TWI600660B - 高純度膠原蛋白顆粒及其製備方法與用途 - Google Patents
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Description
本揭示內容是關於一種製備膠原蛋白的方法，特別是製備膠原蛋白顆粒的改良方法，所述膠原蛋白適合作為可供細胞生長之生物性支架，例如，作為整形手術過程(即，整容手術)或軟組織填充(例如，平滑臉部線條以及皺紋)所需的注射用皮膚填充劑；或者是作為傷口敷料用以促進傷口癒合。
膠原蛋白是一種不溶性纖維蛋白，其存在於脊椎動物中，為結締組織(如，皮膚)之纖絲的主要成分。傳統製備膠原蛋白的方法不僅耗時且效率低，更會破壞膠原蛋白結構的完整性，使其不適合當作生物性支架，因而無法用於整容手術或作為傷口癒合移植物來使用。此外，市面上的膠原蛋白(如，Zyderm和Zyplast)是取自於乳牛皮膚，其無法用於所有的患者，因已知牛膠原蛋白中會在相當多宿主中引發嚴重的過敏反應，特別是具有自體免疫病史的個體身上。此外，牛膠原蛋白不會長時間存在於注射位置，因此，需定期補充注射。膠原蛋白之所以僅短暫存在於注射部位的原因是，從牛皮萃取膠原蛋白的過程中，膠原蛋白結構受到破壞，導致該些膠原蛋白易被宿主吸收。
本領域目前亦專注於開發源自人類的膠原蛋白(例如，Cosmoderm和Cosmoplast)，但其來源有限(例如，取自***環切手術後的皮膚)，導致人類膠原蛋白價格居高不下。或是，患者亦可藉由抽脂手術從身上取得脂肪組織，經處理後形成注射形式的膠原蛋白，再立即回注使用，或是儲存起來以備將來使用。然而，此一方式取得的膠原蛋白和前述牛膠原蛋白具有相同的缺陷，亦即，膠原蛋白的完整性會在分離的過程中受到破壞。
因此，本領域亟需一種製備膠原蛋白的改良方法，其在分離膠原蛋白的過程中可保留膠原蛋白的天然結構和構型，使得據此製備而成的膠原蛋白可作為三維支架，供宿主細胞生長，且不會誘發宿主細胞出現嚴重的免疫反應。
發明內容旨在提供本揭示內容的簡化摘要，以使閱讀者對本揭示內容具備基本的理解。此發明內容並非本揭示內容的完整概述，且其用意並非在指出本發明實施例的重要/關鍵元件或界定本發明的範圍。
為解決上述製備膠原蛋白顆粒的問題，本案發明人揭示了一種從動物皮膚(例如，牛或豬的皮膚)中製備膠原蛋白顆粒的方法，且該膠原蛋白顆粒能夠保留天然膠原蛋白的構型。
再者，本揭示內容的第一態樣是提供一種製備膠原蛋白顆粒的方法。所述方法包含以下步驟： (1) 對一厚度為0.1-1公釐的動物皮膚施以一去細胞處理； (2) 以一水溶液處理步驟(1)中該經去細胞處理的動物皮膚，其中該水溶液包含一表面活性劑； (3) 以一蛋白酶處理步驟(2)中該經水溶液處理的動物皮膚； (4) 以一核酸酶處理步驟(3)中該經蛋白酶處理的動物皮膚； (5) 對步驟(4)中該經核酸酶處理的動物皮膚施以一去離子化處理； (6) 對步驟(5)中該經去離子化處理的動物皮膚施以一去化學物質處理，以產生一膠原蛋白基質；以及 (7) 將步驟(6)中該膠原蛋白基質進行造粒，以產生該膠原蛋白顆粒，其粒徑為10-250微米。
依據某些實施方式，在步驟(1)中，將厚度為約0.1-1公釐之動物皮膚，以超臨界流體(SCF)在壓力100–500巴以及溫度30-50℃下，處理約20分鐘至5天。
所述SCF是超臨界二氧化碳 (scCO2)、超臨界一氧化氮 (scN2O)、超臨界水 (scH2O)、超臨界烷類、超臨界烯類、超臨界醇類或超臨界丙酮。在一實施例中，所述SCF是scCO2。在其他實施例中，所述SCF是scN2O。
依據一較佳實施方式，所述去細胞處理步驟的處理條件是溫度約37℃、壓力約350巴，以及處理時間為20分鐘。
依據某些實施方式，在步驟(2)中，以含有表面活性劑的水溶液處理步驟(1)中去細胞的動物皮膚，其中所述表面活性劑可選自於以下所組成的群組：辛基酚聚氧乙烯醚(octylphenol ethoxylates)(例如， Triton X series)、去水山梨醇單硬脂酸酯(sorbitan monostearate)、聚山梨醇酯(polysorbate)、波洛莎姆(poloxomer)、壬苯醇醚(nonoxynols)、十六醇(cetyl alcohol)和烷基聚葡糖苷(alkylpolyglucoside)。在可任選的實施方式中，所述水溶液更包含一陰離子表面活性劑，例如，月桂基磺酸(lauryl sulfonic acid)、十二烷基磺酸(dodecyl sulfonic acid)、十二烷基磺酸(sodium dodecyl sulfate, SDS)、十二烷基苯磺酸(dodecyl benzene sulfonic acid)、十三烷基苯磺酸(tridecyl benzene sulfonic acid)、烷基苯氧基苯二磺酸(alkyl-phenoxy benzene disulfonic acid)、萘磺酸(naphthalene sulfonic acid)、烷基萘磺酸(alkyl-naphthalene sulfonic acid)和烯基萘(alkenyl-naphthalene)。在又一可任選的實施方式中，所述水溶液更包含一鹽類，例如，氯化鈉和氯化鉀等。在一較佳的實施例中，所述陰離子表面活性劑是十二烷基磺酸 (SDS)。
依據某些實施方式，步驟(3)中的蛋白酶可選自於以下所組成的群組：胃蛋白酶pepsin、胰蛋白酶(trypsin)、胰凝乳蛋白酶(chymotrypsin)、木瓜酶(papain)、木瓜凝乳酶(chymopapain)、鳳梨酶(bromelain)、奇異果酶(actinidain)、蛋白酶A(proteinase A)、蛋白酶K(proteinase K)、胜肽酶(peptidase)、無花果酶(ficin)、鈣蛋白酶(calpain)、半胱天冬酶(caspase)及其組合。
依據某些實施方式，於步驟(4)，以核酸酶處理步驟(3)中經蛋白酶處理的動物皮膚，所述核酸酶是DNA核酸酶或RNA核酸酶。
在可任選的實施方式中，步驟(4)中的產物可進一步以步驟(2)中的水溶液處理，所述水溶液包含非離子表面活性劑，其係選自於以下群組：辛基酚聚氧乙烯醚(例如，Triton X series)、去水山梨醇單硬脂酸酯、山梨醇酯、波洛莎姆、壬苯醇醚、十六醇和烷基聚葡糖苷。在一較佳實施例中，所述水溶液包含1% Triton X-100。在可任選的實施方式中，所述水溶液更包含一陰離子表面活性劑，例如，月桂基磺酸、十二烷基磺酸、十二烷基苯磺酸、十三烷基苯磺酸、烷基苯氧基苯二磺酸、萘磺酸、烷基萘磺酸和烯基萘。在其他可任選的實施方式中，所述水溶液更包含一鹽類，例如氯化鈉和氯化鉀等。在一較佳實施例中，所述陰離子表面活性劑是十二烷基磺酸(SDS)。
依據某些實施方式，在步驟(5)，將步驟(4)中經核酸酶處理的動物皮膚以過氧化氫處理1小時。
依據某些實施方式，在步驟(6)，去除化學物質步驟包含將步驟(5)中的去離子產物，以一超臨界流體(SCF)於壓力100–500巴和溫度30-50℃下處理20分鐘至5天。
