KR102422174B1 - 악성 종양 표적 펩티드 - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 식 (I) 내지 (III) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드:
(I) (X1)[D]P[D](X2)[D]의 아미노산 서열 (여기서, X1은 W 또는 F이고, X2는 S 또는 T이고, 직후에 기호 [D]가 붙어 있는 각각의 아미노산 기호는 아미노산의 D 형이다),
(II) P[D]T[D](X)_n F[D]의 아미노산 서열 (여기서, (X)_n은 서로 독립적으로 선택된 n개의 임의의 아미노산이고, n은 0 내지 4의 정수이고, 기호 [D]는 상기에 정의된 바와 같다),
(III) 전술한 (I) 및 전술한 (II) 중 어느 하나의 아미노산 서열의 레트로-인버소인 아미노산 서열;
및 상기 펩티드과 기능성 부분을 함유하는 접합체를 제공한다.

Description

악성 종양 표적 펩티드

본 발명은 일반적으로 암 생물학의 분야에 관한 것이며, 보다 특히 아넥신 A1에 결합하는 펩티드 및 그의 용도에 관한 것이다.

뇌 종양 중에서도, 수막종 및 신경초종과 같은, 수막, 뇌 또는 척수 신경으로부터 발생하는 많은 종양은 양성 뇌 종양이며 이들을 수술에 의해 제거할 수 있다면 완전히 치유할 수 있다. 대조적으로, 신경교종을 포함한 신경상피 종양은 기본적으로 악성 뇌 종양이다. 특히, 4기 교모세포종(grade 4 glioblastoma)은 개두술에 의해 제거 후 방사선요법 및 화학요법을 수행하더라도 극히 불량한 예후를 나타낸다(5년 생존율이 약 10%이다). 뇌 종양에 대한 효과적인 화학요법의 부족에 대한 주요 이유는 혈액-뇌 관문의 존재이다. 다른 한편으로는, 교모세포종에 효과적인 신약인 테모졸로미드는 2006년에 일본에서 승인되었다. 이 약물은 매우 작은 분자량(194 Da)을 가지며 확산에 의해 혈액-뇌 관문을 통과할 수 있는 것이 명확해졌다. 그러나, 상기 약물은 단지 평균 수명을 12개월에서 16개월로 연장할 수 있었다. 따라서, 장차 악성 뇌 종양의 치료 결과를 극적으로 개선하기 위해, 혈액-뇌 관문에 대해 작은 분자의 확산에 의존하는 소극적인 방법보다는, 뇌 종양에 압도적으로 고농도로 축적되고 적극적으로 혈관 내피의 벽을 통과할 수 있는 치료 약물을 개발하는 것이 필수적이다.

최근, 연구 개발비의 상승 및 항체 약제의 보급으로 인해 환자의 경제적 부담이 점점 더 가중되고 있다. 장차, 유전 정보 등의 진단 시스템과 같은 의료의 고도화에 의해, 이러한 경향은 추가로 가속화될 것으로 간주된다. 게다가, 이들 급상승하는 약 가격이 국가 의료비에 미치는 영향이 또한 헤아릴 수 없다. 더욱이, 고가의 항체 약제가 후진국에 접근하기 어려워져서, 세계적인 규모로 추가의 의료 격차를 야기한다. 상기의 문제에 대해, 보다 장기적인 관점에서 대책이 취해진다면, 우수한 약물 시드(seed)를 추구하는 것에 더하여, 장차 단쇄 펩티드와 같은 저렴한 바이오의약품의 가능성을 모색할 필요가 있다.

본 발명자 중 한 명인 후쿠다(Fukuda)는 그녀가 2014년에 일본 산업 기술 총합 연구소(National Institute of Advanced Industrial Science and Technology)에 부임될 때까지 30년 초과 동안 미국에서의 샌퍼드 번햄 프레비스 의학 발견 연구소(Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute)에서 연구실을 주최하였다. 그 기간 동안, 후쿠다는 당쇄의 구조를 모방하는 펩티드를 사용하여 당쇄-의존성 암 전이를 억제하는데 세계 최초로 성공하였다(비특허문헌 1). 더욱이, 이들 당쇄 모방 펩티드와 상호작용하는 혈관 내피 수용체를 조사하는 과정에서, 그녀는 IF7로 명명되는 펩티드가 아넥신 A1 (Anxa1)에 결합한다는 것을 밝혀냈다(비특허문헌 2). Anxa1은 현재 공지된 종양 혈관 특이적 마커 분자 중에서 가장 특이적인 것으로 얀 슈니처(Jan Schnitzer) 등의 그룹에 의해 명확해졌으며, 정상 세포에서는 세포 내로 발현되나 종양 신생혈관 내피 세포에서는 혈류와 인접한 관강 표면에서 강하게 발현된다(비특허문헌 3). 후쿠다 등은 IF7에 항암제(SN38)를 결합시켜 수득한 약물(IF7-SN38)이 저용량으로 암-보유 마우스에서 종양을 소실시킨다는 것을 명확히 하였다(비특허문헌 2). IF7은 마우스 Anxa1의 N-말단 영역에 결합하지만, 그 영역의 아미노산 서열은 마우스와 인간 사이에 고도로 보존된다. 따라서, IF7-SN38은 인간에서 또한 유용할 수 있다. 이 발견은 PNAS 저널의 "PNAS에서의 이 문제(In this issue in PNAS)"에 실렸으며 NIH는 특별 기사를 소개하였다. 이 발견은 전 세계 언론 보도를 포함하여, 상당한 주목을 끌었다.

Fukuda et al., Cancer Research, 60: 450-6, 2000 Hatakeyama et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 108: 19587-92, 2011 Oh et al., Nature 429: 629-35, 2004

IF7을 암-보유 마우스에게 정맥내 투여하는 경우, IF7은 종양 주위의 혈관에 도달한 후, 혈관 내피 세포의 관강측으로부터 소포에 흡수되고 기저측으로 이동하여, 여기서 암 세포가 존재하는 간질로 방출된다. 또한, 마우스 혈관 내피 F2 세포에서, Anxa1에 결합된 IF7은 트랜스시토시스(transcytosis)에 의해 종양 혈관 내피 세포를 능동적으로 횡단한다. 따라서, IF7은 뇌 종양 내의 혈관-뇌 종양 관문을 통과하는 활성을 갖는 것으로 시사되었다. 놀랍게도, 신경교종 세포를 이식한 뇌 종양 모델 마우스에 형광-표지된 IF7의 정맥내 주사로 인해 형광이 뇌의 종양 부위에 고농도로 축적되었다. 형광은 또한 혈관을 통과하고 뇌 간질에 있는 암 세포에 도달하였다. 더욱이, 동일한 마우스에서 피하 종양 및 뇌 종양을 생성시키고(이중 종양 모델(dual tumor model)), IF7-SN38의 치료 효과를 검증하였다. 결과적으로, 뇌 종양 및 피하 종양 둘 다가 억제되었고, 그의 효과는 피하 종양보다 뇌 종양에서 더 높았다. B16 흑색종 전이성 뇌 종양 모델에서 유사한 결과가 수득되었으며, 숙주 마우스를 C57BL/6 또는 SCID 균주로 변경하여도 결과는 동일하게 유지되었다. 이들 사실은 Anxa1을 표적으로 하는 DDS는 혈액-뇌 종양 관문을 효율적으로 통과할 뿐만 아니라 뇌 종양에서 우수한 치료 효과를 제공함을 나타낸다.

상기에 기재한 바와 같이, IF7은 우수한 악성종양 표적 활성을 갖지만, 임상적 개발에는 난용해성 및 낮은 안정성의 두 가지 문제를 갖는다. 첫째, IF7 펩티드는 프로테아제 감수성이며 쉽게 분해된다. 실제로, 건강한 마우스에게 A488-IF7의 정맥내 투여를 포함한 실험에서, 말초 혈액의 형광 신호는 약 1시간에 거의 소실되었다. 그러나, 암-보유 마우스에 대한 꼬리 정맥 투여에 의해, 말초 혈액으로부터 회수된 A488-IF7의 형광은 건강한 마우스에서보다 상당히 적었다. 이 결과는 A488-IF7의 대부분이 분해를 겪으면서 종양에 급속히 축적된다는 것을 시사한다. 또한, IF7은 소수성이 높고, 예를 들어, 항암제와 결합된 화합물을 정맥내 투여하는 경우, 침전을 피하기 위해 DMSO에 용해시킨 후 계면활성제를 첨가하여야 하는, 투여 형태에 곤란을 야기한다.

따라서, 본 발명의 목적은 IF7과 연관된 상기의 문제점을 적어도 부분적으로 극복할 수 있는, 아넥신 A1에 결합하는 신규한 펩티드 및 그의 용도를 제공하는 것이다.

본 발명자들은, 상기의 과제를 해결하기 위해 예의 검토한 결과, 아넥신 A1에 결합 가능한 D-형 펩티드를 탐색하는 것을 착상하였다. 이를 위해, 본 발명자들은 IF7과 결합하는 것이 공지되어 있는 Anxa1의 N-말단 15개 잔기에 변형용 Cys 잔기를 부가한 16-잔기의 L-형 펩티드(L-MC16)와 거울상 관계에 있는 D-형 펩티드 (D-MC16)를 합성하고, T7 파지 라이브러리를 사용한 스크리닝에 의해, D-MC16과 결합하는 7-아미노산의 복수의 L-형 펩티드를 동정하였다. 이들은 동정된 L-형 펩티드 중에서도 특히 유망했던 TIT7 펩티드라고 불리는 펩티드에 대한 추가 연구를 수행하였다. 본 발명자들이 예상한 바와 같이, 상기 TIT7 펩티드와 거울상 관계에 있는 D-형 펩티드(dTIT7 펩티드)가 Anxa1와 결합하는 것을 본 발명자들이 확인하였다. 더욱이, 본 발명자들은, 생체내 실험에 의해, dTIT7 펩티드는 뇌 종양 모델 마우스에게 꼬리 정맥을 통해 투여된 경우에 종양 부위에 축적된다는 것, 항암제(겔다나마이신)와 결합한 dTIT7 펩티드(GA-dTIT7)는 암-보유 마우스에게 정맥내 투여한 경우에 종양 성장을 현저히 억제하여, 종양 부위에 대량의 괴사를 야기하였다는 것, GA-dTIT7의 경구 투여는 C6 세포를 뇌에 이식한 뇌 종양 모델 마우스와 B16 세포를 뇌에 이식한 뇌 전이 모델 마우스 둘 다에서 종양 성장을 억제하고, 약물 투여를 중지한 후에도 종양이 계속 감소하고, 마침내 일부 동물에 있어서 완전 치유가 달성되었다는 것을 입증하였다.

본 발명자들은 상기 결과에 기초하여 추가 연구를 행하여, 본 발명을 완성하기에 이르렀다. 본 발명은 다음과 같다.

[1] 하기 식 (I) 내지 (III) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드:

(I) (X1)[D]P[D](X2)[D]의 아미노산 서열 (여기서, X1은 W 또는 F이고, X2는 S 또는 T이고, 직후에 기호 [D]가 붙어 있는 각각의 아미노산 기호는 아미노산의 D 형이다),

(II) P[D]T[D](X)_n F[D]의 아미노산 서열 (여기서, (X)_n은 서로 독립적으로 선택된 n개의 임의의 아미노산이고, n은 0 내지 4의 정수이고, 기호 [D]는 상기에 정의된 바와 같다),

(III) 전술한 (I) 및 전술한 (II) 중 어느 하나의 아미노산 서열의 레트로-인버소(Retro-inverso)인 아미노산 서열.

[2] 하기 (i) 내지 (vii) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 (하기 서열에서, 기호 [D]는 상기에 정의된 바와 같다):

(i) T[D] I[D] T[D] W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열,

(ii) L[D] R[D] F[D] P[D] T[D] V[D] L[D]의 아미노산 서열,

(iii) L[D] L[D] S[D] W[D] P[D] S[D] A[D]의 아미노산 서열,

(iv) S[D] P[D] T[D] S[D] L[D] L[D] F[D]의 아미노산 서열,

(v) M[D] P[D] T[D] L[D] T[D] F[D] R[D]의 아미노산 서열,

(vi) 전술한 (i) 내지 (v) 중 어느 하나의 아미노산 서열에 있어서, 1 또는 수개의 아미노산이 삽입, 치환 또는 결실되거나, 이들이 조합되어 있는 아미노산 서열,

(vii) 전술한 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 아미노산 서열의 레트로-인버소인 아미노산 서열.

[3] [2]에 있어서, 상기 (i)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드.

[4] [2]에 있어서, 상기 (i)의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드.

[5] [1] 내지 [4] 중 어느 하나의 펩티드 및 하나 이상의 성분을 포함하는 접합체(conjugate).

[6] [5]에 있어서, 하나 이상의 성분이 항암제를 포함하는 것인 접합체.

[7] [6]에 있어서, 상기의 항암제가 항대사제, 알킬화제, 항암성 항생제, 미소관 억제제, 백금 제제, 토포이소머라제 억제제, 분자 표적제(molecular targeting agent), 및 항혈관신생제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.

