ES2217738T3 - Microparticulas absorbibles. - Google Patents
Microparticulas absorbibles.Info
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Abstract
Una micropartícula unida que comprende un núcleo polimérico absorbible de heterocadena y uno o más péptidos, una o más proteínas o una combinación de los mismos inmovilizados iónicamente en dicho núcleo polimérico absorbible de cadena heterogénea, en la que cada péptido se selecciona independientemente del grupo formado por péptido liberador de la hormona de crecimiento (GHRP), hormona liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), somatostatina, bombesina, péptido liberador de gastrina (GRP), calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona estimulante del melanocito (MSH), factor de liberación de la hormona de crecimiento (GRF), amilina, taquiquininas, secretina, hormona paratiroidea (PTH), encafelina, endotelina, péptido liberador del gen de la calcitonina (CGRP), neuromedinas, proteína relacionada con la hormona paratiroidea (PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona adrenocorticotropa (ACTH), péptido YY (PYY), péptido liberador de glucagón (GLP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), péptido activador de la adenil ciclasa pituitaria (PACAP), motilina, sustancia P, neuropéptido Y (NPY), TSH y análogos y fragmentos de los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos; y en la que cada proteína se selecciona independientemente del grupo formado por hormona del crecimiento, eritropoyetina, factor estimulante de la colonia de granulocitos, factor estimulante de la colonia de granulocitos macrófagos e interferones.
Description
Micropartículas absorbibles.
Esta invención pertenece a un complejo de
liberación sostenida de uno o más péptidos, una o más proteínas o
una combinación de los mismos inmovilizados iónicamente en una
micropartícula polimérica absorbible que tiene opcionalmente un
revestimiento polimérico absorbible. El complejo de micropartícula
de esta invención comprende un péptido(s) y/o
proteína(s) que tienen al menos un grupo amino y/o al menos
un grupo carboxilo por molécula y una micropartícula de poliéster
absorbible sólida que tiene grupos carboxílicos o grupos amino en la
superficie o bajo la superficie en cantidades suficientes para unir
el péptido(s) y/o proteína(s) de forma que el
péptido(s) o proteína(s) inmovilizados representan
del 0,1% al 30% de la masa total del complejo micropartícula. Los
complejos micropartícula con péptido(s) y/o
proteína(s) inmovilizados opcionalmente también están
revestidos individualmente o en grupos con un polímero absorbible
para controlar, además, la liberación del péptido(s) y/o
proteína(s) inmovilizados. Para controlar aún más la
liberación del péptido(s) y/o proteína(s)
inmovilizados, las micropartículas revestidas se pueden incorporar
a una composición con un líquido absorbible formador de gel que se
transforma en un gel o semisólido flexible al contacto con agua en
el entorno biológico.
Se han desarrollado, probado y usado muchos
sistemas portadores de fármacos, para la liberación controlada
in vivo de composiciones farmacéuticas. Por ejemplo, se han
usado poliésteres como ácido
poli-DL-láctico, ácido
poliglicólico, caprolactona poli-\varepsilon y
otros copolímeros diversos para liberar moléculas biológicamente
activas como progesterona; éstos están en forma de microcápsulas,
películas o bastoncitos (M. Chasin y R. Langer, editores,
Biodegradable Polymers as Drug Delivery Systems, Dekker, NY 1990).
Tras la implantación de la composición polímero/agente terapéutico,
por ejemplo, de forma subcutánea o intramuscular, se libera el
agente terapéutico durante un periodo de tiempo específico. Dichos
sistemas poliméricos biodegradables y biocompatibles se diseñan
para permitir al agente terapéutico atrapado codifundirse de la
matriz polimérica. Tras la liberación del agente terapéutico, el
selector se degrada in vivo, obviando la eliminación
quirúrgica del implante. Aunque los factores que contribuyen a la
degradación del selector no se conocen bien, se cree que tal
degradación de poliésteres se puede regular mediante la
accesibilidad de uniones éster a la hidrólisis autocatalítica no
enzimática de los componentes poliméricos.
Varias publicaciones EPO y patentes de EEUU han
tratado informes sobre el diseño de la matriz polimérica y su papel
en la regulación de la tasa y cantidad de liberación de agentes
terapéuticos in vivo.
Por ejemplo, Deluca (Publicación EPO0467389A2)
describe una interacción física entre un polímero biodegradable
hidrófobo y una proteína o polipéptido. La composición formada era
una mezcla de un agente terapéutico y un polímero hidrófobo que
sostenía su liberación difusional de la matriz tras la introducción
en un sujeto.
Hutchinson (Patente de EEUU Nº 4.767.628)
controló la liberación de un agente terapéutico mediante dispersión
uniforme en un dispositivo polimérico. Se revela que esta
formulación prevé la liberación continua controlada mediante la
superposición de dos fases: primero, una lixiviación dependiente de
la difusión del fármaco de la superficie de la formulación; y
segundo, la liberación por canales acuosos inducida por la
degradación del polímero.
Se describen otros implantes biodegradables
formadores in situ y procedimientos para crearlos en las
Patentes de EEUU números 5.278.201 (Patente '201) y Patente de EEUU
Nº 5.077.049 (Patente '049), de Dunn y col. Las patentes Dunn y
col. presentan procedimientos para ayudar a la restauración del
tejido periodontal en una cavidad periodontal y para retardar la
migración de células epiteliales a lo largo de la superficie de la
raíz de un diente. La Patente '049 presenta procedimientos que
implican la colocación de una barrera biodegradable formadora in
situ adyacente a la superficie del diente. La barrera es
microporosa e incluye poros de tamaño definido y puede incluir
agentes biológicamente activos. La formación de la barrera se
consigue poniendo una solución líquida de un polímero
biodegradable, como
poli(dl-láctido-co-glicólido)
coagulable en agua, termoplástico en un disolvente orgánico no
tóxico miscible en agua como N-metil pirrolidona
(esto es, para conseguir una concentración típica de polímero de
aproximadamente 50%) en la cavidad periodontal. El disolvente
orgánico se disipa en los fluidos periodontales y el polímero
coagulable en agua y biodegradable forma un implante biodegradable
sólido in situ. La disipación del disolvente crea poros en el
implante biodegradable sólido para permitir el crecimiento hacia
dentro de las células. La Patente '859 también presenta
procedimientos para las mismas indicaciones implicando la formación
de la barrera biodegradable de una mezcla líquida de un prepolímero
termoendurecible curable y biodegradable, un agente curativo y
material soluble en agua como sal, azúcar, y polímero soluble en
agua. El prepolímero termoendurecible curable se describe como un
polímero absorbible terminado con éster
acrílico.
acrílico.
Además, se presentan en la bibliografía una serie
de sistemas para la administración controlada de compuestos
biológicamente activos a una variedad de sitios. Por ejemplo, la
Patente de EEUU Nº 5.011.692, de Fujioka y col., presenta una
preparación farmacéutica de liberación por impulsos sostenida que
comprende capas de material polimérico con fármacos. Las capas de
material polimérico contienen el fármaco sólo en una pequeña
cantidad, o están libres del fármaco. Toda la superficie se
extiende en una dirección perpendicular al plano de la capa y está
revestida con un material polimérico que es insoluble en agua.
Estos tipos de dosificación farmacéutica por liberación por impulsos
son adecuados para la fijación debajo de la piel.
La Patente de EEUU Nº 5.366.756, de Chesterfield
y col., describe un procedimiento para preparar materiales de
implante quirúrgico bioabsorbibles porosos. El procedimiento
comprende la aportación de una cantidad de partículas de material
de implante bioabsorbible, y partículas de revestimiento de material
de implante bioabsorbible con al menos un factor de crecimiento. El
implante también puede contener agentes antimicrobianos.
La Patente de EEUU Nº 5.385.738, de Yamhira y
col., presenta un sistema de inyección de liberación sostenida, que
comprende una suspensión de un polvo formado por un ingrediente
activo y un vehículo biodegradable farmacéuticamente aceptable (por
ejemplo, proteínas, polisacáridos, y compuestos sintéticos de
elevado peso molecular, preferentemente colágeno, atelo colágeno,
gelatina, y una mezcla de los mismos) en un disolvente viscoso (por
ejemplo, aceites vegetales, polietilén glicol, propilén glicol,
aceite de silicona, y triglicéridos de ácidos grasos de cadena
media) para la inyección. El ingrediente activo en la formulación
farmacéutica se incorpora al vehículo biodegradable en el siguiente
estado: (i) el ingrediente activo está unido químicamente a la
matriz del vehículo; (ii) el ingrediente activo está unido a la
matriz del vehículo mediante acción intermolecular; o (iii) el
ingrediente activo se abraza físicamente a la matriz del
vehículo.
Además, tales sistemas como los descritos
previamente en la bibliografía, por ejemplo, como el de Dunn y col.
(Patente de EEUU Nº 4.938.763), enseñan formaciones in situ
de implantes sólidos microporosos y biodegradables en un cuerpo
vivo mediante coagulación de una solución de un polímero en un
disolvente orgánico como
N-metil-2-pirrolidona.
Sin embargo, el uso de disolventes, incluyendo aquellos de los de
bajo peso molecular, facilita la migración de la solución del sitio
de aplicación causando por lo tanto daños al tejido vivo incluyendo
la deshidratación y necrosis celular. La pérdida de la masa del
disolvente puede llevar a la reducción del coágulo y su separación
del tejido circundante.
La Patente de EEUU Nº 5.612.052 describe
micropartículas intercambiadoras de cationes hechas típicamente de
cadenas de poliéster que llevan carboxilo en las que se inmovilizan
agentes bioactivos básicos para aportar un sistema de liberación
control dentro de un poliéster líquido absorbible formador de gel.
Se incorpora el contenido de la Patente de EEUU 5.612.052 en la
presente memoria descriptiva por referencia. En la técnica anterior
se ha señalado la conjugación de entidades carboxílicas,
iónicamente, con polipéptido básico tal como se describe en la
Patente de EEUU Nº 5.672.659 y Patente de EEUU Nº 5.665.702. Sin
embargo, estos complejos son entidades químicas solubles formadas
mediante reacción molecular de los componentes individuales básico
y carboxílico en sus respectivas soluciones para formar un
conjugado iónico bien definido como nueva entidad química con
propiedades físicoquímicas. Esto se distingue de la presente
invención donde la formación del complejo tiene lugar en un sistema
heterogéneo que implica fundamentalmente la formación de un complejo
de superficie.
