RU2237471C2 - Абсорбируемые микрочастицы - Google Patents

Абсорбируемые микрочастицы Download PDF

Info

Publication number
RU2237471C2
RU2237471C2 RU2000122622A RU2000122622A RU2237471C2 RU 2237471 C2 RU2237471 C2 RU 2237471C2 RU 2000122622 A RU2000122622 A RU 2000122622A RU 2000122622 A RU2000122622 A RU 2000122622A RU 2237471 C2 RU2237471 C2 RU 2237471C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
units
lactide
microparticle
absorbable
cys
Prior art date
Application number
RU2000122622A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2000122622A (ru
Inventor
Шалаби Вахба ШАЛАБИ (US)
Шалаби Вахба ШАЛАБИ
Original Assignee
Поли-Мед Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Поли-Мед Инк. filed Critical Поли-Мед Инк.
Publication of RU2000122622A publication Critical patent/RU2000122622A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2237471C2 publication Critical patent/RU2237471C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6921—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere
    • A61K47/6927—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit the form being a particulate, a powder, an adsorbate, a bead or a sphere the form being a solid microparticle having no hollow or gas-filled cores
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A61K47/585—Ion exchange resins, e.g. polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтическим препаратам, содержащим пептиды. Заявлен комплекс пролонгированного действия, содержащий один или несколько пептидов или их комбинацию, фиксированных на микрочастице из абсорбируемого полимера за счет сил ионного взаимодействия, которая может быть необязательно заключена в оболочку из абсорбируемого полимера. Изобретение обеспечивает продолжительность высвобождения фиксированного пептида или белка. 12 н. и 34 з.п.ф-лы, 6 табл.

