TWI547560B - 大豆品系１２７及其相關方法 - Google Patents
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Description
本發明大體而言係關於分子生物學領域且係關於增加植物對乙醯羥基酸合成酶抑制性除草劑之耐受性的組合物及方法以及用於雜草控制之組合物及方法。
本申請案主張2009年1月7日申請之美國臨時申請案第61/143,049號之權利，該臨時申請案之全部內容係以引用之方式併入本文中。
大豆(Glycine max)為全世界許多地區之重要作物。生物技術方法已被應用於大豆以改良產物之農藝性狀及品質。在大豆生產中重要之一種此類農藝性狀為除草劑耐受性，特定而言，對草甘膦(glyphosate)除草劑之耐受性。隨著使用草甘膦耐受性大豆之不斷增加，已出現對草甘膦耐受之雜草。因此，對可耐受用於管理雜草之除草甘膦以外之除草劑的大豆植物存在需求。
植物(諸如大豆)中之轉殖基因(諸如提供除草劑耐受性之轉殖基因)的表型表現受該基因本身之結構與其在植物基因組中之整合位置的影響。同時，轉殖基因(呈外來DNA形式)在基因組中不同位置處之存在會以不同方式影響植物之總體表型。藉由基因操作將備受商業關注之性狀以農藝學或工業方式成功引入植物中可視不同因素而定為一項冗長程序。使經基因轉型之植物實際轉型及再生僅為一系列選擇步驟中之第一步，該等選擇步驟包括廣泛基因特徵化、育種及田間試驗評估，最終導致選出良種品系(elite event)。
因為在作物改良中對基因修飾之使用增加，所以能夠明確偵測及/或識別特定轉殖基因品系正變得日益重要，以改良轉殖基因向市售品種中之基因滲入，以分離GMO與非GMO產品，且識別專用材料。對研發快速且簡單而無需廣泛實驗室配置之用於偵測特定轉殖基因品系的方法仍存在需求。另外，偵測特定品系之方法將有助於遵守要求上市前許可及標識源自重組作物植物之食品的法規，或有助於用於環境監測、監測田間作物之性狀，或監測源自作物收穫物之產物，以及有助於用於確保當事人主體遵守法規或契約條款。
在一實施例中，本發明提供一種控制耕種區域之雜草的方法，其包含：向具有大豆植物之耕種區域施用有效量之非選擇性除草劑，該大豆植物包含品系127核酸分子。
在另一實施例中，本發明提供一種控制作物田間之草甘膦耐受性雜草的方法，其包含：向具有大豆植物之作物田間施用有效量之AHAS抑制性除草劑，該大豆植物包含品系127核酸分子。
在另一實施例中，本發明提供一種經分離核酸分子，其具有SEQ ID NO:1之位置1312至6069之核酸序列。
在另一實施例中，本發明亦提供一種具有異源核酸分子之轉殖基因大豆植物，該異源核酸分子具有SEQ ID NO:1之核苷酸1302至6079之核酸序列。
本發明亦提供一種經分離核酸引子對，其包含能夠擴增品系127核酸分子之第一及第二經分離核酸分子。
在另一實施例中，本發明提供一種識別生物樣本中之品系127核酸分子的套組，其包含：第一及第二核酸引子，其中該第一及該第二核酸引子能夠擴增品系127核酸分子。
本發明亦提供一種識別品系127大豆植物之方法，其包含：(a)形成包含含有大豆DNA之生物樣本與能夠擴增品系127特異性核酸分子之第一及第二核酸引子的混合物；(b)使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增品系127特異性核酸分子之條件下反應；及(c)偵測經擴增之片段核酸分子的存在，其中大豆品系127特異性核酸分子的存在指示該大豆植物為品系127大豆植物。
在另一實施例中，本發明提供一種識別具有品系127核酸分子之大豆植物的方法，其包含：(a)形成包含含有大豆DNA之生物樣本與能夠與品系127特異性核酸分子雜交之核酸分子探針的混合物；(b)使該混合物在允許該核酸分子探針與品系127特異性核酸分子雜交之條件下反應；及(c)偵測該探針與該DNA之雜交，其中該核酸分子探針與該大豆DNA之雜交的存在指示品系127核酸分子的存在。
本發明進一步提供一種增加包含品系127核酸分子之大豆植物之產率的方法，該方法包含：向包含品系127核酸分子之一或多棵大豆植物及周圍區域施用有效量之AHAS抑制性除草劑，其中該AHAS抑制性除草劑減少雜草在該周圍區域之生長；及自該一或多棵大豆植物收穫種子。
在另一實施例中，本發明提供培育AHAS抑制性除草劑抗性大豆植物之方法，其包含：(a)使包含品系127核酸分子之大豆植物與第二大豆植物雜交；(b)自步驟(a)之雜交物獲得種子；(c)獲得該種子之DNA樣本；及(d)偵測該樣本中品系127核酸分子之存在，其中該品系127核酸分子之存在指示該種子能夠產生AHAS抑制性除草劑抗性大豆植物。
本發明亦提供一種大豆植物種子，其包含品系127核酸分子。
在另一實施例中，本發明提供偵測生物樣本中品系127核酸分子之存在的方法，其包含：(a)形成包含一種含有DNA之生物樣本與能夠擴增品系127特異性核酸分子之第一及第二核酸引子的混合物；(b)使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增包含品系127特異性核酸分子之核酸分子的條件下反應；及(c)偵測經擴增之核酸分子的存在，其中該品系127特異性核酸分子之存在指示該樣本含有品系127核酸分子。
在另一實施例中，本發明提供偵測生物樣本中之品系127核酸分子的方法，其包含：(a)形成包含一種含有DNA之生物樣本與能夠與品系127特異性核酸分子雜交之核酸探針的混合物；(b)使該混合物在允許該探針與品系127特異性核酸分子雜交之條件下反應；及(c)偵測經雜交之核酸分子的存在，其中該品系127特異性核酸分子之存在指示該樣本含有品系127核酸分子。
本發明亦提供一種偵測生物樣本中品系127***核酸分子之存在的方法，其包含：(a)形成包含含有DNA之生物樣本與能夠擴增品系127***核酸分子之第一及第二引子的混合物；(b)使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增包含品系127***核酸分子之核酸分子的條件下反應；及(c)偵測經擴增核酸分子之存在，其中該品系127***核酸分子之存在指示該樣本含有品系127***DNA。
在另一實施例中，本發明提供一種偵測生物樣本中品系127***核酸分子之存在的方法，其包含：(a)形成包含含有DNA之生物樣本與能夠黏接至該品系127***核酸分子之一區域之第一引子及能夠黏接至宿主細胞基因組中之側接核酸分子之第二引子的混合物；(b)使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子產生包含該品系127***核酸分子之片段之經擴增核酸分子的條件下反應；及(c)偵測該經擴增核酸分子之存在，其中該品系127***核酸分子片段之存在指示該樣本含有品系127***DNA。
在另一實施例中，本發明提供一種使大豆植物生長之方法，其包含：(a)提供包含品系127核酸分子之大豆種子；(b)在允許該種子發芽以產生包含品系127核酸分子之生長大豆植物的條件下，將該大豆種子種植於生長培養基中；及(c)使該生長培養基、種子或植物與除草組合物接觸，該除草組合物包含至少一種選自由咪唑啉酮除草劑、磺醯脲除草劑、其彼此之組合以及其與至少一種其他活性成份之組合組成之群的組份。
在另一實施例中，本發明提供一種偵測樣本中之品系127多肽的方法，其包含：自大豆植物獲得生物樣本；及對該樣本進行至少一種免疫檢定，其中該檢定能夠偵測品系127多肽。
本發明亦提供一種用於偵測生物分子之裝置，其包含：一具有一表面之固體支撐物；及附著於該固體支撐物之該表面的至少一種品系127診斷性分子。
本發明提供一種對AHAS抑制性除草劑(諸如咪唑啉酮除草劑、磺醯脲除草劑、***并嘧啶磺醯苯胺除草劑及/或嘧啶基氧基苯甲酸酯除草劑)表現耐受性之大豆植物。本發明之大豆植物含有經***核酸分子，其位於大豆基因組中之經特徵化位置處。亦提供用於所揭示大豆植物之方法及組合物。
在更詳細地描述本發明之前，首先定義下列術語。
如本文中所用，術語「大豆」及「大豆植物」意謂大豆(Glycine max)植物且包括可用大豆培育之所有植物種類。術語「大豆植物」包括植物部分。如本文中所用，術語「植物部分」包括植物細胞、植物器官、植物原生質體、可再生出植物之植物細胞組織培養物、植物愈傷組織、植物叢以及植物或植物部分(諸如胚芽、花粉、胚珠、種子、種莢、葉、花、分枝、果實、莖、根、根尖、花粉囊、子葉、胚軸及其類似者)中完整之植物細胞。穀粒意欲意謂出於除生長或繁殖物種以外之目的而由商業生長物產生之成熟種子。再生植物之後代、衍生物、變異體及突變體亦包括於本發明範疇內，其限制條件為此等部分包含品系127核酸分子。
「品系127核酸分子」係指包含SEQ ID NO:1之位置1312-6069之核酸序列的核酸分子；其藉由傳統植物育種獲得之變異體，該變異體可表現AHAS酶之經修飾形式，其中該AHAS酶之經修飾形式具有含有對應於位置653之天冬醯胺而非天然絲胺酸(S653N)的AHASL蛋白質，其中該AHAS酶之經修飾形式對通常會抑制野生型AHAS酶之酶活性的AHAS抑制劑展現耐受性；或此等核酸分子中之任一者之互補序列。品系127核酸分子可含有側接SEQ ID NO:1之位置1312-6069之其他序列(或對於變異體而言，側接5'及3'位置之其他序列)。
「品系127區域」係指至少包括品系127核酸分子之片段且指示品系127植物之核酸分子。品系127區域可包括5'及/或3'接合區、***DNA或***DNA之csr1-2重複與***DNA之其餘部分的接合區中之一或多者。同樣，5'及/或3'側接序列DNA可進一步包括於其中。
如本文中所用，術語「品系127特異性核酸分子」係指一種可有區別地識別或能夠有區別地識別樣本中之品系127核酸分子的核酸分子序列。品系127特異性核酸分子可包括在***DNA中由轉型事件所產生之接合區及獨特突變或重複。舉例而言，在PCR反應中使用具有SEQ ID NO:37及38之核酸序列的PCR引子會引起指示品系127核酸分子之擴增子擴增。
「品系127分子」係指源自品系127核酸分子、自品系127核酸分子獲得或由品系127核酸分子編碼之核酸分子、多肽分子及其他生物分子。
「品系127診斷性分子」係指可用於直接或間接偵測品系127核酸分子之分子。品系127診斷性分子包括可用於偵測品系127核酸分子或由該等核酸分子表現之多肽之方法中的核酸分子，諸如引子及探針；抗體及其結合位點保留片段(例如Fv、Fab、Fab'、F(ab')及H-域缺失型抗體)；多肽及其衍生物；核酸類似物；適體；及其類似者。
如本文中所用，「***DNA」係指經由轉型過程引入植物材料中之異源DNA且包括不同於用於如本文中所解釋之轉型之原始DNA的DNA。「品系127***核酸」及「品系127***DNA」係指具有SEQ ID NO:1之位置1312-6069之核酸序列的核酸分子(其不同於用於產生品系127之DNA，亦即圖12中所提供之pAC321構築體之6156 bp PvuII片段(SEQ ID NO:4))。
「品系127」植物、細胞、種子、植物部分或植物組織係指任何含有品系127核酸分子且較佳含有至少一種品系127特異性核酸之植物、細胞、種子、植物部分或植物組織。品系127植物包括含有具有SEQ ID NO:1序列之核酸分子的品系127-9大豆植物(諸如稱作BPS-CV127-9之大豆植物)。
術語「側接DNA」係指有機體(諸如植物)中天然存在之基因組DNA，其直接位於經***核酸分子上游或下游且與經***核酸分子相鄰。如本文中所用之「側接區」或「側接序列」係指具有至少10個、20個、50個、100個、200個、300個、400個、1000個、1500個、2000個、2500個或5000個或5000個以上鹼基對之序列，其直接位於原始外來***DNA分子上游(5')且與之相鄰，或直接位於原始外來***DNA分子下游(3')且與之相鄰。品系127之側接區之非限制性實例為SEQ ID NO:2及3中所示者以及其變異體與片段，其中SEQ ID NO:2表示SEQ ID NO:1之位置1-1311，且SEQ ID NO:3表示SEQ ID NO:1之位置6070-10,656。
引起外來***DNA隨機整合之轉型程序可產生個別轉型體，其含有為各轉型體所特有且對於各轉型體而言獨特之不同側接區。當經由傳統雜交將重組DNA引入植物中時，其側接區一般不會為由原始轉型體之側接區變化而來。個別轉型品系亦含有介於一段異源***DNA與基因組DNA之間，或2段基因組DNA，或2段異源DNA之間的獨特接合點。
「接合點」為2個特異性DNA片段接合之點，例如***DNA接合側接DNA之點。接合點亦存在於經轉型有機體中，其中2個DNA片段以由天然有機體中所見者有所改變之方式接合於一起。如本文中所用，「接合DNA」或「接合區」係指包含接合點之DNA。大豆品系127之DNA中之接合點的非限制性實例包括如例如SEQ ID NO:5及6中所示之序列，其中SEQ ID NO:5表示SEQ ID NO:1之位置1311-1312，且SEQ ID NO:6表示SEQ ID NO:1之位置6069-6070。
應瞭解，如本文中所用，術語「轉殖基因」包括所具有之基因型已因異源核酸之存在而改變的任何細胞、細胞株、愈傷組織、組織、植物部分或植物，包括最初有如此改變之彼等轉殖基因物，以及藉由有性雜交或無性繁殖由初始再生品系產生之彼等轉殖基因物。如本文中所用之術語「轉殖基因」不涵蓋藉由習知植物育種方法或藉由自然出現之事件(諸如隨機雜交受精、非重組病毒感染、非重組細菌轉型、非重組轉位(non-recombinant transposition)或自發突變)所引起之基因組變化(染色體或染色體外)。
「轉型」係指將核酸片段轉移至宿主有機體之基因組中，產生基因穩定性遺傳。含有經轉型核酸片段之宿主有機體被稱作「轉殖基因」有機體。植物轉型方法之實例包括此項技術中已知及下文所揭示之方法。
「轉殖基因品系」係由用包括核酸表現卡匣(包含相關轉殖基因)之異源DNA構築體使植物細胞轉型，使由將轉殖基因***植物基因組中所產生之植物群體再生，及選出特徵在於***至特定基因組位置中的特定再生植物而產生。品系表型特徵在於轉殖基因表現。在基因層面上，品系為植物之基因組成之一部分。
如本文中所用，「樣本」包括任何含有核酸分子或多肽且源自植物、植物材料，或處於包含或源自植物材料之產品(諸如(但不限於)食品或飼料產品)(新鮮或經加工)中之樣本。
在轉型之狀況下，「引入」或「經引入」意欲以使構築體進入植物細胞內部之方式向植物提供異源DNA構築體。本發明之植物及方法不依靠用於將核酸構築體引入植物中之特定方法，只是使核酸構築體進入至少一種植物細胞內部即可。將核酸構築體引入植物中之方法在此項技術中係已知的，包括(但不限於)穩定轉型法、短暫轉型法及病毒介導法。
術語「後代」係指介於品系127植物與另一種類之間藉由有性雜交(例如異型雜交、自交或回交)所產生之植物。甚至在與輪回親本反覆回交後，品系127親本之經***DNA及/或側接DNA亦在相同染色體位置上存在於雜交後代中，且可例如藉由篩選品系127特異性區域來識別。
如本文中所用，與核酸分子相關之「異源」者為源自外來物種之核酸分子，或若來自相同物種，則為藉由有意人為干預而在組成及/或基因組基因座方面自其天然形式修飾而得之核酸分子。
「經分離」或「經純化」之核酸分子或其生物活性部分實質上或基本上不含通常伴隨如在其天然存在之環境中所見之核酸分子或與如在其天然存在之環境中所見之核酸分子相互作用的組份。因此，當藉由重組技術產生時，經分離或經純化之核酸分子實質上不含其他細胞物質或培養基，或當以化學方式合成時，實質上不含化學前驅物或其他化學物質。
「探針」係指與可偵測標記或報導分子(例如放射性同位素、配位體、化學發光劑、酶等)連接之經分離核酸分子。該種探針與一股目標核酸分子互補，在本案中，與來自大豆品系127植物生物材料(其來自包括該品系之DNA的大豆植物抑或樣本)之一股經分離DNA互補。探針不僅包括去氧核糖核酸或核糖核酸，而且包括聚醯胺以及其他可特異性偵測目標DNA序列之存在的探針物質。
如本文中所用，「引子」為能夠藉由核酸雜交而與互補目標DNA股黏接以形成介於引子與目標DNA股之間的雜交體之經分離核酸分子，該雜交體可接著利用聚合酶(例如DNA聚合酶)沿目標DNA股延伸。「引子對」係指一對用於例如藉由聚合酶鏈反應(PCR)或其他習知核酸擴增方法來擴增目標核酸分子之引子。「聚合酶鏈反應」或「PCR」為一種用於擴增特定DNA片段之技術。
「品系」或「品種」為具有相同親緣之一組個體，其一般為在某種程度上近親交配的且一般為同基因或接近同基因的。
在本發明上下文中，術語「雜交」在植物之狀況下意謂例如經由授粉使配子融合以產生後代(亦即細胞、種子或植物)。該術語涵蓋有性雜交(一植物對另一植物授粉)且在植物之狀況下，包括自交(selfing)(自花授粉，亦即，當花粉及胚珠來自同一植物時)。
術語「基因滲入」係指基因座之所需對偶基因自一種遺傳背景傳遞至另一遺傳背景。在一種方法中，所需對偶基因可經由2個親本之間進行有性雜交而進行基因滲入，其中親本之一中之至少一者在其基因組中具有所需對偶基因。
提供與轉殖基因AHAS抑制劑耐受性大豆植物相關之組合物及方法。該等組合物包括品系127大豆植物。品系127大豆植物係藉由如本文中所定義向大豆基因組中***或基因滲入來自擬南芥(Arabidopsis thaliana)之咪唑啉酮耐受性乙醯羥基酸合成酶大型次單位基因(csr1-2)而自野生型或未經轉型之大豆植物修飾而得。在一些實施例中，將csr1-2基因***大豆基因組中可提供乙醯羥基酸合成酶(AHAS)之經修飾形式的表現，其中該乙醯羥基酸合成酶具有含有對應於位置653之天冬醯胺而非天然絲胺酸(S653N)的AHASL蛋白質。AHAS酶對於分支鏈胺基酸生物合成為重要的且受某些除草劑(AHAS抑制性除草劑)抑制。對AHAS基因作修飾可消除此抑制作用且從而提供對大範圍AHAS抑制性除草劑之耐受性。因此，與缺乏品系127核酸分子之大豆植物相比，大豆品系127植物對至少一種AHAS抑制性除草劑具有耐受性或可耐受增加量之至少一種AHAS抑制性除草劑。
已發現賦予AHAS抑制劑耐受性之核酸分子被***於大豆基因組中之特徵化位置處且藉此產生127品系。在所述染色體位置處具有品系127核酸分子之品系127大豆植物在一實施例中包含一或多個至少具有SEQ ID NO:5及/或6之核酸分子序列的基因組/轉殖基因接合點。品系127之基因組***位點的特徵化可提供增強之育種效率且使得使用分子標記物來追蹤育種群體及其後代中之轉殖基因***成為可能。在本文中提供識別、偵測及使用品系127大豆植物之各種方法及組合物。
將csr1-2表現卡匣(來自質體pAC321之PvuII片段)整合至大豆基因組中之單個特徵化基因座處以產生品系127。在一實施例中，品系127中之***csr1-2卡匣相對於質體pAC321之原始轉型片段含有3個點突變，一個突變處於AHAS編碼序列中而其他2個突變處於AHASL 3'未轉譯區(UTR)下游。該等突變包括編碼序列中G向A之突變，此導致表現具有R272取代為R272之胺基酸取代之AHAS多肽。對點突變作南方墨點分析及序列驗證之結果指示***物在至少8代內為穩定的。品系127中之***DNA亦含有csr1-2編碼序列之直接處於3'整合點前之一部分的376個鹼基對(bp)重複(該重複係由SEQ ID NO:1之位置5694-6069表示)。此重複376 bp片段產生延伸至3'側接序列中之501 bp開放閱讀框架(ORF)。反轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)結果表明此501 bp ORF未被轉錄。在一些實施例中，品系127核酸分子亦含有大部分擬南芥屬(Arabidopsis)SEC61 γ次單位基因座(At3g48570)，其為用於轉型之DNA片段之組份。在其他實施例中，SEC61γ次單位基因可在大豆品系127植物中表現。舉例而言，如下文實例中所詳述，RT-PCR實驗顯示擬南芥屬SEC61γ次單位基因在品系127葉片組織中之轉錄較弱。總共約1.3個千鹼基(kb)之5'側接大豆DNA及約4.6kb之3'側接大豆DNA已經測序。側接序列資訊可用於開發本發明之品系127特異性定性PCR偵測方法。品系127核酸分子之其他特徵(諸如所識別之點突變及重複)亦可用於本文中所提供之用於偵測品系127植物(包括其後代及衍生物)之方法中。
本發明之品系127植物對施用AHAS抑制性除草劑具有耐受性。品系127植物對如下施用量之AHAS抑制性除草劑展現耐受性或增強之耐受性，該等施用量包括等於介於50g ai/ha與約500g ai/ha之間、介於70g ai/ha與約400g ai/ha之間，及介於70g ai/ha與約300g ai/ha之間的除草劑施用量之量。該種耐受性亦可包括對除草劑商用施用量之1倍、2倍、3倍、4倍、5倍或5倍以上之量的AHAS抑制性除草劑之耐受性。
對AHAS抑制性除草劑之耐受性可用任何測定除草劑耐受性之方法來測定。舉例而言，若與適合之對照植物相比，大豆品系127植物所展示之損傷比對照植物所展現之損傷小至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、400%、500%、600%、700%、800%、900%或1000%或1000%以上，則該大豆品系127植物可對AHAS抑制性除草劑或其他化學物質表現耐受性。以此方式，對AHAS抑制性除草劑或其他化學物質具有耐受性之植物與適合之對照植物相比顯示「改良之耐受性」。由除草劑或其他化學處理所引起之損傷係藉由評估由熟習此項技術者認為合適之任何植物生長或健康參數來評定。可藉由目視檢查及/或藉由統計分析個別植物或一組植物之適合參數來評定損傷。因此，可藉由評估(例如)諸如植物高度、植物重量、葉片顏色、開花、繁殖力、產率、種子產量及其類似者之參數來評定損傷。亦可藉由評估特定發育階段(例如成熟或開花)所經過之時間或直至植物自特定化學物質及/或除草劑處理恢復所經過之時間來評定損傷。
由AHAS抑制性除草劑或其他化學物質所造成之損傷可在用除草劑處理品系127植物或品系127植物與除草劑接觸後各個時間下評定。損傷可大約在對照植物展現最大損傷之時間時評定，或可在未經除草劑或其他化學物質處理之對照植物與已施加處理時之尺寸或階段相比已有可量測程度之生長及/或發育的時段後評定。另外，可在用除草劑處理測試植物之後的各個時間評定損傷，例如第12小時，或第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14天，或第3週、第4週或更久。任何評定時間係適合的，只要其允許回應於對測試植物與對照植物之處理偵測出差異即可。
本發明進一步包括含有品系127核酸分子且以NCIMB專利寄存編號41603寄存之大豆品系CV603(亦稱作「BPS-CV127-9」)之種子，以及由其獲得之植物、植物細胞及種子。申請者已於2008年12月22日在英國工業、食品與海洋細菌菌種保藏中心(National Collections of Industrial,Food,and Marine Bacteria(NCIMB),23 St. Machar Drive,Aberdeen AB2 1RY,Scotland,United Kingdom)寄存至少2500個含有品系127核酸分子之大豆植物種子，且對該寄存指定NCIMB寄存編號為41603。此等寄存物應根據國際承認用於專利程序之微生物寄存布達佩斯條約(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure)之條款來保存。此寄存僅為熟習此項技術者提供方便，而並非承認根據35 U.S.C. § 112需要寄存。在2008年12月22日寄存於NCIMB之種子係取自由Embrapa(Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuaria)保存之寄存物。在本申請案系屬(pendency)期間，專利與商標之委員(Commissioner of Patents and Trademarks)及由該委員根據需要決定授權之人員可獲得此寄存物。在允許本申請案中之任何請求項後，本發明申請者將按照37 C.F.R. § 1.808向公眾提供寄存於英國工業、食品與海洋細菌菌種保藏中心(National Collections of Industrial,Food,and Marine Bacteria (NCIMB),23 St. Machar Drive,Aberdeen AB2 1RY,Scotland,United Kingdom)之至少2500個含有品系127核酸分子之大豆植物種子的樣本。此大豆品系CV603種子寄存物將保存於NCIMB寄存處(其為公眾寄存處)，歷時30年之時段，或在最新請求後5年之時段，或歷時專利之可執行期限(以其中較長者為準)，且若其在彼時段期間不能存活，則將其更換。另外，申請者已滿足37C.F.R. §§ 1.801-1.809之所有要求，包括提供樣本在寄存後之存活力指示。申請者無權取消任何由法律對生物材料之轉移或其商業運輸所施加之限制。申請者保留對根據此專利所授予其之權利或根據植物品種保護法(Plant Variety Protection Act)(7 USC 2321及以下內容)適用於大豆品系CV603之權利的任何侵權行為訴諸法律之權力。禁止未經授權之種子繁殖。種子可經管制。
本發明之品系127大豆植物亦包括產生品系127大豆植物之初始轉型品系之後代、衍生物、變異體及突變體。該等植物可使用任何用於識別該等植物之方法來識別，該等方法包括(但不限於)育種記錄、除草劑耐受性方法、分子偵測方法、本文中所揭示之方法及其組合。
本發明之品系127大豆植物對至少一種干擾缺乏S653N突變之內源性AHAS酶活性的除草劑(AHAS抑制性除草劑)具有耐受性。干擾AHAS酶活性之除草劑包括咪唑啉酮除草劑、磺醯脲除草劑、***并嘧啶除草劑、嘧啶基氧基苯甲酸酯除草劑、磺醯胺基-羰基***啉酮除草劑，或其混合物或組合。在一實施例中，該等除草劑為咪唑啉酮除草劑、磺醯脲除草劑或其混合物。咪唑啉酮除草劑包括(但不限於)PURSUIT(咪草煙(imazethapyr))、CADRE(甲基咪草煙(imazapic))、RAPTOR(甲氧咪草煙(imazamox))、SCEPTER(滅草喹(imazaquin))、ASSERT(敵菌酮(imazethabenz))、ARSENAL(依滅草(imazapyr))、上述除草劑中之任一者之衍生物，以及上述除草劑中之兩者或兩者以上之混合物或組合，例如依滅草/甲氧咪草煙(ODYSSEY)。咪唑啉酮除草劑亦可選自(但不限於)2-(4-異丙基-4-甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-菸鹼酸、[2-(4-異丙基)-4-][甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-3-喹啉甲]酸、[5-乙基-2-(4-異丙基-]4-甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-菸鹼酸、2-(4-異丙基-4-甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-5-(甲氧基甲基)-菸鹼酸、[2-(4-異丙基-4-甲基-5-側氧基-2-]咪唑啉-2-基)-5-甲基菸鹼酸，及[6-(4-異丙基-4-]甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-間甲苯甲酸甲酯與[2-(4-異丙基-4-甲基-5-]側氧基-2-咪唑啉-2-基)-對甲苯甲酸甲酯之混合物。在一實施例中，使用5-乙基-2-(4-異丙基-4-甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-菸鹼酸及[2-(4-異丙基-4-甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-]-基)-5-(甲氧基甲基)-菸鹼酸。在另一實施例中，使用[2-(4-異丙基-4-]甲基-5-側氧基-2-咪唑啉-2-基)-5-(甲氧基甲基)-菸鹼酸。
可用於本發明中之磺醯脲除草劑包括(但不限於)氯磺隆(chlorsulfuron)、甲基甲磺隆(metsulfuron methyl)、甲嘧磺隆(sulfometuron methyl)、乙基氯嘧磺隆(chlorimuron ethyl)、甲基噻吩磺隆(thifensulfuron methyl)、甲基苯磺隆(tribenuron methyl)、甲基免速隆(bensulfuron methyl)、煙嘧磺隆(nicosulfuron)、甲基胺苯磺隆(ethametsulfuron methyl)、碸嘧磺隆(rimsulfuron)、甲基氟胺磺隆(triflusulfuron methyl)、醚苯磺隆(triasulfuron)、甲基氟嘧磺隆(primisulfuron methyl)、醚磺隆(cinosulfuron)、醯嘧磺隆(amidosulfiuon)、嘧啶磺隆(fluzasulfuron)、依速隆(imazosulfuron)、乙基百速隆(pyrazosulfuron ethyl)、氯吡嘧磺隆(halo sulfuron)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、環磺隆(cyclosulfuron)、亞速隆(ethoxysulfuron)、伏速隆(flazasulfuron)、甲基氟啶嘧磺隆(flupyrsulfuron methyl)、甲醯胺磺隆(foramsulfuron)、碘磺隆(iodosulfuron)、環氧嘧磺隆(oxasulfuron)、甲基二磺隆(mesosulfuron)、氟磺隆(prosulfuron)、磺醯磺隆(sulfosulfuron)、三氟啶磺隆(trifloxysulfuron)、三氟甲磺隆(tritosulfuron)、上述除草劑中之任一者之衍生物，以及上述除草劑中之兩者或兩者以上之混合物。本發明之***并嘧啶除草劑包括(但不限於)氯酯磺草胺(cloransulam)、雙氯磺草胺(diclosulam)、雙氟磺草胺(florasulam)、唑嘧磺草胺(flumetsulam)、磺草唑胺(metosulam)及五氟磺草胺(penoxsulam)。本發明之嘧啶基氧基苯甲酸酯(或嘧啶基羧基)除草劑包括(但不限於)雙草醚(bispyribac)、嘧硫草醚(pyrithiobac)、嘧草醚(pyriminobac)、嘧啶肟草醚(pyribenzoxim)及環酯草醚(pyriftalid)。磺醯胺基-羰基***啉酮除草劑包括(但不限於)氟酮磺隆(flucarbazone)及丙苯磺隆(propoxycarbazone)。
應認識到，嘧啶基氧基苯甲酸酯除草劑與嘧啶基硫代苯甲酸酯除草劑相關且可由美國雜草科學協會(Weed Science Society of America)歸入嘧啶基硫代苯甲酸酯除草劑之類。因此，本發明之除草劑進一步包括嘧啶基硫代苯甲酸酯除草劑，包括(但不限於)上文所述之嘧啶基氧基苯甲酸酯。
本發明亦提供經分離之品系127核酸分子。如本文中所用，使用術語「核酸分子」不意欲使核酸分子限於包含DNA，而是可包括任何核苷酸，諸如核糖核苷酸及核糖核苷酸與去氧核糖核苷酸之組合。該等去氧核糖核苷酸及核糖核苷酸包括天然存在之分子及合成類似物。核酸分子亦涵蓋所有序列形式，包括(但不限於)單股形式、雙股形式、髮夾結構、莖環結構及其類似者。在一實施例中，品系127核酸分子包含具有SEQ ID NO:1之位置1312至6069之核酸序列的核酸分子。在另一實施例中，品系127核酸分子包含具有SEQ ID NO:1之核苷酸1302至6079之序列的核酸分子。
品系127核酸分子亦包括SEQ ID NO:1之片段。核苷酸序列之「片段」可具有任何長度，諸如長度為至少7個、15個、20個、25個、30個、40個、60個、80個、100個、150個、200個、250個、300個、350個、400個、450個、550個、650個、700個、800個、900個、1000個、1200個、1400個、1600個、1800個、2000個、2200個、2400個、2600個、2800個、3000個、3500個、4000個、4500個或4500個以上核苷酸(nt)。此等片段具有多種用途，包括(但不限於)用作診斷性探針及引子。當然，較大片段(諸如長度為601nt-8000nt之片段)根據本發明亦為適用的，對應於大部分(若非全部)核苷酸序列SEQ ID NO: 1之片段亦如此。舉例而言，長度為至少20nt之片段意指包括例如SEQ ID NO: 1之核苷酸序列之20個或20個以上連續鹼基的片段。
品系127植物包含具有AHASL編碼序列之轉殖基因表現卡匣，該AHASL編碼序列具有S653N突變，該突變能夠提供針對咪唑啉酮抑制性除草劑之抗性或耐受性。該卡匣另外包括可操作地連接於AHASL編碼序列之5'及3'調節序列。「可操作地連接」意欲意謂介於2個或2個以上元件之間的功能性連接。舉例而言，介於相關核酸分子與調節序列(例如啟動子)之間的可操作之連接為允許相關核酸分子表現之功能性連接。可操作地連接之元件可相鄰或不相鄰。當以「可操作地連接」用以指2個蛋白質編碼區之接合時，其意指該等編碼區處於同一閱讀框架內。
因此，大豆品系127植物中之表現卡匣在5'-3'轉錄方向上含有轉錄與轉譯起始區(例如啟動子)、AHASL S653N編碼區及轉錄與轉譯終止區，其在植物中皆具有功能性。「啟動子」係指能夠控制編碼序列或功能性RNA表現之核苷酸序列。一般而言，編碼序列位於啟動子序列之3'端。啟動子序列可包含近端及較遠端上游元件，後面之元件常常被稱作增強子。因此，「增強子」為可刺激啟動子活性之核苷酸序列且可為啟動子固有元件或經***以增大啟動子含量或增強啟動子組織特異性之異源元件。啟動子可完全由天然基因獲得，或可由源自自然界中所發現之不同啟動子之不同元件組成，或甚至包含合成核苷酸片段。熟習此項技術者應瞭解，不同啟動子可引導基因在不同組織或細胞類型中、或在不同發育階段、或回應於不同環境條件之表現。使核酸片段在大部分時間下在大多數細胞類型中表現之啟動子通常被稱作「組成型啟動子」。
在一實施例中，大豆品系127植物中之表現卡匣含有受擬南芥cSr1-2啟動子與csr1-2轉錄終止區控制之AHASL S653N編碼序列作為可操作地連接之組件。表現卡匣係以來自核酸構築體pAC321之PvuII片段形式獲得。在一實施例中，表現卡匣具有SEQ ID NO:4之序列。
提供可用於各種偵測及/或識別品系127核酸分子之方法中的經分離核酸分子。在一實施例中，「經分離」核酸分子不含天然側接產生核酸分子之有機體的基因組DNA中之核酸分子的序列(亦即位於核酸5'及3'末端之序列)(例如蛋白質編碼序列)。舉例而言，在各種實施例中，經分離核酸分子可含有天然側接產生核酸分子之細胞的基因組DNA中之核酸分子的少於約5kb、4kb、3kb、2kb、1kb、0.5kb或0.1kb之核苷酸序列。
在一些實施例中，核酸分子包含SEQ ID NO:5及/或6中所示之接合DNA序列。在其他實施例中，核酸分子包含SEQ ID NO:5及/或6中所示之接合DNA序列或其變異體及片段。接合DNA序列之片段及變異體適用於有區別地識別品系127 DNA。如本文中別處所論述，該等序列可用作用於偵測樣本中之品系127***DNA之引子及/或探針。
在其他實施例中，提供可偵測品系127植物、品系127***DNA或品系127特異性核酸分子之核酸分子。該等序列包括任何包含SEQ ID NO:5及/或6中所示之核酸分子或其變異體或其互補序列的核酸分子。在一些實施例中，用於偵測品系127核酸分子之核酸分子包含SEQ ID NO:5及/或6中所示之序列或其互補序列。可偵測品系127核酸分子、品系127***DNA或品系127特異性區域之核酸分子片段及變異體適用於有區別地識別品系127植物。如本文中別處所論述，該等序列可用作引子及/或探針。進一步提供包含以下或由以下組成之經分離DNA核苷酸引子序列：SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、47、67、68、69、70中所示之序列或其互補序列，或SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、47、67、68、69、70之變異體及片段或其互補序列。
在一實施例中，本文中使用之特異性引子對包含下文所示之正向及反向引子(其中標識出相對於SEQ ID NO:1之位置)。預測該等引子可產生327個鹼基對之條帶尺寸。
如本文中所用，關於核酸序列之「變異體」係指實質上相似之序列。對於核酸分子，變異體包含在5'及/或3'末端具有缺失(例如截短)、在天然核酸分子之一或多個內部位點上缺失及/或添加一或多個核苷酸、及/或在天然核酸分子之一或多個位點上取代一或多個核苷酸的核酸分子。
在本發明中為偵測品系127特異性區域可使用引子之任何組合，該等引子諸如本文中所揭示之彼等者(例如SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、47、67、68、69及70)。引子對之非限制性實例包括SEQ ID NO:35及36；SEQ ID NO:37及38；SEQ ID NO:39及40；SEQ ID NO:41及42；SEQ ID NO:43及44；SEQ ID NO: 67及68；SEQ ID NO: 69及70。根據本發明亦可設計其他引子及引子對以用於所揭示之方法中。
