CN116322767A - 改善与静脉内施用有关的抗体耐受性 - Google Patents
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Abstract
本发明总体上涉及用于治疗性***和抗体给药方案的组合及其用途。本文还描述了一种模型，所述模型用于预测与人类靶标结合的治疗性抗体是否将与静脉内施用的耐受性问题有关和/或用于预测预处理、改变的施用途径或所述抗体的修饰是否可预防与向人类静脉内施用所述治疗性抗体有关的耐受性问题。所述模型包含向小鼠静脉内或腹膜内施用所述抗体，并且在施用后立即观察所述小鼠的任何肉眼可见的症状孤立和活动减少的瞬时表现。所述模型还可以包含与所述抗体的施用组合的预处理施用，通过除静脉内或腹膜内施用以外的施用途径施用所述治疗性抗体，或向小鼠施用修饰形式的抗体，并且在此类施用后立即观察所述小鼠的任何所述肉眼可见的症状孤立和活动减少的瞬时表现，并且将其与静脉内或腹膜内施用未经预处理的未修饰抗体后的所述肉眼可见的症状分离和活动减少的瞬时表现进行比较。
Description
技术领域
本发明总体上涉及用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的治疗***、用于剂量方案的组合、用途、方法和试剂盒。本发明还涉及一种方法或模型，其可用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否将与向人类静脉内施用的耐受性问题有关，和/或预测预防性或治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰是否可预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
背景技术
治疗性抗体构成了一类得到充分证明的药物，其已被批准用于治疗多种疾病，包括癌症、炎性疾病、自身免疫性疾病和感染性疾病。
单克隆抗体疗法，特别是用于癌症疗法的那些，可以通过静脉内输注施用，从而允许通过重复给药维持高即时药物暴露。然而，在许多情况下，患者或受试者可能会对治疗性抗体的输注产生不良反应，这被称为输注相关反应(“IRR”)。
受试者在输注治疗性抗体期间(一种“单相”反应)和/或输注后数小时内(一种“双相”或“延迟”反应)可能会产生IRR，并且它们包括超敏反应和细胞因子释放综合征(“CRS”)。根据美国卫生与公众服务部于2017年11月27日公布的不良事件通用术语标准(CTCAE)5.0版，将不良事件(例如IRR)的严重程度分类为不同等级，范围从1(最不严重)到5(最严重)。
常见的IRR包括但不限于呼吸***疾病，如鼻塞、咳嗽、过敏性鼻炎、喉咙发炎和呼吸困难，以及非呼吸***疾病，如寒战和恶心。IRR通常在向受试者施用第一剂量时发生，但它们也可在第二次或后续施用后发生。在许多情况下，IRR是轻度的，但有时可能发生更严重的IRR，如果管理不当，会有致命的风险。IRR可能影响身体的任何器官***。
严重CRS可能代表需要及时和积极治疗的危及生命的不良事件。肿瘤负荷的减轻、对施用治疗剂量的限制和类固醇术前用药降低了严重CRS的发生率，如使用抗细胞因子治疗一样。
在不同的治疗性抗体之间以及在具有不同频率持续时间、严重性和不同性质的受试者之间的耐受性问题可能不同。
超敏反应(例如IRR)的常规管理包括暂时中断输注、降低输注速率和/或用抗组胺药、退热药和/或皮质类固醇治疗或在严重情况下中断/停止输注。在此类严重的情况下，可以考虑以较慢的速度随耐受性的增加，谨慎地重新输注。用退热药和/或抗组胺药预处理可以防止后续输注反应。
皮质类固醇通常用于预防或抑制与输注相关反应(IRR)以及治疗性抗体的相关毒性。皮质类固醇方案，即皮质类固醇的类型、剂量和施用时间取决于使用的治疗性抗体和适应症。利妥昔单抗(rituxan/rituximab)是一种CD20导向的细胞溶解抗体，通常用于CD20阳性B细胞淋巴瘤(非霍奇金淋巴瘤(NHL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL))以及慢性炎症疾病如类风湿性关节炎(RA)。对于NHL和CLL，皮质类固醇通常用于降低IRR的风险，然后在第一个利妥昔单抗周期前30分钟施用，并且只有在第一个周期出现严重的输注相关不良事件时，才在后续周期施用。对于NHL，皮质类固醇(即***)也被用作组合治疗的一部分，即利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和强的松(R-CHOP)。对于RA，建议在每次输注前30分钟使用皮质类固醇。当施用另一针对CD20的抗体Gazyva(奥比妥珠单抗)时，还建议在第一个治疗周期前和随后的周期前仅在先前输注或在下一次治疗前在淋巴细胞计数>25x109/L时出现3级IRR的患者中预先施用皮质类固醇。对于Gazyva，应当在抗体输注前至少1小时给予皮质类固醇术前用药。使用皮质类固醇降低IRR风险的治疗性抗体的第三个实例是达雷木单抗(darzalex/daratumumab)，一种用于治疗多发性骨髓瘤患者的CD38定向抗体。在这种情况下，建议在每次输注前后，在输注前1至3小时，然后在输注后2天的每一天再次施用皮质类固醇。
WO 2020/047389描述了治疗性蛋白质如抗体(例如靶向T细胞的双特异性抗体)的给药策略和施用方案，其减轻经历免疫疗法的患者中细胞因子释放综合征或输注相关反应的流行和严重性，包含：(i)在所述给药方案的第1周施用所述治疗性蛋白质的初级剂量部分(D1)，其中所述初级剂量包含不超过10mg的所述治疗性蛋白质，第一剂量部分(F1D1)占总初级剂量的40％至60％，并且在第1周的第1天施用所述受试者，并且第二剂量部分(F2D1)占总初级剂量的剩余40％至60％，并且在施用F1D1后12至96小时施用于受试者；(ii)在给药方案的第2周施用治疗性蛋白质的第二剂量级分(D2)，其中第二剂量不超过治疗性蛋白质的最大周剂量的一半，第一剂量级分(F1D2)占总第二剂量的40％至60％，第二剂量级分(F2D2)占总第二剂量的剩余40％至60％，并且在给药方案的第2周期间在施用F1D2后12至96小时向受试者施用F2D2；以及(iii)在给药方案的后续一周中，以单剂量向受试者施用最大周剂量的治疗性蛋白质。分级给药是不理想的，因为次优有效剂量的给药有限制治疗益处的风险，在最坏的情况下，导致没有预期治疗治疗的临床益处或诱导疾病进展。
WO 2020/037024提到了在用与单甲基澳瑞他汀或其功能类似物或衍生物缀合的抗组织因子抗体或其抗原结合片段治疗卵巢癌、腹膜癌或输卵管癌时，使用另外的治疗剂，例如抗组胺药、对乙酰氨基酚或皮质类固醇，来预防或降低不良事件的严重性，例如输注相关的反应。
管理与免疫疗法相关的毒性是一个具有挑战性的临床问题。非常需要减少、抑制或克服与静脉内施用不同抗体有关的耐受性问题的方法。然而，与针对不同靶标的抗体有关的耐受性问题的性质和频率的异质性，以及对这些机制的分子和细胞理解不足，意味着已经开发了许多不同的方法，并且每种方法的有效性可以根据它们所使用的治疗性抗体的类型而显著不同。
上述情况证明，针对不同靶标的抗体静脉内施用通常与耐受性问题有关。此类耐受性问题在不同的治疗性抗体之间以及在具有不同频率持续时间、严重性和不同性质的患者之间可能不同。
因此，减少、抑制或克服与针对相同靶标(例如抗CD20抗体利妥昔单抗与欧比珠单抗相比)或不同靶标(例如抗CD38抗体与抗CD20抗体相比)的不同抗体的静脉内施用有关的不同耐受性问题的方法差异很大，并且包含在治疗性抗体的静脉内施用之前、同时和/或后立即施用不同的药剂，例如皮质类固醇或抗组胺药。
非常需要能够预测与针对不同靶标的抗体静脉内施用相关的耐受性问题是否可能发生的方法并且所述方法非常有价值，并且同样重要的是能够发现有助于预防、抑制或克服与针对给定靶标的抗体静脉内施用有关的耐受性问题的方法。与人类临床环境相比，允许在治疗性抗体开发的早期阶段以相对较低的成本和较高的产量进行此类预测和筛选的临床前方法是非常重要的。
发明内容和具体实施方式
在此背景下，本发明人开发了一种令人惊讶的有利方法，其用于向受试者施用与FcyRllb特异性结合的抗体分子。如在所附实例中所证明的，本发明人的方法维持了此类抗体的治疗有效性，同时减少和/或预防了与其施用相关的IRR。本发明人的方法涉及施用几个单独剂量的抗体，包括初始亚最大治疗剂量的抗体，并且在向受试者给予皮质类固醇后进行抗体施用。因此，本发明人的方法提供了一种用于施用此类抗体的改进方案，因为其以减少和/或防止受试者中的耐受性问题的方式进行施用。
此外，本发明人已经开发了一种方法或模型，其可用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否将与向人类静脉内施用的耐受性问题有关，和/或预测预防性或治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰是否可预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
本发明的第一至第五方面
在第一方面，本发明提供了一种用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的治疗性***，其中该治疗性***包含：
(i)与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中该抗体分子以至少第一剂量和第二剂量向受试者施用；以及
(ii)皮质类固醇，
其中抗体分子的第一剂量低于抗体分子的最大治疗有效剂量；并且其中该皮质类固醇在抗体分子的第一剂量之前向受试者施用。
在第二方面，本发明提供了一种包含抗体分子和皮质类固醇的组合，其用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的给药方案，其中该给药方案包含以下步骤：
(i)在施用第一剂量的抗体分子之前施用皮质类固醇；
(ii)施用第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子，该第一剂量低于最大治疗有效剂量；以及
(iii)施用第二剂量(并且优选地，至少第二剂量)的与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中第一剂量的抗体分子在第二剂量前施用。
在第三方面，本发明提供以下物质：
(i)与FcyRllb特异性结合的抗体分子；以及
(ii)皮质类固醇，
在制备用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的药物中的用途，其中该药物包含至少第一剂量和第二剂量的抗体分子；并且其中抗体分子的第一剂量低于抗体分子的最大治疗有效剂量；并且其中该皮质类固醇在第一剂量的抗体分子之前施用。
在第四方面，本发明提供了一种用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的方法，其包含：
(i)在施用第一剂量的抗体分子之前施用皮质类固醇；
(ii)施用第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子，该第一剂量低于最大治疗有效剂量；以及
(iii)施用第二剂量(并且优选地，至少第二剂量)的与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中第一剂量的抗体分子在第二剂量前施用。
本发明人惊奇地发现，一定剂量的皮质类固醇、随后第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子(该剂量低于最大治疗有效剂量)、随后第二剂量的抗体分子的组合导致了与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的惊人改善。
抗体分子是免疫学和分子生物学领域的技术人员所熟知的。通常，抗体包含两条重(H)链和两条轻(L)链。在本文中，我们有时将这种完整的抗体分子称为全尺寸或全长抗体。抗体的重链包含一个可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)，并且抗体的分子轻链包含一个可变结构域(VL)和一个恒定结构域(CL)。可变结构域(有时统称为FV区)与抗体的靶标或抗原结合。每个可变结构域包含三个环，称为互补决定区(CDR)，其负责靶标结合。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应子功能。根据其重链恒定结构域的氨基酸序列，抗体或免疫球蛋白可以分为不同的类别。有五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且在人类中，这些中的一些进一步分为亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；IgA1和IgA2。
抗体的另一部分是Fc区(也称为片段可结晶结构域)，其包含抗体重链中的每一个的两个恒定结构域。如本文所述，Fc区负责抗体和Fc受体之间的相互作用。
如本文所用，术语抗体分子涵盖全长或全尺寸抗体以及全长抗体的功能片段和此类抗体分子的衍生物。
全尺寸抗体的功能片段与对应的全尺寸抗体具有相同的抗原结合特性并且包括与对应的全尺寸抗体相同的可变结域(即VH和VL序列)和/或相同的CDR序列。功能片段具有与对应的全尺寸抗体相同的抗原结合特性，意味着其与全尺寸抗体靶标上的相同表位结合。此类功能片段可以对应于全尺寸抗体的Fv部分。替代地，此类片段可以是Fab，也表示为F(ab)，其是不含Fc部分的单价抗原结合片段，或F(ab')2，其是含有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合Fab部分的二价抗原结合片段，或F(ab')，即F(ab')2的单价变体。此类片段也可以是单链可变片段(scFv)。
功能片段不总是含有对应的全尺寸抗体的所有六个CDR。应当理解，含有三个或更少的CDR区(在一些情况下，甚至仅单个CDR或其部分)的分子能够保留衍生出CDR的抗体的抗原结合活性。例如，在Gao等人,1994,《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》,269:32389-93中描述了整个VL链(包括所有三个CDR)对其底物具有高亲和力。
含有两个CDR区的分子在例如Vaughan和Sollazzo 2001,《组合化学与高通量筛选(Combinatorial Chemistry&High Throughput Screening)》,4:417-430中有所描述。在第418页(右栏-3我们的设计策略)描述了一种仅包括散布在构架区内的H1和H2 CDR高变区的微抗体。该微抗体被描述为能够结合到靶标上。Pessi等人,1993,《自然(Nature)》,362:367-9和Bianchi等人,1994,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》,236:649-59由Vaughan和Sollazzo引用，并且更详细地描述H1和H2微抗体及其特性。在Qiu等人,2007,《自然生物技术(Nature Biotechnology)》,25:921-9中证明了由两个连接的CDR组成的分子能够与抗原结合。Quiocho 1993,《自然》,362:293-4提供了“微抗体”技术的概述。Ladner 2007,《自然生物技术》,25:875-7评论了含有两个CDR的分子能够保留抗原结合活性。
含有单一CDR区的抗体分子在例如Laune等人,1997,《生物化学杂志》,272:30937-44中有所描述，其中证明了衍生自CDR的一系列六肽显示抗原结合活性，并且注意到完整、单一CDR的合成肽显示出强结合活性。在Monnet等人,1999,《生物化学杂志》,274:3789-96中显示了一系列12-mer肽和相关的构架区具有抗原结合活性，并且评论了单独的CDR3样肽能够与抗原结合。在Heap等人,2005,《普通病毒学杂志(J.Gen.Virol.)》,86:1791-1800中报道了“微抗体”(含有单个CDR的分子)能够与抗原结合，并且显示了来自抗HIV抗体的环肽具有抗原结合活性和功能。在Nicaise等人,2004,《蛋白质科学(Protein Science)》,13:1882-91中显示了单个CDR可赋予其溶菌酶抗原的抗原结合活性和亲和力。
因此，具有五个、四个、三个或更少个CDR的抗体分子能够保留其衍生的全长抗体的抗原结合特性。
抗体分子也可以是全长抗体的衍生物或此类抗体的片段。当使用衍生物时，其应当具有与对应的全长抗体相同的抗原结合特征，即其与靶标上与全长抗体相同的表位结合。
因此，如本文所用，术语“抗体分子”包括所有类型的抗体分子及其功能片段和衍生物，包括：单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体、双特异性抗体、人类抗体、人类源抗体、人类源化抗体、嵌合抗体、单链抗体、单链Fvs(scFv)、Fab片段、F(ab')2片段、F(ab')片段、二硫键连接的Fvs(sdFv)、抗体重链、抗体轻链、抗体重链的同型二聚体、抗体轻链的同型二聚体、抗体重链的异源二聚体、抗体轻链的异源二聚体、此类同源和异源二聚体的抗原结合功能片段。
进一步地，如本文所用，术语“抗体分子”包括所有类型的抗体分子和功能片段，包括：IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD和IgE，除非另有说明。
如上所述，本发明涵盖不同类型和形式的抗体分子，并且是免疫学领域技术人员已知的。已知地，用于治疗目的的抗体通常用修饰抗体分子特性的另外的组分修饰。
因此，包括本发明的抗体分子或根据本发明使用的抗体分子(例如，单克隆抗体分子、和/或多克隆抗体分子、和/或双特异性抗体分子)包含可检测部分和/或细胞毒性部分。
“可检测部分”包括由以下部分组成的组的一个或多个：酶；放射性原子；荧光部分；化学发光部分；生物发光部分。可检测部分允许抗体分子在体外、和/或体内、和/或离体显现。
“细胞毒性部分”包括放射性部分和/或酶，其中酶是胱天蛋白酶和/或毒素，其中毒素是细菌毒素或毒液；其中细胞毒性部分能够诱导细胞裂解。
进一步包括可以是分离形式和/或纯化形式的抗体分子，且/或可以是聚乙二醇化的抗体分子。聚乙二醇化是一种方法，通过该方法，聚乙二醇聚合物被添加到如抗体分子或衍生物的分子中以修饰其行为，例如通过增加其流体动力学大小来延长其半衰期，从而防止肾清除。
如上所述，抗体的CDR与抗体靶标结合。本文所述的每个CDR的氨基酸分配是根据Kabat EA等人1991年在“免疫目的蛋白质序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)”第五版,NIH出版物第91-3242号,第xv至xvii页中定义的。
如本领域技术人员所知，还存在其它方法将氨基酸分配给每个CDR。例如，国际免疫遗传学信息***(International ImMunoGeneTics information system，IMGT(R))(http://www.imgt.org/以及Lefranc和Lefranc《免疫球蛋白事实书(The ImmunoglobulinFactsBook)》，由学术出版社出版，2001年)。
在一些实施例中，抗体分子与FcyRllb特异性结合。在本领域中，Fc受体作为膜蛋白是已知的，其存在于免疫效应细胞例如巨噬细胞的细胞表面。该名称来源于它们对抗体Fc区的结合特异性，这是抗体与受体结合的通常方式。然而，在抗体特异性结合一种或多种Fc受体的情况下，某些抗体也可以通过抗体的互补决定区(“CDR”)序列结合Fc受体。
Fc受体的亚群是Fcγ受体(Fc-gamma受体，FcgammaR)，其对IgG抗体有特异性。存在两种类型的Fcγ受体：活化Fcγ受体(也表示活化的Fcγ受体)和抑制性Fcγ受体。活化和抑制受体分别通过免疫受体酪氨酸基活化基序(ITAM)或免疫受体酪氨酸基抑制基序(ITIM)传递信号。在人类中，FcγRIIb(CD32b)是抑制性的Fcγ受体，而FcγRI(CD64)、FcγRIIa(CD32a)、FcγRIIc(CD32c)、FcγRIIIa(CD16a)和FcγRIV是活化的Fcγ受体。FcγRIIIb是中性粒细胞上表达的GPI连接受体，缺乏ITAM基序，但通过其交联脂筏和与其它受体结合的能力也被认为是活化的。在小鼠中，活化受体是FcγRI、FcγRIII和FcγRIV。
众所周知，抗体通过与Fcγ受体相互作用来调节免疫细胞活性。具体地，抗体免疫复合物如何调节免疫细胞的活化取决于其活化和抑制Fcγ受体的相对接合。“不同的抗体同种型以不同的亲和力结合活化和抑制Fcγ受体，导致不同的A：I比率(活化：抑制比率)(Different antibody isotypes bind with different affinity to activating andinhibitory Fcγreceptors,resulting in different A:I ratios(activation:inhibition ratios))”(Nimmerjahn等人；《科学(Science)》2005年12月2日；310(5753):1510-2)。
通过与抑制性Fcγ受体结合，抗体可以抑制、阻断和/或下调效应细胞的功能。
通过与活化的Fcγ受体结合，抗体可活化效应细胞功能，从而触发如抗体依赖的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖的细胞吞噬作用(ADCP)、细胞因子释放和/或抗体依赖的内吞作用以及在嗜中性粒细胞情况下的NETosis(即，NET、嗜中性粒细胞细胞外陷阱的活化和释放)的机制。与活化的Fcγ受体结合的抗体也可导致某些活化标记物的增加，如CD40、MHCII、CD38、CD80和/或CD86。
特异性结合FcγRIIb的根据本发明的抗体分子通过抗体的Fab区，即通过结合抗原的抗体上的抗原结合区，与Fcγ受体结合或相互作用，该抗原结合区由重链和轻链中的每一个的一个恒定结构域和一个可变结构域组成。特别地，它与免疫效应细胞上存在的FcγRIIb结合，并且特别是与免疫效应细胞表面上存在的FcγRIIb结合。
在一些优选的实施例中，特异性结合FcγRIIb的根据本发明的抗体分子也可以通过其Fc区结合Fcγ受体。在一些实施例中，这些是活化的或抑制性Fcγ受体。在一些优选的实施例中，抗体分子可以是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4型抗体分子。
在一些其它实施例中，特异性结合FcγRIIb的抗体分子可经工程改造以经由其Fc区(例如经由无岩藻糖基化)增强与Fcγ受体的结合。
在一些其它实施例中，根据本发明的抗体分子通过其Fc区降低或削弱与Fcγ受体的结合。已知地，抗体的糖基化，特别是在297位(例如以下突变之一:N297A、N297Q或N297G)，使人类和小鼠IgG与FcγR的结合受损。如果抗体分子缺乏Fc区，其结合也可能降低或受损。此外，FcγR结合受损或消除意味着修饰形式根本不与FcγR结合，或与未修饰的抗体相比，其与FcγR的结合强度较低。
“降低与Fcγ受体的结合”(也称为“亲和力降低的结合”)包括抗体分子具有降低的Fc介导的与Fcγ受体的结合，或者换句话说，与FcγRIIb特异性结合的抗体分子的Fc区与活化的Fcγ受体结合的亲和力低于正常人类IgG1的Fc区。结合的减少可以使用如表面等离子共振的技术来评估。在本文中,“正常IgG1”是指常规产生的具有未突变Fc区的IgG1，其产生不会改变其糖基化。作为这种“正常IgG1”的参照，可以使用在CHO细胞中产生的未经任何修饰的利妥昔单抗(Tipton等人，《血液(Blood)》,2015125:1901-1909；例如，在EP 0 605 442中描述了利妥昔单抗。与人类IgG1相比，人类IgG2和人类IgG4是与Fcγ受体结合的亲和力降低的抗体同种型的实例。因此，基于人类IgG2和IgG4的抗体在该术语的意义上具有“降低的与Fcγ受体的结合”。
在一些其它实施例中，根据本发明的抗体分子可以不具有Fc区(并且因此不能经由Fc区与Fcγ受体结合)。如上所述的此类片段包括Fv、Fab(也表示为F(ab)、F(ab')2、F(ab')或scFv。根据本发明的抗体分子也可以是双特异性抗体片段，例如scFv、Fab或Fab 2，对FcgRIIB和另外的FcgR是特异性的。
治疗性抗体分子可以是WO 2012/022985、WO 2015/173384和/或WO 2019/138005中描述的抗体分子。在一些实施例中，其是具有CDR序列SEQ ID Nos：83-88的抗体，如WO2012/022985所述。在一些实施例中，其是具有Seq ID No：12的VH和SEQ ID No：25的VL的抗体，如WO 2012/022985中所述。
在一些实施例中，如WO 2012/022985中所述,其是具有Seq ID No：12的VH、Seq IDNo：25的VL、Seq ID No：1的CH和Seq ID No：2的CL的抗体(对应于本文公开的具有带有SEQ.ID.No:1的轻链和SEQ.ID.No:2的重链的抗体)。在一些优选的实施例中，本发明的抗体分子具有SEQ ID No：1的轻链。在一些另外的实施例中，本发明的抗体分子具有SEQ ID No：2的重链。
轻链：
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYADDHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSQRAVIFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQID No:1)
重链：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELYDAFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID No:2)
在一些实施例中，本发明的抗体分子具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链(该抗体表示为BI-1206)。
如上所述，在一些实施例中，本发明的抗体分子可通过其Fc区降低或削弱了与Fcγ受体的结合。在这种情况下，治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，修饰形式是与治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但与具有受损或消除的FcγR结合的抗体。
在一些实施例中，治疗性抗体是Fc受体结合抗FcγRIIB抗体，并且在一些此类情况下，修饰形式是抗FcγRIIB抗体，该抗体具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：195的重链。
BI-1206的修饰形式是这样的形式，其中N297处的糖基化位点(在SEQ ID NO：2中以粗体标记)突变为Q(在下文中以粗体标记)，即N297Q突变，产生如下重链:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELYDAFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ.ID.No:195)
SEQ ID No：1的轻链的CDR区和SEQ ID No：2或195的重链的CDR区如下所示：
重链CDR：
CDRH1:SYGMH (SEQ ID No:196)
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG (SEQ ID No:197)
CDRH3:ELYDAFDI (SEQ ID No:198)
轻链CDR：
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH (SEQ ID No:199)
CDRL2:ADDHRPS (SEQ ID No:200)
CDRL3:ASWDDSQRAVI (SEQ ID No:201)
因此，在一些实施例中，本发明的抗体分子包含SEQ ID No：196-201中的一个或多个CDR序列。例如，抗体分子包含SEQ ID No：196-201中的两个或更多个、或三个或更多个、或四个或更多个、或五个或更多个、或全部六个CDR序列。例如，抗体分子可以包含：轻链CDR区中的一个或多个、或两个或更多个、或三个(即SEQ ID No：199、200和201)；和/或重链CDR区中的一个或多个、或两个或多个、或三个(即SEQ ID No：196、197和198)。
优选地，本发明的抗体分子包含以下恒定区(CH和CL)：
IgG1-CH[SEQ ID No:202]:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
λ-CL[SEQ ID No:203]:
QPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
因此，在优选的实施例中，本发明的抗体分子包含：
-SEQ ID号为1的轻链，SEQ ID号为2的重链，以及SEQ ID号为202和203的恒定区；或
-SEQ ID号为1的轻链，SEQ ID号为195的重链，以及SEQ ID号为202和203的恒定区。
在替代实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子是公开的PCT专利申请WO2012/022985、WO 2015/173384和/或WO 2019/138005中所描述的抗体。
特异性结合FcyRIIb的抗体可包含下列克隆的一个或多个序列:
抗体克隆：1A01
1A01-VH[SEQ ID NO:3]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMNWIRQTPGKGLEWVSLIGWDGGSTYYADSVKGRFTISRDNSENTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYSGYELDYWGQGTLVTVSS
1A01-VL[SEQ ID NO:27]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNASIFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:DYYMN[SEQ ID NO:51]
CDRH2:LIGWDGGSTYYADSVKG[SEQ ID NO:52]
CDRH3:AYSGYELDY[SEQ ID NO:53]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[SEQ ID NO:54]
CDRL2:DNNNRPS[SEQ ID NO:55]
CDRL3:AAWDDSLNASI[SEQ ID NO:56]
抗体克隆：1B07
1B07-VH[SEQ ID NO:4]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTRYDGSNKYYADSVRGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENIDAFDVWGQGTLVTVSS
1B07-VL[SEQ ID NO:28]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNQQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCEAWDDRLFGPVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:SYGMH[SEQ ID NO:57]
CDRH2:FTRYDGSNKYYADSVRG[SEQ ID NO:58]
CDRH3:ENIDAFDV[SEQ ID NO:59]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[SEQ ID NO:60]
CDRL2:DNQQRPS[SEQ ID NO:61]
CDRL3:WDDRLFGPV[SEQ ID NO:62]
抗体克隆：1C04
1C04-VH[SEQ ID NO:5]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSSISDSGAGRYYADSVEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTHDSGELLDAFDIWGQGTLVTVSS
1C04-VL[SEQ ID NO:29]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNHVLWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:SYAMS[SEQ ID NO:63]
CDRH2:SISDSGAGRYYADSVEG[SEQ ID NO:64]
CDRH3:THDSGELLDAFDI[SEQ ID NO:65]
CDRL1:SGSSSNIGSNHVL[SEQ ID NO:66]
CDRL2:GNSNRPS[SEQ ID NO:67]
CDRL3:AAWDDSLNGWV[SEQ ID NO:68]
抗体克隆：1E05
1E05-VH[SEQ ID NO:6]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYAMNWVRQVPGKGLEWVAVISYDGSNKNYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNFDNSGYAIPDAFDIWGQGTLVTVSS
