KR20210044736A - 키메라 항원 수용체(ｃａｒ) ｔ세포 요법과 키나제 억제제의 조합요법 - Google Patents

키메라 항원 수용체(ｃａｒ) ｔ세포 요법과 키나제 억제제의 조합요법 Download PDF

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KR20210044736A
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kinase inhibitor
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cell
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KR1020207034784A
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스탠리 알. 프랭클
젠스 하스칼
제이슨 에이. 두봅스키
Original Assignee
주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
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Abstract

암, 예를 들어 특정 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위한 면역요법제, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)을 포함하는 조합 요법제, 및 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 사용, 및 관련된 방법, 용도 및 제조 물품이 제공된다. 상기 CAR T 요법제는 재조합 수용체 예를 들어 항-CD19 CARS를 발현하는 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 B-세포 악성 종양은 비-호지킨 림프종(NHL), 예를 들어 재발되거나 또는 불응성인 NHL 또는 특정 NHL 서브타입이다.

Description

키메라 항원 수용체(ＣＡＲ) Ｔ 세포 요법과 키나제 억제제의 조합요법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 "Ｔ 세포 요법과 키나제 억제제의 조합요법"이라는 명칭으로 2018년 5월3일자로 출원된 미국 가출원 제62/666,653호의 우선권을 주장하며, 그 내용은 그 전문이 참조로 포함된다.
서열 목록의 참조에 의한 편입
본 출원은 전자 형식의 서열목록과 함께 제출된다. 서열목록은 크기가 34.4bytes이며, 2019년 4월 30일에 생성된 735042017540SeqList.txt라는 파일로 제공된다. 전자적 형식의 서열 목록의 정보는 그 전체가 참조로 포함된다.
본 개시는 일부 측면에서 면역요법제, 예를 들어 입양 세포 요법제, 예를 들어 입양 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품, 및 질병 및 병태 예를 들어 특정 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위한 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제의 용도, 및 관련된 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품에 관한 것이다. 상기 T 세포 요법제는 재조합 수용체 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 질병 또는 병태는 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL), 예를 들어 재발되거나 또는 불응성인 NHL 또는 특정 NHL 서브타입이다.
면역 치료, 예를 들어 입양 요법을 위해, 조작된 T 세포의 투여에 대한 다양한 전략이 이용 가능하다. 예를 들어 T 세포 발현 유전적으로 조작된 항원 수용체, 예를 들어 CAR을 조작하고, 상기 세포를 함유하는 조성물을 대상체에게 투여하기 위한 전략들이 이용가능하다. 예를 들어 대상체에 투여할 때 세포의 지속성, 활성 및/또는 증식을 개선시키는 것과 같은, 세포의 효능을 개선시키는 개선된 전략이 필요하다. 상기 요구에 부합하는 방법, 조성물, 키트, 및 시스템이 제공된다.
본원에에서는, 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 포함한 면역 요법제를 투여하는 단계, 및 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에게 본원에서 기술된 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 단계를 포함하는 조합 요법을 포함하는 방법, 용도, 제조 물품이 제공된다. 일부 측면에서, 상기 B 세포 악성 종양은 비-호지킨 림프종(NHL), 예를 들어 제발되거나 불응성이 NHL 또는 특정 NHL 서브타입이다. 일부 측면에서, 상기 제공된 방법, 용도, 및 제조 물품은, B 세포 상에 발현된 항원에 결합하는 항원-결합 도메인을 포함하는 T 세포 요법제 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여를 포함한다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00001
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제(kinase inhibitor)를 투여하는 단계; 및 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제(autologous T cell therapy)를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 함유하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리(processing)함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;을 포함하는 치료 방법이 제공되되, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법(dosing regimen)으로 수행된다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00002
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계; 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 함유하는 조성물을 생성하는 단계; 및 상기 대상체에게 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량을 함유하는 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계;를 포함하는 치료 방법이 제공되되, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 상기 억제제의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00003
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 것을 포함는 치료 방법이 제공되되, 상기 대상체는 치료 후보이거나 또는 자가 T 세포 요법제로 치료될 예정이며, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 함유하고, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리(processing)하며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 대상체에게 상기 T 세포 요법제를 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝된다(preconditioned). 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여한다. 일부 구체예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 림프구고갈 요법동안 중지되거나 또는 중단된다.
일부 구현예에서, 상기 투여 섭생 요법은 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함한다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00004
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계; 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량(dose)을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리하는 단계를 포함하고, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;을 포함하는 치료 방법이 제공되되, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 함유하는 상기 조성물을 생성하는 것을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 적어도 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 이상에서 개시된다. 일부 구체예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시된다.
일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완성된다. 일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완성된다.
일부 구현예에서, 상기 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 15일 내지 29일동안 연장하는 기간 동안이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 기간 동안이다. 상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날짜에서 1일 1회 실시된다.
상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 유효량은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 840 mg 또는 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg을 포함한다. 일부 구현예는 상기 유효량은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg 또는 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg을 포함한다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
Figure pct00005
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함함; 및 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 함유하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;을 포함하는 치료 방법이 제공되되, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득되하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되며, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제로 사전 컨디셔닝된다. 일부 경우에, 상기 방법은, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완성된다. 일부 구체예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완성된다. 일부 경우에, 상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하는 것을 포함한다.
본원에서는, 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
Figure pct00006
또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 가짐; 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및 상기 림프구고갈 요법을 완료한 후 2일 내지 7일 이내에 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;을 포함하는 치료 방법이 제공되되, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 상기 키나제 억제제의 투여, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여의 중지, 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월 이상 동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 것을 더 포함한다. 상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여된다. 일부 경우에, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 최소 (약) 7일에 개시된다.
상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 30일 내지 (약) 40일에 개시되고; 상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 23일 내지 (약) 38일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나; 상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완성된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 35일에 개시되고; 상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 28일 내지 (약) 32일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나; 상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완성된다.
일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법은 플루라다빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법은 2 내지 4일동안, 선택적으로 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 200-400 mg/m2, 선택적으로 (약) 300 mg/m2 및/또는 플루다라빈 (약) 20-40 mg/m2, 선택적으로 30 mg/m2의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2의 투여를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 300 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하고/하거나, 상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 140 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 420 mg의 양으로 투여된다. 일부 경우에, 상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 560 mg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 또는 4개월 초과동안 연장한다. 일부 경우에, 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 5개월 또는 5개월 초과동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 추가 투여는 (약) 6개월 또는 6개월 초과 연장한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우 상기 기간의 종료시에 중단한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화(remission) 후에 진행되거나 또는 재발하는 경우 상기 기간의 종료시에 중단한다. 일부 경우에, 상기 기간은 (약) 3개월 내지 6개월 동안 연장한다. 일부 구체예에서, 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다.
일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 3개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다. 일부 경우에, 상기 기간은, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 성취한 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다. 일부 구체예에서, 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장한다. 일부 경우에, 상기 기간은, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장한다.
일부 구현예에서, 상기 추가 투여는, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 기간의 종료시에, 상기 대상체가 부분 반응(partial response; PR) 또는 안정적 질병(stable disease; SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후 상기 추가 투여를 지속하는 것을 더 포함한다. 일부 구현예에서, (약) 6개월에, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 추가 투여는 6개월 초과동안 지속된다. 일부 경우에, 상기 추가 투여는 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취할 때까지 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 재발할 때까지 지속된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK)를 억제하고/하거나 IL2 유도성 T-세포 키나제(ITK)를 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 ITK를 억제하고 상기 억제제는 ITK를 억제하거나 또는 (약) 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM 또는 그 이하 미만의 반수 최대 억제 농도(half-maximal inhibitory concentration)(IC50)로 ITK를 억제한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 키나제 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 포함하고, 선택적으로 상기 세포 집단은 B 세포의 집단이거나 또는 그를 포함하고, 또는 T 세포를 포함하지 않으며; 상기 대상체 및/또는 상기 암은 BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 키나제 억제제에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고; 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 키나제 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타낸 것이다.
상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 경우에, 상기 B 세포 악성 종양은 림프종이다. 일부 경우에, 상기 림프종은 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL)이다. 일부 구체예에서, 상기 NHL은, 공격적인 NHL(aggressive NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma; DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질전환된 무통성 종양(indolent); EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma); 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B); 및/또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인된다.,
상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제는 경구 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 CD19는 인간 CD19이다. 일부 측면에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공동자극 신호 전달 영역을 더 포함한다. 일부 경우에, 상기 공동자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 공동자극 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인(transmembrane domain); 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 포함하며; 상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인임;을 포함하거나; 또는 상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은 스페이서를 포함하고 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체를 갖거나 또는 그것들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]을 포함하거나 또는 그것들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이고/이거나; 상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나; 상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나; 상기 scFv는 RASQDISKYLN의 CDR-L1 서열 (서열번호 35), SRLHSGV의 CDR-L2 서열(서열번호 36), 및/또는 GNTLPYTFG의 CDR-L3 서열(서열번호 37) 및/또는 DYGVS의 CDR-H1 서열(서열번호 38), VIWGSETTYYNSALKS의 CDR-H2 서열(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG의 CDR-H3 서열(서열번호 40)을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDR-L1 서열, FMC63의 CDR-L2 서열, 및 FMC63의 CDR-L3 서열, FMC63의 CDR-H1 서열, FMC63의 CDR-H2 서열, 및 FMC63의 CDR-H3 서열을 포함하거나 또는 임의의 전술한 것과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그에 대해 경쟁하며, 선택적으로 상기 scFv는, 순서대로, VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고/하거나 상기 scFv는 유연한 링커를 포함하고/하거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×106 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×106 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×107 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×107 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포(각각의 경계 포함)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 세포를 포함한다. 일부 경우에, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 경우에, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고 상기 용량의 투여는 복수의 다른 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 다른 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 다른 것을 포함하는 제 2 조성물을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 0 내지 12시간 간격(apart), 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나 또는 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되되, 0 내지 12시간 간격(apart), 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/되거나; 상기 제 1 조성물의 투여 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행된다. 일부 측면에서, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물은 상기 CD4+ T 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물은 상기 CD8+ T 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 비경구, 선택적으로 정맥내 투여된다. 상기 임의의 구현예 중의 일부에서, 상기 T 세포는 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득된 1차 T 세포이다. 일부 경우에, 상기 T 세포는 상기 대상체에 자가(autologous)이다.
일부 구현예에서, 상기 처리는, 상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플로부터, T 세포, 선택적으로 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 분리함으로써 1차 T 세포를 포함하는 투입 조성물을 생성하는 단계; 및 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산을 상기 투입 조성물의 T 세포에 도입하는 단계;를 포함한다. 일부 경우에, 상기 분리는 면역친화성-기반 선택(immunoaffinity-based selection)을 수행하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플(buffy coat sample), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획화된 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 혈액성분채집술(apheresis) 생성물, 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 생성물이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 도입 전에, 상기 프로세스는 자극 조건하에 상기 투입 조성물을 인큐베이션하는 것을 포함하되, 상기 자극 조건은 TCR 복합체의 하나 이상의 구성요소의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 하나 이상의 공동자극 분자의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 자극 시약의 존재를 포함함으로써 자극된 조성물을 생성하고, 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 분자는 상기 자극된 조성물에 도입된다. 일부 구체예에서, 상기 자극 시약은 다수의 TCR 복합체에 특이적으로 결합하는, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1차 제제(primary agent)를 포함한다. 일부 경우에, 상기 자극 시약은 T 세포 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 2차 제제(secondary agen)를 더 포함하고, 선택적으로 상기 공동자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40, 또는 ICOS로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 상기 1차 및/또는 2차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 인큐베이션을 포함한다.
일부 경우에, 상기 1차 제제 및/또는 2차 제제는 고형 지지체의 표면 상에 존재한다. 일부 구체예에서, 상기 고형 지지체는 비드이거나 또는 그를 포함하고, 선택적으로 상기 비드는 자성(magnetic) 또는 초상자성(superparamagnetic)이다. 일부 구현예에서, 상기 비드는 (약) 3.5㎛ 초과이되 약 9㎛ 이하 또는 약 8㎛ 이하 또는 약 7㎛ 이하 또는 약 6㎛ 이하 또는 약 5㎛ 이하의 직경을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 비드는 (약) 4.5㎛의 직경을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 도입은 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터로 상기 자극된 조성물의 세포를 형질도입(transducing)하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 구체예에서, 상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 감마레트로바이러스 벡터이다.
일부 구현예에서, 상기 처리는 상기 도입 후 상기 T 세포를 배양하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 배양은 세포의 증식 또는 증폭을 일으키는 조건하에 수행되어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 산출 조성물을 생성한다. 일부 경우에, 상기 배양 후에, 상기 방법은 냉동보존(cryopreservation)을 위해 및/또는 상기 대상체에 대한 상기 T 세포 요법제의 투여를 위해 상기 산출 조성물의 세포를 제형화(formulating)하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 제형화는 약학적으로 허용가능한 부형제의 존재하에서 이루어진다.
상기 임의의 구현예의 일부에서, 상기 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 듀러블한(durable) 완전 반응(complete response, CR)을 성취하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나; 6개월까지 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 반응(response)에서 유지되고, CR에서 유지되고/되거나 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나; 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고 선택적으로 상기 OR은 듀러블하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나; 6개월까지 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 반응에서 유지되거나 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 생존한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량의 투여 시점에 또는 투여 직전에, 상기 대상체는, 상기 림프종, 선택적으로 상기 NHL에 대한 하나 이상의 사전 요법(prior therapies), 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외의 1개, 2개 또는 3개의 사전 요법으로, 치료 후 완화 이후 재발하였거나, 또는 상기 치료 요법에 대해 불응성으로 된다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량을 포함하는 상기 T 세포 요법제의 투여시 또는 투여 전에, 상기 대상체는 이중/삼중 유전자 이상 림프종을 갖는 것이거나 또는 확인되었고; 상기 대상체는 화학요법-불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법-불응성 DLBCL이거나 또는 확인되었고/되었거나; 상기 대상체는 사전 요법에 대한 반응에서 완전 반응(CR)을 성취하지 않았다.
본원에서는, 구조식
Figure pct00007
이거나 또는 그를 포함하거나, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염인 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 본원에 제공된 방법 중의 어느 것을 수행하기 위한 지침을 포함하는 키트가 제공된다.
본원에서는, 구조식
Figure pct00008
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 자가 T 세포 요법제로 치료를 위한 또는 그것으로 치료 받을 후보인 암을 갖는 대상체에게 상기 하나 이상의 단위 용량을 투여하기 위한 지침을 포함하는 키트가 제공되되, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 함유하고, 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플이 수득되고 처리(processing)되며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산을 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고, 상기 지침은, 상기 샘플의 수득 전에 적어도 (약) 3일에 그리고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 하나 이상의 용량 단위의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 상기 대상체에게 상기 키나제 억제제의 단위 용량의 투여를 개시하는 것을 특정한다.
일부 경우에, 상기 지침은 상기 T 세포 요법제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가 상기 림프구고갈 요법제의 투여 동안 중단되는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여 후 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여의 중단 또는 중지, 및 이어서 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 적어도 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 이상에서 개시되는 것을 특정한다. 일부 측면에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법제의 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법제의 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 기간 동안인 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 각각의 단위 용량의 투여가, 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날짜에서 1일 1회 실시되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 단위 용량 각각은 (약) 140 mg 내지 (약_ 840 mg을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 하나 이상의 단위 용량 각각은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg을 포함한다. 일부 경우에, 상기 하나 이상의 단위 용량 각각은, (약) 280 mg 내지 (약) 560 mg을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 최소 (약) 7일에 개시되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 30일 내지 (약) 40일에 개시되고; 상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 23일 내지 (약) 38일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나; 상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완료되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 35일에 개시되고; 상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 28일 내지 (약) 32일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나; 상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완료되는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법은 플루라다빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법이 2 내지 4일동안, 선택적으로 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 200-400 mg/m2, 선택적으로 (약) 300 mg/m2 및/또는 플루다라빈 (약) 20-40 mg/m2, 선택적으로 30 mg/m2의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2의 투여를 포함하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 300 mg/m2 및 플루다라빈 (약) 30 mg/m2의 투여를 포함하고/하거나, 상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2 및 플루다라빈 (약) 30 mg/m2의 투여를 포함하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 140 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 140 mg의 양으로 투여하는 것을 특정한다. 일부 구체예에서, 상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 280 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg의 양으로 투여하는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 420 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 420 mg의 양으로 투여하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 560 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 560 mg의 양으로 투여하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 또는 4개월 초과동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시후 (약) 5개월 또는 5개월 초과동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 추가 투여가 (약) 6개월 또는 6개월 초과 연장하는 기간 동안인 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화(remission) 후에 진행되거나 또는 재발하는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이 (약) 3개월 내지 6개월 동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가, (약) 3개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가, (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 추가 투여가, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간 동안 지속되는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 기간의 종료시에, 상기 대상체가 부분 반응(partial response; PR) 또는 안정적 질병(stable disease; SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후 상기 추가 투여를 지속하는 것을 더 포함하는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, (약) 6개월에, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 추가 투여는 6개월 초과동안 지속되는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 추가 투여가 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취할 때까지 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 재발할 때까지 지속되는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK)를 억제하고/하거나 IL2 유도성 T-세포 키나제(ITK)를 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 ITK를 억제하고 상기 억제제는 ITK를 억제하거나 또는 (약) 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM 또는 그 이하 미만의 반수 최대 억제 농도(half-maximal inhibitory concentration)(IC50)로 ITK를 억제한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 대상체가 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받았거나 투여 받았을 수 있는 것을 특정한다. 일부 측면에서, 상기 지침은, 상기 대상체가 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받지 않았거나 투여 받지 않은 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 키나제 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 함유하고, 선택적으로 상기 세포 집단은 B 세포의 집단이거나 또는 그를 포함하고/하거나 T 세포를 함유하지 않으며; 상기 대상체 및/또는 상기 암은 BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 키나제 억제제에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고; 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 키나제 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나; 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타낸 것이다.
일부 구현예에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 경우에, 상기 B 세포 악성 종양은 림프종이다. 일부 경우에, 상기 림프종은 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL)이다. 일부 구체예에서, 상기 NHL은, 공격적인 NHL(aggressive NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma; DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질전환된 무통성 종양(indolent); EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma); 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B); 및/또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인되는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량은 경구 투여용으로 제형화되고/되거나 상기 지침은 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량이 경구 투여되는 것을 더 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 CD19는 인간 CD19이다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공동자극 신호 전달 영역을 더 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 공동자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인를 포함한다. 일부 경우에, 상기 공동자극 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인(transmembrane domain); 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 포함하며; 상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인임;을 포함하거나; 또는 상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은 스페이서를 포함하고 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체를 갖거나 또는 그것들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]을 포함하거나 또는 그것들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이고/이거나; 상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나; 상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나; 상기 scFv는 RASQDISKYLN의 CDR-L1 서열 (서열번호 35), SRLHSGV의 CDR-L2 서열(서열번호 36), 및/또는 GNTLPYTFG의 CDR-L3 서열(서열번호 37) 및/또는 DYGVS의 CDR-H1 서열(서열번호 38), VIWGSETTYYNSALKS의 CDR-H2 서열(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG의 CDR-H3 서열(서열번호 40)을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDR-L1 서열, FMC63의 CDR-L2 서열, 및 FMC63의 CDR-L3 서열, FMC63의 CDR-H1 서열, FMC63의 CDR-H2 서열, 및 FMC63의 CDR-H3 서열을 포함하거나 또는 임의의 전술한 것과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그에 대해 경쟁하며, 선택적으로 상기 scFv는, 순서대로, VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고/하거나 상기 scFv는 유연한 링커를 포함하고/하거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×106 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×106 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×107 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×107 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포(각각의 경계 포함)를 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 세포를 함유한다. 일부 경우에, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 일부 경우에, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 함유하고 상기 지침은, 상기 용량의 투여가 복수의 다른 조성물을 투여하는 것을 함유하고, 상기 복수의 다른 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 하나를 함유하는 제 1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 다른 것을 함유하는 제 2 조성물을 포함하는 것을 특정한다.일부 구체예에서, 상기 지침은, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물이 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나 또는 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되되, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/되거나; 상기 제 1 조성물의 투여 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는 것을 특정한다. 일부 경우에, 상기 지침은, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물이 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 제 1 조성물이 상기 CD4+ T 세포를 함유하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 제 1 조성물이 상기 CD8+ T 세포를 함유하는 것을 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 세포의 용량이 비경구, 선택적으로 정맥내 투여되는 것을 특정한다.
일부 구현예에서, 상기 T 세포는 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득된 1차 T 세포이다. 일부 경우에, 상기 T 세포는 상기 대상체에 자가(autologous)이다. 일부 구현예에서, 상기 지침은 상기 T 세포 요법제를 생성하는 방법을 더 특정한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제를 생성하는 방법은, 상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플로부터, T 세포, 선택적으로 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 분리함으로써 1차 T 세포를 함유하는 투입 조성물을 생성하는 단계; 및 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산을 상기 투입 조성물에 도입하는 단계;를 포함한다. 일부 경우에, 상기 분리는 면역친화성-기반 선택(immunoaffinity-based selection)을 수행하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플(buffy coat sample), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획화된 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 혈액성분채집술(apheresis) 생성물, 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 생성물이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 도입 전에, 상기 프로세스는 자극 조건하에 상기 투입 조성물을 인큐베이션하는 것을 포함하되, 상기 자극 조건은 TCR 복합체의 하나 이상의 구성요소의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 하나 이상의 공동자극 분자의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 자극 시약의 존재를 포함함으로써 자극된 조성물을 생성하고, 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 분자는 상기 자극된 조성물에 도입된다. 일부 구현예에서, 상기 자극 시약은 다수의 TCR 복합체에 특이적으로 결합하는, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1차 제제(primary agent)를 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 자극 시약은 T 세포 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 2차 제제(secondary agen)를 더 포함하고, 선택적으로 상기 공동자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40, 또는 ICOS로부터 선택된다. 일부 경우에, 상기 1차 및/또는 2차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 인큐베이션을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 1차 제제 및/또는 2차 제제는 고형 지지체의 표면 상에 존재한다. 일부 구체예에서, 상기 고형 지지체는 비드이거나 또는 그를 포함하고, 선택적으로 상기 비드는 자성(magnetic) 또는 초상자성(superparamagnetic)이다. 일부 경우에, 상기 비드는 (약) 3.5㎛ 초과이되 약 9㎛ 이하 또는 약 8㎛ 이하 또는 약 7㎛ 이하 또는 약 6㎛ 이하 또는 약 5㎛ 이하의 직경을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 비드는 (약) 4.5㎛의 직경을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 도입은 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터로 상기 자극된 조성물의 세포를 형질도입(transducing)하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터이다. 일부 경우에, 상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 감마레트로바이러스 벡터이다.
일부 구현예에서, 상기 처리는 상기 도입 후 상기 T 세포를 배양하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 배양은 세포의 증식 또는 증폭을 일으키는 조건하에 수행되어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 산출 조성물을 생성한다. 일부 구체예에서, 상기 배양 후에, 상기 프로세스는 냉동보존(cryopreservation)을 위해 및/또는 상기 대상체에 대한 상기 T 세포 요법제의 투여를 위해 상기 산출 조성물의 세포를 제형화(formulating)하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 제형화는 약학적으로 허용가능한 부형제의 존재하에서 이루어진다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.
일부 구현예에서, 상기 지침은, 상기 세포 용량을 포함하는 상기 T 세포 요법제의 투여시 또는 투여 전에, 상기 대상체는 이중/삼중 유전자 이상 림프종을 갖는 것이거나 또는 확인되었고; 상기 대상체는 화학요법-불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법-불응성 DLBCL이거나 또는 확인되었고/되었거나; 상기 대상체는 사전 요법에 대한 반응에서 완전 반응(CR)을 성취하지 않는 것을 특정한다.
본원에서는, 본원에 제공된 임의의 키트를 포함하는 제조 물품이 제공된다.
도 1a는 이브루티닙(평균 ±SEM)을 갖는 CAR T 세포와 공동 배양된 3개의 웰에서 표적-특이적 세포 용해 활성을 평가하는 정규화된 표적 세포수의 그래프를 도시한다. 도 1b는 세포 독성 분석의 시작 및 종료시에 2.5:1의 효과기 대 표적의 비율(E:T)에서 CAR T 세포와 함께 배양된 표적 세포(누클라이트 레드(NucLight Red) K562.CD19 세포)의 대표적인 이미지를 나타낸다. 도 1c는 항-CDl9 CAR T 세포의 세포 용해 활성에 대한 이브루티닙의 투여량 효과를 나타낸다. 그래프는 3개의 독립적인 공여자로부터의 데이터를 나타내고, 미처리 대조군(100%)으로 표준화된다. 상기 평균 ±SEM은 도시되고 통계적으로 유의한 차이는 P<0.0000l(****)로 표시된다.
도 2a는 지시된 농도의 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 CD4+ 및 CD8+ 세포의 배양 후 CD25, CD28, CD39 및 CD95의 CAR T 세포 발현을 나타낸다. 도 2b는 이브루티닙의 존재하에 초기 자극후 4일 동안 TCM(CCR7+CD45RA-) 및 TEM(CCR7-CD45RA-)의 백분율에 대한 하나의 공여자-유도된 세포로부터의 CAR T 세포의 대표적인 결과를 나타낸다. 도 2c 및 도 2d는 표시된 농도의 이브루티닙의 부재하에, 각각 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 배양 후 CD69, CD107a 및 PD-1의 CAR-T 세포 발현을 나타낸다.
도 3a는 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 하나의 공여자로부터 생성된 CAR-T 세포로부터 4일동안의 사이토카인 생성의 동력학의 대표적인 플롯을 도시한다. 도 3b는 2회의 독립적인 실험의 부재와 비교하여 이브루티닙의 존재하에 2일 동안 CAR-T 세포의 자극 후의 사이토카인 생성의 백분율 변화를 도시한다.
도 4a는 이브루티닙(대조용) 또는 50 nM 또는 500 nM의 이브루티닙의 부재하에 연속 자극 분석에서 재자극의 각 라운드 후에 CAR-T 세포 수의 배수 변화를 나타낸다. 도 4b는 이브루티닙(대조용)의 부재하에 또는 연속 자극 분석에서 50 nM 또는 500 nM의 이브루티닙의 존재하에 재자극의 각 라운드 후에 CAR-T 세포 수의 배가수를 나타낸다. 도 4c는 연속 자극 분석에서 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 각각 1 및 5 라운드의 재자극후 4 및 18일째에 세포수를 나타낸다.
도 5a는 이브루티닙의 존재하에 T 세포의 자극 후 TH1 표면 마커의 발현에 대한 대표적인 유세포 분석법을 도시한다. 도 5b는 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 배양된 T 세포에 대해 유세포 분석법에 의해 측정된 시간 경과에 따라 관찰된 TH1 세포의 백분율을 나타낸다. 도 5c는 다양한 농도의 이브루티닙의 존재하에 자극된 T 세포 배양물에서 TH1 세포의 백분율을 나타낸다. 도 5d는 이브루티닙의 존재하에 연속 자극의 0, 11, 18 및 21일째에 CD25, CD38, CD39 및 CD45RO의 발현을 나타낸다. 하나의 공여자-유도된 세포로부터 CAR T로부터의 대표적인 결과가 도시되어 있다. 도 5e는 이브루티닙의 존재하에 연속 자극의 0, 11, 18 및 21일째에 CD62L, CD69, CD107a 및 PD-l의 발현을 나타낸다. 하나의 공여자-유도된 세포로부터 CAR T 세포로부터의 대표적인 결과가 도시되어 있다.
도 6a는 BTK 억제에 대해 내성이 있는 것으로 확인된 유포된 종양 이종이식 마우스 모델에서 비히클 치료와 비교하여 종양 부담에 대한 이브루티닙 치료의 효과를 나타낸다. 도 6b는 이브루티닙 또는 비히클 대조군의 존재 또는 부재하에 2개의 상이한 공여자-유도된 세포로부터 CAR+ T 세포로 처리된 마우스에서 후-종양 주사 후 더 큰 시점에서 동일한 연구의 결과를 나타낸다. 도 6a 및 도 6b의 결과 는 생물체 발광에 의한 평균 방사(radiance)를 측정함으로써 나타낸 바와 같이 시간에 따른 종양 성장을 나타낸다. 도 6c는 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 CAR-T 세포를 투여한 종양-보유 마우스의 생존을 도시한 카플란 마이어 곡선(Kaplan Meier curve)을 도시한다. 도 6d는 이브루티닙 또는 비히클 대조군의 존재 또는 부재하에 2 개의 상이한 공여자-유도된 세포로부터 CAR+ T 세포로 처리된 마우스에서 후-종양 주사 후 더 큰 시점에서 동일한 연구에서 생존의 결과를 나타낸다.
도 7a는 2개의 상이한 공여자로부터 생성된 CAR-T 세포를 단독으로 또는 음용수를 통해 투여된 매일 이브루티닙의 투여와 조합하여 투여한 종양-보유 마우스의 관찰된 생존을 나타내는 카플란 마이어 곡선을 도시한다. 통계적으로 유의한 차이는 P<0.00l(***)로 나타낸다. 도 7b는 2개의 상이한 공여자로부터 생성된 CAR-T 세포를 투여한 마우스로부터의 생물체 발광에 의한 평균 방사를 측정하고 음용수를 통해 투여된 이브루티닙으로 처리함으로써 나타낸 시간에 따른 종양 성장을 나타낸다. 통계적으로 유의한 차이는 2-방향 ANOVA P<0.05(*), P<0.0l(**)로 나타낸다. 도 7c는 이브루티닙닙의 존재 또는 부재하에 처리된 마우스의 혈액, 골수 및 비장에서 CAR-T 세포의 수준을 나타낸다. 도 7d는 이브루티닙의 존재 또는 부재하의 처리 후 19일째에 혈액 중의 CAR-T 세포의 수준을 나타낸다. 통계적으로 유의한 차이는 *p<0.05로 표시된다. 도 7e는 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 처리된 마우스의 혈액, 골수 및 비장에서 종양 세포수를 나타낸다. 통계적으로 유의한 차이는 p<0.00l(***) 및 p<0.000l(****)로 표시된다.
도 8a는 CAR-T 세포로 및 이브루티닙 또는 대조용과의 조합으로 전달 후 12일째에 동물의 골수로부터 수확한 CAR-발현된 T 세포 상의 표면 마커의 T-분산 스토캐스틱 이웃 임베딩(T-distributed stochastic neighbor embedding; t-SNE) 고차원 분석을 도시한다. 도 8b는 CAR-T 세포 및 이브루티닙 또는 비히클 대조용으로 전달 후 12일째에 동물의 골수로부터 수확한 CAR-발현된 T 세포의 T-분산 스토캐스틱 이웃 임베딩(t-SNE) 고차원 분석으로부터 유도된 4개의 집단을 도시한다. 도 8c는 전체 집단의 발현과 중첩된(음영 표시됨) 4개의 게이트된 t-SNE로부터의 CD4, CD8, CD62L, CD45RA, CD44 및 CXCR3의 개별 발현 프로파일을 나타내는 히스토그램을 도시한다. 도 8d는 이브루티닙으로 처리된 마우스 또는 대조용 마우스로부터의 각 t-SNE 집단의 백분율 및 배수 변화를 도시한다.
도 9a는 이브루티닙(대조군) 또는 50 nM 또는 500 nM 이브루티닙의 존재하에, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)을 갖는 대상체로부터 수득된 세포로부터 생성된, CAR-조작된 세포의 21일의 배양 기간 동안의 연속 자극 분석에서 집단 배가수를 나타낸다. 화살표는 CAR T 세포가 계수된 각각의 재자극의 시점을 나타내며, 이브루티닙과 함께 새로운 표적 세포가 첨가되었다. 도 9b는 이브루티닙의 존재 또는 부재하에 16일의 연속 재자극후 CD19-발현 표적 세포에 대한 유전적으로 조작된 CAR-T 세포의 세포 용해 활성을 나타낸다. % 사멸률은 미처리 대조군(100%)으로 표준화되었다. 데이터는 복제 웰로부터 평균 ±SEM으로 나타냈다. 통계적으로 유의한 차이는 P<0.00l(***), P<0.000l(****)로 표시된다.
도 10a는 대조군과 비교하여 500 nM 이브루티닙으로 처리된 18 일째 연속 자극된 CAR T 세포로부터 차별적으로 발현된 유전자를 나타내는 볼케이노 플롯이다. 상당히 상이하게 상향조절된 유전자는 우측 점선의 우측에 있고, 상당히 상이하게 하향조절된 유전자는 좌측 점선의 좌측에 있다(FDR<0.05, abslog2FC>0.5). 도 10b는 대조군 및 500 nM 이브루티닙 그룹에서 도 10a로부터의 23개의 차별등으로 발현된 유전자의 표준화된 발현(공여자 + 조건당 평균 전사체, 유전자당 정규화된 z-스코어)을 나타내는 가열 맵(heat map)이다. 도 10c는 대조군과 비교하여 50 nM 이브루티닙으로 처리된 18일째 연속 자극된 CAR T 세포로부터 발현된 유전자의 볼케이노 플롯을 도시한다. 도 10d는 대조군 및 50 nM 이브루티닙 처리된 군에서 18일째부터 연속적으로 자극된 CAR T 세포로부터의 정규화된 유전자 발현 변화(도 10b에 도시된 바와 같이 정규화됨)의 가열 맵을 도시한다.
도 11a 내지 도 11e는 대조군(Ctrl)과 비교하여 50 nM(Ibr50) 또는 500 nM 이브루티닙(Ibr500)으로 처리된 연속 자극된 CAR T 세포로부터의 조건당 공여자 및 실험에 대해 요약된 지시된 유전자의 발현(TPM, 전사체/백만) 박스 플롯 프로파일을 도시한다.
도 12a는 유세포 분석법에 의해 측정된 바와 같이, 연속 자극 18일 후에 하나의 공여자-유도된 세포로부터의 CAR T 세포에서의 CD62F 발현의 대표적인 히스토그램이다. 도 12b는 유세포 분석법에 의해 측정된 바와 같이, 대조군으로 정규화된 연속 자극 18일 후에 하나의 공여자-유도된 세포로부터 CD62F+ CAR T 세포의 백분율의 배수 변화를 도시한다. 데이터는 2개의 독립적인 실험(평균 ±SEM)으로부터의 데이터이다.
조작된 세포, 예를 들어 T 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및 키나제의 TEC 족의 억제제, 예를 들어 BTK 또는 ITK 억제제의 방법 및 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는, 조합 요법, 예를 들어 암 또는 증식성 질병을 갖는 대상체에 대해, 예를 들어 키나제의 TEC 족의 억제제, 예를 들어 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여, 및 입양 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여를 포함하는 조합 요법을 포함한다.
일부 구현예에서, 암 또는 증식성 질병을 갖는 대상체의 치료를 위한, 조작된 세포, 예를 들어 T 세포(예를 들어 CAR-T 세포) 및, 구조식
Figure pct00009
을 갖는 화합물이거나, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 입체 이성질체, 호변 이성질체 또는 라세미 혼합물인 이브루티닙인 키나제 억제제의 방법 및 용도, 및 조성물이 제공된다. 일부 경우에, 상기 T 세포 요법제는 상기 암 또는 증식성 질병과 관련된 항원, 예를 들어 B 세포 악성 종양, 예를 들어 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL) 또는 그의 서브타입과 관련된 항원을 특이적으로 인식하고/하거나 표적화하는 T 세포를 포함하는 입양 T 세포 요법제이다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 항원에 결합하는, 예를 들어 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된 T 세포를 포함한다. 일부 경우에, 상기 T 세포 요법제에 의해 표적화된 상기 항원은 CD19이다. 또한 조합물 및 제조 물품, 예를 들어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 조성물 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 조성물, 및 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양을 비롯한 질병, 병태, 및 장애를 치료 또는 예방하는 상기 조성물 및 조합물의 dyde도가 제공된다.
세포 요법, 예를 들어 T 세포-기반 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법(대상 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포 뿐 아니라 다른 입양 면역 세포를 투여하는 것을 포함하는 요법들 입양 T 세포 요법들을 포함함)은 질병 및 장애, 예를 들어 B 세포 악성 종양(B cell malignancy)의 치료에 효과적일 수 있다. 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체의 T 세포 표면 상에서의 조작된 발현은 T 세포 특이성의 재배향(redirection)을 가능케 한다. 임상 연구에서, CAR-T 세포, 예를 들어 항-CD19 CAR-T 세포는 백혈병 환자와 림프종 환자 모두에서 지속가능한, 완전 반응을 생성하였다[문헌 「Porter et al (2015) Sci Transl Med, 7:303ra139; Kochenderfer (2015) J Clin Oncol, 33: 540-9; Lee et al (2015) Lancet, 385:517-28; Maude et al (2014) N Engl J Med, 371:1507-17」 참조].
특정 상황에서, 입양 세포 치료에 대한 접근 방식이 항상 완전히 만족스럽지 않을 수 있다. 예를 들어 CAR T 세포 지속성은 림프종이 있는 많은 대상체에서 검출될 수 있지만, ALL을 갖는 대상체에 비해 NHL을 갖는 대상체에서 더 적은 완전 반응(CR)이 관찰되었다. 보다 특히, CAR T 세포 주입 후 최대 80%(CR 비율 47 ~ 60 %)의 더 높은 전체 반응률이 보고되었지만, 일부에서 반응은 일시적이며 대상체는 지속적인 CAR T 세포의 존재하에 재발하는 것으로 나타났다[문헌 「Neelapu, 58th Annual Meeting of the American Society of Hematology (ASH): 2016; San Diego, CA, USA. Abstract No. LBA-6.2016; Abramson, Blood. 2016 Dec 01;128(22):4192」 참조]. 또 다른 연구에서는 장기 CR 비율이 40%라고 보고하였다[문헌 「Schuster, Ann Hematol. 2016 Oct;95(11):1805-10」 참조].
일부 측면에서, 이에 대한 설명은 순환하는 CAR-발현 T 세포의 면역학적 고갈 및/또는 T 림프구 집단의 변화이다. 이것은, 일부 상황에서, 최적의 효능은, 활성화되는, 증폭하는, 예를 들어 세포독성 살상 및 사이토카인과 같은 다양한 인자들의 분비를 포함하는 다양한 효과기 기능을 작용, 지속, 예를 들어 장기간 지속, 분화, 전이 또는 특정 표현형적 상태로의 재프로그래밍에 관여 (예를 들어 장기 기억, 덜 분화된, 및 효과기 상태), 질병의 국소적 미세환경에서 면역 억제 상태를 회피하거나 저감, 청소(clearance) 다음에 효과적이고 강인한 재반응(recall response) 및 표적 리간드 또는 항체에 대한 재노출을 제공, 및 고갈, 아네르기, 말초 내성, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 회피하거나 감소시키는 상기 투여된 세포의 능력에 달려있을 수 있기 때문이다.
일부 경우에, 반응은 림프구고갈 요법제의 투여 또는 사전 컨디셔닝에 의해서 개선될 수 있으며, 일부 측면에서 이것은, 상기 사전 컨디셔닝이 수행되지 않거나 다른 림프구고갈 요법제 사용하여 수행되는 방법과 비교하여 투여 후 상기 세포의 지속성 및/또는 효능을 향상시킨다. 상기 림프구고갈 요법은 일반적으로 플루다라빈의 투여를, 전형적으로는 또다른 화학요법제 또는 다른 제제, 예를 들어 사이클로포스파미드와의 조합으로 포함하고, 이들은 순차적으로 또는 동시에 임의의 순서로 투여될 수 있다. 최근의 I/II 상 임상 연구에서 급성 림프모구 백혈병(ALL), 비-호지킨 림프종(NHL) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL) 환자의 완전 반응 (CR)은 각각 94%, 47% 및 50%였으며, 무병 생존율은 사이클로포스파미드 및 플루다라빈을 투여하지 않은 환자에 비해 사이클로포스파미드는 투여 받았지만 플루다라빈은 투여 받지 않은 환자에서 더 높았다[문헌 「(Cameron et al. (2016) J Clin Oncol, 34 (suppl; abstr 102)」 참조]. 그러나, 일부 측면에서는 림프구고갈 요법제를 사용하는 경우에도, CAR-T 세포 요법이 모든 대상체에게 항상 일관되게 효과적인 것은 아니다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 노출, 지속 및 기능은 환자에게 투여 한 후에 감소되거나 내려간다. 그러나, 일부 경우, 재조합 수용체를 발현하는 투여된 세포(예를 들어 세포수 증가 또는 지속 시간 증가)는 재증폭시키고/시키거나 생체내에서 재활성화되어 입양 세포 요법에서의 효능 및 치료 결과를 향상시킬 수 있다는 관찰이 있다.
상기 제공된 방법들은 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 T 세로의 증폭, 증식 및 지속성과 관련된 기능을 비롯한 조작된 T 세포 요법제의 T 세포 기능을 향상시킨다는 발견에 기반한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 T 세포 요법제, 예를 들어 입양 세포 요법용 세포, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙과 조합되는 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물을 투여하는 것으로 유리하다. 일부 측면에서, 상기 제공된 방법 및 용도는 특정 대안의 방법과 비교하여 개선되거나 또는 보다 듀러블(durable)한 반응 또는 효능을 제공하거나 또는 성취한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 방법은 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR- 발현 T 세포)의 투여와 관련된 T 세포 활성의 증식 및/또는 활성을 향상시키거나 조절한다.
일부 측면에서, 제공된 방법 및 용도는 치료된 대상체의 특정 그룹에서와 같이, 특정한 대체 방법에 비해 향상되거나 보다 내구성 있는 반응 또는 효능을 제공하거나 달성하게 해준다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법들은 예를 들어 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 위한 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물과 같은 면역요법 또는 면역요법제, 및 TEC 계령의 키나제, 예를 들어 BTK 억제제 또는 ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(ibrutinib)의 억제제를 투여함으로써 유리한 장점을 갖는다.
상기 제공된 방법은 TEC 패밀리 키나제, 예를 들어 이브루티닙의 억제제가 T 세포의 증폭, 증식 및 지속성과 관련된 기능을 포함하는 T 세포 기능을 개선한다는 관찰에 기초한다. 이브루티닙은 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 활성을 차단하고 ITK에 대한 활성을 나타내는 비가역적 소분자 억제제(SMI)이다. 이브루티닙은 재발성 불응성 환경에서 맨틀 세포 림프종(MCL) 및 발덴스트롬 마크로글로불린 혈증(Waldenstrφm's Macroglobulinemia)에 사용하도록 승인되었다[문헌 「Davids et al. (2014) Future Oncol., 10:957-67」 참조]. 일부 경우에, B-세포 수용체(BCR)신호 전달 경로의 비정상적인 활성화는 MCL 및 CLL과 같은 B 세포 악성종양에 대한 주요 메카니즘이다. 따라서,만성 BTK 시그널링은 B 세포 생존 및 비정상적 활성화를 촉진하는 활성화된 B 세포(NFκB) 및 미토겐-활성화된 단백질 키나제(MAP 키나제)의 핵 인자 카파-경쇄-증강제(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer)를 통해 인산화 캐스케이드(phosphorylation cascade)를 개시할 수 있다. 따라서, BTK/ITK 억제제, 예를 들어이브루티닙과 같은 TEC 패밀리 키나제 억제제를 사용하는 기존의 방법은 B 세포 악성 종양을 치료하는데 사용된다.
상기 제공된 발견은 입양 T 세포 요법제의 투여를 포함하는 것과 같은 T 세포를 포함하는 포함하는 방법에서 억제제의 조합 요법이 T 세포 요법의 개선된 기능을 달성함을 나타낸다. 일부 구현예에서, 억제제, 예를 들어 BTK 억제제 및/또는 ITK 억제제(예를 들어 상기 키나제의 선택성 및/또는 비가역역성 억제제)와 세포 요법(예를 들어 조작된 T 세포의 투여)의 조합은 T 세포 요법의 하나 이상의 기능 및/또는 효과, 예를 들어 지속성, 확장성, 세포 독성, 및/또는 치료 결과, 예를 들어 종양 또는 다른 질병 또는 표적 세포를 사멸시키거나 또는 감소시키는 능력을 개선시키거나 또는 향상시킨다.
일부 구현예에서, 상기 효과는 종양 또는 질병 또는 표적 세포 자체가 억제제에 민감하지 않거나, 내성이고/이거나 그렇지 않으면 억제제에 충분히 반응하지 않음에도 불구하고, 상기 억제제가 선택적인 키나제를 표적화하는 억제제에 대해 민감성이고/이거나 상기 TEC 패밀리 키나제의 억제에 대해 내성이 있으며, 선택적으로 상기 억제제에 의한 TEC 패밀리 키나제의 억제에 대해 내성을 갖고/갖거나, 또다른 TEC 패밀리 키나제의 억제에 내성이 있고/있거나, 상기 억제제(또는 그의 주 표적임)에 의해서 표적화된 하나 이상과 비교하여, TEC 패밀리 키나제의 또 다른 억제제, 선택적으로 상이한 TEC 패밀리 키나제에 대해 내성을 갖는 것으로 관찰된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 상기 암은 상기 억제제에 민감하지 않거나, 또는 상기 억제제에 의해서 및/또는 다른 억제제에 의해서 상기 TEC 패밀리 키나제의 억제에 둔감하다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법, 용도 및 조합 요법은 상기 억제제 또는 다른 키나제 억제제를 이미 투여한 대상체에, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR+ T 세포와 조합으로 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하고, 이와 관련하여 상기 대상체는 상기 억제제에 대해 불응성이거나 내성이고/이거나 상기 억제제의 사전 투여를 이용한 치료에 대해 충분히 반응하지 않는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법, 방법 및 용도는, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사전에 투여 받았지만, T 세포 요법제의 부재하의(또는 그와 조합되지 않은) 및/또는 조작된 T 세포 요법제의 부재하의, 및/또는 상기 제공된 요법, 방법 또는 용도에 의해서 표적화된 것과 동일한 질병 또는 표적에 관한 조작된 T 세포 요법제의 부재하의 대상체에 T 세포 요법제(예를 들어 CAR+ T 세포)와의 조합으로 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 조합들은 T 세포 기능 또는 표현형, 예를 들어 T 세포 요법제의 T 세포의 고유 T 세포 기능성 및/또는 고유 T 세포 표현형을 개선시킨다. 일부 측면에서 상기 개선은 기능성, 예를 들어 CAR-T 세포 기능성의 하나 이상의 다른 바람직한 특성을 손상시키지 않거나 또는 실질적으로 손상시키지 않으면서 일어난다. 일부 구현예에서, 상기 억제제와 조합하여, 상기 T 세포의 하나 이상의 결과 또는 기능적 속성을 개선하면서, 활성화되는 상기 세포의 능력을 감소시키지 않으며, 하나 이상의 원하는 사이토카인을 분비하고, 예를 들어 이와 달리 동일하지만 상기 억제제의 부재하에 배양된 세포와 비교하여 시험관내 분석으로 측정하였을 때, 증폭시키고/시키거나 지속시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전에 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시를 포함하고, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시시까지 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후에 계속한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙를 사용한 연장된 처리, 예를 들어 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 연장된 사전처리를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 연장된 처리를 포함하는 상기 제공된 구현예는 T-세포 기능을 회복시키고, 종양 부담을 감소시키며, 종양 미세환경을 붕괴시키고, 골수 유래 억제 세포(MDSC)의 생성을 감소시킴으로써 종양 미세환경(TME)-특이적 면역억제(immunosuppression)를 완화시키거나 극복하는 것을 도울 수 있다. 일부 측면에서, BTK 또는 포스포리파제 C-γ2(PLCγ2) 돌연변이는 특정 세포 요법제의 효능에 해로운 영향을 미치는 것으로 관찰되지 않았다.
일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후에, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속, 재개 및/또는 추가 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어 상기 세포 요법제의 투여 개시 후 계속, 재개 및/또는 추가 투여를 포함한 상기 제공된 구현예는 투여된 세포의 고갈을 감소시키고, 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경독성(NT)과 같은 독성의 위험을 감소시키며, 직교 이중-표적화에 의한 내성 돌연변이의 위험을 감소시키고, 종양 미세환경(예를 들어 종양 내 면역 억제 활성)을 억제시킬 수 있다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예의 이점은 또한 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 또는 투여를 조절하는 능력, 또는 본 발명의 내성에 따라 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 제거 또는 중단시키는 능력을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 투여된 세포의 내재적 기능을 향상시켜서 세포의 성능을 개선시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 효과는 오프-표적 공유 및 비-공유 억제에 의해 조절된다. 일부 측면에서, ITK의 억제는 Th1 바이어스된 편광을 초래할 수 있다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 CLL을 갖는 대상체에서 T 세포 기능성을 회복할 수 있다. 일부 구현예에서, 림프구 증가 효과(lymphocytosis effect)는 상기 TME를 파괴할 수 있으며 상기 투여된 세포에 의한 상기 종양에 대한 개선된 접근에 기여할 수 있다. 일부 측면에서, 독성 예를 들어 사이토카인 방출 증후군(CRS)은 급성 골수성 반응성(acute myeloid reactivity)을 제한함으로써 감소될 수 있다. 일부 측면에서, 조합으로 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 투여된 조작된 세포의 향상된 증식, 생존 및/또는 증폭을 결과할 수 있으며, 향상된 항-종양 활성을 일으킬 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 개선은 최적 활성을 나타내지 않을 수 있는 대상체로부터의 세포에서 관찰될 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 치료는, 연속 자극 후 상기 조작된 세포의 기억 유사 하위 집단(memory-like subpopulation)과 관련된 마커를 발현하는 세포를 증가시키는 것으로 관찰되었으며 유전자 발현 프로파일이 변형된 것으로 관찰되었다. 또한, 투여된 CAR+ T 세포의 증가된 생체 내 효능이 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙과의 조합 요법에서 관찰되었다. ITK를 억제하는 이브루티닙의 표적 외 활성으로 인하여, 일부 경우 이브루티닙 치료가 T 세포 활성에 영향을 미치는 것으로 고려되었다. 일부 측면에서, 이브루티닙 치료와 조합하여 투여된 T 세포의 개선된 활성 및/또는 효과기 기능의 관찰은 T 세포 요법을 개선하는데 예기치 않은 이점을 제공한다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제(예를 들어 이브루티닙)의 투여는 투여된 T 세포 요법제의 효과기 기능을 개선시키고, 종양 환경 매개 면역 기능 장애(tumor environment-mediated immune dysfunction)을 제한하며, 상기 조합으로 치료된 대상체의 감소된 종양 부담, 개선된 종양 제거 및 장기간 생존을 결과할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 CAR-T 세포 요법을 강화할 수 있으며,일부 측면에서, 다른 치료법에 내성 또는 불응성인 암을 갖는 대상체의 치료를 위한 결과를 개선시킬 수 있으며, 공격적인 또는 고 위험성 암이고/이거나 다른 유형의 암과 비교하여 억제제 없이 투여되는 CAR-T 세포 요법제에 대해 비교적 낮은 반응 속도를 나타낼 수 있다.
상기 제공된 방법의 일부 구현예에서, 투여된 유전자 조작된 세포의 하나 이상의 특성예를 들어 상기 대상체에서 상기 투여된 세포의 증가되거나 또는 보다 큰 증폭성 및/또는 지속성, 또는 항원으로 재자극시 증가되거나 또는 보다 큰 회상 반응이 참조 조성물의 투여된 세포와 비교하여 개선되거나 또는 증가되거나 보다 커질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 증가는 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 존재하에 인큐베이션되거나 투여되지 않은 다른 방법을 사용하는 세포 요법제의 투여시 동일한 특성 또는 특징과 비교한 상기 특성 또는 특징에서 적어도 1.2-배, 적어도 1.5-배, 적어도 2-배, 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 6-배, 적어도 7-배, 적어도 8-배, 적어도 9-배, 또는 적어도 10-배의 증가일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 특성 또는 특징 중의 하나 이상의 증가는 상기 유전자 조작된 세포의 투여 후 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 12개월 이내에 관측될 수 있거나 존재한다.
상기 제공된 방법은 T 세포 조절 효과를 나타내는 유효량으로 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 특정 투여량 및/또는 투여 섭생 요법은 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 요법제의 T 세포 기능을 증가 또는 증강시킬 수 있다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시는 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 요법제의 투여 전일 수 있다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시는 유전자 조작을 위해 상기 대상체로부터 세포를 수득하기 전일 수 있다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 특정 기간 동안 특정 섭생에 기초하여 계속된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법, 예를 들어 CAR-T 요법의 개시 후까지, 예를 들어 상기 T 세포 요법의 개시 후 일정 기간 동안 계속된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 장기간 투여된다. 일부 측면에서, 여러 투여 주기를 포함한 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 장기간 투여는 상기 투여된 T 세포의 개선된 증식, 생존, 및/또는 활성화를 결과할 수 있다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 상기 제공된 방법에 따라 투여하는 것은 상기 조작된 T 세포의 T 세포 기능 및 활성을 회복함으로써 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양 예를 들어 NHL을 치료하기 위한 CAR-발현 세포의 상기 활성을 증가시킬 수 있으며, 일부 측면에서는 그의 세포 자율 항종양 효과를 나타낼 수도 있다. 일부 측면에서, DLBCL 대상체로부터 생성된 CAR+ T 세포는 연속 자극 후에 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 존재하에 증가된 세포 용해 기능을 나타내었다. 일부 측면에서, 맨틀 세포 림프종(MCL)에 대해 투여된 CAR+ T 세포의 항-종양 활성이 개선되는 것으로 관찰되었으며 특정 상황에서 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 감소가 관찰되었다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 T 세포 요법제의 활성 및/또는 기능을 조절하기 위해 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 하루에 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유효량은 (대략) 140 mg/day 내지 (대략) 560 mg/day이다. 일부 구현예에서, 상기 양의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 매일 투여된다. 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 상기 투여는 일정 기간 동안, 예를 들어 일반적으로는 1주 이상 동안, 예를 들어 1개월 이상 동안, 2개월 이상 동안, 3개월 이상 동안 4개월 이상 동안, 5개월 이상 동안, 6개월 이상 동안, 7개월 이상 동안 또는 8개월 이상 동안 수행된다. 예시적인 투여 섭생 요법이 본원에 기술된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 조작된 T 세포의 투여 개시 전의 시점에서 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 조작되는 T 세포가 대상체로부터 수득되기 전에, 예를 들어 성분채집술 또는 백혈구성분채집술 전에 개시된다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시는 성분채집술 또는 백혈구성분채집술 전 적어도 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1일이다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 조작된 T 세포의 투여 후까지 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 조작된 T 세포의 투여 후까지 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 후 중증 독성을 나타내지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나 독성 또는 독성 결과의 비율 또는 가능성, 신경독성(NT), 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 혈액 학적 독성, 예를 들어 호중구 감소증을 특정 다른 세포 요법 또는 면역 조절 약물 요법에 비해 감소시킨다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 섭씨 약 38도 이상의 발열 및 적어도 약 20 mg/dL의 혈장 CRP 수준을 유발하지 않거나 위험을 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상 초과가 임의의 등급의 CRS 또는 임의의 등급의 신경독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료된 상기 대상체의 50% 이하(예를 들어 치료된 상기 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)이 등급 2 초과의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 등급 2 초과의 신경독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료된 상기 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)이 중증 독성 결과(예를 들어 중증 CRS 또는 중증 신경독성)을 나타내지 않으며, 예를 들어 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않고/않거나 중증 CRS를 나타내지 않거나, 또는 상기 치료 후 일정 기간 이내에, 예를 들어 상기 세포의 투여의 1주, 2주, 또는 1개월 이내에 그렇게 나타내지 않는다.
일부 경우에, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 그것이 상기 세포를 효율적으로/효과적으로 부스팅(boost) 또는 프라이밍(prime)할 수 있는 때에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제를 강화할 수 있으며, 일부 측면에서는 치료 결과를 개선시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 상기 세포가 약한 증폭을 나타내는 대상체에서 특히 유리하며, 고갈되고, 상기 대상체에서 및/또는 다른 요법제에 내성이거나 또는 불응성인 암을 갖는 대상체에서 감소된 또는 줄어든 지속성을 나타낸다.
일부 구현예에서, T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포가 투여된 대상체는, 대상체의 생물학적 샘플 예를 들어 대상체의 혈액에서와 같이, 대상체에서 상기 요법의 T 세포의 존재, 부재 또는 수준에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 그것이 투여되는 대상체에서 증가된 지속성 및/또는 더 나은 효능을 갖는 유전자 조작된 세포를 생성한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체에서 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 지속성은, 대안 방법, 예를 들어 상기 T 세포 요법제의 투여를 포함하지만 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하의 투여를 포함하는 것에 의해서 성취되는 것에 비해서 증가한다. 일부 구현예에서, 지속성은 적어도 또는 약 적어도 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 20배, 30배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배 이상 증가한다.
일부 구현예에서, 투여된 세포의 지속성의 정도(degree 또는 extent)는 대상체에게 투여 후 검출 또는 정량될 수 있다. 예를 들어 일부 측면에서, 정량적 PCR (qPCR)을 이용하여 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 장기 또는 조직 (예를 들어 병소)에서 재조합 수용체(예를 들어 CAR-발현 세포)를 발현하는 세포의 양을 추정한다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA, 예를 들어 샘플로부터 얻어진 총 DNA의 마이크로그램당 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 복제물 또는, 예를 들어 혈액 또는 혈청 샘플의 마이크로리터당 또는 말초 혈액 단분자 세포(PBMC) 또는 백혈구의 총수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 또는 샘플의 마이크로리터당 T 세포의 수로서 정량화된다. 일부 구현예에서, 일반적으로, 수용체에 특이적인 항체를 사용하여, 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유동세포 계측 분석을 또한 수행할 수 있다. 또한, 세포 기반 분석을 사용하여, 질병 또는 질병의 세포와 결합할 수 있고/있거나, 이에 대한 반응, 예를 들어 세포독성 반응을 중화시킬 수 있고/있거나, 유도할 수 있거나, 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현할 수 있는 세포와 같은 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출할 수 있다. 이러한 구체예 중 임의의 것에 있어서, 재조합 수용체와 결합된 또 다른 마커 (예를 들어 CAR-발현 세포)의 발현의 정도 또는 수준을 사용하여, 대상체에서 내인성 세포와 투여된 세포를 구별할 수 있다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 반응의 듀러빌러티(durability of response)를 증강시키거나, 증가시키거나 또는 최적화시키는 기간 동안 투여된다. 일부 측면에서, 상기 제공된 방법은 상기 T 세포 요법제의 투애 개시 후 3개월, 예를 들어 일반적으로 6개월에 완전 완화(complete remission) 또는 완전 반응(CR)이거나 그것을 성취하는 관찰에 기초하며, 상기 반응을 장기간 지속하며, 예를 들어 상기 치료를 종료한 후 또는 상기 조합 요법제의 투여 후 완전 반응(CR)을 처음 성취한 후 (약) 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 1 개월 또는 12개월 이상 동안 생존하거나 또는 진행없이 진행없이 생존할 가능성이 높다. 일부 측면에서, 상기 방법은 예를 들어 기술된 특정 주기의 섭생으로, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 3개월, 예를 들어 적어도 4개월, 적어도 5개월 또는 적어도 6개월인 기간 동안 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하도록 수행된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 예를 들어 기술된 특정 주기의 섭생으로, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 6개월 또는 적어도 180일동안 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 기간의 종료시에, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 CR을 나타내거나 또는 상기 질병 또는 병태가 상기 치료(조합 요법)을 받은 후 완화 후에 상기 대상체에서 진행하였거나 또는 재발하였을 경우에 종료 또는 중단된다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여는, 상기 기간(예를 들어 (약) 6개월)의 종료시에 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 대상체에서 수행될 수 있다. 다른 측면에서, 상기 기간은 고정된 기간이며 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 추가 투여가 수행되지 않는다.
