PT100086B

PT100086B - Epimeros de esteroides de 16alfa, 17alfa-butilidenodioxi-11beta, 21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona fluoro-substituidos

Info

Publication number: PT100086B
Application number: PT100086A
Authority: PT
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1991-02-04
Filing date: 1992-02-03
Publication date: 1999-06-30
Also published as: DE69228870T2; GR3030657T3; US5674861A; IS3808A; FI933450A; IS1601B; SI9210065A; IE920166A1; EE03111B1; MX9200324A; SK79693A3; BG97971A; CZ149693A3; CN1052155C; EP0570454B1; US5939409A; AP366A; CN1140178A; CN1034868C; NO304073B1

Description

NOVOS ESTERÓIDES”

Campo da Invenção

A presente invenção diz respeito a novos compostos com acções anti-inflamatória e anti-alérgica e a processos para a sua preparação. A presente invenção diz também respeito a composições farmacêuticas que contêm estes compostos e a métodos para utilização farmacológica dos mesmos.

O objectivo da presente invenção consiste em preparar glucocorticosteróides com acções anti-inflâmatória, imunossupressora e anti-alérgica ou composições farmacêuticas que os contêm, com intensa acção no local de administração como, por exemplo, o tracto respiratório, a pele, o tracto intestinal, articulações ou olhos, aplicando o composto na área alvo pretendida, diminuído assim os efeitos sistémicos dos glucocorticóides.

Antecedentes da Invenção

Os entendidos na matéria sabem que os glucocorticosteróides (GCS) se podem utilizar na terapêutica local de doenças inflamatórias, alérgicas ou imunológicas das vias aéreas respiratórias (como, por exemplo, asma, rinite), da pele (eczema, psoríase) ou dos intestinos (colite ulcerativa, Morbus Crohn). Com uma terapia local com glucocorticosteróides, obtêm-se vantagens clínicas relativamente à terapia geral (como, por exemplo, comprimidos de glucocorticosteróides), especialmente no que diz respeito à redução dos efeitos indesejáveis dos glucocorticóides exteriormente à área doente, devido à redução da dose necessária. Para conseguir vantangens clínicas realmente superiores, por exemplo, em doenças graves das vias respiratórias superiores, os GCS devem ter um perfil

farmacológico apropriado. Devem exibir elevada acção glucocorticóide intrínseca no local de aplicação e simultaneamente rápida inactivação antes ou depois da passagem para a circulação geral.

Descrição da Invenção

Um dos objectivos da presente invenção consiste em descrever novos GCS. Estes compostos caracterizam-se por elevada capacidade anti-inflamatória, imunossupressora e anti-anafiláctica no local de aplicação e por exibirem uma relação especialmente e acentuadamente melhorada entre esta capacidade e a aptidão para provocarem acções características dos GCS exteriormente à região tratada.

Os compostos de acordo com a presente invenção são os epímeros 22R e 22S dos compostos de fórmula geral

na qual

X1 e X2, iguais ou diferentes, representam, cada um, um átomo de hidrogénio ou de flúor, Gom a condição de Xi e X2 não representarem, simultaneamente, um átomo de hidrogénio.

Os epímeros individuais 22R e 22S de fórmula geral I podem ilustrar-se do modo seguinte devido à quiralidade no átomo de carbono na posição 22:

em que

X1 e X2 têm os significados definidos antes.

Um epímero 22R ou 22S, respectivamente, de fórmula geral I descrita antes é, por definição, um composto que não contem mais do que 2%, de preferência, não mais do que 1 %, em peso, do outro epímero.

Os compostos preferidos de acordo com a presente invenção são os epímeros

22R e 22Θ de estrutura

Os esteróides preferidos exibem a configuração R no átomo de carbono 22.

Métodos de preparação

Os 16(2,17a-acetais de fórmula geral I preparam-se fazendo reagir um composto de fórmula geral

na qual

Xl e X2 têm os significados definidos antes, com um aldeído de fórmula

H

Z

O = c

CH2CH2CH3

Esta reação realiza-se adicionando o esteróide a uma solução do aldeído juntamente com um catalisador ácido como, por exemplo, o ácido perclórico, o ácido p-toluenossulfónico ou o ácido clorídrico no seio de um éter, de preferência o dioxano ou o acetonitrilo.

Os compostos de fórmula geral I preparam-se também por transacetalização dos 16a,17o!-acetonidos correspondentes de fórmula geral

na qual

X] e X2 têm os significados definidos antes, com um aldeído de fórmula

H

Z = c

CH2CH2CH3

Esta reacção realiza-se adicionando o esteróide a uma solução do aldeído contendo simultaneamente um catalisador ácido como, por exemplo, o ácido perclórico, o ácido p-toluenossulfónico ou o ácido clorídrico no seio de um éter, de preferência o dioxano ou o acetonitrilo, Esta reacção pode realizar-se em um meio reaccional como, por exemplo, um hidrocarboneto, de preferência o isooctano, em que a solubilidade do derivado do pregnano (0 16,17-acetonido ou f 'Τ'.

o 16,17-diol) é inferior a 1 mg/l; ou um hidrocarboneto halogenado, de preferência o cloreto de metileno ou o clorofórmio.

A reacção é catalisada por um ácido hidro-halogenado ou um ácido sulfónico orgânico como, por exemplo, o ácido p-toluenossulfónico.

A mesma reacção realiza-se na presença de pequenos grânulos de um material inerte como, por exemplo, vidro, cerâmica, dióxido de sílica peneirado {areia) ou de partículas de um metal inerte como, por exemplo, aço inoxidável ou tântalo granulado no meio reaccional {quando a reacção se realiza no seio de um hidrocarboneto).

