KR101949557B1 - 땅두릅 추출물을 포함하는 면역증강용조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물에 관한 것이다. 상기 땅두릅 추출물은 고용량에서도 세포독성(toxicity)을 나타내지 않으면서도, 쥐의 골수유래대식세포를 이용하여 세포독성 및 사이토카인 생성유도를 측정하고, 쥐에 경구투여한 후 리스테리아 균을 감염시킨 결과, 면역력 증강효과가 매우 우수함을 확인하였으므로, 최근 항생제 대체제로 각광을 받고 있는 면역증강용 조성물로 동물 및 사람에 활용될 수 있어, 그 산업적 효과가 우수하다 할 것이다.

Description

땅두릅 추출물을 포함하는 면역증강용조성물{COMPOSITION FOR IMMUNE ENHANCING ACTIVITY CONTAININGEXTRACT OF ARALIA CORDATA}

본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물, 구체적으로 면역증강용 식품 조성물 또는 면역증강용 사료 조성물에 관한 것이다.

면역계는 자연저항, 비특이성 면역체계 및 특이성 면역체계로 구분할 수 있다. 자연저항(1차 방어선)이란 미생물을 위시한 모든 침입자들을 그들의 종류에 관계없이 막아내는 해부생리학적 요소들을 말하며, 비특이적 면역(2차 방어선)은 자연저항을 돌파하여 체내로 들어온 침입자들을 제거하는 식세포로 구성된 방어체계를, 그리고 특이성 면역계(3차 방어선)는 림프구들로 구성된 면역체계를 말하는데, 이중 특이성 면역계는 기억능 그리고 자기와 비자기를 구분할 수 있는 능력을 지닌 고도로 발달한 면역체계이다.

백혈구는 2차 또는 3차 방어선을 구성하여 1차 방어선을 돌파하여 체내에 들어온 이물을 담당하게 되며, 세균, 바이러스 감염 또는 염증 반응 시, 대식세포 및 림프구 활성의 조절은 의약품의 치료 효과의 결정에 있어서 중추적인 역할을 한다. 또한, 대식세포(Macrophage)는 다양한 기능을 가진 세포로 산화적 스트레스 상황에서 여러 가지 사이토카인(cytokine)과 일산화산소(NO)를 생성하여 면역체계에서 중요한 역할을 한다.

상기 대식세포는 항원을 제시하거나(antigen-presenting), 종양을 없애거나(tumoricidal) 미생물세포를 죽이는(microbicidal) 세포로서, 세포매개(cell-mediated) 또는 체액성 면역(humoral immunity)에 중심적인 역할을 하는 조절세포로, 활성화된 대식세포에서 생산되는 NO는 비특이적 숙주방어기작인 대식작용, 그리고 세균 및 암세포의 증식억제활성을 보인다. 특히, 대식세포에서 리포다당류(Lipopolysaccharide; LPS), 사이토카인, TNF-α와 같은 자극에 의해 발현되는 iNOS는 장시간 동안 다량의 NO를 생산하여, NFκB 활성을 촉진시키는 것으로 알려져 있다. 활성화된 대식세포에 의한 슈퍼옥사이드 음이온(superoxide anion, O₂ ^-), 과산화수소(hydrogen peroxide, H₂O₂)와 같은 활성산소종(reactive oxygen species; ROS) 및 일산화질소(nitric oxide, NO)의 생산은 비특이적 면역에 있어서 중요한 세포독성 및 세포활성 억제기작이다.

면역활성과 관련하여, 암환자의 경우, 방사성치료 또는 화학치료와 같은 항암 치료 시 조혈모세포들이 손상을 입게 되어 조혈세포와 면역세포들이 감소되고, 이로 인해 종종 조혈과 면역작용의 형성에 장애가 발생한다. 최근에는 이러한 암환자의 항암 치료에 의한 면역활성의 저하뿐만 아니라, 특정 질환을 가지지 않는 일반인의 경우에도 환경적인 이유나 생활습관에 의하여 면역력이 약화되는 것으로 보고되고 있다.

이러한 사정으로 인하여, 현재 전 세계적으로 면역력 증강을 통해 건강을 증진시키고자 많은 식물 추출물이 약재나 의약품 또는 건강기능성 식품으로도 사용되고 있다.

이러한 면역력을 증강시킬 수 있는 식물 추출물의 경우, 세균성 감염이나 바이러스 감염 또는 암세포에 의한 질환의 치료, 예방 또는 개선을 가능하게 하며, 이러한 효과는 항균 작용에 의한 것이라기 보다는 체내의 면역기능 개선에 의한 것이므로, 부작용 등의 문제로부터 자유로울 수 있는 장점이 있다. 일 예로, 서양주목의 수피로부터 얻어진 항암제인 탁솔(Taxol)은 기존 특정 화합물 유래 치료제에 비하여 부작용이 문제되지 않은 장점을 갖는다.