[8] [6] 또는 [7]에 있어서, 상기의 항암제가

에노시타빈, 카페시타빈, 카르모푸르, 클라드리빈, 겜시타빈, 시타라빈, 시타라빈 옥포스페이트(cytarabine ocphosphate), 테가푸르, 테가푸르/우라실, 테가푸르/기메라실/오테라실 포타슘, 독시플루리딘, 넬라라빈, 히드록시카르바미드, 플루오로우라실, 플루다라빈, 페메트렉시드, 펜토스타틴, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트;

시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 부술판, 티오테파, 니무스틴, 라니무스틴, 다카르바진, 프로카르바진, 테모졸로미드, 카르무스틴, 스트렙토조토신, 벤다무스틴;

악티노마이신 D, 아클라루비신, 암루비신, 이다루비신, 에피루비신, 지노스타틴 스티말라머, 다우노루비신, 독소루비신, 피라루비신, 블레오마이신, 페플로마이신, 미토마이신 C, 미톡산트론, 리포소말 독소루비신;

빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 파클리탁셀(탁솔), 도세탁셀;

옥살리플라틴, 카르보플라틴, 시스플라틴, 네다플라틴;

캄프토테신, 이리노테칸, 노기테칸, SN-38, 독소루비신, 에토포시드, 레보플록사신, 시프로플록사신;

레고라페닙, 세툭시맙, 파니투무맙, 람실맙, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 크리조티닙, 알렉티닙, 셀리티닙, 렌바티닙, 트라스투주맙, 라파티닙, 페르투주맙, 수니티닙, 소라페닙, 악시티닙, 파조파닙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 이피리무맙, 베무라페닙, 에버롤리무스, 템시롤리무스, 리툭시맙, 베박시주맙, 겔다나마이신;

안지오스타틴, 엔도스타틴, 메타스타틴, 항-VEGF 항체 및 VEGFR-2 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.

[9] [5]에 있어서, 하나 이상의 성분이 검출 가능한 물질을 포함하는 것인 접합체.

[10] [9]에 있어서, 검출 가능한 물질이 X-선 사진촬영, 컴퓨터 단층촬영(CT), 핵 자기 공명 영상법(MRI), 초음파검사, 신티그라피(scintigraphy), 양전자 방출 단층촬영(PET), 내시경검사 및 복강경검사로 이루어진 군으로부터 선택된 수단에 의해 생체내에서 접합체의 검출을 가능하게 하는 것인 접합체.

[11] [9] 또는 [10]에 있어서, 검출 가능한 물질이 방사성 동위원소, MRI용 증강제, 방사선불투과성 물질, 조영제 또는 형광 물질인 것인 접합체.

[12] [9] 내지 [11] 중 어느 하나에 있어서, 검출 가능한 물질이,

¹⁸F, ⁵¹Mn, ^52mMn, ⁵²Fe, ⁵⁵Co, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ^82mRb, ⁸³Sr, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ^94mTc, ¹¹⁰In, ¹²⁰I, ¹²⁴I, ⁵¹Cr, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁷⁵Se, ⁹⁷Ru, ^99mTc, ¹¹¹In, ^114mIn, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁶⁹Yb, ¹⁹⁷Hg 및 ²⁰¹Tl로부터 선택된 방사성 핵종;

크로뮴 (III), 망가니즈 (II), 철 (III), 철 (II), 코발트 (II), 니켈 (II), 구리 (II), 네오디뮴 (III), 사마륨 (III), 이테르븀 (III), 가돌리늄 (III), 바나듐 (II), 테르븀 (III), 디스프로슘 (III), 홀뮴 (III) 및 에르븀 (III)으로부터 선택된 상자성 이온,

란타늄 (III), 금 (III), 납 (II), 비스무트 (III);

아이오딘 화합물, 바륨 화합물, 갈륨 화합물, 탈륨 화합물;

로다민, 플루오레세인, Cy 염료, 알렉사(Alexa)(등록 상표) 플루오르(Fluor), 피코에리트린(PE), 알로피코시아닌(APC), 그의 유도체 및 근적외선 형광 시약

으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.

[13] [1] 내지 [4] 중 어느 하나의 펩티드 또는 [5] 내지 [12] 중 어느 하나의 접합체, 및 약리학상 허용되는 담체를 포함하는 조성물.

[14] [6] 내지 [8] 중 어느 하나의 접합체, 및 약리학상 허용되는 담체를 포함하는, 암의 치료용 조성물.

[15] [9] 내지 [12] 중 어느 하나의 접합체, 및 약리학상 허용되는 담체를 포함하는, 암의 검사용 조성물.

[16] [14] 또는 [15]에 있어서, 암이 고형암(solid cancer) 또는 액성암(liquid cancer)인 조성물.

[17] [16]에 있어서, 고형암이 혈관신생 고형암인 조성물.

[18] [16] 또는 [17]에 있어서, 고형암이 뇌 또는 신경계의 암, 두경부의 암, 소화관의 암, 요로 또는 생식 기관의 암, 호흡기계의 암, 유방의 암, 피부의 암, 뼈의 암, 또는 근육의 암인 조성물.

[19] [16] 내지 [18] 중 어느 하나에 있어서, 고형암이 뇌 종양, 척수 종양, 후두암, 구강암, 타액선암, 부비동암, 갑상선암, 위암, 식도암, 소장암, 결장암, 직장암, 항문암, 간암, 담도암, 췌장암, 신장암, 신장 세포 암, 방광암, 전립선암, 신우 및 요관 암, 담낭암, 담관암, 고환암, 음경암, 자궁암, 자궁내막암, 자궁 육종, 자궁 경부암, 질암, 외음부암, 난소암, 난관암, 폐암, 유방암, 악성 흑색종, 골육종 또는 횡문근 육종인 조성물.

[20] [19]에 있어서, 고형암이 양성 또는 악성 뇌 종양인 조성물.

[21] [20]에 있어서, 뇌 종양이 원발성 뇌 종양 또는 전이성 뇌 종양인 조성물.

[22] [20] 또는 [21]에 있어서, 뇌 종양이 수막종, 뇌하수체 선종, 신경초종, 성상세포종, 핍돌기신경교종, 역형성 성상세포종, 역형성 핍돌기신경교종, 역형성 핍지교성상세포종 또는 교모세포종인 조성물.

[23] [16]에 있어서, 액성암이 B-세포 림프종인 조성물.

본 발명에 따르면, 아넥신 A1에 결합하는 신규의 펩티드가 제공된다.

에리트로포이에틴 및 최근의 항-PD-1 항체의 경우에서 명백한 바와 같이, 임상적으로 성공적인 약제는 약물이 표적으로 하는 생체분자의 발현의 매우 높은 특이성을 갖는다. 본 발명의 펩티드가 표적으로 하는 아넥신 A1은 현재 공지된 악성 종양의 신생혈관 표적 마커 중에서 가장 특이적인 분자이기 때문에, 본 발명의 펩티드가 결합된 항암제가 기존의 항암제에 비해 우수한 치료 효과를 나타낼 수 있다.

특히 펩티드-항암제 접합체는 악성 종양에 고효율로 항암제를 축적할 수 있을 뿐만 아니라, 프로테아제 내성이기 때문에, 유효 투여 횟수의 감소 및 심지어 더 낮은 투여량을 가능하게 한다. 게다가, 면역계가 온존되는 것으로 간주되기 때문에, 항암제와 면역요법의 병용에 의한 악성 종양의 완전 치유가 기대될 수 있다.

아넥신 A1의 특징적인 점은 종양내에서 형성된 신생혈관 내피 세포의 혈액측에서 발현되며, 본 발명의 펩티드와 같은 리간드와 혈액측에서 결합하는 경우, 리간드를 트랜스시토시스에 의해 기저측으로 수송하며, 암세포가 존재하는 간질로 적극적으로 방출한다는 점이다. 이 특성은 또한 혈관 뇌 관문을 적극적으로 통과하는 메카니즘으로서 역할을 할 수 있다. 아넥신 A1을 표적으로 하는 본 발명의 펩티드는, 종래의 혈관신생 억제제(아바스틴(Avastin)) 및 테모졸로미드(상기에 기재)와 달리, 획기적인 메카니즘에 의해 악성 뇌 종양의 치료를 가능하게 한다. 즉, 현재, 화학요법제로서 혈액-뇌 관문을 통과하는 것, 종양 조직에 축적하는 것, 체내에서 안정적이며 경구 투여 가능한 것이 각각 개발되어 있으나, 그 모두를 조합할 수 있는 화학요법제는 본 발명의 펩티드 이외에는 존재하지 않는다(도 10).

본 발명의 펩티드는 다양한 항암제와 결합될 수 있기 때문에, 광범위한 생리 활성을 제공할 수 있다.

본 발명은 뇌 종양의 치료에 돌파구를 개방한다. 게다가, ANXA1은 다양한 악성 종양의 혈관 표면에 발현되는 것으로 공지되어 있으며, dTIT7-결합 항암제는 뇌 종양뿐만 아니라 광범위한 암 치료제로서 임상적으로 응용될 것으로 기대된다.

게다가, 본 발명의 펩티드는 화학 합성 및 변형이 용이하기 때문에, 항체 약제를 대체하는 중간 분자 바이오의약품으로서 장래성이 매우 높다. 특히, 본 발명의 펩티드는 단쇄 펩티드(예를 들어, 아미노산의 7 잔기)일 수 있기 때문에, 화학 합성에 의해 경제적으로 생산될 수 있다.

더욱이, 본 발명의 펩티드 및 상기 펩티드 및 다른 기능성 부분을 함유하는 접합체는 우수한 안정성을 가지며 또한 경구 투여용 약제로서 사용될 수 있다. 따라서 임상 시험도 용이하다. 실제로 의료 약물로서 승인된 후는, 이는 의료 시설이 부족한 후진국에서도 약제로서 보급될 수 있다.

게다가, 본 발명의 펩티드 및 검출 가능한 물질을 함유하는 접합체는, 예를 들어, 암의 진단 용도에서 유용하다. 본 발명자들은 과거에 IF7을 사용한 마우스의 PET 검사를 시도하였으나, 종양 특이적 영상은 수득되지 않았다. 실패의 이유는 IF7의 높은 소수성으로 인해 방사성 시약에 결합된 IF7이 화합물 내부에 매몰되었기 때문인 것으로 간주된다. 본 발명의 펩티드는 수용성일 수 있어서 이 문제를 극복할 수 있다. 본 발명의 펩티드는, 예를 들어, N-말단의 비교적 용이한 변형을 허용하고, PET와 같은 3D 영상화를 위한 시약으로 표지될 수 있고, 진단제로서 개발될 수 있다.