La presente invención se dirige a una
micropartícula unida que comprende un núcleo polimérico de
heterocadena absorbible y uno o más péptidos, una o más proteínas o
una combinación de los mismos inmovilizados iónicamente en dicho
núcleo polimérico de heterocadena absorbible,
en el que cada péptido se selecciona
independientemente del grupo formado por péptido liberador de
hormona de crecimiento (GHRP), hormona liberadora de hormona
luteinizante (LHRH), somatostatina, bombesina, péptido liberador de
gastrina (GRP), calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona
estimulante del melanocito (MSH), factor de liberación de hormona
de crecimiento (GRF), amilina, taquiquinina, secretina, hormona
paratiroidea (PTH), encafelina, endotelina, péptido liberador del
gen de la calcitonina (CGRP), neuromedinas, proteína relacionada
con la hormona paratiroidea (PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona
adrenocorticotropa (ACTH), péptido YY (PYY), péptido liberador de
glucagón (GLP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), péptido
activador de la adenil ciclasa pituitaria (PACAP), motilina,
sustancia P, neuropéptido Y (NPY), TSH y análogos y fragmentos de
los mismos o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable;
y
en el que cada proteína se selecciona
independientemente del grupo formado por hormona de crecimiento,
eritropoyetina, factor estimulador de la colonia de granulocitos,
factor estimulador de la colonia de granulocitos macrófagos e
interferones.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores, denominada grupo B, es aquella en la que
dicho péptido, proteína o una combinación de los mismos o una sal
de los mismos farmacéuticamente aceptable comprende del 0,1% al 30%
de la masa total de la micropartícula unida.
Una micropartícula unida de las inmediatamente
anteriores, denominada grupo C, es aquella en la que dicho núcleo
polimérico de heterocadena absorbible comprende unidades de
glicolato.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores, denominada grupo D, es aquella en la que
el núcleo polimérico de heterocadena absorbible además comprende
residuos de citrato, residuos de tartrato o residuos de malato.
Una micropartícula unida de las inmediatamente
anteriores, denominada grupo E, es aquella en la que la proporción
de unidades de glicolato respecto a residuos de citrato, residuos
de tartrato o residuos de malato es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1.
Otra micropartícula unida preferente del grupo C
es aquella en la que dichas unidades de glicolato terminan con una
mitad carboxilo.
Todavía otra micropartícula unida preferente del
grupo C es aquella en la que dichas unidades de glicolato terminan
con una mitad amina.
En otro aspecto, esta invención aporta una
micropartícula revestida que comprende una o más micropartículas
unidas dentro de un polímero de revestimiento absorbible
en el que dicha micropartícula unida comprende un
núcleo polimérico de heterocadena absorbible y uno o más péptidos,
una o más proteínas o una combinación de los mismos inmovilizados
en dicho núcleo polimérico de heterocadena absorbible,
donde cada péptido se selecciona
independientemente del grupo formado por péptido liberador de
hormona de crecimiento (GHRP), hormona liberadora de la hormona
luteinizante (LHRH), somatostatina, bombesina, péptido liberador de
gastrina (GRP), calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona
estimulante del melanocito (MSH), factor liberador de la hormona
del crecimiento (GRF), amilina, taquiquininas, secretina, hormona
paratiroidea (PTH), encafelina, endotelina, péptido liberador del
gen de la calcitonina (CGRP), neuromedinas, proteína relacionada
con la hormona paratiroidea (PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona
adrenocorticotropa (ACTH), péptido YY (PYY), péptido liberador de
glucagón (GLP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), péptido
activador de la adenil ciclasa pituitaria (PACAP), motilina,
sustancia P, neuropéptido Y (NPY), TSH y análogos y fragmentos de
los mismos o una sal de los mismos farmacéuticamente aceptable;
cada proteína se selecciona independientemente
del grupo formado por hormona de crecimiento, eritropoyetina, factor
estimulante de la colonia de granulocitos, factor estimulante de la
colonia de granulocitos macrófagos e interferones; y
en el que dicho núcleo polimérico de heterocadena
absorbible comprende unidades de glicolato.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que dicho péptido,
proteína o combinación de los mismos o sal de los mismos
farmacéuticamente aceptable comprende del 0,1% al 30% de la masa
total de la micropartícula unida, y en la que dicho núcleo
polimérico de heterocadena absorbible también comprende residuos de
citrato, residuos de tartrato o residuos de malato.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores, denominada grupo F, es aquella en la que
la proporción de unidades de glicolato con respecto a residuos de
citrato, a residuos de tartrato o a residuos de malato es
aproximadamente 7-1 a aproximadamente
20-1 y dichas unidades de glicolato terminan con
una mitad carboxilo o una mitad amino.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que dicho polímero de
revestimiento absorbible comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades basadas en l-láctido respecto a unidades
basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a
aproximadamente 90-10, la proporción de unidades
basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en
d,l-láctido es aproximadamente 80-20
y la proporción de unidades basadas en d,l-láctido
respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente
75-25 a aproximadamente 90-10.
Una micropartícula revestida preferente del grupo
F es aquella en la que el polímero de revestimiento absorbible
constituye del 5 al 70% de la masa total de la micropartícula
revestida.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que el polímero de
revestimiento absorbible constituye el 20-60% del
total de la masa de la micropartícula revestida.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que el polímero de
revestimiento absorbible constituye el 30-50% de la
masa total de la micropartícula revestida.
En otro aspecto, esta invención aporta una
composición farmacéutica que comprende las micropartículas unidas
descritas arriba y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, esta invención aporta una
composición farmacéutica que comprende las micropartículas unidas
descritas arriba, un poliéster líquido absorbible no acuoso y
formador de gel y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente
aceptable.
En otro aspecto, esta invención aporta una
composición farmacéutica que comprende la micropartícula revestida
descrita arriba y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, esta invención aporta una
composición farmacéutica que comprende la micropartícula revestida
descrita arriba, un poliéster líquido absorbible no acuoso formador
de gel y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otra micropartícula unida preferente del grupo D,
denominada grupo G, es aquella en la que el núcleo polimérico de
heterocadena absorbible comprende residuos de citrato y el péptido
es un análogo de LHRH.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de citrato del núcleo
polimérico de heterocadena absorbible es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1 y donde
el análogo de LHRH es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}.
Otra micropartícula unida preferente del grupo D,
denominada grupo H, es aquella en la que el núcleo polimérico de
heterocadena absorbible comprende residuos de tartrato y el péptido
es un análogo de LHRH.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de tartrato es
aproximadamente 7-1 a aproximadamente
20-1 y el análogo de LHRH es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}.
Aún otra micropartícula unida preferente del
grupo D, denominada grupo I, es aquella en la que el núcleo
polimérico de heterocadena absorbible comprende residuos de citrato
y el péptido es un análogo de somatostatina.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de citrato es
aproximadamente 7-1 a aproximadamente
20-1 y el análogo de somatostatina es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}en
el que las dos Cys están unidas por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro.
Aún otra micropartícula unida preferente del
grupo D, denominada grupo J, es aquella en la que el núcleo
polimérico de heterocadena absorbible comprende residuos de
tartrato y el péptido es un análogo de somatostatina.
Una micropartícula unida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de tartrato es
aproximadamente 7-1 a aproximadamente
20-1 y el análogo de somatostatina es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
en el que las dos Cys están unidas por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro.
Una micropartícula revestida preferente de esta
invención es una micropartícula revestida que comprende una o más
micropartículas unidas del grupo G revestidas en un polímero
absorbible de revestimiento que comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,1-láctido.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de citrato del núcleo
polimérico absorbible es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1, el análogo de LHRH es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}
y en el que la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
Otra micropartícula revestida preferente
comprende una o más micropartículas unidas del grupo H revestidas
en un polímero absorbible de revestimiento que comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de tartrato del núcleo
polimérico absorbible es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1, el análogo de LHRH es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}
y en el que la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
Otra micropartícula revestida preferente
comprende una o más micropartículas unidas del grupo I revestidas en
un polímero absorbible de revestimiento que comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de citrato del núcleo
polimérico absorbible es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1, el análogo de somatostatina es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D
Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro; y en la que
la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
Otra micropartícula revestida preferente
comprende una o más micropartículas unidas del grupo J y un polímero
absorbible de revestimiento que comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
Una micropartícula revestida preferente de las
inmediatamente anteriores es aquella en la que la proporción de
unidades de glicolato respecto a residuos de tartrato del núcleo
polimérico absorbible es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1, el análogo de somatostatina es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro o N-
hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde las dos Cys están unidas por una unión disulfuro; y en la que
la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
En otro aspecto, esta invención aporta un
procedimiento para fabricar una micropartícula revestida como se
describe arriba que comprende la etapa de revestimiento de una
micropartícula unida con un polímero absorbible de
revestimiento.
Un procedimiento preferente de los inmediatamente
anteriores es aquel en que se vierte una dispersión de dichas
micropartículas unidas en una solución que comprende dicho polímero
absorbible de revestimiento y un disolvente a un medio
pre-enfriado, en el que dicho medio no es un
disolvente de dicho polímero absorbible de revestimiento.
Un procedimiento preferente de lo inmediatamente
anterior es aquel en que la solución del polímero absorbible de
revestimiento está formado por aproximadamente el 5% al 30% del
polímero absorbible de revestimiento, el medio
pre-enfriado es un alcohol que tiene dos o más
átomos de carbono y la temperatura del medio es de temperatura
ambiente hasta aproximadamente -80ºC.
Un procedimiento preferente de lo inmediatamente
anterior es aquel en que la temperatura del medio
pre-enfriado es aproximadamente -60ºC a -80ºC y el
medio es alcohol isopropílico.
Todavía en otro aspecto, esta invención aporta un
procedimiento para fabricar una micropartícula revestida como se
describe arriba que comprende la etapa de revestimiento de una
micropartícula unida con un polímero absorbible de revestimiento
usando una técnica de emulsión.
El término "absorbible" como se usa en la
presente memoria descriptiva, significa un material insoluble en
agua como un polímero que sufre la disociación de la cadena en el
medio biológico dando subproductos solubles en agua.
El término "micropartícula" como se usa en
la presente memoria descriptiva, se refiere a las partículas de
poliéster absorbible, que preferentemente están en forma
esencialmente esférica.
El término "micropartícula unida" como se
usa en la presente memoria descriptiva se refiere a una
micropartícula que tiene uno o más péptidos y/o una o más proteínas
inmovilizadas iónicamente en la micropartícula.
El término "micropartícula revestida" como
se usa en la presente memoria descriptiva, se refiere a una
micropartícula unida que tiene una cobertura polimérica, en la que
la cobertura polimérica no necesariamente es completamente
oclusiva.
