RU2642664C2 - Полимерные белковые микрочастицы - Google Patents

Полимерные белковые микрочастицы Download PDF

Info

Publication number
RU2642664C2
RU2642664C2 RU2014124682A RU2014124682A RU2642664C2 RU 2642664 C2 RU2642664 C2 RU 2642664C2 RU 2014124682 A RU2014124682 A RU 2014124682A RU 2014124682 A RU2014124682 A RU 2014124682A RU 2642664 C2 RU2642664 C2 RU 2642664C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
protein
approximately
polymer
microparticles
microns
Prior art date
Application number
RU2014124682A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2014124682A (ru
Inventor
Хантер ЧЕН
Скотт Уолш
Original Assignee
Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47295198&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2642664(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of RU2014124682A publication Critical patent/RU2014124682A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2642664C2 publication Critical patent/RU2642664C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5089—Processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/34—Macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyesters, polyamino acids, polysiloxanes, polyphosphazines, copolymers of polyalkylene glycol or poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1611—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5031—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/5005—Wall or coating material
    • A61K9/5021—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/5036—Polysaccharides, e.g. gums, alginate; Cyclodextrin
    • A61K9/5042—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. phthalate or acetate succinate esters of hydroxypropyl methylcellulose
    • A61K9/5047—Cellulose ethers containing no ester groups, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
    • A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для получения фармацевтической композиции с пролонгированным высвобождением. Предлагаются микрочастицы, содержащие ядро из лечебного белка и верхний слой из биосовместимого и биологически разрушаемого полимера, и способы получения и применения данных микрочастиц. Пролонгированное высвобождение лечебного белка из микрочастиц в физиологический раствор демонстрируется в течение продолжительного периода времени. Группа изобретений позволяет расширить арсенал имеющихся фармацевтических средств. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 3 ил., 7 табл., 9 пр.

