KR101033003B1

KR101033003B1 - 저실자 추출물을 함유하는 면역기능 강화용 조성물

Info

Publication number: KR101033003B1
Application number: KR1020080100511A
Authority: KR
Inventors: 신현규; 하혜경; 이호영; 정다영; 이남헌
Original assignee: 한국 한의학 연구원
Priority date: 2008-10-14
Filing date: 2008-10-14
Publication date: 2011-05-09
Also published as: KR20100041362A

Abstract

본 발명은 저실자 추출물을 함유하는 면역기능 강화용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 본 발명의 저실자 추출물은 생쥐의 비장세포 및 대식 세포의 생장을 촉진하고 NO 생성을 촉진하는 동시에, 생쥐에서 면역감작의 증진에 대해 우수한 효과를 나타내므로, 본 발명의 저실자 추출물이 면역 활성화 및 증강 효과가 있음을 확인하였으며, 본 발명의 저실자 추출물은 면역기능 강화용 조성물, 면역기능 강화용 건강식품 및 면역기능 저하로 인한 질환의 예방 및 치료제로 유용하게 이용될 수 있다.

저실자, 면역기능 강화

Description

저실자 추출물을 함유하는 면역기능 강화용 조성물{A composition comprising Broussonetiae Fructus for immunopotentiating}

본 발명은 저실자 추출물을 함유하는 면역기능 강화용 조성물, 저실자 추출물을 함유하는 면역기능 강화용 건강식품, 및 저실자 추출물을 함유하는 면역기능 저하로 인한 질환의 예방 및 치료제에 관한 것이다.

저실자(Broussonetiae Fructus)는 닥나무(Broussonetia kazinoki SIEB.) 열매로서 뽕나무과(Moraceae)의 쌍떡잎식물인 닥나무는 낙엽활엽관목으로 산언저리 양지쪽에서 볼 수 있는데, 작은 가지에 짧은 털이 밀생하지만 자라면서 없어지고 수피는 회갈색이며, 높이는 약 3 m 정도이다. 잎은 난형 혹은 장타원형으로 가장자리에 날카로운 톱니가 있으며, 벌레가 먹은 것처럼 제각각의 모양으로 찢어져 있다. 꽃은 적자색으로 5-6월에 자웅이주형태로 액출하며, 열매는 핵과로서 구형이며 9월경에 성숙한다. 닥나무는 한방에서 근피를 구피마(構皮麻), 과실을 저실자(楮實子)라 하여 어린가지 및 잎과 함께 여름과 가을철에 채취한다. 잎은 호생하고 난형 또는 난상 타원형이며 긴 점첨두이고 원저 또는 아심장저이며 길이 5-20 cm로서 끝은 날카롭고 간혹 깊이 갈라진 것도 있으며 가장자리에 날카로운 톱니가 있다. 어린 나무에는 2-3개의 결각이 지는 것도 있다. 표면은 거칠며 뒷면은 처음에 털이 있다. 엽병은 길이 1-2 cm로서 꼬부라진 털이 있으나 점차 없어진다. 닥나무의 열매로 핵과는 편구형(偏球形)이며 취합과(聚合果)는 구형이고 9월에 익는다. 외과피는 과경과 더불어 굵어지며 육질로 되어 적색으로 익으므로 딸기와 비슷하고 내과피에 입상의 돌기가 있다. 과실을 저실자(楮實子)라 한다(국가생물종지식정보시스템, http://www.nature.go.kr/plant/plantGuide/). 저실자는 강장, 익기(양기 회복), 자양강장, 명목(明目), 보신청간, 서경임파선염, 음위, 복만, 이뇨, 익기부족, 류머티즘에 의한 비통, 수종, 허노골증, 타박상, 피부염에 효과적이라고 알려져있다.

