JP2002515514A - オリゴヌクレオチドの局所送逹のための組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、オリゴヌクレオチド及び他のヌクレオシド部分の局所経路を介する送逹を増進する組成物及び方法に関する。好ましい組成物には、研究、治療又は予防のために、動物における皮膚及び／又は表皮組織に、そのような部分を送逹するためのリポソーム又は浸透増進剤が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本出願は、１９９８年３月２１日に出願せる米国特許出願第０９／０８２，３
３６号の一部継続出願であり、当該米国特許出願の開示は、参照することによっ
てその全体を本明細書に組み入れることとする。

【０００２】

【発明の分野】

本発明は、動物の表皮、真皮、及びその中の層に核酸を局所送達するための新
しい組成物及び方法に関する。さらに詳細には、本発明は表皮及び真皮内へのオ
リゴヌクレオチド及びその他の核酸の輸送を成し遂げるための、リポソーム及び
浸透増進剤の使用に関するものである。本発明のさらに詳細な目的及び利点は、
以下、本発明の好ましい態様の一連の説明から、当業者にとって明瞭あるいは明
白ものとなるであろう

【０００３】

【発明の背景】

バイオテクノロジー、特に分子生物学の分野における最近の進歩の結果、癌、
遺伝病、自己免疫異常及びＡＩＤＳを包含する、これまで治療が困難であった疾
病の治療にめざましい進展がなされてきている。これらの進歩の多くは、被験体
、特にヒトへ核酸分子を投与することによって達成される。投与される核酸は、
オリゴヌクレオチドであることが多い。

【０００４】 本発明は、特に、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドなどのオリゴヌクレ
オチドを包含する核酸を、動物の表皮及び真皮に投与することを含む、選択され
たタンパク質又は他の生物学的エフェクターの動物での生産を変調するための組
成物及び方法に関するものである。

【０００５】 被験体へのオリゴヌクレオチド投与の様々な態様が、種々の疾病及び／又は障
害の治療のための特定の組織又は器官へのオリゴヌクレオチドの送逹に対して有
効であることが示されてきている。例えば、Ｄｒａｐｅｒらに対して１９９７年
１月２１日に発行された米国特許第５，５９５，９７８号明細書には、哺乳動物
の眼の硝子体液に、そのウイルス感染を治療することを目的としてアンチセンス
オリゴヌクレオチドを直接送達するための手段としての硝子体内注射が開示され
ている。しかしながら今日まで、表皮及び真皮にオリゴヌクレオチドを有効に送
達する試みは実現に至っていない。

【０００６】 オリゴヌクレオチドの局所投与によって、滅菌操作の必要性や、随伴する経費
（例えば、入院、医師の費用など）なく、表皮及び真皮へ核酸をより簡単かつ容
易に、そしてより有効に送達することが約束される。かくして、動物の表皮、真
皮へ、そしてその中の選択された層へオリゴヌクレオチドを局所送達するための
組成物及び方法を提供する必要が存在しているのである。かかる新規組成物及び
方法は、治療用の核酸、特にオリゴヌクレオチドの簡単で有効かつ至便な送逹を
提供することが望ましい。

【０００７】

【発明の要旨】

本発明によれば、動物における核酸の局所送逹のための組成物及び方法が提供
される。特に、本発明は、動物における選択されたタンパク質又は他の生物学的
エフェクターの産生を変調するための組成物及び方法であって、オリゴヌクレオ
チド、特にアンチセンスオリゴヌクレオチドの局所的手段を介する動物への投与
を包含することによって、in vivo 投与の静脈内及び他の非経口様式に付随し得
る複雑さ及び出費を回避する組成物及び方法を提供する。

【０００８】 「局所投与」は、動物の皮膚（表皮）の全体又は一部分に、オリゴヌクレオチ
ドを含む製剤を直接又は別の方法で接触させることにより、核酸を動物に送達す
ることを意味する。この用語は、局所的及び経皮的投与を包含するが、それらに
限定されることはなく、様々な投与の経路を含む。これらの投与の態様に対する
共通の要件は、皮膚の透過バリアの浸透、及び標的組織又は層への効率的な送逹
である。一側面において、表皮及び真皮を浸透させ、そして最終的にオリゴヌク
レオチドの全身送逹を成し遂げる手段として局所投与が用いられる。他の側面に
おいて、動物の表皮もしくは真皮に、又はその特定の層に、選択的にオリゴヌク
レオチドを送達する手段として、局所投与が用いられる。

【０００９】 本発明の組成物は、成分の混合物又はエマルジョン（ミクロエマルジョン及び
クリームを包含する）に存在するような相、及び２以上の相を含む関連製剤であ
ってよい。一側面において、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのタイプの
複数の核酸及び少なくとも１つのタイプの複数のリポソームを含む。特定の態様
において、核酸は封入されており、すなわちリポソームの中に含有せしめられて
おり、また他の態様においては、核酸が予め形成されたリポソームと混合され、
リポソームとの、特徴的でない、おそらくは外側の配置が達成されるものであっ
て、本発明の特定の組成物は、双方のタイプの［リポソーム：核酸］配置を含ん
でいる。

【００１０】 以下に詳説するように、本発明の医薬組成物に配合される核酸は、例えば、ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、外部ガ
イド配列（ＥＧＳ；external guide sequence)、おとり分子(molecular decoy)
又はアプタマー(aptamer) であるとよい。本発明の医薬組成物のリポソーム部分
は、中性リポソーム、陰イオン性リポソーム、又は陰イオン性融合性リポソーム
(fusogenic liposome) とすることができる。好ましいリポソームは、ジミリス
トイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリス
トイルホスファチジルグリセロール、又はジオレオイルホスファチジルエタノー
ルアミンなどの１以上のリン脂質から形成される。特に好ましいリポソームは、
リン脂質、なんらかの天然源から由来したホスファチジルコリン又は合成ホスフ
ァチジルコリン分子（以下本明細書中、「ホスファチジルコリン」と総称する）
、及び、例えばコレステロールなどのステロールから形成される。一般にリポソ
ームは、動物の真皮又は表皮組織にヌクレオシド部分を送達するのに有効な量に
て存在する。

【００１１】 別の側面において、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つのヌクレオシド部
分、及び動物の真皮又は表皮組織内への当該ヌクレオシド部分の浸透を増進する
ための浸透増進剤の少なくとも１つを含む。代表的な浸透増進剤には、脂肪酸（
ミリスチン酸イソプロピルなど）、胆汁酸塩、キレート剤、界面活性剤、ならび
に非界面活性剤（不飽和環状尿素、1-アルキル- アルカノン、1-アルケニルアザ
シクロ- アルカノン、及びステロイド系抗炎症剤など）、グリコール、ピロール
、1-アシルアザシクロヘプタン-2- オン（「アゾン」）ならびにテルペンが包含
される。

【００１２】 さらに提供されるのは、動物の真皮又は表皮組織にヌクレオシド部分を送達す
るための方法であり、表皮組織に本発明の医薬組成物を適用する工程を含む。所
定の方法では、当該ヌクレオシド部分は真皮組織の細胞に優先的に送達され、ま
た他の方法においては、当該ヌクレオシド部分は表皮組織の細胞に優先的に送達
される。

【００１３】 アンチセンスクラスの薬物の局所送逹による利点のために、本発明の組成物及
び方法は、本明細書中でさらに詳細に説明するような治療方法において使用する
ことができる。本発明によって提供される組成物及び方法は、また、培養又は保
存された真皮組織にて in vitro で、及び動物において、様々なタンパク質及び
遺伝子の機能を調べるために使用してもよい。このように本発明は、ヒト以外の
動物における、動物の発生に必須のものを含めたあらゆる遺伝子の機能を調べる
ために適用することができる。本発明の方法はまた、例えば、乾癬、扁平苔癬、
中毒性表皮壊死症、多形紅斑、基底細胞癌、扁平上皮癌（有棘細胞癌）、悪性黒
色腫、パジェット病、カポジ肉腫、肺線維症、ライム病ならびに皮膚のウイルス
、真菌及び細菌感染などの疾病に罹患していることがわかっているか又は罹患の
疑いがある動物の処置のためなど、治療的又は予防的にも使用することができる
。 本発明の多くの目的及び利点は、添付の図面を参照することにより、当業者に
よってよりよく理解され得るものである。

【発明の説明】 Ｉ．概説 本発明は、動物における生物学的活性を有する、オリゴヌクレオチドなどの核
酸の局所投与に関するものである。「生物学的活性を有する」とは、その核酸が
動物において１以上の遺伝子の発現を変調するように、遺伝子の絶対機能（リボ
ザイム活性など）か、又はかかる遺伝子によってコードされるタンパク質の生産
により反映されるような機能をすることを意味する。本発明においては「変調す
る」とは、遺伝子の発現を増加（刺激）又は低下（阻害）させることのいずれか
を意味する。このような変調は、例えば、当該分野で知られる様々な機構により
アンチセンスオリゴヌクレオチドによって達成でき、それには転写阻止；ＲＮＡ
プロセッシング（キャッピング、ポリアデニル化及びスプライシング）及び輸送
に対する効果；標的核酸の細胞分解の増進又は低減；ならびに翻訳阻止が包含さ
れるが、それらに限定されるものではない（Ｃｒｏｏｋｅら、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ
．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１９９６，６：１）。

【００１４】 本発明は、核酸、特にオリゴヌクレオチドを動物の表皮及び／又は真皮に送達
し、その中での当該核酸の生物学的利用能を増大させるための方法及び組成物を
提供する。本明細書中で使用する場合、「生物学的利用能」なる用語は、その標
的に到達して作用する、投与された治療薬（この場合はオリゴヌクレオチド）の
量を称する。この用語は、たとえ薬物の最終的な作用部位が血液外、例えば細胞
内であっても、その効能が血中濃度に関連して測定されるような薬物に対して使
用される（ｖａｎ Ｂｅｒｇｅ−Ｈｅｎｅｇｏｕｗｅｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ
ｅｒｏｌｏｇｙ，１９７７，７３：３００を参照されたい）。

【００１５】 本発明の組成物及び方法は、１以上の核酸で全体又は一部分を治療し得る疾病
又は障害からの予防的、緩和的又は治療的救済を提供するために使用されてもよ
い。好ましい態様において、このような疾病又は障害は、かかる疾病又は障害を
有する動物にアンチセンスオリゴヌクレオチドを局所投与することを介して、全
体又は一部分を治療することが可能である。

【００１６】 本発明において使用される場合、別途特定しない限り「動物」とは、ヒト及び
霊長類；ニワトリ及びシチメンチョウを含む鳥類；イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、
ウシ、ウマ及びブタを含めた家庭内用、スポーツ又は家畜動物；ラット、マウス
、ウサギ及びモルモットを含めた実験動物；魚類；爬虫類；ならびに動物園の動
物を包含する哺乳動物を称するがそれらに限定されることはない。

【００１７】 本明細書中で使用する「皮膚」なる用語は、動物の表皮及び／又は真皮を意味
する。哺乳動物の皮膚は、２つの主要な、別個の層からなっている。皮膚の外層
は、表皮と称される。表皮は、角質層、顆粒層、有棘層、及び基底層を含んでな
り、角質層は皮膚の表面となっており、そして基底層は表皮の最も深い部分であ
る。表皮は、身体の位置によって、５０μｍと０．２ｍｍの間の厚みとなってい
る。 表皮の下が真皮であり、これは表皮よりもかなり厚い。真皮は主に、繊維束の
形状をとっているコラーゲンで構成されている。コラーゲン束は、とりわけ血管
、リンパ毛細管、腺、神経末端及び免疫学的活性細胞に対する支持体を築いてい
る。

【００１８】 一器官としての皮膚の主たる機能のうちの一つは、身体内への物質の侵入を変
調することである。皮膚の主要な透過バリアは角質層によって提供されており、
これは様々な分化状態にある細胞の多くの層から形成されている。角質層におけ
る細胞間の空間は、格子状体に配列された異なる脂質で満たされており、これに
よって皮膚の透過バリアをさらに増進するシールが提供される。

【００１９】 皮膚によって提供される透過バリアは、約７５０Ｄａよりも大きい分子量を有
する分子が大部分不透過であるようなものである。もっと大きい分子が皮膚の透
過バリアを通過するためには、通常の浸透圧以外の機構が用いられなければなら
ない。その結果、皮膚の透過バリアを通って表皮及び真皮にまで核酸を輸送する
ことを容易ならしめる組成物及び方法に対する必要性がある。

【００２０】 いくつかの因子が、投与される薬剤に対する皮膚の透過性を決定している。こ
れらの因子には、治療される皮膚の特徴、送達剤の特徴、薬物と送達剤及び薬物
と皮膚の双方の間の相互作用性、適用される薬物の用量、治療の形態、ならびに
治療後の養生法が包含される。表皮及び真皮へ選択的に標的化するためには、予
め選択された層への薬物の浸透に可能性を与える、１以上の浸透増進剤を含む組
成物を製剤化することが時として可能である。 生物学的活性物質の皮膚への送逹のために好ましい方法は、局所投与である。
局所投与は、薬物の局部的な送逹が、薬物組成物又は製剤の適用部位で、又はそ
のごく近傍で望まれる場合に、投与の経路として使用することができる。投与の
局所的経路の３つの一般的なタイプには、粘膜、皮膚又は眼への薬物組成物の投
与が包含される。

【００２１】 経皮的薬物送逹は、脂溶性治療薬の投与のための重要な経路である。真皮は表
皮よりも透過性が高く、従って、擦傷を受けた、火傷を負った、又は剥離された
皮膚を通じると吸収はより迅速となる。炎症及び皮膚への血流を増大させるその
他の生理的状態もまた、経皮吸収を増進する。この経路を介した吸収は、油性の
ビヒクル（塗擦剤）の使用により、又は１以上の浸透増進剤の使用を通じて増進
され得る。経皮的経路を介して薬物を送達するその他の有効な手段には、皮膚の
水和及び徐放性局所用パッチの使用が包含される。経皮的経路は、全身及び／又
は局部治療のための薬物を送達する、潜在的に有効な手段を提供する。

【００２２】 加うるに、イオントフォレシス（電場の影響下での、生物学的膜を通してのイ
オン性溶質の輸送）（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔ
ｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１
，１６３ページ）、フォノフォレシス又はソノフォレシス（生物学的膜、特に皮
膚及び角膜を通した様々な治療剤の吸収を増進する、超音波の使用）（Ｌｅｅら
、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕ
ｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，１６６ページ）、ならびに投
与の部位での沈着及び保持用量に関連したビヒクルの特徴の至適化（Ｌｅｅら、
Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ
Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，１６８ページ）が、本発明の組
成物及び方法によって薬物の粘膜部位を通した輸送を増進するための有用な方法
になり得る。

【００２３】 II．医薬組成物 本発明の医薬組成物は、液剤、エマルジョン、及びリポソーム含有製剤を包含
するが、それらに限定されることはない。これらの組成物は、予製液体、自己乳
化する固体、及び自己乳化する半固体を包含するがそれらに限定されることのな
い様々な成分から作製されるとよい。 本発明の医薬製剤は、好都合には単位投与剤形にて呈され、医薬業界でよく知
られた従来の技術に従って調製されるとよい。かかる技術には、活性成分と医薬
キャリアー（１もしくはそれ以上）又は賦形剤（１もしくはそれ以上）との会合
をもたらす工程を含む。一般に、この製剤は、活性成分と液体キャリアーもしく
は細かく分割された固体キャリアー又はその双方との均一かつ均質な会合をもた
らし、そしてその後、必要とあれば製品を成形することによって調製される。

【００２４】 本発明の組成物は、錠剤、カプセル剤、液体シロップ剤、軟質ゲル剤、坐剤、
及び浣腸剤などの多くの可能な剤形のいずれか（それらに限定されることはない
）に製剤化されてよい。本発明の組成物はまた、水性、非水性又は混合媒体中で
の懸濁液剤として製剤化されてもよい。水性懸濁液剤は、例えば、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、ソルビトール及び／又はデキストランなどを含めた
、懸濁液の粘性を増加させる物質をさらに含有してもよい。懸濁液はまた、安定
剤を含有してもよい。

【００２５】 本発明の一態様において、医薬組成物はフォーム剤として製剤化及び使用され
てもよい。医薬フォーム剤は、エマルジョン、ミクロエマルジョン、クリーム、
ゼリー及びリポソームなどの製剤を包含するがそれらに限定されることはない。
基本的に事実上類似してはいるが、これらの製剤は、成分及び最終製品の緊硬度
において異なっている。このような組成物及び製剤の調製についてのノウハウは
、医薬及び製剤技術の当業者にとって一般に知られており、そして本発明の組成
物の製剤化に適用され得る。

【００２６】 Ａ．エマルジョン 本発明の組成物は、エマルジョンとして調製及び製剤化されてもよい。エマル
ジョンは典型的には、通常直系０．１μｍを越える液滴の形状にて、他の液体中
に懸濁された一液体の異種システムである。（Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇ
ｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，１９９ページ；Ｒｏｓ
ｏｆｆ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌ
ｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第
１巻，２４５ページ；Ｂｌｏｃｋ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａ
ｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋ
ｅｒ（編），１９８８，第２巻，３３５頁；Ｈｉｇｕｃｈｉら、" Ｒｅｍｉｎｇ
ｔｏｎ′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ" ，Ｍａｃｋ
Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５，３０１ページ）。エ
マルジョンは、２つの混和不能な液相が均質に混合されそして相互に分散された
ものを含む、二相システムであることが多い。一般的にエマルジョンは、油中水
型（ｗ／ｏ）又は水中油型（ｏ／ｗ）のいずれかの種類をとり得る。水相が細か
く分割され、そして大量の油相中へ微小液滴として分散されると、その結果得ら
れる組成物は油中水型（ｗ／ｏ）エマルジョンと称される。あるいは、油相が細
かく分割され、そして大量の水相中へ微小液滴として分散されると、その結果得
られる組成物は水中油型（ｏ／ｗ）エマルジョンと称される。エマルジョンは、
分散された相、及び水相、油相又はそれ自体独立した相のいずれかにて溶液とし
て存在し得る活性薬物に加えて、付加的な成分を含有してもよい。乳化剤、安定
剤、色素、及び酸化防止剤などの医薬賦形剤もまた、必要に応じてエマルジョン
中に存在させてよい。医薬エマルジョンはまた、例えば、油中水中油型（ｏ／ｗ
／ｏ）及び水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ）エマルジョンの場合など、２相以上を含
んでなる多重エマルジョンであってもよい。このような複合製剤は、単純な二成
分エマルジョンでは果たし得ない特定の利点を提供するものである。多重エマル
ジョンで、ｏ／ｗエマルジョンの個々の油滴が小さな水滴を封入しているものが
、ｗ／ｏ／ｗエマルジョンを構成する。同様に、連続油相中に安定化された水の
小球中に封入された油滴のシステムが、ｏ／ｗ／ｏエマルジョンを提供する。

【００２７】 エマルジョンは、熱力学的安定性がわずかか、又はないことによって特徴付け
られる。多くの場合、エマルジョンの分散されたあるいは不連続な相は、外側の
あるいは連続した相の中に良好に分散され、そして、乳化剤の手段により、又は
製剤の粘性により、この形状に維持される。エマルジョンのいずれかの相は、エ
マルジョン様式の軟膏及びクリームの場合のように、半固体又は固体であっても
よい。エマルジョンを安定化させるその他の手段は、エマルジョンのいずれかの
相へ取り込まれ得る乳化剤の使用を必要とする。乳化剤は、４つのカテゴリー、
すなわち、合成界面活性剤、天然に存在する乳化剤、吸収基剤、及び微細に分散
された固体に大別される（Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏ
ｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａ
ｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，１９９ページ）。

【００２８】 表面活性物質としても知られている合成界面活性剤は、エマルジョンの製剤に
おける広い適用可能性が見出されており、そして文献にて概説されている（Ｒｉ
ｅｇｅｒ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，"
Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８６，
第１巻，２８５ページ；Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓ
ａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎ
ｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，１９９ページ）。界面活性剤は、典型的には
両親媒性であり、親水性及び疎水性部分を含んでいる。界面活性剤の疎水性に対
する親水性の比率は、親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）と称されており、そし
て界面活性剤を類別し、製剤の調製において界面活性剤を選択するうえでのかけ
がえないツールとなっている。界面活性剤は、親水性基の性質に基づいて異なる
クラス、すなわち、非イオン性、陽イオン性及び両性に分類され得る（Ｒｉｅｇ
ｅｒ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉ
ｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１
巻，２８５ページ）。

【００２９】 エマルジョン製剤に使用される、天然に存在する乳化剤には、ラノリン、蜜ろ
う、ホスファチド、レクチン及びアカシアが包含される。吸収基剤は、無水ラノ
リン及び親水性ワセリンなど、水を吸い上げてｗ／ｏエマルジョンを形成し、そ
れでもなお半固形の緊硬度を保持することができるような、親水性の性質を保有
している。細かく分割された固体もまた、特に界面活性剤との組み合わせにおい
て、及び粘稠な調剤において、良好な乳化剤として使用されている。これらには
、重金属水酸化物などの極性無機固体、ベントナイト、アタパルガイト、ヘクト
ライト、カオリン、モンモリロナイト、コロイド状ケイ酸アルミニウム及びコロ
イド状ケイ酸マグネシウムアルミニウムなどの非膨潤性粘土、顔料ならびにカー
ボン又はグリセリルトリステアレートなどの非極性固体が包含される。

【００３０】 多様な非乳化性物質もまた、エマルジョン製剤中に含められて、エマルジョン
の性質に寄与するものである。これらには、脂肪、油、ワックス、脂肪酸、脂肪
族アルコール、脂肪酸エステル、湿潤剤、親水性コロイド、保存剤及び酸化防止
剤が包含される（Ｂｌｏｃｋ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ
（編），１９８８，第１巻，３３５ページ；Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕ
ｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅ
ｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，１９９ページ）。

【００３１】 親水性コロイド又は親水コロイドには、天然に存在するゴムならびに合成ポリ
マー、多糖（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、カラギーナン、グアガム、
カラヤゴム、及びトラガント）、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチル
セルロース及びカルボキシプロピルセルロース）、ならびに合成ポリマー（例え
ば、カルボマー、セルロースエーテル、及びカルボキシビニルポリマー）などが
包含される。これらは水中で分散又は膨潤して、分散された相の液滴の周囲に強
固な界面フィルムを形成することにより、及び外側の相の粘性を増加させること
により、エマルジョンを安定化させるコロイド状溶液を形成する。

