PT1358883E - Composições farmacêuticas de re-epitelização contendo goma xantana - Google Patents

Description

COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS DE RE-EPITELIZAÇÃO CONTENDO GOMA SSJT&MA A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas de re-epitelização, especialmente para utilização oftálmica. É bem conhecido que as células epiteliais, por exemplo na córnea, podem sofrer danos causados por corpos estranhos, tais como abrasões, cortes e feridas (acidentais, cirúrgicos, imunológicos, etc.) e úlceras pós-infecção. Os danos deste tipo requerem normalmente períodos longos para sarar as feridas; provocam um grande desconforto e muitas vezes um fecho da ferida imperfeito. A patente WO 02/15913 descreve a utilização de um polímero polianiónico para tratar feridas, tais como ulcerações da córnea, com ou sem algumas enzimas. O objecto da presente invenção é uma composição farmacêutica que possa acelerar a re-epitelização, em especial do tecido córneo, e que seja também bem tolerada.

Este objectivo é alcançado utilizando goma xantana misturada com ácido hialurónico para a preparação de um medicamento para o tratamento de feridas epiteliais, bem como de composições farmacêuticas contendo goma xantana, tal como descrito em pormenor nas reivindicações anexas.

Outras características e vantagens da composição farmacêutica tópica, tal como descrito na presente invenção, tornar-se-ão evidentes a partir da descrição seguinte de algumas formas de realização preferidas de formulações da composição farmacêutica que são apresentadas para fins ilustrativos e não limitativos.

Uma verificação experimental surpreendente foi a observação de que a goma xantana apresenta uma função de re-epitelização elevada, isto é, é capaz de acelerar a formação de novas células epiteliais ao nível da zona epitelial danificada, como demonstrado também numa experiência in vivo referida mais adiante na presente descrição. A goma xantana é um heteropolissacárido com um peso molecular entre 3-7,5 x 106 Da, produzido através de um processo de fermentação pela bactéria Xanthomonas campestris. A estrutura primária da xantana é uma cadeia ramificada com uma cadeia principal de β (1—>4)-D-glucose idêntica a celulose, em que um cadeia de trissacárido com uma ligação glicosídica β(1—>3), composta por manose acetilada, ácido glucorónico e manose, está ligada alternadamente a cada segundo resíduo; por fim a cada carbono C4 e C6 da unidade terminal da manose está ligada uma molécula de ácido pirúvico numa proporção variável de 25-50% que completa a estrutura da cadeia lateral do polímero.

Os dados disponíveis sugerem uma conformação de hélice simples (mas uma estrutura em hélice dupla ou tripla não pode ser posta de parte) em que as cadeias laterais do polímero tendem a alinhar-se com a cadeia principal (com interacções do tipo não covalente) protegendo as ligações glicosídicas aí presentes. O resultado é uma estrutura do tipo vareta, rígida, que confere uma óptima estabilidade a molécula, com uma protecção excelente contra ácidos e bases fortes, temperaturas elevadas, ciclos de congelação e descongelação, ataque enzimático, mistura prolongada, degradação por corte, variações de força iónica e pH.

Consequentemente, devido as propriedades estruturais agora descritas a goma xantana na forma de um gel pré-formado torna possível realizar de forma adequada a função importante de protecção mecânica.

Além disso, após muitas experiências, verificou-se, surpreendentemente que a mistura de goma xantana com ácido hialurónico como principio activo de uma composição de re-epitelização numa preparação na forma de um gel pré-formado, aumenta a taxa de re-epitelização do epitélio danificado e, além disso, promove a reorganização do epitélio formado de novo, que resulta na formação de uma camada celular de qualidade superior.

Em particular, estudos sobre cura de feridas realizados sob um microscópio electrónico de varrimento revelaram um grau de organização epitelial surpreendente, após um tratamento com a composição farmacêutica de re-epitelização de acordo com a invenção, como será explicado em pormenor. É bem conhecido que o ácido hialurónico não só favorece a proliferação celular, como também estabiliza a camada basal do epitélio, estimulando a produção da lâmina e fibronectina.

Em qualquer caso, quando se utilizam a goma xantana e ácido hialurónico como uma mistura na sua capacidade de agentes de re-epitelização, estes têm um efeito sinergístico surpreendente. 0 ácido hialurónico e un polissacárido de peso molecular elevado com características polianiónicas, capacidade elevada para reter água, viscoso, propriedades bioadesivas e pseudoplásticas, sem evidência de tixotropia. A sua estrutura primária consiste em blocos de 8 (1—>4) dissacárido, cada um constituído por ácido D-glucorónico e N-acetil-D-glucosamina ligados uns aos outros por uma ligação 8ΐ1··^3ϊ.

