TW202116356A

TW202116356A - 作為治療劑之微管靶向藥劑之肽結合物

Info

Publication number: TW202116356A
Application number: TW109123266A
Authority: TW
Inventors: 丹尼爾理查馬歇爾; 喬安娜瑪麗琴格利; 羅伯特約翰馬圭爾; 羅伯特Ａ福爾克曼
Original assignee: 美商斯布雷克薩三號公司
Priority date: 2019-07-10
Filing date: 2020-07-09
Publication date: 2021-05-01
Also published as: CO2022001315A2; JP2022541747A; US20210009536A1; CR20220057A; KR20220051332A; IL289659A; PE20220485A1; US11555019B2; CA3146385A1; AU2020311925A1; MX2022000450A; US20240067616A1; EP3996749A1; CL2022000043A1; BR112022000297A2; CN114302744A; ECSP22010121A; WO2021007402A1

Abstract

本發明係關於諸如類美登素(maytansinoid)衍生物之微管靶向藥劑之肽結合物，其適用於治療諸如癌症之疾病。

Description

作為治療劑之微管靶向藥劑之肽結合物

癌症為一組以細胞生長之異常控制為特徵之疾病。僅在美國，估計癌症之年發病率超過160萬。儘管手術、輻射、化學療法及激素用於治療癌症，但其仍為美國第二大主要死因。據估計，每年約600,000名美國人將死於癌症。

藉由全身投與醫藥劑來治療人類之癌症通常藉由減緩或終止作為癌細胞之特徵的不受控複製來起作用。一類此類藥劑為微管靶向藥劑。細胞***需要形成完整的有絲***紡錘體，其由經歷隨機長度變化之微管構成。微管之隨機長度變化稱為動態不穩定性。破壞微管之動態不穩定性可引起對進一步細胞***之抑制。靶向微管以抑制動態不穩定性的藥物目前在臨床中用作針對廣泛多種癌症之有效抗癌劑。參見Lopus, M, Cancer Lett., 2011, 307(2): 113-118。

類美登素(例如，美登素(mertansine)、DM1或DM4)為一類作為潛在臨床化學治療劑出現的微管靶向藥劑。參見Lopus, M, Cancer Lett., 2011, 307(2): 113-118；及Widdison, W., J. Med. Chem. 2006, 49:4392-4408。儘管已展示DM1有效治療若干類型之癌症(包括淋巴瘤及乳癌)，但諸如周邊神經病變之毒副作用阻礙諸如類美登素之微管蛋白靶向藥劑之臨床進展。較佳將類美登素化合物(諸如DM1)遞送至患病組織可避免此等嚴重的副作用。因此，需要更選擇性地將類美登素化合物遞送至患病組織。

本發明尤其提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中構成變數在本文中進行定義。

本發明進一步提供一種醫藥組合物，其包含本發明之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及至少一種醫藥學上可接受之載劑或賦形劑。

本發明亦提供藉由向需要此類治療之人類或其他哺乳動物投與治療有效量的本發明之化合物來治療疾病或病況(例如，癌症)的方法。在一些實施例中，疾病或病況之特徵在於酸性或缺氧患病組織。

本發明亦提供本文所描述之化合物之用途，其用於製造用於療法中之藥劑。本發明亦提供用於療法中的本文所描述之化合物。

本發明亦提供用於合成本發明之化合物之方法及適用於此等方法之中間物。

本文提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為肽； R² 為小分子微管靶向部分；及 L為連接子，其共價連接至部分R¹ 及R² 。

本文提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為具有5至50個胺基酸之肽； R² 為小分子微管靶向部分；及 L為連接子，其共價連接至部分R¹ 及R² 。

本文亦提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為能夠選擇性地遞送R² L-穿過具有酸性或缺氧外套膜之細胞膜的肽； R² 為小分子微管靶向部分；及 L為連接子，其共價連接至部分R¹ 及R² 。

在一些實施例中，R² 為美登素衍生之微管靶向部分。

本文提供一種式(I)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為能夠選擇性地遞送R² L-穿過具有酸性或缺氧外套膜之細胞膜的肽； R² 係選自由以下組成之群：

；及 L為連接子，其共價連接至部分R¹ 及R² 。

本文提供一種式(I)化合物：

；及 L為連接子，其共價連接至部分R¹ 及R² 。

本文提供一種式(I)化合物：

； L為選自以下之基團：

；其中 R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H、C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基、C_3-10 環烷基、5-10員雜芳基、4-10員雜環烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ，其中該C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁴ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁵ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁴ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁵ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁸ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁹ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁸ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁹ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； Z為C_6-10 芳基或5-10員雜芳基；其中該5-10員雜芳基具有至少一個成環碳原子及1、2、3或4個獨立地選自N、O及S之成環雜原子，其中該C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； A為H或C₁ -₄ 烷基； R^a1 、R^b1 、R^c1 及R^d1 各自獨立地選自H、C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_1-6 鹵烷基、OH、CN、NO₂ 及CO₂ CH₃ ；其中該C_1-6 烷基及C_2-6 烯基各自視情況經OH、CN、NO₂ 或CO₂ CH取代；及 n為0、1或2。

本文提供一種式(I)化合物：

； L為選自以下之基團：

；其中 R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H、C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基、5-10員雜芳基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ，其中該C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁴ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁵ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁴ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁵ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁸ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁹ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁸ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁹ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； A為H或C₁ -₄ 烷基；及 R^a1 、R^b1 、R^c1 及R^d1 各自獨立地選自H、C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_1-6 鹵烷基、OH、CN、NO₂ 及CO₂ CH₃ ；其中該C_1-6 烷基及C_2-6 烯基各自視情況經OH、CN、NO₂ 或CO₂ CH取代。

在一些實施例中，L之左手側連接至R² 且L之右手側連接至R¹ 。

在一些實施例中，L之二硫化物部分之硫原子為R¹ 之半胱胺酸殘基之部分。

如本文所使用，「肽」係指包含由天然存在之胺基酸殘基及視情況選用之一或多個非天然存在之胺基酸組成的10-50個胺基酸序列之靶向部分。在一些實施例中，R¹ 之肽為20至40個、20至30個胺基酸或30至40個殘基之肽。適用於本發明之化合物中的肽為可回應於環境pH變化經由構形變化或二級結構變化而***穿過細胞膜之彼等肽。以此方式，肽可靶向酸性組織且回應於低胞外pH選擇性地使極性、細胞不可滲透的分子易位穿過細胞膜。在一些實施例中，肽能夠選擇性地將結合部分(例如，R² L-)遞送穿過具有pH小於約6.0之酸性或缺氧外套膜的細胞膜。在一些實施例中，肽能夠選擇性地將結合部分(例如，R² L-)遞送穿過具有pH小於約6.5之酸性或缺氧外套膜的細胞膜。在一些實施例中，肽能夠選擇性地將結合部分(例如，R² L-)遞送穿過具有pH小於約5.5之酸性或缺氧外套膜的細胞膜。在一些實施例中，肽能夠選擇性地將結合部分(例如，R² L-)遞送穿過具有pH在約5.0與約6.0之間的酸性或缺氧外套膜的細胞膜。

在某些實施例中，R¹ 之肽包括半胱胺酸殘基，其可形成與待遞送穿過細胞膜之有效負載部分(例如，R² L-)之連接位點。在一些實施例中，R¹ 經由R¹ 之半胱胺酸殘基連接至L。在一些實施例中，半胱胺酸殘基之硫原子可形成含二硫鍵之連接子L的二硫鍵之部分。

可基於pH構形地變化且***穿過細胞膜之適合肽描述於例如美國專利8,076,451及9,289,508 (其中之每一者以全文引用之方式併入本文中)中。其他適合肽描述於例如Weerakkody等人, PNAS 110 (15), 5834-5839 (2013年4月9日)中，其亦以全文引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，R¹ 為包含至少一種以下序列之肽： ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)， AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)，及 ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)； Ac-AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG (SEQ ID NO. 4；Pv4)； AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC (SEQ ID No. 5；Pv5)；及 AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID No. 6；Pv6)；其中R¹ 經由R¹ 之半胱胺酸殘基連接至L。

在一些實施例中，R¹ 為包含至少一種以下序列之肽： ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)， AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)，及 ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)；及 AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID No. 6；Pv6)；其中R¹ 經由R¹ 之半胱胺酸殘基連接至L。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列Ac-AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG (SEQ ID NO. 4；Pv4)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC (SEQ ID NO. 5；Pv5)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含序列AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID NO. 6；Pv6)之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列Ac-AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG (SEQ ID NO. 4；Pv4)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC (SEQ ID NO. 5；Pv5)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為由序列AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID NO. 6；Pv6)組成之肽。

在一些實施例中，R¹ 為包含至少一個選自如表1中所展示之SEQ ID NO: 7至SEQ ID NO: 311之序列的肽。

在一些實施例中，R¹ 為由選自如表1中所展示之SEQ ID NO: 7至SEQ ID NO: 311之序列組成的肽。表1.額外R¹ 序列

SEQ ID NO.	序列
7	AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
8	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
9	AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
10	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
11	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
12	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTG
13	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
14	AKEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
15	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG
16	AKEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECT
17	ACEQNPIYWARYANWLFTTPLLLLNLALLVDADEGTG
18	ACEQNPIYWARYAKWLFTTPLLLLKLALLVDADEGTG
19	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVNANQGT
20	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLALALLVDADEGT
21	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
22	AAEQNPIYWARYADWLFTTALLLLDLALLVDADEGT
23	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGT
24	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
25	AAEQNPIIYWARYADWLFTDLPLLLLDLLALLVDADEGT
26	GEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
27	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLDLLALLVDADEGTCG
28	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLLDALLVDADEGTCG
29	GGEQNPIYWARYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
30	GGEQNPIYWARYAWDLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
31	AAEQNPIYWARYADWLFTTGLLLLDLALLVDADEGT
32	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
33	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADEGCT
34	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
35	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
36	AEQNPIYWARYADFLFTTPLLLLDLALLVDADET
37	AEQNPIYFARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
38	AEQNPIYFARYADFLFTTPLLLLDLALLWDADET
39	AKEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDG
40	ACEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDG
41	AEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDCG
42	AEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLELALLVECG
43	AKEDQNPYWRAYADLFTPLTLLDLLALWDG
44	ACEDQNPYWRAYADLFTPLTLLDLLALWDG
45	ACDDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLW
46	TEDADVLLALDLLLLPTTFLWD
47	AEQNPIYWARYADWLFTTPL
48	AEQNPIYWARYADWLFTTPCL
49	ACEQNPIYWARYADWLFTTPL
50	AEQNPIYFARYADWLFTTPL
51	KEDQNPWARYADLLFPTTLAW
52	ACEDQNPWARYADLLFPTTLAW
53	ACEDQNPWARYADWLFPTTLLLLD
54	ACEEQNPWARYAELLFPTTLAW
55	ACEEQNPWARYAEWLFPTTLLLLE
56	ACEEQNPWARYLEWLFPTETLLLEL
57	GGEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
58	ACEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV
59	WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGTCG
60	WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGCT
61	GGEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGTCG
62	ACEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
63	AKEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
64	AKEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADECT
65	AAEQNPIY WARYADWLFTTALLLLDLALLV DADEGT
66	ACAEQNPIY WARYADWLFTTGLLLLDLALLV DADEGT
67	AEQNPIY WARYADFLFTTALLLLDLALLV DADE_T
68	AEQNPIY FARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
69	AEQNPIY FARYADFLFTTPLLLLDLALLW DADE_T
70	AKEDQNP_Y WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DG_____
71	ACEDQNP_Y WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DG_____
72	AEDQNP_Y WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DG_____
73	AEDQNP_Y WARYADWLFTTPLLLLELALLV ECG____
74	AKEDQNP_Y WRAYAD_LFT_PLTLLDLLALW DG_____
75	ACEDQNP_Y WRAYAD_LFT_PLTLLDLLALW DG_____
76	AKEDQNDP_Y WARYADWLFTTPLLLLDLALLV G______
77	TEDADVLLALDLLLLPTTFLWDAYRAWYPNQECA
78	GGEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
79	AEQNPIY WARYADWLFTTPL
80	AEQNPIY WARYADWLFTTPCL
81	ACEQNPIY WARYADWLFTTPL
82	ACEQNPIY FARYADWLFTTPL
83	ACDDQNP WRAYLDLLFPTDTLLLDLLW
84	ACEEQNP WRAYLELLFPTETLLLELLW
85	ACDDQNP WARYLDWLFPTDTLLLDL
86	CDNNNP WRAYLDLLFPTDTLLLDW
87	ACEEQNP WARYLEWLFPTETLLLEL
88	ACEDQNP WARYADWLFPTTLLLLD
89	ACEEQNP WARYAEWLFPTTLLLLE
90	ACEDQNP WARYADLLFPTTLAW
91	ACEDQNP WARYAELLFPTTLW
92	KEDQNP WARYADLLFPTTLW
93	DDDEDNP IYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
94	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
95	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
96	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
97	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
98	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGIG
99	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADET
100	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
101	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLDLLALLVDADEGTCG
102	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLLDALLVDADEGTCG
103	GGEQNPIYWARYAWDLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
104	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
105	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
106	GGEQNPIYWARYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
107	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
108	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
109	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
110	ACEQNPIYWARYANWLFTTPLLLLNLALLVDADEGTG
111	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
112	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
113	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
114	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
115	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
116	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVNANQGT
117	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
118	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
119	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
120	GGEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
121	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
122	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
123	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDALLVNANQGT
124	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
125	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
126	ACEQNPIYWARYAKWLFTTPLLLLKLALLVDADEGTG
127	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
128	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
129	GGEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
130	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
131	AAEQNPIYWARYADWLFTDLPLLLLDLLALLVDADEGT
132	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLLDALLVDADEGTCG
133	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLDLLALLVDADEGTCG
134	AAEQNPIYWARYADWLFTTGLLLLDLALLVDADEGT
135	AEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
136	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
137	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLDADEGTCG
138	GGEQNPIYWARYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
139	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLALALLVDADEGTCG
140	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG .........EGTK(玫瑰紅)C(鬼筆環肽)G
141	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLDADEGTKCG
142	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
143	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC(鬼筆環肽)G
144	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
145	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADET
146	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTG
147	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
148	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVNANQGT
149	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
150	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
151	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
152	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC(鬼筆環肽)G
153	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
154	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG
155	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLBGALLVDADECT
156	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
157	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLBGALLVNADECT
158	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLBGALLVNANECT
159	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLIBGALLVDADECT
160	DDDEDNPIYWARYADWTFTTPLLLLHGALLVDADECT
161	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
162	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
163	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
164	DDDEDNPIYWARYHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
165	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
166	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
167	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
168	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
169	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
170	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVNANQGT
171	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
172	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
173	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
174	DDDEDNPIYWARYAHMLFTTPLLLLDGALLVDADECT
175	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
176	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLDGALLVDADECT
177	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
178	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADECT
179	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADECT
180	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANECT
181	AAEQNPIYWARYADWLFTTGLLLLDLALLVDADEGT
182	GGEQNPIYWARYAWDLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
183	GGEQNPIYWARYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
184	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
185	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
186	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
187	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDALLVDADEGTCG
188	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLDLLALLVDADEGTCG
189	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLDLLALLVDADEGTCG
190	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLLDALLVDADEGTCG
191	GGEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
192	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
193	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
194	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
195	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
196	GGEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
197	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
198	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
199	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
200	GGEQNPIYWAQYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
201	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
202	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
203	................EGTK(玫瑰紅)C(鬼筆環肽)G
204	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG
205	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTG
206	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC(鬼筆環肽)G
207	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG
208	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
209	AAEQNPIYWARYADWLFTDLPLLLLDLLALLVDADEGT
210	AAEQNPIYWARYAAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
211	GGEQNPIYWAQYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
212	GGEQNPIYWAQDYAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
213	GGEQNPIYWARYDAWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
214	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
215	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
216	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLALALLVDADEGTCG
217	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
218	AAEQNPIYWARYAEWLFTTPLLLLELALLVDADEGTCG
219	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
220	ACEQNPIYWARYAKWLFTTPLLLLKLALLVDADEGTG
221	ACEQNPIYWARYANWLFTTPLLLLNLALLVDADEGTG
222	AAEQNPIYWARYADWLFTTALLLLDLALLVDADEGT
223	AEQNPIYFARYADLLFPTTLAW
224	AEQNPIYWARYADLLFPTTLAF
225	AEQNPIYWARYADLLFPTTLAW
226	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADET
227	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGT
228	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
229	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG
230	AKEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECT
231	CCTCTTACCTCAGTTACA
232	D-Arg8 D-Arg8-CCTCTTACCTCAGTTACA
233	D-Lys4 D-Lys4-CCTCTTACCTCAGTTACA
234	S-S-CCTCTTACCTCAGTTACA
235	S-S-CCTCTGACCTCATTTACA
236	D-Arg8-Deca D-Arg8-Deca-CCTCTTACCTCAGTTACA
237	D-Arg8-Deca-錯配D-Arg8-Deca-CCTCTGACCTCATTTACA
238	S-S-CCTCTTACCTCAGTTACA
239	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
240	AEDQNPYWARYDWLFTTPLLLLDLALLVDCG
241	AEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLELALLVECG
242	AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGCT
243	ACEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADET
244	AE-QN-PI YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT-COOH
245	AEDQN-P- YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV D---G--COOH
246	AEDQNDP-YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV----G--COOH
247	AEQNPI YWARYADFLFTTPLLLLDLALLV DADET-COOH
248	AEQNPI YFARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADET-COOH
249	AEQNPI YFARYADFLFTTPLLLLDLALLW DADET-COOH
250	AE-QN-PI YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGCT-COOH
251	AEDQN-PI YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV DC--G-T-COOH
252	AEDQNDPI YWARYADWLFTTPLLLLELALLV EC--G-T-COOH
253	螯合劑-ACEEQNPWARYLEWLFPTETLLLEL
254	AEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT-COOH
255	AKEDQNPY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DG-COOH
256	AKEDQNDPY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV G-COOH
257	AEQNPI YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGC-生物素-T-COO H
258	AEDQNP YWARYADWLFTTPLLLLDLALLV DC-生物素-G-COOH
259	AEDQNP YWARYADWLFTTPLLLLELALLV EC-生物素-G-COOH
260	ACEQNPIY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DADEGT
261	ACEDQNPY WARYADWLFTTPLLLLDLALLV DG
262	ACEDQNPY WRAYADLFTPLTLLDLLALW DG
263	ACDDQNP WRAYLDLLFPTDTLLLDLLW
264	WRAYLELLFPTETLLLELLW
265	WARYLDWLFPTDTLLLDL
266	WRAYLDLLFPTDTLLLDW
267	WARYLEWLFPTETLLLEL
268	WAQYLELLFPTETLLLEW
269	WRAYLELLFPTETLLLEW
270	WARYADWLFPTTLLLLD
271	WARYAEWLFPTTLLLLE
272	ACEDQNP WARYADLLFPTTLAW
273	ACEEQNP WARYAELLFPTTLAW
274	Ac-TEDAD VLLALDLLLLPTTFLWDAYRAW YPNQECA-Am
275	CDDDDDNPNY WARYANWLFTTPLLLLNGALLV EAEET
276	CDDDDDNPNY WARYAPWLFTTPLLLLPGALLV EAEET
277	Ac-AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGCT
278	Ac-AKEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTG
279	ACEQNPIYWARYANWLFTTPLLLLNLALLVDADEGT
280	Ac-AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLELALLVDADEGTKCG
281	DDDEDNPIYWARYADWLFTTPLLLLHGALLVDADET
282	CDDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADET
283	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVDADEGT
284	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNADEGT
285	DDDEDNPIYWARYAHWLFTTPLLLLHGALLVNANEGT
286	AKEDQNDPYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVG
287	AEDQNPYWARYADWLFTTPLLLLELALLVCG
288	AKDDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWC
289	ACEEQNPWRAYLELLFPTETLLLELLW
290	ACDDQNPWARYLDWLFPTDTLLLDL
291	CDNNNPWRAYLDLLFPTDTLLLDW
292	CEEQQPWAQYLELLFPTETLLLEW
293	EEQQPWRAYLELLFPTETLLLEW
294	CDDDDDNPNYWARYANWLFTTPLLLLNGALLVEAEET
295	CDDDDDNPNYWARYAPWLFTTPLLLLPGALLVEAEE
296	AEQNPIYFARYADLLFPTTLAW
297	AEQNPIYWARYADLLFPTTLAF
298	AEQNPIYWARYADLLFPTTLAW
299	KEDQNPWARYADLLFPTTLW
300	ACEEQNPQAEYAEWLFPTTLLLLE
301	AAEEQNPWARYLEWLFPTETLLLEL
302	AKEEQNPWARYLEWLFPTETLLLEL
303	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTGG
304	XXEXNPIYWAXXXXXLFTXXLLLXXXALLVXAXXXTXG
305	DAAEQNPIYWARYADWLFTTLPLLLLDLLALLVDADEGTKGG
306	GGEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTGG
307	XXEXNPIYWAXXXXXLFTXXLLLXXXALLVXAXXXTGG
308	DGGEQNDPIYWARYADWLFTTLPLLLLDLLALLVDADEGCTXGG
309	AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG
310	AEDQNPYWARYDWLFTTPLLLLDLALLVDCG
311	GLAGLAGLLGLEGLLGLPLGLLEGLWLGLELEGN

