KR20210102887A - 말초 세로토닌과 관련된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 트립토판 하이드록실라제 1 (tph1)의 결정질 스피로사이클릭 화합물 억제제 - Google Patents

Abstract

결정질 화합물 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트가 있으며, 이는 19.05 ± 0.20 (°2θ)에서 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴을 나타낸다. 또한 상기 화합물을 포함하는 약학 조성물도 있다. 결정질 화합물과 약학적으로 허용되는 부형제가 포함된 투여 형태도 있다. 이 화합물의 결정화/재결정화 방법도 있다. 이 화합물로 질병을 치료 또는 예방하는 방법도 있다.

Description

말초 세로토닌과 관련된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 트립토판 하이드록실라제 1 (TPH1)의 결정질 스피로사이클릭 화합물 억제제

본 개시는 말초 세로토닌 관련 질환 또는 장애의 치료에 유용한 결정질 스피로사이클릭 화합물에 관한 것이다. 상세하게는 본 개시는 트립토판 하이드록실레이스(TPH) 억제제로서 말초 세로토닌 관련 질환 또는 장애의 치료에 유용한 결정질 스피로사이클릭 화합물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 결정질 스피로사이클릭 화합물을 포함하는 투여 제형에 대해 설명한다. 또한 결정질 스피로사이클릭 화합물의 재결정화 방법에 대해 설명한다.

세로토닌(5-하이드록시트립타민, 5-HT)은 신경세포, 평활근 및 기타 세포 유형에 작용하여 중추 및 말초 기능을 조절하는 신경전달물질이다. 5-HT는 다수의 생리적, 심리적 과정을 통제 및 조절하는 데 관여한다. 중추신경계(CNS)에서 5-HT는 기분, 식욕 및 기타 행동 기능을 조절한다. 소화기계(GI System)에서 5-HT는 일반적인 위장운동 촉진 역할을 담당하며 소화관과 뇌 사이에서 감각의 중요한 매개자(예: 구역 및 포만감)이다. 말초 5-HT 신호선달 시스템의 조절 장애는 여러 상태의 병원과 연관된다는 보고가 있었다(다음 예 참조: Mawe, G. M. & Hoffman, J., Serotonin Signalling in the Gut-functions, Dysfunctions and Therapeutic Targets). Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology 10, 473-486 (2013); Gershon, M. D. 5-hydroxytryptamine (serotonin) in the Gastrointestinal Tract. Current Opinion in Endocrinology, Diabetes, and Obesity 20, 14-21 (2013); Lesurtel, M._, Soil, C, Graf, R. & Ciavien, P.-A. Role of Serotonin in the Hepato-gastrointestinal Tract: An Old Molecule for New Perspectives. Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS 65, 940-52 (2008)). 여기에는 골다공증(예: Kode, A, et al., FOXO1 Orchestrates the Bone-suppressing Function of Gut-derived Serotonin, The Journal of Clinical Investigation 122, 3490-503 (2012), Yadav, V, K. et al., Pharmacological Inhibition of Gut-derived Serotonin Synthesis is a Potential Bone Anabolic Treatment for Osteoporosis. Nature Medicine 16, 308-12 (2010); Yadav, V. K, et al., Lrp5 Controls Bone Formation by Inhibiting Serotonin Synthesis in the Duodenum, Cell 135, 825-37 (2008)), 암(예: Liang, C, et al., Serotonin Promotes the Proliferation of Serum-deprived Hepatocellular Carcinoma Cells Via Upregulation of FOX03a. Molecular Cancer 12, 14 (2013); Soil, C. et al., Serotonin Promotes Tumor Growth in Human Hepatocellular Cancer. Hepatology 51, 1244-1254 (2010); Pai, V. P et al., Altered Serotonin Physiology in Human Breast Cancers Favors Paradoxical Growth and Cell Survival. Breast Cancer Research: BCR 11, R81 (2009); Engelman, K., Lovenberg, W. & Sjoerdsma, A. Inhibition of Serotonin Synthesis by Para-chlorophenylalanine in Patients with The Carcinoid Syndrome. The New England Journal of Medicine 277, 1103-8 (1967)), 심혈관질환(예: Robiolio, P. A, et al., Carcinoid Heart Disease: Correlation of High Serotonin Levels with Valvular Abnormalities Detected by Cardiac Catheterization and Echocardiography. Circulation 92, 790-795 (1995).), 당뇨병(예: Sumara, G., Sumara, O., Kim, J. K. & Karsenty, G. Gut-derived Serotonin is a Multifunctional Determinant to Fasting Adaptation. Cell Metabolism 16, 588-600 (2012)), 죽상동맥경화증(예: Ban, Y. et al., Impact of Increased Plasma Serotonin Levels and Carotid Atherosclerosis on Vascular Dementia. Atherosclerosis 195, 153-9 (2007)) 및 위장 질환(예: Manocha, M. & Khan, W. I. Serotonin and GI Disorders: An Update on Clinical and Experimental Studies. Clinical and Translational Gastroenterology 3, el 3 (2012); Ghia, J.-E. et al., Serotonin has a Key Role in Pathogenesis of Experimental Colitis. Gastroenterology 137, 1649-60 (2009); Sikander, A., Rana, S. V. & Prasad, K. K., Role of Serotonin in Gastrointestinal Motility and Irritable Bowel Syndrome. Clinica Chimica Acta; International Journal of Clinical Chemistry 403, 47-55 (2009); Spiller, R, Recent Advances in Understanding the Role of Serotonin in Gastrointestinal Motility in Functional Bowel Disorders: Alterations In 5-HT Signalling and Metabolism in Human Disease. Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of The European Gastrointestinal Motility Society 19 Suppl 2, 25-31 (2007); Costedio, M. M., Hyman, N. & Mawe, G, M, Serotonin and its Role in Colonic Function and In Gastrointestinal Disorders. Diseases of the Colon and Rectum 50, 376-88 (2007); Gershon, M. D. & Tack, J., The Serotonin Signalling System: From Basic Understanding to Drug Development for Functional GI Disorders. Gastroenterology 132, 397- 14 (2007); Mawe, G. M., Coates, M. D. & Moses, P. L. Review Article: Intestinal Serotonin Signalling In Irritable Bowel Syndrome. Alimentary Pharmacology & Therapeutics 23, 1067-76 (2006); Crowell, M. D. Role of Serotonin in the Pathophysiology of The Irritable Bowel Syndrome. British Journal of Pharmacology 141, 1285-93 (2004)), 폐질환(예: Lau, W. K. W. et al., The Role of Circulating Serotonin in the Development of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. PloS One 7, e31617 (2012); Egermayer, P., Town, G. I. & Peacock, A. J. Role of Serotonin in the Pathogenesis of Acute and Chronic Pulmonary Hypertension. Thorax 54, 161-168 (1999)), 감염성 질환(예: Margolis, K. G. et al., Pharmacological Reduction of Mucosal but Not Neuronal Serotonin Opposes Inflammation in Mouse Intestine. Gut doi: 10.1 136/gutjnl-2013-304901 (2013); Duerschmied, D. et al., Platelet Serotonin Promotes the Recruitment of Neutrophils to Sites of Acute Inflammation in Mice. Blood 121, 1008-15 (2013); Li, N. et al., Serotonin Activates Dendritic Cell Function in the Context of Gut Inflammation. The American Journal of Pathology 178, 662-71 (2011)), 또는 간 질환 또는 장애(예: Ebrahimkhani, M. R. et al., Stimulating Healthy Tissue Regeneration by Targeting The 5-HT2B Receptor in Chronic Liver Disease. Nature Medicine 17, 1668-73 (2011))가 포함된다. 다양한 5-HT 수용체를 차단 또는 자극하는 상당수의 약물은 5-HT 조절 이상과 연관된 광범위한 질병을 나타낸다(다음 예 참조: Wacker, D. et al., Structural Features for Functional Selectivity at Serotonin Receptors, Science (New York N Y.) 340, 615-9 (2013)).

5-HT 생합성의 속도 제한 단계는 이산소에 의한 트립토판의 가수분해로 이 과정은 보조인자, (6R)-L-에리스로-5,6,7,8-테트라하이드로바이오프테린(BH4)에 의해 촉매화된다. 그 결과 산화된 산물, 5-하이드록시 트립토판(5 -hydroxy tryptophan, 5-HTT)은 이어서 방향족 아미노산 디카르복실라아제(AAAD; EC 4.1.1.28)에 의해 탈카르복실화되어 5-HT를 생성한다. 페닐알라닌 하이드록실레이스(PheOH), 티록신 하이드록실레이스(TH)와 함께 TPH는 프테린 의존적 방향족 아미노산 하이드록실레이스군에 속한다.