Tendo em conta as observações anteriormente descritas, outra forma de realização da presente invenção consiste em proporcionar composições farmacêuticas de re-epitelização tópicas, num gel pré-formado, consistindo essencialmente em goma xantana como princípio activo, misturada com ácido hialurónico e aditivos farmacologicamente aceitáveis. A percentagem de goma xantana em relação ao volume total do gel pré-formado é, de preferência, entre 0,7% a 5%, mais preferencialmente entre 0,8% e 3% e muito mais preferencialmente entre 0,9% e 1,5%.

Os excipientes são escolhidos de entre agentes isotónicos, tampões, solventes ou veículos, antioxidantes, agentes de ajuste de pH e semelhantes.

Em particular, os agentes isotónicos possíveis da composição da invenção podem ser iónicos, tais como NaCl, KC1, ou não iónicos, por exemplo glicerol, manitol ou uma mistura destes.

Os tampões possíveis podem ser os normalmente utilizados, por exemplo, em formulações oftálmicas, tais como fosfato ou borato, acetato, um mistura destes tampões, tais como citrato/fosfato ou mesmo tampões que não são frequentemente utilizados no campo oftálmico, tais como Tris-HCl ou baseados em histidina ou arginina.

Portanto, a composição de um gel pré-formado com xantana pode ser uma solução salina equilibrada, ou, de outro modo, uma composição salina não necessariamente equilibrada devido a presença de iões Ca2' e Mgr*,

Os antioxidantes possíveis incluem citrato, ascorbato ou sulfato de sódio.

Agentes de ajuste de pH possíveis são ácidos ou bases orgânicos ou inorgânicos com os seus sais ácidos e básicos respectivos.

Solventes ou veículos possíveis são água ou uma mistura de água/óleo.

Verificou-se que quando os sais são adicionados a uma composição contendo >-0.,25% de xantana, há um aumento de viscosidade proporcional a concentração de xantana e dos sais adicionados, embora se atinja um patamar de viscosidade com tão pouco como 0,1% de NaCl. Deste modo, a xantana comporta-se de forma diferente em função das variações de força iónica em relação a outros polielectrólitos, face as quais a presença de sais (que diminuem o qrau de hidratação e repulsão entre cadeias) promove a interacção intermolecular e um colapso molecular de uma espiral aleatória (com uma viscosidade mais elevada) para uma estrutura em espiral compacta (com uma menor viscosidade). Nas soluções de xantana, a adição de sais diminui o grau de hidratação e repulsão a de cargas entre os aniões carboxilato das cadeias laterais da molécula, o que estabiliza consequentemente a conformação tipo vareta, rigida e promove uma malha tridimensional mais forte e mais rigida que aumenta a viscosidade (cerca de duas vezes a 0,1% de NaCl para 1% de xantana) e um valor de rendimento significativo, que em geral torna as soluções do polímero mais protegidas contra factores como o tratamento térmico, ataque de ácidos e bases, mistura prolongada, etc.

Em solução, as hélices simples tendem a associar-se formando uma malha ordenada complexa de moléculas rígidas, unidas essencialmente por forças de Van der Waals, fracas. O efeito da estrutura distinta e única da xantana em solução é, mesmo para concentrações moderadas (1-2,5%), o de uma consistência do tipo gel com valores de tensão de cedência significativos (e portanto uma capacidade excelente para favorecer a formaçao de suspensões e emulsões) e uma boa viscosidade.

Em conjunto, as propriedades até aqui analisadas, juntamente com a baixa toxicidade, bioadesividade e compatibilidade com os excipientes mais comuns e embalagens disponíveis no mercado, tornam a goma xantana não só adequada, com vantagem, como sistema de fornecimento, como também como agente protector, numa base puramente mecânica. A quantidade de ácido hialurónico presente na referida composição varia de 0,01% a 1% do volume total do gel pré-formado, de preferência de 0,05% a 0,5%, melhor ainda de 0,1% a 0,4%. O ácido hialurónico está presente na forma de sal. Contra-iões possíveis podem ser, por exemplo, sódio, potássio, cálcio ou magnésio.

