TWI331527B

TWI331527B - Azalide antibiotic compositions

Info

Publication number: TWI331527B
Application number: TW098131591A
Authority: TW
Inventors: Wayne Alan Boettner
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2000-01-27
Filing date: 2001-01-18
Publication date: 2010-10-11
Also published as: TWI318880B; AU1722801A; PA8509801A1; ATE243703T1; EP1250343A1; NZ518665A; TNSN01017A1; DE60003586T2; AU779748B2; AR030045A1; AU779748C; BRPI0017013B1; PE20011050A1; BR0017013A2; BRPI0017013B8; EP1250343B1; MXPA02007305A; TW201006476A; US6514945B1; JP2006282676A

Description

Ι33Γ527, 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係有關一種包含氮雜內酯類抗生素化合物異構、物混合物的醫藥組合物，以及彼等的製備方法。本發明更 . 有關上述組合物的穩定化形式以及穩定化彼等的方法》本發明更有關治療哺乳動物的方法，其包括給有此需要的哺乳動物服用本發明醫藥組合物。 . 【先前技術】能有效地抑制多種哺乳動物、魚類和鳥類的細菌和原生動物感染的大環內酯抗生素劑已有報導（參見，如，國際專利公報W0 98/56802和W0 99/ 12552)。這些化合物通常具有一個含12到22個碳原子的大環內酯環，其上附著一個或多個糖部份體。大環內酯抗生素作用於50S核糖核蛋白亞單位，從而抑制微生物中的蛋白質合成。大環內鲁醋抗生素實例包括林肯黴素，azithromycin (紅徵素A的一種衍生物）以及其他氮雜內酯類組合物。 ^ 含有氮雜內酯類化合物作爲活性成份的醫藥組合物之開發面臨許多挑戰。一些氮雜內酯類能在溶液中同分異構化。其結果是，難以生產包含單一異構物或固定比率的諸異構物的可再現性抗生素組合物。其二，包含固定量的特定氮雜內酯類異構物的組合物可能隨著時間而改變。第三 ’即使是在少量溫和酸性或鹼性的pH環境中，氮雜內酯類的內酯環和糖也容易進行水解，降低抗生素組合物的效能 -5- 1331527 和儲存期限。因此，本發明的目的是提供抗生素組合物，以及製備彼等的方法，以克服上述缺點。本文中任何參考文獻的引用都不能視爲該等參考文獻是本發明的先前技藝之指示。【發明內容】發明槪要在第一具體實例中’本發明係有關一種組合物，其包括：（a)通式I化合物

和通式Π化合物

Ι33Γ527' 二者的比例爲約90%±4%到l〇%±4% ; ( b )水，和（c )一或多種酸，其總濃度在每毫升組合物中含有〇 2毫莫耳到約1.0毫莫耳。 - 本發明係有關獲得一種組合物的方法，該組合物、：（a )通式I化合物和通式Π化合物，二者的比例爲約 90%ί4% 到 10%i4%，（b)水，和（c) —或多種酸，甘 ^ 濃度爲在每毫升組合物中含有0.2毫莫耳到約1_0毫莫耳， φ 該方法包括下述步驟：將以下混合物加熱到約5 0到9 0。(：， . 該混合物包括（a)通式I化合物，（b)水，和（c) —或多種酸’其總量爲在每毫升該混合物中有0.2毫莫耳到約 1.0毫莫耳。在一較佳具體實例中，該混合物的pH値爲約 5.0到約8.0，且更佳者爲約5.0到約6.0。本發明係有關治療哺乳動物細菌或原生動物感染之方法’包括向需要這種治療的哺乳動物施以治療有效劑量的組合物，該組合物包括：（a)通式I化合物和通式Π化合 φ 物’二者的比例爲約9 0 % ± 4 %到約1 0 % ± 4 % ; ( b )水，和 (c)—或多種酸’其在每毫升該混合物中的含量爲〇2毫 • 莫耳到約1·〇毫莫耳。在較佳具體實例中，該混合物的pH 値爲約5.0到約8.0，且更佳者爲約5.0到約6.0»在另一較佳具體實例中，該細菌或原生動物感染係由下列組合中選出者：牛呼吸疾病、豬呼吸疾病、肺炎、球蟲病、弓形體病和傳染性眼炎。本發明係有關一種組合物，包括：（a) —種混合物 ’包含：（i )通式I化合物和通式Π化合物，二者的比例 1331527 爲約9 Ο °/〇 ± 4 %到約1 Ο % ± 4 % ; ( Π )水和（ΠΙ )—或多種酸 ’其在每毫升該混合物中的含量爲0.2毫莫耳到約1.0毫莫耳；及（b)—或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升組合物中的總量爲約25 0毫克到750毫克。本發明係有關一種獲得以下組合物的方法，其包括： (a) —種混合物，包含：（i)通式I化合物和通式π化合物，二者的比例爲約90%±4%到約10%±4% ; ( Π )水和（ m )—或多種酸’其在每毫升該混合物中的含量爲〇·2毫莫耳到約1 . 〇毫莫耳；及（b ) —或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升組合物中的總量爲約250毫克到750毫克，該方法包含下述步驟：於混合物中添加一或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升組合物中的總量爲約250毫克到750毫克。本發明也有關獲得以下組合物的方法，其包括：（a )第一種混合物，包含：（i)通式I化合物和通式Π化合物’二者的比例爲約90%±4%到約1〇%±4% ; ( Π )水和（ ΙΠ) —或多種酸，其在每毫升該混合物中的含量爲〇2毫莫耳到約1.0毫莫耳；和（b) —或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升組合物中的總量爲約250毫克到750毫克該方法包括下述步驟：將由通式I化合物、水和一或多種酸（在每毫升該混合物中的含量爲0.2毫莫耳到約1〇毫莫耳）組成的混合物加熱到50到90 °C ’其中在加熱前或加熱過程中或加熱後，加入一或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升組合物中的總量爲約250毫克到750毫克。本發明係有關一種保持通式I或通式Π化合物結構完 1331527 合物。在一較佳具體實例中，該一或多種酸是檸檬酸。在另一較佳實施例中，該一或多種酸是檸檬酸和鹽酸。在一更佳具體實例中’檸檬酸在每毫升組合物中的含量爲約0.02 毫莫耳到約0.3毫莫耳且鹽酸的含量爲足以使組合物pH値達到約5到6。在本發明組合物一具體實例中，該一或多種水混溶性共溶劑係由下列組成之群中選出：乙醇、異丙醇、二乙二醇一甲基醚、二乙二醇丁基醚、二乙二醇一乙基醚、二乙二醇二丁基醚、聚乙二醇- 300、聚乙二醇一400、丙二醇、甘胺酸、2—吡咯烷酮、N-甲基一2—吡咯烷酮、甘油甲縮醛、二甲亞碼、癸二酸二丁基酯、聚山梨醇酯80和彼等的混合物。在其一具體實例中，該一或多種水混溶性共溶劑是丙二醇。在一較佳具體實例中，該聚乙二醇的含量爲每毫升組合物中爲約45〇到約550毫克。本發明組合物一具體實例中，該組合物更包括一或多種抗氧化劑，其在每毫升組合物中的含量爲約0 · 0 1毫克到約10毫克。在較佳具體實例中，該一或多種抗氧化劑是由下列組成之群中選出：亞硫酸氫鈉、亞硫酸納、偏亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、甲醛次硫酸鈉、L 一抗壞血酸、異抗壞血酸、乙醯基半胱胺酸、半胱胺酸、單硫代甘油、氫硫基乙酸、硫代乳酸、硫脲、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇、谷胱甘肽、抗壞血醯基棕櫚酸酯、丁基羥基苯甲醚、丁基 -10- Ι33Γ527, 羥基甲苯、去甲二氫癒創木酸、沒食子酸丙酯、α -生育酚和彼等的混合物。在—更佳具體實例中，該一或多種抗氧化劑是單硫代甘油。在一特佳具體實例中，在每亳升組 ' 合物中，單硫代甘油的含量爲約4毫克到約6毫克。 . 本發明組合物的一具體實例中，第一種混合物（化合物I和化合物Π )的濃度爲約50毫克/毫升到約200毫克/ 毫升。在一更佳實例中’第一種混合物在組合物中的濃度 φ 爲約90毫克/毫升到約1 1〇毫克/毫升。本發明組合物的一特佳具體實例中，檸檬酸在每毫升組合物中的含量爲約〇.〇2毫莫耳到約ο]毫莫耳且鹽酸的含量爲足以使組合物的ρ Η値達到約5到約6 ;其中丙二醇在每毫升組合物中的含量爲約45〇到約5 5〇毫克，且其中單硫代甘油的含量爲4毫克/毫升到約6毫克/毫升。本發明更有關一種下列通式化合物