Description

ОБЛАСТЬ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Изобретение относится к получению композиции и применению белкового терапевтического средства пролонгированного действия. Конкретно, изобретение относится к получению композиции и применению множества покрытых полимером микрочастиц белка для пролонгированного и однородного высвобождения белка в физиологическую окружающую среду или среду на водной основе с течением времени.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Пролонгированное высвобождение лечебного белка, введенного в биологическую мишень, такую как, например, сетчатка глаза или опухоль, или введенного парентерально, является желательным для лечения многочисленных различных состояний, включая злокачественные опухоли, сердечно-сосудистые заболевания, сосудистые заболевания, ортопедические болезни, стоматологические заболевания, раны, аутоиммунные заболевания, желудочно-кишечные болезни и глазные болезни. Биологически совместимые и биоразрушающиеся полимеры для контролируемой и пролонгированной доставки лекарственных препаратов используются в течение десятилетий. По мере того как полимер со временем разрушается, лечебный лекарственный препарат медленно высвобождается.
В случае внутриглазных терапевтических средств существует значительная нереализованная медицинская потребность в композиции пролонгированного действия для доставки белкового терапевтического средства эффективно в течение времени с насколько малым числом внутриглазных инъекций, насколько возможно. В случае других болезней, таких как рак, воспалительные заболевания и другие заболевания, существует потребность в улучшенных вживляемых композициях пролонгированного действия, содержащих белковые терапевтические средства.
Авторы заявки обнаружили, описывают здесь и заявляют способы получения и применения микрочастиц, содержащих биологически разрушающийся полимер и лечебный белок, которые способны равномерно высвобождать терапевтически эффективное количество лечебного белка в течение продолжительного периода времени.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В одном аспекте изобретение предлагает микрочастицу, включающую белок, покрытый полимером. В одном варианте осуществления микрочастица имеет диаметр приблизительно от 2 мкм до 70 мкм. В одном варианте осуществления микрочастица имеет диаметр приблизительно 15 мкм.
В одном варианте осуществления белок представляет собой антигенсвязывающий белок. В одном варианте осуществления белок включает Fc домен. В одном варианте осуществления белок включает рецепторный домен. В одном варианте осуществления белок представляет собой антитело. В другом варианте осуществления белок представляет собой слитый белок-Fc-рецептор. В другом варианте осуществления белок представляет собой белок типа ловушки, который включает фрагмент когнатного рецептора и Fc домен. В одном особом варианте осуществления белок представляет собой белок ловушку-VEGF. В одном варианте осуществления белок ловушку-VEGF включает последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 1.
В одном варианте осуществления полимер представляет собой биологически разрушаемый полимер. В некоторых вариантах осуществления полимер выбран из группы, состоящей из полимолочной кислоты (PLA), полигликолевой кислоты (PGA), сополимера полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолида (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарата, PLGA-альфа-токоферилсукцината, этерифицированного до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрида поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимера гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимера полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактона (PCL), полиалкилцианоакрилата (PAC), поли(этил)цианоакрилата (PEC), полиизобутилцианоакрилата, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламида (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутирата (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоата (PHA), поли-β-R-яблочной кислоты, полимеров фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, полисахаридов, целлюлозы, этилцеллюлозы, метилцеллюлозы, альгинатов, декстрана и декстрановых полимерных гидрогелей, амилозы, инулина, пектина и гуаровой камеди, хитозана, хитина, гепарина, гиалуроновой кислоты, полиротаксанов и полипсевдоротаксанов на основе циклодекстрина (CD), полиаспартатов, полиглутаматов, полилейцина, сополимеров лейцин-глутамат, полибутиленсукцината (PBS), желатина, коллагенов, фибринов, фиброина, полиортоэфиров, сополимеров полиортоэфир-полиамидин, сополимеров полиортоэфир-диамин, полиортоэфиров, включающих латентные кислоты, сополимера полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинаций и сополимеров. В одном варианте осуществления полимер представляет собой поли-ε-капролактон (PCL) или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой PLGA или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой этилцеллюлозу или ее производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой полиортоэфир или его производное или сополимер.
В одном варианте осуществления микрочастица включает ядро микроизмельченного белка с размером меньше чем десять микрон и полимерный верхний слой. В одном варианте осуществления ядро микроизмельченного белка, по меньшей мере, на 50% покрыто полимером, означая, что не более чем 50% поверхности ядра микроизмельченного белка остается незащищенным. В одном варианте осуществления, по меньшей мере, 60%, по меньшей мере, 70%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 99% или 100% поверхности ядра микроизмельченного белка покрыто полимером.
В одном варианте осуществления микрочастица с размером более чем 10 микрон включает (a) ядро микроизмельченного белка с размером менее чем 10 микрон, где белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF; и (b) полимерное покрытие, где полимер представляет собой любой один или более биосовместимый полимер, биологически разрушаемый полимер, биоразлагаемый полимер, полимолочную кислоту (PLA), полигликолевую кислоту (PGA), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарат, PLGA-альфа-токоферилсукцинат, этерифицированный до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрид поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимер гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимер полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактон (PCL), полиалкилцианоакрилат (PAC), поли(этил)цианоакрилат (PEC), полиизобутилцианоакрилат, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламид (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутират (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоат (PHA), поли-β-R-яблочную кислоту, полимеры фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, полисахариды, целлюлозу, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, альгинаты, декстран и декстрановые полимерные гидрогели, амилозу, инулин, пектин и гуаровую камедь, хитозан, хитин, гепарин, гиалуроновую кислоту, полиротаксаны и полипсевдоротаксаны на основе циклодекстрина (CD), полиаспартаты, полиглутаматы, полилейцин, сополимеры лейцин-глутамат, полибутиленсукцинат (PBS), желатин, коллагены, фибрины, фиброин, полиортоэфиры, сополимер полиортоэфир-полиамидин, сополимеры полиортоэфир-диамин, полиортоэфиры, включающие латентные кислоты, сополимер полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинации и сополимеры.
В одном варианте осуществления микрочастица со средним диаметром приблизительно от 15 микрон до 30 микрон включает (a) ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от 10 до 12 микрон, где белок представляет собой белок ловушку-VEGF, и (b) полимерное покрытие, где полимер представляет собой любой один или более полимеров из группы, включающей PCL, PLGA, этилцеллюлозу и полиортоэфир и их сополимеры или производные.
В одном аспекте изобретение предлагает множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон и которые включают ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от двух микрон до 30 микрон, и полимерный верхний слой.
В одном варианте осуществления белок представляет собой антигенсвязывающий белок. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF. В одном варианте осуществления белок включает Fc домен. В одном варианте осуществления белок представляет собой антитело. В другом варианте осуществления белок представляет собой белок типа ловушки, который включает фрагмент когнатного рецептора и Fc домен. В одном особом варианте осуществления белок представляет собой белок ловушку-VEGF. В особом варианте осуществления белок ловушку-VEGF включает последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 1.
В одном варианте осуществления полимер представляет собой биосовместимый полимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой биоразлагаемый полимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой биологически разрушаемый полимер. В некоторых вариантах осуществления полимер выбран из группы, состоящей из полимолочной кислоты (PLA), полигликолевой кислоты (PGA), сополимера полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолида (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарата, PLGA-альфа-токоферилсукцината, этерифицированного до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрида поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимера гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимера полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактона (PCL), полиалкилцианоакрилата (PAC), поли(этил)цианоакрилата (PEC), полиизобутилцианоакрилата, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламида (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутирата (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоата (PHA), поли-β-R-яблочной кислоты, полимеров фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерина, полисахаридов, целлюлозы, этилцеллюлозы, метилцеллюлозы, альгинатов, декстрана и декстрановых полимерных гидрогелей, амилозы, инулина, пектина и гуаровой камеди, хитозана, хитина, гепарина, гиалуроновой кислоты, полиротаксанов и полипсевдоротаксанов на основе циклодекстрина (CD), полиаспартатов, полиглутаматов, полилейцина, сополимеров лейцин-глутамат, полибутиленсукцината (PBS), желатина, коллагенов, фибринов, фиброина, полиортоэфиров, сополимеров полиортоэфир-полиамидин, сополимеров полиортоэфир-диамин, полиортоэфиров, включающих латентные кислоты, сополимера полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинаций и сополимеров. В одном варианте осуществления полимер представляет собой поли-ε-капролактон (PCL) или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой PLGA или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой этилцеллюлозу или ее производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой полиортоэфир, включающий латентную кислоту.
В одном варианте осуществления ядро микроизмельченного белка большинства микрочастиц множества микрочастиц, по меньшей мере, на 50% покрыто полимером, означая, что не более чем 50% поверхности ядра микроизмельченного белка остается незащищенным. В одном варианте осуществления, по меньшей мере, 60%, по меньшей мере, 70%, по меньшей мере, 80%, по меньшей мере, 90%, по меньшей мере, 95%, по меньшей мере, 99% или 100% поверхности ядра микроизмельченного белка покрыто полимером.
В одном варианте осуществления множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон, включает (a) ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от двух микрон до 30 микрон, где белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF; и (b) полимерный верхний слой, где полимер представляет собой любой один или более биосовместимый полимер, биологически разрушаемый полимер, биоразлагаемый полимер, полимолочную кислоту (PLA), полигликолевую кислоту (PGA), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарат, PLGA-альфа-токоферилсукцинат, этерифицированный до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), поли-ε-капролактон (PCL), полиалкилцианоакрилат, полиангидрид поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимер гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимер полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли(этил)цианоакрилат (PEC), полиизобутилцианоакрилат, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламид (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутират (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоат (PHA), поли-β-R-яблочную кислоту, полимеры фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, полисахариды, целлюлозу, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, альгинаты, декстран и декстрановые полимерные гидрогели, амилозу, инулин, пектин и гуаровую камедь, хитозан, хитин, гепарин, гиалуроновую кислоту, полиротаксаны и полипсевдоротаксаны на основе циклодекстрина (CD), полиаспартаты, полиглутаматы, полилейцин, сополимеры лейцин-глутамат, полибутиленсукцинат (PBS), желатин, коллагены, фибрины, фиброин, полиортоэфиры, сополимер полиортоэфир-полиамидин, сополимеры полиортоэфир-диамин, полиортоэфиры, включающие латентные кислоты, сополимер полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинации и сополимеры.
В одном варианте осуществления множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон со средним размером приблизительно от 15 микрон до 30 микрон, включает (a) ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от двух микрон до 30 микрон со средним размером приблизительно от 10 микрон до 12 микрон, где белок представляет собой белок ловушку-VEGF; и (b) полимерный верхний слой, где полимер представляет собой любой один или более полимеров, выбранных из группы, включающей PLA, PCL, PLGA, этилцеллюлозу и полиортоэфир, и их сополимеры или производные.
В одном аспекте изобретение предлагает способ получения микрочастицы, которая включает ядро из белка и полимерный верхний слой. В одном варианте осуществления полученная микрочастица имеет диаметр приблизительно от двух микрон до 70 микрон или средний диаметр приблизительно от 15 микрон до 30 микрон. В одном варианте осуществления способ получения микрочастицы включает (1) получение частицы белка; (2) суспендирование частицы белка в растворе, включающем полимер и растворитель; и (3) удаление растворителя, в котором формируется частица, включающая ядро из белка, покрытое полимерным верхним слоем.
В одном варианте осуществления частица белка из стадии (1) представляет собой микроизмельченную частицу белка, которую получают распылительной сушкой раствора, включающего белок. В некоторых вариантах осуществления раствор белка подвергают распылительной сушке посредством обработки ультразвуком с одинарным наконечником, обработки ультразвуком с двойным наконечником или электрораспылением. В некоторых вариантах осуществления полученная в результате микроизмельченная частица белка, которая формирует ядро полученной микрочастицы, имеет диаметр приблизительно от двух микрон до 30 микрон со средним диаметром приблизительно от 10 микрон до 12 микрон.
В некоторых вариантах осуществления белок, который формирует ядро, представляет собой антигенсвязывающий белок. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело (например, lgG) или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF. В особом варианте осуществления белок представляет собой ловушку-VEGF, включающую последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 1.
В одном варианте осуществления растворитель удаляют из стадии (3), создавая дисперсию смеси белок-полимер-растворитель из стадии (2) и давая возможность растворителю испариться из капель, созданных дисперсией. В одном варианте осуществления дисперсию создают распылительной сушкой, которую можно осуществить обработкой ультразвуком с двойным наконечником, обработкой ультразвуком с одинарным наконечником или электрораспылением. В одном варианте осуществления растворитель удаляют из капель, используя тепло или воздух, или химической экстракцией.
В одном варианте осуществления полимер является биологически разрушаемым, биоразлагаемым и/или биосовместимым. В некоторых вариантах осуществления полимер представляет собой любой один или более полимеров, выбранных из группы, состоящей из полимолочной кислоты (PLA), полигликолевой кислоты (PGA), сополимера полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолида (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарата, PLGA-альфа-токоферилсукцината, этерифицированного до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрида поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимера гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимера полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактона (PCL), полиалкилцианоакрилата (PAC), поли(этил)цианоакрилата (PEC), полиизобутилцианоакрилата, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламида (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутирата (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоата (PHA), поли-β-R-яблочной кислоты, полимеров фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерина, полисахаридов, целлюлозы, этилцеллюлозы, метилцеллюлозы, альгинатов, декстрана и декстрановых полимерных гидрогелей, амилозы, инулина, пектина и гуаровой камеди, хитозана, хитина, гепарина, гиалуроновой кислоты, полиротаксанов и полипсевдоротаксанов на основе циклодекстрина (CD), полиаспартатов, полиглутаматов, полилейцина, сополимеров лейцин-глутамат, полибутиленсукцината (PBS), желатина, коллагенов, фибринов, фиброина, полиортоэфиров, сополимера полиортоэфир-полиамидин, сополимеров полиортоэфир-диамин, полиортоэфиров, включающих латентные кислоты, сополимер полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинаций и сополимеров. В одном варианте осуществления полимер представляет собой поли-ε-капролактон (PCL) или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой PLGA или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой этилцеллюлозу или ее производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимер представляет собой полиортоэфир или его производное, который содержит кислотолабильные элементы. В другом варианте осуществления полимер представляет собой PLA.
В одном аспекте изобретение предлагает способ получения микрочастицы, включающий стадии (1) формирования микроизмельченной частицы белка, имеющей диаметр приблизительно от двух микрон до 30 микрон, причем средний диаметр составляет приблизительно от 10 микрон до 12 микрон, распылительной сушкой раствора, содержащего белок, где белок представляет собой антигенсвязывающий белок. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF (например, белок, имеющий последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 1); (2) суспендирования микроизмельченной частицы белка в растворе, включающем полимер и растворитель, где полимер представляет собой любой один или более полимер, выбранный из группы, включающей биологически разрушаемый полимер, биоразлагаемый полимер, биосовместимый полимер, полимолочную кислоту (PLA), полигликолевую кислоту (PGA), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарат, PLGA-альфа-токоферилсукцинат, этерифицированный до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрид поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимер гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимер полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактон (PCL), полиалкилцианоакрилат (PAC), поли(этил)цианоакрилат (PEC), полиизобутилцианоакрилат, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламид (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутират (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоат (PHA), поли-β-R-яблочную кислоту, полимеры фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, полисахариды, целлюлозу, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, альгинаты, декстран и декстрановые полимерные гидрогели, амилозу, инулин, пектин и гуаровую камедь, хитозан, хитин, гепарин, гиалуроновую кислоту, полиротаксаны и полипсевдоротаксаны на основе циклодекстрина (CD), полиаспартаты, полиглутаматы, полилейцин, сополимеры лейцин-глутамат, полибутиленсукцинат (PBS), желатин, коллагены, фибрины, фиброин, полиортоэфиры, сополимеры полиортоэфир-полиамидин, сополимеры полиортоэфир-диамин, полиортоэфиры, включающие латентные кислоты, сополимер полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинации и сополимеры, и (3) удаления растворителя распылительной сушкой суспензии ''частица микроизмельченного белка-полимер-растворитель'' и отгонки растворителя с применением тепла или воздуха или экстракцией растворителем, где формируется микрочастица, имеющая диаметр приблизительно от двух микрон до 70 микрон, причем средний диаметр составляет приблизительно от 15 микрон до 30 микрон, и включающая ядро из белка и полимерный верхний слой.
