RU2126044C1 - Способ получения гиалуронидазы - Google Patents
Способ получения гиалуронидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2126044C1 RU2126044C1 RU95102697A RU95102697A RU2126044C1 RU 2126044 C1 RU2126044 C1 RU 2126044C1 RU 95102697 A RU95102697 A RU 95102697A RU 95102697 A RU95102697 A RU 95102697A RU 2126044 C1 RU2126044 C1 RU 2126044C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- extract
- solution
- ammonium sulfate
- enzyme
- carried out
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Использование: изобретение относится к производству фермента гиалуронидазы из перспективного источника сырья - молок рыб. Сущность изобретения: для получения гиалуронидазы в качестве сырья используют молоки рыб, измельченное сырье подвергают кислотной экстракции. Затем экстракт центрифугируют, сепарируют. Осветленный экстракт фильтруют на нутч-фильтре и подают на колонну с макропористым катионитом. Элюцию фермента с носителя проводят при рН, меньшем или равном 9,0, так как при pH больше 9,0 протекание раствора затрудняется образованием геля. Высаливание сернокислым аммонием проводят при степени насыщения 0,82-0,85 для выделения мономерных форм гиалуронидазы. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к производству ферментов, а именно, к способу получения фермента гиалуронидазы /гиалуронат-3-гликаногидролаза КФ 3.2.1.3б/ из перспективного вида сырья - молок рыб.
Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому результату является способ получения гиалуронидазы из семенников половозрелого крупного рогатого скота, основанный на экстракции измельченных семенников водным раствором уксусной кислоты при pH 4,5 - 4,7 в атмосфере инертного газа и дальнейшей очистке экстракта обработкой его белой глиной /SU, авт.свид. N 1666534, кл. C 12 N 9/26, 1991/.
Однако в связи с недостаточностью дефицитного сырья, каким являются семенники крупного рогатого скота, актуальным является поиск другого доступного источника сырья, содержащего гиалуронидазу в количестве, достаточном для получения препарата в промышленном масштабе. Таким сырьем являются молоки рыб, большая часть которых в настоящее время составляет отходы рыбной промышленности.
Технической задачей изобретения является возможность использования перспективного источника сырья для получения гиалуронидазы.
Это достигается тем, что в способе получения гиалуронидазы, заключающемся в экстракции измельченного сырья водным раствором уксусной кислоты, отделении экстракта, очистке целевого продукта сорбцией и десорбции его с сорбента, согласно изобретению, экстракции подвергают измельченные молоки рыб при pH 4,0-4,5, сорбцию целевого продукта проводят на макропористом катионите при pH 4,0-4,5, а десорбцию - раствором сульфата аммония в растворе аммиака с последующим осаждением фермента сульфатом аммония, при этом после отделения экстракта подвергают фильтрации на нутч-фильтра.
Для десорбции следует использовать 0,5 - 1,0 H раствор сульфата аммония в 0,02-0,5 H растворе аммиака.
Осаждение фермента сульфатом аммония следует вести при степени насыщения 0,82-0,86.
Способ получения гиалуронидазы осуществляют следующим образом.
Предварительно измельченные молоки рыб подвергают экстракции 0,1 н раствором уксусной кислоты в течение 3-4 часов. Увеличение времени экстракции больше 4 часов нецелесообразно, так как может привести к уменьшению гиалуронидазной активности фермента в экстракте.
Экстракцию необходимо проводить при t=3-5oC, так как это важно для стабилизации активности выделяемого фермента. Полученный экстракт подают на центрифугу, где разделяют на жмых и неосветленный экстракт. Затем экстракт сепарируют, при этом pH экстракта должен быть 4,3-4,8.