用於所提供之方法中之探針及引子具有足以與目標DNA序列結合且特異性偵測及/或識別生物樣本(例如自欲測試之植物獲得之樣本)中之核酸分子的核苷酸長度。應認識到，雜交條件或反應條件可由操作者決定以達成此結果。此長度可為任何適用於所選偵測方法之長度，諸如8個、10個、11個、14個、16個、18個、20個、22個、24個、26個、28個、30個、40個、50個、75個、100個、200個、300個、400個、500個、600個、700個或700個以上核苷酸，或長度為介於約11-20個之間、20-30個之間、30-40個之間、40-50個之間、50-100個之間、100-200個之間、200-300個之間、300-400個之間、400-500個之間、500-600個之間、600-700個之間、700-800個之間或800個以上核苷酸。該等探針及引子可與目標序列在高嚴格度雜交條件下特異性雜交。視實施例而定之探針及引子可與目標序列具有連續核苷酸之完全DNA序列一致性，不過可藉由習知方法設計出不同於目標DNA序列且保留特異性偵測及/或識別目標DNA序列之能力的探針。因此，探針及引子(例如SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44)可與目標核酸分子共有約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99%以上之序列一致性或互補性，或(例如SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44)與目標序列不同之處可在於1個、2個、3個、4個、5個、6個或6個以上核苷酸。探針可用作引子，但一般經設計以與目標DNA或RNA結合而不用於擴增過程中。
在一些實施例中，可使用特異性引子來擴增該品系DNA片段以產生可用作「特異性探針」之擴增子或該擴增子本身可被偵測以識別生物樣本中之品系127核酸分子。或者，可在PCR反應期間使用探針(例如Taqman探針或MGB探針)以允許偵測擴增事件(所謂即時PCR)。當探針與生物樣本中之核酸分子在允許該探針與該樣本結合之條件下雜交時，可偵測此結合且從而允許指出生物樣本中品系127的存在。該種對所結合探針之識別在此項技術中已有描述。在一實施例中，探針為可在最佳化條件下與該品系之包括5'或3'側接區之區域特異性雜交且亦包括相鄰之***DNA之一部分，從而跨越接合區的序列。特異性探針可包含與品系127核酸分子之特異性區域具有至少80%、介於80%與85%之間、介於85%與90%之間、介於90%與95%之間，及介於95%與100%之間的一致性(或互補性)之序列。
如本文中所用，「經擴增DNA」或「擴增子」係指作為核酸模板之一部分的目標核酸分子之核酸分子擴增產物。舉例而言，為確定由有性雜交產生之大豆植物是否含有品系127核酸分子，可使用DNA引子對、利用核酸分子擴增法對自大豆植物組織樣本提取之DNA進行處理以產生可診斷或指示品系127核酸分子之存在的擴增子，該DNA引子對包括源自與***異源DNA之***位點相鄰之側接序列的第一引子與源自***異源DNA之第二引子。「診斷」品系127區域意指使用任何可鑑別生物樣本中有或無品系127區域之方法或檢定。或者，第二引子可源自側接序列。在其他實施例中，引子對可源自***DNA兩側上之側接序列，以便產生包括表現構築體之整個***核酸分子以及側接轉殖基因***物之序列的擴增子(例如SEQ ID NO:1)。擴增子具有某種長度且具有亦可診斷品系之序列(例如，含有品系127區域之接合DNA)。擴增子之長度可處於引子對加上一個核苷酸鹼基對之組合長度至可由DNA擴增方案產生之任何擴增子長度的範圍內。源自側接序列之引子對成員可位於與***DNA序列相距一段距離之位置處，此距離可處於一個核苷酸鹼基對直至擴增反應極限，或約2萬個核苷酸鹼基對之範圍內。在另一實施例中，引子對可經設計以擴增***DNA或***DNA之片段。該等引子對適用於偵測生物樣本中品系127***DNA的存在。術語「擴增子」之使用明確排除可在DNA熱擴增反應中形成之引子二聚體。
在某些實施例中，適用引子對可包括一個與介於***DNA與側接5'或3'基因組DNA之間的接合點重疊之引子。該等引子可經設計位於介於5'側接DNA與***DNA之間的接合點(亦即，介於SEQ ID NO：1之位置1311與1312之間的接合點)附近，以及位於介於***DNA與3'側接DNA之間的接合點(亦即介於SEQ ID NO：1之位置6069與6070之間的接合點)附近。該等引子可經設計以與側接區或***DNA之約10個核苷酸雜交，且與跨越***DNA或側接區中之接合點的至少1個核苷酸雜交。因此，舉例而言，引子可包含經設計以與由SEQ ID NO：1之至少下列位置所表示之核苷酸雜交的核苷酸序列：1311-1321、1302-1312、6060-6070及/或6069-6079。
在其他實施例中，適用之引子對可包括一個與介於***DNA之csr1-2編碼序列之重複部分的5'末端(位於SEQ ID NO：1之位置5694處)與相鄰***DNA(亦即，位於SEQ ID NO：1之位置5693處)之間的接合點重疊之引子。該等引子可經設計以與重複區或相鄰***DNA之約10個核苷酸雜交，且與跨越接合點(例如SEQ ID NO：1之至少5693-5703或至少5684-5694)之至少一個核苷酸雜交。
在本發明中使用之製備及使用探針與引子的方法在此項技術中為已知的。PCR引子對可例如藉由使用意欲用於彼目的之電腦程式自已知序列獲得，該等電腦程式諸如Vector NTI版本6(Informax Inc.,Bethesda Md.)中之PCR引子分析工具；PrimerSelect(DNASTAR Inc.,Madison,Wis.)；及Primer程式(版本0.5,1991,Whitehead Institute for Biomedical Research,Cambridge,Mass.)。另外，可使用熟習此項技術者已知之準則視覺上掃描序列且手動識別引子。
所揭示之品系127大豆植物可用於使用育種方法來產生其他品系127大豆植物(諸如後代植物)之育種計劃中。該等育種方法可用於產生例如用於不同地理區域之商業生產之大豆植物或用於產生其他大豆育種群體。
另外，品系127大豆植物可用於使用育種方法來產生具有其他相關性狀與AHAS抑制劑耐受性之組合(亦稱作「堆疊性狀(stacked trait)」或「性狀堆疊」)(諸如對其他除草劑(諸如草甘膦、草銨膦(glufosinate)及/或麥草畏(dicamba))之抗性組合)之大豆植物的育種計劃中。另外，品系127大豆植物可用於使用育種方法來產生具有多種AHAS抑制性除草劑抗性編碼序列之大豆植物的育種計劃中。此外，所揭示之植物可用於使用育種方法來產生具有AHAS抑制性除草劑耐受性性狀與其他農藝學上重要之性狀(包括輸入型性狀(諸如疾病及病原體抗性，諸如由Bt基因所賦予之抗性)及輸出型性狀(諸如油及蛋白質之品質與數量))的組合之植物的育種計劃中。
所揭示之培育AHAS抑制性除草劑抗性大豆植物之方法包含以下步驟：(a)使品系127大豆植物與第二大豆植物雜交；及(b)獲得雜交物之種子。可進一步篩選所得之種子以識別含有具有品系127核酸分子之DNA的種子。該等方法可進一步涉及自雜交物種子獲得DNA樣本及檢定該樣本中品系127核酸分子之有無。或者，可針對AHAS抑制性除草劑耐受性來篩選種子以識別含有品系127 DNA之種子或後代。
品系127大豆植物可使用任何可用於大豆之育種方法來育種。舉例而言，品系127大豆植物可藉由以下程序來育種：首先使自轉殖基因品系127大豆植物(或其藉由用賦予除草劑耐受性之實施例之表現卡匣轉型所得到的後代)長成之第一親本大豆植物與缺乏除草劑耐受性表型之第二親本大豆植物有性雜交，從而產生多數第一後代植物；接著選擇展現所需除草劑耐受性之第一後代植物；且使該第一後代植物自交，從而產生多數第二後代植物；接著自第二後代植物選擇展現所需除草劑耐受性之植物。此等步驟可進一步包括使第一除草劑耐受性後代植物或第二除草劑耐受性後代植物與第二親本大豆植物或第三親本大豆植物進行回交，從而產生展現所需除草劑耐受性之大豆植物。更應認識到，不需要檢定後代之表型。如本文中別處所揭示，可使用各種方法及組合物來偵測及/或識別品系127***物。
亦應瞭解，亦可使2種不同轉殖基因植物有性雜交以產生含有2種獨立分開添加之外源基因的後代。適合之後代自交可產生對於所添加之兩種外源基因而言同型接合之植物。亦涵蓋與親本植物回交及與非轉殖基因植物異型雜交，亦涵蓋無性繁殖。然而，可使用任何方法來產生該等植物。
可開發含有品系127核酸分子之近親交配大豆品系，以便用於產生大豆種類且以便用作旨在產生新型且獨特之近親交配大豆品系之育種計劃中的親本植物。近親交配大豆品系常被用作經由傳統育種及/或分子基因滲入技術來滲入新穎性狀之目標。多種分析方法可用於測定近親交配品系之同型接合性及表型穩定性。
在一些實施例中，使得本發明之品系127大豆植物得以產生之核酸分子可與賦予對第二種除草劑(諸如草甘膦)之耐受性的核酸分子一起被工程改造成分子堆疊。在其他實施例中，分子堆疊進一步包含至少一種賦予對第三種除草劑之耐受性的其他核酸分子。在一實施例中，序列賦予對草銨膦之耐受性，且在一特定實施例中，序列包含pat。
在其他實施例中，本發明之品系127大豆植物包含一或多種相關性狀，且在某些實施例中，使品系127 DNA堆疊有相關核酸分子序列及/或性狀之任何組合以便產生具有所需性狀組合之植物。如本文中所用，性狀係指自特定序列或序列組得到之表型。舉例而言，除草劑耐受性核酸分子可與任何其他編碼具有殺蟲及/或殺昆蟲活性之多肽(諸如蘇雲金桿菌毒性蛋白(Bacillus thuringiensis toxic protein，Bt蛋白)、凝集素及其類似者)的核酸分子堆疊。所產生之組合亦可包括相關核酸分子中之任一者的多個複本。
在一些實施例中，可使大豆品系127 DNA堆疊有其他除草劑耐受性性狀以產生具有其他改良性狀之本發明的轉殖基因植物。其他可用於該等實施例中之除草劑耐受性核酸分子包括藉由其他作用模式賦予對草甘膦或AHAS抑制劑之耐受性的核酸分子，諸如編碼草甘膦氧化還原酶之基因。其他可與大豆品系127 DNA組合之性狀包括自向植物賦予產生較高含量之5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase，EPSPS)之能力的核酸分子獲得之性狀。其他可與大豆127品系組合之性狀包括賦予對磺醯脲及/或咪唑啉酮之耐受性的性狀。
在一些實施例中，大豆品系127 DNA可與例如羥苯基丙酮酸雙加氧酶堆疊，該等羥苯基丙酮酸雙加氧酶為可催化對羥苯基丙酮酸(HPP)轉化為尿黑酸之反應的酶。可抑制此酶且與該酶結合以抑制HPP轉化為尿黑酸的分子適用作除草劑。賦予植物對該等除草劑之耐受性的性狀在此項技術中為已知的。可與大豆品系127 DNA堆疊之適合的除草劑耐受性性狀之其他實例包括芳氧基烷酸雙加氧酶核酸分子(據報導，其賦予對2,4-D及其他苯氧基植物生長素除草劑以及芳氧基苯氧基丙酸酯除草劑之耐受性)及麥草畏耐受性核酸分子。
可與大豆品系127 DNA組合之除草劑耐受性性狀之其他實例包括由編碼外源性草胺膦(phosphinothricin)乙醯轉移酶之核酸分子所賦予的性狀。含有外源性草胺膦乙醯轉移酶之植物可展現改良之針對草銨膦除草劑之耐受性，該等草銨膦除草劑抑制麩醯胺酸合成酶。可與大豆品系127 DNA組合之除草劑耐受性性狀之其他實例包括由賦予改變之原卟啉原氧化酶(protox)活性之核酸分子所賦予的性狀。含有該等核酸分子之植物可展現改良之針對各種靶向protox酶之除草劑(亦稱作「protox抑制劑」)中之任一者的耐受性。
可與AHAS抑制劑耐受性性狀組合之除草劑耐受性性狀之其他實例包括賦予植物(諸如大豆植物)對至少一種除草劑之耐受性的性狀。除草劑耐受性大豆在此項技術中為已知的，對特定除草劑之耐受性不同的植物在此項技術中亦為已知的。導致產生此等耐受性之性狀可藉由育種或經由其他方法與品系127大豆植物組合以提供本發明之植物及其使用方法。
大豆品系127 DNA亦可與至少一種其他性狀組合以產生本發明之植物，其進一步包含各種所需性狀組合，包括(但不限於)為動物飼料所需之性狀，諸如高油含量、胺基酸組成、蛋白質含量、改良之可消化性或改變之脂肪酸組成。
大豆品系127 DNA亦可與其他所需性狀組合，該等性狀諸如無毒性及疾病抗性基因，諸如大豆胞囊線蟲(soybean cyst nematode)抗性性狀，例如SCN；及為加工或加工產物所需之性狀，諸如增加之油含量或改變之脂肪酸組成(例如脂肪酸去飽和酶基因；以及聚合物或生物塑膠(例如β-酮硫解酶、聚羥基丁酸酯合成酶及乙醯乙醯CoA還原酶)，其促成聚羥基烷酸酯(PHA)之表現)。亦可將除草劑耐受性核酸分子與提供任何農藝學性狀之核酸分子組合。
此等堆疊組合可由包括(但不限於)以下之任何方法產生：藉由任何已知方法或基因轉型來培育植物。若藉由對植物進行基因轉型來使序列堆疊，則相關核酸分子序列可在任何時間且以任何順序組合。性狀可在共同轉型方案中使用由任何轉型卡匣組合提供之相關核酸分子同時引入。舉例而言，若將引入2個序列，則該2個序列可包含於獨立轉型卡匣(反式)中或包含於同一轉型卡匣(順式)上。可由相同啟動子或不同啟動子驅動該等序列之表現。在某些狀況下，可能需要引入可抑制相關核酸分子之表現的轉型卡匣。可將此卡匣與其他抑制卡匣或過度表現卡匣之任何組合組合以在植物中產生所需性狀組合。更應認識到，可使用位點特異性重組系統使核酸分子在所需基因組位置處堆疊。
亦提供培育具有品系127 DNA之大豆植物的方法，其中該方法包含(a)使品系127大豆植物或其衍生物與第二大豆親本植物雜交；(b)獲得雜交物之種子；(c)獲得一或多個種子之DNA樣本；及(d)偵測品系127核酸分子的存在。
具有與品系127性狀組合之性狀的大豆植物亦可藉由使自品系127大豆植物獲得之植物材料或部分轉型而產生。可使用熟練技工可利用之任何轉型方法將其他性狀組合至品系127大豆植物中。因此，品系127大豆植物可用作轉型方法中用於將其他異源核酸分子引入品系127大豆植物中的植物材料來源。舉例而言，轉型載體可經製備以將相關基因引入品系127大豆植物中，產生具有多種所引入性狀之大豆植物。
用於該等方法中之轉型載體可用於產生經任何相關基因(包括本文中所述之基因)轉型之植物。轉型載體可包括可選擇標記物及欲引入之相關基因，且通常表現於經轉型品系127大豆植物中。該等可選擇標記物在此項技術中為已知的。本發明之相關基因視欲引入之所需性狀而不同。舉例而言，各種表型變化可受關注，包括改變植物之脂肪酸組成、改變植物之胺基酸含量、改變植物之昆蟲及/或病原體防禦機制及其類似者。可藉由在植物中使異源產物表現或增加內源性產物之表現來達成此等結果。或者，該等結果可藉由在植物中使一或多種內源性產物(特定而言酶或輔因子)之表現減少來達成。此等變化引起經轉型植物之表型變化。
在本發明之方法中可使用任何轉型載體。多種植物轉型載體及用於使植物轉型之方法為可用的。可使用轉型方法將任何性狀與由品系127***物(包括本文中所述之***物)提供之AHAS抑制性除草劑耐受性性狀堆疊。
亦提供識別及/或偵測生物樣本中之品系127核酸分子的方法及組合物，該生物樣本例如來自自大豆植物(包括後代及衍生物)獲得之樣本。該等方法可用於識別及/或偵測任何生物材料中之品系127區域或核酸分子。該等方法包括例如確定種子純度之方法及針對品系127核酸分子篩選一批種子(seed lot)中之種子的方法。在一實施例中，提供一種識別生物樣本中之127***核酸分子的方法且該方法包含：形成生物樣本與能夠擴增品系127核酸分子之第一及第二核酸引子的混合物；使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增大豆品系127核酸分子之條件下反應；及偵測經擴增之品系127核酸分子的有無。在一些實施例中，品系127核酸分子為品系127特異性核酸分子。
亦提供識別生物樣本中之品系127核酸分子的方法，其包含：形成含有具有大豆DNA之生物樣本與能夠與大豆品系127核酸分子雜交之核酸分子探針的混合物；使該混合物在允許該核酸分子探針與品系127核酸分子雜交之條件下反應；及偵測該核酸分子探針是否與樣本中之品系127核酸分子雜交，其中雜交的存在指示品系127核酸分子的存在。
本發明之方法亦可用於識別及/或偵測生物樣本中之品系127***核酸分子。在一實施例中，提供一種識別生物樣本中之品系127核酸分子的方法且該方法包含：形成生物樣本與能夠擴增品系127***核酸分子之第一及第二核酸引子的混合物；使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增品系127***核酸分子之條件下反應；及偵測經擴增之品系127***核酸分子的有無。
亦提供識別生物樣本中之品系127核酸分子的方法，其包含：形成含有具有DNA之生物樣本與能夠與品系127核酸分子雜交之核酸分子探針的混合物；使該混合物在允許該核酸分子探針與品系127核酸分子雜交之條件下反應；及偵測該核酸分子探針是否與樣本中之品系127核酸分子雜交，其中雜交的存在指示品系127核酸分子的存在。
進一步提供偵測生物樣本中之品系127區域的方法。可使用本發明方法偵測之品系127區域包括品系127***DNA、5'接合區、3'接合區、5'側接區、3'側接區、***DNA中之由轉型事件所引起之獨特突變或重複，或其任何組合及片段。
生物樣本可包含希望測定是否存在有具有品系127核酸分子之DNA的任何樣本。舉例而言，生物樣本可包含任何植物材料或包含植物材料或自植物材料獲得之材料，諸如(但不限於)食品或飼料產品。如本文中所用，「植物材料」係指自植物或植物部分獲得或源自植物或植物部分的材料。在特定實施例中，生物樣本包含大豆組織。在其他實施例中，生物樣本係自大豆葉片組織獲得。在其他實施例中，生物樣本係自大豆種子組織獲得。
可使用本發明方法偵測及/或識別任何品系127相關核酸分子。舉例而言，可偵測之核酸分子包括(但不限於)DNA、mRNA、cDNA及其類似者。在其他實施例中，可使用本發明方法偵測及/或識別由品系127核酸分子編碼之多肽。所偵測及/或識別之核酸分子可涵蓋品系127***DNA之任何片段(包括***DNA中之經識別突變，例如編碼具有S653N或R272K之AHAS多肽的核酸分子及其類似者)、啟動子序列、終止序列、該等序列之片段及其組合。
可使用用於本文中所揭示之方法中之引子及探針，利用習知方法(例如藉由將所揭示序列再選殖及測序)來確定(且必要時，來校正)所揭示序列。核酸分子探針及引子可特異性偵測目標DNA序列。可使用任何習知核酸雜交或擴增方法來偵測或識別樣本中來自轉殖基因品系之核酸分子的存在。「特異性偵測」意指核酸分子可作為引子用於擴增127特異性區域或核酸分子可用作在嚴格條件下與具有品系127特異性區域之核酸分子雜交的探針。允許特異性偵測127品系或127品系特異性區域之雜交量或雜交度足以將具有127特異性區域之核酸分子與缺乏此區域之核酸分子區分開，且因此允許有區別地識別品系127分子。「共有足以允許品系127核酸分子擴增之序列一致性或互補性」意指序列與具有品系127核酸分子之核酸分子之片段或在具有品系127核酸分子之核酸分子的全長上具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致性或互補性。
關於使用特定擴增引子對擴增目標核酸分子(例如藉由PCR來進行擴增)，「嚴格條件」為允許引子對與可與具有相應野生型序列(或其互補序列)之引子結合之目標核酸分子雜交且較佳在DNA熱擴增反應中產生具有品系127核酸分子之可識別擴增產物(擴增子)的條件。在PCR方法中，寡核苷酸引子可經設計而在PCR反應中用於擴增品系127核酸分子。設計PCR引子及PCR選殖之方法在此項技術中一般為已知的。應瞭解，特異性PCR方案中之多種參數會需要調節至特異性實驗室條件且可經略微修改但仍允許收集類似結果。此等調節對於熟習此項技術者應為顯而易見的。
用於所揭示方法中之引子可用於擴增任何127核酸分子。舉例而言，可設計能夠擴增指示含有品系127核酸分子片段之植物之區域的引子對。在一實施例中，該等引子對可擴增包含單個接合點之區域，例如5'接合區或3'接合區。該等引子對包括一種能夠自側接染色體區域(例如5'或3'側接區)沿***DNA方向引導延長之引子，而第二引子能夠自***DNA沿側接染色體區中之第一引子方向引導。該等引子對可擴增涵蓋接合區之核酸分子。在一些實施例中，用於擴增對中之引子之一能夠黏接至跨越接合區(例如5'或3'接合區)之一的區域，且能夠沿染色體區之方向或沿***之方向擴增。用於該等方法中之側接染色體區引子能夠黏接至5'或3'側接染色體區且沿***方向引導擴增。在其他實施例中，可設計能夠擴增2個接合點之引子對。
能夠黏接至5'或3'側接區之適合引子之其他實例可經設計以用於該等方法中且可包含能夠黏接至介於SEQ ID NO:1之位置1-1311之間或介於SEQ ID NO:1之位置6070至10,656之間的核酸分子的具有約10個或12個至約40個核苷酸之引子序列。
或者，可研發能夠黏接於植物基因組各處之隨機引子且該等隨機引子可與***特異性引子結合用於擴增涵蓋***DNA及側接序列片段之核酸分子。在一些實施例中，***特異性引子可經標記以允許偵測使用***特異性引子擴增之片段。在其他實施例中，可使所得經擴增核酸分子與經標記探針雜交以識別或偵測品系127核酸分子。
在另一實施例中，可研發能擴增整個***DNA或該***物之一部分(指示品系127 DNA)的引子對。舉例而言，在一些實施例中，引子對可經設計以使用自***DNA之5'及3'側接區引導之引子來擴增整個***DNA。或者，可設計能夠單獨擴增品系127***物之區域來識別***物之存在的引子對。舉例而言，引子可經設計以擴增質體pAC321之PvuII片段內之任何區域以便偵測生物樣本中***物的存在。該等引子包括能夠擴增***DNA之任何區域(包括介於SEQ ID NO:1之位置1312與6069之間的區域)的引子。在一些實施例中，可研發能夠擴增***DNA之擬南芥突變型AHAS編碼序列(例如位置2762至4774或其片段)或該***物之編碼序列與調節序列之任何組合的引子對。
經擴增核酸分子(擴增子)可具有任何允許偵測品系127核酸分子之長度。舉例而言，擴增子之長度可為約10個、50個、100個、200個、300個、500個、700個、100個、2000個、3000個、4000個、5000個核苷酸或更長。
在一些實施例中，可偵測品系127核酸分子之一或多個特異性區域。
在本發明方法中可使用任何使品系127核酸分子得以擴增及/或偵測之引子。在一實施例中，引子包含諸如8、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30個或30個以上連續核苷酸，或與品系127核酸分子互補，該等連續核苷酸對應於具有SEQ ID NO:1序列之核酸分子或與具有SEQ ID NO:1序列之核酸分子互補。舉例而言，在一些實施例中，第一及第二引子包含SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、67、68、69及70之核酸分子，其中第一或第二引子與該核酸分子共有足以擴增品系127核酸分子之序列一致性或互補性。在其他實施例中，第一及第二引子可包含SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、67、68、69及70中所示之序列中之任一者或任何組合。引子可具有任何足以擴增大豆品系127區域之長度，包括例如至少6個、7個、8個、9個、10個、15個、20個、15個或30個或約7-10個、10-15個、15-20個、20-25個、25-30個、30-35個、35-40個、40-45個核苷酸或更長。
如上文所述，在某些實施例中，適用引子對可包括一個與介於***DNA與側接5'或3'基因組DNA之間的接合點重疊之引子。該等引子可經設計位於介於5'側接DNA與***DNA之間的接合點(亦即，介於SEQ ID NO：1之位置1311與1312之間的接合點)附近，以及位於介於***DNA與3'側接DNA之間的接合點(亦即介於SEQ ID NO：1之位置6069與6070之間的接合點)附近。該等引子可經設計以與側接區或***DNA之約10個核苷酸雜交，且與跨越***DNA或側接區中之接合點的至少1個核苷酸雜交。因此，舉例而言，引子可包含經設計以與由SEQ ID NO：1之至少下列位置所表示之核苷酸雜交的核苷酸序列：1311-1321、1302-1312、6060-6070及/或6069-6079。
在其他實施例中，適用之引子對可包括一個與介於***DNA之csr1-2編碼序列之重複部分的5'末端(位於SEQ ID NO：1之位置5694處)與相鄰***DNA部分之3'末端(亦即，位於SEQ ID NO：1之位置5693處)之間的接合點重疊之引子。該等引子可經設計以與重複區或相鄰***DNA之約10個核苷酸雜交，且與跨越接合點(例如SEQ ID NO：1之至少5693-5703或至少5684-5694)之至少一個核苷酸雜交。
如本文中別處所述，可使用任何用於PCR擴增品系127核酸分子之方法，包括例如即時PCR。
因此，在一些實施例中，提供一種偵測生物樣本中品系127核酸分子之存在的方法。該方法包含(a)自生物樣本提取DNA樣本；(b)提供一對DNA引子分子(例如SEQ ID NO：35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、67、68、69及70之任何組合，其中該組合可擴增大豆品系127區域)，包括(但不限於)以下之序列：i) SEQ ID NO:35及SEQ ID NO:36、ii) SEQ ID NO:37及SEQ ID NO:38、iii)SEQ ID NO:39及SEQ ID NO:40、iv) SEQ ID NO:41及SEQ ID NO:42、v) SEQ ID NO:43及SEQ ID NO:44、vi) SEQ ID NO:67及SEQ ID NO:68、及vii) SEQ ID NO:69及SEQ ID NO:70；(c)提供DNA擴增反應條件；(d)進行DNA擴增反應，從而產生DNA擴增子分子；及(e)偵測DNA擴增子分子，其中對DNA擴增反應中之DNA擴增子分子的偵測可指示樣本中品系127核酸分子的存在。為了使核酸分子可用作引子或探針，其僅需在序列上足夠互補以便能夠在所用之特定溶劑及鹽濃度下形成穩定雙股結構。
在雜交技術中，可使用能與目標品系127核酸分子選擇性雜交之整個核酸分子或其一部分。當關於核酸分子探針時，「嚴格條件」或「嚴格雜交條件」意指探針應在可偵測之大於其他序列(例如高於背景至少2倍)之程度上與其目標序列雜交的條件。關於使用特定擴增引子對擴增目標核酸分子(例如藉由PCR來進行擴增)，「嚴格條件」為允許引子對與可與具有相應野生型序列之引子結合之目標核酸分子雜交的條件。嚴格條件為序列依賴性的且在不同情況下有所不同。藉由控制雜交及/或洗滌條件之嚴格度，可識別與探針100%互補之目標序列(同源探測)。或者，嚴格度條件可經調節以允許序列有一定的錯配，以便偵測較低的一致度(異源探測)。一般而言，探針長度不到約1000個核苷酸或不到500個核苷酸。
如本文中所用，實質上一致或互補之序列為可在高嚴格度條件下與所比較之核酸分子之互補序列特異性雜交的核酸分子。促進DNA雜交之適合嚴格度條件(例如在約45℃下，6×氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)，繼而在50℃下，2×SSC洗滌)為熟習此項技術者所知。通常，雜交及偵測之嚴格條件可為以下者，其中在pH 7.0至8.3下，鹽濃度低於約1.5M Na離子，通常為約0.01M至1.0M Na離子濃度(或其他鹽)，並且對於短探針(例如10至50個核苷酸)，溫度為至少約30℃且對於長探針(例如大於50個核苷酸)，溫度為至少約60℃。嚴格條件亦可由添加去穩定劑(諸如甲醯胺)來達成。低嚴格度條件之實例包括在30%至35%甲醯胺、1M NaCl、1% SDS(十二烷基硫酸鈉)之緩衝溶液中，在37℃下雜交，以及在1×至2×SSC(20×SSC=3.0M NaCl/0.3M檸檬酸鈉)中，在50℃至55℃下洗滌。中等嚴格度條件之實例包括在40%至45%甲醯胺、1.0M NaCl、1% SDS中，在37℃下雜交，以及在0.5×至1×SSC中，在55℃至60℃下洗滌。高嚴格度條件之實例包括在50%甲醯胺、1M NaCl、1% SDS中，在37℃下雜交，以及在0.1×SSC中，在60℃至65℃下洗滌。視情況而定，洗滌緩衝液可包含約0.1%至約1% SDS。雜交持續時間一般少於約24小時，通常為約4小時至約12小時。洗滌持續時間可為至少足以達到平衡之持續時段。
在雜交反應中，特異性通常視雜交後之洗滌而變化，關鍵因素為最終洗滌溶液之離子強度及溫度。對於DNA-DNA雜交物，Tm可根據Meinkoth及Wahl(1984) Anal. Biochem. 138:267-284之方程式估算：Tm=81.5℃+16.6(logM)+0.41(%GC)-0.61(%form)-500/L；其中M為單價陽離子之莫耳濃度，%GC為DNA中鳥苷及胞嘧啶核苷酸之百分比，%form為甲醯胺在雜交溶液中之百分比，且L為雜交物之長度(以鹼基對計)。Tm為50%互補目標序列與完全匹配探針雜交時之溫度(在確定的離子強度及pH值下)。對於每1%錯配，Tm降低約1℃；因此，可調節Tm、雜交及/或洗滌條件以與具有所需一致性之序列雜交。舉例而言，若尋找具有一致性之序列，則Tm可降低10℃。一般而言，對於特定序列及其互補序列，在確定的離子強度及pH值下，嚴格條件可經選擇為比熱熔點(Tm)低約5℃。然而，高嚴格條件可使用在比熱熔點(Tm)低1℃、2℃、3℃或4℃之溫度下之雜交及/或洗滌；中等嚴格條件可使用在比熱熔點(Tm)低6℃、7℃、8℃、9℃或10℃之溫度下之雜交及/或洗滌；低嚴格度條件可使用在比熱熔點(Tm)低11℃、12℃、13℃、14℃、15℃或20℃之溫度下之雜交及/或洗滌。使用該方程式、雜交與洗滌組合物及所需Tm，一般熟習此項技術者應瞭解對雜交及/或洗滌溶液之嚴格度之變化原有描述。若所需錯配度使得Tm低於45℃(水溶液)或32℃(甲醯胺溶液)，則最佳的是增加SSC濃度以便可使用較高溫度。探針與目標DNA分子之雜交可藉由多種熟習此項技術者已知之方法來偵測，此等方法包括(但不限於)螢光標記、放射性標記、基於抗體之標記及化學發光標記。
若2個核酸分子展現互補性，則將一個核酸分子稱作另一核酸分子之「互補序列」。如本文中所用，當核酸分子之一之每個核苷酸皆與另一者之核苷酸互補時，則可稱該等分子展現「完全互補性」。若2個分子彼此可在至少習知之「低嚴格度」條件下以足以允許其保持彼此黏接之穩定性雜交，則可稱其具有「最低互補性」。同樣，若2個分子彼此可在習知之「高嚴格度」條件下以足以允許其保持彼此黏接之穩定性雜交，則可稱該等分子具有「互補性」。
在其他實施例中，可藉由偵測所表現之擬南芥AHAS多肽來偵測或識別品系127植物。可使用任何方法來偵測AHAS多肽。舉例而言，可使用針對所引入之AHAS蛋白而產生之抗體來偵測所表現AHAS多肽的存在。
可使用任何方法(包括(但不限於)遺傳位元分析)來偵測品系127核酸分子或其擴增子。在一種方法中，設計與相鄰側接DNA序列及***DNA序列兩者重疊之DNA寡核苷酸。在其他實施例中，DNA引子寡聚物經設計以用於品系127特異性擴增子。在微孔板之各孔中使寡核苷酸固定。在對相關區域進行PCR後，單股PCR產物可與經固定之寡核苷酸雜交且用作使用對於預期下一個鹼基具有特異性之DNA聚合酶及經標記ddNTP的單鹼基延長反應之模板。讀數可基於螢光或ELISA。歸因於成功擴增、雜交及單鹼基延長，信號指示***/側接序列的存在。
另一種用於本發明方法中之偵測方法為焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術。在此方法中，設計與相鄰DNA及***DNA接合點重疊之寡核苷酸或使用一對可擴增品系127特異性區域之寡聚物。使寡核苷酸與來自相關區域之單股PCR產物(一個引子處於***序列中且一個引子處於側接序列中)雜交，且在DNA聚合酶、ATP、硫酸化酶(sulfurylase)、螢光素酶、三磷酸腺苷雙磷酸酶(apyrase)、腺苷5'磷酸硫酸酯(adenosine 5' phosphosulfate)及螢光素存在下培育。個別添加dNTP且該併入產生光信號，量測該光信號。歸因於成功擴增、雜交及單鹼基或多鹼基延長，光信號指示轉殖基因***/側接序列的存在。
亦可使用螢光偏振來偵測本發明之擴增子。使用此方法，設計與側接及***DNA接合點重疊之寡核苷酸或使用一對可擴增品系127特異性區域之寡聚物。使寡核苷酸與來自相關區域之單股PCR產物(一個引子處於***DNA中且一個引子處於側接DNA序列中)雜交，且在DNA聚合酶及螢光標記之ddNTP存在下培育。單鹼基延長使ddNTP得以併入。併入可使用螢光計根據偏振變化來量測。歸因於成功擴增、雜交及單鹼基延長，偏振變化指示轉殖基因***/側接序列的存在。
亦可使用Taqman基因表現檢定(PE Applied Biosystems,Foster City,Calif.)來偵測及定量品系127核酸分子的存在。簡言之，設計與側接及***DNA接合點重疊之FRET寡核苷酸探針或使用一對可擴增品系127核酸分子之寡聚物。在熱穩定性聚合酶及dNTP存在下，使FRET探針及PCR引子(一個引子處於***DNA序列中且一個引子處於側接基因組序列中)循環。FRET探針之雜交導致FRET探針上螢光部分之裂解及釋放遠離淬滅部分。歸因於成功擴增及雜交，螢光信號指示側接/轉殖基因***序列的存在。
在所揭示之方法中亦可使用分子信標。簡言之，設計與側接及***DNA接合點重疊之FRET寡核苷酸探針或使用一對可擴增127特異性區域之寡聚物。FRET探針之獨特結構使得其含有保持螢光部分與淬滅部分緊密接近之二級結構。在熱穩定性聚合酶及dNTP存在下，使FRET探針及PCR引子(一個引子處於***DNA序列中且一個引子處於側接序列中)循環。在成功的PCR擴增後，FRET探針與目標序列雜交會引起探針二級結構消除且使螢光部分與淬滅部分空間上分離。產生螢光信號。歸因於成功擴增及雜交，螢光信號指示側接/轉殖基因***序列的存在。
使用對擴增子內所見之序列具有特異性之探針的雜交反應為另一種用於偵測由本發明之PCR反應所產生之擴增子的方法。
在另一實施例中，可利用偵測由品系127核酸分子產生之多肽的方法來偵測或識別品系127核酸分子。舉例而言，可使用本文中所揭示之方法來偵測csr-1AHAS基因之表現產物。該等方法可涉及使用能夠結合於由***品系127核酸分子所產生之多肽的結合蛋白。該等方法包括(但不限於)免疫檢定，諸如ELISA(酶聯免疫吸附檢定)、抗原檢定、免疫染色、免疫組織化學、蛋白質晶片檢定、放射免疫沈澱檢定、快速膜式免疫層析檢定及快速試紙式免疫層析檢定(rapid stick immunochromatographic assay)(側流測試)。
本文中所揭示之方法可例如藉由使診斷性分子(諸如引子及/或探針)附著於基底上以形成裝置(例如陣列或微陣列)或附著於多孔板而適用於高通量技術中。裝置可以諸如以下之任何適用形式提供：晶片、載玻片、板、膜、纖維、珠粒、條帶、棒狀物、墊塊、網格、桿狀物、織物、容器壁及其類似者。另外，基底可由任何可用材料製成，該等材料諸如玻璃、陶瓷、凝膠(例如水凝膠、微凝膠、假凝膠)及聚合材料(例如塑膠、聚矽氧、含氟聚合物)。因此，用於本發明之裝置及方法中之基底包括(但不限於)矽石晶片、耐綸膜、光學纖維、多孔板及其類似者。可使用任何可用之附著方法(諸如共價結合、配位結合及非共價結合(例如離子結合、氫鍵結合、親脂性吸引力))使探針或其他品系127診斷性分子附著於基底。
基於陣列之高通量偵測、識別或監測表現之方法可用於量測品系127核酸分子雜交目標。基於晶片之方法涉及使用核酸分子之微陣列作為基因特異性雜交目標以定量量測相應基因的表現。可同時查詢大序列中之每個核苷酸。可使用雜交來有效地分析核苷酸序列。
在本發明方法中可使用任何可用之微陣列方法。舉例而言，微陣列方法可藉由使欲分析之序列與一組表示所有可能的子序列之寡核苷酸或cDNA分子雜交來比較欲分析之序列。第二方法使樣本與寡核苷酸或cDNA探針之陣列雜交。由與品系127目標序列之子序列互補之寡核苷酸或cDNA分子組成的陣列可用於測定目標序列之一致性、量測其量，及偵測目標序列與參照序列之間的差異。核酸分子微陣列亦可用蛋白質分子或其片段來篩選以測定特異性結合蛋白質分子或其片段之核酸分子。其他用於本發明方法中之微陣列診斷方法包括例如美國公開案第2007/0298423號中所揭示之方法。
因此，可使用任何可用之方法來識別或偵測樣本中之品系127核酸分子。該等方法包括(但不限於)凝膠分離技術、核酸墨點偵測(例如南方雜交、北方雜交)、定性、半定量或定量PCR、用於偵測經修飾AHASL之表現之免疫測定(例如使用任何免疫球蛋白、單株抗體、單鏈抗體或結合區保留抗體片段之ELISA、條帶檢定(例如側流條帶))及基於微陣列或「微晶片」之偵測檢定。在其他實施例中，該等方法可涉及使用質譜或核磁共振(NMR)技術來偵測或識別生物樣本中品系127核酸分子的存在。
適用於該等偵測方法中之裝置亦提供於其各種實施例中，該等裝置包含具有一表面之固體支撐物；及附著於其上之至少一種品系127診斷性分子。此等裝置可為雜交檢定裝置、免疫檢定裝置、受體-配位體結合檢定裝置或此項技術中已知之任何其他裝置。
本發明亦提供用於偵測品系127植物或品系127核酸分子之套組，其中該套組包含能夠擴增品系127核酸分子之第一及第二核酸引子。所得經擴增之品系127核酸分子可被直接偵測，或用作與含DNA之生物樣本之反應中的雜交探針。
如本文中所用，「套組」係指一組用於執行方法實施例，更特定而言，用於識別及/或偵測生物樣本中之127品系的試劑。出於品質控制(例如種子批料之純度)、偵測植物材料或包含或源自植物材料之材料(諸如(但不限於)食品或飼料產品)中之品系127核酸分子的目的，可使用該套組且可特定地調整其組分。
在特定實施例中，提供一種用於識別生物樣本中之品系127核酸分子的套組。該套組包含第一及第二引子，其中該第一及該第二引子能夠擴增品系127核酸分子。在其他實施例中，該套組亦包含用於偵測品系127核酸分子之核酸分子。該套組可包含例如第一引子及第二引子，該第一引子及該第二引子包含具有SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43及44序列之核酸分子，其中該第一或該第二引子與該核酸分子共有足以擴增品系127核酸分子之序列同源性或互補性。舉例而言，在特定實施例中，第一引子或第二引子包含具有SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、67、68、69及70序列之核酸分子的片段，其中該第一或該第二引子與該核酸分子共有足以擴增品系127分子之序列同源性或互補性。引子對可包含具有SEQ ID NO:5序列之核酸分子的片段及具有SEQ ID NO:6序列之核酸分子的片段，或者，引子對可選自以下之序列：i)SEQ ID NO:35及SEQ ID NO:36、ii)SEQ ID NO:37及SEQ ID NO:38、iii)SEQ ID NO:39及SEQ ID NO:40、iv)SEQ ID NO:41及SEQ ID NO:42、v)SEQ ID NO:43及SEQ ID NO:44、vi)SEQ ID NO:67及SEQ ID NO:68、及vii)SEQ ID NO:69及SEQ ID NO:70。在其他實施例中，第一及第二引子可包含SEQ ID NO:35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、67、68、69及70中所示之序列中之任一者或任何組合。引子可具有任何足以擴增品系127分子之長度，包括例如至少6個、7個、8個、9個、10個、15個、20個、15個或30個或約7-10個、10-15個、15-20個、20-25個、25-30個、30-35個、35-40個、40-45個核苷酸或更長。