Description

Предпосылки изобретения
Это изобретение относится к комплексу пролонгированного действия, содержащему один или несколько пептидов, один или несколько белков или их комбинацию, фиксированных на микрочастице из абсорбируемого полимера, которая может быть необязательно заключена в оболочку из абсорбируемого полимера. Комплексная микрочастица по этому изобретению включает пептид (пептиды) и/или белок (белки), которые имеют по крайней мере одну аминогруппу, и/или одну карбоксильную группу в молекуле, и твердую микрочастицу из абсорбируемого полиэфира, имеющего поверхностные и субповерхностные карбоксильные или аминогруппы в количестве, достаточном для связывания пептида (пептидов) и/или белка (белков), при этом фиксированный пептид (пептиды) или белок (белки) составляет от 0,1% до 30% от общей массы комплексной микрочастицы. Комплексные микрочастицы, содержащие фиксированный пептид (пептиды) и/или белок (белки), могут быть по отдельности или группами заключены в оболочку из абсорбируемого полимера, которая увеличивает продолжительность высвобождения фиксированного пептида (пептидов) и/или белка (белков).
Чтобы еще более увеличить время высвобождения фиксированного пептида (пептидов) и/или белка (белков), заключенные в оболочку микрочастицы можно ввести в композицию с абсорбируемой гелеобразующей жидкостью, которая превращается в мягкий гель или полутвердое вещество при контактировании с водой в биологической среде.
Существует много систем доставки лекарственных средств к месту действия, которые разработаны, испытаны и применяются для обеспечения регулируемого высвобождения фармацевтических композиций in vivo. Например, для регулируемого высвобождения биологически активных молекул, в частности прогестерона, используют полиэфиры таких кислот, как поли-(DL-молочная кислота), поли(гликолевая кислота), поли(ε-капролактон), и различные другие сополимеры; эти вещества используют в форме микрокапсул, пленок или палочек (М.Chasin and R.Langer, editors. Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems, Dekker, NY, 1990). Лекарственное средство выделяется в течение определенного периода времени из композиции, состоящей из полимера и лекарственного средства, которую имплантируют подкожно или внутримышечно. Такие биосовместимые и биологически разлагающиеся полимерные системы созданы таким образом, что заключенное в них лекарственное средство диффундирует из полимерной матрицы. После выделения лекарственного средства оболочка разрушается in vivo, делая ненужным хирургическое вмешательство для удаления имплантата. Хотя до конца не ясно, какие факторы способствуют разрушению оболочки, считается, что разложение полиэфиров обусловлено расщеплением сложноэфирных связей под действием неферментативного автокаталитического гидролиза полимерных компонентов.
Несколько публикаций ЕРО и патентов США посвящены вопросу создания полимерной матрицы и ее использованию для регулирования скорости и степени высвобождения лекарственных средств in vivo.
Например, Deluca (публикация ЕРО №0467389 А2) описывает физическое взаимодействие между гидрофобным биологически разлагающимся полимером и белком или полипептидом. Полученная композиция представляет собой смесь лекарственного средства и гидрофобного полимера, которая обеспечивает длительное диффузионное высвобождение лекарственного средства из матрицы после введения субъекту.
Hutchinson (патент США №4767628) описывает способ регулируемого высвобождения лекарственного средства из однородной дисперсии в полимерной матрице. В этом патенте указано, что непрерывное регулируемое высвобождение этого препарата достигается в результате объединения двух фаз: во-первых, диффузионно-зависимого выщелачивания лекарственного средства с поверхности препарата и, во-вторых, выделения лекарственного средства по водным каналам, образующимся в результате разрушения полимера.
Другие получаемые in situ биологически разлагающиеся имплантаты и способы их получения описаны в патентах США №№5278201 и 5077049, выданных Dunn et al. В патентах, выданных Dunn et al., описаны способы восстановления периодонтальной ткани в десневом кармане и замедления миграции эпителиальных клеток по корневой поверхности зуба. В патенте №5077049 описаны способы размещения получаемого in situ биологически разлагающегося барьера рядом с поверхностью зуба. Этот барьер является микропористым, имеет поры определенного размера и может содержать биологически активные средства. Этот барьер создают, вводя в десневой карман жидкий раствор биологически разлагающегося полимера, такого как поли(dl-лактид-согликолид), который коагулирует в воде и является термопластичным, в смешивающемся с водой, нетоксичном органическом растворителе, таком как N-метилпирролидон (то есть с достижением обычной концентрации полимера около 50%). Органический растворитель рассеивается в периодонтальных жидкостях, и биологически разлагающийся, коагулируемый в воде полимер образует in situ твердый биологически разлагающийся имплантат. Рассеяние растворителя вызывает образование пор в твердом биологически разлагающемся имплантате, что стимулирует врастание в них клеток. В патенте №'859 описаны предназначенные для той же цели способы, которые включают создание биологически разлагающегося барьера из жидкой смеси биологически разлагающегося, термоотверждающегося форполимера, отверждающего агента, водорастворимого вещества, такого как соль, сахар, и водорастворимого полимера. Термоотверждающимся форполимером является абсорбируемый полимер с концевой группой акрилового эфира.
Кроме того, в научной литературе описан ряд систем, предназначенных для регулируемой доставки биологически активных соединений в разные органы. Например, в патенте США №5011692, выданном Fujioka et al., описан фармацевтический препарат периодического действия, который состоит из содержащих лекарственное средство полимерных слоев. В этом препарате чередуются полимерные слои, содержащие лекарственное средство в небольшом количестве, и полимерные слои, не содержащие лекарственного средства. Поверхность всей композиции перпендикулярна направлению плоскости слоев и покрыта полимерным материалом, который не растворим в воде. Лекарственные препараты периодического действия подобных типов пригодны для введения под кожу.
В патенте США №5366756, выданном Chesterfield et al., описан способ получения пористых биологически абсорбируемых хирургических имплантатов. Этот способ включает получение множества частиц биологически абсорбируемого вещества имплантата и нанесение на эти частицы покрытия, по крайней мере, одного фактора роста. Этот имплантат может также содержать антимикробные средства.
В патенте США №5385738, выданном Yamhira et al., описана инъекционная система пролонгированного действия, представляющая собой суспензию порошка, содержащую активный ингредиент и фармацевтически приемлемый биологически разлагающийся носитель (например, белки, полисахариды и синтетические высокомолекулярные соединения, предпочтительно коллаген, ателоколлаген, желатин и их смеси) в вязком растворителе (например, растительные масла, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, силиконовое масло и триглицериды жирных кислот со средней длиной цепи). Активный ингредиент в этом фармацевтическом препарате заключен в биологически разлагающийся носитель в следующем состоянии: (i) активный ингредиент химически связан с матрицей носителя; (ii) активный ингредиент связан с матрицей носителя межмолекулярными силами или (iii) активный ингредиент физически заключен в матрицу носителя.
Кроме того, известны системы, аналогичные вышеописанным в научной литературе, например система, предложенная Dunn et al. (патент США №4938763), которые предназначены для образования in situ биологически разлагающихся, микропористых, твердых имплантатов в теле субъекта в результате коагуляции раствора полимера в органическом растворителе, таком как N-метил-2-пирролидин. Однако использование растворителей, в том числе и низкомолекулярных органических растворителей, облегчает миграцию раствора с места введения, что вызывает поражение живых тканей, включая обезвоживание и некроз клеток. Уменьшение массы растворителя может привести к растрескиванию коагулята и отделению от окружающей ткани.
В патенте США №5612052 описаны катионообменные микрочастицы, обычно получаемые из полиэфиров с карбоксилсодержащими цепями, на которых фиксированы основные биологически активные агенты с целью создания системы пролонгированного действия в абсорбируемом гелеобразующем жидком полиэфире. Патент США №5612052 включен в это описание изобретения в качестве ссылки. Конъюгирование карбоксильных соединений в ионном состоянии с основным полипептидом описано в патентах США №№5672659 и 5665702. Однако эти комплексы являются растворимыми химическими веществами, образуемыми в результате молекулярного взаимодействия отдельных основных и карбоксильных компонентов в соответствующих растворах с образованием ионного конъюгата в качестве химического вещества с новыми физико-химическими свойствами. Этот способ отличается от способа по настоящему изобретению, в котором образование комплекса происходит в гетерогенной системе, предполагающей прежде всего образование поверхностного комплекса.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к связанной микрочастице, имеющей сердцевину из абсорбируемого гетероцепного полимера и один или нескольких пептидов, один или нескольких белков или их комбинацию, фиксированные на указанной сердцевине из абсорбируемого гетероцепного полимера, в которой:
каждый пептид независимо выбирают из группы, включающей пептид, высвобождающий гормон роста (GHRP), гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH), соматостатин, бомбезин, пептид, высвобождающий гастрин (GRP), кальцитонин, брадикинин, галанин, меланоцитостимулирующий гормон (MSH), фактор высвобождения гормона роста (GRF), амилин, тахикинины, секретин, паращитовидный гормон (РТН), энкафелин, эндотелии, пептид, высвобождающий ген кальцитонина (CGRP), нейромедины, белок, связанный с паращитовидным гормоном (РТНrР), глюкагон, нейротенсин, адренокортикотропный гормон (АСТН), пептид YY (PYY), пептид, высвобождающий глюкагон (GLP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (РАСАР), мотилин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), TSH, их аналоги, фрагменты и фармацевтически приемлемую соль; каждый белок независимо выбирают из группы, включающей гормон роста, эритропоэтин, фактор, стимулирующий колонию гранулоцитов, фактор, стимулирующий колонию макрофагов, и интерфероны.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей группы В является такая микрочастица, в которой указанный пептид, белок, их комбинация или фармацевтически приемлемая соль составляют от 0,1% до 30% от общей массы связанных микрочастиц.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей группы С является такая микрочастица, в которой сердцевина из указанного абсорбируемого гетероцепного полимера содержит гликолятные звенья.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей группы D является такая микрочастица, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера далее содержит цитратные, тартратные или малатные остатки.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей группы Е является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным, тартратным или малатным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы С является такая микрочастица, в которой указанные гликолятные звенья заканчиваются карбоксильной частью.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы С является такая микрочастица, в которой указанные гликолятные звенья заканчиваются амином.
Другим объектом этого изобретения является заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, в которой:
указанная связанная микрочастица имеет сердцевину из абсорбируемого гетероцепного полимера и один или несколько пептидов, один или несколько белков или их комбинацию, фиксированные на указанной сердцевине из абсорбируемого гетероцепного полимера;
каждый пептид независимо выбирают из группы, включающей пептид, высвобождающий гормон роста (GHRP), гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH), соматостатин, бомбезин, пептид, высвобождающий гастрин (GRP), кальцитонин, брадикинин, галанин, меланоцитостимулирующий гормон (MSH), фактор высвобождения гормона роста (GRF), амилин, тахикинины, секретин, паращитовидный гормон (РТН), энкафелин, эндотелии, пептид, высвобождающий ген кальцитонина (CGRP), нейромедины, белок, связанный с паращитовидным гормоном (РТНrР), глюкагон, нейротенсин, адренокортикотропный гормон (АСТН), пептид YY (PYY), пептид, высвобождающий глюкагон (GLP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (РАСАР), мотилин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), TSH, их аналоги, фрагменты и фармацевтически приемлемую соль;
каждый белок независимо выбирают из группы, включающей гормон роста, эритропоэтин, фактор, стимулирующий колонию гранулоцитов, фактор, стимулирующий колонию макрофагов, и интерфероны;
указанная сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит гликолятные звенья.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой указанный пептид, белок, их комбинация или фармацевтически приемлемая соль составляет от 0,1% до 30% от общей массы связанной микрочастицы и указанная сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит цитратные, тартратные или малатные остатки.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей группы F является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным, тартратным или малатным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1, и указанные гликолятные звенья заканчиваются карбоксильной частью или амином.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой указанный абсорбируемый образующий оболочку полимер содержит:
а) звенья на основе l-лактида и звенья на основе гликолида,
(b) звенья на основе d,l-лактида и звенья на основе гликолида,
(c) звенья на основе d,l-лактида или
