MX2011004238A - Derivados de anilina-pirimidina sustituidos con sulfoximina como inhibidores de quinasas dependientes de ciclina (cdk), produccion y uso de los mismos como productos medicinales. - Google Patents

Derivados de anilina-pirimidina sustituidos con sulfoximina como inhibidores de quinasas dependientes de ciclina (cdk), produccion y uso de los mismos como productos medicinales.

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Abstract

Derivados de anilina-pirimidina sustituidos con sulfoximina de la Fórmula (I) (ver fórmula (I)) métodos de producción de los mismos y su uso como medicación para el tratamiento de diversas enfermedades.

Description

DERIVADOS DE ANILINA-PIRI IDINA SUSTITUIDOS CON SULFOXIMINA COMO INHIBIDORES DE QUINASAS DEPENDIENTES DE CICLINA (CDK). PRODUCCIÓN Y USO DE LOS MISMOS COMO PRODUCTOS MEDICINALES CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con derivados seleccionados de anilina-pirimidina sustituidos con sulfoximina, con métodos de producción de los mismos y con el uso de los mismos como medicación para el tratamiento de diversas enfermedades.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las quinasas dependientes de ciclina (CDK) son una familia de enzimas que cumplen un rol importante en la regulación del ciclo celular y por ello representan un blanco especialmente interesante para el desarrollo de pequeñas moléculas inhibidoras. Los inhibidores selectivos de las CDK se pueden usar para el tratamiento de cáncer u otras enfermedades causadas por alteraciones de la proliferación celular.
Las pirimidinas y análogos de las mismas ya fueron descritos como sustancias activas, por ejemplo las 2-anilino-pirimidinas como fungicidas (DE 4029650) o los derivados de pirimidina sustituidos para el tratamiento de enfermeda-des neurológicas o neurodegenerativas (WO 99/19305). Se han descrito derivados de pirimidina extremadamente variados como inhibidores de CDK, p.ej. pirimidinas 2-amino-4-sustituidas (WO 01/14375), purinas (WO 99/02162), 5-c¡ano-piri-midinas (WO 02/04429), anilinopirimidinas (WO 00/12486) y 2-hidroxi-3-N,N-dimetilaminopropoxi-pirimidinas (WO 00/39101 ).
En particular, se han divulgado derivados de pirimidina en WO 02/096888 y WO 03/076437 que tienen efectos inhibidores con respecto a las CDK.
Los compuestos que contienen un grupo fenilsulfonamida son inhibidores conocidos de las anhidrasas carbónicas humanas (en especial anhidrasa carbónica-2) y se usan como diuréticos p.ej. para el tratamiento del glaucoma. El átomo de nitrógeno y los átomos de oxígeno de la sulfonamida se unen a través de puentes de hidrógeno al ion de zinc2* y el aminoácido Thr 199 en el centro activo de la anhidrasa carbónica-2 y por ello bloquean su función enzimática (A. Casini, F. Abbate, A. Scozzafava, C.T. Supuran, Bioorganic. Med. Chem. Lett., 2003, 1 , 2759). El uso clínico de los inhibidores de CDK que contienen un grupo fenilsulfonamida podría restringirse debido a la posibilidad de inhibición de las anhidrasas carbónicas y un espectro resultante de efectos secundarios.
Los ejemplos de sustancias activas de sulfoximina son triazoles modificados con sulfonimidodo como fungicidas (H. Kawanishi, H. Morimoto, T. Nakano, T. Watanabe, K. Oda, K. Tsujihara, Heterocycles, 1998, 49, 181 ) o aralquilsulfoximinas como herbicidas y pesticidas (Shell International Research, Ger. P. 2 129 678).
WO 2005/037800 divulga derivados abiertos de anilina-pirimidina sustituidos con sulfoximina como inhibidores de las quinasas dependientes de ciclina. Los ejemplos ofrecidos son estructuras que no están sustituidas o sustituidas con halógeno, en particular con bromo en la posición 5 de la pirimidina. Ninguna de las estructuras específicamente divulgadas tiene un sustituyente 5-trifluorometilo.
SUMARIO DE LA INVENCIÓN A partir de esta técnica anterior, el problema que afrontó la presente invención comprendía proporcionar compuestos que no sólo fueran potentes inhibidores de CDK, sino que también inhibieran el crecimiento de tumores. De hecho, una inhibición potente de las CDK es un requisito necesario, pero no suficiente, para la inhibición de tumores. Las estructuras también requieren otras propiedades, por ejemplo propiedades de penetración en la célula tumoral.
Ahora se ha descubierto que los compuestos de la fórmula general (I) en donde X representa -O- o -NH- y R representa un grupo metilo, etilo, propilo o isopropilo, y representan, de manera independiente entre sí, hidrógeno, un grupo metilo o un grupo etilo, y R4 representa un grupo C Cs-alquilo o un anillo C3-C7-cicloalquilo, y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos, no sólo inhiben de manera potente a las CDK, sino que también inhiben el crecimiento de tumores de una forma especialmente eficaz.
Los compuestos en donde X representa -O- se agrupan bajo la fórmula (la).
Los compuestos en donde X representa -NH- se agrupan bajo la fórmula (Ib).
La solicitud se basa en las siguientes definiciones: CVCs-alquilo Se considera que un grupo C Ce-alquilo es, en cada caso, un residuo alquilo lineal o ramificado, p.ej. un residuo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, isopentilo o un hexilo.
C3-C7-cicloalquilo Se considera que un anillo C3-C7-cicloalquilo es un anillo ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo o cicloheptilo.
En la fórmula general(l) X puede representar -O- o -NH-.
Preferentemente X representa -O-.
En la fórmula general (I) R1 puede representar un grupo metilo, etilo, propilo o isopropilo. Preferentemente R1 representa un grupo metilo.
En la fórmula general (I), R2 y R3pueden representar, de forma independiente entre sí, hidrógeno, un grupo metilo o un grupo etilo.
Preferentemente R2 y R3 representan, de manera independiente entre sí, hidrógeno o un grupo metilo.
Con especial preferencia, R2 representa un grupo metilo y R3 representa hidrógeno o un grupo metilo.
En la fórmula general (I) R4 puede representar un residuo C-i-C3-alquilo o un anillo C3-C7-cicloalquilo.
Preferentemente R4 representa un grupo metilo o etilo o un anillo ciclopropilo.
Un subgrupo preferido de los compuestos de acuerdo con la fórmula general (I) comprende los compuestos de acuerdo con fórmula general (I), en donde X representa -O- o -N H- y R1 representa un grupo metilo y R2 representa un grupo metilo y R3 representa hidrógeno o un grupo metilo y R4 representa un grupo metilo o etilo o un anillo ciclopropilo, y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
Los compuestos de acuerdo con la invención son adecuados para los siguientes tratamientos: • del cáncer, tal como tumores sólidos, metástasis tumorales y tumores hematológicos, en particular: tumores de cabeza y cuello; tumores de pulmón y bronquiales; tumores gastrointestinales como por ejemplo carcinoma gástrico, carcinoma colorrectal, carcinoma pancreático, carcinoma hepatocelular; tumores endócrinos activos; cáncer de mama y tumores ginecológicos; tumores urogenitales, p. ej. carcinoma de riñón, carcinoma de vejiga urinaria, cáncer de próstata; tumores de piel; sarcomas; leucemias y linfomas. • de enfermedades virales y · de enfermedades cardiovasculares tales como estenosis, arteriesclerosis y restenosis, restenosis inducidos por Stents.
La formulación de los compuestos de acuerdo con la invención en preparaciones farmacéuticas se efectúa de la manera conocida per se, por transformación de la o las sustancias activas con los excipientes habituales usados con medicamentos en la forma de dosificación deseada.
Como excipientes se pueden usar, por ejemplo, vehículos, rellenos, desintegrantes, aglutinantes, humectantes, deslizantes, absorbentes y adsorbentes, diluyentes, solventes, cosolventes, emulsionantes, solubilizantes, correctores, co-lorantes, conservantes, estabilizadores, agentes humectantes, sales para modificar la presión osmótica o soluciones amortiguadoras.
Se hace referencia a Remington's Pharmaceutical Science, 15a ed. Mack Publishing Company, East Pennsylvania (1980).
Las formulaciones farmacéuticas se pueden encontrar en una forma sólida, por ejemplo como tabletas, tabletas recubiertas con azúcar, pildoras, supositorios, cápsulas, sistemas transdérmicos. en una forma semisólida, por ejemplo como ungüentos, cremas, geles, supositorios, emulsiones o en una forma líquida, por ejemplo como soluciones, tinturas, suspensiones o emulsiones. Los excipientes de utilidad de la invención pueden ser, por ejemplo, sales, sacáridos (mono, di, tri, oligo y/o polisacáridos), proteínas, aminoácidos, péptidos, grasas, ceras, aceites, hidrocarburos y derivados de los mismos, en donde los excipientes pueden ser de origen natural o se pueden obtener mediante síntesis o síntesis parcial.
Se pueden considerar particularmente tabletas, tabletas recubiertas con azúcar, cápsulas, pildoras, polvos, gránulos, pastillas, suspensiones, emulsiones o soluciones para una aplicación oral o peroral.
Las suspensiones, emulsiones y, por encima de todo, soluciones pueden considerarse en particular para una aplicación parenteral.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Fig. 1 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con el ejemplo 5-SI-2. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 4 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo con las siguientes dosificaciones y regímenes de aplicación: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 / 60% de agua) Grupo 2: Ejemplo 5-SI-2, régimen de tratamiento cíclico, 2x por día, oral, los días 4, 5, 11 , 12, dosificación 5 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 17, y relación del peso tumoral promedio en el grupo de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 2 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con V11. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 4 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo con las siguientes dosificaciones y regímenes de aplicación: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (30% de HPpCD / 70% de agua, 1x por día, oral, los días 4-17); Grupo 2: V11 , régimen de tratamiento cíclico, 2x por día, oral, los días 4, 5, 11 , 12, dosificación 8 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 17, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 3 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con el ejemplo 6-SI-2. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 4 después que los tumores hablan alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 4, 5, 11 , 12, 17 y 18: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: Ejemplo 6-SI-2, dosificación 3 mg/kg; Grupo 3: Ejemplo 6-SI-2, dosificación 4 mg/kg; Grupo 4: Ejemplo 6-SI-2, dosificación 5 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 20, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 4 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con V12. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 4 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 4, 5, 11 , 12, 17, 18, 23 y 24: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: V12, dosificación 7 mg/kg; Grupo 3: V12, dosificación 8,5 mg/kg; Grupo 4: V12, dosificación 10 mg/kg; A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa- aTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 28, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 5 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con el ejemplo 2-SI-2. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 5 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mma aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 5, 6, 12, 13, 19 y 20: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: Ejemplo 2-SI-2, dosificación 1 ,5 mg/kg; Grupo 3: Ejemplo 2-SI-2, dosificación 2 mg/kg; Grupo 4: Ejemplo 2-SI-2, dosificación 2,5 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 20, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 6 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con V13. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 5 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 5, 6, 12, 13, 19 y 20: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: V13, dosificación 6 mg/kg; Grupo 3: V13, dosificación 8 mg/kg; Grupo 4: V13, dosificación 10 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 20, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 7 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con el ejemplo 1-SI-2. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 5 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 5, 6, 12, 13, 19 y 20: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: Ejemplo 1-SI-2, dosificación 1 ,5 mg/kg; Grupo 3: Ejemplo 1-SI-2, dosificación 2 mg/kg; Grupo 4: Ejemplo 1-SI-2, dosificación 2,5 mg/kg.