藉由用半胱胺酸置換非半胱胺酸殘基或將半胱胺酸殘基附加至N端或C端，適用於本發明中之所敍述肽中之任一者可經修飾以包括半胱胺酸殘基。

在一些實施例中，R¹ 之肽為構形上受限之肽。構形上受限之肽可包括例如巨環肽及訂書肽(stapled peptide)。訂書肽為由兩個胺基酸側鏈之間的共價鍵約束從而形成肽巨環之肽。構形上受限之肽描述於例如Guerlavais等人, Annual Reports in Medicinal Chemistry 2014, 49, 331-345；Chang等人, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (2013), 110(36), E3445-E3454；Tesauro等人, Molecules 2019, 24, 351-377；Dougherty等人, Journal of Medicinal Chemistry (2019), 62(22), 10098-10107；及Dougherty等人, Chemical Reviews (2019), 119(17), 10241-10287中，其中之每一者以全文引用之方式併入本文中。

在一些實施例中，R¹ 為具有10至50個胺基酸之肽。在一些實施例中，R¹ 為具有20至40個胺基酸之肽。在一些實施例中，R¹ 為具有20至40個胺基酸之肽。在一些實施例中，R¹ 為具有10至20個胺基酸之肽。在一些實施例中，R¹ 為具有20至30個胺基酸之肽。在一些實施例中，R¹ 為具有30至40個胺基酸之肽。

適合的小分子微管靶向部分(例如，R² )可為細胞毒性化合物(如類美登素)，其可由於其對正常組織之可能的不利影響而在全身性地遞送時具有不合需要的副作用。小分子微管靶向藥劑包括(但不限於)類美登素、太平洋紫杉醇(aclitaxel)、多西他賽(docetaxel)、埃博黴素(epothilones)、圓皮海綿內酯(discodermolide)、長春花生物鹼(vinca alkaloids)、秋水仙鹼(colchicine)、康柏斯達汀(combretastatins)及前述之衍生物及類似物。微管靶向藥劑描述於Tangutur, A. D., Current Topics in Medicinal Chemistry, 2017 17(22): 2523-2537中。微管靶向藥劑亦包括類美登素(諸如美登素(DM1)及其衍生物及類似物，其描述於Lopus, M, Cancer Lett., 2011, 307(2): 113-118；及Widdison, W., J. Med. Chem. 2006, 49:4392-4408中。

在一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在一些實施例中，R² 為類美登素。在一些實施例中，R² 為DM1或DM4。在一些實施例中，R² 為DM1。在一些實施例中，R² 為DM4。

在一些實施例中，L為共價連接R¹ 及R² 之連接部分，且用以在酸性或缺氧組織附近(諸如在患病組織之細胞內部)釋放含有R² 之部分。

在一些實施例中，L為1至40、1至30、1至25、1至20、1至15、1至10或1至5個鏈原子(包括碳及雜原子)之連接鏈，其視情況經1-10個R^q 取代基取代，且其中一或多個L之鏈碳原子可經氧化以形成羰基(C=O)，且其中一或多個N及S鏈原子可各自視情況經氧化以形成氧化胺、亞碸或磺醯基；其中各R^q 係獨立地選自OH、CN、-COOH、NH₂ 、鹵基、C_1-6 鹵烷基、C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基、C_1-6 鹵烷氧基、C_1-6 烷硫基、苯基、5-6員雜芳基、4-6員雜環烷基、C_3-6 環烷基、NH(C_1-6 烷基)及N(C_1-6 烷基)₂ ，其中R^q 之C_1-6 烷基、苯基、C_3-6 環烷基、4-6員雜環烷基及5-6員雜芳基各自視情況經以下取代：鹵基、OH、CN、-COOH、NH₂ 、C_1-4 烷基、C_1-4 烷氧基、C_1-4 鹵烷基、C_1-4 鹵烷氧基、苯基、C_3-10 環烷基、5員或6員雜芳基或4-6員雜環烷基；及兩個R^q 基團與其所連接之鏈原子一起可形成苯基、5-6員雜芳基、4-6員雜環烷基或C_3-6 環烷基環。

在一些實施例中，R^q 係獨立地選自OH、CN、-COOH、NH₂ 、鹵基、C_1-6 鹵烷基、C_1-6 烷基、C_1-6 烷氧基、C_1-6 鹵烷氧基、NH(C_1-6 烷基)及N(C_1-6 烷基)₂ 。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，n為0。在一些實施例中，n為1。在一些實施例中，n為2。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，L為以下基團：

。

在一些實施例中，R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。在一些實施例中，R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自為H。

在一些實施例中，R³ 及R⁴ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。在一些實施例中，R³ 及R⁴ 各自為H。

在一些實施例中，R⁵ 及R⁶ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。在一些實施例中，R⁵ 及R⁶ 各自為H。

在一些實施例中，R⁷ 及R⁸ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。在一些實施例中，R⁷ 及R⁸ 各自為H。

在一些實施例中，R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。在一些實施例中，R⁹ 及R¹⁰ 各自為H。

在一些實施例中，A為H。在一些實施例中，A為C_1-4 烷基。在一些實施例中，A為CH₃ 。

在一些實施例中，Z為C_6-10 芳基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 。

在一些實施例中，Z為苯基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 。

在一些實施例中，Z為苯基。

在一些實施例中，本發明之化合物為式(II)化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為肽； R² 為小分子微管靶向部分； A為H或C₁ -₄ 烷基；環Y為單環C_5-7 環烷基環或單環5-7員雜環烷基環；各R^Y 係獨立地選自C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或兩個相鄰R^Y 與其所連接之原子一起形成稠合單環C_5-7 環烷基環、稠合單環5-7員雜環烷基環、稠合C_6-10 芳基環或稠合6-10員雜芳基環，其中之每一者視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； R^a1 、R^b1 、R^c1 及R^d1 各自獨立地選自H、C_1-4 烷基、C_2-4 烯基、C_2-4 炔基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自鹵基、OH、CN及NO₂ 之取代基取代；及 m為0、1、2或3。

在式(II)化合物之一些實施例中，R¹ 為包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5之序列的肽。

在式(II)化合物之一些實施例中，R¹ 為Pv1、Pv2、Pv3、Pv4或Pv5。

在式(II)化合物之一些實施例中，R¹ 經由R¹ 之半胱胺酸殘基連接至核，其中式II中之二硫化物部分的硫原子中之一者係衍生自半胱胺酸殘基。

在式(II)化合物之一些實施例中，R² 為類美登素。在式(II)之一些實施例中，R² 為DM1或DM4。在式(II)之一些實施例中，R² 為DM1。在式(II)之一些實施例中，R² 為DM4。

在式(II)化合物之一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在式(II)化合物之一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在式(II)化合物之一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在式(II)化合物之一些實施例中，R² 為以下基團：

。

在式(II)化合物之一些實施例中，A為H。在式(II)化合物之一些實施例中，A為C_1-4 烷基。在式(II)化合物之一些實施例中，A為CH₃ 。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為單環C_5-7 環烷基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為環戊基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為環己基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為環庚基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為單環5-7員雜環烷基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為5員雜環烷基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為6員雜環烷基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，環Y為7員雜環烷基環。

在式(II)化合物之一些實施例中，兩個相鄰R^Y 與其所連接之原子一起形成稠合單環C_5-7 環烷基環、稠合單環5-7員雜環烷基環、稠合C_6-10 芳基環或稠合6-10員雜芳基環，其中之每一者視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 。

在式(II)化合物之一些實施例中，m為0。

在式(II)化合物之一些實施例中，m為1。

在式(II)化合物之一些實施例中，m為2。

在式(II)化合物之一些實施例中，m為3。

在一些實施例中，本發明之化合物為式(III)、式(IV)或式(V)之化合物：

或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 、R² 、R^Y 、A及m如上文關於式(II)之實施例中之任一者中所定義。

在一些實施例中，式(I)化合物係選自：

，或前述中任一者之醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，式(I)化合物係選自：

，或前述中任一者之醫藥學上可接受之鹽。

在一些實施例中，本文提供一種具有式(I-A)之化合物：

，或其鹽，其中Cy¹ 為C_6-10 芳基或5-10員雜芳基。在一些實施例中，Cy¹ 為吡啶基。

在一些實施例中，本文提供一種具有式(I-B)之化合物：

本發明之分子可例如用諸如螢光團、放射性同位素及類似者之探針標記。在一些實施例中，探針為螢光探針，諸如LICOR。螢光探針可包括在光激發時可重新發射光之任何部分(例如，螢光團)。

胺基酸小由如下IUPAC縮寫表示：丙胺酸(Ala；A)、精胺酸(Arg；R)、天冬醯胺(Asn；N)、天冬胺酸(Asp；D)、半胱胺酸(Cys；C)、麩醯胺酸(Gln；Q)、麩胺酸(Glu；E)、甘胺酸(Gly；G)、組胺酸(His；H)、異白胺酸(Ile；I)、白胺酸(Leu；L)、離胺酸(Lys；K)、甲硫胺酸(Met；M)、***酸(Phe；F)、脯胺酸(Pro；P)、絲胺酸(Ser；S)、蘇胺酸(Thr；T)、色胺酸(Trp；W)、酪胺酸(Tyr；Y)、纈胺酸(Val；V)。

術語「Pv1」意謂ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG，其為SEQ ID No. 1之肽。

術語「Pv2」意謂AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG，其為SEQ ID No. 2之肽。

術語「Pv3」意謂ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG，其為SEQ ID No. 3之肽。

術語「Pv4」意謂Ac-AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTKCG，其為SEQ ID NO. 4之肽。

術語「Pv5」意謂AAEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTC，其為SEQ ID NO. 5之肽。術語「Pv6」意謂AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG，其為SEQ ID NO. 6之肽。在本發明之化合物中，肽R¹ 係藉由半胱胺酸部分連接至二硫化物連接子。

術語「酸性及/或缺氧外套膜」係指所討論之患病組織中細胞之環境，其具有低於7.0且較佳低於6.5之pH。酸性或缺氧外套膜更佳具有約5.5之pH且最佳具有約5.0之pH。式(I)化合物以pH依賴性方式***穿過具有酸性及/或缺氧外套膜之細胞膜，以將R² L***至細胞中，當連接子之二硫鍵裂解時，即遞送游離R² L (或R² L*，其中L*為降解產物)。由於式(I)化合物為pH依賴性，其等較佳僅在細胞周圍存在酸性或缺氧外套膜之情況下***穿過細胞膜，且不穿過沒有酸性或缺氧外套膜的「正常」細胞之細胞膜。