【００３２】 エマルジョンは、微生物の成長を直ちに助けることがある、炭水化物、タンパ
ク質、ステロール及びホスファチドなど、多くの構成成分を含有する場合が多い
ので、これらの製剤には保存剤が配合されることが多い。一般的に使用される、
エマルジョン製剤に配合される保存剤には、メチルパラベン、プロピルパラベン
、第４級アンモニウム塩、塩化ベンザルコニウム、ｐ−ヒドロキシ安息香酸のエ
ステル、ホウ酸及びフェノキシエタノールが包含される。酸化防止剤もまた一般
に、製剤の劣化を防止するためにエマルジョン製剤に添加される。使用される酸
化防止剤は、トコフェロール、没食子酸アルキル、ブチル化ヒドロキシアニソー
ル、ブチル化ヒドロキシトルエンなどのフリーラジカルスカベンジャー、又はア
スコルビン酸及びメタ亜硫酸水素ナトリウムなどの還元剤、ならびにクエン酸、
酒石酸、及びレシチンなどの酸化防止相乗剤であってよい。

【００３３】 オリゴヌクレオチド製剤のいずれにおいても使用される保存剤は、好ましくは
広範囲の抗微生物活性を有し、そして中性のｐＨにて高い負荷電状態にあるオリ
ゴヌクレオチドと適合性を有するものである。好ましい保存剤を決定するために
、米国薬局方２３、抗微生物有効性試験（ＡＥＴ）法に従い、選択された生物［
スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕ
ｓ、ＡＴＣＣ Ｎｏ． ６５３８）、エシェリヒア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ、ＡＴＣＣ Ｎｏ． ８７３９）、カンジダ・アルビカンス（Ｃ
ａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、ＡＴＣＣ Ｎｏ． １０２３１）及びアスペ
ルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、ＡＴＣＣ Ｎｏ．１
６４０４）］の存在下及び非存在下に、オリゴヌクレオチドを様々な保存剤とイ
ンキュベートした。これらの研究の結果、オリゴヌクレオチド製剤のための好ま
しい保存剤には、メチルパラベン、プロピルパラベン及びフェノキシエタノール
の配合物が包含されることが見出されている。保存剤の配合物の総量は、使用さ
れる剤形に依存するはずであるが、一般に約０．１重量％から２０重量％までと
されよう。本発明の局所用エマルジョン組成物において、保存剤の配合物は、約
０．１％から１０％まで、好ましくは０．５％〜８％、そしてより好ましくは１
％〜５％の量で存在するであろう。好ましい態様において、メチルパラベン及び
プロピルパラベンはそれぞれ、約０．１％から１％までの量で、そしてフェノキ
シエタノールは、約１％から５％までの量で存在であろう。特に好ましい態様に
おいて、メチルパラベン、プロピルパラベン及びフェノキシエタノールは、それ
ぞれ約１：１：５の割合で存在するであろう。

【００３４】 経皮、経口及び非経口経路を介したエマルジョン製剤の適用ならびにその製造
のための方法は、文献に概説されている（Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ
ｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ
ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，１９９ページ）。経口送逹
用のエマルジョン製剤は、製剤化の容易さ、吸収及び生物学的利用能の観点から
の有効性の理由のために、非常に広範に使用されている。（Ｒｏｓｏｆｆ，" Ｐ
ｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍ
ａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，２４５
ページ；Ｉｄｓｏｎ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒ
ｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），
１９８８，第１巻，１９９ページ）。ｏ／ｗエマルジョンとして一般的に経口投
与されているもののうちに、鉱油ベースの緩下剤、油溶性ビタミン及び高脂肪栄
養調剤がある。

【００３５】 本発明の一態様において、オリゴヌクレオチド及び核酸の組成物はミクロエマ
ルジョンとして製剤化される。ミクロエマルジョンは、単一の光学的等方性かつ
熱力学的に安定な溶液である、水、油及び両親媒性物質のシステムとして定義付
けられ得る（Ｒｏｓｏｆｆ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（
編），１９８８，第１巻，２４５ページ）。典型的には、ミクロエマルジョンは
、先ず水性界面活性剤溶液中に油を分散させ、その後充分量の第４成分、一般的
には中間鎖長のアルコールを添加して透明系を形成することにより調製されるシ
ステムである。従ってミクロエマルジョンは、界面活性分子の界面フィルムによ
って安定化される、２つの混和不能な液体の、熱力学的に安定な、等方性の透明
な分散体としても報告されている（Ｌｅｕｎｇ ａｎｄ Ｓｎａｈ，Ｃｏｎｔｒ
ｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ： Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ａｎｄ
Ａｇｇｒｅｇａｔｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒｏｓｏｆｆ， Ｍ．，編，１９８９
，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１８５−２１５ページ）
。ミクロエマルジョンは一般に、油、水、界面活性剤、共界面活性剤及び電解質
を包含する、３から５つの成分の組み合わせを介して調製される。ミクロエマル
ジョンが油中水型（ｗ／ｏ）又は水中油型（ｏ／ｗ）のいずれであるかは、使用
される油及び界面活性剤の性質と、界面活性剤分子の極性頭部及び炭化水素尾部
の構造及び幾何学的充填状態に依存する（Ｓｃｈｏｔｔ，" Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ
′ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ" ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ社，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８５，２７１ページ）。

【００３６】 相状態図を利用した現象学的アプローチによる研究が大規模になされており、
そしてミクロエマルジョンをどのように製剤化するかについての包括的知識を当
業者にもたらしている（Ｒｏｓｏｆｆ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏ
ｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａ
ｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，２４５ページ；Ｂｌｏｃｋ，" Ｐｈａｒｍ
ａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，Ｒ
ｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，３３５ページ）
。従来のエマルジョンと比較して、ミクロエマルジョンでは、自発的に形成され
る熱力学的に安定な液滴の製剤中に水不溶性の薬物を可溶化するという利点がも
たらされる。

【００３７】 ミクロエマルジョンの調剤において使用される界面活性剤には、イオン性界面
活性剤、非イオン性界面活性剤、Ｂｒｉｊ ９６、ポリオキシエチレンオレイル
エーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、テトラグリセロールモノラウレー
ト（ＭＬ３１０）、テトラグリセロールモノオレート（ＭＯ３１０）、ヘキサグ
リセロールモノオレート（ＰＯ３１０）、ヘキサグリセロールペンタオレート（
ＰＯ５００）、デカグリセロールモノカプレート（ＭＣＡ７５０）、デカグリセ
ロールモノオレート（ＭＯ７５０）、デカグリセロールセキオレート（ＳＯ７５
０）デカグリセロールデカオレート（ＤＡＯ７５０）が包含され、単独で、又は
共界面活性剤と組み合わせられるが、それらに限定されることはない。通常はエ
タノール、１−プロパノール、及び１−ブタノールなどの短鎖アルコールである
共界面活性剤は、界面活性剤フィルム内へ浸透し、その結果、界面活性剤分子間
に作られる空隙空間に起因して無秩序となるフィルムを作り出すことによって、
界面の流動性を増大させるように働く。しかしながら、ミクロエマルジョンは共
界面活性剤を使用することなしに調製され得るものであり、アルコール不含の自
己乳化型ミクロエマルジョンシステムが、当該技術分野で知られている。水相は
、典型的には、水、薬物の水溶液、グリセロール、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ４００
、ポリグリセロール、プロピレングリコール、及びエチレングリコールの誘導体
とされるとよいが、それらに限定されることはない。油相には、Ｃａｐｔｅｘ ３５５、Ｃａｐｍｕｌ ＭＣＭ、脂肪酸エステル、中間鎖長（Ｃ₈ 〜Ｃ₁₂）のモ
ノ、ジ、及びトリグリセリド、ポリオキシエチル化グリセロール脂肪酸エステル
、脂肪族アルコール、ポリグリコール化グリセリド、飽和ポリグリコール化Ｃ₈ 〜Ｃ₁₀グリセリド、植物油及びシリコーン油が包含され得るが、それらに限定さ
れることはない。

【００３８】 ミクロエマルジョンは、薬物の安定化及び薬物の吸収の増進という観点から、
特に興味深いものである。脂質ベースのミクロエマルジョン（ｏ／ｗ及びｗ／ｏ
の双方）は、ペプチドを含めた薬物の経口での生物学的利用能を増進することが
提言されている（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｄｉｎｅｓら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９４，１１，１３８５；Ｒｉｔｓｃｈｅｌ，Ｍｅ
ｔｈ． Ｆｉｎｄ． Ｅｘｐ． Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９３
，１３，２０５）。ミクロエマルジョンによって、薬物安定化の向上、酵素的加
水分解からの薬物の保護、膜流動性及び浸透性の変化が界面活性剤によって誘導
されることに起因した薬物吸収の増進の可能性、調製の容易さ、固体剤形に対す
る経口投与の容易さ、臨床的効能の向上、ならびに毒性の低下の利点がもたらさ
れる（Ｃｏｎｓｔａｎｔｉｄｉｎｅｓら、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ，１９９４，１１，１３８５；Ｈｏら、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｓｃ
ｉ．，１９９６，８５，１３８）。ミクロエマルジョンは、雰囲気温度にてそれ
らの成分を共に配合した場合に、自発的に形成されることが多い。これは、熱不
安定性の薬物、ペプチド又はオリゴヌクレオチドを製剤化する場合に特に好都合
である。ミクロエマルジョンは、化粧品及び医薬での適用の双方において、活性
成分の経皮送逹に有効でもある。本発明のミクロエマルジョン組成物及び製剤は
、胃腸管からのオリゴヌクレオチド及び核酸の全身的吸収の増加を促進し、さら
には胃腸管、膣、頬側口腔及びその他の投与領域内での、オリゴヌクレオチド及
び核酸の局部細胞への取り込みを向上させるであろうことが予期される。

【００３９】 本発明のミクロエマルジョンは、また、付加的成分及びソルビタンモノステア
レート（Ｇｒｉｌｌ ３）、ラブラソール（Ｌａｂｒａｓｏｌ）などの添加剤、
及び製剤の特性を改善し、そして本発明のオリゴヌクレオチド及び核酸の吸収を
増進する浸透増進剤をも含有してよい。本発明のミクロエマルジョンに使用され
る浸透増進剤は、５つの広いカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁
酸塩、キレート剤、及び非キレート非界面活性剤のうちの１つに属するものとし
て分類され得る（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅ
ｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９
２ページ）。これらの分類の各々は、前記しているものである。

【００４０】 特に好ましい態様において、エマルジョン組成物は、緩和薬としてのイソプロ
ピルミリステート（ＩＰＭ）を含む。本発明のＩＰＭエマルジョンは、クリーム
の形状とされ得、そして約１重量％から５０重量％まで、より好ましくは５％〜
２０％、そして最も好ましくは約１０％の量にてＩＰＭを組み込むとよい。好ま
しいクリームエマルジョンにおいて、モノステアリン酸グリセロールは油相乳化
剤として働き、またポリオキシル４０ステアレートは水相乳化剤として働き、そ
れぞれが約１％から３０％まで、より好ましくは５％〜２０％の量にて存在する
。特に好ましい態様において、グリセロールモノステアレートは約１０重量％の
量で、そしてポリオキシ４０ステアレートは約１５％の量で存在する。好ましい
クリームエマルジョンはさらに、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの増
粘剤を含むとよい。特に好ましい態様において、ヒドロキシプロピルメチルセル
ロースは、約０．０１％から約５％まで、より好ましくは０．１％から２％まで
、そして最も好ましくは約０．５％の量にて存在する。

【００４１】 Ｂ．リポソーム 薬物の製剤化のために研究及び使用されてきているミクロエマルジョンに加え
て、組織化された界面活性剤構造が多くある。これらには、単層構造体、ミセル
、二層構造体及び小胞が包含される。リポソームなどの小胞は、薬物送逹の観点
からして、それらの特異性及びそれらから得られる作用の持続期間のゆえに、多
大な興味を集めているものである。本発明において使用される場合、「リポソー
ム」なる用語は、球形の二重層又は二層構造体に配列される、両親媒性脂質で構
成される小胞を意味する。

【００４２】 リポソームは、脂溶性物質から形成される膜及び水性の内部を有する、単層状
又は多層状の小胞である。水性部分は、送達されるべき組成物を含有する。陽イ
オン性リポソームは、細胞壁に融合することができる利点を保有している。非陽
イオン性リポソームは、細胞壁にさほど効率的に融合できないものの、ｉｎ ｖ
ｉｖｏでマクロファージに取り込まれる。

【００４３】 哺乳動物の無傷の皮膚を通過するためには、好適な経皮勾配の影響下に、脂質
小胞は一連の微細孔（それぞれ５０ ｎｍ未満の直系を有する）を通り抜けなけ
ればならない。従って、変形可能性が高く、かつこのような微細孔を通り抜ける
ことができるリポソームを使用することが望ましい。

【００４４】 リポソームのさらなる利点に包含されるのは、天然のリン脂質から得られるリ
ポソームは生物適合性かつ生物分解性であること；リポソームは広い範囲の水及
び脂質溶解性薬物を取り込むことができること；リポソームはそれらの内側の区
画に封入された薬物を代謝及び分解から保護できることである（Ｒｏｓｏｆｆ，
" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｌｉｅｂｅ
ｒｍａｎ，Ｒｉｅｇｅｒ ａｎｄ Ｂａｎｋｅｒ（編），１９８８，第１巻，２
４５ページ）。リポソーム製剤の調製における重要な考慮事項は、脂質表面電荷
、小胞サイズ及びリポソームの含水容量である。

【００４５】 リポソームは、活性成分の作用部位への輸送及び送逹のために有用である。リ
ポソーム膜は構造的に生体膜に類似しているので、リポソームが組織に適用され
ると、そのリポソームは細胞膜に溶け込み始める。リポソームと細胞の溶け込み
が進行するにつれ、リポソームの内容物は細胞内へと空けられ、ここで活性物質
が作用し得るのである。

【００４６】 リポソーム製剤は、多くの薬物に対する送逹の態様として、広範な研究の焦点
となっている。リポソームが、局所投与のために、他の製剤をしのぐ数々の利点
を呈することの証拠が、漸増してきている。このような利点には、投与された薬
物の高い全身吸収量に関連する副作用が低減すること、投与された薬物の望まれ
る標的部位における蓄積が増加すること、及び皮膚内に親水性及び疎水性双方の
多様な薬物を投与することが可能であることが包含される。

【００４７】 いくつかの報告で、高分子量のＤＮＡを含めた薬剤を皮膚内に送達するリポソ
ームの能力が詳説されている。鎮痛剤、抗体、ホルモン及び高分子量ＤＮＡを包
含する化合物が、皮膚に投与されてきている。適用例の大多数で、表皮上部の標
的化の結果が示されている。

【００４８】 リポソームは２つの広いクラスに分類される。陽イオン性リポソームは、負に
荷電したＤＮＡ分子と相互作用して安定な複合体を形成する、正に荷電したリポ
ソームである。正に荷電したＤＮＡ／リポソーム複合体は、負に荷電した細胞表
面に結合して、エンドソームへ内部移行される。エンドソーム内の酸性ｐＨに起
因して、そのリポソームは破裂し、それらの内容物を細胞の細胞質へと放出する
（Ｗａｎｇら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１
４７（１９８７）９８０−９８５）。

【００４９】 ｐＨ感受性又は負に荷電したリポソームは、複合するのでなくむしろ、ＤＮＡ
を貯め込む。ＤＮＡ及び脂質の双方は同様に荷電しているので、複合体生成でな
くむしろ破裂が生じる。それでもやはり、これらリポソームの水性内部の中に貯
め込まれるＤＮＡもある。ｐＨ感受性リポソームは、チミジンキナーゼ遺伝子を
コードするＤＮＡを、培養中の細胞単層に送達するために使用されている。外来
遺伝子の発現が、標的細胞で検出された（Ｚｈｏｕら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，１９，（１９９２） ２６９−２７４
）。

【００５０】 リポソーム組成物の１つの主要なタイプには、天然に由来するホスファチジル
コリン以外のリン脂質が包含される。中性リポソーム組成物は、例えば、ジミリ
ストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）又はジパルミトイルホスファチジル
コリン（ＤＰＰＣ）から形成されることができる。陰イオン性リポソーム組成物
は一般に、ジミリストイルホスファチジルグリセロールから形成され、一方、陰
イオン性融合性リポソームは主として、ジオレオイルホスファチジルエタノール
アミン（ＤＯＰＥ）から形成される。別のタイプのリポソーム組成物は、ホスフ
ァチジルコリン（ＰＣ）、例えば、ダイズＰＣ、及び卵ＰＣなどから形成される
。別のタイプは、リン脂質及び／又はホスファチジルコリン及び／又はコレステ
ロールの混合物から形成される。

【００５１】 様々な研究により、リポソーム薬物製剤の皮膚への局所送逹が評価されている
。インターフェロンを含有するリポソームのモルモット皮膚への適用の結果、皮
膚ヘルペスによるただれの低下が示されたが、他の手段（例えば、溶液として、
又はエマルジョンとして）を介したインターフェロンの送逹は無効であった（Ｗ
ｅｉｎｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，１９９
２，第２巻，４０５−４１０）。さらに追加の研究で、水性システムを使用した
インターフェロンの投与に対し、リポソーム製剤の一部として投与されたインタ
ーフェロンの有効性が試験され、そしてリポソーム製剤が水性システム投与より
も優れていると結論付けられた（ｄｕ Ｐｌｅｓｓｉｓら、Ａｎｔｉｖｉｒａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１８，１９９２，２５９−２６５）。

【００５２】 非イオン性リポソームシステムもまた、特に非イオン性界面活性剤及びコレス
テロールを含むシステムが、皮膚への薬物の送逹における有用性を調べるために
実験されている。ノバソーム（Ｎｏｖａｓｏｍｅ）" Ｉ（グリセリルジラウレー
ト／コレステロール／ポリオキシエチレン−１０−ステアリルエーテル）及びノ
バソーム" ＩＩ（グリセロールジステアレート／コレステロール／ポリオキシエ
チレン−１０−ステアリルエーテル）を含む非イオン性リポソーム製剤を、マウ
ス皮膚の真皮内にサイクロスポリンＡを送達するために使用した。その結果、こ
のような非イオン性リポソームシステムは、皮膚の異なる層内へのサイクロスポ
リンＡの沈着を促進することが示唆された。

【００５３】 トランスファーソームは、リポソームのさらに別のタイプであり、そして薬物
送逹ビヒクルのための興味をひく候補である、変形可能性の高い脂質凝集体であ
る。トランスファーソームは、変形可能性が高いために、液滴より小さい孔を容
易に浸透することができる脂質液滴として述べられ得る。トランスファーソーム
は、それらが使用される環境に適用可能であって、例えば、それらは自己最適化
でき（皮膚の孔の形状に適応でき）たり、自己修復的であったり、時として断片
化することなくその標的に到達したり、また自己負荷的であることもある。トラ
ンスファーソームを製造するために、表面端部活性化剤（ｓｕｒｆａｃｅ ｅｄ
ｇｅ−ａｃｔｉｖａｔｏｒ）、通常は界面活性剤を、標準的なリポソーム組成物
に添加することができる。トランスファーソームは、血清アルブミンを皮膚に送
達するために使用されている。トランスファーソームによって媒介される血清ア
ルブミンの送逹は、血清アルブミンを含有する溶液の皮下注射に劣らないほど有
効であることが示されている。

【００５４】 界面活性剤は、エマルジョン（ミクロエマルジョンを含む）及びリポソームな
どの製剤に、広い適用が認められる。天然及び合成の双方の、多くの異なるタイ
プの界面活性剤の特性を分類しランク付けする最も一般的な方法は、親水性／親
油性バランス（ＨＬＢ）を使用することによるものである。親水性基（「頭部」
としても知られる）の性質が、製剤にて用いられる、異なる界面活性剤をカテゴ
リー分けするための最も有用な手段を提供する（Ｒｉｅｇｅｒ，" Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，" Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅ
ｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８８，２８５ページ）。

【００５５】 界面活性剤分子がイオン化されていなければ、それは非イオン性界面活性剤に
分類される。非イオン性界面活性剤は、医薬及び化粧品の製品において広い適用
が認められ、そして広範囲のｐＨ値にわたって使用可能である。一般的に、それ
らのＨＬＢ値は、構造に依存して２から約１８の範囲にある。非イオン性界面活
性剤には、エチレングリコールエステル、プロピレングリコールエステル、グリ
セリルエステル、ポリグリセリルエステル、ソルビタンエステル、スクロースエ
ステル、及びエトキシル化エステルなどの非イオン性エステルが包含される。非
イオン性アルカノールアミドならびに脂肪族アルコールエトキシレート、プロポ
キシル化アルコール、及びエトキシル化／プロポキシル化ブロックポリマーなど
のエーテルも、このクラスに包含される。ポリオキシエチレン界面活性剤は、非
イオン性界面活性剤のクラスの最も一般的になっているメンバーである。

【００５６】 界面活性剤分子が水中に溶解又は分散された場合に負の電荷を有すれば、その
界面活性剤は陰イオン性に分類される。陰イオン性界面活性剤には、セッケンな
どのカルボキシレート、アシルラクチレート、アミノ酸のアシルアミド、アルキ
ルスルフェート及びエトキシル化アルキルスルフェートなどの硫酸のエステル、
アルキルベンゼンスルホネートなどのスルホネート、アシルイソチオネート、ア
シルタウレート及びスルフォサクシネート、ならびにホスフェートが包含される
。陰イオン性界面活性剤のクラスの最も重要なメンバーは、アルキルスルフェー
ト及びセッケンである。

【００５７】 界面活性剤分子が水中に溶解又は分散された場合に正の電荷を有すれば、その
界面活性剤は陽イオン性に分類される。陽イオン性界面活性剤には、第４級アン
モニウム塩及びエトキシル化アミンが包含される。第４級アンモニウム塩は、こ
のクラスのうちで最も使用されているメンバーである。 界面活性剤分子が正又は負の電荷のいずれをも有する能力を持っていれば、そ
の界面活性剤は両性に分類される。両性界面活性剤には、アクリル酸誘導体、置
換されたアルキルアミド、Ｎ−アルキルベタイン及びホスファチドが包含される
。

【００５８】 薬物製品、製剤における、及びエマルジョンにおける界面活性剤の使用が、概
説されている（Ｒｉｅｇｅｒ，" Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ
Ｆｏｒｍｓ，" Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ， Ｉｎｃ．， Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，ＮＹ，１９８８，２８５ページ）。