Deste modo obtem-se exclusivamente o epímero 22R que se pode purificar suficientemente, de modo a considerar-se uma substância farmacêutica, por recristalização em vez de uma técnica cromatográfica mais dispendiosa.

Durante a técnica reaccional no seio de hidrocarbonetos, o complexo esteróide - catalisador forma um grande grumo pegajoso que impede a agitação e uma reacção eficaz. Para eliminar este problema, utilizam-se pequenos grânulos de um material inerte e procede-se a uma agitação eficaz o que permite separar o complexo esteróide - catalisador em uma camada fina que rodeia os grânulos. Consequentemente, a superfície reaccional é muito maior, prosseguindo a reacção com o composto carbonílico muito rapidamente.

Os grânulos inertes utilizados no processo, de preferência de dióxido de sílica (SiO2), devem apresentar-se como pequenas partículas deslizantes, cujas

dimensões variam entre 0,1 e 1,0 mm, de preferência entre 0,1 e 0,3 mm. A quantidade utilizada na reacção variará entre 1:5 e 1:50, de preferência 1:20.

Por ácido hidro-halogenado entende-se o ácido fluorfdrico, o ácido clorídrico, o ácido bromídrico ou o ácido iodídrico e os ácidos oxo-halogenados correspondentes como, por exemplo, o ácido perclórico.

Os epímeros individuais 22R e 22S, que se formam durante a acetalização, possuem características de solubilidade praticamente idênticas. Consequentemente, tornou-se impossível separar estes compostos da mistura epimérica por métodos convencionais utilizados no desdobramento de estereoisómeros como, por exemplo, cristalização fraccionada. De modo a obterem-se epímeros individuais separadamente, submeteram-se as misturas estereoisoméricas de acordo com a fórmula geral I citada antes a oromatografia em coluna, separando assim os epímeros 22R e 22S aproveitando a diferente mobilidade sobre a fase estacionária. Uma tal oromatografia pode realizar-se, por exemplo, sobre geles de dextrano de ligação cruzada do tipo Sephadex LH, por exemplo Sephadex LH-2Ô, em associação com um dissolvente orgânico apropriado como agente de eluição. O gel Sephadex LH-20, preparado por Pharmacia Fine Chemicals AB, Uppsala, Sweden é um gele de dextrano hidroxipropilado que se apresenta sob a forma de pérolas em que as cadeias de dextrano apresentam ligações cruzadas de modo a obter-se uma rede tri-dimensional de um polissacarido. Como fase móvel, têm-se utilizado com êxito hidrocarbonetos halogenados como, por exemplo,o clorofórmio ou uma mistura de heptano-clorofórmio-etanol nas proporções de 0-50:50-100:10-1, de preferência 20:20:1.

/

Alternativamente, a cromatografia pode realizar-se em colunas de fase ligada por micropartfculas como, por exemplo, colunas de octadecil-silano de 10 //m (/zBondapak C18) ou //Bondapak CN em associação com um dissolvente orgânico apropriado como fase móvel. Misturas de etanol e de água nas proporções de 40-60:60-40 têm sido utilizadas com sucesso.

Os epfmeros 22R e 22S podem também obter-se a partir de uma mistura estereoisomérica de fórmula geral

(IV)

na qual X1 e X2 têm os significados definidos antes e R3 representa um resto de um ácido carboxílico com uma cadeia hidrocarbonada linear com 1 a 5 átomos de carbono, de preferência o 21-acetato, após desdobramento por cromatografia sobre Sephadex LH-20 juntamente com um dissolvente apropriado ou uma mistura de dissolventes como, por exemplo, heptano-clorofórmlo-etanol nas proporções de 0-50:50-10:10-1, de preferência 20:20:1, como fase móvel. Os epfmeros 22R e 228 separados de fórmula geral IV Gitada antes, submetem-se a uma hidrólise catalisada com uma base utilizando hidróxidos ou carbonatos eventualmente hidrogenados de metais alcalinos como, por exemplo, o hidróxido de sódio ou de potássio, o carbonato de sódio ou de potássio ou o carbonato de hidrogénio e de sódio ou de potássio, para se obterem os epfmeros

22R e 22S de fórmulas gerais II e III, respectivamente, citadas antes. Alternativamente, pode realizar-se esta hidrólise utilizando um ácido como catalisador como, por exemplo, o ácido clorídrico ou o ácido sulfúrlco.

Os compostos de fórmula geral IV preparam-se de acordo com métodos descritos em um pedido de patente de invenção que versa este mesmo assunto (nossa referência D 1093-1 SE)

Composições Farmacêuticas

Dependendo do local inflamado, os compostos de acordo com a presente invenção podem administrar-se por diferentes vias como, por exemplo, percutânea ou parentérica ou aplicar-se localmente no tracto respiratório por inalação. Um importante objectivo da fórmula concebida consiste em alcançar a biodisponibílidade óptima do esteróide activo utilizado como princípio activo. Nas fórmulas para administração percutânea, este objeGtivo alcânça-se de um modo vantajoso quando o esteróide se dissolve no veículo com uma elevada actividade termodinâmica. Esta situação é atingida utilizando dissolventes ou um sistema de dissolventes apropriados que incluem glicóis apropriados como, por exemplo, o propilenoglicol ou o 1,3-butanodiol, quer individualmente quer em associação com água.

É também possível dissolver o esteróide, quer totalmente quer pracialmente, em uma fase lipofílica com a ajuda de um tensioactivo como agente solubilizante. As composições farmacêuticas para administração percutânea podem apresentar-se sob a forma de pomadas, cremes do tipo óleo em água ou do tipo água em óleo ou loções. Nos veículos utilizados para preparar a emulsão, o sls9 /

^‘“7 tema que inclui o componente activo dissolvido pode reunir a fase dispersa bem como a fase contínua. O esteróide pode existir também nas composições citadas antes sob a forma de uma substância sólida micronizada.