El término "núcleo polimérico" como se usa
en la presente memoria descriptiva, es otra forma de referirse a
micropartículas.
El término "polímero de revestimiento" como
se usa en la presente memoria descriptiva, se refiere al polímero
que se usa para recubrir una micropartícula unida.
El término "poliéster líquido formador de
gel" como se usa en la presente memoria descriptiva, se refiere
a materiales que absorben disolventes como agua, sufren
transformación de fase y mantienen redes tridimensionales capaces
de sufrir deformación reversible.
La aplicación instantánea denota aminoácidos
usando la abreviación estándar de tres letras conocida en la
técnica, por ejemplo Ala=alanina.
Una micropartícula de la presente invención es
cristalina y está hecha de un poliéster absorbible, como
poliglicólido que tiene uno o más grupos carboxílicos en las
cadenas individuales que resulta en una concentración suficiente de
grupos carboxílicos en la superficie de la micropartícula y en la
subcapa inmediata de la micropartícula para agrupar e inmovilizar
ionicamente un péptido(s) y/o proteína(s) que tiene
uno o más grupos básicos. O los grupos carboxílicos del
poliglicólido pueden estar amidados, por ejemplo por una diamina,
preferentemente una amina primaria o secundaria o una mezcla de las
mismas, en la que la amina forma un complejo que inmoviliza
iónicamente un péptido(s) y/o una proteína(s) que
tiene uno o más grupos acídicos. Como la superficie de las
micropartículas no es necesariamente homogénea, el término
"subcapa" se refiere a las grietas y otros encontrados en la
superficie de las micropartículas. Las micropartículas unidas
aportan un medio para la liberación controlada de un
pétido(s) y/o proteína(s) en un paciente. Para
controlar más la liberación del péptido(s) y/o
proteína(s) inmovilizados, las micropartículas unidas se
pueden recubrir individualmente o en grupos con una cobertura
polimérica absorbible. Las micropartículas unidas liberan el
péptido(s) y/o proteína(s) durante un periodo de
aproximadamente dos días a aproximadamente tres meses en un
paciente, preferentemente aproximadamente una semana a
aproximadamente tres meses. Las micropartículas revestidas liberan
el péptido(s) y/o proteína(s) durante un periodo de
aproximadamente tres días a seis meses en un paciente,
preferentemente aproximadamente dos semanas a cinco meses.
Ejemplos típicos de un péptido que se puede
inmovilizar en una micropartícula incluyen pero no se limitan a
péptido liberador de hormona del crecimiento (GHRP), hormona
liberadora de la hormona luteinizante (LHRH), somatostatina,
bombesina, péptido liberador de gastrina (GRP), calcitonina,
bradiquinina, galanina, hormona estimulante del melanocito (MSH),
factor liberador de la hormona de crecimiento (GRF), amilina,
taquiquininas, secretina, hormona paratiroidea (PTH), encafelina,
endotelina, péptido liberador del gen de la calcitonina (CGRP),
neuromedinas, proteína relacionada con la hormona paratiroidea
(PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona adrenocorticotropa (ACTH),
péptido YY (PYY), péptido liberador de glucagón (GLP), péptido
intestinal vasoactivo (VIP), péptido activador de la adenil ciclasa
pituitaria (PACAP), motilina, sustancia P, neuropéptido Y (NPY),
TSH, y análogos y fragmentos de los mismos. Ejemplos de proteínas
que se pueden inmovilizar en una micropartícula son la hormona del
crecimiento, eritropoyetina, factor estimulante de la colonia de
granulocitos, factor estimulante de la colonia de granulocitos
macrófagos e interferones.
Se puede hacer una micropartícula de un polímero
basado en un láctido o una polilactona sólida semicristalina como
poliglicólido que se puede formar mediante polimerización de
apertura del anillo de iniciadores hidroxílicos portadores de ácido
como ácido glicólico, láctico, málico, tartárico, y cítrico. Una
micropartícula de la presente invención se puede sintetizar según el
siguiente procedimiento. En un recipiente de reacción se mezclan un
monómero basado en un láctido y/o una lactona como glicólido y un
iniciador ácido como ácido tartárico, ácido málico o ácido cítrico.
El recipiente de reacción se calienta a aproximadamente
35-45ºC, preferentemente 40ºC y se pone al vacío
durante aproximadamente 20-60 minutos,
preferentemente 30 minutos. Se sube la temperatura del recipiente de
reacción a aproximadamente 105-115ºC,
preferentemente 110ºC. Una vez se alcanza esta temperatura se pone
el recipiente en una atmósfera de nitrógeno libre de oxígeno, y se
remueve la mezcla. Una vez se funde la mezcla, se añade una
cantidad catalítica de un catalizador organometálico adecuado para
la polimerización con apertura de anillo, como solución estannosa
de 2-etil-hexanoato en un disolvente
no proteico, como tolueno. Se vuelve a aplicar el vacío durante
aproximadamente 30-90 segundos para retirar el
tolueno sin retirar una cantidad significativa de monómero. Se
eleva la temperatura de la mezcla a aproximadamente
115-125ºC, preferentemente 120ºC durante
aproximadamente 5-10 minutos antes de subirla más a
aproximadamente 145-150ºC. Se mantuvo a esta
temperatura durante aproximadamente 3-5 horas,
preferentemente 4 horas, removiéndolo constantemente de forma
mecánica.
El polímero resultante se microniza granulándolo
inicialmente usando un granulador Knife. Luego se microniza el
polímero en un Micronizador Aljet usando un chorro de nitrógeno
seco presurizado. El tamaño del diámetro medio de la partícula se
analiza en un Malvern Mastersizer/E usando un modelo de
distribución de volúmen y aceite de silicona 200/5 cS como
dispersante.
Se purifica el polímero y la sal sódica del mismo
se forma dispersando el polímero micronizado en acetona y
poniéndolo en un baño de ultrasonidos, preferentemente durante
aproximadamente 30 minutos. Durante este tiempo la dispersión
también se homogenizó a aproximadamente 8.000-24.000
rpm, preferentemente 9.500 rpm, usando un homogenizador. Tras esta
etapa de baño de ultrasonidos/homogenización se centrifuga la
dispersión a aproximadamente 3.000- 7.000 rpm, preferentemente 5.000
rpm preferentemente durante aproximadamente 30 minutos en una
centrifugadora. Se desecha el sobrenadante, se vuelven a suspender
los residuos de centrifugado en acetona fresca, y se repite la etapa
de baño de ultrasonidos/homogeneización. Una vez se completa la
segunda homogeneización, se desecha el sobrenadante y los residuos
se vuelven a suspender en agua desionizada. Se lleva a cabo una
última etapa de baño de ultrasonidos/homogeneización para retirar
cualquier acetona restante y la dispersión se vuelve a centrifugar
a aproximadamente 5.000 rpm durante aproximadamente 30 minutos.
Los residuos del centrifugado se vuelven a
suspender en agua desionizada fresca y se monitoriza el pH de la
dispersión. Se añaden suficientes volúmenes de una base suave como
solución de carbonato sódico 0,2M removiendo para elevar el pH a
entre aproximadamente pH 8 y aproximadamente pH 9. Se permite
remover las dispersiones durante aproximadamente 30 minutos antes
de filtrarlas al vacío en papel de filtro. Los residuos del filtro
se aclaran con más agua desionizada, se congelan, y liofilizan.
Se monitoriza la purificación mediante
calorimetría de exploración diferencial (DSC) con un índice de
calentamiento de aproximadamente 5ºC/min a 15ºC/min,preferentemente
10ºC/min.
Se obtiene una micropartícula intercambiadora de
aniones tomando las micropartículas intercambiadoras de cationes e
incubándola en solución diluida caliente (\sim80ºC) de una
diamina, se prefiere que las aminas sean ambas una amina primaria o
ambas una amina secundaria o una mezcla de una amina primaria y una
secundaria, de concentración conocida de dioxano o THF en un gas
inerte como argón. La concentración de la diamina en dioxano o THF
se determina por acidimetría. Cuando la reacción prácticamente se
para, se separan las micropartículas amidadas por filtración, se
aclaran con dioxano o THF, y se secan a presión reducida.
Un péptido(s) y/o proteína(s) se
puede inmovilizar en una micropartícula según el siguiente
procedimiento. Se dispersa la sal sódica de una micropartícula en
soluciones que contienen la base libre de un péptido(s) y/o
proteína(s) disuelta en agua. Se incuban las dispersiones a
temperatura ambiente removiendo durante aproximadamente 2 horas
antes de filtrar las micropartículas unidas. Se aclaran los
residuos de filtrado con más agua desionizada, se congelan, y
liofilizan. Luego se analizan las muestras en busca de nitrógeno
mediante análisis elemental para determinar la cantidad de
péptido(s) y/o proteína(s) inmovilizada.
El tamaño de una micropartícula juega un papel en
la cantidad de péptido y/o proteína que una micropartícula de la
invención instantánea puede inmovilizar. Cuanto más pequeño el
tamaño de una micropartícula, la mayor área de superficie posee una
masa de micropartículas y, así, la mayor cantidad de péptido y/o
proteína se puede inmovilizar por masa de micropartículas. Se puede
conseguir la reducción del tamaño de las micropartículas a
dimensiones de micrón o sub-micrón como se describe
arriba. El diámetro de las micropartículas puede oscilar en tamaño
de aproximadamente 0,5 \mum a 100 \mum, preferentemente 1 \mum
a 15 \mum y más preferentemente 3 \mum a 10 \mum.
El polímero absorbible de revestimiento puede ser
un copolímero de láctido/glicólido cristalino o no cristalino,
copolímero l-láctido/d,l-láctido
amorfo, copolímero caprolactona/glicólido o copolímero carbonato de
trimetileno/glicólido, que es soluble en disolventes orgánicos
convencionales, como cloroformo, cloruro de metileno, acetona,
acetonitrilo, acetato de etilo, y formato de etilo. Los no
disolventes de dichos polímeros absorbibles de revestimiento
incluyen agua, alcoholes que hierven a baja temperatura e
hidrocarburos. Los polímeros absorbibles de revestimiento se pueden
sintetizar catalizando la polimerización con apertura de anillo de
lactonas, o mediante polimerización de monómeros cíclicos como
a-caprolactona, p-dioxanona,
carbonato de trimetileno,
1,5-dioxepan-2-ona o
1,4-dioxepan-2-ona
en presencia de un iniciador de cadena, como un ácido hidroxi
policarboxílico. Aún otro procedimiento implica la reacción de un
ácido policarboxílico orgánico con un poliéster preformado, que se
presenta en la Patente de EEUU Nº 5.612.052, cuyo contenido se
incorpora a la presente memoria por referencia.