TPH의 경우 척추동물의 두 가지 동형단백질 TPH1과 TPH2가 동정된 바 있다. TPH1은 위장관 내에 있는 장 크롬친화성(EC) 세포와 같이 주로 송과샘과 비신경 조직에서 발현된다. TPH2(뇌에서 우세한 형태)는 배측 솔기 또는 근층간 신경총 세포와 같이 신경 세포에서만 발현된다. 5-HT 생합성에 관여하는 말초 및 중추 신경계가 뇌혈관 장벽을 통과할 수 없는 5-HT와 함께 동정되었다. 따라서 5-HT의 말초 약리학적 효과는 말초의 TPH, 주로 장의 TPH1에 영향을 미치는 물질에 의해 조절할 수 있다.

현재 알려진 페닐알라닌 유래 TPH1 억제제는 많지 않다. 한 예로 매우 약하고 비선택적인 TPH의 가역적 억제제는 유암종 환자에서 설사는 물론 화학요법으로 인해 발생한 구토 치료에 효과적임이 입증되었다. 그러나 pCPA는 중추에서 확산되고, 그 결과 이 약물의 투여는 환자와 동물에서 우울증 발생 및 CNS 기능의 기타 변화와 연관되었다. P-에티닐 페닐알라닌(p-Ethynyl Phenllalatnine)은 pCPA에 비해 더욱 선택적이고 강력한 TPH 억제제이나(Stokes, A, H., et al. p-Ethynylphenylalanine: A Potent Inhibitor of Tryptophan Hydroxylase. Journal of Neurochemistry 74, 2067-73 (2000), 중추 5-HT 생성에 영향을 미치고 TPH의 합성 행동에 비가역적으로 방해하는 것으로 알려져 있다(또한 다른 단백질과 상호작용할 가능성이 있다).

최근 부피가 큰 페닐알라닌 유래 TPH 억제제가 뇌의 5-HT 수준에 영향을 미치지 않고 장의 5-HT 농도를 줄이는 것으로 보고되었다(Zhong, H. et al., Molecular dynamics simulation of tryptophan hydroxylase-1: binding modes and free energy analysis to phenylalanine derivative inhibitors. International Journal of Molecular Sciences 14, 9947-62 (2013); Ouyang, L., et al., Combined Structure-Based Pharmacophore and 3D-QSA Studies on Phenylalanine Series Compounds as TPH1 Inhibitors. International Journal of Molecular Sciences 13, 5348-63 (2012); Camilleri, M. LX-1031, A Tryptophan 5-hydroxylase Inhibitor, and its Potential in Chronic Diarrhea Associated with Increased Serotonin. Neurogastroenterology and Motility: The Official Journal of the European Gastrointestinal Motility Society 23, 193-200 (2011); Cianchetta, G., et al., Mechanism of Inhibition of Novel Tryptophan Hydroxylase Inhibitors Revealed by Co-crystal Structures and Kinetic Analysis. Current Chemical Genomics 4, 19-26 (2010); Jin, H., et al., Substituted 3-(4-(l,3,5-triazin-2-yl)-phenyl)-2-aminopropanoic Acids as Novel Tryptophan Hydroxylase Inhibitors. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19, 5229-32 (2009); Shi, Z.C., et al., Modulation of Peripheral Serotonin Levels by Novel Tryptophan Hydroxylase Inhibitors for the Potential Treatment of Functional Gastrointestinal Disorders. Journal of Medicinal Chemistry 51, 3684-7 (2008); Liu, Q., et al., Discovery and Characterization of Novel Tryptophan Hydroxylase Inhibitors That Selectively Inhibit Serotonin Synthesis in the Gastrointestinal Tract. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 325, 47-55 (2008)).

WO 2015/035113에서 TPH 억제제로서 작용하는 스피로사이클릭 화합물을 개시했는데, 이는 폐동맥 고혈압(PAH)과 관련 폐동맥 고혈압(APAH)의 심혈관 질환을 포함하여 말초 세로토닌과 연관된 다양한 질환과 장애의 치료에 유용하다.

5-HT 연관 질병의 치료 및 예방, 세로토닌 수준, 특히 말초 세로토닌 수준의 조절 및/또는 감소를 위한 수단으로 조직의 5-HT(특히, 장의 5-HT 및 폐의 5-HT)를 선택적으로 감소시킬 필요가 있다. 특히 뼈 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 폐 질환, 위장관 질환, 간 질환, 암 및 감염성 질환을치료 또는 예방해야 할 필요가 있다. 특히 심혈관계 질환인 폐동맥 고혈압(PAH)과 관련 폐동맥 고혈압(APAH)을 치료 또는 예방할 필요성은 더욱 크다. 카르시노이드 증후군도 치료 및 예방할 필요가 있다. 이와 같이 상기 질병을 다루기 위해 TPH1 억제제가 필요하다.

개시의 개요

본 개시는 말초 세로토닌 관련 질환이나 장애를 치료하는데 유용한 결정질 스피로사이클릭 화합물을 제공한다.

또한, 본 개시는 트립토판 하이드록실레이스(TPH1), 특히 그 이소폼(isoform) 1 억제제로서, 말초 세로토닌 관련의 질환이나 장애 치료에 유용한 결정질 스피로사이클릭 화합물을 제공한다.

나아가, 본 개시는 기본적으로 도 1과 동일한 XRPD 패턴을 갖는 결정질 화합물로서, (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트(이하 "화합물 1")를 제공한다.

나아가 본 개시에 따르면, 특성피크가 19.05 ± 0.20 (°2θ)에 위치하는 XRPD 패턴을 갖는 결정질 화합물로서, (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 제공한다.

본 개시는 환자 투여용으로 적합한 약학 조성물을 제공한다. 이 조성물은 전술한 결정질 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 하나 이상의 부형제를 갖는다.

또한, 본 개시는 TPH1 억제 방법을 제공한다. 이 방법은 TPH1을 전술한 결정질 화합물과 접촉시키는 단계를 포함한다.

나아가 본 개시에 따르면, 환자의 말초 세로토닌 수치를 낮추는 방법이 제공된다. 이 방법은 전술한 결정질 화합물을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.

더 나아가 본 개시에 따르면, 환자의 말초 세로토닌 수치를 낮춤으로써 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다. 이 방법은 전술한 결정질 화합물의 치료에 효과적인 용량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 선별된 환자군의 대상 질환들은 골질환, 심혈관질환, 대사질환, 폐질환, 위장관질환, 간질환 및 염증성질환으로 구성된다.

본 개시의 실시예들은 아래의 도면들과 함께 본 명세서에 기술되어 있다.
본 개시에 의하면, 도 1은 결정질 화합물인 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트((결정 다형체 형태 3)의 XRPD 플롯이다.
도 2는 도 1의 다형체와는 다른 형태를 갖는 결정질 화합물인 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트(결정 다형체 제1형)의 XRPD 플롯이다.

본 개시에 기재된 ((S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트의 결정 다형체 제3형은 에틸 카르복실레이트 화합물의 다형체 제1형과 비교할 때 95℃ 미만, 더욱 자세하게는 80℃ 미만의 온도에서 매우 뛰어난 열역학적 안정성을 보이므로 유통기한 연장에 유리하다.

에틸 카르복실레이트 화합물의 화학구조는 아래와 같다.

제3형 결정 다형체의 XRPD(X-선 분말 회절) 패턴은 아래의 표 1에 기재된 바와 같다.

화합물 1, 제3형에 대한 X선 분말 회절 패턴에서 관찰된 피크

피크 위치(°2θ)	d 간격( )	강도(%)
8.78 ± 0.20	10.077 ± 0.235	90
12.00 ± 0.20	7.375 ± 0.125	25
13.47 ± 0.20	6.573 ± 0.099	39
14.02 ± 0.20	6.316 ± 0.091	12
14.87 ± 0.20	5.956 ± 0.081	71
15.39 ± 0.20	5.757 ± 0.075	72
15.61 ± 0.20	5.677 ± 0.073	78
15.89 ± 0.20	5.576 ± 0.071	50
16.31 ± 0.20	5.434 ± 0.067	7
17.70 ± 0.20	5.011 ± 0.057	34
18.45 ± 0.20	4.809 ± 0.052	70
19.05 ± 0.20	4.658 ± 0.049	100
20.12 ± 0.20	4.413 ± 0.044	42
20.57 ± 0.20	4.317 ± 0.042	68
20.84 ± 0.20	4.262 ± 0.041	39
21.46 ± 0.20	4.141 ± 0.039	49
21.94 ± 0.20	4.051 ± 0.037	18
22.56 ± 0.20	3.941 ± 0.035	31
22.90 ± 0.20	3.884 ± 0.034	17
23.90 ± 0.20	3.723 ± 0.031	35
24.32 ± 0.20	3.660 ± 0.030	13
25.07 ± 0.20	3.552 ± 0.028	12
26.54 ± 0.20	3.359 ± 0.025	17
26.76 ± 0.20	3.332 ± 0.025	18
27.79 ± 0.20	3.210 ± 0.023	8
28.21 ± 0.20	3.163 ± 0.022	19
29.48 ± 0.20	3.030 ± 0.020	9

다른 측면에서 제3형 결정질 다형체는 아래의 표 2에 나와 있는 두드러진 XRPD 피크를 나타낸다.

