TWI574959B - 調節細胞內鈣之化合物 - Google Patents

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TWI574959B TW100114497A TW100114497A TWI574959B TW I574959 B TWI574959 B TW I574959B TW 100114497 A TW100114497 A TW 100114497A TW 100114497 A TW100114497 A TW 100114497A TW I574959 B TWI574959 B TW I574959B
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裴亞中
曹建國
王志軍
艾文 羅傑斯
布萊恩 戴克
強納森 古雷
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Description

調節細胞內鈣之化合物
本文描述化合物、包括該等化合物之醫藥組合物及藥物、及使用該等化合物調節鈣池操縱鈣(store operated calcium，SOC)通道活性之方法。
本申請案主張2011年2月4日申請之美國臨時申請案第61/439,786號、2011年1月7日申請之美國臨時申請案第61,430,894號、2010年12月10日申請之美國臨時申請案第61/422,088號、2010年10月28日申請之美國臨時申請案第61/407,819號、2010年8月27日申請之美國臨時申請案第61/377,825號、及2010年4月27日申請之美國臨時申請案第61/328,569號的權益，該等案皆以全文引用的方式併入。
鈣在細胞功能及存活方面起關鍵作用。舉例而言，鈣為信號轉導至細胞中及在細胞內轉導的關鍵元素。細胞對生長因子、神經傳遞素、激素及多種其他信號分子之反應經由鈣依賴性過程起始。
實際上，所有細胞類型皆以某種方式依賴於產生細胞質Ca2+信號來調控細胞功能或觸發特異性反應。細胞溶質Ca2+信號控制眾多細胞功能，範圍自短期反應(諸如收縮及分泌)至長期調控細胞生長及增殖。此等信號通常涉及Ca2+自細胞內鈣池(諸如內質網(ER))釋放與Ca2+跨越質膜流入的某種組合。在一實例中，細胞活化以促效劑與表面膜受體結合而開始，該受體經G蛋白機構偶合至磷脂酶C(PLC)。PLC活化得以產生1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)，IP3繼而活化IP3受體，從而使得Ca2+自ER釋放。ER中之Ca2+減少接著發信號以活化質膜之鈣池操縱鈣(SOC)通道。
鈣池操縱鈣(SOC)流入為細胞生理學中控制該等不同功能之過程，該等功能為諸如(但不限於)再充滿細胞內Ca2+池(Putney等人,Cell,75,199-201,1993)、活化酶活性(Fagan等人,J. Biol. Chem. 275:26530-26537,2000)、基因轉錄(Lewis,Annu. Rev. Immunol. 19:497-521,2001)、細胞增殖(Nunez等人,J. Physiol. 571.1,57-73,2006)及釋放細胞激素(Winslow等人,Curr. Opin. Immunol. 15:299-307,2003)。在一些非興奮性細胞中，例如血球、免疫細胞、造血細胞、T淋巴細胞及肥大細胞中，SOC流入係經鈣釋放活化鈣(calcium release-activated calcium，CRAC)通道(一種SOC通道類型)發生。
鈣流入機制已被稱作鈣池操縱鈣進入(store-operated calcium entry，SOCE)。基質相互作用分子(STIM)蛋白為SOC通道功能之基本組分，其充當偵測鈣自細胞內鈣池耗盡及活化SOC通道之感測器。
本文描述用於調節細胞內鈣之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物、包括該等化合物之組合物、及其使用方法。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物藉由抑制鈣池操縱鈣通道活性而調節細胞內鈣。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物藉由遏制活化鈣池操縱鈣通道複合物之活性而調節細胞內鈣。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抑制鈣池操縱通道之活化。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抑制鈣釋放活化鈣通道之活化。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節SOC通道複合物之至少一種蛋白質的活性，調節其相互作用，或調節其含量或其分佈，或與其結合，或與其相互作用。在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節CRAC通道複合物之至少一種蛋白質的活性，調節其相互作用，或調節其含量或其分佈，或與其結合，或與其相互作用。
在一態樣中，本文描述一種具有式(I)結構之化合物：
其中：X為CR3或N；L1為O、S或NR11，其中R11為H、C2-C6烯基或C1-C6烷基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基，其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；n為選自0至2之整數；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有式(II)結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為S、O或NR5；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；R5係選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；n為選自0-3之整數；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(III)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OCF3、-OR5、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；n為選自0-3之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5及R7係各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C4雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R4、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(IV)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；n為選自0-3之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5及R7係各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自CN或視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(V)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CH、CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(VI)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供式(II)化合物，其中R10係選自CF3、C1-C6烷基。在另一實施例中，R10為C2H5。在另一實施例中，R10為C1-C6烷基。在另一實施例中，R10為CH3。
在另一實施例中，R2為芳基。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自以下之取代基取代：D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基及視情況經取代之雜芳基。在一實施例中，取代基為氟。在一實施例中，苯基經至少2個取代基取代。在另一實施例中，苯基經至少3個取代基取代。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(VII)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y為CR3、O、NR5或S；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6羰基烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有式(VIIA)結構之式(VII)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y為CR3、O、NR5或S；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6羰基烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑，及具有式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之前藥或醫藥學上可接受之溶劑合物。
在另一態樣中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與具有式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，或包含上述者與醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑之醫藥組合物。
在另一態樣中，提供一種調節鈣池操縱鈣(SOC)通道活性之方法，其包含使SOC通道複合物或其部分與以下接觸：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，或包含上述者與醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑之醫藥組合物。
在另一態樣中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(II)、(III)、(IV)、(V)或(VI)化合物，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節哺乳動物體內之CRAC活性。
在另一態樣中，提供一種抑制哺乳動物體內活化T細胞核因子(NFAT)之鈣池操縱鈣進入(SOCE)活化之方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抑制哺乳動物體內NFAT之SOCE活化。
在另一態樣中，提供一種藉由抑制哺乳動物體內NFAT之SOCE活化來減少細胞激素釋放之方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物減少哺乳動物體內細胞激素釋放。
在另一態樣中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物。
在一態樣中，提供一種治療哺乳動物之自體免疫疾病、異種免疫疾病或病況、或發炎性疾病之方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽或前藥。
在一實施例中，自體免疫疾病為發炎性腸病、類風濕性關節炎、重症肌無力、多發性硬化症、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)、I型糖尿病、紅斑性狼瘡症、牛皮癬、骨關節炎、硬皮病及自體免疫溶血性貧血。
在另一實施例中，異種免疫疾病或病況為移植物抗宿主疾病、移植物排斥反應、異位性皮炎、過敏性結膜炎、器官移植排斥反應、同種異體或異種移植、及過敏性鼻炎。
在另一實施例中，發炎性疾病為葡萄膜炎、血管炎、***炎、哮喘、發炎性肌病、皮炎、間質性膀胱炎、結腸炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、皮肌炎、肝炎及慢性復發性肝炎。
在另一態樣中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、N-氧化物或前藥。
在一實施例中，哺乳動物之疾病、病症或病況係選自絲球體腎炎、肝臟疾病或病症、腎臟疾病或病症、慢性阻塞性肺病、骨質疏鬆症、濕疹、肺纖維化、甲狀腺炎、囊腫性纖維化及原發性膽汁性肝硬化。
本文提供之化合物用於調節細胞內鈣。在一態樣中，本文提供之化合物調節SOC通道活性。在一態樣中，本文提供之化合物調節CRAC通道活性。在另一態樣中，本文提供之化合物調節STIM蛋白活性。在另一態樣中，本文提供之化合物調節Orai蛋白活性。在另一態樣中，本文提供之化合物調節STIM蛋白與Orai蛋白之功能性相互作用。在另一態樣中，本文提供之化合物減少功能性SOC通道之數目。在另一態樣中，本文提供之化合物減少功能性CRAC通道之數目。在一態樣中，本文所述之化合物為SOC通道阻斷劑。在一態樣中，本文所述之化合物為CRAC通道阻斷劑或CRAC通道調節劑。
在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物為CRAC通道活性之選擇性抑制劑。
本文所述之化合物、組合物、方法及用途之其他目的、特徵及優勢自以下[實施方式]將變得顯而易知。然而，應瞭解，[實施方式]及特定實例儘管指示特定實施例，但其僅作為說明而提供，因為在本發明之精神及範疇內的各種變化及修改自此[實施方式]將變得顯而易知。
細胞鈣恆定為控制細胞內鈣含量及移動所涉及之調控系統之集合所達成的結果。細胞鈣恆定係至少部分由以下達成：鈣結合，及鈣跨越質膜移動至細胞內及細胞外，及在細胞內鈣跨越細胞內細胞器(包括例如內質網、肌漿網、粒線體)及內飲細胞器(包括核內體及溶酶體)之膜移動。
由特定蛋白質實現鈣跨越細胞膜之移動。舉例而言，來自細胞外空間之鈣可經各種鈣通道及鈉/鈣交換體進入細胞，且由鈣泵及鈉/鈣交換體自細胞主動擠壓出。鈣亦可經三磷酸肌醇或利羅丁(ryanodine)受體自內部鈣池釋放，且可藉助於鈣泵被此等細胞器吸收。
鈣可經由若干一般類別之通道中之任一者進入細胞，包括(但不限於)電壓操縱鈣(VOC)通道、鈣池操縱鈣(SOC)通道、及以反向模式操縱之鈉/鈣交換體。VOC通道係藉由膜退極化而活化，且存在於興奮性細胞(如神經及肌肉)中且大多不會存在於非興奮性細胞中。在一些條件下，Ca2+可經由以反向模式操縱之Na+-Ca2+交換體進入細胞。
內飲作用提供另一過程，藉此細胞可經核內體自細胞外介質吸收鈣。另外，一些細胞(例如外分泌細胞)可經由胞泄作用釋放鈣。
哺乳動物細胞中之細胞溶質鈣濃度經嚴格調控，靜止含量通常據估算為約0.1 μM，而細胞外鈣濃度通常為約2 mM。此嚴格調控有助於經由跨越質膜及細胞內細胞器膜之短暫鈣流動來進行信號至細胞中及在細胞內的轉導。細胞中存在多種細胞內鈣轉運及緩衝系統，其用以使細胞內鈣信號成形且維持較低靜止細胞質鈣濃度。在靜止細胞中，維持基礎鈣含量所涉及之主要組分為內質網與質膜中之鈣泵及滲漏路徑。靜止細胞溶質鈣含量的擾動可能影響鈣依賴性信號之傳輸且使許多細胞過程產生缺陷。舉例而言，細胞增殖涉及較長鈣信號傳導序列。其他涉及鈣信號傳導之細胞過程包括(但不限於)分泌、轉錄因子信號傳導及受精。
活化磷脂酶C(PLC)之細胞表面受體形成來自細胞內及細胞外來源之細胞溶質Ca2+信號。自內質網(ER)釋放Ca2+使得[Ca2+]i(細胞內鈣濃度)初始短暫升高，該釋放係由開放ER中之IP3受體的PLC產物1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)觸發(Streb等人,Nature,306,67-69,1983)。接著經質膜中之特定鈣池操縱鈣(SOC)通道(在免疫細胞之狀況下，SOC通道為鈣釋放活化鈣(CRAC)通道)進行Ca2+跨越質膜持續進入的下一階段。鈣池操縱Ca2+進入(SOCE)為Ca2+池排空本身活化質膜中之Ca2+通道以幫助再充滿鈣池的過程(Putney,Cell Calcium,7,1-12,1986；Parekh等人,Physiol.Rev.757-810;2005)。SOCE不僅簡單提供Ca2+以再充滿鈣池，而且本身可產生控制諸如基因表現、細胞代謝及胞泄作用之基本功能的持續Ca2+信號(Parekh及Putney,Physiol. Rev. 85,757-810(2005))。
在淋巴細胞及肥大細胞中，抗原或Fc受體之活化分別引起Ca2+自細胞內鈣池釋放，此繼而使得Ca2+經質膜中之CRAC通道流入。細胞內Ca2+隨後升高會活化鈣調神經磷酸酶(calcineurin)，亦即調控轉錄因子NFAT之磷酸酶。在靜止細胞中，NFAT經磷酸化且處於細胞質中；但當由鈣調神經磷酸酶脫除磷酸時，NFAT易位至細胞核，且視刺激條件及細胞類型而活化不同基因程式。對感染作出反應且在移植排斥反應期間，NFAT與「效應」T細胞之細胞核中的轉錄因子AP-1(Fos-Jun)搭配，藉此轉活化細胞激素基因，調控T細胞增殖之基因及協調活性免疫反應之其他基因(Rao等人,Annu Rev Immunol.,1997;15:707-47)。相比之下，在識別自身抗原之T細胞中，NFAT在不存在AP-1之情況下經活化，且活化抑制自體免疫反應之轉錄程式(稱為「因應性缺失(anergy)」)(Macian等人,Transcriptional mechanisms underlying lymphocyte tolerance. Cell. 2002年6月14日；109(6):719-31)。在抑制自身反應性效應T細胞介導之自體免疫性的T細胞子類(稱為調控性T細胞)中，NFAT與轉錄因子FOXP3搭配以活化負責抑制子功能之基因(Wu等人,Cell,2006年7月28日；126(2):375-87；Rudensky AY,Gavin M,Zheng Y. Cell. 2006年7月28日；126(2):253-256)。
內質網(ER)執行多種過程。ER起到Ca2+儲槽(sink)與促效劑敏感性Ca2+池的作用，且蛋白質摺疊/加工在其內腔中進行。在後一種狀況下，眾多Ca2+依賴性伴隨蛋白確保新合成之蛋白質正確摺疊且發送至其適當目的地。ER亦涉及於囊泡運輸、應力信號釋放、膽固醇代謝調控及細胞凋亡中。許多此等過程需要管腔內Ca2+，且蛋白質摺疊異常、ER應力反應及細胞凋亡皆可藉由長期耗盡ER之Ca2+而誘導。因為ER含有有限量之Ca2+，故顯然ER Ca2+含量在刺激期間彼Ca2+釋放之後必定降低。然而，為保持ER之功能完整性，至關重要的是，Ca2+含量不會降至過低或至少維持在較低水準下。因此，向ER補充Ca2+為所有真核細胞的核心過程。因為ER Ca2+含量降低會活化質膜中之鈣池操縱Ca2+通道，故咸信，此Ca2+進入路徑之主要功能為維持適當蛋白質合成及摺疊所必需的ER Ca2+含量。然而，鈣池操縱Ca2+通道具有其他重要作用。
對鈣池操縱鈣進入的理解係由電生理學研究提供，該等研究確立排空鈣池之過程活化肥大細胞中之Ca2+電流，稱為Ca2+釋放活化Ca2+電流或ICRAC。ICRAC不受電壓活化，內向性整流，且對Ca2+具有顯著選擇性。其存在於若干主要源於造血之細胞類型中。ICRAC並非唯一的鈣池操縱電流，且當前顯而易知，鈣池操縱流入涵蓋不同細胞類型中具有不同特性之Ca2+通透性通道家族。ICRAC為有待描述之第一鈣池操縱Ca2+電流，且仍為研究鈣池操縱流入的通用模型。
鈣池操縱鈣通道可由排空ER Ca2+池之任何程序活化；鈣池如何排空似乎無關緊要，淨效應為活化鈣池操縱Ca2+進入。就生理學而言，鈣池排空係由IP3含量增加或其他Ca2+釋放信號、繼之以Ca2+自鈣池釋放而引發。但存在若干排空鈣池之其他方法。此等方法包括以下：
1)升高細胞溶質中之IP3(在受體刺激或以IP3本身或相關同源物(如非代謝性類似物Ins(2,4,5)P3)透析細胞溶質之後)；
2)應用Ca2+離子載體(例如離子黴素(ionomycin))滲透ER膜；
3)以高濃度之Ca2+螯合劑(例如EGTA或BAPTA)透析細胞質，該螯合劑螯合自鈣池滲漏之Ca2+且因此防止鈣池再充滿；
4)與肌漿網/內質網Ca2+-ATPase(SERCA)抑制劑接觸，如毒胡蘿蔔素(thapsigargin)、環匹阿尼酸(cyclopiazonic acid)及二第三丁基氫醌；
5)以如硫柳汞(thimerosal)之試劑敏化IP3受體以使InsP3達到靜止含量；及
6)直接向鈣池中載入可滲透膜之金屬Ca2+螯合劑，如N,N,N',N'-肆(2-吡啶基甲基)伸乙基二胺(TPEN)。
經由質量作用，TPEN降低管腔內游離Ca2+濃度而不改變總鈣池Ca2+，從而產生鈣池耗盡依賴性信號。
此等排空鈣池之方法不會避免潛在問題。鈣池操縱Ca2+進入之關鍵特徵在於，鈣池內Ca2+含量降低使通道活化，而非由細胞質Ca2+濃度隨後升高達成。然而，離子黴素及SERCA泵阻斷劑一般由於鈣池耗盡而使細胞質Ca2+濃度升高，且此類Ca2+升高可開放Ca2+活化之陽離子通道，使之可被Ca2+滲透。一種避免該等問題之方式為在已用高濃度之Ca2+螯合劑(諸如EGTA或BAPTA)對細胞質Ca2+進行強力緩衝的條件下使用試劑。
鈣池操縱鈣進入
由細胞內鈣池(諸如內質網)之鈣釋放引起的細胞內鈣池中之鈣濃度降低提供鈣自細胞外介質流入細胞中的信號。此鈣流入引起細胞溶質鈣濃度之持續「平緩」升高，該流入一般不依賴於電壓閘控之質膜通道且不涉及以鈣活化鈣通道。此鈣流入機制稱作容量性鈣進入(capacitative calcium entry，CCE)、鈣釋放活化鈣進入、鈣池操縱鈣進入或耗盡操縱鈣進入。鈣池操縱鈣進入可以具有獨特特性之離子電流記錄。此電流稱作ISOC(鈣池操縱電流)或ICRAC(鈣釋放活化電流)。
鈣池操縱電流或鈣釋放活化電流之電生理學分析揭示此等電流之獨特生物物理特性(參看例如Parekh及Penner(1997) Physiol. Rev. 77:901-930)。舉例而言，電流可藉由細胞內鈣池耗盡(例如由非生理學活化劑，諸如毒胡蘿蔔素、CPA、離子黴素及BAPTA；及生理學活化劑，諸如IP3)活化，且在生理溶液中或在生理條件下對二價陽離子(諸如鈣)之選擇性高於單價離子，可受細胞溶質鈣含量之變化影響，且在較低細胞外濃度之二價陽離子存在下可顯示選擇性及電導率改變。電流亦可由2-APB(視濃度而定)阻斷或增強且由SKF96365及Gd3+阻斷，且一般可描述為不受嚴格電壓閘控之鈣電流。
肥大細胞及Jurkat白血病T細胞之膜片鉗研究已確立CRAC進入機構為具有獨特生物物理特徵之離子通道，包括對與極低電導配對之Ca2+具有高選擇性。此外，CRAC通道顯示達到鈣池操縱之嚴格準則，其僅由ER中之Ca2+降低而活化，而非由PLC產生之細胞溶質Ca2+或其他信使達成(Prakriya等人,Molecular and Cellular Insights into Ion Channel Biology(Robert Maue編) 121-140(Elsevier Science,Amsterdam,2004))。
由細胞內鈣池調控鈣池操縱鈣進入
鈣池操縱鈣進入係由細胞內鈣池中鈣之含量調控。細胞內鈣池的特徵可為對活化鈣自鈣池釋放或抑制鈣吸收至鈣池中之生理學試劑或藥理學試劑敏感。已對不同細胞進行研究來表徵細胞內鈣池，且鈣池已表徵為對多種試劑敏感，包括(但不限於)IP3及影響IP3受體之化合物、毒胡蘿蔔素、離子黴素及/或環狀ADP核糖(cADPR)(參看例如Berridge(1993) Nature 361:315-325；Churchill及Louis(1999) Am. J. Physiol. 276:C426-C434；Dargie等人(1990) Cell Regul. 1:279-290；Gerasimenko等人(1996) Cell 84:473-480；Gromoda等人(1995) FEBS Lett. 360:303-306；Guse等人(1999) Nature 398:70-73)。
經由通常稱作鈣泵之肌漿-內質網鈣ATPase(SERCA)達成鈣於內質網及肌漿網(SR；橫紋肌中之特定內質網型式)儲存細胞器內的積聚。在信號傳導期間(亦即，當內質網通道經活化以供鈣自內質網釋放至細胞質中時)，由SERCA泵以自細胞外介質進入細胞之細胞質鈣補充內質網鈣(Yu及Hinkle(2000) J. Biol. Chem. 275:23648-23653；Hofer等人(1998) EMBO J. 17:1986-1995)。
與IP3及利羅丁受體相關之鈣釋放通道供鈣自內質網及肌漿網控制釋放至細胞質中，從而使得細胞質鈣濃度短暫升高。IP3受體介導之鈣釋放係由經磷脂酶C作用使質膜磷酸肌醇分解而形成之IP3觸發，該磷脂酶C係藉由使促效劑與質膜G蛋白偶合受體或酪胺酸激酶結合而活化。利羅丁受體介導之鈣釋放係由細胞質鈣增加而觸發且稱作鈣誘導之鈣釋放(CICR)。利羅丁受體(對利羅丁及咖啡鹼(caffeine)具有親和力)之活性亦可由環狀ADP核糖調控。
因此，鈣池中及細胞質中之鈣含量波動。舉例而言，當以組織胺(一種PLC連接之組織胺受體的促效劑)處理海拉細胞(HeLa cell)時，ER之游離鈣濃度可自約60-400 μM之範圍降至約1-50 μM(Miyawaki等人(1997) Nature 388:882-887)。鈣池操縱鈣進入隨著細胞內鈣池之游離鈣濃度降低而活化。鈣池中之鈣耗盡以及伴隨的細胞溶質鈣濃度增加由此可調控鈣池操縱鈣進入細胞中。
細胞質鈣緩衝
促效劑活化細胞中之信號傳導過程可涉及例如經由開放IP3受體通道而顯著增強鈣對內質網之通透性，及經由鈣池操縱鈣進入而顯著增強鈣對質膜之通透性。此等鈣通透性增強與細胞溶質鈣濃度增加相關，其可分為兩個組成部分：在IP3受體活化期間鈣自內質網釋放之「尖峰期(spike)」，及鈣自細胞外介質進入細胞質中引起鈣含量持續升高的平緩期。在刺激時，約100 nM之細胞內靜止游離鈣濃度可整體升至1 μM以上，且在細胞微域(microdomain)中更高。細胞以內源鈣緩衝劑調節此等鈣信號，包括由諸如粒線體、內質網及高基體(Golgi)之細胞器進行之生理緩衝作用。粒線體經內膜中之單向轉運體(uniporter)吸收鈣之過程係受較大之負性粒線體膜電位驅動，且積聚之鈣經過鈉依賴***換劑及非鈉依賴***換劑且在一些情況下經過渡性通透孔(permeability transition pore，PTP)緩慢釋放。因此，粒線體可藉由在細胞活化期間吸收鈣而充當鈣緩衝劑，且稍後可將其緩慢釋放。鈣吸收至內質網中係由肌漿網及內質網鈣ATPase(SERCA)調控。鈣吸收至高基體中係由P型鈣轉運ATPase(PMR1/ATP2C1)介導。另外，有證據顯示，在IP3受體活化時釋放之大量鈣經質膜鈣ATPase之作用而自細胞擠壓出。舉例而言，質膜鈣ATPase提供人類T細胞及Jurkat細胞中清除鈣之主要機制，不過鈉/鈣交換亦促成人類T細胞中清除鈣。在儲鈣細胞器中，鈣離子可與特異化鈣緩衝蛋白結合，如，例如：隱鈣素(calsequestrin)、鈣網蛋白(calreticulin)及鈣聯蛋白(calnexin)。另外，細胞溶質中存在調節鈣尖峰且幫助鈣離子再分佈之鈣緩衝蛋白。因此，參與可藉以降低細胞溶質鈣含量之任何此等及其他機制的蛋白質及其他分子為涉及、參與及/或提供細胞質鈣緩衝作用之蛋白質。因此，在鈣經SOC通道持續流入或Ca2+釋放爆發期間，細胞質鈣緩衝作用幫助調控細胞質Ca2+含量。細胞質Ca2+含量大幅增加或鈣池再充滿，使SOCE失活。
下游鈣進入介導之事件
除鈣池中之細胞內變化以外，鈣池操縱鈣進入亦影響繼鈣池操縱變化之後或除鈣池操縱變化以外的許多事件。舉例而言，Ca2+流入會使大量鈣調蛋白(calmodulin)依賴性酶(包括絲胺酸磷酸酶鈣調神經磷酸酶)活化。因細胞內鈣增加而活化鈣調神經磷酸酶引起急性分泌過程，諸如肥大細胞脫顆粒。活化之肥大細胞釋放含有組織胺、肝素、TNFa及酶(諸如β-己醣胺酶)之預成型顆粒。一些細胞事件(諸如B細胞及T細胞增殖)需要持續鈣調神經磷酸酶信號傳導，此需要細胞內鈣持續增加。鈣調神經磷酸酶調控許多轉錄因子，包括NFAT(活化T細胞核因子)、MEF2及NFκB。NFAT轉錄因子在許多細胞類型(包括免疫細胞)中起重要作用。在免疫細胞中，NFAT介導包括細胞激素、趨化激素及細胞表面受體之大量分子的轉錄。已於細胞激素(諸如IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-8、IL-13)以及腫瘤壞死因子α(TNFα)、顆粒球群落刺激因子(G-CSF)及γ-干擾素(γ-IFN)之啟動子中發現NFAT之轉錄元件。
NFAT蛋白之活性係由其磷酸化程度調控，磷酸化程度繼而由鈣調神經磷酸酶與NFAT激酶調控。因細胞內鈣含量增加而活化鈣調神經磷酸酶使得NFAT脫除磷酸且進入細胞核中。NFAT之再磷酸化遮蔽NFAT之核定位序列且阻止其進入細胞核中。因為NFAT之定位及活性在很大程度上依賴於鈣調神經磷酸酶介導之磷酸脫除，故NFAT為細胞內游離鈣含量之敏感指示劑。
疾病、病症或病況
臨床研究證實作為T細胞對抗原之反應之基礎的基因活化絕對需要CRAC通道。淋巴細胞活化及應變性免疫反應需要持續鈣進入。鈣進入淋巴細胞中主要經CRAC通道發生。鈣增加會使NFAT活化及免疫反應所需之細胞激素表現。抑制鈣池操縱鈣進入為一種阻止T細胞活化之有效方式。
以本文所述之化合物，諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抑制CRAC通道活性提供一種提供免疫抑制療法之方式，如在嚴重複合性免疫缺乏(SCID)患者中注意到的鈣池操縱鈣進入消除所證實。來自主要缺陷在於T細胞活化之T細胞免疫缺乏或SCID患者之T細胞、纖維母細胞及在一些狀況下為B細胞在鈣池操縱鈣進入方面顯示顯著缺陷(Feske等人(2001) Nature Immunol. 2:316-324；Paratiseti等人(1994) J. Biol. Chem. 269:32327-32335；及Le Deist等人(1995) Blood 85:1053-1062)。SCID患者缺乏應變性免疫反應，但主要器官未受任何損害或毒性作用。SCID患者表型指示抑制CRAC通道為一種有效的免疫抑制策略。
涉及發炎之疾病/病症及與免疫系統相關之疾病/病症
可使用本文提供之化合物、組合物及方法治療或預防之疾病或病症包括涉及發炎及/或與免疫系統相關之疾病與病症。此等疾病包括(但不限於)哮喘、慢性阻塞性肺病、類風濕性關節炎、發炎性腸病、絲球體腎炎、神經發炎性疾病(諸如多發性硬化症)及免疫系統病症。
發炎性介體活化嗜中性球(PMN)係部分藉由增加細胞溶質鈣濃度而達成。尤其認為鈣池操縱鈣流入在PMN活化方面起重要作用。已顯示創傷增加PMN之鈣池操縱鈣流入(Hauser等人(2000) J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48(4):592-598)，且增強之鈣池操縱鈣流入所引起的細胞溶質鈣濃度長期升高可改變與趨化素(chemotaxin)相關聯之刺激-反應且造成損傷後PMN功能不良。經鈣池操縱鈣通道調節PMN細胞溶質鈣濃度因此可能適用於調控在損傷、休克或敗血症之後PMN介導之發炎及備用心血管功能(Hauser等人(2001) J. Leukocyte Biology 69(1):63-68)。
鈣在淋巴細胞活化方面起關鍵作用。藉由例如抗原刺激而活化淋巴細胞使得細胞內游離鈣濃度快速增加及轉錄因子(包括活化T細胞核因子(NFAT)、NF-κB、JNK1、MEF2及CREB)活化。NFAT為IL-2(及其他細胞激素)基因之關鍵轉錄調控子(參看例如Lewis(2001) Annu. Rev. Immunol 19:497-521)。細胞內鈣含量持續升高為保持NFAT處於轉錄活性狀態所需，且取決於鈣池操縱鈣進入。減少或阻斷淋巴細胞中鈣池操縱鈣進入會阻斷鈣依賴性淋巴細胞活化。因此，調節淋巴細胞中細胞內鈣及尤其鈣池操縱鈣進入(例如減少、消除鈣池操縱鈣進入)可為治療免疫病症及免疫相關病症之方法，包括例如慢性免疫疾病/病症、急性免疫疾病/病症、自體免疫及免疫缺乏疾病/病症、涉及發炎及疾病/病症、器官移植之移植物排斥反應及移植物抗宿主疾病以及免疫反應改變(例如過度免疫反應)。舉例而言，自體免疫疾病/病症之治療可能涉及減少、阻斷或消除淋巴細胞中鈣池操縱鈣進入。
免疫病症之實例包括牛皮癬、類風濕性關節炎、血管炎、發炎性腸病、皮炎、骨關節炎、哮喘、發炎性肌病、過敏性鼻炎、***炎、間質性膀胱炎、硬皮病、骨質疏鬆症、濕疹、同種異體或異種移植(器官、骨髓、幹細胞及其他細胞與組織)移植物排斥反應、移植物抗宿主疾病、紅斑性狼瘡症、發炎性疾病、I型糖尿病、肺纖維化、皮肌炎、休格連氏症候群、甲狀腺炎(例如橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)及自體免疫甲狀腺炎)、重症肌無力、自體免疫溶血性貧血、多發性硬化症、囊腫性纖維化、慢性復發性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、過敏性結膜炎及異位性皮炎。
癌症與其他增生性疾病
本文提供之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物、其組合物、及方法可與惡性疾病之治療聯合使用，包括(但不限於)源於淋巴網之惡性疾病、膀胱癌、乳癌、結腸癌、子宮內膜癌、頭頸癌、肺癌、黑素瘤、卵巢癌、***癌及直腸癌。鈣池操縱鈣進入可在癌細胞之細胞增殖方面起重要作用(Weiss等人(2001) International Journal of Cancer 92(6):877-882)。
SOCE受抑制足以阻止腫瘤細胞增殖。吡唑衍生物BTP-2為一種直接ICRAC阻斷劑，其抑制Jurkat細胞(Zitt等人,J. Biol. Chem.,279,12427-12437,2004)及結腸癌細胞之SOCE及增殖。已表明，持續SOCE需要粒線體Ca2+吸收(Nunez等人,J. Physiol. 571.1,57-73,2006)，且阻止粒線體Ca2+吸收會抑制SOCE(Hoth等人,P.N.A.S.,97,10607-10612,2000；Hoth等人,J. Cell. Biol. 137,633-648,1997；Glitsch等人,EMBO J.,21,6744-6754,2002)。刺激Jurkat細胞誘導持續SOCE及Ca2+依賴性磷酸酶鈣調神經磷酸酶活化，該鈣調神經磷酸酶使NFAT脫除磷酸，從而促進介白素-2表現、及增殖。式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抑制SOCE且可用於治療癌症或其他增生性疾病或病況。
肝臟疾病與病症
可使用本文提供之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物、其組合物、及方法治療或預防之疾病或病症包括肝臟疾病與病症。此等疾病與病症包括(但不限於)肝損傷，例如移植、肝炎及肝硬化所致之肝損傷。
鈣池操縱鈣進入已牽涉於慢性肝臟疾病(Tao等人(1999)J. Biol. Chem.,274(34):23761-23769)以及冷藏-溫複氧之後的移植損傷(Elimadi等人(2001) Am J. Physiology,281(3第1部分):G809-G815)中。
腎臟疾病與病症
可使用本文提供之方法治療或預防之疾病或病症包括腎臟疾病與病症。腎小球膜細胞增生常為該等疾病與病症之關鍵特徵。該等疾病與病症可由損傷之免疫學機制或其他機制(包括IgAN)、膜增生性絲球體腎炎或狼瘡性腎炎引起。腎小球膜細胞複製之控制失衡似乎亦在進行性腎衰竭之發病機制中起關鍵作用。
正常成人腎臟中腎小球膜細胞之轉換極低，更新速率小於1%。腎小球/腎臟疾病之顯著特徵為腎小球膜細胞之較高增殖速率或較慢細胞消亡所致之腎小球膜增生。當例如因促有絲***刺激誘導腎小球膜細胞增殖而無細胞消亡時，可導致腎小球膜增生性絲球體腎炎。已有資料指示腎小球膜細胞生長(尤其生長因子)之調控劑可藉由調控鈣池操縱鈣通道而起作用(Ma等人(2001) J Am. Soc. Of Nephrology,12:(1) 47-53)。鈣池操縱鈣流入之調節劑可藉由抑制腎小球膜細胞增殖而幫助治療腎小球疾病。
鈣池操縱鈣通道
臨床研究證實作為T細胞對抗原之反應之基礎的基因活化絕對需要CRAC通道(一種SOC通道類型)(Partiseti等人,J Biol. Chem.,269,32327-32335,1994；Feske等人,Curr. Biol. 15,1235-1241,2005)。SOCE可直接促成細胞溶質Ca2+含量([Ca2+]i)升高，如在T淋巴細胞中，其中CRAC通道產生持續Ca2+信號，該等持續Ca2+信號為驅動作為抗原活化T細胞之基礎的基因表現所需。淋巴細胞活化及應變性免疫反應需要持續鈣進入。鈣進入淋巴細胞中主要經CRAC通道發生。鈣含量增加會使NFAT活化及免疫反應所需之細胞激素表現。
CRAC通道具有獨特生物物理指紋、可定量之鈣池依賴性及T細胞中之基本功能。研究已顯示CRAC通道由兩種組分蛋白形成，該等組分蛋白相互作用以形成CRAC通道。CRAC通道由兩種功能性組分STIM1與Orai1組裝而成。STIM1(基質相互作用分子1)經鑑別為哺乳動物ER Ca2+感測器(Liou,J.等人,Curr. Biol. 15,1235-1241(2005)；Roos,J.等人,J. Cell Biol. 169,435-445(2005)；WO 20041078995；US 2007/0031814)。Orai1/CRACM1經鑑別為哺乳動物CRAC通道之組分(Feske,S.等人,Nature 441,179-185(2006)；Vig,M.等人,Science 312,1220-1223(2006)；Zhang,S. L.等人,Proc. Natl Acad. Sci. USA 103,9357-9362(2006))。
STIM1為ER Ca2+池中Ca2+之感測器，其對鈣池耗盡作出反應而移動至接近於質膜之ER內陷點(puncta)中。Orai1為質膜中之成孔CRAC通道次單元。兩種膜蛋白STIM1及Orai1各自已顯示對活化CRAC通道而言必不可少。
STIM1與Orai1兩者於人類胎腎293細胞(HEK293細胞)中之表現使功能性CRAC通道重構。Orai1之單獨表現大大降低了HEK293細胞中之鈣池操縱Ca2+進入及大鼠嗜鹼性白血病細胞中之Ca2+釋放活化Ca2+電流(ICRAC)。然而，Orai1與鈣池感測STIM1蛋白一起表現時會使SOCE大量增加，從而使得Ca2+進入速率增加高達103倍。此Ca2+進入完全依賴於鈣池，因為相同的共同表現不會引起可量測之鈣池非依賴性Ca2+進入。進入受鈣池操縱通道阻斷劑硼酸2-胺基乙氧基二苯酯完全阻斷。STIM蛋白介導Ca2+池感測及內質網-質膜偶合，而不具有固有的通道特性。Orai1促成負責Ca2+進入之質膜通道組分。Orai1過度表現抑制CRAC通道功能反映了STIM1與Orai1之間所需的化學計量(Soboloff等人，J. Biol. Chem.第281卷，第30期,20661-20665,2006)。
基質相互作用分子(STIM)蛋白
在果蠅S2細胞中使用毒胡蘿蔔素活化Ca2+進入作為鈣池操縱通道之指標的RNAi篩選中，一個基因引起Ca2+進入實質上減少，且彼基因編碼蛋白質基質相互作用分子(Stim)(Roos,J.等人,J. Cell Biol. 169,435-445,2005)。哺乳動物細胞中存在兩種Stim同源物STIM1與STIM2，該兩者似乎均分佈廣泛(Williams等人,Biochem J. 2001年8月1日;357(第3部分):673-85)。STIM1為鈣池操縱Ca2+進入之ER Ca2+感測器。STIM1為具有多個預測蛋白質相互作用域或信號傳導域之77 kDa I型膜蛋白且主要位於ER中，但在有限程度上亦存在於質膜中。
由RNAi敲除STIM1實質上降低Jurkat T細胞中之ICRAC及HEK293上皮細胞與SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞中之鈣池操縱Ca2+進入。然而，敲除密切相關之STIM2尚無影響。此等結果指示STIM(果蠅)及STIM1(哺乳動物)在鈣池操縱通道之活化機制中的基本作用。STIM1為鈣池操縱通道本身並不太可能。STIM1不具有類通道序列，且蛋白質之過度表現僅適度增加Ca2+進入。STIM1位於質膜與細胞內膜(如ER)上(Manji等人,Biochim Biophys Acta. 2000年8月31日;1481(1):147-55. 2000)。蛋白質序列表明跨膜一次，其NH2端則朝ER內腔或細胞外空間定向。NH2端含有EF手型域，且在ER中發揮Ca2+感測器之功能。蛋白質亦含有蛋白質-蛋白質相互作用域，尤其細胞質中之捲曲螺旋域(coiled-coiled domain)與ER(或細胞外空間)中之不育基元(sterile motif，SAM)，兩者均皆接近於預測跨膜域。STIM1可進行寡聚且因此ER與質膜中之蛋白質可相互作用以使兩者橋接(Roos,J.等人,J. Cell Biol. 169,435-445(2005))。
全內反射螢光(TIRF)及共焦顯微法揭示，當Ca2+池充滿時STIM1分佈於整個ER中，但在鈣池耗盡時再分佈至質膜附近的不連續內陷點中。儘管STIM1再分佈至接合ER區中較緩慢(Liou,J.等人,Curr. Biol. 15,1235-1241(2005)；Zhang,S. L.等人,Nature 437,902-905(2005))，但其確實比CRAC通道開放超前數秒鐘(Wu等人,J. Cell Biol. 174,803-813(2006))，且因此足夠快速地成為CRAC通道活化中之基本步驟。
已表明鈣池耗盡使STIM1***質膜中，在質膜中STIM1可控制鈣池操縱鈣經CRAC通道進入(Zhang,S. L.等人,Nature 437,902-905(2005)；Spassova,M. A.等人,Proc. Natl Acad. Sci. USA 103,4040-4045(2006))。
STIM1作為SOCE之Ca2+感測器的關鍵證據為EF手型結構基元之預測Ca2+結合殘基發生突變，從而預期降低STIM1對Ca2+之親和力且因此模擬鈣池耗盡狀態，使得STIM1自發再分佈至內陷點中且甚至當鈣池充滿時仍觸發組成性Ca2+經SOC流入(Spassova,M. A.等人,Proc. Natl Acad. Sci. USA 103,4040-4045(2006)；Liou,J.等人,Curr. Biol. 15,1235-1241(2005))。
Orai蛋白
Orai1(亦稱為CRACM1)廣泛表現，其為具有4個跨膜域且與其他離子通道缺乏顯著序列同源性之33 kDa質膜蛋白(Vig,M.等人,Science 312,1220-1223(2006)；Zhang,S. L.等人,Proc. Natl Acad. Sci. USA 103,9357-9362(2006))。
來自T細胞受體嚙合或鈣池耗盡無法活化Ca2+進入之嚴重複合性免疫缺乏(SCID)症候群之人類患者之T細胞的研究顯示其歸因於Orai1中發生單點突變(Feske,S.等人,Nature 441,179-185(2006))。
存在其他哺乳動物Orai同源物，例如Orai2及Orai3，然而，其功能並未明確定義。Orai2及Orai3當在HEK細胞中與STIM1一起過度表現時可展現SOC通道活性(Mercer,J. C.等人,J. Biol. Chem. 281,24979-24990(2006))。
由Orai1突變誘發研究獲得Orai1促成CRAC通道孔之證據。Glu 106或Glu 190處發生突變顯示CRAC通道對Ca2+離子具選擇性,其削弱Ca2+結合之能力以阻斷單價陽離子滲透(類似於針對電壓閘控之Ca2+通道所述之機制)(Yeromin,A. V.等人,Nature 443,226-229(2006)；Vig,M.等人,Curr. Biol. 16,2073-2079(2006)；Prakriya,M.等人,Nature 443,230-233(2006))。
中和I-II環中一對天冬胺酸(Asp 110與Asp 112)上之電荷會降低Gd3+之阻斷作用及細胞外Ca2+對外向電流之阻斷作用，從而指示此等帶負電之位點可促進多價陽離子於孔口附近積聚。
經由過度表現Orai1所觀測到的電流極為類似於ICRAC，且Orai1可形成多聚體(Yeromin,A. V.等人,Nature 443,226-229(2006)；Vig,M.等人,Curr. Biol. 16,2073-2079(2006)；Prakriya,M.等人,Nature 443,230-233(2006))，使得天然CRAC通道可能為單獨Orai1之多聚體或Orai1與密切相關次單元Orai2及/或Orai3之組合的多聚體。
功能性鈣池操縱鈣通道
SOC通道之表徵已主要由一種SOC通道類型(CRAC通道)獲得。Ca2+自ER內腔損失會觸發CRAC通道活性，其與經由STIM1與Orai1之作用而開放質膜中之CRAC通道相關聯。STIM1感測Ca2+耗盡之情況，使得Ca2+在與質膜相鄰之接合ER中積聚。在用以定位開放CRAC通道之位置的基於TIRF之Ca2+成像研究中，觀察到[Ca2+]i升高與STIM1內陷點共同定位，直接顯示僅極其接近於此等位點之CRAC通道開放(Luik等人,J. Cell Biol. 174,815-825(2006))。
在共同表現STIM1與Orai1之細胞中，鈣池耗盡使Orai1本身自分散之分佈移動以在質膜中正對著STIM1積聚，使得STIM1能夠活化通道(Luik等人,J. Cell Biol. 174,815-825(2006)；Xu,P.等人,Biochem. Biophys. Res. Commun. 350,969-976(2006))。因此，CRAC通道係由ER中之STIM1與質膜中之Orai1的併生簇(apposed cluster)形成。Orai1/STIM1簇所來自的ER與質膜之間的接合間隙(約10-25 nm)可足夠小以允許STIM1與Orai1之間的蛋白質-蛋白質相互作用。此係由過度表現之STIM1與Orai1可共同發生免疫沈澱所支持(Yeromin,A. V.等人,Nature 443,226-229(2006)；Vig,M.等人,Curr. Biol. 16,2073-2079(2006))。
因此，STIM1與Orai1直接相互作用或作為多蛋白複合物之成員相互作用。在一項研究中STIM1之細胞溶質部分本身的表現足以活化CRAC通道對此作出支持(Huang,G. N.等人,Nature Cell Biol. 8,1003-1010(2006))，且ERM/捲曲螺旋域及其他C端域缺失之影響表明在STIM1叢集及SOC通道活化方面的作用(Baba,Y.等人,Proc. Natl Acad. Sci. USA 103,16704-16709(2006))。在STIM1之管腔側，分離之EF-SAM區在活體外移除Ca2+時形成二聚體及更高級多聚體，從而指示STIM1寡聚可為鈣池操縱鈣活化中之早期步驟(Stathopulos等人,J. Biol. Chem. 281,35855-35862(2006))。
在一些實施例中，本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節細胞內鈣，諸如抑制或降低SOCE及/或ICRAC。在其他實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物進行之調節為多種作用之結果，諸如(但不限於)與蛋白質結合，與蛋白質相互作用，或調節與調節細胞內鈣有關之蛋白質(例如STIM蛋白及/或Orai蛋白)的相互作用、活性、含量或任何物理特性、結構特性或其他特性。
舉例而言，評估測試劑與調節細胞內鈣所涉及之蛋白質的結合或相互作用之方法包括NMR、質譜法、螢光光譜法、閃爍近接檢定、表面電漿子共振檢定及其他方法。評估調節與調節細胞內鈣有關之蛋白質的相互作用、活性、含量或任何物理特性、結構特性或其他特性之方法的實例包括(但不限於)評估對蛋白質相互作用之影響的FRET檢定、NMR、評估對蛋白質相互作用以及蛋白質之物理特性及結構特性之影響的X射線結晶學及圓二色性、及適於評估蛋白質之特定活性的活性檢定。
監測或評估對細胞內鈣之影響
在一些實施例中，在以本文所述之任何篩選/鑑別方法監測或評估式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之影響時，對細胞(包括細胞溶質及細胞內細胞器或代謝區)鈣，及/或離子移動至細胞、細胞器、鈣池或其部分(例如膜)中，在其內部移動或移動至其外部進行直接或間接評估或量測。本文描述多種評估鈣含量及離子移動或流動之方法。所使用之特定方法及所採用之條件取決於監測或評估細胞內鈣之哪個特定方面。舉例而言，在本文所述之一些實施例中，已知且使用特定評估鈣池操縱鈣進入、靜止細胞溶質鈣含量、鈣緩衝及鈣含量、以及由細胞內細胞器與鈣池吸收或自細胞內細胞器與鈣池釋放的試劑及條件。在其他實施例中，使用例如細胞、細胞內細胞器或儲鈣區、膜(包括例如分離之膜片或脂質雙層)或無細胞檢定系統(例如外側向外膜囊)監測或評估式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之影響。一般而言，在測試劑存在下監測或評估細胞內鈣之某個方面，且與對照(例如在無測試劑存在下之細胞內鈣)相比較。
調節細胞內鈣之方法
在一些實施例中，細胞內鈣之調節為對細胞內鈣的任何改變或調整，包括(但不限於)改變細胞質及/或細胞內儲鈣細胞器(例如內質網)中之鈣濃度或含量，改變鈣移動至細胞或細胞內鈣池或細胞器中、移動至其外及在其內移動，改變鈣於細胞內之位置，及改變鈣流入細胞中、流出細胞外及在細胞內流動之動力學或其他特性。在一些實施例中，細胞內鈣調節涉及改變或調整(例如降低或抑制)鈣池操縱鈣進入，細胞溶質鈣緩衝，細胞內鈣池或細胞器中之鈣含量或鈣移動至細胞內鈣池或細胞器中、移動至其外或在其內移動，及/或基底或靜止細胞溶質鈣含量。在一些實施例中，細胞內鈣之調節涉及改變或調整受體介導之離子(例如鈣)移動、第二信使操縱之離子(例如鈣)移動、鈣流入細胞中或流出細胞外、及/或離子(例如鈣)吸收至細胞內代謝區(包括例如核內體及溶酶體)中或自細胞內代謝區釋放。
在一態樣中，本文所述之化合物調節細胞內鈣，諸如(但不限於)調節(例如降低或抑制)SOC通道活性，諸如抑制免疫系統細胞(例如淋巴細胞、白血球、T細胞、B細胞)、纖維母細胞(或源自纖維母細胞之細胞)、或表皮細胞、真皮細胞或皮膚細胞(例如角質細胞)中之CRAC通道活性(例如抑制ICRAC、抑制SOCE)。在一些實施例中，調節一或多種涉及於調節細胞內鈣之蛋白質(例如STIM蛋白及/或Orai蛋白)的步驟涉及例如降低蛋白質之含量、表現、活性、功能及/或分子相互作用。舉例而言，若細胞展現鈣含量增加或缺乏細胞內鈣調節之一個方面(例如鈣池操縱鈣進入)的調控，則在其他實施例中，調節涉及降低蛋白質(例如STIM蛋白及/或Orai蛋白)之含量、表現、活性或功能、或分子相互作用。
化合物
本文所述之化合物調節細胞內鈣且可用於治療可因調節細胞內鈣而受益之疾病或病況。在一實施例中，本文所述之化合物抑制鈣池操縱鈣進入。在一實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物干擾SOCE單元組裝。在另一實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物改變形成鈣池操縱鈣通道複合物之蛋白質的功能性相互作用。在一實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物改變STIM1與Orai1之功能性相互作用。在其他實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物為SOC通道孔阻斷劑。在其他實施例中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物為CRAC通道孔阻斷劑。
在一態樣中，本文所述之化合物抑制與活化之SOC通道直接相關的電生理學電流(ISOC)。在另一態樣中，本文所述之化合物抑制與活化之CRAC通道直接相關的電生理學電流(ICRAC)。
可因調節細胞內鈣而受益之疾病或病症包括(但不限於)免疫系統相關疾病(例如自體免疫疾病)、涉及發炎之疾病或病症(例如哮喘、慢性阻塞性肺病、類風濕性關節炎、發炎性腸病、絲球體腎炎、神經發炎性疾病、多發性硬化症及免疫系統病症)、癌症或其他增生性疾病、腎臟疾病及肝臟疾病。在一態樣中，本文所述之化合物可用作預防移植之移植物排斥反應、同種異體或異種移植排斥反應(器官、骨髓、幹細胞、其他細胞及組織)、移植物抗宿主疾病之免疫抑制劑。移植之移植物排斥反應可由組織或器官移植引起。移植物抗宿主疾病可由骨髓或幹細胞移植引起。
本文所述之化合物調節鈣池操縱鈣通道複合物中之蛋白質之至少一部分的活性，調節其相互作用，或與其結合，或與其相互作用。在一實施例中，本文所述之化合物調節鈣釋放活化鈣通道複合物中之蛋白質之至少一部分的活性，調節其相互作用，或與其結合，或與其相互作用。在一態樣中，本文所述之化合物降低功能性鈣池操縱鈣通道複合物之含量。在一態樣中，本文所述之化合物降低活化之鈣池操縱鈣通道複合物的含量。在一態樣中，鈣池操縱鈣通道複合物為鈣釋放活化鈣通道複合物。
用於治療疾病或病症之本文所述化合物在投與患有疾病或病症之個體時有效減輕、改善或消除疾病或病症之症狀或病徵。本文所述之化合物亦可投與易患上疾病或病症但尚未表現該疾病或病症之症狀的個體，預防或延遲症狀顯現。該藥劑可單獨或與其他藥劑組合產生該等作用，或可能具有增強另一藥劑之治療作用的功能。
本文所述之化合物、其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之前藥或醫藥學上可接受之溶劑合物調節細胞內鈣，且可用於治療可因調節細胞內鈣而受益之患者。
在一態樣中，本文所述之化合物為CRAC通道活性之選擇性抑制劑。
在另一態樣中，本文描述一種具有式(I)結構之化合物：
其中：X為CR3或N；L1為O、S或NR11，其中R11為H、C2-C6烯基或C1-C6烷基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基，其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；n為選自0至2之整數；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
對於任何及所有實施例，取代基係選自所列備選物之子組。舉例而言，在一些實施例中，R1為雜芳基。在其他實施例中，雜芳基係選自噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。
在一些實施例中，雜芳基或雙環系統係選自 ，其中R9及R10獨立地為H、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3。
在其他實施例中，雜芳基或雙環系統係選自視情況經取代之苯并咪唑基、視情況經取代之5,6,7,8-四氫吲哚嗪基、視情況經取代之咪唑并[4,5-a]吡啶基、視情況經取代之咪唑并[1,2-a]吡啶基、視情況經取代之咪唑并[4,5-b]吡啶基及視情況經取代之咪唑并[4,5-c]吡啶基。
在一實施例中，R1為選自 之雜芳基；其中R10係選自H、D、C1-C6烷基。在一實施例中，R10為CF3。在另一實施例中，R10為C1-C6烷基。在一實施例中，R10為C2H5。在另一實施例中，R10為CH3。
在某些實施例中，R2為芳基。在其他實施例中，R2為苯基。在某些實施例中，苯基經至少一個選自以下之R3取代：F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基及視情況經取代之雜芳基。在一些實施例中，苯基經至少2個取代基或至少3個取代基取代。在某些實施例中，R3為氟。
在一實施例中，提供式(I)化合物，其中L1為O或S。在另一實施例中，L1為O。在另一實施例中，L1為NR11。在一實施例中，R11為H。在另一實施例中，R11為C1-C6烷基。在另一實施例中，R11為甲基。在另一實施例中，R11為乙基。在另一實施例中，R11為異丙基。在另一實施例中，L2為-NH-C(=O)-。在另一實施例中，L2為-C(=O)NH-。
在一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：L1為O或NH；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為視情況經至少一個R3取代之芳基或雜芳基；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中L1為O或NH；R1及R2各自獨立地為視情況經至少一個選自以下之R3取代之苯基：鹵素、C1-C6烷基、OH、OR5，其中R5為C1-C6烷基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-。
在另一態樣中，提供選自以下之化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：L1為O、S或NR11，其中R11為H、C2-C6烯基或C1-C6烷基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基，其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3及R7係各自獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR6R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、C1-C6烷基、C(O)H、C(O)C1-C6烷基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：L1為O、S或NR11，其中R11為H、C2-C6烯基或C1-C6烷基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基，其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR6R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；R7為-NR6R5；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、C1-C6烷基、C(O)H、C(O)C1-C6烷基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，R7為NH2。在另一實施例中，R7為F。在另一實施例中，R7為OMe。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：R1為芳基或雜芳基；其中芳基或雜芳基視情況經至少一個R3取代；或形成雙環系統；R2為視情況經至少一個R3取代之芳基或雜芳基；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR6R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；各R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、C1-C6烷基、C(O)H、C(O)C1-C6烷基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供選自以下之化合物：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有式(II)結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為S、O或NR5；Y係獨立地選自CR9或N；Y1係獨立地選自CH或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5係選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，L2為-NH-C(=O)-。在另一實施例中，L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，提供式(II)化合物，其中R'1係選自 ，其中Y為CR9；R9為H、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3。在一實施例中，R9為H。在一實施例中，X為O。在另一實施例中，X為S。在另一實施例中，X為NR5，其中R5為H或C1-C6烷基。在另一實施例中，R9為C1-C6烷基。在另一實施例中，R9為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基。在一實施例中，R10為甲基、乙基、正丙基、異丙基。在另一實施例中，R10為選自F、Cl、Br及I之鹵素。在另一實施例中，R10為F。在一實施例中，R10為Cl。在另一實施例中，R10為Br。在另一實施例中，R10為CF3。