В некоторых вариантах осуществления распылительную сушку из стадии (1) или стадии (3) осуществляют посредством обработки ультразвуком с двойным наконечником, обработки ультразвуком с одинарным наконечником или электрораспылением.
В одном варианте осуществления способ получения микрочастиц включает стадии (1) формирования микроизмельченной частицы ловушку-VEGF, имеющей диаметр приблизительно от 10 микрон до 12 микрон распылительной сушкой раствора, содержащего белок ловушку-VEGF; (2) суспендирования микроизмельченной частицы ловушку-VEGF в растворе, содержащем полиортоэфир, включающий латентную кислоту, и совместимый растворитель или этилцеллюлозу и совместимый растворитель; и (3) удаления растворителя (a) распылительной сушкой суспензии микроизмельченная частица ловушка-VEGF-полиортоэфир-латентная кислота-растворитель или суспензии микроизмельченная частица ловушка-VEGF-этилцеллюлоза-растворитель и (b) отгонкой растворителя с помощью тепла или воздуха или экстракцией растворителем, где формируется микрочастица, имеющая диаметр приблизительно от 15 микрон до 30 микрон и включающая ядро ловушку-VEGF и полимерный верхний слой из полиортоэфира и его сополимеров или производных.
В одном аспекте изобретение предлагает композицию пролонгированного действия, содержащую лечебный белок, для высвобождения или обеспечения стационарной концентрации лечебного белка с течением времени. Композиция пролонгированного действия включает множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон, каждая из которых включает ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от двух до 30 микрон, и полимерный верхний слой.
В одном варианте осуществления лечебный белок представляет собой антигенсвязывающий белок. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий белок представляет собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело (например, lgG) или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF (например, один из которых имеет первичную структуру SEQ ID NO: 1). В одном варианте осуществления лечебный белок включает Fc домен. В одном варианте осуществления белок представляет собой антитело. В другом варианте осуществления белок представляет собой lgG. В другом варианте осуществления лечебный белок представляет собой слитый белок-Fc-рецептор. В другом варианте осуществления лечебный белок представляет собой белок типа ловушки, который включает фрагмент когнатного рецептора и Fc домен. В одном особом варианте осуществления лечебный белок представляет собой белок ловушку-VEGF. В еще одном варианте осуществления ловушка-VEGF включает последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO: 1.
В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает биосовместимый полимер. В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает биоразлагаемый полимер. В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает биологически разрушаемый полимер. В некоторых вариантах осуществления полимерный верхний слой включает полимер, выбранный из группы, состоящей из полимолочной кислоты (PLA), полигликолевой кислоты (PGA), сополимера полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолида (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарата, PLGA-альфа-токоферилсукцината, этерифицированного до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрида поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимера гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимера полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактона (PCL), полиалкилцианоакрилата (PAC), поли(этил)цианоакрилата (PEC), полиизобутилцианоакрилата, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламида (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутирата (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоата (PHA), поли-β-R-яблочной кислоты, полимеров фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерина, полисахаридов, целлюлозы, этилцеллюлозы, метилцеллюлозы, альгинатов, декстрана и декстрановых полимерных гидрогелей, амилозы, инулина, пектина и гуаровой камеди, хитозана, хитина, гепарина, гиалуроновой кислоты, полиротаксанов и полипсевдоротаксанов на основе циклодекстрина (CD), полиаспартатов, полиглутаматов, полилейцина, сополимеров лейцин-глутамат, полибутиленсукцината (PBS), желатина, коллагенов, фибринов, фиброина, полиортоэфиров, сополимера полиортоэфир-полиамидин, сополимеров полиортоэфир-диамин, полиортоэфиров, включающих латентные кислоты, сополимера полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинаций и сополимеров. В одном варианте осуществления полимер представляет собой поли-ε-капролактон (PCL) или его производное или сополимер. В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает PLGA. В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает этилцеллюлозу. В одном варианте осуществления полимерный верхний слой включает один или более полимеров, выбранных из группы, включающей PLA, PLGA, этилцеллюлозу и полиортоэфир, и их сополимеры или производные.
В одном варианте осуществления множество микрочастиц включает группу микрочастиц, имеющих некоторый диапазон толщин полимерного верхнего слоя, так что индивидуальные микрочастицы из группы микрочастиц разрушаются с различными скоростями, что дает возможность однородной скорости высвобождения лечебного белка.
В одном варианте осуществления множество микрочастиц включает смесь непокрытых микроизмельченных частиц белка и микрочастиц, имеющих некоторый диапазон толщин полимерного верхнего слоя, что дает возможность высвобождения лечебного белка с периодическими интервалами, исходя из толщины верхнего слоя.
В одном варианте осуществления множество микрочастиц включает смесь микрочастиц, имеющих полимерный верхний слой с различными уровнями гидрофобности, чтобы контролировать время или продолжительность деструкции и последующего высвобождения. В одном варианте осуществления каждая из микрочастиц включает внутренний полимерный слой и внешний полимерный слой, где внешний полимерный слой ограничивает гидратацию внутреннего полимерного слоя, чтобы контролировать высвобождение лечебного белка.
В одном варианте осуществления лечебный белок высвобождается из множества микрочастиц со скоростью приблизительно от 0,01 мг/неделю до 0,30 мг/неделю в течение, по меньшей мере, 60 дней, когда микрочастицы находятся в водной среде. В одном варианте осуществления водная среда представляет собой буферный раствор in vitro. В одном варианте осуществления водная среда представляет собой среду in vivo. В одном варианте осуществления водная среда представляет собой среду ex vivo. В одном варианте осуществления водная среда представляет собой стекловидное тело.
В одном варианте осуществления композиция пролонгированного действия включает множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон, и которые включают (a) ядро микроизмельченного лечебного белка с размером приблизительно от двух микрон до 30 микрон, где лечебный белок представляет собой антигенсвязывающий белок, который в некоторых случаях может представлять собой любой один или более белков, выбранных из группы, включающей антитело или фрагмент антитела, рецептор или его растворимый фрагмент, растворимый фрагмент рецептора Т-клетки, растворимый фрагмент MHC, слитый белок-Fc-рецептор, белок типа ловушки и белок ловушку-VEGF; и (b) полимерный верхний слой с некоторым широким диапазоном толщины, где полимер представляет собой любой один или более биосовместимый полимер, биологически разрушаемый полимер, биоразлагаемый полимер, полимолочную кислоту (PLA), полигликолевую кислоту (PGA), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарат, PLGA-альфа-токоферилсукцинат, этерифицированный до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрид поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимер гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимер полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактон (PCL), полиалкилцианоакрилат (PAC), поли(этил)цианоакрилат (PEC), полиизобутилцианоакрилат, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламид (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутират (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоат (PHA), поли-β-R-яблочную кислоту, полимеры фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, полисахариды, целлюлозу, этилцеллюлозу, метилцеллюлозу, альгинаты, декстран и декстрановые полимерные гидрогели, амилозу, инулин, пектин и гуаровую камедь, хитозан, хитин, гепарин, гиалуроновую кислоту, полиротаксаны и полипсевдоротаксаны на основе циклодекстрина (CD), полиаспартаты, полиглутаматы, полилейцин, сополимеры лейцин-глутамат, полибутиленсукцинат (PBS), желатин, коллагены, фибрины, фиброин, полиортоэфиры, сополимер полиортоэфир-полиамидин, сополимеры полиортоэфир-диамин, полиортоэфиры, включающие латентные кислоты, сополимер полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат и их комбинации и сополимеры, где микрочастицы высвобождают или обеспечивают стационарную концентрацию лечебного белка при скорости приблизительно от 0,01 мг/неделю до 0,30 мг/неделю в течение, по меньшей мере, 60 дней.
В одном варианте осуществления композиция пролонгированного действия включает множество микрочастиц, размер которых находится в диапазоне приблизительно от двух микрон до 70 микрон, причем средний размер составляет приблизительно от 15 микрон до 30 микрон, и которые включают (a) ядро микроизмельченного белка с размером приблизительно от двух микрон до 30 микрон, причем средний размер составляет приблизительно от 10 микрон до 12 микрон, где белок представляет собой белок ловушку-VEGF; и (b) полимерный верхний слой с некоторым диапазоном толщины, где полимер представляет собой любой один или более полимеров из группы PLGA, этилцеллюлозы и полиортоэфира, и их сополимеров и производных, так что в водной среде микрочастицы высвобождают или обеспечивают стационарную концентрацию белка ловушку-VEGF при скорости приблизительно 0,06±0,02 мг/неделю в течение, по меньшей мере, 60 дней.
В одном аспекте изобретение предлагает способ модуляции высвобождения белка. В одном варианте осуществления способ включает стадию получения множества микрочастиц, как описано в предшествующем аспекте, после чего следует стадия помещения микрочастиц в растворитель. Растворитель в некоторых вариантах осуществления является водным. Растворитель может быть in vitro, например, в фосфатном забуференном растворе. Растворитель может быть in vivo, таким как, например, стекловидное тело.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг. 1 показывает относительное количество (% объемные) частиц белка без полимерного верхнего слоя данного диаметра (ECD (мкм)) в совокупности частиц белка, полученных из 50 мг/мл белка ловушку-VEGF, 25 мг/мл белка ловушку-VEGF и 25 мг/мл белка ловушку-VEGF плюс 0,1% полисорбата 80.
Фиг. 2 показывает относительное количество (% объемные определенные микропотоковой визуализацией (MFI)) микрочастиц заданного диаметра ((ECD (мкм)) в совокупности микрочастиц, полученных из 50 мг/мл белка ловушку-VEGF плюс 50 мг/мл POE, 250 мг/мл POE и 50 мг/мл EC.
Фиг. 3 показывает количество белка ловушку-VEGF в миллиграммах, высвобожденного из микрочастиц, полученных из 50 мг/мл POE, 250 мг/мл POE или 50 мг/мл EC в течение приблизительно 60 дней.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
Микрочастица и частица белкового ядра по настоящему изобретению являются в общих чертах сферическими по форме. Некоторые микрочастицы и ядра из белка будут приближаться к сферичности, в то время как другие будут более неправильными по форме. Таким образом, используемый здесь термин ”диаметр” обозначает каждое и любое из нижеследующего: (a) диаметр сферы, которая окружает микрочастицу или ядро из белка, (b) диаметр наиболее большой сферы, которая попадает внутрь границ микрочастицы или ядра из белка, (c) любое измерение между описывающей сферой из (a) и ограничивающей сферой из (b), включая среднее значение между данными двумя величинами, (d) длину наиболее длинной оси микрочастицы или ядра из белка; (e) длину наиболее короткой оси микрочастицы или ядра из белка, (f) любое измерение между длиной длинной оси (d) и длиной короткой оси (e), включая среднее значение между данными двумя величинами, и/или (g) эквивалентный круговой диаметр (”ECD”), определенный микропотоковой визуализацией (MFI), анализом траекторий движения наночастиц (NTA) или методами исследования частиц с применением светотени, таким как динамическое светорассеяние (DSL). В общих чертах, см.
Figure 00000001
Диаметр обычно выражают в микрометрах (мкм или микронах). Диаметр можно определить оптическим измерением.
”Микроизмельченная частица белка” или ”частица белка” обозначает частицу, содержащую множество молекул белка с низкими, очень низкими или близкими к нулю количествами воды (например, <3% воды по массе). При применении в настоящем описании микроизмельченная частица белка обычно является сферической по форме и имеет ECD, находящийся в диапазоне от 2 микрон до приблизительно 35 микрон. Микроизмельченная частица белка не ограничивается какой-либо конкретной белковой структурной единицей и подходит для приготовления и доставки лечебного белка. Обычные лечебные белки включают, помимо прочего, антигенсвязывающие белки, такие как, например, растворимые фрагменты рецептора, антитела (включая lgG) и производные или фрагменты антител, другие Fc-содержащие белки, включая Fc-слитые белки и слитые белки-Fc-рецепторы, включая белок типа ловушки (Huang, C., Curr. Opin. Biotechnol, 20: 692-99 (2009)), такие как, например, ловушка-VEGF.
Микроизмельченную частицу белка по изобретению можно получить любым способом, известным из уровня техники для получения частиц белка микронного размера. Например, частицу белка можно изготовить, помимо прочего, распылительной сушкой (инфра), лиофилизацией, размолом на струйной мельнице, кристаллизацией с применением висячей капли (Ruth et al., Acta Crystallographica D56: 524-28 (2000)), постепенным осаждением (патент США 7998477 (2011)), лиофилизацией водной смеси белок-PEG (полиэтиленгликоль) (Morita et al., Pharma. Res. 17: 1367-73 (2000)), осаждением в сверхкритической среде (патент США 6063910 (2000)) или образованием частиц, индуцированным диоксидом углерода с высоким давлением (Bustami et al., Pharma. Res. 17: 1360-66 (2000)).
Используемый в настоящем описании термин ”белок” относится к молекуле, включающей два или более аминокислотных остатка, присоединенных друг к другу пептидными связями. Пептиды, полипептиды и белки также включают модификации, включающие, но не ограничивающиеся этим, гликозилирование, присоединение липида, сульфирование, гамма-карбоксилирование остатками глутаминовой кислоты, гидроксилирование и АДФ-рибозилирование. Полипептиды могут представлять собой вещества научного или коммерческого интереса, включая лекарственные препараты на основе белков. Полипептиды включают, среди прочего, антитела и химерные или слитые белки. Полипептиды получают с помощью рекомбинантных клеточных линий животных с применением методов выращивания клеток.
”Антитело”, как предполагается, относится к молекулам иммуноглобулина, состоящим из четырех полипептидных цепей, двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, соединенных дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь имеет вариабельную область тяжелой цепи (HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена, CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь имеет вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи состоит из одного домена (CL). Области VH и VL далее могут подразделяться на области гипервариабельности, называемые гипервариабельными участками (CDR), с расположенными в промежутках областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от аминокислотной терминальной группы к карбоксильной терминальной группе в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Термин ”антитело” включает ссылку как к гликозилированным, так и к негликозилированным иммуноглобулинам любого изотипа или подкласса. Термин ”антитело” включает, но не ограничивается этим, антитела, которые готовят, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными средствами, такие как антитела, выделяемые из клетки-хозяина, трансфицированной для экспрессии антитела. lgG включает подгруппу антител.
”Fc слитые белки” включают часть или всю структуру двух или более белков, один из которых является Fc частью молекулы иммуноглобулина, которые не являются слитыми в своем природном состоянии. Было описано приготовление слитых белков, включающих определенные гетерологические полипептиды, слитые с различными частями полипептидов, полученных из антител, (включающих Fc домен), например, (Ashkenazy et al., Proc. Natl. Acad. USA 88: 10535, 1991; Bym et al., Nature 344:677, 1990; и Hollenbaugh et al., “Construction of Immunoglobuline Fusion Proteins” in Current Protocols in Immunology, Suppl. 4, pp. 10.19.1-10.19.11, 1992). ”Слитый белок-Fc-рецептор” включает один или более из одного или более внеклеточных доменов рецептора, связанного с Fc группой, который в некоторых вариантах осуществления включает шарнирную область, за которой следует CH2 и CH3 домен иммуноглобулина. В некоторых вариантах осуществления слитый белок-Fc-рецептор содержит две или более отличающиеся цепи рецептора, которые связаны с одним или более чем одним лигандом(ами). Например, Fc-слитый белок представляет собой ловушку, такую как, например, IL-1 ловушка (например, рилонацепт, который содержит лигандсвязывающую область IL-1RAcP, слитую с внеклеточной областью IL-1R, слитой с Fc антитела higG1; см. патент США №6927004, который включается здесь ссылкой во всей своей полноте), или ловушку-VEGF (например, афлиберцепт, который содержит lg домен 2 рецептора VEGF Flt1, слитого с lg доменом 3 рецептора VEGF Flt1, слитого с Fc антитела higG1; например, SEQ ID NO: 1; см. патенты США №7087411 и 7279159, который настоящим включается здесь ссылкой во всей своей полноте).