일부 측면에서, 상기 제공된 방법 및 용도는 특정한 대안 방법, 예를 들어 치료된 특정 그룹의 대상체에서, 예를 들어 단독 요법으로서 또는 본원에 기재된 바와 같이 조합 요법으로서 투여 없이 상기 T 세포 요법제 또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 포함하는 방법과 비교하여 개선되거나 또는 보다 듀러블한 반응을 제공하거나 또는 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 입양 세포 요법제을 위한 세포, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포), 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 조성물에 의해서 유리하다. 일부 구현예에서, 상기 반응은 예후가 좋지 않은 고위험 환자, 예를 들어 고위험 NHL과 같은 고위험 질환 환자에서 관찰된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 공격적인 및/또는 불량한 예후 B 세포 비-호지킨 림프종(NHL), 예를 들어 재발하였거나 표준 요법에 불응성(R/R)이거나 예후가 좋지 않은 NHL의 형태를 갖는 대상체를 치료한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체는 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 또는 여포성 림프종(FL)을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 이용하여 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 또는 적어도 75% 이상은 완전 반응(CR)을 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 CR 중에 있으며 최소 잔류 질병(MRD)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 CD 중에 있으며 MRD-이다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 이용하여 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%는 부분 반응(PR)의 객관적 반응을 성취한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 이용하여 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 이상은 상기 세포 요법제의 투여 후 6개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 1년에 CR 또는 PR을 성취한다.
일부 구현예에서, 상기 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월까지 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 이용하여 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 이상은 반응에서 유지되며, 예를 들어 CR 또는 객관적 반응(OR)에서 유지된다. 일부 구현예에서, 상기 반응, 예를 들어 CR 또는 OR은, 예를 들어 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 이상에서 또는 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월까지 CR을 성취한 대상체에서 적어도 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월 이상 동안 듀러블(durable)하다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물을 이용하여 치료된 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 이상, 또는 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월까지 CR을 성취한 대상체는 생존하거나 또는 (약) 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월 이상 동안 진행없이 생존한다.
또한 본 발명에 따라 세포의 조작, 제조 및 생산을 위한 방법, 세포 및/또는 억제제를 함유하는 조성물, 및 예를 들어 제공된 조합 요법에 따라 세포 및/또는 억제제를 함유하고 이를 이용, 생산 및 투여하기 위한 키트 및 제조 물품이 제공된다.
본 출원에 언급된 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 간행물은 각각의 개별 간행물이 참조로 개별적으로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 참조로 그 내용 전체가 통합된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개 출원 및 기타 간행물에 기재된 정의와 상반되거나 불일치하는 경우, 참조로 본원에 포함된 정의보다 본원에 제시된 정의가 우선한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 단지 정리 목적을 위한 것이며 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 아니된다.
I. 조합 요법
본 발명에 따라 1) 키나제 억제제 및 2) 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 질병 또는 장애 예를 들어 암 또는 증식성 질병을 치료하기 위한 조합 요법을 위한 방법이 제공된다. 또한, 조작된 세포, 예를 들어 T 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및 TEC 패밀리 키나제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제제의 방법 및 용도가 제공된다. 일부 측면에서, 상기 억제제는 브루톤 티로신 키나제(BTK) 및/또는 IL-2 유도성 T-세포 키나제(ITK), 예를 들어 이브루티닙의 억제제이다. 일부 측면에서, 상기 억제제는 구조식
Figure pct00010
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 입체 이성질체, 호변 이성질체 또는 라세미 혼합물을 가지며, 암을 갖는 대상체를 치료하기 위한 그의 조성물을 포함한다.
예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 상기 조합 요법제, 또는 본원에서 기술된 상기 조작된 세포 및/또는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 조성물은 다양한 치료, 진단 및 예방 적응증에서 유용하다. 예를 들어 상기 조합들은 대상체에서 다양한 질병 및 장애를 치료하는데 유용하다. 상기 방법 및 용도는 질병, 병태, 또는 장애, 예를 들어 종양 또는 암을 갖는 대상체에게 예를 들어 상기 조작된 세포, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및/또는 하나 또는 둘을 함유하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 조작된 세포, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및/또는 하나 또는 둘을 함유하는 조성물이 상기 질병 또는 장애의 치료를 수행하는 유효량으로 투여된다. 용도는 상기 치료적 방법을 수행하기 위해서 상기 조작된 세포, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및/또는 하나 또는 둘을 함유하는 조성물의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 질병 또는 병태를 갖거나 갖는 것으로 의심되는 상기 대상체에게 상기 조작된 세포, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및/또는 하나 또는 둘을 함유하는 조성물을 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 그에 의해서 상기 대상체에서 상기 질병 병태 또는 장애를 치료한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체를 치료하기 위한 것이다. 일부 측면에서, 상기 방법은 백혈병 또는 림프종, 예를 들어 비호 지킨 림프종(NHL)을 치료하기 위한 것이다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 특정 대안 방법과 비교하여 예를 들어 치료된 대상체의 그룹에서 개선된 반응 및/또는 보다 듀러블한 반응 또는 효능을 제공하거나 또는 성취한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 질병 또는 장애 예를 들어 암 또는 증식성 질병과 관련된 항원을 특이적으로 인식하거나 및/또는 표적화하는 T 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또한 T 세포 요법제를 포함하는 조성물 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 조성물을 포함하는 키트와 같은 제조 물품 및 조합물, 그리고 암을 비롯한 질병, 질병 상태 및 장애를 치료 또는 예방하기 위한 그러한 조성물 및 조합물의 용도도 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, (1) 상기 대상체에게 유전자 조작된 세포 표면 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 수용체는 일반적으로, 상기 B 세포 악성 종양, 예를 들어 백혈병 또는 림프종 (예를 들어 NHL)에 의해서 발현되고/되거나, 그와 관련되고/되거나 그에 특이적인 항원을 인식하는, 키메라 수용체 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)임; 및 (2) 상기 대상체에게 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을를 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 일반적으로 상기 세포의 하나 이상의 용량 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 하나 초과의 용량을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법은, 상기 대상체에게 치료적 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙 및 상기 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법은, 상기 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 개시 전에, 그에 이어서, 그 과정동안, 그와 동시에, 그와 거의 동시에, 순차적으로, 병행하여 및/또는 간헐적으로 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 구현예는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함하고 상기 T 세포 요법제의 투여 개시까지 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후에 계속한다. 일부 측면에서, 상기 제공된 구현예는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙를 사용한 연장된 치료, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 연장된 사전 치료를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 다중 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 T 세포 요법의 개시 후에 계속 또는 추가 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 용량 스케쥴은 상기 T 세포 요법의 개시 전 및 후에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 용량 스케쥴은 상기 T 세포 요법과 동시에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 방법은 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 포함하며, 이것은, 예를 들어 투여를 위한 T 세포 요법제를 생산하기 위해서, 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일에 개시된다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는, 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 생산된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 구조식
Figure pct00011
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 키나제 억제제를 투여하는 단계; 및 (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제(autologous T cell therapy)를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 질병 또는 장애와 관련된 항원, 예를 들어 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함함;을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리하고, 상기 처리는, 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 구조식
Figure pct00012
을 갖는 키나제 억제제, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; (2) 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, 질병 또는 장애와 관련된 항원, 예를 들어 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 단계; 및 (3) 상기 대상체에게 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하는 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계;를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 상기 화합물의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 화합물의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 구조식
Figure pct00013
을 갖는 키나제 억제제, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; 및 (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 질병 또는 장애와 관련된 항원, 예를 들어 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함함;을 포함한다. 일부 경우에, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산을 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 제조되되, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는, 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 구조식
Figure pct00014
을 갖는 키나제 억제제, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하되, 상기 대상체는 치료를 위한 후보이거나 또는 상기 대상체에게 T 세포 요법제로 치료되는 것이다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 질병 또는 장애와 관련된 항원, 예를 들어 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산을 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 제조된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 또한 상기 대상체에게 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 도입시킨 상기 대상체로부터 수득된 T 세포를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체로부터 샘플을 수득하는 것은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 채혈 제품 또는 백혈구 채취 제품이거나 또는 그들을 포함하는 샘플을 수득하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체로부터 샘플을 수득하는 것은 또한 성분채집술(apheresis) 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis)이라고도 부른다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제로 사전 컨디셔닝되었다. 일부 측면에서, 상기 림프구고갈 요법제는 본원에서, 예를 들어 섹션 I.C에서 기술된 임의의 림프구고갈 요법제이거나 또는 그를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 림프구고갈 요법제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 섭생 요법은 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함한다.
상기 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 림프구고갈 요법동안 중단 또는 중지된다. 일부 구현예에서, 상기 중단은 일시적인 중단, 예를 들어 투여의 일시적인 중지 또는 일시적인 중단일 수 있다. 상기 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 림프구고갈 요법 후에 선택적으로 재개될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은, 상기 림프구고갈 요법 후에, 추가 투여되거나 또는 상기 투여가 재개된다. 일부 구현예에서, 림프구고갈 요법 및/또는 중단 또는 중지 전에, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 초기 투여의 용량, 빈도, 스케쥴, 또는 섭생은 림프구고갈 요법 및/또는 중단 또는 중지 후의 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 추가 투여 또는 재개 투여의 용량, 빈도, 스케쥴, 또는 섭생과 동일하다. 일부 구현예에서, 림프구고갈 요법 및/또는 중단 또는 중지 전에, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 초기 투여의 용량, 빈도, 스케쥴, 또는 섭생은 림프구고갈 요법 및/또는 중단 또는 중지 후의 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 추가 투여 또는 재개 투여의 용량, 빈도, 스케쥴, 또는 섭생과 상이하다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하기 위한 상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 상기 키나제 억제제의 투여, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여 중단 및, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일, 예를 들어 적어도 15, 30, 60, 90, 120, 150 또는 180일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 요법은 입양 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 종양 침윤 림프구(TIL) 요법, 트랜스제닉 TCR 요법 또는 선택적으로 키메라 항원 수용체(CAR)-발현 세포 요법인 재조합-수용체 발현 세포 요법(선택적으로 T 세포 요법)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 CD19를 표적으로 하거나 또는 B 세포 표적화된 요법이다. 일부 구현예에서, 세포 및 세포를 투여하기 위한 투여계획은 본원에 기술된 임의의 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 TEC 패밀리 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK), IL-2 유도성 T-세포 키나제(ITK), 테크 단백질 티로신 키나제(tec protein tyrosine kinase; TEC), 염색체 X 단백질(chromosome X protein; BMX) 비-수용체 티로신 키나제(상피 및 내피 티로신 키나제로도 불리움; ETK) 및 TXK 티로신 키나제(TXK)을 포함하는, 상기 TEC 패밀리의 하나 이상의 키나제를 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제이다. 일부 구현예에서 상기 억제제를 투여하기 위한 상기 세포 및 투여 섭생 요법은 본원에서 기술된 임의의 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-T 세포 요법제), 및 억제제가 대상체에 투여하기 위한 약학 조성물로서 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 약학 조성물은 예를 들어 입양 세포 요법을 위한 T 세포 및 전술한 억제제와 같은 조합 요법을 위한 상기 제제들 중의 하나 또는 둘 다를 치료적 유효량으로 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 제제들은 별도의 약학 조성물로 투여하기 위해 제형화된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 상기 약학 조성물 중의 어느 것이 각 투여 경로에 적합한 용량형으로 제형화될 수 있다.
일부 구현예에서, 면역 요법제(예를 들어 조작된 세포, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제를 비롯한 T 세포 요법제), 및 억제제를 투여하는 것을 포함하는 조합 요법을 치료하고자 하는 질병 또는 병태(예를 들어 암)에 걸려 있거나 또는 질병 또는 병태(예를 들어 암)에 걸릴 위험이 있는 대상체 또는 환자에게 투여한다. 일부 측면에서, 이 방법은, 면역요법 또는 면역요법제에 의해 인식된, 예를 들어 조작된 T 세포에 의해 인식된 항원을 발현하는 암에 있어서 종양 부담을 경감시키는 것과 같이, 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상을 치료, 예를 들어 완화시킨다.
일부 구현예에서, 치료되는 질병 또는 병태는 항원의 발현이 질병, 질병 상태 또는 장애와 관련되거나 및/또는 병인과 연관이 있거나, 예를 들어 그러한 질병, 질병 상태, 또는 장애를 일으키거나, 악화시키거나 또는 달리 연관되는 것들이다. 예시적인 질병 및 질병 상태는 악성종양 또는 세포의 형질전환(예를 들어 암), 자가면역 또는 염증성 장애, 또는 예를 들어 세균, 바이러스 또는 다른 병원체에 의해 일어나는 감염성 장애와 관련된 질병 또는 장애 상태를 포함할 수 있다. 예시적인 항원으로는 치료될 수 있는 다양한 질병 및 장애 상태와 관련된 항원을 들 수 있고, 여기에는 본 발명에 설명된 임의의 항원들이 포함된다. 특정 구현예에서, 키메라 항원 수용체 또는 트랜스제닉 TCR을 비롯하여, 조합 요법의 조작된 세포 상에서 발현되는 재조합 수용체는, 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 종양, 예를 들어 고형 종양, 림프종, 백혈병, 혈액 종양, 전이성 종양, 또는 기타 암 또는 종양 유형이다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 특정한 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에게 투여된다. 치료되는 상기 B 세포 악성 종양은, 항원의 발현이 상기 B 세포 악성 종양의 병인(etiology), 예를 들어 원인(causes), 악화(exacerbates)와 관련되고/되거나 그에 수반되거나 또는 그렇지 않으면 상기 B 세포 악성 종양에 수반되는 임의의 것일 수 있다. 예시적인 B 세포 악성 종양은 세포의 악성 또는 형질 전환(예를 들어 암)과 관련된 질병 또는 병태를 포함할 수 있다. 치료되는 다양한 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 포함하는 예시적인 항원이 본원에서 기술된다. 특정 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 상기 질병 또는 병태와 관련된 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체에 의해서 표적화된 항원은 B 세포 악성 종양, 예를 들어 임의의 다수의 공지된 B 세포 마커와 관련된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 인간 B 세포를 비롯한 B 세포에 의해서 또는 그 위에서 발현된다. 일부 구현예에서, 상기 수용체에 의해서 표적화된 상기 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30이다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 CD19이며 상기 키메라 항원 수용체는 CD19를 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 CD19 항원은 인간 CD19이다.
일부 구현예에서, 치료되는 상기 B 세포 악성 종양은 백혈병, 및 림프종, 예를 들어 급성 골수(또는 골수성) 백혈병(AML), 만성 골수(또는 골수성) 백혈병(CML), 급성 림프구(또는 림프구성) 백혈병(ALL), 만성 림프구 백혈병(CLL), 털세포 백혈병(HCL), 작은 림프구성 림프종(SLL), 맨틀 세포 림프종(MCL), 한계 영역 림프종, 버킷 림프종, 호지킨 림프종(HL), 비-호지킨 림프종(NHL), 퇴행성 거대세포 림프종(ALCL), 여포성 림프종(FL), 불응성 여포성 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 및 다발성 골수종(MM)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 이에 제한되지는 않는다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 급성 림프모구 백혈병(ALL), 성인 ALL, 만성 림프모구 백혈병(CLL), 비-호지킨 림프종(NHL) 및 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL) 중에서 선택된 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 질병 또는 상태는 NHL이고, NHL은 공격적인 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), NOS(인돌런트 림프종으로부터 신생 및 변형된), 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL), T 세포/조직세포-농축 거대 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 항원 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포) 및 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여함으로써 림프종 또는 백혈병, 예를 들어 비-호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시는 상기 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포)의 투여 전에, 예를 들어 상기 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포)의 투여 개시 전에 이루어진다.
일부 구현예에서, NHL은 Lugano 분류법에 따라 단계화될 수 있다[예를 들어 문헌 「Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5」 참조]. 일부 경우에, 단계는 로마 숫자 I 내지 IV (1-4)으로 기재되며, 림프계 외부의 장기(결절외 장기)에 영향을 미치는 제한된 단계 (I 또는 II) 림프종은 E로 나타낸다. 단계 I은 하나의 결절 또는 인접한 결절의 그룹의 침범, 또는 결절 침범(IE) 없는 단일 결절외 병변을 나타낸다. 단계 2는 횡격막의 동일한 측면에서 둘 이상의 결절 그룹의 침범 또는 제한적인 인접 결절외 침범(IIE)을 가지는 결절 정도에 의한 단계 I 또는 II를 나타낸다. 단계 III은 횡격막 양쪽 결절 또는 비장 침범을 가지는 횡격막 위의 결절의 침범을 나타낸다. 단계 IV는 추가의 비연적인 림프절외 침범의 침범을 나타낸다. 또한, "거대 질병(bulky disease)"은 특히 단계 II에서 흉부의 거대 종양을 나타내는데 사용될 수 있다. 질병의 정도는 친화성 림프종에 대한 양전자 방출 단층촬영 (PET)-컴퓨터 단층촬영 (CT), 및 비-친화성(non-avid) 조직학에 대한 CT에 의해 결정된다.
일부 구현예에서, Eastern Cooperative Oncology Group(ECOG) 전신 상태 지표는 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법으로부터 열악한 신체를 가지는 대상체를 평가 또는 선별하기 위해 사용될 수 있다[예를 들어 문헌 「Oken et al. (1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 1 이하의 ECOG 상태를 갖는다. 전신 상태의 ECOG 등급은 환자 자신의 치료 능력, 일상 활동, 및 신체 능력(예를 들어 걷기, 일 등)에 대한 측면에서 환자의 기능 수준을 나타낸다. 일부 구현예에서, ECOG 전신 상태 0은 대상체가 일반적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 구현예에서, ECOG 전신 상태가 1인 대상체는 신체적 활동에 일부 제한을 나타내지만 대상체는 충분히 보행가능(fully ambulatory)하다. 일부 구현예에서, ECOG 전신 상태가 2인 환자는 50% 초과가 보행가능하다. 일부 경우에, ECOG 전신 상태가 2인 대상체는 또한 자기관리(selfcare)를 할 수 있으며; 예를 들어 문헌 「Sørensen et al., (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775」을 참조한다. ECOG 전신 상태를 반영하는 기준은 하기 표 1에 기재되어 있다.
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일부 구현예에서, 대상체는 이중/삼중 유전자이상 림프종 또는 이중/삼중 유전자이상 분자 서브유형의 림프종을 가지거나 또는 가지는 것으로 식별되었다.　 일부 구현예에서, 림프종은 MYC(골수세포증 종양유전자), BCL2(B-세포 림프종 2), 및/또는 BCL6(B-cell 림프종 6) 유전자 재배열(예를 들어 전좌)의 존재를 특징으로 하는 이중 유전자이상 림프종이다. 　일부 구현예에서, 림프종은 MYC, BCL2, 및 BCL6 유전자 재배열의 존재를 특징으로 하는 삼중 유전자이상 림프종이며; 예를 들어 문헌 「Aukema et al., (2011) Blood 117:2319-2331」을 참조한다. 이러한 구현예의 일부 구현예에서, 대상체는 ECOG 0-1이다. 이러한 양태에서, 요법은 이러한 대상체에 대해 지시되고 및/또는 설명서는 이러한 집단 내의 대상체에게 투여를 지시한다. 일부 구현예에서, 2016 WHO 기준에 따라(문헌 「Swerdlow et al., (2016) Blood 127(20):2375-2390」), 이중/삼중 유전자이상 림프종은, DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자이상) 고급 B-세포 림프종으로 간주될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 반응자(responder)이거나 또는 반응자일 가능성이 있거나 또는 불량한 반응자일 것으로 예상되고/되거나 특정 시간 내에 및/또는 세포 요법제(예를 들어 CAR+ T 세포)를 사용한 특정 정도에 반응할 것으로 예상되지 않거나 또는 반응하지 않는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 예를 들어 세포 요법제의 투여 개시 후 1개월 이내에, 2개월 또는 3개월 이내에 완전 반응 또는 총괄 반응을 나타내지 않거나 또는 나타내지 않을 가능성이 있거나 나타낼 것으로 예상되지 않는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 예를 들어 상기 세포 요법제의 투여 후 1개월 이내에, 2개월 또는 3개월 이내에 진행성 질병(progressive disease; PD)을 나타내거나 또는 나타낼 가능성이 있거나 나타낼 것으로 예상되는 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 상기 세포 요법제로 치료되거나 또는 사전에 치료된 복수의 유사한 상황에 처한 대상체에 기초하여 반응 또는 특정 반응을 나타낼 가능성이 있거나 또는 나타내지 않을 것으로 예상된다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 대상체, 예를 들어 고위험성 질병, 예를 들어 고위험성 NHL을 가지는 것으로 식별된 대상체의 특정 그룹 또는 서브세트를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 공격적인 및/또는 예후가 나쁜 B-세포 비-호지킨 림프종(NHL), 예를 들어 표준 요법에 대해 재발성을 가지거나 또는 불응성(R/R)이거나 예후가 나쁜 NHL의 형태를 가지는 대상체를 치료한다. 일부 경우에, 요법이 지시되는 질병 및/또는 환자 집단에 대한 이용가능한 요법, 주의 기준, 또는 기준 요법에 대한 전체 반응률(ORR)이 40% 미만이고, 및/또는 완전 반응(CR)이 20% 미만이다. 일부 구현예에서, 화학요법-불응성 DLBCL에서, 기준 또는 이용가능한 치료 또는 주의 기준(standard-of-care) 요법으로의 ORR은 약 26%이고 CR 비율은 약 8%이다[문헌 「Crump et al. Outomes in refractory aggressive diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL): Results from the international SCHOLAR study. ASCO 2016 [Abstract 7516])」참조]. 일부 구현예에서, 제공된 방법, 조성물, 용도 및 제조 물품은 이용가능한 요법에 대해 개선된 및 우수한 반응을 달성한다.
일부 구현예에서, 본원에서 기술된 대상체의 치료를 위한 상기 방법 및 용도는 예를 들어 특정 유형의 질병, 진단 기준, 사전 치료 및/또는 사전 치료에 대한 반응에 기초하여, 대상체의 특정 그룹 또는 서브세트를 포함, 선별 또는 식별하는 단계를 대상체의 치료에 포함하거나, 이를 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 선행 요법으로의 치료 이후 완화에 뒤이어 재발성을 가지거나, 이에 불응성이 되는 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 1차 이상의 표준 요법에 재발성을 가지거나 불응성(R/R)인 대상체를 치료하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 1회, 2회, 3회, 4회, 5회 또는 6회 이상의 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 1회의 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 약 2회 내지 4회의 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 약 5회 내지 6회의 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 6회 이상의 사전 치료를 받았다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 투여 전에 B 세포 악성 종양을 표적화하는 치료제 또는 치료제, 예를 들어 NHL로 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 세포 요법제(예를 들어 CAR+ T 세포)로 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어 동종 HSCT 또는 자가 HSCT로 사전 치료를 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 표준 요법을 이용한 치료 후 예후가 좋지 않았고/않았거나 하나 이상의 라인의 사전 요법을 실패하였다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 림프구고갈 요법 이외의 NHL을 치료하기 위한 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7개의 요법으로 치료 받았거나 사전에 치료 받았다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 화학 요법제 또는 방사 요법제로 사전 치료를 받았다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 상기 다른 요법 또는 치료제에 불응성이거나 또는 비-반응성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 예를 들어 화학 요법 또는 방사선을 포함하는 다른 요법 또는 치료적 개입으로 치료한 후 지속성 또는 재발성 질환을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 사전 치료가 징행된 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 사전 요법에 대한 반응이 중단된 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 사전 치료 후 완화 이후 재발한 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 사전 치료에 불응성인 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 사전 치료에 최적 반응(예를 들어 완전 반응, 부분 반응 또는 안정적 반응) 보다 낮은 반응을 갖는 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 최종 사전 요법에 불응성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 최종 사전 요법에 재발성을 갖는다. 최종 사전 치료에 대해 부분 반응보다 적게 달성하는 경우 그 상태는 불응성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 사전 화학요법을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 사전 화학 요법에 화학적 불응성(chemorefractory)이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 사전 요법에 화학적 민감성(chemosensitive)이다. 대상체가 최종 화학 요법제-함유 섭생에 대해 안정적 질병(SD) 또는 진행성 질병(PD)에 도달하거나 또는 자가 줄기세포 이식 후 12개월 미만에 재발한 경우의 상태가 화학적 불응성이다. 그렇지 않은 경우 화학적 민감성이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 B 세포 악성 종양 또는 혈액 악성 종양(hematological malignancies), 및 특히 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포, 또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 단독으로 또는 본원에 제공된 조합 요법과 병용하는 것이 아닌 것으로 사용한 치료에 대한 반응, 예를 들어 완전 반응이 다른 B 세포 악성 종양의 유사한 치료에서 또는 다른 대상체에서와 비교하여 전체적으로 만족스럽지 못하거나 비교적 낮은 상기 악성 종양을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 악성 종양은, 단독으로 또는, 본원에서 제공되는 조합 요법제와 구별되고/되거나 키나제 억제제계 요법제, 예를 들어 이브루티닙계 요법제와의 조합이 아닌 또다른 조합으로 투여될 때, 면역 요법제 또는 면역 치료제, 예를 들어 입양 세포 요법용 세포(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 포함하는 조성물을 사용한 치료가 그렇게 치료된 상기 대상체의 (약) 60% 미만, 약 50% 미만 또는 약 45% 미만에서 CR을 결과하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체 및/또는 상기 B 세포 악성 종양은, 상기 억제제 및/또는 키나제 억제제 요법제, 예를 들어 이브루티닙 요법제를 사용한 치료에 비-반응성이고/이거나 불응성 또는 내성인 것으로 간주되는 것이고, 공격적인 또는 고위험성 암이고/이거나 상기 억제제 및/또는 키나제 억제제 요법제, 예를 들어 이브루티닙 요법제를 사용한 치료 후 불량한 예후 및/또는 불량한 결과를 나타내는 하나 이상의 특징(예를 들어 마커)를 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에서 제고오딘 상기 조합 요법은, 상기 제공된 조합 요법의 시점에서, 예를 들어 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여 시점 및 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 시점에서, 상기 대상체가 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법제를 사용한 사전 치료에 비-반응성이고/이거나 불응성 또는 내성인 것으로 간주되는 암을 갖는 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제 및 면역 요법제를 사용한 상기 제공된 조합 요법은, 상기 조합 요법의 개시시점에서, 상기 대상체가 상기 사전 억제제의 투여 후이지만 T 세포(예를 들어 CAR-T 세포)를 포함하는 요법제의 부재하에 진행 중이며, 예를 들어 최상의 반응으로서 진행성 질병(PD)을 갖거나, 또는 사전 치료 후 진행 중인 질변을 갖는 질병 또는 병태, 예를 들어 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에서 수행된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-T 세포)를 사용한 상기 제공된 조합 요법은, 상기 제공된 조합 요법의 개시 시점에서, 상기 대상체가 적어도 6개월 동안 상기 억제제 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사전에 투여 받은 후 완전 반응(CR) 미만의 반응을 갖는 질병 또는 병태, 예를 들어 B 세포 악성 종양을 갖는 대상체에서 수행된다.
일부 측면에서, 상기 제공된 조합 요법으로 치료를 위한 상기 대상체는 상기 질병 또는 병태의 하나 이상의 고위험 특징을 나타내거나 나타내는 것으로 확인되고/되거나 공격적인 질병 또는 불량한 예후 또는 결과와 관련된 질병을 나타낸다. 일부 측면에서, B 세포 악성 종양, 예를 들어 림프종 또는 백혈병, 예를 들어 CLL 또는 SLL의 고 위험성 특징들은 상기 질병의 중증도 또는 예후인 하나 이상의 분자 마커, 예를 들어 하나 이상의 유전자 마커의 존재를 포함한다[예를 들어 문헌 「Parker and Strout (2011) Discov. Med., 11:115-23」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 예를 들어 형광 동소 혼성화(fluorescence in situ hybridization; FISH)에 의해서 탐지되는, 하나 이상의 유전학적 이상, 예를 들어 예를 들어 2개 또는 3개 이상의 염색체 이상, 예를 들어 17p 결실, 11q 결실, 삼중 염색체 12(trisomy 12), 및/또는 13q 결실을 갖거나 또는 갖는 것으로 확인된 B 세포 악성 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는, 예를 들어 단일 뉴클레오티드 어레이(single nucleotide array; SNP)-어레이 기반 방법, 변성 고성능 액체 크로마토그래피(DHPLC), 효모 중의 분리된 대립 유전자의 기능 분석(functional analysis of separated alleles in yeast; FASAY)을 사용하거나 또는 직접 시퀀싱(sequencing) 또는 다음 생성 시퀀싱 방법을 포함한 시퀀싱에 의해서 평가되는, 하나 이상의 유전자 돌연변이, 예를 들어 TP53 돌연변이, NOTCH1 돌연변이, SF3B1 돌연변이 및 BIRC3 돌연변이를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인된 B 세포 악성 종양을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 돌연변이되지 않은 면역글로불린 중쇄 가변 영역(IGHV)을 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인된 B 세포 악성 종양을 갖는다. IGH의 상기 가변 영역의 돌연변이 상태는 돌연변이되지 않은 것(제름라인(germline)과 비교하여 2% 미만(＜))이 공격적인 질병과 관련되는 예후 가치(prognostic value)를 갖는다[문헌 「Hamblin, Best Pract. Res. Clin. Haematol. 20:455-468 (2007)」 참조]. 유세포 분석으로 평가된 CD38 및 ZAP70 발현은 IGH 돌연변이 상태의 대리물로 간주된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 3개 이상의 염색체 이상, 17p 결실, TP53 돌연변이 및/또는 돌연변이되지 않은 IGHV를 포함하는 고위험 특징을 나타내는 B 세포 악성 종양을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 조합 요법은, 대상체 및/또는 암이 BTK의 억제에 내성이거나 상기 ddjr제제에 의한 억제에 내성인 세포의 집단을 포함하는 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 표적 키나제, 예를 들어 BTK에서, 또는 상기 대상체가 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법에 대한 치료에 내성을 갖게 하는 상기 표적 키나제의 경로의 다운스트림 분자에서 돌연변이를 나타낸다. 대상체가 BTK 억제제 또는 TEC 패밀리 키나제의 또다른 억제제를 사용한 치료에 내성이거나 또는 불응성이 되게 하는 돌연변이는 공지되어 있다[문헌 「Woyach et al. (2014) N Engl J. Med. 370:2286-94」 및 「Liu et al. (2015) Blood, 126:61-8」 참조]. 일부 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 조합 요법은, 대상체 및/또는 암이 BTK를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이 또는 붕괴(disruption), 예를 들어 상기 억제제, 예를 들어 이브루티닙에 의해서 상기 BTK의 억제를 감소 또는 방지할 수 있는 돌연변이를 포함하는 암을 갖는 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 BTK의 상기 C481S 돌연변이를 함유한다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공된 상기 조합 요법은, 대상체 및/또는 암이 PLCγ2를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이 또는 붕괴, 예를 들어 자가 신호 전달(autonomous signaling)로 이어질 수 있는 기능 돌연변이의 이득(gain of function mutation)을 포함하는 암을 갖는 대상체에서 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 PLCγ2 중에 상기 R665W 및/또는 L845F를 함유한다.
일부 경우에, 상기 암을 치료하기 위해 하나 이상의 사전 요법, 예를 들어 적어도 2개 또는 3개의 사전 요법으로 치료한 후, 상기 대상체는 완전 반응(CR)을 성취하지 않으며, 안정적 또는 진행성 질병을 갖고/갖거나 상기 하나 이상의 사전 요법제에 대한 반응 후 재발하였다. 일부 구현예에서, 상기 사전 요법 중의 적어도 하나는 상기 억제제 또는 BTK 억제제 요법제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 사전 치료였다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 CR 보다 덜한 반응으로 적어도 6개월 동안 상기 억제제 또는 BTK 억제제 요법제를 투여 받았고/받았거나 고위험 특징들 예를 들어 복잡한 세포 유전학적 이상(3개 이상의 염색체 이상), 17p 결실, TP53 돌연변이 또는 돌연변이되지 않은 IGHV를 나타낸다.
일부 구현예에서, 특정 암, 예를 들어 NHL, 예를 들어 고-위험 또는 공격적인 NHL, 예를 들어 DLBCL, 및/또는 만성 림프구성 백혈병(CLL)이 내인성 T 세포 기능의 결함 또는 감소와 관련될 수 있으며, 이것은 일부 경우에 상기 질병 자체에 의해서 영향받는다. 예를 들어 다수의 암, 예를 들어 CLL 및 NHL, 예를 들어 DLBCL의 병인은 예를 들어 상기 종양 미세환경에서 하나 이상의 인자에 의해서 유도되는, T 세포의 면역 억제에 기인한, 종양 성장 및 면역 회피의 촉진을 유발하는 면역결핍과 관련될 수 있다. 일부 경우에, 입양 세포 요법과 관련하여 사용하기 위해 상기 환자의 암에서 수득된 고유의 T 세포 결함을 완화하면 입양 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제에 대한 보다 강력한 반응을 제공할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은, 상기 대상체의 T 세포가, T 세포의 참조 집단 또는 참조 또는 역치 수준, 예를 들어 암을 갖지 않거나 갖는 것으로 의심받지 않는 대상체로부터의 T 세포, 예를 들어 건강하거나 또는 정상적인 대상체와 비교하여, T 세포 기능, 건강 또는 활성의 요소 표시(factor indicative)의 감소된 수준을 나타내거나 또는 나타내는 것으로 관찰된 대상체에서 암을 치료하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 고-위험 NHL 및/또는 공격적인 NHL, 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL), T 세포/조직세포-농축 거대 B 세포 림프종(TCHRBCL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL) 및/또는 여포성 림프종(FL)을 갖는 것을 확인된 대상체를 치료하기 위한 것이다. 예를 들어 본원에 나타낸 바와 같이, 상기 예시적인 BTK 억제제 이브루티닙의 존재하에, DLBCL을 갖는 대상체로부터 조작된 T 세포는, 상기 T 세포의 기능이 상기 억제제의 존재하에 강화되는 것으로 나타나는, 보다 높은 T 세포 기능 활성을 나타낸다. 상기 제공된 방법의 일부 구현예에서, 상기 투여된 조작된 T 세포는 상기 대상체의 자가 조직이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 DLBCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 만성 림프구성 백혈병(CLL)을 갖는 대상체를 치료하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 작은 림프구성 림프종(SLL)을 갖는 대상체를 치료하기 위한 것이다.
본원에서 상기 제공된 방법 중에는 CLL을 치료하는 방법이 있으며, 이것은 혈액, 골수 및 림프 조직 중에서 예를 들어 클론-유도된 B-림프구, 예를 들어 CD19+의 점진적 축적을 특징으로 하는 혈액 악성 종양이다. 일부 경우에, CLL과 동일한 질병인 것으로 고려되지만, 작은 림프구성 림프종(SLL)은 림프절 병증(림프절에서 발견되는 암세포)을 특징으로 하지만 CLL에서 상기 혈액 및 골수에서 주로 발견될 때의 질병을 지칭하는데 사용된다. 본원에서, CLL에 대한 언급은 달리 명시되지 않는한 SLL을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, CLL은 IWCLL 기준(문헌 「Hallek (2008) Blood, 111:5446-5456」 참조), 측정 가능한 질병[예를 들어 림프구 증가> 5×109/L, 측정 가능한 림프절, 간 및 / 또는 비장 비대)에 따라 CLL을 문서화한 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, SLL은 림프절 병증 및/또는 비장 비대 및 5×109 개 미만의 CD19+CD5+ 클론 B 림프구/L(<5000/μL)(생검으로 입증된 SLL인 가장 큰 횡단 직경에서 1.5cm 초과의 병변에 의해 결정된 측정 가능한 질병이 있는 대상체가 포함된다. 일반적으로 진행성 CLL을 갖는 환자는 일부 연구에서 보고된 바와 같이 1년 미만의 총괄 생존(OS)을 갖는 불량한 예후를 가진다[문헌 「Jain et al. (2016) Expt. Rev. Hematol., 9:793-801」 참조].
BTK 억제제 요법제, 및 특히 이브루티닙을 사용한 CLL의 치료는 CLL 현재 CLL 환자를 위한 1차 승인된 요법이다. 부분 반응(PR)은 장기간 지속될 수 있지만 사전 치료받은 CLL 환자의 약 25%가 이브루티닙을 중단한다는 연구 결과가 있다[문헌 「Jain et al. (2015) Blood, 125:2062-2067; Maddocks (2015) JAMA Oncol., 1:80-87; Jain et al. (2017) Cancer, 123:2268-2273」 참조]. 일부 경우에, 이브루티닙의 중단은 CLL 또는 리히터 변형의 진행으로 인한 것이다. 진행성 질병(PD) 때문에 이브루티닙을 중단한 대부분의 환자는 del(17p)(17p 결실), 복잡한 핵형(complex karyotype) 또는 세포 유전학적 이상 및 돌연변이되지 않은 면역글로불린 중쇄 가변 영역(IGHV)과 같은 고위험 기능을 가진 환자이다. 추가로, BTK 또는 상기 다운스트림 효과기 포스포리파제 Cγ2(PLCγ2)에서의 돌연변이는 이브루티닙 치료동안 나타날 수 있으며 이브루티닙 내성과 궁극적으로는 재발과 관련된다[문헌 「Woyach et al. (2014) N. Engl. J. Med., 370:2286-2294」 참조]. 상기 돌연변이는 이브루티닙과 관련하여 재발하는 CLL 환자의 87%에서 관찰된다. 그러한 대상체에게는 대체 요법이 필요하다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 전에 초기에 투여된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 계속되고/되거나 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포의 투여 개시와 동시에 및/또는 투여 개시 후에 추가로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 억제제는 매일 투여된다. 일부 측면에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 상기 투여, 예를 들어 매일 투여는 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포의 투여 개시 전에 개시되고, 미리 결정된 일수(days)까지 계속된다. 일부 측면에서, 상기 미리 결정된 일 수는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 미리 결정된 일수이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는, 상기 T 세포 요법제, CAR-T 세포의 수준이 상기 대상체의 혈액 또는 질병 부위에서 상기 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 피크 또는 최대, 예를 들어 Cmax 수준인 때까지 또는 그 수준 후의 시점까지 매일 투여된다. 일부 측면에서, 상기 억제제, 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 14일, 적어도 (약) 30일, 적어도 (약) 60일, 적어도 (약) 90일, 적어도 (약) 120일 또는 적어도 (약) 180일 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포의 투여 개시 후 적어도 (약) 90일동안 계속된다. 일부 측면에서, 상기 억제제의 투여 종지 시점에서, 상기 대상체에서 상기 T 세포 요법제의 지속성이 관측된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여 종지 시점에서, 상기 대상체는 상기 대상체가 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여로부터 혜택을 받는지를 분석하기 위해서 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 억제제의 투여 종지 시점에서, 상기 대상체는, 반응 또는 반응을 나타내는 특정 정도 또는 결과, 예를 들어 일부 구현예에서는 CR을 달성했는지 분석하기 위해 피험자가 평가된다. 일부 그러한 구현예에서, 대상체가 반응을 나타내거나 CR 또는 기타 결과의 가능성을 나타내는 CR 또는 기타 결과를 달성한 경우, 상기 제공된 방법, 조성물, 제조 물품 또는 용도는 상기 억제제의 중단 또는 그의 투여를 허용하거나, 명시하거나, 수반한다. 일부 구현예에서, 대상체가 CR을 달성하지 못하는 경우, 상기 제공된 방법은 상기 억제제의 투여를 계속할 수 있게 한다. 따라서, 일부 측면에서, 상기 제공된 방법 및 다른 구현예는 상기 억제제의 연장되거나 또는 과도하게 연장된 기간의 투여를 피하거나 감소시킨다. 일부 측면에서, 상기 연장된 투여는 그렇지 않으면 환자와 같이 상기 요법제가 투여되는 상기 대상체에 대한 부작용 또는 삶의 질 저하와 같은 하나 이상의 바람직하지 않은 결과를 초래하거나 그 가능성을 증가시킬 수 있다. 일부 측면에서, 투여의 최소 기간과 같은 정해진 미리 결정된 기간은 환자 순응의 가능성 또는 상기 억제제가 지침으로서 또는 방법에 따라, 특히 매일 투여의 경우에 투여될 가능성을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제제 내성이고/이거나 상기 억제제에 의한 억제에 내성인 세포의 집단을 포함하는 대상체 및/또는 암에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, BTK를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하는 대상체 및/또는 암에 투여되고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 억제제 및/또는 이브루티닙에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 예방할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, 포스포리파제 C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 *?*핵산 중에 돌연변이를 포함하는 대상체 및/또는 암에 투여되고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 일으키고, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845이다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 시점 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시점에서, 상기 대상체가 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법제를 사용한 치료 후 완화 이후 재발하였거나 그를 사용한 사전 치료에 불응성인 것으로 간주되는 대상체 및/또는 암에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 시점 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시점에서, 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법제를 사용한 사전 치료 후 진행된 대상체 및/또는 암에 투여되고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최상의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후 진형으로서 진행성 질병을 나타내었다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 시점 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시점에서, 상기 대상체가 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법제를 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후 완전 반응(CR) 미만의 반응을 나타낸 대상체 및/또는 암에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 상기 대상체에게 투여되고, (i) 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 포함하고; (ii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은, 상기 억제제 및/또는 이브루티닙에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있는, BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고; (iii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며; (iv) 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시, 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고; (v) 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시, 및 T 세포를 포함하는 상기 조성물의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나; (vi) 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시, 및 T 세포를 포함하는 상기 조성물의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타내는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사전에 투여 받은 다음, 상기 키나제 억제제를 사용한 상기 치료를 중단한 대상체이다.
일부 구현예에서, 상기 방법, 용도 및 제조 물품은 예를 들어 특정 유형의 질병, 진단 기준, 사전 치료 및/또는 사전 치료에 대한 반응에 기초하여, 대상체의 특정 그룹 또는 서브세트, 예를 들어 기술된 대상체의 임의의 그룹를 포함, 선별 또는 식별하는 단계를 대상체의 치료에 포함하거나, 이를 위해 사용된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 선행 요법으로의 치료 이후 완화에 뒤이어 재발성을 가지거나, 이에 불응성이 되는 대상체; 또는 하나 이상의 선행 요법, 예를 들어 1차 이상의 표준 요법제, 예를 들어 세포 요법제(예를 들어 CAR+ T 세포)에 재발성을 가지거나 불응성 (R/R)인 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 상세불명(NOS; 인돌런트 림프종으로부터 신생 또는 변형된 것), 원발성 종격동성 (흉선) 거대 B-세포 림프종(PMBCL) 또는 여포성 림프종(FL), 선택적으로 여포성 림프종 등급 3B(FL3B), EBV 양성 DLBCL, 또는 EBV 양성 NOS를 가지는 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 이스턴 쿠퍼레이티브 온콜로니 그룹(Eastern Cooperative Oncology Group) 전신 상태(ECOG)가 1 미만, 예를 들어 0 내지 1인 대상체를 치료하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 예후가 나쁜 집단 또는 일반적으로 요법 또는 특정 기준 요법에 대해 저조하게 반응하는 이의 DLBCL 환자 또는 대상체, 예를 들어 하나 이상의, 예를 들어 2 또는 3개의, 염색체 전좌를 가지는 대상체(예를 들어 소위 "이중-유전자 이상" 또는 "삼중-유전자 이상" 림프종으로, 이것은 MYC 및 BCL2 및/또는 DLBCL 조직학을 사용한 BCL6 재배열이 있는 고급 B 세포 림프종임; 일반적으로 t(14; 18) (q32; q21) bcl-2 유전자 또는/및 BCL6/3q27 염색체 전좌와의 조합물로 MYC/8q24 전좌를 가짐; 예를 들어 문헌 「Xu et al (2013) Int J Clin Exp Pathol 6(4): 788-794」 참조), 및/또는 재발성, 선택적으로 12 개월 이내에 재발성을 가지는 대상체, 및/또는 화학요법-불응성인 것으로 간주되었던 대상체를 치료한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 제미럴 중심형(germinal center-like; GCB) DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 비-제미럴 중심형(non-germinal center-like; non-GCB) DLBCL을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 이중 유전자 이상 림프종(double-hit lymphoma; DHL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 삼중 유전자 이상 림프종(THL)을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙에 의한 치료의 반응성을 나타내는 유전자의 발현에 대해 양성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 유전자의 발현에 대해 음성이다[문헌 「Blood 2017 130:4118」 참조].
일부 구현예에서, 상기 항원 수용체(예를 들어 CAR)은 상기 질병 또는 병태와 관련된, 예를 들어 NHL과 관련된 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 질병 또는 병태와 관련된 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, 상기 CD19 항원은 인간 CD19이다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, B 세포 악성 종양이 있을 위험이 있거나 의심되는 대상체에게 상기 세포 요법제 및 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 NHL의 특정 예후 또는 위험을 갖는 것으로 선택되거나 확인된 대상체에게 세포를 투여하는 것을 포함한다. 비-호지킨 림프종(NHL)은 가변성 질병이다. NHL을 갖는 일부 대상체는 치료없이 생존할 수 있는 반면 다른 것들은 즉시 개입을 필요로 할 수 있다. 일부 경우에, NHL을 갖는 대상체는 질병 예후 및/또는 권장 치료 전략을 알릴 수 있는 그룹으로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 이들 그룹은 "저 위험", "중간 위험", "고 위험", 및/또는 "매우 고 위험"일 수 있으며 환자들은 제한되지는 않지만 유전자 이상 및/또는 형태학적 또는 물리적 특성을 포함하는 다수의 인자들에 의존하는 것들로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라, 및/또는 상기 제조 물품 또는 조성물로 치료된 대상체들은 NHL의 위험에 기초하여 분류되거나 또는 확인된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 고 위험 NHL을 갖는 것이다.
일부 구현예에서, 치료되는 상기 대상체는 공격적인 NHL, 특히 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 상세불명 (NOS; 인돌런트 림프종으로부터 신생 또는 변형된 것), T 세포/조직구-풍부 거대 B-세포 림프종, 원발성 종격동성(흉선) 거대 B 세포 림프종(PMBCL), 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 등급 3B(FL3B), EBV 양성 DLBCL, EBV 양성 NOS, 또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 고급 B-세포 림프종(이중/삼중 유전자 이상)을 갖는 대상체의 그룹을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체의 질병은 적어도 2개의 사전 라인의 요법제에 대해 재발하였거나 또는 불응성이었다. 일부 구현예에서, 상기 사전 요법제는 CD20-표적화된 제제 및/또는 안트라사이클린(anthracycline)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인되었다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 스크링시에 0 내지 1의 ECOG 점수를 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 루가노 분류법(Cheson, 2014)에 따라 양전자 방출 단층 촬영(PET) 양성 질환을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 선택적으로 동종이계 세포 이식((SCT)으로 사전에 치료 받았을 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 대상체는 성인이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 남성이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 조합 요법제를 투여 받을 때(예를 들어 상기 세포 요법제를 투여 받을 때) 적어도 40세이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 조합 요법제를 투여 받을 때(예를 들어 상기 세포 요법제를 투여 받을 때) 40세 미만이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 조합 요법제를 투여 받을 때(예를 들어 상기 세포 요법제를 투여 받을 때) 약 40 내지 65세이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 조합 요법제를 투여 받을 때(예를 들어 상기 세포 요법제를 투여 받을 때) 적어도 65세이다.
상기 제공된 방법의 일부 구현예에서, 투여된 유전자 조작된 세포의 하나 이상의 특성은, 참조 조성물의 투여된 세포, 예를 들어 대상체에서 상기 투여된 세포의 증가 또는 더 큰 증폭 및/또는 지속성 또는 항원으로 재자극시 증가된 또는 더 큰 회상 반응과 비교하여 개선되거나 또는 증가되거나 또는 높아질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 증가는 상기 참조 세포 조성물의 투여시 동일한 특성 또는 특징과 비교하여 적어도 1.2-배, 적어도 1.5-배, 적어도 2-배, 적어도 3-배, 적어도 4-배, 적어도 5-배, 적어도 6-배, 적어도 7-배, 적어도 8-배, 적어도 9-배, 또는 적어도 10-배 증가일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 특성 또는 특징 중의 하나 이상에서의 증가가 상기 유전자 조작된 세포의 투여 후 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 또는 12개월 이내에 관찰될 수 있거나 또는 존재한다.
일부 구현예에서, 참조 세포 조성물은 상기 암을 갖지 않거나 갖지 않는 것으로 의심되는 대상체의 혈액으로부터의 T 세포의 조성물일 수 있거나 또는, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 존재하에 인큐베이션되지 않거나 또는 투여되지 않는 것을 제외하고 상기 동일하거나 실질적으로 동일한 조건하에 수득, 단리, 생성, 생산, 인큐베이션 및/또는 투여된 T 세포의 집단이다. 일부 구현예에서, 상기 참조 세포 조성물은 상기 동일한 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 발현을 포함하는 실질적으로 동일한 유전자 조작된 세포를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포는 동일하거나 실질적으로 동일하게 치료되고, 예를 들어 유사하게 제조되고, 유사하게 제형화되며, 통일하거나 대략 동일한 투여량 및 다른 유사한 요소로 투여된다.
A. 키나제 억제제의 투여
상기 제공된 조합 요법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도는 키나제 억제제, 예를 들어 TEC 패밀리 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 포함하고, 이들은 상기 T 세포 요법제의 투여, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 T 세포의 투여 전에, 그에 이어서, 그 과정동안, 그와 동시에, 그와 동시에 또는 거의 동시에, 순차적으로 및/또는 병행하여 및/또는 간헐적으로 투여될 수 있고/있거나 상기 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 전에 시작하여 상기 T 세포 요법제의 투여 개시시까지 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후에 계속할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 조합 요법제 중의 상기 키나제 억제제는 티로신 키나제의 억제제, 예를 들어 일부 경우에 사이토카인 수용체, 림프구 표면 항원, 이종삼량체 G-단백질 결합 수용체 및 인테그린 분자(integrin molecule)의 세포내 신호 전달 메카니즘 중에 포함되는 다수의 TEC 패밀리의 키나제의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제 중의 상기 키나제 억제제는, 브루톤 티로신 키나제(BTK), IL-2 유도성 T-세포 키나제(ITK), 테크 단백질 티로신 키나제(TEC), 염색체 X 단백질(BMX) 비-수용체 티로신 키나제(상피 및 내피 티로신 키나제로도 불리움; ETK) 내 골수 티로신 키나제 유전자 및 TXK 티로신 키나제(TXK)를 포함한, 다수의 TEC 패밀리의 키나제의 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 IL-2 유도성 T-세포 키나제(ITK) 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 BTK 및 ITK 억제제 둘 다, 예를 들어 이브루티닙이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 하나 이상의 TEC 패밀리 키나제의 비가역성 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 BTK의 비가역성 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 ITK의 비가역성 억제제이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 절반-최대 억제 농도(IC50)로 BTK를 억제한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 평형 해리 상수(Kd)로 BTK에 결합한다.
일부 구현예에서, BTK에 대한 상기 키나제 억제제의 상기 억제 상수(Ki)는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 절반-최대 억제 농도(IC50)로 ITK를 억제한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 평형 해리 상수(Kd)로 ITK에 결합한다.
일부 구현예에서, ITK에 대한 상기 키나제 억제제의 상기 억제 상수(Ki)는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 BTK 및 ITK 둘 다를 억제한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 절반-최대 억제 농도(IC50)으로 BTK 및 ITK 둘 다를 억제한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 BTK 및 ITK 둘 다에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만의 평형 해리 상수(Kd)로 BTK 및 ITK 둘 다에 결합한다.
일부 구현예에서, BTK 및 ITK 둘 다에 대한 상기 키나제 억제제의 상기 억제 상수(Ki)는 (약) 1000 nM 미만, (약) 900 nM 미만, (약) 800 nM 미만, (약) 700 nM 미만, (약) 600 nM 미만, (약) 500 nM 미만, (약) 400 nM 미만, (약) 300 nM 미만, (약) 200 nM 미만, (약) 100 nM 미만, (약) 90 nM 미만, (약) 80 nM 미만, (약) 70 nM 미만, (약) 60 nM 미만, (약) 50 nM 미만, (약) 40 nM 미만, (약) 30 nM 미만, (약) 20 nM 미만, (약) 10 nM 미만, (약) 9 nM 미만, (약) 8 nM 미만, (약) 7 nM 미만, (약) 6 nM 미만, (약) 5 nM 미만, (약) 4 nM 미만, (약) 3 nM 미만, (약) 2 nM 미만, (약) 1 nM 미만, (약) 0.9 nM 미만, (약) 0.8 nM 미만, (약) 0.7 nM 미만, (약) 0.6 nM 미만, (약) 0.5 nM 미만, (약) 0.4 nM 미만, (약) 0.3 nM 미만, (약) 0.2 nM 미만, 또는 (약) 0.1 nM 미만이다.
상기 IC50, Kd 및/또는 Ki는 시험관내 분석을 사용하여 측정 또는 결정된다. 기재된 바와 같은 단백질 티로신 키나제 억제제의 활성을 평가 또는 정량화 또는 측정하기 위한 분석은 당업계에 공지되어 있다. 이러한 분석은 시험관 내에서 수행될 수 있으며 특정 생물학적 또는 생화학적 기능을 억제하는 작용제의 능력을 평가하는 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 키나제 활성 연구가 수행될 수 있다. 단백질 티로신 키나제는 아데노신 트리포스페이트(ATP)에서 키나제 자체 또는 다른 단백질 기질의 티로신 잔기의 하이드록실 그룹으로 말단 포스페이트 그룹의 전달을 촉매화한다. 일부 구현예에서, 키나제 활성은 ATP의 존재하에 기질(예를 들어 억제제)과 함께 키나제를 배양하여 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 키나제에 의한 상기 인산화된 기질(phosphorylated substrate)의 측정은 비색, 방사성 및 형광 검출을 포함한 여러 리포터 시스템에 의해 평가될 수 있다[문헌 「Johnson, S.A. & T. Hunter (2005) Nat. Methods 2:17.」 참조]. 일부 구현예에서, 억제제들은 특정 키나제(들)에 대한 그들의 친화성에 대해 예를 들어 경쟁 리간드 결합 분석법(competition ligand binding assays)을 이용하여 분석될 수 있다[문헌 「Ma et al., Expert Opin Drug Discov. 2008 Jun; 3(6):607-621」 참조]. 이러한 분석으로부터 상기 절반-최대 억제 농도(IC50)가 계산될 수 있다. IC50은 생물학적 또는 생화학 적 반응 또는 기능을 최대 값의 50%까지 감소시키는 농도이다. 일부 경우에, 예를 들어 키나제 활성 연구에서, IC50은 표적 키나제 활성을 50%까지 억제하는 데 필요한 화합물의 농도이다. 일부 경우에, 상기 평형 해리 상수(Kd) 및/또는 상기 억제 상수(Ki 값)은 부가적으로 또는 대안적으로 결정될 수 있다. IC50 및 Kd는 당해 분야에서 알려진 임의의 다수의 수단에 의해서 계산될 수 있다. 억제 상수(Ki 값)는 쳉-프루소프 식(Cheng-Prusoff equation) Ki = IC50/(1+L/Kd)[여기서, L은 키나제 억제제의 농도이다]에 따라 상기 IC50 및 Kd로부터 계산될 수 있다[문헌 「Biochem Pharmacol 22: 3099-3108, 1973」 참조]. Ki는 리간드 또는 다른 경쟁자가 없을 때 존재하는 결합 부위의 50%를 점유하게 하는 표지되지 않은 억제제의 농도이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 작은 분자이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 상기 티로신 키나제의 활성 부위 근처에 접근 가능한 시스테인 잔기를 갖는 티로신 단백질 키나제의 억제에이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 TEC 패밀리 키나제의 상기 키나제 억제제는 상기 단백질 티로신 키나제 상에 시스테인 잔기와 공유결합을 형성한다. 일부 구현예에서, 상기 시스테인 잔기는 Cys 481 잔기이다. 일부 구현예에서, 상기 시스테인 잔기는 Cys 442 잔기이다. 일부 구현예에서, 상기 시스테인 잔기는 Cys 481에 결합하는 비가역성 BTK 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 시스테인 잔기는 Cys 442에 결합하는 ITK 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 시스테인 잔기는 상기 티로신 키나제의 상기 적당한 시스테인 잔기와 공유결합을 형성하는 마이클 억셉터 모이어티(Michael acceptor moiety)를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마이클 억셉터 모이어티는 또한 평가 가능한 -SH 모이어티를 함유하는 다른 생물학적 분자에 비해 상기 티로신 단백질의 적절한 시스테인 측쇄와 우세적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 PCT 국제공개공보 제WO2002/0500071호, 제WO2005/070420호, 제WO2005/079791호, 제WO2007/076228호, 제WO2007/058832호, 제WO2004/016610호, 제WO2004/016611호, 제WO2004/016600호, 제WO2004/016615호, 제WO2005/026175호, 제WO2006/065946호, 제WO2007/027594호, 제WO2007/017455호, 제WO2008/025820호, 제WO2008/025821호, 제WO2008/025822호, 제WO2011/017219호, 제WO2011/090760호, 제WO2009/158571호, 제WO2009/051822호, 제WO2014/082085호, 제WO2014/093383호, 제WO2014/105958호, 및 제WO2014/145403호에 기술된 ITK 억제제 화합물이며, 이들 공보는 그 전체가 본원에서 참조로 인용된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 미국출원 제US20110281850호, 제US2014/0256704호, 제US20140315909호, 및 제US20140303161호에 기술된 ITK 억제제 화합물이며, 이들 출원은 그 전체가 본원에서 참조로 인용된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 미국특허 제8,759,358호에 기술된 ITK 억제제 화합물이며, 상기 특허는 그 전체가 본원에서 참조로 인용된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는
Figure pct00016
Figure pct00017
및
Figure pct00018
로부터 선택된 구조식을 갖는다.
BTK 및/또는 ITK의 예시적인 억제제는 당해 분야에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 문헌 「Byrd et al., N Engl J Med. 2016;374(4):323-32; Cho et al., J Immunol. 2015, doi:10.4049/jimmunol.1501828」; 「Zhong et. al., J. Biol. Chem., 2015, 290(10): 5960-78」; 「Hendriks et al., Nature, 2014, 14: 219-232」; 「Akinleye et al., Journal of Hematology & Oncology 2013, 6:59」; 「Wang et al., ACS Med Chem Lett. 2012 Jul 26; 3(9): 705-9」; 「Howard et al., J Med Chem. 2009 Jan 22; 52(2):379-88」; 「Anastassiasdis et al., Nat Biotechnol. 2011 Oct 30; 29(11): 1039-45」; 「Davis, et al., Nat Biotechnol, 2011; 29:1046-51」; 「Bamborough et al., J Med Chem. 2008 Dec 25; 51(24):7898-914」; 「Roth et al., J Med Chem. 2015; 58:1053-63」; 「Galkin et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2007; 104:270-5」; 「Singh et al., J Med Chem. 2012; 55:3614-43」; 「Hall et al., J Med Chem. 2009 May 28; 52(10):3191-204」; 「Zhou et al., Nature. 2009 Dec 24; 462(7276):1070-4」; 「Zapf et al., J Med Chem. 2012; 55:10047-63」; 「Shi et al., Bioorg Med Chem Lett, 2014; 24:2206-11」; 「Illig, et al., J Med Chem. 2011; 54:7860-83」; 및 미국특허출원공보 제20140371241호에 기술된 억제제이다.