在另一實施例中，提供式(II)化合物，其中R2為視情況經至少一個R3取代之芳基。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自F、Cl、Br及I之R3取代。在另一實施例中，苯基經-OH、-CN、CF3或C1-C6烷基取代。在另一實施例中，C1-C6烷基係選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在一實施例中，C1-C6烷基為甲基。在另一實施例中，C1-C6烷基為乙基。在另一實施例中，R3為C3-C8環烷基。在另一實施例中，R3為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。在另一實施例中，R2為經至少2個取代基取代之苯基。在另一實施例中，R2為經至少3個取代基取代之苯基。
在另一實施例中，提供式(II)化合物，其中R2為選自以下之雜芳基：噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為呋喃。在另一實施例中，雜芳基為吡唑。在另一實施例中，雜芳基為噻吩。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自F、Cl、Br、I、-OH、-CN、NO2及C1-C6烷基之R3取代。在一實施例中，雜芳基經至少一個F取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Cl取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Br取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，雜芳基經至少一個甲基取代。在另一實施例中，雜芳基經至少兩個R3基團取代。在另一實施例中，雜芳基經至少三個R3基團取代。
在另一態樣中，提供具有以下結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為S、O或NR5；Y係獨立地選自CR9或N；R2為視情況經至少一個R3取代之芳基或雜芳基；R3係獨立地選自F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5係選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供選自以下之化合物：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：R"1為視情況經至少一個R3取代之5員雜芳基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OCF3、-OR5、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；n為選自1-3之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5及R7係各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C4雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R4、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
本文亦揭示一種具有以下結構之式(III)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-OCF3、-OR5、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；n為選自1-3之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5及R7係各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自H、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C4雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R4、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
本文亦描述式(III)化合物，其中R"1為，其中R6係選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、NO2、OH、CF3、OCF3、OR5、C1-C6烷基及C3-C8環烷基。在一實施例中，R6為-CN。在另一實施例中，R6為OH。在另一實施例中，R6為C1-C6烷基。在另一實施例中，R6係選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基。在一實施例中，R6為甲基。在另一實施例中，R6為乙基。
在另一實施例中，提供式(III)化合物，其中R6係選自CF3、C1-C6烷基及C3-C8環烷基。在某些實施例中，R6為CF3。在其他實施例中，R6為環丙基。在其他實施例中，R7為C1-C6烷基。在某些實施例中，R7為CH3。在某些實施例中，R7為C2H5。在某些實施例中，R7為異丙基。
在一實施例中，提供式(III)化合物，其中L2為-NH-C(=O)-。在一實施例中，L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，R2為芳基。在另一實施例中，R2為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自F、Cl、Br或I之鹵素取代。在另一實施例中，苯基經Cl取代。在另一實施例中，苯基經F取代。在另一實施例中，苯基經Br取代。在另一實施例中，苯基經OH、-CN、OR5、C1-C6烷基或N(R5)2取代。在另一實施例中，苯基經選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R2為雜芳基。在一實施例中，提供式(III)化合物，其中雜芳基係選自噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡哚嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為吡啶。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之R3取代：鹵素、OH、-CN、-NO2、CF3、OCF3、OR5、-N(R5)2、C1-C6烷基或C3-C8環烷基。本文亦描述式(III)化合物，其中與式(III)之吡啶環連接之噻吩部分經至少一個選自以下之R3取代：F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基。在一實施例中，R3為F、Cl、Br或I。在一實施例中，R3經選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R3為甲基。在另一實施例中，R3為乙基。在另一實施例中，R3為異丙基。在另一實施例中，與式(III)化合物之吡啶環連接之噻吩部分經至少兩個R3取代。在另一實施例中，提供式(III)化合物，其中n為1。在另一實施例中，n為2。在另一實施例中，n為3。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(IV)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、D、F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基、-NHS(=O)2R4、-S(=O)2N(R5)2、-N(R5)S(=O)2N(R5)2、-C(=O)CF3、-C(=O)NHS(=O)2R4、-S(=O)2NHC(=O)R4、-N(R5)2、-N(R5)C(=O)R5、-N(R5)C(=O)N(R5)2、-N(R5)C(=O)OR4、-CO2R5、-C(=O)R5、-OC(=O)R4、-OC(=O)N(R5)2、-CON(R5)2、-SR5、-S(=O)R4及-S(=O)2R4；n為選自0-3之整數；各R4係獨立地選自C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R5及R7係各自獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；R6係選自CN或視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供式(IV)化合物，其中R'1為，其中R6獨立地為視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。在一實施例中，各R6獨立地為視情況經取代之芳基。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個鹵素取代。在另一實施例中，至少一個鹵素係選自F、Cl、Br及I。在另一實施例中，鹵素為F。在另一實施例中，鹵素為Cl。在另一實施例中，鹵素為Br。在一實施例中，提供式(IV)化合物，其中R6為CN。在另一實施例中，提供式(IV)化合物，其中R6為視情況經取代之雜芳基。在一實施例中，雜芳基係選自噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為呋喃。在另一實施例中，雜芳基為吡唑。在另一實施例中，雜芳基為噻吩。在另一實施例中，雜芳基為噁二唑。在其他實施例中，R7為C1-C6烷基。在某些實施例中，R7為CH3。在某些實施例中，R7為C2H5。在某些實施例中，R7為異丙基。
在一實施例中，提供式(IV)化合物，其中L2為-NH-C(=O)-。在一實施例中，L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，R2為芳基。在另一實施例中，R2為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自F、Cl、Br或I之鹵素取代。在另一實施例中，苯基經Cl取代。在另一實施例中，苯基經F取代。在另一實施例中，苯基經Br取代。在另一實施例中，苯基經OH、-CN、OR5、C1-C6烷基或N(R5)2取代。在另一實施例中，苯基經選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R2為雜芳基。在一實施例中，提供式(IV)化合物，其中雜芳基係選自噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為吡啶。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之R3取代：鹵素、OH、-CN、-NO2、CF3、OCF3、OR5、-N(R5)2、C1-C6烷基或C3-C8環烷基。本文亦描述式(IV)化合物，其中與式(IV)之吡啶環連接之噻吩部分經至少一個選自以下之R3取代：F、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、-NR5R5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基。在一實施例中，R3為F、Cl、Br或I。在一實施例中，R3經選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R3為甲基。在另一實施例中，R3為乙基。在另一實施例中，R3為異丙基。在另一實施例中，與式(IV)化合物之吡啶環連接之噻吩部分經至少兩個R3取代。在另一實施例中，提供式(IV)化合物，其中n為1。在其他實施例中，n為2。在其他實施例中，n為3。
在一實施例中，提供選自以下之化合物：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(V)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自C或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，L2為-NH-C(=O)-。在另一實施例中，L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，提供式(V)化合物，其中R'1係選自，R9為H、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3。在一實施例中，R9為H。在另一實施例中，R9為C1-C6烷基。在另一實施例中，R9為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基。在一實施例中，R10為甲基、乙基、正丙基、異丙基。在另一實施例中，R10為選自F、Cl、Br及I之鹵素。在一實施例中，R10為Cl。在另一實施例中，R10為Br。在另一實施例中，R10為CF3。
在另一實施例中，提供式(V)化合物，其中R2為視情況經至少一個R3取代之芳基。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自F、Cl、Br及I之R3取代。在另一實施例中，苯基經-OH、-CN、CF3或C1-C6烷基取代。在另一實施例中，C1-C6烷基係選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在一實施例中，C1-C6烷基為甲基。在另一實施例中，C1-C6烷基為乙基。在另一實施例中，R3為C3-C8環烷基。在另一實施例中，R3為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。在另一實施例中，R2為經至少2個取代基取代之苯基。在另一實施例中，R2為經至少3個取代基取代之苯基。
在另一實施例中，提供式(V)化合物，其中R2為選自以下之雜芳基：噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為呋喃。在另一實施例中，雜芳基為吡唑。在另一實施例中，雜芳基為噻吩。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自F、Cl、Br、I、-OH、-CN、NO2及C1-C6烷基之R3取代。在一實施例中，雜芳基經至少一個F取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Cl取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Br取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，雜芳基經至少一個甲基取代。在另一實施例中，雜芳基經至少兩個R3基團取代。在另一實施例中，雜芳基經至少三個R3基團取代。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；Y係獨立地選自C或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，化合物係選自：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(VI)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，L2為-NH-C(=O)-。在另一實施例中，L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R'1係選自，R9為H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6羰基烷基或CF3。在一實施例中，R9為H。在另一實施例中，R9為C1-C6烷基。在另一實施例中，R9為F。在另一實施例中，R9為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基。在一實施例中，R10為甲基、乙基、正丙基、異丙基。在另一實施例中，R10為選自F、Cl、Br及I之鹵素。在一實施例中，R10為Cl。在另一實施例中，R10為Br。在另一實施例中，R10為CF3。
在一實施例中，提供式(VI)化合物，其中各R9為D。在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中各R9為鹵素。在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中各R9為F。在另一實施例中，各R9為Br。在另一實施例中，各R9為Cl。
在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R2為視情況經至少一個R3取代之芳基。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個選自F、Cl、Br及I之R3取代。在另一實施例中，苯基經-OH、-CN、CF3或C1-C6烷基取代。在另一實施例中，C1-C6烷基係選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在一實施例中，C1-C6烷基為甲基。在另一實施例中，C1-C6烷基為乙基。在另一實施例中，R3為C3-C8環烷基。在另一實施例中，R3為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。在另一實施例中，R2為經至少2個取代基取代之苯基。在另一實施例中，R2為經至少3個取代基取代之苯基。
在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R2為選自以下之雜芳基：噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡噁噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異唑啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，雜芳基為呋喃。在一實施例中，雜芳基為苯并噻二唑。在另一實施例中，雜芳基為吡唑。在另一實施例中，雜芳基為噻吩。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自F、Cl、Br、I、-OH、-CN、NO2及C1-C6烷基之R3取代。在一實施例中，雜芳基經至少一個F取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Cl取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個Br取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之C1-C6烷基取代：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，雜芳基經至少一個甲基取代。在另一實施例中，雜芳基經至少一個選自以下之R3取代：視情況經取代之芳基或視情況經取代之雜芳基。在一實施例中，R3為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個鹵素或C1-C6烷基取代。在另一實施例中，苯基經甲基取代。在另一實施例中，R3為雜芳基，其為噻吩基、噻嗯基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、苯并噻二唑基、異苯并呋喃基、烯基、基、啡吖噻基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、異噻唑基、異噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、異喹啉基、喹啉基、呔嗪基、啶基、喹喏啉基、喹唑啉基、噁唑基、啉基、喋啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、咔啉基、啡啶基、吖啶基、呸啶基、啡啉基、啡嗪基、啡呻嗪基、啡噻嗪基、呋呫基及啡噁嗪基。在另一實施例中，R3為噻吩。在另一實施例中，R3為呋喃。在另一實施例中，R3為噻唑。在另一實施例中，雜芳基經至少兩個R3基團取代。在另一實施例中，雜芳基經至少三個R3基團取代。
在另一態樣中，提供一種具有以下結構之式(VI)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R'1為，L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R2為視情況經至少一個R3取代之C1-C6烷基。在一實施例中，R2係選自甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基及第三丁基。在另一實施例中，R2為視情況經至少一個R3取代之C3-C8環烷基。在另一實施例中，R2係選自視情況經至少一個R3取代之環丙基、環丁基、環戊基、環己基及環庚基。在另一實施例中，R2為環戊基。在另一實施例中，R2為環己基。在另一實施例中，R2為經至少一個鹵素取代之環戊基。在另一實施例中，R2為經至少兩個鹵素取代之環戊基。在另一實施例中，R2為經F取代之環戊基。在另一實施例中，環戊基經兩個F取代。在另一實施例中，R2為經至少一個選自以下之C1-C6烷基取代之環戊基：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R2為經至少一個選自鹵素、CN、NO2或OH之R3取代之環戊基。在另一實施例中，R2為經至少一個鹵素取代之環己基。在另一實施例中，R2為經至少兩個鹵素取代之環己基。在另一實施例中，R2為經F取代之環己基。在另一實施例中，環己基經兩個F取代。在另一實施例中，R2為經至少一個選自以下之C1-C6烷基取代之環己基：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在另一實施例中，R2為經至少一個選自鹵素、CN、NO2或OH之R3取代之環己基。
在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R'1為，L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為視情況經至少一個R3取代之C1-C6雜烷基。
在另一實施例中，R2為O-(CH2)nCH3，其中n為0-5。在另一實施例中，R2為OCH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、CH2OCH3、CH2CH2OCH3。在另一實施例中，R2為NH-(CH2)nCH3，其中n為0-5。在另一實施例中，R2為NHCH3、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、CH2NHCH3、CH2CH2NHCH3。在另一實施例中，R2為S-(CH2)nCH3，其中n為0-5。在另一實施例中，R2為SCH3、SCH2CH3、SCH2CH2CH3、CH2SCH3、CH2CH2SCH3。
在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R'1為，L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為視情況經至少一個R3取代之C2-C8雜環烷基。
在一實施例中，R2係選自哌啶基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、啶基、嗎啉基、吡咯啶基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑啶基、烷基、異烷基、咪唑啶基、咪唑啉基及哌喃基。在另一實施例中，哌啶基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、啶基、嗎啉基、吡咯啶基、吡咯啉基、吡唑啉基、吡唑啶基、烷基、異烷基、咪唑啶基、咪唑啉基及哌喃基經至少一個選自以下之R3取代：F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基。
在另一實施例中，提供式(VI)化合物，其中R'1為,L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為視情況經至少一個R3取代之C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，R2為視情況經至少一個選自以下之R3取代之C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基：F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基及C3-C8環烷基。在一實施例中，R2為選自以下之C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基：
在一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：R2為視情況經至少一個R3取代之芳基或雜芳基；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，R3為鹵素。在另一實施例中，具有結構之化合物(其中R2為芳基)經兩個R3取代。在另一實施例中，芳基為苯基。在另一實施例中，R10為鹵素。在另一實施例中，各R9為鹵素。
在另一實施例中，提供選自以下之化合物：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
，或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一態樣中，本文亦描述一種具有以下結構之式(VII)化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y為CR3、O、NR5或S；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6羰基烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供式(VII)化合物，其中R'1為
在另一實施例中，提供式(VII)化合物，其中R'1為
在另一實施例中，提供式(VII)化合物，其中R'1為
在另一實施例中，提供式(VII)化合物，其中R'1為
在另一實施例中，提供具有式(VIIA)結構之式(VII)化合物：
在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中各R3為H。在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中R10為鹵素。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中鹵素為Br。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中鹵素為Cl。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中R10為C1-C6烷基。在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中C1-C6烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中C1-C6烷基為甲基。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中X為CR3。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中R3為H。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中X為N。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中L2為-NH-C(C=O)。在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中L2為-C(=O)NH-。在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中R2為芳基。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中芳基為苯基。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中苯基經至少一個R3取代。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中苯基經至少兩個R3取代。
在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中R2為雜芳基。
在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中雜芳基係選自吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、噻吩基、呋喃基、哌喃基、噻二唑基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吲哚基、吲唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑基、喹啉基、喋啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并噻唑基、喹喏嗪基及吲哚嗪基。在另一實施例中，雜芳基為吡啶。在另一實施例中，雜芳基為噁唑。
在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中雜芳基經至少一個R3取代。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中雜芳基經至少兩個R3取代。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中各R3係獨立地選自F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3或-OR5。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中各R3係獨立地選自C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基或視情況經取代之雜芳基。
在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中各R3係獨立地選自F、Cl、Br或I。
在一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中各R3獨立地為C1-C6烷基。在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中C1-C6烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。
在另一實施例中，提供式(VII)或(VIIA)化合物，其中C1-C6烷基為甲基。
在一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；Y為CR3、O、NR5或S；R2為視情況經至少一個R3取代之芳基或雜芳基；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6羰基烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供選自以下之化合物：
；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有以下結構之化合物：
其中：
L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自C或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；R9及R10係各自獨立地選自H、D、C1-C6烷基、鹵素、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，R2為芳基。在另一實施例中，R2為苯基。在另一實施例中，苯基經至少一個鹵素取代。在另一實施例中，R3係選自OCF3、CF3及OH。
在一實施例中，化合物為。
在另一實施例中，化合物係選自 ；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供具有式(IA)結構之式(I)化合物：
在另一實施例中，提供具有式(IIA)結構之式(II)化合物：
在一實施例中，提供具有式(IIIA)結構之式(III)化合物：
在另一實施例中，提供具有式(IVA)結構之式(IV)化合物：
在另一實施例中，提供具有式(VA)結構之式(V)化合物：
在另一實施例中，提供具有式(VIA)結構之式(VI)化合物：
在某些實施例中，式(VII)化合物具有下式：
其中R'1為茚滿、二氫苯并呋喃、苯并二氧雜環戊烷或其衍生物；其中該茚滿、二氫苯并呋喃、苯并二氧雜環戊烷或其衍生物視情況經至少一個選自以下之基團取代：F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、芳基、雜芳基、稠合芳基或稠合雜芳基視情況經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6羰基烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、視情況經取代之芳基、視情況經取代之O-芳基、視情況經取代之雜芳基；n為選自0-2之整數；或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一態樣中，提供一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑，及具有式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之前藥或醫藥學上可接受之溶劑合物。
在另一態樣中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與具有式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，或包含上述者與醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑之醫藥組合物。
在某些實施例中，哺乳動物之疾病、病症或病況係選自涉及發炎之疾病/病症、絲球體腎炎、葡萄膜炎、肝臟疾病或病症、腎臟疾病或病症、慢性阻塞性肺病、類風濕性關節炎、發炎性腸病、血管炎、皮炎、骨關節炎、發炎性肌病、過敏性鼻炎、***炎、間質性膀胱炎、硬皮病、骨質疏鬆症、濕疹、器官移植排斥反應、同種異體或異種移植、移植物排斥反應、移植物抗宿主疾病、紅斑性狼瘡症、I型糖尿病、肺纖維化、皮肌炎、甲狀腺炎、重症肌無力、自體免疫溶血性貧血、囊腫性纖維化、慢性復發性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、過敏性結膜炎、肝炎及異位性皮炎、哮喘、牛皮癬、多發性硬化症、休格連氏症候群及自體免疫疾病或病症。
在另一態樣中，提供一種調節鈣池操縱鈣(SOC)通道活性之方法，其包含使SOC通道複合物或其部分與以下接觸：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，或包含上述者與醫藥學上可接受之稀釋劑、賦形劑或黏合劑之醫藥組合物。
本文亦提出一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節選自蛋白質之基質相互作用分子(STIM)家族之鈣釋放活化(CRAC)通道複合物之至少一種組分的活性，調節其相互作用，或調節其含量，或與其結合，或與其相互作用。
在另一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節STIM1或STIM2之活性，調節其相互作用，或調節其含量，或與其結合，或與其相互作用。
在另一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中使用式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節鈣釋放活化鈣(CRAC)通道活性會抑制鈣池操縱鈣進入(SOCE)。
在另一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中使用式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節鈣釋放活化鈣(CRAC)通道活性會抑制與活化之CRAC通道直接相關的電生理學電流(ICRAC)。
在另一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物以低於10 μM之IC50抑制SOCE。
在另一實施例中，提供一種調節哺乳動物體內鈣釋放活化鈣通道(CRAC)活性之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物以低於10 μM之濃度抑制與活化之CRAC通道直接相關的電生理學電流(ICRAC)。
在一態樣中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中化合物v調節哺乳動物STIM1蛋白或哺乳動物STIM2蛋白之活性，調節其相互作用，或與其結合，或與其相互作用。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中該疾病、病症或病況為類風濕性關節炎。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中該疾病、病症或病況為牛皮癬。
在一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中該疾病、病症或病況為發炎性腸病。
在另一實施例中，發炎性腸病為潰瘍性結腸炎。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中該疾病、病症或病況為器官移植排斥反應。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中該疾病、病症或病況為多發性硬化症。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其另外包含向該哺乳動物投與第二治療劑。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中第二治療劑係選自免疫抑制劑、糖皮質激素、非類固醇消炎藥、Cox-2特異性抑制劑、來氟米特(leflunomide)、金硫葡萄糖、硫蘋果酸金、奧若菲(aurofin)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、羥氯喹(hydroxychloroquinine)、二甲胺四環素(minocycline)、抗TNF-a藥劑、阿巴西普(abatacept)、阿那白滯素(anakinra)、干擾素-β、干擾素-γ、介白素-2、過敏性疫苗(allergy vaccine)、抗組織胺、抗白三烯、β-促效劑、茶鹼(theophylline)及抗膽鹼劑。
在另一實施例中，提供一種為哺乳動物治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之疾病、病症或病況的方法，其包含向該哺乳動物投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物、或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中第二治療劑係選自他克莫司(tacrolimus)、環孢靈(cyclosporin)、雷帕黴素(rapamicin)、甲胺喋呤(methotrexate)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、巰基嘌呤(mercaptopurine)、黴酚酸鹽(mycophenolate)、或FTY720、潑尼松(prednisone)、乙酸皮質酮(cortisone acetate)、潑尼龍(prednisolone)、甲潑尼龍(methylprednisolone)、***(dexamethasone)、倍他米松(betamethasone)、曲安西龍(triamcinolone)、倍氯米松(beclometasone)、乙酸氟氫皮質酮(fludrocortisone acetate)、乙酸去氧皮質固酮(deoxycorticosterone acetate)、醛固酮(aldosterone)、阿司匹靈(aspirin)、水楊酸、龍膽酸(gentisic acid)、水楊酸膽鹼鎂(choline magnesium salicylate)、水楊酸膽鹼(choline salicylate)、水楊酸膽鹼鎂、水楊酸膽鹼、水楊酸鎂、水楊酸鈉、二氟尼柳(diflunisal)、卡洛芬(carprofen)、非諾洛芬(fenoprofen)、非諾洛芬鈣(fenoprofen calcium)、氟比洛芬(fluorobiprofen)、布洛芬(ibuprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、萘丁酮(nabutone)、酮洛酸(ketolorac)、酮洛酸緩血酸胺(ketorolac tromethamine)、萘普生(naproxen)、奧沙普嗪(oxaprozin)、雙氯芬酸(diclofenac)、依託度酸(etodolac)、吲哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)、甲氯芬那酸鹽(meclofenamate)、甲氯芬那酸鈉(meclofenamate sodium)、甲芬那酸(mefenamic acid)、吡羅昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)、塞內昔布(celecoxib)、羅非昔布(rofecoxib)、伐地昔布(valdecoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、依託昔布(etoricoxib)、盧米羅可(lumiracoxib)、CS-502、JTE-522、L-745,337及NS398、來氟米特、金硫葡萄糖、硫蘋果酸金、奧若菲、柳氮磺胺吡啶、羥氯喹、二甲胺四環素、英利昔單抗(infliximab)、依那西普(etanercept)、阿達木單抗(adalimumab)、阿巴西普、阿那白滯素、干擾素-β、干擾素-γ、介白素-2、過敏性疫苗、抗組織胺、抗白三烯、β-促效劑、茶鹼及抗膽鹼劑。
本文亦描述一種抑制哺乳動物體內活化T細胞核因子(NFAT)之鈣池操縱鈣進入(SOCE)活化的方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在一實施例中，提供一種抑制哺乳動物體內活化T細胞核因子(NFAT)之鈣池操縱鈣進入(SOCE)活化的方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節哺乳動物STIM1蛋白或哺乳動物STIM2蛋白之相互作用，或調節其含量，或與其結合，或與其相互作用。
在另一態樣中，提供一種藉由抑制哺乳動物體內NFAT 之鈣池操縱鈣進入活化來減少細胞激素表現之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥。
在另一實施例中，提供一種藉由抑制哺乳動物體內NFAT之鈣池操縱鈣進入活化來減少細胞激素表現之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物調節哺乳動物STIM1蛋白或哺乳動物STIM2蛋白之相互作用，或調節其含量，或與其結合，或與其相互作用。
在另一實施例中，提供一種藉由抑制哺乳動物體內NFAT之鈣池操縱鈣進入活化來減少細胞激素表現之方法，其包含投與式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之溶劑合物或醫藥學上可接受之前藥，其中細胞激素係選自IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-1α、IL-1β、IL-1 RA、顆粒球群落刺激因子(G-CSF)、顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、抑瘤素M(oncostatin M)、紅血球生成素(erythropoietin)、白血病抑制因子(LIF)、干擾素、γ-干擾素(γ-IFN)、B7.1(CD80)、B7.2(B70、CD86)、TNF-α、TNF-β、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail及遷移抑制因子(MIF)。
化合物之其他形式
在一些狀況下，本文所述之化合物可呈非對映異構體、對映異構體或其他立體異構形式存在。本文呈現之化合物包括所有非對映異構、對映異構及差向異構形式以及其適當混合物。可藉由層析，或藉由形成非對映異構體且藉由再結晶或層析法或其任何組合進行分離，來分離立體異構體(Jean Jacques,Andre Collet,Samuel H. Wilen,「Enantiomers,Racemates and Resolutions」,John Wiley And Sons,Inc.,1981，其揭示內容以引用的方式併入本文中)。亦可藉由立體選擇性合成法來獲得立體異構體。
在一些情況下，化合物可呈互變異構體形式存在。本文所述之化學式包括所有互變異構體。
本文所述之方法及組合物包括使用非晶形形式以及結晶形式(亦稱為多晶型物)。本文所述之化合物可呈醫藥學上可接受之鹽形式。此等化合物之具有相同活性類型之活性代謝物亦包括於本發明之範疇中。另外，本文所述之化合物可呈未溶劑化形式以及與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似物)形成的溶劑化形式存在。本文呈現之化合物的溶劑化形式亦視為本文所揭示者。
在一些實施例中，本文所述之化合物可製備成前藥形式。「前藥」係指在活體內轉化成母體藥物之藥劑。前藥常常適用，因為在一些情況下，其可能比母體藥物容易投與。前藥可例如具有口服生物可用性，而母體藥物則不具有。前藥於醫藥組合物中之溶解度亦可能比母體藥物有所改良。前藥之一非限制性實例應為本文所述之化合物，其以酯(「前藥」)形式投與，以促進跨越細胞膜(其中水溶性不利於遷移)傳送，但一旦進入細胞內(其中水溶性為有益的)即接著以代謝方式水解成羧酸活性實體。前藥之另一實例可為鍵結至酸基之短肽(聚胺基酸)，其中該肽經代謝以顯露活性部分。在某些實施例中，在活體內投與時，前藥以化學方式轉化成化合物之生物活性、醫藥活性或治療活性形式。在某些實施例中，前藥經一或多個步驟或過程經過酶促方式代謝成化合物之生物活性、醫藥活性或治療活性形式。
為了製備前藥，對醫藥活性化合物進行改質，以使活性化合物在活體內投藥時得以再生。前藥可經設計以改變藥物之代謝穩定性或轉運特徵，遮蔽副作用或毒性，改良藥物之味道，或改變藥物之其他特徵或特性。在一些實施例中，依據活體內藥效學過程及藥物代謝之知識，一旦確定醫藥活性化合物，即設計出化合物之前藥(參看例如Nogrady(1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach,Oxford University Press,New York,第388-392頁；Silverman(1992),The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action,Academic Press,Inc.,San Diego,第352-401頁；Saulnier等人(1994),Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters,第4卷，第1985頁；Rooseboom等人,Pharmacological Reviews,56:53-102,2004；Miller等人,J. Med. Chem.第46卷，第24期,5097-5116,2003；Aesop Cho,「Recent Advances in Oral Prodrug Discovery」,Annual Reports in Medicinal Chemistry,第41卷,395-407,2006)。
本文所述化合物之前藥形式包括於申請專利範圍之範疇內，其中前藥在活體內代謝產生具有如上文所陳述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物。在一些狀況下，一些本文所述化合物可為另一衍生物或活性化合物之前藥。
前藥常常適用，因為在一些情況下，其可能比母體藥物容易投與。前藥可例如具有口服生物可用性，而母體藥物則不具有。前藥於醫藥組合物中之溶解度亦可能比母體藥物有所改良。前藥可設計成可逆藥物衍生物，以便用作增強藥物轉運至位點特異性組織的改進劑。在一些實施例中，前藥之設計提高有效水溶性。參看例如Fedorak等人,Am. J. Physiol.,269:G210-218(1995)；McLoed等人,Gastroenterol,106:405-413(1994)；Hochhaus等人,Biomed. Chrom.,6:283-286(1992)；J. Larsen及H. Bundgaard,Int. J. Pharmaceutics,37,87(1987)；J. Larsen等人,Int. J. Pharmaceutics,47,103(1988)；Sinkula等人,J. Pharm. Sci.,64:181-210(1975)；T. Higuchi及V. Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems,A.C.S. Symposium Series,第14卷；及Edward B. Roche,Bioreversible Carriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987，其揭示內容皆併入本文中)。
本文所述化合物之芳族環部分上之位點可能易發生各種代謝反應，因此在芳族環結構上併有適當取代基(諸如(僅舉例而言)鹵素)可減小、最小化或消除此代謝路徑。
本文所述之化合物可經同位素(例如以放射性同位素)作標記或由其他方式(包括(但不限於)使用發色團或螢光部分、生物發光標記、光可活化或化學發光標記)作標記。
本文所述之化合物包括經同位素標記之化合物，其與本文呈現之各個化學式及結構所列舉之化合物相同，只是一或多個原子經原子質量或質量數不同於通常天然所見之原子質量或質量數的原子置換。可併入本發明化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、氟及氯之同位素，分別諸如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、36Cl。本文所述之某些經同位素標記之化合物，例如併有諸如3H及14C之放射性同位素的化合物，適用於藥物及/或基質組織分佈檢定。此外，以諸如氘(亦即2H)之同位素取代因代謝穩定性較高而可產生某些治療優勢，諸如活體內半衰期延長或劑量需求降低。
在額外或其他實施例中，本文所述之化合物在投與有需要之生物體時代謝產生代謝物，該代謝物接著用於產生所要作用，包括所要治療作用。
本文所述之化合物可以醫藥學上可接受之鹽形式形成及/或使用。醫藥學上可接受之鹽的類型包括(但不限於)：(1)藉由使游離鹼形式之化合物與以下醫藥學上可接受之酸反應而形成之酸加成鹽：無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、偏磷酸及其類似酸；或有機酸，諸如乙酸、丙酸、己酸、環戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、丁二酸、蘋果酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、三氟乙酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、3-(4-羥基苯甲醯基)苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、1,2-乙烷二磺酸、2-羥基乙烷磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲基雙環[2.2.2]辛-2-烯-1-甲酸、葡糖庚酸、4,4'-亞甲基雙(3-羥基-2-烯-1-甲酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、第三丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、麩胺酸、羥基萘甲酸、水楊酸、硬脂酸、黏康酸、丁酸、苯基乙酸、苯基丁酸、丙戊酸及其類似酸；(2)母體化合物中存在之酸性質子經金屬離子置換時形成之鹽，該金屬離子為例如鹼金屬離子(例如鋰、鈉、鉀)、鹼土金屬離子(例如鎂或鈣)或鋁離子。在一些狀況下，本文所述之化合物可與以下有機鹼進行配位：諸如(但不限於)乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、緩血酸胺、N-甲基葡糖胺、二環己胺、參(羥甲基)甲胺。在其他狀況下，本文所述之化合物可與以下胺基酸形成鹽：諸如(但不限於)精胺酸、離胺酸及其類似酸。與包括酸性質子之化合物形成鹽所用的可接受之無機鹼包括(但不限於)氫氧化鋁、氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉、氫氧化鈉及其類似鹼。
應瞭解，對醫藥學上可接受之鹽的提及包括其溶劑加合形式或晶體形式，尤其溶劑合物或多晶型物。溶劑合物含有化學計量或非化學計量之溶劑，且可在結晶過程中與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似溶劑)形成。當溶劑為水時形成水合物，或當溶劑為醇時形成醇化物。本文所述化合物之溶劑合物宜在本文所述之過程中製備或形成。另外，本文提供之化合物可以未溶劑化形式以及溶劑化形式存在。一般而言，出於本文提供之化合物及方法之目的，溶劑化形式視為等效於未溶劑化形式。
在一些實施例中，本文所述之化合物，諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IV A)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，呈多種形式，包括(但不限於)非晶形形式、經研磨形式及奈米微粒形式。另外，本文所述之化合物包括結晶形式，亦稱為多晶型物。多晶型物包括化合物之相同元素組成的不同晶體堆積排列。多晶型物通常具有不同X射線繞射圖樣、熔點、密度、硬度、晶形、光學特性、穩定性及溶解度。諸如再結晶溶劑、結晶速率及儲存溫度之多種因素可使單晶形占主導。
可使用包括(但不限於)熱分析、x射線繞射、光譜法、蒸氣吸附及顯微法之多種技術對醫藥學上可接受之鹽、多晶型物及/或溶劑合物進行篩選及表徵。熱分析方法致力於熱化學降解或熱物理過程，其包括(但不限於)多晶型轉變，且該等方法用於分析多晶型之間的關係，測定重量損失，查明玻璃轉移溫度，或進行賦形劑相容性研究。該等方法包括(但不限於)差示掃描熱量測定(DSC)、調幅式差示掃描熱量測定(MDCS)、熱解重量分析(TGA)及熱解重量與紅外分析(TG/IR)。X射線繞射法包括(但不限於)單晶及粉末繞射儀及同步加速器源。各種所用光譜技術包括(但不限於)拉曼(Raman)、FTIR、UV-VIS及NMR(液態及固態)。各種顯微技術包括(但不限於)偏振光顯微法、掃描電子顯微法(SEM)聯合能量色散X射線分析(EDX)、環境掃描電子顯微法聯合EDX(在氣體或水蒸氣氛圍中)、IR顯微法及拉曼顯微法。
在通篇說明書中，可選擇基團及其取代基以提供穩定的部分及化合物。
化合物合成
在一些實施例中，使用化學文獻中所述之方式、使用本文所述之方法或藉由其組合來合成本文所述之化合物。另外，本文呈現之溶劑、溫度及其他反應條件可變化。
在其他實施例中，用於合成本文所述化合物之起始物質及試劑係合成得到或獲自商業來源，諸如(但不限於)Sigma-Aldrich、FischerScientific(Fischer Chemicals)及AcrosOrganics。
在其他實施例中，本文所述之化合物及具有不同取代基之其他相關化合物係使用本文所述以及此領域中公認之技術及物質合成，諸如以下文獻中所述：例如Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis,第1-17卷(John Wiley and Sons,1991)；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds,第1-5卷及增刊(Elsevier Science Publishers,1989)；Organic Reactions,第1-40卷(John Wiley and Sons,1991)；Larock's Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc.,1989)；March,ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY,第4版(Wiley 1992)；Carey及Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY,第4版,A卷及B卷(Plenum 2000,2001)；及Green與Wuts,PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,第3版(Wiley 1999)(其揭示內容皆以引用的方式併入)。用於製備本文揭示之化合物的一般方法可來源於反應，且該等反應可藉由使用適當試劑及條件進行修改，以便引入本文提供之化學式中所見之多個部分。可利用以下合成方法作為指導。