Aerossoles pressurizados contendo esteróides destinam-se a administração oral ou a inalação nasal. O sistema de aerossol é concebido de tal modo que cada dose libertada contém 10 a 1000 //g, de preferência 20 a 250 /rg do esteróide activo»

Os esteróides mais activos administram-se em doses correspondentes aos valores mais baixos dos limites citados. Um esteróide micronizado é constituído por partículas substancialmente Inferiores a 5 //m, que se suspendem em uma mistura propulsora com o auxílio de um agente dispersante, um sal do ácido dioctil-sulfosuccínico.

O esteróide pode também administrar-se utilizando um inalador apropriado para dispensar pós anidros.

Uma possibilidade consiste em misturar o esteróide micronizado com um veículo como, por exemplo, a lactose ou a glucose. A mistura em pó é dispensada em cápsulas de gelatina dura, contendo cada cápsula a dose pretendida do esteróide, colocando-se depois a cápsula em um inalador que permite ao doente a inalação do pó através das vias respiratórias.

Outra possibilidade consiste em transformar o pó micronizado em esferas que se dissolvem durante a técnica de dosagem. Acondiciona-se o pó sob a forma

de esferas no reservatório apropriado para o princípio activo em um inalador de doses múltipas como, porr exemplo, um Turbuhaler {inalador turbo). Uma unidade doseadora determina a dose pretendida que é depois inalada pelo doente. Com este sistema administra-se o esteróide ao doente sem o auxílio de um veículo.

Os esteróides também se podem incluir em composições farmacêuticas para tratamento de doenças inflamatórias do intestino, quer para administração oral quer para administração rectal. As composições farmacêutias para administração orai devem ser concebidas de tal modo que o esteróide seja libertado nas zonas inflamadas do intestino, o que se consegue mediante associações diferentes de princípios de libertação entérica e/ou lenta ou controlada. Para aplicação rectal a composição farmacêutica apropriada é a do tipo clister.

Exemplos práticos

Os exemplos seguintes, não limitativos, concorrem para uma mais ampla elucidação da presente invenção. Nestes exemplos, utiliza-se nos ensaios de cromatografia preparativa um débito de circulação de 2,5 ml/cm2-h-1 Em todos os exemplos determinaram-se os pesos moleculares por espectrometria de massa de ionização química (metano como gás reagente) e os pontos de fusão utilizando um microcópio de Leitz Wetzlar (microscópio de platina quente). As análises de HPLC (Cromatografia Líquida de Alta Resolução) realizaram-se utilizando uma coluna juBondapK C18 (300 x 3,9 mm d.i.) com um débito de circulação de 1,0 ml/min., utilizando como fase móvel etanol/água em proporções compreendidas entre 40:60 ou 60:40, caso não seja fornecida qualquer outra indicação.

Λ

Exemplo 1. 6a,9a-difIuoro-11 β, 16a, 17a,21 -tetra-hidroxipregn-4-eno-3,2O-diona.

A uma solução de 2,2 g de cloreto de tris(trifenil-fosfina)ródio em 500 ml de tolueno, adicionou-se uma solução de 2,0 g de 6a,9a-difluoro-16a-hidroxiprednisolona em 1000 ml de etanol absoluto e hidrogenou-se a mistura durante 7 dias à temperatura ambiente e sob pressão atmosférica. Evaporou-se a mistura reaccional até à secura e adicionaram-se 50 ml de cloreto de metileno. Separou-se o precipitado sólido e lavou-se repetidamente com pequenas porções de cloreto de metileno, obtendo-se 1,8 g de 6a,9a-difluoro-11B, 16a, 17a,21 -tetra-hidroxipregn-4-eno-3,2O-diona. Peso molecular 414 (calculado 414,5).

Exemplo 2. 6<g9a-difluoro-11S,21-di-hidroxi-16a,17a:-f(1-metHetilideno)bis(oxi)lDrean-4-eno-3,20-diona.

Uma suspensão de 0,9 g de cloreto de tris(trifenil-fosfina)ródio em 250 ml de tolueno isento de ar, hidrogenou-se durante 45 minutos à temperatura ambiente e sob pressão atmosférica. Adicionou-se uma solução de 1,0 g de 16a,17a-acetonido de fluocinolona em 100 ml de etanol absoluto e a hidrogenação prosseguiu durante mais 40 horas. Evaporou-se o produto reaccional e purificou-se o resíduo por cromatografia rápida sobre sílica, utilizando como fase móvel acetona/éter de petróleo para separar a maior parte do catalisador. Evaporou-se o eluído e purificou-se o resíduo novamente por cromatografia, utilizando uma coluna Sephadex LH-20 (72,5 x 6,3 cm) e como fase móvel clorofórmio. Recolheu-se a fracção correspondente a 3555-4125 ml e evaporou-se, obtendo-se 0,61 g de 6a,9cí-difluoro-11S,21-di-hidroxi-16a,17a-[(1-metiletilide25 no)bis(oxi)]pregn-4-eno-3,2O-diona. P.F. 146-151 °C. [a] ~ +124,5°

D (c = 0,220, cloreto de metileno). Peso molecular 454 (calculado 454,6). Pureza:

98,5% (análise por HPLC).

