SA517390495B1 - طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ - Google Patents

طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ Download PDF

Info

Publication number
SA517390495B1
SA517390495B1 SA517390495A SA517390495A SA517390495B1 SA 517390495 B1 SA517390495 B1 SA 517390495B1 SA 517390495 A SA517390495 A SA 517390495A SA 517390495 A SA517390495 A SA 517390495A SA 517390495 B1 SA517390495 B1 SA 517390495B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
polysaccharide
protein
conjugates
serotype
adsorption
Prior art date
Application number
SA517390495A
Other languages
English (en)
Inventor
كومار جانا إسوابان
دينيش ماليا أشا
شيفاجي جادهاف براشانت
مهالاساكانت دهيري راجيف
شنكر بيسال سامبهاجي
ماهور سونيل
فيلاس جوشي شيتان
فامسي كريشنا ماليباتي فينكاتا
ماهيش كومار جوتام مانيش
كومار مالفيا هيتيش
Original Assignee
سيروم انستيتيوت أُف إنديا برايفت إل تي دي.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by سيروم انستيتيوت أُف إنديا برايفت إل تي دي. filed Critical سيروم انستيتيوت أُف إنديا برايفت إل تي دي.
Publication of SA517390495B1 publication Critical patent/SA517390495B1/ar

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/085—Staphylococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

ينص الاختراع الحالي على طرق لتحضير تركيبات لقاح مرافق بروتين المكورة الرئوية متعددة السكاريد مستقرة stable multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine formulations. تُظهر التركيبات المستقرة سريعة التحضير نسبة امتزاز adsorption percent لكل مترافق conjugate حيث يمكن منع التراكم باستخدام 1) امتزاز فردي أو منفصل للمترافقات التي تظهر بخلاف ذلك نسبة امتزاز أقل نسبيًا بالامتزاز المشترك؛ 2) نظام منظم هيستيدين histidine buffer system- حمض السكسينك Succinic acid مع وجود تغير في الرقم الهيدروجيني pH من رقم هيدروجيني pH محايد إلى رقم هيدروجيني حمضي acidic pH؛ 3) وجود نسبة من عديد السكاريد polysaccharide إلى البروتين تتراوح من 0.5 إلى حوالي 1.4؛ 4) استخدام دافع توربيني turbine impeller من نوع Rushton مزود بستة أنصال في أوعية التحضير. الشكل 1.

Description

طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ ‎Methods for improving the adsorption of polysaccharide—protein‏ ‎conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع تعد المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ أحد الأسباب الرئيسية التي تؤدي إلى الإصابة بالالتهاب الرئوي البكتيري ‎bacterial pneumonia‏ والتهاب السحايا ‎meningitis‏ والإنتان ‎sepsis‏ لدى الأطفال. تتراوح التقديرات الأخيرة لحالات الوفيات بين الأطفال من جراء المكورة الرئوية ‎(pneumococcal 5‏ 0.7 إلى 1.0 مليون حالة ‎Ug‏ على مستوى العالم. في 2000؛ تقدر حالات الإصابة بمرض المكورة ‎pneumococcal gill‏ الشديد ‎dls 145 say‏ (بنطاق غير تأكيدي يتراوح من 111 إلى 180 مليون) حالة. أدى مرض المكورة ‎pneumococcal digi)‏ إلى وفاة حوالي 0.826 مليون حالة (من 0.58 إلى 0926 مليون) في الأطفال الذين تتراوح أعمارهم من 1 إلى 59 شهرًا حيث كان منهم 0.091 مليون (من 0.063 إلى 0.0 مليون) 0 موجب بفيروس نقص المناعة المكتسبة و0.735 مليون (من 0.51 إلى 0.82 مليون) سالب بفيروس نقصض المناعة المكتسبة . ثبتت قيمة لقاحات عديد السكاريد للمكورة الرئوية ‎multivalent pneumococcal‏ ‎polysaccharide vaccines‏ المصرح بها على مدار عدة سنوات في الوقاية من مرض المكورة الرئوية ‎salpneumococcal‏ البالغين» وخاصة كبار السن والأشخاص المعرضين لدرجة عالية من الخطر . ‎Lain‏ يستجيب الرضع والأطفال الصغار استجابة ضعيفة لعديدات سكاريد المكورة الرثوية ‎pneumococcal‏ غير المقرونة. تم ترخيص لقاح مترافق المكورة الرئوية؛ ‎«®Prevnar‏ الذي يحتوي على الأنماط المصلية السبعة الأكثر ‎6B 4) Hiss‏ لاق 14« ‎(18C‏ 197و ‎All (23F‏ تؤدي إلى الإصابة بمرض المكورة ‎pneumococcal Lgl‏
الاجتياحية لدى الأطفال الصغار والرضع في ذلك الوقت» لأول مرة في الولايات المتحدة في فبراير 2000. كما أن 13 ‎(Wyeth) PrevnarTM‏ هو عبارة عن لقاح مصرح به يحتوي على مترافقات ‎lane conjugates‏ السكاريد من الأنماط المصلية ‎(19A (6B (6A‏ 197 بالإضافة إلى 1؛ ‎18C «14 OV (JF 5 43 5‏ و 237 . ‎(GSK) SynflorixTM‏ عبارة عن لقاح آخر مصرح به يوفر الحماية ضد 1 4 5 ‎<19F (18C 14 OV (TF 6B‏ و ‎23F‏ وحماية شاملة ضد ‎6A 5 19A‏ يجب أن تكون تركيبات اللقاحات مستقرة بشكل عام وفي شكل متسق لتلبية الحاجة إلى فترة تخزينية طويلة واستخدام عبوات تتضمن جرعات متعددة. تتعرض اللقاحات القائمة على 0 البروتينات؛ التي تشتمل على مترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاربد- البروتينات؛ لتراكم البروتينات وترسبها بما قد يؤدي إلى وجود تركيز إجمالي أقل غير فاعل من اللقاح بسبب عدم إتاحة ناتج البروتين المترسب. تظهر لقاحات مترافق عديد السكاريد- البروتين» على وجه الخصوص؛ ‎Sas‏ أقوى نحو التراكم أكثر من البروتين الناقل ‎carrier protein‏ بمفرده (انظر ‎et al‏ 2004.861 86:3-9¢ ل ‎Biophys‏ ). قد ‎jig‏ اختيار تركيبة لقاح مترافق عديد السكاريد- البروتين ‎ipolysaccharide—protein conjugate‏ حد كبير على تراكم البروتين. انظر ‎Vaccine 19:716-725. 2001.10 et al.‏ . بالرغم من وجود العديد من تركيبات لقاحات مترافق عديد السكاريد- البروتين ‎polysaccharide—‏ ‎protein conjugate‏ للمكورة الرئوية عديدة التكافؤ التي تم تطويرها على مستوى العالم» لا تزال هناك حاجة مستمرة في المجال للحصول على تركيبات لقاح توفر قدرة عالية على امتزاز 0 المترافقات ‎conjugates‏ الفردية وتكون خالية من تراكم/ ترسيب التركيبات ذات النشاط المناعي التي تحتوي على مترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاريد- البروتين. تتمثل العوامل المساعدة المستخدمة بشكل تقليدي في لقاحات المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ ‏عديدة التكافؤ المذكورة في أملاح الألمونيوم مثل هيدروكسيد الألمونيوم وفوسفات الألمونيوم. تعرف العديد من العوامل المساعدة التجريبية الأخرى؛ بينما يبقى الامتزاز لأملاح الألمونيوم هو التركيبة
المساعدة للقاح الأكثر شيوعًا. بالرغم من انتشار استخدامها على نطاق واسع؛ قد لا تكون أملاح الألمونيوم متوافقة في الغالب مع مستضدات معينة بما يؤدي إلى وجود تغييرات كبيرة فيما يتعلق بنسبة امتزاز مترافق عديد السكاريد - البروتين ‎polysaccharide—protein conjugate‏ على الألمونيوم أو النشاط ‎.immunogenicity eli)‏
تعتمد الخواص المناعية وثبات اللقاح المترافق المرشح الممتز على العوامل المساعدة من الألمونيوم على مؤشرات متعددة ‎Jie‏ 1) النشاط الاستمناعي ‎immunogenicity‏ لكل مستضد ‎antigen‏ 2( نوع البروتين الناقل ‎carrier protein‏ المستخدم في الترافق» و3) نوع العامل المساعد المستخدم. وبشكل أكثر أهمية؛ تبين قبل ذلك أن نطاق امتزاز المستضد ‎sleantigen‏ ‏0 العامل المساعد يعد أحد المؤشرات المهمة التي تظهر اتساق بين الكميات في عملية التركيب ويمكنها التأثير على فاعلية ناتج اللقاح. بالإضافة إلى ذلك؛ قد تنخفض نسبة امتزاز مترافقات ‎mae conjugates‏ السكاريد- البروتين ‎i<Ipolysaccharide—protein conjugates‏ على تخزين التركيبة أو في ظل حالات سيئة ‎Jie‏ تغير درجات الحرارة. ارجع إلى ‎54th meeting of‏ ‎«the WHO Expert Committee on Biological Standardization‏ ‎Recommendations for the production & control of Pneumococcal 15‏ ‎Session IV: « Carl E. 3850017-21 November 2003:conjugate vaccines‏ ‎Portugal. 2008¢ Vaccine Technology Il«Conjugate Vaccines‏ ‎Gg‏ للمبادئ التوجيهية لوكالة الأدوية الأوروبية ‎European regulatory agency‏ الخاصة 0 ببمترافقات ‎conjugates‏ عديد سكاريد - بروتين المكورة الرئوية؛ يجب اعتبار اكتمال الامتزاز (نسبة المترافق غير المرتبط) كمعيار تحكم جودة جوهري مع محتوى الألمونيوم ودرجة التعقيم والهوية والمحتوى الخالي من عديد السكاريد. ارجع إلى ‎Assessment Report for Synflorix‏ ‎Procedure No.
EMEA/H/C/000973:2009‏ . توصي منظمة الصحة العالمية بزيادة
درجة الامتزاز للمستضدات المترسبة بالألمونيوم (ذوفان ‎diphtheria GUAT‏ وذوفان
الكُراز ‎(tetanus‏ حيث يتم امتزاز 9680 على الأقل من المستضدات فى هذه اللقاحات.
أثناء تصنيع مترافق عديد السكاريد- البروتين» قد يشتمل الفورميولات على تراكمات من نوع عديد
السكاريد- عديد السكاريد أو نوع بروتين- بروتين أو نوع عديد السكاريد- بروتين. يتم ملاحظة
وجود هذه التراكمات أيضًا في الناتج النهائي بما يؤدي إلى رفض ما يتراوح من 964 إلى 9610
من الزجاجات الممتلئة بلقاح مترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاريد- البروتين» بما يؤثر على
ثبات وفاعلية لقاح المترافقات ‎.conjugates‏
مع مراعاة القيود المنصوص عليها أعلاه فيما يتعلق بتراكم وثبات عديد السكاريد والمترافق الخاص به؛ لا تزال هناك حاجة مستقلة تتمثل في الحد من تراكم وثبات عديد السكاريد ‎Sal‏ على
مستوى المعالجة البعدية للوصول إلى مرحلة التركيب النهائية من تصنيع لقاح مترافق المكورة
الرئوية.