화합물 1, 제3형에 대한 X선 분말 회절 패턴에서 두드러지게 관찰된 피크

피크 위치(°2θ)	d 간격( )	강도(%)
8.78 ± 0.20	10.077 ± 0.235	90
14.87 ± 0.20	5.956 ± 0.081	71
15.39 ± 0.20	5.757 ± 0.075	72
15.61 ± 0.20	5.677 ± 0.073	78
18.45 ± 0.20	4.809 ± 0.052	70
19.05 ± 0.20	4.658 ± 0.049	100

본 개시의 또 다른 양상에서, 제3형 결정 다형체는 19.05 ± 0.20 (°2θ)에서 고유의 XRPD 피크가 나타난다. 제3형 결정 다형체는 본원에서 "제3형", "제3형 화합물 1", "제3형 화합물", "제3형 결정질 화합물" 등 다양하게 명명된다.

제1형 결정질 화합물의 의 XRPD(X-선 분말 회절) 패턴은 아래의 표 3에 나와 있다.

화합물 1, 제1형에 대한 X선 분말 회절 패턴에서 관찰된 피크

피크 위치(°2θ)	d 간격( )	강도 (%)
5.92 ± 0.20	14.936 ± 0.522	27
9.01 ± 0.20	9.816 ± 0.222	11
9.68 ± 0.20	9.140 ± 0.192	9
10.38 ± 0.20	8.523 ± 0.167	9
10.95 ± 0.20	8.082 ± 0.150	30
11.85 ± 0.20	7.468 ± 0.128	6
12.90 ± 0.20	6.861 ± 0.108	43
13.89 ± 0.20	6.376 ± 0.093	65
14.62 ± 0.20	6.057 ± 0.084	31
15.04 ± 0.20	5.890 ± 0.079	44
15.41 ± 0.20	5.750 ± 0.075	38
17.13 ± 0.20	5.176 ± 0.061	30
17.83 ± 0.20	4.974 ± 0.056	37
18.72 ± 0.20	4.741 ± 0.051	14
19.44 ± 0.20	4.567 ± 0.047	100
19.79 ± 0.20	4.487 ± 0.045	30
20.11 ± 0.20	4.417 ± 0.044	97
20.34 ± 0.20	4.366 ± 0.043	44
20.84 ± 0.20	4.262 ± 0.041	14
21.41 ± 0.20	4.151 ± 0.039	10
21.88 ± 0.20	4.063 ± 0.037	11
22.28 ± 0.20	3.991 ± 0.036	25
22.83 ± 0.20	3.895 ± 0.034	60
23.85 ± 0.20	3.731 ± 0.031	13
24.40 ± 0.20	3.648 ± 0.030	9
25.45 ± 0.20	3.500 ± 0.027	9
25.97 ± 0.20	3.431 ± 0.026	12
27.22 ± 0.20	3.276 ± 0.024	15
27.58 ± 0.20	3.235 ± 0.023	23
28.06 ± 0.20	3.180 ± 0.022	12
28.66 ± 0.20	3.115 ± 0.021	7

또 다른 측면에서 제1형 결정질 화합물은 표 4 아래에 나와 있는 두드러진 XRPD 피크를 나타낸다.

화합물 1, 제1형에 대한 X선 분말 회절 패턴에서 두드러지게 관찰된 피크

피크 위치(°2θ)	d 간격( )	강도(%)
12.90 ± 0.20	6.861 ± 0.108	43
13.89 ± 0.20	6.376 ± 0.093	65
15.04 ± 0.20	5.890 ± 0.079	44
19.44 ± 0.20	4.567 ± 0.047	100
20.11 ± 0.20	4.417 ± 0.044	97
20.34 ± 0.20	4.366 ± 0.043	44
22.83 ± 0.20	3.895 ± 0.034	60

카복실레이트 화합물의 무정형 형태는 미국 특허 번호. 9,199,994의 실시예 63i에 개시된 방법에 의해 제조가 가능한 바, 상기 실시예 63i가 본 명세서의 인용문헌에 포함되어 있다. 이렇게 제조된 무정형 형태는 본 명세서에 기재된 방법들을 포함하여 이미 알려진 종래 기술을 통해 결정질로 변환시킬 수 있다. 카르복실레이트 화합물의 결정질 제1형과 제3형은 아래의 실시예들에 제시된 방법들을 통해 제조할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "약학적으로 허용 가능한"이란 문구는, 과량의 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하기에 적합한 건전한 의학적 판단의 범주 내에 있는 화합물, 재료, 조성물 및/또는 제형을 말한다.

본 명세서에서 사용되는 "주위온도" 및 "실온"이라는 용어들은 일반적으로 반응온도, 즉 반응이 진행되는 방 안의 공기의 온도로서, 예를 들어 약 20℃ ~ 30℃까지의 온도를 말한다.

본 명세서에서 사용되는 일부 약어들이 아래의 표 5에 정리되어 있다.

약어표

ACN	아세토니트릴
APAH	관련 폐동맥 고혈압
atm	대기
CH3CN	아세토니트릴
CNS	중추신경계
ee	거울상 초과량
EtOH	에틸 알코올
h	시간
IPC	공정관리
Ir catalyst	이리듐 촉매
L	리터
μL	마이크로리터
mbar	밀리바
min	분
mg	밀리그램
mm	밀리미터
MeTHF	메틸 테르타하이드로퓨란
MTBE	메틸 t-부틸 에스터
N/A	해당 없음
N.D. (ND)	결정되지 않음
PAH	폐동맥 고혈압
PheOH	페닐알라닌 하이드록실레이스
rel. vol.	상대부피
RelWt/Vol	상대 중량 대 부피
RT	실온
THF	테트라하이드로퓨란
TLC	박막크로마토그래피
TMSCl	트리메틸클로로실란
TPH	트립토판 하이드록실레이스
V	상대부피
v/v	부피 백분율
wt%	중량 백분율
XRPD	X선 분말 회절

제3형 화합물의 제조 절차가 아래에 기술되어 있다. 이상적인 반응조건과 반응시간은 사용된 반응물질들이 무엇이냐에 따라 달라질 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 용제, 온도 및 기타 반응조건들은 알려진 기술들과 동일할 수 있다. 특정한 제조절차들이 아래의 실시예 항에 제시되어 있다.

반응과정은 전형적으로 TLC(박막 크로마토그래피) 또는 필요할 경우 HPLC-MS에 의해 모니터링이 가능하다. 중간물과 생성물들은 실리카 겔, 재결정화, HPLC 및/또는 역상 HPLC 크로마토그래피를 이용하여 정제할 수 있다. 아래에 기술된 반응들의 경우, 반응성 작용기들(예로, 하이드록시기, 아미노기, 타이오기 또는 카르복시기)을 보호하여 원치 않는 부반응의 발생을 제한할 필요가 있다. 이러한 작용기들의 사용과 이를 도입 및 제거하는 방법은 숙련된 기술자에게 이미 알려져 있다(다음 예 참조: Greene, Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2nd Ed. (1999)). 합성방법 선정 시, 화학식 I 화합물들을 최종적으로 수득하기 위해 하나 이상의 탈보호 단계가 요구될 수 있다. 합성방법들에 도시된 보호기들은 단지 예시로 제시된 것이며, 대응하는 다른 보호기들로 대체가 가능하다. 아래의 합성방법에 제시된 시작 물질은 직접 구매하거나, 또는 화학 문헌들에 기술된 방법들을 그대로 사용하거나 통상의 기술자가 알고 있는 방법으로 이를 변형하여 제조할 수 있다. 단계들이 수행되는 순서는 도입된 보호기 내지는 작용기와 사용된 시약과 반응조건들에 따라 변경될 수는 있으나, 숙련된 기술자가 용이하게 알 수 있도록 한다.

제3형 화합물은 본 개시에 따른 화합물 유효량을 세포에 접촉시킴으로써 세포 내 TPH1 효소 활성을 억제하는 목적으로 사용될 수 있다. 여기서의 세포는 생명체의 조직 일부, 배양되거나 또는 생명체로부터 분리된 세포 등 어느 형태이든 무방하다. 아울러, 제3형 화합물은 본 개시에 따른 화합물 억제 용량을 세포, 동물, 개체 또는 인간 환자에게 투여함으로써 동물, 개체 또는 인간 환자의 TPH1 효소 활성을 억제하는 목적으로 사용될 수 있다.