Se puede conseguir el revestimiento de las
micropartículas unidas mediante separación de fase de una emulsión.
Un procedimiento de revestimiento alternativo supone el uso de un
atomizador ultrasónico en el que una dispersión de las
micropartículas unidas en una solución de polímero absorbible de
revestimiento se introduce como micro-gotas en un
medio no disolvente enfriado. Se recubren las micropartículas
unidas con u copolímero absorbible de revestimiento de láctido y
glicólido usando microencapsulación tradicional o técnicas de
revestimiento de partículas sólidas como el procedimiento de
evaporación de la emulsión descrito por H. Demian y S.W. Shalaby
para encapsular micropartículas de sulfato de bario como se expone
en la solicitud de Patente de EEUU USSN 08/467.361, cuyo contenido
se incorpora en la presente memoria descriptiva por referencia, o
por coagulación de micropartículas sólidas revestidas por una
solución polimérica y administradas mediante un atomizador
ultrasónico (nebulizador) a un medio líquido que es un no disolvente
para el polímero de revestimiento, pero en el que el no disolvente
de medio líquido es capaz de extraer el disolvente de la solución
de polímero de revestimiento alrededor de las micropartículas
sólidas revestidas. Dependiendo de la concentración de solución
polimérica para recubrir las micropartículas, el número de
micropartículas unidas originales en las micropartículas revestidas
puede variar de 1 a varios cientos con un diámetro medio de una
micropartícula revestida que oscila entre 0,5 \mum a 100
\mum.
El siguiente procedimiento se refiere a la
preparación de intercambiadores de cationes cargados de péptido y/o
proteína recubiertos (en adelante cargado de péptido) mediante
nebulización. El copolímero recubierto de interés se disuelve en un
disolvente, como acetonitrilo, acetato de etilo o formato de etilo a
una concentración de entre 10 y 30% (P/P). Un peso suficiente de
esta solución se usa para la dispersión del CE cargado de péptido
de forma que la proporción en peso de CE cargado de péptido
respecto a copolímero de revestimiento oscila de aproximadamente
30:70 a aproximadamente 80:20. La dispersión se consigue mediante
homogeneización a alta velocidad. La dispersión se alimenta a un
intervalo de flujo de entre 1ml/min a 10 ml/min en una cánula de
atomización ultrasónica con frecuencia variable -esta frecuencia se
puede alterar de 12kHz a 35 kHz- una mayor frecuencia permite tasas
de flujo mayores mientras que se mantienen las características de
las partículas. Así se nebuliza la dispersión a un colector hecho
de al menos 1 a 10 veces isopropanol o etanol en exceso (comparado
con el volumen de disolvente de copolímero de revestimiento usado)
que contiene suficientes gránulos de nieve carbónica (normalmente
0,5 - 1Kg en peso por litro de IPA) de forma que la temperatura de
la suspensión permanece entre -70º y -80ºC durante la nebulización.
Esta suspensión se remueve a entre 300 y 700 rpm dependiendo de su
volumen. En el caso de acetonitrilo como disolvente, las gotas de
nebulización se congelarán inmediatamente en contacto con la
suspensión. Una vez la nebulización está completa se permite que la
dispersión entera se descongele voluntariamente a entre 10ºC y
temperatura ambiente antes del filtrado al vacío. Se aclaran los
residuos de filtrado con el agua desionizada para remover el exceso
de no-disolvente. Las partículas obtenidas tienen
la apariencia de microesferas suaves en el caso de un copolímero de
revestimiento d,l-láctido predominante; aparecen
ligeramente arrugadas cuando el copolímero de revestimiento está
principalmente basado en l-láctido.
La capacidad de unión de un intercambiador iónico
de una micropartícula se puede determinar como sigue. Por ejemplo,
para una micropartícula intercambiadora de cationes, se neutralizan
grupos carboxílicos disponibles, en una masa predeterminada de las
micropartículas, usando solución de carbonato sódico acuosa diluida
fría de normalidad conocida. Se aislan las micropartículas
neutralizadas mediante filtración y se aclaran bien con agua
desionizada fría y luego se secan al aire. Luego se incuban las
micropartículas sólidas en solución diluida de hidrocloruro
Pilocarpine de concentración conocida para aportar un pequeño
exceso del fármaco básico sobre aquél predicho de los datos de
capacidad de unión. Se monitoriza la concentación del ClH
Pilocarpine restante en el medio acuoso durante un periodo de tiempo
hasta que no se pueda registrar ningún cambio significativo en la
toma de base por las micropartículas. El porcentaje de base
inmovilizada en las micropartículas se determina con los datos de
agotamiento y luego se comprueban mediante análisis elemental para
nitrógeno.
La capacidad de unión del intercambiador aniónico
(partículas amidadas) se determina por (1) análisis elemental para
nitrógeno y (2) extensión de la unión a Naproxeno midiendo la
cantidad de Naproxeno eliminado de una solución diluida usando
HPLC. Esto último se confirma mediante liberación del Naproxeno
inmovilizado con una solución de hidróxido sódico diluido de
concentración conocida.
Las micropartículas unidas o las micropartículas
revestidas de esta invención se pueden administrar a un paciente por
las vías de administración bien conocidas por aquellos con
habilidad normal en la técnica, como administración parenteral,
administración oral o administración tópica. Preferentemente, se
administra como un polvo o una suspensión por vía intranasal o como
inhalante a través del sistema pulmonar. Cuando se administra de
forma parenteral es preferible que se administre como una
dispersión en un medio acuoso isotónico o en un poliéster líquido
absorbible no acuoso formador de gel como se describe en la Patente
de EEUU Nº 5.612.052, cuyo contenido se incorpora a la presente
memoria por referencia. Las formulaciones que comprende
micropartículas unidas y/o micropartículas revestidas de la presente
invención también pueden incluir una variedad de componentes
opcionales. Dichos componentes incluyen, pero no se limitan a,
surfactantes, agentes controladores de la viscosidad, agentes
medicinales, moduladores del crecimiento celular, colorantes,
agentes agrupadores, antioxidantes, otros polímeros como
carboximetilcelulosa, gomas como goma guar, ceras/aceite como
aceite de castor, glicerol, dibutil ftalato y
di(2-etilhexil)ftalato al igual que
muchos otros. Si se usan, dichos componentes opcionales comprenden
desde aproximadamente 0,1% a aproximadamente 20%, preferentemente
de aproximadamente 0,5% a aproximadamente 5% de la formulación
total.
Las dosis efectivas de micropartículas unidas o
micropartículas revestidas a administrar a un paciente se pueden
determinar por el médico o veterinario y dependerán de las dosis
apropiadas contempladas para el péptido(s) y/o
proteína(s) y la cantidad de péptido(s) y/o
proteína(s) inmovilizados en las micropartículas. Dichas
dosis serán conocidas o se determinarán por una persona con
habilidad normal en la técnica.
La preparación de formadores de gel se presenta
en la Patente de EEUU Nº 5.612.052, cuyo contenido se incorpora a la
presente memoria descriptiva por referencia. Debajo se describen
ejemplos específicos de formadores de gel.
Carbonato/Glicólido y Polietilen
Glicol-400 (GF-1): una caldera
de resina secada a la llama con un agitador mecánico con una entrada
de nitrógeno se cargó con polietilén glicol-400
(0,299 mol, 119,5 g), octoato estannoso (0,2 M en tolueno, 4.700
ml, 0,946 mmol), glicólido (1,78 mol, 206,5 g) y carbonato de
trimetileno (2,65 mol, 270 g). El reactor se purgó con argón varias
veces y luego se calentó hasta la fusión y luego se calentó y
removió a aproximadamente 150ºC durante aproximadamente 12 horas.
Al finalizar la reacción, se bajó la temperatura manteniendo la
fluidez y se eliminó el exceso de monómero a presión reducida. Se
analizó el polímero resultante mediante infrarrojos y NMR para la
composición y en cromatografía de exclusión molecular para el peso
molecular.
Carbonato/Glicólido y Polietilen
Glicol-400 (GF-2): El copolímero
del título se sintetizó según el procedimiento descrito para
GF-1 pero usando polietilén
glicol-400 (1,063 mol, 425 g), octoacto estannoso
(0,2 M en tolueno, 1,760 ml, 0,35 mmol), glicólido (0,279 mol, 32,4
g) y carbonato de trimetileno (0,418 mol, 42,6 g) y se removió
durante aproximadamente 9 horas.
Carbonato/Glicólido y Polietilén
Glicol-1500 (GF-3): El
copolímero del título se sintetizó según el procedimiento descrito
para GF-1 pero usando polietilén
glicol-1500 (0,267 mol, 400 g), octoato estannoso
(0,2 M en tolueno, 1.200 ml, 0,247 mmol), glicólido (0,097 mol,
11,2 g) y carbonato de trimetileno (0,87 mol, 88,7 g) y se removió
durante aproximadamente 13 horas.
Se cargó un reactor de cristal de 500 ml con
242,63 g de glicólido (Purac Biochem, Arkelsedijk, Países Bajos) y
57,37 g de ácido cítrico (Aldrich, Gillingham, Dorset, Reino
Unido). Además se había secado el ácido cítrico sobre gel de sílice
(Fisher Scientific, Loughborough, Leics., Reino Unido) en un
aparato Abderhalden (Aldrich, St. Louis, Missouri, EEUU). Se
introdujo el reactor en un baño de aceite a aproximadamente 40ºC y
se puso al vacío (0,04 mbar) durante aproximadamente 30 minutos.
Luego se bajó el baño y se subió su temperatura a aproximadamente
110ºC. Una vez se alcanzó esta temperatura se puso el reactor en
una atmósfera de nitrógeno libre de oxígeno y se volvió a
introducir. Se removió el contenido a aproximadamente 100 rpm usando
un agitador Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Alemania). Una
vez que el contenido del reactor se fundió, se añadió 1,09 ml de
una solución de 2- etil-hexanoato estannoso 0,1 M
(Sigma, St. Louis, Missouri, EEUU) en tolueno (Riedel
de-Haen, Seelze, Alemania) (ratio stoiquiométrico de
50 ppm). Se volvió a aplicar el vacío por medio de una entrada de
nitrógeno líquido durante aproximadamente 30 segundos para eliminar
el tolueno sin retirar cantidades significativas del monómero.
Luego se subió la temperatura del baño de aceite a aproximadamente
120ºC durante aproximadamente 5 minutos antes de volverla a subir a
aproximadamente 150ºC. Se mantuvo a esta temperatura durante
aproximadamente 4 horas constantemente removiéndolo mecánicamente a
aproximadamente 100 rpm. Se obtuvo el polímero del
título.
título.