如本文所使用之術語「pH敏感性」或「pH依賴性」係指肽R¹ 或係指肽R¹ 或本發明之化合物***穿過細胞膜的模式，意謂肽對具有酸性或缺氧外套膜之細胞膜脂質雙層比中性pH下之膜脂質雙層具有更高的親和力。因此，當細胞膜脂質雙層具有酸性或缺氧外套膜(「患病」細胞)時，本發明之化合物較佳地***穿過細胞膜，以使R² L***至細胞內部(且因此如上文所描述遞送R² H)，但當外套膜(細胞膜脂質雙層之環境)不為酸性或缺氧(「正常」細胞)時，不會***穿過細胞膜。咸信此***優勢係由於肽R¹ 形成螺旋組態所致之結果，此有助於膜***。

術語「小分子微管靶向部分」係指結合至微管之化學基團。小分子微管靶向部分可為衍生自抑制微管之活性之化合物的基團。舉例而言，小分子微管靶向部分可抑制微管之動態穩定性。在一些實施例中，小分子微管靶向部分具有約100-1500、約100-800、約500-1,000、約600-1,000、約100-500、約700-900或約250-500之分子量(Da)。

進一步應瞭解，出於清楚起見而描述於單獨實施例之上下文中的某些本發明特徵亦可以組合形式提供於單一實施例中(同時實施例意欲以如同多次依賴形式書寫之形式併入)。相反，為簡便起見而描述於單一實施例之上下文中的本發明之各種特徵亦可單獨地或以任何適合的子組合形式提供。因此，考慮描述為式(I)化合物之實施例的特徵可以任何適合的組合形式組合。

在本說明書中之各種位置處，化合物之某些特徵以群組或範圍形式揭示。具體言之，期望此揭示內容包括此類群組及範圍之成員的各個及每一個別子組合。舉例而言，具體言之，術語「C_1-6 烷基」意欲個別地揭示(但不限於)甲基、乙基、C₃ 烷基、C₄ 烷基、C₅ 烷基及C₆ 烷基。

術語「n員」(其中n為整數)通常描述部分中之成環原子之數目，其中成環原子之數目為n。舉例而言，哌啶基為6員雜環烷基環之實例，吡唑基為5員雜芳基環之實例，吡啶基為6員雜芳基環之實例，且1,2,3,4-四氫-萘為10員環烷基之實例。

在本發明書中之各種位置處，可描述定義二價連接基團之變數。具體言之，預期各連接取代基包括連接取代基之前向及後向形式。舉例而言，-NR(CR'R'')_n -包括-NR(CR'R'')_n -及-(CR'R'')_n NR-，且意欲個別地揭示形式中之每一者。在結構需要連接基團之情況下，針對該基團所列出之馬庫什變數(Markush variable)應理解為連接基團。舉例而言，若結構需要連接基團且該變數之馬庫西基團定義列出「烷基」或「芳基」，則應理解，「烷基」或「芳基」分別表示伸烷基連接基團或伸芳基連接基團。

術語「經取代」意謂原子或具有原子之基團作為連接至另一基團之「取代基」形式上置換氫。除非另外指示，否則術語「經取代」係指任何程度之取代，例如單取代、二取代、三取代、四取代或五取代，其中准許此類取代。獨立地選擇取代基，且取代可位於任何化學上可接近的位置。應理解，給定原子處之取代受價數限制。應理解，給定原子處之取代產生化學上穩定的分子。片語「視情況經取代」意謂未經取代或經取代。術語「經取代」意謂氫原子經移除且經取代基置換。單個二價取代基(例如，側氧基)可置換兩個氫原子。

術語「C_n-m 」指示包括端點之範圍，其中n及m為整數且指示碳數。實例包括C_1-4 、C_1-6 及其類似者。

單獨或與其他術語組合使用之術語「烷基」係指可為直鏈或分支鏈之飽和烴基。術語「C_n-m 烷基」係指具有n至m個碳原子之烷基。烷基在形式上對應於一個C-H鍵經烷基與化合物之其餘部分之連接點置換的烷烴。在一些實施例中，烷基含有1至6個碳原子、1至4個碳原子、1至3個碳原子或1至2個碳原子。烷基部分之實例包括(但不限於)化學基團，諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、第二丁基；高碳數同源物，諸如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丙基及其類似基團。

單獨或與其他術語組合使用之術語「烯基」係指對應於具有一或多個碳-碳雙鍵之烷基的直鏈或分支鏈烴基。烯基在形式上對應於一個C-H鍵經烯基與化合物之其餘部分之連接點置換的烯烴。術語「C_n-m 烯基」係指具有n至m個碳原子之烯基。在一些實施例中，烯基部分含有2至6個、2至4個或2至3個碳原子。烯基之實例包括(但不限於)乙烯基、正丙烯基、異丙烯基、正丁烯基、第二丁烯基及其類似基團。

單獨或與其他術語組合使用之術語「炔基」係指對應於具有一或多個碳-碳參鍵之烷基的直鏈或分支鏈烴基。炔基在形式上對應於一個C-H鍵經烷基與化合物之其餘部分之連接點置換的炔烴。術語「C_n-m 炔基」係指具有n至m個碳原子之炔基。實例炔基包括(但不限於)乙炔基、丙炔-1-基、丙炔-2-基及其類似基團。在一些實施例中，炔基部分含有2至6個、2至4個或2至3個碳原子。

單獨或與其他術語組合使用之術語「伸烷基」係指二價烷基連接基團。伸烷基在形式上對應於兩個C-H鍵經伸烷基與化合物之其餘部分之連接點置換的烷烴。術語「C_n-m 伸烷基」係指具有n至m個碳原子之伸烷基。伸烷基之實例包括(但不限於)乙-1,2-二基、乙-1,1-二基、丙-1,3-二基、丙-1,2-二基、丙-1,1-二基、丁-1,4-二基、丁-1,3-二基、丁-1,2-二基、2-甲基-丙-1,3-二基及其類似基團。

術語「胺基」係指式-NH₂ 之基團。

單獨或與其他術語組合使用之術語「羰基」係指-C(=O)-基團，其亦可書寫為C(O)。

術語「氰基」或「腈」係指具有式-C≡N之基團，其亦可書寫為-CN。

單獨或與其他術語組合使用之術語「鹵基」或「鹵素」係指氟、氯、溴及碘。在一些實施例中，「鹵基」係指選自F、Cl或Br之鹵素原子。在一些實施例中，鹵基為F。

如本文所使用，術語「鹵烷基」係指其中氫原子中之一或多者已經鹵素原子置換之烷基。術語「C_n-m 鹵烷基」係指具有n至m個碳原子及至少一個至多{2(n-m)+1}個鹵素原子之C_n-m 烷基，其可相同或不同。在一些實施例中，鹵素原子為氟原子。在一些實施例中，鹵烷基具有1至6個或1至4個碳原子。實例鹵烷基包括CF₃ 、C₂ F₅ 、CHF₂ 、CH₂ F、CCl₃ 、CHCl₂ 、C₂ Cl₅ 及其類似基團。在一些實施例中，鹵烷基為氟烷基。

單獨或與其他術語組合使用之術語「鹵烷氧基」係指式-O-鹵烷基之基團，其中鹵烷基如上文所定義。術語「C_n-m 鹵烷氧基」係指其中鹵烷基具有n至m個碳原子之鹵烷氧基。實例鹵烷氧基包括三氟甲氧基及其類似基團。在一些實施例中，鹵烷氧基具有1至6個、1至4個或1至3個碳原子。

術語「側氧基」係指作為二價取代基之氧原子，其在連接至碳時形成羰基，或連接至雜原子從而形成亞碸或碸基團或N -氧化物基團。在一些實施例中，雜環基可視情況經1或2個側氧基(=O)取代基取代。

關於成環N原子之術語「經氧化」係指成環N-氧化物。

關於成環S原子之術語「經氧化」係指成環磺醯基或成環亞磺醯基。

術語「芳族」係指具有一或多個具有芳族特性(亦即具有(4n + 2)個非定域π (pi)電子，其中n為整數)之多不飽和環的碳環或雜環。

單獨或與其他術語組合使用之術語「芳基」係指可為單環或多環(例如，具有2個稠環)之芳族烴基。術語「C_n-m 芳基」係指具有n至m個環碳原子之芳基。芳基包括例如苯基、萘基及其類似基團。在一些實施例中，芳基具有6至約10個碳原子。在一些實施例中，芳基具有6個碳原子。在一些實施例中，芳基具有10個碳原子。在一些實施例中，芳基為苯基。

單獨或與其他術語組合使用之術語「雜芳基」或「雜芳族」係指具有至少一個選自硫、氧及氮之雜原子環成員的單環或多環芳族雜環。在一些實施例中，雜芳基環具有1、2、3或4個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員。在一些實施例中，雜芳基部分中之任何成環N可為N-氧化物。在一些實施例中，雜芳基具有5至14個包括碳原子之環原子及1、2、3或4個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員。在一些實施例中，雜芳基具有5至10個包括碳原子之環原子及1、2、3或4個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員。在一些實施例中，雜芳基具有5至6個環原子及1或2個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子環成員。在一些實施例中，雜芳基為五員或六員雜芳基環。在其他實施例中，雜芳基為八員、九員或十員稠合雙環雜芳基環。

五員雜芳基環為具有五個環原子之雜芳基，其中一或多個(例如1、2或3個)環原子係獨立地選自N、O及S。

六員雜芳基環為具有六個環原子之雜芳基，其中一或多個(例如1、2或3個)環原子係獨立地選自N、O及S。

單獨或與其他術語組合使用之術語「環烷基」係指非芳族烴環系統(單環、雙環或多環)，包括環化之烷基及烯基。術語「C_n-m 環烷基」係指具有n至m個環成員碳原子之環烷基。環烷基可包括單環或多環(例如，具有2、3或4個稠合環之)基團及螺環。環烷基可具有3、4、5、6或7個成環碳原子(C_3-7 )。在一些實施例中，環烷基具有3至6個環成員、3至5個環成員或3至4個環成員。在一些實施例中，環烷基為單環。在一些實施例中，環烷基為單環或雙環。在一些實施例中，環烷基為C_3-6 單環環烷基。環烷基之成環碳原子可視情況經氧化以形成側氧基或硫離子基。環烷基亦包括亞環烷基。在一些實施例中，環烷基為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。環烷基之定義中亦包括具有一或多個與環烷基環稠合(亦即，具有共同鍵)之芳族環的部分，例如環戊烷、環己烷及其類似者之苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族環之環烷基可經由包括稠合芳族環之成環原子的任何成環原子連接。環烷基之實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環戊烯基、環己烯基、環己二烯基及類似基團。在一些實施例中，環烷基為環丙基、環丁基、環戊基或環己基。

單獨或與其他術語組合使用之術語「雜環烷基」係指非芳族環或環系統，其可視情況含有一或多個作為環結構之部分的伸烯基，其具有至少一個獨立地選自氮、硫、氧及磷之雜原子環成員，且其具有4-10個環成員、4-7個環成員或4-6個環成員。術語「雜環烷基」內包括單環4員、5員、6員及7員雜環烷基。雜環烷基可包括單環或雙環(例如，具有兩個稠合或橋接環)或螺環環系統。在一些實施例中，雜環烷基為具有1、2或3個獨立地選自氮、硫及氧之雜原子的單環基團。雜環烷基之成環碳原子及雜原子可視情況經氧化以形成側氧基或硫離子基或其他氧化鍵(例如，C(O)、S(O)、C(S)或S(O)₂ 、N -氧化物等)，或氮原子可經四級銨化。雜環烷基可經由成環碳原子或成環雜原子連接。在一些實施例中，雜環烷基含有0至3個雙鍵。在一些實施例中，雜環烷基含有0至2個雙鍵。雜環烷基之定義中亦包括具有一或多個與雜環烷基環稠合(亦即，具有共同鍵)之芳環的部分，例如哌啶、嗎啉、氮呯等之苯并或噻吩基衍生物。含有稠合芳族環之雜環烷基可經由包括稠合芳環之成環原子的任何成環原子連接。雜環烷基之實例包括2-吡咯啶基、嗎啉基、氮雜環丁基、四氫呋喃基、四氫哌喃基及哌嗪基。

在某些位置，定義或實施例係指特定環(例如，氮雜環丁烷環、吡啶環等)。除非另外指示，否則此等環可連接至任何環成員，其限制條件為不超出原子之價數。舉例而言，氮雜環丁烷環可在環之任何位置處連接，而氮雜環丁烷-3-基環在3-位置處連接。

本文所描述之化合物可為不對稱的(例如，具有一或多個立構中心)。除非另外指示，否則所有立體異構體，諸如對映異構體及非對映異構體為吾人所需。含有經不對稱取代之碳原子的本發明之化合物可以光學活性或外消旋形式分離。此項技術中已知如何由光學惰性起始材料製備光學活性形式之方法，諸如藉由解析外消旋混合物或藉由立體選擇性合成。烯烴、C=N雙鍵及其類似者之許多幾何異構體亦可存在於本文所描述之化合物中，且所有此類穩定異構體均涵蓋於本發明中。描述本發明之化合物之順式及反式幾何異構體且可以異構體混合物形式或經分離異構體形式分離。

化合物之外消旋混合物之解析可藉由此項技術中已知之許多方法中之任一者進行。一種方法包括使用對掌性解析酸進行分步再結晶，該對掌性解析酸為光學活性成鹽有機酸。用於分步再結晶方法之適合解析劑為例如光學活性酸，諸如酒石酸之D及L形式、二乙醯基酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、杏仁酸、蘋果酸、乳酸或各種光學活性樟腦磺酸(諸如α-樟腦磺酸)。適用於分步結晶方法之其他解析劑包括α-甲基苯甲胺之立體異構純形式(例如，S 及R 形式，或非對映異構純形式)、2-苯基甘胺醇、降麻黃鹼(norephedrine)、麻黃鹼(ephedrine)、N -甲基麻黃鹼、環己基乙胺、1,2-二胺基環己烷及其類似物。

外消旋混合物之解析亦可藉由裝填有光學活性解析劑(例如，二硝基苯甲醯基苯基甘胺酸)之管柱溶離來進行。適合溶離溶劑組合物可藉由熟習此項技術者來確定。

在一些實施例中，本發明化合物具有(R )-構型。在其他實施例中，該等化合物具有(S )-構型。在具有超過一個對掌性中心之化合物中，除非另外指示，否則化合物中之對掌性中心中之每一者可獨立地為(R )或(S )。

本發明之化合物亦包括互變異構形式。互變異構形式由單鍵與相鄰雙鍵之調換以及伴隨之質子遷移而產生。互變異構形式包括處於具有相同實驗式及總電荷之異構質子化狀態的質子轉移互變異構體。實例質子轉移互變異構體包括酮-烯醇對、醯胺-亞胺酸對、內醯胺-內醯亞胺對、烯胺-亞胺對及其中質子可佔據雜環系統之兩個或更多個位置的環形形式，例如1H -咪唑及3H -咪唑、1H -1,2,4-***、2H -1,2,4-***及4H -1,2,4-***、1H -異吲哚及2H -異吲哚以及1H -吡唑及2H -吡唑。互變異構形式可處於平衡狀態或藉由適當取代而在空間上鎖定為一種形式。