키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제의 비제한적 예는 이브루티닙(Ibrutinib)(PL-32765); PRN694; 스페브루티닙(Spebrutinib)(CC-292 또는 AVL-292); PCI-45292; RN-486; 화합물 2c; AT9283; BML-275; 도비티닙(Dovitinib)(TKI258); 포레티닙(Foretinib)(GSK1363089);
Figure pct00019
; GSK-3 억제제 IX; GSK-3 억제제 XIII; 헤스페라딘(Hesperadin); IDR E804; K-252a; 레스타우르티닙(Lestaurtinib)(CEP701); 닌테다닙(Nintedanib)(BIBF 1120); NVP-TAE684; R406; SB218078; 스타우로스포린(Staurosporine)(AM-2282); 수니티닙(Sunitinib)(SU11248); Syk 억제제; WZ3146; WZ4002; BDBM50399459(CHEMBL2179805); BDBM50399460(CHEMBL2179804); BDBM50399458(CHEMBL2179806); BDBM50399461(CHEMBL2179790); BDBM50012060(CHEMBL3263640); BDBM50355504(CHEMBL1908393); BDBM50355499(CHEMBL1908395::CHEMBL1908842)를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 이브루티닙이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 구조식
Figure pct00020
, 그의 에난티오머 또는 그의 에난티오머들의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 공-결정(co-crystal), 클라트레이트(clathrate), 또는 폴리모프(polymorph)이거나 또는 그들을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제는 이브루티닙이고 구조식
Figure pct00021
, 그의 에난티오머 또는 그의 에난티오머들의 혼합물, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 공-결정, 클라트레이트, 또는 폴리모프갖거나 또는 그들을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 억제제는, 미국특허 제US 2014/0371241호; 제US 2015/0140085호; 제US 2015/0238490호; 제US 2015/0352116호; 제US 2015/0361504호; 제US 2016/0022683호; 제US 2016/0022684호; 제US 2016/0038495호; 제US 2016/0038496호; 제US 2016/0287592호; 제US 2017/0002009호; 제US 2017/0079981호; 제US 2017/0128448호; 제US 2017/0209462호; 제US 2017/0226108호; 제US 2017/0226114호; 제US 2017/0305914호; 제US 2017/0360796호; 제US 2017/0368173호; 제US 2018/0009814호; 제US 2018/0028537호; 제US 2018/0051026호; 제US 2018/0071293호; 제US 2018/0071295호; 제US 2018/0072737호; 제US 7514444호; 제US 8008309호; 제US 8476284호; 제US 8497277호; 제US 8697711호; 제US 8703780호; 제US 8735403호; 제US 8754090호; 제US 8754091호; 제US 8957079호; 제US 8999999호; 제US 9125889호; 제US 9181257호; 제US 9296753호; 제US 9545407호; 제US 9655857호; 제US 9717731호; 제US 9725455호; 제US 9730938호; 제US 9751889호; 및 제US 9884869호에 기술된 억제제이다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 이브루티닙이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 이브루티닙 또는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피레리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온 [1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피페리딘-1-일]-1-피페리디닐]-2-프로펜-1-온; 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온; 1-((3R)-3-(4-amino-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로(3,4-d)피리미딘-1-일)-1-피페리디닐)-2-프로펜-1-온; 936563-96-1; PCI-32765; IMBRUVICA; UNII-1X70OSD4VX; PCI32765; CRA-032765; 1X70OSD4VX; 또는 CHEBI:76612로도 알려짐]이거나 또는 그를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온 [1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]-1-피페리디닐]-2-프로펜-1-온; 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온; 1-((3R)-3-(4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로(3,4-d)피리미딘-1-일)-1-피페리디닐)-2-프로펜-1-온; 936563-96-1; PCI-32765; IMBRUVICA; UNII-1X70OSD4VX; PCI32765; CRA-032765; 1X70OSD4VX; 또는 CHEBI:76612로도 알려짐] 이거나 또는 그를 포함한다. .
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온, 또는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온의 약학적으로 허용가능한 염, 용매화물, 수화물, 공-결정, 클라트레이트, 또는 폴리모프이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온의 용매화물이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온의 수화물이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온의 약학적으로 허용가능한 염이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제는 1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프롭-2-엔-1-온이다. 일부 구현예에서, 화합물 1은 일반식 I의 구조식을 갖는다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 고체이다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 수화된다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 용매화된다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 무정형이다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 비흡습성(nonhygroscopic)이다.
특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 무정형이다. 특정 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 결정질(crystalline)이다. 특정 구현예에서, 상기 고체 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 미국특허 제9,751,889호에 기술된 결정질 형태이며, 상기 특허는 본원에서 그 전체가 참조로 인용된다.
키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 고체 형태는 국제공개공보 제WO 2016/151438호, 미국 공보 제US 9884869호, 제US 2017/0226108호; 국제공개공보 제WO 2016/151438호; 제WO 2017/134684호; 제WO 2015/145415호; 제WO 2017/137446호; 제WO 2016/088074호; 제WO 2017/134684호; 제WO 2015/145415호; 제WO 2017/085628호; 및 제WO 2017/134588호의 개시에 기술된 방법 또는 그 중 하나 또는 조합된 이용가능한 방법에 따라 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에서 제공된 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 하나의 키랄 중심을 함유하고, 에난티오머의 혼합물, 예를 들어 라세미 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 개시는 입체적으로 순수한 형태의 상기 화합물의 사용 뿐만 아니라 그러한 형태들의 혼합물의 사용을 포함한다. 예를 들어 동일하거나 동일하지 않은 양의 본원에서 제공된 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 에탄티오머가 본원에 개시된 방법 및 조성물에 사용될 수 있다. 이들 이성질체는 키랄 칼럼(chiral columns) 또는 키랄 분해제(chiral resolving agents)와 같은 표준 기술을 사용하여 비대칭으로 합성되거나 분해될 수 있다[예를 들어 문헌 「Jacques, J., et al, Enantiomers, Racemates and Resolutions (Wiley-Interscience, New York, 1981)」; 「Wilen, S. H., et al, Tetrahedron 33 :2725 (1977)」; 「Eliel, E. L., Stereochemistry of Carbon Compounds (McGraw-Hill, NY, 1962)」; 및 「Wilen, S. H., Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions p. 268 (E L. Eliel, Ed., Univ. of Notre Dame Press, Notre Dame, IN, 1972)」 참조].
도시된 구조식과 그 구조식에 주어진 명칭 사이에 불일치가 존재하는 경우 상기 도시된 구조식에 더 많은 가중치가 부여된다는 것에 주목하여야 한다. 또한, 구조식 또는 구조식의 일부의 입체 화학이 예를 들어 굵은 선 또는 점선으로 표시되지 않은 경우 상기 구조식 또는 상기 구조식의 일부는 상기 구조식의 모든 입체 이성질체를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
1. 조성물 및 제형
본원에 제공된 상기 조합 요법, 조성물, 조합물, 키트 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 조합 요법제는 하나 이상의 조성물, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 함유하는 약학 조성물로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 조성물, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 함유하는 약학 조성물은 키나제 억제제 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및/또는 세포가 함께 투여되는 담체 예를 들어 희석제, 아쥬반트, 부형제, 또는 비히클을 포함할 수 있다. 적절한 약학적 담체의 예는 이. 더불유. 마틴(E. W. Martin)의 문헌 「Remington's Pharmaceutical Sciences」에 설명되어 있다. 이러한 조성물은 환자에게 적절한 투여 형태를 제공할 수 있도록, 적절한 양의 담체와 함께 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 치료적 유효량을 일반적으로 순수한 형태로 함유한다. 이러한 약학적 담체는 멸균 액체, 예를 들어 물 및 예를 들어 땅콩 기름, 대두유, 광물유, 참기름과 같은 페트롤륨, 동물, 식물 또는 합성 기원의 오일일 수 있다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 역시 액상 담체, 특히 주사가능한 용액을 위한 담체로서 사용될 수 있다. 약학 조성물은 희석제(들), 아쥬반트(들), 항유착제(들), 결합제(들), 코팅제(들), 충전제(들), 향료(들), 색소(들), 윤활제(들), 활택제(들), 보존제(들), 세제(들), 흡수제(들), 유화제(들), 약학적 부형제(들), pH 완충제(들), 또는 감미료(들), 및 이들의 조합을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 약학 조성물은 액체, 고체, 동결건조 분말, 겔 형태 및/또는 이들의 조합일 수 있다. 일부 측면에서, 담체의 선택은 부분적으로는 특정한 억제제에 의해 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다.
약학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용되는 용량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 이의 비제한적인 예로는: 포스페이트, 시트레이트 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤 예를 들어 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라진, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 비롯한 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트화제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 슈가; 나트륨과 같은 염-형성 카운터-이온; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 안정화제 및/또는 보존제를 들 수 있다. 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 함유하는 조성물은 동결건조될 수도 있다.
일부 구현예에서, 약학 조성물은 근육내, 정맥내, 피내, 병소내, 복강내 주사, 피하, 종양내, 경막외, 코, 구강, 질, 직장, 국소, 국소, 귀, 흡입, 협측(예를 들어 설하), 및 경피 투여 또는 임의의 경로를 비롯한 당업자에게 알려진 임의의 경로에 의해 투여되도록 조성될 수 있다. 일부 구현예에서, 다른 투여 방식도 상정할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구내(periocular) 주사, 망막하 주사, 유리체내 주사, 경막내 주사, 사슬골하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하(subconjectval) 주사, 결막하(subconjuntival) 주사, 서브테논(sub-Tenon's) 주사, 레트로전술 주사, 골반 주사, 또는 후방 점액 전달에 의할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 비경구, 폐내 및 비강내, 및 국소 치료가 요망되는 경우 병변내 투여에 의한다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 이는 다수의 볼루스 투여, 예를 들어 3일 이하의 기간 동안, 또는 연속 주입 투여에 의해 투여된다.
일부 구현예에서, 투여는 치료 부위에 따라 국소, 국소 또는 전신 일 수 있다. 일부 구현예에서, 치료를 필요로 하는 영역으로의 국소 투여는, 예를 들어 수술이 진행되는 동안 국소 주입, 국소 적용, 예를 들어 수술후 상처 드레싱과 관련하여, 주사에 의해, 국소 주입에 의해. 카테터, 좌약 또는 임플란트에 의한 카테터에 의해 달성될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 또한 다른 생물학적 활성제와 함께 순차적으로, 간헐적으로 또는 동일한 조성물로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 또한 제어 방출 제형 및 장치 제어 방출을 포함하는 제어 방출 시스템, 예를 들어 펌프에 의한 제어 방출 시스템을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여는 경구이다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 전형적으로 단위 투여 제형 또는 복수 투여 제형으로서 제형화 및 투여된다. 각각의 단위 용량은 목적하는 치료 효과를 나타내는데 충분한 미리 정해진 양의 치료적 활성 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 함유한다. 일부 구현예에서, 단위 투여 제형의 예로는 적절한 양의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 함유하는 정제, 캡슐, 알약, 분말, 과립, 멸균 비경구 용액 또는 현탁액, 및 경구 용액 또는 현탁액 및 오일 워터 에멀젼을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 단위 투여 제형은 앰풀, 시린지 또는 개별 포장된 정제 또는 캡슐에 함유될 수 있다. 단위 투여 제형은 여러 분획으로 나누어 투여하거나 또는 여러개를 한꺼번에 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 복수 투여 제형은 분리된 단위 투여 제형으로 투여될 단일 용기에 포장된 복수의 동일한 단위 투여 제형이다. 복수 투여 제형의 예로는 바이알, 정제 또는 캡슐의 병 또는 파인트 또는 갤런 들이 병을 들 수 있다.
2. 투여량
일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법은 치료적 유효량의 1회 이상의 투여량의 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및 상기 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법은, 상기 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 투여를 개시하기 전에, 그에 이어서, 그 도중에, 그 과정에, 그와 동시에, 그와 거의 동시에, 순차적으로, 병행하여 및/또는 간헐적으로 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 기간 전에, 도중에, 그 과정에, 및/또는 후에 다중 용량으로 규칙적인 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 전에 그리고 상기 T 세포 요법제의 투여 개시시까지 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후에 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 전에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 후에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 예를 들어 상기 T 세포 요법의 개시 후까지 림프구고갈 요법 동안 중단 또는 일시 중지 후에 추가로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 다중 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 T 세포 요법의 개시 후에 추가로 투여 및/또는 지속되지 않는다. 일부 구현예에서, 투여 스케쥴은 상기 T 세포 요법의 개시 전에 및 후에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 지속하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 투여 스케쥴은 상기 T 세포 요법제의 투여와 동시에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 일정 기간에 걸쳐서, 예를 들어 결정된 시점까지 또는 특정 결과가 성취될 때까지 계속되고/되거나 추가 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 특정 기간 동안 또는 그 기간에, 예를 들어 림프구고갈 요법동안 중단되거나 또는 중지된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 다중 용량으로 다중 횟수로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 일정 기간에 걸쳐서, 예를 들어 결정된 시점까지 또는 특정 결과가 성취될 때까지 다중 횟수로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여의 개시 전에 또는 그에 후속하여 매일 6회, 매일 5회, 매일 4회, 매일 3회, 매일 2회, 매일 1회, 격일로, 3일마다, 주 2회, 주 1회 또는 월 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 기간 전에, 도중에, 그 과정에, 및/또는 후에 다중 용량으로 규칙적인 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 전에 하나 이상의 용량으로 규칙적인 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여 후에 하나 이상의 용량으로 규칙적인 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 하나 이상의 용량이 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 용량의 투여와 동시에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 요법제)의 투여(예를 들어 투여의 개시 전에, 그와 동시에, 도중에, 그 과정에 (그 과정 동안 1회 투여 및/또는 주기적 투여를 포함) 상기 억제제의 투여를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 상기 억제제 및/또는 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 순차적 또는 간헐적 투여를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여의 용량, 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서는 상기 스크리닝 단계의 결과 및/또는 본원에서, 예를 들어 하기 섹션 III 및 IV에서 기술된 치료 결과의 평가의 특정 역치 또는 기준에 기초하여 결정된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 치료적 유효량 또는 하나 이상의 용량을 사전에 투여 받은 대상체에게 상기 세포 요법제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량을 상기 대상체에게 투여하기 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 하나 이상의 용량은 상기 세포의 용량의 투여 개시와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포의 용량의 투여 개시 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 상기 조합 요법제의 치료적 유효량이 증가하도록 세포 요법 전에 충분한 시간에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 전에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 후에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 림프구고갈 요법동안 중단 또는 중지후에, 예를 들어 상기 T 세포 요법의 개시 후까지 계속 및/또는 추가 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 다중 용량의 투여를 포한한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 T 세포 요법의 개시 후에 계속 또는 추가 투여되지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 투여 스케쥴은 상기 T 세포 요법의 개시 전 및 후에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 투여 스케쥴은 상기 T 세포 요법제의 투여와 동시에 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 방법은, 예를 들어 투여용 T 세포 요법제를 제조하기 위해서, 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하기 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일에 개시되는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 생산된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 투여된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은, (1) 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; 및 (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 T 세포 요법제는 예를 들어 본원에서 기술된 질병 또는 장애와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 제조된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 측면에서, 상기 제공된 방법 및 용도는 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하되, 상기 대상체는 치료를 위한 후보이거나 또는 상기 대상체에 T 세포 요법제로 치료되는 대상이다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 예를 들어 본원에서 기술되는 것과 같은 질병 또는 장애와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일 또는 최소 (약) 3일, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 또한 상기 대상체에게 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 분자와 함께 도입되는 상기 대상체로부터 수득된 T 세포를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법 및 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 유효량의 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; (2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및 (3) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 예를 들어 본원에서 기술된 것과 같은 질병 또는 장애와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)을 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 생산된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 상기 키나제 억제제의 투여, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여 중지 또는 중단, 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일, 예를 들어 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 15, 30, 60, 90, 120, 150 또는 180 이상 동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 재개 또는 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일, 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 6일, 최소 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 또는 그 이상일 때 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시된다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 최소 (약) 3일, 최소 (약) 4일, 최소 (약) 5일, 최소 (약) 6일, 최소 (약) 7일, 최소 (약) 14일 또는 그 이상일 때 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 최소 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 또는 그 이상일때 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 또는 최소 (약) 5일 내지 7일에 개시된다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝된다(preconditioned). 일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제는 본원에서, 예를 들어 섹션 I.C.에서 기술된 임의의 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 방법 및 용도는 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 포함한다. 상기 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 림프구고갈 요법동안 중지된다. 상기 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하기 위한 상기 투여 섭생 요법은 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시까지 연장하는 기간 동안 투여를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하기 위한 상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지 상기 키나제 억제제의 투여, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여 중지 및 재개 및/또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안, 예를 들어 적어도 (약) 15, 30, 60, 90, 120, 150 또는 180일 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 2 내지 7일, 예를 들어 약 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 이내에 완성된다. 일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 7일 이내에 완성된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 전 및/또는 그와 동시에, 및/또는 상기 세포 요법제의 투여 개시 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 21일 내지 (약) 49일, 예를 들어 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 25 내지 (약) 35일, (약) 28 내지 (약) 35일, (약) 28일 내지 (약) 31일, 또는 (약) 21, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 또는 49일에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 14일 내지 (약) 35일에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 21일 내지 (약) 35일에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 21일 내지 (약) 28일에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 14일, (약) 15일, (약) 16일, (약) 17일, (약) 18일, (약) 19일, (약) 20일, (약) 21일, (약) 22일, (약) 23일, (약) 24일, (약) 25일, (약) 26일, (약) 27일, (약) 28일, (약) 29일, (약) 30일, (약) 31일, (약) 32일, (약) 33일, (약) 34일, 또는 (약) 35일에 개시된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 개시 전 적어도 (약) 12일, 적어도 (약) 14일, 적어도 (약) 15일, 적어도 (약) 21일, 적어도 (약) 24일, 적어도 (약) 28일, 적어도 (약) 30일, 적어도 (약) 35일, 적어도 (약) 42일, 또는 적어도 (약) 49일의 시간 또는 기간 동안 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법에서 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여의 개시는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전에, 예를 들어 상기 대상체로부터 세포 조작을 위한 상기 샘플을 수득하기 전에, 예를 들어 상기 샘플을 수득하기 적어도 (약) 3, 4, 5, 6, 7 또는 그 이상 전이다. 일부 측면에서, T 세포 요법을 위한 조성물의 생성 또는 생산을 위해서 상기 대상체로부터 수득된다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 키메라 항원 수용체(CAR), 예를 들어 CD19에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현하는 유전자 조작된 T 세포 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산을 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정으로 생산된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법에서 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여의 개시는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에, 예를 들어 그 직전에, 또는 적어도 (약) 3, 4, 5, 6, 7일 또는 그 이상 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 조합 요법에서 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 또는 이어서 계속된다.
일부 구현예에서, 상기 대상체로부터 샘플을 수득하는 것은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 채혈 제품 또는 백혈구 채취 제품이거나 또는 그들을 포함하는 샘플을 수득하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, T 세포, 예를 들어 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 대상체로부터 샘플을 수득하는 것은 또한 성분채집술(apheresis) 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis)이라고도 부른다. 일부 측면에서, 상기 대상체로부터 샘플을 수득하고/하거나 상기 세포를 후속적으로 조작하는 것은, 예를 들어 상기 CAR을 인코딩하는 핵산, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에서 기술된 임의의 핵산을, 상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플 중의 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입함으로써 이루어진다. 일부 구현예에서, 상기 샘플은 상기 T 세포의 투여 개시 전 (약) 23일 내지 (약) 38일, 예를 들어 (약) 28일 내지 (약) 32일, 또는 (약) 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 또는 38일에 상기 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 성분채집술 또는 백혈구성분채집술은 상기 T 세포의 투여 개시 전 (약) 23일 내지 (약) 38일, 예를 들어 (약) 28일 내지 (약) 32일, 또는 (약) 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 또는 38일이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 3일 및/또는 최소 (약) 3일에, 예를 들어 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기(예를 들어 성분채집술 또는 백혈구성분채집술) 전 적어도 (약) 3, 4, 5, 6 또는 7일에 개시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득될 때까지 연정하는 기간 동안 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포의 투여 개시 전 (약) 26일 내지 (약) 45일, 예를 들어 약 28일 내지 약 35일, 또는 (약) 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 또는 45일에 개시된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 투여 섭생 요법 동안 1일 수회, 1일 2회, 매일, 격일로, 1주 3회, 또는 1주 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 1일 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 1일 3회 투여된다. 다른 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 격일로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 그것이 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 날짜마다 1일 1회 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 유효량이 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 다중 투여량이 투여될 때 각각의 투여시 마다 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 유효량이 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브 루티 닙의 유효량은 단일 용량으로 투여되거나 2, 3, 4, 5 또는 6 용량으로 분할 투여되는 경우 본원에 기재된 임의의 투여량을 포함한다. 일부 구현예에서, 각 용량은 하루에 여러차례, 하루에 2회, 매일, 격일로, 일주일에 3회, 일주일에 2회 또는 일주일에 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 투여량이 매일 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 (약) 25 mg 내지 (약) 2000 mg, (약) 25 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 25 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 25 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 25 mg 내지 (약) 100 mg, (약) 25 mg 내지 (약) 50 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 2000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 100 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 2000 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 2000 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 500 mg 내지 (약) 2000 mg, (약) 500 mg 내지 (약) 1000 mg 또는 (약) 1000 mg 내지 (약) 2000 mg(각각의 경계 포함)의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 투여량은 매일 투여된 전술한 투여량 중의 어느 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 (약) 50 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 420 mg, (약)140 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 140 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 420 mg, (약)180 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 180 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 220 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 400 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 380 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 360 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 340 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 320 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 300 mg, (약) 240 mg 내지 (약) 280 mg, (약) 280 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 280 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 300 mg 내지 (약) 560 mg, (약) 300 mg 내지 (약) 420 mg, (약) 또는 (약) 300 mg 내지 (약) 400 mg(각각의 경계 포함)의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 투여량은 매일 투여되는 상기 투여량 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 적어도 (약) 50 mg/day, 100 mg/day, 140 mg/day, 150 mg/day, 175 mg/day, 200 mg/day, 250 mg/day, 280 mg/day, 300 mg/day, 350 mg/day, 400 mg/day, 420 mg/day, 440 mg/day, 460 mg/day, 480 mg/day, 500 mg/day, 520 mg/day, 540 mg/day, 560 mg/day, 580 mg/day, 600 mg/day, 700 mg/day, 750 mg/day, 800 mg/day, 850 mg/day 또는 960 mg/day의 총 1일 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 (약) 420 mg/day의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 (약) 560 mg/day 미만 및 적어도 (약) 140 mg/day의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 (약) 420 mg/day 미만 및 적어도 (약) 280 mg/day의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 (약), 또는 적어도 (약) 140 mg/day, 280 mg/day, 420 mg/day 또는 560 mg/day의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 (약), 또는 적어도 (약) 420 mg/day 또는 560 mg/day의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 140 mg/day, 280 mg/day, 420 mg/day 또는 560 mg/day 이하의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 420 mg/day 또는 560 mg/day 이하의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 유효량은 상기 키나제, 예를 들어 이브루티닙이 매일 (약) 140 mg/ 내지 (약) 840 mg씩 투여되는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 유효량은 상기 키나제, 예를 들어 이브루티닙이 매일 (약) 140 mg/ 내지 (약) 560 mg씩 투여되는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법 또는 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; 및 (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 예를 들어 본원에서 기술된 것과 같은 질병 또는 장애와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 제조된다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 (약) 7일, 예를 들어 (약) 5일, 6일 또는 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득되고 계속될 때까지 상기 키나제의 투여, 및/또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 초과동안 연장하는 상기 키나제의 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 그것이 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날마마 1일 1회 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여 개시 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제로 사전 컨디셔닝되었다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 상기 키나제 억제제의 투여 개시 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 림프구고갈 요법제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 전 7일 이내에 완성된다. 일부 구현예에서, 상기 상기 T 세포 요법제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 전 (약) 2일 내지 (약) 7일, 예를 들어 (약) 7일에 완성된다. 일부 구현예에서, 상기 투여 섭생 요법은 상기 림프구 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중단하거나 또는 중지하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 투여 섭생 요법은 상기 림프구고갈 요법의 완성 후에 상기 키나제 억제제를 재개 또는 추가 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 방법 또는 용도는, (1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 투여하는 단계; (2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및 (3) 상기 림프구고갈 요법제를 투여한 후, 2 내지 7일 이내에, 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제는 예를 들어 본원에서 기술된 것과 같은 질병 또는 장애와 관련된 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제는 상기 대상체로부터 T 세포를 포함하는 샘플을 수득하는 단계 및 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자, 예를 들어 본원에서, 예를 들어 섹션 II.B에 기술된 임의의 핵산 분자를 상기 T 세포를 포함하는 조성물에 도입하는 단계를 포함하는 공정에 의해서 제조된다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법제의 투여 개시시까지 상기 키나제 억제제의 투여, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여 중단 또는 중지, 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월 이상 동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 재개 또는 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되며, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날마마 1일 1회 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 1일 투여량은 (약) 280 mg 내지 (약) 560 mg이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전 적어도 (약) 7일에 개시된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 30일 내지 약 40일에 개시되며; 상기 샘플은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 23일 내지 약 38일에 수득되고/되거나; 상기 림프구고갈 요법은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 5일 내지 약 7일에 완성된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 35일에 개시되며; 상기 샘플은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 28일 내지 약 32일에 수득되고/되거나; 상기 림프구고갈 요법은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 전 (약) 5일 내지 약 7일, 예를 들어 7일에 완성된다.
TEC 패밀리 키나제가 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제) 전에 제공되는 임의의 상기 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법의 개시시까지 및/또는 상기 세포 요법의 개시 후 일정 시간동안 규칙적인 간격으로 계속된다.
상기 구현예 중의 일부에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 개시 전 및 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제의 투여 후에 투여되거나, 또는 계속되고/되거나 추가 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제)의 투여와 동시에 또는 투여 후 (약) 1시간, 2시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 96시간, 4일, 5일, 6일 또는 7일, 14일, 15일, 21일, 24일, 28일, 30일, 36일, 42일, 60일, 72일, 90일, 120일, 180일, 210일, 240일, 270일, 300일, 330일, 360일 또는 720일 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 상기 세포 요법제의 투여 개시 후, 예를 들어 상기 T 세포 요법의 개시 후 전술한 기간 중의 임의의 기간 동안 예를 들어 일정한 간격으로 상기 키나제 억제0제의 계속 및/또는 추가 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 계속 및/또는 추가 투여되며, 예를 들어 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 후 (약) 1일 이하, (약) 2일 이하, (약) 3일 이하, (약) 4일 이하, (약) 5일 이하, (약) 6일 이하, (약) 7일 이하, (약) 12일 이하, (약) 14일 이하, (약) 21일 이하, (약) 24일 이하, (약) 28일 이하, (약) 30일 이하, (약) 35일 이하, (약) 42일 이하, (약) 60일 이하 또는 (약) 90일 이하, (약) 120일 이하, (약) 180일 이하, (약) 240일 이하, (약) 360일 이하 또는 (약) 720일 이하동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 계속 및/또는 추가 투여되며, 예를 들어 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)의 투여 후, (약) 1주, 2주, 3주, 4주, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 12개월, 1년 또는 2년 이상까지 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여를 위한 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 초과동안 연장한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여를 위한 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 5개월 초과동안 연장한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 투여를 위한 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 초과동안 연장한다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하기 위한 상기 투여 섭생 요법은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 일정한 기간 동안 수행된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 1주 초과의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 1개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 2개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 3개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 4개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 5개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 (약) 6개월의 기간 동안 연장한다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 적어도 3개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 90일, (약) 100일, (약) 105일, (약) 110일, (약) 115일, (약) 120일, (약) 125일, (약) 130일, (약) 135일, (약) 140일, (약) 145일, (약) 150일, (약) 155일, (약) 160일, (약) 165일, (약) 170일, (약) 175일, (약) 180일, (약) 185일, (약) 190일, (약) 195일, (약) 200일 이상의 기간 동안 연장한다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후 (약) 90일 또는 3개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후 (약) 120일 또는 4개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후 (약) 150일 또는 5개월의 기간 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후 (약) 180일 또는 6개월의 기간 동안 연장한다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 투여되며, 예를 들어 상기 T 세포 요법제의 투여 후 (약) 180일 이하동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 15일 내지 29일 연장하는 기간 동안이다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 초과 연장하는 기간 동안이다.
일부 구현예에서, 상기 대상체가 (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암(예를 들어 B 세포 악성 종양)이 상기 치료 후 완화 이후 진행하거나 또는 재발하는 경우 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후의 기간(예를 들어 (약) 3, 4, 5 또는 6개월)의 종료시에 종료되거나 또는 중단된다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여가 상기 기간 동안 계속되게 하는 고정된 기간이다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 최소 잔여 질병(MRD)을 갖는 CR이거나 그것을 갖는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 MRD-인 CR을 갖는다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우 상기 기간 종료 후 계속되고, 예를 들어 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포)의 투여 개시 후 (약) 3, 4, 5 또는 6개월 초과동안 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포)의 투여 개시 후 6개월 초과동안 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 기간의 종료시에 PR 또는 SD를 나타낸 대상체에 대해서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체가 상기 치료 후 또는 상기 암(예를 들어 B 세포 악성 종양, 예를 들어 NHL, 예를 들어 DLBCL)이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 재발했을 때까지 계속된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여할 때, 상기 대상체는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포)의 투여 후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 악성 종양은 NHL, 예를 들어 재발성/불응성 공격적인 NHL 또는 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제, 예를 들어 DAR-발현 T 세포는 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 항원은 CD19이다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여할 때, 상기 대상체는 상기 세포 요법제의 투여 후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가, (약) 상기 치료의 종료 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하였거나, 또는 상기 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 재발했을 경우 종료 또는 중단된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 대상체가 상기 기간의 종료 전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취했을 경우에도 상기 기간 동안 계속된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우 상기 초기 기간 종료 후에 계속된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하였거나 또는 상기 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 또는 재발하였을 때까지 반복된다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 악성 종양은 NHL, 예를 들어 재발성/불응성 공격적인 NHL 또는 DLBCL이다. 일부 구현예에서, 상기 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포는 B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 항원은 CD19이다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 특정 종료 시점까지 일정 시간 또는 기간 동안, 상기 세포 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 개시 후에(개시에 이어서) 계속 및/또는 재개 또는 추가 투여된다. 상기 종료 시점은 위에서 기술된 정해진 시점이거나, 또는 특정 기준, 결과, 또는 평가결과가 관찰되거나 또는 성취되는 시점일 수 있다.
일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우에 상기 기간의 종료시에 중단된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속 및/또는 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 또는 재발하였을 경우 상기 기간의 종료시에 중단된다. 일부 구현예에서, 상기 기간은 (약) 3개월 내지 (약) 6개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하였거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 또는 재발하였을 경우에 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가 (약) 3개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가 (약) 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 또는 재발하였을 경우에 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 기간은, 상기 대상체가 (약) 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장한다. 일부 구현예에서, 상기 계속 및/또는 추가 투여는, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간의 시간동안 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 기간 동안 및 상기 기간의 종료 전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취한다.
일부 구현예에서, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우 상기 방법 및 용도는 또한 상기 기간의 종료 후에 계속 및/또는 추가 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 계속 및/또는 추가 투여는, (약) 6개월에 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우에 6개월 초과동안 계속된다. 일부 구현예에서, 상기 계속 및/또는 추가 투여는, 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행하였거나 또는 재발하였을 때까지 계속된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체의 혈액에서 상기 T 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준이 탐지될 때까지 계속된다. 일부 경우에, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시는, (i) 상기 대상체의 혈액에서 상기 T 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준이 탐지되는 시점; (ii) 상기 혈액에서 탐지 가능한 후에 상기 혈액에서 탐지 가능한 상기 T 세포 요법제의 세포의 수가 탐지 가능하지 않거나 또는 감소되고, 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 후 선행 시점과 비교하여 감소되는 시점; (iii) 상기 혈액에서 탐지 가능한 상기 T 세포 요법제의 세포의 수가 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 상기 대상체의 혈액에서 탐지 가능한 상기 T 세포 요법제의 세포의 상기 피크 또는 최대 수의 1.5-배, 2.0-배, 3.0-배, 4.0-배, 5.0-배, 10-배 또는 그 이상까지 감소되는 시점; (iv) 상기 T 세포 요법제의 세포의 피크 또는 최대 수준 이후의 시점에서, 상기 대상체의 혈액에서 탐지 가능한 세포 또는 그 세포로부터 유도된 세포의 수가 상기 대상체의 혈액에서 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 10% 미만, 5% 미만, 1% 미만 또는 0.1% 미만인 시점; (v) 상기 대상체가 상기 T 세포 요법제를 사용한 치료 후 완화 이후 질병 진행을 나타내고/내거나 재발한 시점; 및/또는 (vi) 상기 대상체가, 상기 세포의 투여 전 또는 후 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 전의 종양 부담과 비교하여 증가된 종양 부담을 나타내는 시점; 후 (약) 1주 이내에, 예를 들어 1일, 2일 또는 3일 이내에 수행된다. 특정 측면에서, 상기 제공된 방법은, 상기 T 세포 요법제에 대한 피크 반응이 관찰되었지만 상기 반응, 예를 들어 T 세포의 존재 및/또는 종양 부담의 감소가 둘어 들었거나 또는 더 이상 탐지될 수 없는 대상체들에서 T 세포 요법을 향상, 증가 또는 강화하기 위해 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 대상체가 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 최초로 투여 받은 시점, 및/또는 상기 투여의 개시 후 후속 시점에서, 상기 대상체는 중증 독성, 예를 들어 사이토 카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 독성의 신호 또는 증상을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 상기 투여는, 상기 대상체가 중증 CRS의 징후 또는 증상을 나타내지 않고/않거나 등급 3 이상의 CRS, 예를 들어 연장된 등급 3 CRS 또는 등급 4 또는 5 CRS를 나타내지 않는 때이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 상기 투여는, 상기 대상체가 중증 신경독성의 징후 또는 증상을 나타내지 않고/않거나 등급 3 이상의 신경독성, 예를 들어 연장된 등급 3 신경독성 또는 등급 4 또는 등급 5 신경독성을 나타내지 않는 때이다. 일부 측면에서, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시시와 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여시의 사이는 중증 CRS를 나타내지 않았고/않았거나 등급 3 이상의 CRS, 예를 들어 연장된 등급 3 CRS 또는 등급 4 또는 5 CRS를 나타내지 않았다. 일부 경우에, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시시와 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여시의 사이는 중증 신경독성을 나타내지 않았고/않았거나 등급 3 이상의 신경독성, 예를 들어 연장된 등급 3 신경독성 또는 등급 4 또는 5 신경독성을 나타내지 않았다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은, (약) 10 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 20 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 30 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 40 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 50 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 60 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 70 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 80 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 90 ng/mL 내지 (약) 100 ng/mL, (약) 10 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 20 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 30 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 40 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 50 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 60 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 70 ng/mL 내지 (약) 80 ng/mL, (약) 10 ng/mL 내지 (약) 60 ng/mL, (약) 20 ng/mL 내지 (약) 60 ng/mL, (약) 30 ng/mL 내지 (약) 60 ng/mL, (약) 40 ng/mL 내지 (약) 60 ng/mL, (약) 50 ng/mL 내지 (약) 60 ng/mL, (약) 10 ng/mL 내지 (약) 40 ng/mL, (약) 20 ng/mL 내지 (약) 40 ng/mL, (약) 30 ng/mL 내지 (약) 40 ng/mL의 범위, 예를 들어 (약) 10 ng/mL, 20 ng/mL, 30 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 60 ng/mL, 70 ng/mL, 80 ng/mL, 90 ng/mL, 또는 100 ng/mL의 경구 투여 후 혈액 중의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 최대 농도(Cmax)를 성취하는 양으로, 예를 들어 경구 투여 후 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 적어도 (약) 10 ng/mL, 20 ng/mL, 30 ng/mL, 40 ng/mL, 50 ng/mL, 60 ng/mL, 70 ng/mL, 80 ng/mL, 90 ng/mL, 또는 100 ng/mL의 혈액 중의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 Cmax를 성취하는 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 적어도 약 30분 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12시간의 범위에서 상기 Cmax를 유지하는 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 T 세포 요법제(예를 들어 CAR T 세포 요법제)의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과의 기간 동안(예를 들어 (약) 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 또는 그 초과의 기간 동안) (약) 140 mg 내지 약 560 mg/day의 투여 섭생 요법(dosing regimen)으로 실시된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 세포 요법제의 투여 개시 후 약 14일 초과 내지 약 35일(예를 들어 약 28일 내지 약 35일, 예를 들어 (약) 31, 32, 33, 34 또는 35일)에 개시된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙를 투여할 때, 상기 대상체는 상기 세포 요법제의 투여 후 중증 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포 악성 종양은 NHL, 예를 들어 재발/불응성 공격적인 NHL 또는 DLBCL NHL이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 (약) 6개월 전에 상기 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양의 치료에 따른 완전 반응(CR)을 성취하고, 상기 치료 후 완화 이후 진행 또는 재발하는 경우 상기 T 세포 투여의 개시 후 (약) 6개월에 종료 또는 중단된다. 일부 구현예에서, 상기 순환 섭생은, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 전체 기간 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, (약) 6개월 후에 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우 상기 기간 종료후 추가로 지속되며, 예를 들어 상기 세포 요법제의 투여 개시 후 6개월 초과동안 지속된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 상기 치료에 따른 완전 반응(CR)을 성취할 때까지, 또는 상기 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양이 상기 치료 후 완화 이후 진행 또는 재발하는 경우 지속된다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법제, 예를 들어 CAR-발현 T 세포는, B 세포 항원에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 B 세포는 CD19이다.
일부 경우, 상기 투여 섭생 요법은 언제든지 및/또는 1회 이상 중단될 수 있다. 일부 경우에, 상기 투여 섭생 요법은, 상기 대상체가 하나 이상의 이상 반응, 용량 제한 독성(DLT), 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증, 혈소판 감소증, 사이토 카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 신경독성 (NT), 예를 들어 섹션 IV에서 기술된 것과 같은 것들을 보이는 경우 중단 또는 변형된다. 일부 구현예에서, 각각의 투여시에 또는 한 주의 특정한 날짜들에서 매일 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 양은, 상기 대상체가 하나 이상의 이상 반응, 용량 제한 독성(DLT), 호중구 감소증 또는 열성 호중구 감소증, 혈소판 감소증, 사이토 카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 신경독성 (NT), 예를 들어 섹션 IV에서 기술된 것과 같은 것들을 보이는 경우 변경된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 7, 14, 21, 28, 35, 또는 42일의 주기동안 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 7, 14, 21, 28, 35, 또는 42일의 주기동안 1일 2회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 7, 14, 21, 28, 35, 또는 42일의 주기동안 1일 3회 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 7, 14, 21, 28, 35, 또는 42일의 주기동안 격일로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 다중 주기, 예를 들어 1 주기 이상으로 투여된다. 일부 구현예에서, 각각의 주기는 대략 7, 14, 21, 28, 35, 또는 42일이다. 일부 측면에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 또는 그 이상의 주기동안 투여된다.
본원에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및 상기 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제, 예를 들어 CAR-T 세포 요법제)는 동시에 또는 거의 동시에 투여된다.
일부 구현예에서, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙은, (약) 0.2 mg/대상체 체중 1kg(mg/kg) 내지 200 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 100 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 50 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 1.0 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 200 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 100 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 10 mg/kg, 10 mg/kg 내지 200 mg/kg, 10 mg/kg 내지 100 mg/kg, 10 mg/kg 내지 50 mg/kg, 50 mg/kg 내지 200 mg/kg, 50 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 100 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 억제제는 약 0.2 mg/대상체 체중 1kg(mg/kg) 내지 50 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 25 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 10 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 5 mg/kg, 0.2 mg/kg 내지 1.0 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 50 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 25 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 10 mg/kg, 1.0 mg/kg 내지 5 mg/kg, 5 mg/kg 내지 50 mg/kg, 5 mg/kg 내지 25 mg/kg, 5 mg/kg 내지 10 mg/kg, 또는 10 mg/kg 내지 25 mg/kg의 용량으로 투여된다.
전술한 구현예 중의 임의의 것에서, 상기 이브루티닙은 경구 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 투여량, 예를 들어 1일 투여량은, 하나 이상의 분할된 용량, 예를 들어 2, 3, 또는 4개 용량으로 투여되거나 또는 단일 제형으로서 투여된다. 키나제 억제제는 단독으로, 약학적으로 허용가능한 담체의 존재하에, 또는 다른 치료제의 존재하에 투여될 수 있다.
당업자는, 예를 들어 특정 제제 및 투여 경로에 따라 키나제 억제제의 투여량을 더 많게 또는 더 적게 사용할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 단독으로 투여되거나 또는 상기 화합물이 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제와 혼합되어 있는 의약 조성물 형태로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 치료하고자 하는 장기 또는 조직에 국소적으로 또는 전신적으로 투여될 수 있다. 예시적인 투여 경로의 예로는 국소, 주사(예를 들어 피하, 근육내, 피내, 복강내, 종양내 및 정맥내), 경구, 설하, 직장, 경피, 경비, 질 및 흡입 경로를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 투여 경로는 경구, 비경구, 직장, 코, 국소 또는 눈 경로이거나 흡입에 의한다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 경구 투여된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 캡슐, 정제 및 분말과 같은 고체 투여 제형, 또는 엘릭시르, 시럽 및 현탁액과 같은 액체 투여 제형으로서 경구 투여된다.
일단 환자의 질병이 호전되면, 예방적인 또는 치료 유지에 적합한 용량으로 조정할 수 있다. 예를 들어 투여량 또는 투여 빈도 또는 양자 모두를, 증상의 함수로서, 목적하는 치료 또는 예방 효과가 유지되는 수준으로 감소시킬 수 있다. 만일 증상이 적절한 수준으로 완화되었으면, 치료를 중단할 수 있다. 그러나, 환자는, 증상이 재발할 경우 장기적으로 간헐적인 치료를 필요로 할 수 있다. 환자는 또한 장기적으로 만성 치료를 필요로 할 수도 있다.
B. 세포 요법제의 투여
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지이며 본 발명에서 제공된 방법, 조성물, 및 제조 물품 및 키트와 연계하여 이용될 수 있다. 예를 들어 입양 T 세포 요법은, 예를 들어 그루엔베르그(Gruenberg) 등의 미국특허출원공개공보 제2003/0170238호; 로젠베르그(Rosenberg)의 미국특허 제4,690,915호; 문헌 「Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). See, e.g., Themeli et al., (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al., (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4): e61338」에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 사용하거나 그와 관련하여 투여되는 상기 세포는 조작된 수용체, 예를 들어 조작된 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR), 또는 T 세포 수용체(TCR)을 함유하거나 또는 그를 함유하도록 조작된다. 상기 조성물 중에는 투여를 위한, 예를 들어 입양 세포 요법제를 위한 약학 조성물 및 제형이 있다. 또한, 상기 제공된 방법에 따라 상기 세포 및 조성물을 대상체, 예를 들어 환자에게 투여하기 위한 치료적 방법, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물이 제공된다.
상기 세포는 일반적으로 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함하는 항원 수용체, 및 트랜스제닉 T 세포 수용체(TCR)와 같은 다른 항원-결합 수용체와 같은 재조합 수용체를 발현한다. 또한, 수용체 중에 다른 키메릭 수용체가 있다. 상기 제공된 방법에서 세포 요법제로서 투여하기 위한 예시적인 조작된 세포는 섹션 II에서 기술된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법은 자가조직 전달(autologous transfer)에 의하여 수행되는데, 자가조직 전달에서 세포는 상기 세포 요법을 받는 대상체로부터 또는 그러한 대상체로부터 유도된 샘플로부터 단리 및/또는 달리는 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 대상체, 예를 들어 치료를 필요로 하는 환자로부터 유래하고, 상기 세포는, 단리 및 가공 다음에 동일한 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어 입양 T 세포 요법은 동종이계 전달(allogeneic transfer)에 의해 수행되는데, 동종이계 전달에서 세포는 상기 세포 요법을 받거나 궁극적으로 받는 대상체, 예를 들어 제1 대상체 이외의 대상체로부터 단리 및/또는 달리는 제조된다. 그러한 구현예에서, 세포는 그 후 동일한 종의 상이한 대상체, 예를 들어 제 2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제 2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제 2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제 2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼타입을 발현한다.
상기 T 세포 요법제의 세포는 투여용으로 제형화된 조성물로, 또는 대안으로는, 별도 투여용으로 제형화된 하나 이상의 조성물(예를 들어 2개의 조성물)로 투여될 수 있다. 상기 세포의 용량(들)은 특정 수 또는 상대적인 수의 세포 또는 조작된 세포, 및/또는 정해진 비율 또는 조성의 2개 이상의 서브-타입을 상기 조성물, 예를 들어 CD4 대 CD8 T 세포 내에 포함할 수 있다.
세포는 볼루스 주입, 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안내 주사, 눈 주위 주사, 망막하 주사, 유리체내 주사, 경 중격 주사, 공막하 주사, 맥락막내 주사, 전방내 주사, 결막하 주사(subconjectval injection), 결막하 주사(subconjuntival injection), 안각건하 주사, 안구후 주사, 안구 주위 주사 또는 후 방 공막 부근 전달에 의한 임의의 적절한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 그것들은 비경구, 폐내 및 비내, 및 국소 치료가 필요한 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 세포의 단일 일시 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 그것은 예를 들어 3일 이하의 기간에 걸쳐 세포의 다중 일시 투여에 의해, 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 용량의 투여 또는 임의의 추가 치료, 예를 들어 림프구고갈 치료, 중재 치료 및/또는 병용 치료는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
질병의 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 타입, 질병의 중증도 및 과정, 이전 치료, 개체의 임상 이력 및 세포에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존할 수 있다. 조성물 및 세포는 일부 구체 예에서 한번의 또는 일련의 치료에 걸쳐 개체에게 적합하게 투여된다.
일부 측면에서 면역결핍(예를 들어 림프구결핍) 치료를 가진 사전 치료 대상체는 입양 세포 치료(ACT)의 효과를 개선시킬 수 있다.
따라서, 일부 구현예에서, 방법은 세포 치료의 개시 전에 개체에 전처리 작용제, 예를 들어 림프구고갈 또는 화학요법 작용제, 예를 들어 사이클로포스파마이드, 플루다라빈, 또는 그의 조합을 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들어 개체는 세포 치료의의 개시 적어도 2일 전, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7 일 전 전처리 작용제를 투여받는다. 일부 구현예에서, 개체는 세포 치료의 개시 7 일 이하 전, 예를 들어 6, 5, 4, 3 또는 2일 이하 이전에 전처리 작용제를 투여받는다.
세포의 투여 후, 일부 구현예에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예를 들어 임의의 다수의 공지 된 방법에 의해 측정된다. 평가하는 파라미터는 생체내, 예를 들어 영상화, 또는 생체외, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이 적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에서 서술된 세포독성 분석과 같은 적합한 공지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
1. 조성물 및 제형
일부 구현예에서, 세포 요법제, 예를 들어 재조합 항원 수용체, 예를 들어 CAR 또는 TCR에 의해 조작된 세포를 포함하는 T 세포 요법제의 세포의 용량은 의약 조성물 또는 제형과 같은 조성물 또는 제형으로서 제공된다. 이러한 조성물은 B 세포 악성 종양의 치료에서와 같이, 제공된 방법 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 사용될 수 있다.
상기 용어 "약학적 제형"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하는 형태이고, 상기 제형이 투여될 대상체에게 허용되지 않는 독성이 있는 부가 성분을 함유하지 않는 제형을 지칭한다.
"약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의 약학적 제형의 성분을 나타내며, 이는 대상체에게 무독성이다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
일부 구현예에서, 조작된 T 세포(예를 들어 CAR T 세포)와 같은 세포 요법은 약학적으로 허용 가능한 담체와 함께 제형화된다. 일부 구현예에서, 담체의 선택은 부분적으로는, 특정 세포 또는 물질 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어 의약 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는, 예를 들어 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2종 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.0001 중량% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는, 예를 들어 문헌 「Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A Ed (1980)」에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로, 사용되는 용량 및 농도에서 수용체에 유독하지 않은 것이며, 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제(예를 들어 염화옥타데실디메틸벤질 암모늄; 염화헥사메토늄, 염화벤잘코늄; 염화벤제토늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기)의 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 소수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함한 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당류; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 조성물 중에 완충제가 포함된다. 적합한 완충제는, 예를 들어 시트르산, 시트르산나트륨, 인산, 인산칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2종 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 그의 혼합물은 통상적으로 총 조성물 중 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 의약 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이, 예를 들어 문헌 「Remington: Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed(May 1, 2005)」에 더욱 상세히 기재되어 있다.
제형은 수용액을 포함할 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한, 각각의 활성이 상호 악영향을 미치지 않는 세포 또는 제제에 의해 치료되는 특정 지표, 질병 또는 장애 상태에 유용한 1종 이상의 활성 성분을 함유할 수 있는데, 예를 들어 그 활성은 세포에 상보성이고 및/또는 각각의 활성은 서로 유해한 영향을 주지 않는 것인 하나 이상의 활성 성분이다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합물 중에 적절히 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 의약 조성물은 화학치료제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카르보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 하이드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성 제제를 추가로 포함한다.
의약 조성물은 일부 구현예에서, 질병 또는 장애 상태의 치료에 유효한 양, 예를 들어 치료적 유효량의 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료 대상체의 주기적 평가에 의해, 치료적 효능을 모니터링한다. 수일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여에 대하여, 질병 상태에 따라, 치료는 원하는 질병 예후에 대한 억제가 나타날 때까지 반복된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 요망되는 용량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다회 볼루스 투여 또는 조성물의 연속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
세포는 표준 투여 기법, 제형 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 상기 조성물의 저장 및 투여를 위하여, 제형 및 시린지 및 바이알과 같은 장치가 제공된다. 세포에 관하여, 투여는 자가 또는 이종의 것일 수 있다. 예를 들어 면역반응 세포 또는 전구세포는 하나의 대상체로부터 얻어질 수 있으며, 동일한 대상체 또는 상용 가능한 상이한 대상체에 투여될 수 있다. 말초혈액 유도 면역반응 세포 또는 그의 전구세포(예를 들어 생체내, 생체외 또는 시험관내 유래)는 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥내 주사 또는 비경구 투여를 포함하여, 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어 유전자 변형된 면역반응 세포를 함유하는 의약 조성물)의 투여 시, 이는 일반적으로 단위 용량의 주사 가능한 형태(용액, 현탁액, 유제)로 제형화될 것이다.
제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 협측, 설하 또는 좌제 투여용의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 비경구로 투여된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "비경구"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 제제 또는 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의해, 말초 전신 전달을 사용하여, 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 조성물은, 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 제조물, 예를 들어 등장성 수용액, 현탁액, 유제, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공된다. 액체 제조물은 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 용이하다. 추가로, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기에 다소 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직과의 접촉 시간을 연장하기 위해 적절한 점성 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어 물, 염수, 인산염 완충 염수, 폴리올(예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이들의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
용매, 예를 들어 적절한 담체, 희석제 또는 부형제, 예를 들어 멸균수, 생리 염수, 글루코스, 덱스트로스 등과의 혼합물에 세포를 혼입시킴으로써, 멸균 주사용 용액을 제조할 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균된 것이다. 멸균은, 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
2. 용량
일부 구현예에서, 용량의 세포가 상기 제공된 방법, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 크기 또는 투여 시기는 대상체의 특정 질병 또는 병태(예를 들어 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양)의 함수로서 결정된다. 일부 경우에, 제공된 설명의 견지에서 특정 질병에 대한 용량의 크기 또는 투여 시기가 실험적으로 결정할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 약 2×105 세포/kg 내지 약 2×106 세포/kg, 예를 들어 약 4×105 세포/kg 내지 약 1×106 세포/kg 또는 약 6×105 세포/kg 내지 약 8×105 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 대상체의 체중 킬로그램당 2×105 개 이하의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데(세포/kg), 예를 들어 약 3×105 세포/kg 이하의, 약 4×105 세포/kg 이하의, 약 5×105 세포/kg 이하의, 약 6×105 세포/kg 이하의, 약 7×105 세포/kg 이하의, 약 8×105 세포/kg 이하의, 약 9×105 세포/kg 이하의, 약 1×106 세포/kg 이하의, 또는 약 2×106 세포/kg 이하이다. 일부 구현예에서, 상기 세포 용량은 대상체의 체중 킬로그램당 약 2×105 개 이상 또는 약 2×105 개의 세포(예를 들어 항원-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포)를 포함하는데(세포/kg), 예를 들어 약 3×105 세포/kg 이상 또는 약 3×105 세포/kg, 약 4×105 세포/kg 이상 또는 약 4×105 세포/kg, 약 5×105 세포/kg 이상 또는 약 5×105 세포/kg, 약 6×105 세포/kg 이상 또는 약 6×105 세포/kg, 약 7×105 세포/kg 이상 또는 약 7×105 세포/kg, 약 8×105 세포/kg 이상 또는 약 8×105 세포/kg, 약 9×105 세포/kg 이상 또는 약 9×105 세포/kg, 약 1×106 세포/kg 이상 또는 약 1×106 세포/kg, 또는 약 2×106 세포/kg 이상 또는 약 2×106 세포/kg이다.
특정 구현예에서, 세포, 또는 세포의 각 서브-유형 집단은 대상체에게 (약) 100만 내지 (약) 1000억 개의 세포수준으로 및/또는 체중 킬로그램당 그러한 양의 세포로 투여될 수 있는데, 예를 들어 대상체의 체중 킬로그램당 100만 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어 (약) 500만개의 세포, (약) 2500만개의 세포, (약) 5억개의 세포, (약) 10억개의 세포, (약) 50억개의 세포, (약) 200억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 400억개의 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), (약) 100만 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어 (약) 500만개의 세포, (약) 2500만개의 세포, (약) 5억개의 세포, (약) 10억개의 세포, (약) 50억개의 세포, (약) 200억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 400억개의 세포 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), 예를 들어 (약) 1000만 내지 (약) 1000억개의 세포(예를 들어 (약) 2000만개의 세포, (약) 3000만개의 세포, (약) 4000만개의 세포, (약) 6000만개의 세포, (약) 7000만개의 세포, (약) 8000만개의 세포, (약) 9000만개의 세포, (약) 100억개의 세포, (약) 250억개의 세포, (약) 500억개의 세포, (약) 750억개의 세포, (약) 900억개의 세포, 또는 상기 수치들 중 임의의 2 가지에 의하여 구획되는 범위), 및 일부 경우 (약) 1억개의 세포 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어 (약) 1억 2천만개의 세포, (약) 2억5천만개의 세포, (약) 3억 5천만개의 세포, (약) 4억 5천만개의 세포, (약) 6억 5천만개의 세포, (약) 8억개의 세포, (약) 9억개의 세포, (약) 30억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 450억개의 세포) 또는 이들 범위들 사이의 및/또는 체중 킬로그램당 임의의 수치이다. 용량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특별한 속성에 따라 다를 수 있다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은, (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 2.5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×105 내지 (약) 1×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×106 내지 (약) 2.5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×106　 내지 (약) 5×106 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×106　 내지 (약) 1×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×107　 내지 (약) 2.5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5×107　 내지 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 5×107　 내지 (약) 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 1×108　 내지 (약) 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, (약) 또는 2.5×108 　 내지 (약) 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 T 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 상기 세포의 용량이 대상체의 체 표면적 또는 체중에 연동되지 않거나 그에 기반하지 않는 세포의 플랫 용량(flat dose) 또는 고정 용량이다.
일부 구현예에서, 예를 들어 상기 대상체가 인간인 경우 상기 용량은 (약) 5×108 개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예를 들어 (약) 2×106, 5×106, 1×107, 5×107, 1×108 2×108, 3×108, 4×108 또는 5×108 개의 범위, 또는 상기 수치값 범위의 임의의 두 수치 사이 범위의 총 상기 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 대상체가 인간인 경우, 상기 용량은 (약) 1×106 내지 (약) 3×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포, 예를 들어 (약) 1×107 내지 (약) 2×108 개의 범위, 또는 상기 수치값 범위의 임의의 두 수치 사이 범위의 총 상기 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 환자는 다중 용량으로 투여받으며, 상기 용량 또는 상기 총 용량은 각각 전술한 수치범위 중의 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 (약) 5×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, (약) 5×105 내지 (약) 1×107 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포, 또는 1×106 내지 (약) 1×107 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 T 세포 또는 총 T 세포(각각의 경계를 포함)를 포함한다.
일부 구현예에서, 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 용량에서, 상기 용량 중의 CD8+ T 세포는 (약) 1×106 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD8+ 세포를 포함하는데, 예를 들어 (약) 5×106 내지 (약) 1×108 개의 그러한 세포, 예를 들어 (약) 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108 또는 5×108 개의 총 그러한 세포, 또는 전술한 수치들 중 임의의 2 수치 사이의 개수이다. 일부 구현예에서, 환자는 다회 용량을 투여받고, 용량 각각 또는 총 용량은 전술한 수치들 중 어느 하나 이내일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 2.5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포(각각의 경계 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 (약) 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 상기 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 용량으로 포함하는, 상기 용량의 상기 CD4+ T 세포는 (약) 1×106 내지 (약) 1×108 개의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 CD4+ 세로를, 예를 들어 (약) 5×106 내지 1×108 개의 세포, 예를 들어 (약) 1×107, 2.5×107, 5×107, 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 개의 총 세포의 범위, 또는 전술한 수치 값들 중의 임의의 2개 값 사이의 범위로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 환자는 다중 용량으로 투여 받으며, 각각의 상기 용량 또는 상기 총용량은 전술한 값들 중의 임의의 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 2.5×107 개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포, (약) 1×107 내지 (약) 0.75×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포(각각의 경계 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 (약) 1×107, 2.5×107, 5×107 7.5×107, 1×108, 1.5×108, 또는 5×108 개의 총 재조합 수용체-발현 CD4+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포의 용량은 대상체에 단일 용량으로 투여되거나 또는 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 또는 그 이상 이내에 1회만 투여된다.
입양 세포 요법과 관련하여, 주어진 "용량"의 투여는 단일 조성물 및/또는 단일 무중단 투여(uninterrupted administration)로서, 예를 들어 단일 주사 또는 연속적 주입으로서 주어진 양 또는 세포의 수의 투여를 포함하고, 또한 3일 이하의 특정 기간에 걸쳐 다중의 개별적인 조성물이나 주입으로 제공되는, 분할 용량으로서 또는 복수의 조성물로서 주어진 양이나 세포의 수의 투여를 포함한다. 따라서, 일부 상황에서, 용량은 특정한 단일 시점에서 개시되거나 주어진 특정 수의 세포의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나 일부 상황에서는, 용량은 3일 이하의 기간에 걸쳐 다회의 주사 또는 주입으로 투여되는데, 예를 들어 3일 또는 2일 동안 1회 또는 하루에 걸친 다중 주입에 의한다.
따라서, 일부 측면에서, 용량의 세포는 단일 의약 조성물로서 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 세포는 용량의 세포를 집합적으로 함유하는 복수의 조성물로서 투여된다.
일부 구현예에서, "분할 용량(split dose)"이라는 용어는 1일을 초과하여 투여되도록 분할된 용량을 가리킨다. 이러한 투약 유형은 본 발명의 방법에 의해 포괄되며 단일 용량인 것으로 간주된다.
따라서, 세포의 용량은 분할 용량, 예를 들어 시간에 따라 투여되는 분할 용량으로서 투여될 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 용량은 2일 이상 또는 3일 이상에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 용량을 분할하는 예시적인 방법은 제 1 일에 용량의 25%를 투여하고 제 2 일에 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 용량의 33%는 제 1 일에 투여되고 나머지 67%는 제 2 일에 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 용량의 10%는 제 1 일에 투여되고, 용량의 30%는 제 2 일에 투여되고, 용량의 60%는 제 3 일에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 용량은 3일 이상에 걸쳐 이루어지지는 않는다.
