TW202320750A - 含四氫呋喃多環類衍生物、其藥學上可接受的鹽及其製備方法和應用 - Google Patents

含四氫呋喃多環類衍生物、其藥學上可接受的鹽及其製備方法和應用 Download PDF

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Abstract

本發明涉及一種含四氫呋喃多環類衍生物、其藥學上可接受的鹽及其製備方法和應用。特別地，本發明涉及通式( I )所示的化合物、其藥學上可接受的鹽和含有該化合物的藥用組成物，以及其作為CDK2抑制劑在治療癌症中的用途。其中通式( I )中的各取代基與說明書中的定義相同。

Description

含四氫呋喃多環類衍生物、其藥學上可接受的鹽及其製備方法和應用
本申請主張申請日為2021年10月25日的中國專利申請2021112420210的優先權，本申請主張申請日為2022年8月25日的中國專利申請2022110367844的優先權，本申請主張申請日為2022年10月14日的中國專利申請2022112838508的優先權。本申請引用上述中國專利申請的全文。
本發明屬於藥物合成領域。具體涉及含四氫呋喃多環類衍生物、其藥學上可接受的鹽及其製備方法，以及其作為CDK2抑制劑在製備治療癌症的藥物中的應用。
不受控制的持續的增殖是癌症和其他增殖紊亂的標誌，因此誘導細胞週期阻滯可有效抑制腫瘤的生長。細胞週期是細胞連續***之間的一段時間，在此期間，細胞透過對多種酵素反應的精確控制實現細胞的精確複製和***。在真核生物中，細胞週期有4個主要階段，G1、S、G2、M期，細胞週期轉換主要被CDKs家族激酶調控。
細胞週期蛋白依賴性激酶(CDK)屬於絲/蘇胺酸蛋白激酶家族，是一種由細胞週期催化激酶次單元和調節次單元組成的異二聚體複合物，是參與細胞週期調節的關鍵激酶，目前已發現11個CDK成員。根據CDK功能的不同，可以將其主要分為兩大類。一類CDK參與細胞週期調控，主要包括CDK1、CDK2、CDK4、CDK6等；另一大類CDK參與轉錄調節，主要包括CDK7、CDK8、CDK9、CDK10、CDK11等。CDK1參與M期活動；CDK2參與G1、S、M期活動；CDK4/6參與G1期活動。其餘的CDK 5/7/8/9/19最近也被發現在調控週期活動中有重要作用。
細胞週期蛋白依賴激酶(CDK)構成了一個異二聚體家族的絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶參與細胞週期和轉錄。它們包括兩大類：細胞週期CDK和轉錄CDK。CDK的功能依賴於與調控蛋白細胞週期蛋白(cyclins)的特定相互作用，cyclins與CDKs形成異二聚體而活化調節細胞週期過程。
CDK2的過量表現與細胞週期的異常調節有關。細胞週期蛋白E/CDK2複合物在調控G1/S轉換、組蛋白生物合成和中心體複製方面起著重要作用。細胞週期蛋白D/CDK4/6和細胞週期蛋白E/CDK2對視網膜母細胞瘤(Rb)進行逐步的磷酸化，釋放G1轉錄因子E2F，促進進入S期。在S期早期，細胞週期蛋白A/CDK2的活化促進了允許DNA複製的內源性受質的磷酸化和E2F的失活，以完成S期。
Cyclin E是CDK2的調節性週期蛋白，在癌症中經常過度表現。Cyclin E的擴增或過度表現長期以來一直與乳腺癌的不良後果有關。細胞週期蛋白E2(CCNE2)的過度表現與下列因素有關。細胞週期蛋白E1(CCNE1)的擴增或過度表現也與卵巢癌、胃癌、子宮內膜癌和其他癌症的不良後果有關。Cyclin E過度表現或擴增也引起乳腺癌對CDK4/6的抑制劑抗藥性。抑制CDK2能夠抑制Cyclin E過度表現的癌症細胞生長，此外抑制CDK2也能夠抑制MYCN相關的癌症，CDK2抑制劑具有良好的癌症治療前景。
CDK1在細胞M期轉換時起著關鍵作用，抑制CDK1活性會帶來比較大的毒性。CDK1和CDK2在激酶結構區域極為相似，因此開發高度選擇性的CDK2抑制劑有著極大的難度。目前已經有多種CDK抑制劑被發現，包括CDK4/6抑制劑、CDK7抑制劑、CDK9抑制劑、CDK2/4/6抑制劑及CDK2/9抑制劑，但是選擇性較好的CDK2特異性抑制劑仍然具有潛在的優勢。
本發明發現了一系列新型的CDK2激酶抑制劑化合物，且對CDK2特異性抑制，具有良好的選擇性。
本發明的目的在於提供一種通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其中通式( I )所示的結構如下：
Figure 02_image001
其中， “
Figure 02_image004
”表示順式構型(即四氫呋喃環上的兩個取代基在同一側)； L選自鍵、-C(O)-、-S(O) m-、-C(O)(CH 2) n-或-(CH 2) n-； R選自氫、氘、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、-(CH 2) nOR a、-(CH 2) nSR a、-(CH 2) nNR bR a、-(CH 2) nC(O)R a、-(CH 2) nC(O)NR bR a、-(CH 2) nNR bC(O)R a、-(CH 2) nS(O) mR a、-(CH 2) nS(O) mNR bR a、-(CH 2) nS(O)(=NR b)R a、-(CH 2) nN=S(=O)R aR b或-(CH 2) nNR bS(O) mR a，所述的C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R x選自
Figure 02_image006
或R y； 環A選自C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，所述的C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基、5-14員雜芳基氧基、-(CH 2) nOR c、-(CH 2) nSR d、-(CH 2) nNR dR c、-O(CH 2) nNR dR c、-(CH 2) nC(O)R c、-(CH 2) nC(O)NR dR c、-(CH 2) nNR bC(O)R c、-(CH 2) nS(O) mR c、-(CH 2) nS(O) mNR dR c、-(CH 2) nS(O)(=NR d)R c、-(CH 2) nN=S(=O)R cR d或-(CH 2) nNR dS(O) mR c，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，任意兩個R 1以及它們所在的原子一起形成C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，所述的C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R y選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基和C 2-6炔基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R a、R b、R c和R d各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基或5-14員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-12員雜環基或5-14員雜芳基，所述的3-12員雜環基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代；且 x為0~10的整數； n為0~10的整數； m為0、1或2。
本發明還提供了一種優選方案，所述通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，某些基團的定義可如下所述，其他基團的定義可如本發明任一方案所述(以下簡稱“本發明還提供了一種優選方案”)，R中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基、環丁基或
Figure 02_image008
。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基。
本發明還提供了一種優選方案，R中，所述5-14員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 3-12環烷基為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述3-12員雜環基為C 3-8員雜環基；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 6-14芳基為C 6-10芳基，例如苯基或萘基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述5-14員雜芳基為5-10員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如2個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 1-6烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，還例如甲基、乙基或丙基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基。
本發明還提供了一種優選方案，環A中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述鹵素獨立地為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基或乙基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述5-14員雜芳基立地為5-6員雜芳基或5員并6員雜芳基，其中的5-6員雜芳基和5員并6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的5-6員雜芳基和5員并6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，R 1中，所述C 3-12環烷基氧基獨立地為C 3-6環烷基氧基，例如為環丙基氧基、環丁基氧基、環戊基氧基或環己基氧基，還例如環丙基氧基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基。
本發明還提供了一種優選方案，R y中，所述5-14員雜芳基立地為5-6員雜芳基基，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基。
本發明還提供了一種優選方案，R a、R b、R c和R d中，所述5-14員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( I-A )或通式( I-B )所示：
Figure 02_image010
Figure 02_image012
其中： L、R和R x如通式( I )所定義。 在本發明的一個優選實施方式中，所述R選自3-10員含氮雜環基、5-10員含氮雜芳基、-C(O)R a或-C(O)NR bR a，所述的3-10員含氮雜環基和5-10員含氮雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基或5-14員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-10員雜環基或5-10員雜芳基，所述的3-10員雜環基和5-10員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( II )所示：
Figure 02_image014
其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如通式( I )所定義。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( II-A )或通式( II-B )所示：
Figure 02_image016
Figure 02_image018
其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如前所述。
在本發明的一個優選實施方式中，所述環A選自5-6員單環雜芳基、8-10員雙環稠雜環基或8-10員雙環稠雜芳基。
在本發明的進一步優選實施方式中，所述環A選自吡唑基、吡啶基或吡唑并5-6員雜芳基。
在本發明的進一步優選實施方式中，所述環A選自吡唑基、吡啶基或吡唑并嘧啶基。
在本發明的進一步優選實施方式中，所述環A選自
Figure 02_image020
、
Figure 02_image022
、
Figure 02_image024
、
Figure 02_image026
或
Figure 02_image028
。
在本發明的一個優選實施方式中，所述L為鍵、-C(O)-或-C(O)CH 2。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( III )所示：
Figure 02_image030
其中： R 1、R a、R b和x如通式( I )所定義。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( IV )所示：
Figure 02_image032
其中： R 1、R a、R b和x如通式( I )所定義。
本發明還提供了一種優選方案，所述R a選自氫或甲基； 所述R b選自甲基、乙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基或雙環[1.1.1]戊烷基，所述的甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基和雙環[1.1.1]戊烷基，任選地進一步被甲基、乙基、異丙基或叔丁基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，任選地進一步被一個或多個甲基所取代。
本發明還提供了一種優選方案，
Figure 02_image034
為
Figure 02_image036
、
Figure 02_image038
、
Figure 02_image040
、
Figure 02_image042
、
Figure 02_image044
、
Figure 02_image046
、
Figure 02_image048
或
Figure 02_image050
。
本發明還提供了一種優選方案，
Figure 02_image034
為
Figure 02_image036
。
本發明還提供了一種優選方案，R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基或C 3-12環烷基，所述的C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-8環烷基，進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代。
本發明還提供了一種優選方案，R 1獨立地選自氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基或C 3-8環烷基，所述的C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-8環烷基，進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-8環烷基中的一個或多個取代基所取代。
本發明還提供了一種優選方案，R 1獨立地選自C 1-6烷基，所述的C 1-6烷基任選地進一步被C 1-6烷基和C 1-6烷氧基中的一個或多個取代基所取代。
本發明還提供了一種優選方案，所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，其具體結構如通式( IV-A )和通式( IV-B )所示：
Figure 02_image052
Figure 02_image054
其中： R 1、R a、R b和x如通式( I )所定義。
在本發明的一個優選實施方式中，所述R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-10員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基或5-10員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-10員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基，任選地，進一步被氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-10員雜環基或5-10員雜芳基，所述的3-10員雜環基和5-10員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明進一步優選實施方式中，所述R a選自氫或甲基； 所述R b選自甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基或雙環[1.1.1]戊烷基，所述的甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基和雙環[1.1.1]戊烷基，任選地進一步被甲基、乙基、異丙基或叔丁基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，任選地進一步被一個或多個甲基所取代。
在本發明進一步優選實施方式中，所述
Figure 02_image034
選自
Figure 02_image056
、
Figure 02_image036
、
Figure 02_image058
、
Figure 02_image038
、
Figure 02_image040
、
Figure 02_image060
、
Figure 02_image046
、
Figure 02_image048
、
Figure 02_image050
、
Figure 02_image062
、
Figure 02_image064
、
Figure 02_image042
或
Figure 02_image044
。
在本發明的一個優選實施方式中，所述R 1獨立地選自氫、氘、氰基、胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羥烷基、-CH 2OR c、-(CH 2) 2OR c、-CH 2NR dR c、-(CH 2) 2NR dR c、-O(CH 2) 2NR dR c、-CH 2S(O)(=NR d)R c、-S(O)(=NR d)R c、-CH 2N=S(=O)R cR d或-C(O)NR dR c，所述的胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3羥烷基，任選地進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R c和R d各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基或5-10員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基，任選地，進一步被氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明的進一步優選實施方式中，所述R 1獨立地選自-CN、-NH 2、-OH、-CH 3、-CF 3、-OCH 3、-CH 2OCH 3、-CH 2NH 2、-CH(OH)CH 3、-C(O)NH 2、-CH 2N(CH 3) 2、-C(O)N(CH 3) 2、-(CH 2) 2OCH 3、-OCH(CH 3) 2、-O(CH 2) 2OCH 3或-O(CH 2) 2N(CH 3) 2。
在本發明的進一步優選實施方式中，所述R 1獨立地選自H、D、F、Cl、-CN、-NH 2、-OH、-CH 3、-CF 3、-CD 3、-OCH 3、-OCF 3、-CH 2OCH 3、-(CH 2) 2OCH 3、
Figure 02_image066
、
Figure 02_image068
或
Figure 02_image070
。
在本發明的進一步優選實施方式中，R為
Figure 02_image072
，L選自-C(O)-，R x選自
Figure 02_image006
或R y；環A選自5-14員雜芳基，所述的5-14員雜芳基任選地被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代；R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基或C 3-12環烷基，所述的C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基，任選地進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代； R y選自C 1-6烷基，所述的C 1-6烷基被5-14員雜芳基中的一個或多個取代基所取代；所述5-14員雜芳基進一步被一個或多個C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基和C 1-6烷氧基所取代。
在本發明的進一步優選實施方式中，R為
Figure 02_image072
，-L-R x為
Figure 02_image075
、
Figure 02_image077
、
Figure 02_image079
、
Figure 02_image081
、
Figure 02_image083
、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image087
、
Figure 02_image089
、
Figure 02_image091
、
Figure 02_image093
或
Figure 02_image095
。在本發明的進一步優選實施方式中，-L-R x為
Figure 02_image075
，R為
Figure 02_image072
、
Figure 02_image097
、
Figure 02_image099
、5-10員含氮雜芳基或-(CH 2) nC(O)NR bR a；n為0，R a為氫，R b為被C 3-12環烷基取代的C 1-6烷基、C 3-12環烷基或被C 1-6烷基取代的C 3-12環烷基；或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，任選地進一步被一個或多個甲基所取代；所述的5-10員含氮雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素和C 1-3烷基中的一個或多個取代基所取代。
在本發明的進一步優選實施方式中，-L-R x為
Figure 02_image101
，R為
Figure 02_image072
、
Figure 02_image097
、
Figure 02_image099
、
Figure 02_image102
、
Figure 02_image104
、
Figure 02_image106
、
Figure 02_image108
、
Figure 02_image110
或
Figure 02_image112
。
在本發明的進一步優選實施方式中，R為
Figure 02_image072
、
Figure 02_image097
、
Figure 02_image099
、
Figure 02_image102
、
Figure 02_image104
、
Figure 02_image114
、
Figure 02_image116
、
Figure 02_image108
、
Figure 02_image118
、
Figure 02_image120
、
Figure 02_image106
、
Figure 02_image122
、
Figure 02_image110
或
Figure 02_image112
。
在本發明的進一步優選實施方式中，-L-R x為
Figure 02_image124
，R為
Figure 02_image072
或
Figure 02_image102
。
在本發明的進一步優選實施方式中，R為
Figure 02_image072
、
Figure 02_image108
、
Figure 02_image118
、
Figure 02_image106
或
Figure 02_image112
。
在本發明的進一步優選實施方式中，-L-R x為
Figure 02_image126
、
Figure 02_image128
、
Figure 02_image130
、
Figure 02_image079
、
Figure 02_image132
、
Figure 02_image134
、
Figure 02_image136
、
Figure 02_image138
、
Figure 02_image140
、
Figure 02_image081
、
Figure 02_image143
、
Figure 02_image083
、
Figure 02_image085
、
Figure 02_image145
、
Figure 02_image087
、
Figure 02_image089
、
Figure 02_image091
、
Figure 02_image093
或
Figure 02_image095
。
本發明還提供了一種優選方案，當本發明沒有特別說明是取代還是未取代，通常理解為未取代。
本發明還提供了一種優選方案，如上所示的各通式化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，具體選自如下化合物：
Figure 02_image147
Figure 02_image148
Figure 02_image150
Figure 02_image152
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Figure 02_image155
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Figure 02_image319
Figure 02_image321
Figure 02_image323
Figure 02_image325
Figure 02_image327
或
Figure 02_image329
。
本發明還涉及一種製備如前所述所述的通式( I )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
Figure 02_image331
式( Ia )與式( Ib )透過單步或多步親核取代、偶聯反應、Mitsunobu反應、酯化反應等常見有機反應引入R基團，得到式( Ic )所示化合物或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ic )所示的化合物透過還原反應得到如式( Id )所示的化合物或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Id )與式( Ie )透過醯胺化反應、親核取代或者偶聯反應等常見有機反應得到式( If )所示的化合物或其立體異構體； 式( If )所示的化合物脫去保護基團R 1a得到式( Ig )所示化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ig )透過分離純化得到式( I )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 任選地，式( I )所示的化合物進一步透過手性拆分得到單一構型化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 1選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)等； X 2選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)等； R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)、對甲氧基苄基(PMB)等； L、R和R x如通式( I )所定義。
本發明還涉及一種製備如前所述的通式( II )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
Figure 02_image333
式( IIa )與式( IIb )發生反應得到式( IIc )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIc )透過分離純化得到式( II )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 任選地，式( II )所示的化合物透過手性拆分得到單一構型化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如通式( II )所定義。
本發明涉及一種式( IIa )所示的中間體化合物或其立體異構體及其鹽，其具體結構如下：
Figure 02_image335
其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如通式( II )所定義。
本發明涉及一種式( IIa )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽，其具體結構如下：
Figure 02_image335
其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如通式( II )所定義。
本發明的一個優選實施方式，所述式( IIa )選自如下化合物：
Figure 02_image337
Figure 02_image339
Figure 02_image341
Figure 02_image343
Figure 02_image345
Figure 02_image347
Figure 02_image349
Figure 02_image351
Figure 02_image353
Figure 02_image355
Figure 02_image357
Figure 02_image359
Figure 02_image361
Figure 02_image363
Figure 02_image365
Figure 02_image367
Figure 02_image369
或
Figure 02_image371
。
本發明進一步涉及一種製備所述式( IIa )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
Figure 02_image373
式( IIa-1 )與式( IIa-2 )透過醯胺化反應、親核取代或者偶聯反應等常見有機反應得到式( IIa-3 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIa-3 )與對硝基氯甲酸苯酯反應生成式( IIa-4 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIa-4 )脫去保護基團R 1a得到式( IIa )所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 1選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)等； R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)、對甲氧基苄基(PMB)等； 環A、L、R 1、R a、R b和x如通式( II )所定義。
本發明涉及一種式( IIa-1 )所示的中間體化合物或其立體異構體及其鹽，其具體結構如下：
Figure 02_image375
其中： R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)、對甲氧基苄基(PMB)；所述的鹽可為藥學上可接受的鹽等。
本發明的一個優選實施方式，所述式( IIa-1 )選自如下化合物：
Figure 02_image377
、
Figure 02_image379
、
Figure 02_image381
、
Figure 02_image383
、
Figure 02_image385
、
Figure 02_image387
、
Figure 02_image389
或
Figure 02_image391
。
本發明進一步涉及一種製備所述式( IIa-1 )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
Figure 02_image393
式( IIa-1a )所示的化合物與式( IIa-1b )反應得到式( IIa-1c )所示的化合物； 式( IIa-1c )所示的化合物透過還原反應得到式( IIa-1d )所示的化合物，式( IIa-1d )再經過氧化反應得到式( IIa-1e )所示的化合物； 式( IIa-1e )所示的化合物與烯丙基三氟硼酸鉀透過加成反應，得到式( IIa-1f )所示的化合物； 式( IIa-1f )所示的化合物透過與間氯過氧苯甲酸( mCPBA)的環氧化反應，得到式( IIa-1g )所示的化合物； 式( IIa-1g )所示的化合物在酸性條件下關環得到式( Ia )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ia )所示的化合物透過還原反應可得到式( IIa-1 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 4選自但不限於鹵素、三氟甲磺酸酯基(OTf)或羥基等； R 1a如式( IIa-1 )所定義。
本發明還涉及一種藥用組成物，其包含有治療疾病效劑量的如上所述各通式化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載劑或賦形劑。
本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及上述藥用組成物在製備治療CDK2媒介的疾病的藥物中的用途。
本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及上述藥用組成物在製備治療細胞異常生長的藥物中的用途。
本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及上述藥用組成物在製備治療癌症的藥物中的用途。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療由CDK2媒介的疾病的方法。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療細胞異常生長的方法。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療癌症的用途。
本發明的一個優選實施方式，所述癌症可為卵巢癌。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療由CDK2媒介的疾病的用途。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療細胞異常生長的用途。
另一方面，本發明進一步涉及通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及其藥用組成物治療癌症的用途。 發明的詳細說明
