fc區，藉此產生Fc區變體。Fc區變體可包含於一或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如，取代)的人類Fc區序列(例如，人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。

一些實施例中，本發明涵括擁有一些但並非全部起效子(effector)功能的抗體變體，該功能使該變體成為所期望的應用候選，其中抗體的體內半衰期為重要的，然而一些起效子功能(如ADCC)為非必要或有害的。可進行活體外及/或活體內細胞毒性測試以測定CDC及/或ADCC活性。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合測試以確認抗體是否具有FcγR結合能力(因此可能具有ADCC活性)及/或FcRn結合能力。用於介導ADCC的初代細胞，NK細胞，僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR表現及血幹細胞係總結於Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9：457-492(1991)的第464頁表3。感興趣分子的ADCC活性的活體外測試的非限制性實例係記載於美國專利第5,500,362號(參照，例如，Hellstrom,I.et al.Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83：7059-7063(1986))及Hellstrom,I et al.,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82：1499-1502(1985)；第5,821,337號(參照Bruggemann,M.et al.,J.Exp.Med.166：1351-1361(1987))。替代地，可應用非放射活性測試(參照，舉例而言，用於流式細胞儀的ACT1TM非放射活性細胞毒性測試(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；及CytoTox 96(註冊商標)非放射活性細胞毒性測試(Promega,Madison,WI)。對於該等測試有用的起效子細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。替代地，或額外地，感興趣分子的ADCC活性係於活體內評估，例如，於動物模型中如記載於Clynes et al.Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656(1998)。也可進行C1q結合測試以確認抗體是否能結合C1q且因此具有CDC活性。參照，例如，C1q及C3c結合ELISA記載於WO 2006/029879及WO 2005/100402。為了評估補體活化，可進行CDC測試(參照，舉例而言，Gazzano-Santoro et al.,J.Immunol.Methods 202：163(1996)；Cragg,M.S.et al.,Blood 101：1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.and M.J.Glennie,Blood 103：2738-2743(2004))。FcRn結合及活體內廓清/半衰期測定也可使用所屬技術領域習知的方法進行(參照，例如，Petkova,S.B.et al.,Int’l.Immunol.18(12)：1759-1769(2006))。

具有經修飾的起效子功能的抗體包括於Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329具有一或多個取代者(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包括於胺基酸位置265、269、270、297及327具有二個或更多個取代的Fc突變體，包括殘基265及297取代為丙胺酸之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。

已記載針對FcRs具有經改變的結合的一些抗體。(參照，例如，美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312，及Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001)。)

一些實施例中，抗體變體包含具有一或多個胺基酸取代而改變ADCC的Fc區，例如，於Fc區位置298、333及/或334(殘基的EU編號)的取代。

一些實施例中，改變係製造於Fc區中而造成經改變的(亦即，增加或減少的)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如記載於美國專利第6,194,551號、WO 99/51642、WO2011/091078及Idusogie et al.J.Immunol.164：4178-4184(2000)。

具有增加的半衰期及增加的結合至新生兒Fc受體(FcRn)的抗體，其係負責轉移母體的IgG至胎兒(Guyer et al.,J.Immunol.117：587(1976)及Kim et al.,J.Immunol.24：249(1994))，係記載於US2005/0014934A1(Hinton et al.)。該些抗體包含其中具有一或多個取代而增加結合Fc區至FcRn的Fc區。該等Fc變體包括具有一或多個取代於Fc區殘基者：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc區殘基434的取代(美國專利第7,371,826號)。

關於Fc區變體的其他實例也參照Duncan & Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。

另一實施例中，抗體可包含詳細記載於本文下文中的本發明的變體Fc區。

d)半胱胺酸工程化抗體變體

一些實施例中，可期待創造半胱胺酸工程化抗體，例如，「硫基MAbs」，其中抗體的一或多個殘基係經以半胱胺酸殘基取代。特別的實施例中，經取代殘跡發生於抗體的可觸及位點。藉由以半胱胺酸取代該等殘基，反應性硫基藉此位於抗體的可觸及位典且可使用於接合該抗體至其他部分體，如藥物部分體或連接子-藥物部分體，以創造免疫接合物，如進一步記載於本文。一些實施例中，下述殘基之任何一者或多者可經以半胱胺酸取代：輕鏈的V205(Kabat編號)；重鏈的A118(EU編號)；及重鏈Fc區的S400(EU編號)。可創造半胱胺酸工程化抗體，例如，記載於美國專利第7,521,541號。

e)抗體衍生物

一些實施例中，本文中所提供的抗體可進一步經修飾以含有額外的非蛋白質部分體，其等為已知於所屬技術領域且可容易地取得。適合用於抗體衍生化得部分體包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括，但不限於，聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚1,3,6-三氧雜還己烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(同元聚合物或隨機共聚物)及聚葡萄糖或聚(n-乙醯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚乙二醇同元聚合物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧基乙基化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛因其水中安定性於製造中可具有優勢。該聚合物可為任何分子量，且可為分支或未分支。附接至抗體的聚合物數可改變，且如附接多於一個聚合物，其等可為相同或不同分子。一般而言，使用於衍生的聚合物的數及/或類型可基於下述考量而決定，但不限於，欲改良的抗體的特別性質或功能，無論該抗體衍生物於定義的條件下等是否使用治療。

另一實施例中，抗體及非蛋白質部分體的接合物可藉由曝光至輻射而選擇性地經加熱而改良。一實施例中，該非蛋白質部分體為奈米碳管(Kam et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605(2005))。輻射可為任何波長，及包括但不限於，不傷及傳統細胞的波長，但其加熱非蛋白質部分體達接近於抗體-非蛋白質部分體的細胞被殺死的溫度。

一態樣中，本發明提供經單離的多肽，其包含具有實質上減低的FcγR-結合活性的變體Fc區。一態樣中，本發明提供經單離的多肽，其包含不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區。一態樣中，本發明提供經單離多太，其包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區。一些態樣中，該多肽為抗體。一些態樣中，該多肽為Fc融合蛋白質。一些實施例中，變體Fc區包含至少一個胺基酸殘基改變(例如，取代)，相較於天生的或參考的變體序列的Fc區中的對應序列(本為中有時總合性地指稱為「親代」Fc區)。一些實施例中，本發明的變體Fc區，相較於親代Fc區，具有實質上減低的FcγR-結合活性。一些實施例中，本發明的變體Fc區，相較於親代Fc區，不具有實質上減低的C1q-結合活性。一些實施例中，FcγR為人類FcγR、猴FcγR(例如，食蟹猴、恆河猴、狨猴、黑猩猩或狒狒的FcγR)、或小鼠FcγR。

一態樣中，當相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區對於一或多種人類FcγR具有實質上減低的結合活性，該人類FcγR包括但不限於FcγRIa、FcγRIIa(包括等位變體167H及167R)、FcγRIIb、FcγRIIIa(包括等位變體158F及158V)及FcγRIIIb(包括等位變體NA1及NA2)。進一步的態樣中，當相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區對於人類FcγRIa、FcγRIIa(包括等位變體167H及167R)、FcγRIIb、FcγRIIIa(包括等位變體158F及158V)及FcγRIIIb(包括等位變體NA1及NA2)具有實質上減低的結合活性。

一態樣中，當相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區對於一或多種小鼠FcγR具有實質上減低結合活性，該小鼠FcγR包括，但不限於，FcγRI、FcγRIIb、FcγRIII及FcγRIV。進一步的態樣中，當相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區對於小鼠的FcγRI、FcγRIIb、FcγRIII及FcγRIV具有實質上減低的結合活性。

「Fcγ受體」(本文中，指稱為Fcγ受體、FcγR或FcgR)指稱可結合至IgG1、IgG2、IgG3及IgG4單株抗體的Fc區的受體，且特別地意指由Fcγ受體基因所編碼的蛋白質家族的任何成員。人類中，此家族包括FcγRI(CD64)，其包括同功型FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc；FcγRII(CD32)，其包括同功型FcγRIIa(包括異型H131(type H)及R131(type R))、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1及FcγRIIb-2)及FcγRIIc；及FcγRIII(CD16)，其包括同功型FcγRIIIa(包括異型V158及F158)，及FcγRIIIb(包括異型體FcγRIIIb-NA1及FcγRIIIb-NA2)，及尚未被發現的任何人類FcγR、FcγR同功型或異型，但不限於此。FcγRIIb1及FcγRIIb2已經報導為人類FcγRIIb的剪切變體。此外，已經報導被命名為FcγRIIb3的剪切變體(J Exp Med, 1989,170：1369-1385)。除了該等剪切變體之外，人類FcγRIIb包括經登錄於NCBI的所有剪切變體，其為NP_001002273.1、NP_001002274.1、NP_001002275.1、NP_001177757.1及NP_003992.3。再者，人類FcγRIIb包括前述者的基因性多型物，以及FcγRIIb(Arthritis Rheum.48：3242-3252(2003)；Kono et al.,Hum.Mol.Genet.14：2881-2892(2005)；及Kyogoju et al.,Arthritis Rheum.46：1242-1254(2002))，及未來將被報導的各基因性多型物。

FcγRIIa中，有二種異型，其中一者為FcγRIIa的位置167的胺基酸為組胺酸(H型)及另一者為位置167經以精胺酸取代(R型)(Warrmerdam,J.Exp.Med.172：19-25(1990))。

FcγR包括人類、小鼠、大鼠、兔及猴-衍生的FcγR，但不限於此，及可衍生自任何器官。小鼠FcγR包括FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)及FcγRIV(CD16-2)，及任何小鼠FcγR，或FcγR同功型，但不限於此。

人類FcγRIa的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：69；人類FcγRIIa(167H)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：70；人類FcγRIIa(167R)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：71；人類FcγRIIb的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：72；人類FcγRIIIa(158F)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：73；人類FcγRIIIa(158V)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：74；人類FcγRIIIb(NA1)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：75；及人類FcγRIIIb(NA2)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：76。

的胺基酸序列小鼠FcγRI的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：77；小鼠FcγRIIb的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：78；小鼠FcγRIII的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：79；及小鼠FcγRIV的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：80。

一態樣中，本發明的變體Fc區具有實質上減低的FcγR-結合活性，其為低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%、低於5%、低於2%、低於1%、低於0.5%、低於0.2%或低於0.1%，當以對於親代Fc區的FcγR-結合活性為函數。一態樣中，本發明的變體Fc區具有實質上減低的FcγR-結合活性，其意指[FcγR與變體Fc區的交互作用之前及之後改變的傳感圖的RU值的差異]/[捕捉FcγR至感測晶片之前及之後改變的傳感圖的RU值的差異]的比例為低於1、低於0.8、低於0.5、低於0.3、低於0.2、低於0.1、低於0.08、低於0.05、低於0.03、低於0.02、低於0.01、低於0.008、低於0.005、低於0.003、低於0.002或低於0.001。

一態樣中，本發明的變體Fc區不具有實質上減低的C1q-結合活性，其意指本發明的變體Fc區與親代Fc區之間的C1q-結合或性的差異為低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%或低於5%，當以對於親代的Fc區C1q-結合活性為函數。

一態樣中，本發明提供經單離的多肽，該多肽包含具有實質上減低的ADCC活性的變體Fc區。一態樣中，本發明提供經單離的多肽，該多肽包含不具有實質上減低的CDC活性的變體Fc區。一態樣中，本發明提供經單離多太，該多肽包含具有實質上減低的ADCC活性及不具有實質上減低的CDC活性的變體Fc區。

一態樣中，本發明的變體Fc區具有實質上間ADCC活性其為低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%、低於5%、低於2%、低於1%、低於0.5%、低於0.2%或低於0.1%，當以對於親代Fc區的ADCC活性為函數。

一態樣中，本發明的變體Fc區不具有實質上減低的CDC活性，其意指本發明的變體Fc區及親代Fc區之間的CDC活性差異為低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10% 或低於5%，當以對於親代Fc區的CDC活性為函數。

一態樣中，本發明提供經單離多肽，該多肽具有實質上減低的FcγR-結合活性及不實質上減低的C1q-結合活性，相較於包含親代Fc區的多太。進一步的態樣中，本發明的多肽包含選自下述所成群組的至少一個位置的至少一個胺基酸變化：234、235、236、267、268、324、326、332及333，根據EU編號。

一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含Ala於位置234、Ala於位置235及選自下述所成群組的至少一個位置的至少一的胺基酸變化：236、267、268、324、326、332及333，根據EU編號。

一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含Ala於位置234、Ala於位置235及進一步下述(a)至(c)之任一者的胺基酸變化：(a)位置267、268及324；(b)位置236、267、268、324及332；及(c)位置326及333，根據EU編號。

進一步態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Glu於位置267；(b)Phe於位置268；(c)Thr於位置324；(d)Ala於位置236；(e)Glu於位置332；(f)Ala、Asp、Glu、Met或Trp於位置326；及(g)Ser於位置333，根據EU編號。

一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326及Ser於位置333，根據EU編號。一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Asp於位置326及Ser於位置333，根據EU編號。一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Glu於位置326及Ser於位置333，根據EU編號。一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Met於位置326及Ser於位置333，根據EU編號。一態樣中，具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Trp於位置326及Ser於位置333，根據EU編號。

另一態樣中，本發明的變體Fc區可進一步包含選自下述所成群組的至少一位置的至少一個胺基酸變化；428、434、436、438及440，根據EU編號。

進一步態樣中，變體Fc區可進一步包含選自下述所成群組的胺基酸：(a)Ala於位置434；(b)Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440；(c)Leu於位置428、Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440；及(d)Leu於位置428、Ala於位置434、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號(也參照WO2016/125495記載變體Fc區的胺基酸變化與FcRn-結合活性之間的關係)。

另一態樣中，本發明的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326、Ser於位置333、Leu於位置428、Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號。另一態樣中，本發明的變體Fc區包含胺基酸：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326、Ser於位置333、Leu於位置428、Ala於位置434、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號。

一態樣中，其較佳為，相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區不具有實質上增加的FcRn結合活性，特別是於pH7.4。

「FcRn」係結構性地類似於主要組織相容性複合物(MHC)第I型的多肽，及展現與MHC第I型分子具有22%至29%序列同一性。FcRn係經表現為由可溶性β或輕鏈(β2微球蛋白)複合穿膜α或重鏈所組成的雜二聚體。類似MHC，FcRn的α鏈含有三個胞外域(α1、α2及α3)，及其較短細胞質域將其繫鏈至細胞表面。該α1及α2域與抗體Fc區的FcRn-結合域交互作用。該人類FcRn的多肽及胺基酸序列可衍生，舉例而言，分別自顯示於NM_004107.4及NP_004098.1(含有信號序列)的前驅物。

人類FcRn(α鏈)的胺基酸序列係揭示於SEQ ID NO：81；及人類β2微球蛋白係揭示於SEQ ID NO：82。

一態樣中，較佳為本發明的變體Fc區不具有實質上增加的FcRn結合活性，特別是於pH7.4，其為低於1000倍、低於500倍、低於200倍、低於100倍、低於90倍、低於80倍、低於70倍、低於60倍、低於50倍、低於40倍、低於30倍、低於20倍、低於10倍、低於5倍、低於3倍或低於2倍，相較於對於親代Fc區的FcRn結合活性。一態樣中，本發明的變體Fc區不具有實質上增加的FcRn結合活性，特別是於pH7.4，其意指[FcRn與變體Fc區交互作用之前及之後改變之傳感圖的RU值的差異]/[捕捉FcRn至感測晶片之前及之後改變的傳感圖的RU值的差異]的比例為低於0.5、低於0.3、低於0.2、低於0.1、低於0.08、低於0.05、低於0.03、低於0.02、低於0.01、低於0.008、低於0.005、低於0.003、低於0.002或低於0.001。