或其醫藥可接受的鹽：其中R1爲ΟΗ或 -11 - 1331527

且其中R2爲Η或CH3。經由參照詳細說明和闡述性實施例本發明，其中該等實施例係打算用來示限制性具體實例。發明之詳細說明可以更全面地理解範說明本發明的非

異構物I

異構物Π 本發明係有關醫藥組合物，其包t π (合稱爲“氮雜丙酯類異構物”），二 4%到約10% ± 4% 。異構物I的 2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R) 二去氧_3— C —甲基—3_0_甲基- 基一甲基）一 α-L —蚍喃己核糖基 3,4,10 —三羥基一3,5，8,10,12,14一六甲 _三去氧一3—(二甲胺基）一召_D — -12- 爹異構物I和異構物者的比率爲約90% 化學名稱爲（ —13— ( ( 2,6— 4一 C—((丙基胺 )氧基_ 2乙基— 基-11- ( (3,4,6 @南己木糖基）氧 Ι33Γ527, 基一 1—氧雜一6_氮雜環十五烷一 15—酮。異構物Π的化學名稱是（3R,6R,8R，9R，10S,11S，12R) — 11- （（2,6-

二去氧一 3— C —甲基一3— 0—甲基一4—C一（（丙基胺 - 基）甲基_a— L —妣喃己核糖基）氧基一2— ( (1R，2R • ) — 1，2—二羥基-1 一甲基丁基）一 8-羥基—3,6,8，10,12 -五甲基一9- ( (3,4,6 —三去氧一 3-(二甲胺基）一/3 一 D —妣喃己木糖基）氧基）—丨一氧雜一4 —氮雜環十三 φ 烷-13 -酮。異構物I可經由異構物Π的轉內酯化反應獲得。同樣地，對異構物I的轉內酯化反應也可以獲得異構物Π。獲得異構物I的方法在國際公報W0 98/56802中有記載，其附於此作爲參考。獲得異構物Π的方法在以下實施例1中說明。氮雜內酯類異構物是活性抗生素劑。於不受任何理論的約束之下，本發明部分是基於申請人驚奇地發現由保持90%%±4%到約1〇%±4%的比率的異構物I和異構物Π構成的組合物可以經由在此說明的方法很容易地獲得 φ ，不論氮雜內酯類異構物開始的比率如何。雖然不是絕對肯定，但是申請人相信異構物I和異構物Π保持約90% % 士 • 4%到約10%±4%的比率形成氮雜內酯類異構物平衡混合物。相應地，本文中所用的“異構物的平衡混合物”指的是異構物I和異構物E保持約9 0 % % ± 4 %到約1 0 % ± 4 %的比率。由平衡混合物構成的異構物的抗生素組合物能夠一致地生產並提供測試或消費者使用的一種標準。因此，由異構物的平衡混合物構成的組合物具有極高的價値。本發明更有關一種獲得由異構物的平衡混合物構成的 -13- 1331527 組合物的方法。在一具體實例中，異構物的平衡混合物是從實質純的異構物I的溶液中獲得。如本文中所用者“實質純”，除非特別指出，指的是具有97%的純度。在另一具體實例中，異構物平衡混合物是從異構物I和異構物Π的混合液中獲得。一般而言，異構物的平衡混合物是經由在一或多種酸的存在中，加熱異構物I，較佳者實質純異構物I ，或異構物I和異構物π的混合物之水溶液而產生。在較佳具體實例中，係在pH値爲5.0到約8.0，較佳者約6.0到約 8.0下，將異構物I和一或多種酸的水溶液加熱到約5 0 °C到 90°C，較佳者約60到80°C，約〇.5到約24小時，較加者加熱 1到1 0小時。最佳者係在有一或多種酸的存在中，於pH値爲約6.5到約7.5之下，將異構物I和異構物Π的溶液加熱到 65到75 °C之間的溫度，約1到約8小時。異構物I的濃度或平衡的異構物I和異構物Π的混合溶液的濃度可以從約50毫克/毫升到約500毫克/毫升。更佳的是約1〇〇毫克/毫升到約3 00毫克/毫升，且最佳的是約225毫克/毫升到約 2 7 5毫克/毫升。可以獲得異構物的平衡混合物的適當酸包括’但是不局限於：乙酸、苯磺酸、檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、甲烷磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸酒石酸、P一甲苯磺酸、己二酸、天冬胺酸、樟腦磺酸、1,2 —乙烷二磺酸、月桂基硫酸葡萄庚酸葡萄糖酸、3 -羥基一 2—萘甲酸、1 一羥基—2-萘甲酸、2-羥基乙烷磺酸、蘋果酸、黏液酸硝酸、萘磺酸、棕櫚酸、D—葡萄糖二酸硬脂酸、馬來酸、丙 m -14- Ι33Γ527, 二酸、延胡索酸、苯甲酸、膽酸、乙烷磺酸、葡萄糖醛酸、榖胺酸、馬尿酸、乳糖酸、離胺酸、扁桃酸、 napadisylic acid煙鹼酸、多聚半乳糖醛酸、水楊酸、磺基 - 水楊酸、色胺酸和彼等的混合物。較佳者該一或多種酸爲 . 檸檬酸和鹽酸。使用檸檬酸時，其濃度爲每毫升溶液中約 0.02到約0.3毫莫耳。在一具體實例中，使用酸的濃度爲每毫升溶液約〇 · 2到約1 · 0毫莫耳。於不受任何理論的限制下 φ ，申請人相信，於異構物I的溶液中加入一種酸獲得的鹽具有緩衝作用，這是因爲氮雜內酯類異構物作爲鹼之故。那些熟諳此藝者知道要獲得合意的pH値，使用的酸不同，其使用的數量也不同，且，要保持pH値處於合意範圍中時，可能要在酸與異構物I，或與異構物I和異構物Π的混合物，之溶液中再添加酸或鹼。合適的鹼包括，但不局限於 :鹼金屬氫氧化物、鹼金屬碳酸鹽 '鹼金屬碳酸氫鹽、鹼土金屬氫氧化物和鹼土金屬碳酸鹽。氫氧化鈉和氫氧化鉀 φ 爲較佳者。上述酸和鹼在使用時多採用其水溶液。由異構物的平衡混合物構成的組合物（“平衡組合物” * )可以治療哺乳動物的細菌或原生動物感染。平衡組合物同樣也可以作爲形成經穩定化、平衡組合物的中間體。本發明更有關經穩定化平衡組合物以及使之穩定化的方法，其包括經由一或多種水混溶性有機溶劑（共溶劑）來稀釋平衡組合物。共溶劑不會明顯改變平衡組合物中異構物I和異構物Π的比率，且實際上能保持彼等的結構完整性。在此所用的“保持異構物I和異構物Π的結構完整性 -15- 1331527 ”包括但不局限於，延遲彼等變成，如：去紅梅糖（去紅梅糖）氮雜內酯類的水解速率，以及延遲其副產物的產生速度，如：下述甲醛和乙醛的***產物。於不受任何理論的限制之下，申請人相信經由共溶劑稀釋可提高氮雜內酯類異構物的穩定性。此外，由於有共溶劑，注射經穩定化平衡組合物的疼痛要比注射沒有經過穩定化處理的平衡組合物的疼痛來得輕。能用來穩定化平衡組合物的共溶劑包括但不局限於，醇類例如乙醇和異丙醇；二醇醚類例如二乙二醇一甲基醚、二乙二醇丁基醚，二乙二醇一乙基醚和二乙二醇二丁基醚；聚乙二醇例如聚乙二醇一300和聚乙二醇一400 ;二醇類例如丙二醇（“PG”）和甘油；吡咯烷酮類例如2—吡咯烷酮和N -甲基2 -吡咯烷酮；甘油甲縮醛；二甲亞碩；癸二酸二丁基酯；聚氧化乙烯山梨醇酯例如聚山梨醇酯80;和彼等的混合物。用來將注射液中的平衡組合物予以穩定化所用的較佳共溶劑包括但不局限於：聚乙二醇’如：聚乙二醇一300和聚乙二醇一400;二醇類如丙二醇和甘油；吡咯烷酮如：2 -吡咯烷酮和N—甲基_ 2-吡咯烷酮；甘油甲縮醛；二甲亞碾；聚氧化乙烯山梨醇酯例如聚山梨醇酯80;和彼等的混合物，更佳者爲，甘油甲縮醛’ N —甲基一2—吡咯烷酮和丙二醇，且最佳者爲丙二醇。在一具體實例中’用來使醫藥組合物穩定化的共溶劑濃度爲約每毫升250到約750毫克。在一較佳具體實例中’共溶劑的用量爲每毫升醫藥組合物中約400到600毫克。在一最佳具體實例中’共溶劑的用量爲每毫升醫藥組合 iS 1 -16- 1331527, 物中約450到約550毫克。在一具體實例中，在平衡之前，將一或多種共溶劑添加到異構物I或異構物I和異構物Π的混合物中。在這種情況下，係在pH値爲5.0到約8.0，較佳者約6.0到約8.〇下， . 將所得混合物加熱到約50t到9(TC，較佳者約60到80〇c，約0.5到約24小時，較加者加熱1到10小時。在一較佳具體實例中，氮雜內酯類異構物的平衡處理係在沒有共溶齊；j $ φ 下進行，共溶劑係在平衡組合物的溫度降低到室溫後才加入。在加入共溶劑後，所得溶液的pH値可再調節以進一步提高組合物的穩定性。調節pH値的方法係熟諳此藝者所知者，例如經由添加一量的上述酸或鹼，如：以1 0 % ( w / w )儲液之形式，且使用如pH計來測定所得溶液的pH値。在一具體實例中，如果需要，所得溶液的pH値可調整到約 4.5到約7.5，較佳者約5.0到約6.0，最佳者約5.2到約5.6。 φ 本發明更有關醫藥組合物，其包括異構物平衡混合物、水、一或多種酸以及一或多種水混溶性共溶劑。在該醫 ' 藥組合物中，氮雜內酯類異構物的含量爲每毫升醫藥組合物中爲約50毫克到約200毫克氮雜內酯類異構物。較佳者，該醫藥組合物包括每毫升該醫藥組合物約75到約150毫克’更佳者約90到約110毫克氮雜內酯類異構物。該醫藥組合物還可含有一或多種抗氧化劑。抗氧化劑推遲或阻止了醫藥組合物的氧化分解。合適的抗氧化劑包括但不局限於：硫酸氫鈉 '亞硫酸納、偏亞硫酸氫鈉 '硫 -17- 1331527 代硫酸鈉、甲醛次硫酸鈉、L-抗壞血酸、異抗壞血乙醯基半胱胺酸、半胱胺酸、單硫代甘油（“MTG”）硫基乙酸、硫代乳酸、硫脲、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚、谷胱甘肽、抗壞血醯基棕櫚酸酯、丁基羥基苯甲醚基羥基甲苯、去甲二氫癒創木酸、沒食子酸丙酯、α 育酚和彼等的混合物。熟諳此藝者知道，抗氧化劑不其使用的數量也各異。在一較佳具體實例中，使用抗劑時，其數量爲每毫升醫藥組合物中含0.01毫克到約克。在一更佳具體實例中，運用的抗氧化劑爲單硫代，其在每毫升醫藥組合物中含約1毫克到8毫克。在一具體實例中，使用的抗氧化劑爲單硫代甘油，其在每醫藥組合物中約占4毫克到約6毫克。醫藥組合物中可視需要含有一或多種防腐劑。防的作用是延緩或阻止微生物的繁殖，特別是當醫藥組暴露在空氣中時。有效的防腐劑具有以下特點：能有制大範圍的微生物；在醫藥組合物的壽命期內，具有的、化學的和微生物學上的穩定性；無毒的：可充分的：與組合物的其他成份相容的；並且在味道和氣味能被接受的。合適的防腐劑包括但不局限於：氯苄烷氯化苄乙氧胺、苯甲酸、苯甲醇、對羥基苯甲酸甲酯羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯、對羥基苯甲酸、苯甲酸鈉、酚和彼等的混合物。在一較佳具體實例一或多種防腐劑是從以下各物組成之群中選出：苯甲對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯丙酸丙酯、對羥基苯甲酸、、氫糖醇、丁 —生同，氧化 1 0毫甘油最佳毫升腐劑合物效抑物理溶解上是胺、、對丁酯中，醇、酸甲