除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的技術術語有下述含義。
術語“烷基”指飽和脂肪鏈烴中缺少一個氫的烴基，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有1至8個碳原子的烷基，更優選1至6個碳原子的烷基，最優選1至3個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本發明優選甲基、乙基、異丙基、叔丁基、鹵代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羥基取代的烷基。
術語“亞烷基”是指烷基的一個氫進一步被取代的基團，即飽和脂肪鏈烴中缺少兩個氫的烴基，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有1至8個碳原子的亞烷基，更優選1至6個碳原子的亞烷基，最優選1至3個碳原子的亞烷基。非限制性實例包括“亞甲基”(-CH 2-)、“亞乙基”(-(CH 2) 2-)、“亞正丙基”(-(CH 2) 3-)、“亞異丙基”(-(CH)(CH 3)(CH 2)-)、“亞正丁基”(-(CH 2) 4-)等。
術語“烯基”指至少含有兩個碳原子和至少包含一個碳-碳雙鍵組成的不飽和脂肪族烴基團，其為包含2至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有2至8個碳原子的烯基，更優選2至6個碳原子的烯基，最優選2至4個碳原子的烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“炔基”指至少含有兩個碳原子和至少包含一個碳-碳三鍵組成的不飽和脂肪族炔基團，其為包含2至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，優選含有2至8個碳原子的炔基，更優選2至6個碳原子的炔基，最優選2至4個碳原子的炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-、2-或3-丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。
術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環非芳香環狀烴取代基，環烷基環原子包含3至20個碳原子，優選包含3至12個碳原子，更優選包含3至6個碳原子。單環環烷基的非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等，優選環丙基、環丁基、環己基、環戊基和環庚基；多環環烷基包括螺環烷基、稠環烷基和橋環烷基等。
術語“螺環烷基”指含有5至20個碳原子，單環之間共用一個碳原子(稱螺原子)的多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。螺環烷基環原子優選為6至14個碳原子，更優選為7至10個碳原子。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺環烷基分為單螺環烷基、雙螺環烷基或多螺環烷基，優選為單螺環烷基和雙螺環烷基。更優選為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺環烷基。螺環烷基的非限制性實例包括：
Figure 02_image395
等； 術語“稠環烷基”指含有5至20個碳原子，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對碳原子的全碳多環基團，其中一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。稠環烷基環原子優選為6至14個碳原子，更優選為7至10個碳原子。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠環烷基，優選為雙環或三環，更優選為5員/5員或5員/6員雙環烷基。稠環烷基的非限制性實例包括：
Figure 02_image397
等。
術語“橋環烷基”指含有5至20個碳原子，任意兩個環共用兩個不直接連接的碳原子的全碳多環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。橋環烷基環原子優選為6至14員個碳原子，更優選為7至10個碳原子。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋環烷基，優選為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。橋環烷基的非限制性實例包括：
Figure 02_image399
等。
所述環烷基環可以稠合於環烷基或芳基環上，其中與母體結構連接在一起的環可以為環烷基或芳基環，非限制性實例包括茚滿基、四氫萘基、苯并環庚烷基等。環烷基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環非芳香環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧、磷、硼或S(O) m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。雜環基優選包含3至12個環原子，其中1～4個是雜原子；更優選包含3至10個環原子；進一步優選包含3至8個環原子；最優選包含3至8個環原子。單環雜環基的非限制性實例包括氧雜環丁烷、四氫吡喃基、氮雜環庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、二氫咪唑基、二氫呋喃基、二氫吡唑基、二氫吡咯基、呱啶基、吡啶酮基、呱嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高呱嗪基、吡喃基等，優選氧雜環丁烷、四氫呋喃基、四氫吡喃基、氮雜環庚烷基、呱啶基、吡啶酮基和呱嗪基。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基等；其中涉及到的螺環、稠環和橋環的雜環基任選與其他基團透過單鍵相連接，或者透過環上的任意兩個或者兩個以上的原子與其他環烷基、雜環基、芳基和雜芳基進一步併環連接。
術語“螺雜環基”指含有5至20個環原子，單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子選自氮、氧、磷、硼或S(O) m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。螺雜環基環原子優選為6至14員，更優選為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，優選為單螺雜環基和雙螺雜環基。更優選為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性實例包括：
Figure 02_image401
。
Figure 02_image403
等。
術語“稠雜環基”指含有5至20個環原子，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，其中一個或多個環原子選自氮、氧、磷、硼或S(O) m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。稠雜環基環原子優選為6至14員，更優選為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，優選為雙環或三環，更優選為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括：
Figure 02_image404
Figure 02_image406
等。
術語“橋雜環基”指含有5至20個環原子，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其中一個或多個環原子為選自氮、氧、磷、硼或S(O) m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，其整體不具有芳香性(即整體不能形成共軛的π電子系統)，但可以有一個環或多個環具有共軛的π電子系統。橋雜環基環原子優選為6至14員，更優選為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環橋雜環基，優選為雙環、三環或四環，更有選為雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括：
Figure 02_image407
等。
所述雜環基環可以稠合於環烷基、雜環基、芳基或雜芳基環上，其中與母體結構連接在一起的環可以為環烷基、雜環基、芳基環或雜芳基環，其非限制性實例包括：
Figure 02_image409
Figure 02_image411
Figure 02_image413
Figure 02_image415
Figure 02_image417
等。
雜環基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自氧代基(=O)、硫代基(=S)、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至20員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，芳基環原子優選為6至14員，更優選為6至10員，例如苯基和萘基。更優選苯基。
芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至20個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫或氮等。雜芳基分為單環雜芳基和多環雜芳基；雜芳基環原子優選為5至14員，更優選為5至10員；單環雜芳基環原子優選為5員或6員，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、異噁唑基、吡咯基、***基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基、噠嗪基、噁二唑基等，優選吡啶基、噁唑基、異噁唑基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、噻唑基、噻二唑基和噁二唑基。多環雜芳基一般指所述雜芳基環稠合於芳基或雜芳基形成多環稠雜芳基，其中與母體結構連接在一起的環可以為芳基環或雜芳基環，多環稠雜芳基優選雙環稠雜芳基，雙環稠雜芳基非限制性實例包括：
Figure 02_image418
Figure 02_image420
Figure 02_image422
Figure 02_image424
等。
雜芳基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“鹵代烷基”指烷基中的氫被一個或多個鹵素取代的基團，其中烷基的定義如上所述。鹵代烷基的非限制性實例包括：一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、一氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、1-氟乙基、2-氟乙基、1,1-二氟乙基、1,2-二氟乙基等，鹵代烷基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
“羥烷基”指烷基中的氫被一個或多個羥基取代的基團，其中烷基如上所定義。羥烷基的非限制性實例包括：羥甲基、1-羥基乙基、2-羥基乙基、1,2-二羥基乙基、1-羥基丙基、1-羥基丁基等，羥烷基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基或丁氧基，烷氧基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“烷硫基”指-S-(烷基)，其中烷基的定義如上所述。烷硫基的非限制性實例包括：甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基，烷硫基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、羧基或羧酸酯基。
術語“環烷基氧基”指-O-(環烷基)，其中環烷基的定義如上所述。
術語“雜環基氧基” 指-O-(雜環基)，其中雜環基的定義如上所述。
術語“C 6-14芳基氧基” 指-O-(C 6-14芳基)，其中C 6-14芳基的定義如上所述。
術語“5-14員雜芳基氧基” 指-O-(5-14員雜芳基氧基)，其中5-14員雜芳基氧基的定義如上所述。
“羥基”指-OH。
“鹵素”指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
“胺基”指-NH 2。
“氰基”指-CN。
“硝基”指-NO 2。
“羧基”指-C(O)OH。
“THF”指四氫呋喃。
“PE”指石油醚。
“EA”指乙酸乙酯。
“IPA”指異丙醇。
“MeOH”指甲醇。
“DMF”指N,N-二甲基甲醯胺。
“TFA”指三氟乙酸。
“ACN”指乙腈。
“DMA”指N,N-二甲基乙醯胺。
“Et 2O”指***。
“DCM”指二氯甲烷。
“DCE”指1,2二氯乙烷。
“DIPEA”指N,N-二異丙基乙胺。
“NBS”指N-溴代丁二醯亞胺。
“NIS”指N-碘代丁二醯亞胺。
“Cbz-Cl”指氯甲酸苄酯。
“Pd 2(dba) 3”指三(二亞苄基丙酮)二鈀。
“Dppf”指1,1’-雙二苯基膦二茂鐵。
“HATU”指2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯。
“KHMDS”指雙三甲基二矽基胺基鉀。
“LiHMDS”指雙三甲基二矽基胺基鋰。
“MeLi”指甲基鋰。
“n-BuLi”指正丁基鋰。
“NaBH(OAc) 3”指三乙醯氧基硼氫化鈉。
“X選自A、B、或C”、“X選自A、B和C”、“X為A、B或C”、“X為A、B和C”等不同用語均表達了相同的意義，即表示X可以是A、B、C中的任意一種或幾種。
本發明所述的氫均可被其同位素氘所取代，本發明涉及的實施例化合物中的任一氫也均可被氘取代。
本發明的所有化合物，如所示化合物結構與名稱有衝突，以結構表示為准。
“任選”或“任選地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生的場合。例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不是必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。
“取代的”指基團中的一個或多個氫，優選為5個，更優選為1～3個氫彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(透過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
“藥用組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前驅藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載劑和賦形劑。藥用組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。
“可藥用鹽”是指本發明化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性。
在不違背本領域常識的基礎上，上述各優選條件，可任意組合，即得本發明各較佳實例。
本發明所用試劑和原料均市售可得。
本發明的積極進步效果在於：本發明實施例化合物對CDK2/CycE1激酶具有良好的抑制活性，且對CDK2/CDK1激酶抑制具有良好的選擇性。本發明實施例化合物對於OVCAR-3細胞增殖具有良好的抑制活性。本發明實施例化合物在Caco-2細胞模型上表現出更好的滲透性和更低的外排活性。本發明實施例明顯優化了產品藥物代謝動力學性質。
具體實施方式化學合成方法：
在此描述的化合物可以利用商業化可獲得的或者由已知實驗方法可製備的起始原料，透過有機合成領域技術人員掌握的多種方法進行合成。本發明的化合物可以採用下述方法，或合成有機化學領域中已知的合成方法，結合本領域技術人員所掌握的方法變化來合成。優選的合成方法包括但不限於以下描述。有關各個反應步驟的更詳細說明，請參閱下面的“實施例”部分。
如無特殊說明，合成步驟中的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自西格瑪奧德里奇(Sigma-Aldrich Co. Ltd)、畢得醫藥(Bide Pharmatech Ltd.)、韶遠化學(Accela ChemBio Co. Ltd)等公司。
在無特殊說明的情況下，本發明的所有反應均在連續的磁力攪拌下，在乾燥氮氣或氬氣氛下進行，溶劑為乾燥溶劑，反應溫度單位為攝氏度。 分析方法和儀器設備：
用於實施例特徵分析的LCMS數據是透過帶有DAD檢測器的Agilent 1260-6120/6125 MSD系統獲得的。測試方法包括：
LCMS方法A： 管柱：HALO C18 4.6 × 30 mm, 2.7 μm 柱溫：45℃ 流動相：溶劑A為0.025%三氟乙酸+99.975%水；溶劑B為0.025%三氟乙酸+99.975%乙腈 流速：1.8 mL/min 梯度：在0.8分鐘內，溶劑B由5%至95%線性遞增，然後在95%下保持0.8分鐘，最後溶劑B在5%下保持到2.0分鐘
LCMS方法B： 管柱：HALO C18 4.6 × 30 mm, 2.7 μm 柱溫：45℃ 流動相：溶劑A為0.1%甲酸+99.9%水；溶劑B為0.1%甲酸+99.9%乙腈 流速：1.8 mL/min 梯度：在0.8分鐘內，溶劑B由5%至95%線性遞增，然後在95%下保持0.8分鐘，最後溶劑B在5%下保持到2.0分鐘
LCMS方法C： 管柱：Xbrigde® C18 4.6 × 50 mm, 2.5 μm 柱溫：40℃ 流動相：溶劑A為0.05%氨水+99.5%水；溶劑B為100%乙腈 流速：1.8 mL/min 梯度：在2.5分鐘內，溶劑B由5%至95%線性遞增到1分鐘，然後在95%下保持到2分鐘，最後溶劑B從2.05分鐘開始保持5%到2.5分鐘
用於實施例特徵分析的NMR數據是透過Bruker傅立葉變換光譜儀( 1H NMR: 400 MHz)獲得的。數據以化學位移(多重性、氫原子數目)的形式提供。化學位移以內部標準四甲基矽烷( δ 四甲基矽烷＝0 ppm)和/或參考溶劑峰來進行指定，所述參考溶劑峰在 1H NMR光譜中對於氘代二甲基亞碸(DMSO- d 6 )為2.49 ppm，對於氘代甲醇(CD 3OD)為3.30 ppm，對於氘代乙腈(CD 3CN)為1.94 ppm，對於氘代氯仿(CDCl 3)為7.24 ppm。 純化方法：
實施例和中間體的純化透過矽膠管柱層析法、反相矽膠管柱層析法和/或超臨界流體層析法(SFC)進行。矽膠管柱層析法一般是以矽膠或預裝矽膠管柱為載體、石油醚/乙酸乙酯或二氯甲烷/甲醇等體系為洗提劑；反相矽膠管柱層析法一般是以C18矽膠管柱為載體，使用UV檢測器(214 nm和254 nm)和製備型LCMS進行檢測，流動相包括乙腈/水(0.1%甲酸)、乙腈/水(0.1%三氟乙酸)和乙腈/水(0.1%氨水)等體系。超臨界流體層析法(SFC)一般是採用不同類型的管柱作為載體，以CO 2/含0.2% NH 3的甲醇(7M氨甲醇溶液)等體系為流動相。 中間體的製備： 中間體 A ：5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯
Figure 02_image425
合成途徑：
Figure 02_image427
Figure 02_image428
Figure 02_image429
Figure 02_image430
步驟1：5-硝基-1 H-吡唑-3-甲酸甲酯( A-2)
在0℃將氯化亞碸(98.5 g, 0.83 mol)加入到5-硝基-1氫-吡唑-3-甲酸(50.0 g, 0.32 mol)的甲醇溶液(500 mL)中，反應液在70℃下攪拌16小時。反應結束後真空濃縮除去溶劑。冰浴冷卻下，加水稀釋並用碳酸氫鈉飽和水溶液將pH調至8，然後用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，有機相真空濃縮並乾燥，得到化合物 A-2(粗產物，白色固體，48.0 g)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=170.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 15.23 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 3.90 (s, 3H). 步驟2：1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-甲酸甲酯( A-3)
將5-硝基-1 H-吡唑-3-甲酸甲酯(15.0 g, 87.7 mmol)、三苯基膦(69.1 g, 263 mmol)和叔丁醇(19.5 g, 263 mmol)溶於四氫呋喃(150 mL)中。於0℃下逐滴向以上溶液中加入偶氮二甲酸二乙酯(45.8 g, 263 mmol)，並將混合物於70℃下攪拌16小時。混合物經乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，有機相真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: DCM=3:1)純化得到化合物 A-3(粉紅色油狀物，10.0 g，產率：50%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=227.2 步驟3：(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)甲醇( A-4)
0℃下向1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-甲酸甲酯(11.0 g, 48.4 mmol)的四氫呋喃溶液(55.0 mL)中分批加入硼氫化鋰(3.20 g, 31.7 mmol)，並將混合物於室溫中攪拌16小時。加水稀釋並用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，有機相真空濃縮並乾燥。所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: EA＝4:1)純化得到化合物 A-4(黃色油狀物，7.3 g, 產率：72%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=199.2 步驟4：1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-甲醛( A-5)
(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)甲醇(6.0 g, 30.1 mmol)的乙酸乙酯溶液(55.0 mL)中分批加入二氧化錳(78.5 g, 903 mmol)，將反應混合物於80℃下攪拌16小時。過濾並用乙酸乙酯洗滌濾餅，有機相真空濃縮。所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: EA＝10:1)純化得到化合物 A-5(淡黃色油狀物，4.0 g, 產率：67%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=197.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 10.04 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 1.69 (s, 9H). 步驟5：1-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)丁-3-烯-1-醇( A-6)
室溫下，向1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-甲醛(1.80 g, 9.1 mmol)和四丁基碘化銨(0.34 g, 0.91 mmol)的二氯甲烷和水混合溶液(36.0 mL)中加入烯丙基三氟硼酸鉀(2.69 g, 18.2 mmol)，混合物於室溫下攪拌2小時。混合物經二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得殘留物透過矽膠管柱層析法(PE:EA=3:1)純化得到化合物 A-6(黃色油狀物，1.60 g, 產率：74%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=239.3.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 7.09 (s, 1H), 5.82 (ddt, J=17.2, 10.2, 6.8 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H), 5.19 – 5.02 (m, 2H), 5.00 (s, 1H), 2.59 (td, J=6.8, 4.0 Hz, 2H), 1.65 (s, 9H). 步驟6：1-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)-2-(噁丙環-2-基)乙烷-1-醇( A-7)
室溫下向1-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)丁-3-烯-1-醇(4.50 g, 18.8 mmol)的二氯甲烷溶液(50.0 mL)中分批加入3-氯過氧苯甲酸(9.75 g, 56.5 mmol)，混合物於40℃下攪拌16小時。混合物經二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗滌後，有機相真空濃縮並乾燥，所得殘留物透過矽膠管柱層析法(PE: EA＝3:2)純化得到化合物 A-7(無色油狀物，4.00 g, 產率：83%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=255.3. 步驟7：5-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( A-8)
室溫下向1-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)-2-(噁丙環-2-基)乙烷-1-醇(1.00 g, 3.90 mmol)的1,4-二噁烷溶液(50.0 mL)中逐滴加入濃硫酸(380 mg, 3.90 mmol)，並將混合物於50℃下攪拌16小時。冰浴下，向反應體系加水稀釋並用碳酸氫鈉飽和水溶液將pH調至8，然後用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: EA＝1:1)純化得到化合物 A-8(無色油狀物，400 mg, 產率：41%)。
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=255.3. 步驟8：5-(3-胺基-1-(叔-丁基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( A-9)
室溫下向5-(1-(叔-丁基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇(600 mg, 2.35 mmol) 的四氫呋喃溶液(15.0 mL)中加入鈀碳(300 mg)，混合物於氫氣氛圍中50℃下攪拌16小時。待反應完成後，反應混合物經二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: EA＝20:1)純化得到化合物 A-9(淡黃色油狀物，300 mg, 產率：57%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=226.1. 步驟9：N-(1-(叔-丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺( A-10)
將3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-羧酸(230 mg, 1.35 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺溶液(10.0 mL)中，室溫下向以上溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(668 mg, 1.76 mmol)，混合物於室溫下攪拌30分鐘。然後下向以上溶液中分別加入N,N-二異丙基乙胺(349 mg, 2.70 mmol)，5-(3-胺基-1-(叔-丁基)-1氫-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇(335 mg, 1.49 mmol)，並將反應混合物於70℃下攪拌16小時。待反應完成後，反應混合物經乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，有機相真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(DCM: MeOH=20:1)純化得到化合物 A-10(黃色固體，280 mg, 產率：55%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=378.2. 步驟10：5-(1-(叔-丁基)-3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( A-11)
將 N-(1-(叔-丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺(300 mg, 0.79 mmol)、4-二甲胺基吡啶(10 mg, 0.082 mmol)和吡啶(189 mg, 2.38 mmol)溶於四氫呋喃溶液(150 mL)中，並在0℃下向以上溶液中加入4-硝基苯基氧基甲醯氯(104 mg, 0.52 mmol)，並將反應混合物於室溫下攪拌16小時。待反應完成後，將混合物用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(PE: EA=1:2)純化得到化合物 A-11(白色油狀物，300 mg, 產率：70%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=543.20. 步驟11：5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 中間體 A)
5-(1-(叔-丁基)-3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯(600 mg, 2.35 mmol)的甲酸溶液(5.0 mL)於75℃下攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物減壓濃縮得到 中間體 A(淡黃色油狀物，粗產物，600 mg)，直接用於下一步。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=487.1. 中間體 B:順式-5-(3-胺基-1-(4-叔丁基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇
Figure 02_image431
合成途徑：
Figure 02_image433
步驟1：5-(1-(叔丁基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-酮( B-1)
室溫氮氣保護下，向5-(1-(叔丁基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇(3.30 g, 12.9 mmol)的二氯甲烷(50 mL)溶液中分批加入氯鉻酸吡啶(2.80 g, 25.9 mmol)，並將反應混合物在室溫攪拌過夜。隨後向反應體系中補加氯鉻酸吡啶(1.40 g, 12.9 mmol)並繼續攪拌2小時。待反應完成後，將反應混合物減壓濃縮，所的殘留物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=10：1 – 1：1)純化得到化合物 B-1(2.0 g, 產率：61 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H]+=254.1 步驟2：順式-5-(1-(叔丁基)-3-硝基-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( B-2)
氮氣保護，在-60℃下，向化合物 B-1(3.7 g, 15 mmol)的四氫呋喃(20 mL)溶液中，緩慢加入三乙基硼氫化鋰(1 M的四氫呋喃溶液，18.3 mL, 36.5 mmol)。滴加完畢後，將反應混合物在-60℃氮氣保護下攪拌2小時。待反應完成後，將反應體系中用飽和氯化銨水溶液(50 mL)淬滅，乙酸乙酯萃取(20 mL×3)，合併有機相，再用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去固體並減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析法(二氯甲烷：甲醇=20：1)分離純化得到化合物 B-2(2.8 g, 產率68%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=256.0 步驟3：順式-5-(3-胺基-1-(4-叔丁基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( 中間體 B)
在氫氣氛圍下，向化合物 B-2(600 mg, 2.35 mmol)的四氫呋喃溶液(15 mL)中加入鈀/碳(300 mg)，並將該反應混合物在50℃攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物過濾，並用二氯甲烷/甲醇混合溶液(二氯甲烷：甲醇=10：1)洗滌濾餅。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(二氯甲烷：甲醇=20：1)得到中間體 B(300 mg，產率：57%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=226.1 中間體 C ：順式-5-(3-胺基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇
Figure 02_image435
合成途徑：
Figure 02_image436
Figure 02_image438
Figure 02_image440
步驟1：5-硝基-1H-吡唑-3-羧酸甲酯( C-1)
氮氣氛圍下，向0℃下的5-硝基-1 H-吡唑-3-羧酸(100 g, 0.637 mol)的甲醇(1000 mL)溶液中緩慢滴加氯化亞碸(348 g, 2.93 mol)。滴加完成後，將該反應混合物在0℃下攪拌10分鐘，然後升溫至70℃並在此溫度下攪拌3小時。待反應完成後，將反應混合物冷卻至室溫，減壓濃縮。將所得殘留物溶解於乙酸乙酯(1000 mL)後，用飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後過濾除去固體。將濾液減壓濃縮後得到粗產物化合物 C-1(107 g)，直接用於下一步。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=172.0 步驟2：1-(4-甲氧苄基)-3-硝基-1H-吡唑-5-羧酸甲酯( C-2)