Se obtuvo el polímero del título siguiendo el
procedimiento del Ejemplo Ia, pero usando 257,40 g de glicólido,
42,60 g de ácido cítrico y 1,10 ml de una solución de
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M en
tolueno (relación estequiométrica de 50 ppm).
Una caldera de resina secada a la llama equipada
con un agitador mecánico y una entrada de argón se cargó con
glicólido (2,586 mol, 300 g), ácido cítrico anhidro (0,172 mol, 33
g), y octoato estannoso (0,2M en tolueno, 862 ml, 0,172 mmol). Se
purgaron el reactor de polimerización y su contenido con argón seco
varias veces. Tras fundir la carga de polimerización, se calentaron
los reactivos y se removieron a aproximadamente 160ºC hasta que el
polímero empezó a precipitar de la mezcla fundida. Poco después de
la precipitación parcial, se dejó de remover y se continuó con la
reacción a aproximadamente 160ºC durante aproximadamente 2 horas.
Al concluir la polimerización, se bajó la temperatura por debajo de
120ºC y se retiró el exceso de monómero a presión reducida. La
composición del polímero aislado se verificó usando infrarrojos y
espectroscopia NMR.
Inicialmente se granularon cada uno de los
polímeros de los Ejemplos I(a), I(b) y I(c),
usando un granulador Knife (IKA, Staufen, Alemania). Luego se
micronizaron en un Micronizador Aljet (Fluid Energy Aljet,
Plumsteadsville, Pensilvania, EEUU) usando un chorro de nitrógeno
seco presurizado. El Ejemplo I(a) tenía un tamaño medio de
diámetro de partícula de 24,64 \mum por análisis en un Malvern
Mastersizer/E (Malvern, Worcs., Reino Unido) usando un modelo de
distribución de volumen y aceite de silicona 200/5 cS (Dow Corning,
Seneffe, Bélgica) como dispersante. Los Ejemplos I(b) y
I(c) tenían tamaños medios de diámetro de partícula de 4,69
\mum y 6,31 \mum, respectivamente, tras la micronización.
Se dispersaron muestras de cincuenta gramos de
los Ejemplos I(a), I(b), y I(c) en 2 l de
acetona (Riedel de-Haen, Seelze, Alemania) y se
pusieron en un baño de ultrasonidos (Branson Ultrasonics BV, Soest,
Países Bajos) durante aproximadamente 30 minutos. Durante este
tiempo también se homogenizó la dispersión a aproximadamente 9.500
rpm usando un homogenizador Ultraturrax T25 (IKA, Staufen,
Alemania). Tras esta etapa de baño de ultrasonidos/homogeneización
se centrifugó la dispersión a aproximadamente 5.000 rpm durante
aproximadamente 30 minutos en una centrifugadora Sorvall (Sorvall,
Wilmington, Delaware, EEUU). Se desechó el sobrenadante, se
volvieron a suspender los residuos de centrifugado en acetona
fresca, y se repitió la etapa de baño de
ultrasonidos/homogeneización. Una vez completa la segunda
homogeneización, se desechó el sobrenadante y se volvieron a
suspender los residuos en agua desionizada. Se realizó una etapa
final de baño de ultrasonidos/homogeneización para retirar cualquier
acetona restante y se volvió a centrifugar la dispersión a
aproximadamente 5.000 rpm durante aproximadamente 30
minutos.
minutos.
Se volvieron a suspender los residuos de
centrifugado en agua desionizada fresca y se monitorizó el pH de la
dispersión. Se añadieron volúmenes suficientes de solución de
carbonato sódico 0,2M en cada caso (removiendo) para elevar el pH a
entre aproximadamente pH 8 y aproximadamente pH 9. Se permitió
remover las dispersiones durante aproximadamente 30 minutos antes
de filtrarlas al vacío sobre un papel de filtro (Whatman Intl.
Ltd., Maidstone, Kent, Reino Unido) Whatman nº 1 (24 cm de
diámetro). Se aclararon los residuos de filtrado con más agua
desionizada, se congelaron, y se liofilizaron en un Liofilizador
Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, Reino
Unido).
Se monitorizó la purificación mediante
calorimetría de exploración diferencial (DSC) usando un TA DSC912S
(TA Instruments, New Castle, Delaware, EEUU) con una tasa de
calentamiento de 10ºC/min. Los termogramas DSC obtenidos en cada
caso no mostraron ningún pico endotérmico para un glicólido
monomérico pero mostraron endotermos a 176ºC, 178ºC, y 180ºC para
los Ejemplos I(a), I(b), y I(c),
respectivamente.
La micropartícula del título se sintetizó según
el procedimiento descrito en el Ejemplo I(c) pero usando
glicólido (2,586 mol, 300 g), ácido málico anhidro (0,172 mol, 23
g), y octoacto estannoso (0,2M en tolueno, 862 ml, 0,172 mmol). Se
usó Calorimetría de Exploración Diferencial para determinar la
temperatura de fusión del polímero (Tm = 206ºC).
Se granuló el polímero sólido para conseguir un
diámetro de partícula medio de aproximadamente 125 \mum usando un
moledor Wiley. Se consiguió una mayor reducción del tamaño de la
partícula a aproximadamente 5-10 \mum usando un
molino de chorro que recibía nitrógeno seco presurizado. Se
aclararon las micropartículas resultantes con acetona para retirar
restos del monómero y oligómeros de bajo peso molecular. Luego se
secó el producto a presión reducida a 40ºC hasta su uso. Se
determinó el diámetro medio de la micropartícula seca usando un
analizador de tamaño de partícula.
Ejemplo
III
Se cargó un reactor de cristal de 500 ml con
264,65 g de glicólido (Purac Biochem, Arkelsedijk, Países Bajoa) y
34,22 g de ácido L-tartárico (Riedel
de-Haen, Seelze, Alemania). El ácido tartárico
además se había secado sobre gel de sílice (Fisher Scientific,
Loughborough, Leics., Reino Unido) en un aparato Abderhalden
(Aldrich, St. Louis, MO). Se introdujo el reactor en un baño de
aceite a aproximadamente 40ºC y se puso al vacío (0,04 mbar) durante
aproximadamente 30 minutos. Luego se disminuyó el baño y se subió
su temperatura a aproximadamente 110ºC. Una vez se alcanzó esta
temperatura se puso el reactor en una atmósfera de nitrógeno libre
de oxígeno y se volvió a introducir. Se removió el contenido a
aproximadamente 100 rpm usando un agitador Heidolph (Heidolph
Elektro GmbH, Kelheim, Alemania). Una vez fundido el contenido del
reactor, se añadió 1,14 ml de una solución de
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M
(Sigma, St. Louis, Missouri, EEUU) en tolueno (Riedel
de-Haen, Seelze, Alemania) (relación
estequiométrica de 50 ppm). Se volvió a aplicar un vacío mediante
una entrada de nitrógeno líquido durante aproximadamente 30 segundos
para retirar el tolueno sin una pérdida significativa del monómero.
Luego se subió la temperatura del baño de aceite a aproximadamente
120ºC durante aproximadamente 5 minutos antes de volver a elevarla
a aproximadamente 150ºC. Se mantuvo a esta temperatura durante
aproximadamente 4 horas removiendo constantemente de forma mecánica
a aproximadamente 100 rpm. Se obtuvo el polímero del título.
El Ejemplo III(a) se granuló inicialmente
usando un granulador Knife (IKA, Staufen, Alemania). Luego se
micronizó en un Micronizador Aljet (Fluid Energy Aljet,
Plumsteadsville, Pennsylvania, EEUU) usando un chorro de nitrógeno
seco presurizado. Esto dio un diámetro medio de partícula de
12,42\mum mediante análisis en un Malvern Mastersizer/E (Malvern,
Worcs., Reino Unido) usando un modelo de distribución de volumen y
aceite de silicona 200/5 cS (Dow Corning, Seneffe, Bélgica) como
dispersante.
Se dispersó una muestra de 50 g del Ejemplo
III(a) en 2 l de acetona (Riedel de-Haen) y
se puso en un baño de ultrasonidos (Branson Ultrasonics BV, Soest,
Países Bajos) durante aproximadamente 30 minutos. Durante este
tiempo también se homogenizó la dispersión a aproximadamente 9.500
rpm usando un homogenizador Ultra-turrax T25 (IKA,
Staufen, Alemania). Tras esta etapa de baño de
ultrasonidos/homogeneización se centrifugó la dispersión a
aproximadamente 5.000 rpm durante aproximadamente 30 minutos en una
centrifugadora Sorvall (Sorvall, Wilmington, Delaware, EEUU). Se
desechó el sobrenadante, se volvieron a suspender los residuos de
centrifugado en acetona fresca, y se repitió la etapa de baño de
ultrasonidos/homogeneización. Una vez completa la segunda
homogeneización, se desechó el sobrenadante y se volvieron a
suspender los residuos en agua desionizada. Se realizó una etapa
final de baño de ultrasonidos/homogeneización para retirar
cualquier acetona restante y se volvió a centrifugar la dispersión
a aproximadamente 5.000 rpm durante aproximadamente 30 minutos.
Se volvieron a suspender los residuos de
centrifugado en agua desionizada fresca y se monitorizó el pH de la
dispersión. Se añadió un volumen suficiente de carbonato sódico
0,2M para subir el pH a entre aproximadamente pH 8 y
aproximadamente pH 9. Se permitió remover la dispersión durante
aproximadamente 30 minutos antes de filtrarla al vacío sobre papel
de filtro (Whatman Intl. Ltd., Maidstone, Kent, Reino Unido)
Whatman nº 1 (24 cm de diámetro). Se aclaró el residuo del filtro
con más agua desionizada, se congeló, y se liofilizó en un
Liofilizador Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex,
Reino Unido).
Se monitorizó la purificación mediante DSC usando
un TA DSC912S (TA Instruments New Castle, Delaware, EEUU) con una
tasa de calentamiento de aproximadamente 10ºC/min. El termograma DSC
obtenido no mostró ningún pico endotérmico para el glicólido
monomérico pero mostró una endoterma a 181ºC.
Se sintetizó el polímero del título según el
procedimiento descrito para el Ejemplo I(c) pero usando
glicólido (2,586 mol, 300 g), ácido tartárico anhidro (0,172 mol,
26,8 g) y octoato estannoso (0,2M en tolueno, 862 ml, 0,0172 mmol).
Se usó Calorimetría de Exploración Diferencial para determinar la
temperatura de fusión del polímero (Tm = 204ºC).
