TWI677503B - 抗-pd-l1-抗-tim-3雙特異性抗體 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於抗體，該等抗體係異二聚體並結合人類PD-L1與人類TIM-3，且可單獨及與化學療法及其他癌症療法組合用於治療癌症。

Description

抗-PD-L1-抗-TIM-3雙特異性抗體
本發明係關於醫學領域。更具體而言，本發明係關於雙特異性抗體，其結合人類程式性細胞死亡1配體1 (PD-L1)與含T細胞免疫球蛋白及黏蛋白結構域之蛋白-3 (TIM-3)，且可單獨及與化學療法及其他癌症療法組合用於治療實體及血液腫瘤。
腫瘤細胞藉助多種機制逃過免疫系統之檢測及消除。免疫檢查點路徑用於自身耐受性之維護及T細胞活化之控制，但癌細胞可使用該等路徑來抑制抗腫瘤反應並防止其受到破壞。 PD-L1 /人類程式性細胞死亡1 (PD-1)路徑係一種此類免疫檢查點。人類PD-1發現於T細胞上，且PD-L1係由多種腫瘤類型異常表現；PD-L1與PD-1之結合抑制T細胞增殖及細胞介素產生。在抗腫瘤免疫反應之情況下作為塑造腫瘤進化之自然選擇過程之一部分，PD-1/PD-L1抑制性軸被腫瘤抑制。 TIM-3係檢查點受體，其經鑑別在衰竭T細胞之功能性抑制方面起關鍵作用。可自患者及小鼠模型分離識別腫瘤抗原之T細胞，但此等細胞可展現衰竭之表型，其特徵為細胞毒性功能、效應細胞介素產生及增殖受損。該等T細胞可表現高含量之檢查點調節劑TIM-3。 儘管PD-1/PD-L1路徑之治療靶向在臨床上得到驗證，但在PD-L1-陰性及PD-L2-高陽性腫瘤中，癌症患者中存在介於9% - 45%之間之可變客觀反應，且許多患者不能達成耐久反應。兩種或更多種檢查點受體之組合阻斷可增加客觀反應之頻率，並在對於利用PD-1或PD-L1阻斷抗體之單一療法可能難治之癌症患者中達成效能。 利用兩種抗體(可與T細胞相互作用之抗-小鼠TIM-3抗體及可與小鼠腫瘤細胞單獨相互作用之抗-小鼠PD-L1抗體)活體外處理自具有CT26腫瘤之小鼠收穫之腫瘤浸潤淋巴球導致較靶向任一單獨路徑更有效地控制小鼠腫瘤生長(Sakuishi等人，JEM 2010, 207: 2187及WO 2015/048312)。 已報導拮抗PD-L1及TIM-3之口服小分子(Sasikumar等人，AACR；Cancer Res 2016；76(14 Suppl):Abstract 4861)。據報導，此小分子化合物在異體同質小鼠腫瘤模型中展現效能。 仍然需要提供可結合並抑制人類PD-L1及人類TIM-3二者，但亦具有抗體之靶特異性及藥物動力學之化合物。具體而言，仍然需要提供結合人類PD-L1及人類TIM-3二者之異二聚體雙特異性抗體，其中異二聚體雙特異性抗體使得能夠將兩條不同重鏈及兩條不同輕鏈配對為單一IgG型抗體。此外，需要類似如藉由建模、質譜及穩定性分析所量測之天然抗體結構之雙特異性抗體，以用於諸如低免疫原性、穩定活體內藥物動力學及足夠穩定性之目的。另外，仍然需要提供具有一或多個以下特徵之抗-人類PD-L1及抗-人類TIM-3雙特異性抗體：同時結合並橋接表現PD-L1之腫瘤細胞及表現TIM-3之T細胞；抑制PD-1及TIM-3檢查點抑制劑路徑；展現較抗-PD-L1抗體及抗-TIM-3抗體之組合更佳之抗腫瘤活性，如在腫瘤模型中所量測；及缺少抗體免疫效應物功能。
因此，本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含： a) 包含具有SEQ ID NO: 3之胺基酸序列之重鏈可變區(HCVR)之第一重鏈(HC)， b) 包含具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列之輕鏈可變區(LCVR)之第一輕鏈(LC)， c) 包含具有SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之HCVR之第二HC， d) 包含具有SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之LCVR之第二LC； 且其中，第一LC與第一HC形成鏈間二硫鍵，第二LC與第二HC形成鏈間二硫鍵，且第一HC與第二HC形成兩個鏈間二硫鍵，且第一HC及第二HC係人類IgG1同型。 本發明進一步提供抗體，其中第二HC包含具有SEQ ID NO: 5之胺基酸序列之HCVR且第二LC包含具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之LCVR。本發明進一步提供抗體，其中第二HC包含具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列之HCVR，且第二LC包含具有SEQ ID NO: 9之胺基酸序列之LCVR。本發明進一步提供抗體，其中第二HC包含具有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之HCVR，且第二LC包含具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列之LCVR。 本發明進一步提供抗體，其中： a) 第一HC包含SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22之胺基酸序列， b) 第二HC包含SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26之胺基酸序列， c) 第一LC包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，且 d) 第二LC包含SEQ ID NO: 28之胺基酸序列。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含： a) 包含SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之第一HC， b) 包含SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之第一LC， c) 包含SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之第二HC， d) 包含SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之第二LC； 且其中，第一LC與第一HC形成鏈間二硫鍵，第二LC與第二HC形成鏈間二硫鍵，且第一HC 與第二HC形成兩個鏈間二硫鍵，且第一HC及第二HC係人類IgG1同型。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含： a) 包含SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之第一HC， b) 包含SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之第一LC， c) 包含SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之第二HC， d) 包含SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之第二LC； 且其中，第一LC與第一HC形成鏈間二硫鍵，第二LC與第二HC形成鏈間二硫鍵，且第一HC與第二HC形成兩個鏈間二硫鍵，且第一HC及第二HC係人類IgG1同型。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含： a) 包含SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 19及SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之第一HC， b) 包含SEQ ID NO: 4及SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之第一LC， c) 包含SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 26之胺基酸序列之第二HC， d) 包含SEQ ID NO: 10及SEQ ID NO: 28之胺基酸序列之第二LC； 且其中，第一LC與第一HC形成鏈間二硫鍵，第二LC與第二HC形成鏈間二硫鍵，且第一HC與第二HC形成兩個鏈間二硫鍵，且第一HC及第二HC係人類IgG1同型。 本發明進一步提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其中： a) 第一HC包含SEQ ID NO: 20及SEQ ID NO: 21之胺基酸序列，且 b) 第二HC包含SEQ ID NO: 24及SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。 對於SEQ ID NO: 19-28，表1映射抗體上與序列相關之位置。對於SEQ ID NO: 3-10，表2映射抗體上序列相關之區域。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含兩條輕鏈(LC)及兩條重鏈(HC)，其中： a) 第一LC具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列， b) 第一HC具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列， c) 第二LC具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，且 d) 第二HC具有SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。 本發明提供包含兩條輕鏈(LC)及兩條重鏈(HC)之抗體，其中： a) 第一LC具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列， b) 第一HC具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列， c) 第二LC具有SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17或SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，且 d) 第二HC具有SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)與人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之抗體，其包含兩條輕鏈(LC)及兩條重鏈(HC)，其中： a) 第一LC具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列且第一HC具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列，且 b) 第二LC及第二HC分別具有SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。 