따라서, 상대적으로 안전성에 대한 문제가 발생할 가능성을 최소화 할 수 있을 것으로 기대되는 천연물 중에서 면역증강 효과를 갖는 물질을 선택하여, 면역증강에 대한 면역증강 효과는 높고 부작용은 미약한 면역증강성분의 개발이 요구되고 있다.

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본 발명의 목적은 상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서 본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 땅두릅(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물은 제공한다. 상기 면역증강용 조성물은 식품 조성물일 수 있다. 상기 식품 조성물은 기능성 식품 조성물일 수 있다. 상기 기능성 식품 조성물은 제형이 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 것일 수 있다.

상기 땅두릅 추출물은 물 및 유기용매로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상의 용매, 바람직하게는 물을 이용하여 추출한 것일 수 있고, 이러한 측면에서 상기 땅두릅 추출물은 바람직하게는 땅두릅 열수 추출물일 수 있다.

또한, 본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 동물사료 첨가제를 제공한다. 상기 땅두릅 추출물은 땅두릅 열수 추출물일 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 동물사료 첨가제를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 사료를 제공한다.

또한, 본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물을 제공한다. 상기 면역증강용 약학조성물은 의약 조성물일 수 있다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 유효성분이란 조성물, 구체적으로 의약 조성물 또는 식품조성물에 있어서 면역증강 효과를 제공하는 성분을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 예방이란 본 발명의 조성물의 투여로 면역기능저하로 인한 질환, 일 예로 감염성 질환 등의 증상을 억제시키거나 진행을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 치료란 본 발명의 조성물의 투여로 면역기능저하로 인한 질환, 일 예로 감염성 질환 등의 증상을 호전 또는 이롭게 변경시키는 모든 개선 행위를 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 개체란 본 발명의 조성물을 투여하여 면역기능저하로 인한 질환, 일 예로 감염성 질환 등의 증상이 호전될 수 있는 질환을 가진 인간, 원숭이, 개, 염소, 돼지 또는 쥐 등 모든 동물을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 투여란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 약학적으로 허용되는 이란 생리학적으로 허용되고 동물, 바람직하게는 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 면역증강이란 면역세포의 초기활성화 과정에서 비특이적으로 항원에 대해 면역반응을 촉진하는 기능 또는 면역계의 세포의 활성을 증대시킴으로써 면역을 강화하는 기능을 의미한다.

본 명세서에서 특별한 언급이 없는 한, 면역기능저하로 인한 질환은 감기를 포함한 감염성 질환, 만성피로 알러지 질환 및 암으로 이루어진 군중에서 선택된 어느 하나일 수 있다. 또한, 상기 알러지 질환의 예는 아토피, 천식, 알러지성 비염 등이 있다.

본 발명의 발명자들은 부작용이 적고 투약이 쉬운 천연물질 중 면역사이토카인의 분비 촉진을 통하여 면역활성을 강화할 수 있는 면역증강효과를 가진 소재에 대하여 연구하던 중, 여러 가지 기능성을 갖는 것으로 알려진 여러 300 여종의 식물 추출물 중에서 특히, 땅두릅(Aralia cordata)이 고용량에서도 세포독성(toxicity)을 나타내지 않으면서도, 쥐의 골수유래대식세포를 이용하여 실험한 결과 선천성면역에 관계된 염증성 사이토카인의 생성 증진 효과가 우수하고, 실험동물에서 림프구(lymphocytes) 수의 증가 및 리스테리아 감염을 유도한 동물모델의 면역 증강 효능이 우수하다는 것을 확인하여, 면역력 증강효과가 매우 우수하다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명은 땅두릅(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 조성물에 관한 것이다. 상기 면역증강용 조성물은 면역증강용 식품 조성물일 수 있으며, 상기 면역증강용 식품 조성물은 면역증강용 기능성 식품 조성물일 수 있다.

상기 땅두릅(Aralia cordata)은 독활이라고도 불리우며, 산지에서 자라는 약초과로 재배가 용이하고, 자생력이 높으며 쉽게 구할 수 있는 식물로, 오래 전부터 한의약에서 약재로 사용되어 왔다. 현재까지 알려진 약효로는 진통효과, 항산화 효과(antioxidant), 콜레스테롤 저하효과(hypocholesterolemic), 지질혈 저하효과(hypolipidemic) 등이 알려져 있으나, 면역증강 효과에 대해서는 전혀 알려져 있지 않다.

상기 땅두릅 추출물은 추출용매로 추출하거나 추출용매로 추출하여 제조한 추출물에 분획용매를 가하여 분획하여 제조할 수 있다.

상기 추출용매는 물 및 유기용매로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상일 수 있고, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올을 포함한 극성 용매 및 비극성 용매로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상이며, 상기 추출용매는 바람직하게는 물 및 탄소수 1 내지 탄소수 4의 알코올로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상이고, 더욱 바람직하게는 물일 수 있다. 상기 추출용매는 중량을 기준으로 땅두릅 중량의 1 내지 100 배 또는 5 내지 20배 사용할 수 있다.