1E05-VL[SEQ ID NO:30]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNSRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLGGPVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:TYAMN[SEQ ID NO:69]
CDRH2:VISYDGSNKNYVDSVKG[SEQ ID NO:70]
CDRH3:NFDNSGYAIPDAFDI[SEQ ID NO:71]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:72]
CDRL2:DNNSRPS[SEQ ID NO:73]
CDRL3:AAWDDSLGGPV[SEQ ID NO:74]
抗体克隆：2A09
2A09-VH[SEQ ID NO:7]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVAYISRDADITHYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTGFDYAGDDAFDIWGQGTLVTVSS
2A09-VL[SEQ ID NO:31]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNAVNWYQQLPGTAPKLLIYGNSDRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGRWVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:NAWMS[SEQ ID NO:75]
CDRH2:YISRDADITHYPASVKG[SEQ ID NO:76]
CDRH3:GFDYAGDDAFDI[SEQ ID NO:77]
CDRL1:SGSSSNIGSNAVN[SEQ ID NO:78]
CDRL2:GNSDRPS[SEQ ID NO:79]
CDRL3:AAWDDSLNGRWV[SEQ ID NO:80]
抗体克隆：2B08
2B08-VH[SEQ ID NO:8]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWVRQAPGKGLEWVALIGHDGNNKYYLDSLEGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARATDSGYDLLYWGQGTLVTVSS
2B08-VL[SEQ ID NO:32]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYYDDLLPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCTTWDDSLSGVVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:DYYMS[SEQ ID NO:81]
CDRH2:LIGHDGNNKYYLDSLEG[SEQ ID NO:82]
CDRH3:ATDSGYDLLY[SEQ ID NO:83]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[SEQ ID NO:84]
CDRL2:YDDLLPS[SEQ ID NO:85]
CDRL3:TTWDDSLSGVV[SEQ ID NO:86]
抗体克隆：2E08
2E08-VH[SEQ ID NO:9]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSAIGFSDDNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDGSGWSFWGQGTLVTVSS
2E08-VL[SEQ ID NO:33]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGNNAVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLRGWVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:DYYMS[SEQ ID NO:87]
CDRH2:AIGFSDDNTYYADSVKG[SEQ ID NO:88]
CDRH3:GDGSGWSF[SEQ ID NO:89]
CDRL1:SGSSSNIGNNAVN[SEQ ID NO:90]
CDRL2:DNNKRPS[SEQ ID NO:91]
CDRL3:ATWDDSLRGWV[SEQ ID NO:92]
抗体克隆：5C04
5C04-VH[SEQ ID NO:10]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREWRDAFDIWG
QGTLVTVSS
5C04-VL[SEQ ID NO:34]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSDNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGSWVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:NYGMH[SEQ ID NO:93]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[SEQ ID NO:94]
CDRH3:WRDAFDI[SEQ ID NO:95]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:96]
CDRL2:SDNQRPS[SEQ ID NO:97]
CDRL3:AAWDDSLSGSWV[SEQ ID NO:98]
抗体克隆：5C05
5C05-VH[SEQ ID NO:11]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARENFDAFDVWGQGTLVTVSS
5C05-VL[SEQ ID NO:35]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNSQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGQVVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:TYGMH[SEQ ID NO:99]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[SEQ ID NO:100]
CDRH3:ENFDAFDV[SEQ ID NO:101]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:102]
CDRL2:SNSQRPS[SEQ ID NO:103]
CDRL3:AAWDDSLNGQVV[SEQ ID NO:104]
抗体克隆：5D07
5D07-VH[SEQ ID NO:12]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIAYDGSKKDYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREYRDAFDIWGQGTLVTVSS
5D07-VL[SEQ ID NO:36]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTTASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSVSGWMFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:TYGMH[SEQ ID NO:105]
CDRH2:VIAYDGSKKDYADSVKG[SEQ ID NO:106]
CDRH3:EYRDAFDI[SEQ ID NO:107]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:108]
CDRL2:GNSNRPS[SEQ ID NO:109]
CDRL3:AAWDDSVSGWM[SEQ ID NO:110]
抗体克隆：5E12
5E12-VH[SEQ ID NO:13]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGINKDYADSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERKDAFDIWGQGTLVTVSS
5E12-VL[SEQ ID NO:37]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLNGLVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:SYGMH[SEQ ID NO:111]
CDRH2:VISYDGINKDYADSMKG[SEQ ID NO:112]
CDRH3:ERKDAFDI[SEQ ID NO:113]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:114]
CDRL2:SNNQRPS[SEQ ID NO:115]
CDRL3:ATWDDSLNGLV[SEQ ID NO:116]
抗体克隆：5G08
5G08-VH[SEQ ID NO:14]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFNNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNRYYADSVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRWNGMDVWGQGTLVTVSS
5G08-VL[SEQ ID NO:38]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYANNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPWVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:NYGMH[SEQ ID NO:117]
CDRH2:VISYDGSNRYYADSVKG[SEQ ID NO:118]
CDRH3:DRWNGMDV[SEQ ID NO:119]
CDRL1:SGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:120]
CDRL2:ANNQRPS[SEQ ID NO:121]
CDRL3:AAWDDSLNGPWV[SEQ ID NO:122]
抗体克隆：5H06
5H06-VH[SEQ ID NO:15]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSDTAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDHSVIGAFDIWGQGTLVTVSS
5H06-VL[SEQ ID NO:39]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCSSYAGSNNVVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:SYGMH[SEQ ID NO:123]
CDRH2:VISYDGSDTAYADSVKG[SEQ ID NO:124]
CDRH3:DHSVIGAFDI[SEQ ID NO:125]
CDRL1:SGSSSNIGSNTVN[SEQ ID NO:126]
CDRL2:DNNKRPS[SEQ ID NO:127]
CDRL3:SSYAGSNNVV[SEQ ID NO:128]
抗体克隆：6A09
6A09-VH[SEQ ID NO:16]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVTSYDGNTKYYANSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREDCGGDCFDYWGQGTLVTVSS
6A09-VL[SEQ ID NO:40]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNEGVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:SYGMH[SEQ ID NO:129]
CDRH2:VTSYDGNTKYYANSVKG[SEQ ID NO:130]
CDRH3:EDCGGDCFDY[SEQ ID NO:131]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:132]
CDRL2:GNSNRPS[SEQ ID NO:133]
CDRL3:AAWDDSLNEGV[SEQ ID NO:134]
抗体克隆：6B01
6B01-VH[SEQ ID NO:17]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQLGEAFDIWGQGTLVTVSS
6B01-VL[SEQ ID NO:41]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGPVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:NYGMH[SEQ ID NO:135]
CDRH2:VISYDGSNKYYADSVKG[SEQ ID NO:136]
CDRH3:DQLGEAFDI[SEQ ID NO:137]
CDRL1:TGSSSNIGAGYDVH[SEQ ID NO:138]
CDRL2:DNNKRPS[SEQ ID NO:139]
CDRL3:ATWDDSLSGPV[SEQ ID NO:140]
抗体克隆：6C11
6C11-VH[SEQ ID NO:18]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFDDYGMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAGGDIDYFDYWGQGTLVTVSS
6C11-VL[SEQ ID NO:42]
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNFGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYENNKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLNGPVFGGGTKLTVLG
CDR区
CDRH1:DYGMS[SEQ ID NO:141]
CDRH2:AISGSGSSTYYADSVKG[SEQ ID NO:142]
CDRH3:GDIDYFDY[SEQ ID NO:143]
CDRL1:TGSSSNFGAGYDVH[SEQ ID NO:144]
CDRL2:ENNKRPS[SEQ ID NO:145]
CDRL3:AAWDDSLNGPV[SEQ ID NO:146]
抗体克隆：6C12
6C12-VH[SEQ ID NO:19]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERRDAFDIWGQGTLVTVSS
6C12-VL[SEQ ID NO:43]
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在一些实施例中，与FcγRIIb特异性结合的抗体分子是人类抗体。
在一些实施例中，与FcγRIIb特异性结合的抗体分子是人类源抗体，即如本文所述进行了修饰的原始人类抗体。
在一些实施例中，与FcγRIIb特异性结合的抗体分子是人源化抗体，即进行了修饰以增加其与人类抗体类似性的原始非人类抗体。人类源化抗体可以是例如鼠类抗体或美洲驼抗体。
如上所述，第一抗体可以是单克隆抗体或单克隆来源的抗体分子。
众所周知，抗体与确定的靶分子或抗原特异性结合或相互作用。也就是说，抗体优先地和选择性地结合其靶标而不是非靶标的分子。
评估蛋白质结合的方法是生物化学和免疫学领域的技术人员已知的。本领域技术人员将理解，那些方法可用于评估抗体与靶标的结合和/或抗体的Fc区与Fc受体的结合；以及那些相互作用的相对强度、或特异性、或抑制、或预防、或减少。可以用于评估蛋白质结合的方法的实例是，例如，免疫测定、BIAcore、蛋白质印迹、放射免疫测定(RIA)和酶联免疫吸附测定(ELISA)(参见《基础免疫学第二版(Fundamental Immunology Second Edition)》,雷文出版(Raven Press),纽约,第332至336页(1989)关于抗体特异性的讨论)。
因此,“与…特异性结合的抗体分子”包括与靶标特异性结合的抗体分子，但不结合非靶标，或比靶标更弱地结合非靶标(例如具有较低的亲和力)。
我们还包括这样的含义，即抗与靶标特异性结合的抗体比与非靶标的特异性结合强至少2倍、或至少5倍、或至少10倍、或至少20倍、或至少50倍、或至少100倍、或至少200倍、或至少500倍、或至少约1000倍。
另外地，如果抗体以至少约10-1Kd、或至少约10-2Kd、或至少约10-3Kd、或至少约10- 4Kd、或至少约10-5Kd、或至少约10-6Kd、或至少约10-7Kd、或至少约10-8Kd、或至少约10-9Kd、或至少约10-10Kd、或至少约10-11Kd、或至少约10-12Kd、或至少约10-13Kd、或至少约10-14Kd、或至少约10-15Kd的Kd结合靶标，则包括与靶标特异性结合的抗体。
如上所述，本发明的***、组合、方法或用途是用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性。众所周知，治疗性抗体的施用可能与耐受性问题有关。在一些实施例中，这些问题可能与抗体的静脉内施用有关。
如本文所用，术语“耐受性”是指受试者可耐受治疗剂不良作用的程度。对于“不良作用”,包括由治疗剂直接或间接引起的任何不是所需治疗效果的效果，或由治疗剂直接或间接引起的任何其它有益效果。
“改善耐受性”包括预防或减轻与施用抗体分子有关的耐受性问题。在另一定义中，包括减少或防止与施用抗体分子有关的不良作用。
如本文所用，术语“耐受性问题”包括不同类型的不良作用，这些不良作用可能与向人类施用抗体分子,尤其是静脉内施用抗体有关。这些可能是例如输注相关反应(IRR)、细胞因子释放综合征、血小板减少症、肝毒性如肝酶升高、发热、低血压和/或皮肤毒性，包括皮疹如荨麻疹。在本文中，这些不同的耐受性问题以它们在不良事件通用术语标准(CTCAE)5.0版(由美国卫生与公众服务部于2017年11月27日公布)中定义的方式定义，如下文进一步所述。
耐受性问题可能有不同的等级，即对于出现耐受性问题的受试者，严重性不同。在某些情况下，它们会导致受试者不适，而在其它情况下，它们可能会导致严重的问题，可能会妨碍治疗性抗体分子的持续治疗。在更严重的情况下，耐受性问题甚至可能导致受试者死亡。
如本文所述，可以预测、预防和/或减轻的耐受性问题是与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的不良事件，即，在施用治疗性抗体分子时立即发生，如在向受试者施用治疗性抗体分子后几分钟至几小时内或24小时内发生。在许多情况下，在不到30分钟内观察到第一个耐受性问题。
在一些优选的实施例中，特别感兴趣的是改善与FcyRllb特异性结合的抗体的耐受性，特别是与IRR有关。在一些实施例中，这些抗体更可能会在人类受试者体内引起或导致不同严重程度的IRR。因此，预防或减轻此类IRR是有利的，因为其改善了受试者的体验，并且还允许在由于耐受性问题而需要停止治疗之前(如果确实需要停止治疗的话)施用更长时间和更高剂量的治疗性抗体。
在一些情况下，特别是预防血小板减少症和/或肝毒性可能是有益的。
如本文所述可以预防或减轻的和/或可以用本文所述方法预测的IRR可以是任何IRR。CTCAE 5.0版中“输注相关反应”表示的不良事件用于以对药物或生物物质输注的不良反应为特征的病症；属于“损伤、中毒及手术并发症”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)轻度瞬时反应；未显示输注中断；未指明干预
2)指示治疗或输液中断，但对症治疗(例如，抗组胺药、NSAIDS、***、静脉内液体)迅速有反应；指示≤24小时的预防性药物
3)持续时间长(例如，对症药物治疗反应不迅速和/或输注瞬时中断)；最初改善后症状复发；因临床后遗症住院治疗
4)危及生命的后果；指示紧急干预
5)死亡。
基于上述分类器，本领域技术人员将能够在施用本文定义的抗体分子后，例如通过观察受试者的IRR症状，来确定受试者的输注相关反应。在一些实施例中，这些可以包括瘙痒、荨麻疹、发热、寒战/发冷、发汗、支气管痉挛、恶心、肌肉疼痛和心血管衰竭。
在一些优选的实施例中，通过本文所述的给药方案减少或完全预防与本文所述的抗体分子相关的IRR。
CTCAE 5.0版中“细胞因子释放综合征”表示的不良事件用于以由细胞因子释放引起的发热、呼吸急促、头痛、心动过速、低血压、皮疹和/或缺氧为特征的病症，属于“免疫***病症”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)发热伴或不伴全身症状
2)对输液有反应的低血压；低氧对<40％ O2有反应
3)用一个加压器管理低血压；缺氧需要≥40％ O2
4)危及生命的后果；指示紧急干预
5)死亡
CTCAE 5.0版中“血小板计数减少”(即血小板减少症)表示的不良事件用于基于实验室检验结果的发现，该结果表示血液样本中血小板数量减少，属于“研究”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)<LLN–75,000/mm3；<LLN–75.0x10e9/L
2)<75,000–50,000/mm3；<75.0–50.0x10e9/L
3)<50,000–25,000/mm3；<50.0–25.0x10e9/L
4)<25,000/mm3；<25.0x10e9/L
5)–
有关毒性也可能是肝脏不良事件或肝脏毒性。此类毒性的实例是天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)这两种酶中的一种或两种升高。与血小板减少症一样，CTCAE5.0版中“天冬氨酸转氨酶升高”和“丙氨酸转氨酶升高”表示的不良事件属于“研究”组。AST或ALT分别升高是基于实验室检验结果的发现，该结果表明血液样本中AST(或SGOT)和ALT(或SGPT)水平分别升高。CTCAE中确定的AST和ALT升高的五个等级如下：
1)如果基线正常，则>ULN至3.0倍ULN；如果基线异常，则为基线的1.5至3.0倍
2)如果基线正常，则>ULN的3.0至5.0倍；如果基线异常，则>基线的3.0至5.0倍
3)如果基线正常，则>ULN的5.0至20.0倍；如果基线异常，则>基线的5.0至20.0倍
4)如果基线正常，则>ULN的20.0倍；如果基线异常，则>基线的20.0倍
5)-。
CTCAE 5.0版中“发热”表示的不良事件用于以体温升高超过正常上限为特征的疾病，属于“全身性疾病和施用部位病症”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)38.0至39.0℃
2)>39.0至40.0℃
3)>40.0℃，持续≤24小时
4)>40.0℃，持续>24小时
5)死亡。
CTCAE 5.0版中表示“低血压”的不良事件用于以血压低于指定环境中个体预期的正常值为特征的疾病，属于“血管疾病”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)无症状，无需干预
2)非紧急医疗干预
3)需要医疗干预；住院治疗
4)指示危及生命的后果和紧急干预
5)死亡。
CTCAE 5.0版中表示为“荨麻疹”的不良事件用于以瘙痒性皮疹为特征的病症，该皮疹以内部苍白、边缘清晰的红色风团为特征，属于“皮肤和皮下组织疾病”组。CTCAE中确定的五个等级如下：
1)覆盖<10％BSA的荨麻疹病变；指示局部干预
2)覆盖10至30％BSA的荨麻疹病变；指示口服干预
3)覆盖>30％BSA的荨麻疹性病变；指示静脉内干预
4)-
5)-。
在一些其它实施例中，耐受性的改善与在施用抗体时观察到的不良作用的减少或预防有关。在一些实施例中，这些可以是直接或间接归因于施用抗体的作用。
在一些实施例中，上述耐受性问题和/或不良作用导致几个受试者观察结果的变化超出正常水平。在一些实施例中，这些观察结果包括以下各项中的一项或多项：体温；血小板计数；肝酶(例如丙氨酸氨基转移酶(ALAT)和/或天冬氨酸氨基转移酶(ASAT))的血液水平；细胞因子(例如IL-6、TNF-α、IL-8、IFN-γ、MIP-1β、IL-10、IL-4、IL-1b、IL-2、IL-12)的血液水平。
上述测量的正常水平中的每一个通常定义如下：
·体温：从36.1℃至37.9℃；
·血小板计数：从145x109至400x109每升；
·ALAT的血液水平：从0至1.09μkat/L，16至63U/L；
·ASAT的血液水平：从0至0.759μkat/L，15至37U/L；
·IL-6血液水平：从0.16至27.2pg/ml，以及中值为0.47pg/ml。
在一些实施例中，本发明的***、组合、方法或使用减少了上述参数中的每一个的变化。“减少变化”是指当使用本发明的治疗***或剂量方案时，与施用单剂量(相当于本文所定义的本发明的第一和第二剂量之和(以mg计))的抗体分子相比，上述每个测量值的变化程度较小。优选地，这些变化被减小到可接受的水平内。
“可接受的水平”是指在用第二剂量的抗体分子治疗后，上述测量值保持在如上定义的正常范围内。在一些实施例中，在施用第二剂量的抗体分子后，上述测量值保持在上述定义的正常范围内。在一些其它实施例中，“可接受的水平”包括IRR的临床分级(如本领域和本文使用CTCAE量表所定义)降低到至少2级。在一些优选实施例中，IRR的分级降低到1级。如本文所讨论的，本领域技术人员知道到如何根据CTCAE等级对IRR进行分级。
在一些优选实施例中，这些值在施用第二剂量的抗体分子后至少24小时保持在正常水平内，或在可接受的水平内变化。
如上所述，本发明提供了一种***、组合、方法或用途，其中在第一剂量的抗体分子之前向受试者施用皮质类固醇。皮质类固醇是一类已知的类固醇激素，已被广泛用于各种临床应用。
如实例1中所示，已令人惊讶地发现皮质类固醇提供了针对与施用本发明的治疗性抗体有关的输注相关反应的保护作用。还如实例2中所示，先前已在临床上用于治疗IRR的其它化合物不提供保护作用(或仅提供累加作用)。这些通常用于治疗IRR的其它化合物包括但不限于以下：抗组胺药(例如H1和H2阻断剂)、抗PAF、抗IL-6R和白三烯受体拮抗剂(例如孟鲁司特)。这使得皮质类固醇单独的保护作用在本发明的上下文中令人惊讶，因为这些其它常用的疗法都没有提供类似的保护作用。
在本发明的***、组合、方法或用途的优选实施例中，在与FcyRllb特异性结合的抗体分子第一剂量之前的10分钟至48小时的时间点，向受试者施用皮质类固醇。更优选地，在与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第一剂量之前的10分钟至24小时的时间点，向受试者施用皮质类固醇。
因此，在本发明的实施例中，在与FcyRllb特异性结合的抗体分子第一剂量之前的约10分钟、或约20分钟、或约30分钟、或约40分钟、或约50分钟、或约1小时、或约2小时、或约3小时、或约4小时、或约5小时、或约6小时、或约7小时、或约8小时、或约9小时、或约10小时、或约11小时、或约12小时、或约13小时、或约14小时、或约15小时、或约16小时、或约17小时、或约18小时、或约19小时、或约20小时、或约21小时、或约22小时、或约23小时、或约24小时、或约25小时、或约26小时、或约27小时、或约28小时、或约29小时、或约30小时、或约31小时、或约32小时、或约33小时、或约34小时、或约35小时、或约36小时、或约37小时、或约38小时、或约39小时、或约40小时、或约41小时、或约42小时、或约43小时、或约44小时、或约45小时、或约46小时、或约47小时、或约48小时的时间点，施用皮质类固醇。
在本发明的实施例中，在与FcyRIIb特异性结合的抗体分子的第一剂量之前，可以施用多于一个剂量的皮质类固醇。例如，在施用第一剂量与FcyRIIb特异性结合的抗体分子之前，皮质类固醇可以以两个剂量、三个剂量、四个剂量、五个剂量、六个剂量、七个剂量、八个剂量、九个剂量、十个剂量、十一个剂量、十二个剂量或多于十二个剂量施用。
在一些另外的或替代的实施例中，当施用多于一个剂量的皮质类固醇时，皮质类固醇可以在第一剂量的与FcyRIIb特异性结合的抗体分子之前和后(但在第二剂量的与FcyRIIb特异性结合的抗体之前)施用。至少一个剂量的皮质类固醇将在第一剂量的抗体分子之前施用，但所述的其它后续皮质类固醇剂量将在第一剂量的抗体分子后施用，并且可以以任何顺序在抗体剂量之间分布。
在这些实施例中，在与FcyRIIb特异性结合的抗体第二次施用之前施用皮质类固醇可以是在与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第二次施用之前的约10分钟、或约20分钟、或约30分钟、或约40分钟、或约50分钟、或约1小时、或约2小时、或约3小时、或约4小时、或约5小时、或约6小时、或约7小时、或约8小时、或约9小时、或约10小时、或约11小时、或约12小时、或约13小时、或约14小时，或约15小时、或约16小时、或约17小时、或约18小时、或约19小时、或约20小时，或约21小时、或约22小时、或约23小时、或约24小时、或约25小时、或约26小时、或约27小时、或约28小时、或约29小时、或约30小时、或约31小时、或约32小时、或约33小时、或约34小时、或约35小时、或约36小时、或约37小时、或约38小时、或约39小时、或约40小时、或约41小时、或约42小时、或约43小时、或约44小时、或约45小时、或约46小时、或约47小时、或约48小时的时间点。
优选地，皮质类固醇在第一剂量与FcyRIIb特异性结合的抗体之前以第一剂量和第二剂量施用。优选地，当皮质类固醇以第一剂量和第二剂量施用时，皮质类固醇的第一剂量在第一剂量的与FcyRllb另一剂量的皮质类固醇的抗体分子之前16小时至48小时的时间点施用，第二剂量的皮质类固醇在第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前10分钟至2小时的时间点施用。
应当理解，在本发明的此类实施例中，第一剂量的皮质类固醇可以在第一剂量之的抗体分子前16小时至48小时之间的任何时间点施用，例如，在第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前的在约16小时、或约17小时、或约18小时、或约19小时、或约20小时、或约21小时、或约22小时、或约23小时、或约24小时、或约25小时、或约26小时、或约27小时、或约28小时、或约29小时、或约30小时、或约31小时、或约32小时、或约33小时、或约34小时、或约35小时，或约36小时、或约37小时、或约38小时、或约39小时、或约40小时、或约41小时、或约42小时、或约43小时、或约44小时、或约45小时、或约46小时、或约47小时、或约48小时的时间点。还应当理解，在本发明的这些实施方案中，第二剂量的皮质类固醇可以在第一剂量的抗体分子之前10分钟至2小时之间的任何时间点施用，例如，在第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约10分钟、或约20分钟、或约30分钟、或约40分钟、或约50分钟、或约1小时、或约2小时的时间点。
在本发明进一步优选的实施例中，另一剂量的皮质类固醇在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前施用。因此，在此类实施例中，另一剂量的皮质类固醇在第一剂量的抗体分子后但在第二剂量的抗体分子之前施用。优选地，施用一种或多种另外剂量的皮质类固醇，例如一种另外剂量；或两种另外剂量；或三种另外剂量；或四种另外剂量；或五种另外剂量；或六种另外剂量；或七种另外剂量；或八种另外剂量；或九种另外剂量；或十种另外剂量；或十一种另外剂量；或十二种另外剂量或会更多。
优选地，另外剂量的皮质类固醇在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前16小时至48小时的时间点施用。因此，在本发明的此类实施例中，另外的剂量的皮质类固醇可以在第二剂量的抗体分子之前16小时至48小时之间的任何时间点施用，例如，在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前的在约16小时、或约17小时、或约18小时、或约19小时、或约20小时、或约21小时、或约22小时、或约23小时、或约24小时、或约25小时、或约26小时、或约27小时、或约28小时、或约29小时、或约30小时、或约31小时、或约32小时、或约33小时、或约34小时、或约35小时，或约36小时、或约37小时、或约38小时、或约39小时、或约40小时、或约41小时、或约42小时、或约43小时、或约44小时、或约45小时、或约46小时、或约47小时、或约48小时的时间点。