الوصف العام للاختراع
ينص الاختراع على تحسينات في ثبات اللقاحات التي تشتمل على أملاح الألمونيوم»؛ وخاصة طرق 5 للحد من التراكم وتحسينات فى نسبة امتزاز المترافقات ‎conjugates‏ الفردية في لقاحات مترافقات
5 عديد السكاريد - البروتين ‎polysaccharide—protein conjugates‏ للمكورة
‎dog‏ عديدة التكافؤ. لاحظ القائمون بالاختراع الحالي أن الامتزاز المشترك لمترافقات
‏05 عديد السكاريد - البروتين ‎aladiulpolysaccharide—protein conjugates‏
‏نسبة من عديد السكاريد إلى البروتين ‎polysaccharide to protein ratio‏ تزيد على 1: 1 0 يؤدي إلى 1) نسبة امتزاز أقل من 9655 ‎Lad‏ يتعلق بمترافقات ‎conjugates‏ المكورة الرثوية
‎pneumococcal‏ للأنماط المصلية ‎23F 5 OV (6A‏ و2) وجود نسبة امتزاز تتراوح من حوالي
‏0 إلى 9690 ‎Lad‏ يتعلق بمترافقات ‎conjugates‏ الأنماط المصلية المتبقية؛ بما لا يحقق
‏نسبة امتزاز كاملة لمترافق نمط مصلي فردي ‎Lad‏ يتعلق بتركيبة مترافقات ‎conjugates‏ مكورة
رئوية عديدة التكافو. من الملحوظ ‎Load‏ أن تركيبة اللقاح المحضرة باستخدام رقم هيدروجيني يتراوح من 6.8 إلى 7.0 تؤدي إلى وجود تراكم يتراوح من حوالي 4 إلى 9610 وامتزاز أقل. يتعلق الاختراع الحالي بطريقة لتحضير تركيبة لقاح مترافق بروتين المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ متعددة السكاريد؛ تظهر امتزاز ‎Abe‏ يتراوح من 75 إلى 9699 لكل مترافق
حيث يُمنع التراكم في الطريقة المذكورة باستخدام عنصر واحد على الأقل مما يلي: أ) امتزاز فردي أو منفصل للمترافقات ‎conjugates‏ التي تظهر بخلاف ذلك امتزاز أقل ‎Baws‏ ‏بالامتزاز المشترك؛ ب) نظام منظم هيستيدين ‎buffer system‏ ©01510010- حمض السكسينك مع وجود تغير في الرقم الهيدروجيني من رقم هيدروجيني محايد إلى رقم هيدروجيني حمضي؛
ج) وجود نسبة من عديد السكاريد إلى البروتين ‎polysaccharide to protein ratio‏ تتراوح من 0.6 إلى حوالي 1.4؛ و
‎(a‏ استخدام دافع ‎impeller iw)‏ 110106 من نوع ‎Rushton‏ 353 بستة ‎Jail‏ فى وعاء يفصح الاختراع الحالي ‎Wad‏ عن طريقة لتحضير مترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاريد -
‏5 البروتين ‎polysaccharide—protein conjugates‏ ذات نشاط استمناعى ‎immunogenicity‏ ‏مُحسن ومحتوى أقل خالي من عديد السكاريد للحصول على عديد سكاريد للمكورة الرئوية يحتوي على رايط فسفودايستر ‎(phosphodiester linkage‏ وخاصة ‎6A (19F (19A‏ و68. تحد عملية الترافق المذكورة من التحلل المتوسط بالناتج الثانوي لعامل التحول إلى سيانات لعديد السكاريد محدد الحجم ومنع تراكم عديد السكاريد- عديد السكاريد ‎le‏ يؤدي إلى ثبات عديدات
‏0 المكاريد ذات الطبيعية غير المستقرة. قد يرجع السبب الرئيسي في الحد من التراكم إلى استخدام عديد سكاريد ذو حجم معين يتراوح من 100 إلى 200 ك دالتون؛ ونسبة من عديد السكاريد إلى ‎CDAP‏ (عامل التحول إلى سيانات) في نطاق )1( :(0.8 - 1).
تؤدي التركيبة ذات النشاط الاستمناعي ‎immunogenicity‏ المحضرة وفقًا للاختراع الحالي إلى الحد من التراكم بين عديد السكاريد- عديد السكاريد ومترافق عديد السكاريد- البروتين ‎conjugate‏ 1016(0م-7/5800081106ا00مع وجود تحسن في الثبات والنشاط الاستمناعي. شرح مختصر للرسومات الشكل 1: مستوىي ‎SEC-HP-RI‏ بحجم 19/8 ‎PnPs‏ )178 ك دالتون) قبل ‎DMAP dallas‏ الشكل 2: مستوى ‎SEC-HP-RI‏ بحجم 19/8 0005 )70 ك دالتون) بعد 24 ساعة (أ) و14.5 ك دالتون بعد 72 ساعة (ب) من مستويات التحلل بعلاج ‎DMAP‏ ‏الشكل 3: مستويات ‎SEC-HP-RI‏ بحجم ‎19A‏ 0005 (178 دالتون؛ أ) وتراكم قائم على الزمن بفعل عديدات السكاريد المنشطة ب ‎SE¢(5D 3 5C «5B)-CDAP‏ (مترافق بدون 10 ك 0 دالتون ‎SF (DF‏ (مترافق مع 10 ك دالتون ا0ا).565-بحجم /511/19-المفعل ب ‎19A‏ (نسبة ‎Ps:CDAP‏ معدلة بمقدار 1:1 فيما يتعلق ب ‎(19A‏ لطريقة ترافق بدون الاستعانة بخطوة الترشيح الثنائي بحجم 10 ك دالتون. الشكل 4: مستويات ‎SEC-HP-RI‏ بحجم ‎19F‏ 0005 )157 ك دالتون؛ أ) وتراكم قائم على الزمن بفعل عديدات السكاريد المنشطة ب 0/0ا-(ب)؛ ‎6D/6C‏ (نسبة ‎Ps:CDAP‏ معدلة 1:1 5 فيما يتعلق ب ‎(19F‏ لطريقة ترافق بدون الاستعانة بخطوة الترشيح الثنائي بحجم 10 ك دالتون. الشكل 5: دافع توربيني ‎impeller‏ 110106 من نوع ‎Rushton‏ مزود بستة أتنصال مسطحة. الشكل 6: بروتوكول امتزاز. الوصف التفصيلي: يتم تحديد الاختراع الحالي في مجموعة عناصر الحماية الملحقة. 0 أي ميزة فنية لم يتم تضمينها في نطاق المطالبات الملحقة هي للعلم فقط.
يهدف الافصاح إلى توفير تحسينات في ثبات اللقاحات التي تشتمل على أملاح الألمونيوم؛ وخاصة طرق للحد من التراكم وتحسينات في نسبة امتزاز المترافقات ‎conjugates‏ الفردية في لقاحات مترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاريد - البروتين ‎polysaccharide-protein‏ ‏45 للمكورة الرثوية عديدة التكافؤ. لاحظ القائمون بالافصاح الحالي أن الامتزاز المشترك لمترافقات ‎conjugates‏ عديد السكاريد- البروتين ‎polysaccharide-protein‏ ‏5 واستخدام نسبة من عديد السكاريد إلى البروتين ‎polysaccharide to protein‏ ‎wi ratio‏ على 1: 1 يؤدي إلى 1) نسبة امتزاز أقل من 9655 فيما يتعلق بمترافقات 0005 المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ للأنماط المصلية ‎23F 5 91/ 6A‏ و2) وجود نسبة امتزاز تتراوح من حوالي 9680 إلى 9690 فيما يتعلق بمترافقات ‎conjugates‏ الأنماط 0 المصلية المتبقية؛ ‎Ly‏ لا يحقق نسبة امتزاز كاملة لمترافق نمط مصلي فردي فيما يتعلق بتركيبة مترافقات ‎CONjugates‏ مكورة رثوية عديدة التكافؤ. من الملحوظ أيضًا أن تركيبة اللقاح المحضرة باستخدام رقم هيدروجيني يتراوح من 6.8 إلى 7.0 تؤدي إلى وجود تراكم يتراوح من حوالي 4 إلى 0 وامتزاز أقل. تم استزراع عديد سكازيد باتباع الطريقة المنصوص عليها في براءة الاختراع رقم ‎(WO2013088448A1 5‏ حيث تتألف الطريقة المذكورة من (أ) توفير لقاح من سلالة بكتيرية تعبر عن ‎(CP‏ (ب) استزراع السلالة عن طريق التخمير في رقم هيدروجيني بمقدار 7.2؛ حيث يعادل إضافة معدل وسيط التغذية معدل إضافة مزيج قلوي للحفاظ على الرقم الهيدروجيني المحدد مسبقًا؛ (ج) استزراع وسيط المزرعة في درجة حرارة من 35 إلى 38 درجة مئوية مع التقليب بمعدل من 50 إلى 150 دورة في الدقيقة مع تدفق هواء بمعدل من 0.1 إلى 0.5 ‎WWM‏ ‏0 ."تم تنقية عديد السكاريد باتباع الطريقة المنصوص عليها في براءة الاختراع رقم 5 . يبين 00-55 المحضر باتباع العملية الحالية نسبة استرجاع تتراوح من حوالي 60 إلى 9670؛ حيث انخفضت نسبة التلوث بعديد السكاريد- ج بنسبة تتراوح من 1 إلى 5 أضعاف بالمقارنة مع ‎Lad 0-05 (gine‏ بعد الاستشراب المتفاعل غير الآلف للمياه ‎(HIC)Hydrophobic interaction chromatography‏ أو لكل استشراب تبادل أيوني ‎ion‏
‎(IEC) exchange chromatography‏ ويقل تلوث البروتين عن 9061 ‎Jing‏ تلوث الحمض النووي عن 961. تم إجراء العملية المذكورة على المستوى البحثي والتجريبي والتجاري. يمكن لهذه العملية تنقية عديدات السكاريد مع استهلاك وقت أقل بمقدار من 80 إلى 9690 وتكلفة أقل بمقدار 9690 بالمقارنة بالطرق القائمة على ‎.JsaSH/CTAB‏ ‏5 وفقًا لأحد النماذج المهمة المقدمة على الافصاح الحالي؛ يمكن الحصول على نسبة امتزاز مُحسنة تتراوح من ‎TS‏ إلى 9695 لمترافقات ‎conjugates‏ المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ عن طريق 1) الاستعانة بنسبة من عديد السكاريد إلى البروتين ‎polysaccharide to protein ratio‏ بمقدار من 0.8 إلى 1.4( 2) الاستعانة بامتزاز فردي أو منفصل لمترافقات ‎conjugates‏ المكورة الرئوية ا06001000002مضعيفة الامتزاز» 3) الحفاظ على انخفاض الرقم الهيدروجيني أثناء 0 التركيب. وفقًا لأحد جوانب النموذج الأول؛ تكون النسبة المفضلة من عديد السكاريد إلى البروتين بمقدار 1 . ‎Gg‏ لجانب ثاني من الجانب الأول؛ تشتمل التركيبة المذكورة على مترفقي بروتين عديد سكاريد على الأقل يحتويان على عديد سكاريد مختار من الأنماط المصلية 1 2 5:43 ‎GA‏ ‏5 قوت ف لأوطوقاأق 12 14ل 158 186.177 198 ‎33F23F22F20:19F¢‏ ‏و45 ‏وفقًا لجانب ثالث من الجانب الأول؛ يمكن الاستعانة بوضع الامتزاز الفردي لأي نمط مصلي للمكورة الرثوية مختار من 2 3 4 ‎OV 8 6A‏ اق ‎¢12F ON‏ 158 +17 186 20 ‎33F (23F (22F‏ و45؛ وبفضل للأنماط المصلية الخاصة بالمكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ ‎9V 6A 0‏ و237. وفقًا لأحد الجوانب المفضلة من الجانب الأول» يكون لقاح مترافق المكورة الرئوية ا0061000000002عديد التكافؤ ‎JAemultivalent‏ 10 تكافؤ حيث يتم امتزاز الأنماط المصلية للمكورة الرئوية 168؛ ‎23F 5 OV‏ كمزيج منفصل ثم تتم الإضاءة إلى مزيج ‎AT‏ يحتوي على
— 0 1 — خليط من الأنماط المصلية للمكورة الرئوية ‎19F 5 19A (14 (TF6B5c1‏ التى تم امتزازها في وفقًا لجانب آخر مفضل من النموذج الأول» يحتوي لقاح مترافق المكورة الرئوية ا06001000002معديد التكافؤ ‎Jlemultivalent‏ 11؛ 13 15 »16 تكافؤ أو أكثر حيث يتم امتزاز نمط مصلى واحد على ‎JN‏ من المكورة الرثوية ‎Hie pneumococcal‏ من مجموعة
33+ 23+22 20186017158 12 ONOFOV(8 (6A43 2 ‏على‎ Jails ‏يحتوي على‎ AT ‏و45 فرديًا أو الامتزاز في مجموعة أصغر كخليط منفصل ثم يضاف إلى مزيج‎ ‏الممتزة في الوضع‎ 19F 5 19A (14 »7568:5.1 ‏خليط من الأنماط المصلية للمكورة الرئوية‎ ‏المشترك.‎
0 وا لجانب آخر مفضل من الجانب الأول؛ يحتوي لقاح مترافق المكورة الرئوية ا0061000000002عديد التكافؤ ‎multivalent‏ على 16 385 حيث يتم امتزاز نمط ‎(hae‏ ‏واحد على الأقل من المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ منتقى من مجموعة تشتمل على 32 ‎(6A 4‏ لاق +12 158 186 و23 -افرديًا أو الامتزاز فى مجموعات أصغر كخليط منفصل ثم يضاف إلى مزيج آخر يحتوي على خليط من الأنماط المصلية للمكورة الرئوية
‎19A (14 725468561 5‏ و 197 الممتزة في الوضع المشترك ‎.combined mode‏ يتم النص على الجانب ثاني مقدم على الافصاح الحالي حيث يمكن منع التراكم في تركيبة مترافق عديد سكاريد- بروتين للمكورة الرئوية عديد التكافؤ ‎multivalent‏ بالكامل عن طريق 1( الاستعانة بالتحول في الرقم الهيدروجيني من رقم هيدروجيني محايد إلى رقم هيدروجيني حمضي و2) الاستعانة بتوليفة منظم هيستيدين- حمض السكسينك ‎histidine buffer‏ - 500061016
‎acid 20‏ وفقًا لأحد جوانب النموذج الثاني؛ قد يتم التحول في الرقم الهيدروجيني المذكور من 6.8 إلى رقم هيدروجيني يتم اختياره من دون أن يقتصر على 5.2 5.3 5.4 ذ.ءي 5.6 5.85.7 و5.9. ويفضل أكثر من 6.8 إلى رقم هيدروجيني مختار من 4م ”7ض 5.8
وفقًا لجانب آخر على الجانب الثاني؛ قد يحتوي نظام منظم الهيستيدين- حمض السكسينك
200 ‏المذكور على تركيز يتراوح من 1 مللي مولار إلى‎ 5006016 acid —histidine buffer
مللي مولار. يفضل أن يكون التركيز 1 مللي مولار على الأقل 1 مللي مولار (على سبيل المثال
كحد أقصىء؛ 0 مللي مولار؛ 150 مللي مولارء؛ 100 مللي مولار؛ 90 ‎Ma‏ مولارء 80 ‎Ale‏ ‏5 مولارء 70 ‎Ngo (A‏ ¢ 60 مللي مولار؛ 50 ‎Ale‏ مولار؛ 40 مللي ‎Noe‏ ¢ 30 مللي مولار» 20
‎le‏ مولار؛ 10 مللي مولار وغير ذلك). وبشكل أكثر تفضيلًا» يتراوح تركيز منظم الهيستيدين-
‏حمض السكسينك في التركيبة من 10 مللي مولار إلى 40 مللي مولار.
