PT90506B - Processo para a preparacao de compostos macrolidos - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO i A presente invenção refere-se a novos compostos j! macrólidos, aos processos para a sua preparação e às composiH ções que os contêm. i

Pedido de Patente Inglesa 2166436 e o Pedido de Patente Europeia 170006 descrevem a preparação de uma classe í de macrólidos, designada por S541 ou LL-F28249. Os derivados destes compostos encontram-se descritos, por exemplo, nos Pedidos das Patentes Inglesas n⁹s 2176182A e 2192630A. Descobriu-se agora outro grupo de compostos S541 que possuem acti- j vidade pesticida conforme adiante descrito e que também são !

M.A. λ

eiiBas^a®SgnaS23^^^^SaESí!r úteis como intermediários para a preparação de outros compostos S541.

Assim, de acordo com um dos seus aspectos, a presente invenção proporciona compostos de fórmula (1)

CH.

H

13 15	17	21
k	18

\lj^20

CH-, z<23^_Yg'' ³

(1)

	7 3
0	.6 4

CH₂R' e dos seus sais, em que

R³ representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo;

2

Y representa -CH_?-, Y representa -CH- e X reR² R³ \Z presenta / ^em Q^ue representa um átomo de hidrogénio ou um grupo OR (em que OR® representa um grupo hidroxilo ou um grupo hidroxilo substituido possuindo até 25 átomos de carbono) e R representa um átomo de hidrogénio, ou R e R^J em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados reQ Q presentam >C=0, >C=CH₂ ou >C=NOR^ (em que R^ representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo(C^-Cg) ou um grupo al2

Q quenilo(Gg-Cg)) e o grupo C=NOír encontra-se na Configuração E_7 ou -Y^-X-Y^- representa -CH=CH-CH- ou -ΟΗ₂-0Η=0-;

8

R^ representa um grupo 0R conforme anteriormente definido e R^ representa um átomo de hidrogénio, ou R^ e R^ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados re9a z 9a presentam 0=0 ou C=N0R (em que R possui as significaQ ções anteriormente definidas para R );

,

R representa um átomo de hidrogénio e R represen ta -CHgOH, -CHO, -C0₂H ou um grupo amida ou ester de ácido carboxílico; ou R^ representa um grupo hidroxilo e R represen ta um grupo metilo; e

R representa um átomo de hidrogénio ou quando R 7 x representar um grupo -CH₂0H, então R pode representar também um grupo hidroxilo.

Quando R representar um grupo ester de ácido carboxílico este pode ser, por exemplo, um grupo -CO₉R^^ (em que R representa um grupo alifático, aralifático ou aromático, por exemplo, um grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, ciclo-al quilo, aralquilo ou arilo).

Quando R representar um grupo amida de ácido carT7 18 boxílico este pode ser, por exemplo, um grupo -CONR R (em η η -t o que R e R podem representar individual e independentemente um átomo de hidrogénio ou um grupo conforme anteriormente definido para R^ ).

Q grupo R , quando estiver presente nos compostos de Fórmula (1), pode representar um grupo acilo, por exemplo, um grupo da fórmula R^CO- ou R^OCO- ou R^OCS- (em que R^^ representa um grupo alifático, aralifático ou aromático, por exemplo um grupo alquilo, alquenilo, alquinilo, ciclo-alquilo, aralquilo ou arilo), um grupo formilo, um grupo R^^ o qual possui as significações anteriormente definidas para R , um grupo R^x S0₂- (em que R representa um grupo alquilo(C^-C^)

ou arilo(0/--0_{Ί n})), um grupo sililo, um grupo acetal cíclico o j_u T_3 ou aciclico, um grupo -C0(CH₂)_nC0₂R (em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo conforme anteriormente definido para R^ e n representa 0, 1 ou 2) ou um grupo (em que R^ e R^ podem representar individual e independentemente um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo

Quando R^^, R^^, R^, R^ ou R^® representarem grupos alquilo, podem ser por exemplo grupos alquilo (C-^-Cg), por exemplo grupos metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo, t-butilo ou n-heptilo, os quais podem ser tam bém substituídos. Os grupos alquilo R^, R^, R^^ θ R^® podem ser substituídos, por exemplo, por um ou vários, eventualmente dois ou três átomos de halogéneo (por exemplo átomos de cloro ou de bromo), ou por um grupo carboxi, alcoxi(C-,-C .) (por exemplo metoxi, etoxi), fenoxi ou sililoxi. Quando R representar um grupo alquilo substituído, pode ser substituído por um grupo ciclo-alquilo, por exemplo ciclo-propilo.

Quando R^^, R^\ R^, R^ θ R¹⁸ representarem gru pos alquenilo ou alquinilo, possuem preferencialmente 2-8 át£ mos de carbono e quando representarem grupos ciclo-alquilo, podem ser, por exemplo, grupos ciclo-alquilo(C^-C^₂) tais como ciclo-alquilo (C-^-Cy ), por exemplo grupos ciclo-pentilo.

Quando R^⁸, R^\ R^, R^? _e representarem gru pos aralquilo, possuem preferencialmente 1-6 átomos de carbono no radical alquilo, e o grupo(s) arilo pode ser carbocicli co ou heterociclico e contem preferencialmente 4-15 átomos de carbono.. por exemplo fenilo. Os exemplos de tais grupos englo bam fen-alquilo(C^-Cg), por exemplo grupos benzilo.

Quando R^⁸, R^\ R^, R^ _e R^® representarem gru pos arilo, podem ser carbociclicos ou heterociclicos e possuem preferencialmente 4-15 átomos de carbono, por exemplo fenilo.

- 4 8 12

Quando R representar um grupo R SOg-» pode ser por exemplo um grupo metil-sulfonilo ou p-tolueno-sulfonilo.

g

Quando R representar um grupo acetal cíclico, po. de possuir por exemplo 5-7 membros no anel tal como um grupo tetra-hidropiranilo.

10 16

Quando R representar um grupo sililo ou R , R ,

1T 18

R^x ou R^x contiver um substituinte sililoxi, o grupo sililo pode suportar três grupos que podem ser iguais ou diferentes, seleccionados entre grupos alquilo, alquenilo, alcoxi, ciclo-alquilo, aralquilo, arilo ou ariloxi. Tais grupos podem ser tal como anteriormente definidos e particularmente englobam os grupos metilo, t-butilo e fenilo. Os exemplos particulares desses grupos sililo são trimetil-sililo e t-butil-dimetil-si lilo.

13

Quando R representar um grupo -CO(CH₉) CO₉R , ^c 13 pode ser por exemplo um grupo -COCOgR ou -COCHgCí^C^R em que R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo alquilo (C^-C^) (por exemplo metilo ou etilo).

Quando R^ representar um grupo R^^R^^NCO-, R^ θ 15

R podem representar individual e independentemente, por exemplo, um átomo de hidrogénio ou um grupo metilo ou etilo.

9a

Quando R ou R representarem um grupo alquilo (C^-Οθ) pode ser por exemplo, um grupo metilo, etilo, n-propi. lo, i-propilo, n-butilo, i-butilo ou t-butilo, e preferencial mente é um grupo metilo.

9a

Quando R ou R representar um grupo alquenilo (C-j-Cg) pode ser, por exemplo um grupo alilo.

Os compostos de fórmula (1) que contiverem um gru po ácido podem formar sais com bases adequadas. Os exemplos

- 5 desses seis englobam os sais de metais alcalinos tais como os sais de sódio e de potássio.

Os compostos nos quais R representa um grupo amida ou ester de ácido carboxílico são geralmente preparados tendo em consideração a sua actividade. Quando R representar um grupo -COgR^, R^^ representa preferencialmente um grupo alquilo(CL-Cp) conforme anteriormente definido, particularmen te metilo. Quando R representar um grupo -CONR^X R^x , R^x representa preferencialmente um átomo de hidrogénio e R repre. senta preferencialmente um grupo alquilo (C-^-Cg) conforme ante, riormente definido, particularmente n-butilo.

! Nos compostos de fórmula (1) R¹ representa prefeJí rencialmente um grupo isopropilo.

Um grupo importante de compostos de fórmula (1) é ί 1 2 aquele em que Y representa -C^-, Y representa -CH- e X re-

presenta —C— . Os compostos particularmente importantes /v 2 deste tipo são aqueles em que R representa um átomo de hidro.

¹ génio ou um grupo hidroxi, etoxi ou acetiloxi e R representa z 2 3 : um átomo de hidrogénio ou R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0, >0=0^ ou >C=NOCH₃.

Outro grupo importante de compostos de fórmula i (1) é aquele em que R^ representa um grupo hidroxi, metoxi ou ’ 4 5 aciloxi (por exemplo acetiloxi) ou R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=N0CH₉. 4

R representa preferencialmente um grupo hidroxi.

^! Os compostos activos importantes de acordo com a ί: presente invenção são os de fórmula (1) na qual:

- 6 R representa um grupo -CO₉CH-,, R representa um 1 2 grupo isopropilo, Y representa -CH₉-, Y representa -CH-, X a ^z 5 representa >C=HOCH^, R representa um grupo hidroxilo e R representa um átomo de hidrogénio; e

R representa um grupo -COMH(CH₉),CH₇, R^ represen 1 i 2-⁵ ta um grupo isopropilo, Y representa -CH₉-, Y representa 4

-CH-, Σ representa >C==NOCH₇, R representa um grupo hidroxic >

lo e R⁵ representa um átomo de hidrogénio.

R representa um grupo -CO₉H, R^ representa um gru 1 ^2 po isopropilo, Y representa -CH₉-, Y representa -CH-, X re presenta >C=NOCH₉, R^4- representa um grupo hidroxi e R , R e 7 7

R representam átomos de hidrogénio»

Os compostos de fórmula (1) na qual R representa -COOH são particularmente úteis como intermediários para a preparação de outros compostos de fórmula (1).

Tal como anteriormente indicado os compostos da presente invenção possuem actividade antibiótica, por exemplo actividade anti-helmíntica, por exemplo contra nematoides e em particular possuem actividade anti-endoparasitica e anti-ectoparasitica.

possível demonstrar a actividade antibiótica dos compostos de fórmula (1), por exemplo, através da sua actividade contra nematoides parasitas tais como Hematospiroides dubius e Caenorhabditis elegans.

Os ectoparasitas e os endoparasitas infectam os seres humanos e uma diversidade de animais e são particularmente correntes em animais de explorações pecuárias tais como os suínos, ovídeos, bovinos, caprinos e em avicultura (por exemplo na criação de galinhas e de perús), equídeos, coelhos, aves de caça, aves de gaiola e em animais domésticos tais co- 7 -

mo os cães, gatos, porcos da índia, gerbos e murganhos. As in fecções parasiticas do gado, provocando anemia, desnutrição de perda de peso constituem uma das causas fundamentais das perdas económicas em todo o mundo.

Os exemplos dos géneros de endoparasitas que infectam esses animais e/ou os seres humanos são Ancylostoma, Ascaridia, Ascaris, Aspicularis, Brugia, Bunostomum, Capillaria, Charbertia, Cooperia, Dictyocaulus, Dirofilaria, Dracunculus, Enterobius, Haemonchus, Heterakis, Loa, Necator, Nematodirus, Nematospiroides (Heligomoroides), Nippostrongylus, Oesophagostomum, Onchocerca, Ostertagia, Oxyuris, Parascaris, Strongylus, Strongyloides, Syphacia, Toxascaris, Toxocara, Trichonema, Trichostrongylus, Trichinella, Trichuris, Triodont ophorus, Uneinaria e Wuchereria.

!

i Os exemplos de ectoparasitas que infectam os anij mais e/ou os seres humanos são os ectoparasitas artrópodes ’ tais como os insectos de picada, varejeiras, pulgas, piolhos, ácaros, insectos sugadores, carrapatos e outros pragas de diç teros.

Os exemplos dos géneros de ectoparasitas que ini fectam os animais e/ou os seres humanos são Ambylomma, BoophiIi lus, Chorioptes, Culliphore, Demodex, Damalinia, Dermatobia, ^!l Gastrophilus, Haematobia, Haematopinus, Haemophysalis, Hyaloma, Hypoderma, Ixodes, Linognathus, lucilia, Melophagus, Oes! trus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhipicepha^! lus, Sarcoptes, Stomoxys e Tabanus.

