RU2705299C2 - Антитела против 5-бром-2'-дезоксиуридина и способы применения - Google Patents
Антитела против 5-бром-2'-дезоксиуридина и способы применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2705299C2 RU2705299C2 RU2017102216A RU2017102216A RU2705299C2 RU 2705299 C2 RU2705299 C2 RU 2705299C2 RU 2017102216 A RU2017102216 A RU 2017102216A RU 2017102216 A RU2017102216 A RU 2017102216A RU 2705299 C2 RU2705299 C2 RU 2705299C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- amino acid
- brdu
- seq
- acid sequence
- Prior art date
Links
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 title claims abstract description 86
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 44
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 52
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 51
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 51
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 191
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 68
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 58
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 57
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 57
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 claims description 43
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 9
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 77
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 69
- 229950004398 broxuridine Drugs 0.000 description 65
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 61
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 58
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 58
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 45
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 44
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 38
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 33
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 27
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 24
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 24
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 20
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 20
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 18
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 17
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 16
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 13
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 13
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 13
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 12
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 12
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 11
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 11
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 11
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 11
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 102100031726 Endoplasmic reticulum junction formation protein lunapark Human genes 0.000 description 10
- 101000941029 Homo sapiens Endoplasmic reticulum junction formation protein lunapark Proteins 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- -1 fluorophores Substances 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 9
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 9
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 9
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 9
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 8
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 8
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 7
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 6
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 6
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 6
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 description 5
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 5
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 4
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 4
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 4
- 238000002296 dynamic light scattering Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate Chemical compound C1CC(CN2C(C=CC2=O)=O)CCC1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O JJAHTWIKCUJRDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(pyridin-2-yldisulfanyl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCSSC1=CC=CC=N1 JWDFQMWEFLOOED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 1,4-benzoquinone Chemical compound O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)CC(S(O)(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC HNSDLXPSAYFUHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-1-(5-hydroxy-2,2-dimethylchromen-6-yl)propan-1-one Chemical compound OC1=C2C=CC(C)(C)OC2=CC=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VPFUWHKTPYPNGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N Hidralazin Chemical compound C1=CC=C2C(NN)=NN=CC2=C1 RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000945318 Homo sapiens Calponin-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000652736 Homo sapiens Transgelin Proteins 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102100031013 Transgelin Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 2
- 239000008228 bacteriostatic water for injection Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 2
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 2
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 2
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O JKHVDAUOODACDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O PVGATNRYUYNBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoate Chemical compound C1=CC(NC(=O)CI)=CC=C1C(=O)ON1C(=O)CCC1=O BQWBEDSJTMWJAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 4-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)phenyl]butanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCC(C=C1)=CC=C1N1C(=O)C=CC1=O PMJWDPGOWBRILU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O VLARLSIGSPVYHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)propanoylamino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)CCN1C(=O)C=CC1=O WCMOHMXWOOBVMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) 6-[[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]amino]hexanoate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCNC(=O)C(CC1)CCC1CN1C(=O)C=CC1=O IHVODYOQUSEYJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 1
- IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N (6-azaniumylidene-1,6-dimethoxyhexylidene)azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=N)CCCCC(=N)OC IEUUDEWWMRQUDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 1,5-difluoro-2,4-dinitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=C(F)C=C1F VILFTWLXLYIEMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 1-[3-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=CC(N2C(C=CC2=O)=O)=C1 DIYPCWKHSODVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[(2-iodoacetyl)amino]benzoyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonic acid Chemical compound O=C1C(S(=O)(=O)O)CC(=O)N1OC(=O)C1=CC=C(NC(=O)CI)C=C1 CULQNACJHGHAER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 10043-66-0 Chemical compound [131I][131I] PNDPGZBMCMUPRI-HVTJNCQCSA-N 0.000 description 1
- KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydrophthalazine-1,4-dione Chemical class C1=CC=C2C(=O)NNC(=O)C2=C1 KGLPWQKSKUVKMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical group C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-(4-isothiocyanatophenyl)propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C(C)CN(CC(O)=O)CC(N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 FZDFGHZZPBUTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 3-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010066676 Abrin Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000545417 Aleurites Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102100021266 Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N Ammonia-15N Chemical compound [15NH3] QGZKDVFQNNGYKY-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 108090000363 Bacterial Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101100454807 Caenorhabditis elegans lgg-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710158575 Cap-specific mRNA (nucleoside-2'-O-)-methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N Carbon-14 Chemical compound [14C] OKTJSMMVPCPJKN-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108010023736 Chondroitinases and Chondroitin Lyases Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700032819 Croton tiglium crotin II Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N Daunomycin Natural products CCC1(O)CC(OC2CC(N)C(O)C(C)O2)c3cc4C(=O)c5c(OC)cccc5C(=O)c4c(O)c3C1 WEAHRLBPCANXCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108700004714 Gelonium multiflorum GEL Proteins 0.000 description 1
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000819490 Homo sapiens Alpha-(1,6)-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000935587 Homo sapiens Flavin reductase (NADPH) Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 1
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 238000012695 Interfacial polymerization Methods 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N Iodine-123 Chemical compound [123I] ZCYVEMRRCGMTRW-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102100038609 Lactoperoxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010023244 Lactoperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- 239000004907 Macro-emulsion Substances 0.000 description 1
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241001553014 Myrsine salicina Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 102100031688 N-acetylgalactosamine-6-sulfatase Human genes 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000012570 Opti-MEM I medium Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 101100413173 Phytolacca americana PAP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000218657 Picea Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 238000012181 QIAquick gel extraction kit Methods 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000003946 Saponaria officinalis Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229940123237 Taxane Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical class O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 108010093894 Xanthine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100033220 Xanthine oxidase Human genes 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N [[(2s,4r,5r)-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)-4-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] phosphono hydrogen phosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)C[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 CHKFLBOLYREYDO-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012867 alanine scanning Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical compound NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010913 antigen-directed enzyme pro-drug therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 108010044540 auristatin Proteins 0.000 description 1
- 238000003705 background correction Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229930195731 calicheamicin Natural products 0.000 description 1
- HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N calicheamicin Chemical compound C1[C@H](OC)[C@@H](NCC)CO[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@@H]2C\3=C(NC(=O)OC)C(=O)C[C@](C/3=C/CSSSC)(O)C#C\C=C/C#C2)O[C@H](C)[C@@H](NO[C@@H]2O[C@H](C)[C@@H](SC(=O)C=3C(=C(OC)C(O[C@H]4[C@@H]([C@H](OC)[C@@H](O)[C@H](C)O4)O)=C(I)C=3C)OC)[C@@H](O)C2)[C@@H]1O HXCHCVDVKSCDHU-LULTVBGHSA-N 0.000 description 1
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005251 capillar electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000012832 cell culture technique Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000005354 coacervation Methods 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000013523 data management Methods 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 229930191339 dianthin Natural products 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 125000005442 diisocyanate group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N disuccinimidyl suberate Chemical compound O=C1CCC(=O)N1OC(=O)CCCCCCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZWIBGKZDAWNIFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N dolastatin Chemical compound CC(C)C(N(C)C)C(=O)NC(C(C)C)C(=O)N(C)C(C(C)C)C(OC)CC(=O)N1CCCC1C(OC)C(C)C(=O)NC(C=1SC=CN=1)CC1=CC=CC=C1 AMRJKAQTDDKMCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930188854 dolastatin Natural products 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000000021 endosomolytic effect Effects 0.000 description 1
- 108010028531 enomycin Proteins 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006167 equilibration buffer Substances 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960002143 fluorescein Drugs 0.000 description 1
- 150000002222 fluorine compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N halothane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Br BCQZXOMGPXTTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003132 halothane Drugs 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 1
- 108010048296 hyaluronidase PH-20 Proteins 0.000 description 1
- 229960002474 hydralazine Drugs 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229940044700 hylenex Drugs 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 description 1
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 description 1
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N indium-111 Chemical compound [111In] APFVFJFRJDLVQX-AHCXROLUSA-N 0.000 description 1
- 229940055742 indium-111 Drugs 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000138 intercalating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940057428 lactoperoxidase Drugs 0.000 description 1
- 229950005692 larotaxel Drugs 0.000 description 1
- SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N larotaxel dihydrate Chemical compound O.O.O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@@]23[C@H]1[C@@]1(CO[C@@H]1C[C@@H]2C3)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 SEFGUGYLLVNFIJ-QDRLFVHASA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011572 manganese Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 239000002088 nanocapsule Substances 0.000 description 1
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- DDBNQTLBNWVNAS-UHFFFAOYSA-N o-ethenylhydroxylamine Chemical compound NOC=C DDBNQTLBNWVNAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- BWKDAMBGCPRVPI-ZQRPHVBESA-N ortataxel Chemical compound O([C@@H]1[C@]23OC(=O)O[C@H]2[C@@H](C(=C([C@@H](OC(C)=O)C(=O)[C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]4OC[C@]4([C@H]21)OC(C)=O)C3(C)C)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)CC(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 BWKDAMBGCPRVPI-ZQRPHVBESA-N 0.000 description 1
- 229950001094 ortataxel Drugs 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 108010076042 phenomycin Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 108010054442 polyalanine Proteins 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000001608 potassium adipate Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000007420 radioactive assay Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001601 sodium adipate Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[11-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)undecanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCCCCCCN1C(=O)C=CC1=O MKNJJMHQBYVHRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)butanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCN1C(=O)C=CC1=O ULARYIUTHAWJMU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[6-(2,5-dioxopyrrol-1-yl)hexanoyloxy]-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)CCCCCN1C(=O)C=CC1=O MIDXXTLMKGZDPV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N toluene 2,6-diisocyanate Chemical compound CC1=C(N=C=O)C=CC=C1N=C=O RUELTTOHQODFPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 1
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004528 vincristine Drugs 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N vincristine Chemical compound C([N@]1C[C@@H](C[C@]2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C([C@]56[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]7(CC)C=CCN([C@H]67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)C[C@@](C1)(O)CC)CC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N vincristine Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(OC(C)=O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C=O)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 OGWKCGZFUXNPDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-OUBTZVSYSA-N water-17o Chemical compound [17OH2] XLYOFNOQVPJJNP-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
- A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
- A61K47/6879—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the immunoglobulin having two or more different antigen-binding sites, e.g. bispecific or multispecific immunoglobulin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к гуманизированному антителу 5-бром-2’-дезоксиуридина (анти-BRDU). Также раскрыты комплекс, конъюгат и фармацевтический состав для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке. Также раскрыто применение указанного антитела. Изобретение обладает способностью специфически распознавать BRDU. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 5 пр.
Description
Область изобретения
Данное изобретение относится к гуманизированным антителам против 5-бром-2'-дезоксиуридина (BRDU, от англ. - bromodeoxyuridine) и производным гуманизированных антител против BRDU, а также к способам их применения.
Уровень техники
Гаптен-связывающие антитела могут быть применены в качестве захватывающих модулей для терапевтических и диагностических применений. Например, гаптен-связанные частицы, такие как флуорофоры, хелатирующие реагенты, пептиды, нуклеиновые кислоты, белки, липиды, наночастицы и многие другие агенты, могут вступать в реакцию с гаптен-связывающими антителами и производными антител. Это позволяет эффективно обнаруживать такие "полезные нагрузки", а также собирать, накапливать в нужных местах, сшивать и использовать другие опосредованные антителами эффекты. Поскольку особенности и состав гаптенов могут влиять на состав и "поведение" гаптен-связанных частиц (включая размер, растворимость, активность, биофизические свойства, РК, биологические эффекты и многое другое), то очень желательно разработать множество различных гаптен-связывающих частиц. Таким образом, можно найти соответствие выбранного гаптена с данной полезной нагрузкой для создания оптимизированных конъюгатов гаптена. Впоследствии оптимальные гаптен-связывающие частицы можно объединить с указанными конъюгатами для создания оптимальных комплексов "антитело - гаптен - полезная нагрузка". Кроме того, желательно иметь гаптен-связывающие частицы, такие как производные антител, которые являются гуманизированными. Это делает возможным их применение со значительно меньшим риском помех при терапевтических целях, таких как иммуногенность. Антитела, которые описаны в данном документе, связывают BRDU, а также производные BRDU. Эти антитела называются в данном документе "BRDU-связывающими" или "анти-BRDU-антителами".
Краткое описание
Данное изобретение относится к анти-BRDU-антителам и производным анти-BRDU-антител, а также к способам их применения.
Одним из аспектов, описанных в данном документе, является гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-Н1 (HVR, от англ. hyper variable region - гипервариабельная область) с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 04, и (с) HVR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 05. Это антитело специфически связывается с BRDU.
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, а в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит: (1) HVR-H1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 01, (2) в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, (3) HVR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 04, (4) в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, (5) HVR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 05, и (6) в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток триптофан (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит HVR-H1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 02.
В одном из воплощений указанное антитело содержит HVR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 03.
В одном из воплощений указанное антитело содержит HVR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 12.
В одном из воплощений указанное антитело также содержит (a) HVR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 06, (b) HVR-L2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 07, и (с) HVR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 08.
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин и в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело (1) содержит в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, а в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин, и (2) содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин и в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит: (1) HVR-H1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 01, (2) в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, (3) HVR-H2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 04, (4) в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, (5) HVR-H3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 05, (6) в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток триптофан, (7) HVR-L1 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 06, (8) в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин, (9) HVR-L2 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 07, (10) в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин, и (11) HVR-L3 с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 08 (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит (а) последовательность VH (от англ. variable heavy - вариабельный домен тяжелой цепи), имеющую по меньшей мере 95% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 09, (b) последовательность VL (от англ. variable light - вариабельный домен легкой цепи), имеющую по меньшей мере 95% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 10, или (с) последовательность VH, как в (а), и последовательность VL, как в (b), где (1) в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи находится аминокислотный остаток пролин, в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи находится аминокислотный остаток фенилаланин, а в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи находится аминокислотный остаток треонин, и (2) в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи находится аминокислотный остаток лизин, и в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи находится аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит последовательность VH с SEQ ID NO 09.
В одном из воплощений указанное антитело содержит последовательность VLcSEQ ID NO 10.
Один из аспектов, описанных в данном документе, представляет собой антитело, содержащее последовательность VH с SEQ ID NO 09 и последовательность VL с SEQ ID NO 10.
В одном из воплощений указанное антитело представляет собой полноразмерное антитело lgG1 или полноразмерное антитело lgG4.
В одном из воплощений указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
В одном из воплощений указанное антитело представляет собой фрагмент антитела, который связывает BRDU.
Один из аспектов, описанных в данном документе, представляет собой гуманизированный вариант мышиного антитела, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи, полученный из аминокислотной последовательности SEQ ID NO 11, и вариабельный домен легкой цепи, полученный из аминокислотной последовательности SEQ ID NO 12, который специфически связывается с BRDU.
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело имеет в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, а в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин и в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
В одном из воплощений указанное антитело (1) содержит в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин, в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин, а в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин, и (2) содержит в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лизин и в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация в соответствии с Kabat).
Один из аспектов, описанных в данном документе, представляет собой фармацевтический состав, содержащий антитело, описанное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
Один из аспектов, описанных в данном документе, представляет собой антитело, описанное в данном документе, для применения в качестве лекарственного средства.
Один из аспектов, описанных в данном документе, представляет собой применение антитела, описанного в данном документе, в изготовлении лекарственного средства.
Описание графических материалов
Фиг. 1: А: Анализ эксклюзионная хроматография с детектированием рассеивания лазерного излучения с кратными углами (SEC-MALLS, от англ. - Size-Exclusion Chromatography Combined with Multiangle Laser Light Scattering) проводили с целью выявления и характеризации комплексов биспецифических анти-TfR/BRDU-антител с BRDU-меченной ДНК, а также свободного биспецифического антитела и свободной BRDU-ДНК. Комплексы элюировались с колонки с молекулярной массой (ММ), равной 244,9 кДа, свободное биспецифическое антитело обнаруживалось с ММ, равной 215,4 кДа, а свободная BRDU-ДНК обнаруживалась с ММ, равной 16,4 кДа.
В: Анализ SEC-MALLS проводили с целью выявления и характеризации комплексов биспецифических анти-TfR/BRDU-антител с BRDU-меченной ДНК, а также свободного биспецифического антитела и свободной BRDU-ДНК. Комплексы демонстрировали гидродинамический радиус 6,8 нм, тогда как свободное биспецифическое антитело демонстрировало гидродинамический радиус 6,2 нм.
Подробное описание воплощений данного изобретения
I. Определения
Используемые в данном документе аминокислотные позиции во всех константных областях и доменах тяжелой и легкой цепей пронумерованы в соответствии с системой нумерации Kabat, описанной в Kabat, et al., Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), и упоминаемой в данном документе как "нумерация согласно Kabat". В частности, система нумерации Kabat (см. страницы 647-660) в Kabat, et al., Sequences of Protein of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), используется для константного домена легкой цепи CL изотипа каппа и лямбда, и система нумерации EU-индекса Kabat (см. страницы 661-723) используется для константных доменов тяжелой цепи (СН1, шарнир, СН2 и CH3).
"Акцепторная человеческая каркасная область" в рамках данного изобретения является каркасной областью, включающей аминокислотную последовательность каркасной области вариабельного домена легкой цепи (VL) или каркасной области вариабельного домена тяжелой цепи (VH), полученную из каркасной области человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной области, определенной ниже. Акцепторная человеческая каркасная область, "полученная из" каркасной области человеческого иммуноглобулина или человеческой консенсусной каркасной области, может содержать такую же аминокислотную последовательность, или она может содержать аминокислотные замены. В некоторых воплощениях число аминокислотных замен составляет 10 или менее, 9 или менее, 8 или менее, 7 или менее, 6 или менее, 5 или менее, 4 или менее, 3 или менее, или 2 или менее. В некоторых воплощениях акцепторная человеческая каркасная область VL по своей последовательности идентична последовательности каркасной области VL человеческого иммуноглобулина или последовательности человеческой консенсусной каркасной области.
Понятие "аффинность" относится к силе суммарных общих нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антитела) и его партнером по связыванию (например, антигеном). Если не указано иное, то термин "аффинность связывания", используемый в данном документе, относится к внутренней аффинности связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между элементами пары связывания (антителом и антигеном). Аффинность молекулы X в отношении ее партнера Y можно выразить, в целом, константой диссоциации (Kd). Аффинность можно измерить обычными способами, известными в данной области, включая описанные в данном документе. Конкретные иллюстративные и примерные воплощения измерения аффинности связывания описаны далее.
Понятие "антитела со зрелой аффинностью" относится к антителу с одним или более чем одним изменением в одной или более чем одной гипервариабельной области (hypervariable region, HVR) по сравнению с родительским антителом, которое не содержит таких изменений, причем такие изменения приводят к повышению аффинности антитела к антигену.
Термины "анти-BRDU-антитело" и "антитело, которое связывается с BRDU" относятся к антителу, которое способно связывать BRDU с достаточной аффинностью, так что данное антитело может быть использовано в качестве диагностического и/или терапевтического агента для нацеливания на BRDU.
Термин "антитело" в данном документе используется в самом широком его смысле и охватывает различные структуры антитела, в том числе, но не ограничиваясь ими, моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела) и фрагменты антител, до тех пор пока они проявляют нужную антигенсвязывающую активность.
Термин "фрагмент антитела" относится к молекуле, отличающейся от интактного антитела, которая содержит часть интактного антитела, которая связывается с антигеном, с которым связывается интактное антитело. Примеры фрагментов антител включают, но не ограничиваясь ими, Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; димерные антитела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител (например, scFv); и мультиспецифические антитела, сформированные из фрагментов антител.
Термин "химерное" антитело относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи получена из конкретного источника или вида, в то время как остальная часть тяжелой и/или легкой цепи получена из другого источника или вида.
Понятие "класса" антитела относится к типу константного домена или константной области, которой обладает его тяжелая цепь. Есть пять основных классов антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть далее разделены на подклассы (изотипы), например, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и μ, соответственно.
Термин "цитотоксический агент", используемый в данном документе, относится к веществу, которое ингибирует или предотвращает клеточное функционирование и/или вызывает гибель или разрушение клеток. Цитотоксические агенты включают, но не ограничиваясь ими, радиоактивные изотопы (например, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 и радиоактивные изотопы Lu); химиотерапевтические агенты или лекарственные средства (например, метотрексат, адриамицин, алкалоиды барвинка (винкристин, винбластин, этопозид), доксорубицин, мелфалан, митомицин С, хлорамбуцил, даунорубицин или другие интеркалирующие агенты); агенты-ингибиторы роста; ферменты и их фрагменты, такие как нуклеолитические ферменты; антибиотики; токсины, такие как низкомолекулярные токсины или ферментативно активные токсины бактериального, грибного, растительного или животного происхождения, включая их фрагменты и/или их варианты; и различные противоопухолевые или противораковые агенты, описанные в данном документе.
