KR20160034893A - Cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, tgr5-수용체 아고니스트, fxr 아고니스트 또는 이들의 조합이고, 만성 염증의 치료용, 및 위장 암 또는 섬유증의 예방용인, cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물 - Google Patents

Cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, tgr5-수용체 아고니스트, fxr 아고니스트 또는 이들의 조합이고, 만성 염증의 치료용, 및 위장 암 또는 섬유증의 예방용인, cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물 Download PDF

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마크 데 보어
마리엘 마리 길라움 루이스 더비젠
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Abstract

본 발명은 만성 염증성 질병의 치료가 필요한 개체의 만성 염증성 질병의 치료용 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 제공하며, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다. 본 발명은, 또한 암 및/또는 섬유증의 예방용 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 제공하며, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다.

Description

CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR 아고니스트 또는 이들의 조합이고, 만성 염증의 치료용, 및 위장 암 또는 섬유증의 예방용인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물 {CD40 signalling inhibitor and a further compound, wherein the further compound is a bile acid, a bile acid derivative, an TGR5-receptor agonist, an FXR agonist or a combination thereof, for the treatment of chronic inflammation, and the prevention of gastrointestinal cancer or fibrosis}
본 발명은 의약 분야에 관한 것이다. 본 발명은 상세하게는 만성 염증을 앓거나 앓을 위험이 있는 개체를 치료하는 수단 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 암 및 섬유증의 예방 수단 및 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 CD40 수용체의 활성화를 억제하는, CD40 결합 항체와 같은, CD40 시그널링 억제제 및 담즙산 또는 담즙산 유도체에 관한 것으로서, 염증성 요소를 갖는 만성 염증성 또는 자가면역 질병의 치료용 또는 위장 암 또는 섬유증, 바람직하게 간, 신장 또는 위장 섬유증의 예방용 CD40 시그널링 억제제 및 담즙산 또는 담즙산 유도체에 관한 것이다.
상처에 대한 조직의 반응인 염증은 유체(fluid), 백혈구, 및 사이토카인과 같은 염증성 매개 물질의 축적과 함께 증가된 혈류 및 혈관 투과성에 의해 급성기에서 특징 지어 진다. 아급성/만성기(이하, 만성기라 함)에서는, 조직 손상 부위에 존재하는 병원균(들)에 대한 특정의 체액성 및 세포성 면역 반응들의 전개로 특징 지어진다. 급성 및 만성 염증성 과정들 동안, 세포성 접합 분자의 증가된 발현 및 화학유인(chemoattraction)을 통하여, 다양한 가용성 인자들이 백혈구의 보강(recruitment)에 관여한다. 많은 이러한 가용성 매개 물질은 상주 세포 (섬유아세포, 내피 세포, 조직 대식 세포, 및 비만 세포와 같은) 및 새로이 보강된 염증성 세포 (단핵구, 림프구, 호중구, 및 호산구와 같은)의 활성화를 조절하고, 이들 매개 물질의 일부는 염증성 과정의 전신 효과를 야기한다 (예를 들어 열, 저혈압, 급성기 단백질의 생성, 백혈구 증가, 악액질) (C. A. Feghali et al., 1997, Frontiers in Bioscience 2, pp12-26). 가용성 인자외에도, 또한 만성 염증의 지속 및 극렬함(severity)과 관련이 있는, CD40 시그널링 경로를 포함하는, 세포-세포 매개 시그널링 경로가 있다. 연관된 가용성 및 세포-연관된 인자들 대부분은 다면발현 효과를 나타낸다.
염증성 반응은 단백질 및 다당류와 같은 고분자, 및 외부의 것으로 인식되는 작은 화학물질뿐만 아니라 미생물 성분에 의해서도 유발될 수 있다. 염증성 반응 및 메커니즘은 감염으로부터 개체를 보호하기 위하여 의도된 것이며, 외부 물질을 제거할 수 있으나, 또한 몇몇 상황에서는 조직 손상 및 질병을 일으킬 수 있다. 어떤 조건하에서는, 심지어 자기(자가) 분자가 염증성 반응을 이끌어 낼 수 있으며, 그러한 반응들은 자가면역 반응이라 불리우고 이러한 반응들에 의해 유발된 질병들은 총괄하여 자가면역 질병이라 불리운다 (Abbas et al, Cellular and Molecular Immunology 7E).
본 발명에서는 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물이, 만성 염증성 질병의 치료 및 암 또는 섬유증의 예방에 있어서 유리한 조합이 될 수 있음이 밝혀졌다. 상기 추가 화합물은 바람직하게 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다. 본 발명은 만성 염증성 질병의 치료가 필요한 개체의 만성 염증성 질병의 치료용 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 제공하고, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다. 본 발명은 또한 암 및/또는 섬유증의 예방용 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 제공하고, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다. 바람직한 실시 형태에서, 상기 섬유증은 간 섬유증, 신장 또는 위장 섬유증이다.
담즙산 및 담즙산 유도체는 마이셀(micelles)의 생성을 용이하게 하여 식이성 지방의 처리(processing)를 촉진하는 그들의 주요한 기능에 더하여 다른 효과들의 과잉(plethora)을 매개한다. 이러한 보조 효과는 항-염증성 효과를 포함한다. 이들 및 다른 효과들은 특히, 상기 담즙산 또는 유도체가 특정 담즙산 수용체에 결합함으로써 매개되어지는 것이라 추정된다. 담즙산 수용체의 바람직한 예는 수용체 TGR5 및 FXR 이다. TGR5 는 G-단백질 커플링(G protein-coupled) 수용체이고, 또한 G 단백질-커플링 담즙산 수용체 1 (GPBAR1), G-단백질 커플링 수용체 19 (GPCR19), 담즙산의 막-형태 수용체 (M-BAR)로 알려져 있다. TGR5 는 인간에서 GPBAR1 유전자에 의해 암호화되는 단백질이다. TGR5 는 마우스에서 염색체 1C3 에 그리고 인간에서 염색체 2q35 에 위치하는 단일 엑손에 의해 암호화된다. TGR5 는 어디서나 발현되나, 이의 발현 수준은 서로 다른 조직에서 각기 다르며, 간, 장, 갈색 지방 조직, 및 비장에서는 높게 발현된다. 서로 다른 담즙산은 TGR5 및 FXR 활성화에 다르게 작용하며, 이는 이들 두 수용체들이 담즙산의 효과를 매개하는 데에 있어서 서로 다른 기능을 가지는 것을 나타낸다 (Xiaosong Chen et al (2011) Exp. Diabetes Res. Vol 2011: pp 1-5). 또한 담즙산 수용체 또는 바(BAR) (유전자 기호 NR1H4) 로 알려져 있는 파네소이드(farnesoid) X 수용체 (FXR) 는 핵 수용체 패밀리의 멤버이다. FXR 은 담즙산(콜레스테롤 이화작용의 최종 생성물)의 세포 내 수준의 주요 센서로 기능하며 , 담즙산-유도 전사 프로그램의 주요 집행자(executor)이다. 담즙산은 FXR의 리간드-결합 도메인과 직접적으로 상호작용하며, FXR의 전사활성화(transactivation) 기능을 향상시키거나 상쇄시킨다. 이의 담즙산 수용체로서의 기능에 따라, FXR 은 통상적인 생리에서 담즙산에 흔히 노출되는 조직에서 가장 많이 발현된다: 간, 장, 및 신장. FXR 및 TGR5 를 경유하는 시그널링은, BA 합성 및 장간 재순환(enterohepatic recirculation) 뿐만 아니라, 트리글리세라이드, 콜레스테롤, 글루코오스 및 에너지 항상성을 조절하면서, 다양한 대사의 경로들을 조절한다 (Fiorucci et al (2009) Trends Pharmacol Sci. Vol 30:p570-580 에서 검토됨).
담즙산은 선천 면역의 세포에 직접적인 조절 기능을 행사하는 것으로 오랫 동안 알려져 왔다. 이러한 담즙산의 예는 케노데옥시콜산 (chenodeoxycholic acid, CDCA), 1차 담즙산 및 FXR 리간드이다. CDCA 는 LPS-프라이밍된 대식 세포로부터의 IL1b, IL6 및 TNF 방출을 음성적으로 조절한다 (Calmus 1992). FXR 활성화는 NFκB 활성을 상쇄함으로써, 프로-염증성 유전자 발현을 상쇄하는 것으로 입증되었다 (Wang 2008, Vavassori 2009).