【００５９】 Ｃ．浸透増進剤 一態様において、本発明では、核酸、特にオリゴヌクレオチドの、動物の皮膚
への効率的な送逹を成し遂げるべく、様々な浸透増進剤が用いられる。ほとんど
の薬物は、イオン化及び非イオン化形態の双方において、溶液として存在する。
しかしながら、通常、脂溶性又は親油性薬物だけが、細胞膜を容易に通過する。
たとえ非親油性薬物であっても、通過すべき膜が浸透増進剤を用いて処理されて
いれば、細胞膜を通過し得ることが発見されている。非親油性薬物が細胞膜を通
過して分散することを助けるのに加えて、浸透増進剤は親油性薬物の透過性も増
進する。

【００６０】 浸透増進剤は、５つの広いカテゴリー、すなわち、界面活性剤、脂肪酸、胆汁
酸塩、キレート剤、及び非キレート非界面活性剤のうちの１つに属するものとし
て分類され得る（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒ
ｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９２ページ）。浸透増進剤の前記したクラ
スのそれぞれを、以下にさらに詳細に説明する。

【００６１】 界面活性剤：本発明に関連して、界面活性剤（あるいは「表面活性物質」）は
、水溶液中に溶解されると、溶液の表面張力又は水溶液と他の液体との間の界面
張力を低下させ、粘膜を通してのオリゴヌクレオチドの吸収が増進される結果を
もたらす化学薬品体である。胆汁酸塩及び脂肪酸に加えて、これらの浸透増進剤
には、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエ
ーテル及びポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔ．
Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９
２ページ）、ならびにＦＣ−４３などのパーフルオロケミカル（ｐｅｒｆｌｕｏ
ｒｈｅｍｉｃａｌ）エマルジョンが包含される（Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ． Ｐｈａｒｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９８８，４０：２５２ページ）。

【００６２】 脂肪酸：浸透増進剤として作用する様々な脂肪酸及びそれらの誘導体には、例
えば、オレイン酸、ラウリン酸、カプリン酸（ｎ−デカン酸）、ミリスチン酸、
パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、ジカプレート、トリカ
プレート、モノオレイン（１−モノオレオイル−ｒａｃ−グリセロール）、ジラ
ウリン、カプリル酸、アラキドン酸、グリセロール １−モノカプレート、１−
ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、アシルカルニチン、アシルコリン、そ
れらのＣ_1-10アルキルエステル（例えば、メチル、イソプロピル及びｔ−ブチル
）ならびにそれらのモノ−及びジ−グリセリド（すなわち、オレート、ラウレー
ト、カプレート、ミリステート、パルミテート、ステアレート、リノレートなど
）が包含される（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒ
ｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９２ページ；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉ
ｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０
，７：１；Ｅｌ Ｈａｒｉｒｉら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１
９９２，４４：６５１）。

【００６３】 胆汁酸塩：胆汁の生理学的役割には、脂質及び脂溶性ビタミンの分散及び吸収
の促進が包含される（Ｇｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｍａｎ' ｓ Ｔｈｅ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，
第９版，Ｈａｒｄｍａｎら、編，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
１９９６，９３４−９３５ページの，Ｂｒｕｎｔｏｎ，第３８章）。様々な天然
の胆汁酸塩、及びそれらの合成誘導体が、浸透増進剤として作用する。従って、
「胆汁酸塩」なる用語には、天然に存在する胆汁の成分、さらにはそれらの合成
誘導体のいずれもが包含される。本発明の胆汁酸塩には、例えば、コール酸（又
はその医薬上許容され得るナトリウム塩、コール酸ナトリウム）、デヒドロコー
ル酸（デヒドロコール酸ナトリウム）、デオキシコール酸（デオキシコール酸ナ
トリウム）、グルコール酸（グルコール酸ナトリウム）、グリコール酸 (glycho
lic acid) （グリココール酸ナトリウム）、グリコデオキシコール酸（グリコデ
オキシコール酸ナトリウム）、タウロコール酸（タウロコール酸ナトリウム）、
タウロデオキシコール酸（タウロデオキシコール酸ナトリウム）、ケノデオキシ
コール酸（ケノデオキシコール酸ナトリウム）、ウルソデオキシコール酸（ＵＤ
ＣＡ）、タウロ−２４，２５−ジヒドロフシジン酸ナトリウム（ＳＴＤＨＦ）、
グリコジヒドロフシジン酸ナトリウム及びポリオキシエチレン−９−ラウリルエ
ーテル（ＰＯＥ）が包含される（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ
ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ
，１９９１，９２ページ；" Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ′ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃ
ａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ" ，第１８版，Ｇｅｎｎａｒｏ，編，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ社，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９０，７８２−７８３ページの，
Ｓｗｉｎｙａｒｄ，第３９章；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ
ｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓ
ｔｅｍｓ，１９９０，７：１；Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｘｐ．
Ｔｈｅｒ．，１９９２，２６３：２５；Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒ
ｍ．Ｓｃｉ．，１９９０，７９，５７９）。

【００６４】 キレート剤：本発明に関連して使用される場合のキレート剤は、金属イオンと
複合体を形成することにより溶液から金属イオンを除去し、粘膜を通してのオリ
ゴヌクレオチドの吸収が増進される結果をもたらす化合物として定義される。本
発明における浸透増進剤としてのそれらの使用に関連して、キレート剤はＤＮア
ーゼ阻害剤としても働くというさらなる利点を有しており、これはほとんどの特
徴付けられたＤＮＡヌクレアーゼが触媒作用のために二価の金属イオンを必要と
し、しかしてそれらヌクレアーゼがキレート剤によって阻害されるためである（
Ｊａｒｒｅｔｔ，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．，１９９３，６１８：３１５）。
本発明のキレート剤には、エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）２ナトリウ
ム、クエン酸、サリチラート（例えば、サリチル酸ナトリウム、５−メトキシサ
リチラート及びホモバニラート（ｈｏｍｏｖａｎｉｌａｔｅ））、コラーゲンの
Ｎ−アシル誘導体、ラウレス（ｌａｕｒｅｔｈ）−９ならびにベータ−ジケトン
のＮ−アミノアシル誘導体（エナミン）が包含されるが、それらに限定されるこ
とはない（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐ
ｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９２ペー
ジ；Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒ
ａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０，７：
１；Ｂｕｕｒら、Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．，１９９０，１４：４３）。

【００６５】 非キレート非界面活性剤：本明細書中で使用する場合、非キレート非界面活性
剤の浸透増進剤化合物は、キレート剤として、又は界面活性剤としての活性は取
るに足らないものであることが立証されているが、それにも関わらず、消化器系
粘膜を通してのオリゴヌクレオチドの吸収を増進する化合物として定義される（
Ｍｕｒａｎｉｓｈｉ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐ
ｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９０，７：１）
。このクラスの浸透増進剤には、例えば、不飽和環状尿素、１−アルキル−及び
１−アルケニルアザシクロ−アルカノン誘導体（Ｌｅｅら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１９９１，９２ページ）；ならびにジクロフェナクナトリウム
、インドメタシン及びフェニルブタゾンなどの非ステロイド系抗炎症剤（Ｙａｍ
ａｓｈｉｔａら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９８７，３９，６
２１）が包含される。

【００６６】 細胞レベルでオリゴヌクレオチドの取り込みを増進する薬剤もまた、本発明の
医薬及びその他の組成物に添加してもよい。例えば、リポフェクチンなどの陽イ
オン性脂質（Ｊｕｎｉｃｈｉら、米国特許第５，７０５，１８８号）、陽イオン
性グリセロール誘導体、及びポリリジンなどのポリ陽イオン性分子（Ｌｏｌｌｏ
ら、ＰＣＴ出願ＷＯ９７／３０７３１）もまた、オリゴヌクレオチドの細胞内取
り込みを増進することが知られている。 投与された核酸の浸透を増進するために、エチレングリコール及びプロピレン
グリコールなどのグリコール、２−ピロールなどのピロール、アゾン、ならびに
リモネン及びメントンなどのテルペンを含めた、他の薬剤を利用してもよい。

【００６７】 Ｄ．キャリアー 本発明の特定の組成物はまた、製剤中にキャリアー化合物も組み込まれている
。本明細書中で使用される場合、「キャリアー化合物」又は「キャリアー」は、
核酸、あるいは不活性である（すなわち、それ自体生物学的活性を保有しない）
が、例えば、生物学的に活性な一つの核酸を分解することにより、又はその細胞
からの除去を促進することにより、生物学的活性を有するその核酸の生物学的利
用能を低減させる in vivoのプロセスによって、核酸として認識されるような、
その誘導体を意味することができる。核酸及びキャリアー化合物、典型的には後
者の物質を過剰量共投与する結果、おそらくは共通の受容体に対するキャリアー
化合物と核酸との間の競合に起因して、肝臓、腎臓又はその他の循環系外リザー
バーにおいて回収される核酸の量の実質的な低減をもたらすことができる。例え
ば、部分的にホスホロチオエート化されたオリゴヌクレオチドの肝組織における
回収は、ポリイノシン酸、硫酸デキストラン、ポリシチジン酸又は４−アセトア
ミド−４' −イソチオシアノスチルベン−２，２' −ジスルホン酸と共投与した
場合に低減され得る（Ｍｉｙａｏら、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，
１９９５，５，１１５；Ｔａｋａｋｕｒａら、Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＆ Ｎｕｃ
ｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．，１９９６，６：１７７）。

【００６８】 Ｅ．賦形剤 キャリアー化合物に対して、「医薬キャリアー」又は「賦形剤」は、動物に１
つ以上の核酸を送達するための、医薬上許容され得る溶媒、懸濁剤、又はその他
の薬理学的に不活性なビヒクルである。賦形剤は、液体又は固体であってよく、
核酸及び所定の医薬組成物の他の成分と配合する際に、所望の嵩高さ（ｂｕｌｋ
）、緊硬度などを提供するように計画された投与方法にともなって選択される。
典型的な医薬キャリアーには、結合剤（例えば、予めゼラチン化されたトウモロ
コシデンプン、ポリビニルピロリドン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース
など）；増量剤（例えば、ラクトース及び他の糖、微結晶セルロース、ペクチン
、ゼラチン、硫酸カルシウム、エチルセルロース、ポリアクリレート、又はリン
酸水素カルシウムなど）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク
、シリカ、コロイド状シリコンジオキシド、ステアリン酸、金属のステアリン酸
塩、硬化植物油、トウモロコシデンプン、ポリエチレングリコール、安息香酸ナ
トリウム、酢酸ナトリウムなど）；崩壊剤（例えば、デンプン．デンプングリコ
ール酸ナトリウムなど）；及び湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウムなど）
が包含されるが、それらに限定されることはない。

【００６９】 核酸と有害な反応をしない、非消化管外投与に好適な、医薬上許容され得る有
機又は無機賦形剤もまた、本発明の組成物を製剤化するために使用することがで
きる。好適な医薬上許容され得るキャリアーには、水、塩溶液、アルコール、ポ
リエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグ
ネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポ
リビニルピロリドンなどが包含されるが、それらに限定されることはない。

【００７０】 核酸の局所投与のための製剤は、滅菌及び非滅菌水溶液、アルコールなどの一
般的な溶媒の非水溶液、又は液体もしくは固体油ベースの核酸の溶液が包含され
得る。溶液にはさらに、バッファー、希釈剤、及び他の好適な添加剤を含有して
もよい。核酸と有害な反応をしないような、非消化管外投与に好適な医薬上許容
され得る有機又は無機賦形剤を使用することができる。 好適な医薬上許容され得る賦形剤には、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレ
ングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム
、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニル
ピロリドンなどが包含されるが、それらに限定されるものではない。

【００７１】 Ｆ．他の成分 本発明の組成物は、従来の医薬組成物に認められる他の付加成分を、当該技術
分野で確立されている使用レベルで、さらに含有してもよい。従って、例えば組
成物は、付加的な、適合可能な、医薬上活性な物質（例えば、鎮痒薬、収斂薬、
局部麻酔薬、もしくは抗炎症剤）を含有するか、又は本発明の組成物の様々な剤
形への物理的製剤化に有用な、付加的な物質（例えば、色素、着香剤、保存剤、
酸化防止剤、乳白剤、増粘剤、及び安定剤）を含有してもよい。しかしながら、
このような物質は、添加する場合に、本発明の組成物の成分の生物学的活性に過
度に干渉するべきではない。製剤は滅菌することができ、所望であれば、製剤の
核酸（１又はそれ以上）と有害な相互作用をしないような、例えば、潤滑剤、保
存剤、安定剤、湿潤化剤、乳化剤、浸透圧に影響する塩、バッファー、着色料、
着香料、及び／又は芳香物質などの補助剤と混合することができる。

【００７２】 水溶性懸濁液は、懸濁液の粘性を増加させる物質を含有してもよく、これには
例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナ
トリウム、ソルビトール、及び／又はデキストランが包含される。懸濁液は、安
定剤も含有してよい。

【００７３】 III．オリゴヌクレオチド 本発明は、予防的、対症的、又は治療的目的に有用であり、摘出された組織若
しくは器官、又はヒト以外の動物への研究的使用に有用な生理活性オリゴヌクレ
オチドを含む薬剤成分を用いる。一般に、この発明は約０．００５ｎｇ／ｍＬか
ら約４００ｍｇ／ｍＬのオリゴヌクレオチドを含み、約０．０１ｎｇ／ｍＬから
約２００ｍｇ／ｍＬが好ましく、約０．１ｎｇ／ｍＬから約１００ｍｇ／ｍＬが
最も望ましい。ここでいう「約」は指示濃度の±５％を示す。

【００７４】 この発明の文脈では、リボ核酸（ＲＮＡ）若しくはデオキシリボ核酸（ＤＮＡ
）のオリゴマー若しくは高分子、又はそれらの擬態を「オリゴヌクレオチド」と
呼ぶ。この用語は、同様に機能する非天然部分を有するオリゴヌクレオチドと同
じく、天然ヌクレオベース、糖、及び共有結合性糖間連結（バックボーン）から
成るオリゴヌクレオチドなどを含む。このような修飾オリゴヌクレオチド又は置
換ヌクレオチドは、例えば、核酸標的のための細胞取り込み亢進、親和性亢進及
び核酸分解酵素存在下での安定性上昇のような望ましい性質を有するため天然の
形態よりも好ましいことが多い。Ｄｅ Ｍｅｓｍａｅｋｅｒらにおいて、アンチ
センスオリゴヌクレオチド及びいくつかの好ましい修飾が発見されている（ＡＣ
Ｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．誌 １９９５年、２８号、３６６ページ）。一般に、本
発明の成分の中に処方するオリゴヌクレオチドは、約８から約１００ヌクレオチ
ド長で可能であり、約１０から約５０ヌクレオチド長がより好ましく、約１０か
ら約２５ヌクレオチド長が最も好ましい。 本発明の成分に処方されるオリゴヌクレオチドは、（１）アンチセンス化合物
と（２）その他の生理活性オリゴヌクレオチドをなど含むことを特徴とするオリ
ゴヌクレオチドである。これらの化合物のさらに詳しい詳細を下に示す。

【００７５】 Ａ．アンチセンス化合物：ここでは用語「アンチセンス化合物」は、特に、ア
ンチセンスオリゴヌクレオチド、アンチセンスペプチド核酸（ＰＮＡｓ）、リボ
ザイム及びＥＧＳ（下に述べる）を包含する。伝令ＲＮＡのアンチセンス変調に
おいては、アンチセンス化合物をその標的ｍＲＮＡにハイブリッド形成させるこ
とによりｍＲＮＡの正常な役割を妨げ、細胞のｍＲＮＡ機能の変調を引き起こす
。妨げられるｍＲＮＡ機能には、タンパク質翻訳部位へのＲＮＡの転座、ＲＮＡ
からのタンパク質の実際の翻訳、一つ又は複数のｍＲＮＡ種を産生するＲＮＡス
プライシング、ｍＲＮＡの代謝回転又は分解などがあり、おそらくＲＮＡが行う
可能性がある非依存性の触媒活性さえも含まれる。このようなｍＲＮＡに対する
妨害の全体的な効果はタンパク質発現の変調を引き起こす。この「変調」はタン
パク質発現の増加（刺激）と減少（阻害）の両方を意味する。本発明の文脈では
阻害は遺伝子発現の好ましい形である。

【００７６】 アンチセンス化合物は様々な手段で影響を及ぼす。そのような手段の一つは、
真正核細胞中のＲＮＡ分解酵素Ｈ、又は原核細胞中のＲＮＡ分解酵素Ｐのような
内在性核酸分解酵素の標的核酸に対するアンチセンス媒介による方向性である（
Ｃｈｉａｎｇら、Ｊ．Ｂｏｉｌ．Ｃｈｅｍ誌、１９９１年、２６６号、１８１６
２ページ。Ｆｏｒｓｔｅｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、１９９０年、２４９号、７８
３ページ）。ＲＮＡ分解酵素Ｐを補充する配列は外部ガイド配列（ＥｘｔｅＲＮ
Ａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ）として知られており、そのため略語は「
ＥＧＳ」となっている（Ｇｕｅｒｒｉｅｒ−Ｔａｋａｄａら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９７年、９４号、８４６８ページ）。別の
手段では、内在的拡散分解酵素の補充に頼るよりは、むしろ核酸分解性酵素活性
を有する合成成分をアンチセンス配列をもつオリゴヌクレオチドに共有結合的に
連結させることに伴って生じる。核酸分解性酵素を有する合成成分には、これら
に限定されないが、酵素的ＲＮＡ、ランタニドイオン複合体、及び類似物などが
ある（Ｈａｓｅｌｏｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ誌、１９８８年、３３４号、５８５ペ
ージ。Ｂａｋｅｒら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．誌、１９９７年、１１９
号、８７４９ページ）。

【００７７】 ここでは、用語「アンチセンス化合物」は、リボザイム、合成ＲＮＡ分子及び
非常に特異的なエンドリボヌクレアーゼ反応を触媒する誘導体なども含む（一般
に、Ｈａｓｄｌｏｆｆらに対する米国特許５，５４３，５０８、Ｇｏｏｄｃｈｉ
ｌｄらに対する米国特許５，５４５，７２９を参照）。切断反応はＲＮＡ分子自
身が触媒する。天然ＲＮＡ分子においては、自己触媒切断部位は高度に保存され
たＲＮＡ二次構造の領域内に位置している（Ｂｕｚａｙａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａ
ｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８６年、８３号、８８５９ページ。Ｆｏ
ｒｓｔｅｒら、Ｃｅｌｌ誌、１９８７年、５０号、９ページ）。天然自己触媒Ｒ
ＮＡ分子は、高い特異性を有する特定の細胞性分子又は病原性ＲＮＡ分子を標的
にするリボザイムを産生するよう修飾される。このようにして、リボザイムはア
ンチセンスオリゴヌクレオチドと同じ一般的目的（つまり特異遺伝子発現の変調
）を果たす。また、リボザイムはオリゴヌクレオチドのように一本鎖要素の有意
部分を持つ核酸である。換言すれば、リボザイムは他の生理活性化合物とかなり
の化学的同一性及び機能的同一性を持っており、したがって本発明のリポソーム
を使用する薬剤送達に処方できる可能性がある。

【００７８】 本発明の成分に処方されるアンチセンス化合物は（１）約８から約１００ヌク
レオチド長で可能であり、約１０から約３０ヌクレオチド長がより好ましく、（
２）ヒトを含む哺乳類の遺伝子の発現に必要な核酸配列を標的にし、（３）標的
遺伝子を発現する細胞に接触した場合にはその発現を変調させることを特徴とす
るアンチセンス化合物である。標的遺伝子によってエンコードされた遺伝子産生
の生理活性によって、発現の変調が引き起こされ、これにより予防的、対症的、
及び／又は治療的効果という望ましい結果を得る。

【００７９】 Ｂ．他の生理活性オリゴヌクレオチド： 用語「他の生理活性ヌクレオチド」
は、特に、アプタマー及びおとり分子（下に述べる）を包含する。ここではこの
用語は（１）動物に対する必要な予防的、対症的、治療的効果を得、（２）非ア
ンチセンスメカニズムによって、すなわち核酸とのハイブリッド形成以外の方法
によって、作用する全てのヌクレオチド（ＲＮＡを含む）を呼ぶことを意図して
いる。

【００８０】 アプタマーという名称はペプチド、タンパク質並びに薬剤又は色素のような低
分子などの非核酸リガンドに対して有意な特異性をもってかみ合い、ゆえに結合
する核酸分子を呼ぶためにＥｌｌｉｎｇｔｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ誌、１９９０年
、３４６号、８１８ページ）が作成した名称である。これらの特異的リガンド結
合ペプチドによって、アプタマーに分類される可能性のある核酸及びオリゴヌク
レオチドは、固定化リガンド充填カラムを用いた親和性クロマトグラフィーを介
して容易に精製又は単離できる。アプタマーは数百ヌクレオチドまでのかなり短
い核酸である可能性がある。例えばＲＮＡアプタマーは１５５ヌクレオチド長で
あり、良好な選択性が報告されているシバクロンブルー及び反応ブルー４のよう
な色素と結合する（Ｅｌｌｉｎｇｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ誌、１９９０年、３４
６号、８１８ページ）。ＲＮＡ分子が最初にアプタマーと呼ばれたが、本発明で
使用されているこの用語では、これらに限らないが、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＤＮＡ誘
導体及び共役体、ＲＮＡ誘導体及び共役体、修飾オリゴヌクレオチド、キメラオ
リゴヌクレオチド、並びにｇａｐｍｅｒなどの低分子リガンドとの特異的結合を
表す全てのヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドをアプタマーと呼ぶ（例えば１
９９６年６月４日に発行されたＥｃｋｅｒらに対する米国特許５，５２３，３８
９参照。参照により本明細書中に組み入れられる）。

【００８１】 おとり分子は（それ自身を「折り畳む」よう設計された一本鎖核酸を含む）短
い二重鎖核酸であり、タンパク質のような要素が結合する核酸上の部位とよく似
ている。このようなおとりはその要素を競争的に阻害することが期待される。つ
まり、要素分子がおとりの過剰部分に結合するため、おとりに対応する細胞部位
に結合する要素の濃度が減少し、治療的、対症的、又は予防的効果をもたらす。
おとり分子の同定及び構築の方法は、例えばＥｄｗａｒｄｓらに対する米国特許
５，７１６，７８０に記載されている。