IS -18- 1331.527, 酯和對羥基苯丙酸丙酯的組合物、和酚。當使用防腐劑時 ’其在每毫升醫藥組合物中含約0.01到約10毫克。更佳者 ’該一或多種防腐劑是酚，且其含量爲每毫升醫藥組合物含2_0到5.0毫克，更佳者約2.0到約3.0毫克。熟諳此藝者都知道’在醫組合物中防腐劑的使用量是由選用的防腐劑所決定的，某些防腐劑可用較低濃度使用，甚至低於每毫升醫藥組合物約0.0 1毫克。在一較佳具體實例中，本發明醫藥組合物具有的pH値從約5_0到7_0，包括：（1)異構物的平衡混合物，其在每毫升醫藥組合物中含約50到200毫克；（2)檸檬酸，其濃度爲每毫升醫藥組合物中含約〇 . 〇 2到約〇 · 3毫莫耳，及視情況的一量之鹽酸’其含量能有效地達到pH値範圍；（3) 丙二醇，每毫升醫藥組合物中含約250到約750毫克；（4 )單硫代甘油，每毫升醫藥組合物中含約1到約15毫克； (5 )水，每毫升醫藥組合物中含約i 〇〇到約7 5 〇毫克。在一更佳具體實例中，本發明醫藥組合物的pH値爲約 5.0到約6.0，且包括：（1)異構物的平衡混合物，其在每毫升醫藥組合物中含約75到約150毫克；（2)棒檬酸，其濃度爲每毫升醫藥組合物中含約〇.〇5到約0.15毫莫耳，及視情況的一量之鹽酸’其含量能有效地達到pH値範圍；（ 3)丙二醇，每毫升醫藥組合物中含約4〇〇到約6〇〇毫克； (4)單硫代甘油’每毫升醫藥組合物中含約1到約8毫克 ;(5)水，每毫升醫藥組合物中含約250到約550毫克。在一最佳具體實例中，本發明醫藥組合物的#値爲約 -19- 1331527 5.2到約5.6，且包括：（1)異構物的平衡混合物，其在每毫升醫藥組合物中含約90到1 10毫克；（2 )檸檬酸，其濃度爲每毫升醫藥組合物中含約0.075到約0.125毫莫耳和一量的鹽酸，其含量能有效地達到pH値範圍；（3)丙二醇，每毫升醫藥組合物中含約450到約550毫克；（4)單硫代甘油，每毫升醫藥組合物中含約4到約6毫克；（5)水，每毫升醫藥組合物中含約3 00到5 00毫克。醫藥組合物可以經由如下的方法製得。將試劑放入裝有氮覆蓋的不銹鋼或玻璃襯裏的容器中。於反應容器中添加用於注射用水，並開始攪拌。加入所有附加成份，並不斷攪拌混合物。將每毫升水約〇.〇2到約0.5毫莫耳的酸加入，並使之溶解。視需要加入一種酸的水溶液，譬如：1 〇 % (w/w)鹽酸水溶液，來調整pH値，使之達到合意範圍，並混合溶液。此刻，於水和酸的混合液中緩慢加入少量異構物I和異構物Π的混合物以避免結塊。使異構物I或異構物I和異構物Π的混合物溶解，並測量所得溶液的pH値。在一具體實例中，異構物I或異構物I和異構物Π的混合物在每毫升所得溶液中占約50毫克到約5 00毫克，較佳者約1 0 0到約3 0 0毫克，且最佳者約2 2 5到約2 7 5毫克。將溶液加熱到約70 ±l〇°C，並保持這個溫度，直到獲得異構物的平衡混合物。確定已獲得異構物的方法包括：凝膠層析術，薄層層析術以及高效液相層析術。一般而言，使用在此說明的條件，在約1到8小時就可以獲得異構物的平衡混合物。一旦獲得異構物的平衡混合物，將所得溶液冷卻到約 [S] -20- 1331527· 25±10°C。該溶液可作爲醫藥組合物。更佳的是，升該醫藥組合物中加入約2 5 0到約750毫克共溶劑。加入的抗氧化劑之添加量爲約每毫升醫藥組合物中 ' 到約1 0毫克。如果有添加防腐劑時，則其添加量爲 . 醫藥組合物中約〇.01到約10毫克’且添加酸或驗， 10%的（w/ W )水溶液或固態形式者，將pH値調 5.0到約8.0 ’較佳者約5_0到約6.0。將所得溶液稀鲁思體積。在一具體貫例中’異構物的平衡混合物在所得醫藥組合物中的含量爲約5〇毫克到200毫克，約75¾克到約15〇毫克，且最佳者爲約9〇到約11〇毫. 最好將所得組合物進行消毒，例如，將組合物預濾器’如：5-10微米的濾器且接著，通過—個（已事先消毒過的最終滅菌濾器。在濾器消毒之前以過濾之後，將該滅菌濾器在121 °C下，經溼熱高壓分鐘’並經由壓力-保持法測試其完整性。將無菌 • 到合適的容器中，如：玻璃瓶，該玻璃瓶已在乾熱中在25〇°C的溫度下去熱原24〇分鐘。將容器頂部空 ' 惰性氣體，如：氬氣，或較佳者氮氣。將容器用塞，彼等已在121 °c的溫度下經溼熱高壓消毒60分鐘將容器密封。熟諳此藝者知道，可對以上說明作微以製得無菌組合物。本發明更有關治療哺乳動物的方法，包括給需療的哺乳動物服用有效劑量的本發明醫藥組合物。醫藥組合物可以用來治療革蘭氏陽性細菌、革蘭氏於每毫視情況丨約0.01 每毫升例如：整到約釋到合每毫升較佳者克。通過一 ).2微米及產物消毒60 溶液加的管道間充滿子蓋住。接著小變更要此治本發明陰性細 -21 - 1331527 菌、原生動物、和支原體等感染，包括但不局限於：胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumonia)、多殺巴斯德氏菌（Pasteurella mul.tocida)、溶血巴斯德氏菌 (Pasteurella haemolytica)、Η. parasuis、B. bronchiseptica 、豬霍亂沙門式菌（S. choleraesuis ) 、S. pilo、牛莫拉氏菌（Moraxella bovis)、睡眠睡血菌（H. somnus)、Μ· bovis、Eimeria zuem Π 、Eimeria bovis、A. maarginale、 M. hyopneumoniae、Lawsoniaintracellularis、和葡萄球菌、沙門氏菌屬、衣原體屬、球菌、隱孢蟲屬、大腸桿菌、啦血菌、neospora和鏈球菌種。本文中所用的術語“治療”，除非另外指明，否則包括本發明方法所提供的對細菌或原生動物感染的治療或預防〇除非另外指明，否則本文中所用的“細菌感染”和“ 原生動物感染”包括在哺乳動物、魚類以及鳥類身上發生的細菌感染和原生動物感染以及與細菌和原生動物感染有關的失調症，可以經由施以抗生素，如本發明的化合物，得到解決或預防者。這些細菌或原生動物感染以及失調症包括以下：與肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae)、流感噬血菌（Haemopillus influenzae)、黏膜炎拉氏菌（ Moraxella catarrhalis ) 、金黃色葡萄球菌（