本發明進一步提供抗體，其中第二LC具有SEQIDNO:16之胺基酸序列，且第二HC具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列。本發明進一步提供抗體，其中第二LC具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列，且第二HC具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列。本發明進一步提供抗體，其中第二LC具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列，且第二HC具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。 本發明提供結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)之半抗體，其包含LC及HC，其中LC具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，且HC具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列。 本發明提供結合人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)之半抗體，其包含LC及HC，其中LC及HC分別具有SEQ ID NO: 16及SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 17及SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 18及SEQ ID NO: 15之胺基酸序列。表 1 ：映射至 IgG1 重鏈或輕鏈之區域之序列 本發明提供哺乳動物細胞，其包含包括編碼具有SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列的DNA分子，其中該細胞能表現本發明之抗體。 本發明提供哺乳動物細胞，其包含第一DNA分子及第二DNA分子，其中該第一DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，且其中該第二DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，其中該細胞能表現本發明之抗體。 本發明提供哺乳動物細胞，其包含第一DNA分子、第二DNA分子、第三DNA分子及第四DNA分子，其中該第一DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 11之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，該第二DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，該第三DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 15之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，且該第四DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，其中該細胞能表現本發明之抗體。 本發明提供產生本發明抗體之方法，其包含在使得抗體表現之條件下培養本發明之哺乳動物細胞及回收所表現之抗體。 本發明提供藉由本發明之方法所產生之抗體。 本發明提供藉由以下產生：在使得抗體表現之條件下培養如下哺乳動物細胞，該哺乳動物細胞包含包括編碼具有SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列的DNA分子；並回收所表現之抗體產生之抗體。 本發明提供藉由以下產生之抗體：在使得抗體表現之條件下培養如下哺乳動物細胞，該哺乳動物細胞包含第一DNA分子及第二DNA分子，其中該第一DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 11及SEQ ID NO: 12之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，且其中該第二DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO: 15及SEQ ID NO: 18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列；並回收所表現之抗體。 本發明提供醫藥組合物，其包含本發明之抗體及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。 本發明提供治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本發明抗體。本發明進一步提供治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本發明抗體，其中癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。 本發明提供治療癌症之方法，其中癌症係黑色素瘤。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係肺癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係頭頸癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係肝癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係結腸直腸癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係胰臟癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係胃癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係腎癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係膀胱癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係***癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係乳癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係卵巢癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係子宮內膜癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係食道癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係軟組織肉瘤。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係膽管癌。本發明進一步提供治療癌症之方法，其中癌症係肝細胞癌。 本發明進一步提供方法，其包含將有效量之本發明抗體與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序組合投與：順鉑、卡鉑(carboplatin)、達卡巴嗪(dacarbazine)、脂質體多柔比星(liposomal doxorubicin)、多西他賽(docetaxel)、環磷醯胺及多柔比星、諾維本(navelbine)、艾瑞布林(eribulin)、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他濱(capecitabine)、FOLFOX (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑(oxaliplatin))、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康(irinotecan))、吉西他濱(gemcitabine)、托泊替康(topotecan)、脂質體伊立替康、培美曲塞(pemetrexed)及西妥昔單抗(cetuximab)。 本發明進一步提供方法，其包含將有效量之本發明抗體與一或多種選自由以下組成之群之抗腫瘤藥劑同時、分開或依序組合投與：尼沃魯單抗(nivolumab)、伊匹單抗(ipilimumab)、匹利珠單抗(pidilizumab)、派姆單抗(pembrolizumab)、曲美目單抗(tremelimumab)、烏瑞魯單抗(urelumab)、利利單抗(lirilumab)、阿替珠單抗(atezolizumab)、愛帕司他(epacadostat)及德瓦魯單抗(durvalumab)。 本發明進一步提供方法，其包含將有效量之本發明抗體與離子化輻射同時、分開或依序組合投與。 本發明提供用於療法之本發明抗體。本發明提供用於治療癌症之本發明抗體。本發明提供用於治療癌症之本發明抗體，其中癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。 本發明提供用於治療黑色素瘤之本發明抗體。本發明提供用於治療肺癌之本發明抗體。本發明進一步提供本發明之抗體，其中肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。本發明提供用於治療頭頸癌之本發明抗體。本發明提供用於治療肝癌之本發明抗體。本發明提供用於治療結腸直腸癌之本發明抗體。本發明提供用於治療胰臟癌之本發明抗體。本發明提供用於治療胃癌之本發明抗體。本發明提供用於治療腎癌之本發明抗體。本發明提供用於治療膀胱癌之本發明抗體。本發明提供用於治療***癌之本發明抗體。本發明提供用於治療乳癌之本發明抗體。本發明提供用於治療卵巢癌之本發明抗體。本發明提供用於治療子宮內膜癌之本發明抗體。本發明提供用於治療食道癌之本發明抗體。本發明提供用於治療軟組織肉瘤之本發明抗體。本發明提供用於治療膽管癌之本發明抗體。本發明提供用於治療肝細胞癌之本發明抗體。 本發明提供與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序組合用於治療癌症之本發明抗體：順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、諾維本、艾瑞布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、吉西他濱、托泊替康、脂質體伊立替康、培美曲塞及西妥昔單抗。 本發明提供與一或多種選自由以下組成之群之抗腫瘤藥劑同時、分開或依序組合用於治療癌症之本發明抗體：尼沃魯單抗、伊匹單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、曲美目單抗、烏瑞魯單抗、利利單抗、阿替珠單抗、愛帕司他及德瓦魯單抗。 