상기 유기용매는 탄소수 1 내지 5의 알코올, 상기 알코올 희석수 에틸아세테이트 또는 아세톤 등의 극성용매와 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산 또는 디클로로메탄의 비극성 용매 도는 이들의 혼합용매 일 수 있다.

상기 추출물의 추출방법은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 식물 추출 시 통상적으로 이루어지는 추출방법, 구체적으로 용매 추출법에 의해 제조될 수 있고, 일 예로 열 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 및 증기 추출로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 방법으로 제조될 수 있으며, 이러한 추출방법을 수행하기 위하여 통상의 추출기기, 초음파 분쇄 추출기 또는 분획기를 이용하여 수행할 수 있다. 일 예로, 상기 추출용매로 추출용매로 물을 사용할 경우에는, 열수추출인 것이 바람직하고, 물의 온도는 90 내지 150℃ 또는 110 내지 140℃의 온도 조건 및 1 내지 3 kg/cm² 또는 1.5 내지 2.5 kg/cm²의 압력 조건에서 1시간 내지 12 시간 또는 2시간 내지 6시간 동안 수행하여 얻어질 수 있다.

상기 추출물은 상기 추출과정을 수행한 후, 추출된 추출액을 열풍건조 또는 동결건조 등의 건조법으로 건조하여 제조된 것일 수 있다.

상기 분획을 수행하기 위한 분획용매는 물, 부탄올, 에틸아세테이트, 클로로포름, 헥산 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 상기 분획물은 상기 추출법으로 제조한 추출물, 구체적으로 조추출액에 분획과정을 더욱 실시한 분획물일 수 있다. 상기 분획용매는 에틸아세테이트, 에테르, 클로로포름, 벤젠, 헥산, 메틸렌클로라이드 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택된 용매일 수 있다. 상기 분획과정은 구체적으로 상기 조추출액에 헥산, 플로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 순서로 가한 후에, 층 분리한 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물을 순차적으로 수득하는 방법으로 수행할 수 있다.

상기 추출물 또는 분획물은 추출 또는 분획과정을 수행한 이후, 감압 여과 과정을 수행하거나 추가로 농축 및/또는 동결건조를 수행하여 농축하거나 용매를 제거할 수 있다. 상기 수득한 추출물은 사용시까지 급속 냉동 냉장고(deep freezer)에 보관할 수 있다.

구체적으로, 상기 땅두릅 추출물은 상기 용매 추출 공정 후에 여과 공정, 농축 공정 및/또는 건조 공정을 선택적으로 또는 중복하여 추가 수행한 것일 수 있으며, 상기 여과공정은 여과지를 이용하여 수행할 수 있고, 상기 농축공정은 감압농축 등을 통하여 수행할 수 있으며, 상기 건조공정은 열풍건조 또는 냉동건조 등의 방법으로 수행할 수 있다.

상기 면역증강용 조성물은 사람의 환절기 독감 개선 또는 예방, 세균성 설사 개선 또는 예방, 세균성 감염 개선 또는 예방, 상처 후 치료 효과 강화의 응용효과를 갖는다.

이러한 측면에서, 본 발명의 조성물은 식품조성물일 수 있다.

본 발명의 식품조성물은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 식품조성물일 수 있다. 상기 식품조성물은 기능성 식품조성물, 구체적으로 면역증강 개선 또는 예방용 건강기능성식품일 수 있다.

상기 식품이란 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품으로, 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것일 수 있고, 통상적인 의미로서 건강기능성식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제 등을 모두 포함하는 의도이다.

본 발명의 식품은 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강기능성식품 등이 있다. 추가로, 본 발명에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류 등), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실채소류 음료, 발효음료류, 두유류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 건강기능성식품, 음료, 식품 첨가제 및 음료 첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.

본 발명에서 건강기능성식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체중조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미한다.

상기 건강기능성식품에는 식품학적으로 허용 가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 건강기능성식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다.

본 발명에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 건강기능음료를 포함하는 의도이다. 상기 음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 것 외에 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 식품 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 상기 식품첨가물은 식품의약품안정청에 승인된 식품첨가물공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 적합한 것을 모두 포함한다.

상기 식품첨가물공전에 수재된 품목은 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성품, 감색소, 감초추출물, 결정셀롤로오스, 고랭색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합 제제류들을 들 수 있다.

또한, 상기의 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올 등이 있다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 5 내지 12 g일 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 식품조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 땅두릅 추출물 100 중량부 당 0 내지 20,000 중량부 범위에서 선택될 수 있다.

본 발명에서 건강기능성음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.

상기 건강기능성음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 땅두릅 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로스 등 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 5 g 내지 12 g일 수 있다.