Используемый в настоящем описании термин ”полимер” относится к макромолекуле, включающей повторяющиеся мономеры, соединенные ковалентными химическими связями. Полимеры, используемые при осуществлении на практике данного изобретения, являются биосовместимыми и биологически разрушаемыми. Биосовместимый и биологически разрушаемый полимер может быть природным или синтетическим. Природные полимеры включают полинуклеотиды, полипептиды, такие как встречающиеся в природе белки, рекомбинантные белки, желатин, коллагены, фибрины, фиброины, полиаспартаты, полиглутаматы, полилейцин, сополимеры лейцин-глутамат и полисахариды, такие как целлюлоза, альгинаты, декстран и декстрановые полимерные гидрогели, амилоза, инулин, пектин и гуаровая камедь, хитозан, хитин, гепарин и гиалуроновую кислоту. Синтетические биосовместимые или биологически разрушаемые полимеры включают полимолочную кислоту (PLA), полигликолевую кислоту (PGA), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот (PLGA), поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA), PLGA-этиленоксидфумарат, PLGA-альфа-токоферилсукцинат, этерифицированный до полиэтиленгликоля 1000 (PLGA-TGPS), полиангидрид поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимер гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), сополимер полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA), поли-ε-капролактон (PCL), полиалкилцианоакрилат (PAC), поли(этил)цианоакрилат (PEC), полиизобутилцианоакрилат, поли-N-(2-гидроксипропил)метакриламид (поли(HPMA)), поли-β-R-гидроксибутират (PHB), поли-β-R-гидроксиалканоат (PHA), поли-β-R-яблочную кислоту, полимеры фосфолипид-холестерин, 2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин/полиэтиленгликоль-дистеароилфосфатидилэтаноламин (DOPC/PEG-DSPE)/холестерин, этилцеллюлозу, полиротаксаны и полипсевдоротаксаны на основе циклодекстрина (CD), полибутиленсукцинат (PBS), полиортоэфиры, сополимеры полиортоэфир-полиамидин, сополимеры полиортоэфир-диамин, полиортоэфиры, включающие латентные кислоты для контроля скорости разрушения, и, помимо прочего, сополимеры полиэтиленгликоль/полибутилентерефталат.
Этилцеллюлоза (EC) представляет собой хорошо известный и легкодоступный биоматериал, используемый в фармацевтической и пищевой науке. Она представляет собой производное целлюлозы, в котором некоторая часть гидроксильных групп глюкозы замещена этиловым эфиром (см. Martinac et al., J. Microencapsulation, 22(5): 549-561 (2005) и содержащиеся в ней ссылки), которая описывает методы применения этилцеллюлозы в качестве биосовместимых полимеров при получении микросфер. (см. также патент США 4210529 (1980)) и ссылки в нем для подробного ознакомления с этилцеллюлозой и способами получения производных этилцеллюлозы.
Поли-D,L-лактид-со-гликолид (PLGA) также представляет собой хорошо известный одобренный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами биосовместимый и биологически разрушаемый полимер, используемый в технологии культивирования тканей и фармацевтических системах доставки. PLGA представляет собой сложный полиэфир, включающий мономеры гликолевой кислоты и молочной кислоты. Описание синтеза PLGA и получения наночастиц PLGA можно найти в (Astete and Sabilov, Biomater. Sci. Polym. Ed., 17(3): 247-89 (2006) и содержащиеся в ней ссылки).
Поли-ε-капролактон (PCL) представляет собой другой биосовместимый и биологически разрушаемый полимер, одобренный Управлением по контролю за продуктами и лекарствами для применения в качестве устройства доставки лекарственного препарата при лечении людей. PCL представляет собой сложный полиэфир ε-капролактона, который быстро гидролизуется в организме с образованием нетоксичной или мало токсичной гидроксикарбоновой кислоты. Описание получения PCL можно найти в (Labet and Thielemans, Chemical Society Reviews 38: 3484-3504 (2009) и содержащихся в ней ссылках). Описание получения и применения микросфер и наносфер на основе PCL в качестве систем доставки можно найти в (Sinha et al., J. Pharm., 278(1):1-23 (2004) и содержащихся в ней ссылках).
Полиортоэфир (POE) представляет собой биоразлагаемый полимер, предназначенный для доставки лекарственных препаратов. Как правило, он представляет собой полимер кетенацеталя, предпочтительно циклического дикетенацеталя, такого как, например, 3,9-диметилен-2,4,8,10-тетраокса-спиро[5,5]-ундекана, который полимеризуется посредством конденсации гликоля с образованием ортоэфирных связей. Описание синтеза и различных типов полиортоэфиров можно найти, например, в патенте США 4304767. Полиортоэфиры можно модифицировать, чтобы контролировать их профиль высвобождения лекарственного препарата и скорости разложения посредством введения или выведения различных гидрофобных диолов и полиолов, например, заменяя гексантриол на декантриол; а также добавляя латентные кислоты, такие как, например, октандикарбоновую кислоту или аналогичную, к основной цепи, чтобы увеличить pH чувствительность. Другие модификации полиортоэфира включают интегрирование аминогруппы для увеличения функциональности. Образование, описание и применение полиортоэфиров описывается в патентах США 5968543, 4764364 и (Heller and Barr, Biomacromolecules, 5(5):1625-32 (2004), Heller, Adv. Drug. Deliv. Rev., 57:2053-62 (2005)).
Используемая в настоящем описании фраза ”распылительная сушка” обозначает способ получения сухого порошка, включающего частицы микронного размера, из взвеси или суспензии с помощью устройства для распылительной сушки. Устройства для распылительной сушки используют распылитель или распыляющее сопло для диспергирования суспензии или взвеси в виде спрея с контролируемым размером капель. Распылительной сушкой можно генерировать капли с размером от 10 до 500 мкм. По мере того как растворитель (вода или органический растворитель) высыхает, вещество белка высыхает в частицу микронного размера, формируя порошкообразное вещество; или в случае суспензии белок-полимер в течение сушки полимерная оболочка затвердевает вокруг загрузки из белка.
Микрочастицы по изобретению включают ядро из белка, окруженное полимерным верхним слоем или покрытием. Вкратце, формируется микроизмельченная частица белка, которую затем диспергируют в растворе полимера (полимер, растворенный в растворителе) с получением суспензии белок-полимер. Суспензию белок-полимер затем распыляют до тонкодисперсных (микроизмельченных) капель и растворитель высушивают с формированием микрочастицы.
В одном варианте осуществления микроизмельченную частицу белка получают, изготавливая раствор белка и затем подвергая данный раствор белка распылению и нагреванию с получением сухого порошка, включающего белок. Одним способом получения микроизмельченных частиц белка является распылительная сушка. В одном варианте осуществления белок представляет собой лечебный белок, из которого составляют композицию, включая буферные агенты, стабилизаторы и другие фармацевтически приемлемые наполнители, получая фармацевтическую композицию лечебного белка. Иллюстративные фармацевтические композиции описываются в патентах США 7365165, 7572893, 7608261, 7655758, 7807164, 2010-0279933, 2011-0171241 и PCT/US11/54856.
Количество лечебного белка, содержащегося в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, можно варьировать в зависимости от конкретных желательных свойств композиции, а также конкретных обстоятельств и целей, в которых данную композицию предполагают использовать. В определенных вариантах осуществления фармацевтическая композиция может содержать приблизительно от 1 мг/мл до 500 мг/мл белка; приблизительно от 5 мг/мл до 400 мг/мл белка; приблизительно от 5 мг/мл до 200 мг/мл белка; приблизительно от 25 мг/мл до 180 мг/мл белка; приблизительно от 25 мг/мл до 150 мг/мл белка; или приблизительно от 50 мг/мл до 180 мг/мл белка. Например, композиции по настоящему изобретению могут включать приблизительно 1 мг/мл; приблизительно 2 мг/мл; приблизительно 5 мг/мл; приблизительно 10 мг/мл; приблизительно 15 мг/мл; приблизительно 20 мг/мл; приблизительно 25 мг/мл; приблизительно 30 мг/мл; приблизительно 35 мг/мл; приблизительно 40 мг/мл; приблизительно 45 мг/мл; приблизительно 50 мг/мл; приблизительно 55 мг/мл; приблизительно 60 мг/мл; приблизительно 65 мг/мл; приблизительно 70 мг/мл; приблизительно 75 мг/мл; приблизительно 80 мг/мл; приблизительно 85 мг/мл; приблизительно 86 мг/мл; приблизительно 87 мг/мл; приблизительно 88 мг/мл; приблизительно 89 мг/мл; приблизительно 90 мг/мл; приблизительно 95 мг/мл; приблизительно 100 мг/мл; приблизительно 105 мг/мл; приблизительно 110 мг/мл; приблизительно 115 мг/мл; приблизительно 120 мг/мл; приблизительно 125 мг/мл; приблизительно 130 мг/мл; приблизительно 131 мг/мл; приблизительно 132 мг/мл; приблизительно 133 мг/мл; приблизительно 134 мг/мл; приблизительно 135 мг/мл; приблизительно 140 мг/мл; приблизительно 145 мг/мл; приблизительно 150 мг/мл; приблизительно 155 мг/мл; приблизительно 160 мг/мл; приблизительно 165 мг/мл; приблизительно 170 мг/мл; приблизительно 175 мг/мл; приблизительно 180 мг/мл; приблизительно 185 мг/мл; приблизительно 190 мг/мл; приблизительно 195 мг/мл; приблизительно 200 мг/мл; приблизительно 205 мг/мл; приблизительно 210 мг/мл; приблизительно 215 мг/мл; приблизительно 220 мг/мл; приблизительно 225 мг/мл; приблизительно 230 мг/мл; приблизительно 235 мг/мл; приблизительно 240 мг/мл; приблизительно 245 мг/мл; приблизительно 250 мг/мл; приблизительно 255 мг/мл; приблизительно 260 мг/мл; приблизительно 265 мг/мл; приблизительно 270 мг/мл; приблизительно 275 мг/мл; приблизительно 280 мг/мл; приблизительно 285 мг/мл; приблизительно 290 мг/мл; приблизительно 295 мг/мл; приблизительно 300 мг/мл лечебного белка.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению включают один или более наполнителей. Используемый в настоящем описании термин ”наполнитель” обозначает любое не терапевтическое вещество, добавленное к композиции для обеспечения желательной консистенции, вязкости или стабилизирующего эффекта.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также включать один или более углеводов, например, один или несколько сахаров. Сахар может представлять собой восстанавливающий сахар или невосстанавливающий сахар. ”Восстанавливающие сахара” включают, например, сахара с кетоновой или альдегидной группой и содержат полуацетальную группу, которая дает возможность сахару действовать в качестве восстанавливающего агента. Конкретные примеры восстанавливающих сахаров включают фруктозу, глюкозу, глицеральдегид, лактозу, арабинозу, маннозу, ксилозу, рибозу, рамнозу, галактозу и мальтозу. Невосстанавливающие сахара могут включать аномерный углерод, который является ацеталем, и является по существу не реакционно-способным по отношению к аминокислотам или полипептидам, чтобы инициировать реакцию Майяра. Конкретные примеры невосстанавливающих сахаров включают сахарозу, трегалозу, сорбозу, сукралозу, мелицитозу и рафинозу. Сахарные кислоты включают, например, сахарную кислоту, глюконат и другие полигидроксисахара и их соли.
Количество сахара, содержащегося в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, будет варьироваться в зависимости от конкретных обстоятельств и целей, для которых предназначено применение данных композиций. В некоторых вариантах осуществления композиции могут содержать приблизительно от 0,1% до 20% сахара; приблизительно от 0,5% до 20% сахара; приблизительно от 1% до 20% сахара; приблизительно от 2% до 15% сахара; приблизительно от 3% до 10% сахара; приблизительно от 4% до 10% сахара; или приблизительно от 5% до 10% сахара. Например, фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут включать приблизительно 0,5%; приблизительно 1,0%; приблизительно 1,5%; приблизительно 2,0%; приблизительно 2,5%; приблизительно 3,0%; приблизительно 3,5%; приблизительно 4,0%; приблизительно 4,5%; приблизительно 5,0%; приблизительно 5,5%; приблизительно 6,0%; приблизительно 6,5%; приблизительно 7,0%; приблизительно 7,5%; приблизительно 8,0%; приблизительно 8,5%; приблизительно 9,0%; приблизительно 9,5%; приблизительно 10,0%; приблизительно 10,5%; приблизительно 11,0%; приблизительно 11,5%; приблизительно 12,0%; приблизительно 12,5%; приблизительно 13,0%; приблизительно 13,5%; приблизительно 14%; приблизительно 14,5%; приблизительно 15,0%; приблизительно 15,5%; приблизительно 16,0%; 16,5%; приблизительно 17%; приблизительно 17,5%; приблизительно 18%; приблизительно 18,5%; приблизительно 19%; приблизительно 19,5% или приблизительно 20,0% сахара (например, сахарозы).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению также могут включать одно или более поверхностно-активных веществ. Используемый в настоящем описании термин ”поверхностно-активное вещество” обозначает вещество, которое уменьшает поверхностное натяжение жидкости, в которой оно растворено, и/или снижает межфазное натяжение между маслом и водой. Поверхностно-активные вещества могут быть ионными или неионными. Иллюстративные неионные поверхностно-активные вещества, которые можно включить в композиции по настоящему изобретению, включают, например, алкилполиэтиленоксид, алкилполиглюкозиды (например, октилгюкозид и децилмальтозид), жирные спирты, такие как цетиловый спирт и олеиловый спирт, кокамид MEA, кокамид DEA и кокамид TEA. Конкретные неионные поверхностно-активные вещества, которые можно включить в композиции по настоящему изобретению, включают, например, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 28, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81 и полисорбат 85; полоксамеры, такие как полоксамер 188, полоксамер 407, полиэтиленполипропиленгликоль или полиэтиленгликоль (PEG). Полисорбат 20 также известен как TWEEN 20, монолаурат сорбита и монолаурат полиоксиэтиленсорбита.
Количество поверхностно-активного вещества, содержащегося в фармацевтической композиции по настоящему изобретению, можно варьировать в зависимости от конкретных желательных свойств композиции, а также конкретных обстоятельств и целей, для которых предназначено применение данных композиций. В некоторых вариантах осуществления композиции могут содержать приблизительно от 0,05% до 5% поверхностно-активного вещества или приблизительно от 0,1% до 0,2% поверхностно-активного вещества. Например, композиции по настоящему изобретению могут включать приблизительно 0,05%; приблизительно 0,06%; приблизительно 0,07%; приблизительно 0,08%; приблизительно 0,09%; приблизительно 0,10%; приблизительно 0,11%; приблизительно 0,12%; приблизительно 0,13%; приблизительно 0,14%; приблизительно 0,15%; приблизительно 0,16%; приблизительно 0,17%; приблизительно 0,18%; приблизительно 0,19%; приблизительно 0,20%; приблизительно 0,21%; приблизительно 0,22%; приблизительно 0,23%; приблизительно 0,24%; приблизительно 0,25%; приблизительно 0,26%; приблизительно 0,27%; приблизительно 0,28%; приблизительно 0,29% или приблизительно 0,30% поверхностно-активного вещества (например, полисорбата 20).
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут также включать один или более буферных растворов. В некоторых вариантах осуществления буферный раствор имеет диапазон буферного действия, который полностью или частично перекрывает диапазон pH 5,5-7,4. В одном варианте осуществления буферный раствор имеет pKa приблизительно 6,0±0,5. В некоторых вариантах осуществления буферный раствор включает фосфатный буферный раствор. В некоторых вариантах осуществления фосфат присутствует при концентрации от 5 мМ ± 0,75 мМ до 15 мМ ± 2,25 мМ; от 6 мМ ± 0,9 мМ до 14 мМ ± 2,1 мМ; от 7 мМ ± 1,05 мМ до 13 мМ ± 1,95 мМ; от 8 мМ ± 1,2 мМ до 12 мМ ± 1,8 мМ; от 9 мМ ± 1,35 мМ до 11 мМ ± 1,65 мМ; 10 мМ ± 1,5 мМ или приблизительно 10 мМ. В некоторых вариантах осуществления буферная система включает гистидин при концентрации 10 мМ ± 1,5 мМ при pH 6,0 ± 0,5.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут иметь pH приблизительно от 5,0 до 8,0. Например, композиции по настоящему изобретению могут иметь pH приблизительно 5,0; приблизительно 5,2; приблизительно 5,4; приблизительно 5,6; приблизительно 5,8; приблизительно 6,0; приблизительно 6,2; приблизительно 6,4; приблизительно 6,6; приблизительно 6,8; приблизительно 7,0; приблизительно 7,2; приблизительно 7,4; приблизительно 7,6; приблизительно 7,8 или приблизительно 8,0.
В одном особом варианте осуществления лечебный белок представляет собой белок ловушку-VEGF. Фармацевтические композиции для формирования микроизмельченных частиц белка ФРЕС-ловушки могут содержать приблизительно от 10 мг/мл до 100 мг/мл белка ФРЕС-ловушки, приблизительно 10 мг/мл, приблизительно 15 мг/мл, приблизительно 20 мг/мл, приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 35 мг/мл, приблизительно 40 мг/мл, приблизительно 45 мг/мл, приблизительно 50 мг/мл, приблизительно 55 мг/мл, приблизительно 60 мг/мл, приблизительно 65 мг/мл, приблизительно 70 мг/мл, приблизительно 75 мг/мл, приблизительно 80 мг/мл, приблизительно 85 мг/мл, приблизительно 90 мг/мл, приблизительно 95 мг/мл или приблизительно 100 мг/мл белка ФРЕС-ловушки.
Растворы могут содержать один или более буферных агентов с концентрацией приблизительно от 5 мМ до 50 мМ. В одном варианте осуществления буферный агент представляет собой приблизительно 10 мМ фосфата при pH приблизительно 6±0,5. Растворы могут также содержать сахарозу с концентрацией приблизительно от 1% до 10%. В одном варианте осуществления раствор содержит сахарозу с концентрацией приблизительно 2% масс./масс.
В некоторых вариантах осуществления раствор лечебного белка содержит белок ловушки-ФРЕС с концентрацией приблизительно 25 мг/мл или приблизительно 50 мг/мл в 10 мМ фосфате при pH 6,2, 2% сахарозы и необязательно 0,1% полисорбата.
Композицию лечебного белка затем подвергают распылению и сушке с получением микроизмельченных частиц белка. Один метод получения микроизмельченных частиц белка состоит в распылительной сушке раствора белка. Распылительная сушка обычно известна из уровня техники и ее можно осуществить на таком оборудовании, как, например, BÜCHI Mini Spray Dryer B-290 (Büchi Labortechnik AG, Флавил, Швейцария). В одном особом варианте осуществления раствор белка (например, но не ограничиваясь к какой бы то ни было композиции ФРЕС-ловушки, описанной выше) закачивают в устройство для распылительной сушки со скоростью приблизительно от 2 мл/мин до 15 мл/мин или приблизительно 7 мл/мин. Температуру на входе устройства для распылительной сушки устанавливают выше температуры кипения воды, например приблизительно при 130°C. Температуру на выходе устанавливают ниже температуры кипения воды и выше комнатной температуры, например равной 55°C. В одном конкретном варианте осуществления раствор белка (например, раствор ФРЕС-ловушки или раствор lgG) закачивают в BÜCHI Mini Spray Dryer B-290 со скоростью приблизительно 7 мл/мин с температурой на входе приблизительно 130°C и температурой на выходе приблизительно 55°C, причем аспиратор устанавливают при 33 м3/час и распыляющий газ при 530 л/час.
Размер полученных в результате микроизмельченных частиц белка находится в диапазоне приблизительно от 1 мкм до 100 мкм в диаметре в зависимости от конкретной композиции и концентрации белка и наполнителей. В некоторых вариантах осуществления микроизмельченные частицы белка имеют диаметр приблизительно от 1 мкм до 100 мкм, приблизительно от 1 мкм до 40 мкм, приблизительно от 2 мкм до 15 мкм, приблизительно от 2,5 мкм до 13 мкм, приблизительно от 3 мкм до 10 мкм, приблизительно 5 мкм, приблизительно 6 мкм, приблизительно 7 мкм, приблизительно 8 мкм, приблизительно 9 мкм, приблизительно 10 мкм, приблизительно 11 мкм или приблизительно 12 мкм.
Затем микроизмельченные частицы белка покрывают биосовместимым и биологически разрушаемым полимером. Это можно осуществить суспендированием микроизмельченных частиц белка в растворе полимера. Раствор полимера по существу представляет собой полимер, растворенный в растворителе. Например, биосовместимый и биологически разрушаемый полимер можно растворить, помимо прочего, в метиленхлориде, тетрагидрофуране, этилацетате или в каком-то другом применимом растворителе. Этилацетат широко известен в качестве безопасного растворителя и часто используется при приготовлении лекарственных препаратов, имплантатов или продуктов питания.