A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 20, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
La Fig. 8 muestra la inhibición del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de tumor cervical HeLa-MaTuo humano durante el tratamiento con V14. Las células HeLa-MaTu se implantaron por vía subcutánea en ratones desnudos NMRI el día 0. El tratamiento comenzó el día 5 después que los tumores habían alcanzado un tamaño de 20 mm2 aproximadamente. Los tratamientos se llevaron a cabo a las siguientes dosificaciones y en un régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día los días 5, 6, 12, 13, 19 y 20: Grupo 1 : (Grupo control): solubilizante (40% de PEG400 /60% de agua); Grupo 2: V14, dosificación 6 mg/kg; Grupo 3: V14, dosificación 8 mg/kg; Grupo 4: V14, dosificación 10 mg/kg; A) crecimiento de los tumores de xenoinjerto HeLa-MaTu en función del tiempo.
B) peso de los tumores de HeLa-MaTu el día 20, y relación del peso tumoral promedio en los respectivos grupos de tratamiento y el peso tumoral promedio en el grupo control (T/C).
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Preparación de los compuestos de acuerdo con la invención Las sulfoximinas tienen, como regla, una gran estabilidad en cuanto a estructura y configuración (C. Bolm, J.P. Hildebrand, J. Org. Chem., 2000, 65, 169).
Estas propiedades del grupo funcional a menudo aún permiten condiciones de reacción drásticas y permiten hasta una simple derivatización de las sulfoximinas sobre el nitrógeno de la ¡mina y el carbono a. Las sulfoximinas enantiomé-ri-camente puras también se usan como auxiliares en una síntesis diastereoselectiva ((a) S.G. Pyne, Sulfur Reports 1992, 12, 57; (b) C.R. Johnson, Aldrichimica Acta, 1985, 18, 3).
Se ha descrito la preparación de sulfoximinas enantioméricamente puras, p.ej., por resolución del racemato con ácido alcanfor-10-sulfónico enantioméricamente puro ((a) C.R. Johnson, C.W. Schroeck, J. Am. Chem. Soc, 1973, 95, 7418; (b) C.S. Shiner, A.H. Berks, J. Org. Chem., 1988, 53, 5542). Otro método para la preparación de sulfoximinas ópticamente activas comprende la ¡minación estereoselectiva de sulfóxidos ópticamente activos ((a) C. Bolm, P. Müller, K. Harms, Acta Chem. Scand., 1996, 50, 305; (b) Y. Tamura, J. Minamikawa, K. Sumoto, S. Fujii, M. Ikeda, J. Org. Chem., 1973, 38, 1239; (c) (H. Okamura, C. Bolm, Organic Letters, 2004, 6, 1305).
Por artículos de revisión sobre sulfoximinas véase, por ejemplo: a) M. Regglin, C. Zur, Synthesis, 2000, 1 ; (b) C.R. Johnson, Aldrichimica Acta, 1985, 18, 3).
Los siguientes ejemplos explican la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención, sin limitar el alcance de los compuestos reivindicados a estos ejemplos.
Preparación de los compuestos de la Fórmula (la) (derivados 4-0) Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden preparar mediante un método caracterizado por los siguientes pasos: a) Oxidación de un compuesto de la Fórmula (IVd) en el sulfóxido de la Fórmula bi) Iminación directa del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina protegida de la Fórmula (IVa). o b2) Iminación del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina no protegida de la Fórmula (IVb) y la subsiguiente introducción del grupo protector en un compuesto de la Fórmula (IVa). c) Reducción del compuesto de la Fórmula (IVa) en un compuesto de la Fórmula (IV) d) Funcionalización de la posición 4 de 2,4-dicloro-5-iodo-pirimidina (VII) mediante reacción con un diol mono-protegido de la Fórmula (VI) con formación de un intermediario de la Fórmula (Va).
(VII) (Va) Preparación del intermediario 5-CF3 (V).
(Va) (V) f) Acoplamiento de los compuestos de la Fórmulas (IV) y (V) con el intermediario de la fórmula (III). g) Clivaje del grupo protector (PG) con formación de (II).
(III) (II) h) Clivaje del grupo protector sobre la sulfoximina con formación de (la). (ll) (la) donde los sustituyentes R1, R2, R3 y R4 tienen los valores que se indican en la fórmula general (I).
Paso a) Se oxida un compuesto de la Fórmula (IVd) en el sulfóxido dé la Fórmula (IVc). Existen numerosos métodos, incluyendo métodos estereoselectivos, para transformar un tioéter en un sulfóxido (véase p.ej.: (a) M.H. Ali et al., Synthesis, 1997, 764; b) M.C. Carreno, Chem.Rev., 1995, 95, 1717; c) I. Patel et a\., Org.Proc.Res.Dev., 2002, 6, 225; c) N. Khiar et al., Chem.Rev., 2003, 103, 3651 ). El uso descrito de ácido periódico/cloruro de hierro (III) es especialmente adecuado para la preparación de los compuestos de la Fórmula (IVc).
Se hace reaccionar un sulfóxido de la Fórmula (IVc) con trifluoroacetamida en combinación con diacetato de iodobenceno, óxido de magnesio y cantidades catalíticas del dímero acetato de rodio(ll) permite la preparación de una sulfoximina protegida de la Fórmula (IVa). Esta reacción es estereoespecífica y tiene lugar con retención de la configuración en el estereocentro (véase: (a) H. Okamura, C. Bolm, Org. Lett., 2004, 6, 1305).
Paso b2) Primero, tiene lugar la reacción de un sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina no protegida de la Fórmula (IVb). Los métodos adecuados son, por ejemplo: a) Reacción del sulfóxido con azida sódica / ácido sulfúrico conc. (véase por ejemplo: (a) C.R. Johnson, P.E. Rogers, J. Org. Chem., 1973, 38, 1793). b) Reacción del sulfóxido con azida sódica / óleum (véase por ejemplo: (a) N.V. Kondratenko, O.A. Radchenko, L.M. Yagupol'ski, J. Org. Chem. USSR, 1984, 20, 2051 ). c) Reacción del sulfóxido con sulfonilhidroxilamina de o-mes¡tileno (MSH) (véase por ejemplo: (a) C.R. Johnson, R A. Kirchhoff, H.G. Corkins, J. Org. Chem., 1974, 39, 2458).
La subsiguiente introducción del grupo protector con formación de los compuestos de la Fórmula (IVa) puede tener lugar, por ejemplo, como está descrito por reacción con anhídrido trifluoroacético en condiciones básicas.
Paso c) Para la subsiguiente reducción del grupo nitro aromático en un compuesto de la Fórmula (IV), en principio hay un gran número de condiciones de reacción disponibles (véase por ejemplo: R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH, Nueva York, 1989, 41 1 ). Es especialmente adecuado el uso descrito del cloruro de titanio (III) o la hidrogenación usando, por ejemplo, paladio sobre carbón.
Paso d) La reacción de 2,4-dicloro-5-iodo-pirimidina (VII) con un alcohol de la Fórmula (VI) permite la preparación de un intermediario de la Fórmula (Va) (véase por ejemplo: U. Lücking et al., WO2007/071455).
Paso e) En principio, hay diversos métodos disponibles para el reemplazo de un halógeno por un grupo trifluorometilo en un heteroaromático que contiene nitrógeno (véase por ejemplo: a) G.E.
Carr, R.D. Chambers, T.F. Holmes, J. Chem. Soc. Perkin Trans., 1 , 1988, 921 ; b) F. Cottet, M. Schlosser, Eur. J. Org. Chem., 2002, 327; c) F.G. Njoroge et al., J. Med. Chem, 1997, 40, 4290).
En particular, es adecuado el uso descrito de ioduro de cobre (I), fluoruro de potasio y (trifluorometil)-trimetilsilano en N-metil-2-pirrolidinona y THF para la introducción de la pirimidina (Va) en la posición 5 con formación del intermediario (V).
Paso f) Se puede hacer reaccionar una 2-cloro-pirimidina de la Fórmula (V) con una anilina de la Fórmula (IV) para obtener el intermediario de la Fórmula (III) (véase por ejemplo: (a) J. Bryant et al., WO 2004/048343).
Paso q) El clivaje del grupo protector (PG) del intermediario (III) permite obtener el intermediario (II) (véase por ejemplo: P.J. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag Stuttgart, Nueva York, 1994).
La hidrogenación descrita es especialmente adecuada para el clivaje descrito de un grupo bencilo. Si fuera necesario, el clivaje de un grupo THP ya tiene lugar bajo las condiciones del paso Paso ) El clivaje del grupo trifluoroacetato sobre la sulfoximina (II) permite obtener el compuesto de la Fórmula (la). La técnica descrita, usando carbonato de potasio en metanol a temperatura ambiente, es especialmente adecuada para ello (véase p.ej.: (a) H. Okamura, C. Bolm, Org. Lett., 2004, 6, 1305).
Información general Todas las reacciones con compuestos sensibles a una oxidación o sensibles a una hidrólisis tuvieron lugar bajo argón, con solventes secos.
Con la excepción de los derivados de sulfoximina, las sustancias fueron nombradas usando el programa Autonom 2000 Ñame, que está implementado en MDL ISIS Draw. El programa Autonom 2000 Ñame no acepta ninguna sulfoximina, por lo cual las sulfoximinas fueron nombradas según las reglas de IUPAC (IUPAC, Nomenclature of Organic Chemistry, 1979 Edición, C-6.3.
Sulfoxides and Sulfones, Regla C-633, 633.1 Sulfimide and Sulfoximide).
Abreviaturas Abreviatura Significado Ac Acetilo Aloe ANIoxicarbonilo Boc fer-butiloxicarbonilo BOM Benciloximetilo Br Amplio Cl Ionización química D Doblete Dd Doblete de dobletes DCM Diclorometano DMF /V,/V-dimetilformamida DMSO Dimetilsulfóxido ESI Ionización por electroatomízación HPLC Cromatografía líquida de alta presión M Multiplete MEM (2-metoxietoxi)metilo MOM Metoximetilo MS Espectrometría de masa MTM Metiltiometilo NMP N-metil-2-pirrolidinona NMR Espectroscopia de resonancia magnética nuclear: el desplazamiento químico (d) está expresado en ppm.
Pg Grupo protector que comprende grupos tales como TMS, TES, TBDMS, TBDPS, TIPS, Bencilo, PMB, trifilo, alilo, Aloe, MOM, MTM, MEM, BOM, SEM, THP.
PMB p-metoxibencilo Q Cuarteto S singulete SEM -(tr¡metilsilil)etoximet¡lo TBDMS ter-butilsilildimetilo TBDPS ter-butilsilildifenilo TEA Trietilamina TES Trietilsililo THF Tetrahidrofurano THP Tetrahidropiranilo TIPS Triisopropilo TMS Trimetilsililo tr Triplete Ejemplo 1 (RS)-S-Ciclopropil-S-(4-{[4^[(1 R,2R)-2-hidroxi-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil)pirimidm il]amino}fenil)sulfoximida 1a) Preparación de los intermediarios Compuesto 1.1 1-Ciclopropilsulfanil-4-nitrobenceno Se agregó 1 ,78 g (44,6 mmol) de hidruro de sodio (60%) en porciones a una solución de 3,00 g (40.5 mmol) de ciclopropano tiol (preparación de acuerdo a: E. Block et al., J. Am. Chem. Soc. 1992, 114, 3492) en 100 mi de THF / 100 mi de éter dietflico y se agitó por 30 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó 6,00 g (38,7 mmol) de 1-fluoro-4-nitrobenceno en porciones. La mezcla se agitó por 2 horas a 40°C. Luego de enfriarse, la mezcla se colocó en agua y se extrajo con benceno (3x). Las fases orgánicas combinadas se concentraron mediante evaporación y el residuo se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 95:5). Se obtuvieron 4,6 g (23,6 mmol; rendimiento: 61 %) del producto. 1H-NMR (400 Hz, DMSO): d = 8.12 (m, 2H), 7.54 (m, 2H), 2.35 (m, 1 H), 1.16 (m, 2H), 0,61 (m, 2H).