進一步提供DNA偵測套組，其包含至少一種可特異性偵測品系127區域之核酸分子，其中該核酸分子包含至少一種具有足夠長度之連續核苷酸的與SEQ ID NO:5及/或6同源或互補之DNA分子。在一些實施例中，DNA偵測套組包含具有SEQ ID NO:5及/或6之核酸分子，或包含與可特異性偵測品系127區域之序列雜交的序列，諸如選自由SEQ ID NO:5及/或6組成之群的序列。
本發明亦提供用於控制雜草或不合需要之植物的方法及組合物。該等方法一般涉及向含有一或多棵品系127大豆植物之耕種區域或作物田間施用有效量之一或多種非選擇性除草劑。儘管可用所揭示之方法控制任何雜草，但在一些實施例中，該等方法可涉及首先識別區域或田間對AHAS抑制性除草劑敏感之雜草或不合需要之植物。
提供控制耕種區域之雜草、防止雜草或不合需要之植物在耕種區域產生或出現、生產作物及增加作物安全性之方法。例如如「控制雜草」中之術語「控制」及其衍生詞係指以下中之一或多者：抑制雜草及/或不合需要之植物生長、發芽、繁殖及/或增殖；及/或殺死、移除、破壞雜草及/或不合需要之植物；或以其他方式降低雜草及/或不合需要之植物的出現率及/或活性。
本發明方法可將一區域之雜草或不合需要之植物控制至任何可量測之量，諸如與未用相同量及類型之除草劑處理的區域相比，使一區域之雜草或不合需要之植物的量減少至少約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%。可藉由任何可再現之量測方式來量測對雜草或不合需要之植物的控制。在一實施例中，對雜草或不合需要之植物的控制係藉由對在經除草劑處理之區域中生長的雜草或不合需要之植物之數目進行計數，且與在未經處理之具有類似尺寸之區域中生長的雜草或不合需要之植物之數目進行比較來量測。
本發明亦提供藉由使品系127大豆植物之種子在播種前及/或催芽後與AHAS抑制性除草劑接觸來控制雜草或不合需要之植物的方法。該方法可進一步包含將種子例如播種於適合的生長培養基(諸如田間土壤)中或播種於溫室中之盆栽培養基中。該等方法可特別用於控制緊鄰種子附近之雜草及/或不合需要之植物。
在最廣泛意義上，雜草應理解為意謂所有彼等在不合需要之位置生長之植物。
可用本發明方法控制之雜草包括例如雙子葉及單子葉雜草。可使用所揭示之方法控制之雙子葉雜草包括(但不限於)以下屬之雜草：芥子屬(Sinapis)、獨行菜屬(Lepidium)、豬殃殃屬(Galium)、繁縷屬(Stellaria)、洋甘菊屬(Matricaria)、春黃菊屬(Anthemis)、小米菊屬(Galinsoga)、藜屬(Chenopodium)、蕁麻屬(Urtica)、千里光屬(Senecio)、莧屬(Amaranthus)、馬齒莧屬(Portulaca)、蒼耳屬(Xanthium)、旋花屬(Convolvulus)、番薯屬(Ipomoea)、蓼屬(Polygonum)、田菁屬(Sesbania)、豚草屬(Ambrosia)、薊屬(Cirsium)、飛廉屬(Carduus)、苦苣菜屬(Sonchus)、茄屬(Solanum)、葶藶屬(Rorippa)、節節菜屬(Rotala)、母草屬(Lindernia)、野芝麻屬(Lamium)、婆婆納屬(Veronica)、白麻屬(Abutilon)、三棘果屬(Emex)、曼陀羅屬(Datura)、堇菜屬(Viola)、鼬瓣花屬(Galeopsis)、罌粟屬(Papaver)、矢車菊屬(Centaurea)、三葉草屬(Trifolium)、毛莨屬(Ranunculus)及蒲公英屬(Taraxacum)。可使用所揭示之方法控制之單子葉雜草包括(但不限於)以下屬之雜草：稗屬(Echinochloa)、狗尾草屬(Setaria)、黍屬(Panicum)、馬唐屬(Digitaria)、梯牧草屬(Phleum)、早熟禾屬(Poa)、羊茅屬(Festuca)、穇屬(Eleusine)、臂形草屬(Brachiaria)、黑麥草屬(Lolium)、雀麥屬(Bromus)、燕麥屬(Avena)、莎草屬(Cyperus)、高粱屬(Sorghum)、冰草屬(Agropyron)、狗牙根屬(Cynodon)、鴨舌草屬(Monochoria)、飄拂草屬(Fimbristyslis)、慈姑屬(Sagittaria)、荸薺屬(Eleocharis)、藨草屬(Scirpus)、雀稗屬(Paspalum)、鴨嘴草屬(Ischaemum)、尖瓣花屬(Sphenoclea)、龍爪茅屬(Dactyloctenium)、剪股穎屬(Agrostis)、看麥娘屬(Alopecurus)及阿批拉草屬(Apera)。可用本發明方法控制之特定雜草包括(但不限於)農業上重要之雜草，諸如番薯屬、鴨蹠草屬(Commelina spp.)、長柄菊(Tridax procumbens)、大戟屬(Euphorbia spp.)、黃花稔屬(Sida spp.)、鬼針草屬(Bidens spp.)、小米菊屬、茄屬、蒼耳屬、藜屬、闊葉豐花草(Spermacoce latif lia)、巴西擬鴨舌黃(Richardia brdsiliensis)、日本苦苣菜(Sonchus oleraceous)、白酒草屬(Conyza spp)、莧屬、刺苞果屬(Acanthospermum spp.)、香苦草屬(Hyptis spp.)、馬齒莧(Portulaca oleracea)、決明子(Casia obtusifolia)且亦包括控制莎草屬之莎草科(cyperaceas)物種以及包括以下之禾本科植物物種：臂形草屬、馬唐屬、黍屬、狗尾草屬、假高樑(Sorghum halepense)、稗屬、牛筋草(Eleusine indica)及狼尾草屬(Pennisetum spp.)。在使用非選擇性咪唑啉酮除草劑之情況下，所揭示之方法有利於控制難以控制之雜草，諸如鴨蹠草屬、白酒草屬、飛揚草(Chamaesise hirta)、闊葉豐花草、巴西擬鴨舌黃、番薯屬、白苞猩猩草(Euphorbia heterophylla)、稗屬及決明子。
另外，可用本發明方法控制之雜草包括例如在經識別位置生長之不合需要之作物植物。舉例而言，若玉米植物在大豆植物田間為不需要的，則主要包含品系127大豆植物之田間的自生玉米植物可視作雜草。
可用本發明方法控制之不合需要之植物包括彼等先前在先前季節中種植於特定田間，或已種植於相鄰區域之植物，且包括作物植物，包括大豆、玉米、芥花、棉花、向日葵及其類似者。在一些態樣中，作物植物可耐受除草劑，諸如草甘膦或草銨膦除草劑，或可耐受AHAS抑制性除草劑。
如本文中所用，「耕種區域」包含希望生長一或多種植物(諸如品系127大豆植物)之任何區域。該等耕種區域包括(但不限於)耕種有品系127大豆植物之田間(諸如作物田間、田間試驗等)、溫室、生長室等。
該等方法包含將品系127大豆種子或大豆植物種植於耕種區域，且在一些實施例中，向作物、種子、雜草、不合需要之植物、土壤或其耕種區域施用有效量之相關除草劑。可在耕種品系127大豆植物期間在任何時間施用除草劑。可在耕種區域種植作物之前或之後施用除草劑。該等除草劑施用可包括施用AHAS抑制性除草劑或其組合。
術語「有效量」意謂足以對耕種區域之雜草或不合需要之植物產生任何可觀測到之控制程度的除草劑之量。AHAS抑制性除草劑之有效量可處於介於約50g ai/ha至約500g ai/ha之間、介於約50g ai/ha至約400g ai/ha之間，或介於約50g ai/ha至約300g ai/ha之間的範圍內。AHAS抑制性除草劑之有效量亦可為約70g ai/ha、140g ai/ha或280g ai/ha。在本發明方法中AHAS抑制性除草劑之有效施用量可受多種因素(包括環境)影響且應在實際使用條件下來確定。對雜草或不合需要之植物之控制可藉由以類似於或大於在不具有品系127大豆之區域中達成該種控制所用之量的用量一或多次施用AHAS抑制性除草劑來獲得。該等施用量包括70g ai/ha、140g ai/ha或280g ai/ha或等效於70g ai/ha、140g ai/ha或280g ai/ha之施用量。典型商用施用量為約70g ai/ha之 AHAS抑制性除草劑，亦稱作1×施用量。
在一些實施例中，有效量可為大於欲控制之雜草或不合需要之植物可耐受之量的AHAS抑制性除草劑之量。舉例而言，在雜草或不合需要之植物可耐受70g ai/ha之施用，但對140g ai/ha之施用敏感的實施例中，則有效量為140g ai/ha。
因此，本發明提供控制耕種區域之雜草或不合需要之植物生長的方法，其包含向具有一或多棵品系127大豆植物之耕種區域施用有效量之非選擇性除草劑。
亦提供控制耕種區域之草甘膦耐受性雜草或植物之方法，其包含向具有一或多棵品系127大豆植物之耕種區域施用有效量之AHAS抑制性除草劑。
亦提供一種控制耕種區域之AHAS抑制性除草劑耐受性雜草或植物之方法，其包含向具有一或多棵品系127大豆植物之耕種區域施用有效量之AHAS抑制性除草劑。在該等實施例中，以足以控制雜草，同時對品系127大豆植物實質上無影響之量來施用有效量之AHAS抑制性除草劑。
在一些實施例中，可在一區域中種植品系127大豆種子之前，控制雜草。舉例而言，可在種植種子之前以可有效減少或消除一區域在種植種子前之雜草的量將非選擇性除草劑(諸如AHAS抑制性除草劑)施用於該區域。可在種植前任何可有效控制雜草之時間時進行該等施用，例如在種植前1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或14天以上。另外，在該等方法中可施用任何農用組合物組合。
在其他實施例中，可在種植品系127大豆種子之後控制雜草。舉例而言，可將AHAS抑制性除草劑施用於生長大豆植物、植物部分、圍繞生長植物及與其相鄰之生長培養基(諸如土壤)，或大豆品系127植物生長之區域(亦即局部環境)，其用量可有效控制該區域之雜草。生長大豆品系127植物可處於任何發育階段。在一些該等實施例中，生長大豆至少處於第一真葉階段，此時施用除草劑。另外，在該等方法中可施用任何農用組合物組合。
若在該等方法中使用農用組合物之組合，則該等組合可包括除草劑、殺真菌劑、殺細菌劑、殺昆蟲劑及其類似者之組合。舉例而言，AHAS抑制性除草劑可與諸如以下之其他除草劑組合：5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)抑制性除草劑、麩醯胺酸合成酶(GS)抑制性除草劑、原卟啉原[IX]氧化酶(PPO)抑制性除草劑、植物生長素除草劑或其組合。
亦提供增加大豆植物產率之方法，其包含向具有一或多棵品系127大豆植物之耕種區域施用有效量之AHAS抑制性除草劑及自該(等)大豆植物收穫種子。在一些實施例中，大豆植物產率之增加為在大豆植物之局部區域中生長且通常會與大豆植物競爭之雜草減少的結果。
藉由使用該等方法，與不具有大豆品系127植物之類似區域相比，可增加一區域之大豆產率。大豆產率與由不具有品系127大豆植物且施用有效量之AHAS抑制性除草劑之類似區域所獲得的產率相比，可有任何程度的增加，包括(但不限於)5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、20%、25%或25%以上。
本發明亦提供用於向所揭示之大豆127植物施用之農用組合物。該等組合物可包括除草劑、殺真菌劑、殺細菌劑、肥料及其類似者。在一實施例中，農用組合物為除草組合物，其包含一或多種除草劑或一或多種除草劑與另一農用組合物(諸如殺真菌劑、殺細菌劑、肥料及其類似者)之組合。
可向大豆品系127作物、作物部分或含有品系127大豆植物之耕種區域施用任何除草劑。除草劑之分類(亦即將除草劑分成各種類別及亞類)在此項技術中係熟知的，且包括根據HRAC(除草劑抗性執行委員會(Herbicide Resistance Action Committee))及WSSA(美國雜草科學協會)之分類。HRAC分類可例如在全球範圍內在網站hracglobal.com/Publications/Classificationof HerbicideModeofAction/tabid/222/Default.aspx上獲得。HRAC分類之簡化版本(以及關於相應WSSA群之說明)。
在一些實施例中，本發明提供涉及使用至少一種選自由咪唑啉酮除草劑、磺醯脲除草劑、***并嘧啶除草劑、嘧啶基氧基苯甲酸酯除草劑、磺醯胺基羰基***啉酮除草劑及其混合物組成之群之AHAS抑制性除草劑的方法。在此等方法中，可用此項技術中已知之任何方法來施用AHAS抑制性除草劑，該方法包括(但不限於)種子處理、土壤處理及葉面處理。
在一些實施例中，AHAS抑制性除草劑可與一或多種諸如以下之其他農用組合物組合：其他除草劑、殺真菌劑、殺細菌劑、抗病毒組合物或其組合。該等組合中所用之其他除草劑包括任何除草劑，包括磺醯胺除草劑、有機磷酸酯除草劑及苯并噻二嗪酮除草劑。磺醯胺除草劑包括(但不限於)嘧啶肟草醚(saflufenacil)。有機磷酸酯除草劑包括(但不限於)草甘膦及草銨膦。苯并噻二嗪酮除草劑包括(但不限於)本達隆(bentazon)。用於該等組合中之殺真菌劑包括(但不限於)百克敏(pyraclostrobin)。
以AHAS抑制性除草劑組合物組合及/或以一或多種AHAS抑制性除草劑組合物及一或多種其他農用組合物處理可藉由施用該等組合物之混合物、共同施用該等組合物、連續施用該等組合物，或其任何組合來進行。
在一些實施例中，AHAS抑制性除草劑組合物包含至少一種A)AHAS抑制性除草劑及至少一種其他活性化合物，該活性化合物選自B)類別b1)至b15)之除草劑：
b1)脂質生物合成抑制劑；
b2)乙醯乳酸合成酶抑制劑(AHAS抑制劑)；
b3)光合作用抑制劑；
b4)原卟啉原-IX氧化酶抑制劑；
b5)漂白劑除草劑；
b6)烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSP抑制劑)；
b7)麩醯胺酸合成酶抑制劑；
b8)7,8-二氫喋酸合成酶抑制劑(DHP抑制劑)；
b9)有絲***抑制劑；
b10)長鏈脂肪酸合成抑制劑(VLCFA抑制劑)；
b11)纖維素生物合成抑制劑；
b12)去偶合劑除草劑；
b13)植物生長素除草劑；
b14)植物生長素輸送抑制劑；
b15)其他選自由以下組成之群的除草劑：新燕靈(benzoylprop)、麥草氟(flamprop)、高效麥草氟(flamprop-M)、溴丁醯草胺(bromobutide)、整形醇(chlorflurenol)、環庚草醚(cinmethylin)、甲基迪慕隆(methyldymuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、殺木膦(fosamine)、威百畝(metam)、稗草畏(pyributicarb)、噁嗪草酮(oxaziclomefone)、邁隆(dazomet)、三嗪氟草胺(triaziflam)及甲基溴，以及活性化合物B之農業上可接受之鹽及活性化合物B之農業上可接受之衍生物，其限制條件為其具有羧基。
在其他狀況下，至少一種A)AHAS抑制性除草劑與至少一種除草劑B之該類組合可與安全劑C組合使用(該等安全劑亦可與至少一種AHAS抑制性除草劑組合使用)。安全劑C可選自：解草酮(benoxacor)、解毒喹(cloquintocet)、解草胺腈(cyometrinil)、二氯丙烯胺(dichlormid)、地賽隆(dicyclonon)、迪艾索拉(dietholate)、解草唑(fenchlorazole)、解草啶(fenclorim)、解草安(flurazole)、肟草安(fluxofenim)、呋喃解草唑(furilazole)、雙苯噁唑酸(isoxadifen)、吡唑解草酯(mefenpyr)、對氯苯基胺基甲酸甲酯(mephenate)、萘二甲酸酐、2,2,5-三甲基-1-3-(二氯乙醯基)-1,3-噁唑啶(R-29148)、4-(二氯乙醯基)-1-氧雜-4-氮雜螺[4.5]癸烷(AD-67；MON 4660)及解草腈(oxabetrinil)，以及活性化合物C之農業上可接受之鹽及活性化合物C之農業上可接受之衍生物，其限制條件為其具有羧基。
可與AHAS抑制性化合物組合使用之除草劑B之實例為：
b1)來自脂質生物合成抑制劑之群：氯拉西伏(chlorazifop)、炔草酸(clodinafop)、力平之(clofop)、賽伏草(cyhalofop)、禾草靈(diclofop)、芬殺草(fenoxaprop)、精芬殺草(fenoxaprop-p)、噻唑禾草靈(fenthiaprop)、伏寄普(fluazifop)、精伏寄普(fluazifop-P)、合氯氟(haloxyfop)、精合氯氟(haloxyfop-P)、異噁草醚(isoxapyrifop)、噁唑醯草胺(metamifop)、普拔草(propaquizafop)、喹禾靈(quizalofop)、精喹禾靈(quizalofop-P)、三伏(trifop)、亞汰草(alloxydim)、丁苯草酮(butroxydim)、剋草同(clethodim)、塞科洛定(cloproxydim)、環殺草(cycloxydim)、環苯草酮(profoxydim)、西殺草(sethoxydim)、得殺草(tepraloxydim)、肟草酮(tralkoxydim)、丁草特(butylate)、草滅特(cycloate)、燕麥敵(diallate)、哌草丹(dimepiperate)、EPTC、戊草丹(esprocarb)、硫草敵(ethiolate)、異泊林納(isopolinate)、美塞本卡(methiobencarb)、禾草敵(molinate)、坪草丹(orbencarb)、克草猛(pebulate)、苄草丹(prosulfocarb)、菜草畏(sulfallate)、禾草丹(thiobencarb)、仲草丹(tiocarbazil)、野麥畏(triallate)、滅草猛(vernolate)、呋草黃(benfuresate)、乙氧呋草黃(ethofumesate)及地散磷(bensulide)；
b2)來自AHAS抑制劑之群：醯嘧磺隆、四唑嘧磺隆、免速隆、氯嘧磺隆、氯磺隆、醚磺隆、環磺隆(cyclosulfamuron)、胺苯磺隆、亞速隆、伏速隆、氟啶嘧磺隆、甲醯胺磺隆、氯吡嘧磺隆、依速隆、碘磺隆、甲基二磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、環氧嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、百速隆、碸嘧磺隆、嘧磺隆、磺醯磺隆、噻吩磺隆、醚苯磺隆、苯磺隆、三氟啶磺隆、氟胺磺隆、三氟甲磺隆、咪草酸(imazamethabenz)、甲氧咪草煙、甲基咪草煙、依滅草、滅草喹、咪草煙、氯酯磺草胺、雙氯磺草胺、雙氟磺草胺、唑嘧磺草胺、磺草唑胺、五氟磺草胺、雙草醚、嘧草醚、丙苯磺隆、氟酮磺隆、嘧啶肟草醚、環酯草醚及嘧硫草醚；
b3)來自光合作用抑制劑之群：莠去通(atraton)、莠去津(atrazine)、莠滅淨(ametryne)、迭氮津(aziprotryne)、氰乃淨(cyanazine)、氰草淨(cyanatryn)、氯拉紮尼(chlorazine)、環丙津(cyprazine)、敵草淨(desmetryne)、二甲草淨(dimethametryne)、異丙淨(dipropetryn)、克菊特(eglinazine)、抑草津(ipazine)、美索丙嗪(mesoprazine)、醚草通(methometon)、美蘇撲津(methoprotryne)、撲塞津(procyazine)、甘撲津(proglinazine)、撲滅通(prometon)、撲草淨(prometryne)、撲滅津(propazine)、塞巴津(sebuthylazine)、仲丁通(secbumeton)、西瑪津(simazine)、西瑪通(simeton)、西草淨(simetryne)、特丁通(terbumeton)、特丁津(terbuthylazine)、特丁替尼(terbutryne)、草達津(trietazine)、米三二酮(ametridione)、艾布津(amibuzin)、環嗪酮(hexazinone)、丁嗪草酮(isomethiozin)、苯嗪草酮(metamitron)、嗪草酮(metribuzin)、除草定(bromacil)、異草定(isocil)、環草定(lenacil)、特草定(terbacil)、溴殺草敏(brompyrazon)、氯草敏(chloridazon)、迪米草敏(dimidazon)、甜菜安(desmedipham)、棉胺寧(phenisopham)、甜菜寧(phenmedipham)、乙基甜菜寧(phenmedipham-ethyl)、苯噻隆(benzthiazuron)、布修隆(buthiuron)、磺噻隆(ethidimuron)、愛速隆(isouron)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、單愛速隆(monoisouron)、丁噻隆(tebuthiuron)、噻氟隆(thiazafluron)、安速隆(anisuron)、播土隆(buturon)、氯溴隆(chlorbromuron)、氯土隆(chloreturon)、綠麥隆(chlorotoluron)、枯草隆(chloroxuron)、枯莠隆(difenoxuron)、噁唑隆(dimefuron)、敵草隆(diuron)、非草隆(fenuron)、伏草隆(fluometuron)、氟修隆(fluothiuron)、異丙隆(isoproturon)、利穀隆(linuron)、滅草恆(methiuron)、美本隆(metobenzuron)、秀穀隆(metobromuron)、甲氧隆(metoxuron)、綠穀隆(monolinuron)、滅草隆(monuron)、草不隆(neburon)、對氟隆(parafluron)、稀草隆(phenobenzuron)、環草隆(siduron)、甲氟隆(tetrafluron)、噻苯隆(thidiazuron)、牧草快(cyperquat)、迪噻枯(diethamquat)、野燕枯(difenzoquat)、殺草快(diquat)、伐草快(morfamquat)、對草快(paraquat)、溴播尼(bromobonil)、溴苯腈(bromoxynil)、羥敵草腈(chloroxynil)、碘播尼(iodobonil)、碘苯腈(ioxynil)、胺唑草酮(amicarbazone)、殺草全(bromofenoxim)、福美津(flumezin)、滅草定(methazole)、本達隆、敵稗(propanil)、蔬草滅(pentanochlor)、噠草特(pyridate)及噠嗪醇(pyridafol)；
b4)來自原卟啉原-IX氧化酶抑制劑之群：三氟羧草醚(acifluorfen)、治草醚(bifenox)、甲氧除草醚(chlomethoxyfen)、氯除草醚(chlornitrofen)、氟乳醚(ethoxyfen)、消草醚(fluorodifen)、氟草醚(fluoroglycofen)、氟除草醚(fluoronitrofen)、氟磺胺草醚(fomesafen)、氟呋草醚(furyloxyfen)、鹵索芬(halosafen)、乳氟禾草靈(lactofen)、除草醚(nitrofen)、三氟甲草醚(nitrofluorfen)、乙氧氟草醚(oxyfluorfen)、異丙吡草酯(fluazolate)、吡草醚(pyraflufen)、吲哚酮草酯(cinidon-ethyl)、氟烯草酸(flumiclorac)、丙炔氟草胺(flumioxazin)、炔草胺(flumipropyn)、噠草氟(fluthiacet)、噻二唑草胺(thidiazimin)、噁草酮(oxadiazon)、丙炔噁草酮(oxadiargyl)、唑啶草酮(azafenidin)、唑草酮(carfentrazone)、磺醯唑草酮(sulfentrazone)、環戊噁草酮(pentoxazone)、雙苯嘧草酮(benzfendizone)、氟丙嘧草酯(butafenacil)、雙唑草腈(pyraclonil)、氟唑草胺(profluazol)、氟噠嗪草酸(flufenpyr)、福普帕西(flupropacil)、吡氯草胺(nipyraclofen)及依替普密(etnipromid)；
b5)來自漂白劑除草劑之群：二甲達草伏(metflurazon)、氟草敏(norflurazon)、氟吩尼考(flufenican)、吡氟草胺(diflufenican)、氟吡草胺(picolinafen)、氟丁醯草胺(beflubutamid)、氟啶草酮(fluridone)、氟咯草酮(flurochloridone)、呋草酮(flurtamone)、甲基磺草酮(mesotrione)、磺草酮(sulcotrione)、氯草酮(isoxachlortole)、異噁唑草酮(isoxaflutole)、吡草酮(benzofenap)、吡唑特(pyrazolynate)、苄草唑(pyrazoxyfen)、苯并雙環酮(benzobicyclon)、殺草強(amitrole)、異噁草酮(clomazone)、苯草醚(aclonifen)、4-(3-三氟甲基苯氧基)-2-(4-三氟甲基苯基)嘧啶以及式I之3-雜環基取代之苯甲醯基衍生物：
其中代號R8至R13係如下文所定義：R8、R10為氫、鹵素、C1-C6烷基、C1-C6鹵烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵烷氧基、C1-C6烷基硫基、C1-C6烷基亞磺醯基或C1-C6烷基磺醯基；R9為選自由以下組成之群的雜環基：噻唑-2-基、噻唑-4-基、噻唑-5-基、異噁唑-3-基、異噁唑-4-基、10-異噁唑-5-基、4,5-二氫異噁唑-3-基、4,5-二氫異噁唑-4-基及4,5-二氫異噁唑-5-基，其中所提及之9個基團可未經取代或經以下單取代或多取代，例如單取代、雙取代、三取代或四取代：鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵烷基、C1-C4鹵烷氧基或C1-C4烷基硫基；R11為氫、鹵素或C1-C6烷基；R12為C1-C6烷基；R13為氫或C1-C6烷基。
b6)來自EPSP合成酶抑制劑之群：草甘膦；
b7)來自麩醯胺酸合成酶抑制劑之群：草銨膦及畢拉草(bilanaphos)；
b8)來自DHP合成酶抑制劑之群：磺草靈(asulam)；
b9)來自有絲***抑制劑之群：氟草胺(benfluralin)、比達寧(butralin)、敵樂胺(dinitramine)、乙丁烯氟靈(ethalfluralin)、氯乙氟靈(fluchloralin)、異丙樂靈(isopropalin)、甲丙樂靈(methalpropalin)、磺樂靈(nitralin)、安磺靈(oryzalin)、二甲戊樂靈(pendimethalin)、胺氟樂靈(prodiamine)、環丙氟靈(profluralin)、三福靈(trifluralin)、甲基胺草膦(amiprofos-methyl)、抑草磷(butamifos)、汰硫草(dithiopyr)、噻草啶(thiazopyr)、戊炔草胺(propyzamide)、牧草胺(tebutam)、敵草索(chlorthal)、長殺草(carbetamide)、氯草靈(chlorbufam)、氯苯胺靈(chlorpropham)及苯胺靈(propham)；
b10)來自VLCFA抑制劑之群：乙草胺(acetochlor)、草不綠(alachlor)、去草胺(butachlor)、丁烯草胺(butenachlor)、異丁草胺(delachlor)、乙醯甲草胺(diethatyl)、二甲草胺(dimethachlor)、噻吩草胺(dimethenamid)、精噻吩草胺(dimethenamid-P)、吡草胺(metazachlor)、異丙甲草胺(metolachlor)、高效異丙甲草胺(S-metolachlor)、丙草胺(pretilachlor)、毒草胺(propachlor)、異丙草胺(propisochlor)、丙炔草胺(prynachlor)、特丁草胺(terbuchlor)、噻吩草胺(thenylchlor)、二甲苯草胺(xylachlor)、草毒死(allidochlor)、CDEA、依普納(epronaz)、大芬滅(diphenamid)、敵草胺(napropamide)、萘丙胺(naproanilide)、烯草胺(pethoxamid)、氟噻草胺(flufenacet)、滅芬草(mefenacet)、四唑醯草胺(fentrazamide)、莎稗磷(anilofos)、哌草磷(piperophos)、苯酮唑(cafenstrole)、茚草酮(indanofan)及滅草環(tridiphane)；
b11)來自纖維素生物合成抑制劑之群：敵草腈(dichlobenil)、草克樂(chlorthiamid)、異噁草胺(isoxaben)及氟胺草唑(flupoxam)；
b12)來自去偶合劑除草劑之群：地樂芬特(dinofenate)、硝丙酚(dinoprop)、戊硝酚(dinosam)、地樂酚(dinoseb)、特樂酚(dinoterb)、DNOC、硝草酚(etinofen)及地樂施(medinoterb)；
b13)來自植物生長素除草劑之群：稗草胺(clomeprop)、2,4-D、2,4,5-T、MCPA、MCPA硫基乙基、2,4-滴丙酸(dichlorprop)、高2,4-滴丙酸(dichlorprop-P)、2-甲-4-氯丙酸(mecoprop)、高2-甲-4-氯丙酸(mecoprop-P)、2,4-DB、MCPB、草滅平(chloramben)、麥草畏、2,3,6-TBA、殺草畏(tricamba)、二氯喹啉酸(quinclorac)、喹草酸(quinmerac)、二氯吡啶甲酸(clopyralid)、氟草煙(fluroxypyr)、毒莠定(picloram)、綠草定(triclopyr)及草除靈(benazolin)；
b14)來自植物生長素輸送抑制劑之群：鈉得爛(naptalam)、氟吡草腙(diflufenzopyr)；
b15)新燕靈、麥草氟、高效麥草氟、溴丁醯草胺、整形醇、環庚草醚、甲基迪慕隆、乙氧苯草胺、殺木膦、威百畝、稗草畏、噁嗪草酮、邁隆、三嗪氟草胺及甲基溴。
群組b1)至b15)之活性化合物B及活性化合物C為已知除草劑及安全劑，參見例如The Compendium of Pesticide Common Names(可在全球網網址：hclrss.demon.co.uk/index.html上得到)；Farm Chemicals Handbook 2000，第86卷，Meister Publishing Company,2000；B. Hock,C. Fedtke,R. R. Schmidt,Herbizide,Georg Thieme Verlag,Stuttgart 1995；W. H. Ahrens,Herbicide Handbook，第7版，Weed Science Society of America,1994；及K. K. Hatzios,Herbicide Handbook，第7版附錄，Weed Science Society of America,1998。2,2,5-三甲基-3-(二氯乙醯基)-1,3-噁唑啶[CAS編號：52836-31-4]亦名為R-29148。4-(二氯乙醯基)-1-氧雜-4-氮雜螺[4.5]癸烷[CAS編號：71526-07-03]亦名為AD-67及MON 4660。式II之漂白劑除草劑已揭示於WO 96/26202、WO 97/41116、WO 97/41117及WO 97/41118中。
作為活性化合物C，組合物可包含下文所列之化合物中之至少一者：解草酮、解毒喹、二氯丙烯胺、解草唑、解草啶、肟草安、呋喃解草唑、雙苯噁唑酸、吡唑解草酯、2,2,5-三甲基-3-(二氯乙醯基)-1,3-噁唑啶、4-(二氯乙醯基)-1-氧雜-4-氮雜螺[4.5]癸烷及解草腈，及/或其農業上可接受之鹽及/或在具有COOH基團之化合物的狀況下，農業上可接受之衍生物。
含有活性成份組合之組合物可為二元及三元組合物，其包含至少一種AHAS抑制性化合物(作為活性化合物-A)及至少一種選自類別b1)至b15)之除草劑且適當時，包含一或多種安全劑C。
在包含至少一種AHAS抑制性化合物(作為組份A)及至少一種除草劑B之二元組合物中，活性化合物A:B之重量比可處於1:500至10:1之範圍內，處於1:100至10:1之範圍內，處於1:50至10:1之範圍內，或處於1:25至5:1之範圍內。
在包含至少一種AHAS抑制性化合物及至少一種安全劑C之二元組合物中，活性化合物A:C之重量比通常處於1:100至10:1、1:50至10:1之範圍內，或處於1:25至5:1之範圍內。
在包含AHAS抑制性化合物(作為組份A)、至少一種除草劑B及至少一種安全劑C之三元組合物中，組份A:B:C之相對重量比可處於10:1:1至1:500:10、10:1:1至1:100:10、10:1:1至1:50:1、或5:1:1至1:25:5之範圍內。在一實施例中，在三元組合物中，除草劑B與安全劑C之重量比處於50:1至1:10之範圍內。
美國專利第7,375,058號(以全文引用方式併入本文中)中所述之除草活性混合物亦可用於與大豆品系127植物相關之處理中。
原卟啉原[IX]氧化酶(PPO)抑制性除草劑亦可用於本發明之組合物中。PPO抑制性除草劑在此項技術中為已知的且包括(但不限於)二苯醚除草劑(包括硝基苯基醚除草劑)，諸如三氟羧草醚(5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-2-硝基苯甲酸)、治草醚(5-(2,4-二氯苯氧基)-2-硝基苯甲酸甲酯)、DPEI(5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-2-硝基苯乙酮肟-o-(乙酸，甲酯))、DPEII(5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-3-甲氧基苯酞)、氟乳醚((1S)-2-氯-5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]苯甲酸1-羧基乙酯)、氟磺胺草醚(5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-N-(甲基磺醯基)-2-硝基苯甲醯胺)、乳氟禾草靈(O-[5-(2-氯-α,α,α-三氟-對甲苯氧基)-2-硝基苯甲醯基]-DL-乳酸乙酯)及乙氧氟草醚(2-氯-1-(3-乙氧基-4-硝基苯氧基)-4-(三氟甲基)苯)。PPO抑制性除草劑亦包括二甲醯亞胺除草劑，諸如N-苯基-鄰苯二甲醯亞胺、氟烯草酸([2-氯-5-(環己-1-烯-1,2-二甲醯亞胺基)-4-氟苯氧基]乙酸)、丙炔氟草胺(N-(7-氟-3,4-二氫-3-側氧基-4-丙-2-炔基-2H-1,4-苯并噁嗪-6-基)環己-1-烯-1,2-二甲醯胺)。PPO抑制性除草劑進一步包括***啉酮除草劑，諸如唑草酮(α,2-二氯-5-[4-(二氟甲基)-4,5-二氫-3-甲基-5-側氧基-1H-1,2,4-***-1-基]-4-氟苯丙酸)及磺醯唑草酮(N-[2,4-二氯-5-[4-(二氟甲基)-4,5-二氫-3-甲基-5-側氧基-1H-1,2,4-***-1-基]苯基]甲烷磺醯胺)。PPO抑制性除草劑亦包括苯基吡唑除草劑，包括(但不限於)吡氯草胺(1-[2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基]-4-硝基-1H-吡唑-5-胺)及吡草醚(2-氯-5-(4-氯-5-二氟甲氧基-1-甲基吡唑-3-基)-4-氟苯氧基乙酸)。PPO抑制性除草劑亦包括噁二唑酮除草劑，諸如噁草酮(3-[2,4-二氯-5-(1-甲基乙氧基)苯基]-5-(1,1-二甲基乙基)-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮)及丙炔噁草酮(5-第三丁基-3-[2,4-二氯-5-(丙-2-炔基氧基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2(3H)-酮)。PPO抑制性除草劑進一步包括噻二唑酮除草劑，諸如噠草氟([[2-氯-4-氟-5-[(四氫-3-側氧基-1H,3H-[1,3,4]噻二唑并[3,4-a]噠嗪-1-亞基)胺基]苯基]硫基]乙酸)；以及Zagar及Sievernich之US2008254985(以全文引用之方式併入本文中)之III.4)部分中所述的噻二唑酮除草劑。
植物生長素除草劑亦可用於本發明之組合物中。植物生長素除草劑包括包含作用方式如同植物生長素模擬物或植物生長素抑制劑(抗植物生長素)之除草活性成份的除草劑。植物生長素除草劑之實例包括(但不限於)毒莠定(4-胺基-3,5,6-三氯吡啶甲酸)；麥草畏(3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸)；氯貝酸(clofibric acid，(對氯苯氧基)異丁酸)；2-(4-氯苯氧基)-2-甲基丙酸)；草除靈(4-氯-2-側氧基-3-苯并噻唑乙酸；4-氯-2-側氧基苯并噻唑啉-3-基-乙酸)；TIBA(2,3,5-三碘苯甲酸)；2,3,6-TBA(2,3,6-三氯苯甲酸)；綠草定(3,5,6-三氯-2-吡啶氧基乙酸)；二氯喹啉酸(3,7-二氯喹啉-8-甲酸)；及植物生長素模擬或植物生長素阻斷苯氧基除草劑，例如苯氧基乙酸、苯氧基丙酸及苯氧基丁酸除草劑，包括：2,4-D((2,4-二氯苯氧基)乙酸)、MCPA((4-氯-2-甲基苯氧基)乙酸)、2,4-DB(4-(2,4-二氯苯氧基)丁酸)、2,4-DEP(參[2-(2,4-二氯苯氧基)乙基]磷酸酯)、4-CPA(4-氯苯氧基乙酸)、2,4,5-T((2,4,5-三氯苯氧基)乙酸)、2,4-滴丙酸(2-(2,4-二氯苯氧基)丙酸)、2,4,5-涕丙酸(fenoprop，2-(2,4,5-三氯苯氧基)丙酸)及2-甲-4-氯丙酸(2-(2-甲基-4-氯-苯氧基)丙酸)。