【００８２】 別のタイプの生理活性オリゴヌクレオチドは、内在性核酸の遺伝子変換を指令
できるＲＮＡ−ＤＮＡハイブリッド分子である（Ｃｏｌｅ−Ｓｔｒａｕｓｓら、
Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、１９９６年、２７３号、１３８６ページ）。前述の生理活性
オリゴヌクレオチドはいずれも本発明のリポソームに処方され、予防的又は治療
的目的に使用される可能性がある。

【００８３】 Ｃ．オリゴヌクレオチド修飾：オリゴヌクレオチドは遺伝学的にはヌクレオチ
ドとして知られている反復単位の高分子である。非修飾（天然の）ヌクレオチド
には３つの成分がある。すなわち（１）窒素を含む複素環式塩基であり、その窒
素原子の一つによって（２）５−ペントフラノシル糖に連結し（３）その糖の５
' 及び３' 炭原子の一つに対してエステル化したリン酸塩である、という特徴を
持つ３つの成分である。オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれた場合、第一ヌクレ
オチドのリン酸塩も、第２の隣接ヌクレオチドの隣接する糖に対し、３' −５'
リン酸連結を経由してエステル化する。

【００８４】 この技術において知られているように、ヌクレオチドは塩基−糖の組み合わせ
である。ヌクレオチドの塩基の部分は正常では複素環塩基である。このような複
素環塩基の最も一般的な２つのクラスは、プリンとピリミジンである。ヌクレオ
チドは、さらにそのヌクレオシド糖部位と共有結合的に連結したリン酸基を含む
ヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むこれらのヌクレオシドに対して
、リン酸基はその糖の２' 、３' 、もしくは５' ヒドロキシル成分のいずれとも
連結できる。オリゴヌクレオチド形成においては、リン酸基は隣接ヌクレオシド
に共有結合的に相互に連結し、線状高分子複合体を形成する。この線状高分子複
合体のそれぞれの末端ではさらに接合し環状構造を形成できるが、本発明の文脈
内では一般に開鎖構造が好ましい。

【００８５】 オリゴヌクレオチド構造内では、一般にリン酸基はオリゴヌクレオチドの糖間
「バックボーン」形成のことを指す。ＲＮＡ及びＤＮＡの、正常な連結すなわち
バックボーンは、３' から５' へのリン酸ジエステル連結である。オリゴヌクレ
オチド（又は他のアンチセンス化合物）のバックボーンでは、一連の塩基が特異
的な順序で位置している。他からの指示がない限り通常は５' から３' へと順に
並ぶ一連の塩基の証明書は、ヌクレオチド又はヌクレオベース配列として知られ
ている。

【００８６】 オリゴヌクレオチドは、特定の核酸との効果的特異的なハイブリッド形成に十
分な同一性と数を有するヌクレオチド配列を有する可能性がある。遺伝子の有意
鎖の部分と特異的にハイブリッド形成するこのようなオリゴヌクレオチドは、一
般に「アンチセンス」と記述される。本発明の文脈では「ハイブリッド形成」は
水素結合を意味し、相補的ヌクレオチド間のワトソン−クリック、フーグスティ
ーン又は逆フーグスティーン水素結合である可能性がある。例えば、アデニン及
びチミンは水素結合形成を介して対をなす相補的ヌクレオチドである。ここで使
用する「相補的」は二つのヌクレオチド間の正確な対形成能力を呼ぶ。例えば、
オリゴヌクレオチドの特定位置にあるヌクレオチドがＤＮＡ又はＲＮＡの同じ位
置にあるヌクレオチドと水素結合できる場合、オリゴヌクレオチドとこのＤＮＡ
又はＲＮＡは該当位置において互いに相補的であるとみなす。このオリゴヌクレ
オチドとＤＮＡ、又はこのオリゴヌクレオチドとＲＮＡは、互いに水素結合が可
能であるヌクレオチドが、対応する位置においてそれぞれの分子の十分な数を占
めた場合、互いに相補的である。

【００８７】 「特異的ハイブリッド形成可能である」及び「相補的」の用語は、したがって
、オリゴヌクレオチドと、ＤＮＡ又はＲＮＡ標的の間に安定で特異的な結合が生
じるような相補性すなわち正確な対形成の十分な程度を意味する用語である。オ
リゴヌクレオチドは、核酸二重鎖内部における特異的パートナーヌクレオベース
の間における塩基対形成により、標的配列との特異的ハイブリッド形成が可能で
ある。天然ヌクレオベースの間では、グアニン（Ｇ）がシトシン（Ｃ）に結合し
、アデニン（Ａ）がチミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ）に結合する。Ａのパートナ
ーとしてのＵ（ＲＮＡ）とＴ（ＤＮＡ）の等価性に加えて、他の天然ヌクレオベ
ースが知られており、５−メチルシトシン及び５−ヒドロキシメチルシトシン（
ＨＭＣ）（Ｃと等価）並びに５−ヒドロキシメチルウラシル（Ｕと等価）などが
ある。さらにこの技術ではパートナーを特異的に保持する合成ヌクレオチドが知
られており、これには、例えばＣをパートナー特異的に保持する７−デアザ−グ
アニンがある。このように、このオリゴヌクレオチドは、パートナーヌクレオベ
ースに対する特異性を標的核酸に嵌入せず、オリゴヌクレオチドの有する標的配
列との特異的ハイブリッド形成能力は、このオリゴヌクレオチドのヌクレオチド
配列にあるヌクレオベースに対する化学的修飾によって変化しない。

【００８８】 この技術においてはオリゴヌクレオチド又は他のアンチセンス化合物のヌクレ
オベース配列は、特異的ハイブリッド形成のために必ずしもその標的核酸配列に
対して１００％相補的である必要はない。アンチセンス化合物は、特異的結合が
要求される状態下、すなわち生体内分析もしくは治療的処置、又は生体外分析な
どの分析状態下にある非標的配列に対して、オリゴヌクレオチドの非特異的結合
回避に十分な相補性がある場合、その標的核酸に対して特異的ハイブリッド形成
が可能である。

【００８９】 アンチセンスオリゴヌクレオチドは一般に研究試薬、診断用薬及び治療薬とし
て使用される。例えば、鋭敏な特異性をもって遺伝子発現を阻害するアンチセン
スオリゴヌクレオチドは、特定遺伝子の機能の解明、例えば様々な生物学的経路
の機能の違いの解明に、その通常の能力が用いられることが多い。したがって、
研究的使用のための技術で、この特異的阻害効果を当業者が利用してきた。オリ
ゴヌクレオチドの特異性及び敏感性は治療的使用の目的でも当業者が利用してき
た。本発明の好ましい有用なアンチセンス化合物の明細例には、修飾バックボー
ン又は非天然糖間連結を持つオリゴヌクレオチドがある。本文書の明細にあると
おり、修飾バックボーンを有するオリゴヌクレオチドは、そのバックボーンにリ
ン原子を保持するもの及びそのバックボーンにリン原子を保持しないものを含む
。この明細の目的に関して、及びこの技術において参照を付けたように、その糖
相互バックボーンにリン原子を持たない修飾オリゴヌクレオチドもオリゴヌクレ
オシドとみなすことができる。

【００９０】 特異的オリゴヌクレオチドの化学的修飾は後の小節で述べる。必ずしも与えら
れた化合物のすべての位置に均一修飾が必要なわけではなく、実際、以下の修飾
の一つ以上を単一のアンチセンス化合物に組み込むか、又はその単一の残基、例
えばオリゴヌクレオチド内部の単一のヌクレオシドに組み込む場合さえある。

【００９１】 修飾連結：好ましい修飾オリゴヌクレオチドバックボーンには、例えばホスホ
ロチオエート、キラルホスホロチオネート、ホスホロジチオネート、ホスホトリ
エステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチル並びに３' −アルキレン
ホスホン酸塩及びキラルホスホン酸塩を含む他のアルキルホスホン酸塩、ホスホ
ン酸塩、ホスフィネート、３' −アミノホスホラミデート及びアミノアルキルホ
スホラミデートを含むホスホラミデート、チオノホスホラミデート、チオノアル
キルホスホン酸塩、チオノアルキルホスホトリエステル、並びに正常３' −５'
連結、これらに沿って連結する２' −５' 、並びにヌクレオシド単位の隣接対が
３' −５' から５' −３' に、あるいは２' −５' から５' −２' に連結し連結
している逆極性のボラノリン酸塩などの修飾オリゴヌクレオチドバックボーンが
ある。様々な塩形態、混合性の塩形態、及び遊離酸形態を含む。

【００９２】 上記のリン原子含有連結の調製を教える代表的な米国特許は、これに限らない
が、特許３，６８７，８０８；４，４６９，８６３；４，４７６，３０１；５，
０２３，２４３；５，１７７，１９６；５，１８８，８９７；５，２６４，４２
３；５，２７６，０１９；５，２７８，３０２；５，２８６，７１７；５，３２
１，１３１；５，３９９，６７６；５，４０５，９３９；５，４５３，４９６；
５，４５５，２３３；５，４６６，６７７；５，４７６，９２５；５，５１９，
１２６；５，５３６，８２１；５，５４１，３０６；５，５５０，１１１；５，
５６３，２５３；５，５７１，７９９；５，５８７，３６１；５，６２５，０５
０；及び５，６９７，２４８などであり、これらのうち特定のものはこの申請に
よって共同所有されており、またこれらのそれぞれを参照により本明細書中に組
み入れる。

【００９３】 その中にリン原子を有しない（すなわちオリゴヌクレオシド）好ましい修飾オ
リゴヌクレオチドバックボーンは、アルキル又はシクロアルキルの短鎖糖間連結
で形成されるバックボーンを持つ。この糖間連結は、ヘテロ原子とアルキルもし
くはシクロアルキル糖間連結とを混合した糖間連結、又はヘテロ原子と一つ以上
の短鎖へテロ原子もしくは複素環の糖間連結とを混合した糖間連結である。これ
らの修飾オリゴヌクレオチドバックボーンには、シロキサンバックボーン；硫化
物、スルホキシド及びスルホンバックボーン；ホルムアセチル及びチオホルムア
セチルバックボーン；バックボーンを含むアルケン；スルファミン酸バックボー
ン；メチレンイミン及びメチレンヒドラジンバックボーン；スルホン酸塩及びス
ルホンアミドバックボーン；アミドバックボーン；及びその他混合されたＮ、Ｏ
、Ｓ、及びＣＨ₂ 成分部分などのモルホリノ連結（ヌクレオシドの糖部分から部
分的に形成された）を有する修飾オリゴヌクレオチドバックボーンがある。

【００９４】 上記のオリゴヌクレオシドの調製を教える代表的な米国特許はこれに限らない
が米国特許５，０３４，５０６；５，１６６，３１５；５，１８５，４４４；５
，２１４，１３４；５，２１６，１４１；５，２３５，０３３；５，２６４，５
６２；５，２６４，５６４；５，４０５，９３８；５，４３４，２５７；５，４
６６，６７７；５，４７０，９６７；５，４８９，６７７；５，５４１，３０７
；５，５６１，２２５；５，５９６，０８６；５，６０２，２４０；５，６１０
，２８９；５，６０２，２４０；５，６０８，０４６；５，６１０，２８９；５
，６１８，７０４；５，６２３，０７０；５，６６３，３１２；５，６３３，３
６０；５，６７７，４３７；及び５，６７７，４３９などがあり、これらのうち
特定のものはこの申請によって共同所有されており、またこれらのそれぞれを参
照により本明細書中に組み入れる。

【００９５】 他の好ましいオリゴヌクレオチド擬態においては、ヌクレオチド単位の糖と糖
間連結つまりバックボーンの両方とも新規の基と置換される。塩基単位は維持さ
れ、適正な核酸標的化合物とハイブリッド形成する。このようなオリゴマー化合
物の一つは、優れたハイブリッド形成性を有することが明らかになっているオリ
ゴヌクレオチド擬態であり、ペプチド核酸（ＰＮＡ）と呼ぶ。ＰＮＡ化合物にお
いては、オリゴヌクレオチドの糖バックボーンは、バックボーンを持つアミドと
置換され、特にアミノエチルグリシンバックボーンと置換される。ヌクレオベー
スは保持され、バックボーンのアミノタンパク質のアザ窒素原と直接又は間接的
に結合する。上記のＰＮＡ化合物の調製を教える代表的な米国特許はこれに限ら
ないが米国特許５，５３９，０８２；５，７１４，３３１；及び５，７１９，２
６２などがあり、これらのそれぞれを参照により本明細書中に組み入れられる。
ＰＮＡ化合物はさらにＮｉｅｌｓｅｎら（Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、１９９１年、２５
４号、１４９７ページ）で見ることができる。

【００９６】 本発明の最も好ましい実施例は、ホスホロチオエートバックボーンを有するオ
リゴヌクレオチド及びヘテロ原子バックボーンを有するオリゴヌクレオシドであ
り、また特に上記の米国特許５，４８９，６７７参照の−ＣＨ₂ −ＮＨ−Ｏ−Ｃ
Ｈ₂ −、−ＣＨ₂ −Ｎ（ＣＨ₃ ）−Ｏ−ＣＨ₂ −（メチレン（メチルイミノ）、
又はＭＭＩバックボーンとして知られている−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ₃ ）−ＣＨ ₂ −、−ＣＨ₂ −Ｎ（ＣＨ₃ ）−Ｎ（ＣＨ₃ ）−ＣＨ₂ −及び−Ｏ−Ｎ（ＣＨ₃ ）−ＣＨ₃ −ＣＨ₂ −（ここでは天然リン酸ジエステルバックボーンが−Ｏ−Ｐ
−Ｏ−ＣＨ₂ −で表されている）、及び上記参照米国特許５，６０２，２４０の
アミドバックボーンである。同じく好ましいのは上記参照米国特許５，０３４，
５０６のモルホリノバックボーン構造を有するオリゴヌクレオチドである。

【００９７】 修飾ヌクレオベース：本発明の成分はさらに付加して、又はこれに代えてヌク
レオベース（この技術では単に「塩基」と呼ぶことが多い）修飾又はヌクレオベ
ース置換を含んでいる。ここで使用する「無修飾」ヌクレオベース又は「天然」
ヌクレオベースは、プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）、並びにピリ
ミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）を含む。修飾ヌク
レオベースには、他の合成ヌクレオベース及び天然ヌクレオベースがあり、５−
メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）、５−ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン
、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル並びにアデニン及びグアニ
ンの他のアルキル誘導体、２−プロピル及びアデニン並びにグアニンの他のアル
キル誘導体、２−チオウラシル、２−チオチミン及び２−チオシトシン、５−ハ
ロウラシル及びシトシン、５−プロピニルウラシル及びシトシン、６−アゾウラ
シル、シトシン及びチミン、５−ウラシル（プソイドウラシル）、４−チオウラ
シル、８−ハロ、８−アミノ、８−チオール、８−チオアルキル、８−ヒドロキ
シル並びに他の８−置換アデニン及びグアニン、５−ハロ特に５−ブロモ、５−
トリフルオロメチル並びに他の５−置換ウラシル及びシトシン、７−メエチルグ
アニン及び７−メチルアデニン、８−アザグアニン及び８−アザアデニン、７−
デアザグアニン及び７−デアザアデニン並びに３−デアザグアニン及び３−でア
ザアデニンなどのような他の合成ヌクレオベース及び天然ヌクレオベースである
。さらに、ヌクレオベースには、米国特許３，６８７，８０８で開示されている
ヌクレオベース、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｏｌｙ
ｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、８５８〜８５９ペ
ージ、Ｋｒｏｓｃｈｗｉｔｚ Ｊ．Ｉ編集、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ著
１９９０年で開示されているヌクレオベース、Ｅｎｇｌｉｓｃｈら、Ａｎｇｅｗ
ａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ 国際版１９９１年、３０号、６１３ページで開示さ
れているヌクレオベース、及びＳａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．１５章、Ａｎｔｉｓｅ
ｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、２８９〜３０
２ページ、Ｃｒｏｏｋｅ， Ｓ．Ｔ．及びＬｅｂｌｅｕ Ｂ． 編集、ＣＲＣ出
版、１９９３年で開示されているヌクレオベースなどがある。これらのヌクレオ
ベースのうち特定のものは特に本発明のオリゴマー化合物の結合親和性を増加さ
せるために有用である。これらには５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン及
びＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリンがあり、２−アミノプロピルアデニン、
５−プロピルウラシル及び５−プロピルシトシンを含む。５−メチルシトシン置
換は、０．６〜１．２℃で核酸二重鎖安定性を増大させることが示されており（
Ｉｄ．２７６〜２７８ページ）、現在好ましい塩基置換であり、特に２' −メト
キシエチル糖修飾と組み合わせた場合さらに好ましい。

【００９８】 上記の修飾ヌクレオベースの調製と他の修飾ヌクレオベースの調製を教える米
国特許には、これらに限らないが上記米国特許３，６８７，８０８と同様に４，
８４５，２０５； ５，１３０，３０２； ５，１３４，０６６； ５，１７５
，２７３； ５，３６７，０６６； ５，４３２，２７２； ５，４５７，１８
７； ５，４５９，２５５； ５，４８４，９０８； ５，５０２，１７７； ５，５２５，７１１； ５，５５２，５４０； ５，５８７，４６９； ５，５
９４，１２１； ５，５９６，０９１； ５，６１４，６１７；及び５，６８１
，９４１などがあり、このうちの特定のものは共同所有されており、これらのそ
れぞれを参照により本明細書中に組み入れられる。また、共同所有されている１
９９６年１２月１０日に出願された米国特許出願０８／７６２、４８８も参照に
より本明細書中に組み入れられる。

【００９９】 糖修飾：本発明のアンチセンス化合物はさらに付加して又はこれに代えて一つ
以上の置換糖成分を含んでいる可能性がある。好ましいオリゴヌクレオチドは２
' 位置に、次に挙げるものの一つを含んでいる。ＯＨ；Ｆ；Ｏ−、Ｓ−、もしく
はＮ−アルキル、又はＯ−、Ｓ−、もしくはＮ−アルケニル、又はＯ、Ｓ−、も
しくはＮ−アルキニルであり、ここでは、アルキル、アルケニル及びアルキニル
は、Ｃ₂ をＣ₁₀アルキルに置換するか、又はＣ₂ をＣ₁₀アルケニル及びアルキニ
ルに置換するか、あるいはこれらの置換を行わない可能性がある。特に好ましい
のはＯ［（ＣＨ₂ ）_n Ｏ］_m ＣＨ₃、Ｏ（ＣＨ₂ ）_n ＯＣＨ₃、Ｏ（ＣＨ₂ ）_n ＮＨ ₂、 Ｏ（ＣＨ₃ ）_n ＣＨ₃、Ｏ（ＣＨ₂ ）_n ＯＮＨ₂ 、及びＯ（ＣＨ₂ ）_n ＯＮ［（
ＣＨ₃ ）_n ＣＨ₃ ］］、であり、ここではｎ及びｍは１からおよそ１０までであ
る。他の好ましいオリゴヌクレオチドは２' 位置に次にあげるものの一つを含む
。Ｃ₁ からＣ₁₀の低アルキル、置換低アルキル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−
アルカリル又はＯ−アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ₃ 、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、
ＣＦ₃ 、ＯＣＦ₃ 、ＳＯＣＨ₃ 、ＳＯ₂ ＣＨ₂ 、ＯＮＯ₂ 、ＮＯ₃ 、Ｎ₃ 、ＮＨ ₂ 、ヘトロシクロアルキル、へトロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、
ポリアルキルアミド、置換シリル、ＲＮＡ開裂基、リポーター基、インターカレ
ーター、オリゴヌクレオチドの薬物動態特性を高める基、あるいはオリゴヌクレ
オチドの薬力学的な性質を高める基及び同様の性質を持つ他の置換基などである
。好ましい修飾には２' −メトキシエトキシ［２' −Ｏ−ＣＨ₂ ＣＨ₂ ＯＣＨ₃ 、２' −Ｏ−（２−メトキシエチル）あるいは２' −ＭＯＥとしても知られてい
る］（Ｍａｒｔｉｎら、Ｈｅｌｖ、Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、１９９５年、７８号、
４８６ページ）、すなわちアルコキシアルコキシ基がある。さらなる好ましい修
飾には２' −ジメチルアミノオキシエトキシ、すなわちＯ（ＣＨ₂ ） ₂ＯＮ（Ｃ
Ｈ₂ ） ₃基があり、２' −ＤＭＡＯＥとしても知られており、１９９８年１月３
０日に出願された米国特許出願０９／０１６，５２０に記載したとおりであり、
その内容を参照により本明細書中に組み入れらる。

【０１００】 他の好ましい修飾には２' −メトキシ（２' −Ｏ−ＣＨ₃ ）、２' −アミノプ
ロポキシ（２' −ＯＣＨ₂ ＣＨ₂ ＣＨ₃ ＮＨ₂ ）及び２' −フルオロ（２' −Ｆ
）がある。同様な修飾を、オリゴヌクレオチドの他の位置で作ることも可能であ
り、特に３' 末端のヌクレオチド上の糖あるいはオリゴヌクレオチドに連結する
２' −５' にある糖の３' 位置、及び５' 末端ヌクレオチドの５' 位置で作るこ
とが可能である。オリゴヌクレオチドはまたペントフラノシル糖の代わりのシク
ロブチル成分のような糖擬態も持っていることがある。このような修飾糖構造の
調整を教える代表的な米国特許には、これに限らないが米国特許４，９８１，９
５７；５，１１８，８００；５，３１９，０８０；５，３５９，０４４；５，３
９３，８７８；５，４４６，１３７；５，４６６，７８６；５，５１４，７８５
；５，５１９，１３４；５，５６７，８１１；５，５７６，４２７；５，５９１
，７２２；５，５９７，９０９；５，６１０，３００；５，６２７，０５３１；
５，６３９，８７３；５，６４６，２６５；５，６５８，８７３；５，６７０，
６３３；及び５，７００，９２０などがあり、このうちの特定のものは共同所有
である。また、これらのそれぞれを参照により本明細書中に組み入れ、１９９５
年６月５日に出願された米国特許出願０８／４６８，０３７も参照により本明細
書中に組み入れる。