另一態樣中，本發明的變體Fc區包含記載於表4的任何的胺基酸變化，單獨或組合。另一態樣中，本發明的變體Fc區包含記載於表4的至少任何一種胺基酸變化。另一態樣中，本發明提供多肽，其包含SEQ ID NOs：51-59之任一者的胺基酸序列。

一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽為抗體重鏈恆定區。一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽進一步包含抗原-結合域。進一步的實施例中，該多肽為抗體重鏈。進一步的實施例中，該多肽為抗體。一些實施例中，抗體為嵌合抗體或人源化抗體。抗體的來源不特別限制，但實例包括人類抗體、小鼠抗體、大鼠抗體及兔抗體。進一步的實施例中，該多肽為Fc融合蛋白質。

本文記載的包含變體Fc區的二或更多種多肽可包括於一個分子，其中包括變體Fc區的二種多肽係經連結，非常類似於抗體。抗體的類別不特別限制，且可使用IgA(IgA1、IgA2)、IgD、IgE、IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)及IgM等。

一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽為抗體。進一步的實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽為抗-病毒抗體。

進一步的實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽包含抗體可變區，其包含：(a)(i)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(ii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列，及(iii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列；(b)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，及(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列；(c)(i)HVR-H1，其包含SEQ ID NO：11的胺基酸序列，(ii)HVR-H2，其包含SEQ ID NO：13的胺基酸序列，(iii)HVR-H3，其包含SEQ ID NO：16的胺基酸序列，(iv)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(v)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(vi)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列；或 (d)(i)HVR-L1，其包含SEQ ID NO：21的胺基酸序列；(ii)HVR-L2，其包含SEQ ID NO：24的胺基酸序列；及(iii)HVR-L3，其包含SEQ ID NO：27的胺基酸序列。

進一步的實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽包含抗體可變區，其包含：(a)(i)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列，及(iii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(b)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，及(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列；(c)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(d)(i)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；(ii)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；及(iii)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：10的VL序列；或(e)(i)HVR-H1，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(ii)HVR-H2，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iii)HVR-H3，其來自SEQ ID NO：6的VH序列，(iv)HVR-L1，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；(v)HVR-L2，其來自SEQ ID NO：7的VL序列；及(vi)HVR-L3，其來自SEQ ID NO：7的VL序列。

進一步的實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽包含：包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的VH區，以及包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的VL區。進一步的實施例中，本發明提供抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的VH區、包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的VL區。進一步的實施例中，本發明提供抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的VH區、包含SEQ ID NO：5的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的VL區。進一步的實施例中，本發明提供抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：1的胺基酸序列的VH區、包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的VL區。

本發明也提供本文記載的抗-DENV抗體，進一步包含本發明之包含變體Fc區的多肽。一些實施例中，本發明之抗-DENV抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的VH區，包含SEQ ID NO：54的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的VL區。一些實施例中，本發明之抗-DENV抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的VH區，包含SEQ ID NO：58的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的VL區。一些實施例中，本發明之抗-DENV抗體包含：於重鏈的包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的VH區，包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈的包含SEQ ID NO：10的胺基酸序列的VL區。.

一些實施例中，本發明之抗-DENV抗體包含：於重鏈包含SEQ ID NO：6的胺基酸序列的VH區與包含SEQ ID NO：59的胺基酸序列的變體Fc區，以及於輕鏈包含SEQ ID NO：7的胺基酸序列的VL區。

「親代Fc區」如使用於本文，意指導入本文記載的胺基酸變化之前的Fc區。親代Fc區的較佳實例包括衍生自天生的抗體的Fc區。抗體包括，舉例而言，IgA(IgA1、IgA2)、IgD、IgE、IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)及IgM等。抗體可衍生自人類或猴(例如，食蟹猴、恆河猴、狨猴或狒狒)。天生的抗體也可包括自然發生的突變。起因於基因性多型物的IgG異型序列的多種係記載於「Sequences of proteins of immunological interest",NIH Publication No.91-3242，及其等之任何者可使用於本發明。特別地，對於人類IgG1，於位置356至358(EU 編號)的胺基酸序列可為DEL或EEM。親帶Fc區的較佳實例包括Fc區衍生自人類IgG1(SEQ ID NO：83)、人類IgG2(SEQ ID NO：84)、人類IgG3(SEQ ID NO：85)及人類IgG4(SEQ ID NO：86)的重鏈恆定區。該親代Fc區的另一較佳實例為Fc區衍生自種鏈恆定區SG1(SEQ ID NO：87)。該親代Fc區的另一較佳實例為Fc區衍生自重鏈恆定區SG182(SEQ ID NO：46)。再者，親代Fc區可為介吽對衍生自天生的抗體的Fc區添加本文所記載的胺基酸變化以外的胺基酸變化所製造的Fc區。

此外，針對其他目的所進行的胺基酸變化可組合於本文所記載的變體Fc區。舉例而言，可添加改良FcRn-結合活性的胺基酸取代(Hinton et al.,J.Immunol.176(1)：346-356(2006)；Dall'Acqua et al.,J.Biol.Chem.281(33)：23514-23524(2006)；Petkova et al.,Intl.Immunol.18(12)：1759-1769(2006)；Zalevsky et al.,Nat.Biotechnol.28(2)：157-159(2010)；WO 2006/019447；WO 2006/053301；及WO 2009/086320)，及用於改良抗體異質性或安定性的胺基酸取代(WO 2009/041613)。替代地，具有促進抗原廓清性質的多肽其記載於WO 2011/122011、WO 2012/132067、WO 2013/046704或WO 2013/180201，具有特異性結合至目標組織性質的多肽其記載於WO 2013/180200，具有重複結合至多種抗原分子的性質的多肽其記載於WO 2009/125825、WO 2012/073992或WO 2013/047752，可與本文記載的變體Fc區組合。替代地，目的在於賦予其他抗原結合能力，記載於EP1752471及EP1772465的胺基酸變化可與本文記載的變體Fc區的CH3組合。替代地，目的在於增加血漿滯留，增加恆定區的pI的胺基酸變化(WO 2012/016227)可與本文記載的變體Fc區組合。替代地，目的在於促進攝入至細胞，增加恆定區的pI的胺基酸變化(WO 2014/145159)可與本文記載的變體Fc區組合。替代地，目的在於促進由血漿移除目標分子，增加恆定區的pI的胺基酸變化(WO2016/125495及WO2016/098357)可與本文記載的變體Fc區組合。

於酸性pH下增強人類FcRn-結合活性的胺基酸變化也可與本文記載的變體Fc區組合。具體地，該等變化可包括，舉例而言，於位置428的Leu取代為Met以及於位置434的Ser取代為Asn，根據EU編號(Nat Biotechnol,2010,28：157-159)；於位置434的Ala取代為Asn(Drug Metab Dispos,2010 Apr；38(4)：600-605)；於位置252的Tyr取代為Met、於位置254的Thr取代為Ser及於位置256的Glu取代為Thr(J Biol Chem,2006,281：23514-23524)；於位置250的Gln取代為Thr及於位置428的Leu取代為Met(J Immunol,2006,176(1)：346-356)；於位置434的His取代為Asn(Clin Pharmacol Ther,2011,89(2)：283-290)，及變化記載於WO2010/106180、WO2010/045193、WO2009/058492、WO2008/022152、WO2006/050166、WO2006/053301、WO2006/031370、WO2005/123780、WO2005/047327、WO2005/037867、WO2004/035752、WO2002/060919等。另一實施例中，該等變化可包括，舉例而言，選自下述所成群組的至少一種變化：於位置428的Leu取代為Met、於位置434的Ala取代為Asn及於位置436的Thr取代為Tyr。該等變化可進一步包括於位置438的Arg取代為Gln及/或於位置440的Glu取代為Ser(WO2016/125495)。

本發明中，胺基酸變化意指任何取代、刪除、添加、***，及修飾或其組合。本發明中，胺基酸變化可改寫為胺基酸突變。

胺基酸變化係藉由所屬技術領域中習知的各種方法製造。該等方法包括位點-導向致突變方法(Hashimoto-Gotoh et al.,Gene 152：271-275(1995)；Zoller,Meth.Enzymol.100：468-500(1983)；Kramer et al.,Nucleic Acids Res.12：9441-9456(1984))；Kramer and Fritz,Methods Enzymol.154：350-367(1987)；及Kunkel,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：488-492(1985))、PCR突變方法及匣突變方法，但不限於此等。

經導入至Fc區的胺基酸變化數沒有限制。一些實施例中，其可為1、2或更少、3或更少、4或更少、5或更少、6或更少、8或更少、10或更少、12 或更少、14或更少、16或更少、18或更少或20或更少。

再者，本發明之包含變體Fc區的多肽可利用如聚乙二醇(PEG)及細胞毒性物質之多種分子予以化學修飾。用於多肽之該等化學修飾的方法已建立於所屬技術領域。

一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽為包含可結合至抗原的域的抗體或Fc融合蛋白質。可為該等抗體及Fc融合蛋白質所結合的抗原的實例包括，但不限於配體(細胞激素、驅化激素等)、受體、癌抗原、病毒抗原、MHC抗原、分化抗原、免疫球蛋白及部分含有免疫球蛋白的免疫複合物。

B. 重組方法及組成物

抗體可使用重組方法及組成物製造，例如，記載於美國專利第4,816,567號。一實施例中，提供編碼本文所記載的抗-DENV抗體的經單離核酸。一實施例中，抗-DENV抗體對於ZIKV具有交叉反應性。另一實施例中，提供編碼本文記載的包含變體Fc區或親代Fc區的多肽的經單離核酸。該等核酸可編碼抗體的包含VL的胺基酸序列及/或包含VH的胺基酸序列(例如，抗體的輕鏈及/或重鏈)。進一步的實施例中，提供包含該核酸的一或多種載體(例如，表現載體)。進一步的實施例中，提供包含該核酸的宿主細胞。一該等實施例中，宿主細胞包含(例如，已經以下述者轉形)：(1)編碼包含抗體VL的胺基酸序列及包含抗體VH的胺基酸序列的核酸，或(2)包含編碼包含抗體VL的胺基酸序列的核酸的第一載體以及包含編碼包含抗體之VH的胺基酸序列的核酸的第二載體。一實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或類淋巴細胞(例如，Y0、NS0、Sp2/0細胞)。一實施例中，提供製造抗-DENV抗體的方法，其中該方法包含培養宿主細胞，該宿主細胞包含編碼該抗體的核酸，如上所述，於合適於表現抗體的條件下，及視需要地由宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。另一實施例中，提供製造包含變體Fc區或親代Fc區的多肽的方法，其中該方法包含培養宿主細胞，該宿主細胞包含編碼該多肽的核酸，該多肽如抗體、Fc區或變體Fc區，如上所述，於適合用於表現多太的條件下，及視需要地由宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該多肽。

對於抗-DENV抗體的重組製造，編碼抗體的核酸，例如，如上所述，係經單離及***至一或多個載體用於進一步選殖及/或表現於宿主細胞。對於Fc區的重組製造，編碼Fc區的核酸係經單離及***至一或多個載體用於進一步選殖及/或表現於宿主細胞。該核酸可容易地使用傳統手段經單離及定序(例如，藉由使用能特異性結合至編碼抗體的重鏈及輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。

用於抗體-編碼載體的選殖或表現的合適宿主細胞包括本文所記載的原核細胞或真核細胞。舉例而言，抗體可製造於細菌，特別是當糖基化及Fc起效子功能為不需要時。對於細菌中抗體片段及多肽的表現，參照，例如，美專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(也參照Charlton,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,2003),pp.245-254，記載大腸桿菌中抗體片段的表現)。表現後，抗體可由可溶部分中的細菌細胞糊回收且可進一步純化。

除了原核細胞，真核細胞微生物如絲狀真菌或酵母菌適合用於抗體-編碼載體的宿主的選殖或表現，包括其糖基化途徑已經「人源化」的真菌及酵母菌菌株，結果製造具有部分或全部人類糖基化型式的抗體。參照Gerngross,Nat.Biotech.22：1409-1414(2004)，及Li et al.,Nat.Biotech.24：210-215(2006)。

用於表現糖基化抗體的合適宿主細胞也衍生自多細胞有機體(無脊椎生物及脊椎生物)。無脊椎生物細胞的實例包括植物細胞及昆蟲細胞。已鑑定數種桿狀病毒菌株，其可使用於接合昆蟲細胞，特別地用於草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞的轉染。

也可利用植物細胞培養物做為宿主。參照，例如，美國專利第 5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(記載於基因轉殖植物中用於製造抗體的PL抗體TM技術)。

脊椎生物細胞也可使用作為宿主。舉例而言，適用於懸浮物中生長的哺乳動物細胞可為有用的。有用的哺乳動物細胞株的其他實例為藉由SV40轉型的猴腎CV1細胞株(COS-7)；人類胚胎腎細胞株(293或293細胞記載於，例如，Grahamet al.,J.Gen Virol.36：59(1977))；胎兒倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(TM4細胞，例如，記載於Mather,Biol.Reprod.23：243-251(1980))；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小數乳腺腫瘤(MMT 060562)；TRI細胞，記載於，例如，Mather et al.,Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68(1982)；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他有用的補入動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株，包括DHFR-CHO細胞株(Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216(1980))；及骨髓瘤細胞諸如Y0、NS0及Sp2/0。對於適合用於抗體製造的一些哺乳動物宿主細胞株的總論，參照，例如，Yazaki and Wu,Methods in Molecular Biology,Vol.248(B.K.C.Lo,ed.,Humana Press,Totowa,NJ),pp.255-268(2003)。

多株抗體較佳藉由相關抗原及佐劑的多次皮下注射(sc)及腹膜內注射(ip)於動物體中產生。其可有用的接合相關抗原至在域免疫的物種中具有免疫原性的蛋白質，例如，使用雙功能或衍生劑的鑰孔血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑，舉例而言，馬來醯亞胺基苯甲醯基磺溪基琥珀醯亞胺酯(經由半胱胺酸殘基接合)、N-羥基琥珀醯亞胺(經由離胺酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl₂或R¹N=C=NR，其中R及R¹為不同烷基。

動物(有用的非-人類哺乳動物)係藉由組合，例如，利用100μg或5μg的蛋白質或接合物(分別對於兔或小鼠)與3體積的弗氏完全佐劑且於多個位點皮內注射抗體，免疫原性接合物或衍生物予以免疫。一個月後動物以1/5至1/10原始量的肽或接合物於弗氏完全佐劑中於多個位點皮內注射追加。7至14日後，動物採血且測試血清的抗體效價。動物追加直到效價停滯(titer plateaus)。較佳地，動物係利用相同抗原的接合物追加，但接合至不同蛋白質及/或經由不同的交聯劑。接合物也可製造於重組細胞培養物中作為蛋白質融合物。同時，如明礬之凝集劑適合使用於增強免疫回應。

單株抗體係由實質上同值的抗體族群獲得，亦即，包含相同族群的個別抗體，除了可少量存在的可能的天然發生的突變及/或轉譯後修飾(例如，異構化、醯胺化)。因此，修飾劑「單株」指稱抗體不為分別抗體的混合物的特徵。

舉例而言，單株抗體可使用融合瘤方法製造，首先記載於Kohler et al.,Nature 256(5517)：495-497(1975)。融合瘤方法中，小數或其哪和氏的宿主動物，如倉鼠，係如前文所述經免疫以引發淋巴細胞，該淋巴細胞製造或能製造將特異性地結合至使用於免疫的蛋白質的抗體。替代地，淋巴細胞可於活體外予以免疫。

免疫劑典型地將包括抗原性蛋白質或其融合變體。一般而言，周邊血液淋巴細胞(PBL)為有用的，若人類起源的細胞為所期望的，或脾細胞或淋巴結細胞為有用的，若非-人類哺乳動物來源為所期望的。然後淋巴細胞與不死化細胞株使用合適的融合劑融合，該融合劑如聚乙二醇，以形成融合瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies：Principles and Practice,Academic Press(1986),pp.59-103)。

不死化細胞株通常為經轉形的哺乳動物細胞，特別地為囓齒動物、牛或人類起源的骨髓瘤。通常，應用大鼠或小鼠的骨髓瘤細胞株。然後所製造的融合瘤細胞係經接種且生長於較佳含有抑制未融合、親代骨髓瘤細胞的生長或存活的一種或多種物質的合適培養基。舉例而言，若親代骨髓瘤細胞缺乏酵素次黃嘌呤鳥嘌呤核酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT)，用於融合瘤的培養基典型地將包括次黃嘌呤、胺基蝶玲及胸苷(HAT培養基)，其為預防HGPRT-缺陷細胞生長的物質。

較佳的不死化骨髓瘤細胞為有效率地融合，藉由選擇的抗體-製造細胞支持安定高濃度的製造抗體，且對於如HAT培養基為敏感者。其等之中，較佳為小鼠骨髓瘤細胞株，如衍生自MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤者，可得自Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,California USA，及SP-2細胞(及其衍生物，例如，X63-Ag8-653)可得自American Type Culture Collection,Manassas,Virginia USA。人類骨髓瘤及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株也記載用於製造人類單株抗體(Kozbor et al.J.Immunol.133(6)：3001-3005(1984)；Brodeur et al.,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,Marcel Dekker,Inc.,New York,pp.51-63(1987))。

其中融合瘤細胞生長的培養基係經測試針對抗原的單株抗體的製造。較佳地，由融合瘤細胞所製造的單株抗體的結合特異性係藉由免疫沉澱或藉由活體外結合測試予以測定，如放射免疫測試(RIA)或酵素-連結免疫吸附測試(ELISA)。該等技術及測試為所屬技術領域所習知。舉例而言，結合親和性可藉由Munson,Anal.Biochem.107(1)：220-239(1980)的Scatchard分析予以測定。.

