KR20150092763A - 조작된 항-IL-23p19 항체의 용액 제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항-인간 인터루킨-23p19(IL-23p19) 항체 hum13B8-b의 고농도 용액 제제와 여러가지 질환 치료를 위한 용도를 제공한다.

Description

조작된 항-IL-23p19 항체의 용액 제제{Solution formulations of engineered anti-IL-23p19 antibodies}

본 발명은 일반적으로 치료용 항체의 고농도 용액 제제와 다양한 질환 치료를 위한 그들의 용도에 관한 것이다.

인터루킨-23(IL-23)은 2개의 소단위, IL-23에 대해 유일한 p19 및 인터루킨-12(IL-12)와 공유하는 p40으로 구성된 이종 이량체 사이토킨이다. p19 소단위는 구조적으로 IL-6, 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF), 및 IL-12의 p35 소단위와 관련이 있다. IL-23은 2개의 소단위, 즉 IL-23 수용체에 유일한 IL-23R 및 IL-12 수용체에 의해 공유된 IL-12β1으로 이루어진 이종 이량체 수용체에 결합함으로써 시그날링을 중재한다. 다수의 초기 연구에서는 p40에서의 유전적 결핍(p40 녹아웃 마우스; p40KO 마우스)의 결과는 p35의 결핍, 예를 들면 p35KO 마우스에서 발견된 것보다 더욱 심각함을 입증하였다. 이들 결과들은 궁극적으로 IL-23의 발견과 p40KO가 IL-12뿐만 아니라 IL-23의 발현도 예방한다는 실현에 의해 설명되었다. Oppmann et al. (2000) Immunity 13:715-725; Wiekowski et al. (2001) J. Immunol . 166:7563-7570; Parham et al. (2002) J. Immunol . 168:5699-708; Frucht (2002) Sci STKE 2002, E1-E3; Elkins et al. (2002) Infection Immunity 70: 1936-1948 참조.

p40 KO 마우스의 사용을 통한 최근 연구들은 IL-23 및 IL-12 모두의 차단이 각종 염증 및 자가면역 질환에 대해 효과적인 치료임을 나타내고 있다. 그러나, p40을 통한 IL-12의 차단은 기회적 미생물 감염에 대한 증가된 감수성과 종양의 증가된 위험성과 같은 바람직하지 않은 전신적인 결과(systemic consequence)를 갖는 것으로 여겨진다. Bowman et al. (2006) Curr . Opin . Infect. Dis . 19:245; Langowski et al. (2006) Nature 442:461 참조. 따라서, IL-23의 p19 소단위의 특별한 차단은 인체 질병의 치료에 바람직하다. 그 이유는 예를 들면 감염 방지와 면역 감시로 IL-12의 유익한 활성은 방해하지 않고 IL-23의 병원성 염증 활성만을 방해하기 때문이다.

치료학적 항체는 사이토킨 활성을 차단하는데 사용될 수 있다. 생체 내에서 치료제로서 항체를 사용하는데 있어서 가장 큰 제한은 항체의 면역성이다. 비인간으로부터 유래된 단클론 항체에 대해 인간에의 반복 사용은 치료학적 항체에 대한 면역 반응의 생성을 초래한다. 이러한 면역 반응은 치료학적 효능의 손실을 최소화하며 잠재적으로 치명적인 이상 과민 반응(anaphylactic response)을 초래한다. 따라서, 인간화 또는 완전하게 인간 항체와 같은 인간에서 감소된 면역원성의 항체는 인간 대상물의 치료에 바람직하다. IL-23p19에 대한 실험적인 치료학적 항체는 U.S 특허출원공개 제2007/0009526호, 국제특허공개 WO 제2007/076524호, WO 제2007/024846호, WO 제2007/147019호 및 WO 제2009/043933호에 개시되어 있으며, 개시 내용들은 그들 전체가 참고로 본 명세서에 포함되어 있다. 추가적으로 인간화 항-IL23p19 항체는 국제특허공개 WO2008/103432와 WO2008/103473으로 공개된 일반적으로 배정된 미국 특허출원공개 제2007/0048315호에 개시되어 있으며, 개시 내용들은 그들 전체가 참고로 본 명세서에 포함되어 있다.

인간에 사용하기 위한 항체 의약은 그들의 불변 영역의 아미노산 서열 또는 가변 영역 내에서의 골격 서열에서 다소 상이하지만, 그들은 일반적으로 CDR 서열에서 가장 극적으로 달라질 수 있다. 동일한 단백질, 동일한 폴리펩티드, 또는 잠재적으로 동일한 에피토프(epitope)에 결합하는 항체라고 해도 심지어 완전히 다른 CDR 서열을 포함할 수 있다. 인간 치료에 사용하기 위해 항체는 인간 생식 계열 항체 서열 또는 잠재적인 CDR 서열에서 또 다른 다양성을 유도하는 인간화 항체와 같은 비인간(예를 들면, 설치류)의 생식 계열 항체 서열로부터 얻을 수 있다. 이러한 서열 차이는 용액에서 다른 안정성과, 용액 매개 변수에 대한 다른 응답을 초래한다. 또한, 아미노산의 배열에서의 작은 변화 또는 하나 또는 몇몇 아미노산 잔기에서의 변화는 극적으로 다른 항체를 초래하고 서열-특이적 분해 경로에 대해 감수성이 발생할 수 있다. 결과적으로, 이것은 항체의 안정성을 최적화하는데 필요한 용액 조건을 예측하기 위해 현재 이용 가능하지 않다. 각 항체는 많은 최적의 용액 제제를 결정하도록 개별적으로 검토될 수 있다. Bhambhani et al. (2012) J. Pharm . Sci . 101:1120.

또한, 항체는 예를 들어 호르몬 및 사이토킨(cytokines)과 같은 다른 치료 단백질에 비하여 비교적 고 분자량의 단백질(~150,000 Da)이다. 결과적으로, 이것은 약품의 바람직한 몰 농도를 달성하기 위해 비교적 높은 중량의 항체 약품을 빈번히 복용할 필요가 있게 된다. 또한, 이것은 자가 투여를 할 수 있으므로 피하로 항체 약품을 투여하는 것이 바람직하다.

자가 투여는 예를 들어 정맥내 투여를 위한 의료 시설에 방문과 관련된 시간과 비용을 방지할 수 있습니다. 피하 전달은 실질적으로 통상적으로 약 1~1.5 ml의 단일 주사로 주사 부위에 전달될 수 있는 용액의 부피로 제한된다. 피하 자가 투여는 환자에게 주입하기 전 약품을 다시 일시 정지에 대한 필요성을 피하기 위해 일반적으로 동결 건조된 형태 보다는 약품의 액체 용액 제제로 채워진 프리필드(pre-filled) 주사기 또는 자동주사기를 사용하는 것에 의해 달성된다. 약품의 과다 복용의 전달에 대해 용적 제한은 높은 농도의 용액 제제의 개발에 프리미엄을 두고 있다. 이러한 고농도의 항체는, 하지만, 유백광, 자기 조합, 응집, 전개(unfolding: 미 접힘) 및 상 분리와 같은 물리적 불안정성의 결과로, 고분자 밀집 효과와 증가된 단백질- 단백질 상호 작용을 나타낸다. 이와 같은 고농도의 항체 용액은 프리필드 주사기와 자동 주사 장치에서의 주사 가능성을 감소키는 고점도(예를 들어, > 10 centipoises)를 나타낼 수 있다. 항체 약품은 효능과 일관된 복용을 보장하기 위해 보관시 안정해야 한다. 그래서 무엇보다 제제는 고농도, 선명도와 허용 가능한 점도와 같은 원하는 특성을 지원하도록 선택하는 것이 중요하고, 또한 일반적인 보관 조건하에서 만족할만한 오랜 보관 수명에도 이러한 특성과 약품 효능을 유지하는 것이 중요하다.

결과적으로, 인간 IL-23pl9에 결합하는 항체와 같은 치료용 항체의 안정성, 고농도의 용액 제제에 대한 필요성이 존재한다. 이러한 안정한 용액 제제는 바람직하게는 해당 약품에 대한 긴 보관수명의 결과로서, 예를 들어 주사기에 냉장고 온도, 즉 자가 투여를 위한 약품의 보관을 위한 일반적인 조건하에서 몇 개월에서 몇 년에 걸쳐 안정성을 바람직하게 보일 것이다. 이러한 안정한 고농도 용액 제제는 자가 투여에 의한 고농도 피하 주사를 위해 항체 약품의 포장도 가능하게 할 것이다.

본 발명은 인간화 항 IL-23pl9 항체 13B8-b("huml3B8-b")의 고농도 용액 제제을 제공한다. 항체 hum13B8-b는 SEQ ID NO:2의 서열을 갖는 두 개의 동일한 중쇄와 SEQ ID NO: 1의 서열을 갖는 두 개의 동일한 경쇄로 이루어진다.

하나의 실시예로서, 용액 제제는 인간화 항 IL-23pl9 항체 huml3B8-b, 수크로오스 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 다른 실시예로서, 용액 제제는 인간화 항 IL-23p19 항체 13B8-b, 약 10mM의 히스티딘 완충제 pH 6.0(± 0.3), 약 7 % 수크로오스 및 0.05 % 폴리소르베이트 80을 포함한다. 추가 실시예로서, 용액 제제는 인간화 항 IL-23p19 항체 13B8-b, 10mM의 히스티딘 완충제 pH 6.0(±0.3), 7% 수크로오스 및 0.05% 폴리소르베이트 80를 포함한다.

다양한 실시예로서, 본 발명의 용액 제제는 적어도 50, 80, 90, 100, 110 또는 120 ㎎/㎖ 항체 huml3B8-b를 포함한다. 다른 실시예로서, 본 발명의 용액 제제는 약 80 - 120 ㎎/㎖ 항체 huml3B8-b, 80 - 120 ㎎/㎖ 항체 huml3B8-b, 약 100 mg/ml의 항체 huml3B8-b, 및 100 ㎎/㎖의 항체 huml3B8-b를 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 이에 한정하는 것은 아니지만, 염증 질환, 자가 면역 질환, 증식 질환, 암, 감염성 질환(예를 들면, 만성 감염을 포함하는 박테리아, 마이코 박테리아, 바이러스 또는 진균 감염), 관절염, 건선, 건선 관절염, 골근 부착 부위염, 강직성 척추염, 염증성 장질환, 크론병 및 궤양성 대장염, 다발성 경화증, 포도막염, 이식편 대 숙주병, 전신성 홍반성 낭창 및 당뇨병을 포함하는 질환을 치료하기 위한 본 발명의 항 IL-23pl9 항체 huml3B8-b의 고농도 용액 제제를 이용한 치료 방법에 관한 것이다. 또 다른 양태로서, 본 발명은 이와 같은 질환을 치료하는데 사용하기 위한 의약을 제조하는데 사용하는 항 IL-23pl9 항체 huml3B8-b의 고농도 용액 제제의 용도에 관한 것이다.