본 발명의 용도로 바람직한 TGR5 아고니스트들은 특히 히로유키 사토(Hiroyuki Sato) 등 (2008). J. Med. Chem. 51, 1831-1841 에 설명되어 있다. 사토 등은 최근 케노데옥시콜산의 23-알킬기-치환된 유도체 및 6R-에틸-23(S)-메틸케노데옥시콜산과 같은 6,23-알킬기-2치환된 케노데옥시콜산 유도체는 TGR5의 강력하고 선택적인 아고니스트라고 보고하였다. 상세하게는, 천연 담즙산의 6R-알킬기 치환은 두 수용체 모두에서 효능을 증가시키는 반면에, C23-(S) 위치에서의 메틸화는 FXR 활성화에 비하여, TGR5 활성화에 대한 현저한 선택성을 부여한다. 비스테로이드계 화합물 및 천연 물질의 라이브러리에 대한 스크리닝은 구조적으로 다양한 TGR5 아고니스트로서 6-메틸-2-옥소-4-티오펜-2-일-1,2,3,4-테트라하이드로피리미딘-5-카르복시산 벤질 에스테르 (WO2004067008) 및 올레노인산의 발굴에 이르게 하였다. 최근 다양한 담즙산 및 담즙산 유도체가 합성되어졌다. 예를 들어서, 거울상 이성질체의 케노데옥시콜산 (CDCA) 및 리토콜산(LCA). 사토 등 (2008)은 다른 다양한 TGR5 아고니스트를 개시하고 있고 이는 TGR5 아고니스트에 대한 참조로서 본원에 포함되어진다. 상기 문헌은 TGR5 선택적인 아고니스트 및 TGR5, FXR 듀오(duo) 아고니스트 모두를 개시한다. TGR5 아고니스트 및 FXR 아고니스트는 다양한 특성을 가진다. 본 발명에 있어서 사토 등 (2008)에 개시된 TGR5 아고니스트 분석에서 활성을 나타내면 해당 화합물이 TGR5 아고니스트이다. 본 발명에 있어서 사토 등 (2008)에 개시된 FXR 아고니스트 분석에서 활성을 나타내면 해당 화합물이 FXR 아고니스트이다. 사토 등 (2008)에 개시된 TGR5 및 FXR 분석들에서 활성을 나타내면 해당 화합물이 듀오 TGR5, FXR 아고니스트이다. 또한, 상기 문헌은 따라서 TGR5 및 FXR 아고니스트 시험들의 상세한 설명에 대한 참고 문헌으로서 본원에 포함된다. 바람직한 본 발명의 TGR5 아고니스트는 (Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414)에 개시되어 있다. TGR5 아고니스트는 더 바람직하게는 문헌(Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414)의 표 1, 표 2, 표 3, 도 1, 도 2 또는 도 3에 개시되어 있는 것이다. 또한 TGR5 아고니스트는 바람직하게는 본원의 표 1, 표 2, 도 2, 도 3, 도 4 또는 도 5에 개시되어 있는 것이다. 바람직한 TGR5 아고니스트는 UDCA이다 (도 5). 또한 TGR5 아고니스트는 바람직하게는 WO2008/002573; WO2008/091540; WO2010/059859, WO2010/059853 또는 WO2010/014836 에 개시되어 있는 것이다. 바람직한 FXR 아고니스트는 WO2010/059853; WO2007/095174; WO2008/002573 또는 WO2002/072598에 개시되어 있는 아고니스트이다. 바람직한 FXR 아고니스트는 참고 문헌 Modica S. Deciphering the nuclear bile acid receptor FXR paradigm. NRS 2010;8:pp 1-28 의 도 3의 아고니스트이다. 바람직한 FXR 아고니스트는 도 6의 FXR 아고니스트이다.
TGR5 아고니스트는 또한 US2012/0115832에 개시되어 있다. 상기 참고 문헌은 또한 본 명세서의 일부, 상세하게는 다양한 TGR5 아고니스트의 상세한 설명으로서 포함된다.
FXR 아고니스트는 또한 WO2005/082925 및 US2008/0182832에 개시되어 있다. 이러한 참고문헌들은 또한 본 명세서의 일부, 상세하게는 다양한 FXR 아고니스트의 상세한 설명으로서 포함된다. 바람직한 FXR 아고니스트는 WO2010/059853; WO2007/095174; 또는 WO2002/072598에 개시되어 있는 아고니스트이다.
상기 CD40 분자는 50 kDa 제I형 막 당단백질이고 B 세포, 단핵구/대식 세포, 수지상세포 (DC들) 및 활성화된 내피 세포에서 발현된다.1-6 이러한 조건들 하에서, CD40은 또한 섬유아세포, 상피세포, 각질세포 및 다른 세포에서 발견될 수 있다.7 CD40 리간드 (CD40L, CD154), 32 kDa 제II형 내재성 막 당단백질은, 활성화된 CD4+ T 세포 및 적은 수의 활성화된 CD8+ T 세포에서 일시적으로 발현된다.8, 9 추가적으로, CD40L 은 활성화 이후에, 비만 세포, 호염기구, B 세포, 호산구, DC들 및 혈소판을 포함하는 다른 다양한 세포 형태에서 발견되어 왔다.10, 11 상기 CD40 경로는 염증성 반응의 개시 및 이펙터 단계 모두에서 키 스위치(key switch)로 여겨진다.
CD40 및 CD40L의 결합 (또한, CD40 및 CD40L의 라이게이션으로 지칭됨)은 CD40 발현 세포 내부의 시그널링 캐스케이드를 개시한다. CD40에 의한 시그널링은 일반적으로 CD40 또는 CD40L에 결합하는 항체에 의하여 억제된다. 상기 CD40-CD40L 상호작용은 CD40L 또는 CD40에 대한 단일클론 항체 (Mab들)에 의하여 억제될 수 있다. 활성화된 혈소판 상에서의 CD40L 발현은, 높은 수준의 투여량의 IgG1 항-인간CD40L Mab들로 인간을 치료하는 동안 혈전색전증(thrombo-embolic) 이벤트를 야기하여, 이러한 Mab들의 개발을 종결시켰다12 , 13. 따라서, CD40 결합 항체를 통한 CD40 시그널링 억제는 인간에 있어서 더 시선을 끄는 접근법이라 보여진다. 상기 Mab 5D12 (항-인간CD40)의 억제 활성은 서로 다른 CD40-함유 세포 형태를 사용한 다양한 인 비트로 연구에서 입증되었고14 , 15 , 키메릭 5D12 (ch5D12) CD40 억제 활성은 다양한 비-인간 영장류 질병 모델을 사용한 인 비보 수준에서 확인되었다 16, 17. ch5D12 는 쥐과의 5D12의 중쇄 및 경쇄의 쥐 가변 도메인을 함유하는 분자적으로 조작된 인간 IgG4 항체이고, 면역원성에 대한 잠재성을 감소시키고, 인간에서 사용되었을 때 쥐과의 5D12 Mab의 인 비보 반감기를 증가시키도록 구성되었다.
많은 수용체와 같이, 상기 CD40 수용체는 CD40L 또는 등가물의 부재하에서는 시그널을 보내지 않는다. CD40 시그널링 억제제는 따라서 활성인자가 없을 경우에, 상기 수용체에 의한 시그널링을 억제하지 않는다. 따라서, CD40 시그널링 억제제는 상기 CD40 수용체가 다른 방식으로 활성화 되는 조건(예를 들어서, 억제제의 부재시에) 하에서 시그널링을 억제한다. CD40 시그널링을 활성화하는 생리학적인 방법은 CD40 발현 세포에 CD40L을 제공하는 것이다. 이것은 CD40L 발현 세포 또는 가용성 CD40L 을 제공하는 것으로 행하여질 수 있다. CD40 발현 세포에서 CD40 시그널링의 활성화를 50% 이상 감소시키는 화합물은 CD40 시그널링 억제제이다. 이러한 실험에서, 상기 화합물은 CD40 수용체를 활성화시키는 화합물 또는 세포를 첨가하기 전에 첨가하는 것이 바람직하다. 그러나, 항상 상기와 같이 첨가할 필요는 없다. 상기 실험에서 상기 CD40 수용체를 활성화시키는 화합물은 바람직하게는 CD40L이고, CD40L 발현 세포, 또는 바람직하게는 가용성 CD40L을 제공하는 것에 의한다. 현재 CD40 수용체에 결합한 이후에 이의 시그널링을 활성화시키는, 다양한 CD40 결합 항체는 공중이 이용가능하다. 이러한 항체는 또한 CD40 아고니스트로 지칭된다.