所述超臨界流體是超臨界二氧化碳(supercritical carbon dioxide, scCO2
)，超臨界一氧化氮(supercritical nitrous oxide, scN2
O)、超臨界水(supercritical water, scH2
O)、超臨界烷纇(supercritical alkane)、超臨界烯纇(supercritical alkene)、超臨界醇纇(supercritical alcohol)或超臨界丙酮(supercritical acetone)。在一實施例中，所述SCF是scCO2
。在其他實施例中，所述SCF是scN2
O。
依據較佳實施方式中，所述去除化學物質步驟是在共溶劑存在下進行，處理條件為溫度約37℃和壓力約350巴，處理時間為約60分鐘。在一實施例中，所述共溶劑是乙醇，且和SCF一併施用，其中共溶劑和SCF的體積比為1：10。
依據又一實施方式，在步驟(7)中，造粒步驟是以切割或研磨步驟(6)中的膠原蛋白基質，形成顆粒尺寸為10-250微米的膠原蛋白顆粒。製備而成的膠原蛋白顆粒是由膠原蛋白所構成，其保留了天然結構和構型，因此，這樣的膠原蛋白顆粒可作為三維生物性支架，施用至個體後能夠讓細胞在膠原蛋白顆粒上生長。
因此，本揭示內容第二態樣是提供一種治療個體皮膚狀況的方法，其中皮膚狀況是指傷口、皮膚上的紋路和/或凹陷。所述方法更包含施用一足夠量之以本發明方法製備而成的膠原蛋白顆粒至個體的皮下，以減緩或改善皮膚狀況。所述皮膚狀況是傷口、皮膚上的紋路和/或凹陷。舉例而言，傷口包含，但不限於，手術傷口(如，切口)、潰瘍，以及任何身體上的其他損傷，如，皮膚或其他組織遭破壞、切割、穿刺或撕裂。皮膚上的紋路和/或凹陷(例如，臉部的皮膚) 包含，但不限於，皺眉紋(frown lines)、嘴邊紋(lines around the mouth)、抬頭紋(worry lines)、魚尾紋(crows feet)、法令紋(smile lines)，以及面皰或外傷造成的臉部疤痕。在一較佳的實施方式中，所述膠原蛋白顆粒是作為皮膚填充劑以填充個體的軟組織，並藉由針頭(例如，32號針或以下)注射至個體中。在其他實施方式中，所述膠原蛋白顆粒是作為傷口敷料使用，利用塗敷器將膠原蛋白散佈於個體的傷口上。
本揭示內容第三態樣是提供一種於整容手術過程用於治療前述皮膚狀況的套組。所述套組包含以下成分：一容器、本方法製備而成的膠原蛋白顆粒，其特徵在於膠原纖維的維整體性相對完整，且每一顆粒的直徑為約10–250微米；以及一與容器相關的說明，用以引導使用者使用揭示內容的膠原蛋白顆粒。所述說明可以是手冊、卡帶、CD、VCD或DVD。
在參閱下文實施方式後，本發明所屬技術領域中具有通常知識者當可輕易瞭解本發明之基本精神及其他發明目的，以及本發明所採用之技術手段與實施態樣。
為了使本揭示內容的敘述更加詳盡與完備，下文針對了本發明的實施態樣與具體實施例提出了說明性的描述；但這並非實施或運用本發明具體實施例的唯一形式。實施方式中涵蓋了多個具體實施例的特徵以及用以建構與操作這些具體實施例的方法步驟與其順序。然而，亦可利用其他具體實施例來達成相同或均等的功能與步驟順序。
雖然用以界定本發明較廣範圍的數值範圍與參數皆是約略的數值，此處已儘可能精確地呈現具體實施例中的相關數值。然而，任何數值本質上不可避免地含有因個別測試方法所致的標準偏差。在此處，「約」通常係指實際數值在一特定數值或範圍的正負10%、5%、1%或0。5%之內。或者是，「約」一詞代表實際數值落在平均值的可接受標準誤差之內，視本發明所屬技術領域中具有通常知識者的考量而定。除了實驗例之外，或除非另有明確的說明，當可理解此處所用的所有範圍、數量、數值與百分比（例如用以描述材料用量、時間長短、溫度、操作條件、數量比例及其他相似者）均經過「約」的修飾。因此，除非另有相反的說明，本說明書與附隨申請專利範圍所揭示的數值參數皆為約略的數值，且可視需求而更動。至少應將這些數值參數理解為所指出的有效位數與套用一般進位法所得到的數值。
除非本說明書另有定義，此處所用的科學與技術詞彙之含義與本發明所屬技術領域中具有通常知識者所理解與慣用的意義相同。此外，在不和上下文衝突的情形下，本說明書所用的單數名詞涵蓋該名詞的複數型；而所用的複數名詞時亦涵蓋該名詞的單數型。
本揭示內容是關於一種製備膠原蛋白顆粒的新穎方法、利用該方法所製備而成的新穎膠原蛋白顆粒，以及該膠原蛋白顆粒的用途。
本揭示內容第一態樣是提供一種製備膠原蛋白顆粒的方法，此方法能夠保留膠原蛋白天然結構和構型，因此，當注射本發明膠原蛋白顆粒至宿主時，可提供一較佳的微環境，供宿主細胞組織生長。
據此，本發明方法至少包含以下步驟： (1) 對一厚度為0.1-1公釐的動物皮膚施以一去細胞處理； (2) 以一水溶液處理步驟(1)中該經去細胞處理的動物皮膚，其中該水溶液包含一表面活性劑； (3) 以一蛋白酶處理步驟(2)中該經水溶液處理的動物皮膚； (4) 以一核酸酶處理步驟(3)中該經蛋白酶處理的動物皮膚； (5) 對步驟(4)中該經核酸酶處理的動物皮膚施以一去離子化處理； (6) 對步驟(5)中該經去離子化處理的動物皮膚施以一去化學物質處理，以產生一膠原蛋白基質；以及 (7) 將步驟(6)中該膠原蛋白基質進行造粒，以產生該膠原蛋白顆粒，其粒徑為10-250微米。
在進行本方法之前，較佳是透過剝皮的方式自一動物身上取得其皮膚，再經清洗、除毛和去脂而獲得適合用於本發明方法的動物皮膚。在一較佳實施方式中，適用於本揭示內容的動物是經濟動物，包含但不限於，豬、牛、乳牛、公牛、綿羊、山羊、驢、兔、鴨、鵝和雞。可利用習知任一種物理或化學除毛或去脂方法來執行所述除毛和去脂步驟。舉例而言，利用酸處理動物皮膚以去除動物皮膚(例如，豬皮)上的毛髮，利用酵素(例如，脂肪酶)或化學物質(例如，清潔劑)處理動物皮膚以去除其上的脂肪，另外，亦可透過刀刃直接將脂肪切除。
接著，以皮刀去除上述已除毛和去脂之動物皮膚的表層，進而產生一厚度約0.1至1公釐的動物皮膚，例如，動物皮膚的厚度約 0.1、 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9以及1.0公釐；較佳為約0.2至0.6公釐，例如，0.2、0.3、0.4、0.5以及0.6公釐；最佳為約3公釐。由此所得之動物皮膚即可用於本揭示內容所述的方法中。
在可任選的實施方式中，以鹼試劑於溫度0-55℃之間，處理前述厚度約為0.1至1公釐的動物皮膚約0.1-24小時，以去除殘留的毛髮和/或脂肪。舉例而言，適用於本方法的鹼試劑包含，但不限於，氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、尿素、硫化鈉和硫代乙酸鈣等。在較佳實施方式中，所述動物皮膚是豬的皮膚，且厚度為約0.1-0.6公釐，並且在4℃下，以0.1-1N氫氧化鈉溶液處理約1小時。