Compuesto 1.2 (RS)-1 -Ciclopropano sulfinil-4-nitrobenceno Se agregó 179 mg (1.11 mmol) de cloruro de hierro(lll) a una mezcla de 7,2 g (36,88 mmol) de 1-ciclopropilsulfanil-4-nitrobenceno en 140 mi acetonitrilo y se agitó por 15 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó 9,25 g (40,57 mmol) de ácido peryódico en porciones a 25°C. La mezcla se agitó por 30 minutos y luego se agitó, agitando, a una solución saturada enfriada de tiosulfato de sodio. Luego se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 1 :1 ). Se obtuvieron 5,93 g (28,07 mmol; rendimiento: 76%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO):5 = 8.41 (m, 2H), 7,98 (m, 2H), 2,60 (m, 1 H), 1 ,01 (m, 3H), 0,86 (m, 1 H).
Compuesto 1.3 (RS)-S-Cicloprop¡l-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 1 ,58 g (3,58 mmol) de dímero acetato de rodio(ll), bajo argón, a una suspensión de 15,1 g (71 ,53 mmol) (RS)- -ciclopropano sulfinil-4-nitrobenceno, 17,8 g (157.37 mmol) trifluoroacetamida, 38,0 g (118,02 mmol) diacetato de yodobenceno y 12,7 g (314,73 mmol) óxido de magnesio en 801 mi DCM y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se filtró a través de Celite con succión y se concentró mediante evaporación. El residuo remanente se purificó mediante cromatografía (hexano/acetato de etilo 2:1 ). Se obtuvieron 18,0 g (55,97 mmol; rendimiento: 78%) del producto. 1H-NMR (400 Hz, DMSO): d = 8.49 (m, 2H), 8,25 (m, 2H), 3,56 (m, 1 H), 1 ,51 (m, 1 H), 1.41 (m, 1 H), 1 ,18 (m, 2H).
Compuesto 1.4 (RS)-S-(4-Aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 1 ,4 g de paladio sobre carbón vegetal (10% / 50% de humedad) a una solución de 6,9 g (21,44 mmol) (RS)-S-ciclopropil-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 214 mi de etanol y 39 mi de THF y se hidrogenó por 1 hora bajo presión normal a 25°C. Se agregó 1 ,4 g adicional de paladio sobre carbón vegetal, y se hidrogenó por otras 4,5 horas a presión normal. La mezcla se filtró, se agregó 1 ,4 g de paladio sobre carbón vegetal al material filtrado nuevamente y finalmente se hidrogenó por 45 minutos. La mezcla se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 5,8 g (19,91 mmol; rendimiento: 93%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 7,53 (m, 2H), 6,71 (m, 2H), 6,40 (br, 2H), 3,21 (m, 1 H), 1 ,28 (m, 2H), 1 ,08 (m, 2H).
Compuesto 1.5 (2R,3R)-3-Benc¡loxi-butan-2-ol Se agregó 5,00 g (44,6 mmol) de tert-butilato de potasio a una solución de 4,00 g (44,4 mmol) de (2R,3R)-butan-2,3-diol en 300 mi de THF a temperatura ambiente y la mezcla se sometió a reflujo por 15 minutos. La mezcla se enfrió a aproximadamente 50°C y se agregó 5,3 mi (44,6 mmol) de bromuro de bencilo. Se sometió a reflujo por 3 horas, y luego se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y solución de cloruro de sodio y luego se lavó con solución 1 N de cloruro de hidrógeno (1x) y solución de cloruro de sodio (2x). La fase orgánica se secó (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 1 :1). Se obtuvieron 3,41 g (18,9 mmol; rendimiento: 43%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 7,35 (m, 4H), 7,28 (m, 1 H), 4,52 (m, 3H), 3,67 (m, 1 H), 3,37 (m, 1 H), 1 ,05 (d, 3H), 1 ,01 (d, 3H).
Compuesto 1.6 4-((1R,2R)-2-Benciloxi-1-metil-propoxi)-2-cloro-5-yodo-pirimidina Se agregó 2,07 g de hidruro de sodio (55%) en porciones a 8,55 g (47,4 mmol) (2R,3R)-3-benciloxi-butan-2-ol en 56 mi de éter dietílico a 0°C con agitación. Luego de 10 minutos el baño de hielo se retiró y. se agitó por otros 3 minutos a temperatura ambiente. La suspensión formada se agregó a 0°C a una solución de 6,52 g (23,7 mmol) de 2,4-dicloro-5-yodo-pirimidina. La mezcla se agitó por 4 horas a 40°C y luego se agregó solución de cloruro de sodio diluida. Luego se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 4:1). Se obtuvieron 4,12 g (9,8 mmol; rendimiento: 41%) del producto.
H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,78 (s, 1 H), 7,29 (m, 5H), 5,27 (m, 1 H), 4,64 (d, 1 H), 4,53 (d, 1 H), 3,73 (m, 1 H), 1 ,30 (d, 3H), 1 ,19 (d, 3H).
Compuesto 1.7 4-((1R,2R)-2-Benciloxi-1-metil-propoxi)-2-cloro-5-trifluorometil-pirimidina Se agregó 3,82 g (20,0 mmol) de yoduro de cobre(l), 0,97 g (16,7 mmol) de fluoruro de potasio y 2,47 mi (16,7 mmol) de (trifluorometil)-trimetilsilano, con agitación, a una solución de 4,66 g (11,1 mmol) de 4-((1 R,2R)-2-benciloxi-1-metil-propoxi)-2-cloro-5-yodo-pirimidina en 15,8 mi de NMP y 15,8 mi de THF a temperatura ambiente. La mezcla se agitó por 5,5 horas a 80°C. Luego de enfriar, la mezcla se agregó a solución de cloruro de sodio diluida y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 4. ). Se obtuvieron 2,17 g (6,0 mmol; rendimiento: 54%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,81 (s, 1 H), 7,21 (m, 5H), 5,40 (m, 1 H), 4,57 (d, 1 H), 4,42 (d, 1H), 3,70 (m, 1 H), 1 ,28 (d, 3H), 1 ,13 (d, 3H).
Compuesto 1.8 (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-(Benc¡lox¡)-1-met¡lpropil]oxi}-5-(tr¡fluoromet¡l) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 0,96 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 1 ,39 g (3,85 mmol) de 4-((1 R,2R)-2-benciloxi-1-me-t¡l-propoxi)-2-cloro-5-trifluorometil-pirimidina y 1 ,35 g (4,62 mmol) (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 18,8 mi acetonitrilo y se agitó por 5 horas a 80°C. Luego de enfriar, la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución saturada de carbonato ácido de sodio y solución saturada de cloruro de sodio, se secó (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano/acetato de etilo 4:1). Se obtuvo1 ,32 g (2,14 mmol, rendimiento: 56%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,71 (s, 1 H), 8,84 (s, 1 H), 8,08 (m, 2H), 7,93 (m, 2H), 7,26 (m, 5H), 5,52 (m, 1 H), 4,62 (d, 1 H), 4,51 (d, 1 H), 3,78 (m, 1 H), 3,35 (m, 1 H), 1 ,37 (m, 5H), 1 ,16 (m, 5H). Compuesto 1.9 (RS)-S-C¡clopropil-S-(4-{[4- [( R,2R)-2-h¡drox¡-1-met¡lprop¡l]ox¡}-5-(tr¡fluoromet¡l)pir¡m¡d¡n-2-il]amino}fenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 1 ,64 g de paladio sobre carbón vegetal (10%) a una solución de 1 ,31 g (2, 12 mmol) (RS)-S-(4 [4-{[(1 R,2R)-2-(benciloxi)-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 66 mi de etanol y se hidrogenó a presión normal a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 0,88 g (1 ,67 mmol; rendimiento: 79%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,65 (s, 1 H), 8,58 (s, 1 H), 8,04 (m, 2H), 7,89 (m, 2H), 5,28 (m, 1 H), 4,86 (d, 1 H), 3,82 (m, 1 H), 3,35 (m, 1 H), 1 ,45 (m, 5H), 1 ,15 (m, 5H). 1 b) Preparación del producto final Se agregó 1130 mg (8,20 mmol) de carbonato de potasio a 863 mg (1 ,64 mmol) de (RS)-S-ciclopropil-S-(4-{[4-{[(1 R,2R)-2-hidroxi-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil)pi (trifluoroacetil)sul foximida en 35 mi metanol y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 709 mg (1 ,64 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,50 (s, 1 H), 8,59 (s, 1 H), 7,94 (m, 2H), 7,84 (m, 2H), 5,32 (m, 1 H), 4,91 (d, 1 H), 4,07 (s, 1 H), 3,86 (m, 1 H), 2,63 (m, 1 H), 1 ,30 (d, 3H), 1,11 (m, 4H), 0,91 (m, 3H). MS: 431 (ES+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IA 5µ 250x30 mm Eluyentes : Hexano / etanol 8:2 Velocidad de Flujo: 40,0 mL/min Detector: UV 254 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 10,8-13,4 min; estereoisómero 1 (- ejemplo 1-SI-1) 13,6-18,5 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 1-SI-2) Ejemplo 2 (RS)-S-(4-{[4^[(1R,2R)-2-Hidroxi-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil)pirimidin-2-i S-metilsulfoximida 2a) Preparación de los intermediarios Compuesto 2.1 (RS)-S-(4-Nitrofenil)-S-metilsulfoximida Se agregó 0,70 g (10,76 mmol) de azida de sodio a 1 ,56 g (8,42 mmol) de 1-(metilsulfin¡l)-4-nitrobenceno en 20 mi de DCM. Se agregó 2,3 mi de ácido sulfúrico concentrado lentamente a la mezcla a 0°C y luego se calentó a 45°C. Luego de 16 h la mezcla se enfrió a temperatura ambiente, y luego de agregar agua se extrajo con DCM. La fase acuosa se ajustó a pH 11 con solución al 15% de hidróxido de sodio y se extrajo con DCM (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvo 1 ,08 g (5,39 mmol; rendimiento: 63%) del producto.
H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,43 (m, 2H), 8,17 (m, 2H), 4,62 (s, 1 H), 3,18 (s, 3H).
Compuesto 2.2 (RS)-S-Metil-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 1 ,00 mi (7,08 mmol) de anhídrido trifluoroacético por goteo, con enfriamiento con hielo, a una solución de 1000 mg (4,99 mmol) de (RS)-S-(4-nitrofenil)-S-metilsul-foxim¡da, 55 mg (0,45 mmol) de DMAP y 0,76 mi (5,49 mmol) de trietilamina en 32 mi de DCM. La mezcla se agitó por otras 2 horas en el baño de hielo. Se diluyó con DCM y se lavó con solución semiconcentrada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano/acetato de etilo 60:40). El producto obtenido finalmente se agitó con éter diisopropíHco. El sólido se retiró por filtración con succión y se secó. Se obtuvieron 1444 mg (4,87 mmol; rendimiento: 98%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,50 (m, 2H), 8,24 (m, 2H), 3,87 (s, 3H).
Compuesto 2.3 (RS)-S-(4-Aminofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 292 mg de paladio sobre carbón vegetal (10% / 50% de humedad) a una solución de 1 ,34 g (4,52 mmol) (RS)-S-metil-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 45 mi etanol y 8 mi de THF y se hidrogenó por 45 minutos bajo presión normal a 24°C. La mezcla se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se agitó con éter diisopropllico. El sólido se retiró por filtración con succión y se secó. Se obtuvo 1 ,07 g (4,03 mmol; rendimiento: 89%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 7,54 (m, 2H), 6,67 (m, 2H), 6,35 (s, 2H), 3,55 (s, 3H).
