KR20170129329A - 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강용 조성물 - Google Patents
황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 추출물은 면역결핍마우스를 이용한 실험에서, 실험동물의 체중변화와 식이효율에 미치는 영향실험에서 NK 세포 활성에 미치는 영향실험에서 NK 세포 활성을 측정한 결과, 황칠나무와 가시오가피 혼합물을 섭취한 그룹이 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 NK 세포 활성이 상승적으로 증가시킴을 확인 할 수 있었고 T/B 세포 증식능에 미치는 영향실험에서 영양결핍으로 감소된 T/B 증식능이 황칠나무와 가시오가피 혼합물의 섭취를 통해 유의적으로 증가를 하여 면역 조절 효과가 있는 것을 확인하였으며 시토킨 분비량 측정 실험에서, Th1 시토킨(cytokine) (IL-2, IFN-γ) 분비능을 증가시키고 Th2 cytokine (IL-4, 6, 10, TNF-α) 분비능을 감소시키고 특히, 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 면역기능과 관련 시토킨 분비능 면에서 상승적으로 증가시켜 면역력을 상승적으로 증가시킴을 확인하여 면역기능을 활성화시켜, 면역 저하증의 치료 및 예방용 의약품, 건강기능식품, 기능성 식품, 건강보조식품, 식품 첨가제 등의 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.
Description
본 발명은 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강용 조성물에 관한 것이다.
[문헌 1] Immunology. 49, 1992; Dig dis Sci. 52, pp 1890-1896, 2007; J Life Sci. 19, pp 479-485, 2009; Biol Pharm Bull. 27, pp 617-620, 2004
[문헌 2] J. Allergy clin immunol. 9, pp 616, 1993; Immunology. 47, pp 75, 1982
[문헌 3] A-Reum Yu, Ho-Young Park, Yun-Sook Kim, Sang-Keun Ha, Hee-Do Hong, Hee-Don Choi. 2012. Immuno-enhancing Effect of Seed Extracts on a RAW 264.7 Macrophage Cell Line. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(12): 1671-1676
[문헌 4] Uthaisangsook S, Day NK, Bahna SL, Good RA, Haraguchi S. 2002. Innate immunity and its role against infections. Ann. Allergy Asthma Immunol. 88: 253-264
[문헌 5] Birk RW, Gratchev A, Hakiy N, Politz O, Schledzewski K, Guillot P, Orfanos CE, Goerdt S. 2001. Alternative activation of antigen-presenting cells: concepts and clinical relevance. Hautarzt 52: 193-200
[문헌 6] Seon A Yoo, Ok Kyung Kim, Da-Eun Nam, Yongjae Kim, Humyoung Baek, Woojin Jun, Jeongmin Lee. 2014. Immunomodulatory Effects of Fermented Curcuma longa L. Extracts on RAW 264.7 Cells. J Korean Soc Food Sci Nutr 43(2): 216-243
[문헌 7] Myung-Woo Byun. 2013. Immunomodulatory Activities of Apple Seed Extracts on Macrophage. J Korean Soc Food Sci Nutr 42(9): 1513-1517
[문헌 8] Yi Seul Seo and Kwang-Soon Shin. 2012. Immune System-Stimulating Activities of Mucilage Polysaccharides Isolated from Opuntia humifusa. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(1): 95-102
[문헌 9] A-Reum Yu, Ho-Young Park, In-Wook Choi, Yong-Kon Park, Hee-Do Hong, Hee-Don Choi. 2012. Immune Enhancing Effect of Medicinal Herb Extracts on a RAW 264.7 Macrophage Cell Line. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(11): 1521-1527
[문헌 10] Journal of Ethnopharmacology 90, 403-408 (2004) 박보영 등
[문헌 11] 한국특허 등록 제 10-1194947호
[문헌 12] 한국특허 등록 제 10-1443230호
[문헌 13] 한국특허공개 제 10-2015-0056721호
[문헌 14] 정보섭외, 도해향약대사전, 영림사, pp432-435, 1998년
[문헌 15] 정보섭외, 도해향약대사전, 영림사, p858, 1998년
인체는 항상성을 유지하려고 하는 특징을 가지고 있으며 이는 면역 시스템에서도 작용을 하게 된다. 면역이란 생체가 자기 성분 이외의 물질 등이 생체의 항상성을 깨뜨리거나 자기를 위협하는 것을 배제하기 위해 일어나는 일련의 생체 방어 반응을 의미하며 피부, 소화관, 호흡기 등을 통해 침입한 유해물질로부터 신체를 보호하는 방어체계로 외부 자극물질을 제거하는 대식 작용을 하거나, 상처에 발생한 심각한 염증을 줄이는 작용을 통한 항상성 유지 활동이라고 할 수 있다. 체내 병원균의 유입으로 인해 활성화 되었던 염증 반응을 포함한 모든 면역작용은 병원균의 제거가 이루어지고 나면 정상의 상태로 돌아오게 되지만 면역 조절에 어려움이 있는 경우, 면역 반응이 정상인 사람에 비해 현저히 높거나 낮게 발생한다. 면역기능이 결핍되거나 저하된 상태를 면역부전이라고 하며 이 상태에서는 면역반응이 제대로 활성화 되지 못하여 체내의 이물질에 대한 반응을 제대로 못하여 감염을 일으키게 된다. 반대로 면역과민반응은 일부의 면역반응이 과하게 반응하여 면역체계가 불균형을 이루어 결과적으로 알레르기 반응을 일으키는 것이다 (Immunology. 49, 1992; Dig dis Sci. 52, pp 1890-1896, 2007; J Life Sci. 19, pp 479-485, 2009; Biol Pharm Bull. 27, pp 617-620, 2004).