도 1은 huml3B8-b을 포함하는 제제에 대한 최적의 완충제와 pH 조건을 결정하기 위해 사용된 데이타를 나타낸 것이다. 도 1a는 다양한 1 mg/mL 항체 제제에 대해 시차 주사 열량계(DSC)로 측정한 전개(미접힘) 온도와, RP-HPLC로 측정한 % 순도를 나타낸 것이며, 도 1b는 % 모노머와 여러 다른 완충제(아세트산염, 시트르산염, 인산염 및 Tris)에 대한 pH의 함수로서, HP-SEC로 측정한 % 지연 용출 피크를 나타낸 것이다. DSC 및 HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 2와 3에 각각 제공되어 있다.
도 1c - Ie는 동적 광산란(DLS)으로 측정한, 유백광(OD₃₅₀), 유체 역학적 크기(nm) 분포, DSC로 측정한 융점 온도를 포함하는 pH의 함수로서 10 mM의 시트르산염의 다양한 특성을 나타낸 것이다. DLS와 DSC의 간략한 설명은 실시예 4와 2에 각각 제공되어 있다.
도 If 및 1g는 각각 고성능 이온 교환 크로마토그래피(HP-IEX)로 측정한 시간에 따른 지연 용출 피크의 백분율, 및 메인 피크의 백분율을 나타낸 것이다. HP-IEX의 간략한 설명은 실시예 5에 제공되어 있다.
도 1h 및 1i는 다른 pH의 여러 완충제에서 저 농도 항체 제제(1 mg/ml)에 대해 각각 동적 광산란(DLS)에 의해서 측정한 유백광(OD₃₅₀) 및 유체 역학적 크기(nm)를 나타낸 것인 반면에 도 1j는 DLS로 측정한 보다 농축된 항체 제제(50 및 100 mg/ml)에 대한 유체 역학적 크기(nm)를 나타낸 것이다. DLS의 간략한 설명은 실시예 4에 제공되어 있다.
도 1k는 HP-SEC에 의해서 결정된 시간에 따른 다른 pH에서의 다양한 완충제에서 지연 용출 피크의 백분율을 나타낸 것이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 2a 및 2b는 다양한 첨가제(100 mM NaCl, 7% 수크로오스, 7% 트레할로스 및 6% 만니톨)를 포함하는 hum13B8-b의 제제에 대한 DSC로 결정되는 전개 온도와 유색광에서의 변화를 각각 나타낸 것이다. DS는 의약 물질을 말한다. DSC의 간략한 설명은 실시예 2에 제공되어 있다.
도 3a와 3b는 HP-SEC에 의해서 결정된 % 항체 및 % 조기 용출 피크를 각각 나타낸 것이며, 도 3c는 계면 활성제(0.05% 폴리소르베이트 20, 0.05% 폴리소르베이트 80 또는 플루로닉(Pluronic) F-68)의 존재 또는 부존재의 함수로서, 5일 동안 요동(흔듬) 전 및 후에 유백광을 나타낸 것이다. 계면 활성제가 없는(NS) 시료에 대한 5일 요동값은 실제로 3 이상이고, 따라서, 오프스케일이 잘된다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 4는 다양한 조건 하에서 보관될 때 10 mM의 완충제, 7 % 수크로오스 및 0.05 %의 폴리소르베이트 80을 포함하는 아세트산염과 히스티딘 항체 제제의 안정성을 나타낸 것이다. 시료는 2.0 mL의 유리 바이알에 1.5 mL의 시료로 보관되어 있다. 도 4a는 5℃(주위 상대 습도) 또는 RH4 조건(40℃, 75% 상대습도) 하에서 보관될 때, HP-SEC로 측정된 모노머 항체의 백분율로 반영된 50과 100 mg/ml 항체 제제의 안정성을 나타낸 것이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에서 제공되어 있다.
도 4b - 4d는 25℃, 60%의 상대 습도에 해당하는 "25H"의 저장 조건 하에서, HP-SEC로 결정된 각각 % 모노머, HMW 종 및 LMW 종의 플롯이다. 참고로 도 4b - 4d의 좌표(시간 축)는 선형이 아니다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 4e 및 도 4f는 각각 메인 피크와 산성 변이체의 백분율을 측정하여 항체의 안정성을 모니터하는 HP-IEX 실험 결과의 플롯이다. HP-IEX의 간략한 설명은 실시예 5에 제공되어 있다.
도 4g - 4i는 각각 5℃, 25℃(25H) 및 40℃에서 보관 후, 유백광의 플롯이다. 도 4j 및 4k는 RH4(40℃, 75% 상대 습도) 및 5℃, 그리고 40℃ 및 5℃에서 각각 보관한 후, 단백질 지도화에 의해 측정된 산화를 나타낸 것이다. 단백질 지도화의 간략한 설명은 실시예 6에 제공되어 있다.
도 4l 및 4m은 초기 시료와 5℃ 또는 RH4 조건에서 보관한 시료에 대해, 각각 아세트산염과 히스티딘 제제에서의 DSC 실험으로부터 플롯을 전개하고 있다. DSC의 간략한 설명은 실시예 2에 제공되어 있다.
10 mM 아세트산염과 10 mM 히스티딘 제제의 안정성은 HP-SEC로 측정된 % 모노머와 고분자량 종으로 측정되었다. 안정성은 5℃(±3℃), 25H(25℃, 60% 상대 습도), 또는 RH4(40℃, 75% 상대 습도)에서 보관된 시료에 대해 측정되었다. 결과는 도 4a와 4b에 표시되어 있다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 5는 30 mL 에틸렌-비닐-아세테이트(EVA) 유체 접촉층 Celsius^® Pak 백에 의약 물질을 보관했을 때, 본 발명의 항체 제제에 대한 안정성 데이터를 표시한 것이다. 데이터는 10 mM 히스티딘 완충제(pH 6.0), 7% 수크로오스, 0.05% 폴리소르베이트 80 및 항체 hum13B8-b를 포함하는 제제에 대해 표시된 것이다. 도 5a - 5c는 hum13B8-b의 3개의 다른 제제에 대해 각각 단백질 농도, 생물학적 효능(세포 기반 기능 분석에 의해 측정됨) 및 생물학적 효능(ELISA로 측정됨)의 플롯이다. 단백질 농도 결정, 세포 기반 기능 분석과 ELISA의 간략한 설명은 각각 실시예 7, 8 및 9에 제공되어 있다.
도 5d - 5g는 산성 변이체, 메인 피크, 포스트-메인 피크 종 및 기본 변이체의 백분율을 측정하여 항체 안정성을 모니터하는 HP-IEX 실험의 결과의 플롯이다. HP-IEX의 간략한 설명은 실시예 5에 제공되어 있다.
도 5h는 HP-SEC로 측정한 % 모노머를 나타낸 것이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 5i와 5j는 각각 비환원 CE-SEC에 의해 측정된 % 모노머 또는 CE-SDS의 환원에 의한 % 중쇄 및 경쇄를 나타낸 것이다. CE-SDS의 간략한 설명은 실시예 10에 제공되어 있다.
도 5k와 5l은 HP-SEC로 측정되는 각각 % HMW와 LMW 종을 나타낸 것이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 6은 30 mL 에틸렌-비닐-아세테이트(EVA) 유체 접촉층 Celsius^® Pak 백에 의약 물질을 보관했을 때, 본 발명의 항체 제제(항체 로트 A와 B)에 대한 추가 안정성 데이터를 표시한 것이다. 데이터는 10 mM 히스티딘 완충제(pH 6.0), 7% 수크로오스, 0.05% 폴리소르베이트 80 및 항체 hum13B8-b를 포함하는 제제에 대해 표시된 것이다.
도 6a와 6b는 각각 ELISA와 세포 기반 기능 분석으로 측정된 생물학적 효능의 플롯이다. ELISAs와 세포 기반 기능 분석의 간략한 설명은 각각 실시예 9와 8에 제공되어 있다.
도 6c - 6e는 다양한 보관 조건 하에서, 각각 HP-SEC로 측정되는 % 모노머, HMW 종 및 LMW 종의 플롯이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 6f와 6g는 각각 비환원 CE-SEC에 의해 % 메인 피크를 측정하여 순도를 나타내거나 CE-SDS를 환원하여 % 중쇄와 경쇄를 나타낸 것이다. CE-SDS의 간략한 설명은 실시예 10에 제공되어 있다.
도 6h - 6k는 각각 산성 변이체, 메인 피크, 포스트 메인 피크 종 및 염기성 변이체의 백분율을 측정하여 항체의 안정성을 모니터하는 HP-IEX의 결과의 플롯이다. HP-IEX의 간략한 설명은 실시예 5에 제공되어 있다.
도 7은 100 mg/ml 항체 농도와 1.0 ml 채워진 용적에서 프리필드 주사기에 의약품을 단위 복용량으로 5℃(3℃)에서 보관할 때, 본 발명의 항체 제제에 대한 안정성 데이터를 나타낸 것이다. 도 7a는 자외선 흡수에 의해서 결정되는, 4개의 다른 hum13B-b(로트 D, E, F, G 및 H)의 제제에 대한 단백질의 플롯이다. 단백질 농도 결정의 간략한 설명은 실시예 7에 제공되어 있다.
도 7b와 7c는 각각 4개의 다른 hum13B-b(로트 E, F, G 및 H)의 제제에 대한 세포 기반 기능 분석으로 측정 및 ELISA로 측정되는 생물학적 효능의 플롯이다.
도 7d - 도 7f는 각각 HP-SEC로 결정되는 % HMW 종, 모노머 및 LMW 종의 플롯이다. HP-SEC의 간략한 설명은 실시예 3에 제공되어 있다.
도 7g - 도 7j는 각각 메인 피크, 산성 변이체, 염기성 변이체 및 포스트 메인 피크 종의 백분율을 측정하여 항체의 안정성을 모니터하는 HP-IEX의 결과의 플롯이다. HP-IEX의 간략한 설명은 실시예 5에 제공되어 있다.
도 7k와 7l은 각각 CE-SDS의 비환원으로 % 메인 피크를 측정하여 순도를 나타내거나 CE-SDS를 환원하여 % 중쇄 및 경쇄를 나타낸 것이다. CE-SDS의 간략한 설명은 실시예 10에 제공되어 있다.

첨부하는 청구범위를 포함해서 본 명세서에서 사용하는 "a", "an" 및 "the"와 같은 단수의 형태의 단어는 달리 명확하게 명시하는 문맥이 없는 한 이들의 상응하는 복수의 지시 내용을 포함한다. 하기의 표 10은 본 발명에서 사용된 서열 식별자의 목록을 제공한다. 달리 명시하지 않으면, 여기서 언급하는 단백질 및 대상물은 다른 종류라기 보다는 인체 단백질 및 인체 대상물이다. 여기서 사용하는 "FIG. X"는 개개의 FIGS. XA-XZ 모두를 총칭하는 것이다.

본 명세서에서 인용하는 모든 참고 문헌은, 각 개별의 간행물, 데이터베이스 엔트리(예를 들면, GenBank 서열 또는 GenelD 엔트리), 특허출원 또는 등록특허가 참고로 병합되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 명시한다면 동일한 정도로 참고로 병합된다. 본 명세서에서 참고 문헌의 인용은 그 참고 문헌이 적절한 선행 기술로 인정하는 것을 의미하지는 않고, 이들 간행물과 서류들의 내용 또는 날짜에 관해 어떤 인정을 구성하는 것도 아니다.

I. 정의

"증식 활성"은 예를 들면, 정상 세포 분열은 물론 암, 종양, 이형성, 세포 형질 전환, 전이 및 혈관형성을 촉진하거나 이에 필수적이거나, 또는 이와 특이적으로 연관된 활성을 포함한다.