또한, 제3형 화합물은 본 개시에 따른 화합물의 효과적인 용량을 동물, 개체 또는 환자에게 투여함으로써 동물, 개체 또는 환자의 말초 세로토닌 수치를 낮출 수 있다. 일부 실시예에서, 제3형 화합물은 비 말초 신경계 세로토닌(예로, CNS의 5-HT)보다 말초신경계 세로토닌(예로, 위장관 또는 폐 조직의 5-HT) 선택적으로 더 낮출 수 있다. 일부 실시예에서, 그 선택성은 2배 이상, 3배 이상, 5배 이상, 10배 이상, 50배 이상, 또는 100배 이상일 수 있다.

말초 세로토닌 수치를 낮출 수 있는 TPH1 억제제들과 마찬가지로, 제3형 화합물은 TPH1 효소의 비정상 발현이나 활성에 의한 다양한 질환들, 또는 비정상적 내지는 과도한 말초 세로토닌 수치에 기인한 질환들을 치료 및 예방하는데 유용하다. 일부 실시예에서, 이러한 치료 또는 예방은 TPH1 억제제인 제3형 화합물의 치료적 유효량을 대상환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 제3형 화합물은 세로토닌 증후군의 치료 및 예방에도 유용하다.

마우스를 대상으로 한 TPH1 억제에 대한 무정형 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-다이아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트의 효능은 미국 특허 번호. 9,199,994의 실시예 63i와 표 27에 제시된 생물학적 분석에서 입증되었다. 미국특허 번호. 9,199,994의 전체 내용은 이의 기재와 함께 본 명세서에 인용되었다.

본 명세서에 일부 기술된 바와 같이, 생물학적 분석은 시험관내 및/또는 생체내 TPH(예로, TPH1)에 대해 화합물이 갖는 억제효과를 결정하는 목적으로 사용될 수 있다. 인간과 마우스/랫트의 TPH1, 그리고 인간의 TPH2, PheOH 및 TH에 대한 생화학적 분석은 효소 활성 억제와 TPH1, TPH2, PheOH 및 TH 중의 선택성을 평가하는 목적으로 사용될 수 있다. 또한, 예를 들어 경구투여 후의 설치류의 장내 5-HT 수치를 측정함으로써 이러한 화합물들의 억제 효능을 결정할 수 있다.

본 개시에 따른 TPH1 억제제를 투여함으로써 치료 또는 예방 가능한 질환들은 예를 들어 골다공증, OPPG(골다공증 가성 신경 교종) 증후군, 골감소증, 골연화증, 신장성골형성장애, 피제트병, 골절, 골 전이 등과 같은 골 질환을 포함한다. 일부 실시예에 기재된 골다공증은 원발성 제1형(예로, 폐경후 골다공증), 원발성 제2형(예로, 노인성 골다공증) 및 이차성(예로, 스테로이드 또는 글루코코르티코이드 유발 골다공증) 등이 있다.

나아가, 본 개시는 골절, 예를 들어 골다공성 골절, 외상성 골절 또는 정형외과 수술(예로, 사지연장, 무지외반증 제거 또는 척추유합술) 관련의 골절을 치료 또는 예방하는 방법들을 포함한다.

본 개시에 따른 방법에 의해 치료 또는 예방 가능한 기타 질환은 죽상동맥경화증 및 폐고혈압(PH)과 같은 심혈관질환을 포함하며, 여기에서 PH는 특발성 또는 가족성 PH, 및 기타 질환 또는 질병과 관련되거나 이를 기저로 하는 PH를 포함한다. 일부 실시예에 있어 PH 질환은 폐동맥 고혈압(PAH)를 지칭한다.

본 개시의 방법에 따라 치료 가능한 PAH 유형들은 가장 대표적인 PAH 유형들인 (1) 특발성 PAH (IPAH), (2) 가족성 PAH (FPAH) 및 (3) 다른 질환 또는 기전과 관련된 PAH (APAH)를 포함한다. 여기서 APAH를 유발하는 다른 질환 또는 기전이란 예를 들면, (1) 공피증 또는 루프스와 같은 자기면역질환을 포함하는 교원성 혈관 질환(또는 결체조직질환); (2) 선천성 심장 및 폐 질환; (3) 문맥성 고혈압(예로, 간질환에 의한); (4) 인체면역결핍바이러스 감염; (5) 약물(예로, 식욕억제제, 코카인 및 암페타민); 및 (6) 갑상선질환, 당원병, 고셔병, 유전성출혈성모세현관확장증, 헤모글로빈병, 골수증식성 질환 및 비장절제를 포함하는 기타 요인 등을 말한다. 폐정맥폐쇄병(PVOD)과 폐모세혈관종에서와 같이 페정맥 및/또는 모세혈관의 이상 협착에 기인한 PAH도 APAH의 한 유형이 될 수 있다. PAH의 또 다른 유형으로는 신생아의 지속적 폐고혈압(PPHN)이 있다.

본 개시의 방법에 따라 치료 또는 예방 가능한 다른 질환은 당뇨병 및 고지혈증 등의 대사질환, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD) 및 폐색전증 등의 폐질환, IBD, 대장염, 항암치료와 연관된 구토, 설사, 카르시노이드 증후군, 복강병, 크론병, 복통, 소화불량, 변비, 락토오스불내증, 내분비선종증 1형 및 2형, 오글비증후군, 췌장콜레라증후군, 췌장기능부전, 크롬친화세포종, 피부경화증, 신체화장애, 졸린거 엘리슨 증후군 또는 염증성 장질환 등의 위장질환, 만성 간질환 등의 간질환, 간암, 유방암, 담관암, 대장암, 직장암, 신경내분비 종양, 췌장암, 전립선암 및 골종양(예로, 뼈육종, 연골육종, 유익 육종, 골아세포종, 유골골종, 골연골종, 내연골종, 연골점액양섬유종, 동맥류성 골낭종, 고립성 골낭종, 거대세포종 및 기타 골종양) 등의 암, 혈액질환(예로, 골수증식증후군, 골수이형성증후군, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 골수종, 및 재생불량성빈혈과 같은 빈혈, 및 신장병 관련의 빈혈 등); 혈액암(예로, 급성 림프모구 백혈병(ALL), 만성 림프모구 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML) 및 만성 골수성 백혈병(CL) 등의 백혈병) 등을 포함한다.

제3형 화합물은 카르시노이드 증후군의 치료 및 예방에 특히 유용하다. 카르시노이드 증후군이란 카르시노이드 종양으로 인해 이차적으로 발생하는 징후 및 증상을 동반하는 부종양증후군을 말한다. 카르시노이드 증후군은 카르시노이드 종양이 세로토닌이나 기타 호르몬을 혈류로 분비하는 것이 그 원인이다. 카르시노이μ카로티노이드 종양은 위장관에서 주로 나타나며, 위, 충수, 소장, 결장, 직장, 폐 등에서도 나타난다. 흔한 증상들로는 피부 홍조, 안면 피부 병변, 설사, 과민성 대장 증후군, 경련통, 호흡곤란, 빠른 심장박동 등이 있다.

일부 실시예는 본 개시에 따른 화합물의 약학적 유효량을 환자에게 투여함으로써 동 환자의 혈장 콜레스테롤을 낮추고, 혈장의 트리글리세리드를 낮추며, 혈장의 글리세롤을 낮추고, 혈장 내 유리지방산을 낮추는 방법을 포함한다.

제3형 화합물은 알레르기성 기도 염증(예로, 천식)과 같은 염증성 질환의 치료 및 예방에도 유용하다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "세포(cell)"란 시험관내, 생체외 또는 생체내 세포를 지칭한다. 일부 실시예에 있어, 생체외 세포는 포유동물과 같은 생물체에서 추출한 조직 검체의 일부일 수 있고, 시험관내 세포는 체외에서 배양한 세포일 수 있다. 일부 실시예에 있어, 생체내 세포는 포유동물과 같은 생물체의 살아있는 체내 세포를 뜻한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "접촉시킨다(contacting)"란 시험관내 또는 생체내 추적 시스템 상에서 지시된 대응물들을 서로 접촉시키는 작업을 말한다. 예를 들어, 본 개시에 따른 화합물을 대상 효소에 "접촉시킨다"라 함은 본 개시에 따른 화합물을 TPH1 효소를 갖는 개체나 인간 환자에게 투여하는 단계, 및 또 다른 예로서 본 개시에 따른 화합물을 TPH1 효소를 갖는 세포 검체나 정제된 제제에 도입시키는 단계를 포함한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 상호 혼용적으로 사용되는 용어인 "개체(individual)" 또는 "환자(patient)"란 포유동물, 바람직하게는 마우스, 랫, 기타 설치류, 토끼, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 영장류 등을 포함하는 동물, 그리고 가장 바람직하게는 사람을 지칭한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"이란 조직, 계통, 동물, 개체 또는 인간에 있어서의 생리학적 또는 의학적 반응이 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의가 기대하는 수준만큼 달성되도록 하기 위해 요구되는 활성 화합물 또는 약제의 적정 용량을 의미한다.