本發明之化合物亦可包括中間物或最終化合物中出現之原子的所有同位素。同位素包括原子數相同但質量數不同之彼等原子。舉例而言，氫之同位素包括氚及氘。本發明之化合物之一或多個組成原子可經天然或非天然豐度的原子同位素置換或取代。在一些實施例中，化合物包括至少一個氘原子。舉例而言，本發明之化合物中之一或多個氫原子可經氘置換或取代。在一些實施例中，化合物包括兩個或更多個氘原子。在一些實施例中，化合物包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個氘原子。使有機化合物中包括同位素之合成方法為此項技術中已知的(Alan F. Thomas之Deuterium Labeling in Organic Chemistry (New York, N.Y., Appleton-Century-Crofts, 1971；Jens Atzrodt, Volker Derdau, Thorsten Fey及Jochen Zimmermann之The Renaissance of H/D Exchange, Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 7744-7765；James R. Hanson之The Organic Chemistry of Isotopic Labelling, Royal Society of Chemistry, 2011)。經同位素標記之化合物可用於各種研究中，諸如NMR光譜法、代謝實驗及/或分析。

經諸如氘之較重同位素取代可獲得由較大代謝穩定性產生之某些治療優勢，例如增加之活體內半衰期或降低之劑量需求，且因此在某些情況下可為較佳的。(A. Kerekes等人,J. Med. Chem. 2011 ,54 , 201-210；R. Xu等人,J. Label Compd. Radiopharm. 2015 ,58 , 308-312)。

如本文所使用，術語「化合物」意謂包括所描繪結構之所有立體異構體、幾何異構體、互變異構體及同位素。術語亦意指本發明之化合物，無論其如何例如以合成方式、經由生物過程(例如，代謝或酶轉化)或其組合製備。

所有化合物及其醫藥學上可接受之鹽均可與諸如水及溶劑(例如，水合物及溶劑合物)之其他物質一起存在或可經分離。當呈固態時，本文所描述之化合物及其鹽可以各種形式存在，且可例如呈溶劑合物(包括水合物)之形式。化合物可呈任何固態形式，諸如多晶型物或溶劑合物，因此除非另外明確指示，否則本說明書中對化合物及其鹽之提及應理解為涵蓋化合物之任何固態形式。

在一些實施例中，實質上分離本發明之化合物或其鹽。「實質上經分離」意謂化合物至少部分或實質上與其形成或偵測所在之環境分離。部分分離可包括例如富含本發明之化合物的組合物。實質分離可包括含有按本發明之化合物之重量計至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%、至少約97%或至少約99%之組合物或其鹽。

片語「醫藥學上可接受」在本文中用於指在合理醫學判斷之範疇內適用於與人類及動物之組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症、與合理益處/風險比相稱的彼等化合物、材料、組合物及/或劑型。

如本文所使用，表述「環境溫度」及「室溫」為此項技術中所理解的，且通常係指約為進行反應之房間溫度的溫度，例如反應溫度，例如約20℃至約30℃之溫度。

本發明亦包括本文所描述之化合物的醫藥學上可接受之鹽。術語「醫藥學上可接受之鹽」係指所揭示之化合物之衍生物，其中親本化合物藉由將現有酸或鹼部分轉化為其鹽形式而經修飾。醫藥學上可接受之鹽的實例包括(但不限於)鹼性殘基(諸如胺)之無機酸鹽或有機酸鹽；酸性殘基(諸如羧酸)之鹼金屬鹽或有機鹽；及其類似物。本發明之醫藥學上可接受之鹽包括例如由無毒無機或有機酸形成的親本化合物之無毒鹽。本發明之醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法由含有鹼性或酸性部分之親本化合物合成。一般而言，此類鹽可藉由使此等化合物之游離酸或鹼形式與化學計算量之適當鹼或酸於水或有機溶劑或兩者之混合物中反應來製備；一般而言，非水性介質，如醚、乙酸乙酯、醇(例如，甲醇、乙醇、異丙醇或丁醇)或乙腈(MeCN)為較佳的。適合鹽之清單發現於Remington's Pharmaceutical Sciences , 第17版, (Mack Publishing Company, Easton, 1985), 第1418頁, Berge等人,J. Pharm. Sci. ,1977 ,66 (1), 1-19中，且發現於Stahl等人,Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use , (Wiley, 2002)中。在一些實施例中，本文所描述之化合物包括N-氧化物形式。

合成本發明之化合物(包括其鹽)可使用已知有機合成技術製備，且可根據諸多可能合成途徑(諸如下文流程中之彼等途徑)中之任一者合成。

用於製備本發明之化合物的反應可在可由熟習有機合成技術者容易選擇的適合溶劑中進行。在進行反應之溫度(例如，可範圍介於溶劑結冰溫度至溶劑沸騰溫度的溫度)下，適合溶劑可與起始材料(反應物)、中間物或產物實質上不反應。給定反應可在一種溶劑或超過一種溶劑之混合物中進行。視特定反應步驟而定，用於特定反應步驟之適合溶劑可由熟習此項技術者選擇。

本發明之化合物的製備可涉及各種化學基團之保護及去保護。熟習此項技術者可容易確定對保護及去除保護基之需求及適當保護基之選擇。保護基之化學描述於例如Kocienski,Protecting Groups , (Thieme, 2007)；Robertson,Protecting Group Chemistry , (Oxford University Press, 2000)；Smith等人,March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure , 第6版(Wiley, 2007)；Peturssion等人, 「Protecting Groups in Carbohydrate Chemistry」,J. Chem. Educ ., 1997,74 (11), 1297；及Wuts等人,Protective Groups in Organic Synthesis , 第4版, (Wiley, 2006)中。

反應可根據此項技術中已知的任何適合方法來進行監測。舉例而言，產物形成可藉由光譜手段(諸如核磁共振光譜法(例如，¹ H或¹³ C)、紅外光譜法、分光光度法(例如，UV-可見光)、質譜法)或藉由層析方法(諸如高效液相層析(HPLC)或薄層層析(TLC))來進行監測。

以下流程提供與製備本發明之化合物有關的一般指導。熟習此項技術者將理解，可使用有機化學之常識修改或最佳化流程中所展示之製劑，以製備各種本發明化合物。

可例如使用如以下流程中說明之方法來製備式(I)化合物。

流程 1 ：合成直接結合物

含有固有硫醇(R² -SH)之小分子微管靶向部分(諸如DM1或DM4)可藉由形成吡啶基二硫化物(其中X為例如H、鹵基等)來活化，該吡啶基二硫化物可在二硫化物交換反應中經含硫醇之R¹ 肽置換以得到所需結合物，其中-S-S-為連接部分L。

流程 2 ：合成直接結合物

替代地，具有固有硫醇之R¹ 肽可藉由形成吡啶基二硫化物(II)來活化，該吡啶基二硫化物(II)可在二硫化物交換反應中經含硫醇之R² 置換以得到所需直接結合物，其中L為-S-S-。

流程 3 ：合成硫乙胺醯胺結合物

含有已經作為吡啶基二硫化物V活化之硫醇基的受保護乙胺可在二硫化物交換反應中與含硫醇之R² 反應以得到VII。二硫化物VII可經去保護以得到VIII且在酸性偶合反應中進一步與順丁烯二醯亞胺丙酸IX反應以得到醯胺X。醯胺X可在邁克爾添加劑(Michael addition)中與含硫醇之肽反應以得到所需結合物。

流程 4 ：合成硫基丁醯胺結合物

已經作為吡啶基二硫化物XI活化之含硫醇之丁酸可在二硫化物交換反應中與含硫醇之R² 反應以得到XII。二硫化物酸XII可在酸性偶合反應中與乙胺基順丁烯二醯亞胺XIII反應以得到醯胺XIV。醯胺XIV可在邁克爾添加劑中與含硫醇之肽反應以得到所需結合物。

肽R¹ 可使用首先由Merrifield在J.A.C.S., 第85卷, 第2149-2154頁(1963)中描述之固相合成方法來製備，儘管亦可採用其他技術已知之方法。Merrifield技術為眾所周知的且為製備肽之常用方法。用於固相肽合成之有用技術描述於數本書(諸如Bodanszky之文本「Principles of Peptide Synthesis」, Springer Verlag 1984)中。此合成方法涉及逐步地將受保護胺基酸添加至藉由共價鍵結合至固體樹脂粒子之生長肽鏈。藉由此程序，藉由過濾移除試劑及副產物，由此消除純化中間物之必要性。此方法之一般概念視藉由共價鍵使鏈之第一個胺基酸連接至固體聚合物，隨後以逐步方式一次一個地添加後續受保護胺基酸直至所需序列經組裝而定。最後，自固體樹脂載體移除受保護肽且裂解保護基。

胺基酸可連接至任何適合的聚合物。聚合物必須不溶於所使用之溶劑，必須具有准許隨時過濾之穩定物理形式，且必須含有第一個胺基酸可藉由共價鍵緊密連接之官能基。各種聚合物適用於此目的，諸如纖維素、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸甲酯及聚苯乙烯。

使用方法 本文提供式(I)化合物在治療疾病(諸如癌症或神經退化性疾病)中之用途。本發明之另一態樣為式(I)化合物在治療涉及酸性或缺氧患病組織之疾病(諸如癌症)中之用途。缺氧及酸中毒為許多疾病過程(包括癌症)之生理標記。在癌症中，缺氧為引起實體腫瘤內酸環境之發展的一個機制。因此，氫離子必須自細胞(例如，藉由質子泵)移除以維持細胞內之正常pH。由於氫離子之此輸出，在與正常細胞相比時，癌細胞在細胞膜脂質雙層上之pH梯度增加且胞外環境之pH較低。一種改善細胞毒性劑之功效及治療指數的方法為充分利用此生理特徵以提供將化合物選擇性遞送至健康組織內之缺氧細胞。

在此等治療方法中，治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可作為單一試劑投與或與其他形式之療法(諸如在癌症之情況下的電離輻射或細胞毒性劑)組合投與。在組合療法中，如由熟習此項技術者將瞭解，可在其他治療模式之前、同時或之後投與式(I)化合物。任一治療方法(單一藥劑或與其他形式之療法之組合)可作為涉及多個劑量或歷經一段時間之治療的治療過程投與。

可使用本發明之化合物治療的癌症之實例包括(但不限於)結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭頸癌、皮膚或眼內惡性黑素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區域之癌症、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、輸卵管癌、子宮內膜癌(carcinoma of the endometrium)、子宮內膜癌(endometrial cancer)、子宮頸癌、***癌、外陰癌、霍奇金氏病(Hodgkin's Disease)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)、食道癌、小腸癌、內分泌系統癌症、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴母細胞白血病、慢性淋巴球性白血病)、兒童實體腫瘤、淋巴球性淋巴瘤、膀胱癌、腎癌或尿道癌、腎盂癌、中樞神經系統(CNS)贅瘤、原發性CNS淋巴瘤、腫瘤血管生成、脊柱腫瘤(spinal axis tumor)、腦幹神經膠質瘤、垂體腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、表皮樣癌(epidermoid cancer)、鱗狀細胞癌、T細胞淋巴瘤、環境誘導之癌症(包括由石棉誘導之彼等癌症)，及該等癌症之組合。

在一些實施例中，可用本發明之化合物治療的癌症包括膀胱癌、骨癌、神經膠質瘤、乳癌(例如，三陰性乳癌)、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、上皮細胞癌、食道癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、胰臟癌、膽囊癌、胃癌(gastric cancer)、胃腸道腫瘤、頭頸癌(上呼吸道消化性癌症(upper aerodigestive cancer))、腸癌、卡波西氏肉瘤、腎癌、喉癌、肝癌(例如，肝細胞癌)、肺癌(例如，非小細胞肺癌、腺癌)、黑素瘤、***癌、直腸癌、腎透明細胞癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、甲狀腺癌及子宮癌。

在一些實施例中，可用本發明之化合物治療的癌症包括黑素瘤(例如，轉移性惡性黑素瘤)、腎癌(例如，透明細胞癌)、***癌(例如，激素難治性***腺癌)、乳癌、三陰性乳癌、結腸癌及肺癌(例如，非小細胞肺癌及小細胞肺癌)。另外，本發明包括可使用本發明之化合物抑制其生長之難治性或復發性惡性病。

在一些實施例中，可使用本發明之化合物治療的癌症包括(但不限於)實體腫瘤(例如，***癌、結腸癌、食道癌、子宮內膜癌、卵巢癌、子宮癌、腎癌、肝癌、胰臟癌、胃癌、乳癌、肺癌、頭頸癌、甲狀腺癌、神經膠母細胞瘤、肉瘤、膀胱癌等)、血液癌(例如，淋巴瘤、白血病(諸如急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML))、DLBCL、套細胞淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤(包括復發性或難治性NHL及復發性濾泡)、霍奇金淋巴瘤或多發性骨髓瘤)及該等癌症之組合。

在某些實施例中，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可與化學治療劑、靶向癌症療法、免疫療法或放射療法組合使用。藥劑可以單一劑型之形式與本發明化合物組合，或藥劑可以單獨劑型之形式同時或依序投與。在一些實施例中，當與式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽一起投與時，與當與對應微管靶向劑(例如，R² -H)組合投與時相比，化學治療劑、靶向癌症療法、免疫療法或放射療法對患者之毒性較小，諸如藉由展示降低的骨髓毒性。

適合的化學治療劑或其他抗癌劑包括例如烷基化劑(包括但不限於氮芥(nitrogen mustard)、乙烯亞胺衍生物、磺酸烷基酯、亞硝基脲及三氮烯)，諸如尿嘧啶氮芥、氮芥(chlormethine)、環磷醯胺(Cytoxan^TM )、異環磷醯胺、美法侖(melphalan)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、哌泊溴烷(pipobroman)、三伸乙基-三聚氰胺、三伸乙基硫代磷胺、白消安(busulfan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、鏈脲佐菌素(streptozocin)、達卡巴嗪(dacarbazine)及替莫唑胺(temozolomide)。

與本發明之化合物組合使用的其他適合藥劑包括：達卡巴嗪(DTIC)，視情況以及其他化學療法藥物(諸如卡莫司汀(BCNU)及順鉑(cisplatin))；「達特茅斯方案(Dartmouth regimen)」，其由DTIC、BCNU、順鉑及他莫昔芬(tamoxifen)組成；順鉑、長春鹼(vinblastine)及DTIC之組合；或替莫唑胺。根據本發明之化合物亦可與免疫療法藥物組合，包括細胞介素，諸如干擾素α、介白素2及腫瘤壞死因子(TNF)。

適合的化學治療劑或其他抗癌劑包括例如抗代謝物(包括(但不限於)葉酸拮抗劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物及腺苷脫胺酶抑制劑)，諸如甲胺喋呤(methotrexate)、5-氟尿嘧啶、氟尿苷(floxuridine)、阿糖胞苷(cytarabine)、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、磷酸氟達拉濱(fludarabine phosphate)、噴司他丁(pentostatine)及吉西他濱(gemcitabine)。

適合的化學治療劑或其他抗癌劑進一步包括例如某些天然產物及其衍生物(例如，長春花生物鹼、抗腫瘤抗生素、酶、淋巴因子及表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin))，諸如長春鹼、長春新鹼(vincristine)、長春地辛(vindesine)、博萊黴素(bleomycin)、放線菌素(dactinomycin)、道諾比星(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊達比星(idarubicin)、阿糖胞苷(ara-C)、太平洋紫杉醇(TAXOL^TM )、光神黴素(mithramycin)、去氧助間型黴素(deoxycoformycin)、絲裂黴素-C (mitomycin-C)、L-天冬醯胺酶、干擾素(尤其IFN-a)、依託泊苷(etoposide)及替尼泊苷(teniposide)。

可與本發明之化合物組合投與的其他細胞毒性劑包括例如諾維本(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑(anastrazole)、來曲唑(letrazole)、卡培他濱(capecitabine)、雷洛昔芬(reloxafine)、環磷醯胺、異環磷醯胺及著洛昔芬(droloxafine)。

亦適合的為細胞毒性劑，諸如(例如)表葉毒素(epidophyllotoxin)；抗贅生性酶；拓樸異構酶抑制劑；丙卡巴肼(procarbazine)；米托蒽醌(mitoxantrone)；鉑配位複合物，諸如順鉑及卡鉑(carboplatin)；生物反應調節劑；生長抑制劑；抗激素治療劑；甲醯四氫葉酸(leucovorin)；喃氟啶(tegafur)；及造血生長因子。