Термин "полученный из" означает, что аминокислотная последовательность получена из родительской аминокислотной последовательности путем введения изменений по меньшей мере в одной позиции. Таким образом, полученная аминокислотная последовательность отличается от соответствующей родительской аминокислотной последовательности по меньшей мере в одной соответствующей позиции (нумерация в соответствии с системой нумерации индекса EU Kabat для Fc-областей антител). В одном из воплощений аминокислотная последовательность, полученная из родительской аминокислотной последовательности, отличается от родительской аминокислотной последовательности более чем одним аминокислотным остатком в соответствующих позициях. В одном из воплощений аминокислотная последовательность, полученная из родительской аминокислотной последовательности, отличается от родительской аминокислотной последовательности более чем десятью аминокислотными остатками в соответствующих позициях. В одном из воплощений аминокислотная последовательность, полученная из родительской аминокислотной последовательности, отличается от родительской аминокислотной последовательности более чем пятнадцатью аминокислотными остатками в соответствующих позициях. Таким образом, родительская аминокислотная последовательность формирует основу для производной аминокислотной последовательности.
Понятие "эффекторных функций" относится к таким биологическим активностям, связанным с Fc-областью антитела, которые изменяются в зависимости от класса антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают: связывание C1q и комплементзависимую цитотоксичность (complement dependent cytotoxicity, CDC); Fc-рецепторное связывание; антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC); фагоцитоз; понижающую регуляцию рецепторов клеточной поверхности (например, В-клеточного рецептора); и активацию В-клеток.
Понятие "эффективного количества" агента, например, фармацевтического состава, относится к количеству, эффективному в дозах и в течение периодов времени, необходимых для достижения нужного терапевтического или профилактического результата.
Термин "Fc-область" в данном документе используется для определения С-концевой области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит по меньшей мере часть константной области. Этот термин включает Fc-области нативной последовательности и вариантные Fc-области. В одном воплощении Fc-область тяжелой цепи человеческого IgG простирается от Cys226 или от Pro230 до карбокси-конца тяжелой цепи. Тем не менее, С-концевой лизин (Lys447) Fc-области может присутствовать или отсутствовать. Если не указано иное, то нумерация аминокислотных остатков в Fc-области или константной области осуществляется в соответствии с системой нумерации EU, также называемой индексом EU, как описано в Kabat, Е.А., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242.
Понятие "каркасного участка", или "FR" (от англ. - framework), относится к остаткам вариабельного домена, отличающимся от остатков гипервариабельной области (HVR). FR вариабельного домена обычно состоит из четырех доменов FR: FR1, FR2, FR3 и FR4. Соответственно, последовательности HVR и FR обычно появляются в следующей последовательности в VH (или VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
Термины "полноразмерное антитело", "интактное антитело" и "целое антитело" используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения антитела, имеющего структуру, по существу аналогичную структуре нативного антитела, или содержащего тяжелые цепи с Fc-областью, определенной в данном документе.
Термины "клетка-хозяин", "клеточная линия-хозяин" и "клеточная культура-хозяин" используются взаимозаменяемо и относятся к клеткам, в которые была введена экзогенная нуклеиновая кислота, включая потомство таких клеток. Клетки-хозяева включают "трансформантов" и "трансформированные клетки", которые включают первичные трансформированные клетки и потомство, полученное из них, независимо от числа пассажей. Потомство может не быть полностью идентичным родительской клетке по содержанию нуклеиновых кислот, но может содержать мутации. Мутантное потомство, которое имеет такую же функцию или биологическую активность, как при скрининге или селекции первоначально трансформированной клетки, включено в данный документ.
"Человеческое антитело" является таким антителом, которое обладает аминокислотной последовательностью, которая соответствует антителу, продуцируемому человеком или человеческой клеткой или получено из нечеловеческого источника, который использует репертуар человеческих антител или других последовательностей, кодирующих человеческие антитела. Это определение человеческого антитела, в частности, исключает гуманизированное антитело, содержащее нечеловеческие антигенсвязывающие остатки.
"Человеческая консенсусная каркасная область" является каркасной областью, которая представляет наиболее часто встречающиеся аминокислотные остатки в выборе последовательностей каркасных областей VL или VH человеческого иммуноглобулина. Как правило, выбор VL- или VH-последовательностей человеческого иммуноглобулина осуществляется из подгруппы последовательностей вариабельного домена. Как правило, подгруппа последовательностей является такой подгруппой, как описано в Kabat, Е.А. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Bethesda MD (1991), NIH Publication 91-3242, Vols. 1-3. В одном воплощении для VL подгруппа является подгруппой каппа I, как описано в Kabat et al., см. выше. В одном воплощении для VH подгруппа является подгруппой III, как описано в Kabat et al., см. выше.
"Гуманизированное" антитело относится к химерному антителу, содержащему аминокислотные остатки из нечеловеческих HVR и аминокислотные остатки из человеческих FR. В некоторых воплощениях гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного, а обычно двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все HVR (например, CDR, от англ. complementary determining region - участки, определяющие комплементарность) соответствуют таковым в нечеловеческом антителе, и все или по существу все FR соответствуют таковым в человеческом антителе. Гуманизированное антитело, возможно, может содержать по меньшей мере часть константной области антитела, полученной из человеческого антитела. "Гуманизированная форма" антитела, например, нечеловеческого антитела, относится к антителу, которое подверглось гуманизации.
Термин "гипервариабельная область", или "HVR", используемый в данном документе, относится к каждой из областей вариабельного домена антитела, которые являются гипервариабельными в последовательности и/или образуют структурно определенные петли ("гипервариабельные петли"). Как правило, нативные четырехцепочечные антитела содержат шесть HVR; три в VH (Н1, Н2, H3) и три в VL (L1, L2, L3). HVR, как правило, содержат аминокислотные остатки из гипервариабельных петель и/или из "участков, определяющих комплементарность" (CDR), причем последние имеют наивысшую изменчивость последовательности и/или участвуют в распознавании антигена. Иллюстративные гипервариабельные петли возникают на аминокислотных остатках 26-32 (L1), 50-52 (L2), 91-96 (L3), 26-32 (Н1), 53-55 (Н2) и 96-101 (H3) (Chothia, С. and Lesk, A.M., J. Mol. Biol. 196 (1987) 901-917). Иллюстративные CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3) возникают на аминокислотных остатках 24-34 в L1, 50-56 в L2, 89-97 в L3, 31-35 В в Н1, 50-65 в Н2 и 95-102 в H3 (Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication 91-3242). За исключением CDR1 в VH, CDR, как правило, содержат аминокислотные остатки, которые формируют гипервариабельные петли. CDR также содержат "остатки, определяющие специфичность", или "SDR" (от англ. specificity determining residues), которые являются остатками, контактирующими с антигеном. SDR содержатся в областях CDR, называемых сокращенно -CDR, или а-CDR. Иллюстративные a-CDR (a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 и a-CDR-H3) возникают на аминокислотных остатках 31-34 в L1, 50-55 в L2, 89-96 в L3, 31-35 В в Н1, 50-58 в Н2 и 95-102 в H3 (см. Almagro, J.С. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633). Если не указано иное, то HVR-остатки и другие остатки в вариабельном домене (например, FR-остатки) пронумерованы в данном документе в соответствии с Kabat et al., см. выше.
"Иммуноконъюгат" представляет собой антитело, конъюгированное с одной или более чем одной гетерологичной молекулой (молекулами), включая цитотоксический агент, но не ограничиваясь им.
"Индивидуум" или "субъект" является млекопитающим. Млекопитающие включают, но не ограничиваясь ими, домашних животных (например, коров, овец, кошек, собак и лошадей), приматов (например, людей и приматов, таких как обезьяны), кроликов и грызунов (например, мышей и крыс). В некоторых воплощениях индивидуум или субъект является человеком.
"Изолированное" ("выделенное") антитело является таким антителом, которое было отделено от компонентов его природной среды. В некоторых воплощениях антитело очищают до чистоты более 95% или 99%, которую определяют, например, с помощью электрофореза (например, SDS-PAGE, изоэлектрофокусировки (IEF, isoelectric focusing), капиллярного электрофореза) или хроматографии (например, ионнообменной или обращено-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)). Обзор способов оценки чистоты антител см., например, в Flatman, S. et al., J. Chromatogr. В 848 (2007) 79-87.
Понятие "изолированной" нуклеиновой кислоты относится к нуклеиновокислотной молекуле, которая была отделена от компонентов ее природной среды. Изолированная нуклеиновая кислота включает нуклеиновокислотную молекулу, содержащуюся в клетках, которые обычно содержат эту нуклеиновокислотную молекулу, но эта нуклеиновокислотная молекула находится вне хромосомы или в том месте хромосомы, которое отличается от ее природной хромосомной локализации.
"Изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая анти-BRDU-антитело" относится к одной или более чем одной нуклеиновокислотной молекуле, кодирующей тяжелую и легкую цепи антитела (или их фрагменты), включая такие нуклеиновокислотные молекулы в одном векторе или в отдельных векторах, и такие нуклеиновокислотные молекулы присутствуют в одном или более чем одном месте в клетке-хозяине.
Термин "моноклональное антитело", используемый в данном документе, относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными и/или связывают один и тот же эпитоп, за исключением возможных вариантных антител, например, содержащих природные мутации или возникающих в процессе производства препарата моноклональных антител, при этом такие варианты, как правило, присутствуют в незначительных количествах. В отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают различные антитела, направленные против различных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело в препарате моноклонального антитела направлено против одной единственной детерминанты на антигене. Таким образом, понятие "моноклональное" указывает на характер антитела, полученного по существу из гомогенной популяции антител, и не должно быть истолковано как требующее получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела, которые будут использоваться в соответствии с данным изобретением, могут быть получены с помощью различных методик, включая, но не ограничиваясь ими, гибридомную методику, методики рекомбинантной ДНК, методики фагового дисплея, а также методики, использующие трансгенных животных, содержащих все или часть локусов человеческого иммуноглобулина, при этом такие методики и другие иллюстративные методики получения моноклональных антител описаны в данном документе.
Понятие "голое антитело" относится к антителу, которое не конъюгировано с гетерологичной группировкой (например, цитотоксической группировкой) или радиоактивной меткой. Голое антитело может присутствовать в фармацевтическом составе.
Понятие "нативных антител" относится к молекулам иммуноглобулина природного происхождения с различными структурами. Например, нативные антитела IgG являются гетеротетрамерными гликопротеинами размером примерно 150000 Да, состоящими из двух идентичных легких цепей и двух идентичных тяжелых цепей, которые связаны дисульфидными мостиками. От N- к С-концу каждая тяжелая цепь имеет вариабельную область (VH), также называемую вариабельным тяжелым доменом или вариабельным доменом тяжелой цепи, а затем три константных домена (СН1, СН2 и CH3). Аналогично, от N- к С-концу каждая легкая цепь имеет вариабельную область (VL), также называемую вариабельным легким доменом или вариабельным доменом легкой цепи, с последующим константным легким доменом (CL). Легкая цепь антитела может быть отнесена к одному из двух типов, называемых каппа (κ) и лямбда (λ), на основании аминокислотной последовательности его константного домена.
Термин "вкладыш в упаковку" используется для обозначения инструкций, обычно включаемых в коммерческие упаковки терапевтических продуктов, которые содержат информацию о показаниях, применении, дозировке, введении, комбинированной терапии, противопоказаниях и/или предупреждениях, касающихся применения таких терапевтических продуктов.
"Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности" по отношению к референсной полипептидной последовательности определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны аминокислотным остаткам в референсной полипептидной последовательности после выравнивания последовательностей и введения при необходимости пробелов для достижения максимального процента идентичности последовательностей, и без учета любых консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание с целью определения процента идентичности аминокислотных последовательностей может быть достигнуто различными способами, которые известны специалистам в данной области, например, с использованием общедоступного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, в том числе любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Тем не менее, для целей данного изобретения значения % идентичности аминокислотных последовательностей получают с использованием компьютерной программы для сравнивания последовательностей ALIGN-2. Компьютерная программа для сравнивания последовательностей ALIGN-2 была разработана Genentech, Inc, и исходный код был подан с пользовательской документацией в бюро авторских прав США, Вашингтон, округ Колумбия, 20559, где он был зарегистрирован под номером TXU510087. Программа ALIGN-2 находится в открытом доступе от Genentech, Inc., Саут-Сан-Франциско, Калифорния, или может быть скомпилирована из исходного кода. Программа ALIGN-2 должна быть скомпилирована для применения на операционной системе UNIX, включая цифровую UNIX V4.0D. Все параметры сравнения последовательностей установлены программой ALIGN-2 и не меняются.
В ситуациях, когда для сравнивания аминокислотных последовательностей используется ALIGN-2, процент идентичности аминокислотной последовательности данной аминокислотной последовательности А с данной аминокислотной последовательностью В (альтернативно можно сказать, что данная аминокислотная последовательность А имеет или содержит определенный процент идентичности аминокислотной последовательности с данной аминокислотной последовательностью В) вычисляется следующим образом:
100 × доля X/Y,
где X обозначает число аминокислотных остатков, оцененных как идентичные совпадения с помощью программы для выравнивания последовательностей ALIGN-2 при выравнивании в этой программе А и В, и где Y обозначает общее число аминокислотных остатков в В. Следует иметь в виду, что если длина аминокислотной последовательности А не равна длине аминокислотной последовательности В, то % идентичности аминокислотной последовательности А с В не будет равен % идентичности аминокислотной последовательности В с А. Если специально не указано иное, то все значения % идентичности аминокислотной последовательности, используемые в данном описании, получены так, как описано в предыдущем абзаце, с использованием компьютерной программы ALIGN-2.
Термин "фармацевтический состав" относится к препарату, который находится в такой форме, чтобы обеспечить биологическую активность активного ингредиента, содержащегося в нем, и который не содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет осуществляться введение состава.
Понятие "фармацевтически приемлемого носителя" относится к ингредиенту фармацевтического состава, помимо активного ингредиента, который является нетоксичным для субъекта. Фармацевтически приемлемые носители включают, но не ограничиваясь ими, буфер, эксципиент, стабилизатор или консервант.
Термин "BRDU", используемый в данном документе, обозначает бромдезоксиуридин с химической формулой 5-бром-2'-дезоксиуридина. Другими сокращениями являются BrdU, BUdR, BrdUrd.
Используемый в данном документе термин "лечение" (и его грамматические варианты, такие как "лечить") относится к клиническому вмешательству в попытке изменить естественный ход заболевания у индивидуума, которого лечат, и которое может быть выполнено либо для профилактики, либо в ходе клинической патологии. Желательные эффекты лечения включают, но не ограничиваясь ими, предотвращение возникновения или рецидива заболевания, ослабление симптомов, уменьшение любого прямого или косвенного патологического последствия заболевания, предотвращение метастазирования, уменьшение скорости прогрессирования заболевания, улучшение или временное облегчение болезненного состояния, достижение ремиссии или улучшение прогноза. В некоторых воплощениях антитела согласно данному изобретению используются для задержки развития заболевания или для замедления прогрессии заболевания.
Термин "вариабельная область" или "вариабельный домен" относится к домену тяжелой или легкой цепи антитела, который участвует в связывании антитела с антигеном. Вариабельные домены тяжелой цепи и легкой цепи (VH и VL, соответственно) нативного антитела обычно имеют аналогичную структуру, при этом каждый домен содержит четыре консервативные каркасные области (FR) и три гипервариабельные области (HVR) (см., например, Kindt, T.J. et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., N.Y. (2007), page 91). Один VH- или VL-домен может быть достаточным для придания антигенсвязывающей специфичности. Кроме того, антитела, которые связывают конкретный антиген, могут быть выделены с помощью VH- или VL-домена из антитела, которое связывается с этим антигеном, для скрининга библиотеки комплементарных VL- или VH-доменов, соответственно. См., например, Portolano et al., J. Immunol. 150 (1993) 880-887; Clarkson et al., Nature 352 (1991) 624-628).
Термин "вектор", используемый в данном документе, относится к нуклеиновокислотной молекуле, способной размножать другую нуклеиновую кислоту, с которой она связана. Этот термин включает вектор как самореплицирующуюся нуклеиновокислотную структуру, а также как вектор, включенный в геном клетки-хозяина, в которую он был введен. Некоторые векторы способны направлять экспрессию нуклеиновых кислот, с которыми они функционально связаны. Такие векторы называют в данном документе "экспрессионными векторами".
Термин "гаптен" обозначает небольшую молекулу, которая может вызвать иммунный ответ только при прикреплении к большому носителю, такому как белок. Примерами гаптенов являются анилин, о-, м- и п-аминобензойная кислота, хинон, гидралазин, галотан, флуоресцеин, биотин, BRDU, дигоксигенин, теофиллин и динитрофенол. В одном из воплощений гаптен представляет собой биотин, или дигоксигенин, или теофиллин, или карборан, или BRDU. В одном из воплощений гаптен представляет собой BRDU.
Термин "BRDU, который конъюгирован с" обозначает остаток BRDU, который ковалентно связан, непосредственно или косвенно, с другой группировкой, такой как эффекторная нуклеиновая кислота, полипептид или метка. В одном предпочтительном воплощении другая группировка представляет собой нуклеиновую кислоту.
Термин "ковалентное формирование комплекса" означает, что после формирования нековалентного комплекса, например, между анти-BRDU-антителом и BRDU, между двумя партнерами в комплексе формируется ковалентная связь. Формирование этой ковалентной связи происходит без необходимости добавления дополнительных реагентов.
II. Композиции и способы
В одном из аспектов данное изобретение основано на гуманизированных антителах, которые связываются с BRDU. Эти антитела представлены в данном документе. Антитела согласно данному изобретению могут быть использованы, например, в виде моноспецифических антител для связывания BRDU-содержащих нуклеиновых кислот и в виде мультиспецифических антител для диагностики или лечения всех видов заболеваний с использованием специфичности связывания с BRDU-содержащей нуклеиновой кислотой в качестве универсальной полезной нагрузки, характерной для антитела.
А. Иллюстративные анти-BRDU-антитела
В одном из аспектов данное изобретение относится к выделенным антителам, которые связываются с BRDU. В некоторых воплощениях анти-BRDU-антитела являются гуманизированными анти-BRDU-антителами. В некоторых воплощениях анти-BRDU-антитела, описанные в данном документе, связываются с BRDU-содержащими нуклеиновыми кислотами, не мешая биологической активности нуклеиновой кислоты. Таким образом, эти антитела могут быть использованы для улучшения фармакокинетических свойств BRDU-содержащих нуклеиновых кислот, если антитело представляет собой моноспецифическое антитело. Кроме того, эти антитела могут быть использованы для целевой доставки BRDU-содержащих нуклеиновых кислот, если антитело представляет собой би- или мультиспецифическое антитело, когда одна специфичность связывания направлена против BRDU и может быть использована в качестве универсальной специфичности полезной нагрузки, тогда как вторая специфичность связывания специфически связывается, например, с молекулой клеточной поверхности и обеспечивает нацеливающую характеристику/компонент би- или мультиспецифического антитела.
Для адресной доставки нуклеиновых кислот (т.е. полезной нагрузки в виде нуклеиновых кислот) к клеткам или в клетки, желательно ввести в нуклеиновую кислоту полезной нагрузки как можно меньше изменений.
При конъюгации нуклеиновой кислоты с полипептидами в нуклеиновую кислоту вводится значительная модификация.
В качестве альтернативы возможна конъюгация нуклеиновой кислоты с ненуклеотидным гаптеном. Модификация нуклеиновой кислоты в результате этого является меньшей по сравнению с модификацией, полученной в результате конъюгации с полипептидом. Но ненуклеотидные гаптены, такие как биотин, дигоксигенин, теофиллин, флуоресцеин, по-прежнему существенно отличаются от нуклеотидов, таких как, например, в их структуре. Таким образом, конъюгация с ненуклеотидным гаптеном все еще может привести к нетолерантным модификациям.
В настоящее время было обнаружено, что аналог тимидина, т.е. бромдезоксиуридин (BRDU), может быть использован для получения гаптена, который, с одной стороны, может распознаваться антителом, а с другой стороны, не вносит существенных изменений в нуклеиновую кислоту полезной нагрузки.