藉由親電子試劑與親核試劑反應形成共價鍵
可使用多種親電子試劑及/或親核試劑對本文所述之化合物進行改質以形成新官能基或取代基。題為「共價鍵及其前驅物之實例」之表1列舉共價鍵及產生共價鍵之前驅官能基的所選非限制性實例。表1可用作提供共價鍵之親電子試劑與親核試劑之多種可用組合的導則。前驅官能基展示為親電子基團及親核基團。
保護基的使用
在所述反應中，可能必需保護反應性官能基，例如羥基、胺基、亞胺基、硫基或羧基，此等官能基為最終產物所需，從而避免其不合需要地參與反應。保護基用於阻斷一些或所有反應性部分且防止該等基團參與化學反應，直至移除保護基為止。各保護基較佳可由不同方式移除。在完全不同的反應條件下裂解之保護基滿足不同移除需求。
可由酸、鹼、還原條件(諸如氫解)及/或氧化條件移除保護基。諸如三苯甲基、二甲氧基三苯甲基、縮醛及第三丁基二甲基矽烷基之基團為酸不穩定的，且可用於在經Cbz基團(可由氫解移除)及Fmoc基團(鹼不穩定)保護之胺基存在下保護羧基及羥基反應性部分。羧酸及羥基反應性部分可在酸不穩定基團(諸如胺基甲酸第三丁酯)阻斷或既為酸穩定、亦為鹼穩定但可水解移除之胺基甲酸酯阻斷的胺存在下以鹼不穩定基團(諸如(但不限於)甲基、乙基及乙醯基)阻斷。
羧酸及羥基反應性部分亦可經可水解移除之保護基(諸如苯甲基)阻斷，而能夠與酸發生氫鍵結之胺基可經鹼不穩定基團(諸如Fmoc)阻斷。羧酸反應性部分可藉由轉化成如本文所例示之簡單酯化合物(包括轉化成烷酯)而加以保護，或其可經可氧化移除之保護基(諸如2,4-二甲氧基苯甲基)阻斷，而共同存在之胺基可經氟化物不穩定之胺基甲酸矽烷酯阻斷。
烯丙基阻斷基適於在酸保護基及鹼保護基存在下使用，因為烯丙基阻斷基為穩定的且隨後可經由金屬或π酸催化劑移除。舉例而言，烯丙基阻斷之羧酸可在酸不穩定胺基甲酸第三丁酯或鹼不穩定乙酸胺保護基存在下以Pd0催化之反應脫除保護基。另一種形式之保護基為化合物或中間物可連接之樹脂。只要殘基連接至樹脂，彼官能基即受阻斷且不能反應。一旦自樹脂釋放，官能基可可用於反應。
阻斷基/保護基通常可選自：
其他保護基、以及適用於保護基形成及其移除之技術的詳細說明描述於Greene及Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,John Wiley & Sons,New York,NY,1999；及Kocienski,Protective Groups,Thieme Verlag,New York,NY,1994中，其揭示內容以引用的方式併入本文中。
特定術語
除非另外規定，否則本文所用之所有技術及科學術語具有與通常理解為所主張之標的物所屬之含義相同的含義。在本文中之術語具有複數個定義之情況下，以本章節中之定義為準。本文提及之所有專利、專利申請案、公開案及公開之核苷酸與胺基酸序列(例如可在GenBank或其他資料庫中獲得之序列)以引用的方式併入。在提及URL或其他此類識別符或位址時，應瞭解，該等識別符可變化且網際網路上之特定資訊可自由變動，但可藉由搜尋網際網路而發現等效資訊。對資訊之參考證明該資訊之可用性及公共傳播。
應瞭解，前述一般描述及以下詳細描述僅為例示性及說明性的，且並不限制所主張之任何標的物。在本申請案中，除非另外特別說明，否則使用單數包括複數。須注意，除非本文另外明確規定，否則本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一」及「該」包括複數個指示物。在本申請案中，除非另外說明，否則使用「或」意謂「及/或」。此外，使用術語「包括」以及其他形式不具限制性。
本文所用之章節標題僅為達成組織目的，且不應視為限制所述之標的物。
標準化學術語之定義可見於參考著作中，包括(但不限於)Carey及Sundberg「ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY 4TH ED.」A卷(2000)及B卷(2001),Plenum Press,New York。除非另外指示，否則習知方法為質譜法、NMR、HPLC、蛋白質化學、生物化學、重組DNA技術及藥理學。
除非提供特殊定義，否則與本文所述之分析化學、合成有機化學及醫療與藥物化學相結合採用之命名法，以及本文所述之分析化學、合成有機化學及醫療與藥物化學之實驗室程序及技術為此領域中所公認者。標準技術可用於化學合成，化學分析，醫藥製備、調配及傳遞，以及患者治療。標準技術可用於重組DNA、寡核苷酸合成及組織培養與轉型(例如電穿孔、脂質體轉染)。反應及純化技術可例如使用製造商說明書之套組，或如此項技術中通常所實現，或如本文所述來進行。上述技術及程序一般可根據習知方法及如本說明書通篇引用及論述之各種一般參考文獻及更專業之參考文獻中所述來進行。
應瞭解，本文所述之方法及組合物並不限於本文所述之特定方法、方案、細胞株、構築體及試劑，且因而可變化。亦應瞭解，本文所用之術語僅為達成描述特定實施例之目的，且不欲限制本文所述之方法、化合物、組合物之範疇。
本文所用之C1-Cx包括C1-C2、C1-C3...C1-Cx。C1-Cx係指構成其所指示之部分的碳原子數(視情況選用之取代基除外)。
「烷基」係指脂族烴基。烷基可能包括或可能不包括不飽和單元。烷基部分可為「飽和烷基」，此意謂其不含有任何不飽和單元(亦即，碳-碳雙鍵或碳-碳參鍵)。烷基亦可為「不飽和烷基」部分，此意謂其含有至少一個不飽和單元。飽和或不飽和之烷基部分可為分支鏈、直鏈或環狀。
「烷基」可具有1至6個碳原子(無論其在本文中何時出現，諸如「1至6」之數值範圍係指指定範圍內之各整數；舉例而言，「1至6個碳原子」意謂烷基可由1個碳原子、2個碳原子、3個碳原子...至多且包括6個碳原子組成，不過本定義亦涵蓋未指明數值範圍之術語「烷基」的出現情況)。本文所述化合物之烷基可命名為「C1-C6烷基」或類似名稱。僅舉例而言，「C1-C6烷基」表示在烷基鏈中具有1至6個碳原子，亦即烷基鏈係選自由以下組成之群：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、己基、丙烯-3-基(烯丙基)、環丙基甲基、環丁基甲基、環戊基甲基、環己基甲基。烷基可經取代或未經取代。視結構而定，烷基可為單價基團或二價基團(亦即伸烷基)。
「烷氧基」係指「-O-烷基」，其中烷基如本文所定義。
術語「烯基」係指烷基的前兩個原子形成並非芳族基團之一部分之雙鍵的烷基類型。亦即，烯基以原子-C(R)=CR2開始，其中R係指烯基之其餘部分，R可相同或不同。烯基之非限制性實例包括-CH=CH2、-C(CH3)=CH2、-CH=CHCH3、-CH=C(CH3)2及-C(CH3)=CHCH3。烯基部分可為分支鏈、直鏈或環狀(在此狀況下，亦稱為「環烯基」)。烯基可具有2至6個碳。烯基可經取代或未經取代。視結構而定，烯基可為單價基團或二價基團(亦即伸烯基)。
術語「炔基」係指烷基的前兩個原子形成參鍵之烷基類型。亦即，炔基以原子-C≡C-R開始，其中R係指炔基之其餘部分。炔基之非限制性實例包括-C≡CH、-C≡CCH3、-C≡CCH2CH3及-C≡CCH2CH2CH3。炔基部分之「R」部分可為分支鏈、直鏈或環狀。炔基可具有2至6個碳。炔基可經取代或未經取代。視結構而定，炔基可為單價基團或二價基團(亦即伸炔基)。
「胺基」係指-NH2基團。
術語「烷基胺」或「烷基胺基」係指-N(烷基)xHy基團，其中烷基如本文所定義且x及y係選自x=1、y=1及x=2、y=0之群。當x=2時，烷基與其所連接之氮一起可視情況形成環系統。「二烷基胺基」係指-N(烷基)2基團，其中烷基如本文所定義。
術語「芳族」係指具有含4n+2個π電子(其中n為整數)之非定域π電子系統的平面環。芳族環可由5、6、7、8、9個或9個以上原子形成。芳族物可視情況經取代。術語「芳族」包括芳基(例如苯基、萘基)與雜芳基(例如吡啶基、喹啉基)。
本文所用之術語「芳基」係指芳族環，其中形成環之各原子為碳原子。芳基環可由5、6、7、8、9個或9個以上碳原子形成。芳基可視情況經取代。芳基之實例包括(但不限於)苯基及萘基。視結構而定，芳基可為單價基團或二價基團(亦即伸芳基)。
「羧基」係指-CO2H。在一些實施例中，羧基部分可經「羧酸生物電子等排物體」置換，羧酸生物電子等排物體係指展現與羧酸部分類似之物理及/或化學特性的官能基或官能部分。羧酸生物電子等排物體具有與羧酸基團類似之生物學特性。具有羧酸部分之化合物的羧酸部分可與羧酸生物電子等排物體交換，且與含羧酸化合物相比具有類似物理及/或生物學特性。舉例而言，在一實施例中，羧酸生物電子等排物體在生理pH值下離子化之程度將與羧酸基團大致相同。羧酸生物電子等排物體之實例包括(但不限於)：
，及其類似物。
術語「環烷基」係指單環或多環非芳族基團，其中形成環之各原子(亦即骨架原子)為碳原子。環烷基可飽和或部分不飽和。環烷基可與芳族環稠合(在此狀況下，環烷基經由非芳族環碳原子鍵結)。環烷基包括具有3至10個環原子之基團。環烷基之說明性實例包括(但不限於)以下部分：
及其類似部分。
術語「雜芳基」或者「雜芳族」係指包括一或多個選自氮、氧及硫之環雜原子的芳基。含N「雜芳族」或「雜芳基」部分係指環之至少一個骨架原子為氮原子的芳族基團。多環雜芳基可稠合或未稠合。雜芳基之說明性實例包括以下部分：
及其類似部分。
「雜環烷基」或「雜脂環」基團係指至少一個骨架環原子為選自氮、氧及硫之雜原子的環烷基。該等基團可與芳基或雜芳基稠合。雜環烷基(亦稱作非芳族雜環)之說明性實例包括：
、及其類似基團。術語雜脂環亦包括所有環形式之碳水化合物，包括(但不限於)單醣、雙醣及寡醣。除非另外說明，否則雜環烷基之環中具有2至10個碳。應瞭解，當提及雜環烷基中之碳原子數時，雜環烷基中之碳原子數與構成雜環烷基之原子(亦即雜環烷基環之骨架原子，包括雜原子)的總數不同。
術語「鹵基」或者「鹵素」意謂氟、氯、溴及碘。
術語「鹵烷基」係指經一或多個鹵素取代之烷基。鹵素可能相同或可能不同。鹵烷基之非限制性實例包括-CH2Cl、-CF3、-CHF2、-CH2CF3、-CF2CF3、-CF(CH3)3及其類似基團。
術語「氟烷基」及「氟烷氧基」分別包括經一或多個氟原子取代之烷基及烷氧基。氟烷基之非限制性實例包括-CF3、-CHF2、-CH2F、-CH2CF3、-CF2CF3、-CF2CF2CF3、-CF(CH3)3及其類似基團。氟烷氧基之非限制性實例包括-OCF3、-OCHF2、-OCH2F、-OCH2CF3、-OCF2CF3、-OCF2CF2CF3、-OCF(CH3)2及其類似基團。
術語「雜烷基」係指一或多個骨架鏈原子係選自並非碳之原子(例如氧、氮、硫、磷、矽或其組合)之烷基。雜原子可置於雜烷基之任何內部位置。實例包括(但不限於)-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH2-NH-OCH3、-CH2-O-Si(CH3)3、-CH2-CH=N-OCH3及-CH=CH-N(CH3)-CH3。另外，至多兩個雜原子可相鄰，諸如-CH2-NH-OCH3及-CH2-O-Si(CH3)3。雜原子數除外，「雜烷基」可具有1至6個碳原子。
術語「鍵」或「單鍵」係指當經鍵連接之原子視為較大子結構之一部分時，兩個原子或兩個部分之間的化學鍵。
術語「部分」係指分子之特定區段或官能基。化學部分常被視作嵌入分子中或附接至分子之化學實體。
本文所用之單獨出現且未指定數值之取代基「R」係指選自烷基、鹵烷基、雜烷基、烯基、環烷基、芳基、雜芳基(經環碳鍵結)及雜環烷基之取代基。
術語「視情況經取代」或「經取代」意謂所提及之基團可經一或多個個別且獨立地選自以下之其他基團取代：烷基、環烷基、芳基、雜芳基、雜環烷基、-OH、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷基亞碸基、芳基亞碸基、烷基碸基、芳基碸基、-CN、炔基、C1-C6烷基炔基、鹵基、醯基、醯氧基、-CO2H、-CO2-烷基、硝基、鹵烷基、氟烷基及胺基(包括經單取代及二取代之胺基(例如-NH2、-NHR、-N(R)2))，及其經保護之衍生物。舉例而言，視情況選用之取代基可為LsRs，其中各Ls係獨立地選自一鍵、-O-、-C(=O)-、-S-、-S(=O)-、-S(=O)2-、-NH-、-NHC(O)-、-C(O)NH-、S(=O)2NH-、-NHS(=O)2、-OC(O)NH-、-NHC(O)O-、-(C1-C6烷基)-或-(C2-C6烯基)-；且各Rs係獨立地選自H、(C1-C6烷基)、(C3-C8環烷基)、芳基、雜芳基、雜環烷基及C1-C6雜烷基。可形成上述取代基之保護性衍生物的保護基見於上文諸如Greene及Wuts之原始資料中。
本文所述之方法及調配物包括使用具有式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)結構之化合物的結晶形式(亦稱為多晶型物)或醫藥學上可接受之鹽，以及此等化合物之具有相同活性類型的活性代謝物。在一些情況下，化合物可以互變異構體形式存在。所有互變異構體皆包括於本文呈現之化合物的範疇內。另外，本文所述之化合物可以未溶劑化形式以及與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似物)形成的溶劑化形式存在。本文呈現之化合物的溶劑化形式亦視為本文所揭示者。
術語「套組」及「製造物品」作同義詞使用。
術語「個體」或「患者」涵蓋哺乳動物及非哺乳動物。哺乳動物之實例包括(但不限於)哺乳綱之任何成員：人類；非人類靈長類動物，諸如黑猩猩及其他猿類及猴類；農畜，諸如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家畜，諸如家兔、犬及貓；實驗動物，包括齧齒動物，諸如大鼠、小鼠及天竺鼠；及其類似哺乳動物。非哺乳動物之實例包括(但不限於)鳥類、魚及其類似非哺乳動物。在本文提供之方法及組合物之一個實施例中，哺乳動物為人類。
本文所用之術語「治療」包括以預防及/或治療方式，緩解、減輕或改善疾病或病況症狀、預防其他症狀、改善或預防症狀之潛在病因、抑制疾病或病況，例如遏止疾病或病況顯現、減輕疾病或病況、促使疾病或病況減退、減輕疾病或病況所致之病況、或中止疾病或病況之症狀。
本文所用之術語「標靶蛋白」係指能夠由本文所述之化合物，諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物結合或與其相互作用的蛋白質或蛋白質之一部分。在某些實施例中，標靶蛋白為STIM蛋白。在某些實施例中，標靶蛋白為Orai蛋白。
本文所用之「STIM蛋白」包括(但不限於)哺乳動物STIM-1(諸如人類及齧齒動物(例如小鼠)STIM-1)、黑腹果蠅(Drosophila melanogaster)D-STIM、秀麗新小桿線蟲(C. elegan)C-STIM、瘧蚊(Anopheles gambiae)STIM及哺乳動物STIM-2(諸如人類及齧齒動物(例如小鼠)STIM-2)(參看US 2007/0031814之段落[0211]至[0270]，以及US 2007/0031814之表3，其以引用的方式併入本文中)。如本文所述，已鑑別出該等蛋白質涉及於、參與及/或提供鈣池操縱鈣進入或其調節，細胞質鈣緩衝，及/或調節細胞內鈣池(例如內質網)中之鈣含量或調節鈣移動至細胞內鈣池(例如內質網)中、在細胞內鈣池(例如內質網)內移動或移動至細胞內鈣池(例如內質網)外。
本文所用之「Orai蛋白」包括Orai1(如WO 07/081804中所述之SEQ ID NO: 1)、Orai2(如WO 07/081804中所述之SEQ ID NO: 2)或Orai3(如WO 07/081804中所述之SEQ ID NO: 3)。Orai1核酸序列對應於GenBank寄存編號NM_032790，Orai2核酸序列對應於GenBank寄存編號BC069270，且Orai3核酸序列對應於GenBank寄存編號NM_152288。本文所用之Orai係指Orai基因中之任一者，例如Orai1、Orai2、Orai3(參看WO 07/081804之表I)。如本文所述，已鑑別出該等蛋白質涉及於、參與及/或提供鈣池操縱鈣進入或其調節，細胞質鈣緩衝，及/或調節細胞內鈣池(例如內質網)中之鈣含量或調節鈣移動至細胞內鈣池(例如內質網)中、在細胞內鈣池(例如內質網)內移動或移動至細胞內鈣池(例如內質網)外。
當提及蛋白質(例如STIM、Orai)時，術語「片段」或「衍生物」意謂在至少一種檢定中基本上保持與天然蛋白質相同之生物功能或活性的蛋白質或多肽。舉例而言，所提及蛋白質之片段或衍生物保持至少約50%之天然蛋白質活性、至少75%、至少約95%之天然蛋白質活性，如例如鈣流入檢定所測定。
如本文所用，藉由投與特定化合物或醫藥組合物改善特定疾病、病症或病況之症狀係指任何嚴重性減輕、發作延遲、進程減緩或持續時間縮短(該作用為永久或臨時的、持續或短暫的)，其可歸因於化合物或組合物之投與或與化合物或組合物之投與有關。
本文所用之術語「調節」意謂與標靶蛋白直接或間接相互作用，從而改變標靶蛋白之活性，包括(僅舉例而言)抑制標靶活性、或限制或降低標靶活性。
本文所用之術語「調節劑」係指改變標靶活性之化合物。舉例而言，調節劑可使標靶之某種活性之量值相較於無調節劑存在下之活性量值有所增強或降低。在某些實施例中，調節劑為降低標靶之一或多種活性之量值的抑制劑。在某些實施例中，抑制劑完全遏制標靶之一或多種活性。
本文所用之關於細胞內鈣之「調節」係指對細胞內鈣的任何改變或調整，包括(但不限於)改變細胞質及/或細胞內儲鈣細胞器(例如內質網)中之鈣濃度，及改變鈣流入細胞中、流出細胞外及在細胞內流動之動力學。在一態樣中，調控係指減少。
本文所用之術語「標靶活性」係指能夠由調節劑調節之生物活性。某些例示性標靶活性包括(但不限於)結合親和力、信號轉導、酶促活性、腫瘤生長、發炎或發炎相關過程、及改善與疾病或病況相關之一或多種症狀。
本文所用之術語「抑制」SOC通道活性或CRAC通道活性或者SOC通道活性或CRAC通道活性之「抑制劑」係指抑制鈣池操縱鈣通道之活性或鈣釋放活化鈣通道之活性。
本文所用之關於調配物、組合物或成分之術語「可接受」意謂對所治療個體之一般健康狀況並無持續有害作用。
本文所用之「醫藥學上可接受」係指不會消除化合物之生物活性或特性且相對無毒之物質(諸如載劑或稀釋劑)，亦即，該物質可投與個體而不引起不合需要之生物效應或以有害方式與含有其之組合物的任何組分相互作用。
本文所用之術語「醫藥組合」意謂藉由混合或組合一種以上活性成分而得之產物且包括活性成分之固定組合與非固定組合。術語「固定組合」意謂一種活性成分，例如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，與輔劑，均以單一實體或劑量之形式同時投與患者。術語「非固定組合」意謂一種活性成分，例如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，與輔劑，係以各別實體形式同時、並行或依序投與患者而無特定間隔時間限制，其中該投藥在患者體內提供有效水準之兩種化合物。非固定組合亦適用於混合液療法，例如三種或三種以上活性成分之投藥。
術語「醫藥組合物」係指本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與其他化學組分之混合物，該等化學組分為諸如載劑、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑。醫藥組合物有助於化合物投與生物體。此項技術中存在多種投與化合物之技術，包括(但不限於)：靜脈內、經口、氣霧劑、非經腸、經眼、經肺及局部投與。
本文所用之術語「有效量」或「治療有效量」係指投與藥劑或化合物將足以一定程度地減輕所治療之疾病或病況之一或多種症狀的量。結果可為疾病之徵象、症狀或病因減輕及/或緩解，或生物系統之任何其他所要改變。舉例而言，用於治療用途之「有效量」為包括本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之組合物提供疾病症狀之臨床上顯著減輕所需的量。在任何個別狀況下，可使用諸如劑量遞增研究之技術來確定適當「有效」量。
本文所用之術語「增強」意謂提高或延長所要作用之效能或持續時間。因此，關於增強治療劑之作用的術語「增強」係指在效能或持續時間方面提高或延長其他治療劑對系統之作用的能力。本文所用之「增強有效量」係指足以增強另一治療劑對所要系統之作用的量。
本文所用之術語「共同投與」或其類似術語意欲涵蓋向單一患者投與所選治療劑，且欲包括經由相同或不同投藥途徑或在相同或不同時間投與該等藥劑之治療方案。
本文所用之術語「載劑」係指有助於化合物併入細胞或組織中之相對無毒化合物或試劑。
術語「稀釋劑」係指用於在傳遞之前稀釋相關化合物之化合物。稀釋劑亦可用於穩定化合物，因為其可提供較穩定的環境。溶解於緩衝溶液中之鹽(其亦可控制或維持pH值)在此項技術中用作稀釋劑，包括(但不限於)磷酸鹽緩衝生理食鹽水溶液。
本文揭示之化合物的「代謝物」為化合物代謝時所形成的彼化合物之衍生物。術語「活性代謝物」係指化合物代謝時所形成的化合物之生物活性衍生物。本文所用之術語「代謝」係指特定物質被生物體改變之過程(包括(但不限於)水解反應及酶催化之反應)的總結果。因此，酶可使化合物產生特定結構改變。舉例而言，細胞色素P450催化多種氧化及還原反應，而尿苷二磷酸葡醛糖酸轉移酶催化活化之葡糖醛酸分子轉變成芳族醇、脂族醇、羧酸、胺及游離巰基。關於代謝之更多資訊可獲自The Pharmacological Basis of Therapeutics,第9版,McGraw-Hill(1996)。可藉由將本文揭示之化合物投與宿主且分析宿主之組織樣本，或藉由在活體外將化合物與肝細胞一起培育且分析所得化合物來鑑別該等化合物之代謝物。
「生物可用性」係指本文揭示之化合物(例如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物)傳遞至所研究動物或人類之周身循環中的重量百分比。靜脈內投與時藥物之總暴露量(total exposure，AUC(0-∞))通常定義為100%生物可用性(F%)。「口服生物可用性」係指經口服用醫藥組合物與靜脈內注射相比，本文揭示之化合物吸收至周身循環中的程度。
「血漿濃度」係指本文揭示之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於個體血液之血漿組分中的濃度。應瞭解，本文所述化合物之血漿濃度因代謝及/或與其他治療劑可能發生之相互作用的可變性而在個體間可能顯著不同。根據本文揭示之一個實施例，本文揭示之化合物的血漿濃度在個體間可能不同。同樣，諸如最大血漿濃度(Cmax)或達到最大血漿濃度之時間(Tmax)、或血漿濃度時間曲線下之總面積(AUC(0-∞))的值在個體間可能不同。歸因於此可變性，構成化合物之「治療有效量」所必需的量在個體間可能不同。
本文所用之「鈣恆定」係指在細胞內維持細胞內鈣含量及移動(包括鈣信號傳導)總體上平衡。
本文所用之「細胞內鈣」係指位於細胞中而未明細特定細胞位置之鈣。相比之下，關於鈣之「細胞溶質」或「細胞質」係指鈣位於細胞之細胞質中。
本文所用之對細胞內鈣之影響為細胞內鈣之任何方面所發生的任何改變，包括(但不限於)細胞內鈣含量及位置改變，以及鈣移動至細胞或細胞內鈣池或細胞器中、移動至細胞或細胞內鈣池或細胞器外或在細胞或細胞內鈣池或細胞器內移動。舉例而言，對細胞內鈣之影響可為細胞或其一部分中發生之鈣流動或移動之特性(諸如動力學、敏感性、速率、振幅及電生理學特徵)的改變。對細胞內鈣之影響可為任何細胞內鈣調節過程的改變，該過程包括鈣池操縱鈣進入、細胞溶質鈣緩衝，及細胞內鈣池中之鈣含量或鈣移動至細胞內鈣池中、移動至細胞內鈣池外或在細胞內鈣池內移動。任何此等方面可以多種方式進行評估，包括(但不限於)評估鈣或其他離子(尤其陽離子)之含量、鈣或其他離子(尤其陽離子)之移動、鈣或其他離子(尤其陽離子)之含量波動、鈣或其他離子(尤其陽離子)流動及/或鈣或其他離子(尤其陽離子)跨膜轉運之動力學。改變可為統計學上顯著之任何此類變化。因此，舉例而言，若認為測試細胞與對照細胞中之細胞內鈣不同，則該差異可為統計學上顯著差異。
本文所用之關於蛋白質與細胞內鈣或細胞內鈣調控方面之關係的「涉及於」意謂當降低、改變或消除蛋白質於細胞中之表現或活性時，細胞內鈣或細胞內鈣調控之一或多個方面發生伴隨或相關降低、改變或消除。表現或活性之此類改變或降低可藉助於改變編碼蛋白質之基因的表現或藉由改變蛋白質含量而發生。細胞內鈣之一個方面(諸如鈣池操縱鈣進入)所涉及之蛋白質由此可為提供或參與細胞內鈣或細胞內鈣調控之一個方面的蛋白質。舉例而言，提供鈣池操縱鈣進入之蛋白質可為STIM蛋白及/或Orai蛋白。
本文所用之作為鈣通道組分之蛋白質為參與形成通道之多蛋白複合物的蛋白質。
本文所用之關於細胞溶質鈣含量之「基底」或「靜止」係指鈣於細胞(諸如未受刺激之細胞)之細胞質中的濃度，該細胞尚未經受使鈣移動至細胞中或移動至細胞外或在細胞內移動之條件。基底或靜止細胞溶質鈣含量可為游離鈣(亦即未結合於細胞鈣結合物質)於細胞(諸如未受刺激之細胞)之細胞質中的濃度，該細胞尚未經受使鈣移動至細胞中或移動至細胞外之條件。
本文所用之關於離子(包括陽離子，例如鈣)之「移動」係指離子移動或再定位(諸如流動)至細胞中、移動或再定位(諸如流動)至細胞外或在細胞內移動或再定位(諸如流動)。因此，離子之移動可為例如離子自細胞外介質移動至細胞中、自細胞內移動至細胞外介質、自細胞內細胞器或儲存位點內移動至細胞溶質、自細胞溶質移動至細胞內細胞器或儲存位點中、自一個細胞內細胞器或儲存位點移動至另一細胞內細胞器或儲存位點、自細胞外介質移動至細胞內細胞器或儲存位點中、自細胞內細胞器或儲存位點移動至細胞外介質、及在細胞之細胞質中自一個位置移動至另一位置。
本文所用之「陽離子進入」或「鈣進入」細胞中係指陽離子(諸如鈣)進入細胞內位置(諸如細胞之細胞質)中或細胞內細胞器或儲存位點之內腔中。因此，陽離子進入可為例如陽離子自細胞外介質或自細胞內細胞器或儲存位點移動至細胞之細胞質中，或陽離子自細胞質或細胞外介質移動至細胞內細胞器或儲存位點中。鈣自細胞內細胞器或儲存位點移動至細胞質中亦稱作自細胞器或儲存位點「釋放鈣」。
本文所用之「調節細胞內鈣之蛋白質」係指調控、控制及/或改變細胞內鈣所涉及之任何細胞蛋白質。舉例而言，此類蛋白質可涉及於以多種方式改變或調整細胞內鈣，包括(但不限於)藉由維持靜止或基底細胞質鈣含量，或藉由涉及於細胞經由包括細胞內鈣自靜止或基底狀態偏離之機制對細胞中傳輸之信號的反應。在「調節細胞內鈣之蛋白質」的情形下，「細胞」蛋白質為與細胞相關之蛋白質，諸如細胞質蛋白質、質膜相關蛋白質或細胞內膜蛋白。調節細胞內鈣之蛋白質包括(但不限於)離子轉運蛋白、鈣結合蛋白及調控離子轉運蛋白之調控蛋白。
本文所用之「改善」係指疾病或病況改良或與疾病或病況相關之症狀至少部分緩解。
本文所用之「細胞反應」係指由離子移動至細胞中或移動至細胞外或在細胞內移動而引起的任何細胞反應。細胞反應可能與至少部分取決於離子(諸如鈣)之任何細胞活性相關。該等活性可包括例如細胞活化、基因表現、內飲作用、胞泄作用、細胞運輸及凋亡性細胞死亡。
本文所用之「免疫細胞」包括免疫系統之細胞及在免疫反應中發揮功能或活性之細胞，諸如(但不限於)T細胞、B細胞、淋巴細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、嗜中性球、嗜酸性球、嗜酸性球、肥大細胞、漿細胞、白血球、抗原呈現細胞及天然殺傷細胞。
本文所用之「細胞激素」係指由細胞分泌且可改變分泌細胞或另一細胞之行為或特性的小型可溶性蛋白。細胞激素與細胞激素受體結合且觸發細胞內行為或特性，例如細胞增殖、死亡或分化。例示性細胞激素包括(但不限於)介白素(例如IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-1a、IL-1β及IL-1 RA)、顆粒球群落刺激因子(G-CSF)、顆粒球-巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF)、抑瘤素M、紅血球生成素、白血病抑制因子(LIF)、干擾素、B7.1(亦稱為CD80)、B7.2(亦稱為B70、CD86)、TNF家族成員(TNF-a、TNF-β、LT-β、CD40配位體、Fas配位體、CD27配位體、CD30配位體、4-1BBL、Trail)及MIF。
「鈣池操縱鈣進入」或「SOCE」係指鈣離子自細胞內鈣池釋放藉以與離子跨越質膜流入相配合之機制。
「SOC通道活性之選擇性抑制劑」意謂抑制劑對SOC通道具選擇性且實質上不會影響其他類型之離子通道的活性。
「CRAC通道活性之選擇性抑制劑」意謂抑制劑對CRAC通道具選擇性且實質上不會影響其他類型之離子通道及/或其他SOC通道的活性。
監測或評估對細胞內鈣之影響
在以本文所述或此領域中公認之任何篩選/鑑別方法監測或評估式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之影響時，可對細胞(包括細胞溶質及細胞內細胞器或代謝區)鈣，及/或離子移動至細胞、細胞器、鈣池或其部分(例如膜)中，在其內部移動或移動至其外部進行直接或間接評估或量測。本文描述及/或在此領域中公認多種評估鈣含量及離子移動或流動之方法。所使用之特定方法及所採用之條件可取決於監測或評估細胞內鈣之哪個特定方面。舉例而言，如本文在一些實施例中所述，使用特定評估鈣池操縱鈣進入、靜止細胞溶質鈣含量、鈣緩衝及鈣含量、以及由細胞內細胞器與鈣池吸收或自細胞內細胞器與鈣池釋放的試劑及條件。可使用例如細胞、細胞內細胞器或儲鈣區、膜(包括例如分離之膜片或脂質雙層)或無細胞檢定系統(例如外側向外膜囊)監測或評估式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之影響。一般而言，在測試劑存在下監測或評估細胞內鈣之某個方面，且與對照(例如在無測試劑存在下之細胞內鈣)相比較。
調節細胞內鈣之方法
細胞內鈣之調節可為對細胞內鈣的任何改變或調整，包括(但不限於)改變細胞質及/或細胞內儲鈣細胞器(例如內質網)中之鈣濃度或含量，改變鈣移動至細胞或細胞內鈣池或細胞器中、移動至其外或在其內移動，改變鈣於細胞內之位置，及改變鈣流入細胞中、流出細胞外及在細胞內流動之動力學或其他特性。在特定實施例中，細胞內鈣調節可涉及改變或調整(例如降低或抑制)鈣池操縱鈣進入，細胞溶質鈣緩衝，細胞內鈣池或細胞器中之鈣含量或鈣移動至細胞內鈣池或細胞器中、移動至其外或在其內移動，及/或基底或靜止細胞溶質鈣含量。在一些實施例中，細胞內鈣之調節可涉及改變或調整受體介導之離子(例如鈣)移動、第二信使操縱之離子(例如鈣)移動、鈣流入細胞中或流出細胞外、及/或離子(例如鈣)吸收至細胞內代謝區(包括例如核內體及溶酶體)中或自細胞內代謝區釋放。
在一態樣中，本文所述之化合物調節細胞內鈣，諸如(但不限於)調節(例如降低或抑制)SOC通道活性，諸如抑制免疫系統細胞(例如淋巴細胞、白血球、T細胞、B細胞)、纖維母細胞(或源自纖維母細胞之細胞)、或表皮細胞、真皮細胞或皮膚細胞(例如角質細胞)中之CRAC通道活性(例如抑制ICRAC、抑制SOCE)。調節一或多種涉及於調節細胞內鈣之蛋白質(例如STIM蛋白及/或Orai蛋白)的步驟可涉及例如降低蛋白質之含量、表現、活性、功能及/或分子相互作用。舉例而言，若細胞展現鈣含量增加或缺乏細胞內鈣調節之一個方面(例如鈣池操縱鈣進入)的調控，則調節可涉及降低蛋白質(例如STIM蛋白及/或Orai蛋白)之含量、表現、活性或功能、或分子相互作用。
醫藥組合物與投藥方法之實例
醫藥組合物可按習知方式使用一或多種生理學上可接受之載劑進行調配，該等載劑包括有助於將活性化合物加工成可在醫藥學上使用之製劑的賦形劑及助劑。適當調配物視所選投藥途徑而定。關於適於本文所述之醫藥組合物之賦形劑的其他細節可見於例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy,第19版(Easton,Pa.: Mack Publishing Company,1995)；Hoover,John E.,Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pennsylvania 1975；Liberman,H.A.及Lachman,L.編,Pharmaceutical Dosage Forms,Marcel Decker,New York,N.Y.,1980；及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版(Lippincott Williams & Wilkins1999)中，其揭示內容以引用的方式併入本文中。
本文所用之醫藥組合物係指本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與其他化學組分之混合物，該等化學組分為諸如載劑、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑。醫藥組合物有助於化合物投與生物體。在實施本文提供之治療或使用方法時，將治療有效量之本文所述化合物於醫藥組合物中投與患有待治療之疾病、病症或病況的哺乳動物。在一些實施例中，哺乳動物為人類。治療有效量可視疾病嚴重性、年齡及患者相對健康狀況、所用化合物之效能及其他因素而廣泛變化。式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物可單獨使用或與一或多種治療劑一起作為混合物之組分組合使用(如在組合療法中)。
本文所述之醫藥調配物可經由多種投藥途徑投與個體，包括(但不限於)經口、非經腸(例如靜脈內、皮下、肌肉內)、鼻內、經頰、局部、經直腸或經皮投藥途徑。此外，包括本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物的本文所述之醫藥組合物可調配成任何適合劑型，包括(但不限於)水性口服分散液、液體、凝膠、糖漿、酏劑、漿液、懸浮液、氣霧劑、控制釋放調配物、快速熔融調配物、起泡調配物、凍乾調配物、錠劑、散劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、延遲釋放調配物、延長釋放調配物、脈衝釋放調配物、多微粒調配物及混合型即刻釋放與控制釋放調配物。
可依局部方式而非全身方式投與化合物及/或組合物，例如通常在儲槽式製劑或持續釋放調配物中經由將化合物直接注射至器官或組織中。該等長效調配物可藉由植入(例如皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射來投與。此外，可在靶向藥物傳遞系統中，例如在以器官特異性抗體包覆之脂質體中投與。脂質體將靶向器官且由器官選擇性吸收。另外，藥物可以快速釋放調配物形式、延長釋放調配物形式或即刻釋放調配物形式提供。
包括本文所述化合物之醫藥組合物可依習知方式製造，諸如(僅舉例而言)藉助於習知混合、溶解、粒化、製糖衣藥丸、水磨、乳化、囊封、裹入(entrapping)或壓製製程。
醫藥組合物應包括至少一種本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IV A)、(V)、(V A)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物作為活性成分，其呈游離酸或游離鹼形式或呈醫藥學上可接受之鹽形式。另外，本文所述之方法及醫藥組合物包括使用結晶形式(亦稱為多晶型物)以及此等化合物之具有相同活性類型之活性代謝物。在一些情況下，化合物可以互變異構體形式存在。所有互變異構體皆包括於本文呈現之化合物的範疇內。另外，本文所述之化合物可以未溶劑化形式以及與醫藥學上可接受之溶劑(諸如水、乙醇及其類似物)形成的溶劑化形式存在。本文呈現之化合物的溶劑化形式亦視為本文所揭示者。
在某些實施例中，本文提供之組合物亦可包括一或多種防腐劑以抑制微生物活性。適合之防腐劑包括四級銨化合物，諸如氯化苯甲烴銨(benzalkonium chloride)、溴化十六烷基三甲基銨及氯化十六烷基吡錠。
供口服用之醫藥製劑可由以下方式獲得：混合一或多種固體賦形劑與一或多種本文所述之化合物(例如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IV A)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物)，視情況碾磨所得混合物，且必要時在添加適合助劑之後加工顆粒混合物，獲得錠劑、丸劑或膠囊，適合之賦形劑包括例如填充劑，諸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素製劑，諸如玉米澱粉、小麥澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、黃蓍膠(gum tragacanth)、甲基纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉；或其他，諸如聚乙烯吡咯啶酮(PVP或聚維酮(povidone))或磷酸鈣。必要時，可添加崩解劑，諸如交聯羧甲纖維素鈉(cross-linked croscarmellose sodium)、聚乙烯吡咯啶酮、瓊脂，或褐藻酸或其鹽(諸如褐藻酸鈉)。
糖衣藥丸核心具有適合之包衣。為此目的，可使用濃縮糖溶液，其可視情況含有***膠(gum arabic)、滑石、聚乙烯吡咯啶酮、卡波莫凝膠(carbopol gel)、聚乙二醇及/或二氧化鈦、漆液及適合之有機溶劑或溶劑混合物。可向錠劑或糖衣藥丸包衣中添加染料或顏料以鑑別或表徵活性化合物劑量之不同組合。
可口服用之醫藥製劑包括由明膠製成之配合***膠囊，以及由明膠及增塑劑(諸如甘油或山梨糖醇)製成之軟密封膠囊。配合***膠囊可含有活性成分與填充劑(諸如乳糖)、黏合劑(諸如澱粉)及/或潤滑劑(諸如滑石或硬脂酸鎂)及視情況選用之穩定劑的混合物。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮於適合液體中，諸如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。另外，可添加穩定劑。
在一些實施例中，本文揭示之固體劑型可呈以下形式：錠劑(包括懸浮液錠劑、快速熔融錠劑、咀嚼崩解錠劑(bite-disintegration tablet)、快速崩解錠劑、起泡錠劑或囊片)、丸劑、散劑(包括無菌封裝散劑、可分散散劑或起泡散劑)、膠囊(包括軟膠囊或硬膠囊，例如由源自動物之明膠或源自植物之HPMC製成之膠囊，或「分散型膠囊(sprinkle capsule)」)、固體分散體、固溶體、生物可侵蝕性劑型、控制釋放調配物、脈衝釋放劑型、多微粒劑型、小球、顆粒或氣霧劑形式。在其他實施例中，醫藥調配物呈散劑形式。在其他實施例中，醫藥調配物呈錠劑形式，包括(但不限於)快速熔融錠劑。另外，本文所述化合物之醫藥調配物可以單膠囊或多膠囊劑型投與。在一些實施例中，醫藥調配物分兩個、或三個、或四個膠囊或錠劑投與。
在一些實施例中，藉由混合本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之粒子與一或多種醫藥賦形劑以形成大塊摻合組合物來製備固體劑型，例如錠劑、起泡錠劑、及膠囊。當稱此等大塊摻合組合物均質時，意謂本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之粒子均勻分散於整個組合物中，使得組合物可細分成同等有效之單位劑型，諸如錠劑、丸劑及膠囊。個別單位劑量亦可包括膜包衣，其在口服攝取時或與稀釋劑接觸時崩解。此等調配物可由習知藥理學技術製造。
本文所述之醫藥固體劑型可包括本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，及一或多種醫藥學上可接受之添加劑，諸如相容載劑、黏合劑、填充劑、懸浮劑、調味劑、甜味劑、崩解劑、分散劑、界面活性劑、潤滑劑、著色劑、稀釋劑、增溶劑、濕潤劑、增塑劑、穩定劑、穿透增強劑、濕潤劑、消泡劑、抗氧化劑、防腐劑或其一或多種組合。在其他態樣中，使用標準包覆包衣程序，諸如Remington's Pharmaceutical Sciences,第20版(2000)中所述之程序，在本文所述化合物之調配物周圍提供膜包衣。在一實施例中，對一些或所有本文所述化合物粒子包覆包衣。在另一實施例中，對一些或所有本文所述化合物粒子進行微囊封。在另一實施例中，本文所述化合物之粒子未經微囊封或未包覆包衣。
適合用於本文所述之固體劑型中的載劑包括(但不限於)***膠(acacia)、明膠、膠態二氧化矽、甘油磷酸鈣、乳酸鈣、麥芽糊精、甘油、矽酸鎂、酪蛋白鈉、大豆卵磷脂、氯化鈉、磷酸三鈣、磷酸二鉀、硬脂醯基乳酸鈉、角叉菜膠(carrageenan)、單酸甘油酯、二酸甘油酯、預膠凝化澱粉、羥丙基甲基纖維素、硬脂酸乙酸羥丙基甲基纖維素、蔗糖、微晶纖維素、乳糖、甘露糖醇及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的填充劑包括(但不限於)乳糖、碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸氫鈣、硫酸鈣、微晶纖維素、纖維素粉末、右旋糖、葡萄糖結合劑(dextrate)、聚葡萄糖、澱粉、預膠凝化澱粉、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、硬脂酸乙酸羥丙基甲基纖維素(HPMCAS)、蔗糖、木糖醇、乳糖醇、甘露糖醇、山梨糖醇、氯化鈉、聚乙二醇及其類似物。
為儘可能有效地自固體劑型基質釋放式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，在調配物中常常使用崩解劑，在劑型係用黏合劑壓製而成時尤其如此。崩解劑在水分吸收至劑型中時藉由膨脹或毛細作用而幫助破壞劑型基質。適合用於本文所述之固體劑型中的崩解劑包括(但不限於)天然澱粉，諸如玉米澱粉或馬鈴薯澱粉；預膠凝化澱粉，諸如National 1551或；或羥乙酸澱粉鈉，諸如或；纖維素，諸如木產品、甲基結晶纖維素(methylcrystalline cellulose)(例如、 PH101、 PH102、PH105、 P100、、、Ming 及Solka-)、甲基纖維素、交聯羧甲纖維素或交聯纖維素(諸如交聯羧甲基纖維素鈉(Ac-Di-)、交聯羧甲基纖維素或交聯羧甲纖維素)；交聯澱粉，諸如羥乙酸澱粉鈉；交聯聚合物，諸如交聯聚維酮(crospovidone)、交聯聚乙烯吡咯啶酮；褐藻酸鹽，諸如褐藻酸或褐藻酸之鹽，諸如褐藻酸鈉；黏土，諸如 HV(矽酸鎂鋁)；膠狀物，諸如瓊脂、瓜爾膠(guar)、刺槐豆膠(locust bean)、刺梧桐樹膠(Karaya)、果膠或黃蓍膠；羥乙酸澱粉鈉；膨潤土；天然海綿；界面活性劑；樹脂，諸如陽離子交換樹脂；柑橘渣；月桂基硫酸鈉；於組合澱粉中之月桂基硫酸鈉；及其類似物。
黏合劑賦予固體口服劑型調配物以內聚性：對於粉末填充之膠囊調配物，其幫助塞緊可填充至軟殼或硬殼膠囊中之調配物，且對於錠劑調配物，其確保錠劑在壓製後保持完整且在壓製或填充步驟之前幫助保證摻合物均勻。適用作本文所述固體劑型中之黏合劑的物質包括(但不限於)羧甲基纖維素、甲基纖維素(例如)、羥丙基甲基纖維素(例如Hypromellose USP Pharmacoat-603)、硬脂酸乙酸羥丙基甲基纖維素(Aqoate HS-LF及HS)、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素(例如)、乙基纖維素(例如)及微晶纖維素(例如)、微晶右旋糖、直鏈澱粉、矽酸鎂鋁、多醣酸、膨潤土、明膠、聚乙烯吡咯啶酮/乙酸乙烯酯共聚物、交聯聚維酮、聚維酮、澱粉、預膠凝化澱粉、黃蓍膠、糊精、糖(諸如蔗糖(例如)、葡萄糖、右旋糖、糖蜜、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇(例如)、乳糖)、天然或合成膠(諸如***膠、黃蓍膠、印度膠(ghatti gum)、洋車前子(isapol husk)之黏液)、澱粉、聚乙烯吡咯啶酮(例如 CL、 CL、 XL-10及 K-12)、落葉松***半乳聚糖(larch arabogalactan)、、聚乙二醇、蠟、褐藻酸鈉及其類似物。
一般而言，粉末填充之明膠膠囊調配物中所用之黏合劑含量為20-70%。錠劑調配物中黏合劑之使用量視以下因素而變化：是否直接壓製、是否濕式粒化、是否碾壓，或是否使用其他賦形劑，諸如本身可充當適度黏合劑之填充劑。在一些實施例中，調配師決定調配物之黏合劑含量，但錠劑調配物中黏合劑之使用量通常至多70%。
適合用於本文所述之固體劑型中的潤滑劑或滑動劑包括(但不限於)硬脂酸、氫氧化鈣、滑石、玉米澱粉、硬脂醯反丁烯二酸鈉、鹼金屬鹽及鹼土金屬鹽(諸如鋁鹽、鈣鹽、鎂鹽、鋅鹽)、硬脂酸、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、蠟、、硼酸、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉、白胺酸、聚乙二醇或甲氧基聚乙二醇(諸如CarbowaxTM、PEG 4000、PEG 5000、PEG 6000)、丙二醇、油酸鈉、山崳酸甘油酯(glyceryl behenate)、棕櫚基硬脂酸甘油酯、苯甲酸甘油酯、月桂基硫酸鎂或月桂基硫酸鈉，及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的稀釋劑包括(但不限於)糖(包括乳糖、蔗糖及右旋糖)、多醣(包括葡萄糖結合劑及麥芽糊精)、多元醇(包括甘露糖醇、木糖醇及山梨糖醇)、環糊精及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的濕潤劑包括例如油酸、單硬脂酸甘油酯、脫水山梨糖醇單油酸酯、脫水山梨糖醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯、四級銨化合物(例如Polyquat )、油酸鈉、月桂基硫酸鈉、硬脂酸鎂、多庫酯鈉(sodium docusate)、三乙酸甘油酯(triacetin)、維生素ETPGS及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的界面活性劑包括例如月桂基硫酸鈉、脫水山梨糖醇單油酸酯、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯、聚山梨醇酯、泊洛沙姆(polaxomer)、膽汁鹽、單硬脂酸甘油酯、氧化乙烯與氧化丙烯之共聚物(例如(BASF))及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的懸浮劑包括(但不限於)聚乙烯吡咯啶酮，例如聚乙烯吡咯啶酮K12、聚乙烯吡咯啶酮K17、聚乙烯吡咯啶酮K25或聚乙烯吡咯啶酮K30；聚乙二醇，例如分子量可為約300至約6000、或約3350至約4000、或約5400至約7000之聚乙二醇；乙烯吡咯啶酮/乙酸乙烯酯共聚物(S630)；羧甲基纖維素鈉；甲基纖維素；羥丙基甲基纖維素；聚山梨醇酯-80；羥乙基纖維素；褐藻酸鈉；膠狀物，諸如黃蓍膠及***膠、瓜爾膠、三仙膠類(xanthans)(包括三仙膠(xanthan gum))；糖；纖維素類，諸如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥乙基纖維素；聚山梨醇酯-80；褐藻酸鈉；聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯；聚乙氧基化脫水山梨糖醇單月桂酸酯；聚維酮；及其類似物。
適合用於本文所述之固體劑型中的抗氧化劑包括例如丁基化羥基甲苯(BHT)、抗壞血酸鈉及生育酚。
本文所述之固體劑型中所用之添加劑之間存在相當大的重疊。因此，上文所列之添加劑應僅視作例示而非限制可納入本文所述醫藥組合物之固體劑型中的添加劑類型。
在其他實施例中，對醫藥調配物之一或多個層進行增塑。舉例說明，增塑劑一般為高沸點固體或液體。可添加佔包衣組合物之約0.01重量%至約50重量%(w/w)的適合增塑劑。增塑劑包括(但不限於)鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸酯、聚乙二醇、甘油、乙醯化甘油酯、三乙酸甘油酯、聚丙二醇、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯、癸二酸二丁酯、硬脂酸、硬脂醇、硬脂酸酯及蓖麻油。
壓製錠劑為藉由壓製上文所述調配物之大塊摻合物而製備之固體劑型。在多個實施例中，設計成於口中溶解之壓製錠劑將包括一或多種調味劑。在其他實施例中，壓製錠劑將包括包圍最終壓製錠劑之膜。在一些實施例中，膜包衣可使本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物自調配物延遲釋放。在其他實施例中，膜包衣在患者順應性方面有幫助(例如包衣或糖包衣)。膜包衣包括，其通常佔錠劑重量之約1%至約3%。在其他實施例中，壓製錠劑包括一或多種賦形劑。
膠囊可例如藉由將本文所述化合物之調配物的大塊摻合物置於膠囊內來製備。在一些實施例中，將調配物(非水性懸浮液及溶液)置於軟明膠膠囊中。在其他實施例中，將調配物置於標準明膠膠囊或非明膠膠囊中，諸如包含HPMC之膠囊。在其他實施例中，將調配物置於分散型膠囊中，其中該膠囊可整個吞咽或可打開該膠囊且將內含物噴灑於食物上隨後進食。在一些實施例中，將治療劑量分成多個(例如2、3或4個)膠囊。在一些實施例中，以膠囊形式傳遞整個調配物劑量。
在多個實施例中，將本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之粒子與一或多種賦形劑乾式摻合，且壓製成團塊(諸如錠劑)，該團塊之硬度足以提供實質上在經口投與後約30分鐘內、約35分鐘內、約40分鐘內、約45分鐘內、約50分鐘內、約55分鐘內或約60分鐘內崩解，藉此將調配物釋放至胃腸液中的醫藥組合物。
在另一態樣中，劑型可包括微囊封調配物。在一些實施例中，微囊封物質中存在一或多種其他相容物質。例示性物質包括(但不限於)pH值改質劑、侵蝕促進劑、消泡劑、抗氧化劑、調味劑；及載劑物質，諸如黏合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、界面活性劑、增溶劑、穩定劑、潤滑劑、濕潤劑及稀釋劑。
適用於本文所述之微囊封的物質包括與本文所述化合物相容之物質，其使化合物與其他不相容賦形劑充分分離。與本文所述化合物相容之物質為延遲式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於活體內釋放之物質。
適用於延遲包括本文所述化合物之調配物釋放的例示性微囊封物質包括(但不限於)羥丙基纖維素醚(HPC)，諸如或Nisso HPC；低取代之羥丙基纖維素醚(L-HPC)；羥丙基甲基纖維素醚(HPMC)，諸如Seppifilm-LC、、Metolose SR、-E、Opadry YS、PrimaFlo、Benecel MP824及Benecel MP843；甲基纖維素聚合物，諸如-A；硬脂酸乙酸羥丙基甲基纖維素Aqoat(HF-LS、HF-LG、HF-MS)及；乙基纖維素(EC)及其混合物，諸如E461、-EC、；聚乙烯醇(PVA)，諸如Opadry AMB；羥乙基纖維素，諸如；羧甲基纖維素及羧甲基纖維素(CMC)之鹽，諸如-CMC；聚乙烯醇及聚乙二醇共聚物，諸如Kollicoat ；單酸甘油酯(Myverol)；三酸甘油酯(KLX)；聚乙二醇；改質食物澱粉；丙烯酸系聚合物及丙烯酸系聚合物與纖維素醚之混合物，諸如 EPO、 L30D-55、 FS 30D、 L100-55、 L100、 S100、 RD100、 E100、 L12.5、 S12.5、 NE30D及 NE 40D；鄰苯二甲酸乙酸纖維素；Sepifilm，諸如HPMC與硬脂酸之混合物；環糊精；及此等物質之混合物。
在其他實施例中，將增塑劑併入微囊封物質中，該等增塑劑為諸如聚乙二醇，例如PEG 300、PEG 400、PEG 600、PEG 1450、PEG 3350及PEG 800；硬脂酸；丙二醇；油酸；及三乙酸甘油酯。在其他實施例中，適用於延遲醫藥組合物釋放之微囊封物質係來自USP或官定處方書(National Formulary，NF)。在其他實施例中，微囊封物質為Klucel。在其他實施例中，微囊封物質為甲基纖維素(methocel)。
本文所述之微囊封化合物可由包括以下之方法調配：例如噴霧乾燥法、旋轉盤溶劑法(spinning disk-solvent process)、熱熔融法、噴霧冷卻法、流體化床、靜電沈積、離心擠出、旋轉式懸浮液分離、液體-氣體或固體-氣體界面處聚合、壓力擠出或噴灑溶劑萃取槽法(spraying solvent extraction bath)。除此等方法以外，亦可使用若干化學技術，例如複合凝聚、溶劑蒸發、聚合物-聚合物不相容法、在液體介質中界面聚合、原位聚合、液中乾燥及在液體介質中解溶劑化。此外，亦可使用其他方法，諸如碾壓、擠壓/滾圓、凝聚或奈米粒子包覆。
在其他實施例中，亦根據本發明製備起泡散劑。已使用起泡鹽將藥物分散於水中以供經口投與。起泡鹽為含有於乾式混合物中之藥劑的顆粒或粗粉，其通常由碳酸氫鈉、檸檬酸及/或酒石酸構成。當將該等鹽添加至水中時，酸與鹼反應釋放出二氧化碳氣體，藉此引起「起泡」。起泡鹽之實例包括例如以下成分：碳酸氫鈉或碳酸氫鈉與碳酸鈉之混合物、檸檬酸及/或酒石酸。可使用任何引起釋放二氧化碳之酸-鹼組合來替代碳酸氫鈉與檸檬酸及酒石酸之組合，只要該等成分適於醫藥用途且產生約6.0或6.0以上之pH值即可。
在其他實施例中，包括本文所述化合物之本文所述調配物為固體分散體。製造該等固體分散體之方法包括(但不限於)例如美國專利第4,343,789號、第5,340,591號、第5,456,923號、第5,700,485號、第5,723,269號，及美國專利公開案第2004/0013734號。在其他實施例中，本文所述之調配物為固溶體。固溶體將物質以及活性劑及其他賦形劑合併在一起，使得加熱混合物會使藥物溶解，接著冷卻所得組合物得到固體摻合物，可將其進一步調配或直接添加至膠囊中或壓製成錠劑。製備該等固溶體之方法包括(但不限於)例如美國專利第4,151,273號、第5,281,420號及第6,083,518號。
可進一步調配包括含本文所述化合物之本文所述調配物的固體醫藥口服劑型以提供式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物的控制釋放。控制釋放係指根據所要概況經長時段自併有本文所述化合物之劑型中釋放該等化合物。控制釋放概況包括例如持續釋放、延長釋放、脈衝釋放及延遲釋放概況。與即刻釋放組合物成對比，控制釋放組合物允許根據預定概況經長時段將藥劑傳遞至個體。該等釋放速率可持續長時段提供治療有效量之藥劑，且藉此提供較長藥理反應期，同時使副作用與習知快速釋放劑型相比降至最低。該等較長反應期提供相應短效、即刻釋放製劑無法達成的許多固有效益。
在一些實施例中，本文所述之固體劑型可調配成包覆腸溶包衣之延遲釋放口服劑型，亦即利用腸溶包衣影響在胃腸道之小腸中之釋放的如本文所述之醫藥組合物之口服劑型。包覆腸溶包衣之劑型可為壓製或模製或擠出錠劑/模片(包覆包衣或未包覆包衣)，其含有本身包覆包衣或未包覆包衣之活性成分及/或其他組合物組分的顆粒、粉末、小球、珠粒或粒子。包覆腸溶包衣之口服劑型亦可為膠囊(包覆包衣或未包覆包衣)，其含有本身包覆包衣或未包覆包衣之固體載劑或組合物的小球、珠粒或顆粒。
本文所用之術語「延遲釋放」係指可在腸道中比未作延遲釋放改變時所實現之釋放較遠端的某一一般可預測之位置處實現釋放的傳遞。在一些實施例中，延遲釋放之方法為包覆包衣。任何包衣應塗覆達到足夠厚度，使得整個包衣在約5以下之pH值下不會溶解於胃腸液中，而在約5及5以上之pH值下會溶解。包衣可由以下製成：丙烯酸系聚合物。丙烯酸系聚合物之效能(主要為其於生物流體中之溶解度)可基於取代程度及類型而變化。適合丙烯酸系聚合物之實例包括甲基丙烯酸共聚物及甲基丙烯酸銨共聚物。可利用Eudragit系列E、L、S、RL、RS及NE(Rohm Pharma)，因為其可溶解於有機溶劑、水性分散液或乾粉中。Eudragit系列RL、NE及RS不溶於胃腸道中，但可滲透胃腸道，且主要用於結腸靶向。Eudragit系列E溶於胃中。Eudragit系列L、L-30D及S不溶於胃中而溶於腸中；纖維素衍生物。適合纖維素衍生物之實例為：乙基纖維素；纖維素與鄰苯二甲酸酐之偏乙酸酯的反應混合物。效能可基於取代程度及類型而變化。鄰苯二甲酸乙酸纖維素(CAP)在pH>6下溶解。Aquateric(FMC)為水基系統，且為粒子<1 μm之經噴霧乾燥CAP假膠乳(pseudolatex)。Aquateric中之其他組分可包括pluronic、Tween及乙醯化單酸甘油酯。其他適合之纖維素衍生物包括：苯偏三酸乙酸纖維素(Eastman)；甲基纖維素(Pharmacoat,Methocel)；鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素(HPMCP)；丁二酸羥丙基甲基纖維素(HPMCS)；及丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素(例如AQOAT(Shin Etsu))。效能可基於取代程度及類型而變化。舉例而言，諸如HP-50、HP-55、HP-55S、HP-55F級之HPMCP為適合的。效能可基於取代程度及類型而變化。舉例而言，適合等級之丁二酸乙酸羥丙基甲基纖維素包括(但不限於)AS-LG(LF)，其在pH 5下溶解；AS-MG(MF)，其在pH 5.5下溶解；及AS-HG(HF)，其在更高pH值下溶解。此等聚合物以供水性分散用之顆粒形式或細粉形式提供；聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)。PVAP在pH>5下溶解，且其對水蒸氣及胃液之通透性較小。
在一些實施例中，包衣可能含有且通常確實含有增塑劑及可能存在之其他包衣賦形劑，諸如著色劑、滑石及/或硬脂酸鎂。適合之增塑劑包括檸檬酸三乙酯(Citroflex 2)、三乙酸甘油酯、檸檬酸乙醯基三乙酯(Citroflec A2)、Carbowax 400(聚乙二醇400)、鄰苯二甲酸二乙酯、檸檬酸三丁酯、乙醯化單酸甘油酯、甘油、脂肪酸酯、丙二醇及鄰苯二甲酸二丁酯。詳言之，陰離子型羧酸系丙烯酸系聚合物通常將含有10-25重量%之增塑劑，尤其鄰苯二甲酸二丁酯、聚乙二醇、檸檬酸三乙酯及三乙酸甘油酯。採用諸如噴塗或盤塗(pan coating)之習知包覆技術來塗覆包衣。包衣厚度必須足以確保口服劑型保持完整直至到達腸道中之所要局部傳遞部位為止。
除增塑劑以外，亦可向包衣中添加著色劑、防黏劑、界面活性劑、消泡劑、潤滑劑(例如巴西棕櫚蠟或PEG)以溶解或分散包衣物質，且改良包衣效能及包覆包衣之產品。
在其他實施例中，使用脈衝劑型傳遞包括本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物的本文所述調配物。脈衝劑型能夠在控制滯後時間之後的預定時間點或在特定部位處提供一或多個即刻釋放脈衝。脈衝劑型可使用多種脈衝調配物來投與，包括(但不限於)美國專利第5,011,692號；第5,017,381號；第5,229,135號；第5,840,329號；第4,871,549號；第5,260,068號；第5,260,069號；第5,508,040號；第5,567,441號及第5,837,284號中所述之脈衝調配物。
