RU2603103C2 - Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт - Google Patents

Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт Download PDF

Info

Publication number
RU2603103C2
RU2603103C2 RU2013118323/10A RU2013118323A RU2603103C2 RU 2603103 C2 RU2603103 C2 RU 2603103C2 RU 2013118323/10 A RU2013118323/10 A RU 2013118323/10A RU 2013118323 A RU2013118323 A RU 2013118323A RU 2603103 C2 RU2603103 C2 RU 2603103C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
fibrinogen
approximately
glycine
exchange resin
buffer
Prior art date
Application number
RU2013118323/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2013118323A (ru
Inventor
Петра Шульц
Райнер ПАПЕ
Вернер ГЕРИНГЕР
Original Assignee
Октафарма Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Октафарма Аг filed Critical Октафарма Аг
Publication of RU2013118323A publication Critical patent/RU2013118323A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2603103C2 publication Critical patent/RU2603103C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/18—Ion-exchange chromatography
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/363—Fibrinogen

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены способ очистки фибриногена, содержащий фибриноген продукт и применение анионообменной смолы, содержащей гидроксилированный метакриловый полимер с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами, для получения указанного продукта указанным способом. Подвергают содержащий фибриноген источник хроматографии на анионообменной смоле на основе гидроксилированного метакрилового полимера с привитыми через связывающую группу триметиламиногруппами. Получают содержащий фибриноген продукт с высокой степенью чистоты без содержания вирусов и прионов с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена, фибринопептида А 0,01-9,0 нг/мг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕ/мг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1,0 МЕ/мг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕ/мг фибриногена. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 5 табл.