(d) звенья на основе l-лактида и звенья на основе d,l-лактида.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10, отношение звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе d,l-лактида составляет около 80:20 и отношение звеньев на основе d,l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10.
Предпочтительной заключенной в оболочку микрочастицей группы F является такая микрочастица, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 5-70% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 20-60% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая частица, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 30-50% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
Другим объектом этого изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая вышеописанные связанные микрочастицы и фармацевтически приемлемый носитель.
Другим объектом этого изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая вышеописанные связанные микрочастицы, неводный абсорбируемый гелеобразующий жидкий полиэфир и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
Другим объектом этого изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая вышеописанные заключенные в оболочку микрочастицы и фармацевтически приемлемый носитель.
Другим объектом этого изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая вышеописанные заключенные в оболочку микрочастицы, неводный абсорбируемый гелеобразующий жидкий полиэфир и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы D, входящей в группу G, является такая микрочастица, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит цитратные остатки и пептид является аналогом LHRH.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к нитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого гетероцепного полимера составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы D, входящей в группу Н, является такая микрочастица, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит тартратные остатки и пептид является аналогом LHRH.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы D, входящей в группу I, является такая микрочастица, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит цитратные остатки и пептид является аналогом соматостатина.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинил-ацетил-D-Рhе-Суs-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два Cys связаны дисульфидной связью.
Другой предпочтительной связанной микрочастицей группы D, входящей в группу J, является такая микрочастица, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит тартратные остатки и пептид является аналогом соматостатина.
Предпочтительной вышеописанной связанной микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинил-ацетил-D-Рhе-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Рhе-Суs-Туr-D-Тrр-Lуs-Аbu-Суs-Тhr-NН2, где два Суs связаны дисульфидной связью.
Предпочтительной заключенной в оболочку микрочастицей по этому изобретению является микрочастица, включающая одну или несколько связанных микрочастиц группы G, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит:
(а) звенья на основе l-лактида и звенья на основе гликолида,
(b) звенья на основе d,l-лактида и звенья на основе гликолида,
(с) звенья на основе d,l-лактида или
(d) звенья на основе l-лактида и звенья на основе d,l-лактида.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 и отношение:
(a) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10,
(b) звеньев на основе d,l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и
(c) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе d,l-лактида составляет около 80:20.
Другая предпочтительная заключенная в оболочку микрочастица включают одну или несколько связанных микрочастиц группы Н, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит:
(а) звенья на основе l-лактида и звенья на основе гликолида,
(b) звенья на основе d,l-лактида и звенья на основе гликолида,
(c) звенья на основе d,l-лактида или
(d) звенья на основе l-лактида и звенья на основе d,l-лактида.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 и отношение:
(a) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10,
(b) звеньев на основе d,l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10,
(c) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе d,l-лактида составляет около 80:20.
Другая предпочтительная заключенная в оболочку микрочастица включает одну или несколько связанных микрочастиц группы I, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит:
(а) звенья на основе l-лактида и звенья на основе гликолида,
(b) звенья на основе d,l-лактида и звенья на основе гликолида,
(с) звенья на основе d,l-лактида или
(d) звенья на основе l-лактида и звенья на основе d,l-лактида.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфид-ной связью, N-гидроксиэтилпиперазинил-ацетил-D-Рhе-Суs-Туr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Рhе-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, и отношение:
(a) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10,
(b) звеньев на основе d,l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и
(c) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе d,l-лактида составляет около 80:20.
Другая предпочтительная заключенная в оболочку микрочастица включает одну или несколько связанных микрочастиц группы J и абсорбируемый образующий оболочку полимер, который содержит:
(а) звенья на основе l-лактида и звенья на основе гликолида,
(b) звенья на основе d,l-лактида и звенья на основе гликолида,
(c) звенья на основе d,l-лактида или
(d) звенья на основе l-лактида и звенья на основе d,l-лактида.
Предпочтительной вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицей является такая микрочастица, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинил-ацетил-D-Рhе-Суs-Туг-D-Тrр-Lуs-Аbu-Суs-Тhr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Рhе-Суs-Туr-D-Тrр-Lуs-Аbu-Суs-Тhr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, и отношение:
(a) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10,
(b) звеньев на основе d,l-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и
(c) звеньев на основе l-лактида к звеньям на основе d,l-лактида составляет около 80:20.
Другим объектом этого изобретения является способ получения вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицы, который включает стадию заключения связанной микрочастицы в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера.
Предпочтительным вышеописанным способом является такой способ, в котором дисперсию указанных связанных микрочастиц в растворе, содержащем указанный абсорбируемый образующий оболочку полимер и растворитель, по каплям вводят в предварительно охлажденную среду, причем указанная среда не является растворителем указанного абсорбируемого образующего оболочку полимера.
Предпочтительным вышеописанным способом является такой способ, в котором раствор абсорбируемого образующего оболочку полимера содержит от около 5% до 30% абсорбируемого образующего оболочку полимера, предварительно охлажденная среда является спиртом, имеющим два или больше атомов углерода, и температура среды находится в интервале от комнатной температуры до около -80°С.
Предпочтительным вышеописанным способом является способ, в котором температура предварительно охлажденной среды находится в интервале от около -60°С до -80°С и указанная среда является изопропиловым спиртом.
Еще одним объектом этого изобретения является способ получения вышеописанной заключенной в оболочку микрочастицы, который включает стадию заключения связанной микрочастицы в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера эмульсионным методом.
Подробное описание изобретения
В используемом здесь значении термин "абсорбируемый" означает нерастворимое в воде вещество, в частности полимер, который подвергается цепной диссоциации в биологической среде с образованием водорастворимых побочных продуктов.
В используемом здесь значении термин "микрочастица" означает частицы абсорбируемого полиэфира, которые предпочтительно имеют сферическую форму.
В используемом здесь значении термин "связанная микрочастица" означает микрочастицу, содержащую один или несколько пептидов и/или один или несколько белков, которые фиксированы в ионном состоянии на микрочастице.
В используемом здесь значении термин "заключенная в оболочку микрочастица" означает связанную микрочастицу с полимерным покрытием, причем полимерное покрытие необязательно является полным.
В используемом здесь значении термин "полимерная сердцевина" является еще одним обозначением микрочастиц.
В используемом здесь значении термин "образующий оболочку полимер" означает полимер, используемый для заключения в оболочку связанной микрочастицы.
В используемом здесь значении термин "гелеобразующий жидкий полиэфир" означает вещества, которые абсорбируют растворители, такие как вода, подвергаются фазовому превращению и имеют трехмерные сетки, испытывающие обратимую деформацию.
Аминокислоты обозначены в данной заявке стандартными трехбуквенными аббревиатурами, известными в этой области, например, Аlа=аланин.
Микрочастица по настоящему изобретению имеет кристаллическую структуру и получена из абсорбируемого полиэфира, такого как полигликолид, содержащий одну или несколько карбоксильных групп в разных цепях, что обеспечивает достаточную концентрацию карбоксильных групп на поверхности и субповерхности микрочастицы для комплексообразования и ионной фиксации пептида (пептидов) и/или белка (белков), имеющих одну или несколько основных групп. Карбоксильные группы полигликолида могут быть амидированы, например, диамином, предпочтительно первичным или вторичным амином или его смесью, в результате чего амин образует комплекс, который фиксирует в ионном состоянии пептид (пептиды) и/или белок (белки), имеющие одну или несколько кислотных групп. Поскольку поверхность микрочастиц необязательно является однородной, термин "субповерхность" означает трещины и подобные дефекты на поверхности микрочастиц. Связанные микрочастицы обеспечивают регулируемое высвобождение пептида (пептидов) и/или белка (белков) в организме субъекта. Для более продолжительного высвобождения фиксированного пептида (пептидов) и/или белка (белков) связанные микрочастицы могут быть по отдельности или группами заключены в оболочку из абсорбируемого полимера. Связанные микрочастицы выделяют пептид (пептиды) и/или белок (белки) в организм субъекта в течение периода времени от около двух дней до около трех месяцев, предпочтительно от одной недели до около трех месяцев. Заключенные в оболочку микрочастицы выделяют пептид (пептиды) и/или белок (белки) в организм субъекта в течение периода времени от около трех дней до шести месяцев, предпочтительно от около двух недель до пяти месяцев.
Типичными примерами пептида, который может быть фиксирован на микрочастице, являются, но не ограничиваются ими, пептид, высвобождающий гормон роста (GHRP), гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH), соматостатин, бомбезин, пептид, высвобождающий гастрин (GRP), кальцитонин, брадикинин, галанин, меланоцитостимулирующий гормон (MSH), фактор высвобождения гормона роста (GRF), амилин, тахикинины, секретин, паращитовидный гормон (РТН), энкафелин, эндотелин, пептид, высвобождающий ген кальцитонина (CGRP), нейромедины, белок, связанный с паращитовидным гормоном (РТНrР), глюкагон, нейротенсин, адренокортикотропный гормон (АСТН), пептид YY (PYY), пептид, высвобождающий глюкагон (GLP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (РАСАР), мотилин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), TSH, их аналоги и фрагменты. Примерами белков, которые могут быть фиксированы на микрочастице, являются гормон роста, эритропоэтин, фактор, стимулирующий колонию гранулоцитов, фактор, стимулирующий колонию макрофагов, и интерфероны.
Микрочастица может быть получена из полимера на основе лактида или из твердого полукристаллического полилактона, такого как полигликолид, получаемого в результате полимеризации с раскрытием кольца кислотосодержащих гидроксильных инициаторов, таких как гликолевая, молочная, яблочная, винная и лимонная кислоты. Микрочастицу по настоящему изобретению можно синтезировать нижеследующим способом. В реакторе смешивают мономер на основе лактида и/или лактон, такой как гликолид, и кислотный инициатор, такой как винная, яблочная или лимонная кислота. Реактор нагревают до около 35-45°С, предпочтительно до 40°С и помещают в вакуум примерно на 20-60 минут, предпочтительно на 30 минут. Температуру реактора повышают до около 105-115°С, предпочтительно до 110°С. Сразу же после достижения этой температуры реактор помещают в атмосферу азота, не содержащего кислорода, и смесь перемешивают. Как только смесь расплавится, добавляют каталитическое количество металлорганического катализатора, пригодного для полимеризации с раскрытием кольца, такого как раствор 2-этил-гексаноата олова в апротонном растворителе, таком как толуол. Смесь вновь подвергают воздействию вакуума в течение примерно 30-90 секунд, чтобы удалить толуол без существенного удаления мономера. Температуру смеси повышают до около 115-125°С, предпочтительно до 120°С, в течение примерно 5-10 минут, после чего температуру смеси снова повышают до около 145-150°С. Смесь выдерживают при этой температуре в течение примерно 3-5 часов, предпочтительно в течение 4 часов, при непрерывном перемешивании механической мешалкой.
Полученный полимер измельчают, размалывая его сначала в ножевой мельнице. Затем полимер тонко измельчают в микронайзере Aljet в потоке сжатого сухого азота. Средний диаметр частиц определяют при помощи Malvern Mastersizer/E, используя модель объемного распределения и силиконовое масло 200/5 cS в качестве диспергатора.
