RU2526391C2 - Способ очистки липопептидов - Google Patents
Способ очистки липопептидов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2526391C2 RU2526391C2 RU2011137010/04A RU2011137010A RU2526391C2 RU 2526391 C2 RU2526391 C2 RU 2526391C2 RU 2011137010/04 A RU2011137010/04 A RU 2011137010/04A RU 2011137010 A RU2011137010 A RU 2011137010A RU 2526391 C2 RU2526391 C2 RU 2526391C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- daptomycin
- eluate
- buffer
- reversed
- chromatographic column
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/188—Heterocyclic compound containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen atoms and oxygen atoms as the only ring heteroatoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/20—Partition-, reverse-phase or hydrophobic interaction chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к способу очистки даптомицина, включающий стадии а) загрузки частично очищенного даптомицина в анионообменную хроматографическую колонку и последующие стадии очистки б) и в) в обращено-фазовых хроматографических колонках, где элюирующий буфер на стадии а) представляет собой раствор одновалентной соли и элюирующий буфер на стадии б) и в) представляет собой водный спирт. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 пр.
Description
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к улучшенному способу очистки даптомицина, представленного химическим наименованием N-деканоил-L-триптофил-D-аспарагинил-L-аспартил-L-треонилглицил-L-орнитил-L-аспартил-D-аланил-L-аспартилглицил-D-серил-трео-3-метил-L-глутамил-3-антранилоил-L-аланин-εI-лактон. Даптомицин можно представить формулой I:
Предшествующий уровень техники
Даптомицин является липопептидным антибиотиком с активностью против грамположительных организмов. Даптомицин получают в ходе ферментации Strepromyces roseospoms и затем очистки ферментативного бульона. Механизм действия даптомицина заключается в том, что он связывается с мембранами бактерий и вызывает быструю деполяризацию мембранного потенциала. Это снижение мембранного потенциала вызывает ингибирование синтеза белка, ДНК и РНК, что приводит к гибели бактериальной клетки. Даптомицин одобрен для сложных инфекций кожи и кожных структур (cSSSI от complicated skin and skin structure infections) и инфекций кровотока Staphylococcus aureus (Золотистого стафилококка) (бактериемия). Cubist Pharmaceuticals продает даптомицин под торговой маркой Кубицин®.
Впервые даптомицин был описан в середине 1980-х годов в некоторых патентах и журналах; US 4,537,717 и Debono M. et al, Journal of Antibiotics, 1986, Vol.XL, No 6, 761-777. После этого было несколько публикаций относительно улучшенных способов ферментации и способов очистки.
В US 4,885,243 описан улучшенный способ ферментации для получения даптомицина. Данный способ описывает введение декановой жирной кислоты, или ее эфира, или солей в ферментативный бульон Strepromyces roseosporus. В ходе ферментации декановая жирная кислота встраивается в молекулу с образованием декановой боковой цепи даптомицина.
В предшествующем уровне техники описано несколько способов очистки даптомицина. В US 4,874,843 описан способ очистки даптомицина, согласно которому ферментативный бульон фильтруют и добавляют в хроматографическую колонку, содержащую смолу HP-20. После элюирования частично очищенный даптомицин пропускают через колонку, содержащую смолу HP-20ss, и затем добавляют в другую колонку, содержащую смолу HP-20. В дополнение к этим стадиям описаны попытки увеличить чистоту с помощью некоторых дополнительных хроматографических стадий без какого-либо успеха. Кроме того, в патенте 4,874,843 указано, что при использовании смолы без функциональных групп и водного раствора и включении стадии, на которой воду удаляют физическим образом, и затем смолу повторно увлажняют полярным органическим растворителем, чистота продукта увеличивается от 80% до 93%. Данный способ занимает много времени и не очень пригоден для промышленного производства.