CD40 시그널링 억제제는 CD40 결합 분자, CD40L 결합 분자 또는 이들의 조합이 될 수 있다. 상기 CD40 또는 CD40L 결합 분자는 일반적으로 항체 또는 이의 단편 또는 유도체 또는 모방체이다. 다양한 항체 CD40 시그널링 억제제는 해당 기술 분야에서 널리 알려져 있다. 바람직한 CD40 시그널링 억제제는 바람직하게는 본원에서 이전에 개시된 실험에서, CD40 발현 세포에서 CD40 시그널링을 50% 이상 억제하는 CD40 결합 항체이다. 바람직한 실시 형태에서 상기 CD40 시그널링 억제제는 CD40 결합 CD40 억제제이다. 바람직한 실시 형태에서 상기 CD40 시그널링 억제제는, 인간CD40에 결합하여 이의 활성화를 억제하는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 상기 항체는 바람직하게는 CD40 결합 항체 5D12, ch5D12 뿐만 아니라 PG102, 및 ASKP1240 (EP1391464)으로 이루어지는 군에서 선택되는 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 나아가 항체는 바람직하게는 US2011/0243932 의 CD40 결합 항체로 이루어지는 군에서 선택되는 가변 도메인 아미노산 서열을 포함한다. 비-제한적이지만 바람직한 예들은 전술한 CD40 결합 항체 5D12, ch5D12 뿐만 아니라 PG102, US2011/0243932 및 ASKP1240이다. PG102 및 다른 CD40 시그널링 억제 CD40 결합 항체는 WO2007/129895 에 개시되어 있다. 이러한 항체는 전술한 실험에서 CD40에 결합하여 CD40 수용체 시그널링을 적어도 50% 억제하였다. 상세하게는 바람직한 CD40 시그널링 억제제는 ch5D12, PG102, HCD122 (CHIR-12.12, lucatumumab), US2011/0243932 및 ASKP1240 (EP1391464)이다. 더 바람직한 실시 형태에서, 상기 CD40 시그널링 억제제는 PG102 (가변 영역의 아미노산 서열은 도 1에 나타냄)이다. 다양한 CD40 항체는 임상 시험들에서 시험되어졌다 (루카투무밥(lucatumumab)의 임상 1상 시험, 재발되거나 난치성의 다발성 골수종을 가진 환자에 전적인(fully) 인간 항-CD40 안타고니스트 단일클론 항체를 정맥 주사로 투여함. William Bensinger, et al., British Journal of Haematology, Vol 159, Issue 1, pages 58-66, October 2012 및 재발된 만성 림프성 백혈병에 대한 항-CD40 인간화 단일클론 항체 루카투무밥 (HCD122)의 임상 1상 시험. Leuk Lymphoma. 2012 Nov; 53(11):2136-42, 2012 Jun 12).
다른 CD40 시그널링 억제제는 CD40L에 결합한다. 이러한 억제제는 일반적으로 CD40L이 CD40에 결합하는 것을 예방한다. 이러한 CD40L 결합 억제제는 바람직하게는 CD40L 결합 항체 또는 이의 단편 또는 유도체 또는 모방체이다. 바람직한 CD40 시그널링 억제제인 CD40L 결합 항체는 Vincenti (2002), Am. J. of Transplantation Vol 2, pp 898-903 및 그 안의 참고문헌에 개시되어 있는 MR-1, IDEC131 (E60400), IDEC hu5C8 (BG9588) 이다. 상기 IDEC 분자는 인간CD40L에 대한 것이고, 상기 MR-1은 마우스 CD40L에 대한 것이다.
현재, 항체와 유사한 결합 특성을 가진 많은 다른 단백질이 있다. 이러한 분자들은 나아가 항체 등가물 또는 항체 부분 또는 유도체 또는 모방체로 지칭된다. 본원의 명세서에서, 이러한 항체 등가물 및 항체 부분 및 모방체 및 유도체는 본 발명의 수단, 용도 및 방법에서 제공되므로, 상기 항체에 대한 등가물로 여겨질 수 있다. 이러한 항체 등가물들의 비-제한적인 예들은 예를 들어서, 안티칼린(anticalins), C-타입 렉틴 도메인 바인더, 아비머(avimers), 에드넥틴(Adnectins), 및 다핀(DARPins) (Designed Ankyrin Repeat Proteins) 이지만 이에 제한되지 않는, 비-항체 스캐폴드 단백질 바인더이다 (Sheridan C. Nature Biotechnology 2007, (25), 365-366. 참조).
항체 부분 또는 유도체의 비-제한적인 예는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 도메인 또는 이의 등가물을 포함한다. 이러한 단백질의 비-제한적인 예는 VHH, 나노바디, 인간 도메인 항체 (dAbs), 유니바디, 샤크 항원 반응성 단백질(Shark Antigen Reactive Proteins)(ShArps), Small Modular ImmunoPharmaceutical (SMIP™) 약물, 모노바디 및/또는 IMabs (Sheridan C. Nature Biotechnology 2007, (25), 365-366. 참조)가 있다. 바람직한 항체 부분 또는 유도체는 적어도 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인 또는 이의 등가물을 가진다. 이러한 결합 분자의 비-제한적인 예는 F(ab)-단편 및 단일 쇄 Fv 단편이다. 타겟에 특이적으로 결합할 수 있게 조작될 수 있는 IG-폴드를 가지는 많은 다른 단백질이 존재한다. 이러한 조작된 단백질은 항체의 등가물 또는 모방체로 여겨진다. 바람직한 실시 형태에서 상기 CD40 또는 CD40L 결합 분자는 항체이다. 상기 항체는 천연 항체 또는 합성의 항체일 수 있다. 바람직한 실시 형태에서 항체는 항체의 CDR1, CDR2, CDR3 영역을 포함한다. 한편, 예를 들어서 파아지 디스플레이를 통하여 선택되어질 수 있는 것과 같은 CDR 유사 영역의 인공 생성(artificial generation) 역시 본 발명에 포함될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서 상기 항체는 인간, 인간화 또는 인간-유사 항체이다. 나아가 면역계와 상호작용하지 않는 결합 분자 (이들의 특이성은 별론으로 함)가 더 바람직하다. 항체의 경우, 상기 항체가 IgG4 불변 영역, 또는 IgG4 유사 불변 영역을 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어서, IgG1 타겟에 결합한 후에 보체계를 더 이상 활성화하지 못하게 IgG1 분자의 불변 영역을 뮤테이션 시킬 수 있다.
본 발명에 사용된 항체는 조류 및 포유류 (예를 들어, 인간, 쥐과, 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니피그, 낙타, 말, 또는 닭)를 포함하는 임의의 동물 유래인 것일 수 있다. 바람직하게, 본 발명의 항체는 인간 또는 인간화 단일클론 항체이다. 본원에서 사용되는, "인간" 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체를 포함하고 인간 면역글로불린 라이브러리(인간 면역글로불린 서열에 상응하는 면역글로불린 서열의 합성 라이브러리를 포함하지만, 이에 제한되지 않음) 또는 인간 유전자 유래 항체를 발현하는 마우스로부터 분리된 항체를 포함한다. 인간에서 항체의 인 비보 치료학적 또는 진단적 용도 및 인 비트로 검출 분석을 포함하는 몇몇의 용도를 위하여, 인간 또는 키메릭 항체를 사용하는 것이 바람직하다. 전적인 인간 항체는 특히 인간 대상의 치료학적 치료에 바람직하다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열 또는 인간 면역글로불린 서열에 상동성인 합성 서열에서 유래된 항체 라이브러리를 사용하는 전술한 파아지 디스플레이 방법을 포함하여, 해당 기술 분야에서 공지된 다양한 방법으로 제조될 수 있다. 또한 미국 특허 제4,444,887호 및 제4,716,111호; 및 PCT 공개번호 제WO 98/46645호, 제WO 98/50433호, 제WO 98/24893호 및 제W098/16654호를 참조할 수 있으며, 상기 각각은 전체로서 본원의 참고문헌으로 본 명세서에 포함된다. 본 발명의 방법과 함께 사용되는 항체는 예를 들어서, 어떠한 형태의 분자가 항체에 공유 결합되는 것에 의하여 변형된 유도체를 포함한다. 추가적으로, 상기 유도체는 하나 이상 비-전형적인 아미노산을 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 실시 형태에서, 본 발명에서 사용되는 항체는 비변형된 항체와 비교하였을 때, 포유류, 바람직하게는 인간에서 증가된 반감기를 갖는다. 증가된 인 비보 반감기를 갖는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 해당 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, PCT 공개번호 제WO 97/34631호 참조). 특정의 실시 형태에서, 본 발명의 방법에서 사용되는 항체는 단일-쇄 항체이다. 단일-쇄 항체의 디자인 및 제조는 해당 기술 분야에 잘 알려져 있다. 특정의 실시 형태에서, 본 발명에서 사용되는 항체는 세포 내의 에피토프에 결합하며, 즉, 인트라바디(intrabodies)이다 . 인트라바디는 적어도 항원에 면역-특이적으로 결합하는 항체의 부분을 포함하고 바람직하게는 그것의 분비를 코딩하는 서열을 포함하지 않는다. 이러한 항체는 세포 내의 항원에 결합할 수 있다. 일 실시 형태에서, 상기 인트라바디는 단일-쇄 Fv ("sFv")를 포함한다. 추가의 실시 형태에서, 상기 인트라바디는 바람직하게는 작동가능한 분비성 서열을 암호화하지 않고 따라서 세포 내에 머무른다. 인트라바디의 생성은 통상의 기술자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어서 미국 특허 제6,004,940호; 제6,072,036호; 제5,965,371호에 개시되어 있으며, 이들은 전체로서 본원에 참고문헌으로서 본 명세서에 포함된다. 