본 명세서에서 사용하는 용어 "초가변 영역"은 항원-결합에 관여하는 항체의 아미노산 잔기를 말한다. 초가변 영역은 "상보적 결정 영역" 또는 "CDR"(예를 들면, 경쇄 가변 영역에서 잔기 24-34(CDRL1), 50-56(CDRL2) 및 89-97(CDRL3) 및 중쇄 가변 영역에서 잔기 31-35(CDRH1), 50-65(CDRH2) 및 95-102(CDRH3))(Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.참조) 및/또는 "초가변 루프"(예를 들어, 경쇄 가변 영역에서 잔기 26-32(L1), 50-52(L2) 및 91-96(L3) 및 중쇄 가변 영역에서 잔기 26-32(H1), 53-55(H2) 및 96-101(H3))(Chothia and Lesk (1987) J. Mol . Biol. 196: 901-917 참조)로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "골격" 또는 "FR" 잔기는 CDR 잔기로서 본 명세서에서 정의된 초가변 영역 잔기 외에 가변 영역 잔기를 말한다. 상기 잔기 번호매김은 Kabate 번호매김 시스템(Kabat numbering system)과 관련이 있으며 첨부하는 서열 목록 내 서열 번호매김에 대한 상세에는 필수적으로 해당되지는 않는다.

"면역 조건" 또는 "면역 질환"은 예를 들면 병리학적 염증, 염증 질환 및 자가 면역 질환 또는 질병을 포함한다. "면역 조건"은 또한 감염, 지속적인 감염 및 면역 체계에 의한 제거에 내성인 감염, 종양 및 암을 포함하는, 암, 종양 및 혈관 형성과 같은 증식성 상태를 말한다. "암 상태"는, 예를 들면, 암, 암 세포, 종양, 혈관 형성 및 이형성과 같은 전암 상태를 포함한다.

"염증 질환"은 질환 또는 병리학적 상태를 의미하며, 여기서, 병리학은 전체적으로 또는 부분적으로 예를 들면 면역계의 세포의 수에 있어서의 변화, 이주율에 있어서의 변화, 또는 활성화에 있어서의 변화로부터 기인한다. 면역계의 세포는 예를 들면 T 세포, B 세포, 단핵 세포 또는 대식 세포, 항원 표시 세포(APC), 수지 세포, 미세 아교 세포, NK 세포, NKT 세포, 호중구, 호산구, 비만 세포, 또는 면역과 특이적으로 관련된 어떤 다른 세포, 예를 들면 사이토킨-생산 내피 또는 상피 세포를 포함한다.

본 명세서에서 사용하는 농도는 일반적으로 약학 조성물의 제조에서 이러한 농도와 관련된 범위 내에서의 근사값으로 해석되어야 한다. 특히, 농도는 정확할 필요는 없지만, 일반적으로 GMP 조건 하에서 제조된 의약품에 대한 기대 허용 오차 내에서 언급되는 농도와는 다를 수 있다. 마찬가지로, pH 값은 일반적으로 GMP 조건 하에서 제조되고 일반적인 보관 조건 하에서 보관되는 의약품에 대한 기대 허용 오차 내에서의 근사값이다. 예를 들어, 본 발명의 히스티딘 제제는 6.0의 pH를 갖는 것으로 언급하겠지만, 일반적인 허용 오차는 pH 6.0(± 0.3)이다. 달리 표시하지 않는 한, 퍼센트 농도는 중량/중량 농도이다.

II. 고농도 용액 항체 제제

일반적인 치료용 단클론 항체는 4개의 폴리펩티드 즉, 두 개의 경쇄(예를 들어, 214개의 아미노산 길이)와 두 개의 중쇄(예를 들어, 446개의 아미노산 길이)로 구성되어 있다. 각 사슬은 차례로 가변 영역 및 불변 영역으로 구성되어 있다. 항 IL-23pl9 huml3B8-b의 가변 영역은 각각 경쇄 및 중쇄를 위한 108개 및 116개 아미노산이고, 불변 영역은 106개 및 330개의 아미노산이다. 그의 목표물에 대한 항체의 특이성은 소위 "초가변성" 또는 "상보성 결정" 영역(CDRs) 내에 속하는 서열들에 의해서 주로 결정되는데, 이들 중 세 가지는 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 영역에서 발견된다. CDRs는 다른 항체 사이에서 길이가 변할 수 있지만, hum12B8-b에서 CDRs는 중쇄에 44개의 아미노산과 경쇄에 27개의 아미노산으로 이루어져 있다. CDR 잔기들은 다른 항체 사이에서 가변성이 높으며, 인간 생식 계열의 서열(완전히 인간 항체인 경우에) 또는 비인간 생식 계열의 서열로부터 유래될 수 있다. 골격 영역은 또한 항체에서부터 항체까지 상당히 다를 수 있다. 불변 영역은 선택된 항체가 람다(λ) 또는 카파(κ) 경쇄를 보유하고 있는지, 항체(IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM)와 아형(예를 들어, IgG1, IgG2 IgG3 및 IgG4)의 급(또는 아이소타입)에 따라 다를 수 있다. 총 합계는 대략 650개의 아미노산으로 이루어진 약 150,000 Da의 항체 분자이며, 이 중에서 224개는 급, 아형 및 경쇄 불변 영역이 변하는 불변 영역과 함께 "초가변" 영역에 71개의 아미노산을 포함하는 가변 영역에 있다.

본 발명의 항체(항-IL-23p19 mAb hum13B8-b)는 또한, 최근에 개발된 많은 완전히 인간이라기 보다는 인간화된 치료용 항체와는 다르다. 결과적으로, CDR 서열은 인간 생식 계열이라기 보다는 비인간(이 경우에는 마우스) 생식 계열의 서열로부터 유래된다. 생식 계열의 서열은 체세포 과돌연변이 유도 변경을 제외하고 항체의 CDR 서열이 유래되는 서열 레퍼토리로 이루어지며, 결과적으로 마우스 생식 계열로 시작하여 얻어지는 CDRs은 인간 생식 계열로부터 시작하여 얻어진 것과 체계적으로 다를 것이라고 예상된다. 이것은, 실제로 다른 종의 사용이 그로 인한 CDR 서열에서 잠재적인 다양성을 증가시키게 되므로 항체를 높이기 위한 다른 종의 면역 시스템의 사용의 근거가 된다. 인간 생식 계열 서열의 사용은, CDRs이 그들의 기원이 되는 종에 따라서 체계적으로 다를 것이라는 근원적인 믿음을 반영하여 인간 생식 계열로부터의 CDR 서열이 다른 종으로부터 유래된 것 보다 인간에게 면역성이 더 낮을 수 있다는 근거에 자주 당위성을 지니게 된다. CDR의 다양성 증가가 높은 친화성 등의 원하는 특성을 가진 항체를 발견할 가능성을 증가시키지만, 상기 결과는 항체의 안정한 용액 제제를 개발하는데 어려움을 확대시키게 된다.

아무리 동일한 항원에 결합하는 항체가 서열에서 극적으로 차이가 있어도 완전히 별개의 항원에 대한 항체보다 서열에서 더 밀접하게 관련이 있을 필요는 없다. 예를 들어, 본 발명의 항체(hum13B8-b)의 가변 영역은 다른 항-IL-23pl9-특이 항체 CNTO 1959 (SEQ ID NOs: 미국특허 제7,993,645호의 116과 106)와 동일성이 단지 서열의 약 50~60%만 공유한다. CNTO 1959는 완전히 인간 항체이다. 낮은 서열 유사성을 토대로, 항체의 화학적 특성과 그들의 분해에 대한 감수성은 그들의 공유된 타겟에도 불구하고 유사하게 추정될 수 없다.

상기에서 입증된 바와 같이, 항체는 용액 중에서 다양한 형태로 분해되기 쉽고 불안정한 크고 아주 복잡한 폴리펩티드 복합체이다. 항체 서열의 다양성, 그에 따른 구조는 광범위한 화학적 특성을 일으킨다. 항원 결합 특이성에서 확실한 서열-특이한 차이점 외에, 항체는 다양한 분해적 경로, 응집 및 침전에 대해 감수성의 변화를 보인다. 아미노산 측쇄는 카르복시-(D,E), 아미노-(K), 아미드-(N,Q), 히드록실-(S,T,Y), 술피딜-(C), 티오에테르-(M) 기와 같은 반응기는 물론 히스티딘, 페닐알라닌과 프롤린 잔기에서 잠재적으로 화학적으로 반응 부위의 존재 또는 부존재 하에서 다르다. 항원 결합 작용에 직접적으로 포함되어 있는 아미노산 측쇄는 측쇄의 변형에 의해서 불활성화에 대한 명백한 후보 항원이지만, 다른 위치에서의 분해는 CDRs(예를 들어, 골격 부위에서의 변화)의 입체적 배향, 실행 기능(effector function)(예를 들어, Fc 영역에서의 변화 - Liu et al. (2008) Biochemistry 47: 5088 참조) 또는 자가 연합/응집(self-association/aggregation)과 같은 요인들에도 영향을 줄 수 있다.

항체는 많은 수의 잠재적 분해 경로에 따른다. 항체, 특히 CDRs에서 메티오니온(methionione) 잔기의 산화는 항원 결합을 방해한다면 문제가 될 수 있다. Presta (2005) J. Allergy Clin . Immunol. 116: 731; Lam et al. (1997) J. Pharm . Sci. 86: 1250. 다른 잠재적인 분해 경로로는 아스파라긴 탈아미드화 (Harris et al. (2001) Chromatogr., B 752:233; Vlasak et al. (2009) Anal. Biochem. 392: 145), 트립토판 산화 (Wei et al. (2007) Anal. Chem. 79:2797), 시스테인화(cysteinylation) (Banks et al. (2008) J. Pharm . Sci . 97:775), 당화(glycation) (Brady et al.(2007) Anal. Chem. 79:9403), 피로글루타메이트(pyroglutamate) 형성 (Yu et al. (2006) J. Pharm . Biomed . Anal. 42:455), 이황화 셔플링(disulfide shuffling) (Liu et al. (2008) J. Biol . Chem. 283:29266), 및 가수분해 (Davagnino et al. (1995) J. Immunol . Methods 185: 177)을 포함한다. lonescu & Vlasak (2010) Anal. Chem . 82:3198 참조. 또한, Liu et al. (2008) J. Pharm . Sci. 97:2426 참조. 일부 잠재적 분해 경로는 특정 아미노산 잔기의 존재 뿐만 아니라 주변의 서열에 따라 달라진다. 탈아미드화 및 이소아스파르테이트 형성은 N 또는 D 잔기와 특히 감수성이 있는 N-G 및 D-G 서열과의 단백질 결합의 자발적인 분자내 재배열로부터 발생할 수 있다. Reissner & Aswad (2003) CMLS Cell. Mol . Life Sci . 60: 1281 참조.

항체는 보관시 서열 의존성 비 효소적 단편화에 따른다. Vlasak & lonescu (2011) mAbs 3 : 253 참조. D, G. S. T, C 또는 N과 같은 반응성 측쇄의 존재는 폴리 펩타이드 골격을 서버하는 분자 내 분열 반응에서 발생할 수 있다. 이러한 서열의 특정 가수 분해 반응은 일반적으로 산도(pH) Id에 결정적으로 의존한다. 항체는 예를 들어 CDRs가 다수의 소수성 잔기를 포함할 경우 서열 의존성 응집을 거칠 수 있다. Perchiacca et al. (2012) Prot . Eng . Des. Selection 25:591 참조. 응집은 피하 투여를 위해 고농도로 제제화될 필요가 있는 항체에 대해 특히 문제가 있으며, 심지어 용해도를 증가시키기 위해 하전된 잔기를 첨가하여 항체 서열을 일부 변형을 주도하고 있다. Id.