그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 이러한 성분을 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지 않지만, 본 발명의 땅두릅 추출물 100 중량부 당 0 내지 20 중량부 범위에서 선택될 수 있다.

본 발명에서 건강기능음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체중조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.

상기 건강기능음료는 지시된 비율로 필수 성분으로서 본 발명의 땅두릅 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다.

상기의 천연 탄수화물의 예는 포도당이나 과당 등과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스 등과 같은 디사카라이드, 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 폴리사카라이드 또는 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올 등일 수 있다. 상기 향미제는 타우마틴이나 레바우디오시드 A 또는 글리시르히진과 같은 스테비아 추출물과 같은 천연 향미제 또는 사카린, 아스파르탐 등과 같은 합성 향미제일 수 있다.

상기 천연 탄수화물의 첨가량은 본 발명의 식품 조성물 100 ㎖ 당 일반적으로 약 1 g 내지 20 g, 바람직하게는 5 g 내지 12 g일 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육을 추가로 함유할 수 있다.

또한, 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 식품조성물에 있어서, 상기 유효성분은 전체 식품 중량의 0.01 중량% 내지 15 중량%로 포함될 수 있으며, 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 g 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 g 내지 1 g의 비율로 포함될 수 있다.

또한, 본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역 증강용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 면역증강용 사료를 제공한다.

상기 동물사료 첨가제 즉, 동물사료 첨가제용 조성물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립형태일 수 있다.

본 발명의 동물사료 첨가제용 조성물은 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin), 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 면역 증강용 사료는 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 살아있는 미생물 제제 등과 같은 각종보조제가 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분, 건조 첨가제를 모두 혼합한 후, 액체 성분과, 가열 후에 액체가 되는 성분, 즉, 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분 이외에 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병예방제 등과 같은 물질과 함께 사용될 수 있다.

상기 동물사료 첨가제는 동물에게 단독으로, 또는 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다.

또한, 상기 동물사료 첨가제는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 주사 또는 경피로 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다. 통상적으로, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 단독 일일 투여량 또는 분할 일일 투여량을 사용할 수 있다.

상기 동물사료 첨가제는 동물사료와 별도로 투여할 경우, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 조성물의 투여 형태는 이들의 비-독성 제약상 허용 가능한 식용 담체와 조합하여 즉석 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 추출물의 투여형은 정제, 캡슐제, 산제, 토로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 연젤라틴 캡슐제, 또는 시럽제 또는 액체 현탁액제, 에멀젼제 또는 용액제의 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여 형태는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다.

또한, 본 발명의 동물사료 첨가제를 유효성분 포함하는 면역 증강용 사료는 동물의 식이 요구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분일 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩 곡분 또는 옥수수/콩 곡분 믹스로 주로 구성되어 있다.

상기 동물사료 첨가제는 침지, 분무 또는 혼합하여 상기 동물사료에 첨가하여 이용될 수 있다.

상기 동물사룔 첨가제는 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물 식이에 적용할 수 있다. 보다 상세하게, 식이는 상업상 중요한 포유류, 예를 들어 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치 동물(예, 랫트, 마우스, 햄스터 및 게르빌루스 쥐), 모피 소유 동물(예, 밍크 및 여우), 및 동물원 동물(예, 원숭이 및 꼬리 없는 원숭이), 뿐만 아니라 가축(예, 고양이 및 개)에 사용할 수 있다. 통상적으로 상업상 중요한 가금에는 닭, 터키, 오리, 거위, 꿩 및 메추라기가 포함될 수 있으며, 송어와 같은 상업적으로 사육되는 어류도 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 동물사료 첨가제를 포함한 동물사료 배합 방법은, 상기 동물사료 첨가제를 동물사료에 건조 중량 기준으로 사료 1kg당 약 1g 내지 100g의 양으로 혼입될 수 있다.

또한, 사료 혼합물을 완전히 혼합한 후, 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질이 얻어질 수 있으며, 이것을 매시로서 공급하거나, 또는 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성할 수 있다. 이 때, 저장 중에 분리되는 것을 방지하기 위해, 동물사료에 물을 첨가하고, 이어서 통상의 펠릿화, 팽창화, 또는 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다. 과잉의 물은 건조 제거될 수 있다.

특히, 상기 면역 증강용 동물사료 첨가제 또는 면역 증강용 사료는 자돈 (piglet)의 이유 후 설사, 돼지의 호흡기 질환, 소의 설사병, 닭의 호흡기 질환, 애견의 설사병 및 호흡기 질환 예방 및 치료 등등에 활용될 수 있다.

상기 면역 증강용 동물사료 첨가제 또는 면역 증강용 사료의 섭취 형태는 가축에게는 사료에 섞어줄 수 있는 분말이나 펠렛 (pellet) 형태, 또는 음수로 제공될 수 있다.

상기 땅두릅 추출물은 면역증강 효과를 가지므로, 본 발명의 또 다른 실시예에 의하면, 본 발명은 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 의약 조성물일 수 있다.