在步驟(1)，是對厚度為0.1-1公釐之動物皮膚進行去細胞處理。所述去細胞處理步驟的目的是在去除動物皮膚上的細胞物質的同時，仍能保留膠原蛋白的物理和生物化學特性，使其可作為組織支架。據此，在步驟(1)，以超臨界流體 (SCF)在壓力約100–500巴下，處理厚度為0.1-1公釐之動物皮膚，例如在100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490和500巴的壓力下；較佳為約150–450 巴，例如150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440和450巴；以及更佳為約200-400巴，例如200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390，以及400巴的壓力下進行處理。此外，步驟(1)是在30-50℃的溫度下進行，例如在30、31、32、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49和50℃；較佳是35-45℃之間，例如35、36、37、38、39、40、41、42、43、44和45℃；處理約20分鐘至5天，例如20、30、40、50，以及60 分鐘； 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23，以及24小時；2、3、4和5天。在某些實施例中，所述厚度為0.1-1公釐之動物皮膚以SCF處理約1至24小時。在其他實施方式中，所述厚度為0.1-1公釐之動物皮膚以SCF處理2至5天。
所述SCF可以是超臨界二氧化碳(scCO2
)、超臨界一氧化氮 (scN2
O)、超臨界水(scH2
O)、超臨界烷纇、超臨界烯纇、超臨界醇纇或超臨界丙酮。在一實施例中，所述SCF是scCO2
，scCO2
的超臨界條件是溫度37℃、壓力為350巴，因此，可在接近個體體溫(即，37℃)的溫度下進行去細胞處理，來移除其中的生物性物質。在另一較佳實施方式中，所述SCF是scN2
O。
接著，在步驟(2)，以含有非離子表面活性劑的水溶液，來清洗步驟(1)中經去細胞處理的動物皮膚，以移除其上任何殘留的細胞物質。舉例而言，適用於本發明的非離子表面活性劑包含，但不限於，辛基酚聚氧乙烯醚(例如，Triton X series)，去水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯、波洛莎姆，壬苯醇醚，十六醇、烷基聚葡糖苷等。在較佳的實施方式中，非離子表面活性劑是辛基酚聚氧乙烯醚，即，Triton X series，其包含但不限於，Triton X-15、Triton X-35、Triton X-45、Triton X-100、Triton X-102、Triton X-114等。依據本揭示內容某些實施方式，所述非離子表面活性劑是Triton X-100，其於水溶液中的濃度為0.1–10% (重量%)，例如0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10% (重量%)。在較佳的實施方式中，離子表面活性劑於水溶液的濃度為0.5–5% (重量%)，例如0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4或5% (重量%)。依據一較佳實施方式，所述水溶液含約1% (重量％)之Triton X-100。
在可任選的實施方式中，所述水溶液更包含一陰離子表面活性劑，例如月桂基磺酸、十二烷基磺酸、十二烷基苯磺酸、十三烷基苯磺酸、烷基苯氧基苯二磺酸、萘磺酸、烷基萘磺酸和烯基萘。在又一任選實施方式中，所述水溶液更包含一鹽類，例如氯化鈉和氯化鉀等。在一較佳實施例中，所述陰離子表面活性劑是十二烷基磺酸(SDS)。
接著，在步驟(3)中，以蛋白酶酵素來消化步驟(2)中經水溶液清洗的動物皮膚處理。本步驟採用溫和的酵素消化，因此能夠保留膠原纖維的天然結構和構型。舉例而言，適用於步驟(4)的蛋白酶包含、但不限於、胃蛋白酶、 胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜酶、木瓜凝乳酶、鳳梨酶、奇異果酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胜肽酶、無花果酶、鈣蛋白酶、半胱天冬酶或其組合。 在一實施例中，所述蛋白酶是胃蛋白酶。在其他實施例中，所述蛋白酶是胰蛋白酶和以及胰凝乳蛋白酶的混合物。在較佳的實施方式中，所述蛋白酶的濃度為約0.001–0.1% (重量%)，例如0.001、0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09和0.1% (重量%)；在較佳的實施方式中，約0.002–0.05% (重量%)，例如0.002、0.003、0.004、0.005、0.006、0.007、0.008、0.009、0.01、0.02、0.03、0.04和0.05% (重量%)。依據一較佳實施方式，步驟(2)中經水溶液清洗的動物皮膚以約0.05% (重量%) 胃蛋白酶處理約8-24小時，例如8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23和24小時；較佳為約12至20小時，例如12、13、14、15、16、17、18、19和20小時。
在步驟(4)中，以核酸酶處理步驟(3)中的產品，例如，以DNA核酸酶或RNA核酸酶，較佳是非專一性DNA/RNA核酸酶來處理步驟(3)中的產品。依據本揭示內容某些實施方式，步驟(3)中的產品在37℃下以核酸酶處理1小時。
在可任選的實施方式中，更包含以糖苷水解酶(例如α-半乳糖苷酶)來處理步驟(4)中的產物，以移除步驟(3)中經核酸酶處理產物上任何殘留的半乳糖基部分。
在又一可任選的實施方式中，更包含以上述步驟(2)的水溶液來處理步驟(4)中的產物，以移除任何殘留的細胞物質。在較佳的實施方式中，所述水溶液含1% Triton X-100，且亦含有陰離子表面活性劑，例如SDS。
在步驟 (5)中，將步驟(4)中經核酸酶處理的動物皮膚去離子化，其包含對步驟(4)中經核酸酶處理的動物皮膚，施以過氧化氫溶液處理約0.5-5小時，例如約0.5、1、1.5、2、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5和5小時。在較佳實施方式中，溶液中的過氧化氫濃度為0.1-3% (重量%)，例如約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.5、2、2.5或3% (重量%)。依據一較佳實施方式，是以1% 過氧化氫溶液處理步驟(4)中產物約1小時。
接著，於步驟(6)中，去除步驟(5)產物之化學物質，其包含以超臨界流體處理步驟(5)中經去離子化的產物。利用與步驟(1)相似的條件進行處理， 本步驟可採用相同或不同的超臨界流體，於壓力約100–500巴和溫度30-50℃下，處理約20分鐘至5天。在一實施例中，所述SCF是scCO2