Compuesto 2.4 (RS)-S-(4-{[4-{[(1 R,2R)-2-(Benciloxi)-1 -metilpropil]oxi}-5-(trif luorometil) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 0,97 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 1 ,40 g (3,88 mmol) de 4-((1 R,2R)-2-benciloxi-1-metil-propoxi)-2-cloro-5-trifluorometil-pirimidina y 1 ,20 g (4,51 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoxim¡da en 19,0 mi de acetonitrilo y luego se agitó por 6 horas a 80°C. Luego de enfriar, la mezcla se diluyó con acetato de etilo y se lavó con solución saturada de carbonato ácido de sodio y solución saturada de cloruro de sodio, se secó (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 1 :1). Se obtuvo 1 ,76 g (2,98 mmol, rendimiento: 77%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,66 (s, 1 H), 8,60 (s, 1 H), 8,02 (m, 2H), 7,93 (m, 2H), 7,21 (m, 5H), 5,46 (m, 1 H), 4,57 (d, 1 H), 4,46 (d, 1 H), 3,72 (m, 1 H), 3,68 (s, 3H), 1,31 (d, 3H), 1 ,16 (d, 3H).
Compuesto 2.5 (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-Hidroxi-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 0,18 g de paladio sobre carbón vegetal (10%) a una solución de 1 ,75 g (2,96 mmol) de (RS)-S-(4-{[4-{[(1 R,2R)-2-(benciloxi)-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluoro-metil)p¡rimi^ metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 35 mi de etanol y se hidrogenó a presión normal a temperatura ambiente. La mezcla se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvo 1 ,40 g del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,65 (s, 1 H), 8,58 (s, 1 H), 8,04 (m, 2H), 7,93 (m, 2H), 5,28 (m, 1 H), 4,86 (d, 1 H), 3,83 (m, 1 H), 3,70 (s, 3H), 1 ,26 (d, 3H), 1 ,07 (d, 3H). 2b) Preparación del producto final Se agregó 1 ,92 g (13,89 mmol) de carbonato de potasio a 1 ,39 g (2,78 mmol) de (RS)-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-hidroxi-1-metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 60 mi metanol y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo se purificó mediante cromatografía (DCM / EtOH 9:1). Se obtuvieron 862 mg (2,13 mmol; rendimiento: 77%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,47 (s, 1 H), 8,55 (s, 1 H), 7,90 (m, 2H), 7,83 (m, 2H), 5,27 (m, 1 H), 4,86 (d, 1 H), 4,04 (s, 1 H), 3,82 (m, 1 H), 3,00 (s, 3H), 1 ,26 (d, 3H), 1 ,07 (d, 3H).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IC 5µ 250x20 Eluyentes : Hexano / etanol 8:2 Amortiguador: Hexano/0,1% DEA Velocidad de Flujo: 25,0 mL/min Detector: UV 280 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 9,5-12,1 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 2-SI-1) 13,1-16,0 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 2-SI-2) Ejemplo 3 (RS)-S-(4-{[4-{[(R)-2-Hidroxi-1 ,2-d¡metilpropil]oxi}-5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-metilsulfoximida 3a) Preparación de los intermediarios Compuesto 3.1.
(R)-2- etil-butan-2,3-diol Una solución de 10,0 g (96,1 mmol) de (R)-(+)-lactato de metilo en 20 mi THF se agregó lentamente por goteo a 160 mi (480,0 mmol) de una solución 3N enfriada con hielo de cloruro de metilmagnesio en THF. La mezcla primero se calentó lentamente a temperatura ambiente y luego se mantuvo a reflujo por 30 minutos. Luego de enfriar, la mezcla se agregó a una solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se filtraron sobre un filtro Whatman y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 4,5 g (43,1 mmol) del producto crudo, y se usó sin purificación adicional.
H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 4,21 (d, 1H), 3,93 (s, 1 H), 3,29 (m, 1H), 0,97 (m, 9H).
Compuesto 3.2.
(R)-3-(2-Cloro-5-yodo-pirimidin-4-iloxi)-2-metil-butan-2-ol Se agregó 1 ,84 g (42,3 mmol) de hidruro de sodio (55%) en porciones, con agitación a 0°C, a una solución de 4,40 g (42,3 mmol) de (R)-2-metil-butan-2,3-diol en 83 mi de éter dietílico y se agitó por 10 minutos. Se agitó por otros 3 minutos a temperatura ambiente y la mezcla luego se agregó a una solución enfriada con hielo de 9,68 g (35,2 mmol) de 2,4-dicloro-5-yodo-pirimidina en 97 mi de acetonitrilo. La mezcla se agitó por 4 horas a 40°C y, luego de enfriar, se agregó hielo y solución saturada de NaCI. Luego se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 4:1). Se obtuvieron 4,96 g (14,5 mmol; rendimiento: 41%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,73 (s, 1 H), 4,96 (q, 1 H), 4,62 (s, 1 H), 1,21 (d, 3H), 1 ,13 (s, 6H). ES: 343 (CI+).
Compuesto 3.3. 2-Cloro-4-[(R)-1 ,2-dimetil-2-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-propoxi]-5-yodo-pirimidina Se agregó 2,64 mi (29,0 mmol) de dihidropirano y 0,36 g (1,5 mmol) de tosilato de piridinio a una solución de 4,96 g (14,5 mmol) de (R)-3-(2-cloro-5-yodo-pirimidin-4-iloxi)-2-metil-butan-2-ol en 30 mi de DCM y se agitó por 22 horas a temperatura ambiente. La mezcla se diluyó con DCM y se lavó con solución saturada de carbonato ácido de sodio. La fase orgánica se secó (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 4:1 ). Se obtuvieron 5,50 g (12,9 mmol; rendimiento: 89%) de la mezcla de diastereómeros. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,75 (s, 1 H), 8,74 (s, 1 H), 5,15 (m, 2H), 4,91 (m, 2H), 3,70 (m, 2H), 3,30 (m, 2H), 1 ,31 (m, 30H).
Compuesto 3.4. 2-Cloro^-[(R)-1,2-dimetil-2-(tetrahidro-piran-2-iloxi)^ropoxi]-5-trifluorometil-pir¡mid Se agregó 1 ,61 g (8,44 mmol) de yoduro de cobre(l), 0,41 g (7,03 mmol) de fluoruro de potasio y 1 ,04 mi (7,03 mmol) de (trifluorometil)-trimetilsilano a temperatura ambiente a una solución de 1 ,00 g (2,34 mmol) de 2-cloro-4-[(R)-1 ,2-d¡metil-2-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-propoxi]-5-yodo-pirimidina en 3,3 mi de NMP y 3,3 mi de THF. La mezcla se agitó por 2 horas a 90°C. Luego de enfriar, la mezcla se agregó a solución de cloruro de sodio diluida y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 4:1). Se obtuvieron 0,53 g (1 ,43 mmol; rendimiento: 61 %) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,84 (s, 1 H), 5,32 (m, 1 H), 4,85 (m, 1H), 3,68 (m, 1 H), 3,30 (m, 1 H), 1 ,31 (m, 15H). 3b) Preparación del producto final Se agitó 200 mg (0,54 mmol) de 2-cloro-4-[(R)-1 ,2-dimetil-2-(tetrahidro-piran-2-iloxi)-propoxi]-5-trifluorometil-pirimidina y 87 mg (0,33 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-metil-N- (trifluoroacetil)sulfoximida en 5 mi etanol por 6 horas a 70°C. La mezcla se evaporó a sequedad en un evaporador rotatorio y el residuo se colocó en 1 1 ,6 mi. 373 mg (2,70 mmol) de carbonato de potasio se agregó a la solución y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo se purificó mediante HPLC. Se obtuvieron 31 mg (0,07 mmol; rendimiento: 14%) del producto.
Columna: XBridge C18 5µ 100x30 mm Eluyente A: H20 / 0, 1 % HCOOH Eluyente B: Acetonitrilo Gradiente: 0 min 70%A 30%B 1 ,00 min 70%A 30%B 7,50 min 40%A 60%B 7,52 min 1 %A 99%B 10,00 min 1 %A 99%B Velocidad de Flujo: 50,0 mIJmin Detección: DAD rango de barrido 210-400 nm; MS ESI+, ESI-, rango de barrido 160-1000 m/z Temperatura: Temperatura ambiente 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,48 (s, 1 H), 8,56 (s, 1 H), 7,90 (m, 2H), 7,83 (m, 2H), 5,13 (q, 1 H), 4,67 (s, 1 H), 4,06 (s, 1 H), 3,01 (s, 3H), 1 ,28 (d, 3H), 1 ,12 (m, 6H).
Preparación de los compuestos de la fórmula general (Ib) (derivados 4-N) Los compuestos de acuerdo con la invención se pueden preparar mediante un método caracterizado por los siguientes pasos: a) Oxidación de un compuesto de la Fórmula (IVd) en el sulfóxido de la Fórmula (IVc). bt ) Iminación directa del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina protegida de la Fórmula (IVa). b2) Iminación del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina no protegida de la Fórmula (IVb) y la subsiguiente introducción del grupo protector en un compuesto de la Fórmula (IVa).
Reducción del compuesto de la Fórmula (IVa) en un compuesto de la Fórmula (IV) d) Funcionalización de la posición 4 de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina (Vllb) mediante reacción con una amina de la Fórmula (Vía) con formación de un intermediario de la Fórmula (Vb).
(Vllb) (Vb) (Ve) e) Acoplamiento de los compuestos de la Fórmula (Vb) y (IV) en el intermediario de la Fórmula (llb).
(Vb) (IV) (llb) f) Clivaje del grupo protector sobre la sulfoximina con formación de (Ib). (llb) (Ib) donde los sustituyentes R1, R2, R3 y R4 tienen los valores que se indican en la fórmula general (I). Pasos a)-c) Estos pasos son idénticos a los pasos a)-d) para la preparación de los compuestos de acuerdo con fórmula general (la).
Paso d) La reacción de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina (Vllb) con una amina de la Fórmula (Vía) proporciona una mezcla de los productos (Vb) y (Ve). El producto deseado (Vb) se puede separar, por ejemplo, mediante cromatografía (véase por ejemplo: (a) J. Bryant et al., WO 2004/048343).
Paso e) Se puede hacer reaccionar una 2-cloro-pirimidina de la Fórmula (Vb) con una anilina de la Fórmula (IV) para obtener el intermediario de la Fórmula (llb) (véase por ejemplo: (a) J. Bryant et al., WO 2004/048343).
Paso f) El clivaje del grupo trifluoroacetato sobre la sulfoximina (II) proporcionar el compuesto de la Fórmula (la). La técnica descrita, usando carbonato de potasio en metanol a temperatura ambiente, es especialmente adecuada para ello.
Ejemplo 4 (RS)-S-Ciclopropil-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-hidrox¡-1-metilpropil]amino} -5-(trifluorometil)pirimid¡n-2-il]amino}fenil)sulfoximida 4a) Preparación de los intermediarios Compuesto 4.1 (2R,3R)-3-(2-Cloro-5-trifluorometil-pir¡midin-4-ilamino)-butan-2-ol Se agregó 72,2 mi (520,71 mmol) de trietilamina por goteo a 0°C a 56,5 g (260,35 mmol) de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina y 32,7 g (260,35 mmol) de clorhidrato de (2R,3R)-3-amino-butan-2-ol en 1035 mi de acetonitrilo. La mezcla se calentó lentamente durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se agregó a una solución semiconcentrada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo remanente se purificó mediante cromatografía (hexano / acetato de etilo 0-100%). Se obtuvieron 18,6 g (68,97 mmol; rendimiento: 27%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,38 (s, 1 H), 6,71 (d, 1H), 5,00 (d, 1H), 4,08 (m, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 1 ,12 (d, 3H), 1.01 (d, 3H).