본 명세서에 사용된 것처럼 "치료"라는 용어는 1) 질병을 억제하는 것, 예를 들면 질병의 병인 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개인의 질병, 질환 또는 장애를 억제하는 것(즉, 병인 및/또는 증상의 추가 진전을 멈추는 것) 또는 2) 질병을 개선하는 것, 예를 들면 질병의 병인 또는 증상을 경험하거나 나타내는 개인의 질병, 질환 또는 장애를 개선하는 것(즉, 병인 및/또는 증상을 역전시키는 것)을 나타낸다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "예방하는(preventing)" 또는 "예방(prevention)"이란 예를 들어 어떤 질환, 병인 또는 장애의 발병 위험을 갖지만 아직 관련 병리 내지는 증후를 보이거나 겪지는 않고 있는 사람에 대해 그러한 질환의 발현 또는 악화를 억제시키는 행위를 말한다.

제3형 화합물은 본 명세서에 개시된 다양한 질환, 장애 또는 병인의 치료나 예방 목적으로 하나 이상의 기타 의약품 치료제 또는 치료방법들과 함께 사용할 수 있다. 그러한 치료제들은 제3형 화합물과 함께 1회 투여 제형에 병용할 수 있으며, 또는 따로 제조된 제형들을 동시에 투여하거나 순차적으로 투여하는 것도 가능하다.

혈액암과 같은 혈액 질환의 치료를 위해 병용 사용이 가능한 의약품 치료제로는 예를 들어 부갑상선호르몬, 항-스클러로스틴 억제제, 카텝신 K 억제제, 항-Dickopff 1 등이 있다.

암 치료를 위해 병용 사용이 가능한 의약품 치료제로는 예를 들어 류프롤리드, 고세렐린, 부세렐린, 플루타미드, 닐루타미드, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 미토산트론, 에스트라무스틴, 독소루비신, 에토포시드, 빈블라스틴, 파클리타셀, 카르보플라틴, 비노렐빈 등이 있다. TPH 억제제와 병용 가능한 치료요법은 방사선 치료, 고강도 초음파 및 수술(예: 피해조직 절제)을 포함한다. 암 치료를 위한 기타 약물로는 테스토락톤, 아나스트로졸, 레트로졸, 엑스메스탄, 보로졸, 포르메스탄, 파드로졸, GnRH-아날로그, 테모졸로미드, 바비투시맙, 시클로포스파미드, 플루오로우라실, 풀베스트란트, 게피티닙, 트라스투주맙, IGF-1 억제제, 라파티닙, 메토트렉세이트, 올라파립, BS-201, 파조파닙, 라파미신, 리바비린, 소라페닙, 수니티닙, 타모시펜, 도세탁셀, 바탈라닙, 베바시주맙, 옥트레오티드 등이 있다.

심혈관질환이나 폐질환의 치료를 위해 병용 사용이 가능한 의약품 치료제로는 예를 들어 암브리센탄, BMS-193884, 보센탄, 다루센탄, SB-234551, 시타센탄, 테조센탄 및 마시텐탄과 같은 엔도텔린 수용체 길항제들이 있다. 와파린, 아세노코우마롤, 펜프로코우몬, 페닌디온, 헤파린, 폰다파리눅스, 아르가트로반, 비발리루딘, 레피루딘 및 시멜라가트란과 같은 응고제들도 치료용으로 병용 사용이 가능하다. 병용 치료를 위한 기타 의약품 치료제에 칼슘채널 차단제가 포함되는 바, 여기에는 아말로디핀, 펠로디핀, 니카르디핀, 니페딜핀, 니모디핀, 니솔디핀, 니트렌디핀, 라시디핀, 레르칸디핀, 페닐알킬아민, 베라파밀, 갈로파밀, 딜티아젬, 멘톨 등이 있다. 에포프로스테놀, 일로프로스트 및 트레프로스티닐과 같은 프로스타시클린 제제들도 본 개시에 따른 TPH 억제제들과 병용 사용이 가능하다. 심혈관계 또는 폐 질환에 있어 병용 치료용으로 사용될 수 있는 기타 의약품 치료제로는 실데나필, 타달라필 및 바르데나필과 같은 PDE5 억제제, 푸로세미드, 에타크릴닉 산, 토라세미드, 부메타니드, 하이드로클로로티아지드, 스피로노락톤, 마니톨, 산화질소 또는 산화질소 릴리서, 리오시구아트와 같은 용해성 구아닐레이트 사이클레아제 자극제 등이 있다. 병용 치료를 위한 또 다른 의약품 치료제는 APJ 수용체 작용제(WO 2013/11 11 10), IP 수용체 작용제(WO 2013/105057; WO 2013/105066; WO 2013/105061; WO 2013/105063; WO 2013/105065; WO 2013/105058) 및 PDGF 수용체 작용제(WO 2013/030802)를 포함한다.

대사 장애의 치료를 위해 병용 사용이 가능한 의약품 치료제는 예를 들어 국제특허 WO2006/074957; WO2005/073199; WO2004/111031; WO2004/1 1 1004; WO2004/035550; WO2003/051841; WO2003/051842; 및 WO2001/066531에 개시된 HSL 억제제들을 포함한다.

골 질환과 장애의 치료를 위해 병용 사용이 가능한 의약품 치료제는 예를 들어 비스포스포네이트들을 포함하여, 여기에는 에티드로네이트, 클로드로네이트, 틸루드로네이트, 파미드로네이트, 네리드로네이트, 오이파드로네이트, 알렌드로네이트, 이반드로네이트, 리세드로네이트, 시마드로네이트, 졸레드로네이트 등이 있다. 5-HTIB, 5-HT₂A 및 5-HT2B 효현제 또는 길항제와 같은 세로토닌 수용체 모듈레이터들도 골질환의 병용 치료용으로 유용하다. 병용 가능한 기타 치료제로는, 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSI), 항-세로토닌 억제제는 물론, IPS339, ICI1 18,551, 부타사민, 메티프라놀롤, 나돌, 옥스프레놀롤, 펜부톨롤, 핀돌롤, 프로프라놀롤, 티몰롤 및 소탈롤과 같은 베타 차단제들이 있다. 골다공증과 같은 골 장애 치료를 위해 병용이 가능한 또 다른 유용한 치료제는 테리파라티드, 스트론티움 라넬레이트, 랄로시펜 및 데노수맙을 포함한다.

제3형 화합물은 적정 투여 용량을 사용하여 치료를 요하는 환자(동물 및 인간)에게 투여가 가능하며, 이 경우 예방적 및/또는 치료적 효능을 제공하게 된다. 어느 특정 질환이나 장애의 치료 또는 예방을 위해 사용하여야 할 투여 용량은, 예를 들어 선택된 특정 화합물 또는 조성물, 투여 경로, 치료 대상 질환의 특질, 환자의 연령과 신체조건, 타 약물의 병용 처치 여부 또는 환자에게 시행 중인 특수 식이요법 및 기타 요인들에 따라 환자마다 매우 큰 편차를 갖는다. 담당의사가 그 적정 투여 용량을 결정할 수 있다.

제3형 화합물은 약학적으로 허용되는 운반체, 보강제 및 부형제를 포함한 투여 용량 단위를 제형화하여 이를 경구, 피하 투여, 국소 도포, 비경구, 분무식 흡입 또는 직장 내 투여 방식으로 처치하는 것이 가능하다. 비경구 투여에는 피하 주사, 정맥 도는 근육 주사 또는 주입 기법이 포함될 수 있다. 치료 기간은 치료 의사가 필요하다고 생각하는 만큼 연장될 수 있다. 하루에 1회부터 4회 이상까지 조성물들을 투여할 수 있다. 치료 기간은 원하는 결과, 예를 들면 특정 치료 효과가 이루어지면 그 시점에 중단할 수도 있으며, 아니면 무한히 연장될 수도 있다.

일부 실시 예에서 의약조성물은 경구 투여용 고체 투여 제형으로 제조할 수 있다(예: 캡슐, 정제, 알약, 당제, 분말, 과립 등). 정제는 압착 또는 성형으로 조제할 수 있다. 압착 정제에는 최소 하나 이상의 바인더, 윤할제, 유동화제, 불활성 희석제, 보존제, 붕해제, 분산제를 포함할 수 있다. 정제 및 기타 고형의 제형(예: 캡슐, 알약, 과립 등)에는 장용제와 같은 코팅제가 포함될 수 있다.