일부 구현예에서, 투여량의 세포는 각각 투여량 중 일부의 세포를 함유하는 복수 개의 조성물 또는 용액의 투여에 의하여 투여될 수 있는데, 예를 들어 제1 및 제 2 조성물 또는 용액, 필요에 따라 더 다수의 조성물 또는 용액의 투여에 의하는 것이다. 일부 측면에서, 각각 상이한 세포 집단 및/또는 서브-유형을 함유하는 복수 개의 조성물은, 필요에 따라 특정 기간 내에 개별적이거나 독립적으로 투여된다. 예를 들어 세포의 집단 또는 서브-유형은, 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포 및/또는 각각 CD8+-농축된 및 CD4+-농축된 집단, 예를 들어 각각 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작 세포들을 각기 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여량의 투여는 CD8+ T 세포의 투여량 또는 CD4+ T 세포의 투여량을 포함하는 제1 조성물의 투여, 및 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 다른 투여량을 포함하는 제 2 조성물의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 또는 투여량의 투여, 예를 들어 복수 개의 세포 조성물의 투여는 세포 조성물을 개별적으로 투여하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 개별적인 투여는 동시에 또는 어느 순서로든 순차적으로, 수행된다. 일부 구현예에서, 투여량은 제 1 조성물 및 제 2 조성물을 포함하고, 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 (약) 0 내지 (약) 12 시간 간격으로, (약) 0 내지 (약) 6 시간 간격으로 또는 (약) 0 내지 (약) 2 시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여 개시 및 제 2 조성물의 투여 개시는 (약) 2 시간 이하의 간격으로, (약) 1 시간 이하의 또는 (약) 30 분 이하의, (약) 15분 이하의, (약) 10 분 이하의 또는 (약) 5 분 이하의 간격으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제 2 조성물의 투여의 완료 및/또는 개시는 (약) 2 시간 이하, (약) 1 시간 이하, 또는 (약) 30 분 이하, (약) 15분 이하, (약) 10 분 이하 또는 5 분 이하의 간격으로 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물 및 상기 제 2 조성물은 상기 대상체에 투여되기 전에 혼합된다. 일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물 및 상기 제 2 조성물은 상기 투여 전에 짧게(예를 들어 (약) 6시간, 5시간, 4시간, 3시간, 2시간, 1.5시간, 1시간, 또는 0.5시간 이내) 혼합된다. 일부 구현예에서, 상기 제 1 조성물 및 상기 제 2 조성물은 상기 투여 직전에 혼합된다.
일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어 투여량 중 제 1 조성물은 CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제 1 조성물, 예를 들어 투여량 중 제 1 조성물은 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제 1 조성물은 제 2 조성물 이전에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포의 투여량 또는 조성물은 정의된 비율 또는 표적 비율의 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포에 대한 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포, 및/또는 CD8+ 세포에 대한 CD4+ 세포를 포함하는데, 여기의 비율은 선택적으로 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1 사이로, 예를 들어 대략 1:1이다. 일부 측면에서, 표적 비율 또는 원하는 비율의 상이한 세포 집단 (예를 들어 CD4+: CD8+ 비율 또는 CAR+ CD4+: CAR+ CD8+ 비율, 예를 들어 1:1)을 갖는 조성물 또는 투여량의 투여는 상기 집단 중 하나를 함유하는 세포 조성물을 투여한 후 상기 집단 중 다른 것을 포함하는 개별적인 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하는데, 여기서 투여는 상기 표적 비율 또는 원하는 비율로 또는 대략 그러한 비로 이루어진다. 일부 측면에서, 세포의 용량 또는 조성물을 정해진 비율로 투여하면 T 세포 요법의 증폭, 지속성 및/또는 항종양 활성을 개선시킨다.
일부 구현예에서, 대상체는 세포를 복수 용량, 예를 들어 2 이상의 용량 또는 복수의 연속적인 용량으로 투여받는다. 일부 구현예에서, 2 용량이 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 연속 용량을 투여받으며, 에컨대 제 1 용량 투여로부터 대략 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일 후에 제 2 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 용량에 이어 복수의 연속 용량이 투여되며, 예를 들어 연속 용량 투여 후 부가적인 용량 또는 용량들이 투여된다.　일부 구현예에서, 부가적인 용량(들)은 종래 용량들 보다 많다.
일부 측면에서, 제 1 및/또는 연속 용량의 크기는 하나 이상의 기준에 기초하여 결정되는데, 예를 들어 화학요법과 같은 사전 치료에 대한 환자의 반응, 대상체의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 벌크, 크기 또는 정도, 세기, 또는 전이 유형, 단계 및/또는 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성, 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응를 발생할 가능성 또는 이환율에 기초한다.
일부 측면에서, 제 1 용량의 투여와 연속 용량의 투여 사이의 시간은 약 9 내지 약 35일, 약 14 내지 약 28일, 또는 15 내지 27일이다. 일부 구현예에서, 연속 용량의 투여는 제 1 용량의 투여 이후 약 14일 초과 및 약 28일 미만의 시점이다. 일부 측면에서, 제1 및 연속 용량 사이의 시간은 약 21일이다. 일부 구현예에서, 추가의 용량 또는 용량들, 예를 들어 연속 용량은 연속 용량 투여 이후 투여된다. 일부 측면에서, 추가적인 연속 용량 또는 용량은 이전 용량의 투여 이후 적어도 약 14일 및 약 28일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가적인 용량은 이전 용량 이후 약 14일 미만에, 예를 들어 이전 용량의 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13일에 투여된다. 일부 구현예에서, 용량은 이전 용량 이후 약 14일 미만으로 투여되지 않고 및/또는 용량은 이전 용량 이후 약 28일 초과로 투여되지 않는다.
일부 구현예에서, 세포의 용량, 예를 들어 재조합 수용체-발현 세포는 T세포의 제 1 용량 및 T세포의 연속 용량을 포함하는 2 가지 용량 (예를 들어 이중 용량)을 포함하고, 이러한 제 1 용량 및 제 2 용량 중 하나 또는 둘 모두는 T세포의 분할 용량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 일반적으로 질병 부담을 감소시키는데 충분히 효과적일 정도로 크다.
일부 구현예에서, 세포는 원하는 용량으로 투여되는데, 이는 일부 측면에 있어서 원하는 용량 또는 세포수 또는 세포 유형(들) 및/또는 원하는 세포 유형의 비를 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 총 세포수(또는 체중 kg당 세포수) 및 개개의 서브-유형 집단의 원하는 비율, 예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 세포의 용량은 개개 집단에서 세포의, 또는 개개의 세포 유형의 원하는 총 세포수(또는 체중 kg당 세포수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 상기 용량은 이러한 특징의 조합에 기초하는데, 예를 들어 원하는 총 세포수, 원하는 비율, 및 개개 집단에서 원하는 총 세포수와 같은 특징이다.
일부 구현예에서, 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD8+ 및 CD4+ T 세포는 원하는 총 세포의 용량, 예를 들어 원하는 T 세포의 용량의 용인되는 차이로, 또는 그 내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 원하는 세포의 수 또는 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 세포의 수로서, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 최소한의 세포수 또는 체중 단위당 최소한의 세포수이거나, 또는 그보다 많다. 일부 측면에서, 원하는 용량으로 투여된 총 세포 중에서, 각 집단 또는 서브-유형은 원하는 결과 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 비)로, 또는 그 근처에 존재하는데, 예를 들어 그러한 비의 특정 용인 차이 내이거나 오류 내이다.
일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 각 세포 집단 또는 서브-유형의 원하는 용량, 예를 들어 CD4+ 세포의 원하는 용량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 용량의 용인되는 차이로 또는 그 이내로 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 상기 서브-유형 또는 집단의 원하는 세포수, 또는 상기 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위당 원하는 그러한 세포의 수, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 측면에서, 원하는 용량은 최소한의 세포수 또는 체중 단위당 최소한의 세포수이거나, 또는 그보다 많다.
따라서, 일부 구현예에서, 용량은 총 세포의 원하는 고정 용량 및 원하는 비에 기초하고, 및/또는 하나 이상의, 예를 들어 각각 개별적인 서브-유형 또는 서브-집단의 원하는 고정 용량에 기초한다. 따라서, 일부 구현예에서, 용량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량 및 원하는 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비에 기초하고 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량에 기초한다.
일부 구현예에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 서브-유형, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 서브 유형의 원하는 결과 비의 용인 범위에서 또는 그 이내에서 투여된다. 일부 측면에서, 원하는 비는 특정 비일 수 있고 또는 비의 범위일 수 있다. 예를 들어 일부 구현예에서, 원하는 비(예를 들어 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비)는 약 1:5 내지 약 5:1(또는 약 1:5보다 크고, 약 5:1보다 작음), 또는 약 1:3 내지 약 3:1(또는 약 1:3보다 크고, 약 3:1보다 작음), 예를 들어 약 2:1 내지 약 1:5(또는 약 1:5보다 크고, 약 2:1보다 작음)이고, 예를 들어 약 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5이다. 일부 측면에서, 상기 용인되는 차이는 상기 원하는 비의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 및 이들 범위 사이의 임의의 수치를 포함하여 그 이내이다.
특정 구현예에서, 세포의 수 및/또는 농도는 재조합 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포의 수를 지칭한다. 다른 구현예에서, 상기 세포의 수 및/또는 농도는 투여된 모든 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵구(PBMC)의 수 또는 농도를 말한다.
일부 측면에서, 용량의 크기는 하나 이상의 기준에 기초하여 결정되는데, 예를 들어 화학요법과 같은 이전 치료에 대한 환자의 반응, 대상체의 질병 부담, 예를 들어 종양 부하, 벌크, 크기 또는 정도, 세기, 또는 전이 유형, 단계 및/또는 독성 결과, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성, 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응를 발병할 가능성 또는 이환율에 기초한다.
일부 구현예에서, 또한, 방법은 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 림프구고갈 요법제를 발현하는 하나 이상의 추가 용량의 세포를 투여하는 단계를 포함하고/하거나 상기 방법의 하나 이상의 단계가 반복된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 동일하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량은 초기 용량과 상이하며, 예를 들어 초기 용량에 비해 2 배, 3 배, 4배, 5배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 이상 보다 높은 것과 같이, 보다 높거나, 예를 들어 초기 용량에 비해, 2 배, 3 배, 4배, 5배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 이하 보다 낮은 것과 같이, 보다 낮다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 용량의 투여는 초기 치료 또는 임의이 이전 치료에 대한 개체의 반응, 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 정도, 범위, 또는 전이의 타입, 단계와 같은 개체에서 질병 부담, 및/또는 독성 결과를 발생시키는 개체의 가능성 또는 발생률, 예를 들어 CRS, 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기반하여 결정된다.
C. 림프구 고갈 치료(Lymphodepleting Treatment)
일부 측면에서, 제공된 방법은 면역 요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 투여 개시 전에 또는 투여 개시와 동시에, 하나 이상의 림프구 고갈 치료를 수행 중인 것을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 사이클로포스파미드와 같은 포스파미드의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 플루다라빈의 투여를 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 면역고갈(예를 들어 림프구 고갈) 요법을 받는 사전 컨디셔닝(preconditioning) 대상체는 입양 세포 요법(ACT)의 효과를 향상시킬 수 있다. 사이클로스포린과 플루다라빈과의 조합을 비롯한, 림프구 고갈 제제를 이용한 사전 컨디셔닝은, 전달된 세포의 반응 및/또는 지속성을 향상시키는 것을 포함하여, 세포 치료에서 전달된 종양 침윤 림프구(TIL) 세포의 효능을 향상 시키는데 효과적이었다[예를 들어 문헌 「Dudley et al., Science, 298, 850-54 (2002); Rosenberg et al., Clin Cancer Res, 17(13):4550-4557 (2011)」 참조]. 마찬가지로, CAR+ T 세포의 맥락에서, 일부 연구에서는 림프구 고갈 제제, 가장 일반적으로 사이클로포스파미드, 플루다라빈, 벤다무스틴 또는 이들의 조합을 통합시켰으며, 때때로 저선량 방사선 조사를 동반시켰다[문헌 「Han et al. Journal of Hematology & Oncology, 6:47 (2013); Kochenderfer et al., Blood, 119: 2709-2720 (2012); Kalos et al., Sci Transl Med, 3(95):95ra73 (2011); Clinical Trial Study Record Nos.: NCT02315612; NCT01822652」 참조].
이러한 사전 컨디셔닝은 치료의 효능을 약화시킬 수 있는 하나 이상의 다양한 결과의 위험을 감소시키는 것을 목표로 수행될 수 있다. 여기에는 T 세포, B 세포, NK 세포가 IL-2, IL-7 및/또는 IL-15와 같은 사이토카인의 활성화 또는 항상성을 위해 TIL과 경쟁하는 "사이토카인 싱크(cytokine sink)"라고 알려진 현상; 조절 T 세포, NK 세포 또는 면역계의 다른 세포에 의한 TIL 억제; 종양 미세환경에서 음성 조절제의 영향이 포함된다[문헌 「Muranski et al., Nat Clin Pract Oncol. December; 3(12): 668-681 (2006)」 참조].
그러므로 일부 구현예에서, 제공된 방법은 대상체에게 림프구 고갈 치료를 실시하는 것을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 용량 투여의 개시 전에 대상체에게 림프구 고갈 요법을 실시하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 치료는 플루다라빈 및/또는 사이클로포스파미드와 같은 화학요법제를 함유한다. 일부 구현예에서, 세포의 투여 및/또는 림프구갈 치료는 외래 환자 전달을 통해 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 용량 투여의 개시 전에 대상체에게 사이클로포스파미드, 플루다라빈 또는 그의 조합과 같은 림프구 고갈 제제 또는 화학요법제와 같은 사전 컨디셔닝 제제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어 대상체는 첫번째 또는 후속 용량 투여로부터 적어도 2일 전에, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6 또는 7일 전에 사전 컨디셔닝 제제를 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 세포 용량 투여의 개시 전에 7일 이내, 예를 들어 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내에 사전 컨디셔닝 제를 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 상기 세포의 용량 투여의 개시전 2 내지 7일 사이에, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일에 사전 컨디셔닝제(preconditioning agent)를 투여받는다.
일부 구현예에서, 대상체는 (약) 20mg/kg 내지 100mg/kg, 예를 들어 (약) 40mg/kg 내지 80mg/kg의 용량의 사이클로포스파미드로 사전 컨디셔닝된다. 일부 측면에서, 대상체는 (약) 60mg/kg의 사이클로포스파미드(cyclophosphamide)로 사전 컨디셔닝된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 용량으로 투여되거나 또는 다회 투여, 예를 들어 매일, 격일, 또는 매 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 1일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제가 사이클로포스파미드를 포함하는 경우 대상체는 사이클로포스파미드를 포괄적으로 (약) 100mg/m2 내지 (약) 500mg/m2, 예를 들어 (약) 200mg/m2 내지 (약) 400mg/m2, 또는 (약) 250mg/m2 내지 (약) 350mg/m2의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 대상체는 약 300mg/m2의 사이클로포스파미드를 투여받는다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 용량으로 투여되거나 혹은 복수의 용량, 예를 들어 매일, 격일로 또는 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 매일, 예를 들어 1 내지 5일동안, 예를 들어 3 내지 5일동안 투여될 수 있다. 일부 경우, 대상체는 세포 요법의 개시전에 사이클로포스파미드를 3일동안 매일 약 300mg/m2으로 투여받는다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체는 각각 포괄적으로 플루다라빈을 (약) 1mg/m2 내지 (약) 100mg/m2, 예를 들어 (약) 10mg/m2 내지 (약) 75mg/m2, (약) 15mg/m2 내지 (약) 50mg/m2, (약) 20mg/m2 내지 (약) 40mg/m2, (약) 24mg/m2 내지 (약) 35mg/m2, (약) 20mg/m2 내지 (약) 30mg/m2, 또는 (약) 24mg/m2 내지 (약) 26mg/m2의 용량으로 투여받는다. 일부 경우, 대상체는 플루다라빈을 약 30mg/m2의 용량으로 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 25mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 경우에, 상기 대상체는 30mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다. 일부 경우, 플루다라빈은 단일 용량으로 투여되거나 혹은 복수의 용량, 예를 들어 매일, 격일로 또는 3일마다 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 매일, 예를 들어 1일 내지 5일동안, 예를 들어 3일 내지 5일동안 투여될 수 있다. 일부 경우, 상기 대상체는 세포 요법의 개시전에 3일동안 매일 약 30mg/m2의 플루다라빈을 투여받는다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈 제제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합과 같은 제제의 조합을 포함한다. 따라서, 이러한 제제의 조합은 사이클로포스파미드를 전술한 것과 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴로, 그리고 플루다라빈을 전술한 것과 같은 임의의 용량 또는 투여 스케쥴로 포함할 수 있다. 예를 들어 일부 측면에서, 대상체는 세포 투여 전에, 60mg/kg(~2 g/m2)의 사이클로포스파미드 및 3 내지 5 용량의 25mg/m2 플루다라빈을 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 3일동안 매일 약 300mg/m2의 사이클로포스파미드 및 약 30mg/m2의 플루다라빈를 매일 투여받는다. 일부 구현예에서 상기 사전 컨디셔닝 투여 스케쥴은 상기 세포의 용량 투여의 개시 전에 2 내지 7일 사이, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일에 종료한다.
예시적인 한 가지 투여 요법으로서, 1차 용량 투여에 앞서, 대상체는 세포 투여 1일 전에 키나제 억제제와 사이클로포스파미드 및 플루다라빈(CY/FLU)의 림프구 고갈 사전 컨디셔닝 화학요법을, CAR-발현 세포의 1차 투여로부터 적어도 2일 전에, 일반적으로 상기 세포 투여 전 7일 이내에 투여받는다. 경우에 따라, 예를 들어 사이클로포스파미드는 BTK 억제제의 투여로부터 24 내지 27일 후에 투여받는다. 사전 컨디셔닝 처리 후, 대상체에게 전술한 바와 같은 CAR-발현 T 세포의 용량을 투여한다.
일부 구현예에서, 세포 용량의 주입 전에 사전 컨디셔닝 제제의 투여는 치료 결과를 개선시킨다. 예를 들어 일부 측면에서, 사전 컨디셔닝은 그 용량으로 치료 효능을 향상시키거나, 대상체에서 재조합 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 지속성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 사전 컨디셔닝 처리는 세포 투여 후, 주어진 기간 후에 최소한도의 잔여 또는 분자 검출가능한 질병도 나타내지 않으면서 대상체가 살아있는 무병 생존을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 무병 생존 중앙값까지의 시간이 증가된다.
일단 세포가 대상체(예를 들어 사람)에 투여되면, 일부 측면에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정된다. 평가할 파라미터는 생체내에서 예를 들어 이미징 또는 생체외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 계측법에 의한, 조작된 또는 자연의 T 세포 또는 다른 면역 세포의 항원에 대한 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌 「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에 설명된 세포독성 분석과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 CD107a, IFNγ, IL-2 및 TNF와 같은 특정 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정될 수 있다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하의 감소와 같은 임상적 결과를 평가함으로써 측정된다. 일부 측면에서, 독성 결과, 세포의 지속성 및/또는 확장, 및/또는 숙주 면역 반응의 존재 또는 부재가 평가된다.
일부 구현예에서, 세포 용량의 주입 전에 사전 컨디셔닝 제제의 투여는 용량으로 대상체에서 치료 효과를 개선하거나 또는 재조합 수용체-발현 세포(CAR-발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포)의 지속성을 증가시킴으로써 치료 결과를 향상시킨다. 그러므로, 일부 구현예에서, BTK 억제제와 세포 요법과의 조합 요법인 방법에서 주어지는 사전 컨디셔닝 제제의 용량은 BTK 억제제가 사용되지 않는 방법에서 주어지는 용량보다 높다.
II. T 세포 치료 및 조작 세포
일부 구현예에서, 제공된 병용 요법에 따라 사용하기 위한 세포 요법(예를 들어 T 세포 요법)은 질병 또는 병태, 예를 들어 암, 예를 들어 B 세포 악성 종양과 관련된 항원을 인식 및/또는 특이적으로 결합하도록 설계된 재조합 수용체를 투여하는 것을 포함한다. 수용체는 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR), 및 다른 트랜스제닉 T 세포수용체(TCR)을 포함하는 다른 트랜스제닉 항원 수용체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 조작된 수용체 또는 재조합 수용체, 예를 들어 조작된 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 함유하거나 또는 그를 함유하도록 조작된다. 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로, 일부 측면에서는 링커 및/또는 막관통 도메인(들)(transmembrane domain(s))을 통해서 하나 이상의 세포내 신호 전달 구성요소에 연결된 세포외 항원(또는 리간드)를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 조작된 세포는 예를 들어 입양 세포 요법을 위한, 대상체에게 투여하는데 적합한 약학 조성물 및 제형으로 제공된다. 또한 상기 세포 및 조성물을 대상체, 예를 들어 환자에게 투여하기 위한 치료방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정될 대, 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 결합시킴으로써 세포를 먼저 자극함으로써 유전자 전달을 수행하고, 이어서 활성화된 세포의 형질 도입 및 배양물의 임상적 적용을 위한 충분한 수의 확장을 포함한다.
A. 키메라 항원 수용체
제공된 방법 및 용도의 일부 구현예에서, 상기 조작된 세포, 예를 들어 T 세포는, 세포내 신호 도메인으로 원하는 항원(예를 들어 종양 항원)에 대한 특이성을 제공하는 리간드-결합 도메인(예를 들어 항체 또는 항체 단편)을 조합하는 하나 이상의 도메인을 함유하는, 키메라 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 도메인은 1차 활성화 신호를 제공하는 T 세포 활성화 도메인과 같은 활성화 세포내 도메인 부분이다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 도메인은 효과기 기능을 용이하게 하기 위해 공동자극 신호 도메인을 함유하거나 추가로 함유한다. 상기 분자, 예를 들어 항원에 대한 특이적 결합시에, 상기 수용체는 일반적으로 면역 자극 신호, 예를 들어 ITAM-형질도입 신호를 상기 세포에 전달함으로써 상기 질병 또는 병태에 표적화된 면역 반응을 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 면역 세포 내로 유전적으로 조작될 때 키메라 수용체는 T 세포 활성을 조절할 수 있고, 일부 경우에, T 세포 분화 또는 항상성을 조절할 수 있어, 입양 세포 치료 방법에 사용하기 위한 것과 같은, in vivo 향상된 장수, 생존 및/또는 지속성을 가진 유전적으로 조작된 세포를 초래한다.
CAR를 포함하는 예시적인 항원 수용체 및 그러한 수용체를 세포 내로 조작 및 도입하기 위한 방법은 예를 들어 국제 특허 출원 공개 번호 WO2000/14257, WO2013/126726, WO2012/129514, WO2014/031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, 미국 특허 출원 공개 번호 US2002/131960, US2013/287748, US2013/0149337, 미국 특허 번호 US6,451,995, US7,446,190, US8,252,592, US8,339,645, US8,398,282, US7,446,179, US6,410,319, US7,070,995, US7,265,209, US7,354,762, US7,446,191, US8,324,353, US8,479,118, 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416에서 서술된 것 및/또는 Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75에서 서술된 것을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 미국 특허 번호 7,446,19에서 서술된 바와 같은 CAR, 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014055668 A1에서 서술된 것을 포함한다. CAR의 예시는 상기 언급된 출판물, WO2014/031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 US7,446,190, 미국 특허 번호 US78,389,282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; 및 Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177)와 같은, 하나에서 서술된 바와 같은 CAR를 포함한다. WO2014/031687, US8,339,645, US 7,446,179, US2013/0149337, 미국 특허 번호 US7,446,190, 및 미국 특허 번호 US8,389,282, WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US2013/0149337, 미국 특허 번호 US7,446,190, 및 미국 특허 번호 US8,389,282을 역시 참고한다.
일부 구현예에서, 상기 조작된 세포, 예를 들어 T 세포는 특정 항원(또는 마커 또는 리간드), 예를 들어 특정 세포 유형의 표면에서 발현된 항원에 대해 특이성을 갖는 재조합 수용체 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현한다. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 또는 비-표적화 세포 또는 조직과 비교하여 질병 또는 병태의 세포, 예를 들어 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포에서 발현되고 및/또는 조작된 세포에서 발현된다.
일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화된 항원은 다수의 공지된 B 세포 마커의 하나와 같은 B 세포 악성 종양과 연관된 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나 이를 포함한다. 특정 측면에서, 상기 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, 상기 항원 중의 어느 하나는 인간 B 세포 상에 발현된 항원이다.
상기 키메라 수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 항체 분자의 항원-결합 부분(들)인 세포외 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 항체 분자의 일부, 일반적으로는 상기 항체의 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역, 예를 들어 scFv 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은 단일 도메인 항체(sdAb), 예를 들어 sdFv, 나노바디, VHH 및 VNAR이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 유연성 링커에 의해서 결합된 항체 가변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편(예를 들어 scFv 또는 VH 도메인)은 항원, 예를 들어 CD19를 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 CD19를 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편으로부터 유도되거나 그의 변이체이다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 CD19이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 함유한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 FMC63 및 SJ25C1과 같은 마우스 유래 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 예를 들어 미국공개특허공보 제US2016/0152723호에 서술된 바와 같은, 인간 항체이다.
일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은, 일부 측면에서 scFv일 수 있는, FMC63으로부터 유도된 VH 및/또는 VL를 포함한다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 단일클론 IgG1 항체를 지칭한다[문헌 「Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302」 참조]. 일부 구현예에서, 상기　FMC63 항체는 각각, 서열번호 38 및 39에 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2 및 서열번호 40 또는 54에 제시된 CDR-H3 및 서열번호 35에 제시된 CDR-L1 및 서열번호 36 또는 55에 제시된 CDR-L2 및 서열번호 37 또는 56에 제시된 CDR-L3을 포함한다.　일부 구현예에서, 상기 FMC63 항체는 서열번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 scFv는 서열번호 35의 CDR-L1 서열, 서열번호 36의 CDR-L2 서열, 및 서열번호 37의 CDR-L3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 38의 CDR-H1 서열, 서열번호 39의 CDR-H2 서열 및 서열번호 40의 CDR-H3 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 그와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 임의의 것의 변이체를 포함한다. 　일부 구현예에서, scFv는 서열번호 41에 기재된 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 서열번호 42에 기재된 FMC63의 가변 경쇄 영역, 또는 그와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 임의의 것의 변이체를 포함한다.　 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다.　 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 59에 제시된다.　 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VH, 링커, 및 VL를 포함한다.　 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VL, 링커, 및 VH를 포함한다.　 일부 구현예에서, scFc는 서열번호 57에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열번호 57와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 코딩된다.　 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 43에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 43과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 항원-결합 도메인은, 일부 측면에서 scFv일 수 있는, SJ25C1로부터 유도된 VH 및/또는 VL를 포함한다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 단일클론 IgG1 항체이다[문헌 「Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302」 참조]. 일부 구현예에서, 상기 SJ25C1 항체는 서열번호 47-49로 각각 제시되는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3, 서열번호 44-46으로 각각 제시되는 CDR-L1, L2 및 L3를 포함한다.　 일부 구현예에서, 상기 SJ25C1 항체는 서열번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 svFv는 서열번호 44의 CDR-L1 서열, 서열번호 45의 CDR-L2 서열, 및 서열번호 46의 CDR-L3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 서열번호 47의 CDR-H1 서열, 서열번호 48의 CDR-H2 서열 및 서열번호 49의 CDR-H3 서열을 포함하는 가변 중쇄, 또는 그와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 임의의 것의 변이체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 scFv는 서열번호 50에 기재된 SJ25C1의 가변 중쇄 영역 및 서열번호 51에 기재된 SJ25C1의 가변 경쇄 영역, 또는 그와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 임의의 것의 변이체를 포함한다.　 일부 구현예에서, 상기 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다.　 일부 구현예에서, 상기 링커는 서열번호 52에 제시된다.　 일부 구현예에서, 상기 scFv는, 순서대로, VH, 링커, 및 VL를 포함한다.　 일부 구현예에서, 상기 scFv는, 순서대로, VL, 링커, 및 VH를 포함한다.　 일부 구현예에서, scFv는 서열번호 53에 기재된 아미노산 서열 또는 서열번호 53와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
본 발명에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 폴리클로날 및 모노클로날 항체를 포함하고, 예를 들어 온전한 항체 및 기능적 (항원-결합) 항체 단편, 예를 들어 항원 결합 단편(Fab), F(ab')2 Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 가변 중질 사슬 사슬(VH) 영역, 단일 사슬 항체 단편, 예를 들어 단일 사슬 가변 단편(scFv) 및 단일 도메인 항체(예를 들어 sdAb, sdFv, 나노바디, VHH 또는 VNAR) 단편이다. 상기 용어는 유전적으로 조작된 및/또는 달린 변형된 형태의 면역글로불린들, 예를 들어 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 헤테로 컨쥬게이트 항체, 다중 특이적, 예를 들어 이중 특이적 항체, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv이다. 달리 언급하지 않는한, 용어 "항체"는 그의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장 항체를 포함하는데, 예를 들어 IgG 및 그 서브 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 부류 또는 하위-부류의 항체이다. 일부 측면에서, 상기 CAR은 예를 들어 상이한 특이성을 갖는 2개의 항원-결합 도메인을 함유하는 이중특이적 CAR이다.
일부 구현예에서, 항원-결합 단백질, 항체 및 그의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중질 사슬 및 경질 사슬은 전장일 수 있거나 항원-결합 부분(Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일쇄 Fv 단편(scFv))일 수 있다. 다른 구현예에 있어서, 항체 중질 사슬 불변 영역은 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE로부터 선택되고, 특히 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택되며, 더욱 특히 IgG1(예를 들어 인간 IgG1)이다. 또 다른 구현예에 있어서, 항체 경질 사슬 불변 영역은 예를 들어 카파 또는 람다로부터 선택되고, 특히 카파이다.
"초가변 영역(hypervariable region)" 또는 "HVR)과 동의어인 용어 "상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 및 "CDR"은 일부 경우에, 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는, 항체 가변 영역 내에서 아미노산의 비-연속적 서열을 지칭하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 각각의 중질 사슬 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 그리고 각각의 경질 사슬 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 존재한다. "프레임워크 영역(Framework region)" 및 "FR"은 일부 경우에 중질 및 경질 사슬의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 알려져 있다. 일반적으로 각각의 전장 중질 사슬 가변 영역(full-length heavy chain variable region )에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3, and FR-H4)이 그리고 전장 경질 사슬 가변 영역(full-length light chain variable region)에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3, and FR-L4)이 존재한다.
주어진 CDR 또는 FR의 정밀한 아미노산 서열 경계는, 문헌 「Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest," 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD ("Kabat" numbering scheme); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 ("Chothia" numbering scheme); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), "Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography," J. Mol. Biol. 262, 732-745." ("Contact" numbering scheme); Lefranc MP et al., "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains," Dev Comp Immunol, 2003 Jan; 27(1):55-77 ("IMGT" numbering scheme); Honegger A and Pluckthun A, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool," J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, ("Aho" numbering scheme); and Martin et al., "Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm," PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, ("AbM"numbering scheme)」 에 기술된 것들을 포함하여 다수의 익히 공지된 기법(scheme) 중의 임의의 것을 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 기법에 따라 변할 수 있다. 예를 들어 상기 카밧 기법(Kabat scheme)은 구조적 정렬에 기반한 반면, 상기 초티아 기법(Chothia scheme)은 구조 정보에 기초한다. 상기 카밧 및 초티아 기법 둘 다에 대한 넘버링은, 삽입 문자, 예를 들어 "30a"에 의해 수용되는 삽입, 및 일부 항체에서 나타나는 결실을 갖는, 가장 통상적인 항체 영역 서열 길이에 기초한다. 상기 두가지 기법은 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실("인델(indel")을 위치시켜서 차동 번호(differential numbering)를 매긴다. 상기 콘택트 기법(Contact scheme)은 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 하고 여러 측면에서 코티아 넘버링 기법과 유사하다. 상기 에이비엠 기법(AbM scheme)은 옥스포드 에이비엠 항체 모델링 소프트웨어(Oxford Molecular's AbM antibody modeling software)에 의해서 사용된 것에 기초한 상기 카밧과 코티아의 정의 사이의 절충이다.
하기 표 2는 각각 카밧, 초티아, 에이비엠 및 콘택트 기법에 의해서 식별된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적 위치 경계를 수록한다. CDR-H1에 있어서, 카밧 및 초티아 넘버링 기법 둘 다를 이용한 잔기 넘버링이 수록되어 있다. FR은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치된 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치된 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치된 FR-L3 등으로 CDR 사이에 위치된다. 나타낸 카밧 넘버링 기법은 H35A 및 H35B에서 삽입을 하기 때문에, 나타된 카밧 넘버링 규칙을 이용하여 넘버링될 때 초티아 CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
Figure pct00022
따라서, 달리 명되지 않는 한, 주어진 항체 또는 그의 영역의 "CDR" 또는 "상보적 결정 영역" 또는 개별적으로 지정된 CDR(예를 들어 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), 예를 들어 그의 가변 영역은 임의의 상기 언급된 기법, 또는 다른 공지된 기법에 의해 정의된 (또는 특정) 상보적 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어 특정 CDR(예를 들어 CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에서 상응하는 CDR의 아미노산 서열을 함유하는 것으로 언급되는 경우, 상기 CDR은 전술한 기법, 또는 다른 공지 기법 중의 임의의 것에 의해서 정의된 가변 영역 내의 상응하는 CDR(예를 들어 CDR-H3)의 서열을 갖는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 특정된다. 제공된 항체는 임의의 다른 상기 넘버링 기법 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 기법 중의 임의의 기법에 따라 기재된 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되어야 하지만, 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 기법을 이용하여 기술된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 그의 영역, 예를 들어 그의 가변 영역의 FR 또는 개별적으로 특정된 FR(들)(예를 들어 FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)는 공지 기법 중의 임의의 것으로 정의된 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에는 특정 CDR, FR, 또는 FR 또는 CDR의 식별 기법, 예를 들어 상기 카밧, 초티아, 에이비엠 또는 콘택트 방법, 또는 다른 공지 기법이 특정된다. 다른 경우에는 CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체와 항원의 결합에 관여하는 항체 중질 사슬 또는 경질 사슬의 도메인을 말한다. 자연 항체의 중질 사슬(heavy chanin) 및 경질 사슬(light chain)의 가변 영역(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4 개의 보존된 구조 영역 (FR) 및 3 개의 CDR을 포함한다[예를 들어 문헌 「Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)」 참조]. 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는, 각각 상보적 VH 또는 VL 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다[예를 들어 문헌 「Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)」 참조].
제공되는 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부분을 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 말한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 가변 중질 사슬(VH) 영역, 단일-쇄 항체 분자, 예를 들어 scFv 및 단일 도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성되는 다중 특이적 항체를 포함한다. 특정 구현예에 있어서, 항체는 가변 중질 사슬 영역 및/또는 가변 경질 사슬 영역, 예를 들어 scFv을 포함하는 단일-쇄 항체 단편이다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체와 항원의 결합에 관여하는 항체 중질 사슬 또는 경질 사슬의 도메인을 말한다. 자연 항체의 중질 사슬(heavy chanin) 및 경질 사슬(light chain)의 가변 도메인(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4 개의 보존된 구조 영역 (FR) 및 3 개의 CDR을 포함한다[예를 들어 문헌 「Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)」 참조]. 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는, 각각 상보적 VH 또는 VL 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다[예를 들어 문헌 「Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)」 참조].
단일-도메인 항체(sdAb)는 항체의 중질 사슬 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경질 사슬 가변 도메인의 전부 또는 일부분을 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에 있어서, 단일-도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 항원에, 예를 들어 종양 세포 또는 암세포와 같은 표적화되는 질병의 세포의 암 마커 또는 표면 항원, 예를 들어 본원에서 기술되거나 공지된 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중질 사슬 도메인을 포함한다. 예시적 단일-도메인 항체는 sdFv, 나노항체, VHH 또는 VNAR을 포함한다.
항체 단편은 다양한 기술에 의해 제조될 수 있으며, 예를 들어 온전한 항체의 단백질 분해성 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합적으로-생산된 단편인데, 예를 들어 자연적으로 존재하지 않는 배열을 포함하는 단편, 예를 들어 펩티드 링커와 같은 합성 링커에 의해 결합되는 2 개 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것들, 및/또는 자연적으로-존재하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성될 수 없는 것들이다. 일부 구현예에서, 상기 항체 단편은 scFv이다.
"인간화된" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR로부터 유도된 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유도된 항체이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유도된 항체 불변 영역의 적어도 일부분을 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 "인간화된 형태"는 모태 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 통상 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비-인간 항체의 변이체를 말한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선시키기 위하여 비-인간 항체(예를 들어 그로부터 CDR 잔기가 유도된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
일부 측면에서, 상기 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체는 하나 이상의 리간드-(예를 들어 항원-) 결합 도메인, 예를 들어 그의 항체 또는 단편, 및 하나 이상의 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인(세포질 신호 도메인 또는 영역으로도 불리워짐)을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 스페이서 및/또는 막관통 도메인 또는 부분을 더 포함한다. 일부 측면에서, 상기 스페이서 및/또는 막관통 도메인은 상기 리간드-(예를 들어 항원-) 결합 도메인 및 상기 세포내 신호 전달 영역(들) 또는 도메인(들)을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체 예를 들어 상기 CAR은 스페이서를 더 포함하고, 이것은 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역, 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역과 같은 면역 글로불린 불변 영역(immunoglobulin constant region) 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부일 수 있거나 이를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 불변 영역 또는 부분은 인간 IgG, 예를 들어 IgG4 또는 IgG1의 영역이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 일부는 항원-인식 성분, 예를 들어 scFv 및 막관통 도메인 사이의 스페이서 영역으로 작용한다. 상기 스페이서는 상기 스페이서가 없을 때와 비교하여 항원 결합 후 상기 세포의 반응성을 증가시키는 길이를 가질 수 있다. 일부 예에서 상기 스페이서는 길이가 약 12개 아미노산들(amino acids)이거나 길이가 12개 이하인 아미노산들이다. 예시적인 스페이서들은 약 10 내지 229개 이상의 아미노산들, 약 10 내지 200개의 아미노산들, 약 10 내지 175개의 아미노산들, 약 10 내지 150개의 아미노산들, 약 10내지 125개의 아미노산들, 약 10 내지 100개의 아미노산들, 약 10 내지 75개의 아미노산들, 약 10 내지 50개의 아미노산들, 약 10 내지 40개의 아미노산들, 약 10 내지 30개의 아미노산들, 약 10 내지 20개의 아미노산들 또는 약 10 내지 15개의 아미노산들을 가지는 스페이서들을 포함하고, 임의의 상기 나열된 범위들의 상기 종점들 사이에 있는 임의의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12개 이하의 아미노산들, 약 119개 이하의 아미노산들 또는 약 229개 이하의 아미노산들을 가진다. 예시적인 스페이서들은 IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인들에 연결되는 IgG4 힌지 또는 CH3 도메인에 연결되는 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서들은 문헌 「Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol Res. 3(2): 125-135」 또는 국제공개공보 제WO2014/031687호에 기재된 것들을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 스페이서는 단지 IgG의 힌지 영역, 예를 들어 단지 IgG4 또는 IgG1의 힌지 영역, 서열번호 1에 제시되고 서열번호 2에 제시된 서열에 의해서 인코딩된 스페이서의 힌지만을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지, 예를 들어 CH2 및 CH3 도메인에 연결되고, 예를 들어 서열번호 3에 제시된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지, 예를 들어 단지 CH3 도메인에 연결되고, 예를 들어 서열번호 4에 제시된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 다른 유연성 링커(flexible linker) 예를 들어 공지의 유연성 링커이거나 또는 그를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 일정한 영역 또는 부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 서열번호 1, 3, 4 및 5 중의 어느 것과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산의 서열을 갖는다.
일부 측면에서, 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1, 3-5, 27-34 또는 58에 제시된 아미노산의 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체로 구성되거나 또는 그들을 포함거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]로 구성되거나 또는 그들을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 수용체는 세포외 도메인에 직접 또는 간접적으로 연결된 세포내 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포외 도메인 및 세포내 신호 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 도메인은 ITAM을 포함한다. 예를 들어 일부 측면에서, 항원 인식 도메인(예를 들어 세포외 도메인)은 CAR, 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호의 경우에, TCR 복합체와 같은, 항원 수용체 복합체를 통해 활성화를 모방하는 신호 성분과 같은, 하나 이상의 세포내 신호 성분에 일반적으로 연결된다. 일부 구현예에서, 키메릭 수용체는 세포외 도메인 (예를 들어 scFv)과 세포내 신호 도메인 사이에 연결되거나 융합된 막관통 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 항원-결합 성분(예를 들어 항체)은 하나 이상의 막관통 및 세포내 신호 도메인에 연결된다.
한 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR의 도메인들 중 하나와 자연적으로 결합된 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호 작용을 최소화하기 위해, 동일한 또는 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 이러한 도메인이 결합하는 것을 회피하도록 선택되거나, 아미노산 치환에 의하여 변형된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 자연원 또는 합성원으로부터 유도된다. 상기 유도원이 자연인 경우, 일부바 측면에 있어서 상기 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유도된다. 막관통 영역은 T 세포수용체, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, (4-1BB), 또는 CD154의 알파, 베타 또는 제타 사슬로부터 유도된 것들을 포함한다(즉, 적어도 그의 막관통 영역을 포함). 대안으로, 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성인 것이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 삼중체가 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한다. 일부 측면에서, 상기 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 상기 세포외 도메인 및 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서 상기 세포외 도메인 및 막관통은 스페이서, 예를 들어 본원에 기술된 임의의 것에 의해서 연결된다.
일부 구현예에서, 상기 수용체, 예를 들어 상기 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 또는 그의 변이체의 막관통 도메인, 예를 들어 인간 CD28(수탁번호: P10747.1)의 27-아미노산 막관통 도메인이거나, 또는 서열번호 8에 제시된 아미노산의 서열 또는 서열번호 8과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산의 서열을 포함하는 막관통 도메인이다. 일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체의 상기 막관통-도메인 함유 부분은 서열번호 9에 제시된 아미노산의 서열 또는 그와 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 적어도 하나의 세포내 신호 전달 구성요소(들), 예를 들어 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인을 포함한다. T 세포 활성화는 일부 측면에서는 2가지 부류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR(1차 세포질 신호 전달 서열)을 통해 항원 의존적 1차 활성화를 시작하는 것 및 2차 또는 공동 자극 신호를 제공하기 위해 항원 독립적 방식으로 작용하는 것(2차 세포질 신호 전달 서열)에 의해서 매개되는 것으로 기술된다. 일부 측면에서, 상기 CAR은 상기 신호 전달 구성요소들 중의 하나 또는 둘 다를 포함한다. 세포내 신호 전달 영역 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공동자극 수용체와 조합된 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공동자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 근사하는 것들이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고-또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 길이가 2 내지 10 개 사이의 아미노산인 링커, 예를 들어 글리신 및 세린을 함유하는 것, 예를 들어 글리신-세린 이중체를 함유하는 링커가 존재하며, 막관통 도메인과 CAR의 세포질 신호 전달 도메인과의 연결을 형성한다.
일부 구현예에서, CAR의 연결(ligation)에 따라, CAR의 세포질 도메인 또는 세포내 신호 전달 영역은 면역 세포, 예를 들어 CAR를 발현하도록 조작된 T 세포의 정상적인 효과기 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 활성화시킨다. 예를 들어 일부 관점에서는, CAR은 T 세포의 기능, 예를 들어 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예를 들어 사이토카인 또는 다른 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에 있어서, 항원 수용체 성분 또는 공동자극 분자의 세포내 신호 전달 영역의 절단된 부분 또는 영역은 온전한 면역자극 쇄를 대신하여 사용되는데, 예를 들어 그것이 효과기 기능 신호를 전달하는 경우에 그러하다. 일부 구현예에 있어서, 세포내 신호 전달 영역, 세포내 도메인 또는 도메인들을 함유하는 영역은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열을 포함하고, 일부 측면에서는 천연의 상황에서 항원 수용체 결합 다음에 그러한 수용체와 협력하여 작용하고 신호 전달을 개시하는 공-수용체의 서열을 포함하며, 및/또는 이러한 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 세포내 도메인(들)을 포함하는 상기 세포내 신호 전달 영역은 공동자극 신호를 제공하는 데 관여하는 영역 또는 도메인의 세포질 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 CAR은 상기 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역수용체 타이로신계 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 CD3 제타 사슬, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 입실론으로부터 유도된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 세포질 신호 전달 도메인, 그의 일부분, 또는 CD3 제타로부터 유도된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 수용체는 T-세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬와 같은 TCR 복합체의 세포내 구성요소, 예를 들어 CD3 제타 사슬을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 항원-결합 부분은 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 다른 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8 알파, CD8 베타, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부분을 더 포함한다. 예를 들어 일부 측면에서, CAR 또는 다른 키메라 수용체는, CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와, CD8 알파, CD8 베타, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내(또는 세포질) 신호 전달 영역 및/또는 도메인은 인간 CD3 사슬, 선택적으로 CD3 제타 자극성 신호 전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체, 예를 들어 인간 CD3ζ(수탁번호: P20963.2)의 이소폼 3의 112 AA 세포질 도메인 또는 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함하며 이는 미국특허 제7,446,190호 또는 미국특허 제8,911,993호에 설명되어 있다.　일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 SEQ ID NO: 13, 14, 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 13, 14, 또는 15에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
자연 TCR의 관점에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공동자극 시그널을 요구한다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진시키기 위해, 2차 또는 공-자극 시그널을 발생시키는 위한 요소가 또한 CAR에 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공동자극 시그널을 생성하기 위한 요소를 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가적인 CAR은 동일한 세포에서 발현되며, 2차 또는 공동자극 시그널을 생성하기 위한 요소를 제공한다.
일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 T 세포 공동 자극 분자의 세포내 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 CAR은 공동 자극 수용체, 예를 들어 CD28, 4-1BB, OX40(CD134), CD27, DAP10, DAP12, ICOS 및/또는 다른 공동 자극 수용체의 신호 전달 도메인 및/또는 막관통 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 CAR은 CD28 또는 4-1BB, 예를 들어 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 공동 자극 영역 또는 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역 또는 도메인은 인간 CD28의 세포내 공동자극 신호 전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 부분, 예를 들어 그의 41 아미노산 도메인 및/또는 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL이 GG로 치환된 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 SEQ ID NO: 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 10 또는 11에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포내 영역은 4-1BB의 세포내 공동자극 신호 전달 도메인 또는 그의 기능적 변이체 또는 부분, 예를 들어 인간 4-1BB(수탁번호 Q07011.1)의 42-아미노산 세포질 도메인, 또는 그의 기능적 변이체 또는 부분, 예를 들어 SEQ ID NO: 12에 제시된 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 12에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 동일한 CAR은 1차(또는 활성화) 세포질 신호 전달 영역 및 공동자극 신호 전달 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공동자극 요소는 또다른 수용체, 예를 들어 또다른 항원을 인식하는 또다른 CAR에 의해서 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은, 양자가 동일한 세포 상에서 발현되는, 활성화 또는 자극 CAR, 공동자극 CAR을 포함한다(국제공개공보 제WO2014/055668호 참조). 일부 측면에서, 세포는 하나 이상의 자극 또는 활성화 CAR 및/또는 공동자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR을 더 포함하는데(iCARs)[문헌 「Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)」 참조], 예를 들어 그에 의하여 질병-표적 CAR을 통하여 전달된 활성화 신호가 상기 억제성 CAR의 그의 리간드와의 결합에 의하여 감쇠되거나 억제되어, 예를 들어 오프-타겟 효과를 감소시키게 되는, 상기 질병 또는 병태와 관련되고 및/또는 그에 특이적인 것 이외의 항원을 인식하는 CAR이다.
일부 구현예에서, 두 수용체는 각각 세포에 활성화 및 억제성 신호를 유도하고, 그로써 상기 수용체 중 하나에 의한 그의 항원에 대한 결합(ligation)은 상기 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만, 상기 제2 억제성 수용체의 그의 항원에 대한 결합은 그 반응을 억제하거나 완충하는 신호를 유도한다. 예시로는 활성화 CAR 및 억제 CAR(iCAR)의 조합이 있다. 그러한 전략을 사용하여 예를 들어 그와 관련된 표적 외 효과를 감소시키며, 여기서 활성화 CAR은 질병 또는 병태에서 발현되지만 정상 세포 상에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제성 수용체가 정상 세포에서 발현되지만 질병이나 질병 상태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합한다.
일부 측면에서, 키메라 수용체는 억제 CAR (예를 들어 iCAR)이거나 또는 이를 포함하고 세포에서의 ITAM- 및/또는 공동자극 촉진 반응과 같은 면역 반응을 약화시키거나 억제하는 세포내 성분을 포함한다. 이러한 세포내 신호 전달 성분의 예로는 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR을 비롯한 EP2/4 아데노신 수용체를 포함하여, 면역 체크포인트 분자에서 발견되는 것들을 들 수 있다. 일부 측면에서, 조작된 세포는 이러한 억제 분자의 신호 전달 도메인을 포함하거나 그로부터 유도된 억제 CAR을 포함하여, 예를 들어 활성화 및/또는 공동자극 CAR에 의해 유도된 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.
일부 경우에, CAR은 제1, 제 2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합시 CD3-사슬 유도 시그널을 단독으로 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제 2-세대 CAR은 그러한 시그널 및 공동자극 시그널을 제공하는 것으로서, 예를 들어 CD28 또는 CD137과 같은 하나의 공동자극 수용체로부터의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 상이한 공동자극 수용체들의 복수의 공동자극 도메인을 포함하는 것이다.
일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에서 1개 이상, 예를 들어 2개 이상, 공동자극 도메인 및 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28, 및 4-1BB의 세포내 성분을 포함한다
일부 구현예에서, 항원 수용체는 마커를 추가로 포함하고 및/또는 CAR 또는 다른 항원 수용체를 발현하는 세포는 세포 표면 마커와 같은, 대용 마커를 추가로 포함하며, 이는 수용체를 발현하기 위해 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 마커는 그러한 세포 표면 수용체(예를 들어 tEGFR)의 절단된 버전과 같은, CD34, NGFR, 또는 표피 성장 인자 수용체의 전부 또는 일부(예를 들어 절단된 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 절단가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 링커 서열을 인코딩하는 폴리 뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결된다. 예를 들어 마커 및 선택적인 링커 서열은 국제공개공보 제WO 2014031687호에 개시된 바와 같은 것일 수 있다. 예를 들어 마커는 T2A 절단가능한 링커 서열과 같은, 링커 서열에 선택적으로 연결된, 절단된 EGFR(tEGFR)일 수 있다.
절단된 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열번호 7 또는 16에 제시된 아미노산의 서열 또는 서열번호 7 또는 16과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산의 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 서열번호 6 또는 17에 제시된 아미노산의 서열 또는 서열번호 6 또는 17과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산의 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 T 세포의 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예를 들어 세포 표면 단백질, 또는 그의 일부이다. 일부 구현예에서, 분자는 비-자기 분자, 예를 들어 비-자기 단백질, 즉, 세포가 입양될 숙주의 면역계에 의해 "자기"로 인식되지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고 및/또는 유전적 조작을 위한, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것 외에 다른 효과를 생산하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 치료적 분자 또는 입양 전달 및 리간드와의 접촉시 세포의 반응을 향상시키고 및/또는 약화시키기 위해 공동자극 또는 면역 체크포인트 분자와 같은, 인비보에서 세포가 마주치는 리간드와 같은, 일부 원하는 효과를 달리 나타내는 분자일 수 있다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 본원에서 기술된 항체 또는 단편을 함유하는 세포외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 본원에서 기술된 항체 또는 단편을 함유하는 세포외 부분 및 세포내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv 또는 단일-도메인 VH 항체를 포함하고 세포내 도메인은 ITAM을 함유한다. 일부 측면에서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 쇄의 제타 쇄의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, 키메라 항원 수용체는 세포 도메인과 세포내 신호 전달 영역 사이에 배치된 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공동-자극 도메인을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 CD28은 인간 CD28이다. 일부 구현예에서, 상기 4-1BB는 인간 4-1BB이다. 일부 구현예에서, 상기 키메라 항원 수용체는 상기 세포외 도메인과 상기 세포내 신호 전달 도메인 사이에 위치된 막관통 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 상기 세포외 도메인 및 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포외 도메인 및 막관통은 스페이서, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 스페이서에 의해 연결된다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막 횡단 도메인, 및 CD28의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 상기 CAR은 예를 들어 전술한 것 중 임의의 것인 CD19에 특이적인 scFv, 스페이서, 예를 들어 면역글로불린 분자의 일부, 예를 들어 힌지 영역 및/또는 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역, 예를 들어 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유도된 막관통 도메인, CD28-유도된 세포내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타 신호 전달 도메인의 전부 또는 일부를 함유하는 막관통 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR은 항체, 예를 들어 항체 단편, CD28의 막관통 부분 또는 이의 기능적 변이체이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD28의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타의 신호 전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체는 Ig 분자의 일부, 예를 들어 인간 Ig 분자, 예를 들어 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지, 예를 들어 힌지-전용 스페이서를 함유하는 스페이서를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 CAR은 항체 또는 단편, 예를 들어 전술한 것 중 임의의 것인 CD19에 특이적인 scFv, 상기 Ig-힌지 함유 스페이스 중의 임의의 것과 같은 스페이서, CD-28-유도된 막관통 도메인, 4-1BB-유도된 세포내 신호 전달 도메인, 및 CD3 제타-유도된 신호 전달 도메인을 포함한다.
B. 핵산, 백터 및 유전자 조작방법
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 재조합 수용체를 발현하도록 유전자 조작된다. 일부 구현예에서, 상기 조작은 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 도입함으로써 수행된다. 또한 재조합 수용체를 인코딩하는 뉴클레오티드, 및 상기 핵산 및/또는 뉴클레오티드를 함유하는 벡터 또는 컨스트럭트(construct)가 제공된다.
일부 경우에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 서열은 신호 펩티드를 인코딩하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩티드로부터 유도된 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 서열번호 24에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되고 서열번호 25에 제시된 GMCSFR 알파 사슬의 예시적인 신호 펩티드와 같은 이종성 또는 비-고유 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 인코딩하는 핵산 서열은 신호 펩티드를 인코딩하는 신호 서열을 함유한다. 신호 펩티드의 비제한적인 예로는, 예를 들어 서열번호 25에 제시되고 서열번호 24에 기재된 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 GMCSFR 알파 사슬 신호 펩티드, 또는 서열번호 26에 제시된 CD8 알파 신호 펩티드를 들 수 있다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 재조합 수용체의 발현을 조절하기 위해 작동 가능하게 연결된 적어도 하나의 프로모터를 함유한다. 일부 예에서, 폴리뉴클레오티드는 재조합 수용체의 발현을 조절하기 위해 작동 가능하게 연결된 2 개, 3 개 또는 그 이상의 프로모터를 함유한다.　
핵산 분자가 2 개 이상의 상이한 폴리펩티드 사슬, 예를 들어 재조합 수용체 및 마커를 인코딩하는 특정 경우에, 폴리펩티드 사슬의 각각은 별도의 핵산 분자에 의해 인코딩될 수 있다. 예를 들어 2 개의 분리된 핵산이 제공되고, 각각은 세포내에서 발현을 위해 세포내로 개별적으로 전달되거나 도입될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 및 마커를 인코딩하는 핵산은 동일한 프로모터에 작동 가능하게 연결되고, 내부 리보솜 진입 부위(internal ribosome entry site; IRES) 또는 자가 절단 펩티드 또는 선택적으로 T2A, P2A, E2A 또는 F2A인 리보솜 스킵핑을 일으키는 펩티드를 인코딩하는 핵산에 의해 선택적으로 분리된다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 두 개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 세포의 게놈 내의 상이한 위치에 존재하거나 삽입된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 레트로바이러스 형질도입, 형질주입(transfection) 또는 형질전환에 의해 배양된 세포를 함유하는 조성물로 도입된다.
폴리뉴클레오티드가 제 1 및 제 2 핵산 서열을 함유하는 일부 구현예에서, 상이한 폴리펩티드 사슬 각각을 인코딩하는 코딩 서열들(coding sequences)은 동일하거나 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 2 이상의 상이한 폴리펩티드 사슬의 발현을 유도하는 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 핵산 분자는 멀티시스트론(바이시스트론 또는 트리시스트론, 예를 들어 미국특허 제6,060,273호 참조)일 수 있다. 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 유전자 산물(예를 들어 마커를 인코딩하고 재조합 수용체를 인코딩하는 것)의 동시 발현을 허용하는, IRES(내부 리보솜 진입 부위)를 함유하는 바이시스트론 유닛으로서 조작될 수 있다. 별법으로, 일부 경우에서, 단일 프로모터는 자가-절단 펩티드(예를 들어 2A 서열들) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어 퓨린)을 인코딩하는 서열에 의해 서로 분리된 2 또는 3개의 유전자들(예를 들어 마커 인코딩 및 재조합 수용체 인코딩)을 하나의 오픈 리딩 프레임(ORF)에 함유하는, RNA의 발현을 지시할 수 있다. ORF는 따라서 번역 도중(2A의 경우) 또는 번역 후에 개별적인 단백질로 가공되는, 단일 폴리펩티드를 인코딩한다. 일부 경우에서, T2A와 같은 펩티드는, 리보솜으로 하여금 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합 합성을 생략하도록(리보좀 스키핑) 할 수 있는데 이에 의해, 2A 서열의 말단과 다음 펩티드의 하류 사이가 분리된다[예를 들어 문헌 「de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004)」 및 「de Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)」 참조]. 다양한 2A 요소가 알려져 있다. 본원에 개시된 방법 및 시스템에 사용가능한 2A 서열의 비제한적인 예로는, 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어 서열번호 21), 말의 A형 비염 바이러스(E2A, 예를 들어 서열번호 20), 토세아 아시그나 바이러스(Thosea asigna virus)(T2A, 예를 들어 서열번호 6 또는 17), 및 돼지의 테스코바이러스-1(P2A, 예를 들어 서열번호 18 또는 19)을 들 수 있으며 이에 관해서는 미국특허출원공개공보 제US2007/0116690호에 기재되어 있다.
본원에 기재된 임의의 재조합 수용체는 임의의 조합 또는 배열로 재조합 수용체를 인코딩하는 하나 이상의 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있다. 예를 들어 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 폴리뉴클레오티드는 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 상이한 폴리펩티드, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 벡터 또는 구조물은 마커를 인코딩하는 핵산 서열을 함유하고, 별도의 벡터 또는 구조물은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산 및 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 두 개의 상이한 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산은 마커를 인코딩하는 핵산의 하류에 존재한다.
일부 구현예에서, 벡터 골격은 하나 이상의 마커(들)를 인코딩하는 핵산 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 마커(들)는 형질도입 마커, 대리 마커 및/또는 선별 마커이다.
일부 구현예에서, 마커는 형질도입 마커 또는 대리 마커이다. 형질도입 마커 또는 대리 마커는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 도입된 세포를 검출하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 형질도입 마커는 세포의 변형을 나타낼 수 있거나 또는 세포의 변형을 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커는 세포 표면에서 재조합 수용체, 예를 들어 CAR과 세포 표면에서 동시 발현되도록 만들어진 단백질이다. 특정 구현예에서 그러한 대리 마커는 거의 또는 전혀 활성을 갖지 않도록 변형된 표면 단백질이다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 서열은 마커를 인코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결되고, T2A, P2A, E2A 또는 F2A와 같은 2A 서열과 같은 리보솜 스킵을 야기하는 펩티드 또는 자가-절단 펩티드를 인코딩하는 핵산 또는 내부 리보솜 진입 부위(IRES)에 의해 선택적으로 분리된다. 외래 마커 유전자는 어떤 경우에는 조작된 세포와 관련하여 세포의 검출 또는 선별을 가능하게 하고 경우에 따라 세포 자살을 촉진시킬 수 있다.