製造所期望的特異性、親和性及或活性的抗體的融合瘤細胞經鑑定後，純株藉由標準方法(Goding，如述於前)的限制稀釋過程及生長而次選殖。用於此目的的合適的培養基，舉例而言，D-MEM或RPMI-1640培養基。此外，融合瘤細胞可作為哺乳動物的腫瘤生長於活體內。

藉由次選殖所分泌的單株抗體，合適地由培養基、腹水或血清，藉由傳統免疫球蛋白純化過程予以分離，如舉例而言，蛋白質A-瓊脂糖、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和性層析。

Fc區可在使用如木瓜酵素之蛋白酶部分地分解IgG1、IgG2、IgG3、IgG4單株抗體等之後，藉由再溶洗經吸附至蛋白質A管柱的分液而獲得。蛋白酶不特別限制，只要其可分解全長抗體而使得Fab及F(ab')2將藉由合適地設置酵素反應條件如pH而以限制方式製造，及實例包括胰蛋白酶及木瓜酵素。

再者，本發明提供用於製造包含變體Fc區的多肽的方法，相較於包含親代Fc區的多肽，該包含變體Fc區的多肽具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性，且其包含對親代Fc區導入至少一個胺基酸變化。一些態樣中，所製造的多肽為抗體。一些實施例中，抗體為嵌合抗體或人源化抗體。一些態樣中，所製造的多肽為Fc溶合蛋白質。

一態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中，選自下述所成群組的至少一個位置的至少一個胺基酸經變化：234、235、236、267、268、324、326、332及333，根據EU編號。

另一態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中，於位置234及235的二個胺基酸經變化。

另一態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中，胺基酸係經變化，該變化包含：(a)於位置234及235的二個胺基酸變化，及(b)選自下述所成群組的至少一個位置的至少一個胺基酸經變化：236、267、268、324、326、332及333，根據EU編號。

另一態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中，胺基酸經變化，該變化包含：(a)於位置234及235的二個胺基酸變化，及(b)選自下述(i)至(iii)之任一者的至少一個胺基酸變化：(i)位置267、268及324；(ii)位置236、267、268、324及332；及(iii)位置326及333，根據EU編號。

進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，係選自下述所成群組的各位置為：(a)Ala於位置234；(b)Ala於位置235；(c)Glu於位置267；(d)Phe於位置268；(e)Thr於位置324；(f)Ala於位置236；(g)Glu於位置332；(h)Ala、Asp、Glu、Met、Trp於位置326；及(i)Ser於位置333，根據EU編號。

進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，為：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326及Ser於位置333；根據EU編號。進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，為：Ala於位置234、Ala於位置235、Asp於位置326及Ser於位置333；根據EU編號。進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性，及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，為：Ala於位置234、Ala於位置235、Glu於位置326及Ser於位置333；根據EU編號。進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性，及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，為：Ala於位置234、Ala於位置235、Met於位置326及Ser於位置333；根據EU編號。進一步的態樣中，用於製造包含具有實質上減低的FcγR-結合活性，及不具有實質上減低的C1q-結合活性的變體Fc區的多肽的上述方法中的胺基酸變化，為：Ala於位置234、Ala於位置235、Trp於位置326及Ser於位置333；根據EU編號。

另一態樣中，上述方法中選自下述所成群組的至少一個位置的至少一個胺基酸係進一步經變化：428、434、436、438及440，根據EU編號。

進一步的態樣中，上述方法中的胺基酸變化係進一步選自下述(a)至(d)：(a)Ala於位置434；(b)Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440；(c)Leu於位置428、Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440；及(d)Leu於位置428、Ala於位置434、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號(也參照WO2016/125495記載變體Fc區之胺基酸變化及FcRn-結合活性之間個關係)。

進一步的態樣中，上述方法中的胺基酸變化為：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326、Ser於位置333、Leu於位置428、Ala於位置434、Thr於位置436、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號。進一步的態樣中，上述方法中的胺基酸變化為：Ala於位置234、Ala於位置235、Ala於位置326、Ser於位置333、Leu於位置428、Ala於位置434、Arg於位置438及Glu於位置440，根據EU編號。

一態樣中，較佳為相較於親代Fc區，本發明的變體Fc區不具有實質上增加的FcRn結合活性，特別是於pH7.4。

進一步的態樣中，上述製造方法中的胺基酸變化係選自記載於表4的任何單獨變化、單獨變化的組合或組合變化。

藉由任何上述方法或所屬技術領域習知的其他方法所製造的包含變體Fc區的多肽係包括於本發明。

C. 測試

本文所提供的抗-DENV抗體可藉由所屬技術領域習知的多種方法對於其物理/化學性質及/或生物活性予以鑑定、篩選或特徵化。

本文所提供的變體Fc區可藉由所屬技術領域習知的多種方法對於其物理/化學性質及/或生物活性予以鑑定、篩選或特徵化。

1. 結合測試及其他測試

一態樣中，本發明的抗體係經測試其抗原結合活性，例如，藉由已知方法如ELISA、西方墨點等。一態樣中，本發明之包含變體Fc區的多肽係經測試其抗原結合活性，例如，藉由已知方法如ELISA、西方墨點等。

另一態樣中，可使用競爭測試鑑定與本文記載的任何抗-DENV抗體競爭結合DENV及/或DENV E蛋白質的抗體。一些實施例中，當該競爭抗體過量存在時，其阻斷(例如，減低)參考抗體對DENV及/或DENV E蛋白質的結合至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%或更多。一些情況中，結合係受到抑制至少80%、85%、90%、95%或更多。一些實施例中，該競爭抗體結合至相同的抗原決定基(例如，線性或構型的抗原決定基)其係藉由本文記載的抗-DENV抗體所結合。用於對映與抗體結合的抗原決定基的詳細例示性方法係提供於Morris(1996)「Epitope Mapping Protocols,」in Methods in Molecular Biology vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。

例示性競爭測試中，固定化DENV或DENV E蛋白質係培育於包含第一標記抗體及第二未標記抗體的溶液中，該第一標記抗體結合至DENV及/或DENV E蛋白質及該第二未標記抗體係經測試其與第一抗體競爭結合至DENV或DENV E蛋白質的能力。第二抗體可存在於融合瘤上清液。作為對照，固定化DENV或DENV E蛋白質係培育於包含第一標記抗體但無第二未標記抗體的溶液中。於允許第一抗體結合至DENV或DENV E蛋白質的條件下培育後，移除過量的未結合抗體，及測定與固定化DENV或DENV E蛋白質結合的標記量。若與固定化DENV或DENV E蛋白質結合的標記量，相對於對照樣品，於測試樣品中為實質地減低，則其表示第二抗體與第一抗體競爭結合至DENV或 DENV E蛋白質。參照Harlow and Lane(1988)Antivbodies：A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。

用於測定含有變體Fc區的多肽朝向一或多個FcR家族成員的結合活性的測試係記載於本文或為所屬技術領域所習知。該等結合測試包括但不限於BIACORE®分析，其利用表面電漿偶合(SPR)現象、擴增發光近似均質測試(ALPHA)篩選、ELISA及螢光活化細胞選別(FACS)(Lazar et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11)：4005-4010)。

一實施例中，BIACORE^®分析可使用於評價相對於特別的FcR家族成員，包含變體Fc區的多肽的結合活性是否增強、維持或減少。舉例而言，當使用習知方法與試劑如蛋白質A、蛋白質L、蛋白質A/G、蛋白質G、抗-λ鏈抗體、抗-κ鏈抗體、抗原肽、抗原蛋白質，各種FcR作為分析物與固定化或捕捉於感測晶片的包含變體Fc區的多肽進行交互作用，藉由觀察由傳感圖分析獲得的解離常數(Kd)值是否有減少或增加。結合活性的變化也可藉由比較一或多種類型的FcR作為分析物與捕捉的包含變體Fc區的多肽交互作用之前及之後的傳感圖的共振單位(RU)值而測定。替代地，FcR可經固定化或捕捉於感測晶片，且包含變體Fc區的多使用作為分析物。

BIACORE^®分析中，觀察交互作用的物質之一者(配體)係經固定化至感測晶片上的金薄膜，且藉由從感測晶片相反側的閃光使得金薄膜與玻璃之間的介面發生總反射，部分減低的反射強度係形成部分反射光(SPR信號)。當觀察交互作用的物質之另一者(分析物)係做成流入感測晶片表面且該配體結合分析物，固定化配體分子的質量增加且感測晶片表面的溶劑的反射指數改變。SPR信號位置偏移為反射指數改變的結果(另一方面，當此結合解離時信號位置回復)。BIACORE^®系統指示上述偏移量，或更具體地指示藉由作圖縱坐標的感測晶片表面的質量改變作為測量數據(傳感圖)之質量的時間變量。結合至經捕獲於感測晶片表面的配體的分析物的量係由傳感圖測定。如結合速率常數(ka)及解離速率常數(kd)之動力學參數係由傳感圖的曲線測定，及解離常數(Kd)係由該等常數的比例測定。BIACORE^®方法中，較佳使用用於測定抑制性的方法。用於測定抑制性的方法之實例係記載於Lazar et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103(11)：4005-4010(2006)。

ALPHA篩選係藉由ALPHA技術進行，其使用二種珠粒，供體及接受體，基於下述準則。僅當結合至供體珠粒的分子物理性地與結合至接受體珠粒的分子交互作用，且二珠粒彼此非常接近時，偵測到發光信號供體珠粒中的雷射-激發光敏劑將環境氧轉為激發-肽單氧。單氧分散於供體珠粒周圍，且當其接近鄰近的接受體珠粒時，於珠粒中誘發化學發光反應，最終發射光。當結合至供體珠粒的分子不與結合至接受體珠粒的分子交互作用時，由於供體珠粒所產生的單氧不接觸接受體珠粒，不發生化學發光反應。

舉例而言，生物素化多肽複合物係結合至供體珠粒，及標誌穀胱甘肽S轉移酶(GST)的Fc受體係連接至接受體珠粒。在包含變體Fc區的競爭多肽複合物不存在下，包含親代Fc區的多肽複合物與Fc受體交互作用且產生520-620nm信號。包含未標誌變體Fc區的多肽複合物與包含親代Fc區的多肽複合物，競爭與Fc受體的交互作用。相對結合活性可藉由定量競爭結果觀察到的螢光減少而測定。使用磺酸基-NHS-生物素等之多肽複合物的生物素化為習知的。於帶有藉由於可表現載體中融合框架中編碼Fc受體的多核苷酸與編碼GST的多核苷酸所產生的融合基因的細胞中表現FC受體及GST的方法，及使用穀胱甘肽管住進行純化的方法係合適地應用於標誌具有GST的Fc受體。所獲得的信號較佳經分析，舉例而言，藉由將其擬合至一位點競爭模型，其使用非線性回歸分析，利用如GRAPHPAD PRISM(GraphPad,San Diego)的軟體。

具有減少的FcR-結合活性的變體Fc區意指當測試係使用實質上相同量的對應親代Fc區及變體Fc區進行時，相較於親代Fc區其結合至FcR為基本上較弱結合活性的Fc區。再者，具有增加的FcR-結合活性的變體Fc區意指當測試係使用實質上相同量的親代Fc區及變體Fc區進行時，相較於對應的親代Fc區其結合至FcR為基本上較強結合活性的Fc區。具有維持的FcR-結合活性的變體Fc區意指當測試使用時質上相同量的對應親代Fc區及含有變體Fc區的多肽時，結合至FcR的結合活性相當於或基本上沒有差異於親代Fc區的結合活性的Fc區。

Fc區朝向各種FcR的結合活性是否增加或減少可由各種FcR對Fc區得結合量的增加或減少而測定，其根據上述測量方法而測定。此處，各種FcR對Fc區的結合量可藉由作為分析物的各種FcR與Fc區交互作用之前與之後的改變的傳感圖的R值差，除以捕捉Fc區至感測晶片之前與之後改變的傳感圖的RU值差異所獲得的值與以評估。對於FcγR或FcRn的Fc區結合活性可藉由本文中記載於實施例5的方法測定。

本發明中，實質上減少的FcγR-結合活性較佳意指，舉例而言，變體Fc區對於FcγR的結合活性係低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%、低於5%、低於2%、低於1%、低於0.5%、低於0.2%或低於0.1%，以對於親代Fc區的FcγR-結合活性作為函數。其亦較佳意指，舉例而言，[FcγR與變體Fc區交互作用之前與之後的改變的傳感圖的RU值差異]/[捕捉FcγR至感測晶片之前與之後的傳感圖的RU值差異]的比例係低於1、低於0.8、低於0.5、低於0.3、低於0.2、低於0.1、低於0.08、低於0.05、低於0.03、低於0.02、低於0.01、低於0.008、低於0.005、低於0.003、低於0.002或低於0.001。

本發明中，不實質上增加的FcRn-結合活性，特別是於pH7.4，較佳意指，舉例而言，相較於親代Fc區的FcRn-結合活性，變體Fc區對於FcRn的結合活性係低於1000倍、低於500倍、低於200倍、低於100倍、低於90倍、低於 80倍、低於70倍、低於60倍、低於50倍、低於40倍、低於30倍、低於20倍、低於10倍、低於5倍、低於3倍或低於2倍。其也較佳意指，舉例而言，[FcRn與變體Fc區交互作用之前與之後的改變的傳感圖的RU值差異]/[捕捉FcRn至感測晶片之前與之後的傳感圖的RU值差異]的比例係低於0.5、低於0.3、低於0.2、低於0.1、低於0.08、低於0.05、低於0.03、低於0.02、低於0.01、低於0.008、低於0.005、低於0.003、低於0.002或低於0.001。