許多其他類型之控制釋放系統適合與本文所述之調配物一起使用。該等傳遞系統之實例包括例如基於聚合物之系統，諸如聚乳酸及聚乙醇酸、聚酸酐及聚己內酯；基於多孔基質、非聚合物之系統，其為脂質，包括固醇，諸如膽固醇、膽固醇酯及脂肪酸，或為中性脂肪，諸如單酸甘油酯、二酸甘油酯及三酸甘油酯；水凝膠釋放系統；矽橡膠系統；基於肽之系統；蠟包衣；生物可侵蝕性劑型；使用習知黏合劑之壓製錠劑；及其類似物。參看例如Liberman等人,Pharmaceutical Dosage Forms,第2版，第1卷，第209-214頁(1990)；Singh等人,Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,第2版，第751-753頁(2002)；美國專利第4,327,725號、第4,624,848號、第4,968,509號、第5,461,140號、第5,456,923號、第5,516,527號、第5,622,721號、第5,686,105號、第5,700,410號、第5,977,175號、第6,465,014號及第6,932,983號。
在一些實施例中，提供如下醫藥調配物以供經口投與個體，其包括本文所述化合物(例如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物)之粒子及至少一種分散劑或懸浮劑。調配物可為供懸浮用之粉末及/或顆粒，且與水混合時獲得實質上均勻之懸浮液。
供經口投與之液體調配物劑型可為水性懸浮液，其選自包括(但不限於)以下之群：醫藥學上可接受之水性口服分散液、乳液、溶液、酏劑、凝膠及糖漿。參看例如Singh等人,Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,第2版，第754-757頁(2002)。
本文所述之水性懸浮液及分散液可保持均質狀態持續至少4小時，如The USP Pharmacists' Pharmacopeia(2005版,第905章)中所定義。應藉由與測定整個組合物之均質性一致的取樣法來測定均質性。在一實施例中，可藉由持續1分鐘以內之物理攪動而使水性懸浮液再懸浮成均質懸浮液。在另一實施例中，可藉由持續45秒以內之物理攪動而使水性懸浮液再懸浮成均質懸浮液。在另一實施例中，可藉由持續30秒以內之物理攪動而使水性懸浮液再懸浮成均質懸浮液。在另一實施例中，無需攪動即可維持均質水性分散液。
本文所述之醫藥組合物可包括甜味劑，諸如(但不限於)***糖漿、乙醯磺胺酸鉀(acesulfame K)、阿力甜(alitame)、茴香、蘋果、阿斯巴甜糖(aspartame)、香蕉、巴伐利亞奶油(Bavarian cream)、漿果、黑醋栗、奶油硬糖、檸檬酸鈣、樟腦、焦糖、櫻桃、櫻桃奶油(cherry cream)、巧克力、肉桂、泡泡糖、柑橘、柑橘潘趣(citrus punch)、橘奶油、棉花糖、可可、可樂、冰櫻桃(cool cherry)、冰柑橘、賽克拉美(cyclamate)、賽拉美(cylamate)、右旋糖、桉、丁香酚、果糖、果汁潘趣(fruit punch)、薑黃、甘草亭酸酯(glycyrrhetinate)、甘草糖漿、葡萄、葡萄柚、蜂蜜、異麥芽糖、檸檬、酸橙、檸檬奶油、甘草酸單銨()、麥芽糖醇、甘露糖醇、槭糖、蜀葵、薄荷醇、薄荷奶油、混合漿果、新橘皮DC、紐甜(neotame)、桔、梨、桃、胡椒薄荷、胡椒薄荷奶油、粉末、樹莓、草根沙士(root beer)、朗姆酒(rum)、糖精、黃樟素(safrole)、山梨糖醇、荷蘭薄荷、荷蘭薄荷奶油、草莓、草莓奶油、甜菊、蔗糖素、蔗糖、糖精鈉、糖精、阿斯巴甜糖、乙醯磺胺酸鉀、甘露糖醇、塔林(talin)、蔗糖素、山梨糖醇、瑞士奶油、塔格糖(tagatose)、紅橘、祝馬丁(thaumatin)、蜜餞百果、草、胡桃、西瓜、野櫻、冬青樹、木糖醇，或此等調味成分之任何組合，例如茴香-薄荷醇、櫻桃-茴香、肉桂-桔、櫻桃-肉桂、巧克力-薄荷、蜂蜜-檸檬、檸檬-酸橙、檸檬-薄荷、薄荷醇-桉、桔-奶油、香草-薄荷及其混合物。
在一些實施例中，本文所述之醫藥調配物可為自乳化藥物傳遞系統(SEDDS)。乳液為一種不可混溶相於另一種不可混溶相中之分散液，通常呈液滴形式。一般而言，藉由劇烈機械分散而形成乳液。與乳液或微乳液相對比，當將SEDDS添加至過量水中其自發形成乳液，而無需任何外部機械分散或攪動。SEDDS之一優勢在於僅需要緩緩混合來使液滴分散於整個溶液中。另外，可在臨投藥之前添加水或水相，此確保不穩定或疏水性活性成分的穩定性。因此，SEDDS提供一種經口及非經腸傳遞疏水性活性成分之有效傳遞系統。SEDDS可在疏水性活性成分之生物可用性方面提供改良。製備自乳化劑型之方法包括(但不限於)例如美國專利第5,858,401號、第6,667,048號及第6,960,563號。
上文所列之用於本文所述之水性分散液或懸浮液中之添加劑之間存在重疊，因為既定添加劑常被此領域中之不同從業者以不同方式分類，或通常用於若干不同功能中之任一者。因此，上文所列之添加劑應僅視作例示而非限制可納入本文所述調配物中之添加劑類型。
可能用於鼻內調配物之賦形劑包括例如美國專利第4,476,116號、第5,116,817號及第6,391,452號。於生理食鹽水中之調配物溶液採用苯甲醇或其他適合防腐劑、氟碳化合物及/或其他增溶劑或分散劑。參看例如Ansel,H. C.等人,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第6版(1995)。此等組合物及調配物較佳以無毒醫藥學上可接受之適合成分製備。適合載劑之選擇高度取決於所要鼻用劑型之確切性質，例如溶液、懸浮液、軟膏或凝膠。除活性成分以外，鼻用劑型一般含有大量水。亦可能存在少量其他成分，諸如pH值調節劑、乳化劑或分散劑、防腐劑、界面活性劑、膠凝劑或緩衝劑及其他穩定劑及增溶劑。鼻用劑型較佳應與鼻分泌液等張。
對於藉由吸入投與，本文所述之化合物可呈氣霧劑、細霧劑(mist)或散劑形式。本文所述之醫藥組合物宜以氣霧劑噴霧之呈現形式，藉助於使用適合推進劑自加壓包裝或噴霧器傳遞，該推進劑為例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合氣體。在加壓氣霧劑之狀況下，可藉由提供閥門確定劑量單位來傳遞已計量之量。用於吸入器或吹入器中之膠囊及藥筒(諸如(僅舉例而言)明膠)可經調配而含有本文所述化合物與適合粉末基劑(諸如乳糖或澱粉)之粉末混合物。
可使用多種調配法投與包括本文所述化合物之經頰調配物，包括(但不限於)美國專利第4,229,447號、第4,596,795號、第4,755,386號及第5,739,136號中之調配法。另外，本文所述之經頰劑型可進一步包括生物可侵蝕性(可水解)聚合載劑，該載劑亦用以使劑型黏附於頰黏膜。製造經頰劑型以使之經預定時段逐漸被侵蝕，其中化合物之傳遞基本上遍佈各處。經頰藥物傳遞避免了經口藥物投與所遭遇之缺點，例如吸收緩慢、活性劑受胃腸道中存在之流體降解及/或於肝臟中首次通過失活。關於生物可侵蝕性(可水解)聚合載劑，實際上可使用任何此類載劑，只要不損害所要藥物釋放概況，且載劑與本文所述化合物及經頰劑量單位中可能存在之任何其他組分相容即可。一般而言，聚合載劑包含黏附於頰黏膜之濕潤表面的親水性(水溶性及遇水膨脹)聚合物。適用於本文之聚合載劑的實例包括丙烯酸聚合物及共聚物，例如稱為「卡波姆(carbomer)」者(可獲自B.F. Goodrich之為一種此類聚合物)。亦可將其他組分併入本文所述之經頰劑型中，包括(但不限於)崩解劑、稀釋劑、黏合劑、潤滑劑、調味劑、著色劑、防腐劑及其類似物。對於經頰或舌下投與，組合物可採用以習知方式調配之錠劑、***錠或凝膠形式。
本文所述之經皮調配物可使用多種裝置投與，包括(但不限於)美國專利第3,598,122號、第3,598,123號、第3,710,795號、第3,731,683號、第3,742,951號、第3,814,097號、第3,921,636號、第3,972,995號、第3,993,072號、第3,993,073號、第3,996,934號、第4,031,894號、第4,060,084號、第4,069,307號、第4,077,407號、第4,201,211號、第4,230,105號、第4,292,299號、第4,292,303號、第5,336,168號、第5,665,378號、第5,837,280號、第5,869,090號、第6,923,983號、第6,929,801號及第6,946,144號中之裝置。
本文所述之經皮劑型可併有此項技術中習知之某些醫藥學上可接受之賦形劑。在一實施例中，本文所述之經皮調配物包括至少三種組分：(1)式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之調配物；(2)穿透增強劑；及(3)水性佐劑。另外，經皮調配物可包括其他組分，諸如(但不限於)膠凝劑、乳膏及軟膏基劑，及其類似物。在一些實施例中，經皮調配物可進一步包括編織或非編織襯底材料以增強吸收且防止經皮調配物自皮膚移除。在其他實施例中，本文所述之經皮調配物可維持飽和或超飽和狀態以促進擴散至皮膚中。
適於經皮投與本文所述化合物之調配物可採用經皮傳遞裝置及經皮傳遞貼片，且可為溶解及/或分散於聚合物或黏著劑中之親脂性乳液或緩衝水溶液。可構造該等貼片以供連續傳遞、脈衝傳遞或根據需要傳遞醫藥劑。此外，本文所述化合物之經皮傳遞可藉助於離子導入貼片及其類似物實現。另外，經皮貼片可提供本文所述化合物之控制傳遞。可藉由使用速率控制膜或藉由將化合物截留於聚合物基質或凝膠中來減緩吸收速率。相反，可使用吸收增強劑來增進吸收。吸收增強劑或載劑可包括醫藥學上可接受之易吸收溶劑以幫助穿過皮膚。舉例而言，經皮裝置呈繃帶形式，其包含襯底元件、含有化合物及視情況選用之載劑的儲集層、視情況選用之用以按受控且預定之速率經較長時段將化合物傳遞至宿主之皮膚的速率控制障壁，及用以將裝置緊固於皮膚之構件。
適於肌肉內、皮下或靜脈內注射之調配物可包括生理學上可接受之無菌水性或非水性溶液、分散液、懸浮液或乳液，及用於復原成無菌可注射溶液或分散液之無菌粉末。適合之水性及非水性載劑、稀釋劑、溶劑或媒劑之實例包括水、乙醇、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油、十六醇聚氧乙烯醚(cremophor)及其類似物)、其適合混合物、植物油(諸如橄欖油)及可注射有機酯(諸如油酸乙酯)。可例如藉由使用諸如卵磷脂之包衣，在分散液之狀況下藉由維持所需粒度，及藉由使用界面活性劑來保持適當流動性。適於皮下注射之調配物亦可含有添加劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及分散劑。可由各種抗細菌劑及抗真菌劑(諸如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸及其類似物)確保防止微生物生長。亦可能需要包括等張劑，諸如糖、氯化鈉及其類似物。可藉由使用延遲吸收劑(諸如單硬脂酸鋁及明膠)來延長可注射醫藥形式的吸收。
對於靜脈內注射，本文所述之化合物可於水溶液中、較佳於生理學上相容之緩衝液中調配，諸如漢克氏溶液(Hank's solution)、林格氏溶液(Ringer's solution)或生理食鹽水緩衝液。對於經黏膜投與，在調配物中使用適於待滲透之障壁的滲透劑。該等滲透劑一般為此領域中中所公認。對於其他非經腸注射，適當調配物可包括水性或非水性溶液，較佳具有生理學上相容之緩衝劑或賦形劑。該等賦形劑一般為此領域中所公認。
非經腸注射可涉及快速注射或連續輸注。供注射用之調配物可以添加有防腐劑之單位劑型(例如於安瓿中或於多劑量容器中)提供。本文所述之醫藥組合物可呈適於非經腸注射之形式，如於油性或水性媒劑中之無菌懸浮液、溶液或乳液，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。供非經腸投與之醫藥調配物包括水溶性形式之活性化合物的水溶液。另外，可製備活性化合物之懸浮液，如適當油性注射懸浮液。適合之親脂性溶劑或媒劑包括脂肪油，諸如芝麻油；或合成脂肪酸酯，諸如油酸乙酯或三酸甘油酯；或脂質體。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液黏度之物質，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或聚葡萄糖。懸浮液亦可視情況含有適合穩定劑或增加化合物溶解度之試劑，以允許製備高度濃縮溶液。或者，活性成分可呈粉末形式以在使用前用適合媒劑(例如無菌無熱原質水)復原。
在某些實施例中，可採用醫藥化合物之傳遞系統，諸如脂質體及乳液。在某些實施例中，本文提供之組合物亦包括黏膜黏附聚合物，其係選自例如羧甲基纖維素、卡波姆(丙烯酸聚合物)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚丙烯醯胺、聚卡波非(polycarbophil)、丙烯酸/丙烯酸丁酯共聚物、褐藻酸鈉及聚葡萄糖。
在一些實施例中，本文所述之化合物可局部投與且調配成多種可局部投與之組合物，諸如溶液、懸浮液、洗劑、凝膠、糊劑、藥棒(medicated stick)、香膏、乳膏或軟膏。該等醫藥化合物可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑及防腐劑。
本文所述之化合物亦可調配成直腸組合物，諸如灌腸劑、直腸凝膠、直腸泡沫劑、直腸氣霧劑、栓劑、膠質栓劑或保留灌腸劑，其含有習知栓劑基劑，諸如可可脂或其他甘油酯，以及合成聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮、PEG及其類似物。在栓劑形式之組合物中，首先使低熔點蠟熔融，該低熔點蠟為諸如(但不限於)脂肪酸甘油酯之混合物，視情況與可可脂組合。
一般而言，諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之藥劑係以有效改善疾病或病症或預防疾病或病症之症狀顯現的量(亦即治療有效量)投與。因此，治療有效量可為能夠至少部分預防或逆轉疾病或病症之量。獲得有效量所需之劑量可視藥劑、調配物、疾病或病症、及藥劑所投與之個體而變化。
有效量之測定亦可涉及活體外檢定，其中向培養中之細胞投與不同劑量之藥劑，且測定藥劑有效改善一些或所有症狀之濃度以計算活體內所需濃度。有效量亦可基於活體內動物研究。
可在疾病或病症之症狀出現之前、同時及之後投與藥劑。在一些實施例中，向具有疾病或病症家族史之個體、或具有可指示疾病或病症誘因之表型的個體、或具有使個體易患上疾病或病症之基因型的個體投與藥劑。
所用特定傳遞系統可取決於許多因素，包括例如預期標靶及投藥途徑，例如局部或全身。傳遞標靶可為造成或促成疾病或病症之特定細胞，包括例如細胞內鈣改變或鈣功能異常或穩態失衡之細胞，及細胞內鈣未改變但可能具有某種改變、缺陷或不足之細胞，該改變、缺陷或不足可能至少部分藉由改變細胞之細胞內鈣而得到補償、抵消、逆轉或緩解或消除。特定細胞包括例如免疫細胞(例如淋巴細胞、T細胞、B細胞、白血球)、纖維母細胞(或源自纖維母細胞之細胞)、表皮、真皮或皮膚細胞(例如角質細胞)、血球、腎細胞(例如腎小球膜細胞)、肌肉細胞(例如平滑肌細胞，諸如氣道(氣管或支氣管)平滑肌細胞)及外分泌或分泌(例如唾液腺，包括腮腺腺泡及下頜腺)細胞。舉例而言，標靶細胞可為肺或氣道中促成哮喘疾患或疾病之居留或浸潤細胞，神經系統中促成神經、神經退化或脫髓鞘疾病或病症之居留或浸潤細胞，涉及於腎臟移植物排斥反應中之居留或浸潤細胞，活化時造成移植物抗宿主疾病之移植細胞，涉及於腎臟移植物排斥反應中之居留或浸潤細胞，活化促成發炎(例如關節炎)之居留或浸潤細胞，腎臟系統中涉及於神經病變及絲球體腎炎中之居留或浸潤細胞(例如腎小球膜細胞)，及外分泌腺(例如唾液腺及淚腺)中涉及於自體免疫病症(例如休格連氏疾病)中之居留或浸潤細胞。可由此領域中公認之方法投與藥劑，使之針對一或多種細胞類型或細胞類型之子組。舉例而言，可使藥劑偶合至抗體、針對細胞表面受體之配位體、或毒素；或可含於選擇性內化至細胞中之粒子中，例如脂質體，或病毒受體特異性結合於某種細胞類型之病毒，或缺乏病毒核酸之病毒粒子；或可局部投與。
給藥方法與治療方案之實例
本文所述之化合物可用於製備用以調節細胞內鈣或用以治療至少部分可因調節細胞內鈣而受益之疾病或病況的藥物。另外，治療有治療需要之個體的本文所述之任何疾病或病況的方法包括向該個體投與醫藥組合物，其含有治療有效量的至少一種本文所述化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之前藥或醫藥學上可接受之溶劑合物。
可投與含有本文所述化合物之組合物以供預防性及/或治療性處理。在治療應用中，將組合物以足以治癒或至少部分遏止疾病或病況症狀之量投與已罹患疾病或病況之患者。對此用途有效之量將視疾病或病況之嚴重性及病程、先前療法、患者健康狀態、體重及對藥物之反應、及治療醫師之判斷而定。
在預防應用中，將含有本文所述化合物之組合物投與易患上特定疾病、病症或病況或其他方面處於特定疾病、病症或病況之風險中的患者。此種量定義為「預防有效量或劑量」。在此用途中，精確量亦視患者健康狀態、體重及其類似因素而定。當在患者中使用時，對此用途有效之量將視疾病、病症或病況之嚴重性及病程、先前療法、患者健康狀態及對藥物之反應、及治療醫師之判斷而定。
在患者情況未得到改良之狀況下，基於醫生之判斷，可長期(亦即長時段，包括患者生命之整個持續時間)投與化合物，以改善或以其他方式控制或限制患者疾病或病況之症狀。
在患者狀態得到改良之狀況下，基於醫生之判斷，可連續投與化合物；或者，可臨時減少或臨時暫停所投與之藥物劑量，持續某一時間長度(亦即「停藥期」)。停藥期之時長可在2天至1年之間變化，包括(僅舉例而言)2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。停藥期之劑量減少可為約10%至約100%，包括(僅舉例而言)約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%。
一旦患者情況出現改良，即在必要時投與維持劑量。隨後，可隨症狀變化而降低投藥劑量或頻率或兩者，直至達到改良之疾病、病症或病況得以保持之程度。然而，患者可能需要在症狀出現任何復發之後長期進行間歇性治療。
對應於此種量之既定藥劑之量將視以下因素而變化：諸如特定化合物、疾病或病況及其嚴重性、有治療需要之個體或宿主的特徵(例如體重)，但仍可以此領域中公認之方式根據圍繞該病例之特定情況來決定，包括例如所投與之特定藥劑、投藥途徑、所治療之病況、及所治療之個體或宿主。然而，一般而言，成人治療所採用之劑量通常將在每天約0.02 mg至約5000 mg之範圍中，在一些實施例中為每天約1 mg至約1500 mg。所要劑量宜呈單次劑量或呈分次劑量，該等分次劑量係同時(或經短時段)或以適當時間間隔(例如每天2、3、4或4次以上子劑量)投與。
本文所述之醫藥組合物可呈適於單次投與精確劑量之單位劑型。在單位劑型中，調配物分成含有適當量之一或多種化合物的單位劑量。單位劑型可呈含有個別量之調配物的封裝形式。非限制性實例為封裝錠劑或膠囊，及於小瓶或安瓿中之散劑。水性懸浮液組合物可封裝於不可重新蓋緊之單劑量容器中。或者，可使用可重新蓋緊之多劑量容器，在此狀況下，組合物中通常包括防腐劑。僅舉例而言，供非經腸注射之調配物可存在於單位劑型(包括(但不限於)安瓿)或添加有防腐劑之多劑量容器中。
適於本文所述化合物之日劑量為約0.01 mg/kg至約20mg/kg。在一實施例中，日劑量為約0.1 mg/kg至約10 mg/kg。較大型哺乳動物(包括(但不限於)人類)之指定日劑量在約0.5 mg至約1000 mg之範圍中，宜以單次劑量或以分次劑量投與，包括(但不限於)每天至多4次或延長釋放形式。適於經口投與之單位劑型包括約1 mg至約500 mg活性成份。在一實施例中，單位劑量為約1 mg、約5 mg、約10 mg、約20 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約250 mg、約400 mg或約500 mg。前述範圍僅為示意性的，因為關於個體治療方案之變數的數目較大，且此等推薦值之顯著偏移並不罕見。該等劑量可視許多變數而改變，該等變數並不限於所用化合物之活性、待治療之疾病或病況、投藥模式、個別個體之需求、所治療疾病或病況之嚴重性及從業者之判斷。
可由標準醫藥程序在細胞培養物或實驗動物中確定該等治療方案之毒性及治療功效，包括(但不限於)測定LD50(50%群體之致死劑量)及ED50(對50%群體治療有效之劑量)。毒性作用與治療作用之間的劑量比為治療指數，且其可表示為LD50與ED50之比率。展現高治療指數之化合物較佳。自細胞培養檢定及動物研究獲得之數據可用於調配人類所用之劑量範圍。該等化合物之劑量較佳處於包括ED50與最小毒性之循環濃度範圍內。劑量可視所採用之劑型及所利用之投藥途徑而在此範圍內變化。
組合治療
式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物及其組合物亦可與針對對所治療病況之治療值而選擇之其他治療劑組合使用。一般而言，在採用組合療法之實施例中，本文所述之組合物及其他藥劑並非必須在同一醫藥組合物中投與，且因為物理及化學特徵不同，故可能必須經由不同途徑投與。若可能，則對同一醫藥組合物中之投藥模式及投藥合理性的確定充分處於臨床醫師之知識範圍內。可根據此領域中公認之既定方案進行初始投與，接著基於所觀測之作用，可由臨床醫師修改劑量、投藥模式及投藥時間。
在某些情況下，投與至少一種本文所述化合物與另一治療劑之組合可能適當。僅舉例而言，若患者在接受一種本文之化合物(諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物)時所經歷的一種副作用為噁心，則投與抗噁心劑與初始治療劑之組合可能適當。或者，僅舉例而言，可藉由投與佐劑來增強一種本文所述化合物之治療有效性(亦即，佐劑本身可能具有最小治療效益，但與另一治療劑組合時，對患者之總體治療效益得到增強)。或者，僅舉例而言，可藉由投與一種本文所述化合物與亦具有治療效益之另一治療劑(亦包括治療方案)來提高對患者所產生之效益。在任何狀況下，與所治療之疾病、病症或病況無關，對患者所產生之總體效益可僅為兩種治療劑之加和，或者，可對患者產生協同效益。
所用化合物之特定選擇將取決於主治醫師之診斷及其對患者病況之判斷、及適當治療方案。視疾病、病症或病況之性質、患者情況、及所用化合物之實際選擇而定，化合物可並行(例如同時、基本上同時或在同一治療方案中)或依序投與。在評估所治療疾病及患者情況之後，對治療方案中各治療劑之投藥次序及投藥重複次數的確定充分處於醫師之知識範圍內。
當藥物以治療組合使用時，治療有效劑量可變化。以實驗方式確定組合治療方案中使用之藥物及其他藥劑之治療有效劑量的方法描述於文獻中。舉例而言，文獻中已大量描述節律給藥之用法，亦即提供較頻繁且較低之劑量，以使毒副作用降至最低。組合治療另外包括週期治療，其在多個時間開始及停止以幫助臨床管理患者。
對於本文所述之組合療法，共同投與之化合物的劑量當然將視所採用之輔藥(co-drug)的類型、所採用之特定藥物、所治療之疾病或病況等等而變化。另外，當與一或多種生物活性劑共同投與時，本文提供之化合物可與生物活性劑(群)同時或依序投與。若依序投與，則主治醫師將決定投與蛋白質以及生物活性劑(群)之適當順序。
在任何狀況下，多種治療劑(其中一種為本文所述之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物)可按任何次序投與或甚至同時投與。若同時投與，則多種治療劑可呈單一的統一形式或呈多種形式(僅舉例而言，呈單一丸劑形式或兩種各別丸劑形式)提供。治療劑之一可依多次劑量給藥，或兩者均可依多次劑量給藥。若非同時投與，則多次給藥之間的時間可在0週以上至4週以內變化。另外，組合方法、組合物及調配物並不限於僅使用兩種藥劑；亦可計劃使用多重治療組合。
應瞭解，可根據多種因素來修改用以治療、預防或改善尋求緩解之病況的給藥療程。此等因素包括個體所罹患之病症或病況，以及個體之年齡、體重、性別、飲食及醫學病況。因此，實際採用之給藥療程可廣泛變化且因而可能偏離本文所陳述之給藥療程。
構成本文揭示之組合療法的醫藥劑可呈組合劑型或計劃實質上同時投與之各別劑型。構成組合療法之醫藥劑亦可依序投與，其中任一種治療化合物係由要求兩步投藥之療程投與。兩步投藥療程可能要求依序投與活性劑或間隔投與各別活性劑。多個投藥步驟之間的間隔時間可視各醫藥劑之特性而定，在數分鐘至數小時之範圍內，該等特性為諸如醫藥劑之效能、溶解度、生物可用性、血漿半衰期及動力學概況。標靶分子濃度之晝夜節律變化亦可決定最佳給藥時間間隔。
另外，本文所述之化合物亦可與可向患者提供額外或協同效益之程序組合使用。僅舉例而言，預期患者在本文所述之方法中可發現治療及/或預防效益，其中由本文揭示化合物之醫藥組合物及/或與其他治療劑之組合與基因測試組合，以判定個體是否為已知與特定疾病或病況相關聯之突變基因的載體。
本文所述之化合物及組合療法可在疾病或病況出現之前、期間或之後投與，且投與含有化合物之組合物的時序可變化。因此，舉例而言，化合物可用作預防劑，且可連續投與傾向於發展出病況或疾病之個體，以預防疾病或病況出現。化合物及組合物可在症狀發作期間或在症狀發作之後儘可能快地投與個體。可在症狀發作的前48小時內、較佳在症狀發作的前48小時內、更佳在症狀發作的前6小時內且最佳在症狀發作3小時內開始投與化合物。初始投藥可經由任何途徑實施，諸如靜脈內注射、快速注射、經約5分鐘至約5小時輸注、丸劑、膠囊、經皮貼片、經頰傳遞及其類似途徑，或其組合。化合物較佳在偵測到或懷疑疾病或病況發作之後儘快投與，且持續疾病治療所必需之時間長度，諸如1天至約3個月。治療時長可針對各個體而變化，且時長可使用已知準則確定。舉例而言，可投與化合物或含有化合物之調配物持續至少2週，較佳約1個月至約5年。
SOCE之抑制劑
在一態樣中，式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物係與SOCE之其他抑制劑聯合投與或使用。在一態樣中，SOCE之抑制劑為非選擇性抑制劑。
已描述SOCE之多種抑制劑。SOCE之抑制劑包括：
a)陽離子，其包括鑭系陽離子，諸如Gd3+、La3+；
b)　P-450抑制劑，其包括益康唑(econazole)、咪康唑(miconazole)、克黴唑(clotrimazole)、酮康唑(ketoconazole)；
c)環加氧酶抑制劑，其包括氟尼酸(niflumic acid)、氟滅酸(flufenamic acid)、替尼達普(tenidap)；
d)脂肪加氧酶抑制劑，其包括正二氫癒創酸(nordihydroguaiaretic acid)、花生四烯酸(eicosatetraynoic acid)；
e)作為通道阻斷劑之化合物，其包括SK&F 96365、SC38249、LU52396、L-651,582、漢防己鹼(tetrandrine)、2-APB；
f)並非經由對SOC通道本身作用而抑制SOCE之化合物，其包括U73122(磷脂酶C抑制劑)、渥曼青黴素(wortmannin)(磷脂醯肌醇激酶抑制劑)。
SOCE之此等抑制劑中之一些抑制劑具有促成SOCE受抑制之非特異性作用及/或多種作用模式，其包括阻斷SOC通道之孔(通道阻斷劑)、抑制似乎支持SOCE之粒線體ATP合成(Gamberucci等人,J Biol. Chem.,269,23597-23602,1994；Marriott等人,Am. J. Physiol.,269,C766-C774,1995)、干擾細胞質pH值(Muallem等人,Am. J. Physiol.,257,G917-G924,1989)、以及抑制SOC通道活化。
免疫抑制劑
在一實施例中，在免疫抑制療法中以單劑形式投與本文所述之化合物以降低、抑制或遏制免疫系統之活性。免疫抑制療法在臨床上用於：預防移植之器官及組織(例如骨髓、心臟、腎臟、肝臟)的排斥反應；治療自體免疫疾病或很可能源於自體免疫之疾病(例如類風濕性關節炎、重症肌無力、全身性紅斑性狼瘡症、克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎)；及治療一些其他非自體免疫發炎性疾病(例如控制長期過敏性哮喘)。
在一些實施例中，本文所述之化合物係與選自以下之其他免疫抑制劑一起投與：鈣調神經磷酸酶抑制劑(諸如(但不限於)環孢靈、他克莫司)；mTOR抑制劑(諸如(但不限於)西羅莫司(sirolimus)、依維莫司(everolimus))；抗增生劑(諸如(但不限於)硫唑嘌呤、黴酚酸(mycophenolic acid))；皮質類固醇(諸如(但不限於)潑尼松、乙酸皮質酮、潑尼龍、甲潑尼龍、***、倍他米松、曲安西龍、倍氯米松、乙酸氟氫皮質酮、乙酸去氧皮質固酮、醛固酮、氫皮質酮)；抗體(諸如(但不限於)單株抗IL-2Rα受體抗體(巴利昔單抗(basiliximab)、達利珠單抗(daclizumab))、多株抗T細胞抗體(抗胸腺細胞球蛋白(ATG)、抗淋巴細胞球蛋白(ALG))。
其他免疫抑制劑包括(但不限於)：糖皮質激素(阿氯米松(alclometasone)、醛固酮、安西奈德(amcinonide)、倍氯米松、倍他米松、布***(budesonide)、環索奈德(ciclesonide)、氯倍他索(clobetasol)、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龍(clocortolone)、氯潑尼醇(cloprednol)、皮質酮、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、去氧皮質酮、地索奈德(desonide)、去羥米松(desoximetasone)、去氧皮質酮、***、雙氟拉松(diflorasone)、雙氟可龍(diflucortolone)、二氟孕甾丁酯(difluprednate)、氟氯奈德(fluclorolone)、氟皮質酮、氟氫縮松(fludroxycortide)、氟甲松(flumetasone)、氟尼縮松(flunisolide)、乙酸氟輕鬆(fluocinolone acetonide)、氟輕鬆(fluocinonide)、氟可丁(fluocortin)、氟可龍(fluocortolone)、氟米龍(fluorometholone)、氟培龍(fluperolone)、氟潑尼定(fluprednidene)、氟替卡松(fluticasone)、福莫可他(formocortal)、氯氟舒松(halcinonide)、鹵米松(halometasone)、氫皮質酮/皮質固醇、醋丙氫皮質酮(hydrocortisone aceponate)、丁丙氫皮質酮(hydrocortisone buteprate)、丁酸氫皮質酮(hydrocortisone butyrate)、氯替潑諾(loteprednol)、甲羥松(medrysone)、甲潑尼松(meprednisone)、甲潑尼龍、醋丙甲潑尼龍(methylprednisolone aceponate)、糖酸莫米松(mometasone furoate)、帕拉米松(paramethasone)、潑尼卡酯(prednicarbate)、潑尼松、潑尼龍、潑尼立定(prednylidene)、利美索龍(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龍、烏倍他索(ulobetasol)、環磷醯胺、亞硝基脲、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲胺喋呤、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、嘧啶類似物、蛋白質合成抑制劑、甲胺喋呤、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、放線菌素D(dactinomycin)、蒽環黴素(anthracycline)、絲裂黴素C(mitomycin C)、博萊黴素(bleomycin)、光神黴素(mithramycin)、Atgam(R)、、、巴利昔單抗、達利珠單抗、環孢靈、他克莫司、西羅莫司、干擾素(IFN-β、IFN-γ)、類鴉片(opioid)、TNF結合蛋白(英利昔單抗、依那西普、阿達木單抗、戈利木單抗(golimumab))、黴酚酸、黴酚酸嗎啉乙酯(mycophenolate mofetil)、FTY720，以及US 7,060,697中所列者。
治療自體免疫疾病、發炎性疾病之藥劑
當個體罹患自體免疫疾病、病症或病況、或發炎性疾病、病症或病況，或處於罹患自體免疫疾病、病症或病況、或發炎性疾病、病症或病況之風險中時，投與本文所述化合物與一或多種以下治療劑之任何組合：免疫抑制劑(例如他克莫司、環孢靈、雷帕黴素、甲胺喋呤、環磷醯胺、硫唑嘌呤、巰基嘌呤、黴酚酸鹽或FTY720)、糖皮質激素(例如潑尼松、乙酸皮質酮、潑尼龍、甲潑尼龍、***、倍他米松、曲安西龍、倍氯米松、乙酸氟氫皮質酮、乙酸去氧皮質固酮、醛固酮)、非類固醇消炎藥(例如水楊酸酯、芳基烷酸、2-芳基丙酸、N-芳基鄰胺基苯甲酸、昔康類(oxicam)、昔布類(coxib)或磺醯基苯胺(sulphonanilide))、Cox-2特異性抑制劑(例如伐地昔布、依託昔布、盧米羅可、塞內昔布或羅非昔布)、來氟米特、金硫葡萄糖、硫蘋果酸金、奧若菲、柳氮磺胺吡啶、羥氯喹、二甲胺四環素、TNF-α結合蛋白(例如英利昔單抗、依那西普或阿達木單抗)、阿巴西普、阿那白滯素、干擾素-β、干擾素-γ、介白素-2、抗白三烯、茶鹼或抗膽鹼劑。
在一實施例中，投與本文所述化合物與NFAT-鈣調神經磷酸酶路徑抑制劑之組合。在一實施例中，NFAT-鈣調神經磷酸酶路徑抑制劑包括(但不限於)環孢靈A(CsA)及他克莫司(FK506)。
在一實施例中，向患者投與本文所述之化合物或包括式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之組合物及藥物，與包括(但不限於)非類固醇消炎藥(NSAID)及皮質類固醇(糖皮質激素)之消炎劑組合。
NSAID包括(但不限於)：阿司匹靈、水楊酸、龍膽酸、膽鹼水楊酸鎂、水楊酸膽鹼、膽鹼水楊酸鎂、水楊酸膽鹼、水楊酸鎂、水楊酸鈉、雙氟尼酸、卡洛芬、非諾洛芬、非諾洛芬鈣、氟比洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘布酮、酮洛酸、酮洛酸緩血酸胺、萘普生、奧沙普嗪、雙氯芬酸、依託度酸、吲哚美辛、舒林酸、托美汀、甲氯芬那酸鹽、甲氯芬那酸鈉、甲芬那酸、吡羅昔康、美洛昔康、COX-2特異性抑制劑(諸如(但不限於)塞內昔布、羅非昔布、伐地昔布、帕瑞昔布、依託昔布、盧米羅可、CS-502、JTE-522、L-745,337及NS398)。
本文涵蓋與NSAID(選擇性COX-2抑制劑)之組合。該等化合物包括(但不限於)以下文獻中所揭示者：美國專利第5,474,995號、美國專利第5,861,419號、美國專利第6,001,843號、美國專利第6,020,343號、美國專利第5,409,944號、美國專利第5,436,265號、美國專利第5,536,752號、美國專利第5,550,142號、美國專利第5,604,260號、美國專利第5,698,584號、美國專利第5,710,140、WO 94/15932、美國專利第5,344,991號、美國專利第5,134,142號、美國專利第5,380,738號、美國專利第5,393,790號、美國專利第5,466,823號、美國專利第5,633,272號、美國專利第5,932,598號及第6,313,138號,其藉此皆以引用的方式併入。
已描述為選擇性COX-2抑制劑且因此適用於本文所述方法或醫藥組合物之化合物包括(但不限於)塞內昔布、羅非昔布、盧米羅可、依託昔布、伐地昔布及帕瑞昔布，或其醫藥學上可接受之鹽。
皮質類固醇包括(但不限於)：倍他米松、潑尼松、阿氯米松、醛固酮、安西奈德、倍氯米松、倍他米松、布***、環索奈德、氯倍他索、氯倍他松、氯可托龍、氯潑尼醇、皮質酮、可的伐唑、地夫可特、去氧皮質固酮、地索奈德、去羥米松、去氧皮質酮、***、雙氟拉松、雙氟可龍、二氟孕甾丁酯、氟氯奈德、氟皮質酮、氟氫縮松、氟甲松、氟尼縮松、乙酸氟輕鬆、氟輕鬆、氟可丁、氟可龍、氟米龍、氟培龍、氟潑尼定、氟替卡松、福莫可他、氯氟舒松、鹵米松、氫皮質酮/皮質固醇、醋丙氫皮質酮、丁丙氫皮質酮、丁酸氫皮質酮、氯替潑諾、甲羥松、甲潑尼松、甲潑尼龍、醋丙甲潑尼龍、糠酸莫米松、帕拉米松、潑尼卡酯、潑尼松/潑尼龍、利美索龍、替可的松、曲安西龍及烏倍他索。
用作消炎劑之其他藥劑包括美國專利公開案2005/0227929中所述者，該案以引用的方式併入本文中。
一些市售消炎劑包括(但不限於)：(雙氯芬酸與米索前列醇(misoprostol))、(5-胺基水楊酸)、(5-胺基水楊酸)、(安替比林(antipyrine)與苯佐卡因(benzocaine))、(柳氮磺胺吡啶)、(奧沙普嗪)、(依託度酸)、(甲芬那酸)、(甲潑尼龍)、(阿司匹靈)、(阿司匹靈)、(吲哚美辛)、(羅非昔布)、(塞內昔布)、(伐地昔布)、(依託昔布)、(盧米羅可)、、(布洛芬)、(雙氯芬酸)、(酮洛芬)、(美洛昔康)、(萘丁美酮(nabumetone))、、(萘普生)、(吡羅昔康)。
在一實施例中，本文所述之化合物係與白三烯受體拮抗劑組合投與，該等拮抗劑包括(但不限於)BAY u9773(參看EP 00791576；1997年8月27日出版)、DUO-LT(Tsuji等人,Org. Biomol. Chem.,1,3139-3141,2003)、紮魯司特(zafirlukast，Accolate)、孟魯司特(montelukast，Singulair)、普侖司特(prankulast，Onon)及其衍生物或類似物。
套組/製造物品
為用於本文所述之治療應用，本文亦描述套組及製造物品。該等套組可包括分成隔室以接收一或多個容器(諸如小瓶、管及其類似容器，各容器包括一種待用於本文所述方法之各別成分)之載器(carrier)、封裝或容器。適合容器包括例如大瓶、小瓶、針筒及試管。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。
本文提供之製造物品含有封裝材料。用於封裝醫藥產品之封裝材料包括例如美國專利第5,323,907號、第5,052,558號及第5,033,252號。醫藥封裝材料之實例包括(但不限於)發泡包裝、大瓶、管、吸入器、泵、包、小瓶、容器、針筒、大瓶及適於所選調配物及預期投藥及治療模式的任何封裝材料。本文提供之化合物及組合物的眾多調配物預期作為任何可因抑制CRAC通道活性而受益之疾病、病症或病況的多種治療。
舉例而言，容器可包括一或多種本文所述化合物，視情況以組合物形式或與本文所揭示之另一藥劑組合。容器視情況具有無菌存取口(例如容器可為靜脈內溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。該等套組視情況包含具有辨識性描述之化合物或關於其在本文所述方法中之用法的標籤或說明書。
套組通常可包括一或多個其他容器，各容器具有就商業及使用者觀點而言對使用本文所述化合物所需的多種材料(諸如視情況呈濃縮形式之試劑、及/或裝置)中之一或多者。該等材料之非限制性實例包括(但不限於)緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、針筒；列出內含物及/或使用說明之載器、封裝、容器、小瓶及/或管標籤，及具有使用說明之藥品說明書。通常亦將包括一組說明書。
標籤可在容器上或與容器關聯。當構成標籤之字母、數字或其他符號附著、模製或蝕刻至容器本身時，標籤可在容器上；當標籤存在於亦容納容器之收容器或載器內時，標籤可與容器關聯，例如為藥品說明書形式。標籤可用於指示內含物欲用於特定治療應用。標籤亦可指示關於內含物諸如在本文所述方法中之用法的指導。
在某些實施例中，醫藥組合物可存在於包裝或施配器裝置中，包裝或施配器裝置可含有一或多個含有本文提供之化合物的單位劑型。包裝可例如含有金屬或塑膠箔，諸如發泡包裝。包裝或施配器裝置可附有投藥說明書。包裝或施配器亦可附有與容器關聯且呈管理藥品製造、使用或銷售之政府機關規定之形式的通知，該通知反映了機關批准用於投與人類或獸類之藥物形式。該通知例如可為美國食品藥品監督管理局(U.S. Food and Drug Administration)批准用於處方藥之標籤、或經批准之產品說明書。亦可製備含有在相容醫藥載劑中調配之本文提供之化合物的組合物，將其置於適當容器中，且貼標籤以供治療指定病況。
檢定
若干技術可用於評估細胞中之鈣池操縱鈣進入及鈣信號傳導。該等技術包括(但不限於)膜片鉗電生理學技術(量測跨越細胞膜(諸如質膜)之鈣離子或其他離子)；電容量測(允許在單細胞層面上遵循胞泄作用)；使用螢光染料之鈣成像，其允許追蹤細胞質內鈣移動之圖案；螢光共振能量轉移(FRET)，其能夠評估蛋白質-蛋白質相互作用；及分子生物學方法，其允許操控相關蛋白質之表現量。
可使用多種檢定方法檢查式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之調節。該等檢定包括基於細胞之活體外檢定以及活體內動物模型。可使用偵測、監測或量測對細胞內鈣(包括鈣進入介導事件)之影響的任何檢定。該等檢定包括(但不限於)監測、量測及/或偵測細胞內鈣含量，鈣含量調節，及鈣移動至細胞及細胞內細胞器中、移動至其外或在其內移動之檢定。檢定亦可包括監測、量測及/或偵測鈣進入介導事件及鈣進入介導事件中所涉及之分子，諸如(但不限於)信號轉導分子、轉錄因子、分泌分子及受鈣恆定之變化影響的其他分子。檢定包括(但不限於)本文所述之檢定及美國專利公開案第2007/0031814號及WO 07/081804中所述之檢定，該等文獻以引用的方式併入本文中。
細胞與細胞模型
為在活體外測試式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對細胞內鈣之調節，可利用用於該等檢定之多種細胞類型。在特定實施例中，細胞為發生鈣池操縱鈣進入之細胞或可經操控使得細胞中發生鈣池操縱鈣進入之細胞。在特定實施例中，細胞含有一或多種涉及於調節細胞內鈣(及尤其涉及於參與及/或提供鈣池操縱鈣進入，鈣移動至細胞內細胞器或鈣池中、移動至其外或在其內移動，調節細胞內細胞器或鈣池(例如內質網)中之鈣含量，及/或鈣緩衝)中之蛋白質，諸如本文提供之蛋白質。在特定實施例中，蛋白質包括STIM蛋白(包括STIM1、STIM2、DSTIM及CSTIM蛋白)及/或Orai蛋白(Orai1、Orai2、Orai3)。細胞可內源表現蛋白質或重組表現蛋白質。
用於方法中之細胞可為任何種類。在一實施例中，細胞可為真核細胞。在一實施例中，細胞可為酵母、昆蟲(例如果蠅或瘧蚊)或哺乳動物細胞。哺乳動物細胞包括(但不限於)齧齒動物(例如小鼠、大鼠及倉鼠)、靈長類動物、猴、犬、牛、家兔及人類細胞。方法中可使用多種細胞類型，包括例如神經元、神經系統、腦、免疫系統細胞，例如T淋巴細胞及B細胞；初級細胞；血球及造血細胞；基質細胞；骨髓細胞；淋巴細胞；及多種腫瘤細胞及癌細胞。特定細胞包括果蠅Schneider 2或S2細胞、人類胎腎(HEK293)細胞、大鼠嗜鹼性白血病(RBL-2H3)細胞、Jurkat細胞、上皮細胞、橫紋肌肉瘤細胞、橫紋肌樣細胞(rhabdoid cell)、視網膜母細胞瘤細胞、神經上皮瘤細胞、神經母細胞瘤細胞、骨肉瘤細胞、纖維母細胞、骨髓基質細胞、紅白血病細胞及淋巴母細胞。其他細胞株包括HEK 293及293T、CHO(包括CHO-K1)、LTK、N2A、H6及HGB。許多此類細胞及細胞株可自細胞庫獲得，諸如美國菌種保存中心(American Type Culture Collection，ATCC；Manassas,Va.)。可藉由自組織源分離而獲得初級細胞。
可使用來自已知細胞株之細胞，諸如神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞、嗜鉻細胞瘤PC12細胞、神經母細胞瘤SK-N-BE(2)C或SK-N-SH細胞、人類SK-N-MC神經上皮瘤細胞、SMS-KCNR細胞、人類LAN-5神經母細胞瘤細胞、人類GI-CA-N神經母細胞瘤細胞、人類GOTO神經母細胞瘤細胞、小鼠Neuro 2a(N2A)神經母細胞瘤細胞及/或人類IMR 32神經母細胞瘤細胞、慢性骨髓白血病細胞(例如人類K562細胞)、前髓細胞白血病細胞(例如HL60細胞)及組織細胞淋巴瘤細胞(例如U937細胞)、伯基特氏淋巴瘤細胞(Burkitt's lymphoma cell)(例如CA46細胞)、B細胞(例如NALM6)、急性淋巴母細胞白血病細胞(例如MOLT4細胞)、T細胞(例如Jurkat細胞)及早期T-ALL(例如DU528)細胞。
在一實施例中，用於活體外檢定以測試本文所述化合物對細胞內鈣之調節的細胞選擇涉及若干考慮因素，包括例如方法中所用之特定蛋白質及方法中監測或評估之細胞內鈣調節的特定方面或活性。
在一實施例中，藉由監測或評估對鈣池操縱鈣進入之影響來檢查本文所述化合物或(XIIIA)對細胞內鈣之調節。該等方法中通常所用之細胞天然地或經由操控細胞而展現鈣池操縱鈣進入。內源展現鈣池操縱鈣進入之細胞包括一些興奮性細胞及多數非興奮性細胞，且可使用本文所述及/或此領域中公認之方法鑑別。
在一實施例中，可能需要利用含有信號傳導組分之細胞及可實現鈣自細胞內鈣池釋放之信使系統。舉例而言，含有受體介導之磷脂酶C(PLC)活化系統之組分的細胞可用於生理學活化(經由產生IP3)鈣池耗盡以有助於監測鈣池操縱鈣進入。受體介導之PLC活化經由獨特偶合機制發生：由G蛋白偶合受體(GPCR)活化PLC-β及由酪胺酸激酶受體及非受體酪胺酸激酶活化PLC-γ。因此，在促效劑活化一或多種已知參與受體介導之PLC活化系統的受體時，可監測或評估含有該系統之細胞的鈣池操縱鈣進入(參看例如Bouron(2000) FEBS Lett 470:269-272；Millar等人(1995) J. Exp. Biol. 198:1843-1850；Yagodin等人(1998) Cell Calcium 23:219-228；Yagodin等人(1999) Cell Calcium 25:429-438；及Patterson等人(2002) Cell 111:1-20)。
可在多種條件下，在本文所述化合物處理之後評估細胞內鈣。可選擇條件以評估測試劑對細胞內鈣之特定方面的影響。舉例而言，使用特定評估鈣池操縱鈣進入、靜止細胞溶質鈣含量、鈣緩衝、及細胞內細胞器之鈣含量及細胞內細胞器對鈣之吸收或鈣自細胞內細胞器釋放的試劑及條件。可使用本文所述或此領域中公認之任何方法評估靜止細胞溶質鈣含量、細胞內細胞器鈣含量及陽離子移動。該等評估細胞內鈣調節之方法包括(但不限於)基於對鈣敏感性指示劑之量測，諸如fluo-3、mag-fura 2及靶向ER之水母素(aequorin)；基於經標記鈣(諸如45Ca2+)之量測；及電生理學量測。可進行評估之離子流動的特定方面包括(但不限於)離子流動量減少(包括消除)、離子電流之生物物理特性改變、及流動對鈣流動過程(諸如鈣池操縱鈣進入)之活化劑或抑制劑的敏感性改變。亦可利用用於特定評估受體介導之鈣移動及第二信使操縱之鈣移動的試劑及條件。
評估鈣池操縱鈣進入
在一態樣中，在允許發生鈣池操縱鈣進入之條件下向細胞中添加本文所述之化合物，以評估式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)對鈣池操縱鈣進入的影響。該等條件描述於本文中且為此領域中所公認。
舉例而言，在一種方法中，可處理細胞以降低細胞內鈣池之鈣含量，接著分析在本文所述化合物存在下離子(例如鈣)對鈣含量降低作出反應而流入的證據。降低細胞內鈣池之鈣含量及分析細胞中離子(例如鈣)流入之證據的技術為此領域中所公認且描述於本文中。
在其他方法中，對跨越自細胞分離之質膜膜片或外側向外膜囊之電流的電生理學分析可用於偵測或監測在本文所述化合物存在下鈣池操縱通道之電流(例如ISOC、ICRAC)。
評估鈣進入介導之事件
已知許多涉及於鈣調控路徑中之分子。鈣進入介導之事件中所涉及之分子的評估可用於監測細胞內鈣，且可用於例如本文所述之篩選檢定中以監測本文呈現之化合物的作用。檢定之實例包括(但不限於)偵測或測定鈣進入介導之事件中所涉及之分子之存在、含量、含量改變、產量、修飾(諸如磷酸化及磷酸脫除)、易位、降解及活性的檢定(參看例如Trevillyan等人(2001) J. Biol. Chem. 276:48118-26)。本文所述之檢定可與已經本文呈現之化合物處理或接觸的細胞、或表現改變量之測試分子(諸如鈣調控中所涉及之蛋白質，包括STIM蛋白、Orai蛋白)的細胞、或對照細胞一起使用。檢定亦可在已受生理學或非生理學活化劑刺激之細胞中或未受刺激之細胞中進行。以下為用於鈣進入介導之事件中所涉及之分子的代表性檢定且僅欲作為例示。用於此等分子之其他檢定及用於鈣進入介導之事件中所涉及之其他分子的檢定亦可用於本文所述之任何篩選及/或調節控方法中。
β-己醣胺酶釋放
在肥大細胞中，Ca2+流入使得諸如肝素、組織胺之發炎性介體及諸如β-己醣胺酶之酶脫顆粒及釋放。對該等分子之釋放的偵測及/或量測由此可用於監測細胞內鈣。舉例而言，可收集來自肥大細胞之介質。接著可添加適於β-己醣胺酶之受質(例如對硝基苯基-乙醯基-葡糖醯胺)，且評估所得混合物之吸光度以量測樣本中β-己醣胺酶活性之相對量(Funaba等人(2003) Cell Biol. International 27:879-85)。
鈣/鈣調蛋白依賴性CaN磷酸酶活性
磷酸酶鈣調神經磷酸酶(CaN)使多種蛋白質脫除磷酸，從而影響其活性及定位。可藉由在存在或不存在式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之情況下培育經純化之CaN及CaN受質(例如對應於cAMP依賴性激酶之RII次單元中之序列的經放射性標記肽)來評估CaN活性(參看Trevillyan等人(2001) J. Biol. Chem 276:48118-26)。可量測經放射性標記肽之含量及/或所釋放之游離無機磷酸鹽之量來評估CaN脫除磷酸活性。
NFAT轉錄活性
NFAT(活化T細胞核因子)轉錄因子對細胞內鈣含量作出反應而調控許多基因。舉例而言，NFAT蛋白調控免疫反應中所涉及之細胞激素基因的轉錄。來自NFAT調控之基因的啟動子及/或來自此等基因之調控區及調控元件可用於監測NFAT調控之表現且藉此監測細胞內鈣。可用可操作地連接至報導體基因(諸如螢光素酶、β-半乳糖酶、綠色螢光蛋白(GFP)或此項技術中之任何其他已知報導體)的NFAT調控之啟動子或NFAT調控之元件構築報導體基因融合體(參看例如公開之美國申請案第2002-0034728號)。報導體蛋白之量或活性為NFAT活性之量度。
NFAT磷酸化
NFAT活化主要經其磷酸化調控，繼而調控其次細胞定位。在未受刺激之細胞中，NFAT為過磷酸化細胞溶質蛋白。由多種機制誘導之細胞內Ca2+升高會增強Ca2+-鈣調蛋白依賴性磷酸酶(鈣調神經磷酸酶)之活性。活化之鈣調神經磷酸酶使NFAT分子之調控區內多個絲胺酸殘基脫除磷酸。NFAT對Ca2+含量降低或CaN抑制作出反應而再磷酸化。
可例如藉由在細胞中表現經可偵測標記之NFAT蛋白(諸如經His6標記之NFAT)來監測NFAT之磷酸化狀態。可使用Ni2+層析自細胞純化經標記之NFAT，且對其進行凝膠電泳及染色或西方墨點分析。NFAT之較高磷酸化形式的特點在於其遷移較緩慢。磷酸化NFAT之狀態可用作NFAT活化之量度(參看Trevillyan等人(2001)J. Biol. Chem 276:48118-26)。
NFAT核定位
NFAT於細胞質與細胞核之間的定位係由NFAT之磷酸化狀態調控。NFAT之磷酸化藉由遮蔽核定位序列而阻止核定位。可例如藉由在細胞中表現經螢光標記之NFAT(例如GFP-NFAT)來監測NFAT核定位。可使用共焦顯微法監測經標記NFAT之核定位(參看Trevillyan等人(2001)J. Biol. Chem 276:48118-26)。
細胞激素分泌
可使用蛋白質偵測檢定來監測細胞激素分泌，諸如IL-2分泌。舉例而言，可自免疫細胞收集上清液。使用IL-2抗體之ELISA檢定或其他適合型式可用於偵測及/或量測相較於對照細胞所分泌之IL-2的量。亦可以類似檢定偵測其他細胞激素(例如TNF-α)之分泌。
細胞激素表現
可在細胞中直接或間接評估細胞激素(諸如(但不限於)IL-2)之表現。舉例而言，在間接方法中，可使IL-2啟動子可操作地連接至報導體基因(諸如螢光素酶或β-半乳糖酶)，且將報導體構築體引入細胞中。可監測報導體基因表現且與對照細胞中之基因表現相比較(參看Trevillyan等人(2001) J. Biol. Chem 276:48118-26)。或者，可評估內源或重組IL-2 mRNA或蛋白質之表現。
T細胞增殖
諸如IL-2之細胞激素為T細胞對有絲***原或同種抗原刺激作出反應而增殖所必需，且因此藉由改變細胞激素表現或分泌來改變T細胞增殖。可諸如用刀豆球蛋白A(concanavalin A)或同種異體反應性淋巴細胞來誘導T細胞，且可例如藉由使細胞經受3H-胸苷脈衝且量測3H-胸苷併入來量測T細胞增殖(參看Trevillyan等人(2001) J. Biol. Chem 276:48118-26)。
在一些實施例中，藉由評估以下任一準則來測定本文呈現之化合物對SOCE的調節(例如抑制或降低)：
a.如鈣指示劑所量測，增加之[Ca2+]i受到直接抑制；
b.如膜片鉗所量測，ISOC或ICRAC受到直接抑制；
c.下游信號傳導功能受到抑制，諸如鈣調神經磷酸酶活性、NFAT次細胞定位、NFAT磷酸化及/或細胞激素(例如IL-2)產生；或
d.活化誘導之細胞增殖、分化及/或細胞凋亡信號傳導路徑有所改變。
動物模型
可用於方法實施例中之動物模型另外包括如下動物，諸如(但不限於)非人類動物，其至少一些細胞中依賴於細胞內鈣或由細胞內鈣調控之細胞過程發生改變、具有缺陷或發揮異常功能。依賴於細胞內鈣或由細胞內鈣調控之細胞過程包括例如細胞活化、基因表現、細胞運輸及細胞凋亡。涉及可能至少部分藉由調節細胞內鈣而得到補償之缺陷的疾病/病症包括(但不限於)：自體免疫病症，包括類風濕性關節炎、發炎性腸病、休格連氏症候群(與唾液上皮細胞之淋巴細胞侵入有關的細胞激素可減少腮腺細胞中之鈣移動；又，T細胞活化(包括轉錄因子活化)、細胞激素基因表現及細胞增殖取決於鈣池操縱鈣流入所提供之細胞內鈣含量持續升高)、哮喘(鈣池操縱鈣進入可在介導支氣管狹窄及支氣管平滑肌細胞增殖方面起重要作用)、絲球體腎炎及腎小球發炎(細胞內鈣變化，諸如在腎小球發炎之共同培養模型中鈣池操縱鈣進入、信號單核細胞黏附所引起的變化)。
動物模型之類型包括(但不限於)非人類動物，諸如非人類無脊椎動物與脊椎動物及非人類哺乳動物、齧齒動物(例如小鼠、大鼠及倉鼠)、牛、雞、豬、山羊、犬、綿羊、昆蟲、果蠅、線蟲(nematode)、蠕蟲、秀麗新小桿線蟲、猴、大猩猩及其他靈長類動物。
動物模型包括轉殖基因及非轉殖基因動物。可用於特定方法實施例中之此類動物模型的一個實例為作為哮喘特徵之氣道高反應(AHR)之齧齒動物模型。此模型可例如藉由以卵白蛋白免疫而敏化，隨後與霧化卵白蛋白接觸，且藉由膽鹼激導性刺激進行攻毒(例如經由投與乙醯甲膽鹼(methacholine)或乙醯膽鹼(acetylcholine))來產生(參看例如Xu等人(2002) J. Appl. Physiol. 93:1833-1840；Humbles等人(2002) Proc. Natl. Acad. Sci. 99:1479-1484)。可在經本文呈現之化合物處理及未經處理之動物中評估並比較氣道高反應(其可使用如下方法評估，諸如使用壓力型體積描記法(barometric plethysmography)記錄呼吸壓力曲線且經由量測肺部參數，諸如肺部電導及肺部順應性)。可用於特定方法實施例中之動物模型之另一實例為腎小球膜增生性絲球體腎炎之齧齒動物模型，其可例如藉由投與抗Thy1.1抗體而產生(參看例如Jefferson及Johnson(1999) J. Nephrol. 12:297-307)。可在經測試劑處理及未經處理之動物中評估並比較指示絲球體腎炎或腎功能障礙之許多參數(例如腎小球膜細胞增殖、血壓、尿蛋白分泌、肌酸酐(creatinine)清除率、腎小球指數及其他參數)。非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠為自發形成與1型糖尿病共有許多免疫遺傳特徵之自體免疫糖尿病的近親配種小鼠品系，其為可用於特定方法實施例中之動物模型的另一實例。此等小鼠亦表現自體免疫外分泌腺病變(諸如休格連氏症候群)之許多特徵，包括外分泌組織分泌功能下降(參看例如Humphreys-Beher及Peck(1999) Arch. Oral Biol. 44增刊1:S21-25，及Brayer等人(2000) J Rheumatol. 27:1896-1904)。可在經本文所述化合物處理及未經處理之動物中評估並比較與休格連氏症候群有關之特徵(例如外分泌腺(例如唾液腺及淚腺)中之淋巴細胞浸潤、下頜腺中樹突狀細胞及巨噬細胞之存在、藉由量測基底及受刺激之淚液分泌而評估的淚腺完整性、唾液流動速率及澱粉酶活性)。自體免疫疾病之動物(例如齧齒動物)模型亦可用於特定方法實施例中。該等動物包括可自美國國立衛生研究院自體免疫大鼠模型庫及研發中心(National Institutes of Health(NIH) Autoimmune Rat Model Repository and Development Center)(Bethesda,Md.；可在www.ors.od.nih.gov/dirs/vrp/ratcenter存取)獲得之大鼠模型。類風濕性關節炎(RA)及相關慢性/發炎性自體免疫疾病之一種大鼠模型為膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)模型(參看例如Griffiths及Remmers(2001) Immunol. Rev. 184:172-183)。可在經本文呈現之化合物處理及未經處理之動物中評估並比較自體免疫疾病之特徵表型(例如對自身抗原之免疫反應性程度改變、表現自體抗原之標靶器官的慢性發炎、及在器官損傷中侵襲性單核細胞及組織纖維母細胞的活化及參與)。神經痛或炎性痛之動物(例如齧齒動物)模型亦可用於特定方法實施例中。舉例而言，一種神經痛大鼠模型涉及在接合腰神經之後出現觸覺異常疼痛(對其他方面無害之刺激的反應加劇)(參看例如Chaplan等人(1994) J. Neurosci. Methods 53:55-63，及Luo等人(2001) J. Neurosci. 21:1868-1875)。觸覺異常疼痛為神經痛的一種特有特徵，其可在經本文所述化合物處理及未經處理之動物中評估(例如藉由評估對施加壓力作出反應之縮足閾值)並比較。
實例
此等實例僅出於說明之目的而提供，且不欲限制本文提供之申請專利範圍的範疇。用於合成本文所述化合物之起始物質及試劑可經合成或可獲自商業來源，諸如(但不限於)Sigma-Aldrich、Acros Organics、Fluka及Fischer Scientific。
合成實例 實例1：合成N-(5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯氧基)吡啶-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(5)
製備5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯氧基)-2-硝基吡啶(3)。在氬氣氛圍下，將氫化鈉(23.7 mg，0.99 mmol，60%分散液，於礦物油中)添加至酚2(194 mg，0.99 mmol)於DMF(2.5 ml)中之溶液中，且攪拌10分鐘。向此溶液中添加溴化物1(100 mg，0.49 mmol)。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物4小時。冷卻反應混合物至室溫且以水(10 mL)淬滅，以乙酸乙酯(3×5 mL)萃取，且經Na2SO4乾燥經合併之萃取物並減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之3(113 mg，72%)。
製備5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯氧基)吡啶-2-胺(4)。將10%Pd/C(38 mg，35 μmol，10莫耳% Pd)添加至含氯化物3(113 mg，353 μmol)之乙醇：二氯甲烷(3:1，4.0 mL)中。使混合物脫氣且置於H2(1 atm)下並攪拌1小時。經0.45 μm針筒過濾器過濾混合物且減壓濃縮，獲得呈固體狀之4(98.1 mg，96%)：LRESIMS m/z 289.4[M+H]+，C12H9Cl1F3N2O1之計算值289.0。