其他抗癌劑包括抗體療法，諸如曲妥珠單抗(trastuzumab) (赫賽汀(Herceptin))；共刺激分子(諸如CTLA-4、4-1BB及PD-1)之抗體；或細胞介素(IL-10、TGF-α等)之抗體。

其他抗癌劑亦包括阻斷免疫細胞遷移之彼等抗癌劑，諸如針對趨化因子受體(包括CCR2及CCR4)之拮抗劑。

其他抗癌劑亦包括增強免疫系統之彼等抗癌劑，諸如佐劑或接受性T細胞轉移。

可與本發明之化合物組合投與的抗癌疫苗包括例如樹突狀細胞、合成肽、DNA疫苗及重組病毒。

與本發明之化合物組合使用的其他適合藥劑包括化學療法組合，諸如用於肺癌及其他實體腫瘤中的基於鉑之雙聯體(順鉑或卡鉑加吉西他濱；順鉑或卡鉑加多西他賽；順鉑或卡鉑加太平洋紫杉醇；順鉑或卡鉑加培美曲塞(pemetrexed))或吉西他濱加太平洋紫杉醇結合顆粒(Abraxane®)。

本發明之化合物可有效地與抗激素劑組合以用於治療乳癌及其他腫瘤。適合實例為抗***劑，包括(但不限於)他莫昔芬及托瑞米芬(toremifene)；芳香酶抑制劑，包括(但不限於)來曲唑(letrozole)、阿那曲唑及依西美坦(exemestane)；腎上腺皮質類固醇(例如，強的松(prednisone))；孕激素(例如，醋酸甲地孕酮(megastrol acetate))；及***受體拮抗劑(例如，氟維司群(fulvestrant))。用於治療***癌及其他癌症的適合抗激素劑亦可與本發明之化合物組合。此等包括抗雄激素，包括(但不限於)氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)及尼魯胺(nilutamide)；促黃體素釋放激素(LHRH)類似物，包括亮丙瑞林(leuprolide)、戈舍瑞林(goserelin)、曲普瑞林(triptorelin)及組胺瑞林(histrelin)；LHRH拮抗劑(例如，地加瑞克(degarelix))；雄激素受體阻斷劑(例如，恩雜魯胺(enzalutamide))；及抑制雄激素產生之藥劑(例如，阿比特龍(abiraterone))。

本發明之化合物可與其他針對膜受體激酶之藥劑組合或依序投與，尤其用於對靶向療法已產生原發性或獲得性耐藥性之患者。此等治療劑包括針對EGFR、Her2、VEGFR、c-Met、Ret、IGFR1或Flt-3及針對癌症相關融合蛋白激酶(諸如Bcr-Abl及EML4-Alk)之抑制劑或抗體。針對EGFR之抑制劑包括吉非替尼(gefitinib)及埃羅替尼(erlotinib)且針對EGFR/Her2之抑制劑包括(但不限於)達可替尼(dacomitinib)、阿法替尼(afatinib)、拉匹替尼(lapitinib)及奈拉替尼(neratinib)。針對EGFR之抗體包括(但不限於)西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)及耐昔妥珠單抗(necitumumab)。c-Met之抑制劑可與本發明之化合物組合使用。此等包括奧妥珠單抗(onartumzumab)、替伐尼布(tivantnib)及INC-280。針對Abl (或Bcr-Abl)之藥劑包括伊馬替尼(imatinib)、達沙替尼(dasatinib)、尼羅替尼(nilotinib)及普納替尼(ponatinib)且針對Alk (或EML4-ALK)之彼等藥劑包括克唑替尼(crizotinib)。

血管生成抑制劑與本發明之化合物組合可在一些腫瘤中有效。此等抑制劑包括針對VEGF或VEGFR之抗體或VEGFR之激酶抑制劑。針對VEGF之抗體或其他治療蛋白包括貝伐珠單抗(bevacizumab)及阿柏西普(aflibercept)。VEGFR激酶之抑制劑及其他抗血管生成抑制劑包括(但不限於)舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、西地尼布(cediranib)、帕唑帕尼(pazopanib)、瑞格非尼(regorafenib)、布立尼布(brivanib)及凡德他尼(vandetanib)。

胞內信號傳導路徑之活化在癌症中為常見的，且靶向此等路徑之組分的藥劑已與受體靶向劑組合以增強功效且降低耐藥性。可與本發明之化合物組合的藥劑之實例包括PI3K-AKT-mTOR路徑之抑制劑、Raf-MAPK路徑之抑制劑、JAK-STAT路徑之抑制劑及蛋白質伴隨蛋白及細胞週期進程之抑制劑。

針對PI3激酶之藥劑包括(但不限於)皮拉昔布(pilaralisib)、艾德昔布(idelalisib)、布帕昔布(buparlisib)。mTOR之抑制劑(諸如雷帕黴素(rapamycin)、西羅莫司(sirolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)及依維莫司(everolimus))可與本發明之化合物組合。其他適合實例包括(但不限於)維羅非尼(vemurafenib)及達拉非尼(dabrafenib) (Raf抑制劑)及曲美替尼(trametinib)、司美替尼(selumetinib)及GDC-0973 (MEK抑制劑)。一或多種JAK (例如，盧利替尼(ruxolitinib)、巴瑞替尼(baricitinib)、托法替尼(tofacitinib))、Hsp90 (例如，坦螺旋黴素)、週期蛋白依賴性激酶(例如，帕博西尼(palbociclib))、HDAC (例如，帕比司他(panobinostat))、PARP (例如，奧拉帕尼(olaparib))及蛋白酶體(例如，硼替佐米(bortezomib)、卡非佐米(carfilzomib))之抑制劑亦可與本發明之化合物組合。可與本發明之化合物組合的PARP抑制劑之另一實例為他拉唑帕尼(talazoparib)。

安全且有效投與大部分此等化學治療劑之方法為熟習此項技術者所已知。另外，其投藥描述於標準文獻中。舉例而言，多種化學治療劑之投藥描述於「Physicians' Desk Reference」(PDR，例如1996版, Medical Economics Company, Montvale, NJ)中，其揭示內容如同闡述於其全文中一般以引用之方式併入本文中。

片語化合物(治療劑、活性成分、藥物等)之「治療有效量」係指根據待治療之病症或病況之臨床上可接受標準，向需要緩解症狀、改善病況或減緩疾病病況發作之療法或治療的個體投與的化合物之量。舉例而言，治療有效量可為已在活體外分析、活體內動物分析或臨床試驗中證實具有所需治療作用的量。治療有效量可基於特定劑型、投藥方法、治療方案、待治療之特定疾病或病況、益處/風險比等以及若干其他因素而變化。

該治療有效量可獲自臨床試驗、動物模型或活體外細胞培養分析。此項技術中已知可由自動物模型或活體外細胞培養分析測定之有效量來計算適合於人類使用之有效量。舉例而言，如由Reagan-Shaw等人, FASEB J. 2008: 22(3) 659-61所報導，「μg/ml」(基於活體外細胞培養分析之有效量) =「毫克/公斤體重/天」(小鼠之有效量)。此外，基於小鼠之代謝速率比人類之代謝速率快6倍的事實，可由小鼠之有效量來計算人類之有效量。

作為使用式(I)化合物以及細胞毒性劑進行治療之一實例，可向患有癌症之患者投與治療有效量之式(I)化合物作為治療方案之部分，該治療方案亦涉及治療有效量之電離輻射或細胞毒性劑。在此治療方案之情形中，術語「治療有效」量應理解意謂在組合療法中有效。在癌症治療領域中熟悉此項技術者應理解如何調節劑量以達成最佳治療結果。

類似地，可藉由在醫學領域中熟悉此項技術者容易地測定用於治療非癌性疾病或病況(諸如心血管疾病)的本發明之化合物之適當劑量。

如本文所使用，術語「治療」包括投與化合物或組合物，相對於未接受化合物或組合物之個體，該化合物或組合物降低個體中涉及酸性或缺氧患病組織之疾病(諸如癌症、中風、心肌梗塞或長期神經退化性疾病)之症狀之頻率、延緩其發作或減少其進展。此可包括以改善或穩定個體病況之方式逆轉、減少或抑制症狀、臨床症狀或病況之潛在病變(例如，腫瘤生長、癌症之消退或減少或改善心肌梗塞、中風或類似心血管疾病中之心肌缺血再灌注損傷)。術語「抑制」或「減少」用於癌症，係指與未經治療之對照群體相比，抑制或減少群體之腫瘤生長(例如，減小腫瘤大小)之方法。

出於描述且揭示之目的，本文所提及之所有公開案(包括專利)均以引用之方式併入本文中，例如：公開案中所描述之構築體及方法可能用在本文所描述之相關揭示內容中。貫穿本文論述之公開案僅提供在本申請案之申請日之前的其揭示內容。

本文揭示若干類型之範圍。當揭示或主張任何類型之範圍時，意欲個別地揭示或主張該範圍可合理涵蓋之各個可能的數字，包括範圍之端點以及其中涵蓋之任何子範圍及子範圍之組合。例如：當揭示或主張活性成分之治療有效量之範圍時，意欲個別地揭示或主張該範圍可涵蓋的與本文揭示內容一致的每一個可能的數字。舉例而言，揭示化合物之治療有效量可為介於約1 mg/kg至約50 mg/kg (個體體重)之範圍。

調配物、劑型及投藥 為製備本發明之醫藥組合物，根據習知醫藥混配技術，將式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽作為均勻摻合物中之活性成分，與醫藥載劑組合，該載劑可視投藥所需之製劑形式(例如，經口或非經腸)而採用廣泛多種形式。在製備呈口服劑型之組合物時，可採用常用醫藥介質中之任一者，諸如(例如)水、二元醇、油、醇、調味劑、防腐劑、著色劑及其類似物，係用在口服液體製劑之情況下，諸如(例如)懸浮液、酏劑及溶液；或諸如澱粉、糖、稀釋劑、成粒劑、潤滑劑、黏合劑、崩解劑及其類似物之載劑，係用在口服固體製劑之情況下，諸如(例如)粉劑、膠囊及錠劑。由於錠劑及膠囊易於投藥，所以其代表最有利的口服單位劑型，在此情況下顯然採用固體醫藥載劑。若需要時，錠劑可藉由標準技術包覆糖衣或包覆腸溶包衣。對於非經腸投藥時，載劑將通常包含無菌水，但可包括其他成分，例如用於促進溶解或防腐目的。亦可製備可注射懸浮液，在此情況下，可採用適當液體載劑、懸浮劑及其類似物。在醫藥及醫學領域中熟悉此項技術者將能夠容易地確定用於待治療之特定疾病或病況的本發明之醫藥組合物之適合劑量。

實例如本文所使用，所有縮寫、符號及定則均與當代科學文獻中所使用之彼等縮寫、符號及定則一致。參見例如Janet S. Dodd編,The ACS Style Guide: A Manual for Authors and Editors , 第2版, Washington, D.C.: American Chemical Society, 1997。以下定義描述本文所使用之術語及縮寫： ● 鹽水：含飽和NaCl溶液之水 ● DCM：二氯甲烷 ● TFA：三氟乙酸 ● DIPEA：二異丙基乙胺 ● DMA：二甲基乙醯胺 ● DME：二甲氧基乙烷 ● DMF：二甲基甲醯胺 ● DMSO：甲基亞碸 ● DTT：二硫蘇糖醇 ● MSD：質譜偵測器 ● Et₂ O：*** ● EtOAc：乙酸乙酯 ● EtOH：乙醇 ● HATU：O-(7-氮雜苯并***-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽 ● HOBt：1-羥基苯并*** ● RP：逆相 ● HPLC：高效液相層析 ● IPA：異丙醇 ● LAH：氫化鋰鋁 ● N-BuLi：正丁基鋰 ● LC-MS：液相層析-質譜 ● LDA：二異丙基乙醯胺鋰 ● Me：甲基 ● MeOH：甲醇 ● MTBE：甲基第三丁基醚 ● NMP：N-甲基吡咯啶 ● Ph：苯基 ● PNPC：對硝基苯氯甲酸酯 ● RT或rt：室溫 ● SFC：超臨界流體層析 ● TBAI：碘化四丁銨 ● TBME：第三丁基甲基醚 ● tBu：第三丁基 ● THF：四氫呋喃 ● TEA：三乙胺 ● TMEDA：四甲基乙二胺 ● GSH：麩胱甘肽 ● GS：硫上結合之麩胱甘肽 ● LiOH：氫氧化鋰 ● DPPA：二苯基磷醯基疊氮化物 ● Sn(Bu)₂ (Laurate)₂ ：二月桂酸二丁基錫 ● PBS：磷酸鹽緩衝鹽水 ● ACN：乙腈 ● AcOH：乙酸 ● EEDQ：N -乙氧羰基-2-乙氧基-1,2-二氫喹啉 ● DMAP：4-二甲胺基吡啶 ● EDC：1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺

下文闡述所採用之HPLC方法。

HPLC 方法 A：Sunfire C18 150×4.6 mm；含TFA改質劑(0.05%)之H₂ O/乙腈；流速：1 ml/min；波長= 217 nM。 B：Ace Equivalence 250×4.6 mm；含TFA改質劑(0.05%)之H₂ O/乙腈；流速：1 ml/min；波長= 217 nM。 C：Sunfire C18 150×30 mm；含TFA改質劑(0.05%)之H₂ O/乙腈；流速：30 ml/min；波長= 217 nM。 D：Sunfire C18 150×4.6 mm；含AcOH改質劑(0.5%)之H₂ O/乙腈；流速：1 ml/min；波長= 217 nM。 E：Sunfire C18 150×30 mm；含AcOH改質劑(0.5%)之H₂ O/乙腈；流速：30 ml/min；波長= 217 nM。 F：Agilent 1100/1200/1260或1290系統(與MS聯用或不聯用)。

HPLC參數
行動相A	0.1% AcOH/水
行動相B	0.1% AcOH/ACN
管柱	Merck Chromolith RP-18e
管柱溫度	rt
自動取樣器溫度	rt
注射體積	5 µL
流速	1毫升/分鐘
波長	在λ = 254, 220或280 nm處之Agilent二極體陣列偵測器
梯度方案	時間(min)	% A	% B
初始	95.00	5.00
4.00	5.00	95.00
4.99	5.00	95.00
5.00	95.00	5.00
6.00	95.00	5.00
運行時間	6.00

G：Agilent 1100/1200/1260或1290系統(與MS聯用或不聯用)。

HPLC 參數
行動相A	0.1% TFA/水
行動相B	0.1% TFA/ACN
管柱	Agilent Eclipse XDB C8管柱(3.5 µm，4.6 × 150 mm)
管柱溫度	40℃
自動取樣器溫度	rt
注射量	5 µL
流速	1.5毫升/分鐘
波長	在λ = 254, 220或280 nm處之Agilent二極體陣列偵測器
梯度方案	時間(min)	% A	% B
初始	80.00	20.00
0.20	80.00	20.00
7.50	20.00	80.00
8.00	0.00	100.00
9.00	0.00	100.00
10.00	80.00	20.00
運行時間	10.00

質譜方法 在Applied Biosystems Voyager System 6268上量測Maldi-TOF (基質輔助雷射脫附/電離-飛行時間)質譜。在AB Science盤(Part# V700666)上將樣品製備為α-氰基羥基肉桂酸之基質。

在具有1946 MSD之Agilent 1100系列LC-MS或Waters Xevo Qtof高解析度MS上量測電噴霧電離(ESI)質譜，從而皆提供質量/電荷物種(m/z=3)。

實例中所採用之起始材料之來源闡述於下表中。表2. R² 之起始材料

R² 碼	R² H結構	合成，參考或購買
R² SH-1		MedKoo 123212
R² SH-2		MedKoo 206839
R² SH-3		US 20040235840 A1