Exemplo 3. (22RS)-16a,17a-butilidenodioxi-6«,9Q!-dÍfluoro-11 B,21 -di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

A uma solução de 0,5 g de butanal recentemente destilado e de 0,4 ml de ácido perclórico (70%) em 100 ml de dioxano purificado e seco, adicionaram-se durante 30 minutos, pouco a pouco e com agitação, 1,8 g de 6a,9a-difluoro-118,16a,17a,21-tetra-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 5 horas à temperatura ambiente. Adicionaram-se 600 mi de cloreto de metileno e lavou-se a solução com uma solução aquosa de carbonato de potássio e água e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Purificou-se o produto bruto, obtido após a evaporação, por cromatografia em uma coluna de Sephadex LH-20 (76 x 6,3 cm), utilizando como fase móvel o clorofórmio. Recolheu-se a fracção correspondente a 3015-3705 ml e evaporou-se, obtendo-se 1,5 g de (22RS)-16a,17a-butilidenodioxi-6oí,9a-difluoropregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 468 (calculado 468,5).

Exemplo 4. (22R)-16a,17a-butilidenodloxi-6a,9«-difluoro-11 £,21 -dl-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

À temperatura ambiente, misturaram-se 100 mg de 6a,9a-difluoro-118,21 -di-hidroxi-16a,17«-[(1-metiletilideno)bis(oxi)]pregn-4-eno-3,2O-diona, 0,03 ml de butanal, 2 ml de dióxido de sílicio (areia fina) e 4 ml de heptano. Adicionou-se 0,1 ml de ácido perclórico (70%) mediante agitação enérgica. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 5 horas à temperatura ambiente, arrefeceu-se e filtrou-se. Lavou-se o resíduo sólido com 4 x 15 ml de uma solução aquosa de carbonato de potássio a 10% e depois 4 x 15 ml de água e finalmente agitou »

-se quatro vezes com 25 ml de didorometano. Lavaram-se os extractos reunidos com água, secaram-se e evaporaram-se. Dissolveu-se o resíduo em uma pequena quantidade de didorometano e predpitou-se em éter de petróleo (p.e. 40-60°C), obtendo-se 75 mg de (22R)-16a,17G-butiiidenodioxi-6ct,9a-difiuoro-116,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona misturados com 3% do epímero 22S. Determinou-se a pureza por HPLC. Valor encontrado 98%. Peso molecular 468 (calculado 468,5).

Exemplo 5. (22R)- e (22S)-16qí,1 7a-butilidenodioxi-6o:,9o:-difluoro-116,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

Desdobraram-se 1,5 g de (22RS)-16a,l7a-butilidenodioxi-6oí,9a-difluoro-116,-

21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona nos seus epímeros 22R e 22S, por cromatografia utilizando uma coluna Sephadex LH-2O (76 x 6,3 cm) e como fase móvel uma mistura de n-heptano-clorofórmio-etanol (20:20:1). Recolheram-se as fracções correspondentes a 1845-2565 ml (A) e 2745-3600 mi (B) e evaporaram-se. Precipitaram-se os dois produtos em uma mistura de cloreto de metileno/éter de petróleo. Obtiveram-se 332 mg de um produto proveniente da fracção A que se identificou por RMN e espectro metria de massa como sendo a (22S)-16ce,17a-butilidenodioxi-6o:,9a:-difluoro-116,21 -di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona e 918 mg do produto proveniente da fracção B como sendo o epímero 22R.

Estes epímeros apresentavam as propriedades seguintes. Epímero 22S: P.F.

231-244°C; [a] = +84,4° (c = 0,096, cloreto de metileno); peso molecular

D

./

468 (calculado 468,5). Epímero 22R: P.F. 150-156°C; ld = +120,0°

D (c = 0,190, cloreto de metileno); peso molecular 468 (caiculado 468,5). Determinou-se a pureza dos epímeros por HPLC, obtendo-se o valor de 95,7% para o epímero 22S (contendo 1,2% do epímero 22R) e 98,8% para o epímero 22R (contendo 0,7% do epímero 22S).

Exemplo 6. (22R)-16a,17a-butilidenodioxi-6a,9a-difluoro-11 B,21 -di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

Durante 68 horas, hidrogenou-se à temperatura ambiente uma solução de 4,0 g de (22R)-16a,l7a-butilidenodioxi-6cí,9a-difluoro-11B,21-di-hidroxipregn-1,4-dieno-3,20-diona e de 0,40 g de cloreto de tris(trifenil-fosfina)ródio em 150 ml de etanol absoluto. Adicionaram-se 150 ml de água e filtrou-se a mistura através de um filtro HV LP 0,45 //m. Evaporou-se o filtrado parcialmente. Filtrou-se o precipitado resultante, obtendo-se 1,48 g do produto bruto que se purificou utilizando uma coluna Sephadex LH-20 (75 x 6,3 cm) e como fase móvel clorofórmio. Recolheu-se a fracção correspondente a 3600-4200 ml, evaporou-se e purificou-se novamente utilizando uma coluna Sephadex LH-20 (75 x 6,3 cm) e como fase móvel uma mistura de heptano/clorofórmio/etanol (20:20:1). Recolheu-se a fracção correspondente a 9825-10500 ml e evaporou-se, obtendo-se 0,57 g de (22R)-16a,17a-butilidenodioxi-6a,9a-difluoro-11B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 468 (calculado 468,5). Pureza: 96,5% (análise por HPLC).

Adicionaram-se mais 220 ml de água ao filtrado citado antes, obtendo-se mais uma porção de produto sólido que após purificação sobre uma coluna Sephadex LH-20 (75 x 6,3 cm) utilizando como fase móvel o clorofórmio (frac ção 3795-4275 ml) forneceu 1,04 g de (22R)-16a,17a-butilidenodioxi-6a,9a-difluoro-11B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,2O-diona. Peso molecular 468 (calculado 468,5). Pureza: 98,3% (análise por HPLC).