製備N-(5-(2-氯-5-(三氟甲基)苯氧基)吡啶-2-基)-2,6-二氯苯甲醯胺(5)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(15.3 mg，87 μmol)添加至4(25 mg，87 μmol)、惠寧氏鹼(Hnig's base)(45 μL，34 mg，260 μmol)及DMAP(1.1 mg，8.8 μmol)於二氯甲烷(500 μL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物16小時。減壓濃縮混合物。藉由急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)，接著藉由HPLC.(C18，30×250 mm管柱，含40-100%乙腈之水：0.035% CF3COOH：50 mL/min)純化，獲得呈固體狀之5(14.6 mg，39%)：LRESIMS m/z 429.3[M+H]+，C19H11Cl1F5N2O2之計算值429.0。
實例2：合成N-(6-((2,5-二氟苯基)胺基)吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(9)
製備N-(6-溴吡啶-3-基)-2,6-二氯苯甲醯胺(7)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(1.12 g，6.4 mmol)添加至6(1.0 g，5.8 mmol)、惠寧氏鹼(4.0 mL，3.0 g，23 mmol)及DMAP(71 mg，0.6 mmol)於二氯甲烷(26 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物20分鐘，接著藉由添加NaHCO3飽和溶液(10 mL)淬滅。以二氯甲烷(2×30 mL)萃取混合物，且經Na2SO4乾燥經合併之萃取物並減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈結晶固體狀之7(1.4 g，77%)：LRESIMS m/z 313.4[M+H]+，C12H8Br1F2N2O1之計算值313.0。
製備N-(6-((2,5-二氟苯基)胺基)吡啶-3-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(9)。將乙酸鈀(5.1 mg，22 μmol)及Pd(dba)2(9.9 mg，9 μmol)添加至溴化物7(60 mg，192 μmol)、苯胺8(62 mg，479 μmol)、Xantphos(11.1 mg，19 μmol)及Cs2CO3(187 mg，575 μmol)於二噁烷中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於130℃下加熱所得混合物1小時。冷卻混合物，經矽藻土過濾，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之9(38.4 mg，55%)：LRESIMS m/z 362.3[M+H]+，C18H12F4N3O1之計算值362.1。
實例3：合成N-(5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2,6-二氯苯甲醯胺(13)
製備5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(12)。將肆-三苯膦鈀(74 mg，60 μmol)添加至二溴化物10(360 mg，1.3 mmol)及酸酯11(311 mg，1.4 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，6.4 mL)及碳酸鉀(409 mg，1.9 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物1小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(10 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-10%甲醇之二氯甲烷)獲得呈固體狀之12(223 mg，59%)：LRESIMS m/z 293.1[M+H]+，C12H10Br1N2O2之計算值293.0。
製備N-(5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2,6-二氯苯甲醯胺(13)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(1.7 g，9.4 mmol)添加至12(1.5 g，5.2 mmol)、惠寧氏鹼(2.7 mL，2.0 g，15.7 mmol)及DMAP(64 mg，0.5 mmol)於二氯甲烷(23 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(20 mL)、甲醇(10 mL)及1.2 M氫氧化鋰溶液(12 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至65℃維持30分鐘，接著冷卻至室溫，以鹽水(50 mL)淬滅，且以二氯甲烷(3×100 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之萃取物且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之13(1.64 g，73%)：LRESIMS m/z 433.0[M+H]+，C19H12Br1F2N2O3之計算值433.0。
實例4：合成N-(5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(16)
製備5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺 (15)。將肆-三苯膦鈀(31 mg，30 μmol)添加至二溴化物10(150 mg，54 μmol)及酸酯14(130 mg，59 μmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，2.7 mL)及碳酸鉀(171 mg，800 μmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物2小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(10 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之15(19.6 mg，12%)：LRESIMS m/z 294.1[M+H]+，C11H9Br1N3O2之計算值294.0。
製備N-(5-(6-溴苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(16)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(8.6 mg，48 μmol)添加至15(9.5 mg，32 μmol)、惠寧氏鹼(17 μL，13 mg，97 μmol)及DMAP(1 mg，8 μmol)於二氯甲烷(200 μL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物25分鐘。以四氫呋喃(750 μL)、甲醇(500 μL)及1.2 M氫氧化鋰溶液(250 μL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持10分鐘，接著冷卻至室溫，且以二氯甲烷(5 mL)稀釋，且以硫酸鈉乾燥。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之16(9.3 mg，66%)：LRESIMS m/z 434.0[M+H]+，C18H11Br1F2N3O3之計算值434.0。
實例5：合成2,6-二氟-N-(5-(6-(三氟甲基)苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(21)
製 備4-溴-5-(三氟甲基)苯-1,2-二胺(18)。將10% Pd/C(373 mg，0.4 mmol，10莫耳% Pd)添加至含化合物17(1.0 g，3.5 mmol)之乙醇：二氯甲烷(8:1，140 mL)中。使混合物脫氣且置於H2(1 atm)下並攪拌30分鐘。經0.45 μm針筒過濾器過濾混合物且減壓濃縮，獲得呈油狀之18(865 mg，97%)：LRESIMS m/z 255.0[M+H]+，C7H7Br1F3N2之計算值255.0。
製備5-溴-6-(三氟甲基)苯并[c][1,2,5]噻二唑(19)。將含亞硫醯氯(373 mg，3.1 mmol)之二氯甲烷(0.8 mL)逐滴添加至二胺18(500 mg，2.0 mmol)及三乙胺(794 mg，7.8 mmol)於二氯甲烷(8.0 mL)中之回流溶液中。在攪拌下使混合物回流4小時。接著冷卻混合物至室溫，以水(20 mL)淬滅，且以二氯甲烷(3×75 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之萃取物且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-25%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之19(377 mg，68%)：LRESIMS m/z 294.1。
製備S-(6-(三氟甲基)苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-基)吡啶-2-胺(20)。將肆-三苯膦鈀(41 mg，40 μmol)添加至溴化物19(200 mg，710 μmol)及酸酯11(280 mg，1.3 mmol)於二噁烷:乙腈:水(9:9:2，3.5 mL)及碳酸鉀(225 mg，1.1 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於85℃下加熱所得混合物1小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(15 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-4%甲醇之二氯甲烷)獲得呈固體狀之20(151 mg，72%)：LRESIMS m/z 297.2[M+H]+，C12H8F3N4S1之計算值297.0。
製備2,6-二氟-N-(5-(6-(三氟甲基)苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(21)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(27 mg，152 μmol)添加至20(30 mg，101 μmol)、惠寧氏鹼(53 μL，39 mg，304 μmol)及DMAP(1 mg，8 μmol)於二氯甲烷(500 μL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物10分鐘。以四氫呋喃(1.5 mL)、甲醇(1 mL)及1.2 M氫氧化鋰溶液(500 μL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持10分鐘，接著冷卻至室溫，且以二氯甲烷(5 mL)稀釋，且以硫酸鈉乾燥。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-30%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之21(33.6 mg，76%)：LRESIMS m/z 437.1[M+H]+，C19H10F5N4O1S1之計算值437.1。
實例6：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(7-甲基(4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(26)
製備6-溴-7-甲基-4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶(24)。在80℃下，將5-溴-4-甲基-2-吡啶基胺(1 g，5.35 mmol)及DMF-DMA(924 μl，1.3當量)於3 ml異丙醇中之混合物攪拌3小時。冷卻至室溫後，添加羥胺鹽酸鹽(483 mg，1.3當量)，且在50℃下加熱混合物隔夜。冷卻後，蒸發反應混合物至乾燥。在約10 ml DCM中對固體殘餘物進行音波處理。過濾且以DCM洗滌後，分離出1.353 g呈灰白色固體狀之中間物23。使中間物23(1.353 g)懸浮於15 ml THF中，且冷卻混合物至0℃。添加三氟乙酸酐(899 μl，1.1當量)，且在0℃下攪拌反應混合物15分鐘，接著在室溫下攪拌3小時，隨後以NaHCO3水溶液淬滅。以乙酸乙酯萃取反應混合物2次。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮，接著使用0-100% B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)作為溶離劑對其進行矽膠管柱層析。分離出749.9 mg呈白色固體狀之化合物24。總產率：66%。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(7-甲基(4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(26)。使氬氣鼓泡通過6-溴-7-甲基-4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶(24)(212 mg，1 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(220 mg，1 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(71 mg，0.1 mmol)及K3PO4(212 mg，1 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2.5小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於乙酸乙酯中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮至乾燥。所得粗橙紅色固體中間物25直接用於下一醯胺偶合步驟。
向粗中間物25(約0.3 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(75 μl，0.6 mmol)，隨後添加DIEA(313 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(600 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得62.3 mg呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(7-甲基(4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(26)(總產率：57%)。
實例7：製備(2-氯苯基)-N-[5-(7-甲基(4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(27)
以類似於上文所述之程序，自粗中間物25藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備呈白色固體狀之(2-氯苯基)-N-[5-(7-甲基(4-氫-1,2,4-***并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(27)(產率：68.7%)。
實例8：合成2-氯-N-(5-(5-氯苯并[d]噁唑-6-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(32)
製備2-胺基-5-溴-4-氯苯酚(29)：向4-溴-6-氯-6-甲氧基苯胺(28)(944 mg，4 mmol)於10 ml DCM中之懸浮液中添加含1 M BBr3之DCM(8 ml，8 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時，其變成棕色溶液且變回棕色懸浮液。以碳酸氫鈉水溶液淬滅後，以EA萃取混合物。以鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，濃縮至乾燥，獲得865 mg呈棕色固體狀之29。產率：97.2%，純度>95%。
製備6-溴-5-氯苯并噁唑(30)：將2-胺基-5-溴-4-氯苯酚(29)(865 mg，3.89 mmol)、三氟甲烷磺酸鐿(III)鹽(24 mg，1莫耳%)及原甲酸三甲酯(511 μl，1.2當量)於2 ml EtOH中之混合物在90℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得棕色固體溶解於DCM中，且使用0-100%B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)對其進行矽膠管柱純化，獲得590 mg呈黃色固體狀之30(產率：65.2%)。
製備5-(5-氯苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(31)：使氬氣鼓泡通過6-溴-5-氯苯并噁唑(30)(232 mg，1 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(220 mg，1 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos)(70 mg，0.1 mmol)及K3PO4(212 mg，1 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於乙酸乙酯中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得紅色固體溶解於DCM中，且使用0-100% B(A：己烷；B：EA)對其進行矽膠管柱純化，獲得165.6 mg呈橙色固體狀之31(產率：67.4%)。
製備N-[5-(5-氯苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(32)：
向5-(5-氯苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(31)(23 mg，0.09mmol)及2 mg DMAP於2 ml DCM中之溶液中添加2-氯苯甲醯氯(23 μl，0.18 mmol)，隨後添加DIEA(94 μl)。在室溫下攪拌所得棕色溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(135 μl)一起攪拌30分鐘，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得17 mg呈淺黃色固體狀之32(產率：49%)。
實例9：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(33)
以類似於上文所述之程序，自5-(5-氯苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(31)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯反應來製備呈黃色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(33)(產率：18%)。
實例10：製備N-[5-(5-氯苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](4-氯苯基)甲醯胺(34)。
以類似於上文所述之程序，自5-(5-氯苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(31)藉由與4-氯苯甲醯氯反應來製備呈黃色固體狀之N-[5-(5-氯苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](4-氯苯基)甲醯胺(34)(產率：17%)。
實例11：製備N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(37)
製備6-溴-5-氯-2-甲基苯并噁唑(35)：將2-胺基-5-溴-4-氯苯酚(29)(865 mg，3.89 mmol)、三氟甲烷磺酸鐿(III)鹽(24 mg，1莫耳%)及原乙酸三甲酯(610 μl，1.2當量)於3 ml EtOH中之混合物在90℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，析出灰白色針狀物，將其過濾，以MeOH、水洗滌且乾燥，獲得791 mg呈灰白色結晶固體狀之標題化合物。產率：80.2%：純度>95%。
製備5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(36)：使氬氣鼓泡通過6-溴-5-氯-2-甲基苯并噁唑(35)(123 mg，0.5 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(130 mg，0.6 mmol)、雙(二環己基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(35 mg)及K3PO4(106 mg，0.5 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.25 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱6小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得紅色固體溶解於DCM中，且使用0-100% B(A：己烷；B：EA)對其進行矽膠管柱純化，獲得78 mg呈灰白色固體狀之36(產率：60%)。
製備N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(37)：向5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(36)(19 mg，0.073 mmol)及2 mg DMAP於2 ml DCM中之溶液中添加2-氯苯甲醯氯(19 μl，0.14 mmol)，隨後添加DIEA(64 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(140 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得20.6 mg呈淺黃色固體狀之37(產率：71%)。
實例12：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(38)：
以類似於上文所述之程序，自5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(36)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯反應來製備呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(38)(產率：67%)。
實例13：製備(2-氟苯基)-N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(39)：
以類似於上文所述之程序，自5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(36)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備呈淡黃色固體狀之(2-氟苯基)-N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(39)(產率：66%)。
實例14：製備N-[5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](3-氟(4-吡啶基))(2-氟苯基)甲醯胺(40)：
在室溫下，將3-氟異菸鹼酸(20 mg，0.14 mmol)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(CDMT)(28 mg，0.16 mmol)及38μlN-甲基嗎啉於2 ml DCM中之懸浮液攪拌1小時，隨後添加36(19 mg，0.073 mmol)。在室溫下攪拌所得反應混合物隔夜。以NaHCO3水溶液/EA處理反應混合物。以鹽水洗滌有機相，濃縮，進行矽膠急驟管柱層析，獲得6.7 mg呈白色固體狀之化合物40。(產率：24%)。
實例15：製備N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶 基)](2-氟苯基)甲醯胺(45)
製備6-溴-5-甲基苯并噁唑(43)：向4-溴-6-甲氧基-3-甲基苯胺(41)(500 mg，2.3 mmol)於6 ml DCM中之懸浮液中添加含1 M BBr3之DCM(4.6 ml，4.6 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時，其變成棕色溶液且變回棕色懸浮液。以碳酸氫鈉水溶液淬滅後，以EA萃取混合物。以鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，濃縮至乾燥，獲得581 mg呈深色油狀之2-胺基-5-溴-4-甲基苯酚。
將2-胺基-5-溴-4-甲基苯酚(42)(290 mg)、三氟甲烷磺酸鐿(III)鹽(20 mg)及原甲酸三甲酯(185 μl，1.5當量)於2 ml EtOH中之混合物在90℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得棕色固體溶解於DCM中，且使用0-60% B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)對其進行矽膠管柱純化，獲得91.9 mg呈黃色固體狀之6-溴-5-甲基苯并噁唑(43)(產率：38%)。
製備5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(44)：使氬氣鼓泡通過6-溴-5-甲基苯并噁唑(43)(91 mg，0.43 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(220 mg，1 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos)(30 mg)及K3PO4(127 mg，0.6 mmol)於1.5 ml ACN、1.5 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得紅色固體溶解於DCM中，且使用0-100% B(A：己烷；B：EA)對其進行矽膠管柱純化，獲得79.9 mg呈橙色固體狀之5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(44)(產率：82.5%，純度>90%)。
製備N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(45)：向5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(44)(26.6 mg，0.12 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2-氟苯甲醯氯(29 μl，0.24 mmol)，隨後添加DIEA(105 μl)。在室溫下攪拌所得棕色溶液3小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(180 μl)一起攪拌40分鐘，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得24.1 mg呈灰白色固體狀之N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(45)(產率：57.8%，純度>95%)。
實例16：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(46)：
以類似於上文所述之程序，自5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(44)(0.12 mmol)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯(0.24 mmol)反應來製備29.4 mg呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(46)(產率：67%，純度>95%)。
實例17：製備N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(47)
以類似於上文所述之程序，自5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(44)(0.12 mmol)藉由與2-氯苯甲醯氯(0.24 mmol)反應來製備24.5 mg呈白色固體狀之N-[5-(5-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(47)(產率：55%)。
實例18：製備N-[5-(2，5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(50)
製備5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(49)：將2-胺基-5-溴-4-甲基苯酚(42)(290 mg)、三氟甲烷磺酸鐿(III)鹽(20 mg，1莫耳%)及原乙酸三甲酯(216 μl，1.5當量)於2 ml EtOH中之混合物在90℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得棕色固體溶解於DCM中，且使用0-60% B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)對其進行矽膠管柱純化，獲得148 mg呈淺棕色固體狀之6-溴-2,5-二甲基苯并噁唑(48)。
使氬氣鼓泡通過6-溴-2,5-二甲基苯并噁唑(48)(148 mg，0.65 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(171 mg，1.2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos)(55 mg)及K3PO4(137 mg，0.6 mmol)於1.5 ml ACN、1.5 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。將所得紅色固體溶解於DCM中，且使用0-100% B(A：己烷；B：EA)對其進行矽膠管柱純化，獲得126 mg呈黃色固體狀之5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(49)(產率：81%，純度>95%)。
製備N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(50)：向5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(49)(42 mg，0.175 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2-氯苯甲醯氯(44 μl，2當量)，隨後添加DIEA(153 μl)。在室溫下攪拌所得溶液3小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(350 μl)一起攪拌4小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得47.7 mg呈白色固體狀之N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(50)(產率：72.1%)。
實例19：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(51)：
以類似於上文所述之程序，自5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(49)(42 mg，0.175 mmol)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯(44 μl，2當量)反應來製備34.2 mg呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(51)(產率：51.5%)。
實例20：製備(2-氟苯基)-N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(52)
以類似於上文所述之程序，自5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(49)(42 mg，0.175 mmol)藉由與2-氟苯甲醯氯(42 μl，2當量)反應來製備33.9 mg呈白色固體狀之(2-氟苯基)-N-[5-(2,5-二甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(52)(產率：53.6%)。
實例21：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(56)
製備5-溴-6-甲基苯并噻唑(54)：將2-胺基-5-溴-6-甲基噻唑(53)(460 mg，1.89 mmol)及亞硝酸第三丁酯(336 μl，1.5當量)於aoml DMF中之溶液在50℃下加熱4小時。冷卻至室溫後，以EA稀釋反應混合物，以1 N NaOH、鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮且進行矽膠急驟管柱層析(0-30% B，A：己烷；B：含50% EA之己烷)，獲得呈橙色固體狀之5-溴-6-甲基苯并噻唑(54)(197 mg，產率：45.7%，純度>95%)。
製備5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(55)：使氬氣鼓泡通過5-溴-6-甲基苯并噻唑(54)(91 mg，0.4 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(132 mg，1，5當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(42 mg，10莫耳%)及K3PO4(128 mg，0.6 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(55)(95.8 mg，產率：99%，純度>90%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(56)：向5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(55)(24 mg，0.1 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(25 μl，0.2 mmol)，隨後添加DIEA(105 μl)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌1小時，接著在50℃下攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(56)(29.6 mg，產率：77.6%，純度>95%)。
實例22：製備(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(57)：
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(57)(24 mg，0.1 mmol)藉由與2-氟苯甲醯氯(0.2 mmol)反應來製備呈黃色固體狀之(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(55)(26.7 mg，產率：73.5%，純度>95%)。
實例23：製備(3,5-二氟(4-吡啶基))-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(58)：
在室溫下，將3,5-二氟異菸鹼酸(24 mg，0.15 mmol)、2-氯-4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪(CDMT)(35 mg，0.2 mmol)及45 μl N-甲基嗎啉於2 ml DCM中之懸浮液攪拌1小時，隨後添加5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(55)(24 mg，0.1 mmol)。在室溫下攪拌所得反應混合物隔夜，接著在50℃下攪拌3小時。以NaHCO3水溶液/EA處理反應混合物。以鹽水洗滌有機相，濃縮，進行矽膠急驟管柱層析，獲得8.9 mg呈黃色半固體狀之(3,5-二氟(4-吡啶基))-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(58)(產率：23.3%，純度>90%)。
實例24：製備(3-氟(4-吡啶基))-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(59)：
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)-2-吡啶基胺(55)(24 mg，0.1 mmol)藉由與3-氟-異菸鹼酸(0.15 mmol)反應來製備呈灰白色固體狀之(3-氟(4-吡啶基))-N-[5-(6-甲基苯并噻唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(59)(22.5 mg，產率：61.7%，純度>95%)。
實例25：製備N-[6-胺基-5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(63)
製備N-(6-胺基-5-溴(2-吡啶基))(2-氟苯基)甲醯胺(61)：將3-溴-2,6-二胺基吡啶(60)(564 mg，3 mmol)、三乙胺(0.54 ml)於DCM(6 ml)/THF(4 ml)中之溶液冷卻至-78℃。在10分鐘內逐滴添加2-氟苯甲醯氯(362 μl，3.03 mmol)於2 ml DCM中之溶液。在-78℃下攪拌所得反應混合物1小時，隨後緩慢升溫至室溫。在室溫下攪拌3小時後，以NaHCO3水溶液淬滅反應物。添加200 ml EA。以鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，濃縮。以DCM(約15 ml)濕磨淡黃色固體殘餘物，過濾且乾燥，獲得530 mg呈白色固體狀之N-(6-胺基-5-溴(2-吡啶基))(2-氟苯基)甲醯胺(61)(純度>95%，產率：57%)。
製備N-[6-胺基-5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(63)：使氬氣鼓泡通過N-(6-胺基-5-溴(2-吡啶基))(2-氟苯基)甲醯胺(61)(358 mg，1.15 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(292 mg，2當量)、PdCl2(dppf)2.CH2Cl2(94 mg，10莫耳%)、乙酸鉀(338 mg，3當量)於二噁烷(4 ml)中之混合物，接著在90℃下加熱16小時。以EA/NaHCO3水溶液/鹽水處理反應混合物。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮，接著進行急驟矽膠管柱純化(0-80%B，A：己烷；B：含50%EA之己烷)，獲得196 mg(產率：62%)中間物62，其含有約10%相應頻哪醇酸酯。
使氬氣鼓泡通過中間物62(55 mg，0.2 mmol)、5-溴-6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯(54 mg，0.2 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(12 mg，10莫耳%)及K3PO4(42 mg，0.2 mmol)於0.5 ml ACN、0.5 ml二噁烷、0.2 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮至乾燥。急驟矽膠管柱純化(0-40% B，A：己烷；B：含50% EA之己烷)獲得17.8 mg呈淺黃色固體狀之N-[6-胺基-5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(63)(產率：21%，純度>95%)。
實例26：製備N-[6-胺基-5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯-5-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(65)
以類似於上文所述之程序，自5-溴-6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯(54 mg，0.2 mmol)及2-胺基-6-(2-氯苯基)羰基胺基-吡啶-3-基酸(62)(58 mg，0.2 mmol)製備32.5 mg(產率：37%，純度>95%)呈淺黃色固體狀之N-[6-胺基-5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d]1,3-二氧雜環戊烯-5-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(65)。
實例27：製備N-[6-胺基-5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(68)
以類似於上文所述之程序，自6-溴-5-氯-2-甲基苯并噁唑(25 mg，0.1 mmol)及2-胺基-6-(2-氟苯基)羰基胺基-吡啶-3-基酸(62)(28 mg，0.1 mmol)製備18.4 mg(產率：46%，純度>95%)呈黃色固體狀之N-[6-胺基-5-(5-氯-2-甲基苯并噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(68)。
實例28：製備N-[6-胺基-5-(1-甲基-3-苯基吡唑-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(69)
使氬氣鼓泡通過N-(6-胺基-5-溴(2-吡啶基))(2-氟苯基)甲醯胺(61)(16 mg，0.05 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(4 mg，10莫耳%)及K3PO4(11 mg，0.05 mmol)於0.5 ml ACN、0.5 ml二噁烷、0.2 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱4小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮至乾燥。急驟矽膠管柱純化(0-90% B，A：己烷；B：含50% EA之己烷)獲得2.2 mg呈黃色固體狀之所要粗產物，藉由製備型HPLC對其進行再純化，獲得0.8 mg呈灰白色固體狀之N-[6-胺基-5-(1-甲基-3-苯基吡唑-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(69)(產率：4%，純度>90%)。
實例29：製備(2-氯苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(75)：
製備5-甲基-3-(1-甲基吡唑-3-基)-1,2,4-噁二唑(72)：向羥胺鹽酸鹽(351 mg，5.05 mmol)於4 ml EtOH中之懸浮液中添加1.86 ml含21重量%乙醇鈉之乙醇。在室溫下攪拌所得混合物10分鐘，隨後添加3-氰基-1-甲基吡唑(70)(535 mg，5 mmol)。在90℃下加熱所得懸浮液隔夜。冷卻後，以EA稀釋反應混合物，接著以鹽水洗滌。濃縮有機相至乾燥，獲得506 mg粗中間物71。將上述粗中間物71、三氟甲烷磺酸鐿(III)鹽(22 mg，1莫耳%)及原乙酸三甲酯(550 μ1，1.2當量)於5 ml EtOH中之混合物在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，形成細針狀物。過濾且以MeOH洗滌後，回收到166 mg呈淺黃色針狀之中間物71。濃縮濾液，使用0-100% B(A：己烷；B：EA)對其進行矽膠管柱純化，獲得230 mg呈白色固體狀之5-甲基-3-(1-甲基吡唑-3-基)-1,2,4-噁二唑(72)。
製備[1-甲基-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)]吡唑-5-基- 酸(73)：在-70℃下，將正丁基鋰(1.12 ml，2.5 M，於己烷中)之己烷溶液逐滴添加至5-甲基-3-(1-甲基吡唑-3-基)-1,2,4-噁二唑(72)(230 mg，1.4 mmol)於7 ml無水THF中之***液中。在相同溫度下攪拌反應混合物3小時，隨後添加硼酸三甲酯(468 μl，3當量)。使混合物緩慢升溫至室溫，且在室溫下攪拌隔夜。以15 ml 1 N HCl淬滅反應物。在室溫下攪拌2小時後，添加EA，接著以鹽水洗滌。以1 N NaOH萃取有機相。以HCl將水相酸化至pH=2，接著以EA萃取。以鹽水洗滌EA相，經硫酸鈉乾燥，且濃縮至乾燥，獲得374 mg呈黃色固體狀之[1-甲基-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)]吡唑-5-基-酸(73)。
製備5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基]-2-吡啶基胺(74)：使氬氣鼓泡通過[1-甲基-3-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)]吡唑-5-基-酸(73)(62 mg，0.3 mmol)、2-胺基-5-溴吡啶(52 mg，0.3 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos)(21 mg)及K3PO4(64 mg，0.3 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之懸浮液，隨後在85℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌，經Na2SO4乾燥，濃縮至乾燥。獲得82.5 mg呈橙色半固體狀之粗5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基]-2-吡啶基胺(74)，其直接用於下一醯胺偶合步驟。
製備(2-氯苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(75)：向粗5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基]-2-吡啶基胺(74)(27 mg，0.1 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2-氯苯甲醯氯(25 μl，2當量)，隨後添加DIEA(70 μl)。在室溫下攪拌所得溶液3小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(250 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得7 mg呈淡黃色固體狀之(2-氯苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(75)(產率：17.7%，純度>95%)。
實例30：製備(2-氟苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(76)：
以類似於上文所述之程序，自粗5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基]-2-吡啶基胺(74)(27 mg，0.1 mmol)藉由與2-氟苯甲醯氯(25 μl，2當量)反應來製備6.4 mg呈淡黃色固體狀之(2-氟苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(76)(產率：16.9%，純度>95%)。
實例31：製備(2,6-二氟苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(77)：
以類似於上文所述之程序，自粗5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基]-2-吡啶基胺(74)(27 mg，0.1 mmol)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯(25 μl，2當量)反應來製備6.6 mg呈淡黃色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-{5-[1-甲基-3-(5-甲基(1,2,4-噁二唑-3-基))吡唑-5-基](2-吡啶基)}甲醯胺(77)(產率：16.7%，純度>95%)。
實例32：製備(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(2-氟甲基)-1-甲基 吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(83)：
合成1-甲基-3-(2-氟苯基)吡唑-5-基 酸(80)
向78(1 g，6.0 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中添加NaH(0.57 g，24 mmol)。攪拌混合物1小時，且以一份添加MeI(1.75 g，12 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。以MeOH淬滅反應物且真空移除溶劑。以水及EtOAc處理殘餘物。分離有機層且以EtOAc萃取水層。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得粗產物。在ISCO管柱上純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得黃色油狀物79(0.97 g，92%)。
在-78℃下冷卻79(971 mg，5.51 mmol)於THF(20 ml)中之溶液，隨後添加2.5 M n-BuLi(3.3 mL，8.26 mmol)。在-78℃下攪拌混合物4小時，且添加硼酸三甲酯(1 mL，8.96 mmol)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌隔夜。以1 M HCl淬滅反應物且攪拌0.5小時。以EtOAc(20 mL×2)萃取混合物。以1 M NaOH洗滌有機相。以濃HCl酸化水相且以EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得呈黃色固體狀之酸80(994 mg，82%)。
5-(1-甲基-3-(2-氟苯基)吡唑-5-基)-2-吡啶基胺(82)
將酸80(480 mg，2.18 mmol)及81(377 mg，2.18 mmol)溶解於5 mL二甲氧基乙烷及5 mL EtOH中。添加4 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物1分鐘，隨後添加肆(三苯膦)-鈀(0)(Pd(Ph3P)4，230 mg，0.2 mmol)。在110℃下於微波引發劑下加熱反應物30分鐘。以EtOAc萃取處理反應混合物，且藉由急驟管柱純化產物，且獲得呈黃色油狀之82(410 mg，70%)。
(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(2-氟甲基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺
向82(25 mg，0.11 mmol)於CH2Cl2(10 ml)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(DIEA，52 mg，72 μL，0.4 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(DMAP，0.6 mg，0.05 mmol)。將2,6-二氟苯甲醯氯(22 mg，0.12 mmol)滴加至上述溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。藉由HPLC純化產物且獲得呈黃色固體狀之83(20.4 mg，45%)。LC-MS：C22H15F3N4O之計算值：409(M+1)。
實例33：(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(噻吩基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(83)：
合成1-甲基-3-(2-噻吩基)吡唑-5-基 酸(86)
向84(1.5 g，10 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中添加NaH(2.4 g，100 mmol)。攪拌混合物1小時，且以一份添加MeI(2.8 g，20 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。以MeOH淬滅反應物且真空移除溶劑。以水及EtOAc處理殘餘物。分離有機層且以EtOAc萃取水層。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得粗產物。在ISCO管柱上純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得黃色油狀物85(1.5 g，91%)。
在-78℃下冷卻85(395 mg，2.4 mmol)於THF(20 ml)中之溶液，隨後添加2.5 M n-BuLi(1.4 mL，3.6 mmol)。在-78℃下攪拌混合物4小時，且添加硼酸三甲酯(0.4 mL，3.6 mmol)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌隔夜。以1 M HCl淬滅反應物且攪拌0.5小時。以EtOAc(20 mL×2)萃取混合物。以1 M NaOH洗滌有機相。以濃HCl酸化水相且以EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得呈黃色固體狀之酸86(317 mg，63%)。
合成5-(1-甲基-3-(2-噻吩基)吡唑-5-基)-2-吡啶基胺(87)
將酸86(123 mg，0.59 mmol)及81(85 mg，0.49 mmol)溶解於1 mL二甲氧基乙烷及1 mL EtOH中。添加1 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物1分鐘，隨後添加肆(三苯膦)-鈀(0)(Pd(Ph3P)4，58 mg，0.05 mmol)。在110℃下於微波引發劑下加熱反應物30分鐘。以EtOAc萃取處理反應混合物，且藉由急驟管柱純化產物，且獲得呈黃色固體狀之87(60 mg，48%)。
合成(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(2-噻吩基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(88)
向87(20 mg，0.08 mmol)於CH2Cl2(10 ml)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(DIEA，52 mg，72 μL，0.4 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(DMAP，0.6 mg，0.05 mmol)。將2,6-二氟苯甲醯氯(22 mg，0.12 mmol)滴加至上述溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。藉由HPLC純化產物且獲得呈白色固體狀之88(11 mg，35%)。LC-MS：C20H14F2N4OS之計算值：397(M+1)。
實例34：(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(2-呋喃基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(94)
合成1-甲基-3-(2-呋喃基)吡唑-5-基 酸(91)
向(1.4 g，10.4 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中添加NaH(2.4 g，100 mmol)。攪拌混合物1小時，且以一份添加MeI(3 g，21 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。以MeOH淬滅反應物且真空移除溶劑。以水及EtOAc處理殘餘物。分離有機層且以EtOAc萃取水層。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得粗產物。在ISCO管柱上純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得黃色油狀物90(1.45 g，94%)。