氮氣氛圍下，向化合物 C-1(30 g, 0.18 mol)的 N,N-二甲基甲醯胺(300 mL)的溶液中加入對甲氧基苄溴(52 g, 0.26 mol)和無水碳酸鉀(48 g, 0.35 mol)。將反應混合物在50℃攪拌15小時。待反應完成後，將反應混合物冷卻到室溫，過濾除去固體並將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過打漿(石油醚：乙酸乙酯=10：1)收集固體。將固體烘乾後得到化合物 C-2(36 g, 71%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=309.0 步驟3：1-(4-甲氧基苄基)-3-硝基-1H-吡唑-5-甲醇( C-3)
氮氣氛圍下，向0℃的化合物 C-2(130 g, 0.421 mol)的四氫呋喃(1.3 L)溶液中分批加入硼氫化鈉(39 g, 1.8 mol)。加入完成後，讓反應混合物自然恢復到室溫，並在室溫下攪拌15小時。待反應完成後，向反應混合物中緩慢加入冰水混合物(1 L)並攪拌30分鐘。將水相用乙酸乙酯(700 mL × 3)萃取，合併有機相並用飽和食鹽水洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥後過濾除去固體。將所得濾液減壓濃縮得到粗產物化合物 C-3(120 g)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=285.9 步驟4：1-(4-甲氧基苄基)-3-硝基-1H-吡唑-5-甲醛( C-4)
氮氣氛圍下，將草醯氯(32 mL, 0.38 mol)的二氯甲烷(500 mL)溶液冷卻至-78℃，並向反應中緩慢加入二甲基亞碸(34 mL, 0.48 mol)，並將反應混合物在-78℃攪拌1小時。向反應中滴加化合物 C-3(50 g, 0.19 mol)的二氯甲烷溶液(200 mL)，在滴加完成後將反應混合物在-78℃攪拌2小時。向反應中緩慢滴加三乙胺(131 g, 1.30 mol)，滴加完成後，將反應體系的溫度自然恢復至-20℃，並在此溫度下將反應混合物攪拌1小時。待反應完成後，向反應混合物中加水(300 mL)淬滅，並用二氯甲烷萃取(200 mL × 3)。有機相合併後使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化，得到化合物 C-4(40 g，產率：81%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 9.96 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.30 – 7.22 (m, 3H), 6.96 – 6.88 (m, 3H), 5.73 (s, 2H), 3.73 (s, 3H). 步驟5：1-(1-(4-甲氧苄基)-3-硝基-1 H-吡唑-5-基)丁-3-炔-1-醇( C-5)
氮氣氛圍下，將含有鋅粉(18 g, 0.28 mol)的四氫呋喃(240 mL)懸浮液冷卻至0℃，並向上述懸浮液中緩慢滴加炔丙基溴(16 g, 0.14 mol)。滴加完成後，將反應混合物在0℃攪拌1小時。隨後，向反應體系中加入化合物 C-4(24 g, 0.92 mol)的四氫呋喃(100 mL)溶液。滴加完成後，將反應體系的溫度緩慢恢復到室溫，並將反應混合物在室溫攪拌16小時。待反應完成後，向反應混合物中加水(300 mL)淬滅，過濾除去固體，並將濾餅用乙酸乙酯洗滌。所得濾液用乙酸乙酯(300 mL × 3)萃取後將有機相合併，使用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所的殘留物用矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化，得到化合物 C-5(20 g，產率：74%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+Na] +=324.1 步驟6：5-(1-((4-甲氧基苯基)甲基)-3-硝基吡唑-5-基)四氫呋喃-3-酮( C-6)
氮氣氛圍下，向化合物 C-5(50 g, 0.17 mol)的1,2-二氯乙烷溶液(500 mL)中緩慢加入二溴吡啶氮氧化物(57 g, 0.33 mol)的1,2-二氯乙烷溶液(500 mL)、甲磺酸(19 g, 0.20 mol) 的1,2-二氯乙烷溶液(0.2 mol/L, 1000 mL)以及三苯基膦金(I)雙三氟甲烷磺醯亞胺(3.68 g, 4.98 mmol)的1,2-二氯乙烷(36 mL)溶液。將該反應混合物在室溫下攪拌16小時。待反應完成後，向反應混合物中加入水(1000 mL)稀釋，並用二氯甲烷(200 mL × 2)萃取。有機相合併後用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物用矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化，得到化合物 C-6(29.0 g，產率：55 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+Na] +=340.1 步驟7：順式-5-(1-((4-甲氧基苯基)甲基)-3-硝基吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( C-7)
氮氣氛圍下，將化合物 C-6(16.7 g, 52.7 mmol)的四氫呋喃(170 mL)溶液冷卻至-70℃，並向反應中緩慢加入三乙基硼氫化鋰(1.0 mol/L, 130 mL, 130 mmol)，並將反應混合物在-60℃攪拌2小時。待反應完成後，向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液(300 mL)淬滅，並用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。有機相合併後用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所的殘留物用矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化，得到化合物 C-7(12.4 g，產率：78 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+Na] +=342.0 步驟8：順式-5-(1-(4-甲氧基苄基)-3-胺基吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( 中間體 C)
在氫氣氛圍下，向化合物 C-7(50 g, 0.16 mol)的四氫呋喃溶液(500 mL)中加入鈀/碳(10 g)，並將該反應混合物在室溫下攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物過濾，並將濾液減壓濃縮，得到粗產物化合物 中間體 C(40 g)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=290.1 中間體 D：順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯
Figure 02_image442
合成途徑：
Figure 02_image443
Figure 02_image445
步驟1： N-(1-叔丁基-5-(4-氧代四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺( D-1)
向化合物A-10 (25.80 g, 68.25 mmol)的二氯甲烷溶液(387 mL)中加入吡啶氯鉻酸鹽(22.00 g, 102.4 mmol)，並將該反應混合物在室溫下攪拌16小時。待反應結束後，向反應體系中加入水(400 mL)，並將混合物用二氯甲烷萃取(400 mL × 2)。將有機相合併後用飽和食鹽水(400 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(二氯甲烷：甲醇=50：1)純化得到化合物 D-1(15.0 g, 58%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=376.1 步驟2：順式- N-(1-叔丁基-5-((2 R,4 R)-4-羥基四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺( D-2)
在-65℃下，向化合物D-1 (11.00 g, 29.26 mmol)的四氫呋喃溶液(440 mL)中加入三乙基硼鋰(58.5 mL, 1.0 mol/L的四氫呋喃溶液, 58.5 mmol)，並將該反應混合物在-65℃下攪拌2小時。待反應結束後，在0℃下向反應體系中加水(100 mL)淬滅反應。然後，向反應體系中加入水(300 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯(400 mL × 2)萃取。將有機相合併後用飽和食鹽水(400 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(二氯甲烷：甲醇=100：1到1：1)純化得到化合物 D-2(10.0 g, 90%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=378.2 步驟3：順式-5-(1-(叔-丁基)-3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 中間體 D)
將化合物 D-2(10.00 g, 26.46 mmol)和4-二甲胺基吡啶(323 mg, 2.64 mmol)溶於二氯甲烷(200 mL)中，並在室溫下向以上溶液中加入吡啶(6.28 g, 79.4 mmol)和4-硝基苯基氧基甲醯氯(7.98 mg, 39.7 mmol)，並將反應混合物於室溫下攪拌16小時。待反應完成後，將混合物用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=100：1到3：7)純化得到 中間體 D(11.20 g, 78%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=543.20 實施例的製備： 實施例 1 ：順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔-丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image446
合成途徑：
Figure 02_image447
室溫下向5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯(600 mg, 1.23 mmol)的四氫呋喃溶液(20 mL)中逐滴加入叔丁基胺(902 mg, 12.3 mmol)，混合物於室溫下攪拌1小時。待反應結束後，反應混合物經乙酸乙酯萃取，合併有機相。用飽和食鹽水洗滌後，真空濃縮並乾燥，所得殘餘物透過製備HPLC (管柱：Gemini 5u C18 150 × 21.2 mm; 流動相：乙腈(30-40%)/水(0.1% 甲酸)；流速：20 mL/min)得到順式產物 實施例 1(HPLC前峰, t R=4.43 min, 150 mg，LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=421.20)和反式產物 實施例 1’(HPLC後峰, t R=4.581 min, 140 mg，產率：33%，LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=421.20)。 實施例 1A 和實施例 1B ：(3R,5R)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔-丁基胺基甲酸酯( 實施例 1A)和(3S,5S)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔-丁基胺基甲酸酯( 實施例 1B)
Figure 02_image448
順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔-丁基胺基甲酸酯( 實施例 1)經手性製備HPLC (管柱：CHIRALPAK AD-H 250 mm 20 mm, 5 μm，流動相：35% IPA (NH 4OH 0.2%)，流速：40 mL/min)拆分得到 實施例 1A(62.1 mg, 產率：11%)和 實施例 1B(66.4 mg, 產率：12%)。 實施例 1A ：
t R=2.35 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=421.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.49 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.15 (br, 1H), 4.85 (br, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.86 (br, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.75 – 2.64 (m, 1H), 1.93 (br, 1H), 1.22 (s, 9H). 實施例 1B ：
t R=4.64 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=421.2.
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.49 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.15 (br, 1H), 4.85 (br, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.85 (br, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.75 – 2.64 (m, 1H), 1.93 (br, 1H), 1.22 (s, 9H).
實施例3~11參考實施例1、1A和1B的合成方法製備得到，具體特徵分析數據如下：
實施例編號 結構 1 H NMR LC-MS (ESI), m/z: [M+H] + t R/min
3
Figure 02_image449
 / 421.2 /
3A 和 3B
Figure 02_image451
Figure 02_image453
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (d, J=8.2 Hz, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.38 (dd, J=14.7, 7.1 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.69 (m, 1H), 1.97 (m, 1H), 1.37 (m, 2H), 1.01 ( d, J=6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H). 421.2 2.59
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.51 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.05 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.39 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.69 (m, 1H), 1.94 (m, 1H), 1.37 (m, 2H), 1.02 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H). 421.2 2.86
4
Figure 02_image455
 / 421.2 /
4A 和 4B
Figure 02_image457
Figure 02_image459
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.86 (t, J=7.4 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.42 – 3.36 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 2.02 – 1.92 (m, 1H), 1.40 – 1.32 (m, 2H), 1.02 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H). 421.2 2.59
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.79 (s, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.05 (d, J=8.3 Hz, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.86 (t, J=7.6 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.42 – 3.36 (m, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 2.01 – 1.91 (m, 1H), 1.41 – 1.31 (m, 2H), 1.01 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3H). 421.2 2.93
5
Figure 02_image461
 / 433.2 /
5A 和 5B
Figure 02_image463
Figure 02_image465
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.51 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.23 – 7.08 (m, 2H), 6.58 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (t, J=7.6 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.01 – 2.95 (m, 1H), 2.75 – 2.66 (m, 1H), 2.00 – 1.91 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.7 Hz, 3H), 0.86 – 0.78 (m, 1H), 0.40 – 0.21 (m, 3H), 0.13 – 0.07 (m, 1H). 433.2 2.80
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.51 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.20 – 7.08 (m, 2H), 6.57 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.02 – 2.95 (m, 1H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 1.99 – 1.90 (m, 1H), 1.07 (d, J=7.2 Hz, 3H), 0.85 – 0.77 (m, 1H), 0.41 – 0.21 (m, 3H), 0.13 – 0.07 (m, 1H). 433.2 3.11
6
Figure 02_image467
6A 和 6B
Figure 02_image469
Figure 02_image471
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.18 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.87 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.02 – 2.95 (m, 1H), 2.73 – 2.65 (m, 1H), 2.00 – 1.92 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.86 – 0.78 (m, 1H), 0.40 – 0.21 (m, 3H), 0.14 – 0.06 (m, 1H). 433.2 2.81
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.17 (d, J=8.5 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 3.03 – 2.95 (m, 1H), 2.75 – 2.66 (m, 1H), 2.02 – 1.91 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.88 – 0.79 (m, 1H), 0.39 – 0.22 (m, 3H), 0.13 – 0.08 (m, 1H). 433.2 3.10
7
Figure 02_image473
 / 419.2 /
7A 和 7B
Figure 02_image475
Figure 02_image477
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (t, J=7.6 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.73 – 2.66 (m, 1H), 1.96 – 1.88 (m, 1H), 1.24 (s, 3H), 0.61 (s, 2H), 0.49 – 0.46 (m, 2H). 419.2 2.90
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.56 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (t, J=7.6 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.84 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.73 – 2.64 (m, 1H), 1.96 – 1.88 (m, 1H), 1.24 (s, 3H), 0.61 (s, 2H), 0.49 – 0.46 (m, 2H). 419.2 3.31
8
Figure 02_image479
 (400 MHz, CD 3OD) δ 6.90 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 5.20 (ddt, J=6.3, 3.9, 1.8 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.42 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 4.06 – 4.02 (m, 1H), 3.99 – 3.95 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 2.75 (s, 3H), 2.67 (ddd, J=14.4, 8.3, 6.5 Hz, 1H), 2.23 (dd, J=14.0, 4.6 Hz, 1H), 1.32 (s, 6H). 435.2
9
Figure 02_image481
 / 433.2 /
9A 和 9B
Figure 02_image483
Figure 02_image485
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.73 – 2.66 (m, 1H), 2.28 – 2.18 (m, 2H), 1.99 – 1.89 (m, 1H), 1.83 – 1.76 (m, 2H), 1.75 – 1.67 (m, 2H), 1.32 (s, 3H). 433.2 3.05
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.73 – 2.66 (m, 1H), 2.28 – 2.18 (m, 2H), 1.99 – 1.89 (m, 1H), 1.83 – 1.76 (m, 2H), 1.75 – 1.67 (m, 2H), 1.32 (s, 3H). 433.2 3.39
10
Figure 02_image487
 / 435.2 /
10A 和 10B
Figure 02_image489
Figure 02_image491
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.22 (t, J=6.3 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.87 (t, J=8.3 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.89 – 3.83 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.79 (d, J=6.5 Hz, 2H), 2.74 – 2.69 (m, 1H), 2.00 – 1.92 (m, 1H), 0.81 (s, 9H). 435.2 2.47
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.21 (t, J=6.3 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.17 (s, 1H), 4.85 (t, J=8.3 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.89 – 3.83 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.79 (d, J=6.5 Hz, 2H), 2.74 – 2.69 (m, 1H), 2.00 – 1.92 (m, 1H), 0.81 (s, 9H). 435.2 2.79
11
Figure 02_image493
 / 433.2 /
11A 和 11B
Figure 02_image495
Figure 02_image497
 (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.80 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.22 – 5.11 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.92 – 3.84 (m, 2H), 3.73 (t, J=7.6 Hz, 1H), 3.65 (t, J=7.8 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.68 – 2.59 (m, 1H), 2.08 – 2.02 (m, 1H), 1.96 – 1.91 (m, 2H), 1.38 (d, J=4.9 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H). 433.2 1.74
(400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.50 (s, 1H), 10.80 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 5.22 – 5.11 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.94 – 3.83 (m, 2H), 3.72 (t, J=7.6 Hz, 1H), 3.65 (t, J=7.8 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 2.70 – 2.59 (m, 1H), 2.09 – 2.00 (m, 1H), 1.96 – 1.91 (m, 2H), 1.38 (d, J=4.9 Hz, 3H), 1.26 (s, 3H). 433.2 2.07
。
上表中實施例3~7和9~10透過手性製備(CHIRALPAK IC 250mm x 20 mm，5 μm， 40% MeOH(0.2% NH 4OH), 流速：40 g/min)分離得到對應的單一構型化合物；實施例11透過手性製備(CHIRALPAK OJ-H 250mm x 20 mm, 5 μm， 40% MeOH(0.2% NH 4OH), 流速：40 g/min)分離得到對應的單一構型化合物。 實施例 12 ：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image499
合成途徑：
Figure 02_image500
Figure 02_image502
步驟1：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 12-2)
氮氣保護下，向化合物 12-1(0.135 g, 1.07 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中，加入HATU (0.446 g, 1.17 mmol)，並將反應混合物在25℃下攪拌0.5小時。然後向體系中加入 N,N-二異丙基乙基胺(0.252 g, 1.95 mmol)和 中間體 B(0.22 g, 0.98 mmol)。將反應體系升溫至50℃並攪拌2小時。反應完全後，加水(20 mL)稀釋，混合物用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到化合物 12-2(0.24 g, 產率：73%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=333.9 步驟2：順式-5-(1-(叔丁基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 12-3)
氮氣保護下，向化合物 12-2(0.24 g, 0.72 mmol)的二氯甲烷(3 mL)和四氫呋喃(3 mL)混合溶液中，加入氯甲酸-4-硝基苯酯(0.218 g, 1.08 mmol)、吡啶(0.171 g, 2.16 mmol)和4-二甲胺基吡啶(9.0 mg, 0.070 mmol)，並將反應混合物於室溫下攪拌16小時。待反應完成後，向反應體系加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除掉固體然後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到化合物 12-3(0.20 g, 產率：55 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=499.2 步驟3：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 12-4)
將化合物 12-3(0.20 g, 0.40 mmol)溶於甲酸(4 mL)溶液中，並將反應混合物升溫至85℃，然後攪拌2小時。反應結束後將反應液減壓濃縮，所得殘餘物為粗產物化合物 12-4(0.15 g)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=442.8 步驟4：順式-5-(3-(1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 12)
室溫下，向化合物 12-4(0.15 g, 0.34 mmol)的四氫呋喃(3 mL)溶液中加入叔丁胺(0.248 g, 3.39 mmol)，並將反應混合物於室溫下攪拌16小時。待反應結束後，將反應液直接減壓濃縮，所得殘餘物透過製備HPLC分離純化(管柱：Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%三氟乙酸)；梯度：30%-40%)，得到 實施例 12。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=376.9 實施 12A和 實施例 12B：
(3 S,5 S)-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 12A)和(3 R,5 R)-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 12B)
Figure 02_image503
實施例12經手性製備HPLC (管柱：CHIRALPAK WHELK-01 250 mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：50 mL/min)拆分得到 實施例 12A(11.5 mg, 產率：16%)和 實施例 12B(14.2 mg, 產率：20%)。 實施例 12A：
t R=3.08 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=376.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.54 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.98 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.25 – 5.19 (m, 1H), 5.08 – 5.01 (m, 1H), 4.19 (s, 3H), 4.08 – 4.04 (m, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 2.79 – 2.70 (m, 1H), 2.20 – 2.12 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 12B ：
tR=3.31 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H]+=376.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.48 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.92 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.21 – 5.14 (m, 1H), 5.02 – 4.95 (m, 1H), 4.13 (s, 3H), 4.01 (d, J=10.2 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=10.3, 4.5 Hz, 1H), 2.75 – 2.63 (m, 1H), 2.16 – 2.06 (m, 1H), 1.25 (s, 9H).