【０１０１】 他の修飾：付加的修飾をオリゴヌクレオチドの他の位置で作ることが可能であ
り、特に３' 末端ヌクレオチドにある糖の３' 位置及び５' 末端ヌクレオチドの
５' 位置で作ることが可能である。例えば、本発明のオリゴヌクレオチドの付加
的修飾の一つは、オリゴヌクレオチドの一つ以上の成分との化学的連結を伴って
生じるか、又は活性、細胞分配もしくはオリゴヌクレオチドの細胞取り込みを亢
進する共役体との化学的連結を伴って生じる。このような成分には脂質成分があ
り、これに限らないが、コレステロール成分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、Ｐｒｃｃ
．Ｎａｔｌ．Ａｃｚｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９年８６号、６５５３ページ）
、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ
ｔ．、１９９４年、４号、１０５３ページ）、チオエーテル、例えばへキシルＳ
−トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．誌、１９９２年、６６０号、３０６ページ；Ｍａｎｏｈａｒａら、Ｂｉｏｏ
ｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔ．、１９９３年、３号、２７６５ページ
）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｅｓ
Ｒｅｓ．、１９９２年、２０号、５３３ページ）、脂肪族鎖、例えばドデカン
ジオール又ははウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ−Ｂｅｈｍｏａｒａｓら、ＥＭＢ
Ｏ誌、１９９１年、１０号、１１１ページ；Ｋａｂｎｏｖら、ＦＥＢＳ Ｌｅｔ
ｔ．、１９９０年、２５９号、３２７ページ；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋら、Ｂｉｏ
ｃｈｉｍｉｅ誌、１９９３年、７５号、４９ページ）、リン脂質、例えばジ−ヘ
キサデシル−ｒａｃ−グリセロール又はトリエチルアンモニウム１、２−ジ−Ｏ
−ヘキサデシル−ｒａｃ−グリセロ−３−Ｈ−ホスホン酸塩（Ｍａｎｏｈａｒａ
ｎら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９５年、３６号、３６５１ペ
ージ； Ｓｈｅａら、Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９０年１８号、
３７７７ページ）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒ
ａｎら、Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｋｕｒｅｏｏｔｉｄｅｓ、１９９５
年、１４号、９６９ページ）、あるいはエナメル質の酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ
ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９５年、３６号、３６５１ペー
ジ）、パルミチル成分（Ｍｉｓｈｒａら、Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ａｃｔａ、１９９５年、１２６４号、２２９ページ）、あるいはオクタデシル
アミン又はヘキシルアミノ−カルボニル−オキシコレステロール成分（Ｃｒｏｏ
ｋｅら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．誌、１９９６年２７７号、９
２３ページ）などのような脂質成分がある。

【０１０２】 このようなオリゴヌクレオチド共役体の調製を教える代表的な米国特許は、こ
れに限らないが、米国特許４，８２８，９７９；４，９４８，８８２；５，２１
８，１０５；５，５２５，４６５；５，５４１，３１３；５，５４５，７３０；
５，５５２，５３８；５，５７８，７１７；５，５８０，７３１；５，５８０，
７３１；５，５９１，５８４；５，１０９，１２４；５，１１８，８０２；５，
１３８，０４５；５，４１４，０７７；５，４８６，６０３；５，５１２，４３
９；５，５７８，７１８；５，６０８，０４６；４，５８７，０４４；４，６０
５，７３５；４，６６７，０２５；４，７６２，７７９；４，７８９，７３７；
４，８２４，９４１；４，８３５，２６３；４，８７６，３３５；４，９０４，
５８２；４，９５８，０１３；５，０８２，８３０；５，１１２，９６３；５，
２１４，１３６；５，０８２，８３０；５，１１２，９６３；５，２１４，１３
６；５，２４５，０２２；５，２５４，４６９；５，２５８，５０６；５，２６
２，５３６；５，２７２，２５０；５，２９２，８７３；５，３１７，０９８；
５，３７１，２４１；５，３９１，７２３；５，４１６，２０３；５，４５１，
４６３；５，５１０，４７５；５，５１２，６６７；５，５１４，７８５；５，
５６５，５５２；５，５６７，８１０；５，５７４，１４２；５，５８５，４８
１；５，５８７，３７１；５，５９５，７２６；５，５９７，６９６；５，５９
９，９２３；５，５９９，９２８及び５，６８８，９４１などがあり、これらの
うちの特定のものは共同所有である。また、これらのそれぞれを参照により本明
細書中に組み入れる。

【０１０３】 キメラオリゴヌクレオチド：本発明はキメラ化合物であるアンチセンス化合物
も含む。この発明の文脈における「キメラ」アンチセンス化合物もしくは「キメ
ラ」はアンチセンス化合物であり、特に複数の化学的に異なる領域を持つオリゴ
ヌクレオチドであり、それぞれが少なくとも一つの単量体単位、すなわちオリゴ
ヌクレオチド化合物の場合ではヌクレオチドである単量体単位で作成される。こ
れらのヌクレオチドは通常少なくとも一つの領域を持ち、その領域ではオリゴヌ
クレオチドにヌクレオベース分解耐性増大、細胞取り込み増加、及び／又は標的
核酸に対する結合親和性増大をもたらすよう、オリゴヌクレオチドを修飾する。
オリゴヌクレオチドの付加的領域はＲＮＡ：ＤＮＡ又はＲＮＡ：ＲＮＡハイブリ
ッドを切断できる酵素のための基質の役割を果たす可能性がある。例証として、
ＲＮＡ分解酵素ＨはＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌク
レアーゼである。したがってＲＮＡ分解酵素Ｈの活性化は、ＲＮＡ標的の切断を
もたらし、それにより遺伝子発現のオリゴヌクレオチド阻害効果を非常に増進す
る。その結果、キメラオリゴヌクレオチドを使用した場合には、同じ標的領域に
ハイブリッド形成したホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチドに匹敵す
る結果を、より短いオリゴヌクレオチドで得ることができる。ＲＮＡ標的の切断
は、ゲル電気泳動法によって常例的に検出可能であり、必要な場合には、この技
術において知られている核酸ハイブリッド形成技法と連結させることができる。
ＲＮＡ分解酵素Ｈによる標的切断は核酸を切断するリボザイムの使用とはっきり
区別される。リボザイムは本発明に包含されない。

【０１０４】 例として、このような「キメラ」は、「ギャップマー」すなわちオリゴヌクレ
オチドの可能性がある。このオリゴヌクレオチドは、その中心部分（「ギャップ
」）が、例えばＲＮＡ分解酵素Ｈの基質の役割を果たすオリゴヌクレオチドであ
り、標的ＲＮＡ分子に対して高い親和性を持ち、あるいは二重鎖になった場合は
高い安定性を持つが、核酸分解酵素活性を支持できないよう５' 及び３' 部分（
「翼」）を修飾したオリゴヌクレオチドである（例えば、２' −フルオロ−又は
２' −メトキシエトキシ−が置換される）。他のキメラには「へミマー (hemime
r)」すなわち、オリゴヌクレオチドの５' 部分が例えばＲＮＡ分解酵素のための
基質の役割を果たすオリゴヌクレオチドであり、標的ＲＮＡ分子に対して高い親
和性を持ち、あるいは二重鎖になった場合には高い安定性を持つが、核酸分解酵
素活性を支持できないように３' 部分を修飾したオリゴヌクレオチド（例えば、
２' −フルオロ−又は２' −メトキシエトキシ−が置換される）、あるいはこの
逆のオリゴヌクレオチドがある。

【０１０５】 オリゴヌクレオチドに対する多くの化学的修飾は、オリゴヌクレオチド：ＲＮ
Ａの高い二重鎖安定性をもたらす。この化学的修飾についてはＦｒｅｉｅｒら（
Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９９７年、２５号、４４２９ページ）に記
載されている。このような修飾はオリゴヌクレオチドのＲＮＡ分解酵素Ｈ−不応
部分に好ましく、一般にアンチセンス化合物の標的ＲＮＡに対する親和性増進に
使用される可能生がある。

【０１０６】 本発明のキメラアンチセンス化合物は、複数のオリゴヌクレオチド、複数の修
飾オリゴヌクレオチド及び／又は先に述べた複数のオリゴヌクレオチド擬態の複
合体構造として形成される可能性がある。このような化合物もまた技術的にハイ
ブリッド又はギャップマーと言われてきた。このようなハイブリッド構造の調製
を教える代表的な米国特許は、これに限らないが、特許５，０１３，８３０；５
，１４９，７９７；５，２２０，００７；５，２５６，７７５；５，３６６，８
７８；５，４０３，７１１；５，４９１，１３３；５，５６５，３５０；５，６
２３，０６５；５，６５２，３５５；５，６５２，３５６；及び５，７００，９
２２などであり、これらのうちの特定のものは共同所有であり、これらのそれぞ
れを参照により本明細書中に組み入れる。また、共同所有であり、許可されてい
る１９９５年６月６日に出願された米国特許出願０８／４６５，８８０も、その
内容を参照により本明細書中に組み入れる。

【０１０７】 さらに好ましい修飾には、２' ジメチルアミノオキシエトキシつまりＯ₂ （Ｃ
Ｈ₂ ） ₂ＯＮ（ＣＨ₃ ） ₂基があり、これは２' −ＤＭＡＯＥとしても知られて
いる。これは１９９８年１月３０日出願の米国特許出願０９／０１６，５２０に
記載されているとおりであり、その内容を参照により本明細書中に組み入れる。
他の好ましい修飾には、２' −メトキシ（２' −Ｏ−ＣＨ₃ ）、２' −アミノプ
ロポキシ（２' −ＯＣＨ₂ ＣＨ₂ ＣＨ₂ ＮＨ₂ ）、及び２' −フルオロ（２' −
Ｆ）などがある。同様の修飾は、糖基のほかの位置でも作成される可能性があり
、特に３' −末端ヌクレオチドもしくは２' −５' 連結オリゴヌクレオチド上の
糖の３' 位置、並びに５' 末端ヌクレオチドの５' 位置に形成される可能性があ
る。オリゴヌクレオチドのヌクレオチドは、ペントフラノシルの代わりのシクロ
ブチル成分のような糖擬態を有する可能性がある。

【０１０８】 置換及び非置換リン酸ジエステルオリゴヌクレオチドは、ヨウ素による酸化を
有する標準ホスホラミダイト化学作用を用いた自動ＤＮＡ合成装置で交互に合成
される（Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍ モデル ３Ｂ０Ｂを適用）。 ホスホロチオエートは、亜リン酸塩連結の段階的チオ化のために、標準の酸化
瓶をアセトニトリル中３Ｈ−１，２−ベンゾジチオル−３−オン １，１−ジオ
キシド０．２Ｍ溶液と取り替えた点を除いては、リン酸ジエステルオリゴヌクレ
オチドにより合成される。チオ化待ち段階は６８秒に延び、その後にキャップ形
成段階が続く。濃水酸化アンモニウム５５℃（１８時間）下のＣＰＧカラム及び
脱遮断での切断の後、オリゴヌクレオチドを、０．５Ｍ ＮａＣｌ溶液から２．
５エタノール量で二度沈殿させ精製した。 ホスフィン酸塩オリゴヌクレオチドは、参照により本明細書中に組み入れられ
る米国特許５，５０８，２７０に記載したように調製する。 アルキルホスホン酸塩オリゴヌクレオチドは、参照により本明細書中に組み入
れられる米国特許４，４６９，９６３に記載したように調製する。

【０１０９】 ３' −デオキシ−３' −メチレンホスホン酸塩オリゴヌクレオチドは、参照に
より本明細書中に組み入れられる米国特許５，６１０，２８９又は５，６２５，
８７８に記載したように調製する。 ホスホラミダイトオリゴヌクレオチドは、参照により本明細書中に組み入れら
れる米国特許５，２５６，７７５又は米国特許５，３６６，８７８に記載したよ
うに調製する。 アルキルホスホノチオエートオリゴヌクレオチドは、広告されたＰＣＴ出願Ｐ
ＣＴ／ＵＳ９４／００９０２及びＰＣＴ／ＵＳ９３／０６９７６（それぞれＷＯ
９４／１７０９３及びＷＯ ９４／０２４９９として広告された）に記載した
ように調製する。 ３' −デオキシ−アミノホスホラミダイトオリゴヌクレオチドは、参照により
本明細書中に組み入れられる米国特許５，４７５，９２４に記載したように調製
する。 ホスホトリエステルオリゴヌクレオチドは、参照により本明細書中に組み入れ
られる米国特許５，０２３，２４３に記載したように調製する。 ボラノリン酸塩オリゴヌクレオチドは、参照により本明細書中に組み入れられ
る米国特許５，１３０，３０２及び５，１１７，１９８に記載したように調製す
る。

【０１１０】 ＭＭＩ連結オリゴヌクレオシドとしても同定されたメチレンメチルイミノ連結
オリゴヌクレオシド、ＭＤＨ連結オリゴヌクレオシドとして同定されたメチレン
ジメチルヒドラゾ連結オリゴヌクレオシド、並びにアミド−３連結オリゴヌクレ
オシドとしても同定されたメチレンカルボニルアミノ連結オリゴヌクレオシド、
並びにアミド−４連結オリゴヌクレオシドとしても同定されたメチレンアミノカ
ルボニル連結オリゴヌクレオシドと同じく、例えば交代性のＭＭＩ及びＰＯ又は
ＰＳ連結を有する混合バックボーン化合物も、米国特許５，３７８，８２５、５
，３８６，０２３、 ５，４８９，６７７、５，６０２，２４０及び５，６１０
，２８９に記載したとおり調製される。これら全てを参照により本明細書中に組
み入れられる。

【０１１１】 ホルムアセタール及びチオホルムアセタール連結オリゴヌクレオシドは、参照
により本明細書中に組み入れられる米国特許５，２６４，５６２及び５，２６４
，５６４に記載したように調製する。 エチレン酸化物オリゴヌクレオシドは参照により本明細書中に組み入れられる
米国特許５，２２３，６１８に記載したように調製する。 ペプチド核酸（ＰＮＡｓ）は、ペプチド核酸（ＰＮＡ）；Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ
， Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉ
ｏｎｓ、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
、１９９６年、４号、５ページにおいて言及した多様な手順のいずれによっても
調製できる。これらも参照により本明細書中に組み入れられる米国特許５，５３
９，０８２、５，７００，９２２、及び５，７１９，２６２によっても調製され
る可能性がある。 特異的オリゴヌクレオチドの例及びそれらが阻害する標的遺伝子で本発明の製
剤に使用される可能性のあるものには

【０１１２】

【表１】

【０１１３】 などがあり、ここでは（ｉ）各オリゴバックボーン連結はホスホロチオエート連
結であり（ＩＳＩＳ−９６０５を除く）、（ｉｉ）２' −Ｏ−メトキシエチル着
を組み込んでいる場合の太字体で表されない限り、それぞれの糖は、２' −デオ
キシであり、（ｉｉｉ）下線のあるシトシンヌクレオシドは、そのヌクレオベー
スに５−メチル置換基を組み入れている。ＩＳＩＳ−９６０５は、ホスホロチオ
エート連結である残部との最初の５連結及び最後の５連結に、天然リン酸ジエス
テル結合を組み込んでいる。

【０１１４】 Ｄ．オリゴヌクレオチドの合成：本発明により使用されたオリゴヌクレオチド
は簡便にまた常例的に、よく知られた液相合成技法により作成される可能性があ
る。このような合成のための設備は、例えばＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅ
ｍｓ（カリフォルニア州、フォスター市）などのいくつかの業者で販売されてい
る。この技術で既知のこのような合成用の他の手段はいずれも、ここで使用した
手段に追加できる可能性があり、あるいは代わりの方法になる可能性がある。ホ
スホロチオエート及びアルキル化誘導体のような他のオリゴヌクレオチドを調製
する類似技法を使用することも知られている。

【０１１５】 特定の修飾オリゴヌクレオチド合成に関する教示は次に示す米国特許又は懸案
中の特許出願で見出す可能性がある。各教示はこの出願によって共同で譲渡され
ている。ポリアミン共役オリゴヌクレオチドに対して作成された米国特許５，１
３８，０４５及び５，２１８，１０５、キメラリン連結を有するオリゴヌクレオ
チド調製用単量体に対して作成された米国特許５，２１２，２９５、修飾バック
ボーンを有するオリゴヌクレオチドに対して作成され米国特許５，３７８，８２
５及び５，５４１，３０７、バックボーン修飾オリゴヌクレオチド及び還元的カ
ップリングによるそれらの調製に対して作成された米国特許５，３８６，０２３
、３−デアザプリン環システムに基づく修飾ヌクレオベース及びその合成方法に
対して作成された米国特許５，４５７，１９１、Ｎ−２置換プリンに基づく修飾
ヌクレオベースに対して作成された米国特許５，４５９，２５５、キメラリン連
結を有するオリゴヌクレオチド調製過程に対して作成された米国特許５，５２１
，３０２、ペプチド核酸に対して作成された米国特許５，５３９，０８２、β−
ラクタムバックボーンを有するオリゴヌクレオチドに対して作成された米国特許
５，５５４，７４６、オリゴヌクレオチド合成の方法及び材料に対して作成され
た米国特許５，５７１，９０２、ヌクレオシドの種々の位置のいずれにも付着す
る他成分へのリンカーとして使用される可能性があるようなアルキルチオ基を有
するヌクレオシドに対して作成された米国特許５，５７８，７１８、高キメラ純
度のホスホロチオエートを有するオリゴヌクレオチドに対して作成された米国特
許５，５８７，３６１及び５，５９９，７９７、２' −Ｏ−アルキルグアノシン
及び２，６−ジアミノプリン成分などの関連成分の調製過程に対して作成された
米国特許５，５０６，３５１、Ｎ−２置換プリンを有するオリゴヌクレオチドに
対して作成された米国特許５，５８７，４６９、３−ジアザプリンを有するオリ
ゴヌクレオチドに対して作成された米国特許５，５８７，４７０、両方とも共役
４' −脱メチルヌクレオシド類似体に対して作成された米国特許５，２２３，１
６３、１９９３年６月２９日発行、及び米国特許５，６０８，０４６、オリゴヌ
クレオチド類似体修飾されたバックボーンに対して作成された米国特許５，６０
２，２４０及び５，６１０，２８９、並びに、特に２' −フルオロ−オリゴヌク
レオチド合成方法に対して作成された米国特許出願０８／３８３，６６６，１９
９５年２月３日に出願された米国特許５，４５９，２５５などである。

【０１１６】 Ｅ．生物学的同等物： オリゴヌクレオチド薬剤それ自体に加えて、本発明の
製薬成分は、薬学的に許容できる塩類の製剤、エステル又はこのようなエステル
の塩類の製剤、あるいはヒトを含む動物への投与において生物学的に活性のオリ
ゴヌクレオチド又はその残基を（直接的又は間接的に）得られる全ての他の化合
物の製剤に使用できる。したがって、例えば、この公開は、本発明のオリゴヌク
レオチドの「プロドラッグ」及び「薬学的に許容できる塩類」、このようなプロ
ドラッグの薬学的に許容できる塩類、並びに他の生物学的同等性があるものに対
しても作成されている。

【０１１７】 オリゴヌクレオチドプロドラッグ：本発明の成分に使用するこのオリゴヌクレ
オチド及び核酸化合物は、さらに付け加える方法として、又は変わりになる方法
として、「プロドラッグ」形態で送達されるよう調製される可能性がある。用語
「プロドラッグ」は、不活性形態に調剤されている治療薬で、内在性酵素又は他
の化学作用、及び／あるいは状態によって、体内又は細胞内で活性形態（すなわ
ち薬剤）に変わる治療薬を指す。特にアンチセンス化合物のプロドラッグ種はＷ
Ｏ ９３／２４５１０（Ｇｏｓｓｅｌｉｎら、１９９３年、１２月９日広告た）
で公開されている方法によるＳＥＴＥ

【（Ｓ−アセチル−２−チオエチル）リン
酸塩】誘導体として調製される可能性がある。

【０１１８】 薬学的に許容できる塩類：用語「薬学的に許容できる塩類」は、本発明の成分
に使用したオリゴヌクレオチド及び核酸化合物の、生理学的及び薬学的に許容で
きる塩類（すなわち、親化合物の望ましい生理活性を保持し、且つそれらに対し
て望ましくない毒性効果を嵌入しない塩類）を呼ぶ。

【０１１９】 薬学的に許容できる塩基付加塩類は、アルカリ及びアルカリ土類金属、あるい
は有機アミンのような金属もしくはアミンで形成される。陽イオンとして用いら
れる金属の例は、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、アンモニ
ウム、スペルミン及びスペルミジンのようなポリアミン、並びにその他同種類の
ものである。適切なアミンの例は、クロロプロカイン、コリン、Ｎ，Ｎ' −ジベ
ンジルエチレンジアミン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチ
レンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、及びプロカインである（例えば、Ｂｅｒ
ｇｅら、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ，" Ｐｈａｒｍａ Ｓｃ
ｉ．誌、１９７７年、６６；１参照）。前述の酸性化合物の塩基付加塩類は、遊
離酸形態を十分な量の望ましい塩基に接触させて調製し、従来の方法でこの塩を
生成する。遊離酸形態はその塩形態を酸に接触させること、及び従来の方法で遊
離酸を単離することにより再生される可能性がある。遊離酸形態は、それらの形
態のそれぞれの塩形態とは、極性溶媒における溶解性のような特定の物理学的性
質がやや異なるが、その他の点ではこの塩類は本発明の目的上、塩類それぞれの
遊離酸と等価である。