Экстракт молок, подаваемый на колонну с макропористым катионитом, должен быть абсолютно прозрачным, в противном случае, при сдвиге pH в щелочную сторону в процессе элюции возможно образование геля в колонне, что делает невозможным протекание раствора. В связи с этим осветленный экстракт после сепарирования передают на стадию дополнительной фильтрации на нутч-фильтре. Затем экстракт подают в сборник и охлаждают. Осветленный экстракт с t=+5oC передают при помощи центробежного насоса из сборника на ионообменную колонну через расходомер со скоростью 50-150 мл/см. 2 час. После окончания сорбции колонну промывают дистиллированной водой в количестве, равном объему колонны. Затем осуществляют десорбцию с ионита путем подачи сверху вниз элюента со скоростью 25-75 мл/см. 2 час. В качестве элюента используют 0,5 - 1,0 н раствор сульфата аммония в 0,02-0,5 и раствора аммиака. pH элюента должно быть 8,5-9,0. Изменение pH больше значения 9,0 приводит к образованию геля и невозможности элюирования, а также к значительным потерям гиалуронидазной активности. Уменьшение скорости элюента приводит к размыванию целевого пика, увеличению его объема, что не дает достаточной степени концентрирования. После процесса десорбции проводят регенерацию катионита, чтобы его можно было использовать в дальнейшем. Полученный после десорбции элюат подают на стадию осаждения сульфатом аммония при степени насыщения 0,82 - 0,85.
Полученный высол растворяют в воде на стадию обессоливания.
Технический результат изобретения заключается в следующем:
1) возможность использования перспективного источника гиалуронидазы - молок рыб, являющихся отходом рыбной промышленности;
2) сырье хорошо измельчается, выход фермента практически не зависит от степени измельчения / см. таблицу/;
3) удельная гиалуронидазная активность молок рыб в 1,5 раза больше, чем удельная активность семенников /см. таблицу/;
4) при осаждении сульфатом аммония выделяются, в основном, мономерные, а не олигомерные формы гиалуронидазы /см. чертеж/;
5) удельная активность получаемого по данной технологии фермента из молок в 5 раз больше удельной активности субстанции препарата "Лидаза".
1) возможность использования перспективного источника гиалуронидазы - молок рыб, являющихся отходом рыбной промышленности;
2) сырье хорошо измельчается, выход фермента практически не зависит от степени измельчения / см. таблицу/;
3) удельная гиалуронидазная активность молок рыб в 1,5 раза больше, чем удельная активность семенников /см. таблицу/;
4) при осаждении сульфатом аммония выделяются, в основном, мономерные, а не олигомерные формы гиалуронидазы /см. чертеж/;
5) удельная активность получаемого по данной технологии фермента из молок в 5 раз больше удельной активности субстанции препарата "Лидаза".
Способ иллюстрируется следующим примером.
Пример 1.
В качестве сырья для получения фермента используют молоки лососевых рыб. 50 кг замороженных молок лососевых рыб измельчают до величины частиц около 2 мм и подвергают экстракции 150 л и 0,1 н раствором уксусной кислоты при t= +5oC в течение 3,5 часов при периодическом перемешивании. После окончания экстракции жмых отделяют на центрифуге, а экстракт сепарируют, подвергают дополнительной фильтрации на нутч-фильтре и охлаждают до t=+5oC. Затем экстракт подают на ионообменную колонну, заполненную макропористым сульфокатионитом КУ-23 в H+-форме в количестве 30 кг. Скорость сорбции 10 мл/см. 2 час. Объем пропущенного экстракта 150 л pH 4,3. Затем сорбент промывают дистиллированной водой V=125 л и проводят десорбцию фермента 1 н раствором сульфата аммония в 0,03 н растворе аммиака, подавая элюент сверху вниз со скоростью 55 мл/см. 2 час при t=+5oC. pH элюента 9,0. На выходе колонны собирают фракции объемом 5 л, в которых определяют количество белка по методу Лоури, фракции, содержащие более 2,5 мг/мл белка, объединяют, доводят pH элюента до 4,5 и проводят осаждение фермента сернокислым аммонием при степени насыщения 0,85.
Claims (3)
1. Способ получения гиалуронидазы, заключающийся в экстракции измельченного сырья водным раствором уксусной кислоты, отделении экстракта, очистке целевого продукта сорбцией и десорбции его с сорбента, отличающийся тем, что экстракции подвергают измельченные молоки рыб при рН 4,0 - 4,5, сорбцию целевого продукта проводят на макропористом катионите при рН 4,0 - 4,5, а десорбцию - раствором сульфата аммония в растворе аммиака с последующим осаждением фермента сульфатом аммония, при этом после отделения экстракт подвергают фильтрации на нутч-фильтре.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для десорбции используют 0,5 - 1,0 Н раствор сульфата аммония в 0,02 - 0,5 Н растворе аммиака.