예시적인 대리 마커는 절단된 형태의 세포 표면 폴리펩티드 예를 들어 비-작용성이고 신호 또는 전장 형태의 세포 표면 폴리펩티드에 의해서 통상적으로 형질도입된 신호를 형질도입하지 않거나 형질도입할 수 없고/없거나 내재화할 수 없는 절단된 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절단된 세포 표피 폴리펩티드는 절단된 형태의 성장 인자 또는 다른 수용체, 예를 들어 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2(예시적인 절단된 세포 표피 폴리펩티드(tHER2), 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체(tEGFR, 서열번호 7 또는 16에 제시된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선 특이적 막 항원(PSMA) 또는 그의 변형된 형태를 포함한다. tEGFR는 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 기타 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있으며, 이는 tEGFR 구조물에 의해 조작된 세포를 확인 또는 선별하고/하거나 상기 인코딩된 외인성 단백질을 발현하는 세포들을 제거 또는 분리하는데 이용될 수 있다[미국특허 제8,802,374호 및 문헌 「Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)」 참조]. 일부 측면에서, 예를 들어 대리 마커와 같은 마커는, CD34, NGFR, CD19 또는 절단된 CD19, 예를 들어 절단된 비-인간 CD19, 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어 tEGFR)의 전부 또는 일부(예를 들어 절단된 형태)를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 형광 단백질, 예를 들어 녹색 형광 단백질(GFP), 강화된 녹색 형광 단백질(EGFP), 예를 들어 슈퍼-폴드 GFP (sfGFP), 적색 형광 단백질(RFP), 예를 들어 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(CFP), 청록색 형광 단백질(BFP), 강화 청색 형광 단백질(EBFP), 및 황색 형광 단백질(YFP), 및 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체 및 코돈-최적화 및/또는 강화된 변이체를 포함하는 그의 변이체이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 루시퍼라아제, E. coli로부터 lacZ 유전자, 알칼리성 포스파타아제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타아제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라아제(CAT)와 같은, 효소이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자는 루시퍼라아제(luc), β-갈락토시다아제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라아제(CAT), β-글루쿠로니다아제(GUS) 또는 그의 변이체를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 외인성 제제 또는 약물에 내성을 부여하는 폴리펩티드이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이고, 포유동물 세포에 항생제 내성을 부여한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 퓨로마이신 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 블라스티시딘 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 제네티신 내성 유전자 또는 제오신 내성 유전자 또는 그의 변형된 형태이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 분자는 비-자기 분자, 예를 들어 비-자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달하게 될 숙주의 면역 시스템에 의해서 "자기"로 인식되지 않는 분자이다.
일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고/않거나 유전자 조작용, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것 이외의 다른 효과를 생성하지 않는다. 다른 구현예에서, 마커는 세포의 반응을 향상시키고/시키거나 약화시키기 위한 공동자극 또는 면역 체크 포인트 분자와 같이 생체 내에서 만날 세포에 대한 리간드와 같은 원하는 효과를 발휘하는 치료 분자 또는 분자일 수 있다.
일부 구현예에서, 마커를 인코딩하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A와 같은 링커 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어 마커, 및 선택적으로 링커 서열은 국제공개공보 제WO2014031687호에 개시된 임의의 것일 수 있다. 예를 들어 마커는 T2A 절단가능한 링커 서열과 같은 링커 서열에 선택적으로 연결된 절단된 EGFR(tEGFR)일 수 있다. 절단된 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는 서열번호 7 또는 16에 제시된 아미노산 서열 또는 서열번호 7 또는 16에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 녹색 형광 단백질(GFP), 증강된 녹색 형광 단백질(EGFP), 예를 들어 수퍼-폴드 GFP(sfGFP), 적색 형광 단백질(RFP)과 같은 형광 단백질, 예를 들어 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(CFP), 청색 녹색 형광 단백질(BFP), 증강된 청색 형광 단백질(EBFP), 및 황색 형광 단백질(YFP)과 같은 형광 단백질 및 상기 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체, 및 코돈-최적화되고/되거나 증강된 변이체를 비롯한, 변이체들이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 루시퍼라제, 대장균 유래의 lacZ 유전자, 알칼라인 포스파타제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타제(SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT)이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자에는 루시퍼라제(luc), β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(CAT), β-글루쿠로니다제(GUS) 또는 그의 변이체가 포함된다.
일부 구현예에서, 마커는 선별 마커이다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 외인성 제제 또는 약물에 내성을 부여하는 폴리펩티드이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 항생제 내성 유전자로서 포유동물 세포에 대해 항생제 내성을 부여한다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 푸로마이신 내성 유전자, 하이그로 마이신 내성 유전자, 블라스티시딘 (Blasticidin) 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 제네티신 내성 유전자 또는 제오신 내성 유전자 또는 이의 변형된 형태이거나 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은, 예를 들어 유인원 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스(AAV)로부터 유래한 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여, 세포내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여, T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25」; 「Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46」; 「Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93」; 「Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557」 참조].
일부 구현예에서, 상기 바이러스 벡터는 아데노-관련 바이러스(AAV)이다.
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복부 서열(LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식성 육종 바이러스(MPSV), 뮤린 배아 줄기세포 바이러스(MESV), 뮤린 줄기세포 바이러스(MSCV) 또는 비장 병소 형성 바이러스(SFFV)로부터 유래한 레트로바이러스 벡터를 가질 수 있다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래한 것을 포함한다. 레트로바이러스는 통상적으로 양쪽성이며, 이는 이들이 인간을 포함하는 여러 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 하나의 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적 레트로바이러스 시스템이 기재된 바 있다[예를 들어 미국특허 제5,219,740호; 제6,207,453호; 제5,219,740호; 문헌 「Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14」; 「Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852」;「Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037」; 및 「Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109」 참조].
렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적 방법은, 예를 들어 문헌 「Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701」; 「Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644」; 「Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114」 및 「Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505」에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기천공을 통해 T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Chicaybam et al., (2013) PLoS ONE 8(3): e60298」 및 「Van Tedeloo et al., (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437」 참조]. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 트랜스포지션(transposition)를 통해 T 세포내로 전달된다[예를 들어 문헌 「Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437」; 「Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74」; 및 「Huang et al., (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126」 참조]. 면역 세포에서 유전 물질을 도입하여, 발현시키는 다른 방법으로는 인산칼륨 형질주입[예를 들어 문헌 「Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.」에 기재된 바와 같음], 원형질체 융합, 양이온성 리포솜 매개 형질주입; 텅스텐 입자 촉진 미립자 충격[문헌 「Johnston, Nature, 346: 776-777(1990)」]; 및 스트론튬 인산염 DNA 공-침전[문헌 「Brash et al., Mol Cell Biol, 7: 2031-2034(1987)」 참조]을 포함한다.
재조합 산물을 인코딩하는 핵산의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터에는, 예를 들어 국제공개공보 제WO2014/055668호 및 미국특허 제7,446,190호에 기재된 것들이 있다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 T 세포는 증식 도중 또는 증식 후에 예를 들어 T 세포 수용체(TCR) 또는 키메라 항원 수용체(CAR)로 형질주입될 수 있다. 원하는 수용체 유전자의 도입을 위한 이러한 형질주입은 예를 들어 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 그 후, 유전적으로 변형된 세포 집단은 초기 자극(예를 들어 항-CD3/항-CD28 자극)으로부터 유리될 수 있고, 이어서, 예를 들어 새로 도입된 수용체를 통하여 제 2 유형의 자극으로 자극될 수 있다. 이 제 2 유형의 자극은 펩티드/MHC 분자 형태의 항원 자극, 유전적으로 도입된 수용체의 동족(가교성) 리간드(예를 들어 CAR의 천연 리간드) 또는(예를 들어 수용체 내 불변 영역을 인식함으로써) 새로운 수용체의 구조 내에 직접 결합하는 기타 리간드(항체 등)를 포함할 수 있다. 예를 들어 문헌 「Cheadle et al, "Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy" Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66 」 또는 「Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014).」를 참조한다.
일부 경우에, 세포, 예를 들어 T 세포가 활성화되는 것을 요하지 않는 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 일부 경우에서, 세포는 활성화 전에 선별 및/또는 형질도입될 수 있다. 따라서, 세포는, 세포의 배양 전에 또는 후에, 그리고 경우에 따라서는 상기 배양과 동시에 적어도 일부의 상기 배양도중에 조작될 수 있다.
부가적인 핵산들 중에서도, 예를 들어 도입을 위한 유전자로는 예를 들어 전달된 세포의 생존능 및/또는 기능을 촉진함으로써 치료 효능을 향상시키는 것들; 예를 들어 생체내 생존 또는 국소화를 위해, 세포의 선별 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하기 위한 유전자; 문헌 「Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991)」에 설명된 바와 같이 생체내 음성 선별에 민감한 세포; 및 T2A, P2A, E2A를 만들어냄으로써, 안정성을 향상시키는 유전자를 들 수 있다. 예를 들어 우세한(dominant) 양성 선별가능한 마커와 음성 선별가능한 마커를 융합시켜 유도된 이중기능성 선별가능한 융합 유전자의 사용에 대해 설명한 문헌 「Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991)」에 설명된 바와 같이 생체내 음성 선별에 민감한 세포; 및 T2A, P2A, E2A를 만들어냄으로써, 안정성을 향상시키는 유전자를 들 수 있다. 또한 예를 들어 Lupton 등의 국제출원 제PCT/US91/08442호 및 제PCT/US94/05601호를 참조한다. 또한 Riddell 등의 미국특허 제6,040,177호의 칼럼 14-17를 참조한다.
C. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포의 준비
일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 예를 들어 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유도된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는 것 같은 다른 생물 또는 세포로부터 얻은 것과 같은 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에 통상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함하여 자연계에서 발견되지 않는 핵산과 같이 자연 발생적 핵산은 아니다.
세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이고, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프 기관으로부터 유래되며, 타고난 면역 또는 적응 면역의 세포, 예를 들어 림프구를 비롯한 골수 또는 림프 세포, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한다. 다른 예시적인 세포는 유도된 만능 줄기 세포(pluripotent stem cell; iPSCs)를 포함하여 다능성 및 만능 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상으로부터 직접 단리된 및/또는 대상으로부터 단리되고 동결된 것과 같은 일차세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포의 하나 이상의 서브 세트 또는 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이들의 모집단과 같은 다른 세포 유형, 예를 들어 기능, 활성화 상태, 성숙도, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획에서의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일 및/또는 분화 정도에 의존적일 수 있다. 치료될 대상과 관련하여, 세포는 동종 및/또는 자기 조직일 수 있다. 방법 중에는 상용 방법이 포함된다. 상용 기술과 같은 일부 측면에서, 세포는 만능성 및/또는 다능성, 예를 들어 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs)와 같은 줄기 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 피험자로부터 세포를 단리하고, 이들을 제조, 가공, 배양하고/하거나 조작하고 동결 보존 전후에 동일 대상으로 도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또 CD4+ 및/또는CD8+ T 세포의 서브 타입 및 하위 집단 중에서, 천연 T(TN) 세포, 효과기 T 세포(TEFF), 메모리 T 세포 및 그의 서브-타입, 예를 들어 줄기 세포 메모리 T(TSCM), 센트럴 메모리 T(TCM), 효과기 메모리 T(TEM), 또는 말단분화 효과기 메모리(terminally differentiated effector memory) T 세포, 종양-침윤 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes; TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼(helper) T 세포, 세포독성 T 세포, 점막 관련 불변 T(mucosa-associated invariant T; TMAIT) 세포, 자연적으로 발생하는 및 적응 조절 T(adaptive regulatory Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예를 들어 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 폴리큘러 헬퍼(follicular helper) T 세포, 알파/베타 T 세포, 및 델타/감마 T 세포가 있다.
일부 구현예에서, 세포는 천연 킬러 세포(NK cell)이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵 세포 또는 과립구, 예를 들어 골수 세포, 대 식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전자 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 예를 들어 조작되는 세포 및/또는 그러한 세포가 유도된 유기체에서 통상적으로 발견되지 않는 세포는 다른 유기체 또는 세포로부터 얻어진 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에 통상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 인코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함하여 자연계에서 발견되지 않는 핵산과 같이 자연 발생적 핵산은 아니다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조단계를 포함한다. CAR과 같은 형질전환 수용체를 인코딩하는 핵산 도입용 세포는 생물학적 샘플, 예를 들어 대상으로부터 수득되거나 이로부터 유도된 샘플과 같은 샘플로부터 분리 될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리된 대상은 질병 또는 증상를 가지거나 세포 치료가 필요하거나 세포 치료가 투여될 대상이다. 일부 구현예에서 환자는 세포가 분리, 가공 및/또는 조작되는 적용 세포 치료와 같은 특정 치료적 개입이 필요한 인간이다.
따라서, 한 구현예에서 세포는 일차 세포, 예를 들어 일차 인간 세포이다. 샘프에는 분리, 원심 분리, 유전자 조작(예를 들어 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입), 세척 및/또는 배양과 같은 하나 이상의 처리 단계에서 생성되는 샘플뿐만 아니라 조직에서 추출한 조직, 유체 및 기타 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 소스 또는 처리된 샘플에서 직접 얻은 샘플일 수 있다. 생물학적 시료로는 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플(이로부터 추출한 가고 샘플 포함)과 같은 체액이 있으나 이에 국한되지 않는다.
한 양상에서, 세포가 유래되거나 분리되는 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이고, 또는 성분 채집술 또는 백혈구 추출물에서 유도된 것이다. 예시적인 샘플은 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 다른 기관에서 유도된 세포, 및/또는 이로부터 유도된 세포를 포함한다. 샘플은 세포 치료와 관련하여, 예를 들어 적용 세포 치료, 자기 및 동종 원천으로부터의 샘플을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주에서 유래한다. 일부 구현예에서 세포는 이종의 소스, 예를 들어 마우스, 래트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화성에 기초한 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 구체예에서, 세포를 세척, 원심 분리 및/또는 하나 이상의 시약의 존재하에, 예를 들어 원하지 않는 성분을 제거하고, 원하는 성분을 풍부하게하고, 특정 시약에 민감한 세포를 용해 시키거나 제거하기 위해 배양한다. 일뷰 구체예에서, 세포는 밀도, 부착 성질, 크기, 민감성 및/또는 특정 성분에 대한 내성과 같은 하나 이상의 특성에 기초하여 분리된다.
일부 구체예에서, 환자의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분 채집술 또는 백혈구 제거에 의해 얻어진다. 샘플에는 T 세포, 단핵 세포, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 비롯한 일부 림프구가 포함되어 있으며 일부 측면에서는 적혈구 및 혈소판 이외의 세포가 포함되어 있다.
일부 구현예에서, 환자로부터 수집된 혈액 세포를 세척하여 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 공정 단계를 위해 적절한 완충액 또는 배지에 세포를 위치시킨다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 환충 식염수(PBS)로 세척한다. 일부 구현예에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 다수 또는 모든 2가 양이온이 부족하다. 일부 측면에서 세척 단계는 반자동 "플로우 스루(flow-through)" 원심 분리기(예를 들어 the Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)를 제조사의 지침에 따라 수행한다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조사의 지시에 따라 접선 유동 여과(TFF)에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어 Ca++/Mg++ 부재 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분을 제거하고 세포를 배양 배지에 직접 재현탁한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 적혈구를 용해시켜 퍼콜(Percoll) 또는 피콜(Ficoll) 구배를 통해 원심 분리하여 말초 혈액으로부터 백혈구를 제조하는 것과 같은 밀도-기반 세포 분리방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어 표면 단백질, 세포내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 마커에 기초한 임의의 공지된 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도 또는 면역 친화성-기재분리이다. 예를 들어 일부 측면에서 단리는 세포의 예를 들어 그러한 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양에 의해, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포 발현 또는 발현 수준에 기초한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함하며, 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포를 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터 분리하는 단계를 포함한다.
이러한 분리 단계는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 보유되는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 보유된 양성 선택 및/또는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일 예에서, 두 분획은 추후 사용을 위해 보유된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어, 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발견된 마커에 기초하여 분리가 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 세포 집단 또는 특정 마커를 발현하는 세포의 100% 농축 또는 제거를 수반할 필요는 없다. 예를 들어 마커를 발현하는 세포와 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 또는 풍부화는 그러한 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 말하지만, 마커를 발현하지 않는 세포가 완전히 없게 할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선별, 제거 또는 고갈은 그러한 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 의미하지만 그러한 모든 세포를 완전히 제거할 필요는 없다.
일부 구체예에서, 한 번의 단계로부터 양 또는 음으로 선택된 분획이 후속적인 양성 또는 음성의 선택과 같은 다른 분리 단계를 거치는 다중 단계의 분리 단계가 수행된다. 일부 구체예에서, 단일 분리 단계는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 세포를 항온 처리함으로써, 복수의 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있으며, 각각은 음성 선택을 목표로 하는 마커에 특이적이다. 마찬가지로, 여러 세포 유형은 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 세포를 배양함으로써 동시에 양성으로 선택될 수 있다.
예를 들어 일부 측면에서, 양성이거나 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+ T 세포의 높은 수준을 발현하는 세포와 같은 T 세포의 하위 집단은 양성 또는 음성 선별 기술에 의해 분리된다.
예를 들어 CD3+, CD28+ T 세포는 항-CD3/항-CD28 콘쥬게이트된 자성 비드(conjugated magnetic bead)(예를 들어 DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T 세포 확장기)를 사용하여 적극적으로 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 음성 선택에 의한 양성 선별 또는 특정 세포군의 고갈에 의해 특정 세포 집단에 대한 농축에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선별는 양성 또는 음성으로 선택된 세포 상에 상대적으로 높은 수준(마커 하이(high))으로 발현되거나 발현되는 하나 이상의 표면 마커(마커+)에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 인큐베이션시킴으로써 달성된다.
일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비 T 세포에서 발현된 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선별 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포를 분리하는데 사용된다. 이러한 CD4+ 및 CD8+ 모집단은 하나 이상의 순진, 메모리 및/또는 효과기 T 세포 하위 집단에서 상대적으로 높은 정도로 발현되거나 표현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는 각각의 부분 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해서, 네이비(naive), 센트럴 메모리, 효과기 메모리(effector memory) 및/또는 센트럴 메모리 줄기 세포(central memory stem cell)를 추가로 풍부하게 하거나 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 센트럴 메모리 T(TCM) 세포에 대한 농축은 증폭 및/또는 생체내 투여를 개선하는 것과 같은 효능을 증가시키기 위해 수행되며, 일부 측면에서는 특히 이러한 하위 집단에서 강건하다[문헌 「Terakura et al. (2012) Blood,1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701」 참조]. 일부 구현예에서, TCM-풍부 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포를 결합시키는 것은 효능을 추가로 강화시킨다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브 세트에 모두 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하는 것과 같은, CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획을 풍부하게 하거나 고갈시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 센트럴 메모리(central memory) T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및/또는 CD127의 양성 또는 고표면 발현에 기초하며; 일부 측면에서 그것은 CD45RA 및/또는 그랜자임 B(granzyme B)를 발현하거나 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 구현예에서 TCM 세포에 대한 풍부한 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선별 또는 농축에 의해 수행된다. 일부 측면에서, 센트럴 메모리 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L에 기초한 양성 선별을 실시한 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행한다. 일부 측면에서, 이러한 선택은 동시에 수행되고 다른 양상에서는 어느 순서로 순차적으로 수행된다. 일부 구현예에서, CD8+ 세포 집단 또는 부분 집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현-기반 선택 단계는 또한 CD4+ 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하는데 사용되어 CD4-기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획을 둘 다 유지시켜서 상기 방법의 후속 단계에서 사용한 후, 선택적으로 하나 이상의 추가의 양성 또는 음성 선택 단계를 수행한다.
특정 구체예에서, PBMC 또는 다른 백혈구 샘플의 시료는 CD4+ 세포의 선택에 종속되며, 여기서 양성 및 양성 분획 모두가 유지된다. 이어서, 음성 분획을 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초한 음성 선별 및 양성 및 음성 선택이 어느 순서로 수행되는지에 대한 CD62L 또는 CCR7와 같은 센트럴 메모리 T 세포의 표지 특징에 기초한 양성 선택을 실시한다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 가진 세포 집단을 확인함으로써 네이비하고 센트럴 메모리 및 효과 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 얻을 수 있다. 일부 구현예에서, 천연의 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 센트럴 메모리 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 효과기 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
한 구체예에서, 음성 선택에 의한 CD4+ 세포를 풍부하게 하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리를 허용하기 위해 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역 자기(또는 친화력 자기) 분리 기술을 사용하여 분리 또는 단리된다[문헌 「Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒ Humana Press Inc., Totowa, NJ」에서 검토됨].
일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 상자성 비드(예를 들어 Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 같은 자기적으로 반응하는 입자 또는 미세 입자와 같은 작고 자화 가능한 또는 자기적으로 반응하는 물질로 배양된다. 자기 반응 물질, 예를 들어 입자는 세포, 세포 또는 분리하고자하는 세포 집단 상에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에, 예를 들어 음성 또는 양성으로 선발하는 것이 바람직하다는 것을 의미, 특이적으로 결합하는 항체와 같은 결합 파트너에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 부재에 결합된 자기 반응 물질을 포함한다. 자기 분리법에 많이 사용되는 자기 반응 재료가 있다. 적합한 자기 입자는 몰데이(Molday)의 미국특허 제4,452,773호 및 유럽특허 제452342 B호에 개시되어 있으며, 이는 본원에 참고로 인용된다. 오웬(Owen)의 미국특허 제4,795,698호 및 리버티(Liberti) 등의 미국특허 제5,200,084호에 기재된 것과 같은 콜로이드 상 입자는 다른 예이다.
일반적으로 배양은 샘플 내의 세포에 존재하는 경우, 자성 입자 또는 비드에 결합된 항체 또는 결합 파트너 또는 이 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 이차 항체 또는 다른 시약과 같은 분자가 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건 하에서 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장에 놓이며, 자기적으로 반응하는 또는 자화 가능한 입자가 부착된 세포는 자석에 끌려가서 표지가 없는(unlabeled) 세포로부터 분리될 것이다. 긍정적인 선택의 경우, 자석에 끌리는 세포는 유지된다; 음성 선택의 경우 끌리지 않는 세포(표지가 없는 세포)은 유지된다. 일부 구현예에서, 양성 및 음성 선별의 조합은 양성 및 음성 분획이 보유되고 추가 처리되거나 추가 분리 단계에 종속되는 동일한 선별 단계에서 수행된다.
특정 구현예에서, 자기적 응답 입자는 1 차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘에 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 일부 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포-유형 특이적인 2차 항체 또는 다른 결합 파트너(예를 들어 스트렙타빈)-코팅 자성 입자가 첨가된다. 일부 구현예에서, 스트렙타비딘-코팅 자성 입자는 바이오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자기적으로 반응하는 입자는 후속 배양, 배양 및/또는 조작되는 세포에 부착된 채로 남게 된다; 일부 구현예에서 입자는 환자에게 투여하기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 구현예에서, 자화가능하거나 또는 자기적으로 반응하는 입자는 세포로부터 제거된다. 세포로부터 자화 가능한 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 경쟁하는 비 표지된 항쳉 및 자화 가능한 입자 똔느 절단 가능한 리어에 접합된 항체를 포함된다. 일부 구현예에서, 자화 가능한 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기재 선택은 자기-활성화 세포 분류(MACS)(Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통해 이루어진다. 자기화성화 세포 분류(MACS) 시스템은 자화된 입자가 부착되 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 일부 구현예에서, MACS는 비 표적종 및 표적종을 외부 자기장의 적용 후에 순차적으로 용출시키는 모드로 작동한다. 즉 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 화학종이 용리되는 동안 제 위치에 유지된다. 이어서, 이 첫 번째 용출 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되어 용출되는 것을 방지한 종을 용리 및 회수할 수 있는 방법으로 자유롭게 한다. 일부 구현예에서, 비 표적 세포는 표적화되고 세포의 이종 집단으로부터 고갈된다.
일부 구현예에서, 추출 또는 분리는 세포 준비, 분리, 처리, 항온 배양, 배양 및/또는 방법의 제형 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 장치 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템은 폐쇄, 무균 환경, 예를 들어 에러, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 이들 단계 각각을 수행하는데 사용된다. 한 구체예에서, 시스템은 국제공개공보 제WO2009/072003호 또는 미국특허출원공보 제20110003380 A1호에 기재된 것과 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 자동화된 또는 프로그래밍 가능한 방식으로, 하나 이상의, 예를 들어 모든 분리, 처리, 엔지니어링 및 제형 단계를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 처리, 격리, 엔지니어링 및 제형 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가 및/또는 조정할 수 있게 하는 시스템 및/또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 ClinMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여, 예를 들어 밀폐된 및 멸균 시스템에서 임상 규모의 세포의 자동화된 분리를 위해 수행된다. 구성 요소로는 통합 마이크로컴퓨터, 자기 분리 장치, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서 통합 컴퓨터는 계측기의 모든 구성요소를 제어하고 표준화된 순서로 반복적인 절차를 수행하도록 시스템에서 지시한다. 일부 측면에서 자기 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 컬럼용 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유속을 제어하며 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름과 세포의 지속적인 정지를 보장한다.
CliniMACS 시스템은 일부 측면에서 멸균 비 발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자성 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후, 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서 세포 준비 백을 튜빙 세트에 연결하고, 버퍼 세트 및 세포수집 백을 연결한다. 튜빙 세트는 프리-컬럼과 분리 컬럼을 포함하여 미리 조립된 무균 튜빙으로 구성되어 있으며 일회용으로만 사용된다. 분리 프로그램을 시작한 후, 상기 시스템은 세포 샘플을 자동으로 분리 컬럼에 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 보유되는 반면, 표지되지 않는 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 지답은 표지되지 않고 칼럼에 보유되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 컬럼에 보유된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장의 제거 후 컬럼으로부터 용리되어 세포수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 원심 분리에 의한 세포의 자동화된 세척 및 분별을 가능하게 하는 세포 처리 단일체를 갖추고 있다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템에는 소스 세포 생성물의 거시적 층(macroscopic layer)을 식별하여 최적의 세포 분획 종말점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어가 포함될 수 있다. 예를 들어 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. 상기 CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 세포 분화 및 증폭, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 수행하는 일체형 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 멸균 제거 및 매체의 보충을 허용할 수 있으며, 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터할 수 있다[문헌 예를 들어 「Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82, and Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701」 참조].
일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유세포 계측법을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되며, 여기서 다수의 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 세포 집단은 예비 스케일(형광 활성화된 세포 분류, FACS)-분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 조합된 마이크로 전자 기계 시스템(MEMS) 칩의 사용에 의해 수집 및 농축(또는 고갈)된다[예를 들어 국제공개공보 제WO2010/033140호, 문헌 「Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573」; 및 「Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376」 참조]. 두 경우 모두 세포를 여러 마커로 분류하여 잘 정의된 T 세포 하위 세트를 고순도로 분리 할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 카로 표지되어 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어 분리는 형광 표지된 항체와의 결합에 기초할 수 있다. 예를 들어 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 형광-활성 세포 분류(FACS)을 포함하는 분취용(FACS) 및/또는 미세 전자 기계 시스템(MEMS) 칩, 예를 들어 유세포 계측 탐지 시스템과 조합하여 사용될 수 있다. 이러한 방법은 동시에 여러 마커를 기반으로 긍정적이고 부정적인 선택을 허용한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 항온 처리 및/또는 조작 전 또는 후에 세포를 동결, 예를 들어 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 행동 단계는 과립구 및 어는 정도는 세포 집단 내의 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 후에 냉동 용액에 현탁된다. 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일예로 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA) 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 함유하는 PBS를 사용하는 것을 포함한다. 그런 다음 DMSO와 HSA의 최종 농도가 각각 10%와 4%가 되도록 배지로 1 : 1로 희석한다. 이어서, 세포를 일반적으로 분당 1℃의 속도로 -80℃로 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 증기 상에 저장한다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작 전에 또는 유전자 조작과 관련하여 배양 및/또는 배양된다. 배양 단계는 배양(culture), 배양(cultivation), 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함 할 수 있다. 배양 및/또는 조작은 배양 용기 또는 세포 배양을 위한 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 기타 용기와 같은 배양 용기에서 수행 될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재하에 배양된다. 그러한 조건은 집단 내에서 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 준비하는 것을 포함한다.
조건은 하나 이상의 특정 매질, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 영양제, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예를 들어 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 용해성 수용체, 및 세포를 활성화 시키도록 고안된 임의의 다른 제제를 포함한다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 작용제는 TCR 복합체의 세포내 신호 전달 영역을 활성화시키거나 또는 자극시킬 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 약제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 전달 계통을 작동시키거나 개시시킨다. 이러한 제제는 항체, 예를 들어 TCR에 특이적인 항체, 예를 들어 항-CD3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 자극 조건은 하나 이상의 제제, 예를 들어 공동자극 수용체를 자극할 수 있는 리간드, 예를 들어 항-CD28을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제 및/또는 리간드는 고형 지지체 예를 들어 비드, 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합될 수 있다. 선택적으로 상기 확장 방법은 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 배양 배지에 (예를 들어 적어도 약 0.5ng/mL 농도로) 첨가하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 IL-2 농도는 적어도 약 10 유닛/mL이다.
일부 측면에서, 배양은 리델(Riddell) 등의 미국특허 제6,040,177호, 문헌 「Klebanoff et al.(2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82, and/or Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701」에 기재된 기법에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 T 세포는 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)와 같은 배양-개시 조성물(culture-initiating composition)에 피더 세포(feeder cell)를 (예를 들어 결과적인 세포 집단이 확대될 초기 집단에서 각 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 공급 세포를 포함하도록) 첨가하고; 상기 배양물을 (예를 들어 T 세포의 수를 확장시키기에 충분한 시간동안) 배양함으로써 확대시킨다. 일부 측면에서는, 비분할 피더 세포는 감마-조사 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rad 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 측면에서, 피더 세포는 T 세포 집단을 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 측면에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어 적어도 약 25℃, 일반적으로는 약 30℃, 일반적으로는 약 37℃의 온도를 포함한다. 선택적으로, 배양은 피더 세포로서 비분할 EBV-형질 전환 림프구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 추가로 포함 할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad의 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 피더 세포는 적당한 양으로, 예를 들어 약 10:1의 LCL 피더 세포 대 초기 T 림프구 비율의 양으로 제공된다.
일부 구현예에서, 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원 특이적 T 세포는 항원으로 순수 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극함으로써 수득된다. 예를 들어 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 피험자로부터 T 세포를 분리하고 시험관내에서 동일한 항원으로 세포를 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원(cytomegalovirus antigen)에 생성될 수 있다.
III. 예시적인 치료 결과 및 이를 평가하는 방법
본 발명에 제공된 방법, 조성물, 조합물, 용도, 키트 및 제조 물품의 일부 구현예에서, 제공된 조합 요법은 하기에서 기술하는 바와 같이 요법 또는 치료와 관련된 하나 이상의 임의의 파라미터와 연관된 특성과 같은, 하나 이상의 치료 결과를 일으킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 치료를 위해 투여된 T 세포의 노출, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에서 제공되는 방법에서 세포, 예를 들어 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위하여 투여된 세포의 노출, 또는 증식 연장 및/또는 지속성, 및/또는 그 세포의 세포 표현형이나 기능적 활성의 변화는 상기 T 세포의 특징을 시험관 내 또는 생체 외로 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 그러한 평가는 본 발명에서 제공되는 조합 요법제를 투여하기 전, 도중 또는 후에, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정 또는 확인하는데 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 조합 요법은 조합 요법으로 치료할 대상체를 확인하기 위한 스크리닝 단계 및/또는 조합 요법을 지속하는 단계, 및/또는 치료 결과를 평가하기 위한 단계 및/또는 치료 결과를 모니터링하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료 결과의 평가 단계는 치료를 평가하고/하거나 모니터링하는 단계 및/또는 요법 및/또는 반복 요법의 추가 또는 잔여 단계의 실시를 위한 대상체를 확인하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 본 발명에 제공된 조합 요법의 용량, 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는데 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명에 설명된 임의의 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는, 제공된 조합 요법, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포), 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여의 하나 이상의 단계의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 평가는 제공된 임의의 방법의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 행해진다. 일부 구현예에서, 평가는 본 발명에 제공된 방법의 실시 전에 수행된다. 일부 구현예에서, 평가는 본 발명에 제공된 방법의 하나 이상의 단계를 실시한 후에 수행된다. 일부 구현예에서, 평가는 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계, 예를 들어 조합 요법을 투여받기에 적합하거나 및/또는 민감한 환자를 스크리닝 및 확인하기 위한 단계의 수행에 앞서 실시된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 치료 효능을 결정하거나 및/또는 치료를 지속할지 반복할지를 결정하거나 및/또는 조합 요법의 나머지 단계들을 실시할지를 결정하기 위한 것과 같이, 중간 또는 최종 치료 결과를 평가할 목적으로, 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계의 실시 전, 실시 도중, 그 경과 도중 또는 실시 후에 평가를 수행한다.
일부 구현예에서, 치료 결과는 개선된 면역 기능, 예를 들어 세포 기반 요법에서 투여된 T 세포의 면역 기능 및/또는 체내 내인성 T 세포의 면역 기능을 포함한다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과에는 증강된 T 세포 증식, 증강된 T 세포 기능성 활성, 면역 세포 표현형 마커 발현의 변화, 예를 들어 대상체에 투여된, 조작된 T 세포, 예를 들어 CAR-T 세포와 관련된 특징들이 포함되나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 예시적인 치료 결과에는 감소된 질병 부담, 예를 들어 종양 부담, 개선된 임상 결과 및/또는 증강된 치료 효능이 포함된다.
일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 세포 기반 요법에서 투여된 T 세포의 생존 및/또는 기능을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 사이토카인 또는 성장 인자의 수준을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 질병 부담 및/또는 개선의 평가, 예를 들어 종양 부담 및/또는 임상 결과를 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 중 어느 것이든 평가 방법 및/또는 본 발명에 설명된 분석법 및 또는 기술분야에 공지인 것을 포함할 수 있으며, 예를 들어 조합 요법의 하나 이상의 단계들의 실시 전, 실시 도중, 실시 경과 도중 또는 실시 후에, 1회 이상 수행될 수 있다. 본 발명에 제공된 일부 구현예에들에서 평가될 수 있는, 치료 결과와 관련된 예시적인 파라미터 세트들에는, 말초 혈액 면역 세포 집단 프로파일 및/또는 종양 부담이 포함된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 대상체에서 세포 요법의 효능에 영향을 미칠 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법에서 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙과 함께 용량의 세포를 투여한 후 대상체에서의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 지속성, 증폭 및/또는 존재는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여되지 않은 방법에서 달성된 것보다 크다. 일부 구현예에서, 투여된 T 세포의 증폭 및/또는 지속성은, 상기 T 세포 요법제가 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에 투여되는 방법과 비교하여 평가된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에게 T 세포 요법제가 투여되는 방법에 비해 대상체에서 증가되거나 연장된 증폭 및/또는 지속성을 나타내는 투여된 T 세포를 생성한다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에게 투여되는 방법에 비해, 대상체에 있어서 질병 부담, 예를 들어 종양 부담을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에게 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 투여되는 방법에 비해 대상체에 있어서 골수 모구(blast marrow)를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에게 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량이 투여되는 방법에 비해, 예를 들어 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)과 같은 임상 결과의 개선을 야기한다.
일부 구현예에서, 대상체는 조합 요법의 하나 이상의 단계들의 실시에 앞서 스크리닝될 수 있다. 예를 들어 대상체는 조합 요법 투여에 대한 적합성, 반응성 및/또는 감수성을 결정하기 위해 조합 요법 투여에 앞서, 질병 부담 예를 들어 종양 부담 및/또는 질병의 특징에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가는 본 발명에 제공된 조합 요법의 용량 빈도, 기간, 시기 및/또는 순서를 결정하는데 이용될 수 있다.
일부 구현예에서, 조합 요법의 나머지 단계를 실시하고 및/또는 치료법의 효능을 모니터링하기 위한 대상체를 결정 및 확인하기 위해, 조합 요법의 하나 이상의 단계를 실시한 후에 대상체를 스크리닝할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여된 T 세포의 수, 수준 또는 양 및/또는 투여된 T 세포의 증식 및/또는 활성은 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 전 및/또는 투여 후에 평가된다.
일부 구현예에서, 어떤 파라미터 또는 결과의 수준, 값 또는 측정치의, 상이한 평가 시점, 상이한 질병 상태, 레런스 포인트 및/또는 상이한 대상체에서의 동일 파라미터 또는 결과의 수준, 값 또는 측정치와 비교된, 변화 및/또는 변경, 예를 들어 증가, 상승, 감소 또는 저감을 구하거나 평가한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 전에, 상이한 조건 하에서 동일한 파라미터에 비해, 샘플 내 조작된 T 세포의 수와 같은 특정 파라미터의 증가 또는 감소와 같은 배수 변화가 구해질 수 있다. 일부 구현예에서, 2 가지 이상의 파라미터들의 수준, 값 또는 측정치를 구하여 상대적인 수준을 비교한다. 일부 구현예에서, 파라미터의 결정된 수준, 값 또는 측정치는 대조군 샘플 또는 미처리 샘플로부터의 수준, 값 또는 측정치와 비교된다. 일부 구현예에서, 파라미터의 결정된 수준, 값 또는 측정치는 동일한 대상체의 샘플, 그러나 상이한 시점에서의 수준과 비교된다. 개별 파라미터의 정량화에서 얻어진 값들은 예를 들어 다변량 분석을 이용하여 파라미터의 수준, 값 또는 측정치에 대해 산술 또는 논리 연산을 형성함으로써 질병 평가 목적으로 조합될 수 있다. 일부 구현예에서, 2가지 이상의 특정 파라미터의 비율이 계산될 수 있다.
T 세포 건강, 기능, 활성 및/또는 결과, 예를 들어 반응, 효능 및/또는 독성 결과와 관련된 파라미터의 평가 및 결정은 다양한 시점에서 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 평가는, 예를 들어 세포 요법제의 투여 전에, 세포의 제조 전에, 도중에 또는 후에, 및/또는 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 전에, 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 계속, 재개 및/또는 추가 투여 도중에, 예를 들어 상기 세포 요법제의 투여 개시 시에 및/또는 상기 세포 요법제의 투여 개시 후에 여러차례 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 투여된 세포 및/또는 세포 조성물의 기능적 속성은 상기 세포의 약동학적(PK) 파라미터, 증폭 및 지속성, 세포 기능 분석(예를 들어 세포 독성 분석, 사이토카인 분비 분석 및 생체내 검정과 같은 본원에 기재된 것), 고차원 T 세포 신호 전달 평가, 및 상기 T 세포의 소진 표현형 및/또는 서명의 평가를 포함한다. 일부 측면에서, 평가되거나 모니터링될 수 있는 다른 속성은 최소 잔류 질환(MRD)의 모니터링 및 평가를 포함한다. 일부 측면에서, 평가될 수 있거나 모니터링될 수 있는 다른 속성은 상기 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 약동학적 파라미터를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 파라미터는 활성 부위 점유 분석, 예를 들어 BTK 점유 분석 또는 ITK 점유 분석을 이용하여 평가될 수 있다.
A. T 세포 노출, 지속성 및 증식
일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과 모니터링에 대해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터는 T 세포 예를 들어 T 세포 기반 요법으로 투여되는 T 세포의 노출, 지속성 및 증식을 평가하는 것이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명에 제공된 방법에서 예를 들어 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 세포와 같은 세포의 세포 표현형 또는 기능성 활성의 변화 및/또는 세포의 증가된 노출, 또는 연장된 증폭 및/또는 지속성은, 시험관내 또는 생체외에서 T 세포의 특징들을 평가함으로써 측정할 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 분석법은 본 발명에 제공된 조합 요법의 하나 이상의 단계들을 실시하기 전 또는 후에, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 T 세포의 기능을 결정하거나 확인하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 세포에 대한 대상체의 노출을, 예를 들어 경시적인 그의 증폭 및/또는 지속성을 촉진함으로써 촉진하도록 설계된다. 일부 구현예에서, T 세포 요법은 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 대상체에게 T 세포 요법이 실시되는 방법에 비해 대상체에서 증가되거나 연장된 증폭 및/또는 지속성을 나타낸다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 투여된 세포에 대한 대상체의 노출을 증가시키거나(예를 들어 경시적으로 세포수가 증가됨) 및/또는 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법의 효능 및 치료 결과를 개선시킨다. 일부 측면에서, 상기 방법은 재조합 수용체를 발현하는 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포에 대해 더 많이, 및/또는 더 길게 노출된다는 점에서, 다른 방법에 비해 치료 결과를 개선시킨다. 이러한 결과는 종양 부담이 심한 개체에서조차, 환자 생존 및 완화를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 T 세포 단독이 투여된 경우에 비해 대상체에서 예를 들어 T 세포 기반 요법으로 투여된 T 세포와 같은 세포에 대한 노출의 최대치, 총합 및/또는 기간을 증가시킬 수 있다. 일부 측면에서, 높은 질병 부담(및 그에 따라 더 많은 양의 항원) 및/또는 보다 공격적이거나 내성인 B 세포 악성 종양의 맥락에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 세포의 증폭 및/또는 지속성을 막을 수 있는 면역억압, 아네르기 및/또는 소진을 결과시킬 수 있는 동일 맥락에서의 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재하에 T 세포만을 단독으로 투여한 경우에 비해, 치료 효능을 증강시킨다.
일부 구현예에서, T 세포의 투여 후 및, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 전, 도중 및/또는 그 후에, 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어 T 세포 기반 요법을 위하여 투여된 CAR-발현 세포)의 존재 및/또는 양이 탐지된다. 일부 측면에서, 정량적 PCR(qPCR)은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 장기 또는 조직 샘플(예를 들어 질병 위치, 예를 들어 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포(예를 들어 T 세포 기반 요법에서 투여되는 CAR-발현 세포)의 양을 평가하는데 사용된다. 일부 측면에서, 지속성은 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 카피 수, 또는 샘플, 예를 들어 혈액 또는 혈청의 마이크로리터당 또는 샘플의 마이크로리터당 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC) 또는 백혈구 또는 T 세포의 총 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포의 수로서 정량화된다.
일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여로부터 4, 7, 10, 14, 18, 21, 24, 27, 또는 28일 후에 또는 적어도 그 때 대상체에서 탐지된다. 일부 측면에서, 세포는 T 세포의 투여로부터 2, 4, 또는 6 주 후에 또는 적어도 그 때, 또는 3, 6, 또는 12개월, 18, 또는 24개월, 30 또는 36개월 후에 또는 적어도 그 때, 또는 1, 2, 3, 4, 5년, 또는 그 이상 후에 또는 적어도 그 때 탐지된다.
일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후, 상기 방법에 의한 대상체에서 수용체-발현 세포(예를 들어 CAR-발현 세포)의 지속성은, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재 하에, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 투여하는 것과 같이 면역요법 단독을 실시하는 것과 관련된 대체 방법에 의해 달성되는 것보다 더 크다.
증식 및/또는 지속성의 표지가 되는 노출, 예를 들어 세포수, 예를 들어 T 세포 요법을 위하여 투여된 T 세포의 수는 상기 대상체가 노출되는 세포의 최대 수, 검출 가능한 세포의 지속 시간 또는 특정 수 또는 백분율 이상의 세포, 시간에 따른 세포수에 대한 곡선하영역, 및/또는 그들의 조합 및 그들의 표지자의 관점에서 기술될 수 있다. 이러한 결과는 공지의 방법을 사용하여 평가될 수 있는데, 예를 들어 특정 샘플, 예를 들어 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 총량과 비교하여 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수를 검출하는 qPCR 및/또는 상기 수용체들에 특이적인 항체를 사용하여 일반적으로 상기 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석이다. 세포-기반 분석은 또한 기능성 세포의 수 또는 백분율을 검출하는데 사용될 수 있는데, 상기 기능성 세포는 예를 들어 질병 또는 장애 상태의 세포와 결합 및/또는 그를 중화 및/또는 그에 대한 반응, 예를 들어 세포독성 반응을 유도하거나 상기 수용체에 의하여 인식되는 항원을 발현할 수 있는 세포이다.
일부 측면에서, 대상체의 상기 세포에 대한 노출 증가는 세포의 증식 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 발현 세포, 예를 들면, CAR-발현 세포는, T-세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 후 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후에 대상체에서 증폭한다. 일부 측면에서, 이 방법은 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 없이, T-세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 투여하는 것과 관련된, 다른 방법에 비해, 더 큰 정도로 세포 증폭을 일으킨다.
일부 측면에서, 예를 들어 부위(예를 들어 대상체의 조직, 장기, 덩어리 또는 병변 부위 또는 그의 영역 또는 일부분)을 파괴하는 방법은, 예를 들어 유세포 분석에 의하여 측정되는 바, 투여된 세포의 높은 생체 내 증식이라는 결과를 낳는다. 일부 측면에서, 피크 세포의 분율이 높게 검출된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 질병-위치 또는 그들의 백혈구 분획, 예를 들어 PBMC 분획 또는 T 세포 분획 중의 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후 피크 또는 최대 수준에서, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%의 세포가 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 기관 또는 조직에서 DNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR를 인코딩하는 핵산 카피 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 이상, 또는 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC)의 총 수, 단핵구 세포의 총 수, T 세포의 총 수 또는 총 마이크로리터 수당 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 또는 0.9 이상의 최대 농도라는 결과를 낳는다. 일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는, 상기 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 다음 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 또는 52 주 동안, 또는 그러한 투여 다음 1, 2, 3, 4, 5 년 동안 또는 그 이상, 대상체의 혈액 중 총 PBMC의 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60% 이상으로 검출되고, 및/또는 그러한 수준으로 검출된다.
일부 측면에서, 상기 방법은, 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, DNA 마이크로그램당 상기 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 핵산 카피 수에 있어서 2배 이상, 4배 이상, 10배 이상 또는 20배 이상 증가라는 결과를 낳는다.
일부 구현예에서, 상기 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 예를 들어 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어 종양 샘플에서, 예를 들어 특정 방법, 예를 들어 qPCR 또는 유세포 분석-기반 검출 방법에 의하여, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음, 또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후, 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 일 또는 그 이상의 일수 동안, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 다음 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 또는 그 이상의 주수 동안 검출된다.
일부 양상에서, 약 1×102, 약 1×103, 약 1×104, 약 1×105, 또는 약 1×106또는 약 5×106 또는 약 1×107 또는 약 5×107 또는 약 1×108 개 이상의 재조합 수용체-발현, 예를 들어 CAR-발현 세포 및/또는 마이크로리터당 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000개 수용체-발현 세포가 대상체에서, 또는 그의 유액, 혈장, 혈청, 조직 또는 구획에서, 예를 들어 그의 혈액, 예를 들어 말초 혈액, 또는 질병 위치, 예를 들어 종양 내에서 검출 가능하거나 존재한다. 일부 구현예에서, 이러한 세포수 또는 농도는, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포의 투여 다음, 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 다음 적어도 약 20 일간, 적어도 약 40 일간, 또는 적어도 약 60 일간, 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월간, 또는 적어도 2 또는 3년간 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포수는 유세포 분석-기반의 또는 정량적 PCR-기반의 방법에 의하여 검출되고 공지의 방법을 이용하여 총 세포수가 외삽될 수 있다. 예를 들어 문헌 「Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al., Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828」을 참조한다.
일부 양상에서, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서 면역조직화학, PCR 및/또는 유세포 분석에 의하여 측정되는, 100개 세포당 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 수, 예를 들어 벡터 카피 수는, 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 다음 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 적어도 약 6주에, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 9, 10, 11, 또는 12개월에 또는 적어도 2 또는 3년에 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1 또는 적어도 10이다. 일부 구현예에서, 게놈 CNA 마이크로그램당 상기 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 벡터의 카피 수는 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포, 또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 다음 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주에 또는 그러한 투여 다음 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 또는 적어도 2 또는 3년에, 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000 또는 적어도 10000 또는 적어도 15000 또는 적어도 20000이다.
일부 양상에서, 세포에 의하여 발현되는 수용체, 예를 들어 CAR는 대상체, 그의 혈장, 혈청, 조직 및/또는 질병 위치, 예를 들어 종양 위치에서의 정량적 PCR(qPCR) 또는 유세포 분석법에 의해, 상기 세포의 투여 다음, 예를 들어 T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포, 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 개시 다음 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 3년보다 더 후의 시간에 검출 가능하다.
일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 다음 시간 경과에 따른 대상체의 유액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 기관 및/또는 질병 위치, 예를 들어 종양 위치에서의 수용체(예를 들어 CAR)-발현 세포의 농도에 대한 곡선하면적(AUC)은, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 부재하에, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포를 대상체에게 투여하는 대체 투여 계획을 통해 달성되는 경우에 비해 더 크다.
일부 양상에서, 상기 방법은 예를 들어 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같이, 투여된 세포의 높은 생체내 증식을 야기한다. 일부 양상에서, 세포의 높은 피크 비율이 검색된다. 예를 들어 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 CAR-발현 T 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여에 이어, 대상체의 혈액, 혈장, 혈청, 조직 또는 병소에서 또는 그의 백혈구 세포 분획, 예를 들어 PBMC 분획 또는 T 세포 분획에서, 피크 또는 최대 수준으로, 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%가 재조합 수용체 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 양상에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 투여된 대상체에서 세포 용량의 증가 또는 연장된 증폭 및/또는 지속성은 대상체의 종양 관련 결과에서의 장점과 관련이 있다. 일부 구현예에서, 종양 관련 결과는 대상체에서 골수 모구의 감소 또는 종양 부담의 감소를 포함한다. 일부 구현예에서, 종양 부담은 상기 방법 실시 후 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%, 또는 적어도 그 이상 감소한다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량, 및/또는 종양 부하 또는 벌크는 용량의 세포 투여 후, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 투여되지 않는 방법으로 치료된 대상체에 비해 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 적어도 그 이상 감소된다.
B. T 세포 기능성 활성
일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링에 대해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터는 T 세포의 하나 이상의 활성, 표현형, 증식 또는 기능포함한다. 일부 구현예에서, T 세포, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하기 위한 당업계에 공지된 임의의 분석법이 사용될 수 있다. 세포 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 전 및/또는 후에, 일부 구현예에서 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예를 들어 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된다. 평가하고자 하는 파라미터에는 예를 들어 영상화에 의한 생체내, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의한 생체외 분석에 의한, 항원에 대한 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 표적 세포를 파괴하는 조작된 세포의 능력은 예를 들어 문헌 「Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al., J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)」에 설명된 세포독성 분석과 같은, 기술분야에 공지인 임의의 적절한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ, IL-2, GM-CSF 및 TNFα와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석하거나 및/또는 세포용해 활성을 평가함으로써 측정된다.
일부 구현예에서, 상기 세포 건강, 활성 표현형 및/또는 기능, 예를 들어 신호 전달 기능을 모니터링하기 위한 검정은, 유도 결합 혈장 질량 분광법(inductively coupled plasma mass spectrometry) 및 비행 시간 질량 분광법(flight mass spectrometry), T 세포 표현형, 면역표현형, 예를 들어 항체 패널을 사용하는 질량 세포분석법(CyTOF)에 기초한 T 세포 신호 전달 평가, 및 예를 들어 본원에서 기술된 것과 같은 다른 기능 검정을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능에 대한 분석법의 예로는, ELISPOT, ELISA, 세포 증식, 세포독성 림프구(CTL) 분석, T 세포 에피토프, 항원 또는 리간드에 대한 결합, 또는 세포내 사이토카인 염색, 증식 분석, 림포카인 분비 분석, 직접 세포독성 분석 및 제한 희석 분석법을 들 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포의 증식 반응은, 예를 들어 3H-티미딘, BrdU(5-브로모-2'-데옥시우리딘) 또는 2'-데옥시-5-에티닐우리딘(EdU)의, 이들의 DNA로의 통합에 의해 또는 카르복시플루오레신 디아세테이트 석신이미딜 에스테르(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester; CFSE), CellTrace Violet, 또는 멤브레인 염료 PKH26을 이용한 염료 희석 분석에 의해 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것은, T 세포로부터의 사이토카인 생성, 및/또는 대상체의 생물학적 샘플, 예를 들어 혈장, 혈청, 혈액, 및/또는 조직 샘플, 예를 들어 종양 샘플 중의 사이토카인 생성량 측정을 포함한다. 경우에 따라, 이렇게 측정된 사이토카인의 예로는 인터류킨-2(IL-2), 인터페론-감마(IFNγ), 인터류킨-4(IL-4), TNF-알파(TNFα), 인터류킨-6(IL-6), 인터류킨-10(IL-10), 인터류킨-12(IL-12), 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GMCSF), CD107a, 및/또는 TGF-베타(TGFβ)를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 사이토카인을 측정하는 분석법은 기술 분야에 잘 알려져 있으며, ELISA, 다중 사이토카인 분석(multiplexed cytokine assay), 세포내 사이토카인 염색, 세포측정 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 시험 샘플 존재하에 관련 사이토카인에 반응하는 세포를 반응성(예를 들어 증식)에 대해 시험하는 바이오-분석법을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포의 활성, 표현형, 증식 및/또는 기능을 평가하는 것은, 세포 표면형, 예를 들어 특정한 세포 표면 마커의 발현을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여된 T 세포와 같은 T 세포는 T 세포 활성화 마커의 발현, T 세포 소진(exhaustion) 마커, 및/또는 T 세포 분화 마커에 대해 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 투여 전에 평가된다. 일부 구현예에서, 세포 표현형은 세포 요법제 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 도중 또는 투여 후에 평가된다. 평가를 위한 T 세포 활성화 마커, T 세포 고갈 마커, 및/또는 T 세포 분화 마커는 T 세포의 특별한 서브세트, 예를 들어 CD25, CD38, 인간 백혈구 항원-DR(HLADR), CD69, CD44, CD137, KLRG1, CD62Llow, CCR7low, CD71, CD2, CD54, CD58, CD244, CD160, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1), 림프구 활성화 유전자 3 단백질(LAG-3), T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 단백질 3(TIM-3), 세포독성 T 림프구 항원-4(CTLA-4), 밴드 T 림프구 감쇠자(BTLA) 및/또는 T-세포 면역글로불린 및 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 도메인(TIGIT)[예를 들어 문헌 「Liu et al., Cell Death and Disease (2015) 6, e1792」] 등의 기술분야에 알려진 임의의 마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25, PD-1 및/또는 TIM-3이다. 일부 구현예에서, 평가된 세포 표면 마커는 CD25이다.
일부 양상에서, 발현 수준을 탐지하는 것은 시험관내 분석을 수행한느 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 시험관내 분석은 면역분석, 압타머-기반 분석, 조직 또는 세포 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 인자, 효과기, 효소 및/또는 표면 마커 각각 중 하나 이상에 대한 파라미터 또는 파라미터들은 효소결합 면역흡착 분석법(ELISA), 면역블로팅, 면역침전, 방사능면역분석법(RIA), 면역염색, 유세포 분석법, 표면 플라즈몬 공명(SPR), 화학발광 분석법, 측면 유동면역분석, 억제 분석, 또는 열성 분석법을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 사이토카인 및/또는 표면 마커의 검출은 적어도 하나의 바이오 마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약을 이용하여 탐지된다. 경우에 따라, 결합 시약은 그의 항체 또는 항원-결합 단편, 압타머 또는 핵산 프로브이다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 순환 CAR T 세포의 수준을 증가시킨다.
C. 반응, 효능 및 생존
일부 구현예에서, 스크리닝 단계 및/또는 치료 결과의 평가 및/또는 치료 결과의 모니터링을 위해 평가될 수 있는 파라미터를 포함하는, 요법 또는 치료 결과와 관련된 파라미터들에는, 종양 또는 질병 부담이 포함된다. 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 대상체에서 질병 또는 병태의 확산 또는 부담을 감소시키거나 예방할 수 있다. 예를 들어 질병 또는 병태가 종양인 경우, 상기 방법은 일반적으로 골수 또는 분자상에서 검출가능한 B 세포 악성 종양 중의 모구의 백분율, 종양 크기, 벌크, 전이를 감소시키거나 및/또는 종양 부담과 관련된 기타 증상 또는 생존 또는 예후를 개선시킨다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따른, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 투여는, 일반적으로 대상체에서 질병 또는 병태의 증폭 또는 부담을 감소 또는 예방한다. 예를 들어 질병 또는 질병 상태가 종양인 경우, 상기 방법은 일반적으로 종양 크기, 벌크, 전이, 골수나 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양에서의 아세포의 백분율을 감소시키고 및/또는 예후 또는 생존 또는 종양 부담과 관련된 다른 증상을 개선시킨다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 없이, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포)가 주어지는 대체 방법에 비해, 치료된 대상체에 있어서 종양 부담을 감소시키는 결과를 초래한다. 조합 요법이 실시된 모든 대상체에서 종양 부담이 실질적으로 감소될 필요는 없으나, 그러한 조합 요법으로 치료된 대상체의 대다수에서, 예를 들어 임상 데이터에 기초하여, 조합 요법으로 치료된 대상체에 있어서 평균적으로, 예를 들어 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 감소된 종양 부담을 나타낸다.
질병 부담은 종양 또는 예를 들어 전이를 가리키는 다른 위치의 장기나 조직과 같이, 대상체의 장기, 조직 또는 체액 내의 또는 대상체 내 질병 세포의 총 수를 포함할 수 있다. 예를 들어 종양 세포는 특정할 혈액학적 악성종양 관점에서 혈액, 림프 또는 골수에서 검출되거나 및/또는 정량될 수 있다. 질병 부담은, 일부 구현예에서, 종양의 무게, 골수에 존재하는 모구 세포의 백분율 및/또는 개수, 전이 정도를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 골수종, 림프종 또는 백혈병을 갖는다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있습니다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-호지킨 림프종(NHL), 급성 림프모구성 백혈병(ALL), 만성 림프구 백혈병(CLL), 소형 림프구성 림프종(SLL), 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 또는 골수종, 예를 들어 다발성 골수종(MM)을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 MM 또는 DBCBL을 갖는다. 일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 앓는다. 일부 구현예에서, 백혈병은 CLL 또는 SLL이다.
일부 구현예에서, 대상체, 예를 들어 NHL을 가지는 대상체에서의 반응률은 Lugano 기준에 기초한다[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin. Oncol. 4(1):5」 참조]. 일부 구현예에서, 반응 평가는 임상, 혈액, 및/또는 분자 방법 중 임의의 방법을 이용한다. 일부 측면에서 Lugano 기준을 사용하여 평가된 반응은 양전자 방출 단층 촬영(PET)-컴퓨터 단층 촬영(CT) 및/또는 CT를 적절하게 사용하는 것을 포함한다. PET-CT 평가는 FDG-친화성 림프종(FDG-avid lymphoma)에 대한 플루오로디옥시글루코스(FDG)의 사용을 더 포함할 수 있다. PET-CT가 FDG-친화성 조직학에서의 반응을 평가하는데 사용되는 일부 측면에서, 5-점 스케일이 사용될 수 있다. 어떤 면에서, 상기 5-점 스케일은 다음 기준을 포함한다: 1, 백그라운드를 넘는 어떠한 흡수도 없음; 2, 흡수≤종격(mediastinum); 3, 흡수>종격, 그러나≤간; 중등도의 흡수>간; 5, 간 및/또는 새로운 병변보다 매우 높은 흡수; X, 림프종과 관련된 것 같지 않은 새로운 흡수 영역.