В одном из аспектов данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В одном из аспектов данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 02; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В одном из аспектов данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 03; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В одном из аспектов данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, две, три, четыре, пять или шесть HVR, выбранных среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 02; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 03; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; (d) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (е) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (f) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В одном из аспектов данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, две или три последовательности VH HVR, выбранные среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01; (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04; (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05. В одном из воплощений антитело содержит HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05. В другом воплощении антитело содержит HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05, и HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08. В другом воплощении антитело содержит HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05, HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08, и HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04. В другом воплощении антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04; и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
В другом аспекте данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL HVR, выбранные среди (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08. В одном из воплощений данное антитело содержит (a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (с) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В другом аспекте анти-BRDU-антитело согласно данному изобретению содержит (а) домен VH, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VH HVR, выбранные среди (i) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (ii) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04, и (iii) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; и (b) домен VL, содержащий по меньшей мере одну, по меньшей мере две или все три последовательности VL HVR, выбранные среди (i) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность из SEQ ID NO 06, (ii) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07, и (iii) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В другом аспекте данное изобретение относится к анти-BRDU-антителу, содержащему (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01; (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04; (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; (d) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06; (е) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07; и (f) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную среди SEQ ID NO 08.
В одном из воплощений анти-BRDU-антитело является гуманизированным.
Было установлено, что в гуманизированном анти-BRDU-антителе в определенной позиции необходимы конкретные остатки, чтобы поддерживать характеристики негуманизированного родительского антитела.
Гуманизированное анти-BRDU-антитело содержит в позиции 30 согласно Kabat в вариабельном домене тяжелой цепи аминокислотный остаток Р.
Гуманизированное анти-BRDU-антитело содержит в позиции 58 согласно Kabat в вариабельном домене тяжелой цепи аминокислотный остаток F.
Гуманизированное анти-BRDU-антитело содержит в позиции 108 согласно Kabat в вариабельном домене тяжелой цепи аминокислотный остаток Т.
В одном из воплощений гуманизированное анти-BRDU-антитело содержит HVR, как в любом из указанных выше воплощений, и также содержит человеческую акцепторную каркасную область, например, каркасную область человеческого иммуноглобулина или человеческую консенсусную каркасную область.
В одном из воплощений гуманизированное анти-BRDU-антитело содержит VH, содержащую HVR-Hs, как в любом из указанных выше воплощений, и также содержит один или более чем один из следующих остатков:
- Р в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- F в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- Т в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- К в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи, и/или
- L в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи (все позиции в соответствии с Kabat).
Позиция 30 вариабельного домена тяжелой цепи согласно Kabat соответствует остатку номер 30 в SEQ ID NO 09 и 11.
Позиция 58 вариабельного домена тяжелой цепи согласно Kabat соответствует остатку номер 59 в SEQ ID NO 09 и 11.
Позиция 108 вариабельного домена тяжелой цепи согласно Kabat соответствует остатку номер 114 в SEQ ID NO 09 и 11.
Позиция 49 вариабельного домена легкой цепи согласно Kabat соответствует остатку номер 49 в SEQ ID NO 10 и 12.
Позиция 98 вариабельного домена легкой цепи согласно Kabat соответствует остатку номер 98 в SEQ ID NO 10 и 12.
Эти изменения (обратные мутации) могут быть введены для повышения аффинности связывания гуманизированного анти-BRDU-антитела.
В другом аспекте анти-BRDU-антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH) по меньшей мере с 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичностью последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 09. В некоторых воплощениях последовательность VH, имеющая по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичность, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции по отношению к референсной последовательности, но анти-BRDU-антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с BRDU. В некоторых воплощениях в общей сложности от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO 09. В некоторых воплощениях замены, вставки или делеции имеют место в областях вне HVR (т.е. в FR). Возможно, анти-BRDU-антитело содержит последовательность VH в SEQ ID NO 09, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном воплощении VH содержит одну, две или три HVR, выбранные среди: (a) HVR-H1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01 или 02, (b) HVR-H2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 03 или 04, и (с) HVR-H3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
В другом аспекте предложено анти-BRDU-антитело, которое содержит вариабельный домен легкой цепи (VL), имеющий по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичности последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 10. В некоторых воплощениях последовательность VL, имеющая по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%), 98% или 99% идентичность, содержит замены (например, консервативные замены), вставки или делеции по отношению к референсной последовательности, но анти-BRDU-антитело, содержащее эту последовательность, сохраняет способность связываться с BRDU. В некоторых воплощениях в общей сложности от 1 до 10 аминокислот были замещены, вставлены и/или удалены в SEQ ID NO 10. В некоторых воплощениях замены, вставки или делеции возникают в областях вне HVR (т.е. в FR). Возможно, анти-BRDU-антитело содержит последовательность VL в SEQ ID NO 10, включая посттрансляционные модификации этой последовательности. В конкретном воплощении VL содержит одну, две или три HVR, выбранные среди: (a) HVR-L1, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06, (b) HVR-L2, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07, и (с) HVR-L3, содержащей аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
В другом аспекте предложено анти-BRDU-антитело, которое содержит VH как в любом из воплощений, приведенных выше, и VL как в любом из воплощений, приведенных выше. В одном из воплощений антитело содержит последовательности VH и VL в SEQ ID NO 09 и SEQ ID NO 10, соответственно, в включая посттрансляционные модификации этих последовательностей.
В другом аспекте данного изобретения анти-BRDU-антитело согласно любому из указанных выше воплощений представляет собой моноклональное антитело, в том числе химерное, гуманизированное или человеческое антитело. В одном из воплощений анти-BRDU-антитело представляет собой фрагмент антитела, например, Fv, Fab, Fab’, scFv, димерное антитело или Р(ab’)2-фрагмент. В другом воплощении данное антитело представляет собой полноразмерное антитело, например, интактное IgG1- или IgG4-антитело или антитело другого класса или изотипа, определенного в данном документе.
В другом аспекте анти-BRDU-антитело согласно любому из вышеописанных воплощений может включать любой из признаков, по отдельности или в комбинации, описанных в разделах 1-5 ниже:
1. Аффинность антитела
Kd можно измерить с помощью анализа связывания антигена, меченного радиоактивным изотопом (radiolabeled antigen binding assay, RIA), проводимого с Fab-версией антитела, представляющего интерес, и его антигеном, как описано далее. Например, аффинность связывания Fab с антигеном в растворе измеряют, уравновешивая Fab с минимальной концентрацией (125I)-меченного антигена в присутствии серии титров немеченого антигена с последующим захватом связанного антигена на планшете, покрытом анти-Fab-антителом (см., например, Chen, Y., et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881). Для создания условий анализа многолуночные планшеты MICROTITER® (Thermo Scientific) покрывают в течение ночи 5 мкг/мл захватывающего анти-Fab-антитела (Cappel Labs) в 50 мМ растворе карбоната натрия (рН 9,6), а затем блокируют 2% (вес/объем) раствором бычьего сывороточного альбумина в PBS в течение 2-5 часов при комнатной температуре (примерно 23°C). В неадсорбирующем планшете (Nunc №269620) смешивают 100 пМ или 26 пМ [125I]-антиген с серийными разведениями Fab, представляющего интерес (например, сообразно оценке анти-VEGF-антитела, Fab-12, в Presta, L.G., et al., Cancer Res. 57 (1997) 4593-4599). Затем Fab, представляющий интерес, инкубируют в течение ночи; тем не менее, инкубацию можно продолжать в течение более долгого периода (например, примерно 65 часов) для гарантии того, что равновесие достигнуто. После этого смеси переносят в планшет для захвата и инкубируют при комнатной температуре (например, в течение одного часа). Затем раствор удаляют и планшет промывают восемь раз 0,1% раствором полисорбата 20 (TWEEN-20®) в PBS. После высушивания планшетов добавляют 150 мкл/лунка сцинтиллянта (MICROSCINT-20™; Packard) и регистрируют сигнал на гамма-счетчике TOPCOUNT™ (Packard) в течение десяти минут. Выбирают концентрации каждого Fab, которые дают 20% или меньше от максимального связывания, для использования в анализах на конкурентное связывание.
Альтернативно, Kd можно измерить с помощью анализов поверхностного плазмонного резонанса с использованием BIACORE®-2000 или BIACORE®-3000 или BIACORE® Т-100 (BIAcore, Inc., Пискатавэй, Нью-Джерси). Например, антиген иммобилизируют на чипе СМ5 примерно на уровне 10 единиц ответа (RU) и определяют значение Kd при 25°C. Вкратце, биосенсорные чипы с карбоксиметилированным декстраном (СМ5, BIACORE, Inc.) активируют N-этил-N’-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлоридом (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика. Антиген разводят в 10 мМ растворе ацетата натрия, рН 4,8, до концентрации 5 мкг/мл (примерно 0,2 мкМ) и вводят со скоростью потока 5 мкл/мин до достижения примерно 10 единиц ответа (RU) связанного белка. После введения антигена вводят 1 М этаноламин для блокировки непрореагировавших групп. Для измерений кинетики двукратные серийные разведения Fab (от 0,78 нМ до 500 нМ) вводят в PBS с 0,05% поверхностно-активного вещества полисорбата 20 (TWEEN-20™) (PBST) при 25°C со скоростью потока примерно 25 мкл/мин. Скорости ассоциации (kon) и скорости диссоциации (koff) рассчитывают с помощью простой модели связывания Ленгмюра 1:1 (программное обеспечение BIACORE® Evaluation Software версии 3.2), одновременно подгоняя сенсограммы ассоциации и диссоциации. Константа равновесия диссоциации (Kd) рассчитывается как отношение kon/koff. См., например, Chen, Y. et al., J. Mol. Biol. 293 (1999) 865-881. Если on-скорость превышает 106 M-1 с-1 в анализе поверхностного плазмонного резонанса, описанном выше, то on-скорость может быть определена с помощью методики тушения флуоресценции, которая измеряет увеличение или уменьшение интенсивности флуоресцентного излучения (возбуждение составляет 295 нм; излучение составляет 340 нм; 16 нм полосовой фильтр) при 25°C с 20 нМ антителом против антигена (Fab-форма) в PBS, рН 7,2, в присутствии возрастающих концентраций антигена, измеряемых спектрометром, таким как спектрофотометр, оборудованный системой быстрого смешивания с последующей остановкой (stop-flow) (Aviv Instruments) или спектрофотометр SLM-AMINCO™ серии 8000 (ThermoSpectronic) со встряхивающейся кюветой.
2. Фрагменты антител
В некоторых воплощениях антитело, описанное в данном документе, представляет собой фрагмент антитела. Фрагменты антитела включают, но не ограничиваясь ими, Fab-, Fab’-, Fab’-SH-, F(ab’)2-, Fv- и scFv-фрагменты, а также другие фрагменты, описанные ниже. Обзор определенных фрагментов см. в Hudson P.J., et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134. Обзор scFv-фрагментов см., например, в Pleuckthun, A., In: The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore (eds.), Springer-Verlag, New York (1994), pp. 269-315; см. также WO 93/16185; и US 5571894 и US 5587458. Обсуждения Fab- и F(ab’)2-фрагментов, содержащих остатки эпитопов, связывающих рецепторы реутилизации, и имеющих повышенный период полужизни in vivo, см. в US 5869046.
Димерные антитела представляют собой фрагменты антител с двумя антигенсвязывающими сайтами, которые могут быть двухвалентными или биспецифическими. См., например, ЕР 0404097, WO 93/01161, Hudson, P.J., et al., Nat. Med. 9 (2003) 129-134, и Holliger, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448. Тримерные и тетрамерные антитела также описаны в Hudson, P.J., et al., Nat. Med. 9(2003) 129-134.
Однодоменные антитела представляют собой фрагменты антител, содержащие весь или часть вариабельного домена тяжелой цепи или весь или часть вариабельного домена легкой цепи антитела. В некоторых воплощениях однодоменное антитело представляет собой человеческое однодоменное антитело (Domantis, Inc., Уолтем, Массачусетс; US 6248516).
Фрагменты антител могут быть получены различными способами, включая, но не ограничиваясь ими, протеолитическое расщепление интактного антитела, а также продукцию рекомбинантными клетками-хозяевами (например, Е. coli или фаг), как описано в данном документе.
3. Химерные и гуманизированные антитела
В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данном документе, является химерным антителом. Некоторые химерные антитела описаны, например, в US 4816567; и в Morrison, S.L et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81 (1984) 6851-6855. В одном примере химерное антитело содержит нечеловеческую вариабельную область (например, вариабельную область, полученную от мыши, крысы, хомяка, кролика или примата, например, обезьяны) и человеческую константную область. В другом примере химерное антитело представляет собой антитело "с переключением класса", в котором класс или подкласс был изменен по сравнению с родительским антителом. Химерные антитела включают их антигенсвязывающие фрагменты.
В некоторых воплощениях химерное антитело представляет собой гуманизированное антитело. Как правило, нечеловеческое антитело гуманизируют, чтобы уменьшить иммуногенность для людей, сохраняя при этом специфичность и аффинность родительского нечеловеческого антитела. Как правило, гуманизированное антитело содержит один или более чем один вариабельный домен, в котором HVR, например, CDR (или их части) получены из последовательностей нечеловеческого антитела, a FR (или их части) получены из последовательностей человеческого антитела. Гуманизированное антитело, возможно, также будет содержать по меньшей мере часть человеческой константной области. В некоторых воплощениях некоторые FR-остатки в гуманизированном антителе замещены соответствующими остатками из нечеловеческого антитела (например, антитела, из которого получены HVR-остатки), например, для восстановления или повышения специфичности или аффинности антитела.
Гуманизированные антитела и способы их получения приведены, например, в Almagro, J.С. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633, а также описаны, например, в Riechmann, I., et al., Nature 332 (1988) 323-329; Queen, C, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86 (1989) 10029-10033; US 5821337, US 7527791, US 6982321 и US 7087409; Kashmiri, S.V., et al., Methods 36 (2005) 25-34 (описывает прививание SDR (a-CDR)); Padlan, E.A., Mol. Immunol. 28 (1991) 489-498 (описывает "перекладку"); Dall’Acqua, W.F. et al., Methods 36 (2005) 43-60 (описывает "перетасовку FR"); и Osbourn, J. et al., Methods 36 (2005) 61-68, и Klimka, A. et al., Br. J. Cancer 83 (2000) 252-260 (описывают подход "направляемой селекции" к перетасовке FR).
Человеческие каркасные области, которые могут быть использованы для гуманизации, включают, но не ограничиваясь ими: каркасные области, выбранные с помощью методики "наилучшего соответствия" (см., например, Sims, M.J., et al., J. Immunol. 151 (1993) 2296-2308); каркасные области, полученные из консенсусной последовательности человеческих антител конкретной подгруппы вариабельных областей легкой или тяжелой цепей (см., например, Carter, P., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 (1992) 4285-4289; и Presta, L.G., et al., J. Immunol. 151 (1993) 2623-2632); человеческие зрелые (соматически мутантные) каркасные области или человеческие зародышевые каркасные области (см., например, Almagro, J.С. and Fransson, J., Front. Biosci. 13 (2008) 1619-1633); и каркасные области, полученные при скрининге FR-библиотек (см., например, Baca, М. et al., J. Biol. Chem. 272 (1997) 10678-10684, и Rosok, M.J. et al., J. Biol. Chem. 271 (19969 22611-22618).
4. Мультиспецифические антитела
В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данном документе, является мультиспецифическим антителом, например, биспецифическим антителом. Мультиспецифические антитела представляют собой моноклональные антитела, которые обладают специфичностью связывания по меньшей мере с двумя различными сайтами. В некоторых воплощениях одна из специфичностей связывания является специфичностью в отношении BRDU, а другая в отношении любого другого антигена. В некоторых воплощениях биспецифические антитела также могут быть использованы для локализации цитотоксических агентов на клетках, которые экспрессируют BRDU. Биспецифические антитела могут быть получены в виде полноразмерных антител или фрагментов антител.
Методики изготовления мультиспецифических антител включают, но не ограничиваясь ими, рекомбинантную коэкспрессию двух пар тяжелых цепей и легких цепей иммуноглобулина, имеющих различные специфичности (см. Milstein, С.and Cuello, А.С., Nature 305 (1983) 537-540, WO 93/08829, и Traunecker, A. et al., EMBO J. 10 (1991) 3655-3659), и инженерию типа "ключ в замке" (см., например, US 5731168). Мультиспецифические антитела также могут быть получены за счет использования инженерных электростатических перемешивающих влияний для создания Fc-гетеродимерных молекул антитела (WO 2009/089004); поперечного сшивания двух или более антител или фрагментов (см., например, US 4676980 и Brennan, М. et al., Science 229 (1985) 81-83); использования лейциновых застежек для получения биспецифических антител (см., например, Kostelny, S.A. et al., J. Immunol. 148 (1992) 1547-1553); использования методики "димерного антитела" для получения биспецифических фрагментов антител (см., например, Holliger, P. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90 (1993) 6444-6448); и использования одноцепочечных Fv-димеров (sFv) (см., например, Gruber, М et al., J. Immunol. 152 (1994) 5368-5374); и получения триспецифических антител, как описано, например, в Tutt, A. et al., J. Immunol. 147 (1991)60-69).
Инженерные антитела с тремя или более функциональными антигенсвязывающими сайтами, в том числе "антитела-осьминоги", также включены в данный документ (см., например, US 2006/0025576).
Антитело или фрагмент в данном документе также включает "Fab двойного действия" или "DAF" (от англ. dual acting Fab), включающий антигенсвязывающий сайт, который связывается с BRDU, а также с другим, отличающимся, антигеном (см., например, US 2008/0069820).
Антитело или фрагмент в данном документе также включают мультиспецифические антитела, описанные в WO 2009/080251, WO 2009/080252, WO 2009/080253, WO 2009/080254, WO 2010/112193, WO 2010/115589, WO 2010/136172, WO 2010/145792 и WO 2010/145793.
В одном из воплощений, описанных в данном документе, мультиспецифическое антитело, описанное в данном документе, является биспецифическим двухвалентным антителом.
В одном из воплощений биспецифическое двухвалентное антитело, описанное в данном документе, характеризуется тем, что содержит
а) тяжелую цепь и легкую цепь первого полноразмерного антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и
b) модифицированную тяжелую цепь и модифицированную легкую цепь второго полноразмерного антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором константные домены CL и СН1 поменяны местами.
Эти антитела, основанные на этом биспецифическом двухвалентном формате антител, называются CrossMab.
В одном из воплощений биспецифическое двухвалентное антитело, характеризуется тем, что содержит
a) тяжелую цепь и легкую цепь первого полноразмерного антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и
b) тяжелую цепь и легкую цепь второго полноразмерного антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, где N-конец тяжелой цепи соединен с С-концом легкой цепи через пептидный линкер.
Эти антитела, основанные на этом биспецифическом двухвалентном формате антител, называются одноцепочечными Fab-фрагментами с одной ветвью (OAscFabs).
5. Варианты антител
В некоторых воплощениях рассматриваются варианты аминокислотных последовательностей антител, предложенных в данном документе. Например, может быть желательным улучшение аффинности связывания и/или других биологических свойств антитела. Варианты аминокислотной последовательности антитела могут быть получены путем введения соответствующих модификаций в нуклеотидную последовательность, кодирующую антитело, или путем пептидного синтеза. Такие модификации включают, например, делеции и/или вставки и/или замены остатков в аминокислотных последовательностях антитела. Можно использовать любую комбинацию делеций, вставок и замен, чтобы получить конечную конструкцию, при условии, что конечная конструкция обладает желаемыми характеристиками, например, связыванием антигена.
а) Варианты с заменой, вставкой и делецией
В некоторых воплощениях предложены варианты антител, имеющие одну или более чем одну аминокислотную замену. Сайты для мутагенеза путем замен, представляющие интерес, включают HVR и FR. Консервативные замены приведены в таблице 1 под заголовком "предпочтительные замены". Более существенные изменения приведены в таблице 1 под заголовком "иллюстративные замены" и дополнительно описаны ниже со ссылкой на классы аминокислот по боковой цепи. Аминокислотные замены могут быть введены в антитело, представляющее интерес, и продукты могут быть проверены на нужную активность, например, сохранившееся/улучшенное связывание антигена, сниженную иммуногенность или улучшенную ADCC или CDC.
Аминокислоты могут быть сгруппированы в соответствии с общими свойствами боковой цепи:
(1) гидрофобные: норлейцин, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) нейтральные гидрофильные: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) кислые: Asp, Glu;
(4) основные: His, Lys, Arg;
(5) остатки, которые влияют на ориентацию цепи: Gly, Pro;
(6) ароматические: Trp, Tyr, Phe.