實施例14-15參考實施例1、1A和1B的合成方法製備得到，具體特徵分析數據如下：
實施例編號 結構 1 H NMR (400 MHz, CD 3OD ) LC-MS (ESI), m/z: [M+H] + t R /min
14
Figure 02_image504
 / 407.0 /
14A 和 14B
Figure 02_image506
Figure 02_image508
 δ 6.62 (s, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.04 (t, J=9.9 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.98 – 3.93 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.77 – 2.70 (m, 1H), 2.19 – 2.11 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 407.0 2.09
δ 6.62 (s, 1H), 6.35 (s, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.04 (s, 1H), 4.04 (t, J=9.9 Hz, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.98 – 3.93 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.77 – 2.70 (m, 1H), 2.19 – 2.11 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 407.0 2.35
15
Figure 02_image510
 / 421.1 /
15A 和 15B
Figure 02_image512
Figure 02_image514
 δ 7.45 (d, J=1.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.66 (t, J=5.4 Hz, 2H), 3.97 – 3.91 (m, 1H), 3.87 – 3.81 (m, 1H), 3.65 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.66 – 2.58 (m, 1H), 2.08 – 1.99 (m, 1H), 1.18 (s, 9H). 421.1 3.20
δ 7.45 (d, J=1.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.51 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.92 (s, 1H), 4.66 (t, J=5.4 Hz, 2H), 3.97 – 3.92 (m, 1H), 3.87 – 3.81 (m, 1H), 3.65 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.18 (s, 3H), 2.66 – 2.57 (m, 1H), 2.08 – 1.99 (m, 1H), 1.18 (s, 9H). 421.1 6.06
。
上表中實施例14透過手性製備(CHIRALPAK WHELK-01 250 mm x 20 mm, 5 μm m，流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：50 mL/min)分離得到對應的單一構型化合物；實施例15透過手性製備(CHIRALPAK AD-H 250 mm 20 mm, 5 μm，流動相：35% 異丙醇(0.2%氨水)，流速：40 g/min)分離得到對應的單一構型化合物。 實施例 18 ：順式- N-(5-(4-((4-異丙基吡啶-2-基)四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺 合成途徑：
Figure 02_image516
Figure 02_image518
Figure 02_image520
步驟1：2-氟-4-(丙-1-烯-2-基)吡啶( 18-2)
在室溫下，向化合物 18-1(3.35 g, 19.0 mmol)和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3-二氧雜硼烷(9.58 g, 56.9 mmol)的1,4-二氧六環/水(24 mL)溶液中加入碳酸鉀(7.88 g, 56.9 mmol)和1,1'-雙二苯基膦二茂鐵二氯化鈀(0.70 g, 0.95 mmol)。氬氣氛圍下，將該反應混合物在70℃攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物冷卻至室溫，加入水(150 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(150 mL × 2)萃取。將有機相合併後用飽和食鹽水(200 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，並過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(乙酸乙酯：石油醚=1：9)純化得到化合物 18-2(1.1 g，產率：42%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=138.1 步驟2：2-((5-(1-(叔丁基)-5-硝基-1H-吡唑-3-基)四氫呋喃-3-基)氧基)-4-(丙-1-烯-2-基)吡啶( 18-3)
在0℃下，向化合物 18-2(250 mg, 1.82 mmol)和5-(1-叔丁基-5-硝基吡唑-3-基)四氫呋喃-3-醇( A-8, 512 mg, 2.00 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中加入氫化鈉(60%, 1.83 g, 4.56 mmol)。將該反應混合物在80℃攪拌16小時。待反應完成後，在0℃下用水淬滅反應。將淬滅後的混合物加水(100 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。將有機相合併後用水(100 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，並過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，得到化合物 18-3(284 mg，產率：42%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=373.2 步驟3：1-(叔丁基)-3-(-4-((異丙基吡啶-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)-1H-吡咯-5-胺(化合物 18-4)
在氫氣氛圍下，向化合物 18-3(300 mg, 0.804 mmol)的四氫呋喃/水(5 mL)溶液中加入鈀/碳(300 mg, 2.82 mmol)和氫氧化鈀/碳(300 mg, 2.09 mmol)。將該反應混合物在100℃攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物過濾，並用二氯甲烷/甲醇混合溶液(二氯甲烷：甲醇=10：1)洗滌濾餅。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(乙酸乙酯：石油醚=1：9)純化得到化合物 18-4(220 mg，產率：79%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=345.3 步驟4：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-((4-異丙基吡啶-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 18-5)
向5-(甲氧基甲基)-2-甲基吡唑-3-羧酸(50 mg, 0.29 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(145 mg, 0.382 mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌30分鐘。向反應體系中加入 N,N-二異丙基乙胺(76 mg, 0.59 mmol)和化合物 18-4(111 mg, 0.322 mmol)，並將反應混合物在室溫下攪拌2小時。待反應完成後，將反應混合物冷卻至室溫，加入水(100 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。將有機相合併後用飽和食鹽水(150 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，並過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析(乙酸乙酯：石油醚=3：2)純化得到化合物 18-5(90 mg，產率：62%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=497.2 步驟5：順式- N-(5-(4-((4-異丙基吡啶-2-基)四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 實施例 18)
將化合物 18-5(80 mg, 0.16 mmol)加入甲酸(3 mL)中，將該反應混合物在40℃攪拌16小時。待反應完成後，將反應混合物冷卻至室溫，加入水(100 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取。將有機相合併後用飽和食鹽水(150 mL × 2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，並過濾除去固體。將濾液減壓濃縮，所得殘留物經製備HPLC純化(管柱：Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%甲酸)；梯度：0-35%)，得到化合物 實施例 18。LC-MS (ESI), m/z: [M + H] +=441.2 實施例 18A 和 實施例 18B ：
N-(5-((2R,4R)-4-((4-異丙基吡啶-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-胺基甲酸酯和 N-(5-((2S,4S)-4-((4-異丙基吡啶-2-基)氧基)四氫呋喃-2-基)-1 H-吡唑-3-基)-3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1 H-吡唑-5-胺基甲酸酯
Figure 02_image521
將實施例18經手性製備HPLC (管柱：CHIRALPAK OJ-H 250 mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%乙醇/0.2%氨水；流速：50 mL/min)進一步拆分得到 實施例 18A(27 mg, 產率：36%)和 實施例 18B(25 mg, 產率：34 %)。 實施例 18A ：
t R= 2.22 min
LC-MS (ESI), m/z: [M + H] +=441.2
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.55 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.05 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.90 (dd, J=5.3, 1.2 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.98 (t, J=6.8 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 4.03 – 3.96 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.89 – 2.75 (m, 2H), 2.15 – 2.05 (m, 1H), 1.17 (d, J=6.9 Hz, 6H). 實施例 18B：
t R= 2.90 min
LC-MS (ESI), m/z: [M + H] +=441.2
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.55 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 8.05 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.90 (dd, J=5.3, 1.2 Hz, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.56 (s, 1H), 4.98 (t, J=6.8 Hz, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 4.03 – 3.96 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.88 – 2.74 (m, 2H), 2.15 – 2.06 (m, 1H), 1.17 (d, J=6.9 Hz, 6H). 實施例 20:順式-5-(3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image522
合成途徑：
Figure 02_image523
Figure 02_image524
Figure 02_image525
步驟1：2,2-二氟-2-((5-(甲氧基羰基)-1-甲基-1H-吡唑-3-基)氧基)乙酸( 20-3)
室溫下，向化合物 20-1(1.0 g, 6.4 mmol)的1,4-二氧六環(20 mL)溶液中，加入氫化鈉(0.384 g , 9.61 mmol)。反應混合物在25℃下攪拌30分鐘後，加入2-溴-2,2-二氟乙酸鈉(1.89 g , 9.61 mmol)，將混合物升溫至80℃攪拌16小時。待反應完全後，加入1,4-二氧六環(50 mL)稀釋。將混合物抽濾，濾液減壓濃縮。得到的固體中加入鹽酸二氧六環溶液(4.0 mol/L)，室溫攪拌2分鐘，然後減壓濃縮除去溶劑，所得殘餘物用水(50 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取，將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物透過製備HPLC分離得到產物化合物 20-3(1.10 g，產率：68%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=251.1 步驟2：1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-羧酸甲酯( 20-4)
室溫和氮氣保護條件下，向化合物 20-3(0.50 g, 2.0 mol)的氘代氯仿(10 mL)溶液中加入二氟化氙(1.0 g, 6.0 mol)。反應體系在超聲下室溫反應2分鐘，然後在25℃攪拌下20分鐘。反應結束後，向反應體系中加水(50 mL)稀釋，並將混合物用氯仿(50 mL × 2)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化得到化合物 20-4(0.30 g，產率：67%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=225.0 步驟3：1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-羧酸( 20-5)
於25℃下，向化合物 20-4(0.30 g, 1.34 mmol)的甲醇(5 mL)和水(5 mL)混合溶液中，加入氫氧化鈉(0.16 g, 4.0 mmol)。將反應混合物於25℃攪拌2小時。待反應完成後，向體系中加入稀鹽酸(1.0 mol/L)調整pH=5，並將混合物用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得粗產物化合物 20-5(0.25 g)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=211.1 步驟4：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺( 20-6)
氮氣保護下，向化合物 20-5(0.25 g, 1.2 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中，加入HATU(0.547 g, 1.44 mmol)，反應混合物在25℃下攪拌0.5小時。然後，向反應體系中加入 N,N-二異丙基乙基胺(0.464 g, 3.60 mmol)和中 間體 B(0.268 g, 1.19 mmol)。升溫至50℃並攪拌2小時。反應結束後，向反應體系中加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得化合物 20-6(0.35 g, 產率：71%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=418.2 步驟5：順式-5-(1-(叔丁基)-3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基))碳酸鹽( 20-7)
氮氣保護下，向化合物 20-6(0.30 g, 0.72 mmol)的二氯甲烷(5 mL)和四氫呋喃(5 mL)混合溶液中，加入4-硝基苯氯甲酸酯(0.29 g, 1.44 mmol)，吡啶(0.17 g, 2.16 mmol)和4-二甲胺基吡啶(9.0 mg, 0.07 mmol)，並將反應混合物在25℃下攪拌16小時。待反應結束後，向反應體系中加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到化合物 20-7(0.30 g, 產率：68%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=583.2 步驟6：順式-5-(3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 20-8)
將化合物 20-7(0.28 g, 0.48 mmol)溶於甲酸(10 mL)中，升溫至90℃，攪拌2小時。待反應結束後，將反應液減壓濃縮，得粗產物 20-8(0.30 g)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=527.1 步驟7：順式-5-(3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 20)
室溫下，向化合物 20-8(0.10 g, 0.20 mmol)的四氫呋喃(3 mL)溶液中，加入叔丁胺(0.16 mg, 2.0 mmol)。將反應混合物繼續攪拌16小時。反應完成後將反應液減壓濃縮，所得殘餘物透過製備HPLC分離純化(管柱：Gemini-C18, 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水（0.1%甲酸）；梯度：30%-34%)，得到 實施例 20。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=460.9 實施例 20A和 實施例 20B：
(3 R,5 R)-5-(3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3,S5 S)-5-(3-(1-甲基-3-(三氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲醯胺)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image527
實施例20透過手性分離(層析管柱型號：CHIRALPAK AD-H 250 mm x 20 mm，5 μm；流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：40 mL/min)進一步純化得到 實施例 20A(28.1 mg, 產率：31%)和 實施例 20B(25.8 mg, 產率：28%)。 實施例 20A：
t R=1.57 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=460.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.80 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.20 – 5.14 (m, 1H), 5.01 – 4.95 (m, 1H), 4.11 (s, 3H), 4.06 – 4.01 (m, 1H), 3.97 – 3.91 (m, 1H), 2.76 – 2.67 (m, 1H), 2.16 – 2.10 (m, 1H), 1.28 (s, 9H). 實施例 20B：
t R=2.62 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=460.8
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.77 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.20 – 5.14 (m, 1H), 5.01 – 4.95 (m, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.01 (d, J=10.3 Hz, 1H), 3.91 (dd, J=10.4, 4.3 Hz, 1H), 2.75 – 2.63 (m, 1H), 2.14 – 2.06 (m, 1H), 1.26 (s, 9H). 實施例 21：順式-5-(3-(6-甲氧基甲基-4-甲基煙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image529
合成途徑：
Figure 02_image530
Figure 02_image532
Figure 02_image534
步驟1：5-溴-4-甲基吡啶-2-甲醇( 21-2)
氮氣保護下，將硼烷-四氫呋喃錯合物(0.074 L, 0.074 mol)中滴入化合 21-1(4.0 g, 0.019 mol)的四氫呋喃溶液(30 mL)中。室溫下攪拌12小時後，向反應混合物中加入飽和氯化銨水溶液(100 mL)淬滅，用二氯甲烷萃取(30 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=5：1) 純化，得到化合物 21-2(2.0 g, 產率：52%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=202.1, 204.1 步驟2：5-溴-2-甲氧基甲基-4-甲基吡啶( 21-3)
氮氣保護和0℃下，將氫化鈉(0.48 g, 0.012 mol)分批加入到化合物 21-2(2.00 g, 9.90 mmol)的四氫呋喃溶液(30 mL)中，將反應混合物在0℃攪拌0.5小時後，將碘甲烷(2.81 g, 0.012 mol)加入到反應液中，隨後移除冷浴，將反應混合物在室溫下攪拌2小時。反應完畢後，向反應體系中加入飽和氯化銨水溶液(100 mL)淬滅反應，用二氯甲烷萃取(30 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)純化，得到化合物 21-3(0.50 g, 產率：23 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=216.1, 218.1. 步驟3：6-甲氧基甲基-4-甲基煙酸叔丁酯( 21-4)
氮氣保護下，將化合物 21-3(0.30 g, 1.39 mmol)的四氫呋喃溶液(10 mL)降溫至-78℃，滴加丁基鋰(1.20 mL, 2.78 mmol)。反應液在-78℃下攪拌0.5小時，然後滴加碳酸酐二叔丁酯(0.606 g, 2.78 mmol)的四氫呋喃溶液(5 mL)，滴加完畢後繼續在-78℃下反應2小時。待反應完成後，向反應體系中加入飽和氯化銨水溶液(15 mL)，用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)，得到化合物 21-4(0.130 g, 產率：39%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=238.1 步驟4：6-甲氧基甲基-4-甲基煙酸( 21-5)
室溫下，將化合物 21-4(0.13 g, 0.55 mmol)溶於二氯甲烷(2.0 mL)中，降溫至0℃，滴加鹽酸/二氧六環溶液(4 mol/L, 5.0 ml)。將反應液保持在0℃下攪拌3小時。待反應完畢後，向反應體系中加入飽和碳酸氫鈉水溶液(10 mL)，並將反應混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，水相加鹽酸(2 mol/L)調至pH=5，再用二氯甲烷萃取 (10 mL × 3)。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮，得到化合物 21-5(95.0 mg, 產率：95%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=182.0 步驟5：順式- N-(1-叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-6-甲氧基甲基-4-甲基煙醯胺( 21-6)
氮氣保護下，向化合物 21-5(0.301 g, 1.33 mmol)的 N, N二甲基甲醯胺溶液(8 mL)中加入二環己基碳二亞胺(0.18 g, 0.87 mmol)和4-二甲胺基吡啶(81 mg, 0.67 mmol)。常溫下攪拌0.5小時，隨後加入 中間體 B(0.15 g, 0.67 mmol)，加料完成後繼續攪拌2小時。待反應完畢後，向反應體系中加入水(30 mL)淬滅反應，並用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：9)，得到化合物 21-6(0.14 g, 產率：54 %)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.0 步驟6：順式-5-(1-叔丁基)-3-(6-甲氧基甲基)-4-甲基煙醯胺基-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 21-7)
氮氣保護下，將化合物 21-6(0.15 g, 0.77 mmol)、吡啶(0.122 g, 1.54 mmol)、氯甲酸對硝基苯酯(0.19 mg, 0.93 mmol)和4-二甲胺基吡啶(9.44 mg, 0.0774 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，將反應混合物在室溫攪拌5小時。待反應完畢後，向反應體系中加入水(10 mL)淬滅反應。反應混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化，得到化合物 21-7(0.115 g, 產率：27%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=553.8 步驟7：順式-5-(3-(6-甲氧基甲基)-4-甲基煙醯胺基-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 21-8)
室溫下，將化合物 21-7(0.11 g, 0.20 mmol)溶於甲酸(3 mL)中，升溫至90℃，攪拌2小時。反應完畢後將反應液減壓濃縮，得到粗產物化合物 21-8(80 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=497.8 步驟8：順式-5-(3-(6-甲氧基甲基-4-甲基煙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯（ 實施例 21）
氮氣保護下，向化合物 21-8(80 mg, 0.16 mmol)的四氫呋喃(5 mL)溶液中加入 N, N-二異丙基乙胺(21 mg, 0.16 mmol)和叔丁胺(59 mg, 0.80 mmol)。反應液在室溫下繼續攪拌5小時。反應結束後，加入水(10 mL)淬滅反應，並用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過製備HPLC(管柱: Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%甲酸)；梯度：30-95%)分離純化得到 實施例 21(41.0 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=432.0 實施例 21A和 實施例 21B：
(3 R,5 R)-5-(3-(6-甲氧基甲基-4-甲基煙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(6-甲氧基甲基-4-甲基煙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image536
實施例21透過手性製備SFC(儀器：SFC Thar prep 80；管柱：CHIRALPAK AD-H 250mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)分離純化得到 實施例 21A(20.0 mg, 產率：29%)和 實施例 21B(19.5 mg, 產率：28%)。 實施例 21A：
t R=5.04 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=431.9
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ12.43 (s, 1H), 10.91 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.62 (brs, 1H), 5.18 – 5.10 (m, 1H), 4.90 – 4.79 (m, 1H), 4.50 (s, 2H), 91 – 3.83 (m, 2H), 3.36 (s, 3H), 2.74 – 2.67 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.01 – 1.94 (m, 1H), 1.22 (s, 9H). 實施例 21B：
t R=7.14 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=432.0
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ12.43 (s, 1H), 10.91 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.62 (s, 1H), 5.20 – 5.09 (m, 1H), 4.91 – 4.81 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.90 – 3.76 (m, 2H), 3.38 (s, 3H), 2.76 – 2.65 (m, 1H), 2.41 (s, 3H), 2.01 – 1.93 (m, 1H), 1.22 (s, 9H). 實施例 22：順式-5-(3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image537
合成途徑：
Figure 02_image539
Figure 02_image540
步驟1：順式- N-(1-叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺( 22-2)
氮氣保護下，向化合物 22-1(0.10 g, 0.60 mmol)的二氯甲烷(8 mL)中加入三乙胺(61 mg, 0.60 mmol)、1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(0.14 g, 0.60 mmol)和4-二甲胺基吡啶(73 mg, 0.60 mmol)。反應液在室溫下攪拌0.5小時後，將 中間體 B(0.14 g, 0.60 mmol)加入到反應液中，室溫下繼續反應2小時。待反應完畢後，向反應體系中加入水(15 mL)淬滅反應，並將反應混合物用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：9)得到化合物 22-2(0.12 g, 產率：53%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=375.1 步驟2：順式-5-(1-叔丁基)-3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 22-3)
氮氣保護下，將化合物 22-2(0.27 g, 0.72 mmol)，吡啶(0.114 g, 1.44 mmol)，氯甲酸對硝基苯酯(0.17 g, 0.86 mmol)和4-二甲胺基吡啶(10 mg，0.070 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中，室溫攪拌5小時。待反應完畢後，向反應體系加入水(10 mL)淬滅反應，反應混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化，得到產物化合物 22-3(0.180 g, 產率：46%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=539.8 步驟3：順式-5-(3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基) -1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 22-4)
室溫下，將化合物 22-3(0.16 g, 0.30 mmol)溶於甲酸(3 mL)中，升溫至90℃然後攪拌2小時。反應完畢後減壓濃縮反應液，得到粗產物化合物 22-4(0.120 g)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=484.1 步驟4：順式-5-(3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 22)
室溫下，向化合物 22-4(90 mg, 0.19 mmol)的四氫呋喃(5 mL)溶液中加入 N,N-二異丙基乙胺(48 mg, 0.37 mmol)和叔丁胺(68 mg, 0.93 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌5小時。待反應結束後，向反應體系中加入水(10 mL)淬滅反應，並將混合物用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)，合併有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過製備HPLC(層析管柱：Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈-水(0.1%甲酸)； 梯度：10-95%)分離純化得到 實施例 22(16.0 mg, 產率：20%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=418.2. 實施例 22A和 實施例 22B：
(3 R,5 R)-5-(3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(2-(2-甲氧基吡啶-4-基)乙醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image541
實施例22透過手性製備SFC(儀器：SFC Thar prep 80；管柱: CHIRALPAK AD-H 250mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)分離純化得到 實施例 22A(6.3 mg, 產率：8 %)和 實施例 22B(8.9 mg, 產率：11%)。 實施例 22A：
t R=3.17 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=418.2
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.95 (d, J=5.3 Hz, 1H), 6.85 (dd, J=5.3, 1.3 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.34 (brs, 1H), 5.07 (s, 1H), 4.94 – 4.83 (m, 1H), 3.94 – 3.89 (m, 1H), 3.83 (d, J=4.5 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.58 (s, 2H), 2.62 – 2.52 (m, 1H), 2.04 – 1.96 (m, 1H), 1.14 (s, 9H). 實施例 22B：
t R=5.82 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=418.2
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 8.03 (d, J=5.3 Hz, 1H), 6.92 (dd, J=5.3, 0.9 Hz, 1H), 6.77 (s, 1H), 6.43 (brs, 1H), 5.14 (s, 1H), 5.00 – 4.91 (m, 1H), 3.98 (d, J=10.3 Hz, 1H), 3.90 (d, J=3.6 Hz, 1H), 3.87 (s, 3H),3.65 (s, 2H), 2.70 – 2.59 (m, 1H), 2.07 (d, J=9.0 Hz, 1H), 1.22 (s, 9H). 實施例 23：順式-5-(3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image542
合成途徑：
Figure 02_image543
Figure 02_image544
Figure 02_image545
Figure 02_image546
步驟1：3-(羥甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯( 23-2)
氮氣保護下，將化合物 23-1(5.0 g, 0.029 mol)、碘甲烷(8.35 g, 5.90 mmol)和碳酸鉀(8.13 g, 5.90 mmol)溶於乙腈(50 mL)中。將反應體系升溫至80℃並攪拌10小時。待反應完成後，將反應混合物降至室溫，過濾，濾餅用乙腈(20 mL)淋洗。將濾液減壓濃縮，所得殘留物透過矽膠管柱層析 (石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化得到化合物 23-2(1.30 g, 產率：20%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=185.1 步驟2：3-溴甲基-1-甲基吡唑-5-甲酸乙酯( 23-3)