‏تم النص على الجانب ثالث مقدم على الافصاح الحالي حيث يمكن منع تكون الكتل أو التراكم في
‏مترافقات ‎conjugates‏ المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ باستخدام دافعات من نوع ‎rushton‏
‏0 ذات نواصل مسطحة ‎Yay‏ من التقليب المغناطيسي والدافعات ذات النوع المحوري أو الفُطري في أوعية التحضير. يتحدد ثبات التركيبة ذان النشاط الاستمناعي ‎immunogenicity‏ المنصوص عليها في الافصاح الحالي بالفعل باستخدام أساليب قياسية المعروفة جيدًا والمستخدمة بشكل روتيني من جانب المتمرسين في المجال. على سبيل المثال؛ تتحلل التركيبة ذات النشاط الاستمناعي
‏5 | /0710101009©0161لللتعرف على نسبة امتزاز المترافقات ‎conjugates‏ والثبات والتراكم والنشاط الاستمناعي ‎immunogenicity‏ وتكوين الجسيمات وفقدان (تركيز) البروتينات وما شابه ذلك باتباع طرق تشتمل دون أن تقتصر على؛ ‎ELISA‏ التشتت الضوئيء الكثافة البصرية؛ الطرد المركزي لسرعة الترسيب» الطرد المركزي لاتزان الترسيب» ازدواج اللون الدائري ‎(CD)‏ مقايسة ‎Lowry‏ مقايسة حمض بيسينتشونينيك ‎(BCA)‏ وما شابه ذلك.
‏0 في أحد الجانب المفضل؛ ينص الافصاح الحالي على ‎ELISA‏ جديد ‎ae‏ تحديد كم عديد السكاريد المقترن/ المرتبط مباشرّة بدون التأثير على النشاط الاستمناعي ‎Immunogenicity‏ ‏للمترافقات ‎cONjugates‏ الموجودة في لقاحات مترافقات ‎conjugates‏ المكورة الرثوية
‏(006000000008عديدة التكافؤ. يمكن اتباع نفس الطريقة في تحديد كم محتوى المترافق غير الممتز في قالب التركيبة كمؤشر يدل على نسبة الامتزاز حيث تبين المترافقات ‎conjugates‏
‏5 امتزاز بنسبة أكبر من 9670. يفضل إمكانية استعانة ‎ELISA‏ المذكور بخطوة ما قبل المقايسة
— 2 1 — تتضمن امتزاز المترافق من مساعد الألمونيوم بدون التأثير على النشاط الاستمناعي 00010009600 اللبروتين الناقل ‎carrier protein‏ وعديد السكاريد المترافق. ‎Jag‏ أكثر ‎dias‏ يتحقق حل عينات المترافق الممتز بالألمونيوم باستخدام هيدروكسيد الصوديوم وحمض الستريك.
يمكن ‎lan‏ الناقل من مجموعة تشتمل دون أن تقتصر على 197 ‎«CRM‏ ذوفان الحُناق؛ ذوفان ‎SEN‏ الجزه ج من كُراز الذوفان؛ ذوفان السعال الديكي؛ البروتين د من الإنفلونزا إتش»؛ إيشريشيا إيكولاي ‎(LT‏ إيشربشيا إيكولاي ‎ST‏ والذيفان الخارجي أ من زائفة زنجارية؛ مركب الغشاء الخارجي ‎(OM PC) z‏ ¢ البروتينات ¢ بروتينات ارتباط ترنسفيرين ¢ نيومولسين ¢ البروتين السطحى للمكورة الرئوية ‎(PSpA)i‏ ؛ حبة الالتصاق السطحيى للمكورة الرئوية ‎(PsaA)l‏ 0010 للمكورة الرئوية؛
0 البروتينات السطحية للمكورة الرئوية ‎BVH-3‏ و ‎BVH-11‏ مستضد 20096107واقي ‎(PA)‏ ‏للعصوية الجمرية وعامل الاستسقاء المزيل للسموم ‎(EF)‏ والعامل القاتل ‎(LF)‏ من العصوية الجمرية؛ ألبومين؛ هيموسيانين ‎((KLH) GW‏ الألبومين المصلي البشري؛ الألبومين المصلي للأبقار ‎(BSA)‏ ومشتق بروتين نقي من التويركولين (000)؛ وخاصة ‎CRM197‏ أو ‎P4‏ ‎Gig‏ للجانب المفضل؛ قد تشتمل التركيبة عديدة التكافؤ على:
‎(V 5‏ مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على 080/1197 كبروتين ناقل ‎carrier‏ ‎protein‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎TT‏ كبروتين ناقل ‎carrier‏ ‎¢protein‏ أو
‏") مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على 080/1197 كبروتين ناقل ‎carrier‏ ‎protein‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎DT‏ كبروتين ناقل ‎carrier‏
‎¢protein 0‏ أو
‏¥( مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎CRM19T‏ كبروتين ‎«JB‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على حبة التصاق سطحية للمكورة الرئوية أ ‎(PsaA)‏ ‏كبروتين ناقل ‎«carrier protein‏ أو
— 3 1 — ( مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎CRM19T‏ كبروتين ناقل» وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎TT‏ كبروتين ‎«Jl‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎DT‏ كبروتين ناقل؛ أو ©( مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎CRM19T‏ كبروتين ‎«Jl‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على ‎J‏ لأقل يحتوي على 11 كبروتين ناقل ‘ وحبة التصاق سطحية للمكورة الرثوية ‎(PsaA) j‏ كبروتين ناقل 3 أو 1( مترافق بروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎CRM19T‏ كبروتين ‎«Jl‏ وبروتين عديد سكاريد واحد على الأقل يحتوي على ‎DT‏ كبروتين ناقل» وحبة التصاق سطحية للمكورة الرئوية أ ‎(PsaA)‏ كبروتين ناقل. 0 في الجانب ‎al‏ يتمثل البروتين الناقل ‎Jeaidicarrier protein‏ المترافق مع النمط المصلي ‎3serotype‏ فى ‎<CRM-197‏ والنمط المصلى ‎4serotype‏ فى ‎TT‏ أو ‎DT‏ والنمط المصلى ‎18Cserotype‏ فى ‎.CRM197‏ ‏يتضمن الجانب ‎AT‏ مفضل مقدم على الافصاح الحالي استخدام ‎PsaA‏ كبروتين ناقل في التركيبة النهائية. يمكن استخدام ‎PsaA‏ أيضًا في التركيبة النهائية كعامل مساعد.
5 في بعض الجوانب ؛ قد تحتوي التركيبة عديدة التكافؤؤ المنصوص عليها في الافصاح الحالي على خافض للتوتر السطحي؛ يفضل أن يتمثل في البوليسوريات 20. في بعض الجوانب » يتراوح التركيز النهائي للبوليسوريات 20 في التركيبة من 700.01 إلى 9010 من البوليسوريات 20 بالوزن/ حجم التركيبة. في الجوانب أخرى ‎Und‏ يكون التركيز النهائي للبوليسوريات 20 في التركيبة 960.01 بالوزن/ حجم التركيبة. في الجوانب أخرى أيضًاء يكون التركيز النهائي
0 لبوليسوريات 20 في التركيبة 160.05 بالوزن/ حجم التركيبة. في الجوائب أخرى أيضًاء يكون التركيز النهائي للبوليسوريات 20 في التركيبة 160.1 بالوزن/ حجم التركيبة. في الجانب ‎CAT‏ ‏يكون التركيز النهائي للبوليسوريات 20 في التركيبة 61.0 بالوزن/ حجم التركيبة. في الجانب آخر أيضًاء يكون التركيز النهائي للبوليسوريات 20 في التركيبة 9610.0 بالوزن/ حجم التركيبة.
قد تحتوي تركيبات اللقاح عديد التكافؤ ]00101078160"الحالي على مواد حافظة مختارة من مجموعة تشتمل دون أن تقتصر على مواد حافظة ‎dad)‏ (مثل ثيثيروسال)» 2-فينوكسي- إيثانول» بارابين الميثيل؛ بارابين البروبيل؛ الكحول البنزبلي (أو أمزجة منهم). ‎Gg‏ لأحد الجوانب المفضلة المقدمة على الاختراع الحالي» من الممكن أن تحتوي تركيبة لقاح مترافق عديد السكاريد - بروتين للمكورة ‎Lgl‏ عديدة ‎SH‏ المذكورة. يفضل 10 أو 16 تكافق
على المترافقات ‎cONjugates‏ الممتزة بفوسفات الألمونيوم؛ هيستيدين» حمض السكسينيك؛ كلوريد الصوديوم؛ بوليسوربات20 ؛ والثيوميرسال. قد تشتمل تركيبة اللقاح المنصوص عليها في الاختراع الحالي على خطوة إضافة مساعد ملح الألومنيوم بكمية 375-20 ‎ang Sie 300-20 png Sie‏ 200-20 ميكروجم؛ 150-25
0 ميكروجم من ل/+++ لكل ‎deja‏ بمقدار 0.5 مل. وبشكل نمطي تُحضر التركيبات ذات النشاط الاستمناعي ‎dmmunogenicity‏ شكل قابلة للحقن؛ سواء محاليل مائعة أو معلقات؛ أو أشكال صلبة ملائمة للذويان في المحلول أو في المعلق» ويمكن أيضًا تحضير وسائل مائعة قبل الحقن. يمكن استحلاب التركيبة أيضًا أو دمجها في جسيمات شحمية لتعزيز تأثير العامل المساعد. سيكون التعاطي المباشر للتركيبات عن طرق
5 الحقن بشكل عام (الحقن أو الحقن تحت الجلد أو الحقن داخل الصفاق أو الحقن الوربدي أو الحقن العضلي أو التعاطي عن طريق المساحة الانفراجية للنسيج). يمكن وضع التركيبات ‎Lal‏ في أحد الجروح. تشتمل طرق تعاطي أخرى على التعاطي عن طريق الفم أو الرئة أو الأقماع أو بطريق الأدمة أو إبر الوخز في الجلد أو الحاقن النفاث. قد يتمثل العلاج بالجرعات في جدول زمني بجرعة مفردة أو جدول زمني بجرعات متعددة (بما في ذلك الجرعات المعززة).
0 بشكل مفضل؛ يمكن تخزين اللقاحات المنصوص عليها في الافصاح الحالي في شكل محلول أو شكل مجفد؛ حيث يمكن أن تتمثل تركيبة اللقاح المجفدة من الافصاح الحالي في تركيبة تشتمل على 1 أو 5 أو 10 جرعات مع مخفف يحتوي على هلام فوسفات الألمونيوم 5 ‎NaCl‏ ‏يتضمن الجانب ‎HAT‏ مقدم على الافصاح الحالي استخدام دافع من نوع ‎Rushton‏ مزود بأنصال مسطحة في وعاء التحضير (ارجع إلى الشكل 5).