Патент US RE 39071 описывает две основных примеси, найденные при производстве даптомицина, ангидро-даптомицин и бета-изомер даптомицина. Кроме того, в US RE 39071 заявлено, что используя способ, описанный в примере 1-3, можно получить продукт даптомицина, содержащий менее 6 % двух упомянутых примесей. Пример 3 описывает способ, согласно которому даптомицин промежуточного уровня качества затем очищают способом, включающим четыре хроматографические стадии и дополнительные стадии деминерализации, концентрирования и лиофилизации. На стадиях хроматографирования для промывки и элюирования используется ацетонитрил и, кроме того, этот способ надлежит выполнять с охлажденными растворами и в охлаждаемой комнате.
Патент US 6,696,412 раскрывает способ очистки даптомицина, при котором используют стадию анионообменной хроматографии, где применяют модифицированный буфер для элюирования, и используют стадию микрофильтрации, на которой даптомицин образует мицеллы. В данном патенте описано несколько способов, которые представляют собой комбинацию двух указанных выше стадий в сочетании с другими стадиями очистки, известными квалифицированному специалисту в данной области техники. Высокоочищенный продукт даптомицина определен в патенте как даптомицин с уровнем чистоты 95-97%.
Сущность изобретения
Согласно настоящему изобретению создан улучшенный способ очистки даптомицина, который дает в результате продукт с чистотой по меньшей мере 95%. Описанный способ является более простым чем те способы, что описаны в предшествующем уровне техники, и как описано ниже, исключает чрезмерное использование модифицированных буферов и избавляет от применения ацетонитрила, что благоприятно для окружающей среды.
Согласно способу по изобретению применяются стадии анионообменной хроматографии и обращено-фазовой хроматографии. Кроме того, можно осуществлять стадии обычной фильтрации и лиофилизацию конечного продукта.
Согласно одному воплощению раствор одновалентной соли, используемый в качестве элюирующего буфера на стадиях анионообменной хроматографии, представляет собой раствор хлорида натрия в воде.
Элюирующий буфер стадии б) обращено-фазовой хроматографии в настоящем изобретении представляет собой водный спирт. Предпочтительно водный спирт представляет собой водный этанол. Согласно одному воплощению настоящего изобретения даптомицин элюируют на стадии обращено-фазовой хроматографии, используя элюирующий буфер, содержащий 40-70% этанола в воде.
Настоящее изобретение может быть проиллюстрировано стадиями, приведенными на реакционной схеме 1.
Настоящее изобретение дает в результате продукт даптомицина с итоговой чистотой 95% или более. Количество ангидро-даптомицина изменяется между 0,5-1,5% и количество бета-изомера составляет менее 0,5%.
Согласно данному изобретению создан способ очистки, который проще, чем способы, известные в данной области, в отношении используемых буферов и стадий, что позволяет избежать применения растворителей, которые являются токсичными для окружающей среды. Кроме того, это приводит к очень хорошему отделению и низким уровням двух важнейших примесей: ангидро-даптомицина и бета-изомера даптомицина. Способ по изобретению дает простой процесс очистки, обеспечивающий продукт, который по меньшей мере такой же чистый, как и продукты, описанные в предшествующем уровне техники.
Подробное описание изобретения
Исходное вещество для способа по настоящему изобретению может быть получено способом, описанным в US 4,885,243, где жирная кислота, которую вводят, представляет собой декановую кислоту.
Согласно настоящему изобретению даптомицин очищают, используя в качестве первой стадии анионную хроматографию и затем в качестве второй стадии обращено-фазовую хроматографию.
Ферментативный бульон, используемый в качестве исходного вещества по настоящему изобретению, может быть предварительно обработан до указанных хроматографических стадий для удаления больших частиц и биомассы.
В качестве способа предварительной обработки ферментативный бульон, используемый в качестве исходного вещества по настоящему изобретению, может быть пропущен через одну или более стадий осветления. Квалифицированному специалисту в данной области известны различные пригодные стадии осветления. Неограниченные примеры стадий осветления, пригодных для предварительной обработки ферментативного бульона по настоящему изобретению, представляют собой обратный осмос, центрифугирование, ультрафильтрацию, микрофильтрацию, нанофильтрацию и диафильтрацию. Для осветления возможно использовать даже стадию анионного обмена с высокопористой смолой.
Следует понимать, что различные сочетания способов осветления, хорошо известных квалифицированному специалисту, могут быть использованы согласно настоящему изобретению для предварительной обработки ферментативного бульона перед дальнейшей очисткой даптомицина с помощью анионообменной хроматографии и обращено-фазовой хроматографии.