Ainda noutra forma de realização da presente invenção, a composição farmacêutica de re-epitelização pode incluir, além da mistura de goma xantana e ácido hialurónico como agentes de re-epitelização, um ou vários agentes farmacológicos seleccionados de entre agentes anti-infecciosos, anti-inflamatórios, anestésicos e midriáticos. A invenção é também descrita por meio dos seguintes exemplos não limitativos das mesmas formulações.

Componentes

Quantidade

Função

Goma xantana Principio activo, de re-epitelização Cloreto de sódio Ó.MÓÓ f Agente isotonico Fosfato de sódio dibásico.12H20 í 1.. n $s <: r? Tampão Fosfato de sódio, monobásico.H20 :Á. ÓFM g Tampão Glicerol Χ,όόνΦ g Agente isotónico Água purificada q.s. para lEÁS sal Solvente .......... :rC^MIEÃÇM 2

Componentes Quantidade Função Goma xantana 1,0000 g Principio activo, de re-epitelização Cloreto de sódio C iSóó g Agente isotónico Cloreto de potássio 0 >500 ;v Agente isotónico Cloreto de magnésio.6H20 ò. óut g Agente isotónico Cloreto de cálcio.2H20 li, δφδ4 §' Agente isotónico Fosfato de sódio, dibásico.12H20 D;síssçí g Tampão Fosfato de sódio, monobásico.H20 É SSFF Q- Tampão Citrato de sódio.2H20 Ó,OSJHl 1 Tampão/antíoxidante Glicerol 1,8888 g Agente isotónico Água purificada q.s. para Solvente FOFMOÁÃCXO 3

Componentes Quantidade Função Sal de sódio do ácido 0,1500 g principio activo, de hialurónico re-epitelização Goma xantana 1, 0000 g Principio activo, de re-epitelização Cloreto de sódio 0,3500 g Agente isotónico Cloreto de potássio 0,1500 g Agente isotónico Cloreto de magnésio.6H2G 0,0120 g Agente isotónico Cloreto de cálcio.2H20 0,0084 g Agente isotónico Fosfato de sódio, dibásico,12H20 0,0890 g Tampão Fosfato de sódio, monobásico.H20 0,0069 g Tampão Citrato de sódio.2H20 0,0590 g Tampão/antioxidante

Glicerol 1, 0000 g Agente isotónico Água purificada g.s. para 100,0 ml Solvente r

Componentes Quantidade Função Sal de sódio do ácido 0,1500 g Principio activo, de hialurónico re-epitelização Goma xantana 1, 0000 g Principio activo, de re-epitelização Cloreto de sódio 0,3500 g Agente isotónico Cloreto de potássio 0,1500 g Agente isotónico Cloreto de magnésio.6H20 0,0120 g Agente isotónico Cloreto de cálcio.2H20 0,0084 g Agente isotónico Base Tris 0,2425 g Tampão HC1 IN q.s. para PH 7,4-7,6 Tampão Citrato de sódio.2HzO 0,0590 g Tampão/antioxidante Glicerol 0,5000 g Agente isotónico Água purificada q.s. para 100,0 ml Solvente

FõHMOliMvãD

Componentes Quantidade Função Sulfato de netilmicina equivalente a base de netilmicina 0, 4550 g 0,3000 g Principio activo Hialuronato de sódio 0,1500 g Principio activo, de re-epitelização Goma xantana 1,0000 g Principio activo, de re-epitelização Cloreto de sódio 0,8700 q Aqente isotónico Hidróxido de sódio 1M q.s. para pH = 7,00-7,6 Aiuste de pH Água purificada q.s. para 100,0 ml Solvente •^^'Y'Λ\ί!ί r' ·> VVS. .··'>. ,ít v í'«íi^· Λ.ίΛ’Χν^ν ^^¾¾¾¾¾¾ fes.t'e sí ίφί·&8:£ ^ítÇSÍ#

Sulfato de netilmicina equivalente a base de netilmicina 0, 4550 g 0,3000 g principio activo Hialuronato de sódio 0,1500 g principio activo, de re-epitelizacão Goma xantana 1, 0000 g principio activo, de re-epitelização Fosfato de sódio dibásico dodeca-hidratado 0,5000 g Tampão Fosfato de sódio monobásico mono-hidratado 0,1465 g Tampão Citrato de sódio di-hidratado 2, 1000 g Tampão/antioxidante Água purificada g. s . para 100,0 ml Solvente