【０１２０】 ｎ−１誘導体：オリゴヌクレオチド合成の間、ヌクレオシド単量体カップリン
グ、酸化、カップリング及び脱トリチル化のような一連の化学反応の反復の中で
、ヌクレオシド単量体は鎖の単量体に付着する。それぞれのヌクレオシド付加に
対する段階的な収率は９９％以上である。これは、不完全なキャップ形成、脱ト
リチル化及び酸化の後に続く不完全なカップリングの全ての結果として、各段階
でヌクレオシド付加からの産生に失敗した配列鎖が１％以下であったことを意味
している（Ｓｍｉｔｈ， Ａｎａｌ． Ｃｈｅｍ．、１９８８年、６０号、３８
１Ａ）。より短い（ｎ−１）、（ｎ−２）などから１−ｍｅｒ（ヌクレオチド）
までの範囲のオリゴヌクレオチドは、ｎ−ｍｅｒオリゴヌクレオチド生成物の中
に不純物として存在する。不純物の中には、（ｎ−２）−ｍｅｒ及び、より短い
オリゴヌクレオチド不純物がごく少量存在し、クロマトグラフィー精製により容
易に取り除くことができる（Ｗａｒｒｅｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２６巻９章： Ｐｒｏｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ａｇｒａｗａｌ， Ｓ編集、１９９４年、Ｈｕｍｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ 株式会社、Ｔｏｔｏｗａ，
ＮＪ、２３３〜２６４ページ）。しかし、クロマトグラフィー選択性及び生成
収率の欠除のため、特定の（ｎ−１）−ｍｅｒ不純物は精製過程の後もなお完全
長（つまりｎ−ｍｅｒ）オリゴヌクレオチド生成物の中に存在する。（ｎ−１）
部分は、ｎ−ｍｅｒ親オリゴヌクレオチドに関連がある全ての可能な一塩基欠失
配列で構成される。このような（ｎ−ｍｅｒ）不純物は、欠けている塩基の位置
により、端部欠失又は内部欠失配列に分類される（すなわち、５' 又は３' 末端
、あるいは内部のどちらか）。一塩基欠失配列不純物を含むオリゴヌクレオチド
を薬剤として使用する場合（Ｃｒｏｏｋｅ、Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｐａｔｈ
ｏｌｏｇｙ、１９９５年、９号、５９ページ）、端部欠失配列不純物は、完全長
配列としての標的ｍＲＮＡに結合するがわずかに親和性が低い。したがって、あ
る程度まで、このような不純物を活性薬剤成分とみなすことができ、またそれゆ
え本発明の目的上、生物学的同等性があるものとみなすことができる。

【０１２１】 IV．治療への適応とその他の用途 乾癬：オリゴヌクレオチド及びその他の核酸を局所的に送達する特別に関心の
ある治療適応は乾癬である。乾癬は、乾燥した、境界のはっきりした、銀のよう
な鱗を落す、様々な大きさの丘疹及びプラークで特徴づけられる慢性の再発性疾
患である。疾患は、僅かな病変から障害性の関節炎又は剥離を伴う広範な皮膚炎
に至るまで様々である。乾癬の決定的な原因は判っていないが、激しい落屑はお
そらく表皮細胞の増殖によるものである（診断と治療のメルクマニュアル、第１
５版、２２８３〜２２８５頁、Ｂｅｒｋｏｗら編、Ｒａｈｗａｙ、Ｎ．Ｊ．１９
８７年）。タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）、ＩＣＡＭ−１及び腫瘍壊死因子（
ＴＮＦα）の阻害剤はｉｎ ｖｉｔｒｏで抗増殖及び抗炎症作用の両方を有する
ことが示されている。シクロスポリンＡ及びアントラリンのような抗乾癬剤の中
にはＰＫＣを阻害することを示すものもあり、ＰＫＣの阻害は乾癬を治療するた
めのアプローチとして示唆されてきた（Ｈｅｇｅｍａｎｎ，Ｌ．及びＧ．Ｍａｈ
ｒｌｅ，皮膚の薬理学、Ｈ．Ｍｕｋｈｔａｒ編、３５７〜３６８頁、ＣＲＣ出版
、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ、１９９２年）。タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ
）を標的としたアンチセンス化合物が、Ｃｏｏｋらへの米国特許第５，６２０，
９６３号及びＢｏｇｇｓらへの米国特許第５，６８１，７４７号に記載されてい
る。

【０１２２】 炎症：局所的に送達する特別に関心のあるもう１つのタイプの治療適応には、
皮膚の炎症性障害が挙げられる。このようなものは、扁平苔癬、中毒性表皮壊死
症（ＴＥＮ）、多形性紅斑などを含む様々な形状で生じる（診断と治療のメルク
マニュアル、第１５版、２２８６〜２２９２頁、Ｂｅｒｋｏｗら編、Ｒａｈｗａ
ｙ、Ｎ．Ｊ．１９８７年）。ＩＣＡＭ−１の発現は、アレルギー性接触皮膚炎、
固定薬疹、扁平苔癬及び乾癬のような様々な炎症性皮膚障害に関わってきた（Ｈ
ｏら、Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９９０年２２、６４；Ｇｒｉｆ
ｆｉｔｈｓら、Ａｍ．ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８９年、１３５、１０４５
；Ｌｉｓｃｙら、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９８９年、１２０、４７９
；Ｓｈｉｏｈａｒａら、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９８９年、１２５、
１３７１；Ｒａｇｅｚｉら、Ｏｒａｌ Ｓｕｒｇ．Ｏｒａｌ Ｍｅｄ．Ｏｒａｌ
Ｐａｔｈｏｌ．，１９９６年、８１、６８２）。更に、ＩＣＡＭ−１に対する
モノクローナル抗体の腹腔内投与によって、卵白アルブミンで誘導したマウスの
皮膚への好酸球の浸潤が低下した（Ｈａｋｕｇａｗａら、Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ
．，１９９７年、２４、７３）。ＩＣＡＭ−１を標的としたアンチセンス化合物
は、それぞれ、１９９８年１月２０日及び１９９８年４月１７日の日付の、米国
特許第５，５１４，７８８号並びに第５，５９１，６２３号及び同時係属米国特
許出願第０９／００９，４９０号並びに第０９／０６２，４１６号（すべてＢｅ
ｎｎｅｔｔら）に記載されている。

【０１２３】 炎症性皮膚障害に対するその他のアンチセンスの標的は、ＶＣＡＭ−１及びＰ
ＥＣＡＭ−１である。ＶＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体の腹腔内投与に
よって、卵白アルブミンで誘導したマウスの皮膚への好酸球の浸潤が低下した（
Ｈａｋｕｇａｗａら、Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，１９９７年、２４、７３）。Ｖ
ＣＡＭ−１を標的とするアンチセンス化合物は、米国特許第５，５１４，７８８
号及び第５，５９１，６２３号に記載されている。ＰＥＣＡＭ−１は、様々なタ
イプの細胞表面に発現している糖タンパク質である（概説については、Ｎｅｗｍ
ａｎ，ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｖｅｓｔ．，１９９７年、９９、３及びＤｅｌｉｓｓｅ
ｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，１９９４年、１５、４９０を参照さ
れたい）。細胞と細胞の相互作用に直接関わることに加えて、ＰＥＣＡＭ−１は
明らかに細胞相互作用に関与する他の分子の活性及び／又は発現も調節しており
（Ｌｉｔｗｉｎら、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９９７年、１３９、２１９）、従
って、いくつかの細胞と細胞の相互作用における鍵となるメディエータである。
ＰＥＣＡＮ−１を標的としたアンチセンス化合物は、１９９８年３月１９日Ｂｅ
ｎｎｅｔｔらによって提出された同時係属米国特許出願第０９／０４４，５０６
号に記載されている。

【０１２４】 皮膚癌：オリゴヌクレオチドを局所的に送達する特別に関心のあるもう１つの
タイプの治療適応は、様々な皮膚癌である。皮膚癌の代表的なものには、良性腫
瘍（疣、ほくろなど）、及び例えば基底細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、パジ
ェット病、カポジ肉腫等のような悪性腫瘍が挙げられる（診断と治療のメルクマ
ニュアル、第１５版、２３０１〜２３１０頁、Ｂｅｒｋｏｗら編、Ｒａｈｗａｙ
、Ｎ．Ｊ．１９８７年）。腫瘍形成、過剰増殖状態の維持及び転移に関与する数
多くの分子標的が、皮膚癌を防御する又は阻害する、又は癌の他組織への広がり
を妨げるための目標となっている。

【０１２５】 ｒａｓ癌遺伝子は、例えば、活性化されたｒａｓ癌遺伝子が一般にヒトの腫瘍
の約３０％で見出され；この数字は外分泌線膵臓の癌では１００％に達するとい
う事実によって癌に関係していると見なされているグアニン結合タンパク質であ
る（概説については、Ｄｏｗｎｗａｒｄ，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｌ．Ｓｃ
ｉ．，１９９０年、１５、４６９を参照されたい）。Ｈ−ｒａｓ及びＫ−ｒａｓ
を標的としたアンチセンス化合物は、米国特許第５，５８２，９７２号（Ｌｉｍ
ａら）、第５，５８２，９８６号（Ｍｏｎｉａら）、及び第５，６６１，１３４
号（Ｃｏｏｋら）、及び公開されたＰＴＣ出願ＷＯ９４／０８００３号に記載さ
れている。

【０１２６】 タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）も腫瘍形成に関係していると見なされている
。タンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）を標的としたアンチセンス化合物は、米国特
許第５，６２０，９６３号（Ｃｏｏｋら）及び第５，６８１，７４７号（Ｂｏｇ
ｇｓ）に記載されている。ＡＰ−１サブユニット及びＪＮＫタンパク質も、特に
腫瘍形成と転移におけるそれらの役割について関心が高い。転移の過程には連続
した事象が関与しており、そこでは（１）癌細胞が細胞外マトリックスから離れ
、（２）離れた癌細胞は、多くの場合循環系を介して体内の他の部位に移動し、
そして（３）遠くの不適当な細胞外マトリックスに取りつき、それによって病巣
を創り、そこから第２腫瘍を生じることができる。正常な細胞はそのような事象
が生じても侵入する又は転移する能力を持たない、及び／又はアポトーシス（プ
ログラムされた細胞死）を受ける（Ｒｕｏｓｌａｈｔｉ，Ｓｃｉ．Ａｍｅｒ．，
１９９６年、２７５、７２）。しかしながら、ヒト腫瘍の多くは、１つ又はそれ
より多くのマトリックス・メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の活性を高める（Ｓ
ｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．
，１９９３年９、５４１；Ｂｅｒｎｈａｒｄら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），１９９４年、９１、４２９３）。ＭＭＰは、細胞外マト
リックスの成分を壊す能力を有する酵素ファミリーである（Ｂｉｒｋｅｄａｌ−
Ｈａｎｓｅｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐ．Ｂｉｏｌ．，１９９５年、７、７２８）
。特にこのファミリーの一員の１つである、マトリックス・メタロプロテイナー
ゼ−９（ＭＭＰ−９）は腫瘍でのみ及びその他の病気に冒された組織にのみ見い
出されることが多い（Ｈｉｍｅｌｓｔｅｉｎら、侵襲と転移、１９９４年、１４
、１４６）。

【０１２７】 ＭＭＰ−９遺伝子の調節がＡＰ−１転写因子によって制御されている可能性が
いくつかの研究によって明らかにされている（Ｋｅｒｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，１
９８８年、２４２、１２４２；Ｋｅｒｒら、Ｃｅｌｌ，１９９０年、６１、２６
７；Ｇｕｍら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９６年、２７１、１０６７２；
Ｈｕａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９９６年、５６、５２７９）。ＡＰ−１
機能を阻害するとＭＭＰ−９の発現が低下することが判っている（米国特許出願
第０８／８３７，２０１号）。ＡＰ−１は、２つのサブユニットであるｆｏｓ及
びｊｕｎの遺伝子産物を有するヘテロニ量体である。ｃ−ｆｏｓ及びｃ−ｊｕｎ
を標的としたアンチセンス化合物は、１９９７年３月１４日、Ｄｅａｎらによっ
て提出された同時係属米国特許出願第０８／８３７，２０１号に記載されている
。

【０１２８】 その上、ＡＰ−１それ自体は、Ｊｕｎターミナルキナーゼ（ＪＮＫ）によりア
ミノ末端部位でＪｕｎＮサブユニットがリン酸化されることによって特定の状況
で活性化される。従って、１つ又はそれより多いＪＮＫを阻害することによって
ＡＰ−１活性を低下させ、その結果ＭＭＰの発現を減らすことが期待されている
。ＪＮＫを標的としたアンチセンス化合物は、１９９７年８月１３日、Ｄｅａｎ
らによって提出された同時係属米国特許出願第０８／９１０，６２９号に記載さ
れている。

【０１２９】 皮膚の感染症：オリゴヌクレオチドの局所処方に関しては、皮膚の感染症にも
関心が高い。そのような感染は、ウイルス、細菌又は真菌によって引き起こされ
る。 ライム病の場合、その原因物質である、スピロヘータ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂ
ｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉを運ぶダニが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで内皮細胞におけるＩＣ
ＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１及びＥＬＡＭ−１の発現を上方制御する。Ｂｏｇｇｅｍ
ｅｙｅｒら、Ｃｅｌｌ Ａｄｈｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１９９４年、２、１４５）。
その上、抗炎症剤、プレドニゾロンによる疾患への介在は、部分的にはこの接着
分子の上方制御への介在に負うことが提案されている（Ｈｕｒｔｅｎｂａｃｈら
、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃ．，１９９６年、１８、２８１）。
従って、ライム病の治療に介在する（又は予防する）可能性のある標的にはＩＣ
ＡＭ−１、ＶＣＡＭ−１及びＥＬＡＭ−１が包含される（上記）。

【０１３０】 発明の組成物及び方法を用いて治療し易いその他の皮膚感染症には、細菌、ウ
イルス又は真菌による感染の結果生じた障害が挙げられる（診断と治療のメルク
マニュアル、第１５版、２２６３〜２２７７頁、Ｂｅｒｋｏｗら編、Ｒａｈｗａ
ｙ、Ｎ．Ｊ．１９８７年）。真菌物質により引き起こされた皮膚の感染に関して
は、米国特許第５，６９１，４６１号がＣａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓの増
殖を阻害するアンチセンス化合物を提供している。

【０１３１】 ウイルス物質により引き起こされる皮膚の感染に関しては、米国特許第５，１
６６，１９５号、第５，５２３，３８９号及び第５，５９１，６００号がヒト免
疫不全ウイルス（ＨＩＶ）のオリゴヌクレオチド阻害剤を提供している。米国特
許第５，００４，８１０号は、単純性ヘルペスウイルス、Ｖｍｗ６５のｍＲＮＡ
とハイブリッド形成能を持ち、その複製を阻害する能力のあるオリゴマーを提供
している。米国特許第５，１９４，４２８号及び第５，５８０，７６７号は、イ
ンフルエンザウイルスに対する抗ウイルス活性を有するアンチセンス化合物を提
供している。米国特許４，８０６，４６３号は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩの複製を阻害
するためのアンチセンス化合物とそれらを用いた方法を提供している。米国特許
第４，６８９，３２０号、第５，４４２，０４９号、第５，５９１，７２０号及
び第５，６０７，９２３号は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）に特異的な抗ウ
イルス剤としてのアンチセンス化合物に向けられている。米国特許第５，２４２
，９０６号は、潜在性エプスタイン・バーウイルス（ＥＢＶ）の治療に有用なア
ンチセンス化合物を提供している。米国特許第５，２４８，６７０号、第５，５
１４，５７７号及び第５，６５８，８９１号はヘルペスウイルスの感染の治療に
有用なアンチセンス化合物を提供している。米国特許第５，４５７，１８９号及
び第５，６８１，９４４号は、乳頭腫ウイルス感染の治療に有用なアンチセンス
化合物を提供している。このような特許で開示されているアンチセンス化合物は
、参照により本明細書中に組み入れられ、示された病原物質により引き起こされ
た、又は悪化させられた疾患を予防する、和らげる又は治療して救済するために
発明の組成物と共に使用する可能性がある。

【０１３２】 研究用途：本発明の組成物において採用されたアンチセンス・オリゴヌクレオ
チドは、生体の様々な遺伝成分の性質、機能及び疾患又は動物の体の状態との可
能性ある関係を調べるのに使用することができる。これまで、遺伝子の機能は、
主として動物において（例えばトランスジェニック・マウス）遺伝子の機能を喪
失させる突然変異（即ち「ノックアウト」変異）によって調べられてきた。その
ような作業は難しく、時間がかかり、動物の発生に必須の遺伝子については、「
ノックアウト」変異によって致死表現型が生じるので、研究することができない
。更に、動物のライフサイクルや疾患の状態の特定の部分には、機能を喪失させ
る表現型を導入することができない；「ノックアウト」変異は常に存在している
のである。アンチセンス・オリゴヌクレオチドによる遺伝子発現の選択的な変調
である「アンチセンス・ノックアウト」は、直接的な遺伝子操作ではなく、この
ような限界性を克服する（例えば、Ａｌｂｅｒｔら、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４年、１５、２５０を参
照されたい）。更に、遺伝子の中にはそのような第２のスプライシング過程の結
果として様々なｍＲＮＡ転写物を生じるものがある；「ノックアウト」変異では
典型的にそのような遺伝子から作られるｍＲＮＡの全部を除いてしまうので、特
定のｍＲＮＡ転写物の生物学的役割を調べるのには用いることができない。神経
死におけるＮ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体の役割を調べるためにラット
に、タンパク質キナーゼＣ−ａの生物学的役割を調べるためにマウスに、及び不
安における神経ペプチドＹ１受容体の役割を調べるためにラットに、アンチセン
ス・オリゴヌクレオチドを全身性に投与した（それぞれ、Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ
ら、Ｎａｔｕｒｅ，１９９３年、３６３：２６０；Ｄｅａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．，１９９４年、９１：１１７６２；及びＷ
ａｈｌｅｓｔｅｄｔ ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９３年、２５９：５２８）。関
連したタンパク質の複合体ファミリーを研究するような場合、「アンチセンス・
ノックアウト」（即ち、アンチセンス・オリゴヌクレオチドの全身性投与による
遺伝子の阻害）は、ファミリーの具体的なメンバーを調べるには最も正確な手段
を表している可能性がある（一般には、Ａｌｂｅｒｔら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．，１９９４年１５：２５０を参照されたい）。オリゴヌ
クレオチド及びその他の核酸の簡単な非経口送達に関する組成物及び方法を提供
することによって本発明は、これらの、及びその他の欠点を克服する。

【０１３３】 Ｖ．治療方式 発明のリポソームを含んでなる治療用又は医薬組成物の投与は、当業者の技量
の範囲内にあると考えられる。一般に、治療又は予防の必要な患者に、発明に従
ってリポソームで処方した生物活性のある物質を投与し、普通それは、薬学的に
許容できるキャリアに入っており、患者の年齢及び治療されるべき障害又は疾患
の重症度によって、体重ｋｇ当り０．０１μｇ〜１００ｇの範囲の用量で投与す
る。投与は、治療されるべき疾患の重症度及び反応性に依存し、治療が効果を上
げる、又は疾患程度の減少又は予防が達成されるまで、治療単位は数日から数ヵ
月続く。任意の投与スケジュールは、患者の体内に蓄積する薬剤の測定によって
算出することができる。当業者は最適用量、投与方法及び繰り返し率を容易に決
定することができる。最適用量は、個々のアンチセンス化合物の相対的な能力に
よって変化する可能性があり、一般にｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ動物
モデルにおいて有効であることが見い出されるＥＣ₅₀に基づいて算出される。

【０１３４】 本発明の前後関係で、「治療方式」という用語は、発明の１つ又はそれより多
くのリポソーム組成物の投与に治療的、緩和的及び予防的様態を包含することを
意味する。特定の治療方式は、特定の疾患又は障害、患者の重症度及び全体的な
症状に依存して変化する期間持続してもよく、１日に１回から２０年に１回に拡
張してもよい。治療に続いて、彼／彼女の症状の変化、及び障害又は疾患状態の
緩和について患者をモニターする。リポソーム組成物の投与量は、現在の投与量
に患者が十分に反応していない場合な増やしてもよく、障害又は疾患状態の緩和
が認められる、又は障害又は疾患状態がなくなった場合は減らしてもよい。

【０１３５】 最適の投与様式を介して投与する発明のリポソームに封じ込められた生物活性
物質の治療的に有効な量を送達するために、任意の投与スケジュールを採用する
。発明の目的に関する「治療上に有効な量」という用語は、望ましくない副作用
（例えば、毒性、刺激性又はアレルギー反応）がなく、意図する目的を達成する
のに効果的なオリゴヌクレオチド含有医薬組成物の量を言う。個々の必要性は変
化する可能性があるが、医薬組成物の有効量に関する任意の範囲の決定は当該技
術の技量の範囲内である。ヒトの用量は、動物試験から外挿できる（Ｋａｔｏｃ
ｓら、「投与計画の薬学」第１８版、第２７章、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏ，ＰＡ，１９９０年）。一般に当業
者によって調製することができる医薬組成物の有効量を提供するのに必要な投与
量は、年齢、健康状態、身体状態、体重、受け取る側の疾患又は障害の型と程度
、治療頻度、併用治療の性質（もしあれば）、及び所望の効果の性質と範囲によ
って変化する（Ｎｉｅｓら、「グッドマンとギルマンの治療の薬理学的基礎」第
９版、第３章、Ｈａｒｄｍａｎら、編、ＮｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、ニューヨーク
州、ニューヨーク、１９９６年）。

【０１３６】 治療の成功に続いて、疾患状態の再発を防止するために患者は維持療法を受け
るのが望ましく、その場合、体重ｋｇ当り０．０１μｇから１００ｇの範囲で１
日に１回又はそれより多い回数から２０年に１回の割合で生物活性物質を維持療
法で投与する。例えば、自己免疫症状又は炎症症状を持つ傾向が判っている又は
疑われている人の場合、体重ｋｇ当り０．０１μｇから１００ｇの範囲で１日に
１回又はそれより多い回数から２０年に１回の防御用量の投与によって予防効果
が達成される可能性がある。同様に、何らかの医学的治療、例えば、細胞、組織
、又は臓器を人に移植した結果起きる移植片対宿主疾患、の結果起きることが予
想されているような炎症性症状への感受性が少なくなる可能性がある。

【０１３７】 ハイリスクの人のための予防的様態も発明によって包含される。本明細書で使
用するとき、「ハイリスクの人」という用語は、その人にとって、例えば個人歴
、家族歴、又は遺伝子試験を介して疾患又は障害の発症又は再発に対する感受性
が通常よりも有意に高いことが判明している人を言う。例えば、対象動物は、特
定の疾患又は障害の頻繁な発生を含む個体及び／又は家族病歴を持つ可能性があ
る。別の例では、対照動物は、当該技術で既知の技術に従って行った遺伝的スク
リーニングによってそのような感受性がすでに判明している可能性がある。（例
えば、米国連邦議会、技術評価局、第５章：「職場における遺伝的モニタリング
とスクリーニング」ＯＴＡ−ＢＡ−４５５、米国政府印刷局、ワシントンＤＣ、
１９９０年、７５〜９９頁を参照されたい）。ハイリスクの人に対する治療方式
の一部として、疾患又は障害の発症又は再発を防ぐために予防的にその人を治療
することができる。「予防上に有効な量」という用語は、疾患又は障害の発症又
は再発の予防として認められる効果を生じる医薬組成物の量を言う。医薬組成物
の予防上に有効な量は典型的には、同様の状態の人に活性物質を欠く第２の医薬
組成物を投与した場合に認められる効果と比べた効果によって決定する。