일 실시 형태에서, 인트라바디는 세포질에서 발현된다. 다른 실시 형태에서, 상기 인트라바디는 다양한 세포 내의 위치에 국소화 된다. 이러한 실시 형태에서, 특정의 국소화 서열은 뉴클레오티드내(intranucleotide) 폴리펩티드에 결합하여 인트라바디로 하여금 특정 위치로 향하게 할 수 있다. 본 발명의 방법에 사용되는 항체 또는 이의 단편은 상기 항체의 합성을 위하여 해당 기술 분야에서 알려진 임의의 방법 상세하게는, 화학적 합성 또는 바람직하게는, 재조합 발현 기술에 의하여 제조될 수 있다. 단일클론 항체는 하이브리도마, 재조합, 및 파아지 디스플레이 기술 또는 이 조합을 포함하는, 해당 기술 분야에서 공지된 다양한 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어서, 단일클론 항체는 해당 기술 분야에서 개시된 것을 포함하는 하이브리도마 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본 발명의 항체를 제조하기 위한 파아지 디스플레이 방법의 예들은 W097/13844; 및 미국 특허 제5,580,717호, 제5,821,047호, 제5,571,698호, 제5,780,225호, 및 제5,969,108호에 개시된 것들을 포함하며; 상기 각각은 전체로서 본원의 참고문헌으로 본 명세서에 포함된다. 상기 참고문헌에 개시되어 있는 바와 같이, 파아지 선택 이후에, 파아지로부터의 항체 코딩 영역은 분리되어 인간 항체, 또는 다른 관심 있는 항원 결합 단편을 포함하는 전체 항체를 생성하는데 사용될 수 있고 포유류 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모, 및 박테리아를 포함하는 원하는 숙주에서 발현될 수 있으며, 예를 들어, 하기에 개시되어 있다. PCT 공개번호 제WO 92/22324호에 개시되어 있는 것과 같은 해당 기술 분야에서 개시된 방법을 이용하여 Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합으로 제조할 수 있는 기술 역시 적용될 수 있다. 또한 치료학적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 제조하는 것이 가능하다. 인간 항체 및 인간 단일클론 항체를 제조하는 기술의 상세한 논의 및 이러한 항체를 생성하는 프로토콜은, 예를 들어, PCT 공개번호 제WO 98/24893호를 참조할 수 있다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은 전체로서 본원의 참고문헌으로 본 명세서에 포함된다. 추가적으로, 전술한 것과 유사한 기술을 사용하여, 선택된 항원에 대한 인간 항체를 제공하기 위하여, Medarex, Inc. (Princeton, NJ), Abgenix, Inc. (Freemont, CA) 및 Genpharm (San Jose, CA)와 같은 회사들을 이용할 수 있다. 항체, 이의 유도체 또는 유사체 (예를 들어, 본 발명 항체의 중쇄 또는 경쇄 또는 이의 부분 또는 본 발명의 단일 쇄 항체)를 제조하기 위해 사용되는 재조합 발현은, 상기 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터의 구축 및 적절한 숙주 세포 또는 인 비보에서의 상기 벡터의 발현을 필요로 한다. 본 발명의 항체 분자 또는 항체의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 부분 (필수적이지는 않지만, 바람직하게는 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인을 포함하는) 을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 제조하면, 상기 항체 분자의 제조를 위한 벡터는 해당 기술 분야에서 잘 알려진 기술을 사용한 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 뉴클레오티드 서열을 암호화하는 항체를 포함하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키는 것에 의해 단백질을 제조하는 방법은 본원에 개시되어 있다. 해당 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 잘 알려진 방법은 항체 코딩 서열 및 적절한 전사 및 번역 조절 시그널을 포함하는 발현 벡터를 구축하는 데에 사용될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어서, 인 비트로 재조합 DNA 기술, 합성 기술, 및 인 비보 유전적 재조합을 포함한다. 본 발명은, 따라서, 작동가능하게 프로모터에 연결된, 본 발명의 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인 또는 이의 부분, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는, 복제가능한 벡터를 제공한다. 이러한 벡터는 항체 분자의 불변 영역 (예를 들어, PCT 공개번호 제WO 86/05807호; PCT 공개번호 제WO 89/01036호; 및 미국 특허 제5,122,464호 참조) 을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있고, 상기 항체의 가변 도메인은 중쇄 전체, 경쇄 전체, 또는 중쇄 및 경쇄 전체 모두의 발현을 위한 벡터에 클로닝될 수 있다. 상기 발현 벡터는 통상의 기술에 의해 숙주 세포로 형질전환될 수 있고, 상기 형질전환된 세포는 이후에 통상의 기술에 의해 배양되어 본 발명의 항체를 생산할 수 있다. 따라서, 본 발명은, 작동가능하게 이종(heterologous) 프로모터에 연결된, 본 발명의 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이의 부분, 또는 본 발명의 단일 쇄 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포를 포함한다. 이중-쇄 항체의 발현을 위한 바람직한 실시 형태에서, 중쇄 및 경쇄 모두를 암호화하는 벡터는, 하기에 상세히 나타낸 바와 같이, 면역글로불린 분자 전체의 발현을 위한 숙주 세포에서 동시(co)-발현될 수 있다. 다양한 숙주-발현 벡터 시스템은 본원에서 정의한 항체 분자를 발현하는 데에 활용될 수 있다. 포유류 숙주 세포에서, 다양한 바이러스계 발현 시스템이 활용될 수 있다. 발현 벡터로서 아데노바이러스가 사용되는 경우, 관심있는 항체 코딩 서열은 아데노바이러스 전사/번역 조절 복합체, 예를 들어, 레이트(late) 프로모터 및 삼부(tripartite) 리더 서열에 연결될 수 있다. 상기 키메릭 유전자는 이후 인 비트로 또는 인 비보 재조합에 의해서 아데노바이러스 게놈에 삽입될 수 있다. 바이러스성 게놈의 비-필수(essential) 영역 (예를 들어, 영역 El 또는 E3)내의 삽입은 생존 가능하고 감염된 숙주 내에서 항체 분자를 발현시킬 수 있는 재조합 바이러스를 만들어 낸다. 특정의 개시 시그널 역시 삽입된 항체 코딩 서열의 효율적인 번역을 위하여 요구될 수 있다. 이러한 시그널은 ATG 개시 코돈 및 인접하는 서열을 포함한다. 나아가, 상기 개시 코돈은, 삽입된 전체 부분의 번역을 확실히 하기 위하여, 원하는 코딩 서열의 리딩 프레임과 인페이즈(in phase)여야 한다. 이러한 외인성 번역 조절 시그널 및 개시 코돈은, 천연 및 합성 모두 등의 다양한 기원에서 유래할 수 있다. 발현의 효율성은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결자, 등을 포함함으로써 증가될 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 항체 분자가 재조합 발현에 의해 제조되면, 면역글로불린 분자의 정제를 위하여 해당 기술 분야에서 잘 알려진 방법, 예를 들어서, 크로마토그래피 (예를 들어, 이온 교환, 친화성, 상세하게는 단백질 A 다음의 특정 항원에 대한 친화성, 및 사이징 컬럼 크로마토그래피), 원심분리법, 용해도 차이, 또는 단백질의 정제를 위한 기타의 표준 기술에 의해서 정제될 수 있다. 나아가, 본 발명의 항체 또는 이의 단편은, 정제를 용이하게 하기 위하여, 본원 또는 해당 기술 분야에서 알려진 이종 폴리펩티드 서열과 융합될 수 있다. 전술한 바와 같이, 본 발명의 다른 측면에 의하면, 본 발명은 상기에서 치료의 용도로 개시된 바와 같이, 항체 또는 등가물 또는 이의 유도체를 제공한다. 치료학적 치료를 위하여, 항체, 또는 이의 등가물 또는 유도체는, 인 비트로에서 제조될 수 있고, 이를 필요로 하는 대상에 적용될 수 있다. 상기 항체, 또는 이의 등가물 또는 유도체는 대상에 임의의 적절한 경로, 바람직하게는 그러한 경로에 맞추어진 약학적 조성물의 형태로 그리고 의도된 치료에 효과적인 투여량으로 투여될 수 있다. 질병의 진행 속도를 감소시키는 데에 필요하거나 질병 상태를 제거하는 데에 필요한 항체의 치료학적으로 효과적인 투여량은 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 다른 한편으로, 항체는 전술한 인 비보 항체 생성 방법론을 이용하여 대상 자체에 의하여 생산될 수 있다. 적절하게는, 이러한 인 비보 생산에 사용되기 위한 상기 벡터는 바이러스성 벡터, 바람직하게는 본원에서 언급된 특정 타겟 세포에 대한 타겟 세포 선택성을 갖는 바이러스성 벡터이다. 따라서, 본 발명의 다른 측면에 의하면, 본 발명은 전술한 바와 같이, 상기 치료학적 효과를 달성하기 위하여 대상의 치료에 사용되는 의약의 제조에서의, 항체 또는 이의 등가물 또는 유도체의 용도를 제공한다. 상기 치료는 원하는 치료학적 효과를 달성하기에 충분한 투여량으로 의약을 투여하는 것을 포함한다. 상기 치료는 항체의 반복된 투여를 포함할 수 있다. 본 발명의 또 다른 측면에 의하면, 본 발명은 전술한 바와 같은 항체 또는 이의 등가물 또는 유도체를 상기 원하는 치료학적 효과를 달성하기 위해 충분한 투여량으로 투여하는 것을 포함하는 인간의 치료 방법을 제공한다.