本發明提供與離子化輻射同時、分開或依序組合用於治療癌症之本發明抗體。 本發明提供用於治療癌症之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明進一步提供用於治療癌症之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體，其中癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。本發明進一步提供用於治療癌症之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體，其中肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。 本發明提供用於治療黑色素瘤之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療肺癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療頭頸癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療肝癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療結腸直腸癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療胰臟癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療胃癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療腎癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療膀胱癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療***癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療乳癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療卵巢癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療子宮內膜癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療食道癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療軟組織肉瘤之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療膽管癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。本發明提供用於治療肝細胞癌之醫藥組合物，其包含有效量之本發明抗體。 本發明進一步提供用於治療癌症之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序組合投與：順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、諾維本、艾瑞布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、吉西他濱、托泊替康、脂質體伊立替康、培美曲塞及西妥昔單抗。 本發明進一步提供用於治療癌症之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係與一或多種選自由以下組成之群之抗腫瘤藥劑同時、分開或依序組合投與：尼沃魯單抗、伊匹單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、曲美目單抗、烏瑞魯單抗、利利單抗、阿替珠單抗、愛帕司他及德瓦魯單抗。 本發明進一步提供用於治療癌症之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係與離子化輻射同時、分開或依序組合投與。 本發明提供本發明抗體之用途，其用於製造供治療癌症用之藥劑。本發明進一步提供本發明之抗體製造供治療癌症用之藥劑之用途，其中癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。本發明進一步提供本發明之抗體製造供治療癌症用之藥劑之用途，其中肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。 本發明進一步提供本發明之抗體製造供治療癌症用之藥劑之用途，其中該藥劑係與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序投與：順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、諾維本、艾瑞布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、吉西他濱、托泊替康、脂質體伊立替康、培美曲塞及西妥昔單抗。 本發明進一步提供本發明之抗體製造供治療癌症用之藥劑之用途，其中該藥劑係與一或多種選自由以下組成之群之抗腫瘤藥劑同時、分開或依序投與：尼沃魯單抗、伊匹單抗、匹利珠單抗、派姆單抗、曲美目單抗、烏瑞魯單抗、利利單抗、阿替珠單抗、愛帕司他及德瓦魯單抗。 本發明提供本發明抗體製造供治療癌症之藥劑之用途，其中該藥劑係與離子化輻射同時、分開或依序投與。 本發明之抗體係經改造之非天然多肽複合物。本發明之DNA分子係非天然DNA分子，其包括編碼具有本發明抗體中一種多肽之胺基酸序列之多肽之聚核苷酸序列。 本發明之抗體係IgG型抗體，且具有經由鏈內及鏈間二硫鍵交聯之「重」鏈及「輕」鏈。每一重鏈係由N端HCVR及重鏈恆定區(「HCCR」)構成。每一輕鏈係由LCVR及輕鏈恆定區(「LCCR」)構成。輕鏈各自與重鏈形成二硫鍵，且兩條重鏈彼此之間形成兩個二硫鍵。 重鏈之恆定區含有CH1、CH2及CH3結構域。CH1在HCVR之後；CH1及HCVR形成Fab之重鏈部分。CH2在鉸鏈區之後及CH3之前。CH3在CH2之後且在重鏈之羧基端。 輕鏈之恆定區含有一個結構域CL。CL在LCVR之後；CL與LCVR形成Fab之輕鏈部分。 本發明之抗體為異二聚體，其中由於兩條不同重鏈及兩條不同輕鏈形成抗體，故抗體之每一臂展現與其同源抗原之選擇性單價結合。在本發明中，抗體之一個臂結合人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)，且另一臂結合人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)。為確保該等雙特異性抗體之適當組裝，將突變納入CH1及CH3區內重鏈之序列中並納入輕鏈恆定區內輕鏈之序列中。進行CH1及LC突變，以有利於必需輕鏈及重鏈對之天然配對且不利於輕鏈錯配。進行CH3突變，以有利於兩條不同重鏈之異二聚體配對且不利於同二聚體之形成。抗體之抗-PD-L1部分之CH3區中之突變較佳包括位置356、372、398及400，如SEQ ID NO: 11中之絕對位置編號(若使用EU編號，則為位置350、366、392及394)。抗體之抗-TIM-3部分之CH3區中之突變較佳包括位置350、351、356、405及407，如SEQ ID NO: 15中之絕對位置編號(若使用EU編號，則為位置350、351、405及407)。抗體之抗-PD-L1部分之CH1區中之突變較佳包括位置189，如SEQ ID NO: 11中之絕對位置編號(若使用EU編號則為位置183)。抗體之抗-TIM-3部分之CH1區中之突變較佳包括位置128、147、175及183，如SEQ ID NO: 15中之絕對位置編號(若使用EU編號，則為位置128、147、175及183)。 抗體之抗-PD-L1部分之CL區中之突變較佳包括位置179及181，如SEQ ID NO: 11中之絕對位置編號(若使用EU編號，則為位置176及178)。抗體之抗-TIM-3部分之CL區中之突變較佳包括位置131、133、176及178，如SEQ ID NO: 15中之絕對位置編號(若使用EU編號，則為位置131、133、176及178)。 在本發明之某些抗體中，重鏈異二聚體配對突變產生大於80℃之CH3熱穩定性，此與天然抗體相當(表1及Von Kreudenstein等人，2014)。 當在某些生物系統中表現時，具有Fc序列之抗體在Fc區中醣基化。通常，醣基化出現於抗體之Fc區中之高度保守之N-醣基化位點處。N-聚糖通常連接至天冬醯胺。抗體亦可在其他位置醣基化。 視情況，本發明之某些抗體含有衍生自人類IgG1 之Fc部分。眾所周知，IgG1結合至Fc-γ受體家族(FcγR) 以及C1q之蛋白質。與該等受體之相互作用可誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。因此，將某些胺基酸取代引入本發明某些抗體(包括抗體A、B及C)之IgG1 Fc中以除去免疫效應物功能。抗體之抗-PD-L1部分之CH2區中之突變可包括位置240、241及271，如根據SEQ ID NO: 11中之絕對位置所編號(若使用EU編號，則為位置234、235及265)。抗體之抗-TIM-3部分之CH2區中之突變可包括位置234、235及265，如根據SEQ ID NO: 15中之絕對位置所編號(若使用EU編號，則為位置234、235及265)。 可藉由使編碼HCVR之DNA可操作地連接至另一編碼重鏈恆定區之DNA分子來將編碼HCVR區之經分離DNA分子轉化成全長重鏈基因。業內已知人類以及其他哺乳動物重鏈恆定區基因之序列。可(例如)藉由標準PCR擴增獲得涵蓋該等區之DNA片段。 可藉由使編碼LCVR之DNA可操作地連接至另一編碼輕鏈恆定區之DNA分子來將編碼LCVR區之經分離DNA轉化成全長輕鏈基因。業內已知人類以及其他哺乳動物輕鏈恆定區基因之序列。可藉由標準PCR擴增獲得涵蓋該等區之DNA片段。輕鏈恆定區可為κ或λ恆定區。對於本發明之抗體較佳地，抗體之抗-PD-L1部分之輕鏈恆定區係λ輕鏈，且抗體之抗-TIM-3部分之輕鏈恆定區係κ輕鏈。 本發明之多核苷酸將在將序列可操作地連接至表現控制序列之後在宿主細胞中表現。表現載體通常可在宿主生物體中作為游離基因體或作為宿主染色體DNA之組成部分而複製。通常，表現載體將含有選擇標記物(例如四環素、新黴素及二氫葉酸還原酶)，以使得可檢測經期望DNA序列轉變之彼等細胞。 本發明之抗體可易於在哺乳動物細胞(例如CHO、NS0、HEK293或COS細胞)中產生。使用業內熟知之技術培養宿主細胞。 可藉由熟知方法將含有所關注多核苷酸序列(例如編碼抗體之多肽之多核苷酸及表現控制序列)之載體轉移至宿主細胞中，該等方法端視細胞宿主之類型而變化。 可採用多種蛋白質純化之方法，且此等方法為業內已知並闡述於(例如) Deutscher,Methods in Enzymology 182: 83-89 (1990)及Scopes,Protein Purification: Principles and Practice ，第3版，Springer, NY (1994)中。 在本發明之另一實施例中，以分離形式提供抗體或編碼其之核酸。如本文所用之術語「經分離」係指不含或實質上不含發現於細胞環境中之任一其他大分子物質之蛋白質、肽或核酸。如本文所用之「實質上不含」意指所關注蛋白質、肽或核酸包含大於80% (以莫耳計)、較佳地大於90%且更佳地大於95%之所存在大分子物質。 本發明之抗體或包含其之醫藥組合物可藉由非經腸途徑(例如皮下及靜脈內途徑)投與。可單獨將本發明之抗體與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑以單一或多個劑量投與患者。本發明之醫藥組合物可藉由業內熟知之方法來製備(例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy ，第22版(2012), A. A. Loyd等人，Pharmaceutical Press)，且包含如本文所揭示之抗體及一或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