Неконсервативные замены влекут за собой замену члена одного из этих классов на член другого класса.
Один тип варианта с заменой предполагает замену одного или более чем одного остатка гипервариабельной области родительского антитела (например, гуманизированного или человеческого антитела). Как правило, полученный вариант(ы), выбранный для дальнейшего изучения, будет иметь модификации (например, улучшения) определенных биологических свойств (например, повышенную аффинность, сниженную иммуногенность) относительно родительского антитела и/или будет иметь практически сохранившиеся определенные биологические свойства родительского антитела. Иллюстративным вариантом с заменой является антитело со зрелой аффинностью, которое можно легко получить, например, с помощью методик созревания аффинности на основе фагового дисплея, таких как описанные в данном документе. Вкратце, один или более чем один остаток HVR подвергается мутированию, и вариантные антитела выставляются на фаге и проверяются на конкретную биологическую активность (например, аффинность связывания).
Изменения (например, замены) могут быть сделаны в HVR, например, для улучшения аффинности антитела. Такие изменения могут быть сделаны в "горячих точках" HVR, т.е. остатках, кодируемых кодонами, которые подвергаются мутации с высокой частотой в ходе процесса соматического созревания (см., например, Chowdhury, P.S., Methods Mol. Biol. 207 (2008) 179-196), и/или в SDR (a-CDR), при этом образующиеся вариантные VH или VL исследуются на аффинность связывания. Созревание аффинности путем конструирования и повторного выбора из вторичных библиотек было описано, например, в Hoogenboom, H.R. et al. in Methods in Molecular Biology 178 (2002) 1-37. В некоторых воплощениях созревания аффинности разнообразие вводится в вариабельные гены, выбранные для созревания, с помощью любой из разнообразных методик (например, ПЦР с внесением ошибок, перестановка цепей или олигонуклеотид-направленный мутагенез). Затем создается вторичная библиотека. Затем эту библиотеку скринируют для выявления любых вариантов антител с нужной аффинностью. Другой способ внесения разнообразия включает HVR-направленные подходы, в которых рандомизируют несколько остатков HVR (например, 4-6 остатков за один раз). HVR-остатки, участвующие в связывании антигена, могут быть специфически выявлены, например, с помощью сканирующего аланином мутагенеза или моделирования. CDR-H3 и CDR-L3, в частности, часто становятся мишенями.
В некоторых воплощениях в одном или более чем одном HVR могут возникать замены, вставки или делеции до тех пор, пока такие изменения не вызывают существенного снижения способности антитела связывать антиген. Например, в HVR могут быть сделаны консервативные изменения (например, консервативные замены, предложенные в данном документе), которые существенно не снижают аффинность связывания. Такие изменения могут находиться вне "горячих точек" в HVR или SDR. В некоторых воплощениях вариантных VH- и VL-последовательностей, предложенных выше, каждый HVR либо не меняется, либо содержит не более чем одну, две или три аминокислотные замены.
Способ, который может быть использован для выявления остатков или областей антитела, которые могут стать мишенями мутагенеза, называется "сканирующим аланином мутагенезом", который описан в Cunningham, B.C. and Wells, J.A., Science 244 (1989) 1081-1085. В этом способе остаток или группу остатков-мишеней (например, заряженные остатки, такие как Arg, Asp, His, Lys и Glu) выявляют и заменяют нейтральной или отрицательно заряженной аминокислотой (например, аланином или полиаланином), чтобы определить, влияют ли они на взаимодействие антитела с антигеном. Другие замены могут быть введены в аминокислотных позициях, демонстрирующих функциональную чувствительность к первоначальным заменам. Альтернативно или дополнительно может быть использована кристаллическая структура комплекса "антиген - антитело" для выявления точек контакта между антителом и антигеном. Такие контактные остатки и соседние остатки могут стать мишенями или могут быть устранены в качестве кандидатов на замену. Варианты можно подвергнуть скринингу, чтобы определить, содержат ли они нужные свойства.
Вставки в аминокислотную последовательность включают амино- и/или карбокси-концевые слияния длиной от одного остатка до полипептидов, содержащих сто или более остатков, а также вставки одного или множества аминокислотных остатков внутрь последовательности. Примеры концевых вставок включают антитела с N-концевым остатком метионина. Другие варианты молекул антитела со вставками включают слияние N- или С-конца антитела с ферментом (например, ADEPT) или полипептидом, который увеличивает время полужизни антитела в сыворотке.
Одним из предпочтительных вариантов является вариант с одним цистеином, в котором аминокислотный остаток в позиции 53 согласно Kabat в вариабельном домене тяжелой цепи представляет собой цистеин.
b) Варианты гликозилирования
В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данном документе, изменено для увеличения или уменьшения степени, в которой антитело гликозилировано. Добавление к антителу или удаление сайтов гликозилирования может быть удобно проведено путем изменения аминокислотной последовательности, так что создается или удаляется один или более чем один сайт гликозилирования.
Если антитело содержит Fc-область, то углевод, прикрепленный к ней, может быть изменен. Нативные антитела, продуцируемые клетками млекопитающих, обычно содержат разветвленный двухантенный олигосахарид, который, как правило, прикреплен с помощью N-связи к Asn297 СН2-домена Fc-области. См., например, Wright, A. and Morrison, S.L., TIBTECH 15 (1997) 26-32. Олигосахарид может включать различные углеводы, например, маннозу, N-ацетилглюкозамин (GlcNAc), галактозу и сиаловую кислоту, а также фукозу, прикрепленную к GlcNAc в "стволе" двухантенной олигосахаридной структуры. В некоторых воплощениях модификации олигосахаридов в антителе изобретения могут быть сделаны для того, чтобы получить варианты антитела с определенными улучшенными свойствами.
В одном воплощении предложены варианты антитела, имеющее углеводную структуру, в которой отсутствует фукоза, прикрепленная (прямо или косвенно) к Fc-области. Например, количество фукозы в таком антителе может составлять от 1% до 80%, от 1% до 65%, от 5% до 65% или от 20% до 40%. Количество фукозы определяется путем вычисления среднего количества фукозы в сахарной цепи на Asn297 по отношению к сумме всех гликоструктур, прикрепленных к Asn 297 (например, сложных, гибридных и высокоманнозных структур), измеренного путем MALDI-TOF-масс-спектрометрии, как описано, например, в WO 2008/077546. Asn297 относится к остатку аспарагина, расположенному примерно в позиции 297 в Fc-области (EU-нумерация остатков Fc-области); тем не менее, Asn297 также может быть расположен в позиции примерно ±3 аминокислоты до или после позиции 297, т.е. между позициями 294 и 300, в связи с минорными изменениями последовательности в антителах. Такие варианты фукозилирования могут иметь улучшенные ADCC-функции. См., например, US 2003/0157108; US 2004/0093621. Примеры публикаций, связанных с "дефукозилированными" или "фукозодефицитными" вариантами антител, включают: US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO 2005/053742; WO 2005/031140; Okazaki, A. et al., J. Mol. Biol. 336 (2004) 1239-1249; Yamane-Ohnuki, N. et al., Biotech. Bioeng. 87 (2004) 614-622. Примеры клеточных линий, способных продуцировать дефукозилированные антитела, включают СНО-клетки Lec13, дефицитные по фукозилированию белка (Ripka, J. et al., Arch. Biochem. Biophys. 249 (1986) 533-545; US 2003/0157108; и WO 2004/056312, особенно пример 11), и нокаутные клеточные линии, такие как СНО-клетки с нокаутом гена альфа-1,6-фукозилтрансферазы, FUT8 (см., например, Yamane-Ohnuki, N. et al., Biotech. Bioeng. 87 (2004) 614-622; Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng. 94 (2006) 680-688; и WO 2003/085107).
Также предложены варианты антител с олигосахаридами с симметричным разветвлением, например, в которых двухантенный олигосахарид, присоединенный к Fc-области антитела, разделен пополам посредством GlcNAc. Такие варианты антител могут обладать уменьшенным фукозилированием и/или улучшенной ADCC-функцией. Примеры таких вариантов антител описаны, например, в WO 2003/011878; US 6602684 и US 2005/0123546. Также предусмотрены варианты антител по меньшей мере с одним остатком галактозы в олигосахариде, прикрепленном к Fc-области. Такие варианты антител могут обладать улучшенной CDC-функцией. Такие варианты антител описаны, например, в WO 1997/30087, WO 1998/58964 и WO 1999/22764.
с) варианты Fc-области
В некоторых воплощениях в Fc-область антитела, предложенного в данном документе, может быть введена одна или более чем одна аминокислотная модификация, образующая тем самым вариант Fc-области. Вариант Fc-области может содержать последовательность человеческой Fc-области (например, Fc-области человеческого IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), содержащую аминокислотную модификацию (например, замену) в одной или более чем одной аминокислотной позиции.
В некоторых воплощениях данное изобретение предусматривает вариант антитела, который обладает некоторыми, но не всеми эффекторными функциями, которые делают его желательным кандидатом для применений, в которых время полужизни антитела in vivo является важным, а еще некоторые эффекторные функции (такие как комплемент и ADCC) являются не необходимыми или вредными. Можно провести анализ цитотоксичности in vitro и/или in vivo, чтобы подтвердить уменьшение/истощение CDC- и/или ADCC-активности. Например, можно провести анализы Fc-рецепторного (FcR) связывания для того, чтобы убедиться, что антитело не связывается с FcγR (и, следовательно, скорее всего не обладает ADCC-активностью), но сохраняет FcRn-связывающую способность. Первичные клетки для опосредования ADCC, NK-клетки, экспрессируют только FcγRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcγRI, FcγRII и FcγRIII. Экспрессия FcR на гемопоэтических клетках суммирована в таблице 3 на странице 464 в Ravetch, J.V. and Kinet, J.P., Annu. Rev. Immunol. 9 (1991) 457-492. Неограничивающие примеры анализов in vitro для оценки ADCC-активности молекулы, представляющей интерес, описаны в US 5500362 (см., например, Hellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83 (1986) 7059-7063; и Hellstrom, I. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 (1985) 1499-1502); US 5821337 (см. Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166 (1987) 1351-1361). Альтернативно, могут быть использованы нерадиоактивные способы анализа (см., например, нерадиоактивный анализ цитотоксичности ACTI™ для проточной цитометрии (CellTechnology Inc., Маунтин-Вью, Калифорния; и нерадиоактивный анализ цитотоксичности CytoTox96® (Promega, Мэдисон, Висконсин). Используемые эффекторные клетки для таких анализов включают мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) и натуральные киллеры (NK-клетки). Альтернативно или дополнительно ADCC-активность молекулы, представляющей интерес, может быть оценена in vivo, например, на животной модели, такой как описана в Clynes, R. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95 (1998) 652-656. Также можно выполнить анализы Clq-связывания, чтобы подтвердить, что антитело не может связываться с C1q и, следовательно, не обладает CDC-активностью. См., например, C1q- и С3с-связывающий анализ ELISA в WO 2006/029879 и WO 2005/100402. Для оценки активации комплемента может быть выполнен анализ CDC (см., например, Gazzano-Santoro, Н. et al., J. Immunol. Methods 202 (1996) 163-171; Cragg, M.S. et al., Blood 101 (2003) 1045-1052; и Cragg, M.S. and M.J. Glennie, Blood 103 (2004) 2738-2743). Определение FcRn-связывания и периода выведения/полужизни in vivo также можно проводить с использованием способов, известных в данной области (см., например, Petkova, S.B. et al., Int. Immunol. 18 (2006) 1759-1769).
Антитела со сниженной эффекторной функцией включают таковые с заменой одного или более чем одного из остатков Fc-области 238, 265, 269, 270, 297, 327 и 329 (US 6737056). Такие Fc-мутанты включают Fc-мутанты с заменами в двух или более чем двух из аминокислотных позиций 265, 269, 270, 297 и 327, включая так называемый "DANA”-мутант Fc-области с заменами остатков 265 и 297 на аланин (US 7332581).
Описаны некоторые варианты антител с улучшенным или уменьшенным связыванием с FcR (см., например, US 6737056; WO 2004/056312, и Shields, R.L. et al., J. Biol. Chem. 276 (2001) 6591-6604).
В некоторых воплощениях вариант антитела содержит Fc-область с одной или более чем одной аминокислотной заменой, которая улучшает ADCC, например, с заменами в позициях 298, 333 и/или 334 в Fc-области (EU-нумерация остатков).
В некоторых воплощениях в Fc-области сделаны изменения, которые приводят к измененному (т.е. повышенному или пониженному) Clq-связыванию и/или комплемент-зависимой цитотоксичности (CDC), например, как описано в US 6194551, WO 99/51642 и Idusogie, Е.Е. et al., J. Immunol. 164 (2000) 4178-4184.
Антитела с удлиненным периодом полужизни и повышенным связыванием с неонатальным Fc-рецептором (FcRn), который отвечает за перенос материнских IgG к плоду (Guyer, R.L. et al., J. Immunol. 117 (1976) 587-593, и Kim, J.K. et al., J. Immunol. 24 (1994) 2429-2434), описаны в US 2005/0014934. Эти антитела содержат Fc-область с одной или более чем одной заменой в ней, что улучшает связывание Fc-области с FcRn. Такие варианты Fc-области включают варианты с заменами в одном или более чем одном из остатков Fc-области: 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 или 434, например, с заменой в Fc-области остатка 434 (US 7371826).
См. также Duncan, A.R. and Winter, G., Nature 322 (1988) 738-740; US 5648260; US 5624821 и WO 94/29351, касающиеся других примеров вариантов Fc-области.
d) Цистеин-инженерные варианты антител
В некоторых воплощениях может быть желательным создание цистеин-инженерных антител, например, "тиоМКА" ("thioMAb"), в которых один или более чем один остаток антитела замещен на остаток цистеина. В конкретных воплощениях замещенные остатки находятся в доступных сайтах антитела. При замещении этих остатков цистеином реактивные тиольные группы, таким образом, располагаются в доступных участках антитела и могут быть использованы для конъюгирования антитела с другими группировками, такими как лекарственные группировки или линкер-лекарственные группировки, для образования иммуноконъюгата, описанного далее. В некоторых воплощениях один или более чем один из следующих остатков может быть замещен цистеином: V205 (нумерация Kabat) легкой цепи; А118 (EU-нумерация) тяжелой цепи; и S400 (EU-нумерация) Fc-области тяжелой цепи. Цистеин-инженерные антитела могут быть получены, как описано, например, в US 7521541.
е) Производные антител
В некоторых воплощениях антитело, предложенное в данном документе, может быть дополнительно модифицировано так, чтобы содержать дополнительные небелковые группировки, которые известны в данной области и легко доступны. Группировки, пригодные для получения производных антител, включают, но не ограничиваясь ими, водорастворимые полимеры. Неограничивающие примеры водорастворимых полимеров включают, но не ограничиваясь ими, полиэтиленгликоль (PEG), сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6-триоксан, сополимеры этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (гомополимеры или рандомные сополимеры), и декстран или поли(н-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропропиленгликоля, сополимеры оксида полипропиленгликоля/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы (например, глицерин), поливиниловый спирт и их смеси. Полиэтиленгликоля пропиональдегид может давать преимущества в производстве благодаря его стабильности в воде. Полимер может иметь любую молекулярную массу и может быть разветвленным или неразветвленным. Число полимеров, присоединенных к антителу, может варьировать, и если присоединено больше одного полимера, то они могут быть одинаковыми или различными молекулами. Как правило, число и/или тип полимеров, используемых для получения производных, можно определить на основании соображений, включая, но не ограничиваясь ими, конкретные свойства или функции антитела, которые будут улучшены, будет ли использоваться производное антитела в терапии в определенных условиях и т.д.
В другом воплощении предложены конъюгаты антитела и небелковой группировки, которая может селективно нагреваться при воздействии излучения. В одном воплощении небелковая группировка представляет собой углеродную нанотрубку (Kam, N.W. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102 (2005) 11600-11605). Излучение может иметь любую длину волны, включая, но не ограничиваясь ими, такие длины волн, которые не повреждают обычные клетки, но нагревают небелковую группировку до температуры, при которой клетки, ближайшие к небелковой группировке антитела, погибают.
f) Гетеродимеризация
Для создания мультиспецифических антител может быть необходимым усиление формирования гетеродимерного спаривания тяжелых цепей. Существует несколько подходов к СН3-модификации, обеспечивающих гетеродимеризацию, которые хорошо описаны, например, в WO 96/27011, WO 98/050431, ЕР 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012058768, WO 2013157954, WO 2013096291. Как правило, во всех таких подходах СН3-домен первой тяжелой цепи и СН3-домены второй тяжелой цепи разработаны на основе комплементарности, так что каждый СН3-домен (или тяжелая цепь, содержащая его) не может больше гомодимеризоваться сам с собой, но вынужден гетеродимеризоваться с комплементарно разработанным другим СН3-доменом (так что первый и второй СН3-домен (и с ними первая и вторая тяжелые цепи) гетеродимеризуются, и между двумя первыми или двумя вторыми СН3-доменами гомодимеры не формируются).
Эти различные подходы к улучшению гетеродимеризации тяжелой цепи рассматриваются как различные альтернативы в сочетании с модификациями тяжелой и/или легкой цепи (обмен/замена VH и VL в одной связывающей ветви и введение замен заряженных аминокислот с противоположными зарядами в контактную поверхность CH1/CL) в мультиспецифических антителах согласно изобретению, которые снижают число побочных продуктов типа Бенс-Джонса с ошибочным спариванием легкой цепи.
В одном предпочтительном воплощении данного изобретения (в случае, когда мультиспецифическое антитело содержит СН3-домены в тяжелых цепях) СН3-домены указанного мультиспецифического антитела согласно изобретению могут быть изменены с помощью технологии "ключ в замке", которая подробно описана на нескольких примерах, например в WO 96/027011, Ridgway J.В., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621, и Merchant, A.M., et al., Nat. Biotechnol. 16 (1998) 677-681; WO 98/050431. В этом подходе поверхности взаимодействия двух СН3-доменов изменены так, чтобы увеличить гетеродимеризацию обеих тяжелых цепей, содержащих эти два СН3-домена. Каждый из двух СН3-доменов (двух тяжелых цепей) может быть "ключом", в то время как другой является "замком". Введение дисульфидного мостика также стабилизирует гетеродимеры (Merchant, А.М, et al., Nature Biotech. 16 (1998) 677-681, Atwell, S., et al. J. Mol. Biol. 270 (1997) 26-35) и повышает выход гетеродимера.
Так, в одном воплощении указанное мультиспецифическое антитело (содержит СН3-домен в каждой тяжелой цепи и) характеризуется тем, что
первый СН3-домен первой тяжелой цепи мультиспецифического антитела в и второй СН3-домен второй тяжелой цепи мультиспецифического антитела встречаются на контактной поверхности, которая содержит исходную контактную поверхность между СН3-доменами антитела;
где указанная контактная поверхность изменена таким образом, чтобы способствовать формированию мультиспецифического антитела, где изменение характеризуется тем, что
i) СН3-домен одной тяжелой цепи изменен так,
что в исходной контактной поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, которая встречается с исходной контактной поверхностью СН3-домена другой тяжелой цепи в мультиспецифическом антителе,
аминокислотный остаток заменен аминокислотным остатком, имеющим больший объем боковой цепи, тем самым формируя выступ в контактной поверхности СН3-домена одной тяжелой цепи, который может быть расположен в полости на контактной поверхности СН3-домена другой тяжелой цепи
и
ii) СН3-домен другой тяжелой цепи изменен так,
что в исходной контактной поверхности второго СН3-домена, которая встречается с исходной контактной поверхностью первого СН3-домена в мультиспецифическом антителе,
аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, имеющий меньший объем боковой цепи, тем самым формируя полость в контактной поверхности второго СН3-домена, в которой может быть расположен выступ на контактной поверхности первого СН3-домена.
Предпочтительно, указанный аминокислотный остаток, имеющий боковую цепь большего объема, выбран из группы, состоящей из аргинина (R), фенилаланина (F), тирозина (Y), триптофана (W).
Предпочтительно указанный аминокислотный остаток, имеющий боковую цепь меньшего объема, выбран из группы, состоящей из аланина (А), серина (S), треонина (Т), валина (V).
В одном из воплощений оба СН3-домена также изменены путем введения цистеина (С) в качестве аминокислоты в соответствующих позициях каждого СН3-домена, так что между двумя СН3-доменами может быть сформирован дисульфидный мостик.