Description

Уровень техники, к которому относится изобретение
Фибриноген, также известный как фактор свертывания крови I, играет ключевую роль в гемостазе и заживлении ран. Он является гликопротеином, синтезируемом в печени, с приблизительной молекулярной массой 340000 Да, состоит из двух димеров, каждый из которых составляют три пары неидентичных полипептидных цепей, называемых Aα, Bβ и γ, связанных дисульфидными мостиками. Он циркулирует в кровотоке в концентрации приблизительно 150-400 мкг/мл. При повреждении кровеносных сосудов активируются тромбоциты и образуется тромб. Фибриноген участвует в первичном гемостазе, способствуя связыванию активированных тромбоцитов.
Параллельно начинается активация каскада свертывания крови. На завершающем этапе фибриноген преобразуется в фибрин путем протеолитического высвобождения тромбином фибринопептида А и, медленнее, фибринопептида В. Растворимые мономеры фибрина объединяются в двухцепочечные скрученные фибриллы. Далее эти фибриллы организуются вдоль друг друга с образованием более толстых волокон. Затем эти волокна сшиваются FXIIIa в фибриновую сеть, которая стабилизирует тромбоцитарную пробку путем взаимодействий фибрина с активированными тромбоцитами, что приводит к стабильному тромбу.
Расстройства и дефициты
Врожденная афибриногенемия представляет собой редкое нарушение свертываемости крови, при котором пациенты страдают от недостаточного свертывания крови вследствие отсутствия или нарушения функции фибриногена. Это медицинское состояние может приводить к случаям спонтанного кровотечения или обильным кровотечениям после незначительных травм или в ходе хирургических процедур.
Приобретенные дефициты фибриногена встречаются гораздо чаще, чем врожденная афибриногенемия, и могут индуцироваться гемодилюцией или другими событиями, такими как потеря крови во время хирургической операции, травма, диссеминированное внутрисосудистое свертывание или сепсис.
Дефицит фибриногена можно корректировать до нормальных уровней фибриногена в плазме приблизительно 1,5-3 г/л заместительной терапией с помощью внутривенной инфузии свежезамороженной плазмы или криопреципитата. Однако эти способы лечения сопряжены с риском занесения патогенов, например, вирусов или прионов, в организм пациента и, тем самым, возникновения дополнительных расстройств. Таким образом, рекомендуется внутривенно вводить композиции фибриногена, прошедшие вирусную инактивацию, для безопасного восстановления физиологических уровней фибриногена.
Несмотря на то, что существуют содержащие фибриноген препараты, которые называются фибриновым клеем, фибриногеновым адгезивом, тканевым клеем и т.п., эти препараты предназначены для местного применения в виде порошков, паст, пен или в комбинации с тканью в качестве пластыря для ран, они не пригодны для внутривенного применения, так как их консистенция и состав незамедлительно вызовут тромботические явления при инъекции. Эти препараты дополнительно содержат тромбин, соли кальция и относительно высокие количества фактора свертывания крови XIII. Примерами для таких препаратов являются US-A1-2008/003272, WO-A-95/22316 или US-A1-2008/181878.
Способы получения фибриногена описаны в EP-B1-1 240 200, который относится к способу очистки фибриногена из содержащего фибриноген раствора, включающему нанесение содержащего фибриноген раствора на ионообменную матрицу в условиях, при которых фибриноген связывается матрицей, промывание ионообменной матрицы буферным раствором, содержащим по меньшей мере одну ω-аминокислоту, элюирование фибриногена с матрицы буфером, содержащим 10 мМ Трис, 10 мМ цитрат, 45 мМ сахарозу и NaCl в концентрации от 200 мМ до 1,0 М, и необязательно выделение фибриногена из элюата.
Патентная заявка EP-B1-0 771 324 относится к способу получения свободного от вируса концентрата фибриногена, получаемого путем проведения в содержащей фибриноген разбавленной фракции плазмы химической обработки для инактивации вирусов, например, такой как обработка S/D или растворителем-детергентом, проведения осаждения полученной фракции после инактивации вирусов в растворе, содержащем аминокислоту при кислом значении рН, с получением супернатанта, фильтрации супернатанта с получением очищенного концентрата фибриногена и выделения очищенного концентрата фибриногена. Выделенный концентрат фибриногена подвергают обработке ультрафиолетовым излучением в качестве второй инактивации вирусов. Перед третьей инактивацией вирусов продукт стабилизируют и лиофилизируют.
В EP-B1-1 519 944 описано использование матрицы аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом в условиях, при которых фибриноген и плазминоген связываются с матрицей, и селективного элюирования фибриногена и 93% плазминогена по отдельности с матрицы.
В EP-B1-0 555 135 описан способ получения фибриногена для внутривенного введения путем очистки раствора фибриногена на анионообменном геле на основе сшитой агарозы, содержащей четвертичные аминогруппы. Утверждается, что полученный фибриноген свободен от фактора VIIIc.
EP-B1-1 457 497 относится к способу удаления вирусов из растворов фибриногена, отличающемуся стабилизацией и замораживанием раствора и последующим его размораживанием. Отделение нерастворенных материалов происходит перед разбавлением белка, и после него следует нанофильтрация полученного раствора с использованием фильтров с размером пор менее 35 нм.
В US-A1-2006/0009376 также описан способ производства фибриногена. Его осуществляют после многократного растворения и осаждения фибриногена для удаления фактора свертываемости крови XIII.
Goheen S. C. et al., Journal of Chromatography A. 816 (1998) 89-96, описывают ВЭЖХ ионообменную хроматографию белков плазмы: альбумина, фибриногена и иммуноглобулина (G) на непористых материалах колонки, содержащих либо функциональные группы четвертичных аминов, либо сульфопропильные функциональные группы.
Сущность изобретения
Одной из задач изобретения является предоставление концентрата фибриногена, произведенного с помощью специализированных стадий устранения и/или инактивации патогенов для устранения побочных реакций или предотвращения развития заболеваний, обусловленных патогеном. Указанные патогены выбраны из групп бактерий, вирусов и прионов, таких как прионный белок скрейпи (PrPSC). Системное применение такого фибриногенового продукта внутривенным путем позволяет лечить врожденную афибриногенемию и приобретенные дефициты фибриногена. Применение этого стандартизованного концентрата фибриногена обеспечивает быстрое лечение в экстренных ситуациях без требующего времени размораживания свежезамороженной плазмы и снижение объемной нагрузки и надежные показатели свертываемости благодаря по существу постоянному составу.