— 5 1 — الأمثلة: المثال 1: التخمير ‎call‏ الطريقة من )1( توفير لقاح من سلالة بكتيرية تعبر عن ‎SCP‏ (ب) استزراع ‎ADL‏ عن طريق التخمير في رقم هيدروجيني بمقدار 7.2( حيث يعادل إضافة معدل وسيط التغذية معدل إضافة مزيج قلوي للحفاظ على الرقم الهيدروجيني المحدد مسبقًا؛ (ج) استزراع وسيط المزرعة في درجة حرارة من 35 إلى 38 درجة مئوية مع التقليب بمعدل من 50 إلى 150 دورة في الدقيقة مع تدفق هواء بمعدل من 0 إلى 0.5 ‎wm‏ ‏المثال 2: تنقية عديد السكاريد المحفظى تنقية النمط المصليى 56+01/0©6لعديد السكاريد المحفظى للمكورة الرئوية ‎HIC) 19F‏ يعقبه ‎(IEC‏
تم تركيز 5 ل نقي من مستزرعات تخمير النمط المصلي 56:01/06للمكورة الرثوية ‎19F‏ وإجراء ترشيح مخفف إلى 500 ‎Je‏ باستخدام غشاء ‎MWCO‏ بمقدار 100 ‎Sl‏ دالتون . تم إجراء الترشيح الثانتي باستخدام 25 ميكرو مولار من منظم فوسفات الصوديوم عتد رقم هيدروجيني محايد يعقبه
الترشيح الثنائي بالمياه للحقن ‎(WF)‏ ‏5 .تم إضافة نوكلياز إلى محلول عديد السكاريد للحصول على تركيز نهائي بمقدار 8 وحدة/ مل من المحلول. تمت المعالجة بالإنزيم عند 370 درجة مئوية لمدة 10 + 2 ساعة مع التقليب. تم إضافة كبريتات الأمونيوم إلى محلول عديد السكاريد المعالج بالنوكلياز بتشبع 9650 والاحتضان عند 2 - 80 مئوية ‎sad‏ 12 + 2 ساعة (باستثناء الأنماط المصلية 5 و4). تم تعريض المزيج للطرد المركزي. تم التخلص من الحبيبات (الراسب). تعرض المحلول (حوالي 500 مل) إلى 0 التترشيح الثنائي 100 ك دالتون باستخدام ‎NaCl‏ يعقبه ‎WI‏ المبرد. تم تحميل هذا المحلول المعرض للترشيح الثنائي الذي يحتوي على عديد السكاريد مع منظم وتركيز عالي من الملح على عمود ‎HIC‏
— 6 1 — تم توازن عمود الاستشراب المتفاعل غير الآلف للمياه ‎Hydrophobic interaction‏
‎(Je 300)chromatography‏ مع 9650 من منظم كبريتات الأمونيوم المشبعة ومحلول عديد السكاريد (500 مل) ثم تحميله على عمود في نطاق رقم هيدروجيني يتراوح من 6 إلى 8؛ ويفضل أن يتراوح من 6 إلى 7. تم غسل العمود أيضًا بمحلول منظم يحتوي على 9650 من كبريتات
‏5 الأمونيوم المشبعة. في ظل هذه الظروف؛ تم استرجاع عديد السكاريد في تدفق وغسل توازن من العمود . تم تركيز محلول عديد السكاريد بعد ذلك باستخدام مرشح ‎MWCO‏ بحجم 100 ك دالتون ثم تعريضه للترشيح الثنائي مع ‎NaCl‏ والمياه المخصصة للحقن ‎(WF)‏
‏0 .تم توازن عمود استشراب تبادل الأيونات )300 مل) مع 20 ميكرو مولار من منظم فوسفات الصوديوم ومحلول عديد السكاريد )500 مل) ثم تحميله على عمود في نطاق رقم هيدروجيني يتراوح من 6 إلى 8؛ وبفضل أن يتراوح من 6.5 إلى 7.5. تم غسل العمود بعد ذلك بالمنظم. تم استخلاص عديدات السكاريد باتباع خطوة استخراج تدريجي باستخدام 1.0 مولار من ‎NaCl‏ (تم استخراج عديدات سكاريد متعددة بقوى أيونية مختلفة من ‎(NaCl‏
‏15 تم تركيز محلول عديد السكاريد بعد ذلك باستخدام مرشح ‎MWCO‏ بحجم 100 ك دالتون ثم تعريضه للترشيح الثنائي مع المياه المخصصة للحقن ‎(WF)‏ ‏ميكرو في زجاجات من مادة البروبلين. تم تخزين عديد السكاريد المرشح في ‎Alla‏ مجمدة عند - 0+0 م.
‏0 .تم اتباع العملية المذكورة أعلاه أيضًا فيما يتعلق بالأنماط المصلية 6:4 68 ‎OV (TF‏ م1410 186 198 197 و 237. النتائج:
— 7 1 — تم تقييم عديد السكاريد- ج ما بعد ‎HIC‏ وما بعد استشراب تبادل الأيونات باستخدام نطاق ‎.NMR H1/P31‏ أدت العملية إلى انخفاض في محتوى الملوثات بما يتراوح من 2 إلى 3 أضعاف. المثال 3: تحديد حجم عديدات السكاريد تم استخدام جهاز تجانس (الموائع الدقيقة) للحد من الوزن الجزيئي لعديد السكاريد قبل خطوة
التفعيل. فيما يتعلق ب ‎«19A‏ تم تقليل الحجم عند 28-24 ا5ظكل ولكن فيما يتعلق ب ‎«19F‏ تم تقليل الحجم عند 30-26 ‎KPSI‏ حيث كان عدد التمريرات يتراوح من حوالي 1 إلى 3 تم تعريض عديدات السكاريد محددة الحجم إلى الترشيح الثنائي والتركيز يعقبه الترشيح بحجم 0.22 ميكرو. تم تعريض عديدات السكاريد محددة الحجم بعد ذلك إلى ‎HPSEC-RI‏ لتقييم الوزن
0 الجزيئي المتوسط. المثال 4: عملية الترافق العامة تم إجراء ترافق عديد السكاريد إلى بروتين ناقل باستخدام طريقة الترافق ‎CDAP‏ لليس وآخرين (اللقاح 26: 198-190؛ 1996). تم حل عديدات السكاريد ذات الحجم المخفض ميكانيكيًا (باستثناء 68 المستخدم في الشكل الأصلى أو ذو الحجم المحدد ‎oly‏ على حجم ‎(6A‏ في ‎NaCl‏
‎.2M 5‏ تم إضافة ‎CDAP‏ (في شكل الأسيتونتريل) من محلول تخزين 100 ملجم/ مل إلى محلول عديد السكاريد ‎Gy‏ لنسية عديد السكاريد:000/0. بعد حوالي 1 دقيقة؛ تم إضافة 2 مولار من ‎NaOH‏ للحصول على رقم هيدروجيني معين للتفعيل . تم تفعيل عديد السكاريد عند هذا الرقم الهيدروجيني في مدة تتراوح من 4 إلى 10 دقائق عند 22 درجة مثوية. ثم إضافية ‎CRM-197‏ ‏(تعتمد الكمية على نسبة 05/البروتين الأولية) إلى عديد السكاريد المفعل وتم إجراء تفاعل مزدوج
‏0 عند الرقم الهيدروجيني المحدد لمدة تتراوح من 3 إلى 8 ساعات بالاستناد على النمط المصلي. تم إخماد ‎Je Lal)‏ بعد ذلك بالغليسين لمدة 1 ساعة عند 220 درجة مثوية وعند 20 1 درجة مثئوية أثناء الليل. تمت تنقية المترافقات 000[1/98165 بعد ذلك بالترشيح الثنائي بما يتراوح من 300 ك دالتون إلى 500 ك دالتون يعقبه الترشيح الثنائي بمقدار 100 ك دالتون. تم بعد ذلك تحديد
— 8 1 — محتوى عديد السكاريد والبروتين في المترافقات ‎conjugates‏ المرشحة والمنقاه بمرشح 0.22 مايكرومتر. الجدول 1- متغيرات مقياس تفاعل الترافق الخاص ‎Lally‏ المصلي ‎Ludserotype‏ يتعلق بعشرة أنماط مصلية . تفاصيل الترافق لعشرة أنماط مصلية الخصائص 19 ‎23F | 19F 14 9v| TF 6A 5 1‏ ‎A‏ ‏2 ‏2 2 2 2 2 2 مولا 2 مولار |2 مولار ‎١‏ 2 مولار مولار | مولار مولار . مولار مولار ‎J‏ مولار الذويان من |من من من |من من من من من من ‎Na Na Na NaCl NaCl | NaC‏ ‎NaCl Na | NaCl NaCl‏ ‎Cl Cl Cl ١‏ ‎Cl‏ ‏.1:1 .1:1 .1:1 .1:1 .1:0 .1:1 نسبة ‎Ps/CDAP‏ 1:1 1:1 1 1:1 15 25 21 8 1 تركيز 197 ‎CRM‏ ‏20 20 20 20 20 20 201 20 20 201 (ملجم/ ‎(de‏
2 5 7 6 |6 :9.5 :9.5 | :9.5 | :9.5 |9.5:9 |:9.5:19.5:109 5 .9.5:9 ‎pHa:pHc:pHq‏ :9.5 :9.5 :9.5 :9.5 ..5:9 |:9.5:19.5:109 :9.5 5:9.5 9.5 9.5 ]9.5 ]9.5 51 09 |9.5 9.5 1.0 ‎Ps‏ الحر (96) < 1 |6.3 2.63 |1.57 <1 ‎ND|‏ 2.53 |1.5 2.59 7 توزيع الحجم الجزيئي | .70 5 |.75 72.1 ‎٠‏ .74 72.9 . 74.93 | 67.67 76.59 )%( 56 2 68 |75 1 35 |1 الجدول (2): مقارنة نسبة امتزاز الأنماط المصلية الفردية لتركيبات ‎PCV-10‏ بطريقة الخلط الأحادي والمزدوج من التركيب. طريقة الخلط الأحادي طريقة الخلط المزدوج (الخليط أ الأنماط ا : الخليط ب (جميع المستضدات مع بعضها) بلي * ( المصلية التركييات نسبة الامتزاز نسبة الامتزاز 0/0 التجرية- التجرية- | التجربة- | التجربة- | التجرية- التجربة- 2 1 3 4 5 6 النمط المصلى 1 ّ 85 92 >99 >99 97 ‎1serotype‏ ‏النمط المصلى 2 ° | 84 82 85 88 97 ‎Sserotype‏
—_ 2 0 —_ ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎93 71 77 61 51 67 serotype 3 6A ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎84 83 72 82 serotype 4 6B ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎84 87 81 77 83 serotype 5
TF
‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎85 85 74 43 67 serotype ov ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎91 92 88 83 serotype 7 14 ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎85 93 95 97 92 95 serotype 19A ‏لمصلي‎ ١ ‏النمط‎ ‎75 88 91 93 87 91 serotype 19F ١ ‏النمط‎ ‎81 81 84 58 52 ‏لمصلي | م5‎ 10 serotype
— 1 2 — في طريق الخلط الأحادي؛ تم امتزاز الأنماط المصلية ‎23F 5 OV (6A‏ بشكل ضعيف في التركيبة؛ بينما كانت نسبة الامتزاز في طريقة الخلط المزدوج >9670 ‎Lad‏ يتعلق بجميع الأنماط المصلية. الجدول 3: تأثير التغير في الرقم الهيدروجيني على سلوك تراكم تركيبات ‎PCV-10‏ ‏نسبة رفض الزجاجات بسبب التراكمات (الجسيمات البيضاء/ ف إك كبدة التكتلار” م وصف التركيبة لتكتلات) تركيبات ‎PCV-10‏ ‏1 بدون 'تغير في الرقم | %10 %4 %6 الهيدروجيني" تركيبات ‎PCV-10‏ التجرية- 10 التجرية- 11 التجرية- 12 2 بتغير في الرقم : لا يوجد تراكم ‎ade)‏ | لا يوجد تراكم (عد لا يوجد تراكم (عد الهيدروجيني من يوجد تراكم (عدم | لا يوجد تراكم ‎pao)‏ | لا يوجد تراكم (عدم ‎or J - ‘a J or J - ‘a J or J - ‘a J‏ . 8 إلى ‎oo oo‏ | الرفض عند الفرز) | الرفض عند ‎(OA)‏ الرفض عند الفرز) الم يتم العثور على تراكمات للرقم الهيدروجيني 5.8-5.6 ‎Lad‏ يتعلق بالتركيبة 001/10 بالمقارنة بالرقم الهيدروجيني 6.8. تبين أن نسبة عديد السكاريد إلى البروتين (1:1) لها تأثير نفعي على نطاق امتزاز مترافق المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ فى التركيبة. الجدول 4: تأثير نسبة ‎Ps‏ إلى ‎CRM197‏ على امتزاز مترافق المكورة الرئوية ‎pneumococcal‏ ‏0 (النمط المصلي ‎(GAserotype‏ في التركيبة
— 2 2 — النمط المصلى ‎yilserotype‏ )38 المكورة نسبة 05 إلى م ّ نسبة الامتزاز الرئوية ‎6Apneumococcal‏ البروتين تمت ملاحظة تأثير نسبة عديد السكاريد إلى البروتين على امتزاز المترافقات ‎.conjugates‏ ‏أظهرت مترافقات ‎6A conjugates‏ ذات نسبة ‎Ps‏ إلى البروتين بمقدار >1.5 امتزاز ضعيف. تحتوي معظم الأنماط المصلية المستخدمة في تركيبة ‎PCV-10‏ على ‎Ps: Prods‏ في نطاق 1.3-0.6 بما أدى إلى امتزاز مثالى للأنماط المصلية المتعددة بما فى ذلك النمط المصلى ‎.6Aserotype‏ بالاستناد على بيانات الامتزاز المتحققة للنمط المصلى ‎6A‏ وتركيبة ‎PCV-10‏ ‏عند تركيب 16 3885 يمكن استنتاج أن نسبة ‎Ps: Pr‏ للمترافقات ‎conjugates‏ الستة المتبقية الموجودة في نفس النطاق قد تضمن وجود امتزاز متسق لمترافقات ‎conjugates‏ جميع الأنماط المصلية الستة عشر. 0 الجدول 5: مواصفات الدافع التورييني ‎turbine impeller‏ من نوع ‎Rushton‏ ذو الأتصال المسطحة للأوعية المختلفة طول قطر التصل (ملم)
— 3 2 — التحكم في الدوران (دورة في الدقيقة) 500-50 سرعة الطرف (م/ث) 1.95-0.19 المتال 6: بروتوكول ‎ELISA‏ ‏تم تحديد محتوى المستضدات ونسبة الامتزاز باستخدام ‎Sandwich ELISA‏ المعدل. تم تعديل ‎Sandwich ELISA‏ التقليدي فيما يتعلق بظروف الاختبار/ ظروف المقايسة ومن ثم؛ فإنه يتسم بالسمات النفعية التالية
‎)١‏ لتحديد كم عديد السكاريد المترافق فى وجود 9 مستضدات مترافقة أخرى في لقاح يحتوي على 0 تكافؤ.