在-78℃下冷卻90(670 mg，4.5 mmol)於THF(20 ml)中之溶液，隨後添加2.5 M n-BuLi(3.6 mL，9 mmol)。在-78℃下攪拌混合物4小時，且添加硼酸三甲酯(1 mL，9 mmol)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌隔夜。以1 M HCl淬滅反應物且攪拌0.5小時。以EtOAc(20 mL×2)萃取混合物。以1 M NaOH洗滌有機相。以濃HCl酸化水相且以EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得呈黃色固體狀之酸91(343 mg，40%)。
合成5-(1-甲基-3-(2-呋喃基)吡唑-5-基)-2-吡啶基胺(92)
將酸91(156 mg，0.8 mmol)及81(140.5 mg，0.8 mmol)溶解於1 mL二甲氧基乙烷及1 mL EtOH中。添加1 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物1分鐘，隨後添加肆(三苯膦)-鈀(0)(Pd(Ph3P)4，100 mg，0.08 mmol)。在110℃下於微波引發劑下加熱反應物30分鐘。以EtOAc萃取處理反應混合物，且藉由急驟管柱純化產物，且獲得呈黃色固體狀之92(47 mg，24%)。
合成(2,6-二氟苯基)-N-{5-[3-(2-呋喃基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(94)
向93(15 mg，0.06 mmol)於CH2Cl2(10 ml)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(DIEA，52 mg，72 μL，0.4 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(DMAP，0.6 mg，0.05 mmol)。將2,6-二氟苯甲醯氯(22 mg，0.12 mmol)滴加至上述溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。藉由HPLC純化產物且獲得呈白色固體狀之94(7 mg，30%)。LC-MS：C20H14F2N4O2之計算值：381(M+1).
實例35：(2,6-二氟苯基)-N-[5-(1-甲基-3-(1,3-噻唑-2-基)吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(99)
合成1-甲基-3-(1,3-噻唑-2-基)吡唑-5-基 酸(97)
向95(1.51 g，10 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中添加NaH(1.2 g，50 mmol)。攪拌混合物1小時，且以一份添加MeI(2.8 g，20 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。以MeOH淬滅反應物且真空移除溶劑。以水及EtOAc處理殘餘物。分離有機層且以EtOAc萃取水層。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得粗產物。在ISCO管柱上純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得黃色油狀物96(1.6 g，97%)。
在-78℃下冷卻96(604 mg，3.6 mmol)於THF(20 ml)中之溶液，隨後添加2.5 M n-BuLi(2.2 mL，5.5 mmol)。在-78℃下攪拌混合物4小時，且添加硼酸三甲酯(0.6 mL，5.5 mmol)。使反應混合物升溫至室溫，且攪拌隔夜。以1 M HCl淬滅反應物且攪拌0.5小時。以EtOAc(20 mL×2)萃取混合物。以1 M NaOH洗滌有機相。以濃HCl酸化水相且以EtOAc萃取。經Na2SO4乾燥經合併之有機相，過濾，濃縮獲得呈黃色固體狀之酸97(635 mg，84%)。
合成(2,6-二氟苯基)-N-(5-溴(2-吡啶基)甲醯胺(98)
向81(346 mg，2 mmol)於CH2Cl2(20 ml)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(DIEA，1 g，8 mmol)、4-二甲基胺基吡啶(DMAP，12 mg，0.1 mmol)。將2,6-二氟苯甲醯氯(388 mg，2.2 mmol)滴加至上述溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。藉由ISCO純化產物且獲得呈白色固體狀之98(400mg，64%)。
合成(2,6-二氟苯基)-N-[5-(1-甲基-3-(1,3-噻唑-2-基)吡唑-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(99)
將酸97(21 mg，0.1 mmol)及98(31 mg，0.1 mmol)溶解於1 mL二甲氧基乙烷及1 mL EtOH中。添加0.5 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物1分鐘，隨後添加肆(三苯膦)-鈀(0)(Pd(Ph3P)4，11 mg，0.01 mmol)。在110℃下於微波引發劑下加熱反應物30分鐘。以EtOAc萃取處理反應混合物，且藉由HPLC純化產物，且獲得呈白色固體狀之99(8.5 mg，21%)。LC-MS：C19H13F2N5OS之計算值：398(M+1)。
實例36：N-[6-胺基-5-(3-(2-呋喃基)-1-甲基吡唑-5-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(100)
將酸91(19.2 mg，0.1 mmol)及61(31 mg，0.1 mmol)溶解於1 mL二甲氧基乙烷及1 mL EtOH中。添加0.5 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物1分鐘，隨後添加肆(三苯膦)-鈀(0)(Pd(Ph3P)4，11 mg，0.01 mmol)。在110℃下於微波引發劑下加熱反應物30分鐘。以EtOAc萃取處理反應混合物，且藉由HPLC純化產物，且獲得呈白色固體狀之100(10.8 mg，29%)。LC-MS：C20H16FN5O2之計算值：378(M+1)。
實例37：製備N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(106)
製備6-溴-3,5-二甲基苯并[d]異噁唑(104)：將羥胺鹽酸鹽(400 mg，58 mmol)於1 ml水中之溶液添加至NaOAc於1 ml水中之溶液中。向所得溶液中添加1-乙醯基-4-溴-2-羥基-5-甲基苯(101)(1.14 g，5 mmol)，隨後添加15 ml EtOH。在80℃下攪拌反應混合物1小時。濃縮至一半體積後，將反應混合物傾倒入60 ml冰水中。過濾所形成之沈澱物，以水洗滌且乾燥，獲得1.19 g(產率：97.5%，純度>95%)呈白色固體狀之5-溴-2-((羥基亞胺基)乙基)-4-甲基苯酚(102)。
將上述中間物102(1.19 g，4.875 mmol)溶解於10 ml Ac2O中，在室溫下攪拌2小時，且反應混合物變成白色懸浮液。過濾且以水洗滌後，獲得1.0 g乙酸2-(4-溴-2-羥基-5-甲基苯基)-1-氮雜丙-1-烯基酯(103)。向濾液中添加EA，以水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，且濃縮至乾燥，獲得另一份370 mg呈灰白色固體狀之103(總共1.37 g，產率：98%，純度>95%)。
將純的乙酸2-(4-溴-2-羥基-5-甲基苯基)-1-氮雜丙-1-烯基酯(103)(0.5 g，1.748 mmol)在175℃下加熱2小時，接著在100℃下加熱1小時。冷卻至室溫後，將深棕色固體溶解於DCM中，且進行矽膠急驟層析(0-40% B，A：己烷；B：含50% EA之己烷)，獲得呈黃色晶體形式之6-溴-3,5-二甲基苯并[d]異噁唑(104)(92 mg，產率：23.3%；純度>95%)。
製備5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(105)：使氬氣鼓泡通過6-溴-3,5-二甲基苯并[d]異噁唑(104)(46 mg，0.2 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(66 mg，0.3 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(21 mg，10莫耳%)及K3PO4(64 mg，0.3 mmol)於0.5 ml ACN、0.5 ml二噁烷、0.25 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2.5小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(105)(44 mg，產率：91.9%，純度>90%)。
製備N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶 基)](2-氯苯基)甲醯胺(106)：向5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(105)(14.5 mg，0.06 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2-氯苯甲醯氯(16 μl，0.12 mmol)，隨後添加DIEA(63 μl)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(120 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈灰白色固體狀之N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(106)(17.1 mg，產率：75.4%，純度>95%)。
實例38：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(107)
以類似於上文所述之程序，自5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(105)(14.5 mg，0.06 mmol)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯(0.3 mmol)反應來製備呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(107)(17.9 mg，產率：78.6%，純度>95%)。
實例39：製備N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(108)：
以類似於上文所述之程序，自5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)-2-吡啶基胺(105)(14.5 mg，0.06 mmol)藉由與2-氟苯甲醯氯(0.3 mmol)反應來製備呈淡黃色固體狀之N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(108)(20.1 mg，產率：92.7%，純度>95%)。
實例40：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基]甲醯胺(110)
製備5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基胺(109)：使氬氣鼓泡通過6-溴-3,5-二甲基苯并[d]異噁唑(104)(54 mg，0.24 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(14)(79 mg，0.358 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(25 mg，10莫耳%)及K3PO4(76 mg)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈淡黃色固體狀之5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基胺(109)(15 mg，產率：26.1%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基]甲醯胺(110)：向5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基胺(109)(7.5 mg，0.03 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(11 μl，0.09 mmol)，隨後添加DIEA(47 μl)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(90 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得7.3 mg(產率：63.8%，純度>95%)呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基]甲醯胺(110)。
實例41：製備N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基](2-氟苯基)甲醯胺(111)
以類似於上文所述之程序，自5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基胺(109)(7.5 mg，0.03 mmol)藉由與2-氟苯甲醯氯(0.09 mmol)反應來製備N-[5-(3,5-二甲基苯并[d]異噁唑-6-基)吡嗪-2-基](2-氟苯基)甲醯胺(111)(6.3 mg，呈白色固體狀，產率：58%，純度>95%)。
實例42：2-氯-N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環 戊烯-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(114)
製備5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(113)。將肆-三苯膦鈀(43 mg，37 μmol)添加至溴化物112(200 mg，740 μmol)及酸酯11(195 mg，880 μmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，3.7 mL)及碳酸鉀(234 mg，1.11 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物1小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之113(94.5 mg，45%)：LRESIMS m/z 285.3[M+H]+，C12H8Cl1F2N2O2之計算值285.0。
製備2-氯-N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(114)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將酸2,6-二氟苯甲醯氯(16 mg，92 μmol)添加至113(25 mg，88 μmol)、惠寧氏鹼(46 μL，34 mg，260 μmol)及DMAP(1.1 mg，8.8 μmol)於二氯甲烷(440 μL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(500μL)、甲醇(200 μL)及1.2 M氫氧化鋰溶液(100 μL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持5分鐘，接著冷卻至室溫，且以二氯甲烷稀釋，且以硫酸鈉乾燥。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之114(21.6 mg，58%)：LRESIMS m/z 423.3[M+H]+，C19H11Cl2F2N2O3之計算值423.0。
實例43：製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2-氟苯甲醯胺(115)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(113)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2-氟苯甲醯胺(115)。
實例44：N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(116)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(113)藉由與2,6-二氟苯甲醯氯反應來製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(116)。
實例45：N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(118 )
製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)環戊烷甲醯胺
製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)環戊烷甲醯胺(221)。
在室溫下，將酸氯化物220(28 mg，0.2 mmol)添加至113(30 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(92 μL，68 mg，0.7 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時，接著減壓濃縮。將粗物質溶解於四氫呋喃(0.9 mL)、甲醇(0.6 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.4 mL)中。在室溫下攪拌混合物20分鐘，接著以二氯甲烷(3×3 mL)萃取，且以硫酸鈉乾燥經合併之萃取物。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-25%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之221(28 mg，68%)：LRESIMS m/z 381.1[M+H]+，C18H16Cl1F2N2O3之計算值381.1。
製備5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(117)。將雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(20 mg，28 μmol)添加至溴化物112(150 mg，550 μmol)及酸酯14(134 mg，610 μmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，2.8 mL)及碳酸鉀(176 mg，0.83 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於85℃下加熱所得混合物1小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(15 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之117(43 mg，27%)：LRESIMS m/z 286.1[M+H]+，C11H7Cl1F2N3O2之計算值286.0。
製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(118)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(17 mg，98 μmol)添加至117(14 mg，49 μmol)、惠寧氏鹼(51 μL，38 mg，290 μmol)及DMAP(1 mg，8 μmol)於二氯甲烷(780 μL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(1.5 mL)、甲醇(1 mL)及1.2 M氫氧化鋰溶液(500 μL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持45分鐘，接著冷卻至室溫，且以二氯甲烷(5 mL)稀釋，且以硫酸鈉乾燥。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-30%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之118(11.5 mg，55%)：LRESIMS m/z 426.1[M+H]+，C18H9Cl1F4N3O3之計算值426.0。
實例46：製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(119)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(117)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(119)。
實例47：製備2-氯-N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(120)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(117)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(120)。
製備N-(5-(6-氯-2,2-二氟苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)環戊烷甲醯胺(222)。
在室溫下，將酸氯化物220(28 mg，0.2 mmol)添加至117(30 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(92 μL，68 mg，0.7 mmol)於二氯甲烷(1 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時，接著減壓濃縮。將粗物質溶解於四氫呋喃(0.9 mL)、甲醇(0.6 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.4 mL)中。在室溫下攪拌混合物20分鐘，接著以二氯甲烷(3×3 mL)萃取，且以硫酸鈉乾燥經合併之萃取物。減壓濃縮混合物。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-25%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之222(23 mg，57%)：LRESIMS m/z 382.0[M+H]+，C17H15Cl1F2N3O3之計算值382.1。
製備5-溴-2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯(2)。將N-溴代丁二醯亞胺(4.34 g，24.4 mmol)及氯化鐵(III)(1.13 g，7.0 mmol)添加至1(4.0 g，23.2 mmol)於乙腈(46 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得混合物6小時。以碳酸氫鈉飽和溶液(100 mL)稀釋混合物，且以二氯甲烷(3×50 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-5%乙酸乙酯之己烷)獲得呈液體狀之2(5.46 g，94%)。
製備5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(4)。將肆-三苯膦鈀(58 mg，43 μmol)添加至溴化物2(250 mg，1.0 mmol)及酸酯3(274 mg，1.25 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，5 mL)及磷酸鉀(317 mg，1.5 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物14小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×50 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈結晶固體狀之4(236 mg，90%)：LRESIMS m/z 265.2[M+H]+，C13H11F2N2O2之計算值265.1。
製備N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(5)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(32 mg，0.2 mmol)添加至4(24 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(95 μL，70 mg，0.5 mmol)於二氯甲烷(1.0 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.6 mL)、甲醇(0.4 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持15分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-25%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之5(27.8 mg，76%)：LRESIMS m/z 405.1[M+H]+，C20H13F4N2O3之計算值405.1。
以類似於上文所述之程序，自5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(4)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)-2-氟苯甲醯胺(6)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-胺(4)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(7)。
製備5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(9)。將肆-三苯膦鈀(35 mg，30 μmol)添加至溴化物2(150 mg，0.6 mmol)及酸酯8(171 mg，0.8 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，3 mL)及磷酸鉀(190 mg，0.9 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於80℃下加熱所得混合物4小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×5 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈結晶固體狀之9(64 mg，40%)：LRESIMS m/z 266.1[M+H]+，C12H10F2N3O2之計算值266.1。
製 備N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(10)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(40 mg，0.2 mmol)添加至9(30 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(120 μL，88 mg，0.7 mmol)於二氯甲烷(1.0 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.9 mL)、甲醇(0.6 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持10分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(3×5 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈結晶固體狀之10(26.4 mg，58%)：LRESIMS m/z 406.1[M+H]+，C19H12F4N3O3之計算值406.1。
以類似於上文所述之程序，自5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(9)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2-氟苯甲醯胺(11)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-胺(9)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(12)。
製備2-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 (14)。將Pd(dppf)2Cl2(51 mg，0.1 mmol)添加至溴化物2(150 mg，0.6 mmol)及酸酯13(182 mg，0.7 mmol)於二噁烷及乙酸鉀(117 mg，12 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物14小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-30%乙酸乙酯之己烷)獲得呈液體狀之14(117 mg，66%)。
製備N-(5-溴吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(17)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(20.3 g，115 mmol)添加至15(10.0 g，57.5 mmol)及三乙胺(24.0 mL，17.4 g，172 mmol)於二氯甲烷(145 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物15小時。以碳酸氫鈉飽和溶液(100 mL)淬滅混合物，且以二氯甲烷(3×100 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且減壓濃縮。以四氫呋喃(200 mL)、甲醇(100 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(75 mL)溶解粗物質。在室溫下攪拌混合物20分鐘，接著以1:1乙酸乙酯：己烷(3×300 mL)萃取，依序以鹽水(100 mL)、硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。進行急驟層析(二氧化矽，含25%乙酸乙酯之己烷)，隨後自含乙酸乙酯之己烷中結晶，獲得呈結晶固體狀之17(15 g，84%)：LRESIMS m/z 314.0[M+H]+，C11H7Br1F2N3O1之計算值314.0。
製備N-(5-(2,2-二氟-6-甲基苯并[d][1,3]二氧雜環戊烯-5-基)吡嗪-2-基)-2,6-二氟苯甲醯胺(10)。將肆-三苯膦鈀(23 mg，20 μmol)添加至溴化物17(129 mg，0.4 mmol)及酸酯14(117 mg，0.4 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，2.0 mL)及磷酸鉀(125 mg，0.6 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於80℃下加熱所得混合物1.5小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×7 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-30%乙酸乙酯之己烷)獲得呈結晶固體狀之10(124 g，78%)：LRESIMS m/z 406.1[M+H]+，C19H12F4N3O3之計算值406.1。
實例48：N-(6-胺基-5-(4-氟-2,5-二甲基苯基)吡啶-2-基)-4-氯苯甲醯胺(123)
製備N-(6-胺基-5-(4-氟-2,5-二甲基苯基)吡啶-2-基)-4-氯苯甲醯胺(123)。將雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(5.5 mg，8 μmol)添加至溴化物122(50 mg，153 μmol)及酸121(65 mg，385 μmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，1.0 mL)及碳酸鉀(49 mg，230 μmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於80℃下加熱所得混合物0.5小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(4 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-30%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之123(45.9 mg，81%)：LRESIMS m/z 370.3[M+H]+，C20H18Cl1F1N3O1之計算值370.1。
實例49：2,6-二氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(127)
製備5-溴-6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚(125)。將N-溴代丁二醯亞胺(1.26 g，7.1 mmol)添加至5-甲氧基茚滿124(1.0 g，6.7 mmol)於乙腈(34 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。以水(100 mL)稀釋混合物，且以二氯甲烷(3×50 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-10%乙酸乙酯之己烷)獲得呈液體狀之125(1.53 g，100%)。
製備5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-胺(126)。將肆-三苯膦鈀(25 mg，20 μmol)添加至溴化物125(100 mg，0.4 mmol)及酸酯11(174 mg，0.8 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，2.2 mL)及碳酸鉀(139 mg，0.7 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物2天。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈不純油狀之126。LRESIMS m/z 241.1[M+H]+，C15H17N2O1之計算值241.1。
製備2,6-二氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(127)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(44 mg，0.2 mmol)添加至126(30 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(130 μL，97 mg，0.7 mmol)於二氯甲烷(0.7 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.6 mL)、甲醇(0.4 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持60分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之127(14.4 mg，30%)：LRESIMS m/z 381.1[M+H]+，C22H19F2N2O2之計算值381.1。
實例50：2-氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(128)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-胺(126)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備2-氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(128)。
實例51：2-氯-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(129)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-胺(126)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(129)。
實例52：2,6-二氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(131)
製備5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-胺(130)。將肆-三苯膦鈀(25 mg，20 μmol)添加至溴化物125(100 mg，0.4 mmol)及酸酯14(122 mg，0.6 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，2.2 mL)及碳酸鉀(139 mg，0.7 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物3天。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈不純油狀之130：LRESIMS m/z 242.1[M+H]+，C14H16N3O1之計算值242.1。
製備2,6-二氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(131)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(29 mg，0.2 mmol)添加至130(20 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(90 μL，64 mg，0.5 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.6 mL)、甲醇(0.4 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持60分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之131(14.4 mg，30%)：LRESIMS m/z 381.1[M+H]+，C21H18F2N3O2之計算值382.1。
實例53：2-氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(132)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-胺(130)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備2-氟-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(132)。
實例54：2-氯-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(133)
以類似於上文所述之程序，自5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-胺(130)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(6-甲氧基-2,3-二氫-1H-茚-5-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(133)。
實例55：(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(140)
製備1,4-二溴-2-(2-溴乙氧基)苯(136)。在80℃下，將2,5-二溴苯酚(134)(1.26 g，5 mmol)及1,2-二溴乙烷(135)(431 μl，5 mmol)於5 ml 1 N NaOH中之混合物攪拌40小時。冷卻後，以***萃取反應混合物。隨後以1 NNaOH及鹽水洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮獲得922 mg(產率51%，純度約90%)呈橙紅色油狀之1,4-二溴-2-(2-溴乙氧基)苯(136)，其未經純化即直接用於進一步反應。
製備6-溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(137)。將1,4-二溴-2-(2-溴乙氧基)苯(136)(922 mg，2.57 mmol)溶解於25 ml無水THF中。冷卻至-78℃後，逐滴添加2.5 M n-BuLi(1.23 ml，1.2當量)於己烷中之溶液。在-78℃下攪拌反應混合物4小時，隨後傾倒入冰水中。以乙酸乙酯萃取2次後，以鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，接著濃縮，獲得504 mg(純度約80%)呈深棕色油狀之6-溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(137)，其直接用於進一步反應。
製備5,6-二溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(138)。將NBS(450 mg，2.53 mmol)添加至6-溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(137)(504 mg，2.53 mmol)於15 ml ACN中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。將黃色溶液傾倒入冰水中，以EA萃取。隨後以碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥後，濃縮有機相，獲得676 mg(純度約90%)呈深色油狀之標題化合物，其在室溫下靜置後凝固。
製備5-(5-溴-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(139)。使氬氣鼓泡通過5,6-二溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(138)(489 mg，1.75 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(465 mg，1.2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(124 mg，10莫耳%)及K3PO4(371 mg，1.75 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(5-溴-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(139)(48.5 mg，產率：9.5%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(140)：
向5-(5-溴-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(139)(13 mg，0.044 mmol)於1 mlDCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(11 μl，0.088 mmol)，隨後添加DIEA(38 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(140)(15.5 mg，產率：81.6%，純度>90%)。
實例56：N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(141)
製備N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(141)。向5-(5-溴-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(139)(13 mg，0.044 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2-氟苯甲醯氯(11 μl，0.088 mmol)，隨後添加DIEA(38 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之N-[5-(5-溴(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(141)(11 mg，產率：64.9%，純度>90%)。
實例57：(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(145)
製備5-溴-6-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(143)。以類似於上文所述之方式，以2-溴-5-氯苯酚為起始物製備6-氯-2,3-二氫苯并呋喃(142)。將NBS(155 mg，0.87 mmol)添加至2-溴-5-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(142)(135 mg，0.87 mmol)於5 ml ACN中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物5小時。將黃色溶液傾倒入冰水中，以EA萃取。隨後以碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥後，濃縮有機相，獲得204 mg(純度>90%，定量產率)呈淺黃色固體狀之標題化合物。
製備5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(144)。使氬氣鼓泡通過5-溴-6-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(144)(102 mg，0.437 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(144 mg，1.5當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(23 mg，5莫耳%)、Pd(PPh3)4(38 mg，5莫耳%)及K3PO4(139 mg，0.437 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，隨後進行製備型HPLC純化，獲得64 mg呈灰白色固體狀之5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(144)(產率：59%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(145)。向5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(144)(41 mg，0.166 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(42 μl，2當量)，隨後添加DIEA(145 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜，以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(330 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(145)(52.7 mg，產率：82.1%，純度>95%)。
實例58：N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(146)
製備N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(146)。向5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(144)(19 mg，0.045 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2-氟苯甲醯氯(16 μl，3當量)，隨後添加DIEA(39 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。製備型HPLC純化獲得呈白色固體狀之N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(146)(7.6 mg，產率：45.8%，純度>95%)。
實例59：(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(148)
製備5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(147)。使氬氣鼓泡通過5-溴-6-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(143)(102 mg，0.437 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(14)(145 mg，1.5當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(23 mg，5莫耳%)、Pd(PPh3)4(38 mg，5莫耳%)及K3PO4(139 mg，0.437 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱隔夜。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行製備型HPLC純化，獲得7.8 mg呈黃色固體狀之5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(147)(產率：7.2%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(148)：
向5-(6-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(147)(7.8 mg，0.031 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(12 μl，3當量)，隨後添加DIEA(27 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在60℃下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。製備型HPLC純化獲得呈淺黃色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(148)(4.2 mg，產率：34.9%，純度>90%)。
實例60：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(20)：
製備6-溴-5-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(18)：
將NCS(451 mg，3.39 mmol)添加至6-溴-2,3-二氫苯并[b]呋喃(4)(695 mg，約60%純度，約3.4 mmol)於20 ml ACN中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。將黃色溶液傾倒入冰水中，以EA萃取。隨後以碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥後，濃縮有機相，獲得773 mg(純度約60%)呈深色油狀之標題化合物，其在室溫下靜置後凝固。
製備5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺 (19)：
使氬氣鼓泡通過6-溴-5-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(18)(233 mg，純度約60%，約0.6 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(6)(220 mg，1 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(36 mg，10莫耳%)、Pd(PPh3)4(58 mg)及K3PO4(212 mg，1 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱4小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行製備型HPLC純化，獲得呈黃色固體狀之5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(19)(111.8 mg，產率：75.5%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(152)：
向5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(151)(15 mg，0.06 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(11 μl，0.088 mmol)，隨後添加DIEA(52 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(120 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(152)(14 mg，產率：60.1%，純度>90%)。
製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(153)：
向5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(151)(15 mg，0.06 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2-氟苯甲醯氯(11 μl，0.088 mmol)，隨後添加DIEA(52 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(120 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氟苯基)甲醯胺(153)(14.7 mg，產率：66.4%，純度>90%)。
製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(154)：
類似地，自5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)-2-吡啶基胺(151)(15 mg，0.06 mmol)及2-氯苯甲醯氯(11 μl)製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))(2-吡啶基)](2-氯苯基)甲醯胺(154)(16.1 mg，產率69.7%，純度>90%)。
製備5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)吡嗪-2-基胺(155)：
使氬氣鼓泡通過6-溴-5-氯-2,3-二氫苯并[b]呋喃(150)(233 mg，純度約60%，約0.6 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(14)(221 mg，1 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(36 mg，5莫耳%)、Pd(PPh3)4(58 mg，5莫耳%)及K3PO4(212 mg，1 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱4小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行製備型HPLC純化，獲得34.7 mg呈棕色半固體狀之5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)吡嗪-2-基胺(155)(產率：23.3%，純度>90%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(156)：
向5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)吡嗪-2-基胺(23)(11.5 mg，0.046 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(17 μl，3當量)，隨後添加DIEA(40 μl)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。製備型HPLC純化獲得呈灰白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[b]呋喃-6-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(156)(6.2 mg，產率：34.7%，純度>95%)。
製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))吡嗪-2-基)](2-氯苯基)甲醯胺(154)：