Exemplo 7. 6g'-fluoro-11S,16ai_J17o:,21-tetra-hidroxiorean-4-eno-3,20-diona·

A uma suspensão de 1,4 g de cloreto de tris(trifenil-fosfina)ródio em 300 ml de tolueno, adicionou-se uma solução de 1170 mg de βα-fluoro-l 1β,16α,17α,21-tetra-hidroxipregna-1,4-dieno-3,20-dlona em 250 ml de etanol absoluto. Hidrogenou-se a mistura durante 22 horas à temperatura ambiente e evaporou-se sob pressão atmosférica. Precipitou-se o resíduo em uma mistura de acetona-clorofórmio, obtendo-se 661 mg de 6a-f I uoro-11B, 16a, 17a, 21-tetra-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 396 (calculado 396,5). Pureza: 96,6% (análise por HPLC).

Exemplo 8. (22RS)-16a,17a-butiljdenodioxi-6a-fluoro-11 B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

Pouco a pouco, adicionaram-se 308 mg de 6a-fluoro-11S,16a,17a,21-tetra-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona a uma solução de 115 mg de butanal e 0,2 ml de ácido perclórico a 70% em 50 mi de dioxano. Agitou-se a mistura reaccional durante seis horas à temperatura ambiente. Adicionaram-se 200 ml de cloreto de metileno e lavou-se com uma solução aquosa a 10% de carbonato de potássio e água e secou-se. Purificou-se o resíduo após evaporação utilizando uma coluna Sephadex LH-20 (87 x 2,5 cm) e como fase móvel o clorofórmio. Recolheu-se a fracção correspondente a 420-500 ml e evaporou-se, obtendo-se 248 mg de (22RS)-16a,17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11 S,21-di-hidroxipregn-4-eno25

-3,20-diona. P.F. 85-96°C. [a] = +119,8° (c~0,192, cloreto de metileno).

D

Peso molecular 450 (calculado 450,6). Pureza: 96,1% (análise por HPLC). A distribuição entre os epímeros 22R e 22S era 59/41 (análise por HPLC).

Exemplo 9. (22R)- e (22S)-butilidenodioxÍ-6o!-fluoro-11 S,21-di-hidroxioregn-4-eno-3,20-diona.

Desdobraram-se 225 mg de (22RS)-16a,17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona mediante HPLC preparativa utilizando uma coluna //Bondapak C-jg (150 x 19 mm) e como fase móvel etanol/água (40:60). Reuniram-se as fracções correspondentes a 265 ml (A) e 310 ml (B), respectivamente e evaporaram-se. Após precipitação na mistura cloreto de metileno/éter de petróleo, a fracção A forneceu 68 mg de (22R)-16a,17<x-butilldenodioxi-6a-fluoro-11B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. P.F. 180-192°C.

[a] = +138,9° (c = 0,144, cloreto metileno). Peso molecular 450 (calculado

D

450,6). Pureza: 99,4% (análise por HPLC).

A fracção B forneceu 62 mg de (229)-16a,17ce-butilidenodioxi-6a-fluoro-11B,

21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. P.F. 168-175°C. [a] = +103,7°

D (c = 0,216, doreto de metileno). Peso molecular 450 (calculado 450,6). Pureza: 99,5% (análise por HPLC).

Exemplo 10. (22R)- e (228)-21 -acetoxi-16a, 17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11B-hidroxiprean-4-eno-3,20-diona.

Em 1 ml de piridina, dissolveram-se 68 mg de (22RS)-16a,17a-butilidenodÍoxi-6a-fluoro-11B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Adicionou-se 1 ml de anidrido acético e agitou-se a mistura reaccional durante uma hora à temperatura ambiente, verteu-se sobre água gelada e extraiu-se com 3 x 25 ml de cloreto de metileno. Secou-se o extracto e evaporou-se. Cromatog rafou-se o

<.1 &

resíduo sobre uma coluna Sephadex LH-20 (89 x 2,5 cm) utilizando como fase móvel uma mistura de heptano/clorofórmio/etanol (20:20:1). Recolheram-se as fracções correspondentes a 380-400 ml (A) e 420-440 ml (B) e evaporaram-se.

Após precipitação na mistura cloreto de metiieno/éter de petróleo, a fracção A forneceu 14 mg de (22S)-21-acetoxi-iea,17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11B-hi25 droxipregn-4-eno-3,20-diona. P.F. 179-186°C. [a] = +86,2° (c = 0,188, cloD reto de metileno). Peso molecular 492 (calculado 492,6). Pureza: 97,5% (análise por HPLC).

A fracção B forneceu, após precipitação, 20 mg de (22R)-21-acetoxi-16oí,17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11 S-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. P.F. 169-172°C.

[a] = +139,0° (c = 0,200, cloreto de metileno). Peso molecular 492 (calculaD do 492,6). Pureza: 97,9% (análise por HPLC).

Exemplo 11. (22R)-16α,17a-butilidenodioxi-6a-fluoro-11 K,21-dl-hÍdroxiorean-4-eno-3,20-diona.

A uma solução de 20 mg de (22R)-21-acetoxi-16«,17a-butilidenodioxi-6«-fluoro-11B-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona em 2 ml de etanol, adicionaram-se 2 ml de ácido clorídrico 2M. Após agitação durante 5 horas à temperatura de 60°C, neutralizou-se a mistura reaccional com uma solução aquosa saturada de carbonato de hidrogénio e de sódio e extraiu-se com 3 x 25 ml de cloreto de metileno. Lavaram-se os extractos reunidos com água, secaram-se e evaporaram-se. Purificou-se o resíduo sobre uma coluna Sephadex LH-20 (87 x 2,5 cm) utilizando como fase móvel o clorofórmio. Recolheu-se a fracção correspondente a 460-515 ml e evaporou-se, obtendo-se 8 mg de (22R)-16a,17a-butilide18

nodioxi-6«-fluoro-11 β,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 450 (calculado 450,6). Pureza 98,4% (análise por HPLC).