Полимер очищают и получают его натриевую соль, для чего тонко измельченный полимер диспергируют в ацетоне и помещают его в ультразвуковой распылитель предпочтительно примерно на 30 минут. В течение этого времени дисперсию гомогенизируют в гомогенизаторе со скоростью около 8000-24000 оборотов/мин, предпочтительно 9500 оборотов/мин. Вслед за стадией ультразвуковой обработки/гомогенизации дисперсию центрифугируют в центрифуге со скоростью около 3000-7000 оборотов/мин, предпочтительно 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут. Супернатант сливают, центробежный осадок вновь суспендируют в свежем ацетоне и повторяют стадию ультразвуковой обработки/гомогенизации. После окончания второго центрифугирования супернатант сливают и осадок вновь суспендируют в деионизированной воде. Затем выполняют последнюю стадию ультразвуковой обработки/гомогенизации, чтобы удалить остаток ацетона, и дисперсию еще раз центрифугируют со скоростью около 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут.
Центрифужный осадок вновь суспендируют в свежей деионизированной воде, контролируя показатель рН дисперсии. Перемешивая смесь, добавляют достаточные количества слабого основания, например 0,2 М раствора карбоната натрия, чтобы довести показатель рН примерно до 8-9. Дисперсии перемешивают в течение примерно 30 минут и фильтруют в вакууме через фильтровальную бумагу. Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют.
Степень очистки контролируют дифференциальной сканирующей калориметрией (DSC) со скоростью нагрева от 5°С/мин до 15°С/мин, предпочтительно 10°С/мин.
Анионообменные микрочастицы получают из катионообменных микрочастиц, которые инкубируют в горячем разбавленном растворе (~80°С) диамина с известной концентрацией в диоксане или ТГФ в атмосфере инертного газа, такого как аргон, при этом желательно, чтобы оба амина были первичными или вторичными аминами либо смесью первичного и вторичного аминов. Концентрацию диамина в диоксане или ТГФ определяют при помощи ацидиметрии. После окончания реакции амидированные микрочастицы отделяют фильтрованием, промывают диоксаном или ТГФ и сушат при пониженном давлении.
Пептид (пептиды) и/или белок (белки) могут быть фиксированы на микрочастице нижеследующим способом. Натриевую соль микрочастицы диспергируют в растворах, содержащих свободное основание пептида (пептидов) и/или белка (белков), растворенное в воде. Дисперсии инкубируют при комнатной температуре, перемешивая в течение примерно 2 часов, и отфильтровывают связанные микрочастицы. Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют. Количество фиксированного пептида (пептидов) и/или белка (белков) определяют, выполняя элементный анализ образцов на содержание азота.
Количество пептида и/или белка, которое может быть фиксировано на микрочастице по этому изобретению, определяется размером микрочастицы. Чем меньше размер одной микрочастицы, тем большую площадь поверхности имеет совокупность всех микрочастиц, и таким образом на общей массе микрочастиц может быть фиксировано большее количество пептида и/или белка. Уменьшить размер микрочастиц до микронных и субмикронных размеров можно в соответствии с вышеописанным способом. Диаметр микрочастиц может быть равен от около 0,5 мкм до 100 мкм, предпочтительно от 1 мкм до 15 мкм и более предпочтительно от 3 мкм до 10 мкм.
Абсорбируемый образующий оболочку полимер может быть кристаллическим или некристаллическим сополимером лактида и гликолида, аморфным сополимером l-лактида и d,l-лактида, сополимером капролактона и гликолина или сополимером триметиленкарбоната и гликолида, который растворим в обычных органических растворителях, таких как хлороформ, метиленхлорид, ацетон, ацетонитрил, этилацетат и этилформиат. К веществам, не растворяющим такой абсорбируемый образующий оболочку полимер, относятся вода, спирты с низкой температурой кипения и углеводороды. Абсорбируемые образующие оболочку полимеры можно синтезировать при помощи каталитической полимеризации лактонов с раскрытием кольца или полимеризации циклических мономеров, таких как ε-капролактон, п-диоксанон, триметиленкарбонат, 1,5-диоксепан-2-он или 1,4-диоксепан-2-он, в присутствии инициатора цепной полимеризации, такого как гидроксиполикарбоновая кислота. Другой способ, включающий взаимодействие органической поликарбоновой кислоты с предварительно полученным полиэфиром, описан в патенте США №5612052, который включен в это описание изобретения в качестве ссылки.
Связанные микрочастицы можно заключить в оболочку фазовым разделением эмульсии. Альтернативным способом заключения микрочастиц в оболочку является использование ультразвукового диспергатора, при помощи которого дисперсию связанных микрочастиц в растворе абсорбируемого образующего оболочку полимера вводят в виде микрокапель в охлажденную среду, не являющуюся растворителем. Связанные микрочастицы заключают в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку сополимера лактида и гликолида известными методами микроинкапсулирования или нанесения покрытия на твердые частицы, такими как упаривание эмульсии для инкапсулирования микрочастиц сульфата бария, описанное Н.Demian и S.W.Shalaby в заявке на патент США USSN: 08/467361, которая включена в это описание изобретения в качестве ссылки, или коагуляция твердых микрочастиц, заключенных в оболочку в полимерном растворе, и введение их при помощи ультразвукового диспергатора в жидкую среду, которая не растворяет образующий оболочку полимера, но может экстрагировать растворитель из раствора образующего оболочку полимера вокруг заключенных в оболочку твердых микрочастиц. В зависимости от концентрации полимерного раствора, используемого для заключения в оболочку микрочастиц, количество исходных связанных микрочастиц в заключенных в оболочку микрочастицах может изменяться от 1 до нескольких сотен, при этом средний диаметр заключенной в оболочку микрочастицы равен от 0,5 мкм до 100 мкм.
Нижеследующий способ относится к получению распылением заключенных в оболочку катионитов, содержащих пептид и/или белок (далее определяются как пептидсодержащие катиониты). Образующий оболочку сополимер растворяют в растворителе, таком как ацетонитрил, этилацетат или этилформиат, в концентрации около 10-30% (в весовом отношении). Для диспергирования пептидсодержащего катионита используют достаточное количество этого раствора, чтобы весовое отношение пептидсодержащего катионита к образующему оболочку сополимеру составляло от около 30:70 до около 80:20. Смесь диспергируют при помощи высокоскоростной гомогенизации. Дисперсию подают со скоростью потока от 1 мл/мин до 10 мл/мин к соплу ультразвукового диспергатора с переменной частотой, причем эта частота может изменяться от 12 кГц до 35 кГц, причем более высокая частота соответствует более высокой скорости потока при сохранении свойств частиц. Дисперсию распыляют в собирающую среду, содержащую по крайней мере 1-10-кратный избыток изопропанола или этанола (по сравнению с объемом используемого растворителя образующего оболочку сополимера) с достаточным количеством гранул сухого льда (обычно 0,5-1 кг в весовом отношении на литр IPA), что позволяет поддерживать температуру суспензии в интервале от -70°С до -80°С на протяжении всего распыления. Эту суспензию перемешивают со скоростью 300-700 оборотов/мин в зависимости от ее объема. При использовании ацетонитрила в качестве растворителя распыляемые капли сразу же замерзают при соприкосновении с суспензией. Закончив распыление, дисперсию оставляют оттаивать при температуре от 10°С до комнатной температуры и фильтруют в вакууме. Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, чтобы удалить избыток нерастворителя. Полученные частицы представляют собой гладкие микросферы при использовании образующего оболочку сополимера на основе d,l-лактида; они выглядят немного сморщенными при использовании образующего оболочку сополимера на основе l-лактида.
Связующую способность ионообменных микрочастиц можно определить следующим образом. Например, в случае катионообменных микрочастиц карбоксильные группы, имеющиеся у заранее определенного количества микрочастиц, нейтрализуют холодным разбавленным водным раствором карбоната натрия с известной нормальностью. Нейтрализованные микрочастицы отделяют фильтрованием, обильно промывают холодной деионизированной водой и подвергают воздушной сушке. Твердые микрочастицы инкубируют в разбавленном растворе гидрохлорида пилокарпина с известной концентрацией, чтобы получить небольшой избыток основного лекарственного средства по сравнению с прогнозируемыми данными связующей способности. Концентрацию остального гидрохлорида пилокарпина в водной среде контролируют в течение определенного периода времени, пока датчик основания не зарегистрирует отсутствие значительных изменений, вызываемых микрочастицами. Процентное значение фиксированного основания на микрочастицах определяют, исходя из данных выбирания компонента, и проверяют при помощи элементного анализа на содержание азота.
Связующую способность анионита (амидированные частицы) определяют (1) элементным анализом на содержание азота и (2) по степени связывания с напроксеном, измеряя при помощи ВЭЖХ количество напроксена, удаленного из разбавленного раствора. Результаты хроматографии подтверждены высвобождением фиксированного напроксена разбавленным раствором гидроксида натрия известной концентрации.
Связанные или заключенные в оболочку микрочастицы по этому изобретению можно вводить нуждающемуся субъекту разными способами, хорошо известными специалистам в этой области, такими как парентеральное, пероральное или местное введение. Это лекарственное средство предпочтительно вводят в виде порошка или суспензии через нос или в виде лекарственной формы для ингаляции через легкие. При парентеральном введении это лекарственное средство желательно использовать в виде дисперсии в изотонической водной среде или в безводном абсорбируемом гелеобразующем жидком полиэфире, описанном в патенте США №5612052, который включен в это описание изобретения в качестве ссылки. Препараты, содержащие связанные и/или заключенные в оболочку микрочастицы по настоящему изобретению, могут также включать разные необязательные компоненты. Такими компонентами являются, но не ограничиваются ими, поверхностно-активные вещества, средства, регулирующие вязкость, лекарственные средства, модуляторы роста клеток, красители, комплексообразователи, антиоксиданты, другие полимеры, такие как карбоксиметилцеллюлоза, камедь, такая как гуаровая камедь, воски/масла, такие как касторовое масло, глицерин, дибутилфталат и ди(2-этилгексил)фталат и многие другие. В случае использования таких необязательных компонентов они составляют от около 0,1% до около 20%, предпочтительно от около 0,5% до около 5% от общей массы лекарственного препарата.
Эффективные дозы связанных или заключенных в оболочку микрочастиц, предназначенных для введения нуждающемуся субъекту, может определить лечащий врач или ветеринар с учетом требуемого количества пептида (пептидов) и/или белка (белков) и количества пептида (пептидов) и/или белка (белков), фиксированных на микрочастицах. Такие дозы или известны, или могут быть легко определены специалистом в этой области.
Получение гелеобразующих веществ описано в патенте США №5612052, который включен в это описание изобретения в качестве ссылки. Ниже приведены типичные примеры гелеобразующих веществ.
Получение блок-сополимеров (80/20 в весовом отношении) триметиленкарбоната, гликолида (60/40) и полиэти-ленгликоля-400 (GF-1). В высушенный пламенем смоляной котел, оснащенный механической мешалкой и впускным отверстием для азота, вводят полиэтиленгликоль-400 (0,299 моль, 119,5 г), октоат олова (0,2 М раствор в толуоле, 4700 мл, 0,946 ммоль), гликолид (1,78 моль, 206,5 г) и триметилен-карбонат (2,65 моль, 270 г). Реактор несколько раз продувают аргоном, нагревают до плавления и продолжают нагревать, перемешивая, при температуре около 150°С в течение примерно 12 часов. После окончания реакции температуру снижают, сохраняя текучесть реакционной смеси, и избыток мономера удаляют при пониженном давлении. Состав полученного полимера определяют при помощи инфракрасной спектроскопии и спектроскопии ЯМР и молекулярную массу при помощи гельпроникающей хроматографии.
Получение блок-сополимера (15/85 в весовом отношении) триметиленкарбоната, гликолида (60/40) и полиэтиленгликоля-400 (GF-2). Целевой сополимер синтезируют в соответствии со способом получения GF-1, используя полиэтиленгликоль-400 (1,063 моль, 425 г), октоат олова (0,2 М раствор в толуоле, 1,760 мл, 0,35 ммоль), гликолид (0,279 моль, 32,4 г) и триметиленкарбонат (0,418 моль, 42,6 г), и перемешивая смесь в течение примерно 9 часов.
Получение блок-сополимера (80/20 в весовом отношении) триметиленкарбоната, гликолида (90/10) и полиэтиленгликоля-1500 (GF-3). Целевой сополимер синтезируют в соответствии со способом получения GF-1, используя полиэтиленгликоль-1500 (0,267 моль, 400 г), октоат олова (0,2 М раствор в толуоле, 1200 мл, 0,247 ммоль), гликолид (0,097 моль, 11,2 г) и триметиленкарбонат (0,87 моль, 88,7 г), и перемешивая смесь в течение примерно 13 часов.
ПРИМЕР I
Получение, тонкое измельчение и очистка полимеров поли(гликолевой кислоты), инициируемых лимонной кислотой (PGCA), предназначенных для использования в качестве катионитов (СЕ)
Пример I(a): PGCA 7/1. В 500 мл стеклянный реактор вводят 242,63 г гликолида (Purac Buochem, Arkelsedijk, The Netherlands) и 57,37 г лимонной кислоты (Aldrich, Gillingham, Dorset, U.K.). Лимонную кислоту сушат над силикагелем (Fisher Scientific, Loughborough, Leics., U.K.) в аппарате Абдергалдена (Aldrich, St. Louis, Missouri, USA). Реактор погружают в масляную баню с температурой около 40°С и держат под вакуумом (0,04 мбар) примерно 30 минут. Затем баню удаляют и повышают ее температуру примерно до 100°С. По достижении этой температуры реактор помещают в атмосферу азота, не содержащего кислорода, и снова погружают в баню. Содержимое перемешивают со скоростью около 100 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). Как только содержимое реактора расплавится, добавляют 1,09 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова (Sigma, St. Louis, Missouri, USA) в толуоле (Riedel de-Haen, Seeize, Germany) (стехиометрическое соотношение равно 50 миллионным долям). Смесь снова подвергают воздействию вакуума в течение примерно 30 секунд, используя ловушку с жидким азотом, чтобы удалить толуол без существенного удаления мономера. Температуру масляной бани повышают до около 120°С в течение примерно 5 минут, после чего температуру повышают до около 150°С. Смесь выдерживают при этой температуре в течение 4 часов при непрерывном перемешивании механической мешалкой со скоростью около 100 оборотов/мин. Получают целевой полимер.