면역 활성화를 검증하는 대표적인 방법으로 대식세포 증식 효과(Friedl R, Moeslinger T, Kopp B, and Spiecke- rmann PG. Stimulation of nitric oxide synthesis by the aqueous extract of Panax ginsena root in Raw 264.7 cells. British Journal of pharma- cology, 2001;134:1663-1670.)와 비장세포의 증식 효과를 선택하였다. NO의 생성 촉진 효과는 대식세포 활성화의 지표로 대식세포에서 생성되는 NO는 침입한 병원체를 없애고 기본적인 숙주 방어체계를 작동시키는 역할을 한다(Farrell AJ, Blake DR. Nitric oxide. Annals of the Rheumatic Dieases. 1996;55:7-20.). 특히 Th 세포의 분화단계 중 ThO 상태에서 Thl과 Th2로 나누어질 때, Thl로의 분화를 돕는 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 백혈구의 활성 중 암세포, 기생충 또는 박테리아를 살해하는 세포독성 활성은 NO를 유리시킴으로써 나타나는 것으로 보고되고 있다(Nathan C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. FASEB Journal. 1992;6: 3051-3064.). 또한 기관지 염증에 NO가 T-cell과 내피세포간의 immunomodulating을 하며 (Bingisser RM, Holt PG Immunomodulating mechanism in the lower respiratory tract; nitric oxide mediated intraction between alveolar macrophage, epithelial cell, and T-cell, SWISS Medical Weekly. 2001;131;171-179.) 강력한 혈소판 응집 억제작용이 있다는 것이 알려져 있다.

이에 본 발명자들은 저실자 추출물이 비장 세포 및 대식 세포의 증식을 촉진하며, NO의 생성을 유발하며, 생쥐에서 면역감작의 증진에 대해 우수한 효과를 나타내므로 저실자 추출물이 면역 활성화 및 증강 효과가 있음을 확인하므로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 강화용 조성물, 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 강화용 건강식품 및 이를 유효성분으로 하는 면역기능 저하로 기인한 질환의 예방 및 치료제를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 강화용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 강화용 건강식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 저하로 기인하는 질환용 예방 및 치료제를 제공한다.

아울러, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 저실자 추출물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 면역기능 저하로 인한 질환의 예방 및 치료 방법을 제공한다.

본 발명의 저실자 추출물은 생쥐의 비장세포 및 대식 세포의 생장을 증가시키고, NO의 생성을 증가시키고, 생쥐에서 면역감작의 증진에 대해 우수한 효과를 나타내므로 면역기능의 강화에 효과적이므로, 면역기능 강화용 조성물, 면역기능 강화용 건강식품 및 면역기능 저하로 기인하는 질환의 예방 및 치료제로 이용하는데 유용하다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 물, 저급 알코올 또는 이들의 혼합물로 추출된 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 강화용 조성물을 제공한다.

상기 저급 알코올은 C₁ 내지 C₄ 저급 알코올인 것이 바람직하다. 상기 저실자에 시료 중량의 약 5 내지 20 배, 바람직하게는 약 10배의 물, 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 추출용매로 이용하는 것이 바람직하며, 상기 저급 알코올은 메탄올 또는 에탄올인 것이 바람직하며, 상기 물과 저급 알코올의 혼합물은 10 ~ 90% 메탄올 또는 에탄올 혼합물인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 실온에서 약 1 내지 24시간, 바람직하게는 4 내지 15시간 동안, 가장 바람직하게는 1 ~ 2시간 동안 추출하는 것이다. 추출 방법으로는 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 및 증기 추출로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것이 바람직하며, 추출 후 동결건조를 수행하므로써 본 발명의 저실자 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명자들은 상기와 같이 추출된 저실자 추출물이 생쥐의 비장 세포, 대식 세포의 생장에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, 비장세포의 증식을 유발하며(표 2 참조), 대식 세포에서도 탁월한 증식 효과를 보이며, 양성 대조군에 비해서도 우월하게 효율적임을 확인하였다(도 1 내지 3 참조).