잠재적 서열-특이적 안정성의 다양성을 미러링(mirroring)하는 것은 항체와 결부되어 있으므로 잠재적 항체 제제도 다양하다. 다수의 다른 변수들은 각각의 새로운 항체에 대해 사용자에게 최적화되어야 한다. 제제는 예를 들어, 항체 농도, 완충제, pH, 계면 활성제의 존재 또는 부존재, 긴장제(이온성 또는 비이온성)의 존재 또는 부존재, 분자 군집제의 존재 또는 부존재에 따라 달라질 수 있다. 상업적으로 이용할 수 있는 치료용 항체로는 광범위한 용액 제제, 즉, 인산염 완충제(예를 들어, adalimumab), 인산염/글리신 완충제(예를 들어, basilixumab), 트리스 완충제(예를 들어, ipilimumab), 히스티딘(예를 들어, ustekinumab), 시트르산 나트륨(e.g. rituximab); 및 pH 4.7 이상(예를 들어, certolizumab) 및 pH 5.2 (예를 들어, adalimumab) 내지 pH 7.0-7.4 (예를 들어, cetuximab)으로 시판되고 있다. 이들은 또한 임의로 에데트산 이나트륨(e.g. alemtuzumab), 만니톨(e.g. ipilimumab), 솔비톨(e.g. golimumab), 수크로오스(e.g. ustekinumab), 염화나트륨(e.g. rituximab), 염화칼륨(e.g. alemtuzumab), 및 트레할로스(e.g. ranibizumab); 이들은 모두 폴리소르베이트-80 유무, 0.001% (e.g. abcixmab) 내지 0.1% (e.g. adalimumab)의 범위로 포함하는 제제로 이용할 수 있다.

예시적인 항체 제제로는 미국 특허 제7,691,379호(항-IL-9 mAb MEDI-528); 동 제7,592,004호(항-IL-2 수용체, daclizumab); 동 제7,705,132호(항-EGFR, panitumumab); 및 동 제7,635,473호(항-Αβ; bapineuzumab)에서 찾아볼 수 있다. 추가로 예시적인 항체 제제로는 미국특허출원공개 제2010/00021461호(항-a4-인테그린, natalizumab); 동 제2009/0181027호(항-IL-12/IL-23, ustekinumab); 동 제2009/0162352호(항-CD20, ritumixmab); 동 제2009/0060906호(항-IL-13); 동 제2008/0286270호(항-RSV, palivizumab); 및 동 제2006/0088523호(항-Her2, pertuzumab)에서 찾아볼 수 있다. 또한 추가적인 제제가 Daugherty & Mrsyn (2006) Adv . Drug Deliv. Rev. 58:686; Wang et al. (2007) J. Pharm . Sci . 96: 1; and Lam et al. (1997) J. Pharm . Sci . 86: 1250.에 기재되어 있다.

항체의 특이성에 대해 기본이 되는 서열 가변성은 면역 반응의 핵심이다. 이러한 가변성은 광범위한 잠재적인 분해 경로에 기인하는 최종 항체의 화학적 불균일성으로 이어진다. 오늘날까지 개발된 항체 제제의 광대한 배열은 최적의 안정성을 보장하기 위해 각각의 특정 항체에 대해 제제가 개별적으로 최적화되어야 한다는 사실을 입증한다. 실제로, 인간에 대해 사용이 승인된 각각의 모든 상업적인 치료용 항체는 지금까지 유일하고 독특한 제제이었다.

III. 인간화 항 IL-23의 생물학적 활성

본 발명의 항 IL-23pl9 mAb huml3B8-b의 용액 제제는 IL-23 신호 전달의 선택적인 길항 작용이 유익한 것으로 예상되는 질환의 치료에 사용하는 것을 발견할 것이다. 피부의 염증성 질환, 관절, CNS 뿐만 아니라 증식성 질환이 유사한 면역 반응을 유도하므로, IL-23 차단은 계통 감염을 퇴치하기 위해 호스트 기능을 포함하지 않고 면역 매개성 염증 질환의 억제를 제공해야만 한다. 길항하는 IL-23은 염증성 장 질환, 크론병, 궤양성 대장염, 류마티스성 관절염, 건선성 관절염, 건선, 강직성 척추염, 이식편 대 숙주질환, 아토피성 피부염 및 다양한 다른 자가 면역 및 염증성 질환과 관련된 염증을 완화한다. IL-23 억제제의 사용은 또한 증식성 질환, 예를 들면, 암과 자가 면역 질환, 예를 들어, 다발성 경화증, 타입 I 당뇨 및 SLE의 억제를 제공할 것이다. 이러한 다양한 질환에서 IL-23에 대한 설명은 다음과 같이 공개된 PCT 출원: WO 제04/081190호; WO 제04/071517 호; WO 제00/53631호; 및 WO 제01/18051호에서 찾아볼 수 있다. IL-23 억제제는 또한, 박테리아, 마이코 박테리아, 바이러스 및 곰팡이 감염 등의 만성 감염을 포함하여 감염의 치료에 사용을 있음을 찾아볼 수 있다. 미국 특허 제8,263,080호 및 국제출원공개 WO 제2008/153,610호 참조.

본 발명의 고농도의 용액 제제는 장시간 동안 보관될 때 생물학적 활성을 보유하는 항체를 포함한다. 본 명세서에서 사용하는 바와 같은 "생물학적 활성"이라는 용어는 원하는 항원성 에피토프에 결합할 수 있고, 직접 또는 간접적으로 생물학적 효과를 발휘할 수 있는 항체 또는 항체 단편을 말한다. 일반적으로, 이러한 효과는 IL-23 수용체에 결합하기 위한 IL-23의 실패로부터 초래된다. 본 명세서에서 사용하는 바와 같은 "특이적"이라는 용어는 표적 항원 에피토프에 대한 항체의 선택적인 결합을 의미한다. 항체는 주어진 조건하에 관련이 없는 항원 또는 항원 혼합물과 결합하여 IL-23에 대한 항체의 결합을 비교함으로써 결합 특이성에 대해 시험 할 수 있다. 항체는 제공된 조건하에서 관련이 없는 항원 또는 항원 혼합물에 대한 결합과 IL-23에 대한 항체의 결합을 비교하여 결합 특이성에 대해 시험할 수 있다. 항체가 관련없는 항원 또는 항원 혼합물에 비해 적어도 10배, 및 바람직하게 50배 이상 IL-23에 결합하는 경우 그것은 특이적인 것이라 생각한다. IL-12에 결합하는 항체는 IL-23에 특이적인 항체가 아니다. IL-23pl9에 "특이적인 결합"하는 항체는 IL-23pl9 파생 서열을 포함하지 않는 단백질에 결합하지 않는데, 본 명세서에서 사용되는 "특이성"은 IL-23p19 특이성과 관련되어 있으며, 문제의 단백질 내에 존재할 수 있는 어느 다른 서열과는 관련되지 않는다. 예를 들어, 본 명세서에서 사용하는 바와 같이, IL-23pl9에 "특이적으로 결합"하는 항체는 일반적으로 IL-23p19와 FLAG^® 단백질 태그를 포함하는 융합 단백질인 FLAG^®-hIL-23p19에 결합할 수 있지만, 단독으로 또는 IL-23p19와 다른 단백질에 융합하는 경우에는 FLAG^® 단백질 태그에 결합하지 않는다.

본 발명의 IL-23 특이적 결합 화합물은 이에 한정하는 것은 아니지만, 복강 대식세포에 의한 IL-Ιβ 및 TNF의 생산, T_H17 T 세포에 의한 IL-17의 생산을 포함해서 어떠한 방식으로 그의 생물학적 활성을 억제할 수 있다. Langrish et al. (2004) Immunol. Rev. 202:96-105 참조. 항-IL-23pl9 항체는 또한 IL-17A, IL-17F, CCL7, CCL17, CCL20, CCL22, CCR1 및 GM-CSF의 유전자 발현을 억제할 수 있을 것이다. Langrish et al. (2005) J. Exp . Med . 201 :233-240 참조. 본 발명의 IL-23 특이적 결합 화합물은 T_H17 세포의 증식 또는 생존을 향상시키기 위하여 IL-23의 능력을 차단할 것이다. Cua and Kastelein (2006) Nat. Immunol . 7:557-559 참조. 제조합된 항 IL-23pl9 항체의 억제 활성은 염증성, 자가 면역 및 증식성 질환의 치료에 유용할 것이다. 이러한 질환의 예는 PCT 특허출원공개 WO 제04/081190호; WO 제04/071517호; WO 제00/53631호; 및 WO 제01/18051호에 기재되어 있다.

본 발명의 고농도 용액 제제는, 예를 들면, Th-17 매개 질환, 자가 면역 또는 만성 염증성 질환 또는 암과 같은 IL-23 또는 IL-23pl9의 높은 활성과 관련된 질환의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 항 IL-23pl9 항체 huml3B8-b의 보관 및 전달하는데 유용하다.

IV. 인간화 항-IL-23p19 항체 13B8-b의 용액 제제

본 발명은 SEQ ID NO: 2의 서열을 갖는 2개의 동일한 경쇄와 SEQ ID NO: 1의 서열을 갖는 2개의 동일한 중쇄를 포함하는 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b의 고농도 용액 제제를 제공하며, 이들은 현재 계류중인 일반적으로 배정된 미국 특허 제8,293,883호에 개시되어 있으며, 그 개시 내용 전체가 본원에 참고 문헌으로 인용되어 있다. 인간화 경쇄 13B8 서열(kappa 불변 영역으로)은 SEQ ID NO:2로 제공되며; 경쇄 가변 부위는 서열의 잔기 1-108를 포함한다. 인간화 중쇄 13B8 서열(γ1 불변 영역)은 SEQ ID NO:1에서 제공되며, 중쇄 가변 부위는 그 서열의 잔기 1-116를 포함한다.

중쇄 및 경쇄 서열(SEQ ID NO_S : 1과 2)는 신호 서열 없이 제공된다. 예시적인 중쇄 및 경쇄 신호 서열은 SEQ ID NO_S: 12와 13으로 각각 제공된다. 신호 서열 또는 신호 서열을 암호화하는 핵산 서열은 숙주 세포에서 분비하는 전구 단백질을 만들기 위해 각 항체 사슬의 N-말단에 부가될 수 있다. 대안적인 신호 서열이 또한 사용될 수 있고, 몇몇은 "SPdb: a Signal Peptide Database." Choo et al. (2005) BMC Bioinformatics 6:249"에서 찾아볼 수 있다.

부모의 항체 13B8를 발현하는 하이브리도마는 부다페스트 조약에 따라 미국 미생물 보존센터(ATCC-Manassas, Virginia, USA)에 2006년 8월 17일에 기탁 번호 PTA-7803에 기탁되었다. 부모 항체 13B8와 huml3B8-b 간의 관계는 일반적으로 부여된 미국 특허 제8,293,883호에 기재되어 있다.

본 발명의 용액 제제는 500 - 2000 L 규모에서 배양액 중에서 중국 햄스터 난소(CHO) 세포로부터 준비한 항체 13B8-b의 적어도 8개의 다른 로트를 사용하여 만들었다.