[ Além disso, os compostos de fórmula (I) também são utilizáveis no combate às pragas de insectos, ácaros e ne matoides em agricultura, horticultura, silvicultura, saúde pú ! blica e produtos armazenados. E possível tratar eficazmente i

i as pragas do solo e das culturas de plantas, incluindo cej reais (por exemplo trigo, cevada, milho e arroz), vegetais (por exemplo soja), frutos (por exemplo maças, uvas e citrinos), e bem assim das culturas de raízes (por exemplo beterra ba sacarina, batatas). Os exemplos particulares dessas pragas são os ácaros dos frutos e os afídeos tais como os Aphis fabae, Aulacorthum circumflexum, Myzus persicae, Eephotettix cincticeps, Nilparvata lugens, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urticae e os membros do género Trialeuroides; nematoides tais como os membros dos géneros Aphelencoides, Globodera, Heterodera, Meloidogyne e Panagrellus; lepidopteros tais como Heliothis, Plutella e Spodoptera; gorgulhos dos grãos tais como Anthonomus grandis e Sitophilus granarius; escaravelhos da farinha tais como Tribolium castaneum; moscas como a Musca domestica; himenópt£ ros; mineiros das folhas; Pear psylla;Thrips tahaci; baratas tais como Blatella germanica e Periplaneta americana e mosquitos tais como Aedes aegypti.

Deste modo, de acordo com a presente invenção prç) porciona-se compostos de fórmula (1) conforme anteriormente definida, os quais podem ser utilizados como antibióticos. Em particular é possível utilizá-los no tratamento de animais e de seres humanos com infecções endoparasiticas, ectoparasiticas e/ou fúngicas e como pesticidas em agricultura, horticultura, ou silvicultura para combater pragas de insectos, ácaros e nematoides. Também podem ser utilizados genericamente como pesticidas para combater ou controlar pragas noutras cir cunstancias, por exemplo em armazéns, edifícios ou noutros lo cais públicos ou onde se localizem as pragas. Em geral, é po.s sível aplicar os compostos quer ao hospedeiro (animal, ser hu mano, plantas ou qualquer tipo de vegetação) ou às próprias pragas ou ao local onde se desenvolvem.

Os compostos da presente invenção podem ser formu lados para administração por qualquer via conveniente para utilização em medicina veterinária ou humana pelo que a invenção engloba no seu âmbito as composições farmacêuticas constl.

- 9 tuidas por um composto de acordo com a invenção adaptadas para utilização em medicina veterinária ou humana. Tais composições podem ser apresentadas para utilização por um processo convencional com o auxílio de um ou vários veículos ou excipientes adequados. As composições da presente invenção englobam as que se encontram numa forma especialmente formulada pa. ra utilização parenteral (incluindo a administração intramamá ria), oral, rectal, tópica, por implantação, oftálmica, nasal ou genito-urinária.

Os compostos de fórmula (1) podem ser formulados para utilização em medicina veterinária ou humana de acordo com os métodos gerais descritos no Pedido de Patente do Reino Unido Ns 2166436.

As dosagens diárias totais dos compostos da presente invenção utilizados quer em medicina veterinária quer humana estarão adequadamente compreendidas no intervalo entre

1-2000 g/kg de peso do corpo, de preferência entre 50-1000 g/ /kg podendo estas ser administradas em doses divididas, por exemplo 1-4 vezes por dia.

Os compostos de acordo com a presente invenção po dem ser formulados por qualquer via conveniente para utilização em horticultura ou agricultura pelo que a invenção engloba no seu âmbito as composições constituídas por um composto de acordo com a presente invenção, adaptadas para utilização hortícola ou agrícola. Tais formulações englobam os tipos secos ou líquidos, por exemplo poeiras, incluindo as bases de poeiras ou de concentrados, pós, englobando os pós solúveis ou humedecíveis, granulados, incluindo microgrênulos ou grênu los dispersíveis, aglomerados, composições fluidificáveis, emulsões tais como as emulsões diluídas ou os concentrados emulsionáveis, banhos tais como os banhos para raízes e para sementes, revestimentos para sementes, aglomerados para semen tes, concentrados oleosos, soluções oleosas, injecções, por exemplo injecções para os caules, aspersões, fumigações e névoas .

De um modo geral essas formulações englobarão o composto em associação com um veículo ou diluente adequado. Tais veículos e diluentes encontram-se descritos no Pedido de Patente Inglesa n^e 2166436„

Nas formulações a concentração do material activo está geralmente compreendida entre 0,01% e 99% e mais preferencialmente entre 0,01% e 40% em peso.

Os produtos comerciais são fornecidos geralmente como composições concentradas para serem diluídas até se obter uma concentração apropriada, por exemplo entre 0,001 e 0,0001% em peso, para fins de utilização.

A proporção de aplicação do composto depende de diversos factores incluindo o tipo de praga envolvido e o grau de infestação. Todavia, de um modo geral considera-se adequada uma proporção entre 10 g/ha e 10 xg/ha; preferencialmente entre 10 g/ha e um kg/ha para o controlo de ácaros e de insectos e entre 50 g/ha e 10 kg/ha para o controlo de nematoides.

Para utilização em medicina veterinária e para utilização hortícola e agrícola pode ser desejável utilizar o caldo de fermentação integral como fonte de composto activo. Também pode ser adequado utilizar o caldo seco (contendo mice. lios) ou utilizar micelios separados do caldo e pasterizados ou mais preferencialmente secos, por exemplo por aspersão, por liofilização ou por centrifugação. Se desejado, é possível formular o caldo ou os micelios em composições que englobem veículos, excipientes ou diluentes inertes convencionais, conforme descrito antes.

- 11 Os compostos antibióticos da presente invenção po. dem ser administrados ou utilizados em combinação com outros ingredientes activos.

Em particular é possível utilizar um composto antibiótico da presente invenção em conjunto com outros compostos. Por exemplo, isto pode ocorrer quando se utiliza caldo de fermentação integral antes da separação dos compostos da presente invenção ou quando se faz reagir os produtos de fermentação brutos de acordo com processos de fermentação da pre. sente invenção, sem separação prévia ou posterior; por exemplo, isto pode ser preferível na utilização agrícola de um composto, quando for importante manter baixos custos de produ ção.

Os compostos de acordo com a presente invenção po dem ser preparados segundo diversos processos conforme adiante descrito, em que R , R , R , R , R , X, Y^x e Y possuem as significações definidas para a fórmula geral (1) salvo quando especificado de outro modo. Em alguns desses processos pode ser necessário proteger um ou vários dos grupos hidroxilo pre sentes no material de partida, antes de se efectuar a reacção descrita. Nesses casos pode ser necessário desproteger depois 0 mesmo(s) grupo(s) hidroxilo logo que a reacção tenha ocorri do, para se obter o desejado composto da presente invenção. E possível utilizar métodos convencionais de protecção e de des. protecção, por exemplo, conforme descrito em ’Protective Groups in Organic Synthesis’ por Theodora W. Greene (Wiley-In terscience, New York 1981) e 'Protective Groups in Organic Chemistry’ por J. P. W. McOmie (Plenum Press, London 1973). Deste modo, é possível remover um grupo acilo tal como um gru po acetilo, por exemplo, por hidrólise alcalina, utilizando por exemplo hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio ou amónia num álcool aquoso tal como o metanol.

Assim, de acordo com outro aspecto da presente in

venção, proporciona-se um processo para a preparação de um composto de fórmula (1) (na qual R^ representa um átomo de hi drogénio e R representa -CHO ou -COOH, ou R^ represen ta -OH e R representa -CH^), o qual consiste em incubar um composto de fórmula (2)

R (2) ch₃ num meio adequado na presença de um micro-organismo ou de uma enzima dele derivada, ou na presença de uma preparação deriva, da de um micro-organismo que contenha a enzima com interesse susceptível de efectuar a conversão.

Os micro-organismos adequados e os seus extractos para utilização no processo de acordo com a invenção podem ser identificados através de ensaios preliminares em pequena escala concebidos para demonstrar a capacidade de um micro-or ganismo ou de um seu extracto para converter compostos de fór mula (2) em compostos de fórmula (1). Rode confirmar-se a for mação dos compostos de fórmula (1) através de análise cromato gráfica adequada (por exemplo cromatografia líquida de eleva- 13 -

do rendimento) da mistura de reacção.

Descobriu-se que os micro-organismos do género Streptomyces e seus extractos são particularmente adequados para utilização no processo de acordo com a presente invenção.

Os micro-organismos Streptomyces particulares para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as estirpes de Streptomyces griseoplanus, Streptomyces virginiae, Streptomyces cacaoi, Streptomyces spinichromogenes var. kujimyceticus, Streptomyces tendae, Streptomyces aureofaciens, Streptomyces autotrophicus , Streptomyces filamentosus, Streptomyces canescens, Streptomyces deltae, Streptomyces fungicidicus, var. espinomyceticus, Streptomyces mycarofaciens, Streptomyces rimosus, Streptomyces djakartensis, Streptomyces mashuensis e Streptomyces platensis e malvinus, e os mutantes dessas estirpes.

li

I!

¹ Os micro-organismos Streptomyces particularmente f adequados para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as estirpes de Streptomyces mashuensis, j I

Streptomyces rimosus e Streptomyces platensis e malvinus por exemplo Streptomyces mashuensis ISP 5221, Streptomyces rimo! sus NKRL 2455 e Streptomyces platensis e malvinus NKRL 3761 (!

ji e seus mutantes.

i:

Os mutantes das estirpes anteriores podem aparecer espontaneamente ou podem ser produzidos de acordo com diversos métodos incluindo os que se encontram descritos no Pe1; dido de Patente Inglesa n⁵ 2166436.

i |

H j Outras bactérias que se podem utilizar englobam !j Pseudomonas putida, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluo! rescens_? Pseudomonas oleovarans, Mycobacterium rhodochrous, j Micrococcus flavoroseus, Aerobacter aerogenes e Corynebactejj rium simplex.

Outros micro-organismos que se podem utilizar no processo de acordo com a presente invenção englobam fungos e preparações de células de plantas.

Os exemplos de fungos para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam Penicillium oxalicum, Rhizopus nigricans, Calonectria decora_; Aspergillus ochraceus, Cunninghame11a elegans, Rhizopus arrhizus, Giberel· la fu.jikuroi, Absidia orchidis, Absidie cylindrospora, Cunninghame 11a blakesleeana, Cunninghamella echinulata, Mucor hiemlis, Cladosporium herbarum, Curvularia lunata, Pellicularia filamentosa, Aspergillus fumigatus, Aspergillus niger e Fusarium oxysporum.

Os exemplos de preparações de células de plantas para utilização no processo de acordo com a presente invenção englobam as espécies Phaseolus vulgaris L., Citrus paradisi, Nicotiana tabacum L., Coptis japonica, Digitalis purpurea e Dioscorea tokoro. As preparações de células de plantas são particularmente úteis no processo de acordo com a invenção pa ra preparar compostos de fórmula (1) na qual R representa um grupo -C^OH.

Também se pode efectuar a bioconversão utilizando um organismo que contenha 0 material genético de um dos micro -organismos anteriormente referidos que participe na síntese do composto de fórmula (1). Esses organismos podem ser obtidos utilizando técnicas da engenharia genética, incluindo as descritas por D A Hopwood em Oloning genes for Antibiotic Biosynthesis in Streptomyces Spp.: Production of a hybrid antibiotic’ p 409-413 em Microbiology 1985, Ed. L. Lieve, American Society of Microbiology, Washington D.C_O 1985”. E5 possível utilizar essas técnicas por um processo idêntico ao previamente descrito para a clonagem de genes biossintéticos antibióticos, incluindo os genes biossintéticos para actinorodi. na (Malpartida, F. e Hopwood, D. A. 1984, Nature 309, p 462- 15 -

-464), eritromicina (Stanzak, R. e outros, 1986, Biotechnology, 4, p 229-232) e uma enzima importante implicada na produção de penicilina e de cefalosporina em Acremonium chrysogenum (Sansom, S. M. e outros, 1985, Nature, 318, p 191-194).

As enzimas adequadas para utilização no processo de acordo com a presente invenção podem derivar de fontes mui tissimo variadas. Todavia, os micro-organismos Streptomyces anteriormente referidos representam uma fonte particularmente adequada de enzimas susceptíveis de converterem os compostos de fórmula (2) em compostos de fórmula (1).