면역 체계가 정상적으로 조절되지 못하고 불균형을 이루게 되면 체내 사이토카인의 불균형, T/B 세포의 증식 불균형, 항산화 영양소 고갈 등의 원인으로 면역 조절에 장애가 발생하여 염증성 물질 분비가 증가하여 세포와 조직에 손상을 입히게 되며 병원체 유입에 대처하지 못하여 염증의 심화가 이루어질 수 있다. 따라서 인체의 면역반응은 균형을 이루어 조절이 정상적으로 되어야 건강을 유지할 수 있으므로 면역 조절 능력은 질병 예방과 치료에 중요시 된다 (J Allergy clin immunol. 9, pp 616, 1993; Immunology. 47, pp 75, 1982).
비장에서는 면역조절에 관여하며 interferon (IFN)-γ, tumor necrosis factor (TNF)-α과 interleukin (IL)-1β, IL-5, IL-6, PGE2 등의 사이토카인을 분비한다. 이런 사이토카인은 면역반응의 실행단계에서 작용을 나타내며, 면역 세포와 염증계간의 신호 전달 과정에서도 중요한 역할을 한다.
2000년 이후 전 세계적으로 급성호흡기증후군 SARS, 조류독감, 에볼라 바이러스 등과 같은 급성 신종 전염병들이 등장하면서 이러한 전염병에 대한 인체의 방어능력인 면역력의 중요성이 더욱 대두되고 있다. 인체의 체내 항상성이 깨지거나 병원균의 침입과 같이 위협이 되는 것들에 대한 생체방어력인 면역력은 대식세포나 Natural killer(NK) 세포 등이 관련된 비특이적 면역과 T 세포나 B 세포가 관여하는 특이적 면역으로 분류할 수 있다(1. A-Reum Yu, Ho-Young Park, Yun-Sook Kim, Sang-Keun Ha, Hee-Do Hong, Hee-Don Choi. 2012. Immuno-enhancing Effect of Seed Extracts on a RAW 264.7 Macrophage Cell Line. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(12): 1671-1676). 병원균이 인체에 침입했을 때 neutrophile(호중구), monocyte(단핵구), macrophage(대식세포)와 같은 탐식세포(phagocytes)들은 가장 먼저 인체를 병원균들로부터 방어하는 선천 면역반응의 주요 세포군이다(Uthaisangsook S, Day NK, Bahna SL, Good RA, Haraguchi S. 2002. Innate immunity and its role against infections. Ann. Allergy Asthma Immunol. 88: 253-264). 특히, 대식세포는 상피세포 장벽 이후의 생체방어에 있어 최초 대응세포로 항원제시세포(antigen presenting cell)로써의 기능도 수행하며, 적응면역과 관련하여 T 세포에 작용에도 영향을 주고(3. Birk RW, Gratchev A, Hakiy N, Politz O, Schledzewski K, Guillot P, Orfanos CE, Goerdt S. 2001. Alternative activation of antigen-presenting cells: concepts and clinical relevance. Hautarzt 52: 193-200), 병원균에 감염된 세포나 암세포 등도 제거하고, 면역반응에 기여하는 nitric oxide (NO) 와 tumor necrosis factor-α (TNF-α) 등의 cytokine등도 분비한다(4Seon A Yoo, Ok Kyung Kim, Da-Eun Nam, Yongjae Kim, Humyoung Baek, Woojin Jun, Jeongmin Lee. 2014. Immunomodulatory Effects of Fermented Curcuma longa L. Extracts on RAW 264.7 Cells. J Korean Soc Food Sci Nutr 43(2): 216-243).
인체의 적응면역이 작동하기 전에 질병들로부터 대응할 수 있는 선천성 면역기능을 담당하는 대식세포의 활성인자를 찾기 위한 천연물질들의 연구가 활발히 진행되고 있다. 유 등(5.A-Reum Yu, Ho-Young Park, In-Wook Choi, Yong-Kon Park, Hee-Do Hong, Hee-Don Choi. 2012. Immune Enhancing Effect of Medicinal Herb Extracts on a RAW 264.7 Macrophage Cell Line. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(11): 1521-1527)은 생약 추출물을 이용하여 대식세포의 면역증강 효과를 보고하였고, 변은 사과씨 에탄올 추출물을 이용하여 대식세포 면역조절 활성 보고하였으며(6.Myung-Woo Byun. 2013. Immunomodulatory Activities of Apple Seed Extracts on Macrophage. J Korean Soc Food Sci Nutr 42(9): 1513-1517), 유 등은 RAW264.7 대식세포주에서 발효울금의 면역조절 효과를 보고하였다. (4Seon A Yoo, Ok Kyung Kim, Da-Eun Nam, Yongjae Kim, Humyoung Baek, Woojin Jun, Jeongmin Lee. 2014. Immunomodulatory Effects of Fermented Curcuma longa L. Extracts on RAW 264.7 Cells. J Korean Soc Food Sci Nutr 43(2): 216-243)
대식세포는 탐식작용을 하는 면역세포로 인체의 거의 모든 조직에 존재하는 내재면역의 중요한 1차 방어기능을 담당한다. Macrophage는 세균이나 이물질을 탐색, 제거하는 과정에서 여러 가지 cytokine을 분비하고 항원에 대한 면역작용의 중추적인 역할을 하는 면역세포이다(12Yi Seul Seo and Kwang-Soon Shin. 2012. Immune System-Stimulating Activities of Mucilage Polysaccharides Isolated from Opuntia humifusa. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(1): 95-102). 대식세포에서 생성되는 NO는 면역계에서 종양세포나 세포내 감염된 미생물에 대한 방어작용을 하는 중요한 신호전달물질로 유 등은 감초, 건지황, 당귀, 도라지, 목천료의 생약추출물의 RAW264.7에서의 NO생성능을 평가하였는데, 이들 생약추출물들은 양성대조군인 LPS의 처리와 비슷한 수준으로 대식세포의 NO생성능을 보였었다(5.A-Reum Yu, Ho-Young Park, In-Wook Choi, Yong-Kon Park, Hee-Do Hong, Hee-Don Choi. 2012. Immune Enhancing Effect of Medicinal Herb Extracts on a RAW 264.7 Macrophage Cell Line. J Korean Soc Food Sci Nutr 41(11): 1521-1527).