최초 용액 조건의 범위는 본 발명의 용액 제제가 고려되었다. 실험은 pH 4.0-8.8 범위에서 아세트산염, 시트르산염, 히스티딘, TRIS 및 인산염 등과 같은 다양한 완충제로 수행하였다. 수크로오스, 트레할로스, 만니톨과 같은 첨가제를 다양한 농도 (및 이온 강도)의 NaCl과 계면 활성제 폴리소르베이트 80으로 시험하였다. 제제를 350nm에서 O.D.를 결정함으로써 유백광을 기반으로 스크린 하였다. 응집은 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC), 동적 광산란(DLS) 및 분석 초원심(AUC)에 의해 측정하였다. 생화학적 안정성은 고성능 이온 교환 크로마토그래피(HP-IEX)로 측정하고, 열 안정성은 시차 주사 열량계(DSC)로 측정하였다.

1 mg/mL hum13B8-b에서 초기 예비 제제 실험 결과, % 순도는 역상 고성능 액체 크로마토그래피(RP-HPLC)로 측정했을 때, pH가 약 6.0까지 증가하고, pH 8.8 까지 안정되게 유지되었음이 밝혀졌다(도 1a 참조). 그러나, 항체의 전개 온도는 pH가 5 주위에서 정점이었다(도 1a 참조). 아세트산염, 시트르산염, 인산염 및 TRIS 간에 완충제 종류의 비교 결과, pH가 5.5에서 시트르산염 완충제가 단량체의 백분율이 가장 높았고, 지연 용출 피크의 백분율은 가장 낮았다(도 1b 참조). 최적의 생화학적 및 생물리적 안정성이 pH 5.5의 시트르산염 완충제에서 관찰되었지만, >65 mg/ml 항체에 대한 시트르산염 완충제에서의 항체의 농도는 실질적으로 유백광을 초래하였다(데이타 표시하지 않음). 유백광은 자가 투여를 위해 제제화될 수 있는 의약에 대한 특별한 관심이 있는 저하된 환자의 수용을 위한 잠재성 때문에 바람직하지 않다. 이러한 유백광은 희석시 가역적이고 시트르산염 완충제에서 pH를 4.8로 떨어뜨리지만(도 1c 참조), pH의 저하는 유체 역학적 직경을 감소시키고(도 1d 참조), pH의 저하는 또한 저 융점 형태의 증가된 비율에 의해 반영된 바와 같이 용액의 열적 및 생화학적 안정성을 감소시키며(도 Ie 참조), HP-SEC로 측정한 바와 같이, 시간 경과로 지연 용출 피크의 축적의 증가하고(도 If 참조), HP-IEX에 의해 측정된 바와 같이 시간 경과로 주 피크가 감소한다(도 1g 참조).

히스티딘은 열적 및 생화학적 안정성을 저하시키지 않고 유백광과 자기 연관을 감소시키기 위한 시도로 대안적인 완충 시스템으로 고려되었다. 샘플로서 10 mM의 아세트산염(pH 4.8과 5.6), 10 mM의 시트르산염(pH 4.8, 5.5 및 6.0), 10 mM의 히스티딘 (pH 5.5와 6.0)을 준비하였다. 유백광과 유체 역학적 직경을 OD₃₅₀과 DLS로 각각 측정하였다(도 1h와 1i 참조). 시트르산염을 아세트산염이나 히스티딘으로의 교체는 생화학적 안정성을 손상시키지 않고 유백광을 최소화, 자기 연관을 감소시켰다. 고농도의 항체(50 ~ 100 ㎎/㎖)에서, 아세트산염(pH 5.5)과 히스티딘(pH 6.0) 제제는 깨끗했고, 시트르산염(pH 5.5)으로 관찰된 유체 역학적 크기를 증가시키지 않았다(도 1j 참조). 낮은 pH(4.8) 시트르산염과 아세트산염 제제는 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해서 측정된 바와 같이 RH4 조건(40 ℃, 75 % 상대 습도) 하에서 보관시 지연 용출 피크의 축적을 증가시켰다(도 1k 참조).

여러 가지 첨가제(100 mM의 NaCl, 7 %의 수크로오스, 7 %의 트레할로스 및 6 %의 만니톨)를 전개 온도(도 2a) 및 유백광(도 2b)에 대한 그들의 영향에 대해 시험을 하였다. 7 %의 수크로오스를 유백광을 감소시키고, 열적 안정성(Tm 증가)을 상승시키기 위해서 제제 등장액이 되도록 첨가하였다. 계면 활성제 폴리소르베이트-20(PS20), 폴리소르베이트-80(PS80) 및 PLURONIC^® F-68을 또한 응집(도 3a 및 3b) 및 유백광(도 3c 참조)에서의 그들의 영향에 대해 시험하였다. 폴리소르베이트 80을 교반 유도된 응력에 의한 응집을 최소화되게 첨가하였다.

이러한 결과는 바람직한 완충 시스템에서 변화를 이끌었다. 항 IL-23은 시트르산 pH 5.5와 pH 6.0의 고 농도에서 자기 연관 및 유백광을 보였다. 시트르산의 아세트산염(pH 5.5) 또는 히스티딘(pH 6.0)의 대체는 열적 및 생화학적 안정성을 손상시키지 않고 유백광을 최소화시켰다. 수크로오스(7%)는 제제 등장액이 되도록 첨가하였다. 수크로오스(7%)는 또한 유백광을 감소시키고, 열적 안정성을 증가시키고(Tm 증가), 가속 안정성 시험 중에 단량체의 백분율 손실을 감소시켰다(데이터는 표시하지 않음). 폴리소르베이트 80(0.05 %)를 진동 응력에 의한 응집을 최소화하기 위해 첨가하였다.

10 mM의 히스티딘(pH 6.0), 7 %의 수크로오스 및 0.05 %의 PS-80을 포함하는 히스티딘계 제제를 huml3B8-b의 바람직한 고농도 제제로 선택하였다. 점도, 밀도, 삼투압 및 입자 등을 포함하는 여러 가지 용액 특성이 10 mM의 히스티딘(pH 6.0) 제제를 위해 결정되었다[표 1 참조]. 관찰된 실온 점도(5.65 cP)가 프리필드 주사기 및 자동 주사기에 사용되기 위해서 허용 가능하다.

V. 인간화 항 IL-23p19 항체 13B8-b의 고농도 용액 제제의 안정성

본 발명의 선택된 제제의 장기간 안정성은 다양한 보관 조건하에서 3-24개월 보관 후에 조사하였다. 시료를 다양한 온도 및 습윤 조건 하에서 2 mL 유리 바이알(도 4), 30 ml 백(벌크 보관)(도 5 및 6), 또는 프리필드 주사기(1회 복용, 판매용으로 포장)(도 7)에서 배양하였다. 시료를 고성능 크기 배제 크로마토그래피(HP-SEC), 이온 교환 크로마토그래피(HP-IEX), SDS 모세관 전기 영동(CE-SDS, 환원 및 비환원) 및 단백질 지도화와 같은 방법으로 분해 및 응집 제품의 존재에 대해 분석하였다. 항체 안정성은 시차 주사 열량계(DSC)로 측정하였다. 생물학적 활성은 IL-23 결합 ELISA 및 세포 기반 기능 시험에 의해서 평가하였다. 항체 농도는 280 nm에서 UV 흡수에 의해 측정하였다. 유백광은 350 nm(OD₃₅₀)에서 광학 밀도를 측정하는 것으로 결정하였다. 이들 결과는 도 4-7에 제공하였다.

이 실험의 첫 번째 세트에서, 1.5 ml의 시료를 2.0 ml의 유리 바이알에 넣고, 다양한 조건하에 보관 후 분석하였다. 그 결과는 도 4에 표시되어 있다. 일반적인 냉각 조건에 해당하는 5℃와 주변 습도에서 보관된 시료에서 미세한 분해와 응집이 관찰되었다(도 4a - 4f 참조). 시료 분해를 위한 양성 대조군으로서 포함되는 RH4(40 ℃, 75 % 상대 습도)와 같은 가속된 분해 조건은 모노머의 예측된 손실과 첫번째 시점 (1 개월)에서 즉시 개시하는 분해 및 응집의 예측된 상승을 보였다(도 4a - 4f 참조). 유백광은 5℃(도 4g)에서 안정하지만, 25℃와 40℃에서는 증가하였다(도 4h와 4i). 산화는 마찬가지로 5℃에서 최소이지만 RH4 조건 또는 40℃에서 심각하였다(도 4j 및 4k). 이러한 결과는 여러 번의 분석, 예를 들어 RH4 결과에 의해서 입증된 바와 같이, 분해를 검침할 수 있다고 할지라도 일반적인 냉동 조건 하에서의 보관은 적어도 약 9 개월 동안 제품의 품질에 거의 또는 전혀 손실되지 않게 된다는 것을 나타낸다.

실험의 두 번째 세트에서, 시료는 30 ml의 에틸렌 - 비닐 아세테이트(EVA)의 유체 접촉층 CELSIUS^®-Pak 백(Sartorius, Goettingen, Germany)에 넣고, 각종 조건하에 보관 후 분석하였다. 그 결과는 도 5와 6에 표시하였다. 이들 실험들은 전형적인 벌크 보관 조건하에서의 약품의 안정성을 평가하기 위해 주로 설계한 것이었다.

벌크 저장 시료를 냉동 조건(-80℃, -45℃ 및 -20℃) 하에서 보관하고 냉장(2°-8℃)을 하였다. 18개월까지 5℃ (± 3℃) 및 -45℃에서 보관한 시료에 대한 대표적인 데이터를 도 5에 제공하였다. 아마도 5℃ 시료에서 보관 백으로부터의 증발 때문에 12개월의 보관 후 농도가 약간 증가한 것으로 관찰되었다(도 5a). 생물학적 활성(도 5b와 5c), 단백질 관련 불순물에 관한 심각한 현상은 없었으며, 분해 생성물과 응집체는 18개월까지 특히, -45℃에서 냉동 보관된 시료(도 5d - 5l)에 대해 일반적으로 그 사양 내에 있었다.

고온에서 벌크 보관에서의 안정성을 평가하였다. 5℃(±3℃), 25℃, 25H, 40℃ 및 RH4에서 12개월까지 저장한 시료에 대한 대표적인 데이터가 도 6에 제공되어 있다. 냉장 시료는 12개월 이상에서 안정한 생물학적 안정성을 보인 반면에 실온(25℃)에서 저장한 시료는 실제로 생물학적 효능에서 명백히 증가하였다. 그 효과는 증발로 인한 순 농도 때문인 것 같다(도 6A 및 6B 참조). 시료를 5℃에서 보관할 때 12개월 이상 안정하였다. 그러나, 단백질 관련 불순물(분해 생성물과 응집체)은 25℃, 25H에서 보관된 시료에 대해 시간 경과에 따라 증가하였고, 40℃, RH4(가속된 분해 조건)에 보관된 시료에 대해 극적으로 증가하였다(도 6C-6K 참조).