為了測定含有Fc區的多肽朝向C1q的結合活性，可進行C1q結合ELISA。簡明地，測試盤係於4℃以含有變體Fc區的多肽或含有親代Fc區的多肽(對照)於被覆緩衝液中被覆隔夜。然後將盤清洗及封阻。清洗後，對各孔添加人類C1q分液且於室溫培育2小時。進一步清洗後，對各孔添加100μl的山羊抗-補體C1q過氧化酶接合抗體且於室溫培育1小時。然後以清洗緩衝液再次清洗盤且對各孔添加100μl之含有OPD(鄰-伸苯二胺二鹽酸鹽(Sigma))的受質緩衝液。氧化反應，藉由觀察黃色的出現，可允許進行30分鐘且藉由添加100μl的4.5N H₂SO₄而停止。然後於(492-405)nm讀取吸收度。Fc區對於C1q的結合活性可藉由本文實施例4記載的方法測定。

一態樣中，本發明之變體Fc區及親代Fc區之間的C1q結合活性的差異係低於50%、低於45%、低於40%、低於35%、低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%或低於5%，當以對於親代Fc區的C1q-結合活性作為函數。

2. 活性測試

一態樣中，提供測試用於鑑定具有生物活性的抗-DENV抗體。生物活性可包括，例如，阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合、抑制DENV進入宿主細胞、抑制及/或預防宿主細胞的DENV感染等。也提供活體內及/或活體外具有該等生物活性的抗體。

一些實施例中，本發明之抗體係經試驗該等生物活性。一些實施例中，溶菌斑減低中和試驗(PRNT)測試可利用於測定試驗抗體的活性或中和效價。一些實施例中，動物宿主可使用於測定活體內抗-DENV活性。

一些實施例中，細胞可直接測試DENV與試驗抗體之間的結合。免疫組織化學技術、共焦技術及/或用於評估的其他技術為所屬技術領域中具有通常知識者所習知。各種細胞株可利用於該等篩選測試，包括對於此目的之細胞特異性工程化。使用於篩選測試的細胞實例包括哺乳動物細胞、真菌細胞、細菌細胞或病毒細胞。細胞可為受刺激細胞，如以生長因子刺激的細胞。所屬技術領域中具有通常知者將理解本文記載的發明涵括廣泛的各種測試用以測定試驗抗體結合至DENV的能力。

一態樣中，提供測試用於鑑定具有生物活性的抗-ZIKV抗體。生物活性可包括，例如，阻斷ZIKV對宿主細胞的結合、抑制ZIKV進入宿主細胞、抑制及/或預防宿主細胞的ZIKV感染等。也提供活體內及/或活體外具有該等生物活性的抗體。

一些實施例中，本發明之抗體係經試驗該等生物活性。一些實施例中，溶菌斑減低中和試驗(PRNT)測試或焦點減低中和試驗(FRNT)測試可利用於測定試驗抗體的活性或中和效價。一些實施例中，動物宿主可使用於測定活體內抗-ZIKV活性。

一些實施例中，細胞可直接測試ZIKV與試驗抗體之間的結合。免疫組織化學技術、共焦技術及/或用於評估的其他技術為所屬技術領域中具有通常知識者所習知。各種細胞株可利用於該等篩選測試，包括對於此目的之細胞特異性工程化。使用於篩選測試的細胞實例包括哺乳動物細胞、真菌細胞、細菌細胞或病毒細胞。細胞可為受刺激細胞，如以生長因子刺激的細胞。所屬技術領域中具有通常知者將理解本文記載的發明涵括廣泛的各種測試用以測定試驗抗體結合至ZIKV的能力。

取決於測試，可能需要細胞及/或組織培養。可使用任何樹的不同生理測試檢測細胞。替代地或額外地，可進行分子分析，包括但不限於西方墨點以偵測蛋白質表現及/或試驗蛋白質-蛋白質交互作用；質譜以偵測其他化學修飾等。

一些實施例中，該等方法利用動物宿主。舉例而言，適合用於本發明之動物宿主可為任何哺乳動物宿主，包括靈長類、貂、貓、犬、牛、馬及囓齒動物如小鼠、倉鼠、兔及大鼠。一些實施例中，動物宿主在試驗抗體投予之前或同時接種、感染或其他方式暴露於病毒。天生的及/或接種的動物可使用於任何各種研究。舉例而言，如所屬技術領域習知，該等動物模型可使用於病毒傳遞研究。可於病毒傳遞之前、期間或之後投予試驗抗體至合適的動物宿主以測定飾演抗體於阻斷病毒結合及/或阻斷於動物宿主中的感染性的效力。

一態樣中，提供測試用於鑑定包含具有生物活性的變體Fc區的多肽。生物活性可包括，例如，ADCC活性及CDC活性。也提供活體內及/或活體外包含具有該等生物活性的變體Fc區的多肽。

一些實施例中，本發明之包含變體Fc區的多肽係經測試該等生物活性。一些態樣中，本發明之包含變體Fc區的多肽，相較於包含親代Fc區的多肽，係調節起效子功能。一些態樣中，此調節為ADCC及/或CDC的調節。

可進行活體外及/或活體內細胞毒性測試已確認CDC及/或ADCC活性。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合測試以證實抗體具有FcγR結合(因此可能具有ADCC活性)，及保留FcRn結合活性。用於媒介ADCC的主要細胞，NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。於造血幹細胞的FcR表現係總結於Ravetch and Kinet,Annu Rev Immunol(1991)9,457-492的第4645頁表3。活體外測試以評估感興趣分子的ADCC活性的非限制性實例記載於美國專利第5,500,362號(參照，e.g.Hellstrom et al,Proc Natl Acad Sci USA(1986)83,7059-7063)及Hellstrom et al,Proc Natl Acad Sci USA(1985)82,1499-1502；美國專利第5,821,337號(參照Bruggemann et al,J Exp Med(1987)166,1351-1361)。替代地，可應用非放射活性測試方法(參照，舉例而言，ACTI^TM non-radioactive cytotoxicity assay for flow cytometry(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；及CytoTox 96® non-radioactive cytotoxicity assay(Promega,Madison,WI))。對於該等測試有用的起效子細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。替代地，或額外地，感興趣分子的ADCC活性可於活體內評估，例如，於動物模型中如記載於Clynes et al,Proc Natl Acad Sci USA(1998)95,652-656。也可進行Clq結合評估以確認抗體是否結合Clq且因此具有CDC活性。參照，例如，WO 2006/029879及WO 2005/100402中的C1q及C3c結合LISA。為了評估補體活化，可進行CDC測試(參照，舉例而言，Gazzano-Santoro et al,J Immunol Methods(1997)202,163-171；Cragg et al,Blood(2003)101,1045-1052；及Cragg and Glennie,Blood(2004)103,2738-2743)。也可使用所屬技術領域習知的方法進行FcRn結合及活體內廓清/半衰期測定(參照，例如，Petkova et al,Int Immunol(2006)18,1759-1769)。

D. 免疫接合物

一些實施例中，本發明也提供免疫接合物，其包含本文中經接合至一或多種細胞毒性劑，如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，蛋白質毒素，細菌、真菌、植物或動物起源的酵素性活化毒素，或其片段)或放射活性同位素的抗-DENV抗體。一些實施例中，本發明也提供免疫接合物，其包含經接合至一或多種細胞毒性劑，如化學治療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，蛋白質毒素，細菌、真菌、植物或動物起源的酵素性活化毒素，或其片段)或放射活性同位素之包含本文中變體Fc區的多肽。

一實施例中，免疫接合物為抗體-藥物接合物(ADC)，其中抗體係經結合至一或多種藥物，包括但不限於美登木素(maytansinoid)(參照美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；奧瑞斯坦丁(auristatin)如單甲基奧瑞斯坦丁藥物部分體DE及DF(MMAE及MMAF)(參照美國專利第5,635,483號、第5,780,588號及第7,498,298號)；海兔毒素(dolastatin)；卡利其黴素(calicheamicin)或其衍生物(參照美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及第5,877,296號；Hinman et al.,Cancer Res.53：3336-3342(1993)；及Lode et al.,Cancer Res.58：2925-2928(1998))；蒽環黴素(anthracycline)如道諾黴素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(參照Kratz et al.,Current Med.Chem.13：477-523(2006)；Jeffrey et al.,Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362(2006)；Torgov et al.,Bioconj.Chem.16：717-721(2005)；Nagy et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834(2000)；Dubowchik et al.,Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532(2002)；King et al.,J.Med.Chem.45：4336-4343(2002)；及美國專利第6,630,579號)；甲胺蝶呤(methotrexate)；長春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)如多西紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、拉洛他賽(larotaxel)、特西紫杉醇(tesetaxel)，及沃塔紫杉醇(ortataxel)；單端孢黴素(trichothecene)；及CC1065。

另一實施例中，免疫接合物包含如本文所記載的抗體經接合至酵素性活化毒素或其片段，包括但不限於白喉A鏈、白喉毒素的非結合活性片段、內毒素A鏈(來自綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻素A鏈、相思子素(abrin)A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、α-八疊球菌素(sarcin)、油桐(Aleurites fordii)蛋白質、石竹素(dianthin)蛋白質、美洲商陸(Phytolacca Americana)蛋白質(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制劑、痲瘋樹毒蛋白 (curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(saponaria officinalis)抑制劑、白樹素(gelonin)、米托菌素(mitogellin)、侷限曲菌素(restrictocin)、酚黴素(phenomycin)、伊諾黴素(neomycin)及單端孢黴素(tricothecenes)。

另一實施例中，免疫接合物包含如本文所記載的抗體經接合至放射活性原子以形成放射接合物。各種放射活性同位素可用於製造放射接合物。實例包括²¹¹At、¹³¹I、¹²⁵I、⁹⁰Y、¹⁸⁶Re、¹⁸⁸Re、¹⁵³Sm、²¹²Bi、³²P、²¹²Pb及Lu的放射活性同位素。當放射接合物使用於偵測時，其可包含用於閃爍檢查研究的放射活性原子，例如Tc-99m或¹²³I，或用於核磁共振(NMR)造影的自旋標記，如碘-123再次、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。

抗體及細胞毒性劑的接合物可使用各種雙功能性蛋白質偶合劑製造如N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀醯亞胺基-4-(N馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、亞胺酸酯的雙功能性衍生物(如己二亞胺二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(如二琥珀醯亞胺辛二酸酯)、醛類(如戊二醛)、雙-疊氮化合物(如雙(p-疊氮苯甲醯基)己烷二胺)、雙-疊氮鎓衍生物(如雙-(p-疊氮鎓苯甲醯基)-伸乙二胺)、二異氰酸酯(如二甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，蓖麻素免疫毒素可如記載於Vitetta et al.,Science 238：1098(1987)方式製備。碳-14-標記1-異硫氰酸基苯甲基3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)為用於接合放射核種至抗體的例示性螯合劑。參照WO94/11026。連接子可為「可裂解連接子」有助於細胞中細胞毒性藥物的釋放。舉例而言，可使用酸-可分解連接子、肽酶-敏感性連接、光可分解連接子、二甲基連接子或含雙硫鍵連接子(Chari et al.,Cancer Res.52：127-131(1992)；美國專利第5,208,020號)。

免疫接合物或ADC於本文中明確地考慮，但不限於該等利用交聯連接劑所製備的接合物，包括但不限於BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、 LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺酸基-EMCS、磺酸基-GMBS、磺酸基-KMUS、磺酸基-MBS、磺酸基-SIAB、磺酸基-SMCC及磺酸基-SMPB，及SVSB(琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)其可為市售取得(例如，得自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。

E. 用於診斷及偵測的方法及組成物

一些實施例中，本文所提供之抗-DENV抗體之任一者有用於用以偵測生物樣品中DENV及/或DENV E蛋白質的存在。一些實施例中，本文所提供之抗-DENV抗體之任一者有用於偵測生物樣品中ZIKV的存在。如使用於本文之用語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。一些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，如血清、全血、血漿、活體切片樣品、組織樣品、細胞懸浮物、唾液、痰、口腔流體、腦脊髓流體、羊水、腹水、乳汁、初乳、乳腺分泌物、淋巴液、尿液、汗液、淚液、胃液、滑液、腹膜液、眼晶體液或黏液。

一實施例中，係提供使用於診斷或偵測的方法的抗-DENV抗體。進一步的態樣中，係提供生物樣品中偵測DENV存在的方法。一些實施例中，該方法包含將生物樣品與本文所記載的抗-DENV抗體於允許抗-DENV抗體結合至DENV的條件下接觸，及偵測抗-DENV抗體與DENV之間是否形成複合物。該方法可為活體外方法或活體內方法。進一步的態樣中，係提供偵測生物樣品中DENV E蛋白質存在的方法。一些實施例中，該方法包含將生物樣品與本文所記載的抗-DENV抗體於允許抗-DENV抗體結合至DENV E蛋白質的條件下接觸，及偵測抗-DENV抗體及DENV E蛋白質之間是否形成複合物。該方法可為活體外方法或活體內方法。一實施例中，抗-DENV抗體係使用於選擇適合於利用抗-DENV抗體的療法的對象，例如，當DENV或DENV E蛋白質為用於選擇患者的生物標記時。

可使用本發明的抗體予以診斷的例示性疾患包括DENV感染及藉由或相關於DENV感染所引起的疾病及/或症狀，如登革熱、出血性登革熱(DHF)及登革休克症狀(DSS)。

一實施例中，係提供使用於診斷或偵測的方法的抗-ZIKV抗體。進一步的態樣中，係提供生物樣品中偵測ZIKV存在的方法。一些實施例中，該方法包含將生物樣品與本文所記載的抗-ZIKV抗體於允許抗-ZIKV抗體結合至ZIKV的條件下接觸，及偵測抗-ZIKV抗體與ZIKV之間是否形成複合物。該方法可為活體外方法或活體內方法。進一步的態樣中，係提供偵測生物樣品中ZIKV存在的方法。一些實施例中，該方法包含將生物樣品與本文所記載的抗-ZIKV抗體於允許抗-ZIKV抗體結合至ZIKV的條件下接觸，及偵測抗-ZIKV抗體及ZIKV之間是否形成複合物。該方法可為活體外方法或活體內方法。一實施例中，抗-DENV抗體係使用於選擇適合於利用抗-DENV抗體的療法的對象，例如，當ZIKV為用於選擇患者的生物標記時。

可使用本發明的抗體予以診斷的例示性疾患包括ZIKV感染及藉由或相關於ZIKV感染所引起的疾病及/或症狀，如發熱、發紅、頭痛、關節痛、紅眼及肌肉痛。

一些實施例中，提供經標記的抗-DENV抗體。一些實施例中，提供經標記的抗-ZIKV抗體。標劑包括，但不限於，直接偵測的標記或部分體(如螢光標記、發色團標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射活性標記)，以及經由酵素反應或分子交互作用而間接偵測的部分體如酵素或配體。例示性標記包括，但不限於，放射同位素³²P、¹⁴C、¹²⁵I、³H及¹³¹I，螢光團如稀土螯合物或螢光速及其衍生物，若單明及其衍生物，丹參，繖型酮，螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(美國專利第4,737,456號)，螢光素，2,3-二氫酞嗪二酮類，辣根過氧化氫酶(HRP)，鹼性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡萄糖澱粉酶，溶菌酶，糖氧化酶例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，雜環氧化酶如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，與酵素偶合而應用過氧化氫以氧化染劑前驅物者如HRP、乳糖過氧化酶或為過氧化酶，生物素/卵白素，自旋標記，噬菌體標記，安定自由基等。

一實施例中，包含本發明的變體Fc區的抗體可使用作為親和性純化劑。此步驟中，抗體變體係使用所屬技術領域習知的方法，經固定至固相如葡聚糖凝膠(Sephadex)樹脂或濾紙。經固定的抗體變體係與含有欲純化的抗原的樣品接觸，及之後該支持體以將實質上移除樣品中欲純化的抗原以外的所有材料的合適溶劑清洗，該抗原係經結合至該固定化抗體變體。最終地，該支持體以另一合適溶劑清洗，如甘胺酸緩衝液，pH 5.0，其將由該抗體變體釋放抗原。