도 1은 IF7의 뇌 종양 표적 효과를 나타낸다. IF7-A488을 뇌 종양 모델 마우스에 정맥내 투여한 후의 뇌 조직 절편. A488(좌) 및 훽스트(Hoechst)(우, 종양 부위). RQ7은 IF7의 역서열 음성 대조군이다. 바(Bars); 5 mm.
도 2는 형광 표지된 IF7로 처리한 마우스로부터의 뇌 종양 조직 절편의 형광 현미경 사진을 나타낸다. 도 1에 나타낸 뇌 종양 조직 절편의 확대도. 혈관 내피 세포는 CD31 특이적 항체로 염색되었다(적색). IF7-A488(녹색)은 혈관을 통과하여 간질의 암세포에 도달한다. RQ7은 IF7의 역서열 대조군이다. 바; 40 μm.
도 3은 이중 종양 모델 마우스를 설명한다. 혈관-뇌 종양 관문(BBTB)에 대한 영향을 조사하기 위해, 루시퍼라제(Luc)-발현 암세포를 한 마리의 마우스의 뇌에 그리고 피하에 이식하여 종양을 생성시켰다. BBTB가 꼬리 정맥을 통해 투여된 항암 약물의 뇌 종양으로의 침투를 억제하는 경우(BBTB+), 항암 약물의 효과는 피하 종양에서만 나타난다. 다른 한편으로는, 항암 약물이 뇌 종양에 침투하는 경우(BBTB-), 항암 약물은 뇌 및 피하 종양 둘 다에 효과적이다.
도 4는 뇌 종양에 대한 IF7-SN38의 치료 효과를 나타낸다. C6-Luc 세포(래트 신경교종에서 루시퍼라제를 강제 발현하는 세포)를 면역결핍 SCID 마우스의 뇌에 그리고 피하에 이식하여 종양을 생성시켜 이중 종양 모델을 제공하였다. IF7-SN38을 꼬리 정맥을 통해 매일 투여하고, 종양 중의 루시퍼라제 활성으로 인한 발광을 측정하고, C6-Luc 세포의 생존율을 측정하였다. IF7-SN38은 뇌 종양의 성장을 억제할 뿐만 아니라, 피하 종양보다 뇌 종양을 더 강력하게 억제하였다.
도 5는 암을 보유하는 마우스 및 건강한 마우스에게 정맥내 투여된 A488-IF7의 혈중에 잔존하는 형광의 정량 분석을 나타낸다. 흑색종 B16의 피하 암종을 가진 마우스에게 A488-IF7을 꼬리 정맥을 통해 투여하고, 경시적으로 말초 혈액을 안정맥으로부터 수집하여 형광을 측정하였다. 회수된 형광은 종양의 크기에 의존하여 감소하였다.
도 6은 Anxa1에 결합하는 D-형 펩티드에 대한 스크리닝을 설명한다. (A) 거울상 스크린에 의한 D-형 펩티드 서열 동정법. IF7은 16개의 아미노산 잔기로 이루어진 Anxa1 N 말단 펩티드((1) L-형 MC16)에 결합한다. (2) D-형 MC16을 합성하고 거기에 결합하는 서열을 선택한다. (3) 수득된 L-형 펩티드는 D-아미노산과 합성되어 Anxa1에 결합하는 D-형 펩티드를 형성한다. (B) D-MC16을 표적으로 하는 T7 파지 라이브러리의 스크리닝 결과. 파지의 농축이 각각의 라운드마다 나타났다. (C) 차세대 시퀀서에 의한 D-MC16 특이적 T7 파지의 서열 분석. (D) 농축된 펩티드 및 그의 비율. (E) D-MC16에 대한 TIT7 파지의 결합 확인(플라크 형성 실험).
도 7은 IRDye-dTIT7 투여 실험의 결과를 나타낸다. 루시퍼라제를 강제로 발현한 래트 신경교종 세포(C6-Luc)를 누드 마우스의 뇌에 이식하여 뇌 종양 모델 마우스를 제작하였다. 근적외선 형광 시약(IRDye 800CW)으로 표지된 dTIT7(IRDye-dTIT7, 미정제품)을 꼬리 정맥에 주사하고, 경시적으로 IVIS 영상장치(Imager)에 의해 형광을 관찰하였다. 24시간 후에 뇌 종양 부위와 신장에서 형광 신호의 축적이 관찰되었다. (A) 경시적 전체 영상 (B) 확대 사진 (C) IVIS 영상장치의 소프트웨어에 의한 신호 정량화.
도 8은 GA-dTIT7 축합체의 구조를 나타낸다. 겔다나마이신에 아미노기를 도입하여 말레이미드 링커를 결합시킨다. dTIT7의 C-말단에 미리 시스테인을 부가하여 합성을 수행한다. 이를 시스테인 잔기의 술프히드릴 기를 통해 말레이미드와 반응시켜 GA-dTIT7 축합체를 축합체를 수득한다.
도 9는 dTIT7에 항암제 겔다나마이신(GA)를 결합시킨 약물(GA-dTIT7)을 뇌 종양 모델 마우스에 격일 경구 투여를 포함한 실험의 결과를 나타낸다. 뇌 종양의 생존은 루시퍼라제에 의한 발광에 의해 정량하였다. 겔다나마이신과 결합한 WIPTTMT(dTIT7을 구성하는 D-아미노산 서열의 순서가 바뀐 펩티드)를 함유하는 GA-dWIP7을 대조군으로서 마우스에 투여하였다. 악성 종양의 생존 세포 신호(좌)를 정량한 그래프(우측 위), 및 생존 곡선(우측 아래)을 나타낸다.
도 10은 IF7, dTIT7-결합 항암제에 의한 악성 뇌 종양의 표적 치료를 개념적으로 설명한다. 편의상, 혈액-뇌 관문이 목 위에 존재하는 것으로 간주하였다. 일반적인 항암 약물은 종양 표적 능력을 갖지 않는다. 테모졸로미드는 확산에 의해 뇌 종양에 어느 정도 침투하지만 농축되지 않는다. 아바스틴은 새로운 혈관에 작용하지만 종양 세포에는 직접 작용하지 않는다. 대조적으로, Anxa1-결합 펩티드는 혈액-뇌 종양 관문을 통과하고, 종양에서만 고농도로 축적된다.
도 11은 dLRF7, dSPT7, dMPT7 및 dLLS7 펩티드와 Anxa1의 분자간 상호작용의 결과를 나타낸다. 시험된 모든 펩티드는 Anxa1에 양성 결합을 나타냈다.
도 12는 IRDye-dLRF7, IRDye-dSPT7, IRDye-dMPT7 및 IRDye-dLLS7의 뇌 종양 모델 누드 마우스에의 투여 실험의 결과를 나타낸다. dLLS7을 주사한 마우스를 제외한, 모든 마우스는 뇌 종양 부위에서 강한 신호를 나타냈으며, dLLS7 이외의 dLRF7, dMPT7 및 dSPT7의 3개의 펩티드는 혈관계 경로를 통한 뇌 종양 표적 능력을 나타냈다.

1. 펩티드

본 발명은 하기 (I) 내지 (III) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드를 제공한다.

(I) (X1)[D]P[D](X2)[D]의 아미노산 서열 (여기서, X1은 W 또는 F이고, X2는 S 또는 T이다),

(II) P[D]T[D](X)_n F[D]의 아미노산 서열 (여기서, (X)_n은 서로 독립적으로 선택된 n개의 임의의 아미노산이고, n은 0 내지 4의 정수이다),

(III) 전술한 (I) 및 전술한 (II) 중 어느 하나의 아미노산 서열의 레트로-인버소인 아미노산 서열.

본 발명은 하기 (i) 내지 (vii) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드를 또한 제공한다:

(i) T[D] I[D] T[D] W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열,

(ii) L[D] R[D] F[D] P[D] T[D] V[D] L[D]의 아미노산 서열,

(iii) L[D] L[D] S[D] W[D] P[D] S[D] A[D]의 아미노산 서열,

(iv) S[D] P[D] T[D] S[D] L[D] L[D] F[D]의 아미노산 서열,

(v) M[D] P[D] T[D] L[D] T[D] F[D] R[D]의 아미노산 서열,

(vi) 전술한 (i) 내지 (v) 중 어느 하나의 아미노산 서열에 있어서, 1 또는 수개의 아미노산이 삽입, 치환 또는 결실되거나, 이들이 조합되어 있는 아미노산 서열,

(vii) 전술한 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 아미노산 서열의 레트로-인버소인 아미노산 서열.

본 명세서에서, 쇄상 펩티드의 아미노산 서열은, 펩티드 표기의 관례에 따라 N-말단 측을 좌측으로 하고, C-말단 측을 우측으로 하여 기재된다. 게다가, 아미노산 서열 직후에 기호 [D]를 가진 각각의 아미노산 기호는 상기 아미노산의 D 형태를 나타내고, 아미노산 서열 직후에 기호 [D]가 없는 각각의 아미노산 기호는, 문맥에 반하지 않는 한, 상기 아미노산의 L 형태를 나타낸다. 본 명세서에서, 상기 (I) 내지 (II) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드 및 상기 (i) 내지 (vii) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드는 총칭하여 본 발명의 펩티드라고 지칭한다.

상기 (I)의 아미노산 서열은 W[D] P[D] S[D], W[D] P[D] T[D], F[D] P[D] S[D] 및 F[D] P[D] T[D] 중 어느 하나일 수 있다.

상기 (II)의 아미노산 서열에서, 정수 n은 0 내지 4이고, 바람직하게는 2 내지 3이다. X는 서로 독립적으로 선택된 임의의 아미노산일 수 있다.

본 발명의 펩티드는 상기 (I) 내지 (III) 및 (i) 내지 (vii) 중 어느 하나의 아미노산 서열로 이루어질 수 있거나, 이들 서열의 N-말단 측 및/또는 C-말단 측에 부가된 하나 이상의 아미노산을 가질 수 있다.

본 명세서에서, 펩티드는 2개 이상의 아미노산이 펩티드-결합된 것을 지칭한다. 본 발명의 펩티드의 길이는 특히 제한되지 않는다. 본 발명의 펩티드는 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14 또는 적어도 15개의 아미노산을 함유할 수 있다. 본 발명의 펩티드는 최대 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8 또는 7개의 아미노산으로 이루어질 수 있다. 본 발명의 펩티드는 3-10, 3-15, 3-20, 3-25, 3-30, 3-40, 3-50, 4-10, 4-15, 4-20, 4-25, 4-30, 4-40, 4-50, 5-10, 5-15, 5-20, 5-25, 5-30, 5-40, 5-50, 6-10, 6-15, 6-20, 6-25, 6-30, 6-40, 6-50, 7-10, 7-15, 7-20, 7-25, 7-30, 7-40, 7-50, 8-10, 8-15, 8-20, 8-25, 8-30, 8-40 또는 8-50의 아미노산의 길이을 가질 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 펩티드는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15의 아미노산의 길이를 가질 수 있다.

본 발명의 펩티드는 D형 아미노산과 L형 아미노산의 조합으로 구성될 수 있다. 더 상세히, 상기 (I) 내지 (II) 및 (i) 내지 (vi) 중 어느 하나의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드를 구성하는 모든 아미노산은 D형 아미노산일 수 있거나, D형 아미노산 이외에 L형 아미노산을 함유할 수 있으며, 상기 (III) 또는 (vii)의 아미노산 서열을 함유하는 펩티드를 구성하는 모든 아미노산은 L형 아미노산일 수 있거나, L형 아미노산 이외에 D형 아미노산를 함유할 수 있다. L-형 아미노산은 천연에 존재하는 L-형 아미노산일 수 있으며 예는 글리신, 알라닌, 류신, 프롤린, 페닐알라닌, 티로신, 메티오닌, 세린, 트레오닌, 시스테인, 아스파르트산, 글루탐산, 아스파라긴, 글루타민, 리신, 아르기닌, 히드록시리신, 히스티딘, 트립토판, 발린을 포함하며, 이 모두가 L 형태이다. D-형 아미노산은, 예를 들어, 상기에 기재한 바와 같은 L-형 아미노산의 광학 이성질체를 포함한다. 본 명세서에서, 광학 활성을 나타내지 않는 아미노산인 글리신은 문맥에 반하지 않는 한 L-형 및 D-형 아미노산으로서 판독될 수 있다.

본 발명의 펩티드는 37 C.F.R. 1.821-1.822에 언급된 것들 등과 같은 변형 또는 이상 아미노산을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 펩티드는 변형 또는 이상 아미노산을 함유하지 않는다. 변형 또는 이상 아미노산의 예는 3-아미노아디프산, β-알라닌, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 2,4-디아미노부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라긴, 히드록시리신, 알로-히드록시리신, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, 6-N-메틸리신, N-메틸발린, 노르발린, 노르류신, 오르니틴 등을 포함한다.

본 발명의 펩티드의 아미노 말단 및/또는 카르복시 말단은 변형될 수 있다. 아미노 말단의 변형은 메틸화(예를 들어, -NHCH₃ 또는 -N(CH₃)₂), 아세틸화(예를 들어, 아세트산 또는 그의 할로겐화 유도체에 의해), 또는 임의의 보호기 예컨대 벤질옥시카르보닐 기, 카르복실레이트 관능기(RCOO-) 또는 술포닐 관능기(R-SO₂-)(여기서 R은 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 및 알킬 아릴로부터 선택된다) 등이 도입될 수 있다. 카르복시 말단의 변형은 아미드화(-CONH₂), 에스테르화(-COOR) 등을 포함한다. 여기서, 에스테르에 있어서의 R로서, 예를 들어, C_1-6 알킬 기 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸; C_3-8 시클로알킬 기 예컨대 시클로펜틸, 시클로헥실; C_6-12 아릴 기 예컨대 페닐, α-나프틸; 페닐-C_1-2 알킬 기 예컨대 벤질, 펜에틸; C_7-14 아르알킬 기 예컨대 α-나프틸-C_1-2 알킬 기; 피발로일옥시메틸 기 등이 사용된다.

본 발명의 펩티드는 N-말단 또는 C-말단 이외에 있어서도 다양한 변형을 겪을 수 있다. 화학 변형은, 예를 들어, 메틸화, 아세틸화, 포스포릴화 등일 수 있다. 본 발명의 펩티드가 C-말단 이외의 부위에서 카르복실 기(또는 카르복실레이트)를 갖는 경우, 카르복실 기가 아미드화 또는 에스테르화될 수 있다. 이 경우에 에스테르로서는, 예를 들어, 상기에 기재된 C-말단 에스테르 등이 사용된다. 대안으로, 분자 내의 아미노산의 측쇄 상의 치환기(예를 들어, -OH, -SH, 아미노 기, 이미다졸 기, 인돌 기, 구아니디노 기 등)가 적절한 보호기(예를 들어, C_1-6 아실 기 예컨대 C_1-6 알카노일 기 예컨대 포르밀, 아세틸 등)로 보호될 수 있다.

상기 (vi)의 아미노산 서열을 함유하는 본 발명의 펩티드는 상기 (i) 내지 (v)의 아미노산 서열 중의, 연속하는 4개의 아미노산으로 이루어진 부분 서열, 연속하는 5개의 아미노산으로 이루어진 부분 서열, 또는 연속하는 6개의 아미노산으로 이루어진 부분 서열을 함유할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들어, 원래의 아미노산 서열이 상기 (i)의 아미노산 서열인 경우, 상기 펩티드는 T[D] I[D] T[D] W[D]의 아미노산 서열, I[D] T[D] W[D] P[D]의 아미노산 서열, T[D] W[D] P[D] T[D]의 아미노산 서열, W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열, T[D] I[D] T[D] W[D] P[D]의 아미노산 서열, I[D] T[D] W[D] P[D] T[D]의 아미노산 서열, T[D] W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열, T[D] I[D] T[D] W[D] P[D] T[D]의 아미노산 서열 또는 I[D] T[D] W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열을 함유할 수 있다.