Staphylococcus aureus )、或消化鏈球菌屬( Peptostreptococcus spp.)感染有關的肺炎、中耳炎、竇炎、支氣管炎、扁桃體炎和乳竇炎：和釀腫鏈球菌（ m •22- 1331527·

Streptococcus pyogenes) 、C和G組鏈球菌、白喉梭菌（

Clostriduim diptheriae)或溶血放線桿菌（Actinobacillus haemolyticum)感染有關的咽喉炎，風濕熱和腎小球性腎炎；與肺炎支原體、Legionella pneumophila、肺炎鏈球菌，流感噬血菌和肺炎衣原體感染引起的呼吸道感染；由金黃色葡萄球菌、凝固酶陽性葡萄球菌（如表皮葡萄球菌（ Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌）、釀腫鏈球菌、無乳鏈球菌（Staphylococcus agalactiae)、鏈球菌 C_F組（小菌落的鏈球菌）、綠色鏈球菌（ Staphylococcus viridans ) 、最細棒桿菌（ Corynebacterium minutissimum )、梭菌屬、或 Bartonella henselae等引起的未倂發性皮膚和軟組織感染、膿瘡和骨髓炎，及產褥熱；由腐生葡萄球菌（Staphyloccus saprophyticus )或腸球菌屬引起的非倂發性急性尿道感染 ;與砂眼衣原體（Chlamydia trachomatis)、杜氏隨血菌 (Haemopillus ducreyi )、梅素密螺旋體（Treponema pallidum) 、Ureaplasma urealyticum、或淋病奈瑟氏球菌 (N e i s e r r i a g ο η o r r h e a e )有關的尿道炎、子宮頸炎；和性傳播疾病；與金黃色葡萄球菌（S. aureus )(食物中毒和中毒性休克徵候群）或A、B和C組鏈球菌感染有關的毒素疾病；與幽門螺旋菌（Heliobacter pylori)感染有關的潰瘍；與回歸熱包柔氏螺旋體（Borrlia recuuentis)感染有關的系統性發熱徵候群；與Borrlia burgdorferi感染有關的Lyme病；與沙眼衣原體、淋病奈瑟氏球菌、金黃色葡萄 -23- 1331527 球菌、肺炎葡萄球菌、釀膿葡萄球菌、流感噬血菌或利斯特氏小菌（Listeria sPP.)感染有關的結膜炎、角膜炎和淚腺炎；與鳥分支桿菌（Mycobacterium avium)或胞內分支桿菌（Mycobacterium intracellulare )感染有關的傳染性鳥分支桿菌綜合症（MAC ):與空腸彎曲桿菌（ Campylobacter jejuni)感染有關的胃腸炎；與隱孢蟲種感染有關的腸原生動物；與綠色鏈球菌感染有關的牙發生性感染；與白日咳博德特式菌（Bordetella pertussis)感染有關的持續性咳嗽；與產氣莢膜梭菌（Clostridium perfringens)或擬桿菌（Bacteroides spp.)感染有關的氣性壞疽；及與幽門螺旋菌或肺炎衣原體或博德特氏菌感染有關的動脈粥樣硬化。在動物身上能夠治療或預防的與這些感染有關的細菌感染、原生動物感染和失調症包括：與溶血巴斯德氏菌、多殺巴斯德氏菌、牛枝原體或博德特氏菌感染有關的牛呼吸系統疾病、與大腸桿菌或原生動物（如：球蟲、隱孢蟲等）感染有關的牛腸的疾病；與金黃色葡萄球菌、***鏈球菌（Strep, uberis)、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌（Strep, dysgalactiae)、克雷伯氏菌屬（ Klebsiella spp.)、棒桿菌屬、或腸球菌屬等的感染有關的奶牛乳腺炎；與胸膜肺炎放線桿菌、多殺巴斯德氏菌、或支原體屬等的感染有關的豬呼吸系統疾病；與大腸桿菌、Lawsonia intracellularis、沙門氏菌屬或 Serpulina hyodyisinteriae感染有關的豬腸病；與梭桿菌（ Fusobacterium spp·)感染有關的牛腐蹄病：與大腸桿菌感 [S 1 -24- 1331527. 染有關的乳腺炎；與壞死梭桿菌（Fusobacterium necrophorum)或節瘤擬桿菌（Bacteroides nodosus)感染有關的牛茸毛疣：與牛莫拉氏菌屬感染有關的牛紅眼病； ' 與原生動物（例如：新孢子蟲（neosporium ))感染有關 • 的牛早產：與大腸桿菌感染有關的狗和貓的尿道感染；與表皮葡萄球菌、中葉葡萄球菌（Staph. Intermedius)、凝固酶陰性葡萄球菌或多殺巴斯德氏菌等感染有關的狗和貓鲁的皮膚和軟組織感染；與產驗菌屬（Alcaligenes spp·)、擬桿菌屬、梭菌屬、腸桿菌屬、真桿菌屬、消化鏈球菌屬、Porphyromonas、或prev〇tella等感染有關的狗和貓的牙齒和口腔感染。可以根據本發明的方法進行治療或預防之其他細菌感染、原生動物感染及與這些細菌感染有關的失調症，可參照 J.P. Sanford et al. “The Sanford Guide to Antimicrobial Therapy”，第 26版(Antimicrobial Therapy, Inc.， 1996)。 • 本發明化合物的抗細菌和抗原生動物病原體的抗菌活性和抗原生動物活性是經由該化合物抑制特定的人類或動 " 物病原體株系的效能來展現的。