本發明之農用組合物組合之實例包括：依滅草與甲基咪草煙；依滅草與本達隆；依滅草、甲基咪草煙及本達隆；依滅草與百克敏；依滅草、甲基咪草煙及百克敏；依滅草與嘧啶肟草醚；依滅草、甲基咪草煙及嘧啶肟草醚；甲基咪草煙、嘧啶肟草醚及草甘膦；依滅草、甲基咪草煙、嘧啶肟草醚及草甘膦；甲基咪草煙與草甘膦；依滅草與草甘膦；依滅草、嘧啶肟草醚及草甘膦；及嘧啶肟草醚與草甘膦。
施用前，可將除草劑(諸如AHAS抑制性除草劑)轉變為習用調配物，例如溶液、乳液、懸浮液、粉末、粉劑、糊劑及顆粒。使用形式視特定預期目的而定；在各狀況下，應確保本發明之化合物精細且均勻的分布。
用於本發明方法中之調配物可以任何已知方式製備，例如藉由向活性化合物中摻加適用於農用化學品調配物之助劑(諸如溶劑及/或載劑)，必要時摻加乳化劑、界面活性劑及分散劑、防腐劑、消泡劑、抗凍劑，對於種子處理調配物亦視情況摻加著色劑及/或黏合劑及/或膠凝劑來製備。
適用於該等調配物中之溶劑之實例包括水、芳族溶劑(例如Solvesso產品、二甲苯)、石蠟(例如礦物油餾份)、醇類(例如甲醇、丁醇、戊醇、苯甲醇)、酮類(例如環己酮、γ-丁內酯)、吡咯啶酮(NMP、NOP)、乙酸酯(乙二醇二乙酸酯)、二醇類、脂肪酸二甲基醯胺、脂肪酸及脂肪酸酯。亦可使用溶劑混合物。
適用於本發明調配物中之載劑之實例包括經研磨之天然礦物(例如高嶺土、黏土、滑石、白堊)及經研磨之合成礦物(例如高度分散矽石、矽酸鹽)。
適用於本發明調配物中之乳化劑包括非離子型及陰離子型乳化劑(例如聚氧乙烯脂肪醇醚、烷基磺酸鹽及芳基磺酸鹽)。
用於本發明調配物中之分散劑之實例包括木質素-亞硫酸鹽廢液及甲基纖維素。
適用於本發明調配物中之界面活性劑包括木質素磺酸、萘磺酸、酚磺酸、二丁基萘磺酸之鹼金屬、鹼土金屬及銨鹽、烷基芳基磺酸鹽、烷基硫酸鹽、烷基磺酸鹽、脂肪醇硫酸鹽、脂肪酸及硫酸化脂肪醇二醇醚，此外為磺化萘及萘衍生物與甲醛之縮合物、萘或萘磺酸與酚及甲醛之縮合物、聚氧乙烯辛基酚醚、乙氧基化異辛基酚、辛基酚、壬基酚、烷基酚聚乙二醇醚、三丁基苯基聚乙二醇醚、三硬脂醯基苯基聚乙二醇醚、烷基芳基聚醚醇、醇及脂肪醇環氧乙烷縮合物、乙氧基化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚、乙氧基化聚氧化丙烯、月桂醇聚乙二醇醚縮醛、山梨糖醇酯、木質素亞硫酸鹽廢液及甲基纖維素。
適用於製備可直接噴灑之溶液、乳液、糊劑或油分散液之物質為中等沸點至高沸點之礦物油餾份，諸如煤油或柴油；此外為煤焦油及植物或動物來源之油；脂族烴、環烴及芳族烴，例如甲苯、二甲苯、石蠟、四氫化萘、烷基化萘或其衍生物；甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、環己醇、環己酮、異佛爾酮；高極性溶劑，例如二甲亞碸、N-甲基吡咯啶酮或水。
亦可將諸如甘油、乙二醇、丙二醇之防凍劑及殺細菌劑添加至調配物中。
適用於本發明調配物中之消泡劑包括例如基於矽或硬脂酸鎂之消泡劑。
適用於本發明調配物中之防腐劑包括例如二氯苯酚及苯甲醇半甲醛。
本發明之種子處理調配物可另外包括黏合劑及視情況選用之著色劑。
可將黏合劑添加至所揭示之種子調配物中以改良在處理後活性物質於種子上之黏著性。適合黏合劑為嵌段共聚物EO/PO界面活性劑，以及聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丁烯、聚異丁烯、聚苯乙烯、聚乙烯胺、聚乙烯醯胺、聚乙烯亞胺(Lupasol、Polymin)、聚醚、聚胺基甲酸酯、聚乙酸乙烯酯、甲基纖維素及由此等聚合物衍生之共聚物。
調配物中亦可視情況包括著色劑。適用於種子處理調配物之著色劑或染料為若丹明(Rhodamin)B、C.I.顏料紅112、C.I.溶劑紅1、顏料藍15:4、顏料藍15:3、顏料藍15:2、顏料藍15:1、顏料藍80、顏料黃1、顏料黃13、顏料紅112、顏料紅48:2、顏料紅48:1、顏料紅57:1、顏料紅53:1、顏料橙43、顏料橙34、顏料橙5、顏料綠36、顏料綠7、顏料白6、顏料棕25、鹼性紫10、鹼性紫49、酸性紅51、酸性紅52、酸性紅14、酸性藍9、酸性黃23、鹼性紅10、鹼性紅108。
適合膠凝劑之一實例為角叉菜(Satiagel)。
粉劑、撒布用物質及可粉化產品可藉由將活性物質與固體載劑混合或伴隨研磨來製備。
例如經塗覆顆粒、經浸漬顆粒及均質顆粒之顆粒可藉由使活性化合物與固體載劑結合來製備。固體載劑之實例為礦土，諸如矽膠、矽酸鹽、滑石、高嶺土、美國活性白土、石灰石、石灰、白堊、紅玄武土、黃土、黏土、白雲石、矽藻土、硫酸鈣、硫酸鎂、氧化鎂、經研磨之合成材料；肥料，諸如硫酸銨、磷酸銨、硝酸銨、尿素；及植物源性產品，諸如穀類粗粉、樹皮粗粉、木材粗粉及堅果殼粗粉、纖維素粉；及其他固體載劑。
一般而言，調配物包含0.01重量%至95重量%、較佳為0.1重量%至90重量%之除草劑，例如AHAS抑制性除草劑。除草劑可以90重量%至100重量%、較佳為95重量%至100重量%之純度(根據NMR譜)來使用。出於種子處理目的，可將各別調配物按2-10倍稀釋以在即用製劑中產生以重量計0.01重量%至60重量%、較佳為0.1重量%至40重量%之活性化合物濃度。
本發明之AHAS抑制性除草劑可按原樣、以其調配物形式或由此所製備之使用形式，例如以可直接噴灑之溶液、粉劑、懸浮液或分散液、乳液、油分散液、糊劑、可粉化產品、撒布用物質或顆粒之形式藉由噴灑、霧化、粉化、撒布或灌注來使用。使用形式完全視預期目的而定；其意欲確保在各種狀況下使本發明之AHAS抑制性除草劑有儘可能最精細的分布。
可藉由添加水而自乳液濃縮物、糊劑或可潤濕性粉劑(可噴灑粉劑、油分散液)製備水性使用形式。為製備乳液、糊劑或油分散液，藉助於濕潤劑、增黏劑、分散劑或乳化劑可使物質本身或溶解於油或溶劑中之物質在水中均質化。然而，亦有可能製備由活性物質、濕潤劑、增黏劑、分散劑或乳化劑及(適當時)溶劑或油組成之濃縮物，且該等濃縮物適於用水稀釋。
即用製劑中之活性化合物濃度可在相對廣泛之範圍內變化。一般而言，其為0.0001重量%至10重量%，較佳為0.01重量%至1重量%。
本發明之AHAS抑制性除草劑亦可成功地以超低容量方法(ULV)來使用，該方法有可能施用包含超過95重量%之活性化合物的調配物，或甚至在無添加劑之情況下施用活性化合物。
以下為用於本發明方法中之AHAS抑制性除草劑調配物之實例：
1.適於以水稀釋之用於葉面施用之產品。出於種子處理之目的，該等產品可經稀釋或未經稀釋而施用於種子。
A) 水溶性濃縮物(SL、LS)
將10重量份AHAS抑制性除草劑溶解於90重量份水或水溶性溶劑中。作為另一項選擇，添加濕潤劑或其他助劑。AHAS抑制性除草劑以水稀釋後溶解，藉以獲得具有10%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
B) 可分散性濃縮物(DC)
在添加10重量份分散劑(例如聚乙烯吡咯啶酮)之同時，將20重量份AHAS抑制性除草劑溶解於70重量份環己酮中。以水稀釋得到分散液，藉以獲得具有20%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
C) 可乳化濃縮物(EC)
在添加十二烷基苯磺酸鈣及乙氧基化蓖麻油(在各種狀況下為5重量份)之同時，將15重量份AHAS抑制性除草劑溶解於7重量份二甲苯中。以水稀釋得到乳液，藉以獲得具有15%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
D) 乳液(EW、EO、ES)
在添加十二烷基苯磺酸鈣及乙氧基化蓖麻油(在各種狀況下為5重量份)之同時，將25重量份AHAS抑制性除草劑溶解於35重量份二甲苯中。藉助於乳化機(例如Ultraturrax)將此混合物引入30重量份水中且將其製成均質乳液。以水稀釋得到乳液，藉以獲得具有25%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
E) 懸浮液(SC、OD、FS)
在攪動式球磨機中，在添加10重量份分散劑、濕潤劑及70重量份水或有機溶劑之同時，將20重量份AHAS抑制性除草劑磨碎以得到精細AHAS抑制性除草劑懸浮液。以水稀釋得到AHAS抑制性除草劑之穩定懸浮液，藉以獲得具有20%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
F) 水分散性顆粒及水溶性顆粒(WG、SG)
在添加50重量份分散劑及濕潤劑之同時，將50重量份AHAS抑制性除草劑精細研磨且藉助於技術設備(例如擠壓機、噴霧塔、流化床)製成水分散性或水溶性顆粒。以水稀釋得到AHAS抑制性除草劑之穩定分散液或溶液，藉以獲得具有50%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
G) 水分散性粉劑及水溶性粉劑(WP、SP、SS、WS)
在轉子-定子研磨機中於添加25重量份分散劑、濕潤劑及矽膠之同時研磨75重量份之AHAS抑制性除草劑。以水稀釋得到AHAS抑制性除草劑之穩定分散液或溶液，藉以獲得具有75%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。
H) 凝膠調配物(GF)
在攪動式球磨機中，在添加10重量份分散劑、1重量份膠凝劑濕潤劑及70重量份水或有機溶劑之同時將20重量份AHAS抑制性除草劑磨碎以得到精細AHAS抑制性除草劑懸浮液。以水稀釋得到AHAS抑制性除草劑之穩定懸浮液，藉以獲得具有20%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。此凝膠調配物適合於種子處理。
2.不經稀釋而適用於葉面施用之產品。出於種子處理之目的，該等產品可經稀釋而施用於種子。
A) 可粉化粉劑(DP、DS)
將5重量份AHAS抑制性除草劑精細研磨且與95重量份細粉狀高嶺土精細混合。此舉得到具有5%(w/w)AHAS抑制性除草劑之可粉化產品。
B) 顆粒(GR、FG、GG、MG)
將0.5重量份AHAS抑制性除草劑精細研磨且與95.5重量份載劑結合，藉以獲得具有0.5%(w/w)AHAS抑制性除草劑之調配物。當前方法為擠壓、噴霧乾燥或流化床。此舉得到未經稀釋而適用於葉面使用之顆粒。
習知種子處理調配物包括例如可流動濃縮物FS、溶液LS、乾式處理用粉劑DS、漿料處理用水分散性粉劑WS、水溶性粉劑SS及乳液ES與EC及凝膠調配物GF。此等調配物可經稀釋或未經稀釋而施用於種子。施用於種子可在播種之前進行或直接對種子進行。
在一實施例中，FS調配物係用於種子處理。通常，FS調配物可包含1g/l-800g/l之活性成份、1g/l-200g/l之界面活性劑、0g/l至200g/l之防凍劑、0g/l至400g/l之黏合劑、0g/l至200g/l之顏料及至多1公升之溶劑(較佳為水)。
對於種子處理，用除草劑處理本發明之品系127大豆植物種子，該等除草劑諸如選自由諸如以下之AHAS抑制性除草劑組成之群的除草劑：醯嘧磺隆、四唑嘧磺隆、免速隆、氯嘧磺隆、氯磺隆、醚磺隆、環磺隆、胺苯磺隆、亞速隆、伏速隆、氟啶嘧磺隆、甲醯胺磺隆、氯吡嘧磺隆、依速隆、碘磺隆、甲基二磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、環氧嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、百速隆、碸嘧磺隆、嘧磺隆、磺醯磺隆、噻吩磺隆、醚苯磺隆、苯磺隆、三氟啶磺隆、氟胺磺隆、三氟甲磺隆、咪草酸、甲氧咪草煙、甲基咪草煙、依滅草、滅草喹、咪草煙、氯酯磺草胺、雙氯磺草胺、雙氟磺草胺、唑嘧磺草胺、磺草唑胺、五氟磺草胺、雙草醚、嘧草醚、丙苯磺隆、氟酮磺隆、嘧啶肟草醚、環酯草醚、嘧硫草醚及其混合物；或用包含AHAS抑制性除草劑之調配物處理。
術語種子處理包含此項技術中已知之所有適合之種子處理技術，諸如拌種(seed dressing)、種子包衣(seed coating)、種子噴粉(seed dusting)、浸種(seed soaking)及種子丸化(seed pelleting)。
根據本發明之一變體，本發明之另一標的為一種藉由(尤其)在種子條播機(seed drill)中施用以下物質來處理土壤之方法：含有呈組合物/調配物形式之AHAS抑制性除草劑的顆粒調配物(例如，具有視情況選用之一或多種固體或液體、農業上可接受之載劑及/或視情況具有一或多種農業上可接受之界面活性劑的顆粒調配物)中之任一者。此方法可有利地在例如穀物、玉米、棉花及向日葵之種子床中使用。
本發明亦包含用種子處理調配物包覆或含有種子處理調配物之種子，該種子處理調配物包含至少一種選自由以下組成之群的AHAS抑制性除草劑：醯嘧磺隆、四唑嘧磺隆、免速隆、氯嘧磺隆、氯磺隆、醚磺隆、環磺隆、胺苯磺隆、亞速隆、伏速隆、氟啶嘧磺隆、甲醯胺磺隆、氯吡嘧磺隆、依速隆、碘磺隆、甲基二磺隆、甲磺隆、煙嘧磺隆、環氧嘧磺隆、氟嘧磺隆、氟磺隆、百速隆、碸嘧磺隆、嘧磺隆、磺醯磺隆、噻吩磺隆、醚苯磺隆、苯磺隆、三氟啶磺隆、氟胺磺隆、三氟甲磺隆、咪草酸、甲氧咪草煙、甲基咪草煙、依滅草、滅草喹、咪草煙、氯酯磺草胺、雙氯磺草胺、雙氟磺草胺、唑嘧磺草胺、磺草唑胺、五氟磺草胺、雙草醚、嘧草醚、丙苯磺隆、氟酮磺隆、嘧啶肟草醚、環酯草醚及嘧硫草醚。
術語「種子」涵蓋所有種類之種子及植物繁殖體，包括(但不限於)實生種子、種塊、吸根、球根、球莖、果實、塊莖、插枝、伐條及其類似者。在一較佳實施例中，使用實生種子。「實生種子」係指含有胚芽且封閉於種皮或外種皮中之成熟植物胚珠，以及可含有此等封閉於果皮或殼中之胚珠的種子樣繁殖結構(諸如穎果或瘦果)。
術語「包覆及/或含有」一般表示在施用時活性成份大部分處於繁殖產物之表面上，不過視施用方法而定，較多或較少部分之成份亦可穿透至繁殖產物中。當(重新)種植該繁殖產物時，其可吸收活性成份。
用AHAS抑制性除草劑或用包含AHAS抑制性除草劑之調配物的種子處理施用係藉由在植物播種之前及植物萌芽之前對種子進行噴灑或撒布來進行。
在處理種子時，相應調配物係藉由用有效量之AHAS抑制性除草劑或包含AHAS抑制性除草劑之調配物處理種子來施用。此處，施用量一般為每100公斤種子0.1g至10kg活性成份(或活性成份混合物或調配物)，較佳為每100公斤種子1g至5kg，特定而言，每100公斤種子1g至2.5kg。對於諸如萵苣之特定作物，施用量可較高。
施用於品系127大豆植物上之任何除草劑調配物可製備成「貯槽混合型」組合物。在該等實施例中，各成份或成份組合可彼此分開儲存。可接著在施用前將諸成份彼此混合。通常，該混合在即將施用前進行。在貯槽混合製程中，各成份在混合前通常存在於水或適合的有機溶劑中。用於製備該等調配物之方法及指導在此項技術中為已知的。
該等方法更可允許研發用於品系127大豆植物之除草劑組合。在該等方法中，評估耕種區域之環境條件。可評估之環境條件包括(但不限於)地面及表面水污染問題、作物之預期用途、作物耐受性、土壤殘餘物、存在於耕種區域之雜草、土壤質地、土壤pH值、土壤中有機物質之量、施用設備及耕作實踐。在評估環境條件後，可將有效量之除草劑組合施用於作物、作物部分、作物種子或耕種區域。
在一些實施例中，施用於品系127大豆植物之除草劑用以防止敏感性雜草或不合需要之植物開始生長及/或用以對在相關區域生長之雜草或不合需要之植物造成損傷。在一些實施例中，除草劑或除草劑混合物對影響隨後種植於相關區域(亦即耕種田間或區域)之作物的雜草或不合需要之植物發揮此等作用。在該等方法中，不需要同時進行除草劑組合之施用。只要種植作物之田間含有可偵測量之第一除草劑且在作物處於耕種區域之時段期間在某個時間施用第二除草劑，則將該作物視為已經本發明之除草劑混合物處理。因此，所提供之方法涵蓋「萌芽前」、「萌芽後」、「植物併入前」及/或涉及種植前種子處理的除草劑施用。
另外，提供用於包覆品系127大豆植物種子之方法。該等方法包含用有效量除草劑或除草劑組合(如本文中別處所揭示)包覆種子。接著可將種子種植於耕種區域。進一步提供具有包含有效量之除草劑或除草劑組合(如本文中別處所揭示)之包衣的品系127植物種子。
「萌芽前」係指在植物明顯自土壤萌芽前及/或在種子發芽前向相關區域(亦即耕種田間或區域)施用除草劑。「萌芽後」係指在植物明顯自土壤萌芽後向一區域施用除草劑。在一些情況下，術語「萌芽前」及「萌芽後」之使用係關於相關區域之雜草或不合需要之植物，且在一些情況下，此等術語之使用係關於相關區域之作物植物。當關於雜草或不合需要之植物使用時，此等術語可能僅適用於存在於或咸信存在於相關區域之特定雜草類型或雜草或不合需要之植物物種。雖然可在萌芽前及/或萌芽後處理中施用任何除草劑，但已知一些除草劑在萌芽前或萌芽後施用時更有效於控制雜草或不合需要之植物。舉例而言，碸嘧磺隆具有萌芽前及萌芽後活性，而其他除草劑主要具有萌芽前(異丙甲草胺)或萌芽後(草甘膦)活性。特定除草劑之此等特性在此項技術中為已知的且易於由熟習此項技術者來判定。此外，熟習此項技術者可容易地能夠選擇用於本發明之轉殖基因植物及/或將種植本發明之轉殖基因植物之區域上的適合之除草劑及施用時間。「種植前併入」涉及在種植前將化合物併入土壤中。
因此，提供使作物生長及/或控制雜草或不合需要之植物的改良方法，諸如「種植前根除」，其中在種植相關作物前用一或多種除草劑處理一區域以便更好地控制雜草或不合需要之植物。另外提供使作物生長及/或控制雜草或不合需要之植物的方法，其為「免耕(no-till)」或「低耕(low-till)」(亦稱作「減少耕作」)。在該等方法中，在生長週期期間，與傳統方法相比，不耕作或以較低頻率耕作土壤；此等方法可節省否則將歸因於額外耕作所花費之成本(包括勞動力及燃料成本)。
該等方法涵蓋利用多種類別之除草劑之同時及/或相繼施用。在一些實施例中，該等方法涉及僅用一種除草劑或其他化學物質(諸如咪唑啉酮除草劑)處理本發明植物及/或相關區域(例如耕種田間或區域)及/或雜草及/或不合需要之植物。
向相關區域(及彼處之任何植物)施用除草劑之時間對於最佳化雜草或不合需要之植物的控制係重要的。施用除草劑之時間可根據相關區域之植物(例如在該區域生長之作物植物或雜草或不合需要之植物)尺寸及/或植物生長及/或發育之階段來確定。植物之生長及/或發育之階段在此項技術中為已知的。舉例而言，大豆植物通常經歷稱作VE(萌芽)、Vc(單一葉片)、V1(第一三出複葉)及V2至VN之營養生長階段。大豆接著回應於光週期刺激而轉入繁殖生長階段：繁殖階段包括R1(開始開花)、R2(完全開花)、R3(開始結莢)、R4(完全結莢)、R5(開始結籽)、R6(完全結籽)、R7(開始成熟)及R8(完全成熟)。因此，舉例而言，向生長植物之相關區域施用除草劑或其他化學物質之時間可為某一特定區域之一些或所有植物已至少達到特定尺寸及/或生長及/或發育階段之時間，或某一特定區域之一些或所有植物尚未達到特定尺寸及/或生長及/或發育階段之時間。
在一些實施例中，品系127大豆植物對萌芽後除草劑處理展示改良之耐受性。舉例而言，與適合的對照植物相比，品系127植物可耐受較高劑量之除草劑，可耐受較寬範圍之除草劑(亦即可耐受較多AHAS抑制劑化學物質)及/或可耐受在發育之較早或較遲時間施用之除草劑劑量。
不同化學物質(諸如除草劑)具有不同「殘留」效應，亦即，用化學物質或除草劑之處理對生長在經處理區域之植物持續具有影響之時間量不同。該等效應可為所需或不合需要的，此視經處理區域(亦即耕種田間或區域)之所需之將來目的而定。因此，作物輪種方案可基於將用於各作物之處理的殘留效應及其對將隨後生長於同一區域之作物的影響來選擇。熟習此項技術者熟悉可用於評估除草劑之殘留效應的技術；舉例而言，用以抑制AHAS之除草劑在其殘留活性程度方面有所不同。各種除草劑之殘留活性在此項技術中為已知的，且亦已知其隨各種環境因素而變化，該等環境因素諸如土壤水分含量、溫度、pH值及土壤組成(質地及有機物質)。品系127大豆植物尤其可用於使作物生長之方法中，其中針對除草劑殘留活性具有改良耐受性係有益的。
另外，本發明之大豆品系127植物提供針對用於作物之其他化學物質之處理連同除草劑處理的改良耐受性，該等其他化學物質諸如安全劑、佐劑(諸如磺酸銨及作物油濃縮物)及其類似者。
另外，所揭示之方法可包含使用AHAS抑制性除草劑或除草劑混合物以及一或多種其他殺昆蟲劑、殺真菌劑、殺線蟲劑、殺細菌劑、殺蟎劑、生長調節劑、化學滅菌劑、化學信息素(semiochemical)、驅避劑、引誘劑、信息素、取食刺激劑或其他生物活性化合物或昆蟲病原性細菌、病毒或真菌以形成提供甚至更寬範圍之農業保護的多組份混合物。可用於該等方法中之該等農業保護劑之實例包括：殺昆蟲劑，諸如阿巴汀(abamectin)、歐殺松(acephate)、啶蟲脒(acetamiprid)、醯胺氟美(amidoflumet)(S-1955)、阿維菌素(avermectin)、印楝素(azadirachtin)、穀硫磷(azinphos-methyl)、畢芬寧(bifenthrin)、聯苯肼酯(bifenazate)、布芬淨(buprofezin)、加保扶(carbofuran)、殺螟丹(cartap)、溴蟲腈(chlorfenapyr)、克福隆(chlorfluazuron)、陶斯松(chlorpyrifos)、甲基陶斯松(chlorpyrifos-methyl)、環蟲醯肼(chromafenozide)、可尼丁(clothianidin)、賽芬蟎(cyflumetofen)、賽扶寧(cyfluthrin)、β-賽扶寧(beta-cyfluthrin)、賽洛寧(cyhalothrin)、λ-賽洛寧(lambda-cyhalothrin)、賽滅寧(cypermethrin)、賽滅淨(cyromazine)、第滅寧(deltamethrin)、汰芬隆(diafenthiuron)、二嗪農(diazinon)、地特靈(dieldrin)、二福隆(diflubenzuron)、四氟甲醚菊酯(dimefluthrin)、大滅松(dimethoate)、呋蟲胺(dinotefuran)、戴芬蘭(diofenolan)、因滅汀(emamectin)、硫丹(endosulfan)、益化利(esfenvalerate)、乙蟲清(ethiprole)、芬硫克(fenothiocarb)、芬氧克(fenoxycarb)、芬普寧(fenpropathrin)、芬化利(fenvalerate)、氟蟲腈(fipronil)、氟尼胺(flonicamid)、氟蟲醯胺(flubendiamide)、護賽寧(flucythrinate)、τ-氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、氟芬林(flufenerim)(UR-50701)、氟芬隆(flufenoxuron)、大福松(fonophos)、氯蟲醯肼(halofenozide)、六伏隆(hexaflumuron)、伏蟻腙(hydramethylnon)、益達胺(imidacloprid)、因得克(indoxacarb)、亞芬松(isofenphos)、祿芬隆(lufenuron)、馬拉硫磷(malathion)、美氟腙(metaflumizone)、聚乙醛(metaldehyde)、甲胺磷(methamidophos)、滅大松(methidathion)、滅多蟲(methomyl)、美賜年(methoprene)、甲氧滴滴涕(methoxychlor)、甲氧苄氟菊酯(metofluthrin)、亞素靈(monocrotophos)、甲氧蟲醯肼(methoxyfenozide)、烯啶蟲胺(nitenpyram)、尼塞嗪(nithiazine)、諾華隆(novaluron)、多氟蟲醯脲(noviflumuron)(XDE-007)、草胺醯(oxamyl)、對硫磷(parathion)、甲基對硫磷(parathion-methyl)、氯菊酯(permethrin)、福瑞松(phorate)、裕必松(phosalone)、益滅松(phosmet)、福賜米松(phosphamidon)、抗蚜威(pirimicarb)、布飛松(profenofos)、丙氟菊酯(profluthrin)、吡蚜酮(pymetrozine)、吡氟普羅(pyrafluprole)、除蟲菊酯(pyrethrin)、啶蟲丙醚(pyridalyl)、皮瑞普(pyriprole)、比普西芬(pyriproxyfen)、魚藤酮(rotenone)、尼魚丁(ryanodine)、賜諾殺(spinosad)、螺二克芬(spirodiclofen)、螺甲蟎酯(spiromesifen)(BSN 2060)、螺蟲乙酯(spirotetramat)、硫丙磷(sulprofos)、蟲醯肼(tebufenozide)、得福隆(teflubenzuron)、七氟菊酯(tefluthrin)、託福松(terbufos)、殺蟲畏(tetrachlorvinphos)、噻蟲啉(thiacloprid)、噻蟲嗪(thiamethoxam)、硫地克(thiodicarb)、殺蟲雙(thiosultap-sodium)、四溴菊酯(tralomethrin)、唑蚜威(triazamate)、三氯松(trichlorfon)及殺鈴脲(triflumuron)；殺真菌劑，諸如活化酯(acibenzolar)、阿迪莫(aldimorph)、吲唑磺菌胺(amisulbrom)、氧環唑(azaconazole)、亞托敏(azoxystrobin)、苯霜靈(benalaxyl)、苯菌靈(benomyl)、苯噻菌胺(benthiavalicarb)、苯噻菌胺異丙酯(benthiavalicarb-isopropyl)、雙諾咪(binomial)、聯苯、比多農(bitertanol)、滅瘟素-S(blasticidin-S)、波爾多混合物(Bordeaux mixture)(三元硫酸銅)、啶醯菌胺(boscalid)/尼可必芬(nicobifen)、糠菌唑(bromuconazole)、磺嘧菌靈(bupirimate)、丁硫啶(buthiobate)、萎鏽靈(carboxin)、加普胺(carpropamid)、敵菌丹(captafol)、蓋普丹(captan)、貝芬替(carbendazim)、地茂散(chloroneb)、四氯異苯腈(chlorothalonil)、乙菌利(chlozolinate)、克黴唑(clotrimazole)、氧氯化銅、諸如硫酸銅及氫氧化銅之銅鹽、賽座滅(cyazofamid)、噻芬胺(cyflunamid)、霜脲氰(cymoxanil)、環克座(cyproconazole)、嘧菌環胺(cyprodinil)、抑菌靈(dichlofluanid)、雙氯氰菌胺(diclocymet)、噠菌清(diclomezine)、氯硝胺(dicloran)、乙黴威(diethofencarb)、苯醚甲環唑(difenoconazole)、達滅芬(dimethomorph)、地莫菌胺(dimoxystrobin)、達克利(diniconazole)、達克利-M(diniconazole-M)、敵蟎普(dinocap)、迪克曲濱(discostrobin)、腈硫醌(dithianon)、嗎菌靈(dodemorph)、多果定(dodine)、益康唑(econazole)、乙環唑(etaconazole)、護粒松(edifenphos)、氟環唑(epoxiconazole)、乙噻博胺(ethaboxam)、乙菌啶(ethirimol)、依得利(ethridiazole)、噁唑菌酮(famoxadone)、咪唑菌酮(fenamidone)、芬瑞莫(fenarimol)、芬克座(fenbuconazole)、芬卡咪得(fencaramid)、甲呋醯胺(fenfuram)、環醯菌胺(fenhexamide)、禾草靈(fenoxanil)、拌種咯(fenpiclonil)、苯鏽啶(fenpropidin)、粉鏽啉(fenpropimorph)、三苯醋錫(fentin acetate)、三苯基氫氧化錫(fentin hydroxide)、福美鐵(ferbam)、嘧氟酯(ferfurazoate)、嘧菌腙(ferimzone)、扶吉胺(fluazinam)、護汰寧(fludioxonil)、氟美醯胺(flumetover)、氟吡菌胺(fluopicolide)、氟氧菌胺(fluoxastrobin)、氟喹唑(fluquinconazole)、氟喹唑、護矽得(flusilazole)、氟硫滅(flusulfamide)、氟多寧(flutolanil)、護汰芬(flutriafol)、滅菌丹(folpet)、福賽得(fosetyl-aluminum)、麥穗靈(fuberidazole)、呋霜靈(furalaxyl)、福拉比(furametapyr)、六康唑(hexaconazole)、噁黴靈(hymexazole)、雙胍鹽(guazatine)、依滅列(imazalil)、易胺座(imibenconazole)、雙胍辛胺(iminoctadine)、艾地卡(iodicarb)、種菌唑(ipconazole)、丙基喜樂松(iprobenfos)、依普同(iprodione)、纈黴威(iprovalicarb)、異康唑(isoconazole)、稻瘟靈(isoprothiolane)、春日黴素(kasugamycin)、克收欣(kresoxim-methyl)、錳粉克(mancozeb)、雙炔醯菌胺(mandipropamid)、錳乃浦(maneb)、錳普啉(mapanipyrin)、甲霜靈(mefenoxam)、滅鏽胺(mepronil)、滅達樂(metalaxyl)、葉菌唑(metconazole)、磺菌威(methasulfocarb)、免得爛(metiram)、苯氧菌胺(metominostrobin/fenominostrobin)、嘧菌胺(mepanipyrim)、表苯菌酮(metrafenone)、咪康唑(miconazole)、邁克尼(myclobutanil)、新阿蘇仁(neo-asozin)(甲烷胂酸鐵)、氟苯嘧啶醇(nuarimol)、辛噻酮(octhilinone)、呋醯胺(ofurace)、肟醚菌胺(orysastrobin)、歐殺斯(oxadixyl)、歐索林酸(oxolinic acid)、嗯咪唑(oxpoconazole)、氧化萎鏽靈(oxycarboxin)、巴克素(paclobutrazol)、平克座(penconazole)、賓克隆(pencycuron)、吡噻菌胺(penthiopyrad)、培氟甲酸鹽(perfurazoate)、膦酸、苯酞、匹克本米(picobenzamid)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、多氧菌素(polyoxin)、噻菌靈(probenazole)、咪鮮胺(prochloraz)、腐黴利(procymidone)、霜黴威(propamocarb)、霜黴威鹽酸鹽(propamocarb-hydrochloride)、普克利(propiconazole)、甲基鋅乃浦(propineb)、丙氧喹啉(proquinazid)、丙硫菌唑(prothioconazole)、百克敏、白粉松(pryazophos)、比芬諾(pyrifenox)、嘧黴胺(pyrimethanil)、比芬諾、吡咯尼群(pyrolnitrine)、百快隆(pyroquilon)、喹唑(quinconazole)、快諾芬(quinoxyfen)、奎脫辛(quintozene)、矽硫芬(silthiofam)、矽氟唑(simeconazole)、螺環菌胺(spiroxamine)、鏈黴素(streptomycin)、硫、得克利(tebuconazole)、特克齊(techrazene)、克枯爛(tecloftalam)、四氯硝基苯(tecnazene)、氟醚唑(tetraconazole)、噻苯咪唑(thiabendazole)、賽氟滅(thifluzamide)、硫菌靈(thiophanate)、甲基硫菌靈(thiophanate-methyl)、得恩地(thiram)、汰敵寧(tiadinil)、脫克松(tolclofos-methyl)、甲苯氟磺胺(tolyfluanid)、三泰芬(triadimefon)、三泰隆(triadimenol)、嘧菌醇(triarimol)、咪唑嗪(triazoxide)、三得芬(tridemorph)、三莫芬咪(trimoprhamide)、三賽唑(tricyclazole)、三氟敏(trifloxystrobin)、賽福寧(triforine)、環菌唑(triticonazole)、烯效唑(uniconazole)、有效黴素(validamycin)、免克寧(vinclozolin)、鋅乃浦(zineb)、益穗(ziram)及座賽胺(zoxamide)；殺線蟲劑，諸如得滅克(aldicarb)、草胺醯及芬滅松(fenamiphos)；殺細菌劑，諸如鏈黴素；殺蟎劑，諸如三亞蟎(amitraz)、滅蟎猛(chinomethionat)、乙酯殺蟎醇(chlorobenzilate)、三環錫(cyhexatin)、大克蟎(dicofol)、得氯蟎(dienochlor)、乙蟎唑(etoxazole)、喹蟎醚(fenazaquin)、芬布賜(fenbutatin oxide)、芬普寧、芬普蟎(fenpyroximate)、合賽多(hexythiazox)、克蟎特(propargite)、噠蟎靈(pyridaben)及吡蟎胺(tebufenpyrad)；及生物劑，包括昆蟲病原性細菌，諸如蘇雲金桿菌鯰澤亞種(Bacillus thuringiensis subsp. Aizawai)、蘇雲金桿菌庫斯塔克亞種(Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki)及蘇雲金桿菌之囊封型δ-內毒素(例如Cellcap、MPV、MPVII)；昆蟲病原性真菌，諸如綠僵病真菌；及昆蟲病原性病毒，包括桿狀病毒、核型多角體病毒(nucleopolyhedro virus，NPV)，諸如HzNPV、AfNPV；及顆粒體病毒(GV)，諸如CpGV。此等各種混合搭配物與其他用於該等方法中之組合物(例如除草劑)的重量比通常介於100:1與1:100之間，或介於30:1與1:30之間，介於10:1與1:10之間，或介於4:1與1:4之間。
進一步提供包含以下之組合物：生物有效量之相關AHAS抑制性除草劑或除草劑混合物以及有效量之至少一種其他生物活性化合物或藥劑，且該等組合物可進一步包含界面活性劑、固體稀釋劑或液體稀釋劑中之至少一者。該等生物活性化合物或藥劑之實例為：殺昆蟲劑，諸如阿巴汀、歐殺松、啶蟲脒、醯胺氟美(S-1955)、阿維菌素、印楝素、穀硫磷、畢芬寧、聯苯肼酯、布芬淨、加保扶、溴蟲腈、克福隆、陶斯松、甲基陶斯松、環蟲醯肼、可尼丁、賽扶寧、β-賽扶寧、賽洛寧、λ-賽洛寧、賽滅寧、賽滅淨、第滅寧、汰芬隆、二嗪農、二福隆、大滅松、戴芬蘭、因滅汀、硫丹、益化利、乙蟲清、芬硫克、芬氧克、芬普寧、芬化利、氟蟲腈、氟尼胺、護賽寧、τ-氟胺氰菊酯、氟芬林(UR-50701)、氟芬隆、大福松、氯蟲醯肼、六伏隆、益達胺、因得克、亞芬松、祿芬隆、馬拉硫磷、聚乙醛、甲胺磷、滅大松、滅多蟲、美賜年、甲氧滴滴涕、亞素靈、甲氧蟲醯肼、尼塞嗪、諾華隆、多氟蟲醯脲(XDE-007)、草胺醯、對硫磷、甲基對硫磷、氯菊酯、福瑞松、裕必松、益滅松、福賜米松、抗蚜威、布飛松、吡蚜酮、啶蟲丙醚、比普西芬、魚藤酮、賜諾殺、螺甲蟎酯(BSN 2060)、硫丙磷、蟲醯肼、得福隆、七氟菊酯、託福松、殺蟲畏、噻蟲啉、噻蟲嗪、硫地克、殺蟲雙、四溴菊酯、三氯松及殺鈴脲；殺真菌劑，諸如活化酯、亞托敏、苯菌靈、滅瘟素-S、波爾多混合物(三元硫酸銅)、糠菌唑、加普胺、敵菌丹、蓋普丹、貝芬替、地茂散、四氯異苯腈、氧氯化銅、銅鹽、噻芬胺、霜脲氰、環克座、嘧菌環胺、(S)-3,5-二氯-N-(3-氯-1-乙基-1-甲基-2-側氧基丙基)-4-甲基苯甲醯胺(RH 7281)、雙氯氰菌胺(S-2900)、噠菌清、氯硝胺、苯醚甲環唑、(S)-3,5-二氫-5-甲基-2-(甲基硫基)-5-苯基3-(苯基-胺基)-4H-咪唑-4-酮(RP 407213)、達滅芬、地莫菌胺、達克利、高效達克利、多果定、護粒松、氟環唑、噁唑菌酮、咪唑菌酮、芬瑞莫、芬克座、芬卡咪得(SZX0722)、拌種咯、苯鏽啶、粉鏽啉、三苯醋錫、三苯基氫氧化錫、扶吉胺、護汰寧、氟美醯胺(RPA 403397)、氟嗎啉(flumorf/flumorlin)(SYP-L190)、氟氧菌胺(HEC 5725)、氟喹唑、護矽得、氟多寧、護汰芬、滅菌丹、福賽得、呋霜靈、福拉比(S-82658)、六康唑、種菌唑、丙基喜樂松、依普同、稻瘟靈、春日黴素、克收欣、錳粉克、錳乃浦、甲霜靈、滅鏽胺、滅達樂、葉菌唑、苯氧菌胺(SSF-126)、表苯菌酮(AC375839)、邁克尼、新阿蘇仁(甲烷胂酸鐵)、尼可必芬(BAS 510)、肟醚菌胺、歐殺斯、平克座、賓克隆、噻菌靈、咪鮮胺、霜黴威、普克利、丙氧喹啉(DPX-KQ926)、丙硫菌唑(JAU 6476)、比芬諾、百克敏、嘧黴胺、百快隆、快諾芬、螺環菌胺、硫、得克利、氟醚唑、噻苯咪唑、賽氟滅、甲基硫菌靈、得恩地、汰敵寧、三泰芬、三泰隆、三賽唑、三氟敏、環菌唑、有效黴素及免克寧；殺線蟲劑，諸如得滅克、草胺醯及芬滅松；殺細菌劑，諸如鏈黴素；殺蟎劑，諸如三亞蟎、滅蟎猛、乙酯殺蟎醇、三環錫、大克蟎、得氯蟎、乙蟎唑、喹蟎醚、芬布賜、芬普寧、芬普蟎、合賽多、克蟎特、噠蟎靈及吡蟎胺；及生物劑，包括昆蟲病原性細菌，諸如蘇雲金桿菌鯰澤亞種、蘇雲金桿菌庫斯塔克亞種及蘇雲金桿菌之囊封型δ-內毒素(例如Cellcap、MPV、MPVII)；昆蟲病原性真菌，諸如綠僵病真菌；及昆蟲病原性病毒，包括桿狀病毒、核型多角體病毒(NPV)，諸如HzNPV、AfNPV；及顆粒體病毒(GV)，諸如CpGV。方法亦可包含使用經遺傳轉型以表現對無脊椎害蟲有毒之蛋白質(諸如蘇雲金桿菌δ-內毒素)的植物。在該等實施例中，外源性施用之無脊椎害蟲控制化合物之作用可與所表現之毒素蛋白質一起起協同作用。