氮氣保護下，將化合物 23-2(0.750 g, 4.07 mmol)溶於乙腈(25 mL)中，隨後加入三溴化磷(1.65 g, 6.01 mmol)，並將反應體系升溫至80℃攪拌2小時。待反應結束後，將反應混合物冷卻至室溫，加水(100 mL)淬滅反應。繼續攪拌5分鐘後，向反應體系中加入乙酸乙酯(100 mL)。將反應混合物分液，水相用乙酸乙酯萃取(50 mL × 2)。合併的有機相飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)得到化合物 23-3(0.83 g, 產率：78%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=247.1, 249.1 步驟3：3-環丙氧基甲基-1-甲基吡唑-5-羧酸乙酯( 23-4)
室溫下，將環丙醇(0.390 g, 6.71 mol)溶於四氫呋喃(30 mL)中。將反應體系降溫至0℃後分批加入氫化鈉(269 mg, 60%, 6.71 mol)，加完後繼續攪拌0.5小時。向反應中加入化合物 23-3(0.830 g, 3.35 mol)，在室溫下攪拌10小時。反應結束後加水(100 mL)淬滅反應。攪拌5分鐘後，反應混合物用乙酸乙酯萃取(50 mL × 3)。合併的有機相飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到產物化合物 23-5(0.468 g, 產率：55%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=225.0 步驟4：3-環丙氧基甲基-1-甲基吡唑-5-羧酸( 23-5)
室溫下，將化合物 23-4(0.20 g, 0.89 mmol)和一水合氫氧化鋰(74.8 mg, 1.78 mmol)溶於四氫呋喃和水(10：1, 20 mL)中。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。反應結束後，向反應體系中加入水(50 ml)，隨後用稀鹽酸(1 mol/L)調整體系的pH至3-4，反應混合物用乙酸乙酯萃取(50 mL × 3)，合併的有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)純化得到化合物 23-5(0.130 g, 產率：67%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=197.1 步驟5：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 23-6)
氮氣保護下，向化合物 23-5(0.218 g, 1.11 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入HATU(0.586 g, 1.33 mmol)，將反應混合物攪拌0.5小時。然後向體系中加入 N,N-二異丙基乙基胺(0.287 g, 2.22 mmol)和 中間體 B(0.250 g, 1.11 mmol)。將反應體系升溫至50℃並攪拌2小時。反應結束後，向反應體系中加水(30 mL)稀釋，然後用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合併的有機相飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到化合物 23-6(0.250 g, 產率：56%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=404.1 步驟6：順式-5-(1-(叔丁基)-3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 23-7)
氮氣保護下，向化合物 23-6(0.25 g, 0.62 mmol)的二氯甲烷(5 mL)和四氫呋喃(5 mL)溶液中，加入4-硝基苯氯甲酸酯(0.19 g, 0.93 mmol)、吡啶(0.147 g, 1.86 mmol)和4-二甲胺基吡啶(8.0 mg, 0.066 mmol)。反應混合物於25℃下攪拌16小時。反應完成後加水(20 mL)稀釋，混合物用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。合併的有機相飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到產物 23-7(0.280 g, 產率：79%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=569.2. 步驟7：順式-5-(3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 23-8)
將化合物 23-7(0.28 g, 0.49 mmol)溶於四氫呋喃(3 mL)和甲酸(3 mL)中，並將反應混合物在70℃攪拌72小時。反應結束後將反應混合物減壓濃縮，所得殘留物透過矽膠管柱層析法(二氯甲烷：甲醇=20：1)純化得到化合物 23-8(0.100 g, 產率：40%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=523.1 步驟8：順式-5-(3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯（ 實施例 23）
室溫下，向化合物 23-8(0.10 g, 0.20 mmol)的四氫呋喃溶液(3 mL)中，加入叔丁胺(0.143 g, 1.96 mmol)，並將反應混合物繼續攪拌16小時。反應完全後將反應體系濃縮，所得殘餘物透過製備HPLC純化(管柱：Gemini-C18, 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%三氟乙酸)；梯度：30%-32%)，得到 實施例 23(30.0 mg, 產率：34%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=446.9. 實施例 23A和 實施例 23B：
(3 S,5 S)-5-(3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 R,5 R)-5-(3-(3-(環丙氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image547
實施例 23透過手性製備SFC (管柱：CHIRALPAK IC, 250mm x 20 mm，5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 mL/min)進一步純化得到 實施例 23A(6.4 mg, 產率：7 %)和 實施例 23B(7.1 mg, 產率：8%)。 實施例 23A：
t R=2.18 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H]+=446.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.96 (s, 1H), 6.71 – 6.54 (m, 1H), 5.27 – 5.17 (m, 1H), 5.08 – 5.00 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 4.15 (s, 3H), 4.08 – 4.04 (m, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 3.46 – 3.42 (m, 1H), 2.80 – 2.70 (m, 1H), 2.20 – 2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H), 0.64 – 0.58 (m, 2H), 0.56 – 0.50 (m, 2H). 實施例 23B：
t R=2.35 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=446.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.96 (s, 1H), 6.63 (s, 1H), 5.25 – 5.20 (m, 1H), 5.10 – 5.00 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 4.15 (s, 3H), 4.08 – 4.04 (m, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 3.46 – 3.40 (m, 1H), 2.79 – 2.69 (m, 1H), 2.20 – 2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H), 0.64 – 0.58 (m, 2H), 0.56 – 0.50 (m, 2H). 實施例 24：順式-5-(3-(4-氟-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image548
合成途徑：
Figure 02_image549
Figure 02_image550
Figure 02_image551
步驟1：1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯( 24-2)
室溫下，向化合物 24-1(2.5 g, 0.020 mol)的 N, N二甲基甲醯胺(30 mL)溶液中加入碳酸鉀(5.5 g, 0.040 mol)和碘甲烷(3.4 g, 0.020 mol)，然後在室溫下反應6小時。反應完畢後加入水(80 mL)淬滅反應。反應混合物用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物 24-2(1.80 g, 產率：58%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=141.1 步驟2：4-氟-1-甲基吡唑-5-羧酸甲酯( 24-3)
室溫下，向化合物 24-2(1.8 g, 0.013 mol)的硝基甲烷(20 mL)溶液中加入碳酸鈉(0.551 g, 5.20 mmol)和1-氯甲基-4-氟-1,4-氮鎓雙環[2.2.2]辛烷雙(四氟硼酸鹽)(5.1 g, 0.014 mol)。反應體系升溫至80℃並攪拌12小時。反應完畢後，加入水(30 mL)淬滅反應。反應混合物用二氯甲烷萃取(20 mL × 3)。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物 24-3(0.30 g, 產率：15%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=159.1 步驟3：4-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸( 24-4)
室溫下，將化合物 24-3(0.460 g, 2.91 mmol)和一水合氫氧化鋰 (0.244 g, 5.82 mmol)溶於四氫呋喃和水的混合液(10：1, 15 mL)中。反應液室溫攪拌過夜。反應完全後，加入水50 mL，隨後用稀鹽酸(1 mol/L)調整pH至3-4，混合物用乙酸乙酯萃取(50 mL × 2)。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)得到化合物 24-4(0.230 g, 產率：49%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=145.1 步驟4：順式- N-(1-叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-4-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 24-5)
氮氣保護下，向化合物 24-4(96 mg, 0.66 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(8 mL)溶液中加入HATU (0.38 g, 0.99 mmol)和 N,N-二異丙基乙基胺(0.172 g, 1.33 mmol)。將反應混合物攪拌0.5小時後向體系中加入 中間體 B(0.15 g, 0.66 mmol)。將反應體系繼續攪拌2小時。反應結束後，向反應體系中加水(30 mL)稀釋，反應混合物用二氯甲烷萃取(20 mL × 3)。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘留物透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)得到產物化合物 24-5(54 mg, 產率：23%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=517.2 步驟5：順式-5-(1-叔丁基)-3-(4-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 24-6)
氮氣保護下，將化合物 24-5(40 mg, 0.11 mmol)、吡啶(27 mg, 0.34 mmol)、氯甲酸對硝基苯酯(28 mg, 0.13 mmol)和4-二甲胺基吡啶(2.0 mg, 0.016 mmol)溶於二氯甲烷(5 mL)中，室溫下攪拌5小時。反應完畢後，加入水(10 mL)淬滅反應，反應混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)得到產物化合物 24-6(46 mg, 產率：78%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=517.2 步驟6：順式-5-(4-氟-1-甲基吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 24-7)
室溫下，將化合物 24-6(46 mg, 0.089 mmol)溶於甲酸(3 mL)中，室溫攪拌2小時。反應混合物減壓濃縮得到粗產物 24-7(50 mg)，直接用於下一步反應。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=461.1. 步驟7：順式-5-(3-(4-氟-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1 H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 24)
室溫下，向化合物 24-7(50 mg, 0.11 mmol)的四氫呋喃溶液(5 mL)中加入叔丁胺(40 mg, 0.54 mmol)和 N, N-二異丙基乙胺(28 mg, 0.21 mmol)，攪拌5小時。反應完全後，向反應體系中加入水(10 mL)淬滅反應，反應混合物用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)。合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得粗產品透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=20：1)得到 實施例 24(7.0 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=395.1. 實施例 24A和 實施例 24B：
(3 R,5 R)-5-(3-(4-氟-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(4-氟-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image552
實施例24透過手性SFC (管柱：CHIRALPAK AD-H, 250 mm x 20 mm，5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)進一步純化得到 實施例 24A(3.3 mg, 產率：9%)和 實施例 24B(3.3 mg, 產率：9%)。 實施例 24A：
tR=2.76 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=395.1
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.50 – 7.43 (m, 1H), 6.58 – 6.49 (m, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.06 – 4.96 (m, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.98 – 3.92 (m, 1H), 2.75 – 2.65 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 24B：
t R=6.23 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=395.1
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.50 – 7.43 (m, 1H), 6.58 – 6.49 (m, 1H), 5.21 (s, 1H), 5.06 – 4.96 (m, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.05 (s, 1H), 3.98 – 3.92 (m, 1H), 2.75 – 2.65 (m, 1H), 2.20-2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 25 ：順式-5-(3-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image553
合成途徑：
Figure 02_image554
Figure 02_image556
Figure 02_image558
步驟1：3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯( 25-2)
室溫下，向化合物 25-1(1.00 g, 6.30 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)溶液中加入碳酸鉀(1.74 g, 12.6 mmol)和碘甲烷(1.34 g, 9.50 mmol)，將反應混合物攪拌2小時。反應結束後加水(150 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(100 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=10：1)純化得到化合物 25-2(0.65 g, 產率：60%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ6.29 (d, J=6.0 Hz, 1H), 4.32 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 4.04 (s, 3H), 1.35 (t, J= 7.2 Hz, 3H). 步驟2：3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸( 25-3)
室溫下，向化合物 25-2(0.65 g, 38 mmol)的四氫呋喃(5 mL)和水(5 mL)混合溶液中，加入一水合氫氧化鋰(0.48 g, 11 mmol)，並將反應混合物攪拌1小時。反應結束後向體系中加入稀鹽酸(1 mol/L)調整pH至5，然後混合物用乙酸乙酯萃取(20 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物為粗產物化合物 25-3(0.48 g)。
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ13.7 (brs, 1H), 6.50 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H). 步驟3：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 25-4)
室溫下，向化合物 25-3(0.12 g, 0.83 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中加入HATU(0.380 g, 1.00 mmol)，並將反應混合物攪拌0.5小時。然後向體系中加入 N, N-二異丙基乙基胺(0.323 g, 2.50 mmol)和 中間體 B(0.19 g, 0.83 mmol)。加料完畢後將反應體系升溫至50℃並攪拌2小時。反應結束後，向反應中加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(15 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到產物化合物 25-4(0.15 g, 產率：51%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=352.2 步驟4：順式-5-(1-(叔丁基)-3-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 25-5)
室溫下，向化合物 25-4(0.15 g, 0.43 mmol)的二氯甲烷(3 mL)和四氫呋喃(3 mL)混合溶液中，加入4-硝基苯氯甲酸酯(0.17 g, 0.85 mmol)、吡啶(0.101 g, 1.28 mmol)和4-二甲胺基吡啶(5.0 mg, 0.041 mmol)，並將反應混合物繼續攪拌16小時。反應結束後，向反應體系中加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(15 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到化合物 25-5(0.120 g, 產率：54%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=516.8 步驟5：順式-5-(3-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 25-6)
室溫下，將化合物 25-5(0.12 g, 0.23 mmol)溶於甲酸(4 mL)中，隨後將反應體系升溫至90℃，並繼續攪拌1小時。反應結束後，將反應混合物冷卻至室溫，然後減壓濃縮，所得殘餘物為粗產物化合物 25-6(0.100 g)，直接用於下一步。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=460.7 步驟6：順式-5-(3-(3-氟-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 25)
室溫下，向化合物 25-6(0.10 g, 0.22 mmol)的四氫呋喃溶液(3 mL)中，加入叔丁胺(0.158 g, 2.17 mmol)，並將反應混合物攪拌16小時。反應結束後，將反應混合物減壓濃縮，所得殘餘物透過製備HPLC純化(管柱：Gemini-C18, 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%甲酸)；梯度：30%-34%)，得到 實施例 25(50.0 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=394.9 實施例 25A和 實施例 25B：
(3 R,5 R)-5-(3-(3-氟)-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(3-氟-1-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image559
實施例25透過手性SFC分離(管柱：CHIRALPAK AD-H, 250 mm x 20 mm，5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 mL/min)進一步純化得到 實施例 25A(19.4 mg, 產率：23%)和 實施例 25B(19.3 mg, 產率：23%)。 實施例 25A：
t R=2.88 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=394.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.62 (brs, 1H), 6.53 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.25 – 5.20 (m, 1H), 5.10 – 5.00 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.05 – 4.03 (m, 1H), 3.98 – 3.93 (m, 1H), 2.80 – 2.70 (m, 1H), 2.20 – 2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 25B：
t R=7.10 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=394.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ6.62 (brs, 1H), 6.53 (d, J=5.8 Hz, 1H), 5.25 – 5.20 (m, 1H), 5.10 – 5.00 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 4.05 – 4.03 (s, 1H), 3.98 – 3.93 (m, 1H), 2.80 – 2.70 (m, 1H), 2.20 – 2.10 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 26 ：順式-5-(3-(1-環丙基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image560
合成途徑：
Figure 02_image561
Figure 02_image562
Figure 02_image563
步驟1：1-環丙基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯( 26-2)
氮氣保護下，向化合物 26-1(1.00 g, 7.10 mmol)的1,2-二氯乙烷(15 mL)溶液中加入環丙基硼酸(1.22 g, 14.2 mmol)、2, 2-聯吡啶(1.29 g, 7.10 mmol)、醋酸銅(1.29 g, 7.10 mmol)和碳酸鈉(1.51 g, 14.20 mmol)。隨後將反應混合物升溫至70℃並攪拌16小時。反應結束後，向反應體系加水(100 mL)稀釋，反應液過濾，濾液用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=10：1)分離純化得到化合物 26-2(0.28 g, 產率：22%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=181.0 步驟2：1-環丙基-1H-吡唑-5-羧酸( 26-3)
室溫下，向化合物 26-2(0.20 g, 1.1 mmol)的四氫呋喃(5 mL)和水(5 mL)混合溶液中，加入一水合氫氧化鋰(0.14 g, 3.3 mmol)，將反應混合物攪拌1小時。反應結束後，向體系中加入稀鹽酸(1 mol/L)調整pH至5，然後將混合物用乙酸乙酯萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘留物為粗產物化合物 26-3(0.13 g)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=153.1 步驟3：順式- N-(1-(叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1-環丙基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 26-4)
室溫下，向化合物 26-3(0.12 g, 0.79 mmol)的 N, N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中加入HATU (0.36 g, 0.95 mmol)，並將反應混合物繼續攪拌0.5小時。然後向體系中加入 N, N-二異丙基乙基胺(0.306 g, 2.37 mmol)和 中間體 B(0.18 g, 0.79 mmol)。加料完畢後將反應體系升溫至50℃並攪拌2小時。反應結束後加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(15 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=10：1)分離純化得到產物化合物 26-4(0.15 g, 產率：53%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=360.2 步驟4：順式-5-(1-(叔丁基)-3-(1-環丙基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 26-5)
室溫下，向化合物 26-4(0.15 g, 0.42 mmol)的二氯甲烷(3 mL)和四氫呋喃(3 mL)混合溶液中加入4-硝基苯氯甲酸酯(0.17 g, 0.83 mmol)、吡啶(0.099 g, 1.2 mmol)和4-二甲胺基吡啶(5.0 mg, 0.041 mmol)，將反應混合物繼續攪拌16小時。反應結束後，向反應體系中加水(20 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(15 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到產物化合物 26-5(0.160 g, 產率：73%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=525.1 步驟5：順式-5-(3-(1-環丙基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 26-6)
室溫下，將化合物 26-5(0.16 g, 0.31 mmol)溶於甲酸(4 mL)中，隨後將反應體系升溫至85℃，繼續攪拌1小時。反應結束後將反應體系冷卻至室溫，然後將反應混合物減壓濃縮，所得殘餘物為粗產物化合物 26-6(0.120 g)，直接用於下一步。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=469.1 步驟6：順式-5-(3-(1-環丙基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 26)
室溫下，向化合物 26-6(0.10 g, 0.21 mmol)的四氫呋喃溶液(3 mL)中加入叔丁胺(0.156 g, 2.14 mmol)，攪拌16小時。反應結束後將，反應混合物減壓濃縮，所得殘餘物透過製備液相層析法分離純化(層析管柱型號：Gemini-C18, 150 x 21.2 mm，5 µm，流動相：乙腈/水(0.1%甲酸)，梯度：29%-31%)，得到 實施例 26(50.0 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=402.9. 實施例 26A和 實施例 26B：
Figure 02_image565
實施例26透過SFC手性分離(層析管柱型號：CHIRALPAK AD-H, 250 mm x 20 mm，5μm; 流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)進一步純化得到 實施例 26A(21.8 mg, 產率：25%)和 實施例 26B(20.4 mg, 產率：24%)。 實施例 26A：
t R=2.51 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=402.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.42 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.61 (brs, 1H), 5.25 – 5.12 (m, 1H), 5.05 – 4.95 (m, 1H), 4.31 – 4.19 (m, 1H), 4.04 – 3.99 (m, 1H), 3.94 – 3.89 (m, 1H), 2.75 – 2.65 (m, 1H), 2.17 – 2.05 (m, 1H), 1.25 (s, 9H), 1.15 – 1.10 (m, 2H), 1.04 – 0.98 (m, 2H). 實施例 26B：
t R=5.34 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=402.9
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ7.42 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.83 (d, J=1.7 Hz, 1H), 6.61 (brs, 1H), 5.25 – 5.20 (m, 1H), 5.05 – 4.95 (m, 1H), 4.31 – 4.19 (m, 1H), 4.04 – 3.99 (m, 1H), 3.94 – 3.89 (m, 1H), 2.75 – 2.65 (m, 1H), 2.15 – 2.05 (m, 1H), 1.25 (s, 9H), 1.15 – 1.10 (m, 2H), 1.04 – 0.98 (m, 2H). 實施例 27：順式-5-(3-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image566
合成途徑：
Figure 02_image568
Figure 02_image569
Figure 02_image570
步驟1：1-環丙基甲基吡唑-5-羧酸甲酯( 27-2)
室溫下，向化合物 27-1(2.0 g, 0.016 mol)的 N, N二甲基甲醯胺溶液(20 mL)溶液中加入碳酸銫(10 g, 0.032 mol)和溴甲基環丙烷(2.58 g, 0.019 mol)，將反應混合物室溫下攪拌6小時。反應完畢後，向反應體系中加入水(80 mL)淬滅反應，反應混合物用二氯甲烷萃取(20 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化得到產物化合物 27-2(0.850 g, 產率：29%)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ7.49 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.84 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 4.44 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 3.88 (s, 3H), 1.42 – 1.31 (m, 1H), 0.53 – 0.48 (m, 2H), 0.43 – 0.39 (m, 2H). 步驟2：1-環丙基甲基吡唑-5-羧酸( 27-3)
室溫下，向化合物 27-2(0.85 g, 4.7 mmol)的四氫呋喃(20 mL)和水(14 mL)混合溶液中，加入一水合氫氧化鋰(0.594 g, 14.2 mmol)，將反應混合物在室溫攪拌2小時。反應結束後，向體系中加入稀鹽酸(1 mol/L)調整pH至5，然後混合物用二氯甲烷萃取(20 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物為粗產物化合物 27-3(0.58 g)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=167.1 步驟3：順式- N-(1-叔丁基)-5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1H-吡唑-3-基)-1-環丙基甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 27-4)
室溫下，向化合物 27-3(0.50 g, 3.1 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中加入 N, N-二異丙基乙基胺(0.778 g, 6.02 mmol)和HATU(1.70 g, 4.52 mmol)，將反應混合物攪拌0.5小時，然後向體系中加入 中間體 B(0.678 g, 3.09 mmol)。加料完畢後反應繼續攪拌2小時。反應結束後，向反應體系中加水(30 mL)稀釋，並將混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：9)分離純化得到產物化合物 27-4(0.40 g, 產率：35%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=374.2 步驟4：順式-5-(1-叔丁基)-3-(1-環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 27-5)
室溫下，向化合物 27-4(0.40 g, 1.07 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中加入4-硝基苯氯甲酸酯(0.258 g, 1.29 mmol)、吡啶(0.170 g, 2.14 mmol)和4-二甲胺基吡啶(13.1 mg, 0.11 mmol)，反應混合物攪拌5小時。反應結束後加水(10 mL)稀釋，並將混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化得到產物化合物 27-5(0.33 g, 產率：61%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=538.8 步驟5：順式-5-(3-(1-環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 27-6)
室溫下，將化合物 27-5(0.24 g, 0.45 mmol)溶於甲酸(3 mL)中，升溫至90 ℃，攪拌2小時。反應結束後，將反應體系冷卻至室溫，然後減壓濃縮，所得殘餘物為粗產物化合物 27-6(0.180 g)，直接用於下一步。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=483.0 步驟6：順式(5-(3-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 27)