Осветленный ферментативный бульон добавляют в анионообменную колонку. Согласно настоящему изобретению можно использовать как сильные анионообменные смолы, такие как Capto Q, Q Sepharose XL, Q Sepharose FF, Source 15 Q, Source 30 Q или Macroprep High Q, или эквиваленты, так и слабые анионообменные смолы, такие как имеющиеся в продаже смолы DEAE Sepharose PF (диэтиламинозтил сефароза), ANX Sepharose FF, Source 15 Q. Предпочтительной смолой является в высокой степени поперечно-сшитая агарозная смола с декстрановым поверхностным наполнителем, подобная имеющейся в продаже смоле Capto Q. После загрузки осветленного раствора колонку промывают водой.
Элюирующий буфер стадии а) анионообменной хроматографии в настоящем способе представляет собой раствор одновалентной соли. Указанной одновалентной солью может быть, например, хлорид, такой как NaCl или KCl. Также могут быть использованы другие одновалентные соли, такие как одновалентные соли ацетата, такие как ацетат натрия.
Согласно одному воплощению даптомицин может быть элюирован из колонки с помощью градиента NaCl в воде с градиентом от 0,1 М NaCl до 1,5 М NaCl, предпочтительно от 0,2 М NaCl до 1,0 М NaCl.
Частично очищенный даптомицин затем добавляют в обращено-фазовую колонку. Предпочтительной обращено-фазовой смолой является пористая смола однородного размера, полученная из полистирола и дивинилбензола, подобная имеющейся в продаже смоле Source PRC 30, SP20ss, HP20ss или эквивалентным типам смол на основе полистирола. Затем раствор даптомицина вводят в колонку, колонку промывают водой, содержащей 15% спирт, такой как 15% этанол.
Даптомицин может быть элюирован водным спиртом, например С1-С3 алкильным спиртом, таким как метанол, этанол или изопропанол. Согласно одному воплощению настоящего изобретения даптомицин элюируют из обращено-фазовой колонки, используя этанол в качестве элюирующего растворителя.
Даптомицин согласно одному воплощению элюируют из обращено-фазовой колонки с помощью градиента этанола в воде. Градиент составляет 5-80% этанола и предпочтительно 40%-70% этанола.
В одном предпочтительном воплощении изобретения существует дополнительная стадия обращено-фазовой хроматографии. Предпочтительное воплощение изобретения состоит в пропускании через две обращено-фазовые колонки при разных pH для улучшения чистоты продукта. В одном предпочтительном воплощении первую колонку проходят при нейтральном pH и вторую колонку проходят при кислом pH. Не является существенным порядок прохождения двух обращено-фазовых хроматографических стадий в отношении pH. Первая колонка может быть пройдена при кислом pH и вторая при нейтральном pH, или наоборот.
Согласно одному воплощению изобретения первую обращено-фазовую хроматографическую колонку элюируют при pH 6,5-8,5, предпочтительно при pH 7,5-8,0. Согласно другому воплощению изобретения вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку элюируют при pH 2,5-3,5, предпочтительно при pH 3,0-3,1.
Колонка, которая используется на стадии обращено-фазовой хроматографии в способе по настоящему изобретению, может представлять собой смолу на основе стирола, такую как имеющаяся в продаже смола Source 30RPC. Также могут быть использованы другие эквивалентные смолы для обращено-фазовой хроматографии, такие как SP20ss, HP20ss или эквивалентные типы смол на основе полистирола, известные квалифицированному специалисту.
Очищенный даптомицин затем фильтруют и лиофилизируют при стандартных условиях. Конечный очищенный даптомицин имеет чистоту по меньшей мере 95%.
Экспериментальная часть
Пример 1
После осветления раствор частично очищенного даптомицина загружали в анионообменную колонку. Исходное вещество осветляли диафильтрацией.
Очистка с помощью ионообменной хроматографии:
Диафильтрованный даптомицин загружали в анионообменную колонку, смола Capto Q.