이후 본 발명자들은 저실자 추출물이 NO 생성에 미치는 영향을 조사하였다. 그 결과, NO 생성 또한 효과적으로 유발하여 면역 증강에 효과적임을 확인하였다(도 4 참조). 아울러 생쥐를 대상으로 하는 면역 감작 증진 효과 또한 뛰어남을 알 수 있었다(도 5 참조).

그러므로 본 발명의 저실자 추출물은 면역기능 강화용 조성물에 효율적으로 이용될 수 있다.

본 발명의 면역기능 강화용 조성물은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함 되며, 이러한 고형제제는 상기 생약 추출액에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 액제, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제, 주사제제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

저실자 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 유제품, 음료, 껌, 차, 비타민 단일제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

또한, 면역기능 강화를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 저실자 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 저실자 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 저실자 추출물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적 으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 저실자 100 중량부 당 0.1 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 저실자 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역기능 저하로 인한 질환용 예방 및 치료제를 제공한다.

상기 면역기능 저하로 기인되는 질환으로는 감기 등의 감염성 질환 및 염증성 질환, 아토피 등의 알러지 질환, 만성피로, 및 암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에 알려진 면역기능 저하로 기인되는 질환은 모두 본 발명에 포함된다.

본 발명의 저실자 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 저실자 추출물은 1일 0.0001 내지 500 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 500 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 방법에 있어서, 본 발명의 저실자 추출물은 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 저실자( Broussonetiae Fructus ) 추출물 제조

<1-1> 저실자 추출물의 제조

저실자(닥나무 열매, 중국산)를 약재상(백제당, 대전)에서 구입하여 사용하였다. 약재의 10배(w/v)에 해당하는 추출용매를 사용하였으며, 추출방법으로는 열수 추출법, 70% 에탄올을 용매로 하여 초음파 추출법 및 환류 추출 방법을 이용하여 3가지 추출액을 수득하였다. 각 추출액을 감압 농축한 후 동결건조하여 추출물을 제조하였다. 각 추출법에 다른 수율은 표 1과 같다.

나무 열매 추출법에 따른 추출물의 수율

기호	추출용매	방법	수율 (%)
W	탈이온 증류수	열수추출, 가열시간 90분	4.09
ES	70% 에탄올	초음파추출, 초음파처리 90분	2.80
ER	70% 에탄올	환류추출, 가열 및 환류장치 90분	2.80

<실험예 1> 생쥐 비장 세포의 세포증식 효과 조사

7주령의 수컷 C57BL/6 마우스(대한바이오링크, 충북 음성)를 경추탈골 후 비장을 적출하였다. 적출한 비장을 HBSS(Hank's Balanced Salts Modified. Gbico BRL.)로 세척하고 세포 분리 후 원심분리하여 RBC 세포용해 버퍼(lysing buffer, Sigma)로 적혈구를 제거한 후 10% FBS(fetal bovine serum, Gibco BRL.)와 페니실린(penicillin, Gibco BRL.) 및 스트렙토마이신(streptomycin, Gibco BRL.)을 함유하는 RPMI 1640(Hyclone) 배지에 부유시켜 5% CO₂, 37℃에서 배양하였다. 상기 실시예 1에서 제조된 저실자 열수 추출물(W), 저실자 70% 에탄올 초음파 추출물(ES) 및 저실자 70% 에탄올 환류 추출물(ER)이 비장 세포 증식에 미치는 효과를 검색하기 위하여 96-웰 플레이트(well plate)에 분리 배양한 비장 세포를 5×10⁵ cells/well로 분주하고 저실자 추출물(열수 추출물(W), 70% 에탄올 초음파 추출물(ES) 및 70% 에탄올 환류 추출물(ER))을 2×10^-3~ 1×10⁰ mg/ml 농도로 PBS에 용해하여 첨가하였다. 세포증식 효과에 대한 비교물질로 ConA(Concanavalin A, Sigma Co., U.S.A)와 LPS(lipopolysaccharide, Sigma Co., U.S.A) 2 μg/ml로 각각 사용하였다. 48시간 배양 후 테트라졸리움 염인 CCK-8 kit(Cell Counting Kit-8, Dojindo Laboratories, Tokyo, Japan) 용액을 첨가하여 4시간 더 배양한 다음 ELISA 리더기(Ceres UV 900C, Bio-tech instrument, U.S.A.)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군 웰(Control well)의 흡광도에 대한 약물첨가 well의 흡광도의 비를 %로 계산하였고, 여러 웰(well)의 평균값을 사용하였다. 계산식은 다음과 같다.