Exemplo 12. (22S)-1 SceJ la-butilidenodioxi-Qa-fluoro-l 1 S,21-di-hÍdroxipregn-4-eno-3,20-diona,

A uma solução de 14 mg de (22S)-21-acetoxi-16a,17a-butÍlidenodioxi-6a-fluoro-11S-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona em 2 ml de etanol, adicionaram-se 2 ml de ácido clorídrico 2M. A reacção, a separação e a purificação decorreram utilizando uma técnica similar à do Exemplo 11. Recolheu-se a fracção correspondente a 450-510 ml e evaporou-se, obtendo-se 7 mg de (22S)-16a,17a-butilidenodioxi-6ce-fluoro-11 B,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,2O-diona. Peso molecular 450 (calculado 450,6). Pureza 98,6% (análise por HPLC).

Exemplo 13.9«-fluoro-111S,16ce,17a:,21-tetra-hidroxioregn-4-eno-3,20-diona.

Durante 45 minutos, hidrogenõu-se à temperatura ambiente e sob pressão atmosférica uma suspensão de 3,0 g de cloreto de tris(trifenil-fosfina)ródlo em 1000 ml de tolueno isento de ar. Adicionou-se uma solução de 5,0 g de triamcinolona em 500 ml de etanol absoluto e a hldrogenação prosseguiu durante 48 horas. Evaporou-se a mistura reaccional até à secura e suspendeu-se em 50 ml de cloreto de metileno. Após filtração lavou-se a fase sólida, repetidamente, com pequenas porções de cloreto de metileno, obtendo-se, após secagem, 4,4 g de 9a-fluoro-11S,16ce,17oí,21-tetra-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 396 (calculado 396,5).

-sí

Exemp lo 14. (22R8)-16a,17a-butilidenodioxi-9a-fluoro-11 S,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,2Q-diona.

A uma solução de 100 mg de butanal recentemente destilado e de 0,2 ml de ácido perclórico a 70% em 50 ml de díoxano purificado e seco, adicionaram-se, pouco a pouco e com agitação durante 20 minutos, 340 mg de 9a-fluoro-11l3>,16a,17a,21-tetra-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Agitou-se a mistura reaccional durante mais 5 horas à temperatura ambiente. Adicionaram-se 200 ml de cloreto de metileno e lavou-se a solução com uma solução aquosa de carbonato de potássio e água e secou-se sobre sulfato de magnésio anidro. Purificou-se o produto bruto resultante, após evaporação, utilizando uma coluna de Sephadex LH-20 {72,5 x 6,3 cm) e como fase móvel o clorofórmio. Recolheu-se a fracçao correspondente a 2760-3195 ml e evaporou-se, obtendo-se 215 mg de (22RS)-16a,17a-butilidenodioxi-9a-fluoro-11 S,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Peso molecular 450 {calculado 450,6). Pureza 97,4% (análise por HPLC).

Exemplo 15. (22R)- e (22S)-16a,17a-butilidenodioxi-9a-fluoro-11 S,21-di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona.

Utilizando uma coluna Sephadex LH-20 (76 x 6,3 cm) e como fase móvel uma mistura de heptano/clorofórmio/etanol (20:20:1), desdobraram-se, por cromatografia, 200 mg de (22RS)-16α, 17a-butilidenodioxi-9a-fluoro-11B,21 -di-hidroxipregn-4-eno-3,20-diona. Recolheram-se as fracções correspondentes a 7560-8835 ml (A) e 8836-9360 ml (B) e evaporaram-se. Identificaram-se os 128 mg de produto proveniente da fracçao A por RMN 1H e por espectrometria de massa como sendo a (22S)-16a,17a-butilidenodioxi-9a-fluoro-11 B,21-di-hidroxi20

pregn-4-eno-3,20-diona e os 50 mg de produto proveniente da fracção B como sendo o epímero 22R.

Estes epímeros apresentavam as propriedades seguintes. Epímero 22S: P.F.

180-190°C; [a] = +105,6° (c = 0,214, cloreto de metileno); peso molecular

D 25

450 (calculado 450,6). Epímero 22R: P.F. 147-151 °C; Ia] = +133,7°

D (c = 0,196, cloreto de metileno); peso molecular 450 (calculado 450,6). A pureza destes epímeros determinou-se por HPLC como sendo 97,6% para o epímero 22S (contendo 1,8% do epímero 22R) e 98,2% para o epímero 22R (contendo 0,8% do epímero 228).

Exemplo 16.Composições farmacêuticas

Os exemplos seguintes, não limitativos, ilustram as composições farmacêuticas destinadas a diferentes formas de administração tópica. A quantidade de esteróide activo incorporada nas fórmulas percutâneas está, na generalidade, compreendida entre 0,001 e 0,2% (p/p), de preferência entre 0,01 e 0,1 % (p/p).

Fórmula 1, Pomada

Esteróide micronizado

0,025 g

Parafina líquida

10,0 g

Vaselina q.b.p.

100,0 g

Fórmula 2, Pomada

Esteróide

0,025 g

Propilenoglicol

5,0 g

Sesquioleato de sorbitano

5,0 g

Parafina líquida

10,0 g

Vaselina q.b.p.