檢定I 以下所說明的檢定I係運用傳統的方法和解釋標準，且經設計以提供化學改質以導致可能避免已界定的大環內酯抗性機制之化合物。在檢定I中，組合出一組細菌菌株 ’包括多種目標病原體種，包括已被稱爲大環內酯抗性機 -25- 1331527 制的代表。使用此組可以決定化學結構/效能關係，包括效力、效能範圍和結構要素，或必須避免抗藥性機制的改質。由篩選組構成的細菌病原體顯示在下表中。在許多情況下，從細菌病原體中衍生出的大環內酯敏感性母株和大環內酯抗性品系能對化合物克服抗病性機制的能力提供一個更爲準確的評定。含有名稱爲ermA/ ermB/ ermC基因的菌株對大環內酯、lincosamides和鏈陽性菌素B抗生素具有抗性，這是由於Erm甲基化酶對23S rRNA分子的改質（甲基化）作用，藉而通常防止所有三種結構類的結合之故。說明了兩種類型的大環內酯溢出物：msr A編碼葡萄球菌中溢出物系統的成份，其可抑制大環內酯和鏈陽性菌素的進入：而mef A / E編碼僅溢出大環內酯的透膜蛋白質。大環內酯抗生素的鈍化作用可以發生，並且可以經由2N—羥基（mph )的磷酸化作用或大環內酯（酯酶）的裂解作用予以促成。運用傳統的聚合酶鏈型反應（PCR )技術及/ 或對抗病性決定基因定序可決定菌株的特點。用於本申請案中的 PCR技術載於 J. Sutcliffe et al., “Detection of Erythromycin-resistant Determinants By PCR’’，

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11)， 2 5 62- 2566 (19 96)之中。檢定是在微滴定盤中進行，並且根據 Performance Standars for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests-Sixth Edition; Approved Standard,

The National Committee for Clinical Laboratory

Standards ( NCCLS )指引進行解釋。使用最小抑制濃度（ IS 3 -26- 1331527 MIC )來比較菌株。氮雜內酯類異構物平衡混合物起初是溶解在二甲亞碩（DMSO )中作爲濃度爲40毫克/毫升的儲液。

-27- 1331527 菌株名稱大環內酯抗性機制金黃色葡萄球菌1116 敏感性母株金黃色葡萄球菌1117 ermB 金黃色葡萄球菌0052 敏感性母株金黃色葡萄球菌1120 ermC 金黃色葡萄球菌1032 msrA，mph,醋酶溶血葡萄球菌1006 msrA,mph, 釀膿鏈球菌0203 敏感性母株釀膿鏈球菌1079 ermB 釀膿鏈球菌1062 敏感性母株釀膿鏈球菌1061 ermB 釀膿鏈球菌1064 ermB 無乳鏈球菌1024 敏感性母株無乳鏈球菌1023 ermB 肺炎鏈球菌1016 敏感性肺炎鏈球菌1046 ermB 肺炎鏈球菌1095 ermB 肺炎鏈球菌1175 mefE 肺炎鏈球菌0085 敏感性流感噬血菌0131 敏感性黏膜炎莫拉氏菌0040 敏感性黏膜炎莫拉氏菌1055 紅黴素中間體抗藥性大腸桿菌0266 敏感性運用檢定π來測試抗多殺巴斯德氏菌的活性並用檢定 m來測試抗溶血巴斯德菌的活性。檢定π 此檢定是基於在微升格式的液體稀釋方法。將單一的多殺巴斯德氏菌（菌株59A067 )菌落接種到5毫升的腦心 -28- 1331527. 注輸（bhi )肉湯中。可以經由將1毫克的混合物溶解到 125微升的二甲亞碾（DMSO )中獲得氮雜內酯類異構物平衡混合物。運用沒接種的BHI肉湯來配置氮雜內酯類異構 - 物平衡混合物的稀釋液。使用的氮雜內酯類異構物平衡混 . 合物經兩倍連續稀釋後濃度從200微克/毫升到0.098微克 /毫升不等。多殺巴斯德氏菌接種BHI溶液用未接種的 BHI肉湯稀釋製得每200微升含104細胞的懸浮液。將8111細 φ 胞懸浮液分別與氮雜內酯類異構物平衡混合物的連續稀釋液混合，並且在37°C下溫浸18小時。最小抑制濃度（MIC )爲與未接種對照相比，等於能1 00%抑制多殺巴斯德氏菌的生長之混合物濃度。檢定m 此檢定係以使用Steers Replicator的瓊脂稀釋方法。將從瓊脂盤中分離的二到五種菌落接種到BHI肉湯中並在 # 37 °C的條件下與前一天晚上進行，接種時，以每分鐘200 轉的速度搖動。次曰早晨，將300微升充分生長的溶血巴斯德菌預培養液在37°C的條件下接種到3毫升新鮮的BHI肉湯中，並以每分鐘200轉的速度搖動。將一定量的氮雜內酯類異構物平衡混合物在乙醇中溶解，並進行一系列兩倍連續稀釋。分別將兩毫升連續稀釋液與18毫升熔化的BHI 細菌培養基混合並使之凝固。當溶血巴斯德菌的培養液的密度達到0·5麥克法蘭德標準密度時，在37艺的條件下，其包括下述步驟控制複製器將約5微升的溶血巴斯德菌培養 -29- 1331527 液接種到含有不同濃度的氮雜內酯類異構物平衡混合物的 BHI培養基盤中，爲時18小時。混合物的起始濃度爲100 — 200微克/毫升。MIC爲與未接種對照相比，等於能100% 抑制多殺巴斯德氏菌的生長之混合物濃度。

最佳者，該微稀釋檢定係根據NCCLS指南Ivni-AJOL. 1 9,ΝΟ. 1 1/’PERFORMANCE STANDARDS FOR ANITMICROBIAL DISK AND DILUTION SUSCEPTIBILITY TESTS FOR BACTERIA ISOLATED FROM ANIMALS，，’ JUNE 1 999(ISBN 1 -5623 8-377-9 )，使用陽離子調節木勒希頓肉湯實施的，該指南附於此作爲參考。此分析物可以用來決定抗溶血巴斯德菌和多殺巴斯德氏菌化合物的最小抑制濃度。例如，根據此標準來測試異構物的平衡混合物的抗溶血巴斯德菌性（ATCC14003)，發現其最小抑制濃度爲1微克/毫升。根據此標準來測試異構物的平衡混合物的抗多殺巴斯德氏菌性（ATCC43 1 3 7 )，最小抑制濃度爲1微克/毫升。

檢定IV 本發明醫藥組合物在活的機體內的活性能夠經由傳統的動物保護硏究來確定，這對那些熟諳此藝者來說並不陌生。試驗物件通常爲小鼠。小鼠一到，就將彼等裝入籠子中（每籠10只），在使用之前，使彼等適應環境至少48小時。動物接受〇.5毫升 3xl03CFU/毫升的細菌懸浮液（多殺巴斯德氏菌59AO〇6 IS 1 -30- 1331527· 菌株）腹膜內的接種。每一次試驗至少含有3組非藥制的小鼠，包括一隻注射了免疫性試驗〇. 1倍劑量的和兩隻注射免疫性劑量1倍的小鼠；也可以使用注射 - 倍劑量的小鼠。總而言之’在特定的硏究中’所有的 . 在30 - 90分鐘後都能接受免疫試驗，特別是使用重復器（例如：一種Corn wal 17注射器）來施藥。在免疫開始30分鐘後，向小鼠施以第一種醫藥組合物。如果 φ 分鐘之後，並非所有的動物都接受了藥物注射，可以二個人進行劑量給藥。施藥的方式有皮下注射和口服。皮下注射在頸後部難看的部位進行，而口服則經由針。在這兩種情況下，每只小鼠的用藥量爲0.2毫升激發後30分鐘、4小時和24小時向小鼠施藥。在每一中，以同樣的方式向小鼠施以已知功效的對照組合物天觀察動物，記錄下每組存活小鼠的數量。在激發後殺巴斯德氏菌模式監測持續96小時（4天）。 φ PD5〇是適當的劑量，使用此劑量，能使一組小 5 0%避免因細菌性感染而死亡。在缺乏治療時，細菌 ' 染將是致命的。本發明醫藥組合物可以用來治療人類、牲口、馬、豬、山羊、兔、貓、狗和其他需要這種治療的哺乳。特別是，本發明醫藥組合物可以用來治療牛呼吸系病、豬呼吸系統疾病、肺炎、巴斯德氏菌病、球蟲病形蟲病以及感染性的角蛋白炎。醫藥組合物可以經由、肌肉方式、靜脈方式、皮下方式、腸內方式、非經物控小鼠了 1 0 小鼠注射試驗在30 讓第兩種給料。在測試。每，多鼠的性感、羊動物統疾、Μ y»\> 口服腸方 -31 - 1331527 式、局部方式、***內的方式或直腸方式進行施藥。對於給牲口、豬或其他家養動物施藥，可以將醫藥組合物放入飼料中或作爲一服藥劑口服。更佳的是，將醫藥組合物進行肌肉、靜脈或皮下注射。在較佳具體實例中，醫藥組合物的施藥量爲每千克體重每天服用約0.5毫克到約20毫克異構物的平衡混合物。在更佳的實施例中，醫藥組合物的施藥量的範圍從1.25毫克/千克/天到約5.0毫克/千克/ 天不等。一天可以多次給藥，持續給藥約1到15天，1到5 天更佳’合適的可重復施藥。那些熟按此藝者不難意識到 ’劑量因治療物件的種類、重量和身體條件不同而有所不同。個體對藥物的反應以及施藥方式也會不同。在一些情況下’低於前面所提到的施藥量範圍的最低標準的劑量可能對治療有效；然而在另一些時候，需要使用更大劑量但不會造成任何有害的副作用。使用更大劑量的前提是，在一天中’要將大劑量先分成若干小劑量進行施藥。【實施方式】以下實施例進一步舉例說明本發明的組合物和方法。應該認爲本發明並不局限於以下提供的實施例的具體細節實施例1 異構物的合成物。將去甲AZITHROMYCIN ( 190.5克，259_2毫莫耳）、二氯甲烷（572毫升）以及硫酸鎂（38 IS 3 -32- 1331527· 克）添加到錐瓶中。攪動混合物ι〇分鐘。然後將混合物過濾倒入5升的圓底燒瓶中。另加入二氯甲烷（2285毫升），將溶液冷卻到〇— 5°C。接著加入CBZ_ CL (苯甲基氨甲 - 酸脂）達10分鐘。在約0°C時，反應進行達6小時，接著在 . 室溫下進行反應。高性能液體液體色譜分析表明，將存在的殘留原料再冷卻到約〇°C，再加入苯甲基氨甲酸脂（19.5 毫升）。反應在〇°C下進行5.5小時，接著在室溫下進行2.5 φ 小時。薄膜層析術顯示這是完全反應。在飽和的碳酸氫納水溶液（953毫升）中，反應中止，相分離。在硫酸鎂條件下，有機相乾燥，接著過濾、溶縮形成通式（瓜）的化合物。