術語「治療(treating，或treat或treatment)」係指減緩、中斷、阻止、緩解、停止、減輕或逆轉現有症狀、病症、病狀或疾病之進展或嚴重程度。 除非另外指示，否則如本文所用關於抗體對人類PD-L1 (SEQ ID NO: 1)、人類TIM-3 (SEQ ID NO: 2)或二者之親和力之「結合」意欲指KD 小於約1 × 10-6 M、較佳地小於約1 × 10-9 M，如藉由業內已知之常見方法(包括藉由在37℃下使用表面電漿共振(SPR)生物感測器，基本上如本文所述)所測定。 「有效量」意指本發明抗體或包括本發明抗體之醫藥組合物將對組織、系統、動物、哺乳動物或人類引發研究者、醫師或其他臨床醫師所尋求之生物或醫學反應或期望治療效應之量。抗體之有效量可根據諸如以下之因素而變化：疾病狀態、個體之年齡、性別及體重以及抗體引發該個體之期望反應之能力。有效量亦為抗體之治療有益效應勝過其任何毒性或有害效應之量。 藉由下列非限制性實例來進一步闡釋本發明。實例 1 ： 抗體表現及純化 重鏈及輕鏈之可變區之多肽；抗體A、抗體B及抗體C之完整重鏈及輕鏈胺基酸序列及編碼其之核苷酸序列列示於下文標題為「胺基酸及核苷酸序列」之部分中。此外，抗體A、B及C之輕鏈、重鏈、輕鏈可變區及重鏈可變區之SEQ ID NO顯示於表2中。包括(但不限於)抗體A、抗體B及抗體C之本發明抗體可基本上如下來製得並純化。諸如CHO之適當宿主細胞可以20HC抗-TIM-3 : 10HC抗-PD-L1 : 24LC抗-TIM-3 : 46LC抗-PD-L1之比率使用四重載體(quad vector)、雙重載體(dual vector)或四種單一載體利用分泌抗體之表現系統瞬時或穩定轉染。SEQ ID NO: 29至SEQ ID NO: 32係抗體C之輕鏈及重鏈之DNA序列；PD-L1抗體輕鏈具有相對於TIM-3輕鏈增加表現程度之內部內含子。抗體已分泌至其中之澄清培養基可使用許多常用技術中之一種來純化。舉例而言，對於Fab片段，可將培養基便捷地施加至已經諸如磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)之相容緩衝液平衡之MabSelect管柱(GE Healthcare)或KappaSelect管柱(GE Healthcare)。可洗滌管柱以去除非特異性結合組分。所結合之抗體可(例如)藉由pH梯度(例如20 mM Tris緩衝液(pH 7)至10 mM檸檬酸鈉緩衝液(pH 3.0)，或磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)至100 mM甘胺酸緩衝液(pH 3.0))來溶析。抗體部分可(例如)藉由SDS-PAGE檢測且然後可將其彙集。可溶性聚集體及多聚體可藉由常用技術有效去除，該等技術包括粒徑排阻層析、疏水相互作用層析、離子交換層析、多元層析或羥磷灰石層析。抗體可使用常用技術來濃縮及/或無菌過濾。產物可立即冷凍於-70℃下或可凍乾。表 2 ： SEQ ID NO 分析 抗體之活體外結合 關於異二聚體雙特異性抗體，抗體之一個臂(一條輕鏈及一條重鏈)單價結合一個抗原且抗體之第二臂(一條輕鏈及一條重鏈)單價結合第二抗原。當與二價結合抗原之親代抗體相比時，本發明之抗體維持相當地結合至每一抗原之能力可藉由Biacore分析來評價。 在37℃下，使用BIAcore T200生物感測器儀器(GE Healthcare)，藉由表面電漿共振(SPR)來分析抗體C及其親代抗體對相應抗原TIM-3及PD-L1之結合動力學及親和力。將人類Fab使用胺偶合以7000 RU至9000 RU之固定位凖固定於CM5感測器晶片上。將抗體試樣稀釋於HBS-EP+緩衝液中並以30 µL/min之流速注射。然後注射連續濃度之人類TIM-3單臂抗原(TIM-3-SAG)及Fc標記之PD-L1 (PD-L1-Fc)達180秒，隨後1200秒之解離時間。使用Biacore T200評估軟體3.0來評估感測圖，且基於1:1 Langmuir結合模型擬合計算締合(Ka)及解離(Kd)速率常數。自動力學速率常數Kd/Ka之比率計算平衡解離常數(KD)或結合親和力常數。 抗體A之Fab與PD-L1之單價抗原結合係6.5 × 10-10 M，且與親代抗-PD-L1抗體之Fab與PD-L1之二價結合相當。抗體B及C之Fab之單價PD-L1結合亦與親代抗-PD-L1抗體之Fab相當。 抗體A之Fab與TIM-3之單價抗原結合係2.53 × 10-9 M，且較親代抗-TIM-3抗體之二價結合親和力低大約33倍。抗體B之Fab針對TIM-3具有1.91 × 10-10 M之Kd，且抗體C之Fab針對TIM-3具有1.11 × 10-10 M之Kd。抗體B之單價Fab結合之親和力較親代抗-TIM-3抗體之二價結合親和力低三倍，而抗體C之單價Fab結合與親代之二價結合親和力相當。熱穩定性 關於異二聚體雙特異性抗體，需要配對兩條不同重鏈並選擇性配對同源輕鏈與每一各別重鏈。本發明之抗體維持與天然抗體相當之穩定性之能力可藉由DSC分析來測試。 使用MicroCal VP-Capillary DSC (系列編號11.05083.CAP)在PBS中以1 mg/mL實施研究。以60℃/小時之掃描速率在25℃-100℃之溫度範圍內掃描所有試樣。在每次掃描期間，在毛細管中將溶液在約60 psi下加壓。對於每種蛋白質，自緩衝液/蛋白質掃描減去緩衝液/緩衝液掃描，並將溫度記錄圖針對蛋白質濃度正規化。實施基線校正，並自最大峰值獲得每一熱變性之中點(Tm )。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C之DSC分析顯示解摺疊溫度與親代抗體(抗-PD-L1 Ab：Tm1 67℃、Tm2 75℃、Tm3 82℃，抗-TIM-3 Ab：Tm1 64℃、Tm2 85℃)相當之熱穩定性(Tm1 67℃、Tm2 76℃、Tm3 83℃)。與 PD-L1 及 TIM-3 之同時結合，如藉由 ELISA 所量測 可在夾心式ELISA分析中量測本發明之抗體同時結合PD-L1及TIM-3之能力。可將TIM-3-Fc蛋白質塗佈在板上，以測試本發明之抗體與TIM-3之結合，但僅當板結合之抗體亦結合可溶生物素化PD-L1-Fc時才生成信號。 對於結合分析，在4℃下用50 μl/孔之1 μg/ml人類TIM-3-Fc將96孔(Immulon 2HB)板塗佈過夜。然後用含有0.2% Tween-20之PBS將板洗滌三次，並在室溫下用250 μl/孔之具有3% BSA之PBS封阻1 hr。去除封阻緩衝液，並將50 μl滴定抗體以200 nM開始添加至板並在室溫下培育1 hr。然後用含有0.2% Tween-20之PBS將板洗滌三次，並添加50 μl 100 ng/ml之人類PD-L1生物素且在室溫下培育1 hr。然後用含有0.2% Tween-20之PBS將板洗滌三次，並添加以1:5000稀釋之50 μl Strep HRP (Jackson Immuno 106-030-084)且在室溫下培育1 hr。然後用含有0.2% Tween-20之PBS將板洗滌三次，並在室溫下使用100 μl/孔之1:1 TMB受質溶液A及B (KPL)顯色10 min。用100 ul/孔之0.1 N H2 SO4 使反應停止並在Spectramax讀板儀上讀數。使用GraphPad Prism繪製數據。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C產生隨抗體C之濃度增加之信號，此展現抗體C在該等條件下同時結合人類PD-L1及TIM-3。單獨對照TIM-3抗體僅產生背景信號。抗體 C 同時結合至細胞表面上之 PD-L1 及 TIM-3 靶標 可在活細胞報導基因分析中測試本發明之抗體同時接合細胞表面上之TIM-3及PD-L1蛋白質之能力，以量測TIM-3:PD-L1異質型受體締合(HRA) (DiscoverX, Fremont, CA)。HRA分析係基於酶片段互補並採用兩個重組β-半乳糖苷酶片段，其個別地經催化失活並顯示對彼此之小親和力。當將其作為融合伴侶添加至相互結合之蛋白質時，可使兩個片段接近以重構功能性β-半乳糖苷酶。藉由在化學發光受質裂解期間產生之光監測酶活性。 對於分析，利用編碼TIM-3 (1-223)-PK及PD-L1(1-259)-EA (PK = ProLink β-半乳糖苷酶片段，EA =酶受體片段)之構築體連續轉染U2OS細胞。針對U2OS細胞抗異位膜蛋白表現之能力來選擇U2OS細胞，並設計TIM-3、PD-L1構築體以消除大部分細胞內結構域及潛在併發症，例如受體內化及信號誘導之聚類。 將來自穩定U2OS TIM-3(1-223)-PK PD-L1(1-259)-EA彙集庫之細胞一式四份平鋪在384孔板上(5000個細胞/孔)。將一系列稀釋之抗體C及相應親代抗-TIM-3及抗-PD-L1抗體添加至細胞，並在37℃ / 5% CO2 下培育過夜(16小時)。然後，將含有溶解緩衝液及酶受質之檢測試劑添加至細胞並在Envision光度計上讀取板。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C以大約2 nM之EC50 產生可滴定的信號增加，而針對TIM-3及PD-L1之相應單一特異性單株抗體完全失活。該等數據指示，抗體C在該等條件下可同時接合細胞表面上之TIM-3及PD-L1二者。抗體 C 橋接表現之 TIM-3 細胞與表現 PD-L1 之細胞 可藉由流式細胞術分析，使用表現PD-L1之經轉染CHO及表現TIM-3之DO11細胞測定本發明之抗體橋接表現TIM-3及PD-L1之細胞之能力。簡言之，可利用CFSE (羧基二乙酸螢光素琥珀醯亞胺酯) (BD Horizon)或Cell Tracker Deep Red (CTDR/Thermo)來區別標記CHO-PD-L1及DO11-TIM-3過表現細胞。將DO11-TIM-3及CHO-PDL1細胞分開與測試抗體(例如抗體C)一起培育30分鐘(於PBS + 1% BSA + 0.09%疊氮化鈉中在冰上)。可藉由洗滌(2X，利用200 µl PBS + 1% BSA + 0.09%疊氮化鈉)去除未結合之抗體。將CHO-PDL1細胞與45 µg/ml之親代PD-L1抗體或hIgG1對照一起於PBS + 1% BSA + 0.09%疊氮化鈉中在冰上培育2小時。將DO11-TIM-3細胞與45 µg/ml之親代TIM-3抗體或huIgG4-PAA一起於PBS + 1%BSA + 0.09%疊氮化鈉中在冰上培育2小時。