황칠나무(Dendropanax morbifera)는 두릅나무과에 속하는 우리나라의 전라남도 서남부 해안 지역과 제주도에서만 자생하는 상록활엽교목으로 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다.
황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장신구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 이용되어 왔으며, 고려시대에 쓰여진 고려사절요, 중국의 계림유사, 계림지, 해동역사에 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있고, 그 이전인 백제의 특산품이었다는 것이 당나라 역사서인 책부원구, 통전에 남아있다. 성분연구에 있어서도 덴드로파녹사이드 및 폴리아세틸렌류 화합물이 발견된 일이 있으나(Journal of Ethnopharmacology 90, 403-408 (2004) 박보영 등), 황칠나무의 학명에서 일컬어지듯이 만병통치약이라는 개념하에 민간에서 오래전부터 각종 질환에 사용되어 오고 있는 현실을 감안한다면 이에 대한 과학적 규명 역시 거의 전무하다고 할 수 있다.
황칠나무(Dendropanax morbifera) 추출물을 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 발명(한국특허 등록특허 제 10-1176529호); 황칠나무 추출물을 포함하는 간질환 치료용 약학 조성물 (한국특허 등록 제 10-1194947호), 황칠 추출물을 포함하는 혈압조절용, 혈당조절용, 간기능 개선용 조성물 (한국특허 등록 제 10-1443230호), 황칠나무를 포함하는 숙취 해소제 및 그 제조방법(한국특허공개 제 10-2015-0056721호) 등이 공개된 바 있다.
가시오가피는 오갈피과(Araliaceae) 식물인 가시오가피 (Acanthopanax senticosus HARMS)의 근으로서, 성분으로는 다량의 배당체, 다우코스테롤(daucosterol), 에틸-알파-갈락토시드(ethyl-alpha-galactoside), 시린가레시놀 글루코시드(syringaresinol glucoside), 시린진(syringin) 등을 함유한 것으로 알려져 있으며, 전국에 분포하며 적응원적 작용(adaptogens)을 나타내는 것으로 알려져 있다 (정보섭외, 도해향약대사전, 영림사, pp432-435, 1998년).
이에 본 발명자들은 본 발명의 추출물을 대상으로 한 면역결핍마우스를 이용한 실험에서, 실험동물의 체중변화와 식이효율에 미치는 영향실험에서 체중과 식이 효율을 측정한 결과, NC 군에 비해 Mal 군은 유의적으로 낮았으며, DM, AS, Low, High 군에서 체중 증가량이 mal 군에 비해 유의적으로 증가하였고, 식이효율은 DM, AS, High 군에서 mal군에 비해 유의적으로 증가한 것을 확인하였으며(실험예 1-1-1); NK 세포 활성에 미치는 영향실험에서 NK 세포 활성을 측정한 결과, 황칠나무와 가시오가피 혼합물을 섭취한 그룹이 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 NK 세포 활성이 상승적으로 증가시킴을 확인 할 수 있었고 (실험예 1-2- 1); T/B 세포 증식능에 미치는 영향실험에서 영양결핍으로 감소된 T/B 증식능이 황칠나무와 가시오가피 혼합물의 섭취를 통해 유의적으로 증가를 하여 면역 조절 효과가 있는 것을 확인하였으며(실험예 1-3-1); 시토킨(Cytokine) 분비량 측정 실험에서, Th1 시토킨 ( cytokine ) (IL-2, IFN-γ) 분비능을 증가시키고 Th2 cytokine (IL-4, 6, 10, TNF -α) 분비능을 감소시키고 특히, 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 면역기능과 관련 시토킨 분비능 면에서 상승적으로 증가시켜 면역력을 상승적으로 증가시킴을 확인하여 (실험예 1-4-1) 면역기능을 활성화시켜, 면역 저하증의 치료 및 예방용 의약품, 건강기능식품, 기능성 식품, 건강보조식품, 식품 첨가제 등의 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하여, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강용 조성물을 제공한다.
상기 목적을 해결하기 위해 본 발명은 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본원에서 정의되는 생약 추출물은 바람직하게는, 황칠나무 및 가시오가피의 중량 혼합비(w/w)가 1-100 : 0.01-1 중량부 (w/w), 보다 바람직하게는 1-50 : 0.1-1 중량부 (w/w), 보다 더 바람직하게는 1-30 : 1 중량부로 배합된 배합물을 포함하는 것임을 특징으로 한다. 본원에서 정의되는 추출물은 정제수를 포함한 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매 바람직하게는 물 또는 물 및 주정의 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.
상기 추출물의 약학조성물은 총 중량에 대하여 0.1 내지 90 중량%로 사용이 가능하다.
본원에서 정의되는 면역저하증은 화학요법 및 방사선요법과 같은 항암요법에 의한 면역기능의 저하 또는 골수이식 후 면역저하로 인한 질환, 면역계손상으로 인한 에이즈 및 면역기능의 저하로 인한 암질환 등과 같은 면역저하증, 바람직하게는 화학요법 및 방사선요법과 같은 항암요법에 의한 면역기능의 저하 또는 골수이식 후 면역저하로 인한 질환, 보다 바람직하게는, 고령자에서의 세균성/바이러스성 감염, 만성 호흡기감염, 만성 요로감염, 욕창, 독감, 폐렴, 소아에 다발하는 수두, 홍역, 돌발성 발진, 수족구병, 풍진, 또는 크론병을 포함한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명의 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.