В некоторых вариантах осуществления полимер может представлять собой этилцеллюлозу (”EC”), полимолочную кислоту (”PLA”), полиортоэфир (”POE”), поли-D,L-лактид-со-гликолид (”PLGA”) или поли-ε-капролактон (”PCL”). Полимер можно растворить в растворителе (например, этилацетате) при концентрации приблизительно от 10 мг/мл до 300 мг/мл, приблизительно от 15 мг/мл до 295 мг/мл, приблизительно от 20 мг/мл до 290 мг/мл, приблизительно от 25 мг/мл до 280 мг/мл, приблизительно от 30 мг/мл до 270 мг/мл, приблизительно от 35 мг/мл до 265 мг/мл, приблизительно от 40 мг/мл до 260 мг/мл, приблизительно от 45 мг/мл до 260 мг/мл, приблизительно от 50 мг/мл до 255 мг/мл, приблизительно от 55 мг/мл до 250 мг/мл, приблизительно 20 мг/мл, приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 35 мг/мл, приблизительно 40 мг/мл, приблизительно 45 мг/мл, приблизительно 50 мг/мл, приблизительно 75 мг/мл, приблизительно 100 мг/мл, приблизительно 125 мг/мл, приблизительно 150 мг/мл, приблизительно 175 мг/мл, приблизительно 200 мг/мл, приблизительно 225 мг/мл или приблизительно 250 мг/мл.
Микроизмельченные частицы белка добавляют в раствор полимера при концентрации приблизительно от 10 мг/мл до 100 мг/мл, приблизительно от 15 мг/мл до 95 мг/мл, приблизительно от 20 мг/мл до 90 мг/мл, приблизительно от 25 мг/мл до 85 мг/мл, приблизительно от 30 мг/мл до 80 мг/мл, приблизительно от 35 мг/мл до 75 мг/мл, приблизительно от 40 мг/мл до 70 мг/мл, приблизительно от 45 мг/мл до 65 мг/мл, приблизительно от 50 мг/мл до 60 мг/мл, приблизительно 25 мг/мл, приблизительно 30 мг/мл, приблизительно 35 мг/мл, приблизительно 40 мг/мл, приблизительно 45 мг/мл или приблизительно 50 мг/мл. Частицы перемешивают с образованием взвеси или суспензии, которую затем подвергают распылению и сушке с получением частицы белка, покрытого полимером (т.е. микрочастиц).
В одном варианте осуществления суспензию частиц белка в растворе полимера подвергают распылительной сушке, которую осуществляют в манере, аналогичной методу получения микроизмельченных частиц белка, но с сниженной температурой на входе для защиты от воспламенения органического растворителя или полимера. Вкратце, суспензию частиц белка в растворе полимера закачивают в устройство для распылительной сушки при скорости приблизительно от 5 мл/мин до 20 мл/мин или приблизительно от 12,5 мл/мин. Суспензию закачивали со скоростью 12,5 мл/мин в устройство для распылительной сушки со скоростью потока всасываемого воздуха и распыляющего газа приблизительно 530 л/час и 35 м3/час (мм) соответственно. Температуру на входе устанавливали равной 90°C и температуру на выходе устанавливали приблизительно 54°C. Температуру на входе устройства для распылительной сушки устанавливали выше температуры воспламенения растворителя, например приблизительно 90°C. Температура на выходе была ниже температуры на входе и выше температуры окружающей среды, например приблизительно 54°C. В одном особом варианте осуществления суспензию, содержащую приблизительно 50 мг/мл частиц белка (например, ловушку-VEGF) в растворе полимера в этилацетате с концентрацией приблизительно от 50 мг/мл до 250 мг/мл, закачивают в BÜCHI Mini Spray Dryer B-290 со скоростью приблизительно 12,5 мл/мин с температурой на входе приблизительно 90°C и температурой на выходе приблизительно 54°C, причем аспиратор устанавливают приблизительно при 35 м3/час и распыляющий газ приблизительно при 530 л/час.
Полученные в результате микрочастицы, которые содержат ядро частицы белка с полимерным верхним слоем, имеют диаметр в диапазоне приблизительно от 2 мкм до 70 мкм, приблизительно от 5 мкм до 65 мкм, приблизительно от 10 мкм до 60 мкм, приблизительно от 15 мкм до 55 мкм, приблизительно от 20 мкм до 50 мкм, приблизительно 15 мкм, приблизительно 20 мкм, приблизительно 25 мкм или приблизительно 30 мкм. Разброс по размеру во многом отражает толщину полимерного верхнего слоя, хотя диаметр ядра из белка в некоторой степени может внести вклад в разброс по размеру. Изменяя исходную концентрацию раствора полимера и/или сам полимер, можно контролировать диаметр микрочастицы. Например, микрочастицы, которые изготавливали с применением 50 мг/мл полимера, имели средний размер приблизительно от 15 мкм до 20 мкм, тогда как микрочастицы, которые изготавливали с применением 250 мг/мл полимера, имели средний размер приблизительно 30 мкм.
Микрочастицы по настоящему изобретению применимы в белковых терапевтических средствах медленного высвобождения или пролонгированного действия. Например, представляется, что микрочастицы ловушку-VEGF применимы в лечебном белке ловушку-VEGF пролонгированного высвобождения, например в стекловидном теле для лечения заболеваний стекловидного тела глаз или подкожной имплантации для пролонгированного высвобождения ловушку-VEGF для лечения рака или других заболеваний.
Микрочастицы по настоящему изобретению высвобождают белок в физиологическую водную среду приблизительно при 37°C при относительно постоянной скорости в течение продолжительного периода времени, вплоть до, по меньшей мере, 60 дней. В общем, данные микрочастицы, полученные с более высокой концентрацией полимера (например, 250 мг/мл), имеют тенденцию показывать относительно линейный профиль высвобождения белка, тогда как микрочастицы, полученные с более низкой концентрацией полимера (например, 50 мг/мл), имеют тенденцию показывать исходный выброс, за которым следует начало отложенного ”взрывного” высвобождения. Более того, микрочастицы, сформированные из полимера с более высокой концентрацией, показывали более медленную скорость высвобождения белка по сравнению с микрочастицами, полученными из полимера с более низкой концентрацией. Качество белка, высвобождаемого из микрочастиц, с течением времени соответствовало качеству исходного материала белка. Имело место незначительное разрушение белка, либо оно отсутствовало вовсе.
ПРИМЕРЫ
Следующие ниже примеры предлагаются с тем, чтобы обеспечить специалистов в данной области полным раскрытием и описанием, как осуществить и использовать способы и композиции по изобретению, и они не имеют намерения ограничивать объем патентной защиты, который авторы заявки рассматривают в качестве своего изобретения. Были осуществлены попытки обеспечить точность, что касается используемых цифр (например, количеств, размеров и т.д.), но некоторые экспериментальные ошибки и отклонения должны быть приняты во внимание.
В следующих ниже примерах белок ловушку-VEGF (”VGT”), который является димером полипептида, включающего последовательность аминокислот SEQ ID NO: 1, служит в качестве примера слитого белка-Fc-рецептора.
ПРИМЕР 1: МИКРОИЗМЕЛЬЧЕННЫЕ БЕЛКИ
Растворы, содержащие 25 мг/мл белка ловушку-VEGF (”VGT”), 25 мг/мл VGT плюс 0,1% полисорбата 80 и 50 мг/мл VGT в 10 мМ фосфата, 2% сахарозы, pH 6,2, каждый, независимо распыляли с помощью устройства для распылительной сушки (BÜCHI Mini Spray Dryer B-290, Büchi Labortechnik AG, Флавил, Швейцария) с формированием капель, содержащих ловушку-VEGF. Для испарения воды из капель использовали тепло, в результате получая порошок, содержащий ловушку-VEGF. Температуру на входе устанавливали равной 130°C, а температуру на выходе - приблизительно 55°C. Аспиратор устанавливали приблизительно при 33 м3/час и распыляющий газ приблизительно при 530 л/час. Раствор VGT закачивали со скоростью приблизительно 7 мл/мин.
Размер полученных в результате частиц VGT измеряли микропотоковой визуализацией (MFI) и динамическим светорассеянием (DLS). Фигура 1 показывает распределение частиц по размерам, определенное методом MFI для частиц VGT, полученных из концентраций 25 мг/мл VGT, 25 мг/мл VGT плюс 0,1% полисорбата 80, и 50 мг/мл VGT. Для всех концентраций эквивалентный круговой диаметр (ECD) частиц VGT находился в диапазоне приблизительно от 1 мкм до 39 мкм, причем размер основной массы частиц находился в диапазоне приблизительно от 2 мкм до 14 мкм. Для раствора VGT с концентрацией 25 мг/мл частицы образовывали кластеры в диапазоне приблизительно от 2,5 мкм до 8,8 мкм с модой приблизительно 6 мкм. Для раствора 25 мг/мл VGT плюс 0,1% полисорбата 80 частицы образовывали кластеры в диапазоне приблизительно от 2,5 мкм до 9,7 мкм с модой приблизительно 6 мкм. Для раствора VGT с концентрацией 50 мг/мл частицы образовывали кластеры в диапазоне приблизительно от 2,7 мкм до 12,8 мкм с модой приблизительно 7 мкм. Средние диаметры для каждой композиции, определенные методами MFI и DLS, показаны в таблице 1.
Частицы VGT повторно растворяли в воде для инъекций и исследовали с помощью гель-фильтрации, т.е. эксклюзионной-сверхэффективной жидкостной хроматографии (SE-UPLC), чтобы определить чистоту белка. Никаких изменений в чистоте не было отмечено после микроизмельчения относительно исходного материала (см. таблицу 3).
Таблица 1
Средние размеры частиц белка (мкм), определенные методами микропотоковой визуализации (MFI) и динамического светорассеяния (DLS)
Композиция Средний размер по методу микропотоковой визуализации (мкм) Средний размер по методу динамического светорассеяния (мкм)
50 мг/мл ловушку-VEGF 7 7,6
25 мг/мл ловушку-VEGF 6 5,9
25 мг/мл ловушку-VEGF, 0,1% полисорбата 80 6 7,1
ПРИМЕР 2: МИКРОИЗМЕЛЬЧЕННЫЕ СУСПЕНЗИИ БЕЛКА В ОРГАНИЧЕСКОМ ПОЛИМЕРНОМ РАСТВОРЕ
Различные полимеры использовались или рассматриваются для применения при получении полимерного верхнего слоя микрочастиц. Данные полимеры включают, помимо прочего, этилцеллюлозу (”EC”), полиортоэфир (”POE”), поли-D,L-лактид-со-гликолид (”PLGA”) и поли-ε-капролактон (”PCL”).
Покрытие этилцеллюлозой
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 50 мг/мл этилцеллюлозы в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-50-EC”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 100 мг/мл этилцеллюлозы в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-100-EC”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 250 мг/мл этилцеллюлозы в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-250-EC”.
Покрытие полиортоэфиром
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 50 мг/мл полиортоэфира, содержащего приблизительно 5% латентной кислоты, в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-50-POE”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 250 мг/мл полиортоэфира, содержащего приблизительно 5% латентной кислоты, в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-250-POE”.
Покрытие поли-D,L-лактид-со-гликолидом
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 50 мг/мл PLGA в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-50-PLGA”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 200 мг/мл PLGA в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-200-PLGA”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 250 мг/мл PLGA в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-250-PLGA”.
Покрытие поли-ε-капролактоном
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 50 мг/мл PCL в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-50-PCL”.
Микроизмельченные частицы ловушку-VEGF суспендировали в растворе 250 мг/мл PCL в этилацетате при концентрации приблизительно 50 мг/мл VGT; в настоящем описании обозначено ”суспензия VGT-250-PCL”.
PCL имеет низкую Тстекл и может не подходить для термической сушки, как описано ниже, но его можно использовать для экстракции растворителем в водной бане, например, с поливиниловым спиртом (ПВС).
ПРИМЕР 3: ДИСПЕРСИЯ ТОНКОДИСПЕРСНЫХ КАПЕЛЬ БЕЛОК-ПОЛИМЕР И УДАЛЕНИЕ РАСТВОРИТЕЛЯ
Каждую суспензию VGT полимер, которую изготавливали в соответствии с примером 2 (см. выше), подвергали распылительной сушке, используя BÜCHI Mini Spray Dryer B-290 (Büchi Labortechnik AG, Флавил, Швейцария). Вкратце, каждую суспензию распыляли с получением микрокапель, которые затем подвергали распылительной сушке для удаления растворителя и формирования микрочастиц белка, покрытого полимером. Суспензию закачивали со скоростью 12,5 мл/мин в устройство для распылительной сушки со скоростью потока всасываемого воздуха и распыляющего газа приблизительно 530 л/час и 35 м3/час соответственно. Температуру на входе устанавливали равной 90°C и температуру на выходе устанавливали приблизительно 54°C.
ПРИМЕР 4: ХАРАКТЕРИЗАЦИЯ МИКРОЧАСТИЦ БЕЛОК-ПОЛИМЕР
Подвергнутые распылительной сушке частицы белка, покрытого полимером, полученные согласно представленному в качестве примера способу, генерируют множество микрочастиц, имеющих диапазон эквивалентных круговых диаметров приблизительно от 2,5 мкм до 65 мкм (фиг. 2). Разброс по размеру во многом отражает толщину полимерного верхнего слоя, хотя диаметр ядра из белка в некоторой степени может внести вклад в разброс по размеру.
Диаметр микрочастиц коррелирует с исходной концентрацией раствора полимера (таблица 2, фиг. 2). Микрочастицы, которые изготавливали с применением 50 мг/мл полимера, имели средний размер приблизительно 17 мкм ± 2,8 мкм. Микрочастицы, которые изготавливали с применением 250 мг/мл полимера, имели средний размер приблизительно 29 мкм.
ПРИМЕР 5: СТАБИЛЬНОСТЬ БЕЛКА ПОСЛЕ РАСПЫЛИТЕЛЬНОЙ СУШКИ
Стабильность белка ловушку-VEGF оценивали, используя количественную эксклюзионную хроматографию (SE-UPLC), которая позволяет количественную оценку более мелких продуктов разложения и более крупных продуктов агрегации относительно неповрежденного мономера. Результаты приводятся в таблице 3. По существу, белок оставался стабильным на всем протяжении процессов распылительной сушки и нанесения покрытия распылением.
Также определяли среднее отношение белка к полимеру по массе для полученных микрочастиц. Совокупность микрочастиц, полученных с варьированием полимеров и концентрации полимера, выделяли и подвергали количественной обращенно-фазовой высокоэффективной хроматографии (ОФ ВЭЖХ). Результаты представлены в таблице 3. Данные можно интерпретировать для подтверждения теории, что более высокая исходная концентрация полимера дает более толстый верхний слой на микрочастице.
Таблица 2
Значения эквивалентного кругового диаметра
Материал Диапазон (мкм) Средняя величина (мкм) Мода (мкм)
Ловушка-VEGF (”VGT”) (50 мг/мл) 2,5-29,4 10-12 8,3
VGT (50 мг/мл) + POE (50 мг/мл) 2,5-6,4 15 9,4
VGT (50 мг/мл) + POE (250 мг/мл) 2,5-49,4 29 28,5
VGT (50 мг/мл) + EC (50 мг/мл) 2,5-49,6 19 16,5
Таблица 3
Стабильность и загрузка белка
Материал VGT исходный материал VGT, экстрагированный из покрытых полимеров1
% Нативного % Нативного2 % масс./масс. VGT/полимер3
VGT исходный материал 97,7 - -
Ресуспендированный VGT 97,6 - -
VGT (50 мг/мл) + POE (50 мг/мл) - 96,3 14,6
VGT (50 мг/мл) + POE (250 мг/мл) - 97,7 1,8
VGT (50 мг/мл) + EC (50 мг/мл) - 97,1 6,1
1Исходя из экстрагированной ловушку-VEGF после 1 часа ресуспендирования для удаления непокрытой ловушку-VEGF.
2Среднее значение процентного содержания нативного белка по данным SE-UPLC (n=4).
3Среднее значение массовых процентов загрузки VGT к полимеру по данным ОФ ВЭЖХ (n=4).
ПРИМЕР 6: ВЫСВОБОЖДЕНИЕ БЕЛКА ИЗ МИКРОЧАСТИЦ
Высвобождение белка из микрочастиц определяли, суспендируя различные партии микрочастиц в буферном растворе (10 мМ фосфата, 0,03% полисорбата 20, pH 7,0) и измеряя количество и качество белка, высвобожденного в раствор с течением времени при инкубировании при 37°C. При 1-2 недельных интервалах микрочастицы осаждали мягким центрифугированием и 80% надосадочной жидкости, содержащей высвобожденный белок, собирали для последующего анализа. Заменяли эквивалентное количество свежего буферного раствора и микрочастицы повторно суспендировали мягким встряхиванием и возвращали в инкубационную камеру с температурой 37°C. Количество и качество белка в надосадочной жидкости оценивали эксклюзионной хроматографией.
В общем, микрочастицы, полученные с более высокой концентрацией полимера (например, 250 мг/мл), имели тенденцию показать относительно линейный профиль высвобождения белка, тогда как микрочастицы, полученные с более низкой концентрацией полимера (например, 50 мг/мл), имели тенденцию показать начальный выброс, за которым следует начало отложенного "взрывного" высвобождения. Данные, показывающие пролонгированное выделение белка, которое оставалось стабильным, вплоть до 60 дней, изображены на фигуре 3 (данные по высвобождению). В таблице 4 суммируются данные линейной скорости высвобождения.
Таблица 4
Динамика высвобождения белка
Материал Высвобождение белка ловушку-VEGF (мг VGT/неделю)
VGT (50 мг/мл) + POE (50 мг/мл) 0,14±0,16
VGT (50 мг/мл) + POE (250 мг/мл) 0,06±0,02
VGT (50 мг/мл) + EC (50 мг/мл) 0,031±0,02
ПРИМЕР 7: РАЗМЕРОМ ЧАСТИЦЫ МОЖНО МАНИПУЛИРОВАТЬ ПОСРЕДСТВОМ КОНЦЕНТРАЦИИ ПОЛИМЕРА И ПОТОКА РАСПЫЛЯЮЩЕГО ГАЗА
Распределение частиц по размерам контролировали концентрацией полимера и потоком распыляющего газа для измельчения. Увеличенная концентрация полимера сдвигала распределение по направлению к более крупным частицам (200 мг/мл PLGA при 45 мм потока распыляющего газа относительно 100 мг/мл PLGA при 45 мм потока распыляющего газа; см. таблицу 5). Аналогичным образом, более низкий поток распыляющего газа для измельчения в результате приводил к более крупным каплям и, таким образом, к более крупным частицам (100 мг/мл PLGA при 25 мм потока распыляющего газа относительно 100 мг/мл PLGA при 45 мм потока распыляющего газа; см. таблицу 5).
Таблица 5
Размер частиц (все измерения являются приблизительными)
[PLGA] (мг/мл) Скорость потока газа (м3/час) Диапазон размера частиц (микроны) Мода размера частиц (микроны) Процентное содержание общего объема частиц с размером 15 микрон
Только белок отсутствует 2,5-25 3,5 1,5%
100 25 2,5-40 9,4 3,7%
100 45 2,5-30 9,4 3,7%
200 45 2,5-30 10,2-15,4 5,4%
ПРИМЕР 8: РАЗМЕР ЧАСТИЦ И ВЫСВОБОЖДЕНИЕ БЕЛКА ЧЕРЕЗ РАЗЛИЧНЫЕ ПОЛИМЕРЫ
На ловушку-VEGF или lgG распылением наносили покрытие низкомолекулярной (202S) полимолочной кислоты (PLA-LMW), высокомолекулярной (203S) полимолочной кислоты (PLA-HMW), полиангидрида поли[1,6-бис(п-карбоксифенокси)гексана] (pCPH), сополимера гидроксимасляной кислоты с гидроксивалериановой кислотой (PHB-PVA), блок-сополимера полиэтиленгликоль-полимолочная кислота (PEG-PLA) и поли-D,L-лактид-со-гликолида (PLGA). 25 мг/мл подвергнутого распылительной суше белка объединяли с 50-100 мг/мл полимера. Анализ высвобождения in vitro проводили в 10 мМ фосфатном буферном растворе, pH 7,2 при 37°C. Результаты показаны в таблице 6.
Таблица 6
Зависящие от полимера размер частиц и высвобождение белка (все измеряемые величины являются приблизительными)
Полимер Белок Относительное число частиц с размером 15 микрон Время до 100% высвобождения белка
PLA-LMW Ловушка-VEGF 0,8×102 3 дня
PLA-HMW Ловушка-VEGF 0,8×102 3 дня
pCPH Ловушка-VEGF 1×102 3 дня
PHB-PVA Ловушка-VEGF 5×102 1 день
PEG-PLA Ловушка-VEGF 0,6×102 6 часов
PLGA lgG 1×102 8 дней
ПРИМЕР 9: СТАБИЛЬНОСТЬ БЕЛКА В РАЗЛИЧНЫХ ПОЛИМЕРАХ
Ловушку-VEGF и lgG экстрагировали из их соответствующих полимерных покрытий и измеряли их чистоту с помощью эксклюзионной-сверхэффективной жидкостной хроматографии. Результаты суммируются в таблице 7. Для протестированных полимеров белки, как правило, были совместимы со способом нанесения покрытия распылением. Белок оставался стабильным в течение, по меньшей мере, 14 дней для тех полимеров, которые продолжали высвобождать белок.
Таблица 7
Белок Полимер % Чистоты по данным эксклюзионной хроматографии
После нанесения покрытия распылением 1 день высвобождения in vitro (IVR) дня IVR 14 дней IVR
Ловушка-VEGF POE (AP141) 97,7 98,3 98,2 96,7
Ловушка-VEGF PLA-LMW 97,0 97,4 92,8 -
Ловушка-VEGF PLA-HMW 93,9 97,3 95,4 -
Ловушка-VEGF PEG-PLA 89,9 91,2 - -
Ловушка-VEGF pCPH 89,2 94,2 84,8 -
Ловушка-VEGF PHB-PVA 97,4 96,2 - -
Ловушка-VEGF PLGA 96,6 97,8 - 93,6
lgG PLGA 99,2 98,0 - 92,0