일부 측면에서, Lugano 기준을 사용하여 기술되는 것과 같은 완전 반응은 다양한 측정 가능한 위치에서의 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선학적 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 위치는 림프절 및 림프외 위치를 포함하며, 여기서 CR은 PET-CT가 사용될 때, 5-점 스케일 상 잔류 매쓰를 포함하거나 포함하지 않고 1, 2 또는 3의 점수로 기술된다. 일부 측면에서, 생리학적 흡수가 높거나 비장 또는 골수 내에서 활성화된(예를 들어 화학요법 또는 골수 콜로니-자극 인자를 갖는) Waldeyer 고리 또는 결절외 위치에서, 흡수는 정상 종격 및/또는 간보다 클 수 있다. 이 상황에서, 조직이 높은 생리적 흡수량을 가진다 하더라도, 초기 침범 위치에서의 흡수가 주변의 정상 조직보다 크지 않으면 완전한 대사 반응이 추론될 수 있다. 어떤 측면에서 반응은 CT를 사용하여 림프절로 평가되는데, 여기서 CR은 질병의 림프외 위치가 없고 표적 결절/결절 매쓰가 병변의 가장 긴 횡직경(LDi)에서 ≤1.5cm로 퇴행하여야 하는 것으로 기술된다. 추가적인 평가 위치는 골수를 포함하는데 여기서 PETCT-기반 평가는 골수에서 FDG-친화성 질병의 증거가 부족함을 나타내야 하고, CT-기반 평가는, 불확실한 경우 IHC 음성인 것인, 정상 형태를 나타내야 한다. 추가적인 위치는 정상으로 퇴행되어야 할 기관 확대에 대한 평가를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, 이는 CR의 경우에 존재하지 않아야 한다[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin. Oncol. 4(1):5」 참조].
일부 측면에서, Lugano 기준을 사용하여 기술되는 부분 반응 (PR; 또한 일부 경우에 부분 완화로도 알려짐)은 다양한 측정 가능한 위치에서 부분적인 대사 반응 및/또는 방사선학적 반응을 포함한다. 일부 측면에서, 이들 위치는 림프절 및 림프외 위치를 포함하며, 여기서 PR은 PET-CT가 사용되는 경우, 기준치 및 임의의 크기의 잔류 매쓰와 비교하여 감소 된 흡수를 갖는 4 또는 5의 점수로 기재된다. 중반에, 그러한 발견은 질병에 반응하는 것을 나타낸다. 치료의 종결시, 그러한 결과는 질병 잔류를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 반응은 CT를 사용하여 림프절에서 평가되며, 여기서 PR은 최대 6 개의 표적 측정 가능 결절 및 결절외 위치의 SPD가 ≥50% 감소하는 것으로 기술된다. 병변이 너무 작아서 CT로 측정할 수 없으면 기본 값으로 5mm×5mm가 할당되고; 병변이 더 이상 보이지 않으면 그 값은 0mm×0 mm이며; >5mm×5mm이지만 정상보다 작은 결절의 경우에는, 실측이 계산에 사용된다. 추가적인 평가 위치는 골수를 포함하는데, 여기서 PET-CT 기반 평가는 정상 골수에서의 흡수보다 높지만 기준치와 비교하여 감소된 잔류 흡수를 나타내야 한다(화학요법으로부터의 반응 변화와 일치하는 확산 흡수는 허용됨). 일부 측면에서, 결절 반응의 맥락에서 골수에 지속적인 국소적 변화가 있다면, MRI 또는 생검, 또는 인터벌 스캔을 이용한 추가적인 평가가 고려되어야 한다. 일부 측면에서, 추가적인 위치는 비대 기관의 평가를 포함할 수 있는데, 여기서 비장은 길이에 있어서 >50% 정상 이상으로 퇴행되어야 한다. 일부 측면에서, 비측정 병변 및 새로운 병변이 평가되는데, PR의 경우라면 이는 부재/정상, 퇴행되어야 하고, 증가는 없어야 한다. 무반응/안정적 질병(SD) 또는 진행성 질병(PD) 또한 PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 이용하여 측정될 수 있다[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO., 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin. Clin. Oncol., 4(1):5」 참조].
일부 측면에서, 무-진행 생존(PFS)은 질병, 예를 들어 B 세포 악성 종양의 치료 중 또는 그 후에, 대상체가 그 질병을 앓고 있으나 더 악화되지는 않는 시간의 길이로서 설명된다. 일부 측면에서 객관적 반응(OR)은 측정 가능한 반응으로 설명된다. 일부 구현예에서, 객관적 반응률(ORR)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 분율로서 설명된다. 일부 측면에서 전체 생존율(OS)은, 진단 날짜나 질병, 예를 들어 B 세포 악성 종양에 대한 치료 개시 중 어느 하나로부터 상기 질병으로 진단된 대상체가 여전히 생존하는 시간의 길이로서 설명된다. 일부 측면에서, 무-사건 생존(EFS)은 B 세포 악성 종양의 치료가 종료된 후, 대상체가, 상기 치료가 방해되거나 지체되려 하였던 사건 또는 특정 합병증 없이 남아있는 시간의 길이로서 설명된다. 이러한 사건은 B 세포 악성 종양이 회귀하거나 특정한 병태가 개시되는 것을 포함할 수 있는데, 예를 들어 뼈까지 퍼진 B 세포 악성 종양으로부터의 뼈 통증이나 사망이다.
일부 구현예에서, 반응의 지속(DOR) 시간 측정은 종양 반응의 기록부터 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하는 파라미터는 지속 반응, 예를 들어 요법의 개시로부터 일정 기간 이후 지속되는 반응을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지속 반응은 요법의 개시 이후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24 개월에서의 반응률에 의해 지시된다. 일부 구현예에서, 반응은 3 개월 초과 또는 6 개월 초과동안 지속된다.
일부 측면에서, RECIST 기준은 객관적 종양 반응을 결정하는데 사용된다[문헌 「Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.」 참조]. 일부 측면에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 어떤 면에서는, RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전 반응은 모든 표적 병변의 소실로 설명되며 병리학적 림프절 (표적이든 비-표적이든)은 짧은 축에서 <10 mm로 감소해야 한다. 다른 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분 반응은, 기준값 직경들의 합계를 레퍼런스로 하여, 표적 병변 직경들의 합계가 적어도 30% 감소하는 것으로 설명된다. 다른 측면에서, 진행성 질병 (PD)은 연구중인 최소 합계 (이는, 그것이 연구중인 가장 작은 것이라면 기준값 합계를 포함한다)를 레퍼런스로 하여, 표적 병변 직경들의 합계가 적어도 20% 증가하는 것으로 설명된다. 20%의 상대적 증가에 더하여, 그 합계는 적어도 5 mm의 절대적 증가를 입증해야 한다[일부 측면에서, 하나 이상의 새로운 병변의 출현 또한 진행으로 간주된다. 다른 측면에서, 안정한 질병 (SD)은, 연구 중인 직경들의 가장 작은 합계를 레퍼런스로 하여, PR로 평가될 만큼 충분히 수축하지도, PD로 평가될 만큼 충분히 증가하지도 않은 것으로 설명된다.
MM의 경우, 질병 부담의 정도를 추정하는 예시적인 파라미터들에는 클론 혈장 세포(예를 들어 골수 생검에서 > 10% 또는 다른 조직으로부터의 생검에서 임의의 양으로; 혈장세포종); 혈청 또는 소변 중 모노클로날 단백질(파라단백질)의 존재, 혈장 세포 장애(예를 들어 고칼슘혈증(수정된 칼슘 > 275mmol/l))와 관련된 말단-장기 손상의 증거; 골수종에 기인하는 신장기능 부전; 빈혈(헤모글로빈 <10 g/dl) 및/또는 뼈 병변(압축 골절이 있는 용해성 병변 또는 골다공증))이 포함된다.
DLBCL의 경우, 질병 부담의 정도를 평가하기 위한 예시적인 파라미터들은 세포 형태학(예를 들어 중심모세포, 면역모세포 및 역형성 세포), 유전자 발현, miRNA 발현 및 단백질 발현(예를 들어 BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC, 및 p21의 발현)과 같은 파라미터를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 CLL을 앓고 있는 대상체와 같은 대상체의 반응률은 만성 림프성 백혈병에 대한 국제 워크샵(IWCLL) 반응 기준에 기초한다[문헌 「Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456」 참조]. 일부 구현예에서, 이러한 기준은 다음과 같이 기술된다: 완전 완화(CR), 이는 일부 측면에서 면역표현형 검사에 의한 말초 혈액 클론 림프구의 부재, 림프선염의 부재, 간 비대증 또는 비장 비대증의 부재, 구성적 증상의 부재 및 만족스러운 혈구 수를 요구하고; 불완전 골수 회복을 동반하는 완전 완화(CRi), 이는 일부 측면에서 상기 CR과 같이 설명되지만 정상적인 혈구 수를 갖지 못하며; 부분 완화(PR), 이는 일부 측면에서 말초 혈액 수에서의 개선과 함께, 림프구 수 ≥50% 저하, 림프선염 ≥50% 감소 또는 간이나 비장에서의 ≥50% 크기 감소로서 설명되고; 진행적 질병(PD), 이는 일부 측면에서 >5×109/L로 림프구 수 ≥50% 증가, 림프선염의 ≥50% 증가, 간 또는 비장 크기, 리히터 변이 또는 CLL에서 기인한 새로운 혈구감소증의 ≥50% 증가로서 설명되고; 안정 질병, 이는 일부 측면에서 CR, CRi, PR 또는 PD에 대한 기준을 충족시키지 못하는 것으로 설명된다.
일부 구현예에서, 대상체가, 세포의 복용량의 투여 1 개월 이내에, CR 또는 OR를 나타내는 경우, 대상체의 림프절은 크기가 (약) 20 mm 미만, 크기가 (약) 10 mm 미만 또는 크기가 (약) 10 mm 미만이다.
일부 구현예에서, CLL의 지표 클론 (index clone)은 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 골수에서 (또는 대상체들 중 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 그 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 지표 클론은 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 지표 클론은, 세포를 투여한 다음 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월의 시점에 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월의 시점에 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 광학 현미경 법에 의해 검출된 바와 같이 골수에 5% 이상, 예를 들어 골수에 10% 이상, 골수에 20% 이상, 골수에 30% 이상, 골수에 40% 이상 또는 골수에 50% 이상의 모구가 있는 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 모구가 있는 경우 대상체는 완전 또는 임상적인 완화를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 완전 완화(complete remission)를 나타낼 수 있지만, 형태학적으로 검출불가능한 (광학 현미경 기술에 의해) 잔여 백혈구 세포가 적은 비율로 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질병(MRD)을 나타내는 것이라고 일컬어진다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양은 소수의 세포를 민감하게 검출하게 하는 다양한 분자적 기법 중 임의의 것을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 양상에서, 그러한 기법은 독특한 Ig/T-세포수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위에 의해 생성된 융합된 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석법은 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 B 세포 악성 종양 세포를 확인하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양의 분자적 검출은 100,000개의 정상 세포 중에서 1 개만큼 적은 백혈병 세포를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 PCR이나 유세포 분석법에 의하여 100,000개 세포 중 적어도 1 개 또는 그 보다 많은 백혈병 세포가 검출된다면 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 분자적으로 검출할 수 없거나 MRD-인데, 그렇게, 일부 경우, 어떠한 백혈병 세포도 PCR 또는 유세포 분석 기법을 이용하여 대상체에서 검출될 수 없다.
백혈병의 경우, 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수의 잔류 백혈병을 평가하여 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 광학 현미경에 의해 검출되는 바, 골수에 5% 이상의 아세포가 존재하는 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 골수에 5% 미만의 아세포가 존재한다면, 대상체는 완전한 또는 임상적 완해를 나타낸다.
일부 구현예에서, 백혈병에 대해 대상체는 완전 완화를 나타낼 수 있지만, (광학 현미경 기법에 의하여) 형태학적으로 검출할 수 없는 적은 분률의 잔류 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수에서 5% 미만의 아세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양을 나타내는 경우 대상체는 최소 잔류 질병(MRD)을 나타내는 것이라고 일컬어진다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 B 세포 악성 종양은 소수의 세포를 민감하게 검출하게 하는 다양한 분자적 기법 중 임의의 것을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 그러한 기법은 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 염색체 전위에 의해 생성된 융합 된 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 측정법은 백혈병-특이적 면역 표현형에 기초하여 B 세포 악성 종양 세포를 확인하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, B 세포 악성 종양의 분자적 검출은 100,000 개의 정상 세포 중에서 1 개만큼 적은 백혈병 세포를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 PCR이나 유세포 측정법에 의하여 100,000 개 세포 중 적어도 1 개 또는 그 보다 많은 백혈병 세포가 검출된다면 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 분자적으로 검출할 수 없거나 MRD-인데, 그렇게, 일부 경우, 어떠한 백혈병 세포도 PCR 또는 유세포 분석 기법을 이용하여 대상체에서 검출될 수 없다.
일부 구현예에서, 세포요법제 예를 들어 T 세포 요법제(예를 들어 CAR-발현 T 세포) 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 및/또는 방법은, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 직전 시점에서의 질병 부담에 비해 질병 부담을 감소시킨다.
일부 양상에서, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는, 질병 부담 증가를 방지할 수 있고, 이것은 질병 부담에 변화가 없다는 것에 의해 입증될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 예를 들어 종양 세포의 수, 종양의 크기, 환자 생존 기간 또는 무사건 생존의 질병 또는 병태의 부담을, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 부재 하에, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 만을 단독으로 투여받은 대상체에서 관찰되는 것과 같은, 대체 요법을 이용하는 비교 방법으로 관찰되는 부담보다 더 많이, 및/또는 더 오랫동안 감소시킨다. 일부 구현예에서, 질병 부담은 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제, 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하는 조합 요법의 경우가, 각 제제를 단독으로 투여하는 경우 예를 들어 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제가 투여되지 않은 대상체에게 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 투여하거나; 또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 투여되지 않은 대상체에게 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제를 투여하는 방법에 의해 발휘되는 질병 부담의 감소에 비해 그 정도가 더 크고 더 장기간 지속된다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 질병 또는 장애 상태의 부담은 검출, 평가 또는 측정된다. 질병 부담은 일부 양상에서, 대상체에서 또는 대상체의 기관, 조직 또는 체액, 예를 들어 혈액 또는 혈청에서 질병 또는 질병-관련 세포의 총 수를 탐지함으로써 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 예를 들어 종양 부담은 전이의 정도 또는 전이 개수를 측정함으로써 평가된다. 일부 양상에서, 대상체의 생존, 특정 기간 내의 생존율, 생존 범위, 무-사건 또는 무-증상 생존 또는 무-재발 생존의 존재 또는 기간이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애 상태의 임의의 증상이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 장애 상태 부담의 척도가 특정된다. 일부 구현예에서, 예시적인 측정 파라미터들에는 예를 들어 종양과 같은 질병 또는 병태의 완화 또는 개선을 가리키는 특정한 임상 결과가 포함된다. 이러한 파라미터에는: 질병 제어 기간, 예를 들어 완전 반응(CR), 부분 반응(PR) 또는 안정한 질병(SD)(예를 들어 「Response Evaluation Criteria In Solid Tumors(RECIST)」 가이드라인 참조), 객관적 반응률(ORR), 무진행 생존(PFS) 및 전체 생존(OS)이 포함된다. 이들 파라미터에 대한 특정한 역치를 설정하여 본 발명에 제공된 조합 요법의 효능을 구할 수 있다.
일부 양상에서, 질병 부담은 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 투여 전에, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 투여 후 그러나 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 전에, 및/또는 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후에 측정 또는 탐지된다. 조합 요법의 하나 이상의 단계의 다중 투여와 관련하여, 일부 구현예에서 질병 부담은 임의의 단계, 용량 및/또는 투여 사이클의 투여 전 또는 후에, 또는 임의의 단계, 용량 및/또는 투여 사이클의 투여 사이의 시점에 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 적어도 2개의 사이클(예를 들어 28일 사이클)로 수행되며, 질병 부담은 각 사이클 전에, 도중에, 및/또는 후에 측정 또는 탐지된다.
일부 구현예에서, 부담은 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙 및 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제의 투여 직전에 비해, 제공된 방법에 의해 적어도 또는 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100% 감소된다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 종양 크기, 종양 부피, 종양 질량, 및/또는 종양 부하 또는 벌크는 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후, 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법제 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 직전에 비해, 적어도 또는 약 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90% 이상 감소된다.
일부 구현예에서, 이 방법에 의한 질병 부담의 감소는 예를 들어 조합 요법제의 투여 개시로부터 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 6개월 초과한 시점에서 평가되는 바와 같이, 형태학적 완전 완화의 유도를 포함한다.
일부 양상에서, 다중 파라미터 유세포 분석에 의해 측정되는 바와 같은, 최소 잔여 질병에 대한 분석은 음성이거나, 또는 최소 잔여 질병 수준은 약 0.3% 미만, 약 0.2% 미만, 약 0.1% 미만 또는 약 0.05% 미만이다.
일부 구현예에서, 대상체의 무-사건 생존율 또는 총 생존율은, 다른 방법에 비하여, 상기 방법에 의하여 향상된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 본 발명에 따른 조합 요법 투여 후 6개월에 상기 방법으로 치료된 대상체들에 대한 무-사건 생존율 또는 확률은 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상이다. 일부 양상에서, 총 생존율은 약 40% 이상, 약 50% 이상, 약 60% 이상, 약 70% 이상, 약 80% 이상, 약 90% 이상, 또는 약 95% 이상이다. 일부 구현예에서, 상기 방법으로 치료된 대상체는 무-사건 생존, 무-재발 생존, 또는 6개월 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10년 이상까지 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 진행까지의 시간이 향상되는데, 예를 들어 진행까지의 시간은 약 6개월 이상 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10년 이상이다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 의한 치료 다음에, 재발 가능성은, 다른 방법에 비하여, 감소된다. 예를 들어 일부 구현예에서, 복합 요법제의 투여 후 6개월에 재발 가능성은 약 80% 미만, 약 70% 미만, 약 60% 미만, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만 또는 약 10% 미만이다.
일부 경우에, 투여되는 세포, 예를 들어 입양 전달된 세포의 약물동력학은 투여되는 세포의 이용률, 예를 들어 생체이용률을 평가하기 위해 결정된다. 입양 전달된 세포의 약물동력학 결정 방법은 조작된 세포가 투여된 대상체로부터 말초 혈액을 채취하는 단계, 및 말초 혈액 내 조작된 세포의 수 또는 비율을 결정하는 단계를 포함할 수 있다. 세포를 선택 및/또는 단리하는 접근법은 키메라 항원 수용체 (CAR)-특이적 항체의 사용(예를 들어 [Brentjens et al., Sci. Transl Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38]), 단백질 L(Zheng et al, J. Transl Med. 2012 Feb; 10:29), 에피토프 태그, 예를 들어 CAR 내 특정 위치로 직접 도입된 Strep-Tag 서열의 사용으로, 이에 의하여 Strep-Tag에 대한 결합 시약이 CAR을 직접 평가하는데 이용되고 ([Liu et al. (2016) Nature Biotechnology, 34:430]; 국제공개공보 제WO2015/095895호) 및 CAR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 단일클론 항체의 사용(예를 들어 국제공개공보 제WO2014/190273호 참조)을 들 수 있다. 일부 경우, 외인성 마커 유전자가 조작된 세포 요법과 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 가능케 하고, 일부 경우에 또한 세포의 자살을 촉진할 수 있다. 일부 경우에, 절단된 표피 성장 인자 수용체 (EGFRt)는 형질도입된 세포에서 대상 전이유전자 (예를 들어 CAR)와 함께 공-발현될 수 있다(예를 들어 미국특허 제8,802,374호 참조) EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFL 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있는데, 이는 EGFRt 컨스트럭트 및 다른 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)로 조작된 세포를 확인하거나 선택, 및/또는 상기 수용체를 발현하는 세포를 제거하거나 분리시키는데 사용될 수 있다.[미국 특허 제8,802,374호 및 문헌 「Liu et al., Nature Biotech 2016 April; 34(4): 430-434」 참조].
일부 구현예에서, 환자로부터 수득한 생물학적 샘플, 예를 들어 혈액 내 CAR+ T 세포의 수는, 세포 요법의 투여 이후 결정되어, 예를 들어 세포의 약물동력학을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체의 혈액에서, 또는 상기 방법에 의해 치료되는 대부분의 대상체에서 감지될 수 있는, CAR+ T 세포, 선택적으로 CAR+ CD8+ T 세포 및/또는 CAR+ CD4+ T 세포의 수는, μL 당 1개 초과의 세포, μL 당 5개 초과의 세포 또는 μL 당 10개 초과의 세포이다.
IV. 독성 및 부작용
상기 제공된 방법의 구현예에서, 상기 대상체는, 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제) 및 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 포함하는 상기 제공된 조합 요법제를 투여한 대상체에서 치료 관련 결과, 예를 들어 호중구 감소증(neutropenia), 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경독성(NT)의 발생을 비롯한 독성 또는 기타 부작용에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 독성 결과 또는 증상, 독성 촉진 프로파일, 요소 또는 특성, 예를 들어 중증 호중구 감소증, 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 중증 신경독성과 관련되거나 이들을 나타내는 증상 또는 결과의 위험을 감소시키도록 수행된다.
일부 구현예에서, 상기 제공된 방법은 예를 들어 특정 다른 세포 요법제와 비교하여, 독성 또는 독성 결과, 극심한 신경독성(NT) 또는 극심한 사이토카인 방출 증후군(CRS)의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나, 또는 그 비율 또는 가능성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 극심한 NT(sNT), 극심한 CRS(sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 섭씨 38도 이상의 발열 및 적어도 약 20 mg/dL의 혈장 CRP 수준을 초래하지 않거나 그 위험을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 초과 또는 이상은 여하한 CRS의 등급 또는 여하한 신경독성의 등급을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 등급 2 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 등급 2 이상의 신경독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 중증 독성 결과(예를 들어 중증 CRS 또는 중증 신경독성)을 나타내지 않거나, 예를 들어 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않고 및/또는 중증 CRS를 나타내지 않거나, 또는 치료 후 특정 기간 내에, 예를 들어 세포의 투여 후 1주, 2주, 또는 1개월 이내에 이러한 독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 독성을 결정하기 위해 평가되는 파라미터로는 부작용(AE), 용량-제한 독성(DLT), CRS 및 NT를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 예를 들어 특정 다른 세포 요법과 비교하여, 중증 신경독성(NT), 또는 중증 사이토카인 방출 증후군(CRS)과 같은 독성 또는 독성 결과의 높은 비율 또는 가능성을 초래하지 않거나, 또는 독성 또는 독성 결과의 비율 또는 가능성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 중증 NT(sNT), 중증 CRS(sCRS), 대식세포 활성화 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상의 적어도 (약) 섭씨 38 도의 발열 및 적어도 (약) 20 mg/dL의 CRP 혈장 수준의 위험을 야기하지 않거나, 증가시키지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 방법에 따라 치료되는 대상체의 (약) 30%, 35%, 40%, 50%, 55%, 60% 이상은 임의의 등급의 CRS 또는 임의의 등급의 신경독성을 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 등급 2 이상의 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및/또는 등급 2 이상의 신경독성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료되는 대상체의 적어도 50%(예를 들어 치료되는 대상체의 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 이상)은 중증 독성 결과(예를 들어 중증 CRS 또는 중증 신경독성)을 나타내지 않거나, 예를 들어 등급 3 이상의 신경독성을 나타내지 않고 및/또는 중증 CRS를 나타내지 않거나, 또는 치료 후 특정 기간 내에, 예를 들어 세포의 투여 후 1 주, 2 주, 또는 1 개월 이내에 이러한 독성을 나타내지 않는다.
A. 사이토카인 방출 증후군(CRS) 및 신경독성
일부 측면에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)와 연관되거나 또는 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어 sCRS는 입양 T 세포 요법 이후 및 다른 생물학적 제품을 대상자에게 투여한 이후 발생할 수 있다[문헌 「Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); and Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78.」 참조].
전형적으로, CRS는 예를 들어 T 세포, B 세포, NK 세포, 단구 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역 반응에 의해 유발된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 많은 양의 염증성 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인은 급성 염증 반응을 유발하거나 내피 기관 손상을 유도하여 미세 혈관 누출, 심부전 또는 사망을 초래할 수 있다. 중증의, 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전 또는 파종된 혈관내 응고를 유발할 수 있다. 다른 중증의 생명을 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경독성 및/또는 간부전이 포함될 수 있다. CRS는 항-염증성 요법 예를 들어 항-IL-6 요법, 예를 들어 항-IL-6 항체, 예를 들어 토실리주맙, 또는 항생제 또는 기재된 다른 시제를 사용하여 치료될 수 있다.
CRS의 결과, 징후 및 병태는 공지되어 있으며, 본원에 설명된 병태를 포함한다. 일부 구현예에서, 특정 투여량 요법 또는 투여가 주어진 CRS-관련 결과, 병태 또는 병태에 영향을 미치지 않거나 영향을 미치는 경우, 특정 결과, 징후 및 병태 및/또는 양 또는 정도가 특정될 수 있다.
CAR- 발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 CAR을 발현하는 세포를 주입한 후 전형적으로 6-20 일에 나타난다[문헌 「Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78.」 참조]. 일부 경우에, CRS는 CAR T 세포 주입 후 6 일 미만 또는 20 일 이후에 발생한다. CRS 발병률 및 시기는 주입시의 베이스라인 사이토카인 수준 또는 종양 부하량과 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 인터페론(IFN)-γ, 종양 괴사 인자(TNF)-α, 및/또는 인터루킨 (IL)-2의 혈청 농도 상승을 포함한다. CRS에서 신속하게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8 및 IL-10이다.
CRS와 관련된 예시적인 결과는 발발열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡 곤란, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 뇌병변증, ALT/AST 상승, 신부전, 심장 질병, 저산소증, 신경 장애 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증으로는 섬망, 발작-유사 행동, 혼동, 단어 찾기 어려움, 실어증, 및/또는 둔감(obtunded)하게 된다. 다른 CRS 관련 결과에는 피로, 메스꺼움, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애 및 신부전이 포함된다. 일부 구현예에서, CRS는 혈청 페리틴, d-이합체, 아미노트랜스퍼라제, 락테이트 디하이드로게나제 및 트리글리세라이드와 같은 하나 이상의 요인의 증가, 또는 저섬유소원혈증(hypofibrinogenemia)또는 간비장비대(hepatosplenomegaly)와 관련이 있다.
일부 구현예에서, CRS와 관련된 결과는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 지속적인 발열, 2일 이상, 에컨대 3일 이상, 예를 들어 4일 이상, 또는 적어도 3일 연속 특정 온도의 발열, 예를 들어 섭씨 약 38도 이상의 발열; 약 38도 이상의 발열; 적어도 2가지 사이토카인(예를 들어 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사인자 알파(TNFα)로 이루어진 군 중 적어도 2 가지)의 전처리 수준에 비교시, 사이토카인의 상승, 예를 들어 적어도 약 75배와 같은 최대 배수 변화, 또는 이러한 사이토카인 중 적어도 한 가지의 적어도 (약) 250배와 같은 최대 배수 변화; 및/또는 독성의 적어도 하나의 임상 징후, 예를 들어 저혈압(예를 들어 적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압제에 의해 측정); 저산소증(예를 들어 약 90% 미만의 혈장 산소(PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경 장애(정신 상태 변화, 혼란 및 발작 포함)
예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인 및 CRS와 관련된 다른 인자를 포함하는 하나 이상의 인자의 증가된 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 하나 이상의 그러한 인자의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 선천성 면역 세포 또는 B 세포와 같은, T 세포와 상호 작용하는 세포에 의한 것일 수 있다.
일부 구현예에서, CRS-관련 혈청 인자 또는 CRS-관련 결과는 인터페론 감마(IFN-γ), TNF-α, IL-1β, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 대식세포 염증성 단백질(MIP)-1, 종양 괴사인자 알파(TNFα), IL-6, 및 IL-10을 포함하는 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인, IL-1β, IL-8, IL-2, MIP-1, Flt-3L, 프랙탈카인, 및/또는 IL-5를 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과는 C 반응성 단백질(CRP)을 포함한다. CRS에 대해 초기 및 쉽게 측정가능한 위험 인자가 되는 것 외에도 CRP는 세포 증폭에 대한 마커이다. 일부 구현예에서, 15 mg/dL 이상(≥)과 같이 높은 CRP 수치를 갖는 것으로 측정된 대상자들은 CRS를 가진다. 일부 구현예에서, 높은 수준의 CRP를 갖는 것으로 측정된 대상자들은 CRS를 갖지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 가리키는 다른 인자를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 사이토카인 또는 케모카인이 CAR 치료 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙 치료 전, 동안 또는 후에 모니터링된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 또는 대식세포 염증성 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α, 및 IL-6가 모니터링된다.
sCRS 발병 위험이 더 높은 환자를 예측하기 위해 CRS 발병과 관련이 있는 것으로 나타난 CRS 기준이 개발되었다[문헌 「Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25」 참조]. 인자로는 발발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증성 사이토카인, 예를 들어 7종의 사이토카인(IFNγIL-5, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 GM-CSF)의 혈청 수준 상승)과 같이 이의 치료-유도된 상승이 예비치료 종양 부담 및 sCRS 병태 모두와 잘 연관될 수 있는 것을 포함한다.　 CRS의 진단 및 관리에 관한 다른 지침이 알려져 있다[예를 들어 문헌 「Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95」참조]. 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준은 하기 표 3에 기재된 기준이다.
Figure pct00023
일부 구현예에서, 대상체는 세포 치료제 또는 세포 복용량의 투여 후 다음을 나타내면, 세포 요법 또는 세포 투여량의 투여에 반응하여, 또는 이에 2차적으로 "중증 CRS"("sCRS")가 발병된 것으로 간주된다: (1) 적어도 3일간 적어도 섭씨 38 도의 발열; (2) 다음 중 하나를 포함하는 사이토카인 상승 (a) 투여 직후 수준과 비교하여 다음의 7개의 사이토카인의 그룹 중 적어도 2 개에 대한 적어도 75배의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 IL-5 및/또는 (b) 투여 직후 수준과 비교하여 다음의 7 개의 사이토카인의 그룹 중 적어도 1 개에 대한 적어도 250배의 최대 배수 변화: 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6,IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 IL-5; 및 (c) 적어도 하나의 독성의 임상 징후, 예를 들어 저혈압(적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압제 필요) 또는 저산소증 (PO2 < 90%) 또는 하나 이상의 신경 장애(정신 상태 변화, 혼란 및 발작 포함) 일부 구현예에서, 중증 CRS는 예를 들어 표 3에 제시된 등급 3 이상의 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 등급 3 이상의, 예를 들어 등급 4 이상의 CRS와 관련된 결과는 다음 중 하나 이상을 포함한다: 지속적인 발열, 2일 이상, 에컨대 3일 이상, 예를 들어 4일 이상, 또는 적어도 3일 연속 특정 온도의 발열, 예를 들어 섭씨 약 38도 이상의 발열; 약 38도 이상의 발열; 적어도 2가지 사이토카인(예를 들어 인터페론 감마(IFNγ), GM-CSF, IL-6, IL-10, Flt-3L, 프랙탈카인, 및 IL-5, 및/또는 종양 괴사인자 알파(TNFα)로 이루어진 군 중 적어도 2 가지)의 전처리 수준에 비교시, 사이토카인의 상승, 예를 들어 적어도 약 75배와 같은 최대 배수 변화, 또는 이러한 사이토카인 중 적어도 한 가지의 적어도 (약) 250배와 같은 최대 배수 변화; 및/또는 독성의 적어도 하나의 임상 징후, 예를 들어 저혈압(예를 들어 적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압제에 의해 측정); 저산소증(예를 들어 약 90% 미만의 혈장 산소(PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경 장애(정신 상태 변화, 혼란 및 발작 포함) 일부 구현예에서, 중증 CRS는 집중 치료실(ICU)에서의 관리 또는 치료를 필요로 하는 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, CRS, 예를 들어 중증 CRS는 (1) 지속적인 발열 (적어도 3일간 적어도 섭씨 38도의 발열) 및 (2) 적어도 (약) 20mg/dL의 CRP 혈청 수준의 조합을 포함한다.일부 구현예에서, CRS는 둘 이상의 승압제를 필요로 하는 저혈압 또는 기계적 호흡을 필요로 하는 호흡 부전을 포함한다. 일부 구현예에서, 승압제의 복용량은 제 2 또는 후속 투여에서 증가된다.
일부 구현예에서, 중증 CRS 또는 등급 3의 CRS는 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 증가, 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제의 증가, 오한, 열성 호중구 감소증, 두통, 좌심실 기능 장애, 뇌병증, 뇌수종, 및/또는 떨림을 포함한다.
다양한 결과를 측정 또는 검출하는 방법이 특정될 수 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과는 신경독성이거나, 이와 관련이 있다. 일부 구현예에서, 신경독성의 임상 위험과 관련된 병태로는 혼동, 섬망, 실어증, 표현형 실어증, 둔화, 근육간대경련, 무기력, 의식 변화, 경련, 발작-유사 활동, 발작 (선택적으로 뇌파도[EEG]에 의해 확인), 베타 아밀로이드(Aβ수준 증가, 글루타메이트 수준 증가, 및 산소 라디칼 수준 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 신경독성은 중증도에 기초하여(예를 들어 1-5 등급을 사용하여) 등급이 매겨진다[예를 들어 문헌 「Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)」 참조].
일부 구체예에서, 신경 병태는 sCRS의 가장 초기 병태일 수 있다. 일부 구현예에서, 신경 병태는 세포 요법 주입 이후 5 내지 7일에 시작되는 것으로 보인다.　일부 구현예에서, 신경 변화의 지속 기간은 3 내지 19 일 범위일 수 있다. 일부 경우에, 신경 변화의 회복은 sCRS의 다른 병태가 소산된 이후 일어난다. 일부 구현예에서, 신경 변화의 소산 시간 또는 정도는 항-IL-6 및/또는 스테로이드(들)을 사용한 치료에 의해 재촉되지 않는다.
일부 구현예에서, 대상체가 투여 이후, 다음의 병태 중 하나로부터 자가-관리(예를 들어 목욕, 착의 및 탈의, 섭식, 화장실 사용, 의약 복용)를 제한하는 병태를 나타내면, 대상체는 세포 요법 또는 이의 세포 복용량의 투여에 대해 반응하여, 또는 이에 2차적으로, "중증 신경독성"이 발병된 것으로 간주한다: 1) 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴행을 포함한, 말초 운동 신경병증의 병태; 2) 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴행을 포함하는 말초 감각 신경병증의 병태, 비정상 및 불쾌한 감각을 유발하는 감각 지각의 왜곡과 같은 감각 장애(dysesthesia), 신경 또는 신경 그룹을 따라 강렬한 통증 감각과 같은 신경통(neuralgia), 및/또는 자극이 없을때, 따끔거림, 마비, 압력, 추위 및 따뜻함의 비정상적인 피부 감각을 유발하는 감각 뉴런의 기능 장애와 같은 지각 이상(paresthesia) 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 예를 들어 표 4에 제시된 등급 3 이상의 신경독성을 포함한다. 일부 구현예에서, 증상 또는 등급 3의 신경독성이 10일 이상 지속되는 경우 중증 신경독성은 연장된 등급 3으로 간주된다.
Figure pct00024
일부 구현예에서, 상기 방법은 다른 방법과 비교하여 CRS 또는 신경독성과 관련된 병태를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 다른 방법과 비교하여, 중증 CRS 또는 등급 3 이상의 CRS와 관련된 병태, 결과 또는 인자를 포함하는 CRS와 관련된 병태, 결과 또는 인자를 감소시킨다. 예를 들어 본 발명의 방법에 따라 치료되는 대상체는 검출가능한 CRS, 예를 들어 중증 CRS 또는 등급 3 이상의 CRS의 병태, 결과 또는 인자, 예를 들어 표 3에 제시된 임의의 병태, 결과 또는 인자를 가지지 않을 수 있고 및/또는 이러한 병태, 결과 또는 인자가 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 치료되는 대상체는, 다른 방법에 의해 치료되는 대상체와 비교하여, 신경독성의 병태, 예를 들어 사지 허약감 또는 둔함, 기억력, 시력, 및/또는 지적 능력의 상실, 통제불가능한 강박관념 및/또는 강박 행동, 망상, 두통, 및 운동 제어 상실, 인지 기능저하, 및 자율 신경계 기능 장애, 및 성기능 장애를 포함하는 인지 및 행동 문제가 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법에 따라 치료되는 대상체는 말초 운동 신경병증, 말초 감각 신경병증, 감각 장애, 신경통 또는 지각 이상과 관련된 병태가 감소될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 신경계 및/또는 뇌의 손상, 예를 들어 뉴런의 사망을 포함하는 신경독성과 관련된 결과를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 신경독성과 관련된 인자, 예를 들어 베타 아밀로이드(Aβ), 글루타메이트, 및 산소 라디칼의 수준을 감소시킨다.
일부 구현예에서, 독성 결과는 용량-제한 독성(DLT)이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량-제한 독성을 가지지 않는다. 일부 구현예에서, 용량-제한 독성(DLT)은, 특정 독성을 평가하기 위해 임의의 공지된 또는 발행된 가이드라인, 예를 들어 임의의 상기 기재된 가이드라인 및 미국 국립 암 연구소 (NCI)의 부작용에 대한 표준 용어 기준(Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 버전 40을 포함하는 가이드라인에 의해 평가된 임의의 등급 3 이상의 독성으로 정의된다. 일부 구현예에서, 용량-제한 독성(DLT)은 세포 요법제(예를 들어 T 세포 요법제) 및/또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후 하기 논의되는 사건 중의 어느 것이 발생할 때로 정의되며, 상기 사건은 a) 열성 호중구 감소증; b) (약) 7일 이상 지속되는 등급 4 호중구 감소증; c) 임상적으로 유의한 출혈을 동반하는 등급 3 또는 4 혈소판 감소증; 및 d) 24시간 이상 지속되는 등급 4 혈소판 감소증을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 구현예는 예를 들어 상기 제공된 조합 요법, 및/또는 상기 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라 T 세포의 복용량을 투여하여 관찰된, 독성, 예를 들어 CRS 또는 신경독성 또는 중증 CRS 또는 신경독성, 예를 들어 등급 3 이상의 CRS 또는 신경독성이 발생할 비율, 위험 또는 가능성을 낮출 수 있다. 일부 경우에, 이것은 외래 환자에 대한 세포 요법제의 투여를 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 상기 제공된 방법에 따른, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따른 세포 요법, 예를 들어 T 세포의 복용량(예를 들어 CAR+ T 세포)의 투여는, 외래 환자 기준으로 수행되거나 또는 대상체가 병원에서의 입원, 예를 들어 하룻밤 체류를 필요로 하는 병원에서의 입원을 필요로 하지 않는다.
일부 구현예에서, 외래 환자 기준으로 치료되는 대상체를 비롯하여, 제공된 방법에 따라, 및/또는 제공된 제조 물품 또는 조성물에 따라, 세포 요법, 예를 들어 T세포의 복용량 (예를 들어 CAR+ T 세포)가 투여된 대상체는, 대상체가 독성의 징후 또는 증상, 예를 들어 신경독성 또는 CRS의 징후 또는 증상을 나타내지 않는 한, 또한 나타낼 때까지, 세포 복용량의 투여 이전에 또는 투여와 함께 임의의 독성을 치료하기 위한 중재가 투여되지 않는다.
일부 구현예에서, 외래 환자 기준으로 치료되는 대상체를 비롯하여, 세포 요법, 예를 들어 T세포의 복용량 (예를 들어 CAR+ T 세포)이 투여되는 대상체가 발열을 나타내는 경우, 대상체는 발열을 감소시키기 위한 치료를 받거나, 또는 받도록 또는 투여되도록 지시받는다. 일부 구현예에서, 대상체에서의 발열은 대상체의 체온이 특정 임계 온도 또는 수준 이상인 (또는 측정된) 것을 특징으로 한다. 일부 구현예에서, 임계 온도는 적어도 낮은 등급의 발열, 적어도 적당한 발열, 및/또는 적어도 높은 등급의 발열과 관련된 온도이다. 일부 구현예에서, 임계 온도는 특정 온도 또는 범위이다. 예를 들어 임계 온도는 (약) 또는 적어도 (약) 섭씨 38, 39, 40, 41, 또는 42도일 수 있고, 및/또는 (약) 섭씨 38 도 내지 (약) 섭씨 39 도의 범위, (약) 섭씨 39 도 내지 (약) 섭씨 40 도의 범위, (약) 섭씨 40 도 내지 (약) 섭씨 41 도의 범위, 또는 (약) 섭씨 41 도 내지 (약) 섭씨 42 도의 범위일 수 있다.
일부 구현예에서, 발열을 감소시키기 위해 설계된 치료는 해열제를 사용한 치료를 포함한다. 해열제로는 발열을 감소시키는 임의의 시제, 예를 들어 화합물, 조성물, 또는 성분, 예를 들어 해열 효과를 가지는 것으로 공지된 시제의 임의의 개수 중 하나, 예를 들어 NSAID (예를 들어 이부프로펜, 나프록센, 케토프로펜, 및 니메술라이드), 살리실레이트, 예를 들어 아스피린, 콜린 살리실레이트, 마그네슘 살리실레이트, 및 소듐 살리실레이트, 파라세타몰, 아세트아미노펜, 메타미졸, 나부메톤, 페나존, 안티피린, 해열제(febrifuge)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 해열제는 아세트아미노펜이다. 일부 구현예에서, 아세트아미노펜은 최대 매 4 시간 마다 경구 또는 정맥 내로 125 mg/kg의 복용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이부프로펜 또는 아스피린이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 발열이 지속되는 발열인 경우, 대상체는 독성을 치료하기 위한 대안의 치료제가 투여된다. 외래 환자 기준으로 치료되는 대상체에 있어서, 대상체는 대상체가 지속되는 발열을 가지고 및/또는 가지는 것으로 결정되거나, 간주되는 경우 병원으로 돌아오도록 지시받는다. 일부 구현예에서, 대상체가 관련 임계 온도 이상의 발열을 나타내고, 구체적인 치료 이후, 예를 들어 발열을 감소시키도록 설계된 치료, 예를 들어 해열제로의 치료, 예를 들어 NSAID 또는 살리실레이트, 예를 들어 이부프로펜, 아세트아미노펜 또는 아스피린으로의 치료 이후 대상체의 발열 또는 체온이 감소되지 않거나, 또는 특정 양 이상으로 감소되지 않는 경우 (예를 들어 1℃ 초과, 및 일반적으로 약, 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃ 이상 변동하지 않는다), 대상체는 지속되는 발열을 가지고, 및/또는 가지는 것으로 결정되거나 또는 간주된다. 예를 들어 대상체가 적어도 (약) 섭씨 38 또는 39 도의 발열을 나타내거나 나타내는 것으로 결정되어, 아세트아미노펜과 같은 해열제로의 치료 이후에도 6 시간 이상, 8 시간 이상, 또는 12 시간 이상, 또는 24 시간 이상 동안, (약) 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2 ℃ 이상, 또는 (약) 1%, 2%, 3%, 4%, 또는 5% 감소되지 않거나, 그 이상 감소되지 않는 경우, 대상체는 지속되는 발열을 가지는 것으로 간주된다. 일부 구현예에서, 해열제의 복용량은 발열 또는 특정 유형의 발열, 예를 들어 박테리아 또는 바이러스 감염, 예를 들어 국소 또는 전신 감염과 관련된 발열을 감소시키는 대상체에서 일반적으로 효과적인 용량이다.
일부 구현예에서, 대상체가 관련 임계 온도 이상에서 발열을 나타내고, 대상체의 발열 또는 체온이 약 1℃ 이상 변동하지 않고, 일반적으로 약, 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃ 이상 변동하지 않는 경우, 대상체는 지속되는 발열을 가지고, 및/또는 가지는 것으로 결정되거나, 가지는 것으로 간주된다. 특정 양 이상의 변동의 부재는 일반적으로 주어진 일정 시간 동안 측정된다 (예를 들어 24-시간, 12-시간, 8-시간, 6-시간, 3-시간, 또는 1-시간 이상, 발열의 제1 징후 또는 지시된 임계를 초과하는 제1 온도로부터 측정될 수 있다) 예를 들어 일부 구현예에서, 대상체가 적어도 (약) 섭씨 38 또는 39 도의 발열을 나타내고, 6 시간 이상, 8 시간 이상, 또는 12 시간 이상, 또는 24 시간 이상 온도가 (약) 0.5℃, 0.4℃, 0.3℃, 또는 0.2℃ 이상 변동하지 않는 경우, 대상체는 지속되는 발열을 나타내는 것으로 간주되거나, 또는 결정된다.
일부 구현예에서, 발열은 지속되는 발열이고; 일부 구현예에서, 대상체는 독성을 유도할 가능성이 있는 초기 요법 이후, 예를 들어 세포 요법 이후, 예를 들어 T세포, 예를 들어 CAR+ T 세포의 복용량 이후, 지속적인 열을 가지는 것으로 결정된 시간, 예를 들어 이러한 결정의 1, 2, 3, 4, 5, 6 시간 이하 내에 또는 첫 번째 이러한 결정과 같은 시간에 치료된다.
일부 구현예에서, 독성을 치료하기 위한 하나 이상의 중재 또는 시제, 예를 들어 독성-표적 요법은, 예를 들어 상기 언급된 임의의 구현예에 따라 측정된 바와 같이, 대상체가 지속되는 발열을 나타내는 것으로 결정되거나 또는 확정(예를 들어 먼저 결정되거나 확정)될 때 또는 그 직후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 독성-표적 요법은 이러한 확정 또는 결정의 특정 기간 이내에, 예를 들어 이의 30 분, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 6 시간, 또는 8 시간 이내에 투여된다.
B. 기타 독성
일부 측면에서, 상기 독성 결과는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후 하나 이상의 비-혈액학적 독성 또는 예후이거나 그와 관련된 것이다. 비-혈액학적 독성의 예는, 제한되지는 않지만 종양 플레어 반응(tumor flare reaction), 감염, 종양 용해 증후군(tumor lysis syndrome), 심장 검사실 이상, 혈전 색전증 사건(들)(예를 들어 심부 정맥 혈전증 및 폐색전증) 및/또는 폐렴을 포함한다.
일부 측면에서, 상기 비-혈액학적 독성은 종양 플레어 반응(TFR)(종종 의사 진행(pseudoprogression)으로도 언급됨)이다. TFR은 종종 미열, 압통 및 부기, 미만성 발진 및 경우에 따라 말초 혈액 림프구 수의 증가가 동반되는 림프절, 비장 및/또는 간을 포함하는 질병-보유 부위의 크기의 급격한 증가이다. 일부 구현예에서, TFR은 이상 반응에 대한 공통 용어 기준[Common Terminology Criteria for Adverse Events (Version 3.0; US National Cancer Institute, Bethesda, MD, USA)]에 따라 등급화된다. 일부 구현예에서, TFRDMS 하기와 같이 등급화된다. 등급 1: 기능을 방해하지 않는 가벼운 통증(mild pain); 등급 2: 기능을 방해하지만 일상 생활(ADL)을 방해하지 않는 중간 정도의 통증(moderate pain), 통증(pain) 또는 진통제(analgesics); 등급 3: 기능을 방해하고 ADL을 방해하는 심한 통증(severe pain), 통증 또는 애널지식스; 등급 4: 장애(disabling); 등급 5: 사망. 일부 구현예에서, TFR과 관련된 하나 이상의 증상을 치료, 개선 또는 감소시키기 위해 하나 이상의 제제, 예를 들어 코르티코 스테로이드, NSAID 및/또는 마약성 진통제가 대상체에게 투여 될 수 있다.
일부 측면에서, 상기 비-혈액학적 독성은 종양 용해 증후군(TLS)이다. 일부 구현예에서, TLS는 카리오-비숍 그레이딩 시스템(Cairo-Bishop grading system)[문헌 「Cairo and Bishop (2004) Br J Haematol, 127:3-11」 참조]에 의해서 특정된 기준에 따라 등급화될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 고요 산혈증을 줄이기 위해 정맥내 수화를 받을 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 ECGS, LVEF를 모니터링하고 트로포닌-T 및 BNP 수준을 모니터링함으로써 심장 독성에 대해 모니터링할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 보유하거나 현탁해야할 가능성이 있는 심장 독성은 하나 이상의 심장 증상과 함께 트로포닌-T 및/또는 BNP의 상승된 수준이 관찰되는 경우 발생할 수 있다.
상기 제공된 방법의 일부 구현예에서, 대상체가 비-혈액학적 독성, 예를 들어 TFR 또는 기타 비-혈액학적 독성 또는 그의 특정한 등급을 나타내는 것으로 결정되는 경우 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙을 사용한 순환 요법이 변경될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 순환 요법은, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여 후 상기 대상체가 등급 3 또는 비-혈액학적 독성, 예를 들어 등급 3 이상의 TFR을 갖는 경우 변경된다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 독성의 징후 또는 증상이 해결, 감소 또는 감소될 때까지 영구 중단 또는 중지된다. 상기 대상체를 지속적으로 모니터링하여 독성의 하나 이상의 징후 또는 증상을 평가할 수 있다. 일부 경우에, 상기 독성이 분해되거나 또는 감소되는 경우 키나제 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 투여는 상기 순환 요법을 중장하기 전에 동일한 용량 또는 투여 섭생 요법으로, 보다 낮거나 감소된 용량으로, 및/또는 덜 빈번한 투여를 포함한 투여 섭생 요법으로 다시 시작될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 순환 요법을 다시 시작하는 경우에, 상기 용량은 적어도 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 또는 60% 낮아지거나 또는 감소된다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법을 중단하기 전에 상기 용량이 2 mg(예를 들어 주어진 5/7일)인 경우, 상기 용량은 1 mg(주어진 5/7일)으로 감소된다. 일부 구현예에서, 용량 감량 후에도 등급 3 독성이 재발하면 용량을 더 줄일 수 있다. 일부 구현예에서, 용량 감량 후에도 등급 4 독성이 재발하면 용량을 더 줄일 수 있다. 일부 측면에서, 혈액학적 독성이 순환 요법의 중단이 4주를 초과할 정도로 심각하다면, 순환 요법은 영구적으로 중단될 수 있다.
V. 제조 물품 및 키트(ARTICLES OF MANUFACTURE AND KITS)
키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 및 면역 요법제, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 T 세포 요법제, 조작된 세포를 위한 성분들, 및/또는 그의 조성물을 포함하는 제조 물품이 또한 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서 용기는 그 자체로 또는 질병 상태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균된 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 스토퍼를 갖는 것을 포함하는 정맥내 용액 백, 바이알, 또는 경구 투여되는 약제를 위한 병 또는 바이알을 포함한다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 질병 또는 질병 상태를 치료하는데 사용됨을 나타낼 수 있다.
제조 물품은 (a) 면역요법제, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되는 조작된 세포를 포함하는 조성물이 함유된 제 1 용기; 및 (b) 제 2 제제, 예를 들어 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙이 포함된 조성물을 함유하는 제 2 용기를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 제 1 용기는 제 1 조성물 및 제 2 조성물을 포함하되, 상기 제 1 조성물은 상기 면역 요법제, 예를 들어 CD4+ T 세포 요법제에 사용된 상기 유전자 조작된 세포의 제 1 집단을 포함하고, 상기 제 2 조성물은 상기 유전자 조작된 세포의 제 2 집단을 포함하고, 상기 제 2 집단은 상기 제 1 집단과 별개로 조작될 수 있으며, 예를 들어 CD8+ T 세포 요법제일 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 제 1 및 제 2 세포 조성물은 정해진 비율의 상기 조작된 세포, 예를 들어 CD4+ 및 CD8+ 세포(예를 들어 1:1 비율의 CD4+:CD8+ T 세포)를 함유한다.
상기 제조 물품은 조성물이 특정 질병 상태를 치료하는데 사용될 수 있음을 가리키는 패키지 삽입물을 더 포함할 수 있다. 별법으로 또는 이에 더해, 제조 물품은 약학적으로 허용가능한 완충제를 포함하는 또 다른 또는 동일한 용기를 더 포함할 수 있다. 또한 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 재료도 포함할 수 있다.
VI. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 발명에 사용되는 분야의 모든 용어, 표기 및 다른 기술적 및 과학적 용어 또는 전문용어는 청구 대상이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에서, 일반적으로 이해되는 의미의 용어는 본 명세서에서 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 정의되며, 본 명세서에 이러한 정의가 포함된 경우에는 반드시, 당업계에서 일반적으로 이해되는 것 이상의 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명에서 사용되는 바, "대상체"는 인간 또는 다른 동물과 같은 포유류이고, 통상 인간이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 조작된 세포 또는 조성물이 투여되는 대상체, 예를 들어 환자는 포유류, 통상 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성 또는 여성이될 수 있으며 유아, 청소년, 청년, 성인 및 노인 대상체를 포함하는 임의의 적절한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은, 비-영장류 포유류이다.
본 발명에서 사용되는 바, "치료" (및 그 문법적 변형, 예를 들어 "치료하다" 또는 "치료하는")은 질병 또는 장애 상태 또는 장애 또는 그와 관련된 증상, 부작용 또는 결과, 또는 표현형의 완전한 또는 부분적 개선 또는 감소를 말한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질병의 직접적인 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질병 진행률 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화, 및 완화 또는 개선된 예후를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 이 용어는 질병의 완전한 치유 또는 임의의 증상에 대한 완전한 제거 또는 모든 증상 또는 결과에 대한 효과(들)을 의미하지는 않는다.
본 발명에서 사용되는 "질병의 발생 지체"는 질병(예를 들어 B 세포 악성 종양)의 발생을 연기, 방해, 지연, 늦춤, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지체는 질병 이력 및/또는 치료 대상인 개체에 따라 다양한 시간 길이일 수 있다. 충분한 또는 상당한 지체는, 개체가 질병을 발생시키지 않는다는 점에서, 사실상 예방을 포함할 수 있음이 명백하다. 예를 들어 전이 발생과 같은 말기 단계 B 세포 악성 종양이 지체될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 바, "방지"는 질병에 걸리기 쉽지만 아직 그 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발에 관한 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 세포 및 조성물은 질병의 발생을 지체시키거나 질병의 진행을 지연시키는데 사용된다.
본 발명에서 사용되는 바, 기능 또는 활성을 "억제"시킨다는 것은, 대상 조건 또는 파라미터를 제외하고 다른 것은 동일한 조건과 비교하였을 때, 또는 다른 조건과 비교하여 상기 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어 종양 성장을 억제하는 세포는, 상기 세포의 부재시 종양의 성장 속도와 비교하여 상기 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
투여의 맥락에서 제제, 예를 들어 조작된 세포 또는 항-PD-L1 또는 항원-결합 단편, 또는 약학적 제형, 또는 그의 조성물의 "유효량"은 원하는 결과, 예를 들어 치료적 또는 예방적 결과를 달성하기 위하여 필요한 투여량/양으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다.
제제, 예를 들어 조작된 세포 또는 항-PD-L1 또는 항원-결합 단편, 또는 약학적 제형 또는 그의 조성물의 "치료적 유효량"은 원하는 치료적 결과를 달성하기 위하여, 예를 들어 질병, 질병 상태 또는 장애의 치료, 및/또는 치료의 약물 동태학적 또는 약물 동력학적 효과를 달성하기 위하여 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 치료적으로 유효한 양은 대상체의 질병, 병태, 연령, 성별 및 체중, 및 투여되는 면역조절 폴리펩티드 또는 조작된 세포와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법은 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙, 조작된 세포(예를 들어 세포 요법제), 또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적으로 유효한 양으로 투여하는 것을 포함한다.
"예방적 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량으로 및 그러한 시간 동안 효과적인 양을 말한다. 반드시 그러한 것은 아니지만 통상, 예방적 투여량은 질병 발생 전 또는 초기 단계에서 대상체에게 사용되기 때문에, 상기 예방적 유효량은 치료적으로 유효한 양보다 적을 것이다.
"약학적 제형"이라는 용어는 그러한 형태로서 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는, 그 제형이 투여될 대상체에 허용될 수 없을만큼 독성인 어떠한 추가 성분을 함유하지 않는 제형을 말한다.
"약학적 허용가능한 담체"는 활성 성분 이외의, 약학적 제제의 성분을 말하며, 이는 대상체에게 비독성이다. 약학적 허용가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정화제 또는 보존제를 포함하지만, 이에 국한되는 것은 아니다.
본 발명에서 사용되는바, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 분명히 다르게 지시하지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어 "a" 또는 "an"은 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다. 본 발명에서 기술된 측면 및 변형은 측면들 및 변형들"로 이루어지는" 및/또는 "필수적으로 그로 이루어지는"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에 걸쳐, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식에서의 설명은 편의상 및 간략화를 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 설명은 가능한 모든 하위 범위 및 그 범위 내의 개별적인 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내 임의의 언급된 또는 개재된 값이 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이들과 같은 보다 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로보다 더욱 작은 범위에 포함될 수 있으며, 기술된 범위 내에서 특별히 배제된 한계에 따라 청구된 대상 내에 포함된다. 명시된 범위가 하나의 한계 또는 두 한계를 포함하는 경우, 포함된 한계들 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위는 청구 대상에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본 발명에서 사용되는 "약"이라는 용어는 이 기술분야에서 당업자에게 쉽게 알려딘 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 발명에서 어떠한 값 또는 파라미터와 관련한 "약"의 언급은 그 값 또는 매개 변수 자체에 대한 구현예를 포함(및 설명)한다. 예를 들어 "약 X"을 언급하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.
본 발명에서 사용되는바, 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치가, 기재된 서열, 예를 들어 서열 목록에 기재된 서열 내 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치"에 대응한다"는 것은, 표준 정렬 알고리즘, 예를 들어 GAP 알고리즘을 사용하여 상기 기재된 서열과 상동성을 최대화하는 정렬시 확인된 뉴클레오티드 또는 아미노산 위치를 말한다. 당업자는 서열을 정렬시킴으로써, 예를 들어 보존된 아미노산 잔기 및 동일한 아미노산 잔기를 가이드로서 사용하여 대응하는 잔기를 확인할 수 있다. 일반적으로, 대응하는 위치를 확인하기 위해, 가장 높은 정도의 매치가 얻어지도록 아미노산 서열을 정렬한다[예를 들어 문헌 「Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New.Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073」 참조].
본 발명에 사용되는바, 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 발명에서는 "발현 벡터"라 지칭한다. 벡터 중에는 레트로바이러스, 예를 들어 감마레트로바이러스 및 렌티 바이러스 벡터와 같은 바이러스 벡터가 있다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주" 및 "숙주 세포 배양체"는 상호교환적으로 사용되며, 이러한 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하는데, 여기에는 최초의 형질전환된 세포 및 계대의 수에 관계없이 그로부터 유도된 자손이 포함된다. 자손은 핵산 함량이 부모 세포와 완전히 동일하지는 않을 수 있고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 본래의 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본 발명에 포함된다.
본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상의 또는 세포내의 검출 가능한 존재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 존재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출 가능하다.
본 발명에서 사용되는 바, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은 특정 마커, 통상 표면 마커의, 세포 상에 또는 세포내의 실질적인 검출 가능한 존재의 부재를 말한다. 표면 마커를 언급할 때, 이 용어는 유세포 분석에 의하여 검출되는, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출되는 표면 발현의 부재를 말하는데, 여기서 상기 염색은, 다른 것은 동일한 조건 하에서 이소형-매치된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색을 실질적으로 초과하는 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출되지 않고, 및/또는 상기 마커에 대하여 양성이라고 알려진 세포에 대한 것보다 실질적으로 낮은 수준에서, 및/또는 상기 마커에 대하여 음성이라고 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의하여 검출된다.
본 발명에서 사용되는바, 아미노산 서열(레퍼런스 폴리펩티드 서열)에 대해 사용되는 경우, "백분율(%) 아미노산 서열 상동성" 및 "백분율 상동성"은, 서열들과, 최대치의 백분율 서열 상동성을 얻기 위하여 필요하다면 도입되는 갭을 정렬한 후, 상기 기준 폴리펩티드 서열 내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어 대상 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로서 정의되며, 상기 서열 상동성의 일부로서 어떠한 보존적 치환은 고려하지 않는다. 백분율 아미노산 서열 상동성을 결정하는 목적을 위한 서열정렬은 당해 분야의 기술의 범주 내에서 다양한 방식, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 메갈리안(DNASTAR) 소프트웨어와 같은 공중이 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어를 이용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 적절히 결정할 수 있다.