100,0 g

Fórmula 3, creme do tipo óleo em água

Esteróide	0,025	g
Cetanol	5,0	g
Mono-estearato de glicerilo	5,0	g
Parafina líquida	10,0	g
Cetomacrogol 1000	2,0	g
Ácido cítrico	0,1	g
Citrato de sódio	0,2	g
Propilenoglicol	35,0	g
Água q.b.p.	100,0	g

Fórmula 4, creme do tipo óleo em água

Esteróide micronizado

0,025 g

Vaselina	15,0	g
Parafina líquida	5,0	g
Cetanol	5,0	g
Estearato de sorbimacrogol	2,0	g
Mono-estearato de sorbitano	0,5	g
Ácido sórbico	0,2	g
Ácido cítrico	0,1	g
Citrato de sódio	0,2	g
Água q.b.p.	100,0	g

Fórmula 5, creme do tipo água em óleo

Esteróide

0,025 g

Vaselina	35,0	g
Parafina líquida	5,0	g
Sesquioleato de sorbitano	5,0	g
Ácido sórbico	0,2	g
Ácido cítrico	0,1	g
Citrato de sódio	0,2	g
Água q.b.p.	100,0	g

Fórmula 6, loção

Esteróide	0,25	mg
Isopropanol	0,5	ml
Polímero carboxivinílico	3,0	mg
Hidróxido de sódio q.b.
Água q.b.p.	1,0	0

Fórmula 7, suspensão iniectável

Esteróide micronizado

0,05-10 mg

Carboximetil-celulose sódica

7,0 mg

Cloreto de metileno

7,0 mg

Polioxietileno (20)-mono-oleato de sorbitano

0,5 mg

Fenil-carbinol

8,0 mg

Água estéril q.b.p.

1,0 ml

Fórmula 8, aerosol para inalação oral e nasal

Esteróide micronizado	0,1	%	p/p
Tri-oleato de sorbitano	0,7	%	p/p
Triclorofluorometano	24,8	%	p/p
Diclorotetrafluorometano	24,8	%	p/p
Diclorodifluorometano	49,6	%	p/p

Fórmula 9, solução para atomlzação

Esteróide	7,0	mg
Propilenoglicol	5,0	9
Água q.b.p.	10,0	0

Fórmula 10, pó para inalação

Cada cápsula de gelatina contem uma mistura de

Esteróide miçronizado

0,1 mg

Lactose

20,0 mg pó é inalado utilizando um dispositivo apropriado.

Fórmula 11, oó para inalação

Em um inalador apropriado para dispensar doses múltiplas, acondiciona-se um pó em esferas. Cada dose contem

Esteróide micronizado 0,1 mg

Fórmula 12, pó para inalação

Em um inalador próprio para dispensar doses múltiplas, acondiciona-se um pó em esferas. Cada dose contem

Esteróide micronizado

0,1 mg

Lactose micronizada

1,0 mg

Fórmula 13, cápsulas para tratamento do intestino delgado

Esteróide

1,0 mg

Esferas de açúcar

321,0 mg

Aquacoat ECD 30

6,6 mg

Citrato de acetll-tributilo

0,6 mg

Polissorbato 80

0,1 mg

Eudragit L100-55

17,5 mg

Citrato de trietilo

Talco

Anti-espuma MMS

1.8 mg

8.8 mg

0,01 mg

Fórmula 14, cápsulas para tratamento do intestino grosso

Esteróide	2,0	mg
Esferas de açúcar	305,0	mg
Aquacoat ECD 30	5,0	mg
Citrato de acetil-tributilo	0,4	mg

Polissorbato 80

0,14 mg

Eudragit NE30 D

12,6 mg

Eudragit S100

12,6 mg

Talco

12,6 mg

Fórmula 15, clister

Esteróide

0,02 mg

Carboximetil-celulose sódica

25,0 mg

Edetato dissódico

0,5 mg p-hidroxibenzoato de metilo

0,8 mg

p-hidroxibenzoato de propilo	0,2	mg
Cloreto de sódio	7,0	mg
Ácido cítrico anidro	1,8	mg
Polissorbato 80	0,01	mg
Água pura q.b.p.	1,0	ml

Farmacologia

A selectivídade para uma acção anti-inflamatória pode exemplificar-se utilizando o seguinte modelo de vias respiratórias.

Uma considerável fracção de um glucocortícosteróide (GC8) inalado, deposita-se na faringe depois do que é engolida, atingindo o intestino. Esta fracção contribui para os efeitos secundários dos esteróides uma vez que a sua aGtuação se observa exteriormente à área que se pretende tratar (o pulmão). Consequentemente, é conveniente utilizar um GCS com intensa acção anti-inflamatória local, mais precisamente pulmonar, mas com escassos efeitos induzidos pe25

lo mesmo esteróide após captação por via oral. Consequentemente, realizaram-se ensaios para determinar os efeitos induzidos pelos GCS após aplicação local nos pulmões bem como após administração perorai e avaliou-se a diferenciação entre acções devidas a glucocorticosteróides na região pulmonar tratada e exteriormente à mesma, seguindo-se a técnica seguinte.