В одном предпочтительном воплощении указанное мультиспецифическое антитело содержит аминокислотную мутацию T366W в первом СН3-домене "цепи-ключа" и аминокислотные мутации T366S, L368A, Y407V во втором СН3-домене "цепи-замка". Также может быть использован дополнительный межцепочечный дисульфидный мостик между СН3-доменами (Merchant, А.М, et al., Nature Biotech 16 (1998) 677-681), например, путем введения аминокислотной мутации Y349C в СН3-домен "цепи-ключа" и аминокислотной мутации Е356С или аминокислотной мутации S354C в СН3-домен "цепи-замка".
В одном предпочтительном воплощении указанное мультиспецифическое антитело (которое содержит СН3-домен в каждой тяжелой цепи) содержит аминокислотные мутации S354C, T366W в одном из двух СН3-доменов и аминокислотные мутации Y439C, T366S, L368A, Y407V в другом из двух СН3-доменов (дополнительная аминокислотная мутация S354C в одном СН3-домене и дополнительная аминокислотная мутация Y349C в другом СН3-домене для формирования межцепочечного дисульфидного мостика) (нумерация согласно Kabat).
Другие методики СН3-модификаций, обеспечивающие гетеродимеризацию, предусмотрены в качестве альтернатив и описаны, например, в WO 96/27011, WO 98/050431, ЕР 1870459, WO 2007/110205, WO 2007/147901, WO 2009/089004, WO 2010/129304, WO 2011/90754, WO 2011/143545, WO 2012058768, WO 2013157954, WO 2013096291.
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в ЕР 1870459 А1. Этот подход основан на введении замен/мутаций заряженных аминокислот с противоположным зарядом в определенных аминокислотных позициях на контактной поверхности CH3/СН3-доменов между обеими тяжелыми цепями. В одном из предпочтительных воплощений указанное мультиспецифическое антитело содержит аминокислотные мутации R409D; К370Е в СН3-домене первой тяжелой цепи (мультиспецифического антитела) и аминокислотные мутации D399K; Е357К в СН3-домене второй тяжелой цепи мультиспецифического антитела (нумерация согласно Kabat).
В другом воплощении указанное мультиспецифическое антитело содержит аминокислотную мутацию T366W в СН3-домене "цепи-ключа" и аминокислотные мутации T366S, L368A, Y407V в СН3-домене "цепи-замка" и дополнительные аминокислотные мутации R409D; К370Е в СН3-домене "цепи-ключа" и аминокислотные мутации D399K; Е357К в СН3-домене "цепи-замка".
В другом воплощении указанное мультиспецифическое антитело содержит аминокислотные мутации S354C, T366W в одном из двух СН3-доменов и аминокислотные мутации Y349C, T366S, L368A, Y407V в другом из двух СН3-доменов, или указанное мультиспецифическое антитело содержит аминокислотные мутации Y349C, T366W в одном из двух СН3-доменов и аминокислотные мутации S354C, T366S, L368A, Y407V в другом из двух СН3-доменов и дополнительные аминокислотные мутации R409D; К370Е в СН3-домене "цепи-ключа" и аминокислотные мутации D399K; Е357К в СН3-домене "цепи-замка".
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2013/157953. В одном воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотную мутацию Т366К, а второй полипептид СН3-домена содержит аминокислотную мутацию L351D. В другом воплощении первый СН3-домен также содержит аминокислотную мутацию L351K. В другом воплощении второй СН3-домен также содержит аминокислотную мутацию, выбранную среди Y349E, Y349D и L368E (предпочтительно L368E).
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO2012/058768. В одном воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотные мутации L351Y, Y407A, а второй СН3-домен содержит аминокислотные мутации Т366А, K409F. В другом воплощении второй СН3-домен содержит дополнительную аминокислотную мутацию в позиции Т411, D399, S400, F405, N390 или К392, например, выбранную среди a) T411N, T411R, T411Q, Т411К, T411D, Т411Е или T411W, b) D399R, D399W, D399Y или D399K, с) S400E, S400D, S400R или S400K, F405I, F405M, F405T, F405S, F405V или F405W, N390R, N390K или N390D, K392V, К392М, K392R, K392L, K392F или К392Е. В другом воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотные мутации L351Y, Y407A, а второй СН3-домен содержит аминокислотные мутации T366V, K409F. В другом воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотную мутацию Y407A, а второй СН3-домен содержит аминокислотные мутации Т366А, K409F. В другом воплощении второй СН3-домен также содержит аминокислотные мутации К392Е, Т411Е, D399RH S400R.
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2011/143545, например, с модификацией аминокислоты в позиции, выбранной из группы, состоящей из 368 и 409.
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2011/090762, который также использует технологию типа "ключ в замке". В одном воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотную мутацию T366W, а второй СН3-домен содержит аминокислотную мутацию Y407A. В одном воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотную мутацию T366Y, а второй СН3-домен содержит аминокислотную мутацию Y407T.
В одном из воплощений мультиспецифическое антитело относится к изотипу IgG2, и может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2010/129304.
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2009/089004. В одном воплощении первый СН3-домен содержит замену аминокислотного остатка К392 или N392 отрицательно заряженной аминокислотой (например, глутаминовой кислотой (Е) или аспарагиновой кислотой (D), предпочтительно K392D или N392D), а второй СН3-домен содержит замену аминокислотного остатка D399, Е356, D356 или Е357 положительно заряженной аминокислотой (например, лизином (К) или аргинином (R)), предпочтительно D399K, Е356К, D356K или Е357К, и более предпочтительно D399K и Е356К. В другом воплощении первый СН3-домен также содержит замену аминокислотного остатка К409 или R409 отрицательно заряженной аминокислотой (например, глутаминовой кислотой (Е) или аспарагиновой кислотой (D), предпочтительно K409D или R409D). В другом воплощении первый СН3-домен дополнительно или альтернативно содержит замену аминокислотного остатка К439 и/или К370 отрицательно заряженной аминокислотой (например, глутаминовой кислотой (Е) или аспарагиновой кислотой (D)).
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO 2007/147901. В одном воплощении первый СН3-домен содержит аминокислотные мутации К253Е, D282K и K322D, а второй СН3-домен содержит аминокислотные мутации D239K, Е240К и K292D.
В одном из воплощений может быть использован подход к гетеродимеризации, описанный в WO2007/110205.
В. Комплексы анти-BRDU-антитела и нуклеиновой кислоты
миРНК и гаптен-содержащие производные миРНК
Общие принципы проектирования и конструирования миРНК известны специалистам в данной области и не будут подробно рассматриваться в данном документе.
Важной особенностью модульного нацеленного подхода является связывание миРНК с гаптенами или гаптен-содержащей группировкой без ущерба для функциональности миРНК или взаимодействия гаптена и гаптен-связывающего домена bsAb (bispecific antibody, биспецифического антитела).
Для прямого соединения гаптена с миРНК выбора был выбран 3'-конец смысловой цепи производных двухцепочечных миРНК. Ранее было установлено, что эта позиция в миРНК толерантна к добавленным частицам (например, холестерину (25)) и не влияет на активность миРНК. В соответствии с этим было отмечено, что активность 3'-гаптен-конъюгированных производных миРНК, т.е. их способность снижать уровни мРНК-мишени, является такой же, как у немодифицированной миРНК (13). В качестве дополнительной модификации к 5'-концу смысловой цепи можно присоединить флуоресцентные соединения, такие как Су5, чтобы обеспечить визуализацию и отслеживание миРНК (например, Dig-миРНК-Су5). Гаптен, связанный с 5'-концом смысловой цепи, в нашем опыте также дает миРНК с хорошей активностью, но не превосходящей связывание с 3'-концом.
Гаптен-содержащие наночастицы
Гаптен-связанная миРНК может находиться непосредственно в комплексе с bsAb. Эти комплексы способны доставлять миРНК специфически к клеткам, которые экспрессируют соответствующий антиген-мишень на своей поверхности. Тем не менее, специфическое накопление миРНК на и во внутриклеточных везикулах (при интернализации) само по себе в большинстве случаев не приводит к специфическому нокдауну гена. Причина этого заключается в том, что немодифицированная миРНК накапливается в эндосомальных компартментах, но не выходит в цитоплазму (13). Для того чтобы обеспечить доставку в цитозоль, миРНК можно упаковать в наночастицы (1, 2, 26, 27, 3, 28, 29, 30, 5, 31, 32, 9), которые несут гаптены на своей поверхности. Эти гаптены должны быть доступны для bsAb, когда они включены в структуру (большой) наночастицы. Были описаны различные виды наночастиц для эффективной доставки миРНК, многие из которых содержат ПЭГ. Таким образом, один из способов получения гаптен-содержащих наночастиц является применение гаптен-связанных производных ПЭГ в качестве компонентов для производства наночастиц. Включение этих реагентов в составы формирует наночастицы с встроенным гаптеном (например, миРНК в Dig-LNP). В некоторых случаях наночастицы с встроенным гаптеном также можно получить путем сборки в состав гаптен-связанных миРНК в стандартные наночастицы. Удивительно, но это приводит к формированию наночастиц, которые имеют молекулы гаптена, экспонированные на их поверхности, доступным для антител образом. Таким же образом в наночастицы с встроенным гаптеном могут быть включены меченные флуоресцентными метками миРНК без потери флуоресцентного сигнала. Это может быть использовано для визуализации и отслеживания гаптен-содержащих bsAb-нацеленных наночастиц.
Двумя признанными типами наночастиц являются динамические поликонъюгаты (dynamic polyconjugates, DPC) и наночастицы на основе липидов (lipid-based nanoparticles, LNP). DPC и LNP, содержащие гаптен-конъюгированные ПЭГ-липиды, были использованы для конструирования функциональных группировок миРНК для клеточного нацеливания (13). DPC включают матрицы-реагенты, такие как полибутил и аминовиниловый эфир (PBAVE), эндосомолитический полимер, который экранирован от неспецифических клеточных взаимодействий за счет обратимой ковалентной модификации с полиэтиленгликолем (ПЭГ, PEG). Как миРНК, так и гаптен могут быть присоединены к полимеру с помощью линкеров, которые либо являются стабильными (например, для связывания гаптена), либо обеспечивают рН-зависимое высвобождение полезной нагрузки (30, 32, 33).
DPC с встроенным гаптеном могут находиться в виде комплекса с bsAb в определенном молярном соотношении (например, 1:1 или 2:1), чтобы образовать bsAb-нацеленные DPC. Загрузка bsAb-антитела миРНК, содержащей DPC, приводит к увеличению молекулярной массы и гидродинамического радиуса, которые могут быть обнаружены с помощью SEC-MALLS. Например, DPC Dig-полимер-миРНК без bsAb являются полидисперсным раствором с молекулами с ориентировочной молекулярной массой 300-720 кДа и гидродинамическим радиусом 7-10 нм. Добавление bsAb с формированием комплексов DPC гаптен-полимер-миРНК - BsAb увеличивает диапазон молекулярной массы до 500-1100 кДа и гидродинамический радиус до 9-12,5 нм (13).
LNP содержат полиэтиленгликоль (РЕС)-липиды, липофильные ацильные цепи которых заякоривают гидрофильные молекулы ПЭГ в частице. Это обеспечивает стабильность и структурную целостность частиц. Ацильные цепи ПЭГ-липидов могут быть различной длины. LNP, которые мы успешно использовали, содержали ПЭГ-липиды либо с относительно длинным якорем С18, который состоит из 18 метандиил-групп и считается незаменяемым, либо с более коротким якорем С16, который состоит из 16 метандиил-групп и является высоко заменяемым (34, 35). Гаптен-конъюгированные миРНК-содержащие LNP по отдельности или в виде комплекса с bsAb в PBS можно проанализировать с помощью динамического рассеяния света (dynamic light scattering, DLS), чтобы определить их гидродинамические радиусы и индексы полидисперсности (polydispersity index, PDI). LNP можно инкубировать вместе с bsAb при комнатной температуре (примерно 25°C; до 3 часов) и с помощью DLS определить изменения размера частиц и полидисперсности стечением времени (13, 36).
LNP-составы с встроенным гаптеном, которые были успешно нами использованы, содержали в общей сложности 1,4 моль % ПЭГ-липидов, из них 0,4 или 0,04 моль % были гаптен-связанными (Dig-модифицированными) С18 ПЭГ-липидами. Оставшиеся безгаптеновые ПЭГ-липиды содержали С16-липидные якори для обеспечения эффективного деэкранирования LNP и высокой активности переноса/трансфекции миРНК (34, 35 и 36). При использовании таких LNP была достигнута эффективность нокдауна до 90% с IC50 1,7 нМ. Более того, в отличие от результатов, полученных с другими составами миРНК (37), с этими LNP не наблюдалось никаких иммуностимулирующих влияний (13).
Цитируемые документы:
1. Akinc, A., et al. Mol. Ther. 18 (2010) 1357-1364.
2. Bhattarai, S. R., et al., Pharm. Res. 27 (2010) 2556-2568.
3. Lee, S.K., et al., Meth. Enzymol. 502 (2012) 91-122.
4. Leus, N.G., et al., Int. J. Pharm. 459 (2014) 40-50.
5. Semple, S.C., et al., Nat. Biotechnol. 28 (2010) 172-176.
6. Song, E., et al., Nat. Biotechnol. 23 (2005) 709-717.
7. Toloue, M.M. and Ford, L. P., Methods Mol. Biol. 764(2011) 123-139.
8. Yu, B„ et al., AAPS J 11 (2009) 195-203.
9. Zimmermann, T.S., et al., Nature 441 (2006) 111-114.
10. Beck, A., et al., Nat. Rev. Immunol. 10 (2010) 345-352.
11. Weidle, U.H., et al., Cancer Genomics Proteomics 10(2013) 1-18.
12. MetzS., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108(2011)8194-8199.
13. Schneider, В., et al., Mol. Ther. Nucleic Acids. 1 (2012) e46.
14. Jung, S.H., et al., Proteins 19 (1994) 35-47.
15. Reiter, Y., et al., Protein Eng. 8(1995) 1323-1331.
16. Reiter, Y., et al., Nat. Biotechnol. 14 (1996) 1239-1245.
17. Ridgway, J.В., et al., Protein Eng. 9 (1996) 617-621.
18. Molina, M.A., et al., Cancer Res. 61 (2001) 4744-4749.
19. Baselga, J., Eur. J. Cancer 37 (2001) Suppl. 4, S16-S22.
20. Kies, M.S. and Harari, P.M., Curr. Opin. Investig. Drugs 3 (2002) 1092-1100.
21. Chitnis, M.M., et al., Clin. Cancer Res. 14 (2008) 6364-6370.
22. Mansfield, E., et al., Blood 90 (1997) 2020-2026.
23. Brinkmann, U., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 (1991) 8616-8620.
24. Pastan, I., etal., Cancer Res. 51 (1991) 3781-3787.
25. Soutschek, J., et al., Nature 432 (2004) 173-178.
26. Chan, D.P., et al., Biomaterials 34 (2013) 8408-8415.
27. Jhaveri, A.M. and Torchilin, V.P., Front Pharmacol. 5 (2014) 77.
28. Malhotra, M., et al., Int. J. Nanomedicine 8 (2013) 2041-2052.
29. Miele E., et al., Int. J. Nanomedicine 7 (2012) 3637-3657.
30. Rozema, D.В., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 104 (2007) 12982-12987.
31. Tiera, M.J., etal., Curr. Gene Ther. 13(2013)358-369.
32. Wolff, J.A. and Rozema, D.В., Mol. Ther. 16 (2008) 8-15.
33. Wong, S.C., et al., Nucleic Acid Ther. 22 (2012) 380-390.
34. Akinc, A., et al., Mol. Ther. 17 (2009) 872-879.
35. Sou, K., et al., Bioconjug. Chem. 11 (2000) 372-379.
36. Tao, W., et al., Mol. Ther. 18 (2010) 1657-1666.
37. Robbins, M., et al., Oligonucleotides 19 (2009) 89-102.
38. Grate, M., et al., Methods Mol. Biol. 901 (2012) 247-263.
39. Haas, A.K., et al., Methods Mol. Biol. 901 (2012) 265-276.
40. Aigner, A., Curr. Pharm. Des. 14 (2008) 3603-3619.
41. Leucuta, S.E., Curr. Drug. Deliv. 10 (2013) 208-240.
42. Burris, T.P., et al., Mol. Endocrinol. 13 (1999) 410-417.
43. Collins, M.L, et al., Nucleic Acids Res. 25 (1997) 2979-2984.
С. Рекомбинантные способы и композиции
Антитела могут быть получены с использованием рекомбинантных способов и композиций, например, описанных в US 4816567. В одном из воплощений предложена изолированная (выделенная) нуклеиновая кислота, кодирующая анти-BRDU-антитело, описанное в данном документе. Такая нуклеиновая кислота может кодировать аминокислотную последовательность, содержащую VL, и/или аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела (например, легкую и/или тяжелую цепи антитела). В другом воплощении предложен один или более чем один вектор (например, экспрессионный вектор), содержащий такую нуклеиновую кислоту. В другом воплощении предложена клетка-хозяин, содержащая такую нуклеиновую кислоту. В одном таком воплощении клетка-хозяин содержит (например, была трансформирована им): (1) вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела, или (2) первый вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VL антитела, и второй вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, которая кодирует аминокислотную последовательность, содержащую VH антитела. В одном из воплощений клетка-хозяин является эукариотической, например, клеткой яичника китайского хомячка (СНО) или лимфоидной клеткой (например, Y0, NS0, Sp2/0). В одном из воплощений предложен способ получения анти-BRDU-антитела, который включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, описанное выше, в условиях, подходящих для экспрессии антитела, и, возможно, извлечение антитела из клетки-хозяина (или культуральной среды клетки-хозяина).
Для рекомбинантной продукции анти-BRDU-антитела нуклеиновую кислоту, кодирующую антитело, например, описанное выше, выделяют и встраивают в один или более чем один вектор для дальнейшего клонирования и/или экспрессии в клетке-хозяине. Такая нуклеиновая кислота может быть легко выделена и секвенирована с использованием обычных процедур (например, с использованием олигонуклеотидных зондов, которые способны специфически связываться с генами, кодирующими тяжелые и легкие цепи антитела).
Подходящие клетки-хозяева для клонирования или экспрессии векторов, кодирующих антитела, включают прокариотические или эукариотические клетки, описанные в данном документе. Например, антитела могут быть получены в бактериях, в частности, когда не нужны гликозилирование и Fc-эффекторные функции. Про экспрессию фрагментов антитела и полипептидов в бактериях см., например, в US 5648237, US 5789199 и US 5840523. (См. также Charlton, К.А., In: Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2003), pp. 245-254, где описывается экспрессия фрагментов антител в Е. coli). После экспрессии антитело может быть выделено из массы бактериальных клеток в растворимой фракции и может быть далее очищено.
Помимо прокариотов для векторов, кодирующих антитела, подходящими клонирующими или экспрессирующими хозяевами являются эукариотические микроорганизмы, такие как нитчатые грибы или дрожжи, включая штаммы грибов и дрожжей, у которых пути гликозилирования являются "гуманизированными", что приводит к продукции антитела с частично или полностью человеческим характером гликозилирования. См. Gerngross, T.U., Nat. Biotech. 22 (2004) 1409-1414; и Li, Н. et al., Nat. Biotech. 24 (2006) 210-215.
Подходящие клетки-хозяева для экспрессии гликозилированного антитела также получают из многоклеточных организмов (беспозвоночных и позвоночных). Примеры клеток беспозвоночных включают клетки растений и насекомых. Были идентифицированы многочисленные бакуловирусные штаммы, которые могут быть использованы в сочетании с клетками насекомых, в частности, для трансфекции клеток Spodoptera frugiperda.
В качестве хозяев также могут быть использованы культуры растительных клеток. См., например, US 5959177, US 6040498, US 6420548, US 7125978 и US 6417429 (описывающие технологию PLANTIBODIES™ для получения антител в трансгенных растениях).