Num dos aspectos do processo de acordo com a invenção, pode efectuar-se a conversão de um composto de fórmula (2) num composto de fórmula (1) fornecendo o composto de fórmula (2), por exemplo num meio solvente adequado, a uma meio de fermentação constituído pelo micro-organismo anterior mente referido na presença de fontes assimiláveis de carbono,

I azoto e sais minerais. As fontes assimiláveis de carbono, azo ; to e sais minerais podem ser proporcionadas por nutrientes ' simples ou complexos. As fontes de carbono englobarão geralmente a glicose, maltose, amido, glicerol, melaços, dextrina, lactose, sacarose, fructose ácidos carboxílicos, aminoácidos, glicéridos, alcoóis, alcanos e óleos vegetais. As fontes de carbono serão constituídas geralmente por 0,5 a 10% em peso do meio de fermentação.

As fontes de azoto englobarão geralmente farinha ! de soja, licores de infusão de cereais, destilados solúveis, extractos de malte, farinha de semente de algodão, peptonas, farinha de amendoim, extracto de malte, melaços, caseina, mis turas de aminoácidos, amónia (em gaz ou em solução), sais de amónio e nitratos. Também é possível utilizar ureia e outras amidas. As fontes de azoto serão constituídas geralmente por 0,1 a 10% em peso do meio de fermentação.

- 16 K ^..................... I

SSjSaaflSB^BÍ!g?ggBZ^^^SagS«Í->^_leiM________

Os sais minerais nutrientes que é possível incorporar no meio de cultura englobam os sais geralmente utilizados susceptiveis de proporcionar iões de sódio, potássio, amó nio, ferro, magnésio, zinco, cobalto, manganês, vandio, crómio, cálcio, cobre, molibdénio, boro, fosfato, sulfato, clor£ to e carbonato.

Pode estar presente um anti-espumífero para controlar a espuma excessiva e pode adicionar-se intervaladamente conforme necessário.

No início do desenvolvimento da cultura, ou mais frequentemente, quando o micro-organismo já estiver a desenvolver-se, por exemplo 2 a 4 dias após o início da cultura, é possível adicionar um composto de fórmula (2) num solvente or gênico miscível com água (por exemplo um álcool como o metanol ou propan-2-ol, um diol como propan-l,2-ol ou butan-1,3-ol, uma cetona tal como a acetona, um nitrilo tal como o ace. tonitrilo, um éter tal como tetra-hidrofurano ou dioxano, uma amida substituída tal como dimetil-formamida ou um dialquil-sulfóxido tal como o dimetil-sulfóxido).

A cultura do organismo efectuar-se-é geralmente a uma temperatura compreendida entre 20 e 50°C, de preferência entre 25 e 40°G e desejavelmente ocorrerá com arejamento e agitação, por exemplo misturando ou agitando. 0 meio pode ser inicialmente inoculado com uma pequena quantidade de uma suspensão do micro-organismo esporulado, mas no sentido de evitar uma falha no desenvolvimento pode preparar-se um inoculo vegetativo do organismo inoculando uma pequena quantidade do meio de cultura com a forma de esporo do organismo, e o inócu lo vegetativo pode ser transferido para o meio de fermentação ou, mais preferencialmente, para um ou vários passos de disse, minação em que ocorra desenvolvimento adicional antes da trans ferência para o meio de fermentação principal. Geralmente efectuar-se-á a fermentação para valores de pH compreendidos

entre 4,0 e 9,5, preferencialmente entre 5,5 e 8,5 quando estiver presente um organismo Streptomyces e preferencialmente entre 4,0 e 8,5 quando estiver presente um fungo.

Depois de se ter adicionado à cultura um composto de fórmula (2), normalmente com agitação suave, mantem-se a cultura até se acumular o produto desejado. A presença do pro duto no caldo de fermentação pode ser determinada efectuando o controlo dos extractos do caldo por cromatografia líquida de elevado rendimento, e por espectroscopia de UV a 238 nm.

S possível isolar o produto a partir do caldo de fermentação integral utilizando técnicas convencionais de is_o lamento e de separação, conforme descrito nos Pedidos de Patente Ingleses 2166436 e 2176182.

Quando se utiliza células de plantas como parte do processo de fermentação é preferível efectuar a cultura utilizando um meio vegetal contendo um regulador do desenvolvi mento das células das plantas tal como o ácido indol-acético, ácido naftaleno-acético, ácido indol-butírico, ácido 2,4-dicloro-fenoxi-acético, quinetina ou benzil-amino-purina a uma temperatura compreendida entre 15 e 35°G, mantendo-se o valor de pH entre 5,0 e 7,5. Os sais de amónio e os nitratos constituem também fontes preferenciais de azoto presentes no meio de fermentação. A sacarose, fructose e glicose constituem tam bém fontes preferenciais de carbono presentes no meio de fermentação .

De acordo com um aspecto adicional do processo da presente invenção, pode efectuar-se a conversão de um composto de fórmula (2) num composto de fórmula (1) combinando e in cubando um composto de fórmula (2), por exemplo num solvente adequado (por exemplo um solvente orgânico miscível com água conforme anteriormente definido) com uma preparação da enzima da presente invenção desejavelmente numa solução tampão, por

h exemplo a uma temperatura entre 0°C e 60°C, preferencialmente íj entre 20°C e 40°C, por exemplo cerca de 28°C. Geralmente efec.

tusr-se-rá a reacção para valores de pH compreendidos entre

3,5 e 8,5, por exemplo entre 5,5 e 7,5· Se desejado, a reacção pode ser efectuada na presença de um cofactor tal como NAJDH ou NADPH. Quando a reacção estiver completa, isto é, quando o composto de fórmula (2) já não for convertível no composto da presente invenção (conforme determinado pelo controlo dos extractos da mistura de reacção por cromatografia

I líquida de elevado rendimento e por espectroscopia de UV a 238 nm), recupera-se o produto por técnicas convencionais de isolamento e de separação conforme descrito no Pedido de Patente Inglês 2166436 e 2176182.

Pode preparar-se a enzima para utilização no processo da presente invenção, por exemplo, fazendo a cultura de ί um micro-organismo que produza a enzima num meio nutriente.

Os meios nutrientes e as condições de fermentação adequados para a preparação da enzima englobam os anteriormente descritos para a preparação de um composto de fórmula (1) a partir de um composto de fórmula (2) na presença de um micro-organis. mo. 0 momento em que a actividade enzimática necessária atinge um máximo variará, como é evidente, de acordo com 0 micro' -organismo utilizado e, consequentemente, o tempo de cultura óptimo para cada estirpe utilizada é desejavelmente determina do de forma independente.

ii Para os micro-organismos em que a enzima seja ex: j tracelular, é possível utilizar o meio de cultura líquido ou

Hz X o filtrado, apos a remoção de todas as células, como fonte en í zimatica. Quando a enzima estiver associada as células pode i;

j ser libertada por meios convencionais tais como o tratamento ^! por ultrasons, a trituração com esferas de vidro, homogeneíza 'j ção, tratamento com enzimas líticas ou com detergentes, após suspensão das células num tampão adequado.

- 19 I

A preparação resultante, com ou sem a remoção dos fragmentos celulares, pode ser utilizada como fonte enzimática. Todavia é preferível purificar melhor a enzima por meios convencionais. Pode utilizar-se convenientemente a cromatogra fia por lotes ou em coluna com celuloses de permuta iónica ou com adsorventes por afinidade ou com outros adsorventes, por exemplo hidroxil-apatite. Adicionalmente é possível concentrar a enzima ou purificá-la ainda mais por técnicas de criva gem molecular, por exemplo ultrafiltração ou salificação. Em geral, durante os procedimentos de purificação, ó desejável manter o pH em valores compreendidos entre 3 e 11.

Pode utilizar-se a enzima numa forma imobilizada, por exemplo fazendo a sua insolubilização ou captura numa matriz adequada. Deste modo é possível ligar ou associar um extracto da enzima a um polímero orgânico ou inorgânico inerte, capturada sobre uma fibra, ou sobre uma membrana ou polímero tal como gel de poliacrilamida, adsorvida por uma resina de permuta iónica, recticulada com um reagente tal como glutaral deido, ou oclusa num invólucro com a forma de uma pérola. Van tajosamente ó possível utilizar enzimas imobilizadas tanto j nos processos por lotes, após os quais é possível utilizar no vamente a enzima, como nos processos em fluxo contínuo em que

I j os substractos passam através de uma coluna contendo a enzima i imobilizada.

E possível preparar compostos de fórmula (1) na qual R representa um grupo ester de ácido carboxílico tratando um correspondente ácido carboxílico de fórmula (1) na qual

I, > R representa -COOH ou um seu sal ou um seu derivado reactivo, , tal como um halogeneto ácido (por exemplo um anidrido ou clore ' to ácido) com um reagente susceptível de efectuar a conversão ;| nos esteres correspondentes de fórmula (1) e, se desejado, se.

: i ji gue-se a remoção de quaisquer grupos de protecção 5- e/ou 23I -hidroxilo que estejam presentes.

As condições de esterificação adequadas englobam os procedimentos normalizados descritos na literatura. Deste modo, é possível efectuar a esterificação utilizando, por exemplo, um álcool tal como um álcool da fórmula R OH (em que

Q

R possui as significações anteriores).

As esterificações que utilizam alcóois podem ser efectuadas desejavelmente na presença de um agente de conden sação, por exemplo, uma carbo-di-imida tal com Μ,Ν’-diciclo-hexil-carbo-di-imida. Também pode estar presente um agente de ligação ácido tal como uma amina terciária (por exemplo trietil-amina, dimetil-anilina, piridina ou 4-pirrolidino-piri dina).

Também se pode efectuar a esterificação de um com posto de fórmula (2) para se preparar um composto de fórmula 8 8 (l) na qual R representa um grupo -CC^R (em que R representa um grupo alquilo, por exemplo terc-butilo) utilizando um alqueno tal como isobutileno, efectuando-se a reacção a uma pressão elevada.

Também se pode efectuar a esterificação de _um com posto de fórmula (2) para se preparar um composto de fórmula 8 8 (1) na qual R representa um grupo -CC^R (em que R representa um grupo metilo) utilizando diazo-metano.

A esterificação pode efectuar-se convenientemente num solvente tal como éter (por exemplo éter dietílico, tetra, -hidrofurano ou dioxano), na presença de uma cetona (por exem pio acetona), de uma amida (por exemplo ΙΤ,Ν-dimetil-formamida), de um nitrilo (por exemplo acetonitrilo), de um hidrocar boneto tal como um hidrocarboneto halogenado (por exemplo cio reto de metileno) ou de um ester (por exemplo acetato de etilo), e bem assim na presença de misturas de dois ou vários destes solventes. Em alternativa, quando se utilizar um álcool este pode ser utilizado também como solvente para uma reacção.

A reacção de esterificação efectua-se convenientemente a uma temperatura compreendida entre -20°G e +100°C. por exemplo en tre -10°C e +50°C.

De acordo com outro aspecto da presente invenção proporciona-se um processo (B) para a preparação de um compos. to de fórmula (1) na qual R representa um grupo amida de ácido carboxílico, o qual consiste em tratar o ácido carboxílico primitivo ou um seu sal ou um seu derivado reactivo com uma 17 18 amina adequada, por exemplo uma amina da fórmula R R NH (em 17 18 que R e R possuem as significações anteriores).

Pode efectuar-se a reacção num solvente adequado, por exemplo num hidrocarboneto halogenado tal como o dicloro-metano a uma temperatura próxima de 20°C. Também pode estar presente convenientemente um agente de condensação adequado tal como l-etoxi-carbonil-2-etoxi-l,2-di-hidroquinolina.

Num outro processo é possível preparar os compostos de fórmula (1) na qual OR representa um grupo hidroxilo substituido fazendo reagir o correspondente composto 5- e/ou 23-hidroxi com um reagente que sirva para formar um grupo hi droxilo substituido.

A reacção será geralmente uma acilação, sulfonila ção, eterificaçãoj sililação ou acetalação, e pode efectuar-se a reacção de acordo com os métodos gerais descritos no pe. dido de Patente Inglesa n⁹ 2176182.

Ainda noutro processo adicional, é possível prepe, 4 5 rar os compostos de fórmula (1) na qual R e R^J em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >G=0, por oxidação dos correspondentes composto 5-hidroxi em A que R representa um grupo hidroxilo.

Pode efectuar-se a reacção com um agente oxidante

que sirva para converter um grupo hidroxilo secundário alilico num grupo oxo, proporcionando assim um composto de fórmula (1).

Os agentes oxidantes adequados englobam, por exem pio, oxidos de metais de transição tais como o dióxido de man ganes, e o oxigénio atmosférico na presença de um catalizador adequado tal como um metal finamente dividido, por exemplo platina.