Claims (37)

1. Способ получения фармацевтической композиции с пролонгированным высвобождением, содержащей белковую частицу, покрытую биологически разрушаемым полимером, причем указанный способ включает:
a. распыление водного раствора, содержащего белок;
b. подачу тепла к распыленному водному раствору с образованием совокупности белковых частиц;
c. суспендирование указанной совокупности частиц белка в органическом растворе, содержащем биологически разрушаемый полимер и органический растворитель; и
d. распылительную сушку суспензии для формирования совокупности микрочастиц белок-полимер, где каждая белковая частица указанной совокупности частиц белка содержит менее 3% (масс./масс.) воды.
2. Способ по п. 1, где биологически разрушаемый полимер представляет собой полиортоэфир (РОЕ) или этилцеллюлозу (ЕС).
3. Способ по п. 2, где указанный органический растворитель представляет собой этилацетат.
4. Способ по п. 1, где указанный белок представляет собой слитый белок-Fc-рецептор или антитело.
5. Способ по п. 4, где указанный белок представляет собой ловушку-VEGF.
6. Способ по п. 1, где указанная распылительная сушка суспензии (d) включает распыление указанной суспензии и последующую подачу тепла к распыленной суспензии при температуре, превышающей температуру воспламенения указанного органического растворителя, для испарения указанного органического растворителя с образованием указанной совокупности микрочастиц белок-полимер.
7. Способ по п. 6, где средний диаметр указанной совокупности микрочастиц белок-полимер составляет от приблизительно 15 микрон до приблизительно 30 микрон.
8. Способ по п. 1, где каждая частица белка указанной совокупности частиц белка имеет диаметр от приблизительно 2 микрон до приблизительно 14 микрон.
9. Способ обеспечения покрытия с пролонгированным высвобождением для фармацевтического белка, включающий:
a. распыление водного раствора, содержащего белок;
b. подачу тепла при температуре, превышающей температуру кипения воды, к распыленному водному раствору с образованием совокупности белковых микрочастиц;
c. нанесение покрытия на каждую микрочастицу белка указанной совокупности микрочастиц белка с помощью биологически разрушаемого полимера с образованием совокупности микрочастиц белок-полимер, где указанная совокупность белковых микрочастиц содержит менее 3% воды.
10. Способ по п. 9, где указанная совокупность белковых микрочастиц является сухой.
11. Способ по п. 9, где указанный водный раствор содержит приблизительно 10 мг/мл - 100 мг/мл указанного белка.
12. Способ по п. 9, где указанный водный раствор дополнительно содержит от приблизительно 0,1% и 20% (масс./об.) сахарозы.
13. Способ по п. 9, где указанный водный раствор дополнительно содержит приблизительно 0,05% и 5% (масс./об.) полисорбата.
14. Способ по п. 9, где указанный водный раствор дополнительно содержит от приблизительно 5 мМ до 50 мМ фосфата или гистидина.
15. Способ по п. 9, дополнительно включающий стадию объединения органического растворителя, указанного биологически разлагающегося полимера в концентрации между приблизительно 10 мг/мл и 300 мг/мл и указанной совокупности белковых микрочастиц до концентрации между приблизительно 10 мг/мл и 100 мг/мл с образованием суспензии; и распылительную сушку указанной суспензии с образованием указанного множества микрочастиц белок-полимер на стадии (с).
16. Способ получения фармацевтической композиции с пролонгированным высвобождением, содержащей белковые частицы, покрытые биологически разрушаемым полимером, причем указанный способ включает:
а. распыление водного раствора, содержащего:
i. приблизительно от 25 мг/мл до 50 мг/мл белка,
ii. приблизительно от 5 мМ до 50 мМ фосфата или гистидина,
iii. приблизительно от 0,1% до 20% (масс./об.) сахарозы, и
iv. приблизительно от 0,05% до 5% (масс./об.) полисорбата;
b. подачу тепла к указанному распыленному водному раствору при температуре выше, чем температура кипения воды, чтобы образовать множество частиц сухого белка без лиофилизации;
c. объединение:
i. этилацетата,
ii. приблизительно 50 мг/мл указанного множества сухих белковых частиц, и
iii. приблизительно от 50 мг/мл до 100 мг/мл этилового эфира целлюлозы или от 50 мг/мл до 250 мг/мл полиортоэфира с образованием суспензии; и
d. распыление указанной суспензии; и
e. подачу тепла к указанной распыленной суспензии при температуре, превышающей температуру воспламенения этилацетата, с образованием множества микрочастиц белок-полимер, где каждая белковая частица указанной совокупности частиц белка содержит менее 3% (масс./масс.) воды.
17. Способ по п. 16, где указанный белок представляет собой антитело или слитый белок-Fc-рецептор.
18. Способ по п. 16, в котором указанный водный раствор содержит приблизительно 25 мг/мл или приблизительно 50 мг/мл ловушки-VEGF, приблизительно 10 мМ фосфата, приблизительно 2% сахарозы и приблизительно 0,1% полисорбата при рН, равном приблизительно 6,2.
RU2014124682A 2011-11-18 2012-11-18 Полимерные белковые микрочастицы RU2642664C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161561525P 2011-11-18 2011-11-18
US61/561,525 2011-11-18
PCT/US2012/065735 WO2013075068A1 (en) 2011-11-18 2012-11-18 Polymer protein microparticles