將DO11-TIM-3/抗體C細胞與22.5 ug/ml最終濃度下之CHO-PDL1 +親代PD-L1抗體或hIgG1混合。將CHO-PDL1/抗體C細胞與22.5 µg/ml最終濃度下之DO11-TIM-3 + TIM-3抗體或huIgG4-PAA之親代混合。在4℃下培育大約72小時後，在適於CFSE及CTDR之通道中在Fortessa X20 (具有HTS取樣器)上量測細胞。使用FLOWJO®軟體(FlowJo, LLC, Ashland, OR)對雙陽性事件(CFSE+/ CTDR+)設門，且可計算並報告總事件之比例(對於2個重複孔)。利用Graphpad Prism使用非線性迴歸(可變斜率，4參數)生成擬合及統計。 在如上文所述實施之實驗中，欲藉由流式細胞術將抗體C介導之細胞橋接檢測為雙陽性事件。抗體C與DO11-TIM-3或CHO-PDL1細胞結合(隨後去除未結合者)及然後分別與CHO-PDL1或DO11-TIM-3細胞混合引起雙陽性事件相對於背景之劑量依賴性增加(與僅緩衝液相比增加高達4倍)。雙陽性事件之此增加受添加過量高濃度之競爭PD-L1及/或TIM-3 mAbs阻斷但不受匹配之非特異性IgG對照阻斷，此展現對靶抗原表現之特異性及依賴性。活體外 功能活性 1. 基於 hTIM-3 DO11 細胞之分析 可在DO11活體外分析中量測本發明之抗體藉助TIM-3抑制減輕T細胞抑制之能力。 對於基於hTIM-3 DO11細胞之分析，使用RPMI 1640培養基(Gibco，編號11875-085)，將50 μl DO11或hTIM-3過表現DO11細胞以2 × 104 個細胞/孔並將50 μl A20細胞以2 × 104 個細胞/孔平鋪在U形底96孔組織培養板(Greiner Cellstar，編號651180)中。添加0.2 μM (於培養基中稀釋)之最終濃度下之50 μl OVA (Sigma，編號O1641)。添加50 μl連續稀釋之抗體(稀釋於培養基中)。將培養基添加至一些孔中以使總體積為200 μl/孔。在18-22小時後收集上清液並使用ELISA套組(R&D，編號SM2000)量測其mIL-2。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C以劑量依賴性方式增強OVA抗原特異性T細胞活化，其EC50 為4.366 nM，如藉由增加mIL-2含量所量測，但人類IgG對照未做到。2. 混合白血球反應 (MLR) 分析 可在活體外MLR分析中，藉由量測細胞介素在T細胞活化期間之釋放評估本發明之抗體阻斷PD-L1信號之能力。若利用本發明之抗體處理促進T細胞活化，則預計某些細胞介素(例如IFN-γ)之含量會增加。 對於MLR分析，利用人類單核球分離套組II (Miltenyi，編號130-091-153)自人類PBMC (Allcells，編號PB001)分離單核球，並與62.5 ng/ml GM-CSF及20 ng/ml IL-4一起培養7天以使樹突細胞分化。將100 μl利用CD4 T細胞分離套組(Miltenyi, cat編號130-091-155)自PBMC (來自Allcells之不同供體)分離之1 × 105 個CD4 T細胞及1 × 104 個單核球源人類樹突細胞與100 μl抗體一起平鋪於96孔U形底板中。將細胞在濕潤的37℃、5% CO2 培育器中培育並在三天後收集上清液。使用R&D ELISA套組(編號SIF50)對上清液進行人類IFN-γ ELISA。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，4 nM之抗體C使IFN-γ含量增加大約三倍，而8 nM之抗體C使IFN-γ含量增加大約五倍。該等結果展現抗體C在此分析中增強同種異體T細胞反應之能力。活體內功能研究 1. HCC827 人類 NSCLC 異種移植物模型中之抗體 C 可在HCC827人類NSCLC異種移植物模型中測試本發明抗體之效能，以評價該等抗體藉助增強對同種異體抗原之T細胞反應延遲或破壞模型中所確立腫瘤之能力。 對於該研究而言，在第0天，向來自Jackson Laboratories之NSG小鼠(7週齡，雌性，於8隻小鼠之組中)之側腹中皮下移植於HBSS (0.2 ml總體積)中之10 × 106 個HCC827細胞。使用人類T-活化劑CD3/CD28 Dynabeads®將自全血(紐約血液中心(New York Blood Center))分離之大量人類T細胞擴增10天並冷凍保存。在第36天將T細胞解凍，洗滌，計數並靜脈內輸注(2.5 ×106 個於0.2 ml PBS中之T細胞/小鼠)於具有HCC827腫瘤之小鼠中。自第36天開始，利用i.p.注射人類IgG (20 mg/kg)、抗體C之親代抗-PD-L1抗體(10 mg/kg)與抗體B之親代抗-TIM-3抗體(10 mg/kg)或抗體C之親代抗-TIM-3抗體(10 mg/kg)之組合、抗體B (20 mg/kg)或抗體C (20 mg/kg)對小鼠進行治療，每週一次持續三週(在d36、d43、d50投藥)。每週至少兩次監測動物健康及行為，包括理毛及步行。一週兩次量測體重及腫瘤體積。在細胞移植後第4天開始，使用電子測徑器每週兩次量測腫瘤體積，如標題為：IM-Tumor Growth Measurement之SOP中所述。腫瘤體積係使用以下公式來計算：腫瘤體積(mm3 ) = π/6 *長度*寬度2 。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，在第50天，當比較經處理相對於未經處理之腫瘤大小時，抗體C之親代抗-PD-L1抗體與抗體C之親代抗-TIM-3抗體之組合使腫瘤生長減緩62.5% (T/C = 27.5%)。抗體B之親代抗-PD-L1抗體與抗體B之親代抗-TIM-3抗體使腫瘤生長減緩，其中T/C = 41.5%。與輸注T細胞之第35天相比，在第50天，抗體C處理導致腫瘤大小消退8.3%。因此，儘管TIM-3抗體與PD-L1抗體之組合在HCC827模型中使腫瘤生長減緩，但抗體C引起腫瘤大小之消退。2. 具有 L55 腫瘤之人類化 HSCTFL-NOG-F 小鼠 (NSCLC 模型 ) 中之抗體 C 可在L55人類NSCLC異種移植物模型中測試本發明抗體之效能，以評價該等抗體藉助增強對同種異體抗原之T細胞反應延遲或破壞模型中所確立腫瘤之能力。 向來自Jackson Laboratories之雌性NOG小鼠植入人類CD34+ 造血幹細胞。植入後16週，藉由流式細胞術確認huCD45+ 細胞及鼠類CD45+ 細胞(mCD45)在小鼠外周血中之存在。對於研究，在第0天，向HSCTFL-NOG-F小鼠之側腹中皮下移植L55片段。在具有10%胎牛血清加1 mM丙酮酸鈉及L-麩醯胺酸之RPMI-1640培養基中培養L55細胞，並使L55腫瘤在NSG小鼠上生長以產生用於此研究之片段。根據大約180 mm3 之平均腫瘤體積將動物隨機化至各組中。在第26天起始處理，隨後在第33天及第40天每週投與(Q7DX3)所有抗體。對於抗體C之親代抗-PD-L1抗體與抗體C之親代抗-TIM-3抗體之組合，以10 mg/kg投用各抗體。對於雙特異性抗體，以20 mg/kg投用抗體C。每週至少兩次監測動物健康及行為，包括理毛及步行。一週兩次量測體重及腫瘤體積。在細胞移植後第4天開始，使用電子測徑器每週兩次量測腫瘤體積，如標題為：IM-Tumor Growth Measurement之SOP中所述。腫瘤體積係使用以下公式來計算：腫瘤體積(mm3 ) = π/6 *長度*寬度2 。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，在第40天，當比較經處理相對於對照之腫瘤大小時，抗體C之親代抗-PD-L1抗體與抗體C之親代抗-TIM-3抗體之組合具有50%之T/C% (對於腫瘤體積，P=0.314)。在第40天，與兩種親代抗體之組合相比，抗體C處理延遲腫瘤生長，且當比較經治療相對於對照之腫瘤大小時具有7%之T/C% (對於腫瘤體積，P=0.013)。3. 抗體 C 及培美曲塞在 L55 人類 NSCLC 異種移植物模型中之組合療法 可在L55人類NSCLC異種移植物模型中測試本發明抗體與培美曲塞之組合之效能，以評價其藉助增強對同種異體抗原之T細胞反應延遲或破壞模型中所確立腫瘤之能力。 將L55細胞在具有10%胎牛血清加1mM丙酮酸鈉及L-麩醯胺酸之RPMI-1640培養基中培養。對於研究，在第0天，向來自Jackson Laboratories之NSG小鼠(7週齡，雌性，於8隻小鼠之組中)之側腹中皮下移植於(50/50)基質膠:HBSS (0.2 ml總體積)中之5 × 106 個L55細胞。自血球分離術(BioSpec)分離大量人類PBMC，並在第33天當腫瘤達到約250 mm3 時，將其靜脈內輸注(11 ×106 個於0.2 ml PBS中之PBMC細胞/小鼠)於具有L55腫瘤之小鼠。在第34天開始，利用i.p.注射人類IgG (20 mg/kg)、抗體C (20 mg/kg)或與培美曲塞(50 mg/kg)之組合處理小鼠。培美曲塞每週投用5天，其間間斷2天。抗體每週投用一次，持續四週(在d34、d41、d48、d55投藥)。在第47天，將第二批5M PBMC (與第一次輸注相同之批次)注射於具有L55腫瘤之小鼠中。每週至少兩次監測動物健康及行為，包括理毛及步行。一週兩次量測體重及腫瘤體積。在細胞移植後第4天開始，使用電子測徑器每週兩次量測腫瘤體積，如標題為：IM-Tumor Growth Measurement之SOP中所述。腫瘤體積係使用以下公式來計算：腫瘤體積(mm3 ) = π/6 *長度*寬度2 。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C自身或huIgG與培美曲塞之組合導致「無效應」，如藉由Bliss獨立方法在此模型中所定義。抗體C與培美曲塞之組合在研究結束時使腫瘤生長減緩，其中T/C = 48.9%。在人類 PBMC 中利用板結合抗體 C 之活體外細胞介素釋放研究 可使用新鮮外周血單核細胞(PBMC)，藉由在板結合分析中量測細胞介素釋放來評價本發明之抗體引發細胞介素釋放症候群之潛力。由利用抗體治療誘導之細胞介素釋放症候群係對大多數患者而言不期望之反應，且利用雙特異性抗體治療可提高風險。 將自六名健康個體剛分離之PBMCs與板結合抗體C或對照抗體在0.1 µg至10 µg之寬滴定範圍內一起培育24小時。陽性對照係抗-人類CD3ε抗體OKT3及CD28特異性超激動劑治療性抗體之同系物TGN1412。已知兩種抗體在臨床中引起細胞介素風暴。陰性對照係效應物無效hIgG1 (IgG1-EN)同型抗體。將總計2 × 105 個細胞/孔(200 μL)一式三份添加至經抗體塗佈之板，並在37℃、5% CO2 下培育24小時。培育後，將板以400 g離心5分鐘；收集細胞培養上清液並在細胞介素測定之前儲存在-80℃。使用定製5重分析MSD套組(Cat編號K151A0H-2；Meso Scale Discovery)，遵循製造商說明書在細胞培養上清液中量測包括IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10及TNF-α之五種細胞介素。 在基本上如此分析所述實施之實驗中，人類PBMCs與抗體C一起在寬濃度範圍內培育並未導致顯著量IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10及TNF-α之細胞介素釋放。