상기 (vi)의 아미노산 서열에 있어서의 변이(즉, 삽입, 치환, 결실, 및 그의 조합)의 위치는 특히 제한되지 않는다. 변이는 (a) 삽입만, (b) 치환으로만, (c) 결실로만, (d) 삽입 및 치환으로만, (e) 삽입 및 결실로만, (f) 치환 및 결실로만, 또는 (g) 삽입, 치환 및 결실의 조합으로 이루어질 수 있다. 상기 (a) 내지 (g)의 변이의 개수는, 예를 들어, 1-5개, 바람직하게는 1-4개, 보다 바람직하게는 1-3개, 추가로 더 바람직하게는 1 또는 2개, 훨씬 더 바람직하게는 1개이다.

상기 (vi)의 아미노산 서열에 있어서의 삽입된 아미노산은 상기에 기재된 임의의 아미노산일 수 있다. 아미노산은 L-형 또는 D-형 아미노산, 예를 들어, 상기에 기재된 천연에 존재하는 L-형 아미노산, 또는 그의 광학 이성질체인 D-형 아미노산일 수 있다. 또한, 아미노산은 상기에 기재된 다양한 화학 변형을 겪을 수 있다.

바람직하게는, 상기 (vi)의 아미노산 서열 중의 치환은 보존적 아미노산 치환이다. "보존적 아미노산 치환"은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 측쇄의 유사한 특성을 갖는 아미노산 간의 치환으로서 정의될 수 있다. 따라서, 보존적 아미노산 치환은, 예를 들어, (1) 방향족 아미노산(Phe, Trp, Tyr) 간의 치환, (2) 비극성 지방족 아미노산(Gly, Ala, Val, Leu, Met, Ile, Pro) 간의 치환, (3) 비전하 극성 아미노산(Ser, Thr, Cys, Asn, Gln) 간의 치환, (4) 염기성 아미노산(Lys, Arg, His) 간의 치환, 또는 (5) 산성 아미노산(Asp, Glu) 간의 치환일 수 있다. 본 명세서에서, 보존적 아미노산 치환은 또한 D형 아미노산을 그의 광학 이성질체인 L형 아미노산으로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 따라서, 보존적 아미노산 치환은 또한 상기 (1) 내지 (5)의 군 내에서의, 2개의 L-형 아미노산 간의 치환, 2개의 D-형 아미노산 간의 치환, 또는 L-형 아미노산과 D-형 아미노산 간의 치환일 수 있다.

한 실시양태에서, 상기 (vi)의 서열은 상기 (I) 또는 (II)의 서열에 포함될 수 있다. 이 경우에, 상기 (vii)의 서열은 상기 (III)의 서열에 포함된다. 이러한 실시양태에서, 상기 (i)의 서열에 있어서 4번째 아미노산은 W[D] 또는 F[D]일 수 있고 5번째 아미노산은 P[D]일 수 있고 6번째 아미노산은 T[D] 또는 S[D]일 수 있으며, 상기 (ii)의 서열에 있어서 3번째 아미노산은 W[D] 또는 F[D]일 수 있고 4번째 아미노산은 P[D]일 수 있고 5번째 아미노산은 T[D] 또는 S[D]일 수 있으며, 상기 (iii)의 서열에 있어서 4번째 아미노산은 W[D] 또는 F[D]일 수 있고 5번째 아미노산은 P[D]일 수 있고 6번째 아미노산은 T[D] 또는 S[D]일 수 있으며, 상기 (iv)의 서열에 있어서 제2 아미노산은 P[D]일 수 있고 제3 아미노산은 T[D]일 수 있고 제6 아미노산은 F[D]일 수 있으며, 상기 (v)의 서열에 있어서 제2 아미노산은 P[D]일 수 있고 제3 아미노산은 T[D]일 수 있고 제5 아미노산은 F[D]일 수 있다.

펩티드의 레트로-인버소 이성질체는 원래의 펩티드에 대하여, 각각의 아미노산 잔기의 키랄성이 반대이고("인버소"), 아미노산 서열의 방향이 반전인("레트로") 펩티드를 지칭한다. 레트로-인버소 이성질체는 원래의 펩티드와 유사한 구조 및 기능을 나타내는 것으로 공지되어 있다(예를 들어, 문헌 [Acc. Chem. Res., 1993, 26(5), pp 266 273], 및 [PLoS One. 2013 Dec 2; 8(12):e80390]). 구체적으로, 상기 (vii)의 아미노산 서열은, 예를 들어, 상기 (i)의 서열의 레트로-인버소인 MTPWTIT(서열번호: 1), 상기 (ii)의 서열의 레트로-인버소인 LVTPFRL(서열번호: 2), 상기 (iii)의 서열의 레트로-인버소인 ASPWSLL(서열번호: 3), 상기 (iv)의 서열의 레트로-인버소인 FLLSTPS(서열번호: 4), 및 상기 (v)의 서열의 레트로-인버소인 RFTLTPM(서열번호: 5)을 포함한다.

본 발명의 펩티드는 상기 (I) 내지 (III) 및 (i) 내지 (vii)로부터 선택된 2개 이상의 서열을 함유할 수 있다. 한 실시양태에서, 본 발명의 펩티드는 상기 (I) 내지 (III) 및 (i) 내지 (vii)의 서열 중 어느 하나의 탠덤 반복부(tandem repeat)(즉, 동일한 서열 부분이 서로 직접적으로 연결되어 있는 구조)를 함유한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 펩티드는 상기 (I) 내지 (III) 및 (i) 내지 (vii)의 2개 이상의 상이한 서열이 직접적으로 연결되어 있는 구조를 함유한다. 구체적인 반복부 구조는, 예를 들어, T[D]I[D]T[D]W[D]P[D]T[D]M[D]-T[D]I[D]T[D]E[D]P[D]T[D]M[D], 및 T[D]I[D]T[D]-T[D]I[D]T[D]를 포함한다. 대안으로, 본 발명의 펩티드는 덴드리머(dendrimer)에 의해 다가 펩티드를 구성할 수 있다.

본 발명의 펩티드는 유리 형태 또는 염 형태일 수 있다. 본 발명의 펩티드 염의 예는 제약상 허용되는 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 산 부가 염의 예는 무기 산 예컨대 염산, 황산, 질산, 인산 등과의 염, 및 유기 산 예컨대 아세트산, 말산, 숙신산, 타르타르산, 시트르산 등과의 염을 포함한다. 염기 부가 염의 예는 알칼리 금속 예컨대 나트륨, 칼륨 등과의 염, 알칼리 토금속 예컨대 칼슘, 마그네슘 등과의 염, 및 아민 예컨대 암모늄, 트리에틸아민 등과의 염을 포함한다.

본 발명의 펩티드는 아넥신 A1에 결합할 수 있다. 아넥신 A1(Anxa1)은 리포코르틴 1(lipocortin 1)로서도 공지된, 아넥신 패밀리에 속하는 공지된 단백질이다. 다양한 종에 대해 Anxa1의 유전자 서열 및 아미노산 서열이 공지되어 있다. 예를 들어, 인간 Anxa1에 관해서 mRNA의 RefSeq 번호 NM-000700.2(서열번호: 6), 단백질의 RefSeq 번호 NP-000691.1(서열번호: 7); 마우스 Anxa1에 관해서 mRNA의 RefSeq 번호 NM-010730.2(서열번호: 8), 단백질의 RefSeq 번호 NP-034860.2(서열번호: 9)가 언급될 수 있다. 본 발명의 펩티드는 Anxa1의 N-말단 영역에 결합할 수 있다. 보다 특히, 본 발명의 펩티드는 인간 Anxa1 중의 서열번호: 7의 1 내지 15번째의 아미노산으로 이루어진 영역 또는 뮤린 Anxa1 중의 서열번호: 9의 1 내지 15번째의 아미노산으로 이루어진 영역에 결합할 수 있다. 본 발명의 펩티드는, 예를 들어, 마우스 또는 인간 Anxa1과의 분자간 상호작용을 QCM(수정 진동자 미량저울(Quartz Crystal Microbalance)) 법을 사용하여 측정한 경우에, 바람직하게는 10^-6 M 미만, 보다 바람직하게는 10^-7 M 미만, 추가로 더 바람직하게는 5Х10^-8 M 미만의 해리 상수(Kd 값)를 가질 수 있다. 상기 측정을 위해, 에이티젠사(ATGen Corporation)(한국 성남시)로부터 시판되고 있는 346 아미노산 잔기로 이루어진 인간 재조합 Anxa1 단백질을 사용할 수 있다.

본 발명의 펩티드는 공지된 펩티드 합성 방법에 따라 제조될 수 있다. 펩티드 합성 방법은, 예를 들어, 고상 합성법 및 액상 합성법 중 어느 하나일 수 있다. 목적 펩티드는 본 발명의 펩티드를 구성할 수 있는 부분 펩티드 또는 아미노산과 나머지 부분을 축합시키고, 생성물이 보호기를 갖는 경우 보호기를 제거함으로써 제조할 수 있다.

여기서, 보호기의 축합 및 제거는 자체 공지된 방법, 예를 들어, 하기 (1) 내지 (8)에 기재된 방법에 따라 수행할 수 있다.

(1) M. Bodanszky & M.A. Ondetti, Peptide Synthesis, Interscience Publishers, New York (1966)

(2) Schroeder & Luebke, The Peptide, Academic Press, New York (1965)

(3) Nobuo Izumiya, et al.: Peptide Gosei-no-Kiso to Jikken (Basics and experiments of peptide synthesis), published by Maruzen Co. (1975)

(4) Haruaki Yajima and Shunpei Sakakibara: Seikagaku Jikken Koza (Biochemical Experiment) 1, Tanpakushitsu no Kagaku (Chemistry of Proteins) IV, 205 (1977)

(5) Haruaki Yajima, ed.: Zoku Iyakuhin no Kaihatsu (A sequel to Development of Pharmaceuticals), Vol. 14, Peptide Synthesis, published by Hirokawa Shoten.

(6) Stewart, J.M. & Young, J.D., "Solid phase peptide synthesis (2nd ed.)", Pierce Chemical Company, Rockford (1984)

(7) Atherton, E. & Sheppard, R.C., "Solid Phase peptide synthesis: a practical approach", IRL Press, Oxford (1989)

(8) "Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach (Practical Approach Series)", Oxford University Press (2000)

이와 같이 하여 수득된 펩티드는 공지된 정제 방법에 의해 정제 및 단리할 수 있다. 정제 방법의 예는 용매 추출, 증류, 칼럼 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 재결정화, 그의 조합 등을 포함한다.

상기의 방법에 의해 수득된 펩티드가 유리 형태인 경우, 상기 형태를 공지된 방법 또는 그에 준하는 방법에 의해 적합한 염으로 전환시킬 수 있으며; 역으로, 펩티드가 염의 형태로 수득되는 경우, 상기 염을 공지된 방법 또는 그에 준하는 방법에 의해 유리 형태 또는 다른 염으로 전환시킬 수 있다.

상술한 바와 같이, 아넥신 A1은 현재 공지된 종양 혈관 특이적 마커 분자 중에서 가장 높은 특이성을 갖는 것으로 공지되어 있으며, 정상 세포에서는 세포내로 발현되나, 종양 신생혈관 내피 세포에서는 혈류에 접하는 관강 표면에 강하게 발현한다(Oh et al., Nature 429: 629-35, 2004). 따라서, 본 발명의 펩티드는 생체 내에서 혈관신생 종양에 선택적으로 결합할 수 있다. 게다가, Anxa1은 종양 내에서 형성된 신생혈관 내피 세포의 혈액측에서 발현되며, 본 발명의 펩티드와 같은 리간드에 혈액측에서 결합하는 경우, 리간드는 트랜스시토시스에 의해 기저측에 수송되고, 암세포가 존재하는 간질로 적극적으로 방출한다. 따라서, 본 발명의 펩티드는 생체내에서 악성종양을 표적화할 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩티드는, 예를 들어, 악성 종양의 표적화에 유용하다.

2. 접합체

본 발명은 또한, 하나 이상의 성분이 상기의 본 발명의 펩티드와 결합한 접합체 (이하, 본 발명의 접합체라고도 지칭함)를 제공한다.

상기 성분은 본 발명의 펩티드와 연결될 수 있는 한 특히 제한되지 않으며고, 동물(예를 들어, 인간)에게 투여하기에 적합할 수 있고, 동물의 체내에서 일부 기능을 수행할 수 있다. 성분은 천연물 또는 비천연물일 수 있다. 성분의 예는 생물학적 물질(예를 들어, 세포, 파지, 바이러스 등), 올리고뉴클레오티드 및 핵산(예를 들어, DNA, RNA, DNA/RNA 키메라 등), 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 항체, 지질, 다당류, 소분자 화합물(예를 들어, 1000 Da 이하의 유기 또는 무기 화합물), 입자(예를 들어, 금 입자, 다양한 나노입자 등), 그의 조합물 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

성분은 동물(예를 들어, 인간) 체내의 표적 부위에서 주어진 기능성을 수행할 수 있다. 기능성의 종류는 특히 제한되지 않는다. 본 발명의 접합체는 본 발명의 펩티드에 상응하는 부분의 작용에 의해 악성 종양에 표적화될 수 있기 때문에, 기능성의 바람직한 예는 항암 활성 및 검출 가능성의 제공을 포함한다. 따라서 성분은, 예를 들어, 항암제 또는 검출 가능한 물질일 수 있다.