氮氣保護下，向化合物 27-6(0.15 g, 0.31 mmol)的四氫呋喃(5 mL)溶液中加入 N, N-二異丙基乙胺(60 mg, 0.47 mmol)和叔丁胺(0.40 g, 0.78 mmol)。室溫下攪拌5小時。反應結束後，向反應體系中加入水(10 mL)淬滅反應。反應混合物用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)，合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾後減壓濃縮。所得殘餘物透過製備HPLC(管柱: Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相: 乙腈/水(0.1%甲酸); 梯度：10-95%)純化得到 實施例 27(80.0 mg)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=417.1. 實施例 27A和 實施例 27B：
(3 R,5 R)-5-(3-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(1-(環丙基甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image571
實施例27透過手性SFC (儀器：SFC Thar prep 80；管柱: CHIRALPAK AD-H 250mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)分離純化得到 實施例 27A(37.7 mg, 產率：29%)和 實施例 27B(30.5 mg, 產率：24%)。 實施例 27A：
t R=2.61 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=417.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ12.50 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.47 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.16 – 5.06 (m, 1H), 4.87 – 4.76 (m, 1H), 4.35 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 3.86 – 3.73 (m, 2H), 2.72 – 2.63 (m, 1H), 1.97 – 1.88 (m, 1H), 1.28 – 1.20 (m,1H), 1.18 (s, 9H), 0.47 – 0.35 (m, 2H), 0.33 – 0.26 (m, 2H). 實施例 27B：
t R=4.75 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=417.2
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ12.50 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.47 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 5.16 – 5.06 (m, 1H), 4.87 – 4.76 (m, 1H), 4.35 (d, J= 7.1 Hz, 2H), 3.86 – 3.73 (m, 2H), 2.72 – 2.63 (m, 1H), 1.97 – 1.88 (m, 1H), 1.28 – 1.20 (m,1H), 1.18 (s, 9H), 0.47 – 0.35 (m, 2H), 0.33 – 0.26 (m, 2H). 實施例 28:順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-7-氮雜二環[2.2.1]庚烷-7-甲酸酯
Figure 02_image572
合成途徑：
Figure 02_image573
步驟1：順-5-(1-叔丁基-3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-7-氮雜二環[2.2.1]庚烷-7-甲酸酯( 28-1)
室溫下，將 中間體 D(150 mg, 0.276 mmol)、7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷鹽酸鹽(111 mg, 0.830 mmol)和DIEA(214 mg, 1.66 mmol)加入THF (2mL)中。將該混合物於40℃攪拌2小時之後冷卻至室溫。混合物經乙酸乙酯萃取，合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾除去固體。將濾液真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過矽膠管柱層析法(二氯甲烷：甲醇=15：1)純化得到化合物 28-1(110 mg，產率：80%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=501.3 步驟2：順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-7-氮雜二環[2.2.1]庚烷-7-甲酸酯( 實施例 28)
室溫下，化合物 28-1(110 mg, 0.220 mmol)加入甲酸(2mL)中。將該混合物於75℃攪拌12小時之後冷卻至室溫。將反應混合物真空濃縮並乾燥，所得殘餘物透過製備HPLC (管柱：Gemini 5u C18 150 × 21.2 mm；流動相：乙腈-水(0.1%甲酸)；梯度：40-60%；流速：20 mL/min)得到 實施例 28(45 mg，產率：46%)。 LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=445.1. 實施例 28A和 實施例 28B：
(3 R,5 R)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-7-氮雜二環[2.2.1]庚烷-7-甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-7-氮雜二環[2.2.1]庚烷-7-甲酸酯
Figure 02_image575
實施例28經手性製備SFC (管柱：CHIRALPAK-OJ，流動相：二氧化碳/甲醇(三乙胺)，流速：12.5 mL/min)拆分得到 實施例 28A(19.7 mg, 產率：88%)和 實施例 28B(23.0 mg, 產率：98%) 實施例 28A：
t R=2.09 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=445.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.48 (s, 1H), 10.80 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.19 (s, 1H), 5.04 – 5.00 (m, 1H), 4.33 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.94 – 3.86 (m, 2H), 3.27 (s, 2H), 2.69 – 2.57 (m, 1H), 2.16 – 2.02 (m, 1H), 1.60 – 1.57 (m, 4H), 1.34 (d, J= 6.7 Hz, 4H). 實施例 28B：
t R=2.73 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=445.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.47 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.24 – 5.13 (m, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.34 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.94 – 3.86 (m, 2H), 3.27 (s, 3H), 2.61 (dd, J= 14.2, 6.4 Hz, 1H), 2.08 (dd, J=13.6, 3.4 Hz, 1H), 1.60 – 1.58 (m, 4H), 1.34 (d, J =6.8 Hz, 4H). 實施例 29：順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基二環[1.1.1]戊烷-1-基胺基甲酸酯
Figure 02_image576
合成途徑：
Figure 02_image577
步驟1：順-5-(1-叔丁基-3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基二環[1.1.1]戊烷-1-基胺基甲酸酯( 29-1)
室溫下，將 中間體 D(100 mg, 0.184 mmol)和 N,N-二異丙基乙胺(71 mg, 0.55 mmol)加入THF(5 mL)中。將該混合物於室溫下攪拌0.5小時之後，加入雙環[1.1.1]戊-1-胺鹽酸鹽(33 mg, 0.28 mmol)。將該混合物於室溫下攪拌5小時。反應混合物經乙酸乙酯萃取，合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥後，過濾除去固體。將濾液真空濃縮並乾燥，所得粗產物透過製備薄層層析法(二氯甲烷：甲醇=20：1)純化得到化合物 29-1(80 mg，產率：89%). LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=487.2 步驟2：順式-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基二環[1.1.1]戊烷-1-基胺基甲酸酯( 實施例 29)
室溫下，將化合物 29-1(60 mg, 0.087 mmol)加入甲酸(5 mL)中。將該混合物於75℃攪拌2小時之後冷卻至室溫。將反應混合物真空濃縮並乾燥，所得殘餘物透過製備HPLC (管柱：Gemini 5u C18 150 × 21.2 mm；流動相：乙腈-水(0.1%甲酸)；梯度：40-60%；流速：20 mL/min)得到 實施例 29(28 mg，產率：44%). LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=431.2 實施例 29A和 實施例 29B：
(3 R,5 R)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基二環[1.1.1]戊烷-1-基胺基甲酸酯和(3 S,5S)-5-(3-(3-(甲氧基甲基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基二環[1.1.1]戊烷-1-基胺基甲酸酯
Figure 02_image578
實施例 29經手性製備HPLC (管柱：CHIRALPAK AD-H 250 mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：40 mL/min)拆分得到 實施例 29A(9.1 mg, 產率：65%)和 實施例 29B(9.9 mg, 產率：71%)。 實施例 29A：
t R=1.61 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=431.2
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.51 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.16 (dd, J=6.8, 3.4 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.76 – 2.67 (m, 1H), 2.36 (s, 1H), 1.91 (m, 7H). 實施例 29B：
t R=2.81 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=431.2
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.51 (s, 1H), 10.79 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 5.16 (dd, J=6.8, 3.4 Hz, 1H), 4.87 (s, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.28 (s, 3H), 2.76 – 2.67 (m, 1H), 2.36 (s, 1H), 1.91 (m, 7H). 實施例 30：順式-5-(3-(1-( S)-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-( S)-1-甲基-1-環丙基甲基)胺基甲酸酯
Figure 02_image579
合成途徑：
Figure 02_image580
Figure 02_image581
Figure 02_image582
步驟1：順式- N-(5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1-(4-甲氧苄基)-1H-吡唑-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺( 30-2)
將2-甲基吡唑-3-羧酸(140 mg, 1.11 mmol)和 中間體 C(321 mg, 1.11 mmol)溶於二氯乙烷中，在室溫下向攪拌中的反應混合物中加入三乙胺(337 mg, 3.33 mmol)和1-丙基磷酸酐(706 mg, 2.22 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌5小時。反應結束後，用二氯甲烷萃取，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥。過濾後，減壓濃縮濾液。殘餘物透過矽膠管柱層析純化(二氯甲烷：甲醇=92：8)，得到化合物 30-2(170 mg, 產率：38%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=398.1 步驟2：順式-5-(1-(4-甲氧苄基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(4-硝基苯基)碳酸酯( 30-3)
室溫下，向化合物 30-2(160 mg, 0.403 mmol)和4-二甲胺基吡啶(4.0 mg, 0.033 mmol)在二氯甲烷(5 mL)中的懸濁液中加入吡啶(96 mg, 1.2 mmol)和對硝基苯基氯甲酸酯(162 mg, 0.806 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時。反應結束後，將反應液直接旋乾，殘餘物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=0~3：7)，得到化合物 30-3(200 mg，產率：88%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=563.0 步驟三：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基 (4-硝基苯基)碳酸酯( 30-4)
將化合物 30-3(200 mg, 0.357 mmol)溶於三氟乙酸(3 mL)中，並將反應混合物在75℃下攪拌16小時。反應混合物冷卻至室溫後，減壓濃縮得到化合物 30-4(120 mg，產率：76%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=443.1 步驟四：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基 (1-( S)-甲基環丁基)胺基甲酸酯( 實施例 30)
將(1S)-1-環丙基乙胺(58 mg, 0.68 mmol)溶於四氫呋喃中，加入 N,N-二異丙基乙胺(175 mg, 1.36 mmol)。在室溫下攪拌反應半小時後加入化合物 30-4(60 mg, 0.14 mmol)，繼續攪拌16小時。反應結束後，加入水，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，有機相減壓濃縮濾液，殘餘物經製備HPLC純化得到 實施例 30(15 mg，29%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1. 實施例 30 A和 實施例 30B：
(3 R,5 R)-5-(3-(1-( S)-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-( S)-1-甲基-1-環丙基甲基)胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(1-( S)-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-( S)-1-甲基-1-環丙基甲基)胺基甲酸酯
Figure 02_image583
實施例 30經手性製備SFC (管柱：CHIRALPAK-AD；流動相：二氧化碳/異丙醇(甲酸)；流速：1.8 mL/min)拆分得到 實施例 30A(5.0 mg, 產率：67%)和 實施例 30B(4.9 mg, 產率：65%)。 實施例 30A：
t R=11.61 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.53 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.17 (d, J= 13.8 Hz, 2H), 6.56 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.03 – 2.94 (m, 1H), 2.74 – 2.66 (m, 1H), 1.97 (s, 1H), 1.10 (d, J= 6.6 Hz, 3H), 0.86 – 0.79 (m, 1H), 0.41 – 0.29 (m, 2H), 0.28 – 0.21 (m, 1H), 0.14 – 0.06 (m, 1H). 實施例 30B：
t R=14.13 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.49 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 7.17 (d, J= 11.3 Hz, 2H), 6.58 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 3.03 – 2.94 (m, 1H), 2.75 – 2.66 (m, 1H), 2.01 – 1.91 (m, 1H), 1.10 (d, J=6.6 Hz, 3H), 0.87 – 0.77 (m, 1H), 0.41 – 0.28 (m, 2H), 0.28 – 0.21 (m, 1H), 0.14 – 0.06 (m, 1H). 實施例 31：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-甲基環丁基)胺基甲酸酯
Figure 02_image585
合成途徑：
Figure 02_image586
將1-甲基環丁烷-1-胺(115 mg, 1.36 mmol)溶於四氫呋喃後加入 N,N-二異丙基乙胺(263 mg, 2.03 mmol)。在室溫下攪拌反應半小時後加入化合物 12-4(60 mg, 0.14 mmol)，並將反應混合物在室溫下攪拌16小時。反應結束後，向反應體系和中加入水，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，有機相減壓濃縮濾液，殘餘物經得到化合物 實施例 31(10 mg，19%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1. 實施例 31A和 實施例 31B：
(3 R,5 R)-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-甲基環丁基)胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(1-甲基環丁基)胺基甲酸酯
Figure 02_image587
實施例31經手性製備SFC (管柱：CHIRALPAK-AD；流動相：二氧化碳/異丙醇(二乙胺)；流速：0.8 mL/min)拆分得到 實施例 31A(3.5 mg, 產率：70%)和 實施例 31B(3.5 mg, 產率：70%)。 實施例 31A：
t R=3.44 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 2.74 – 2.65 (m, 1H), 2.27 – 2.18 (m, 2H), 1.95 (s, 1H), 1.85 – 1.77 (m, 2H), 1.75 – 1.67 (m, 2H), 1.32 (s, 3H). 實施例 31B：
t R=14.65 min.
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=389.1
1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ 12.52 (s, 1H), 10.81 (s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.59 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 4.85 (s, 1H), 4.09 (s, 3H), 3.86 (s, 2H), 2.74 – 2.65 (m, 1H), 2.28 – 2.17 (m, 2H), 1.95 (s, 1H), 1.85 – 1.76 (m, 2H), 1.75 – 1.65 (m, 2H), 1.32 (s, 3H) . 實施例 32：順式(3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image589
合成途徑：
Figure 02_image591
Figure 02_image592
Figure 02_image593
步驟1：1-甲基-1 H-吡唑-5-甲酸乙酯( 32-2)
於室溫下，將化合物1H-吡唑-5-甲酸乙酯(1.1 g，7.9 mmol)溶於 N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)中。向反應中加入碳酸鉀(2.1 g, 16 mmol)和碘甲烷(1.4 g, 9.4 mmol)並將反應混合物在室溫下攪拌12小時。液質檢測反應完畢後，向反應體系中加水(30 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物 32-2(560 mg，產率：46%)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=155.1 步驟2：3,4-二碘-1-甲基-1H-吡唑-5-羧酸乙酯( 32-3)
於室溫下，將化合物 32-2(500 mg, 3.24 mmol)溶於四氯化碳(8 mL)中。向反應中加入碘(1.65 g, 6.48 mmol)、碘酸(570 mg, 3.24 mmol)、醋酸(19 mg, 0.32 mmol)和硫酸(106 mg, 0.32 mmol)，並將反應混合物在80℃下攪拌2小時。反應完畢後，向反應體系加水(30 mL)稀釋，並將混合物用乙酸乙酯萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水(10 mL)洗滌，減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法純化(石油醚：乙酸乙酯=1：1)得到化合物 32-3(1.3 g，產率：98%)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=406.8 步驟3：1-甲基吡唑-3,4-二氘-5-羧酸( 32-4)
於室溫下，將化合物 32-3(300 mg, 0.739 mmol)溶於氘代氫氧化鈉(99.5%氘代)的氘水溶液(40%濃度，5 mL)中，加入鋅粉(4.7 mg, 0.073 mmol)，並將混合物在80℃下攪拌1小時。待反應完成後，將反應混合物減壓濃縮，得到粗產物化合物 32-4(80 mg)。
1H NMR (400 MHz, CDCl 3) δ 4.21 (s, 3H). 步驟4：順式- N-(5-羥基四氫呋喃-2-基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-3-基)-1-甲基-1H-吡唑-3,4-二氘-5-甲醯胺( 32-5)
氮氣保護下，在室溫下將化合物 32-4(80 mg, 0.70 mmol) 的 N,N-二甲基甲醯胺溶液(5 mL)中加入 N,N-二異丙基乙胺(181 mg, 1.40 mmol)和2-(7-氮雜苯并三氮唑)- N,N ， N' ， N'-四甲基脲六氟磷酸酯(533 mg, 1.40 mmol)，反應液在室溫下攪拌0.5小時後，將順式-5-(3-胺基-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-醇( 中間體 C，203 mg, 0.702 mmol)加入。將該反應混合物在室溫下攪拌2小時。液質檢測反應完畢後，向反應體系和中加水(15 mL)稀釋，並將混合物用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併的有機相經飽和食鹽水(10 mL)洗滌，減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=5：1)得到化合物 32-5(120 mg，產率：43 %)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=400.0 步驟5：順式-5-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基-(4-硝基苯基)碳酸酯( 32-6)
氮氣保護下，在室溫下將化合物 32-5(120 mg, 0.30 mmol)、吡啶(72 mg，0.65 mmol)，氯甲酸對硝基苯酯(74 mg, 0.39 mmol)和4-二甲胺基吡啶(4.0 mg, 0.033 mmol)溶於二氯甲烷(10 mL)中。將反應混合物在室溫攪拌5小時。液質監控反應完畢後，加入水(10 mL)稀釋，並用二氯甲烷萃取(10 mL × 3)，合併的有機相用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，減壓濃縮，所得殘留物經過矽膠管柱層析純化(石油醚：乙酸乙酯=2：1)純化得到化合物 32-6(150 mg，產率：89 %)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=565.0 步驟6：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 32-7)
在室溫下，將化合物 32-6(150 mg, 0.266 mmol)溶於三氟乙酸(3 mL)中，90℃下攪拌2小時，反應完畢後將反應液減壓濃縮得到粗產物化合物 32-7(100 mg)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=445.0 步驟7：順式-5-(3-(1-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 32)
在室溫下，向化合物 32-7(100 mg, 0.225 mmol)的四氫呋喃溶液(5 mL)中，加入 N， N-二異丙基乙胺(60 mg，0.47 mmol)和叔丁胺(82.3 mg, 1.13 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌5小時。待反應完成後，將反應混合物加入水(10 mL)稀釋，並用二氯甲烷萃取(5 mL × 3)，飽和食鹽水(5 mL)洗滌，減壓濃縮。所得殘餘物透過製備HPLC (管柱： Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：10 – 95%乙腈-水(0.1%甲酸)；流速：20 mL/min) 純化得到 實施例 32(30 mg，產率：34%)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=379.1. 實施例 32A和 實施例 32B：
(3 R,5 R)-(3-甲基-1H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-(3-甲基-1 H-吡唑-5-甲醯胺基-3,4-二氘)-1H-吡唑-5-基四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image594
實施例32(30 mg, 0.079 mmol)經手性SFC(管柱：CHIRALPAK AD-H 250mm x 20 mm, 5 μm；流動相：40%乙醇(0.2%)氨水；流速：40 g/min)拆分得到 實施例 32A( 9.4 mg，產率：31%)和 實施例 32B( 10 mg，產率：33%)。 實施例 32A:
t R=2.7 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=379.1
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.52 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 4.93 (s, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.94 (d, J=10.2 Hz, 1H), 3.87 – 3.81 (m, 1H), 2.62 (dt, J=14.5, 7.6 Hz, 1H), 2.08 – 1.98 (m, 1H), 1.18 (s, 9H). 實施例 32B:
t R=6.1 min
LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=379.1
1H NMR (400 MHz, MeOD) δ 6.64 (s, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.05 (s, 1H), 4.18 (s, 3H), 4.06 (d, J=10.2 Hz, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 2.74 (dt, J=14.5, 7.6 Hz, 1H), 2.19 – 2.11 (m, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 33：順式-5-(3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image596
合成途徑：
Figure 02_image597
Figure 02_image598
Figure 02_image599
步驟1：1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲酸乙酯( 33-2)
在氮氣保護下，室溫下，向1 H-吡唑-5-甲酸乙酯(2.00 g, 14.3 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(20 mL)溶液中加入氘代碘甲烷(4.15 g, 28.6 mmol)和碳酸鉀(3.95 g, 28.6 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。待反應完成後，向反應混合物加水(100 mL)稀釋後過濾。濾液用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析(石油醚：乙酸乙酯=5：1)分離純化得到化合物 33-2(1.00 g, 產率：45%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=158.1 步驟2：1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-羧酸( 33-3)
在室溫下，向四氫呋喃(5 mL)和水(5 mL)混合溶液中加入化合物 33-2(500 mg, 3.18 mmol)，並將反應混合物是室溫下攪拌1小時。待反應完成後，向體系中加入稀鹽酸(1 mol/L)調整pH=5，並將酸化後的混合物用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。將合併的有機相用飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮後得到化合物 33-3(0.36 g，產率：87%)。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=130.1 步驟3：順式- N-(5-(4-羥基四氫呋喃-2-基)-1-(4-甲氧基苄基)-1H-吡唑-3-基)-1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺( 33-4)
在氮氣保護下，室溫下，向化合物 33-3(100 mg, 0.769 mmol)的 N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)- N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(354 mg, 0.931 mmol)。將該混合物在室溫下攪拌0.5小時後，加入 N,N-二異丙基乙基胺(301 mg, 2.32 mmol)和 中間體 C(224 mg, 0.775 mmol)。將反應混合物在室溫繼續攪拌2小時。待反應完成後，將反應混合物加水(20 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取。合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)純化得到化合物 33-4(220 mg，產率：70%)。
LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=401.1 步驟4：順式-5-(1-(4-甲氧基苄基)-3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 33-5)
在室溫下，向化合物 33-4(220 mg, 0.549 mmol)的二氯甲烷(3 mL)和四氫呋喃(3 mL)混合溶液中加入4-硝基苯氯甲酸酯(167 mg, 0.829 mmol)、吡啶(131 mg, 1.65 mmol)和4-二甲胺基吡啶(7 mg, 0.06 mmol)。反應混合物於室溫下攪拌16小時後，將反應混合物加水(20 mL)稀釋，並用乙酸乙酯(15 mL × 3)萃取，合併的有機相經飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮。所得殘餘物透過矽膠管柱層析法(石油醚：乙酸乙酯=1：1)分離純化得到化合物 33-5(150 mg，產率：50%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=566.1 步驟5：順式-5-(3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基(4-硝基苯基)碳酸酯( 33-6)
室溫下，將化合物 33-5(150 mg, 0.265 mmol)溶於甲酸(3 mL)中並將該反應混合物於85℃攪拌1小時。反應結束後，將反應混合物減壓濃縮，濃縮所得殘餘物即為粗產物化合物 33-6(100 mg)。該粗產物直接用於下一步反應。LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=445.8 步驟6：順式-5-(3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯( 實施例 33)
室溫下，向化合物 33-6(100 mg, 0.225 mmol)的四氫呋喃溶液(3 mL)中加入叔丁胺(164 mg, 2.25 mmol)，並將該反應混合物於室溫攪拌16小時。反應結束後，將反應體系減壓濃縮，濃縮所得殘餘物透過製備HPLC純化(管柱：Gemini-C18 150 × 21.2 mm，5 µm；流動相：乙腈/水(0.1%三氟乙酸)；梯度：30%-34%；流速：20 mL/min)，得到 實施例 33(50 mg，產率：58%)。LC-MS (ESI), m/z: [M+H] +=380.2. 實施例 33A和 實施例 33B ：
(3 R,5 R)-5-(3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯和(3 S,5 S)-5-(3-(1-(三氘代甲基)-1H-吡唑-5-甲醯胺基)-1H-吡唑-5-基)四氫呋喃-3-基叔丁基胺基甲酸酯
Figure 02_image600
將實施例33 (50 mg, 0.13 mmol)透過手性SFC層析管柱分離(管柱：CHIRALPAK  AD-H 250mm x 20 mm，5 μm；流動相：40%異丙醇(0.2%氨水)；流速：40 g/min)得到 實施例 33A(24.1 mg，產率：48%)和 實施例 33B(22.8 mg，產率：46%)。 實施例 33A：
t R=2.38 min
LC-MS (ESI) m/z: [M+H] +=380.1
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.53 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.97 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.60 (d, J=16.6 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.03 (t, J=6.3 Hz, 1H), 4.06 (d, J=10.2 Hz, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 2.77 – 2.70 (m, 1H), 2.16 (dd, J=6.1, 5.0 Hz, 1H), 1.30 (s, 9H). 實施例 33B：
t R=5.39 min
LC-MS (ESI) m/z: [M+H]+=380.1
1H NMR (400 MHz, CD 3OD) δ 7.53 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.96 (d, J=2.1 Hz, 1H), 6.58 (d, J=16.6 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.03 (t, J=6.3 Hz, 1H), 4.06 (d, J=10.2 Hz, 1H), 3.98 – 3.94 (m, 1H), 2.77 – 2.70 (m, 1H), 2.16 (dd, J=6.1, 5.0 Hz, 1H), 1.30 (s, 9H). 生物評價
以下結合測試進一步描述解釋本發明，但這些實施例並非意味著限制本發明的範圍。 一、酵素活性實驗(一)CDK1/CDK2酵素活性測試 1. 實驗目的：
測試本發明化合物CDK2/CycE1及CDK1/cyclinB的體外酵素活性。 2. 實驗儀器和試劑：
名稱 來源 Cat. No. Lot No.