상기 단계에서 얻은 건조생약재료인 황칠나무 및 가시오가피를 각각 황칠나무 및 가시오가피의 중량 혼합비(w/w)가 1-100 : 0.01-1 중량부 (w/w), 보다 바람직하게는 1-50 : 0.1-1 중량부 (w/w), 보다 더 바람직하게는 1-30 : 1 중량부로 배합하여 배합물 시료를 수득하는 제 1단계; 상게 제 1단계의 시료를 세척하여, 상기 시료의 1 내지 20배 (w/v) 중량, 바람직하게는 1 내지 10배 (w/v) 중량의 물, 메탄올, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합용매로 50 내지 120℃, 바람직하게는 약 80-100℃에서 1시간 내지 5시간, 바람직하게는 2시간 내지 4시간 동안 열수 추출법, 냉침 추출법 또는 초음파 추출법, 바람직하게는 열수 추출법을 수행하는 제 2단계; 상기 단계에서 얻은 추출액을 여과지로 여과하여 여과물을 수득하는 제 3단계; 상기 여과물을 동결건조, 상온건조 또는 열풍건조, 바람직하게는 동결건조를 수행하여 건조상태의 복합생약 추출물을 수득하는 제 4단계 공정을 통하여 본 발명의 혼합생약 추출물을 제조가능하다.
따라서, 본 발명은 상기의 제조방법 및 상기 제조공정으로 얻어진 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품을 제공한다.
상기 제조방법으로 제조된 본 발명의 추출물을 대상으로 한 면역결핍마우스를 이용한 실험에서, 실험동물의 체중변화와 식이효율에 미치는 영향실험에서 체중과 식이 효율을 측정한 결과, NC 군에 비해 Mal 군은 유의적으로 낮았으며, DM, AS, Low, High 군에서 체중 증가량이 mal 군에 비해 유의적으로 증가하였고, 식이효율은 DM, AS, High 군에서 mal군에 비해 유의적으로 증가한 것을 확인하였으며(실험예 1-1-1); NK 세포 활성에 미치는 영향실험에서 NK 세포 활성을 측정한 결과, 황칠나무와 가시오가피 혼합물을 섭취한 그룹이 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 NK 세포 활성이 상승적으로 증가시킴을 확인 할 수 있었고 (실험예 1-2- 1); T/B 세포 증식능에 미치는 영향실험에서 영양결핍으로 감소된 T/B 증식능이 황칠나무와 가시오가피 혼합물의 섭취를 통해 유의적으로 증가를 하여 면역 조절 효과가 있는 것을 확인하였으며(실험예 1-3-1); 시토킨(Cytokine) 분비량 측정 실험에서, Th1 시토킨 ( cytokine ) (IL-2, IFN-γ) 분비능을 증가시키고 Th2 cytokine (IL-4, 6, 10, TNF -α) 분비능을 감소시키고 특히, 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 면역기능과 관련 시토킨 분비능 면에서 상승적으로 증가시켜 면역력을 상승적으로 증가시킴을 확인하여 (실험예 1-4-1) 면역기능을 활성화시켜, 면역 저하증의 치료 및 예방용 의약품, 건강기능식품, 기능성 식품, 건강보조식품, 식품 첨가제 등의 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하여, 면역 저하증의 치료 및 예방에 유용함을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 상기 제조방법 및 상기 제조방법으로 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증 약학조성물을 제공한다.
본 발명의 면역저하증의 예방 및 치료용 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 99% 중량으로 포함된다.
그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.
본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 또한 본 발명의 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 외용제제에는 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 g/kg 내지 5 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 건강보조식품을 제공한다.
따라서, 또한, 본 발명은 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 식품 또는 식품첨가제를 제공한다.
본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 면역저하증의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 캔디류의 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.
본 발명의 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
본 발명의 상기 추출물은 면역저하증의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.
본 발명의 식품은 건강보조식품, 건강기능식품, 기능성 식품 등이 될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 천연식품, 가공식품, 환자식품, 일반적인 식자재 등에 본 발명의 추출물을 첨가하는 것도 포함된다. 본 발명의 식품 조성물은, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 조성물과 함께 사용될 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 개선 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 본 발명의 추출물은, 식품 또는 음료의 제조 시에 식품 또는 음료의 원료 100 중량부에 대하여 0.1 내지 70 중량부, 바람직하게는 2 내지 50 중량부 첨가될 수 있다. 상기 추출물의 유효용량은 상기 약학적 조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품 조성물은 정제, 경질 또는 연질 캅셀제, 액제, 현탁제 등과 같은 경구투여용 제제의 형태로 이용될 수 있으며, 이들 제제는 허용 가능한 통상의 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 가용화제, 현탁화제, 보존제 또는 증량제 등을 사용하여 조제할 수 있다.
상기 추출물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제, 기타 영양제 등을 들 수 있으나 이들 종류의 식품으로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 추출물은 면역결핍마우스를 이용한 실험에서, 실험동물의 체중변화와 식이효율에 미치는 영향실험에서 체중과 식이 효율을 측정한 결과, NC 군에 비해 Mal 군은 유의적으로 낮았으며, DM, AS, Low, High 군에서 체중 증가량이 mal 군에 비해 유의적으로 증가하였고, 식이효율은 DM, AS, High 군에서 mal군에 비해 유의적으로 증가한 것을 확인하였으며(실험예 1-1-1); NK 세포 활성에 미치는 영향실험에서 NK 세포 활성을 측정한 결과, 황칠나무와 가시오가피 혼합물을 섭취한 그룹이 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 NK 세포 활성이 상승적으로 증가시킴을 확인 할 수 있었고 (실험예 1-2-1); T/B 세포 증식능에 미치는 영향실험에서 영양결핍으로 감소된 T/B 증식능이 황칠나무와 가시오가피 혼합물의 섭취를 통해 유의적으로 증가를 하여 면역 조절 효과가 있는 것을 확인하였으며(실험예 1-3-1); 시토킨(Cytokine) 분비량 측정 실험에서, Th1 시토킨(cytokine) (IL-2, IFN-γ) 분비능을 증가시키고 Th2 cytokine (IL-4, 6, 10, TNF-α) 분비능을 감소시키고 특히, 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 면역기능과 관련 시토킨 분비능 면에서 상승적으로 증가시켜 면역력을 상승적으로 증가시킴을 확인하여 (실험예 1-4-1) 면역기능을 활성화시켜, 면역 저하증의 치료 및 예방용 의약품, 건강기능식품, 기능성 식품, 건강보조식품, 식품 첨가제 등의 조성물로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하였다.
