RU2013118323A

RU2013118323A - Способ получения фибриногена

Info

Publication number: RU2013118323A
Application number: RU2013118323/10A
Authority: RU
Inventors: Петра Шульц; Райнер ПАПЕ; Вернер ГЕРИНГЕР
Original assignee: Октафарма Аг
Priority date: 2010-09-20
Filing date: 2011-09-20
Publication date: 2014-10-27
Also published as: AU2011304364A1; US20130274444A1; KR20130112031A; EP2619225B1; AU2011304364B2; WO2012038410A1; BR112013006384B1; US20160264619A1; CN106046147B; ES2586698T3; CN103328503A; CA2809471A1; CN103328503B; RU2603103C2; MX2013002657A; MX347190B; US9938318B2; CN106046147A; US9371355B2; EP2619225A1

Abstract

1. Способ очистки фибриногена из содержащего фибриноген сырья с применением хроматографии на анионообменных смолах, где анионообменные смолы выбраны из группы, состоящей из носителя, содержащего гидроксилированный полимер с привитыми третичными или четвертичными аминогруппами.2. Способ по п.1, где носитель состоит из целлюлозы, агарозы, диоксида кремния, полимерного или керамического материала.3. Способ по любому из пп.1 и 2, где анионообменная смола представляет собой триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к гидроксилированному метакриловому полимеру, такую как GigaCap Q-650®.4. Способ по п. 1, где содержащее фибриноген сырье представляет собой криопреципитат, предпочтительно растворенный при нейтральном значении рН.5. Способ по п.4, где полученный раствор обрабатывают Al(OH)и полученный гель удаляют.6. Способ по п.4 или 5, где инактивацию вирусов проводят с помощью обработки растворителем-детергентом (S/D).7. Способ по п.6, где проводят экстракцию реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и осмоляльностью 570-610 мосмоль/л.8. Способ по п.7, где фибриноген осаждают с помощью глицина, в частности, приблизительно 1 М глицина, и выделяют образованную пасту фибриногена.9. Способ по п.8, где пасту фибриногена ресуспендируют предпочтительно в приблизительно 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0.10. Способ по п.9, где полученную после фильтрации фракцию наносят на сильную ионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и слабо связавшиес�

Claims

1. Способ очистки фибриногена из содержащего фибриноген сырья с применением хроматографии на анионообменных смолах, где анионообменные смолы выбраны из группы, состоящей из носителя, содержащего гидроксилированный полимер с привитыми третичными или четвертичными аминогруппами.

2. Способ по п.1, где носитель состоит из целлюлозы, агарозы, диоксида кремния, полимерного или керамического материала.

3. Способ по любому из пп.1 и 2, где анионообменная смола представляет собой триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к гидроксилированному метакриловому полимеру, такую как GigaCap Q-650®.

4. Способ по п. 1, где содержащее фибриноген сырье представляет собой криопреципитат, предпочтительно растворенный при нейтральном значении рН.

5. Способ по п.4, где полученный раствор обрабатывают Al(OH)₃ и полученный гель удаляют.

6. Способ по п.4 или 5, где инактивацию вирусов проводят с помощью обработки растворителем-детергентом (S/D).

7. Способ по п.6, где проводят экстракцию реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и осмоляльностью 570-610 мосмоль/л.

8. Способ по п.7, где фибриноген осаждают с помощью глицина, в частности, приблизительно 1 М глицина, и выделяют образованную пасту фибриногена.

9. Способ по п.8, где пасту фибриногена ресуспендируют предпочтительно в приблизительно 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0.

10. Способ по п.9, где полученную после фильтрации фракцию наносят на сильную ионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и слабо связавшиеся вещества отмывают предпочтительно промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см.

11. Способ по п.10, где фибриноген элюируют элюирующим буфером, содержащим цитрат натрия, хлорид натрия и глицин, предпочтительно около 1,5 г/л цитрата натрия, 7,0 г/л хлорида натрия и 10,0 г/л глицина, в частности со значением рН, доведенным до 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см.

12. Способ по п.11, где полученную фракцию концентрируют, составляют, стерилизуют фильтрованием и/или заполняют.

13. Способ по п.12, где полученную фракцию лиофилизируют.

14. Способ по п.1, включающий следующие стадии:

a. растворение криопреципитата, разведенного при нейтральном значении рН,

b. подвергание раствора адсорбции с Al(OH)₃ и удаление полученного геля,

c. инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D), экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт контакта водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и с осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,

d. осаждение фибриногена, обнаруживаемого в смыве или супернатанте стадии с) с помощью приблизительно 1 М глицина и выделение пасты фибриногена,

e. ресуспендирование пасты фибриногена в 20 мМ трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0, фильтрация и

f. нанесение отфильтрованного раствора стадии е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабо связавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,

g. элюирование фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности со значением рН, доведенным до значения приблизительно 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см,

h. концентрирование, составление, стерилизация фильтрованием и заполнение.

15. Содержащий фибриноген продукт, полученный по любому из пп.1-14.

16. Содержащий фибриноген продукт по п.15 с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена, полученный способом, включающим следующие стадии:

b. подвергание полученного раствора адсорбции с Al(OH)₃ и удаление полученного геля,

c. инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D) c Triton и TnBP, экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой TMAE при значении рН 6,9-7,1 и осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,

f. нанесение отфильтрованного раствора этапа е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабо связавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,

17. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16 с содержанием фибринопептида А 0,01-9,0 нг/мг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕ/мг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1 МЕ/мг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕ/мг фибриногена.

18. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16, обладающий следующими свойствами:

Фибриноген по методу Клауса (турбидометрический метод) [мг/мл] 20-26,0 мг антигена фибриногена/мг фибриногена (по методу Клауса) 0,8-1,2 МЕ фактора свертываемости крови FXIII/мг фибриногена (по методу Клауса) 0,09-0,14 мкг фибронектина/мг фибриногена (по методу Клауса) 0,1-1,0 нг фибринопептида А/мг фибриногена (по методу Клауса) 0,3-5,0

19. Содержащий фибриноген продукт по пп.15 и 16, отличающийся тем, что он находится в лиофилизированном виде.

20. Применение анионообменной смолы, выбранной из группы, состоящей из носителя, содержащего основную цепь гидроксилированного полимера с привитыми к нему третичными или четвертичными аминогруппами, для очистки или производства содержащего фибриноген продукта по любому из пп.15-19 способом по любому из пп.1-14.