Пример I(b): PGCA 10/1. Целевой полимер получают в соответствии со способом по примеру Iа, используя 257,40 г гликолида, 42,60 г лимонной кислоты и 1,10 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова в толуоле (стехиометрическое соотношение равно 50 миллионным долям).
Пример I(с): PGCA 15/1. В высушенный пламенем смоляной котел, оснащенный механической мешалкой и впускным отверстием для аргона, вводят гликолид (2,586 моль, 300 г), безводную лимонную кислоту (0,172 моль, 33 г) и октоат олова (0,2 М раствора в толуоле, 0,862 мл, 0,172 ммоль). Полимеризационный реактор и его содержимое несколько раз продувают сухим аргоном. Как только полимеризационная смесь расплавится, реагенты нагревают и перемешивают при температуре около 160°С, пока полимер не начнет осаждаться из расплава. Сразу же после частичного осаждения полимера перемешивание прекращают и реакционную смесь продолжают нагревать при температуре около 160°С в течение примерно 2 часов. После окончания полимеризации температуру понижают ниже 120°С и избыток мономера удаляют при пониженном давлении. Состав выделенного полимера проверяют при помощи инфракрасной спектроскопии и спектроскопии ЯМР.
Тонкое измельчение. Полимеры по примерам I(a), I(b) и I(с) сначала размалывают в ножевой мельнице (IKA, Staufen, Germany). Затем их тонко измельчают в микронайзере Aljet (Fluid Energy Aljet, Plumsteadsville, Pennsylvania, USA) в потоке сжатого сухого азота. У полимера по примеру I(а) средний диаметр частиц равен 24,84 мкм, о чем свидетельствуют результаты анализа при помощи Malvern Mastersizer/E (Malvern, Worcs., U.K.) при использовании в качестве диспергатора силиконовое масло 200/5 cS (Dow Corning, Seneffe, Belgium) и модель объемного распределения. У полимеров по примерам I(b) и I(с) средний диаметр частиц после тонкого измельчения равен соответственно 4,69 мкм и 6,31 мкм.
Очистка/получение натриевой соли. Пятидесятиграммовые порции полимеров по примерам I(a), I(b) и I(с) диспергируют в 2 л ацетона (Riedel de-Haen, Seeize, Germany) и помещают в ультразвуковой диспергатор (Branson Ultrasonics BV, Soest, The Netherlands) примерно на 30 минут. В течение этого времени дисперсию также гомогенизируют со скоростью около 9500 оборотов/мин с помощью гомогенизатора Ultraturrax T25 (IKA, Staufen, Germany). После осуществления стадии ультразвуковой обработки/гомогенизации дисперсию центрифугируют со скоростью около 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут в центрифуге Sorvall (Sorvall, Wilmington, Delaware, USA). Супернатант сливают, центробежный осадок вновь суспендируют в свежем ацетоне и повторяют стадию ультразвуковой обработки/гомогенизации. После окончания второго центрифугирования супернатант сливают и осадок вновь суспендируют в деионизированной воде. После выполнения последней стадии ультразвуковой обработки/гомогенизации с целью удаления оставшегося ацетона дисперсию снова центрифугируют со скоростью около 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут.
Центробежные осадки вновь суспендируют в свежей деионизированной воде, контролируя показатель рН дисперсии. Добавляют достаточное количество 0,2 М раствора карбоната натрия (при перемешивании), чтобы увеличить показатель рН до около 8-9. Дисперсии перемешивают в течение примерно 30 минут и фильтруют в вакууме через фильтровальную бумагу Whatman №1 (диаметр 24 см) (Whatman Intl, Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальные осадки промывают дополнительным количеством деионизированной воды, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo Lyophilizer (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.).
Степень очистки контролируют при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), выполняемой в приборе ТА DSC912S (ТА Instruments, New Castle, Delaware, USA) со скоростью нагрева 10°С/мин. На полученных термограммах DSC не обнаружены эндотермические пики для мономерного гликолида, но получены эндотермы для полимеров по примерам I(а), I(b) и I(с) соответственно при температуре 176°С, 178°С и 180°С.
ПРИМЕР II
Получение микрочастиц катионообменного сополимера гликолида и яблочной кислоты (PGMA)
Целевые микрочастицы синтезируют в соответствии со способом, описанным в примере I(с), используя гликолид (2,586 моль, 300 г), безводную яблочную кислоту (0,172 моль, 23 г) и октоат олова (0,2 М раствор в толуоле, 0,862 мл, 0,172 ммоль). Температуру плавления полимера определяют при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии (т.п. = 206°С).
Твердый полимер измельчают в мельнице Wiley до достижения среднего диаметра частицы около 125 мкм. Дальнейшее измельчение частиц до диаметра около 5-10 мкм производят в струйной мельнице в потоке сжатого сухого азота. Полученные микрочастицы промывают ацетоном, чтобы удалить следовые количества мономера и низкомолекулярных олигомеров. Затем продукт сушат при пониженном давлении и температуре 40°С до применения. Средний диаметр сухих микрочастиц определяют при помощи анализатора размера частиц.
ПРИМЕР III
Получение, тонкое измельчение и очистка полимера поли(гликолевой кислоты), инициируемого винной кислотой (PGTA), предназначенного для использования в качестве катионита (СЕ)
Пример III (a): PGTA 10/1. В 500 мл стеклянный реактор вводят 264,65 г гликолида (Purac Biochem, Arkelsedijk, The Netherlands) и 34,22 г L-винной кислоты (Riedel de-Haen, Seeize, Germany). Винную кислоту сушат над силикагелем (Fisher Scientific, Loughborough, Leics., U.K.) в аппарате Абдергалдена (Aldrich, St., Louis, МО). Реактор погружают в масляную баню с температурой около 40°С и держат под вакуумом (0,04 мбар) примерно 30 минут. Затем баню удаляют и ее температуру повышают до около 110°С. По достижении этой температуры реактор помещают в атмосферу азота, не содержащего кислорода, и вновь погружают в баню. Содержимое реактора перемешивают со скоростью около 100 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). Как только содержимое реактора расплавится, добавляют 1,14 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова (Sigma, St. Louis, Missouri, USA) в толуоле (Riedel de-Haen, Seeize, Germany) (стехиометрическое соотношение равно 50 миллионным долям). Реакционную смесь вновь подвергают воздействию вакуума в течение примерно 30 секунд, используя ловушку для жидкого азота, чтобы удалить толуол без существенного удаления мономера. Температуру масляной бани повышают до около 120°С в течение примерно 5 минут, после чего температуру повышают до около 150°С. Смесь выдерживают при этой температуре в течение примерно 4 часов при непрерывном перемешивании механической мешалкой со скоростью 100 оборотов/мин. Получают целевой полимер.
Тонкое измельчение. Полимер по примеру III(a) сначала размалывают в ножевой мельнице (IKA, Staufen, Germany). Затем его тонко измельчают в микронайзере Aljet (Fluid Energy Aljet, Plumsteadsville, Pennsylvania, USA) в потоке сжатого сухого азота. Получают полимер со средним диаметром частиц 12,42 мкм, о чем свидетельствуют результаты анализа при помощи Malvern Mastersizer/E (Malvern, Worcs., U.K.) при использовании силиконового масла 200/5 cS (Dow Coming, Seneffe, Belgium) в качестве диспергатора и модели объемного распределения.
Очистка/получение натриевой соли. Пятидесятиграммовую порцию полимера по примеру III(a) диспергируют в 2 л ацетона (Riedel de-Haen) и помещают в ультразвуковой диспергатор (Branson Ultrasonics BV, Soest, The Netherlands) примерно на 30 минут. В течение этого времени дисперсию также гомогенизируют со скоростью около 9500 оборотов/мин гомогенизатором Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen, Germany). После осуществления стадии ультразвуковой обработки/гомогенизации дисперсию центрифугируют со скоростью около 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут в центрифуге Sorvall (Sorvall, Wilmington, Delaware, USA). Супернатант сливают, центробежный осадок вновь суспендируют в свежем ацетоне и повторяют стадию ультразвуковой обработки/гомогенизации. После окончания второго центрифугирования супернатант сливают и осадок вновь суспендируют в деионизированной воде. После выполнения последней стадии ультразвуковой обработки/гомогенизации с целью удаления оставшегося ацетона дисперсию снова центрифугируют со скоростью около 5000 оборотов/мин в течение примерно 30 минут.
Центробежный осадок вновь суспендируют в свежей деионизированной воде, контролируя показатель рН дисперсии. Добавляют достаточное количество 0,2 М раствора карбоната натрия, чтобы увеличить показатель рН до около 8-9. Дисперсию перемешивают в течение примерно 30 минут и фильтруют в вакууме через фильтровальную бумагу Whatman №1 (диаметр 24 см) (Whatman Intl, Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальный осадок промывают дополнительным количеством деионизированной воды, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.).
Степень очистки контролируют при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), выполняемой в приборе ТА DSC912S (ТА Instruments, New Castle, Delaware, USA) со скоростью нагрева около 10°С/мин. На полученных термограммах DSC отсутствует эндотермический пик для мономерного гликолида, но обнаружена эндотерма при температуре 181°С.
Пример III(b): PGTA 15/1. Целевой полимер синтезируют в соответствии со способом по примеру I(с), используя гликолид (2,586 моль, 300 г), безводную винную кислоту (0,172 моль, 26,8 г) и октоат олова (0,2 М раствор в толуоле, 0,862 мл, 0,172 ммоль). Температуру плавления полимера определяют при помощи дифференциальной сканирующей калориметрии (т.п. = 204°С).
Твердый полимер измельчают в мельнице Wiley до достижения среднего диаметра частиц около 125 мкм. Дальнейшее измельчение частиц до диаметра около 5-10 мкм производят в струйной мельнице в потоке сжатого сухого азота. Полученные микрочастицы промывают ацетоном, чтобы удалить следовые количества мономера и низкомолекулярных олигомеров. Затем продукт сушат при пониженном давлении и температуре около 40°С до применения. Средний диаметр сухих микрочастиц определяют при помощи анализатора размера частиц.
ПРИМЕР IV
Получение анионообменных микрочастиц (АЕ-1) на основе полигликолида
Анионит получают в результате осуществления двух стадий. Сначала получают низкомолекулярный полигликолид в соответствии со способом по примеру I(с), используя следующие компоненты: гликолид (1 моль, 116 г), 1,3-пропандиол в качестве инициатора (30 ммоль, 2,22 г) и октоат олова (0,03 ммоль). Измельчение и очистку полимера выполняют в соответствии со способом, описанным в примере I(с). На второй стадии практически неионные микрочастицы инкубируют в горячем разбавленном растворе (~80°С) диамина, например гександиамина с известной концентрацией, в диоксане в атмосфере аргона. Концентрацию диамина в диоксане определяют ацидиметрией. После окончания реакции амидированные микрочастицы отделяют фильтрованием, промывают диоксаном и сушат при пониженном давлении. Связующую способность анионита (амидированные частицы) определяют (1) элементным анализом на содержание азота и (2) по степени связывания с напроксеном, измеряя степень удаления лекарственного средства из разбавленного раствора при помощи ВЭЖХ. Результаты хроматографии подтверждены высвобождением фиксированного напроксена разбавленным раствором гидроксида натрия известной концентрации.
ПРИМЕР V
Получение сополимеров поли(лактида, согликолида), инициируемых пропандиолом (PLGPD), предназначенных для использования в качестве образующих оболочку веществ
Пример V(a): P(1)LGPD 75/25. В 500 мл стеклянный реактор вводят 235,01 г l-лактида (Purac Biochem, Arkelsedijk, The Netherlands), 63,09 г гликолида (Purac Biochem, Arkelsedijk, The Netherlands) и 1,90 г пропандиола (Riedel de-Haem, Seeize, Germany) и добавляют 3,96 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова (Sigma, St. Louis, Missouri, USA) в толуоле (Riedel de-Haen, Seeize, Germany) (стехиометрическое соотношение равно 200 миллионным долям). Реакционную смесь сушат в вакууме в течение примерно одного часа, чтобы удалить толуол, после чего реактор помещают в атмосферу азота, не содержащего кислород, и погружают в масляную баню, предварительно нагретую примерно до 160°С. Содержимое реактора перемешивают со скоростью около 100 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). Когда содержимое реактора расплавится, температуру повышают до около 180°С и поддерживают на этом уровне в течение примерно 3 часов. Получают аморфный сополимер. Молекулярная масса (MW) этого сополимера равна около 12500 г/моль, как это установлено гельпроникающей хроматографией (GPC) с использованием насоса Waters 510 Pump, дифференциального рефрактора Waters 410 Differential Refractometer (Waters, Milford, Massachusetts, USA) и детектора рассеяния света Wyatt Minidawn Light Scattering Detector (Wyatt Technology Corporation, Santa Barbara, California, USA).
Пример V(b): P(1)LGPD 90/10. Целевое соединение синтезируют в соответствии со способом по примеру V(a), используя 274,31 г l-лактида, 24,55 г гликолида, 1,14 г пропандиола и 3,89 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова в толуоле (стехиометрическое соотношение равно 200 миллионным долям). Получают кристаллический сополимер. Результаты GPC показывают, что молекулярная масса этого сополимера равна примерно 20780 г/моль.
Пример V(c): P(d,1)LGPD 90/10. Целевое соединение получают в соответствии со способом по примеру V(a), используя 274,31 г d,l-лактида, 24,55 г гликолида, 1,14 г пропандиола и 3,86 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова в толуоле (стехиометрическое соотношение равно 200 миллионным долям). Получают аморфный сополимер. Результаты GPC показывают, что молекулярная масса этого сополимера равна примерно 20650 г/моль.