상기 만성 염증성 질병은 바람직하게는 염증성 요소를 갖는 자가면역 질병이다. 상기 만성 염증성 질병은 바람직하게는 간, 신장, 위장관, 심혈관계 또는 대사계의 만성 염증성 질병이다. 바람직한 간의 만성 염증성 질병은 담즙울체성 간병증 (VBDS), 원발성 담즙성 간경변 (PBC), 담즙산 설사병 (만성 설사병), 원발성 경화성 담관염 (PSC), 자가면역 간염, 간 이식 연관된 이식편대숙주 질병, 문맥압 항진증, 비-알코올성 지방간염 (NASH) 또는 비-알코올성 지방간 질병 (NAFLD)이다. 바람직한 상기 만성 염증성 위장 질병은 췌장의 만성 염증, 크론 질병, 또는 궤양성 대장염이다. 만성 염증성 심혈관 질병은 동맥경화이고 바람직한 대사계의 만성 염증성 질병은 비만, 인슐린 저항성, 제I형 당뇨병 또는 제II형 당뇨병이다.
상기 만성 염증성 또는 자가면역 질병은 바람직하게는 간, 신장, 위장관, 심혈관계 또는 대사계의 만성 염증성 또는 자가면역 질병이다. 바람직한 간의 만성 염증성 또는 자가면역 질병은 원발성 담즙성 간경변 (PBC), 담즙산 설사병 (만성 설사병), 원발성 경화성 담관염 (PSC), 자가면역 간염, 간 이식 연관된 이식편대숙주 질병, 문맥압 항진증, 비-알코올성 지방간염 (NASH) 또는 비-알코올성 지방간 질병 (NAFLD)이다. 바람직한 상기 만성 염증성 또는 자가면역 위장 질병은 췌장의 만성 염증, 크론 질병, 또는 궤양성 대장염이다. 만성 염증성 심혈관의 질병은 동맥경화이고, 대사계의 바람직한 만성 염증성 또는 자가면역 질병은 비만, 인슐린 저항성, 대사증후군, 제I형 당뇨병 또는 제II형 당뇨병이다.
만성 염증이 종종 암 및 섬유증과 같은 심한 질병과 연관되어 있음을 고려해보고, 본 발명이 적어도 만성 염증을 완화시킨다는 것을 고려해보면, 적어도 암 예방 또는 섬유증 예방 처리를 하지 않은 동일 또는 유사한 개체와 비교하였을 때, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물은 또한 처리된 개체에서 적어도 암의 발병을 늦추고, 적어도 섬유증을 경감시키는 데에 사용될 수 있다. 이미 발병한 섬유증은 때때로 되돌릴 수 없다. 따라서, 섬유증을 예방하는 것은 한편으로 상기 처리를 하지 않았다면, 발병했을 수도 있는 섬유증을 예방하는 것을 의미하기도 한다.
상기 담즙산 또는 담즙산 유도체는 바람직하게 담즙산, 또는 앞에서 언급된 유도체이다. 현재, 많은 담즙산 및 담즙산 유도체는 인 비트로 에서 합성 가능하다. 따라서, 본원에서 사용된 담즙산 유도체는 담즙산으로부터 유래된 화합물뿐만 아니라, 담즙산으로부터 유래된 화합물과 동일한 구조를 갖는 합성 화합물도 지칭한다. 케노데옥시콜산 유도체는 바람직한 담즙산 유도체이다. 바람직하게는, 상기 담즙산 유도체는 6-알파-에틸 케노데옥시콜산, 또는 23-치환된 담즙산이다.
바람직한 담즙산은 우르소데옥시콜산 또는 케노데옥시콜산이다.
상기 담즙산 또는 담즙산 유도체는 FXR 및/또는 TGR5 시그널링 활성인자인 것이 바람직하다. 이러한 화합물들은 또한, 해당 기술 분야에서 FXR-아고니스트 또는 TGR5-아고니스트로 지칭된다. 앞서 언급한 바와 같이, 다양한 TGR5 시그널링 활성인자는 또한 FXR 시그널링 활성인자이다.
본 발명은 나아가 만성 염증을 앓는 개체의 치료 방법을 제공하는데, 상기 방법은 만성 염증의 치료가 필요한 개체에 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다.
본 발명은 또한 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 포함하는 키트를 제공하는데, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합이다. 상기 키트는 바람직하게는 만성 염증성 질병의 치료가 필요한 개체의 만성 염증성 질병의 치료용 또는 암 및/또는 섬유증의 예방이 필요한 개체의 암 및/또는 섬유증의 예방용이다.
도 1. 항체 PG102의 아미노산 서열
도 2. A. 담즙산 스캐폴드의 다양한 변형. B. 담즙산 유도체들, 구조 및 길이. C. 노바티스사의 담즙산 유도체 (Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414 참조).
도 3a 내지 3j. 다양한 TGR 아고니스트. 구조 및 효능(potency).(Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414 참조).
도 4. 다양한 천연 TGR5 아고니스트 및 효능. (Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414 참조).
도 5. TGR5 및 FXR 아고니스트.
도 6a 내지 6b. FXR 아고니스트. Modica S. Deciphering the nuclear bile acid receptor FXR paradigm. NRS 2010;8:pp 1-28 참조.
도 7: PG102 및 6-ECDCA에 의한 사이토카인 분비의 억제. PBMC를 A) 메가CD40L 또는 B) 메가CD40L 및 LPS로 자극하여 사이토카인 분비를 유도하였다. 6-ECDCA 및/또는 PG102를 배양에 첨가하였고, 이들의 배양 상등액 내의 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β및 IL-12p70 수준에 대한 효과를 측정하였다.
도 8: 실험 동안의 마우스 체중. 식수 내의 2.5% (질량/부피) DSS를 3일 차부터 8일 동안 투여함으로써 마우스의 대장염을 유도하였다. 체중을 매일 측정하였고 1일 차의 체중을 기준으로 나타내었다.
도 9: 경구 섭식한 지 4시간 후의 플라스마 내 FITC 농도로 결정한 장 투과성. 마우스에 DSS-처리한 지 8-일 후에 경구 섭식으로 FITC를 투여하였다. FITC 투여한 지 4 시간 후에, 마우스를 희생시켰고 장 투과성의 마커로서 혈액 내 형광의 양을 결정하였다.
도 10: 결장의 길이. 실험의 종료 시에 마우스를 희생시켰고 결장을 분리하였다. 상기 결장의 길이를 결장 염증의 척도로 측정하였다.
도 11: 비장 내 과립구의 분석. 실험의 종료 시에 마우스를 희생시켰고 비장을 분리하였다. 비장 세포를 GR-1 및 CD11b에 대한 항체로 염색하였고, 과립구의 상대적인 기여도를 FACS 분석으로 결정하였다.
도 12: PMA 및 이오노마이신으로 자극한 후의 비장 세포에 의한 TNF 방출. 실험의 종료 시에 마우스를 희생시켰고 비장을 분리하였다. 비장 세포를 PMA 및 이오노마이신으로 4.5 시간 동안 자극하였고, TNF 방출을 ELISA로 측정하였다.
실시예 1
THP1 세포에 의한 프로-염증성(pro-inflammatory) 사이토카인 분비에 대한 PG102 및, GW4064 및 6-ECDCA 와 같은 합성의 FXR 아고니스트의 억제 효과.
재료 및 방법:
세포: THP1 은 급성 단핵구성 백혈병 환자로부터 유래한 인간 단핵세포주이다(Tsuchiya S et al (1980). Int. J. Cancer 26 (2): 171-6.). 주카 세포주는 Schneider U et al., (1977). Int J Cancer 19 (5): 621-6 에 설명되어 있다.