아미노산 치환은 폴리펩티드에서 하나의 아미노산을 다른 아미노산으로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 아미노산 치환은 관심있는 결합 분자, 예를 들어 항체에 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
아미노산은 일반적으로 하기의 통상적인 측쇄 특성에 따라 분류될 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe
일부 구현예에서, 보존적 치환은 상기 클래스 중 하나의 구성원을 같은 클래스의 다른 구성원으로 교환하는 것을 수반할 수 있다. 일부 구현예에서, 비보존적 아미노산 치환은 상기 클래스 중 하나의 구성원을 다른 클래스로 교환하는 것을 수반할 수 있다.
본원에서 사용된 용어 '조성물'은 세포를 포함한, 둘 이상의 생성물, 물질, 또는 키나제 억제제, 예를 들어 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙의 혼합물을 지칭한다. 그것은 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비-수성 또는 그들의 임의의 조합물일 수 있다.
본원에서 사용된 용어 '대상체'는 포유동물, 인간 또는 기타 동물, 전형적으로는 인간이다.
VII. 예시적 구현예
제공된 구현예는 아래와 같다:
1. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
(1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00025
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제(kinase inhibitor)를 투여하는 단계; 및
(2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제(autologous T cell therapy)를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량(dose)을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리(processing)함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
을 포함하되,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법(dosing regimen)으로 수행되는, 방법.
2. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
(1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00026
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계;
(2) 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 단계; 및
(3) 상기 대상체에게 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하는 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계
를 포함하되,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 상기 화합물의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되는, 방법.
3. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00027
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 것
을 포함하되,
상기 대상체는 치료 후보이거나 또는 자가 T 세포 요법제로 치료될 예정이며, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하고,
상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리(processing)하며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되는, 방법.
4. 구현예 3에 있어서,
상기 대상체에게 상기 T 세포 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
5. 구현예 1, 2 및 4 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝되는(preconditioned), 방법.
6. 구현예 1, 2 및 4 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
7. 구현예 5 또는 6에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 림프구고갈 요법동안 중지되거나 또는 중단되는, 방법.
8. 구현예 5 내지 7 중의 어느 하나에 있어서,
상기 투여 섭생 요법은 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하는, 방법.
9. 구현예 5 내지 7 중의 어느 하나에 있어서,
상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는, 방법.
10. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
(1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
Figure pct00028
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계;
(2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및
(3) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리하는 단계를 포함하고, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
을 포함하되,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는, 방법.
11. 구현예 10에 있어서,
상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 것을 더 포함하는, 방법.
12. 구현예 1 내지 11 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 적어도 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 이상에서 개시되는, 방법.
13. 구현예 1 내지 12 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되는, 방법.
14. 구현예 1 내지 13 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는, 방법.
15. 구현예 5 내지 14 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는, 방법.
16. 구현예 9 내지 15 중의 어느 하나에 있어서,
상기 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 15일 내지 29일동안 연장하는 기간 동안인, 방법.
17. 구현예 9 내지 16 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 기간 동안인, 방법.
18. 구현예 1 내지 17 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날짜에서 1일 1회 실시되는, 방법.
19. 구현예 1 내지 18 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유효량은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 840 mg 또는 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg을 포함하는, 방법.
20. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
(1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
Figure pct00029
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함함; 및
(2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
을 포함하되,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득되하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되며, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
21. 구현예 20에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제로 사전 컨디셔닝되는, 방법.
22. 구현예 20에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
23. 구현예 20 내지 22 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는, 방법.
24. 구현예 20 내지 23 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는, 방법.
25. 구현예 20 내지 24 중의 어느 하나에 있어서,
상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하는 것을 포함하는, 방법.
26. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
(1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
Figure pct00030
또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 가짐;
(2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및
(3) 상기 림프구고갈 요법을 완료한 후 2일 내지 7일 이내에 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
을 포함하되,
상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월 이상 동안 연장하는 기간 동안 추가 투여를 포함하고, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 약 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
27. 구현예 20 내지 26 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 것을 더 포함하는, 방법.
28. 구현예 1 내지 27 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg 내지 약 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
29. 구현예 1 내지 28 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 7일에 개시되는, 방법.
30. 구현예 1 내지 29 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 30일 내지 40일에 개시되고;
상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 23일 내지 38일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전에 5일 내지 7일에 완료되는, 방법.
31. 구현예 1 내지 30 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 35일에 개시되고;
상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 28일 내지 32일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전에 5일 내지 7일에 완료되는, 방법.
32. 구현예 5 내지 31 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법은 플루라다빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는, 방법.
33. 구현예 5 내지 32 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법은 2 내지 4일동안, 선택적으로 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 200-400 mg/m2, 선택적으로 (약) 300 mg/m2 및/또는 플루다라빈 (약) 20-40 mg/m2, 선택적으로 30 mg/m2의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2의 투여를 포함하는, 방법.
34. 구현예 5 내지 33 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 300 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하고/하거나,
상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하는, 방법.
35. 구현예 1 내지 34 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 140 mg의 양으로 투여되는, 방법.
36. 구현예 1 내지 34 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg의 양으로 투여되는, 방법.
37. 구현예 1 내지 34 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 420 mg의 양으로 투여되는, 방법.
38. 구현예 1 내지 34 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
39. 구현예 9 내지 38 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 또는 4개월 초과 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시후 (약) 5개월 또는 5개월 초과동안 연장하는, 방법.
40. 구현예 9 내지 39 중의 어느 하나에 있어서,
상기 추가 투여는 (약) 6개월 또는 6개월 초과 연장하는 기간 동안인, 방법.
41. 구현예 9 내지 40 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하거나, 또는
상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화(remission) 후에 진행되거나 또는 재발하는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는, 방법.
42. 구현예 9 내지 41 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은 (약) 3개월 내지 6개월 동안 연장하는, 방법.
43. 구현예 9 내지 42 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
44. 구현예 9 내지 42 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 3개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
45. 구현예 44에 있어서,
상기 기간은, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
46. 구현예 9 내지 42 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
47. 구현예 9 내지 42 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
48. 구현예 47에 있어서,
상기 기간은, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
49. 구현예 9 내지 48 중의 어느 하나에 있어서,
상기 추가 투여는, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간 동안 지속되는, 방법.
50. 구현예 9 내지 49 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는, 방법.
51. 구현예 9 내지 40, 42 내지 44, 46 및 47 중의 어느 하나에 있어서,
상기 기간의 종료시에, 상기 대상체가 부분 반응(partial response; PR) 또는 안정적 질병(stable disease; SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후 상기 추가 투여를 지속하는 것을 더 포함하는, 방법.
52. 구현예 9 내지 40, 42 내지 44, 46, 47 및 51 중의 어느 하나에 있어서,
(약) 6개월에, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 추가 투여는 6개월 초과동안 지속되는, 방법.
53. 구현예 51 또는 52에 있어서,
상기 추가 투여는 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취할 때까지 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 재발할 때까지 지속되는, 방법.
54. 구현예 1 내지 53 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK)를 억제하고/하거나 IL2 유도성 T-세포 키나제(ITK)를 억제하는, 방법.
55. 구현예 1 내지 54 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 ITK를 억제하고 상기 억제제는 ITK를 억제하거나 또는 (약) 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM 또는 그 이하 미만의 반수 최대 억제 농도(half-maximal inhibitory concentration)(IC50)로 ITK를 억제하는, 방법.
56. 구현예 1 내지 55 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받은 것인, 방법.
57. 구현예 1 내지 55 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받지 않는 것인, 방법.
58. 구현예 1 내지 57 중의 어느 하나에 있어서,
(i) 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 키나제 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 포함하고, 선택적으로 상기 세포 집단은 B 세포의 집단이거나 또는 그를 포함하고, 또는 T 세포를 포함하지 않으며;
(ii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 키나제 억제제에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고;
(iii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며;
(iv) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 키나제 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고;
(v) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나;
(vi) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타낸 것인, 방법.
59. 구현예 1 내지 58 중의 어느 하나에 있어서,
상기 암은 B 세포 악성 종양인, 방법.
60. 구현예 59에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 림프종인, 방법.
61. 구현예 60에 있어서,
상기 림프종은 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL)인, 방법.
62. 구현예 61에 있어서,
상기 NHL은, 공격적인 NHL(aggressive NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma; DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질전환된 무통성 종양(indolent); EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma); 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B); 및/또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종을 포함하는, 방법.
63. 구현예 1 내지 62 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인되는 것인, 방법.
64. 구현예 1 내지 63 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 경구 투여되는, 방법.
65. 구현예 1 내지 64 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD19는 인간 CD19인, 방법.
66. 구현예 1 내지 65 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
67. 구현예 66에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
68. 구현예 66 또는 67에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공동자극 신호 전달 영역을 더 포함하는, 방법.
69. 구현예 68에 있어서,
상기 공동자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인를 포함하는, 방법.
70. 구현예 68 또는 69에 있어서,
상기 공동자극 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
71. 구현예 1 내지 70 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CAR은, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인(transmembrane domain); 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 포함하며;
상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인임;을 포함하거나; 또는
상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하는, 방법.
72. 구현예 71에 있어서,
상기 CAR은 스페이서를 포함하고 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지의 전부 또는 일부, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지의 전부 또는 일부, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 전술한 것들에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체를 갖거나 또는 그것들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]을 포함하거나 또는 그것들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이고/이거나;
상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
상기 scFv는 RASQDISKYLN의 CDR-L1 서열 (서열번호 35), SRLHSGV의 CDR-L2 서열(서열번호 36), 및/또는 GNTLPYTFG의 CDR-L3 서열(서열번호 37) 및/또는 DYGVS의 CDR-H1 서열(서열번호 38), VIWGSETTYYNSALKS의 CDR-H2 서열(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG의 CDR-H3 서열(서열번호 40)을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDR-L1 서열, FMC63의 CDR-L2 서열, 및 FMC63의 CDR-L3 서열, FMC63의 CDR-H1 서열, FMC63의 CDR-H2 서열, 및 FMC63의 CDR-H3 서열을 포함하거나 또는 임의의 전술한 것과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그에 대해 경쟁하며, 선택적으로 상기 scFv는, 순서대로, VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고/하거나 상기 scFv는 유연한 링커를 포함하고/하거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
73. 구현예 1 내지 72 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×106 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×106 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×107 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×107 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포(각각의 경계 포함)를 포함하는, 방법.
74. 구현예 1 내지 73 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 세포를 포함하는, 방법.
75. 구현예 1 내지 74 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
76. 구현예 1 내지 75 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
77. 구현예 1 내지 76 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고 상기 용량의 투여는 복수의 다른 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 다른 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 다른 것을 포함하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
78. 구현예 77에 있어서,
상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 0 내지 12시간 간격(apart), 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나 또는 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되되, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/되거나;
상기 제 1 조성물의 투여 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는, 방법.
79. 구현예 77 또는 78에 있어서,
상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는, 방법.
80. 구현예 77 내지 79 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물은 상기 CD4+ T 세포를 포함하는, 방법.
81. 구현예 77 내지 79 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물은 상기 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
82. 구현예 77 내지 81 중의 어느 하나에 있어서,
상기 제 1 조성물은 상기 제 2 조성물 이전에 투여되는, 방법.
83. 구현예 1 내지 82 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포의 용량은 비경구, 선택적으로 정맥내 투여되는, 방법.
84. 구현예 1 내지 83 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득된 1차 T 세포인, 방법.
85. 구현예 1 내지 82 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포는 상기 대상체에 자가(autologous)인, 방법.
86. 구현예 1 내지 85 중의 어느 하나에 있어서,
상기 처리는,
상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플로부터, T 세포, 선택적으로 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 분리함으로써 1차 T 세포를 포함하는 투입 조성물을 생성하는 단계; 및
상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산을 상기 투입 조성물의 T 세포에 도입하는 단계;
를 포함하는, 방법.
87. 구현예 87에 있어서,
상기 분리는 면역친화성-기반 선택(immunoaffinity-based selection)을 수행하는 것을 포함하는, 방법.
88. 구현예 1 내지 87 중의 어느 하나에 있어서,
상기 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플(buffy coat sample), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획화된 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 혈액성분채집술(apheresis) 생성물, 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 생성물이거나 이를 포함하는, 방법.
89. 구현예 86 내지 88 중의 어느 하나에 있어서,
상기 도입 전에, 상기 처리는 자극 조건하에 상기 투입 조성물을 인큐베이션하는 것을 포함하되, 상기 자극 조건은 TCR 복합체의 하나 이상의 구성요소의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 하나 이상의 공동자극 분자의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 자극 시약의 존재를 포함함으로써 자극된 조성물을 생성하고, 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 분자는 상기 자극된 조성물에 도입되는, 방법.
90. 구현예 89에 있어서,
상기 자극 시약은 TCR 복합체의 한 요소에 특이적으로 결합하는, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1차 제제(primary agent)를 포함하는, 방법.
91. 구현예 90에 있어서,
상기 자극 시약은 T 세포 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 2차 제제(secondary agen)를 더 포함하고, 선택적으로 상기 공동자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40, 또는 ICOS로부터 선택되는, 방법.
92. 구현예 90 또는 91에 있어서,
상기 1차 및/또는 2차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 인큐베이션을 포함하는, 방법.
93. 구현예 90 내지 92 중의 어느 하나에 있어서,
상기 1차 제제 및/또는 2차 제제는 고형 지지체의 표면 상에 존재하는, 방법.
94. 구현예 93에 있어서,
상기 고형 지지체는 비드이거나 또는 그를 포함하고, 선택적으로 상기 비드는 자성(magnetic) 또는 초상자성(superparamagnetic)인, 방법.
95. 구현예 94에 있어서,
상기 비드는 (약) 3.5㎛ 초과이되 약 9㎛ 이하 또는 약 8㎛ 이하 또는 약 7㎛ 이하 또는 약 6㎛ 이하 또는 약 5㎛ 이하의 직경을 포함하는, 방법.
96. 구현예 94 또는 95에 있어서,
상기 비드는 (약) 4.5㎛의 직경을 포함하는, 방법.
97. 구현예 1 내지 96 중의 어느 하나에 있어서,
상기 도입은 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터로 상기 자극된 조성물의 세포를 형질도입(transducing)하는 것을 포함하는, 방법.
98. 구현예 97에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터인, 방법.
99. 구현예 97 또는 98에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 감마레트로바이러스 벡터인, 방법.
100. 구현예 86 내지 99 중의 어느 하나에 있어서,
상기 처리는 상기 도입 후 상기 T 세포를 배양하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 배양은 세포의 증식 또는 증폭을 일으키는 조건하에 수행되어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 산출 조성물을 생성하는, 방법.
101. 구현예 100에 있어서,
상기 배양 후에, 상기 방법은 냉동보존(cryopreservation)을 위해 및/또는 상기 대상체에 대한 상기 T 세포 요법제의 투여를 위해 상기 산출 조성물의 세포를 제형화(formulating)하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 제형화는 약학적으로 허용가능한 부형제의 존재하에서 이루어지는, 방법.
102. 구현예 1 내지 101 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 인간인, 방법.
103. 구현예 1 내지 102 중의 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 듀러블한(durable) 완전 반응(complete response, CR)을 성취하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나;
6개월까지 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 반응(response)에서 유지되고, CR에서 유지되고/되거나 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고 선택적으로 상기 OR은 듀러블하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나;
6개월까지 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 반응에서 유지되거나 생존하는, 방법.
104. 구현예 60 내지 103 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량의 투여 시점에 또는 투여 직전에, 상기 대상체는, 상기 림프종, 선택적으로 상기 NHL에 대한 하나 이상의 사전 요법(prior therapies), 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외의 1개, 2개 또는 3개의 사전 요법으로, 치료 후 완화 이후 재발하였거나, 또는 상기 치료 요법에 대해 불응성으로 되었던, 방법.
105. 구현예 60 내지 104 중의 어느 하나에 있어서,
상기 세포 용량을 포함하는 상기 T 세포 요법제의 투여시 또는 투여 전에,
상기 대상체는 이중/삼중 유전자 이상 림프종을 갖는 것이거나 또는 확인되었고;
상기 대상체는 화학요법-불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법-불응성 DLBCL이거나 또는 확인되었고/되었거나;
상기 대상체는 사전 요법에 대한 반응에서 완전 반응(CR)을 성취하지 않은 것인, 방법.
106. 키트로서,
구조식
Figure pct00031
, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 자가 T 세포 요법제로 치료를 위한 또는 그것으로 치료 받을 후보인 암을 갖는 대상체에게 상기 하나 이상의 단위 용량을 투여하기 위한 지침을 포함하고,
상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하고, 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플이 수득되고 처리되며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산을 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고,
상기 지침은, 상기 샘플의 수득 전에 적어도 (약) 3일에 상기 대상체에 상기 키나제 억제제의 단위 용량의 투여를 개시하고, 그리고 투여 섭생 요법 내에는 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 하나 이상의 용량 단위의 반복 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
107. 구현예 106에 있어서,
상기 지침은 상기 T 세포 요법제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 특정하는, 키트.
108. 구현예 106 또는 107에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 특정하는, 키트.
109. 구현예 108에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가 상기 림프구고갈 요법제의 투여 동안 중단되는 것을 특정하는, 키트.
110. 구현예 108 또는 109에 있어서,
상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
111. 구현예 108 또는 110에 있어서,
상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여 후 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여의 중단 또는 중지, 및 이어서 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
112. 구현예 106 내지 111 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 적어도 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 이상에서 개시되는 것을 특정하는, 키트.
113. 구현예 106 내지 112 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되는 것을 특정하는, 키트.
114. 구현예 108 내지 113 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법제의 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는 것을 특정하는, 키트.
115. 구현예 108 내지 114 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법제의 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는 것을 특정하는, 키트.
116. 구현예 111 내지 115 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 기간 동안인 것을 특정하는, 키트.
117. 구현예 106 내지 116 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 각각의 단위 용량의 투여가, 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날짜에서 1일 1회 실시되는 것을 특정하는, 키트. .
118. 구현예 106 내지 117 중의 어느 하나에 있어서,
상기 하나 이상의 단위 용량 각각은 (약) 140 mg 내지 약 840 mg을 포함하는, 키트.
119. 구현예 119 내지 118 중의 어느 하나에 있어서,
상기 하나 이상의 단위 용량 각각은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 약 560 mg을 포함하는, 키트.
120. 구현예 106 내지 119 중의 어느 하나에 있어서,
상기 하나 이상의 단위 용량 각각은, (약) 280 mg 내지 560 mg을 포함하는, 키트.
121. 구현예 106 내지 120 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 최소 (약) 7일에 개시되는 것을 특정하는, 키트.
122. 구현예 106 내지 121 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 30일 내지 40일에 개시되고;
상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 23일 내지 38일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전에 5일 내지 7일에 완료되는 것을 특정하는, 키트.
123. 구현예 106 내지 122 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은,
상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 35일에 개시되고;
상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 28일 내지 32일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전에 5일 내지 7일에 완료되는 것을 특정하는, 키트.
124. 구현예 108 내지 123 중의 어느 하나에 있어서,
상기 림프구고갈 요법은 플루라다빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는, 키트.
125. 구현예 108 내지 124 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 림프구고갈 요법이 2 내지 4일동안, 선택적으로 3일동안 매일 사이클로포스파미드 약 200-400 mg/m2, 선택적으로 약 300 mg/m2 및/또는 플루다라빈 약 20-40 mg/m2, 선택적으로 30 mg/m2의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드 약 500 mg/m2의 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
126. 구현예 108 내지 125 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은,
상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 300 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하고/하거나,
상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
127. 구현예 106 내지 126 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 140 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 140 mg의 양으로 투여하는 것을 특정하는, 키트.
128. 구현예 106 내지 127 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 280 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg의 양으로 투여하는 것을 특정하는, 키트.
129. 구현예 106 내지 128 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 420 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 420 mg의 양으로 투여하는 것을 특정하는, 키트.
130. 구현예 106 내지 129 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 단위 용량 각각은 (약) 560 mg이고/이거나 상기 지침은, 상기 키나제 억제제를 그것이 투여되는 날마다 (약) 560 mg의 양으로 투여하는 것을 특정하는, 키트.
131. 구현예 111 내지 130 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 또는 4개월 초과동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
132. 구현예 111 내지 131 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시후 (약) 5개월 또는 5개월 초과동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
133. 구현예 111 내지 132 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 추가 투여가 (약) 6개월 또는 6개월 초과 연장하는 기간 동안인 것을 특정하는, 키트.
134. 구현예 111 내지 133 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는 것을 특정하는, 키트.
135. 구현예 111 내지 134 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 추가 투여가, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화(remission) 후에 진행되거나 또는 재발하는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는 것을 특정하는, 키트.
136. 구현예 111 내지 135 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이 (약) 3개월 내지 6개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
137. 구현예 111 내지 136 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
138. 구현예 111 내지 136 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가, (약) 3개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
139. 구현예 138에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
140. 구현예 111 내지 136 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
141. 구현예 111 내지 136 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가, (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
142. 구현예 141에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간이, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는 것을 특정하는, 키트.
143. 구현예 111 내지 142 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 추가 투여가, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간 동안 지속되는 것을 특정하는, 키트.
144. 구현예 111 내지 133, 136 내지 138, 140 및 141 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 기간의 종료시에, 상기 대상체가 부분 반응(partial response; PR) 또는 안정적 질병(stable disease; SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후 상기 추가 투여를 지속하는 것을 더 포함하는 것을 특정하는, 키트.
145. 구현예 111 내지 133, 136 내지 138, 140, 141 및 144 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, (약) 6개월에, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 추가 투여는 6개월 초과동안 지속되는 것을 특정하는, 키트.
146. 구현예 144 또는 144에 있어서,
상기 지침은, 상기 추가 투여가 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취할 때까지 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 재발할 때까지 지속되는 것을 특정하는, 키트.
147. 구현예 106 내지 146 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK)를 억제하고/하거나 IL2 유도성 T-세포 키나제(ITK)를 억제하는, 키트.
148. 구현예 106 내지 147 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제는 ITK를 억제하고 상기 억제제는 ITK를 억제하거나 또는 (약) 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM 또는 그 이하 미만의 반수 최대 억제 농도(half-maximal inhibitory concentration)(IC50)로 ITK를 억제하는, 키트.
149. 구현예 106 내지 148 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 대상체가 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받았거나 투여 받았을 수 있는 것을 특정하는, 키트.
150. 구현예 106 내지 148 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 대상체가 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받지 않았거나 투여 받지 않은 것을 특정하는, 키트.
151. 구현예 106 내지 150 중의 어느 하나에 있어서,
(i) 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 키나제 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 포함하고, 선택적으로 상기 세포 집단은 B 세포의 집단이거나 또는 그를 포함하고, 또는 T 세포를 포함하지 않으며;
(ii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 키나제 억제제에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고;
(iii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며;
(iv) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 키나제 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고;
(v) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나;
(vi) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타낸 것인, 키트.
152. 구현예 106 내지 151 중의 어느 하나에 있어서,
상기 암은 B 세포 악성 종양인, 키트.
153. 구현예 152에 있어서,
상기 B 세포 악성 종양은 림프종인, 키트
154. 구현예 153에 있어서,
상기 림프종은 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL)인, 키트.
155. 구현예 154에 있어서,
상기 NHL은, 공격적인 NHL(aggressive NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma; DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질전환된 무통성 종양(indolent); EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma); 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B); 및/또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종을 포함하는, 키트.
156. 구현예 106 내지 155 중의 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인되는 것인, 키트.
157. 구현예 106 내지 156 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량은 경구 투여용으로 제형화되고/되거나 상기 지침은 상기 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량이 경구 투여되는 것을 더 특정하는, 키트.
158. 구현예 106 내지 157 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CD19는 인간 CD19인, 키트.
159. 구현예 106 내지 158 중의 어느 하나에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는, 키트.
160. 구현예 159에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함하는, 키트.
161. 구현예 159 또는 160에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공동자극 신호 전달 영역을 더 포함하는, 키트.
162. 구현예 161에 있어서,
상기 공동자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인를 포함하는, 키트.
163. 구현예 161 또는 162에 있어서,
상기 공동자극 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함하는, 키트.
164. 구현예 106 내지 163 중의 어느 하나에 있어서,
상기 CAR은, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인(transmembrane domain); 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 포함하며;
상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인임;을 포함하거나; 또는
상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하는, 키트.
165. 구현예 164에 있어서,
상기 CAR은 스페이서를 포함하고 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4 힌지, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지의 전부 또는 일부, 선택적으로 IgG4, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체를 갖거나 또는 그것들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]을 포함하거나 또는 그것들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이고/이거나;
상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15 또는 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
상기 scFv는 RASQDISKYLN의 CDR-L1 서열 (서열번호 35), SRLHSGV의 CDR-L2 서열(서열번호 36), 및/또는 GNTLPYTFG의 CDR-L3 서열(서열번호 37) 및/또는 DYGVS의 CDR-H1 서열(서열번호 38), VIWGSETTYYNSALKS의 CDR-H2 서열(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG의 CDR-H3 서열(서열번호 40)을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDR-L1 서열, FMC63의 CDR-L2 서열, 및 FMC63의 CDR-L3 서열, FMC63의 CDR-H1 서열, FMC63의 CDR-H2 서열, 및 FMC63의 CDR-H3 서열을 포함하거나 또는 임의의 전술한 것과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그에 대해 경쟁하며, 선택적으로 상기 scFv는, 순서대로, VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고/하거나 상기 scFv는 유연한 링커를 포함하고/하거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 키트.
166. 구현예 106 내지 165 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×106 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×106 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×107 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×107 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포(각각의 경계 포함)를 포함하는, 키트.
167. 구현예 106 내지 166 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 세포를 포함하는, 키트.
168. 구현예 106 내지 167 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 키트.
169. 구현예 106 내지 168 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 키트.
170. 구현예 106 내지 169 중의 어느 하나에 있어서,
상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고 상기 지침은, 상기 용량의 투여가 복수의 다른 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 다른 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 다른 것을 포함하는 제 2 조성물을 포함하는 것을 특정하는, 키트.
171. 구현예 170에 있어서,
상기 지침은, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물이 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나 또는 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되고, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/되거나;
상기 제 1 조성물의 투여 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는 것을 특정하는, 키트.
172. 구현예 170 또는 171에 있어서,
상기 지침은, 상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물이 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는 것을 특정하는, 키트.
173. 구현예 170 내지 172 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 제 1 조성물이 상기 CD4+ T 세포를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
174. 구현예 170 내지 172 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 제 1 조성물이 상기 CD8+ T 세포를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
175. 구현예 170 내지 174 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 제 1 조성물이 상기 제 2 조성물 이전에 투여되는 것을 특정하는, 키트.
176. 구현예 106 내지 175 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 세포의 용량이 비경구, 선택적으로 정맥내 투여되는 것을 특정하는, 키트.
177. 구현예 106 내지 176 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 T 세포가 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득된 1차 T 세포인 것을 특정하는, 키트.
178. 구현예 106 내지 177 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은, 상기 T 세포가 상기 대상체에 자가(autologous)인 것을 특정하는, 키트.
179. 구현예 106 내지 178 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은 상기 T 세포 요법제를 생성하는 상기 방법을 더 특정하는, 키트.
180. 구현예 106 내지 179 중의 어느 하나에 있어서,
상기 T 세포 요법제를 생성하는 방법은,
상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플로부터, T 세포, 선택적으로 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 분리함으로써 1차 T 세포를 포함하는 투입 조성물을 생성하는 단계; 및
상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산을 상기 투입 조성물에 도입하는 단계;
를 포함하는, 키트.
181. 구현예 180에 있어서,
상기 분리는 면역친화성-기반 선택(immunoaffinity-based selection)을 수행하는 것을 포함하는, 키트.
182. 구현예 106 내지 181 중의 어느 하나에 있어서,
상기 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플(buffy coat sample), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획화된 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 혈액성분채집술(apheresis) 생성물, 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 생성물이거나 이를 포함하는, 키트.
183. 구현예 180 내지 182 중의 어느 하나에 있어서,
상기 도입 전에, 상기 처리는 자극 조건하에 상기 투입 조성물을 인큐베이션하는 것을 포함하되, 상기 자극 조건은 TCR 복합체의 하나 이상의 구성요소의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 하나 이상의 공동자극 분자의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 자극 시약의 존재를 포함함으로써 자극된 조성물을 생성하고, 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 분자는 상기 자극된 조성물에 도입되는, 키트.
184. 구현예 183에 있어서,
상기 자극 시약은 다수의 TCR 복합체에 특이적으로 결합하는, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1차 제제(primary agent)를 포함하는, 키트.
185. 구현예 184에 있어서,
상기 자극 시약은 T 세포 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 2차 제제(secondary agen)를 더 포함하고, 선택적으로 상기 공동자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40, 또는 ICOS로부터 선택되는, 키트.
186. 구현예 184 또는 185에 있어서,
상기 1차 및/또는 2차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 인큐베이션을 포함하는, 키트.
187. 구현예 184 내지 186 중의 어느 하나에 있어서,
상기 1차 제제 및/또는 2차 제제는 고형 지지체의 표면 상에 존재하는, 키트.
188. 구현예 187에 있어서,
상기 고형 지지체는 비드이거나 또는 그를 포함하고, 선택적으로 상기 비드는 자성(magnetic) 또는 초상자성(superparamagnetic)인, 키트.
189. 구현예 188에 있어서,
상기 비드는 (약) 3.5㎛ 초과이되 약 9㎛ 이하 또는 약 8㎛ 이하 또는 약 7㎛ 이하 또는 약 6㎛ 이하 또는 약 5㎛ 이하의 직경을 포함하는, 키트.
190. 구현예 188 또는 189에 있어서,
상기 비드는 (약) 4.5㎛의 직경을 포함하는, 키트.
191. 구현예 106 내지 190 중의 어느 하나에 있어서,
상기 도입은 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터로 상기 자극된 조성물의 세포를 형질도입(transducing)하는 것을 포함하는, 키트.
192. 구현예 191에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터인, 키트.
193. 구현예 191 또는 192에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 감마레트로바이러스 벡터인, 키트.
194. 구현예 180 내지 193 중의 어느 하나에 있어서,
상기 처리는 상기 도입 후 상기 T 세포를 배양하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 배양은 세포의 증식 또는 증폭을 일으키는 조건하에 수행되어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 산출 조성물을 생성하는, 키트.
195. 구현예 194에 있어서,
상기 배양 후에, 상기 처리는 냉동보존(cryopreservation)을 위해 및/또는 상기 대상체에 대한 상기 T 세포 요법제의 투여를 위해 상기 산출 조성물의 세포를 제형화(formulating)하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 제형화는 약학적으로 허용가능한 부형제의 존재하에서 이루어지는, 키트.
196. 구현예 106 내지 195 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은 상기 대상체가 인간인 것을 특정하는, 키트.
197. 구현예 106 내지 196 중의 어느 하나에 있어서,
상기 지침은,
상기 세포 용량을 포함하는 상기 T 세포 요법제의 투여시 또는 투여 전에,
상기 대상체는 이중/삼중 유전자 이상 림프종을 갖는 것이거나 또는 확인되었고;
상기 대상체는 화학요법-불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법-불응성 DLBCL이거나 또는 확인되었고/되었거나;
상기 대상체는 사전 요법에 대한 반응에서 완전 반응(CR)을 성취하지 않는 것을 특정하는, 키트.
198. 구조식
Figure pct00032
이거나 또는 그를 포함하거나, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염인 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 구현예 1 내지 105 중의 어느 하나의 방법을 수행하기 위한 지침을 포함하는 키트.
199. 구현예 106 내지 198 중의 어느 하나의 키트를 포함하는 제조 물품.
VIII. 실시예
하기 실시예는 단지 설명 목적으로 포함된 것이며 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다.
실시예 1: 이브루티닙의 존재하에서 CAR-발현 T 세포 표현형 및 기능의 평가
BTK 억제제, 이브루티닙(구조식
Figure pct00033
을 가짐)의 특성을 시험관내 연구에서 평가하였다.
CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해서, T 세포를 3명의 건강한 인간 공여자 대상체로부터 면역친화성 기반 농축에 의해서 분리하였고, 각각의 공여자로부터의 세포를 활성화하고 항-CD19 CAR을 인코딩하는 바이러스 벡터로 형질도입하였다. 상기 CAR은 항-CD19 scFv, Ig-유도된 스페이서, 인간 CD28-유도된 막관통 도메인, 인간 4-1BB-유도된 세포내 신호 전달 도메인 및 인간 CD3 제타-유도된 신호 전달 도메인을 함유하였다. 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 구조체는 또한 자가 절단 T2A 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리된 형질도입 마커로 사용하기 위한 절단된 EGFR(tEGFR) 서열을 포함하였다.
CAR-발현 CD4+ 및 CD8+ 세포를 각각의 공여자에 대해 개별적으로 1:1로 혼합하고 각각의 공여자에 대해 풀링된 세포를 다양한 조건하의 시험관내에서 평가하였다.
A. 세포 용해 활성
상기 기재된 바와 같이 생성된 CAR T 세포를 폴리-D-리신 플레이트 상에 3중으로 플레이팅하고, 이어서 2.5:1의 효과기 대 표적(E:T) 비에서 이브루티닙-내성 CD19-발현 표적 세포(CD19, K562-CD19를 발현하도록 형질도입된 K562 세포)와 공동 배양하였다. 표적 세포를 nucklight Red(NLR)로 표지하여 현미경에 의한 표적 세포의 추적을 가능하게 하였다. 이브루티닙을 5000, 500, 50, 5 및 0.5 nM의 농도(생리학적 (500 nM) 및 Cmax (227 nM)로 되도록 관찰된 용량을 커버하는 투여량 범위를 반영함)로 배양물에 첨가하였다. 이브루티닙의 부재하에 표적 세포의 존재하에 인큐베이션된 CAR-T 세포를 미처리된 세포 대조군으로 사용하였다. 세포 용해 활성은, 적색 형광 신호(「IncuCyte® Live Cell Analysis System, Essen Bioscience」를 사용함)에 의해 결정된 바와 같이, 4일의 기간 동안 살아있는 표적 세포의 손실을 측정함으로써 평가하였다. 목표 사멸의 퍼센트(%)는 시간에 따른 정규화된 표적 세포 카운트에 대한 곡선(AUC)하의 면적을 측정하고, 0%의 값(표적 세포 단독) 및 100%의 값(비히클 대조군 중의 표적 세포와 공동 배양된 CAR+ T 세포)을 정의함으로써 역 AUC(L/AUC) 값을 정규화함으로써 평가되었다.
현미경(microscopy)으로 나타낸 바와 같이, 표적 세포 성장의 초기 기간 후에, 모든 공여자로부터의 항-CD19 CAR T 세포를 관찰하여 4일의 기간 동안 표적 세포 수를 감소시키고, 따라서 분석에서 효과적인 사멸을 입증하였다(도 1a). 세포독성 분석의 시작 및 종료시 CAR T 세포와 공동 배양된 표적 세포의 대표적인 이미지가 도 1b에 도시되어 있다. 도 1c에 도시된 바와 같이, 곡선 아래의 면적(AUC) 계산을 사용하여 처리되지 않은 대조군으로 이브루티닙으로 처리된 CAR-T 세포에 의한 표적 세포 사멸의 정규화(normalization)는, 농도가 생리학적 수준(500 nM)으로 증가된 경우에도, 2개의 공여자에 대한 상기 분석에서 항-CD19 CAR-발현 T 세포의 세포 용해 활성에 유의적으로 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 공동-배양동안 시험된 모든 농도에서 이브루티닙의 첨가는 항-CD19 CAR T 세포의 세포 용해 기능을 억제하지 않았다. 그러나 이브루티닙(P<0.0001)(도 1c)로 처리된 하나의 공여자에 대해 강하게 증가된 표적 세포 사멸이 관찰되었다.
B. CAR-T 세포 표면 마커의 발현
이브루티닙의 존재하에 배양된 항-CD19 CAR T 세포의 다양한 표현형 마커를 평가하기 위해, CAR+, CD4+ 및 CD8+ 세포(3명의 공여자로부터) 상의 활성화 마커의 패널을 CD19 를 발현하는 조사된 K562 표적 세포에 의한 자극 후 4일동안 추적하였다. 상기한 바와 같이 생성된 CAR-T 세포를 96웰 폴리-D-리신 코팅된 플레이트 상에 100,000개의 세포/웰로 플레이팅하였다. 조사된 K562-CD19 표적 세포를 2.5:1의 효과기 대 표적의 비에서 첨가하였다. 세포들은 배양물의 지속기간 동안 5000, 500, 50, 5 및 0.5 nM의 농도에서 이브루티닙의 부재하에 4일 이하동안 배양되었다. 세포를 1, 2, 3 및 4일에 수확하고, T 세포 활성화 및 분화 표면 마커 CD69, CDl07a, PD-L, CD25, CD38, CD39, CD95, CD62L, CCR7, CD45RO 및 절단된 EGFR(CAR-형질도입된 세포에 대한 대리 마커)에 대해 유세포측정법에 의해 분석하였다.
5000, 500, 50, 5 및 0.5 nM의 농도에서 3개의 상이한 항-CDl9 CAR T 세포 공여자를 가로질러, 활성화 마커 CD25, CD38, CD39, CD95 및 CD62L 중의 임의의 것, 또는 본 연구에서 평가된 T 세포 표현형 마커 중의 임의의 것(CCR7, CD62L 및 CD45RO)에서, 절단된 EGFR 대리 마커의 발현에 상당한 영향을 미치지 않았으며, 따라서 이브루티닙이 이 분석에서 T 세포의 활성화 상태 및/또는 분화/서브타입에 크게 영향을 미치지 않는다는 결론에 부합한다. 도 2a는 예시적인 마커에 대한 결과를 도시한다. 도 2b의 결과는 이브루티닙을 사용한 처리가 CCR7 및 CD45RA의 발현에 의해 평가되는 바와 같이 중앙 메모리(TCM) 또는 효과기 메모리(TEM) 서브세트로서 세포의 표현형에 영향을 미치지 않음을 보여준다. 도 2c 및 도 2d에 도시된 바와 같이, CD69, CDl07a 또는 PD-L의 발현 수준이 각각 CD4+ 또는 CD8+ 세포가 이브루티닙의 존재하에 배양하였을 때 미묘한 감소가 있었다. 이러한 마커를 발현하는 항-CD19 CAR T 세포의 백분율의 미묘한 감소는 시험된 억제제의 최고 (생리학적) 농도에서 관찰되었다.
C. 사이토카인 생성
이브루티닙의 존재 또는 부재하에 배양된 항-CD19 CAR T 세포에 의한 사이토카인의 생성은 CAR-T 세포의 공동 배양물의 상층액에서 사이토카인 수준을 평가하고 K562-CD19 표적 세포를 조사하여 평가하였다. 상기한 바와 같이 생성된 CAR-T 세포를, 조사된 표적 세포(K562-CD19)가 2.5:1의 효과기 대 표적 비로 첨가된 96 웰 폴리-D-리신 코팅된 플레이트 상에서 100,000개의 세포/웰에서 플레이팅하였다. 세포를 이브루티닙 부재 또는 0.5, 5, 50 또는 500 nM의 이브루티닙의 존재하에 4일까지 배양하였다. 배양 상청액을 1, 2, 3 및 4 째에 24시간 마다 수확하고, IFNγ, IL-2, TNFa, IL-4 및 IL-10을 메조 스케일 발견(Meso Scale Discovery; MSD)으로부터의 사이토카인 키트를 사용하여 배양 상층액으로부터 측정하였다.
도 3a는 공여자로부터 생성된 CAR-T 세포로부터 4일동안의 사이토카인 생성의 동력학의 대표적인 플롯을 도시한다. 도 3b는 독립적인 실험에서 2일동안 자극 후 사이토카인 생성의 절대 변화율을 도시한다. 도 3a 및 도 3b에 도시된 바와 같이, 이브루티닙의 생리학적 농도는 사이토카인 농도를 현저하게 감소시키지 않았다. 50 nM 이브루티닙에 반응하여, IFN-γ 및 IL-2의 일부 증가가 관찰되었다. 50 nM에서의 이브루티닙은 일부 공여자에서 사이토카인 생성을 증가시키고, 19.6% 또는 l200pg/mL의 IL-2의 평균 감소는 500 nM 이브루티닙(P<0.05)(도 3b)으로 관찰되었다.
D. 연속 재자극
일부 측면에서, 반복된 자극 이후 생체외(ex vivo) 증폭시키는 세포의 능력은(예를 들어,초기 활성화 후) 지속하는 CAR-T 세포의 능력을 나타낼 수 있고/있거나 생체내 기능 및/또는 피트니스(fitness)를 나타낼 수 있다[문헌 「Zhao et al. (2015) Cancer Cell, 28:415-28」 참조]. 전술한 바와 같이 생성된 항-CD19 CAR+ T 세포를 96 웰 폴리-D-리신 코팅된 플레이트 상에서 100,000개의 세포/웰에서 3중으로 플레이팅하고, 조사된 표적 세포(K562-CD19)를 2.5:1의 효과기 대 표적의 비로 첨가하였다. 세포를 500 및 50 nM 이브루티닙의 존재하에 자극하고, 3 내지 4일마다 수확하고, 계수하고, 세포수를 각 라운드에 대한 초기 시딩 밀도수로 리셋한 후 동일한 배양 조건 및 첨가된 이브루티닙 농도를 사용하여 새로운 표적 세포로 재자극하기 위해 배양하였다. 25일의 배양 기간 동안 총 7 라운드의 자극을 수행하였다.
자극의 각 라운드에 대해, 세포수(도 4a)에서의 배수 변화(fold change) 및 배가수(the number of doublings)(도 4b)가 결정되었다. 도 4a 및 도 4b에 도시된 바와 같이, 이브루티닙의 존재는 세포수 또는 집단 배가수의 배수 변화에서 관찰되는 바와 같이 항-CD19 CAR T 세포의 초기 성장을 방해하지 않았다(예를 들어 억제하지 않았다). 그러나, 도 4b에 도시된 바와 같이, 여러 라운드의 재형성 후, 18일째 자극까지 평가한 두 농도에서 이브루티닙은 평가된 3개의 공여자 중의 2 개로부터 유도된 T 세포에 의해 생성된 항-CD19 CAR T 세포의 세포수 및 집단 배수를 증가시키는 것으로 관찰되었다. 일반적으로, 다른 공여자로부터 유도된 것과 비교하여, 이들 2개의 공여자로부터 유도된 세포는 이브루티닙의 부재하에 연속 재자극 분석에서 보다 덜하게 수행된다. 도 4c는 이브루티닙의 존재하에 상기 3개의 공여자에 대한 자극 후 4일(1 라운드 또는 재자극) 및 18일(재자극의 5 라운드)에서 배양중인 세포의 수의 결과를 요약한다. 도시된 바와 같이, 상기 연속 자극 분석의 18일 후의 세포수의 통계학적으로 유의한 증가가 관찰되었다. 특히, 5 라운드의 자극 후(18일째), 가장 높은 농도에서 이브루티닙으로 처리된 공여자 2로부터의 CAR T 세포는 대조용 세포에 비해서 상당히 증가된 세포수를 가졌다(P<0.05). 중요하지 않은 증가된 세포수를 또한 시험된 가장 높은 농도에서 이브루티닙 처리로 공여자 3에 대해 관찰하였다. 이와 관련하여, 증가된 세포수는 우수한 증식능 또는 생존율을 나타낼 수 있고 구별되지 않았다. 대조용 조건에 대한 세포수를 평가할 때, 공여자 2 및 3으로부터 유도된 세포는 이 분석에서 공여자 1 세포에 비해 열악한 성능을 나타내었다. 또한, 이러한 차이가 관찰되었던 2개의 공여자로부터 유도된 세포는 일반적으로 다른 공여자로부터 유도된 것과 비교하여, 이브루티닙의 부재하에 연속 재자극 분석에서 보다 덜하게 수행되었다. 특히, 보다 열등한 성능을 갖는 이들 공여자는 이 분석에서 이브루티닙에 의한 처리로부터 이익을 얻는다. 그 결과는 생존 및/또는 증식능을 나타내는 하나 이상의 인자로 손상된 T 세포가 키나제 억제제, 예를 들어 TEC 패밀리 키나제 억제제 또는 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙과의 조합으로부터 유리할 수 있음을 나타낸다. 상기 결과는, 생존 및/또는 증식 능력을 나타내거나 중요한 하나 이상의 인자가 손상된 T 세포에 대해 키나제 억제제, TEC 패밀리 키나제 억제제 또는 BTK/ITK 억제제, 예를 들어 이브루티닙과의 조합으로부터 유리할 수 있다는 것을 나타낸다. 예를 들어 상기 T 세포와 키나제 억제제 예를 들어 이브루티닙과의 조합은 항원 만남 후 T 세포 기능 및/또는 지속성을 개선시킬 수 있다.
E. TH1 표현형
이브루티닙의 존재하에 배양하였을 때, 항-CD19 CAR T 세포의 TH1 표현형을 향한 스큐잉(skewing)을 입증하는 분석을 수행하였다. 이브루티닙은 ITK의 억제를 통한 TH2 CD4 T 세포 활성화 및 증식을 제한하는 것으로 관찰되었다[문헌 「Honda, F., et al. (2012) Nat Immunol, 13(4): 369-78」 참조]. 전술한 바와 같이 연속 재자극 분석을 수행하였고, 세포를 다양한 시간에 수확하고 유세포 분석법으로 분석하여 TH1-표현형(CD4+CXCR3+CRTH2-) T 세포 또는 TH2-표현형(CD4+CXCR3-CRTH2+로서 평가됨)의 백분율을 평가하였다. 각각 지시된 농도의 이브루티닙을 사용하여 배양된 세포에 대한 대표적인 플롯을 각각 도 5a에 나타내고, 연속 재자극의 과정동안, 그리고 다양한 농도의 이브루티닙하에서 배양 후 TH1 세포의 백분율이 각각 도 5b 및 도 5c에 도시되어 있다.
상기 분석에서 이브루티닙의 존재는, 연속 자극 후, TH1 표현형을 나타내는 것으로 관찰된 CAR+ T 세포의 백분율을 증가시키는 것으로 관찰되었고, 그 효과는 이브루티닙의 농도가 증가함에 따라 더 큰 것으로 관찰되었다. 18일 연속 자극 기간 동안, CAR T TH1 세포의 백분율은 3개의 상이한 공여자 각각으로부터 유도된 세포로부터 증가하였다(도 5b). 500 nM 이브루티닙은 TH1 세포(P<0.01)의 백분율을 추가로 향상시켰다(도 5c).
추가의 CAR T 활성화 또는 메모리 마커에 대한 이브루티닙의 현저한 효과는 연속 자극 분석으로부터 분리된 CAR T 세포에서 관찰되지 않았다(도 5d 및 5e).
F. 유전자 발현 분석
다양한 유전자의 발현은 전술한 바와 같이 18일동안 연속 자극동안 이브루티닙(50 nM 또는 500 nM)의 존재 또는 부재하에 배양된 항-CDl9 CAR T 세포에서 평가되었다. 연속 자극 후 18일째에, RNA를 항-CD19 CAR T 세포로부터 단리하고, 나노스트링 면역 V2 패널 시험(Nanostring Immune V2 panel test)을 594개 유전자에 대해 수행하였다. 각 유전자의 log2(배수 변화)는 처리 대 대조군에 대한 데이터를 계수하기 위해 정규화된 밀봉되지 않은 하우스키핑 유전자(unscaled housekeeping gene)의 ANOVA 시험으로부터 유도된 -logl0(원(raw) p-값)에 대해 플롯팅되었다. 결과는 연속 재자극동안 이브루티닙으로 처리하는 것이 유전자 발현을 유의적으로 변화시키지 않는다는 것을 나타낸다.
실시예 2: 브루톤 티로신 키나제 억제제의 존재하에 CAR-발현 T 세포의 항-종양 활성의 향상
BTK 억제에 대해 내성이 있는 것으로 확인된 CD19+ Nalm-6 유포된 종양 라인의 세포로 NOD/Scid/gc-/-(NSG) 마우스를 주사함으로써 유포된 종양 이종이식 마우스 모델을 생성하였다.
0일째에, NSG 마우스에 반딧불이 루시퍼라제(firefly luciferase)를 발현하는 5×105 개의 Nalm-6 세포를 정맥내 주사하였다. 4일째부터 시작하여 연구기간 동안 매일, 마우스를 비히클 대조군으로 처리하거나, 25 mg/kg qd에서 매일 경구 위관영양법(PO)에 의해 각 경우에 이브루티닙으로 처리하였다. 2개의 상이한 공여자로부터의 항-CD19 CAR T 세포(실질적으로 상기 기재된 바와 같은 인간 공여자 대상체의 샘플로부터 유도된 형질도입 세포에 의해 생성됨)로부터의 항-CD19 CAR T 세포의 차선의 투여량을 마우스당 5×l05 개의 CAR+ T 세포의 농도로 각 마우스에 주사하였다. 대조군의 마우스는 비히클 대조군 또는 이브루티닙을 투여하였으나 CAR-T 세포를 투여하지 않았다. 그룹당 8개(N = 8)의 마우스를 모니터링하였다.
전술한 바와 같이 처리한 후, 시간에 따른 종양 성장을 생물발광 이미징에 의해 측정하고, 평균 방사(p/s/㎠/sr)를 측정하였다. 또한 처리된 마우스의 생존율을 시간에 따라 평가하였다
결과는 이브루티닙 및 CAR T 세포로 처리된 마우스로부터의 시간에 따른 종양 성장에 대해 도 6a에 도시되어 있다. 2개의 상이한 공여자로부터의 후-종양 주사에서 더 큰 시점에서 종양 성장을 모니터링하는 동일한 연구로부터의 결과의 분석이 도 6b에 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 이브루티닙 처리는 단독으로 비히클 처리와 비교하여 이 이브루티닙-내성 모델에서 종양 부담에 영향을 미치지 않았다. 대조적으로, CAR-T 세포 및 이브루티닙을 투여한 마우스는 CAR-T 세포 및 비히클 대조군(p<0.00l,***; p<0.000l* * *)으로 처리된 마우스와 비교하여 상당히 감소된 종양 성장을 나타내었다.
카플란 마이어 곡선(Kaplan Meier curve)에 의해 나타낸 바와 같이, CAR T 및 이브루티닙의 배합은 종양-보유 마우스의 생존율을 증가시켰으며, 이는 이브루티닙 및 CAR T 세포로 처리되었다. 도 6c에 나타낸 바와 같이, 대표적인 결과는 CAR-T 세포 및 이브루티닙으로 처리된 마우스가 차선의 항-CD19 CAR T 세포 용량 + 비히클을 수용하는 그룹과 비교하여 증가된 중간 생존율을 나타내었다는 것을 보여준다. 다른 공여자 대상체의 혈액으로부터 분리된 T 세포를 형질변환시킴으로써 생성된 항-CD19 CAR T 세포를 사용하여 복제 연구에서 유사한 효과가 관찰되었다. 2개의 상이한 공여자로부터의 후-종양 주사후 더 큰 시점에서 동일한 연구 모니터링 생존으로부터의 결과의 분석은 도 6d에 도시되어 있으며, 이것은 CAR T 및 이브루티닙과 조합 투여가 CAR T 및 비히클 조건과 비교하여 현저히 증가된 생존율을 결과하는 것으로 관찰되었음을 보여준다(p<0.001,***).
실시예 3: TEC 패밀리 키나제의 억제제의 존재하에 생체내에서 CAR-발현 T 세포 표현형, 기능 및 항-종양 활성의 평가
실시예 2에 기재된 NSG 마우스를 반딧불이 루시페라제를 발현하는 5×105 개의 lm-6 세포로 0일째에 정맥내 주사하였다. 4일째에 시작하여 연구기간 동안 매일 생쥐를 비히클 대조군으로 처리하고, 25 mg/kg/day의 식수(D.W.)에서 이브루티닙으로 매일 처리하였다. 브리징 실험(bridging experiment)은 음용수에 의한 이브루티닙의 투여가 경구 위장 투여와 동등하다는 것을 확인하였다(데이터는 나타내지 않음). 억제제와의 조합 요법의 효과를 평가하기 위해, 항-CDl9 CAR T 세포의 차선의 투여량을 5×l05 개/마우스의 마우스에 5일째에 정맥내 주사하였다. 대조군으로, 마우스를 CAR-T 세포 또는 억제제의 투여 없이 비히클 대조군으로 투여하였다.
상기 기재된 바와 같이 처리한 후, 처리된 마우스의 종양 성장 및 % 생존율을 측정하였다. 도 7a에 도시된 바와 같이, 항-CD19 CAR-T 세포 및 이브루티닙으로 처리된 마우스는 차선의 항-CDl9 CAR T 세포 용량+비히클(p<0.00l)을 수용하는 그룹과 비교하여 증가된 중간 생존율을 나타내었다. 또한, CAR T와 함께 투여된 이브루티닙은 비히클 단독으로 투여된 CAR T와 비교하여 종양 성장을 상당히 감소시켰다(p<0.001)(도 7b). 결과는 2개의 상이한 공여자로부터 유도된 T 세포를 조작함으로써 생성된 항-CD19 CAR-T 세포를 사용한 것과 유사하였다.
CAR+ T 세포의 약동학적 분석은 하나의 공여자-유래 세포로부터 항-CD19 CAR+ T 세포를 수용한 마우스로부터 혈액, 골수 및 비장에서 분석되었고, 비히클 또는 이브루티닙(그룹당 3마리의 마우스)로 처리되었다. 샘플을 분석하여 CAR T 세포의 존재 및 수준을 평가(항-EGFR 항체를 사용한 대리 마커의 발현에 기초하여)하고/하거나 7, 12, 19 및 26일에 CAR+ T 세포 전달에서 종양 세포를 평가하였다. 도 7c에 도시된 바와 같이, CAR+ T 세포 및 비히클로 처리된 마우스와 비교하여, 순환하는 CAR+ T 세포의 유의한 증가가, CAR+ T 세포 및 비히클로 처리된 마우스에서 관찰되었으며, 이것은 이브루티닙의 존재하에 혈액 중의 CAR-T 세포의 보다 큰 증폭과 일치한다. CAR-T 세포 전달 후, 19일째에, 혈액내 세포의 수의 현저한 증가가 이브루티닙으로 처리한 후에 관찰되었다(도 7d: *p<0.05). 도 7e에 도시된 바와 같이, 비히클 단독과 비교하여, CAR+ 세포 처리가 이브루티닙을 사용한 처리와 조합된 마우스의 혈액, 골수 또는 비장에서 상당히 더 적은 종양 세포가 검출되었다.
생체외 면역표현형은 또한 CAR+ T 세포를 받고 비히클 또는 이브루티닙으로 처리된 마우스로부터 CAR T 투여 후 12일째에 채취한 혈액, 골수 및 비장 세포에 대해 수행되었다(n=그룹당 3마리의 마우스). 세포를 유세포 분석법에 의해 표면 마커 CD44, CD45RA, CD62L, CD154, CXCR3, CXCR4, 및 PD-l에 대해 평가하였고, 플로우조 소프트웨어(FlowJo software)를 사용하여 T-분산 스토캐스틱 이웃 임베딩(T-distributed stochastic neighbor embedding; t-SNE) 고차원 분석을 수행하였다. 도 8a에 도시된 바와 같이, 표현형 변화는, 벡터 단독(대조군)과 비교하여,이브루티닙과 조합된 CAR-T 세포를 갖는 동물의 골수로부터 분리된 CAR+ T 세포에서 관찰되었다. 그룹당 3마리의 마우스로부터의 풀링된 분석에 기초하여 다변량 t-SNE 유세포 분석법을 사용하여, 4개의 별개의 집단 클러스터를 확인하였다(도 8b). 전체 집단의 발현과 중첩된(음영 표시됨) 4 게이트된 t-SNE로부터의 CD4, CD8, CD62L, CD45RA, CD44 및 CXCR3의 개별 발현 프로파일을 나타내는 유세포 분석법 히스토그램이 도 8c에 표시된다.
대조군 마우스에서 각 t-SNE 집단의 백분율 및 배수 변화 또는 이브루티닙으로 처리된 마우스가 도 8d에 도시되어 있다. 통계적으로 유의한 차이는 P<0.95(*), P<0.0l(**), P< 0.00l(***), P<0.000l(****)로 표시된다.
CAR T 전달 후 12일째에, 대조군과 비교하였을 때, 이브루티닙을 투여한 CAR T-처리된 마우스의 골수에서 CD8+ CD44hi CXCR3hi CD45RA10 CD62Lhi(집단 2) 및 CD4+ CD44hl CXCR3mt CD45RAhl CD62Lhl(집단 4)의 증가가 관찰되었다(도 8a 내지 8c). 집단 4의 더 큰 향상은 이브루티닙-처리된 동물(CAR-T 세포의 4.4%에 비해 15.2%)에서 관찰되었다(도 8c).
실시예 4: 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL) 환자로부터 제조된 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제는 세포용해 기능을 향상시킨다.
항-CD19 CAR-T 세포는 T 세포가 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL)을 갖는 2개의 상이한 인간 대상체로부터 분리된 것을 제외하고는 실질적으로 실시예 1에 기재된 것과 동일하게 생성되었다. 세포를, 실시예 l.D에 기재된 바와 같이 500 및 50 nM의 이브루티닙의 존재하에서 K562-CD19를 갖는 CAR-T 세포를 2.5:1의 효과기 대 표적의 비로 공동 배양하고, 매 3 내지 4일마다 수확하고 세포수를 리셋팅한 후 동일한 조건하에 재자극함으로써 연속 재자극에 적용시켰다. 21일의 배양 기간에 걸쳐서 연속 재자극하고 세포 증폭 및 세포독성 활성에 대해 모니터링하였다. 도 9a에 도시된 바와 같이, 세포 배가수에 의해 결정되는 바와 같은 세포 증폭은 각각의 개체로부터 유도된 세포에 대한 21일의 배양 기간 동안 관찰되었다. 이브루티닙은 환자(도 9a)로부터 유도된 CAR T 세포의 증식을 나타내지 않았으며, 관찰은 건강한 공여자 유도 CAR T 세포로부터의 이전 데이터와 일치한다. 도 9b에 도시된 바와 같이, 각각의 개체로부터 유도된 세포로부터 제조된 CAR-T 세포는 연속 자극 16일 후에 500 nM 이브루티닙의 존재하에 세포 용해 기능의 증가를 입증하였다(도 9b). 1명의 환자로부터 유도된 세포에서, 16일 경과 후 세포 용해 활성의 증가는 50 nM 이브루티닙을 사용하여 관찰되었다(P<0.01)(도 9b). 세포 용해 활성의 이러한 증가는 건강한 공여자 세포로부터의 결과와 일치한다(도 1c 내지 도 1d).
실시예 5: 이브루티닙으로 처리된 CAR-발현 T 세포의 RNA-Seq에 의한 분자 신호의 평가
이브루티닙(50 nM, 500 nM) 또는 대조군(0 nM)의 존재하에 연속 자극 분석에서 18일 동안 처리된, 3개의 상이한 공여자로부터 유도된 개별 CAR-발현 세포로부터 RNA를 단리하였다. RNA 단리는 마이크로 키트(RNEasy Micro Kit)(Qiagen)를 사용하여 수행되었다. 샘플을 서열화하고, RNASeq 판독을 인간 게놈(GRCh38)에 맵핑하고 GENCODE 방출 24 유전자 모델에 정렬하였다. RNAseq 품질 메트릭스를 생성하여 샘플에 대한 일관성을 확인하기 위해 평가하였다. 차등적으로 발현된 유전자는 0.5의 log2 배수 변화 컷오프 및 0.05의 벤자미니-호흐버그(Benjamini-Hochberg) 조정된 거짓 발견 레이트(FDR) 컷오프를 부과함으로써 확인되었다.
