SU730277A3 - Способ получени азотсодержащих полисахаридов, обладающих противоопухолевым действием - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к химикофармацевтической промышленности и касаетс  получени  лекарственных пре паратов . Известен способ получени  азотсодержащих полисахаридов, обладающих противоопухолевым действием, путем экстракции из грибов класса базидиомицетов гор чим экстрагентом с по следующим выделением и очисткой целевого продукта 1. Однако при этом способе выход целевого продукта незначителен - 3,5% Целью изобретени   вл етс  повы .шение выхода целевого продукта. Это достигаетс  тем, что экстракцию ведут из грибов Coriolus genus of Polyporaceae водным раствором щелочи в концентрации 0,01-2 н. и очистку ведут ультрафильтрацией и/ил обратимым осмосом. Кроме того, из грибов, относ щих с  к Coriolus genus of Polyporaceae берут Coriolus Versicolor (Fr) Quel a a качестве водного раствора щелоч используют раствор гидроокиси натри в количестве, превышающем грибы в 5-200 раз (по весу). Ультрафильтрацию ведут под давлением 0,5-5 кг/см, а обратимый осмос по давлением 25-35 кг/см. Способ осуществл ют следующим образом . Провод т экстракцию грибов из класса базидиомицетов Coriolus genus of Polyporaceae водным раствором щелочи в концентрации 0,01-2 Н. При температуре 50-110°С, предпочтительно 80-98 С, в течение 20-600 мин. Дл  получени  щелочного раствора примен ют различные щелочные соединени  такие, как гидроокись натри , гидроокись кали , гидроокись аммони  или кальци , предпочтительно применение гидроокисей кали  и натри . Полученный жидкий экстракт нейтрализуют обычным методом, примен   минеральную кислоту, например разбавленную сол ную кислоту, и затем подвергают этот нейтрализованный экстракт ультрафильтрации или обратимому осмосу , чтобы(Получить низкомолекул рные вещества (с мол.вес. менее 5000) в экстракте. Дл  этого компоненты продукта фракционируют под давлением по молекул рному весу с применением мембраны , представл ющей собой тип молекул рного сита.

Процесс ультрафильтрации осуществл ют под давлением 0,5-5 кг/см, предпочтительно 1-4 к г/см з, и при температуре 5-70°С.

В случае применени  обратимого осмоса , примен ют давление пор дка 2035 кг/см, предпочтительно 20 25 кг/см, при температуре 5-20°С.

Ультрафильтрацию примен ют дл  фракционировани  материала с молекул рным весом свыше iOOOO , а обратимый осмос применим дл  фракционировани  материала с молекул рным весом менее 1000.

Экстракт, из которого удал ют вещества с низким молекул рным весом (менее 5000), подвергают распылительной сушке или лиофилизации и затем перевод т в товарные продукты.

Полученные полисахариды имеют красновато-коричневый цвет и содержат азот в количестве 2-8%, в р де случаев 3-6%. Они не имеют четкой точки плавлени  и постепенно темнеют и разлагаютс  при температуре выше 1200с.

Полисс1хариды растворимы в воде, почти нерастворимы в спирте, пиридине , хлороформе, бензоле и гексане, не имеют вкуса и запаха.

Молекул рный вес полисахаридов составл ет 10000-100000.

Азотсодержащие полисахариды обладают высокой противbcfhyxoлeвoй активностью с высоким коэффициентом задержани  против -саркомы- 80 на мышах при внутрибрюшинном введении, но также обеспечивают эффективность лечени  и при оральном применении.

Полученные азотсодержащие полисахариды могут быть использованы дл  предупреждени  побочного действи  в хемотерапии рака.или повышени  эффективности радиотерапии и предупреждают инфекционные заболевани , вызываемые вирусами или бактери ми, улучшают функцию печени, аппетит, регулируют внутренние нарушени .и поддержание урологических функций.