간단히 요약하면, 1일 차에, THP-1 및 주카(Jurkat) 39.8/50 인간 세포를 10 % 태아 소 혈청 (Gibco, ref 10270-106) 및 50 ㎍/mL 젠타마이신 (Invitrogen, 카탈로그 번호 15750-045)으로 보충된 아이스코브의 변형 둘베코 배지(Iscove's Modified Dulbecco's Medium)(IMDM, BioWhittaker, 카탈로그 번호 BE12-722F)에서 배양한다. 그 다음에, 상기 THP1 세포를 미처리로 두거나,
● rhuIFNγ(1000U/mL, PeproTech)을 48 시간 동안 선처리하여 CD40 발현을 상향조절하거나
● FXR 아고니스트 (GW4064 (Sigma G5172), 또는 6-ECDCA (Cayman, 11031))를 18시간 동안 선처리한다.
생물분석의 3일 차에, THP-1 세포를 세척하고, 하기의 도표에 따라 배양한다:
Figure pct00001
* CD40L 발현 인간 T 세포 세포주. THP1 세포 및 J39.8/50 세포를 1:1 비로 배양함.
** PG102; PanGenetics, Batch PANY001, June 2011
모든 조건들은 둥근 바닥 세포 배양 플레이트(넌클론(Nunclon™)에서 하기의 순서에 따라 세 벌로(triplicate) 행하여진다: 50 ㎕의 THP-I 세포 (2 x 104 세포/웰에 해당함), 50 ㎕의 시험 샘플 및 50 ㎕ J39.8/50 세포. 전체 부피는 150 ㎕/웰이다. 세포를 가습된 5 % CO2 대기에서 37 ℃에서 48시간 동안 항온처리한다.
5일 차에, 48시간의 배양 기간 후에, 70 ㎕의 세포 배양 상등액을 모아 저-결합(low-binding) 둥근 바닥 마이크로타이터 플레이트로 옮긴다. 상기 수집된 세포 배양 상등액을 TNF, IL-6, IL-1β 및 IL-10을 포함하는 복수의 사이토카인에 대하여, 제조사의 사용 설명서에 따라 다중 사이토카인 분석(Luminex)을 사용하여 분석한다.
다른 시험 조건에서의 시험 샘플들로 얻어진 사이토카인 분비 억제의 백분율을 계산한다.
실시예 2
말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 의한 프로-염증성 사이토카인 분비에 대한 PG102 및 합성의 FXR 아고니스트 6-ECDCA의 상승적(Synergistic) 억제 효과.
재료 및 방법:
헤파린 처리된 인간 혈액으로부터 파이콜(Fycoll) 밀도 구배 원심분리법(Histopaque; Sigma Diagnostics)을 이용하여 PBMC를 갓 분리하였다. PBMC를 둥근-바닥 96-웰 플레이트 상에서 10% FCS를 함유하는 RPMI에서 5X10E5 세포/mL의 농도로 배양하였다. 두 개의 다른 자극을 사용하여 PBMC로부터 사이토카인 분비를 유도하였다:
1. PBMC를 IFN-γ(250U/mL)의 존재 하에 24 시간 동안 배양하여 CD40의 상향조절을 유도하였다. 이후, 상기 CD40 경로를 메가CD40L (100 ng/mL, Enzo Life Sciences) 로 24 시간 동안 활성화 하였다.
2. PBMC를 IFN-γ의 존재 하에 24 시간 동안 배양하여 CD40의 상향조절을 유도하였다. 이후, 세포를 메가CD40L (100 ng/mL) 및 LPS (100ng/mL)로 24 시간 동안 자극하였다.
자극된 PBMC를 PG102 (5, 10 및 100ng/mL) 및/또는 6-ECDCA (0.1, 1 및 5 μM)의 부재 또는 다양한 농도의 존재 하에서 배양하였다. PG102는 상기 자극제와 동시에 첨가하였다. 대조적으로, 6-ECDCA는 상기 자극제를 첨가하기 3 시간 전에 첨가하였다. 배양 기간의 마지막에, 상등액을 모아 사이토카인 분석을 행하기 전까지 -80℃ 에서 저장하였다. BD 싸이토메트릭 비드 어레이(cytometric Bead Array, CBA) 인간 염증성 사이토카인 키트(BD Biosciences)를 사용하여 상기 배양 상등액의 IL-1β IL-8, IL-6, TNF 및 IL-12p70 수준을 측정하였다.
상기 분석은 제조사의 사용 설명서에 따라 행하였다. 간단히 요약하면, 관심 있는 사이토카인에 대한 포획 비드(capture beads)를 포착한 다음에 상등액 또는 인간 염증성 사이토카인 스탠다드(standards), 및 PE 검출 시약과 혼합하였다. 샘플들을 암조건의 실온에서 3 시간 동안 항온처리 하였다. 이후, 샘플들을 세척하였고 FACS CANTO II 싸이토미터(cytometer) (BD Biosciences) 상에서 분석하였다. 데이터는 FCAP 어레이 소프트웨어(FCAP Array software) (BD Biosciences)를 사용하여 분석하였다.
결과:
CD40-CD154 경로의 자극 이후에, 상당한 양의 TNF (733pg/mL), IL-6 (5.3ng/mL) 및 IL-8 (19.5ng/mL) 이 생성되었다. IL-12p70 (50 pg/mL) 또한 이러한 자극 조건들 하에서 생성되었다. IL-1β(7 pg/mL)은 거의 검출되지 않았다. PG102은 PBMC로부터 이러한 사이토카인 방출을 투여량-의존적인 방식으로 억제하였으며, 100ng/mL PG102 이 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β및 IL-12p70의 방출을 각각 89%, 87%, 78%, 88%, 및 93% 억제하였다. 6-ECDCA는 단독으로, 0.1 또는 1 μM의 농도에서 이들 사이토카인의 방출을 억제하지 못하였다. 그러나, 5 μM의 6-ECDCA는 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β 및 IL-12p70의 방출을 각각 14%, 18%, 17%, 35% 및 20% 억제하였다. PG102 및 6-ECDCA의 조합을 상기 배양에 첨가하게 되면, PG102 또는 6-ECDCA 단독보다 사이토카인 방출을 더 억제하였고, PG102의 부재 하에서는 사이토카인 방출 억제 효과가 없었던 농도 (1μM)의 6-ECDCA를 사용한 경우에도 마찬가지였다. 도 7A에서, 사이토카인 분비의 억제 백분율은 PG102 (5ng/mL) 단독, 6-ECDCA (1 μM) 단독, 및 PG102 (5ng/mL) 및 6-ECDCA (1 μM)의 조합에 대해 나타내었다.
다른 한편으로, PBMC를 톨-유사(Toll-like) 수용체 자극(LPS)과 조합하여 CD40 경로를 통해 자극시켰다. LPS는 그람-음성 박테리아의 외막의 주요한 요소이고, 인간 내에서 강력한 면역 반응을 이끌어 낸다. LPS가 TLR4 수용체에 결합하면, CD40 경로의 자극과 같이, NF-κB의 활성화 및 프로-염증성 사이토카인의 생성을 이끌어 낸다. 이러한 자극 조건들 하에서, 측정된 모든 사이토카인들은 많은 양이 분비되었다(TNF: 9 ng/mL; IL-6: 23ng/mL; IL-8: 23 ng/mL; IL-1β 100 pg/mL; IL-12p70: 1500 pg/mL). PG102는 단독으로 TNF, IL-12p70 및 IL-1b 분비를 투여량-의존적으로 억제할 수 있었으나, IL-8 및 IL-6의 분비에는 거의 영향을 미치지 못하였다. 명백히, PG102는 CD40 경로만의 한정적인 자극과 대조하였을 때, 이러한 자극 조건들 하에서는 덜 강력하였다. PG102 (100ng/mL)는 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β및 IL-12p70 을 각각, 38%, 0%, 17%, 43% 및 67% 억제하였다. 6-ECDCA 는 이전에 LPS-유도 TNF 생성을 투여량-의존적인 방식으로 억제하는 것으로 밝혀졌다(Gadaleta RM, et al. Gut 2011;60(4):463-72). 본 발명에서는, 6-ECDCA는 CD40 경로 단독 또는 TLR-4 경로와의 조합의 활성화에 의해 유도된 프로염증성 사이토카인 방출을 억제하는 데에 매우 효과적이지는 않다는 것을 밝혔내었다. 6-ECDCA (5 μM)는 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β 및 IL-12p70 을 각각 21%, 0%, 9%, 12% 및 22% 억제하였다. PG102 및 6-ECDCA의 조합은 TNF, IL-6, IL-8, IL-1β 및 IL-12p70의 방출을 억제하는데 PG102 또는 6-ECDCA 단독 보다 더 효과적이었다. 이를 도 7B에 나타내었으며, PG102 및 6-ECDCA는 각각 5ng/mL 및 1μM의 농도로 사용하였다.