(항암제)

본 명세서에서, 항암제는 악성 종양 (암)의 성장을 억제하기 위한 약물을 지칭한다. 항암제의 작용의 메카니즘은 특히 제한되지 않는다. 항암제는 항대사제, 알킬화제, 항암성 항생제, 미소관 억제제, 백금 제제, 토포이소머라제 억제제, 분자 표적제 등일 수 있다. 본 발명의 접합체는 둘 이상의 동일하거나 상이한 항암제를 함유할 수 있다.

대사 길항제는, 예를 들어, 엽산 항대사제, 디히드로프테로에이트 신타제 억제제, 디히드로폴레이트 리덕타제 억제제(DHFR 억제제), 피리미딘 대사 억제제, 티미딜레이트 신타제 억제제, 퓨린 대사 억제제, IMPDH 억제제, 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, 뉴클레오티드 유사체, L-아스파라기나제 등일 수 있다. 대사 길항제의 구체예는 에노시타빈(선라빈(SUNRABIN)), 카페시타빈(크셀로다(Xeloda)), 카르모푸르(미푸롤(Mifurol)), 클라드리빈(류스타틴(Leustatin)), 겜시타빈(겜자르(Gemzar)), 시타라빈(킬로시드(kiloside)), 시타라빈 옥포스페이트(스타라시드(Starasid)), 테가푸르(아킬론(Achillon), 아프토르(AFTHOUR), 테프실(Tefseal), 푸트라푸르(Futrafur), 루나신(Lunasin) 등), 테가푸르/우라실(UFT), 테가푸르/기메라실/오테라실 포타슘(TS-1: T-S-One), 독시플루리딘(푸르투론(FURTURON)), 넬라라빈(아라논(Arranon) G), 히드록시카르바미드(히드레아(HYDREA)), 플루오로우라실(5-FU, 카르조날(carzonal), 벤톤(Benton), 루나콜(Lunachol), 루나폰(Lunapon)), 플루다라빈(플루다라(fludara)), 페메트렉시드(알림타(alimta)), 펜토스타틴(코폴린(cofolin)), 메르캅토푸린(류케린(leukerin)), 메토트렉세이트(메소트렉세이트) 등을 포함한다.

알킬화제의 구체예는 질소 머스터드계 알킬화제 예컨대 시클로포스파미드(엔독산(endoxane)), 이포스파미드(이포미드(ifomide)), 멜팔란(알케란(alkeran)), 부술판, 티오테파(테스파민(tespamine)) 등, 니트로우레아계 알킬화제 예컨대 니무스틴(니드란(nidran)), 라니무스틴(시메린(cymerin)), 다카르바진(다카르바진), 프로카르바진(프로카르바진 히드로클로라이드), 테모졸로미드(테모달(Temodal)), 카르무스틴(글리아델(Gliadel)), 스트렙토조토신(자노사르(zanosar)), 벤다무스틴(트레아키심(treakisym)) 등을 포함한다.

항암성 항생제의 구체예는 악티노마이신 D(코스메겐(cosmegen)), 아클라루비신(아클라시논(aclacinone)), 암루비신(칼세드(Calsed)), 이다루비신(이다마이신(idamycin)), 에피루비신(에피루비신 히드로클로라이드, 파르모루비신(Farmorubicin)), 지노스타틴 스티말라머(스만크스(Smancs)), 다우노루비신(다우노마이신(daunomycin)), 독소루비신(아드리아신(adriacin)), 피라루비신(피노루빈(Pinorubin), 테라루비신(THERARUBICIN)), 블레오마이신(블레오(Bleo)), 페플로마이신(펠레오(Peleo)), 미토마이신 C (미토마이신(Mitomycin)), 미톡산트론(노반트럼(Novantrum)), 리포소말 독소루비신(독실(Doxil)) 등을 포함한다.

미소관 억제제의 예는 빈카 알칼로이드 미소관 중합 억제제 예컨대 빈블라스틴(엑살(exal)), 빈크리스틴(온코빈(oncovin)), 빈데신(필데신(Fildesin)) 등, 탁산 유형 미소관 탈중합 억제제 예컨대 파클리탁셀(탁솔(taxol)), 도세탁셀(탁소테레(taxotere)) 등을 포함한다.

백금 제제의 예는 옥살리플라틴(엘 프래트(El Prat)), 카르보플라틴(카르보플라틴(Carboplatin), 카르보머크(Carbomerck), 파라플라틴(Paraplatin)), 시스플라틴(아이에이-콜(IA-call), 코나부리(Konaburi), 시스플라틴 등), 네다플라틴(아쿠플라(Aqupla)) 등을 포함한다.

토포이소머라제 억제제의 예는 I형 토포이소머라제 억제제 예컨대 캄프토테신 및 그의 유도체(예를 들어, 이리노테칸(캄프토(Campto)), 노기테칸(히캄틴(HYCAMTIN)), SN-38 등) 등; II형 토포이소머라제 억제제 예컨대 안트라시클린 약물 예컨대 독소루비신(아드리아신(adriacin)) 등, 에피포도필로톡신 약물 예컨대 에토포시드(라스테트(Lastet), 베페시드(VePesid)) 등, 및 퀴놀론 약물 예컨대 레보플록사신(크라비트(cravit)), 시프로플록사신(시프록산(ciproxan)) 등을 포함한다.

분자 표적 약물의 예는 레고라페닙(스티바르가(Stivarga)), 세툭시맙(에르비툭스(Erbitux)), 파니투무맙(벡티빅스(Vectibix)), 람실맙(시람자(Cyramza)), 게피티닙(이레싸(Iressa)), 에를로티닙(타르세바(Tarceva)), 아파티닙(지오트리프(GIOTRIF)), 크리조티닙(크살코리(XALKORI)), 알렉티닙(알레센사(ALECENSA)), 셀리티닙, 렌바티닙(렌비마(Lenvima)), 트라스투주맙(헤르셉틴(Herceptin)), 라파티닙(티케르브(Tykerb)), 페르투주맙(페르제타(PERJETA)), 수니티닙(수텐트(Sutent)), 소라페닙(넥사바르(Nexavar)), 악시티닙(인리타(Inlyta)), 파조파닙(보트리엔토(Votriento)), 니볼루맙(옵디보(OPDIVO)), 펨브롤리주맙, 이피리무맙(예르보이(YERVOY)), 베무라페닙(젤보라프(ZELBORAF)), 에버롤리무스(아피니토르(AFINITOR)), 템시롤리무스(토리셀(TORISEL)), 리툭시맙(리툭산(Rituxan)), 베박시주맙(아바스틴), 겔다나마이신 등을 포함한다.

항암제는 또한 항혈관신생제일 수 있다. 항혈관신생제는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 또는 다른 혈관신생 인자, 또는 그의 수용체를 억제하는 것일 수 있다. 항혈관신생제의 예는 안지오스타틴, 엔도스타틴, 메타스타틴, 항 VEGF 항체(예를 들어, 아바스틴), VEGFR-2 억제제(예를 들어, SU5416, SU6668) 등을 포함한다.

(검출 가능한 물질)

본 명세서에서, 검출 가능한 물질은 상기 물질을 함유하는 본 발명의 접합체를 검출 가능하게 만드는 임의의 물질을 지칭한다. 바람직하게는, 검출 가능한 물질은 직접적으로 또는 적절한 가시화 또는 영상화 수단을 사용하여 간접적으로 생체내에서 본 발명의 접합체의 검출을 가능하게 한다. 가시화 또는 영상화 수단의 예는, X-선 사진촬영, 컴퓨터 단층촬영(CT), 핵 자기 공명 영상법(MRI), 초음파검사, 신티그라피, 양전자 방출 단층촬영(PET), 내시경검사, 복강경검사 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 검출 가능한 물질은, 예를 들어, 방사성 동위원소, MRI용 증강제(예를 들어, 상자성 이온), 방사선불투과성 물질, 조영제, 또는 형광 물질 등일 수 있다.

PET에 유용한 방사성 핵종의 예는 ¹⁸F, ⁵¹Mn, ^52mMn, ⁵²Fe, ⁵⁵Co, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ^82mRb, ⁸³Sr, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ^94mTc, ¹¹⁰In, ¹²⁰I, ¹²⁴I 등을 포함한다. γ 선 검출에 유용한 방사성 핵종의 예는 ⁵¹Cr, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁷⁵Se, ⁹⁷Ru, ^99mTc, ¹¹¹In, ^114mIn, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁶⁹Yb, ¹⁹⁷Hg, ²⁰¹Tl 등을 포함한다.

상자성 이온의 바람직한 예는 크로뮴 (III), 망가니즈 (II), 철 (III), 철 (II), 코발트 (II), 니켈 (II), 구리 (II), 네오디뮴 (III), 사마륨 (III), 이테르븀 (III), 가돌리늄 (III), 바나듐 (II), 테르븀 (III), 디스프로슘 (III), 홀뮴 (III), 에르븀 (III) 등을 포함하며, 가돌리늄이 특히 바람직하다. 게다가, 금속 예컨대 란타늄 (III), 금 (III), 납 (II), 비스무트 (III) 등이 또한 X-선 영상화 등에 유용하다.

방사선불투과성 물질 및 조영제의 예는 아이오딘 화합물(예를 들어, 유기 아이오딘산 예컨대 아이오도카르복실산, 아이오도포름, 트리아이오도페놀, 테트라아이오도에틸렌 등), 바륨 화합물(예를 들어, 황산바륨 등), 갈륨 화합물(예컨대 시트르산갈륨), 탈륨 화합물(예컨대 염화탈륨) 등을 포함한다.

형광 물질의 예는 로다민, 플루오레세인, Cy 염료, 알렉사(등록 상표) 플루오르, 피코에리트린(PE), 알로피코시아닌(APC), 그의 유도체 등을 포함한다. 또한, 근적외선 형광 시약 예컨대 인도시아닌이 바람직한 형광 물질로서 예시된다.

(본 발명의 펩티드와 성분과의 결합)

본 발명의 접합체에서 본 발명의 펩티드가 하나 이상의 성분과 결합하는 방식은 특히 제한되지 않는다. 결합은 직접적으로 또는 링커(linker) 등을 통해 간접적일 수 있다. 결합은 공유 결합, 비공유 결합, 또는 그의 조합에 의한 것일 수 있다. 하나 이상의 성분은 본 발명의 펩티드의 N-말단, C-말단, 또는 다른 위치에 직접 또는 간접적으로 결합할 수 있다. 펩티드와 다른 성분(또는 제2의 펩티드)의 결합은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 결합은 본 발명의 접합체에 있어서 임의의 공지된 수단에 의한 것일 수 있다.

예를 들어, 결합이 링커를 통해서인 경우, 공지된 가교결합제 예컨대 NHS 에스테르, 이미드 에스테르, 말레이미드, 카르보디이미드, 알릴 아지드, 디아질린, 이소시아니드, 소랄렌을 사용할 수 있다. 사용되는 가교결합제에 따라, 본 발명의 펩티드는 적절하게 변형될 수 있다. 예를 들어, 말레이미드 링커와의 결합을 위해 본 발명의 펩티드의 C-말단에 미리 시스테인을 부가할 수 있다.

상술한 방사성 금속 또는 상자성 이온을 본 발명의 펩티드와 연결하기 위해, 적절한 킬레이트제(예를 들어, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA), 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA), 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-N,N',N",N"'-테트라아세트산(DOTA) 등) 및/또는 메탈로티오네인 등을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Culali Aktolun et al. ed., "Nuclear Medicine Therapy: Principles and Clinical Applications", Springer, 2013] 등을 참조.

3. 조성물

본 발명은 또한, 본 발명의 펩티드 또는 접합체 및 약리학상 허용되는 담체를 함유하는 조성물(이하, 본 발명의 조성물이라고도 지칭함)을 제공한다. 조성물은 경구 또는 비경구 투여에 적합한 투여 형태로 제공될 수 있다.

비경구 투여를 위한 조성물의 예는 주사제, 좌제 등을 포함한다. 주사제는 정맥내 주사제, 피하 주사제, 피내 주사제, 근육내 주사제, 점적 정맥내 주사제 등의 투여 형태를 포함할 수 있다. 이러한 주사제는 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 주사제의 제조 방법으로서, 예를 들어, 본 발명의 펩티드 또는 접합체는 본 발명의 펩티드 또는 접합체를 일반적으로 주사제에 사용되는 무균 수용액 또는 유성액에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조할 수 있다. 주사용 수용액으로서, 예를 들어, 생리 식염수, 글루코스 및 기타 아주반트를 함유하는 등장액을 사용할 수 있고, 적절한 가용화제 예컨대 알콜(예를 들어, 에탄올), 폴리알콜(예를 들어, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제(예를 들어, 폴리소르베이트 80, HCO-50(수소화 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50 mol) 부가물)) 등과 병용할 수 있다. 유성액으로서, 예를 들어, 참깨유, 대두유 등을 사용하고, 가용화제로서 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등을 병용할 수 있다. 제조된 주사액은 바람직하게는 적합한 앰풀에 충전된다. 직장 투여에 사용되는 좌제는 본 발명의 펩티드 또는 접합체를 좌약용 통상적인 기제와 혼합함으로써 제조될 수 있다.