그 결과, 저실자 추출물을 생쥐에서 분리한 비상세포에 건조약재 해당 농도로 2.5 mg/ml로 처리하였을 때 비장세포의 증식효과가 저실자 추출물 W, ES, ER에서 각각 대조군의 1.2배, 3.0배, 2.0배로 증가되었다. 이것은 양성대조군으로 사용한 LPS와 ConA를 2 μg/ml 처리한 경우 대조군의 150 ± 2.70, 198.22 ± 0.93%로 증가한 것으로 나타났으므로 저실자 추출물은 추출법에 따라 약간의 차이가 있으나 모두 면역 증강에 효과적임을 알 수 있다(표 2).

생쥐 비장세포에서 저실자 추출물 처리에 따른 비장세포 증식효과

Ctrl (%)	W	ES	ER
100 ± 0.95	124.74 ± 4.34	305.20 ± 22.85	195.96 ± 12.87

<실험예 2> 생쥐 대식 세포주의 세포 증식 및 NO(nitric oxide) 생성 효과 조사

<2-1> 생쥐 대식 세포주의 세포 증식 효과 조사

쥐 대식 세포주(Murin macrophage cell line)인 Raw 264.7 세포주를 96-웰 플레이트에 5 × 10³ cells/well로 분주하고 저실자 추출물(열수 추출물(W), 70% 에탄올 초음파 추출물(ES) 및 70% 에탄올 환류 추출물(ER))을 1×10^-3～1×10⁰ mg/ml 농도로 처리하였다. 비교물질로는 ConA(Sigma Co., U.S.A)와 LPS(Sigma Co., U.S.A) 2 μg/ml로 각각 사용하였다. 48시간 배양 후 테트라졸리움 염인 CCK-8 kit(Cell Counting Kit-8, Dojindo Laboratories, Tokyo, Japan) 용액을 첨가하여 4시간 더 배양한 다음 ELISA 리더기(Ceres UV 900C, Bio-tech instrument, U.S.A.)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군 웰(Control well)의 흡광도에 대한 약물첨가 well의 흡광도의 비를 %로 계산하였고, 여러 웰(well)의 평균값을 사용하였다. 계산식은 다음과 같다.

그 결과, 저실자 열수추출물(W), 70% 에탄올 추출물(ES 및 ER) 모두 건조약재 해당량으로 50 μg/ml 농도에서 대조군의 185%, 265%, 276% 이상 세포증식 효과를 나타냈으며, 저실자의 에탄올 추출물(ES 및 ER)들은 농도의존적으로 세포증식을 유발하여 500 μg/ml 에서 대조군의 330% 이상으로 세포증식 효과가 우수한 것으로 나타났다(도 1~3).

<2-2> 생쥐 대식 세포주의 NO 생성 효과 조사

Raw 264.7 세포를 2.5×10⁵ cells/well로 48-웰 플레이트에 분주하여 CO₂ 배양기 내에서 24시간 배양한 후 양성 대조군으로 LPS를 농도별로 처리하였다. 약물 처리군에는 저실자 추출물(열수 추출물(W), 70% 에탄올 초음파 추출물(ES) 및 70% 에탄올 환류 추출물(ER))을 0.2, 2, 20, 200, 2000 μg/ml 로 처리하고 18시간 배양 후 상층액을 분리하고 NO 생성량을 측정하였다. NO 생성량은 Griess reagent(Promega, U.S.A)를 이용하여 반응시켰으며 535 nm에서 흡광도를 측정하였다.