。 在其他實施例中，所述SCF是scN2
O。依據一較佳實施方式，所述SCF係連同一共溶劑一併施用至步驟(5)的產物，且去除化學物質步驟的處理條件為溫度約37℃、壓力約350巴，處理約60分鐘。所述共溶劑是C1-4醇，
其包含，但不限於，乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、仲丁醇、叔丁醇和環丁醇。在某些較佳的實施方式中，所述共溶劑是乙醇，可和SCF一併施用，其中共溶劑和SCF的體積比為1:20至1:4，例如，1:20、1:19、1:18、1:17、1:16、1:15、1:14、1:13、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5和1:4。在一較佳實施方式中，所述乙醇和SCF是以體積比約1:19施用。在其他實施方式，所述乙醇和SCF是以體積比約1:10施用。在又一實施方式中，所述乙醇和SCF是以體積比約1:4施用。
在最終步驟(7)中，將步驟(6)產物進行造粒，以產生適合注射施用的膠原蛋白顆粒。所述造粒是在液態氮下，以切割、研磨或修剪的方式處理步驟(6)中的產物(即，膠原蛋白基質)，以便產出尺寸為10-250微米之膠原蛋白顆粒，例如約10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、240、245和250微米。在一較佳實施方式，所述膠原蛋白顆粒的尺寸為約50-100微米， 例如約50、55、60、65、70、75、80、85、90、95，以及100微米。在其他實施方式中，所述膠原蛋白顆粒的尺寸為約100-150微米，例如約100、105、110、115、120、125、130、135、140、145和150微米。在其他實施方式，所述膠原蛋白顆粒的尺寸為約150-250微米，例如約150、155、160、170、175、180、185、190、195、200、205、210、220、225、230、235、240、245和250微米。依據本方法製備而成的膠原蛋白顆粒其特徵在於，膠原蛋白中的膠原纖維保留了天然膠原纖維結構和構型，使得本發明的膠原蛋白顆粒可作為生物性支架供細胞生長。
因此，本發明膠原蛋白顆粒可作為皮膚填充劑，並可利用32號或32號以下的針頭，來將本發明膠原蛋白顆粒施用至個體中的特定部位 (例如，臉部)，例如以 32、30、29、28、27、26s、26、25、24、23、22、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8或7號針頭來進行注射。在一實施例中，使用30號針頭注射本發明膠原蛋白顆粒。
在其他實施例中，使用27號針頭注射本發明膠原蛋白顆粒。 此外，所述膠原蛋白顆粒是作為傷口敷料使用，利用塗敷器將膠原蛋白散佈於至個體的傷口上，所述傷口但不限於，手術傷口(如，切口)、潰瘍，以及任何身體上的其他損傷，如，皮膚或其他組織破壞、切割、穿刺或撕裂。
本發明方法不同於先前技術之處在於，本方法在製備過程中不需使用交聯劑或額外添加鹽類以穩定膠原蛋白基質，亦不需要從膠原蛋白基質中萃取膠原蛋白纖維；取代而之的是本發明是將完整的膠原蛋白基質進行造粒產生膠原蛋白顆粒，其中每一顆粒的直徑約10-250微米。利用本方法製備的膠原蛋白顆粒是由膠原蛋白纖維所構成，其保留天然膠原纖維的完整性，因此，本發明膠原蛋白顆粒適合作為供宿主細胞生長的生物性支架使用。
因此，本揭示內容另一態樣式提供一種治療一個體皮膚狀況的方法；所述皮膚狀況是指傷口、皮膚上的紋路和/或凹陷。所述方法包含以下步驟：施用一足夠量的本方法製備的膠原蛋白顆粒至個體的皮膚下，以減緩或改善皮膚狀況。 本發明膠原蛋白顆粒適用於促進傷口癒合，平滑臉部的線條和/或皺紋，特別是所述傷口包含，但不限於，手術傷口(如，切口)、潰瘍，以及任何身體上的其他損傷，如，皮膚或其他組織破壞、切割、穿刺或撕裂；以及皮膚上的紋路和/或凹陷(例如，臉部的皮膚) 包含，但不限於，皺眉紋、嘴邊紋、抬頭紋(worry lines)、魚尾紋、法令紋，以及面皰或外傷造成的臉部疤痕。
為了提供相關工具讓本發明相關技術人士使用本發明，本發明膠原蛋白顆粒可包裝成一套組形式，用來治療上述各種皮膚狀況。在一實施方式中，本發明提供一種將本發明之膠原蛋白顆粒應用於臉部整容的套組。在其他實施方式中，本發明提供一種利用本發明膠原蛋白顆粒治療個體傷口的套組。
所述套組的成分包含：一容器、依據本發明任一實施方式所製備而成的膠原蛋白顆粒，其特徵在於膠原纖維的整體性相對完整，且每一顆粒的直徑為約10至250微米；以及一與容器相關的說明，記載如何使用本發明膠原蛋白顆粒。所述說明可以是手冊、卡帶、CD、VCD或DVD。
下文提出多個實驗例來說明本發明的某些態樣，以利本發明所屬技術領域中具有通常知識者實作本發明，且不應將這些實驗例視為對本發明範圍的限制。據信習知技藝者在閱讀了此處提出的說明後，可在不需過度解讀的情形下，完整利用並實踐本發明。此處所引用的所有公開文獻，其全文皆視為本說明書的一部分。
實驗例
材料與方法
細胞培養
NIH-3T3纖維母細胞培養於高濃度葡萄糖DMEM(含10%胎牛血清 (FBS)、100單位/毫升之盤林西林和100毫克/毫升之鏈黴素)中，置於37°C、5% CO2，潮濕環境下培養。
於膠原蛋白顆粒重新生長(Recellularization)
當3T3細胞生長至約80% 滿(confluent)時，利用酵素(0.25%胰蛋白酶溶於1 mM EDTA)讓貼附生長的細胞脫離後，， 在500 x g下離心5分鐘將脫離的細胞收集起來。將所收集到的細胞再次懸浮至培養基中，並接種至經SCF處理的膠原蛋白顆粒(濃度：1x103
細胞/毫升)上，接著將所述顆粒置於24孔培養盤，置於培養箱內培養12、24、48或72小時，確保細胞已貼附至膠原蛋白顆粒表面。接著，將其上有3T3細胞生長的膠原蛋白顆粒分別浸漬於2.5%戊二醛和1%四氧化鋨中1.5小時，再浸漬至酒精中脫水。
動物
採用紐西蘭白兔(每隻重量大於0.5或2公斤)進行熱原試驗和皮內刺激試驗；採用ICR小鼠(BioLASCO Taiwan Co., Ltd)(每隻重量為約17-23克)和天竺鼠(每隻重量為約300-500克)進行皮膚敏感性試驗。實驗動物培養在動物設施中，以可自由取用飲水和食物的方式飼養所述兔子(每籠一隻)、小鼠(每籠5隻)和天竺鼠(每籠5隻)，動物設施中的溫度和濕度分別維持在18-26℃和30-75%。每日記錄紐西蘭白兔的體溫，本熱原試驗所採用的紐西蘭白兔生理條件如下：體溫不超過39.8℃且體溫最高值和最低值間不超過1℃。每次試驗前皆會進行動物檢疫並讓實驗動物適應試驗環境。
實施例
1
膠原蛋白顆粒之製備和特性分析
1.1
製備膠原蛋白基質
將去除毛髮和脂肪的豬皮(0.2-0.4公釐)置於4℃下乾燥24小時，接著以二氧化碳超臨界流體(scCO2
)在350巴，37℃下，處理40-180分鐘，去除任何殘留的細胞物質。