В качестве хозяев также могут быть использованы клетки позвоночных животных. Например, могут быть использованы клеточные линии млекопитающих, приспособленные к росту в суспензии. Другими примерами используемых клеточных линий-хозяев от млекопитающих являются линия почки обезьяны CV1, трансформированная SV40 (COS-7); человеческая эмбриональная почечная линия (293 или клетки 293, описанные, например, в Graham, F.L. et al., J. Gen Virol. 36 (1977) 59-74); клетки почек детенышей хомяка (ВНК); мышиные клетки Сертоли (ТМ4-клетки, описанные, например, в Mather, J.P., Biol. Reprod. 23 (1980) 243-252); клетки почки обезьяны (CV1); клетки почки африканской зеленой обезьяны (VERO-76); клетки человеческой карциномы шейки матки (HELA); клетки почки собаки (MDCK); клетки печени крысы buffalo (BRL 3А); клетки легких человека (W138); клетки печени человека (Hep G2); клетки опухоли молочной железы мыши (ММТ 060562); TRI-клетки, описанные, например, в Mather, J.P. et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383 (1982) 44-68; клетки MRC 5; и клетки FS4. Другие используемые линии клеток-хозяев от млекопитающих включают клетки яичника китайского хомячка (СНО), в том числе DHFR-CHO-клетки (Urlaub, G. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77 (1980) 4216-4220); и клеточные линии миеломы, такие как Y0, NS0 и Sp2/0. Обзор некоторых линий клеток-хозяев от млекопитающих, подходящих для продукции антител, см., например, в Yazaki, P. and Wu, A.M., Methods in Molecular Biology, Vol. 248, Lo, B.K.C. (ed.), Humana Press, Totowa, NJ (2004), pp. 255-268.
D. Анализы
АНТИ-BRDU-антитела, описанные в данном документе, могут быть идентифицированы, подвергнуты скринингу или охарактеризованы на предмет их физических/химических свойств и/или биологической активности с помощью различных анализов, известных в данной области.
Анализы связывания и другие анализы
В одном из аспектов антитело согласно данному изобретению анализируют на его активность связывания с антигеном, например, с помощью известных способов, таких как ИФА (ELISA), вестерн-блот и т.п.
В другом аспекте конкурентные анализы могут быть использованы для определения антитела, которое конкурирует с антителами, предложенными в данном документе для связывания с BRDU.
В иллюстративном конкурентном анализе иммобилизованный BRDU инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, которое связывается с BRDU, и второе немеченое антитело, которое проверяют на его способность конкурировать с первым антителом за связывание BRDU. Второе антитело может присутствовать в супернатанте гибридомы. В качестве контроля иммобилизованный BRDU инкубируют в растворе, содержащем первое меченое антитело, но не содержащем второе немеченое антитело. После инкубации в условиях, разрешающих связывание первого антитела с BRDU, избыток несвязанного антитела удаляют и измеряют количество метки, связанной с иммобилизованным BRDU. Если количество метки, связанной с иммобилизованным BRDU, существенно снижено в анализируемом образце по сравнению с контрольным образцом, то это указывает на то, что второе антитело конкурирует с первым антителом за связывание BRDU. См. Harlow, Е. and Lane, D., Antibodies: A Laboratory Manual, Chapter 14, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1988).
E. Иммуноконъюгаты
Данное изобретение также предусматривает иммуноконъюгаты, содержащие анти-BRDU-антитело, описанное в данном документе, которое конъюгировано с одним или более чем одним цитотоксическим агентом, таким как химиотерапевтические агенты или лекарственные препараты, ингибирующие рост агенты, токсины (например, белковые токсины, ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения или их фрагменты) или радиоактивные изотопы.
В одном из воплощений иммуноконъюгат является конъюгатом "антитело - лекарственный препарат" (antibody-drug conjugate, ADC), в котором антитело конъюгировано с одним или более чем одним лекарственным препаратом, включая, но не ограничиваясь ими, мейтансиноид (см. US 5208020, US 5416064 и ЕР 0425235 В1); ауристатин, такой как монометилауристатиновые лекарственные группировки DE и DF (ММАЕ и MMAF) (см. US 5635483, US 5780588 и US 7498298); доластатин; калихеамицин или его производное (см. US 5712374, US 5714586, US 5739116, US 5767285, US 5770701, US 5770710, US 5773001 и US 5877296; Hinman, L.M. et al., Cancer Res. 53 (1993) 3336-3342; и Lode, H.N. et al., Cancer Res. 58 (1998) 2925-2928); антрациклины, такие как дауномицин или доксорубицин (см. Kratz, F. et al., Curr. Med. Chem. 13 (2006) 477-523; Jeffrey, S.C. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 16 (2006) 358-362; Torgov, M.Y. et al., Bioconjug. Chem. 16 (2005) 717-721; Nagy, A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97 (2000) 829-834; Dubowchik, G.M. et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12 (2002) 1529-1532; King, H.D. et al., J. Med. Chem. 45 (2002) 4336-4343; и US 6630579); метотрексат; виндезин; таксаны, такие как доцетаксел, паклитаксел, ларотаксел, тезетаксел и ортатаксел; трихотецен; и СС1065.
В другом воплощении иммуноконъюгат содержит антитело, описанное в данном документе, конъюгированное с ферментативно активным токсином или его фрагментом, включая, но не ограничиваясь ими, дифтерийную А-цепь, несвязывающиеся активные фрагменты дифтерийного токсина, цепь А экзотоксина (из Pseudomonas aeruginosa), цепь А рицина, цепь А абрина, цепь А модецина, альфа-сарцин, белки Aleurites ford/7, белки диантина, белки Phytoiacca americana (PAPI, РАРII и PAP-S), ингибитор Momordica charantia, курцин, кротин, ингибитор Saponaria officinalis, гелонин, митогеллин, рестриктоцин, феномицин, эномицин и трихотецены.
В другом воплощении иммуноконъюгат содержит антитело, описанное в данном документе, конъюгированное с радиоактивным атомом с образованием радиоактивного конъюгата. Множество радиоактивных изотопов доступно для получения радиоактивных конъюгатов. Примеры включают At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 и радиоактивные изотопы Lu. Когда радиоактивный конъюгат используется для обнаружения, он может содержать радиоактивный атом для сцинтиграфических исследований, например, TC99m или I123, или спиновую метку для визуализации путем ядерного магнитного резонанса (NMR) (также известного как магнитно-резонансная томография, MRI), такую как снова йод-123, йод-131, индий-111, фтор-19, углерод-13, азот-15, кислород-17, гадолиний, марганец или железо.
Конъюгаты антитела и цитотоксического агента могут быть получены с использованием множества бифункциональных связывающих белки агентов, таких как N-сукцинимидил-3-(2-пиридилдитио)пропионат (SPDP), сукцинимидил-4-(N-малеимидометил)циклогексан-1-карбоксилат (SMCC), иминотиолан (IT), бифункциональные производные имидоэфиров (такие как диметиладипимидат HCl), активные сложные эфиры (такие как дисукцинимидилсуберат), альдегиды (такие как глутаральдегид), бис-азидосоединения (такие как бис(параазидобензоил)гександиамин), производные бис-диазония (такие как бис-(п-диазонийбензоил)этилендиамин), диизоцианаты (такие как толуол-2,6-диизоцианат) и бис-активные соединения фтора (такие как 1,5-дифтор-2,4-динитробензол). Например, иммунотоксин рицин может быть получен, как описано в Vitetta, E.S. et al., Science 238 (1987) 1098-1104. Меченная углеродом-14 1-изотиоцианатобензил-3-метилдиэтилентриаминпентауксксная кислота (MX-DTPA) является примером хелатирующего агента для конъюгации радионуклида с антителом. См. WO 94/11026. Линкер может представлять собой "расщепляемый линкер", облегчающий высвобождение цитотоксического лекарственного агента в клетке. Например, может быть использован кислотно-лабильный линкер, чувствительный к пептидазе линкер, фотолабильный линкер, линкер, содержащий диметил или дисульфид (Chari, R.V. et al., Cancer Res. 52 (1992) 127-131; US 5208020).
Среди иммуноконъюгаты или ADC в данном документе особенно рассмтариваются, но не ограничиваясь ими, такие конъюгаты, полученные с помощью сшивающих реагентов, включая, но не ограничиваясь ими, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, МРВН, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, сульфо-EMCS, сульфо-GMBS, сульфо-KMUS, сульфо-MBS, сульфо-SIAB, сульфо-SMCC и сульфо-SMPB и SVSB (сукцинимидил-(4-винилсульфон)бензоат), которые являются коммерчески доступными (например, Pierce Biotechnology, Inc., Рокфорд, Иллинойс, США).
F. Способы и композиции для диагностики и обнаружения
Термин "обнаружение", используемый в данном документе, включает количественное или качественное обнаружение.
В одном из воплощений предложено анти-BRDU-антитело для применения в способах диагностики или обнаружения. Такой способ может быть способом in vitro или in vivo.
В некоторых воплощениях предложены меченые анти-BRDU-антитела. Метки включают, но не ограничиваясь ими, метки или группировки, которые обнаруживаются непосредственно (такие как флуоресцентные, хромофорные, электронно-плотные, хемилюминесцентные и радиоактивные метки), а также группировки, такие как ферменты или лиганды, которые обнаруживаются косвенно, например, через ферментативную реакцию или молекулярное взаимодействие. Примеры меток включают, но не ограничиваясь ими, радиоизотопы 32Р, 14С, 125I, 3Н и 131I, флуорофоры, такие как хелаты редкоземельных металлов или флуоресцеин и его производные, родамин и его производные, дансил, умбеллиферон, люциферазы, например люциферазу светлячка и бактериальную люциферазу (US 4737456), люциферин, 2,3-дигидрофталазиндионы, пероксидазу хрена (HRP), щелочную фосфатазу, β-галактозидазу, глюкоамилазу, лизоцим, оксидазы сахаридов, например, глюкозооксидазу, галактозооксидазу и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, гетероциклические оксидазы, например, уриказу и ксантиноксидазу, в сочетании с ферментом, который использует пероксид водорода для окисления предшественника метки, таким как HRP, лактопероксидаза или микропероксидаза, биотин/авидин, спиновые метки, бактериофаговые метки, стабильные свободные радикалы и т.п.
G. Фармацевтические составы
Фармацевтические составы анти-BRDU-антитела, описанного в данном документе, получают путем смешивания такого антитела, имеющего требуемую степень чистоты, с одним или более чем одним возможным фармацевтически приемлемым носителем (Osol, A. (ed.) Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, (1980)) в виде лиофилизированных составов или водных растворов. Фармацевтически приемлемые носители, как правило, являются нетоксичными для реципиентов в используемых дозах и концентрациях и включают, но не ограничиваясь ими: буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как октадецилдиметилбензиламмония хлорид; гексаметония хлорид; бензалкония хлорид; бензетониума хлорид; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен; катехол; резорцин; циклогексанол; 3-пентанол; и N-крезол); низкомолекулярные (менее чем примерно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как EDTA; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, Zn-белковые комплексы); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как полиэтиленгликоль (PEG). Иллюстративные фармацевтически приемлемые носители в данном документе также включают агенты для диспергирования лекарственного средства в интерстициальном пространстве, такие как растворимые нейтрально-активные гликопротеины гиалуронидазы (sHASEGP), например, человеческие растворимые гликопротеины гиалуронидазы РН-20, такие как rhuPH20 (HYLENEX®, Baxter International, Inc.). Некоторые типичные sHASEGP и способы их применения, в том числе rhuPH20, описаны в US 2005/0260186 и US 2006/0104968. В одном из аспектов sHASEGP комбинирован с одной или более чем одной дополнительной гликозамингликаназой, такой как хондроитиназа.
Иллюстративные лиофилизированные составы антител описаны в US 6267958. Водные составы антител включают те, которые описаны в US 6171586 и WO 2006/044908, последние составы включают гистидин-ацетатный буфер.
Состав в данном документе также может содержать более чем один активный ингредиент, что необходимо при лечении по конкретным показаниям, предпочтительно с дополняющими активностями, которые не влияют друг на друга. Такие активные ингредиенты предпочтительно присутствуют в комбинации в количествах, которые эффективны для данной цели.
Активные ингредиенты могут быть заключены в микрокапсулы, полученные, например, с помощью методик коацервации или путем межфазной полимеризации, например, в гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и полиметилметакрилатные микрокапсулы, соответственно, в коллоидных системах доставки лекарственных средств (таких как липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсиях. Такие методики раскрыты в Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed.) (1980).
Могут быть изготовлены препараты с замедленным высвобождением. Подходящие примеры препаратов с замедленным высвобождением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие антитело, при этом матрицы находятся в виде формованных изделий, например, пленок, или в виде микрокапсул.
Составы, используемые для введения in vivo, как правило, являются стерильными. Стерильность может быть легко достигнута, например, путем фильтрации через стерилизующие фильтрационные мембраны.
Н. Терапевтические способы и композиции
Любое из анти-BRDU-антител, описанных в данном документе, может быть использовано в терапевтических способах.
В одном из аспектов предусмотрено анти-BRDU-антитело для применения в качестве лекарственного средства. В некоторых воплощениях предусмотрено анти-BRDU-антитело для применения в способе лечения.
В другом аспекте данное изобретение относится к применению анти-BRDU-антитела в производстве или получении лекарственного препарата.
В другом аспекте данное изобретение относится к фармацевтическим составам, содержащим любое из анти-BRDU-антител, предложенных в данном документе. В одном из воплощений фармацевтический состав содержит любое из анти-BRDU-антител, предложенных в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель.
Антитела согласно данному изобретению могут быть использованы в терапии по отдельности или в комбинации с другими агентами. Например, антитело согласно данному изобретению может быть введено совместно по меньшей мере с одним дополнительным терапевтическим агентом.
Такие комбинированные терапии, отмеченные выше, охватывают комбинированное введение (когда два или более двух терапевтических агентов включены в один и тот же или в раздельные составы) и раздельное введение, в случае которого введение антитела согласно данному изобретению может осуществляться до, одновременно и/или после введения дополнительного агента и/или адъюванта. Антитела согласно данному изобретению также могут быть введены в комбинации с радиационной терапией.
Антитело согласно данному изобретению (и любой дополнительный терапевтический агент) может быть введено с помощью любых подходящих средств, в том числе путем парентерального, внутрилегочного и интраназального, и, если нужно местное лечение, внутриочагового введения. Парентеральные инфузии включают внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрибрюшинное или подкожное введение. Введение дозы может быть осуществлено любым подходящим способом, например, с помощью инъекций, таких как внутривенные или подкожные инъекции, частично в зависимости от того, является ли введение кратковременным или хроническим. В данном документе рассматриваются различные схемы дозировки, включая, но не ограничиваясь ими, одно или множество введений в различные временные точки, болюсное введение и импульсную инфузию.
Антитела согласно данному изобретению будут собраны в состав, дозированы и введены в соответствии с надлежащей медицинской практикой. Факторы, подлежащие рассмотрению в этом контексте, включают конкретное нарушение, подлежащее лечению, конкретное млекопитающее, подлежащее лечению, клиническое состояние отдельного пациента, причину нарушения, место доставки агента, способ введения, схему введения и другие факторы, известные практикующим врачам. Антитело не обязательно, но может быть собрано в состав с одним или более чем одним агентом, используемым в настоящее время для профилактики или лечения рассматриваемого нарушения. Эффективное количество таких других агентов зависит от количества антитела, присутствующего в составе, от типа заболевания или лечения, а также от других факторов, описанных выше. Как правило, они используются в тех же дозировках и с теми же путями введения, которые описаны в данном документе, или в дозировках примерно от 1 до 99% от описанных в данном документе, или в любой дозировке и любым путем, который является эмпирически/клинически подходящим.
Для профилактики или лечения заболевания подходящая доза антитела согласно данному изобретению (при использовании его отдельно или в комбинации с одним или более чем одним другим дополнительным терапевтическим агентом) будет зависеть от типа заболевания, подлежащего лечению, от типа антитела, от тяжести и течения заболевания, от того, вводят ли антитело с профилактической или терапевтической целью, от предыдущей терапии, истории болезни пациента и ответа на антитело, а также по усмотрению лечащего врача. Данное антитело вводят пациенту подходящим образом одномоментно или серийно. В зависимости от типа и тяжести заболевания изначальной кандидатной дозировкой антитела для введения пациенту может быть дозировка от примерно 1 мкг/кг до 15 мг/кг (например, от 0,5 мг/кг до 10 мг/кг) независимо от того, например, вводится ли оно в ходе одного или более отдельных введений или путем непрерывной инфузии. Одна из типичных суточных доз может варьировать от примерно 1 мкг/кг до 100 мг/кг или более в зависимости от указанных выше факторов. В случае повторных введений в течение нескольких дней или дольше в зависимости от состояния лечение, как правило, может быть продолжено до требуемого подавления симптомов заболевания. Один из примеров дозировки антитела будет находиться в диапазоне от примерно 0,05 мг/кг до примерно 10 мг/кг. Таким образом, пациенту может быть введена одна или более чем одна доза примерно 0,5 мг/кг, 2,0 мг/кг, 4,0 мг/кг или 10 мг/кг (или любая их комбинация). Такие дозы можно вводить периодически, например, каждую неделю или каждые три недели (например, так, чтобы пациент получал от примерно двух до примерно двадцати доз антитела или, например, примерно шесть доз антитела). Может быть введена изначальная более высокая нагрузочная доза с последующей одной или более чем одной более низкой дозой. Прогресс этой терапии легко контролировать с помощью обычных методик и анализов.
Понятно, что любой из вышеуказанных составов или терапевтических способов может быть осуществлен с использованием иммуноконъюгата согласно данному изобретению вместо или в дополнение к анти-BRDU-антителу.
III. Продукты производства
В другом аспекте данного изобретения предложен продукт производства, содержащий материалы, используемые для лечения, профилактики и/или диагностики нарушений, описанных выше. Продукт производства содержит контейнер и этикетку или листок-вкладыш, прикрепленный или связанный с контейнером. Подходящие контейнеры включают, например, бутылки, флаконы, шприцы, пакеты для внутривенно вводимых растворов и т.д. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик. Контейнер содержит композицию саму по себе или в сочетании с другой композицией, эффективной для лечения, профилактики и/или диагностики состояния, и может иметь стерильное входное отверстие (например, контейнер может представлять собой пакет для внутривенно вводимого раствора или флакон с пробкой, прокалываемой иглой для подкожной инъекции). По меньшей мере один активный агент в композиции представляет собой антитело согласно данному изобретению. На этикетке или вкладыше в упаковку указывается, что композиция используется для лечения выбранного состояния. Кроме того, продукт производства может содержать: (а) первый контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция содержит антитело согласно данному изобретению; и (b) второй контейнер с композицией, содержащейся в нем, где композиция также содержит цитотоксический или другой терапевтический агент. Продукт производства в этом воплощении изобретения также может содержать вкладыш в упаковку, указывающий, что композиции могут быть использованы для лечения конкретного состояния. Альтернативно или дополнительно, изделие также может включать второй (или третий) контейнер, содержащий фармацевтически приемлемый буфер, например, бактериостатическую воду для инъекций (bacteriostatic water for injection, BWFI), забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и раствор декстрозы. Он также может включать другие материалы, желательные с коммерческой и потребительской точки зрения, в том числе другие буферы, разбавители, фильтры, иглы и шприцы.
Следует понимать, что любой из указанных выше продуктов производства может включать иммуноконъюгат согласно данному изобретению вместо или в дополнение к анти-BRDU-антителу.
IV. Конкретные воплощения
1. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
2. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 02, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
3. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 03, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
4. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 02, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 03, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
5. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 13, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
6. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 02, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 13, и (с) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05.
7. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-6, также содержащее (a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06, (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07, и (с) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08.
8. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-7, где указанное антитело имеет в позиции 30 тяжелой цепи аминокислотный остаток пролин (нумерация согласно Kabat).
9. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-8, где указанное антитело имеет в позиции 58 тяжелой цепи аминокислотный остаток фенилаланин (нумерация согласно Kabat).
10. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-9, где указанное антитело имеет в позиции 108 тяжелой цепи аминокислотный остаток треонин (нумерация согласно Kabat).
11. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-10, где указанное антитело имеет в позиции 49 легкой цепи аминокислотный остаток лизин (нумерация согласно Kabat).
12. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-11, где указанное антитело имеет в позиции 98 легкой цепи аминокислотный остаток лейцин (нумерация согласно Kabat).
13. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-12, где указанное антитело содержит один или более чем один из следующих остатков
- Р в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- F в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- Т в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи, и/или
- R в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи, и/или
- L в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи (все позиции согласно Kabat).
14. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-13, где указанное антитело содержит последовательность VH, имеющую по меньшей мере 95% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 09, и последовательность VL, имеющую по меньшей мере 95% идентичность последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 10.
15. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-13, где указанное антитело содержит аминокислотную последовательность VH, полученную из аминокислотной последовательности вариабельного домена тяжелой цепи SEQ ID NO 11, и аминокислотную последовательность VL, полученную из аминокислотной последовательности вариабельного домена легкой цепи SEQ ID NO 12.
16. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-13, где указанное антитело представляет собой гуманизированный вариант нечеловеческого анти-BRDU-антитела, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO 11 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO 12.
17. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-16, где указанное антитело содержит VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 09.
18. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-17, где указанное антитело содержит VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 10.
19. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-18, где указанное антитело представляет собой полноразмерное IgG1-антитело или полноразмерное lgG4-антитело.
20. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-19, где указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.
21. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-20, где указанное антитело представляет собой двухвалентное антитело.
22. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-21, где указанное антитело представляет собой биспецифическое антитело.
23. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-22, где указанное антитело содержит
a) тяжелую цепь и легкую цепь первого полноразмерного антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и
b) модифицированную тяжелую цепь и модифицированную легкую цепь второго полноразмерного антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, в котором константные домены CL и СН1 поменяны местами друг с другом,
где первый антиген или второй антиген представляет собой BRDU.
24. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-22, где указанное антитело содержит
а) легкую цепь первого антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и
b) тяжелую цепь первого антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, конъюгированную на ее С-конце с scFv или scFab, полученным из второго антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном,
где первый антиген или второй антиген представляет собой BRDU.
25. Гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-20, где указанное антитело представляет собой фрагмент антитела, который связывается с BRDU.
26. Комплекс, содержащий гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-25 и нуклеиновую кислоту, содержащую BRDU.
27. Ковалентный комплекс, содержащий гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 3-25 и BRDU, конъюгированный с остатком цистеина.
28. Фармацевтический состав, содержащий гуманизированное анти-BRDU-антитело согласно любому из воплощений 1-25 или комплекс согласно любому из воплощений 26-27 и фармацевтически приемлемый носитель.
29. Применение гуманизированного анти-BRDU-антитела согласно любому из воплощений 1-25 для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке.
30. Применение гуманизированного анти-BRDU-антитела согласно любому из воплощений 1-25 для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты через гематоэнцефалический барьер.
V. ПРИМЕРЫ
Ниже приведены примеры способов и композиций согласно данному изобретению. Нужно понимать, что на практике можно осуществить различные другие воплощения, учитывая общее описание, представленное выше.
Пример 1
Выделение и характеризация кДНК, кодирующих домены VH и VL мышиного анти-BRDU-антитела от мышиной гибридомы
Информацию о белке и последовательности (ДНК) доменов VH и VL мышиного анти-BRDU-антитела получали непосредственно из гибридомных клонов. Этапы эксперимента, проведенные последовательно, включали (i) выделение РНК из гибридомных клеток, продуцирующих антитела, (ii) превращение этой РНК в кДНК, перенос в VH- и VL-несущие ПЦР-фрагменты, и (iii) интеграция этих ПЦР-фрагментов в плазмидные векторы для размножения в Е. coli и определение их ДНК- (и выведенных белковых) последовательностей.
Получение РНК из гибридомных клеток:
Для выделения мРНК из гибридомных клеток использовали набор RNeasy Mini Kit (Qiagen). Примерно 106 клеток лизировали в RLT-буфере и лизат помещали на колонку Qiashredder. мРНК концентрировали и промывали с помощью набора RNeasy Mini column.
Создание фрагментов ДНК, кодирующих VL и VH, с помощью RACE PCR, клонирование этих фрагментов ДНК в плазмиды и определение их ДНК- и аминокислотных последовательностей:
Создание кДНК и амплификацию специфических последовательностей кДНК антител проводили с помощью набора SMART Race cDNA Amplification kit (Clontech) в соответствии с протоколом производителя. Для специфической амплификации использовали универсальный праймер из набора и специфические праймеры из константной области легкой и тяжелой цепи антитела, соответственно.
Продукт ПЦР очищали с помощью электрофореза в геле и выделяли из агарозы (набор QIAquick Gel extraction kit; Qiagen).
Продукты ПЦР клонировали в векторы pCR4-TOPO (набор клонирования для секвенирования ТОРО ТА cloning kit for sequencing, Life Technologies). После трансформации клеток E.coli собирали 5-10 колоний, выделяли плазмидную ДНК в соответствии со стандартными методиками и клонированные вставки подвергали анализу на их последовательность ДНК.
Последовательность мышиного VL анти-BRDU-антитела показана в SEQ ID NO 12. Последовательности мышиного VH анти-BRDU-антитела показана в SEQ ID NO 11.
Пример 2
Гуманизация доменов VH и VL мышиного анти-BRDU-антитела
Мышиное BRDU-связывающее антитело гуманизировали следующим образом: создание и характеризация кодирующих последовательностей и аминокислотных последовательностей, которые содержат домены VH и VL мышиного анти-BRDU-антитела класса IgG1 с легкой каппа-цепью из мышиной гибридомы, описаны в WO 2011/003557 и WO 2011/003780. Основываясь на этой информации, создавали соответствующее гуманизированное анти-BRDU-антитело на основе комбинации человеческой зародышевой каркасной области IGHV1-18-01 и IGKV3-15-01. Аминокислотная последовательность гуманизированного VH изображена в SEQ ID NO 09, а аминокислотная последовательность гуманизированного VL показана в SEQ ID NO 10.
Пример 3
Сборка, экспрессия и очистка рекомбинантных анти-BRDU-антител
Вариабельные области мышиных анти-BRDU-антител объединяли с константными областями человеческого происхождения для формирования моно- или биспецифических химерных антител.
Для создания моноспецифических анти-BRDU-антител и биспецифических анти-BRDU-антител, которые специфически связываются с BRDU, а также с другой нe-BRDU-мишенью (например, рецепторными тирозинкиназами или IGF-1R), требуется (i) разработка и определение аминокислотных и нуклеотидных последовательностей для таких молекул, (ii) экспрессия этих молекул в трансфицированных культивируемых клетках млекопитающих, и (iii) очистка этих молекул из супернатантов трансфицированных клеток. Эти этапы выполняли, как было описано ранее в WO 2012/093068.
Как правило, для создания антитела класса IgG, которое обладает специфичностью связывания мышиного анти-BRDU-антитела, последовательность VH сливали в рамке считывания с N-концом СН1-шарнир-СН2-CH3 человеческой Fc-области подкласса IgG1. Аналогичным образом, последовательность VL сливали в рамке считывания с N-концом человеческой константной области CL-каппа.
Для создания производных биспецифических антител, которые обладают BRDU-связывающей специфичностью, а также специфичностью к другим мишеням, анти-BRDU-антитело, scFv- или Fab-фрагмент сливали в рамке считывания с С-концом тяжелой цепи описанных ранее антител. Во многих случаях применяемый антигаптеновый scFv дополнительно стабилизировали введением дисульфидной связи VH44-VL100, которая была описана ранее (например, Reiter, Y., et al., Nature biotechnology 14 (1996) 1239-1245).
Экспрессионные плазмиды
Экспрессионные плазмиды, содержащие экспрессионные кассеты для экспрессии тяжелой и легкой цепей, по отдельности собирали в векторах для экспрессии в клетках млекопитающих.
При этом генные сегменты, кодирующие отдельные элементы, соединяли, как описано выше.
Общие сведения касательно нуклеотидных последовательностей человеческих легких и тяжелых цепей, из которых может быть выведено использование кодонов, даны в: Kabat, Е.А., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed., Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991), NIH Publication No 91-3242.
Транскрипционный блок для легкой κ-цепи состоял из следующих элементов:
- немедленный ранний энхансер и промотор из человеческого цитомегаловируса (hCMV),
- синтетическая 5'-UT-область, включающая последовательность Козака,
- сигнальная последовательность тяжелой цепи мышиного иммуноглобулина, включающая интрон сигнальной последовательности,
- клонированная кДНК вариабельной области легкой цепи, собранная с уникальным сайтом рестрикции Bsml на 5'-конце и сайтом-донором для сплайсинга и уникальным сайтом рестрикции Notl на 3'-конце,
- геномная константная область человеческого κ-гена, включающая энхансер интрона 2 κ-цепи мышиного lg (Picard, D., and Schaffner, W. Nature 307 (1984) 80-82), и
- сигнальная последовательность κ-полиаденилирования иммуноглобулина человека ("поли А").
Транскрипционный блок для тяжелой y1-цепи состоял из следующих элементов:
- немедленный ранний энхансер и промотор из человеческого цитомегаловируса (hCMV),
- синтетическая 5'-UT-область, включающая последовательность Козака,
- модифицированная сигнальная последовательность тяжелой цепи мышиного иммуноглобулина, включающая интрон сигнальной последовательности,
- клонированная кДНК моноспецифической вариабельной области тяжелой цепи или клонированная кДНК биспецифического гибрида scFv-вариабельная тяжелая цепь, собранная с уникальным сайтом рестрикции Bsml на 5'-конце и сайтом-донором для сплайсинга и уникальным сайтом рестрикции Notl на 3'-конце,
- геномная константная область человеческого гена тяжелой y1-цепи, включающая μ-энхансер мышиного lg (Neuberger, M.S., EMBO J. 2 (1983) 1373-1378), и
- сигнальная последовательность полиаденилирования y1-иммуноглобулина человека ("поли А").
Помимо экспрессионной кассеты легкой κ-цепи или тяжелой y1-цепи эти плазмиды содержали
- ген устойчивости к гигромицину,
- сайт начала репликации, oriP, из вируса Эпштейна-Барр (EBV),
- сайт начала репликации из вектора pUC18, который делает возможной репликацию этой плазмиды в Е. coli, и
- ген β-лактамазы, который придает Е. coli устойчивость к ампициллину.
Методики рекомбинантной ДНК
Клонирование проводили с использованием стандартных методик клонирования, описанных в Sambrook, J. et al., Molecular Cloning, second edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989). Все молекулярно-биологические реагенты были коммерчески доступны (если не указано иное) и использовались в соответствии с инструкциями производителя.
ДНК, которая содержит кодирующие последовательности, мутации или другие генетические элементы, была синтезирована в Geneart AG, Регенсбург.
ДНК-последовательности определяли с помощью секвенирования двунитевой ДНК, проведенного в SequiServe (SequiServe GmbH, Германия).
Анализ ДНК- и белковой последовательности и управление данными о последовательности
Программу Vector NTI Advance версии 9.0 использовали для создания, картирования, анализа, аннотирования и иллюстрирования последовательности.
Экспрессия анти-BRDU-антител и их производных
Анти-BRDU-антитела экспрессировали путем временной трансфекции клеток почек эмбриона человека 293 (НЕК293) в суспензии. Для этого легкие и тяжелые цепи соответствующих моно- или биспецифических антител встраивали в экспрессионные векторы, несущие маркеры прокариотической и эукариотической селекции, описанные выше. Эти плазмиды амплифицировали в Е. coli, очищали, а затем использовали для временных трансфекций. Для процедур с клетками использовали стандартные методики культивирования клеток, описанные в Current Protocols in Cell Biology (2000), Bonifacino, J.S., Dasso, M., Harford, J.В., Lippincott-Schwartz, J. and Yamada, K.M. (eds.), John Wiley & Sons, Inc.
Клетки культивировали в соответствующей среде для экспрессии при 37°C/8% CO2. В день трансфекции клетки высевали в свежей среде с плотностью 1-2×106 жизнеспособных клеток/мл. ДНК-комплексы с реагентами для трансфекции готовили в среде Opti-MEM I (Invitrogen, США), содержащей 250 мкг плазмидной ДНК с тяжелой и легкой цепями в молярном соотношении 1:1, в конечном объеме для трансфекции 250 мл. Клеточные культуральные супернатанты, содержащие моноспецифические или биспецифические антитела, осветляли через 7 дней после трансфекции путем центрифугирования со скоростью 14000 g в течение 30 минут и фильтрации через стерилизующий фильтр (0,22 мкм). Супернатанты хранили при -20°C до очистки.
Для определения концентрации антител и производных в клеточных культуральных супернатантах применяли аффинную ВЭЖХ-хроматографию. Для этого клеточный культуральный супернатант, содержащий моно- или биспецифическое антитело или его производные, которые связываются с белком А, наносили на колонку Applied Biosystems Poros А/20 в растворе, содержащем 200 мМ KH2PO4, 100 мМ цитрат натрия, рН 7,4. Элюирование с хроматографического материала проводили путем подачи раствора, содержащего 200 мМ NaCl, 100 мМ лимонную кислоту, рН 2,5. Использовали ВЭЖХ-систему UltiMate 3000 (Dionex). Элюированный белок количественно оценивали по УФ-поглощению и интеграции площади пиков. Очищенное антитело IgG1 служило в качестве стандарта.
Очистка анти-BRDU-антител
Через семь дней после трансфекции собирали клеточные супернатанты НЕК293. Рекомбинантное антитело, содержащееся в них, очищали из супернатанта в два этапа путем аффинной хроматографии с использованием аффинной хроматографии на белке A-Sepharose™ (GE Healthcare, Швеция) и эксклюзионной хроматографии Superdex200. Вкратце, содержащие антитело осветленные культуральные супернатанты наносили на колонку MabSelectSuRe Protein А (5-50 мл), уравновешенную PBS-буфером (10 мМ Na2HPO4, 1 мМ KH2PO4, 137 мМ NaCl и 2,7 мМ KCl, рН 7,4). Несвязанные белки отмывали уравновешивающим буфером. Антитела (или их производные) элюировали с помощью 50 мМ цитратного буфера, рН 3,2. Содержащие белок фракции нейтрализовали с помощью 0,1 мл 2 М Tris-буфера, рН 9,0. Затем элюированные белковые фракции объединяли, концентрировали на устройстве с фильтрованием центрифугированием Amicon (MWCO: 30 К, Millipore) и наносили на гель-фильтрационную колонку Superdex200 HiLoad 26/60 (GE Healthcare, Швеция), уравновешенную раствором, содержащим 20 мМ гистидин, 140 мМ NaCl, рН 6,0. Белковую концентрацию очищенных антител и их производных оценивали путем определения оптической плотности (OD) при 280 нм, используя OD при 320 нм в качестве фоновой коррекции и коэффициент молярной экстинкции, рассчитанный на основании аминокислотной последовательности в соответствии с Расе et. al., Protein Science 4 (1995) 2411-2423. Фракции мономерных антител объединяли, мгновенно замораживали и хранили при -80°C. Часть образцов использовали для последующего анализа и характеризации белка.
Гомогенность антител подтверждали путем SDS-PAGE в присутствии и в отсутствие восстанавливающего агента (5 мМ 1,4-дитиотреитола) и окрашивания Кумасси бриллиантовым синим. Использовали гель-систему NuPAGE® Pre-Cast (Invitrogen, США) в соответствии с инструкцией производителя (4-20% Tris-глициновые гели).
При SDS-PAGE в восстанавливающих условиях полипептидные цепи, связанные с IgG, показали кажущиеся молекулярные размеры, аналогичные расчетным молекулярным массам. Уровни экспрессии всех конструкций анализировали с помощью белка А. Средний выход белка в таких экспериментах с неоптимизированной временной экспрессией составлял от 6 мг до 35 мг очищенного белка на литр клеточного культурального супернатанта.
На Фиг. 1 показаны результаты экспрессии и очистки гуманизированного антитела, которое связывает BRDU и производные BRDU. SDS PAGE в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях показывает состав и гомогенность гуманизированных антител с цистеином в позиции 53 согласно Kabat и без него после очистки с помощью белка A (MabSelect) и SEC. Маркер молекулярных весов находится в непомеченных дорожках. Н-цепи (верхняя полоса на 50 кДа) и L-цепи (нижняя полоса на 25 кДа) антитела обнаруживаются в восстанавливающих условиях в виде уникальных полос без присутствия видимых количеств дополнительных белковых примесей.
Пример 5
BRDU-связывающие биспецифические антитела формируют комплексы с BRDU-содержащими полезными нагрузками
Анализы SEC-MALLS применяли для оценки того, способно ли и до какой степени биспецифическое антитело (bsAb) против рецептора трансферрина (TfR) и бромдезоксиуридина (BRDU) связываться с BRDU-содержащими полезными нагрузками. Для этого BRDU-ДНК добавляли к TfR-BRDU-bsAb в стехиометрическом соотношении 2:1 (350 мкг; 2,5 мг/мл) и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре для формирования комплексов bsAb/полезная нагрузка. В качестве контрольных реагентов мы подготовили свободное bsAb (2,5 мг/мл) и свободную BRDU-ДНК (3,2 мг/мл). BRDU-ДНК (BRDU-ACC AAG ССТ AGA GAG GAG САА ТАС AAC AGT АСА TAT CGC GTG GTA AGС GT; SEQ ID NO 14) содержала одну молекулу BRDU на одну молекулу ДНК на 5'-конце ДНК. Комплексы и контрольные реагенты хранили при -80°C до анализа.
Полученные таким образом комплексы и контрольные реагенты подвергали анализу SEC-MALLS для определения и характеризации свободного bsAb, свободной полезной нагрузки и комплексов их обоих. Анализ SEC-MALLS проводили на инструменте Dionex Ultimate 3000 ВЭЖХ, снабженном детекторами Wyatt miniDawnTREOS/QELS и Optilab rЕХ. Анализируемые вещества растворяли в концентрации 1 мг/мл в PBS-буфере, рН 7,4, наносили на колонну Superdex200 10/300GL со скоростью потока 0,5 мл/мин и элюировали PBS-буфером с рН 7,4 в течение 60 минут.
Результаты этих анализов (показаны на фиг. 1) показывают, что BRDU-содержащие ДНК формируют определенные комплексы с bsAb. Эти комплексы элюируются из колонки с ММ, равной 244,9 кДа (Фиг. 1А) и демонстрируют гидродинамический радиус 6,8 нм (Фиг. 1В), что позволяет рассчитать стехиометрическое соотношение как примерно две (1,8) молекулы ДНК на одну молекулу bsAb. По сравнению с этим у свободного bsAb была выявлена ММ 215,4 кДа, а его гидродинамический радиус составлял 6,2 нм. Свободная BRDU-ДНК выявлялась с ММ 16,4 кДа.
Таким образом, было показано, что BRDU-содержащая ДНК эффективно и стехиометрически связывается с TfR-BRDU bsAb, образуя комплексы в молярном соотношении 2:1.
Claims (25)
1. Гуманизированное антитело против 5-бром-2’-дезоксиуридина (анти-BRDU-антитело), где указанное антитело содержит: (a) HVR-H1 (HVR - гипервариабельная область), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 04, и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; а также содержит (a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06, (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07, и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08,
где указанное антитело содержит
- P в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- F в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- T в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- К в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи, и
- L в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи (все позиции согласно Kabat).
2. Гуманизированное анти-BRDU-антитело, где указанное антитело содержит (a) HVR-H1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 01, (b) HVR-H2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 13, и (c) HVR-H3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 05; а также содержит (a) HVR-L1, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 06, (b) HVR-L2, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 07, и (c) HVR-L3, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 08, где указанное антитело содержит
- P в позиции 30 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- F в позиции 58 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- T в позиции 108 вариабельного домена тяжелой цепи, и
- К в позиции 49 вариабельного домена легкой цепи, и
- L в позиции 98 вариабельного домена легкой цепи (все позиции согласно Kabat).
3. Гуманизированное анти-BRDU-антитело по п. 1 или 2, где указанное антитело содержит последовательность вариабельного домена тяжелой цепи (VH), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 09, и последовательность вариабельного домена лёгкой цепи (VL), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 10.
4. Гуманизированное анти-BRDU-антитело по п. 1 или 2, где указанное антитело представляет собой гуманизированный вариант нечеловеческого анти-BRDU-антитела, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO 11 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO 12.
5. Гуманизированное анти-BRDU-антитело по п. 1, где указанное антитело содержит VH с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 09.
6. Гуманизированное анти-BRDU-антитело по п. 1 или 2, где указанное антитело содержит VL с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO 10.
7. Комплекс для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке, содержащий эффективное количество гуманизированного анти-BRDU-антитела по любому из пп. 1-6 и нуклеиновую кислоту, содержащую 5-бром-2’-дезоксиуридин (BRDU).
8. Конъюгат для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке, содержащий гуманизированное анти-BRDU-антитело по любому из пп. 2-6 и BRDU, конъюгированный с остатком цистеина.
9. Фармацевтический состав для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке, содержащий эффективное количество гуманизированного анти-BRDU-антитела по любому из пп. 1-6 или комплекс по п. 7 или конъюгат по п. 8 и фармацевтически приемлемый носитель.
