RU2013107765A - Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение - Google Patents

Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение Download PDF

Info

Publication number
RU2013107765A
RU2013107765A RU2013107765/10A RU2013107765A RU2013107765A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A RU 2013107765/10 A RU2013107765/10 A RU 2013107765/10A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A RU 2013107765 A RU2013107765 A RU 2013107765A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
column
galns
enzyme
galns enzyme
composition
Prior art date
Application number
RU2013107765/10A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2607376C2 (ru
Inventor
Виш КОППАКА
Мишель Клод ВЕЛЛАР
Аугустус О. Окхамафе
Кидисти Арайа
Original Assignee
Байомарин Фармасьютикал Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Байомарин Фармасьютикал Инк. filed Critical Байомарин Фармасьютикал Инк.
Publication of RU2013107765A publication Critical patent/RU2013107765A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2607376C2 publication Critical patent/RU2607376C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
    • C12Y301/06—Sulfuric ester hydrolases (3.1.6)
    • C12Y301/06004—N-Acetylgalactosamine-6-sulfatase (3.1.6.4)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

1. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в C-формилглицин (FGly), и(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено SDS-капиллярным гель-электрофорезом (SDS-CGE), включающий:а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующей фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию;б) загрузку питательной среды, прошедшей фильтрацию активированным углем, ультрафильтрацию/диафильтрацию, из этапа а) в улавливающую колонку, промывание улавливающей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в улавливающей колонке, и элюирование фермента GALNS из удерживающей колонки;в) необязательно, фильтрацию элюата из улавливающей колонки из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;г) корректирование уровня рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата �

Claims (46)

1. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено SDS-капиллярным гель-электрофорезом (SDS-CGE), включающий:
а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующей фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию;
б) загрузку питательной среды, прошедшей фильтрацию активированным углем, ультрафильтрацию/диафильтрацию, из этапа а) в улавливающую колонку, промывание улавливающей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в улавливающей колонке, и элюирование фермента GALNS из удерживающей колонки;
в) необязательно, фильтрацию элюата из улавливающей колонки из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;
г) корректирование уровня рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата из этапа в) к кислому значению рН, и фильтрацию элюата с кислым скорректированным рН из улавливающей колонки или фильтрата со скорректированным кислым рН;
д) загрузку элюата с кислым скорректированным рН из улавливающей колонки или фильтрата Q с кислым скорректированным рН из этапа г) в промежуточную колонку, промывание промежуточной колонки в условиях, при которых фермент GALNS остается в промежуточной колонке, и элюирование фермента GALNS из промежуточной колонки;
е) корректировку рН элюата из промежуточной колонки из этапа д) к более низкому для вирусной инактивации; и
ж) загрузку элюата с низким рН для вирусной инактивации из этапа е) в полирующую колонку, промывание полирующей колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в полирующей колонке, и элюирование фермента GALNS из полирующей колонки.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что питательная среда сконцентрирована примерно в 20 раз на этапе а).
3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что фильтр из активированного угля из этапа а) является фильтром с активированным углем Zeta Plus R55.
4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что улавливающая колонка из этапа б) является колонкой для Zn-иммобилизированной аффинной хроматографии с металлом (Zn-IMAC).
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что колонка Zn-IMAC является Zn-хелатной колонкой с сефарозой FF.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выполняют этап в), фильтр является фильтром Mustang Q.
7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что значение рН элюата из улавливающей колонки из этапа б) или фильтрата из этапа в) скорректировано на этапе г) до примерно 4,5±0,1.
8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что промежуточная колонка из этапа д) является катионообменной колонкой.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что катионообменная колонка является колонкой Fractogel EMD SE HiCap.
10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что кислое значение рН для вирусной инактивации корректируют на этапе е) до примерно 3,5±0,1.
11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полирующая колонка из этапа ж) является хроматографической колонкой с гидрофобным взаимодействием (ХГВ).
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что колонка ХГВ является колонкой ToyoPearl Butyl 650M.
13. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно включает:
з) буфер-обмен элюата из полирующей колонки из этапа ж) в композицию;
и) удаление любого остаточного вируса и ДНК путем фильтрации подвергнутой буфер-обмену композиции из этапа з) вирусным фильтром и фильтром ДНК; и
к) добавление неоинного сурфактанта к композиции из этапа и).
14. Способ по п. 13, отличающийся тем, что композиция из этапа з) включает 20 мМ NaOAc/HOAc, 50 мМ NaH2PO4, 30 мМ аргинина HCl, 2% (в/о) сорбитол, pH 5,4.
15. Способ по п. 13, отличающийся тем, что фермент GALNS в композиции из этапа з) скорректирован до примерно 3 мг/мл.
16. Способ по п. 13, отличающийся тем, что вирусный фильтр из этапа и) является фильтром DV20 и фильтр ДНК из этапа и) является фильтром Mustang Q.
17. Способ по п. 13, отличающийся тем, что неоионный сурфактант из этапа к) является полисорбатом 20 (ПС20), при этом концентрация ПС20 в финальной композиции составляет 0,01% (в/о).
18. Способ очистки рекомбинантного фермента N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом такой фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27 - 522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно, имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE, включающий:
а) фильтрацию питательной среды, содержащей фермент GALNS, секретируемый из линии клеток млекопитающего, экспрессирующих фактор модификации сульфатазы человека 1 (SUMF1) и рекомбинантный фермент GALNS человека, ультрафильтрацию/диафильтрацию профильтрованной питательной среды, при этом питательная среда, прошедшая ультрафильтрацию/диафильтрацию, сконцентрирована примерно в 20 раз, и фильтрацию через активированный уголь питательной среды, прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию и сконцентрированной в 20 раз;
б) загрузку питательной среды, сконцентрированной до 20 раз и прошедшей ультрафильтрацию/диафильтрацию и фильтрацию активированным углем, из этапа а) в Zn-хелатную улавливающую колонку с сефарозой FF, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
в) необязательно, фильтрацию элюата из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF из этапа б) через фильтр для удаления вирусов;
г) корректировку рН элюата из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF из этапа б) или фильтрата из этапа в) до примерно рН 4,5±0,1, и фильтрацию элюата с корректированным рН до 4,5 из Zn-хелатной улавливающей колонки с сефарозой FF или фильтрата;
д) загрузку элюата с скорректированным рН до 4,5 из Zn-хелатной улавливающей колонки FF или фильтрата из этапа г) в катионообменную колонку Fractogel EMD SE Hi-Cap, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS остается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
е) корректировку рН элюата из катионообменной колонки Fractogel EMD SE Hi-Cap из этапа д) до примерно рН 3,5±0,1 для вирусной инактивации;
ж) загрузку элюата с инактивированными вирусами и рН 3,5 из этапа е) в полирующую колонку ToyoPearl Butyl 650 M, промывание колонки в условиях, при которых фермент GALNS удерживается в колонке, и элюирование фермента GALNS из колонки;
з) буфер-обмен элюата из полирующей колонки ToyoPearl Butyl 650 M из этапа ж) в композицию, включающую 20 мМ NaOAc/HOAc, 50 мМ NaH2PO4, 30 мМ аргинин HCl, 2% (в/о) сорбитол, pH 5,4, и корректировку концентрации фермента GALNS в композиции до примерно 3 мг/мл;
и) удаление любого остаточного вируса и/или ДНК фильтрацией подвергнутой буфер-обмену композиции из этапа з) с фильтром DV20 и фильтром Mustang Q; и
