KR930702373A

KR930702373A - 합성 올리고누클레오티드에 대한 다중 리포터(Reporter)그룹의 첨합

Info

Publication number: KR930702373A
Application number: KR1019930701387A
Authority: KR
Inventors: 서더 어그래월; 지년 탱
Original assignee: 안토니 제이. 페이네; 하이브리돈, 아이엔씨.
Priority date: 1990-11-08
Filing date: 1991-11-08
Publication date: 1993-09-08
Also published as: US5510475A; JPH06501485A; EP0556301B1; EP0556301A1; ATE198598T1; JP3172178B2; WO1992008728A1; CA2095212A1; DE69132510D1; DE69132510T2

Abstract

본원은 검출 분석용으로 서로 엄밀한 간격으로 부착된 단일 또는 다중 리포터 그룹을 갖는 올리고누클레오티드 합성 방법 및 시약을 제공함과 동시에 간격 조절 부착된 단일 또는 다중 리포터 그룹을 갖는 올리고누클레오티드를 제공한다.

(D)CF₃CONH(CH₂)₆NH₂/CCl₄(b) 수성 암모니아

Description

합성 올리고누클레오티드에 대한 다중 리포터(Reporter)그룹의 첨합

본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음

제1도는 요구된 배역순서대로 제조된 후, 링커 분자와 H-포스포네이트 화학을 사용하여, 실시예 1에서 설명된 대로 결합된다. 그리고 나서 CF₃CONH(CH₂)₆NH₂로 산화 반응이 일어나고, 암모니아에서 탈 보호가 수반된다. 제2도는 (a)조적 17-mer; (b)L(pN)-17-mer; (c)biotinylated L(pN)-17mer; (d) L(pN)L(pN)L(pN) -17mer; 그리고 (e) biotinylatedd L(pN)L(pN)L(pN) -17-mer. 의 역상 HPLC 분석.

[L=헥산디올; (pN)=6-아미노헥실 포스포라미테이트], HPLC는 (A) 0%아세토니트릴 및 (B)80%아세토니트릴을 함유한 0.1M 암모늄 아세테이트 버퍼와 Novapak C₁₈을 사용하였다. 농도 기울기는 2분간 B에 대해 0%: 2분간 0-30% B및 10분간 30-100% B; 유속 1.5㎖/분.