Se granuló el polímero sólido para conseguir un
diámetro medio de partícula de aproximadamente 125\mum usando un
granulador Wiley. Se consiguió una mayor reducción del tamaño de la
partícula a aproximadamente 5-10 \mum de diámetro
usando un molino de chorro que recibía nitrógeno seco presurizado.
Las micropartículas resultantes se aclararon con acetona para
retirar restos de monómero y oligómeros de bajo peso molecular.
Luego se secó el producto a presión reducida a aproximadamente 40ºC
hasta su uso. El diámetro medio de la micropartícula seca se
determinó usando un analizador de tamaño de partícula.
La preparación de un intercambiador de aniones se
consigue en dos etapas. Primero, se prepara un poliglicólido de
bajo peso molecular usando un procedimiento similar al Ejemplo
I(c), pero usando la siguiente carga de polimerización:
glicólido (1 mol, 116 g), 1,3 propanodiol como iniciador (30 mmol,
2,22 g) y octoato estannoso (0,03 mmol). Luego se realiza la
reducción del tamaño y purificación del polímero también como se
describe en el Ejemplo I(c). En la segunda etapa, las
micropartículas prácticamente no iónicas se incuban en solución
diluida caliente (\sim80ºC) de una diamina, por ejemplo
hexanodiamina de concentración conocida en dioxano con argón. La
concentración de la diamina en dioxano se determina por
acidimetría. Cuando la reacción prácticamente cesa, se separan las
micropartículas amidadas mediante filtración, se aclaran con
dioxano, y se secan a presión reducida. La capacidad de unión del
intercambiador de aniones (partículas amidadas) se determina por
(1) análisis elemental para nitrógeno y (2) cantidad de la unión a
Naproxeno midiendo la cantidad de fármaco eliminado de una solución
diluida usando HPLC. Esto último se confirma liberando el Naproxeno
inmovilizado con una solución de hidróxido sódico diluida de
concentración conocida.
Se llenó un reactor de cristal con 235,01 g de
l-láctido (Purac Biochem, Arkelsedijk, Países
Bajos), 63,09 g de glicólido (Purac Biochem, Arkelsedijk, Países
Bajos) y 1,90 g de propanodiol (Riedel de-Haen,
Seelze, Alemania) y luego se añadieron 3,96 ml de solución
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M
(Sigma, St. Louis, Missouri, EEUU) en tolueno (Riedel
de-haen, Seelze, Alemania)(relación estequiométrica
de 200 ppm). Tras secado al vacío durante aproximadamente una hora
para retirar el tolueno, se puso el reactor en una atmósfera de
nitrógeno libre de oxígeno y se introdujo en un baño de aceite
precalentado a aproximadamente 160ºC. Se removió el contenido del
reactor a aproximadamente 100 rpm con un agitador Heidolph
(Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Alemania). Una vez el contenido se
fundió, se incrementó la temperatura a aproximadamente 180ºC y se
mantuvo a este nivel durante aproximadamente 3 horas. Se obtuvo un
copolímero amorfo. Se observó que el copolímero tenía un peso
molecular (PM) de aproximadamente 12.500 g/mol mediante
cromatografía de exclusión molecular (GPC) en una Bomba Waters 510,
Refractómetro Diferencial Waters 410 (Waters, Milford,
Massachusetts, EEUU) con detección con poca dispersión en un Wyatt
Minidawn Light Scattering Detector (Wyatt Technology Corporation,
Santa Barbara, California, EEUU).
El producto del título se sintetizó según el
procedimiento del Ejemplo V(a) pero usando 274,31 g de
l-láctido, 24,55 g de glicólido, 1,14 g de
propanodiol y 3,89 ml de una solución de
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M en
tolueno (relación estequiométrica de 200 ppm). Se obtuvo un
copolímero cristalino. Se observó que el copolímero tenía un peso
molecular de aproximadamente 20.780 g/mol mediante GPC.
El producto del título se obtuvo siguiendo el
procedimiento del Ejemplo V(a) pero usando 274,31 g de
d,l-láctido, 24,55 g de glicólido, 1,14 g de
propanodiol y 3,86 ml de una solución de
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M en
tolueno (relación estequiométrica de 200 ppm). Se obtuvo un
copolímero amorfo. Se observó que el copolímero tenía un peso
molecular de aproximadamente 20.650 g/mol por GPC.
El producto del título se obtuvo siguiendo el
procedimiento del Ejemplo V(a) pero usando 239,09 g de
l-láctido, 59,77 g de d,l-láctido
(Purac Biochem, Arkelsedijk, Países Bajos) y 1,14 g de propanodiol
y se añadieron 3,96 ml de una solución de
2-etil-hexanoato estannoso 0,1M en
tolueno (relación estequiométrica de 200 ppm). Se obtuvo un
copolímero amorfo. Se observó que el copolímero tenía un peso
molecular (Pm) de 22.320 g/mol mediante GPC. Mostró una transición
cristalina a 48ºC mediante DSC.
Se lavó cada uno de los Ejemplos V(a),
V(b), y V(c) mediante nebulización de una solución al
30% (P/P) en acetonitrilo (Labscan, Dublín, Irlanda) a 8 ml/min en
agua desionizada enfriada a aproximadamente 2ºC en un reactor
recubierto de 6 l unido a un baño circulante y removido a
aproximadamente 350 rpm con un agitador Heidolph (Heidolph Elektro
GmbH, Kelheim, Alemania). Se introdujeron las soluciones en una
cánula de Atomización Vibra-Cell VC 50 (Bioblock,
Ilkirch, Francia) usando una bomba Masterflex (Cole Parmer
Instrument Co., Niles, Illinois, EEUU) y se consiguió la
nebulización usando una frecuencia de ultrasonidos de 12 kHz. Se
filtraron las dispersiones obtenidas en papeles filtro (Whatman
Intl. Ltd., Maidstone, Kent, Reino Unido) Whatman Nº 1 (24 cm de
diámetro) y se aclararon los residuos de filtrado con agua
desionizada, se congelaron, y se liofilizaron en un Liofilizador
Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, Reino
Unido).
Se confirmó la pureza mediante DSC usando un TA
DSC912s (TA Instruments, New Castle, Delaware, EEUU) con una tasa de
calentamiento de 10ºC/min que mostró transiciones cristalinas (Tg)
a 44ºC, 49ºC, 45ºC y 48ºC para los Ejemplos V(a),
V(b), V(c) y V(d), respectivamente.
Ejemplo
VI(a)
Se dispersaron cuatro gramos de cada una de las
sales sódicas de los Ejemplos I(a), I(b), I(c)
y II(a) en soluciones que contienen 1,33 g de la base libre
del Péptido A (Kinerton Ltd., Dublín, Irlanda) disuelta en 70 ml de
agua desionizada. Las dispersiones se incubaron a temperatura
ambiente removiendo durante aproximadamente dos horas antes del
filtrado sobre papel de filtro Whatman Nº 1 de 9 cm de diámetro
(Whatman Intl. Ltd., Maidstone, Kent, Reino Unido). Se aclararon
los residuos de filtrado con más agua desionizada, se congelaron, y
se liofilizaron en un Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West
Sussex, Reino Unido). Luego se analizaron las muestras para
nitrógeno mediante análisis elemental para determinar la cantidad
de Péptido A unido. Se obtuvieron los siguientes
resultados:
resultados:
| Ejemplo | CE Ex.-# | CE Polímero | % en peso de |
| Péptido A Unido | |||
| VI(a) (i) | I(a) | 7/1 PGCA | 24,52% |
| VI(a) (ii) | I(b) | 10/1 PGCA | 12,60% |
| VI(a) (iii) | I(c) | 15/1 PGCA | 19,29% |
| VI(a) (iv) | III(a) | 10/1 PGTA | 17,60% |
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo
VI(a) y usando 4 g de cada una de las sales sódicas de los
Ejemplos I(a), I(b), I(c) y II(a) y 1,33
g de la base libre del Péptido B (Kinerton Ltd., Dublín, Irlanda)
se obtuvieron micropartículas unidas de los Ejemplos I(a),
I(b) y I(c) con el péptido B allí inmovilizado. Se
analizaron las muestras por el contenido de nitrógeno mediante
análisis elemental para determinar la cantidad de Péptido B unido.
Los resultados obtenidos se muestran debajo:
| Ejemplo | CE Ex.-# | CE Polímero | % en peso de |
| Péptido B Unido | |||
| VI(b) (i) | I(a) | 7/1 PGCA | 25,20% |
| VI(b) (ii) | I(b) | 10/1 PGCA | 13,10% |
| VI(b) (iii) | I(c) | 15/1 PGCA | 19,64% |
| VI(b) (iv) | III(a) | 10/1 PGTA | 14,23% |
Se dispersaron intercambiadores de cationes
cargados de polipéptido en soluciones de acetonitrilo (Labscan,
Dublín, Irlanda) de copolímeros de revestimiento, indicados abajo.
Esta dispersión se consiguió homogeneizando con un
Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen, Alemania) a
aproximadamente 9.500 rpm durante aproximadamente 5 minutos. La
concentración de las soluciones copolímero de
revestimiento/acetonitrilo oscilaron desde 12,5% hasta 25% (P/P) y
la proporción de copolímero de revestimiento respecto a
intercambiador de cationes cargado con polipéptido osciló desde 1:1
a 1,3:1 en peso.
Tras la dispersión, la dispersión se introdujo en
una cánula de atomización Vibra-Cell VC50
(Bioblock, Illkirch, Francia) con una frecuencia de sonicación de
16 kHz usando una bomba de pistón cerámica (FMI, Oyster Bay, N.Y.,
EEUU) con una tasa de flujo de 2 ml/min. Al alcanzar la cánula la
dispersión se nebulizó a alcohol isopropílico (IPA) (Labscan,
Dublín, Irlanda) enfriado a aproximadamente -80ºC por adición de
gránulos de nieve carbónica (A.I.G., Dublín, Irlanda). El IPA actuó
como un no disolvente colector y se removió a aproximadamente 300
rpm usando un agitador Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim,
Alemania). Una vez completa la nebulización, se permitió que toda
la dispersión se calentara a una temperatura de entre
aproximadamente 10ºC y aproximadamente temperatura ambiente. Luego
se recuperaron las micropartículas revestidas mediante filtración
al vacío sobre un papel filtro Whatman Nº 1 (Whatman Intl. Ltd.,
Maidstone, Kent, Reino Unido). Se aclaró el residuo de filtrado con
agua desionizada, se congeló y se liofilizó en un liofilizador
Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, Reino Unido).