도 1은 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Yac-1 세포에 대한 NK(Natural Killer) 세포의 세포독성에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (NK 세포 (1105cell/well)는 Yac-1 세포와 공동배양(coincubated)하였으며, 4시간 배양 후에, 세포 활성을 ELISA 리더(reader)로 측정하였으며, 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 2은 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 T/B 세포 증식에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (배양 48시간 후에 증식을 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 3는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th1 cytokines (IL-2, IFN-γ)에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 4는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th2 cytokines (IL-4, IL-6) 에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 5는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th2 cytokines (IL-10, TNF-α) 에 미치는 영향을 나타낸 도이다. (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함).
도 2은 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 T/B 세포 증식에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (배양 48시간 후에 증식을 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 3는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th1 cytokines (IL-2, IFN-γ)에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 4는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th2 cytokines (IL-4, IL-6) 에 미치는 영향을 나타낸 도이며 (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함);
도 5는 시료의 C57BL/6 마우스 실험모델에서 비장에서 얻은 Th2 cytokines (IL-10, TNF-α) 에 미치는 영향을 나타낸 도이다. (시토킨은 ELISA 리더(reader)로 측정하였고 모든 데이터는 평균(mean) ± 표준오차(standard deviation; SD)로 표시하고, 개개 실험은 6회 실험하였고(n=6), NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W을 각각 의미함).
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
비교예 1. 황칠나무 추출물의 제조(비교용)
농업회사법인(주)함박재바이오팜의 제주도 농장에서 재배하고 있는 황칠나무 500g에 물을 10배량(v/w) 가하여 90℃ 이상의 온도에서 환류추출법으로 5시간동안 추출하였다. 추출액은 여과지(Whatman사)로 여과한 후, 감압농축(Eyela, Rotary Evaporator N-1000) 및 동결건조(Eyela, Freeze Dryer FDU-540)하여 황칠나무 물추출물 (이하, DM이라 함)을 수득하여 하기 실험예의 비교용 시료로 사용하였다.
비교예 2. 가시오가피 추출물의 제조(비교용)
충남 논산농장에서 재배하고 있는 가시오가피 500g에 물을 10배량(v/w) 가하여 90℃ 이상의 온도에서 환류추출법으로 5시간동안 추출하였다. 추출액은 여과지(Whatman사)로 여과한 후, 감압농축(Eyela, Rotary Evaporator N-1000) 및 동결건조(Eyela, Freeze Dryer FDU-540)하여 가시오가피 물추출물 (이하, AS이라 함)을 수득하여 하기 실험예의 비교용 시료로 사용하였다.
실시예 1. 황칠나무와 가시오가피 혼합추출물의 제조
농업회사법인(주) 함박재 바이오팜의 제주도 농장에서 재배하고 있는 황칠나무와 충남 논산농장에서 재배하고 있는 가시오가피를 7 : 3(중량비)의 비율로 혼합한 혼합물 500g에 물을 10배량(v/w) 가하여 90℃ 이상의 온도에서 환류추출법으로 5시간동안 추출하였다. 추출액은 여과지(Whatman사)로 여과한 후, 감압농축(Eyela, Rotary Evaporator N-1000) 및 동결건조(Eyela, Freeze Dryer FDU-540)하여 복합생약 물추출물 (이하, DMS이라 함)을 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
실험예
1. 7.5%
micronutrient
(비타민, 무기질)결핍으로 유도한 면역 결핍 마우스 모델에서 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물의
in vivo
면역 조절 효능 실험
1-1. 실험 동물 준비 및 처치
1-1-1. 동물처리
: 20g 내외의 4주령 암컷 C57BL/6 mice 마우스(중앙실험동물(주))를 공급받아, 명암은 12시간(light/dark cycle), 온도는 23±2℃, 상대습도는 50±5%인 조건에서 1주 동안 적응기를 거쳐 실험에 이용하였다. 적응기간 동안 AIN-93G 식이와 음용수는 자유롭게 섭취하도록 하였으며, 적응기간 중 건강하다고 판정된 동물에 대하여 체중을 측정하고 평균체중에 가까운 개체를 선택하여 무작위법을 이용하여 군 분리를 실시하였다.
1-1-2. 식이제작 및 시험군 분리
: 면역파괴 유발 동물 모델을 만들기 위하여 7.5% micronutrient(비타민, 무기질)결핍으로 면역 체계가 붕괴 된 마우스를 10주 동안 황칠나무 물추출물, 가시오가피 물추출물과 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물(100 mg/kg b.w과 300 mg/kg b.w)이 함유된 식이를 제공하면서 식이량, 체중을 매주 2회씩 측정하고 10주 후 희생시켰음. 시험군은 정상군(NC), 대조군(Mal), 황칠나무 물추출물 처리군(DM), 가시오가피 물추출물 처리군(AS), 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 저농도 처리군(Low), 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 고농도 처리군(High)으로 분리하였다(표 1).