Cbz

向裝有通式（Π)的化合物（225.3克）和二氯甲烷 (901毫升）和二甲亞碾（450毫升）的圓底燒瓶中加入三氟乙酸酐（82.4毫升）。在添加過程中，將溫度保持在零下60°C，添加過程將持續9分鐘。反應在零下65到零下70°C 的溫度範圍進行，爲時20分鐘。在三乙基胺（145毫升） -33- 1331527 溶液中，反應中止。接著在在零下60到零下65 °C下’攪拌 2 0分鐘。接著向反應混合物中加入水（1 127毫升），持續 3分鐘以上，此刻溫度升到零下2。(：。攪動反應混合物10分鐘，允許相分離。分別用水（675毫升）和飽和的氯化鈉水溶液（675毫升）沖洗有機相。在硫酸鎂條件下，將有機相乾燥、過濾並經由蒸餾將有機溶液移走。加入MTBE ，並經由蒸餾去除所有二氯甲烷和三甲基亞硕的痕量。再加入1^丁6£使體積達到33 80毫升。加入溶解於1^丁8£(1126 毫升）的一水二苯醯D—酒石酸（87.8克），從而形成濃的懸浮液。加熱混合物使之分餾並徹夜攪拌。在降溫到室溫條件時，結晶固體留在布奇樂漏斗中，並用MTBE漂清。將結晶固體置於40 °C的乾燥爐中進行乾燥，獲得通式（ IV)化合物的二苯醯酒石酸鹽。

向3升的圓底燒瓶中加入二氯甲院（ 800毫升）和通式 (IV)化合物的二氯醯酒石酸鹽（188克）。再加入水（ IS 1 400毫升）和碳酸鉀（45.5克）。在室溫條件下，攪拌混 -34- 1331527· 合物5分鐘。有機相被分離，用250毫升的水洗。並在硫酸鎂中乾燥。經由過濾移去乾燥劑，所得溶液在氮氣流下蒸發，直至形成623毫升游離鹼酮。 ' 向5升的圓底燒瓶中加入四氫呋# ( 623毫升）和三甲 . 基溴化藥（74·7克）.將所得溶液冷卻到零下l〇°C，並加入特丁基氧化鉀（54.4克）。在零下10 °C下將反應混合物攪拌10分鐘，接著冷卻至零下70°C達5分鐘以上。加入游離 φ 鹼酮溶液達11分鐘，將溫度保持在零下60到零下65 °C。高性能液體色譜顯示在90分鐘後反應結束。使用溶于水（ 1 8 00毫升）的氯化胺（315克）溶液，在零下60 °C的條件下，反應中止。將反應混合物加熱到5到1 0 °C，相分離。有機相在硫酸鈉中乾燥，並經過濾、濃縮形成以黃色泡沬形式的通式（V)的化合物（117.4克）《HPLC顯示，在色譜峰時，純度達到61.4%。

將碘化鉀（51 8克，3.12毫莫耳）和正丙胺（250毫升 3. 12毫莫耳）添加到通式（V )的化合物（275克，312 -35- 1331527 毫莫耳）在乾甲醇（2.75升）的溶液中。在45 °C條件下，徹夜攪拌混合物。薄膜層析術顯示完全反應。反應物在旋轉蒸發器中濃縮。殘餘物分爲水（2.5升）和二氯甲烷（ 2.5升）。經由使用3N的鹽酸將水相的pH値調整到6.7。在進行一次提取。化合的水相與新鮮二氯甲烷（1 ·5升）化合。經由固體碳酸鉀將水相的PH値調整到8.5。相被分離，水相與多餘的二氯甲烷一起再進行提取。合成的有機相在硫酸鈉中乾燥，接著進行過濾。濾液在旋轉蒸發器中濃縮直到產出米黃色泡沫（23 0克）。泡沫的純化在漿液塡充的矽膠管柱中進行。純化時，採用己烷-二乙胺作爲移動相。以這種方式，1 2 5克粗產物獲得7 2克白色、非結晶形態的異構物I。在室溫下，異構物I溶解在乙腈（〇.5升）溶液中。接著加入除去離子的水，其導致沈澱。接著在加入乙腈（ 0.5升），從而形成均勻的溶液，在室溫下將該溶液攪動 30分鐘。HPLC分析顯示由約20 %峰區構成的新成份的形成〇在旋轉蒸發器中移去有機相。向殘留溶液中加入碳酸鉀（30克），接著是二氯甲烷（〇.3升）。搖動混合物移去低有機相。同時進行兩次提取（2x〇.3升）。合成的有機相在硫酸鈉中乾燥。接著過濾’所得溶液濃縮形成泡沬體。（約等於10克）所得異構物I和異構物Π的混合物溶解於二氯甲烷和 19/3 (v/v)乙烷—二乙胺的混合液中，接著將其放入 IS 3 -36- 1331527 漿液塡充矽膠管柱中’並經由19/3系統洗提。將流出物轉換到19/6己烷二乙胺。組合分餾物9 - 17並濃縮成隻含有未反應的原料的乾燥泡沫體。組合分餾物52 - 72並濃縮，包含異構物Π ( HPLC顯示79%的純度）。實施例2