к) добавление полисорбата 20 (ПС20) к композиции из этапа и) до финальной концентрации 0,01% (в/о).
19. Композиция, очищенная способом по п.1 или 18, отличающаяся тем, что включает рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеет по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 98% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE.
20. Способ лечения субъекта, страдающего мукополисахаридозом типа IVa (МПС IVa) или синдромом Моркио типа А, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, очищенной по п. 1 или 18 и включающей очищенный рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и:
(i) имеет чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) обладает по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно, имеет от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 98% указанного фермента GALNS представлен в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE.
21. Композиция, включающая
(а) рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, включающий аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеющая чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) имеющая по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) необязательно имеющая от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
и при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено путем SDS-CGE, и
(б) один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ, включающих:
(i) количество фосфатного буфера, эффективного для снижения дефосфорилирования указанного фермента GALNS; и
(ii) стабилизирующее количество одного или более стабилизаторов, выбранных из группы, состоящей из солей аминокислот, буферов аминокислот, сурфактантов и полиолов;
при этом указанная композиция имеет значение рН примерно 5,0-5,8.
22. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фосфатный буфер в композиции представлен в концентрации между примерно 25 мМ и 75 мМ.
23. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что композиция дополнительно включает второй буфер, необязательно ацетатный буфер.
24. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является буфером или солью аргинина или гистидина, необязательно аргинина гидрохлоридом.
25. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является полисорбатом, необязательно полисорбатом 20.
26. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизатор является трехатомным или высшим сахароспиртом, необязательно сорбитолом.
27. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что включает буфер или соль аргинина, полисорбат и полиол.
28. Способ предотвращения дефосфорилирования рекомбинантного фермента GALNS человека, включающий смешивание фермента GALNS и фосфатного буфера до финальной концентрации фосфатного буфера между примерно 25 мМ и 75 мМ.
29. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что чистота фермента GALNS составляет по меньшей мере 95%, как это определено ОФ-ВЭЖХ.
30. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что от 50% до 80% фермента GALNS связывается с рецептором маннозо-6-фосфата в колонке.
31. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-5 нМ.
32. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-3,5 нМ.
33. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что концентрация фермента GALNS составляет от примерно 0,5 до 1,5 мг/мл.
34. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что буферные агенты являются NaOAc/HOAc и NaH2PO4.
35. Композиция по п. 34, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет от примерно 10 до 30 мМ, и концентрация NaH2PO4 составляет от примерно 25 до 75 мМ.
36. Композиция по п. 21, отличающаяся тем, что стабилизаторы являются аргинином HCl, Твин-20 и сорбитолом.
37. Композиция по п. 36, отличающаяся тем, что концентрация аргинина HCl составляет от примерно 10 до 50 мМ, концентрация Твин-20 составляет от примерно 0,005% до 0,015% (в/о), а концентрация сорбитола составляет от примерно 1,0% до 3,0% (в/о).
38. Композиция, включающая
(а) рекомбинантный фермент N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы (GALNS) человека, при этом указанный фермент GALNS включает аминокислотную последовательность, идентичную по меньшей мере на 95% аминокислотам 27-522 последовательности SEQ ID NO:4, и
(i) имеющая чистоту по меньшей мере примерно 95%, как это определено окрашиванием Кумасси синим при проведении анализа SDS-PAGE в невосстанавливающих условиях,
(ii) обладающая по меньшей мере примерно 50% конверсии остатка цистеина в положении 53 в Cα-формилглицин (FGly), и
(iii) имеющая от 0,5 до 0,8 бис-фосфорилированных олигоманнозных цепей на мономерную белковую цепь,
при этом по меньшей мере 97% указанного фермента GALNS представлено в форме предшественника, как это определено окрашиванием Кумасси-синим при проведении анализа SDS-PAGE в восстанавливающих условиях, и
(б) один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ, включающих:
(i) NaOAc/HOAc и NaH2PO4 в качестве буферных агентов;
(ii) аргинин HCl, Твин-20 и сорбитол в качестве стабилизаторов; и
(iii) pH примерно 5,4±0,4.
39. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что чистота фермента GALNS составляет по меньшей мере 95%, как это определено ОФ-ВЭЖХ.
40. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что от 50% до 80% фермента GALNS связывается в колонке с рецептором маннозо-6-фосфата.
41. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-5 нМ.
42. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что фермент GALNS обнаруживает специфический захват (K-захват) фибробластами в количестве примерно 1-3,5 нМ.
43. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация фермента GALNS составляет примерно 1,0±0,5 мг/мл.
44. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет примерно 20±10 мМ, и концентрация NaH2PO4 составляет примерно 50±25 мМ.
45. Композиция по п. 38, отличающаяся тем, что концентрация аргинина HCl составляет примерно 30±20 мМ, концентрация Твин-20 составляет примерно 0,01%±0,005% (в/о), а концентрация сорбитола составляет примерно 2,0%±1,0% (в/о).
46. Композиция по п. 45, отличающаяся тем, что концентрация NaOAc/HOAc составляет примерно 20±10 мМ, а концентрация NaH2PO4 составляет примерно 50±25 мМ.
RU2013107765A 2010-07-22 2011-07-22 Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение RU2607376C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36671410P 2010-07-22 2010-07-22
US61/366,714 2010-07-22
PCT/US2011/045011 WO2012012718A2 (en) 2010-07-22 2011-07-22 Manufacture of active highly phosphorylated human n-acetylgalactosamine-6-sulfatase and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013107765A true RU2013107765A (ru) 2014-08-27
RU2607376C2 RU2607376C2 (ru) 2017-01-10