Claims

(a)H-포스포네이트 결합 사이클에 의해 보호 포스포네이트 링커와 지지체 결합 올리고누클레오티드를 결합시키는 단계; (b) 요구된 아미노 그룹의 수에 따라 (a)단계의 결합을 반복하는 단계; (c)지지체 결합 올리고누클레오티드를 보호 디아미노 링커로 산화시켜 보호 아미노 작용기를 가진 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; (d)올리고누클레오티드를 탈보호시켜 5'기능화 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; 및 (e) 5'기능화 올리고누클레오티드를 리포터 분자와 결합시켜 5'말단 다중 라벨 올리고 누클레오티드를 수득하는 단계로 구성된 일정 누클레오티드 배열의, 5'말단 단일 또는 다중 라벨 합성 올리고 디옥시 누클레오티드 제조방법.
제1항의 방법으로 제조된 단일 또는 다중 라벨 올리고누클레오티드.
다음과 같은 구조적 특징을 갖는, 한 말단이 리포터 그룹으로 단일 또는 다중 라벨된 올리고누클레오티드;
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는 화학변형된 유사 결합, X는 리포터 그룹 n은 1-20, a는 1-20, b는 1-20, c는 1-20, z는 0-20, t는 1-100, 및 [괄호]안 각 반복단위의 "a"는 다른 모든 반복 단위의 "a"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "b"는 다른 모든 반복 단위의 "b"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
(a)유리 포스포네이트 링커의 유리 하이드록실을 통해 유리 포스포네이트 링커를 지지체에 결합시킴으로써 결합된 포스포네이트 링커를 수득하는 단계; (b)H-포스포네이트 결합 사이클을 사용하여, 최소한 1개 이상의 포스포네이트 링커를 결합된 포스포네이트에 결합시킴으로써 결합된 포스포네이트 링커를 수득하는 단계: (c)보호 디아미노 라이커로 결합 포스포네이트 링커를 산화시켜 다중 보호 아미노 작용기를 가진 결합 반복 구조를 수득하는 단계; (d) 결합된 반복 구조에 부착된 올리고누클레오티드를 합성하여 보호3'기능화 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; (e)아미노 작용기를 탈보호시켜 3'기능화 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; 및 (f) 3'기능화 올리고누클레오티드를 리포터 분자와 결합시켜 3'말단 라벨 올리고노클레오티드를 수득하는 단계로 구성된 일정 누클레오티드 배열의. 3'말단 다중 라벨 합성 올리고누클레오티드 제조방법.
제4항의 방법으로 제조된 단일 또는 다중 라벨 올리고누클레오티드.
다음과 같은 구조적 특징을 갖는, 3'말단이 단일 또는 다중 라벨된 올리고누클레오티드;
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는화학변형된 유사 결합, X는 리포터 그룹 n은 1-20, a는 1-20, b는 1-20, c는 1-20, z는 0-20, 그리고 [괄호]안 각 반복단위의 "a"는 다른 모든 반복된위의 "a"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "b"는 다른 모든 반복 단위의 "b"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
(a)H-포스포네이트 결합 사이클에 의해 보호 포스포네이트 링커와 지지체 결합 올리고누클레오티드를 결합시키는 단계; (b) 요구된 아미노 그룹의 수에 따라 (a)단계의 결합을 반복하는 단계; (c)지지체 결합 올리고누클레오티드를 보호 디아미노 링커로 산화시켜 보호 아미노 작용기를 가진 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; (d) 포스포네이트 링커의 유리 말단에서 올리고누클레오티드 합성을 계속하는 단계; (e)올리고누클레오티드를 탈보호시켜 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분-결합 기능화 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; 그리고 (f) 인터누클레오티드포스포디에스테르 성분-결합 기능화 올리고누클레오티드를 리포터 분자와 결합시켜 1개 이상의 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분에 부착된 다중 라벨을 갖는 합성 올리고누클레오티드를 수득하는 단계로 구성된 일정 누클레오티드 배열의, 1개 이상의 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분 부착 라벨을 갖는 합성 올리고누클레오티드 제조방법.
제7항의 방법으로 제조된, 1개 이상의 포스포디에스테르 성분에 부착된 라벨을 갖는 올리고누클레오티드.
다음과 같은 구조식을 갖는, 1개 이상의 포스포디에스테르 성분에 부착된 라벨을 갖는 올리고누클레오티드 :