相比之下，PBMCs與抗CD3ε及TGN1412陽性對照抗體一起培育導致大多數供體中所分析之全部五種細胞介素之強烈細胞介素產生。在人類全血中利用可溶抗體 C 之活體外細胞介素釋放研究 亦可藉由量測人類全血中細胞介素由本發明可溶抗體之釋放來評估本發明之抗體引發細胞介素釋放症候群之潛力。 將來自10個健康供體之新鮮人類全血試樣與可溶抗體C或對照抗體以100 µg/mL培育24小時。陽性對照包括抗-人類CD3ε抗體OKT3及同系物抗-人類CD52 (坎帕斯，Campath)。已知OKT3及坎帕斯在臨床中引起「細胞介素風暴」。陰性對照係與臨床中之細胞介素釋放症候群無關之市售治療性抗體英利昔單抗(infliximab)及效應物無效(EN) hIgG1 (IgG1-EN)同型抗體。在人類血漿上清液中使用基於Mesoscale平臺(Cat編號K15049D-1, Meso Scale Discovery)之定製多重分析來分析廣泛細胞介素組，包括IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-13及TNF-α。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，將人類血液試樣與坎帕斯或OKT3一起培育導致在若干所分析細胞介素之所有供體中強烈的細胞介素釋放，所分析細胞介素包括與CRS相關之細胞介素(IFN-γ、IL-6、TNF-α及IL-10)。相比之下，與抗體C或與英利昔單抗一起培育並未觸發10個健康供體中之任何顯著細胞介素釋放。當與人類全血以高達100 µg/ml之濃度培育長達24小時時，抗體C並未導致強烈的細胞介素釋放。 活體外 免疫原性分析 將本發明之抗體改造為異二聚體抗體，其中每一半抗體結合不同靶標。由於異二聚體抗體之非天然組成，故免疫原性係必須評價之潛在風險。 EpiScreenTM DC：使用T細胞分析來測定抗體C之臨床免疫原性之相對潛力。自50個加載有抗體C之健康供體之同類群組之PBMC製備單核球源樹突細胞，並將其誘導為成熟表型，以將T細胞表位呈遞至自體純化之CD4+ T細胞。使用T-細胞增殖([3 H]-胸苷攝取)及IL-2細胞介素分泌(ELISpot)來量測T細胞反應。 利用一組已知生物製劑(例如英利昔單抗、阿達木單抗(adalimumab)及貝伐珠單抗(adalimumab))進行之EpiScreenTM 時程T細胞分析已顯示，EpiScreenTM 分析中供體T細胞反應之頻率與臨床中所觀測到免疫原性(抗蛋白質治療性抗體反應)之水凖之間存在明顯相關性。已在免疫原性抗體(例如阿倫單抗)之EpiScreenTM 分析中觀測到高頻率供體反應，而對於非免疫原性抗體(例如奧馬珠單抗(omalizumab)及曲妥珠單抗(trastuzumab))則觀測到相對低頻率之供體反應。一般而言，在EpiScreenTM 分析中誘導小於或等於10%陽性反應之蛋白質治療劑與臨床中免疫原性之低風險相關。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，CD4+ T細胞反應之頻率及量級之分析指示，抗體C在6%-8%之供體同類群組中誘導適度陽性反應且因此顯示臨床免疫原性之低風險。抗體 C 免疫效應物功能之活體外分析 作為利用針對人類PD-L1及人類TIM-3之雙特異性抗體之潛在癌症療法，不期望抗體產生免疫效應物功能。改造抗體C以缺少免疫效應物功能。為確認不存在免疫效應物功能，在標準固相結合分析中測試抗體C與人類Fcγ受體及C1q之結合，並在基於標準細胞之活體外分析中測試其對抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)及補體依賴性細胞毒性(CDC)反應之誘導。 對於固相人類Fcγ受體結合分析，此分析中所使用之重組Fcγ受體(FcγR)蛋白係FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb及FcγRIIIa (V)。將受體蛋白稀釋於PBS中並塗佈(50 ng/孔)至Meso Scale板(MSD cat編號L15XA-3)上。在4℃下過夜培育後，用PBS/0.05% Tween-20 (PBST)將板洗滌三次，並在室溫下用150 µL/孔之於PBST中之5% MSD Blocker A (MSD cat編號R93BA-1)封阻1-2小時。然後用PBST將板洗滌三次，並將稀釋於1% MSD Blocker A中之30 µL測試抗體或對照抗體(表3)添加至各孔並容許培育2個小時。培育後，用PBST將板洗滌兩次，並將30 µL二級抗體(MSD Cat編號D20TF-6)添加至各孔並容許在室溫下且在攪動下培育1小時。然後用PBST洗滌板並將150 µL 1×讀取緩衝液(MSD目錄號R92TC-1)添加至各孔。然後在Sector Imager 2400上讀取板。 對於C1q結合ELISA分析，用測試抗體及對照(利妥昔單抗-IgG1-效應物無效及另一人類IgG1-效應物無效抗體)以於PBS中之200 μg/mL至0.0305 μg/mL範圍內的濃度塗佈96孔聚苯乙烯ELISA板(Thermo Scientific Cat. 3855)。在4℃下培育過夜後，用PBST將板洗滌三次，並然後在室溫下用300 µl酪蛋白緩衝液(Thermo Fisher cat編號37528)封阻2小時。用PBST將板洗滌3次並然後添加0.5 µg/孔之稀釋於酪蛋白封阻緩衝液中之C1q (Quidel Cat編號A400)。在室溫下2小時後，用PBST將板洗滌三次並將50 μL二級抗體(1:200, Abd Serotec Inc編號2221-5004P)添加至各孔。將板在室溫下培育1小時並然後用PBST洗滌三次。然後將100 µL 3,3’,5,5’-四甲基聯苯胺(TMB：KPL cat編號50-65-01/02) (HRP之受質)添加至各孔並將板在室溫下培育20分鐘。停止反應(KPL cat編號50-85-06)並使用微板讀取器在450 nM下量測吸光度。 對於ADCC分析，將PD-L1及TIM-3-陽性靶細胞及CD20-陽性Wil2S細胞以10000個細胞/孔之密度接種於96孔平底板(Perkin Elmer，編號600-5680)中之50 µL ADCC分析緩衝液(於RPMI 1640中之0.5%BSA)中。將細胞培育30分鐘(除非另外說明，否則所有與細胞之培育皆在37℃及5% CO2 下實施)，隨後添加25 µL/孔之稀釋於ADCC分析緩衝液中之滴定測試抗體。與測試抗體培育30分鐘後，以15:1 (效應物:靶標)之比率添加25 µL效應細胞(具有NFAT-螢光素酶報導基因構築體之FcγRIIIa-陽性Jurkat細胞)並培育5-6小時。與100 µL Bright-GloTM 螢光素酶受質(Promega，編號G7940)室溫培育10分鐘後，量測活化效應細胞之螢光素酶活性。使用微量滴定板讀取器量化發光並使用四參數模型分析數據，以確定各抗體之EC50 值。 對於ADCP分析，將PD-L1及TIM-3-陽性靶細胞及CD20-陽性Wil2S細胞以10000個細胞/孔之密度接種於96孔平底板(Perkin Elmer，編號600-5680)中之50 µL ADCP分析緩衝液(於RPMI 1640中之0.5%BSA)中。將細胞培育30分鐘(除非另外說明，否則所有與細胞之培育皆在37℃及5% CO2 下實施)，隨後添加25 µL/孔之稀釋於ADCP分析緩衝液中之滴定測試抗體。與測試抗體培育30分鐘後，以6:1 (效應物:靶標)之比率添加25 µL效應細胞(具有NFAT-螢光素酶報導基因構築體之FcγRIIa-陽性Jurkat細胞；Promega G9885)並培育5-6小時。與100 µL Bright-GloTM 螢光素酶受質(Promega，編號G7940)室溫培育10分鐘後，量測活化效應細胞之螢光素酶活性。使用微量滴定板讀取器量化發光並使用四參數模型分析數據，以確定各抗體之EC50 值。 對於CDC分析，將貼壁靶細胞以25000個細胞/孔接種於96孔白色平底板(Perkin Elmer，編號600-5680)中之100 µL/孔之細胞生長培養基中。過夜培育(除非另外說明，否則所有與細胞之培育皆在37℃及5% CO2 下實施)後，去除培養基並添加50µl CDC分析緩衝液(RPMI 1640、含有0.1% BSA之10% FBS及25 mM HEPES)。在分析當日以50,000細胞/孔之密度在50 µL CDC分析緩衝液中接種懸浮細胞。將測試及對照抗體一式雙份添加至板並培育30分鐘。培育後，然後將稀釋於5-mL分析緩衝液(1:5)中之50 µL人類補體(S1764；Sigma)添加至各孔保持1小時。培育後，將16 µL/孔之阿爾瑪藍(Alamar Blue)試劑(Invitrogen, DAL1100)添加至各孔。將板培育22小時並然後將其自培育器去除且容許平衡至室溫保持5分鐘。在Synergy Neo2 (激發：560 nm，發射：590 nm)上讀取螢光，並相對於由Triton×100誘導之完全細胞溶解來表現CDC細胞溶解。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，抗體C未展現與任一測試人類Fcγ受體或與C1q之特異性結合。此外，在使用用於抗體C之相關TIM-3及PD-L1陽性細胞系之基於細胞之ADCC、ADCP或CDC分析中不存在可檢測反應。該等結果展現抗體C在所實施分析之檢測範圍內缺少可檢測免疫效應物功能。猴中之藥物動力學 可在ELISA分析中，使用血清藥物動力學(PK)分析測試本發明抗體在猴中之穩定性。 為表徵抗體C之血清PK，以三種不同酶聯免疫吸附分析(ELISA)格式分析血清試樣。採用總免疫球蛋白(IgG) ELISA來定量總IgG主鏈之存在，無論與TIM-3或PD-L1之結合能力如何。抗體C之標準曲線範圍係125-8000 ng/mL，其中定量上限(ULOQ)係3000 ng/mL且定量下限(LLOQ)係300 ng/mL。另外，採用TIM-3抗原捕獲ELISA及PD-L1抗原捕獲ELISA來定量血清中活性藥物之存在。對於TIM-3抗原捕獲ELISA，抗體C之分析範圍係125-8000 ng/mL，其中ULOQ係3000 ng/mL且LLOQ係300 ng/mL。對於PD-L1抗原捕獲ELISA，抗體C之標準曲線範圍係125-8000 ng/mL，其中定量上限(ULOQ)係3000 ng/mL且定量下限(LLOQ)係300 ng/mL。 在基本上如此分析中所述實施之實驗中，TIM-3及PD-L1之總IgG及功能性抗原捕獲ELISA分析在所有劑量水凖下在量上相似，此指示抗體C之穩定性及功能性結合能力在活體內隨時間之保留。