在一些实施例中，本文所述的给药方案可以根据具体患者的需要重复多次。例如，每次向患者施用与FcyRllb特异性结合的抗体分子时，都可以采用这种剂量方案。在一些实施例中，施用方案的确切形式(就施用时间和量而言)可在对患者的重复施用之间变化。重复使用本文所述施用方案的优点在于其确保每次施用与FcyRllb特异性结合的抗体时实现耐受性的改善(例如输注相关反应减少)。
本发明的皮质类固醇可以0.5至20mg的剂量施用。在本发明优选的实施例中，皮质类固醇以约4mg至约20mg的剂量，例如以约12mg至约20mg的剂量施用、或以约4mg至约12mg的剂量施用。例如，皮质类固醇的施用剂量为约4mg或更大，例如约5mg或更大、或约6mg或更大、或约7mg或更大、或约8mg或更大、或约9mg或更大、或约10mg或更大、或约11mg或更大、或约12mg或更大、或约13mg或更大、或约14mg或更大、或约15mg或更大、或约16mg或更大、或约17mg或更大、或约18mg或更大、或约19mg或更大、或约20mg或更大。
在一些优选的实施例中，皮质类固醇是***(dexamethasone)。在一些另外的或替代的实施例中，皮质类固醇是倍他米松(betamethasone)。在一些实施例中，使用***和倍他米松的组合。本领域技术人员将理解，本发明考虑了其它皮质类固醇，例如以下的一种或多种：可的松；氢化可的松；强的松；***龙；去炎松；和甲泼尼龙；或其组合。
在一些实施例中，当皮质类固醇为***时，***的剂量为0.5mg至20mg。在一些实施例中，当使用***时，***的剂量为约4mg或更大，例如在优选的实施例中约4至20mg。在一些实施例中，***的剂量为约12mg或更大，例如约12至20mg。在一些实施例中，***的剂量为约4至12mg。在特别优选的实施例中，***的剂量为约12mg或为约20mg。
在本发明特别优选的实施例中，施用第一剂量和第二剂量的皮质类固醇***。更优选在本发明的这些实施例中，当使用***时：第一剂量为约4至20mg和/或第二剂量为约4至25mg；或第一剂量为约4至20mg和第二剂量为约4至25mg；或第一剂量为约10至12mg和/或第二剂量为约20mg；或第一剂量为约10至12mg和第二剂量为约20mg。
在一些实施例中，当皮质类固醇为倍他米松时，倍他米松的剂量为0.5mg至20mg。在一些实施例中，当使用倍他米松时，倍他米松的剂量为约3.2mg或更大，例如约4mg或更大，例如约3.2至16mg或约4至20mg。在一些实施例中，倍他米松的剂量为约12mg或更大，例如约12至20mg。在一些实施例中，倍他米松的剂量为约4至12mg。在特别优选的实施例中，倍他米松的剂量为约12mg或为约20mg。
在本发明特别优选的实施例中，施用第一剂量和第二剂量的皮质类固醇倍他米松。更优选地，在本发明的这些实施例中，当使用倍他米松时：第一剂量为约3.2至16mg和/或第二剂量为约3.2至20mg；或第一剂量为约3.2至16mg和第二剂量为约3.2至20mg；或第一剂量为约8至9.6mg和/或第二剂量为约16mg；或第一剂量为约8至9.6mg和第二剂为约16mg。
技术人员将理解，除了本文所述的那些之外，其它皮质类固醇是本领域已知的；由于皮质类固醇以类似的方式起作用，应当理解，任何皮质类固醇都可用于本发明。
如上所述，本发明提供了一种***、组合、方法或用途，其中以至少第一剂量和第二剂量向受试者施用与FcyRllb特异性结合的抗体分子。
在本发明的优选实施例中，第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约1至约24小时的时间点施用。因此，在本发明的此类实施例中，第一剂量的抗体分子在第二剂量的抗体分子之前约1至约24小时之间的任何时间点施用，例如，在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前的在约1小时、或约2小时、或约3小时、或约4小时、或约5小时、或约6小时、或约7小时、或约8小时、或约9小时、或约10小时、或约11小时、或约12小时、或约13小时、或约14小时、或约15小时、或约16小时、或约17小时、或约18小时、或约19小时、或约20小时、或约21小时、或约22小时、或约23小时、或约24小时的时间点。
最优选地，在本发明实施例中，第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约1小时施用，或在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约24小时施用。
在另一实施例中，第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子在第二剂量与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约24小时至约48小时的时间点施用。因此，在本发明的此类实施例中，第一剂量的抗体分子在第二剂量的抗体分子之前约24小时至约48小时之间的任何时间点施用-例如，在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前的约24小时、或约25小时、或约26小时、或约27小时、或约28小时、或约29小时、或约30小时、或约31小时、或约32小时、或约33小时、或约34小时、或约35小时、或约36小时、或约37小时、或约38小时、或约39小时、或约40小时、或约41小时、或约42小时、或约43小时、或约44小时、或约45小时、或约46小时、或约47小时、或约48小时的时间点。
如上所述，本发明提供了一种***、组合、方法或用途，其中抗体分子的第一剂量低于抗体分子的最大治疗有效剂量。
本领域技术人员知道，对于经批准的抗体疗法，建议某些剂量(通常以mg/kg表示)用于某些患者组或用于患有特定类型癌症的受试者。通常，建议剂量在经批准的抗体治疗剂的标签或处方信息中有所描述。可以根据特定受试者计算建议剂量，即基于癌症类型、癌症阶段、其体重、体重指数(BMI)和其它因素。
本领域技术人员将理解，建议剂量将根据抗体分子的特性而不同。在标记或处方信息中没有描述抗体分子的情况下，如何使用本领域熟知的技术确定建议剂量对于本领域技术人员是显而易见的。
“建议剂量”通常指抗体分子的“批准剂量”、“最大耐受剂量(MTD)”或“治疗有效剂量”。MTD是药物开发中一个公认的术语，并且指的是在可接受的耐受性水平下可以使用的最高药物剂量。
“治疗有效剂量”是指被认为具有治疗活性(即在本文定义的受试者体内产生期望的治疗效果)的任何剂量。
“最大治疗有效剂量”是指在不考虑耐受性的情况下实现最大治疗活性的(最低)剂量(其在缺乏适当的施用措施来减轻不良作用的情况下，这可能是次优的或不耐受的)。这是本领域技术人员在向有此需要的受试者施用抗体分子时尝试使用的理想剂量。
“治疗活性”包括在受试者体内产生期望的治疗效果的剂量。“治疗效果”包括可直接或间接归因于使用考虑中的疗法的所有效果。这可以是可测量的治疗效果，例如减小的肿瘤体积或减小的肿瘤大小(其可以通过例如CT扫描确定)，或治疗性抗体或治疗的有效性。在其它情况下，这可能是更主观的效果，例如受试者报告的症状严重程度的降低。受试者响应于治疗性抗体的施用的治疗效果的测量是本领域已知的。此外，一名受试者或一组受试者在限定的一段时间内的存活水平是治疗效果的替代读出。
本发明基于发明人的惊人发现，即当向受试者施用皮质类固醇，后续施用至少第一剂量和第二剂量的抗体分子时，受试者体内于FcyRIIb特异性结合的抗体分子的耐受性得到改善，其中第一剂量低于该抗体的“最大治疗有效剂量”。换句话说，抗体分子的第一剂量是次最大治疗剂量——也就是说，它低于抗体的最大治疗有效剂量。
在本发明的优选实施例中，与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第一剂量低于最大耐受治疗剂量。如上所述，最大耐受治疗剂量是可以使用的被认为是耐受的药物的最高剂量(即不会在患者体内产生不可接受水平的毒性或不良作用，并且这可能低于最大治疗有效剂量)。这不同于最大治疗有效剂量，因为该剂量必须是患者可以耐受的。特定患者可耐受的不良作用/毒性水平取决于疾病的阶段或严重程度等因素。
改善药物耐受性和治疗窗不仅对于治疗严重疾病患者(例如患有癌症的患者)很重要，而且对于用于患有非危及生命的疾病(例如自身免疫性疾病或传染病，其中中度或甚至轻度不良作用可能是不可接受的)的患者也是至关重要的。
在一些其它情况下，低于最大治疗有效剂量或最大耐受治疗剂量的剂量低于被认为是治疗有效的最低剂量(即最小有效剂量)。换句话说，抗体分子的第一剂量可以是当作为单一剂量单独施用时没有治疗效果的剂量。
在一些其它情况下，抗体的第一剂量低于最大可行剂量。在一些情况下，实际性，例如制剂的考虑，可能会限制可以施用的最大剂量。考虑到此类因素的最大此类剂量被称为最大可行剂量。
在一些其它情况下，低于耐受治疗剂量的剂量低于建议的耐受治疗剂量。在一些实施例中，这可以包括药物标签中包括的适应症的建议剂量。
对于本领域技术人员如何为任何特定抗体定义特定耐受治疗剂量是显而易见的，通常在临床试验期间使用剂量递增研究。尚未被批准的抗体的耐受治疗剂量可以基于已经被批准或已经过大量临床试验的类似抗体的耐受治疗剂量。
在本发明优选的实施例中，与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第一剂量比最大治疗有效剂量低至少50％。例如，抗体分子的第一剂量比最大治疗有效剂量低至少60％、或低至少70％、或低至少80％、或低至少90％。
在本发明的一个实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子以第一剂量施用，导致FcyRIIb受体的高受体饱和度，如：在输注结束和直到第二抗体输注之前之间的时间点测量的至少50％的受体饱和度；或至少60％的受体饱和度；或至少70％的受体饱和度；或至少80％的受体饱和度；或至少90％的受体饱和度；或至少95％的受体饱和度；或至少96％的受体饱和度；或至少97％的受体饱和度；或至少98％的受体饱和度；或至少99％的受体饱和度；或接近100％的受体饱和度；或100％的受体饱和度。测量受体饱和度的方法是本领域技术人员已知的。
优选地，高受体饱和度至少是瞬时的，但可以维持较长一段时间。瞬时受体饱和是指所指示的饱和维持至少15分钟，并且优选1至6小时，并且最优选持续直到第二次抗体施用。如本文所讨论的，第一和第二抗体分子剂量之间的一段时间可以在约1小时至约48小时之间变化。
如本文所讨论的，抗体分子的剂量可以基于其将待施用的受试者的体重来表示—通常以每千克受试者体重的抗体分子的毫克数来表示。
在本发明优选的实施例中，第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子以约0.2mg/kg至约0.6mg/kg的剂量施用；例如，剂量为约0.3mg/kg至约0.5mg/kg。因此，应当理解，第一剂量的抗体分子可以以下剂量施用：约0.2mg/kg、或约0.3mg/kg、或约0.4mg/kg、或约0.5mg/kg、或约0.6mg/kg。
应当理解，根据待施用抗体分子的受试者的体重，第一剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子可以以约10mg至约20mg的剂量施用。在其它实施例中，第一剂量的抗体可以以约20mg至约40mg或更多的剂量施用；例如，剂量为约20mg至30mg、或约30mg至40mg、或约40mg至50mg、或约50mg至60mg、或约60mg至70mg、或更多。因此，应当理解，第一剂量的抗体分子可以以下剂量施用：约10mg、约20mg、或约25mg、或约30mg、或约35mg或约40mg、或约45mg、或约50mg、或约55mg、或约60mg、或约65mg、或约70mg、或更多。
在本发明的一个实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子以导致FcyRIIb受体的高受体饱和度的剂量施用，例如：至少50％的受体饱和度；或至少60％的受体饱和度；或至少70％的受体饱和度；或至少80％的受体饱和度；或至少90％的受体饱和度；或至少95％的受体饱和度；或至少96％的受体饱和度；或至少97％的受体饱和度；或至少98％的受体饱和度；或至少99％的受体饱和度；或接近100％的受体饱和度；或100％的受体饱和度。测量受体饱和度的方法是本领域技术人员已知的。
瞬时受体饱和是指所指示的饱和维持至少15分钟，并且优选1至6小时，并且最优选持续直到第二次抗体施用。
如上所述，本发明提供了一种***、组合、方法或用途，其中向受试者施用第二剂量的与FcyRIIb特异性结合的抗体分子。
优选地，与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第二剂量是治疗有效剂量。在一些实施例中，抗体分子的第二剂量可以是如本文所定义的最大治疗有效剂量。
更优选地，与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第二剂量是最大耐受治疗剂量或最大可行治疗剂量。
更优选地，与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第二剂量低于治疗有效剂量。
在一些实施例中，抗体分子的第二剂量高于抗体分子的第一剂量。在替代的实施例中，抗体分子的第二剂量低于抗体分子的第一剂量。
在一些实施例中，在第一剂量和第二剂量之间施用的与FcyRllb特异性结合的抗体的总量为约30mg至约3000mg。在一些实施例中，在第一剂量和第二剂量之间施用的与FcyRllb特异性结合的抗体的总剂量为约0.3mg/kg至约20mg/kg。在一些其它实施例中，第一和第二抗体剂量之间的总剂量是导致FcyRIIb受体至少瞬时高受体饱和度，例如至少90％受体饱和度的剂量。在一些优选的实施例中，这种高受体饱和度持续约1小时至约4周的总持续时间。
本领域技术人员将理解，可以按施用的抗体分子的第一剂量的量来调节与FcyRllb特异性结合的抗体分子的第二剂量。
在一些优选的实施例中，以约0.1mg/kg至约19.8mg/kg的剂量施用第二剂量的与FcyRIIb受体特异性结合的抗体分子。
应当理解，根据待施用抗体分子的受试者的体重，第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子可以以约20mg至约2900mg的剂量施用。
在本发明优选的实施例中，在第二剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子后，向受试者施用另外剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子。
在优选的实施例中，还根据本文公开的给药方案施用其它另外剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子。例如，每次向患者施用与FcyRllb特异性结合的抗体分子时，都可以采用这种剂量方案。在一些实施例中，施用方案的确切形式(就施用时间和量而言)可在对患者的重复施用之间变化。重复使用本文所述施用方案的优点在于其确保每次施用与FcyRllb特异性结合的抗体时实现耐受性的改善(例如输注相关反应减少)。在一些其它实施例中，抗体分子的其它另外剂量以本文所定义的最大治疗有效剂量施用。典型地，重复剂量将在量级上类似于先前施用的剂量-例如：
-如果先前施用的抗体剂量为1.3mg/kg(例如0.3mg/kg(第一剂量)+1mg/kg(第二剂量))，则后续另外剂量也将为1.3mg/kg；
-如果先前施用的抗体剂量为2.5mg/kg(例如0.5mg/kg(第一剂量)+2mg/kg(第二剂量))，则后续另外剂量也将为2.5mg/kg；
-如果先前施用的抗体剂量为3.3mg/kg(0.3mg/kg(第一剂量)+3mg/kg(第二剂量))，则另外剂量也将为3.3mg/kg；
-如果先前施用的抗体剂量为5.4mg/kg(例如0.4mg/kg(第一剂量)+5mg/kg(第二剂量))，则另外剂量也将为5.4mg/kg；
-如果先前施用的抗体剂量为10.5mg/kg(例如0.5mg/kg(第一剂量)+10mg/kg(第二剂量))，则后续另外剂量也将为10.5mg/kg；
然而，如本领域技术人员将理解的，重复给药也可以根据患者耐受性的指导使用更高或更低的总剂量。可以使用类似的基于平坦给药或受体占有率引导的给药方案。应当理解，当与某些治疗性抗体，特别是用于治疗癌症或炎性疾病的治疗性抗体一起施用时，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子具有特别的效用。
已知地，许多治疗性抗体通过募集天然效应***(如细胞毒性细胞(例如巨噬细胞)和酶(例如补体),然后靶向治疗性抗体结合的细胞，从而刺激癌症和其它不需要的细胞的清除，从而发挥其治疗效果。例如，I型抗CD20单克隆抗体(如目前的市场领导者利妥昔单抗)的工作原理是与B细胞表面的CD20分子结合，并删除这些靶标B细胞。它们通过募集和活化效应细胞来做到这一点，这些效应细胞通过这些效应细胞表面表达的Fcγ(即Fcγ)受体与治疗性抗体的Fc结构域相互作用。
已知决定此类治疗性抗体(例如针对抗原如CD20的抗体)的有效性的因素是与抑制性FcγRIIb(也称为并包括CD32、CD32B、CD32B1、CD32B2、FcRII、FcγRII或FcRIIB)的相互作用。FcgRIIB可通过顺式作用(即作用于治疗性抗体靶向的细胞)或反式作用(即作用于邻近效应细胞，该效应细胞通过其Fcγ受体与抗体靶向细胞表面包被的抗体恒定区结合)的几种机制降低治疗效果并促进对癌症的抗性。例如，这种相互作用可导致治疗性抗体被靶细胞内化，从而消除其与效应细胞Fc受体相互作用的能力。已知与靶细胞上的FcyRIIb结合的试剂(例如与FcyRIIb特异性结合的抗体分子)阻断这种内化，并改善治疗性抗体的活性。
因此，在特别优选的实施例中，本发明提供了一种***、组合、用途或方法，其进一步包含施用一种或多种治疗性抗体以治疗受试者的癌症或炎性疾病。
优选地，一种或多种治疗性抗体选自由以下组成的组：
-一种或多种抗PD1抗体(例如派姆单抗、纳武单抗、西米普利单抗、卡瑞利珠单抗、多塔利单抗和/或其生物类似物)；
-一种或多种抗CD20抗体(例如利妥昔单抗、奥比妥珠单抗、奥法木单抗和/或其生物类似物；例如如Roghanian等人,《癌细胞(Cancer Cell)》,2015,27:473-488中讨论的)；
-一种或多种抗CD19抗体(例如替朗妥昔单抗)；
-一种或多种抗CD40抗体(例如CP-870,893)；
-一种或多种抗CD38抗体(例如，如Vaughan等人,《血液》,2014,123:669-677中所述或达雷木单抗或达雷木单抗生物类似物)；
-一种或多种抗Her2抗体(例如曲妥珠单抗或曲妥珠单抗生物类似物)；
-一种或多种抗EGFR抗体(例如西妥昔单抗或西妥昔单抗生物类似物)。
优选地，治疗性抗体是选自包含以下的组的一种或多种：利妥昔单抗；派姆单抗；纳武单抗；西米普利单抗；卡瑞利珠单抗；多塔利单抗；奥比妥珠单抗；奥法木单抗及其生物类似物或等同物。
应当理解，本文讨论和考虑的每种治疗性抗体的剂量和剂量方案将取决于这些治疗性抗体的批准剂量/方案，并且还将根据适应症(例如癌症类型/阶段)和受试者(例如BMI或年龄)而变化。
例如，在一些实施例中，其中治疗性抗体是利妥昔单抗，剂量和给药方案可以如FDA标签中所定义的(参见https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/ 2010/103705s5311lbl.pdf)。如其中所述，剂量可以如下：
·非霍奇金淋巴瘤(NHL)：375mg/m2，每周一次，共4至8剂；
·慢性淋巴细胞白血病(CLL)：FC化疗开始前一天为375mg/m2，然后在第2至6周期的第1天为500mg/m2(每28天)；
·类风湿性关节炎(RA)：分两次施用，每次1000mg，间隔两周。
在另一个实例中，其中治疗性抗体是派姆单抗，剂量和给药方案可以如FDA标签中所定义的(参见https://www.accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2019/ 125514s040lbl.pdf)。如其中所述，剂量可以如下：
·黑素瘤：每3周200mg；
·非小细胞肺癌(NSCLC)：每3周200mg；
·头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)：每3周200mg；
·经典霍奇金淋巴瘤(cHL)或原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)：成人每3周200mg；小儿每3周2mg/kg(最多200mg)；
·尿路上皮癌：每3周200mg；
·微卫星不稳定性-高(MSI-H)癌症：成人每3周200mg，小儿每3周2mg/kg(最多200mg)；
·胃癌：每3周200mg；
·***：每3周200mg；
·肝细胞癌(HCC)：每3周200mg；
·默克尔细胞癌(MCC)：成人每3周200mg；小儿每3周2mg/kg(最多200mg)。
术语“受试者”(其在本文中可与“患者”互换使用)包括需要用与FcyRllb特异性结合的抗体分子治疗的任何动物，包括人类。受试者或患者可以是哺乳动物或非哺乳动物。优选地，受试者是哺乳动物，例如马、或牛、或绵羊、或猪、或骆驼、或狗、或猫。最优选地，哺乳动物患者是人类。
优选地，受试者是已经被诊断为患有癌症或炎性疾病的受试者，或者已经被确定为可能患有癌症或炎性疾病和/或表现出癌症或炎性疾病症状的受试者。
在其它优选的实施例中，受试者是已经被诊断为患有传染病，或已经被确定为可能患有传染病和/或表现出传染病症状的受试者。传染病包括由细菌、真菌、寄生虫或病毒引起的任何疾病，这些疾病可以在人与人之间传播(直接或间接)。
在一些其它实施方案中，受试者患有癌症和/或炎性疾病和/或感染性疾病，并且本文所述的剂量方案与旨在增强体液或细胞应答的疫苗的施用联合使用相关，以治疗和/或预防所述癌症或疾病。
“表现”包括受试者表现出癌症症状和/或癌症诊断标记，和/或癌症症状和/或癌症诊断标记可以被测量、和/或评估、和/或量化。对于医学领域的技术人员来说，什么是癌症症状和癌症诊断标记以及如何测量和/或评估和/或量化癌症症状的严重性是否降低或增加，或者癌症诊断标记是否降低或增加是显而易见的；以及如何将这些癌症症状和/或癌症诊断标记用于形成癌症的预后。
在一些实施例中，癌症是FcyRllb阳性癌症。在其它实施例中，癌症是FcγRIIb阴性癌症。
“FcyRllb阳性癌症”包括表达FcyRIIb的任何癌症，尽管其表达水平不同。FcyRIIb表达在慢性淋巴细胞白血病和套细胞淋巴瘤中最明显，在弥漫性大B细胞淋巴瘤中中等，在滤泡性淋巴瘤中最不明显。然而，在一些情况下，患有通常表达低水平的FcyRIIB的癌症(例如滤泡性淋巴瘤)的受试者可能具有非常高水平的FcyRIIb表达。
“FcγRIIb阴性癌症”包括不存在任何FcγRIIb受体的任何癌症。这可以在多种方法中使用抗FcγRIIB特异性抗体进行检验，包括免疫组织化学和流式细胞术，如Tutt等人,《免疫学杂志(J Immunol)》,2015,195(11)5503-5516中所述。
在一些优选的实施例中，癌症选自由癌、肉瘤和淋巴瘤组成的组。在一些实施例中，癌症是选自由腺癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌、间变性或未分化癌、大细胞癌和小细胞癌组成的组的癌。在一些实施例中，癌症是选自由骨肉瘤、软骨肉瘤、脂肪肉瘤和平滑肌肉瘤组成的组的肉瘤。
在一些优选的实施例中，癌症选自由与抗FcgRIIB抗体共同施用的经批准的治疗性抗体的标签中所指示的癌症的组成的组。共同施用是指用作包含抗FcgRIIB抗体的治疗的一部分的抗体，其中共同施用的抗体可以在抗FcgRIIB抗体之前、同时或后施用。
在一些优选的实施例中，疾病选自由与抗FcgRIIB抗体共同施用的经批准的治疗性抗体的标签中所示的疾病组成的组。共同施用是指用作包含抗FcgRIIB抗体的治疗的一部分的抗体，其中共同施用的抗体可以在抗FcgRIIB抗体之前、同时或后施用。
癌症可以选自包含以下的组：黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、***、***癌、转移性激素难治性***癌、结肠直肠癌、肺癌、小细胞肺癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌、尿路上皮癌、膀胱癌、肾癌、间皮瘤、默克尔细胞癌、头颈癌和胰腺癌。
优选地，癌症是B细胞癌症，如选自包含以下的组的癌症：慢性淋巴细胞白血病、套细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤。
上述癌症中的每一种都是已知的，并且症状和癌症诊断标记被充分描述，用于治疗那些癌症的治疗剂也是如此。因此，用于治疗上述癌症类型的症状、癌症诊断标记和治疗剂是医学领域技术人员已知的。
大量癌症的诊断、预后和进展的临床定义依赖于称为分期的某些分类。这些分期***用于整理许多不同的癌症诊断标记和癌症症状，以提供癌症的诊断和/或预后和/或进展的概述。肿瘤学领域的技术人员将知道如何使用分期***评估癌症的诊断、和/或预后、和/或进展，以及应当使用哪些癌症诊断标记和癌症症状来进行评估。
“癌症分期”包括Rai分期，其包括0期、I期、II期、III期和IV期，和/或Binet分期，其包括A期、B期和C期，和/或Ann Arbour分期，其包括I期、II期、III期和IV期。
已知地，癌症可导致细胞形态的异常。这些异常通常在某些癌症中重复发生，这是指检查这些形态学变化(也称为组织学检查)可用于癌症的诊断或预后。用于可视化样品以检查细胞形态的技术以及制备用于可视化的样品的技术在本领域中是已知的；例如，光学显微镜或共焦显微镜。
“组织学检查”包括存在小的成熟淋巴细胞、和/或存在具有窄的细胞质边缘的小的成熟淋巴细胞、存在具有缺乏可辨别的核仁的致密核的小的成熟淋巴细胞、和/或存在具有窄的细胞质边缘和缺乏可辨别的核仁的致密核的小的成熟淋巴细胞、和/或存在非典型细胞、和/或裂解细胞、和/或前淋巴细胞。
众所周知，癌症是细胞DNA突变的结果，其可导致细胞避免细胞死亡或不可控地增殖。因此，检查这些突变(也称为细胞遗传学检查)可以是评估癌症的诊断和/或预后的有用工具。其实例是染色***置13q14.1的缺失，这是慢性淋巴细胞白血病的特征。用于检查细胞中的突变的技术是本领域已知的；例如，荧光原位杂交(FISH)。
“细胞遗传学检查”，包括对细胞中DNA的检查，尤其是对染色体的检查。细胞遗传学检查可用于鉴定可能与难治性癌症和/或复发性癌症的存在相关的DNA变化。此类可一以包括：13号染色体长臂的缺失、和/或13q14.1染色***置的缺失、和/或12号染色体的三体性、和/或12号染色体长臂的缺失、和/或11号染色体长臂的缺失、和/或11q的缺失、和/或6号染色体长臂的缺失、和/或6q的缺失、和/或17号染色体短臂的缺失、和/或17p的缺失、和/或t(11:14)易位，和/或(q13:q32)易位、和/或抗原基因受体重排、和/或BCL2重排，和/或BCL6重排、和/或t(14:18)易位、和/或t(11:14)易位，和/或(q13:q32)易位、和/或(3:v)易位、和/或(8:14)易位、和/或(8:v)易位、和/或t(11:14)和(q13:q32)易位。
已知的地，患有癌症的患者表现出某些身体症状，这通常是癌症对身体造成负担的结果。那些症状经常在同一癌症中复发，因此可以是疾病的诊断、和/或预后、和/或进展的特征。医学领域的技术人员将理解哪些身体症状与哪些癌症相关，以及如何评估那些身体***可以与疾病的诊断、和/或预后、和/或进展相关。“身体症状”包括肝肿大和/或脾肿大。
在一些实施例中，癌症是对治疗性抗癌抗体的治疗有抗性的癌症。此类抗性癌症可以是复发性和/或难治性癌症。
复发的癌症是先前已经治疗过的癌症，并且作为该治疗的结果，受试者完全或部分康复(即，称受试者处于缓解中)，但是在停止治疗后，癌症复发或恶化。换句话说，复发性癌症是在其有效且受试者完全或部分恢复的一段时间后变得对治疗产生抗性的癌症。
难治性癌症是已经治疗过但对该治疗没有反应的癌症，和/或已经治疗过但在治疗期间有进展的癌症。换句话说，难治性癌症是对治疗有抗性的癌症。应当理解，由于固有的抗性，癌症可能是难治性癌症。“内在抗性”包括癌症和/或受试者和/或靶细胞从第一次施用时起，或在完全施用之前，对特定治疗有抗性的意思。
医学领域的技术人员可以容易地诊断出复发性癌症和/或难治性癌症。
在本发明的实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子被配制和/或调整用于通过选自由包含以下的组的途径递送：静脉内；肌肉内；皮下。在一些实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子被配制和/或调整用于静脉内(即i.v.或iv)递送。在其它实施例中，与FcyRIIb特异性结合的抗体分子被配制和/或调整用于皮下(即s.c.或sc)递送。
在本发明的实施例中，通过选自包含以下的组的途径将与FcyRIIb特异性结合的抗体分子递送至受试者：静脉内；肌肉内；皮下。优选地，静脉内递送与FcyRIIb特异性结合的抗体分子。
因此，在优选的实施例中，第一和/或第二和/或另外剂量的与FcyRllb特异性结合的抗体分子被配制成用于静脉内递送至受试者和/或通过静脉内递送递送至受试者。
静脉内施用抗体分子的方法和制剂是本领域已知的。在本发明中，可以使用任何类型的静脉内施用，例如注射或输注。
在本发明的实施例中，皮质类固醇被配制和/或调整通过选自包含以下的组的途径递送：静脉内；口服。
在本发明的实施例中，皮质类固醇通过选自包含以下的组的途径递送至受试者：静脉内；口服。
因此，在优选的实施例中，第一和/或第二和/或另外剂量的皮质类固醇被配制成用于静脉或口服递送给至受试者和/或通过静脉内或口服递送递送至受试者。
用于静脉内或口服施用皮质类固醇的方法和制剂是本领域已知的。
如本文所述的与FcyRIIb特异性结合的抗体分子和/或皮质类固醇可以与赋形剂和/或药学上可接受的载体和/或药学上可接受的稀释剂和/或佐剂组合。
例如，与FcyRIIb特异性结合的抗体和/或皮质类固醇可以被配制成水性和/或非水性无菌溶液，其可以含有抗氧化剂、和/或缓冲剂、和/或抑菌剂、和/或使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；和/或水性和/或非水性无菌悬浮液，其可以包括悬浮剂和/或增稠剂。此类制剂可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿和小瓶，并且可以在冷冻干燥(即冻干)的条件下储存，仅需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如水。
临时注射溶液和悬浮液可由本领域已知类型的无菌粉末、和/或颗粒、和/或片剂制备。
与FcyRIIb特异性结合的抗体和/或皮质类固醇可以用药学上可接受的酸或碱加成盐配制。用于制备药学上可接受的酸加成盐的酸是那些形成无毒的酸加成盐的酸，即含有药学上可接受的阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘化物、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲烷磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3萘甲酸酯)]盐等。药学上可接受的碱加成盐也可用于生产药学上可接受的盐形式。可用作制备药学上可接受的碱盐的试剂的化学碱是形成无毒碱盐的那些。此类无毒的碱盐包括但不限于衍生自此类药学上可接受的阳离子的那些，例如碱金属阳离子(例如钾和钠)和碱土金属阳离子(例如钙和镁)、铵或水溶性胺加成盐，例如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，以及低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其它碱盐等。
与FcyRIIb特异性结合的抗体分子和/或皮质类固醇可以冻干用于储存并在使用前在合适的载体中重构。可以使用任何合适的冻干方法(例如喷雾干燥、滤饼干燥)和/或重构技术。本领域技术人员将理解，冻干和重建可导致不同程度的抗体活性损失(例如，对于常规免疫球蛋白，IgM抗体往往比IgG抗体具有更大的活性损失),并且可能必须上调使用水平以进行补偿。在一个实施例中，冻干的(冷冻干燥的)抗体分子在再水合时损失不超过其活性的约20％、或不超过约25％、或不超过约30％、或不超过约35％、或不超过约40％、或不超过约45％、或不超过约50％(冻干前)。
如上文所讨论的和如所附实例中所证明的，本发明的***、组合、方法或用途改善了受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性。换句话说，本发明的***、组合、方法或用途减少或防止了与施用抗体分子(并且特别是与抗体分子的静脉内施用)相关的不良作用。