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는 화학변형된 유사 결합, X는 리포터 그룹 a는 1-100, b는 1-100, c는 1-20, d는 0-20, e는 1-20, f는 0-20 그리고 [괄호]안 각 반복단위의 "c"는 다른 모든 반복 단위의 "c"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "d"는 다른 모든 반복 단위의 "d"로 표시된 수와 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "e"는 다른 모든 반복 단위의 "e"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
구조식이 다음과 같은 보호 포스포네이트 링커.
식중, DMTr는 산-불안정 보호그룹, 그리고n은 1-20.
구조식이 다음과 같은 보호 디아미노 링커.
식중, R은 염기-불안정 그룹, 그리고n은 1-20
(a)H-포스포네이트 결합 사이클에 의해 보호 포스포네이트 링커와 지지체 결합 올리고누클레오티드를 결합시키는 단계; (b) 요구된 아미노 그룹의 수에 따라 (a)단계의 결합을 반복하는 단계; (c)지지체 결합 올리고누클레오티드를 보호 디아미노 링커로 산화시켜 보호 아미노 작용기를 가진 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; (d) 올리고누클레오티드를 탈보호시켜 5'기능화 올리고누클레오티드를 수득하는 단계로 구성된 5'기능화 올리고누클레오티드 제조방법.
제1항의 방법으로 단일 또는 다중 라벨 올리고누클레오티드.
다음과 같은 구조적 특징을 갖는, 5'기능화 올리고누클레오티드.
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는 화학변형된 유사 결합, X는 리포터 그룹 n은 1-20, a는 1-20, b는 1-20, c는 1-20, z는 0-20, t는 1-100, 및 [괄호]안 각 반복단위의 "a"는 다른 모든 반복된위의 "a"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "b"는 다른 모든 반복 단위의 "b"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
(a)유리 포스포네이트 링커의 유리 하이드록실을 통해 유리 포스포네이트 링커를 지지체에 결합시킴으로써 결합된 포스포네이트 링커를 수득하는 단계; (b)H-포스포네이트 결합 사이클을 사용하여, 최소한 1개 이상의 포스포네이트 링커를 결합된 포스포네이트에 결합시킴으로써 결합된 포스포네이트 링커를 수득하는 단계: (c)보호 디아미노 링커로 결합 포스포네이트 링커를 산화시켜 다중 보호 아미노 작용기를 가진 결합 반복 구조를 수득하는 단계; (d) 결합된 반복 구조에 부착된 올리고누클레오티드를 합성하여 보호3'기능화 올리고누클레오티드 제조방법.
제15항의 방법으로 제조된 단일 또는 다중 라벨 올리고누클레오티드.
구조식이 다음과 같은 3'기능화 올리고누클레오티드.
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는 화학변형된 유사 결합, X는 리포터 그룹 n은 1-100, a는 1-20, b는 1-20, c는 1-20, z는 0-20, 그리고 [괄호]안 각 반복단위의 "a"는 다른 모든 반복된위의 "a"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "b"는 다른 모든 반복 단위의 "b"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
(a)H-포스포네이트 결합 사이클에 의해 보호 포스포네이트 링커와 지지체 결합 올리고누클레오티드를 결합시키는 단계; (b) 요구된 아미노 그룹의 수에 따라 (a)단계의 결합을 반복하는 단계; (c)지지체 결합 올리고누클레오티드를 보호 디아미노 링커로 산화시켜 보호 아미노 작용기를 가진 올리고누클레오티드를 수득하는 단계; (d) 포스포네이트 링커의 유리 말단에서 올리고누클레오티드 합성을 계속하는 단계; (e) 올리고누클레오티드를 탈보호, 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분 -결합 기능화 올리고누클레오티드를 제조하는 단계로 구성된 인터누클레오티드포스포디에스테르 성분-결합 기능화 올리고누클레오티드 제조방법.
제16항의 방법에 의해 제조된 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분-결합 기능화 올리고누클레오티드.
구조식이 다음과 같은 인터누클레오티드 포스포디에스테르 성분-결합 기능화 올리고누클레오티드:
식중, D는 리보누클레오지드 또는 디옥시리누클레오지드, p는 포스포디에스테르 결합 또는 화학변형된 유사 결합, 및 a는 1-100, b는 1-100, c는 1-20, d는 1-20, e는 1-20, f는 0-20 그리고 [괄호]안 각 반복단위의 "c"는 다른 모든 반복 단위의 "c"로 표시된 수와, 그리고[괄호]안 각 반복단위의 "d"는 다른 모든 반복 단위의 "d"로 표시된 수와 같거나 다를 수 있음.
올리고누클레오티드 합성용으로 적합한 고체 지지체 부착 포스포네이트 링커.
반복구조 부착 올리고누클레오티드 합성용으로 적합한 포스포네이트 링커 및 디아미노 링커 구성 지지체-결합, 아미노 기능화 반복 구조.
반복구조 부착 올리고누클레오티드 합성용으로 적합한 포스포네이트 링커 및 디아미노 링커 구성 지지체-결합, 리포터 그룹 부착 라벨된 반복 구조.
※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.