Group | 면역결핍 | 제공식이 |
NC | - | AIN 93G |
Mal | + | 7.5% micronutrient in AIN 93G |
DM | + | DM 300 mg/kg B.W. in 7.5% micronutrient AIN 93G |
AS | + | AS 300 mg/kg B.W. in 7.5% micronutrient AIN 93G |
Low | + | DM+AS 100 mg/kg B.W. in 7.5% micronutrient AIN 93G |
High | + | DM+AS 300 mg/kg B.W. in 7.5% micronutrient AIN 93G |
1-2. 실험과정
: 상기 실시예 시료의 면역 결핍 마우스에서의 면역 조절능에 미치는 영향을 확인하기 위하여 하기에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.
1-2-1. 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물이 실험동물의 체중변화와 식이효율에 미치는 영향
: 매주 2회씩 식이량 및 체중을 측정하여, 체중변화량 및 식이효율은 하기 수학식 1 및 2을 이용하여 계산하였다.
1-2-2. 혈청 및 조직처리
: 실험동물은 12시간 절식하고 마취 후 개복하여 장기(비장, 간, 림프절)을 적출한 다음 중량을 측정하였다. 비장은 적출 즉시 Roswell Park Memorial Institute medium 1640 (RPMI-1640) (Hyclone Laboratories, Logan, Utah, USA)로 세척하여 0.45μm cell strainer (BD biosciences, San Diego, USA)을 사용하여 얻어진 세포 부유액을 Red blood cell lysing buffer (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)로 적혈구를 용혈시켰다. 분리된 비장세포를 Cytokine과 T, B 세포 증식능 측정에 이용하였고 분리한 복강대식세포는 대식세포 활성화 측정에 이용하였다.
1-2-3. 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물이 세포
증식능에
미치는 영향
: 분리한 비장세포를 96 well plate에 각 well당 1X106 cells/well로 분주하고, T 세포 Mitogen인 ConA (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)를 5 μg/mL과 B 세포 Mitogen인 LPS (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)를 5 μg/mL을 처리한 후 37℃, 5% CO2에서 배양하였다. 48시간 후 Ez-Cytox (Dugen, Seoul, Korea)용액 20 μL를 첨가하고 ELISA reader (VERSAMAXSL-20 Molecular Devices, Korea)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.
1-2-4.
시토킨
(
Cytokine
) 분비량 측정
: 분리한 비장세포를 96 well plate에 각 well당 1X106 cells/well씩 분주하였다. IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γ는 ConA를 각 5 μg/mL로 처리하고, IL-6, TNF-α는 LPS를 각 5 μg/mL로 처리하였다. 37℃, 5% CO2에서 배양하여 IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α는 24시간 후, IFN-γ는 72시간 후에 상층액을 수거하여 Duoset ELISA kit (R&D system, USA)를 이용하여 ELISA reader로 650nm에서 흡광도를 측정하였다.
1-3. 실험 결과
1-3-1. 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물이 실험동물의 체중변화와
식이효율에
미치는 영향
상기 실험기간 10주 동안 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물(황칠나무:가시오가피 7:3)이 영양결핍으로 인한 면역 불균형 모델 실험동물의 체중 변화와 식이효율에 미치는 영향을 실험한 결과는 표 2에 나타내었다.
Group1 ) | Weight gain2 ) (g) | Food consumption3 ) (g) | FER4) |
NC | 2.48±0.79a | 1.83±0.19ns5) | 3.86±1.27a |
Mal | -1.25±2.3c | 1.73±0.39 | -3.96±3.11c |
DM | -0.05±0.49b | 1.53±0.27 | -0.09±0.92b |
AS | -0.28±2.04b | 1.55±0.3 | -0.52±3.77b |
Low | -0.75±0.08b | 1.48±0.18 | -1.45±1.55bc |
High | 1.47±0.32a | 1.61±0.19 | 2.61±0.57a |
Values are presented as means ± SD. Different letters show a significantly difference at p<0.05 as determined by Duncan’s multiple range test. 1)NC : Normal control, Mal : Malnutrition, DM : Dendropanax Morbifera L. 300 mg/kg B.W., AS : Acantho Panax senticosus 300 mg/kg B.W., Low : DM+AS 100 mg/kg B.W., High : DM+AS 300 mg/kg B.W. 2)Weight gain (g/10weeks) = final body weight (g) initial body weight (g) 3)Food consumption (g/day) = food consumption (g/day) 4)FER (Food efficiency rate) = {weight (g) / food intake (g) } * 100 5)ns : no significant difference |
상기한 체중과 식이 효율을 측정한 결과, NC 군에 비해 Mal 군은 유의적으로 낮았으며, DM, AS, Low, High 군에서 체중 증가량이 mal 군에 비해 유의적으로 증가하였고, 식이효율은 DM, AS, High 군에서 mal군에 비해 유의적으로 증가한 것을 확인하였다.
1-3-2. 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물이 실험동물의
NK
세포 활성에 미치는 영향
상기한 실험기간 10주 동안 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물(황칠나무:가시오가피 7:3)이 영양결핍으로 인한 면역 불균형 모델 실험동물의 NK 세포 활성에 미치는 영향을 실험한 결과는 도 1에 나타냈다.
NK 세포 활성을 측정한 결과, NC 군에 비해 Mal 군에서 61.47% 감소하였으며, 시료를 섭취한 그룹(DM, AS, Low, High)의 NK 세포 활성을 측정한 결과, Mal 군에 비해 각각 187.52%, 192.16%, 218.45%, 233.69% 유의적으로 증가하였으며, 특히, 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물을 섭취한 그룹이 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 NK 세포 활성이 상승적으로 증가시킴(황칠나무 물추출물 처리군(DM): 187.52%, 가시오가피 물추출물 처리군(AS): 192.16%, 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 저농도 처리군(Low): 218.45%, 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 고농도 처리군(High): 233 .69%)을 확인 할 수 있으므로 면역 증강에 효과가 있음을 확인하였다.