상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물은 상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 단독으로 포함하거나 상기 땅두릅 추출물에 면역증강 효과가 있는 물질을 유효성분으로 더욱 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.

상기 면역증강용 약학조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하고, 소화기관, 배설기관 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하며, 바람직하게는 포유류, 더욱 바람직하게는 인간일 수 있다.

상세하게는, 상기 땅두릅 추출물이 약제로 사용되거나, 의약 또는 약학적 용도로 사용되는 경우, 상기 땅두릅 추출물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합하거나 희석제로 희석하여 사용될 수 있다.

보다 상세하게는, 상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역용 약학조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다.

상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분 즉, 땅두릅 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 약학적으로 유효한 양이 포함될 수 있고, 구체적으로 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량%, 더욱 바람직하게는 1중량% 내지 50 중량% 포함될 수 있다. 상기 약학적으로 유효한 양이란 질환 및 이의 중증 정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여경로 및 치료기간 등에 따라 적절히 변화될 수 있다.

또한, 상기 추가성분의 함량은 상기 면역증강용 약학조성물 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 20 중량% 범위에서 추가할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용할 수 있다.

구체적으로, 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 유효성분 즉, 땅두릅 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

또한, 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

또한, 본 발명의 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 과립제, 산제, 시럽제, 액제, 현탁제, 정제, 주사제, 주정제, 카타플라스마제(cataplasma), 캅셀제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다.

더 나아가 본 발명의 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물은 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화될 수 있다.

본 발명에 따른 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물은 상기 유효성분을 기준으로 할 때, 0.0001 mg/kg 내지 1000 mg/kg으로, 보다 효과적이기 위해서는 0.01 mg/kg 내지 100 mg/kg으로 투여할 수 있다. 상기 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

또한, 본 발명의 땅두릅 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 약학조성물은, 상기 유효성분 이외에 공지의 면역증강 효과를 갖는 화합물 또는 천연물에 대한 추출물을 더욱 포함할 수 있으며, 상기 유효성분 100 중량부에 대하여 각각 5 중량부 내지 200 중량부로 포함될 수 있다.

본 발명의 면역증강 조성물의 유효성분인 땅두릅열수추출물은오래전부터 약용으로 이용되어온 땅두릅과 안전성이 보장되는 수용매를 이용하여 제조된 것으로, 실험결과 세포독성이 없을 뿐만 아니라, 면역증강 효과가 매우 우수한 것으로 확인되었다. 구체적으로, 쥐를 이용하여 실험한 결과, 면역반응과 관련된 사이토카인(cytokine)의 수준이 증가하고, 감염된 균의 수가 감소하는 것이 확인되었어, 면역증강 효과가 매우 우수한 것으로 확인되어 인간 및 동물에 널리 사용될 수 있을 것으로 판단되었으므로, 본 발명의 조성물은식품산업, 사료산업 및 의약산업을 포함한 면역증강효과가 적용될 수 있는 다양한 산업분야에서 널리 사용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른, 땅두릅 열수 추출물의 세포독성 및 증식효과를 확인한 결과를 나타낸 그래프로, HAC는 땅두릅 열수 추출물(hot water extract of Aralia cordata, HAC)을 의미하고, 상기 그래프의 가로축은 땅두릅 열수 추출물의 투여량을 의미하고, 세로축은 대조군 대비 세포 생존율을 의미한다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른,땅두릅 열수추출물 첨가에 의한 세포내 면역사이토카인 생산량을 확인한 그래프로, A는 TNF-α, B는 IL-1β, C는 IL-6 및 D는 IL-10을 나타내고, 상기 그래프의 가로축은 땅두릅 열수 추출물의 투여량을 의미하고, 세로축은 면역사이토카인 생산량을 의미한다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른,땅두릅 열수추출물 첨가에 의한 세포내 면역사이토카인의mRNA 즉, 염증반응 전 세포내 면역사이토카인의mRNA 량을 확인한 그래프로, A는 TNF-α, B는 IL-1β, C는 IL-6 및 D는 IL-10을 나타내고, 상기 그래프의 가로축은 땅두릅 열수 추출물의 투여량을 의미하고, 세로축은 면역사이토카인의mRNA 생산량을 의미한다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른,땅두릅 열수추출물 첨가에 의한 세균 감염 후 면역증강효과를 확인한 그래프로, 도 4a는 땅두릅 열수추출물 섭취 및 감염 후 쥐의 몸무게 변화를 나타낸 것으로, 도 4a의 가로축은 감염 후 경과된 시간을 의미하고, 세로축은 체중 감소 정도를 나타내며, 도 4b는 리스테리아 감염 후 간 (liver)과 비장 (spleen)에서의 세균 수를 측정한 것으로, 도 4b의 가로축은 실험군의 종류를 나타내고, 세로축은 장기 무게 당 감염 균주(리스테리아 균)의 수를 나타낸 것이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른, 땅두릅 열수추출물 첨가에 의한 면역증강효과를 확인한 그래프로, 도 5a는 간(liver)에서 면역사이토카인의 양을 측정한 것이고, 도 5b는 비장(spleen)에서 간에서 면역사이토카인의 양을 측정한 것이며, 도 5a 및 도 5b의 가로축은 실험군을 나타내고, 세로축은 면역사이토카인 생산량을 나타낸다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른,땅두릅 추출물의리스테리아균에 대한 항균활성을 평판 디스크법으로 측정한 결과를 확인한 사진으로, 사진의 첫 번째 줄과 두 번째 줄은 땅두릅 추출물 처리 결과이고, 세 번째 줄의 좌측은 양성대조군으로항생제인 Gentamicine을 처리한 결과이고, 우측은 PBS만을 처리한 결과이며, 땅두릅 추출물 처리 결과의 경우, 첫 번째 줄 좌측은 땅두릅추출물을 0.25 mg 처리한 결과이고, 첫 번째 줄 우측은 땅두릅추출물을 0.5 mg 처리한 결과이며, 두 번째 줄 좌측은 땅두릅 추출물을 1 mg 처리한 결과이고, 두 번째 줄 가운데는 땅두릅 추출물을 2 mg 처리한 결과이며, 두 번째 줄 우측은땅두릅 추출물을 4 mg 처리한 결과를 나타낸다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