저실자 추출물을 건조약재 해당량으로 50～5000 μg/ml 농도 RAW 264.7 세포에 처리하고 상등액을 수집하여 생성된 NO의 양을 검색한 결과, 모두 농도의존적으로 NO 생성량의 증가를 나타냈으며, 특히 열수 추출물(W)은 2500 μg/ml 이상의 농도에서 양성대조군으로 사용한 LPS 200 ng/ml 정도의 우수한 효과를 나타냈다(도 4). 또한 동일한 농도에서 세포독성은 나타나지 않았으므로 안전한 농도임을 알 수 있다.

<실시예 3> 저실자 추출물의 생체 내 면역 증강 효과 조사

<3-1> 면역 감작 및 약물 투여

6주령의 C57BL/6 mouse(대한방이오링크, 충북 음성)에 ovalbumin (Imject Ovalbumin, Thermo Scientific) + Aluminium(Aluminum hydroxide Gel, Sigma-Aldrich) (100 μg+200 μg/100 μl)을 복강투여 하여 감작시켰다(0일). 투여 10일 후에 다시 ovalbumin + Aluminium 을 복장투여하여 부스팅(boosting)시켰다(10일). 상기 실시예에서 제조된 저실자 추출물은 0일부터 20일간 건조약재 해당량으로 5 g/kg/day로 투여하여 추출법에 따른 효능을 비교하였다. 대조군, OVA군 및 OVA+Al군은 해당량의 증류수를 경구투여 하였다. 동물실험 시작 후 20일에 ether 마취하에 복부를 절개하여 후대정맥에서 채혈하고 비장을 적출하여 이후의 실험에 사용하였다.

<3-2> 분열유발성 효과(mitogen effect) 검색을 위한 비장세포의 증식 검색

20일간 저실자 추출물 투여 후 각 투여군 별로 적출한 비장을 HBSS (Hank's Balanced Salts Modified. Gbico BRL.)로 세척하고 세포 분리 후 원심 분리하여 RBC 세포용해 버퍼(lysing buffer, Sigma)로 적혈구를 제거한 후 10% FBS(fetal bovine serum, Gibco BRL.)와 페니실린, 스트렙토마이신을 함유하는 RPMI 1640(Hyclone) 배지에 부유시켜 5% CO₂, 37℃에서 배양하였다. 분열유발성 효과(mitogen effect)를 검색하기 위하여 96-웰 플레이트에 분리 배양한 비장 세포를 5×10⁵ cells/well로 분주하고 대조군 웰에는 PBS를, 다른 웰에는 LPS(10 μg/ml), ConA(4 μg/ml), OVA(10 μg/ml)를 처리하였다. 2일간 배양한 후 테트라졸리움 염인 CCK-8 kit로 세포 증식도를 측정하였다.

OVA+Aluminium(100 μg + 200 μg/100 μl)을 10일 간격으로 2회 감작한 C57 BL/6 마우스에 저실자 물추출물을 건조약재 해당량으로 5 g/kg/day의 용량으로 3주간 경구 후 비장을 분리하여 분열유발성 효과를 확인한 결과 대조군인 OVA 보다 저실자 투여군(W) 의 분열유발성 효과가 우수한 것으로 나타났다(도 5).

상기 결과를 통해, 본 발명의 저실자의 열수추출물, 70% 에탄올 추출물이 모두 생쥐 비장세포의 세포증식, 대식세포의 증식, 대식세포의 NO 생성 촉진, 생쥐에서 면역감작의 증진에 대해 우수한 효과를 나타냈으므로 본 발명에서는 저실자는 면역 활성화 및 면역 기능 강화에 사용될 수 있음을 제시한다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

<제제예 1> 약학적 제제의 제조

<1-1> 산제의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 2 g

유당 1 g

상기의 성분을 혼합한 후, 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

<1-2> 정제의 제조

본 발명에 따른 저실자 70% 에탄올 추출물(ES) 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