La preparación de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-c¡clopropil-N-(trifluoroacet¡l)sulfoximida se describió como Compuesto 1.4. 4b) Preparación del producto final Se agregó 0,21 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 250 mg (0,86 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 231 mg (0,86 mmol) de (2R.3R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-butan-2-ol en 3,75 mi acetonitrilo y luego se agitó por 3,5 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 18,4 mi de metanol y 590 mg (4,28 mmol) de carbonato de potasio y se agitó por una hora a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo remanente se purificó mediante cromatografía (DC / MeOH 4:1 ). Se obtuvieron 242 mg (0,56 mmol; rendimiento: 65%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,04 (s, 1 H), 8,25 (s, 1 H), 7,91 (m, 2H), 7,74 (m, 2H), 6,05 (d, 1 H), 5,07 (d, 1 H), 4,14 (m, 1 H), 3,97 (s, 1 H), 3,77 (m. 1 H), 2,56 (m, 1H), 1 ,19 (d, 3H), 1 ,05 (m, 4H), 0,86 (m, 3H).
MS: 430 (ESI+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IA 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / 2-propanol 50:50 Amortiguador: Hexano/ 0, 1 % DEA Velocidad de Flujo: 15,0 mIJmin Detector: UV 254 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 5,9-6,6 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 4-SI-1 ) 7,1-8,8 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 4-SI-2) Ejemplo 5 (RS)-S-Ciclopropil-S-(4-{[4-{[(R)-2-hidrox¡-1,2-dimet¡lpropil]amino} -5-(tr¡fluorometil)p¡rimidin-2-il]amino}fenil)sulfoximida 5a) Preparación de los intermediarios Compuesto 5.1 (R)-3-(2-Cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-2-met¡l-butan-2-ol Se agregó 3,6 g (35,03 mmol) de (R)-3-amino-2-metil-butan-2-ol por goteo a una solución de 7,6 g (35,03 mmol) de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina en 139 mi de acetonitrilo. Luego se agregó 9,7 mi (70,1 mmol) de trietilamina por goteo a 0°C y la mezcla se calentó lentamente durante la noche a temperatura ambiente. Se agitó por otros 2 días a temperatura ambiente. La mezcla se agregó a una solución semiconcentrada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo remanente se purificó mediante HPLC preparativa. Se obtuvieron 3,0 g (10,65 mmol; rendimiento: 30%) del producto.
Columna: XBridge C18 5µ 150x20 mm Eluyente A: H2O / 0,2% NH3 Eluyente B: Acetonitrilo Gradiente: 70%?+30%?(2') 30->60%?(10') 60->99%B(0,1') Velocidad de Flujo:50,0 mL min Detector: DAD (200-400 nm) TAC; MS-ESI+ (160-1000 m/z) TIC Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 5,6-6,4 min 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,42 (s, 1 H), 6,52 (d, 1 H), 5,01 (s, 1 H), 4,10 (m, 1 H), 1 ,11 (m, 9H). La preparación de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida se describió como Compuesto 1.4. 5b) Preparación del producto final Se agregó 0,34 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 400 mg (1 ,37 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 388 mg (1 ,37 mmol) de (R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-2-metil-butan-2-ol en 6,0 mi de acetonitrilo y se agitó por 3,5 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 29,4 mi de metanol y 950 mg (6,84 mmol) de carbonato de potasio y se agitó por una hora a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 600 mg (1 ,35 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,08 (s, 1 H), 8,30 (s, 1 H), 7,94 (m, 2H), 7,80 (m, 2H), 6,07 (d, 1 H), 4,95 (s, 1 H), 4,16 (m, 1 H), 4,02 (s, 1 H), 2,62 (m, 1 H), 1 ,20 (m, 6H), 1 ,10 (m, 4H), 0,89 (m, 3H). MS: 444 (ESI+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak AD-H 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / 2-propanol 60:40 Amortiguador: Hexano/ 0,1% DEA Velocidad de Fl 20,0 mIJmin Detector: UV 280 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 5,1-6,3 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 5-SI-1) 8,0-10,8 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 5-SI-2) Ejemplo 6 (RS)-S-Etil-S-(4-{[4-{[(1R,2R)-2-hidroxi-1-metilpropil]amino} -5-(trifluorometil)pirimidin-2-il]amino}fenil)sulfoximida 6a) Preparación de los intermediarios Compuesto 6,1 1-Etilsulfanil-4-nitrobenceno Se agregó 16,56 g (106,72 mmol) de 4-nitrotiofenol, enfriando con agua, a una solución de 4,27 g (106,76 mmol) de hidróxido de sodio en 320 mi de etanol y se agitó por 15 minutos a temperatura ambiente. Luego, enfriando con agua, se agregó 8,63 mi (106,79 mmol) de yoduro de etilo y la mezcla se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La mezcla se agregó a solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Luego se disolvió en DCM y se filtró nuevamente y se evaporó a sequedad. Se obtuvieron 16,86 g (92,02 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,14 (m, 2H), 7,49 (m, 2H), 3, 14 (q, 2H), 1 ,31 (tr, 3H).
Compuesto 6,2 (RS)-1-Etilsulfinil-4-n¡trobenceno Se agregó 428 mg (2,64 mmol) de cloruro de hierro(lll) a una mezcla de 16,86 g (92,02 mmol) de 1-etilsulfanil-4-nitrobenceno en 75 mi de acetonitrilo y se agitó por 10 minutos a temperatura ambiente. Luego se agregó 22,44 g (98,44 mmol) de ácido peryódico en porciones, de manera tal que temperatura no excedió los 30°C. La mezcla se agitó por 50 minutos y luego se agregó, con agitación, a una mezcla de 170 mi de DCM, 500 mi de agua helada y 100 g de tiosulfato de sodio pentahidratado. Se extrajo con DCM (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. El residuo obtenido se recristalizó a partir de acetato de etilo / hexano. Se obtuvieron 12,49 g (62,69 mmol; rendimiento: 68%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,35 (m, 2H), 7,88 (m, 2H), 3, 12 (m, 1 H), 2,84 (m, 1 H), 0,99 (tr, 3H).
Compuesto 6,3 (RS)-S-Etil-S-(4-nitrofenil)sulfoximida Se agregó 30,5 mi de óleo (20% S03) cuidadosamente, sobre un baño de hielo, a 6,00 g (30,12 mmol) de (RS)-1-etilsulfinil-4-nitrobenceno. Luego, bajo argón, se agregó 2,35 g (36,14 mmol) de azida de sodio cuidadosamente, en porciones y con agitación, y la mezcla luego se calentó a 45°C. Luego de 6 horas la mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se vertió cuidadosamente sobre hielo. La mezcla se alcalizó con carbonato ácido de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 5,74 g (26,79 mmol; rendimiento: 89%) del producto.
H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,37 (m, 2H), 8,09 (m, 2H), 4,56 (s, 1 H), 3,18 (q, 2H), 1 ,04 (tr, 3H). Compuesto 6,4 (RS)-S-Etil-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó 4,53 mi (32,04 mmol) de anhídrido trifluoroacético por goteo, con enfriamiento con hielo, a una solución de 5,72 g (26,70 mmol) de (RS)-S-etil-S-(4-nitro-fenil)sulfoximida y 4,07 mi (29,37 mmol) de trietilamina en 175 mi de DCM. La mezcla se agitó por otras 3 horas en el baño de hielo, donde la temperatura se elevó a aproximadamente 10°C. Se diluyó con DCM y se lavó con solución semiconcentrada de cloruro de sodio. La fase orgánica se secó (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 8,17 g (26,33 mmol) del producto.
H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 8,52 (m, 2H), 8,22 (m, 2H), 3,99 (m, 2H), 1 ,16 (tr, 3H).
Compuesto 6,5 (RS)-S-(4-Aminofenil)-S-etil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida Se agregó lentamente 88,5 mi de solución al 15% de cloruro de titanio(lll) en ácido clorhídrico a aproximadamente el 10%, con enfriamiento con hielo, a una solución de 4,05 g (13,05 mmol) de (RS)-S-etil-S-(4-nitrofenil)-N-(trifluoroacetil)sulfoximida en 191 mi de THF. La mezcla se agitó por 3,5 horas a temperatura ambiente, se diluyó con acetato de etilo y luego se lavó con solución semiconcentrada de cloruro de sodio (3x). La fase orgánica se secó (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 3,17 g (11 ,31 mmol) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 7,48 (m, 2H), 6,68 (m, 2H), 3,64 (m, 2H), 1,06 (tr, 3H).
La preparación de (2R,3R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-¡lamino)-butan-2-ol se describió como Compuesto 4.1. 6b) Preparación del producto final Se agregó 0,36 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 400 mg (1 ,43 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-etil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 385 mg (1 ,43 mmol) de (2R,3R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-butan-2-ol en 7,0 mi acetonitrilo y se agitó por 4,5 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 19,0 mi de metanol y 608 mg (4,40 mmol) de carbonato de potasio, y se agitó por 1 hora a temperatura ambiente. Se diluyó con so-lución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 590 mg (1 ,41 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,10 (s, 1 H), 8,30 (s, 1 H), 7,96 (m, 2H), 7,78 (m, 2H), 6,10 (d, 1 H), 5,11 (d, 1 H), 4,19 (m, 1 H), 4,00 (s, 1 H), 3,82 (m, 1 H), 3,07 (q, 2H), 1,24 (d, 3H), 1 ,06 (m, 6H). MS: 418 (ESI+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak AD-H 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / 2-propanol 60:40 Amortiguador: Hexano/0,1% DEA Velocidad de Flujo: 20,0 mL/min Detector: UV 280 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 6,2-6,8 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 6-SI-1) 7,2-8,9 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 6-SI-2) Ejemplo 7 (RS)-S-Etil-S-(4-{[4-{[(R)-2-hidroxi-1,2-dimetilpropil]amino} -5-(trifluorometil)pirim¡din-2-il]amino}fen¡l)sulfoximida 7a) Preparación de los intermediarios La preparación de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-etil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida se describió como Compuesto 6,5.
La preparación de (R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-2-met¡l-butan-2-ol se describió como Compuesto 5.1. 7b) Preparación del producto final Se agregó 0,36 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 400 mg (1 ,43 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-etil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 405 mg (1,43 mmol) de (R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-2-metil-butan-2-ol en 7,0 mi de acetonitrilo y se agitó por 4,5 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 25,0 mi de metanol y 788 mg (5,70 mmol) de carbonato de potasio y se agitó por una hora a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 620 mg (1 ,43 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 Hz, DMSO): d =10,06 (s, 1 H), 8,28 (s, 1 H), 7,92 (m, 2H), 7,74 (m, 2H), 6,03 (d, 1 H), 4,90 (s, 1 H), 4, 12 (m, 1 H), 3,96 (s, 1 H), 3,03 (q, 2H), 1 ,16 (m, 6H), 1 ,08 (m, 3H), 1 ,02 (tr, 3H). MS: 432 (ESI+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak AD-H 5µ 250x20 mm Eluyentes : A:Hexano B:2-propanol Amortiguador: Hexano/ 0,1 % DEA Gradiente: 20->40%B(20')+40%B(5') Velocidad de Flujo: 10,0 mL min Detector: UV 280 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 17,5-19,8 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 7-SI-1 ) 20,1-22,0 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 7-SI-2) Ejemplo 8 (RS)-S-(4-{[4-{[(1 R,2R)-2-Hidroxi-1-metilpropil]amino}-5-(trifluorometil) pirimidin-2-il]amino}fenil)-S-metilsulfoximida 8a) Preparación de los intermediarios La preparación de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida se describió como Compuesto 2.3.
La preparación de (2R,3R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-butan-2-ol se describió como Compuesto 4.1. 8b) Preparación del producto final Se agregó 0,38 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano se agregó a 399 mg (1 ,50 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 404 mg (1 ,50 mmol) de (2R,3R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimidin-4-ilamino)-butan-2-ol en 7,3 mi acetonitrilo y se agitó por 9 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 32,2 mi de metanol y 1040 mg (7,50 mmol) de carbonato de potasio y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 565 mg (1 ,40 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): 10,09 (s, 1 H), 8,30 (s, 1 H), 7,96 (m, 2H), 7,83 (m, 2H), 6, 10 (d, 1 H), 5,11 (d, 1 H), 4,18 (m, 1 H), 4,03 (s, 1 H), 3,82 (m, 1 H), 3,03 (s, 3H), 1 ,25 (d, 3H), 1 , 10 (d, 3H).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IC 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / etanol 50:50 Amortiguador: Hexano/ 0,1 % DEA Velocidad de Flujo: 20,0 mUmin Detector: UV 254 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención:5,1-5,8 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 8-SI-1 ) 6,1-6,7 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 8-SI-2) Ejemplo 9 9a) Preparación de los intermediarios La preparación de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida se describió como Compuesto 2.3.