세 번째 실험 세트에서, 100 ㎎/ml 항체 제제 1 ml의 시료를 주사기(BD Hypak Physiolis Pre-Filled Syringe)에 넣고, 다양한 조건하에서 보관 후 분석 하였다. 24 개월 까지 5℃ (± 3℃)에서 보관한 시료에 대해 도 7에 그 결과를 표시하였다. 항체 농도가 생물학적 활성(도 7B 및 7C)이 했던 것처럼 본질적으로 변화가 없었다(도 7A). 고분자량 종, 모노머의 백분율, 저분자량 종, 주 항체 피크의 백분율, 산성 변이체, 기본적인 변이체, 포스트 메인 피크 종, 메인 IgG, 및 중쇄 및 경쇄(각각 도 7d - 7l)의 수준은 모두 최소한 12 -24 개월에 걸쳐 본질적으로 안정하게 유지되었다.

도 4 - 7에 표시한 장기간 안정성 실험은 본 발명의 huml3B8-b의 히스티딘 제제가 프리필드 주사기와 같이 벌크 용액으로 냉동된 것이든 냉장된 것이든 일반적인 보관 조건하의 높은 항체 농도에서 생물학적 활성과 물리적인 건전성의 측면에서 안정하다는 것을 밝혀주고 있다.

RH4와 25H와 같은 가속 분해 조건과 다른 상승된 온도 조건하에서 얻어진 결과는 항체 huml3B8-b의 가능성이 있는 분해 생성물과 경로를 단지 예시하기 위한 것이었으며, 치료학적 용도를 염두해 둔 항체의 분해율을 반영한 것은 아니다. 가속 분해 조건 중에 발견된 huml3B8-b의 주요 분해 루트는 CE-SDS에 의해서 관찰된 순도의 손실, HMW 및 LMW에서의 증가, HP-SEC에 의해 관찰된 모노머 백분율의 감소를 포함한다. 추가로, HP-IEX는 기본 변이체와 주 피크에서의 감소와 함께 산성 변이체와 포스트 주 피크종에서 증가하는 것으로 밝혀졌다. 상승된 온도에서 huml3B8-b와 같은 항체 약품의 용액 제제의 연장된 보관은 매우 어렵다. huml3B8-b의 장기간 보관, 예를 들면, 품질 특성이 최소한 18개월 동안 안정적으로 유지될 것으로 예상되는 조건하에서 - 45℃에서 냉동된 CELSIUS® - Pak 백에 보관하기에는 쉽다. hum13B8-b의 개개의 복용량을 포함하는 프리필드 주사기 또는 자동주사기는 약 5℃(±3℃)에서 저장하기에 수월하며, 또한 최소한 18개월 동안 안정하게 유지될 것으로 기대된다.

VI. 복용 및 투여

본 발명의 고농도 용액 제제는 고용량의 피하 투여에 특히 적합하지만, 이러한 제제는 또한 다른 방식으로 투여될 수 있다. 투여의 적합한 경로, 예를 들면, 경구, 직장, 경 점막 또는 장내 투여; 근육 내, 경피내, 골수 주사 뿐만 아니라, 수강내, 직접적인 뇌실내, 정맥내, 복강내, 비강내 또는 안구내 주입을 포함하는 비경구 전달일 수 있다.

대안적으로, 항체를 예를 들어, 전신계 방식보다는 국소로, 예를 들면, 흔히 데포트 또는 지속된 방출 제제에서 관절 또는 면역 병리학으로 특징화된 병원체-유도된 병변 내로 직접 항체의 주입을 통해서 투여할 수 있다. 추가적으로 항체를 면역 병리학으로 특징화된 관절 또는 병원체로 유도된 병변을 표적화하는 표적화된 약품 전달 시스템, 예를 들면 조직-특이적 항체로 피복된 리포좀 내로 표적화된 약물 전달 시스템을 통해서 투여할 수 있다. 이 리포좀은 겪는 조직에 대해 표적화되고 이에 의해 선택적으로 흡수될 것이다.

피하 투여는 주사기, 자동주사기, 주사기 펜 또는 바늘이 없는 주입 장치를 사용하여 주입에 의해 수행될 수 있다.

본 발명의 고농도 용액 제제가 고농도의 항체를 필요로 하는 용도에 특히 유리하지만 제제가 고농도가 필요하거나 원하지 않는 상황에서 저농도로 사용될 수 없는 이유는 없다. 저농도의 항체는 저용량의 피하 투여에 유용할 수 있고, 또는 전달될 수 있는 용량이 실질적으로 1 ml 이상의 다른 투여 형태(예를 들어, 정맥 내 투여와 같은)에도 유용할 수 있다. 이러한 저농도는 60, 50, 40, 30, 25, 20, 15, 10, 5, 2, 1 mg/ml 미만을 포함할 수 있다.

치료제에 대한 투여 요법의 선택은 혈청 또는 전체의 조직 전환율, 증상의 정도, 전체의 면역원성 및 생물학적 매트릭스에서 표적 세포의 수용성을 포함해서 여러 가지 요인에 따라 달라진다. 바람직하게는 투여 요법은 부작용이 허용되는 수준과 일치하여 환자에게 전달된 치료제의 양을 최대화한다. 따라서, 전달되는 생물학적의 양은 치료되는 상태의 특정 실체 및 중증도에 일부 의존한다. 항체, 사이토킨 및 소분자의 적절한 복용량을 선택하는 지침을 사용할 수 있다. Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl . J. Med. 341 : 1966- 1973; Slamon et al. (2001) New Engl . J. Med. 344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl . J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl . J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl . J. Med. 343: 1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002) 참조.

적절한 복용량의 결정은 임상에 의해서, 예를 들어, 치료에 영향을 미치는 것으로 공지되거나 당해 분야에서 예측되거나 치료에 영향을 미치는 것으로 예측된 매개변수 또는 인자를 사용하여 측정된다. 단백질의 적당한 복용량("치료학적으로 유효량")은 예를 들어, 치료 대상의 조건, 중증도 및 조건의 과정에 따라 달라질 것이다. 여기서, 단백질은 예방 또는 치료 목적, 이전 치료, 환자의 임상 기록 및 단백질에 대한 반응, 사용되는 단백질의 유형, 주치의의 재량으로 투여된다. 어떤 경우에는, 낮은 초기 복용량이 선택되고, 바람직하거나 또는 최적 치료 효과가 어떠한 음성적인 부작용과 관련하여 달성될 때까지 소량씩 증가시켜서 투약량을 증가시킨다. 중요한 진단학적 측정은 예를 들면 생산된 염증성 사이토킨의 수준 또는 염증의 증상의 것들을 포함한다. 단백질은 한번 또는 반복해서 환자에게 적절하게 투여된다. 단백질은 단독으로 또는 다른 약품 또는 치료와 함께 투여될 수 있다.

항체는 연속 주입에 의해 또는 예를 들면, 매일, 주당 1-7회, 1주, 2주, 매달, 2개월, 4개월, 반년, 또는 1년 간격으로 복용하는 것으로 제공될 수 있다. 바람직한 복용 프로토콜의 하나는 상당히 바람직하지 못한 부작용을 피하는 최대 복용량 또는 복용량 횟수를 포함하는 것이다. 총 주간 복용량은 체중당 적어도 0.05 μg/㎏, 0.2 μg/㎏, 0.5 μg/㎏, 1 μg/㎏, 10 μg/kg, 100 μg/㎏, 0.2 ㎎/㎏, 1.0 ㎎/㎏, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg 또는 그 이상이다. Yang et al. (2003) New Engl . J. Med . 349:427-434; Herald et al. (2002) New Engl . J. Med. 346: 1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol . Neurosurg . Psych. 67:451-456; Portielji et al. (20003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144.

VII. 용도

본 발명은 예를 들면 중추 신경계, 말초 신경계 및 위장기관 등의 염증성 질환 및 염증성 질환 및 상태, 및 자가면역 및 증식성 질환의 치료에 사용하기 위한 항-인간 IL-23pl9 mAb huml3B8-b의 고농도 용액 제제를 제공한다.

본 발명의 제제는 릴랩싱-래미팅 다발경화중(MS) 및 원발 진행성 MS를 포함하는 다발 경화증(MS), 알츠하이머병, 근 위축성 측색 경화증(a.k.a. ALS; Lou Gehrig's disease), 허혈성 뇌 손상, 프리온 질환 및 HIV-관련 치매의 치료는 물론, 신경병적 통증, 외상후 신경병증, 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome(GBS)), 말초 다발신경병증 및 신경 재생을 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 제제는 또한 염증성 장 질환의 치료, 예를 들면, 크론병, 궤양성 결장염, 복강 질환, 과민성 대장 증후군에 사용될 수 있다. 이들은 또한, 전신성 홍반성 낭창과 유형 I 당뇨병과 같은 류마티스성 관절염, 골관절염 및 건선 관절염을 포함해서, 이식편대숙주병, 건선, 아토피성 피부염, 관절염 등과 같은 염증성 질환과 암과 같은 증식성 질환의 치료에도 사용될 수 있다. PCT 특허출원공보 WO 제04/081190호; WO 제04/071517호; WO 제00/53631호; 및 WO 제01/18051호 참조.

실시예

실시예 1

용액 제제

하나의 실시예로서, 본 발명의 huml3B8-b의 용액 제제가 프리필드 주사기, 또는 자동 주사기에 1.0 mL의 용량으로 항체 용액 100 ㎎/㎖로 제공된다. 1.0 mL의 용량이 충전 용량이라기 보다는 추출할 수 있는 용량이며, 전체 1.0 mL의 복용량이 전달되도록 충분한 과충전을 포함 할 수 있다. 본 발명의 제제의 10 ml에 대한 예시적인 레시피가 표 2에 제공되어 있다. 하나의 실시예로서, 의약품 1회분이 15-30 L 규모, 또는 약 15,000 -30,000 복용량으로 제조된다.

일부 실시예에서, 완충 성분(L-히스티딘과 L-히스티딘 HCl)의 양은 pH를 대략 6.0으로 조정할 필요가 있기 때문에 표 2에 나열된 중량으로부터 약간 벗어난다. 특히, 일부 실시예에서는, 표 2에 기재한 양과 비교해서, 산성 또는 염기성 형태의 히스티딘이든 더 많이 또는 더 적은 양이 pH를 약 6.0의 원하는 값으로 조정하기 위해서 첨가된다. 또 다른 실시예에서는, 표 2의 것에 근사한 L-히스티딘 및 L-히스티딘 HCl의 양이 pH가 6.0에 가깝지만 그 보다는 약간 높게 얻기 위해서 첨가되고, HCl은 약 6.0의 최종 제제의 pH를 낮추기 위해서 첨가된다.

실시예 2

시차 주사 열량법(DSC)

본 발명의 제제에서 항체의 열 안정성을 모니터하는데 발레리안-플로트니코브(Valerian-Plotnikov) 시차 주사 열량법(DSC)이 사용되었다. DSC는 직접 조절된 온도 증가 또는 감소시 단백질에서 발생하는 열 변화를 측정한다. 용액에서 단백질은 고유(접힘) 형태 및 변성(미접힘:전개) 상태 간에 평형이 되어 있다. DSC는 단백질의 50 %가 변성되는 시점의 온도(열 전이 중간점 Tm)를 결정하는데 사용된다. 높은 Tm을 갖는 단백질은 일반적으로 더 안정하다. 예를 들어, DSC 곡선은 도 1e에 제공되어 있으며, 2개의 전이, 즉 pH에 의존하는 약 64 - 70℃에서 발생하는 제1 전이(Tm1), 80℃에서의 제2 메인 전이(Tm2)를 나타내고 있다. 메인 전이는 Fc 단편의 전개에 의한 것으로 여겨진다. 메인 전이를 선행하는 열적 사건은 문헌에 기술된 IgG1 항체의 예상되는 구조적인 요소와 일치하는 항체(예를 들어, Fab) 내에서 여러 다른 부분의 전개 때문일 가능성이 있다. Vermeer(2000) Biophys . J. 78:394 참조.