FOlMOLâCílO

Componentes Quantidade Função Sulfato de netilmicina equivalente a base de netilmicina 0,4550 g >' Á’ "T vt Principio activo Hialuronato de sódio 0,1500 g Principio activo, de re-epitelização Goma xantana 1, 0000 g Principio activo, de re-epitelização Base Tris 0,2425 q Tampão HCl 1 M q.s. para pH 7,4-7,6 Tampão Citrato de sódio di-hidratado 2,1000 Tampão/antioxidante Agua purificada q.s. para 100,0 ml Solvente

Componentes

Quantidade

Função

Sulfato de netilmicina equivalente a base de netilmicina 0, 4550 g 0,3000 g Principio activo Hialuronato de sódio 0, 1500 g Principio activo, de re-epitelização Goma xantana 1,0000 g Principio activo, de re-epitelização Base Tris 0,2423 g Tampão

Em geral, nas composições da invenção o glicerol apresenta uma acção dispersante em relação a goma xantana, impedindo a formação de aglomerados e altos durante a fase de dispersão do polímero em H2O.

Seguir-se-á uma descrição geral de um procedimento para a preparação de uma composição farmacêutica de acordo com a presente invenção. A título ilustrativo a formulação preparada é para 100 ml/g de produto. Procedimento para a preparação de um gel 0.¾¾ re-epitelização pré-formado

Num volume de água purificada de cerca de 50 ml adicionam-se e dissolvem-se todos os aditivos da formulação, adicionando cada componente após o anterior estar completamente dissolvido.

Se a composição assim o requerer, adiciona-se a solução uma quantidade predeterminada de um ou mais dos agentes farmacológicos enumerados acima, até o(s) referido(s) agente(s) farmacológico(s) estar/estarem completamente dissolvido(s) ou misturado(s).

Separadamente, adiciona-se um grama de goma xantana a 50 ml de água e dispersa-se na superfície do líquido, sem agitação, para evitar a formação de altos. Alternativamente, a dispersão pode ser homogeneizada com um agitador de pás, ou um homogeneizador, de modo a acelerar o processo, evitando ao mesmo tempo a formação de altos. 0 ácido hialurónico também é disperso nesta fase. A dispersão homogénea é então autoclavada até se obter um mínimo de FO = Fl5 válido para esterilidade (letalidade, expressa em termos de equivalentes de tempo em minutos a uma temperatura de 1212C em relação a morte de microorganismos durante o processo de esterilização pelo vapor).

Neste ponto, a solução dos aditivos esterilizada por filtração (no caso de uma suspensão esterilizar de modo adequado) é adicionada de forma asséptica a dispersão de goma xantana e agitada durante cerca de 1 h a uma velocidade que irá permitir uma mistura suave, sem turbulência excessiva, até se obter um gel homogéneo.

Por fim, o gel pode ser distribuído de forma asséptica nos recipientes adequados.

Para ilustrar a eficácia das composições principais da invenção, descrever-se-ão duas experiências que foram realizadas para verificar, num modelo de re-epitelização in vivo, o efeito de 2 geles pré-formados de acordo com as formulações referidas - uma (formulação 2) contendo apenas goma xantana ®f) e outra (formulação 3) contendo goma xantana e também ácido hialurónico (EPG) - em comparação com uma solução que contém apenas 0,15% de hialuronato de sódio e sais (EYP) e uma solução salina sem polímeros (SOL).

Eficácia de re-epitelização A diferença entre as duas experiências reside no facto de a primeira ser concebida para determinar os aspectos dinâmicos e quantitativos da re-epitelização e a segunda para determinar os aspectos morfológicos e qualitativos da re-epitelização após tratamento com as várias formulações. Na primeira experiência, utilizou-se um oftalmoscópio confocal (CSLO) para seguir a velocidade de re-epitelização e no último utilizou-se um microscópio electrónico de varrimento (SEM) para a analise ultraestrutural.

Para cada experiência utilizaram-se coelhos albinos da Nova Zelândia, subdivididos em 6 grupos de tratamento de acordo com o descrito nos próximos dois parágrafos.

Animais

Utilizaram-se coelhos albinos da Nova Zelândia, machos (Charles River Itália) com um peso médio de 2,400 kg.

Os animais foram distribuídos em compartimentos para animais mantidos em condições convencionais de humidade (50% + 10% HR) e temperatura (19 r 2aC) com ciclos alternados de luz artificial (12 horas de escuro/luz). Os animais receberam alimentos e água ad libitum.