於室溫(約22-28℃)，對已經過去細胞處理的豬皮施以下述處理，包含超音波震盪、清洗、酵素消化和清洗。簡而言之，將經過去細胞處理的豬皮以音波震盪(sonication)(0.1 M Tris)1小時，持續搖晃22小時(速度：100 rpm)，再進行音波震盪1小時。接著，依序以下列溶液清洗上述經音波震盪處理過的豬皮，水(10分鐘/清洗，清洗二次)、含1% Triton X-100 溶液(搖晃速度：100 rpm；處理時間：24小時)，以及水 (10分鐘/清洗，清洗二次)，以移除任何不純物，並產生膠原蛋白基質。接著，以胃蛋白酶溶液(0.01% 胃蛋白酶溶於0.5M醋酸)處理所述膠原蛋白基質約1小時，接著，再以水清洗(10分鐘/清洗，清洗二次)(搖晃速度：100 rpm)。
於37℃下以DNA核酸酶溶液(0.3 U/公分2
)處理膠原蛋白基質1小時， 接著，在室溫下(約22-28℃)以1% Triton X-100(搖晃速度：100 rpm，處理時間：24小時)，和水清洗(10分鐘/清洗，清洗二次)。接著，將膠原蛋白基質置於1% H2
O2
溶液中處理1小時(搖晃速度：65 rpm)，再於室溫下以水清洗(10分鐘/清洗，清洗二次)(約22-28℃)，接著，於37℃下真空乾燥約8-30分鐘。接著，再以scCO2
於壓力350巴和溫度37℃下處理60分鐘(含10% (vol%)乙醇)；再以水於25℃處理10分鐘進行復水，最終，於37℃下進行真空乾燥約8-30分鐘。
1.2
製備膠原蛋白顆粒
切割實施例1.1復水的膠原蛋白基質，以及利用Freezer/Mill (6770/6870，5-25循環)研磨產生膠原蛋白顆粒。製備而成的膠原蛋白顆粒以伽瑪射線(10-50 kGy)照射，儲存於無菌環境中備用。
依據電子顯微鏡(EM)分析結果可知每一本發明製備而成的膠原蛋白顆粒具有相對完整的纖絲(fibril)結構(參見圖1)。
1.3 實施例1.2膠原蛋白顆粒可支持3T3細胞生長
依據前述「材料與方法」所述的步驟，以實施例1.2膠原蛋白顆粒作為生長支架，測試其支持細胞於其上再次生長的能力。實施例1.2膠原蛋白顆粒的多孔性，使其可作為一良好的生物性支架，用以支持新接種的3T3細胞於該些膠原蛋白顆粒上生長(參見圖2，(A))，經培養72小時候，整個膠原蛋白顆粒均被3T3細胞所包覆(參見圖2，(B))。
實施例
2
實施例
1
膠原蛋白顆粒的過敏試驗
為了評估本發明膠原蛋白顆粒是否會造成其他宿主免疫反應的潛在風險，本實驗利用從實施例1.1膠原蛋白基質中製備出膠原蛋白萃取物，依照相關核准流程(特別是ISO0993-10和11)進行以下多種過敏性試驗，包含熱原試驗、皮膚致敏化試驗、急性全身性注射試驗、皮下刺激試驗。
2.1
製備膠原蛋白萃取物
在50℃下，將實施例1.1之膠原蛋白基質(3 x 4 公分)浸漬於0.9%食鹽水或棉花籽油中72小時，並持續攪拌(150 rpm)，使其溶出於食鹽水或棉花籽油中，進而產生膠原蛋白萃取物。膠原蛋白基質/0.9%食鹽水或棉花籽油的表面積比約為1平方公分/1毫升。
2.2
熱原試驗
在此，依據美國藥典(Pharmacopoeia National Formulary USP36/NF31(151))所揭示的步驟進行熱原試驗。簡言之，本試驗採用6隻公紐西蘭白兔(＞1.5 公斤，控制組：3隻兔子，以及試驗組：3隻兔子)，實驗過程係將10毫升/公斤實施例2.1之膠原蛋白萃取物（於食鹽水中）注射至兔子的耳靜脈中。對照組的兔子僅注射0.9%食鹽水。所述注射需於10分鐘內完成。接著，分別於施用膠原蛋白萃取物後的1、1.5、2、2.5和3小時，測量實驗動物的體溫。
控制組兔子的體溫分別為39.1、38.8以及38.8℃(表1)；在試驗組中的動物，於施用膠原蛋白萃取物（於食鹽水中）後，實驗動物的體溫有微幅波動，但這樣的波動是在可接受範圍內的(表2)，結果顯示從實施例1之膠原蛋白基質中製成的膠原蛋白萃取物基本上沒有熱原性。
表1 膠原蛋白萃取物施用前實驗動物的體溫
表2 膠原蛋白萃取物施用後實驗動物的體溫
HBT：體溫最高值 CT：表1中實驗動物的控制溫度
2.3
皮膚致敏化試驗
依據ISO 10993-10所示之步驟進行皮膚致敏化試驗。將30隻公天竺鼠隨機分派至4組，即，控制組-1 (N=5)、控制組-2 (N=5)、處理組-1 (N=10)以及處理組-2 (N=10)。於試驗前，利用電動刀去除實驗動物背部、頸部至肩胛骨區域上的毛，於每一實驗動物的左側上產生三個除毛後的區域，分別為A、B和C，實驗的動物右側也以前述相同的方式，產生三個除毛後的區域分別為A、B和C，每一區域約為2 x 2平方公分。
在處理的第一天，依據表3或表4所揭示「誘導(I)」的試驗條件，以皮下注射的方式將相應的0.1毫升溶液注射至每組實驗動物除毛後的區域。一週後，若實驗動物沒有產生刺激反應，再注射10%十二烷基磺酸 (SDS)至該射區域，接著，依據表3或表4所揭示的「誘導(II)」的條件，將個別預浸泡於0.2毫升相對應溶液的貼片分別覆蓋於前述相同的注射區域上。於「誘導(II)」處理的兩週後，將實驗動物下背部肩胛骨到臀部區域上的毛去除，選定適當的位置並將依據表3或表4所揭示「激發期間」的條件，將個別預浸泡於0.1毫升相對應處理溶液的貼片，分別覆蓋於前述相同的注射區域上。
表3
FCA：弗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant)
表4。
於激發後24和48小時，觀察去除毛髮的皮膚區域，是否有產生刺激和/或過敏反應。結果顯示，無論是控制組或處理組的動物，在測試區域上皆未出現肉眼可見的刺激症狀。因此，本發明膠原蛋白萃取物不會造成試驗中的天竺鼠產生遲發性過敏反應。
2.4
皮內刺激試驗
依據ISO 10993-10所示的步驟進行刺激試驗。簡言之，本試驗採用6隻公紐西蘭白兔(＞2 公斤，控制組：3隻兔子，以及試驗組：3隻兔子)。於試驗進行前，利用電動刀去除實驗動物背部、頸部至肩胛骨區域上的毛。在處理當天，將0.2毫升之實施例2.1膠原蛋白萃取物(於食鹽水中)注射至每隻實驗兔左側的5個區域；以及將0.2毫升之實施例2.1膠原蛋白萃取物(於棉花籽油中)注射至每隻實驗兔右側的5個區域。控制組的實驗兔則分別注射0.2毫升之0.9%食鹽水或棉花籽油至相同位置。於施用後24、48和72小時，觀察實驗動物的處理區域是否產生皮膚反應。
實驗結果顯示，無論是在控制組或處理組的動物，皆無明顯的皮內刺激的臨床徵狀，亦無造成動物死亡。因此，單一局部施用膠原蛋白萃取物不會造成紐西蘭白兔皮內刺激。
2.5
急性全身性注射試驗
在此，依據ISO 10993-11所示的步驟進行急性全身性注射試驗。將20隻公天竺鼠隨機分配至4組中，即，控制組-1 (N=5)、控制組-2 (N=5)、處理組-1 (N=5)以及處理組-2 (N=5)。
在處理的第一天，靜脈注射單一劑量之膠原蛋白萃取物(溶於食鹽水)(50毫升/公斤)至處理組-1的動物，另，腹腔注射單一劑量之膠原蛋白萃取物（溶於棉花籽油）(50毫升/公斤)至處理組-2的動物。將0.9％食鹽水和棉花籽由分別施用至控制組-1和控制組-2的動物。於施用後24、48和72小時觀察實驗小鼠毒性反應。