Следующей задачей настоящей заявки является предоставление способа производства концентрата в промышленных масштабах, т.е. от нескольких сотен до тысяч литров исходного материала, такого как кровь или плазма крови, хотя также возможна мелкомасштабная продукция, т.е. от нескольких 1/10 литра до нескольких литров.
Эти и другие задачи решаются с помощью способа согласно пп.1-14 формулы изобретения и продукта, получаемого способом по настоящему изобретению в соответствии с пп.15-19 формулы изобретения.
В целом способ по изобретению для очистки или производства фибриногена из содержащего фибриноген сырья, включает стадии:
- формирование обогащенного фибриногеном преципитата путем добавления по меньшей мере одного осаждающего агента к содержащему фибриноген сырью;
- необязательно выделение обогащенного фибриногеном преципитата, например, путем центрифугирования указанного преципитата;
- отбор обогащенного фибриногеном преципитата в водную среду с получением содержащего фибриноген раствора, необязательно с последующей фильтрацией и/или ультра/диафильтрацией;
- проведение хроматографии содержащего фибриноген раствора с неподвижной фазой, имеющей сильные анионообменные группы, путем приведения в контакт указанного раствора с указанной фазой в условиях, при которых фибриноген связывается с указанной фазой;
- последующее элюирование фибриногена с неподвижной фазы с помощью водного раствора с более высокой ионной силой по сравнению с ионной силой предыдущей стадии с получением обогащенной фракции, которую собирают;
- необязательно последующие стадии разбавления и/или концентрирования обогащенной фибриногеном фракции;
- и необязательно заполнение обогащенной фибриногеном фракцией подходящих флаконов.
В одном из вариантов осуществления способа производства по изобретению содержащее фибриноген сырье выбрано из группы, состоящей из плазмы крови, фракций плазмы, таких как фракция I, или криопреципитат, культуры клеток, продуцирующих фибриноген, и/или супернатанты указанных культур клеток. Если в качестве исходного материала используется не криопреципитат, то в качестве исходного материала получают содержащий фибриноген промежуточный материал хорошо известными способами, такими как способы, описанные Cohn, Kistler-Nitschmann, и их модификации.
Для получения фармацевтически применимого продукта является преимущественным, чтобы содержащее фибриноген сырье подвергали способу инактивации вируса, например, способу с растворителем-детергентом.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения инактивацию вирусов проводят перед формированием обогащенного фибриногеном преципитата. Однако также инактивацию вирусов можно проводить на другой стадии.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения удаление инактивирующих вирусы веществ проводят путем масляной экстракции и/или хроматографии с сильными анионообменниками.
Типичный осаждающий агент для применения в способе производства по изобретению выбирают из группы, состоящей из аминокислот, таких как глицин, солей в высокой концентрации (высаливание) или пропиленгликоля.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения отбор представляет собой ресуспендирование пасты в буфере, имеющем рН от 7,5 до 8,5.
В соответствии с другим вариантом осуществления изобретения неподвижная фаза имеет третичные или четвертичные аминогруппы.
Хроматографические стадии способа производства по изобретению, в частности, можно проводить на колонке.
Как правило, предназначенная для хранения форма заполненной обогащенной фибриногеном фракции находится в жидком состоянии, замороженном состоянии, предпочтительно при <-15°С, более предпочтительно ниже -30°С, или в качестве лиофилизата.
Также объектом настоящего изобретения является обогащенная фибриногеном фракция, полученная способом производства по изобретению. Обогащенная фибриногеном фракция по изобретению содержит, например, 0,01-9,0 нг фибринопептида А на мг фибриногена. Другая обогащенная фибриногеном фракция по изобретению имеет 0,80-1,10 мг антигена фибриногена на мг фибриногена, определенного по методу Клауса; активность vWF:Ag <0,1 МЕ на мг фибриногена; активность фактора свертывания крови XIII ≥0,07 МЕ на мг фибриногена; 0,01-1,00 мкг фибронектина на мг фибриногена и менее 0,03 МЕ тромбина на мг фибриногена.
Концентратом фибриногена заполняют конечные контейнеры после стерилизации фильтрованием, и его можно хранить в форме жидкости, замороженной жидкости или в лиофилизированной форме.
Полученный указанным способом фибриноген характеризуется низким количеством примесей, что гарантирует чистоту продукта и позволяет длительное лечение людей, нуждающихся в этом. FXIII является предпочтительным в содержащейся концентрации, поскольку он поддерживает стабилизацию образовавшегося фибрина, в то время как избыточной нагрузки этой трансглутаминазой избегают.
Термин «включающий», «включают» или «включает» также может быть заменен терминами «состоящий», «состоят» или «состоит» без изменения содержания описания.
Детальное описание изобретения
Хотя в соответствии с изобретением можно использовать практические любое содержащее фибриноген сырье, предпочтительным сырьем является криопреципитат, и далее криопреципитат служит в качестве типичного сырья для получения фибриногена в дальнейшем описании способа производства по изобретению.
Обычно криопреципитат разбавляют или растворяют в условиях подходящего буфера, в частности при приблизительно нейтральном значении рН (6,9-7,0, например, в буфере для растворения, содержащем Na-цитрат или NaCl), подвергают адсорбции, в частности, с помощью Al(OH)3, и полученный гель удаляют, например, центрифугированием. Далее проводят инактивацию вирусов в супернатанте, например, обработкой растворителем/детергентом (S/D). Этот способ хорошо известен специалисту в данной области и впервые был описан в EP-A-131 740. Соединения S/D, такие как Triton (О-[4-(1,1,3,3-тетраметилбутил)фенокси]полиэтоксиэтанол) и TnBP (три-N-бутилфосфат), в частности, удаляют экстракцией касторовым маслом. Для дальнейшей очистки водную фазу можно подвергать хроматографическому способу. Обычно его можно проводить путем приведения в контакт водной фазы с сильным ионообменным гелем, триметиламиноэтилом (TMAE), привитым к материалу матрицы, таким, как Fractogel® EMD-TMAE. Хороших результатов достигают в случае, если хроматографию проводят с буферами, имеющими значение рН 6,9-7,1 и осмоляльность 570-610 мосмоль/л. В этих условиях фибриноген не связывается с неподвижной фазой и, таким образом, обнаруживается в смыве или супернатанте, последний из которых получают при проведении периодической хроматографии.
Раствор не связавшегося фибриногена, содержащий, как правило, приблизительно 40 г/л (турбидометрический метод Клауса) доводят до рН 7,0-8,0, в частности, до 7,3-7,5. После добавления подходящего осаждающего агента, например, глицина, до концентрации 0,8-1,2 М, в частности, 0,9-1,1 М, конечный раствор можно перемешивать в течение 60-120 минут для осаждения фибриногена. Затем содержащий фибриноген преципитат можно далее отделять центрифугированием, и эту промежуточную пасту фибриногена можно хранить при ≤-70°С, предпочтительно при от -100°С до -70°С, в течение вплоть до одного месяца. Уже одно осаждение, например, с глицином, обеспечивает достаточно чистую пасту для дальнейшей переработки.