Family

ID=44543776

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013107765A RU2607376C2 (ru) 2010-07-22 2011-07-22 Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение

Country Status (28)

Country Link
US (3) US8765437B2 (ru)
EP (1) EP2595650B1 (ru)
JP (2) JP6030553B2 (ru)
KR (2) KR101598897B1 (ru)
CN (1) CN103037895B (ru)
AR (2) AR082319A1 (ru)
AU (1) AU2011280937B2 (ru)
BR (1) BR112013001558B1 (ru)
CA (2) CA3146151A1 (ru)
CL (2) CL2013000219A1 (ru)
CY (1) CY1118934T1 (ru)
DK (1) DK2595650T3 (ru)
ES (1) ES2616263T3 (ru)
HR (1) HRP20170245T1 (ru)
HU (1) HUE033163T2 (ru)
IL (2) IL224125B (ru)
LT (1) LT2595650T (ru)
MX (1) MX341838B (ru)
PE (3) PE20171798A1 (ru)
PL (1) PL2595650T3 (ru)
PT (1) PT2595650T (ru)
RS (1) RS55669B1 (ru)
RU (1) RU2607376C2 (ru)
SG (1) SG187580A1 (ru)
SI (1) SI2595650T1 (ru)
SM (1) SMT201700106B (ru)
WO (1) WO2012012718A2 (ru)
ZA (1) ZA201300286B (ru)

Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HUE032074T2 (en) * 2008-01-18 2017-08-28 Biomarin Pharm Inc Preparation and use of active, highly phosphorylated, human lisosomal sulfatase enzymes
US8956859B1 (en) 2010-08-13 2015-02-17 Aviex Technologies Llc Compositions and methods for determining successful immunization by one or more vaccines
WO2013119715A1 (en) * 2012-02-07 2013-08-15 Saint Louis University Determination of immunogenic peptides in lysosomal enzymes and induction of oral tolerance
KR101380740B1 (ko) 2012-06-29 2014-04-11 쉐어 휴먼 제네텍 세러피스, 인코포레이티드 이듀로네이트-2-설파타제의 정제
US11529397B2 (en) 2018-01-22 2022-12-20 Saint Louis University Method of treating mucopolysaccharidosis type IVA
AU2014243749A1 (en) 2013-03-13 2015-08-06 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Method of characterizing lysosomal enzymes
WO2014143622A1 (en) * 2013-03-13 2014-09-18 Seattle Genetics, Inc. ACTIVATED CARBON FILTRATION FOR PURIFICATION OF BENZODIAZEPINE ADCs
WO2014201220A1 (en) * 2013-06-12 2014-12-18 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Methods for detecting prostate cancer
EP3019521A1 (en) 2013-07-12 2016-05-18 EMD Millipore Corporation A method of determining virus removal from a sample containing a target protein using activated carbon
US20170191041A1 (en) * 2014-07-11 2017-07-06 Biostrategies LC Materials and methods for treating disorders associated with sulfatase enzymes
US10472615B2 (en) 2016-01-21 2019-11-12 Saint Louis University Reduced immunogenic proteins for lysosomal storage disorders
WO2017189432A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 R.P. Scherer Technologies, Llc Antibody conjugates and methods of making and using the same
WO2019045149A1 (en) * 2017-08-31 2019-03-07 Green Cross Corporation PROCESS FOR PURIFYING SULFATASE PROTEIN
RU2763990C2 (ru) * 2020-02-19 2022-01-12 Акционерное общество "ГЕНЕРИУМ" Клетка, продуцирующая с высокой эффективностью активный белок арилсульфатазу в, и способ получения этой клетки
WO2021216460A1 (en) * 2020-04-19 2021-10-28 Figene, Llc Gene modified fibroblasts for therapeutic applications
WO2023150387A1 (en) * 2022-02-07 2023-08-10 M6P Therapeutics, Inc. Compositions comprising acid alpha glucosidase and methods of use thereof
TW202403043A (zh) * 2022-03-18 2024-01-16 美商健臻公司 重組人類酸性鞘磷脂酶醫藥組合物及方法