實驗結果顯示無論是在控制組或處理組的動物皆無明顯的毒性臨床徵狀，且亦無造成動物死亡。因此，單一局部施用膠原蛋白萃取物不會造成實驗動物產生毒性反應。
雖然上文實施方式中揭露了本發明的具體實施例，然其並非用以限定本發明，本發明所屬技術領域中具有通常知識者，在不悖離本發明之原理與精神的情形下，當可對其進行各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當以附隨申請專利範圍所界定者為準。
無
為讓本發明的上述與其他目的、特徵、優點與實施例能更明顯易懂，所附圖式之說明如下： 圖1是依據本揭示內容一實施方式所闡示之本發明膠原蛋白顆粒分別在電子顯微鏡(EM)於放大倍率(A)50X和(B)20,000X倍下所拍攝的照片；以及 圖2是依據本揭示內容一實施方式所闡示之3T3細胞重新生長(recellularizing)於本發明膠原蛋白顆粒後(A)12小時和(B)72小時，以電子顯微鏡(electromicroscope, EM) 在放大倍率(A) 2,000 X和(B) 4,000 X下拍攝本發明膠原蛋白顆粒的照片。
Claims (23)
- 一種製備膠原蛋白顆粒的方法，包含：(1)以一超臨界流體(SCF)在壓力100-500巴以及溫度30-50℃下處理一厚度為0.1-1公釐的動物皮膚約20分鐘至5天；(2)以一水溶液處理步驟(1)中該經去細胞處理的動物皮膚，其中該水溶液包含一表面活性劑；(3)以一蛋白酶處理步驟(2)中該經水溶液處理的動物皮膚；(4)以一核酸酶處理步驟(3)中該經蛋白酶處理的動物皮膚；(5)對步驟(4)中該經核酸酶處理的動物皮膚施以一去離子化處理；(6)對步驟(5)中該經去離子化處理的動物皮膚施以一去化學物質處理，以產生一膠原蛋白基質；以及(7)將步驟(6)中該膠原蛋白基質進行造粒，以產生該膠原蛋白顆粒，其粒徑為10-250微米；其中該方法不使用鹽類和交聯劑。
- 如請求項1所述之方法，其中該SCF是超臨界二氧化碳(scCO2)、超臨界一氧化氮(scN2O)、超臨界水(scH2O)、超臨界烷類、超臨界烯類、超臨界醇類或超臨界丙酮。
- 如請求項2所述之方法，其中該SCF是scCO2。
- 如請求項2所述之方法，其中該SCF是scN2O。
- 如請求項2所述之方法，其中該溫度是37℃，且該壓力是350巴。
- 如請求項1所述之方法，其中在該步驟(2)中，該表面活性劑是非離子表面活性劑，且是選自於以下物質所組成之群組：辛基酚聚氧乙烯醚、去水 山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯、波洛莎姆、壬苯醇醚、十六醇和烷基聚葡糖苷。
- 如請求項6所述之方法，其中該水溶液更包含一陰離子表面活性劑，其是選自於以下物質所組成之群組：月桂基磺酸、十二烷基磺酸、十二烷基磺酸(SDS)、十二烷基苯磺酸、十三烷基苯磺酸、烷基苯氧基苯二磺酸、萘磺酸、烷基萘磺酸和烯基萘。
- 如請求項6所述之方法，其中該水溶液更包含一鹽類。
- 如請求項1所述之方法，其中在該步驟(3)中該蛋白酶是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜酶、木瓜凝乳酶、鳳梨酶、奇異果酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胜肽酶、無花果酶、鈣蛋白酶、半胱天冬酶或其組合。
- 如請求項1所述之方法，其中在該步驟(4)中，該核酸酶是一DNA核酸酶或一RNA核酸酶。
- 如請求項10所述之方法，更包含以步驟(2)的水溶液處理該步驟(4)的產物。
- 如請求項11所述之方法，其中該步驟(2)中之水溶液包含一非離子表面活性劑，其是選自於以下物質所組成之群組：辛基酚聚氧乙烯醚、去水山梨醇單硬脂酸酯、聚山梨醇酯、波洛莎姆、壬苯醇醚、十六醇和烷基聚葡糖苷。
- 如請求項12所述之方法，其中該水溶液更包含一陰離子表面活性劑，其是選自於以下物質所組成之群組：月桂基磺酸、十二烷基磺酸、十二烷基磺酸(SDS)、十二烷基苯磺酸、十三烷基苯磺酸、烷基苯氧基苯二磺酸、萘磺酸、烷基萘磺酸和烯基萘。
- 如請求項13所述之方法，其中該水溶液更包含一鹽類。
- 如請求項1所述之方法，其中該步驟(5)去離子化處理包含將步驟(4)經核酸酶處理的動物皮膚，以一過氧化氫溶液處理一小時。
- 如請求項1所述之方法，其中在步驟(6)中，將該步驟(5)經去離子化處理的動物皮膚，以一超臨界流體(SCF)於壓力100-500巴和溫度30-50℃下，處理20分鐘至5天，以移除殘留的化學物質。
- 如請求項16所述之方法，其中該SCF是超臨界二氧化碳(scCO2)、超臨界一氧化氮(scN2O)、超臨界水(scH2O)、超臨界烷類、超臨界烯類、超臨界醇類或超臨界丙酮。
- 如請求項17所述之方法，其中該SCF是scCO2。
- 如請求項17所述之方法，其中該SCF是scN2O。
- 如請求項16所述之方法，其中該SCF係連同一共溶劑一併施用至步驟(5)之經去離子化處理的動物皮膚。
- 如請求項20所述之方法，其中該共溶劑是乙醇。
- 如請求項16所述之方法，其中該溫度是37℃，以及該壓力是350巴。
- 如請求項1所述之方法，其中該步驟(7)之造粒步驟是在液態氮下切割或研磨該步驟(6)之膠原蛋白基質，以產生粒徑為10-250微米的膠原蛋白顆粒。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI791290B (zh) * | 2021-09-17 | 2023-02-01 | 亞果生醫股份有限公司 | 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途 |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101954905B1 (ko) * | 2016-08-08 | 2019-03-08 | 주식회사 도프 | 지방흡입 유출물로부터 초임계공정을 이용하여 콜라겐을 분리하는 방법 |
| JP7012950B2 (ja) * | 2016-11-17 | 2022-01-31 | 地方独立行政法人東京都立産業技術研究センター | 生体組織孔閉鎖用、潰瘍保護用及び血管塞栓療術用ゾル |
| CN107164298A (zh) * | 2017-06-02 | 2017-09-15 | 广州新诚生物科技有限公司 | 超临界流体技术制备软组织去细胞基质的方法 |
| TWI712687B (zh) * | 2018-09-11 | 2020-12-11 | 亞果生醫股份有限公司 | 去細胞器官及其製備方法 |
| TWI694817B (zh) * | 2019-06-12 | 2020-06-01 | 亞果生醫股份有限公司 | 去細胞骨移植物及包含該去細胞骨移植物之人工移植組件 |