Полученный таким образом промежуточный материал можно ресуспендировать в 10-30 мМ Трис-буфере (рН=7,5-8,5), в частности, в 15-25 мМ Трис-буфере с рН=7,5-8,5. Затем полученную суспензию можно отфильтровывать и подвергать ультра/диафильтрации, например, против объема того же или другого буфера, равного 5-кратному объему суспензии.
Затем полученный содержащий фибриноген раствор наносят на сильный анионообменный гель, предпочтительно выбранный из группы третичных или четвертичных аминогрупп в качестве лигандов, привитых к матрице. Указанные функциональные группы выбраны из хорошо известных диэтиламиноэтила (DEAE), триметиламиноэтила (TMAE) и других групп, в то время как носитель может состоять из целлюлозы, агарозы, диоксида кремния, полимерного или керамического материала. Хорошие результаты, в частности, в отношении восстановления фибронектина и витронектина, могут быть достигнуты с помощью триметиламиногрупп, привитых к гидроксилированному метакриловому полимеру, такому как GigaCap Q-650®, через связывающую группу. Это является в высокой степени неожиданным, поскольку химически сходный Macro-Prep High Q®, метакриловый сополимер, состоящий из диэтиленгликольдиметакрилата/глицидилметакрилата также с триметиламинолигандами, но без гидроксильной функциональной группы в его полимерной основной цепи, является менее эффективным в отношении восстановления указанных двух белков. Эффективное восстановление вязкого фибронектина является в высокой степени преимущественным для необязательных фильтраций, таких как ультра/диафильтрация или нанофильтрация, так как срок службы фильтров увеличивается благодаря меньшей закупорке. Если предполагается, что способ включает нанофильтрацию, предпочтительным является выполнение способа с разбавленным раствором (концентрация фибриногена приблизительно 2 г/л), в частности, в случае каскадного использования нанофильтров. Хроматографический гель или смолу, в частности, предварительно уравновешивают тем же буфером, который использовался для ресуспендирования промежуточной пасты фибриногена перед нанесением раствора фибриногена. Слабо связавшиеся вещества вымывали уравновешивающим буфером, а затем промывочным буфером (1,5 г/л цитрата натрия, 6,0 г/л хлорида натрия, доведенный до рН=6,8-7,2, предпочтительно 6,9-7,1 и обладающий проводимостью 11,0-13,0 мСм/см при комнатной температуре 20-25°С).
Затем фибриноген можно элюировать с хроматографической колонки элюирующим буфером, содержащим 1,5 г/л цитрата натрия и 10,0 г/л глицина, в частности, доведенным до того же диапазона рН, что и у промывочного буфера, например, с помощью HCl и/или NaOH, и доведенным с помощью приблизительно 7,0 г/л NaCl до проводимости 13,1-15 мСм/см при комнатной температуре 20-25°С. Приблизительно 74% нанесенного на колонку фибриногена выделяется в элюате, в то время как фибронектин практически полностью удаляется из содержащего фибронектин элюата.
Этот отфильтрованный раствор фибриногена можно далее концентрировать ультра/диафильтрацией до 20-26 г/л и подвергать стерилизации фильтрованием через мембраны с номинальным размером пор ≤0,2 мкм. Специалистам в данной области известно, что также достижимы другие концентрации, такие как 1-19,9 г/л или 26,01-30 г/л или даже выше. Концентрат фибриногена по настоящему изобретению также можно изготавливать с адъювантами и стабилизаторами, известными специалисту в данной области, такими как углеводороды, например, сахароза, трегалоза, аминокислоты, например, глицин, гистидин, аланин, аргинин, и детергентами, например, полиоксиэтилен-(20)-сорбитанмоноолеатом (TWEEN 80®). Этот подвергнутый стерилизации фильтрованием совокупный материал либо необязательно хранят в течение вплоть до 5 суток при -70°С или ниже, в частности, при от -70°С до -80°С, до проведения стерилизации фильтрованием во второй раз и заполнения в конечные контейнеры, либо необязательно лиофилизируют без второй стерилизации фильтрованием.
Нет необходимости добавлять дополнительные буферы, стабилизаторы, адъюванты или другие добавки, такие как фактор свертывания крови XIII (F XIII). Фактор свертывания крови XIII присутствует в концентрате с активностью ≥0,05 МЕ на мг фибриногена (по методу Клауса), в частности 0,07-0,3 МЕ на мг фибриногена, 0,06-0,5 МЕ на мг фибриногена, или 0,05-1 МЕ на мг фибриногена.
Концентрат фибриногена, полученный способом по настоящему изобретению, проявляет свои биологические свойства через отношение антиген фибриногена/фибриноген по методу Клауса 0,80-1,10, в частности, 0,85-1,05 или 0,90-1,00; содержание фибринопептида А 0,01-9,0 нг на мг фибриногена (по методу Клауса), в частности, 0,05-8,0 нг на мг фибриногена или 0,08-6,0 нг на мг фибриногена; активность vWF:Ag <0,1 МЕ на мг фибриногена (по методу Клауса), в частности, 0,001-0,09 МЕ на мг фибриногена, 0,002-0,07 МЕ на мг фибриногена, 0,002-0,04 МЕ на мг фибриногена; активность фактора XIII ≥0,07 МЕ на мг фибриногена (по методу Клауса), в частности, 0,07-0,3 МЕ на мг фибриногена, в частности, 0,08-0,5 МЕ на мг фибриногена, или 0,07-1 МЕ на мг фибриногена; содержание фибронектина 0,01-1,00 мкг на мг фибриногена (по методу Клауса), в частности, 0,03-0,70 мкг на мг фибриногена или 0,05-0,40 мкг на мг фибриногена; и активность плазминогена 1-11 мМЕ на мг фибриногена. Было определено, что активность тромбина находится ниже порога определения 0,15 МЕ/мл для всех испытаний и при тех концентрациях фибриногена, которые указаны в таблице 1, что эквивалентно менее чем 0,007 МЕ на мг фибриногена или 0,0069-0,0001 МЕ/мг.
Далее изобретение поясняется с помощью следующего неограничивающего примера.
Пример
Криопреципитат, полученный из плазмы крови с использованием общепринятых способов, разбавляли или растворяли при приблизительно нейтральном значении рН, подвергали адсорбции на Al(OH)3, и полученный гель удаляли центрифугированием. Затем супернатант подвергали инактивации вирусов обработкой растворителем-детергентом (S/D). Соединения растворителя/детергента, Triton и TnBP, экстрагировали растительным маслом и водную фазу приводили в контакт с Fractogel® EMD-TMAE. Использовали условия хроматографии (значение рН 6,9-7,1 и осмоляльность 570-610 мосмоль/л), в которых фибриноген не связывался с гелем и, таким образом, обнаруживался в смыве или супернатанте.
Раствор не связавшегося фибриногена перемешивали в течение приблизительно 90 минут после добавления глицина (конечная концентрация 1 моль/л и рН=7,4) для осаждения фибриногена.
Содержащий фибриноген преципитат далее разделяли центрифугированием с получением промежуточной пасты фибриногена.