Буферы следующего состава готовили в отдельных сосудах:
Буфер 1: | ДИ-вода |
Буфер 2: | 0,2 М NaCl |
Буфер 3: | 0,4 М NaCl |
Буфер 4: | 1,0 М NaCl |
Доводили pH исходного раствора до 6-8 с помощью разбавленного NaOH перед загрузкой. Даптомицин связывался со смолой при максимальной емкости 20 г/л смолы. После связывания со смолой связанные с ферментацией примеси сначала вымывали буфером 1, а затем буфером 2.
Элюирование и повторное получение даптомицина проводили в изократическом режиме с буфером 3. После элюирования колонку десорбировали с буфером 4, чтобы удалить оставшийся даптомицин или сильно связанные примеси.
Даптомицин собирали, исходя из объема около 5 - 10 BV (объем пропущенного раствора, отнесенный к объему сорбента).
Обращено-фазовая хроматография I (ОФХ I):
Даптомицин очищали с помощью ВЭЖХ, используя смолу Source 30RPC на основе стирола.
Буферы для этой стадии готовили в отдельных сосудах:
Буфер 1: | ДИ-вода |
Буфер 2: | 12-16% этанол |
Буфер 3: | 55-65% этанол |
Даптомицин очищали при нейтральном pH (pH 7,5-8,0). Сначала колонку уравновешивали с буфером 1. Даптомицин загружали в колонку (максимальная степень загрузки <30 г/л смолы) перед тем, как менее гидрофобные примеси вымывали (главным образом продукты распада), используя буфер 2.
Затем даптомицин повторно извлекали с помощью градиентного элюирования от 15 до 60% этанола (градиентное смешивание буфера 1 с 2) по 12-16 BV. Даптомицин собирали, исходя из УФ сигнала.
Обращено-фазовая хроматография II:
Исходя из чистоты, фракции собирали и объединяли с полученными на первой стадии обращено-фазовой хроматографии (ОФХ I) и доводили pH до 3,0-3,1 с уксусной кислотой при быстром перемешивании для предотвращения выпадения в осадок даптомицина в сосуде.
Буферы для этой стадии готовили в отдельных сосудах:
Буфер 1: | ДИ-вода, pH 3,0-3,1 достигали с уксусной кислотой |
Буфер 2: | 30-35% этанол, pH 3,0-3,1 достигали с уксусной кислотой |
Буфер 3: | 65-75% этанол, pH 3,0-3,1 достигали с уксусной кислотой |
Раствор даптомицина с достигнутым pH загружали в колонку (максимальная степень загрузки <30 г/л смолы) и менее гидрофобные примеси вымывали буфером 1. Элюирование и повторное извлечение даптомицина проводили, используя градиент этанола от 35% до 70%, смешивая буфер 2 и 3, по 8-12 BV.
Даптомицин собирали, исходя из УФ-сигнала.
Пример 2
Чтобы осветлить ферментативный бульон использовали несколько способов осветления. Во-первых, ферментативный бульон центрифугировали для удаления больших частиц и биомассы. pH ферментативного бульона составлял 6,4, а сухой материал (СМ) составлял около 6-7%. После центрифугирования надосадочная жидкость содержала только 3% СМ. Затем надосадочную жидкость дополнительно предварительно фильтровали через 25-100 мкм фильтр, чтобы удалить частицы больше, чем 25-100 мкм.
Центрифугированный и предварительно фильтрованный раствор затем ультрафильтровали через фильтр Pellicon 2, 500 кДа (Millipore) для удаления больших молекул. После ультрафильтрации раствор сверхконцентрировали в ходе нанофильтрации. Используемый фильтр был DL-серии, 350 Да (GE Osmonics). Концентрат содержал 5 г/л даптомицина и имел pH 6.
Затем концентрат очищали на анионообменной хроматографической колонке согласно настоящему изобретению. Используемая смола представляла собой Capto Q (90 мкм) от GE Healthcare. При необходимости рН концентрата доводили до 6 с NaOH перед загрузкой его в колонку. Затем концентрат загружали в колонку, колонку промывали водой и даптомицин элюировали ступенчатым градиентом NaCl. Элюирующие растворы содержали 0,2 М, 0,4 М и 1,0 М NaCl в воде. Объединенные фракции из анионообменной колонки содержали около 2,5 г/л даптомицина.