以下圖表1顯示pH値、溫度、酸的種類以及異構物I的 φ 濃度對平衡反應速度以及主要雜質水平的影響。複製反應 (資料沒有顯示）表明結果的再現性。異構物I和異構物 π的平衡比率（分別從約9 0 % ± 4 %到1 〇 % ± 4 % )符合所有的試驗。對資料的分析表明pH値和溫度對平衡所需的時間具有顯著的影響。於不受任何理論的限制之下，較低的平衡溫度或低的pH値通常會導致大體上更長的平衡時間。此外 ’平衡時間同樣由原料的濃度、使用的酸的類型和濃度。在一或多種酸的條件下，該酸的濃度占每毫升混合物的約 # 〇·2毫莫耳到1·〇毫莫耳，在足夠數量的鹽酸的情況下，pH 値達到約6.5到約7.5，將濃度爲每毫升300毫克的異構物I 加熱達20小時，使溫度達到約40到80。(：，從而產生出純度爲約95 %- 98 %的異構物的平衡混合物。氮雜內酯類異構物I和異構物E的平衡反應動力參數和雜質水平來確定pH 値的作用、平衡溫度、酸的種類以及異構物I的濃度，並在圖表1中列出。已知的方法，包括：高性能液體層析術 (HPLC)、核磁共振（NMR)、氣體層析術（GC)、磁譜儀（MS)、液相層析術/磁譜儀（LC/MS) > GC/ -37- 1331527 MS以及薄膜層析術，可以用來確定雜質。DS指的是平衡前的異構物I，並在比較時包括在內。異構物的平衡混合物如以下方法獲得和分析。在1A -11A的每一個實驗中都準備40毫升的溶液其中在加熱前，每一溶液都分成1毫升的等分試樣從而更容易地監測在不同時間的平衡化。在12B- 24B的每一實驗中都準備20毫升的溶液且在加熱前，將每一溶液都分成0.7毫升的等分試樣。在25C-28C的每一實驗中都準備1〇〇毫升的溶液。在 29C- 3 0C的每一實驗中都準備200毫升，從溶液中提取的 0.5毫升等分試樣中觀察平衡。在31D — 33D以及35D-41D 的每一實驗中準備60毫升的溶液，在34D實驗中準備170毫升的溶液，從溶液中提取的0·5毫莫耳等分試樣中觀察平衡。在42E-46E的實驗中，準備7200到54000毫升的溶液，在從溶液中取出的2到5毫升的等分試樣中監測平衡。在試樣47F—50G中，準備35毫升到50毫升的溶液，在加熱前，將溶液分成1毫升的等分試樣。將水加入合適的容器中，接著是圖表1第4欄列出的酸的類型和數量。在酸的類型前表明的“qs”指的是足以獲得第2欄中理得出PH値的酸的數量。當使用0.1M的檸檬酸或酒石酸時，也加入足夠數量的鹽酸來獲得第2欄中列出的pH値。在第4欄中指出的酸的濃度（例如：〇.1Μ的檸檬酸），該濃度指的是酸在異構物 I和異構物Π的平衡的混合物的濃度爲每毫升1〇〇毫克。攪拌水和酸的混合物直到所有的酸都溶解了（爲約5分鐘，量少約用20分鐘，量多約用20分鐘）。將異構物I以少量

ES -38- 1331527· 緩緩地加入，避免凝塊。劇烈攪動所得混合物直至溶解（量少約用少於30分鐘的時間，量大約耗時60 — 120分鐘）。在異構物I溶解之後，測量所得溶液的p Η値。若p Η値低 ' 於欄2中所列之數値，用1 0 %的氯化鈉使之達到欄2的ρ Η値 - 。若PH値高於欄2的數値，用相應的酸使pH値降低。在每一實驗中，在欄3所列的溫度値時，加熱溶液直到獲得異構物的平衡混合物，由以下其中一種高性能液體層析術分 # 析報告來確定。在一些實驗中，混合物的加熱時間比平衡所需時間來的長（百分比大於欄8所示的1 〇〇% )，從而確定延長加熱對純度的影響。爲監測氮雜內酯類異構物的平衡，在平衡的不同時間 ’用高性能液體層析術來分析反應混合物等分試樣。對於圖表1所示的大多數平衡實驗，等分試樣和40mM磷酸鉀緩衝液（pH値爲6 )，直至濃度達到每毫升全部試樣含約0.5 毫克氮雜內酯類異構物蒸餾，並使用層析法，在 _ Asahipack ODP-50，5微米，250x4.0毫米的反應管柱（ 40%的乙腈，35%甲醇，25% 40mM磷酸鉀；pH8.5移動相 ;流動速度0.7毫升/分鐘，室溫）進行分析。在高性能液體色譜，該色譜時配備一外部的應用生物系統783 A程式吸收檢定器。經由監測在21 Onm時紫外線的吸收來檢定峰値。對於圖表1中顯示的其他平衡實驗（實驗31D-46E) ’等分試樣與20 %乙腈，50 %甲醇，30 % 50mM磷酸鉀（pH 値爲5.5 )蒸餾直至濃度達到每毫升全部試樣含約i.o毫克氮雜內酯類異構物。並使用層析法，在YMC PRO — -39- 1331527 PACKC18，3微米，50x2.0毫米反應管柱（20%的乙腈， 50%甲醇，30% 50mM磷酸鉀；PH7.0移動相；流動速度〇-5 毫升/分鐘，室溫）用有內部的紫外線監測器的HPLC進行分析。經由監測在21〇nm時紫外線的吸收來檢定峰値。異構物I和異構物Π的相對數量由彼等的相關色譜峰區域的比率來確定的。在以上的HPLC條件下，異構物I的保留時間爲約13— 23分鐘，異構物Π的相對保留時間（RRT) 爲0.8到0.9。這裏所說的“RRT”指的是在以上的HPLC條件下，相對於異構物I的時間。根據三種方法之一，運用高性能液體層析術來確定圖表1中平衡試樣的純度。在實驗ΙΑ— 24B，48F和50G中，等分試樣與25mM的磷酸鉀緩衝液蒸餾，直至濃度達到每毫升試樣含1.25毫克氮雜內酯類異構物並在WATERS ALLIANCE 2690 SEPERATION MODULE 和 BAS CC-5/LC-4C，經由ECLIPSE XDB - C18，5微米，250x4.6毫米反應管柱（22%的乙腈，58%甲醇，20% 25mM磷酸鉀；PH値爲 7.0，移動相；流動速度爲0.5毫升/分鐘，室溫）進行分析。用一個+ 0.7伏特的電極和另一個+ 0.88伏特的電極，在0.5安培的條件下，用電化方法監測出峰値。在實驗25C —41D中’等分試樣和5〇mM的檸檬酸（pH値爲5.5 )蒸餾 ’直至濃度達到每毫升試樣含0.25毫克氮雜內酯類異構物。並用水聯合系統YMCPRO-PACKC丨8，3微米，150x4.6 毫米反應管柱（70%甲醇，30% 50mM磷酸鉀；PH値爲7.0 ’移動相：流動速度1毫升/分鐘，室溫）進行分析。用 [si -40- I331527 只有一個+ 0.9伏特的電極經由電化方法監物的平衡混合物的比例（欄9 )和相對於分 (欄10)由層析法中的峰値區域決定。一些 :去紅梅糖氮雜內酯類（在ECLIPSE XDB-相對保留時間爲約0.26 );乙醛***產物 XDB— C8管柱中，其相對保留時間爲約1·75 ***產物（在ECLIPSE XDB— C8管柱中’其爲約1.6)。去紅梅糖氮雜內酯類具有的結構如τ: 測峰値。異構析試樣的雜質監測的雜質是 c8管柱中，其 (在 ECLIPSE )和一種甲醛相對保留時間

乙醛***產物具有的結構如下：

-41 - 1331527 甲醛***產物具有的結構如下： H0 \

去紅梅糖氮雜內酯類、乙醛***產物和甲醛***產物以及醫藥所能接受的鹽具有抗生素特性，並且可作爲抗生素媒介。經由進行圖表1中組A和組B的實驗來確定pH値、溫度、酸的類型、酸的濃度以及異構物I的濃度對平衡的影響。圖表1中組C的實驗表明pH値和溫度對平衡的影響。圖表 1中組D的實驗表明pH値、溫度和酸的濃度對平衡的影響。圖表1中組E的實驗表明平衡的較佳的方法，gp，PH値爲約7.0’平衡溫度爲約70 °C，異構物I的濃度爲每毫升25〇毫克。組F的實驗測試不同的酸和平衡溫度的不同效果。實驗G在50%的丙二醇共溶劑中進行。這些實驗結果顯示，即使在多種條件下，氮雜內酯類異構物的平衡都形成約90%±4%的異構物I和約1 0%±4%的異構物Π。平衡溫度和pH値對平衡速率具有最大的影響’ 與異構物I的高濃度相比，高的溫度通常會導致更快的速 -42- 1331527· 率。在多數情況下，更長的平衡時間會導致更高的雜質濃度。樂觀的平衡條件是能構帶來相對高的平衡速率，例如 :在1- 3小時內形成平衡混合物。