因此，該等方法可使用AHAS抑制性除草劑或AHAS抑制性除草劑組合，且可進一步包含使用殺昆蟲劑及/或殺真菌劑及/或其他農用化學物質(諸如肥料)。使用該等組合處理可擴大針對其他雜草物種之活性範圍且抑制任何抗性生物型增殖。
在以下實例中進一步詳細說明實施例。應瞭解，僅以示例方式給出此等實例。根據以上論述及此等實例，熟習此項技術者可確定本發明之基本特徵，且在不偏離本發明之精神及範疇下，可對本發明之實施例作出各種變化及修改以使其適於各種用途及條件。因此，除本文中所示及所述之內容以外，根據以上描述，對本發明實施例之各種修改對於熟習此項技術者應為顯而易見的。該等修改亦意欲屬於隨附申請專利範圍之範疇內。
使用來自質體pAC321之DNA線性化片段(PvuII)來研發轉殖基因大豆(Glycine max L.)植物，該DNA線性化片段(PvuII)含有提供針對咪唑啉酮除草劑之抗性的突變型乙醯羥基酸合成酶大型次單位(AHASL)編碼序列。pAC321質體含有突變型擬南芥AHASL基因(csr1-2)編碼序列，其在對應於位置653之位置上具有天冬醯胺而非天然絲胺酸(S653N)。AHAS(S653N)編碼序列受天然擬南芥AHAS啟動子序列及轉錄終止序列控制。參見，例如美國公開案第2005/0034187號，其係以全文引用之方式併入本文中。PvuII片段包括擬南芥屬AHASL啟動子、除草劑耐受性擬南芥屬AHASLl(csr1-2)編碼序列及擬南芥屬AHASL終止子。此啟動子、編碼序列及終止子卡匣在本文中係稱作csr1-2卡匣。
使用自商業品種「Conquista」之單個大豆種子之頂端分生組織獲得的胚胎發生胚軸組織來進行基因槍(biolistic)轉型。使用基因槍轉型(微彈或粒子轟擊)(Arago,F. J. L.等人,Theor. Appl. Genet. 1996;93:142-150)來產生含有csr1-2基因之大豆轉型品系。在轟擊前，使含有csr1-2基因片段之DNA沈澱於微觀金粒子上。接著將所沈澱之DNA及粒子置放於塑膠大載體上且以高速加速以使得停止屏夾持大載體。使具有DNA之粒子繼續其行程並最終穿透且併入大豆植物細胞中。將經轟擊細胞轉移至含有50g ai/ha當量之依滅草(一種咪唑啉酮除草劑)之選擇性培養基中，且僅彼等經csr1-2基因轉型之細胞繼續生長。自此過程，識別出耐受性T0植物且稱作大豆品系127(表1)。
藉由自交(self-crossing)(自花授粉)維持初始大豆品系127轉型體得到如下表1中所提供之T4代。
對來自9棵T3植物(E01、E02、E03、E04、E05、E06、E07、E09及E10)之種子的基因分析顯示轉殖基因分離不始終遵循簡單的孟德爾模式(Mendelian pattern)，此暗示存在1個以上活性基因座。使來自T3植物(E09、E10及E05)的對於針對依滅草之耐受性展現孟德爾分離且具有正常表型的T4後代與非轉殖基因品種(BRS137、Conquista及BR97-7066)雜交以產生4個群體(表2，圖2)。
在F2及F3代中，選擇在溫室中具有正常表型及針對依滅草之耐受性的家族及個別植物。在介於轉殖基因Conquista(T4-E10)與非轉殖基因Conquista之間的雜交之F2群體中對於針對依滅草(100g ai/ha)之耐受性的分離模式(38棵耐受：13棵不耐受)顯示出含有品系127之轉殖基因品系V03-603(CV-603)中之單個顯性基因控制針對依滅草之耐受性。
使用來自4種雜交中之每一者的F4及/或F5品系(表2)進行之後續田間試驗支持將含有品系127之品系V03-603選為用於後續分析及研發之良種大豆品系。在4個位置使用具有3次重複之隨機化完全區組設計及裂區處理設計建立田間試驗。各表目為整區(whole plot)且依滅草施用量(0g ai/ha、70g ai/ha、240g ai/ha或280g ai/ha)為子區(subplot)。在種植後18-21天噴灑植物且在施用後14天進行評估。評估植物之損傷百分比(0=在小區中無死亡植物至100=小區中所有植物皆死亡)。所收集之其他資料包括植物高度、種子產量、種子尺寸、開花天數及成熟天數。
經由修改之溴化十六烷基三甲基銨(CTAB)方法(Carlson等人，1991)自大豆葉片組織分離DNA。用液氮冷凍經矽膠乾燥之葉片組織且用自動研磨器(Autogrinder，Autogen;Holliston,MA)研磨。在74℃下，用預先加熱之由以下組成之提取緩衝液培育經研磨組織20分鐘：2%(w/v)CTAB、100mM Tris-HCl、1.4M NaCl、1%(w/v)聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、20mM乙二胺四乙酸(EDTA)(pH 9.5)(每60mg經乾燥葉片組織5ml)及β-巰基乙醇(10μl/ml緩衝液)。以2440×g離心10分鐘後，用等體積氯仿/異戊醇(24:1)萃取上清液2次。用0.7體積之異丙醇使DNA沈澱且溶解於TE緩衝液(10mM Tris-HCl、1mM EDTA，pH 8.0)中，同時添加0.5mg/ml RNase A(Invitrogen;Carlsbad,CA)直至約500ng/μl之最終濃度。根據螢光計使用者手冊，在Packard FluoroCountTM BF10000微板螢光計(Packard Instrument Company;Meriden,CT)上，用Hoechst 33258染料(Invitrogen)且用小牛胸腺DNA(Invitrogen)作為DNA標準品來定量經分離之DNA。
用Qiagen RNeasy Mini套組(Qiagen;Valencia,CA)自源自F7與F8代品系127植物之經矽膠乾燥之嫩葉及自非轉殖基因親本大豆品種Conquista之葉片提取總RNA。用液氮冷凍約25mg經矽膠乾燥之葉片組織且用自動研磨器研磨。根據製造商之說明書進行總RNA分離程序。根據RNeasyMini套組使用者手冊中之建議，用無RNase之DNase(Qiagen)進行柱上DNase消化以自總RNA製劑去除任何大豆基因組DNA。藉由使用BioMateTM 3分光光度計(Thermo Electron Corporation;Waltham,MA)在260nm下量測吸光度來定量經分離之RNA。
用作轉殖基因探針之DNA片段之位置係如圖1B中指示。載體骨架探針係如圖5C中指示。用於產生所識別之轉殖基因及載體探針之PCR引子係提供於以下表3中。此等5個重疊探針一起跨越整個質體。特定而言，探針1跨越AHASL啟動子區，探針2跨越csr1-2編碼序列，探針3跨越AHASL終止子區，且探針4及5一起覆蓋整個載體骨架(VB)。藉由PCR擴增使用質體pAC321作為模板來產生探針DNA片段。根據製造商之說明書使用RediprimeTM II DNA標記系統(Amersham；Piscataway,NJ)用50μCi之(α-32P)-dCTP(3000Ci/mmol)(MP Biomedicals;Irvine,CA)來對探針作放射性標記(各25ng-50ng)。用Spin-離心管過濾器(Corning Costar Corporation;Acton,MA)來純化經標記之探針。
使用南方墨點分析來測定csr1-2表現卡匣之複本數目及完整性以及確定品系127中不存在質體骨架。使用限制酶NcoI、SpeI及XbaI來消化自品系127植物及非轉殖基因對照Conquista獲得之基因組DNA。在圖3中將pAC321 PvuII轉型片段與大豆品系127***物進行比對。用於使大豆轉型之質體pAC321之PvuII片段係展示於圖3之上部。用填充有對角條紋之方框指示此片段的不包含於大豆品系127中之轉殖基因***物內之部分。大豆品系127中之轉殖基因***物及側接基因組大豆DNA的特徵展示於該圖下部。介於PvuII轉型片段與轉殖基因***區之圖之間繪製的垂直虛線之間的DNA為2個DNA片段所共有。圖上指出與南方墨點分析相關之限制性位點。PvuII轉型片段之編號系統對應於圖1中之pAC321質體圖之編號系統。大豆品系127***物之編號系統對應於圖8中之編號系統，其中1號為處於大豆基因組側接序列(側接序列由灰色方框指示)之5'末端處之第一個核苷酸。csr1-2卡匣中之單個NcoI限制性位點係位於csr1-2編碼序列之5'末端處，且用NcoI消化品系127之基因組DNA預計會產生2個含有來自csr1-2卡匣之DNA的片段。2個片段由csr1-2卡匣中之NcoI位點及側接大豆基因組序列中最靠近NcoI之位點界定。在5'側接大豆基因組序列中存在1個SpeI限制性位點且在品系127中之AHASL 3'UTR下游存在2個SpeI限制性位點。XbaI限制性位點側接整個csr1-2表現卡匣。預期可由南方雜交偵測之DNA片段之數目及尺寸係列於以下表7中。
c對品系127***物之序列分析指示csr1-2編碼區之一小部分緊接3'轉殖基因整合位點上游為重複的，從而確定在此等南方墨點中所見之800bp條帶之一致性。
基於品系127植物中之經選殖***物及側接序列來估計預測之片段尺寸。5' UTR探針及3' UTR探針各與1個XbaI位點重疊，且因此與質體pAC321之2個XbaI片段雜交(在圖4A及4C之泳道11中用點標記)。對品系127區域之序列分析指示csr1-2編碼區之一小部分緊接3'轉殖基因整合位點上游為重複的，從而確定在南方墨點結果中所識別之800 bp條帶之一致性。
品系127之F8代及非轉殖基因對照Conquista之基因組DNA(7μg)在40μl體積中用上列限制酶(每微克DNA 8單位)在酶製造商(New England Biolabs；Ipswich,MA；或Amersham)指定之條件下消化隔夜。限制性消化物由在10cm長之0.8%瓊脂糖凝膠中電泳分離。藉由該凝膠在0.25N HCl中浸泡約20分鐘使DNA進一步斷裂，且用0.4N NaOH使其變性約30分鐘。用2×NaCl/檸檬酸鈉溶液(SSC)沖洗凝膠，使用0.4N NaOH作為轉移緩衝液將變性之DNA轉移至Hybond N+耐綸膜(Amersham)上。根據Sambrook等人(1989)進行南方雜交。膜在65℃預雜交2-4小時，且於20ml-30ml(約0.2ml/cm2)之雜交緩衝液(2×SSC、0.6% SDS、50mM Na2HPO4、1×鄧氏溶液(Denhardt's solution)、2.5mM EDTA、5%硫酸葡聚糖，pH 7.2)中在Hybaid MAXI 14雜交烘箱(Thermo Electron Corporation)中在65℃雜交隔夜。雜交後，膜在室溫用2×SSC、0.5% SDS(1ml/cm2)洗15分鐘，在65℃用2×SSC、0.1% SDS(4ml/cm2)洗30分鐘，最終在65℃用0.1×SSC、0.1% SDS(4ml/cm2)洗15分鐘。洗滌後，膜包裹於塑膠包裝中，且在-80℃在具有增光屏之盒中暴露於HyperfilmTM MP薄膜(Amersham)2-5天，視放射信號強度而定。
亦如上文所述進行南方墨點分析以監測***物歷經多代之穩定性。自T4、F4、F8及F9代獲得植物材料(圖2)。此等樣本之基因組DNA用NcoI及SpeI消化(如上述)，且如上文所述進行南方墨點分析。
藉由使用上文所述之方法對經NcoI、SpeI及XbaI限制酶消化之品系127 F8代植物之基因組DNA進行南方墨點分析來評估品系127中之***物之複本數。
南方墨點分析之結果提供於圖4A、4B及4C中。如所描述用NcoI(1-4)、SpeI(5-8)及XbaI(9-12)限制酶消化非轉殖基因大豆品種Conquista之基因組DNA(泳道1、5及9)、Conquista外加1基因組複本當量之pAC321的基因組DNA(泳道2、6及10)、或Conquista外加2基因組複本當量之pAC321的基因組DNA(泳道3、7及11)、以及F8代之大豆品系127之基因組DNA(泳道4、8及12)。使墨點與探針5' UTR(圖4A)、探針AHAS(圖4B)及探針3' UTR(圖4C)雜交。第一及最後泳道(標記M)含有λ/HindIII梯度；條帶尺寸以千鹼基指示。圖4D指示介於南方雜交探針與品系127***物之間的同源區。圖4B中之箭頭指示約885bp SpeI片段，其含有在3'側接序列接合點處存在於品系127中之csr1-2之另一376bp片段。
用所有3種限制酶消化非轉殖基因Conquista DNA且與3種探針雜交並未顯示出任何信號，此指示在所用之南方墨點嚴格度條件下，既未偵測到內源性大豆AHASL基因，亦未偵測到內源性大豆Sec61γ次單位基因(圖4，泳道1、5及9)。用不同酶及探針組合處理來自品系127F8代之DNA樣本皆提供單一條帶(圖4A、4B及4C，泳道4、8及12)，例外為與AHASL編碼序列探針雜交之SpeI消化物，其具有另一約800bp之小條帶(圖4B，泳道8，箭頭)。此AHASL雜交之800bpSpeI片段與以下觀測結果相一致：AHASL編碼序列之一小片段在品系127中之3'側接序列接合點處重複(參見，關於完全序列之部分；實例3E)。所有主要條帶具有大致類似於1基因組複本當量之pAC321的信號強度。
經NcoI消化且用At AHASL 5'UTR探測品系127之基因組DNA會產生尺寸約為4.5kb之雜交條帶。此條帶尺寸與由***物內之NcoI位點(nt2761，圖4D)及5'基因組大豆側接序列上游約4.5kb處之NcoI位點所界定的單個DNA片段之產生相一致。用AtAHASL編碼序列或AtAHASL 3' UTR探測之相同消化物會產生尺寸約為9.0kb之雜交條帶。此條帶尺寸與由***物中之NcoI位點(nt 2761，圖4D)及3'大豆基因組側接序列下游約9.0kb處之NcoI位點所界定之單個DNA片段相一致。
用SpeI消化品系127基因組DNA且用At AHASL 5' UTR探測會產生尺寸約為4.4kb之雜交條帶。此與來自***物中之SpeI位點(nt 5620，圖4D)及大豆基因組之5'DNA側接序列上游約4.4kb處之SpeI限制性位點(nt 1268，圖4D)的單個DNA片段之產生相一致。在對品系127之5'側接序列之分析中確定此上游SpeI位點的存在(參見，關於側接序列之部分；實例3D)。用At AHASL編碼序列或At AHASL 3' UTR探測之相同消化物亦產生對應於上文所述之相同片段的4.4kb雜交條帶。另外，當用At AHASL編碼序列探測SpeI消化物時，偵測到尺寸約為0.8kb之雜交條帶，此與含有csr1-2基因之處於3'側接DNA序列接合點處之376bp片段的單個SpeI DNA片段相一致。此雜交片段係由DNA***物中之SpeI位點及大豆基因組下游0.8kb處之SpeI位點(nt 5620-6505，圖4D)產生。用At AHASL 3' UTR探針未偵測到0.8kb雜交條帶，此指示0.8kb片段中不包括At AHASL 3' UTR DNA，且***物中之SpeI nt 5620位點與csr1-2基因之376bp片段相鄰。因此，在品系127基因組中之DNA***物中不包括用於轉型之質體pAC321之線性PvuII片段中的核苷酸5622及5719處之SpeI限制酶位點(展示於圖1B中)。此係藉由對DNA***物進行DNA序列分析而確定(參見，完全序列部分；實例3E)。外加pAC321之對照物中的280bp及97bp之較小預測SpeI片段會產生低於使用此方法之偵測程度的信號。
品系127基因組DNA當用XbaI消化且用At AHASL 5' UTR探測時，顯示出尺寸約為10kb之單一雜交條帶。基於用於轉型之線性DNA中的XbaI限制性位點之位置(圖1B)，預期在品系127基因組中之DNA***物內會產生約5.7kb之雜交條帶。然而，對品系127中之DNA***物的DNA序列分析顯示線性轉型DNA中之XbaI限制性位點中之任一者均不包括於DNA***物中(參見，關於完全序列之部分；實例3E)。因此，10kb雜交條帶係由側接***物之5'及3' DNA序列(nt 410及10652，圖4D)內之XbaI限制性位點產生。因此，用At AHASL編碼序列或At AHASL 3' UTR探測之相同消化物會產生對應於上文所述之相同DNA片段的相同10kb雜交條帶。
對展示於圖4中之南方墨點的所有雜交條帶之數目及尺寸的分析與品系127大豆基因組中之單一DNA***物整合相一致，該DNA***物含有csr1-2基因之單一功能性複本以及csr1-2基因之5'末端上編碼蛋白質SEC61γ之序列，且在***物3'末端處含有含csr1-2基因之376bp片段的單一DNA片段。
儘管用pAC321之不包括載體骨架DNA之PvuII限制性片段進行轉型，但仍進行南方墨點研究以確定品系127基因組中不存在質體pAC321載體DNA。為確定是否存在任何整合於品系127中之載體骨架，使用於上文所述之南方分析之相同墨點組(圖4)與2種載體骨架特異性探針雜交(圖5)。如所預期，在含有非轉殖基因Conquista基因組DNA之泳道中未偵測到雜交條帶。外加1或2基因組複本當量之轉型質體pAC321的非轉殖基因Conquista基因組DNA顯示預期尺寸之雜交條帶(表7)。使墨點與探針VP1(圖5A)及探針VP2(圖5B)雜交。在品系127 F8代DNA中未偵測到雜交條帶，此指示無載體骨架DNA整合至此品系之大豆基因組中。圖5C指示探針VP1及VP2相對於pAC321組份之位置。
為測定品系127中之***物之穩定性，對來自4個不同代T4、F4、F8及F9(圖2)之DNA樣本進行南方墨點分析。用NcoI及SpeI消化基因組DNA樣本且用At AHASL 5' UTR、At AHASL編碼序列或At AHASL 3' UTR探針探測，該等探針跨越用於轉型之整個DNA片段(圖1B)。此等限制酶及探針之組合提供品系127中之DNA***物的獨特指紋譜圖(圖4)。非轉殖基因Conquista基因組DNA用作陰性對照，而外加1及2基因組複本當量之pAC321的Conquista用作陽性對照(圖6)。用所有3種探針偵測到經NcoI或SpeI消化之品系127 T4代DNA的多個條帶，此指示T4代含有csr1-2卡匣之多個複本。然而，來自F4、F8及F9代之DNA皆顯示先前在***物及複本數分析(圖4)中所觀測到之相同南方圖案(圖6)。此結果指示T4代中之***物的多個複本在T4與Conquista之間的雜交後代中分離且僅單個複本保留於所選擇之分離子中。此外，此單個複本在後代中穩定遺傳。
使用反向PCR來獲得側接經***csr1-2卡匣之大豆基因組DNA序列(Triglia等人,1988)。在20μl反應體積中，用15單位之XbaI、SpeI、HindIII、NcoI、EcoRI、BamHI或BglII消化品系127 F7代之基因組DNA(1μg)3小時。在65℃下培育XbaI、HindIII、NcoI及EcoRI消化物20分鐘以使酶失活，同時使BamHI及BglII消化物發生異丙醇沈澱。直接將T4DNA連接酶(800單位，New England Biolabs)添加至各消化反應物中。亦添加水以使反應體積達到200μl。在16℃下培育反應物隔夜且將成環之DNA直接用作反向PCR之模板。用 XL PCR套組(Applied Biosystems;Foster City,CA)擴增轉殖基因側接序列。100μl一級PCR含有1×製造商提供之PCR緩衝液、200μM之各dNTP、25ng之成環基因組DNA片段、1.2mM乙酸鎂、2單位rTth DNA聚合酶XL及0.2μM之各一級PCR引子。100μl巢式PCR含有與一級PCR相同之組份，例外為將10μl之一級PCR之1:50稀釋液用作模板。在GeneAmp PCR系統9700(Applied Biosystems)上進行一級及巢式PCR。一級及巢式引子之序列係提供於下表4中。在94℃下初始1分鐘變性步驟後，進行94℃(歷時15秒)、60℃(歷時8分鐘)及72℃(歷時2分鐘)之30個循環，繼而在72℃下進行最終10分鐘的延長步驟。
完成PCR反應後，用Zymo DNA Clean & ConcentratorTM-5(Zymo Research;Orange,CA)純化產物。PCR產物直接被測序或在選殖後測序。當PCR產物或經選殖片段長於1kb時，使用引子步移法(primer walking)獲得全長序列。對2股DNA進行測序，獲得各鹼基大於Phred 40之序列品質。用Applied Biosystems之BigDyeTM終止子v3.1預備反應循環測序套組(BigDyeTM Terminator v3.1 Ready Reaction Cycle Sequencing Kit)及ABI 3730 DNA分析器進行測序。
自XbaI消化物擴增之3'側接PCR產物為約6kb且擴增非常弱而不能獲得足以用於直接測序之DNA。因此，用SpeI消化PCR產物且用DNA聚合酶I大(克倫諾(Klenow))片段(New England Biolabs)處理所得限制性片段(其一者為約800bp且另一者為約5.2kb)以產生平末端(blunt end)，且選殖至-Blunt II-TOPO選殖載體(Zero PCR選殖套組；Invitrogen)中。藉由限制性消化來驗證各片段之10個純系且藉由引子步移法測序。藉由對整個接合點進行PCR擴增及測序來證實限制性片段之接合點。
藉由反向PCR自品系127 F7代基因組DNA之分子內成環之NcoI消化物擴增出3kb DNA片段。對該片段之兩個末端的測序指示其特定而言係自轉殖基因***物之5'側擴增而來。對該片段進一步測序，獲得1.3kb之5'大豆側接基因組序列。藉由反向PCR自品系127 F7代基因組DNA之XbaI消化物擴增出6kb DNA片段且在次選殖後進行完全測序。所得序列指示其在3'側上側接***物。使用來自5'及3'側接區之引子對非轉殖基因品種Conquista DNA進行PCR分析以確定側接序列對於植物基因組係原生的(資料未示)。
具有5'及3'側接序列之整個大豆品系127轉殖基因***序列係展示於圖8中(SEQ ID NO:1)。對針對可用之公開DNA資料庫(所有基因庫(GenBank)+EMBL+DDBJ+PDB序列)及BASF植物科學專用DNA資料庫(BASF Plant Science proprietary DNA database)查詢的5'側接序列之BLAST分析顯示出與專有大豆表現序列標籤(EST)具有序列一致性之區域，此證實所識別之側接序列之起源為天然大豆DNA。進一步分析序列之預測開放閱讀框架。結果指示在***之5'末端上游存在315bp ORF，自側接序列之核苷酸941至1255。5'側接序列與轉型序列之比對顯示出整合點係位於核苷酸1312(圖8；SEQ ID NO:1)處，其位於經預測ORF之終止密碼子下游60bp處。
對3'側接序列之分析顯示在3'整合點前，存在376bp序列片段，其與csr1-2編碼序列之一部分(圖8之核苷酸3768-4143；SEQ ID NO:1)的不同之處僅在於單個核苷酸。將此376bp序列***於3'側接序列接合點處會產生自轉殖基因***物延伸至3'側接序列中之501bp ORF。藉由RT-PCR研究此ORF之潛在轉錄。對針對可用之公開DNA資料庫(所有基因庫+EMBL+DDBJ+PDB序列)及BASF植物科學專用DNA資料庫查詢的3'側接序列之BLAST分析顯示出在近端3'側接序列中與大豆過氧化氫酶基因(登記號：Z12021)具有序列相似性之區域。然而，整合點係位於潛在基因同系物上游約500bp處且推定編碼序列係位於整合點下游約2.4kb處。因此，即使可能的過氧化氫酶同系物為活性基因，其亦不可能受***影響。另外，遠端3'側接序列之區域與專有大豆EST共有序列一致性。
進行研究以便以PCR擴增來自非轉殖基因Conquista基因組之品系127整合位點。使用非轉殖基因品種Conquista之基因組DNA作為模板，包括一個處於5'側接區中之引子及處於3'側接區中之第二引子以擴增***位點之PCR引子組A及B並未產生擴增DNA產物。具有對3'側接序列具有特異性之引子的PCR引子組C並未產生非轉殖基因品種Conquista DNA之擴增產物，而連同品系127之基因組DNA產生預期擴增子(資料未示)。此證實由引子組C擴增之DNA片段存在於品系127中，但在相同情況下不存在於Conquista之基因組中，由此表明在品系127中於***位點處發生DNA重排。此與對csr1-2編碼區接近經***DNA與基因組大豆DNA之接合點的376bp重複序列片段之識別相一致。
6個經PCR產生之擴增子經設計以跨越整個***物以及與相鄰大豆基因組序列之接合點(圖7)。藉由對此等6個重疊片段進行PCR擴增，繼而進行DNA序列分析來獲得經***DNA之完全序列。用於PCR擴增之引子序列係提供於表5中。用rTth DNA聚合酶XL再擴增相對於轉型片段序列含有序列偏差之PCR擴增子。用Zymo DNA Clean ＆ConcentratorTM-5純化PCR產物且藉由直接測序及引子步移法對2股進行測序直至Phred 40之品質程度。如上文所述進行DNA測序。
儘管南方墨點分析暗示轉殖基因***物含有整個csr1-2表現卡匣，但仍對***物進行選殖及測序以確定***物完整性。藉由用Taq DNA聚合酶對6個重疊擴增子(圖7)進行PCR擴增，獲得經***DNA之完全序列。完全大豆品系127***序列之長度為4758bp且除在3'整合點處***csr1-2之376bp片段以外以及除了3個點突變以外，該序列與轉型片段之序列一致(圖8；SEQ ID NO:1)。點突變之一為AHASL編碼序列中G向A之突變，其引起R272變為K272之胺基酸變化。此點突變為保守胺基酸取代且對At AHAS蛋白質之除草劑耐受性或酶特性無影響。其他2個突變包括G向A突變及G向C突變，該兩者皆位於csr1-2基因之3' UTR下游且因此為基因沉默的。
進行實驗以確定在大豆品系127之產生及育種發展中何時出現AHASL編碼序列中之G向A之突變。最初，用來自品系127 T4及F8代之基因組DNA作為模板建立用於***物測序之PCR4反應(圖7)且對PCR產物測序。品系127 T4代之序列不同於預期(pAC321)序列。考慮到T4代含有***物之多個複本且PCR4產物可能為***物之各個複本之序列混合物，所以用處於5'側接序列中之正向引子(5'-GCCCTCCTTATTTATCCCCTTA-3'；SEQ ID NO:35)及處於csr1-2編碼序列中之反向引子(5'-ACAAACCTACCCAATTCATCGC-3'；SEQ ID NO:36)設計2.5kb之品系127基因座特異性PCR擴增子。對PCR產物直接測序。序列比較顯示G向A之突變亦存在於品系127 T4代中，此指示在T4代之前有時會發生突變(資料未示)且該突變維持後續8代。
初始轉型序列含有最初標註為AHASL啟動子及5' UTR之2.5kb片段。新近序列分析顯示此序列片段亦含有先前未經標註之編碼SEC61γ次單位(一種多聚轉運蛋白)之擬南芥屬基因。品系127***序列含有大部分包括該完全編碼序列之AtSec61γ次單位基因。如由擬南芥屬資訊資源所標註，AtSec61γ5' UTR開始於5'轉殖基因整合位點下游18個核苷酸處。因而，***物不可能含有AtSec61γ基因之完全天然啟動子。
使用RT-PCR評估在大豆品系127中之***物中所見之擬南芥屬AtSEC61γ次單位基因的可能轉錄。使用經DNase處理之自品系127 F7代提取之總RNA作為模板進行RT-PCR。使用對2種內源性大豆基因Iota及GmSec61γ具有特異性之引子作為陽性對照以確定模板RNA之品質。亦使用未經DNase處理之來自擬南芥屬葉片及根組織之總RNA作為陽性對照。結果顯示2種內源性大豆陽性對照物Iota及GmSec61γ在幼小的大豆葉片組織中有較強轉錄，而品系127 F7代中之AtSec61γ次單位基因僅被弱轉錄。圖9中之箭頭指示對應於自品系127擴增之AtSec61γ次單位的模糊RT-PCR產物。來自品系127 F7代之經擴增393bp AtSec61γ次單位DNA條帶之尺寸與自擬南芥屬葉片及根擴增之條帶尺寸相同(圖9)。相同引子對亦自擬南芥屬葉片及根樣本中之污染基因組DNA擴增出具有預期尺寸965bp之條帶。為證實品系127 RT-PCR產物之身分，對其進行測序且與AtSec61γ次單位之預測mRNA序列進行比較(資料未呈現)。2個序列匹配，此指示AtSec61 γ次單位在品系127之葉片中被弱轉錄。
將csr1-2編碼序列之376bp部分***於接近3'側接序列接合點處(圖7)會產生501bp ORF。藉由RT-PCR分析研究此ORF之可能的轉錄。使用2種不同量(500ng及125ng)之RNA模板進行RT-PCR。在使用ORF特異性引子之陽性對照反應中，亦使用品系127 F8代基因組DNA。在陽性對照反應中使用對大豆Iota基因具有特異性之引子以確定模板RNA之品質。ORF特異性引子自品系127基因組DNA擴增出435bp片段。然而，使用來自嫩葉組織之總RNA作為模板未觀測到可偵測之RT-PCR產物，此暗示ORF未表現於品系127中(圖10)。
使用自DNA側接序列及***序列獲得之資訊建立品系特異性PCR。設計4對引子，其中各對之一個引子處於5'大豆側接序列中而另一者處於csr1-2卡匣中。用於品系特異性PCR中之引子序列係提供於以下表10中。
該等引子經設計以擴增出長度介於約200bp與約400bp之間的PCR產物。使用來自品系127及非轉殖基因品種Conquista之基因組DNA作為模板。每一反應以25μl總體積，用25ng模板DNA、200μM之各dNTP、0.4μM之各引子及1單位Taq DNA聚合酶進行PCR。在94℃下初始4分鐘變性後，進行94℃(歷時30秒)、60℃(品系PCR1及PCR3)或66℃(品系PCR2及PCR4)(歷時30秒)及72℃(歷時45秒)之30個循環，繼而在72℃下進行最終10分鐘的延長。藉由定性PCR使用「品系PCR3」引子組來分析來自6個不同種植位置之大豆品系127及非轉殖基因品種Conquista各4棵的植物。
所有4個PCR自大豆品系127特異性產生具有預期尺寸之產物(圖11A)，此暗示4種引子組中之任一者均可用於偵測樣本中之品系127核酸分子。用自6個不同種植位置收集之品系127大豆植物及非轉殖基因品種Conquista的樣本進一步驗證品系特異性PCR產物3。結果顯示PCR產物3在所有24個品系127大豆樣本中被特異性擴增，但在非轉殖基因對照品種Conquista中未被擴增(圖11B及C)。
若樣本中存在有介於樣本中存在之核酸總量之0.08%與5%之間的品系127核酸大豆，則設計品系特異性定量PCR以偵測且精確及準確定量經混合批次種子中之品系127核酸。在此方法中，使用2對引子以及介入探針。用於品系特異性PCR中之引子序列係提供於以下表11中。
在此基於Taq-Man之檢定中，在各循環期間，在2種不同反應混合物中，將品系特異性PCR產物之含量與內源性對照組之產物含量相比較。
對於2種PCR系統中之每一者，檢定形式使用標準曲線；各標準曲線包含各自由3次重複量測獲得之4個標準點。藉由製備20ng/μl含有10%品系127大豆DNA之總基因組DNA的溶液(標準品1)且隨後以稀釋緩衝液按1:5連續稀釋(標準品2至4)來製備標準品。
每系統設立3個無模板對照(NTC)以驗證試劑純度。以每一反應100ng基因組DNA分析各樣本(未知)。
使品系及內源性PCR探針與FAM(激發495nm；發射520nm)結合。引子經設計以產生長度小於100bp之短擴增子。將品系127大豆(10%)與Conquista(非GM)(90%)之基因組DNA混合物稀釋至20ng/μl。對於標準曲線，將此接著用10ng/μl鮭***DNA稀釋至20ng、4ng及0.8ng大豆DNA(反應體積為5μl)。使用所有標準組份(TaqMan通用PCR母體混合物(TaqMan Universal PCR master mix)以及尿嘧啶-N-糖基化酶(AmpEraseUNG,ABI))在96孔板中以25μl體積進行PCR反應。對於品系PCR，以400nM之濃度添加引子且以100nM之濃度添加探針。對於內源性PCR，以150nM之濃度添加引子且以50nM之濃度添加探針。在Applied Biosystems 7500快速即時PCR系統上進行檢定。在50℃下2分鐘及95℃下10分鐘之初始單循環後，進行95℃(歷時15秒)及60℃(歷時60秒)之45個循環。藉由定量PCR分析品系127大豆及非轉殖基因品種Conquista及混合物的各自3個樣本。
進行RT-PCR以確定大豆品系127中存在之csr1-2編碼序列之一部分的376bp重複或AtSec61γ基因是否被轉錄。將總RNA用作使用Qiagen單步RT-PCR套組(Qiagen)之RT-PCR的模板。對於AtSec61γ編碼序列之RT-PCR分析，亦使用來自葉片及根之擬南芥屬總RNA樣本作為陽性對照。在未經DNase處理下，用TRIzol試劑(Invitrogen)製備擬南芥屬總RNA樣本。50μl總體積之RT-PCR反應物含有1×Qiagen單步RT-PCR緩衝液、400μM之各dNTP、0.6μM之各引子、2μl之Qiagen單步RT-PCR酶混合物及500ng或125ng之總RNA。使用GeneAmp PCR系統9700進行RT-PCR。在50℃下進行一個30分鐘的反轉錄步驟後，在下列條件下進行PCR擴增：一個在95℃下15分鐘的變性步驟；在94℃下30秒、在64℃下30秒及在72℃下1分鐘的30個循環；及一個在72℃下10分鐘的延長步驟。用於RT-PCR分析之引子序列係提供於表12中。
使用內源性大豆Sec61γ次單位及Iota基因作為陽性對照。大豆Iota次單位基因組成性及廣泛地表現於大豆中(Yamamoto及Knap,2001)。
*N/A-不適用。此為陽性對照；引子組預期會擴增源自與品系127***物無關之內源性大豆轉錄物的cDNA。
進行3個PCR反應以特徵化非轉殖基因大豆品種Conquista中之***位點。此研究中所用之PCR引子係自對於側接品系127基因組中之新穎表現卡匣之5'及3'基因組區所確定的DNA序列獲得。
PCRA之PCR引子(參見下表13)經設計以便使正向引子能結合於5'側接序列中且反向引子能結合於直接位於3'整合點後之3'側接序列中。PCRB之引子經設計以便使正向引子能結合於5'側接序列中，而反向引子能結合於3'側接序列遠端附近。PCRC之2個引子經設計以結合於3'側接序列內。
用Qiagen Taq DNA聚合酶進行PCRA及PCRC且用GeneAmp XL PCR套組進行PCR2。在所有PCR擴增中使用25ng之品系127或Conquista DNA。對於使用Qiagen Taq DNA聚合酶之PCR，在25μl總體積中，反應物含有1×Qiagen PCR緩衝液、200μM之各dNTP、0.4μM之各引子及1單位Taq DNA聚合酶。在94℃下初始4分鐘的變性步驟後，進行在94℃下30秒、在66℃下45秒及在72℃下2分鐘之30個循環，繼而在72℃下進行最終10分鐘的延長步驟。
對於使用GeneAmp XL PCR套組之PCR，除模板DNA以外，反應物含有與用以選殖側接序列之組份相同的組份。在94℃下初始1分鐘的變性步驟後，進行在94℃下1分鐘及在66℃下10分鐘之30個循環，繼而在72℃下進行最終10分鐘的延長步驟。
用Staden Pregap4及Gap4(Staden,1996)進行DNA序列組裝。使用LI-COR AlignIR軟體(Licor Biotechnology;Lincoln,NE)將經選殖序列與預期***序列進行比對。經由BLAST分析(Altschul等人,1997)針對可用之公開DNA資料庫(所有基因庫+EMBL+DDBJ+PDB序列)及BASF植物科學專用DNA資料庫查詢側接序列。用載體NTI v9.0(Invitrogen)之ORF分析功能識別具有30個或30個以上密碼子之開放閱讀框架。
基於此等實驗之結果，大豆品系127含有4758bp之單個複本***物，其包括csr1-2之整個表現卡匣以及AtSec61γ次單位基因之5' UTR、整個編碼序列及3' UTR。csr1-2基因之376bp編碼序列重複亦與側接序列在3'接合點處整合。未發現載體骨架序列整合至大豆基因組中。***物歷經8代育種而穩定遺傳，此表明該***物穩定整合於大豆基因組中。在csr1-2表現卡匣中存在3個點突變：一個處於AHASL編碼序列中對突變型AHASL蛋白質之除草劑耐受性或酶特性無影響之保守突變，而另2個突變位於3' UTR下游。在側接***物3'末端之DNA中似乎發生大豆基因組DNA重排，且此最有可能在DNA整合過程期間發生。***物含有AtSec61γ次單位基因之編碼序列，其包括於用於轉型之DNA片段中。此基因僅被弱轉錄。csr1-2編碼序列之376bp片段形成新的501bp之ORF。RT-PCR實驗指示此ORF無可偵測之轉錄。
在巴西中心區域之3個不同位置建立3個田間實驗：Santo Antonio de Posse,SP之農業研究站(ARS)、Santo Antonio de Gois,GO之Embrapa水稻及豆研究中心(Embrapa Rice and Beans，CNPAF)以及Uberaba,MG之Embrapa-Epamig(CTTP)。各位置之雜草侵擾呈現於表13中。
CYPRO=香附子(Cyperus rotundus)；BOILF=闊葉豐花草；COMBE=圓葉鴨蹠草(Commelina benghalensis)；EPHHL=白苞猩猩草；SIDRH=金午時花(Sida rombifolia)；RCHBR=巴西擬鴨舌黃；IPOGR=牽牛花(Ipomoea grandifolia)。
對於所有3個位置，自種植至收穫之所有程序為相同的。在萌芽後早期，當雜草具有2至4片葉片，且大豆作物具有完全張開之第一三出複葉時，施用除草劑。使用具有3次重複之完全隨機化區組設計。主要處理提供於表15中。
對咪唑啉酮耐受性大豆(源自品系127)施用咪唑啉酮除草劑且對抗農達大豆(Roundup Ready soybean，Valiosa RR)施用草甘膦，該等植物在各位置處並排種植。施用咪唑啉酮除草劑(依滅草及Kifix)及0.25% v/v之非離子型佐劑Dash。對於所有除草劑施用，使用具有80015型低壓噴嘴、在190kpa下傳遞1701/ha之CO2背負式噴霧器。所有大豆種子皆以每公頃380,000個種子之密度以50cm行間距種植5cm深。
在施藥後(DAA)15天及30天基於0至100等級來評定作物損傷，其中0為無損傷而100為作物死亡。在施藥後15天、30天及60天基於0至100等級來評定除草劑功效，其中0為無控制而100為完全控制。