Полученный таким образом промежуточный материал ресуспендировали в 20 мМ Трис-буфере (рН=приблизительно 8,0). Затем полученную суспензию фильтровали и подвергали ультра/диафильтрации.
Затем полученный содержащий фибриноген раствор наносили на GigaCap Q-650M® и хроматографический гель или смолу предварительно уравновешивали тем же Трис-буфером, который использовали для ресуспендирования перед нанесением раствора фибриногена. Слабо связавшиеся молекулы вымывали уравновешивающим буфером, а затем промывали промывочным буфером (1,5 г/л цитрата натрия, 6,0 г/л хлорида натрия, значение рН, доведенное до приблизительно 7,0, и проводимость приблизительно 12,0 мСм/см). Затем фибриноген элюировали с хроматографической колонки элюирующим буфером (1,5 г/л цитрата натрия и 10,0 г/л глицина, доведенный до того же рН, что и у промывочного буфера, и доведенный с помощью приблизительно 7,0 г/л NaCl до проводимости 13,1-15 мСм/см).
Полученный раствор фибриногена концентрировали, составляли и подвергали стерилизации фильтрованием. Подвергнутый стерилизации фильтрованием совокупный материал хранили в течение 5 суток при температуре -80°С, а затем подвергали стерилизации фильтрованием во второй раз и заполняли в конечные контейнеры. Одну часть конечных контейнеров лиофилизировали, а другую часть хранили в качестве жидкого состава.
Продукты четырех разных серий получения анализировали после восстановления лиофилизированного продукта. Восстановление лиофилизатов проводили добавлением воды для инъекций вплоть до концентрации до лиофилизации. Все серии получения проводили, по существу так, как представлено в примере. Результаты представлены в Таблице 1.
№ серии 1 2 3 4 Диапазон
Фибриноген по методу Клауса (турбидометрический метод) [мг/мл] 22,1 22,6 25,0 25,0 22,1-25,0
Антиген фибриногена [мг/мл] 20,7 19,1 22,0 23,0 19,1-23,0
FXIII [МЕ/мл] 2,9 2,5 2,4 2,6 2,4-2,9
vWF:Ag [МЕ/мл] 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Фибронектин [мкг/мл] 3,3 4,9 4,5 3,8 3,3-4,9
Фибринопептид А [нг/мл] 36 20 10 11 10-36
Таблица 1
В таблице 2 представлена нормализация измеренных значений путем вычисления содержания или активности на мг фибриногена при определении по методу Клауса.
№ серии 1 2 3 4 Диапазон
Фибриноген по методу Клауса [мг/мл] 22,1 22,6 25,0 25,0 22,1-25,0
мг антигена фибриногена/ мг фибриногена по методу Клауса 0,937 0,845 0,880 0,920 0,845-0,937
МЕ FXIII/мг фибриногена по методу Клауса 0,131 0,111 0,096 0,104 0,096-0,131
МЕ vWF:Ag/мг фибриногена по методу Клауса 0,005 0,004 0,004 0,004 0,004-0,005
мкг фибронектина/мг фибриногена по методу Клауса 0,149 0,217 0,180 0,152 0,149-0,217
нг фибринопептида А/мг фибриногена по методу Клауса 1,629 0,885 0,400 0,440 0,400-1,629
Таблица 2
Сравнение с коммерчески доступными продуктами.
В таблице 3 представлены измеренные значения для коммерчески доступных концентратов фибриногена. Все продукты представляли собой лиофилизированные продукты и их восстанавливали в соответствии с рекомендациями изготовителя. Также показан диапазон значений серий 1-4 согласно настоящему изобретению, как уже показано в Таблице 1.
  Продукт 1 Продукт 2 Продукт 3 Настоящее изобретение
Фибриноген по методу Клауса (турбидометрический метод) [мг/мл] 11,5 9,8 23,7 22,1-25,0
Антиген фибриногена [мг/мл] 16,3 19,1 21,0 19,1-23,0
FXIII [МЕ/мл] <0,2 <0,2 1 2,4-2,9
vWF:Ag [МЕ/мл] 14 1,3 3,8 0,1
Фибронектин [мкг/мл] 13,3 258,9 944,3 3,3-4,9
Фибринопептид А [нг/мл] 130 1843 814 10-36
Таблица 3
В Таблице 4 представлена нормализация измеренных значений для коммерчески доступных продуктов путем вычисления содержания или активности на мг фибриногена при определении способом Клауса. Также показан диапазон значений для серий 1-4 в соответствии с настоящим изобретением, как уже показано в Таблице 2.
  Продукт 1 Продукт 2 Продукт 3 Настоящее изобретение
Фибриноген по методу Клауса (турбодиметрический метод) [мг/мл] 11,5 9,8 23,7 22,1-25,0
мг антигена фибриногена/мг фибриногена по методу Клауса 1,417 1,949 0,886 0,845-0,937
МЕ FXIII/мг фибриногена по методу Клауса <0,017 <0,020 0,042 0,096-0,131
МЕ vWF:Ag/мг фибриногена по методу Клауса 1,217 0,133 0,160 0,004-0,005
мкг фибронектина/ мг фибриногена по методу Клауса 1,157 26,418 39,844 0,149-0,217
нг фибринопептида А/мг фибриногена по методу Клауса 11,304 188,061 34,346 0,400-1,629
Таблица 4
Сравнение с предпочтительным вариантом осуществления WO 01/48016.
1 г пасты фракции I экстрагировали с помощью 8,33 г экстрагирующего буфера (0,8 М NaCl, 5 мМ ε-АСА (эпсилон-аминокапроновая кислота), 20 мМ Na-цитрат, 60 МЕ/мл гепарина и рН=7,3, т.е. усовершенствованный буфер согласно разделу 1.1.19) при 37°С в течение 2 часов. К супернатанту после выделения добавляли 50 г 2% раствора гидроксида алюминия (алгидрогеля). Смесь перемешивали в течение 15 минут при комнатной температуре, центрифугировали при 5000g в течение 10 минут и осадок выбрасывали. Супернатант алгидрогеля и буфер глицина/NaCl (2,1 М глицин, 20 мМ Na-цитрат, 3,6 М NaCl и 2,4 мМ CaCl2) доводили до 30,2°С и 29,7°С, соответственно, и супернатант добавляли к буферу в течение 4,5 минут. Смесь 1 части супернатанта и 2,05 частей буфера перемешивали в течение 20 минут при 30,2°С-31,1°С, после чего центрифугировали в течение 10 минут при 5000g. Преципитат Gly/NaCl повторно растворяли в буфере D, соответствующем 1/3 объема супернатанта после экстракции пасты фракции I, при 21°С при постоянном перемешивании в течение 2 часов. После этого повторно растворенный преципитат обрабатывали S/D с помощью полисорбата-80 и TnBP в течение 1 часа в концентрациях 1% (полисорбат-80) и 0,3% (TnBP) при приблизительно 23°С. Анионообменную хроматографию проводили на смоле MacroPrep® HQ в колонке XK26 и при высоте слоя приблизительно 20 см, что соответствовало приблизительно объему колонки приблизительно 100 мл при скорости потока 10 мл/мин. Уравновешивание проводили 2 объемами колонки усовершенствованного буфера MQ (50 мМ ТРИС, 100 мМ NaCl, 20 мМ ε-АСА при рН=8,0, раздел 2.2.3) и проводимость (после колонки), достигала указанных границ проводимости буфера MQ ±10%. После промывки колонки шестью объемами буфера MQ, фибриноген элюировался в виде одиночного пика с помощью усовершенствованного буфера ME (500 мМ NaCl, 1,1 мМ CaCl2, 10 мМ Na-цитрат, 10 мМ Трис и 45 мМ сахароза при рН=7,0, т.е., буфер D+2×200 мМ NaCl). Аналитические результаты представлены в Таблице 5.
  WO 01/48016 Настоящее изобретение
Фибриноген по методу Клауса (турбидометрический метод) [мг/мл] 5,90 22,1-25,0
мг антигена фибриногена/мг фибриногена по методу Клауса 0,845 0,845-0,937
МЕ FXIII/мг фибриногена по методу Клауса 0,440 0,096-0,131
МЕ vWF:Ag/мг фибриногена по методу Клауса 0,100 0,004-0,005
мкг фибронектина/мг фибриногена по методу Клауса 10,83 0,149-0,217
нг фибринопептида А/мг фибриногена по методу Клауса 6,02 0,400-1,629
Таблица 5