‏") لاستخلاص العشرة مترافقات ‎conjugates‏ بالكامل من هلام فوسفات الألمونيوم حيث يكون الامتزاز أكبر من 9680
‏0 3) حيث يتم التقاط المترافق حتى عند الرقم الهيدروجيني 9 بدون تعرض النشاط الاستمناعي ‎dimmunogenicity‏ 38 للضرر تم تحديد محتوى المستضد ‎dusiantigen‏ الامتزاز باستخدام ‎ELISA‏ وفقًا للبروتوكول المبين أدناه: اليوم 1 5 1) تم تغليف الأطباق بجسم مضاد الالتقاط (جسم مضاد لا يتوافق مع البروتين الناقل ‎carrier‏
‏00)) يعقبه الاحتضان لمدة 0.5- 2 ساعة عند 35 + 5 © ‎Agia‏
‏2) تم غسل الأطباق من 3 إلى 6 مرات باستخدام أداة ‎Jue‏ الأطباق ‎ELISA‏
3) تم حجب الأطباق بمنظم حاجب )%3 ‎BSA‏ في ‎1X PBS‏ ومنظم تريس للأنماط المصلية ‎(9V 5 4‏ ثم الاحتضان لمدة 1.5 - 2.5 ساعة عند 30 +5" مثوية. 4) تم غسل الأطباق 3 مرات باستخدام أداة غسل الأطباق ‎ELISA‏ ‏5) تم إضافة العينات إلى الأطباق. 6) تم احتضان الأطباق أثناء الليل عند 3+5 © ‎Age‏ ‏اليوم 2 1) تم السماح للأطباق بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة. 2) تم إضافة جسم مضاد أولي بعد غسل الأطباق 3 مرات ثم الاحتضان في درجة حرارة الغرفة عند 2425 لمدة 30 دقيقة ثم الغسل. 0 3) تم إضافة جسم مضاد ثانوي ثم الاحتضان عند 2+25 لمدة 30 دقيقة. 4) تم إضافة ‎TMB sale‏ يعقبها الاحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-15 دقيقة في الظلام. 5) تم إضافة محلول توقف. 6) تم قراءة الأطباق عند 450 نانومتر.
إجراء إذابة العينة بدون الإضرار بحاتمة البروتين الناقل ‎:carrier protein‏ تم إضافة كمية ملائمة تتراوح من 0.5 إلى 2 مولار من ١١80ل‏ إلى 2 مل من عينة اللقاح. تم تعريض العينة المذكورة إلى دوامة خفيفة لحين نقاء المحلول. تم تعديل الرقم الهيدروجيني للمحلول من 9 إلى 12 لحين نقاء المحلول. تم إرجاع الرقم الهيدروجيني للمحلول إلى 7.4-6 باستخدام 0 كمية تتراوح من 0.5 مولار إلى 2 مولار من حمض الستريك. تم تعريض المحلول المذكور إلى
— 5 2 — الطرد المركزي (العينات المذابة) عند 3000 إلى 6000 9 ‎X‏ لمدة 5 دقائق وتم تجميع ‎Balall‏ ‏الطافية بغرض الاختبار. الجدول (6) النمط المصلي المحتوى المحتوى ‎serotype‏ نسبة الامتزاز نسبة الامتزاز بالميكروجم/ مل بالميكروجم/ مل النمط المصلى . 3.87 4.66 99.4 ‎1serotype‏ ‏النمط المصلى . 3.57 83 4.03 90.8 ‎Sserotype‏ ‏النمط المصلى . 3.39 83 4.6 68.3 ‎O6Aserotype‏ ‏النمط المصلى 8.01 85 ‎6Bserotype‏ ‏النمط المصلى 4.72 97 4.18 84.4 ‎TFserotype‏ ‏النمط المصلى . 4.61 3.95 70.4 ‎OVserotype‏ ‏النمط المصلى . 5.11 94 5.06 92.5 ‎14serotype‏
— 6 2 — النمط المصلى . 4.35 82 4.14 81.4 ‎19Fserotype‏ ‏النمط المصلى . 3.66 72 4.03 75 ‎23Fserotype‏ ‏المثال 7: لقاح مترافق المكورة الرثئوية- 10 تكافؤ ‎(PCVI10)‏ ‏الجدول 7-تركيبة 001/10: ‎١ | 2 -‏ النمط ‎serotype Lead)‏ لعديد السكاريد 1 5؛ 1 ّ 2 ميكروجم لكل نمط ‎JTF 6A‏ لاق 14 198 ‎*23F 3 19F‏ 2 | ~ ~ 7 ,1 ّ ‎Ce‏
— 7 2 — ‎we]‏ > | ~ *تم ترافق المكونات المشطة مع البروتين الناقل ‎.CRM197 carrier protein‏ المثال 8: التركيبة 1 ‎(PCV16)‏ ‏لقاح مترافق المكورة الرئوية ‎(PCV16) sis 16 —pneumococcal‏ الجدول 8-تركيبة 2601/16 (1): 1 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 1 2 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 2 3 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 3 4 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 4 5 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 5 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎6A‏
— 2 8 —
7 النمط المصلي ‎serotype‏ | 4.0 ميكروجم ‎6B‏ ‏النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎TF‏ ‏النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎ov‏
النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎12F‏
11 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 14
12 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎15B‏
13 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎18C‏
14 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎19A‏
النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎19F‏
16 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎23F‏
* تم ترافق المكونات النشطة من اللقاح مع بروتين ناقل واحد على الأقل مختار من ‎(CRM197‏ ‎DT,TT‏ ‏** يضاف في تمثيل الجرعة المتعددة فقط المثال 9: التركيبة 1 ‎(PCV16)‏ ‏5 الجدول 9-تركيبة 01/16 (2): 1 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم
I ‏لانن‎ 2 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎ie I‏ ل
— 3 0 —
3 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 3
4 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 4
النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 5 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎6A‏
7 النمط المصلي ‎serotype‏ | 4.0 ميكروجم 68 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎TF‏ ‏النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎ov‏
النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎12F‏
11 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم 14
12 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎15B‏
ااا 14 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم عا ‎I‏ ‏15 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم ‎le‏ ل 16 النمط المصلي ‎serotype‏ | 2.0 ميكروجم هت ا * تم ترافق المكونات النشطة من اللقاح مع بروتين ناقل واحد على الأقل مختار من ‎(CRM197‏ ‎DT, TT‏ ** يضاف في تمثيل الجرعة المتعددة فقط. المثال 10:
— 2 3 — 1( تحلل 0005 ذات الحجم المحدد ‎(6B 5 6A19F(19A)‏ في وجود ‎:DMAP‏ ‏تم معالجة 0005 ذات الحجم المحدد في محلول تفاعل ب ‎DMAP‏ بنسبة 1: 1.5 والتحقق من مستوى التحلل بواسطة ‎.SEC-HP-RI‏ ‏النتائج : تبين تعرض 19/8 0005 فقط للتحلل فى وجود ‎Lay DMAP‏ بقيت 0005 الأخرى التى تحتوي على فسفودايستر ‎6ALIF)‏ و68) كما هي بدون تحلل. ارجع إلى الشكلين 1 (بدون ‎(DMAP‏ ‏و2 حيث يبين تحلل 005 المتوسط ب ‎.DMAP‏ ‏للحد من تحلل 19/8 هذاء تم تعريض ‎PRPS‏ النشط إلى ترشيح ثنائي بمقدار 10 ك دالتون باستخدام 2 مولار من ‎NaCl‏ لتحريك ‎DMAP‏ المتكون من محلول التفاعل قبل الترافق مع ‎.CRM197 0‏ 2) تحلل وتراكم 0005 ذات الحجم المحدد (/019 60195 و68) في وجود ‎:CDAP‏ ‏تم ‎dallas‏ 0005 محددة الحجم في محلول التفاعل ب ‎CDAP‏ بنسبة 1: 1.5 أثناء التفعيل. تم ملاحظة تولد 96501 من ‎DMAP‏ كناتج ثانوي (القياس بواسطة ‎(RP-HPLC‏ بما أدى إلى تحلل 0005 والتراكم بين ‎PRPs‏ المفعل بعد وقت معين من التفعيل (ارجع إلى الجدول 2) وتم 5 التحقق من التحلل والتراكم بواسطة مستوى 1-586-110. ارجع إلى الأشكال 13 (بدون ‎((CDAP‏ 3« 3ج و3د (فيما يتعلق ب ‎(19A‏ 145 (بدون00/8©6) جب ‎Led)‏ يتعلق ب ‎(19F‏ ‏التى تبين تحلل وتراكم 0005 بواسطة ‎.CDAP‏ ‏الجدول 10-العوامل المسؤولة عن الترابط العرضي والتراكم بين عديدات السكاريد وبيعضها تأثير 'مدة تفعيل 010/9" على تكوين 'تراكمات عديد السكاريد - عديد السكاريد" . 05 المعدل المفعل ‎Mw LL‏ ل ‎PnPs‏ ذو & دالتون) ‎١ SEC]‏ الأنثا المصلية الحجم المحدد/ المعدل 1 (ك دالتون) [ 0 (ك دالتون) ‎[AP-RIT 686-[‏