La preparación de (R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirim¡din-4-ilamino)-2-metil-butan-2-ol se describió como Compuesto 5.1. 9b) Preparación del producto final Se agregó 0,38 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 399 mg (1 ,50 mmol) de (RS)-S-(4-am¡nofenil)-S-metil-N-(trifluoroacetil)sulfoximida y 425 mg (1 ,50 mmol) de (R)-3-(2-cloro-5-trifluorometil-pirimid¡n-4-ilamino)-2-met¡l-butan-2-ol en 7,3 mi acetonitrilo y se agitó por 4 horas a 60°C. La mezcla se evaporó a sequedad. Se agregó 32,2 mi de metanol y 1040 mg (7,50 mmol) de carbonato de potasio y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (2x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante eva-poración. Se obtuvieron 600 mg (1 ,44 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 Hz, DMSO): d = 10,05 (s, 1 H), 8,26 (s, 1 H), 7,91 (m, 2H), 7,79 (m, 2H), 6,03 (d, 1 H), 4,91 (s, 1 H), 4,1 1 (m, 1 H), 3,99 (s, 1 H), 2,99 (s, 3H), 1 ,16 (m, 6H), 1, 10 (m, 3H).
MS: 418 (ESI+).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IC 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / etanol 80:20 Velocidad de Flujo: 30,0 mL/min Detector: UV 254 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 6,0-6,7 min; estereoisómero 1 (= ejemplo 9-SI-1) 7,1-8,9 min; estereoisómero 2 (= ejemplo 9-SI-2) Preparación de las sustancias comparativas Los compuestos de acuerdo a la invención, caracterizados entre otras cosas por un sustituyente 5-CF3 en la posición 5 de la pirimidina, se compararon, con respecto a la eficacia in vitro e in vivo, con sus análogos 5-Br que se revelaron explícitamente en WO 2005/037800 o bien de manera alternativa están cubiertos por su revelación genérica.
V11 = sustancia comparativa 5-Br en ejemplo 11 La sustancia comparativa en ejemplo 11 es el estereoisómero más activo de la mezcla de diastereómeros (RS)-S-[4-({5-bromo-4-[(R)-(2-hidroxi-1 ,2-dimetilpropil)amino]pirimidin-2-il}amino)fenil]-S-ciclopropil-sulfoxim¡da, la cual se revela como ejemplo 1.6 en la solicitud WO 2005/037800 (p. 35).
Para la comparación ¡n vivo, se usó el diastereómero (R)-S-[4-({5-bromo-4-[(R)-(2-hidroxi-1 ,2-dimetilpropil)amino]pirimidin-2-il}amino)fenil]-S-ciclopropil-sulfoximida, el cual tiene una eficacia in vitro más alta que (S)-S-[4-({5-bromo-4-[(R)-(2-hidroxi-1 ,2-dimetilpropil)amino]pirimidin-2-il}amino)fenil]-S-ciclopropil-sulfoximida, en ejemplo 11.
Para este fin, se preparó V11 mediante el siguiente método: V11a) Preparación del intermediario Se agregó 0,07 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 988 mg (3,35 mmol) de (R)-3-(5-bromo-2-cloro-pirimidin-4-ilamino)-2-metil-butan-2-ol y 750 mg (2,79 mmol) de (R)-S-(4-aminofenil)-N-(etoxicarbonil)-S-ciclopropilsulfoximida (preparación de acuerdo a: U. Lücking et al., WO 2007 / 071455, p. 112, Ejemplo 4) en 16,50 mi butanol y 1 ,65 mi metanol y se agitó por 3 días a 60°C. Luego de enfriar, la mezcla se evaporó a sequedad y se purificó me-diante cromatografía (DC / EtOH 9:1 ). Se obtuvieron 319 mg (0,61 mmol, rendimiento: 22%) del producto. 1H-NMR (400 Hz, DMSO): d = 9,96 (s, 1 H), 8, 13 (s, 1 H), 7,92 (m, 2H), 7,73 (m, 2H), 6,28 (d, 1 H), 4,05 (m, 1 H), 3,84 (m, 2H), 2,96 (m, 1 H), 1 ,05 (m, 16H).
V11b) Preparación del producto final Se agregó 2,0 mi de solución 1 ,5M de etanolato de sodio recién preparada a 319 mg (0,61 mmol) del intermediario en 4,3 mi etanol y se agitó por 18 horas a 60°C. Luego de enfriar, la mezcla se agregó a solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S0 ), se filtró y se concentró mediante evaporación. Luego de la recristalización final (DCM / acetato de etilo), se obtuvieron 215 mg (0,47 mmol; rendimiento: 78%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 9,68 (s, 1 H), 8,08 (s, 1 H), 7,86 (m, 2H), 7,70 (m, 2H), 6,07 (d, 1 H), 4,82 (s, 1 H), 4,05 (m, 1 H), 3,93 (s, 1 H), 2,55 (m, 1 H), 1 ,15 (m, 6H), 1 ,10 (m, 3H), 1 ,03 (m, 1 H), 0,83 (m, 3H).
Columna: Chiralpak AD-H 5µ 150x4,6 mm Eluyentes : Hexano / etanol 80,20 Velocidad de Flujo: 1 ,0 mL/min Detección: PDA 280 nm Temperatura: 25°C Tiempo de retención: 1 1 ,64 min V12 = sustancia comparativa 5-Br en ejemplo 12 La sustancia comparativa en ejemplo 12 se preparó de acuerdo con ejemplo 1 ,52 en WO 2005/037800. Ejemplo 1.52 tiene una eficacia in vitro más alta que ejemplo 1.53.
V13 = sustancia comparativa 5-Br en ejemplo 13 La sustancia comparativa en ejemplo 13 se preparó de acuerdo con ejemplo 3,13 en WO 2005/037800. Ejemplo 3.13 tiene una eficacia in vitro más alta que ejemplo 3.12.
V14 = sustancia comparativa 5-Br en ejemplo 14 V14a) Preparación del intermediario Se agregó 1 ,5 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano a 845 mg (3,00 mmol) de (2R,3R)-3-(5-bromo-2-cloro-pirimidin-4-iloxi)-butan-2-ol (preparación de acuerdo a: WO 2005 / 037800, p. 93) y 877 mg (3,00 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(trifluoroace- til)sulfox¡m¡da en 13,1 mi acetonitrilo y se agitó por 5 horas a 80°C. Se agregó otros 422 mg (1 ,50 mmol) de (2 ,3R)-3-(5-bromo-2-cloro-pirimidin-4-iloxi)-butan-2-ol a la mezcla y se agitó adicionalmente a 80°C. Luego de 3 horas, se agregó nuevamente 0,75 mi de solución 4N de cloruro de hidrógeno en dioxano y se agitó adicionalmente e 80°C. Luego de 33 horas, se agregó nuevamente 175 mg (0,60 mmol) de (RS)-S-(4-aminofenil)-S-ciclopropil-N-(tri-fluoroacetil)sulfoximida y se agitó finalmente por 18 horas a 80°C.
Luego de enfriar, la mezcla se concentró mediante evaporación y el residuo remanente se purificó mediante cromatografía (DCM / EtOH 9:1). Se obtuvieron 740 mg (1 ,38 mmol, rendimiento: 46%) del producto. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,31 (s, 1 H), 8,44 (s, 1 H), 8,01 (m, 2H), 7,84 (m, 2H), 5,19 (m, 1 H), 4,88 (d, 1 H), 3,81 (m, 1H), 3,31 (m, 1 H), 1 ,40 (m, 1 H), 1,29 (m, 4H), 1 ,08 (m, 5H).
V14b) Preparación del producto final Se agregó 950 mg (6,84 mmol) de carbonato de potasio a 735 mg (1 ,37 mmol) del intermediario en 29 mi de metanol y se agitó por 1 ,5 horas a temperatura ambiente. Se diluyó con solución saturada de cloruro de sodio y se extrajo con acetato de etilo (3x). Las fases orgánicas combinadas se secaron (Na2S04), se filtró y se concentró mediante evaporación. Se obtuvieron 607 mg (1 ,37 mmol) del producto crudo. 1H-NMR (400 MHz, DMSO): d = 10,08 (s, 1 H), 8,40 (s, 1 H), 7,86 (m, 2H), 7,75 (m, 2H), 5,19 (m, 1 H), 4,87 (d, 1 H), 3,97 (s, 1 H), 3,82 (m, 1 H), 2,56 (m, 1 H), 1 ,25 (d, 3H), 1,09 (d, 3H), 1 ,05 (m, 1 H), 0,86 (m, 3H).
La mezcla de diastereómeros se separó en los estereoisómeros puros mediante HPLC preparativa: Columna: Chiralpak IC 5µ 250x20 mm Eluyentes : Hexano / etanol 7:3 Velocidad de Flujo: 20,0 mL/min.
Detector: UV 280 nm Temperatura: Temperatura ambiente Tiempo de retención: 9,6-11 ,2 min; estereoisómero 1 11,3-14,9 min; estereoisómero 2 El Estereoisómero 2 mostró mayor eficacia in vitro que el estereoisómero 1 y por lo tanto se lo usó como sustancia comparativa en ejemplo 14.
Ejemplo 10 10.1 Ensayo 1 : Ensayo con CDK1/CycB-quinasa Las proteínas de fusión recombinantes CDK1 y CycB-GST, purificadas a partir de células de insecto (Sf9) infectadas con baculovirus, se obtuvieron de ProQinase GmbH, Freiburg. La histona IMS usada como sustrato de quinasa está disponible comercialmente de la empresa Sigma.
La proteína CDK1/CycB (200 ng/punto de medición) se incubó durante 10 min a 22°C en la presencia de distintas concentraciones de sustancias de prueba (0 µ? y dentro del rango 0,01 -100 µ?) en solución amortiguadora de ensayo [Tris/HCI 50 mM, pH 8,0, MgCI2 10 mM, orto-vanadato de Na 0, 1 mM, ditiotreitol 1 ,0 mM, adenosina trifosfato (ATP) 0,5 µ?, 10 µg/punto de medición de histona MIS, 33P-gamma ATP 0,2 µ??/????? de medición, NP40 0,05%, dimetilsulfóxido 1 ,25%]. La reacción se detuvo por adición de una solución de EDTA (250 mM, pH 8,0, 15 µ?/punto de medición).
Se aplicaron 15 µ? de cada mezcla de reacción a tiras de filtro P30 (de Wallac), y el 33P- ATP no incorporado se removió lavando las tiras de filtro tres veces, durante 10 min cada vez, en ácido fosfórico 0,5%. Después de secar las tiras de filtro durante 1 hora a 70°C, las tiras de filtro se cubrieron con tiras para centelleo (MeltiLex™ A, de Wallac) y llevaron a horno durante 1 hora a 90°C. La cantidad de 33P incorporado (fosforilación del sustrato) se determinó por medición de centelleo con un instrumento para la medición de radiación gamma (Wallac). Los datos de la medición se normalizaron al 0% de inhibición (reacción de enzima sin inhibidor) y 100% de inhibición (todos los componentes del ensayo excepto la enzima). Los valores de IC50 se determinaron por medio de un ajuste de 4 parámetros usando el software de la empresa. 10.2 Ensayo 2: Ensayo con CDK2/CycE quinasa Las proteínas de fusión recombinantes CDK2 y CycE-GST, purificadas a partir de células de insecto (Sf9) infectadas con baculovirus, se obtuvieron de ProQinase GmbH, Freiburg. La histona IMS, usada como sustrato de quinasa, se obtuvo de la empresa Sigma.