| CN112143243A (zh) * | 2019-06-28 | 2020-12-29 | 柏登生医股份有限公司 | 鳞片衍生生活用品及其制造方法 |
| CN111214704B (zh) * | 2020-02-25 | 2022-02-25 | 南通大学 | 一种超临界流体萃取反应制备脱细胞神经移植物的方法 |
| KR102451565B1 (ko) * | 2020-07-13 | 2022-10-06 | 주식회사 엘앤씨바이오 | 수화형태 무세포화 피부대체재 및 그 제조방법 |
| CN112113786B (zh) * | 2020-09-22 | 2022-08-12 | 北京小米移动软件有限公司 | 检测方法及装置、测试设备、存储介质 |
| CN112604030A (zh) * | 2020-12-03 | 2021-04-06 | 广东省医疗器械研究所 | 一种脱细胞基质、骨修复支架及其制备方法 |
| CN113244439A (zh) * | 2021-06-24 | 2021-08-13 | 北京欣康研医药科技有限公司 | 一种无抗原胶原聚集体及其制备方法 |
| WO2023004359A2 (en) * | 2021-07-21 | 2023-01-26 | Organogenesis Inc. | Porcine collagen compositions and methods of use thereof |
| CN113577389A (zh) * | 2021-08-06 | 2021-11-02 | 中国医学科学院整形外科医院 | 一种来自猪耳软骨的脱细胞软骨材料及制备方法和应用 |
| WO2023039833A1 (zh) * | 2021-09-17 | 2023-03-23 | 谢达仁 | 胶原蛋白颗粒于促进毛囊生成或血管生成的用途 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102781485A (zh) * | 2009-10-07 | 2012-11-14 | 克雷西斯公司 | 用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料 |
| EP2578247A2 (en) * | 2011-09-22 | 2013-04-10 | Covidien LP | Processing tissue utilizing supercritical fluid |
| CN104189944A (zh) * | 2014-09-05 | 2014-12-10 | 四川大学 | 高纯度天然胶原纤维及其制备方法 |
Family Cites Families (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2699408B1 (fr) * | 1992-12-21 | 1995-03-24 | Bioland | Procédé de traitement de tissus osseux et biomatériaux implantables correspondants. |
| FR2735372B1 (fr) * | 1995-06-13 | 1997-09-05 | Bioland | Nouvelles utilisations d'un courant de dioxyde de carbone supercritique a titre d'agent antiviral |
| US6613278B1 (en) * | 1998-11-13 | 2003-09-02 | Regeneration Technologies, Inc. | Tissue pooling process |
| US20080077251A1 (en) * | 1999-06-07 | 2008-03-27 | Chen Silvia S | Cleaning and devitalization of cartilage |
| CN1116794C (zh) * | 2000-07-13 | 2003-08-06 | 胡杰 | 制备软骨移植体的方法 |
| US7008591B2 (en) * | 2001-10-17 | 2006-03-07 | Edwards Lifesciences Corporation | Supercritical fluid extraction process for tissue preparation |
| WO2006095342A2 (en) * | 2005-03-07 | 2006-09-14 | Technion Research & Development Foundation Ltd. | Natural tissue-derived decellularized matrix and methods of generating and using same |
| CN100348277C (zh) * | 2005-08-09 | 2007-11-14 | 中国人民解放军第三军医大学 | 成骨细胞特异性转录因子－2基因修饰的组织工程化骨的构建方法 |
| JP2007105081A (ja) * | 2005-10-11 | 2007-04-26 | Japan Health Science Foundation | 超臨界二酸化炭素による移植用生体組織の脱細胞処理 |
| EP2031968B1 (en) * | 2006-04-21 | 2017-11-22 | Wake Forest University Health Sciences | Structurally modified acellular tissue engineering scaffolds and methods of production |
| CN101332312B (zh) * | 2007-06-29 | 2013-09-11 | 上海国睿生命科技有限公司 | 组织工程化移植物的处理方法 |
| US20090062233A1 (en) | 2007-08-09 | 2009-03-05 | Xin Ji | Modified starch material of biocompatible hemostasis |
| WO2009048597A1 (en) * | 2007-10-10 | 2009-04-16 | Tenera Technology, Llc | Measurement of protease activity in post-mortem meat samples |
| KR100947553B1 (ko) * | 2008-02-14 | 2010-03-12 | 주식회사 바이오랜드 | 생체조직 이식재 및 그의 제조 방법 |