抗體變體也可有用於診斷測試，例如，用於真感興趣抗原於特定細胞、組織或血清中的表現。

抗體變體可應用於任何習知的測試方法，如競爭結合測試、直接或間接三明治測試及免疫沉澱測試。Zola,Monoclonal Antibodies：A Manual of Techniques，(1987)pp.147-158,CRC Press,Inc.。

F. 醫藥調配物

本文所記載抗-DENV抗體的醫藥調配物係藉由混合該等具有所期望程度的抗體與一或多種視需要的醫藥可接受載體(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)，呈冷凍乾燥調配物或水性溶液形式而製備。本文所記載抗-ZIKV抗體的醫藥調配物係藉由混合該等具有所期望程度的抗體與一或多種視需要的醫藥可接受載體(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980))，呈冷凍乾燥調配物或水性溶液形式而製備。

本文記載的包含變體Fc區的多肽的醫藥調配物係藉由混合該等具有所期望程度的多肽與一或多種視需要的醫藥可接受載體，呈冷凍乾燥調配物或水性溶液形式而製備。

醫藥可接受載體於所應用的用藥及濃度通常對於接受者為非毒性，及包括，但不限於：緩衝液如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸類；抗氧化劑包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(如十八基二甲基苯甲基氯化銨；六甲基氯化銨；苯札氯銨；苄索氯銨；酚、丁基醇或苄基醇；對羥基苯甲酸烷基酯如對羥基苯甲酸甲基酯或對羥基苯甲酸丙基酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間-甲酚)；低分子量(少於約10殘基)多；蛋白質，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物如聚乙烯基吡咯啶酮；胺基酸如甘胺酸、麩胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖類、雙糖類及其他碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；糖類如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；鹽形成抗衡離子如鈉；金屬複合物(例如，Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子性界面活性劑如聚乙二醇(PEG)。本文中例示性醫藥可接受載體進一步包括間質性藥物分散劑如可溶性中性活性玻尿酸酶糖蛋白(sHASEGP)，舉例而言，人類可溶性PH-20玻尿酸酶糖蛋白，如rHuPH20(HYLENEX(註冊商標)，Baxter International,Inc.)。使用的某例示性sHASEGP及方法，包括rHuPH20，係記載於美國專利公開號2005/0260186及2006/0104968。一態樣中，sHASEGP係與一或多種額外的糖胺聚多糖酶如軟骨素酶組合。

例示性冷凍乾燥抗體調配物係記載於美國專利第6,267,958號。水性抗體調配物包括記載於美國專利第6,171,586號及WO2006/044908者，後者調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。

如需要時，本文之調配物也可含有多於一種的活性成分用以治療特別的適應症，較佳為無不良作用影響彼此之具有互補活性者。舉例而言，其可為所期望的進一步提供抗病毒劑，如，但不限於干擾素(例如，干擾素α-2b、干擾素-γ等)、抗-DENV單株抗體、抗-DENV多株抗體、RNA聚合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、螺旋酶抑制劑、免疫調節劑、反義化合物、短型干擾RNA、短型髮夾RNA、微小RNA、RNA適體及核糖酶、及其組合。該等活性成分適合以對於目的需求為有效的量組合存在。

活性成分可被包埋於所製備的微膠囊中，舉例而言，藉由凝聚技術或藉由界面聚合，舉例而言，羥甲基纖維素或明膠-微膠囊及具(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，分別地於膠體藥物傳遞系統(舉例而言，微脂體、白蛋白微球體、奈米顆粒或奈米膠囊)或於***化物中。該等技術係記載於Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。

可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適實例包括含有抗體的固體疏水型聚合物的半通透性基質，該基質係呈經塑型的物件形式，例如膜或微膠囊。

欲使用於活體內投予的調配物通常為無菌的。無菌可容易地達成，例如，藉由通過無菌過濾膜過濾。

G. 治療方法及組成物

本文所提供抗-DENV抗體之任一者可使用於治療方法。

一態樣中，提供使用作為醫藥的抗-DENV抗體。進一步態樣中，提供使用於治療DENV感染的抗-DENV抗體。一些實施例中，提供使用於治療方法的抗-DENV抗體。一些實施例中，本發明提供抗-DENV抗體使用於治療具有DENV感染的個體的方法，該方法包含對該個體投予有效量的抗-DENV抗體。一該實施例中，該方法進一步包含對該個體投予有效量之至少一額外的治療劑，例如，如下文所記載者。進一步的實施例中，本發明提供抗-DENV抗體用於阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞。一些實施例中，本發提供明抗-DENV抗體用於阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞的方法，包含對該個體投予有效的抗-DENV抗體以阻斷DENV E蛋白質的結合及/或DENV進入宿主細胞。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供抗-DENV抗體於醫藥的製造或製備中的用途。一實施例中，該醫藥係用於DENV感染的治療。進一步的實施例中，該醫藥係用於治療DENV感染的方法，包含對具有DENV感染的個體投予有效量的醫藥。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予有效量的至少一額外治療劑，例如，如下文記載。進一步的實施例中，該醫藥用於阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞。進一步的實施例中，該醫藥用於個體中阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞的方法，包含對該個體投予有效量的醫藥以阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供用於治療DENV感染的方法。一實施例中，該方法包含對具有DENV感染的個體投予有效量的抗-DENV抗體。一該實施例中，該方法進一步包含對該個體投予有效量的至少一額外治療劑，如下文記載。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供用於阻斷個體中DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞的方法。一實施例中，該方法包含對該個體投予有效量的抗-DENV抗體以阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞。一實施例中，「個體」為人類。

進一步的態樣中，本發明提供包含本文所提供的任何抗-DENV抗體的醫藥調配物，例如，用於使用於上述治療方法之任一者。一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供的任何抗-DENV抗體及醫藥可接受載體。另一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供的任何抗-DENV抗體及至少一額外治療劑，例如，如下文記載。

進一步的態樣中，醫藥調配物係用於治療DENV感染。進一步的實施例中，醫藥調配物係用於阻斷DENV E蛋白質對宿主細胞的結合及/或DENV進入宿主細胞。一實施例中，醫藥調配物係經投予至具有DENV感染的個體。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

一些實施例中，DENV感染可包括由DENV感染所引起獲相關的疾病及/或症狀如登革熱、出血性登革熱(DHF)及登革休克症候群(DSS)。

一態樣中，本發明提供用於治療或預防茲卡病毒感染的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。一態樣中，本發明提供用於抑制由妊娠母體至胎兒的茲卡病毒的傳遞的方法。一態樣中，本發明提供用於預防先天性茲卡症後群(例如，先天性發育缺乏、小腦症等)的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。一態樣中，本發明提供用於抑制減低胎兒體重(例如，全身中、頭等)的方法，包含投予結合至ZIKV的抗體。

一實例中，用語「先天性茲卡症後群」意指出生缺陷的不同型態，其獨特於出生前受到茲卡感染的胎兒及嬰兒。如所屬技術領域中具有通常知識者所理解，具有先天性茲卡症候群的對象可顯現症狀如，但不限於，先天性發育缺陷、小腦症、嚴重小腦症其中頭骨部分坍塌、具有特定類型腦損傷之減少的腦組織，包括皮質下鈣化、對於眼後的損傷，包括黃斑部瘢痕及視焦色素視網膜斑駁、先天性攣縮、如內翻足或關節攣縮、出生後很快的張力亢進限制身體動作等。咸信投予如本文所記載的抗體將預防先天性茲卡症候群的至少一種(或至少二種，或至少三種，或至少四種，或全部)症狀。舉例而言，如所記載的抗體預防胎兒或嬰兒出生前的茲卡病毒感染而藉此抑制胎兒體重(如全身、頭等)降低。

本文所提供的抗-ZIKV抗體之任一者可使用於治療方法。

一態樣中，提供抗-ZIKV抗體使用作為醫藥。進一步態樣中，提供抗-ZIKV抗體使用於治療ZIKV感染。一些實施例中，提供抗-ZIKV抗體使用於治療方法。一些實施例中，本發明提供抗-ZIKV抗體使用於治療個體具有ZIKV感染的方法，包含對該個體投予有效量的抗-ZIKV抗體。一該實施例中，該方法進一步包含對該個體投予有效量的至少一額外治療劑，例如，如下文記載。進一步的實施例中，本發明提供抗-ZIKV抗體用於阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。一些實施例中，本發明提供抗-ZIKV抗體用於個體中阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞，包含對該個體投予治療有效量的抗-ZIKV抗體，以阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供抗-ZIKV抗體用於製造或製備醫藥的用途。一實施例中，該醫藥用於治療ZIKV感染。進一步的實施例中，該醫藥用於治療ZIKV感染的方法，包含對具有ZIKV感染的個體投予有效量的醫藥。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予宿效力的至少一額外治療劑，例如，如下文記載。進一步的實施例中，該醫藥用於阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。進一步的實施例中，該醫藥用於個體中阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV盡速宿主細胞的方法，包含對個體投予有效量的醫藥以阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供用於治療ZIKV感染的方法。一實施例中，該方法包含對具有ZIKV感染的個體投予有效量的抗-ZIKV抗體。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予有效量的至少一額外治療劑，如下文記載。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

進一步的態樣中，本發明提供用於個體中阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞的方法。一實施例中，該方法包含對個體投予有效例的抗-ZIKV抗體以阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。一實施例中，「個體」為人類。

進一步的態樣中，本發明提供包含本文所提供的抗-ZIKV抗體的醫藥調配物，例如，使用於上述治療方法之任一者。一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供抗-ZIKV抗體之任一者及醫藥可接受載體。另一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供抗-ZIKV抗體之任一者及至少一額外治療劑，例如，如下文記載。

進一步的態樣中，醫藥調配物係用於治療ZIKV感染。進一步的實施例中，醫藥調配物係用於阻斷ZIKV對宿主細胞的結合及/或ZIKV進入宿主細胞。一實施例中，醫藥調配物係投予至具有ZIKV感染的個體。根據上述實施例之任一者的「個體」較佳為人類。

一些實施例中，ZIKV感染可包括因ZIKV感染所引起獲相關的疾病及/或症狀，如發熱、發紅、頭痛、關節痛、紅眼及肌肉痛。

包含本文所提供的變體Fc區的多肽可使用於治療方法。

一態樣中，提供包含變體Fc區的多肽使用作為醫藥。一些實施例中，提供包含變體Fc區的多肽使用於治療方法。一些實施例中，本發明提供包含變體Fc區的多肽使用於治療具有疾患的個體的方法，包含對個體投予有效量的包含變體Fc區的多肽。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予有效量的至少一額外治療劑。一實施例中，該疾患為病毒感染。一實施例中，「個體」為人類。.

進一步的態樣中，本發明提供包含變體Fc區的多肽於製造或製備醫藥的用途。一實施例中，該醫藥用於治療疾患。一些態樣中，該多肽為抗體。一些態樣中，多肽為Fc融合蛋白質。進一步的實施例中，該醫藥用於治療疾患的方法，包含對具有疾患的個體投予有效量的醫藥。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予有效量的至少一額外治療劑。一實施例中，該疾患為病毒感染。一實施例中，該「個體」為人類。

進一步的態樣中，本發明提供用於治療疾患的方法。一實施例中，該方法包含對具有該疾患的個體投予有效量的包含變體Fc區的多肽。一該實施例中，該方法進一步包含對個體投予有效量的至少一額外治療劑。一實施例中，該疾患為病毒感染。一實施例中，該「個體」為人類。

進一步的態樣中，本發明提供包含本文所提供的包含變體Fc區的多肽的醫藥調配物，用於如本文所記載的治療方法之任一者的治療方法。一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供包含變體Fc區的多肽及醫藥可接受載體。另一實施例中，醫藥調配物包含本文所提供包含變體Fc區的多肽及至少一額外治療劑。

進一步的態樣中，醫藥調配物係用於治療疾患。一實施例中，該醫藥調配物係投予至具有疾患的個體。一實施例中，該疾患為病毒感染。一實施例中，該「個體」為人類。

包含本發明的變體Fc區的抗-病毒抗體可壓制利用傳統的抗-病毒抗體所觀察到的抗體-依賴性增強(ADE)。ADE為當病毒結合至抗體係經由活化FcγR而被吞噬，使得病毒對細胞的感染增強的現象。減低與活化FcγR的交互作用的Fc修飾能緩和ADE風險。突變於位置234及235由白胺酸成為丙胺酸以形成LALA突變體，已顯示減低活體內登革感染的ADE(Cell Host Microbe(2010)8,271-283)。然而，該等修飾藉由抗體減低其他起效子免疫功能，如ADCC及CDC。特別地，可期望CDC於抑制ADE中扮演重要角色，因此Fc區之補體成分C1q結合對於治療藥效不應被減低。再者，抗體半衰期可藉由改變對其挽救性受體，FcRn，的結合親和性的工程化Fc區而延伸，其可能導致用於預防病毒感染的抗體的預防性用途。

病毒較佳選自腺病毒(adenovirus)、星狀病毒(astrovirus)、嗜肝 DNA病毒(hepadnavirus)、皰疹病毒(herpesvirus)、乳多泡病毒(papovavirus)、痘病毒(poxvirus)、砂粒病毒(arenavirus)、布尼雅病毒(bunyavirus)、鈣病毒(calcivirus)、冠狀病毒(coronavirus)、絲狀病毒(filovirus)、黃病毒(flavivirus)、正黏病毒(orthomyxovirus)、副黏病毒(paramyxovirus)、小核糖核酸病毒(picornavirus)、里奧病毒(reovirus)、反轉錄病毒(retrovirus)、桿狀病毒(rhabdovirus)或披膜病毒(togavirus)。

較佳實施例中，腺病毒包括，但不限於人類腺病毒。較佳實施例中，星狀病毒包括，但不限於，哺乳動物星狀病毒(mamastrovirus)。較佳實施例中，嗜肝DNA病毒包括，但不限於，B型肝炎病毒。較佳實施例中，疱疹病毒包括，但不限於，疱疹簡單病毒I型、疱疹簡單病毒II型、人類巨細胞病毒(cytomegalovirus)、艾波斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、水痘帶狀皰疹病毒(varicella zoster virus)、玫瑰病毒(roseolovirus)及卡波西氏肉瘤相關皰疹病毒。較佳實施例中，乳多皰病毒包括，但不限於，人類乳突病毒及人類多瘤病毒。較佳實施例中，痘病毒包括，但不限於，天花病毒、牛痘病毒(vaccine cvirus)、乳牛痘病毒(cowpox virus)、猴痘病毒、小痘病毒、假牛痘病毒、丘疹性口炎病毒(papular stomatitis virus)、塔納痘病毒(tanapox virus)、雅巴猴瘤病毒(yaba monkey tumor virus)及傳染性軟疣病毒(molluscum contagiosum virus)。較佳實施例中，砂粒病毒包括，但不限於淋巴細胞性脈絡叢腦膜病毒(lymphocytic choriomeningitis virus)、拉薩病毒(lassa virus)、馬丘病毒(machupo virus)及胡寧病毒(junin virus)。較佳實施例中，布尼雅病毒包括，但不限於，漢他病毒(hanta virus)、內羅病毒(nairovirus)、正布尼雅病毒(orthobunyavirus)及白蛉屬病毒(phlebovirus)。較佳實施例中，鈣病毒包括，但不限於，囊病毒(vesivirus)、諾羅病毒(norovirus)如諾爾沃克病毒(Norwalk virus)及皂病毒(sapovirus)。較佳實施例中，冠狀病毒包括，但不限於，人類冠狀病毒(嚴重急性呼吸道症候群(SARS)的致病因子)。較佳實施例中，絲狀病毒包括，但不限於，伊波拉病毒(Ebola virus)及馬爾堡病毒(Marburg virus)。較佳實施例中，黃病毒包括，但不限於，黃熱病毒、西尼羅病毒(West Nile virus)、登革病毒(DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4)、C型肝炎病毒、蜱傳腦炎病毒(tick borne encephalitis virus)、日本腦炎病毒、墨累山谷腦炎病毒(Murray Valley encephalitis virus)、聖路易斯腦炎病毒(St.Louis encephalitis virus)、***春夏腦炎病毒(Russian spring-summer encephalitis virus)、鄂墨斯可出血熱病毒(Omsk hemorrhagic fever virus)、牛病毒性下痢病毒(bovine viral diarrhea virus)、克薩努森林症病毒(Kyasanus Forest disease virus)及波瓦森腦炎病毒(Powassan encephalitis virus)。較佳實施例中，正黏病毒包括，但不限於，流感病毒A型、流感病毒B行及流感病毒C型。較佳實施例中，副黏病包括，但不限於，副流感病毒、紅斑病毒(rubula virus)(腮腺炎(mumps))、麻疹病毒(morbillivirus)(麻疹(measles))、肺病毒如人類呼吸道滑液病毒及亞急性硬化性腦炎病毒。較佳實施例中，小核糖核酸病毒包括，但不限於，脊髓灰質炎病毒(poliovirus)、鼻病毒(rhinovirus)、克沙奇病毒A(coxsackievirus A)、克沙奇病毒B(coxsackievirus B)、A型肝炎病毒、埃可病毒(echovirus)及腸病毒。較佳實施例中，里奧病毒包括，但不限於，科羅拉多蜱熱病毒(Colorado tick fever virus)及輪狀病毒。較佳實施例中，反轉錄病毒包括，但不限於，慢病毒(lentivirus)如人類免疫缺乏病毒及人類嗜T-淋巴細胞性病毒(HTLV)。較佳實施例中，桿狀病毒包括，但不限於麗沙病毒(lyssavirus)如狂犬病毒(rabies virus)、水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus)及傳染性造血組織壞死症病毒(infectious hematopoietic necrosis virus)。較佳實施例中，披膜病毒包括，但不限於，α病毒如羅斯河病毒(Ross river virus)、奧絨絨病毒(O'nyong'nyong virus)、辛德必斯病毒(Sindbis virus)、委內瑞拉馬腦炎病毒(Venezuelan equine encephalitis virus)、東方馬腦炎病毒(Eastern equine encephalitis virus)及西方馬腦炎病毒(Western equine encephalitis virus)，及德國麻疹病毒(rubella virus)。