在本发明的***、组合、方法或用途的优选实施例中，减少或消除了与施用与FcyRllb特异性结合的抗体分子有关的输注相关反应。此处描述了这种与输注相关的反应，并且预期本发明的***、组合、方法或用途减少或消除了这些与输注相关的反应中任何一种或多种。
在一个优选的实施例中，降低了受试者的体温和/或血小板计数和/或肝酶(例如ALAT或ASAT)的血液水平和/或细胞因子(例如IL-6)的血液水平的变化。优选地，在施用第二剂与FcyRllb特异性结合的抗体分子后至少24小时，IRR降低至可接受的水平，即低于本文所定义的药物不良事件通用术语(CTCAE)定义的3级。最优选地，通过受试者的正常体温和/或血小板计数和/或肝酶(例如ALAT或ASAT)的血液水平和/或细胞因子(例如IL-6)的血液水平，完全预防IRR。
如上定义，这些参数中的一些的正常水平如下：
·体温：从36.1℃至37.9℃；
·血小板计数：从145x109至400x109每升；
·ALAT的血液水平：从0至1.09μkat/L，16至63U/L；
·ASAT的血液水平：从0至0.759μkat/L，15至37U/L；
·IL-6血液水平：从0.16至27.2pg/ml，以及中值为0.47pg/ml。
“可接受的水平”包括IRR的临床分级(如本领域和本文使用CTCAE量表所定义)降低到至少2级。在一些优选实施例中，IRR的分级降低到1级。如本文所讨论的，本领域技术人员知道到如何根据CTCAE等级对IRR进行分级。
本发明的第五方面提供了一种试剂盒，其包含：
(i)与FcyRllb特异性结合的抗体分子，优选如本文所述的抗体分子；
(ii)皮质类固醇，优选本文所述的皮质类固醇；以及
(iii)任选地，供使用的说明书，
其中抗体分子以至少第一剂量和第二剂量提供，其中抗体分子的第一剂量低于抗体分子的最大治疗有效剂量，进一步任选地其中第一剂量如本文所定义，进一步任选地其中第二剂量如本文所定义。本发明各方面抗体分子和剂量如本文所定义。
优选地，本发明的试剂盒用于改善受试者体内抗体分子的耐受性，如本文所述。
优选地，在本发明的试剂盒中，皮质类固醇以本文所定义的剂量提供。
在优选的实施例中，本发明的试剂盒进一步包含一种或多种如本文所述的治疗性抗体。例如，治疗性抗体是选自包含以下的组的一种或多种：利妥昔单抗；派姆单抗；纳武单抗；西米普利单抗；卡瑞利珠单抗；多塔利单抗；奥比妥珠单抗；奥法木单抗及其生物类似物或等同物。
应当理解，当试剂盒中存在一种或多种治疗性抗体时，本发明的试剂盒用于治疗受试者的癌症，如本文所述。
本发明的进一步的方面
在第六方面，本文公开了一种方法(或模型)，其用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否会与向人类静脉内施用的耐受性问题有关，其包含以下步骤:
(i)向小鼠静脉内或腹膜内施用治疗性抗体分子(如果与鼠类靶标或替代抗体具交叉反应性)，并且在施用治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察所述小鼠，其中在所述小鼠状态恢复至正常状态后的一段时间内表现出肉眼可见的症状孤立和活动减少，表明向人类静脉内施用治疗性抗体分子将与耐受性问题有关，
和/或用于预测预防性或治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰是否可预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题，
除了如上所述的(i)之外，包含以下步骤：
(ii)向小鼠施用预防性或治疗性试剂，与向小鼠静脉内或腹膜内施用治疗性或替代抗体相关，并且在施用治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察小鼠，其中与在(i)中小鼠表现的肉眼可见的症状相比，在一段时间内肉眼可见的症状表现减少或未表现肉眼可见的症状，表明与向人类施用治疗性抗体分子组合的用预防剂或治疗剂进行的预处理可预防或减轻耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关；
(iii)通过除静脉内或腹膜内施用以外的施用途径向小鼠施用治疗性或替代抗体，并且在施用治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察小鼠，其中与在(i)中小鼠表现的肉眼可见的症状相比，在一段时间内肉眼可见的症状表现减少或未表现肉眼可见的症状，表明其它施用途径可用于向人类施用治疗性抗体分子以预防或减轻与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题；和/或
(iv)通过除静脉内或腹膜内施用以外的施用途径向小鼠静脉内或腹膜内施用修饰形式的治疗性或替代抗体，并且在施用修饰的治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察小鼠，其中与(i)中小鼠表现的肉眼可见的症状相比，在一段时间内肉眼可见的症状表现减少或未表现肉眼可见的症状，表明向人类施用修饰形式的治疗性抗体分子可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
在第七方面，本文还公开了一种用于剂量方案中的皮质类固醇，以预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题，
其中已经预测治疗性抗体分子与使用上述方法向人类静脉内施用的耐受性问题有关，且/或其中使用上述方法预测用皮质类固醇组合与向人类施用治疗性抗体分子的预处理可预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关，
并且其中给药方案包含在静脉内施用治疗性抗体分子前以至少两个剂量向受试者施用皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
该方面的变体涉及一种用于给药方案中的皮质类固醇，以预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题，
其中所述治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，
并且其中给药方案包含在静脉内施用治疗性抗体分子前以至少两个剂量向受试者施用皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
在第八方面，本文还公开了一种用于治疗癌症的治疗性抗体分子，其中预测该治疗性抗体分子与使用上述方法向人类静脉内施用的耐受性问题有关，且/或其中向人类施用治疗性抗体分子的皮下途径已经被预测为预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与使用上述方法向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关，并且其中抗体被配制用于皮下施用。
在第九方面，本文还公开了一种用于治疗癌症的修饰形式的治疗性抗体分子，其中使用上述方法预测治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用上述方法预测向人类施用修饰形式的治疗性抗体分子可预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关，并且其中该治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且修饰形式是与治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但具有降低、削弱或消除的FcγR结合的抗体。
在第十方面，本文还公开了一种用于预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的方法，其包含皮质类固醇给药方案，其中使用上述预测方法预测治疗性抗体分子与向人类静脉内施用的耐受性问题相关，且/或其中使用上述预测方法预测用皮质类固醇组合与向人类施用治疗性抗体分子的预处理可预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关，并且其中给药方案包含在静脉内施用治疗性抗体分子前以至少两个剂量向受试者施用皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
在第十一方面中，还公开了一种用于治疗癌症的方法，其包含皮下施用治疗活性量的治疗性抗体分子，已经预测其与使用上述预测方法与向人类静脉内施用相结合的耐受性问题有关，和/或其中已经预测向人类施用治疗性抗体分子的皮下途径预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与使用上述预测方法向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关。
在第十二方面，还公开了一种治疗癌症的方法，其包含施用治疗活性量的修饰形式的治疗性抗体，其中使用上述预测方法预测治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题相关，且/或其中已经使用上述预测方法预测向人类施用修饰形式的治疗性抗体分子可预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关，并且其中治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且修饰形式是与治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但具有受损或消除的FcγR结合的抗体。
具体实施方式
简而言之，在本发明的这些进一步的方面，描述了一种模型，其用于预测与人类靶标结合的治疗性抗体是否将与静脉内施用的耐受性问题有关，和/或用于预测预处理、改变的施用途径或抗体的修饰是否可预防与向人类静脉内施用治疗性抗体有关的耐受性问题。该模型包含向小鼠静脉或腹膜内施用抗体，并且在施用后立即观察小鼠的任何肉眼可见的症状孤立和活动减少的瞬时表现。该模型还可以包含与抗体施用组合的预处理施用，通过除静脉内或腹膜内施用以外的施用途径施用治疗性抗体，或向小鼠施用修饰形式的抗体，并且在此类施用后立即观察小鼠的任何肉眼可见的症状孤立和活动减少的瞬时表现，并且将其与静脉内或腹膜内施用未经预处理的未修饰抗体后的任何肉眼可见的症状分离和活动减少的瞬时表现进行比较。对相关微观症状、生化变化或细胞参数的分析可有助于收集IRR性质的信息，并指导候选的预防性用药前干预或IRR降低干预在模型中进行检验，如下所述。
在本发明的其它方面中，本文所述的预测方法使得有可能预测针对给定靶标的治疗性抗体分子是否将与或可能与对人类受试者静脉内施用相关的耐受性问题有关。另外地或替代地，使得预测预防性或治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰是否可用于预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题成为可能。
在本发明的这些进一步的方面中，治疗性抗体分子与人类靶标特异性结合。抗体与靶标特异性结合是指抗体与确定的靶标分子或抗原特异性结合或相互作用，这是指抗体优先和选择性地与其靶标而不是非靶标分子结合。
治疗性抗体分子结合的靶标可以是在任何人类细胞上发现的受体或抗原。此类细胞的实例是白细胞、骨髓细胞和B细胞。
在一些实施例中，靶标是FcγRII(CD32)。
在一些实施例中，靶标是FcγRIIB(CD32b)。
在一些实施例中，靶标是FcγRIIA(CD32a)。
在一些实施例中，靶标是CD40。
在本发明的这些进一步的方面，治疗性抗体分子可以是已经获得监管机构批准用于人类的任何治疗性抗体分子，或者是在临床开发中的治疗性抗体分子，或者可以是与人类靶抗原结合的、旨在或假设用于人类疾病治疗的任何抗体。如本文所用，术语治疗性抗体分子还涵盖考虑用于或正在开发用于治疗用途的抗体，包括临床前开发中的抗体。因此，治疗性抗体分子是对人类具有治疗效果的抗体。在本文所述的预测方法中，可以向小鼠施用治疗性抗体分子(如果是交叉反应性的)或类似小鼠靶标的替代抗体。所用小鼠是具有免疫能力的实验室小鼠。可以使用不同遗传背景、近交或远交的小鼠。进一步地，可以使用治疗性抗体分子的人类靶标的转基因小鼠。
通常，此类治疗性抗体分子是单克隆抗体。在许多情况下，它是人类或人类源化抗体。
在本发明的这些进一步的方面，治疗性抗体分子可以是任何类型的抗体，例如免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)或免疫球蛋白M(IgM)。在一些实施例中，其是为IgG。它也可以是任何亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。它也可以是一种经工程化以增强、减少或减弱FcγR依赖性接合和功能的抗体分子。此外，治疗性抗体分子可以是对相同或不同靶标的单特异性、双特异性或三特异性，并且包含或融合到抗体Fc结构域。此外，治疗性抗体分子可以是对相同或不同靶标的单特异性、双特异性或三特异性，并且不包含抗体Fc结构域。进一步地，治疗性抗体分子可以是抗体的功能片段，例如Fv，由抗体的可变域组成，Fab，也表示为F(ab)，其是不含Fc部分的单价抗原结合片段，或F(ab')2，其是含有通过二硫键连接在一起的两个抗原结合Fab部分的二价抗原结合片段，或F(ab')，即F(ab')2的单价变体。此类片段也可以是单链可变片段(scFv)。
在一些实施例中，治疗性抗体分子是用于或旨在用于癌症治疗的抗体。针对多种癌症的单克隆抗体已经被开发出来，并且正在被开发，更多的单克隆抗体将会出现。一些实例是脑癌、乳腺癌、慢性淋巴细胞性白血病、结肠直肠癌、头颈癌、霍奇金淋巴瘤、肺癌、黑素瘤、非霍奇金淋巴瘤、***癌和胃癌。一些抗体被批准用于不同的适应症。例如，抗CD20抗体利妥昔单抗被批准用于癌症(NHL和CLL)和自身免疫病(类风湿性关节炎)。然而，本文所述的方法不限于用于癌症治疗或自身免疫/炎性疾病治疗的抗体。
如上所述，在一些实施例中，靶标是FcγRIIB。在一些优选的实施例中，治疗性抗体分子具有带有SEQ ID No：1的轻链和带有SEQ ID No：2的重链。
在本发明的这些进一步的方面，用于给人类施用治疗性抗体分子的静脉(iv)施用方法可以是任何类型的静脉内施用，例如通过注射或输注。
在本发明的这些进一步的方面中，本文所述的预测方法利用小鼠作为模型来预测人类将会发生什么。当待检验的治疗性抗体分子与人类靶标的已知鼠同源物交叉反应时，治疗性抗体分子可用于预测方法中。当待检验的治疗性抗体分子不与人类靶标的已知鼠类同源物发生交叉反应时，有必要使用替代抗体。替代抗体是对治疗性抗体分子结合的人类靶标的鼠类同源物具有特异性的抗体。例如，在本文中，人类靶FcγRIIB的鼠类同源物是鼠类FcγRII，人类靶FcγRIIA的鼠同源物是鼠FcγRIII，人类靶CD40的鼠类同源物是鼠CD40。替代抗体可以是鼠类抗体或来自另一物种例如大鼠、兔、猴或鸡的抗体。有时，使用替代抗体可能是优选的，即使待检验的治疗性抗体分子与人类靶标的已知鼠类同源物具有交叉反应性。如果与治疗性抗体分子本身相比，替代抗体与小鼠靶标抗原和调节抗体活性的小鼠免疫蛋白(例如FcγRs)的结合和相互作用更好地反映了人类候选抗体与人类靶标抗原和调节抗体活性的人类免疫蛋白(例如FcγRs)的相互作用，则可能是这种情况。优选地，当可用时，交叉反应性治疗性抗体分子和鼠类替代抗体可以平行用于检验如本文所述的耐受性问题。
在本发明的这些进一步的方面，治疗性抗体分子可以是结合或不结合Fc受体的抗体。然后可以使用修饰形式，即由于同种型转换或Fc工程而具有较低Fc-FcgR结合的抗体变体。如果替代抗体用于预测或模拟治疗性抗体分子对相同或同源靶标的耐受性问题，那么替代抗体的Fc应选择与治疗性抗体分子的Fc在FcγR结合和功能的结合/非结合(或结合/非结合)方面相匹配。例如，众所周知，人类IgG1、IgG3和IgG4虽然带有不同的绝对和相对亲和力，但都生产性地结合和接合人类FcγR。类似地，在小鼠中，mIgG2a强烈且广泛地结合不同的小鼠FcγRs，而mIgG1仅结合小鼠FcγRII和FcγRIII。进一步已知的是抗体的糖基化，特别是在297位(例如以下突变之一:N297A、N297Q或N297G)，使人类和小鼠IgG与FcγR的结合受损和/或减少或严重减少。在本文中，Fc结合是指治疗性抗体分子的Fc部分与FcγR结合，导致Fc:FcγR依赖性活性或功能的参与。此外，受损的或消除的FcγR结合意味着修饰形式不再与FcγR结合，或者与治疗性的未修饰抗体相比，其与FcγR的结合强度较低。
在本发明的这些进一步的方面，向小鼠静脉内或腹膜内施用治疗性抗体分子或替代抗体。在一些情况下，向小鼠施用的治疗性抗体分子或替代抗体的剂量是导致高受体饱和度的剂量。在一些情况下，向小鼠施用的治疗性抗体分子或替代抗体的剂量是导致至少90％受体饱和的剂量。在一些情况下，向小鼠施用的治疗性抗体分子或替代抗体的剂量是导致接近100％或100％受体饱和的剂量。
一旦给小鼠施用了抗体，观察动物的视觉身体反应，特别是行为变化或肉眼可见的症状。如果治疗性抗体分子是与向人类静脉内施用相结合的与耐受性问题有关的抗体，则小鼠将在施用治疗性或替代抗体后很短的时间内，即几分钟内，例如5至10分钟内，开始显示肉眼可见的症状孤立和活动减少。在某些情况下，小鼠还会表现出平衡受损、竖毛和/或弓起的迹象，随后身体姿势不自然。这三种另外的肉眼可见的症状将在与孤立和活动减少相同的时间范围内观察到，即在施用治疗性或替代抗体后的几分钟内，如5至10分钟内。与小鼠仅表现出孤立和活动减少的迹象相比，表现出一种、两种或三种这些另外的肉眼可见的症状是一种更强的预测标记，表明与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子可能与向人类静脉内施用的耐受性问题有关。
如果小鼠的行为出现上述变化，有实验室小鼠工作经验的人会立即注意到，因为这些迹象容易观察到，并且是在施用治疗性或替代抗体前小鼠行为的显著变化。症状表现的很明显，并且很明显老鼠不舒服。在注射抗体(治疗性或替代)后，在约1小时内结束的一段时间后，例如45分钟至1.5小时，小鼠不再表现出任何肉眼可见的症状。相反，其行为恢复到正常状态，即恢复到施用抗体(治疗性或替代)前的行为。
除了上述肉眼可见的症状，小鼠可能表现出其它症状。一种此类症状是血压降低。另一此类症状是血小板计数减少。另一此类症状是两种肝酶天冬氨酸转氨酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平升高。与肉眼可见的症状相反，这些不能通过简单地观察老鼠来确定。相反，它们可以通过血液分析来确定。为了检查这些“肉眼可见的”症状，在注射抗体(治疗性或替代)后大约五分钟对小鼠取血。然后分析血液的血小板计数和/或AST和/或ALT水平。降低的血压也可以通过这种方式确定；如果血压降低，在出现肉眼可见的症状的一段时间内，不可能从小鼠身上取血。为了确定血小板计数是否降低和/或AST和/或ALT水平是否升高，可以与施用治疗性抗体分子或替代抗体前取自小鼠的血液样品或取自对照小鼠的样品进行比较。降低的血压将在与肉眼可见的症状相同的一段时间内恢复。血小板计数、AST水平和ALT水平需要稍长时间才能恢复；它在6至10小时内，例如在8小时内被标准化。
本文在本发明的这些进一步方面中描述的预测方法可用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否会与向人类静脉内施用的耐受性问题有关。
此外，本文在本发明的这些进一步方面中描述的预测方法可用于检验克服此类耐受性问题的策略。更准确地说，它可用于预测特定策略是否可预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子相关的耐受性问题有关。这对于例如正在临床开发或已经在临床中使用的治疗性抗体分子是有用的，其中已经观察到耐受性问题。
此外，本文在本发明的这些进一步方面中描述的预测方法既可用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否会与向人类静脉内施用的耐受性问题有关，也可用于预测特定策略是否能预防或减轻耐受性问题。例如，当开发药物时，这可能是令人感兴趣的，因为它能够识别潜在的问题和找到解决问题的方法。
如果本文在本发明的这些进一步方面中描述的预测方法仅用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，则该方法如上所述进行，施用治疗性或替代抗体，随后观察小鼠。通常，不仅仅使用一只小鼠，而是使用几只小鼠的检验组，例如5至10只，重复实验以确定观察到的任何变化是有代表性的、可重复的和有统计学意义的。
如果在本发明的这些另外的方面中，本文所述的预测方法仅用于，或除了预测具体策略是否可以预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子相关的耐受性问题之外，上述方法在对照小鼠上进行，或优选在对照组小鼠如5至10只小鼠上进行。此外，根据待检验的具体策略处理第二只小鼠或优选第二组小鼠，例如5至10只小鼠。将第二只小鼠或第二组小鼠的结果与对照小鼠或对照组小鼠的结果进行比较。
用于克服与向人类静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的策略的实例是不同的预防性治疗、不同的治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰。通过检验本文所述的策略，将获得可用于预测该特定策略是否可用于预防或减轻耐受性问题的数据，该耐受性问题将与向人类静脉内施用特定治疗性抗体分子有关。因此，有可能获得可靠的数据，而不必检验不同策略对首先经历耐受性问题的人类的影响。
当克服耐受性问题的策略是预防性治疗时，在对小鼠或小鼠组静脉内或腹膜内施用治疗性或替代抗体前，对第二只小鼠或第二组小鼠施用预防剂。因此，这种策略是用预防剂进行预处理。在施用治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察第二只小鼠或第二组小鼠。将第二只小鼠或第二组小鼠的结果与未接受预防剂的对照小鼠或对照组小鼠的结果进行比较。与对照小鼠或对照组小鼠相比，第二只小鼠或第二组小鼠的肉眼可见的症状表现减少，或第二只小鼠或第二组小鼠根本未表现肉眼可见的症状，表明施用预防剂可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
以这种方式检验的预防性药物可以是任何已知能预防或减轻耐受性问题的药物，或者是根据其帮助减轻耐受性问题的能力而假设或筛选的药物。
在本发明这些进一步方面的一些实施例中，预防性治疗是用皮质类固醇进行的预处理。在一些此类实施例中，预处理包含两次施用皮质类固醇。皮质类固醇优选是强效皮质类固醇，并且更优选是具有尽可能高效力或可用的皮质类固醇。此类皮质类固醇的实例是***和倍他米松。
当使用皮质类固醇如***或倍他米松进行预处理时，可以包含在施用治疗性或替代抗体前施用两次皮质类固醇。在一些此类实施例中，在施用治疗性或替代抗体前的10至48小时施用一剂皮质类固醇，并且在施用治疗性或替代抗体前的5分钟至5小时施用另一剂皮质类固醇。在一些此类实施例中，在施用治疗性或替代抗体前的6至36小时施用一剂皮质类固醇，并且在施用治疗性或替代抗体前的15至120分钟施用另一剂皮质类固醇。在一些此类实施例中，在施用治疗性或替代抗体前的16至24小时施用第一剂量的皮质类固醇。在一些此类实施例中，在施用治疗性或替代抗体前的30至60分钟施用第二剂量的皮质类固醇。
当克服耐受性问题的策略是治疗性处理时，这可以通过向第二只小鼠或第二组小鼠施用治疗剂，与向该小鼠或该组小鼠静脉内或腹膜内施用治疗性或替代抗体相关来完成。在这种情况下，与…相关意味着基本上同时或后不久。在施用治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察第二只小鼠或第二组小鼠。将第二只小鼠或第二组小鼠的结果与未接受治疗剂的对照小鼠或对照组小鼠的结果进行比较。与对照小鼠或对照组小鼠相比，第二只小鼠或第二组小鼠的肉眼可见的症状表现减少，或第二只小鼠或第二组小鼠根本未表现肉眼可见的症状，表明施用治疗剂可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
以这种方式检验的治疗剂可以是已知逆转或控制不良事件的任何药剂或药物。免疫调节剂，如抗体，例如抗IL-6抗体，已知用于对抗细胞因子释放综合征(Frey NV，PorterDL.“细胞因子释放综合征与急性淋巴细胞白血病的新疗法(Cytokine releasesyndrome with novel therapeutics for acute lymphoblastic leukemia)”美国血液学会血液教育项目(Hematology Am Soc Hematol Educ Program),2016；2016:567-572)，或免疫抑制剂和/或抗炎剂，如皮质类固醇或抗组胺剂。
当克服耐受性问题的策略是不同的施用途径时，通过静脉内或腹膜内施用以外的施用途径向第二只小鼠或第二组小鼠施用治疗性或替代抗体。在施用修饰的治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察第二只小鼠或第二组小鼠。将第二只小鼠或第二组小鼠的结果与通过静脉内或腹膜内施用已经接受治疗性或替代抗体的对照小鼠或对照组小鼠的结果进行比较。与对照小鼠或对照组小鼠相比，第二只小鼠或第二组小鼠的肉眼可见的症状表现减少，或第二只小鼠或第二组小鼠根本未表现肉眼可见的症状，表明通过静脉内或腹膜内以外的施用途径向人类施用治疗性抗体分子可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
以这种方式检测的施用途径可以是技术人员已知的任何途径，其适用于向人类施用治疗性抗体分子，并且也适用于向小鼠施用治疗性或替代抗体。
在本发明这些进一步方面的一些实施例中，不同的施用途径，即除静脉或腹膜内施用之外的施用途径是皮下施用。然后应制备或配制治疗性或替代抗体，用于对第二只小鼠或第二组小鼠进行皮下施用。
当克服耐受性问题的策略是使用治疗性或替代抗体的修饰形式时，向第二只小鼠静脉内或腹膜内施用该治疗性或替代抗体的修饰形式。在施用修饰的治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察第二只小鼠或第二组小鼠。将第二只小鼠或第二组小鼠的结果与通过静脉内或腹膜内施用已经接受未修饰的治疗性或替代抗体的对照小鼠或对照组小鼠的结果进行比较。与对照小鼠或对照组小鼠相比，第二只小鼠或第二组小鼠的肉眼可见的症状是表现减少，或第二只小鼠或第二组小鼠根本未表现肉眼可见的症状，表明向人类施用修饰的治疗性抗体分子可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
以这种方式检验的治疗性抗体分子的修饰可以是任何已知或未知的修饰，以在人类中引起较轻或较轻的毒性事件。例如，如果发现与对人类静脉内施用的耐受性问题相关的治疗性抗体分子是与Fc受体结合的抗体，则这种修饰可以是改变抗体，使其不与Fc受体结合，或者使其与治疗性非修饰抗体相比，FcγR结合受损或消除，而修饰抗体的Fv可变序列保持与治疗性抗体分子相同。如上所述，应选择替代抗体的Fc，以在FcγR-结合和功能的结合/非结合(或结合/非结合)方面匹配治疗性抗体分子的Fc。
在本发明这些进一步方面的一些实施例中，修饰是导致Fc受体接合增加的修饰。
通过包括另外的小鼠或小鼠组，可以同时检验一种以上的上述策略，或一种或一种以上的上述策略的几种变体，其中一种小鼠或小鼠组用于每种策略或策略的每种变体。
在本发明的这些进一步的方面中，本文还描述了一种用于给药方案中的皮质类固醇，以预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题，以及一种用于预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的方法，其包含用于向受试者施用皮质类固醇的给药方案。
在本发明的这些进一步的方面中，治疗性抗体分子可以是使用上述预测方法预测与向人类静脉内施用的耐受性问题相关的抗体分子。此外，或替代地，上述预测方法可用于预测皮质类固醇的预处理与向人类施用治疗性抗体分子的组合可能预防或减轻耐受性问题，否则该耐受性问题将与向人类静脉内施用治疗性抗体分子有关。
给药方案包含在静脉内施用治疗性抗体分子前，以至少两个剂量向受试者施用皮质类固醇。一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。除了这两个剂量之外，还可以使用其它剂量，如“第一剂量”前的一个剂量，和/或“第一剂量”和“第二剂量”之间的一个剂量。通常，在整个治疗过程中给患者多次施用治疗性抗体分子。然后可以向患者施用两个剂量的皮质类固醇与治疗性抗体分子的一次或多次施用相结合。优选地，在每次施用治疗性抗体分子时给予患者两个剂量。
在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前6至36小时给予第一剂量的皮质类固醇，并且在开始施用治疗性抗体分子前立即给予第二剂量的皮质类固醇。在本文中，紧接前是指开始施用治疗性抗体分子前大约15至120分钟。
在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前的8至30小时给予第一剂量的皮质类固醇。
在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前16至24小时给予第一剂量的皮质类固醇。
在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前30至60分钟给予第二剂量的皮质类固醇。
在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前16至24小时给予第一剂量的皮质类固醇，并且在开始施用治疗性抗体分子前30至60分钟给予第二剂量的皮质类固醇。
在一些情况下，给药方案包含在抗体治疗过程中每次输注抗体前施用至少两个剂量的皮质类固醇。
所用的皮质类固醇优选是强效皮质类固醇，并且更优选是具有尽可能高效力或可用的皮质类固醇。此类皮质类固醇的实例是***和倍他米松。可以使用***或倍他米松、或***和倍他米松的组合。
在某些情况下，当使用***时，第一剂量为4至20mg。在某些情况下，当使用***时，第二剂量为4至25mg。在某些情况下，当使用***时，第一剂量为4至20mg并且第二剂量为4至25mg。在某些情况下，当使用***时，第一剂量为10至12mg。
在某些情况下，当使用***时，第二剂量为20mg。在某些情况下，当使用***时，第一剂量为10至12mg并且第二剂量为20mg。在一些情况下，当使用倍他米松时，第一剂量为3.2至16mg。在一些情况下，当使用倍他米松时，第二剂量为3.2至20mg。
在一些情况下，当使用倍他米松时，第一剂量为3.2至16mg并且第二剂量为3.2至20mg。在一些情况下，当使用倍他米松时，第一剂量为8至9.6mg。在一些情况下，当使用倍他米松时，第二剂量为16mg。在一些情况下，当使用倍他米松时，第一剂量为8至是9.6mg并且第二剂量为16mg。
在一些情况下，除了至少两次施用皮质类固醇之外，给药方案包含施用抗组胺药。在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前10分钟至24小时施用抗组胺药。在一些情况下，在开始施用治疗性抗体分子前30至60分钟施用抗组胺药。
与皮质类固醇一起用于预防或减轻与静脉内施用相关的耐受性问题的治疗性抗体分子在某些情况下是Fc受体结合抗体。在一些情况下，其是抗FcγRIIB抗体。在一些情况下，抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体。
在本发明的第十三方面，本文还描述了一种用于治疗癌症的治疗性抗体分子，其中该治疗性抗体分子被配制成用于皮下施用，以便预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子的相关的耐受性问题，以及一种用于治疗癌症的方法，其包含皮下施用治疗性抗体而不是静脉内施用，以便预防或减轻耐受性问题。
在一些情况下，配制用于皮下施用的治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体。在一些此类情况下，治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗体。
在本发明的第十四方面，本文还描述了一种用于治疗癌症的修饰形式的治疗性抗体分子，其中该治疗性抗体分子的修饰是为了预防或减轻向受试者静脉内施用治疗性抗体分子时可能发生的耐受性问题，以及一种治疗癌症的方法，其包含施用此类修饰形式的治疗性抗体。
所使用的治疗性抗体分子的修饰可以是任何已知的在人类中引起较轻或较轻毒性事件的修饰。
如上所述，治疗性抗体的修饰也可以是先前未知的修饰，以在人类体中产生较轻的毒性事件，该修饰已经用本文所述的预测模型进行了检测，并发现其可用于预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子有关的耐受性问题。
如上所述，一个实例是，如果发现与向人类静脉内施用的耐受性问题相关的治疗性抗体分子是接合Fc受体的抗体，则在本文中使用的修饰可以是改变抗体，使得其不接合Fc受体，或使得其与治疗性未修饰抗体相比具有受损的或消除的FcγR结合，而修饰抗体的Fv可变序列保持与治疗性抗体分子相同。