Geralmente utilizar-se-á o agente oxidante em exí cesso relativamente à quantidade estequiométrica.

A reacção pode efectuar-se convenientemente num í solvente adequado o qual pode ser seleccionado entre uma ceto na, por exemplo acetona; um éter, por exemplo éter dietílico, dioxano ou tetra-hidrofurano; um hidrocarboneto, por exemplo

J hexano; um hidrocarboneto halogenado, por exemplo clorofórmio i í ! ou cloreto de metileno; ou um ester, por exemplo acetato de etilo. Também é possível utilizar combinações destes solven'! tes entre si ou com água.

Pode efectuar-se a reacção a uma temperatura com^: I j preendida entre -50°G e +50°C, preferencialmente entre 0°C e !! 30°C.

|| í

Noutro processo de acordo com a presente invenção i é possível preparar um composto da fórmula (l) na qual X re9 4 8 4 ! presenta o grupo >C=NOR e R representa um grupo OR ou R ‘! C ' e R^ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0, ou X representa

χ ¹ (em que R representa um átomo de hidrogénio ou um grupo OR'

< '23 e R representa um átomo de hidrogénio ou R e em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=N0R⁹) ou -Y^X-Y²- representa -0H=CH-CH- ou -CH²-CH=C- e R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão liga

Q Q dos representam >C=NOR , a partir dos compostos correspondentes 5- e/ou 23-ceto de fórmula (1) por reacção com um rea9 9 gente í^NOR (em que R possui as significações anteriormente definidas.

A reacção de oximação pode efectuar-se convenientemente a uma temperatura compreendida entre -20 e +100°C, por exemplo entre -10 e +50°C. Pode ser conveniente utilizar o o reagente HgNOR na forma de um sal, por exemplo um sal de adição de ácido ou como um cloridrato. Quando se utilizar esse sal a reacção pode ser efectuada na presença de um agente de ligação ácido.

Os solventes que podem ser utilizados englobam os alcóois (por exemplo metanol ou etanol), amidas (por exemplo N,N-dimetil-formamida, Ν,Ν-dimetil-acetamida ou hexametil-f os. foramida), éteres (por exemplo éteres ciclicos tais como o t£ tra-hidrofurano ou o dioxano, e éteres aciclicos tais como di metoxi-etano ou éter dietílico), nitrilos (por exemplo acetonitrilo), sulfonas (por exemplo sulfolano) e hidrocarbonetos tais como os hidrocarbonetos halogenados (por exemplo cloreto de metileno), e bem assim misturas de 2 ou de vários desses solventes. Também se pode utilizar água como co-solvente.

Quando se utilizarem condições aquosas a reacção pode ser convenientemente tamponada com um ácido, base ou tam pão apropriados.

Os ácidos adequados englobam os ácidos minerais tal como o ácido clorídrico ou o sulfúrico, e o ácido carbox.í lico tal como o ácido acético. As bases adequadas englobam carbonatos e bicarbonatos de metais alcalinos tais como o bi- 24 -

carbonato de sódio, hidróxidos tais como o hidróxido de sódio, e carboxilatos de metais alcalinos tais como o acetato de sódio. Um tampão adequado é o acetato de sódio/ácido acético.

Paz-se observar que quando se prepara compostos de fórmula (1) na qual X representa >C=NOR^ e R^ e R^ em con junto com átomo de carbono ao qual estão ligados representam

Q Q _z >C=N0R a partir das correspondentes 5,23-dicetonas (isto é compostos de fórmula (1) na qual X representa >C=0 e R^ e R^ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam >C=0) os grupos >C=NOR e >C=NOR serão iguais.

Num processo adicional de acordo com a presente invenção é possível preparar um composto de fórmula (1) na qual X representa o grupo >C=0 oxidando um composto de fórmu la (1) na qual X representa

-C' z 2 3 ; (em que R representa um grupo hidroxilo e R representa um ii átomo de hidrogénio). Rode efectuar-se a reacção com um agenjí te oxidante que sirva para converter um grupo hidroxilo secun ; dério num grupo oxo proporcionando assim um composto de fórmn ! la (1).

í ί Os agentes oxidantes adequados englobam as quinonas na presença de água, por exemplo 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzoquinona ou 2,3,5,6-tetracloro-l,4-benzoquinona; um agente oxidante de crómio (VI), por exemplo dicromato de piri ΐ dinilo ou trióxido de crómio em piridina; um agente oxidante í de manganês (IV), por exemplo dioxido de manganês em dicloroi -metano; uma N-halo-succinimida, por exemplo N-cloro-succiniί mida ou N-bromo-succinimida; um dialquil-sulfoxido, por exemI pio dimetil-sulfoxido, na presença de um agente activador tal como N,N^xdiciclo-hexil-carbo-di-imida ou um halogeneto de aci lo, por exemplo cloreto de oxalilo; ou um complexo de piridi- 25 -

na/trióxido de enxofre.

Pode efectuar-se convenientemente a reacção num solvente adequado o qual pode ser seleccionado entre uma ceto na, por exemplo acetona; um éter, por exemplo éter dietílico, dioxano ou tetra-hidrofurano; um hidrocarboneto, por exemplo hexano; um hidrocarboneto halogenado por exemplo clorofórmio ou cloreto de metileno; ou um éster, por exemplo acetato de etilo ou uma amida substituída por exemplo dimetil-formamida. Também é possível utilizar combinações destes solventes entre si ou com égua₀

Pode efectuar-se a reacção a uma temperatura compreendida entre -80°C e +50°C.

I ; Noutro processo de acordo com a presente invenção | é possível preparar um composto de fórmula (1) na qual X rel presenta >C=CH2 fazendo reagir os correspondentes compostos

23-ceto (isto é, compostos de fórmula (1) na qual X representa >C=0) com um reagente Wittig apropriado, por exemplo um forforano de fórmula (R P=CH2 (onde R representa alquilo I (C^-Οθ) ou arilo, por exemplo arilo monociclico tal como feni lo). Os solventes de reacção adequados englobam éteres tais como tetra-hidrofurano ou éter dietílico ou um solvente apró! tico dipolar tal como dimetil-sulfoxido. Pode efectuar-se a reacção a qualquer temperatura adequada, por exemplo a 0°C.

í

Num processo adicional é possível preparar um com posto de fórmula (1) na qual X representa -CH₉- tratando um 2 composto correspondente no qual R representa um grupo hidroi 3 , , xilo e R^ representa um átomo de hidrogénio sequencialmente I com (i) cloreto de oxalilo e (ii) 2-mercapto-piridina-N-óxido, uma quantidade catalítica de uma base orgânica, por exemplo uma amina terciária tal como dimetil-amino-piridina e um tiol que seja preferencialmente um tiol protegido, por exemplo tri til-tiol.

Pode efectuar-se a reacção num solvente inerte tal como um hidrocarboneto aromático, por exemplo tolueno. 0 j passo (i) pode realizar-se convenientemente à temperatura am· I biente e o passo (ii) a uma temperatura elevada, por exemplo

I ao refluxo.

Ainda de acordo com outro processo da presente in venção é possível preparar um composto de fórmula (1) na qual -Y^-X-Y^ representa -CH=CH-CH- ou -GH2“CH=C- eliminando HL de um composto de fórmula (1) em que L representa um grupo removível tal como um grupo OR (em que OR representa um grupo hidroxi ou aciloxi). Pode efectuar-se a reacção de remoção pa, ra proporcionar um composto de fórmula (l), utilizando técnicas convencionais, por exemplo conforme descrito no pedido de Petente Europeia n^s 215654.

í! E possível preparar sais de ácidos de fórmula (1) de acordo com métodos convencionais, tratando por exemplo o ácido com uma base ou convertendo um sal noutro sal por permu i ta iónica.

I !, Os compostos de fórmula intermediária (2) na qual ¹ 1 2 ! Y representa -CH₉-, Y representa -CH- e X representa , R² R³ ί ^Λ 2 * í —C— (em que R representa um átomo de hidrogénio ou um i 8 3 * * 2 3 ! grupo OR e R^J representa um átomo de hidrogénio ou R e R i * i em conjunto com um átomo de carbono ao qual estão ligados re¹ ,12 ¹ presentam >0=0) ou -Y -X-Y - representa -CH=CH-CH- ou j -CH^-CH^-, são compostos conhecidos descritos nos pedidos de

Patente Inglesas 2166436 e 2176182 e no pedido de Patente Eui! ropeia 215654, ou podem ser preparados a partir desses compo£ I tos conhecidos, utilizando procedimentos conforme anteriormen í te descrito.

E possível preparar compostos intermediários de

τ_ 2 fórmula (2) na qual Y representa -CH₉-, Y representa -CH- e í 9

X representa >C=CH₂ ou >C=HOR a partir de compostos de fór mula (2) descritos nos pedidos de Patentes Inglesas n⁹s 2166436 e 2176182, utilizando os processos anteriormente descritos (para a preparação dos compostos correspondentes de fórmula (l) e no pedido de Patente Inglesa n⁹ 2192630 e no pe dido de Patente Europeia n⁹ 2311104).

A presente invenção ilustra-se com os exemplos que se seguem em que se designa por 'Factor A’ o composto de fórmula (2) anterior no qual R³ representa isopropilo, Y¹ reR² R³ ₂ ''-f presenta -CH_O-, Y representa -CH-, X representa -C- (em que R representa um grupo hidroxilo e R^J representa um átomo de hidrogénio), R^ representa um grupo hidroxilo e R repreí senta um átomo de hidrogénio. Os compostos de acordo com a presente invenção são designados por referência ao Factor A. Todas as temperaturas estão em 0°C.

j Exemplo 1 h

h 12-Desmetil-Factor A 12-écido carboxílico l!

Adicionou-se água esterilizada (5 ml) a uma cultu ί ra de Streptomyces platensis subsp. malvlnus NRRL 3761, e uti lizaram-se porções de 1 ml para inocular balões agitados de 250 ml contendo meio A (25 ml):

D-Glucose	2,5
Dextrose de malte MD30E	25,0
Arkasoy 50	12,5
Melações	1,5
kh2po4	0,125
Carbonato de cálcio	1,25

/ Ácido 3-(N-morfolino)propano-sulfónico_7 21,0

Água destilada conforme necessário ajustou-se o pH para 6,5 com í^SO^ antes de se colocar em autoclave.

Fez-se a incubação dos balões a 28°C durante 2 dias num agitador rotativo (250 rpm) e utilizou-se a cultura de 2 dias (100 ml) para inocular um fermentador 7 1 contendo o Meio A (5 1). Manteve-se a incubação a 28°C com arejamento (2 l/min) e com agitação (250 rpm) e, decorridos 2 dias, adicionou-se uma solução de Factor A (2,5 g) em dimetil-sulfóxido (50 ml). Manreve-se a fermentação durante mais 5 dias e fez-se a remoção das células por centrifugação e extraiu-se com metanol. Após remoção das células extraiu-se com acetato de etilo o sobrenadante aquoso e os extractos de acetato de etilo combinados foram adicionados ao extracto de metanol e evaporou-se para proporcionar um óleo. Dissolveu-se o óleo em água e lavou-se a solução (160 ml) com éter e extraiu-se com acetato de etilo. Procedeu-se à evaporação dos extractos de acetato de etilo combinados e dissolveu-se o resíduo em aceto. nitrilo (15 ml), purificou-se por centrifugação e depois apli cou-se a uma coluna de Spherisorb S5 ODS-2 (250 mm x 20 mm) com detecção a 240 nm em porções de 1 ml diluidas com igual volume de acetonitrilo/di-hidrogenofosfato de amónio/0,1 M (1:1). Utilizou-se acetonitrilo/di-hidrogeno-fosfato de amónio 0,1 M (1:1) como eluente com um débito constante de 25 ml/min e recolheu-se sucessivamente o pico de eluição entre 14 e 17 min. Todas as fracções foram combinadas, diluidas com igual volume de água e bombeadas novamente para a coluna. Eluiu-se a coluna com acetonitrilo, removeu-se o acetonitrilo in vacuo e dissolveu-se em acetona o sólido residual, diluiu-se com ciclo-hexano e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe (148 mg) na forma dum sólido incolor.