合成中間物 I (R² S-S-Pyr)

向含(2S)-2-[甲基(3-硫基丙醯基)胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (46.7 mg，0.06 mmol)之1 mL CH₃ CN中添加2-(2-吡啶基二硫基)吡啶(20.0 mg，0.09 mmol)。將混合物濃縮且純化(SiO₂ ，0-10% MeOH/CH₂ Cl₂ )以得到(2S)-2-[甲基-[3-(2-吡啶基二硫基)丙醯基]胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (53.6 mg，產率：100%)。MS m/z 847.1 [M+H]⁺ 。

合成 Pv3-S-Pyr ( 中間物 II-3)

將Pv3 (250 mg，0.06 mmol；呈自由流動固體形式)及2-(2-吡啶基二硫基)吡啶(0.110 g，0.5 mol)溶解於MeOH (10 mL)中且將反應物在室溫下攪拌隔夜。LC-MS指示所需產物形成。濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於DMSO中且藉由逆相管柱層析(40-65% CH₃ CN/H₂ O (0.5% AcOH)，13 min)純化以得到212 mg所需產物(187 mg，產率：74.9%)。MS m/z=3 1273.4。

使用Pv1、Pv2及Pv6，類似於II-3來製備中間物II-1、II-2及II-6，如下文所示：

中間物	結構	MS A: Maldi-TOF B: m/z=3
II-1	Pv1-SPyr	B: 1130.1
II-2	Pv2-SPyr	B: 1373.9
II-3	Pv3-SPyr	B: 1273.4
II-6	Pv6-SPyr	B: 1450.3

表3. L基團之起始材料

中間物	結構	購買、參考或合成
III-1		Enamine EN3000-33931
III-2		Astatech 39541
III-3		Enamine EN3000-6731388
III-4		Enamine EN3000-6731596
III-5		Astatech 39018

合成中間物 VI-2

將1-胺基-2-甲基-丙烷-2-硫醇鹽酸鹽(100 mg，0.706 mmol)溶解於CH₂ Cl₂ (7 mL)中且向其中添加氯甲酸9H-茀-9-基甲酯(274 mg，1.06 mmol)及N,N -二異丙基乙胺(182 mg，1.41 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌隔夜。用水洗滌反應混合物且濃縮。藉由管柱層析(0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物以得到N-(2-甲基-2-硫基-丙基)胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(213 mg，產率：92.2%)。MS m/z 350.1 [M+Na]⁺ 。

合成中間物 V-1

將2-(2-吡啶基二硫基)吡啶(746 mg，3.38 mmol)溶解於MeOH (15 mL)中且向其中添加N-(2-硫基乙基)胺基甲酸第三丁酯(200 mg，1.13 mmol)。將反應物在室溫下攪拌3 h。濃縮混合物且藉由管柱層析(0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物以得到N-[2-(2-吡啶基二硫基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(200 mg，產率：61.9%)。MS m/z 287.1 [M+H]⁺ 。

合成中間物 V-2

將2-(2-吡啶基二硫基)乙胺鹽酸鹽(200 mg，0.898 mmol)溶解於CH₂ Cl₂ 中且向其中添加氯甲酸9H-茀-9-基甲酯(348 mg，1.35 mmol)及N,N -二異丙基乙胺(232 mg，1.80 mmol)。將反應混合物在RT下攪拌2h，用水洗滌且濃縮。藉由管柱層析(0-50% EtOAc/己烷)純化殘餘物以得到N-[2-(2-吡啶基二硫基)乙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(288 mg，產率：78.5%)。MS m/z 409.1 [M+H]⁺ 。

合成中間物 VII-1

向含有含(2S)-2-[甲基(3-硫基丙醯基)胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (25.0 mg，0.03 mmol)之1 mL CH₃ CN的小瓶中添加N-[2-(2-吡啶基二硫基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(中間物V-1，14.5 mg，0.051 mmol)及4-甲基嗎啉(0.138 mL，1.25 mmol)。將混合物攪拌16 h。LC-MS分析指示所需材料。將混合物濃縮，溶解於50 mL EtOAc中且用1×25 mL飽和NH₄ Cl及1×25 mL飽和鹽水洗滌。有機相經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗殘餘物純化(SiO₂ ，0-100% EtOAc/己烷)以得到(2S)-2-[3-[2-(第三丁氧基羰基胺基)乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (30.9 mg，產率：100%)。MS m/z 913.2 [M+H]⁺ 。

合成中間物 VII-2

使用中間物V-2代替中間物V-1，類似於VII-1來製備中間物VII-2。

合成中間物 VII-3

向含有含(2S)-2-[3-[2-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (25.0 mg，0.03 mmol)之1 mL CH₃ CN的小瓶中添加N-(2-甲基-2-硫基-丙基)胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(14.5 mg，0.044 mmol)及4-甲基嗎啉(0.120 mL，1.09 mmol)。將混合物攪拌16 h。LC-MS分析指示所需材料形成。將混合物濃縮，溶解於50 mL EtOAc中且用1×25 mL飽和NH₄ Cl及1×25 mL飽和鹽水洗滌。有機相經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗殘餘物純化(SiO₂ ，0-100% EtOAc/己烷)為(2S)-2-[3-[[2-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)-1,1-二甲基-乙基]二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (0.0313 g，產率：100%)。MS m/z 1085.0 [M+Na]⁺ 。

合成中間物 VIII-1 ( BOC 去保護 )

將(2S)-2-[3-[2-(第三丁氧基羰基胺基)乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (31.9 mg，0.05 mmol)溶解於0.3/0.1/0.1 mL CH₃ CN/H₂ O/TFA中。將混合物攪拌36 h。LC-MS指示完全去保護。藉由製備型HPLC (含0.05% TFA之20-95% CH₃ CN/H₂ O)純化混合物以得到(2S)-2-[3-(2-胺乙基二硫基)丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯]；2,2,2-三氟乙酸(22.9 mg，產率：70.7%)。MS m/z 813.2 [M+H]⁺ 。

替代合成中間物 VIII-1 (FMOC 去保護 )

向含有(2S)-2-[3-[2-(9H-茀-9-基甲氧羰基胺基)乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (中間物VII-2；29.6 mg，0.03 mmol)之小瓶中添加0.5 mL DMF及4-甲基嗎啉(0.120 mL，1.09 mmol)。將混合物在40℃下加熱16 h。LC-MS證實完全去保護。藉由(含0.05% TFA之20-95% CH₃ CN/H₂ O)純化混合物以得到(2S)-2-[3-(2-胺乙基二硫基)丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯]三氟乙酸鹽(22.9 mg，產率：86.4%)。MS m/z 813.2 [M+H]⁺ 。

合成中間物 VIII-2

類似於中間物VIII-1來製備中間物VIII-2。MS m/z 841.2 [M+H]⁺ 。

合成中間物 X-1

向含(2S)-2-[3-(2-胺乙基二硫基)丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯]三氟乙酸鹽(中間物VIII-1；45.8 mg，0.05 mmol)之1 mL DMF中添加3-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)丙酸(12.5 mg，0.074 mmol)、TBTU (23.8 g，0.074 mmol)及DIPEA (0.0169 mL，0.1 mmol)。LC-MS指示完全轉化為產物。將混合物用50 mL EtOAc稀釋。用1×25 mL飽和NH₄ Cl、4×25 mL H₂ O及1×25 mL H₂ O洗滌此混合物。有機相經MgSO₄ 乾燥，過濾且濃縮。將粗產物純化(SiO₂ ，0-10% MeOH/CL₂ Cl₂ )以得到(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)丙醯基胺基]乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (17.3 mg，產率：36.5%) MS m/z 986.1 [M+Na]⁺ 。

實例 2 ：合成化合物 2

向含有Pv2 (25.0 mg，0.006 mmol；呈自由流動固體形式)及(2S)-2-[甲基-[3-(2-吡啶基二硫基)丙醯基]胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (7.70 mg，0.009 mmol)之小瓶中添加1 mL脫氣DMF及0.5 mL脫氣H₂ O。向其中添加CH₃ CO₂ H (0.0103 mL，0.180 mmol)。將混合物攪拌72 h。LC-MS指示所需產物之形成。藉由製備型HPLC (Sunfire C18 150×30 mm；含0.5% AcOH改質劑之20-77% H₂ O/乙腈；運行15 min；流速：30ml/min；波長= 217 nM)純化混合物以得到所需結合物(17.0 mg，產率：59.1%)。

實例 6：合成化合物 6

向含有Pv2-SPyr (中間物II-2；27.0 mg，6.55e-6 mol)及(2S)-2-[甲基-(4-甲基-4-硫基-戊醯基)胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10,12,14(26),16,18-五烯-6-基酯] (7.67 mg，0.01mmol)之小瓶中。向其中添加1 mL脫氣DMF及0.5 mL脫氣H₂ O。向其中添加CH₃ CO₂ H (0.015 mL，0.262 mmol)。將混合物攪拌72 h。LC-MS指示所需產物之形成。藉由製備型HPLC (Sunfire C18 150×30 mm；含0.5% AcOH改質劑之20-80% H₂ O/乙腈；運行16 min；流速：30ml/min；波長= 217 nM)純化混合物以得到所需結合物(11.4 mg，產率：36.6%)。

實例 9.合成化合物 9

向含有Pv2 (25.0 mg，0.006 mol；呈自由流動固體形式)及(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)丙醯基胺基]乙基二硫基]丙醯基-甲基-胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5 ]二十六碳-10(26),11,13,16,18-五烯-6-基酯] (中間物X-1；0.00877 g，0.01 mmol)之小瓶中添加1 mL CH₃ CN。混合物為異質的。向其中添加0.5 mL CH₃ CN、0.5 mL H₂ O及0.5 mL MeOH。未實現均質性。將混合物嚴密攪拌72 h。LC-MS指示所需產物之形成。藉由製備型HPLC (Sunfire C18 150×30 mm；含0.05% TFA改質劑之45-61% H₂ O/乙腈；運行13 min；流速：30ml/min；波長= 217 nM)純化混合物以得到所需結合物(21.1 mg，產率：70.0%)。

分別使用Pv1、Pv3及Pv4，類似於化合物2之化合物來合成化合物1、3及4。分別使用中間物II-1、II-3及II-6，類似於化合物6來合成化合物5、7及8。表4.實例化合物

化合物	結構	MS A: Maldi-TOF (M+) B: ESI (m/z=3)	條件 %ACN/H₂ O 運行時間 RT
1		B: 1339.3	D 20-95% 11min 7.28min
2		B: 1582.7	A 20-95% 11min 7.0min
3		B: 1483.8	D 20-95% 11min 7.82min
4		B: 1659.4	A 20-95% 11min 6.92min
5		B: 1352.8	A 20-95% 11min 6.81min
6		B: 1597.0	A 20-95% 11min 7.44min
7		B: 1487.1	A 20-95% 11min 6.60min
8		B: 1673.4	A 20-95% 11min 7.14min
9		B: 1659.4	A 20-95% 11min 7.16min

實例 5 ：詳細合成化合物 5 向含Pv1 (50.0 mg，1.48e-5 mol)及(2S)-2-[甲基-(4-甲基-4-硫基-戊醯基)胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基-12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳-10,12,14(26),16,18-五烯-6-基酯] (0.0150 g，1.92e-5 mol)之3 mL 2:1 CH₃ CN/H₂ O中添加N-甲基嗎啉(0.0600 mL，0.000546 mol)。將混合物攪拌36 h。LC-MS分析指示所需材料之形成。藉由Gilson製備型HPLC (Sunfire C18 30×150mm；含0.05% TFA之20-80% CH₃ CN/H₂ O；運行16 min；13.5 min)純化混合物以得到所需結合物。藉由Gilson製備型HPLC (Sunfire C18 30×150mm；含0.05% TFA之20-72% CH₃ CN/H₂ O；運行15 min；12.5 min；滯留時間：6.847 min)純化混合物以得到化合物5 (0.0322 g，7.94e-6mol，產率：53.8%)。ESI (m/z=3): 1352.8。

實例 5a ： 替代合成化合物 5

步驟 1. 製備 Pv1-S- 吡啶基 將肽Pv1及2,2′-二吡啶基二硫化物溶解於MeOH中且攪拌反應物隔夜。LC-MS指示所需產物形成。濃縮反應混合物且將殘餘物溶解於DMSO中並藉由逆相管柱層析(40-75% ACN/H₂ O (0.5% AcOH)，15 min)純化以得到212 mg所需產物。

步驟 2. 製備化合物 5 向含有Pv1-SPyr (25.0 mg，736e-6 mol)及(2S)-2-[甲基-(4-甲基-4-硫基-戊醯基)胺基]丙酸[(1S,2R,3S,6S,16E,18E,20R,21S)-11-氯-21-羥基12,20-二甲氧基-2,5,9,16-四甲基-8,23-二側氧基-4,24-二氧雜-9,22-二氮雜四環[19.3.1.110,14.03,5]二十六碳10,12,14(26),16,18-五烯-6-基酯] (0.00864 g，1.11e-5 mol)之小瓶中。向此混合物中添加1 mL脫氣DMF及0.5 mL脫氣H₂ O。添加CH₃ CO₂ H (0.017 mL，0.000295 mol)。將混合物攪拌72 h。LC-MS指示所需產物之形成。藉由Gilson製備型HPLC (Sunfire C18 30x150mm；20-80含0.5% AcOH之CH₃ CN/H₂ O；運行16 min；12.9 min)純化混合物以得到化合物5 (0.00750 g，1.85e-6mol，產率：25.1%)。

實例 10：合成化合物 10

步驟 1. N-(4-((2-((2,5- 二側氧基吡咯啶 -1- 基 ) 氧基 )-2- 側氧基乙基 ) 硫基 )-4- 甲基戊醯基 )-N- 甲基 -L- 丙胺酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將180 mg DM4 (0.23 mmol)及57 mg溴乙酸N-羥基丁二醯亞胺酯(0.24 mmol)溶解於DMF (4.6 mL)中且在冰水浴中冷卻。一次性添加36.2 µL DBU (0.24 mmol)且使混合物升溫至RT。此時LC/MS指示接近95%之轉化率且藉由添加0.1 mL AcOH來淬滅反應物。將粗反應混合物直接裝載至50 g C18Aq管柱上且經由標準10-100% B梯度(A：含0.05% AcOH之水；B：含0.05% AcOH之水)純化。將含有產物之級分凍乾以得到160 mg產物(77%產率)。254 nm處之HPLC純度：96%。滯留時間：2.83 min (方法F)。LCMS: 935.4 MH⁺ 。

步驟 2. N-(4-((2-((2- 胺乙基 ) 胺基 )-2- 側氧基乙基 ) 硫基 )-4- 甲基戊醯基 )-N- 甲基 -L- 丙胺酸 1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1+- 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將25 mg之N-(4-((2-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-2-側氧基乙基)硫基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(0.027 mmol)及36 mg之N1-((4-甲氧基苯基)二苯甲基)乙烷-1,2-二胺(0.11 mmol，4 eq)溶解於二噁烷(1 mL)。在3 h之後，反應似乎在LC/MS上完成。將混合物濃縮至乾燥且溶解於80% AcOH/水(2 mL)中。LC/MS展示完成中間物之去保護且將混合物直接凍乾。將殘餘物溶解於DMSO (1 mL)中且裝載至15.5 g C18Aq管柱上並經由標準5-100% B梯度(A：含0.05% AcOH之水；B：含0.05% AcOH之水)純化。將含有產物之級分凍乾以得到18 mg產物。254 nm處之HPLC純度：95%。滯留時間：2.17 min (方法F)。LCMS: 880.4 MH⁺ 。