경구 투여를 위한 조성물은, 예를 들어, 고체 또는 액체 투여 형태, 구체적으로는 정제(당의정, 필름-코팅 정제 포함), 환제, 과립제, 산제, 캡슐제(연질 캡슐제 포함), 시럽제, 유제, 현탁제 등을 포함한다. 이러한 조성물은 공지된 방법에 의해 제조되며, 제제 분야에서 일반적으로 사용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 함유할 수 있다. 정제용 담체 및 부형제로서, 예를 들어, 락토스, 전분, 수크로스, 스테아린산마그네슘을 사용한다.

상기의 조성물 각각은 상기의 펩티드 또는 접합체와의 블렌딩이 바람직하지 않은 상호작용을 일으키지 않는 한, 다른 활성 성분을 함유할 수 있다.

상기의 비경구용 또는 경구용 제약 조성물은 활성 성분의 투여량에 적합한 투여 단위 형태로 편리하게 제제화된다. 이러한 투여 단위의 투여 형태의 예는 정제, 환제, 캡슐제, 주사제(앰풀) 및 좌제를 포함한다. 펩티드 또는 접합체의 함량은 투여 단위 형태당 일반적으로 바람직하게는 1 내지 500 mg이며, 바람직하게는, 특히 주사제에서는 1 내지 100 mg이고, 다른 투여 형태에서는 10 내지 250 mg이다.

본 발명의 조성물은 종양, 특히 혈관신생하는 악성 종양을 표적화할 수 있고, 바람직하게는 상기 종양에 상기 펩티드 또는 접합체를 축적시킬 수 있다. 따라서, 상기 접합체 중에 항암제를 함유하는 본 발명의 조성물은 표적화한 악성 종양의 치료 또는 예방에 유용하다. 또한, 상기 접합체 중에 검출 가능한 물질을 함유하는 본 발명의 조성물은 악성 종양의 검사 또는 진단에 유용하다.

악성 종양(암)은 임의의 종류의 암일 수 있으며, 또한 고형암 또는 액성암일 수 있다. 고형암으로서는, 바람직하게는 Anxa1을 세포 표면에 발현하는 고형암, 따라서 혈관신생하는 고형 종양이 언급된다. 고형암의 예는 뇌/신경계의 암(예를 들어, 뇌 종양, 척수 종양 등), 두경부 암(예를 들어, 후두암, 구강암, 타액선암, 부비동암, 갑상선암 등), 소화기 암(예를 들어, 위암, 식도암, 소장암, 결장암, 직장암, 항문암, 간암, 담도암, 췌장암), 요로 또는 생식 기관의 암(예를 들어, 신장암, 신장 세포 암, 방광암, 전립선암, 신우 및 요관 암, 담낭암, 담관암, 고환암, 음경암, 자궁암, 자궁내막암, 자궁 육종, 자궁 경부암, 질암, 외음부암, 난소암, 난관암 등), 호흡기계의 암(예를 들어, 폐암 (소세포 폐암, 비소세포 폐암, 전이성 폐암 포함), 기관지암 등), 유방암, 피부암(예를 들어, 악성 흑색종 등), 뼈암(예를 들어, 골육종 등), 근육암(예를 들어, 횡문근 육종) 등을 포함한다.

액성암으로서, 백혈병, 악성 림프종, 다발성 골수종, 골수이형성 증후군 등이 언급될 수 있다. 백혈병으로서, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프성 백혈병 등이 언급될 수 있다. 악성 림프종은 호지킨 림프종 및 비호지킨 림프종으로 분류되며, 비호지킨 림프종의 예는 B 세포 림프종, 성인 T 세포 림프종, 림프모구성 림프종, 미만성 대세포 림프종, 버킷 림프종, 여포성 림프종, MALT 림프종, 말초 T 세포 림프종, 맨틀 세포 림프종 등을 포함한다.

본 발명의 펩티드 또는 접합체가 혈액-뇌 종양 관문을 효율적으로 통과할 수 있기 때문에, 뇌 종양이 특히 바람직한 표적으로 언급될 수 있다. 뇌 종양은 원발성 뇌 종양 또는 전이성 뇌 종양일 수 있다. 뇌 종양은 또한 양성 뇌 종양(예를 들어, 수막종, 뇌하수체 선종, 신경초종 등) 또는 악성 뇌 종양, 바람직하게는 악성 뇌 종양일 수 있다. 악성 뇌 종양의 예는 2기 뇌 종양 예컨대 성상세포종, 핍돌기신경교종, 3기 뇌 종양 예컨대 역형성 성상세포종, 역형성 핍돌기신경교종, 역형성 핍지교성상세포종, 및 4기 뇌 종양 예컨대 교모세포종을 포함한다.

본 발명의 조성물은 아넥신 A1을 발현하는 동물, 특히 포유동물에게 투여될 수 있다. 포유동물의 예는 실험용 동물 예컨대 설치류 예컨대 마우스, 래트, 햄스터, 기니아 피그, 및 토끼 등, 가축 예컨대 돼지, 소, 염소, 말, 양, 밍크 등, 애완 동물 예컨대 개, 고양이 등, 영장류 예컨대 인간, 원숭이, 붉은털 원숭이, 마모셋, 오랑우탄, 침팬지 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.

본 발명의 조성물의 투여량은 또한 투여 목적, 투여 대상, 표적 질환, 병태, 투여 경로 등에 따라 다르다. 예를 들어, 상기에 기재된 암의 치료 또는 예방에 사용하는 경우, 항암제를 함유하는 본 발명의 접합체를 1회 용량으로서 일반적으로 체중 kg당 0.1 내지 10 mg을 주 1회 정맥내 또는 경구 투여하는 것이 편리하다. 대안으로, 상기에 기재된 암의 검사 또는 진단에 사용하는 경우, 검출 가능한 물질을 함유하는 본 발명의 접합체를 일반적으로 약 0.1 내지 10 mg/kg 체중으로 검사에 앞서 정맥내 또는 경구 투여하는 것이 편리하다.

[실시예]

이하에 실시예 등을 참조로 본 발명을 보다 상세히 설명하나, 본 발명은 이하의 실시예 등에 의해 제한되지 않는다.

(실험 동물의 제작)

래트 신경교종 C6 세포를 10% 태아 소 혈청, 고글루코스 및 항생제가 첨가된 둘베코 변형 이글 배지에서 배양하였다. 렌티바이러스(Lentivirus) 벡터 PGK-Luc를 샌퍼드-번햄-프레비스 의학 발견 연구소의 바이러스 핵심 연구시설(Virus Core Facility)에서 제작하였다. C6 세포 및 B16 세포를 PGK-Luc 렌티바이러스에 감염시키고, 루시퍼라제 양성 세포를 생성시켰다. 정위 프레임을 사용하여, C6-Luc 세포(4 μl PBS에 현탁된 4.8 x 10⁴ 세포)를 C57BL/6 마우스의 뇌 선조체에 주사하였다. 이틀 후, 루시퍼라제를 발현시키는 종양에 대해서 마우스를 영상화하였다. 이를 위해, 100 μl의 루시페린(30 mg/ml PBS)을 복막강에 주사한 후, 마우스를 산소(1 ml/분)와 함께 이소플루란 기체(20 ml/분)로 마취시키고, 크세노겐(Xenogen) IVIS 200 영상장치를 갖춘 카메라 하에 배치하였다. 광자 수를 1 내지 10초 동안 측정하였다. 이중 종양 모델에 있어서, 유사하게 C6-Luc 세포를 NOD-SCID 마우스의 뇌에 주사하고, 종양 성장을 크세노겐 영상장치에 의해 모니터링하였다.

뇌 종양이 검출 가능하게 된 때, C6-Luc 세포(100 μl PBS에 현탁된 2x10⁵ 세포)를 동일한 마우스의 등쪽 옆구리에 피하 주사하였다. 뇌 종양 및 피하 종양의 광자 수는 크세노겐 영상장치를 사용하여 측정하였다. B16-Luc 세포를 사용하여 동일한 균주 C57BL/6 마우스의 이중 종양 모델을 또한 제작하였다. C6-Luc 세포에 대해 상기에 기재된 바와 같이 8 내지 10 주령의 C57BL/6 암컷 마우스의 뇌에 B16-Luc 세포(5x10⁴ 세포)를 주사하였다. 뇌의 B16-Luc 종양이 검출 가능하게 된 때 B16-Luc 세포(2x10⁵ 세포)를 피하 주사하였다.

검토예 1: 종양-보유 마우스에 IF7의 투여 실험

IF7(즉, IFLLWQR(서열번호: 10)의 아미노산 서열을 갖는 L 형 펩티드)을 종양-보유 마우스에게 정맥내 투여하였다. IF7은 종양 주위의 혈관에 도달한 후, 혈관 내피 세포의 관강측으로부터 소포로 취입하여, 기저측으로 이동하고, 암세포가 존재하는 간질로 방출되었다.

마우스 혈관 내피 F2 세포에서도, Anxa1에 결합된 IF7은 트랜스시토시스에 의해 능동적으로 종양 혈관 내피 세포를 종단하였다. 따라서, IF7은 뇌 종양 내의 혈관-뇌 종양 관문을 통과하는 활성을 갖는 것이 시사되었다.

놀랍게도, 신경교종 세포를 이식한 뇌 종양 모델 마우스에 형광 표지된 IF7을 정맥내 주사한 경우에, 형광이 뇌 종양 부위에 고농도로 축적하는 것이 관찰되었다(도 1 및 도 2). 게다가, 형광은 혈관을 통과하고 뇌 간질에 있는 암 세포에 도달하였다.

검토예 2: 이중 종양 모델에 IF7-SN38의 투여 실험

피하 종양 및 뇌 종양 둘 다가 존재하는 마우스(이중 종양 모델)를 사용하여, IF7-SN38의 치료 효과를 검증하였다. 실험은 다음과 같이 수행하였다.

뇌 종양의 광자 수가 >1.0x10⁶이 된 때(이것은 일반적으로 2주 후에 일어났다), IF7C(RR)-SN38을 종양-보유 마우스에 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. IF7C(RR)-SN38(14.2 mg 또는 6.63 mmol)을 100 μl의 디메틸 술폭시드(DMSO)에 용해시키고, 1 μL의 용액(142 mg 또는 66.3 nmoles)을 크레모포어(Cremophore) EL의 50% 에탄올 용액(10 μl)으로 희석하고, 90 μl의 PBS를 추가로 첨가하였다. 주사당 IF7C(RR)-SN38 양은 142 mg/마우스 또는 7.1 mg/kg이었다. IF7의 역서열 또는 유사하게 제조된 RQ7C(RR)-SN38을 대조군으로서 사용하였다. PBS에 용해된 이리노테칸 및 PBS 단독을 음성 대조군으로서 사용하였다.

결과적으로, 뇌 종양 및 피하 종양 둘 다가 억제되었고, 그 효과는 피하 종양보다 뇌 종양에서 더 높았다(도 3 및 도 4). B16 흑색종 전이성 뇌 종양 모델에서 유사한 결과를 수득하였으며, 숙주 마우스를 C57BL/6 또는 SCID 균주로 변경시키더라도 결과는 변하지 않았다. 이들 사실은 Anxa1을 표적으로 하는 DDS는 효율적으로 혈액-뇌 종양 관문을 통과할 뿐만 아니라, 종양 세포 유형 및 마우스 균주에 관계없이 뇌 종양에서 우수한 치료 효과를 제공함을 나타낸다.

검토예 3: IF7의 약물통태의 연구

검토예 1 및 2에서 입증된 바와 같이, IF7은 우수한 악성 종양 표적 활성을 갖는다. 그러나, 임상 개발의 관점에서, 난용해성 및 낮은 안정성의 두 가지 문제가 있다. 즉, IF7 펩티드는 프로테아제 감수성이며 분해되기 쉽다. 실제로, A488-IF7을 건강한 마우스에게 정맥내 투여하는 것을 포함하는 실험에서, 말초 혈액의 형광 신호가 약 1시간에 거의 소실되었다(도 5). 그러나, 종양-보유 마우스에 대한 꼬리 정맥 투여에 의해, 말초 혈액으로부터 회수된 A488-IF7의 형광은 건강한 마우스에서 보다 현저히 적었다. 이 결과는 A488-IF7이 분해되는 동안 대부분이 종양에서 급속히 축적된다는 것을 시사한다. 게다가, IF7은 소수성이 높고, 항암제와 결합된 화합물을 정맥내 투여하는 경우 침전을 피하기 위해 DMSO에 용해시킨 후 계면활성제를 첨가하여야 하는 등 투여 형태에 곤란을 야기한다.

실시예 1: dTIT7 펩티드의 동정

본 발명자들은 일단 IF7과 연관된 상기의 약점을 극복하면 보다 우수한 치료제를 창출할 수 있다고 생각하고, 신규 서열로 이루어진 차세대 펩티드의 개발에 착수하였다.