고체 및 액체 투여 제형은 속방성, 장상성, 서방성 또는 지속성 등 바람직한 용해 특성에 부합되도록 만들 수 있다.

투여할 스피로사이클릭 화합물의 양은 선택한 스피로사이클릭 화합물, 투여 방법, 용해 특성 및 조성 제형화와 같은 요소에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로 PH/PAH/APAH/IPAH/FPAH를 치료 또는 예방하기 위한 경구 투여 형태로 제3형 스피로사이클릭 화합물의 경우 일반적인 용량은 환자의 체중에 따라 약 1mg/kg/일 내지 약 50mg/kg/일이고 보다 일반적으로 약 5mg/kg/일 내지 약 30mg/kg/일이 사용된다. 가장 바람직한 스피로사이클릭 화합물은 결정질 3형의 RVT-1201이다. 개별 투여 제형은 일반적으로 스피로사이클릭 화합물 약 50mg 내지 약 3000mg이고 한 가지 이상의 약학적으로 허용되는 부형제가 추가된다. 예를 들어 다른 유용한 개별 경구 투여 제형으로는 스피로사이클릭 화합물 100mg, 150mg, 200mg, 250mg, 300mg, 350mg, 또는 400mg, 450mg, 500mg, 550mg, 575mg, 600mg, 625mg, 650mg, 675mg, 700mg, 725mg, 750mg, 775mg, 800mg, 900mg, 950mg, 1000mg, 1050mg, 1100mg, 1150mg과 대략적으로 1200mg, 특히 1200mg이 있다. 50mg 내지 3000mg 사이의 다른 용량, 예를 들어 약 325mg 내지 약 475mg, 약 350mg 내지 약500mg, 약 375mg 내지 약 525mg, 약 400mg 내지 약 550mg, 약 425mg 내지 약 575mg, 약 450mg 내지 약 600mg, 약 475mg 내지 약 625mg, 약 500mg 내지 약 650mg, 약 525mg 내지 약 675mg, 약 550mg 내지 약 700mg, 약 575mg 내지 약 725mg, 약 600mg 내지 약 750mg, 약 625mg 내지 약 775mg,약 650mg 내지 약 800mg, 약 675mg 내지 약 825mg, 약 700mg 내지 약 850mg,약 725mg 내지 약 875mg, 약 750mg 내지 약 900mg,약 775mg 내지 약 925mg,약 800mg 내지 약 950mg,약 825mg 내지 약 975mg,약 850mg 내지 약 1000mg,약 900mg 내지 약 1150mg,약 1000mg 내지 약 1150mg, 약 1100mg 내지 약 1250mg,약 1200mg 내지 약 1350mg도 가능하다.

"Wt%"란 조성물 또는 제형의 총 중량에 근거한 중량 퍼센트를 의미한다.

선호되는 투여 제형은 존재하는 어떤 형태든 (S)-8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실산 중 90 wt% 이상, 더 바람직하게는 95 wt% 이상 비율로 존재하는 제3형 결정질 화합물을 갖는다.

투여 제형은 어떠한 분량 또는 비율이든 본원의 제3형 결정질 화합물을 갖는다. 일반적인 비율은 투여 제형의 총 중량에 따라 약 20 wt% 이상, 또는 약 60 wt% 이상 및 약 90 wt% 포함된다(대개 부형제, 수송체 및 운반체를 균형있게 사용). 특히 25wt%와 60wt%는 유용한 비율이다.

흡입 또는 통기 조성에는 약학적으로 허용되는 수용액 또는 유기용매 또는 그 혼합물 및 분말 형태의 용액 및 현탁액이 포함된다. 경구 투여용 액상 투여 제형에는 예를 들어 약학적으로 허용되는 유제, 미세유제, 용액, 현탁액, 시럽, 엘릭서가 포함될 수 있다. 현탁액에는 1개 이상의 현탁화제가 포함될 수 있다.

대상 조성의 경피 투여용 투여 제형에는 분말, 비말, 연고, 된연고, 크림, 로션, 젤, 용액 및 패치가 포함된다.

동일한 제형을 포함하는 제3형 화합물 및 조성은 에어졸 형태로 투여 가능한데, 예를 들면 음파 네블라이저로 투여할 수 있다.

비경구 투여에 적합한 의약조성물에는 하나 이상 약학적으로 허용가능한 멸균 등장성 수용액 또는 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 유제가 혼합된 제3형 화합물이 포함될 수 있다.

대안으로 조성물은 사용 직전에 멸균 주사액 또는 분산액에 재용해될 수 있는 멸균 분말 형태를 사용할 수 있다.

다음 예시는 본 개시의 설명으로 제한적이라고 해석하지 않는다.

실시예

본 개시의 화합물 1의 제1형 다형체는 아래 기술한 바에 따라 제조된다.

화합물 1의 제조

(R)-4-클로로-6-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-2-아민(화합물 4)

케톤 환원은 N₂ 대기하에서 반응기로 페닐-2,2,2-트리플루오로에타논(2)(2.54kg)과 아세토니트릴(8kg)로 하전된 후, 이어서 디클로로(펜타메틸-시클로펜타디에닐)이리디움(III) 다이머(3.8 g)로 하전되고, 그런 다음 적절한 디아민 리간드, 예를 들면 N-((1S,2R)-2-아미노-1,2-디페닐에틸)-4-메틸벤젠설폰아마이드(3.7 g)로 하전되었다. 물(10.2kg)과 아세토니트릴(1.4kg)이 추가된다. 혼합물에 HCOONa·2H₂O(1.86kg)를 천천히 추가한 후 30~40℃로 가열하면서 2~6시간 동안 교반하였다, 그런 다음 혼합물을 30~40℃에서 2~8시간 동안 교반하였다, 반응은 1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에탄-1-논(2)이 ≤1%에 도달하면 완료한 것으로 간주하였다. 혼합물을 20~30℃로 식힌 다음 2-MeTHF(13.0 kg)가 추가되었다. 혼합물은 수용액 상태가 제거된 다음 반응 용매가 2-MeTHF(190 wt% 대비 1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에탄-1-논(2))로 전환되었다. 그런 다음 질소 보호하에 20~30℃에서 아세토니트릴(20kg) Cs₂CO₃(5.8kg)이 추가되었고 이어서 4,6-다이클로로피리미딘-2-아민(7) 1.5kg)을 천천히 추가하였다. 이 혼합물을 55~65℃로 가열하면서 2~10시간 동안 교반하였다. 반응은 남아있는 4,6-디클로로피리미딘-2-아민(7)이 ≤1%에 도달하면 완료한 것으로 간주하였다. 20~30℃로 냉각시킨 후 혼합물을 디아토마이트(2kg) 패드를 통과시킨 후 카본 카트리지에 통과시켰다. 반응용매는 35~40℃에서 메틸 시클로헥산(840 wt% 대비 1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐-2-일)-2,2,2)으로 전환되었다. 그런 다음, -25~15℃로 추가로 냉각시켰다. 산물(4)는 35-40℃에서 8~16시간 동안 감소된 압력하에서 건조시킨 다음 여과망에서 여과를 통해 수집하였다. 이와 같이 얻은 산물에는 적절한 참조 표준과 일치하는 HPLC 머무름 시간을 나타냈다.

2-벤질 3-에틸 (S)-8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-yl)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-2,3-디카르복실레이트(화합물 6)

반응기는 아세토니트릴(11kg)로 하전된 후 화합물 4(2.4kg), 화합물 5(2.4kg), NaHCO₃(1.5kg)으로 하전된다. 반응기는 N₂로 불활성화시킨 다음 교반하면서 75~85℃로 가열하였다. 남아있는 화합물 4이 ≤1.0%에 도달하면 반응이 완료된 것으로 간주하였다. 혼합물은 20~30℃로 냉각한 후 MTBE(13kg)로 하전되었다. 이 혼합물은 매 세척 후 수용액 단계를 버리고 5% H₂SO₄ 수용액(12kg)으로 3회에 걸쳐 세척하였다. 유기 용액은 실리카 베드(2.3kg)를 통과하여 여과시킨 다음 MTBE(17.7kg)로 실리카를 헹구었다. 혼합한 유기물질은 남아있는 MTBE가 ≤0.05% w/w로 측정될 때까지 아세토니트릴(13kg)로 교체된 용매였다. 원제품은 다음 단계에서 아세토니트릴 용액으로 사용되었다.