Se analizaron las micropartículas revestidas resultantes para el
tamaño usando el Malvern Mastersizer/E (Malvern, Worcs., Reino
Unido) y Tween 20 al 1% en agua como dispersante. También se
analizaron las micropartículas revestidas por el contenido en
nitrógeno mediante análisis elemental para determinar el contenido
en péptido.
La tabla inferior representa los diversos
experimentos de revestimiento realizados:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página
siguiente)
Todas las muestras se cribaron en una criba de
180 \mum (Bioblock, Illkirch, Francia) antes de un examen in
vivo y/o in vitro.
Se puede probar in vitro una
micropartícula unida o una micropartícula revestida para comprobar
la tasa de liberación de un péptido unido o una proteína unida por
el siguiente procedimiento. Se pone una alícuota de una
micropartícula unida o micropartícula revestida que tiene una masa
de aproximadamente 50 mg en un sistema de flujo celular continuo
donde una solución tampón fosfato a aproximadamente pH 7,2 y a
aproximadamente 37ºC pasa a través de toda la masa de las
micropartículas unidas o micropartículas revestidas a una tasa de
aproximadamente 45 ml/h. Se recogen muestras del tampón que
contienen el fármaco liberado a aproximadamente 4ºC y se analizan
por las concentraciones de péptido o proteína a intervalos de 1 ó 2
días. Se determina el perfil de liberación de cada micropartícula
tras un periodo de 2 semanas.
Se puede probar una micropartícula unida o
micropartícula revestidas para comprobar la tasa de liberación de un
péptido unido o una proteína unida en un sistema in vivo por
el siguiente procedimiento. Se administran muestras a ratas Wistar
machos (Bioresources, Trinity College, Dublín, Irlanda) mediante
inyección intramuscular en el muslo. El medio en suspensión está
formado por carboximetilcelulosa al 3% y Tween 20 al 1% en solución
salina. Para muestras cargadas de Péptido A la dosis efectiva
equivalente es de 40\mug/Kg/día. La dosis para muestras cargadas
de Péptido B es 1 mg/Kg/día. Se tomaron muestras mediante punción
cardiaca y se monitorizaron los niveles de péptido en plasma
mediante radioinmunoensayo (RIA) específico para Péptido A y para
Péptido B. En el caso de muestras cargadas de Péptido A (el Péptido
A es un análogo de LHRH), también se usa un RIA de testosterona
para monitorizar la supresión de testosterona. Como alternativa al
medio suspensión, en algunos casos se pueden usar formadores de
gel. Los resultados se muestran en las Tablas A y B, abajo.
| Péptido A | Péptido A (>150pg/ml) | Testosterona (<1ng/ml) |
| Ejemplos | Días | Días |
| VII (a) | 20 | 21 |
| VII (b) | 10 | 10 |
| VII (c) | 2 | 11 |
| VII (d) | 2 | 11 |
| VII (e) | 2 | 13 |
| VII (f) | 2 | 16 |
| VII (a) | 25 | 44 |
| En formador de gel |
| Péptido B | Péptido B (>1000 pg/ml) |
| Ejemplos | Días |
| VII (g) | No probado |
| VII (h) | No probado |
| VII (i) | No probado |
| VII (j) | 15 |
| VII (k) | 10 |
| VII (l) | 10 |
Se dispersaron aproximadamente 1,06 g de
intercambiador de cationes del Ejemplo I(c) (no unido al
polipéptido) en una solución al 25,24% (P/P) de copolímero de
revestimiento del Ejemplo V(a) en acetonitrilo (Labscan,
Dublín, Irlanda) tal que la proporción de intercambiador de
cationes con respecto a copolímero de revestimiento era
aproximadamente 1,03:1 en peso. Esta dispersión se consiguió
homogenizando con un Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen,
Alemania) a aproximadamente 9.500 rpm durante aproximadamente 5
minutos.
Tras la dispersión, se introdujo la dispersión en
una cánula de atomización Vibra-Cell VC50
(Bioblock, Illkirch, Francia) con una frecuencia de sonicación de
16 kHz usando una bomba de pistón de cerámica (FMI, Oyster Bay,
N.Y., EEUU) a una tasa de flujo de 2 ml/min. Al alcanzar la cánula,
la dispersión se nebulizó a IPA (Labscan, Dublín, Irlanda) a
temperatura ambiente (17 a 22ºC). Este IPA actuó como un no
disolvente colector y se removió a aproximadamente 300 rpm usando
un agitador Heidolph (Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Alemania). Una
vez completa la nebulización, se siguió removiendo la dispersión
durante aproximadamente otros 60 minutos a temperatura ambiente
antes de recuperar las partículas revestidas mediante filtración al
vacío sobre papel filtro Whatman Nº 1 (Whatman Intl. Ltd.,
Maidstone, Kent, Reino Unido). Se aclaró el residuo de filtrado con
agua desionizada, se congeló y se liofilizó en un liofilizador
Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex, Reino Unido).
Se analizaron las partículas resultantes para el tamaño de
partícula usando el Malvern Mastersizer/E (Malvern, Worcs., Reino
Unido) y Tween 20 al 1% en agua como dispersante. Las partículas
resultantes tenían un tamaño medio de partícula (d(0,5)) de
84,75\mum.
La nebulización se realizó sustancialmente según
el procedimiento del Ejemplo VIII(a) pero usando
aproximadamente 0,99 g de intercambiador de cationes del Ejemplo
I(c) (no unido al polipéptido) dispersado en una solución al
24,88% (P/P) de copolímero de revestimiento del Ejemplo V(a)
en acetato de etilo (Riedel de-Haen, Seelze,
Alemania) tal que la proporción de intercambiador de cationes
respecto a copolímero de revestimiento era aproximadamente 0,96:1 en
peso. Las partículas resultantes tenían un tamaño medio de
partícula (d(0,5)) de 100,56\mum.
Se dispersó aproximadamente 1,02 g de
intercambiador de cationes del Ejemplo I(c) (no unido a
polipéptido) en una solución al 15,14% (P/P) de copolímero de
revestimiento del Ejemplo V(a) en acetato de etilo (Riedel
de-Haen) tal que la proporción de intercambiador de
cationes respecto a copolímero de revestimiento era aproximadamente
1,05:1 en peso. Esta dispersión se consiguió homogenizando con un
Ultra-turrax T25 (IKA, Staufen, Alemania) a
aproximadamente 9.500 rpm durante aproximadamente 5 minutos.
Tras la dispersión, ésta se introdujo en un
nebulizador Martin Walter 400 GSIP (Sodeva, Le Bouget du Lac,
Francia) con una frecuencia ultrasónica de aproximadamente 34,6 kHz
usando una bomba de pistón cerámica (FMI, Oyster Bay, N.Y., EEUU) a
una tasa de flujo de 5 ml/min. Al llegar a la cánula, la dispersión
se nebulizó a IPA (Labscan, Dublín, Irlanda) enfriada a
aproximadamente -77ºC por la adición de gránulos de nieve carbónica
(A.I.G., Dublín, Irlanda). Este IPA actuó como no disolvente
colector y se removió a 300 rpm usando un agitador Heidolph
(Heidolph Elektro GmbH, Kelheim, Alemania). Una vez completa la
nebulización, se recuperaron las partículas revestidas mediante
filtración al vacío sobre papel filtro Whatman Nº 1 (Whatman Intl.
Ltd., Maidstone, Kent, Reino Unido). Se aclaró el residuo de
filtrado con agua desionizada, se congeló y se liofilizó en un
liofilizador Edwards SuperModulyo (Edwards, Crawley, West Sussex,
Reino Unido). Se analizaron las partículas resultante para el
tamaño de la partícula usando un Malvern Mastersizer/E (Malvern,
Worcs., Reino Unido) y Tween 20 al 1% en agua como dispersante. Las
partículas resultantes tenían un tamaño medio de partícula
(d(0,5)) de 95,69\mum.
Aproximadamente 1,01 g de la sal sódica del
Ejemplo I(c) dispersa en una solución que contiene 0,25g de
la base libre del péptido C, que tiene la estructura
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr
NNH_{2} donde los do residuos Cys están unidos por una unión
disulfuro (Kinerton Ltd., Dublín, Irlanda), disuelta en 40 ml de
agua desionizada. La dispersión se incubó removiendo durante
aproximadamente 2 horas antes de filtrar sobre un papel filtro
Whatman Nº1 de 9 cm de diámetro (Whatman Intl. Ltd., Maidstone,
Kent, Reino Unido). Se aclaró el residuo de filtrado con más agua
desionizada, se congeló y se liofilizó en un Edwards SuperModulyo
(Edwards, Crawley, West Sussex, Reino Unido). Luego se envió la
muestra a análisis de nitrógeno para determinar la cantidad de
péptido unido, 20,21%.
Usando el procedimiento del Ejemplo IX(a)
pero usando aproximadamente 2,04 g de la sal sódica del Ejemplo
I(c) dispersa en una solución que contiene 0,51 g de la base
libre del péptido D, que tiene la estructura
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro
(Kinerton Ltd., Dublín, Irlanda), disuelta en 80 ml de agua
desionizada. Luego se envió la muestra para análisis de nitrógeno
para determinar la cantidad de péptido unido, 19,53%.
Las micropartículas unidas de los Ejemplos
IX(a) y IX(b) se revistieron como se describe en el
Ejemplo VII dando los siguientes resultados:
| Ex. Nº. | CE cargado | Copolímero de | Conc. (P/P) de | Copolímero de | Tamaño medio | % en peso |
| de péptido | revestimiento | copolímero de | revestimiento: | de partícula | de carga de | |
| revestimiento en | CE cargado de | (\mum) | péptido | |||
| actonitrilo | péptido | |||||
| X (a) | IX (a) | V (c) | 12,51% | 1:1 | 83,33 | 9,48% |
| X (b) | IX (b) | V (c) | 12,48% | 0,98:1 | 72,15 | 8,87% |
| X (c) | IX (b) | V (d) | 12,35% | 0,98:1 | 86,03 | 6,74% |
Se mezclaron micropartículas revestidas del
Ejemplo VII(a) (0,3 g) con un formador de gel líquido (2,0
ml de una mezcla 50/50 del componente "A" del Ejemplo I y el
componente "C" del Ejemplo III, ambos expuestos en la Patente
de EEUU Nº 5.612.052) en un cuerpo de jeringa de 5 ml usando un
micromezclador mecánico a aproximadamente 20 rpm durante
aproximadamente 10 minutos. Se pre-esterilizó el
formador de gel mediante calor seco y la mezcla se realizó usando
un agitador esterilizado en una campana de flujo laminar. Se expulsó
la formulación de la jeringa de 5 ml (tras introducir el émbolo) a
una jeringa más pequeña que se pretende usar para la administración
de la formulación. Se comprobó la uniformidad de la formulación
usando un microscopio óptico. Se reunieron las jeringas pequeñas
para su almacenamiento en un paquete seco y se guardaron a
aproximadamente 4ºC hasta su uso.