因此，在一些此类情况下，治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且修饰形式是与治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但具有受损或消除的FcγR结合的抗体。在一些情况下，治疗性抗体是Fc受体结合抗体抗FcγRIIB抗体，并且在一些这样的情况下，修饰形式是抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No:1的轻链和SEQ ID No：195.
在一些情况下，抗FcgRIIB抗体用作单一药剂。在其它情况下，它用于增强活性或克服对其它治疗性抗体的抗性，该抗体的活性由FcgRs调节，例如抗CD20或抗PD-1。
关于组合治疗抗CD20抗体，抗FcgRIIB可用于治疗癌症和炎性/自身免疫性疾病，其中抗CD20抗体已被批准用于治疗。本文所用的术语“受试者”是指已被诊断为患有特定疾病的人类。本文中，术语“受试者”和“患者”可互换使用。
在某些情况下，受试者被诊断患有癌症。在一些此类情况下，癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些此类情况下，癌症选自由非霍奇金淋巴瘤，例如滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病组成的组。
在一些情况下，被预防或减轻的耐受性问题是血小板减少症(血小板减少)。在一些此类情况下，其是瞬时血小板减少症。
在一些情况下，被预防或减轻的耐受性问题是细胞因子释放综合征。在一些此类情况下，其是瞬时细胞因子释放。
在一些情况下，被预防或减轻的耐受性问题是肝酶升高。在一些此类情况下，天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高和/或丙氨酸转氨酶(ALT)水平升高。
在本发明的第十五方面，提供了一种用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的治疗性抗体分子，其中该治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，并且其中该治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
在本发明的第十六方面，提供了一种在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的药物中的治疗性抗体分子，其中该治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中该药物被配制用于皮下施用。
在本发明的第十七方面，提供了一种包含治疗性抗体分子的药物制剂，其中该治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中该药物制剂包含药学上可接受的稀释剂或赋形剂，并且被配制用于皮下施用。
优选地，本发明这些方面的治疗性抗体是Fc受体结合抗体。更优选地，治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
在本发明这些方面的替代实施方案中，治疗性抗体分子如本文本发明的任何前述方面中所述。
然而，在优选的实施例中，药物组合物包含治疗性抗体分子，该抗体分子具有SEQID No:1的轻链和SEQ ID No:2的重链(如本文所述，该抗体称为BI-1206)。优选地，治疗性抗体分子包含具有SEQ ID No:1的轻链和具有SEQ ID No:2的重链，以及具有SEQ ID No:202和203的恒定区。
因此，本发明还提供了以下内容：
-一种用于治疗癌症的治疗性抗体分子，其中治疗性抗体分子是具有SEQ ID No1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中治疗性抗体分子被配制用于皮下施用；
-治疗性抗体分子在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，其轻链具有SEQ ID No:1的轻链和SEQ ID No：2，并且其中治疗性抗体分子和/或药物被配制用于皮下施用；
-一种包含治疗性抗体分子的药物制剂，其中治疗性抗体分子是如本文所述的抗FcγRIIB抗体(并且优选是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体)，并且其中药物制剂包含药学上可接受的稀释剂或赋形剂，并且被配制用于皮下施用。
优选地，根据本发明上述方面(包括本发明的第十五、第十六和第十七方面)使用的治疗性抗体分子、治疗性抗体分子的用途或药物制剂用于治疗癌症。
应当理解，本发明这些方面的药物制剂包含治疗有效量的治疗性抗体。优选地，治疗性抗体以约90mg/mL至约220mg/mL之间的浓度存在。例如，治疗性抗体可以以约90mg/mL、或约100mg/mL、或约110mg/mL、或约120mg/mL、或约130mg/mL、或约140mg/mL、约150mg/mL、或约160mg/mL、或约170mg/mL、约180mg/mL、或约190mg/mL、或约200mg/mL、约210mg/mL、或约220mg/mL的浓度存在。特别优选的浓度为约150mg/mL。
优选本发明这些方面的药物制剂是无菌的。
在优选的实施例中，本发明这些方面的药物制剂进一步包含在约5mM至约20mM之间的乙酸盐，例如约10mM乙酸盐或约15mM乙酸盐。特别优选的是约5mM乙酸盐。
在优选的实施例中，本发明这些方面的药物制剂进一步包含在约50mM至约250mMNaCl之间，例如约60mM NaCl、或约70mM NaCl、或约80mM NaCl、或约90mM NaCl、或约100mMNaCl、或约110mM NaCl、或约120mM NaCl、或约130mM NaCl、或约140mM NaCl、或约150mMNaCl、或约160mM NaCl、或约170mM NaCl、或约180mM NaCl、或约190mM NaCl、或约200mMNaCl、或约210mM NaCl、或约220mM NaCl。特别优选的是约110mM NaCl。
在一个优选的实施例中，本发明这些方面的药物制剂进一步包含约0.05％(w/v)聚山梨醇酯20，例如来自默克(Merck)/西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)的目录号为8.17072.1000的吐温20(Tween 20)(聚山梨醇酯)
ESSENTIAL Ph Eur,JPE,NF。
在优选的实施例中，本发明这些方面的药物制剂的pH在约pH 5.0至约pH 5.8之间，例如约pH 5.1、或约pH 5.2、或约pH 5.3、或pH约5.4、或约pH 5.5、或约pH 5.6、或约pH5.7。特别优选的pH为约5.8。
在特别优选的实施例中，本发明这些方面的药物制剂包含或由以下组成：
-浓度为150mg/mL的治疗性抗体；
-5mM乙酸盐；
-110mM NaCl；
-0.05％(w/v)聚山梨酯20；并且
-pH 5.8。
在本发明的第十八个方面，提供了治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，该方法包含给予受试者治疗性抗体分子的步骤，其中治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且其中治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
优选地，在本发明的第十八方面，Fc受体结合抗体是抗FcγRIIB抗体。更优选地，Fc受体结合抗体是抗FcγRIIB抗体，其轻链具有SEQ ID No:1的轻链和SEQ ID No：2的重链。
因此，在优选的实施例中，本发明提供了:
-一种用于治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，其包含向受试者施用治疗性抗体分子的步骤，其中治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。应当理解，在本发明的第十八方面，优选通过皮下施用途径向受试者治疗性抗体施用。
在本发明的第十九个方面，提供了治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，其包含向受试者施用本发明第十七个方面的药物制剂的步骤。应当理解，在本发明的第十九方面，优选通过皮下施用途径向受试者施用药物制剂。优选该方法用于治疗癌症。
参考以下附图和实例，现在将描述体现本发明某些方面的优选的非限制性实例：
附图说明
图1：概括BI-1206耐受性特征的小鼠模型。当将鼠类替代抗CD32b抗体(AT-130-2IgG2a)静脉内(i.v.)或腹膜内(i.p.)注射到野生型C57/BL6小鼠中时，小鼠在临床上表现出概括BI-1206耐受性特征的反应。A.显示了在注射后表现出肉眼可见的IRR的小鼠的％，该肉眼可见的IRR如孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然。当静脉内滴定剂量时，低至10mg(0.5mg/kg)时，可以看到肉眼可见的症状的时间和严重程度相同。然而，在4mg(0.2mg/kg)下未看到IRR。当腹膜内施用200mg(10mg/kg)时，与静脉内注射相比，看到IRR发作延迟，其中IRR在注射后20至30分钟出现。当将腹膜内剂量增加到400mg(20mg/kg)时，与静脉内注射途径相比，IRR的发作仍然延迟，然而，所有小鼠都表现出与200mg静脉内施用相同程度和等级的IRR。所有小鼠在注射后1小时完全恢复。B.使用Vetscan分析新鲜血液中的PLT(血液中的血小板计数)，显示了IRR的小鼠(灰色条)也表现出血小板计数的减少。C.还分析血液样品的AST，显示了在静脉内接受200μg抗-CD32b抗体的组中增加。D.显示了腹膜内注射200ug抗-CD32b抗体的小鼠血液中的IL6水平随注射后时间的变化。注射后1小时看到峰，并且注射后8小时水平恢复正常(灰色区域)。在IL-5、IL-10、KC/GRO、TNF-α中也看到类似的模式。
图2：术前用药两个剂量的皮质类固醇可剂量依赖地阻断或减少体内IRR。在静脉内注射10mg/kg AT-130-2IgG2a前24小时和1小时(术前用药)，用以下物质预处理小鼠：A40mg/kg或B10mg/kg倍他米松。注射后20分钟对小鼠取血。对血液进行了血小板计数分析。术前用药10mg/kg倍他米松没有完全抑制IRR或血小板计数B的减少(条纹条)，表明降低术前用药的剂量可能降低其抑制IRR和血小板减少的可能性。
图3：分次给药-少量预给药的Ab降低IRR和血小板减少的严重程度。A.开始分次给药，其中静脉内施用8μg/小鼠的小鼠抗-CD32B AT-130-2IgG2a，随后在1小时后大剂量给药200μg/小鼠。在平行试验中，小鼠仅注射大剂量。研究IRR(并且根据B中的分级***在图中可视化)和并且测量和比较血小板计数和体温。当给予大/主要剂量(200μg)时，少量预给药的AT-130(8μg)降低IRR、血小板减少和体温降低的严重程度/防止其IRR、血小板减少和体温降低。灰色区域表示PLT(血液中的血小板计数)和体温的正常范围。预给药需要8μg(在50％的小鼠C中看到IRR的剂量)，较低的剂量没有保护作用。
图4：对于全(抗体)耐受和对IRR的保护，需要类固醇和抗体分次给药的组合术前用药。开始分次给药：A次优皮质类固醇治疗后24小时(10mg/kg)或B在未进行皮质类固醇预处理的情况下，静脉内施用8μg/小鼠的小鼠抗-CD32B AT-130-2IgG2a，随后在1小时后大剂量给药200μg/小鼠。在平行试验中，小鼠仅注射大剂量。研究IRR和血小板计数，并且测量和比较体温。如果在24小时之前给予“低”剂量的皮质类固醇(10mg/kg)，则AT-130的少量预给药(8μg)是良好耐受的。次优术前用药与少量预剂量AT-130(8μg)一起完全防止与大Ab剂量(200μg)有关的IRR和血小板减少。次优剂量皮质类固醇(10mg/kg)本身没有保护作用。灰色区域表示PLT和体温的正常范围。
图5：用几种不同的临床相关物质进行术前用药不抑制与AT-130-2IgG2a施用有关的IRR。为了评价在临床上常用的治疗IRR的物质预处理是否可以抑制该模型中的IRR，用抗PAF、抗IL6、抗组胺药或用白三烯拮抗剂预处理小鼠。在静脉内注射小鼠抗-CD32BAT-130-2IgG2a前1小时，以200μg/小鼠的大剂量腹膜内给予这些术前用药。观察小鼠的肉眼可见的IRR，如孤立、移动性和皮毛状况。这些术前用药均不能抑制IRR。
图6：在施用70至100mg剂量的BI-1206后，在患有非霍奇金B细胞淋巴瘤的人类受试者体内看到耐受性特征。(A)用BI-1206处理后血小板减少。这种减少是瞬时的，并且大多数发作在一周内得到解决，并且从不严重或与出血有关。每个点表示测量值和线中值。垂直条纹线表示BI-1206施用。(B)血小板减少与ALT升高有关。尽管ALT/AST升高仅在3/14患者中显著。(C)用BI-1206治疗后检测到的细胞因子升高的频率。在8名受试者体内有7名检测到瞬时的细胞因子释放，其中血清/血浆可用于分析。在输注后立即看到峰值细胞因子释放，并且总是在24小时内消失。(D)血小板减少、ALT和细胞因子升高的动力学由个体504-001举例说明。细胞因子在此以IL-6为例。
图7：FcgRIIb受体占有率转化成B细胞耗竭。临床数据与来自使用hFcgRIIB转基因小鼠的体内模型的临床前数据一致，其中已经证明持续的受体饱和对于实现持续的B淋巴细胞耗竭是必要的。在施用抗FcgRIIb mAb前施用两个剂量的皮质类固醇并且少量预剂量mAb(分次剂量)改善了耐受性(IRR)。在用100mg BI-1206单一疗法治疗的患有非霍奇金B细胞淋巴瘤的人类受试者体内的外周B细胞上的FcgRIIb受体占有率(A)和外周B细胞水平(B)。静脉内施用增加剂量的BI-1206后，hFcgRIIB转基因小鼠的FcgRIIb受体占有率(E)和外周B细胞耗竭(F)。(C)用70至100mg BI-1206治疗的患有非霍奇金B细胞淋巴瘤的人类受试者的输注相关反应(IRR)的等级。带有黑色符号的深灰色条表示没有对两个剂量的皮质类固醇进行术前用药的施用；浅灰色条和空心白色符号表示用两个剂量的皮质类固醇进行术前用药的施用。X轴表示受试者id和抗体剂量。(D)在临床方案中使用两个剂量的皮质类固醇进行术前用药后，出现IRR的频率和严重程度显著降低；黑色符号表示未给药两个剂量的皮质类固醇，灰色符号表示给药两个剂量的皮质类固醇；使用曼-惠特尼U检验(MannWhitney U-test)，P<0.0001。(G)在野生型小鼠中静脉内施用抗FcgRIIb mAb(AT-130-2mIgG2a)后的输注相关反应。剂量滴定显示，在0.4mg/kg的剂量下，大约50％的动物出现了Ab IRR，而在静脉内施用的剂量下，100％的动物出现了上述IRR。对两次40mg/kg剂量的甲基强的松进行术前用药完全阻断IRR，而两次40mg/kg剂量的甲基强的松部分阻断IRR。将分次剂量添加到次优的10mg/kg甲基强的松中阻断IRR。分次剂量是0.4mg/kg Ab的少量预剂量，随后是10mg/kg Ab的大剂量。(H)在临床方案中使用两个剂量的皮质类固醇实施术前用药后，看到耐受性改善且疗效持续。CR：完全响应；PR：部分响应；SD：病情稳定；DLT：剂量限制性毒性。
图8.BI-1206输注后瞬时的FcγRIIB受体占有率和外周淋巴细胞耗竭。图8A)在已经接受100mg BI-1206(n＝8)的受试者体内，BI-1206输注后的外周B细胞上的FcγRIIB受体占有率随时间变化。垂直虚线表示BI-1206输注。在第二次和第三次BI-1206输注时，受体占用率数据仅在输注前可用。线表示中值。基于初步数据。图8B)在已经接受100mg BI-1206(n＝9)的受试者体内，BI-1206输注后的外周淋巴细胞随时间变化。垂直虚线表示BI-1206输注。线表示中值。基于初步数据。
图9.BI-1206输注后血小板的暂时减少与ALT升高有关。图9A)在已经接受70至100mg BI-1206(n＝16)的受试者体内，BI-1206输注后的血小板计数随时间变化。垂直虚线表示BI-1206输注。线表示中值。基于初步数据。图9B)ALT的增加倍数与血小板减少百分比(n＝16)。计算与第1天BI-1206输注前相关的变化。基于初步数据。
图10.BI-1206输注后的细胞因子释放。在BI-1206输注结束时检测到不同细胞因子的血浆/血清升高的患者数量。与输注前相比，该值应增加10倍以上，并且高于正常范围上限10倍以上(ULN)，才被视为阳性。已从5名接受≥70mg BI-1206的受试者体内获得用于分析的样品。基于初步数据。
图11.两个剂量的***缓解了接受BI-1206的两名受试者的IRR、血小板减少和转氨酶升高。受试者501-001(图11A)和503-002(图11B)的血小板计数和ALT。垂直虚线表示抗体输注。每名受试者的第一次输注是单独的利妥昔单抗并且随后是BI-1206和利妥昔单抗。表明了每次抗体输注的IRR等级。501-001和503-002在诱导治疗期间第三次施用BI-1206(70mg)前一晚分别服用12mg和4mg***，并且30分钟后再次服用20mg***。在使用两剂***的这种术前用药方案后，没有受试者出现任何IRR。在用BI-1206的前两次输注期间，其中仅在输注前30分钟给予***(20mg)，出现了IRR(2至3级)。此外，当术前用药两个剂量的***时，在受试者501-001和503-002中，在施用BI-1206后，未看到血小板减少/其降低，也未看到ALT/AST增加。
图12.注射鼠类替代抗CD32b(AT-130-2IgG2a)后的肉眼可见的症状。通过静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)3种不同的注射途径将鼠替代抗CD32b(AT-130-2IgG2a)注射到野生型C57/BL6小鼠中。静脉内和腹膜内注射后出现肉眼可见的症状。这些肉眼可见的症状包括孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然，并且基于观察结果将肉眼可见的症状评分为0至2。当静脉内滴定剂量时，在注射后5至7分钟后看到IRR的快速发作。低至10μg(0.5mg/kg)时，可以看到肉眼可见的症状的时间和严重程度相同。然而，在1μg(0.05mg/kg)的剂量下，未看到肉眼可见的症状。当腹膜内施用200μg(10mg/kg)时，与静脉内注射相比，肉眼可见的症状发作延迟，肉眼可见的症状在注射后20至30分钟出现。与静脉内注射途径相反，该组中的所有小鼠没有表现出肉眼可见的症状，并且在几只小鼠中肉眼可见的症状不太严重。当将腹膜内剂量增加到400μg(20mg/kg)时，与静脉内注射途径相比，肉眼可见的症状的发作仍然延迟，然而，所有小鼠都表现出与200mg静脉内施用相同程度和等级的肉眼可见的症状。所有小鼠在注射后1小时完全恢复。最后，当向小鼠皮下施用200μg时，未看到肉眼可见的症状(注射后长达24小时)。当皮下剂量增加到400μg时，小鼠仍未受影响。
图13.AT-130-2IgG2a在C57BL/6小鼠体内的药代动力学特征。观察通过三种不同施用途径用AT-130治疗的小鼠中的AT-130-2血清浓度；通过静脉内注射200μgAT-130-2、通过腹膜内注射200μg AT-130-2、通过皮下注射400μg AT-130-2。给出的数据是1至4只小鼠/剂量组的平均值。缩写：h＝小时；i.p.腹膜内、i.v.静脉内、s.c.皮下。注意，尽管皮下给药，但随后皮下给药AT130获得完全和持续的FcgRIIB受体。与静脉内或腹膜内给药相比，C最大较低并且获得完全饱和的动力学较慢。
图14.肉眼可见的症状(在本图中表示为IRR)和快速大量接触AT-130-2之间的相关性，而不是FcγRIIB饱和的时间。将AT-130-2IgG2a的血清浓度(虚线)对不同施用途径(A：静脉内、B：腹膜内和C：皮下)的肉眼可见的症状等级(虚线)作图。当将AT-130-2的血清浓度和推测的受体占用率(RO)(虚线，10mg/ml给出100％受体饱和)与IRR的发作、严重程度和持续时间进行比较时，很明显，在高和快速暴露AT-130-2之间存在相关性，而不是FcγRIIB饱和的时间。耐受性表现出明显的皮下>腹膜内>静脉内模式，RO在肉眼可见的症状恢复后可维持较长一段时间。
图15A.血小板(PLT)最低点的时间与施用途径和达到FcγRIIB饱和的时间相关。在注射AT-130-2IgG2a后的不同时间点对小鼠取血，并在自动Vetcount中分析血液的血小板计数(PLT)。在通过静脉内和腹膜内施用途径注射AT-130-2后，在肉眼可见的症状发作的同时看到血小板计数的最低点。对于皮下施用途径，未看到肉眼可见的症状，在注射后10小时看到中度下降，根据PK与FcγRIIB达到饱和的时间相关。在所有情况下，PLT降低是瞬时的，并且在注射后8小时内恢复到正常范围内的值。出现肉眼可见的症状的小鼠用实心柱表示。
图15B显示了当使用皮下施用途径时，避免了注射AT-130-2IgG2a后转氨酶增加。注射AT-130-2IgG2a后对小鼠取血，并且分析血液中的转氨酶。对于静脉内施用途径，在肉眼可见的症状发作后1小时，转氨酶(AST)增加(先前确立为转氨酶峰值的时间点)。对于皮下施用途径，未看到肉眼可见的症状，在注射后11小时(根据PK(10小时)的FcγRIIB饱和时间后1小时)未看到转氨酶增加。
图16：施用AT-130-2IgG2a后，瞬时血小板减少、转氨酶增加和细胞因子释放。在腹膜内注射200μg AT-130-2后，在不同时间点对小鼠取血，并且分析血液中的血小板计数(图16A)、转氨酶(图16B)和细胞因子(图16C)。在注射后8小时，PLT计数完全恢复时看到瞬时PLT降低(图16A)。注射后1小时具有峰值的转氨酶(AST和ALT)的增加是受AT-130-2注射影响的唯一临床化学参数(图16B)。这些增加与PLT降低瞬态类似。当静脉内注射AT-130-2时，看到同样的瞬时增加，而当皮下注射AT-130-2时，未检测到转氨酶的增加。(数据未示出)。在腹膜内注射200mg后的不同时间点，分析了一组细胞因子，包括分析物IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、KC/GRO、TNF-α。在所分析的细胞因子中，IL-5、IL-6、IL-10、KC/GRO、TNF-α显示出瞬时增加，除了IL-5在注射后1至3小时达到峰值(图16C)。IL-5在注射后3至8小时显示出延迟的峰(图16C)。这些是在BI-1206的临床研究中已表明在一些患者中增加的相同细胞因子。
图17.2个剂量的皮质类固醇的术前用药抑制与AT-130-2IgG2a施用有关的肉眼可见的症状。在静脉内注射10mg/kg AT-130-2IgG2a前24小时和1小时，用40mg/kg倍他米松预处理小鼠，或者不处理小鼠。观察小鼠的肉眼可见的症状(图17A)并在注射后20分钟出血。分析血液的血小板计数(图17B)、转氨酶和细胞因子(图17C)。用倍他米松的术前用药完全抑制了肉眼可见的症状(图17A)、血小板计数减少(图17B)和转氨酶增加减少(图17C)。静脉内注射AT-130-2后看到的瞬时细胞因子释放也被术前用药抑制(数据未显示)。当使用***时看到相同的结果(数据未显示)。
图18.术前用药的剂量很重要。在静脉内注射10mg/kg AT-130-2IgG2a前24小时和1小时(术前用药)用40mg/kg或10mg/kg倍他米松预处理小鼠。观察小鼠的肉眼可见的症状(图18A)并在注射后20分钟出血。分析血液的血小板计数(图18B)。用10mg/kg倍他米松的术前用药没有完全抑制肉眼可见的症状(图18A)或血小板计数减少(图18B)，表明降低术前用药的剂量可能降低其抑制肉眼可见的症状和血小板减少的可能性。
图19.输注前1小时的类固醇术前用药不足以抑制IRR。在静脉内注射10mg/kg AT-130-2IgG2a前24小时、1小时或24小时+1小时用40mg/kg倍他米松预处理小鼠。观察小鼠的肉眼可见的症状(图19A)并在注射后10至20分钟出血。对血液进行了血小板计数分析(图19B)。注射AT-130-2后1小时用倍他米松的单次术前用药没有抑制肉眼可见的症状(图19A)或血小板减少(图19B)，而注射AT-130-2后24小时用倍他米松的单次术前用药仅将肉眼可见的症状降低至1级。这表明需要两个剂量的类固醇治疗来完全抑制耐受性问题。
图20.抗组胺药的术前用药不足以抑制与AT-130-2IgG2a施用有关的耐受性问题。在静脉内注射10mg/kg AT-130-2IgG2a前(24小时和1小时)，用单独的抗组胺药或用40mg/kg倍他米松+/-抗组胺药预处理小鼠。观察小鼠的肉眼可见的症状(图20A)并在注射后约20分钟出血。对血液进行了血小板计数分析(图20B)。单独使用抗组胺药的术前用药不抑制肉眼可见的症状(图20A)，但似乎改善了血小板计数的减少(图20B)。在静脉内注射10mg/kgAT-130-2IgG2a前(24小时和1小时)，将抗组胺药添加到40mg/kg倍他米松中不影响肉眼可见的症状或血小板计数。当使用三种不同类型的抗组胺药(Zyrlex、Zantac或Au，数据未显示)时，看到相同的结果。
图21显示了几种但不是所有的鼠类替代抗体诱导IRR。将鼠类替代抗CD32b抗体(AT-130-2mIgG2a)、抗CSFR1(AFS98 rIgG2a)、抗EGFR(7A7 mIgG2a)、抗CD40(FGK4.5rIgG2a)和抗FcγRIII(AT154-2 mIgG2a)静脉内注射到野生型C57/BL6小鼠中。注射抗CD32b、抗CD40和抗FcγRIII后看到IRR。IRR包括孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然，并且基于观察结果将IRR评分为0至2。未看到抗EGFR或抗CFSR1的IRR。在注射抗CD32b或抗CD40前1小时和24小时，用40mg/kg倍他米松预处理小鼠，未看到IRR(未用术前用药评估抗FcγRIII)。表明术前用药可以抑制与不同抗体和靶标相关的IRR。
图22显示了诱导IRR的抗体也诱导血小板减少。将鼠类替代抗CD32b抗体(AT-130-2mIgG2a)、抗CD40(FGK4.5 rIgG2a)和抗FcγRIII(AT154-2 mIgG2a)静脉内注射到野生型C57/BL6小鼠中。注射后20分钟使用Vetscan(Vetscan HM5 Abaxis，Triolab)分析新鲜血液中的血小板计数。注射抗CD32b、抗CD40和抗FcγRIII后，血小板计数下降。在注射抗CD32b或抗CD40之前1小时和24小时，用40mg/kg倍他米松预处理小鼠，未看到血小板减少(未用术前用药评估抗FcγRIII)。表明术前用药可以抑制血小板减少，这与不同的抗体和靶标有关。
现在将描述体现本发明某些方面的具体的非限制性实例。这些实例应该与上面提供的附图的简要描述一起阅读。
实例
实例1
发明内容
与皮质类固醇预处理醋和的分次给药方案在体内模型中进行了评估，该模型概括了使用BI-1206鼠类替代AT-130-2IgG2a在BI-1206中看到的耐受性特征。与皮质类固醇预处理组合的分次给药方案改善了抗FCγRIIb治疗的耐受性特征。分次给药可改善肉眼可见的IRR和血小板计数。第一剂量和第二剂量之间的时间间隔似乎并不重要，而皮质类固醇预处理的正确时间对于第一剂量的完全耐受性似乎很重要。
材料和方法
检验物质
抗小鼠CD32B IgG2a克隆AT130-2在HEK293细胞中瞬时表达。在基于发光的ELISA或FACS分析中证明了纯化的研究批次的特异性。通过LAL-变形细胞检验确定，发现抗体的内毒素水平<0.1IU/mL。
| 抗体克隆 | 说明书 | 参考 |
| AT-130-2IgG2a | BI-1206的小鼠替代 | mIgG2aK-AT130 ref:uct,2019-06-07,1443:65 |
小鼠
从Taconic或Janvier获得六至八周龄(17至20g)雌性C57/BL6和Balb C小鼠。以200ug/小鼠的大剂量，或以8ug/小鼠的分剂量，随后以200ug/小鼠的分剂量给小鼠静脉内注射小鼠抗CD32B AT-130-2IgG2a。
术前用药
对于皮质类固醇治疗，甲基强的松(倍他米松，VNR：008938，Alfasigma S.P.A.)以10mg/kg的剂量使用，这在这些小鼠模型中是次优剂量。
分次给药
皮质类固醇治疗后24小时开始分次给药，静脉内施用8μg/小鼠的小鼠抗-CD32BAT-130-2IgG2a，随后在20至40分钟后大剂量给药200μg/小鼠。在平行试验中，小鼠仅注射大剂量。
动物监测
在注射后监测小鼠的行为变化和肉眼可见的症状如孤立、移动性和皮毛状况。基于观察结果建立0至2分的肉眼可见的IRR评分***。
体温
注射大剂量后20分钟，用小鼠温度计测量体温。
血液取样
注射大剂量抗CD32B后20分钟从隐静脉收集血样用于即时血细胞计数分析。对于肝酶和细胞因子分析，在处死前在异氟烷麻醉下从小鼠的主动脉取血。在大量给药后1小时和3小时分别收集肝酶和细胞因子样品。
血小板计数
使用Vetscan(Vetscan HM5 Abaxis，Triolab)分析新鲜血液中的血小板计数。
转氨酶
将冷冻血清样品运送至(IDEXX BioResearch Vet Med Labor GmbH)进行转氨酶分析。
结果和讨论
与皮质类固醇预处理组合的分次给药方案改善了抗CD32b治疗的耐受性特征。抗-CD32b单独治疗的耐受性特征可参见图1。分次给药与初始剂量的皮质类固醇组合改善了肉眼可见的IRR和血小板计数(图2、3和4)。这在体内模型中进行了评估，该模型概括了使用BI-1206鼠类替代AT-130-2IgG2a在BI-1206中看到的耐受性特征。第一剂量和第二剂量之间的时间间隔似乎并不重要，但是，皮质类固醇预处理的正确时间对于第一剂量的完全耐受性似乎很重要。
实例2
发明内容
为了评估用临床上通常用于治疗IRR的其它物质(除皮质类固醇外)预处理是否可以抑制该模型中的IRR，发明人用几种其它临床相关物质预处理小鼠。在该模型中，所检验的前药疗法均不能抑制IRR，这表明它们在预防与BI-1206施用有关的不良作用方面是无效的。
材料和方法
检验物质
抗小鼠CD32B IgG2a克隆AT130-2在HEK293细胞中瞬时表达。在基于发光的ELISA或FACS分析中证明了纯化的研究批次的特异性。通过LAL-变形细胞检验确定，发现抗体的内毒素水平<0.1IU/mL。
| 抗体克隆 | 说明书 | 参考 |
| AT-130-2IgG2a | BI-1206的小鼠替代 | mIgG2aK-AT130 ref:uct,2019-06-07,1443:65 |
小鼠
从Taconic或Janvier获得六至八周龄(17至20g)雌性C57/BL6和Balb C小鼠。以200ug/小鼠的大剂量，或以8ug/小鼠的分剂量，随后以200ug/小鼠的分剂量给小鼠静脉内注射小鼠抗CD32B AT-130-2IgG2a。
术前用药
对于皮质类固醇治疗，甲基强的松(倍他米松，VNR：008938，Alfasigma S.P.A.)以10mg/kg的剂量使用，这在这些小鼠模型中是次优剂量。
评估的其它术前用药是抗PAF(CV3988，sc-201015，Santa Cruz 20mg/kg)、抗IL6(克隆15A7，BE0047，Bioxcell，10mg/kg)、抗组胺药(Zantac，VNR：077875，GlaxoSmithKlineAB，5mg/kg)或白三烯拮抗剂(131064，Apoex，4mg/kg)。这些术前用药在静脉内注射小鼠抗CD32B AT-130-2IgG2a前1小时以200ug/小鼠的大剂量进行腹膜内给予。
分次给药
皮质类固醇治疗后24小时开始分次给药，静脉内施用8μg/小鼠的小鼠抗-CD32BAT-130-2IgG2a，随后在20至40分钟后以200μg/小鼠大剂量给药。在平行试验中，小鼠仅注射大剂量。
动物监测
在注射后监测小鼠的行为变化和肉眼可见的症状如孤立、移动性和皮毛状况。基于观察结果建立0至2的肉眼可见的IRR评分***。
| 评分 | 肉眼可见的症状 |
| 0 | 无明显症状 |
| 1 | 孤立、活动减少 |
| 2 | 孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然 |
体温
注射大剂量后20分钟，用小鼠温度计测量体温。
血液取样
注射大剂量抗CD32B后20分钟从隐静脉收集血样用于即时血细胞计数分析。对于肝酶和细胞因子分析，在处死前在异氟烷麻醉下从小鼠的主动脉取血。在大量给药后1小时和3小时分别收集肝酶和细胞因子样品。
血小板计数
使用Vetscan(Vetscan HM5 Abaxis，Triolab)分析新鲜血液中的血小板计数。
转氨酶
通过将冷冻血清样品运送至(IDEXX BioResearch Vet Med Labor GmbH)进行转氨酶分析。
结果和讨论
如图5所示，检验物质(抗PAF、抗IL-6、抗组胺药和白三烯拮抗剂)均不能预防该小鼠模型中与AT-130-2施用有关的IRR。这表明仅皮质类固醇作为预处理能够提供实例1中所述的保护作用。考虑到所有这些物质通常在临床上用于治疗与其它治疗性抗体有关的IRR，这一发现是令人惊讶的。
实例3
发明内容
显而易见，静脉内施用BI-1206经常与IRR、血小板减少症、细胞因子的瞬时峰值有关，并且在较不频繁但最严重的情况下，与肝酶的增加有关(图6)。因此，如果可以使用能够预防或减轻这些不良作用的剂量方案，则是有利的。同样显而易见的是，在非霍奇金淋巴瘤患者中，FcγRIIb受体占用率转化为B细胞耗竭(这与来自小鼠模型的体内数据相关)，因此持续的受体饱和对于持续的B淋巴细胞耗竭是重要的，然而，通过静脉内注射获得治疗益处所需的这种持续的高受体占用率与高水平的IRR有关(图7)。
材料和方法
血小板计数、ALT浓度和IRR分级