Exemplos de ensaios

A. Ensaio para avaliar a acção anti-infalamatória local pretendida sobre a mucosa das vias aéreas (lóbulo do pulmão esquerdo)

Anestesiaram-se, ligeiramente, ratos Sprague Dawley pesando 250 g, com Ephrane e instilou-se 0,5 ml/kg da composição em ensaio contendo o glucocorticosteróide (suspenso em soro fisiológico) precisamente no lóbulo do pulmão esquerdo. Decorridas duas horas, instilou-se uma suspensão de Sephadex (5 mg/kg em um volume de 1 ml/kg), sob ligeira anestesia, na traqueia, mesmo acima da bifurcação, de tal modo que a suspensão atinjiu ambos os lóbulos pulmonares, esquerdo e direito. Decorridas 20 horas, sacrificaram-se os ratos e dissecaram-se os lóbulos pulmonares esquerdos e pesaram-se. Nos grupos de controlo instilou-se soro fisiológico em vez quer da composição contendo um grupo glucocorticosteróide quer da suspensão de Sephadex, para determinar o peso do edema provocado pelo Sephadex e não tratado com o composto e o peso normal do pulmão.

B. Ensaio para avaliar a acção sistémica indesejável provocada por gluco corticosteróides absorvidos por via oral

Anestesiaram-se, ligeiramente, ratos Sprague Dawley pesando 250 g, com Ephrane, após o que se administrou por via oral 0,5 ml/kg da composição em ensaio contendo o GCô. Decorridas duas horas, instilou-se uma suspensão de Sephadex (5 mg/kg em um volume de 1 ml/kg) na traqueia mesmo acima da bifurcação, de tal modo que a suspensão atinjiu ambos os lóbulos pulmonares, esquerdo e direito. Decorridas 20 horas, sacrificaram-se os ratos e pesaram-se os lóbulos pulmonares. Aos grupos de controlo administrou-se soro fisiológico em vez quer da composição contendo um glucocorticosteróide quer da suspensão do Sephadex, para determinar o peso do edema provocado por Sephadex e não tratado pelo composto e o peso normal.

No Quadro 1, podem observar-se os resultados deste estudo comparativo. Comparou-se o perfil farmacológico do composto de acordo com a presente invenção submetido a análise com o do budesonido. Os resultados demonstram que o composto de acordo com o Exemplo 6 exibe uma acção anti-inflamatória local muito superior à do budesonido. Os resultados demonstram ainda a mais intensa selectividade pulmonar do composto de acordo com a presente invenção analisado relativamente ao composto seieccionado anterior à mesma invenção, uma vez que a dose necessária para inibir o edema pulmonar (ED^q), mediante administração oral do composto citado antes, é 32 vezes superior e a do budesonido 13 vezes superior à dose necessária para inibir o edema pulmonar mediante aplicação local dos mesmos compostos no pulmão (budesonido 4000 e 300 nmoles/kg; Exemplo 6, 320 e 10 nmoles/kg, respectivamente).

Podemos assim concluir que os compostos de acordo com a presente invenção são próprios para o tratamento local de doenças inflamatórias da pele e de diversas cavidades do corpo {por exemplo, pulmões, nariz, intestinos e articulações).

Quadro 1. Acção de gíucocorticosteróides ensaiados no edema pulmonar experimental induzido por Sephadex

d o 4->

E

©

X o

ifo £	O O	O
π	O	<N
Q.		O

o

^χ) DE50 = dose de glucocorticosteróide necessária para reduzir o edema em 50%.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1.- Epímeros 22R ou 22S de compostos de fórmula geral (22) H

0^

C

CH₂CH₂CH₃ caracterizados pelo facto de

X^ e ^2’ ig^uai-^{s ou} diferentes, representarem, ca da um, um átomo de hidrogénio ou de flúor;

com a condição de X^ e X₂ não representarem simultaneamente um átomo de hidrogénio.
2,- Compostos de acordo com a reivindicação 1, cara.c terizados pelo facto de serem o epímero 22R ou 22S do composto
3.- Compostos de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 e 2, caracterizados pelo facto de apresentarem a configuração estereoisomérica R no átomo de carbono 22.
4.- Processo para a preparação de compostos de fórmula geral I como definidos na reivindicação 1, caracterizado pelo facto:

(a) de se fazer reagir um composto de fórmula geral x₂ na qual

X^ e X£ têm os significados definidos na reivin dicação 1;

com um aldeído de fórmula hcoch₂ch₂ch₃ e de se separar depois a mistura de epímeros resultante para se obterem os seus componentes estereoisoméricos; ou (b) de se fazer reagir um composto de fórmula geral

X₂ na qual e X₂ têm os significados definidos na reivin dicação 1;

com um aldeído de fórmula hcoch₂ch₂ch₃ e de se separarem depois os componentes estereoisoméricos da mistura de epímeros resultante; ou (c) de se hidrolisar um composto de fórmulas gerais ou

CH_oORn

I ^{2 3}

C = O «

em que

X^ e X₂ têm os significados definidos na reivin dicação 1; e

Rg representa um resto de um ácido carboxílico comportando, uma cadeia hidrocarbonada linear com 1 a 5 átomos de carbono.
5.- Composições farmacêuticas, caracterizadas pelo facto de incluírem como princípio activo um composto de acor34 do com uma qualquer das reivindicações 1 a 3.
6. - Composições farmacêuticas de acordo com a reivin dicação 5, caracterizadas pelo facto de se apresentarem sob uma forma de dosagem unitária.
7. - Composições farmacêuticas de acordo com as reivindicações 5 a 6, caracterizadas pelo facto de incluírem o ingrediente activo em associação com um veículo aceitável em farmácia.
8. - Compostos de acordo com uma qualquer das reivin dicações 1 a 3, caracterizados pelo facto de se utilizarem como substancias activas sob o ponto de vista terapêutico.
9. - Utilização de compostos de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo facto de se prepararem medicamentos com acções anti-inflamatória e antialérgica.
10. - Método para o tratamento de situações inflamatórias e alérgicas em mamíferos, incluindo o homem, caracteri zado pelo facto de se administrar a um doente uma quantidade eficaz de um composto de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 3.