— 3 3 — لا يوجد تراكم بين عديدات ‎6A‏ 432 435 السكاريد المفعلة لا يوجد تراكم بين عديدات 131 131 السكاريد المفعلة يوجد تراكم بين عديدات 4 (بعد 20 دقيقة) السكاريد المفعلة يوجد تراكم بين عديدات ‎19A‏ 178 7 (بعد 60 دقيقة) السكاريد المفعلة 3 (بعد 120 يوجد تراكم بين عديدات دقيقة) السكاريد المفعلة يوجد تراكم بين عديدات ‎19F‏ 157 5 (بعد 30 دقيقة) السكاريد المفعلة 3( منع تحلل وتراكم ‎PRPs‏ ذات الحجم المحدد ‎(19F 5 19A)‏ بنسبة ‎CDAP‏ :0005 بمقدار 1 باستخدام خطوة الترشيح الثنائي: للحد من هذا التراكم ل 19/8 تم تعريض 0005 المفعل لترشيح ثنائي بمقدار 10 ك دالتون باستخدام 2 مولار من ‎NaCl‏ لإزالة ‎DMAP‏ المتكون من المحلول قبل الترافق مع ‎.CRM197‏ ‏ارجع إلى الأشكال 3 ه (الترافق بدون 10 ك دالتون ‎(DF‏ و3و (الترافق مع 10 ك دالتون ‎(DF‏ ‏حيث يتبين مستوى ‎SEC-HP-RI‏ للمترافق باستخدام 0005 المفعل والمرشح ثنائيًا بمقدار 10 ك دالتون و08./1197. إلا أن خطوة الترشيح الثنائي أثرت ‎Ula‏ على ناتج الترافق حيث أدت إلى انخفاض بمقدار 9640-9630 في الناتج ‎LAS‏
— 4 3 — 4( منع تحلل وتراكم 0005 ذات الحجم المحدد ‎(19F 5 19A)‏ بتقليل نسبة ‎PnPs :CDAP‏ إلى 1 (198) و1: 0.8 ‎(19F)‏ بدون الاستعانة بخطوة الترشيح الثنائي تمت ‎dallas‏ 0005 بالحجم المحدد في محلول التفاعل ب ‎CDAP‏ بنسب 1: 1 و1 :0.8 فيما يتعلق ب 19/8 و 197 بالترتيب والتحقق من مستوى التحلل والتراكم ذو الصلة بواسطة ‎SEC-‏ ‎HP-RI 5‏ النتائج: تبين أن نسب ‎PS:CDAP‏ المعدلة (1: 1 ‎Laid‏ يتعلق ب ‎19A‏ و1: 0.8 ‎Lad‏ يتعلق ب ‎(19F‏ تمنع التحلل والتراكم لكل من ‎.PnPs 1 OF 19A‏ ارجع إلى الشكلين 3 ‎J)‏ وح ‎19A J‏ ( و4 ‎z)‏ ود ‎J‏ ‎4a. (19F‏ ميزة إضافية لاستخدام النسب المعدلة تتمثل في عدم الاستعانة بخطوة الترشيح الثنائي 0 بمقدار 10 ك دالتون بما يضمن الحد الأدنى من فقدان الناتج الإجمالي. تم ملاحظة أنه في حالة النمط ‎Load)‏ 19/85©6001/06,؛ عندما كانت 'مدة تفعيل 000/8" أكبر من 10 دقائق؛ أدى ذلك إلى وجود ترابط تشابكي لعديد السكاريد المفعل مع عديد السكاريد المفعل بما يؤدي في النهاية إلى تكون ‎SUSIE‏ عديد سكاريد- عديد سكاريد". بالإضافة إلى ذلك؛ فى ‎dla‏ النمط المصلى 19/5860017/06؛ عندما كانت 'مدة ‎"CDAP (Lagi‏ أكبر من 20 دقيقة؛ فإن هذا أدى إلى الترابط التشابكي لعديد السكاريد المفعل مع عديد السكاريد المفعل بما يؤدي في النهاية إلى تكون 'تراكمات عديد سكاريد- عديد سكاريد". فضلًا عن ذلك؛ تبين أن مدة تفاعل الترافق أكبر من المدة اللازمة للترابط التشابكي لعديد السكاريد المفعل مع عديد السكاريد المفعل بما يؤدي إلى تكون التراكمات. ارجع إلى الشكلين 3 و4. ولكن فيما يتعلق بأنماط مصلية أخرى مثل ‎«6BPNPs 3 6APNPs‏ لم تتم ملاحظة هذا الترابط 0 التشابكي. المثال 11:
— 3 5 —
PnPs19F ; PNPs19A :conjugates ‏تحضير المترافقات‎ تم إجراء ترافق عديد السكاريد إلى بروتين ناقل باستخدام طريقة الترافق ‎CDAP‏ لليس وآخرين (اللقاح 26: 198-190؛ 1996( مع إدخال التعديلات التالية: 1) لتحضير مترافق ‎(19A‏ استخدم نسبة عديد السكاريد إلى ‎CDAP‏ بمقدار 1:1 عند 220 م مع _مدة تفعيل بمقدار 4 دقائق وياستخدام نسبة عديد السكاريد إلى البروتين بمقدار 1:1 2) لتحضير مترافق ]19؛ استخدم نسبة عديد السكاريد إلى ‎CDAP‏ بمقدار 0.8:1 عند 220 م مع مدة تفعيل تتراوح من 9 إلى 10 دقائق وياستخدام نسبة عديد السكاريد إلى البروتين بمقدار 1 فيما يتعلق ب ‎JF‏ الجدول 10- مقارنة نتائج المترافقات ‎conjugates‏ فيما يتعلق ب ‎19A‏ 5 197 باتباع ‎dal‏ ‎CDAPGas 0‏ التقليدية" (الخانة 1) و'طريقة الترافق المُحسنة" (الخانة 2). 1) بيانات تفاعل الترافق المترافقات ‎conjugates‏ | المترافق 19/8 المترافق ‎19F‏ ‏تركيز 005 (ملجم/ ‎(Je‏ 9.5 9.5 9.5 9.5 2 مولار من 2 مولار من 2 مولار من 2 مولار من حل ‎NaCl NaCl NaCl NaCl PnPs‏ نسبة ‎PnPs/CDAP‏ 1.0:1.5 1.0:1.0 1.0:1.5 1.0:0.8 20 20 20
— 6 3 — ‎(Ja‏ ‏النسبة الأولية ل ‎Ps/CRM197‏ 1.0:1.5 1.0:1.0 1.0:1.5 1.0:1.0 ‎pHa:pHc:pHq‏ 9.0:9.0:9.0 9.0:9.0:9.0 9.5:9.5:9.5 9.5:9.5:9.5 2( خصائص المترافقات ‎conjugates‏ النهائية النسبة النهائية ل ‎PnPs/CRM197‏ 0.53 0.86 0.52 ‎&)(SEC-HP-I‏ 1081 853 994 847 دالتون) ‎(UV/RI/MALS)‏ (ك | 8212 6012 6393 4773 دالتون)
— 3 7 —
النتائج:
تم ملاحظة أن نسبة عديد ‎CDAP: 1) ICull‏ المعدلة؛ ووقت تفعيل 010/10 ونسية عديد
السكاريد:البروتين النهائية؛ تحد من تحلل عديد السكاريد محدد الحجم بواسطة 4- ثنائي ميثيل
الأمين - بيربدين أثناء التفعيل وتمنع ‎La‏ تراكم عديد السكاريد- عديد السكاريد فيما بعد بما يحسن
5 .من خصائص المترافقات ‎conjugates‏ النهائية ‎Lad‏ يتعلق بالمحتوى الخالى من عديد السكاريد.
أدت طريقة الترافق المُحسنة المستخدمة فى تحضير مترافقات ‎A 19 conjugates‏ و 197 إلى
إنتاج مترافقات ‎conjugates‏ لم تبين أي إشارة إستير أحادي من الفوسفات في مستويات
المترافقات ‎conjugates‏ ذات الصلة ‎Le (31P Proton NMR)‏ يشير إلى أن طريقة الترافق
المُحسنة تتسم بالفاعلية في تحسين التحلل ‎Sl)‏ لعديدات السكاريد على مستوى تفاعلات الترافق. 0 في ضوءٍ العديد من النماذج المحتملة التي تنطبق عليها مبادئ الافصاح المفصح عنه؛ يجب
إدراك أن الجانب المبينة هي مجرد أمثلة مفضلة مقدمة على الافصاح ولا يجب اعتبارها مقيدة
لنطاق الافصاح. كما لا يتم تحديد نطاق الافصاح إلا من خلال عناصر الحماية التالية. ‎slug‏
عليه؛ فإنني ندعي افصاحنا ‎al‏ عبارة عن جميع ما يدخل ضمن روح عناصر الحماية المبينة
وتطاقها.

Claims (1)

  1. عناصر الحماية
    ‎.١‏ طريقة لتحضير لقاح مرافق بروتين المكورة الرتئوية متعددة السكاريد ‎stable multivalent‏ ‎«Streptococcus pneumoniae polysaccharide—protein conjugate vaccine‏ تظهر امتزاز مثالي لكل مرافق وأقل تكتل للمترافقات ¢ الطريقة المذكورة تشمل الخطوات التالية:
    أ. ترافق جزيئات عديد السكاريد للمكورة الرئوية المشتقة من المكورات الرئوية إلى ‎sale‏ ‏5 حاملة لبروتين بنسبة تتراوح بين 0.5 و1.4؛ وعند رقم هيدروجيني يتراوح بين 5.2 و5.9 للحصول على مترافقات عديد سكاريد - بروتين؛
    ب. بصورة فردية امتزاز مترافقات عديد سكاريد - بروتين تم الحصول عليها في الخطوة (أ) تشتمل على الأنماط الفردية ‎VO (AG‏ و77 على مساعد ملح ألمنيوم أول في محلول منظم من هيستيدين - حمض سكسينيك بتركيز يتراوح بين 1 ملي مولار و200 ملي مولار وعند رقم 0 هيدروجيني يتراوح بين 5.6 و5.8» حيث تتراوح كمية مساعد ملح الألمنيوم المذكور من 20- ميكرو جرام من ‎AH‏ لكل ‎deja‏ تبلغ 0.5 مل تركيبة اللقاح النهائية؛
    ت. خلط وامتزاز مترافقات عديد سكاريد - بروتين التي تم الحصول عليها في الخطوة (1) تشتمل على الأنماط الفردية التي تُختار من 1م 2 3 4« 5 6ق 7ل 12 14 ‎B15‏ ‎F225 F19 A19 C18‏ على مساعد ملح ألمنيوم ثاني في محلول منظم من هيستيدين - 5 حمض مكسينيك بتركيز يتراوح بين 1 ملي مولار و200 ملي مولار وتحول في الرقم الهيدروجيني من 6.8 إلى ما يتراوح بين 5.6 و5.8؛ حيث تتراوح كمية مساعد ملح الألمنيوم المذكور من 375-20 ميكرو جرام من +++ل8 لكل جرعة تبلغ 0.5 من تركيبة اللقاح النهائية؛ و
    ث. مزج المجموعة الممتزة الأولى المذكورة التي تم الحصول عليها في الخطوة (2) مع المجموعة الممتزة الثانية التي تم الحصول عليها في الخطوة (3)؛ في وجود خافض توتر سطحي 0 بمساعدة دفاعة توربينية بنصل مسطح ‎Rushton‏ للحصول على تركيبة لقاح مترافق عديد سكاريد ‎Gig pg‏ للمكورة الرثوية متعددة التكافؤ مستقرة؛ حيث يتم اختيار البروتين من ‎CRMYAY‏ و وذوفان الكُراز ‎(TT) tetanus‏ و ذوفان الحُناق ‎(DT) diphtheria‏ يتم تحضير مترافقات عديد سكاريد ويروتين للمكورات الرئوية باستخدام كيمياء ترافق بادخال سيانيل وبتراوح الامتزاز من 9699-75 كما تم قياسه بواسطة ‎ELISA‏ بيني.