【０１３８】 オリゴヌクレオチドを局所的に又は経皮的に投与した in vivo動物試験から、
オリゴヌクレオチドは投与部位から広く分布することが明らかにされている。例
えば、オリゴヌクレオチドＩＳＩＳ−２３０２をミニブタ及びラットの背中に局
所的に塗布した。真皮及び表皮組織の試料をキャピラリーゲル電気泳動と免疫組
織化学染色によって分析し、投与部位（背中）だけでなく、胃、首及び後肢にも
有意なレベルのオリゴヌクレオチドを検出した。従って、オリゴヌクレオチドを
動物の第１の真皮又は表皮組織部位に送達し、その動物は、前記オリゴヌクレオ
チドを第２の真皮又は表皮組織部位に塗布することを含み、そこでは前記第１の
部位が前記第２の部位から除かれているような方法を提供する。好ましい態様で
は、オリゴヌクレオチドは、発明の医薬組成物、特に本明細書で記載するような
エマルションの中で局所的に投与される。方法は、オリゴヌクレオチドが一様に
真皮又は表皮組織及び／又は塗布するのが困難な、又は直接塗布に感受性の高い
広い範囲又は部位に確かに送達されるのに有用である。

【０１３９】

【実施例】

以下の実施例は発明を説明するのであって、同じものに限定することを意図す
るものではない。当業者は、日常の実験を介して、本明細書に記載した具体的な
物質及び方法に数多くの同等物があることを認識し、確かめることができるであ
ろう。そのような同等物は、本発明の範囲内にあると見なされる。

【０１４０】 実施例１． オリゴヌクレオチド Ａ．一般合成技術：ヨウ素を用いた酸化による標準ホスホラミダイト化学
反応を用いて自動ＤＮＡシンセサイザーによってオリゴヌクレオチドを合成した
。ベータ−シアノエチルジイソプロピル・ホスホラミダイトは、アプライド・バ
イオシステムズ（カリフォルニア州、フォスター。シティ）から購入した。ホス
ホロチオエート・オリゴヌクレオチドについては、亜リン酸結合の段階的硫化を
行うために標準酸化瓶を３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン−１，１−
ジオキシドの２Ｍ溶液で置き換えた。

【０１４１】 Ｂ．オリゴヌクレオチドの精製：制御間隙グラス（ＣＰＧ）カラム（アプ
ライド・バイオシステムズ）から切断し、濃縮水酸化アンモニウム中で５５℃に
て１８時間ブロックを外した後、２．５容量のエタノールと共に０．５ＭのＮａ
Ｃｌで２回沈殿を行い、次いで逆相高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）によ
ってオリゴヌクレオチドを精製した。２０％アクリルアミド、３Ｍ尿素及び４５
ｍＭのトリス・ホウ酸緩衝液（ｐＨ７）にて分析用ゲル電気泳動を行った。

【０１４２】 Ｃ．オリゴヌクレオチドの標識：ｉｎ ｓｉｔｕでオリゴヌクレオチドの
分布を追跡するために、本質的にＳｔｅｉｎら（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
１９９０年、１８８、１１）によって記載されているように、水素ホスホン酸反
応を用いて³⁵Ｓを合成的に取りこむことによって高い比活性で放射性標識した。

【０１４３】 Ｄ．オリゴヌクレオチドの構造：本明細書に記載した試験で用いられたオ
リゴヌクレオチドは、以下のような構造及び生物活性を有する。 ＩＳＩＳ ２３０２は、ホスホロチオエート主鎖及び配列、５' −ＧＣＣ−
ＣＡＡ−ＧＣＴ−ＧＧＣ−ＡＴＣ−ＣＧＴ−ＣＡ−３' （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１）を有する２' −デオキシオリゴヌクレオチドである。ＩＳＩＳ ２３０２は
、ヒトＩＣＡＭ−１遺伝子の３' −非翻訳領域（３' −ＵＴＲ）を標的としてい
る。ＩＳＩＳ ２３０２は、米国特許第５，５１４，７８８号及び第５，５９１
，６２３号に記載されており、参照により本明細書中に組み入れられる。

【０１４４】 ＩＳＩＳ １９３９は、ホスホロチオエート主鎖及び配列、５' −ＣＣＣ−
ＣＣＡ−ＣＣＡ−ＣＴＴ−ＣＣＣ−ＣＴＣ−ＴＣ−３' （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２）を有する２' −デオキシオリゴヌクレオチドである。ＩＳＩＳ １９３９は
ヒトＩＣＡＭ−１遺伝子の３' −非翻訳領域（３' −ＵＴＲ）を標的としている
。ＩＳＩＳ １９３９は米国特許第５，５１４，７８８号及び第５，５９１，６
２３号に記載されており、参照により本明細書中に組み入れられる。

【０１４５】 ＩＳＩＳ １５８３９は、構造５' −ＧＣＣ−ＣＡＡ−ＧＣＴ−ＧＧＣ−Ａ
ＴＣ−ＣＧＴ−ＣＡ−３' （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を有するＩＳＩＳ ２３
０２のホスホロチオエート・イソ配列「ヘミマー」誘導体であり；そこでは太字
の「Ｃ」残基は５−メチルシトシン塩基（ｍ５ｃ）を有し、太字で二重下線の残
基は更に２' −メトキシエトキシ修飾（その他の残基は２' −デオキシである）
を含む。ＩＳＩＳ １５８３９は、１９９８年４月１７日提出された同時係属米
国特許出願第０９／０６２，４１６号に記載されており、参照により本明細書中
に組み入れられる。

【０１４６】 ＩＳＩＳ ３０８２は、ホスホロチオエート主鎖及び配列、５' −ＴＧＣ−
ＡＴＣ−ＣＣＣ−ＣＡＧ−ＧＣＣ−ＡＣＣ−ＡＴ−３' （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
３）を有する２' −デオキシオリゴヌクレオチドである。ＩＳＩＳ１ ３０８２
はマウスＩＣＡＭ−１遺伝子の３' −非翻訳領域（３' −ＵＴＲ）を標的として
いる。ＩＳＩＳ１ ３０８２は、Ｓｔｅｐｋｏｗｓｋｉら、（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．，１９９４年、１５３、５３３６）に記載されている。

【０１４７】 ＩＳＩＳ ２５０３は、ホスホロチオエート主鎖及び配列、５' −ＴＣＣ−
ＧＴＣ−ＡＴＣ−ＧＣＴ−ＣＣＴ−ＣＡＧ−ＧＧ−３' （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４）を有する２' −デオキシオリゴヌクレオチドである。ＩＳＩＳ ２５０３は
、ヒト癌遺伝子、Ｈａ−ｒａｓも翻訳開始コドンを標的としている。ＩＳＩＳ ２５０３は、米国特許第５，５７６，２０８号に記載されており、参照により本
明細書中に組み入れられる。

【０１４８】 ＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡの３' 非翻訳領域の配列を標的としているＩＳＩＳ １９３９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）であるホスホロチオエート・オリゴヌクレ
オチドは、十分な生物活性を示すことが判っている。ＩＳＩＳ １９３９標的部
位に対するＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡの１４３番目の部位３' 側塩基とハイブリッド
を形成するＩＳＩＳ ２３０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）も生物アッセイで同
様の活性が見い出された。ヒトＩＣＡＭ−１ｍＲＮＡの３' 非翻訳領域（Ｚｕｋ
ｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８９年２４４、４８）の予想されたＲＮＡ二次構造
は、驚くべきことに、ＩＳＩＳ １９３９及びＩＳＩＳ ２３０２の両方ともｍ
ＲＮＡの安定な幹ループ構造であると予測される構造とハイブリッド形成するこ
とが示唆された。現在の中心的な考え方では、アンチセンスを設計する場合、 ＲＮＡ二次構造のオリゴヌクレオチド領域を避けるべきであることが示唆されて
いる。従って、ＩＳＩＳ １９３９及びＩＳＩＳ ２３０２は、ＩＣＡＭ−１の
発現を阻害するとは予測されていなかった。

【０１４９】 ＩＳＩＳ ２３０２は、ヒト臍帯血管細胞、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９）、ヒ
ト表皮癌細胞（Ａ４３１）及びヒト角化細胞におけるＩＣＡＭ−１の発現を阻害
することが見い出された。ＩＳＩＳ ２３０２はまた、ＨＬＡ−α及びＨＬＡ−
βのような可能性のあるその他の核酸標的を越えてその標的ＩＣＡＭ−１に対す
る特異性を示している。ＩＳＩＳ ２３０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）及びＩ
ＳＩＳ １９３９（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）は両方共、Ｃ８１６１ヒトメラノ
ーマ細胞においてｍＲＮＡレベルを確定するためのノーザンブロット分析によっ
て検出されたようにＩＣＡＭ−１の発現を顕著に低下させる。実験的転移アッセ
イにおいて、ＩＳＩＳ ２３０２はＣ８１６１細胞の転移能を低下させ、ＴＮＦ
α処理により高められるＣ８１６１細胞の転移能を除去した。ＩＳＩＳ ２３０
２は炎症性疾患の動物モデルでも有意な生物活性を示した。動物試験からのデー
タは、例えばクローン病、慢性関節リウマチ、乾癬、潰瘍性大腸炎、及び腎移植
の拒絶を含む数多くの炎症性疾患においてＩＳＩＳ ２３０２の強い抗炎症効果
を示した。ヒトで試験をした場合、ＩＳＩＳ ２３０２は安全性が高く、クロー
ン病に対して活性があることが明らかにされている。更に、ＩＳＩＳ ２３０２
は、ステロイドで治療している患者でステロイドを減らすような統計的に有意な
効果を示し、治療後５カ月経ってもステロイドから離れて疾患は緩和していた。
このことは、ＩＳＩＳ ２３０２の治療効果に関して驚くべき及び重要な知見で
ある。

【０１５０】 実施例２． 化合物の供給源 一般に、本明細書に記載する試験で用いられる化合物は、様々な市販品から
入手でき、当該技術で既知の方法により、当業者が入手できる試薬から合成する
ことができる。便宜のために、本明細書に記載された試験に用いられ、又は同定
された比較的重要な化合物の具体的な供給業者の一部を以下のリストに提供する
。

【０１５１】 Ｃｈｏｌ（コレステロール）は、アバンチ・ポラー・リピッド社（アラバマ
州、アラバスター）又はシグマ・ケミカル・コープ（ミズーリ州、セントルイス
）から購入する。 １−ドデシル−２−ピロリジノンはアルドリッチ・ケミカル社（ワイオミン
グ州、ミルウォーキー）から購入する。 ドーパ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）はアバンチから購入
する。 ＤＭＰＣ（ジミリストイルホスファチジルコリン）はアバンチ又はシグマか
ら購入する。 ＤＰＰＣ（ジパルミトイルホスファチジルコリン）は、シグマ、アバンチ又
はゲンザイムコープ（マサチューセッツ州、ケンブリッジ）から購入する。

【０１５２】 ＤＭＰＧ（ジミリストイルホスファチジルグリコール）は、アバンチ又はシ
グマから購入する。 ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）は、シグマ又はアルドリッチから購入す
る。 ＩＭＰ（イソプロピルミリステート、ミリスチン酸イソプロピルエステルと
しても知られる）は、シグマ又はアルドリッチから購入する。 メントンはアルドリッチから購入する。 １−メチル−２−ピロリジノンはシグマから購入する。 オレイン酸はシグマから購入する。 ＰＧ（プロピレングリコール、１，２−プロパンジオールとしても知られる
）はシグマ又はアルドリッチから購入する。 ツイーン４０（ポリオキシエチレン（２）ソルビタンモノパルミテート）は
シグマ又はアルドリッチから購入する。 アゾン（ドデシルアゾン、ラウロカプラムとしても知られる）は、上海ダニ
エル・ケム・テクノロジー社（中華人民共和国、上海）から購入する。 リモネン（ｄ−リモネン）は、シグマから購入する。 ミグリオール^TM８１８は、ドイツ、マールのＨｈｌｓ社から購入する。

【０１５３】 実施例３． in vitro 皮膚試験 ６〜８週令のオス及びメスの無毛ＳＫＨ１マウスをチャールズリバー・ラボラ
トリーズ（マサチューセッツ州、ウィルミントン）から入手し、二酸化炭素によ
って安楽死させた。新鮮な皮膚及び凍結した皮膚を０．６３６ｃｍ² の拡散範囲
を有する水平フランツ拡散セル（ニュージャージー州、パーマージャー）に載せ
た。５．１ｍｌの容積を有する受容器チャンバーを、保存剤として３６％ホルム
アルデヒド水溶液を０．１％（ｖ／ｖ）含有する等張リン酸緩衝液（ｐＨ７．２
）で満たした。受容器の温度は３７±０．５℃に保ち、６００ｒｐｍにて撹拌し
続けた。実験の前に皮膚を１時間水和させた。実験は徐々に２４時間で行った。

【０１５４】 浸透増進剤／ビヒクルを提供者区分に１時間加え、次いで５００μｌのメタノ
ールにて洗浄した。提供者区分に加えた増進剤／ビヒクルの全量は１０μｌであ
った（他に注意がない限り）。メタノールで洗浄した後、皮膚を軽く拭い、風で
乾かして目に見える湿気を除いた。実験では、浸透増進におけるメタノールの影
響を調べるので、洗浄は行わなかった。また、実験では、事前処理時間の影響を
調べるので、増進剤が皮膚上に留まる時間は様々であった（即ち、３０分、又は
１、２又は３時間）。

【０１５５】 増進剤溶液の上にオリゴヌクレオチド（即ち、ＩＳＩＳ ２３０２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）を載せた。ＩＳＩＳ ２３０２は、１ｍｇの非標識オリゴヌク
レオチドと１分間に約３００，０００崩壊（「ＤＰＭ」）の放射性標識オリゴヌ
クレオチドの両方を含有する２００μｌの普通の生理食塩水溶液として各提供者
区分に加えた。表皮、真皮及び受容器の浸透値は、浸透したカウント対対照のカ
ウントの比として表わされる。

【０１５６】 以下の化学物質を増進剤／ビヒクルとして使用した：プロピレングリコール（
ＰＧ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、イソプロピルミリステート（ＩＰ
Ｍ）、アゾン、ミグリオール^TM８１８、オレイン酸、ｄ−リモネン、リモネン、
１−ドデシル−２−ピロリジノン（１ドデシル２ピロール）、１−メチル−２−
ピロリジノン（１メチル２ピロール）、メントン、エタノール、及びツイーン４
０。

【０１５７】 エクセル上で平均値、標準偏差及び標準誤差と共にステューデントのｔ検定（
２試料等分散）を用いて統計処理を行った。選択的にオスマウスを標的として特
定できないが、再発する濾胞感染のために、試験ではメスの無毛マウスを選択的
に用いた。

【０１５８】 図１に示すように、ＩＳＩＳ ２３０２の送達に最も良好な表皮浸透増進剤は
、イソプロピルミリステートであった（「ＩＰＭ」１．６７％、２．１４％、及
び３．１１％）、メントン（２．９３％）、エチレングリコール（２．４１％）
、１−メチル−２−ピロリジノン（「１メチル２ピロール」２．４１％）、ｄ−
リモネン（１．５５％）、ミグリオール^TM８１８（１．６２％）及びジメチルス
ルホキシド（ＤＭＳＯ、１．５６％）。それに対して、真皮への浸透では、最も
良好な表皮浸透増進剤は、ツイーン４０（１．４２％）、オレイン酸（１．０％
）、ｄ−リモネン（０．７２％）、１−ドデシル−２−ピロリジノン（「１ドデ
シル２ピロール、０．６７％）、ＤＭＳＡ（０．３８％）及び１−メチル−２−
ピロリジノン（「１メチル２ピロール」、０．２５％）であった。表皮浸透の増
進と真皮浸透の増進にはほとんど、又は全く相関はなく、２つの相への送達作用
のメカニズム、浸透速度、実験持続時間、増進剤による事前処理の時間、又はそ
のような因子の組合せの差異による影響がある。

【０１５９】 表における「受容体浸透率」とは、単離した皮膚を貫いて移動する薬剤分量の
比率を言い、従って、実験終了時に容器内に残ったものを言う。このカラムにお
ける高い数値は、製剤が全身性の送達ビヒクルとしての可能性を有することを示
している。

【０１６０】 アゾンを用いた実験を行い、ＩＳＩＳ ２３０２の送達においてメタノールが
どれくらいの要因であるのかを調べた；この結果も図１に示す。メタノール洗浄
によるアゾンの事前処理では表皮及び真皮の浸透値はそれぞれ、１．３１％及び
０．６１％であったが、メタノールを使用しない場合それらはそれぞれ０．７２
％及び０．１３％であった。リモネンを増進剤として使用した場合、ＩＳＩＳ ２３０２の浸透にエタノールはほとんど影響を与えなかった。リモネン及びイソ
プロピルミリステートの容量を高くしても浸透を高めることはなかった。

【０１６１】 実施例４． クリーム製剤とオリゴヌクレオチドの化学反応の影響 イソプロピルミリステートを含有する製剤を最適化するために試験を行い、結
果を図２に示した。３０分から３時間という事前処理時間は、ＩＳＩＳ ２３０
２の浸透にはほとんど影響しなかった。水において１０〜３５％（ｖ／ｖ）とい
う低い濃度のイソプロピルミリステートでは浸透は有意に低下した。しかしなが
ら、極めて少量（１０〜３０μｌ）で塗布したイソプロピルミリステートと水の
粗い混合物は皮膚を斑点状に覆った。少ない量のＩＳＩＳ ２３０２によって塗
布した量の浸透率が高まった。

【０１６２】 イソプロピルミリステートからクリームを処方するために、グリセリルモノス
テレート、ステアリン酸及び蜜蝋のような油性物質及び界面活性剤を用いてその
粘度を高めた。水溶性界面活性剤及びポリオキシル−４０ステアレート及びポリ
エチレングリコール誘導体のような粘度伝達剤を含有する水相にオリゴヌクレオ
チドを溶解した。水（３６〜４５％ｗ／ｗ）、イソプロピルミリステート（３０
〜４８％、ｗ／ｗ）、グリセリルモノステアレート（１０〜１６％、ｗ／ｗ）、
ポリオキシル−４０ステアレート（０〜１５％、ｗ／ｗ）、及び抗菌保存剤（ベ
ンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン）を含有するクリーム製
剤を in vitro で浸透について調べた。オリゴヌクレオチドをクリーム製剤と十
分に混合し、最終的に各１４９ｍｇのクリーム当り１ｍｇのオリゴヌクレオチド
の濃度になるようにした。クリームのｍｇ当りの放射活性を測定するために適当
な対照を用いた。

【０１６３】 ３０％イソプロピルミリステートのクリーム製剤はＩＳＩＳ ２３０２につい
て表皮の浸透が１．６６％、真皮の浸透が１．５７％であった（図２）。４８％
のイソプロピルミリステートを含有するクリーム製剤でも同様の浸透値が認めら
れた。 ５−メチルシトシンを含むＩＳＩＳ ２３０２の２' −メトキシエトキシイソ
配列ヘミマー誘導体であるＩＳＩＳ １５８３９と３０％イソプロピルミリステ
ートのクリーム製剤は、極めて高い真皮浸透、即ち、塗布量の１１％を示した。
従って図２に表した結果は、イソプロピルミリステートのクリーム製剤で処方し
た場合、異なった化学組成のオリゴヌクレオチドは皮膚を貫通することを示して
いる。

【０１６４】 実施例５．ＩＣＡＭ−１抑制の in vivo試験 それによって影響を受けるＩＣＡＭ−１抑制の程度を調べるために、以下に述
べるようにマウスＩＣＡＭ−１を標的としているオリゴヌクレオチドＩＳＩＳ ３０８２（ＳＥＱ ＩＤＮＯ：３）を空（「ｆ」）のリポソームと混合、又は（
「ｅ」）リポソームに封入した： １．ＤＯＰＥ−ｆリポソーム（ＤＯＰＥ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０
：２０％ｗ／ｗ）をＩＳＩＳ ３０８２と混合して１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ２．１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２の溶液 ３．ＤＯＰＥ−ｆリポソーム（ＤＯＰＥ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０
：２０％ｗ／ｗ）をＩＳＩＳ ３０８２と混合して１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ４．リポソームに封入したＩＳＩＳ ３０８２とＤＯＰＥ−ｅリポソーム（
ＤＯＰＥ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０：２０％ｗ／ｗ）、精製せずに１０
ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ５．ＤＭＰＧ−ｆリポソーム（ＤＭＰＧ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０
：２０％ｗ／ｗ）をＩＳＩＳ ３０８２と混合して１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ６．リポソームに封入したＩＳＩＳ ３０８２とＤＭＰＧ−ｅリポソーム（
ＤＭＰＧ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０：２０％ｗ／ｗ）、精製せずに１０
ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ７．ＤＭＰＣ−ｆリポソーム（ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０
：２０％ｗ／ｗ）をＩＳＩＳ ３０８２と混合して１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 ８．ＤＭＰＣリポソームに封入したＩＳＩＳ ３０８２とＤＭＰＣ−ｅリポ
ソーム（ＤＭＰＣ：ＤＰＰＣ：Ｃｈｏｌ；２０：６０：２０％ｗ／ｗ）、精製せ
ずに１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を得た。 １２．無処理、ホルボールミリステートアセテート）（「ＰＭＡ」）陽性対照
及び １３．無処理、ＰＭＡのない対照（「基礎レベル」）

【０１６５】 リポソームの調製：ガラス容器の中で、ｐＨ７のリン酸緩衝液生理食塩水又は
１０ｍｇ／ｍＬのＩＳＩＳ ３０８２を含むＰＢＳ溶液にて乾燥脂質膜を水和す
ることによってリポソームを調製する。次いで水和した脂質を５０ｎｍのメンブ
レンを介して２１回押し出し、最終的に脂質濃度を１００ｍｇ／ｍＬ、薬剤濃度
を１０ｍｇ／ｍＬ、及び粒子サイズを１００ｎｍに成るようにする。