Claims (33)
1. Una micropartícula unida que comprende un
núcleo polimérico absorbible de heterocadena y uno o más péptidos,
una o más proteínas o una combinación de los mismos inmovilizados
iónicamente en dicho núcleo polimérico absorbible de cadena
heterogénea,
en la que cada péptido se selecciona
independientemente del grupo formado por péptido liberador de la
hormona de crecimiento (GHRP), hormona liberadora de la hormona
luteinizante (LHRH), somatostatina, bombesina, péptido liberador de
gastrina (GRP), calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona
estimulante del melanocito (MSH), factor de liberación de la hormona
de crecimiento (GRF), amilina, taquiquininas, secretina, hormona
paratiroidea (PTH), encafelina, endotelina, péptido liberador del
gen de la calcitonina (CGRP), neuromedinas, proteína relacionada con
la hormona paratiroidea (PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona
adrenocorticotropa (ACTH), péptido YY (PYY), péptido liberador de
glucagón (GLP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), péptido
activador de la adenil ciclasa pituitaria (PACAP), motilina,
sustancia P, neuropéptido Y (NPY), TSH y análogos y fragmentos de
los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
y
en la que cada proteína se selecciona
independientemente del grupo formado por hormona del crecimiento,
eritropoyetina, factor estimulante de la colonia de granulocitos,
factor estimulante de la colonia de granulocitos macrófagos e
interferones.
2. Una micropartícula unida según la
reivindicación 1 en la que dicho péptido, proteína o combinación de
los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos
comprende del 0,1% al 30% de la masa total de la micropartícula
unida.
3. Una micropartícula unida según la
reivindicación 2 en la que dicho núcleo polimérico absorbible de
heterocadena comprende unidades de glicolato.
4. Una micropartícula unida según la
reivindicación 3 en la que el núcelo polimérico absorbible de
heterocadena además comprende residuos de citrato, residuos de
tartrato o residuos de malato.
5. Una micropartícula unida según la
reivindicación 4 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a dicho residuo de citrato, dicho residuo de tartrato o
dicho residuo de malato es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1.
6. Una micropartícula unida según la
reivindicación 3 en la que dichas unidades de glicolato terminan
con una mitad carboxilo, o una mitad amino.
7. Una micropartícula revestida que comprende una
o más micropartículas unidas revestidas en un polímero absorbible
de revestimiento,
en la que dicha micropartícula unida comprende un
núcleo polimérico absorbible de heterocadena y uno o más péptidos,
una o más proteínas o una combinación de los mismos inmovilizados
iónicamente en dicho núcleo polimérico absorbible de
heterocadena,
en la que cada péptido se selecciona
inddependientemente del grupo formado por péptido liberador de la
hormona de crecimiento (GHRP), hormona liberadora de la hormona
luteinizante (LHRH), somatostatina, bombesina, péptido liberador de
gastrina (GRP), calcitonina, bradiquinina, galanina, hormona
estimulante del melanocito (MSH), factor de liberación de la hormona
de crecimiento (GRF), amilina, taquiquininas, secretina, hormona
paratiroidea (PTH), encafelina, endotelina, péptido liberador del
gen de la calcitonina (CGRP), neuromedinas, proteína relacionada con
la hormona paratiroidea (PTHrP), glucagón, neurotensina, hormona
adrenocorticotropa (ACTH), péptido YY (PYY), péptido liberador de
glucagón (GLP), péptido intestinal vasoactivo (VIP), péptido
activador de la adenil ciclasa pituitaria (PACAP), motilina,
sustancia P, neuropéptido Y (NPY), TSH y análogos y fragmentos de
los mismos o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos;
en la que cada proteína se selecciona
independientemente del grupo formado por hormona del crecimiento,
eritropoyetina, factor estimulante de la colonia de granulocitos,
factor estimulante de la colonia de granulocitos macrófagos e
interferones; y
en la que dicho núcleo polimérico absorbible de
heterocadena comprende unidades de glicolato.
8. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 7 en la que dicho péptido, proteína o combinación de
los mismos o sal famacéuticamente aceptable de los mismos comprende
del 0,1% al 30% de la masa total de la micropartícula unida, y en
la que dicho núcleo polimérico absorbible de heterocadena además
comprende residuos de citrato, residuos de tartrato o residuos de
malato.
9. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 8 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a residuos de citrato, a residuos de tartrato o a residuos
de malato es aproximadamente 7-1 a aproximadamente
20-1 y dichas unidades de glicolato terminan con una
mitad carboxilo o una mitad amina.
10. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 9 en la que dicho polímero absorbible de
revestimiento comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
11. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 10 en la que
la proporción de unidades basadas en
l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido
es aproximadamente 75-25 a aproximadamente
90-10; o
la proporción de unidades basadas en
l-láctido respecto a unidades basadas en
d,l-láctido es aproximadamente
80-20; o
la proporción de unidades basadas en
d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido
es aproximadamente 75-25 a aproximadamente
90-10.
12. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 9 en la que el polímero absorbible de revestimiento
constituye del 5 al 70% de la masa total de la micropartícula
revestida.
13. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 12 en la que el polímero absorbible de revestimiento
constituye el 20-60% y preferentemente el
20-50% de la masa total de la micropartícula
revestida.
14. Una composición farmacéutica que comprende
micropartículas unidas según la reivindicación 1 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
15. Una composición farmacéutica que comprende
las micropartículas unidas según la reivindicación 1, un poliéster
líquido absorbible no acuoso formador de gel y opcionalmente un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
16. Una composición farmacéutica que comprende
las micropartículas revestidas según la reivindicación 7 y un
vehículo farmacéuticamente aceptable.
17. Una composición farmacéutica que comprende
las micropartículas revestidas según la reivindicación 7, un
poliéster líquido absorbible no acuoso formador de gel y
opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable.
18. Una micropartícula unida según la
reivindicación 3 en la que dicho núcleo polimérico absorbible de
heterocadena además comprende residuos de citrato y dicho péptido
es un análogo de LHRH o un análogo de somatostatina.
19. Una micropartícula unida según la
reivindicación 18 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a residuos de citrato del núcleo polimérico absorbible de
heterocadena es aproximadamente 7-1 a
aproximadamente 20-1 y en la que el péptido es
dicho análogo de LHRH que es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-
NH_{2}.
NH_{2}.
20. Una micropartícula unida según la
reivindicación 18 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a residuos de citrato es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1 y el
péptido es dicho análogo de somatostatina que es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro.
21. Una micropartícula unida según la
reivindicación 3 en la que el núcleo polimérico absorbible de
heterocadena además comprende residuos de tartrato y el péptido es
un análogo de LHRH o un análogo de somatostatina.
22. Una micropartícula unida según la
reivindicación 21 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a residuos de tartrato es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1 y el
péptido es dicho análogo de LHRH que es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}.
23. Una micropartícula unida según la
reivindicación 21 en la que la proporción de unidades de glicolato
respecto a residuos de tartrato es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1 y el
péptido es dicho análogo de somatostatina que es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro.
24. Una micropartícula revestida que comprende
una o más micropartículas unidas según la reivindicación 18 ó 21
revestida de un polímero absorbible de revestimiento que
comprende
- (a)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido y unidades basadas en glicólido,
- (c)
- unidades basadas en d,l-láctido o
- (d)
- unidades basadas en l-láctido y unidades basadas en d,l-láctido.
25. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 24, cuando depende de la reivindicación 18, en la
que la proporción de unidades de glicolato respecto a residuos de
citrato del núcleo polimérico absorbible es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1, el
péptido es dicho análogo de LHRH que es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}
y en el que la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
26. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 24, cuando depende de la reivindicación 21, en la
que la proporción de unidades de glicolato respecto a residuos de
tartrato del núcleo polimérico absorbible es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1, el
péptido es dicho análogo de LHRH que es
p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH_{2}
y en el que la proporción de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
27. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 24, cuando depende de la reivindicación 18, en la
que la proporción de unidades de glicolato respecto a residuos de
citrato del núcleo polimérico absorbible es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1, el
péptido es dicho análogo de somatostatina que es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil-etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro;
y donde la proporción
de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
28. Una micropartícula revestida según la
reivindicación 24, cuando depende de la reivindicación 21, en la
que la proporción de unidades de glicolato respecto a residuos de
tartrato del núcleo polimérico absorbible es aproximadamente
7-1 a aproximadamente 20-1, el
péptido es dicho análogo de somatostatina que es
H-\beta-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro,
N-hidroxietilpiperazinil-acetil-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro o
N-hidroxietilpiperazinil
etilsulfonil-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH_{2}
donde los dos residuos Cys están unidos por una unión disulfuro;
y donde la proporción
de:
- (a)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10,
- (b)
- unidades basadas en d,l-láctido respecto a unidades basadas en glicólido es aproximadamente 75-25 a aproximadamente 90-10 y
- (c)
- unidades basadas en l-láctido respecto a unidades basadas en d,l-láctido es aproximadamente 80-20.
29. Un procedimiento para hacer una
micropartícula revestida según la reivindicación 7 que comprende la
etapa de revestimiento de una micropartícula unida con un polímero
absorbible de revestimiento.
30. Un procedimiento según la reivindicación 29
en el que una dispersión de dichas micropartículas unidas en una
solución que comprende dicho polímero absorbible de revestimiento y
un disolvente se vierte a un medio pre-enfriado,
donde dicho medio no es un disolvente de dicho polímero absorbible
de revestimiento.
31. Un procedimiento según la reivindicación 30
en el que la solución del polímero absorbible de revestimiento está
formado por aproximadamente del 5% al 30% del polímero absorbible
de revestimiento, el medio pre-enfriado es un
alcohol que tiene dos o más átomos de carbono y la temperatura del
medio es de temperatura ambiente a aproximadamente -80ºC.
32. Un procedimiento según la reivindicación 31
en el que la temperatura del medio pre-enfriado es
aproximadamente -60ºC a -80ºC y el medio es alcohol
isopropílico.
33. Un procedimiento para hacer una
micropartícula revestida según la reivindicación 7 que comprende la
etapa de revestimiento de una micropartícula unida con un polímero
absorbible de revestimiento usando una técnica de emulsión.
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