步驟 3. (2S,18S)-2,3,7,7- 四甲基 -4,10,15- 三側氧基 -18-( 吡啶 -2- 基二硫烷基 )-16- 氧雜 -8- 硫雜 -3,11,14- 三氮雜壬癸酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將N-(4-((2-((2-胺乙基)胺基)-2-側氧基乙基)硫基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(14 mg，0.016 mmol)於DMF (0.2 mL)中之溶液添加至固體碳酸(S)-4-硝基苯酯(2-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酯) (6.6 mg，0.018 mmol)中。將催化性HOAt及DIEA (10 mL，0.057 mmol)添加至所得溶液中且在室溫下攪拌3小時。將溶液用乙酸(10 mL)中和且施加至逆相管柱(RediSEP C18 (15.5g))並用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到18 mg (85%產率)之標題產物。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：2.85 min (方法F)。LCMS: 1129.4 MNa⁺ 。

步驟 4. 合成化合物 10 將(2S,18S)-2,3,7,7-四甲基-4,10,15-三側氧基-18-(吡啶-2-基二硫烷基)-16-氧雜-8-硫雜-3,11,14-三氮雜壬癸酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(17.7 mg，0.00857 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液用碳酸氫鈉(1.8 mg，0.0214 mmol)及水(50 mL)處理。將所得溶液用肽、Pv1 (31.5 mg，0.0899 mmol)處理且在室溫下攪拌3小時，接著施加至逆相管柱(RediSep C18 (15.5 g))並用含乙酸銨(10 mM)之乙腈(30%至70%)/水之梯度溶離。將級分合併、冷凍且凍乾，以得到呈白色固體狀之產物，18.7 mg (50%)。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間: 6.49 min (方法G) LCMS: 2138.0 (M+2H)/2⁺ , 1425.3 (M+3H)/3⁺ 。

實例 11 ：合成化合物 11

步驟 1. N-(4-((4-((2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙基 ) 胺基 )-4- 側氧基丁基 ) 二硫烷基 )-4- 甲基戊醯基 )-N- 甲基 -L- 丙胺酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

在DMF (0.26 mL)中混合DM4 (10 mg，0.013 mmol)及4-(2-吡啶基二硫基)丁酸丁二醯亞胺酯(6 mg，0.02 mmol)。添加三乙胺(0.015 mL)且將混合物攪拌2 h。添加1-(2-胺乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(5 mg，0.026 mmol)且在3 h之後，將混合物直接裝載至RediSEP C18Aq (15.5 g)管柱上且用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到6 mg (40%產率)之標題產物。254 nm處之HPLC純度：92%。滯留時間：2.83 min (方法F)。LCMS: 1020.4 MH⁺ 。

步驟 2. 合成化合物 11 將N-(4-((4-((2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)胺基)-4-側氧基丁基)二硫烷基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(6 mg，0.006 mmol)之溶液及Pv1肽(22.3 mg，0.006 mmol)溶解於DMF (0.12 mL)中且用三乙胺(0.001 mL)處理。在30分鐘之後，將反應混合物直接裝載至RediSEP C8 (15.5 g)管柱上且用含TFA (0.05%)之乙腈(35%至75%)/水之梯度溶離以得到16 mg (64%產率)之標題化合物。254 nm處之HPLC純度：98%。滯留時間：6.19 min (方法G)。LCMS: 2150.2 (M+2H)/2⁺ , 1433.3 (M+3H)/3⁺ 。

實例 12. 合成化合物 12

步驟 1. (S)-1-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 )-16,16,20,21- 四甲基 -10,19- 二側氧基 -3,6- 二氧雜 -14,15- 二硫雜 -9,20- 二氮雜二十二烷 -22- 酸 ((1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S, 2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

在DMF (0.75 mL)中混合DM4 (20 mg，0.026 mmol)及4-(2-吡啶基二硫基)丁酸丁二醯亞胺酯(12 mg，0.04 mmol)。添加三乙胺(0.045 mL)且將混合物攪拌2 h。添加1-(21-(2-(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(9 mg，0.036 mmol)且在3 h之後，將混合物直接裝載至RediSEP C18Aq (15.5 g)管柱上且用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到17 mg (61%產率)。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：2.84 min (方法F)。LCMS: 1108.4 MH⁺ 。

步驟 2. 合成化合物 12 。將(S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-16,16,20,21-四甲基-10,19-二側氧基-3,6-二氧雜-14,15-二硫雜-9,20-二氮雜二十二烷-22-酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(15 mg，0.014 mmol)之溶液及Pv1肽(52 mg，0.015 mmol)溶解於DMF (0.28 mL)中且用三乙胺(0.006 mL)處理。在30分鐘之後，將反應混合物直接裝載至RediSEP C8 (15.5 g)管柱上且用含TFA (0.05%)之乙腈(35%至60%)/水之梯度溶離以得到25 mg (34%產率)。254 nm處之HPLC純度：98%。滯留時間：6.26 min (方法G)。LCMS: 2194.0 (M+2H)/2⁺ , 1463.0 (M+3H)/3⁺ 。

實例 13. 合成 化合物 13

步驟 1. (S)-1-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 )-13,13,17,18- 四甲基 -7,16- 二側氧基 -3- 氧雜 -11,12- 二硫雜 -6,17- 二氮十九 -19- 酸 1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

在DMF (0.75 mL)中混合DM4 (20 mg，0.026 mmol)及4-(2-吡啶基二硫基)丁酸丁二醯亞胺酯(12 mg，0.04 mmol)。添加三乙胺(0.045 mL)且將混合物攪拌2 h。添加1-(2-(2-胺基乙氧基)乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮鹽酸鹽(5 mg，0.024 mmol)且在3 h之後將混合物直接裝載至RediSEP C18Aq (15.5 g)管柱上且用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到13 mg (41%產率)之標題產物。254 nm處之HPLC純度：94%。滯留時間：2.85 min (方法F)。LCMS: 1064.4 MH⁺ 。

步驟 2. 合成化合物 13 將(S)-1-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-16,16,20,21-四甲基-10,19-二側氧基-3,6-二氧雜-14,15-二硫雜-9,20-二氮雜二十二烷-22-酸(14S,16S,32S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-氯-14-羥基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(18 mg，0.017 mmol)之溶液及Pv1肽(63 mg，0.019 mmol)溶解於DMF (0.34 mL)中且用三乙胺(0.007 mL)處理。在30分鐘之後，將反應混合物直接裝載至RediSEP C8 (15.5 g)管柱上且用含TFA (0.05%)之乙腈(35%至60%)/水之梯度溶離以得到25 mg (34%產率)之標題化合物。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：6.24 min (方法G)。LCMS: 2172.0 (M+2H)/2⁺ , 1448.7 (M+3H)/3⁺ 。

實例 14. 合成化合物 14

步驟 1. (S)-9,9,13,14- 四甲基 -1,6,12- 三側氧基 -1-(((1S,2S)-2-( 吡啶 -2- 基二硫 烷基 ) 環己基 ) 氧基 )-8- 硫雜 -2,5,13- 三氮雜十五烷 -15- 酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將N-(4-((2-((2-胺乙基)胺基)-2-側氧基乙基)硫基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(14 mg，0.016 mmol；實例10，步驟2)於DMF (0.2 mL)中之溶液添加至固體碳酸4-硝基苯酯((1S,2S)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)環己酯) (7.2 mg，0.018 mmol)中。將催化性HOAt及DIEA (10 mL，0.057 mmol)添加至所得溶液中且在室溫下攪拌3小時。將溶液用乙酸(10 mL)中和且施加至逆相管柱(RediSEP C18 (15.5 g))並用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到15 mg (80%產率)之標題化合物。254 nm處之HPLC純度：98%。滯留時間：3.05 min (方法F)。LCMS: 1147.4 MH⁺ 。

步驟 2. 合成化合物 14 將(S)-9,9,13,14-四甲基-1,6,12-三側氧基-1-(((1S,2S)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)環己基)氧基)-8-硫雜-2,5,13-三氮雜十五烷-15-酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(17 mg，0.015 mmol)之溶液及Pv1肽(47 mg，0.013 mmol)溶解於DMF (0.34 mL)中且用三乙胺(0.007 mL)處理。在30分鐘之後，將反應混合物直接裝載至RediSEP C8 (15.5 g)管柱上且用含TFA (0.05%)之乙腈(35%至60%)/水之梯度溶離以得到28 mg (37%產率)。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：7.36 min (方法G)。LCMS: 2158.0 (M+2H)/2⁺ , 1439.0 (M+3H)/3⁺ 。

實例 15. 合成化合物 15

步驟 1. (S)-5,9,9,13,14- 五甲基 -6,12- 二側氧基 -8- 硫雜 -2,5,13- 三氮雜十五烷 -15- 酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將25 mg之N-(4-((2-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-2-側氧基乙基)硫基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(0.027 mmol)及40 mg之N1-((3-甲氧苯基)二苯甲基)-N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(0.11 mmol，4 eq)溶解於二噁烷(1 mL)中。在3 h之後，反應似乎在LC/MS上完成。添加0.05 mL TFA且將混合物裝載至15.5 g C18Aq管柱上並經由標準5-100% B梯度(A：含0.05% TFA之水；B：含0.05% TFA之ACN)純化。將含有產物之級分凍乾以得到22 mg產物(75%產率)。254 nm處之HPLC純度：98%。滯留時間：2.25 min (方法F)。LCMS: 908.4 MH⁺ 。

步驟 2. (S)-2,5,9,9,13,14- 六甲基 -1,6,12- 三側氧基 -1-(((1S,2S)-2-( 吡啶 -2- 基二硫 烷基 ) 環己基 ) 氧基 )-8- 硫雜 -2,5,13- 三氮雜十五烷 -15- 酸 (1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ - 氯 -1⁴ - 羥基 -8⁵ ,14- 二甲氧基 -3³ ,2,7,10- 四甲基 -1² ,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將(S)-5,9,9,13,14-五甲基-6,12-二側氧基-8-硫雜-2,5,13-三氮雜十五烷-15-酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(15 mg，0.016 mmol)於DMF (0.2 mL)中之溶液添加至固體碳酸4-硝基苯酯((1S,2S)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)環己酯)(6.6 mg，0.018 mmol)中。將催化性HOAt及DIEA (10 mL，0.057 mmol)添加至所得溶液中且在室溫下攪拌3小時。將溶液用乙酸(10 mL)中和且施加至逆相管柱(RediSEP C18 (15.5g))並用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離以得到16 mg (82%產率)之標題產物。254 nm處之HPLC純度：97%。滯留時間：3.36 min (方法F)。LCMS: 1175.5 MH⁺ 。

步驟 3. 合成化合物 15 將(S)-2,5,9,9,13,14-六甲基-1,6,12-三側氧基-1-(((1S,2S)-2-(吡啶-2-基二硫烷基)環己基)氧基)-8-硫雜-2,5,13-三氮雜十五烷-15-酸(1⁴ S,1⁶ S,3² S,3³ S,2R,4S,10E,12E,14R)-8⁶ -氯-1⁴ -羥基-8⁵ ,14-二甲氧基-3³ ,2,7,10-四甲基-1² ,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(16 mg，0.014 mmol)之溶液及Pv1肽(52 mg，0.015 mmol)溶解於DMF (0.28 mL)中且用三乙胺(0.008 mL)處理。在30分鐘之後，將反應混合物直接裝載至RediSEP C8 (15.5 g)管柱上且用含TFA (0.05%)之乙腈(35%至60%)/水之梯度溶離以得到32 mg (44%產率)之標題化合物。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：6.86 min (方法G)。LCMS: 2172.0 (M+2H)/2⁺ , 1448.4 (M+3H)/3⁺ 。

實例 16. 合成化合物 16

步驟 1 . (4-((5- 硝基吡啶 -2- 基 ) 二硫烷基 ) 苯基 ) 甲醇

將(4-巰基苯基)甲醇(0.74 g，4.83 mmol)於THF (10 mL)中之溶液用5-硝基-2-((4-硝基苯基)二硫烷基)吡啶(1.0 g，3.23 mmol)處理。將所得懸浮液在室溫下攪拌2小時，且在真空中蒸發溶劑。將殘餘物溶解於DCM中且施加至RediSep矽膠管柱並用乙酸乙酯(10%至60%)/己烷之梯度溶離以得到產物(0.499 g，52%產率)。254 nm處之HPLC純度：90%。滯留時間：2.72 min (方法F)。MS資料, 295.1 (M+H)⁺ 。¹ HNMR(DMSO-d₆ ) d 9.18 (s, 1H), 8.58 (d of d, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.34 (d, 2H), 5.24 (t, 1H)及4.47 (d, 2H)。

步驟 2. 碳酸 4- 硝苯酯 (4-((5- 硝基吡啶 -2- 基 ) 二硫烷基 ) 苯甲酯 )

將氯甲酸4-硝基苯酯(255 mg，1.26 mmol)於THF (5 mL)中之溶液在冰浴上冷卻且歷經約15分鐘，用所添加之(4-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)苯基)甲醇(220 mg，0.748 mmol)、三乙胺(0.7 mL，5.03 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(45 mg，0.368 mmol)於THF (5 mL)中之溶液處理。移除冰浴，且將溶液在室溫下攪拌一小時並儲存於冷凍器中隔夜。在真空中蒸發溶劑，且將殘餘物溶解於DCM中，施加至RediSep矽膠管柱(12 g)並用乙酸乙酯(2%至100%)/己烷之梯度溶離。將產物藉由RediSep C18筒柱(50 g)上之反相層析進一步純化，用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離，以得到產物，55 mg (16%)。254 nm處之HPLC純度：＞99%。滯留時間：3.77 min (方法F)。MS資料, 460.7 (M+H)⁺ 。¹ HNMR(CDCl₃ ) d 9.29 (d, 1H), 8.39 (d of d, 1H), 8.28 (d of d, 2H), 7.83 (d of d, 1H), 7.55 (d of d, 2H), 7.44 (d of d), 7.36 (d of d, 2H)及5.26 (d, 2H)。

步驟 3. (S)-11,11,15,16- 四甲基 -1-(4-((5- 硝基吡啶 -2- 基 ) 二硫烷基 ) 苯基 )-3,8,14- 三側氧基 -2- 氧雜 -10- 硫雜 -4,7,15- 三氮雜十七烷 -17- 酸 (14S,16S,32S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86- 氯 -14- 羥基 -85,14- 二甲氧基 -33,2,7,10- 四甲基 -12,6- 二側氧基 -7- 氮雜 -1(6,4)- 氮氧雜環己烷 -3(2,3)- 環氧乙烷 -8(1,3)- 苯環十四卡芥 -10,12- 二烯 -4- 基酯

將N-(4-((2-((2-胺乙基)胺基)-2-側氧基乙基)硫基)-4-甲基戊醯基)-N-甲基-L-丙胺酸(14S,16S,32S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-氯-14-羥基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(15 mg，0.017 mmol；實例10，步驟2)於DMF (1 mL)中之溶液添加至固體碳酸4-硝基苯酯(4-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)苯甲酯) (26 mg，0.0566 mmol)中。將催化性HOAt及DIEA (10 mL，0.057 mmol)添加至所得溶液中且在室溫下攪拌3小時。將溶液用乙酸(7 mL，0.122 mmol)中和且施加至逆相管柱(RediSEP C18 (15.5 g))並用含乙酸(0.05%)之乙腈(30%至95%)/水之梯度溶離。使用作為溶離劑之甲醇(0.2%至6%)/DCM之梯度，在矽膠管柱(RediSep (4 g))上進行進一步純化，得到標題產物(10.3 mg，50%產率)。254 nm處之HPLC純度：＞99%。滯留時間：3.16 min (方法F)。MS資料, 1182.3 (M+H-H₂ O)⁺ , 1201.3 (M+H)⁺ , 1222.3 (M+Na)⁺ 。