R.M.N. (CDCI3, 200 MHz) aproximadamente proporcionou si

nais δ 0.79 (d7, 3H), 0.94 (d7, 3H), 1.04 (d7, 3H), 1.52 (s,

3H), 1.59 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 3.23 (m, 2H), 3.73 (dll, 1H), í 3.92 (d6, 1H), 4.27 (d6, 1H), 5.08 (t8, 1H), e 5.18 (d9, 1H);

I.V. (solução de CHBr^) 1702, 1730 e 3480 cm”^; espectro de massa (I.E.) proporcionou um ião M+ a m/z 642 e iões de bombardeamento a m/z 624, 606, 560, 514, 512, 496, 478, 455, 437, ! 384, 344, 297, 278, 265, 247, 237, 219, 181 e 95; ¹³C R.M.N.

(25.05 MHz) aproximadamente proporcionou sinais 610.8(q),

13.7(q), 14.8(q), 19.6(q), 22.6(q), 26.6(d), 34.6(t), 35.7(d),

40.5(t), 42.5(t), 45.3(d), 46.6(d), 67.3(d), 67.6(d), 68.0(t),

I 69.1(d), 76.5(d), 79.1(d), 80.0(s), 99.5(s), 117.6(d), 119.3 (d), 122.4(d), 127.3(d), 130.2(s), 132.5(d), 134.2(s), 137.2 (s), 137.4(s), 141.7(s), 173.0(s) e 177.l(s).

j Exemplo 2

I j 12-Desmetil-23-ceto Eactor A 12-ácido carboxílico

Adicionou-se 23-ceto Eactor A (721 mg, Exemplo 21 ! no pedido de Patente Inglesa 2176182) em metanol (50 ml) a j

! uma cultura desenvolvida de acordo com o método descrito no ’ Exemplo 1 anterior. Manteve-se a fermentação sob as mesmas condições durante mais 2 dias e fez-se a remoção das células ί por centrifugação. Ajustou-se o sobrenadante para pH 2,0 com j ácido clorídrico concentrado e extraiu-se com acetato de etiί lo. Evaporou-se o extracto de acetato de etilo para proporcio . nar um óleo que se dissolveu em água (100 ml) contendo bicarbonato de sódio (2 g). Lavou-se a solução com éter, ajustouj -se para pH 2,0 e extraiu-se com éter. Eez-se a evaporação ^; dos extractos étereos combinados para proporcionar um sólido oleoso que se dissolveu em metanol (4 ml), diluiu-se com ace1 tonitrilo/di-hidrogeno-fosfato de amónio 0,1 M (1:1; 0,7 ml) ! e filtrou-se.

; Aplicou-se a solução resultante a uma coluna ”Sphe

J risorb S5 ODS-2 (250 mm x 20 mm) em porções de 1,75 ml com detecção das fracções a 255 nm. Utilizou-se 0 acetonitrilo/di

-hidrogeno-fosfato de amónio 0,1 M (1:1) como eluente com um débito constante de 25 ml/min e fez-se a combinação dos picos detectados na eluição entre os 12,2 e os 14,9 min a partir de injecções separadas, diluiu-se com igual volume de água e bom j beou-se novamente para a coluna. Lavou-se a coluna com acetonitrilo/água (1:3) θ eluiu-se com acetonitrilo. A evaporação do acetonitrilo seguida pela liofilização do resíduo a partir de acetona/ciclo-hexano proporcionou o composto em epígrafe (258 mg) incolor e no estado sólido. ¹H R.M.N. (CDCl^, 200 MHz) aproximadamente engloba os sinais <5 0.86 (d7, 3H), 0.96 (d7, 3H), 1.05 (d7, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.70 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 3.25 (m, 2H), 3.70 (dll, 1H), 3.94 (d6, 1H), 4.28 (d6, 1H), 5.06 (t8, 1H) e 5.20 (dlO, 1Ή), I.V. (Nujol) 1720, 3450 cm”¹; Espectro de massa (I.E.) proporcionou um ião M+ a m/z 640 e iões ue bombardeamento a m/z 622, 604, 579, 517, 499, 400, 356, 263 e 95.

Exemplo 3

12-Desmetil-23/~E_7-metoxi-imino Eactor A 12-ácido carbo¹ II· - - I - 1 r - - - - r - τ - - i r - - - ^{T 1} xílico

I

I ;· Durante 16 horas agitou-se o produto do Exemplo 2, : cloridrato de metoxi-amina (12,5 g) e acetato de sódio (20,7 ; mg) em metanol (0,5 ml) e depois diluiu-se com dicloro-metano j e lavou-se com água (25 ml) e com uma solução salina. A evapo.

! ração da fase orgânica seca proporcionou uma espuma que se dissolveu em clorofórmio/metanol/ácido acético (180:8:1) e aplicou-se a uma coluna de Merck Kieselgel 60, silica de ma lha 230/400 (25 g). A eluição da coluna com o mesmo sistema j solvente, sob pressão, proporcionou o composto em epígrafe ; (62 mg), /k./^¹ +49° (ç 0.4, CHC1₃), λ 248.2 nm ( Çmax ¹ 26,000), vmax (CHBr^) 3470 (0H), 1740 (COgH) e 1708 cm¹ (lactona), <5 (CDCl^) engloba 0.92 (d, 6Hz, 3H), 0.97 (d, 6Hz, ' 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.87 (s, 3H), 3.2-3.4 (m, 3H), 3.83 í (s, 3H), 3.96 (d, 6Hz, 3H) e 4.29 (d, 6Hz, 3H).

I

í Exemplo 4 ί,

I i 12a-hidroxi-23-ceto Factor A

I

Inocolou-se directamente 25 ml de Meio A num balão agitado de 250 ml a partir de uma cultura de Streptomyces platensis subsp. malvinus URRL 3761 e incubou-se a 28°C num agitador rotativo (250 rpm, braço de 5 cm) durante 2 dias.

Fez-se a transferência de aliquota de 5 ml desta cultura de 2 dias para balões agitados de 50 ml e adicionou-se 50 μΐ de 23. -ceto Factor A em metanol (50 mg/ml) para proporcionar um con sumo de 500 mg/l. Manteve-se a fermentação nas mesmas condições durante mais 3 dias. Depois adicionou-se igual volume de metanol e agitou-se o balão e o seu conteúdo durante 1 hora í

antes da centrifugação.

Evaporou-se o sobrenadante até à secura e extraiu j -se o resíduo com acetonitrilo/acetato de amónio 0,05 M tendo i -se ajustado o valor do pK para 4,5 com ácido acético. Purifi cou-se o extracto e fraccionou-se o sobrenadante em porções de 250 μΐ numa coluna de Spherisorb S5 ODS-2 (100 mm x 4,6 í mm) com detecção a 238 nm. Utilizou-se um sistema de eluição por gradiente, constituído por acetonitrilo/acetato de amónio j, 0,05 M a pH 4.-5 (40:60 60:40), com um débito constante de 3 j ml/min e recolheu-se sucessivamente o pico de eluição decorri ! dos 4,3 min após cada injecção. Fez-se a combinação de todas ; as fracções e evaporou-se para proporcionar o composto em epí!í grafe no estado sólido. 0 espectro de massa (i.e.) proporcionou um ião M+ a m/z 626 e iões de bombardeamento a m/z 608,

565, 498, 455, 437, 386 e 167.

íj Exemplo 5

-i

12a-hidroxi Factor A ' Adicionou-se Factor A (2,5 g) em metanol (50 ml) | a uma cultura de Streptomyces mashuensis ISP 5221, desenvolvi

J da de acordo com o método descrito no Exemplo 1 anterior. Man teve-se a fermentação sob as mesmas condições durante mais 5 dias e fez-se a remoção das células por centrifugação. As células foram combinadas com metanol e decorridos 30 min foram centrifugadas para proporcionar 900 ml de extracto de metanol Extraiu-se com acetato de etilo o sobrenadante do fluído da cultura, procedeu-se à evaporação dos extractos de acetato de etilo combinados e dissolveu-se o resíduo no extracto das células em metanol. Evaporou-se a mistura dissolveu-se o resíduo em metanol (200 ml) e carregou-se numa coluna de Sephadex LH20 (125 cm/5 cm) eluindo com metanol. Recolheu-se cada fracção de 30 ml e combinou-se as fracções 47-57 e evaporou-se. Dissolveu-se o resíduo em acetonitrilo/água (1:1; 10 ml) e purificou-se por cromatografia líquida de elevado rendimento preliminar, numa coluna Spherisorb S5 ODS-2” (250 mm x 20 mm) eluindo com acetonitrilo/água (1:1) com um débito de 20 ml/min com detecção a 250 nm. Porções consecutivas de 1,5 ml foram carregadas numa coluna e procedeu-se à combinação dos picos de eluição entre 14,8 e 15,6 min., diluiu-se com igual volume de égua, bombeou-se novamente para a coluna e eluiu-se com acetonitrilo. A evaporação do acetonitrilo seguida por liofilização a partir da acetona/ciclo-hexano proporcionou o composto em epígrafe (25,1 mg) incolor e no estado sólido.

I.V. (CHBr-j) 996, 1710 e 3500 cm¹; ¹³C R.M.N. (62.5 MHz) aproximadamente proporcionou sinais δ 10.8 (q), 13.7 (q), 15.4

(q)»	19.7	(q),	22.7	(q)»	26.7 (d),	34.7 (t), 35.9	(d), 36.0
(t),	40.6	(t),	41.0	(t),	42.1 (t),	44.3 (d), 45.5	(d), 66.2
(t),	67.5	(d),	67.7	(d),	68.3 (t),	69.1 (d), 76.6	(d), 79.2
(d),	80.1	(s),	99.6	(s),	117.8 (d),	119.7 (d), 120	.9 (d),
127.	2 (d),	130,	.5 (s)	, 135	.9 (s) 137	.1 (d), 137.3 (	d), 137.8
(s),	140 „ S	) (s)	e 173	.2 (s	); -4 R.M.	N. corresponde	ao espectro

do produto correspondente do Exemplo 6.

Exemplo 6

I2a-hidroxi Factor A e 4a,12a-di-hidroxi Pactor A

Adicionou-se Pactor A (2,5 g) em metanol (50 ml)

> a uma cultura de Streptomyces rimosus NRRL 2455 desenvolvida ' de acordo com o método do Exemplo 1 anterior. Manteve-se a ;í fermentação só as mesmas condições durante mais 5 dias e fez) -se a remoção das células por centrifugação. Eliminou-se o so

I _{x z} j brenadante e fez-se a lavagem das células com agua e centrifu ! gou-se novamente. Eliminou-se o produto de lavagem com água, extraiu-se as células com metanol e centrifugou-se novamente í para proporcionar um extracto de metanol de 1300 ml. Evaporou

-se o extracto de metanol para proporcionar um óleo que se ex traiu com acetonitrilo (250 ml) e com metanol (200 ml). Pez-se a combinação dos extractos e evaporou-se para proporcioi nar um óleo que se dissolveu em metanol (200 ml) e fraccionou

-se (50 ml) numa coluna de Sephadex LH20 (130 cm x 5 cm) e: luindo com metanol. Pez-se a combinação das fracções 26 a 36 e evaporou-se e dissolveu-se do resíduo em acetonitrilo/água (55:45; 15 ml) e submeteu-se porções de 1,8 ml a cromatograí, fia líquida de elevado rendimento preliminar numa coluna de p Spherisorb S5 ODS-2” (250 ram x 20 mm). Os solventes de pro| cessamento foram acetonitrilo/água (55:45; 0 a 12,5 min) acej tonitrilo/água (70:30; 12,5 a 21,0 min) e acetonitrilo (21,0 í! a 30 min) os quais foram aplicados com um débito de 20 ml/min.

Depois equilibrou-se a coluna com acetonitrilo/água (55:45). íí Pez-se a recolha das fracções cuja eluição ocorreu entre 14,8 ! e 15,5 min, procedeu-se à sua combinação, diluiu-se com igual ; volume de água e bombeou-se de novo para a coluna. Eluiu-se J a coluna com acetonitrilo e removeu-se o acetonitrilo. Dissol | veu-se o resíduo em acetona/ciclo-hexano e liofilizou-se para jí proporcionar 12a-hidroxi Pactor A (32,2 mg) incolor e no esta do sólido. R.M.N. (250 MHz, CDGl^) aproximadamente engloba ί sinais £ 0.80 (d6, 3H), 0.96 (d6, 3H), 1.06 (d6, 3H), 1.88 (s, 3H), 3.27 (m, 1H), 3.40 (t9, 1H), 3.74 (dll, 1H), 3.96 p (d6, 1H), 4.30 (t6, 1H), 5.02 (m, 1H), e 5.21 (d9, 1H);

o espectro de massa (I.E.) proporcionou um ião M+ a m/z 628 e íj iões de bombardeamento a m/z 610, 592, 482, 464, 441, 423, 37(1

330, 297, 265, 247, 237, 219, 167 e 95.