類似地，自5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)吡嗪-2-基胺(155)(11.5 mg，0.046 mmol)及2-氯苯甲醯氯(17 μl)製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))吡嗪-2-基](2-氯苯基)甲醯胺(154)(5.4 mg，產率30.4%，純度>95%)。
製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))吡嗪-2-基)](2-氟苯基)甲醯胺(158)：
類似地，自5-(5-氯-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基)吡嗪-2-基胺(155)(11.5 mg，0.046 mmol)及2-氟苯甲醯氯(16 μl)製備N-[5-(5-氯(2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-6-基))吡嗪-2-基](2-氟苯基)甲醯胺(158)(2 mg，產率30.4%，純度>95%)。
實例61：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(162)：
製備5-溴-6-甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(159)：
以與上文所述化合物149類似之方式，以2-溴-5-甲基苯酚為起始物製備6-甲基-2,3-二氫苯并呋喃(159)。將NBS(539 mg，3.03 mmol)添加至6-甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(159)(508 mg，純度約40%)於20 ml ACN中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物隔夜。將黃色溶液傾倒入冰水中，以EA萃取。隨後以碳酸氫鈉水溶液及鹽水洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥後，濃縮有機相，獲得709 mg(純度約40%)呈棕色油狀之粗標題化合物，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。
製備5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(161)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-6-甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(160)(350 mg，純度約40%，0.66 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(360 mg，1.6 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(113 mg，5莫耳%)及K3PO4(348 mg，1.6 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、1 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱4小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行製備型HPLC純化，獲得94 mg呈淡黃色固體狀之5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(161)(產率：63%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(162)：
向5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(161)(13 mg，0.06 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(22 μl，3當量)，隨後添加DIEA(94 μl)。在室溫下攪拌所得溶液3小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/鹽水處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(162)(13.9 mg，產率：63.9%，純度>95%)。
製備(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(163)：
類似地，自5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(161)(13 mg，0.06 mmol)及2-氟苯甲醯氯(21 μl)製備(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(163)(15.5 mg，產率：74.2%，純度>95%)。
製備(2-氯苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(164)：
類似地，自5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(161)(13 mg，0.06 mmol)及2-氯苯甲醯氯(23 μl)製備(2-氯苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(164)(13.1 mg，產率：59.8%，純度>95%)。
製備5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(165)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-6-甲基-2，3-二氫苯并[b]呋喃(160)(350 mg，純度約40%，0.66 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(14)(290 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(93 mg，10莫耳%)及K3PO4(280 mg，1.32 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、1 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行製備型HPLC純化，獲得23 mg呈黃色固體狀之5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(165)(產率：15.3%，純度90%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃- 5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(166)：
向5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(165)(7.5 mg，0.03 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(12 μl，3當量)，隨後添加DIEA(26 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(150 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/鹽水處理。製備型HPLC純化獲得呈灰白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(166)(8.3 mg，產率：75.3%，純度>95%)。
製備(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(167)：
類似地，自5-(6-甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(165)(7.5 mg，0.03 mmol)及2-氟苯甲醯氯(11 μl)製備(2-氟苯基)-N-[5-(6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(167)(6.8 mg，產率：64.9%，純度>95%)。
實例62：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(173)：
製備4-溴-2-(2-氯-第三丁基)-5-甲基苯酚(170)：
向4-溴-3-甲基苯酚(36，1.87 g，10 mmol)與3-氯-2-甲基-丙烯(980 μl，10 mmol)之經冷卻(冰水)混合物中逐滴添加濃硫酸(178 μl，3.3 mmol)。10分鐘後，對半固體混合物進行音波處理且其變成濃稠深色液體。在室溫下攪拌1小時後，其變成粉紅色固體。添加冰水，隨後添加***。以水及鹽水洗滌有機相，濃縮。使用0-20% B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)對淺黃色固體進行矽膠管柱純化，獲得1.751 g(產率：63.1%，純度>95%)呈粉色固體狀之170。
製 備5-溴-3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(171)：
向氫化鈉(60%分散液，於礦物油中，302 mg，1.2當量)於12 ml無水THF中之經攪拌、經冷卻(冰水浴)懸浮液中添加4-溴-2-(2-氯-第三丁基)-5-甲基苯酚(170，1.751 g，6.3 mmol)於5 ml THF中之溶液。在0℃下攪拌1小時後，以甲醇淬滅反應物，且以水稀釋混合物，以EA萃取。以鹽水洗滌有機相，且經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮獲得1.412 g呈黃色油狀之5-溴-3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(171，產率：93%，純度>90%)。
製備5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(172)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(171)(241 mg，1 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(330 mg，1.5 mmol)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(106 mg)及K3PO4(636 mg)於3m1ACN、3ml二噁烷、1.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2.5小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠管柱純化，獲得231 mg呈濃稠黃色油狀之5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(172)(產率：90.8%，純度>95%)。
製 備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(173)：
向5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(172)(25 mg，0.1 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(25 μl，2當量)，隨後添加DIEA(87 μl)。在室溫下攪拌所得溶液2小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/鹽水處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(173)(20.1 mg，產率：51%，純度>95%)。
製備(2-氟苯基)-N-[5-(3,3,6-甲基(2，3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(174)：
類似地，自5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(172)(25 mg，0.1 mmol)及2-氟苯甲醯氯(24 μl)製備(2-氟苯基)-N-[5-(3,3,6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(174)(18.1 mg，產率：48.1%，純度>95%)。
製備(2-氯苯基)-N-[5-(3,3,6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(175)：
類似地，自5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(172)(25 mg，0.1 mmol)及2-氯苯甲醯氯(25 μl)製備(2-氯苯基)-N-[5-(3,3,6-甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(175)(23.2 mg，產率：59.1%，純度>95%)。
製備5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(177)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[b]呋喃(176)(200 mg，0.83 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(14)(221 mg，1.2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(71 mg)及K3PO4(424 mg，2 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、1 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠管柱純化，獲得57.7 mg呈濃稠黃色油狀之5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(177)(產率：27.3%，純度>95%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(178)：
向5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(177)(19 mg，0.075 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(19 μl，2當量)，隨後添加DIEA(65 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在60℃下與1 N NaOH(400 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/鹽水處理。製備型HPLC純化獲得呈灰白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))吡嗪-2-基]甲醯胺(178)(10.5 mg，產率：35.4%，純度>95%)。
製備(2-氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(179)：
類似地，自5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(177)(19 mg，0.075 mmol)及2-氟苯甲醯氯(18 μl)製備(2-氟苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(179)(13.8 mg，產率：48.7%，純度>95%)。
製備(2-氯苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(180)：
類似地，自5-(3,3,6-三甲基-2,3-二氫苯并[3,4-b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基胺(177)(19 mg，0.075 mmol)及2-氯苯甲醯氯(19 μl)製備呈白色固體狀之(2-氯苯基)-N-[5-(3,3,6-三甲基(2,3-二氫苯并[b]呋喃-5-基))-吡嗪-2-基]甲醯胺(180)(14.8 mg，產率：50.1%，純度>95%)。
實例63：製備5-(7-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)-2-吡啶基胺(183)
製備7-溴-6-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯(182)：
在氬氣下，將4-甲基兒茶酚(6.2 g，50 mmol)、1,2-二溴乙烷(37.4 g，200 mmol)、K2CO3(13.8 g，100 mmol)於乙二醇(200 mL)中之混合物加熱至130℃，維持48小時。冷卻反應混合物至環境溫度，且傾倒入鹽水中。以EtOAc萃取產物，且藉由急驟管柱純化。獲得呈無色油狀之化合物181(3 g，40%)。
將化合物181(150 mg，1 mmol)溶解於無水MeCN(2 mL)中，且添加N-溴代丁二醯亞胺(214 mg，1.2 mmol)。在環境溫度下攪拌混合物72小時，接著傾倒入飽和NaHCO3中。以EtOAc萃取產物。獲得粗化合物182(200 mg，87%)，且其未經進一步純化即用於下一步驟。
製 備5-(7-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)-2-吡啶基胺(183)：
將2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(400 mg，1.8 mmol)及182(550 mg，2 mmol)溶解於2 mL 1,4-二噁烷及2 mL MeCN中。添加4 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物2分鐘，隨後添加雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos，70 mg，0.1 mmol)。在85℃下加熱反應物2小時。以EtOAc萃取處理反應混合物。藉由急驟管柱純化產物且獲得呈黃色油狀之183(112.4 mg，26%)。LC-MS：C14H14N2O2之計算值：243(M+1)。
製備5-(7-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)吡嗪-2-基胺(184)
將5-胺基吡嗪-2-酸頻哪醇酯(400 mg，1.8 mmol)及182(550 mg，2 mmol)溶解於2 mL 1,4-二噁烷及2 mL MeCN中。添加4 ml 2 M Na2CO3，且使Ar鼓泡通過混合物2分鐘，隨後添加雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos，70 mg，0.1 mmol)。在85℃下加熱反應物2小時。以EtOAc萃取處理反應混合物。藉由急驟管柱純化產物且獲得呈黃色蠟狀之184(95 mg，20%)。LC-MS：C13H13N3O2之計算值：244(M+1)。
製備(2,6-二氟苯基)- N -[5-(7-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(185)：
向183(30 mg，0.12 mmol)於CH2Cl2中之溶液中添加4-二甲基胺基吡啶(DMAP，1.2 mg，0.01 mmol)、2,6-二氟苯甲醯氯(53 mg，0.3 mmol)及二異丙基乙胺(DIEA，62 mg，0.48 mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。真空移除有機溶劑。將殘餘物溶解於THF:MeOH(1:1)中且添加1 N NaOH(2當量)。在環境溫度下攪拌混合物10分鐘。真空濃縮反應溶液，且以EtOAc萃取殘餘物。藉由ISCO管柱及HPLC純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得白色固體185(18.2 mg，40%)。LC-MS：C21H16F2N2O3之計算值：383(M+1)。
使用與化合物185類似之方法製備化合物186-193。
製備(2,6-二氟苯基)- N -[5-(7-甲基-2H,3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)吡嗪-2-基]甲醯胺(194)：
向184(25 mg，0.1 mmol)於CH2Cl2中之溶液中添加4-二甲基胺基吡啶(DMAP，1.2 mg，0.01 mmol)、2,6-二氟苯甲醯氯(53 mg，0.3 mmol)及二異丙基乙胺(DIEA，62 mg，0.48 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。真空移除有機溶劑。將殘餘物溶解於THF:MeOH(1:1)中且添加1 N NaOH(2當量)。在環境溫度下攪拌混合物10分鐘。真空濃縮反應溶液，且以EtOAc萃取殘餘物。藉由ISCO管柱及HPLC純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得白色固體194(3.3 mg，9%)。LC-MS：C20H15F2N3O3之計算值：384(M+1)。
使用與化合物194類似之方法製備化合物195-202。
實例64：製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(4-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺
製備硝酸1-胺基-3-溴-4-甲基吡錠(205)：
小心地將氧化鋇(950 mg，90%，5.56 mmol)以小份添加至6 ml水中，隨後添加硝酸鋇(983 g，3.76 mmol)及3-溴-4-甲基吡啶(1.72 g，10 mmol)。在室溫下攪拌所得懸浮液，且逐滴添加羥胺O-磺酸(995 mg，8.36 mmol)於2 ml水中之溶液。在90℃下攪拌白色懸浮液15小時，隨後冷卻至室溫。濾出白色沈澱物且以水洗滌。蒸發水相至乾燥，獲得1.065 g呈灰白色固體狀之205(產率：45.7%)，其未經進一步純化即直接用於下一步驟。
製備6-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸甲酯(206A)及4-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸甲酯(206B)：
將硝酸1-胺基-3-溴-4-甲基吡錠(205，1.065 g，4.57 mmol)溶解於7 ml DMF中，且逐份添加固體碳酸鉀(630 mg，1當量)，隨後逐滴添加乙炔甲酸甲酯(382 μl，1當量)。在室溫下，在鼓入空氣下，劇烈攪拌所得紅色懸浮液。4小時後，以冰水稀釋反應混合物，且以乙酸乙酯萃取3次。經硫酸鈉乾燥經合併之乙酸乙酯相且濃縮。藉由矽膠管柱(40 g ISCO管柱)，使用0-60% B(A：己烷；B：含50% EA之己烷)作為溶離劑進行純化。自第一峰，分離出79.6 mg呈灰白色固體狀之化合物206A(產率：6.5%，純度>90%，藉由NMR確認結構)。自第二峰，獲得188 mg呈黃色固體狀之化合物206B(純度約70%，產率11%)。
製備6-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(207A)：
在85℃下於3 ml 50% v/v硫酸中加熱6-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯(206A，79.6 mg，0.3 mmol)持續3小時，接著在60℃下加熱4天。冷卻後，以水稀釋反應混合物，首先以1 N NaOH中和，接著以碳酸氫鈉飽和溶液中和至pH=9。以EA萃取混合物，以鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮至乾燥，獲得51 mg呈棕色固體狀之207A(產率：64%，純度>80%)，其未經進一步純化即直接用於進一步反應。
製備5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基胺(208)：
使氬氣鼓泡通過6-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(207A)(26 mg，0.12 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(53 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(17 mg，10莫耳%)及K3PO4(53 mg，0.24 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.25 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基胺(208)(10.6 mg，純度>90%，產率：39.2%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(209)：
向5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基胺(208)(10.6 mg，0.047 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(12 μl，0.094 mmol)，隨後添加DIEA(41 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-6-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(209)(3.3 mg，產率：19.2%，純度>90%)。
製備4-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(207B)：
在85℃下於5 ml 50% v/v硫酸中加熱4-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯(206B，188 mg，0.7 mmol)，持續3小時。冷卻後，以水稀釋反應混合物，以1 N NaOH中和至pH=11。以EA萃取混合物，以鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮至乾燥，獲得113.7 mg呈淺黃色固體狀之207B(產率：77%，純度>95%)。
製備5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-2-吡啶基胺(210)：
使氬氣鼓泡通過4-溴-5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(207B)(31 mg，0.15 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(48 mg，1.5當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(16 mg，10莫耳%)及K3PO4(48 mg)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.25 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈灰白色固體狀之5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-2-吡啶基胺(210)(22 mg，純度>90%，產率65.4%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(211)：
向5-(5-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基)-2-吡啶基胺(210)(22 mg，0.098 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(25 μl，2當量)，隨後添加DIEA(87 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(5-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-4-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(211)(31.5 mg，產率：88.3%，純度>95%)。
類似於206A及206B，自4-溴-3-甲基吡啶製備214A及214B。
製備5-溴-6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(215A)：
在85℃下於3 ml 50% v/v硫酸中加熱5-溴-6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸甲酯(214A，15.9 mg，0.06 mmol)持續20小時，接著在70℃下加熱6天。冷卻後，以水稀釋反應混合物，首先以1 N NaOH中和，接著以碳酸氫鈉飽和溶液中和至pH=9。以EA萃取混合物，以鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮至乾燥，獲得12.3 mg呈灰白色固體狀之215A(產率：97%，純度約80%)，其未經進一步純化即直接用於進一步反應。
製備5-(6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(216)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(215A)(12.3 mg，0.058 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(26 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(8 mg，10莫耳%)及K3PO4(13 mg)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2.5小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈灰白色固體狀之5-(6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(216)(7.3 mg，純度>80%，產率56%)，其直接用於下一反應步驟。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(217)：
向5-(6-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(216)(7.3 mg，0.03 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(11 μl，3當量)，隨後添加DIEA(21 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1.5小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(150 μl)一起攪拌1小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(6-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(217)(11.1 mg，產率：100%，純度>90%)。
製備5-溴-4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(215B)：
在85℃下於3 ml 50% v/v硫酸中加熱5-溴-4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸酯(214B，36.9 mg，0.137 mmol)，持續5小時。冷卻後，以水稀釋反應混合物，首先以1 N NaOH中和，接著以碳酸氫鈉溶液中和至pH=8。以EA萃取混合物，以鹽水洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，濃縮至乾燥，獲得29 mg呈白色固體狀之215B(產率：100%，純度>95%)。
製備5-(4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(218)：
使氬氣鼓泡通過5-溴-4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶(215B)(29 mg，0.137 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(60 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(19 mg，10莫耳%)及K3PO4(57 mg)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈白色固體狀之5-(4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(218)(20.5 mg，純度>90%，產率：66.7%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(4-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(219)：
向5-(4-甲基-8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2-吡啶基胺(218)(20.5 mg，0.09 mmol)於2 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(22 μl，2當量)，隨後添加DIEA(63 μl)。在室溫下攪拌所得溶液1小時。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於2 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(4-甲基(8-氫吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基))(2-吡啶基)]甲醯胺(219)(24 mg，產率：73.2%，純度>95%)。
實例65：製備2,6-二氟-N-(5-(2-氟-6-甲基苯并呋喃-5-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(223)及類似物
製備5-溴-2-羥基苯甲醛(227)：向2-羥基-4-甲基苯甲醛(224，1.36 g，10 mmol)於50 ml乙腈中之溶液以小份添加固體NBS(225，1.78 g，10 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。LC-MS顯示仍有大量起始物質未反應。再添加0.3當量(534 mg)NBS，且在室溫下再攪拌反應混合物3小時。添加碳酸氫鈉水溶液且蒸發乙腈。以EA/NaHCO3水溶液/鹽水處理殘餘物。矽膠管柱純化獲得226與227之混合物(2.125 g)。在逆相管柱上純化1.035 g此混合物，分別獲得356 mg呈灰白色固體狀之226及317 mg呈黃色固體狀之227。藉由H-NMR確認兩種結構。
製備5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-甲酸(229)：將5-溴-2-羥基苯甲醛(227，356 mg，1.656 mmol)、溴代丙二酸二乙酯(339 μl，1.2當量)及碳酸鉀(828 mg，6 mmol)於10 ml 2-丁酮中之懸浮液在100℃下於微波反應器中加熱30分鐘。以EA/鹽水處理，隨後進行矽膠急驟管柱純化，獲得637 mg呈淡黃色油狀之中間物，將其在70℃下於8.5 ml 1 N NaOH及8.5 ml EtOH中加熱3小時。冷卻至室溫後，蒸發反應混合物以移除EtOH。以2.5 M H2SO4將殘餘物酸化至pH=1-2，且以EA萃取2次。經硫酸鈉乾燥有機相，且濃縮獲得423 mg呈灰白色固體狀之標題化合物。
製備5-溴-2-氟-6-甲基-苯并呋喃(230)：在室溫下，將5-溴-6-甲基-苯并呋喃-2-甲酸(229，243 mg，0.95 mmol)、Selectfluor(481 mg，1.36 mmol)及碳酸氫鈉(228 mg，2.72 mmol)於3 ml水及3 ml EA中之混合物劇烈攪拌60小時，隨後再添加240 mg Selectfluor。再過20小時後，以EA稀釋反應混合物，以1 N NaOH洗滌2次。以鹽水洗滌有機相，經硫酸鈉乾燥，濃縮至乾燥，獲得78.5 mg呈淡棕色蠟狀之標題化合物(產率：36.1%，純度>95%)。
製備5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(231)：使氬氣鼓泡通過5-溴-2-氟-6-甲基-苯并呋喃(230)(78.5 mg，0.34 mmol)、2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(11)(151 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(48 mg，10莫耳%)及K3PO4(145 mg，0.69 mmol)於2 ml ACN、2 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱3小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(231)(46.8 mg，純度>95%，產率：56.8%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(223)：向5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(231)(23 mg，0.095 mmol)於3 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(36 μl，3當量)，隨後添加DIEA(149 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於3 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(200 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。矽膠急驟層析獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(223)(24.9 mg，產率：68.6%，純度>95%)。
製備(3,5-二氟(4-吡啶基))-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(232)：以與上文所述化合物223類似之方式，自3,5-二氟吡啶-4-羰基氯(40 mg)藉由與5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(231)(12 mg，0.05 mmol)反應來製備(3,5-二氟(4-吡啶基))-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(232)(11.2 mg，產率：58.5%，純度>95%)。
製備(2-氯苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(233)：以與上文所述化合物223類似之方式，自2-氯苯甲醯氯(3當量)藉由與5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-2-吡啶基胺(231)(12 mg，0.05 mmol)反應來製備(2-氯苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(233)(13 mg，產率：68.4%，純度>95%)。
製備5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-吡嗪-2-基胺(234)：使氬氣鼓泡通過5-溴-2-氟-6-甲基-苯并呋喃(230)(0.3 mmol)、2-胺基吡嗪-5-酸頻哪醇酯(133 mg，2當量)、雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(42 mg，10莫耳%)及K3PO4(127 mg，0.6 mmol)於1 ml ACN、1 ml二噁烷、0.5 ml H2O中之混合物，隨後在85℃下加熱2小時。冷卻至室溫後，將反應混合物溶解於EA中，以NaHCO3水溶液及鹽水洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，濃縮，接著進行矽膠急驟管柱層析(0-100% B，A：己烷；B：EA)，獲得呈黃色固體狀之5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)-吡嗪-2-基胺(234)(18.5 mg，純度>95%，產率：25.4%)。
製備(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基)]甲醯胺(235)：向(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基)]甲醯胺(234)(9 mg，0.037 mmol)於1 ml DCM中之溶液中添加2,6-二氟苯甲醯氯(14 μl，3當量)，隨後添加DIEA(32 μl)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜。以NaHCO3水溶液/DCM處理反應混合物。以鹽水洗滌DCM相，濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於1 ml THF/MeOH/H2O(5:4:1)中，且在室溫下與1 N NaOH(100 μl)一起攪拌2小時，隨後以EA/NaHCO3水溶液處理。製備型HPLC獲得呈白色固體狀之(2,6-二氟苯基)-N-[5-(2-氟-6-甲基苯并[b]呋喃-5-基)吡嗪-2-基)]甲醯胺(235)(7.1 mg，產率：50%，純度>95%)。
實例66：製備2,6-二氟-N-(5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(236)及類似物
製備2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩(238)。在0℃下，將第三丁胺-甲硼烷(5.73 g，65.8 mmol)添加至氯化鋁(4.3 g，32.9 mmol)於二氯甲烷(46 mL)中之溶液中。在0℃下攪拌所得混合物10分鐘，接著添加含237(1.0 g，5.5 mmol)之二氯甲烷(10 mL)。在0℃下攪拌所得混合物3小時，接著藉由緩慢添加冰冷之0.1 N HCl(60 mL)淬滅。以二氯甲烷(3×100 mL)萃取混合物。以0.1 N HCl(2×60 mL)洗滌經合併之有機萃取物，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-35%乙酸乙酯之己烷)獲得呈液體狀之238(27 mg，3%)。
製備3-溴-2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩(239)。將N-溴代丁二醯亞胺(52 mg，0.3 mmol)添加至238(42 mg，0.3 mmol)於乙腈(1.4 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得混合物2天。以碳酸氫鈉飽和溶液(10 mL)稀釋混合物，且以二氯甲烷(3×5 mL)萃取。以硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-5%乙酸乙酯之己烷)獲得呈液體狀之239(47 g，73%)。
製備5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-胺(240)。將肆-三苯膦鈀(12 mg，10 μmol)添加至溴化物239(46 mg，0.2 mmol)及酸酯11(88 mg，0.4 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，1.5 mL)及磷酸鉀(63 mg，0.3 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物4小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×10 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈油狀之240(32 mg，66%)：LRESIMS m/z 245.1[M+H]+，C14H17N2S1之計算值245.1。
製備2,6-二氟-N-(5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(236)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(9.4 mg，53 μmol)添加至240(6.5 mg，26 μmol)及惠寧氏鹼(28 μL，21 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.6 mL)、甲醇(0.4 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持5分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(5 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之236(5.1 mg，50%)：LRESIMS m/z 385.1[M+H]+，C21H19F2N2O1S1之計算值385.1。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-胺(240)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備2-氟-N-(5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(241)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-胺(240)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(242)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-胺(240)藉由與異丁醯氯反應來製備N-(5-(2-甲基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-3-基)吡啶-2-基)異丁醯胺(243)。
製備5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-胺(245)。將肆-三苯膦鈀(68 mg，0.1 mmol)添加至溴化物244(250 mg，1.2 mmol)及酸酯11(521 mg，2.4 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，6 mL)及磷酸鉀(376 mg，1.8 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物18小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×15 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之245(202 mg，76%)：LRESIMS m/z 225.2[M+H]+，C14H13N2O1之計算值225.1。
製備2,6-二氟-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(246)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(47 mg，0.3 mmol)添加至245(30 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(140 μL，104 mg，0.8 mmol)於二氯甲烷(1.0 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.8 mL)、甲醇(0.6 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.2 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至60℃維持15分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(10 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之246(35.5 mg，73%)：LRESIMS m/z 365.1[M+H]+，C21H15F2N2O2之計算值365.1。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-胺(245)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備2-氟-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(247)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-胺(245)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡啶-2-基)苯甲醯胺(248)。
製備5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-胺(249)。將肆-三苯膦鈀(41 mg，35 μmol)添加至溴化物244(150 mg，0.7 mmol)及酸酯14(196 mg，0.9 mmol)於二噁烷：乙腈：水(9:9:2，4 mL)及磷酸鉀(226 mg，1.1 mmol)中之經脫氣溶液中。在攪拌下，在氬氣下於90℃下加熱所得混合物14小時。接著冷卻混合物，以二氯甲烷(3×15 mL)萃取，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-50%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之249(34.3 mg，21%)：LRESIMS m/z 226.1[M+H]+，C13H12N3O1之計算值226.1。
製備2,6-二氟-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(250)。在氬氣氛圍下、於室溫下，將2,6-二氟苯甲醯氯(8.0 mg，35 μmol)添加至249(13 mg，0.1 mmol)及惠寧氏鹼(37 μL，28 mg，0.2 mmol)於二氯甲烷(0.5 mL)中之經攪拌溶液中。攪拌反應物0.5小時。以四氫呋喃(0.6 mL)、甲醇(0.3 mL)及2 M氫氧化鈉溶液(0.1 mL)稀釋溶液。攪拌混合物，且加熱至50℃維持20分鐘，接著冷卻至室溫，以二氯甲烷(10 mL)稀釋，以硫酸鈉乾燥，且減壓濃縮。急驟層析(ISCO系統，二氧化矽，含0-20%乙酸乙酯之己烷)獲得呈固體狀之250(7.0 mg，54%)：LRESIMS m/z 366.1[M+H]+，C20H14F2N3O2之計算值366.1。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-胺(249)藉由與2-氟苯甲醯氯反應來製備2-氟-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(251)。
以類似於上文所述之程序，自5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-胺(249)藉由與2-氯苯甲醯氯反應來製備2-氯-N-(5-(2-甲基苯并呋喃-3-基)吡嗪-2-基)苯甲醯胺(252)。
實例67：製備6-溴-7-氯-2,2-二氟-3H-苯并[e]1,4-二氧雜環己烯(254)
在氬氣下，將4-氯兒茶酚(5.8 g，40 mmol)、1,2-二溴-1,1-二氟乙烷(18 g，40 mmol)、K2CO3(22 g，160 mmol)於乙二醇(100 mL)中之混合物加熱至130℃，維持48小時。冷卻反應混合物至環境溫度，且傾倒入鹽水中，獲得異構體之混合物。以EtOAc萃取混合物，且藉由急驟層析純化。獲得呈無色油狀之化合物253(0.9 g，11%)。
將化合物253(900 mg，4.3 mmol)溶解於無水MeCN(2 mL)及N-溴代丁二醯亞胺(214 mg，1.2 mmol)中，且添加FeCl3(1.2 g，7.3 mmol)。在環境溫度下攪拌混合物72小時，接著傾倒入飽和NaHCO3中。以EtOAc萃取產物，接著蒸發至乾燥。獲得粗化合物254(134 mg，11%)，且其未經進一步純化即用於下一步驟。
製備5-(7-氯-2,2-二氟-3H-苯并[3,4-e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)-2-吡啶基胺(255)
將2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(62 mg，0.28 mmol)及254(67 mg，0.23 mmol)溶解於2 mL 1,4-二噁烷及2 mL MeCN中。接著添加1 ml 2 M K3PO3，且使Ar鼓泡通過混合物2分鐘，隨後添加雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos，14 mg，0.02 mmol)。接著在85℃下加熱反應物2小時。冷卻反應物，且以EtOAc萃取處理混合物。藉由急驟管柱純化所得粗產物且獲得呈黃色固體狀之255(6 mg，9%)。
製備5-(7-氯-2，2-二氟-3H-苯并[3,4-e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)吡嗪-2-基胺(256)
將5-胺基吡嗪-2-酸頻哪醇酯(62 mg，0.28 mmol)及254(67 mg，0.23 mmol)溶解於2 mL 1,4-二噁烷及2 mL MeCN中。接著添加1 ml 2 M K3PO3，接著使Ar鼓泡通過混合物2分鐘，隨後添加雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos，70 mg，0.1 mmol)。接著在85℃下加熱反應物2小時。冷卻反應混合物，接著以EtOAc萃取處理。藉由急驟管柱純化產物且獲得呈黃色蠟狀之256(6 mg，9%)。
製備(2,6-二氟苯基)- N -[5-(7-氯-2,2-二氟(3H-苯并[3,4-e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)(2-吡啶基)]甲醯胺(257 )
向255(6 mg，0.02 mmol)於CH2Cl2中之溶液中添加4-二甲基胺基吡啶(DMAP，1.2 mg，0.01 mmol)、2,6-二氟苯甲醯氯(5 mg，0.03 mmol)及二異丙基乙胺(DIEA，62 mg，0.48 mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物2小時。接著以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。真空移除有機溶劑。接著將殘餘物溶解於THF:MeOH(1:1)中，且添加1 N NaOH(2當量)。接著在環境溫度下攪拌所得混合物10分鐘，接著真空濃縮。接著以EtOAc萃取殘餘物，且藉由ISCO矽膠管柱，隨後藉由逆相製備型HPLC純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得白色固體257(7.8 mg，88%)。LC-MS：C20H11ClF4N2O3之計算值：439(M+1)。
製備(2,6-二氟苯基)- N -[5-(7-氯-2,2-二氟(3H-苯并[3,4-e]1,4-二氧雜環己烯-6-基)吡嗪-2-基]甲醯胺(258)
向256(6 mg，0.02 mmol)於CH2Cl2中之溶液中添加4-二甲基胺基吡啶(DMAP，1.2 mg，0.01 mmol)、2,6-二氟苯甲醯氯(5 mg，0.03 mmol)及二異丙基乙胺(DIEA，62 mg，0.48 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時。接著以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。真空移除有機溶劑，且隨後將殘餘物溶解於THF:MeOH(1:1)中，且添加1 N NaOH(2當量)。在環境溫度下攪拌所得混合物10分鐘。接著真空濃縮反應溶液，且以EtOAc萃取殘餘物。藉由ISCO矽膠管柱，隨後藉由製備型逆相HPLC純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得白色固體258(5.6 mg，64%)。LC-MS：C19H10F2N3O3之計算值：440(M+1)。
製備7-溴-2,2-二氟-6-甲基-1,2,3,4-四氫萘(260)
在環境溫度下，將6-甲基-1,3,4-三氫萘-2-酮(320.4 mg，2 mmol)及三氟化二乙基胺基硫( DAST ， 806 mg ， 5 mmol )於CH2Cl2(1 mL)中之溶液攪拌72小時。接著以飽和NaHCO3(10 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取。真空移除有機溶劑。將所得殘餘物溶解於無水MeCN(5 mL)中，且添加N-溴代丁二醯亞胺(428 mg，2.4 mmol)及FeCl3(81 mg，0.5 mmol)。在80℃下加熱混合物18小時，接著傾倒入飽和NaHCO3中。以EtOAc萃取產物，且蒸發至乾燥。藉由ISCO矽膠管柱純化粗化合物且獲得呈棕色油狀之260(440 mg，84%)。