Esquema e regime de tratamento

Após examinar os olhos dos animais para excluir eventuais patologias oftalmológicas, os animais foram distribuídos por seis grupos de tratamento diferentes, de acordo com o seguinte esquema:

Animais utilizados durante os diferentes tempos de observação e tratamento . •x :·> T24h T48h Τ7211 T96h Controlo 4 ~~ __ — Ferida não tratada 4 4 4 4 4 EPG 4 4 4 4 4 XNT 4 4 4 4 4 EYP 4 4 4 4 4 SOL 4 4 4 4 4 Legenda Controlo: animais com córnea intacta, não tratados oftalmologicamente. Ferida não tratada: animais com ferida na córnea não tratados farmacologicamente EPG, XNT, EYP, SOL: animais com ferida na córnea tratada com as diferentes formulações

Todas as substâncias testadas foram administradas 5 vezes por dia até ao final da experiência. Modelo experimental

Os animais foram anestesiados por injecção i.m. de cetamina (37,5 mg/kg p.c.) e xilazina (10 mg/kg p.c.) e com oxibuprocaina (1 gota/olho). A ferida da córnea foi efectuada utilizando um Algerbrush com uma ponta de 1 mm. Com o auxilio de uma máscara de parafilm estéril, com um buraco de 6 mm no centro, removeu-se o epitélio numa área circular. O olho foi imediatamente lavado com BBS estéril para remover os detritos celulares e fez-se o tratamento.

Ao longo do tempo os coelhos foram avaliados as 0, 24, 48, 72 e 96 horas com um CLSO acoplado a um sistema de processamento de imagem, ou foram sacrificados para análise num SEM (0, 24, 48 e 72 horas). 0 método de pesquisa e resultados de cada experiência são descritos a seguir.

Experiência de CLSO

Os olhos dos coelhos de cada grupo de tratamento foram tratados com 25 pi de uma solução de fluoresceina de sódio a 0,5%. Após 2 minutos, o excesso de fluoresceina foi removido por lavagem com uma solução fisiológica. Os coelhos sedados foram em seguida analisados através de CLSO. Este sistema detecta o sinal fluorescente que tem origem na zona danificada sem epitélio e mede quantitativamente a área danificada através de um sistema de processamento de imagem.

Resultados A análise de CLSO revelou que a ferida cura espontaneamente após 72 horas, em todos os grupos tratados. 0 grupo tratado com a formulação que contem apenas goma xantana como principio activo (XNT) apresentou um processo de re-epitelização acelerado logo as 24 horas após o tratamento. 0 fecho da ferida era pelo menos 30% mais avançado do que nos grupos de "ferida não tratada", EYP e SOL. Observou-se uma taxa de re-epitelização maior (50% mais elevada do que os outros grupos) 48 horas após o tratamento em ambos, o grupo tratado apenas com goma xantana (XNT) e o grupo tratado com goma xantana misturada com ácido hialurónico (EPG). Não se observaram diferenças entre o grupo tratado apenas com hialuronato de sódio (EYP) e os grupos SOL e "ferida não tratada".

Experiência de SEM A tempos predeterminados (0, 24, 48, 72 horas desde o inicio do tratamento), os animais dos diferentes grupos de tratamento foram sacrificados (Tanax i.v.). Rapidamente após o sacrifício o bolbo foi enucleado e as córneas excisadas e imediatamente fixadas com gluteraldeído a 2%, durante 24 horas. Após fixação as córneas foram processadas para análise SEM.

Resultados

Todas as córneas processadas para observação imediatamente após re-epitelização da córnea exibem feridas com margens aguçadas, elevadas e estroma nu. Os controlos (córneas intactas) exibem um epitélio homogéneo com um bom grau de diferenciação celular e uma presença normal de "buracos" (áreas circunscritas sem microvilosidades que estão presentes na superfície das células epiteliais, com prováveis funções de comunicação), contactos celulares dentados e numerosas microvilosidades, presença de epitélio superficial com o aspecto típico de mosaico que reflecte as diferentes fases de maturação (células escuras, médio claro e claro) . T24 ore

Vinte e quatro horas após o início da experiência, as córneas do grupo "ferida não tratada" exibem uma área sem epitélio com um estroma totalmente nu, com a margem da zona sem epitélio aguçada mas pouco elevada. Todas as células formadas de novo presentes nas margens da "ferida" ou ligeiramente fora apresentam poucas microvilosidades e não estão claramente diferenciadas em escuras, médias e claras.

As margens das feridas das córneas do grupo SOL são semelhantes as do grupo anterior, mas as células formadas de novo são mais diferenciadas, com a presença das três fases de diferenciação e microvilosidades mais profusas.