進一步的態樣中，本發明提供用於製備醫藥或醫藥調配物的方法，包含混合本文所提供的抗-DENV抗體之任一者與醫藥可接受載體，例如，使用於上述治療方法之任一者。一實施例中，用於製備醫藥或醫藥調配物的方法進一步包含對該醫藥或醫藥調配物添加至少一額外治療劑。

進一步的態樣中，發明提供用於製備醫藥或醫藥調配物的方法，包含混合本文所提供的抗-ZIKV抗體之任一者與醫藥可接受載體，例如，使用於上述治療方法之任一者。一實施例中，用於製備醫藥或醫藥調配物的方法進一步包含對該醫藥或醫藥調配物添加至少一額外治療劑。

本發明的抗體於療法中可單獨使用或與其他藥劑組合使用。例如，本發明的抗體可與至少一額外治療劑共投予。一些實施例中，額外治療劑為抗病毒劑，如，但不限於干擾素(例如，干擾素α-2b、干擾素-γ等)、抗-DENV單株抗體、抗-DENV多株抗體、RNA聚合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、螺旋酶抑制劑、免疫調節劑、反義化合物、短型干擾RNA、短型髮夾RNA、微小RNA、RNA適體、核糖酶及其組合。

進一步的態樣中，本發明提供用於製備醫藥或醫藥調配物的方法，包含混合本文所提供的包含變體Fc區的多肽與醫藥可接受載體，例如，使用於上述治療方法之任一者。一實施例中，用於製備醫藥或醫藥調配物的方法進一步包含對該醫藥或醫藥調配物添加至少一額外治療劑。

包含本發明的變體Fc區的多肽於療法中可單獨使用或與其他劑組合使用。例如，本發明之包含變體Fc區的多肽可與至少一額外治療劑共投予。一些實施例中，額外治療劑為抗病毒劑，如，但不限於干擾素(例如，干擾素α-2b、干擾素-γ等)、抗-病毒單株抗體、抗-病毒多株抗體、RNA聚合酶抑制劑、蛋白酶抑制劑、螺旋酶抑制劑、免疫調節劑、反義化合物、短型干擾RNA、短型髮夾 RNA、微小RNA、RNA適體、核糖酶及其組合。

應注意上述該等組合療法涵蓋組合投予(其中二或更多種治療劑係包括於相同或分開的調配物中)，及分開投予，此情況中，抗體或包含本發明的變體Fc區的多肽的投予可於該額外治療劑(類)的投予之前、同時、或之後投予。一實施例中，抗-DENV抗體的投予及額外治療劑的投予可發生於彼此的約一個月內，或約一、二或三週內，或約一、二、三、四、五或六日內。另一實施例中，包含本發明的變體Fc區的多肽的投予及該額外治療劑的投予可發生於彼此的約一個月內，或約一、二或三週內，或約一、二、三、四、五或六日內。

抗體或包含本發明之變體Fc區的多肽(以及任何額外治療劑)可藉由任何合適手段投予，包括腸道外、肺內及鼻內，及期望時用於局部治療、病灶內投予。腸道外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、或皮下投予。用藥可為任何合適途徑，例如，藉由注射如靜脈內或皮下注射，部分取決於投予是否為簡明的慢性的。各種用藥排程，包括但不限於在各種時間期間單一投予或多次投予、濃注投予及脈衝投予，皆涵蓋於本文中。

抗體或包含本發明之變體Fc區的多肽將可調配為、用藥為級投予為與優良藥品規範一致的方式。於此全文中所考量的因子包括欲治療的實際疾患、欲治療的實際哺乳動物、個體患者的臨床條件、疾患成因、遞送藥劑的位點、投予方法、投予排程及醫藥操作者所習知的其他因子。該藥劑不必，但是視需要地與目前使用於預防或治療所疑問的疾患的一或多種藥劑調配。該等其他藥劑的有效量取決於調配物中存在的藥劑量、疾患或治療類型及上述討論的其他因子。該等通常以與本文所記載的相同劑量及投予途徑使用，或本文所記載的劑量的約1至99%，或以經由經驗/臨床所測定為合適的任何劑量及任何途徑。

對於疾病的預防或治療，本發明之抗體或包含變體Fc區的多肽 (當單獨使用或與一或多種其他治療劑組合使用時)的合適劑量將取決於與治療的疾病類型、抗體類型、包含變體Fc區的多肽的類型、疾病的嚴重度及進展、抗體或包含變體Fc區的多肽是否投予用於預防或治療目的、之前的療法、對於抗體或包含變體Fc區的多肽患者的臨床歷史及回應、及到場醫師的判斷。抗體或包含變體Fc區的多肽系適合投予至患者一次或歷經系列治療。取決於疾病的類型及嚴重度，約1μg/kg至15mg/kg(例如，0.1mg/kg-10mg/kg)的抗體或包含變體Fc區的多肽可為用於投予給患者的起始候選劑量，舉例而言，無論是藉由一或多個分開投予或藉由連續輸注。一個典型的每日劑量範圍可由約1μg/kg至100mg/kg或更多，取決於上述因子。對於重複投予歷時數日或更久，取決於條件，治療通常將持續直到疾病症狀發生所期望的壓制。抗體或包含變體Fc區的多肽的一個例示性劑量為範圍由約0.05mg/kg至約10mg/kg。因此，一或多個劑量約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)可投予至患者。該等劑量可間歇性地投予，例如每週或每三週(例如，使患者接受由約二至約二十，或例如約六劑量的抗體或包含變體Fc區的多肽)。起始較高負荷劑量，接著可投予一或多種較低劑量。此療法的進展係容易地藉由傳統技術及測試所監控。

應瞭解上述調配物或治療方法之任一者，可使用本發明之免疫接合物替代或外加於抗-DENV抗體或抗-ZIKV抗體而實施。類似地應了解上述調配物或治療方法之任一者，可使用本發明之免疫接合物替代或外加於本文所提供的包含變體Fc區的多肽而實施。

H. 物件製造

本發明另一態樣中，提供含有有用於治療、預防及/或診斷上文所記載的疾患的材料的物件製造。物件製造包含容器及與容器相關的標籤仿單或包裝內插文件。合適容器包括，舉例而言，瓶、小管、注射器、IV溶液袋等。容器可由各種材料形成，如玻璃或塑膠。容器收容組成物，該組成物本身或與另一種有效於治療、預防及/或診斷狀況的組成物組合，並且可具有無菌接續入口(例如，該容器可為藉由皮下注射針頭的靜脈內溶液袋或具有可刺穿的塞子的小瓶)。組成物中的至少一活性成分為本發明的抗體或包含變體Fc區的多肽。標籤仿單或包裝內插文件指示該組成物用於治療所選擇的狀況。再者，物件製造可包含(a)具有包含於其中的組成物的第一容器，其中該組成物包含本發明的抗體或包含變體Fc區的多肽；及(b)具有包含於其中的組成物的第二容器，其中該組成物包含進一步的細胞毒性活其他治療劑。本發明此實施例中的製造物件可進一步包含指示該組成物可使用於治療特定狀況的包裝內插文件。替代地，替代地，或額外地，製造物件可進一步包含第二(或第三)容器，該容器包含醫藥可接受緩衝液，如用於注射的制菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液及葡萄糖溶液。其可進一步包括由商業取得或使用者處所期望的其他材料，包括緩衝液、稀釋劑、針及注射器。

應瞭解上述任何製造物件之任一者，可包括本發明之免疫接合物替代或外加於抗-DENV抗體或抗-ZIKV抗體。類似地應了解上述任何製造物件之任一者，可包括本發明之免疫接合物替代或外加於包含變體Fc區的多肽。

III. 實施例

下述為本發明的方法及組成物的實例。應當理解鑑於以上所提供的一般描述，可實踐各種其他實施例。實施例

實施例1：抗原及抗體的製備

來自DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4之重組可溶性E蛋白質的表現及純化

使用FreeStyle293-F細胞株或Expi293細胞株(Thermo Fisher,Carlsbad,CA,USA)來瞬時表現來自DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4之具有羧基終端8x組胺酸標誌(分別為SEQ ID NOs：65-68)的重組可溶性E蛋白質(0.8E-His)。藉由表現來自DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4之prM0.8E-His(分別為SEQ ID NOs：61-64)，prM0.8E-His係於細胞中表現為單一多肽。然後其經細胞內處理以於prM與0.8E-His之間被裂解。結果，0.8E-His被分泌至細胞培養基。含有0.8E-His的條件化培養基施用至填有帶有鎳或鈷之固定化金屬親和性層析(IMAC)樹脂的管柱，接著以咪唑沖提。匯集含有0.8E-His的分液且施用至Superdex 200凝膠過濾管柱(GE healthcare,Uppsala,Sweden)。匯集含有0.8E-His的分液且儲存於-80℃。

重組人類FcγR的表現及純化

人類FcγR的細胞外域係藉由下述方法製備。首先，FcγR的細胞外域的基因，係藉由所屬技術領域中具有通常知識者習知的方法合成。此時，各FcγR的序列係基於註冊於NCBI的資訊而製造。具體地，FcγRIa係基於NCBI登錄編號NM_000566(Version No.NM_000566.3)的序列而製造，FcγRIIa係基於NCBI登錄編號NM_001136219(Version No.NM_001136219.1)的序列而製造，FcγRIIb係基於NCBI登錄編號NM_004001(Version No.NM_004001.3)的序列而製造，FcγRIIIa係基於NCBI登錄編號NM_001127593(Version No.NM_001127593.1)的序列而製造，及FcγRIIIb係基於NCBI登錄編號NM_000570(Version No.NM_000570.3)的序列而製造，且His標誌係附接於各FcγR構築物的C終端。再者，對於FcγRIIa、FcγRIIIa及FcγRIIIb，已知多型性的存在，而多型性位點的製造，對於FcγRIIa係藉由參照Warmerdam et al.(J Exp Med(1990)172,19-25)；對於FcγRIIIa係藉由參照Wu et al.(J Clin Invest(1997)100,1059-1070)for FcγRIIIa；及對於FcγRIIIb係藉由參照Ory et al.(J Clin Invest(1989)84,1688-1691)。

表現載體係藉由將所獲得基因片段***至動物細胞表現載體而構築。所構築的載體被瞬時導入至人類胚胎腎癌細胞株衍生的FreeStyle293細胞(Invitrogen)以表顯感興趣的蛋白質。將藉由自上述經進行瞬時導入的細胞的培養基所獲得的培養上清液通過0.22-μm過濾器過濾所製備的液體純化，主要係藉由下述四步驟：(i)陽離子交換管柱層析(SP Sepharose FF)；(ii)對於His-標誌的親和性管柱層析(HisTrap HP)；(iii)凝膠過濾管柱層析(SuperdeX₂00)；及(iv)無菌過濾。為純化FcγRI，將利用Q sepharose FF的陰離子交換管柱層析使用於步驟(i)。經純化蛋白質的吸收使用分光光度計於280nm測定。基於測定值，經純化蛋白質的濃度使用藉由例如PACE的方法所測定的消光係數計算(Protein Science(1995)4,2411-2423)。

重組小鼠FcγR的表現及純化

小鼠FcγR(mFcγR)的細胞外域係藉由下述方法製備：首先，FcγR細胞外域基因係藉由所屬技術領域中具有通常知識者習知的方法合成。對於此合成，各FcγR的序列係基於註冊於NCBI的資訊被製備。具體地，mFcγRI係基於NCBI參考序列：NP_034316.1的序列而製備；mFcγRIIb係基於NCBI參考序列：NP_034317.1的序列而製備；mFcγRIII係基於NCBI參考序列：NP_034318.2的序列而製備；及mFcγRIV係基於NCBI參考序列：NP_653142.2的序列而製備。該等序列之各者係利用His標誌被標至於C-終端。

所獲得基因片段之各者係***至用於動物細胞中表現的載體以製備表現載體。所製備的表現載體被瞬時移轉至人類胚胎腎癌細胞株衍生的FreeStyle 293細胞(Invitrogen)以表現感興趣的蛋白質。將所獲得之培養上清液回收並0.22-μm過濾器以獲得培養上清液。原則上係藉由下述四步驟純化所獲得之培養上清液：(i)離子交換管柱層析，(ii)對於His-標誌的親和性管柱層析(HisTrap HP)，(iii)凝膠過濾管柱層析(Superdex 200)，及(iv)無菌過濾。步驟(i)的離子交換管柱層析的進行，對於mFcγRI係使用Q Sepharose HP，對於mFcγRIIb及mFcγRIV係使用SP Sepharose FF，及對於mFcγRIII係使用SP Sepharose HP。D-PBS(-)係於步驟(iii)或之後使用為溶劑，而對於mFcγRIII，係使用含有0.1M精胺酸的D-PBS(-)。各經純化蛋白質的吸收使用分光光度計於280nm測定，而經純化蛋白質的濃度使用藉由例如PACE的方法從所獲得之值計算出的消光係數來計算(Protein Science(1995)4,2411-2423)。

重組人類FcRn的表現及純化

FcRn為FcRn α鏈及β2-微球蛋白的雜二聚體。寡-DNA引子係基於公開的人類FcRn基因序列(J Exp Med(1994)180,2377-2381)來製備。編碼全蛋白質的DNA片段係使用人類cDNA(Human Placenta Marathon-Ready cDNA,Clontech)作為模板及所製備的引子藉由PCR而製備。使用所獲得的DNA片段作為模板，編碼含有信號區域(Metl-Leu290)的細胞外域的DNA片段藉由PCR擴增，且***至哺乳動物細胞表現載體。類似地，寡-DNA引子係基於公開的人類β2-微球蛋白基因序列(Proc Natl Acad Sci USA(2002)99,16899-16903)來製備。編碼全蛋白質的DNA片段使用人類cDNA(Human Placenta Marathon-Ready cDNA,Clontech)作為模板及所製備的引子藉由PCR製備。使用所獲得的DNA片段作為模板，編碼含有信號區域(Met1-Met119)的全蛋白質的DNA片段藉由PCR擴增，且***至哺乳動物細胞表現載體。