-43- 1331527 %雜質 —一对寸 3 寸 — m 寸〇卜 vd^nco 寸（、v〇 !cn〇寸〇〇〇〇〇〇〇〇〇(N … • · · · 暑 —二1 m^cNcnco 寸寸（NmcNmmu^ 異構物平衡混合物％ ononco 卜—vocn'O 寸（Ν〇οαο»οοσ\ 卜 v〇〇m 寸 moo^n 卜 mv〇卜 Om —产 cn — (N 卜寸 vo 卜 v〇v〇 ·······♦·······« « « · 暑 # 〇〇V〇寸寸 V〇V〇〇N 卜 V〇V〇ir>V〇U^v〇l〇卜 v〇卜 v〇v〇寸〇\ 〇\ 〇\ Os cc 〇\ 〇〇〇\ 〇\ 〇\ OS 〇\ 〇\ 〇s 〇\ 〇s 〇\ 〇\ 到平衡的時間之％〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇〇 o^no 卜〇寸〇〇〇卜〇卜〇v〇〇^n〇v〇〇〇N CO c**^ 到平衡的時間(小時） 5.1 2 1.4 10.9 12.9 17.6 2.2 7.2 1.2 3.3 平衡時的異構物11% cN^〇i〇i〇<Nmas 寸 — rn 广产— 产一产H i * —^ i < 起始異構物I濃度 (毫克/毫升） 112 75 75 150 150 75 150 75 150 112 氍經激經經激經經觀齡經 Hii 2 1« nn * _] ¢1 2 2 _l 徊御倒瞭倒画粮瑕個平衡溫度 υ〇〇〇〇〇〇〇〇〇ι〇 νοοο 卜 mvovooom 卜 ν〇 moooooooo^o v〇\〇r-r^\〇v〇v〇r^r^v〇實驗編號&組別 53<<<<<<<<<< Q^cNmrfmOr^oooN* Γ Γ·ί ^ -44- 1331527， %鬆<0蜞 {屯爾/^爾} %^酲盤(盤/SSE狴髮li鹋驅I鬆siil^-fiMH_酿袈韶 0 ro 寸卜 ΟνΊ 寸》nmCNO 卜 OO — — (N —(NVOO 寸卜（N〇〇〇(N O — OCNO — — (N — mv〇 — t^'Or^OO'O Ό 卜 00 寸 OOCN ΓηΟΟΟΝαοο 〇〇们—卜 oo 卜 m〇^n<N 卜―O 卜 Osoo ONOOOOOOO 卜 OO^Oc^CN vo寸寸寸寸寸寸对r^<N 寸寸 mm寸mmm 寸寸 OS OS ON ON On On On On On On C^s On On On On Os On On On On Os ^ on 001on 001on 001 OSI 001on 001 OSI 001 on 001 ou-11 001 on 001 on 001 i 001 Γ寸 ς·ι s·寸9Τ 6·寸寸·ι9·ε ιο·(Νε·ε 寸二9.ε ε·(Νιru Γη.II ΓίΝι 寸·二 9·ΙΙ 0.11 ΓΙΙ ΓΗ ς·(Ν1 寸·(Νι

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[S -50- 1331527· 。酸的濃度同樣也對醫藥組合物的穩定性具有影響。在貯藏後，具有相對較低的酸的濃度（爲約2mM )以及pH値爲約4.5的組合物具有最高的穩定性。然而，低的酸的濃度會導致低的緩衝液強度，其形成浮動的PH値，並可能在其他時間或溫度情況下，形成相對高程度的雜質水平。

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CS -56- 13.31527 · 由一個0.2微米的最終已消毒的篩檢程式，該篩檢程式已在121 °C下經濕潤加熱高壓消毒達60分鐘並在消毒前、過濾後都採用壓力承受方法進行完整性測試。、將20毫升的燧石類型1血清玻璃瓶（偉頓科學創作，新澤西洲）進行消毒並放入乾熱的管道中在25(TC下進行無熱原反應240分鐘。經由.沖洗將20微升的4432/ 50灰氯丁基矽化的塞子（西部公司）進行無熱原反應並在121 9C下經濕潤加熱高壓消毒。在消毒的條件下’ 25 25個玻璃瓶都充滿了 20毫升所得組合物及0.6毫升（每瓶2〇.6毫升即每瓶2.06克醫藥組合物的單位效能每毫升100毫克畢構物的平衡混合物基於實際藥物全部效能的97.1%)瓶子頂部充滿了氮氣，瓶子用塞子塞住並再用封條封住。（20毫米的銘.封條，產物號# 5120 - 1125，西部公司）。本發明‘的範_不受實施例所揭示的具體實施例所限制。採用這些實施例是本發明一些方面的展現。任何在機能上相當的實施例都屬於本發明的範疇。實際上，除了那些在此顯示和說明的修改之外’其他的改變對於熟諳此藝者來說是顯而易見的，並屬於所附的發明申請範圍中。在此的任何引用附于此作爲參考。 -57-

Claims

1331527 * 七、申請專利範園：附件第98131591號專利申請案中文申請專利範圍替換本一一秀枚正 I —種製得供治療哺乳動物的細菌或原生動物感染用之藥學組成物的方法，該組成物包括： (a)通式I化合物

⑴

和通式Π化合物

(II) 1331527 二者比率分別爲9 Ο % ± 4 %到1 Ο % ± 4 % ; (b )水；和， (c) 一或多種酸，其在每毫升該組成物中的含量爲 0.2毫莫耳到1.〇毫莫耳，該方法包括將包含下列的混合物加熱到50。C到90。(：的步驟： (a)通式I化合物； (b )水；和 (c) 一或多種酸，其在每毫升該混合物中的含量爲 0.2毫莫耳到1.0毫莫耳；其中該混合物的pH値範圍爲5.0到8.0，且其中該一或多種酸是從以下各酸組成之群中選出：乙酸、苯磺酸、檸檬酸' 氫溴酸 '鹽酸、乳酸、甲烷磺酸' 磷酸、琥珀酸、硫酸酒石酸、對-甲苯磺酸、己二酸、天冬胺酸、樟腦磺酸、1,2 -乙烷二磺酸、月桂基硫酸葡萄庚酸葡萄糖酸、3 —羥基一 2 —萘甲酸、1—羥基一 2 —萘甲酸、2-羥基乙烷磺酸、蘋果酸、黏液酸硝酸、萘磺酸、棕櫚酸、D-葡萄糖二酸硬脂酸、馬來酸、丙二酸、延胡索酸、苯甲酸、膽酸、乙烷磺酸、葡萄糖醛酸、榖胺酸、馬尿酸、乳糖酸、離胺酸、扁桃酸、1，5 -萘二磺酸（ napadisylic acid)、煙鹼酸、多聚半乳糖醛酸、水楊酸、磺基水楊酸、色胺酸和彼等的混合物。 2. —種製得供治療哺乳動物的細菌或原生動物感染用之藥學組成物的方法，該組成物包括： -2- 1331527 · (a)第一混合物，包含： (i)通式I化合物：

和通式Π化合物：

二者的比例爲90%±4%到1 0%土4% ; (ϋ )水；和 (iii) 一或多種酸，其在每毫升該第一混合物中的含量爲0.2毫莫耳到1.0毫莫耳；及 (b) —或多種水混溶性共溶劑，其在每毫升該組成物中的含量爲2 5 0毫克到75 0毫克， -3- 1331527 該方法包括將包含下列的混合物加熱到5 0。c到9 0。c @ 步驟： (a)通式I的化合物； (b )水；和 (c) 一或多種酸，其在每毫升該混合物中的含量爲 0.2毫莫耳到1 .0毫莫耳；其中在加熱步驟之前、之中或之後加入一或多彳重# M 溶性共溶劑，其量爲每毫升組成物25〇到75〇毫克，其中該一或多種酸是從以下各酸組成之群中選& : ζ 酸、苯磺酸、檸檬酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、甲院擴酸、磷酸' 琥珀酸、硫酸酒石酸、對-甲苯磺酸、己二酸、天冬胺酸、樟腦磺酸、1，2_乙烷二磺酸、月桂基硫酸葡萄庚酸葡萄糖酸、3_羥基—2-萘甲酸、1—羥基—2—萘甲酸、2—羥基乙烷磺酸、蘋果酸、黏液酸硝酸、萘擴酸、棕櫚酸、D —葡萄糖二酸硬脂酸 '馬來酸、丙二酸、延胡索酸、苯甲酸、膽酸、乙烷磺酸、葡萄糖醛酸、榖胺酸、馬尿酸、乳糖酸、離胺酸、扁桃酸、1，5-萘二磺酸、煙鹼酸、多聚半乳糖醛酸、水楊酸、磺基水楊酸、色胺酸和彼等的混合物，且其中該一或多種水混溶性共溶劑係由下列組成之群中選出：乙醇、異丙醇、二丁氧基二乙二醇丁醚、二丁氧基二乙二醇一乙基醚、二丁氧基二乙二醇二丁醚、聚乙二醇一 3 00、聚乙二醇—400、丙二醇、甘胺酸、2 -吡咯烷酮、Ν -甲基—2_吡咯烷酮、甘油甲縮醛、二甲亞碣、癸二 -4 - 1331527 · 酸二丁基、聚山梨醇酯80和彼等的混合物。

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