从临床地点获得血小板计数、ALT浓度和IRR分级，并根据当地标准程序进行分析和报告。描述的所有临床研究数据均为初步数据，仅进行了部分质量控制，应视为BI-1206有关药效和耐受性的说明。
FcgRIIb受体占有率
使用流式细胞术分析人类和hFcgRIIb转基因小鼠中的FcgRIIb受体占有率。将全血与005-C05抗体(靶向hFcgRIIb)或抗hCD32-AF647抗体一起孵育。005-C05与BI-1206结合相同的表位，但亲和力低得多。在分析中，在CD19+细胞群体上分别获得mAb(005-C05和抗人类CD32)的几何平均值。使用以下等式计算受体占有率(RO)：RO(％)＝((总受体-标准化游离受体)*100)/总受体。然后将CD19+细胞的005-C05几何平均值的所有重复乘以标准化因子。
细胞因子分析
对于细胞因子浓度，将冷冻血浆样品解冻并稀释2倍和8倍。分析了两组平行的细胞因子，用IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、IL-10、IL-2和IL-4进行的促炎测定(MesoScaleDiscovery(MSD)#K15049)，和用MIP-1β、IL-1β、IL-23、IL-12p70、TARC和VEGF进行的趋化因子测定(MSD#K15067)。测定遵循制造商的方案，简述如下：将50μL样品和校准标准品添加到适当的MSD板中并孵育。洗涤后，将25μL SULFO-TAG检测抗体混合物添加到对应板的每个孔中。在QuickPlex SQ120读数仪(MSD)上分析板，并且使用MSD软件计算细胞因子浓度(Discovery工作台，2013；版本LSR-4-0-12)。
hFcgRIIb转基因小鼠中的B细胞耗竭
使用市售抗体，使用流式细胞术分析hFcgRIIb转基因小鼠中的B细胞耗竭。
结果和讨论
如图6所示，很明显，BI-1206的静脉内施用经常与IRR、血小板减少症、细胞因子的瞬时峰值有关，并且在较不频繁但最严重的情况下，与肝酶的增加有关。如图7所示，实现此类持续的高受体占有率对于与高水平IRR有关的治疗益处是必需的。
实例4
在实例4A和实例4B中，使用表示为BI-1206的抗体。该抗体具有以下轻链和重链：
轻链：
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYADDHR
PSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCASWDDSQRAVIFGGGTKLTVL
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETT
TPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
(SEQ.ID.No:1)
重链：
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYD
GSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELYDAFDIWG
QGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALT
SGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFN
WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKAL
PAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG
QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ.ID.No:2)
BI-1206的修饰形式是这样的形式，其中N297处的糖基化位点(上面以粗体标记)突变为Q(下面以粗体标记)，即N297Q突变，产生以下重链:
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWMAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARELYDAFDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ.ID.No:195)
作为替代抗体和对照抗体，下面使用作为IgG2a同种型的抗小鼠CD32B抗体AT130-2和作为IgG1同种型的对照抗体AT130-2 N297A。作为IgG2a同种型的AT130-2是可商购的，例如从ThermoFisher Scientific以目录#12-0321-82购得，然而#12-0321-82是PE缀合物，因此抗体应该被修饰以使其不是缀合物。AT130-2 N297A作为IgG1同种型可以通过任何已知的方法产生，包括用A取代297位的N(如上所述)。
实例4A-靶标：FcγRIIB
背景技术
BioInvent International AB公司开发了具有抗肿瘤活性的治疗性单克隆抗体BI-1206，可用作单一疗法或与抗CD20靶向疗法或其它经临床验证的检查点抑制剂组合使用。BI-1206以高特异性结合CD32B(FcγRIIB),目前正在两项临床I/IIa期研究(CRUKD/16/001和17-BI-1206-02)中进行评估，治疗慢性淋巴细胞白血病(CLL)和B细胞非霍奇金淋巴瘤(B细胞NHL)患者。下文描述的所有临床研究数据均为初步数据，仅进行了部分质量控制，应视为BI-1206有关药效和耐受性的说明。部分数据基于与个体研究者的个人交流。
迄今为止，已有24名受试者接受了高达100mg的BI-1206单独治疗或与利妥昔单抗组合治疗。100mg BI-1206显示外周B细胞上的瞬时受体饱和，其中受体占用率为100％，或接近100％，长达48小时(图8)。对应地，看到外周B淋巴细胞的瞬时耗竭，在约7天内恢复(图8)。这与使用hFcγRIIB小鼠的临床前体内模型一致，其中已经证明持续的受体饱和对于实现持续的B淋巴细胞耗竭是必需的。
在BI-1206输注期间，已经在人类受试者体内看到频繁的输注相关反应(IRR)(图7A)。施用≥50mg BI-1206也与血小板的瞬时减少有关(图9)。血小板减少症并不严重，也不与出血有关，并且大多数发作在一周内得到解决。血小板减少和转氨酶升高(即丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST))之间似乎存在联系，在接受70mg BI-1206治疗的16名受试者体内，有3名出现ALT和AST显著升高≥(图9)。
此外，在血浆或血清可用于分析的情况下，在接受≥70mg BI-1206的5名受试者体内，观察到5名受试者出现瞬时的细胞因子释放。细胞因子释放包括巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10、IL-8、IL-6和IL-4，峰值在输注后立即出现，细胞因子总是在24小时内正常化(图10)。细胞因子释放与临床症状无关。
在临床研究17-BI-1206-02中，16名受试者已经接受了70至100mg BI-1206，在这些剂量水平下总共施用了58次BI-1206。其中46次施用是在实施动物模型中确定的体内保护性基于皮质类固醇的术前用药方案后进行的(图7C和7H)。将体内动物模型确定的术前用药方案实施到临床中，导致人类癌症患者中IRR的严重程度和频率在统计学上显著降低(图7D和7H)。
受试者501-001和503-002在诱导治疗期间第三次施用BI-1206(70mg)前一晚分别服用12mg和4mg***，并且30分钟后再次服用20mg***。在使用两个剂量的***的这种术前用药方案后，两个受试者都没有出现IRR。在用BI-1206的前两次输注期间，其中仅在输注前30分钟给予***(20mg)，出现了IRR(2至3级)。此外，在受试者501-001和503-002中，当术前用药两个剂量的***时，在施用BI-1206后未看到血小板减少/其降低，并且未看到ALT/AST增加(图11)。第三名受试者(201-003)接受了9次30mg BI-1206施用(诱导期4次，维持期5次),并重复出现IRR。在第10次施用BI-1206时，使用两个剂量***的术前用药，并且IRR改善至1级。在接受较低剂量BI-1206(30mg)的受试者201-003中，从未看到血小板减少或ALT/AST增加。重要的是，并且与确定治疗效果的FcgRIIB受体饱和度一致，在临床中实施术前用药方案后，治疗效果得以维持。在术前用药方案纳入临床方案后，在患者中观察到完全和部分反应(图7H)。
材料和方法
检验和对照物质
抗小鼠CD32B IgG2a克隆AT130-2和对照抗体(AT130-2 N297A)在HEK293细胞中瞬时表达。在基于发光的酶联免疫吸附测定(ELISA)或流式细胞仪分析中证明了纯化研究批次的特异性。通过LAL-变形细胞检验确定，发现抗体的内毒素水平<0.1IU/mL。
| 抗体克隆 | 说明书 |
| AT-130-2IgG2a | 如上所述的BI-1206的小鼠替代 |
| AT-130-2IgG1 N297A | 如上所述的BI-1206的小鼠替代的FC空版本 |
小鼠
从Taconic获得六至八周龄(17至20g)雌性C57/BL6小鼠。向小鼠静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)注射1μg至400μg/小鼠剂量的小鼠抗CD32B AT-130-2IgG2a。
术前用药
对于皮质类固醇治疗，使用甲基强的松(倍他米松，VNR：008938,AlfasigmaS.P.A.)或***(目录号：S1322，批号：02，Selleckchem)。对于抗组胺治疗，使用Zyrlex(10mg/ml，VNR:523084，MACURE PHARMA ApS)、Zantac(25mg/ml，VNR:077875，葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline AB))或Aeurius(0.5mg/ml，VNR:097288，默沙东(Merck sharp&DohmeBV))。
动物监测
在注射后监测小鼠的行为变化和肉眼可见的症状如孤立、移动性和皮毛状况。基于观察结果建立0至2的肉眼可见的IRR评分***：
| 评分 | 肉眼可见的症状 |
| 0 | 无明显症状 |
| 1 | 孤立、活动减少 |
| 2 | 孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然 |
血液取样
从隐静脉收集血样用于即时血细胞计数分析。对于AT130-2的血清浓度、肝酶和细胞因子分析，在处死前在异氟烷麻醉下从小鼠的主动脉取血。
AT130-2的血清浓度
使用夹心ELISA对AT130-2 mAb的血清浓度进行定量。简言之，重组CD32B蛋白(Sino生物#50030-M08H)用作包被。将稀释的样品添加到ELISA板，并且在孵育和洗涤步骤后，通过HRP缀合的多克隆驴抗小鼠IgG Ab(Jackson#715-035-151)进行检测。后续地，使用Pico化学发光底物(ThermoFisher#37069)，用Tecan Ultra微量滴定板读数仪进行板读数。
血小板计数
使用Vetscan(Vetscan HM5 Abaxis，Triolab)分析新鲜血液中的血小板计数。
转氨酶
将冷冻血清样品运送至(IDEXX BioResearch Vet Med Labor GmbH)进行转氨酶分析。
细胞因子
为了研究小鼠中输注相关反应(IRR)的潜在因素，在选定的时间点评估了与腹膜内注射AT-130-2mAb有关的细胞因子释放。将冷冻一次的血清样品解冻并稀释2倍或4倍。使用V-plex促炎小组1小鼠试剂盒(MesoScale Discovery#K15048D)分析细胞因子，包括分析物干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、KC/GRO、肿瘤坏死因子(TNF)-α。测定遵循制造商的方案，简述如下：将50μL样品和校准标准品添加到MSD板中并孵育。洗涤后，将25μL SULFO-TAG检测抗体混合物添加到对应板的每个孔中。在QuickPlex SQ120读数仪(MSD)上分析板，并且使用MSD软件计算细胞因子浓度(Discovery工作台，2013；版本LSR-4-0-12)。
结果
鼠类替代抗CD32b IgG2a(AT-130-2)后的肉眼可见的症状
通过静脉内(i.v.)、腹膜内(i.p.)或皮下(s.c.)3种不同的注射途径将鼠类替代抗CD32b(AT-130-2IgG2a)注射到野生型C57/BL6小鼠中。在200μg(对应于10mg/kg)剂量下，静脉内注射后5至7分钟看到现快速输注相关反应(IRR)。这些IRR包括孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然。这些小鼠的血液取样表明血压降低。IRR发作后10至15分钟，这些小鼠开始恢复，注射后1小时未看到肉眼可见的症状。
当滴定静脉内剂量时，低至10μg(0.5mg/kg)时，可以看到肉眼可见的症状的时间和严重程度相同。然而，在1μg(0.05mg/kg)的剂量下，未看到IRR(图12)。
当腹膜内施用相同剂量200μg(10mg/kg)时，看到IRR发作延迟，以及IRR在注射后20至30分钟出现。与静脉内注射途径相反，该组中的所有小鼠未表现IRR，并且在几只小鼠中IRR不太严重(图12)。
当将腹膜内剂量增加到400μg(20mg/kg)时与静脉内注射途径相比，IRR的发作仍然延迟，然而，所有小鼠都表现出与200μg静脉内施用相同程度和等级的IRR(图12)。所有小鼠在注射后1小时完全恢复。
最后，当给小鼠皮下施用200μg时，未看到IRR(注射后长达24小时)。当皮下剂量增加到400μg时，小鼠仍未受影响(图12)。
当静脉内施用AT-130-2的Fc-null版本，即AT-130-2IgG1 N297A时，未看到IRR，表明Fc-结合是引发与AT-130-2有关的症状所必需的。
评估了静脉内、腹膜内和皮下注射AT-130-2的药代动力学特征(图13)。
当将PK和假定的受体占有率(RO，基于此处未显示的单独实验，其中显示10μg/ml给出100％受体饱和度)与IRR的发作、严重性和持续时间进行比较时，清楚的是在高和快速暴露AT-130-2之间存在相关性，而不是FcγRIIB饱和的时间。耐受性表现出明显的皮下>腹膜内>静脉内模式，RO在IRR恢复后RO可维持较长一段时间(图14)。
血小板、转氨酶和细胞因子
为了研究在这些小鼠中看到的IRR是否与在BI-1206临床研究中看到的其它参数有关，在IRR发作时对小鼠取血，并分析血液中的血细胞计数、临床化学参数和细胞因子。在皮下注射没有出现IRR的情况下，在注射后的不同时间点对小鼠取血。在通过静脉内和腹膜内施用途径注射AT-130-2后，在IRR发作的同时看到血小板计数(PLT)下降(图15A)。对于皮下施用途径，在注射后10小时仅看到中度下降(图15A)。在所有情况下，PLT降低是瞬时的，并且在注射后8小时内恢复到正常范围内的值(对于腹膜内注射200μg AT-130-2的数据，如图16A所示)。当皮下施用AT-130-2IgG2a时，避免了静脉内注射后出现的转氨酶升高。对于静脉内施用途径，在肉眼可见的症状发作后1小时，转氨酶(AST)增加(先前确立为转氨酶峰值的时间点)。然而，对于皮下施用途径，未看到肉眼可见的症状。更具体地，如图15B所示，在注射后11小时(根据PK(10小时)的FcγRIIB饱和时间后1小时)未看到转氨酶增加。
关于临床化学参数，转氨酶(AST和ALT)在注射后1小时达到峰值的增加是受AT-130-2注射影响的唯一参数。这些增加就像PLT瞬时减少一样(图16B)。当静脉内注射AT-130-2时，看到同样的瞬时增加，而当皮下注射AT-130-2时，未检测到转氨酶的增加。
在腹膜内注射200μg后的不同时间点分析了一组细胞因子，包括分析物IFN-γ、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12p70、KC/GRO、TNF-α。在所有分析的细胞因子中，IL-5、IL-6、IL-10、KC/GRO、TNF-α显示出瞬时的增加，在注射后1至3小时达到峰值，除了IL-5(图16C)。IL-5在注射后3至8小时显示延迟的峰值(图16C)。在使用BI-1206的临床研究中，这些细胞因子与在一些患者中显示增加的细胞因子相同。
术前用药
为了研究预先给予皮质类固醇是否可以抑制IRRs和AT-130-2的相关毒性，小鼠在注射AT-130-2前16-24小时和1小时术前用药40mg/kg倍他米松。用AT-130-2看到的IRR和血小板减少均被术前用药完全抑制(图17A至B)。此外，肝脏转氨酶和细胞因子释放的增加不太明显(图17C和未显示的数据)。当评估另一皮质类固醇***时，看到相同的效果(数据未显示)。
为了评估皮质类固醇治疗剂量的重要性，在以下实验中，倍他米松的剂量从40mg/kg下降至10mg/kg(图18)。在10mg/kg剂量下，半数小鼠出现IRR和血小板计数下降，表明需要高剂量皮质类固醇才能完全阻断IRR和有关毒性(图18)。
此外，通过比较仅早期(注射前1小时)或仅晚期(注射前24小时)术前用药与两个剂量的皮质类固醇治疗的保护作用，研究了两个剂量皮质类固醇治疗的重要性。仅在注射前1小时施用不能抑制IRR，也不能抑制血小板计数的下降(图19)。注射前24小时的术前用药减少了IRR和血小板减少，但不能完全阻断这些症状(图19)，这表明需要两个剂量的皮质类固醇才能完全阻断IRR。
最后，评估了抗组胺药(临床试验中的标准术前用药)的影响。术前单独使用抗组胺药不能抑制IRR或血小板减少。当将两个剂量的皮质类固醇治疗与抗组胺药预处理组合时，保护作用得以保留(图20)。三种不同类型的抗组胺药(Zyrlex、Zantac和Aeurius)证实了这些结果。
结论
数据表明，在野生型小鼠中使用抗FcγRIIB mIgG2a替代(AT-130-2)静脉内(i.v.)或腹膜内(i.p.)施用的体内模型重现了在BI-1206中看到的耐受性特征，包括IRR、血小板计数减少、转氨酶(即ALT和AST)升高和瞬时的细胞因子释放。注射AT-130-2后5至20分钟，IRR出现肉眼可见的症状，包括孤立、活动减少、平衡受损、竖毛、弓起、随后身体姿势不自然和血压降低。可见的物理反应是瞬时的，并且动物在施用抗体1小时后完全恢复。肉眼可见的症状伴有血小板计数减少和转氨酶升高，这些症状在8小时内正常化。细胞因子释放是急性和瞬时的，包括IL-6、IL-5、IL-10、TNFα和KC/GRO(人类IL-8的啮齿动物同源物)。细胞因子分布和动力学与BI-1206后在人类受试者体内看到的相当。在小鼠模型中，IRR与高和快速的暴露之间存在明显的相关性，而不是FcγRIIB饱和的时间，其中皮下(s.c.)施用AT-130-2比腹膜内和静脉内施用具有更好的耐受性。症状发作的时间与受体达到饱和时的血清浓度相关。然而，当施用达到受体饱和6天或更长时间的抗体剂量时，动物在24小时内从所有症状中恢复。持续的FcγRIIB阻断本身似乎不是IRR的原因。
在该模型中，两个剂量的皮质类固醇(***或倍他米松)的术前用药抑制肉眼可见的IRR以及血小板减少和转氨酶升高。在抗体施用前16至24小时皮下给予两个剂量并且30至60分钟静脉内给予两个剂量。皮质类固醇对小鼠肉眼可见的症状的预防是剂量依赖性的，并且重要的是术前用药的时机是至关重要的。为了获得保护效果，在施用抗体前16至24小时的剂量是必要的。如果仅在抗体施用前30至60分钟给予皮质类固醇，对于肉眼可见的症状没有保护作用，而仅在抗体施用前16至24小时给药部分地改善了耐受性。当给予两个剂量时，实现了对肉眼可见的症状、血小板减少、转氨酶升高和细胞因子释放的抑制。
根据在小鼠模型中确定的基于皮质类固醇的方案给人类患者施用可防止IRR，并允许施用更高剂量的所研究的抗FcgRIIB抗体，这可能与更强的抗肿瘤活性有关。
实例4B-其它靶标
材料和方法
检验和对照物质
抗小鼠CD32b克隆在HEK293细胞中瞬时表达。在基于发光的酶联免疫吸附测定(ELISA)或流式细胞仪分析中证明了该批次的特异性。通过LAL-变形细胞检验确定，发现抗体的内毒素水平<0.1IU/mL。抗小鼠CD40、EGFR和CSFR1抗体从BioXcell或AbsoluteAntibody(见下表)购买，抗小鼠FcγRIII抗体AT154-2是由南安普敦大学(University ofSouthampton)赠送的。或者，AT154-2作为大鼠IgG2b同种型可以从例如BioRad、ArgioBiolaboratories(ARG23942)或LSBio(LS-C745656)购买，然后使用任何已知的方法将其转化为IgG2a形式。
小鼠
从Taconic获得六至八周龄(17至20g)雌性C57/BL6小鼠。对小鼠进行静脉内注射(i.v.)，其中每只小鼠注射200μg不同的抗体。
术前用药
对于皮质类固醇治疗，使用甲基强的松(倍他米松，VNR：008938,AlfasigmaS.P.A.)或***(目录号：S1322，批号：02，Selleckchem)。
动物监测
在注射后监测小鼠的行为变化和肉眼可见的症状如孤立、移动性和皮毛状况。基于观察结果建立0至2的肉眼可见的IRR评分***：
血液取样
从隐静脉收集血样用于即时血细胞计数分析。
血小板计数
使用Vetscan(Vetscan HM5 Abaxis，Triolab)分析新鲜血液中的血小板计数。
结论
该实例显示本文所述的模型可以区分诱导耐受性问题的抗体分子和不诱导耐受性问题的抗体分子。其进一步显示术前用药可抑制与不同抗体和靶标相关的IRR。
该实例还显示诱导IRR的抗体也诱导血小板减少症。此外，它证明术前用药可抑制与不同抗体和靶标相关的血小板减少症。
实施例
将参考以下编号的段落描述本发明的某些实施例：
1.一种用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的治疗性***，其中所述治疗性***包含：
(i)与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中所述抗体分子以至少第一剂量和第二剂量向所述受试者施用；以及
(ii)皮质类固醇，
其中所述抗体分子的所述第一剂量低于所述抗体分子的最大治疗有效剂量；并且
其中在施用所述第一剂量的所述抗体分子之前将向所述受试者施用所述皮质类固醇。
2.一种包含抗体分子和皮质类固醇的组合，其用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的给药方案，其中所述给药方案包含以下步骤：
(i)在施用第一剂量的所述抗体分子之前施用皮质类固醇；
(ii)施用所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子，所述第一剂量低于最大治疗有效剂量；以及
(iii)施用第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中所述第一剂量的所述抗体分子在所述第二剂量的所述抗体分子前施用。
3.以下物质：
(i)与FcyRllb特异性结合的抗体分子；以及
(ii)皮质类固醇，
在制备用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的药物中的用途，其中所述药物包含至少第一剂量和第二剂量的所述抗体分子；并且
其中所述抗体分子的所述第一剂量低于所述抗体分子的最大治疗有效剂量；并且
其中在施用所述第一剂量的所述抗体分子之前施用所述皮质类固醇。
4.一种用于改善受试者体内与FcyRllb特异性结合的抗体分子的耐受性的方法，其包含：
(i)在施用第一剂量的抗体分子之前施用皮质类固醇；
(ii)施用所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子，所述第一剂量低于最大治疗有效剂量；以及
(iii)施用第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子，其中所述第一剂量的所述抗体分子在所述第二剂量的所述抗体分子前施用。
5.根据段落1至4所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述***、供使用的组合、用途或方法进一步包含施用一种或多种治疗性抗体以治疗受试体内的癌症。
6.根据段落5所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述治疗性抗体选自：利妥昔单抗；派姆单抗；纳武单抗；西米普利单抗；卡瑞利珠单抗；多塔利单抗；奥比妥珠单抗；奥法木单抗及其生物类似物或等同物。
7.根据段落1至6所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中在所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前10分钟至48小时的时间点向所述受试者施用所述皮质类固醇。
8.根据段落7所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中在所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前10分钟至24小时的时间点向所述受试者施用所述皮质类固醇。
9.根据段1至6所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以第一剂量和第二剂量施用，并且其中所述第一剂量的所述皮质类固醇在所述第一剂量的所述与FcγRIIb特异性结合的抗体分子之前16小时至48小时的时间点施用，并且其中所述第二剂量的所述皮质类固醇在所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前10分钟至2小时的时间点施用。
10.根据第9段所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中另外剂量的皮质类固醇在所述第二剂量的所述与Fcyr11b特异性结合的抗体分子之前16小时至48小时的时间点施用。
11.根据段落1至10所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与Fcyr11b特异性结合的抗体分子在所述第二剂量的所述与Fcyr11b特异性结合的抗体分子之前1至24小时的时间点施用。
12.根据段落1至10所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与Fcyr11b特异性结合的抗体分子在所述第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约1小时施用。
13.根据段落1至10所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子在所述第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前约24小时施用。
14.根据段落1至10所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子在所述第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子之前24小时至48小时施用。
15.根据段落1至14所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以4mg或更大的剂量施用。
16.根据段落1至15所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以12mg或更大的剂量施用。
17.根据段落1至14所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以4mg至20mg的剂量施用。
18.根据段落17所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以12mg至20mg的剂量施用。
19.根据段落17所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇以4mg至12mg的剂量施用。
20.根据段落1至19所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇是***或倍他米松或***和倍他米松的组合。
21.根据段落1至20所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第一剂量低于最大耐受治疗剂量。
22.根据段落1至21所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第一剂量比最大治疗有效剂量低至少50％。
23.根据段落1至22所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子以0.2mg/kg至0.6mg/kg的剂量施用。
24.根据段落23所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子以0.3mg/kg至0.5mg/kg的剂量施用。
25.根据段落1至24所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第一剂量以20mg至40mg的剂量施用。
26.根据段落25所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子以约30mg的剂量施用。
27.根据段落1至26所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第二剂量是治疗有效剂量。
28.根据段落1至27所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第二剂量是所述最大耐受治疗剂量或最大可行治疗剂量。
29.根据段落1至27所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子的所述第二剂量低于所述治疗有效剂量。
30.根据段落1至29所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中另外的剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子在所述第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子后向所述受试者施用。
31.根据段落1至30所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中减少或消除了与施用所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子有关的输注相关反应。
32.根据段落1至31所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中在施用所述第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子后，所述受试者的体温和/或血小板计数和/或肝酶的血液水平的变化在至少24小时内降低(并且优选降低至可接受的水平)。
33.根据段落1至32所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子能够通过其Fc区与一种或多种Fcy受体结合。
34.根据段落1至33所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子具有SEQ ID No：1的轻链序列和SEQ ID No：2的重链。
35.根据段落1至34所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述第一和第二剂量的所述与FcyRllb特异性结合的抗体分子被配制用于静脉内递送至所述受试者。
36.根据段落1至35所述的***、供使用的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇被配制用于静脉内或口服递送至所述受试者。
37.一种试剂盒，其包含：
(i)任选地根据段落33和/或34所述的与FcyRllb特异性结合的抗体分子；
(ii)任选地根据段落15至20中任一段所述的皮质类固醇；以及
(iii)任选地，供使用的说明书，
其中所述抗体分子以第一剂量和第二剂量提供，其中所述抗体分子的所述第一剂量低于所述抗体分子的最大治疗有效剂量，进一步任选地其中所述第一剂量根据段落11至14和21至26所定义，进一步任选地其中所述第二剂量根据段落27至29所定义。
38.根据段落37所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于改善所述受试者体内所述抗体分子的耐受性。
39.根据段落37或38所述的试剂盒，其中所述皮质类固醇以根据段落12至17中任一段所定义的剂量提供。
40.根据段落37至39所述的试剂盒，其中所述试剂盒进一步包含一种或多种治疗性抗体。
41.根据段落40所述的试剂盒，其中所述治疗性抗体选自：利妥昔单抗；派姆单抗；纳武单抗；西米普利单抗；卡瑞利珠单抗；多塔利单抗；奥比妥珠单抗；奥法木单抗及其生物类似物或等同物。
42.根据段落40或41所述的试剂盒，其中所述试剂盒用于治疗所述受试者体内的癌症。
43.基本上参考说明书和附图如本文所述的***、供使用的组合、用途、方法或试剂盒。
