SU1131506A1 - Способ получени митолектина (фитогемагглютинина) из сем н фасоли - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИТОЛЕКТИНА (ФИТОГЕМАГГЛНЛИНИНА) ИЗ СЕМЯН BS -J2rj 3i : ФАССЛИ путем экстракции муки фасоли раствором сол ной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммони , диализом и очисткой, отличающийс  тем, что, с целью сокращени  времени получени  и повьппени  активности целевого продукта, экстракцию провод т в присутствии 2 ммоль метабисульфи а натри  в течение 1 ч, высаливание . провод т сульфатом аммони  с насьпцением при первом высаливании 40Z, а последуклцую очистку провод т фильтрацией че.рез сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натри  при рН 7,0.

Description

00

ел

о ot Изобретение/относитс  к биологии в частности к получению биологически активного гликопротеида из сем н фасоли, и может найти применение при проведении цито- и иммуногенетического анализа, в мембраноло гии, иммунологии. Известен способ получени  митоле тина путем экстракцией муки фасоли разбавленной сол ной кислотой,двухступенчатого высаливани  сульфатом аммони  с последующим диализом и очисткой ацетоном f 11 Однако известный способ не обеспечивает достаточной активности imjeлевого продукта и  вл етс  длительным и трудоемким. Цель изобретени  - повышение активности целевого продукта и сокращение времени его получени . Указанна  цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  мито лектина (фитогемаглютинина) из сем н фасоли путем экстракции муки фа соли раствором сол ной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммони , диализом очисткой экстракцию провод т-в присутствии 2 ммоль метабисульфита нат ри  в течение 1ч, высаливание провод т сульфатом аммони  с насыщение при парвом высаливании 40%, а последующую очистку провод т фильтрацией через сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натри  при рН7, Пример Семена фасоли Крас ноградска -15 урожа  1982 г. измел чали и просеивали через сито так, ч средний размер частиц муки был 250300 мкм. К 0,5 кг муки добавл ли 2,5 л холодной дистиллированной води (все операции проводили при 4 С при перемешивании и рН смеси доводи концентрированной сол ной кислотой 1(рН контролировали по покраснению бумажки универсального рН-индикатора Экстракцию проводили в присутствии 2ммоль антиоксиданта (метабисульфита натри ) 1 ч при посто нном пер мешивании. Смесь подвергали центрифугированию на центрифуге Кг-70 (ГДР) при 4000 об/мин 10 мин. К надосадочной жидкости добавл ли растертый (дл  удалени  крупных комков) кристаллический сульфат аммони  марки ХЧ или ОСЧ в количестве 304 т в 1 л смеси при перемешивании. Через 1 ч смесь центрифугировали 2 ч при 4000 об/мин, осадок отбрасывали, а из надосадочной жидкости второй раз высаливали белок путем добавлени  измельченного сульфата аммони  таким образом, чтобы конечна  концентраци  соли (с учетом первого добавлени  соли) составила 380 г в 1 л смеси (с учетом второго добавлени  соли). Через 1 ч перемешивани  смесь центрифугировали 2 ч при 4000 об/мин (как и после первого высаливани  белка), надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок подвергали.диализу против дистиллированной воды (1:20 по объему , 3 смены воды) 48 ч. Смесь центрифугировали при 4000 об/мин 20 мин. осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость доводили до рН 5,4. Вьшавший осадок удал ли центрифугированием 20 мин при 4000 об/мин, а к надосадочной жидкости добавл ли бидистшшированную воду (1:10 по объему). Смесь сразу центрифугировали 1 ч при 4000 об/мин, полученный осадок раствор ли в 10%-ном растворе поваренной соли с рН 7 (в объеме, равном 1 /20 объема колонки с сефадексом Г-100) и проводили гельфильтрацию через колонку с сефадексом Г-100 размером 3 см в диаметре и высотой 20 см. Первый выход щий с колонки митолектиновый пик собирали и лиофильно сушили. Выход митолектина (фитогемагглютинина) составил 1,45 г из 1 кг муки сем н фасоли. Предлагаемый способ иллюстрируетс  табл. 1 и 2. Таким образом, предложенный способ позвол ет повысить митогенетичесую активность целевого продукта и ократить врем его получени .

СоответствующееМитогенетическа 

насыщение экст-активность целеракта сульфатомвого продукта,

аммони , %% РБТЛ

3570,1

/ 4080,2

Врем ,ч

2424

11

Таблица 1

Таблица 2

1-е высаливание| 2-е высаливание

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МИТОПЕКТИНА (ФИТОГЕМАГГЛЮГИНИНА) ИЗ СЕМЯН

   ФАСОЛИ путем экстракции муки фасоли раствором соляной кислоты с последующим двухступенчатым высаливанием сульфатом аммония, диализом и очисткой, отличающийся' тем, что, с целью сокращения времени получения и повышения активности целевого продукта, экстракцию проводят в присутствии 2 ммоль метабисульфита натрия в течение 1 ч, высаливание проводят сульфатом аммония с насыщением при первом высаливании 40%, а последующую очистку проводят фильтрацией через сефадекс Г-100 в 10%-ном растворе хлористого натрия при pH 7,0.