CDK1/cyclinB Millipore 14-450M 25729U
CDK2/CycE1 Carna 04-165 12CBS-0569 C
Peptide18 GL 114202 P080319-XY114202
EDTA Gibco 15575-038 846901
HEPES, pH7.5 Gibco 11344-041 1653630
Triton X-100 Sigma T9284 SLBS6421
Brij-35 solution Sigma B4184 018K61251
MgCl2 Sigma M2670-500g BCBM7703V
DTT Sigma D0632-10G SLBK4951V
EGTA Sigma E3889-25G 129K54001V
96 well plate Corning 3365 22008026
384well plate Corning 3573 7419022
3. 實驗方法：
所有的化合物最初在DMSO中製備成10 mM的母液，隨後在DMSO中稀釋到50×其最終濃度，將每個DMSO稀釋液的10 µL轉移到含有90 µL 1×激酶緩衝液(50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl 2, 2 mM DTT和0.01% Brij-35)的新96孔集束板的一個孔中，然後混合10分鐘。隨後將5µL每個化合物稀釋液加入384孔盤中。在每個孔中加入10 µL含有CDK2/CycE1或CDK1/cyclinB(終濃度3 nM)的酵素溶液，混合後在室溫下培育10分鐘。隨後在每個孔中加入10 μL含有FAM標記的胜肽(最終濃度為3000nM FAM-P18(5-FAM-QSPKKG-CONH2))、ATP(最終濃度分別為77 μM或20 μM)的1×激酶緩衝液的胜肽溶液。所有反應在20-30℃培育30分鐘，然後加入25 μL終止緩衝液(100mM HEPES pH 7.5，50mM EDTA，0.2% Coating Reagent #3和0.015% Brij-35)終止。 4. 數據處理方法：
反應結束後使用Caliper EZ ReaderⅡ檢測，抑制率=[(MA-X)/(MA-MI)] ×100%，其中MA=僅DMSO對照的值，MI=無酵素對照的值，X=任何特定化合物劑量下的值。然後透過繪製劑量-反應曲線，使用XLfit計算IC 50值。 5. 實驗結果：
透過以上方案得出，本發明所示的化合物在CDK2/CycE1酵素活性實驗中，顯示出約0.01 nM至10 nM的IC 50抑制活性；本發明所示的化合物在CDK1/cyclinB酵素活性實驗中，顯示出約1 nM至1000 nM的IC 50抑制活性。
本發明實施例化合物對CDK2/CDK1抑制活性的選擇性倍數為2~1000倍；有些實施例化合物的選擇性倍數為10~30；有些實施例化合物的選擇性倍數為30~50；有些實施例化合物的選擇性倍數甚至大於50倍。 表1  本發明化合物對CDK2/CycE1和CDK1/cyclinB的抑制活性及選擇性倍數
實施例編號 CDK2/CycE1 IC 50(nM) CDK1/cyclinB IC 50(nM) CDK2/CDK1抑制選擇性倍數N （N=IC 50(CDK1)/ IC 50(CDK2)）
1A A B +++
1B A D ++++
3A A C ++++
3B A C +++
4A B D +++
4B A B +++
5A A D +++++
5B A C ++++
6A B D ++++
6B A B +++
7A A D +++++
7B A C +++
9A A C +++++
9B A B +++
10B A C +++
12A A D +++++
12B A B +++
14A A D +++++
14B A C +++
15A A C ++++
15B A D +++++
20A A B +++
20B A C ++++
21A B C +++
21B B D +++
22B A C ++++
23A A D ++++
23B A C +++
24A A C ++++
24B A D +++++
25A A B +++
25B A C +++++
26A A C ++++
26B A D +++++
27A A B +++
27B A C ++++
28A A C ++++
28B A C +++
29A A B +++
29B A C ++++
30A A C +++
30B A C +++++
31A A B +++
31B A C +++++
32A A B +++
32B A C +++++
33A A B +++
33B A C +++++
以上表格中“A”、“B”、“C”、“D”、“E”以及“+”、“++”、“+++”、“++++”、“+++++”和“++++++”表示含義如下： “A”表示IC 50≤10 nM；“B”表示10 nM＜IC 50≤50 nM；“C”表示50 nM＜IC 50≤250 nM；“D”表示250 nM＜IC 50≤1000 nM；“E”表示IC 50＞1000 nM； “+”表示1＜N≤3；“++”表示3＜N≤10；“+++”表示10＜N≤30；“++++”表示30＜N≤50；“+++++”表示N＞50。 6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物對CDK2/CycE1激酶具有良好的抑制活性，且對CDK2/CDK1激酶抑制具有良好的選擇性。 (二)CDK4/CDK6/CDK7酵素活性測試 1. 實驗目的：
測試本發明化合物CDK4/CycD1、CDK6/cycD3以及CDK7/cycH/MAT1的體外酵素活性。 2. 實驗儀器和試劑：
名稱 來源 Cat. No. Lot No.
CDK4/CycD1 ProQinase 0142-0143-1 007
CDK6/cycD3 Carna 04-107 15CBS-0744C
CDK7/cyclinH/MAT1 Millipore 14-476M WAD0131-B
Peptide8 GL 112396 P170731-SY112396
Peptide CTD3 GL SY346885 P160205-SY346885
EDTA Gibco 15575-038 846901
HEPES, pH7.5 Gibco 11344-041 1653630
Brij-35 solution Sigma B4184 018K61251
MgCl 2 Sigma M2670-500g BCBM7703V
DTT Sigma D0632-10G SLBK4951V
EGTA Sigma E3889-25G 129K54001V
96 孔反應盤 Corning 3365 22008026
384孔反應板 Corning 3573 7419022
3. 實驗方法：
本實驗透過利用螢光微流體遷移率檢測技術(Mobility-Shift Assay)，檢測小分子抑制劑對CDK4/CycD1, CDK6/cycD3和CDK7/cyclinH/MAT1激酶的抑制作用。激酶催化ATP脫去一個磷酸基團生成ADP，並將該磷酸基團轉移到基質胜肽上，該基質胜肽帶有螢光標記，其產物因增加了一個磷酸基團，所帶的電荷發生了變化，在電泳泳動過程中，受質和磷酸化的產物因遷移率不同被分開，並分別被檢測到，其量與螢光信號成正比。利用Caliper儀器測定受質與產物的量，並計算出產物的轉化率，進而計算出抑制率。
所有的化合物，用100%DMSO配製成初始濃度的50倍，轉移50 µL到384孔Echo盤中；按照客戶的需求用100%DMSO進行稀釋，轉移50 µL 100% DMSO到兩個空的孔中作為不加化合物和不加酵素的對照。使用Echo 550轉移400 nL化合物到384孔反應盤中。轉移10µL 的用1倍激酶緩衝液(50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 2 mM DTT and 0.01% Brij-35)配置的CDK4/CycD1, CDK6/cycD3和CDK7/cyclinH/MAT1 2倍激酶溶液到384孔盤反應盤中，陰性對照孔加入1倍激酶緩衝液。混勻後室溫下培育10分鐘；將FAM標記的多肽(CDK4/CycD1, CDK6/cycD3上終濃度均是3000 nM FAM-P8 ，CDK7/cyclinH/MAT1上終濃度均是3000 nM FAM-CTD3)，ATP (CDK4/CycD1, CDK6/cycD3和CDK7/cyclinH/MAT1上終濃度分別是672 µM，800 µM和70µM)加入1倍激酶緩衝液，形成2倍受質溶液；轉移10µL上述2倍受質溶液到384孔盤反應盤中起始反應；28℃下培育60分鐘，向384孔盤反應盤中加25 µL終止液(100 mM HEPES pH 7.5, 50 mM EDTA, 0.2% Coating Reagent #3 and 0.015% Brij-35)終止反應。 4. 數據處理方法：
在CaliperEZ Reader II(下游電壓：-500V，上游電壓：-2250V，基準壓力：-0.5 PSI，篩選壓力：-1.2 PSI)上讀取轉化率數據。把轉化率轉化成抑制率數據。抑制百分比=[(MA–X)/(MA–MI)]×100%。“MI”為不加酵素進行反應的對照樣孔讀數；“MA”為加入DMSO作為對照孔讀數；“X”為化合物不同孔讀數。使用Excel軟體中的XLFit(excel add-in version 5.4.0.8)擬合計算IC 50值。 5. 實驗結果：
透過以上方案得出，本發明所示的化合物對CDK4/CycD1、CDK6/CycD3和CDK7/cycH/MAT1的激酶抑制的IC 50值如表2所示。 表2 本發明化合物對CDK4/CycD1、CDK6/CycD3和CDK7/cycH/MAT1的抑制活性
實施例編號 CDK4/CycD1 IC 50(nM) CDK6/cycD3 IC 50(nM) CDK7/cycH/MAT1 IC 50(nM)
1A 3590 5130 ＞10000
3A ＞10000 ＞10000 6780
3B 3060 NA 8100
5A ＞10000 ＞10000 6610
5B NA NA 4540
7B 3190 4600 9180
9A 9300 ＞10000 6780
10B 2660 6620 8310
12B NA NA 6240
25B 9440 7380 3870
26A 5940 NA 7480
PF07104091 2000 3270 1130
“NA”表示未測試。 6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物對CDK4/CycD1、CDK6/cycD3和CDK7/cycH/MAT1的激酶抑制活性較弱；本發明實施例化合物對CDK2/CDK4、CDK2/CDK6以及CDK2/CDK7激酶抑制具有良好的選擇性。 二、細胞活性實驗1. 實驗目的：
測試本發明化合物對OVCAR-3細胞的增殖抑制活性。 2. 實驗儀器和試劑 酵素標示讀取儀：TECAN Spark 10M (TECAN)
名稱 來源 編號
OVCAR-3 ATCC HTB-161
FBS Gibco 10099141
RPMI1640 ATCC 302001
Penicillin/Streptomycin (100 x) Gibco 15140122
Insulin from bovine pancreas MNCGENE CC101
Celltiter-glo luminescent cell viability assay kit Fisher scientific G7573
3. 實驗方法
OVCAR-3培養條件：RPMI1640, 20% FBS, 1% 青黴素和鏈黴素，0.01 mg/mL牛胰島素。
第0天：將細胞種入96孔盤中，加入120 μL培養基培養過夜。
第1天：將化合物溶於DMSO中至10 mM的儲備溶液。將參考和測試化合物在DMSO中稀釋至200倍終濃度。在96孔盤中對DMSO中的化合物進行3倍稀釋至8個不同濃度，然後用細胞培養基稀釋試驗化合物40倍，在每孔細胞中加入30 μL(5×)化合物溶液。在1000 rpm下離心細胞培養盤1分鐘，然後在37°C和5%CO 2下培養細胞培養盤7天。0.5%DMSO培養基作為空白對照，0.5% DMSO培養基溶液培養的細胞作為100%對照。
第8天：細胞使用CellTiter-Glo®試劑進行檢測。 4. 數據處理：
抑制率按照以下公式計算：
抑制率=100-100*(化合物藥物處理的讀數-低對照的讀數)/(高對照的讀數-低對照的讀數)，根據公式計算IC 50。 5. 實驗結果：
透過以上方案得出，本發明實施例化合物對OVCAR-3細胞的增值抑制的IC 50如表3所示。 表3  本發明化合物對OVCAR-3細胞的增值抑制活性
實施例編號 IC 50(nM)
1A 58
3A 132
3B 173
4B 193
5A 182
5B 61
6B 57
7B 169
9A 103
9B 57
12A 112
12B 44
14B 144
20A 85
20B 195
21A 120
22A 32
22B 89
23A 169
23B 96
24A 135
25A 31
25B 137
26A 78
26B 144
27A 146
28A 71
28B 139
29A 36
29B 193
30A 39
30B 47
31A 48
31B 73
32A 63
32B 181
33A 60
33B 165
PF07104091 294
6. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物對於OVCAR-3細胞增殖具有良好的抑制活性。 三、 Caco-2 細胞滲透性實驗1. 實驗目的：
透過Caco-2細胞模型對發明化合物在給藥濃度下的滲透性進行研究。 2. 實驗儀器：
儀器名稱 型號 廠商
離心機 Heraeus MULTIFUGE X3R Thermo Fisher
電子分析天平 DENVER TB-25 丹佛儀器(北京)有限公司
質譜儀 4000 Q TRAP AB SCIEX
高效液相層析儀 LC-20AD Shimadzu
自動進樣器 RACK CHANGER II Shimadzu
3. 實驗試劑：
試劑 供應商 貨號
DMEM Gibco 11995073
FBS Gibco 10091148
PS Invitrogen 15140-122
HBSS Sigma H8264
HEPES Invitrogen 15630080
BSA VWR Life Science 0332
Nadolol LGC 15401000
Propranolol sigma P0884
Taxol Aladdine T7191
4. 實驗方法
第一步：將Caco-2細胞(ATCC)用加入10%FBS、1%PS和1%NEAA的DMEM培養液，於37°C，5% CO 2條件下在培養瓶中培養。細胞生長融合至70%~80%，將細胞用0.25%EDTA-胰蛋白酶消化，計數，用DMEM培養液稀釋至80,000個細胞/孔，細胞接種於Transwell-24孔盤，置於CO 2培養箱中培養，每隔兩到三天將培養基棄去，加入新鮮培養基，繼續於37°C，5% CO 2條件下培養，連續培養18~22天。
第二步：將TC儲備液用預熱至37°C的轉運緩衝液1000倍稀釋，混合均勻，即為受試化合物給藥溶液，給藥濃度為10 μM。將細胞培養液棄去，加入預熱至37°C的轉運緩衝液潤洗，對於頂膜側至基底側的轉運研究(轉運方向為A→B)，A側加入500 μL含對照化合物或受試化合物的給藥溶液，B側加入1300 μL轉運緩衝液。對於基底側至頂膜側的轉運研究(轉運方向為B→A)，A側加入500 μL轉運緩衝液，B側加入1300 μL含對照化合物或受試化合物的給藥溶液。細胞培養盤培育90 min。培育結束後，取樣品加入一定體積沉澱劑。振盪混勻1 min，4000 rpm/分鐘離心15 min。取上清復溶後LC-MS/MS檢測分析。
第三步：透過測定細胞單層的跨膜電阻值(TEER)來評價細胞單層的完整性，要求每個細胞孔的跨膜電阻值不小於600 Ohms。
第四步：透過LC/MS/MS方法檢測樣品中受試化合物TC和陽性對照納多洛爾、普萘洛爾、P-gp受質紫杉醇的濃度 5. 數據處理：
利用以下公式計算出TC以及陽性化合物的表觀滲透係數(Papp)以及表觀滲透係數的比率Efflux ratio(ER)。
Papp(cm/sec)=( υ•∂ C/∂ t)/(A•C)
流出比率(Efflux ratio)= Papp （ B→A ）/ Papp （ A→B ）
註：v為接收池的體積；A為轉運膜的面積；C為培育初始濃度；∂C/∂t為單位時間藥物轉運量 6. 實驗結果：
透過以上方案得出，本發明實施例化合物的滲透性實驗數據如表4所示： 表4
實施例編號 Papp （A→B ） (10 -6cm/s) Papp （B→A ） (10 -6cm/s) 流出比率
12A 15.2 23.2 1.5
12B 14.1 27.8 2.0
14B 50.2 29.7 0.6
15A 5.6 20.8 3.7
23B 7.1 33.9 4.8
26A 20.5 40.7 2.0
30A 16.5 85.9 5.2
30B 15.9 67.8 4.3
31B 27.8 76.5 2.8
32A 22.0 63.3 2.9
32B 29.0 69.6 2.4
33B 27.6 54.2 2.0
PF07104091 2.1 25.3 12
7. 實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物在Caco-2細胞模型上表現出更好的滲透性和更低的外排活性。 四、 代謝穩定性測定1. 實驗目的：
測試化合物在肝細胞中的穩定性。
種屬 性別 供應商 貨號
人肝細胞 男女混合 BioVT X008001
使用台盼藍測定冷凍保存的肝細胞的活力，並用緩衝液將細胞濃度調節至10 6個細胞/mL。在24孔盤中，將400 μL陽性對照/測試化合物溶液(培養介質中含2 μM化合物)與400 μL肝細胞(每毫升200萬個細胞)一起培養。在不同時間點(0、15、30、60、90和120分鐘)，透過將300 μL人硫酸吲哚酚(IS)添加到30 μL反應混合物中並在4°C以4000 rpm離心15分鐘，來停止反應。取100 μL上清液用LC-MS/MS分析。體外肝細胞清除率是根據化合物從其初始濃度的消除半衰期(t 1/2)來估計的。計算每種化合物（測試或對照）與IS的峰面積比。藥物消除速率常數k(min-1）、t 1/2(min)和體外固有清除率CL int(微升/分鐘/百萬細胞)根據以下等式計算：
K=-斜率
t1/2 = 0.693/k
CL int= (0.693/t 1/2)×(培養體積(μL)/細胞數(百萬))
CL in=體外CL int× (肝重(g)/體重(Kg)) × (細胞數(百萬)/肝重(g))
CL hepatic= (Q hep× F u× CL int)/(Q hep+ F u× CL int)
提取率= CL hepatic/Q hep4.實驗結果：
透過以上方案得出本發明所示的化合物在人肝穩定性試驗實驗的結果如下表5所示： 表 5
實施例編號 半衰期 t 1/2(min) 體外固有清除率 CL int （微升 / 分鐘 / 百萬細胞） 提取率
實施例1A ＞373 ＜1.9 ＜0.2
實施例12B 376 1.8 0.2
5.實驗結論：
以上數據顯示，本發明實施例化合物在人肝細胞穩定性試驗實驗中顯示出較好的代謝穩定性。 五、藥代動力學研究
實驗目的：測試化合物在比格犬體內實驗的藥代動力學
實驗材料：比格犬(雄性，Marshall Bio)
實驗操作： 3條雄性比格犬，Crossover給藥。在給藥前一天下午17點30分對比格犬進行禁食處理，給藥後4小時恢復餵食。給藥第一週期，單次前肢頭靜脈注射待測化合物，給藥劑量為1 mg/kg；洗提7天後，進行第二週期，單次口服待測化合物，給藥劑量為10 mg/kg。前肢頭靜脈注射組於給藥前，給藥結束後5 min，15 min，30 min，1 h，2 h，4 h，8 h，12 h及24 h透過頸靜脈取血。單次口服組於給藥前，給藥結束後15 min，30 min，1 h，2 h，4 h，8 h，12 h及24 h透過頸靜脈取血。取血置於EDTA-K2抗凝管中，每個時間點取800 µL全血。血樣採集後，立即放在濕冰上等待離心。樣品將在30分鐘內離心 (設置保持4度，10分鐘，3000轉/分) ，以獲得血漿。將血漿樣本分別放入2支試管 (目標為150µL/支)。取50 µL血漿加入5 µL MeOH, 然後加入200µL 含有5 ng/mL ISTD (Terfenadine)的MeOH/ACN溶液，振盪混合均勻後4000 rpm離心15 min，取上清液用MeOH/水 (1:1, v/v, 0.1% FA)稀釋5倍，使用LC-MS/MS進樣，以分析方法定量分析血藥濃度，並計算藥代參數，如達峰濃度，達峰時間，清除率，半衰期，藥時曲線下面積，生物利用度等。
實驗結果： 透過以上方案得出，本發明實施例化合物的藥代動力學數據如表6所示： 表6
編號 清除率 (mL/min/kg) 藥時曲線下面積 AUC (µM•hr) 生物利用度 F (%)
實施例12B 2.7 24.9 31
PF-07104091 32 1.1 16
實驗結論： 本發明化合物在犬中具有良好的藥代動力學參數；尤其是實施例12B，相比參比化合物PF-07104091，清除率要低9倍，暴露量高近24倍，生物利用度也是要高1倍。 六、體內藥效研究
實驗目的 評價化合物在OVCAR-3腫瘤小鼠移植模型上的體內藥效。
動物與模型 動物資訊 Balb/c裸小鼠，6-9周，雌性，購於江蘇集萃藥康生物科技有限公司。小鼠飼養於12小時光照12小時黑暗環境。接種前用小鼠耳標標記小鼠。 細胞資訊
模型 Accession ID 腫瘤類型
OVCAR-3 CVCL_0465 人卵巢癌
實驗操作
細胞培養 OVCAR-3腫瘤細胞在含20%牛血清及10 µ/mL胰島素的RPMI1640培養液中進行培養。細胞置於培養箱內，溫度37ºC，CO 2濃度5%。細胞生長進入對數期時收集並計數細胞。
細胞接種 收集1x 10 7OVCAR-3細胞重新懸浮於0.2毫升的PBS與Matrigel(1：1)的懸浮液中，並接種於每只小鼠右側背部靠右肩位置。
分組 當荷瘤小鼠腫瘤平均腫瘤體積達到150-200 mm 3時，對小鼠進行隨機分組並開始給藥。
小鼠觀察於數據採集 細胞接種後，每天檢查小鼠發病於死亡。每週測量腫瘤與小鼠體重兩次。 腫瘤體積按以下公式計算： 腫瘤體積(mm 3)=長(mm)x寬(mm)x高(mm)/2。 給藥方式：口服，每天給藥兩次，給藥週期28天。 實驗結束後安樂死動物。 用Excel等軟體處理數據，並計算化合物抑瘤率TGI(%)。 TGI(%)=(1-藥物處理組平均腫瘤體積/對照組平均腫瘤體積）x 100%
試驗結果如下表 表7 化合物的移植瘤藥效參數
編號 給藥劑量 腫瘤體積（ mm 3, Mean±SEM ） T/C(%) 抑瘤率 TGI(%)
第28天 第28天 第28天
對照組 / 1115.58±259.64 / /
實施例12B 75 mg/kg 207.18±65.39 18.57 81.43
PF-07104091 175 mg/kg 342.17±74.94 30.67 69.33
實驗結果 以上結果顯示，在OVCAR-3小鼠移植瘤模型中，實施例12B在75 mg/kg劑量下顯示出良好的腫瘤增長抑制效果；並且，顯示出比PF-07104091在175 mg/kg劑量下更好的腫瘤增長抑制效果。
Figure 111140504-A0101-11-0001-1

Claims (23)

  1. 一種通式( I )所示的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽：
    Figure 03_image001
    其中， “
    Figure 03_image004
    ”表示順式構型（即四氫呋喃環上的兩個取代基在同一側）； L選自鍵、-C(O)-、-S(O) m-、-C(O)(CH 2) n-或-(CH 2) n-； R選自氫、氘、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、-(CH 2) nOR a、-(CH 2) nSR a、-(CH 2) nNR bR a、-(CH 2) nC(O)R a、-(CH 2) nC(O)NR bR a、-(CH 2) nNR bC(O)R a、-(CH 2) nS(O) mR a、-(CH 2) nS(O) mNR bR a、-(CH 2) nS(O)(=NR b)R a、-(CH 2) nN=S(=O)R aR b或-(CH 2) nNR bS(O) mR a，所述的C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R x選自
    Figure 03_image006
    或R y； 環A選自C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，所述的C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基、5-14員雜芳基氧基、-(CH 2) nOR c、-(CH 2) nSR d、-(CH 2) nNR dR c、-O(CH 2) nNR dR c、-(CH 2) nC(O)R c、-(CH 2) nC(O)NR dR c、-(CH 2) nNR bC(O)R c、-(CH 2) nS(O) mR c、-(CH 2) nS(O) mNR dR c、-(CH 2) nS(O)(=NR d)R c、-(CH 2) nN=S(=O)R cR d或-(CH 2) nNR dS(O) mR c，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，任意兩個R 1以及它們所在的原子一起形成C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基或5-14員雜芳基，所述的C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R y選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基或C 2-6炔基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基和C 2-6炔基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R a、R b、R c和R d各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基或5-14員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-12員雜環基或5-14員雜芳基，所述的3-12員雜環基和5-14員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代；且 x為0~10的整數； n為0~10的整數； m為0、1或2。
  2. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R選自3-10員含氮雜環基、5-10員含氮雜芳基、-C(O)R a或-C(O)NR bR a，所述的3-10員含氮雜環基和5-10員含氮雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基或5-14員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-8員雜環基或5-10員雜芳基，所述的3-8員雜環基和5-10員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-12環烷基、3-12員雜環基、C 6-14芳基、5-14員雜芳基、C 3-12環烷基氧基、3-12員雜環基氧基、C 6-14芳基氧基和5-14員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代。
  3. 根據請求項1或2所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，通式( I )進一步如通式( II )所示：
    Figure 03_image014
    其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如請求項1所述； 較佳地，通式( I )進一步如通式( II A )和通式(II B )所示：
    Figure 03_image016
    Figure 03_image018
    其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如請求項1所述。
  4. 根據請求項1-3任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，所述化合物滿足如下條件種的一種或多種： (1) 環A選自5-6員單環雜芳基、8-10員雙環稠雜環基或8-10員雙環稠雜芳基；較佳地，所述環A選自吡唑基或吡唑并5-6員雜芳基；更佳地，所述環A選自吡唑基、吡啶基或吡唑并嘧啶基；例如，
    Figure 03_image020
    、
    Figure 03_image022
    、
    Figure 03_image024
    、
    Figure 03_image026
    或
    Figure 03_image028
    ； (2) L為鍵、-C(O)-或-C(O)CH 2-； (3) 所述R a選自氫或甲基；所述R b選自甲基、乙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基或雙環[1.1.1]戊烷基，所述的甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基和雙環[1.1.1]戊烷基，任選地進一步被甲基、乙基、異丙基或叔丁基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷，任選地進一步被一個或多個甲基所取代；較佳地，
    Figure 03_image034
    為
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image038
    、
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image042
    、
    Figure 03_image044
    、
    Figure 03_image046
    、
    Figure 03_image048
    或
    Figure 03_image050
    ；例如
    Figure 03_image034
    為
    Figure 03_image036
    (4) R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基，進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代；較佳地，R 1獨立地選自氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-8環烷基，進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-8環烷基中的一個或多個取代基所取代；更佳地，R 1獨立地選自C 1-6烷基，進一步被C 1-6烷基和C 1-6烷氧基中的一個或多個取代基所取代。