    2- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 1؛ حيث تشتمل الخطوة (أ) على: ‎g‏ تفاعل عديد سكاريد المكورات الرئوية ‎pneumococcal polysaccharide‏ التي تحتوي على رابطة فوسفو داي إستر ‎phosphodiester linkage‏ بين وحدات تكرار مرتبطة تساهمياً ببروتين حامل يتسم بمتوسط حجم يتراوح بين 130 كيلو دالتون و190 كيلو دالتون مع ‏5 عامل إدخال سيانيل ‎cyanylation agent‏ بنسبة ‎Viv A‏ و1:1 عند 22 م إلى 25" م لفترة تتراوح بين 4 دقيقة إلى 10 دقائق؛ مما يؤدي إلى عديد سكاريد منشط بسيانات ‎cyanate—‏ ‎polysaccharide‏ 200173160؛
    ب. ملامسة عديد سكاريد منشط بسيانات ‎cyanate-activated polysaccharide‏ مع بروتين بنسبة تبلغ 1:1 عند رقم هيدروجيني يتراوح من 9 إلى 9.5 لفترة تتراوح من 3 ساعات إلى 0 5 ساعات متبوعة بالإخماد بجليسين ‎t(glycine‏ ‏حيث تعمل عملية الترافق المذكورة على تقليل التحلل بواسطة منتج ثانوي لعامل إدخال سيائيل ‎cyanylation agent‏ لعديد سكاريد تم ضبط حجمه وتمنع تكتل لاحق لعديد سكاريد-عديد سكاريد ‎«polysaccharide—polysaccharide‏ مما يؤدي إلى مترافق به أدنى محتوى من عديد سكاريد حر. 3- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 2؛ حيث يتم اشتقاق عديد السكاريد الذي يشتمل على رابطة فوسفو داي إستر ‎phosphodiester linkage‏ بين وحدات تكرار من أحد الأنماط المصلية للمكورات الرئوية ‎AG (F19 (A19 streptococcus pneumoniae serotype‏ أو 86. 4- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 3( حيث يكون عديد السكاريد من النمط المصلي لعديد سكاريد للمكورات الرئوية ‎streptococcus pneumoniae serotype‏ 819 ويكون عامل إدخال سيانيل عبارة عن 1- سيانو- 4- داي ميثيل - أمينو- بيريميدنيوم - تترا فلورو بورات -1 ‎cyano—4-dimethyl-amino—pyridinium—tetrafluoroborate‏ مختلط بنسبة 1:1 عند 2م لفترة تبلغ 4 دقائق مما يؤدي إلى عديد سكاريد منشط بسيانات ‎cyanate-activated‏
    ‎.polysaccharide 5‏
    5- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 3؛ حيث يكون عديد السكاريد من النمط المصلي لعديد سكاريد للمكورات الرئوية ‎F19 Streptococcus pneumoniae serotype‏ ويكون عامل إدخال ‎dab‏ عبارة عن 1- ‎gibi‏ = 4- داي ميثيل - أمينو- بيريميدنيوم - تترا فلورو بورات -1 ‎cyano—4-dimethyl-amino—pyridinium—tetrafluoroborate‏ مختلط بنسبة ‎Vio, A‏ عند 22 "م لفترة تبلغ 10-8 دقائق مما يؤدي إلى عديد سكاريد منشط بسيانات ‎cyanate—‏
    ‎.activated polysaccharide‏ 6- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 1؛ حيث يتسم المحلول المنظم بهيستيدين - حمض سكسينيك 50116 ‎histidine—succinic acid‏ المذكور بتركيز يتراوح بين 1 ملي مولار و 200 0 ملي مولار. 7- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 6؛ حيث يتسم المحلول المنظم بهيستيدين - حمض سكسينيك ‎acid buffer‏ 71500106-5001016 المذكور بتركيز يتراوح بين 10 ملي مولار و 40 ملي مولار. 8- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم ‎oY‏ حيث يترافق النمط المصلي 3 مع ‎(CRM197‏ يترافق النمط المصلي ‎C18‏ مع 041/197؛ يترافق النمط المصلي 4 مع ‎DT‏ يترافق النمط المصلي 5 مع ‎TT‏ وبيترافق النمط المصلي ‎F22‏ مع ‎TT‏
    ‎J A‏ أ ‎a aE Co ste |‏ ا : نتم القمة ‎an | Asia | ١‏ | تيع ‎or‏ الثتتت ‎ial‏ ‏ا ‎Ya {ana} HEE {shag‏ ‎re‏ . ‎YEYAAY‏ ‎ran} 18 Bape |‏ الح ‎Bn‏ المحتد ‎DWAR Spa‏ ; ‎xr LILA 3 ; 3‏ ‎NES, da 3‏ ‎pi ;‏ ‎i‏ § اي ‎Road‏ ‎Thee f 1‏ الداع ا لاا تي يدت اه ميم يي ب م م لام اح هدجم ا و ل ‎Shee See vba en as‏ ريا ‎Aiea Serve Taos‏ ليج ‎Rien‏ ميخ ‎SN‏ ‎CHE‏ ‏الدقائق
    شكل ؟! حا تال جرازة ‎me it SN‏ الأكتنى ‎WIE‏ المساجة ‎SNE‏ ‎Pay I hd 8 Asana ow asad pid‏ \ اا ب الدتث اتمتجدد التررفة ‎Lusty‏ | (دالترت) | ‎(step‏ 5 ‎VANE‏ ا ا ايع ‎i CH Sized 194 Pobs Vong‏ ‎Ena Sima amet 2‏ ‎A Name IN wr J 1‏ ‎DVIAP !‏ السنائجة المجة ‎{i} Gai ¥ 8 : 1‏ 1 كال« ‎x En‏ 3 3 3 واج ل ‎Pod‏ ْ ايخ ‎Foes a Aq 1‏ ‎SRI HE‏ ‎Yew pes 4 } 3‏ ‎x] , 5‏ ا بدك و ‎VARA EY‏ ‎WA‏ 5 3 الاب ‎A 8 x‏ % ا 8 ‎as % hd‏ § 3 م 0 ‎hE EY‏ 4 ا + ‎ee ¥ CE § Lae 5 Ss A‏ ‎waa 4‏ ‎Ha +‏
    ا شكل أب 1 3 ب | ‎eww |. sie‏ | لأ | ‎Ee | WP‏ ا ‎Slight : ui Had ad‏ ا ب" ‎aaa ay fs : CU A‏ ‎PERN $A Symi 3‏ حا 2 ‎BE ad‏ ‎{edly Ea‏ | (دالترق) | ‎io fay‏ لحز : ‎iy‏ لخ * الال اجيج ‎Pris J %‏ 194 نات الحجم ‎Tax Rk i‏ 3 5 1 : 1 £ المحدد. شحج ‎Tye ci 3 Tig ae‏ ‎WY sad dalled Fg‏ ساعة 3 ‎Te, 3 ii 3 :‏ ‎i } :‏ { : ‎RV ¥ XW 3 ] i‏ ‎YQ pus ] 3‏ 3 , و ‎Xie‏ ‎SARE EY J id‏ ‎renee 3‏ ب : | ‎conn‏ ‎x Sew ¥ 5 SE‏ ما 0 امي 5 ‎LN LA GEE 3 $ GAL‏ دل اي أ الاك لخ ااي ‎yo i‏ ¥ اا اك الدقائق اليا
    1 ااا ‎a <‏ > ا شك ؟ اد | ‎fs‏ د | الأقضن | ‎ad‏ خلا الصاح | ل نت ‎Ambar sn Salt? i‏ ا ام 8 م و ل ا - ‎INI‏ اموق ‎AR gokl‏ د ‎{aig de‏ ناشين { ‎oa‏ ‎re‏ - ' 0 ‎FETA‏ ًْ هج 0 ‎Ta 3X 3 Lei‏ ‎Pods Foi‏ 195 أدات الحجم : ‎i {orate SHAY smal Foi‏ ‎Yi ene od EF 1‏ ‎١ 3‏ الا ‎fa | ١ i‏ ‎i‏ م ميد« ا ا # ‎Shs‏ ‏> َ ا ‎x ones‏ ¥ ججح ‎we 7 RRR irri‏ + اي ‎Ey‏ م ‎Yess Bes Tee iY aa Sper Tae‏ جاع ‎og a Teed‏ المءاة ‎wire.‏ ‎wh‏ ‏الدقائق
    1 =. oy oa ‏مكل أب‎ A ‏الممنتنحة لتحت ليث‎ BE . Sa i Lad a FE 55 <n 1 SSA A a5 Fa AE > whet Faas Abii! CL Aad oat 4 foie | {nea [ss 40 Hho wf Ess vy asd head YEA wf x XRT ‏رلا‎ 3 PY A Me Roy Na , Le A : cet md ‏اننا‎ a ‏ادا للد‎ 3 } Eo - 3 ‏وم با‎ 8 1 ‏ابيبح‎ AGA 253 ‏عضوم‎ id \ ‏نل‎ 1 ٍ 2 3 ‏ارون م ةب‎ ay J x 3 Be] 3 3 Faux Nw - ٍ ; or ‏كيين .تيا لجيج يجيج دمب مي لاج جتنن لمكي ييمي‎ neti ‏اجا‎ ‎Row boa \ Bog NN * LE § aE 4 ‏مين أ ا ا اجا‎ 3 + Ce 4% Cex ta cu vo or x § ve ‏الدقائق‎
    الشكل ‎=v‏ ‏الا ‏خا ل ا المت § ماع م ميل + نامع 1 ‎Hoary J 1‏ ‎ND ٍِ 0 %‏ يجبت ها 04 ‎TE‏ ‎EY‏ ال ااا رجا اجاج تان ا رحن ‎Ta‏ ‎Een i‏ ما ب ب ينا جيم يضيب يدوي سج ددمي ميد جد لحت :ا ومسيسجح: ‎eI rR A 1 Ta ee‏ 5 ا 3 ‎te ! 2 + arr 3 abt & £¥ be at 1 5 a t‏ ‎Lag‏ ‏الدقائق ‎SE Lait Er ;‏ نا ‎Rasa‏ ; ام ‎Sa‏ مر | «المساة ‎Wi Tn pm‏ ٍ الا ‎ETE‏ ‎{onde Hg‏ | دفتيت) | ‎food‏ 8
    الشكل “د 3 ا ا الجاع § ‎i | oa 3 3 3‏ 4 ‎Vg Mead FX‏ ساعة ‎ed‏ أي حر ‎X i IA ™‏ ‎[RCE § 1 ¢ 3‏ ‎SE § i‏ ماي ‎i‏ ‏1 : ¥ 3 ابا 5 م وجح جم حتت ‎Rina‏ م << ل |#امعية١ة ‎gic arr Roe Balto SL ode Pied‏ ال« ‎sare‏ ‏الدقائق ‎FEM 881 : iat . ein Loy Stax 8 |‏ ل ا ا ‎nm ibe TATE a Pa i En = i Adami ST‏ ‎33a :‏ تي ‎١ {ovale} ١‏ لدع ‎a‏ ‎me‏ ‏¥ تلق ‎BRUTE es EY Y‏ عدت ‎Xan [ERE Few [AXNETVL‏ د وبحت ‎TA‏ ‎a R |‏
    2 ‏ب‎ 1 Is ® 3 § £ Ri, AON 3 i x * LE 3 § 1 4 ‏ال‎ x vi E 3 & EET { i to ; § 3 NARA ¥ x RM $x er 4 § Ne ¥ ‏اباي‎ 01 7 x ‏واج ارات‎ persone ‏بي‎ AR cranes : 1 " 8 ‏ننج‎ PAE = ‏ايج بيجي جحي‎ ‏دي‎ ¥ eR 3 vax «> ‏ا #8 الي‎ ix cr TET ay YE ‏عام خاو كج جيب‎ Ti ‏ماما‎ ‏الدقائق.‎ ‏الدقاق‎ ‎’ ‏ل‎ 3 PS Chet wy CE Ret Sadat | NE eh reed ‏بي ا‎ EE Er ‏ا‎ ‏لمتحت‎ CHO , ‏الح المساجة 5 8 ا‎ | Sees ER ‏موت‎ | En dnd ‏انجرخ اماك‎ i ‏اين | [مالحين | لفوت نل‎ SE ) ' } ' or to 01 ! ً ‏ل‎ > ١ ِ ١ '
    * ‏الشكل‎ ‏الشكل “و‎ ‏ست‎ ew } ¥ § NN 3 FT en 3 3 Yuga d Foy MY Aree 3 x ‏اوج‎ 3 3 8 3 £ Tae S i § % Fa CER 3 § by, or ‏مسي ساس سس سس إن‎ sis ge 4# ّّ ‏ع‎ $y yy 3 * A [Ea wee YY ‏تا‎ ri ‏حي ا جم 3 ف‎ Yaga 43 an 4 RI cE 7 £5 i i ‏التي ريخ المساحة‎ eins ‏اها‎ ifs | oy . ST i 7 ‏ب‎ PERISH i Sash ad 8% ‏اف الات 1 دان ال‎ 5 2 ‏“مح ال الج راج تم‎ x ww [NEAR EIN ‏عاو و‎ aie ‏احج‎ |e em] CEG LA « AAT TARE ‏تعاض ا‎ ears AeA 3
    الشكل *#ز وي ‎Ya‏ ‏ا اج و يأر ‎VEY‏ ٍْ : : الح 3 ا ‎fox 2 ER‏ ‎wv I 1‏ \ م اد 3 § بال ‎$e wo‏ 3 2 با عي با ‎Bop Xe . - oes ne I ogy:‏ الب ——————— فس ينه ‎eee‏ سات اس سيت ‎hee 1, LE‏ ارح عي ‎YEW VE‏ ليع جين ‎ween RR Trew Th‏ 3 لحن الدقائق ‎Fa tiaall AT andl de SE‏ م القمنة ‎hE at i we J Amst a‏ م ‎Sala onl‏ الخرفة (داثتون؟ | ‎{oni} fain‏ ‎vas [a‏ ايت موادي جاب ‎YE‏ لح ‎TERNS as [APETV‏
    ال ‎I<‏ الا 2 ذو ‎im ad‏ ‎Top NX i‏ & ‎i : Thad AY‏
    ".م ‎MV Sand‏ } ا ا ‎Ys AR : xX %‏ ‎inne EBS ABB BE - mmm WT‏ ]> اواك ‎CRE Koa Ries Terr Sges Yager A% ee Bes When BR Tees‏ الدقائق ‎ail conn | Ee | La‏ التي ‎Talia) KP‏ ناج ما رمحي اسيم ‎Reh‏ | 7 | الصباحة | ‎Halt SALI oe Cin |p | eas‏ : انراق : ‎fossils)‏ | لدالتون) | ‎Scaled‏ 0 ْ
    $ ie ‏الشكل‎ ‎Faas Coal ‏رودا نات الح‎ Dag : Adal ‏قار أتحجم‎ 198 Pols 8 Cael oi ‏و الا‎ ‏ثالتون)‎ ety 2:64 x Bea [ T dng § 3 ¥ RE ‏وا‎ 1 ‏لا اعلا‎ 7 8 Wain ‏ذا‎ 3 A 8 ‏بجببسججججججججبجبب مد 5 اا الي‎ oo NE a Ee. ‏دي‎ ١ Hahn 1 ‏جم‎ i AR % ‏وا تجابيخة ماج‎ t T pot Xg ‏جا 5 دا‎ 0 X ‏ب 5 5 و‎ ‏اول جد‎ ‏ا‎ an 1 in = -- i - ‏رقا‎ aes ‏البساخة‎ ME pt pea ! ‏ل‎ ae | ons oat ‏المساحة الي ان : 0 المت‎ > Sh ad ‏الإدالى د | لوت‎ | See Bi ‏ال‎ ٍ ‏ا‎ { Trg 2 { ‏التي م احور‎ + AE a Tempe
    الأ اد ىب الشكل ل ل مدا حا تتجيل ‎EE Te‏ ‎T LI Xp‏ % ‎X Bk AR‏ ا ‎Aen]‏ ‏خوات ‎oh YAR‏ اع ‎Ey SAR‏ ‎Tres temas SE «‏ ‎va : ¥03 10F; GaCDAR Jini “4‏ ‎ny we Cigale 3‏ § ‎TL : 1‏ ال كنا : ‎gw wd Te ! %‏ ¥ ب ‎at Ea‏ ‎RN + 1‏ الحو ‎NNN‏ احج احج جيب مجح ااا ااا 7 ‎a “ou X‏ « ¥ ‎PE‏ مك ْ الام # 3 ‎x LEE YE N \ i % . re‏ 3 ا . ‎A oo & Pa‏ تاج + ‎ss‏ ¥ : ب ال ‎ERX‏ ‎Saad‏
    ‎=i‏ 8 * جد ‎١‏ ا 4 جاعم ‎Ta ds‏ ‎vw a‏ ‎MY | + 1‏ ‎Mise sie ;‏ ‎Ta ioe 4‏ يي ا ممم ل ‎RE:‏ ‎bo : : en‏ 1 ا ‎Tues‏ ايم © 30 ‎Lax‏ يمك ‎Tusa Loa ea Yoh on A PT bees‏ 3 ‎١ ٍ‏ ا 1 ‎tk Re‏ الدقائق للم ‎Tw we | an | PE‏ ‎So IF ae a‏ 3 لصي الى ‎AR‏ 0 الاج ‎ide‏ ‎Lesion all | | ited‏ الات ‎Oi‏ ‎fondle aE ’‏ | (دالترن) | ‎x {oii‏ ‎on hep‏