胺基酸及核苷酸序列 SEQ ID NO: 1 (人類PD-L1)SEQ ID NO: 2 (人類TIM-3)SEQ ID NO: 3 (抗體A、抗體B及抗體C中PD-L1 Ab之HCVR)SEQ ID NO: 4 (抗體A、抗體B及抗體C中PD-L1 Ab之LCVR)SEQ ID NO: 5 (抗體A中TIM-3 Ab之HCVR)SEQ ID NO: 6 (抗體B中TIM-3 Ab之HCVR)SEQ ID NO: 7 (抗體C中TIM-3 Ab之HCVR) EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYYMSWVRQAPGKGLEWVSAISGNGKSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYNTGFDLWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 8 (抗體A中TIM-3 Ab之LCVR)SEQ ID NO: 9 (抗體B中TIM-3 Ab之LCVR)SEQ ID NO: 10 (抗體C中TIM-3 Ab之LCVR)SEQ ID NO: 11 (抗體A、抗體B及抗體C中PD-L1 Ab之HC)SEQ ID NO: 12 (抗體A、抗體B及抗體C中PD-L1 Ab之LC)SEQ ID NO: 13 (抗體A中TIM-3 Ab之HC)SEQ ID NO: 14 (抗體B中TIM-3 Ab之HC) SEQ ID NO: 15 (抗體C中TIM-3 Ab之HC) SEQ ID NO: 16 (抗體A中TIM-3 Ab之LC) DIVMTQSPSSLSASVGDGVTITCQASQDIYNYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLRSALTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 17 (抗體B中TIM-3 Ab之LC) DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASEAIYGYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLPIGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYGFPPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTARVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLRSALTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO: 18 (抗體C中TIM-3 Ab之LC) SEQ ID NO: 19 (來自PD-L1 Ab HC之CH1結構域之區域) GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLKS SEQ ID NO: 20 (來自PD-L1 Ab HC之CH2結構域之區域) APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVS SEQ ID NO: 21 (來自PD-L1 Ab HC之CH2結構域之區域) SNKALPAPIEK SEQ ID NO: 22 (來自PD-L1 Ab HC之CH3結構域之區域) REPQVYVLPPSRDELTKNQVSLLCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYLTWPPVLDSDGSF SEQ ID NO: 23 (來自TIM-3 Ab HC之CH1結構域之區域) EAPSSKSTSGGTAALGCLVTDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLESSGLYSLWSVVTVPS SEQ ID NO: 24 (來自TIM-3 Ab HC之CH2結構域之區域) APEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVS SEQ ID NO: 25 (來自TIM-3 Ab HC之CH2結構域之區域) APIEKTISKAK SEQ ID NO: 26 (來自TIM-3 Ab HC之CH3結構域之區域) VYPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFALVSKL SEQ ID NO: 27 (來自PD-L1 Ab之輕鏈恆定區之區域) ANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAESE SEQ ID NO: 28 (來自TIM-3 Ab之輕鏈恆定區之區域) RVGCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLRSALTL SEQ ID NO: 29 抗體C之PD-L1 LC之DNA序列 SEQ ID NO: 30 抗體C之TIM-3 LC之DNA序列 SEQ ID NO: 31 抗體C之PD-L1 HC之DNA序列 SEQ ID NO: 32 抗體C之TIM-3 HC之DNA序列
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Claims (25)

  1. 一種結合人類PD-L1(SEQ ID NO：1)與人類TIM-3(SEQ ID NO：2)之抗體，其包含：a)包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：22之胺基酸序列之第一重鏈(HC)，b)包含SEQ ID NO：4及SEQ ID NO：27之胺基酸序列之第一輕鏈(LC)，c)包含SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：23及SEQ ID NO：26之胺基酸序列之第二HC，d)包含SEQ ID NO：10及SEQ ID NO：28之胺基酸序列之第二LC；且其中，該第一LC與該第一HC形成鏈間二硫鍵，該第二LC與該第二HC形成鏈間二硫鍵，且該第一HC與該第二HC形成兩個鏈間二硫鍵，且該第一HC及第二HC係人類IgG1同型。
  2. 如請求項1之抗體，其中：a)該第一HC包含SEQ ID NO：20及SEQ ID NO：21之胺基酸序列，且b)該第二HC包含SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之胺基酸序列。
  3. 一種結合人類PD-L1(SEQ ID NO：1)與人類TIM-3(SEQ ID NO：2)之抗體，其包含兩條輕鏈(LC)及兩條重鏈(HC)，其中：a)第一LC具有SEQ ID NO：12之胺基酸序列，且第一HC具有SEQ ID NO：11之胺基酸序列，以及b)第二LC及第二HC分別具有SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：17及SEQ ID NO：14或SEQ ID NO：18及SEQ ID NO：15之胺基酸序列。
  4. 如請求項3之抗體，其中該第二LC具有SEQ ID NO：16之胺基酸序列，且該第二HC具有SEQ ID NO：13之胺基酸序列。
  5. 如請求項3之抗體，其中該第二LC具有SEQ ID NO：17之胺基酸序列，且該第二HC具有SEQ ID NO：14之胺基酸序列。
  6. 如請求項3之抗體，其中該第二LC具有SEQ ID NO：18之胺基酸序列，且該第二HC具有SEQ ID NO：15之胺基酸序列。
  7. 一種哺乳動物細胞，其包含包括編碼具有SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：12及SEQ ID NO：18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列的DNA分子，其中該細胞能表現如請求項6之抗體。
  8. 一種哺乳動物細胞，其包含第一DNA分子及第二DNA分子，其中該第一DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，且其中該第二DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO：15及SEQ ID NO：18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，其中該細胞能表現如請求項6之抗體。
  9. 一種產生抗體之方法，其包含如請求項7或8之哺乳動物細胞在使得該抗體表現之條件下培養及回收該表現之抗體。
  10. 一種抗體，其係由以下產生：哺乳動物細胞在使得該抗體表現之條件下培養，該哺乳動物細胞包含包括編碼具有SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：12及SEQ ID NO：18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列的DNA分子；及回收該表現之抗體。
  11. 一種抗體，其係由以下產生：包含第一DNA分子及第二DNA分子之哺乳動物細胞在使得該抗體表現之條件下培養，其中該第一DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列，且其中該第二DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO：15及SEQ ID NO：18之胺基酸序列之多肽之多核苷酸序列；及回收該表現之抗體。
  12. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至6或10至11中任一項之抗體及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  13. 一種如請求項1至6及10至11中任一項之抗體之用途，其用於製造供治療癌症之藥劑。
  14. 如請求項13之用途，其中該癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。
  15. 如請求項14之用途，其中該肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。
  16. 如請求項13至15中任一項之用途，其中該藥劑係與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序投與：順鉑、卡鉑(carboplatin)、達卡巴嗪(dacarbazine)、脂質體多柔比星(liposomal doxorubicin)、多西他賽(docetaxel)、環磷醯胺及多柔比星、諾維本(navelbine)、艾瑞布林(eribulin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他濱(capecitabine)、FOLFOX(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑(oxaliplatin))、FOLFIRI(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康(irinotecan))、吉西他濱(gemcitabine)、托泊替康(topotecan)、脂質體伊立替康、培美曲塞(pemetrexed)及西妥昔單抗(cetuximab)。
  17. 如請求項1至6或10至11中任一項之抗體，其用於療法。
  18. 如請求項1至6或10至11中任一項之抗體，其用於治療癌症。