【０１６６】 動物試験：製剤をその場に保持するヒルトップ・チャンバー（オハイオ州、シ
ンシナティ、ヒルトップ・リサーチ）を用いてリポソーム製剤を無毛マウスの背
中に適用する。各群３匹のマウスを調べた。製剤を適用した４８時間後、ＰＭＡ
でチャレンジしてＩＣＡＭ−１を誘導した。ＰＭＡ適用４時間後にマウスを屠殺
し、ｍＲＮＡレベルのノーザン分析のために皮膚を回収した。従った方法は、１
９９８年４月１７日に提出された同時係属米国特許出願第０９／０６２，４１６
号の実施例３及び７に詳細があり、参照により本明細書中に組み入れられる。 空のリポソームと混合したＩＳＩＳ ３０８２の結果は以下のとおりである。

【０１６７】

【表２】

【０１６８】 ＤＯＰＥ及びＤＭＰＧリポソームによるものは、ＰＭＡ誘導のＩＣＡＭ−１発
現を約３０〜約４０％低下させたが、リン酸緩衝液生理食塩水及びＤＰＰＣリポ
ソームによるものは僅かにしか低下させなかった。結果は、リポソームと混合し
た場合、ＩＳＩＳ ３０８２は皮膚を貫通し、従って薬剤の貫通は生物作用を引
き起こすのに十分であることを示している。 リポソームに封入したＩＳＩＳ ３０８２の結果を以下に示す。

【０１６９】

【表３】

【０１７０】 ＤＰＥ、ＤＰＰＣ又はＤＭＰＧを含む、及びＩＳＩＳ３０８２を封入したリポ
ソーム製剤は、すべて、ＩＣＡＭ−１のｍＲＮＡを３０〜５０％低下させた。と
いうことは、リポソームに封入した場合、ＩＳＩＳ ３０８２は皮膚を貫通し、
従って薬剤の貫通は生物作用を引き起こすのに十分であることを示している。

【０１７１】 実施例６． オリゴヌクレオチドの局所投与と全身性投与の比較 局所投与を介してオリゴヌクレオチドを局所に送達するために製剤を開発する
ために以下の実験を行った。 製剤：局所適用を意図した２％ＩＳＩＳ ２５０３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
）のクリーム製剤を、静脈内、皮下、又は経皮で投与した生理食塩水中の２０ｍ
ｇ／ｍＬの製剤と比較した。 クリーム製剤は、油相［イソプロピルミリステート（３０％、ｗ／ｗ）及びグ
リセリルモノステアレート（１０％、ｗ／ｗ）を含有する］と水相［水（４５％
、ｗ／ｗ）及びポリオキシル−４０−ステアレート（１５％、ｗ／ｗ）］を７０
℃に加熱し、シルバーソンＬ４ＲＴミキサー（マサチューセッツ州、イーストロ
ングメドウ、シルバーソン・マシーン）を用いて７，０００ｒｐｍにてホモジネ
ートし、その後混合物を室温まで冷却した。クリームの油相液滴の粒子サイズは
平均直径１．０( ｍを有していた。ＩＳＩＳ ２５０３は摩砕によってクリーム
と混合した。

【０１７２】 動物試験：６週令のＳＣＩＤマウス（ニューヨーク州、ジャーマンタウン、タ
コニックファーム社）にヒトの皮膚を移植し、６週間で異種移植を確立した。Ｔ
ＮＦαを投与する４８、２４、及び４時間前に、２００ｍｇのクリーム又は２０
ｍｇ／ｋｇの溶液を投与した。ＴＮＦαを異種移植片に注射して炎症を誘発した
。マウスを屠殺し、免疫組織化学のために皮膚を分離した。 クリーム製剤で処理した場合、染色した組織試料によって生存表皮における細
胞の核にオリゴヌクレオチドの顕著な蓄積が示された。蓄積は、真皮にも見られ
たが、核への蓄積は見えなかった。従って、クリーム製剤は、皮膚の細胞にオリ
ゴヌクレオチドの選択的送達を提供している。 それに対して、液状製剤を静脈内投与した皮膚の顕微鏡写真では、真皮へのオ
リゴヌクレオチドの蓄積が示され、核への蓄積は見られなかった。表皮への蓄積
はなかった。

【０１７３】 同様に、液状製剤を経皮投与した皮膚の顕微鏡写真では、皮膚の針の経路の近
傍で大量のオリゴヌクレオチドが見られ、表皮にも認められた。再びしかしなが
ら、核への蓄積はなかった。 総合すれば、前の結果は、全身性又は直接経路によって皮膚に送達したオリゴ
ヌクレオチドは生表皮細胞に蓄積しないが、クリーム製剤で局所的に送達した場
合、生表皮細胞を標的にすることができることを示している。従って、皮膚への
送達を意図した本明細書での記載に限定することなく、様々なオリゴヌクレオチ
ドを含む医薬及びその他の製剤を調製するためにクリーム製剤を使用することが
できる。従って、発明は、本開示に従ってオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物
を動物の皮膚に接触させることを含む方法のような、様々な皮膚の疾患及び障害
を防ぐ、又は治療する方法を提供する。

【０１７４】 実施例７． ＩＰＭクリーム製剤 加熱したイソプロピルミリステートＩＰＭ（１００ｍｇ）中でメチルパラベン
（３ｍｇ）、プロピルパラベン（４．８ｍｇ）、フェノキシエタノール（１０ｍ
ｇ）及びグリセロールモノステアレート（１００ｍｇ）を溶解することによって
油相を調製する。合計１ｇの製剤で目標とする重量の水の中で第一リン酸ナトリ
ウム一水和物（３ｍｇ）と第二リン酸ナトリウム七水和物（９ｍｇ）を溶解する
ことによって水相を調製した。１Ｎの第一リン酸ナトリウムと１Ｎの水酸化ナト
リウムで水溶液のｐＨを７±０．２に合わせた。溶液を加熱し、メチルパラベン
（２ｍｇ）、プロピルパラベン（０．２ｍｇ）、フェノキシエタノール（１５ｍ
ｇ）及びポリオキシル−４０−ステアレート（１５０ｍ）を加え、更に、ヒドロ
キシプロピルメチルセルロース（５ｍｇ）及びオリゴヌクレオチド、ＩＳＩＳ ２３０２（０．１ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、及び２０ｍｇ）を加えた。次いで油相
を水相に加え、ホモジネートしながらエマルションを形成し、その後室温に冷ま
した。

【０１７５】 当業者は、発明の好ましい態様には数多くの変更や修正が可能であり、そのよ
うな変更や修正は発明の精神から逸脱せずに可能であることを正しく認識するで
あろう。従って、添付の請求は、発明の真の精神と範囲の中にあるものとしてそ
のような等価の変異をすべて網羅することを意図している。 本明細書で言及した又は引用した特許、出願、印刷物及びその他の文献はそれ
ぞれ全体を参照により本明細書中に組み入れることを意図するものである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 様々なビヒクル増進剤を併用したオリゴヌクレオチドの、表皮及び真皮への送
逹の結果を示す。

【図２】 様々なビヒクル増進剤を併用したオリゴヌクレオチドの、表皮及び真皮への送
逹の結果を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/24 Ａ６１Ｋ 47/24 ４Ｃ０８６ 47/38 47/38 Ｃ０７Ｈ 21/04 Ｃ０７Ｈ 21/04 Ｂ Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ (72)発明者 ハーディー，グレゴリー・イー アメリカ合衆国カリフォルニア州92067， ランチョ・サンタ・フェ，ラ・ブリサ 17407 (72)発明者 クック，フィリップ・ディー アメリカ合衆国カリフォルニア州92069， レーク・サン・マルコス，ラ・カサ 1155 (72)発明者 エッカー，デービッド・ジェイ アメリカ合衆国カリフォルニア州92024， エンシニタス，サクソニー・ロード 1041 (72)発明者 ツァイ，イェイリ・ジェニファー アメリカ合衆国カリフォルニア州92037， ラ・ホーラ，ヒルプワント・ロー 6025 (72)発明者 テンプリン，マイケル・ブイ アメリカ合衆国カリフォルニア州92008， カールズバッド，パリセイズ・ドライブ 1806 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA07 BA28 CA04 DA02 EA04 GA13 HA01 4B063 QA01 QQ43 QR32 QR55 QS34 4C057 BB02 CC01 DD01 MM09 4C076 AA17 AA19 BB31 CC04 DD26 DD30 DD37 DD38 DD39 DD40 DD41 DD43 DD45 DD46 DD51 DD57 DD60 DD63 DD70 EE05 EE23 EE32 EE41 FF03 FF16 FF68 4C084 AA13 MA63 NA13 ZA892 4C086 AA01 EA16 MA02 MA03 MA05 MA24 MA63 NA13 ZA89 ZB21

Claims (70)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 局所送達剤と混和されたオリゴヌクレオチドを含んでなる医
   薬組成物。
2. 【請求項２】 局所送達剤が、有効濃度で存在するときに、オリゴヌクレオ
   チドを動物の表皮組織に送逹するのに有効である、請求項１記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】 局所送達剤が、有効濃度で存在するときに、オリゴヌクレオ
   チドを動物の真皮組織に送逹するのに有効である、請求項１記載の医薬組成物。
4. 【請求項４】 局所送達剤が、複数の顕微鏡的小嚢である、請求項１記載の
   医薬組成物。
5. 【請求項５】 顕微鏡的小嚢がリポソームである、請求項４記載の医薬組成
   物。
6. 【請求項６】 医薬組成物中のオリゴヌクレオチドの大半が顕微鏡的小嚢内
   に包まれている、請求項４記載の医薬組成物。
7. 【請求項７】 医薬組成物中のオリゴヌクレオチドの大半が顕微鏡的小嚢内
   に包まれていない、請求項４記載の医薬組成物。
8. 【請求項８】 リポソームが、中性リポソーム、陰イオン性リポソーム及び
   陰イオン性融合性リポソームからなる群から選択される、請求項５記載の医薬組
   成物。
9. 【請求項９】 顕微鏡的小嚢がジミリストイルホスファチジルコリンを含ん
   でなる、請求項４記載の医薬組成物。
10. 【請求項１０】 顕微鏡的小嚢がジパルミトイルホスファチジルコリンを含
    んでなる、請求項４記載の医薬組成物。
11. 【請求項１１】 顕微鏡的小嚢がジミリストイルホスファチジルグリセロー
    ルを含んでなる、請求項４記載の医薬組成物。
12. 【請求項１２】 顕微鏡的小嚢がジオレオイルホスファチジルエタノールア
    ミンを含んでなる、請求項４記載の医薬組成物。
13. 【請求項１３】 顕微鏡的小嚢が、リン脂質、ホスファチジルコリン及びコ
    レステロールを含んでなる、請求項４記載の医薬組成物。
14. 【請求項１４】 リン脂質、ホスファチジルコリン及びコレステロールが約
    ２０：６０：２０モル％の比率で存在する、請求項１３記載の医薬組成物。
15. 【請求項１５】 顕微鏡的小嚢がホスファチジルコリンを含んでなる、請求
    項４記載の医薬組成物。
16. 【請求項１６】 ホスファチジルコリンが大豆又は卵から誘導される、請求
    項１５記載の医薬組成物。
17. 【請求項１７】 顕微鏡的小嚢が非イオン性界面活性剤及びコレステロール
    を含んでなる、請求項４記載の医薬組成物。
18. 【請求項１８】 顕微鏡的小嚢が界面活性剤を含んでなる、請求項４記載の
    医薬組成物。
19. 【請求項１９】 顕微鏡的小嚢が、動物におけるオリゴヌクレオチドの真皮
    送逹を行えるように配合される、請求項４記載の医薬組成物。
20. 【請求項２０】 顕微鏡的小嚢が、動物におけるオリゴヌクレオチドの表皮
    送逹を行えるように配合される、請求項４記載の医薬組成物。
21. 【請求項２１】 オリゴヌクレオチドがアンチセンス化合物である、請求項
    １記載の医薬組成物。
22. 【請求項２２】 アンチセンス化合物が、リボザイム、外部ガイド配列、ア
    ンチセンスオリゴヌクレオチド、又はアンチセンスペプチド核酸である、請求項
    ２１記載の医薬組成物。
23. 【請求項２３】 オリゴヌクレオチドがアプタマー又はおとり分子である、
    請求項１記載の医薬組成物。
24. 【請求項２４】 オリゴヌクレオチドの共有結合性連結の少なくとも１が修
    飾された共有結合性連結である、請求項１記載の医薬組成物。
25. 【請求項２５】 修飾された共有結合性連結が、ホスホロチオエート連結、
    ホスホトリエステル連結、メチルホスホネート連結、メチレン（メチルイミノ）
    連結、モルホリノ連結、アミド連結、ポリアミド連結、短鎖アルキル糖間連結、
    シクロアルキル糖間連結、短鎖ヘテロ原子糖間連結、及び複素環ヘテロ糖間連結
    からなる群から選択される、請求項２４記載の医薬組成物。
26. 【請求項２６】 オリゴヌクレオチドの少なくとも１のヌクレオチドが修飾
    された糖部分を有する、請求項１記載の医薬組成物。
27. 【請求項２７】 修飾された糖部分が、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＳＣＨ₃ 、−Ｆ
    、−ＯＣＮ、−ＯＣＨ₃ ＯＣＨ₃ 、−ＯＣＨ₃ Ｏ（ＣＨ₂)_n ＣＨ₃ 、−Ｏ（ＣＨ ₂ )_n ＮＨ₂ 又は−Ｏ（ＣＨ₂)_n ＣＨ₃ （ここで、ｎは１〜約１０である）、Ｃ₁ 〜Ｃ₁₀低級アルキル基、アルコキシアルコキシ基、置換低級アルキル基、置換ア
    ルカリール基、置換アラルキル基、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＣＮ、−ＣＦ₃ 、−ＯＣ
    Ｆ₃ 、−Ｏ−アルキル基、−Ｓ−アルキル基、−Ｎ−アルキル基、−Ｏ−アルケ
    ニル基、−Ｓ−アルケニル基、−Ｎ−アルケニル基、−ＳＯＣＨ₃ 、−ＳＯ₂ Ｃ
    Ｈ₃ 、−ＯＮＯ₂ 、−ＮＯ₂ 、−Ｎ₃ 、−ＮＨ₂ 、ヘテロシクロアルキル基、ヘ
    テロシクロアルカリール基、アミノアルキルアミノ基、ポリアルキルアミノ基、
    置換シリル基、ＲＮＡ開裂基、リポーター基、ＤＮＡインターカレーター、オリ
    ゴヌクレオチドの薬物動態特性を改善するための基、オリゴヌクレオチドの薬力
    学特性を改善するための基、メトキシエトキシ基、及びメトキシ基からなる群か
    ら選択される部分の置換又は付加を２’位に有する、請求項２６記載の医薬組成
    物。
28. 【請求項２８】 オリゴヌクレオチドの少なくとも１のヌクレオチドが修飾
    されたヌクレオベースを有する、請求項１記載の医薬組成物。
29. 【請求項２９】 オリゴヌクレオチドがキメラオリゴヌクレオチドである、
    請求項１記載の医薬組成物。
30. 【請求項３０】 キメラオリゴヌクレオチドがヘミマーである、請求項２９
    記載の医薬組成物。
31. 【請求項３１】 オリゴヌクレオチドが、細胞接着タンパク質の発現を変調
    するか又は細胞増殖の速度を変調する、請求項１記載の医薬組成物。
32. 【請求項３２】 局所浸透増進剤と混和されたオリゴヌクレオチドを含んで
    なる医薬組成物。
33. 【請求項３３】 局所浸透増進剤が脂肪酸である、請求項３２記載の医薬組
    成物。
34. 【請求項３４】 脂肪酸が、アラキドン酸、オレイン酸、ラウリン酸、カプ
    リル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸
    、リノレン酸、ジカプレート、トリカプレート、モノオレイン、ジラウリン、グ
    リセリル１−モノカプレート、１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン、ア
    シルカルニチン、アシルコリン、又はＣ_1-10アルキルエステル、モノグリセライ
    ド、ジグリセライド、及びそれらの薬学的に許容できる塩からなる群から選択さ
    れる、請求項３３記載の医薬組成物。
35. 【請求項３５】 脂肪酸がミリスチン酸イソプロピルである、請求項３４記
    載の医薬組成物。
36. 【請求項３６】 局所浸透増進剤が胆汁酸塩である、請求項３２記載の医薬
    組成物。
37. 【請求項３７】 胆汁酸塩が、コール酸、デヒドロコール酸、デオキシコー
    ル酸、グルコール酸 (glucholic acid) 、グリコール酸 (glycholic acid) 、グ
    リコデオキシコール酸、タウロコール酸、タウロデオキシコール酸、ケノデオキ
    シコール酸、ウルソデオキシコール酸、タウロ−２４，２５−ジヒドロフシジン
    酸ナトリウム、グリコジヒドロフシジン酸ナトリウム、ポリオキシエチレン−９
    −ラウリルエステル、及びそれらの薬学的に許容できる塩からなる群から選択さ
    れる、請求項３６記載の医薬組成物。
38. 【請求項３８】 局所浸透増進剤がキレート剤である、請求項３２記載の医
    薬組成物。
39. 【請求項３９】 キレート剤が、ＥＤＴＡ、クエン酸、サリシクレート、コ
    ラーゲンのＮ−アシル誘導体、ラウレス−９ (laureth-9)、β−ジケトンのＮ−
    アミノアシル誘導体、及びそれらの混合物からなる群から選択される、請求項３
    ８記載の医薬組成物。
40. 【請求項４０】 局所浸透増進剤が界面活性剤である、請求項３２記載の医
    薬組成物。
41. 【請求項４１】 界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチ
    レン−９−ラウリルエステル、ポリオキシエチレン−２０−セチルエーテル、パ
    ーフルオロケミカルエマルジョン、及びそれらの混合物からなる群から選択され
    る、請求項４０記載の医薬組成物。
42. 【請求項４２】 局所浸透増進剤が、不飽和環状尿素、１−アルキルアルカ
    ノン、１−アルケニルアザシクロアルカノン、ステロイド系抗炎症剤、及びそれ
    らの混合物からなる群から選択される、請求項３２記載の医薬組成物。
43. 【請求項４３】 局所浸透増進剤が、グリコール、ピロール、アゾン、又は
    テルペン類である、請求項３２記載の医薬組成物。
44. 【請求項４４】 動物における遺伝子の発現を変調する方法であって、前記
    動物に請求項３２記載の医薬組成物を投与することを含んでなる方法。
45. 【請求項４５】 オリゴヌクレオチドと局所浸透増進剤がエマルジョンを形
    成する、請求項３２記載の医薬組成物。
46. 【請求項４６】 エマルジョンがクリーム状である、請求項４５記載の医薬
    組成物。
47. 【請求項４７】 局所浸透増進剤がミリスチン酸イソプロピルである、請求
    項４６記載の医薬組成物。
48. 【請求項４８】 ミリスチン酸イソプロピルが、約１〜５０重量％の量で存
    在する、請求項４６記載の医薬組成物。
49. 【請求項４９】 ミリスチン酸イソプロピルが、約５〜２０重量％の量で存
    在する、請求項４７記載の医薬組成物。
50. 【請求項５０】 更にメチルパラベンを含んでなる、請求項４７記載の医薬
    組成物。
51. 【請求項５１】 更にプロピルパラベンを含んでなる、請求項４７記載の医
    薬組成物。
52. 【請求項５２】 更にフェノキシエタノールを含んでなる、請求項４７記載
    の医薬組成物。
53. 【請求項５３】 更に、メチルパラベン、プロピルパラベン及びフェノキシ
    エタノールを含んでなる保存剤の組合せを約０．５〜１０重量％の量で含んでな
    る、請求項４７記載の医薬組成物。
54. 【請求項５４】 前記保存剤の組合せが約１〜５重量％の量で存在する、請
    求項５３記載の医薬組成物。
55. 【請求項５５】 油相乳化剤がモノステアリン酸グリセロールであり、そし
    て水相乳化剤がポリオキシル４０ステアレートである、請求項４７記載の医薬組
    成物。
56. 【請求項５６】 更に増粘剤を含んでなる、請求項４７記載の医薬組成物。
57. 【請求項５７】 増粘剤がヒドロキシプロピルメチルセルロースである、請
    求項５６記載の医薬組成物。
58. 【請求項５８】 ｐＨが約７である、請求項４７記載の医薬組成物。
59. 【請求項５９】 オリゴヌクレオチドが、ＩＣＡＭをコードするｍＲＮＡ配
    列の一部分に相補性である、請求項４７記載の医薬組成物。
60. 【請求項６０】 オリゴヌクレオチドがＩＳＩＳ−２３０２である、請求項
    ５９記載の医薬組成物。
61. 【請求項６１】 オリゴヌクレオチドがＩＳＩＳ−１５８３９である、請求
    項６０記載の医薬組成物。
62. 【請求項６２】 オリゴヌクレオチドが、腫瘍壊死因子をコードするｍＲＮ
    Ａ配列の一部分に相補性である、請求項４７記載の医薬組成物。
63. 【請求項６３】 オリゴヌクレオチドがＩＳＩＳ−１０４８３８である、請
    求項６２記載の医薬組成物。
64. 【請求項６４】 動物における真皮又は表皮組織にオリゴヌクレオチドを送
    逹する方法であって、前記表皮組織に請求項１記載の医薬組成物を適用すること
    を含んでなる方法。
65. 【請求項６５】 動物における真皮又は表皮組織にオリゴヌクレオチドを送
    逹する方法であって、前記表皮組織に請求項４７記載の医薬組成物を適用するこ
    とを含んでなる方法。
66. 【請求項６６】 乾癬を治療する方法であって、その治療を必要とする動物
    における真皮又は表皮組織に請求項６０記載の医薬組成物を投与することを含ん
    でなる方法。
67. 【請求項６７】 動物における第１の真皮又は表皮組織部位にオリゴヌクレ
    オチドを送逹する方法であって、前記オリゴヌクレオチドを、前記動物における
    第２の真皮又は表皮組織部位に適用することを含んでなり、前記第１部位が前記
    第２部位から剥がされる方法。
68. 【請求項６８】 オリゴヌクレオチドが請求項１記載の医薬組成物中に存在
    する、請求項６７記載の方法。
69. 【請求項６９】 オリゴヌクレオチドが請求項４７記載の医薬組成物中に存
    在する、請求項６７記載の方法。
70. 【請求項７０】 オリゴヌクレオチドが第２部位の表皮組織に局所適用され
    る、請求項６７記載の方法。