La proteína CDK2/CycE (50 ng/punto de medición) se incubó durante 10 min a 22°C en la presencia de distintas concentraciones de sustancias de prueba (0 µ? y dentro del rango 0,01 -100 µ ) en solución amortiguadora de ensayo [Tris/HCI 50 mM, pH 8,0, MgCI2 10 mM, orto-vanadato de Na 0, 1 mM, ditiotreitol 1 ,0 mM, adenosina trifosfato (ATP) 0,5 µ?, histona IIIS 10 g/punto de medición, 33P-gamma ATP 0,2 Ci/punto de medición, NP40 0,05%, dimetiisulfóxido 1 ,25%]. La reacción se detuvo por adición de una solución de EDTA (250 mM, pH 8,0, 15 µ?/punto de medición).
Se aplicaron 15 µ? de cada mezcla de reacción sobre tiras de filtro P30 (de Wallac), y el 33P-ATP no incorporado se removió lavando las tiras de filtro tres veces, durante 10 min cada vez, en ácido fosfórico 0,5%. Después de secar las tiras de filtro durante 1 hora a 70°C, las tiras de filtro se cubrieron con tiras para centelleo (MeltiLex™ A, de Wallac) y llevaron a horno durante 1 hora a 90°C. La cantidad de 33P incorporado (fosforilación del sustrato) se determinó por medición de centelleo con un instrumento para la medición de radiación gamma (Wallac). Los datos de la medición se normalizaron al 0% de inhibición (reacción de enzima sin inhibidor) y 100% de inhibición (todos los componentes del ensayo excepto la enzima). Los valores de IC50 se determinaron por medio de un ajuste de 4 parámetros usando el software de la empresa. 10.3 Ensayo 3: Ensayo con la quinasa del receptor-2 VEGF La tirosina quinasa-2 del receptor de VEGF recombinante se purificó como una protefna de fusión GST a partir de células de insecto (Sf9) infectadas por baculovirus. La poli-(Glu4Tyr), usada como sustrato de quinasa, se obtuvo de la empresa Sigma.
La proteína tirosina quinasa del receptor VEGF (90 ng/punto de medición) se incubó durante 10 min a 22°C en la presencia de distintas concentraciones de sustancias de prueba (0 µ? y dentro del rango 0,001 - 30 µ?) en 30 µ? de solución amortiguadora de ensayo [Tris/HCI 40 mM, pH 5,5, MgCI2 10 mM, MnCI2 1 mM, orto-vanadato de Na 3 mM, ditiotreitol 1 ,0 mM, adenosina trifosfato (ATP) 8 µ?, 0,96 µg/punto de medición de poli-(Glu4Tyr), 0,2 pCi/punto de medición 33P-gamma ATP, dimetiisulfóxido 1 ,4%]. La reacción se detuvo por adición de una solución de EDTA (250 mM, pH 8,0, 15 µ?/punto de medición).
Se aplicaron 15 µ? de cada mezcla de reacción a tiras de filtro P30 (de Wallac), y el 33P-ATP no incorporado se removió lavando las tiras de filtro tres veces, durante 10 min cada vez, en ácido fosfórico 0,5%. Después de secar las tiras de filtro durante 1 hora a 70°C, las tiras de filtro se cubrieron con tiras para centelleo (MeltiLex™ A, de Wallac) y llevaron a horno durante 1 hora a 90°C. La cantidad de 33P incorporado (fosforilación del sustrato) se determinó por medición de centelleo con un instrumento para la medición de radiación gamma (Wallac). Los datos de la medición se normalizaron al 0% de inhibición (reacción de enzima sin inhibidor) y 100% de inhibición (todos los componentes del ensayo excepto la enzima). Los valores de IC50 se determinaron por medio de un ajuste de 4 parámetros usando el software de la empresa. 10.4 Ensayo 4: Ensayo de proliferación Se plaquearon células de carcinoma cervical humano HeLa-MaTu cultivadas (obtenidas de EPO-GmbH, Berlín) a una densidad de 3000 células/punto de medición en una placa para multititulación de 96 cavidades en 200 µ? de medio de crecimiento (DMEM/HAMS F12, L-glutamina 2 mM, suero fetal bovino 10%). Después de 24 horas, las células de una placa (placa cero) se tiñeron con violeta cristal (véase más adelante), en tanto el medio en las otras placas fue reemplazado por medio de cultivo fresco (200 µ?) al cual se habían agregado las sustancias de prueba a diversas concentraciones (0 µ?, y en el rango entre 0,01 n - 30 µ?; la concentración final del solvente dimetilsulfóxido era del 0,5%). Las células se incubaron durante 4 días en presencia de las sustancias de prueba. La proliferación celular se determinó por coloración de las células con violeta cristal: las células se fijaron por adición de 20 µ?/punto de medición de una solución de glutaraldehído 11 % durante 15 min a temperatura ambiente. Después de lavar las células fijadas tres veces con agua, las placas se secaron a temperatura ambiente. Las células se tiñeron por adición de 100 µ?/punto de medición de una solución de violeta cristal 0,1 % (el pH se ajustó en 3 por adición de ácido acético). Después de lavar las células teñidas tres veces con agua, las placas se secaron a temperatura ambiente. El colorante se disolvió por adición de 100 µ?/punto de medición de una solución de ácido acético 10%. La extinción se determinó por fotometría a una longitud de onda de 595 nm. Se calculó el porcentaje de cambio en el crecimiento celular normalizando los valores medidos con respecto a los valores de extinción de la placa del punto cero (= 0%) y la extinción de las células no tratadas (0 pm) (= 100%). Los datos medidos se normalizaron al 0% de inhibición (proliferación celular sin inhibidor) y 100% de inhibición (placa cero). Los valores de IC50 se determinaron por medio de un ajuste de 4 parámetros usando el software de la empresa. 10.5 Resultados de los ensayos con enzima y de proliferación Tabla 1 CDK1/CycB CDK2/CycE VEGF-R2 HeLa-MaTu Ejemplo (Ensayo 1 ) (Ensayo 2) (Ensayo 3) (Ensayo 4) Concentración para el 50% de inhibición de actividad enzimática o proliferación celular, IC50 [nM] 1 -SI-1 9 7 114 13 1-SI-2 7 9 163 11 2-SI-1 5 6 84 12 2-SI-2 4 5 281 8 3 13 10 70 4-SI-1 6 6 46 10 4-SI-2 5-SI-1 25 8 70 22 5-SI-2 9 8 82 10 6-SI-1 10 5 73 16 6-SI-2 5 5 71 10 7-SI-1 24 4 143 27 7-SI-2 7 5 136 10 8-SI-1 11 6 116 14 8-SI-2 3 4 81 10 9-SI-1 4 5 158 20 9-SI-2 17 3 154 21 V11 8 7 59 13 V12 3 3 32 13 V13 3 4 140 9 V14 4 7 91 10 Los resultados de los ensayos con enzima y de proliferación no muestran ninguna superioridad sistemática de los compuestos de acuerdo con la invención con relación a los compuestos de la técnica anterior.
Comparación in vivo Se investigó la eficacia in vivo del ejemplo 5-SI-2 en el ejemplo 11 con V11 a efectos comparativos.
Se investigó la eficacia in vivo del ejemplo 6-SI-2 en el ejemplo 12 con el ejemplo 1.52 de WO 2005/037800 (= sustancia comparativa V12) a efectos comparativos.
Se investigó la eficacia in vivo del ejemplo 2-SI-2 en el ejemplo 13 con el ejemplo 3.13 de WO 2005/037800 (= sustancia comparativa V13) a efectos comparativos.
Se investigó la eficacia in vivo del ejemplo 1-SI-2 en el ejemplo 14 con V14 a efectos comparativos.
Ejemplo 11 Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzara un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG400/60% de agua) Grupo 2: estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 5 (= ejemplo 5-SI-2, 5 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11 , 12) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con el ejemplo 5-SI-2. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El ejemplo 5-SI-2 se disolvió por completo en el solubilizante compuesto por 40% de polietilenglicol (PEG) 400 / 60% de agua hasta una concentración final de 0,5 mg/ml. El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 4 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 17 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 1 ) muestran que el ejemplo 5-SI-2 a la dosificación elegida de 5 mg/kg por vía oral en un régimen de tratamiento cíclico (tratamiento 2 días sucesivos 2x por día seguido por 5 días sin tratamiento) inhibió en gran medida el crecimiento tumoral (grupo 3, reducción del peso tumoral al final del estudio hasta un 7% con respecto al grupo control, p<0,05).
Sustancia comparativa 5-Br (= V11 ) Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas N RI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzara un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (30% de HP CD/70% de agua) Grupo 2: Compuesto de acuerdo con WO 2005/037800 preparado de acuerdo con la preparación V1 1 divulgado previamente (8 mg/kg, por vía oral, 2x por día los días 4, 5, 11 , 12) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con la sustancia comparativa 5-Br, V1 1. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xe-noinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El compuesto V11 se disolvió por completo en el solubilizante de 30% de ß-hidroxipropil-ciclodextrina (HPpCD)/70% de agua hasta una concentración final de 0,8 mg/ml. El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 4 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 17 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 2) muestran que V11 , a la dosificación elegida de 8 mg/kg por vía oral 2x por día 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, inhibió el crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (grupo 2, reducción de peso tumoral al final del estudio hasta un 39% con respecto al grupo control, p<0,05).
Conclusión El estereoisómero 2 del ejemplo 5 (ejemplo 5-SI-2 (5-CF3)) permite lograr, en el régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día con una dosis de 5 mg/kg, dos días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, una inhibición completa del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,07). En el correspondiente régimen de tratamiento cíclico, bien tolerado, a una dosis de 8 mg/kg, la sustancia comparativa 5-Br (= V11 ) solamente permite lograr un retardo del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,39). Sorprendentemente, en com-paración con V11 (5-Br), el ejemplo 5-SI-2 (5-CF3) muestra una mayor potencia (dosis de 5 mg/kg para el ejemplo 5-SI-2 en comparación con 8 mg/kg para V11) y una eficacia antitumoral mucho mejor (inhibición completa del crecimiento tumoral con una T/C = 0,07 para el ejemplo 5-SI-2 en comparación con un retardo del crecimiento tumoral con una T/C = 0,39 para V11 ).
Ejemplo 12 Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzara un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 6 (= ejemplo 6-SI- 2) (3 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11, 12, 17, 18) Grupo 3: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 6 (= ejemplo 6-SI- 2) (4 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11, 12, 17, 18) Grupo 4: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 6 (= ejemplo 6-SI- 2) (5 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11 , 12, 17, 18) El estudio se diseñó para determinar la- respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con el ejemplo 6-SI-2. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El ejemplo 6-SI-2 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,3 mg/ml (grupo 2), 0,4 mg/ml (grupo 3) o 0,5 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 4 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 20 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 3) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el ejemplo 6-SI-2 proporcionó una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido casi por completo y se logra una reducción del peso tumoral al final del estudio del 8% con respecto al grupo control (T/C = 0,08, p<0,05).
Sustancia comparativa 5-Br (= V12) Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzaba un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 1.52 de WO 2005/037800 (= V12) (7 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11 , 12, 17, 18, 23, 24) Grupo 3: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 1.52 de WO 2005/037800 (= V12) (8,5 mg/kg, oral, 2x por día los d(as 4, 5, 11 , 12, 17, 18, 23, 24) Grupo 4: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 1.52 de WO 2005/037800 (= V12) (10 mg/kg, oral, 2x por día los días 4, 5, 11 , 12, 17, 18, 23, 24) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con la sustancia comparativa 5-Br, V12. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El compuesto V12 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,7 mg/ml (grupo 2), 0,85 mg/ml (grupo 3) o 1 ,0 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 4 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 28 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 150 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 4) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el compuesto V12 proporcionó una inhibición del crecimiento tumoral débil dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido aproximadamente a la mitad en comparación con el grupo control (T/C = 0,51 ).