Пример V(d): Сополимер поли (l-лактида, co-d,l-лактида), инициируемый пропандиолом (PLGPD), предназначенный для использования в качестве оболочки, Р(l)L(d,l)LPD 80/20
Целевое соединение получают в соответствии со способом по примеру V(a), используя 239,09 г l-лактида, 59,77 г d,l-лактида (Purac Biochem, Arkelsedijk, The Netherlands) и 1,14 г пропандиола, после чего добавляют 3,96 мл 0,1 М раствора 2-этилгексаноата олова в толуоле (стехиометрическое соотношение равно 200 миллионным долям). Получают аморфный сополимер. При помощи GPC установлено, что молекулярная масса (Mw) этого сополимера равна 22320 г/моль. Результаты DSC показывают, что этот полимер подвергается стеклованию при 48°С.
Очистка. Полимеры по примерам V(a), V(b) и V(c) промывают, диспергируя 30% (в весовом отношении) раствор в ацетонитриле (Labscan, Dublin, Ireland) со скоростью 8 мл/мин в деионизированную воду, охлажденную до около 2°С в 6-литровом реакторе с рубашкой, который присоединен к циркуляционной бане и снабжен мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany), обеспечивающей перемешивание со скоростью около 350 оборотов/мин. Растворы подают к диспергирующему соплу Vibra-Cell VC 50 (Bioblock, Illkirch, France) при помощи насоса Masterflex (Cole Farmer Instrument Co., Niles, Illinois, USA) и диспергируют при ультразвуковой частоте 12 кГц. Полученные дисперсии фильтруют через фильтровальную бумагу Whatman №1 (диаметр 24 см) (Whatman Intl. Ltd., Maidstone, Kent, U.K.), фильтровальные осадки промывают деионизированной водой,, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo Lyophilizer (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.).
Степень чистоты проверяют при помощи DSC в устройстве ТА DSC912s (ТА Instruments, New Castle, Delaware, USA) со скоростью нагрева 10°С/мин, при этом установлено, что полимеры по примерам V(a), V(b), V(c) и V(d) подвергаются стеклованию (Тg) соответственно при температуре 44°С, 49°С, 45°С и 48°С.
ПРИМЕР VI
Получение пептидсодержащих катионитов по примеру VI(а):
введение пептида A (p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2, аналога LHRH)
По четыре грамма натриевых солей, полученных в примерах I(а), I(b), I(с) и II(а), диспергируют в растворах, содержащих 1,33 г свободного основания пептида A (Kinerton Ltd., Dublin, Ireland), растворенного в 70 мл деионизированной воды. Полученные дисперсии инкубируют при комнатной температуре, перемешивая в течение примерно 2 часов, и фильтруют через фильтровальную бумагу Whatman №1 с диаметром 9 см (Whatman Intl. Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальные осадки промывают дополнительным количеством деионизированной воды, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.). Количество связанного пептида А определяют, выполняя элементный анализ образцов на содержание азота. Получены следующие результаты (см. табл. 1).
Figure 00000001
Пример VI(b): Введение пептида В (H-P-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lvs-Val-Cys-Thr-NH2, где два Суs связаны дисульфидной связью, аналога соматостатина)
Связанные микрочастицы по примерам I(a), I(b) и I(с) с фиксированным на них пептидом В получают в соответствии со способом по примеру VI(b), используя по 4 г натриевых солей полимеров по примерам I(a), I(b), I(с) и II(а) и 1,33 г свободного основания пептида В (Kinerton Ltd., Dublin, Ireland). Выполняют элементный анализ образцов на содержание азота с целью определения количества связанного пептида В. Полученные результаты приведены в табл. 2.
Figure 00000002
ПРИМЕР VII
Получение заключенных в оболочку полипептидсодержащих катионитов диспергированием
Полипептидсодержащие катиониты диспергируют в растворах нижеописанных образующих оболочку сополимеров в ацетонитриле (Labscan, Dublin, Ireland). Дисперсию получают гомогенизацией в гомогенизаторе Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen, Germany) со скоростью около 9500 оборотов/мин в течение примерно 5 минут. Концентрация растворов образующего оболочку сополимера в ацетонитриле составляет 12,5%-25% (в весовом отношении), и отношение образующего оболочку сополимера к полипептидсодержащему катиониту составляет от 1:1 до 1,3:1 в весовом отношении.
Полученную дисперсию подают к диспергирующему соплу Vibra-Cell VC 50 (Bioblock, Illkirch, France) при ультразвуковой частоте 16 кГц, используя керамический поршневой насос (FMI, Oyster Bay, N.Y., USA), обеспечивающий подачу со скоростью потока 2 мл/мин. Проходящую через сопло дисперсию распыляют в изопропиловый спирт (IPA) (Labscan, Dublin, Ireland), охлажденный до около -80°С гранулами сухого льда (A.I.G., Dublin, Ireland). IPA используют в качестве собирающего нерастворителя и перемешивают со скоростью около 300 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). Закончив распыление, дисперсию оставляют оттаивать до температуры от около 10°С до комнатной температуры. Заключенные в оболочку микрочастицы отделяют фильтрованием в вакууме через фильтровальную бумагу Whatman №1 (Whatman Intl, Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.). Размер полученных заключенных в оболочку микрочастиц определяют при помощи Malvent Mastersizer/E (Malvern, Worcs, U.K.), используя раствор 1% твина 20 в воде в качестве диспергатора. Количество пептида определяют элементным анализом заключенных в оболочку микрочастиц на содержание азота.
В табл. 3 приведены результаты разных экспериментов по заключению микрочастиц в оболочку.
Figure 00000003
Все образцы просеивают через сито 180 мкм (Bioblock, Illkirch, France) перед выполнением испытания in vivo и/или in vitro.
Связанные или заключенные в оболочку микрочастицы могут быть испытаны in vitro с целью определения скорости высвобождения связанного пептида или белка нижеследующим способом. Аликвоту связанных или заключенных в оболочку микрочастиц массой около 50 мг помещают в систему с проточной кюветой непрерывного действия, в которой раствор с фосфатным буфером при рН около 7,2 и температуре около 37°С протекает по всей массе связанных или заключенных в оболочку микрочастиц со скоростью около 45 мл/час. Образцы буфера, содержащего выделенное лекарственное средство, собирают при температуре около 4°С и анализируют с целью определения концентраций пептида или белка с интервалами в 1 или 2 дня. Профиль высвобождения частиц каждого типа определяют в течение 2 недель.
Связанные или заключенные в оболочку микрочастицы могут быть подвергнуты анализу в отношении скорости высвобождения связанного пептида или белка в системе in vivo в соответствии с нижеследующим способом. Образцы вводят самцам крыс Wistar (Bioresources, Trinity College, Dublin, Ireland) в виде внутримышечной инъекции в бедро. Суспендирующая среда содержит 3% карбоксиметилцеллюлозы и 1% твина 20 в физиологическом растворе. Для образцов, содержащих пептид А, эффективная эквивалентная доза равна 40 мкг/кг/день. Доза для образцов, содержащих пептид В, равна 1 мг/кг/день. Пробы крови берут, выполняя пункцию сердца, и содержание пептида в плазме определяют специфическим для пептида А и пептида В радиоиммунным анализом (RIA). В случае образцов, содержащих пептид А (пептид А является аналогом LHRH), выполняют RIA тестостерона для контроля супрессии тестостерона. В качестве альтернативы для суспендирующей среды в некоторых случаях можно использовать гелеобразующие вещества. Полученные результаты приведены в нижеследующих табл. 4 и 5.
Figure 00000004
Figure 00000005
ПРИМЕР VIII
Пример VIII(а): Диспергирование с использованием ацетонитрила в качестве растворителя и IPA при комнатной температуре в качестве нерастворителя
Около 1,06 г катионита по примеру I(с) (не связанного с полипептидом) диспергируют в 25,24% (в весовом отношении) растворе образующего оболочку сополимера по примеру V(a) в ацетонитриле (Labscan, Dublin, Ireland), при этом отношение катионита к образующему оболочку сополимеру составляет примерно 1,03:1 в весовом отношении. Эту дисперсию получают гомогенизацией в гомогенизаторе Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen, Germany) со скоростью около 9500 оборотов/мин в течение примерно 5 минут.
Полученную дисперсию подают к диспергирующему соплу Vibra-Cell VC 50 (Bioblock, Illkirch, France) при ультразвуковой частоте 16 кГц, используя керамический поршневой насос (FMI, Oyster Bay, N.Y., USA), обеспечивающий подачу со скоростью потока 2 мл/мин. Проходящую через сопло дисперсию распыляют в изопропиловый спирт (IPA) (Labscan, Dublin, Ireland) при комнатной температуре (17-22°С). IPA используют в качестве собирающего нерастворителя и перемешивают со скоростью около 300 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). Закончив диспергирование, дисперсию продолжают перемешивать при комнатной температуре в течение еще 60 минут, после чего заключенные в оболочку частицы отделяют фильтрованием в вакууме через фильтровальную бумагу Whatman №1 (Whatman Intl., Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.). Размер полученных частиц определяют при помощи Malvern Mastersizer/E (Malvern, Worcs, U.K.), используя раствор 1% твина 20 в воде в качестве диспергатора. Средний размер полученных частиц (d(0,5)) равен 84,75 мкм.
Пример VIII(b): Диспергирование с использованием этилацетата в качестве растворителя и IPA при комнатной температуре в качестве нерастворителя
Диспергирование осуществляют в соответствии со способом по примеру VIII(а), используя около 0,99 г катионита по примеру I(с) (не связанного с полипептидом), диспергированного в 24,88% (в весовом отношении) растворе образующего оболочку сополимера по примеру V(a) в этилацетате (Riedel-de-Haen, Seeize, Germany), при этом отношение катионита к образующему оболочку сополимеру равно примерно 0,96:1 в весовом отношении. Средний размер полученных частиц (d(0,5)) равен 100,56 мкм.
Пример VIII(с): Диспергирование с использованием этилацетата в качестве растворителя и датчика более высокой частоты
Около 1,02 г катионита по примеру I(с) (не связанного с полипептидом) диспергируют в 15,14% (в весовом отношении) растворе образующего оболочку сополимера по примеру V(a) в этилацетате (Riedel de-Haen), при этом отношение катионита к образующему оболочку сополимеру равно примерно 1,05:1 в весовом отношении. Дисперсию получают гомогенизацией в гомогенизаторе Ultra-turrax T25 (IKA Staufen, Germany) со скоростью около 9500 оборотов/мин в течение примерно 5 минут.
Полученную дисперсию подают в диспергатор Martin Walter 400 GSIP (Sodeva, Le Bouget du Lac, France) при ультразвуковой частоте около 34,6 кГц, используя керамический поршневой насос (FMI, Oyster Bay, N.Y., USA), обеспечивающий подачу со скоростью потока 5 мл/мин. Проходящую через сопло дисперсию диспергируют в изопропиловый спирт (IPA) (Labscan, Dublin, Ireland), охлажденный до около -77°С гранулами сухого льда (A.I.G., Dublin, Ireland). IPA используют в качестве собирающего нерастворителя и перемешивают со скоростью около 300 оборотов/мин мешалкой Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Germany). После окончания диспергирования заключенные в оболочку частицы отделяют фильтрованием в вакууме через фильтровальную бумагу Whatman №1 (Whatman Intl., Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.). Размер полученных частиц определяют при помощи Malvern Masterizer/E (Malvern, Worcs, U.K.), используя раствор 1% твина 20 в воде в качестве диспергатора. Средний размер полученных частиц (d(0,5)) равен 95,69 мкм.
ПРИМЕР IX
Связывание с катионитом и последующее заключение в оболочку пептидов C и D, являющихся аналогами соматостатина
Пример IX(а): Введение пептида С
Около 1,01 г натриевой соли полимера по примеру I(с), диспергированной в растворе, содержащем 0,25 г свободного основания пептида С структуры N-гидроксиэтилпиперазинил-ацетил-D-Рhе-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Суs связаны дисульфидной связью (Kinerton Ltd., Dublin, Ireland), растворяют в 40 мл деионизированной воды. Дисперсию инкубируют, перемешивая в течение примерно 2 часов, и фильтруют через фильтровальную бумагу Whatman №1 с диаметром 9 см (Whatman Intl., Ltd., Maidstone, Kent, U.K.). Фильтровальный осадок промывают деионизированной водой, замораживают и лиофилизуют в лиофилизаторе Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, U.K.). Затем образец анализируют на содержание азота, чтобы определить количество связанного пептида (20,21%).
Пример IX(b): Введение пептида D
В соответствии со способом по примеру IX(а) около 2,04 г натриевой соли полимера по примеру I(с), диспергированной в растворе, содержащем 0,51 г свободного основания пептида D структуры N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью (Kinerton Ltd., Dublin, Ireland), растворяют в 80 мл деионизированной воде. Затем образец анализируют на содержание азота, чтобы определить количество связанного пептида (19,53%).
ПРИМЕР Х
Связанные микрочастицы по примерам IX (а) и IX (b) заключают в оболочку, как это описано в примере VII (результаты показаны в табл. 6).
Figure 00000006
ПРИМЕР XI Получение препарата, содержащего гелеобразующее вещество
Заключенные в оболочку микрочастицы по примеру VII(а) (0,3 г) смешивают с жидким гелеобразующим веществом (2,0 мл смеси 50/50 компонента А по примеру I и компонента С по примеру III, которые описаны в патенте США №5612052) в цилиндре 5 мл шприца при помощи механического микросмесителя, действующего со скоростью 20 оборотов/мин в течение примерно 10 минут. Гелеобразующее вещество предварительно стерилизуют горячим воздухом и перемешивают при помощи стерилизованной мешалки в вытяжном шкафу с ламинарным потоком. Полученный препарат экструдируют из 5 мл шприца (нажатием на поршень) в шприц меньшего размера, используемый для введения лекарственного средства нуждающемуся субъекту. Однородность препарата проверяют оптической микроскопией. Маленькие шприцы помещают в сухую упаковку и хранят при температуре около 4°С до применения.