- 34 De modo idêntico as fracções de eluição entre 6,2 e 6,8 minutos proporcionar 4a,12a-di-hidroxi Factor A (26,4 mg) incolor e no estado sólido. R.M.N„ (250 MHz, GDCl^) aproximadamente engloba sinais & 0.80 (d6; 3H), 0.96 (d6$ 3H),

1.06 (d6; 3H), 1.56 (s; 3H), 1.62 (s; 3H), 3.31 (m; Ui), 3.40 (dd 11, 9; 1H), 3.75 (dlO; 1H), 3.97 (d6; 1H), 4.24 (dl4; 1H),

4.33 (dl4; 1H), 4.58 (d6; UI) e 5.72 (s; 1H).

espectro de massa (i.e.) proporcionou um ião M+ a m/z 644 e iões de bombardeamento a 626, 608, 482, 464, 457, 439, 297, 265, 247, 237, 219 e 167.

Exemplo 7

12-hidroxi Factor A

Adicionou-se Factor A (2,5 g) em metanol (50 ml) a uma cultura de Absidia cylindrospora HRRL 2796 desenvolvida de acordo com o método do Exemplo 1, com a excepção de se ter utilizado o meio seguinte:

licor de infusão de cereais Meritose Oleo de soja Água destilada

20,0

10,0

1,0 conforme necessário ajustou-se o valor do pH para 4,8-5,0 com hidroxido de potássio antes de se colocar em autoclave.

Manteve-se a fermentação nas mesmas condições durante mais 5 dias e fez-se a remoção das células por centrifu gação. Depois procedeu-se à extracção das células com metanol (400 ml). Evaporou-se o sobrenadante do fluido da cultura até se obter aproximadamente 900 ml e extraiu-se com acetato de etilo. Evaporou-se os extractos de acetato de etilo combinados e dissolveu-se o resíduo em metanol (ca. 100 ml). Filtrou

-se a suspensão resultante e evaporou-se o filtrado até à secura. Evaporou-se o extracto de célula metalónico para propor cionar um óleo que se dissolveu em água e extraiu-se com acej tato de etilo. 0 extracto de acetato de etilo combinado foi depois adicionado ao resíduo sobrenadante e secou-se a mistura.

Dissolveu-se o resíduo em clorofórmio/acetato de etilo (3:1, ca. 30 ml) e carregou-se numa coluna de silica (100 ml, malha 70-230) contendo uma camada de areia. Recolheu -se cada fracção de 20 ml e procedeu-se à combinação das fraç. ções 11-32 e evaporou-se até à secura. Purificou-se o resíduo pior cromatografia liquida de elevado rendimento preliminar numa coluna de Spherisorb S5 ODS-2 eluindo com acetonitrilo/ /água (1:1) com um débito de 30 ml/min com detecção a 238 nm. Procedeu-se à combinação dos picos de eluição entre 29,6 e 31,θ min, diluiu-se com igual volume de água, bombeou-se nova ; mente para a coluna e eluiu-se com acetonitrilo. Evaporou-se o eluído, dissolveu-se o resíduo em acetona/ciclo-hexano e liofilizou-se para proporcionar o composto em epígrafe (42,4 mg). 4 R.M.N. (250 MHz, CDCl^) aproximadamente proporcionou ! sinais 6 0.79 (d7; 3H), 0.96 (d7; 3H), 1.06 (d6; 3H), 1.30 P (s; 3H), 1.60 (s; 3H), 1.69 (s; 3H), 1.89 (s; 3H), 3.29 (m;

[ 1H), 3.75 (dlO; 1H), 3.98 (d6; 1H), 4.30 (t6; 1H), 5.41 (s, í 1H); 566 (dl5; 1H).

espectro de massa (I.E.) proporcionou um ião M+ ¹ a m/z 628 e iões de bombardeamento a 610, 592, 574, 484, 441, | 423, 370, 334, 316, 265, 247, 237, 219 e 167.

ί !

í Exemplo 8 ;j 12-desmetil-Factor A 12-ácido cerboxílico, ester metílico ' I j!

(i) Durante 2,5 horas agitou-se uma solução do ; produto do Exemplo 1 (100 mg), de N,N*-diciclo-hexil-carbo-di | -imida (35 mg) e de metanol (11 /il) em éter (2 ml) na presenS ça de uma quantidade catalílica de 4-pirrolidino-piridina (2

mg). Filtrou-se a mistura resultante e evaporou-se o filtrado

I ! para proporcionar uma espuma. A purificação cromatográfica da ί espuma sobre Merck Kieselgel 60 (25 g) proporcionou o com|í posto em epígrafe (31 mg) na forma de uma espuma branca, /Õf 7S¹ +23° (c 0.5, OHC1₇), 245.6 nm (Gnax 25,200),

Vmax (CHBr^) 3500 (0H) e 1720 cm^-1 (00₂Κ), 6 (CDCl^) engloba 0.80 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.89 (s, 3H), 3.25 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.96 (d, 6Hz, 1Ή) e 4.29 (d, 6Hz, 1H).

(ii) Tratou-se com excesso de diazometano etéreo i

i uma solução agitada do Exemplo 1 (155 mg) em éter (15 ml), a , uma temperatura de 0-5°C. Decorridos 30 minutos destruiu-se o i excesso de diazometano com ácido acético e evaporou-se a solu ί ção incolor resultante para proporcionar uma espuma. A purifi í cação cromatográfica da espuma sobre Merck Kieselgel, silii ca de malha 230-400 (26 g) proporcionou o composto em epígraij fe (125 mg). 0 espectro RMH foi idêntico ao anteriormente des.

crito.

I

Exemplo 9 ' 12-desmetil-Factor A 5-acetato 12-ácido carboxílico, ester il metílico ί! Durante 72 horas agitou-se uma solução do produto do Exemplo 8 (60 mg) e de anidrido acético (10,3 μΐ) em piridina seca (1 ml). Depois adicionou-se uma porção catalítica j de 4-dimetil-amino-piridina (3 mg). Decorridos 20 minutos dij luiu-se a solução com acetato de etilo (60 ml) e lavou-se sequencialmente com ácido clorídrico 2N, com água e com uma soj lução salina. A secagem e a evaporação da fase orgânica proí porcionou uma espuma que na forma de solução em hexano:acetato de etilo (2:1) se aplicou a uma coluna de Merck Kieselgel ^: silica de malha 230-400 (36 g). A eluição da coluna sob pres! são, com o mesmo sistema solvente, proporcionou o composto em

J epígrafe (35 mg) na forma de uma espuma, / <<_7p +50° (c 0.4,

CHC1.), λ®ί2^Η 239.4 nm ( Emax 22,000), Vmax (CHBr.) 3480 (OH), 1730 (C02R + 000CH3) e 1235 cm¹, <5(CD013) engloba 0.80 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.74 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 3.24 (m, 1H), 3.66 (s, 3H), 4.06 (d, 6Hz, 1H) e 5.53 (m, 2H).

Exemplo 10

12-desmetil-Factor A 12-ácido carboxílico, ester isopropílico

Durante 26 horas agitou-se uma mistura do produto do Exemplo 1 (150 mg), de N,N’-diciclo-hexil-carbo-di-imida (53 mg), de álcool isopropílico seco (176 μΐ) e de uma quanti . dade catalítica de 4-pirrolidino-piridina (3,4 mg). Piltrou-se o material insolúvel e evaporou-se o filtrado para propor cionar uma espuma. Dissolveu-se a espuma em éter e lavou-se com uma solução aquosa de ácido acético a 5%, com égua e com uma solução salina. A secagem e a evaporação da fase orgânica proporcionaram uma espuma que se purificou por cromatografia intermitente sobre silica (36 g) para proporcionar o composto ‘ em epígrafe (53 mg), Λ 245.6 nm ( £max 26,200), Vmax (GHBr₃) 3500 (0H) e 1714 cm¹ (COgR), 6 (CDC1₃) engloba 0.80 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.20 (d, ' 6Hz, 6H), 1.87 (s, 3H), 3.17 (m, 1H), 3.96 (d, 6Hz, 1H), 4.29 ) (t, 6Hz, 1H) e 4.97 (m, 1H).

I i Exemplo 11

12-desmetil-Eactor A 12-ácido carboxílico, ester terc-butílico ί Arrefeceu-se para -30°C uma solução do Exemplo 1

I (500 mg) em éter (10 ml) e tratou-se com ácido sulfurico con; centrado (30 μΐ) seguindo-se isobutileno (30 ml). Agitou-se a ; mistura resultante a 21°G numa garrafa vedada sob pressão, du rante 96 horas. Deixou-se evaporar o excesso de isobutileno e

J diluiu-se o resíduo etéreo com dicloro-metano (20 ml) e de- 38 pois lavou-se sequencialmente com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (20 ml), com água (2 x 20 ml) e com uma S£ lução salina. A secagem e a evaporação da fase orgânica proporcionou uma espuma que na forma de solução em dicloro-metano/acetona (10:1) foi aplicada a uma coluna de Merck Kieselgel, silica de malha 230-400 (68 g). A eluição da coluna sob pressão com o mesmo sistema solvente proporcionou o composto

EtOH

245.8 nm max em epígrafe (86 mg) na forma de uma espuma,Λ ( £max 28,600) max (CHBr^) 3500 (0H) e 1712 cm^_'^L (C0₂R), 6 (CDC1₃) engloba 0.80 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.89 (s, 3H), 3.11 (m, 1H), 3.97 (d, 6Hz, 1H) e 4.29 (d, 6Hz, 1H).

Exemplo 12

12-desmetil-Factor A 5,23-bis-acetato 12-acido carboxílico, ester metílico

Tratou-se uma solução do produto do Exemplo 8 (55 mg) em piridina seca (2 ml) com 4-dimetil-amino-piridina (10 mg) seguindo-se anidrido acético (0,15 ml). Decorridas 80 horas diluiu-se a solução com acetato de etilo (60 ml) e lavou-se sequencialmente com ácido clorídrico 2N, com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, com água e com uma solução salina. A secagem e a evaporação da fase orgânica pro porcionaram uma espuma que na forma de solução em hexano/acetato de etilo (2:1) foi aplicada a uma coluna de Merck Kieselgel 60, silica de malha 230-400 (16 g). A eluição da colu na sob pressão com o mesmo sistema solvente proporcionou o composto em epígrafe (51 mg) na forma de uma espuma branca, /“O<7pl ₊₁₀₂o _{(£ 0>4}} CHC1₃), λ™^Η 245 nm ( £max 25,300), Vmax (CHBr3) 3460 (0H), 1728 (G02R e acetoxi) e 1258 e 1238 cm^-1 (OCOCH3), 6 (CDC1₃) engloba 0.70 (d, 6Hz, 3H), 0.95 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.74 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 3.23 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 4.05 (d, 5H, 1H) e 5.52 (m, 2H).

Os exemplos 13 e 14 foram preparados por um processo idêntico.

Exemplo 13

12-desmetil-Eactor A 5,23-bis-acetato 12-ácido carboxílico, ester isopropílico (26 mg) na forma de uma espuma branca, (CDCip engloba 0.70 (d, 6Hz, 3H), 0.95 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.21 (d, 6Hz, 6H), 1.77 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 3.18 (m, 1H), 4.06 (d, 6Hz, 1H), 4o97 (m, 1H), e 5.53 (m, 2H), a partir do produto do Exemplo 10 (37 mg).

Exemplo 14

12-desmetil-Eactor A 5,23-bis-acetato 12-acido carboxílico, ester terc-butílico (86 mg), Λ 246.0 nm ( £max 26,500),.

’ ’ ^— - ΙΠΗΧ η

Vmax (CHBr^), 1720 (COgR) e 1254 e 1235 cm (acetato), &

(CDCip engloba 0.71 (d, 7Hz, 3H), 0.95 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.43 (s, 9H), 1.76 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 3.10 (m, 1H), 4.07 (d, 6Hz, 1H), 4.90 (q, 3Hz, 1H) e

5.53 (m, 2H), a partir do produto do Exemplo 11 (96 mg), com a excepção de se ter diluido a solução com dicloro-metano (30 ml) antes do processamento.