Объединенные фракции из анионообменной колонки затем загружали в первую обращено-фазовую хроматографическую колонку (ОФХ I). Используемая смола представляла собой Source 30RPC (30 мкм) от GE Healthcare. После загрузки колонку промывали водой и элюировали градиентом 20-50% этанола при pH 7-8. Пул фракций на этой стадии содержал около 6 г/л даптомицина.
Затем этот пул фракций загружали во вторую обращено-фазовую колонку с той же самой смолой. После загрузки раствора даптомицина из предыдущей обращено-фазовой колонки колонку промывали водой и даптомицин элюировали градиентом 20-50% этанола при pH 3,0. Пул фракций на этой стадии содержал около 8 г/л даптомицина.
Затем раствор даптомицина подвергали стадии нанофильтрации с 350 Да мембраной DL-серии от GE Osmonics.
После нанофильтрации раствор даптомицина лиофилизировали при стандартных условиях.
Чистота конечного продукта находится в пределах 95-97%.
Claims (16)
1. Способ очистки даптомицина, включающий стадии, на которых
а) загружают раствор, содержащий частично очищенный даптомицин, в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером, где частично очищенный даптомицин возможно очищают из ферментативного бульона, содержащего даптомицин, с использованием одной или нескольких стадий осветления;
б) загружают первый элюат со стадии а) в обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 6,5-8,5;
в) загружают второй элюат со стадии б) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 2,5-3,5; и
г) возможно фильтруют и лиофилизируют третий элюат,
где первый элюирующий буфер в а) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в б) и г) представляет собой водный спирт.
а) загружают раствор, содержащий частично очищенный даптомицин, в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером, где частично очищенный даптомицин возможно очищают из ферментативного бульона, содержащего даптомицин, с использованием одной или нескольких стадий осветления;
б) загружают первый элюат со стадии а) в обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 6,5-8,5;
в) загружают второй элюат со стадии б) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 2,5-3,5; и
г) возможно фильтруют и лиофилизируют третий элюат,
где первый элюирующий буфер в а) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в б) и г) представляет собой водный спирт.
2. Способ по п.1, где продукт стадии в) обращено-фазовой хроматографии дополнительно очищают в ходе одной или нескольких стадий фильтрации.
3. Способ по п.2, где продукт обращенной фазы дополнительно подвергают стадии лиофилизации.
4. Способ по п.1, где одновалентная соль первого элюирующего буфера в а) представляет собой NaCl.
5. Способ по п.4, где элюирующий буфер представляет собой 0,1-1,5 М NaCl.
6. Способ по п.1, где элюирующий буфер в б) представляет собой водный этанол.
7. Способ по п.6, где элюирующий буфер представляет собой 5-80% этанол.
8. Способ по п.1, где стадию анионообменной хроматографии осуществляют, используя в высокой степени поперечно-сшитую агарозную смолу с декстрановым поверхностным наполнителем.
9. Способ по п.1, где стадию обращено-фазовой хроматографии осуществляют, используя колонку со смолой на основе стирола.
10. Способ очистки даптомицина, включающий стадии, на которых
а) подвергают ферментативный бульон, содержащий даптомицин, одной или нескольким стадиям осветления с получением раствора;
б) загружают раствор со стадии а) в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером;
в) загружают раствор со стадии б) в первую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 6,5-8,5;
г) загружают второй элюат со стадии в) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 2,5-3,5;
д) подвергают третий элюат со стадии г) одной или нескольким стадиям фильтрации с получением фильтрата; и
е) подвергают фильтрат д) лиофилизации, получая в результате очищенный порошок даптомицина,
где первый элюирующий буфер в б) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в в) и г) представляет собой водный спирт.