Claims (46)

1. Связанная микрочастица, имеющая сердцевину из абсорбируемого гетероцепного полимера и один или несколько пептидов, один или несколько белков или их комбинацию, иммобилизированных за счет сил ионного взаимодействия на поверхности указанной сердцевины из абсорбируемого гетероцепного полимера, в которой каждый пептид независимо выбирают из группы, включающей пептид, высвобождающий гормон роста (GHRP), гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH), соматостатин, бомбезин, пептид, высвобождающий гастрин (GRP), кальцитонин, брадикинин, галанин, меланоцитостимулирующий гормон (MSH), фактор высвобождения гормона роста (GRF), амилин, тахикинины, секретин, паращитовидный гормон (РТН), энкафелин, эндотелии, пептид, высвобождающий ген кальцитонина (CGRP), нейромедины, белок, связанный с паращитовидным гормоном (РТНrР), глюкагон, нейротенсин, адренокортикотропный гормон (АСТН), пептид YY (PYY), пептид, высвобождающий глюкагон (GLP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (РАСАР), мотилин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), TSH, их аналоги, фрагменты или фармацевтически приемлемую соль и каждый белок независимо выбирают из группы, включающей гормон роста, эритропоэтин, фактор, стимулирующий колонию гранулоцитов, фактор, стимулирующий колонию макрофагов, и интерфероны.
2. Связанная микрочастица по п.1, в которой указанный пептид, белок, их комбинация или фармацевтически приемлемая соль составляет от 0,1 до 30% от общей массы связанной микрочастицы.
3. Связанная микрочастица по п.2, в которой указанная сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит гликолятные звенья.
4. Связанная микрочастица по п.3, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера дополнительно содержит нитратные остатки.
5. Связанная микрочастица по п.4, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1.
6. Связанная микрочастица по п.3, в которой сердцевина из абсорбируемого полимера дополнительно содержит тартратные остатки.
7. Связанная микрочастица по п.6, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1.
8. Связанная микрочастица по п.3, в которой сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера дополнительно содержит малатные остатки.
9. Связанная микрочастица по п.8, в которой отношение гликолятных звеньев к малатным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1.
10. Связанная микрочастица по п.3, в которой указанные гликолятные звенья заканчиваются карбоксильной частью.
11. Связанная микрочастица по п.3, в которой указанные гликолятные звенья заканчиваются амином.
12. Заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц по пп.1-11, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, в которой указанная связанная микрочастица имеет сердцевину из абсорбируемого гетероцепного полимера и один или несколько пептидов, один или несколько белков или их комбинацию, фиксированные на указанной сердцевине из абсорбируемого гетероцепного полимера; каждый пептид независимо выбирают из группы, включающей пептид, высвобождающий гормон роста (GHRP), гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (LHRH), соматостатин, бомбезин, пептид, высвобождающий гастрин (GRP), кальцитонин, брадикинин, галанин, меланоцитостимулирующий гормон (MSH), фактор высвобождения гормона роста (GRF), амилин, тахикинины, секретин, паращитовидный гормон (РТН), энкафелин, эндотелии, пептид, высвобождающий ген кальцитонина (CGRP), нейромедины, белок, связанный с паращитовидным гормоном (РТНrР), глюкагон, нейротенсин, адренокортикотропный гормон (АСТН), пептид YY (PYY), пептид, высвобождающий глюкагон (GLP), вазоактивный кишечный пептид (VIP), пептид, активирующий аденилатциклазу гипофиза (РАСАР), мотилин, вещество Р, нейропептид Y (NPY), TSH, их аналоги, фрагменты или фармацевтически приемлемую соль; каждый белок независимо выбирают из группы, включающей гормон роста, эритропоэтин, фактор, стимулирующий колонию гранулоцитов, фактор, стимулирующий колонию макрофагов, и интерфероны и указанная сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера содержит гликолятные звенья.
13. Заключенная в оболочку микрочастица по п.12, в которой указанный пептид, белок, их комбинация или фармацевтически приемлемая соль составляет от 0,1 до 30% от общей массы связанной микрочастицы и указанная сердцевина из абсорбируемого гетероцепного полимера дополнительно содержит цитратные, тартратные или малатные остатки.
14. Заключенная в оболочку микрочастица по п.13, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным, тартратным или малатным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1, и указанные гликолятные звенья заканчиваются карбоксильной частью или амином.
15. Заключенная в оболочку микрочастица по п.14, в которой указанный абсорбируемый образующий оболочку полимер содержит (a) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе гликолида; (b) звенья на основе d,1-лактида и звенья на основе гликолида; (c) звенья на основе d,1-лактида или (d) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе d,1-лактида.
16. Заключенная в оболочку микрочастица по п.15, в которой отношение звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10.
17. Заключенная в оболочку микрочастица по п.15, в которой отношение звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе d,1-лактида составляет около 80:20.
18. Заключенная в оболочку микрочастица по п.15, в которой отношение звеньев на основе d,1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10.
19. Заключенная в оболочку микрочастица по п.14, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 5-70% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
20. Заключенная в оболочку микрочастица по п.19, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 20-60% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
21. Заключенная в оболочку микрочастица по п.20, в которой абсорбируемый образующий оболочку полимер составляет 30-50% от общей массы заключенной в оболочку микрочастицы.
22. Фармацевтическая композиция, содержащая связанные микрочастицы по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
23. Фармацевтическая композиция, содержащая связанные микрочастицы по п.1, неводный абсорбируемый гелеобразующий жидкий полиэфир и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
24. Фармацевтическая композиция, содержащая заключенные в оболочку микрочастицы по п.12 и фармацевтически приемлемый носитель.
25. Фармацевтическая композиция, содержащая заключенные в оболочку микрочастицы по п.12, неводный абсорбируемый гелеобразующий жидкий полиэфир и необязательно фармацевтически приемлемый носитель.
26. Связанная микрочастица по п.4, в которой пептид является аналогом LHRH.
27. Связанная микрочастица по п.26, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого гетероцепного полимера составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.
28. Связанная микрочастица по п.6, в которой пептид является аналогом LHRH.
29. Связанная микрочастица по п.28, в которой отношении гликолятных звеньев к тартратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1 и аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2.
30. Связанная микрочастица по п.4, в которой пептид является аналогом соматостатина.
31. Связанная микрочастица по п.30, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1, и аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинилацетил-D-Рhе-Суs-Туr-D-Тrр-Lуs-Аbu-Суs-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинилэтилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью.
32. Связанная микрочастица по п.6, в которой пептид является аналогом соматостатина.
33. Связанная микрочастица по п.32, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам составляет от около 7:1 до около 20:1, и аналогом соматостатина является H-p-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинилацетил-D-Рhе-Суs-Туr-D-Тrр-Lуs-Аbu-Суs-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью.
34. Заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц по п.26, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит (a) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе гликолида; (b) звенья на основе d,1-лактида и звенья на основе гликолида; (c) звенья на основе d,1-лактида или (d) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе d,1-лактида.
35. Заключенная в оболочку микрочастица по п.34, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 и отношение (a) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10; (b) звеньев на основе d, 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и (с) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе d,1-лактида составляет около 80:20.
36. Заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц по п.28, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит (a) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе гликолида; (b) звенья на основе d,1-лактида и звенья на основе гликолида; (c) звенья на основе d,1-лактида или (d) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе d,1-лaктидa.
37. Заключенная в оболочку микрочастица по п.36, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом LHRH является p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 и отношение (a) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10; (b) звеньев на основе d,1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и (c) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе d,1-лактида составляет около 80:20.
38. Заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц по п.30, заключенных в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера, который содержит (a) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе гликолида; (b) звенья на основе d,1-лактида и звенья на основе гликолида; (c) звенья на основе d,1-лактида или (d) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе d,1-лактида.
39. Заключенная в оболочку микрочастица по п.38, в которой отношение гликолятных звеньев к цитратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинилацетил-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, и отношение (a) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10; (b) звеньев на основе d,1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и (c) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе d,1-лактида составляет около 80:20.
40. Заключенная в оболочку микрочастица, содержащая одну или несколько связанных микрочастиц по п.32 и абсорбируемый образующий оболочку полимер, который содержит (a) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе гликолида; (b) звенья на основе d,1-лактида и звенья на основе гликолида; (c) звенья на основе d,1-лактида или (d) звенья на основе 1-лактида и звенья на основе d,1-лактида.
41. Заключенная в оболочку микрочастица по п.40, в которой отношение гликолятных звеньев к тартратным остаткам сердцевины из абсорбируемого полимера составляет от около 7:1 до около 20:1, аналогом соматостатина является H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, N-гидроксиэтилпиперазинилацетил-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, или N-гидроксиэтилпиперазинил-этилсульфонил-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2, где два остатка Cys связаны дисульфидной связью, и отношение (a) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10; (b) звеньев на основе d,1-лактида к звеньям на основе гликолида составляет от около 75:25 до около 90:10 и (c) звеньев на основе 1-лактида к звеньям на основе d,1-лактида составляет около 80:20.
42. Способ получения заключенной в оболочку микрочастицы по п.12, который включает стадию заключения связанной микрочастицы в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера.
43. Способ по п.42, в котором дисперсию указанных связанных микрочастиц в растворе, содержащем указанный абсорбируемый образующий оболочку полимер и растворитель, по каплям вводят в предварительно охлажденную среду, которая не является растворителем указанного абсорбируемого образующего оболочку полимера.
44. Способ по п.43, в котором раствор абсорбируемого образующего оболочку полимера содержит от около 5 до 30% абсорбируемого образующего оболочку полимера, предварительно охлажденная среда является спиртом, имеющим два или более атомов углерода, и температура среды находится в интервале от комнатной температуры до около -80°С.
45. Способ по п.44, в котором температура предварительно охлажденной среды составляет от около -60 до -80°С и указанная среда является изопропиловым спиртом.
46. Способ получения заключенной в оболочку микрочастицы по п.12, который включает стадию заключения связанной микрочастицы в оболочку из абсорбируемого образующего оболочку полимера по методу эмульгирования.
RU2000122622A 1998-01-29 1999-01-20 Абсорбируемые микрочастицы RU2237471C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1539498A 1998-01-29 1998-01-29
US09/015,394 1998-01-29