以下表16顯示在除草劑施用時此等關鍵處理對區域中存在之雜草的效率。根據此等結果，依滅草及依滅草+甲基咪草煙組合具有相似功效。在施藥後30天，2種產品對以下7種重要巴西雜草極有效：CYPRO(87%)、COMBE(87%-90%)、EPHHL(85%-87%)、IPOGR(90%-91%)、BOILF(82%-83%)、SIDRH(86%-87%)及RCHBR(83%)。在施藥後60天，在萌芽後施用時，對於CYPRO、COMBE、RCHBR及IPOGR，咪唑啉酮除草劑優於草甘膦。
在巴西中心區域之3個不同位置建立3個田間實驗：Santo Antonio de Posse,SP之農業研究站(ARS)、Santo Antonio de Gois,GO之Embrapa水稻及豆研究中心(CNPAF)以及Uberaba,MG之Embrapa-Epamig(CTTP)。此等區域中之每一者中之雜草侵擾呈現於表17中。
BRAPL=車前狀臂形草(Brachiaria plantaginea)；DIGHO=平枝馬唐(Digitaria horizontalis)；CYPRO=香附子；COMBE=圓葉鴨蹠草；EPHHL=白苞猩猩草；IPOGR=牽牛花；GASPA=牛膝菊(Galinsoga parviflora)；BIDPI=白花鬼針草(Bidens pilosa)。
對於所有3個位置，自種植至收穫之所有程序為相同的。在大豆種植前5天根除時施用除草劑。
使用具有3次重複之完全隨機化區組設計。主要處理列於表18中。
以每公頃380,000個種子之密度，以50cm行間距，種植源自品系127之咪唑啉酮耐受性大豆5cm深。施用咪唑啉酮除草劑以及0.25% v/v之非離子型佐劑Dash。對於所有除草劑施用(表18)，使用具有80015型低壓噴嘴、在190kpa下傳遞170l/ha之CO2背負式噴霧器。
在種植後(DAP)15天及30天基於0至100等級來評定作物損傷，其中0為無損傷而100為作物死亡。在種植後15天、30天及60天基於0至100等級來評定除草劑功效，其中0為無控制而100為完全控制。
表19顯示在根除施用時此等關鍵處理對區域中存在之雜草的效率。在施藥後30天及60天之結果顯示咪唑啉酮除草劑與草甘膦相比較之殘留效應。在施藥後30天，依滅草+甲基咪草煙組合略優於甲基咪草煙，但兩者對BRAPL(85%)、DIGHO(95%)、CYPRO(88%)、COMBE(75%-94%)、EPHHL(95%)、IPOGR(75%)、GASPA(84%-95%及BIDPI(79-93%)皆有效。草甘膦無殘留活性且其在施藥後30天及第60天對此等8種雜草無效。
進行溫室研究以確定咪唑啉酮除草劑是否可用於控制耕種區域生長之不合需要之草甘膦耐受性雜草及作物。使用metro混合物(metro mix)(對於萌芽後施用)及北卡羅來納土壤(North Carolina soil，對於萌芽前施用)將草甘膦抗性植物種子種植於4.5吋盆中，在土壤表面存在有緩釋肥料。使植物維持於具有頂部澆水之溫室中。
對草甘膦抗性大豆、玉米及加拿大乍蓬(horseweed)中之每一者之5棵個別植物進行萌芽後或萌芽前施用之草甘膦、依滅草或甲基咪草煙之噴霧處理。對於玉米及大豆，在2片真葉階段進行萌芽後噴霧，而對於加拿大乍蓬，在9片真葉階段進行萌芽後噴霧。以774g ae/ha之施用量施用草甘膦，而以20g ai/ha、40g ai/ha、80g ai/ha、160g ai/ha及240g ai/ha之施用量施用依滅草及甲基咪草煙除草劑。在處理後(DAT)14天及處理後(DAT)25天視覺上判定總損傷率百分比。在任何研究中，未經處理之對照植物不展現可見之損傷。萌芽後測試之結果概示於表20中且萌芽前研究之結果概示於表21中。結果係以5棵個別植物之平均值提供。
此等結果指示咪唑啉酮除草劑可用於控制萌芽前或萌芽後之草甘膦耐受性雜草及作物。一個優勢為能夠對品系127植物使用咪唑啉酮除草劑來控制草甘膦已不再能有效控制之抗性雜草及不合需要之植物。
進行田間試驗以評估具有針對咪唑啉酮除草劑之耐受性的轉殖基因大豆品系(品系127)相對於非轉殖基因同基因對照物(空白)及其他非轉殖基因(習知)大豆品種(校驗)的農藝學、表型及物候特徵。為此目的，在巴西之田間位置進行研究，該等位置代表商業大豆生產區域且所有基因型皆適於此等位置。
在所有田間位置，以完全隨機化區組設計將5種處理(表22)重複4次。各小區由8m長之6行組成，其中相同小區之各行間的間距為0.5m而相鄰小區之各行間的間距為1.0m。由第3行及第4行內之植物確定表型及農藝學量測。
此等評估中所包括之5種處理為產生適合於滿足此等研究目的之資料所需的特異性大豆基因型及除草劑調配物(咪唑啉酮及非咪唑啉酮除草劑)之組合。
在此等評估中使用2種除草劑處理：1)依滅草，以70g ai/ha之施用量噴灑，及2)Volt，本達隆(400g ai/ha)與三氟羧草醚(170g ai/ha)之組合，以570g ai/ha之施用量噴灑。組合不同大豆基因型及除草劑調配物以形成5種處理(表22)。此等5種處理(T1、T2、T3、T4、T5)構成實驗設計中之一個完整重複。
在巴西之7個實驗站點進行實驗(表23)。該等站點位於代表大豆生產區域及為大豆基因型所適應之區域的區域中。所有位置具有生物安全品質証明(CQB)、已建立之基礎設施、實驗室設施及田間設備，以及有農業研究經驗且在生物安全方面受過訓練之人員。
藉由記錄常規用於描述大豆基因型之表型及行為的各種特徵來判定品系127、同基因對照物及校驗品種之表型、物候及農藝學相似性。對於所有位置之所有小區，記錄特徵(除非另作說明)。使用塔基測試(Tukey's test)來比較由ANOVA測定對特定特徵具有顯著效應之變異來源之平均值。
作為位置間平均值，對於發芽、最終立地(Final Stand)、綠莖、倒伏、開花天數、成熟天數或產量，依滅草(T1)或Volt(T2)處理品系127之效能與依滅草處理同基因對照物(T3)之效能無顯著不同(表24)。僅對於植物高度及種子尺寸，T1顯著不同於T3，且僅對於種子尺寸，T2顯著不同於T3。另外，性狀之差異無一者意謂T1與T2之位置顯著不同(表24)。
G=初始發芽(%)；FS=最終植物立地；PH=植物高度(cm)；GS=綠莖(%)；L=倒伏度；DF=完全開花天數(營養週期)；DM=完全成熟天數(總週期)；100SW=種子尺寸(100顆種子重量(g))；且產率=穀粒產量(kg/ha)。
T1=用依滅草處理BPS-CV-127-9，T2=用Volt處理BPS-CV-127-9，T3=用Volt處理同基因(Isoline)對照物，T4=用Volt處理Monsoy 8001，T5=用Volt處理Coodetec 217。
§藉由塔基測試，在5%機率下，相同字母前之平均值無顯著差異。
此研究之結果指示含有品系127之大豆品系可用於在施用具有殘留活性之咪唑啉酮除草劑後維持與其他商業品種在不存在該除草劑施用下之產量相同之產量。
研發出用於偵測種子及穀粒樣本中之品系127核酸的基於凝膠之定性PCR檢定方法。該方法能夠偵測非轉殖基因大豆DNA混合物中0.05%之品系127大豆DNA。
在25ml研磨燒杯中使用混合研磨器MM 400(Retsch;Haan,Germany)以30Hz研磨穀粒及種子樣本30秒，得到均勻粉末。使用CTAB(溴化十六烷基三甲基銨)緩衝液自0.1g-1g經研磨穀粒樣本提取基因組DNA，繼而進行氯仿：辛醇萃取及醇沈澱。溶解所得沈澱物，且藉由陰離子交換層析使用基因組-tip 20/G重力流管柱(Qiagen;Hilden,Germany)移除剩餘抑制劑。
用分光光度計Nanodrop ND-1000(Peqlab Biotechnologie;Erlangen,Germany)藉由測定樣本在260nm與280nm之波長下的吸光度比率(A260/280)及在260nm與230nm之波長下的吸光度比率(A260/230)來檢定DNA之濃度及純度。選擇A260/280比率接近1.8且A260/230高於1.8之DNA用於後續PCR。
研發另一組引子以擴增品系127特異性區域，且使用大豆特異性基因作為內源性對照。品系特異性PCR檢定靶向為品系127特有之轉殖基因***物-天然大豆基因組DNA接合點。在T1熱循環器(Biometra;Gttingen,Germany)中進行所有PCR擴增。在各PCR反應中，使用100奈克之基因組DNA作為模板。
使用用以偵測大豆凝集素基因(Le1)(基因庫寄存編號：K00821)之大豆特異性PCR系統作為參照系統。用於凝集素基因PCR之引子序列及PCR循環條件係自Hird等人(J. AOAC Int.,86: 66-71(2003))修改而來。引子序列為SoyLec-F(5'-TGGTCGCGCCCTCTACTC)(SEQ ID NO: 65)及SoyLec-R(5'-GGCGAAGCTGGCAACG)(SEQ ID NO: 66)。該等引子經設計以擴增具有70個鹼基對(bp)之大豆特異性片段。
對內源性對照組，每一反應以20μl總體積，用100ng基因組DNA、200μM dNTP、2mM MgCl2、500nM之各引子及1單位Taq DNA聚合酶進行PCR。在94℃下初始2分鐘的變性後，進行94℃(歷時30秒)、60℃(歷時30秒)及72℃(歷時30秒)之32個循環，繼而在72℃下進行最終1分鐘的延長。
對自水稻(Oryza sativa)、油菜籽(甘藍型油菜(Brassica napus))、棉花(陸地棉(Gossypium hirsutum)，2個不同品系)、玉米(Zea mays)、大豆Conquista、大豆品系127獲得之個別DNA樣本及無DNA模板(作為對照)進行使用上述引子及條件的反應，且在瓊脂糖凝膠上進行電泳。在來自大豆植物(Conquista及品系127)之DNA樣本中獲得70個鹼基對之產物，而在其他樣本中未獲得擴增產物。因此，內源性對照引子能夠特異性偵測來自大豆之基因組DNA。
在5'***物與基因組大豆DNA之接合點處進行用於品系127大豆之品系特異性檢定。正向引子結合位點係位於天然基因組大豆DNA內(127-61F：5'-GGGCAAACTAGTCTCGTAATATAT)(SEQ ID NO: 67)，而反向引子之結合位點位於127***物中(127-176R：5'-CGGAATTGGTAATCGAAATT)(SEQ ID NO: 68)。該反應擴增具有116個鹼基對(bp)之片段。
使用100ng基因組DNA(來自水稻(Oryza sativa)、油菜籽(甘藍型油菜)、棉花(陸地棉)、玉米(Zea mays)、大豆GTS 40-3-2、大豆305423、大豆356043、大豆A2704-12、大豆Conquista、大豆品系127及無模板對照物)測定品系特異性引子(127-61F及127-176R)之特異性。每一反應以20μl總體積，用100ng模板DNA、200μM dNTP、2mM MgCl2、500nM之各引子及1單位Taq DNA聚合酶進行品系特異性反應之PCR。在94℃下初始2分鐘的變性後，進行94℃(歷時30秒)、56℃(歷時30秒)及72℃(歷時30秒)之32個循環，繼而在72℃下進行最終1分鐘的延長。
藉由在經溴化乙錠-染色之4%瓊脂糖凝膠中分離經擴增之品系127特異性116bp PCR片段來判定樣本中存在或不存在大豆品系127。
在所有對應於大豆品系127樣本之反應中獲得品系127特異性116bp PCR片段，而在其他樣本中之任一者中未獲得127特異性PCR片段。因此，品系特異性引子127-61F及127-176R能夠特異性偵測來自品系127大豆植物之DNA。使用DNA-DNA鹼基局部比對檢索工具(BLASTN)分析，使用經擴增品系特異性擴增子序列之核苷酸序列檢索未識別出任何100%一致匹配。
為測定使用127-61F及127-176R引子之反應的檢測極限，藉由隨後用Conquista DNA稀釋品系127 DNA來製備含有確定品系127 DNA含量(100%、1%、0.5%、0.1%、0.05%及0%)之標準品。對各稀釋液，使用上文所述之條件進行22次重複PCR擴增。每系統設立一個無DNA模板對照(NTC)以驗證試劑之純度。
在0.05%至100%品系127 DNA範圍內測試之所有稀釋液中皆偵測到品系127特異性PCR產物(116bp片段)。如所預期，即使所有非轉殖基因大豆樣本因在大豆特異性PCR擴增中預期擴增子的存在而顯示出具有可擴增DNA，但在非轉殖基因大豆樣本或無模板對照物(NTC)中未偵測到品系127特異性條帶。可可靠地使用127-61F及127-176R引子偵測之樣本中的最低品系127 DNA量為0.05%。
使用127-61F及127-176R引子之品系特異性PCR在95%置信度下展示小於0.1%之相對LOD。另外，127-61F及127-176R引子在0%品系127參照(100%非轉殖基因大豆)或無模板對照反應中未擴增出任何可偵測之PCR產物。
為評定改變PCR反應中之黏接溫度的影響，在黏接溫度為54℃及58℃之實驗中，以一式三份分析4個樣本(稀釋於非轉殖基因Conquista大豆DNA本底中之0%、0.05%、1%及100%之品系127大豆DNA)。結果表明偏離最佳黏接溫度±2℃之黏接溫度可產生對品系127特異性DNA之100%正確偵測。
為評定不同PCR平台之影響，使用ABI 7500快速即時PCR系統(Applied Biosystems;Darmstadt,Germany)，以一式三份分析3個樣本(稀釋於非轉殖基因Conquista大豆DNA本底中之0.05%、1%及100%品系127大豆DNA)。包括0%品系127樣本(100%Conquista DNA)及無DNA模板之樣本作為對照。
結果表明使用127-61F及127-176R引子之品系127特異性PCR檢定在不同PCR儀器中之效能良好。在所有3個反應中，探測之相對極限為0.05%。如所預期，在於非轉殖基因大豆DNA本底中含有0%品系127 DNA之樣本中或在無模板對照物中未偵測到PCR產物。
為評定檢定介於實驗室之間的再現性(實驗室間可轉移性)，在獨立實驗室中進行2次獨立實驗。在2次獨立實驗中，每一反應在DNA Engine Dyad熱循環器(BioRad;Mnchen,Germany)上使用100ng基因組DNA，以一式兩份分析於非轉殖基因大豆DNA本底中含有0.05%至100%品系127 DNA含量之不同樣本。結果指示檢定介於實驗室之間的再現性(實驗室間可轉移性)良好。結果展示100%、1%及0.5%品系127 DNA樣本之100%陽性結果。另外，對於0.1%及0.05%品系127 DNA樣本獲得至少95%陽性結果(假定相對)，在0%品系127 DNA樣本或無模板對照物中未獲得陽性結果。
使用127-61F及127-176R引子的定性品系特異性之基於凝膠之PCR偵測方法能夠偵測0.05%品系127 DNA於非轉殖基因大豆DNA本底中之混合物中的品系127特異性目標序列。僅含有非轉殖基因大豆DNA或其他轉殖基因品系之樣本中無一者產生可偵測之品系127特異性PCR產物，由此以實驗方法證明該方法之特異性。
用(1)咪唑啉酮除草劑、(2)嗜毬果傘素殺真菌劑及(3)咪唑啉酮除草劑以及嗜毬果傘素殺真菌劑之組合處理大豆品系127植物。
使大豆品系127植物以5棵植物/盆生長於25cm直徑之盆中。對於處理1-16，在播種後23天進行各種除草劑及/或殺真菌劑施用(如以下表X中所示)，且對於處理17-32，在播種後24天進行各種除草劑及/或殺真菌劑施用。
在施藥後(DAA)1天、7天及14天，針對植物毒性、活力、植物高度、相對光合作用、相對SPAD(亦即葉片葉綠素/綠度之相對度量)及氣孔導度(stomatal conductance)評定植物。
如以下表26中所示，在某些時間點，相對於某些無百克敏之處理，向甲基咪草煙或甲基咪草煙加上依滅草之處理中添加百克敏會顯著增加淨光合作用、增加總體植物綠度(相對SPAD)且增加氣孔導度。
此指示百克敏與AHAS抑制性除草劑之組合可向品系127大豆植物提供驚人之有益程度。
圖1A提供質體pAC321之示意圖。圖1B提供pAC321之含有AHASL 5' UTR、csr1-2編碼序列及AHASL 3' UTR且用於轉型之PvuII片段(6375 bp片段(分子8669 bp))的示意圖。圖上顯示用於複本數、骨架之缺乏及代間穩定性之南方墨點分析的酶(NcoI、XbaI、SpeI)之限制性位點。圖上顯示用作轉殖基因探針之DNA片段的位置。
圖2提供大豆品系127植物之一個實例之育種史的示意圖。
圖3提供pAC321 PvuII轉型片段與大豆品系127(Cultivance)***物比對之示意圖。
圖4A-4C提供如實例3中所述之大豆品系127植物的一個實例中之***物複本數的南方墨點雜交結果。圖4D提供用於雜交實驗中之探針之相對位置的示意圖。
圖5提供顯示在如實例3中所述之大豆品系127植物的一個實例中不存在載體骨架序列之南方墨點雜交之結果。圖5A提供使用探針VP1之結果，且圖5B提供使用探針VP2之結果。圖5C提供127品系序列上雜交區域之相對位置的示意圖。
圖6提供對品系127序列之代間穩定性作南方墨點雜交分析之結果。圖6A提供使用5' UTR探針之結果。圖6B提供使用AHAS探針之結果。圖6C提供使用3' UTR探針之結果。圖6D提供各別探針在品系127序列上之雜交區的示意圖。
圖7提供大豆品系127植物之一個實例中之***及側接序列的圖。圖上亦顯示6個如實例3中所述用於測序之擴增子。
圖8提供大豆品系127***區及側接區之全長核酸序列(SEQ ID NO:1)。位置1-1311表示5'側接DNA，位置1312-6069表示編碼經修飾之AHASL蛋白質的***DNA，且位置6070-10,656表示3'側接DNA。
圖9提供對如實例3中所述之大豆品系127植物的一個實例中之AtSec 61γ次單位之轉錄作RT-PCR分析的凝膠電泳結果。
圖10提供對如實例3中所述之大豆品系127植物的一個實例中藉由將csr1-2編碼序列之376 bp重複***3'側接接合點處所產生之501 bp開放閱讀框架(ORF)之轉錄作RT-PCR分析的凝膠電泳結果。
圖11A-C提供如實例3中所述之品系127特異性PCR偵測方法之實例的凝膠電泳結果。
圖12提供用於產生品系127之DNA，亦即pAC321構築體之6156 bp PvuII片段(SEQ ID NO:4)。
(無元件符號說明)
Claims (31)
- 一種控制耕種區域雜草的方法，其包含：將有效量之包含乙醯羥基酸合成酶(AHAS)抑制性咪唑啉酮除草劑之除草組合物施用於具有包含含有SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的核酸分子之大豆植物的耕種區域，其中該有效量可抑制耕種區域雜草及野生型大豆植物之生長。
- 如請求項1之方法，其中該核酸分子包含SEQ ID NO：1之核酸序列。
- 如請求項1之方法，其中該除草組合物進一步包含一或多種其他咪唑啉酮除草劑、其他AHAS抑制性除草劑、5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)抑制性除草劑、麩醯胺酸合成酶(GS)抑制性除草劑、原卟啉原[IX]氧化酶(PPO)抑制性除草劑、植物生長素(auxinic)除草劑以及其組合。
- 如請求項1之方法，其中該AHAS抑制性咪唑啉酮除草劑係選自依滅草(imazapyr)、甲基咪草煙(imazapic)及其組合。
- 如請求項1之方法，其進一步包含將有效量之一或多種咪唑啉酮除草劑、其他AHAS抑制性除草劑、EPSPS抑制性除草劑、GS抑制性除草劑、PPO抑制性除草劑、植物生長素除草劑以及其組合施用於該耕種區域。
- 如請求項3或5之方法，其中該EPSPS抑制性除草劑包含草甘膦(glyphosate)且該PPO抑制性除草劑包含嘧啶肟草 醚(saflufenacil)。
- 如請求項1之方法，其中該等雜草對草甘膦具有抗性。
- 如請求項1之方法，其中該方法其中該方法進一步包含將嗜毬果傘素(strobilurin)施用於該耕種區域。
- 如請求項8之方法，其中該嗜毬果傘素包含百克敏(pyraclostrobin)。
- 如請求項1之方法，其中該除草組合物進一步包含依滅草；甲基咪草煙；或以下任一者：依滅草及甲基咪草煙之組合；依滅草、甲基咪草煙及本達隆(bentazon)之組合；依滅草、甲基咪草煙及百克敏之組合；依滅草、甲基咪草煙及嘧啶肟草醚之組合；依滅草、甲基咪草煙、嘧啶肟草醚及草甘膦之組合；依滅草及本達隆之組合；依滅草及百克敏之組合；依滅草及嘧啶肟草醚之組合；依滅草、嘧啶肟草醚及草甘膦之組合；依滅草及草甘膦之組合；甲基咪草煙及草甘膦之組合；及甲基咪草煙、嘧啶肟草醚及草甘膦之組。
- 一種控制作物田間之草甘膦耐受性雜草的方法，其包含： 將有效量之含有AHAS抑制性咪唑啉酮除草劑之除草組合物施用於具有包含SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的核酸分子之大豆植物的作物田間。
- 如請求項11之方法，其中該大豆植物包含具有SEQ ID NO：1核酸序列之核酸分子。
- 如請求項11之方法，其中該AHAS抑制性咪唑啉酮除草劑係選自依滅草、甲基咪草煙及其組合。
- 如請求項11之方法，其中該方法進一步包含將嗜毬果傘素施用於該耕種區域。
- 一種經分離及重組之核酸分子，其編碼包含位置653之絲胺酸取代為天冬醯胺(S653N)之AHASL蛋白質的經修飾形式且包含SEQ ID NO：1之位置1302-6079之核酸序列。
- 如請求項15之經分離及重組之核酸分子，其中該核酸分子於重組核酸構築體中。
- 一對分離之核酸引子，其係用於擴增包含至少一部分SEQ ID NO：1之位置1302至6079的核酸序列之標的核酸分子，該引子包含：第一及第二經分離之核酸分子，其中該第一經分離之核酸分子包含選自於SEQ ID NO：37、39、41、43及67之核酸序列，且第二經分離之核酸分子包含選自於SEQ ID NO：38、40、42、44及68之核酸序列。
- 如請求項17之經分離之核酸引子對，其中該第一經分離之核酸分子包含SEQ ID NO：41之序列，且該第二經分離 之核酸分子包含SEQ ID NO：42之序列。
- 一種偵測生物樣本中存在包含SEQ ID NO：1位置1302-6079核酸序列之核酸分子之方法，該方法包含：(a)形成包含一種含有大豆DNA之生物樣本與第一及第二核酸引子的混合物，其中該第一經分離之核酸分子包含選自於SEQ ID NO：37、39、41、43及67之核酸序列，且第二經分離之核酸分子包含選自於SEQ ID NO：38、40、42、44及68之核酸序列；(b)使該混合物在允許該第一及該第二核酸引子擴增核酸分子之條件下反應；及(c)偵測經擴增之核酸分子的存在或不存在，其中該經擴增核酸分子的存在指示該生物樣本包含含有SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的核酸分子。
- 一種偵測生物樣本中存在包含SEQ ID NO：1位置1302-6079核酸序列之核酸分子的方法，該方法包含：(a)形成包含一種含有大豆DNA之生物樣本與能夠與包含SEQ ID NO：1位置1302-6079核酸序列之核酸分子雜交之核酸分子探針的混合物；(b)使該混合物在允許該核酸分子探針與包含SEQ ID NO：1位置1302-6079核酸序列之核酸分子雜交之條件下反應；及(c)偵測該探針與該DNA之雜交，其中該核酸分子探針與該大豆DNA之雜交存在指示該生物樣本包含SEQ ID NO：1位置1302-6079核酸序列之核酸分子存在。
- 如請求項19或20之方法，其中該生物樣本包含大豆種子。
- 如請求項19或20之方法，其中該生物樣本包含大豆植物部分。
- 一種於耕種區域增加大豆植物產率的方法，該方法包含：將有效量之包含AHAS抑制性咪唑啉酮除草劑之除草組合物施用於包含含有SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的核酸分子之一或多種大豆植物及耕種區域，其中該AHAS抑制性除草劑減少雜草在該耕種區域生長；及自該一或多種大豆植物收穫種子。
- 一種用於偵測生物分子之裝置，其包含：具有一表面之固體支撐物；及至少一種包含SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的診斷性核酸分子附著於該固體支撐物表面。
- 如請求項24之裝置，其中該固體支撐物係(A)選自由玻璃、凝膠、聚合物、塑膠、彈性體、陶瓷、金屬及其組合組成之群，或(B)選自由板、晶片、膜、桿、棒、珠粒、纖維、墊、網格、織物、容器壁及其組合組成之群，或(C)選自(A)及(B)。
- 如請求項24之裝置，其中該包含SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的診斷性核酸分子係選自由核鹼基寡聚物探針、適體(aptamers)、抗體及其組合組成之群。
- 如請求項26之裝置，其中該等核鹼基寡聚物探針包含核酸類似物。
- 如請求項26之裝置，其中該抗體係選自由單株抗體、單鏈抗體、及保留對由包含SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的核酸分子所編碼多肽之結合特異性的免疫反應性抗體片段組成之群。
- 如請求項24之裝置，其中該(等)診斷分子係由選自與該表面共價結合、配位結合及非共價結合之方法固定。
- 如請求項24之裝置，其中該基底包含免疫層析條。
- 如請求項24之裝置，其中該裝置包含多數確定區域之陣列，各區域包含：(a)該固體支撐物表面的一部分，及附著於其上之(b)至少一種包含SEQ ID NO：1位置1302-6079之核酸序列的診斷性核酸分子。
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| MX2015006500A (es) | 2012-12-03 | 2015-08-14 | Bayer Cropsciense Ag | Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida. |
| US9867377B2 (en) | 2012-12-03 | 2018-01-16 | Bayer Cropscience Ag | Composition comprising a biological control agent and an insecticide |
| WO2014090765A1 (en) | 2012-12-12 | 2014-06-19 | Bayer Cropscience Ag | Use of 1-[2-fluoro-4-methyl-5-(2,2,2-trifluoroethylsulfinyl)phenyl]-5-amino-3-trifluoromethyl)-1 h-1,2,4 tfia zole for controlling nematodes in nematode-resistant crops |
| AR093996A1 (es) | 2012-12-18 | 2015-07-01 | Bayer Cropscience Ag | Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias |
| IN2015DN04206A (zh) | 2012-12-19 | 2015-10-16 | Bayer Cropscience Ag | |
| EP2953465A1 (en) | 2013-02-11 | 2015-12-16 | Bayer Cropscience LP | Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and a fungicide |
| BR112015018419A2 (pt) | 2013-02-11 | 2017-07-18 | Bayer Cropscience Lp | composições compreendendo um agente de controle biológico à base de streptomyces e um outro agente de controle biológico |
| CA2898725A1 (en) | 2013-02-11 | 2014-08-14 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and an insecticide |
| RU2020105862A (ru) | 2013-03-07 | 2020-02-28 | Атеникс Корп. | Гены токсинов и способы их применения |
| EP2986117A1 (en) | 2013-04-19 | 2016-02-24 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Binary insecticidal or pesticidal mixture |
| CA2909725A1 (en) | 2013-04-19 | 2014-10-23 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants |
| WO2014177514A1 (en) | 2013-04-30 | 2014-11-06 | Bayer Cropscience Ag | Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides |
| TW201507722A (zh) | 2013-04-30 | 2015-03-01 | Bayer Cropscience Ag | 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類 |
| EP3013802B1 (en) | 2013-06-26 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives |
| AU2014327408B2 (en) * | 2013-09-26 | 2018-02-15 | Basf Agrochemical Products B.V. | Method for controlling weeds in sugar cane plantations |
| CN103667450B (zh) * | 2013-11-11 | 2015-04-22 | 上海交通大学 | 适用于转基因产品高通量检测的dna芯片 |
| WO2015082587A1 (en) | 2013-12-05 | 2015-06-11 | Bayer Cropscience Ag | N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| AU2014359208B2 (en) | 2013-12-05 | 2018-10-04 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | N-cycloalkyl-N-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives |
| EP2885970A1 (en) | 2013-12-21 | 2015-06-24 | Bayer CropScience AG | Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide |
| US10876130B2 (en) | 2014-03-11 | 2020-12-29 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | HPPD variants and methods of use |
| WO2015160618A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent |
| WO2015160619A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide |
| WO2015160620A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Bayer Cropscience Lp | Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide |
| RS60016B1 (sr) | 2014-06-26 | 2020-04-30 | Basf Agrochemical Products Bv | Tretiranje semena inhibitorima acetolaktat sintaze (als) |
| US10219515B2 (en) | 2014-11-07 | 2019-03-05 | Basf Se | Agrochemical adjuvant containing 2-oxo-1,3-dioxolan-4 carboxylates |
| UA123991C2 (uk) | 2015-01-22 | 2021-07-07 | Басф Агро Б.В. | Трикомпонентна гербіцидна комбінація, що включає сафлуфенацил |
| EP3283476B1 (en) | 2015-04-13 | 2019-08-14 | Bayer Cropscience AG | N-cycloalkyl-n-(biheterocyclyethylene)-(thio)carboxamide derivatives |
| EP3097782A1 (en) | 2015-05-29 | 2016-11-30 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents |
| WO2017009137A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | BASF Agro B.V. | Herbicidal composition comprising cinmethylinandpethoxamid |
| JP6875368B2 (ja) | 2015-07-10 | 2021-05-26 | ビーエーエスエフ アグロ ベー．ブイ． | シンメチリン及びアセトクロール又はプレチラクロールを含む除草剤組成物 |
| US11219215B2 (en) | 2015-07-10 | 2022-01-11 | BASF Agro B.V. | Herbicidal composition comprising cinmethylin and specific inhibitors of protoporphyrinogen oxidase |
| PL3319436T3 (pl) | 2015-07-10 | 2020-03-31 | BASF Agro B.V. | Kompozycja chwastobójcza zawierająca cynmetylinę i chinomerak |
| PL3319427T3 (pl) | 2015-07-10 | 2020-05-18 | BASF Agro B.V. | Kompozycja chwastobójcza zawierająca cynmetalinę i dimetenamid |
| US11219212B2 (en) | 2015-07-10 | 2022-01-11 | BASF Agro B.V. | Herbicidal composition comprising cinmethylin and imazamox |
| US20180184658A1 (en) | 2015-07-10 | 2018-07-05 | BASF Agro B.V. | Herbicidal composition comprising cinmethylin and saflufenacil |
| WO2017009090A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | BASF Agro B.V. | Herbicidal composition comprising cinmethylin and pyroxasulfone |
| CN107846891B (zh) | 2015-07-10 | 2024-02-20 | 巴斯夫农业公司 | 包含环庚草醚和特异性色素合成抑制剂的除草组合物 |
| MX2018003044A (es) | 2015-09-11 | 2018-04-11 | Bayer Cropscience Ag | Variantes de hppd y metodos de uso. |
| CN105483213B (zh) * | 2015-10-27 | 2018-12-18 | 上海速创诊断产品有限公司 | 转基因抗除草剂大豆bps-cv127-9的lamp检测引物组、lamp检测试剂盒及检测方法 |
| EP3490379A1 (en) | 2016-07-29 | 2019-06-05 | Bayer CropScience Aktiengesellschaft | Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants |
| CN109790547B (zh) * | 2016-08-05 | 2023-08-15 | 利马格兰集团 | 控制植物中气孔关闭的构建体和方法 |
| AU2017315687A1 (en) * | 2016-08-23 | 2021-09-09 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Monoterpenoid/phenylpropanoid-containing compounds and methods of their making and use as herbicides |