상기 데이터는 6-ECDCA와 조합된 PG102가 본 연구에서 분석한 모든 프로염증성 사이토카인의 분비를 PG102 또는 6-ECDCA 단독 보다, 더 효과적으로 억제함을 나타낸다. 특히, 사이토카인-유도 자극이 강력할수록, 6-ECDCA 및 PG102 조합이 프로염증성 사이토카인 방출에 대하여 상승적 억제 효과를 나타내었다. 이들 데이터는 PG102와 조합된 6-ECDCA가 상기 자극과는 관계없이 염증을 막을 수 있다는 것을 나타내고, 이는 미생물의 요소 또는 자가면역 과정이 프로염증성 사이토카인 방출의 기초가 되는 것과 관련이 없음을 시사한다. 상기 데이터는 또한 이들 제제는 함께 사용될 경우 더 낮은 농도로 사용될 수 있어, 효과의 손실 없이 더 우수한 안전성을 나타낼 수 있다.
실시예 3
DSS-유도된 대장염 마우스 모델에서 MR-1 및 합성의 FXR 아고니스트 6-ECDCA의 상승적 억제 효과.
재료 및 방법:
C57/Bl6 야생형 마우스에 식수 중의 2.5% (질량/부피) 덱스트란 소듐 설페이트 (Dextran Sodium Sulphate, DSS; MW. 36000-50000 Da, MP Biochemicals Inc)를 8 일 동안 투여하여 대장염을 유도하였다. FXR의 약리학적 활성화는 6-에틸-케노데옥시콜산 (6-ECDCA)의 처리를 통해 달성하였다. 6-ECDCA (10mg/kg/일) 또는 부형제를 DSS-처리에 앞서 3 일 동안 경구 섭식(oral gavage)으로 투여하였고, DSS-처리의 종료시까지 계속 투여하였다. DSS 치료의 2일 차(6-ECDCA 처리의 4일 차)에, 마우스에 마우스 CD40L에 대한 햄스터 항체, MR-1, 또는 대조군 IgG (LEAF™ 정제된 아르메니안 햄스터 IgG 이소타입 대조군 항체, 바이오레전드) 250㎍을 복강내(i.p.) 주사하였다.
실험에서는 다음과 같은 5개의 처리군 (n=10 마우스/군)을 대상으로 하였다:
1. -DSS, + 경구 섭식(o.g.)에 의한 부형제 + 대조군 IgG i.p.
2. +DSS, + 부형제 o.g. + 대조군 IgG i.p.
3. +DSS, + 부형제 o.g. + 항-CD40L i.p.
4. +DSS, + 6-ECDCA o.g. + 대조군 IgG i.p.
5. +DSS, + 6-ECDCA o.g. + 항-CD40L i.p.
체중의 일일 변화량을 측정하였는데, 2-11 일 차의 체중을 1 일 차의 체중에 대하여 상대적으로 나타내었다. 장 투과성 측정을 위하여, DSS-처리한 8-일 후에 마우스에 경구 섭식으로 FITC를 투여하였다. FITC 투여한 4 시간 후에, 마우스를 희생시키고 투과성의 마커로서 혈액 내 형광의 양을 측정하였다. 결장을 분리하고 결장의 길이를 측정하였다. 비장을 모아 세포를 분리하였다. 세포를 항체 혼합물로 염색하였고, 비장 내 면역 세포의 조성을 FACS 분석으로 결정하였다. 과립구는 GR-1 및 CD11b 발현에 기초하여 확인하였고, 비장 내 생 세포(living cell)의 백분율로 나타내었다. 최종적으로, 비장 세포를 인 비트로에서 PMA 및 이오노마이신으로 4.5 시간 동안 자극하였다. 배양 상등액을 모아 ELISA를 이용하여 TNF 를 측정하였다.
결과:
FXR 수용체 아고니스트 6-ECDCA는 이전에 대장염 증상의 개선, 상피의 투과성의 억제 및 감소된 배상 세포의 손실을 동반하여, 화학적으로 유도된 장 염증을 저지한다고 밝혀졌다(Gadaleta RM, et al. Gut 2011;60(4):463-72). 안타고니스트성 항-CD40L 항체인, MR-1은 동종동계(syngeneic) CD45RB고(high)CD4+ T 세포로 재구성된 SCID 마우스의 실험적 대장염 모델에서 효과적이었다 (Liu Z, et al. J. Immunol 2000;164(11):6005-11). 본 연구에서는, 6-ECDCA의 투약 계획은 Gadaleta 등에 알려진 바와 동일하게 하였다. 실제로, 또한 본 연구에서 6-ECDCA는 i DSS에 의해 유도된 대장염 질병 과정을 저지하였다. MR-1은, 대조적으로, 차선으로(suboptimally)(대장염 유도한 다음 날 단 1회) 투여하여, CD40 경로 차단 및 FXR 수용체 활성화 조합의 상승적 효과를 가능케 하였다. CD40 경로 차단의 투여량 및 빈도를 낮추는 것은, 부작용 및 원치 않는 면역 억제의 위험을 낮추어 준다. 본 연구로부터의 결과는 MR-1의 적용된 투약 계획은, 단독으로 적용되었을 때 대장염 질병 과정을 저지하는 데에 충분하지 않지만, FXR 수용체 아고니스트 6-ECDCA와의 조합으로 적용되었을 때 대장염 질병 과정을 저지할 수 있음을 보여준다.
예상한 바와 같이, DSS는 7일, DSS 투여한 지 4일차 부터 체중 감소를 유발하였다. 상기 체중의 감소는 마우스에 6-ECDCA 및 MR-1을 모두 투여한 처리군 5에서 가장 적었다(도 8). 또한, DSS를 투여한 마우스 중에서, 장 투과성은 조합되어 처리된 군에서 최소로 악화되었다(도 9). 결장 단축은 염증의 홀마크(hallmark)이다. DSS는 주로 염증을 유발하고, 따라서 결장을 단축시킨다. DSS + 6-ECDCA + αCD40L의 조합을 투여한 마우스 결장의 길이는 DSS를 투여하지 않은 마우스 결장의 길이와 크게 다르지 않았다(도 10). 6-ECDCA는 비장에서 과립구의 증가를 유발하는 것으로 나타났고, 이러한 효과는 6-ECDCA 및 αCD40L를 조합함으로써 감소되었다(도 11). 도 12는 6-ECDCA 및 αCD40L을 모두 투여한 마우스로부터 분리된 비장 세포는, 다른DSS-처리군(처리군 2-4)의 마우스로부터 분리된 비장 세포와 비교하여, 인 비트로 자극 이후에 보다 적은 TNF를 생성함을 나타낸다. 전체적으로 보았을 때, 복수의 결과 측정을 살펴 보면, 이러한 마우스 대장염 모델에서 MR-1이 효과를 나타내지 않은 반면에, MR-1 및 6-ECDCA를 조합하게 되면, 6-ECDCA 단독에 비교하여, 우월한 효과를 나타내었다. 이러한 이유로, FXR-수용체 활성화 및 항-CD40 차단을 간을 포함하는 위장관의 자가면역 질병에 적용시키면, 상기 조합은 사용된 제제 각각의 더 낮은 농도 및 더 낮은 투약 빈도로 가벼운(mild) 투약 계획을 가능하게 한다. FXR 수용체 활성화 및 CD40 차단의 조합은 개선된 안정성 측면 및 염증의 더 효과적인 억제에 기여를 한다.
참고 문헌
Figure pct00002

Figure pct00003
특허 등록된 다양한 TGR5 아고니스트 (Gioiello et al (2012) Expert Opin. Ther. Patents. Vol 22: pp 1399-1414).