모든 실험결과는 최소한 3회 이상 반복하여 평균치로 표시하였고, 각 군과의 비교는 ANOVA test를 이용하여 각각 p<0.05인 경우를 유의성 있는 것으로 판정하였다.

[ 준비예 . 땅두릅 추출물의 제조]

준비예 1. 땅두릅 추출물의 제조

땅두릅은 전라북도에서 채취한 신선한 땅두릅을 채취하여 건조한 후, 분쇄기를 이용하여 분쇄하였다. 상기 분쇄한 분쇄물 50 g을 물 1 L에 혼합한 후, 120℃의 온도조건 및 2 kg/cm²의 압력조건에서 탕제기를 이용하여 4시간 동안 추출한 후, 추출액을 여과하고, 동결건조시켰다.

상기 건조시킨 땅두릅 열수 추출물은 -20℃의 조건에서 보관하였으며, 실험에서는 상기 땅두릅 열수 추출물을 phosphate buffered saline(PBS)로 희석하여 적정한 농도를 취한 뒤 실험에 이용하였다.

[ 실험예 1. 땅두릅 추출물의 면역증강 효과 확인]

상기 땅두릅 추출물의 면역증강 효과를 확인하기 위하여, 쥐의 골수유래대식세포(bone marrow derived macrophage; BMDM)를 이용하였다.

우선, 골수유래대식세포를 분리하기 위하여, C57B/L6 마우스를 사육하였다. 구체적으로, 생후 8주령의 C57B/L6 마우스((주)샘타코, 대한민국)를 24 내지 26℃의 온도조건, 35 내지 45%의 상대습도 조건 및 12시간 명암이 반복되는 명암조건(12 h/day)의 환기시설이 갖춰진 실험동물사를 이용하여, 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 하며, 사육하였다.

상기 골수유래대식세포는 상기 사육한 실험동물을 희생시킨 후, 경골 및 대퇴골을 분리하고, 주사기(syringe)를 이용하여, flushing 방법으로 골수를 빼내었다. 상기 골수로부터 세포 분리망(cell strainer)을 이용하여 골수유래대식세포(BMDM)만 분리한 뒤, 소태아혈청액(fetal calf serum)이 포함된 DMEM 세포 배양액에 부유시켜, 배양하였다.

우선적으로, 상기 분리된 골수유래대식세포(BMDM)를 이용하여 세포독성(MTT assay)을 측정하였다.

구체적으로, 96-well plate의 각 well당 5 x 10⁴ cell 수가 되도록 주입한 후, 37.5℃ 및 5% CO₂의 조건에서 배양기를 이용하여 24시간 배양하였다. 이 후, 다양한 농도의 땅두릅 열수추출물(0 내지 500 μg/ml)을 각 well당 각각 첨가한 후, 4시간 동안 더 배양하였다. 이 후, 배양액의 상층액을 제거하고, MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 처리한 후, 2시간 더 배양하였다. 다시 상층액을 제거하고, DMSO를 처리하여, 540 nm 파장에서 흡광도 (absorbance)를 측정하였다. 상기 측정결과를 도 1에 나타내었다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 최대 500 μg/ml 땅두릅 열수추출물을 처리한 결과에도 아무런 시료를 처리하지 않은 대조군과 동일한 세포수를 나타내어, 세포독성은 나타나지 않는 것으로 확인되어, 이 후, 62.5 내지 250 μg/ml의 농도에서 처리하지 않은 대조군에 비한 면역증강효과를 확인하였다.