| CN106404970A (zh) * | 2016-11-21 | 2017-02-15 | 河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 一种铁棍山药中吡唑醚菌酯残留量的检测方法 |
| WO2018098214A1 (en) | 2016-11-23 | 2018-05-31 | Bayer Cropscience Lp | Axmi669 and axmi991 toxin genes and methods for their use |
| WO2018114393A1 (en) | 2016-12-19 | 2018-06-28 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| US20190364908A1 (en) | 2016-12-22 | 2019-12-05 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Use of cry14 for the control of nematode pests |
| DK3558961T3 (da) | 2016-12-22 | 2021-04-12 | Syngenta Participations Ag | Polymorfer |
| GB201622007D0 (en) | 2016-12-22 | 2017-02-08 | And See Cambridge Display Tech Ltd Syngenta Participations Ag | Polymorphs |
| KR20190095409A (ko) | 2016-12-22 | 2019-08-14 | 바스프 아그리컬쳐럴 솔루션즈 시드 유에스 엘엘씨 | 엘리트 이벤트 ee-gm4, 및 생물학적 시료에서 이러한 이벤트를 동정하기 위한 방법 및 키트 |
| WO2018119364A1 (en) | 2016-12-22 | 2018-06-28 | Bayer Cropscience Lp | Elite event ee-gm5 and methods and kits for identifying such event in biological samples |
| US11279946B2 (en) | 2017-01-18 | 2022-03-22 | Basf Argicultural Solutions Seed Us Llc | BP005 toxin gene and methods for its use |
| BR112019014720A2 (pt) | 2017-01-18 | 2020-04-07 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | métodos para conferir resistência a doença em uma planta e para aumentar o rendimento em uma planta |
| BR112019015338B1 (pt) | 2017-02-21 | 2023-03-14 | Basf Se | Compostos de fórmula i, composição agroquímica, semente revestida, uso dos compostos e método para combater fungos nocivos fitopatogênicos |
| UY37623A (es) | 2017-03-03 | 2018-09-28 | Syngenta Participations Ag | Derivados de oxadiazol tiofeno fungicidas |
| WO2018165091A1 (en) | 2017-03-07 | 2018-09-13 | Bayer Cropscience Lp | Hppd variants and methods of use |
| WO2018177880A1 (en) | 2017-03-31 | 2018-10-04 | Syngenta Participations Ag | Fungicidal compositions |
| US11974572B2 (en) | 2017-03-31 | 2024-05-07 | Sygenta Participations Ag | Fungicidal compositions |
| US20210101874A1 (en) | 2017-04-03 | 2021-04-08 | Syngenta Participations Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| WO2018184985A1 (en) | 2017-04-05 | 2018-10-11 | Syngenta Participations Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| WO2018184988A1 (en) | 2017-04-05 | 2018-10-11 | Syngenta Participations Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| WO2018184984A1 (en) | 2017-04-05 | 2018-10-11 | Syngenta Participations Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| BR112019020734B1 (pt) | 2017-04-05 | 2023-12-05 | Syngenta Participations Ag | Compostos derivados de oxadiazol, composição agroquímica, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso dos referidos compostos |
| BR112019020735B1 (pt) | 2017-04-05 | 2023-12-05 | Syngenta Participations Ag | Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas e seu uso, composição agroquímica e método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos |
| BR112019021019B1 (pt) | 2017-04-05 | 2023-12-05 | Syngenta Participations Ag | Compostos derivados de oxadiazol microbiocidas, composição agrícola, método para controlar ou prevenir a infestação de plantas úteis por microrganismos fitopatogênicos e uso de um composto derivado de oxadiazol |
| WO2018185211A1 (en) | 2017-04-06 | 2018-10-11 | Syngenta Participations Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| US20200045974A1 (en) | 2017-04-07 | 2020-02-13 | Basf Se | Substituted Oxadiazoles for Combating Phytopathogenic Fungi |
| WO2018188962A1 (en) | 2017-04-11 | 2018-10-18 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| AR111561A1 (es) | 2017-04-21 | 2019-07-24 | Bayer Cropscience Lp | Método para mejorar la seguridad de los cultivos |
| US11109591B2 (en) | 2017-04-24 | 2021-09-07 | Taminco Bvba | Single phase liquids of alkanolamine salts of dicamba |
| WO2018202491A1 (en) | 2017-05-04 | 2018-11-08 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| CN110621669A (zh) | 2017-05-04 | 2019-12-27 | 巴斯夫欧洲公司 | 防除植物病原性真菌的取代5-卤代烷基-5-羟基异噁唑类 |
| CN110709395A (zh) | 2017-06-02 | 2020-01-17 | 先正达参股股份有限公司 | 杀微生物的噁二唑衍生物 |
| WO2018219773A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Syngenta Participations Ag | Fungicidal compositions |
| WO2018219797A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Basf Se | Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| EP3638032A1 (en) | 2017-06-14 | 2020-04-22 | Syngenta Participations AG | Fungicidal compositions |
| WO2018234139A1 (en) | 2017-06-19 | 2018-12-27 | Basf Se | 2 - [[5- (TRIFLUOROMETHYL) -1,2,4-OXADIAZOL-3-YL] ARYLOXY] (THIO) ACETAMIDES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| US20200315176A1 (en) | 2017-06-28 | 2020-10-08 | Syngenta Participations Ag | Fungicidal compositions |
| WO2019011923A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019011929A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019011926A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019011928A1 (en) | 2017-07-11 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019012011A1 (en) | 2017-07-12 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019012001A1 (en) | 2017-07-12 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019012003A1 (en) | 2017-07-13 | 2019-01-17 | Syngenta Participations Ag | MICROBIOCIDE OXADIAZOLE DERIVATIVES |
| WO2019025250A1 (en) | 2017-08-04 | 2019-02-07 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| WO2019038042A1 (en) | 2017-08-21 | 2019-02-28 | Basf Se | SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI |
| EP3684761A1 (en) | 2017-09-18 | 2020-07-29 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| UY37912A (es) | 2017-10-05 | 2019-05-31 | Syngenta Participations Ag | Derivados de picolinamida fungicidas que portan grupos terminales heteroarilo o heteroariloxi |
| UY37913A (es) | 2017-10-05 | 2019-05-31 | Syngenta Participations Ag | Derivados de picolinamida fungicidas que portan un grupo terminal cuaternario |
| WO2019068811A1 (en) | 2017-10-06 | 2019-04-11 | Bayer Aktiengesellschaft | COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE |
| US11279944B2 (en) | 2017-10-24 | 2022-03-22 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Of herbicide tolerance to 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase (HPPD) inhibitors by down-regulation of HPPD expression in soybean |
| WO2019083808A1 (en) | 2017-10-24 | 2019-05-02 | Basf Se | IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE AGAINST HPPD INHIBITORS BY REGULATION OF PUTATIVE REDUCED 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE REDUCES IN SOYBEANS |
| EP3710429B1 (en) | 2017-11-15 | 2023-04-05 | Syngenta Participations AG | Microbiocidal picolinamide derivatives |
| US11147275B2 (en) | 2017-11-23 | 2021-10-19 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019121143A1 (en) | 2017-12-20 | 2019-06-27 | Basf Se | Substituted cyclopropyl derivatives |
| WO2019137995A1 (en) | 2018-01-11 | 2019-07-18 | Basf Se | Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests |
| WO2019145221A1 (en) | 2018-01-29 | 2019-08-01 | BASF Agro B.V. | New agrochemical formulations |
| US20200354321A1 (en) | 2018-02-07 | 2020-11-12 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| WO2019154665A1 (en) | 2018-02-07 | 2019-08-15 | Basf Se | New pyridine carboxamides |
| US11917995B2 (en) | 2018-03-01 | 2024-03-05 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions of mefentrifluconazole |
| BR112020021645A2 (pt) | 2018-04-26 | 2021-01-26 | Syngenta Participations Ag | derivados de oxadiazol microbicidas |
| WO2019219464A1 (en) | 2018-05-15 | 2019-11-21 | Basf Se | Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi |
| WO2019224092A1 (en) | 2018-05-22 | 2019-11-28 | Basf Se | Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides |
| CN112673095A (zh) * | 2018-05-25 | 2021-04-16 | 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 | 含有优良事件ee-gm5的植物，和用于在生物样品中识别所述事件的方法和试剂盒，以及其处理 |
| CN112673096A (zh) * | 2018-05-25 | 2021-04-16 | 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 | 含有优良事件ee-gm4的植物，和用于在生物样品中识别所述事件的方法和试剂盒，以及其处理 |
| CN112513033A (zh) | 2018-06-04 | 2021-03-16 | 拜耳公司 | 除草活性的双环苯甲酰基吡唑 |
| WO2020002331A1 (en) | 2018-06-29 | 2020-01-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| CN112714764A (zh) | 2018-07-02 | 2021-04-27 | 先正达农作物保护股份公司 | 作为农用化学杀真菌剂的3-(2-噻吩基)-5-(三氟甲基)-1,2,4-噁二唑衍生物 |
| US20210267204A1 (en) | 2018-07-16 | 2021-09-02 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal oxadiazole derivatives |
| EP3613736A1 (en) | 2018-08-22 | 2020-02-26 | Basf Se | Substituted glutarimide derivatives |
| EP3628158A1 (en) | 2018-09-28 | 2020-04-01 | Basf Se | Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide |
| BR112021007156A2 (pt) | 2018-10-17 | 2021-07-20 | Syngenta Crop Protection Ag | derivados de oxadiazol microbiocidas |
| AR116628A1 (es) | 2018-10-18 | 2021-05-26 | Syngenta Crop Protection Ag | Compuestos microbiocidas |
| CN109136341A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-04 | 浙江省农业科学院 | 一种检测转基因大豆a2704-12的引物、探针及试剂盒和方法 |
| UA127747C2 (uk) | 2018-10-23 | 2023-12-20 | Басф Се | Трициклічні пестицидні сполуки |
| EP3643705A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-29 | Basf Se | Pesticidal compounds |
| EP3670501A1 (en) | 2018-12-17 | 2020-06-24 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| WO2020144308A1 (en) | 2019-01-11 | 2020-07-16 | Basf Se | Crystalline forms of 1-(1,2-dimethylpropyl)-n-ethyl-5-methyl-n-pyridazin-4-yl-pyrazole-4-carboxamide |
| EP3696177A1 (en) | 2019-02-12 | 2020-08-19 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2020165403A1 (en) | 2019-02-15 | 2020-08-20 | Syngenta Crop Protection Ag | Phenyl substituted thiazole derivatives as microbiocidal compounds |
| BR112021016416A2 (pt) | 2019-02-20 | 2021-10-13 | Syngenta Crop Protection Ag | Uso de spiropidion |
| GB201903942D0 (en) | 2019-03-22 | 2019-05-08 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| WO2020208095A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal picolinamide derivatives |
| CA3132321A1 (en) | 2019-04-10 | 2020-10-15 | Clemens Lamberth | Fungicidal compositions |
| BR112021020760A2 (pt) * | 2019-04-16 | 2021-12-14 | Kao Corp | Método de predição de produtividade de soja |
| EP3965575A1 (en) | 2019-05-10 | 2022-03-16 | Bayer CropScience LP | Active compound combinations |
| EP3975718A1 (en) | 2019-05-29 | 2022-04-06 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| EP3769623A1 (en) | 2019-07-22 | 2021-01-27 | Basf Se | Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests |
| WO2020244970A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | New carbocyclic pyridine carboxamides |
| WO2020244969A1 (en) | 2019-06-06 | 2020-12-10 | Basf Se | Pyridine derivatives and their use as fungicides |
| US20220235005A1 (en) | 2019-06-06 | 2022-07-28 | Basf Se | Fungicidal n-(pyrid-3-yl)carboxamides |
| WO2021004968A1 (en) | 2019-07-05 | 2021-01-14 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal picolinamide derivatives |
| GB201910037D0 (en) | 2019-07-12 | 2019-08-28 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| EP3766879A1 (en) | 2019-07-19 | 2021-01-20 | Basf Se | Pesticidal pyrazole derivatives |
| BR112022000354A2 (pt) | 2019-07-22 | 2022-05-10 | Bayer Ag | Pirazóis e trizóis substituídos com amino na posição 5 como pesticidas |
| JP2022541807A (ja) | 2019-07-23 | 2022-09-27 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 殺有害生物剤としての新規なヘテロアリール－トリアゾール化合物 |
| US20220264880A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-08-25 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP4007494A1 (en) | 2019-08-01 | 2022-06-08 | Bayer CropScience LP | Method of improving cold stress tolerance and crop safety |
| EP3701796A1 (en) | 2019-08-08 | 2020-09-02 | Bayer AG | Active compound combinations |
| CN114340391A (zh) | 2019-09-03 | 2022-04-12 | 巴斯夫欧洲公司 | 用于农药喷洒的喷洒漂移控制的聚合物 |
| US20220403410A1 (en) | 2019-09-26 | 2022-12-22 | Bayer Aktiengesellschaft | Rnai-mediated pest control |
| MX2022003964A (es) | 2019-10-02 | 2022-04-25 | Bayer Ag | Combinaciones de compuestos activos que comprenden acidos grasos. |
| WO2021063735A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | New bicyclic pyridine derivatives |
| WO2021063736A1 (en) | 2019-10-02 | 2021-04-08 | Basf Se | Bicyclic pyridine derivatives |
| CN114728928A (zh) | 2019-10-09 | 2022-07-08 | 拜耳公司 | 作为农药的新的杂芳基***化合物 |
| TW202128664A (zh) | 2019-10-09 | 2021-08-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為除害劑之新穎雜芳基***化合物 |
| US20220380318A1 (en) | 2019-11-07 | 2022-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted sulfonyl amides for controlling animal pests |
| WO2021097162A1 (en) | 2019-11-13 | 2021-05-20 | Bayer Cropscience Lp | Beneficial combinations with paenibacillus |
| MX2022005893A (es) | 2019-11-15 | 2022-06-14 | Basf Corp | Metodos de uso de una composicion que comprende un plaguicida anionico y un amortiguador. |
| US20220408727A1 (en) | 2019-11-18 | 2022-12-29 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations comprising fatty acids |
| TW202134226A (zh) | 2019-11-18 | 2021-09-16 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-***化合物 |
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| WO2021155084A1 (en) | 2020-01-31 | 2021-08-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Suppression of shade avoidance response in plants |
| WO2021165195A1 (en) | 2020-02-18 | 2021-08-26 | Bayer Aktiengesellschaft | Heteroaryl-triazole compounds as pesticides |
| EP3708565A1 (en) | 2020-03-04 | 2020-09-16 | Bayer AG | Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides |
| CN115209736A (zh) | 2020-03-05 | 2022-10-18 | 先正达农作物保护股份公司 | 杀真菌组合物 |
| UY39115A (es) | 2020-03-05 | 2021-10-29 | Syngenta Crop Protection Ag | Mezclas fungicidas de derivados de arilo metoxiacrilato |
| CN115697045A (zh) | 2020-04-16 | 2023-02-03 | 成对植物服务股份有限公司 | 控制分生组织大小以改良作物的方法 |
| WO2021209490A1 (en) | 2020-04-16 | 2021-10-21 | Bayer Aktiengesellschaft | Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides |
| TW202200570A (zh) | 2020-04-21 | 2022-01-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之經２—（雜）芳基取代的稠合雜環衍生物 |
| EP3903583A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii |
| EP3903584A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv |
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| BR112022021631A2 (pt) | 2020-04-28 | 2022-12-06 | Basf Se | Compostos, composição, métodos para combater ou controlar pragas invertebradas, para proteger plantas em crescimento e para tratar ou proteger um animal, semente e uso de um composto |
| EP3903581A1 (en) | 2020-04-28 | 2021-11-03 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i |
| GB202006386D0 (en) | 2020-04-30 | 2020-06-17 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal Compounds |
| GB202006399D0 (en) | 2020-04-30 | 2020-06-17 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| GB202006480D0 (en) | 2020-05-01 | 2020-06-17 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| GB202006606D0 (en) | 2020-05-05 | 2020-06-17 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| CN115915941A (zh) | 2020-05-06 | 2023-04-04 | 拜耳公司 | 作为杀真菌化合物的吡啶（硫代）酰胺 |
| TW202208347A (zh) | 2020-05-06 | 2022-03-01 | 德商拜耳廠股份有限公司 | 作為殺蟲劑之新穎雜芳基***化合物 |
| US20230180756A1 (en) | 2020-05-12 | 2023-06-15 | Bayer Aktiengesellschaft | Triazine and pyrimidine (thio)amides as fungicidal compounds |
| EP3909950A1 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-17 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| US20230192617A1 (en) | 2020-05-19 | 2023-06-22 | Bayer Cropscience Aktiengesellschaft | Azabicyclic(thio)amides as fungicidal compounds |
| CA3185017A1 (en) | 2020-06-02 | 2021-12-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for controlling meristem size for crop improvement |
| US20230278994A1 (en) | 2020-06-04 | 2023-09-07 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterocyclyl pyrimidines and triazines as novel fungicides |
| WO2021249995A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Bayer Aktiengesellschaft | Azabicyclyl-substituted heterocycles as fungicides |
| WO2021249800A1 (en) | 2020-06-10 | 2021-12-16 | Basf Se | Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides |
| EP3945089A1 (en) | 2020-07-31 | 2022-02-02 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v |
| WO2021254875A1 (en) | 2020-06-15 | 2021-12-23 | Basf Se | A stable, solvent-free, self-emulsifiable concentrate |