Claims (18)

1. Способ очистки фибриногена из содержащего фибриноген источника, причем указанный способ включает подвергание содержащего фибриноген источника хроматографии на анионообменной смоле, где анионообменная смола представляет собой гидроксилированный метакриловый полимер, к которому триметиламиногруппы привиты через связывающую группу.
2. Способ по п.1, где содержащий фибриноген источник представляет собой криопреципитат, предпочтительно растворенный при нейтральном значении рН.
3. Способ по п.2, где полученный раствор обрабатывают Al(OH)3 и полученный гель удаляют.
4. Способ по п.2 или 3, где инактивацию вирусов проводят с помощью обработки растворителем-детергентом (S/D).
5. Способ по п.4, где проводят экстракцию реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой ТМАЕ при значении рН 6,9-7,1 и с осмоляльностью 570-610 мосмоль/л.
6. Способ по п. 5, где фибриноген осаждают с помощью глицина, в частности приблизительно 1 М глицина, и выделяют образованную пасту фибриногена.
7. Способ по п.6, где пасту фибриногена ресуспендируют, предпочтительно в приблизительно 20 мМ Трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0.
8. Способ по п.7, где полученную после фильтрации фракцию наносят на сильную ионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и слабосвязавшиеся вещества отмывают предпочтительно промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см.
9. Способ по п.8, где фибриноген элюируют элюирующим буфером, содержащим цитрат натрия, хлорид натрия и глицин, предпочтительно около 1,5 г/л цитрата натрия, 7,0 г/л хлорида натрия и 10,0 г/л глицина, в частности, со значением рН, доведенным до 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см.
10. Способ по п.9, где полученную фракцию концентрируют, составляют, стерилизуют фильтрованием и/или заполняют.
11. Способ по п.10, где полученную фракцию лиофилизируют.
12. Способ по п.1, включающий следующие стадии:
a) растворение криопреципитата, разведенного при нейтральном значении рН,
b) подвергание раствора адсорбции с Al(ОН)3 и удаление полученного геля,
c) инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D), экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой ТМАЕ при значении рН 6,9-7,1 и с осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,
d) осаждение фибриногена, обнаруживаемого в смыве или супернатанте стадии с), с помощью приблизительно 1 М глицина и выделение пасты фибриногена,
e) ресуспендирование пасты фибриногена в 20 мМ Трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0, фильтрация и
f) нанесение отфильтрованного раствора стадии е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающую группу к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабосвязавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,
g) элюирование фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности, со значением рН, доведенным до значения приблизительно 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см,
h) концентрирование, составление, стерилизация фильтрованием и заполнение.
13. Содержащий фибриноген продукт, полученный по любому из пп.1-12, где указанный содержащий фибриноген продукт имеет содержание фибринонектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена.
14. Содержащий фибриноген продукт по п.13 с содержанием фибронектина 0,01-1,00 мкг/мг фибриногена, полученный способом, включающим следующие стадии:
a) растворение криопреципитата, разведенного при нейтральном значении рН,
b) подвергание полученного раствора адсорбции с Al(ОН)3 и удаление полученного геля,
c) инактивация вирусов в полученном растворе стадии b) обработкой растворителем-детергентом (S/D) с Triton и TnBP, экстракция реагентов S/D с использованием растительного масла и приведение в контакт водной фазы со смолой ТМАЕ при значении рН 6,9-7,1 и с осмоляльностью 570-610 мосмоль/л,
d) осаждение фибриногена, обнаруживаемого в смыве или супернатанте стадии с), с помощью приблизительно 1 М глицина и выделение пасты фибриногена,
e) ресуспендирование пасты фибриногена в 20 мМ Трис-буфере при значении рН приблизительно 8,0, фильтрация и
f) нанесение отфильтрованного раствора этапа е) на сильную анионообменную смолу, содержащую триметиламиногруппы, привитые через связывающие группы к основной цепи гидроксилированного метакрилового полимера, и отмывка слабосвязавшихся веществ промывочным буфером с проводимостью приблизительно 12,0 мСм/см,
g) элюирование фибриногена элюирующим буфером, содержащим приблизительно 1,5 г/л цитрата натрия, приблизительно 7,0 г/л хлорида натрия и приблизительно 10,0 г/л глицина, в частности, со значением рН, доведенным до значения приблизительно 7,0, и с проводимостью 13,1-15 мСм/см,
h) концентрирование, составление, стерилизация фильтрованием и заполнение.
15. Содержащий фибриноген продукт по п.13 или 14 с содержанием фибринопептида А 0,01-9,0 нг/мг фибриногена, с активностью vWF:Ag менее 0,1 МЕ/мг фибриногена, с активностью фактора XIII 0,07-1 МЕ/мг фибриногена и с активностью тромбина менее 0,007 МЕ/мг фибриногена.
16. Содержащий фибриноген продукт по п.13 или 14, обладающий следующими свойствами:
Figure 00000001
Figure 00000002
17. Содержащий фибриноген продукт по п.13 или 14, отличающийся тем, что он находится в лиофилизированном виде.
18. Применение анионообменной смолы, содержащей гидроксилированный метакриловый полимер, к которому триметиламиногруппы привиты через связывающую группу, для очистки или производства содержащего фибриноген продукта по любому из пп.13-17 способом по любому из пп.1-12.
RU2013118323/10A 2010-09-20 2011-09-20 Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт RU2603103C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10177640.9 2010-09-20
EP10177640 2010-09-20
US34471910P 2010-09-21 2010-09-21
US61/344,719 2010-09-21
PCT/EP2011/066293 WO2012038410A1 (en) 2010-09-20 2011-09-20 Process for production of fibrinogen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013118323A RU2013118323A (ru) 2014-10-27
RU2603103C2 true RU2603103C2 (ru) 2016-11-20