1-3-3. 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물이 실험동물의 T/B 세포
증식능에
미치는 영향
상기한 실험기간 10주 동안 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 (황칠나무:가시오가피 7:3)이 영양결핍으로 인한 면역 불균형 모델 실험동물의 T/B 세포 증식능에 미치는 영향을 실험한 결과는 도 2에 나타내었다.
세포 증식능을 측정한 결과, T 세포 증식능은 NC 군에 비해 Mal 군에서 32.93% 유의적으로 감소하였고, B 세포 증식능은 NC 군에 비해 Mal 군에서 30.26% 유의적으로 감소하였으며, 시료 섭취에 따른 T 세포 증식능을 측정한 결과, Mal 군에 비해 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 각각 107.16%, 105%, 116.13%, 121.83.% 증가하였고, 특히, 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물을 섭취한 군에서 Mal 군에 비해 유의적으로 T 세포의 증식능이 증가한 것을 확인하였으며, 시료 섭취에 따른 B 세포 증식능을 측정한 결과, Mal 군에 비해 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 각각 104.30%, 104.09%, 131.03%, 131.03% 증가하였으며, 특히 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물을 섭취한 군에서 Mal군에 비해 유의적으로 B 세포의 증식능이 증가하고 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 B 세포의 증식능이 상승적으로 증가됨을 확인한 것을 확인하였다.
따라서, 영양결핍으로 감소된 T/B 증식능이 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물의 섭취를 통해 유의적으로 증가를 하여 면역 조절 효과가 있는 것을 확인하였다.
1-3-4.
시토킨
(
Cytokine
) 분비량 측정
상기한 실험기간 10주 동안 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 (황칠나무:가시오가피 7:3)이 영양결핍으로 인한 면역 불균형 모델 실험동물의 Th1 시토킨(cytokine) (IL-2, IFN-γ) 분비능에 미치는 영향을 실험한 결과는 도 3에 나타내었다.
IL-2 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 6.56±3.85 pg/mL로 NC 군에 비해 유의적으로 감소하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 각각 117.67±13.33, 118.78±7.70, 154.33±3.33, 238.50±29.17 pg/mL로 Mal군에 비해 유의적으로 증가하였으며,
- IFN-γ 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 297.22±9.62 pg/mL로 NC 군 (1458.33±83.33 pg/mL)에 비해 유의적으로 감소하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 IFN-γ 분비능은 각각 769.44±38.49, 908.33±83.33, 830.56±19.25, 730.56±50.92 pg/mL로 Mal군에 비해 각각 258.88%, 305.61%, 279.44%, 245.79% 증가하여 황칠나무, 가시오가피를 각각 단독으로 섭취한 비교용 그룹보다 Th1 시토킨 분비 농도가 상승적으로 증가됨을 확인한 것을 확인하였다.
상기 실험기간 10주 동안 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 (황칠나무:가시오가피 7:3)이 영양결핍으로 인한 면역 불균형 모델 실험동물의 Th2 cytokine (IL-4, 6, 10, TNF-α) 분비능에 미치는 영향을 실험한 결과는 도 4 내지 도 5에 나타내었다.
먼저, IL-4 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 286.00±8.66 pg/mL로 NC 군에 비해 유의적으로 증가하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 각각 252.67±2.89, 269.33±2.89, 259.33±2.89, 249.33±2.89 pg/mL로 Mal군에 비해 유의적으로 감소하였고,
IL-6 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 393.50±25.00 pg/mL로 NC 군 (35.17±2.89 pg/mL)에 비해 유의적으로 증가하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 IL-6 분비능은 각각 350.17±16.07, 346.00±12.50, 264.75±23.75, 233.50±15.00 pg/mL로 Mal군에 비해 각각 11.01%, 12.07%, 32.72%, 40.66% 유의적으로 감소하였으며,
IL-10 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 568.00±52.92 pg/mL로 NC 군 (354.67±23.09 pg/mL)에 비해 유의적으로 증가하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 IL-10 분비능은 각각 434.67±23.09, 448.00±40.00, 381.33±30.55, 654.67±23.09 pg/mL로 Mal군에 비해 각각 23.47%, 21.13%, 32.86%, 37.56% 유의적으로 감소하였으며, 특히 황칠나무 및 가시오가피 혼합추출물 섭취군은 NC 군과 유의적인 차이가 나타나지 않았다.
TNF-α 분비능을 측정한 결과, Mal 군에서 440.56±25.46 pg/mL로 NC 군 (129.44±19.25 pg/mL)에 비해 유의적으로 증가하였고, 시료 섭취(DM, AS, Low, High)군에서 TNF-α 분비능은 각각 326.67±8.33, 335.00±16.67, 318.33±16.67, 189.17±20.83 pg/mL로 Mal군에 비해 각각 25.85%, 23.96%, 27.74%, 57.06% 유의적으로 감소하였음을 확인하였다.
통계처리
모든 실험은 3번 이상 반복하여 평균값과 오차를 구하여 나타내었고, 통계처리는 SPSS(Statistical Package for Social Science, version 20.0. SPSS Inc., Chicago, Il, USA) 통계프로그램을 이용하여 one way ANOVA test로 분석하였으며, 실험군 간의 유의성은 Duncan’s multiple range test로 P<0.05 수준에서 비교하였다.
본 발명의 추출물들을 포함하는 조성물의 제제 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예
1.
산제의
제조
DMS ---------------------------------------------- 20 ㎎
유당 -------------------------------------------- 100 ㎎
탈크 --------------------------------------------- 10 ㎎
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.
제제예
2. 정제의 제조
DMS ---------------------------------------------- 10 ㎎
옥수수전분 -------------------------------------- 100 ㎎
유당 -------------------------------------------- 100 ㎎
스테아린산 마그네슘 ------------------------------- 2 ㎎
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.