| AR122661A1 (es) | 2020-06-17 | 2022-09-28 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para el control del tamaño del meristemo para la mejora de cultivos |
| CN116157017A (zh) | 2020-06-18 | 2023-05-23 | 拜耳公司 | 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物 |
| CA3187291A1 (en) | 2020-06-18 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Composition for use in agriculture |
| BR112022025692A2 (pt) | 2020-06-19 | 2023-02-28 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas |
| UY39276A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones. |
| UY39275A (es) | 2020-06-19 | 2022-01-31 | Bayer Ag | 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos |
| WO2021255089A1 (en) | 2020-06-19 | 2021-12-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides |
| EP3929189A1 (en) | 2020-06-25 | 2021-12-29 | Bayer Animal Health GmbH | Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides |
| JP2023532548A (ja) | 2020-07-02 | 2023-07-28 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 有害生物防除剤としてのヘテロサイクレン誘導体 |
| EP3939961A1 (en) | 2020-07-16 | 2022-01-19 | Basf Se | Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi |
| WO2022017836A1 (en) | 2020-07-20 | 2022-01-27 | BASF Agro B.V. | Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol |
| EP3970494A1 (en) | 2020-09-21 | 2022-03-23 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii |
| WO2022033991A1 (de) | 2020-08-13 | 2022-02-17 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| IL300935A (en) | 2020-08-31 | 2023-04-01 | Basf Se | Improving plant yield |
| WO2022053453A1 (de) | 2020-09-09 | 2022-03-17 | Bayer Aktiengesellschaft | Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel |
| WO2022058327A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Bayer Aktiengesellschaft | Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents |
| GB202014840D0 (en) | 2020-09-21 | 2020-11-04 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal compounds |
| EP3974414A1 (de) | 2020-09-25 | 2022-03-30 | Bayer AG | 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| EP4222167A1 (en) | 2020-09-30 | 2023-08-09 | Nobell Foods, Inc. | Recombinant milk proteins and food compositions comprising the same |
| US10894812B1 (en) | 2020-09-30 | 2021-01-19 | Alpine Roads, Inc. | Recombinant milk proteins |
| US10947552B1 (en) | 2020-09-30 | 2021-03-16 | Alpine Roads, Inc. | Recombinant fusion proteins for producing milk proteins in plants |
| EP4236691A1 (en) | 2020-10-27 | 2023-09-06 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| WO2022090071A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi |
| WO2022090069A1 (en) | 2020-11-02 | 2022-05-05 | Basf Se | Compositions comprising mefenpyr-diethyl |
| WO2022106304A1 (en) | 2020-11-23 | 2022-05-27 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| TW202231187A (zh) | 2020-11-27 | 2022-08-16 | 瑞士商先正達農作物保護公司 | 殺有害生物組成物 |
| WO2022117650A1 (en) | 2020-12-02 | 2022-06-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Fungicidal compositions |
| UY39544A (es) | 2020-12-02 | 2022-06-30 | Syngenta Crop Protection Ag | Composiciones fungicidas que comprenden una mezcla de componentes (a) y (b) como principios activos |
| JP2024501464A (ja) | 2020-12-14 | 2024-01-12 | ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア | スルホキシミン系殺虫剤 |
| EP3915971A1 (en) | 2020-12-16 | 2021-12-01 | Bayer Aktiengesellschaft | Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides |
| WO2022129200A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops |
| WO2022129190A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| WO2022129188A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides |
| WO2022129196A1 (en) | 2020-12-18 | 2022-06-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides |
| EP4036083A1 (de) | 2021-02-02 | 2022-08-03 | Bayer Aktiengesellschaft | 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel |
| BR112023015909A2 (pt) | 2021-02-11 | 2023-11-21 | Monsanto Technology Llc | Métodos e composições para modificar níveis de citocinina oxidase em plantas |
| EP4043444A1 (en) | 2021-02-11 | 2022-08-17 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| MX2023009799A (es) | 2021-02-25 | 2023-10-30 | Pairwise Plants Services Inc | Metodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas. |
| AR125089A1 (es) | 2021-03-19 | 2023-06-07 | Syngenta Crop Protection Ag | Composiciones plaguicidas |
| BR112023019788A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-11-07 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| BR112023019400A2 (pt) | 2021-03-30 | 2023-12-05 | Bayer Ag | 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida |
| CA3217066A1 (en) | 2021-05-03 | 2022-11-10 | Timothy H Anderson | Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms |
| MX2023013014A (es) | 2021-05-04 | 2023-11-15 | Syngenta Crop Protection Ag | Uso de cletodim para el control de insectos. |
| KR20240005019A (ko) | 2021-05-06 | 2024-01-11 | 바이엘 악티엔게젤샤프트 | 알킬아미드 치환된, 환형 이미다졸 및 살충제로서의 이의 용도 |
| JP2024517305A (ja) | 2021-05-12 | 2024-04-19 | バイエル・アクチエンゲゼルシヤフト | 有害生物防除剤としての２－（ヘテロ）アリール置換縮合複素環誘導体 |
| EP4091451A1 (en) | 2021-05-17 | 2022-11-23 | BASF Agro B.V. | Compositions comprising mefentrifluconazole |
| CN117355520A (zh) | 2021-05-18 | 2024-01-05 | 巴斯夫欧洲公司 | 用作杀真菌剂的新型取代喹啉类 |
| CN117355518A (zh) | 2021-05-18 | 2024-01-05 | 巴斯夫欧洲公司 | 用作杀真菌剂的新型取代吡啶类 |
| CA3218900A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Wassilios Grammenos | New substituted pyridines as fungicides |
| EP4355764A1 (en) | 2021-06-14 | 2024-04-24 | Basf Se | Yield improvement by gene combinations |
| CA3223995A1 (en) | 2021-06-17 | 2022-12-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of growth regulating factor family transcription factors in soybean |
| UY39827A (es) | 2021-06-24 | 2023-01-31 | Pairwise Plants Services Inc | Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento |
| MX2023014883A (es) | 2021-07-01 | 2024-02-12 | Pairwise Plants Services Inc | Metodos y composiciones para mejorar el desarrollo del sistema radicular. |
| CN117597025A (zh) | 2021-07-02 | 2024-02-23 | 先正达农作物保护股份公司 | 精吡氟禾草灵用于昆虫控制的用途 |
| EP4119547A1 (en) | 2021-07-12 | 2023-01-18 | Basf Se | Triazole compounds for the control of invertebrate pests |
| KR20240042626A (ko) | 2021-08-02 | 2024-04-02 | 바스프 에스이 | (3-퀴놀릴)-퀴나졸린 |
| AU2022321882A1 (en) | 2021-08-02 | 2024-02-15 | Basf Se | (3-pirydyl)-quinazoline |
| CN118076742A (zh) | 2021-08-12 | 2024-05-24 | 成对植物服务股份有限公司 | 修饰油菜素内酯受体基因以改善产量性状 |
| EP4384016A1 (en) | 2021-08-13 | 2024-06-19 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combinations and fungicide compositions comprising those |
| WO2023023496A1 (en) | 2021-08-17 | 2023-02-23 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying cytokinin receptor histidine kinase genes in plants |
| EP4140986A1 (en) | 2021-08-23 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023025682A1 (en) | 2021-08-25 | 2023-03-02 | Bayer Aktiengesellschaft | Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides |
| EP4140995A1 (en) | 2021-08-27 | 2023-03-01 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| CN118265446A (zh) | 2021-08-30 | 2024-06-28 | 成对植物服务股份有限公司 | 修饰植物中的泛素结合肽酶基因以改善产量性状 |
| EP4144739A1 (de) | 2021-09-02 | 2023-03-08 | Bayer Aktiengesellschaft | Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel |
| AR126938A1 (es) | 2021-09-02 | 2023-11-29 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento |
| EP4151631A1 (en) | 2021-09-20 | 2023-03-22 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| WO2023049720A1 (en) | 2021-09-21 | 2023-03-30 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for reducing pod shatter in canola |
| CA3237641A1 (en) | 2021-10-04 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| CA3234455A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods for improving floret fertility and seed yield |
| WO2023072670A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x |
| WO2023072671A1 (en) | 2021-10-28 | 2023-05-04 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix |
| WO2023078915A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-11 | Bayer Aktiengesellschaft | Bis(hetero)aryl thioether (thio)amides as fungicidal compounds |
| CN118317956A (zh) | 2021-11-30 | 2024-07-09 | 拜耳公司 | 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚噁二嗪 |
| EP4194453A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-06-14 | Basf Se | Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests |
| AR127904A1 (es) | 2021-12-09 | 2024-03-06 | Pairwise Plants Services Inc | Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas |
| EP4198033A1 (en) | 2021-12-14 | 2023-06-21 | Basf Se | Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests |
| EP4198023A1 (en) | 2021-12-16 | 2023-06-21 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| AR128372A1 (es) | 2022-01-31 | 2024-04-24 | Pairwise Plants Services Inc | Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas |
| WO2023148036A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests in soybean |
| WO2023148028A1 (en) | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Globachem Nv | Methods and compositions for controlling pests |
| WO2023156402A1 (en) | 2022-02-17 | 2023-08-24 | Basf Se | Pesticidally active thiosemicarbazone compounds |
| WO2023156270A1 (en) | 2022-02-18 | 2023-08-24 | Basf Se | Coumarin synthesis and uses thereof |
| EP4238971A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-06 | Basf Se | Substituted isoxazoline derivatives |
| WO2023168217A1 (en) | 2022-03-02 | 2023-09-07 | Pairwise Plants Services, Inc. | Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits |
| WO2023192838A1 (en) | 2022-03-31 | 2023-10-05 | Pairwise Plants Services, Inc. | Early flowering rosaceae plants with improved characteristics |
| US20230357789A1 (en) | 2022-04-07 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight |
| WO2023205714A1 (en) | 2022-04-21 | 2023-10-26 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| WO2023215704A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for enhancing yield and disease resistance |
| WO2023213626A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Use of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine for controlling unwanted microorganisms |
| WO2023213670A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Bayer Aktiengesellschaft | Crystalline forms of (5s)-3-[3-(3-chloro-2-fluorophenoxy)-6-methylpyridazin-4-yl]-5-(2-chloro-4-methylbenzyl)-5,6-dihydro-4h-1,2,4-oxadiazine |
| WO2023215809A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying root architecture and/or improving plant yield traits |
| US20230416771A1 (en) | 2022-06-27 | 2023-12-28 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants |
| WO2024006792A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024006791A1 (en) | 2022-06-29 | 2024-01-04 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| WO2024018016A1 (en) | 2022-07-21 | 2024-01-25 | Syngenta Crop Protection Ag | Crystalline forms of 1,2,4-oxadiazole fungicides |
| WO2024028243A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Basf Se | Pyrazolo pesticidal compounds |
| WO2024030984A1 (en) | 2022-08-04 | 2024-02-08 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield traits |
| WO2024033374A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-15 | Syngenta Crop Protection Ag | Novel arylcarboxamide or arylthioamide compounds |
| US20240060081A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-02-22 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement |
| US20240090466A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-21 | Pairwise Plants Services, Inc. | Methods and compositions for improving yield characteristics in plants |
| EP4342885A1 (en) | 2022-09-20 | 2024-03-27 | Basf Se | N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides |
| WO2024068518A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| GB202214202D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Agricultural methods |
| WO2024068520A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4295688A1 (en) | 2022-09-28 | 2023-12-27 | Bayer Aktiengesellschaft | Active compound combination |
| GB202214203D0 (en) | 2022-09-28 | 2022-11-09 | Syngenta Crop Protection Ag | Fungicidal compositions |
| WO2024068519A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| WO2024068517A1 (en) | 2022-09-28 | 2024-04-04 | Bayer Aktiengesellschaft | 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide |
| EP4361126A1 (en) | 2022-10-24 | 2024-05-01 | Basf Se | Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv |
| WO2024100069A1 (en) | 2022-11-08 | 2024-05-16 | Syngenta Crop Protection Ag | Microbiocidal pyridine derivatives |
| WO2024104815A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104823A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | New substituted tetrahydrobenzoxazepine |
| WO2024104818A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted benzodiazepines as fungicides |
| WO2024104822A1 (en) | 2022-11-16 | 2024-05-23 | Basf Se | Substituted tetrahydrobenzodiazepine as fungicides |
| EP4385326A1 (en) | 2022-12-15 | 2024-06-19 | Kimitec Biogorup | Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants |
| WO2024137438A2 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | BASF Agricultural Solutions Seed US LLC | Insect toxin genes and methods for their use |
| EP4389210A1 (en) | 2022-12-21 | 2024-06-26 | Basf Se | Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008124495A2 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Basf Plant Science Gmbh | Ahas mutants |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5202251A (en) | 1990-08-03 | 1993-04-13 | American Cyanamid Company | Monocot-specific monoclonal antibodies against acetohydroxyacid synthase |
| US5767366A (en) * | 1991-02-19 | 1998-06-16 | Louisiana State University Board Of Supervisors, A Governing Body Of Louisiana State University Agricultural And Mechanical College | Mutant acetolactate synthase gene from Ararbidopsis thaliana for conferring imidazolinone resistance to crop plants |
| DE19505995A1 (de) | 1995-02-21 | 1996-08-22 | Degussa | Verfahren zur Herstellung von Thietanonen |
| WO1997041117A1 (fr) | 1996-04-26 | 1997-11-06 | Nippon Soda Co., Ltd. | Nouveaux derives du benzene substitues par des heterocycles, et herbicides |
| ATE264856T1 (de) | 1996-04-26 | 2004-05-15 | Nippon Soda Co | Heterocyclisch substituierte benzolderivate und herbizide |
| AU1670797A (en) | 1996-04-26 | 1997-11-19 | Nippon Soda Co., Ltd. | Benzene derivatives substituted by heterocycles and herbicides |
| US20070298423A1 (en) | 2000-03-24 | 2007-12-27 | Eppendorf Array Technologies Sa (Eat) | Identification of multiple biological (micro) organisms by specific amplification and detection of their nucleotide sequences on arrays |
| AU6135801A (en) | 2000-05-10 | 2001-11-20 | Univ Louisiana State | Resistance to acetohydroxyacid synthase-inhibiting herbicides |
| AU9379801A (en) | 2000-09-09 | 2002-03-22 | Basf Plant Science Gmbh | Modified tet-inducible system for regulation of gene expression in plants |
| RU2337531C2 (ru) * | 2001-08-09 | 2008-11-10 | Юниверсити Оф Саскачеван | Растения пшеницы с повышенной устойчивостью к имидазолиноновым гербицидам |
| WO2003024221A1 (en) | 2001-09-14 | 2003-03-27 | Basf Aktiengesellschaft | Herbicidal mixtures based on 3-phenyluracils |
| KR100480479B1 (ko) | 2002-04-22 | 2005-04-07 | 주식회사 싸이젠하베스트 | 프로토포르피리노겐 옥시다아제의 엽록체 및 미토콘드리아동시발현을 이용한 작물의 제초제 저항성 증대 방법 및 이유전자를 제초제 저항성 선발 마커로 사용하는 형질전환세포주 선발 방법 |
| EP2292768A1 (en) * | 2002-07-09 | 2011-03-09 | BASF Plant Science GmbH | Use of AHAS mutant genes as selection marker in potato transformation |
| US7432082B2 (en) * | 2004-03-22 | 2008-10-07 | Basf Ag | Methods and compositions for analyzing AHASL genes |
| US8541653B2 (en) | 2004-06-07 | 2013-09-24 | Basf Plant Science Gmbh | Transformation of soybean |
| CA2603944C (en) * | 2005-04-08 | 2015-06-23 | Bayer Bioscience N.V. | Elite event a2704-12 comprising the integration of the phosphinothricin acetyltransferase (pat) gene into soybeans, and methods and kits for identifying such event in biological samples |
| CN102368903B (zh) * | 2009-01-07 | 2016-10-26 | 巴斯夫农化产品有限公司 | 大豆事件127和与其相关的方法 |
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008124495A2 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Basf Plant Science Gmbh | Ahas mutants |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| US9024114B2 (en) | 2015-05-05 |
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