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4394448A (en) 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
US4391904A (en) 1979-12-26 1983-07-05 Syva Company Test strip kits in immunoassays and compositions therein
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US5186941A (en) 1983-05-06 1993-02-16 Vestar, Inc. Vesicle formulation for the controlled release of therapeutic agents
JPS62122588A (ja) 1985-11-22 1987-06-03 Taiyo Fishery Co Ltd 純コンドロイチナ−ゼの製造法
US6048729A (en) 1987-05-01 2000-04-11 Transkaryotic Therapies, Inc. In vivo protein production and delivery system for gene therapy
NZ245015A (en) 1991-11-05 1995-12-21 Transkaryotic Therapies Inc Delivery of human growth hormone through the administration of transfected cell lines encoding human growth hormone, which are physically protected from host immune response; the transfected cells and their production
US5824784A (en) 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
TW492882B (en) 1997-11-28 2002-07-01 Caleb Pharmaceuticals Inc Cholinergic antagonist plaster composition
US6689600B1 (en) * 1998-11-16 2004-02-10 Introgen Therapeutics, Inc. Formulation of adenovirus for gene therapy
US7083793B2 (en) 1999-02-26 2006-08-01 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Tango 243 polypeptides and uses thereof
US6537785B1 (en) 1999-09-14 2003-03-25 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Methods of treating lysosomal storage diseases
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
RU2195492C2 (ru) * 2000-09-04 2002-12-27 Институт физиологии Коми научного центра Уральского отделения РАН Способ получения пектолитического ферментного препарата
EP1395669B1 (en) 2001-01-26 2009-07-22 Selexis S.A. Matrix attachment regions and methods for use thereof
JP2006508643A (ja) * 2002-07-01 2006-03-16 アーキオン ライフ サイエンシーズ エルエルシー ディー／ビー／エー バイオ−テクニカル リソーセズ ディビジョン グルコサミンおよびｎ−アセチルグルコサミン製造のためのプロセスおよび材料
NZ603330A (en) 2003-02-11 2015-02-27 Shire Human Genetic Therapies Diagnosis and treatment of multiple sulfatase deficiency and other sulfatase deficiencies
JP2007277094A (ja) * 2004-06-29 2007-10-25 Chemo Sero Therapeut Res Inst 改変ダニ主要アレルゲン含有医薬組成物
BRPI0518661A2 (pt) * 2004-12-22 2008-12-02 Ambrx Inc mÉtodos para expressço e purificaÇço do hormânio do crescimento humano recombinante
CA2649538C (en) * 2006-04-21 2014-06-03 Yatin Gokarn Buffering agents for biopharmaceutical formulations
US20080231439A1 (en) 2007-03-22 2008-09-25 Inventec Corporation Activity Detection Circuit for a Storage Device
CA2904458C (en) * 2007-11-30 2017-07-25 Wolfgang Fraunhofer Protein formulations and methods of making same
US7722865B2 (en) * 2008-01-18 2010-05-25 Biomarin Pharmaceutical Inc. Manufacture of active highly phosphorylated human lysosomal sulfatase enzymes and uses thereof
HUE032074T2 (en) * 2008-01-18 2017-08-28 Biomarin Pharm Inc Preparation and use of active, highly phosphorylated, human lisosomal sulfatase enzymes
EP2196476A1 (en) * 2008-12-10 2010-06-16 Novartis Ag Antibody formulation