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что осаждение сульфатом аммония ведут при степени насыщения 0,82 - 0,86.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95102697A RU2126044C1 (ru) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | Способ получения гиалуронидазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU95102697A RU2126044C1 (ru) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | Способ получения гиалуронидазы |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU95102697A RU95102697A (ru) | 1997-02-20 |
RU2126044C1 true RU2126044C1 (ru) | 1999-02-10 |
Family
ID=20165125
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU95102697A RU2126044C1 (ru) | 1995-02-23 | 1995-02-23 | Способ получения гиалуронидазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2126044C1 (ru) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103060291A (zh) * | 2012-12-28 | 2013-04-24 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种玻璃酸酶的提取方法 |
CN103060288A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-04-24 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种从猪睾丸中提取玻璃酸酶的方法 |
RU2570631C2 (ru) * | 2013-10-07 | 2015-12-10 | Владимир Николаевич Иванов | Способ получения пероксидазы |
RU2658605C2 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-06-21 | Наталья Владимировна Глазова | Способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
-
1995
- 1995-02-23 RU RU95102697A patent/RU2126044C1/ru active
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103060291A (zh) * | 2012-12-28 | 2013-04-24 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种玻璃酸酶的提取方法 |
CN103060291B (zh) * | 2012-12-28 | 2014-10-08 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种玻璃酸酶的提取方法 |
CN103060288A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-04-24 | 青岛九龙生物医药有限公司 | 一种从猪睾丸中提取玻璃酸酶的方法 |
RU2570631C2 (ru) * | 2013-10-07 | 2015-12-10 | Владимир Николаевич Иванов | Способ получения пероксидазы |
RU2658605C2 (ru) * | 2016-07-01 | 2018-06-21 | Наталья Владимировна Глазова | Способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU95102697A (ru) | 1997-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112409132B (zh) | 一种肌醇和副产物的分离方法 | |
CN101525306A (zh) | 一种章鱼下脚料中提取分离天然牛磺酸的方法 | |
CN108779147B (zh) | 还原型谷胱甘肽的晶体及其制造方法 | |
RU2126044C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
CN105238841B (zh) | 头孢菌素c吸附废液中dcpc的回收与转化方法 | |
US5061627A (en) | Method for preparing enzymes from crustaceans | |
CN104404094A (zh) | 基于蛤利用酶转化法提取牛磺酸的方法 | |
CN111153835A (zh) | 一种超高压辅助酶解河蚌肉制取牛磺酸的方法 | |
CN113735136B (zh) | 一种利用玉米浸泡水制备钾盐并副产镁盐的工艺方法 | |
CN110590586B (zh) | 一种分离纯化赖氨酸发酵液的方法 | |
RU2021372C1 (ru) | Способ получения гидролитических ферментов | |
CN109836468A (zh) | 一种从微生物发酵液中分离纯化胞二磷胆碱钠的方法 | |
JPH01244000A (ja) | 甜菜糖液を処理する方法 | |
JPS58103355A (ja) | タウリンの製造法 | |
CN1477197A (zh) | 一种从植物中提取超氧化物歧化酶的方法 | |
SU654612A1 (ru) | Способ выделени цитохрома | |
SU1035063A1 (ru) | Способ получени пищевого пепсина | |
RU2658605C2 (ru) | Способ получения гиалуронидазы из семенников крупного рогатого скота | |
JPS6328061B2 (ru) | ||
US4101539A (en) | Bacitracin recovery process | |
CN1052727C (zh) | 青霉素的提取与纯化 | |
SU1113127A1 (ru) | Способ получени средства дл диагностики заболеваний поджелудочной железы | |
JP3776160B2 (ja) | D−パントテン酸カルシウムの製造法 | |
SU777903A1 (ru) | Способ получени аминокислотного препарата дл парентерального питани | |
CN118184547A (zh) | 一种从河豚内脏提取分离河豚毒素的废水中回收制备精氨酸的方法 |