可溶性人類FcRn係藉由下述步驟表現。將構築用於表現人類FcRn α鏈(SEQ ID NO：81)及β2-微球蛋白(SEQ ID NO：82)的質體，使用PEI(Polyscience)藉由脂轉染方法導入至人類胚胎腎癌衍生的細胞株HEK293H(Invitrogen)。收集所得培養上清液，及FcRn係使用IgG Sepharose 6 Fast Flow(Amersham Biosciences)純化，接著使用HiTrap Q HP(GE Healthcare)進一步純化(J Immunol(2002)169,5171-5180)。

重組抗體的表現及純化

使用FreeStyle293-F細胞株或Expi293細胞株(Thermo Fisher,Carlsbad,CA,USA)來瞬時表現重組抗體。從表現抗體的條件化培養基的純化係使用蛋白質A利用傳統方法完成。需要時進一步進行凝膠過濾。

重組可溶性人類CD154的表現及純化

人類CD154基因係基於公開的蛋白質序列(NP_000065.1)合成。編碼可溶性形式的具有FLAG標誌的人類CD154(shCD154)的DNA片段，係使用所合成的DNA作為模板藉由PCR來製備，而所得DNA片段係經***至哺乳動物細胞表現載體，藉此製造FLAG-shCD154(SEQ ID NO：106)表現載體。所獲得表現載體的核苷酸序列係使用所屬技術領域中具有通常知識者所知的傳統方法測定。FLAG-shCD154係使用FreeStyle 293細胞株(Invitrogen)如製造商所提供的方案所記載來表現。轉染後，於條件化培養基收集前使細胞生長合適的時間。使用25mM MES(pH6.0)對條件化培養基進行陽離子交換層析，及以連續梯度25mM MES，1M NaCl(pH6.0)沖提FLAG-shCD154。匯集峰分液，使用AmiconUltra Ultracel濃縮且使用磷酸鹽緩衝鹽水進行凝膠過濾層析(Wako)。再次匯集峰分液且使用AmiconUltra Ultracel濃縮後，之後以0.22微米PVDF膜過濾器藉由過濾而無菌化。為了測定經純化FLAG-shCD154的濃度，使用分光光度計測定於280nm的吸收。蛋白質濃度係藉由使用記載於Protein Science(1995)4：2411-2423的方法所計算的吸收係數由測定值來計算。

實施例2：對於DENV E蛋白質具有改良親和性的抗體變體的產生

合成編碼抗-DENV E蛋白質抗體的VH(3CH，SEQ ID NO：1)及VL(3CL，SEQ ID NO：7)的基因且分別與人類IgG1 CH(SG182，SEQ ID NO：46)及人類CL(SK1，SEQ ID NO：60)組合，及該二構築物經選殖至單一表現載體。抗體於本文中指稱為DG_3CH-SG182/3CL-SK1或為3C。

檢測數種突變及其組合以鑑定改良3C的結合性質的突變及組合。然後多種突變經導入至可變區以增強對E蛋白質的結合親和性。由此產生最適化VH變體3CH912(SEQ ID NIO：2)、3CH953(SEQ ID NO：3)、3CH954(SEQ ID NO：4)、3CH955(SEQ ID NO：5)、3CH1047(SEQ ID NO：6)、3CH987(SEQ ID NO：90)、3CH989(SEQ ID NO：91)、3CH992(SEQ ID NO：92)、3CH1000(SEQ ID NO：93)、3CH1046(SEQ ID NO：94)、3CH1049(SEQ ID NO：95)，及最適化VL變體3CL499(SEQ ID NO：8)、3CL563(SEQ ID NO：9)、3CL658(SEQ ID NO：10)、3CL012(SEQ ID NO：96)、3CL119(SEQ ID NO：97)、3CL633(SEQ ID NO：98)、3CL666(SEQ ID NO：99)、3CL668(SEQ ID NO：100)。編碼VH的基因係與人類IgG1 CH(SG182,SEQ ID NO：46；SG1095,SEQ ID NO：54；或SG1106,SEQ ID NO：59之一個)組合，而編碼VL的基因係與人類CL(SK1,SEQ ID NO：60)組合。其各者係經選殖至表現載體。抗體變體的胺基酸序列係總結於表2。變體之一者，DG_3CH1047-SG182/3CL658-SK1，於本文中亦指稱為3Cam以及另一變體，DG_3CH1047-SG182/3CL-SK1，於本文中亦指稱為3Cam2。

抗體係表現於經以重鏈及輕鏈表現載體共轉染的HEK293細胞，及藉由蛋白質A純化。

表2 3C及3C變體的胺基酸序列

抗-DENV E蛋白質抗體結合至DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4的E蛋白質的親和性係於25℃使用Biacore T200儀器(GE Healthcare)來測定。抗-組胺酸抗體(GE Healthcare)係使用胺偶合套組(GE Healthcare)被固定至CM4感測晶片的所有流體槽(flow cell)。所有抗體及分析物係製備於含有20mM磷酸鈉、150mM NaCl、0.05% Tween 20及0.005% NaN₃之PBS，pH 7.4。具有C-終端His-標誌的DENV-1、DENV-2、DENV-3及DENV-4的E蛋白質係被捕捉至流體槽2或3，利用流體槽1作為對照流體槽(reference flow)。E蛋白質的捕捉程度係目標為200共振單位(RU)。以250nM注射抗-DENV E蛋白質抗體至全部感測器表面180秒，接著解離300秒。感測器表面於各循環後使用10mM Gly-HCl pH1.5予以再生。結合親和性係藉由處理及擬合數據至1：1結合模型而使用Biacore T200評估軟體，version 2.0(GE Healthcare)測定。

表3a及3b顯示抗-DENV E蛋白質抗體結合至DENV-1(表中記載為DV1)、DENV-2(表中記載為DV2)、DENV-3(表中記載為DV3)及DENV-4(表中記載為DV4)的E蛋白質的親和性(K_d)。相較於親代3C，各3C變體對於所有四種DENV血清型顯示增加的結合親和性。作為例子，親代抗體3C(DG_3CH-SG182/3CL-SK1)及變體抗體之一者3Cam(DG_3CH1047-SG182/3CL658-SK1)的傳感圖顯示於圖1。又，親代抗體3C(DG_3CH-SG182/3CL-SK1)及變體抗體之一者3Cam2(DG_3CH1047-SG182/3CL-SK1)的傳感圖顯示於圖12。

表3a對於所有四種DENV血清型的3C及3C變體的KD值

表3b對於DENV1及DENV3血清型的3C及3C變體的KD值

實施例3：用於經改良性質的抗體CH變體的產生

多種突變經導入至人類IgG1重鏈恆定區CH(SG182，SEQ ID NO：46)，且其結果，產生人類IgG1 CH變體SG192(SEQ ID NO：47)、SG1085(SEQ ID NO：48)、 SG1086(SEQ ID NO：49)、SG1087(SEQ ID NO：50)、SG1088(SEQ ID NO：51)、SG1089(SEQ ID NO：52)、SG1090(SEQ ID NO：53)、SG1095(SEQ ID NO：54)、SG1096(SEQ ID NO：55)、SG1097(SEQ ID NO：56)、SG1098(SEQ ID NO：57)、SG1105(SEQ ID NO：58)、SG1106(SEQ ID NO：59)、SG1109(SEQ ID NO：107)、SG1044(SEQ ID NO：108)及SG1045(SEQ ID NO：109)。編碼CH變體的基因與3C的VH(3CH，SEQ ID NO：1)、3C變體之一者的VH(3CH1047，SEQ ID NO：6)或抗-CD154抗體的VH(SLAPH0336a，SEQ ID NO：88)組合。抗-CD154抗體的VL基因(SLAPL0336a，SEQ ID NO：89)與人類CL(SK1，SEQ ID NO：60)組合。其等之各者經選殖至表現載體。CH變體的詳細內容總結於表4。使用可於三聚體抗原CD154存在下形成大免疫複合物之抗-CD154抗體SLAPH0336a/SLAPL0366a的可變區，以便評估CH變體對各Fc受體的結合性(avidity)結合。

抗體被表現於經以重鏈及輕鏈表現載體的混合物共轉染的HEK293細胞，及藉由蛋白質A被純化。

實施例4：具有Fc變體的抗體對於補體C1q的結合親和性人類C1q結合測試

具有Fc變體的抗-CD154抗體(內部抗體(in-house antibody)，其係使用記載於實施例3的方法產生)分散至Nunc-ImmunoPlate MaxiSorp(Nalge Nunc International)且使其於4℃靜置隔夜。利用PBST清洗後，利用含有0.5% BSA及1×Block Ace：Blocking Reagent(DS Pharma)的TBST將盤於室溫封阻2小時。清洗盤後，人類C1q(Calbiochem)分散至盤，且使其於室溫靜置1小時。清洗盤，及添加HRP-標記抗-人類C1q抗體(Bio Rad)以於室溫反應1小時，並進行清洗。後續地，添加TMB受質(Invitrogen)。藉由讀盤儀於波長450nm(測試波長)及570nm(對照波長)測量信號。具有野生型Fc區的抗體(WT)對人類C1q的結合親和性係藉由導入LALA突變至Fc區而消除，及該對人類C1q經消除的結合親和性係除了LALA突變外藉由進一步導入KWES、EFT或EFT+AE而回復(圖2)。LALA+KMES突變些為增加結合親和性，而LALA+KWES、LALA+KAES及LALA+KEES突變體以與WT相當的親和性結合至C1q(圖3)。上述LALA或LALA+KAES突變體的結合性質不受進一步導入ACT3或ACT5突變所影響(圖4)。

小鼠C1q結合測試

具有Fc變體的抗-CD154抗體(內部抗體，其係使用記載於實施例3的方法產生)分散至Nunc-ImmunoPlate MaxiSorp(Nalge Nunc International)且使其於4℃靜置隔夜。利用PBST清洗後，利用含有0.5% BSA及1×Block Ace：Blocking Reagent(DS Pharma)的TBST將盤於4℃封阻7小時。清洗盤後，10%小鼠血漿(Innovative Research)分散至盤，且使其於4℃靜置隔夜。清洗盤，及添加生物素化抗-小鼠 C1q抗體(Hycult Biotech)以於室溫反應1小時，並進行清洗。添加鏈親合素-HRP (Pierce)於室溫反應1小時，並進行清洗。後續地，添加ABTS ELISA HRP售質(KPL)。藉由讀盤儀於波長405nm測量信號。具有野生型Fc區的抗體(WT)對小鼠C1q的結合親和性係藉由導入LALA突變至Fc區而消除，及該對小鼠C1q經消除的結合親和性係除了LALA突變外藉由進一步導入KAES而回復。上述LALA或LALA+KAES突變體的結合性質不受進一步導入ACT3或ACT5突變所影響(圖5)。

實施例5：對於Fc變體結合至FcγR及FcRn的Biacore分析

Fc變體朝向人類或小鼠FcγR及人類FcRn於pH 7.4的結合，係於25℃使用Biacore T200儀器(GE Healthcare)測定。所有抗體及FcγR或FcRn係製備於含有50mM Na-磷酸鹽、150mM NaCl、0.05% Tween 20、0.005% NaN₃的PBS-P pH 7.4。對於FcγR結合測試，抗-組胺酸抗體(GE Healthcare)係使用胺偶合套組(GE Healthcare)被固定至CM4感測晶片的所有流體槽。FcγR之各者係藉由抗-組胺酸抗體被捕捉於流體槽2、3或4，以流體槽1作為對照流體槽。FcγR捕捉程度係目標於400共振單位(RU)。所有抗體以100nM注射於所有流體槽。免疫複合物藉由混合1：1莫耳比例之抗體與三聚體CD54來製備，且於室溫培育1小時。感測器表面於各循環後使用10mM甘胺酸-HCl，pH 1.5予以再生。

對於FcRn結合測試，Biotin CAPture Reagent(GE Healthcare)係使用Biotin CAPture套組(GE Healthcare)被固定至CAP感測晶片的流體槽1及2二者。生物素化-FcRn係被捕捉於流體槽2而以流體槽1作為對照流體槽。FcRn捕捉程度係目標於400RU。所有抗體以100nM注射於流體槽1及2。免疫複合物藉由混合1：1莫耳比例之抗體與三聚體CD54來製備，且於室溫培育1小時。感測器表面於各循環後使用8M胍-HCl，1M NaOH(3：1 vol/vol)予以再生。

結合程度係經標準化(normalized)至對應的FcγR或FcRn的捕捉程度。抗體單獨或免疫複合物(抗體及三聚體CD154抗原)朝向人類或小鼠FcγR及人類FcRn的結合，係基於結合回應予以監測。使用免疫複合物以評估經由結合性(avidity)功效朝向FcγR或FcRn之增強的結合。對於人類FcγR1a、FcγR2a 167H及167R、FcγR2b、FcγR3a 158F及158V、FcγR3b NA1及NA2的結果示於圖6(a)-(h)。對於小鼠FcγR1、FcγR2b、FcγR3、FcγR4的結果示於圖7(a)-(d)。對於試驗的FcγR的各者，野生型Fc區(記載為WT IgG)的結合藉由導入LALA、LALA+KAES或LALA+KWES突變至Fc區而顯著降低。使用抗體單獨(記載為Ab單獨)之測定及免疫複合物(記載為CD154 IC)之測定之間的傾向為大致相同。對於試驗的FcγR多數，KAES或KWES突變體的結合，相較於WT IgG，並未大幅地減低。對於人類FcRn的結果示顯於圖8。野生型Fc區(記載為hIgG1)對人類FcRn的結合並未顯示受到影響，即便在導入LALA或LALA+KAES突變至Fc區後。結合藉由進一步地導入ACT3或ACT5突變而稍為增強但仍維持相對地低(圖8)。

實施例6：抗-DENV抗體對於DENV感染的活體內效力

將6-8週齡的AG129小鼠係以10⁶溶菌斑形成單位(pfu)的DENV-2株D2Y98P腹膜內感染。48小時後，將小鼠以於P1緩衝液中的1至30μg抗體處理。抗體經由眼窩後(retro-orbital)途徑靜脈內注射。進一步經24小時後，亦即起始感染72小時後，收集血液。在先前的研究中(Zust et al,J Virol(2014)88,7276-7285；Tan et al,PLOS Negl Trop Dis(2010)4,e672)，已確認以D2Y98P感染後峰病毒血症(peak viremia)於感染後第3至4日之間達到。由來自各小鼠的血漿抽出病毒RNA且進行定量PCR並與於溶菌班測試中具有已知感染性的DENV-2標準品比較。相較於此小鼠模型中的PBS對照，3C及3Cam抗體二者大幅地減低病毒血症，且該二抗體的效力為相當的。於Fc區具有LALA+KAES突變的抗體，相較於僅具有LALA突變的抗體，顯示較強的效力。此係適用於3C及3Cam抗體二者(圖9)。此結果指示藉由添加KAES突變至LALA突變的C1q結合活性的回復有助於抗體的抗病毒效力。