  5. 根據請求項1-4任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，通式( I )進一步如通式( III )所示：
    Figure 03_image030
    其中： R x、R a和R b如請求項1-4所述；較佳地，通式( I )進一步如通式( IV )所示：
    Figure 03_image032
    其中： R 1、R a、R b和x如請求項1-4所述；更佳地，通式( I )進一步如通式( IV-A )和通式( IV-B )所示：
    Figure 03_image052
    Figure 03_image054
    其中： R 1、R a、R b和x如請求項1-4所述。
  6. 根據請求項1-5任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R a和R b各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-10員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基或5-10員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-10員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基，任選地，進一步被氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成3-10員雜環基或5-10員雜芳基，所述的3-10員雜環基和5-10員雜芳基，任選地，進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基、C 1-6烷硫基、C 1-6羥烷基、C 2-6烯基、C 2-6炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代。
  7. 根據請求項1-6任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R a選自氫或甲基； R b選自甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基或雙環[1.1.1]戊烷基，所述的甲基、乙基、異丙基、叔丁基、異丁基、環丙基、環丁基和雙環[1.1.1]戊烷基，任選地進一步被甲基、乙基、異丙基或叔丁基中的一個或多個取代基所取代； 或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，任選地進一步被一個或多個甲基所取代；較佳地，
    Figure 03_image034
    選自
    Figure 03_image056
    、
    Figure 03_image036
    、
    Figure 03_image058
    、
    Figure 03_image038
    、
    Figure 03_image040
    、
    Figure 03_image060
    、
    Figure 03_image046
    、
    Figure 03_image048
    、
    Figure 03_image050
    、
    Figure 03_image062
    、
    Figure 03_image064
    、
    Figure 03_image042
    或
    Figure 03_image044
    。
  8. 根據請求項1-7任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R 1獨立地選自氫、氘、氰基、胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3羥烷基、-CH 2OR c、-(CH 2) 2OR c、-CH 2NR dR c、-(CH 2) 2NR dR c、-O(CH 2) 2NR dR c、-CH 2S(O)(=NR d)R c、-S(O)(=NR d)R c、-N=S(=O)R cR d、-CH 2N=S(=O)R cR d或-C(O)NR dR c，所述的胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基和C 1-3羥烷基，任選地進一步被氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基、5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代； R c和R d各自獨立地選自氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基或5-10員雜芳基氧基，所述的胺基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基，任選地，進一步被氫、氘、鹵素、羥基、巰基、硝基、氰基、胺基、氧代基、硫代基、C 1-3烷基、C 1-3鹵代烷基、C 1-3烷氧基、C 1-3烷硫基、C 1-3羥烷基、C 2-3烯基、C 2-3炔基、C 3-8環烷基、3-8員雜環基、C 6-10芳基、5-10員雜芳基、C 3-8環烷基氧基、3-8員雜環基氧基、C 6-10芳基氧基和5-10員雜芳基氧基中的一個或多個取代基所取代；較佳地，R 1獨立地選自H、D、F、Cl、-CN、-NH 2、-OH、-CH 3、-CF 3、-CD 3、-OCH 3、-OCF 3、-CH 2OCH 3、-(CH 2) 2OCH 3、
    Figure 03_image066
    、
    Figure 03_image068
    或
    Figure 03_image070
    。
  9. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R為
    Figure 03_image072
    ，L選自-C(O)-，R x選自
    Figure 03_image006
    或R y；環A選自5-14員雜芳基，所述的5-14員雜芳基被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代；R 1獨立地選自氫、氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基，進一步被氘、鹵素、C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基、C 1-6烷氧基和C 3-12環烷基中的一個或多個取代基所取代；R y選自C 1-6烷基，所述的C 1-6烷基被5-14員雜芳基中的一個或多個取代基所取代；所述5-14員雜芳基進一步被一個或多個C 1-6烷基、C 1-6鹵代烷基和C 1-6烷氧基所取代； 較佳地，R為
    Figure 03_image072
    ，-L-R x為
    Figure 03_image075
    、
    Figure 03_image077
    、
    Figure 03_image079
    、
    Figure 03_image081
    、
    Figure 03_image083
    、
    Figure 03_image085
    、
    Figure 03_image087
    、
    Figure 03_image089
    、
    Figure 03_image091
    、
    Figure 03_image093
    或
    Figure 03_image095
    。
  10. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，-L-R x為
    Figure 03_image075
    ，R為
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image097
    、
    Figure 03_image099
    、5-10員含氮雜芳基或-(CH 2) nC(O)NR bR a；n為0，R a為氫，R b為被C 3-12環烷基取代的C 1-6烷基、C 3-12環烷基或被C 1-6烷基取代的C 3-12環烷基；或者，R a和R b以及它們所在的原子一起形成氮雜環丁烷基或7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，所述的氮雜環丁烷基和7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷基，任選地進一步被一個或多個甲基所取代；所述的5-10員含氮雜芳基，任選地進一步被氘、鹵素和C 1-3烷基中的一個或多個取代基所取代；較佳地，-L-R x為
    Figure 03_image101
    ，R為
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image097
    、
    Figure 03_image099
    、
    Figure 03_image102
    、
    Figure 03_image104
    、
    Figure 03_image106
    、
    Figure 03_image108
    、
    Figure 03_image110
    或
    Figure 03_image112
    。
  11. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，R為
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image097
    、
    Figure 03_image099
    、
    Figure 03_image102
    、
    Figure 03_image104
    、
    Figure 03_image114
    、
    Figure 03_image116
    、
    Figure 03_image108
    、
    Figure 03_image118
    、
    Figure 03_image120
    、
    Figure 03_image106
    、
    Figure 03_image122
    、
    Figure 03_image110
    或
    Figure 03_image112
    ；較佳地，R為
    Figure 03_image072
    、
    Figure 03_image108
    、
    Figure 03_image118
    、
    Figure 03_image106
    或
    Figure 03_image112
    ； 和/或，-L-R x為
    Figure 03_image660
    、
    Figure 03_image126
    、
    Figure 03_image128
    、
    Figure 03_image077
    、
    Figure 03_image079
    、
    Figure 03_image132
    、
    Figure 03_image134
    、
    Figure 03_image136
    、
    Figure 03_image666
    、
    Figure 03_image140
    、
    Figure 03_image081
    、
    Figure 03_image143
    、
    Figure 03_image083
    、
    Figure 03_image085
    、
    Figure 03_image145
    、
    Figure 03_image087
    、
    Figure 03_image089
    、
    Figure 03_image091
    、
    Figure 03_image093
    或
    Figure 03_image095
    。
  12. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，所述化合物不為
    Figure 03_image672
    Figure 03_image674
    Figure 03_image676
    Figure 03_image678
    Figure 03_image680
    Figure 03_image682
    Figure 03_image684
    。
  13. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，所述化合物滿足如下條件中的一種或多種： (1)   R中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (2)   R中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F； (3)   R中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (4)   R中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基； (5)   R中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基； (6)   R中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基、環丁基或
    Figure 03_image008
    ； (7)   R中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (8)   R中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基； (9)   R中，所述5-14員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (10) 環A中，所述C 3-12環烷基為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基或環己基； (11) 環A中，所述3-12員雜環基為C 3-8員雜環基；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (12) 環A中，所述C 6-14芳基為C 6-10芳基，例如苯基或萘基； (13) 環A中，所述5-14員雜芳基為5-10員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如2個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (14) 環A中，所述C 1-6烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，還例如甲基、乙基或丙基； (15) 環A中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F； (16) 環A中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基； (17) 環A中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基； (18) 環A中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (19) 環A中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基； (20) 環A中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基； (21) R 1中，所述鹵素獨立地為F、Cl、Br或I，例如F； (22) R 1中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基或乙基； (23) R 1中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F； (24) R 1中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基； (25) R 1中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (26) R 1中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基； (27) R 1中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基； (28) R 1中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基； (29) R 1中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (30) R 1中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基； (31) R 1中，所述5-14員雜芳基立地為5-6員雜芳基或5員并6員雜芳基，其中的5-6員雜芳基和5員并6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的5-6員雜芳基和5員并6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (32) R 1中，所述C 3-12環烷基氧基獨立地為C 3-6環烷基氧基，例如為環丙基氧基、環丁基氧基、環戊基氧基或環己基氧基，還例如環丙基氧基； (33) R y中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (34) R y中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F； (35) R y中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁硫基或叔丁硫基； (36) R y中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基； (37) R y中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (38) R y中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基； (39) R y中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基； (40) R y中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基； (41) R y中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種； (42) R y中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基； (43) R y中，所述5-14員雜芳基立地為5-6員雜芳基基，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種； (44) R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷基獨立地為C 1-4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (45) R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6鹵代烷基獨立地為C 1-4鹵代烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基；所述鹵代可為F、Cl、Br或I，例如F； (46) R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷氧基獨立地為C 1-4烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基； (47) R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6烷硫基獨立地為C 1-4烷硫基，例如甲硫基、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、異丁硫基、仲丁氧基或叔丁硫基； (48) R a、R b、R c和R d中，所述C 1-6羥烷基獨立地為C 1-4羥烷基，所述烷基優選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基； (49) R a、R b、R c和R d中，所述C 2-6烯基獨立地為C 2-4烯基，例如為乙烯基、丙烯基或丁烯基； (50) R a、R b、R c和R d中，所述C 2-6炔基獨立地為C 2-4炔基，例如為乙炔基、丙炔基或丁炔基； (51) R a、R b、R c和R d中，所述C 3-12環烷基獨立地為C 3-6環烷基，例如為環丙基、環丁基、環戊基、雙環[1.1.1]戊烷基或環己基，還例如環丙基； (52) R a、R b、R c和R d中，所述3-12員雜環基獨立地為3-8員雜環基(例如7員)；其中的3-8員雜環基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的3-8員雜環基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)； (53) R a、R b、R c和R d中，所述C 6-14芳基獨立地為C 6-10芳基，例如苯基或萘基；和 (54) R a、R b、R c和R d中，所述5-14員雜芳基獨立地為5-6員雜芳基(例如6員)，其中的5-6員雜芳基中雜原子個數獨立地可為1或2個(例如1個)；其中的5-6員雜芳基中的雜原子可獨立地選自N和O中的一種或兩種(例如N)。
  14. 根據請求項1所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受鹽，其特徵在於，選自如下化合物：
    Figure 03_image147
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    Figure 03_image325
    Figure 03_image327
    或
    Figure 03_image329
    。
  15. 一種製備請求項1所述的通式( I )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
    Figure 03_image776
    式( Ia )與式( Ib )透過單步或多步親核取代、偶聯反應、Mitsunobu反應、酯化反應有機反應引入R基團，得到式( Ic )所示化合物或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ic )所示的化合物透過還原反應得到如式( Id )所示的化合物或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Id )與式( Ie )透過醯胺化反應、親核取代或者偶聯反應有機反應得到式( If )所示的化合物或其立體異構體； 式( If )所示的化合物脫去保護基團R 1a得到式( Ig )所示化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ig )透過分離純化得到式( I )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 任選地，式( I )所示的化合物進一步透過手性拆分得到單一構型化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 1選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)； X 2選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)； R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)； L、R和R x如請求項1-14任一項所述。
  16. 一種製備請求項3所述通式( II )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
    Figure 03_image333
    式( IIa )與式( IIb )發生反應得到式( IIc )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIc )透過分離純化得到式( II )所示的化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 任選地，式( II )所示的化合物透過手性拆分得到單一構型化合物、其前驅藥或立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如請求項1-14所述。
  17. 一種式( IIa )所示的中間體化合物或其立體異構體及鹽，其具體結構如下：
    Figure 03_image335
    其中： 環A、L、R 1、R a、R b和x如請求項1-8所述； 較佳地，所述鹽為藥學上可接受的鹽； 更佳地，所述式( IIa )選自如下化合物：
    Figure 03_image337
    Figure 03_image339
    Figure 03_image341
    Figure 03_image343
    Figure 03_image345
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    Figure 03_image351
    Figure 03_image353
    Figure 03_image355
    Figure 03_image357
    Figure 03_image359
    Figure 03_image361
    Figure 03_image363
    Figure 03_image365
    Figure 03_image367
    Figure 03_image369
    或
    Figure 03_image371
    。
  18. 一種製備請求項17所述式( IIa )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
    Figure 03_image373
    式( IIa-1 )與式( IIa-2 )透過醯胺化反應、親核取代或者偶聯反應有機反應得到式( IIa-3 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIa-3 )與對硝基氯甲酸苯酯反應生成式( IIa-4 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( IIa-4 )脫去保護基團R 1a得到式( IIa )所示化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 3選自但不限於羥基、鹵素或三氟甲磺酸酯基(OTf)； R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)； 環A、L、R 1、R a、R b和x如請求項1-14所述。
  19. 一種式( IIa-1 )所示的中間體化合物或其立體異構體及其鹽，其具體結構如下：
    Figure 03_image799
    其中： R 1a為吡唑氮上的保護基，選自但不限於叔丁基( t-Bu)、四氫-2 H-吡喃-2-基(THP)、(三甲基矽烷基)乙氧甲基(SEM)、對甲氧基苄基(PMB)；所述的鹽可為藥學上可接受的鹽； 較佳地，所述式( IIa-1 )選自如下化合物：
    Figure 03_image377
    、
    Figure 03_image379
    、
    Figure 03_image381
    、
    Figure 03_image383
    、
    Figure 03_image385
    、
    Figure 03_image387
    、
    Figure 03_image389
    或
    Figure 03_image391
    。
  20. 一種製備請求項19所述式( IIa-1 )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽的方法，其特徵在於，包含以下步驟：
    Figure 03_image393
    式( IIa-1a )所示的化合物與式( IIa-1b )反應得到式( IIa-1c )所示的化合物； 式( IIa-1c )所示的化合物透過還原反應得到式( IIa-1d )所示的化合物，式( IIa-1d )再經過氧化反應得到式( IIa-1e )所示的化合物； 式( IIa-1e )所示的化合物與烯丙基三氟硼酸鉀透過加成反應，得到式( IIa-1f )所示的化合物； 式( IIa-1f )所示的化合物透過與間氯過氧苯甲酸( mCPBA)的環氧化反應，得到式( IIa-1g )所示的化合物； 式( IIa-1g )所示的化合物在酸性條件下關環得到式( Ia )所示的中間體化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 式( Ia )所示的化合物透過還原反應可得到式( IIa-1 )所示的化合物或其立體異構體及其藥學上可接受鹽； 其中： X 4選自但不限於鹵素、三氟甲磺酸酯基(OTf)或羥基； R 1a如請求項6所述。
  21. 一種藥用組成物，其包括治療有效劑量的請求項1～14中任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載劑或賦形劑。
  22. 一種根據請求項1～14中任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，或請求項21所述的藥用組成物在製備治療由CDK2媒介的疾病藥物中的用途。
  23. 一種根據請求項1～14中任一項所述的化合物、其前驅藥、立體異構體或其藥學上可接受的鹽，或請求項21所述的藥用組成物在製備治療異常細胞生長的藥物中的用途，優選地，在製備治療癌症的藥物中的用途，更優選地，所述癌症為卵巢癌。
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