우선, 면역증강 효과와 관련하여, 세포 내 면역사이토카인(inflammatory cytokine) 생산량과 면역사이토카인의 mRNA 량을 측정하였다.

구체적으로, 면역사이토카인의 생산량은 효소결합 면역흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)을 이용하여 수행하였다. 상기 골수유래대식세포(BMDM)의 배양 동안, 다양한 농도의 땅두릅 열수추출물(0 내지 500 μg/ml)을 첨가하여 37.5℃ 및 5% CO₂의 조건에서 배양기를 이용하여 24시간 배양하였다. 상기 배양한 후, 각 면역사이토카인에 대한 항체와 ELISA kit (eBioscience, USA)를 이용하여, 흡광도 450 nm에서 사이토카인 생산량을 측정하였다. 상기 측정결과를 도 2에 나타내었다.

상기 도 2에 나타낸 바와 같이, 전반적으로 땅두릅 열수추출물 첨가 농도가 높아질수록 사이토카인의 생산량이 증가되는 것이 확인되었고, 구체적으로, TNF-α의 경우, 125 μg/ml 농도부터 유의적으로 사이토카인 생산량이 증가됨이 확인되었고, IL-1β와 IL-6의 경우, 500 μg/ml 농도부터 유의적으로 사이토카인 생산량이 증가됨이 확인되었으며, IL-10의 경우, 250 μg/ml 농도부터 유의적으로 사이토카인 생산량이 증가됨이 확인되었다.

또한, 면역사이토카인의 mRNA 량은 Real-time PCR을 이용하여 측정하였다.

구체적으로, 상기 골수유래대식세포(BMDM)의 배양 동안, 다양한 농도의 땅두릅 열수추출물(0 내지 500 μg/ml)을 첨가하여 37.5℃ 및 5% CO₂의 조건에서 배양기를 이용하여 4시간 배양하였다. 상기 배양한 후, 각 면역사이토카인의 mRNA함량을 Real-time PCR을 이용하여 측정하였다. 상기 측정결과를 도 3에 나타내었다.

상기 도 3에 나타낸 바와 같이, 전반적으로 땅두릅 열수추출물 첨가 농도가 높아질수록 사이토카인의 mRNA함량이 증가되는 것이 확인되었고, 구체적으로, TNF-α(125 μg/ml), IL-1β(62.5 μg/ml) 및 IL-10(62.5 μg/ml)는 농도가 증가함에 따라 유의적으로 사이토카인의 mRNA함량이 증가됨이 확인되었다. 한편, IL-6의 경우, 125 μg/ml 농도에서 사이토카인의 mRNA함량이 가장 높았으며, 상기 농도 이후로는 첨가 농도가 높아질수록 감소하는 경향을 나타내었으나, 저농도(62.5 μg/ml) 첨가 보다는 여전히 높은 수준을 나타냈었다.

상기 도 2 및 도 3의 결과로부터, 땅두릅 열수추출물의 첨가로 인하여, 세포내 면역 사이토카인 수준 및 면역 사이토카인의 mRNA 함량이 증가내어, 체내 면역력을 강화시킬 수 있는 것으로 확인되었다.

추가로, 상기 땅두릅 열수추출물의 첨가에 의한 실험동물 내에서의 항균 작용을 통해 면역증강효과를 확인하였다.

구체적으로, 땅두릅 열수추출물을 실험동물인 쥐 한 마리당 100 mg/kg으로 일주일간 섭취시키는 것을 제외하고는 상기와 동일한 조건에서 실험동물을 사육하였다. 일주일간의 섭취가 경과된 후, 상기 실험동물에 대해 1x10⁹ CFU의 리스테리아균(Listeria monocytogenes)을 경구투여로 감염시켰다. 대조군의 경우에는 땅두릅 열수추출물 외에 PBS를 대신 투여하였다.

상기 경구투여로 감염시킨 후, 감염일로부터 1일 간격으로 감염 4일이 경과될 때까지 실험동물의 체중을 측정하였으며, 그 결과를 도 4a에 나타내었다. 또한, 감염 96시간 후, 상기 실험동물인 쥐를 희생시키고, 상기 쥐의 간(liver)과 비장(spleen)을 적출하여 무게를 잰 뒤, Triton X-100이 포함된 차가운 PBS에 넣고 금속 구슬(metal beads)과 Minilys homogenizer(Bertin technologies, France)를 이용하여 균질화시켰다. 상기 균질화시킨 세포를 BHI agar에 접종한 뒤, 37℃에서 36시간 동안 배양하고, 콜로니(colony) 수를 세었으며, 그 결과를 도 4b에 나타내었다.