화합물의 1 제조

아세토니트릴로 용해한 화합물 6 용액에 NaI(3.5 kg)을 추가한 다음 혼합물을 10~20℃로 냉각시켰다. 1~2시간 동안 10~20℃에서 TMSCl(2.5 kg)를 혼합물에 한 방울씩 추가하면서 교반하였다. 그런 다음 혼합물을 22~24시간 동안 교반하여 30~40℃로 유지하였다. 남아있는 화합물 6이 ≤1.0%에 도달하면 반응이 완료된 것으로 간주하였다. 10~20℃로 냉각시킨 후 물을 추가하였다. 이 수성 혼합물을 n-헵탄(10.1kg)으로 추출한 다음 농축하였다. 그런 다음 수성 혼합물을 MTBE(31kg)로 추출하였다. 그리고 나서 유기상을 30~40℃에서 Na₂S₂O₃(11.7kg의 물에 1.7kg) 수용액으로 세척한 후 40% 메틸아민 수용액(1.5 kg)으로 세척하였다. 그런 다음 유기상을 8% 메틸아민(4.1kg) 수용액으로 세척한 후 물(4.1kg)로 세척하였다. 유기상을 건조시킨 다음 실리카겔(3.7kg)에 여과시켰다. 여과된 물질을 40~50℃로 데워 n-헵탄(7.1kg)이 하전되었다. 1시간 동안 교반 후 화합물 1을 원료 물질(52.4g)에 추가하였다. 40~50℃에서 1시간 동안 교반 후 같은 온도에서 12시간에 걸쳐 n-헵탄(69kg)을 추가하였다. 혼합물은 5~15℃로 냉각시킨 다음 현탁액을 여과하였다. 고체 부분을 1:4 MTBE/n-헵탄(28kg)으로 세척한 다음 n-헵탄(7kg)으로 세척하였다. 그런 다음 고체 부분을 35~40℃에서 6~10시간 동안 진공 상태에서 건조시켰다.

화합물 1의 재결정화

원료화합물 1(2.1kg)을 MTBE(5.4kg)으로 처리한 후 반응기에서 하전시켰다. 혼합물을 40~50℃로 가열한 다음 여과시켜 처리하였다. 40~50℃에서 교반하면서 n-헵탄(5.6 kg)을 추가하였다. 그런 다음 화합물 1(42.6g)을 시드 물질로서 하전시켰다. 2시간 교반 후 10시간에 걸쳐 n-헵탄(17.1 kg)이 하전되었다. 혼합물을 3.5시간에 걸쳐 5~15℃로 냉각시킨 다음 같은 온도에서 7시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과시킨 후 고체 부분을 차가운 1:4 MTBE/n-헵탄(1.6kg/5.7kg)으로 세척하고 차가운 n-헵탄(1.4kg)으로 세척하였다. 젖은 고체부분을 35~45℃의 진공 상태에서 건조시켰다.

용해도 및 형태 평가

화합물 1의 용해도는 MTBE/n-헵탄 혼합물이 아닌 유기 용매에서 평가하였다. 잔여 고체 형태를 XRPD로 검사하였다. 그 결과는 아래 표 6에 나와 있다.

경쟁 슬러리

아래 표 7에 요약한 것처럼 화합물은 MTBE/n-헵탄 혼합물에서 제1형 화합물 1과 제3형 화합물 1 간에 경쟁 슬러리 실험도 실시하였다.

화합물 1, 제3형의 용해도

화합물 1의 용해도는 10℃~45℃에서 MTBE/n-헵탄 혼합물로 평가되었다. 잔여 고체 형태를 XRPD로 검사하였다. 결과는 아래 표 8에 기재된 바와 같다.

실시예 1

화합물 1 물질 배치(CS14-075Aa-1702)는 MTBE 존재 또는 미존재 시 n-헵탄에서 슬러리로 재결정화되었다. 해당 물질 배치의 XRPD 패턴은 주로 제3형과 일치하였고 제1형의 2개 피크에 포함되었다. 해당 물질 배치를 다른 온도 조건의 용매에 넣고 4시간 동안 교반하였다. 재결정화 화합물 1의 다형태는 XRPD로 확인하였다. 그 결과는 아래 표 9에 기재된 바와 같다.

n-헵탄 및 n-헵탄/MTBE에서 재결정화

샘플	용매	온도 (℃)	XRPD
ES928-S1-1	n-헵탄	20	제3형
ES928-S1-2	n-헵탄	40	제3형
ES928-S1-3	n-헵탄	60	제3형
ES928-S1-4	MTBE/n-헵탄	20	제3형
ES928-S1-5	MTBE/n-헵탄	40	제3형
ES928-S1-6	MTBE/n-헵탄	60	제3형

모든 샘플은 XRPD 평가에서 제3형으로 확인되었다(화합물 1). 다른 결정화 조건은 결과에 영향을 미치지 않았다.

샘플 중 하나인 ES928-S1-2도 TGA/DSC로 확인되었다. 28시간 후 샘플 ES928-S1-2의 TGA/DSC 온도 기록은 T=107.2℃에서 용해 현상을 나타냈고 30℃~240℃의 온도 범위에서 0.33%의 점진적 중량 손실을 나타냈다. 제1형 화합물 1 물질 배치(로트 Fb1113-15)는 비교 목적으로 평가되었다. 제1형 물질은 잔여 용매로 인한 중량 손실 0.21%와 함께 용해 현상 T 피크=109.8℃를 나타냈다. 용해 현상 후 0.95%의 중량 손실이 관찰되었다. 열반응 차이는 XRPD로 평가된 다른 형태와 관련될 수 있다.

실시예 2

화합물 1 샘플(CS14-075Aa-1702 중 ES928-52-1)은 n-헵탄 및 MTBE로 용액에서 재결정화시켰다. 화합물 1 샘플(50mg, 1당량)을 실온에서 MTBE(300μL, 6 상대 부피)로 용해하였다. n-헵탄(500μL, 10 상대 부피)은 침전될 때까지 단계별로 추가하였다. n-헵탄 300μL, 400μL를 추가한 후 용액은 뿌연 현탁액으로 변하였다. 다시 100μL를 추가한 후 혼합물은 바이알 바닥에 약간 끈적거리는 고체가 생성된 거의 투명한 용액으로 변하였다. 혼합물을 1시간 동안 그대로 두었을 때 흰색 현탁액이 생겼다. XRPD 평가에서 제1형의 패턴에는 변화가 없었으나 제3형으로 전환되는 것으로 나타났다. 28시간 후 제3형이 여전히 생겼다. TGA/DSC: 0.97%의 점진적인 중량 손실 및 T_peak=105.0℃에서 용해 현상.

실시예 3

화합물 1 샘플(CS14-075Aa-1702 중 ES928-52-2)은 n-헵탄 및 MTBE를 사용하여 용액에서 재결정화시켰다. 화합물 1 샘플(50mg, 1당량)을 실온에서 MTBE(100μL, 2 상대 부피)로 용해하였다. n-헵탄(100μL, 2 상대 부피)을 혼합물에 추가하여 실온에서 냉각시켰다. 혼합물을 1시간 동안 그대로 두었을 때 흰색 현탁액이 생겼다. XRPD 평가에서 제1형의 패턴에는 변화가 없었으나 제3형으로 전환되는 것으로 나타났다. 5시간 및 21시간 후 제3형이 여전히 생겼다. TGA/DSC: 0.15%의 점진적인 중량 손실 및 T_peak=107.1에서 용해 현상.

실시예 4

화합물 1 CS14-075Aa-1702 샘플 ES928-53-1, ES928-53-2, ES928-53-3은 n-헵탄 및 MTBE로 용액에서 재결정화시켰다. 화합물 1 샘플들(24.95mg, 1당량)은 25°C에서 MTBE(175μL, 7 상대 부피)에 각각 용해시켰다. n-헵탄(37.5 ml, 1.5 상대 부피)를 용액에 추가하였다. 온도는 25.2°C로 유지되었다. 혼합물은 진공 상태(250mbar)에 두어 MTBE(55mL, 48.78g)를 증류시켰다. 다시 n-헵탄(25mL, 1 상대 부피)을 혼합물에 추가하여 증류 절차를 반복하였다. 혼합물을 1시간 동안 그대로 두었다. IPC 1: Es928-53-1을 취하였다. 혼합물을 10°C로 냉각하였다. 다시 혼합물을 16시간 동안 그대로 두었다. IPC 2: Es928-53-2를 취하였다. 온도를 25°C로 올려 MTBE(7 상대 부피)에서 다시 제품을 용해시켰다. n-헵탄(7 상대 부피) 및 증류된 MTBE는 were n-헵탄을 추가하여 일정하게 유지하였다. 제1형(14-075Aa-1601 재결정화됨)의 몇 개의 시드를 추가하였으나 용해되었다. MTBE 124.6g 증류 후 제1형의 새 시드가 추가되어 흐릿한 혼합물이 생성되었다. 증류가 계속되었다. 1 시간 후 흰색 슬러리가 생겼다. IPC-3: Es928-53-3를 취하였다. 증류는 용매 57.85g을 얻은 후 중단되었다. 생성물을 여과하여 대기 조건에서 건조시켰다. 샘플을 TGA/DSC로 확인 후 진공 상태에 보관하였다. 2차 증류 중에 침전이 발생하였다. (증류액 부피 - 65mL). 다음 각각에 대해 XRPD는 제3형을 얻었다. ES928-53-1, IPC 2: ES928-53-2 및 IPC 3: ES928-53-3 -> 제3형.