а) подвергают ферментативный бульон, содержащий даптомицин, одной или нескольким стадиям осветления с получением раствора;
б) загружают раствор со стадии а) в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером;
в) загружают раствор со стадии б) в первую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 6,5-8,5;
г) загружают второй элюат со стадии в) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 2,5-3,5;
д) подвергают третий элюат со стадии г) одной или нескольким стадиям фильтрации с получением фильтрата; и
е) подвергают фильтрат д) лиофилизации, получая в результате очищенный порошок даптомицина,
где первый элюирующий буфер в б) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в в) и г) представляет собой водный спирт.
11. Способ по п.10, где стадии осветления в а) представляют собой одну или комбинацию следующих методик: обратный осмос, центрифугирование, фильтрация, ультрафильтрация, нанофильтрация, анионообменная хроматография.
12. Способ по п.10, где элюирующий раствор в б) представляет собой NaCl.
13. Способ по п.12, где элюирующий буфер представляет собой 0,1-1,5 М NaCl.
14. Способ по п.10, где элюирующий буфер в в) представляет собой водный этанол.
15. Способ по п.14, где элюирующий буфер представляет собой 5-80% этанол.
16. Способ очистки даптомицина, включающий стадии, на которых
а) загружают раствор, содержащий частично очищенный даптомицин, в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером, где частично очищенный даптомицин возможно очищают из ферментативного бульона, содержащего даптомицин, с использованием одной или нескольких стадий осветления;
б) загружают первый элюат со стадии а) в обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 2,5-3,5;
в) загружают второй элюат со стадии б) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 6,5-8,5; и
г) возможно фильтруют и лиофилизируют третий элюат,
где первый элюирующий буфер в а) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в б) и г) представляет собой водный спирт.
а) загружают раствор, содержащий частично очищенный даптомицин, в анионообменную хроматографическую колонку и элюируют первый элюат первым элюирующим буфером, где частично очищенный даптомицин возможно очищают из ферментативного бульона, содержащего даптомицин, с использованием одной или нескольких стадий осветления;
б) загружают первый элюат со стадии а) в обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют второй элюат вторым элюирующим буфером с pH 2,5-3,5;
в) загружают второй элюат со стадии б) во вторую обращено-фазовую хроматографическую колонку и элюируют третий элюат третьим элюирующим буфером с pH 6,5-8,5; и
г) возможно фильтруют и лиофилизируют третий элюат,
где первый элюирующий буфер в а) представляет собой раствор одновалентной соли и второй и третий элюирующий буфер в б) и г) представляет собой водный спирт.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US15366009P | 2009-02-19 | 2009-02-19 | |
US61/153,660 | 2009-02-19 | ||
PCT/NO2010/000066 WO2010095953A1 (en) | 2009-02-19 | 2010-02-19 | Process for purifying lipopeptides |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2011137010A RU2011137010A (ru) | 2013-03-27 |
RU2526391C2 true RU2526391C2 (ru) | 2014-08-20 |
Family
ID=42116034
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2011137010/04A RU2526391C2 (ru) | 2009-02-19 | 2010-02-19 | Способ очистки липопептидов |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9150894B2 (ru) |
EP (1) | EP2398817B2 (ru) |
JP (1) | JP5752609B2 (ru) |
KR (1) | KR101666144B1 (ru) |
CN (1) | CN102325785B (ru) |
AU (1) | AU2010216475B2 (ru) |
BR (1) | BRPI1008300B1 (ru) |
CA (1) | CA2748932C (ru) |