Family

ID=43048945

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013118323/10A RU2603103C2 (ru) 2010-09-20 2011-09-20 Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт

Country Status (12)

Country Link
US (2) US9371355B2 (ru)
EP (1) EP2619225B1 (ru)
JP (1) JP2013537215A (ru)
KR (1) KR20130112031A (ru)
CN (2) CN106046147B (ru)
AU (1) AU2011304364B2 (ru)
BR (1) BR112013006384B1 (ru)
CA (1) CA2809471A1 (ru)
ES (1) ES2586698T3 (ru)
MX (1) MX347190B (ru)
RU (1) RU2603103C2 (ru)
WO (1) WO2012038410A1 (ru)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9371355B2 (en) 2010-09-20 2016-06-21 Octapharma Ag Process for production of fibrinogen
AU2013231321B2 (en) 2012-03-13 2017-05-25 Octapharma Ag Improved process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby
US10188965B2 (en) 2012-12-05 2019-01-29 Csl Behring Gmbh Hydrophobic charge induction chromatographic depletion of a protein from a solution
US20140154233A1 (en) 2012-12-05 2014-06-05 Csl Limited Method of purifying therapeutic proteins
RU2556804C2 (ru) * 2013-12-17 2015-07-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения РФ Способ получения концентрата фибриногена
US9932388B2 (en) 2014-11-13 2018-04-03 Hemarus Therapeutics Limited Chromatographic process for producing high purity fibrinogen and thrombin
CA3003097A1 (en) * 2015-10-23 2017-04-27 Cerus Corporation Plasma compositions and methods of use thereof
KR101841587B1 (ko) 2016-01-12 2018-05-14 주식회사 녹십자홀딩스 피브리노겐의 정제방법
CN107540743A (zh) * 2017-10-11 2018-01-05 南岳生物制药有限公司 一种双层析法制备人纤维蛋白原的方法
CN114901685A (zh) * 2019-12-10 2022-08-12 生物测试股份公司 用于制备纤维蛋白原制剂的方法
CA3224328A1 (en) 2021-08-13 2023-02-16 Biotest Ag Fibrinogen compositions and methods of preparation
CN113698470B (zh) * 2021-09-02 2023-03-17 成都蓉生药业有限责任公司 一种人纤维蛋白原的纯化方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4278594A (en) * 1979-06-19 1981-07-14 David Amrani Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma
EP0555135B1 (fr) * 1992-02-04 1996-08-14 Association D'aquitaine Pour Le Developpement De La Transfusion Sanguine Et Des Recherches Hematologiques Procédé de fabrication de fibrinogène de très haute pureté
US5834420A (en) * 1994-07-14 1998-11-10 Croix-Rouge De Belgique Fibrinogen concentrate obtained from blood plasma, process and plant for its preparation
US6037457A (en) * 1997-01-31 2000-03-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method for recombinant fibrinogen production
US6468733B2 (en) * 2000-06-05 2002-10-22 Omrix Biopharmaceuticals Inc. Method of the inactivation of viruses by a solvent-detergent combination and nanofiltration
RU2008130356A (ru) * 2001-05-21 2010-01-27 Омрикс Биофармасьютикалс С.А. (Be) Удаление плазмин(оген)а из белковых растворов