실시예 5

경쟁 슬러리 실험은 제1형 화합물 1 샘플과 제1형 및 제3형 혼합물이 제3형으로 전환될 수 있는지 확인하기 위해 실시하였다. 순수한 제1형과 제3형도 검사하였다. 먼저 700mg의 화합물 1을 10개 부피의 n-헵탄에 대해 다른 비율로 추가하여 3일 동안 교반하였다(표 2) 4일 16시간 후 샘플을 XRPD로 다형태에 대해 확인하였다. 모든 실험에서 제3형으로 완전히 전환되었다. 16시간 후 제1형을 가지고 시작한 실험은 제1형을 유지하였으나 4일에 걸쳐 제3형으로 느리게 전환되었다. 결과는 아래 표 10에 나와 있다.

실시예 7의 경쟁 슬러리 실험

샘플	제1형 (%)	제3형 (%)	제1형 및 제3형의 혼합물 (%)	XRPD 16시간	XRPD 4일
ES928-60-1	100	0	해당 없음	제1형	제3형
ES928-60-2	99	1	해당 없음	혼합물 1 및 3	제3형
ES928-60-3	50	50	해당 없음	제3형	제3형
ES928-60-4	1	99	해당 없음	제3형	제3형
ES928-60-S	0	100	해당 없음	제3형	제3형
ES928-60-6	33	33	33	제3형	제3형

실시예 6

제1형과 제3형 사이의 차이를 이해하기 위해 추가 검사를 실시하였다. 이들 검사 중 하나는 물 속에 다른 형태를 교반할 때 여러 번 pH 측정을 통해 다형태의 안정성을 확인할 목적으로 실시하였다(표 11). 검사 중 다형태에 어떤 변화가 확인되었다. XRPD 평가에서 물 속에 슬러리 침전 후 다형태의 변화는 나타나지 않았다.

제1형, 제3형의 안정성 검사 및 제1형 및 제3형 혼합물.

샘플	pH(2시간)	pH(4시간)	pH(7시간)
ES928-59-1(혼합물 1,3)	8.68	8.22	8.05
ES928-59-2(제1형)	8.26	7.75	7.76
ES928-59-3(제3형)	8.71	8.65	8.32

실시예 7

제1형과 제3형의 용해도 결정에서 작은 차이가 나타났다(표 12). 육안으로 완전한 용해가 관찰될 때까지 용매를 점진적으로 추가하는 shake-flask 용해도 결정 방법이 사용되었다. 용해도의 이러한 결과는 다양하다.

Shake-flask법을 이용한 제1형 및 제3형의 용해도 결정(mg/ml)

용매	용해도 제1형(mg/ml)	용해도 제3형(mg/ml)
메탄올	99-990	102-1020
메틸 삼차 부틸 에스터	102-1020	106-1060
아세톤	96-960	108-1080
테트라하이드로퓨란	97-970	99-990
에틸 아세테이트	101-1010	95-950
에탄올	96-960	33-100
2-메틸-테트라하이드로퓨란	97-970	106-1060
2-프로판올	98-980	<10.1
아세토니트릴	99-990	99-990
이소프로필 아세테이트	103-1030	94-940
I-프로판올	101-1010	35-104
n-헵탄	<10.1	<9.9
톨루엔	98-980	105-1050
물	<10.0	<10.0
포름산 99%	97-970	96-960
아세트산	32-95	104-1040
메틸 이소부틸 케톤	99-990	100-1000
N,N-디메틸-아세트아미드	96-960	108-1080
디메틸 술폭사이드	101-1010	109-1090

용해도의 작은 차이로 인해 HPLC가 용해도를 평가하는 데 사용되었다. 그 가치는 shake-flask법 결과와 일치하였다. 적시에 에탄올에 제3형의 잔여 슬러리가 완전히 용해되었다. 알코올에 용해하였을 때 용해율에 차이가 없었다. 수용액에서 다른 차이는 관찰되지 않았다.

HPLC에 의한 제1형 및 제3형의 용해도 결정

샘플	형태	용매	면적	농도 실제 mg/mL
ES-928-62-1	1	완충액 pH 1.2	1581022	49
ES-928-62-4	3	완충액 pH 1.2	1493705	46
EdA-928-63-1	1	에탄올 흡광도	3975890	129
EdA-928-63-2	3	에탄올 흡광도	1851577	58

상기 설명은 본 개시의 유일한 설명이라는 것이 이해되어야 한다. 본 개시에서 벗어나지 않는 선에서 숙련된 기술자에 의해 다양한 대안과 수정안이 작성될 수 있다. 따라서 본 개시는 첨부한 청구 범위 내에서 이런 모든 대안, 수정안 및 변동 사항을 포함하도록 의도하였다.

Claims (19)

1. 실질적으로 도 1에 도시된 바와 같은 XRPD 패턴을 나타내는 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트의 결정질 화합물.
2. 19.05 ± 0.20 (°2θ)에서 특징적인 피크를 갖는 XRPD 패턴을 나타내는 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트의 결정질 화합물.
3. 제2항에 있어서,
   상기 XRPD 패턴은 다음과 같은 특징적인 피크를 나타내는 결정질 화합물:
   

   
4. 제2항에 있어서,
   상기 XRPD 패턴은 다음과 같은 특징적인 피크를 나타내는 결정질 화합물:
   

   
5. 환자에게 투여하기에 적합한 약학 조성물로서,
   상기 조성물은 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 결정질 화합물 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 조성물.
6. TPH1을 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 결정질 화합물과 접촉시키는 것을 포함하는 TPH1을 억제하는 방법,
7. 환자에게 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 결정질 화합물을 투여하는 것을 포함하는 환자의 말초 세로토닌을 낮추는 방법.
8. 환자의 질병을 치료 또는 예방하는 방법으로서, 상기 질병은 골 질환, 심혈관 질환, 대사 질환, 폐 질환, 위장 질환, 간 질환, 암 및 염증성 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 상기 방법은 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항의 결정질 화합물의 치료적 유효량을 상기 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
9. 제8항에 있어서,
   상기 질병은 심혈관 질환이고, 상기 심혈관 질환은 폐동맥 고혈압(PAH)인 방법.
10. 제9항에 있어서,
    상기 PAH는 관련 폐동맥 고혈압(APAH)인 방법.
11. 제8항에 있어서,
    상기 질병은 암이고, 상기 암은 카로테노이드 암인 방법.
12. 제8항에 있어서,
    상기 질병은 위장 질환이고, 상기 위장 질환은 카르시노이드 증후군인 방법.
13. 환자에게 투여하기에 적합한 투여 형태로서, 결정질 화합물이 존재하는 임의의 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트 중 90 중량% 이상인 비율로 존재하는 투여 형태.
14. 제13항에 있어서,
    상기 결정질 화합물은 존재하는 임의의 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트 중 95 중량% 이상인 비율로 존재하는 투여 형태.
15. 환자에게 투여하기에 적합한 투여 형태로서, 상기 투여 형태는 투여 형태의 중량에 대하여 20중량% 이상인 비율로 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 결정질 화합물을 포함하는 투여 형태.
16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 형태는 속방성 프로파일을 갖는 투여 형태.
17. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 형태는 흡입제인 투여 형태.
18. (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 결정화 또는 재결정화하는 방법으로서,
    상기 방법은
    (A) (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 이의 현탁액을 형성하기에 충분한 헵탄의 양과 접촉시키는 단계; 및
    (B) 상기 현탁액으로부터 헵탄을 제거하거나 상기 현탁액을 여과하여 결정질 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 형성하는 단계를 포함하는 방법.
19. (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 결정화 또는 재결정화하는 방법으로서,
    상기 방법은
    (A) (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 메틸 삼차 부틸 에테르에 용해하여 이의 현탁액을 형성하기에 충분한 헵탄의 양을 도입하는 단계; 및
    (B) 상기 현탁액으로부터 헵탄을 제거하거나 상기 현탁액을 여과하여 결정질 (S)-에틸 8-(2-아미노-6-((R)-1-(5-클로로-[1,1'-바이페닐]-2-일)-2,2,2-트리플루오로에톡시)피리미딘-4-일)-2,8-디아자스피로[4.5]데칸-3-카르복실레이트를 형성하는 단계를 포함하는 방법.

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