DK (1) | DK2398817T4 (ru) |
ES (1) | ES2543457T5 (ru) |
HR (1) | HRP20150761T4 (ru) |
HU (1) | HUE026818T2 (ru) |
IL (1) | IL214374A (ru) |
MX (1) | MX2011008621A (ru) |
PL (1) | PL2398817T5 (ru) |
PT (1) | PT2398817E (ru) |
RU (1) | RU2526391C2 (ru) |
SI (1) | SI2398817T2 (ru) |
UA (1) | UA105785C2 (ru) |
WO (1) | WO2010095953A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201104848B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2762182C1 (ru) * | 2020-12-08 | 2021-12-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Гауземицины А и В - гликолипопептидные антибактериальные антибиотики и способ их получения |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PT2398817E (pt) | 2009-02-19 | 2015-08-28 | Xellia Pharmaceuticals Aps | Processo para purificar lipopéptidos |
CN102690329B (zh) * | 2011-03-25 | 2014-06-04 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法 |
CN102875652A (zh) * | 2011-07-13 | 2013-01-16 | 北大方正集团有限公司 | 一种分离纯化达托霉素的方法 |
CN103159829B (zh) * | 2011-12-08 | 2014-11-05 | 北大方正集团有限公司 | 达托霉素的提取方法 |
CN102675426B (zh) * | 2012-04-26 | 2013-12-11 | 杭州华东医药集团生物工程研究所有限公司 | 一种达托霉素的提取纯化方法 |
CN102924572B (zh) * | 2012-11-12 | 2014-12-03 | 华北制药集团新药研究开发有限责任公司 | 一种高纯度达托霉素的制备方法 |
CN104387444B (zh) * | 2014-11-13 | 2017-12-08 | 北大医药重庆大新药业股份有限公司 | 一种达托霉素杂质rs‑2高纯度样品的制备方法 |
SG11201704822WA (en) * | 2014-12-15 | 2017-07-28 | Merck Patent Gmbh | Target molecule capture from crude solutions |
CN105001305A (zh) * | 2015-04-29 | 2015-10-28 | 利穗科技(苏州)有限公司 | 利用层析技术提取高纯度达托霉素的方法 |
CN105481950B (zh) * | 2016-01-28 | 2019-01-04 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 一种达托霉素提取方法 |
IT201600127655A1 (it) | 2016-12-16 | 2018-06-16 | Gnosis Spa | Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici |
CN108250270A (zh) * | 2016-12-29 | 2018-07-06 | 天津领世生物科技开发有限公司 | 一种从发酵液中富集提取达托霉素的方法 |
CN112979756B (zh) * | 2019-12-13 | 2023-01-03 | 浙江昌海制药有限公司 | 达托霉素的提纯方法 |
CN113004373A (zh) * | 2019-12-19 | 2021-06-22 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种达托霉素的纯化方法 |
CN113340691B (zh) * | 2021-06-05 | 2023-12-12 | 清华大学 | 一种提取海洋沉积物中不同赋存形态磷的方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2311460C9 (ru) * | 2000-01-20 | 2009-06-10 | Кьюбист Фармасьютикалз, Инк. | Способ очистки липопептида (варианты), антибиотическая композиция на основе очищенного липопептида (варианты) |
CN101899094A (zh) * | 2009-06-01 | 2010-12-01 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种高纯达托霉素的制备方法 |
Family Cites Families (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4537717A (en) | 1982-05-21 | 1985-08-27 | Eli Lilly And Company | Derivatives of A-21978C cyclic peptides |
US4885243A (en) * | 1984-10-09 | 1989-12-05 | Eli Lilly And Company | Process for producing A-21978C derivatives |
US4667016A (en) | 1985-06-20 | 1987-05-19 | Kirin-Amgen, Inc. | Erythropoietin purification |
US4874843A (en) | 1987-12-03 | 1989-10-17 | Eli Lilly And Company | Chromatographic purification process |
ZA883887B (en) | 1987-06-10 | 1990-02-28 | Lilly Co Eli | Chromatographic purification process |
JP2661790B2 (ja) * | 1990-11-27 | 1997-10-08 | 電気化学工業株式会社 | 入尿トリプシンインヒビターの精製方法 |
ZA946122B (en) * | 1993-08-17 | 1995-03-20 | Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
US5650496A (en) | 1995-04-14 | 1997-07-22 | Cephalon, Inc. | IGF-I purification process |
US20060014674A1 (en) | 2000-12-18 | 2006-01-19 | Dennis Keith | Methods for preparing purified lipopeptides |
KR20110127732A (ko) * | 2000-12-18 | 2011-11-25 | 큐비스트 파마슈티컬즈 인코포레이티드 | 정제된 리포펩티드의 제조 방법 |
JP2010505874A (ja) * | 2006-10-03 | 2010-02-25 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | ポリペプチドコンジュゲートの精製方法 |