Exemplo 15

12-Desmetil-Factor A 23-acetato 12-ácido carboxílico, ester metílico

Arrefeceu-se para 0-5°C uma solução do produto do Exemplo 12 (30 mg) em metanol (1 ml) e tratou-se com hidróxido de sódio IN (44 μΐ). Decorridas 3 horas diluiu-se a solução com éter (50 ml) e lavou-se com ácido clorídrico 2N, com água e com uma solução salina. A secagem e a evaporação da fa se orgânica proporcionaram uma espuma. A cromatografia intermitente da espuma sobre silica (16 g), utilizando como eluente hexano/acetato de etilo (1:1) proporcionou o composto em epígrafe (18 mg) na forma de uma espuma branca, /. +44°

- 40 (c 0.2, CHCIt), A.max^2^H 245.6 nm ( £max 32,500), vmax (CHBr3) 3550 (OH), 3450 (OH), e 1720 cm·¹- (C02R), δ (ODCip engloba 0.70 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 3.26 (m, 2H), 3.67 (m, 3H), 3.96 (d, 6Hz, 1H), 4.29 (t, 6Hz, 1HÍ 4.90 (q, 3Hz, 1H).

Os exemplos 16 e 17 foram preparados por um proces so idêntico.

Exemplo 16

12-desmetil-Factor A 23-acetato 12-ácido carboxílico, ester isopropílico (15 mg), /VJd^{1 +71}° (Ç 0.2, CHC13), λ™^Η 245.6 nm ( £max 27,500), Vmax (CHBr3) 1718 (COgR) e 1255 cm^-1 (acetato), δ (GDC1₃) engloba 0.71 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz. 3H), 1.22 (d, 6Hz, 6H), 1.88 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 3.18 (m, 1H), 3.97 (d, 6Hz, 1H), 4.29 (t, 6Hz, 1H),

4.90 (q, 3Hz, 1H), 4.98 (m, 1H), a partir do produto do Exemplo 13 (24 mg).

Exemplo 17

12-desmetil-Factor A 23-acetato 12-ácido carboxílico, ester terc-butílico — 21 (46,5 mg) na forma de uma espuma branca, / +54° (_c 0.4, CHClo), λ 246 nm ( £max 25,200), v max > ΠΊ8Χ η (CHBr₃) 1710 (CO₂R) e 1250 cin (acetato), 5 (CDC1₃) engloba 0.71 (d, 7Hz, 3H), 0.95 (d, 6Hz, 3H), 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.42 (s, 9H), 1.88 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 3.10 (m, 1H), 3.96 (d, 6Hz, 1H), 4.29 (t, 6Hz, 1H), e 4.91 (q, 3Hz, 1H), a partir do produto do Exemplo 14 (76 mg).

Exemplo 18

12-desmetil-23-desoxi-factor A 5-acetato 12-ácido carboxílico, ester metílico

A uma solução agitada do produto do Exemplo 9 (50 mg) em tolueno (2 ml), sob uma atmosfera de azoto, adicionou-se cloreto de oxalilo (13 jul). Decorridos 90 minutos adicionou-se a solução, durante 2 minutos, a uma mistura ao refluxo de sal de sódio de N-óxido de 2-mercapto-piridina (33,5 mg), de tritil-tiol (83 mg) e de 4-dimetil-amino-piridina (2 mg) em tolueno (3 ml). Decorridas 2 1/4 horas arrefeceu-se a solução, diluiu-se com acetato de etilo (30 ml) e lavou-se com ácido clorídrico 2N, com bicarbonato de sódio, com água e com tuna solução salina. A secagem e a evaporação da fase orgânica proporcionaram uma espuma que se purificou por cromatografia intermitente sobre silica (36 g), utilizando como eluente hexano/acetato de etilo (3:1) para proporcionar o composto em ρ η epígrafe (20 mg) na forma de uma espuma branca, L +35° (c 0.4, CHCIt), ²45 nm ( £max 25,700), V max (CHBr_q) “ η > HiHX J

1735 cm (acetato e C^R), & (CDCl^) engloba 0.70 (d, 5Hz, 3H), 0.92 (d, 6Hz, 3H), 1.02 (d, 6Hz, 3H), 1.75 (s, 3H), 2.l6 (s, 3H), 3.22 (m, 1H), 3.67 (s, 3H), 4.05 (d, 5Hz, 1H), 5.52 (m, 2H)o

Exemplo 19

12-desmetil-23-desoxi-Factor A 12-ácido carboxílico, ester metílico

A uma solução arrefecida (0 a 5°C) do produto do Exemplo 18 (30 mg) em metanol (1 ml) adicionou-se uma solução aquosa de hidróxido de sódio IN (48 μΐ). Decorridas 5 horas diluiu-se a solução com éter (40 ml) e lavou-se com ácido cio rídrico 2ΪΤ (20 ml), com água e com uma solução salina. A secEi gem e a evaporação da fase orgânica proporcionaram tuna espuma que se purificou por cromatografia sobre silica (16 g) para proporcionar o composto em epígrafe (19 mg), / 0<_7p +41° (ç

0.2, CHC1-,), λ^Εί?^Η 245.4 nm ( £max 22,500), v max (CHBr₇) 3540 (0H), 3450 (0H), e 1720 cm¹ (COgR), b (CDCl^) engloba 0.69 (d, 5Hz, 3H), 0.93 (d, 6Hz, 3H), 1.03 (d, 6Hz, 3H), 1.87 (s, 3H), 3.26 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.96 (d, 6Hz, 1H), e

4.29 (t, 6Hz, 1H).

Exemplo 20

12-desmetil-23-ceto-Pactor A 5-acetato 12-ácido carboxílico, ester metílico

Pode oxidar-se uma solução do produto do Exemplo com dicromato de piridinio utilizando o processo descrito no Exemplo 70 do Pedido de Patente Inglesa n⁹ 2176182. Purifi cou-se o resíduo por cromatografia numa coluna de Merck Kieselgel 60, malha 230-400, eluindo com hexano/acetato de eti10 (2:1) para proporcionar o composto em epígrafe, λ^_ΗΧ

245.6 nm ( Çmax 25,200) vmax (CHBr₇) 3450 (0H fraco), 1724 —1 (cetona e lactona) e 1232 cm (acetato), β(ΟΒΟΙ^) engloba 0.86 (d, 6Hz, 3H), 0.97 (d, 6Hz, 3H), 1.07 (d, 6Hz, 3H), 1.76 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.50 (s, 2H), 3.23 (m, 1H), 4.06 (d, 6Hz, 1H), e 5.53 (m, 2H).

Exemplo 21

12-desmetil-23/ E 7-metoxi-imino-Pactor A 12-ácido carboxílico, ester metílico

Arrefeceu-se para cerca de 10°C uma solução do Exemplo 3 (40 mg) em éter (3 ml) e tratou-se com diazometano etéreo (1,5 ml). Decorridos 15 minutos destruiu-se o excesso de diazometano com ácido acético e evaporou-se a solução inc£ lor resultante para proporcionar uma espuma. Purificou-se a espuma por cromatografia intermitente sobre silica (20 g) uti lizando como eluente dicloro-metano/acetona (20:1). Pez-se a combinação das fracções apropriadas e evaporou-se para propor cionar o comp.osto em epígrafe (39 mg) na forma de uma espuma branca, / 0( 7-^ +41° (c 0.4, CHC1-.), 245.6 nm ( £max

23,200), vmax (CHBr^) 3540 (0H), 3450 (0H) e 1720 cm-1 (lactona), 5 (ODCl-j) engloba 0.91 (d, 6Hz, 3H), 0.96 (d, 6Hz, 3H) 1.06 (d, 6Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 3.2-3.4 (m, 3H), 3.66 (s, 3H), 3.83 (s, 3H), 3.96 (d, 6Hz, 1H), e 4.29 (t, 6Hz, Ifí).

Exemplo 22

12-desmetil-23/ E 7-met oxi-imino-Pactor A 12-ácido carboí xilico, n-butil-amida

I! -ⁱA uma solução do Exemplo 3 (84 mg) em dicloro-metano (0,3 ml) adicionou-se uma solução de l-etoxi-carbonil-2-etoxi-l,2-di-hidroquinolina (31 mg) em dicloro-metano (0,5 ί ml) seguindo-se n-butil-amina (12,5 /al) em dicloro-metano (0,5 ml). Decorridas 96 horas adicionou-se dicloro-metano e lavou-se a solução com ácido clorídrico 2N (2 x 20 ml), com água (20 ml) e com uma solução salina. Evaporou-se a fase orgânica seca para proporcionar um pó que se purificou por meio de cromatografia de pressão média sobre silica (30 g) utilizando como eluente dicloro-metano/acetato de etilo (6:1). Pro. cedeu-se à combinação das fracções apropriadas e evaporou-se í para proporcionar o composto em epígrafe (58 mg) na forma de um pó branco, / Οζ_7ρ^ +68° (.c 0.5, CHgClg)» λ max^ ^48 Hm ( £ max 29,000), Vmax (CHBr-j) 3550 (0H), 3420 (NH), 1708 (lac i tona) e 1658 e 1510 c^-1 (CONH), δ (ODCl^) engloba 0.92 (d, ’ 6Hz, 3H), 0.99 (d, 6Hz, 3H), 1.08 (d, 6Hz, 3H), 0.92 (m, 3H),

1.90 (s, 3H), 3.09 (m, 1H), 3.29 (d, 14Hz, 1H), 3.20 (m, 2H), !: 3.86 (s, 3H), 4.00 (d, 6Hz, IH), e 4.32 (t, 6Hz, 1H)„ ! Apresentam-se a seguir exemplos de formulações de acordo com a presente invenção. 0 termo 'Ingrediente Activo' tal como agora utilizado significa um composto da presente in venção.

Injecção Parenteral Multidose

Exemplo 1

Ingrediente activo álcool benzílico

Poli-sorbato 80 % vj/v Gama

2.0 0.1 - 6.0 % w/v

1.0

10.0

- 44 Glicerol formal Água para injecções

50.0 até 100.0

Dissolve-se o ingrediente activo no poli-sorbato 80 e no glicerol formal. Adiciona-se o álcool benzílico e ajusta-se o volume com água para injecções. Esteriliza-se o produto por métodos convencionais, por exemplo por filtração esterilizadora ou por aquecimento em autoclave e procede-se à embalagem de modo acético.

Exemplo 2

	% w/v	Gama
Ingrediente activo	4-0	0.1 - 7.5% w/v
Álcool benzílico	2.0
Triacetato de glicerilo	30.0
Propileno-glicol até	100.0

Dissolve-se o ingrediente activo no álcool benzílico e no triacetato de glicerilo. Adiciona-se o propileno-glicol e ajusta-se o volume. Esteriliza-se o produto por métodos farmacêuticos convencionais, por exemplo por filtração esterilizadora, e depois embala-se por um processo acético.

Exemplo 3

Ingrediente activo Etanol

Agente tensio-activo não iónico (por exemplo ”Synperonic PE L44* ) Propileno-glicol % Gama . Ow/v 0.1 - 7.5% w/v 36.0 v/v

10.0 w/v até 100,0

Dissolve-se o ingrediente activo em etanol e no agente tensio-activo e ajusta-se o volume. Esteriliza-se o

;i produto por métodos farmacêuticos convencionais, por exemplo ! por filtração esterilizadora e depois embala-se por um proces.

so acético.

* Marca comercial da ICI

Exemplo 4 % Gama

Ingrediente activo

Agente tensio-activo não iónico (por exemplo Synperonic PE F68 *)

Álcool benzílico Miglyol 840” **

Água para injecções até

2.0 w/v 0.1 - 3 -0% w/v

2.0 w/v 1.0 w/v

16.0 v/v 100.0

Dissolve-se o ingrediente activo em Miglyol 840. Dissolve-se o agente tensio-activo não iónico e o álcool benzílico na maior parte de água. Prepara-se a emulsão adicionan do a solução oleosa à solução aquosa enquanto se homogenisa utilizando meios convencionais. Ajusta-se o volume. Prepara-se e embala-se por um processo acético.

* Marca comercial da ICI ** Marca comercial da Dynamit Nobel

Aspersão para Aerossol i

Ingrediente activo Tricloro-etano Tricloro-fluoro-metano Dicloro-difluoro-metano

I f

I

I no e pa-se % w/w Gama

0.1 0.01-2.0$ _w/w

29.9

35.0

35.0

Mistura-se o ingrediente activo com tricloro-etaprocede-se ao enchimento do recipiente do aerossol. Limo espaço superior com propulsor gasoso e fixa-se a vál- 46 -

vula na sua posição. Através da válvula procede-se ao enchimento do peso necessário de líquido propulsor sob pressão. Co. loca-se o dispositivo de accionamento e a protecção contra o pé.