Além disso, as células são centripetamente alongadas, em contraste com as amostras recolhidas do grupo "ferida não tratada", em que a forma oblonga é menos evidente.

Nas córneas do grupo EYP a margem da zona destituída de epitélio é achatada e circunscrita por um anel de células formadas de novo diferenciadas, com um aspecto centripetamente alongado.

As córneas do grupo xnt têm um aspecto em grande medida semelhante ao do grupo EYP.

As córneas no grupo EPG exibem uma margem de ferida achatada com células com microvilosidades mais numerosas do que nos outros grupos de tratamento. As células formadas de novo exibem um número razoável de "buracos". T48 ore

As córneas do grupo da "ferida não tratada" observadas após 48 horas com a ampliação menor exibem uma zona sem epitélio bastante desorganizada, com margens acentuadas e indentadas e células formadas de novo com junções parcialmente aumentadas. Um pequeno número de células são alongadas e o pequeno número de microvilosidades são curtas e distribuídas uniformemente, sem diferenciação entre células claras, médias e escuras.

As amostras do grupo SOL também exibem uma zona sem epitélio com contornos bastante irregulares com margens acentuadas, embora as células formadas de novo pareçam mais diferenciadas e as microvilosidades sejam mais numerosas, com uma forma praticamente normal. Os bordos das células que fazem a fronteira das margens da zona re-epitelizada estão aumentados e nalguns casos elevados.

As córneas do grupo EYP re-epitelizaram de forma semelhante as córneas dos outros grupos. No entanto, os contornos da zona re-epitelizada permanecem irregulares, mesmo quando o grau de diferenciação, a distribuição e a qualidade das microvilosidades das células formadas de novo são bons.

As amostras do grupo de tratamento de XNT exibem contornos de ferida irregulares, mas o estado do epitélio formado de novo é significativamente melhor do que o dos outros grupos. A nova zona de epitélio nas proximidades das margens da ferida apresenta um anel de células centripetamente alongadas. Além disso, o grau de diferenciação celular, bem como os contornos celulares, são bons, embora persistam zonas em que as células parecem elevadas em parte. As microvilosidades são normais e numerosas. A organização das amostras do grupo de tratamento EPG ê semelhante a dos grupos EYP e XNT. No entanto, o bordo da ferida, tal como no tempo de observação anterior, é ainda plano. Consequentemente, a zona formada de novo com células orientadas centripetamente é maior e, em geral, mesmo com a ampliação mais baixa, o aspecto da zona sem epitélio é mais uniforme. T72 ore

Após 72 horas de tratamento, todos os grupos exibem uma ferida sarada, embora persistam áreas pequenas destituídas de células, distribuídas pontualmente e com junções aumentadas. Este fenómeno é parte do processo de re-epitelização normal e é causado pelo rearranjo contínuo do epitélio formado de novo.

As diferenças entre os grupos residem na organização do epitélio formado de novo. De facto, no grupo da "ferida não tratada" o epitélio parece uniforme devido a presença de microvilosidades curtas e escassas que dão ao epitélio um aspecto "pastoso". Assim, a diferenciação típica em células escuras, médias e claras não está presente, excepto nas zonas do epitélio formado de novo mais distantes do centro, provavelmente porque nessas zonas a renovação celular retomou ao normal, enquanto que no centro a multiplicação celular é ainda caótica.

As amostras SOL exibem um certo grau de organização epitelial. De facto, mesmo na zona central, re-epitelizada mais tarde, está presente alguma diferenciação e em comparação com as córneas do grupo da sferida não tratada", as microvilosidades são mais numerosas e "não pastosas".

As diferenças entre os grupos tratados com os produtos que contêm biopolímeros persistem, mesmo as 72 horas, embora as córneas tratadas com EPG estejam melhores do que as tratadas com XNT e estas últimas estejam melhores do que as do grupo EYP. Em geral, o aspecto das córneas tratadas com EPG é semelhante ao dos controlos (córneas intactas), com microvilosidades numerosas e longas, um número razoável de buracos distribuídos uniformemente na camada celular e uma boa representação das células em diferentes fases de diferenciação.

De acordo com o que foi descrito até agora, a composição farmacêutica de re-epitelização na forma de um gel pré-formado acelera a reconstrução do epitélio danificado.

Além disso, a referida composição favorece com vantagem a reorganização do epitélio e consequentemente aumenta a adesão e estabilidade do epitélio novo no tecido conjuntivo subjacente.

Outra vantagem da composição de acordo com a invenção é a sua formulação na forma de um gel pré-formado, que tem como consequência que a composição farmacêutica de re-epitelização também desempenha uma função mecanicamente protectora.