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4540573A (en) * 1983-07-14 1985-09-10 New York Blood Center, Inc. Undenatured virus-free biologically active protein derivatives
US5290918A (en) * 1993-02-23 1994-03-01 Haemacure Biotech Inc. Process for the obtention of a biological adhesive made of concentrated coagulation factors by acidic precipitation
EP0748215B1 (en) 1994-02-17 2003-05-28 New York Blood Center, Inc. Biologic bioadhesive compositions containing fibrin glue and liposomes, methods of preparation and use
US7572769B2 (en) 1998-12-23 2009-08-11 Csl Behring Gmbh Fibrin adhesive granulate and method for its preparation
CA2362513C (en) * 1999-02-12 2011-04-26 Baxter Aktiengesellschaft A method for producing a preparation based on fibrinogen and fibronectin as well as protein compositions obtainable according to this method
WO2001048016A1 (en) 1999-12-23 2001-07-05 Csl Limited Separation of fibrinogen from plasma proteases
EP1148063A1 (de) 2000-04-18 2001-10-24 Octapharma AG Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung
DE10211632A1 (de) 2002-03-15 2003-10-09 Aventis Behring Gmbh Verfahren zur Abtrennung von Viren aus einer Proteinlösung durch Nanofiltration
GB0216001D0 (en) 2002-07-10 2002-08-21 Nat Blood Authority Process and composition
AT501088A2 (de) 2002-12-18 2006-06-15 Bio Prod & Bio Eng Ag Stabile therapeutische proteine
ES2214967B1 (es) 2003-03-06 2005-06-16 Probitas Pharma, S.A Procedimiento para la eliminacion de virus en soluciones de fibrinogeno y fibrinogeno obtenido por dicho procedimiento.
FR2887883B1 (fr) 2005-06-29 2007-08-31 Lab Francais Du Fractionnement Procede de separation des proteines fibrinogene, facteur xiii et colle biologique d'une fraction plasmatique solubilisee et de preparation de concentres lyophilises desdites proteines
US7968682B2 (en) 2006-12-12 2011-06-28 Oregon Health & Science University Degradation-resistant fibrinogen sealants
EP2293776B8 (de) 2008-06-23 2016-05-11 Bio-Products & Bio-Engineering Aktiengesellschaft Lagerstabiles, funktionell intaktes virus-inaktiviertes fibrinogen
CN101703763B (zh) * 2009-11-05 2012-07-11 绿十字(中国)生物制品有限公司 人纤维蛋白原的生产方法
US9371355B2 (en) 2010-09-20 2016-06-21 Octapharma Ag Process for production of fibrinogen
AU2013231321B2 (en) 2012-03-13 2017-05-25 Octapharma Ag Improved process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4278594A (en) * 1979-06-19 1981-07-14 David Amrani Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma
EP0555135B1 (fr) * 1992-02-04 1996-08-14 Association D'aquitaine Pour Le Developpement De La Transfusion Sanguine Et Des Recherches Hematologiques Procédé de fabrication de fibrinogène de très haute pureté
US5834420A (en) * 1994-07-14 1998-11-10 Croix-Rouge De Belgique Fibrinogen concentrate obtained from blood plasma, process and plant for its preparation
US6037457A (en) * 1997-01-31 2000-03-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method for recombinant fibrinogen production
US6468733B2 (en) * 2000-06-05 2002-10-22 Omrix Biopharmaceuticals Inc. Method of the inactivation of viruses by a solvent-detergent combination and nanofiltration
RU2008130356A (ru) * 2001-05-21 2010-01-27 Омрикс Биофармасьютикалс С.А. (Be) Удаление плазмин(оген)а из белковых растворов

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Toyopearl GigaCap Q-650 resin", Tosoh Bioscience LLC: The Chemistry of Innovation, 24.02.2010, Найдено в Интернет [27.07.15]. *

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011304364A1 (en) 2013-01-31
US20130274444A1 (en) 2013-10-17
KR20130112031A (ko) 2013-10-11
EP2619225B1 (en) 2016-06-15
AU2011304364B2 (en) 2015-07-09
WO2012038410A1 (en) 2012-03-29
BR112013006384B1 (pt) 2021-12-07
US20160264619A1 (en) 2016-09-15
CN106046147B (zh) 2019-11-19
ES2586698T3 (es) 2016-10-18
CN103328503A (zh) 2013-09-25
CA2809471A1 (en) 2012-03-29
RU2013118323A (ru) 2014-10-27
CN103328503B (zh) 2016-08-24
MX2013002657A (es) 2013-04-08
MX347190B (es) 2017-04-19
US9938318B2 (en) 2018-04-10
CN106046147A (zh) 2016-10-26
US9371355B2 (en) 2016-06-21
EP2619225A1 (en) 2013-07-31
BR112013006384A2 (pt) 2017-07-18
JP2013537215A (ja) 2013-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2603103C2 (ru) Способ получения фибриногена с использованием сильной анионообменной смолы и содержащий фибриноген продукт
US11401300B2 (en) Process for production of fibrinogen and fibrinogen produced thereby
JP3701028B2 (ja) 高純度フォンビルブラント因子の入手方法
JP5662988B2 (ja) 可溶化血漿フラクションから蛋白質フィブリノーゲン、第ｘｉｉｉ因子および生物学的グルーを分離し、そして該蛋白質の凍結乾燥濃縮物を調製するための方法
US20090176709A1 (en) Process for obtaining a concentrate of von willebrand factor or a complex of factor viii/von willebrand factor and use of the same
AU2003244850B2 (en) Processes for the preparation of fibrinogen
NO324659B1 (no) Utvinning av von Willebrand-faktor ved kationebytterkromatografi samt preparat inneholdende slik faktor og anvendelse derav.
ES2237854T5 (es) Procedimiento para la preparación mediante filtración de una solución de factor VIII víricamente segura
JP2004269529A (ja) フィブリノゲン溶液中のウイルスを除去する方法およびこの方法により得られるフィブリノゲン
EP3404037B1 (en) Method for purifying fibrinogen
MXPA06001112A (en) Process for preparing an alpha-1-antitrypsin solution