<1-3> 캡슐제의 제조

본 발명의 저실자 70% 에탄올 추출물(ER) 100 ㎎

옥수수전분 100 ㎎

유 당 100 ㎎

스테아린산 마그네슘 2 ㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

<1-4> 주사액제의 제조

본 발명에 따른 저실자 물 추출물 10 ㎍/㎖

묽은 염산 BP pH 3.5로 될 때까지

주사용 염화나트륨 BP 최대 1 ㎖

적당한 용적의 주사용 염화나트륨 BP 중에 본 발명에 따른 목이버섯 균사체 분말을 용해시키고, 생성된 용액의 pH를 묽은 염산 BP를 사용하여 pH 3.5로 조절하고, 주사용 염화나트륨 BP를 사용하여 용적을 조절하고 충분히 혼합하였다. 용액을 투명 유리로 된 5 ㎖ 타입 I 앰플 중에 충전시키고, 유리를 용해시킴으로써 공기의 상부 격자하에 봉입시키고, 120 ℃에서 15 분 이상 오토클래이브시켜 살균하여 주사액제를 제조하였다.

<제제예 2> 식품의 제조

본 발명에 따른 본 발명의 저실자 추출물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

<2-1> 밀가루 식품의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 0.1 ~ 10.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 통상의 방법으로 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

<2-2> 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 0.1 ~ 1.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 통상의 방법으로 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

<2-3> 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 통상의 방법으로 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

<2-4> 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 0.1 ~ 1.0 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 통상의 방법으로 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

<2-5> 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 저실자 물 추출물을 진공 농축기에서 감압, 농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명에 따른 목이버섯 균사체 분말을 다음의 비율로 배합하여 통상의 방법으로 제조하였다.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부),

종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부),

본 발명의 저실자 물 추출물(1 중량부),

영지(0.5 중량부),

지황(0.5 중량부)

<제제예 3> 음료의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물을 포함하는 음료를 다음과 같이 제조하였다.

<3-1> 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명에 따른 저실자 물 추출물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후, 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

<3-2> 야채쥬스의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 0.5 g을 토마토 또는 당근 등의 야채의 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 통상의 방법으로 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

<3-3> 과일쥬스의 제조

본 발명의 저실자 물 추출물 0.1 g을 사과 또는 포도 등의 과일의 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 통상의 방법으로 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

본 발명의 저실자 추출물은 면역기능의 강화에 효과적이므로, 면역기능 강화용 조성물, 면역기능 강화용 건강식품 및 면역기능 저하로 기인하는 질환인 감기 등의 감염성 질환 및 염증성 질환, 아토피 등의 알러지 질환, 만성피로 및 암 등의 예방 및 치료제 개발에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 생쥐 대식세포에서 본 발명의 저실자 열수 추출물(W) 처리에 따른 대식세포의 증식 효과를 나타내는 그래프이다.

도 2은 생쥐 대식세포에서 본 발명의 저실자 70% 에탄올 초음파 추출물(ES) 처리에 따른 대식세포의 증식 효과를 나타내는 그래프이다.

도 3은 생쥐 대식세포에서 본 발명의 저실자 70% 에탄올 환류 추출물(ER) 처리에 따른 대식세포의 증식 효과를 나타내는 그래프이다.

도 4는 생쥐 대식세포주에서 본 발명의 저실자 추출물 처리에 따른 NO 생성 유발 효과를 나타내는 그래프이다.

도 5는 OVA + Al 감작 생쥐에서 저실자 열수 추출물의 분열유발성 효과(mitogen effect)를 나타내는 그래프이다.

Claims

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에탄올 또는 에탄올 수용액을 용매로 하여 추출되는 저실자(Broussonetiae Fructus) 추출물을 유효성분으로 함유하는 면역 기능 강화용 건강식품 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 추출물은 초음파 추출 또는 환류 추출의 방법으로 추출되는 것을 특징으로 하는 면역기능 강화용 건강식품 조성물.
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