製備5-(7,7-二氟-3-甲基-2-5,6,7,8-四氫萘基)-2-吡啶基胺(261)
將2-胺基吡啶-5-酸頻哪醇酯(132 mg，0.6 mmol)及260(131 mg，0.5 mmol)溶解於2 mL 1,4-二噁烷及2 mL MeCN中。接著添加4 ml 2 M K3PO3，且使Ar鼓泡通過混合物2分鐘，隨後添加雙(二第三丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯鈀(II)(A-Phos，35 mg，0.05 mmol)。接著在85℃下加熱反應物2小時。以EtOAc萃取處理反應混合物。藉由急驟管柱純化產物且獲得呈黃色蠟狀之261(73 mg，53%)。
製備N-[5-(7,7-二氟-3-甲基(2-5,6,7,8-四氫萘基)(2-吡啶基)](2,6-二氟苯基)甲醯胺(262)
向261(73 mg，0.26 mmol)於CH2Cl2中之溶液中添加4-二甲基胺基吡啶(DMAP，1.2 mg，0.01 mmol)、2,6-二氟苯甲醯氯(53 mg，0.3 mmol)及二異丙基乙胺(DIEA，62 mg，0.48 mmol)。接著在室溫下攪拌反應混合物2小時。以飽和NaHCO3(20 ml)淬滅反應物，且以EtOAc萃取，且真空移除有機溶劑。將殘餘物溶解於THF:MeOH(1:1)中，接著添加1 N NaOH(2當量)。在環境溫度下再攪拌混合物10分鐘。接著真空濃縮反應溶液，且以EtOAc萃取殘餘物。藉由ISCO矽膠管柱，隨後藉由製備型HPLC純化粗產物。合併含有純產物之溶離份且蒸發。獲得白色固體262(11.5 mg，11%)。LC-MS：C23H18F4N2O之計算值：415(M+1)。
使用與化合物262類似之方法製備化合物263-264。
活體外實例
實例68：活體外篩選調節細胞內鈣含量之藥劑
使用基於螢光之檢定篩選調節細胞內鈣之本文所述化合物，諸如式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物。
A.在Orai1/STIM1穩定細胞中對鈣池操縱鈣進入進行基於螢光之檢定
細胞：
藉由將人類Orai1表現質體(pcDNA3.1-Orai1-cmyc)轉染至穩定地過度表現人類STIM1之HEK-293細胞中來產生穩定表現重組人類STIM1及Orai1之細胞(Roos等人,2005 JCB 169(3): 435-445)。選擇穩定表現STIM1蛋白與Orai1蛋白之細胞群落，接著藉由限制稀釋法進行次選殖。在37℃/6% CO2下，於含10% FBS及適當選擇標記物之完全培養基中培養細胞。
檢定：
在進行檢定前一天，將Orai1/STIM1穩定細胞以90-95%之匯合度塗於384孔板中之50 μL完全培養基中。在37℃/6% CO2下使細胞生長隔夜。在檢定當天，向細胞中添加含1.5 μM fluo-4-AM(Invitrogen)之完全培養基，接著在室溫下培育1小時。在不含Ca2+之HBSS(漢克氏緩衝生理食鹽水溶液)中洗滌細胞一次，且向各孔中添加35 μl不含Ca2+之HBSS。向孔中添加10 μL不含Ca2+之HBSS溶液中的測試化合物(在4.5×所要最終濃度下製備)，且在室溫下培育30分鐘。接著以FLIPR384(Molecular Devices)板讀取器量測初始基線螢光信號。藉由添加5 μl 10×CaCl2(10 mM)之HBSS溶液而引發鈣進入，且以FLIPR384板讀取器量測細胞螢光變化。在各孔中，藉由計算添加鈣之後所量測之峰值螢光信號與初始基線螢光信號之間的差異(命名為峰值-基底)來測定鈣進入細胞中所引起之螢光信號的量值。通常將抑制50%峰值-基底信號之濃度計算為IC50值。
B.在RBL-2H3細胞中對鈣池操縱鈣進入進行基於螢光之檢定細胞：
RBL-2H3細胞獲自ATCC且在37℃/6% CO2下維持於含10% FBS之完全培養基中。
檢定：
在進行檢定前一天，將RBL-2H3細胞塗於384孔板中之50 μL完全培養基中。在37℃/6% CO2下使細胞生長隔夜，且第二天生長至50-60%之匯合度。在檢定當天，添加含1.5 μM Fluo-4-AM染料(Invitrogen)之完全培養基，且在室溫下培育1小時。在不含Ca2+之HBSS緩衝液中洗滌細胞兩次，且向各孔中添加35 μL不含Ca2+之HBSS緩衝液。向孔中添加在不含Ca2+之HBSS溶液中於4.5×所要濃度下製備之10 μL測試化合物，且在室溫下培育5分鐘。向各孔中添加在不含Ca2+之HBSS溶液中於5.5×所要濃度(5.5 μM)下製備之10 μL毒胡蘿蔔素，且再培育25分鐘。以FLIPR384(Molecular Devices)板讀取器量測初始基線螢光信號。添加5 μL 12×鈣之HBSS溶液(12 mM)，且以FLIPR384板讀取器量測細胞螢光變化。在各孔中，藉由計算添加鈣之後7秒所量測的螢光信號與零時(t=0)之初始基線螢光信號之間的差異來測定鈣進入細胞中所引起的螢光信號隨時間之變化。此參數命名為升坡(Upslope)。將抑制50%升坡之濃度計算為IC50值。
C.在Jurkat細胞中對鈣池操縱鈣進入進行基於螢光之檢定細胞：
Jurkat E6-1細胞獲自ATCC且在37℃/6% CO2下維持於含10% FBS之完全培養基中。
檢定：
進行檢定前一天，將Jurkat E6-1細胞以2,000,000個細胞/毫升之密度接種於T-175燒瓶中之完全培養基中。在37℃/6% CO2下使細胞生長隔夜。第二天，添加含1.5 μM Fluo-4-AM染料(Invitrogen)之完全培養基，且在室溫下培育1小時。收集細胞，在不含Ca2+之HBSS緩衝液中洗滌兩次且塗於384孔板中之35 μL不含Ca2+之HBSS緩衝液中。向孔中添加在不含Ca2+之HBSS溶液中於4.5×所要濃度下製備之10 μL測試化合物，且在室溫下培育5分鐘。向各孔中添加在不含Ca2+之HBSS溶液中於5.5×所要濃度(5.5 μM)下製備之10 μL毒胡蘿蔔素，且再培育25分鐘。以FLIPR384(Molecular Devices)板讀取器量測初始基線螢光信號。添加5 μL 12×鈣之HBSS溶液(12 mM)，且以FLIPR384板讀取器量測細胞螢光變化。在各孔中，藉由計算添加鈣之後7秒所量測的螢光信號與零時(t=0)之初始基線螢光信號之間的差異來測定鈣進入細胞中所引起的螢光信號隨時間之變化。此參數命名為升坡。將抑制50%升坡之濃度計算為IC50值。
實例69：活體外I CRAC 膜片鉗檢定 目的
此檢定之目的在於檢查在活體外測試化合物對引起鈣釋放活化鈣通道電流ICRAC之經選殖CRAC通道(在HEK293細胞中穩定表現之Orai1及STIM1基因)的影響。
測試物品與對照物品
調配物：在二甲亞碸(DMSO)中製備測試物品儲備溶液，且冷凍儲存。每天藉由以適當外部記錄緩衝液稀釋儲備溶液得到新鮮的測試物品濃度。必要時，在環境室溫下對測試物品調配物進行音波處理(型號2510,Branson Ultrasonics,Danbury,CT)以促進溶解。在某些情況下，測試溶液含有至多0.1% DMSO且0.1% DMSO的存在不會影響通道電流。
測試物品濃度與品質
通常評估三(3)種濃度(0.1、1及10 μM)之各測試物品的影響。將測試物品稱重且製備成DMSO中之30 mM或10 mM儲備溶液。以外部記錄緩衝液稀釋DMSO儲備液以製備10 μM測試溶液(最終DMSO為0.03%或0.1%)。以外部記錄緩衝液稀釋10 μM測試溶液以製備1 μM及0.1 μM測試溶液。最高濃度之測試溶液含有至多0.1% DMSO，將最高濃度之測試溶液稀釋成較低濃度。
陽性對照物品
分批製備陽性對照物品之儲備溶液，將其分成等分試樣以供個別使用，冷凍儲存且在6個月內使用。每天藉由以外部記錄緩衝液稀釋儲備溶液來得到新鮮的陽性對照濃度。測試陽性對照物品中之最終DMSO濃度為溶液之至多0.1%。
陰性對照物品
陰性對照物品為含0.1% DMSO之外部記錄緩衝液。
經選殖離子通道測試系統
按照CalciMedica標準方案，將細胞維持於組織培養恆溫箱中。使儲備液維持低溫儲存。將電生理學所用之細胞塗於塑膠組織培養皿中。
HEK293細胞
以適當離子通道cDNA(Orai1/STIM1)穩定轉染HEK293細胞。在補充有10%胎牛血清(Gibco 10082)、100 U/mL青黴素G鈉(penicillin G sodium)、1 mM丙酮酸鈉(Gibco 11360)、100 μg/mL硫酸鏈黴素(streptomycin sulfate)(Gibco 10378)、0.5 mg/ml遺傳黴素(geneticin)(Gibco 10131-035)及50 μg/ml勻黴素(zeocin)(Invitrogen 45-0430)之DMEM(Gibco 11960)中培養細胞。細胞應維持於匯合度80%下。測試前一天，以不含鈣/鎂之D-PBS洗滌培養皿中之細胞一次，以胰蛋白酶/EDTA處理且再懸浮於培養基中並進行計數。接著以含1%胎牛血清之培養基稀釋細胞，且以較低密度(5-10K)塗於24孔組織培養皿中之經聚-D-離胺酸塗覆之玻璃蓋片上，且置於經設定在37℃下、含95%濕氣之空氣、6% CO2氛圍中的組織培養恆溫箱中。
測試方法
記錄腔室與測試物品灌注
藉由連續灌注外部記錄緩衝液將含有細胞之玻璃蓋片轉移至記錄腔室(Warner Instruments)中。在ICRAC記錄期間，藉由自拋棄式針筒儲集器進行重力饋料槽灌注，經由饋入鐵氟龍(Teflon manifold)中之拋棄式聚乙烯管傳遞所有處理。流動速率設定為1.2-1.5 ml/min，確保在約1分鐘內完成溶液交換。所有實驗皆在環境溫度下進行。
測試物品處理組
對於施用測試物品持續10分鐘之實驗，處理範例概述於表2中。灌注對照記錄緩衝液五(5)分鐘，同時產生ICRAC且建立穩定基線；各細胞用作其自身之對照。將各測試物品施用於天然細胞(n2，其中n=細胞數目/濃度；1濃度/細胞)持續十(10)分鐘(表2)。洗去測試物品持續十(10)分鐘，以觀察作用可逆性。灌注不含鈣之外部記錄生理食鹽水持續兩(2)分鐘，以測定無ICRAC存在下之背景電流。再施用含有鈣之對照生理食鹽水持續三(3)分鐘。
對於在記錄ICRAC之前施用測試物品持續30分鐘之實驗，處理範例概述於表3中。在各實驗開始之前，在室溫下將細胞與化合物一起培育30分鐘，且在整個ICRAC記錄過程中始終存在化合物。對照細胞僅與媒劑接觸。在進入(break-in)及建立全細胞膜片鉗組態之後，灌註記錄緩衝液±化合物持續十(10)分鐘。在10分鐘時段結束時，量測ICRAC之振幅。藉由比較經化合物預處理之細胞中的ICRAC信號與媒劑預處理之細胞中的信號來確定化合物之作用。
對照處理組
作為陰性對照，將0.1% DMSO施用於天然細胞(n2，其中n=細胞數目)。此用於監測ICRAC衰減(rundown)之量值。作為陽性對照，將1 μM 4-(4-溴苯基)-2-(3-氟苯甲醯胺基)噻吩-3-甲酸常規施用於天然細胞(n2，其中n=細胞數目)。
全細胞膜片鉗程序
使用標準全細胞膜片鉗程序。細胞外及細胞內溶液之組成展示於表4及表5中。在倒置顯微鏡(Olympus IX71)上觀測細胞，且使用Multiclamp 700B放大器及PClamp軟體(Axon Instruments)鉗制電壓。簡言之，將填充有細胞內溶液(Appendix 1)之硼矽酸鹽膜片吸液管(patch pipette)安置於細胞膜上。一旦形成GΩ密封，即施加吸力直至膜片斷裂且建立全細胞組態。在Clampex中用「膜測試」評估組態品質，以測定電池電容(Cm)、輸入電阻(Rm)、接入電阻(Ra)及-50 mV下之保持電流(Ih)。在CalciMedica電腦網路上儲存數據(且每夜備分)以供離線分析。
表4細胞外溶液組成(濃度以mM為單位)
NaCl　120
TEA-Cl　10
HEPES　10
CaCl2　10(及0)
MgCl2　2(及12)
葡萄糖　10
用NaOH將pH值調整至7.2，且用蔗糖將最終容積滲透濃度(osmolarity)調整至325。每天製備溶液。除非另外說明，否則溶液製備中所用之化學品係購自Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)，且具有ACS試劑級純度或更高級純度。
表5細胞內溶液組成(濃度以mM為單位)
麩胺酸銫　120
HEPES　10
BAPTA　20
MgCl2　3
用CsOH將pH值調整至7.2。分批製備溶液，將其分成等分試樣且冷藏直至使用。每天使用新鮮等分試樣且整天儲存於冰上。除非另外說明，否則溶液製備中所用之化學品係購自Sigma-Aldrich(St. Louis,MO)，且為ACS試劑級。
I CRAC 測試程序
藉由使用含20 mM BAPTA之細胞內溶液被動耗盡細胞內鈣池來活化Orail/STIM1通道複合物之ICRAC。使用Clampex軟體獲得電壓鉗數據以引出每六(6)秒施加之刺激電壓處理法(展示於表6中)。電流在10 kHz下數位化且在2 kHz下過濾。採用全細胞電容補償。代表性ICRAC跡線展示於圖2中。
表6電壓鉗制方案
電壓　描述
Vh+30 mV　使掃視間的鈣進入降至最低
Vstep至0 mV持續10 ms　評估「0」電流
Vstep至-100 mV持續10 ms　在高驅動力下量測ICRAC
Vramp經50 ms至+100 mV　監測ICRAC之內向性整流概況
Vstep至+50 mV持續10 ms　估算漏流
數據分析
使用Clampfit軟體進行數據分析。在-100　mV下量測ICRAC且5分鐘後所量測之電流用作基線對照。對於10分鐘施用研究，將施用測試物品10分鐘後所量測之電流針對基準電流進行校正且表示為對照%。對於40分鐘施用研究，在10分鐘ICRAC記錄時間結束時所量測之電流用作比較電流(comparator)。使用「0鈣」緩衝液中所量測之電流減去背景漏流。將各測試物品濃度之數據點(n2)與S型函數(SigmaPlot)擬合以測定IC50及希爾斜率(Hill slope)。
活體內實例 實例70.本文所述化合物之微粒體穩定性
材料：肝微粒體購自XenoTech,LLC(Lenexa，KS)。其他化學品獲自Sigma-Aldrich(Milwaukee,WI)。用於LC/MS/MS移動相之溶劑及拋棄式實驗室器皿獲自多個供應商。
研究方案： 僅I期(在NADPH再生系統存在下但無UDPGA存在時的氧化代謝) ：將測試化合物與肝微粒體之混合物(總共475 μL)在37℃下預培育5分鐘。藉由添加25 μL輔因子(NADPH再生系統)來起始反應，且在37℃下進行長達60分鐘。檢定中之最終濃度為：5 μM測試化合物、1 mg/mL微粒體蛋白、1 mM NADP+、5 mM葡萄糖-6-磷酸及1 U/mL葡萄糖-6-磷酸去氫酶，於含有3.3 mM MgCl2及100 μM EDTA之50 mM磷酸鉀(pH 7.4)中。將DMSO與測試化合物儲備溶液一起引入反應混合物中；其濃度不超過0.4%(v/v)。在預定時間點，藉由移除50 μL等分試樣且以200 mL含有0.5 μM內標(卡馬西平(carbamazepine))之ACN混合物淬滅以達成蛋白質沈澱來終止反應。使樣品渦旋，以4000 rpm(3400 rcf)離心15分鐘，且藉由LC/MS/MS分析澄清上清液。
I期及II期：(在NADPH再生系統及UDPGA存在下之氧化代謝及結合)： 類似於上文所述來製備反應混合物，但6.6 mM UDPGA、6.25 μg/mL丙甲甘肽(alamethicin)及1.25 mM D-葡萄糖二酸1,4-內酯(最終檢定濃度)亦與NADPH再生系統一起添加。咪達唑侖(midazolam)及4-甲基繖酮分別用作I期及II期之陽性對照。
生物分析： 使用非GLP LC/MS/MS方法進行生物分析。不產生校準曲線且使用測試化合物峰面積與內標峰面積之比率來測定各時間點剩餘之測試化合物的相對量。
穩定在本文定義為降解小於10%。
實例71.肥大細胞脫顆粒之活體外檢定 細胞：
RBL-2H3細胞獲自ATCC且在37℃/6% CO2下維持於含10%FBS之完全培養基中。
檢定：
a)以1 μM毒胡蘿蔔素/20 nM TPA刺激
在進行檢定前一天，將RBL-2H3細胞塗於96孔板中。在37℃/6% CO2下使細胞生長隔夜。第二天，在含1.8 mM CaCl2及1.75%胎牛血清(FBS)之HBSS緩衝液中洗滌細胞兩次。添加在含1.8 mM CaCl2+1.75% FBS之HBSS緩衝液中製備的70 μL測試化合物，且在37℃/6% CO2下培育10分鐘。藉由添加7 μL 11×毒胡蘿蔔素/TPA(11 μM毒胡蘿蔔素/220 nM TPA)刺激細胞，且在37℃/6% CO2下培育120分鐘。收集培養基，且藉由添加70 μL 0.05% Triton X-100之HBSS溶液(含1.8 mM CaCl2)來製備細胞溶胞物。量測培養基與細胞溶胞物中β-己醣胺酶之含量。藉由向10 μL樣本(條件培養基或細胞溶胞物)中添加40 μL含1 mM對硝基苯基-乙醯基-葡糖醯胺受質之0.05 M檸檬酸鈉(pH 4.5)，在37℃下培育60分鐘，接著添加100 μL 0.05 M碳酸鈉/0.05 M碳酸氫鈉(pH 10.5)，充分混合且讀取405 nm下之吸光度來進行β-己醣胺酶檢定。如下計算所釋放之β-己醣胺酶之百分比：A405(培養基)/[A405(培養基)+A405(溶胞物)]。將抑制經媒劑處理之細胞中所釋放之50%β-己醣胺酶的濃度計算為IC50值。
b)以IgE-DNP刺激
在進行檢定前一天，將RBL-2H3細胞塗於96孔板中之200 μL完全培養基中，持續1小時。添加20 μL 11×DNP-IgE，且在37℃/6% CO2下使細胞生長隔夜。第二天，在含1.8 mM CaCl2及1.75%胎牛血清(FBS)之HBSS緩衝液中洗滌細胞兩次。添加在含1.8 mM CaCl2及1.75% FBS之HBSS緩衝液中製備之70 μL測試化合物，且在37℃/6% CO2下培育10分鐘。藉由添加7 μL 11×DNP-BSA刺激細胞，且在37℃/6% CO2下培育30分鐘。收集培養基，且藉由添加70μL 0.05% Triton X-100之HBSS溶液(含1.8 mM CaCl2)來製備細胞溶胞物。量測培養基與細胞溶胞物中β-己醣胺酶之含量。藉由向10 μL樣本(條件培養基或細胞溶胞物)中添加40 μL含1 mM對硝基苯基-乙醯基-葡糖醯胺受質之0.05 M檸檬酸鈉(pH 4.5)，在37℃下培育60分鐘，接著添加100μL 0.05 M碳酸鈉/0.05 M碳酸氫鈉(pH 10.5)，充分混合且讀取405 nm下之吸光度來進行β-己醣胺酶檢定。如下計算所釋放之β-己醣胺酶之百分比：A405(培養基)/[A405(培養基)+A405(溶胞物)]。將抑制經媒劑處理之細胞中所釋放之50% β-己醣胺酶的濃度計算為IC50值。
實例72：細胞激素自T細胞釋放之活體外檢定 細胞：
Jurkat E6-1細胞獲自ATCC且在37℃/6% CO2下維持於含10% FBS之完全培養基中。
檢定：
進行檢定前一天，將Jurkat T細胞以每孔1.5×105個細胞之密度塗於96孔板中之90 μL含1.8 mM CaCl2及1.75%胎牛血清(FBS)之HBSS緩衝液中，持續3小時。添加10 μL在HBSS中製備之10×測試化合物，且在37℃/6% CO2下培育10分鐘。藉由添加10 μL 11×PHA/TPA(27.5 μg/mL PHA/880 nM TPA)刺激細胞，且在37℃/6% CO2下培育20小時。第二天，收集上清液，且根據製造商之方案由ELISA檢定IL-2含量。將抑制經媒劑處理之細胞中所分泌之50% IL-2的濃度計算為IC50值。
實例73.式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物、CSA或雷帕黴素(Rapamycin)於小鼠足掌DTH中之劑量反應效應
目的：測定在敏化期間以及誘導階段進行給藥時，測試化合物對足掌中mBSA誘導之DTH反應的劑量反應效應。
動物：雄性瑞士韋伯斯特小鼠(Swiss Webster Mice)在研究開始時重約20-25公克。
材料：甲基化BSA(Sigma)弗氏完全佐劑(Freund's complete adjuvant，Difco)加上補充性結核分枝桿菌(M. tuberculosis)H37 R A(Difco)。
一般研究設計：
以異氟醚(Isoflurane)麻醉小鼠，且在尾巴基部(D0，D07)皮內注射0.1 ml抗原。藉由於無菌水中製成4 mg/l1溶液來製備抗原。藉由手動混合將等體積的添加有4 mg/ml MTB之抗原與弗氏完全佐劑(MTB添加至油中之後音波處理5分鐘)乳化，直至此材料之珠粒當置於水中時保持其形態為止。第0天開始以測試化合物處理，每日一次(間隔24小時)且持續至第10天，屆時完成攻毒。
第10天，向動物右後足掌中注射20 μl 10 mg/ml mBSA。向5隻未敏化雄性動物之足掌中注射mBSA。24小時後(第11天)，在中間踝部與外側踝部切斷右後爪及左後爪，且稱重，且測定注射抗原所引發之重量差異。
統計分析。使用司徒頓氏t檢驗(Student's t test)或採用杜奈特氏事後檢驗(Dunnett's post test)之ANOVA分析各組之爪重量(平均值±SE)的差異。統計顯著性設定為p0.05。
預期式(I)-(VIIA)化合物在此模型中有效。
實例74：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於大鼠中之藥物動力學資料
在25% PEG400/20%乙醇/55% H2O媒劑中經口投與之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於大鼠中之生物可用性及血漿藥物動力學特性。向重約250-300公克之雄性史泊格多利大鼠(Sprague-Dawley rat)(每組3隻大鼠)投與兩個處理組：1)靜脈內給藥組，2 mg/kg；及2)經口給藥組，10 mg/kg。各組收集至多10個時間點。典型時間點為：給藥前、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、12小時及24小時。在各時間點經由頸靜脈套管收集至多300 μL全血。將全血收集至含有抗凝血劑之微量離心管中，且在微量離心機中以5000 rpm離心5分鐘，隨後將血漿轉移至清潔的微量離心管中。對血漿樣品進行生物分析。
實例75：大鼠哮喘模型-參看圖4
製備敏化及攻毒溶液
敏化溶液：在PBS中製備1% OVA溶液(1 g OVA溶解於100 mL PBS中。最終濃度為10 mg/mL)。將6 mL 1% OVA溶液及54 mL礬溶液以1:9之比率添加至小瓶中，產生溶液，將其在37℃下於水平震盪器上震盪30分鐘。
攻毒溶液：在PBS中製備1% OVA溶液(1 g OVA溶解於100 mL PBS中。最終濃度為10 mg/mL)。
大鼠敏化與攻毒：將50隻動物隨機分成5組(n=10隻/組)。第1天、第2天及第3天，藉由腹膜內注射(每隻大鼠1 mL)敏化溶液使第2組、第3組、第4組及第5組中之大鼠敏化。第1天、第2天及第3天，第1組中之大鼠藉由腹膜內注射接受1 mL PBS。第21天，使用大規模給藥系統(mass dosing system，Buxco)以攻毒溶液對第2組、第3組、第4組及第5組中之大鼠進行攻毒，持續20分鐘。以PBS對第1組中之大鼠進行攻毒。
體重量測：第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天、第21天及第22天將動物稱重。在Biobook中即時記錄各動物之體重且記錄保存於封存資料庫中。將體重錄入Excel試算表中，用於測定各動物之給藥體積。
藥物投與：根據以下給藥方案投與測試化合物及參考藥物：第1組(假敏化-媒劑2組)，第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天及第21天(第21天，在PBS攻毒之前2小時)每天兩次經口投與媒劑2(22.5% PEG400/1.25% Tween-80/1.25% PVP40/75% CMC(1%))；第2組(OVA敏化-媒劑2組)，第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天及第21天(第21天，在OVA攻毒之前2小時)每天兩次經口投與媒劑2；第3組(參考藥物組)，第18天、第19天、第20天及第21天(第21天，在OVA攻毒之前2小時)每天兩次經口投與含***(0.3 mg/kg)之媒劑1(0.5% CMC)；第4組，第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天及第21天(第21天，在OVA攻毒之前2小時)每天兩次經口投與一次劑量之含測試化合物(57 mg/kg)之媒劑2；第5組，第14天、第15天、第16天、第17天、第18天、第19天、第20天及第21天(第21天，在OVA攻毒之前2小時)每天一次經口投與一次劑量之含測試化合物(57 mg/kg)之媒劑。
樣品收集：第22天，藉由腹膜內注射1%戊巴比妥鈉(pentobarbital sodium)(60 mg/kg)來麻醉動物。在戊巴比妥麻醉下將來自腹主動脈之血液樣品收集至EDTA-K2管中。
在對血液取樣之後，隨即藉由頸椎脫臼法處死動物。首先，經由氣管套管以3 ml PBS(含有1% FBS)灌洗肺。接著再重複該過程兩次，每次使用5 mL PBS(含有1% FBS)。將BALF儲存於冰上，且與後續灌洗液保持隔開。將來自3次灌洗之細胞集結塊彙集在一起，且調整至15 ml體積以供細胞計數。使用血球計及錐蟲藍排阻檢定估算BALF中之細胞總數。接著在4℃下以300×g使BALF離心5分鐘，且使細胞再懸浮於PBS(含有1% FBS)中以供製備塗片。藉由稀釋細胞(至約107個細胞/毫升)且將等分試樣(100 μl)吸移至細胞離心機樣品室中來製備塗片，且以800 rpm離心5分鐘。在空氣中乾燥載片，於甲醇中固定1分鐘，接著在瑞氏染色溶液(Wright's stain solution)中染色(1分鐘)，隨後在吉氏染色溶液(Giemsa stain solution)中染色(7分鐘)，以區分嗜伊紅血球、嗜中性白血球、巨噬細胞及淋巴細胞。在光學顯微鏡下計數得出每個塗片總共200個細胞。
將所有血液樣品收集於EDTA-K2管中。分離血漿後，將0.5 mL血漿分成3個等分試樣且儲存於-80℃下。
實例76：測試化合物於大鼠膠原蛋白誘發之關節炎(CIA)模型中之作用-參看圖3
目的：測定藉由每日一次經口給藥而投與之測試化合物抑制大鼠中發展成II型膠原蛋白關節炎之發炎、血管醫形成、軟骨損壞及骨骼再吸收的功效。
動物：雌性路易斯大鼠(Lewis rat)(Charles River)，在研究開始時重125-150 g。第10天及第11天向大鼠注射膠原蛋白以獲得可靠反應(solid responder)。四隻未免疫動物充當正常對照。
材料：測試化合物、II型膠原蛋白、弗氏不完全佐劑、乙酸。在22.5% PEG400/1.25% Tween80/1.25%聚乙烯吡咯啶酮40/0.75%羧甲基纖維素中製備濃度為10 mg/ml之測試化合物以用於5 ml/kg、50 mg/kg給藥。藉由於0.01 N乙酸中製成4 mg/ml溶液來製備膠原蛋白。藉由手動混合使等體積之膠原蛋白及弗氏不完全佐劑乳化，直至此材料之珠粒當置於水中時保持其形態為止。
一般研究設計：動物(對於關節炎，10隻大鼠/組；對於正常對照，4隻大鼠/組)。
以異氟醚麻醉關節炎組中之動物，且進行膠原蛋白注射(D0)；各動物獲得散佈於背部3個皮下部位處之400 μl混合物。第6天(D6)，如先前一般，再次麻醉動物，且進行散佈於背部3個皮下部位處之200 μl混合物的二次膠原蛋白注射。
第0天，使用10 mg/ml口服溶液(對於50 mg/kg給藥)用之5 ml/kg給藥體積以12小時間隔(每日兩次)或24小時間隔(每日一次)開始進行測試化合物的經口給藥。第0天、第3天、第6天及第9-17天將關節炎大鼠稱重，且在第9天至第17天開始每天用測徑規量測踝部。第17天獲得關節炎組之最終體重。第17天，麻醉所有動物以最終抽取血液，接著施以無痛致死術。隨後，移除後爪及膝蓋，將後爪稱重，接著(與膝蓋一起)置於福馬林(formalin)中，處理以供顯微鏡檢查。亦移除肝臟、脾臟及胸腺及腎臟，修剪附生組織且稱重。將腎臟保持於福馬林中以供組織病理學檢查。
第16天進行藥物動力學取樣。
實例77：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對大鼠中DNBS誘發之結腸炎的影響
程序：在使用前使重200±20 g之雄性韋斯特大鼠(Wistar rat)禁食24小時。藉由以12 cm長之導管直腸內滴入DNBS(2,4-二硝基苯磺酸，於0.5 ml 30%乙醇中20 mg)，隨後經導管緩緩注射空氣(2 ml)以確保溶液保留於結腸中，從而誘發遠端結腸炎。將動物分組，每組5隻動物。在DNBS滴入之前24小時及1小時，經由適當投藥途徑每日一次或每日兩次投與測試物質及媒劑，接著在其後連續投與6天。一個正常對照組僅以0.9% NaCl處理，而未進行DNBS攻毒。在最終每日兩次給藥後12小時及最終每日給藥後24小時後處死動物，且移出結腸並稱重。在實驗期間，每日監測體重、大便潛血及糞便稠度。此外，當在移出結腸之前打開腹腔時，結腸與其他器官之間的黏連解釋為移出並稱重各結腸之後存在結腸潰瘍(根據既定評分準則記錄宏觀損傷評分)。根據下式計算結腸-體重比：結腸(g)/BW×100。媒劑對照+DNBS組相對於媒劑對照組之比率的「淨」增加用作與個別處理組比較的基礎且表示為「Dec.(%)」(降低百分比)。結腸-體重比相對於經媒劑處理之對照組降低30%或30%以上(30%)視為顯著。
柳氮磺胺吡啶用作標準測試劑。(Hogaboam CM等人,An orally active non-selective endothelin receptor antagonist,bosentan,markedly reduces injury in a rat model of colitis. Eur J Pharmacol. 309: 261-269,1996；Yue G等人,In some embodiments,the 21-aminosteroid tirilazid mesylate ameliorates inflammatory bowel disease in rats. J Pharmacol Exp Ther. 276:265-270,1996。)
預期式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物在此模型中減輕結腸炎。
實例78.　式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物對大鼠之皮膚移植排斥反應的影響
程序。10週齡的無特異性病原體之路易斯大鼠及棕色挪威大鼠(Brown Norway rat)購自Charles River且在清潔習知條件下圈養。對動物進行處理且使其適應環境2週。皮膚供體：雌性棕色挪威大鼠，10週齡。皮膚接受者：雌性路易斯大鼠，10週齡。
殺死供體棕色挪威大鼠以充當5至8份皮膚移植物之供體。殺死棕色挪威大鼠之後直接將大鼠腹部皮膚剃毛，且獲取直徑尺寸為20 mm之皮膚移植物。移除結締組織之後，將此等移植物移植至路易斯大鼠上。藉由在異氟醚麻醉下將路易斯大鼠之上背部皮膚剃毛，藉由穿孔移除一塊直徑為15 mm之皮膚且以源自棕色挪威大鼠之皮膚移植物替換來進行此移植。
在研究期間，使用Safil 6/0 violet(B Braun,Aesculap)縫合4-6次來固定各移植物，且以Paraffin Gauze Dressing BP(3×3 cm,Smith & Nephew)、一塊紗布及醫藥膠帶覆蓋。此改適使移植物因不同於排斥反應之原因而發生不穩定的機會降至最低。
在所有狀況下，以繃帶保護移植物；在6天後移除此等繃帶，從而能夠每日檢查移植物。
藉由評估發炎(發紅)及壞死(移植物變硬及變黑)之第一徵象來監測排斥反應。
實例79：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於活動性類風濕性關節炎患者中之安全性及功效的II期臨床試驗
此II期試驗之目的在於研究單次及重複靜脈內輸注式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於活動性類風濕性關節炎患者中之安全性、耐受性、PK、PD及功效。
患者：入選個體應為年齡介於18歲與75歲之間的男性及女性
準則 ：
納入準則：
‧　所有個體必須使用可接受之避孕法以確保在研究過程中及對男性給藥後至少12週及對女性給藥後32週不會發生懷孕；
●除體重在55 kg至95 kg之範圍內以外，身體質量指數亦在包括18.5 kg/m2至包括35 kg/m2之範圍內；
●個體必須能夠提供知情同意書且能遵守研究要求及時間表；
●個體必須具有根據美國風濕病學院(American College of Rheumatology，ACR)之1987修正準則對RA的診斷；
●在篩選時及給藥前，個體之DAS28疾病活動性評分必須大於4.2；
●在篩選時及給藥前，個體之CRP血清含量必須>/0.5mg/dl或ESR含量必須為28 mm/h；
●個體過去未接受任何生物療法，包括用於治療類風濕性關節炎之生物製劑；
●個體必須具有肝功能測試，包括篩選時丙胺酸轉胺酶(ALT)及天門冬胺酸轉胺酶(AST)在1.5倍正常值上限(ULN)內，且鹼性磷酸酶(ALP)在3倍ULN內。篩選時，患者之總膽紅素亦必須在ULN內；
●在篩選之前，個體必須已接受甲胺喋呤持續至少3個月且必須進行甲胺喋呤穩定給藥(至多25毫克/週)持續至少8週，且願意在整個研究中保持此給藥；
●若除甲胺喋呤以外亦服用柳氮磺胺吡啶，則在篩選之前個體必須穩定給藥持續至少4週，且願意在整個研究中保持此給藥；
●　若除甲胺喋呤以外亦服用羥氯喹或氯喹，則在篩選之前個體必須穩定給藥持續至少3個月，且願意在整個研究中保持此給藥；
●　進行其他口服抗風濕病療法(可包括非類固醇消炎藥(NSAID)、COX-2抑制劑、口服糖皮質激素(例如潑尼龍(每天約10毫克))之彼等個體在篩選之前必須進行穩定給藥療程持續至少4週，且願意在整個研究中保持此療程。接受肌肉內糖皮質激素(例如甲潑尼龍(每月約120毫克))之個體在篩選之前必須進行穩定給藥療程持續至少3個月，且願意在整個研究中保持此療程；
●　個體先前必須進行葉酸鹽補充劑穩定給藥(每週5毫克)持續至少4週。
排除準則：
●　在篩選醫學評估、實驗室檢查(例如血液學參數在正常界限外)或ECG(12導(Lead)或霍爾德(Holter))時鑑別出任何臨床相關異常；
●　在篩選時，個體具有陽性B型肝炎表面抗原或C型肝炎抗體結果；
●　在過去6個月中，個體具有一個以上誘因之高肝功能測試病史(ALT、AST及ALP>3×正常值上限(ULN)；總膽紅素>1.5×ULN)；
●　先前與結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)接觸或過去由結核分枝桿菌引起感染；
●　個體具有急性感染；
●　個體具有重複、慢性或機會性感染病史，就調查員及/或GSK醫學監測員之觀點而言，此使個體作為此試驗之參與者處於不可接受之風險中；
●　個體具有惡性疾病病史，但手術癒合之基底細胞癌或子宮頸癌癒合之女性(之前2年以上)除外；
●　個體具有人類免疫缺乏病毒(HIV)或其他免疫缺乏疾病病史；
●　個體之計算肌酸酐清除率小於50 ml/min；
●　個體患有顯著心臟、肺部、代謝、腎臟、肝臟或胃腸病況，就調查員及/或GSK醫學監測員之觀點而言，此使個體作為此試驗之參與者處於不可接受之風險中；
●　個體在篩選1個月內已服用環孢靈、來氟米特(leflonomide)、環磷醯胺或硫唑嘌呤。過去服用環孢靈、來氟米特、環磷醯胺或硫唑嘌呤之個體必須已自所有藥物相關不良事件中恢復；
●　個體在篩選前1個月內已服用金鹽或d-青黴胺(d-penicillamine)。過去服用金鹽或d-青黴胺之個體必須已自所有藥物相關不良事件中恢復；
●　個體在篩選1個月內已接受關節內糖皮質激素；
●　最近有出血病症、貧血、消化性潰瘍疾病、吐血或胃腸出血病史；
●　具有血液病或後天血小板病症病史之個體，包括藥物誘發之血小板減少症、急性特發性血小板減少症或馮威里氏病(von Willebrand's disease)；
●　具有已知顱內出血風險之個體，包括在過去12個月內進行過中樞神經系統(CNS)手術、動脈血管畸形、動脈瘤、在6個月內發生過嚴重閉合性頭部創傷，或調查員及/或醫學監測員認為相關的任何其他意外事件；
●　個體之Hb<10公克/分升(dL)且血小板計數<150×109/公升(L)；
●　給藥前56天內獻血超過500 ml；
●　男性個體不願意避免與懷孕或哺乳期女性***；或者，若女性可能在給藥後至少12週內懷孕，但男性個體除了使其女性伴侶使用另一形式之避孕法(諸如宮內節育裝置(IUD)、具有殺***劑之***隔膜、口服避孕藥、可注射孕酮、左炔諾孕酮之皮下植入物、或輸卵管結紮)以外不願意使用具有殺***劑之避孕套；
●　如研究約束部分所定義，育齡期女性個體不願意使用適當避孕法。必要時，將批准非育齡期女性(亦即停經後或手術絕育，例如輸卵管結紮或子宮切除或雙側卵巢切除)。停經後狀態將由篩選時血清促濾泡素(FSH)及***濃度來確認。手術絕育將定義為證明已經子宮切除、輸卵管結紮或雙側卵巢切除之女性；
●　個體在篩選前12個月內具有濫用藥物的歷史；
●　超過平均每週攝入21單位以上或平均每日攝入3單位以上(男性)或平均每週攝入14單位以上或平均每日攝入2單位以上(女性)的常規酒精消耗史。經常性在24小時內消耗12單位以上酒精之個體亦將排除在外。1單位等效於半品脫(pint)(220 ml)啤酒/以上或1(25 ml)量酒器(measure)烈酒或1杯(125 ml)葡萄酒；
●　篩選時懷孕測試呈陽性或處於哺乳期；
●　之前3個月或5個半衰期(甚至更長時間)內參與使用任何研究性藥物之試驗。
研究設計：此為隨機化、雙盲、安慰劑對照應變性、劑量發現研究，用以研究單次及重複靜脈內輸注式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於活動性類風濕性關節炎患者中之安全性、耐受性、PK、PD及功效。研究分為2個部分：部分A為應變性、劑量發現階段，其將提供單次靜脈內輸注時的安全性、耐受性、PK及PD。部分B為重複劑量階段，其將提供重複靜脈內輸注所選劑量之後的安全性、耐受性、PK、PD及功效。
主要結果量度：
●　式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物單次遞增給藥之後1個月時及式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物三次重複給藥之後3個月時的安全性及耐受性。1個月時式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之臨床功效(DAS28評分)
次要結果量度：
●單次及重複靜脈內給藥之後的加權平均DAS28
●單次及重複靜脈內給藥之後式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之血漿PK參數，包括游離及經結合之式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物的(血清)濃度、AUC(0-∞)、Cmax、清除率、分佈體積及積聚率
●單次及重複靜脈內給藥之後的DAS28及EULAR反應準則
●單次及重複靜脈內給藥之後的ACR20/ACR50/ACR70反應
●使用28關節計數評估之腫脹關節數目
●使用28關節計數評估之觸痛/疼痛關節數目
●個體疼痛評估
●關節炎病況之醫師整體評估
●關節炎病況之患者整體評估
●功能失能指數(健康評估問卷(Health Assessment Questionnaire))
●C反應性蛋白(CRP)
●ESR
●整體疲勞指數
●HAQ失能指數
●單次及重複靜脈內給藥之後的藥效學生物標記
●血漿暴露模型之臨床終點變化的特徵性AUC50及EC50，如S型Emax及間接反應PK/PD模型所評估。
●　免疫原性(人類抗式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物抗體)
實 例80：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於患有嚴重、頑固、斑塊型牛皮癬之患者中之安全性及功效的II期臨床試驗
此II期試驗之目的在於研究式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於患有嚴重、頑固、斑塊型牛皮癬之患者中的安全性、功效及耐受性。
患者：入選個體應為年齡介於18歲與75歲之間的男性及女性。
準則：
納入準則：
●　患者患有嚴重、頑固、斑塊型牛皮癬且至少一種全身性療法(為達成此研究之目的，將補骨脂素與紫外光A視為全身性療法)失敗；
●　患者之牛皮癬已涉及至少10% BSA；
●　患者之PSGA評分為4或4以上；
●　患者若為女性則手術絕育或停經後2年，或若為育齡期則當前使用醫學上接受之避孕方法，且同意在研究持續期間繼續使用此方法(且在參與研究後持續30天)。可接受之避孕方法包括：節制、類固醇避孕藥(口服、經皮、植入或注射)聯合屏障法或子宮內裝置(IUD)；
●患者若為男性則手術絕育，或若能夠生育後代則當前使用批准之節育法，且同意在研究持續期間繼續使用此方法(且在服用最後一次劑量的式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之後持續60天，因為對***發生可能產生影響)；
●患者必須願意且能夠遵守研究程序及約束，且願意如此研究所規定回到診所進行追蹤評估。
排除準則：
●患者在研究處理計劃第1天之前4週內已接受全身性牛皮癬治療處理(特定言之，類視黃素、甲胺喋呤、環孢靈A、依那西普、依法珠單抗(efalizumab)、其他生物劑或其他免疫調節劑)，2週內接受基於UV之療法，或6週內接受阿法賽特(alefacept)；
●患者在研究處理計劃第1天之前1週(7天)內已接受有效CYP3A4抑制劑處理，包括環孢靈、克黴唑、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑、伏立康唑(voriconazole)、紅黴素(erythromycin)、克拉黴素(clarithromycin)及醋竹桃黴素(troleandomycin)、人類免疫缺乏病毒(HIV)蛋白酶抑制劑或奈法唑酮(nefazodone)；
●患者當前接受華法林(warfarin)；
●　患者對式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之任何組分過敏。
●　患者具有以下一或多個血清化學值，如篩選隨訪(隨訪1)時所測定：
●　膽紅素含量大於2倍正常值上限(ULN)；
● ALT或AST含量大於2倍ULN；
●　血清肌酸酐含量大於2 mg/dL；
●　患者當前需要使用蛋白酶抑制劑治療HIV；
●　患者正服用臨床診斷胃腸道潰瘍之藥物或在前3週已經歷黑糞症或吐血；
●　患者為懷孕或哺乳期女性；
●　患者在研究處理計劃第1天之前4週內已接受研究性藥物治療。
研究設計：此為式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於患有嚴重、頑固、斑塊型牛皮癬之患者中之功效、安全性及耐受性的探索性、開放標記、非隨機化、劑量遞增研究。
實例81：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物預防腎臟移植後急性排斥反應之安全性及功效的II期 臨床試驗
腎臟移植後的標準免疫抑制治療為他克莫司、黴酚酸嗎啉乙酯及潑尼龍之組合。使用此方案，移植後的前6個月內急性排斥反應之發病率可降至約20%。目前主要挑戰在於藉由預防慢性同種異體腎病變(CAN)而改良長期結果。因為急性排斥反應為CAN之有力預測因素，故急性排斥反應發病率的進一步降低可提高長期移植物存活率。此II期臨床試驗之目的在於研究式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物預防腎臟移植後急性排斥反應之有效性及安全性。
患者：入選個體應為年齡18歲及18歲以上之男性及女性
準則：
納入準則：
●　腎臟移植接受者；
●　簽名、註明日期及有證人見證的IRB批准之知情同意書；
排除準則：
●　懷孕；
● HLA一致之活供體；
●　溶血性尿毒癥候群作為原始腎臟疾病；
●　在先前移植中已復發的局灶節段性腎小球硬化；
●　先前兩次以上移植失敗及/或PRA>85%；
●　當前未經胰島素治療之糖尿病；
●　總白血球計數<3,000/mm3或血小板計數<75,000/mm3；
●　經B型肝炎、C型肝炎或HIV主動感染；
●　結核病病史。
研究設計：此為預防性使用式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之功效及安全性的隨機化、雙盲、安慰劑對照介入研究。一組將在移植時靜脈內接受單次劑量的式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物，且另一組接受安慰劑輸注。
主要結果：
●　測定在移植後的前6個月內活組織檢查確認之急性排斥反應的發病率及嚴重性
次要結果：
●　如6個月時內源性肌酸酐清除率所評價之腎臟功能
●　6個月時慢性同種異體腎病變之發生率
●　6個月時感染及惡性疾病之累積發病率
●　移植後的前6個月之醫學成本
●　患者及移植物存活率
實例82：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於活動性潰瘍性結腸炎(UC)患者中之安全性及耐受性的II期臨床試驗
此II期試驗之目的在於研究式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物方案於活動性潰瘍性結腸炎患者中之安全性、耐受性。
患者：入選個體應為年齡18歲及18歲以上之男性及女性
準則：
納入準則：
●　對活動性UC進行5-ASA療法且亦使用6-MP及/或皮質類固醇治療，或先前已使用AZA、6-MP或皮質類固醇治療且對其不可耐受；
●　研究藥物投與14天內進行內視鏡檢查時發現中度至嚴重疾病的6至10個點之梅友評分(Mayo score)(梅友評分為至少2)；
●　若在研究藥物投與之前根據以下時程投與藥物且若預期在研究期間不發生變化，則投與以下藥物之個體可加入研究中；
○　潑尼龍20毫克/日(或等效物)(在研究藥物投與之前，給藥必須穩定至少2週)；
○　5-ASA(在研究藥物投與之前，給藥必須穩定至少4週)；
○　AZA或6-MP(在研究藥物投與之前，給藥必須穩定至少3個月)；
○　直腸類固醇或5-ASA(在研究藥物之前，必須已穩定至少4週)；
●　使用直腸藥物之個體在乙狀結腸鏡檢查時必須具有20cm之可見疾病；
●　篩選實驗值必須滿足特定準則：
○　女性必須為停經後(無月經>12個月)或手術絕育(例如藉由子宮切除及/或雙側卵巢切除)或必須在研究藥物投與之前至少4週使用有效避孕法(例如口服避孕藥、子宮內裝置(IUD)、避孕套與殺***雙屏障法)，且同意在其參與研究之持續時間內繼續避孕；及
○　性能力活躍之男性個體在研究持續期間必須使用屏障避孕法
排除準則：
●　在研究藥物投與之前8週內使用抗TNF療法；
●　在研究藥物投與之前4週內使用任何實驗療法；
●　在研究處理之前8週內以使用任何單株抗體或基於免疫球蛋白之融合蛋白進行先前治療；
●　存在庫欣氏症候群(Cushing's syndrome)；
●　可能需要結腸切除之毒性巨結腸或爆發性疾病；
●　禁忌結直腸鏡檢查或乙狀結腸鏡檢查；
●　原發性或繼發性免疫缺乏；
●　除UC以外之自體免疫疾病，休格連氏症候群或甲狀腺功能低下除外；
●　惡性疾病病史，經充分治療且癒合之皮膚基底細胞或鱗狀細胞、或原位子宮頸癌除外；
●　嚴重精神疾病(接受適當管理之穩定抑鬱症個體將允許參與研究)；
●　急性或慢性感染跡象，如由以下證明：
●　糞便培養物對病原體及/或難養芽胞梭菌(Clostridium difficile)毒素呈陽性；
●　篩選胸部放射性攝影時發現諸如肺浸潤或腺病變；
●　當前治療肺結核感染、活動性TB之臨床或放射性證據，或對於北美洲個體而言，無先前預防之陽性PPD；
●　研究藥物投與之前3個月內出現帶狀疱疹；
●　活動性感染疾病，其在研究處理之前4週內需要靜脈內抗生素或在加入時需要口服抗生素；
● HIV或AIDS；
●　指示活動性或慢性感染之HBV或HCV陽性測試；
●　需要藥物之臨床上顯著心臟瓣膜病、不穩定心絞痛、6個月內產生心肌病、或充血性心臟衰竭；
●　需要主動療法之心律不整，臨床上不顯著或次要傳導異常除外；
●　需要藥物/治療之腦血管疾病病史；
●　抗凝血療法或已知出血病症；
●　需要主動療法之癲癇病症；
●　已知藥物或酒精濫用；
●　懷孕或哺育；
●　就主要調查員之觀點而言，將使研究藥物對個體具危險性或將使治療功效或安全性之說明模糊的任何潛在醫學病況；或
●　不能或不願意返回進行追蹤隨訪且遵守研究方案
主要結果量度：
●　與篩選時相比第57天梅友評分之變化
次要結果量度：
●　緩解率
研究設計：此為在患有活動性UC且經歷爆發之個體中式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物之II期、雙盲、安慰劑對照、隨機化、多劑量研究。所有個體在服用含5-ASA之藥物時將患有活動性疾病，且服用穩定劑量之皮質類固醇及/或硫唑嘌呤或6-巰基嘌呤，或先前已服用此等藥物但對其不可耐受。爆發定義為在接受研究藥物投與2週內進行內視鏡檢查時發現中度至嚴重疾病活動性的6至10之梅友評分(內視鏡梅友次評分為至少2)。所允許之伴隨藥物(含皮質類固醇、硫唑嘌呤(AZA)、6-巰基嘌呤(6-MP)及5-胺基水楊酸酯(5-ASA)之化合物)的劑量在研究過程中應保持恆定。個體將隨機分組以在第1天、第15天、第29天及第43天靜脈內接受安慰劑或式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物。將以規則時間間隔臨床觀察所有個體直至第85天，以供安全性、功效、藥物動力學及/或藥效學評估。在研究藥物最後一次給藥後70天，將聯繫所有個體。將藉由生命徵象量測、臨床實驗測試、身體檢查、免疫原性評估、胸部x射線、心電圖、及治療期緊急不良事件之發生率及嚴重性來評估安全性。將由與篩選時相比第57天梅友評分之變化來對活動性進行主要臨床評估。次要終點包括由第57天之梅友評分測定緩解率、評估黏膜癒合及IBDQ評分相對於基線之變化。
實例83：式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於多發性硬化症患者中之安全性及功效的II期臨床試驗
此II期試驗之目的在於研究式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物於復發-緩解型多發性硬化症患者中之安全性、功效及耐受性。
患者：入選個體應為年齡介於18歲與65歲之間的男性及女性。
準則：
納入準則：
●　具有復發緩解型多發性硬化症之明確診斷
●　具有至少一種以下病史：a.在篩選之前2年內但並非之前1個月內MS復發至少兩次。b.在篩選之前6個月內但並非之前1個月內MS復發1次
排除準則：
●　患有CNS疾病(例如CNS淋巴瘤、全身性紅斑性狼瘡症)
●　顯著延髓涉及於MS或其他神經缺陷
●　患有褥瘡
●　在篩選3個月內接受免疫調節療法
主要結果量度：
●至第23週進行頭顱MRI時所發現之新Gd增強T1加權損傷的累積數目
次要結果量度：
●至第23週MS之復發總次數；第23週擴展失能狀態量表(Expanded Disability Status Scale，EDSS)評分相對於基線之變化
研究設計：此為式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物多次皮下注射於復發-緩解型多發性硬化症患者中之II期、雙盲、安慰劑對照、隨機化、劑量範圍研究。患者將在第0週、第1週、第2週、第3週、第7週、第11週、第15週及第19週或第100週接受皮下注射式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IV A)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物或安慰劑。
醫藥組合物
非經腸組合物
為製備適於藉由注射投與之非經腸醫藥組合物，將100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物溶解於DMSO中，接著與10 mL 0.9%無菌生理食鹽水混合。將混合物併入適於藉由注射投與之單位劑型中。
在另一實施例中，混合以下成分以形成可注射調配物：
組合除水以外之所有上述成分並攪拌，且必要時略微加熱。接著添加足量水。
口服組合物
為製備供經口傳遞之醫藥組合物，將100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IV A)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與750 mg澱粉混合。將混合物併入適於經口投與之口服劑量單位中，諸如硬明膠膠囊。
在另一實施例中，精細混合以下成分且壓成單刻痕錠劑。
在另一實施例中，精細混合以下成分且裝載至硬殼明膠膠囊中。
在另一實施例中，混合以下成分以形成供經口投與之溶液/懸浮液：
舌下(硬***錠)組合物
為製備供經頰傳遞之醫藥組合物(諸如硬***錠)，混合100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與420 mg混合有1.6 mL輕質玉米糖漿、2.4 mL蒸餾水及0.42 mL薄荷提取物之粉糖。緩緩摻合混合物且傾倒入模具中以形成適於經頰投與之***錠。
吸入組合物
為製備供吸入傳遞之醫藥組合物，將20 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與50 mg無水檸檬酸及100 mL 0.9%氯化鈉溶液混合。將混合物併入適於吸入投與之吸入傳遞單元中，諸如噴霧器。
直腸凝膠組合物
為製備供直腸傳遞之醫藥組合物，將100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與2.5 g甲基纖維素(1500 mPa)、100 mg對羥基苯甲酸甲酯、5 g甘油及100 mL純水混合。接著將所得凝膠混合物併入適於直腸投與之直腸傳遞單元中，諸如針筒。
栓劑調配物
藉由混合式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與WitepsolTM H-15(飽和植物脂肪酸之三酸甘油酯；Riches-Nelson,Inc.,New York)來製備總重量為2.5 g之栓劑，且其具有以下組成：
局部凝膠組合物
為製備醫藥局部凝膠組合物，將100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與1.75 g羥丙基纖維素、10 mL丙二醇、10 ML十四烷酸異丙酯及100 mL純乙醇USP混合。接著將所得凝膠混合物併入適於局部投與之容器中，諸如管。
眼用溶液組合物
為製備醫藥眼用溶液組合物，將100 mg式(I)、(IA)、(II)、(IIA)、(III)、(IIIA)、(IV)、(IVA)、(V)、(VA)、(VI)、(VIA)、(VII)或(VIIA)化合物與0.9 g NaCl在100 mL純水中混合，且使用0.2微米過濾器過濾。接著將所得等張溶液併入適於眼部投與之眼用傳遞單元中，諸如滴眼液容器。
本文所述之實例及實施例僅為達成說明性目的，且在一些實施例中，各種修改或變化欲納入本發明之範圍及隨附申請專利範圍之範疇內。
圖1概述ICRAC通道路徑。
圖2展示在進入之後即刻、在活化ICRAC之前、及在因細胞內鈣池耗盡而完全活化ICRAC之後5分鐘，於穩定地過度表現人類Orail及STIM 1之細胞中對電壓刺激作出反應的典型ICRAC跡線。
圖3展示(A)測試化合物1-鹽及(B)本文所述之測試化合物2於膠原蛋白誘發大鼠之關節炎(CIA)模型中之結果。
圖4展示本文所述之測試化合物於大鼠哮喘模型中之結果。
(無元件符號說明)

Claims (9)

  1. 一種化合物，其具有式(VIA)結構： 其中：R'1為、、或 ；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為CR3或N；Y係獨立地選自CR9或N；R2為C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、C6-C10芳基或C2-C9雜芳基；其中C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、C1-C4伸烷基C2-C8雜環烷基、C6-C10芳基或C2-C9雜芳基經至少一個R3取代；R3係獨立地選自H、F、D、Cl、Br、I、-CN、-NO2、-OH、-CF3、-OCF3、-OR5、C1-C6烷基、C3-C8環烷基、C1-C6雜烷基、C1-C6鹵烷基、C2-C8雜環烷基、未經取代之C6-C10芳基、未經取代之O-C6-C10芳基、未經取代之C2-C9雜芳基； n為選自0-2之整數；R9係獨立地選自H、D、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；或連接於同一碳原子之兩個R9形成氧雜環丁烷環；R10係選自鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、-OR5、-OCF3、C1-C6羰基烷基或-CF3；R5係獨立地選自H、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C3-C8環烷基、苯基及苯甲基；其中雜芳基及雜環烷基基團含有一或多個選自氮、氧及硫之環雜原子；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中R'1為；L2為-NH-C(=O)-或-C(=O)NH-；X為N；Y為CR9；且R2為經至少一個R3取代之C6-C10芳基。
  3. 如請求項2之化合物，其中C6-C10芳基為苯基。
  4. 如請求項3之化合物，其中苯基經至少一個選自Cl、Br、F、I、CF3、C1-C6烷基或OC1-C6烷基之R3取代。
  5. 如請求項4之化合物，其中C1-C6烷基為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。
  6. 如請求項1之化合物，其中R10為鹵素。
  7. 一種醫藥組合物，其包含醫藥學上可接受之稀釋劑、賦 形劑或黏合劑，及如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
  8. 一種如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造於治療可因抑制鈣池操縱鈣通道活性而受益之哺乳動物之疾病、病症或病況之藥物。
  9. 如請求項8之用途，其中哺乳動物之該疾病、病症或病況係選自涉及發炎之疾病/病症、絲球體腎炎、葡萄膜炎、肝臟疾病或病症、腎臟疾病或病症、慢性阻塞性肺病、類風濕性關節炎、發炎性腸病、血管炎、皮炎、骨關節炎、發炎性肌病、過敏性鼻炎、***炎、間質性膀胱炎、硬皮病、骨質疏鬆症、濕疹、器官移植排斥反應、同種異體或異種移植、移植物排斥反應、移植物抗宿主疾病、紅斑性狼瘡症、I型糖尿病、肺纖維化、皮肌炎、甲狀腺炎、重症肌無力、自體免疫溶血性貧血、囊腫性纖維化、慢性復發性肝炎、原發性膽汁性肝硬化、過敏性結膜炎、肝炎及異位性皮炎、哮喘、牛皮癬、多發性硬化症、休格連氏症候群(Sjogren's syndrome)及自體免疫疾病或病症。
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