Also Published As

Publication number Publication date
RU2607376C2 (ru) 2017-01-10
HUE033163T2 (en) 2017-11-28
US20120189605A1 (en) 2012-07-26
BR112013001558B1 (pt) 2022-08-16
KR20150038715A (ko) 2015-04-08
CA2805673C (en) 2022-04-05
WO2012012718A2 (en) 2012-01-26
CL2013000219A1 (es) 2014-07-11
IL260282B (en) 2020-05-31
KR101949906B1 (ko) 2019-04-22
ZA201300286B (en) 2014-03-26
PE20171799A1 (es) 2017-12-28
CA3146151A1 (en) 2012-01-26
RS55669B1 (sr) 2017-06-30
EP2595650A2 (en) 2013-05-29
SMT201700106B (it) 2017-03-08
BR112013001558A2 (pt) 2020-08-04
MX341838B (es) 2016-09-05
US8765437B2 (en) 2014-07-01
SG187580A1 (en) 2013-03-28
AU2011280937B2 (en) 2016-06-09
KR101598897B1 (ko) 2016-03-03
AU2011280937A1 (en) 2013-01-31
DK2595650T3 (en) 2017-02-27
JP2013532986A (ja) 2013-08-22
AR082319A1 (es) 2012-11-28
US20140341878A1 (en) 2014-11-20
ES2616263T3 (es) 2017-06-12
CA2805673A1 (en) 2012-01-26
US8940513B2 (en) 2015-01-27
CN103037895B (zh) 2016-11-09
US9567572B2 (en) 2017-02-14
JP6030553B2 (ja) 2016-11-24
CN103037895A (zh) 2013-04-10
PE20171798A1 (es) 2017-12-28
WO2012012718A3 (en) 2012-04-05
PT2595650T (pt) 2017-02-22
EP2595650B1 (en) 2016-11-16
KR20130105605A (ko) 2013-09-25
IL260282A (en) 2018-07-31
IL224125B (en) 2019-02-28
AR119552A2 (es) 2021-12-29
CL2017000498A1 (es) 2017-11-24
CY1118934T1 (el) 2018-01-10
LT2595650T (lt) 2017-03-10
PE20131140A1 (es) 2013-10-17
HRP20170245T1 (hr) 2017-04-21
MX2013000908A (es) 2013-07-05
JP2016178950A (ja) 2016-10-13
US20160186149A1 (en) 2016-06-30
SI2595650T1 (sl) 2017-04-26
PL2595650T3 (pl) 2017-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2013107765A (ru) Производство активной высокофосфорилированной n-ацетилгалактозамин-6-сульфатазы человека и ее применение
JP2013532986A5 (ru)
JP7407161B2 (ja) アリールスルファターゼａの精製方法
ES2774408T3 (es) Método de purificación de proteína
KR101380740B1 (ko) 이듀로네이트-2-설파타제의 정제
KR102382662B1 (ko) 방법
CA2959947A1 (fr) Procede de purification d'un anticorps monoclonal
JP2009273427A (ja) 組換え体ヒトｆｓｈの製造方法
CN110167575B (zh) 因子xa衍生物的制备
EP0534812A1 (fr) Procédé de purification du facteur VIII et préparations obtenues
JP2014518508A5 (ru)
KR20060070543A (ko) 알파-１-항트립신 용액의 제조 방법
AU645794B2 (en) Process for purifying polypeptide
CN107208081B (zh) 用于从包含污染宿主细胞蛋白质的材料纯化重组人α-半乳糖苷酶A的方法
EP4180521A1 (en) Method for production of varicella zoster virus surface protein antigen
CN102834111A (zh) 用于生产和纯化重组溶酶体α-甘露糖苷酶的方法
FR2952639A1 (fr) Procede de purification de facteur b
EP2699678B1 (fr) Procede de preparation d'un concentre de facteur xi
FR2952640A1 (fr) Procede de fabrication d'une preparation de facteur h
US11584777B2 (en) Method for purifying a sulfatase protein
US20120177603A1 (en) Method for the purification of interferon-b
JP2011067202A (ja) タンパク質水溶液の安定化剤、この安定化剤を含有するタンパク質水溶液及びタンパク質の安定化方法
CN113121638B (zh) 一种纯化重组蛋白的方法
KR101426459B1 (ko) 형질전환 벼 세포 현탁 배양으로 생산된 재조합 트립신의 효율적인 정제 방법
JP4651536B2 (ja) 組換えアンチトロンビンの製造方法