이 연구의 기초가 되는 기술은, 7 아미노산 잔기로 이루어진 약 10억 종류(20⁷ 종)의 랜덤 펩티드를 표면에 제시한 파지 라이브러리를 스크리닝하는 방법이다. 생물을 구성하는 모든 아미노산은 일부 예외를 제외하고는 L-형 아미노산이다. 따라서, 일반적인 파지 라이브러리 스크리닝에 의해 표적에 결합하는 D-형 펩티드의 서열을 수득하는 것이 불가능하다. 따라서, 새롭게 T7 파지 라이브러리를 사용한 거울상 스크리닝(Funke et al., Mol. Biosystem. 2009, 783-6)을 실시하였다(도 6).

하기 발견 및 가정에 기초하여 스크리닝을 수행하여, Anxa1과 높은 결합 친화도를 갖는 파지를 수득하였다. IF7이 Anxa1의 N-말단 15 잔기(MAMVSEFLKQAWFIE; 서열번호: 11)와 상호작용하는 것, 그리고 IF7은 Axna1의 N-말단 15 잔기에 변형용 Cys 잔기를 부가한 16 잔기를 가진 L-펩티드(L-MC16)와 결합하는 것이 명확해졌다(Sasai et al., 미발표). 우선, L-MC16과 거울상 관계에 있는 D-MC16(모든 16 염기가 D-형이다)을 합성하고, T7 파지 라이브러리를 사용한 스크리닝에 의해, D-MC16과 결합하는 7 아미노산(L-형 TIT7 펩티드)을 동정하였다. 수득된 서열을 기초로, D-형 아미노산으로 구성된 TIT7 펩티드(dTIT7)를 합성하였다. 이 dTIT7 펩티드는 Anxa1과 결합할 것으로 예상된다.

파지가 제시하는 펩티드 서열을 분석할 때, 펩티드 서열에 다양한 돌연변이를 도입함으로써 서열을 최적화하는 것이 일반적인 관행이었다. 현재, 수득된 파지 군을 차세대 DNA 시퀀서에 적용함으로써 10,000종 이상의 후보 펩티드의 서열로부터 최적의 펩티드 서열을 한꺼번에 평가 및 동정할 수 있다.

분석 결과, Anxa1의 N-말단 부위에 결합하는 서열로서, TIT(트레오닌-이소류신-트레오닌)로 시작하는 7 아미노산의 출현 빈도가 높고, 그 중에서도 TIT7 서열 "TITWPTM"(서열번호: 12)이 두드러진 것으로 밝혀졌다. TIT7의 부분 서열의 빈도도 상위에 나타난 반면, TIT7의 서열 치환체는 발견되지 않았다. 또한, TIT7의 펩티드는 IF7의 서열(IFLLWQR; 서열번호: 10)과 완전히 상이한 신규 한 서열로 구성되었다.

상기 결과는 모든 D-형 아미노산으로 이루어진 7개의 아미노산의 직쇄형 펩티드 TIT7이 성공적으로 수득되었음을 나타냈다.

더욱이, dTIT7과 Anxa1의 분자간 상호작용을 QCM 법에 의해 측정한 경우, 해리 상수(Kd 값)는 4.57 x 10^-8 M이었다.

도 6D에 도시된 바와 같이, TIT7 서열(서열번호: 12) 이외에, LRFPTVL(서열번호: 13), SPTSLLF(서열번호: 14), MPTLTFR(서열번호: 15), LKGMLRI(서열번호: 16) 및 LLSWPSA(서열번호: 17)의 서열을 가진 펩티드가 빈번하게 출현하였고, 10⁹종의 팽대한 수의 랜덤 펩티드 중에서, 이들 6개의 펩티드가 전체의 약 50%를 차지하였다.

실시예 2: dTIT7 펩티드의 뇌 종양 표적 능력

근적외선 형광 시약 IRDye 800CW로 표지된 dTIT7(IRDye-dTIT7)을 제작하였다. 래트 신경교종을 누드 마우스의 뇌에 이식한 뇌 종양 누드 마우스 모델을 제작하고 마우스의 꼬리 정맥을 통해 IRDye-dTIT7을 주입하였다. 결과적으로, IRDye-dTIT7이 뇌 종양 모델 마우스의 종양 부위에 축적된다는 것이 생체내 영상화에 의해 관찰되었다(도 7).

실시예 3: 뇌 종양 모델에 대한 dTIT7-결합 항암제의 항종양 효과

다음으로, dTIT7-항암제 접합체가 뇌 종양 모델 마우스에 미치는 영향을 조사하였다.

dTIT7 펩티드에 항암 약물 겔다나마이신을 결합시킨 GA-dTIT7(도 8)은 프로테아제 및 에스테라제 둘 다에 내성이며 생체내에서 보다 안정한 것으로 여겨진다. 권장 투여량의 1/10배(몰수 환산)로 GA-dTIT7을 종양-보유 마우스(흑색종 B16 세포, 피하 투여)에 1일 또는 2일마다 정맥내 투여하였다. 결과적으로, 종양 성장이 현저히 억제되고, 조직병리학적 관찰에 의해 GA-dTIT7을 투여한 마우스의 종양 부위에서 대량의 괴사가 관찰되었다. 이러한 효과는 연일 투여가 필요했던 IF7보다(Hatakeyama et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 108: 19587-92, 2011) dTIT7이 우수한 가능성을 강하게 시사한다.

더욱 놀랍게도, B16 세포를 뇌에 이식한 뇌 종양 모델에 GA-dTIT7을 경구 투여하였을 때, 종양 퇴축이 관찰되고, 약물의 투여를 중지한 후에도 종양이 계속 감소하고, 마침내, 완전 치유가 4 마리 중 2 마리에서 관찰되었다(도 9). 유사한 치료 효과가 C6 세포를 사용한 뇌 종양 모델에서도 관찰되었다. 이것은 GA-dTIT7이 경구 투여가 가능한 항암제로서 뇌 종양의 완전 치유를 야기할 수 있음을 시사한다.

실시예 4: dLRF7, dSPT7, dMPT7 및 dLLS7 펩티드와 Anxa1의 분자간 상호작용

실시예 1에 기재된 TIT7 서열(서열번호: 12) 이외의 출현 빈도가 높은 LRFPTVL(서열번호: 13), SPTSLLF(서열번호: 14), MPTLTFR(서열번호: 15) 및 LLSWPSA(서열번호: 17)의 서열의 펩티드에 관해서는, dTIT7 펩티드와 마찬가지로, D-형 아미노산으로 이루어진 펩티드(dLRF7, dSPT7, dMPT7 및 dLLS7 펩티드)를 합성하고, 하기 방법에 의해 Anxa1과의 분자간 상호작용을 그들 각각에 대해 측정하였다.

센서 칩을 피라나 용액(piranha solution)으로 5분 동안 2회 세척한 후, 0.9 mM 히드록시-EG3-운데칸티올(도진도(Dojindo)) 및 0.1 mM 아미노-EG6-운데칸티올(도진도)의 용액에 밤새 함침시켰다. 물로 세척한 후, 칩을 1 mM GMBS(도진도)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 나머지 GMBS를 세척해 낸 후, 1 mM 펩티드 용액을 칩에 첨가하고, 칩을 30분 동안 인큐베이션하였다. 펩티드-결합 센서 칩을 QCM 장치(싱클-큐(Single-Q), 아손(ASONE))에 배치하고, 0.5 ml의 PBS를 웰에 첨가하였다. 다양한 투여량의 Anxa1을 반응 챔버에 주입하고, 각각의 펩티드에 대한 결합 친화성(kd 값)을 결정하였다.

결과적으로, 시험된 모든 펩티드는 Anxa1에 양성 결합을 나타냈다(표 1 및 도 11).

합성 펩티드의 명칭	kd 값 (M)
dLRF7	3.119x10-8
dSPT7	9.029x10-8
dMPT7	2.982x10-7
dLLS7	5.418x10-8

실시예 5: dLRF7, dSPT7, dMPT7 및 dLLS7 펩티드의 뇌 종양 표적 능력

말단 시스테인을 부가함으로써 신장된 dLRF7, dSPT7, dMPT7 및 dLLS7 펩티드를 화학적으로 합성하였다. 그 다음에, 각각의 펩티드와 근적외선 형광 염료 IRDye 800CW 말레이미드(Li-Cor)를, 시스테인 잔기를 통해 결합시켰다. 생성된 펩티드 접합체를 HPLC에 의해 정제한 다음에 동결건조시켰다. 각각의 펩티드-IRDye 접합체를 DMSO 및 6% 글루코스에 용해시키고, 뇌 종양 모델 누드 마우스에 100 μl/마우스로 정맥내 주사하였다. 24시간 후, IVIS 스펙트럼(퍼킨 엘머(Perkin Elmer))에 의해 형광 영상을 측정하였다.

결과적으로, dLLS7을 주사한 마우스를 제외한 모든 마우스는 뇌 종양 부위에서 IRDye의 강한 신호를 나타냈고, dLLS7 이외의 3개의 펩티드 dLRF7, dMPT7 및 dSPT7이 혈관계 경로를 통한 뇌 종양 표적 능력을 나타냈다(도 12).