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018101248A Division RU2768492C2 (ru) 2011-11-18 2012-11-18 Полимерные белковые микрочастицы

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014124682A RU2014124682A (ru) 2015-12-27
RU2642664C2 true RU2642664C2 (ru) 2018-01-25

Family

ID=47295198

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014124682A RU2642664C2 (ru) 2011-11-18 2012-11-18 Полимерные белковые микрочастицы
RU2018101248A RU2768492C2 (ru) 2011-11-18 2012-11-18 Полимерные белковые микрочастицы

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018101248A RU2768492C2 (ru) 2011-11-18 2012-11-18 Полимерные белковые микрочастицы

Country Status (20)

Country Link
US (3) US20130129830A1 (ru)
EP (4) EP3384903B1 (ru)
JP (5) JP6267649B2 (ru)
KR (4) KR20220063293A (ru)
CN (2) CN103957898B (ru)
AU (1) AU2012340107B2 (ru)
BR (1) BR112014011915B1 (ru)
CA (2) CA3076725A1 (ru)
DK (3) DK3574897T3 (ru)
ES (3) ES2810003T3 (ru)
FI (1) FI2790681T4 (ru)
HU (2) HUE048597T2 (ru)
IL (4) IL303832A (ru)
MX (2) MX362286B (ru)
PL (3) PL3384903T3 (ru)
PT (2) PT3574897T (ru)
RU (2) RU2642664C2 (ru)
SG (2) SG10202103003RA (ru)
WO (1) WO2013075068A1 (ru)
ZA (2) ZA201403379B (ru)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN104531671A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3682905B1 (en) 2011-10-03 2021-12-01 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
CN103957898B (zh) 2011-11-18 2016-02-24 瑞泽恩制药公司 聚合物蛋白微粒
ES2923757T3 (es) 2011-12-16 2022-09-30 Modernatx Inc Composiciones de ARNm modificado
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
AU2013243953A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
DK2922554T3 (en) 2012-11-26 2022-05-23 Modernatx Inc Terminalt modificeret rna
WO2014152211A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Moderna Therapeutics, Inc. Formulation and delivery of modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2015034925A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Circular polynucleotides
CA2923029A1 (en) 2013-09-03 2015-03-12 Moderna Therapeutics, Inc. Chimeric polynucleotides
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
EP3169693B1 (en) 2014-07-16 2022-03-09 ModernaTX, Inc. Chimeric polynucleotides
CN108366968B (zh) 2015-12-16 2022-02-18 瑞泽恩制药公司 制造蛋白质微粒的组合物和方法
SI3394093T1 (sl) 2015-12-23 2022-05-31 Modernatx, Inc. Metode uporabe liganda OX40, ki kodira polinukleotid
CA3010056A1 (en) 2015-12-30 2017-07-06 Kodiak Sciences Inc. Antibodies and conjugates thereof
WO2017120612A1 (en) 2016-01-10 2017-07-13 Modernatx, Inc. Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies
AU2018270111B2 (en) 2017-05-18 2022-07-14 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding tethered interleukin-12 (IL12) polypeptides and uses thereof
EP3459529A1 (en) 2017-09-20 2019-03-27 Tillotts Pharma Ag Preparation of sustained release solid dosage forms comprising antibodies by spray drying
SG11202107762QA (en) * 2019-01-30 2021-08-30 Amgen Inc Aflibercept attributes and methods of characterizing and modifying thereof
EP4041312A4 (en) 2019-10-10 2023-12-20 Kodiak Sciences Inc. METHOD FOR TREATING AN EYE DISORDER
KR20220104797A (ko) 2019-11-25 2022-07-26 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 비수성 에멀전을 이용한 지속 방출 제형
CN115887760A (zh) * 2022-11-21 2023-04-04 娜罗曼苏(杭州)医疗生物科技有限公司 一种注射用左旋聚乳酸制备工艺

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018164A1 (en) * 1991-04-10 1992-10-29 Delta Biotechnology Limited Preparation of diagnostic agents
RU2177785C2 (ru) * 1994-08-04 2002-01-10 Квадрант Холдингс Кембридж Лимитед Твердые системы доставки для контролируемого высвобождения включенных в них молекул и способы их приготовления
RU2237471C2 (ru) * 1998-01-29 2004-10-10 Поли-Мед Инк. Абсорбируемые микрочастицы
WO2008153997A1 (en) * 2007-06-07 2008-12-18 Brookwood Pharmaceuticals, Inc. Reduced-mass, long-acting dosage forms