10. Применение антитела, содержащего
a) легкую цепь первого антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, и
b) тяжелую цепь первого антитела, которое специфически связывается с первым антигеном, конъюгированную на ее C-конце с scFv или scFab, полученным из второго антитела, которое специфически связывается со вторым антигеном, где первое антитело или второе антитело представляет собой анти-BRDU-антитело по любому из пп. 1-6, при этом соответственно первый или второй антиген представляет собой BRDU, а оставшийся из первого или второго антигена представляет собой молекулу клеточной поверхности, для доставки BRDU-содержащей нуклеиновой кислоты к клетке.
11. Применение по п. 10, где анти-BRDU-антитело содержит последовательность VH, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 09, и последовательность VL, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO 10.
12. Применение по п. 10 или 11, где анти-BRDU-антитело представляет собой гуманизированный вариант нечеловеческого анти-BRDU-антитела, содержащий вариабельный домен тяжелой цепи SEQ ID NO 11 и вариабельный домен легкой цепи SEQ ID NO 12.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP14174043 | 2014-06-26 | ||
EP14174043.1 | 2014-06-26 | ||
PCT/EP2015/064322 WO2015197736A1 (en) | 2014-06-26 | 2015-06-25 | Anti-brdu antibodies and methods of use |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2017102216A RU2017102216A (ru) | 2018-07-26 |
RU2017102216A3 RU2017102216A3 (ru) | 2019-02-05 |
RU2705299C2 true RU2705299C2 (ru) | 2019-11-06 |
Family
ID=51063280
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2017102216A RU2705299C2 (ru) | 2014-06-26 | 2015-06-25 | Антитела против 5-бром-2'-дезоксиуридина и способы применения |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20170114150A1 (ru) |
EP (1) | EP3164419A1 (ru) |
JP (3) | JP6654581B2 (ru) |
KR (1) | KR20170026362A (ru) |
CN (1) | CN106687476B (ru) |
BR (1) | BR112016029935A2 (ru) |
CA (1) | CA2947504A1 (ru) |
MX (1) | MX2016015280A (ru) |
RU (1) | RU2705299C2 (ru) |
WO (1) | WO2015197736A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
BR112016013849A2 (pt) | 2014-01-03 | 2017-10-10 | Hoffmann La Roche | conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica |
JP6602304B2 (ja) | 2014-01-03 | 2019-11-06 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 共有結合で連結されたヘリカー−抗ヘリカー抗体コンジュゲートおよびその用途 |
CA2930046A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates |
TW201805234A (zh) * | 2016-06-02 | 2018-02-16 | 奧托德里克有限公司 | 以抗體-功能化碳奈米管為基礎之場效電晶體及其於紫杉醇免疫測定之用途 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2396084C1 (ru) * | 2006-06-26 | 2010-08-10 | С-Байомедикс Ко., Лтд. | Композиция филлера для мягких тканей для инъекции и способ ее получения |
EP1798240B1 (en) * | 2005-12-15 | 2011-04-27 | Industrial Technology Research Institute | Recombinant triplex scaffold-based polypeptides |
EP2319529A1 (en) * | 1999-04-23 | 2011-05-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Methods for treating congestive heart failure |
EA018708B1 (ru) * | 2007-07-09 | 2013-10-30 | Астразенека Аб | ПРОИЗВОДНЫЕ МОРФОЛИНОПИРИМИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ, СВЯЗАННЫХ С mTOR КИНАЗОЙ И/ИЛИ PI3K |
RU2509558C2 (ru) * | 2008-03-26 | 2014-03-20 | Новартис Аг | Имидазохинолины и производные пиримидина в качестве потенциальных модуляторов vegf-стимулируемых ангиогенных процессов |
Family Cites Families (123)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4526988A (en) | 1983-03-10 | 1985-07-02 | Eli Lilly And Company | Difluoro antivirals and intermediate therefor |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
EP0184365B1 (en) | 1984-12-04 | 1993-08-04 | Eli Lilly And Company | Improvements in the treatment of tumors in mammals |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
US6548640B1 (en) | 1986-03-27 | 2003-04-15 | Btg International Limited | Altered antibodies |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
DE3883899T3 (de) | 1987-03-18 | 1999-04-22 | Sb2 Inc | Geänderte antikörper. |
US5770701A (en) | 1987-10-30 | 1998-06-23 | American Cyanamid Company | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
US5606040A (en) | 1987-10-30 | 1997-02-25 | American Cyanamid Company | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group |
WO1990005144A1 (en) | 1988-11-11 | 1990-05-17 | Medical Research Council | Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
CA2026147C (en) | 1989-10-25 | 2006-02-07 | Ravi J. Chari | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
US5959177A (en) | 1989-10-27 | 1999-09-28 | The Scripps Research Institute | Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies |
US5620686A (en) | 1990-09-28 | 1997-04-15 | British Technology Group Limited | Antigen-antibody conjugates |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
JP4124480B2 (ja) | 1991-06-14 | 2008-07-23 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 免疫グロブリン変異体 |
GB9114948D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-08-28 | Pfizer Ltd | Process for preparing sertraline intermediates |
EP0861893A3 (en) | 1991-09-19 | 1999-11-10 | Genentech, Inc. | High level expression of immunoglobulin polypeptides |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
WO1993008829A1 (en) | 1991-11-04 | 1993-05-13 | The Regents Of The University Of California | Compositions that mediate killing of hiv-infected cells |
DE69334255D1 (de) | 1992-02-06 | 2009-02-12 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür |
DE69329503T2 (de) | 1992-11-13 | 2001-05-03 | Idec Pharma Corp | Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma |
US5635483A (en) | 1992-12-03 | 1997-06-03 | Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University | Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides |
US5780588A (en) | 1993-01-26 | 1998-07-14 | Arizona Board Of Regents | Elucidation and synthesis of selected pentapeptides |
CA2163345A1 (en) | 1993-06-16 | 1994-12-22 | Susan Adrienne Morgan | Antibodies |
US5773001A (en) | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
US5789199A (en) | 1994-11-03 | 1998-08-04 | Genentech, Inc. | Process for bacterial production of polypeptides |
US5840523A (en) | 1995-03-01 | 1998-11-24 | Genetech, Inc. | Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5714586A (en) | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US5712374A (en) | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
GB9603256D0 (en) | 1996-02-16 | 1996-04-17 | Wellcome Found | Antibodies |
CA2288600C (en) | 1997-05-02 | 2010-06-01 | Genentech, Inc. | A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
EP0994903B1 (en) | 1997-06-24 | 2005-05-25 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for galactosylated glycoproteins |
US6040498A (en) | 1998-08-11 | 2000-03-21 | North Caroline State University | Genetically engineered duckweed |
AU759779B2 (en) | 1997-10-31 | 2003-05-01 | Genentech Inc. | Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms |
BR9813365A (pt) | 1997-12-05 | 2004-06-15 | Scripps Research Inst | Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato |
ATE375365T1 (de) | 1998-04-02 | 2007-10-15 | Genentech Inc | Antikörper varianten und fragmente davon |
US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
DK2180007T4 (da) | 1998-04-20 | 2017-11-27 | Roche Glycart Ag | Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
KR101077001B1 (ko) | 1999-01-15 | 2011-10-26 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
AU3370000A (en) | 1999-02-22 | 2000-09-14 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Biotinylated-chemokine antibody complexes |
PT1176195E (pt) | 1999-04-09 | 2013-07-18 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Processo para controlar a actividade de uma molécula funcional sob o ponto de vista imunológico |
US7125978B1 (en) | 1999-10-04 | 2006-10-24 | Medicago Inc. | Promoter for regulating expression of foreign genes |
KR100797667B1 (ko) | 1999-10-04 | 2008-01-23 | 메디카고 인코포레이티드 | 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법 |
AU7950400A (en) | 1999-10-19 | 2001-04-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. | Process for producing polypeptide |
GB9926529D0 (en) | 1999-11-09 | 2000-01-12 | Ks Biomedix Ltd | Targeting agents |
JP2003531821A (ja) | 1999-12-29 | 2003-10-28 | イムノージェン インコーポレーテッド | 改変型ドキソルビシンおよびダウノルビシンを含む細胞傷害性薬剤ならびにその治療上の使用 |
DK2857516T3 (en) | 2000-04-11 | 2017-08-07 | Genentech Inc | Multivalent antibodies and uses thereof |
EP3263702A1 (en) | 2000-10-06 | 2018-01-03 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US7064191B2 (en) | 2000-10-06 | 2006-06-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
MXPA04001072A (es) | 2001-08-03 | 2005-02-17 | Glycart Biotechnology Ag | Variantes de glicosilacion de anticuerpos que tienen citotoxicidad celulares dependiente de anticuerpos incrementada. |
KR100988949B1 (ko) | 2001-10-25 | 2010-10-20 | 제넨테크, 인크. | 당단백질 조성물 |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
EP1500400A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-10-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION |
US20050031613A1 (en) | 2002-04-09 | 2005-02-10 | Kazuyasu Nakamura | Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa |
DE60336548D1 (de) | 2002-04-09 | 2011-05-12 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins |
PL373256A1 (en) | 2002-04-09 | 2005-08-22 | Kyowa Hakko Kogyo Co, Ltd. | Cells with modified genome |
EP1498491A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-12-13 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA |
EP1498490A4 (en) | 2002-04-09 | 2006-11-29 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION |
US7361740B2 (en) | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
SI2289936T1 (sl) | 2002-12-16 | 2017-10-30 | Genentech, Inc. | Imunoglobulinske variante in njihove uporabe |
WO2004065569A2 (en) | 2003-01-23 | 2004-08-05 | The Regents Of The University Of California | Multi-functional antibodies |
US20050026263A1 (en) | 2003-07-31 | 2005-02-03 | The Regents Of The University Of California | Multi-functional antibodies |
US7871607B2 (en) | 2003-03-05 | 2011-01-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases |
US20060104968A1 (en) | 2003-03-05 | 2006-05-18 | Halozyme, Inc. | Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases |
WO2004097372A2 (en) | 2003-04-28 | 2004-11-11 | The Regents Of The University Of California | Element-coded affinity tags |
AU2004255216B2 (en) | 2003-07-01 | 2010-08-19 | Immunomedics, Inc. | Multivalent carriers of bi-specific antibodies |
WO2005035586A1 (ja) | 2003-10-08 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 融合蛋白質組成物 |
AU2004280065A1 (en) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase |
LT2380911T (lt) | 2003-11-05 | 2018-07-10 | Roche Glycart Ag | Antigeną surišančios molekulės, pasižyminčios padidintu fc receptoriaus surišimo afiniškumu ir efektoriaus funkcija |
KR101438983B1 (ko) | 2003-11-06 | 2014-09-05 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
WO2005053742A1 (ja) | 2003-12-04 | 2005-06-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | 抗体組成物を含有する医薬 |
CN1961003B (zh) | 2004-03-31 | 2013-03-27 | 健泰科生物技术公司 | 人源化抗TGF-β抗体 |
EP2360186B1 (en) | 2004-04-13 | 2017-08-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | Anti-P-selectin antibodies |
TWI309240B (en) | 2004-09-17 | 2009-05-01 | Hoffmann La Roche | Anti-ox40l antibodies |
PL1791565T3 (pl) | 2004-09-23 | 2016-10-31 | Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty | |
JO3000B1 (ar) | 2004-10-20 | 2016-09-05 | Genentech Inc | مركبات أجسام مضادة . |
ES2592271T3 (es) | 2005-03-31 | 2016-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos |
AR060070A1 (es) | 2006-03-24 | 2008-05-21 | Merck Patent Gmbh | Dominios proteicos heterodimericos obtenidos por ingenieria |
MX2008015132A (es) | 2006-05-30 | 2008-12-10 | Genentech Inc | Anticuerpos e inmunoconjugados y sus usos. |
WO2007147901A1 (en) | 2006-06-22 | 2007-12-27 | Novo Nordisk A/S | Production of bispecific antibodies |
US8759297B2 (en) | 2006-08-18 | 2014-06-24 | Armagen Technologies, Inc. | Genetically encoded multifunctional compositions bidirectionally transported between peripheral blood and the cns |
EP2471816A1 (en) | 2006-08-30 | 2012-07-04 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies |
ES2524059T3 (es) | 2006-10-27 | 2014-12-03 | Lpath, Inc. | Composiciones y procedimientos de unión a esfingosina-1-fosfato |
US20080226635A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-09-18 | Hans Koll | Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8227577B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-07-24 | Hoffman-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
EP2235064B1 (en) | 2008-01-07 | 2015-11-25 | Amgen Inc. | Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects |
US20110033378A1 (en) | 2008-01-18 | 2011-02-10 | Medlmmune, Llc. | Cysteine Engineered Antibodies For Site-Specific Conjugation |
WO2010056893A1 (en) | 2008-11-13 | 2010-05-20 | Imclone Llc | Humanization and affinity-optimization of antibodies |
JP5501439B2 (ja) | 2009-04-02 | 2014-05-21 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | 完全長抗体と単鎖Fabフラグメントとを含む多重特異的抗体 |
JP5616428B2 (ja) | 2009-04-07 | 2014-10-29 | ロシュ グリクアート アクチェンゲゼルシャフト | 三価の二重特異性抗体 |
EP2424567B1 (en) | 2009-04-27 | 2018-11-21 | OncoMed Pharmaceuticals, Inc. | Method for making heteromultimeric molecules |
EP2435473B1 (en) | 2009-05-27 | 2013-10-02 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Tri- or tetraspecific antibodies |
US9676845B2 (en) | 2009-06-16 | 2017-06-13 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific antigen binding proteins |
US8703132B2 (en) | 2009-06-18 | 2014-04-22 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bispecific, tetravalent antigen binding proteins |
WO2011003780A1 (en) * | 2009-07-06 | 2011-01-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bi-specific digoxigenin binding antibodies |
AU2010343057B2 (en) | 2009-12-29 | 2017-02-23 | Aptevo Research And Development Llc | Heterodimer binding proteins and uses thereof |
WO2011143545A1 (en) | 2010-05-14 | 2011-11-17 | Rinat Neuroscience Corporation | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
MX336540B (es) | 2010-06-08 | 2016-01-22 | Genentech Inc | Conjugados y anticuerpos manipulados geneticamente con cisteina. |
BR112013011811A2 (pt) | 2010-11-05 | 2023-02-23 | Zymeworks Inc | Modelo de anticorpo heterodimérico estável com mutações no domínio fc |
WO2012093068A1 (en) * | 2011-01-03 | 2012-07-12 | F. Hoffmann-La Roche Ag | A pharmaceutical composition of a complex of an anti-dig antibody and digoxigenin that is conjugated to a peptide |
LT2794905T (lt) | 2011-12-20 | 2020-07-10 | Medimmune, Llc | Modifikuoti polipeptidai, skirti bispecifinių antikūnų karkasams |
KR102382304B1 (ko) | 2012-04-20 | 2022-04-04 | 메뤼스 엔.페. | Ig-유사 분자의 제조방법 및 제조수단 |
US20150353639A1 (en) | 2012-05-21 | 2015-12-10 | Genentech, Inc. | Methods for improving safety of blood-brain barrier transport |
KR20150030755A (ko) | 2012-07-04 | 2015-03-20 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-바이오틴 항체 및 사용 방법 |
WO2014006124A1 (en) | 2012-07-04 | 2014-01-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked antigen-antibody conjugates |
HUE029435T2 (en) | 2012-07-04 | 2017-02-28 | Hoffmann La Roche | Anti-theophylline antibodies and methods of their application |
JP6114825B2 (ja) * | 2013-07-03 | 2017-04-12 | 株式会社日本歯科商社 | 施術用エプロンシート |
JP6602304B2 (ja) | 2014-01-03 | 2019-11-06 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | 共有結合で連結されたヘリカー−抗ヘリカー抗体コンジュゲートおよびその用途 |
BR112016013849A2 (pt) | 2014-01-03 | 2017-10-10 | Hoffmann La Roche | conjugados de anticorpos biespecíficos antihapteno/antirreceptores da barreira hematoencefálica, seus usos, e formulação farmacêutica |
CA2930046A1 (en) | 2014-01-03 | 2015-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Covalently linked polypeptide toxin-antibody conjugates |
CN107592812A (zh) | 2015-05-11 | 2018-01-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 治疗狼疮性肾炎的组合物和方法 |
-
2015
- 2015-06-25 RU RU2017102216A patent/RU2705299C2/ru active
- 2015-06-25 WO PCT/EP2015/064322 patent/WO2015197736A1/en active Application Filing
- 2015-06-25 MX MX2016015280A patent/MX2016015280A/es unknown
- 2015-06-25 EP EP15732216.5A patent/EP3164419A1/en active Pending
- 2015-06-25 CN CN201580034058.0A patent/CN106687476B/zh active Active
- 2015-06-25 JP JP2016575149A patent/JP6654581B2/ja active Active
- 2015-06-25 CA CA2947504A patent/CA2947504A1/en not_active Abandoned
- 2015-06-25 KR KR1020167035182A patent/KR20170026362A/ko active IP Right Grant
- 2015-06-25 BR BR112016029935A patent/BR112016029935A2/pt not_active IP Right Cessation
-
2016
- 2016-12-16 US US15/382,329 patent/US20170114150A1/en not_active Abandoned
-
2019
- 2019-03-05 US US16/293,478 patent/US11673968B2/en active Active
- 2019-12-13 JP JP2019225192A patent/JP6998357B2/ja active Active
-
2021
- 2021-10-19 JP JP2021171101A patent/JP7248761B2/ja active Active
-
2023
- 2023-05-01 US US18/310,390 patent/US20240043564A1/en active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2319529A1 (en) * | 1999-04-23 | 2011-05-11 | Cambridge Neuroscience, Inc. | Methods for treating congestive heart failure |
EP1798240B1 (en) * | 2005-12-15 | 2011-04-27 | Industrial Technology Research Institute | Recombinant triplex scaffold-based polypeptides |
RU2396084C1 (ru) * | 2006-06-26 | 2010-08-10 | С-Байомедикс Ко., Лтд. | Композиция филлера для мягких тканей для инъекции и способ ее получения |
EA018708B1 (ru) * | 2007-07-09 | 2013-10-30 | Астразенека Аб | ПРОИЗВОДНЫЕ МОРФОЛИНОПИРИМИДИНА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ, СВЯЗАННЫХ С mTOR КИНАЗОЙ И/ИЛИ PI3K |
RU2509558C2 (ru) * | 2008-03-26 | 2014-03-20 | Новартис Аг | Имидазохинолины и производные пиримидина в качестве потенциальных модуляторов vegf-стимулируемых ангиогенных процессов |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6654581B2 (ja) | 2020-02-26 |
JP2017522295A (ja) | 2017-08-10 |
CA2947504A1 (en) | 2015-12-30 |
US20200002437A1 (en) | 2020-01-02 |
EP3164419A1 (en) | 2017-05-10 |
BR112016029935A2 (pt) | 2017-10-31 |
US20240043564A1 (en) | 2024-02-08 |
KR20170026362A (ko) | 2017-03-08 |
RU2017102216A3 (ru) | 2019-02-05 |
JP2020055861A (ja) | 2020-04-09 |
US20170114150A1 (en) | 2017-04-27 |
JP2022023147A (ja) | 2022-02-07 |
MX2016015280A (es) | 2017-03-03 |
CN106687476B (zh) | 2020-11-13 |
US11673968B2 (en) | 2023-06-13 |
JP7248761B2 (ja) | 2023-03-29 |
WO2015197736A1 (en) | 2015-12-30 |
CN106687476A (zh) | 2017-05-17 |
RU2017102216A (ru) | 2018-07-26 |
JP6998357B2 (ja) | 2022-01-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2017201958B2 (en) | Covalently linked antigen-antibody conjugates | |
JP6470384B2 (ja) | 抗ビオチン抗体および使用方法 | |
CN109071635B (zh) | Contorsbody-单链靶标结合物 | |
EP3164152B1 (en) | Humanized anti-tau(ps422) antibody brain shuttles and use thereof | |
US10626177B2 (en) | HER3 antigen binding proteins binding to the beta-hairpin of HER3 | |
KR20160104628A (ko) | 이중특이성 항-합텐/항-혈액뇌장벽 수용체 항체, 그의 복합체 및 혈액뇌장벽 셔틀로서 그의 용도 | |
RU2682754C2 (ru) | Конъюгаты полипептидного токсина и антитела, соединенных ковалентной связью | |
JP6549278B2 (ja) | 抗テオフィリン抗体および使用方法 | |
JP7248761B2 (ja) | 抗brdu抗体および使用方法 | |
JP7089483B2 (ja) | 修飾された抗テネイシン抗体及び使用方法 |