제제예
3. 캅셀제의 제조
DMS --------------------------------------------- 10 ㎎
결정성 셀룰로오스 --------------------------------- 3 ㎎
락토오스 --------------------------------------- 14.8 ㎎
마그네슘 스테아레이트 --------------------------- 0.2 ㎎
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.
제제예
4. 주사제의 제조
DMS --------------------------------------------- 10 ㎎
만니톨 ------------------------------------------ 180 ㎎
주사용 멸균 증류수 ----------------------------- 2974 ㎎
Na2HPO412H2O -------------------------------------- 26 ㎎
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.
제제예
5.
액제의
제조
DMS --------------------------------------------- 20 ㎎
이성화당 ------------------------------------------ 10 g
만니톨 --------------------------------------------- 5 g
정제수 -------------------------------------------- 적량
통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.
제제예
6.
건강 식품의
제조
DMS -------------------------------------------- 1000 ㎎
비타민 혼합물 ------------------------------------- 적량
비타민 A 아세테이트 ------------------------------ 70 ㎍
비타민 E ---------------------------------------- 1.0 ㎎
비타민 B1 --------------------------------------- 0.13 ㎎
비타민 B2 --------------------------------------- 0.15 ㎎
비타민 B6 ---------------------------------------- 0.5 ㎎
비타민 B12 --------------------------------------- 0.2 ㎍
비타민 C ----------------------------------------- 10 ㎎
비오틴 ------------------------------------------- 10 ㎍
니코틴산아미드 ---------------------------------- 1.7 ㎎
엽산 --------------------------------------------- 50 ㎍
판토텐산 칼슘 ----------------------------------- 0.5 ㎎
무기질 혼합물 ------------------------------------- 적량
황산제1철 -------------------------------------- 1.75 ㎎
산화아연 --------------------------------------- 0.82 ㎎
탄산마그네슘 ----------------------------------- 25.3 ㎎
제1인산칼륨 -------------------------------------- 15 ㎎
제2인산칼슘 -------------------------------------- 55 ㎎
구연산칼륨 --------------------------------------- 90 ㎎
탄산칼슘 ---------------------------------------- 100 ㎎
염화마그네슘 ----------------------------------- 24.8 ㎎
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
제제예
7. 건강 음료의 제조
DMS --------------------------==----------------- 100 ㎎
비타민 C ------------------------------------------- 15 g
비타민 E(분말) ------------------------------------ 100 g
젖산철 ------------------------------------------ 19.75 g
산화아연 ------------------------------------------ 3.5 g
니코틴산아미드 ------------------------------------ 3.5 g
비타민 A ------------------------------------------ 0.2 g
비타민 B1 ----------------------------------------- 0.25 g
비타민 B2 ------------------------------------------ 0.3 g
물 -------------------------------------------------- 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예
8.
씨리얼의
제조
DMS ---------------------------------------------- 7.51 g
쌀 ---------------------------------------------- 40.49 g
현미 -------------------------------------------- 24.29 g
수수 --------------------------------------------- 2.02 g
보리 --------------------------------------------- 2.02 g
찹쌀 --------------------------------------------- 2.02 g
소금 --------------------------------------------- 0.49 g
깨 ----------------------------------------------- 0.16 g
설탕 -------------------------------------------- 17.75 g
해바라기유 --------------------------------------- 1.21 g
물 ------------------------------------------------- 정량
통상의 씨리얼 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 압출성형, 1차건조, 숙성, 파칭, 시럽코팅, 2차건조 과정, 포장한 다음 본 발명의 씨리얼 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
제제예
9.
초코
크런치의
제조
DMS ---------------------------------------------------- 5.00 g
쌀 ---------------------------------------------------- 21.50 g
정백당 ------------------------------------------------ 23.02 g
혼합전지분유 ------------------------------------------ 27.78 g
코코아버터 -------------------------------------------- 15.35 g
식물성경화유 ------------------------------------------ 13.02 g
레시틴 ------------------------------------------------- 0.15 g
폴리글리세린축합리시놀레인산에스테르 ------------------- 0.15 g
바닐린 ------------------------------------------------- 0.03 g
제제예 10. 과자류의 제조
DMS ----------------------------------------------------- 5.00 g
전분 ---------------------------------------------------- 83.00 g
쌀가루 ------------------------------------------------- 10.00 g
천일염 --------------------------------------------------- 0.5 g
유자시즈닝 ----------------------------------------------- 1.5 g
Claims (8)
- 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 치료용 약학 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 황칠나무 및 가시오가피의 중량 혼합비(w/w)가 1-100 : 0.01-1 중량부 (w/w)임을 특징으로 하는 약학조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, 주정, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매임을 특징으로 하는 약학조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 면역저하증은 화학요법 및 방사선요법과 같은 항암요법에 의한 면역기능의 저하 또는 골수이식 후 면역저하로 인한 질환, 면역계손상으로 인한 에이즈 및 면역기능의 저하로 인한 암질환 등과 같은 면역저하증임을 특징으로 하는 약학조성물.
- 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 건강기능식품.
- 제 5항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태인 건강기능식품.
- 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 건강보조식품.
- 황칠나무 및 가시오가피로 구성된 복합생약 추출물을 함유한 면역증강 또는 면역저하증의 예방 및 개선용 식품 또는 식품첨가제.
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KR102009275B1 (ko) | 2018-09-14 | 2019-10-21 | 농업회사법인 주식회사 도솔바이오팜 | 클로로제노일클로로제닉산 및 캠퍼롤 7-글리코사이드를 함유하는 항산화성 버섯 및 이의 제조방법 |
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2016
- 2016-05-16 KR KR1020160059587A patent/KR101862282B1/ko active IP Right Grant
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KR101862282B1 (ko) | 2018-05-31 |
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