步驟 4. 合成化合物 16 將(S)-11,11,15,16-四甲基-1-(4-((5-硝基吡啶-2-基)二硫烷基)苯基)-3,8,14-三側氧基-2-氧雜-10-硫雜-4,7,15-三氮雜十七烷-17-酸(14S,16S,32S,33S,2R,4S,10E,12E,14R)-86-氯-14-羥基-85,14-二甲氧基-33,2,7,10-四甲基-12,6-二側氧基-7-氮雜-1(6,4)-氮氧雜環己烷-3(2,3)-環氧乙烷-8(1,3)-苯環十四卡芥-10,12-二烯-4-基酯(10.3 mg，0.00857 mmol)於DMF (1 mL)中之溶液用碳酸氫鈉(1.8 mg，0.0214 mmol)及水(50 mL)處理。將所得溶液用肽、Pv1 (31.5 mg，0.0899 mmol)處理且在室溫下攪拌3小時，接著施加至逆相管柱(RediSep C18 (15.5 g))並用含乙酸銨(10 mM)之乙腈(30%至70%)/水之梯度溶離。將級分合併、冷凍且凍乾，以得到呈白色固體狀之產物，18.7 mg (50%)。254 nm處之HPLC純度：99%。滯留時間：6.63 min (方法G)。MS資料, 2162.4 (M+2H)/2⁺ , 1441.8 (M+3H)/3⁺ , 1082.6 (M+4H)/4⁺ , 1435.7 (M+3H-H₂ O)/3⁺ 。

實例 A. 生長延遲分析 在含有10% FBS之生長培養基中，將細胞接種於96孔黑色壁透明底盤(Griener)中，以2500個細胞/孔接種DLD-1 WT細胞，以5000個細胞/孔接種FaDu及HeLa細胞，且以3000個細胞/孔接種HCT116。在返回至37℃、5% CO₂ 培育箱之前，使細胞在室溫下黏附60分鐘。在24小時之後，移除培養基且經含有不同藥物濃度之新鮮生長培養基置換。一式三份地添加各藥物濃度。未經藥物處理之對照物僅含有生長培養基。使細胞返回至培育箱。在添加藥物後九十六小時，將細胞用4%多聚甲醛固定20分鐘且用1 µg/mL之Hoechst染色。盤在Cytation 5自動成像器(BioTek)上成像且使用CellProfiler (http://cellprofiler.org)計數細胞。計算細胞生長延遲百分比且使用GraphPad Prism繪製資料。表5：生長延遲分析資料

實例	DLD-1 (IC₅₀ , nM)	HCT116 (IC₅₀ , nM)	FaDu (IC₅₀ , nM)	HeLa (IC₅₀ , nM)
R² SH-1 (參見表2)	9.8	4.3	2.8	2.6
R² SH-2 (參見表2)	0.45	0.20	0.13	0.02
1	60.5	21.8	10.4	7.4
2	114	21.1	15.4	8.0
3	45.1	19.3	10.1	6.9
4	11.7	2.5	1.4	0.85
5	9.4	2.7	2.3	0.95
6	8.3	3.3	5.2	1.8
7	NC*	3.4	4.6	2.0
8	9.8	3.0	3.4	1.6

NC* =未計算

實例 B ： 對活體外微管蛋白聚合之影響

進行基於螢光之微管蛋白聚合分析(細胞骨架目錄號BK011P)以定量未結合之DM4及化合物5對活體外微管蛋白聚合之影響。將DM4及化合物5製備為含10 mM儲備液之DMSO，接著在超純蒸餾水中以10×稀釋至200、50及5 μM，最終DMSO濃度為0.2%。將套組試劑快速解凍，接著在冰上保持冷卻以防止提前聚合。藉由將經純化豬腦微管蛋白、GTP及甘油緩衝液全部混合在1×套組緩衝液中在冰上製備微管蛋白反應混合物，最終濃度為2 mg/mL微管蛋白、1 mM GTP及15%甘油。在37℃下，將5 μL之DM4、化合物5或DMSO對照物添加至預溫熱的黑色半孔反應盤中不超過1分鐘，以升溫但不允許蒸發。將50 μL之微管蛋白反應混合物快速添加至各孔且立即置放於預溫熱的Cytation 5成像讀取器(BioTek)中。在37℃下，在360激發/450發射下進行動力學讀取持續2小時，每2.5分鐘進行一次讀取以追蹤由於螢光報導子在聚合發生時併入至微管中而引起的螢光增強。

圖1展示在0.5 µM、5 µM及20 µM下游離DM4及化合物5對活體外β-微管蛋白聚合(就相對螢光單位而言)之影響的曲線圖。

實例 C ： 結合物結合之動力學分析 使用Biacore S200儀器進行結合實驗。用含1 M NaCl之50 mM NaOH調節具有預先固定之抗生蛋白鏈菌素之系列S感測器晶片。衍生自HeLa細胞之經生物素標記之人類微管蛋白在HBS-P+緩衝液中以10 μl/min之流速以125 μg/mL之濃度固定至感測器晶片。將最終3000 RU (反應單位)之蛋白質直接固定至晶片。在微管蛋白固定之後，將感測器晶片用50%異丙醇、50 mM NaOH及1 M NaCl洗滌，且隨後使其在分析緩衝液中平衡4小時。抗生蛋白鏈菌素-生物素捕獲空白組(參考FC)用於監測非特異性結合。

為收集動力學結合資料，將稀釋於分析緩衝液中之化合物5以範圍介於100 μM至0.048 μM及50 μM至0.024 μM之濃度，以60 μL/分鐘之流速且在25℃之溫度下注射於流通槽上。允許複合物解離60秒。即時監測化合物與微管蛋白之結合以獲得結合(Ka)及解離(Koff)速率。藉由穩態動力學計算親和力常數(KD)。

圖2描繪活體外結合至β-微管蛋白之化合物5之動力學分析，如由Biacore表面電漿子共振所測定。化合物5能夠以與游離DM4類似的KD (3.55 µM)及相對於游離DM4更慢的結合/解離速率結合至β-微管蛋白。

實例 D ： 化合物 5 在小鼠結腸直腸癌模型中之療效 六週大的雌性無胸腺裸Foxn^nu 小鼠係獲自Taconic Labs (Cat# NCRNU-F)且在一次性籠框系統中之Alpha-Dri墊料上每籠圈養5隻。將衍生自結腸直腸癌之人類HCT116細胞在不含酚紅之基質膠中以1:1稀釋且以2.5×10⁶ 個細胞/100 µL之密度皮下植入至各小鼠之左側腹中。當異種移植物達至100-200 mm³ 之平均體積時，將小鼠隨機分為多組且如下表中所詳述進行處理。向小鼠投與腹膜內(IP)劑量之媒劑或0.21、0.29、0.35、0.42微莫耳/公斤化合物5(等效於1.1、1.4、1.7或2 mg/kg化合物5)或0.42微莫耳/公斤未結合之DM4 (等效於0.33 mg/kg未結合之DM4)。劑量係藉由將0.1 mg/µL含DMSO儲備液之5%甘露糖醇稀釋於檸檬酸鹽緩衝液中來製備且以第二劑量與第三劑量之間的兩天間隔，以12 mL/kg之體積(300 μL/25 g小鼠)進行QDX4投與。異種移植腫瘤係藉由測徑規量測且體積係使用橢球體積等式計算：體積=π/6 × (長度) × (寬度)² 。在腫瘤體積評定的同時量測動物之體重。由於死亡、腫瘤大小超過2000 mm³ 或體重減輕＞20%，自研究移除動物。卡本-麥爾分析(Kaplan-Meier analysis)用於基於死亡或自研究移除來評估存活率。

圖3A展示給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之平均腫瘤體積之曲線圖。

圖3B展示給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之體重相對於第0天的百分比變化。

圖4描繪給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之卡普蘭-邁耶曲線圖。由於死亡、腫瘤大小超過2000 mm³ 或由於體重減輕超過20%，自研究移除動物。在給藥後期間，游離DM4誘導一半DM4組之動物自發死亡。如圖4中所展示，化合物5在活體內安全地遞送一定量之DM4，否則當作為游離DM4給藥時會導致全身毒性及死亡。

實例 E ： 化合物 6 對 小鼠肺癌模型中之肺轉移的影響 將衍生自小鼠乳癌且經近紅外螢光蛋白(iRFP)轉染之小鼠4T1-iRFP癌細胞在37℃下在5% CO₂ 之潮濕氛圍中培養為單層。使細胞在植入前一至三天傳代且按需要每2-3天置換培養基以維持細胞成活力。細胞不允許超過80%匯合。在植入當天，以胰蛋白酶處理細胞，用完全培養基洗滌且藉由以1200 rpm離心5分鐘粒化。傾析上清液，且用無菌PBS洗滌細胞三次並藉由離心粒化。在最終離心期間，使用台盼藍排除法(trypan blue exclusion)測定成活力。使細胞再懸浮於最終濃度為5×10⁵ 個細胞/100 μL之無菌PBS中。用27號針頭將細胞抽取至無菌1cc結核菌素注射器中。移除氣泡，且將過量細胞混合物排回至錐形管中，在各注射器中留下100 μL之注射體積。將100 μL之細胞直接注射至六週齡雌性無胸腺裸Foxn^nu 小鼠(Taconic Labs Cat# NCRNU-F)之內側尾部靜脈中。

在細胞注射後三天，向小鼠每天一次投與腹膜內劑量之媒劑或2.5 mg/kg化合物6持續2天，隨後2天不治療，隨後投與單一劑量之化合物6，總共三劑化合物6。在注射後十一天，對小鼠進行安樂死，且移除肺部，以供使用LI-COR PEARL Trilogy小動物成像器成像以視覺化且定量肺轉移且評估化合物對腫瘤生長之影響。

圖5A描繪經由尾部靜脈注射接種有4T1-RFP螢光細胞的裸小鼠之腹部視圖及所提取肺部且在接種後11天並在3劑媒劑或化合物6之後成像。

圖5B描繪在3劑媒劑或化合物6之後來自接種4T1-RFP之小鼠之所提取肺部的螢光信號之圖示。

除本文所描述之彼等修改以外，根據前述描述，本發明之各種修改對熟習此項技術者而言為顯而易見的。此類修改亦意欲處於所附申請專利範圍之範疇內。本申請案中所引用之各參考文獻以全文引用之方式併入本文中，包括(但不限於)所有專利、專利申請案及公開案。

圖1展示在不同濃度下游離DM4及化合物5對活體外β-微管蛋白聚合(就相對螢光單位而言)之影響的曲線圖。圖2描繪活體外結合至β-微管蛋白之化合物5之動力學分析，如由Biacore表面電漿子共振所測定。圖3A展示給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之平均腫瘤體積之曲線圖。圖3B展示給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之體重相對於第0天的百分比變化。圖4描繪給藥有DM4或化合物5之攜帶HCT116結腸直腸側面腫瘤的裸小鼠之卡普蘭-邁耶曲線圖(Kaplan-Meier plot)。圖5A描繪經由尾部靜脈注射接種有4T1-RFP螢光細胞的裸小鼠之腹部視圖及所提取肺部且在接種後11天並在3劑媒劑或化合物6之後成像。圖5B描繪在3劑媒劑或化合物6之後來自接種4T1-RFP之小鼠之所提取肺部的螢光信號之圖示。

Claims

一種式(I)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為能夠選擇性地遞送R² L-穿過具有酸性或缺氧外套膜之細胞膜的肽； R² 係選自由以下組成之群：

； L為選自以下之基團：

；其中 R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H、C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基、C_3-10 環烷基、5-10員雜芳基、4-10員雜環烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ，其中該C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁴ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁵ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁴ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁵ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁸ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁹ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁸ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁹ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C_3-14 環烷基或4-14員雜環烷基，其各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； Z為C_6-10 芳基或5-10員雜芳基；其中該5-10員雜芳基具有至少一個成環碳原子及1、2、3或4個獨立地選自N、O及S之成環雜原子，其中該C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：C_1-4 烷基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； A為H或C₁ -₄ 烷基； R^a1 、R^b1 、R^c1 及R^d1 各自獨立地選自H、C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_1-6 鹵烷基、OH、CN、NO₂ 及CO₂ CH₃ ；其中該C_1-6 烷基及C_2-6 烯基各自視情況經OH、CN、NO₂ 或CO₂ CH取代；及 n為0、1或2。
如請求項1之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R¹ 為能夠選擇性地遞送R² L-穿過具有酸性或缺氧外套膜之細胞膜的肽； R² 係選自由以下組成之群：

； L為選自以下之基團：
及
；其中 R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H、C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基、5-10員雜芳基、鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ，其中該C_1-4 烷基、C_1-4 烯基、C_6-10 芳基及5-10員雜芳基各自視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁴ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R³ 及R⁵ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁴ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁵ 及R⁶ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁸ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁷ 及R⁹ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁸ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ；或R⁹ 及R¹⁰ 與其所連接之碳原子一起形成C₃ -₇ 環烷基，其視情況經1、2或3個獨立地選自以下之取代基取代：鹵基、CN、NO₂ 、OR^a1 、SR^a1 、C(O)R^b1 、C(O)NR^c1 R^d1 、C(O)OR^a1 、OC(O)R^b1 、OC(O)NR^c1 R^d1 、NR^c1 R^d1 、NR^c1 C(O)R^b1 、NR^c1 C(O)OR^a1 及NR^c1 C(O)NR^c1 R^d1 ； A為H或C₁ -₄ 烷基；及 R^a1 、R^b1 、R^c1 及R^d1 各自獨立地選自H、C_1-6 烷基、C_2-6 烯基、C_2-6 炔基、C_1-6 鹵烷基、OH、CN、NO₂ 及CO₂ CH₃ ；其中該C_1-6 烷基及C_2-6 烯基各自視情況經OH、CN、NO₂ 或CO₂ CH取代。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為能夠選擇性地遞送R² L-穿過具有pH小於約6.0之酸性或缺氧外套膜之細胞膜的肽。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為包含至少一種以下序列之肽： ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)， AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)，及 ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)；以及 AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID No. 6；Pv6)；其中R¹ 經由R¹ 之半胱胺酸殘基連接至L。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為包含至少以下序列之肽： ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWCG (SEQ ID NO. 1；Pv1)。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為包含至少以下序列之肽： AEQNPIYWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADECG (SEQ ID NO. 2；Pv2)。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為包含至少以下序列之肽： ADDQNPWRAYLDLLFPTDTLLLDLLWDADECG (SEQ ID NO. 3；Pv3)。
如請求項1或2之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R¹ 為包含至少以下序列之肽： AAEQNPIYWWARYADWLFTTPLLLLDLALLVDADEGTCG (SEQ ID NO. 6；Pv6)。
如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R² 為：
。
如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R² 為：
。
如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R² 為：
。
如請求項1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R² 為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中L為：
。
如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自獨立地選自H及C_1-4 烷基。
如請求項1至18中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R³ 、R⁴ 、R⁵ 、R⁶ 、R⁷ 、R⁸ 、R⁹ 及R¹⁰ 各自為H。
如請求項1至20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為H。
如請求項1至20中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中A為CH₃ 。
如請求項1至22中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中Z為苯基。
如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為0。
如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為1。
如請求項1至23中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中n為2。
如請求項1之化合物，其選自：

，或前述中任一者之醫藥學上可接受之鹽。
如請求項1之化合物，其選自：

，或前述中任一者之醫藥學上可接受之鹽。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
一種治療有需要之患者之癌症之方法，其包含向該患者投與治療有效量的如請求項1至28中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
如請求項30之方法，其中該癌症係選自膀胱癌、骨癌、神經膠質瘤、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜癌、上皮細胞癌、食道癌、尤文氏肉瘤(Ewing's sarcoma)、胰臟癌、膽囊癌、胃癌(gastric cancer)、胃腸道腫瘤、頭頸癌、腸癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、腎癌、喉癌、肝癌、肺癌、黑素瘤、***癌、直腸癌、腎透明細胞癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、甲狀腺癌及子宮癌。
如請求項30之方法，其中該癌症係選自肺癌、結腸直腸癌及胃癌。