  19. 如請求項18之抗體，其中該癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。
  20. 如請求項19之抗體，其中該肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。
  21. 如請求項1至6或10至11中任一項之抗體，其與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序組合用於治療癌症：順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、諾維本、艾瑞布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、吉西他濱、托泊替康、脂質體伊立替康、培美曲塞及西妥昔單抗。
  22. 一種用於治療癌症之醫藥組合物，其包含有效量之如請求項1至6或10至11中任一項之抗體。
  23. 如請求項22之組合物，其中該癌症係黑色素瘤、肺癌、頭頸癌、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、膀胱癌、***癌、乳癌、卵巢癌、子宮內膜癌、食道癌、軟組織肉瘤、膽管癌或肝細胞癌。
  24. 如請求項23之組合物，其中該肺癌係非小細胞肺癌、小細胞肺癌或間皮瘤。
  25. 如請求項22至24中任一項之組合物，其係與一或多種選自由以下組成之群之標準護理劑同時、分開或依序組合投與：順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、諾維本、艾瑞布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合顆粒、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI(甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、吉西他濱、托泊替康、脂質體伊立替康、培美曲塞及西妥昔單抗。
TW107110637A 2017-04-11 2018-03-28 抗-pd-l1-抗-tim-3雙特異性抗體 TWI677503B (zh)

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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA039020B1 (ru) 2016-04-12 2021-11-23 Симфоген А/С Антитела и композиции против tim-3
JP7027401B2 (ja) 2016-07-14 2022-03-01 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｔｉｍ３に対する抗体およびその使用
JOP20190013A1 (ar) * 2016-08-25 2019-01-31 Lilly Co Eli أجسام مضادة لـ (تي آي ام -3)
JP2020513009A (ja) 2017-04-05 2020-04-30 シムフォゲン・アクティーゼルスカブＳｙｍｐｈｏｇｅｎ Ａ／Ｓ Ｐｄ−１、ｔｉｍ−３、およびｌａｇ−３を標的とする併用治療

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016061142A1 (en) * 2014-10-14 2016-04-21 Novartis Ag Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
US20170058033A1 (en) * 2015-08-24 2017-03-02 Eli Lilly And Company PD-L1 Antibodies
WO2017055404A1 (en) * 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3

Family Cites Families (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011120135A1 (en) 2010-03-29 2011-10-06 Zymeworks, Inc. Antibodies with enhanced or suppressed effector function
WO2012037659A1 (en) 2010-09-24 2012-03-29 Zymeworks Inc. System for molecular packing calculations
EP2622524A4 (en) 2010-09-30 2014-12-24 Zymeworks Inc SIMPLIFICATION OF REST RELATIONS IN A PROTEIN DESIGN
AU2011325833C1 (en) 2010-11-05 2017-07-13 Zymeworks Bc Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the Fc domain
AU2012222833B2 (en) 2011-03-03 2017-03-16 Zymeworks Inc. Multivalent heteromultimer scaffold design and constructs
WO2013016594A2 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Virginia Commonwealth University Abhesive coatings
WO2013063702A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
MX360109B (es) 2012-04-20 2018-10-23 Merus Nv Metodos y medios para la produccion de moleculas de tipo ig.
KR20150008171A (ko) 2012-05-10 2015-01-21 자임워크스 인코포레이티드 단일군 일가 항체 구조물 및 그의 용도
WO2013190555A1 (en) * 2012-06-21 2013-12-27 Compugen Ltd. Lsr antibodies, and uses thereof for treatment of cancer
JP2015528003A (ja) 2012-07-13 2015-09-24 ザイムワークス，インコーポレイテッド 抗ｃｄ３構築物を含む二重特異性の非対称ヘテロ二量体
WO2014012082A2 (en) 2012-07-13 2014-01-16 Zymeworks Inc. Multivalent heteromultimer scaffold design an constructs
CN104640561A (zh) 2012-07-23 2015-05-20 酵活有限公司 包含轻链和重链的选择性配对的免疫球蛋白构建体
AU2013326974B2 (en) 2012-10-03 2019-01-03 Zymeworks Bc Inc. Methods of quantitating heavy and light chain polypeptide pairs
EP2903641A2 (en) * 2012-10-04 2015-08-12 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human monoclonal anti-pd-l1 antibodies and methods of use
CA2889951C (en) 2012-11-02 2023-04-18 Zymeworks Inc. Crystal structures of heterodimeric fc domains
WO2014082179A1 (en) 2012-11-28 2014-06-05 Zymeworks Inc. Engineered immunoglobulin heavy chain-light chain pairs and uses thereof
EP3049442A4 (en) * 2013-09-26 2017-06-28 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
US20160326249A1 (en) 2014-01-15 2016-11-10 Zymeworks Inc. Bi-specific cd3 and cd19 antigen-binding constructs
JOP20200096A1 (ar) * 2014-01-31 2017-06-16 Children’S Medical Center Corp جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها
TWI701042B (zh) * 2014-03-19 2020-08-11 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
EA201692476A1 (ru) 2014-05-28 2017-07-31 Займворкс Инк. Модифицированные антигенсвязывающие полипептидные конструкции и их применение
TWI595006B (zh) * 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
JOP20190013A1 (ar) 2016-08-25 2019-01-31 Lilly Co Eli أجسام مضادة لـ (تي آي ام -3)

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016061142A1 (en) * 2014-10-14 2016-04-21 Novartis Ag Antibody molecules to pd-l1 and uses thereof
US20170058033A1 (en) * 2015-08-24 2017-03-02 Eli Lilly And Company PD-L1 Antibodies
WO2017055404A1 (en) * 2015-10-02 2017-04-06 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies specific for pd1 and tim3

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Publication number Publication date
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