| US7771652B2 (en) * | 2008-04-11 | 2010-08-10 | Novasterilis, Inc. | Combined use of an alkaline earth metal compound and a sterilizing agent to maintain osteoinduction properties of a demineralized bone matrix |
| JP5429708B2 (ja) * | 2009-03-23 | 2014-02-26 | 学校法人福岡大学 | 生体組織再生用移植材およびその製造方法 |
| JP2013501586A (ja) * | 2009-08-11 | 2013-01-17 | ザ ジョンズ ホプキンス ユニヴァーシティ | 処理した脂肪性組織および処理した脂肪性組織の生産物の移入のための組成物および方法 |
| AU2010284365B2 (en) * | 2009-08-18 | 2015-01-29 | Lifecell Corporation | Method for processing tissues |
| WO2011031827A2 (en) * | 2009-09-09 | 2011-03-17 | Cook Biotech Incorporated | Manufacture of extracellular matrix products using supercritical or near supercritical fluids |
| CN102085390B (zh) * | 2009-12-07 | 2014-08-27 | 上海国睿生命科技有限公司 | 软骨脱细胞基质及其制备方法和用途 |
| US8926710B2 (en) * | 2010-10-25 | 2015-01-06 | Warsaw Orthopedic, Inc. | Osteoinductive bone graft injectable cement |
| KR101269618B1 (ko) * | 2011-04-12 | 2013-06-05 | 한스바이오메드 주식회사 | 포유류의 연골조직에서 유래한 생체이식재 |
| WO2012141454A2 (en) * | 2011-04-12 | 2012-10-18 | Hans Biomed. Cor. | Graft materials derived from mammalian cartilage |
| WO2012142569A2 (en) * | 2011-04-15 | 2012-10-18 | The Regents Of The University Of California | Decellularized extracellular matrix |
| JP2014519906A (ja) * | 2011-05-27 | 2014-08-21 | コーマトリックス カーディオバスキュラー， インコーポレイテッド | 滅菌された無細胞の細胞外マトリックス組成物及びその作製方法 |
| KR101329411B1 (ko) * | 2012-05-31 | 2013-11-14 | 주식회사 엘지생활건강 | 피부투과성 펩타이드 |
| GB201215725D0 (en) * | 2012-09-04 | 2012-10-17 | Univ Leeds | Composite connective tissue and bone implants |
| CN103223194A (zh) * | 2013-01-15 | 2013-07-31 | 广州莱德尔生物科技有限公司 | 一种用于软骨损伤修复的软骨移植物及其制备方法 |
| WO2014181886A1 (ja) * | 2013-05-07 | 2014-11-13 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | 粒子状脱細胞化組織を含むハイブリッドゲル |
| CN104174068B (zh) * | 2013-05-22 | 2016-02-17 | 烟台正海生物科技股份有限公司 | 一种生物型软骨修复材料及其制备方法 |
| MX2016001247A (es) * | 2013-07-30 | 2016-08-17 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Matrices derivadas de tejido suave acelular y metodos para preparar las mismas. |
| US20150328561A1 (en) * | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Battelle Energy Alliance, Llc | Methods for separating bio-oils |
| CN104107456B (zh) * | 2014-07-09 | 2016-05-25 | 四川大学 | 无抗原胶原聚集体及其制备方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102781485A (zh) * | 2009-10-07 | 2012-11-14 | 克雷西斯公司 | 用于创伤护理和/或其它组织愈合应用的支架材料 |
| EP2578247A2 (en) * | 2011-09-22 | 2013-04-10 | Covidien LP | Processing tissue utilizing supercritical fluid |
| CN104189944A (zh) * | 2014-09-05 | 2014-12-10 | 四川大学 | 高纯度天然胶原纤维及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Peter M. Crapo et al, An overview of tissue and whole organ decellularization processes, Biomaterials. 2011 April ; 32(12): 3233–3243. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI791290B (zh) * | 2021-09-17 | 2023-02-01 | 亞果生醫股份有限公司 | 膠原蛋白顆粒於促進毛囊生成或血管生成之用途 |
Also Published As
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