Conclusión: En el régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día con una dosis de 5 mg/kg, dos días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el estereoisómero 2 del ejemplo 6 (ejemplo 6-SI-2 (5-CF3)) permite una inhibición casi completa del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,08). En el correspondiente régimen de tratamiento cíclico, bien tolerado, a una dosis de 10 mg/kg, el compuesto de acuerdo con el ejemplo 1.52 de WO 2005/037800 (= V12 (5-Br)) solamente permite lograr un retardo del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,51). Sorprendentemente, en comparación con V12 (5-Br), el ejemplo 6-SI-2 (5-CF3) mostró una mayor potencia (dosis de 5 mg/kg para el ejemplo 6- SI-2 en comparación con 10 mg/kg para V12) y una eficacia antitumoral mucho mejor (inhibición completa del crecimiento tumoral con una T/C = 0,08 para el ejemplo 6-SI-2 en comparación con un retarde del crecimiento tumoral con una T/C = 0,51 para V12).
Ejemplo 13 Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzaba un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1: Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 2 (= ejemplo 2-SI- 2) (1 ,5 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 3: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 2 (= ejemplo 2-SI-2) (2,0 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 4: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 2 (= ejemplo 2-SI- 2) (2,5 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con el ejemplo 2-SI-2. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El ejemplo 2-SI-2 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,15 mg/ml (grupo 2), 0,2 mg/ml (grupo 3) o 0,25 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 5 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 20 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 5) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el ejemplo 2-SI-2 produjo una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (2,5 mg/kg, grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido casi por completo y hay una reducción del peso tumoral al final del estudio del 18% con respecto al grupo control (T/C = 0,08, p<0,05).
Sustancia comparativa 5-Br (= V13) Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzaba un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1: Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 3,13 de WO 2005/037800 (= V13) (6 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 3: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 3,13 de WO 2005/037800 (= V13) (8 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 4: Compuesto de acuerdo con el ejemplo 3,13 de WO 2005/037800 (= V13) (10 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con la sustancia comparativa 5-Br, V13. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El compuesto V13 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,6 mg/ml (grupo 2), 0,8 mg/ml (grupo 3) o 1,0 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 5 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 20 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 6) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el compuesto V13 produjo una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (10 mg/kg, grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido muy marcadamente y se logra una reducción del peso tumoral al final del estudio del 23% con respecto al grupo control (T/C = 0,23, p<0,05).
Conclusión: En el régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día con una dosis de 2,5 mg/kg, dos días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el estereoisómero 2 del ejemplo 2 (ejemplo 2-SI-2 (5-CF3)) permitió una inhibición casi completa del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,18). En el correspondiente régimen de tratamiento cíclico, bien tolerado, a una dosis de 10 mg/kg, el compuesto de acuerdo con el ejemplo 3,13 de WO 2005/037800 (= V12 (5-Br)) solamente permite lograr un retardo ligeramente menor del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,23). Sorprendentemente, en comparación con V13 (5-Br), el ejemplo 2-SI-2 (5-CF3) mostró una potencia mucho más alta (dosis de 2,5 mg/kg para el ejemplo 2-SI-2 en comparación con 10 mg/kg para V13) y una eficacia antitumoral algo mejor (inhibición del crecimiento tumoral con una T/C = 0,18 para el ejemplo 2-SI-2 en comparación con la inhibición del crecimiento tumoral con una T/C = 0,23 para V13).
Ejemplo 14 Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumo-res en uno de los grupos alcanzaba un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 1 (= ejemplo 1-SI- 2) (1 ,5 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 3: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 1 (= ejemplo 1-SI- 2) (2,0 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 4: Estereoisómero 2 preparado de acuerdo con el ejemplo 1 (= ejemplo 1-SI- 2) (2,5 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con el ejemplo 1-SI-2. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El ejemplo 1-SI-2 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,15 mg/ml (grupo 2), 0,2 mg/ml (grupo 3) o 0,25 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 5 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 20 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 7) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el ejemplo 1-SI-2 produjo una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (2,5 mg/kg, grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido casi por completo y se logra una reducción del peso tumoral al final del estudio del 19% con respecto al grupo control (TIC = 0,19, p<0,05).
Sustancia comparativa 5-Br (= V14) Se implantaron células de carcinoma cervical HeLa-MaTu humano (EPO-GmbH, Berlín), que se cultivaron en cultivo celular, por vía subcutánea en el flanco de ratones hembra desnudas NMRI. El tratamiento comenzó tan pronto como los tumores hubieran crecido hasta alcanzar un tamaño de aproximadamente 20 mm2. El estudio se terminó tan pronto como los tumores en uno de los grupos alcanzaba un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Se usaron los siguientes grupos de prueba: Grupo 1 : Control, tratamiento con solubilizante (40% de PEG 400/60% de agua) Grupo 2: Compuesto de acuerdo con WO 2005/037800 preparado de acuerdo con la preparación V14 divulgada antes (6 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 3: Compuesto de acuerdo con WO 2005/037800 preparado de acuerdo con la preparación V14 divulgada antes (8 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) Grupo 4: Compuesto de acuerdo con WO 2005/037800 preparado de acuerdo con la preparación V14 divulgada antes (10 mg/kg, oral, 2x por día los días 5, 6, 12, 13, 19, 20) El estudio se diseñó para determinar la respuesta inicial de un modelo de xenoinjerto de carcinoma cervical humano a los tratamientos con la sustancia comparativa 5-Br, V14. El efecto inhibidor del crecimiento de los compuestos se evaluó en el modelo de tumor cervical HeLa-MaTu como un xenoinjerto sobre ratones desnudos NMRI. El compuesto V14 se disolvió por completo en el solubilizante de 40% de polietilenglicol 400 (PEG 400) / 60% de agua hasta una concentración final de 0,6 mg/ml (grupo 2), 0,8 mg/ml (grupo 3) o 1,0 mg/ml (grupo 4). El tratamiento de los tumores establecidos comenzó el día 5 después de la inoculación de los tumores. El estudio se terminó el día 20 después que el tamaño de los tumores en los animales en el grupo 1 (control) habían excedido un tamaño de aproximadamente 160 mm2.
Los resultados de los estudios (Fig. 8) muestran que en un régimen de tratamiento que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día, 2 días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el compuesto V14 produjo una inhibición del crecimiento tumoral dependiente de la dosis en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu. En el grupo de la dosis más alta (10 mg/kg, grupo 4), el crecimiento tumoral es inhibido débilmente y se logra una reducción del peso tumoral al final del estudio del 44% con respecto al grupo control (T/C = 0,44, no se obtuvo significancia estadística).
Conclusión: En el régimen de tratamiento cíclico que consiste de dos aplicaciones por vía oral por día con una dosis de 2,5 mg/kg, dos días sucesivos seguido por 5 días sin tratamiento, el estereoisómero 2 del ejemplo 1 (ejemplo 1-SI-2 (5-CF3)) permitió una inhibición casi completa del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C = 0,19). En el correspondiente régimen de tratamiento cíclico, bien tolerado, a una dosis de 10 mg/kg, el compuesto 5Br de acuerdo con WO 2005/037800 (= V14 (5-Br)) mostró una inhibición débil del crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de HeLa-MaTu (relación de tratamiento/control T/C=0,44). Sorprendentemente, en comparación con V14 (5-Br), el ejemplo 1 -SI-2 (5-CF3) mostró una potencia mucho más alta (dosis de 2,5 mg/kg para el ejemplo 1-SI-2 en comparación con 10 mg/kg para V14) y una eficacia antitumoral muy superior (inhibición del crecimiento tumoral con una T/C = 0, 19 para el ejemplo 1-SI-2 en comparación con la inhibición del crecimiento tumoral con una T/C = 0,44 para V14).

Claims (13)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de la fórmula general (I) en donde X representa -O- o -NH- y R1 representa un grupo metilo, etilo, propilo o isopropilo, y R2 y R3 representa^ de manera independiente entre sí, hidrógeno, un grupo metilo o un grupo etilo, y R4 representa un grupo CrCe-alquilo o un anillo C3-C7-cicloalquilo, y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
2. Los compuestos de la reivindicación 1 , en donde X representa -O-.y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
3. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 ó 2, en donde R1 representa un grupo metilo.y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
4. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 a 3, en donde R2 representa un grupo metilo, y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
5. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 a 4, en donde R3 representa hidrógeno o un grupo metilo.y sales, diastereómeros y enan-tiómeros de los mismos.
6. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 a 5, en donde R4 representa un grupo metilo o. etilo o un anillo ciclopropilo.y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
7. Los compuestos de fórmula general (I) de la reivindicación 1, en donde X representa -O- o -N H- y R1 representa un grupo metilo y R2 representa un grupo metilo y R3 representa hidrógeno o un grupo metilo y R4 representa un grupo metilo o etilo o un anillo ciclopropilo, y sales, diastereómeros y enantiómeros de los mismos.
8. Un método de producción de los compuestos de la fórmula general (la), que comprende al menos uno de los pasos a)-h) a) oxidación de un compuesto de la Fórmula (IVd) en el sulfóxido de la Fórmula (IVc) iminación directa del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina protegida de la Fórmula (IVa) b2) iminación del sulfóxido de la Fórmula (IVc) en una sulfoximina no protegida de la Fórmula (IVb) y la subsiguiente introducción del grupo protector en un compuesto de la Fórmula (IVa) reducción del compuesto de la Fórmula (IVa) en un compuesto de la Fórmula (IV) funcionalización de la posición 4 de 2,4-dicloro-5-iodo-pirimidina (VII) mediante reacción con un diol mono-protegido de la Fórmula (VI) con formación de un intermediario de la Fórmula (Va) (VII) (Va) producción del intermediario 5-CF3 (V) (Va) (V) acoplamiento de los compuestos de la Fórmula (IV) y (V) para formar el intermediario de la Fórmula (III) clivaje del grupo protector PG con formación de (II) (III) O") clivaje del grupo protector sobre la sulfoximina con formación de (la) en donde los sustituyentes R1, R2, R3 y R4 tienen los valores que se indican en la fórmula general (I) de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Un método de producción de los compuestos de la fórmula general (Ib) que comprende al menos uno de los pasos a)-f) a) oxidación de un compuesto de la Fórmula (IVd) en el sulfóxido de la Fórmula (IVc) b,) iminación directa del sulfóxido de la Fórmula (IVc) para formar una sulfoximina protegida de la Fórmula (IVa) b2) iminación del sulfóxido de la Fórmula (IVc) para formar una sulfoximina no protegida de la Fórmula (IVb) y la subsiguiente introducción del grupo protector en un compuesto de la Fórmula (IVa) c) reducción del compuesto de la Fórmula (IVa) en un compuesto de la Fórmula (IV) funcionalización de la posición 4 de 2,4-dicloro-5-trifluorometil-pirimidina (Vllb) mediante reacción con una amina de la Fórmula (Vía) con formación de un intermediario de la Fórmula (Vb) (Vllb) (Vb) (Ve) e) acoplamiento de los compuestos de la Fórmula (Vb) y (IV) para formar el intermediario de la Fórmula (llb) (Vb) (IV) (llb) clivaje del grupo protector sobre la sulfoximina con formación de (Ib) (llb) (Ib) en donde los sustituyentes R1, R2, R3 y R4 tienen los valores que se indican en la fórmula general (I) de las reivindicaciones 1 a 7.
10. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso como productos medicinales.
11. Uso de un compuesto reivindicado en una de las reivindicaciones 1 a 7 para la producción de un producto medicinal para el tratamiento de cáncer.
12. Los compuestos reivindicados en una de las reivindicaciones 1 a 7 para usar como productos medicinales contra el cáncer.
13. Una formulación farmacéutica que contiene un compuesto reivindicado en una de las reivindicaciones 1 a 7.
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