44.一种用于预测与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子是否与结合向人类静脉内施用的耐受性问题有关的方法，其包含以下步骤：
(i)向小鼠静脉内或腹膜内施用所述治疗性抗体分子(如果与鼠类靶标或替代抗体具交叉反应性)，并且在施用所述治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察所述小鼠，其中在所述小鼠状态恢复至正常状态后的所述一段时间内表现出肉眼可见的症状孤立和活动减少，表明向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子将与耐受性问题有关，
和/或用于预测预防性或治疗性治疗、改变的施用途径和/或治疗性抗体分子的修饰是否可预防或减轻与向人类静脉内施用与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题，
除了如上所述的(i)之外，包含以下步骤：
(ii)向小鼠施用预防性或治疗性试剂，与向小鼠静脉内或腹膜内施用所述治疗性或替代抗体相关，并且在施用所述治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察小鼠，其中与在(i)中所述小鼠表现的所述肉眼可见的症状相比，在所述一段时间内所述肉眼可见的症状表现减少或未表现所述肉眼可见的症状，表明与向人类施用所述治疗性抗体分子组合的用所述预防剂或治疗剂进行的预处理可预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关；
(iii)通过除静脉或腹膜内施用以外的施用途径向小鼠施用所述治疗性或替代抗体，并且在施用所述治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察所述小鼠，其中与(i)中所述小鼠表现的所述肉眼可见的症状相比，在所述一段时间内所述肉眼可见的症状表现减少或未表现所述肉眼可见的症状，表明另一施用途径可用于向人类施用所述治疗性抗体分子以预防或减轻将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关的所述耐受性问题；和/或
(iv)通过除静脉内或腹膜内施用以外的施用途径向小鼠静脉内或腹膜内施用修饰形式的所述治疗性或替代抗体，并且在施用所述修饰的治疗性或替代抗体后立即在一段时间内观察所述小鼠，其中与在(i)中所述小鼠表现的所述肉眼可见的症状相比，在所述一段时间内所述肉眼可见的症状表现减少或未表现所述肉眼可见的症状，表明向人类施用修饰形式的所述治疗性抗体分子可用于预防或减轻将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关的所述耐受性问题。
45.根据段落44所述的方法，其中在(i)中表现1至3种另外的肉眼可见的症状，所述症状选自在(i)中的所述一段时间的平衡受损、竖毛和弓起，随后是身体姿势不自然，其中在所述小鼠的所述状态恢复到所述正常状态后，进一步增强表明向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子与耐受性问题有关。
46.根据段落44或45所述的方法，其中在(i)中表现出所述肉眼可见的症状的所述一段时间开始于施用所述治疗性或替代抗体后的5至10分钟，并且结束于施用所述治疗性或替代抗体后的45至90分钟，并且其中在(ii)、(iii)和/或(iv)中的观察时间段内具有相同的长度。
47.根据段落44至46中任一段所述的方法，其中包含以下另外参数中的至少一个：
·降低的血压、
·减少的血小板计数，和/或
·增加的肝酶(AST/ALT)。
在(i)的所述一段时间内观察到的进一步增强表明向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子将与耐受性问题有关。
48.一种用于预测预防性或治疗性治疗是否可预防或减轻与向人类静脉内施用根据权利要求1至4中任一项所述的与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题的方法，其至少包含步骤(i)和(ii)，其中在(ii)中使用预处理，并且其中所述预处理是在注射所述治疗性或替代抗体前向小鼠施用皮质类固醇。
49.根据段落48所述的方法，其中所述预处理包含皮质类固醇的两次施用，其中一次在施用所述治疗性或替代抗体前10至48小时给予，以及另一次在施用所述治疗性或替代抗体前5分钟至5小时给予。
50.根据段落49所述的方法，其中所述皮质类固醇是***或倍他米松。
51.一种用于预测改变的施用途径是否可预防或减轻与向人类静脉内施用根据段落44至50中任一段所述的与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题的方法，其至少包含步骤(i)和(iii)，其中在(iii)中使用的施用途径是皮下施用。
52.一种用于预测治疗性抗体分子的修饰是否可预防或减轻与向人类静脉内施用根据段落44至51中任一段所述的与人类靶标特异性结合的治疗性抗体分子有关的耐受性问题的方法，其至少包含步骤(i)和(iv)，其中在(iv)中使用的所述治疗性或替代抗体的修饰形式是导致Fc受体的接合减少或消除的修饰。
53.根据段落44至52中任一段所述的方法，其中所述人类靶标选自由FcγRIIB、FcγRIIA和CD40组成的组。
54.根据段落53所述的方法，其中所述治疗性抗体分子是能够通过其Fc结构域与人类FcγR结合的人类抗FcγRIIB抗体，并且其中所述小鼠替代抗体是能够通过其Fc结构域与小鼠FcγR结合的抗FcγRIIb抗体。
55.根据段落54所述的方法，其中所述治疗性抗体分子是人类抗FcγRIIB IgG1抗体，并且其中所述小鼠替代抗体是抗FcγRIIb mIgG2a。
56.一种用于给药方案中以预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的皮质类固醇，
其中已经使用段落44至56中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用段落48至50中任一段所述的或当涉及段落48至50中任一段时段落53至55中任一段所述的方法预测用所述皮质类固醇组合与向人类施用所述治疗性抗体分子的预处理可预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关，
并且其中所述给药方案包含在静脉内施用所述治疗性抗体分子前以至少两个剂量向所述受试者施用所述皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在所述治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
57.一种用于给药方案中以预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的皮质类固醇，
其中所述治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，
并且其中所述给药方案包含在静脉内施用所述治疗性抗体分子前以至少两个剂量向所述受试者施用所述皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在所述治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
58.根据段落56或57所述的供使用的皮质类固醇，其中所述第一剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前6至36小时给予，以及第二剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前15至120分钟给予。
59.根据段落56至58所述的供使用的皮质类固醇，其中所述第一剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前16至24小时给予。
60.根据段落56至59中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述第二剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前30至60分钟给予。
61.根据段落56至60中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述给药方案包含在抗体治疗过程中每次输注所述抗体前施用至少两个剂量的所述皮质类固醇。
62.根据段落56至61中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述皮质类固醇是***或倍他米松或***和倍他米松的组合。
63.根据段落56至62中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述皮质类固醇是***，并且其中所述第一剂量为4至20mg以及所述第二剂量为4至25mg。
64.根据段落63所述的供使用的皮质类固醇，其中所述第一剂量为10至12mg以及第二剂量为20mg。
65.根据段落56至62中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述皮质类固醇是倍他米松，并且其中所述第一剂量为3.2至16mg以及所述第二剂量为3.2至20mg。
66.根据段落65所述的供使用的皮质类固醇，其中所述第一剂量为8至9.6mg以及所述第二剂量为16mg。
67.根据段落56至66中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述给药方案进一步包含在开始施用所述治疗性抗体分子前10分钟至24小时施用抗组胺药。
68.根据段落56至67中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述治疗性抗体是Fc受体结合抗体。
69.根据段落56至68中任一段所述的供使用的皮质类固醇，其中所述治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
70.根据段落69所述的供使用的皮质类固醇，其中所述抗FcγRIIB抗体是具有SEQID No：1的轻链和SEQ ID No：2重链的抗体。
71.一种用于治疗癌症的治疗性抗体分子，其中已经使用根据段落44至55中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用根据段落51所述的或当提及段落51时段落53至55中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子的皮下施用途径预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述的治疗性抗体分子有关，
并且其中所述治疗性抗体被配制用于皮下施用。
72.根据段落71所述的供使用的治疗性抗体分子，其中所述治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
73.根据段落72所述的供使用的治疗性抗体分子，其中所述抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗体。
74.一种用于治疗癌症的修饰形式的治疗性抗体分子，其中已经使用段落44至55中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用段落52所述的或当提及段落52时段落53至55中任一段所述的方法预测以修饰形式向人类施用所述治疗性抗体分子可预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用的所述治疗性抗体分子有关，
并且其中所述治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且所述修饰形式是与所述治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但FcγR结合受损或被消除的抗体。
75.根据段落74所述的供使用的修饰形式的治疗性抗体分子，其中所述治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
76.根据段落75所述的供使用的修饰形式的治疗性抗体分子，其中所述修饰形式的抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：295重链的抗体。
77.一种用于预防或减轻与向受试者静脉内施用治疗性抗体分子相关的耐受性问题的方法，其包含皮质类固醇给药方案，
其中已经使用段落44至56中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用段落48至50中任一段所述的或当提及段落48至50中任一段时段落53至56中任一段所述的方法预测用皮质类固醇组合与向人类施用所述治疗性抗体分子的预处理可预防或减轻耐所述受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关，
并且其中所述给药方案包含在静脉内施用所述治疗性抗体分子前以至少两个剂量向所述受试者施用所述皮质类固醇，其中一剂皮质类固醇在治疗性抗体分子开始施用前10至48小时施用(“第一剂量”)，并且一剂皮质类固醇在所述治疗性抗体分子开始施用前5分钟至5小时施用(“第二剂量”)。
78.根据段落77所述的方法，其中所述第一剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前6至36小时给予，以及所述第二剂量在所述治疗性抗体分子开始施用药前15至120分钟给予。
79.根据段落77或78所述的方法，其中所述第一剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前16至24小时给予。
80.根据段落77至79中任一段所述的方法，其中所述第二剂量在所述治疗性抗体分子开始施用前30至60分钟给予。
81.根据段落77至80中任一段所述的方法，其中所述给药方案包含在抗体治疗过程中每次输注所述抗体前施用至少两个剂量的所述皮质类固醇。
82.根据段落77至81中任一段所述的方法，其中所述皮质类固醇是***或倍他米松或***和倍他米松的组合。
83.根据段落77至82中任一段所述的方法，其中所述皮质类固醇为***，并且其中所述第一剂量为4至20mg以及所述第二剂量为4至25mg。
84.根据段落83所述的方法，其中所述第一剂量为10至12mg以及所述第二剂量为20mg。
85.根据段落77至82中任一段所述的方法，其中所述皮质类固醇为倍他米松，并且其中所述第一剂量为3.2至16mg以及所述第二剂量为3.2至20mg。
86.根据段落85所述的方法，其中所述第一剂量为8至9.6mg以及所述第二剂量为16mg。
87.根据段落77至86中任一段所述的方法，其中所述给药方案进一步包含在开始施用所述治疗性抗体分子前10分钟至24小时施用抗组胺药。
88.根据段落76至86中任一段所述的方法，其中所述抗体是Fc受体结合抗体。
89.根据段落77至88中任一段所述的方法，其中所述抗体是抗FcγRIIB抗体。
90.根据段落89所述的方法，其中所述抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2重链的抗体。
91.一种用于治疗癌症的方法，其包含皮下施用治疗活性量的治疗性抗体分子，所述治疗性抗体分子已经使用段落44至56中任一段所述的方法预测与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用段落51所述的或当提及段落51时段落53至56中任一段所述的方法预测向人类施用治疗性抗体分子的皮下途径可预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关。
92.根据段落91所述的方法，其中所述抗体是抗FcγRIIB抗体。
93.根据段落92所述的方法，其中所述抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗体.
94.一种治疗癌症的方法，其包含施用治疗活性量的修饰形式的治疗性抗体，其中已经使用段落44至56中任一段所述的方法预测所述治疗性抗体分子与向人类静脉内施用相关的耐受性问题有关，且/或其中已经使用段落52或当提及段落52时段落53至56中任一段所述的方法预测向人类施用所述修饰形式的所述治疗性抗体分子可预防或减轻所述耐受性问题，否则所述耐受性问题将与向人类静脉内施用所述治疗性抗体分子有关，
并且其中所述治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且所述修饰形式是与所述治疗性抗体分子相比具有相同Fv可变序列但FcγR结合受损或被消除的抗体。
95.根据段落94所述的方法，其中所述抗体是抗FcγRIIB抗体。
96.根据段落95所述的方法，其中所述抗FcγRIIB抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链中具有N297Q突变的抗体。
97.一种用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的治疗性抗体分子，其中所述治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，并且其中所述治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
98.治疗性抗体分子在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的药物中的用途，其中所述治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中所述药物被配制用于皮下施用。
99.一种包含治疗性抗体分子的药物制剂，其中所述治疗性抗体分子是具有SEQIDNo：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中所述药物制剂包含药学上可接受的稀释剂或赋形剂，并且被配制用于皮下施用。
100.根据段落97所述的供使用的治疗性抗体分子、根据段落98所述的治疗性抗体分子的用途或根据段落99所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体是Fc受体结合抗体。
101.根据段落97或100所述的供使用的治疗性抗体分子、根据段落98或100所述的治疗性抗体分子的用途或根据段落99或100所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
102.根据段落101所述的供使用的治疗性抗体分子、根据段落101所述的治疗性抗体分子的用途或根据段落101所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗体。
103.根据段落101或102所述的供使用的治疗性抗体分子、根据段落101或102所述的治疗性抗体分子的用途或根据段落101或102所述的药物制剂，其用于治疗癌症。
104.根据段落99至103中任一段所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体以约90mg/mL至约220mg/mL之间的浓度存在。
105.根据段落99至104中任一段所述的药物制剂，其进一步包含在约5mM至约20mM之间的乙酸盐、和/或在约50mM至约250mM之间的NaCl、和/或在约0.05％的聚山梨酯20，且/或其中所述药物制剂的pH在约pH 5.0至约pH 5.8之间。
106.根据段落99至105中任一段所述的药物制剂，其中所述制剂包含：
-浓度为150mg/mL的所述治疗性抗体；
-5mM乙酸盐；
-110mM NaCl；
-0.05％(w/v)聚山梨酯20；并且
-其中所述制剂pH为5.8。
107.一种用于治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗性抗体分子的步骤，其中所述治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且其中所述治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
108.根据段落107所述的方法，其中所述Fc受体结合抗体是抗FcγRIIB抗体。
109.根据段落107或108所述的方法，其中所述Fc受体结合抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体。
110.一种用于治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，所述方法包含向所述受试者皮下施用根据段落99至106中任一段所述的药物制剂的步骤。
111.根据段落109或110所述的方法，其用于治疗癌症。
序列表
<110> 生物发明国际公司
<120> 皮下抗体制剂
<130> BIOBX/P77463PC
<160> 203
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链
<400> 1
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Asp Asp His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser
85 90 95
Gln Arg Ala Val Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 2
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链
<400> 2
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
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<220>
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35 40 45
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<213> 人工序列
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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<220>
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<220>
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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<211> 119
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<213> 人工序列
<220>
<223> 6D01-VH
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<220>
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<210> 23
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 23
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85 90 95
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100 105 110
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<210> 24
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 24
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<210> 25
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<213> 人工序列
<220>
<223> 7C07-VH
<400> 25
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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100 105 110
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<220>
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<400> 26
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn His
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Thr Trp Asp Ala Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> 人工序列
<220>
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
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Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
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<220>
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100 105 110
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<211> 109
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<220>
<223> 4B02-VL
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<213> 人工序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 65
Thr His Asp Ser Gly Glu Leu Leu Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 66
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 66
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn His Val Leu
1 5 10
<210> 67
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 67
Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 68
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 68
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val
1 5 10
<210> 69
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 69
Thr Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 70
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 71
Asn Phe Asp Asn Ser Gly Tyr Ala Ile Pro Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15
<210> 72
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 72
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 73
Asp Asn Asn Ser Arg Pro Ser
1 5
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 74
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Gly Gly Pro Val
1 5 10
<210> 75
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 75
Asn Ala Trp Met Ser
1 5
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 76
Tyr Ile Ser Arg Asp Ala Asp Ile Thr His Tyr Pro Ala Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 77
Gly Phe Asp Tyr Ala Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 78
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 78
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Asn
1 5 10
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 79
Gly Asn Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 80
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 80
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Arg Trp Val
1 5 10
<210> 81
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 81
Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5
<210> 82
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 82
Leu Ile Gly His Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Leu Asp Ser Leu Glu
1 5 10 15
Gly
<210> 83
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 83
Ala Thr Asp Ser Gly Tyr Asp Leu Leu Tyr
1 5 10
<210> 84
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 84
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn
1 5 10
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 85
Tyr Asp Asp Leu Leu Pro Ser
1 5
<210> 86
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 86
Thr Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 87
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 87
Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 88
Ala Ile Gly Phe Ser Asp Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 89
Gly Asp Gly Ser Gly Trp Ser Phe
1 5
<210> 90
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 90
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Ala Val Asn
1 5 10
<210> 91
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 91