將6-8週齡的AG129小鼠係以10⁶-10⁷溶菌斑形成單位(pfu)的DENV病毒(DENV-1株08K3126、DENV-2株D2Y98P、DENV-3株VN32/96、DENV-4株TVP360)腹膜內感染。48小時後，將小鼠以於P1緩衝液中的1至30μg抗體處理。抗體經由眼窩後途徑靜脈內注射。進一步經24小時後，亦即起始感染72小時後，收集血液。在先前的研究中(Zust et al,J Virol(2014)88,7276-7285；Tan et al,PLOS Negl Trop Dis(2010)4,e672)，已確認以D2Y98P感染後峰病毒血症於感染後第3至4日之間達到。由來自各小鼠的血漿抽出病毒RNA且進行定量PCR並與於病灶形成測試中具有已知感染性的DENV標準品比較。具有相同Fc變體(LALA+KAES)的3C及3Cam2抗體二者，相較於P1緩衝液對照，於此小鼠模型中大幅地減低病毒血症，及相較於3C抗體，3Cam2抗體減低病毒血症(圖10)。

於Fc區具有LALA+KAES突變的3Cam2，相較於僅具有LALA突變的抗體，隨著所投予抗體的劑量增加而顯示較強的效力(圖11)。此結果指示藉由添加KAES突變至LALA突變之C1q結合活性的回復有助於抗體的抗病毒效力。

雖然為了清楚理解的目的，前述發明已藉由說明和實施例詳細地描述，但是說明和實施例不應被解釋為限制本發明的範疇。本文引用的所有專利和科學文獻的公開內容明確地以全文參考方式併入。

實施例7：登革-特異性抗體3C及3Cam2對於茲卡病毒的交叉反應性的活體外試驗

7.1. FRNT測試

為了試驗DG_3CH1047-SG1106/3CL_SK1(或3Cam2-LALA+KAES+ACT5) 對茲卡的中和能力，進行病灶減低中和(focus-reduction neutralization,FRNT)測試。結果顯示相較於DG_3CH-SG1106/3CL_SK1(或3C-LALA+KAES+ACT5)，3Cam2-LALA+KAES+ACT5針對茲卡具有較高的中和能力(圖13)。對於茲卡病毒的平均中和能力或EC50係提供於表5。

試驗抗體的序列係如下述：

˙3Cam2：

DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG182(SEQ ID NO：46)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

˙3Cam2-LALA+KAES：

DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG1095(SEQ ID NO：54)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

˙3Cam2-LALA+KAES+ACT5：

DG_3CH1047(SEQ ID NO：6)-SG1106(SEQ ID NO：59)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

˙3C：

DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG182(SEQ ID NO：46)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

˙3C-LALA：

DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG192(SEQ ID NO：47)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

˙3C-LALA+KAES+ACT5：

DG_3CH(SEQ ID NO：1)-SG1106(SEQ ID NO：59)/3CL(SEQ ID NO：7)_SK1(SEQ ID NO：60)

7.2. 利用茲卡病毒的ADE測試

為了試驗相較於野生型Fc版本的抗體，3Cam2-LALA+KAES+ACT5是否不僅廢除DENV感染的增強也廢除茲卡病毒感染的增強，發明人使用K562細胞進行ADE測試(圖14)。方法係相同於使用於DENV者。對於野生型Fc版本之DG_3CH1047-SG182/3CL_SK1(或3Cam2)觀察到增強，但對於其Fc-變體DG_3CH1047-SG1095/3CL_SK1(或3Cam2-LALA+KAES)及3Cam2-LALA+KAES+ACT5(圖14A)則未觀察到增強。此實驗利用新批次的3Cam2 Ab重複進行，確認藉由Fc-變體抗體的增強廢除。

綜上，數據證明LALA突變廢除DENV及茲卡病毒感染二者增強，且額外的KAES及ACT5突變不回復LALA的功效。

7.3. 活體外方法

7.3.1. 病毒

茲卡病毒(亞洲株，登錄編號KF993678)係由新加坡環境衛生署獲得。此病毒生長於C6/36細胞(ATCC)且如下述使用病灶形成測試予以定量：感染前20至24小時，1×10⁵ BHK-21細胞係每孔接種至24-孔盤且於37℃，5% CO₂，培養隔夜。含有病毒的上清液係系列稀釋1：100至1：100,000且以體積500μL於細胞單層(cell monolayer)上於37℃，5% CO₂培養2-3小時。培養結束時，各孔覆以0.5mL於RPMI中的0.8%甲基-纖維素。盤於37℃，5% CO₂培養4½日。

為了經感染細胞的染色，移除具有甲基纖維素的細胞培養基且將細胞以3.7%甲醛固定30分鐘。移除甲醛後，盤以自來水清洗且細胞使用於1X PBS中的1%Triton X-100滲透。另一清洗步驟後，使用經稀釋於1%FBS/1XPBS的抗體4G2來將經感染的細胞染色，接著與經稀釋1：2,000於1%FBS/1XPBS中的多株山羊抗-小鼠HRP培育。Trueblue過氧化酶受質(KPL)使用於成色反應。對於各孔手動計數病灶且基於由可計數各孔的計數平均計算起始濃度。

7.3.2. FRNT測試

感染前20至24小時，1×10⁵ BHK-21細胞係每孔接種至24-孔盤且於37℃，5% CO₂，培養隔夜。將抗體稀釋物製備於96 U-底無菌盤於RPMI培養基中及添加恆定量的病毒。於添加至細胞前，此混合物於37℃，5%CO₂，培養30分鐘。來自24-孔盤的隔夜培養基以新鮮的450μL 5% FBS/RPMI置換及50μL病毒/抗體混合物添加至各孔且於於37℃，5%CO₂，培養2-3小時。

培養結束時，各孔覆以0.5mL於RPMI中的0.8%甲基-纖維素。盤於37℃，5% CO₂培養4½日。

為了經感染細胞的染色，移除具有甲基纖維素的細胞培養基且細胞利用3.7%甲醛固定30分鐘。移除甲醛後，盤以自來水清洗且細胞使用於1X PBS中的1%Triton X-100滲透。另一清洗步驟後，使用經稀釋於1%FBS/1XPBS的抗體4G2來將經感染的細胞染色，接著與經稀釋1：2,000於1%FBS/1XPBS中的多株山羊抗-小鼠HRP培育。Trueblue過氧化酶受質(KPL)使用於成色反應。對於各孔手動計數病灶且使用Prism軟體(三參數曲線-擬合)計算EC50值。

7.3.3. K562 ADE測試

6×10⁴ K562細胞/孔於RPMI/10%FCS培養基中係接種至96-孔圓底組織培養盤且培養隔夜。抗體的系列稀釋物係製備於分開的圓底盤及添加恆定量的病毒。將此混合物於添加50μL至K562細胞前，於37℃培養30分鐘。使用MOI為1。於添加抗體/病毒混合物之前，移除隔夜培養基。於37℃培養90分鐘後，添加RPMI，10% FCS以進一步培養2.5日。然後於抗-E抗體4G2-Alexa647及抗-NS1-Alexa488染色前，將細胞利用Cytofix/Cytoperm溶液(Becton Dickinson)固定。將樣品以96-孔HTS單位(BD)於FACS Verse細胞流式儀分析。

實施例8：登革-特異性抗體抗體3C及3Cam2針對茲卡病毒感染的保護能力的活體內試驗

8.1. 治療性抗體療法的效力

由於AG129小鼠為高度地易感於茲卡病毒且屈服於感染即使較早於DENV感染後，所以我們選擇IFNAR模型用於茲卡來替代。

IFNAR小鼠系缺乏於I型IFN受體(IFNAR)，但正常地表現II型或IFNγ受體(IFNGR)。

10⁴pfu/小鼠的病毒劑量係基於先前文獻[Cell Host Microbe.2016；19(5)：720-30.doi：10.1016/j.chom.2016.03.010.]選擇。所使用的茲卡株係在加拿大從自泰國返回的旅客於加拿大單離。該病毒株係來自亞洲譜系(lineage)。小鼠以劑量100μg的抗體處理。

相較於以P1緩衝液處理得對照，於茲卡感染後二日以3Cam2-LALA+KAES+ACT5處理的小鼠，於感染後第3日及第5日具有顯著較低的病毒血症。3Cam2-LALA+KAES+ACT5相較於3C-LALA+KAES+ACT5更有效地降低病毒血症(圖15)。存活分析中，相對於P1-處理小鼠於感染15日後全部死亡，該二經抗體處理的群組存活到至少50日(試驗終點)(圖16)。

8.2. 活體內方法

8.2.1. 用於活體內處理的抗體製備

抗體於P1緩衝液(20mM His,150mM Arg-Asp,pH6.0)中濃縮至數milligrams/mL且於活體內處理前快速地於P1緩衝液中稀釋至所需要濃度。

8.2.2. 小鼠

如所示的，AG129小鼠或IFNAR小鼠係使用於活體內試驗。AG129小鼠係由B&K Universal,UK購得。IFNAR小鼠(B6.129S2-Ifnar1tm1Agt/Mmjax)係由The Jackson Laboratory(US)購得。

8.2.3. 治療處理

小鼠以10⁴pfu/小鼠進行腹膜內(i.p.)感染。感染48小時後，將小鼠以異氟烷麻醉以靜脈內(i.v.)注射抗體。將抗體稀釋於P1緩衝液且以體積100μL眼窩後注射。

實施例9：3Cam2-LALA+KAES+ACT5針對茲卡病毒的活體外效價(potency)

9.1 結合

測量DG_3CH-SG182/3CL_SK1(或3C)、DG_3CH-SG192/3CL_SK1(或3C-LALA)及3Cam2-LALA+KAES+ACT5人類抗體對茲卡病毒(ZIKV)的結合。

簡明地，mAbs係經稀釋且後續地於經純化的ZIKV-被覆的ELISA盤於37℃培育1小時。HRP-接合二級抗-人類IgG抗體使用於偵測3C、3C-LALA及3Cam2-LALA+KAES+ACT5對ZIKV病毒體的結合。使用TMB受質完成啟示。停止反應後，測定吸收度，讀值進行二重複。

3Cam2-LALA+KAES+ACT5結合至ZIKV類似於3C及3C-LALA抗體(圖17)。

9.2 中和

也測試抗體抑制ZIKV感染細胞的能力。ZIKV係以MOI 10與稀釋的人類mAb混合且以溫和攪動於37℃培育2小時。然後添加病毒/mAb混合物至經接種於96-孔盤的HEK 293T細胞。於37℃培養2日後，使用細胞流式儀藉由偵測ZIKV-特異性抗原測定細胞的感染。所有讀值係進行三重複，中和能力係於抗體不存在下針對利用ZIKV感染的細胞而計算。

所有抗體，3Cam2-LALA+KAES+ACT5、3C及3C-LALA，展現類似的能力以中和經由ZIKV之HEK細胞的感染(圖18)。

實施例10：3Cam2-LALA+KAES+ACT5針對茲卡病毒的活體內效價：母體對胎兒傳遞

然後活體內測試抗體以研究其抑制病毒由母體傳遞至後裔的能力。

妊娠之IFNαR基因剔除小鼠係於交配後10.5日接種ZIKV。於感染後-1日、0日及3日投予抗體。於交配後16.5日，撲殺妊娠小鼠且收集胎兒。記錄胎兒重量，全身及頭二者；測量羊水、胎盤、胎兒腦及肝中的病毒負載。

相較於未經處理的小鼠胎兒相比，來自經處理母體的胎兒展現顯著更高的重量，而顯示對於在未經治療的ZIKV感染動物中觀察到先天性發育缺陷的防護(圖19)。抗體顯著地抑制病毒由妊娠母體傳遞至胎兒(圖20)。

<110> 日商中外製藥股份有限公司(Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha) 新加坡科技研究局(AGENCY FOR SCIENCE,TECHNOLOGY AND RESEARCH)

<120> 對茲卡病毒具有交叉反應性的抗登革病毒抗體及其應用

<130> 34246SG6/MBR(JKN)/ndh

<140> TW 108108864

<141> 2019-03-15

<150> SG 10201802164Y

<151> 2018-03-15

<160> 109

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 132

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> VH

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<223> VH

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<213> 人工序列

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<210> 30

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L3

<400> 30

<210> 31

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 31

<210> 32

<211> 14

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 32

<210> 33

<211> 32

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 33

<210> 34

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FR-H3

<400> 34

<210> 35

<211> 11

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 35

<210> 36

<211> 23

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 36

<210> 37

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 37

<210> 38

<211> 32

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 38

<210> 39

<211> 10

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 39

<210> 40

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-H1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Asn或Tyr

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa為Ile或Met

<400> 40

<210> 41

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-H2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (9)..(9)

<223> Xaa為Thr或Arg

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (10)..(10)

<223> Xaa為Ala或Arg

<400> 41

<210> 42

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-H3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> Xaa為Arg或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (14)..(14)

<223> Xaa為Arg或Phe

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (16)..(16)

<223> Xaa為Gly,Asp或Leu

<400> 42

<210> 43

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L1

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa為Asp或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (8)..(8)

<223> Xaa為Lys或Gln

<400> 43

<210> 44

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L2

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa為Asn或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (7)..(7)

<223> Xaa為Thr或Phe

<400> 44

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-L3

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (4)..(4)

<223> Xaa為Asp,Ser或Glu

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (5)..(5)

<223> Xaa為Asp或Ala

<400> 45

<210> 46

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 46

<210> 47

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 47

<210> 48

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 48

<210> 49

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 49

<210> 50

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 50

<210> 51

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 51

<210> 52

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 52

<210> 53

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 53

<210> 54

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 54

<210> 55

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 55

<210> 56

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 56

<210> 57

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 57

<210> 58

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 58

<210> 59

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 59

<210> 60

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CL

<400> 60

<210> 61

<211> 585

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 61

<210> 62

<211> 585

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 62

<210> 63

<211> 583

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 63

<210> 64

<211> 585

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 64

<210> 65

<211> 403

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 65

<210> 66

<211> 403

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 66

<210> 67

<211> 401

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 67

<210> 68

<211> 403

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> DENV

<400> 68

<210> 69

<211> 374

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 69

<210> 70

<211> 316

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 70

<210> 71

<211> 316

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 71

<210> 72

<211> 291

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 72

<210> 73

<211> 254

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 73

<210> 74

<211> 254

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 74

<210> 75

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 75

<210> 76

<211> 233

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 76

<210> 77

<211> 404

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 77

<210> 78

<211> 293

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 78

<210> 79

<211> 267

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 79

<210> 80

<211> 249

<212> PRT

<213> 小鼠(Mus musculus)

<400> 80

<210> 81

<211> 365

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 81

<210> 82

<211> 119

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 82

<210> 83

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 83

<210> 84

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 84

<210> 85

<211> 377

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 85

<210> 86

<211> 327

<212> PRT

<213> 智人(Homo sapiens)

<400> 86

<210> 87

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 87

<210> 88

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 88

<210> 89

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 89

<210> 90

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 90

<210> 91

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 91

<210> 92

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 92

<210> 93

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 93

<210> 94

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 94

<210> 95

<211> 132

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VH

<400> 95

<210> 96

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 96

<210> 97

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 97

<210> 98

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 98

<210> 99

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 99

<210> 100

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> VL

<400> 100

<210> 101

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HVR-H1

<400> 101

<210> 102

<211> 30

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FR-H1

<400> 102

<210> 103

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FR-H3

<400> 103

<210> 104

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FR-L1

<400> 104

<210> 105

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> FR-L3

<400> 105

<210> 106

<211> 157

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD154

<400> 106

<210> 107

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 107

<210> 108

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 108

<210> 109

<211> 328

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CH

<400> 109

Claims

一種抗體在製備用於治療或預防茲卡病毒感染之藥物中的用途，其中該抗體包含，SEQ ID NO：6之一VH序列，及SEQ ID NO：7之一VL序列，其中該抗體更包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列。
如申請專利範圍第1項的用途，其中，該抗體包含，如於SEQ ID NO：6中顯示之一VH序列連同如於SEQ ID NO：59中顯示之一人類IgG1 CH序列，及如於SEQ ID NO：7中顯示之一VL序列連同如於SEQ ID NO：60中顯示之一人類CL序列。