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2000122622A RU2000122622A (ru) 2002-08-10
RU2237471C2 true RU2237471C2 (ru) 2004-10-10

Family

ID=21771154

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2000122622A RU2237471C2 (ru) 1998-01-29 1999-01-20 Абсорбируемые микрочастицы

Country Status (19)

Country Link
US (1) US20060210641A1 (ru)
EP (1) EP1053020B1 (ru)
JP (2) JP3842042B2 (ru)
CN (1) CN1289256A (ru)
AR (1) AR014510A1 (ru)
AT (1) ATE262926T1 (ru)
AU (1) AU2329199A (ru)
CA (1) CA2318152A1 (ru)
DE (1) DE69916031T2 (ru)
DK (1) DK1053020T3 (ru)
ES (1) ES2217738T3 (ru)
HU (1) HUP0101250A3 (ru)
IL (2) IL137388A (ru)
NO (1) NO20003810L (ru)
PL (1) PL193111B1 (ru)
PT (1) PT1053020E (ru)
RU (1) RU2237471C2 (ru)
TW (1) TWI255721B (ru)
WO (1) WO1999038536A1 (ru)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA018472B1 (ru) * 2010-09-15 2013-08-30 Открытое Акционерное Общество "Протек" Частицы, содержащие эритропоэтин, для лечения и профилактики неврологических и гематологических заболеваний и нарушений
RU2633483C2 (ru) * 2011-06-14 2017-10-12 Ипсен Фарма С.А.С. Композиция с длительным высвобождением, содержащая в качестве активного ингредиента пептиды
RU2642664C2 (ru) * 2011-11-18 2018-01-25 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Полимерные белковые микрочастицы

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6413539B1 (en) * 1996-10-31 2002-07-02 Poly-Med, Inc. Hydrogel-forming, self-solvating absorbable polyester copolymers, and methods for use thereof
US6756480B2 (en) 2000-04-27 2004-06-29 Amgen Inc. Modulators of receptors for parathyroid hormone and parathyroid hormone-related protein
WO2002040537A2 (en) * 2000-11-16 2002-05-23 Novo Nordisk A/S Analogues and derivatives of gastrin releasing peptide (grp)
FR2825273B1 (fr) * 2001-05-29 2006-11-24 Oreal Composition pour le traitement des signes cutanes du vieillissement
JP2007536214A (ja) 2003-12-16 2007-12-13 ソシエテ・ドゥ・コンセイユ・ドゥ・ルシェルシュ・エ・ダプリカーション・シャンティフィック・エス・ア・エス Ｇｌｐ−１類似体
WO2005067890A2 (en) 2004-01-13 2005-07-28 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Controlled release cgrp delivery composition for cardiovascular and renal indications
TW200538148A (en) * 2004-01-13 2005-12-01 Vasogenix Pharmaceuticals Inc Methods for treating acute myocardial infarction by administering calcitonin gene related peptide and compositions containing the same
EP2952522B1 (en) 2007-01-31 2019-10-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Stabilized p53 peptides and uses thereof
KR101623985B1 (ko) 2007-03-28 2016-05-25 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 스티칭된 폴리펩티드
US20100256056A1 (en) 2007-09-07 2010-10-07 Zheng Xin Dong Analogues of exendin-4 and exendin-3
BRPI0913943A2 (pt) 2008-07-04 2015-10-20 Translational Cancer Drugs Pharma S L método para determinar o prognóstico de um paciente que sofre de câncer e composição de agente indutor de atividade de chok(beta)
KR20110043689A (ko) 2008-08-07 2011-04-27 입센 파마 에스.에이.에스 Ｎ-말단이 변형된 포도당 의존적인 인슐린 분비 자극성 폴리펩타이드(ｇｉｐ)의 유사체
MX2011001028A (es) 2008-08-07 2011-04-26 Ipsen Pharma Sas Analogos truncados de polipeptidos de insulinotropicos dependientes de glucosa.
MX2011001031A (es) 2008-08-07 2011-04-26 Ipsen Pharma Sas Analogos de polipeptidos insulinotropicos dependientes de glucosa.
AU2010212794A1 (en) 2009-02-12 2011-08-11 Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. Use of cardiotrophin- 1 for the treatment of metabolic diseases
UA103104C2 (ru) 2009-07-22 2013-09-10 Ипсен Фарма С.А.С. Аналоги инсулиноподобного фактора роста-1 (igf-1), содержащие аминокислотную замену в положении 59
AU2011289579B2 (en) * 2010-08-10 2016-11-17 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Erythrocyte-binding therapeutics
US9517257B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
WO2012021876A2 (en) 2010-08-13 2012-02-16 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
TWI643868B (zh) 2011-10-18 2018-12-11 艾利倫治療公司 擬肽巨環化合物
EP2822572B1 (en) 2012-02-15 2020-06-10 Aileron Therapeutics, Inc. Peptidomimetic macrocycles
CA2864120A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Aileron Therapeutics, Inc. Triazole-crosslinked and thioether-crosslinked peptidomimetic macrocycles
EP2914256B1 (en) 2012-11-01 2019-07-31 Aileron Therapeutics, Inc. Disubstituted amino acids and methods of preparation and use thereof
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
KR20160135214A (ko) 2014-02-21 2016-11-25 에꼴 뽈리떼끄닉 뻬데랄 드 로잔느 (으뻬에프엘) 글리코타겟팅 치료제
CN106999541A (zh) 2014-09-24 2017-08-01 艾瑞朗医疗公司 拟肽大环化合物及其用途
MX2017011834A (es) 2015-03-20 2018-04-11 Aileron Therapeutics Inc Macrociclos peptidomimeticos y usos de los mismos.
US10953103B2 (en) 2015-11-06 2021-03-23 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V Composition comprising a biocompatible and biodegradable polymer, nanocarriers and a drug and methods of making and using the same
EP3638296A1 (en) 2017-06-16 2020-04-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance
CN113281317B (zh) * 2021-05-14 2022-04-29 北京指真生物科技有限公司 一种含有花菁类化合物的编码微球及其制备方法和应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IE52535B1 (en) * 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US5385738A (en) * 1983-10-14 1995-01-31 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Ltd. Sustained-release injection
EP0230654B1 (en) * 1985-12-28 1992-03-18 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Sustained pulsewise release pharmaceutical preparation
US4938763B1 (en) * 1988-10-03 1995-07-04 Atrix Lab Inc Biodegradable in-situ forming implants and method of producing the same
US5077049A (en) * 1989-07-24 1991-12-31 Vipont Pharmaceutical, Inc. Biodegradable system for regenerating the periodontium
JPH07503700A (ja) * 1991-01-03 1995-04-20 アルカーメス　コントロールド　セラピューティックス，　インコーポレイテッド カチオン生体ポリマーによるタンパク質の安定化
CA2114122A1 (en) * 1991-07-24 1993-02-04 Thomas Sai Ying Ko Therapeutic compositions and methods
US5366756A (en) * 1992-06-15 1994-11-22 United States Surgical Corporation Method for treating bioabsorbable implant material
US5672659A (en) * 1993-01-06 1997-09-30 Kinerton Limited Ionic molecular conjugates of biodegradable polyesters and bioactive polypeptides
CA2123144A1 (en) * 1993-05-10 1994-11-11 David Bodmer Stabilisation of pharmacologically active compounds in sustained release compositions
WO1995003356A1 (en) * 1993-07-23 1995-02-02 Massachusetts Institute Of Technology Nanoparticles and microparticles of non-linear hydrophilic-hydrophobic multiblock copolymers
US5612052A (en) * 1995-04-13 1997-03-18 Poly-Med, Inc. Hydrogel-forming, self-solvating absorbable polyester copolymers, and methods for use thereof
US5665702A (en) * 1995-06-06 1997-09-09 Biomeasure Incorporated Ionic molecular conjugates of N-acylated derivatives of poly(2-amino-2-deoxy-D-glucose) and polypeptides
US5795922A (en) * 1995-06-06 1998-08-18 Clemson University Bone cement composistion containing microencapsulated radiopacifier and method of making same
KR100210509B1 (ko) * 1996-01-10 1999-07-15 성재갑 지속성 동물 성장 호르몬 제형 및 이의 제조 방법

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA018472B1 (ru) * 2010-09-15 2013-08-30 Открытое Акционерное Общество "Протек" Частицы, содержащие эритропоэтин, для лечения и профилактики неврологических и гематологических заболеваний и нарушений
RU2633483C2 (ru) * 2011-06-14 2017-10-12 Ипсен Фарма С.А.С. Композиция с длительным высвобождением, содержащая в качестве активного ингредиента пептиды
RU2642664C2 (ru) * 2011-11-18 2018-01-25 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Полимерные белковые микрочастицы
US11291636B2 (en) 2011-11-18 2022-04-05 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Polymer protein microparticles
US11951216B2 (en) 2011-11-18 2024-04-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Polymer protein microparticles

Also Published As

Publication number Publication date
AU2329199A (en) 1999-08-16
DE69916031T2 (de) 2005-02-17
CA2318152A1 (en) 1999-08-05
AR014510A1 (es) 2001-02-28
IL137388A (en) 2005-05-17
NO20003810L (no) 2000-09-13
PT1053020E (pt) 2004-06-30
WO1999038536A1 (en) 1999-08-05
NO20003810D0 (no) 2000-07-25
US20060210641A1 (en) 2006-09-21
JP2002501908A (ja) 2002-01-22
ATE262926T1 (de) 2004-04-15
PL193111B1 (pl) 2007-01-31
PL342662A1 (en) 2001-07-02
TWI255721B (en) 2006-06-01
ES2217738T3 (es) 2004-11-01
CN1289256A (zh) 2001-03-28
DK1053020T3 (da) 2004-07-26
JP2005047928A (ja) 2005-02-24
HUP0101250A2 (hu) 2001-08-28
JP3842042B2 (ja) 2006-11-08
EP1053020A1 (en) 2000-11-22
EP1053020B1 (en) 2004-03-31
HUP0101250A3 (en) 2006-06-28
IL137388A0 (en) 2001-07-24
DE69916031D1 (de) 2004-05-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2237471C2 (ru) Абсорбируемые микрочастицы
AU740493B2 (en) Process for making absorbable microparticles
RU2146128C1 (ru) Ионный конъюгат с длительным периодом высвобождения пептида, способ синтезирования ионного конъюгата, способ синтезирования микрочастиц
CA2493478C (en) Cell transport compositions and uses thereof
EP0904062B1 (en) Sustained release ionic conjugate
US20080187568A1 (en) Polymerization with precipitation of proteins for elution in physiological solution
DE60027334T2 (de) Zusammensetzung mit verzögerter Abgabe in der ein Peptid mit einem Polymer komplexiert ist
HUT70177A (en) Salts of peptides with carboxy-terminated polyesters
Daugherty et al. Pharmacological modulation of the tissue response to implanted polylactic-co-glycolic acid microspheres
RU2202563C2 (ru) Фосфорилированные полимеры и их конъюгаты
EP1212095B1 (en) Process to make a sustained release formulation
CZ20002640A3 (cs) Způsob výroby absorbovatelných mikročástic
CZ20002654A3 (cs) Absorbovatelné mikročástice
TW200831131A (en) Pharmaceutical compositions with enhanced stability

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20070121