Пример 1.К 200 г сухого мицели  Coriolus Versicolor (Fr) Quel (FERM - P № 2414) прибавл ют 4 л Ofl и. раствора NaOH и экстрагируют при перемешивании на кип щей водной бане при температуре экстрагируемой массы ЭО-55 С в течение 1 час ; и затем охлаждают до 50®С и порци ми прибавл ют 1 Н. раствора, НСе дл  поддержани  рн 7,0. Затем удал ют твердую фазу фильтрацией под;разрежением и полученный твердый продукт промывают 500 мл воды, получа  4,2 л жидкого экстракта. Этот жидкий экстракт подвер гают ультрафилътрации с применением , специального ультрафильтра при перемешивании и охлаждении, провод  фильтрацию под давлением 1/5 кт/см при 10°С с отделением низкомол екул  р ных соединений с молекул рным весом менее 5000 и последующим концентрированием, получа  300 м раствора, который затем подвергают лиофилизации и выдел ют 26,6 г красновато-коричневого порошка (выход 13,5%). Этот порошок содержит 7,5% влаги и имеет следующий элементный анализ: С - 40,5%, Н - 6,2%,N - 5,8% О - 47,5% (процентное содержание кислорода определ ют, вычита  из 100 суммарное процентное содержание остальных элементов). Это вещество легко раствор етс  в воде и обладает примерно 90%- .ым задерживающим коэффициентом против твердой опухоли саркома-180 у мышей при внутрибрюишНном введении и 65%- ,ым при оральном применении .

Антиопухолевый эффект соединений определ ют обычным методом. Клетки опухоли саркомы-180 трансплантируют в брюшную полость мыши и после того, как эти клетки разрастутс  в достаточной степени в течение 7 дней, 10 таких клеток трансплантируют под кожу подмьл кой другой мыши, где образуетс  тверда  опухоль.

Лечение препаратом, который испытывают , начинают через 24 часа после трансплантации. В случае лечени  интраперитонально препарат ввод т в дозе 10 мг/кг за курс лечени  один раз в день, либо каждый второй день в течение 20 дней общей дозой 0,2 мл/20 живого веса мыши, а в случае перорального применени  препарат ввод т дозой 1000 мг/кг за курс лечени , т.е. один раз в день в течение 20 дней общей дозой 0,2 мл/20 г живого веса мыши. В опухоли образуетс   дро на 25-ый день после трансплантации, коэффициент задерживани  роста опухоли вычисл ют из среднего веса опухоли мыши, которую лечат препаратом, и среднего веса опухоли контрольной мыши. Дл  сравнени  экстракцию и очистку производ т при тех же услови х , но примен   воду вместо 4 л 0,1 Н. раствора NaOH, Выход продукта составл ет 7,8% или около 60% от выхода , получаемого согласно способу изобретени .

Пример2.К 500 г живого мицели  Coriolus versicolor (Fr) Quel FERM - P № 2414 (содержание влаги 70,8%, общее содержание азота, 2,6% в расчете на сухой материал) прибавл ют 2 л воды и измельчают в смесителе дл  сока 10-20 мин. и к этой смеси затем постепенно прибавл ют 500 мл 1 Н. раствора NaOH и экстрагируют 2 часа на гор чей вод ной бане при температуре экстрагируемой массы ЭО-ЭБ С, затем нейтрализуют сол ной кислотой, промывают и обрабатывают как описано в примере 1 Полученный экстракт подвергают ультрафильтрации на специальном ультрафильтре дл  отделени  низкомолекул р

Claims (4)

2Q Формула изобретения

1. Способ получения азотсодержащих полисахаридов обладающих противоопухолевым действием, путем экстракции из грибов класса баэидиомице— 35 тов горячим экстрагентом с последующим выделением и очисткой целевого продукта, отличающийс я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, экстракцию ведут 40 из грибов Coriolus genus of Poly^ poraceae водным раствором щелочи в концентрации 0,01 - 2N, и очистку ведут ультрафильтрацией и/или обратимым осмосом.

45

2. Способ поп. 1, отличающийся тем, что из грибов, относящихся к Coriolus genus of Polyporaceae берут Coriolus versicolor (Fr) Quel.

3. Способ поп. 1, ©тличающ и й с я тем, что в качестве водного раствора щелочи используют раствор гидроокиси натрия в количестве в 5-200 раз превышающем грибы (по весу).

“ 4. Способ по π. 1, о т л и ч а говд и й с я тем, что ультрафильтрацию ведут под давлением 0,5-5 кг/см , а обратимый осмос 25-35 кг/см?.