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 92
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Trp Val
1 5 10
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 93
Asn Tyr Gly Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 94
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 95
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 95
Trp Arg Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 96
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 96
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 97
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 97
Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 98
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Ser Trp Val
1 5 10
<210> 99
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 99
Thr Tyr Gly Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 100
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 101
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 101
Glu Asn Phe Asp Ala Phe Asp Val
1 5
<210> 102
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 102
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 103
Ser Asn Ser Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 104
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 104
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Gln Val Val
1 5 10
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 105
Thr Tyr Gly Met His
1 5
<210> 106
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 106
Val Ile Ala Tyr Asp Gly Ser Lys Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 107
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 107
Glu Tyr Arg Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 108
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 109
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 109
Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 110
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Ser Gly Trp Met
1 5 10
<210> 111
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 111
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 112
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ile Asn Lys Asp Tyr Ala Asp Ser Met Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 113
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 113
Glu Arg Lys Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 114
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 114
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 115
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 115
Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 116
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 116
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Leu Val
1 5 10
<210> 117
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 117
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 118
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 118
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 119
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 119
Asp Arg Trp Asn Gly Met Asp Val
1 5
<210> 120
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 120
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 121
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 121
Ala Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 122
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 122
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Trp Val
1 5 10
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 123
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 124
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 124
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 125
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 125
Asp His Ser Val Ile Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 126
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 126
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> 127
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 127
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 128
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 128
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Asn Val Val
1 5 10
<210> 129
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 129
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 130
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 130
Val Thr Ser Tyr Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 131
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 131
Glu Asp Cys Gly Gly Asp Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 132
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 133
Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 134
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 134
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Glu Gly Val
1 5 10
<210> 135
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 135
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 136
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 136
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 137
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 137
Asp Gln Leu Gly Glu Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 138
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 138
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 139
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 139
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 140
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 140
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val
1 5 10
<210> 141
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 141
Asp Tyr Gly Met Ser
1 5
<210> 142
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 142
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 143
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 143
Gly Asp Ile Asp Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 144
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 144
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Phe Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 145
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 145
Glu Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 146
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 146
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 147
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 147
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 148
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 148
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 149
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 149
Glu Arg Arg Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 150
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 150
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 151
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 151
Ser Asp Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 152
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 152
Ala Thr Trp Asp Ser Asp Thr Pro Val
1 5
<210> 153
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 153
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 154
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 154
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 155
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 155
Asp His Ser Ala Ala Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 156
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 156
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> 157
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 157
Gly Asn Ser Ile Arg Pro Ser
1 5
<210> 158
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 158
Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ser Pro Val
1 5 10
<210> 159
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 159
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 160
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 160
Gly Ile Ser Trp Asp Ser Ala Ile Ile Asp Tyr Ala Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 161
Asp Glu Ala Ala Ala Gly Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 162
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 162
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 163
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 163
Gly Asn Thr Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 164
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 164
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val Val
1 5 10
<210> 165
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 165
Ser Tyr Gly Ile Ser
1 5
<210> 166
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 166
Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 167
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 167
Ser Val Gly Ala Tyr Ala Asn Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 168
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 168
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 169
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 169
Gly Asp Thr Asn Arg Pro Ser
1 5
<210> 170
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 170
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Pro Val
1 5 10
<210> 171
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 171
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 172
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 172
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 173
Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 174
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 174
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 175
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 175
Ala Asp Asp His Arg Pro Ser
1 5
<210> 176
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 176
Ala Ser Trp Asp Asp Ser Gln Arg Ala Val Ile
1 5 10
<210> 177
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 177
Asn Tyr Gly Met His
1 5
<210> 178
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 178
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 179
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 179
Glu Tyr Lys Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 180
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 180
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> 181
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 181
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 182
Gln Ala Trp Gly Thr Gly Ile Arg Val
1 5
<210> 183
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 183
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 184
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 184
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 185
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 185
Glu Phe Gly Tyr Ile Ile Leu Asp Tyr
1 5
<210> 186
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 186
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn
1 5 10
<210> 187
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 187
Arg Asp Tyr Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 188
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 188
Met Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 189
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 189
Asn His Gly Met His
1 5
<210> 190
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 190
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Thr Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 191
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 191
Glu Thr Trp Asp Ala Phe Asp Val
1 5
<210> 192
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 192
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asn Ala Asn
1 5 10
<210> 193
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 193
Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 194
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
1 5
<210> 195
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BI-1206 N297Q
<400> 195
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 196
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 196
Ser Tyr Gly Met His
1 5
<210> 197
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 197
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 198
Glu Leu Tyr Asp Ala Phe Asp Ile
1 5
<210> 199
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 199
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His
1 5 10
<210> 200
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 200
Ala Asp Asp His Arg Pro Ser
1 5
<210> 201
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 201
Ala Ser Trp Asp Asp Ser Gln Arg Ala Val Ile
1 5 10
<210> 202
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> IgG1-CH
<400> 202
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 203
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> λ-CL
<400> 203
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
20 25 30
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
35 40 45
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
50 55 60
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
65 70 75 80
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
Claims (15)
1.一种用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的治疗性抗体分子，其中所述治疗性抗体分子是抗FcγRIIB抗体，并且其中所述治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
2.一种治疗性抗体分子在制备用于治疗癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的药物中的用途，其中所述治疗性抗体分子是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中所述药物被配制用于皮下施用。
3.一种包含治疗性抗体分子的药物制剂，其中所述治疗性抗体分子是具有SEQ IDNo：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体，并且其中所述药物制剂包含药学上可接受的稀释剂或赋形剂，并且被配制用于皮下施用。
4.根据权利要求1所述的供使用的治疗性抗体分子、根据权利要求2所述的治疗性抗体分子的用途或根据权利要求3所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体是Fc受体结合抗体。
5.根据权利要求1或4所述的供使用的治疗性抗体分子、根据权利要求2或4所述的治疗性抗体分子的用途或根据权利要求3或5所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体是抗FcγRIIB抗体。
6.根据权利要求5所述的供使用的治疗性抗体分子、根据权利要求5所述的治疗性抗体分子的用途或根据权利要求5所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体具有SEQ IDNo：1的轻链和SEQ ID No：2的重链。
7.根据权利要求5或6所述的供使用的治疗性抗体分子、根据权利要求5或6所述的治疗性抗体分子或根据权利要求5或6所述的药物制剂，其用于治疗癌症。
8.根据权利要求3至7中任一项所述的药物制剂，其中所述治疗性抗体以约90mg/mL至约220mg/mL之间的浓度存在。
9.根据权利要求3至8中任一项所述的药物制剂，其进一步包含在约5mM至约20mM之间的乙酸盐、和/或在约50mM至约250mM之间的NaCl、和/或在约0.05％的聚山梨酯20，且/或其中所述药物制剂的pH在约5.0至约5.8之间。
10.根据权利要求3至9中任一项所述的药物制剂，其中所述制剂包含：
-浓度为150mg/mL的所述治疗性抗体；
-5mM乙酸盐；
-110mM NaCl；
-0.05％(w/v)聚山梨酯20；并且
-其中所述制剂pH为5.8。
11.一种用于治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗性抗体分子的步骤，其中所述治疗性抗体分子是Fc受体结合抗体，并且其中所述治疗性抗体分子被配制用于皮下施用。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述Fc受体结合抗体是抗FcγRIIB抗体。
13.根据权利要求11或12所述的方法，其中所述Fc受体结合抗体是具有SEQ ID No：1的轻链和SEQ ID No：2的重链的抗FcγRIIB抗体。
14.一种用于治疗受试者的癌症、自身免疫性疾病、炎性疾病、免疫性疾病和/或感染性疾病的方法，所述方法包含向所述受试者皮下施用根据权利要求3至10中任一项所述的药物制剂的步骤。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其用于治疗癌症。
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