Family Cites Families (81)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4210529A (en) 1974-12-26 1980-07-01 Midwest Research Institute Blood compatible polymers and applications thereof
US4304767A (en) 1980-05-15 1981-12-08 Sri International Polymers of di- (and higher functionality) ketene acetals and polyols
US4764364A (en) 1986-02-25 1988-08-16 S R I International Method of preparing bioerodible polymers having pH sensitivity in the acid range and resulting product
US5104221A (en) 1989-03-03 1992-04-14 Coulter Electronics Of New England, Inc. Particle size analysis utilizing polarization intensity differential scattering
EP1132471A3 (de) 1989-09-12 2001-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
US6063910A (en) 1991-11-14 2000-05-16 The Trustees Of Princeton University Preparation of protein microparticles by supercritical fluid precipitation
ES2107051T3 (es) 1992-09-21 1997-11-16 Upjohn Co Formulaciones de proteinas de liberacion sostenida.
JP3971797B2 (ja) 1994-09-23 2007-09-05 アレクション・ファーマシューティカルズ・インク 炎症性関節疾患の治療方法
US6004549A (en) 1994-12-14 1999-12-21 Schering Corporation Crystalline protein controlled release compositions
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US5968543A (en) 1996-01-05 1999-10-19 Advanced Polymer Systems, Inc. Polymers with controlled physical state and bioerodibility
US5985309A (en) 1996-05-24 1999-11-16 Massachusetts Institute Of Technology Preparation of particles for inhalation
EP0913177A1 (de) 1997-11-03 1999-05-06 Roche Diagnostics GmbH Verfahren zur Herstellung trockener, amorpher Produkte enthaltend biologisch aktive Materialien mittels Konvektionstrocknung, insbesondere Sprühtrocknung
US6284282B1 (en) 1998-04-29 2001-09-04 Genentech, Inc. Method of spray freeze drying proteins for pharmaceutical administration
US6956021B1 (en) 1998-08-25 2005-10-18 Advanced Inhalation Research, Inc. Stable spray-dried protein formulations
US6927044B2 (en) 1998-09-25 2005-08-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 receptor based cytokine traps
US6223455B1 (en) * 1999-05-03 2001-05-01 Acusphere, Inc. Spray drying apparatus and methods of use
US7087411B2 (en) 1999-06-08 2006-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Fusion protein capable of binding VEGF
US7070959B1 (en) 1999-06-08 2006-07-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Modified chimeric polypeptides with improved pharmacokinetic properties
US7303746B2 (en) 1999-06-08 2007-12-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating eye disorders with modified chimeric polypeptides
US7306799B2 (en) 1999-06-08 2007-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Use of VEGF inhibitors for treatment of eye disorders
WO2001030320A1 (en) 1999-10-22 2001-05-03 Amgen Inc. Biodegradable microparticles with novel erythropoietin stimulating protein
FR2809309B1 (fr) 2000-05-23 2004-06-11 Mainelab Microspheres a liberation prolongee pour administration injectable
TWI283182B (en) 2000-08-07 2007-07-01 Nektar Therapeutics Inhalable spray dried 4-helix bundle protein powders having minimized aggregation
AU2002322295C1 (en) 2001-06-21 2008-12-18 Altus Pharmaceuticals Inc. Spherical protein particles and methods of making and using them
JPWO2003006052A1 (ja) * 2001-07-09 2005-02-17 山之内製薬株式会社 徐放性注射剤用組成物およびその製造方法
SG106672A1 (en) 2002-03-08 2004-10-29 Asml Netherlands Bv Mask for use in lithography, method of making a mask, lithographic apparatus, and device manufacturing method
WO2003092665A2 (en) * 2002-05-02 2003-11-13 Massachusetts Eye And Ear Infirmary Ocular drug delivery systems and use thereof
WO2004060310A2 (en) 2002-12-31 2004-07-22 Altus Pharmaceuticals Inc. Human growth hormone crystals and methods for preparing them
US20040208928A1 (en) * 2003-04-15 2004-10-21 Animal Technology Institute Taiwan Method for preparing an orally administrable formulation for controlled release
TWI367103B (en) 2003-06-26 2012-07-01 Psivida Inc Bioerodible sustained release drug delivery systems
DE10339197A1 (de) 2003-08-22 2005-03-24 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Sprühgetrocknete amorphe Pulver mit geringer Restfeuchte und guter Lagerstabilität
BRPI0414982A (pt) * 2003-10-01 2006-11-21 Debio Rech Pharma Sa dispositivo e método para produção de partìculas
US20050244472A1 (en) * 2004-04-30 2005-11-03 Allergan, Inc. Intraocular drug delivery systems containing excipients with reduced toxicity and related methods
US20070059336A1 (en) 2004-04-30 2007-03-15 Allergan, Inc. Anti-angiogenic sustained release intraocular implants and related methods
US7727962B2 (en) 2004-05-10 2010-06-01 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Powder comprising new compositions of oligosaccharides and methods for their preparation
US7655758B2 (en) 2004-08-17 2010-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable liquid IL-1 antagonist formulations
US7572893B2 (en) 2004-08-17 2009-08-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-1 antagonist formulations
BRPI0514411B8 (pt) 2004-08-17 2021-05-25 Regeneron Pharma formulação, e, método de produzir uma formulação
WO2006057859A1 (en) 2004-11-24 2006-06-01 Therakine Corporation An implant for intraocular drug delivery
WO2006071102A1 (en) 2004-12-30 2006-07-06 Dobeel Co., Ltd. Spray-dried composition containing collectin family proteins or variants therof and process for preparing the same
LT2586459T (lt) 2005-03-25 2017-09-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Vegf antagonisto kompozicijos
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
ES2616296T3 (es) * 2005-12-02 2017-06-12 (Osi) Eyetech, Inc. Micropartículas de liberación controlada
KR100722607B1 (ko) * 2006-05-11 2007-05-28 주식회사 펩트론 분산성 및 주사 투여능이 향상된 서방성 미립구의 제조방법
ES2406764T3 (es) 2006-06-16 2013-06-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Formulaciones que comprenden antagonistas de VEGF para administración intravítrea
DE102006030166A1 (de) * 2006-06-29 2008-01-10 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Tempern
DE102006030164A1 (de) 2006-06-29 2008-01-03 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Inhalative Pulver
EP1958622A1 (en) 2006-11-07 2008-08-20 Royal College of Surgeons in Ireland Method of producing microcapsules
WO2008109886A1 (en) 2007-03-08 2008-09-12 The Regents Of The University Of California Topographically engineered structures and methods for using the same in regenerative medicine applications
WO2008115883A1 (en) 2007-03-16 2008-09-25 The Regents Of The University Of California Nanostructure surface coated medical implants and methods of using the same
KR100805208B1 (ko) 2007-03-27 2008-02-21 주식회사 펩트론 엑센딘 함유 서방성 제제 조성물, 엑센딘 함유 서방성미립구 및 이의 제조 방법
JP5773651B2 (ja) 2007-12-21 2015-09-02 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツングＭｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｍｉｔ ｂｅｓｃｈｒａｅｎｋｔｅｒ Ｈａｆｔｕｎｇ 内部固形コア中に成長ホルモンを含有する固形脂質マイクロカプセル
JP6078217B2 (ja) 2008-01-15 2017-02-08 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 粉末化されたタンパク質組成物及びその作製方法
US8623395B2 (en) 2010-01-29 2014-01-07 Forsight Vision4, Inc. Implantable therapeutic device
AU2010208046B2 (en) 2009-01-29 2014-10-02 Forsight Vision4, Inc. Posterior segment drug delivery
EP3130396B1 (en) * 2009-03-27 2021-03-17 Bend Research, Inc. Spray-drying process
CN101559041B (zh) 2009-05-19 2014-01-15 中国科学院过程工程研究所 粒径均一的多肽药物缓释微球或微囊制剂及制备方法
MX2011014008A (es) 2009-06-26 2012-06-01 Regeneron Pharma Anticuerpos biespecificos facilmente aislados con formato de inmunoglobulina original.
US8417452B2 (en) 2009-08-19 2013-04-09 General Motors Llc System for providing information to an operator of a vehicle
WO2011041642A1 (en) * 2009-10-01 2011-04-07 Surmodics Pharmaceuticals, Inc. Microparticle compositions and methods for treating age-related macular degeneration
JO3417B1 (ar) 2010-01-08 2019-10-20 Regeneron Pharma الصيغ المستقرة التي تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد مستقبل( interleukin-6 (il-6r
JOP20190250A1 (ar) 2010-07-14 2017-06-16 Regeneron Pharma صيغ مستقرة تحتوي على الأجسام المضادة لمضاد عامل نمو الأعصاب
US9033911B2 (en) 2010-08-05 2015-05-19 Forsight Vision4, Inc. Injector apparatus and method for drug delivery
SI2600812T1 (sl) 2010-08-05 2021-12-31 ForSight Vision4, Inc., Naprava za zdravljenje očesa
EA028945B1 (ru) 2010-10-06 2018-01-31 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. СТАБИЛЬНЫЕ ЖИДКИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ КОМПОЗИЦИИ, СОДЕРЖАЩИЕ АНТИТЕЛА К АЛЬФА РЕЦЕПТОРУ ЧЕЛОВЕЧЕСКОГО ИНТЕРЛЕЙКИНА-4 (hIL-4Rα)
AU2012242766B2 (en) 2011-04-14 2017-02-02 The Regents Of The University Of California Multilayer thin film drug delivery device and methods of making and using the same
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
CN103957898B (zh) 2011-11-18 2016-02-24 瑞泽恩制药公司 聚合物蛋白微粒
WO2013173687A1 (en) 2012-05-18 2013-11-21 Genentech, Inc. High-concentration monoclonal antibody formulations
BR112014029760A2 (pt) 2012-05-30 2017-06-27 Univ California dispositivos de distribuição de agente bioativo e métodos para fazer e usar os mesmos
US9463177B2 (en) 2012-09-10 2016-10-11 The Regents Of The University Of California Compounds and methods for modulating vascular injury
CA2903345A1 (en) 2013-03-19 2014-09-25 Biotech Tools S.A. Allergen preparation
MX2017000526A (es) 2014-07-14 2017-08-02 Amgen Inc Formulaciones de anticuerpos cristalinos.
CA3001346A1 (en) 2015-10-16 2017-04-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Stable protein compositions
PE20181453A1 (es) 2015-11-05 2018-09-12 Basf Se Oxadiazoles sustituidos para combatir hongos fitopatogenos
BR112018009511A2 (pt) 2015-11-13 2018-11-06 Novartis Ag derivados de pirazolo pirimidina
TW201731867A (zh) 2015-12-02 2017-09-16 賽諾菲公司 Ｆｇｆ２１變異體
CN108291056A (zh) 2015-12-07 2018-07-17 醋酸纤维国际有限责任公司 乙酸纤维素成膜组合物
KR20180093925A (ko) 2015-12-15 2018-08-22 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 박테리아 감염을 치료하기 위한 비아릴 모노박탐 화합물 및 그의 사용 방법
CN108366968B (zh) 2015-12-16 2022-02-18 瑞泽恩制药公司 制造蛋白质微粒的组合物和方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992018164A1 (en) * 1991-04-10 1992-10-29 Delta Biotechnology Limited Preparation of diagnostic agents
RU2177785C2 (ru) * 1994-08-04 2002-01-10 Квадрант Холдингс Кембридж Лимитед Твердые системы доставки для контролируемого высвобождения включенных в них молекул и способы их приготовления
RU2237471C2 (ru) * 1998-01-29 2004-10-10 Поли-Мед Инк. Абсорбируемые микрочастицы
WO2008153997A1 (en) * 2007-06-07 2008-12-18 Brookwood Pharmaceuticals, Inc. Reduced-mass, long-acting dosage forms

Also Published As

Publication number Publication date
IL277958A (en) 2020-11-30
DK2790681T4 (da) 2023-05-01
RU2018101248A (ru) 2019-02-21
JP2014533698A (ja) 2014-12-15
US20170181978A1 (en) 2017-06-29
ZA201403379B (en) 2020-12-23
AU2012340107A1 (en) 2014-06-05
AU2012340107B2 (en) 2017-06-15
EP3574897B1 (en) 2022-01-05
FI2790681T4 (fi) 2023-05-04
ES2810003T3 (es) 2021-03-08
RU2768492C2 (ru) 2022-03-24
MX2019000382A (es) 2023-01-05
SG11201402152YA (en) 2014-06-27
PL3574897T3 (pl) 2022-05-09
ES2775104T3 (es) 2020-07-23
JP2018008990A (ja) 2018-01-18
EP2790681B1 (en) 2020-01-22
KR20140096327A (ko) 2014-08-05
CN103957898A (zh) 2014-07-30
DK2790681T3 (da) 2020-04-14
US11291636B2 (en) 2022-04-05
ZA201800078B (en) 2020-05-27
IL303832A (en) 2023-08-01
JP2020169195A (ja) 2020-10-15
JP6267649B2 (ja) 2018-01-24
KR20210021112A (ko) 2021-02-24
JP6549653B2 (ja) 2019-07-24
CN105688188A (zh) 2016-06-22
EP3384903B1 (en) 2020-05-27
EP3384903A1 (en) 2018-10-10
CN103957898B (zh) 2016-02-24
HUE048597T2 (hu) 2020-07-28
IL277958B1 (en) 2023-07-01
JP6727372B2 (ja) 2020-07-22
PL2790681T5 (pl) 2024-02-05
EP4026543A1 (en) 2022-07-13
ES2775104T5 (es) 2023-06-08
US20220249387A1 (en) 2022-08-11
RU2018101248A3 (ru) 2021-02-18
IL262651A (en) 2018-12-31
KR20220063293A (ko) 2022-05-17
CA2855749A1 (en) 2013-05-23
KR102218223B1 (ko) 2021-02-22
CA3076725A1 (en) 2013-05-23
MX2014005997A (es) 2014-08-27
JP2019135255A (ja) 2019-08-15
IL232328B (en) 2018-11-29
JP7217247B2 (ja) 2023-02-02
PL3384903T3 (pl) 2020-10-19
ES2909777T3 (es) 2022-05-10
PT3574897T (pt) 2022-04-06
IL277958B2 (en) 2023-11-01
US20130129830A1 (en) 2013-05-23
BR112014011915B1 (pt) 2022-08-30
KR102133352B1 (ko) 2020-07-14
BR112014011915A2 (pt) 2017-05-16
EP2790681B2 (en) 2023-02-22
MX362286B (es) 2019-01-10
PT3384903T (pt) 2020-06-25
DK3574897T3 (da) 2022-04-04
SG10202103003RA (en) 2021-05-28
DK3384903T3 (da) 2020-07-20
PL2790681T3 (pl) 2020-07-27
US11951216B2 (en) 2024-04-09
JP2023052564A (ja) 2023-04-11
CA2855749C (en) 2020-05-26
EP3574897A1 (en) 2019-12-04
IL262651B (en) 2020-11-30
EP2790681A1 (en) 2014-10-22
WO2013075068A1 (en) 2013-05-23
IL232328A0 (en) 2014-06-30
HUE051644T2 (hu) 2021-03-01
KR20200018712A (ko) 2020-02-19
RU2014124682A (ru) 2015-12-27
EP2790681B9 (en) 2023-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2642664C2 (ru) Полимерные белковые микрочастицы
CN114760986A (zh) 使用非水性乳液的持续释放调配物