본 출원은 일본에서 출원된 특허 출원 번호 2016-159743(출원일: 2016년 8월 16일)에 기초하며, 그 내용은 전부 본 명세서에 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> NATIONAL INSTITUTE OF ADVANCED INDUSTRIAL SCIENCE AND TECHNOLOGY <120> MALIGNANT TUMOR TARGET PEPTIDE <130> IPA190063-JP <150> JP 2016-159743 <151> 2016-08-16 <160> 17 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 1 Met Thr Pro Trp Thr Ile Thr 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 2 Leu Val Thr Pro Phe Arg Leu 1 5 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 3 Ala Ser Pro Trp Ser Leu Leu 1 5 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 4 Phe Leu Leu Ser Thr Pro Ser 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 5 Arg Phe Thr Leu Thr Pro Met 1 5 <210> 6 <211> 1556 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 acttgtttca ctttgttttt ggacatagct gagccatgta cttcaaacag aaggcagcca 60 attactaact tctggttgct aggtgtggct tcctttaaaa tcctataaaa tcagaagccc 120 aagtctccac tgccagtgtg aaatcttcag agaagaattt ctctttagtt ctttgcaaga 180 aggtagagat aaagacactt tttcaaaaat ggcaatggta tcagaattcc tcaagcaggc 240 ctggtttatt gaaaatgaag agcaggaata tgttcaaact gtgaagtcat ccaaaggtgg 300 tcccggatca gcggtgagcc cctatcctac cttcaatcca tcctcggatg tcgctgcctt 360 gcataaggcc ataatggtta aaggtgtgga tgaagcaacc atcattgaca ttctaactaa 420 gcgaaacaat gcacagcgtc aacagatcaa agcagcatat ctccaggaaa caggaaagcc 480 cctggatgaa acactgaaga aagcccttac aggtcacctt gaggaggttg ttttagctct 540 gctaaaaact ccagcgcaat ttgatgctga tgaacttcgt gctgccatga agggccttgg 600 aactgatgaa gatactctaa ttgagatttt ggcatcaaga actaacaaag aaatcagaga 660 cattaacagg gtctacagag aggaactgaa gagagatctg gccaaagaca taacctcaga 720 cacatctgga gattttcgga acgctttgct ttctcttgct aagggtgacc gatctgagga 780 ctttggtgtg aatgaagact tggctgattc agatgccagg gccttgtatg aagcaggaga 840 aaggagaaag gggacagacg taaacgtgtt caataccatc cttaccacca gaagctatcc 900 acaacttcgc agagtgtttc agaaatacac caagtacagt aagcatgaca tgaacaaagt 960 tctggacctg gagttgaaag gtgacattga gaaatgcctc acagctatcg tgaagtgcgc 1020 cacaagcaaa ccagctttct ttgcagagaa gcttcatcaa gccatgaaag gtgttggaac 1080 tcgccataag gcattgatca ggattatggt ttcccgttct gaaattgaca tgaatgatat 1140 caaagcattc tatcagaaga tgtatggtat ctccctttgc caagccatcc tggatgaaac 1200 caaaggagat tatgagaaaa tcctggtggc tctttgtgga ggaaactaaa cattcccttg 1260 atggtctcaa gctatgatca gaagacttta attatatatt ttcatcctat aagcttaaat 1320 aggaaagttt cttcaacagg attacagtgt agctacctac atgctgaaaa atatagcctt 1380 taaatcattt ttatattata actctgtata atagagataa gtccattttt taaaaatgtt 1440 ttccccaaac cataaaaccc tatacaagtt gttctagtaa caatacatga gaaagatgtc 1500 tatgtagctg aaaataaaat gacgtcacaa gacaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 1556 <210> 7 <211> 346 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Ala Met Val Ser Glu Phe Leu Lys Gln Ala Trp Phe Ile Glu Asn 1 5 10 15 Glu Glu Gln Glu Tyr Val Gln Thr Val Lys Ser Ser Lys Gly Gly Pro 20 25 30 Gly Ser Ala Val Ser Pro Tyr Pro Thr Phe Asn Pro Ser Ser Asp Val 35 40 45 Ala Ala Leu His Lys Ala Ile Met Val Lys Gly Val Asp Glu Ala Thr 50 55 60 Ile Ile Asp Ile Leu Thr Lys Arg Asn Asn Ala Gln Arg Gln Gln Ile 65 70 75 80 Lys Ala Ala Tyr Leu Gln Glu Thr Gly Lys Pro Leu Asp Glu Thr Leu 85 90 95 Lys Lys Ala Leu Thr Gly His Leu Glu Glu Val Val Leu Ala Leu Leu 100 105 110 Lys Thr Pro Ala Gln Phe Asp Ala Asp Glu Leu Arg Ala Ala Met Lys 115 120 125 Gly Leu Gly Thr Asp Glu Asp Thr Leu Ile Glu Ile Leu Ala Ser Arg 130 135 140 Thr Asn Lys Glu Ile Arg Asp Ile Asn Arg Val Tyr Arg Glu Glu Leu 145 150 155 160 Lys Arg Asp Leu Ala Lys Asp Ile Thr Ser Asp Thr Ser Gly Asp Phe 165 170 175 Arg Asn Ala Leu Leu Ser Leu Ala Lys Gly Asp Arg Ser Glu Asp Phe 180 185 190 Gly Val Asn Glu Asp Leu Ala Asp Ser Asp Ala Arg Ala Leu Tyr Glu 195 200 205 Ala Gly Glu Arg Arg Lys Gly Thr Asp Val Asn Val Phe Asn Thr Ile 210 215 220 Leu Thr Thr Arg Ser Tyr Pro Gln Leu Arg Arg Val Phe Gln Lys Tyr 225 230 235 240 Thr Lys Tyr Ser Lys His Asp Met Asn Lys Val Leu Asp Leu Glu Leu 245 250 255 Lys Gly Asp Ile Glu Lys Cys Leu Thr Ala Ile Val Lys Cys Ala Thr 260 265 270 Ser Lys Pro Ala Phe Phe Ala Glu Lys Leu His Gln Ala Met Lys Gly 275 280 285 Val Gly Thr Arg His Lys Ala Leu Ile Arg Ile Met Val Ser Arg Ser 290 295 300 Glu Ile Asp Met Asn Asp Ile Lys Ala Phe Tyr Gln Lys Met Tyr Gly 305 310 315 320 Ile Ser Leu Cys Gln Ala Ile Leu Asp Glu Thr Lys Gly Asp Tyr Glu 325 330 335 Lys Ile Leu Val Ala Leu Cys Gly Gly Asn 340 345 <210> 8 <211> 1395 <212> DNA <213> Mus musculus <400> 8 gtctgaaacc atctgagcag agtctctctt cagtccccgg gaagacaagc aaatacaaag 60 atacttctct aaaaatggca atggtatcag aattcctcaa gcaggcccgt tttcttgaaa 120 atcaagaaca ggaatatgtt caagctgtaa aatcatacaa aggtggtcct gggtcagcag 180 tgagccccta cccttccttc aatgtatcct cggatgttgc tgccttgcac aaagctatca 240 tggttaaagg tgtggatgaa gcaaccatca ttgacattct taccaagagg accaatgctc 300 agcgccagca gatcaaggcc gcgtacttac aggagaatgg aaagcccttg gatgaagtct 360 tgagaaaagc ccttacaggc cacctggagg aggttgtttt ggctatgcta 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cattactctg tacaatagag aaatacttgt tttgttaatt atgtttatcc caaattataa 1320 agccccataa gcaagtcact ttggtaccat tcctgagaaa gaagtttaca tataataaaa 1380 taaaacaatt ttata 1395 <210> 9 <211> 346 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 9 Met Ala Met Val Ser Glu Phe Leu Lys Gln Ala Arg Phe Leu Glu Asn 1 5 10 15 Gln Glu Gln Glu Tyr Val Gln Ala Val Lys Ser Tyr Lys Gly Gly Pro 20 25 30 Gly Ser Ala Val Ser Pro Tyr Pro Ser Phe Asn Val Ser Ser Asp Val 35 40 45 Ala Ala Leu His Lys Ala Ile Met Val Lys Gly Val Asp Glu Ala Thr 50 55 60 Ile Ile Asp Ile Leu Thr Lys Arg Thr Asn Ala Gln Arg Gln Gln Ile 65 70 75 80 Lys Ala Ala Tyr Leu Gln Glu Asn Gly Lys Pro Leu Asp Glu Val Leu 85 90 95 Arg Lys Ala Leu Thr Gly His Leu Glu Glu Val Val Leu Ala Met Leu 100 105 110 Lys Thr Pro Ala Gln Phe Asp Ala Asp Glu Leu Arg Gly Ala Met Lys 115 120 125 Gly Leu Gly Thr Asp Glu Asp Thr Leu Ile Glu Ile Leu Thr Thr Arg 130 135 140 Ser Asn Glu Gln Ile Arg Glu Ile Asn Arg Val Tyr Arg Glu Glu Leu 145 150 155 160 Lys Arg Asp Leu Ala Lys Asp Ile Thr Ser Asp Thr Ser Gly Asp Phe 165 170 175 Arg Lys Ala Leu Leu Ala Leu Ala Lys Gly Asp Arg Cys Gln Asp Leu 180 185 190 Ser Val Asn Gln Asp Leu Ala Asp Thr Asp Ala Arg Ala Leu Tyr Glu 195 200 205 Ala Gly Glu Arg Arg Lys Gly Thr Asp Val Asn Val Phe Thr Thr Ile 210 215 220 Leu Thr Ser Arg Ser Phe Pro His Leu Arg Arg Val Phe Gln Asn Tyr 225 230 235 240 Gly Lys Tyr Ser Gln His Asp Met Asn Lys Ala Leu Asp Leu Glu Leu 245 250 255 Lys Gly Asp Ile Glu Lys Cys Leu Thr Thr Ile Val Lys Cys Ala Thr 260 265 270 Ser Thr Pro Ala Phe Phe Ala Glu Lys Leu Tyr Glu Ala Met Lys Gly 275 280 285 Ala Gly Thr Arg His Lys Ala Leu Ile Arg Ile Met Val Ser Arg Ser 290 295 300 Glu Ile Asp Met Asn Glu Ile Lys Val Phe Tyr Gln Lys Lys Tyr Gly 305 310 315 320 Ile Ser Leu Cys Gln Ala Ile Leu Asp Glu Thr Lys Gly Asp Tyr Glu 325 330 335 Lys Ile Leu Val Ala Leu Cys Gly Gly Asn 340 345 <210> 10 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> A tumor-targeting peptide <400> 10 Ile Phe Leu Leu Trp Gln Arg 1 5 <210> 11 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Claims (23)

1. 하기 (i)의 아미노산 서열을 포함하는, 7 내지 50개 아미노산 길이의 펩티드로서, 아넥신 A1(Anxa1)과 결합할 수 있는 펩티드:
   (i) T[D] I[D] T[D] W[D] P[D] T[D] M[D]의 아미노산 서열(여기서, 직후에 기호 [D]가 붙어 있는 각각의 아미노산 기호는 아미노산의 D 형이다).
2. 제1항에 있어서, 상기 (i)의 아미노산 서열로 이루어진 펩티드.
3. 하나 이상의 성분과 결합된 제1항에 따른 펩티드를 포함하는 접합체(conjugate).
4. 제3항에 있어서, 하나 이상의 성분이 항암제를 포함하는 것인 접합체.
5. 제4항에 있어서, 항암제가 항대사제, 알킬화제, 항암성 항생제, 미소관 억제제, 백금 제제, 토포이소머라제 억제제, 분자 표적제(molecular targeting agent), 및 항혈관신생제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.
6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 항암제가
   에노시타빈, 카페시타빈, 카르모푸르, 클라드리빈, 겜시타빈, 시타라빈, 시타라빈 옥포스페이트, 테가푸르, 테가푸르/우라실, 테가푸르/기메라실/오테라실 포타슘, 독시플루리딘, 넬라라빈, 히드록시카르바미드, 플루오로우라실, 플루다라빈, 페메트렉시드, 펜토스타틴, 메르캅토푸린, 메토트렉세이트;
   시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란, 부술판, 티오테파, 니무스틴, 라니무스틴, 다카르바진, 프로카르바진, 테모졸로미드, 카르무스틴, 스트렙토조토신, 벤다무스틴;
   악티노마이신 D, 아클라루비신, 암루비신, 이다루비신, 에피루비신, 지노스타틴 스티말라머, 다우노루비신, 독소루비신, 피라루비신, 블레오마이신, 페플로마이신, 미토마이신 C, 미톡산트론, 리포소말 독소루비신;
   빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 파클리탁셀, 도세탁셀, 옥살리플라틴, 카르보플라틴, 시스플라틴, 네다플라틴;
   캄프토테신, 이리노테칸, 노기테칸, SN-38, 에토포시드, 레보플록사신, 시프로플록사신;
   레고라페닙, 세툭시맙, 파니투무맙, 람실맙, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 크리조티닙, 알렉티닙, 세리티닙, 렌바티닙, 트라스투주맙, 라파티닙, 페르투주맙, 수니티닙, 소라페닙, 악시티닙, 파조파닙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 이피리무맙, 베무라페닙, 에버롤리무스, 템시롤리무스, 리툭시맙, 베박시주맙, 겔다나마이신;
   안지오스타틴, 엔도스타틴, 메타스타틴, 항-VEGF 항체 및 VEGFR-2 억제제로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.
7. 제3항에 있어서, 하나 이상의 성분이 검출 가능한 물질을 포함하는 것인 접합체.
8. 제7항에 있어서, 검출 가능한 물질이 X-선 사진촬영, 컴퓨터 단층촬영 (CT), 핵 자기 공명 영상법 (MRI), 초음파검사, 신티그라피(scintigraphy), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 내시경검사 및 복강경검사로 이루어진 군으로부터 선택된 수단에 의해 생체내에서 접합체의 검출을 가능하게 하는 것인 접합체.
9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 검출 가능한 물질이 방사성 동위원소, MRI용 증강제, 방사선불투과성 물질, 조영제 또는 형광 물질인 것인 접합체.
10. 제7항 또는 제8항에 있어서, 검출 가능한 물질이
    ¹⁸F, ⁵¹Mn, ^52mMn, ⁵²Fe, ⁵⁵Co, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ^82mRb, ⁸³Sr, ⁸⁶Y, ⁸⁹Zr, ^94mTc, ¹¹⁰In, ¹²⁰I, ¹²⁴I, ⁵¹Cr, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵⁹Fe, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁷⁵Se, ⁹⁷Ru, ^99mTc, ¹¹¹In, ^114mIn, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ¹⁶⁹Yb, ¹⁹⁷Hg 및 ²⁰¹Tl로부터 선택된 방사성 핵종;
    크로뮴 (III), 망간 (II), 철 (III), 철 (II), 코발트 (II), 니켈 (II), 구리 (II), 네오디뮴 (III), 사마륨 (III), 이테르븀 (III), 가돌리늄 (III), 바나듐 (II), 테르븀 (III), 디스프로슘 (III), 홀뮴 (III) 및 에르븀 (III)으로부터 선택된 상자성 이온,
    란타늄 (III), 금 (III), 납 (II), 비스무트 (III);
    요오드 화합물, 바륨 화합물, 갈륨 화합물, 탈륨 화합물;
    로다민, 플루오레세인, Cy 염료, 피코에리트린 (PE), 알로피코시아닌 (APC), 및 근적외선 형광 시약으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 접합체.
11. 삭제
12. 제4항에 따른 접합체, 및 약리학상 허용되는 담체를 포함하는, 세포 표면 상에 Anxa1을 발현하는 암을 치료하기 위한 조성물.
13. 제7항에 따른 접합체, 및 약리학상 허용되는 담체를 포함하는, 세포 표면 상에 Anxa1을 발현하는 암에 대한 검사용 조성물.
14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 암이 고형암(solid cancer) 또는 액성암(liquid cancer)인 조성물.
15. 제14항에 있어서, 고형암이 혈관신생 고형암인 조성물.
16. 제14항에 있어서, 고형암이 뇌 또는 신경계의 암, 두경부의 암, 소화관의 암, 요로 또는 생식 기관의 암, 호흡기계의 암, 유방의 암, 피부의 암, 뼈의 암, 또는 근육의 암인 조성물.
17. 제14항에 있어서, 고형암이 뇌 종양, 척수 종양, 후두암, 구강암, 타액선암, 부비동암, 갑상선암, 위암, 식도암, 소장암, 결장암, 직장암, 항문암, 간암, 담도암, 췌장암, 신장암, 신장 세포 암, 방광암, 전립선암, 신우 및 요관 암, 담낭암, 담관암, 고환암, 음경암, 자궁암, 자궁내막암, 자궁 육종, 자궁 경부암, 질암, 외음부암, 난소암, 난관암, 폐암, 유방암, 악성 흑색종, 골육종 또는 횡문근 육종인 조성물.
18. 제17항에 있어서, 고형암이 양성 또는 악성 뇌 종양인 조성물.
19. 제18항에 있어서, 뇌 종양이 원발성 뇌 종양 또는 전이성 뇌 종양인 조성물.
20. 제18항에 있어서, 뇌 종양이 수막종, 뇌하수체 선종, 신경초종, 성상세포종, 핍돌기신경교종, 역형성 성상세포종, 역형성 핍돌기신경교종, 역형성 핍지교성상세포종 또는 교모세포종인 조성물.
21. 제14항에 있어서, 액성암이 B-세포 림프종인 조성물.
22. 삭제
23. 삭제

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