Quando a composição da invenção inclui o sal de sódio de ácido hialurónico, a sua formulação exibe características extremamente favoráveis para um produto de uso tópico.

Em particular, a consistência é a de um gel macio, quase transparente, de cor creme claro, agradável ao toque, não pegajoso, fácil de espalhar e absorvível. As sensações após instilação são semelhantes: a preparação não queima, a sensação de "visão desfocada" é muito limitada ou não existente, ao mesmo tempo que persiste a sensação de frescura e lubrificação do olho. Adicionalmente, o produto é facilmente administrado, quer em termos de libertação a partir do recipiente (facilidade de formação de gota e fornecimento) e distribuição das gotas na superfície ocular.

Além disso, observou-se, surpreendentemente, que o ácido hialurónico embora presente em água a concentrações quase sete vezes inferiores às da goma xantana, tem uma capacidade de estabilização notável em relação à conformação da última.

De facto, a viscosidade das soluções de goma xantana sem sais diminui em cerca de 30% após tratamento térmico.

Pelo contrário, a viscosidade das soluções de goma xantana e sal de sódio de ácido hialurónico diminuem apenas em 10-15% após tratamento térmico.

Em particular, o estudo das características reológicas do produto deu os resultados seguintes. A título ilustrativo, o diagrama de viscosidade/velocidade de corte de uma composição que consiste de goma xantana a 1% + ácido hialurónico foi estudado e comparado com uma composição de xantana a 1% + solução salina (BSS) e xantana a 1% + H20. O perfil reológico do produto completo apresenta um valor de η (viscosidade) muito elevado e uma tensão de corte bem definida a γ baixo e, portanto, uma boa resistência, consistência reticular e retenção no local de aplicação. A viscosidade =?d diminui rapidamente a medida que a velocidade de corte aumenta, com um grau elevado de pseudoplasticidade que confere ao sistema uma boa capacidade de se espalhar e uma boa distribuição no local de aplicação e dá ao utilizador uma sensação confortável. A curva de η/γ obtida aumentando gradualmente a velocidade de corte coincide com a do caminho inverso, obtida diminuindo a mesma gradualmente; assim, o sistema não apresenta tixotropia e readquire a sua estrutura instantaneamente, após cessar a tensão de corte.

Em particular para aplicações oculares isto traduz-se com vantagem na recuperação da estrutura e viscosidade do produto entre cada pestanejar, aumentando consequentemente o tempo de contacto com a córnea.

Tal como pode ser determinado a partir do que aqui foi descrito, uma composição farmacêutica de re-epitelização de acordo com a presente invenção responde às necessidades mencionadas na secção introdutória e ultrapassa os problemas do estado da arte actual.

19 HEI

Lisboa,

Claims (22)

1. Utilização de goma xantana como principio activo de um medicamento misturada com ácido hialurónico, para a produção de um remédio para o tratamento de feridas do epitélio oftálmico.

2. Utilização de goma xantana de acordo com a reivindicação 1, em associação com um medicamento seleccionado de entre anti-infecciosos, anti-inflamatórios, anestésicos e midriáticos.

3. Utilização de goma xantana de acordo com qualquer das reivindicações 1 e 2, em que o referido epitélio é o epitélio da córnea.

4. utilização de goma xantana de acordo com qualquer das reivindicações 1 a 3 para promover a proliferação de células epiteliais.

5. Composição de re-epitelização oftálmica substancialmente na forma de um gel pré-formado que consiste em goma xantana como principio activo misturada com ácido hialurónico e aditivos farmacologicamente aceitáveis.

6. Composição oftálmica de acordo com a reivindicação 5, em que o referido princípio activo compreende goma xantana em quantidades entre 0,7% a 5% do volume total do referido gel pré-formado.

7. Composição oftálmica de acordo com a reivindicação 5, em que a referida goma xantana está presente em quantidades entre 0,8% a 3% do volume total do gel pré-formado.

8. Composição oftálmica de acordo com a reivindicação 5, em que a referida goma xantana está presente em quantidades entre 0,9% a 1,5% do volume total do gel pré-formado.

9. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 8 em que os referidos aditivos incluem agentes isotónicos, tampões, solventes, antioxidantes, agentes de ajuste de pH e semelhantes.