Pastilha

Processo de Preparação - Granulação a Húmido

	mg
Ingrediente activo	250.0
Estearato de magnésio	4.5
Amido de milho	22.5
Glicolato de amido de sódio	9.0
Lauril-sulfato de sódio	4.5
Celulose microcristalina	até o núcleo da pastilha pesar 450 mg

• Adiciona-se ao ingrediente activo uma quantidade ί suficiente de uma pasta de amida a 10% para proporcionar uma ι massa húmida adequada para granulação. Paz-se a preparação 'í dos grânulos e seca-se utilizando um tabuleiro ou um secador l! _z de leito fluido. Paz-se passar através de um crivo, adicionam ' -se os ingredientes restantes e comprime-se em pastilhas.

í Se necessário faz-se o revestimento dos núcleos das pastilhas com uma película de revestimento utilizando hidroxi-propil-metil-celulose ou outro material idêntico que proporcione uma película, utilizando um sistema solvente aquc> so ou não aquoso. Pode incluir-se na solução da película de ^! revestimento um plastificante ou um corante adequados.

ί

Pastilha para Utilização Veterinária para Utilização em Aί nimais Pequenos / Domésticos

Processo de Preparação - Granulação a Seco

	mg
Ingrediente activo	50.0
Estearato de magnésio	7.5
Celulose microcristalina até o
núcleo da pastilha pesar	75.0

: Mistura-se o ingrediente activo com o estearato de magnésio e com a celulose microcristalina, Compacta-se a mistura em barras. Quebram-se as barras e faz-se passar os pe. daços por um granulador rotativo para proporcionar grânulos que fluam livremente. Comprime-se em pastilhas.

Depois os núcleos das pastilhas podem ser revesti i dos com película, se desejado, conforme anteriormente descrit o.

Injecção Intramamária	para	Veterinária
			mg/d<	ose		Gama
Ingrediente activo			150	mg	0	.05 - 1.0 g
Poli-sorbato 60	3.0	w/ w)		)
Cera branca de abelhas	6.0	w / w)	até 3	g )	até	3 ou 15 g
Oleo araquídico	91.0	w/ w		)

íj Aquece-se o óleo araquídico, a cera branca de abe.

lha e o poli-sorbato 60 à temperatura de l60°C com agitação, j Mantem-se a l60°C durante 2 horas e depois arrefece-se até à temperatura ambiente com agitação. Por um processo acético aii diciona-se o ingrediente activo ao veículo e dispersa-se utii lizando um misturador de alta velocidade. Refina-se fazendo I passar a mistura através de um moinho de coloides. Por um pro ! cesso acético enche-se com o produto seringas de plástico βει terilizadas.

Pílula Grande de Libertação Lenta para. Veterinária % \\7vr

Gama

0.25-2 g para o peso de enchimento exi gido

Mistura-se o ingrediente activo com o dióxido de silicio coloidal e com a celulose microcristalina utilizando uma técnica adequada para misturar aliquotas de modo a conseguir uma distribuição satisfatória do ingrediente activo atra vés do veículo. Faz-se a incorporação no dispositivo de liber tação lenta proporcionando (1) uma libertação constante do in grediente activo ou (2) uma libertação intermitente do ingrediente activo.

Ingrediente activo

Dióxido de silicio coloidal 2.0 )

Celulose microcristalina atá 100.0)

Purgante Oral para Veterinária % w/ v

Gama

Ingrediente activo

Poli-sorbato 85

Álcool benzílico

Propileno-glicol

Tampão fosfato

Água até

0.35 5.0 3.0 30.0 como pH 6.0 - 6.5 100.0

0.01 - 2% w/v

Dissolve-se o ingrediente activo no poli-sorbato 85, no álcool benzílico e no propileno-glicol. Ádiciona-se uma quantidade de égua e ajusta-se o pH para 6,0 - 6,5 com tam pão fosfato, se necessário. Ajusta-se o volume final com água. Enche-se com o produto o recipiente do purgante.

Pasta Oral para Veterinária

% w/w

Gama

Ingrediente activo		4.0
Sacarina de sódio		2.5
Poli-sorbato 85		3.0
Distearato de alumínio		5.0
Oleo de coco fraccionado	até	100.0

1-20% w/w

Dispersa-se o distearato de alumínio no óleo de coco fraccionado e no poli-sorbato 85 com aquecimento. Arref e. ce-se até à temperatura ambiente e dispersa-se a sacarina de sódio no veículo oleoso. Dispersa-se o ingrediente activo na base. Com o produto enchem-se seringas de plástico.

Grânulos para Administração Alimentar em Veterinária

Gama % w/w

Ingrediente activo Hemi-hidrato de sulfato de cálcio

2.5 até 100.0

0.05 - 5% w/w

Mistura-se o ingrediente activo com o sulfato de cálcio. Preparam-se grânulos utilizando um processo de granulação a húmido. Seca-se utilizando um tabuleiro ou um secador de leito fluido. Faz-se o enchimento de recipientes apropriados .

Aglomerados para Veterinária % w/v

Gama

Ingrediente activo 2.0 Dimetil-sulfóxido 10.0 Metil-isobutil-cetona 30.0 Propileno-glicol (e pigmentos) até 100.0

0.1 até 30%

Dissolve-se o ingrediente activo em dimetil-sulfó

- 50 xido e em metil-isobutil-cetona. Adiciona-se o pigmento e ajusta-se o volume com propileno-glicol. Enchem-se os r ecipientes para aglomerados.

Concentrado Emulsionável

Ingrediente activo

Emulsionante aniónico (por exemplo sulfonato de fenilo CALX)

Emulsionante não iónico (por exemplo Synperonic NP13”)*

Solvente aromático (por exem pio Solvesso 100”) g 40 g g

até 1 litro

Mistura-se todos os ingredientes e agita-se até à dissolução.

* Marca comercial da ICI

Grânulos | (a) Ingrediente activo

Resina de madeira Grânulos de gesso (malha 20-60) (por exemplo ”Agsorb 100A”) g 40 g até 1 kg.

(b) Ingrediente activo 50 g

Synperonic NT13 * 40 g

Grânulos de gesso (malha 20-60) até 1 kg

Dissolve-se os ingredientes num solvente volátil, por exemplo cloreto de metileno, e adiciona-se aos grânulos que caiem no misturador. Seca-se para remoção do solvente.

* Ma_rca comercial da ICI.

la 1

Claims (4)

1. Processo para a preparação de compostos de fórmuR (D e seus sais, em que

   R¹ representa um grupo metilo, etilo ou isopropilo;

   R‘

   RY¹ é -CH?-, Y^ é -CH- e X representa -C- / no qual R^ rez , 8 8 presenta um átomo de hidrogénio ou um grupo OR (em que OR é um grupo hidroxilo ou um grupo hidroxilo substituido possuindo até 25 átomos de carbono) e R^J representa um átomo de hidro z 2 3 z génio, ou R e R^ em conjunto com o átomo de carbono o qual estão ligados representam >C=0, >C=CH_O ou >C=NOR (no qual

   9 Z Z

   R representa um átomo de hidrogénio, um grupo alquilo (C,-C_fl) Q 1 O ou um grupo alquenilo(C^-Cq)) e o grupo >C=NOR^ está na con- 52 - figuração S_7 ou -Y^-X-Y^- representa -CH=CH-CH- ou -CH₂-CH=

   —.

   j 5 i 4 8 5 ¹ R representa um grupo OR como definido anteriormente e R z 4 5 representa um atomo de hidrogénio, ou R e R em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados, representam >0=0 ou >C=NOR^ (em que R^ é como definido anteriormente para ^R6^);

   R° representa um átomo de hidrogénio e R representa -CKLjOH, -CHO, -COgH ou um ester de um ácido carboxílico ou um grupo amida; ou R^ representa um grupo hidroxilo e R representa um grupo metilo; e

   R representa um átomo de hidrogénio ou auando R representa um grupo -CH^OH então R pode também representar um grupo hidroxilo, caracterizado por

   A) na preparação de um composto de fórmula (1) (no qual R é um átomo de hidrogénio e R é -CH₂0H, -CHO ou -COOH, ou R^ é -OH e R é -CH^), se incubar um composto de fórmula (2) num meio adequado na presença de um nicroorganismo ou um seu derivado enzimático ου. uma preparação derivada de um micro, organismo contendo a enzima de interesse susceptível de efectuar a conversão;

   B) na preparação de um composto no qual R é um grupo ester de ácido carboxílico, se esterificar o ácido carboxílico correspondente (no qual R é -GOOH);

   C) na preparação de um composto no qual R é um grupo amida de ácido carboxílico, se tratar o ácido carboxílico correspon dente ou um seu sal ou derivado reactivo com uma amina;

   D) na preparação de um composto no qual OR é um grupo hidroxilo substituido, se fazer reagir o composto 5- e/ou 23-hi droxi correspondente com um reagente que proporciona um grupo hidroxilo substituido;

   E) na preparação de um composto no qual X é um grupo carbonilo ou R^ e R^ em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão ligados representam um grupo carbonilo, se oxidar um composto correspondente no qual R e/ou R^ são -OH;

   F) na preparação de um composto que contem o grupo >C=NOR⁷ ou >C=N0R'’^a, se fazer reagir um composto 5- e/ou 23-oxo 9 9 s correspondente com ^NOR ou ^NOR ; ou

   G) na preparação de um composto no qual X é -CH₉- se tratar
2. 2 *um composto correspondente no qual R é um grupo hidroxilo e R^-2 é um átomo de hidrogénio, sequencialmente com i) cloreto de oxalilo e ii) 2-mercapto-piridina-N-óxido, uma quantidade catalítica de uma base orgânica e um tiol.

   - 2a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte rizado por R^ ser um grupo isopropilo.

   -
3. 3^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte.

   rizado por R ser -COOR^ em que R^^ é um grupo alquilo (C-,-C_Q) 18 18 z lo ou -CONHR em que R é um grupo alquilo (C^-Cg).

   - 4^ã Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte. rizado por Y^ ser -CH9-, Y² ser -CH- e X ser -C(R²)(r3)_ na qual R é um átomo de hidrogénio ou um grupo hidroxi, etoxi ou acetuxi e R^J é um átomo de hidrogénio, ou R e R^J em conjunto com o átomo de carbono ao qual estavam ligados represen tam >C=0, ^C=CH9 ou >C=N0CH₇; e R^ ser um grupo hidroxi, metoxi ou acetiloxi ou R e R em conjunto com o átomo de car bono ao qual estavam ligados representarem >C=NOCH^.

   - 5^a Processo de acordo com a reivindicação 1, caract£ rizado por R ser -COOH.

   - 6a Processo de acordo com a reivindicação 1, caracte.

   rizado por R ser -CO₉CH₇, R^ ser um grupo isopropilo, Y^ ser

   2 > 4

   -CH2~, Y ser -CH-, X ser >C=NOCHg, R ser um grupo hidroxilo, e R^ aer um átomo de hidrogénio; ou R ser -C0NH(CH_o)_qCH₉,
4. 4 1 2

   R ser um grupo isopropilo, Y ser -CH₉-, Y ser -CH-, X ser

   4 ο χ >C=NOCH_q, R ser um grupo hidroxilo e R ser um atomo de hidro _z 3 Ί génio; ou R ser -CO₉H, R ser um grupo isooropilo, Y ser

   -CH^-» ”7 ser -CH-, X ser >C=NOCH^, R4 ser um grupo hidroxi e R5 ser um átomo de hidrogénio.

   _ 7a Processo para a preparação de uma composição farmacêutica, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo uma quantidade eficaz de pelo menos um composto quando preparado de acordo com a reivindicação 1, em associação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

   - 8a Processo para a preparação de uma composição vete rinária, caracterizado por se incorporar como ingrediente activo pelo menos um composto de fórmula 1, quando preparado de acordo com a reivindicação 1, em associação com um veículo aceitável sob o ponto de vista veterinário.

   _ 9a _

   Processo para a preparação de uma composição pesticida, caracterizado por se incorporar como ingrediente acti vo pelo menos um composto de fórmula 1, quando preparado de £ cordo com a reivindicação 1, em associação com um veículo aceitável sob o ponto de vista pesticida.