실시예 3

고성능 크기 배제 크로마토그래피 (HP-SEC)

본 발명의 huml3B8-b 제제에서 고분자량(HMW) 종, 저분자량(LMW) 종 및 모노머는 HP-SEC에 의해 검출되었다. 시험 용액은 희석되고, 크기 배제 컬럼(YMC-pack Diol-200, 200Å 기공 크기, 300 × 8.0 mm, 5㎛ 또는 등가물; YMC Co. Ltd., Kyoto, Japan)을 사용하여 HPLC에 의해서 분리되었다. 피크 면적은 백분율 모노머, HMW 종과 LMW 종을 결정하는데 사용되었다.

SEC로부터의 용출 피크는 분자량을 평가하고 응집체를 모니터링하는데 사용될 수 있는 멀티 앵글 레이저 광 산란(SEC-MALLS)을 사용하여 특정되었다. SEC 컬럼에서 단편 및 응집체로부터 모노머 피크의 분리 후에, 시료는 자외선(UV), MALLS 및 굴절율(RI) 검출기를 통과하면서 물질의 농도와 그의 분자량(MW)의 연속적인 평가를 할 수 있게 된다. 산란광의 강도(MALLS에 의해 검출)는 단백질 농도(RI에 의해서 결정) 및 분자량의 곱에 비례한다. SEC-MALLS은 약 138 kDa의 분자량을 가진 우세한 메인 피크를 나타낸다. 이것은 SEC의 크로마토그래피와 광산란 검출의 정확도를 고려할 때, hum13B8-b의 모노머의 계산된 이론적인 분자량은 물론 질량 분석법 사용하여 검출된 hum13B8-b의 모노머의 질량과도 아주 잘 일치한다. 고분자량의 종(HMW1)은 대략 300 kDa의 분자량을 가지며, 아마도 이량체 종을 나타낸다. 제2 HMW 피크(HMW2)는 모두 알괄적으로 관찰되지 않지만, 삼량체에 해당하는 대략 465 kDa의 추정 분자량을 갖는 종을 포함한다. 저분자량의 종(LMW)은 108 - 117 kDa의 적당한 분자량으로 검출되며, 단편화 생성물, 예를 들면 힌지 단편화의 생성물을 나타낼 수 있다.

실시예 4

동적 광산란(DLS)

동적 광산란(DLS)은 용액에서 0.5 내지 6㎛의 범위로 단클로날 항체의 크기 분포 프로필에 대한 통찰력을 제공할 수 있는 기술이다. 단클로날 항체 huml3B8-b는 강도에서 대략 9.5 nm(용적에서 6.5 ㎚)의 평균 유체 역학적 직경을 보여준다. 이것은 다른 단클로날 항체의 값과 일치한다. 높은 이온 강도의 제제는 낮은 이온 강도 제제보다 낮은 유체 역학적 직경을 갖는 경향이 있으며, 완충제와 pH와 같은 다른 용액 인자들에 의해서 영향을 받을 수 있다. 도 1i와 1j 참조. 본 발명의 제제에서 항체는 본질적으로 단 분산이다. 본 발명의 항체에 대한 유체 역학적 직경은 항체가 보다 높거나 낮은 이온 강도(데이터는 나타내지 않음)의 완충제로 희석되는 실험에 의해서 입증된 바와 같이 가역적이다. 이러한 결과는 환자에게 투여할 때의 유체 역학적 직경이 주사 부위의 국소 환경과 평형하다는 것을 시사하는 것이다.

실시예 5

고성능 양이온 교환 크로마토그래피(HP-IEX)

hum 13B8-b에 대한 하전 변이체는 시료에 있는 단백질과 수지에 고정된 전하 간의 정전기의 상호 작용에 의존하는 HP-IEX에 의해서 검출되었다. 양성적으로 하전된 huml3B8-B 변이체가 약한 양이온 교환 컬럼(Dionex ProPac WCX-10, 4×250 mm, 또는 등가; Thermo Scientific, Bannockburn, I11., USA)에서 음성적으로 하전된 수지에 결합되며, HPLC에 의해서 분리된다. 항체는 효과적으로 항체 변이체의 전하를 감소시키고 동등한 전하의 이온으로 대체하여 pH 및 염 농도를 증가시킴으로써 용출된다. 용출액 중에 hum3B8-b 및 변이체의 존재는 UV 검출에 의해 결정된다. 피크 면적은 산성 변이체, 메인 피크, 포스트 메인 피크 및 기본 변이체의 백분율을 결정하는데 사용된다.

약 23분 동안 용출하는 메인 피크 이전에 검출된 모든 종들은 산성 변이체라고 하지만, 메인 피크 이후에 용출하는 것은 염기성 변이체라고 한다. 산성 변이체와 산성 피크의 분석은 이들이 N- 또는 C-말단 변형은 없는 것으로 드러난 반면에 메인 피크는 C-말단에서 완전한 라이신 분열을 나타내고, N-말단에서 완전한 피로글루타민산염 형성을 나타낸다. 메인 피크는 완전한 생물학적 활성을 유지한다. 포스트 메인 피크는 완전한 라이신 분열과 C-말단에서 제한된 프롤린 α-아미드화, N-말단에서 완전한 피로글루타민산염 형성, Met251 및 Met427의 산화를 나타내며, 결합하는 ELISA에 의해서 측정된 바와 같이 감소된 효능을 나타낸다. 기본 피크 1은 완전한 라이신 분열과 C-말단에서의 약간의 프롤린 α-아미드화, 및 N-말단에서의 피로글루타민산염 형성을 나타낸다. 기본 피크 3, 가장 많은 기본 피크는 C- 말단에서 완전한 라이신 분열과 N-말단에서 불완전한 피로글루타민산염 형성을 나타낸다. 기본 변이체는 완전한 라이신 분열과 C-말단에서 프롤린 α-아미드화의 가변 수준과 N-말단에서 불완전한 내지 완전한 피로글루타민산염을 나타낸다. 대부분의 전하 변이체는 생물학적 활성을 유지한다.

실시예 6

단백질 지도화

단백질 지도화는 huml3B8-B의 기본 구조에 대한 정보를 제공하고, 산화가 일어났는지의 여부를 평가하기 위해 사용될 수 있다. 서열 범위를 확대하기 위해 두 개의 서로 다른 효소 단백질 지도는 huml3B8-b의 특성을 이용하였다. 첫 번째는 엔도프로테나아제 Lys-C 분해 후 단백질 지도화를 하였다. 단백질 지도는 단백질을 변성시키기 위해 huml3B8-b의 시료를 염산구아니딘으로, 이황화 결합을 감소시키기 위해서 1,4-디티오테리톨(DTT)로 처리하여 수득하였다. 그 다음에 DTT 처리로 인한 프리 티올을 알킬화하기 위해 시료를 요오도 아세트아미드(IAM)로 처리하였다. 시료는 그 다음에 엔도프로테나아제 Lys-C로 분해시켰다. 생성된 단백질의 분석은 전기방사 질량 분석기에 결합된 역상 액체 크로마토그래피(Xbridge C18, 5㎛, 130Å 기공 크기, 2.1×150 mm 또는 등가물; Water Corporation, Milford, Mass., USA)을 사용하여 수행하였다. 경쇄(L) 및 중쇄(H)로부터 기원하는 단백질 서열과 그들의 중량이 질량 분석기를 사용하여 검출되었으며 표 3에 제공되어 있다.

체류 시간은 90 분에 걸쳐 크로마토그래피를 214 nm에서의 자외선 흡수에 의해 측정하였다. 질량은 IAM-알킬화 시스테인 잔기 당 57 Da의 순 질량을 추가하여 시스테인 잔기의 알킬화에 대해 보정하였다. huml3B8-b의 상보성 결정 영역(CDR)로부터 기원하는 다섯개의 단백질은 특히 중요하다. 피로글루타민산염화된 N-말단 중쇄 단백질, 라이신이 클립된 C-말단 중쇄 단백질 및 메티오닌 산화된 및 탈아미드화된 단백질과 같은 보통 번역 후에 변형된 단백질이 관찰되었다. 이러한 변형 중에 분자의 CDR은 발견되지 않았다. 루틴 단백질 지도화 실험은 질량 분석계를 이용하지 않고 수행될 수 있으며, 관찰된 피크의 체류 시간은 이러한 안정성(시험) 시료 및 대조(참조) 시료와 같이 시료를 비교하는데 사용할 수 있다.

트립신 분해를 사용하는 제2 단백질 지도화 방법은, Lys-C 단백질 지도에 잘 표시되지 않은 중쇄의 잔기 64 - 120에 걸쳐 적용 범위를 추가하기 위해 개발되었다. 분열에 사이트에 추가해서, 엔도프로데나아제와 공유하는 라이신 잔기의 C-말단, 트립신은 또한 아르기닌 잔기의 C-말단을 분열시켜 작은 단백질의 세트를 생성한다. 중쇄의 64 - 120 잔기로부터 발생하는 단백질은 UV 흡광도 검출 및 질량 분석법에 결합된 역상 액체 크로마토그래피를 이용하여 검출되었다. huml3B8-b의 관련 트립신 단백질 단편이 표 3에 포함되어 있다.

실시예 7

자외선 분광법에 의한 단백질 농도

본 발명의 용액 제제에서 huml3B8-b 항체의 단백질 농도는 UV 분광법으로 결정된다. 이 결정은 트립토판, 티로신 및 시스테인 잔기 등의 아미노산에 의해 280 nm에서 UV 광의 흡광도에 기초한다. 280 nm에서의 흡광도는 320 nm에서의 흡광도를 이용하여 빛의 산란을 위해 보정된다. 이 방법은 물에서의 시료의 중량 희석과, 280 nm에서의 흡광도와 320 nm에서 흡광도를 확립하기 위한 UV 스펙트럼의 기록을 포함한다. 이 흡광도 값과 1.44 mL mg^-1 cm^-1의 실험적으로 결정된 흡광 계수는 huml3B8-b의 농도를 계산하는데 사용된다.

실시예 8

생물학적 활성 - 세포 기반 기능 분석

기능적인 세포 기반 분석은 인간 IL-23의 생물학적 활성을 차단하는 본 발명의 제제에서 huml3B8-b의 능력을 평가하기 위해 개발되었다. 이 분석은 IL-23에 응답 세포주(Kit 225)에서 IL-23 유도 STAT3 활성화를 억제하는 huml3B8-b의 능력을 평가한다. huml3B8-b 기준 물질과 시험 시료의 연속 희석물은 Kit225 IL-23-응답하는 세포와 함께 배양된 후, 인간 IL-23의 고정 농도로 배양되었다. hum13B8-b에 의한 STAT3 인산화의 억제는 STAT3 캡쳐와 항-p-STAT3 검출 항체쌍을 사용하여 ELISA에 의해서 이어서 항-IgG이 접합된 퍼옥시다아제로 배양하고 화학 발광 기질을 첨가하는 것에 의해서 세포 용해물 중에서 측정되었다. 저해 반응 곡선("표준 곡선")은 IC50 값은 최대 반응의 50 %를 억제하는 항-IL-23의 농도를 나타내고, 비선형 회귀 4개의 파라미터 로지스틱 피트를 이용하여 생성된다. 시험 시료의 상대 효능은 시험 시료의 억제 반응 곡선과 기준 대상의 백분율로 계산된 표준 곡선을 비교하여 평가하였다. 시험 시료의 다중 복제에 대한 상대 효능은 단일 보고값-상대 효능의 기하 평균으로 통합되었다.