WO2009144739A1 (en) * | 2008-05-26 | 2009-12-03 | Biocon Limited | Amorphous daptomycin and a method of purification thereof |
PT2398817E (pt) | 2009-02-19 | 2015-08-28 | Xellia Pharmaceuticals Aps | Processo para purificar lipopéptidos |
-
2010
- 2010-02-19 PT PT107076945T patent/PT2398817E/pt unknown
- 2010-02-19 UA UAA201111075A patent/UA105785C2/ru unknown
- 2010-02-19 ES ES10707694T patent/ES2543457T5/es active Active
- 2010-02-19 US US12/708,539 patent/US9150894B2/en active Active
- 2010-02-19 PL PL10707694T patent/PL2398817T5/pl unknown
- 2010-02-19 BR BRPI1008300-6A patent/BRPI1008300B1/pt active IP Right Grant
- 2010-02-19 AU AU2010216475A patent/AU2010216475B2/en active Active
- 2010-02-19 RU RU2011137010/04A patent/RU2526391C2/ru active
- 2010-02-19 EP EP10707694.5A patent/EP2398817B2/en active Active
- 2010-02-19 KR KR1020117021714A patent/KR101666144B1/ko active IP Right Grant
- 2010-02-19 WO PCT/NO2010/000066 patent/WO2010095953A1/en active Application Filing
- 2010-02-19 CA CA2748932A patent/CA2748932C/en active Active
- 2010-02-19 DK DK10707694.5T patent/DK2398817T4/da active
- 2010-02-19 MX MX2011008621A patent/MX2011008621A/es active IP Right Grant
- 2010-02-19 JP JP2011551028A patent/JP5752609B2/ja active Active
- 2010-02-19 HU HUE10707694A patent/HUE026818T2/en unknown
- 2010-02-19 SI SI201030966T patent/SI2398817T2/sl unknown
- 2010-02-19 CN CN201080008292.3A patent/CN102325785B/zh active Active
-
2011
- 2011-06-30 ZA ZA2011/04848A patent/ZA201104848B/en unknown
- 2011-08-01 IL IL214374A patent/IL214374A/en active IP Right Grant
-
2015
- 2015-07-10 HR HRP20150761TT patent/HRP20150761T4/hr unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2311460C9 (ru) * | 2000-01-20 | 2009-06-10 | Кьюбист Фармасьютикалз, Инк. | Способ очистки липопептида (варианты), антибиотическая композиция на основе очищенного липопептида (варианты) |
CN101899094A (zh) * | 2009-06-01 | 2010-12-01 | 安徽丰原发酵技术工程研究有限公司 | 一种高纯达托霉素的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GU JIAN-QIAO ET AL: "Structural characterization of daptomycin analogues A21978C1-3(d-Asn11) produced by a recombinant Streptomyces roseosporus strain." JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS, 2007, vol. 70, no. 2, pages 233-240 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2762182C1 (ru) * | 2020-12-08 | 2021-12-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе" | Гауземицины А и В - гликолипопептидные антибактериальные антибиотики и способ их получения |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2526391C2 (ru) | Способ очистки липопептидов | |
EP2560738B1 (en) | Simple method for simultaneous removal of multiple impurities from culture supernatants to ultralow levels | |
WO2009144739A1 (en) | Amorphous daptomycin and a method of purification thereof | |
EP3663401B1 (en) | Purification process for biological molecules such as plasmid dna using anionic exchange chromatography | |
JP2008506360A (ja) | テイコプラニンの高純度生産方法 | |
US20190330269A1 (en) | Method for purifying antibodies using pbs | |
CN104066747A (zh) | 替考拉宁的纯化方法 | |
CN112979756A (zh) | 达托霉素的提纯方法 | |
US5986089A (en) | Process for the preparation of moenomycin A | |
CA3045214A1 (en) | Process for the purification of lipopolypeptide antibiotics | |
RU2081122C1 (ru) | Способ выделения и очистки инсулина или его биотехнологических предшественников | |
DK2776453T3 (en) | A process for the purification of teicoplanin | |
CN116284285A (zh) | 一种离子交换层析纯化腐生子囊菌抗菌肽Plectasin的方法 | |
JPH0121836B2 (ru) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HE9A | Changing address for correspondence with an applicant |