도 10a에서 볼케이노 플롯(volcano plot)으로 나타낸 바와 같이, 500 nM 이브루티닙은 23개의 단백질-코딩 유전자를 상당히 감소시켰다(FDR<0.05, absLog2FC>0.5). 도 10b는 도 10b에서의 23개의 단백질-코딩 유전자의 발현을 변화시켰음을 보여준다. 중요하지는 않지만 50nM에서도 유사한 경향이 나타났다(도 10c 및 10d). 상이한 농도의 억제제(50 nM 또는 500 nM) 또는 대조군을 처리한 후 예시적인 유전자에 대한 유전자 발현의 박스 플롯이 도 11a 내지 11b에 도시되어 있다. 차등적으로 발현된 유전자 중에서 그란자임 A(도 11a) 및 CD38(도 11c)과 같은 유전자에서의 감소 및 SELL/CD62L(도 11a)에서의 증가는 메모리 개발과 관련된 유전자를 향상시키면서 말단-효과기-유사 유전자를 감쇠시키기 위한 이브루티닙의 효과와 일치한다. 또한, RNA-Seq는, TH1 분화를 촉진하는 것과 관련된 유전자가 TH2 프로그래밍을 억제하는 것으로 알려진 MSC의 상향조절[문헌 「Wu, C., et al. (2017) Nat Immunol, 18(3): 344-353」 참조]; 및 TH1 발달을 억제하는 것으로 확인된 ATRA/레티오닉산(Retinoic acid)과 관련된 HES6, HIC1, LZTFL1, NRIP1, CD38 및 RARRES3의 하향조절[문헌 「Britschgi, C., et al. (2008) Br J Haematol, 141(2): 179-87; Jiang, H., et al. (2016) J Immunol, 196(3): 1081-90; Heim, K.C., et al. (2007) Mol Cancer, 6: 57; Nijhof, I.S., et al. (2015) Leukemia, 29(10): 2039-49; Zirn, B., et al. (2005) Oncogene, 24(33): 5246-51」 참조]을 포함하여, 이브루티닙에 의해서 변경된는 것으로 나타났다(도 11e, 11b 및 11d). RNA-Seq 결과를 뒷받침하기 위하여, 공여자 2 및 3에서 연속 자극의 18일 후에 유세포 분석법에 의해서 CD62L 발현의 상당한 증가가 관찰되었다(도 12a 및 12 b). 이러한 결과는 장기간의 이브루티닙 처리가 TH1 및 메모리-유사 표현형을 증가시킬 수 있다는 것을 뒷받침한다.
실시예 6: 재발성 및 불응성 비-호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체에게 화합물 1과 조합된 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
실시예 1에 기재된 것과 실질적으로 동일하게 항-CD19 CAR-발현 T 세포를 제조하고 생성된 CD4+ CAR-발현 T 세포 조성물 및 CD8+ CAR-발현 T 세포 조성물을 이브루티닙(구조식
Figure pct00034
을 가짐)를 사용한 투여와 조합으로 재발된/불응성(R/R) B 세포 비-호지킨 림프종(NHL)을 갖는 대상체에게 개별적으로 투여한다. 치료를 위해 선택된 대상체의 그룹은 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL); 인돌런트 림프종으로부터 신생 또는 변형된 것(de novo or transformed from indolent lymphoma; NOS); DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종; 고-등급 B-세포 림프종, MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열과 함께 DLBCL 조직학(이중/삼중 히트 림프종); 여포성 림프종 등급 3b(FLG3B); T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종; EBV 양성 DLBCL, NOS; 및 원발성 종격동성 (흉선) 거대 B-세포 림프종(PMBCL)을 포함한다. 치료되는 대상체는 또한 CD20-표적화제 및 안트라사이클린을 포함하여, 적어도 2개의 선행 치료 라인에 대해 그후 재발하였꺼나 불응성인 것들을 포함하며, 스크리닝시 1 이하의 이스턴 쿠퍼레이티브 온콜로지 그룹(ECOG) 스코어를 갖는다.
인간 대상체의 순환 혈액으로부터 세포를 포함하는 샘플을 혈액성분채집술 또는 백혈구성분채집술에 의해서 수득하고, T 세포를 면역친화성-기반 풍부화에 의해 단리한다. 세포는 CAR+ T 세포 주입 전에 28일(± 7일)에 얻어진다. 단리된 세포를 활성화시키고 항-CD19 CAR을 인코딩하는 바이러스 벡터로 형질도입한다
CAR+ T 세포 주입 전에, 대상체는 3일동안 플루다라빈(flu, 30 mg/㎡/day) 및 시클로포스파미드(Cy, 300 mg/㎡/day)로 림프구고갈 화학요법을 받는다.
이브루티닙은 성분채집술 또는 백혈구성분채집술(35일(±7일) 전 7일에 시작하여 림프구고갈 화학요법의 개시시까지, 매일 140 mg, 280 mg, 420 mg 또는 560 mg의 용량/day로 대상체에게 경구 투여된다. 대상체가 림프구고갈 화학요법을 받는 시간 동안, 이브루티닙은 투여되지 않는다. 이브루티닙의 투여는 림프구고갈 화학요법의 완료 후에 재개된다.
대상체는 림프구고갈 후 2-7일에 CAR-발현 T 세포를 수용한다. 대상체는 1×108 개의 CAR-발현 T 세포의 단일 용량량(각각 1:1 비율의 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 별도의 주입을 통한 단일 용량)을 투여한다. 림프구고갈 화학요법 및 조작된 CAR-발현 세포의 주입 완료 후, 이브루티닙의 투여가 계속된다.
처리에 대한 반응은 처리 전의 기준선 및 처리 후 다양한 시간에서 양전자 방출 단층촬영(positron emission tomography; PET) 및/또는 전산화 단층 촬영(computed tomography; CT) 또는 자기공명영상(MRI) 스캔에 기초하여 평가된다[문헌 「Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067」 참조]. 또한 치료 후 치료 유발 반대 이벤트(treatment-emergent adverse event; TEAE)의 존재 또는 부재가 평가된다. 대상체는 또한 신경독성(혼란(confusion), 실어증, 뇌병증, 근간대성 발작(myoclonus seizures), 경련, 무기력 및/또는 정신 상태 변화를 포함한 신경학적 합병증)에 대해 평가되고 모니터링되며, 「the National Cancer Institute―Common Toxicity Criteria (CTCAE) scale, version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)」에 따라 1 내지 5 등급으로 등급화된다[문헌 「Common Terminology for Adverse Events (CTCAE) Version 4, U.S. Department of Health and Human Services, Published: May 28, 2009 (v4.03: June 14, 2010); and Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)」 참조]. 또한 사이토카인 방출 증후군(CRS)은 중증도에 기초하여 결정 및 모니터링된다[문헌 「Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95」 참조]. 대상체는 또한 이브루티닙을 사용한 항-CDl9 CAR+ T 세포 사전 및 사후 치료의 약동학(PK) 및 이브루티닙의 PK 및 약력학(PD) 파라미터에 대해 평가된다.
이브루티닙의 투여는, 상기 대상체가 이브루티닙의 추가 투여가 질병 빈행시까지 계속할 수 있는 부분 반응(PR)을 성취할 때까지 180일 후(CAR+ T-세포 주입 후 6개월 후)에 중단된다.
본 발명은 예를 들어 본 발명의 다양한 구현예를 예시할 목적으로 제공되는 특정 개시된 실시예로 그 범위가 제한되도록 의도되어서는 안된다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본원의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 사상을 벗어남이 없이 실시될 수 있으며 본 개시의 범위 내에 속하도록 의도된다.
서 열
# 서열 주석
1 ESKYGPPCPPCP 스페이서 (IgG4힌지) (aa)
2 GAATCTAAGTACGGACCGCCCTGCCCCCCTTGCCCT 스페이서 (IgG4힌지) (nt)
3 ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH3 스페이서
4 ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 힌지-CH2-CH3 스페이서
5 RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEEKKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRDKATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGSQSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQAPVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQREVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCVVSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH IgD-힌지-Fc
6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A
7 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR
8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28 (수탁번호 P10747의 아미노산 153-179)
9 IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV CD28(수탁번호 P10747의 114-179)
10 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28(P10747의 180-220)
11 RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28(LL 내지 GG)
12 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 4-1BB (Q07011.1의 아미노산 217-255)
13 RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타
14 RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타
15 RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR CD3 제타
16 RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM tEGFR
17 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A
18 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
19 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A
20 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A
21 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A
22 -PGGG-(SGGGG)5-P- 여기서 P는 프롤린이고, G는 글리신이며 S는 세린이다. Linker
23 GSADDAKKDAAKKDGKS Linker
24 atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatccca GMCSFR 알파 쇄 신호 서열
25 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP GMCSFR 알파 쇄 신호 서열
26 MALPVTALLLPLALLLHA CD8 알파 신호 펩티드
27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
29 ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP 힌지
30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 힌지
31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 힌지
35 RASQDISKYLN CDR L1
36 SRLHSGV CDR L2
37 GNTLPYTFG CDR L3
38 DYGVS CDR H1
39 VIWGSETTYYNSALKS CDR H2
40 YAMDYWG CDR H3
41 EVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS VH
42 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEIT VL
43 DIQMTQTTSSLSASLGDRVTISCRASQDISKYLNWYQQKPDGTVKLLIYHTSRLHSGVPSRFSGSGSGTDYSLTISNLEQEDIATYFCQQGNTLPYTFGGGTKLEITGSTSGSGKPGSGEGSTKGEVKLQESGPGLVAPSQSLSVTCTVSGVSLPDYGVSWIRQPPRKGLEWLGVIWGSETTYYNSALKSRLTIIKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAIYYCAKHYYYGGSYAMDYWGQGTSVTVSS scFv
44 KASQNVGTNVA CDR L1
45 SATYRNS CDR L2
46 QQYNRYPYT CDR L3
47 SYWMN CDR H1
48 QIYPGDGDTNYNGKFKG CDR H2
49 KTISSVVDFYFDY CDR H3
50 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSS VH
51 DIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR VL
52 GGGGSGGGGSGGGGS 링커
53 EVKLQQSGAELVRPGSSVKISCKASGYAFSSYWMNWVKQRPGQGLEWIGQIYPGDGDTNYNGKFKGQATLTADKSSSTAYMQLSGLTSEDSAVYFCARKTISSVVDFYFDYWGQGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIELTQSPKFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAWYQQKPGQSPKPLIYSATYRNSGVPDRFTGSGSGTDFTLTITNVQSKDLADYFCQQYNRYPYTSGGGTKLEIKR scFv
54 HYYYGGSYAMDY HC-CDR3
55 HTSRLHS LC-CDR2
56 QQGNTLPYT LC-CDR3
57 gacatccagatgacccagaccacctccagcctgagcgccagcctgggcgaccgggtgaccatcagctgccgggccagccaggacatcagcaagtacctgaactggtatcagcagaagcccgacggcaccgtcaagctgctgatctaccacaccagccggctgcacagcggcgtgcccagccggtttagcggcagcggctccggcaccgactacagcctgaccatctccaacctggaacaggaagatatcgccacctacttttgccagcagggcaacacactgccctacacctttggcggcggaacaaagctggaaatcaccggcagcacctccggcagcggcaagcctggcagcggcgagggcagcaccaagggcgaggtgaagctgcaggaaagcggccctggcctggtggcccccagccagagcctgagcgtgacctgcaccgtgagcggcgtgagcctgcccgactacggcgtgagctggatccggcagccccccaggaagggcctggaatggctgggcgtgatctggggcagcgagaccacctactacaacagcgccctgaagagccggctgaccatcatcaaggacaacagcaagagccaggtgttcctgaagatgaacagcctgcagaccgacgacaccgccatctactactgcgccaagcactactactacggcggcagctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc scFv를 인코딩하는 서열
58 X1PPX2PX1 은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고
X2 는 시스테인 또는 트레오닌이다.		 힌지
59 GSTSGSGKPGSGEGSTKG 링커
SEQUENCE LISTING <110> JUNO THERAPEUTICS, INC. FRANKEL, Stanley R. HASSKARL, Jens <120> COMBINATION THERAPY OF A T CELL THERAPY AND A KINASE INHIBITOR <130> 735042017540 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/666,653 <151> 2018-05-03 <160> 59 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 65 70 75 80 Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 85 90 95 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 100 105 110 Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 115 <210> 4 <211> 229 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 4 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 115 120 125 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly Lys Val 100 105 110 Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser Asn Gly 115 120 125 Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu Trp Asn 130 135 140 Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu Pro Pro 145 150 155 160 Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro Val Lys 165 170 175 Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala Ala Ser 180 185 190 Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile Leu Leu 195 200 205 Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe Ala Pro 210 215 220 Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala Trp Ser 225 230 235 240 Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr Tyr Thr 245 250 255 Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala Ser Arg 260 265 270 Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His 275 280 <210> 6 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 6 Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg 20 <210> 7 <211> 357 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 7 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly 20 25 30 Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe 35 40 45 Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala 50 55 60 Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu 65 70 75 80 Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile 85 90 95 Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu 100 105 110 Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala 115 120 125 Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu 130 135 140 Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr 145 150 155 160 Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys 165 170 175 Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly 180 185 190 Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu 195 200 205 Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys 210 215 220 Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu 225 230 235 240 Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met 245 250 255 Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala 260 265 270 His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val 275 280 285 Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His 290 295 300 Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro 305 310 315 320 Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala 325 330 335 Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly 340 345 350 Ile Gly Leu Phe Met 355 <210> 8 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 8 Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu 1 5 10 15 Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val 20 25 <210> 9 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 9 Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn 1 5 10 15 Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu 20 25 30 Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly 35 40 45 Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe 50 55 60 Trp Val 65 <210> 10 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <300> <308> UniProt P10747 <309> 1989-07-01 <400> 10 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 11 <211> 41 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD28 <400> 11 Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr 1 5 10 15 Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro 20 25 30 Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser 35 40 <210> 12 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 4-1BB <300> <308> UniProt Q07011.1 <309> 1995-02-01 <400> 12 Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met 1 5 10 15 Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe 20 25 30 Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu 35 40 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 13 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 14 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 15 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CD3 zeta <400> 15 Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly 1 5 10 15 Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr 20 25 30 Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys 35 40 45 Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys 50 55 60 Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg 65 70 75 80 Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala 85 90 95 Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 100 105 110 <210> 16 <211> 335 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> tEGFR <400> 16 Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu 1 5 10 15 Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile 20 25 30 Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe 35 40 45 Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr 50 55 60 Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn 65 70 75 80 Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg 85 90 95 Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile 100 105 110 Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val 115 120 125 Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp 130 135 140 Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn 145 150 155 160 Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu 165 170 175 Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser 180 185 190 Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu 195 200 205 Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln 210 215 220 Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly 225 230 235 240 Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro 245 250 255 His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr 260 265 270 Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His 275 280 285 Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro 290 295 300 Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala 305 310 315 320 Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met 325 330 335 <210> 17 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> T2A <400> 17 Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro 1 5 10 15 Gly Pro <210> 18 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 18 Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2A <400> 19 Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn 1 5 10 15 Pro Gly Pro <210> 20 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> E2A <400> 20 Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser 1 5 10 15 Asn Pro Gly Pro 20 <210> 21 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> F2A <400> 21 Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <220> <221> REPEAT <222> (5)...(9) <223> SGGGG is repeated 5 times <400> 22 Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 23 Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys 1 5 10 15 Ser <210> 24 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GMCSFR alpha chain signal sequence <400> 24 atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60 atccca 66 <210> 25 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> GMCSFR alpha chain signal sequence <400> 25 Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro 1 5 10 15 Ala Phe Leu Leu Ile Pro 20 <210> 26 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CD8 alpha signal peptide <400> 26 Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 His Ala <210> 27 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 27 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 28 Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 29 Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro 1 5 10 15 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu 20 25 30 Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro 35 40 45 Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro 50 55 60 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 30 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 31 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 32 Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 <210> 33 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 33 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <400> 34 Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 35 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 35 Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 36 Ser Arg Leu His Ser Gly Val 1 5 <210> 37 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 37 Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly 1 5 <210> 38 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 38 Asp Tyr Gly Val Ser 1 5 <210> 39 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 39 Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 40 Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 1 5 <210> 41 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 41 Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 42 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 42 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr 100 105 <210> 43 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 43 Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly 100 105 110 Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys 115 120 125 Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser 130 135 140 Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser 145 150 155 160 Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile 165 170 175 Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn 195 200 205 Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr 210 215 220 Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser 225 230 235 240 Val Thr Val Ser Ser 245 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 <400> 44 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 51 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL <400> 51 Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser 65 70 75 80 Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr 85 90 95 Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 52 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe 210 215 220 Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Ile Lys Arg 245 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HC-CDR3 <400> 54 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC-CDR2 <400> 55 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC-CDR3 <400> 56 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 57 <211> 735 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sequence encoding scFv <400> 57 gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60 atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120 gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180 cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240 gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300 ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360 ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420 cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480 tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540 accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600 agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660 gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720 gtgaccgtga gcagc 735 <210> 58 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Hinge <220> <221> VARIANT <222> (1)...(1) <223> Xaa is glycine, cysteine or arginine <220> <221> VARIANT <222> (4)...(4) <223> Xaa is cysteine or threonine <400> 58 Xaa Pro Pro Xaa Pro 1 5 <210> 59 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 59 Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr 1 5 10 15 Lys Gly

Claims (113)

  1. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    (1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
    Figure pct00035
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제(kinase inhibitor)를 투여하는 단계; 및
    (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제(autologous T cell therapy)를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리(processing)함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩(encoding)하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
    을 포함하되,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법(dosing regimen)으로 수행되는, 방법.
  2. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    (1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
    Figure pct00036
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계;
    (2) 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 단계; 및
    (3) 상기 대상체에게 상기 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하는 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계
    를 포함하되,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 상기 화합물의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되는, 방법.
  3. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    암을 갖는 대상체에게 구조식
    Figure pct00037
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 것
    을 포함하되,
    상기 대상체는 치료 후보이거나 또는 자가 T 세포 요법제로 치료될 예정이며, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하고,
    상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리하며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 상기 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되는, 방법.
  4. 제 3 항에 있어서,
    상기 대상체에게 상기 T 세포 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  5. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제(lymphodepleting therapy)로 사전 컨디셔닝되는(preconditioned), 방법.
  6. 제 1 항, 제 2 항 및 제 4 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  7. 제 5 항 또는 제 6 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는 상기 림프구고갈 요법동안 중지되거나 또는 중단되는, 방법.
  8. 제 5 항 내지 제 7 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 섭생 요법은 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하는, 방법.
  9. 제 5 항 내지 제 7 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는, 방법.
  10. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    (1) 암을 갖는 대상체에게 구조식
    Figure pct00038
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 갖는 유효량의 키나제 억제제를 투여하는 단계;
    (2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및
    (3) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되,
    상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리하는 단계를 포함하고, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
    을 포함하되,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 3일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는, 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 것을 더 포함하는, 방법.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 4일, 적어도 (약) 5일, 적어도 (약) 6일, 적어도 (약) 7일, 적어도 (약) 14일 이상에서 개시되는, 방법.
  13. 제 1 항 내지 제 12 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되는, 방법.
  14. 제 5 항 내지 제 13 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는, 방법.
  15. 제 5 항 내지 제 14 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는, 방법.
  16. 제 9 항 내지 제 15 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 15일 내지 29일동안 연장하는 기간 동안인, 방법.
  17. 제 9 항 내지 제 16 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 기간 동안인, 방법.
  18. 제 1 항 내지 제 17 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 투여 섭생 요법 동안 투여되는 각각의 날짜에서 1일 1회 실시되는, 방법.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유효량은, 상기 키나제 억제제가 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 840 mg 또는 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg을 포함하는, 방법.
  20. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    (1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
    Figure pct00039
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함함; 및
    (2) 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
    을 포함하되,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득되하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간에 걸쳐서 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여 및 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 또는 3개월 초과동안 연장하는 추가 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되며, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  21. 제 20 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체는 림프구고갈 요법제로 사전 컨디셔닝되는, 방법.
  22. 제 20 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 더 포함하는, 방법.
  23. 제 20 항 내지 제 22 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 7일 이내에 완료되는, 방법.
  24. 제 20 항 내지 제 23 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법제의 투여는, 상기 T 세포 요법제의 투여의 개시 전에 2일 내지 7일에 완료되는, 방법.
  25. 제 22 항 내지 제 24 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 섭생 요법은, 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하는 것을 포함하는, 방법.
  26. 치료 방법으로서, 상기 방법은,
    (1) 암을 갖는 대상체에게 키나제 억제제를 투여하는 단계, 상기 키나제 억제제는 구조식
    Figure pct00040
    또는 그의 약학적으로 허용가능한 염을 가짐;
    (2) 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 단계; 및
    (3) 상기 림프구고갈 요법을 완료한 후 2일 내지 7일 이내에 상기 대상체에게 자가 T 세포 요법제를 투여하는 단계, 상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하되, 상기 T 세포 요법제를 투여하기 전에 상기 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하고 그것을 처리함, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산 분자를 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함함;
    을 포함하되,
    상기 키나제 억제제의 투여는, 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 5일 내지 7일에 개시되고, 상기 림프구고갈 요법의 개시까지의 투여를 포함하는 투여 간격으로 상기 키나제 억제제의 반복 투여를 포함하는 투여 섭생 요법으로 수행되고, 이어서 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여를 중지 또는 중단하고, 그 후 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 3개월 이상 동안 연장하는 기간 동안 추가 투여를 포함하고, 상기 키나제 억제제는 상기 투여 섭생 요법 동안 그것이 투여되는 각각의 날마다 (약) 140 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  27. 제 20 항 내지 제 26 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은, 상기 대상체로부터 상기 생물학적 샘플을 수득하고 상기 샘플의 T 세포를 처리함으로써, CD19에 특이적으로 결합하는 상기 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 상기 유전자 조작된 T 세포를 포함하는 조성물을 생성하는 것을 더 포함하는, 방법.
  28. 제 1 항 내지 제 27 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg 내지 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  29. 제 1 항 내지 제 28 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는 상기 대상체로부터 상기 샘플을 수득하기 전에 적어도 (약) 7일에 개시되는, 방법.
  30. 제 1 항 내지 제 29 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 30일 내지 (약) 40일에 개시되고;
    상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 23일 내지 (약) 38일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
    상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완료되는, 방법.
  31. 제 1 항 내지 제 30 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 투여는 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 35일에 개시되고;
    상기 샘플은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 28일 내지 (약) 32일에 상기 대상체로부터 수득되고/되거나;
    상기 림프구 고갈 요법은 상기 T 세포 억제제의 투여를 개시하기 전 (약) 5일 내지 7일에 완료되는, 방법.
  32. 제 5 항 내지 제 31 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법은 플루라다빈(fludarabine) 및/또는 사이클로포스파미드의 투여를 포함하는, 방법.
  33. 제 5 항 내지 제 32 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법은 2 내지 4일동안, 선택적으로 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 200-400 mg/m2, 선택적으로 (약) 300 mg/m2 및/또는 플루다라빈 (약) 20-40 mg/m2, 선택적으로 30 mg/m2의 투여를 포함하거나, 또는 상기 림프구고갈 요법은 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2의 투여를 포함하는, 방법.
  34. 제 5 항 내지 제 33 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 300 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하고/하거나,
    상기 림프구고갈 요법은 3일동안 매일 사이클로포스파미드 (약) 500 mg/m2 및 플루다라빈 30 mg/m2의 투여를 포함하는, 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 34 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 140 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 34 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 280 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  37. 제 1 항 내지 제 34 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 420 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 34 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 그것이 투여되는 날마다 (약) 560 mg의 양으로 투여되는, 방법.
  39. 제 9 항 내지 제 38 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 4개월 또는 4개월 초과 또는 상기 T 세포 요법제의 투여 개시후 (약) 5개월 또는 5개월 초과동안 연장하는, 방법.
  40. 제 9 항 내지 제 39 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 추가 투여는 (약) 6개월 또는 6개월 초과 연장하는 기간 동안인, 방법.
  41. 제 9 항 내지 제 40 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 나타내는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하거나, 또는
    상기 키나제 억제제의 추가 투여는, 상기 기간의 종료시에 상기 암이 상기 치료 후 완화(remission) 후에 진행되거나 또는 재발하는 경우 상기 기간의 종료시에 중단하는, 방법.
  42. 제 9 항 내지 제 41 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은 (약) 3개월 내지 6개월 동안 연장하는, 방법.
  43. 제 9 항 내지 제 42 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
  44. 제 9 항 내지 제 42 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 3개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
  45. 제 44 항에 있어서,
    상기 기간은, 상기 대상체가 3개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 3개월 동안 연장하는, 방법.
  46. 제 9 항 내지 제 42 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
  47. 제 9 항 내지 제 42 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간은, 상기 대상체가, (약) 6개월 전에 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취하거나 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 또는 재발하는 경우, 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
  48. 제 47 항에 있어서,
    상기 기간은, 상기 대상체가 6개월에 완전 반응(CR)을 성취하는 경우 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 (약) 6개월 동안 연장하는, 방법.
  49. 제 9 항 내지 제 48 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 추가 투여는, 상기 대상체가 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는 경우에도 상기 기간 동안 지속되는, 방법.
  50. 제 9 항 내지 제 49 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 상기 기간의 종료 이전의 시점에서 완전 반응(CR)을 성취하는, 방법.
  51. 제 9 항 내지 제 40 항, 제 42 항 내지 제 44 항, 제 46 항 및 제 47 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 기간의 종료시에, 상기 대상체가 부분 반응(partial response; PR) 또는 안정적 질병(stable disease; SD)을 나타내는 경우, 상기 기간의 종료 후 상기 추가 투여를 지속하는 것을 더 포함하는, 방법.
  52. 제 9 항 내지 제 40 항, 제 42 항 내지 제 44 항, 제 46 항, 제 47 항 및 제 51 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    (약) 6개월에, 상기 대상체가 상기 치료 후 부분 반응(PR) 또는 안정적 질병(SD)을 나타내는 경우, 상기 추가 투여는 6개월 초과동안 지속되는, 방법.
  53. 제 51 항 또는 제 52 항에 있어서,
    상기 추가 투여는 상기 대상체가 상기 치료 후 완전 반응(CR)을 성취할 때까지 또는 상기 암이 상기 치료 후 완화 이후 진행되거나 재발할 때까지 지속되는, 방법.
  54. 제 1 항 내지 제 53 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase; BTK)를 억제하고/하거나 IL2 유도성 T-세포 키나제(ITK)를 억제하는, 방법.
  55. 제 1 항 내지 제 54 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 ITK를 억제하고 상기 억제제는 ITK를 억제하거나 또는 (약) 1000 nM, 900 nM, 800 nM, 600 nM, 500 nM, 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM 또는 그 이하 미만의 반수 최대 억제 농도(half-maximal inhibitory concentration)(IC50)로 ITK를 억제하는, 방법.
  56. 제 1 항 내지 제 55 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받은 것인, 방법.
  57. 제 1 항 내지 제 55 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 전에 상기 키나제 억제제를 사전에 투여 받지 않는 것인, 방법.
  58. 제 1 항 내지 제 57 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 대상체 및/또는 상기 암은, (a) 브루톤 티로신 키나제(BTK)의 억제에 내성이고/이거나 (b) 상기 키나제 억제제에 의한 억제에 내성인 세포 집단을 포함하고, 선택적으로 상기 세포 집단은 B 세포의 집단이거나 또는 그를 포함하고, 또는 T 세포를 포함하지 않으며;
    (ii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 BTK를 인코딩(encoding)하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 상기 키나제 억제제에 의한 상기 BTK의 억제를 감소시키거나 또는 방지할 수 있으며, 선택적으로 상기 돌연변이는 C481S이고;
    (iii) 상기 대상체 및/또는 상기 암은 포스포리파제(phospholipase) C 감마 2(PLCgamma2)를 인코딩하는 핵산 중에 돌연변이를 포함하고, 선택적으로 상기 돌연변이는 구성적 신호 전달 활성(constitutive signaling activity)을 생성하며, 선택적으로 상기 돌연변이는 R665W 또는 L845F이며;
    (iv) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는, 상기 키나제 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한, 사전 치료 후 완화 이후 재발한 것이거나, 또는 사전 치료에 불응성으로 간주된 것이고;
    (v) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 사전 치료 후에 진행한 것이고, 선택적으로 상기 대상체는 상기 사전 치료에 대한 최선의 반응 또는 상기 사전 치료에 대한 사전 반응 후의 진행으로서 진행성 질병을 나타낸 것이고/이거나;
    (vi) (1)에서 상기 키나제 억제제의 투여 개시 시에, 및 선택적으로 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 시에, 상기 대상체는 상기 억제제 및/또는 BTK 억제제 요법을 사용한 적어도 6개월 동안 사전 치료 후에 완전 반응(CR) 보다 덜한 반응을 나타낸 것인, 방법.
  59. 제 1 항 내지 제 58 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 B 세포 악성 종양인, 방법.
  60. 제 59 항에 있어서,
    상기 B 세포 악성 종양은 림프종인, 방법.
  61. 제 60 항에 있어서,
    상기 림프종은 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma; NHL)인, 방법.
  62. 제 61 항에 있어서,
    상기 NHL은, 공격적인 NHL(aggressive NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종(diffuse large B cell lymphoma; DLBCL), DLBCL-NOS, 선택적으로 형질전환된 무통성 종양(indolent); EBV-양성 DLBCL-NOS; T 세포/조직구-풍부 거대 B 세포 림프종(T cell/histiocyte-rich large B-cell lymphoma); 원발성 종격동성 거대 B 세포 림프종(PMBCL); 여포성 림프종(FL), 선택적으로, 여포성 림프종 3B(FL3B); 및/또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 (이중/삼중 유전자 이상) 고급 B-세포 림프종을 포함하는, 방법.
  63. 제 1 항 내지 제 62 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 1 이하의 이스턴 코퍼레이티브 온콜로지 그룹 퍼퍼먼스 스테이터스(Eastern Cooperative Oncology Group Performance Status; ECOG) 점수를 갖는 것이거나 또는 갖는 것으로 확인되는 것인, 방법.
  64. 제 1 항 내지 제 63 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키나제 억제제는 경구 투여되는, 방법.
  65. 제 1 항 내지 제 64 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CD19는 인간 CD19인, 방법.
  66. 제 1 항 내지 제 65 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 상기 CD19에 특이적으로 결합하는 세포외 항원-인식 도메인 및 ITAM을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
  67. 제 66 항에 있어서,
    상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3-제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함하는, 방법.
  68. 제 66 항 또는 제 67 항에 있어서,
    상기 키메라 항원 수용체(CAR)는 공동자극 신호 전달 영역을 더 포함하는, 방법.
  69. 제 68 항에 있어서,
    상기 공동자극 신호 전달 영역은 CD28 또는 4-1BB, 선택적으로 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인를 포함하는, 방법.
  70. 제 68 항 또는 제 69 항에 있어서,
    상기 공동자극 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함하는, 방법.
  71. 제 1 항 내지 제 70 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 CAR은, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인(transmembrane domain); 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하고; 선택적으로 상기 CAR은 상기 막관통 도메인과 상기 scFv 사이에 스페이서(spacer)를 포함하며; 또는
    상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 4-1BB 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인, 선택적으로 인간 CD3 제타 신호 전달 도메인임;을 포함하거나; 또는
    상기 CAR은, 순서대로, 상기 CD19에 특이적인 scFv; 스페이서; 막관통 도메인; 공동자극 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 4-1BB 신호 전달 도메인임; 및 1차 신호 전달 ITAM-함유 분자로부터 유도된 세포질 신호 전달 도메인, 이는 선택적으로 CD3 제타 신호 전달 도메인이거나 또는 그를 포함함;을 포함하는, 방법.
  72. 제 71 항에 있어서,
    상기 CAR은 스페이서를 포함하고 상기 스페이서는, (a) 면역글로불린 힌지(immunoglobulin hinge)의 전부 또는 일부 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나 또는 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않으며, (b) 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지의 전부 또는 일부, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되고/되거나 약 15개 또는 그 미만의 아미노산을 포함하고 CD28 세포외 영역 또는 CD8 세포외 영역을 포함하지 않거나, 또는 (c) 길이가 (약) 12개의 아미노산이고/이거나 면역글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지의 전부 또는 일부, 또는 그의 변형된 버젼을 포함하거나 또는 그것들로 구성되거나; 또는 (d) 서열번호 1의 서열, 서열번호 2, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34로 인코딩된 서열, 또는 전술한 것들에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 전술한 것들의 임의의 변이체를 갖거나 또는 그것들로 구성되거나, 또는 (e) 일반식 X1PPX2P(서열번호 58)[여기서, X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고 X2는 시스테인 또는 트레오닌(threonine)임]을 포함하거나 또는 그것들로 구성되는 폴리펩티드 스페이서이고/이거나;
    상기 공동자극 도메인은 서열번호 12 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
    상기 1차 신호 전달 도메인은 서열번호 13 또는 14 또는 15 또는 그에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 그의 변이체를 포함하고/하거나;
    상기 scFv는 RASQDISKYLN의 CDR-L1 서열 (서열번호 35), SRLHSGV의 CDR-L2 서열(서열번호 36), 및/또는 GNTLPYTFG의 CDR-L3 서열(서열번호 37) 및/또는 DYGVS의 CDR-H1 서열(서열번호 38), VIWGSETTYYNSALKS의 CDR-H2 서열(서열번호 39), 및/또는 YAMDYWG의 CDR-H3 서열(서열번호 40)을 포함하거나 또는 상기 scFv는 FMC63의 가변 중쇄 영역 및 FMC63의 가변 경쇄 영역 및/또는 FMC63의 CDR-L1 서열, FMC63의 CDR-L2 서열, 및 FMC63의 CDR-L3 서열, FMC63의 CDR-H1 서열, FMC63의 CDR-H2 서열, 및 FMC63의 CDR-H3 서열을 포함하거나 또는 임의의 전술한 것과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 그에 대해 경쟁하며, 선택적으로 상기 scFv는, 순서대로, VH, 선택적으로 서열번호 41을 포함하는 링커, 및 VL를 포함하고/하거나 상기 scFv는 유연한 링커를 포함하고/하거나 서열번호 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
  73. 제 1 항 내지 제 72 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×105 내지 5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×106 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×106 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 1×107 내지 2.5×108 개의 총 CAR-발현 T 세포, 5×107 내지 1×108 개의 총 CAR-발현 T 세포(각각의 경계 포함)를 포함하는, 방법.
  74. 제 1 항 내지 제 73 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 적어도 (약) 1×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5×107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1×108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5×108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5×108 개의 CAR-발현 세포를 포함하는, 방법.
  75. 제 1 항 내지 제 74 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 5×107 개의 총 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
  76. 제 1 항 내지 제 75 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 (약) 1×108 개의 CAR-발현 T 세포를 포함하는, 방법.
  77. 제 1 항 내지 제 76 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 유전자 조작된 T 세포의 용량은 상기 CAR을 발현하는 CD4+ T 세포 및 상기 CAR을 발현하는 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 용량의 투여는 복수의 다른 조성물을 투여하는 것을 포함하고, 상기 복수의 다른 조성물은 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 하나를 포함하는 제 1 조성물 및 상기 CD4+ T 세포 및 상기 CD8+ T 세포 중의 다른 것을 포함하는 제 2 조성물을 포함하는, 방법.
  78. 제 77 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 0 내지 12시간 간격(apart), 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 투여되거나 또는 상기 제 1 조성물의 투여 및 상기 제 2 조성물의 투여는 같은 날에 수행되되, 0 내지 12시간 간격, 0 내지 6시간 간격 또는 0 내지 2시간 간격으로 수행되고/되거나;
    상기 제 1 조성물의 투여 개시 및 상기 제 2 조성물의 투여 개시는 약 1분 내지 약 1시간 간격 또는 약 5분 내지 약 30분 간격으로 수행되는, 방법.
  79. 제 77 항 또는 제 78 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물 및 제 2 조성물은 2시간 이하, 1시간 이하, 30분 이하, 15분 이하, 10분 이하 또는 5분 이하의 간격으로 투여되는, 방법.
  80. 제 77 항 내지 제 79 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물은 상기 CD4+ T 세포를 포함하는, 방법.
  81. 제 77 항 내지 제 79 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물은 상기 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
  82. 제 77 항 내지 제 81 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 1 조성물은 상기 제 2 조성물 이전에 투여되는, 방법.
  83. 제 1 항 내지 제 82 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포의 용량은 비경구, 선택적으로 정맥내 투여되는, 방법.
  84. 제 1 항 내지 제 83 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 상기 대상체로부터의 상기 샘플로부터 수득된 1차 T 세포인, 방법.
  85. 제 1 항 내지 제 82 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 T 세포는 상기 대상체에 자가(autologous)인, 방법.
  86. 제 1 항 내지 제 85 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 처리는,
    상기 대상체로부터 수득된 상기 샘플로부터, T 세포, 선택적으로 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 분리함으로써 1차 T 세포를 포함하는 투입 조성물을 생성하는 단계; 및
    상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산을 상기 투입 조성물의 T 세포에 도입하는 단계;
    를 포함하는, 방법.
  87. 제 86 항에 있어서,
    상기 분리는 면역친화성-기반 선택(immunoaffinity-based selection)을 수행하는 것을 포함하는, 방법.
  88. 제 1 항 내지 제 87 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 생물학적 샘플은 전혈 샘플, 버피 코트 샘플(buffy coat sample), 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 샘플, 미분획화된 T 세포 샘플(unfractionated T cell sample), 림프구 샘플, 백혈구 샘플, 혈액성분채집술(apheresis) 생성물, 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis) 생성물이거나 이를 포함하는, 방법.
  89. 제 86 항 내지 제 88 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 도입 전에, 상기 처리는 자극 조건하에 상기 투입 조성물을 인큐베이션하는 것을 포함하되, 상기 자극 조건은 TCR 복합체의 하나 이상의 구성요소의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 하나 이상의 공동자극 분자의 하나 이상의 세포내 신호 전달 도메인을 활성화시킬 수 있는 자극 시약의 존재를 포함함으로써 자극된 조성물을 생성하고, 상기 CAR을 인코딩하는 상기 핵산 분자는 상기 자극된 조성물에 도입되는, 방법.
  90. 제 89 항에 있어서,
    상기 자극 시약은 TCR 복합체의 한 요소에 특이적으로 결합하는, 선택적으로 CD3에 특이적으로 결합하는 1차 제제(primary agent)를 포함하는, 방법.
  91. 제 90 항에 있어서,
    상기 자극 시약은 T 세포 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 2차 제제(secondary agen)를 더 포함하고, 선택적으로 상기 공동자극 분자는 CD28, CD137 (4-1-BB), OX40, 또는 ICOS로부터 선택되는, 방법.
  92. 제 90 항 또는 제 91 항에 있어서,
    상기 1차 및/또는 2차 제제는 항체를 포함하고, 선택적으로 상기 자극 시약은 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 사용한 인큐베이션을 포함하는, 방법.
  93. 제 90 항 내지 제 92 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 1차 제제 및/또는 2차 제제는 고형 지지체의 표면 상에 존재하는, 방법.
  94. 제 93 항에 있어서,
    상기 고형 지지체는 비드이거나 또는 그를 포함하고, 선택적으로 상기 비드는 자성(magnetic) 또는 초상자성(superparamagnetic)인, 방법.
  95. 제 94 항에 있어서,
    상기 비드는 (약) 3.5㎛ 초과이되 약 9㎛ 이하 또는 약 8㎛ 이하 또는 약 7㎛ 이하 또는 약 6㎛ 이하 또는 약 5㎛ 이하의 직경을 포함하는, 방법.
  96. 제 94 항 또는 제 95 항에 있어서,
    상기 비드는 (약) 4.5㎛의 직경을 포함하는, 방법.
  97. 제 1 항 내지 제 96 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 도입은 상기 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터로 상기 자극된 조성물의 세포를 형질도입(transducing)하는 것을 포함하는, 방법.
  98. 제 97 항에 있어서,
    상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터인, 방법.
  99. 제 97 항 또는 제 98 항에 있어서,
    상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 감마레트로바이러스 벡터인, 방법.
  100. 제 86 항 내지 제 99 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 처리는 상기 도입 후 상기 T 세포를 배양하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 배양은 세포의 증식 또는 증폭을 일으키는 조건하에 수행되어 상기 T 세포 요법제를 포함하는 산출 조성물을 생성하는, 방법.
  101. 제 100 항에 있어서,
    상기 배양 후에, 상기 방법은 냉동보존(cryopreservation)을 위해 및/또는 상기 대상체에 대한 상기 T 세포 요법제의 투여를 위해 상기 산출 조성물의 세포를 제형화(formulating)하는 것을 더 포함하고, 선택적으로 상기 제형화는 약학적으로 허용가능한 부형제의 존재하에서 이루어지는, 방법.
  102. 제 1 항 내지 제 101 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체는 인간인, 방법.
  103. 제 1 항 내지 제 102 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 듀러블한(durable) 완전 반응(complete response, CR)을 성취하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나;
    6개월까지 CR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 반응(response)에서 유지되고, CR에서 유지되고/되거나 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 및/또는 9개월 이상 동안 생존하거나 또는 진행없이 생존하고/하거나;
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 객관적 반응(objective response; OR)을 성취하고 선택적으로 상기 OR은 듀러블하거나, 또는 6개월 이상 또는 9개월 이상 동안 상기 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%에서 듀러블하고/하거나;
    6개월까지 OR을 성취한 대상체의 적어도 60, 70, 80, 90, 또는 95%는 3개월 이상 및/또는 6개월 이상 동안 반응에서 유지되거나 생존하는, 방법.
  104. 제 60 항 내지 제 103 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량의 투여 시점에 또는 투여 직전에, 상기 대상체는, 상기 림프종, 선택적으로 상기 NHL에 대한 하나 이상의 사전 요법(prior therapies), 선택적으로 상기 CAR을 발현하는 세포의 또다른 용량 이외의 1개, 2개 또는 3개의 사전 요법으로, 치료 후 완화 이후 재발하였거나, 또는 상기 치료 요법에 대해 불응성으로 되었던, 방법.
  105. 제 60 항 내지 제 104 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 용량을 포함하는 상기 T 세포 요법제의 투여시 또는 투여 전에,
    상기 대상체는 이중/삼중 유전자 이상 림프종을 갖는 것이거나 또는 확인되었고;
    상기 대상체는 화학요법-불응성 림프종(chemorefractory lymphoma), 선택적으로 화학요법-불응성 DLBCL이거나 또는 확인되었고/되었거나;
    상기 대상체는 사전 요법에 대한 반응에서 완전 반응(CR)을 성취하지 않은 것인, 방법.
  106. 키트로서,
    구조식
    Figure pct00041
    , 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염이거나 또는 그를 포함하는 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 자가 T 세포 요법제로 치료를 위한 또는 그것으로 치료 받을 후보인 암을 갖는 대상체에게 상기 하나 이상의 단위 용량을 투여하기 위한 지침을 포함하고,
    상기 T 세포 요법제는 CD19에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 용량을 포함하고, 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체로부터 생물학적 샘플이 수득되고 처리되며, 상기 처리는, 선택적으로 상기 CAR을 인코딩하는 핵산을 상기 T 세포에 도입함으로써 상기 샘플로부터 T 세포를 유전자 변형시키는 것을 포함하고,
    상기 지침은, 상기 샘플의 수득 전에 적어도 (약) 3일에 상기 대상체에 상기 키나제 억제제의 단위 용량의 투여를 개시하고, 그리고 투여 섭생 요법 내에는 적어도 상기 샘플이 상기 대상체로부터 수득된 날 또는 그 후에 투여를 포함하도록 연장하는 기간 동안 투여 간격으로 하나 이상의 용량 단위의 반복 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
  107. 제 106 항에 있어서,
    상기 지침은 상기 T 세포 요법제를 상기 대상체에게 투여하는 것을 더 특정하는, 키트.
  108. 제 106 항 또는 제 107 항에 있어서,
    상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여를 개시한 후 및 상기 T 세포 요법제의 투여 전에, 상기 대상체에게 림프구고갈 요법제를 투여하는 것을 특정하는, 키트.
  109. 제 108 항에 있어서,
    상기 지침은, 상기 키나제 억제제의 투여가 상기 림프구고갈 요법제의 투여 동안 중단되는 것을 특정하는, 키트.
  110. 제 108 항 또는 제 109 항에 있어서,
    상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 적어도 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
  111. 제 108 항 내지 제 110 항 중의 어느 한 항에 있어서,
    상기 지침은, 상기 투여 섭생 요법이 상기 림프구고갈 요법의 개시시까지 투여를 포함하는 기간에 걸쳐서 상기 키나제 억제제의 투여 후 상기 림프구고갈 요법동안 상기 키나제 억제제의 투여의 중단 또는 중지, 및 이어서 상기 T 세포 요법제의 투여 개시 후 적어도 15일동안 연장하는 기간 동안 상기 키나제 억제제의 추가 투여를 포함하는 것을 특정하는, 키트.
  112. 구조식
    Figure pct00042
    이거나 또는 그를 포함하거나, 또는 그의 약학적으로 허용가능한 염인 키나제 억제제의 하나 이상의 단위 용량, 및 제 1 항 내지 제 105 항 중의 어느 한 항의 방법을 수행하기 위한 지침을 포함하는 키트.
  113. 제 106 항 내지 제 112 항 중의 어느 한 항의 키트를 포함하는 제조 물품.
KR1020207034784A 2018-05-03 2019-04-30 키메라 항원 수용체(ｃａｒ) ｔ세포 요법과 키나제 억제제의 조합요법 KR20210044736A (ko)

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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020511462A (ja) 2016-12-03 2020-04-16 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド キナーゼ阻害剤との組み合わせで治療用ｔ細胞を使用するための方法および組成物
EP3630132A1 (en) 2017-06-02 2020-04-08 Juno Therapeutics, Inc. Articles of manufacture and methods for treatment using adoptive cell therapy
US11364478B2 (en) * 2019-05-22 2022-06-21 Mezzimatic, LLC Method of manufacturing throwable paintballs and paintballs made therefrom
JP2022554348A (ja) 2019-11-05 2022-12-28 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 治療用ｔ細胞組成物の属性を決定する方法
IL294724A (en) * 2020-01-24 2022-09-01 Juno Therapeutics Inc Methods for dosing and treatment of follicular lymphoma and marginal zone lymphoma in stress cell therapy
WO2021231655A1 (en) * 2020-05-12 2021-11-18 Lyell Immunopharma, Inc. Chimeric antigen receptor spacers
WO2021231657A1 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
GB2598894A (en) * 2020-09-10 2022-03-23 Oxford Nanoimaging Ltd Cell classification algorithm
EP4071248A1 (en) 2021-04-07 2022-10-12 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Means and methods for enhancing receptor-targeted gene transfer
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy

Family Cites Families (99)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4452773A (en) 1982-04-05 1984-06-05 Canadian Patents And Development Limited Magnetic iron-dextran microspheres
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US4795698A (en) 1985-10-04 1989-01-03 Immunicon Corporation Magnetic-polymer particles
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
EP0452342B1 (en) 1988-12-28 1994-11-30 MILTENYI, Stefan Methods and materials for high gradient magnetic separation of biological materials
US5200084A (en) 1990-09-26 1993-04-06 Immunicon Corporation Apparatus and methods for magnetic separation
DE4228458A1 (de) 1992-08-27 1994-06-01 Beiersdorf Ag Multicistronische Expressionseinheiten und deren Verwendung
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
DE19608753C1 (de) 1996-03-06 1997-06-26 Medigene Gmbh Transduktionssystem und seine Verwendung
US6451995B1 (en) 1996-03-20 2002-09-17 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Single chain FV polynucleotide or peptide constructs of anti-ganglioside GD2 antibodies, cells expressing same and related methods
EP1109921A4 (en) 1998-09-04 2002-08-28 Sloan Kettering Inst Cancer FOR PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANE-ANTI-SPECIFIC FUSION RECEPTORS AND THEIR USE
WO2000023573A2 (en) 1998-10-20 2000-04-27 City Of Hope Cd20-specific redirected t cells and their use in cellular immunotherapy of cd20+ malignancies
WO2001094944A2 (en) 2000-06-02 2001-12-13 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Artificial antigen presenting cells and methods of use thereof
EP1334188B1 (en) 2000-11-07 2006-08-30 City of Hope Cd19-specific redirected immune cells
DK1347971T3 (da) 2000-12-21 2006-05-15 Bristol Myers Squibb Co Thiazolylinhibitorer af tyrosinkinaser fra Tec-familien
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7939059B2 (en) 2001-12-10 2011-05-10 California Institute Of Technology Method for the generation of antigen-specific lymphocytes
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
SE0202461D0 (sv) 2002-08-14 2002-08-14 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0202462D0 (sv) 2002-08-14 2002-08-14 Astrazeneca Ab Novel use
SE0202429D0 (sv) 2002-08-14 2002-08-14 Astrazeneca Ab Novel Compounds
SE0202463D0 (sv) 2002-08-14 2002-08-14 Astrazeneca Ab Novel compounds
US20050129671A1 (en) 2003-03-11 2005-06-16 City Of Hope Mammalian antigen-presenting T cells and bi-specific T cells
RS51846B (en) 2003-09-08 2012-02-29 Aventis Pharmaceuticals Inc. TIENOPIRAZOLI
WO2005070420A1 (en) 2004-01-14 2005-08-04 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. 1h-benzimidazol-2-yl-benzamide derivatives and related compounds as itk inhibitors (interleukin-2-inducible t cell kinase) for the treatment of inflammation, immunological and allergic disorders
WO2005079791A1 (en) 2004-02-12 2005-09-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Thiophene -2- carboxylic acid - (1h - benzimidazol - 2 yl) - amide derivatives and related compounds as inhibitors of the tec kinase itk (interleukin -2- inducible t cell kinase) for the treatment of inflammation, immunological and allergic disorders
JP2008524233A (ja) 2004-12-16 2008-07-10 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 炎症性疾患、増殖性疾患および免疫介在性疾患の治療のためのｔｅｃファミリータンパク質キナーゼのインヒビターとして有用なピリド−２−オン
WO2007016977A1 (de) 2005-08-05 2007-02-15 Delica Ag Vorrichtung zum extrahieren eines in einer kapsel enthaltenen extraktionsgutes mit einem flüssigen extraktionsmittel
JP2009507792A (ja) 2005-08-29 2009-02-26 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 非受容体型チロシンキナーゼのｔｅｃファミリーの阻害剤として有用な３，５−二置換ピリド−２−オン
US20080261975A1 (en) 2005-11-12 2008-10-23 Joerg Martin Bentzien Tec Kinase Inhibitors
JP2009520831A (ja) 2005-12-20 2009-05-28 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｔｅｃキナーゼインヒビター
WO2007136790A2 (en) 2006-05-18 2007-11-29 Mannkind Corporation Intracellular kinase inhibitors
EP1900727A1 (en) 2006-08-30 2008-03-19 Cellzome Ag Aminopyridine derivatives as kinase inhibitors
CA2662074A1 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Cellzome Limited Triazole derivatives as kinase inhibitors
EP1900739A1 (en) 2006-08-30 2008-03-19 Cellzome Ag Diazolodiazine derivatives as kinase inhibitors
SI2526934T1 (sl) 2006-09-22 2016-04-29 Pharmacyclics Llc Inhibitorji Bruton tirozin kinaze
ES2663323T3 (es) 2007-03-30 2018-04-12 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Expresión constitutiva de ligandos coestimuladores en linfocitos T transferidos de manera adoptiva
EP2214486A4 (en) 2007-10-19 2011-03-09 Avila Therapeutics Inc HETEROARYL COMPOUNDS AND ITS USES
DK2433713T3 (en) 2007-12-07 2017-09-25 Miltenyi Biotec Gmbh CELL PROCESSING SYSTEMS AND PROCEDURES
US8479118B2 (en) 2007-12-10 2013-07-02 Microsoft Corporation Switching search providers within a browser search box
US20120164718A1 (en) 2008-05-06 2012-06-28 Innovative Micro Technology Removable/disposable apparatus for MEMS particle sorting device
JP5173594B2 (ja) 2008-05-27 2013-04-03 キヤノン株式会社 管理装置、画像形成装置及びそれらの処理方法
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
TWI546290B (zh) 2008-06-27 2016-08-21 賽基艾維洛米斯研究股份有限公司 雜芳基化合物及其用途
WO2011017219A1 (en) 2009-08-03 2011-02-10 The Regents Of The University Of California Imidazoquinoxalinones and anti-tumor treatment
ES2911246T3 (es) 2009-11-03 2022-05-18 Hope City Receptor del factor de crecimiento epidérmico truncado (EGFRT) para selección de células T transducidas
MX342405B (es) 2010-06-03 2016-09-28 Pharmacyclics Inc El uso de inhibidores de la tirosina quinasa de bruton (btk).
DK3214091T3 (en) 2010-12-09 2019-01-07 Univ Pennsylvania USE OF CHEMICAL ANTIGEN RECEPTOR MODIFIED T CELLS FOR TREATMENT OF CANCER
RU2688185C2 (ru) 2011-03-23 2019-05-21 Фред Хатчинсон Кэнсер Рисерч Сентер Способ и композиции для клеточной иммунотерапии
US8398282B2 (en) 2011-05-12 2013-03-19 Delphi Technologies, Inc. Vehicle front lighting assembly and systems having a variable tint electrowetting element
MX359234B (es) 2011-11-11 2018-09-20 Hutchinson Fred Cancer Res Inmunoterapia de celulas t objetivadas en ciclina a1 para cancer.
ES2774160T3 (es) 2012-02-13 2020-07-17 Seattle Childrens Hospital D/B/A Seattle Childrens Res Institute Receptores de antígenos quiméricos biespecíficos y usos terapéuticos de los mismos
WO2013126726A1 (en) 2012-02-22 2013-08-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Double transgenic t cells comprising a car and a tcr and their methods of use
CA2872471C (en) 2012-05-03 2022-11-22 Fred Hutchinson Cancer Research Center Enhanced affinity t cell receptors and methods for making the same
KR20150015021A (ko) 2012-06-04 2015-02-09 파마시클릭스, 인코포레이티드 브루톤 타이로신 키나아제 저해제의 결정 형태
US20150140085A1 (en) 2012-06-29 2015-05-21 Principia Biopharma Inc. Formulations comprising ibrutinib
HUE053439T2 (hu) 2012-08-20 2021-06-28 Hutchinson Fred Cancer Res Sejtes immunterápiára szolgáló eljárás és készítmények
EP3597215A1 (en) 2012-10-02 2020-01-22 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Compositions and methods for immunotherapy
KR20150080592A (ko) 2012-11-02 2015-07-09 파마시클릭스, 인코포레이티드 Tec 패밀리 키나제 억제제 애쥬번트 요법
US9649313B2 (en) 2012-11-26 2017-05-16 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of ITK inhibitors for the treatment of cancer
US9260426B2 (en) 2012-12-14 2016-02-16 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted 1H-pyrrolo [2, 3-b] pyridine and 1H-pyrazolo [3, 4-b] pyridine derivatives as salt inducible kinase 2 (SIK2) inhibitors
US9405601B2 (en) 2012-12-20 2016-08-02 Mitsubishi Electric Corporation In-vehicle apparatus and program
WO2014105958A2 (en) 2012-12-26 2014-07-03 Medivation Technologies, Inc. Fused pyrimidine compounds and use thereof
CN105073115A (zh) 2013-03-14 2015-11-18 药品循环有限责任公司 布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂和cyp3a4抑制剂的组合
AU2014233069A1 (en) 2013-03-15 2015-09-24 Nantbioscience, Inc. Substituted indol-5-ol derivatives and their therapeutic applications
JP6575952B2 (ja) 2013-04-08 2019-09-18 ファーマサイクリックス エルエルシー イブルチニブ併用療法
US8957080B2 (en) 2013-04-09 2015-02-17 Principia Biopharma Inc. Tyrosine kinase inhibitors
US9206188B2 (en) 2013-04-18 2015-12-08 Arrien Pharmaceuticals Llc Substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines as ITK and JAK inhibitors
SG11201509609SA (en) 2013-05-24 2015-12-30 Univ Texas Chimeric antigen receptor-targeting monoclonal antibodies
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
CN103694241A (zh) 2013-11-27 2014-04-02 苏州晶云药物科技有限公司 Pci-32765的新晶型a及其制备方法
HUE052573T2 (hu) 2013-12-20 2021-05-28 Hutchinson Fred Cancer Res Jelölt kiméra effektormolekulák és receptoraik
US20150238490A1 (en) 2014-02-21 2015-08-27 Pharmacyclics, Inc. Biomarkers for predicting response of dlbcl to treatment with ibrutinib
MX2016012419A (es) 2014-03-27 2016-11-30 Perrigo Api Ltd Formas solidas de ibrutinib y procesos para la produccion de las mismas.
WO2015187848A1 (en) 2014-06-04 2015-12-10 Sampath Deepa Hdac inhibitor and btk inhibitor combinations
US20150361504A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Pharmacyclics Llc Biomarker for predicting response of cll to treatment with a btk inhibitor
SG11201700201UA (en) 2014-07-11 2017-02-27 Celgene Corp Combination therapy for cancer
US20160022684A1 (en) 2014-07-25 2016-01-28 Pharmacyclics Llc Bet inhibitor and bruton's tyrosine kinase inhibitor combinations
WO2016022942A1 (en) 2014-08-07 2016-02-11 Pharmacyclics Llc Novel formulations of a bruton's tyrosine kinase inhibitor
US9730938B2 (en) 2014-08-08 2017-08-15 Pharmacyclics Llc Bruton's tyrosine kinase inhibitor combinations and uses thereof
US10035802B2 (en) 2014-08-14 2018-07-31 Teva Pharmaceuticals Usa, Inc. Solid state forms of ibrutinib
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
US10059715B2 (en) 2014-10-01 2018-08-28 Ratiopharm Gmbh Acid addition salt of ibrutinib
WO2016088074A1 (en) 2014-12-03 2016-06-09 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Process for the preparation of amorphous ibrutinib
US20170360796A1 (en) 2014-12-23 2017-12-21 Pharmacyclics Llc Btk inhibitor combinations and dosing regimen
MA41350A (fr) 2015-01-14 2017-11-21 Janssen Pharmaceutica Nv Synthèse d'un inhibiteur de la tyrosine kinase de bruton
RU2017133663A (ru) 2015-03-03 2019-04-03 Др. Редди'С Лабораторис Лимитед П0лиморфы ибрутиниба
RU2017133990A (ru) 2015-03-03 2019-04-05 Фармасайкликс Элэлси Фармацевтические лекарственные формы ингибитора тирозинкиназы брутона
WO2016151438A1 (en) 2015-03-20 2016-09-29 Sun Pharmaceutical Industries Limited A process for the preparation of ibrutinib
EP3277688B1 (en) 2015-04-02 2019-05-08 ratiopharm GmbH Co-crystals of ibrutinib
JP2018525411A (ja) 2015-08-31 2018-09-06 ファーマサイクリックス エルエルシー 多発性骨髄腫を治療するためのｂｔｋ阻害剤の組み合わせ
ITUB20155616A1 (it) 2015-11-16 2017-05-16 Laboratorio Chimico Int S P A Procedimento per la preparazione della forma amorfa dell?ibrutinib e nuova forma cristallina.
US10626117B2 (en) 2016-02-01 2020-04-21 Natco Pharma Limited Process for the preparation of Ibrutinib
WO2017134588A1 (en) 2016-02-04 2017-08-10 Shilpa Medicare Limited Process for the preparation of ibrutinib
GB2558514A (en) 2016-02-09 2018-07-18 Azad Pharmaceutical Ingredients Ag Process for the synthesis of stable amorphous ibrutinib
MA45341A (fr) 2016-06-06 2019-04-10 Hutchinson Fred Cancer Res Procédés de traitement de malignités de lymphocytes b au moyen d'une thérapie cellulaire adoptive
CA3029003A1 (en) 2016-06-27 2018-01-04 The Regents Of The University Of California Cancer treatment combinations

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