분류 케미컬 종류
(화합물 번호)		 출원인 공개번호
스테로이드계 화합물 담즙산(BAs)(7) 인터셉트 파마슈티컬스
(Intercept Pharmaceuticals)		 WO091540A2
담즙 황산염
(Bile sulfates)(8)		 WO002573A2
담즙 술폰산염
(Bile sulfonates)(9)		 US0172198A1
담즙산(BAs)(10) WO059859A1
리토콜 아마이드
(Lithocholic amides)		 노바티스(Novartis) WO009407A2
비-스테로이드계 화합물 천연물-유래 화합물 클레이스탄테인스
(Cleistanthanes)(15, 16)		 메르크(Merck) WO146772A1
파촐루엔스
(Patchoulenes)(17)		 WO146772A1
펜타데카놀라이즈
(Pentadecanolides)(18)		 WO146772A1
케미컬 라이브러리 유래 화합물 테트라하이드로피리미딘
(Tetrahydropyrimidines)(19)		 다케다 파마슈티컬스
(Takeda Pharmaceuticals)		 WO043468A1
옥사제파인스
(oxazepines)(20)		 EP1591120A1
옥사제파인스
(oxazepines)(21)		 US136778
티아졸-4-카르복스아마이드
(Thiazol-4-carboxamides)(22)		 아레나 파마슈티컬스
(Arena Pharmaceuticals)		 WO116653A2
비스-술폰아마이드
(Bis-Sulfonamides)(23)		 스미스클라인 비캄 코포레이션
(Smithkline Beecham Corp.)		 WO127505A2
헤테로사이클릭 아마이드
(Heterocyclic amides)(27, 28)		 노바티스(Novartis) WO110237A2
WO125627A1
디아제파인
(Diazepines)(29, 30)		 칼립시스(Kalypsys) WO06722A1
퀴나졸린
(Quinazolines)(31)		 WO067219A2
프테리딘(Pteridines)(32) WO014739A2
피리딘(Pyridines)(33) WO016846A1
퀴놀린(Quinolines)(34) WO097976A1
이미다졸(Imidazoles)(37) 엑셀리시스(Exelixis) WO093845A1
트리아졸(Triazoles)(38)
이소퀴놀린
(Isoquinolines)(39)		 반유 파마슈티컬스
(Banyu Pharmaceuticals)		 WO117084A1
WO117090A1
아릴 아마이드
(Aryl amides)(40)		 호프만-라 로슈
(Hoffmann-La Roche)		 WO049302A1
WO089099A1
피라졸(Pyrazoles)(41) IRM LCC WO082947A1
Figure pct00004

Claims (15)

  1. 만성 염증성 또는 자가면역 질병의 치료가 필요한 개체의 만성 염증성 또는 자가면역 질병의 치료용 CD40 시그널링 억제제(signalling inhibitor) 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 만성 염증성 또는 자가면역 질병은 간, 신장, 위장관, 심혈관계 또는 대사계의 만성 염증성 또는 자가면역 질병인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 간의 만성 염증성 또는 자가면역 질병은, 원발성 담즙성 간경변 (primary biliary cirrhosis, PBC), 담즙산 설사병 (만성 설사병), 원발성 경화성 담관염 (primary sclerosing cholangitis, PSC), 자가면역 간염, 간 이식 연관된 이식편대숙주 질병, 문맥압 항진증, 비-알코올성 지방간염 (NASH) 또는 비-알코올성 지방간 질병 (NAFLD)인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 만성 염증성 또는 자가면역 위장 질병은 췌장의 만성 염증, 크론(Crohn's) 질병 또는 궤양성 대장염인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 만성 염증성 심혈관의 질병은 동맥경화인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 대사계의 만성 염증성 또는 자가면역 질병은 비만, 인슐린 저항성, 대사증후군, 제I형 당뇨병 또는 제II형 당뇨병인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  7. 암 및/또는 섬유증의 예방용 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 담즙산 또는 담즙산 유도체는 FXR 및/또는 TGR5 시그널링 활성인자(아고니스트)인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 담즙산 유도체는 케노데옥시콜산 유도체, 바람직하게 6-알파-에틸 케노데옥시콜산, 또는 23-치환된 담즙산을 포함하는, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 담즙산은 우루소데옥시콜산 또는 케노데옥시콜산인, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD40 시그널링 억제제는 CD40, 또는 이의 단편 또는 유도체에 결합하는 항체를 포함하는, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  12. 제11항에 있어서, 상기 CD40에 결합하는 항체는, 항체 5D12, ch5D12, PG102, CHIR-12.12, ASKP1240, 또는 이들의 유도체의 가변 영역을 포함하는, CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물.
  13. 만성 염증의 치료가 필요한 개체에 CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 추가 화합물이 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합인, 만성 염증을 앓는 개체의 치료 방법.
  14. CD40 시그널링 억제제 및 추가 화합물을 포함하며, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, TGR5-수용체 아고니스트, FXR-수용체 아고니스트 또는 이들의 조합인, 키트.
  15. 제14항에 있어서, 만성 염증성 또는 자가면역 질병의 치료가 필요한 개체의 만성 염증성 또는 자가면역 질병 치료용, 또는 암 및/또는 섬유증의 예방이 필요한 개체의 암 및/또는 섬유증의 예방용인, 키트.
KR1020167000804A 2013-06-13 2014-06-13 Cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물로서, 상기 추가 화합물은 담즙산, 담즙산 유도체, tgr5-수용체 아고니스트, fxr 아고니스트 또는 이들의 조합이고, 만성 염증의 치료용, 및 위장 암 또는 섬유증의 예방용인, cd40 시그널링 억제제 및 추가 화합물 KR20160034893A (ko)

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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2016149299A1 (en) * 2015-03-16 2016-09-22 Epinova Therapeutics Corp. Therapeutic compounds that suppress protein arginine methyltransferase activity for reducing tumor cell proliferation
US11419878B2 (en) * 2016-03-28 2022-08-23 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Medicine obtained by combining FXR agonist and ARB
US20210346401A1 (en) * 2018-09-25 2021-11-11 Yichang Humanwell Pharmaceutical Co., Ltd Regulator of tgr5 signaling as immunomodulatory agent
KR20220150270A (ko) 2019-10-07 2022-11-10 칼리오페, 인크. Gpr119 효능제
CA3178994A1 (en) 2020-05-19 2021-11-25 Iyassu Sebhat Ampk activators
JP2023531726A (ja) 2020-06-26 2023-07-25 キャリーオペ，インク． Ａｍｐｋアクチベーター
CN115569130B (zh) * 2022-10-09 2024-02-09 东莞广州中医药大学研究院 环氧广藿香烯及其组合物在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用

Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
WO1986005807A1 (en) 1985-04-01 1986-10-09 Celltech Limited Transformed myeloma cell-line and a process for the expression of a gene coding for a eukaryotic polypeptide employing same
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5750373A (en) 1990-12-03 1998-05-12 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins having altered binding properties, M13 phagemids, and growth hormone variants
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
DE69334095T2 (de) 1992-07-17 2007-04-12 Dana-Farber Cancer Institute, Boston Verfahren zur intrazellulären Bindung von zielgerichteten Molekülen
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
ATE279947T1 (de) 1996-03-18 2004-11-15 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
KR100942002B1 (ko) 1996-12-03 2010-02-12 암젠 프레몬트 인코포레이티드 복수의 ｖｈ 및 ｖｋ 부위를 함유하는 사람 면역글로불린 유전자좌를 갖는 형질전환된 포유류 및 이로부터 생성된 항체
BRPI9809391B8 (pt) 1997-04-14 2021-05-25 Amgen Res Munich Gmbh processo para a produção de um receptor de antígeno anti-humano, anticorpo humano e composição farmacêutica
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US20030059427A1 (en) 2000-04-28 2003-03-27 Force Walker R. Isolation and characterization of highly active anti-CD40 antibody
ATE303399T1 (de) 2001-03-12 2005-09-15 Intercept Pharmaceuticals Inc Steroide als agonisten für fxr
WO2004067008A1 (ja) 2003-01-28 2004-08-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited 受容体作動薬
JP4746552B2 (ja) * 2003-11-04 2011-08-10 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 自己免疫疾患および炎症性疾患ならびに臓器移植拒絶の処置のためのアンタゴニスト抗ｃｄ４０抗体の使用
EP1568706A1 (en) 2004-02-26 2005-08-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Novel steroid agonist for FXR
EP1945260B1 (en) * 2005-11-01 2012-10-24 Novartis AG Uses of anti-cd40 antibodies
BRPI0707794A2 (pt) 2006-02-14 2011-05-10 Intercept Pharmaceuticals Inc compostos derivados de Ácido biliar, formulaÇÕes e composiÇÕes farmacÊuticas, bem como uso de ditos compostos
EP1854810A1 (en) 2006-05-09 2007-11-14 PanGenetics B.V. Deimmunized antagonistic anti-human CD40 monoclonal antibody from the ch5D12 antibody
EP2040713B1 (en) 2006-06-27 2014-06-18 Intercept Pharmaceuticals Inc. Bile acid derivatives as fxr ligands for the prevention or treatment of fxr-mediated deseases or conditions
EP2112995B1 (en) 2007-01-19 2013-07-31 Intercept Pharmaceuticals, Inc. 23-substituted bile acids as tgr5 modulators and methods of use thereof
CN102164940B (zh) 2008-07-30 2015-08-19 英特塞普特医药品公司 Tgr5调节剂及其使用方法
PT2376519E (pt) 2008-11-19 2014-02-20 Intercept Pharmaceuticals Inc Moduladores de tgr5 e métodos da sua utilização
CA2744135C (en) 2008-11-19 2017-07-04 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Tgr5 modulators and methods of use thereof
CN102481322A (zh) * 2009-05-01 2012-05-30 微制药有限公司 预防和治疗退化性疾病的细菌组合物
KR101760242B1 (ko) 2010-03-31 2017-07-21 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항-ｃｄ40 항체

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