10. Composição oftálmica de acordo com a reivindicação 9, em que os referidos agentes isotónicos podem ser iónicos ou não iónicos e suas misturas, os tampões podem ser fosfato ou borato, acetato, citrato/acetato, Tris-HCl, ou baseados em histidina ou arginina, os antioxidantes podem ser citrato, ascorbato ou sulfato de sódio, os agentes de ajuste de pH podem ser ácidos ou bases orgânicos ou inorgânicos, juntamente com as suas formas de sal, os solventes ou veículos podem ser água ou uma mistura de óleo/água.

11. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 10 em que o referido ácido hialurónico está presente em quantidades entre 0,01% a 1% do volume total do gel pré-formado.

12. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 10 em que o referido ácido hialurónico está presente em quantidades entre 0,05% a 0,5% do volume total do gel pré-formado.

13. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 10 em que o referido ácido hialurónico está presente em quantidades entre 0,1% a 0,4% do volume total do gel pre-formado.

14. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 13 em que o referido ácido hialurónico está na forma de sal de sódio.

15. Composição oftálmica que consiste em: Sal de sódio do ácido 0,1500 g Principio activo, de re- hialurónico epitelização Goma xantana 1,0000 g Principio activo, de re- epitelização Cloreto de sódio 0, 3500 g Agente isotónico Cloreto de potássio 0,1500 g Agente isotónico Cloreto de magnésio.6H20 0,0120 g Agente isotónico Cloreto de caLu ο, Α*ί:·.·0 0, 0084 g Agente isotónico Fosfato de sódio, 0,0890 g Tampão dibásico,12H20 Fosfato de sódio, 0,0069 g Tampão monobásico.H20 Citrato de sódio.2h20 0,0590 g Tampão/antioxidante Glicerol 1, 0000 g Agente isotónico Água purificada q.s. para 100,0 ml Solvente

16. Composição oftalmica que consiste em: Sal de sódio do ácido 0, 1500 g Principio activo, de re- hialurónico epitelização Goma xantana 1, 0000 g Principio activo, de re- epitelização Cloreto de sódio 0,3500 g Agente isotónico Cloreto de potássio 0,1500 g Agente isotónico Cloreto de 0,0120 g Agente isotónico Cloreto de cálcio.2H20 0, 0084 g Agente isotónico Base Tris 0,2425 g Tampão HC1 IN g.s. para pH 7,4-7,6 Tampão Citrato de sódio.2H20 0,0590 g Tampão/antioxidante Glicerol 0,5000 g Agente isotónico Água purificada q.s. para 100,0 ml Solvente

17. Composição oftálmica que consiste em: Sulfato de netilmicina equivalente a base de netilmicina 0,4550 g 0,3000 g Principio activo Hialuronato de sódio 0,1500 g Princípio activo, de re-epitelização Goma xantana 1, 0000 g Princípio activo, de re-epitelização Fosfato de sódio dibásico dodeca-hidratado 0,5000 g Tampão Fosfato de sódio monobásico mono-hidratado 0,1465 g Tampão Citrato de sódio di-hidratado 2,1000 g Tampão/antioxidante Agua purificada q.s. para 100,0 ml Solvente

18. Composição oftálmica farmacêutica, de re-epitelização na forma de um gel pré-formado compreendendo goma xantana misturada com ácido hialurónico como princípio activo de re-epitelização, um medicamento seleccionado de entre anti-infecciosos, anti-inflamatórios, anestésicos e midriáticos e aditivos farmacologicamente aceitáveis.

19. Método para a preparação de uma composição oftálmica farmacêutica de re-epitelização de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 18, incluindo as fases de: - dissolver a quantidade adequada de aditivos num volume adequado de água; adicionar, como necessário, outros agentes farmacológicos; - esterilizar a referida solução; dispersar num volume adequado de água uma quantidade pré-determinada de goma xantana, sem agitar para evitar a formação de altos; - esterilizar a referida dispersão; - adicionar a dispersão de goma xantana a solução de aditivos a que se adicionaram eventualmente agentes farmacológicos e agitar, evitando turbulência; - distribuir de forma asséptica o gel obtido nas fases anteriores, em recipientes adequados.

20. Método de acordo com a reivindicação 19 em que a fase de dispersão da goma xantana ocorre por homogeneização.

21. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 18 que tem também uma função mecanicamente protectora.

22. Composição oftálmica de acordo com qualquer das reivindicações 5 a 18 que evita a tixotropia e readquire a sua estrutura instantaneamente quando cessa a tensão de corte, i.e. recupera a estrutura e viscosidade do produto entre cada pestanejar, aumentando desse modo o tempo de contacto com a córnea. Lisboa,