실시예 9

생물학적 활성 - 결합 ELISA

인간 IL-23에 대한 본 발명의 제제에서 huml3B8-b의 친화력은 평형 상태의 결합 ELISA에서 평가되며, 여기서, 인간 IL-23 사이토킨과 함께 코팅된 분석 플레이트에 기준 물질과 시험 시료의 연속 희석이 적용된다. 이 분석은 다양한 잠재적인 치료 제제의 생물학적 활성의 보유를 평가하는데 이용될 수도 있다. 시험 시료의 상대적인 효능은 기준 물질의 투여량 반응 곡선에 대한 시료의 투여량 반응 곡선의 비교에 의해 평가하고, 기준 물질의 백분율로서 계산된다.

ELISAs는 당업계에서 공지된 방법에 의해 수행된다. 간략하게, 본 발명의 제제에서 huml3B8-b의 연속 희석은 이전에 인간 IL-23 단백질로 코팅한 후 차단되었던 마이크로타이터 플레이트(microtiter plate)의 웰에 첨가하였다. 배양 기간 후에, 웰을 세척하고 퍼옥시다아제-결합된 염소 항-인간 IgG(FC) 검출 항체 시약을 첨가한다. 웰을 다시 세척하고, 화학 발광 퍼옥시다아제 기질을 첨가하였다. 신호는 화학 발광에 의해 판독된다. EC50 값이 최대 IL-23 결합된 신호의 50 %를 달성하는데 필요한 농도를 나타내는 비선형 회귀 4개의 파라미터의 로지스틱 피트(logistic fit)를 이용하여 S 자 용량 반응 곡선이 생성된다. 상대적인 생물학적 효능은 기준 시료로 얻은 신호 레벨에 기초하여 표준 곡선과 시험 시료로 얻은 결과를 비교함으로써 계산된다. 결과는 기준 항체 용액에 비해 백분율의 생물학적 효능으로 표시되어 있다. 동일한 시료의 다수의 복제에 대한 상대적인 효능값은 단일 보고값 - 상대적인 효능의 기하 평균값으로 합쳐진다.

실시예 10

SDS 모세관 전기 영동 (CE-SDS)

도데실 황산나트륨(SDS-CE)으로의 모세관 전기 영동이 크기에 기초하여 단백질을 분리한다. CE-SDS은 비환원성 조건 하에서 또는 환원성 조건 하에서 수행 될 수 있다. 비환원성 CE-SDS는 시료에 있는 다른 종으로부터 온전한 항체를 해결하는 반면에 환원성 CE-SDS는 서로로부터, 시료에 있는 다른 잠재적인 종으로부터 해리된 중쇄 및 경쇄를 해결한다. Rustandi et al.(2008) Electrophoresis 29: 3612 참조.

비 환원성 SDS-CE는 자유 시스테인 잔기 및 SDS를 알킬화되게 N-에틸 말레이 미드의 존재하에 항체 huml3B8-b의 시료의 열 변성을 포함한다. 이어서, 시료는 분리 를 위한 체 선택성을 제공하는 교체 가능한 SDS 중합체 매트릭스를 포함하는 모세관에서 분리된다. 시험 샘플의 모든 피크를 통합하고, 피크 영역은 샘플의 백분율 메인의 IgG(손상 항체)를 결정하기 위해 사용된다.

환원성 SDS-CE는 이황화 결합 및 SDS를 줄이기 위해 2-머르캅토 에탄올의 존재하에 항체 huml3B8-B의 시료의 열 변성을 포함한다. 이어서, 시료는 분리를 위한 체질 선택성을 제공하는 교체 가능한 SDS 중합체 매트릭스를 포함하는 모세관에서 분리된다. 시험 시료의 모든 피크가 통합되고, 피크 영역은 huml3B8-B에서 손상 중쇄 및 경쇄의 백분율을 결정하는데 사용된다.

실시예 11

침강 속도 분석 초원심 분리(SV-AUC)

SV-AUC는 본 발명의 제제에서 huml3B8-b 항체의 4차 구조를 조사하기 위해 사용되었다. SV-AUC는 분자 침전물이 원심력에 응답하는 속도를 측정한다. 이 침전 속도는 시료에 존재하는 분자의 분자량에 관한 정보를 제공한다. huml3B8-b는 7.0S의 침전 계수(s20,w)를 갖는 한 종으로서 주로 침전물이다. 이 종은 대략 150 kDa의 예상 분자량을 가지며, 모노머의 예상 분자량과 일치한다. 고분자의 수화와 모양에 따라 달라지는 마찰 비율은 로트들 간에 유사하다.

실시예 12

항체 제제의 확장된 안정성

추가적인 장기 안정성 데이터를 본 발명의 항체에 대한 제제에 대해서 얻었다. 24개월 까지 예시적인 안정성 데이터를 이하의 표 4 - 9에 로트 E와 D에 대해 표시하였다.

표 10은 서열 목록에서의 서열을 나열한 것이다.

SEQUENCE LISTING <110> MERCK SHARP & DOHME CORP. Kashi, Ramesh Badkar, Aniket <120> Solution Formulations of Engineered Anti-IL-23p19 Antibodies <130> 23364 <150> US 61/737,035 <151> 2012-12-13 <160> 13 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 446 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(116) <223> Variable Domain <400> 1 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr 20 25 30 Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Glu Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro 245 250 255 Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser 325 330 335 Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 2 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Human frameworks, rodent CDRs <220> <221> DOMAIN <222> (1)..(108) <223> Variable Domain <400> 2 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 3 Gly Tyr Ile Phe Ile Thr Tyr Trp Met Thr 1 5 10 <210> 4 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Rodent CDR with one amino acid substitution <400> 4 Gln Ile Phe Pro Ala Ser Gly Ser Ala Asp Tyr Asn Glu Lys Phe Glu 1 5 10 15 Gly <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Gly Gly Gly Gly Phe Ala Tyr 1 5 <210> 6 <211> 11 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Arg Thr Ser Glu Asn Ile Tyr Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 8 Gln His His Tyr Gly Ile Pro Phe Thr 1 5 <210> 9 <211> 170 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln Cys Gln Gln 1 5 10 15 Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His Pro Leu Val 20 25 30 Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr Thr Asn Asp 35 40 45 Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln Gly Leu Arg 50 55 60 Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly Leu Ile Phe 65 70 75 80 Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu Pro Ser Leu 85 90 95 Leu Pro Asp Ser Pro Val Gly Gln Leu His Ala Ser Leu Leu Gly Leu 100 105 110 Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr Gln Gln Ile 115 120 125 Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu Leu Arg Phe 130 135 140 Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala Ala Arg Val 145 150 155 160 Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 165 170 <210> 10 <211> 1398 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human constant and framework regions, rodent CDRs <400> 10 atggctgtgc tggggctgct gttctgcctg gtgacattcc caagctgtgt gctgtcccag 60 gtgcagctgg tgcagtctgg cgctgaggtg aagaagcctg gcgcctccgt gaaggtctcc 120 tgcaaggctt ctggctacat cttcatcacc tactggatga cctgggtgcg gcaggcccct 180 ggccaggggc tggagtggat gggccagatc ttccctgcca gcggctctgc agactacaac 240 gagaagttcg aaggcagagt caccatgacc acagacacat ccaccagcac agcctacatg 300 gagctgagga gcctgagatc tgacgacacc gccgtgtatt actgtgccag aggcggtggc 360 ggattcgctt actggggcca gggcaccctg gtcaccgtct ccagcgctag caccaagggc 420 ccatcggtct tccccctggc accctcctcc aagagcacct ctgggggcac agcggccctg 480 ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgcc 540 ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt cctcaggact ctactccctc 600 agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcagc ttgggcaccc agacctacat ctgcaacgtg 660 aatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagaaagttg agcccaaatc ttgtgacaaa 720 actcacacat gcccaccgtg cccagcacct gaactcctgg ggggaccgtc agtcttcctc 780 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg 840 gtggtggacg tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg 900 gaggtgcata atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg 960 gtcagcgtcc tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag 1020 gtctccaaca aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag 1080 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag 1140 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1200 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc 1260 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1320 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1380 ctgtctccgg gtaaatga 1398 <210> 11 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Human constant and framework regions, rodent CDRs <400> 11 atggctccag tgcagctgct ggggctgctg gtgctgttcc tgccagccat gagatgtgat 60 atccagatga cccagtctcc atcctccctg tctgcctctg tgggcgacag agtgaccatc 120 acctgcagga ccagcgagaa catctacagc tacctggcct ggtatcagca gaagccaggg 180 aaggccccta agctgctgat ctataacgcc aagaccctgg ctgaaggggt gccatccagg 240 ttcagcggca gcggctctgg gacagacttc accctgacca tcagcagcct gcagcctgag 300 gacttcgcca cctactactg tcagcaccac tacggaattc cattcacctt cggccagggc 360 accaaggtgg agatcaagcg tacggtggct gcaccatctg tgttcatctt ccctccatct 420 gatgagcagc tgaagtctgg aactgcctcc gtggtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 480 agagaggcca aggtgcagtg gaaggtggat aacgccctcc agagcggcaa ctcccaggag 540 agcgtgacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg 600 agcaaagcag actacgagaa acacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca tcagggcctg 660 agcagccccg tgacaaagag cttcaacagg ggagagtgtt aa 702 <210> 12 <211> 19 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Phe Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys 1 5 10 15 Val Leu Ser <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 13 Met Ala Pro Val Gln Leu Leu Gly Leu Leu Val Leu Phe Leu Pro Ala 1 5 10 15 Met Arg Cys

Claims (8)

1. a) 최소한 50 mg/ml 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b;
   b) 10 mM의 히스티딘 완충제, pH 6.0;
   c) 0.05%의 폴리소르베이트 80; 및
   d) 7% 수크로오스를 포함하되
   상기 항체 huml3B8-b는
   i) SEQ ID NO: 2의 서열을 포함하는 경쇄 폴리펩티드; 및
   ii) SEQ ID NO: 1의 서열을 포함하는 중쇄 폴리펩티드로 이루어진 항-IL-23p19 항체 hum13B-b의 용액 제제.
2. 제1항에 있어서, 최소한 80 mg/ml 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b로 이루어진 용액 제제.
3. 제2항에 있어서, 최소한 100 mg/ml 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b로 이루어진 용액 제제.
4. 제1항에 있어서, 80 - 120 mg/ml 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b로 이루어진 용액 제제.
5. 제4항에 있어서, 약 100 mg/ml 항-IL-23pl9 항체 huml3B8-b로 이루어진 용액 제제.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 용액 제제를, 이것이 필요한 대상물에 투여하는 것으로 이루어진 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 증식성 질환의 치료 방법.
7. 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 증식성 질환에 사용하기 위한 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 따른 용액 제제.
8. 자가 면역 질환, 염증성 질환 또는 증식성 질환을 치료하기 위한 의약 제조에 사용하기 위한 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 따른 용액 제제의 용도.
   

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