상기 도 4a에 나타낸 바와 같이, 땅두릅 열수추출물을 섭취시켰을 때 쥐의 몸무게를 측정한 경우에 측정 변화가 거의 없었으나, PBS를 섭취한 쥐의 경우에는 유의적이지는 않았으나, 체중이 감소한 후, 4일째부터 다시 회복하는 것으로 확인되었다. 또한, 상기 도 4b에 나타낸 바와 같이, 간과 비장에서 세균 수를 측정한 결과, 땅두릅 열수추출물을 섭취한 쥐에서 유의적으로 낮은 세균 수를 나타내어, 땅두릅 열수추출물이 면역 활성의 증가로 인해 리스테리아균을 억제할 수 있는 것으로 확인되어, 상기 땅두릅 열수추출물의 면역증강효과가 신체 내(in vivo)에서도 유의하게 작용함이 확인되었다.

추가로, 상기 리스테리아균 억제 활성이 신체 내 면역 활성 증가에 의한 것인지 항균 효과에 의한 것인지 여부를 확인하기 위하여, 땅두릅 추출물을 0.25 mg, 0.5 mg, 1 mg, 2 mg 및 4 mg를 처리하여, 리스테리아균에 대한 항균활성을 확인하였다.

구체적으로, 상기 리스테리아균에 대한 항균활성은 상기 땅두릅 추출물 특정 함량을 PBS를 이용하여 녹인 후, 상기 추출물 용액을 직경 8 mm, 두께 1.5 mm의 평판 디스크(paper disk, Advantec Filter Paper, 일본)에 흡수시킨 후, 용매를 완전히 증발시키고, 상기 용매를 증발시킨 평판 디스크를 상기 리스테리아균이 도말된 아가평판배지에 올려 놓고, 24시간 동안 배양한 후, 저해환의 크기를 확인하는 방법으로 수행하였다. 음성대조군으로는 PBS만을 사용하였고, 양성대조군으로는 항생제인 Gentamicine을 사용하였다. 상기 저해환 크기를 확인한 결과를 도 6에 나타내었다.

상기 도 6에 나타낸 바와 같이, 리스테리아균에 대한 항균활성을 측정한 결과, 항생제인 Gentamicine에 대해서는 명확한 저해환이 확인되었으나, 땅두릅 추출물의 경우 모든 함량에서 저해환이 확인되지 아니하여, 땅두릅 추출물의 리스테리아균 저해활성은 추출물 자체의 항균 활성이 아닌 면역 증강 효과에 의한 것임이 명확히 확인되었다.

추가로, 세균 감염 후 면역사이토카인(inflammatory cytokine) 생산량을 측정하여, 상기 신체 내에서의 면역증강효과를 추가적으로 확인하였다.

구체적으로, 상기 감염 후 48시간이 경과된 뒤 적출된 간과 비장에서 효소결합 면역흡착 분석법 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)으로 면역사이토카인 함량을 측정하였다. 상기 측정결과를 도 5에 나타내었다.

상기 도 5a에 나타낸 바와 같이, 땅두릅 열수 추출물을 섭취한 쥐의 간에서 대조군으로 PBS를 섭취시킨 쥐와 비교하여 높은 수준의 사이토카인 수준이 확인되었으며, 특히, IL-6, IFN-γ, TNF-α는 땅두릅 열수 추출물을 섭취한 쥐에서 유의적으로 높은 생산량을 나타났으며, 상기 도 5b에서 나타낸 바와 같이, 비장에서 분리된 세포의 경우에는 거의 모든 사이토카인에서 현저한 차이의 면역사이토카인 생산량 차이를 나타내었다.

본 발명에서는 대표적 실험동물인 쥐(mouse)를 이용하여 일정 기간 동안 땅두릅 열수추출물을 섭취시키고, 면역반응을 조사한 결과, 면역반응에 관여하는 사이토카인(cytokine)의 수준이 증가하는 것이 확인도었고, 대표적인 감염세균 중 하나인 리스테리아균(Listeria monocytogenes)을 쥐에 감염시켰을 때, 땅두릅 열수 추출물을 섭취한 쥐는 그 세균 수가 현저하게 줄어들고, 높은 면역력 수준을 보이는 것으로 확인되었다. 상기 결과로부터, 땅두릅 추출물은 체내에서 우수한 면역증강효과가 있는 것으로 확인되었다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims (8)

1. 땅두릅(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역증강용 식품 조성물.
2. 삭제
3. 제1항에 있어서,
   상기 면역증강용 식품 조성물은 기능성 식품인 것을 특징으로 하는 면역증강용 식품 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 면역증강용 식품 조성물은 제형이 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 면역증강용 식품 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 땅두릅 추출물은 물 및 유기용매로 이루어진 군 중에서 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것인 면역증강용 식품 조성물.
6. 땅두릅(Aralia cordata) 추출물을 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 동물사료 첨가제.
7. 제6항에 있어서,
   상기 땅두릅 추출물은 땅두릅 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 면역 증강용 동물사료 첨가제.
8. 제6항의 동물사료 첨가제를 유효성분으로 포함하는 면역 증강용 사료.

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