    Axe] > ‏ال‎ ; 0: 8 Hg RN i 1 ¥ Nog Rw ik ¥ 1 ‏اياي‎ A 0 ‏ل‎ ‎LEER Few Ee ‏ا اح ري‎ vy cease wa IE ik cea HE ‏الدقائق‎ ‏يي‎ [Abad RAP Ns | ee | ‏د ا‎ smut ‏النشتت‎ ae | Te | | Radda | TT | RE ad 85 ‏تين‎ [fay | ‏|للعيقة | << تونق‎ ‏ا‎ ٍِّ ًْ ْ ’ ' 0 : | ' ’ i ‏ض‎ ًْ ' ' ١ '
    85 0 5 ‏إلى‎ ‏مزود بسثة أئصال مسطحة‎ Rushton ‏دافع تورببني سن نوع‎ 9 F Na Wo ors ‏ا‎ a a ‏اله‎ 0 ‏ا ااا ال‎ Re Solr ETR oR AS soy Re ORY LL A
    FO or ‏افنات الكطية‎ ad, Mall ‏يموي‎ daa) ‏افات الكثلية‎ ad Nall ‏الإطباقة جيستيدين و‎ ‏قة‎ OY, 235 {1,568 FF 18,194,185)
    i . ‏ليح يري‎ amt ‏لدان‎ ‎$n ga ait aad WF ‏اثتك كرسفات‎ peat Laine ‏ل الموتلوم‎ : hugh Sy phen Sip HLH AS ‏إدراحة كلوية‎ Ve ‏الجرارة:‎ Ra ‏الحرارة: 5 خرجة ملوية‎ dan Cie Td 7 <١ ‏تون‎ ALS cha 5 ‏عط‎ * > cag ‏إضاقة‎ ‎2 ‏اص ف‎ 7 ThA ‏تركيب الخليطات { ) تركيب‎ } 3 J ‏ا‎ A ‏اا متت‎ RRR Asie 5+ £73 ‏بد‎ i ‏ساعات‎ > SYA da Rw ‏ا ا‎ . ‏مؤرة ان ال؛فيقة‎ <3 nN SB fr Jal ‏تين‎ ‏الكتلة المت كبة النياتية‎
    الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎[email protected]‏
SA517390495A 2015-06-08 2017-12-10 طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ SA517390495B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN2185MU2015 2015-06-08
PCT/IB2016/053265 WO2016199003A1 (en) 2015-06-08 2016-06-03 Methods for improving the adsorption of polysaccharide-protein conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA517390495B1 true SA517390495B1 (ar) 2023-03-23

Family

ID=57503115

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517390495A SA517390495B1 (ar) 2015-06-08 2017-12-10 طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ

Country Status (18)

Country Link
US (1) US10729780B2 (ar)
EP (1) EP3302542A4 (ar)
JP (2) JP7258463B2 (ar)
KR (1) KR20240007690A (ar)
CN (1) CN107847571A (ar)
AU (1) AU2016276269B2 (ar)
BR (1) BR112017026343A2 (ar)
CA (1) CA2988366C (ar)
CO (1) CO2017012628A2 (ar)
EA (1) EA201792470A1 (ar)
IL (1) IL256118B (ar)
MX (1) MX2017015985A (ar)
MY (1) MY187461A (ar)
PE (1) PE20180460A1 (ar)
PH (1) PH12017502244A1 (ar)
SA (1) SA517390495B1 (ar)
WO (1) WO2016199003A1 (ar)
ZA (1) ZA201708325B (ar)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2692923C2 (ru) 2015-05-04 2019-06-28 Пфайзер Инк. Конъюгаты полисахарида стрептококка группы В и белка, способы получения конъюгатов, иммуногенные композиции, содержащие конъюгаты, и их применения
WO2016199003A1 (en) * 2015-06-08 2016-12-15 Serum Institute Of India Private Ltd. Methods for improving the adsorption of polysaccharide-protein conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof
CN106822884B (zh) * 2016-12-28 2021-04-30 北京民海生物科技有限公司 一种多价肺炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法
CA3048981A1 (en) 2016-12-30 2018-07-05 Sutrovax, Inc. Polypeptide-antigen conjugates with non-natural amino acids
US11951165B2 (en) 2016-12-30 2024-04-09 Vaxcyte, Inc. Conjugated vaccine carrier proteins
EP3585803A4 (en) * 2017-02-24 2020-11-11 Merck Sharp & Dohme Corp. PNEUMOCOCCIC CONJUGATE VACCINE FORMULATIONS
US10729763B2 (en) 2017-06-10 2020-08-04 Inventprise, Llc Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds
WO2019050814A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Merck Sharp & Dohme Corp. ANTI-PNEUMOCOCCAL POLYSACCHARIDES AND THEIR USE IN IMMUNOGENIC CONJUGATES POLYSACCHARIDE-PROTEIN CARRIER
JP7369123B2 (ja) 2017-12-06 2023-10-25 メルク・シャープ・アンド・ドーム・エルエルシー 肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲートを含む組成物およびその使用方法
CN108524926B (zh) * 2018-06-29 2021-06-29 康希诺生物股份公司 一种多价肺炎球菌结合疫苗的制剂组合及其应用
AU2019401535B2 (en) 2018-12-19 2023-12-14 Merck Sharp & Dohme Llc Compositions comprising Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates and methods of use thereof
JP2022535063A (ja) * 2019-06-05 2022-08-04 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 免疫原性血清型３５ｂ肺炎球菌多糖類－タンパク質コンジュゲート及びそれを作成するためのコンジュゲーションプロセス
US20210070890A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Serum Institute Of India Private Limited Method for obtaining purified bacterial polysaccharides
CN113607939A (zh) * 2021-08-05 2021-11-05 艾美探索者生命科学研发有限公司 肺炎球菌多糖结合疫苗各型结合原液吸附率测定方法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2059692C (en) * 1991-01-28 2004-11-16 Peter J. Kniskern Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine
CN102302776B (zh) * 2003-01-30 2014-06-18 诺华疫苗和诊断有限公司 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗
CA2534870C (en) * 2003-08-06 2014-05-06 Che-Hung Robert Lee Polysaccharide-protein conjugate vaccines
RU2442825C2 (ru) * 2005-04-18 2012-02-20 Новартис Вэксинес Энд Дайэгностикс Инк. Иммуногенные композиции, способы получения таких композиций и плазмида, включенная в такие композиции
MY150719A (en) * 2005-12-22 2014-02-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine
WO2007071786A2 (en) * 2005-12-23 2007-06-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Conjugate vaccines
TW200806315A (en) * 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
US9610340B2 (en) * 2007-06-26 2017-04-04 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine comprising Streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates
TW201136603A (en) 2010-02-09 2011-11-01 Merck Sharp & Amp Dohme Corp 15-valent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate vaccine composition
CA2819366A1 (en) * 2010-12-10 2012-06-14 Merck Sharp & Dohme Corp. Novel formulations which mitigate agitation-induced aggregation of immunogenic compositions
HUE040914T4 (hu) 2012-01-30 2019-05-28 Serum Institute Of India Pvt Ltd Immunogén készítmény
KR102057217B1 (ko) 2012-06-20 2020-01-22 에스케이바이오사이언스 주식회사 다가 폐렴구균 다당류-단백질 접합체 조성물
CN104661684B (zh) * 2012-08-16 2018-03-20 辉瑞公司 糖缀合方法和组合物
CN103893751B (zh) * 2014-03-26 2016-04-20 天津康希诺生物技术有限公司 一种肺炎球菌多糖蛋白缀合疫苗及其制备方法
WO2016199003A1 (en) * 2015-06-08 2016-12-15 Serum Institute Of India Private Ltd. Methods for improving the adsorption of polysaccharide-protein conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201708325B (en) 2019-05-29
NZ738090A (en) 2023-09-29
PH12017502244A1 (en) 2018-06-11
EP3302542A1 (en) 2018-04-11
EA201792470A1 (ru) 2018-10-31
MX2017015985A (es) 2018-08-15
AU2016276269A1 (en) 2018-01-18
CA2988366A1 (en) 2016-12-15
KR20180030498A (ko) 2018-03-23
BR112017026343A2 (pt) 2019-11-19
IL256118B (en) 2021-12-01
KR20240007690A (ko) 2024-01-16
EP3302542A4 (en) 2019-04-10
JP2018516962A (ja) 2018-06-28
US20180161445A1 (en) 2018-06-14
US10729780B2 (en) 2020-08-04
CN107847571A (zh) 2018-03-27
WO2016199003A1 (en) 2016-12-15
CA2988366C (en) 2021-12-07
PE20180460A1 (es) 2018-03-06
JP2021185152A (ja) 2021-12-09
CO2017012628A2 (es) 2018-03-28
IL256118A (en) 2018-02-28
JP7258463B2 (ja) 2023-04-17
MY187461A (en) 2021-09-23
AU2016276269B2 (en) 2021-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA517390495B1 (ar) طريقة لتحسين امتزاز مترافقات عديد السكاريد- بروتين والحصول بها على تركيبة لقاح عديد التكافؤ
EP2865392B1 (en) Polyvalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
Bulkow et al. Comparative immunogenicity of four Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines in Alaska Native infants
CN104487086B (zh) 无动物源的不含酒精的疫苗组合物及其制备方法
Ghasparian et al. Engineered Synthetic Virus‐Like Particles and Their Use in Vaccine Delivery
JP2020533442A (ja) 肺炎球菌多糖体および免疫原性多糖体−キャリアタンパク質コンジュゲートでのその使用
US20090016946A1 (en) Process for producing aluminum phosphate
UA128204C2 (uk) Імуногенна композиція з покращеною стабільністю, підвищеною імуногенністю та зниженою реактогенністю і спосіб її виготовлення
AU2015329590B2 (en) An improved process of conjugation and novel synthetic oligosaccharide- protein conjugates obtained thereof
CN110809477A (zh) 新型多价多糖-蛋白轭合物疫苗组合物及其制剂
Lee et al. Quality improvement of capsular polysaccharide in Streptococcus pneumoniae by purification process optimization
KR102083973B1 (ko) 향상된 IgG 역가를 갖는 다가면역원성 조성물 및 이의 용도
Loor Comparative immunogenicities of tobacco mosaic virus, protein subunits, and reaggregated protein subunits
JP2022532142A (ja) コンジュゲートの製造
KR20190069479A (ko) 저분자화 PRP를 사용한 Hib 컨쥬게이트 백신의 제조방법
WO2017140913A2 (en) Fusion proteins
TW201932140A (zh) 用於改善多糖—蛋白質共軛物及其獲得的多價疫苗配製劑的吸附的方法
KR102690378B1 (ko) 다당류-단백질 접합체의 흡착을 개선시키는 방법 및 그로부터 수득된 다가 백신 제제
Suker et al. Control and lot release of meningococcal group C conjugate vaccines
EP2931652B1 (en) Specific internalization of nanoparticles into protein cages
OA19863A (en) Methods for improving the adsorption of polysaccharide-Protein conjugates and multivalent vaccine formulation obtained thereof.
US12048739B2 (en) Purified capsular polysaccharides of Streptococcus pneumoniae
KR20230173114A (ko) 6종 혼합 액상 백신 조성물
KR20220126300A (ko) 스트랩토코커스 뉴모니애 다당류와 운반체 단백질의 접합체 제조 방법
CA2525615C (en) Vaccine composition comprising iron phosphate as a pharmaceutical aid to said vaccine