KR20150020180A - 안티센스 올리고뉴클레오티드 전달을 위한 지질 나노입자 조성물 - Google Patents

안티센스 올리고뉴클레오티드 전달을 위한 지질 나노입자 조성물 Download PDF

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KR20150020180A
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로버트 제이. 리
영 복 이
동 중 김
창 호 안
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더 오하이오 스테이트 유니버시티
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Abstract

중합체에 접합된 거대분자 및 표적화제를 포함하는 지질 나노입자 조성물을 기술한다. 조성물은 치료제를 포함할 수 있다. 치료제는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)일 수 있다. 예시적인 ASO는 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 것; 또는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 것이다. 또한, 중합체, 및 ASO, 예컨대 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 ASO; 또는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO인 치료제에 접합된 거대분자를 포함하는 지질 나노입자 조성물을 기술한다. 제약 제제, 지질 나노입자를 제조하는 방법, 및 지질 나노입자를 사용하는 방법, 예를 들어 암을 치료하는 방법을 또한 개시한다.

Description

안티센스 올리고뉴클레오티드 전달을 위한 지질 나노입자 조성물 {LIPID NANOPARTICLE COMPOSITIONS FOR ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES DELIVERY}
관련 출원
본 출원은 2012년 5월 23일 출원된 미국 가출원 번호 61/650,729 및 2013년 3월 14일 출원된 미국 가출원 번호 61/784,892를 우선권 주장하며, 이들 가출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
연방정부 지원 연구에 관한 진술
본 발명은 국립 보건원(National Institutes of Health)에 의해 부여된 보조금 번호 R01 CA135243, DK088076 및 CA152969 하에 정부 지원에 의해 이루어졌다. 정부는 본 발명에 일정 권리를 갖는다.
서열 목록
본 출원은 EFS-웹을 통해 ASCII 포맷으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2013년 5월 23일자로 작성된 상기 ASCII 복사본의 명칭은 41890-349711_SL.txt이고, 크기는 3,404 바이트이다.
기술 분야
본 개시내용은 핵산 및 관련 화합물의 전달을 위해 사용될 수 있는 지질 나노입자를 개시한다.
siRNA 및 다른 치료학적 올리고뉴클레오티드를 전달하는 것은 그의 임상적 번역의 잠재력을 제한해 온 기술상의 주된 도전과제이다.
리포솜은 수성 코어 내의 친수성 분자 또는 그의 지질 이중층(들) 내의 소수성 분자를 운반할 수 있는, 하나 이상의 지질 이중층으로 구성된 소포체이다. 지질 나노입자 (LN)는 서브마이크로미터 범위의 지질 기반 입자를 기술하는 일반명이다. 이는 리포솜의 특징이 되는 구조를 가지고/거나, 대안적인 비-이중층 유형의 구조를 가질 수 있다. 전신 경로를 통해 LN에 의해서 약물을 전달하기 위해서는 수개의 생리학적 장벽을 극복하여야 한다. 세망내피계 (RES)가 순환으로부터 LN 제거를 담당할 수 있다. LN이 일단 혈관계로부터 벗어나 표적 세포에 도달하고 나면, 이는 전형적으로는 세포내이입에 의해 흡수되고, 산성 엔도솜 조건 내에서 분해되기 이전에 약물을 세포질 내로 방출하여야 한다.
LN 제조시에는 제타 전위 또는 표면 전하가 고려되어야 한다. LN의 제타 전위는 전형적으로 전신 전달을 위해서 과도하게 양성 또는 매우 음성이 아니어야 한다. 고도로 양성인 전하를 갖는 LN은 비특이적으로 표적 세포 및 순환 혈장 단백질과 상호작용하는 경향이 있으며, 세포독성을 유발할 수 있다. 대안적으로, 고도로 음성인 전하를 갖는 LN은 또한 음으로 하전된 핵산을 효과적으로 혼입할 수 없고, 신속한 RES-매개 제거를 유발할 수 있으며, 이로 인해 치료학적 효능은 감소하게 된다. 중성 내지 중간 정도의 전하를 갖는 LN이 생체내 약물 및 유전자 전달을 위해 가장 적합하다.
LN은 전통의 치료학적 화합물 및 핵산 기반 요법의 전달을 위해 유망한 플랫폼을 구성한다. LN을 사용하여 제제화된 약물은 대개 투과 및 체류 증강(EPR: enhanced permeability and retention) 효과에 기인하여 우수한 생체내 약동학적 (PK) 특성, 예컨대 혈액 순환 시간 연장 및 고형 종양 부위에의 축적 증가와 같은 특징을 가질 수 있다. 또한, LN은 혈청 단백질에 의한 LN의 옵소닌화 및 생성되는 RES-매개 흡수를 감소시키기 위해 폴리에틸렌 글리콜로 표면이 코팅될 수 있다. LN은 또한 표적화된 약물 전달을 제공하기 위해 세포-특이 리간드로 코팅될 수 있다.
지난 수십 년간에 걸쳐 핵산 기반 요법에 관해 많은 관심이 일어있다. 핵산 기반 요법은 유전자 발현을 촉진 또는 억제시키는 핵산 (NA)을 도입시킨다는 것을 전제로 작동되는 것이다. 유전자의 돌연변이 및 miRNA 프로파일의 변화가 암 및 다른 질환의 근본 원인이 된다고 여겨지고 있고, 핵산 기반 작용제는 잠재적으로는 근본적 병인에 직접적으로 작용할 수 있으며, 이를 통해 치료학적 잠재능은 최대화될 수 있다. 핵산 기반 요법의 몇몇 예로는 플라스미드 DNA (pDNA), 소형 간섭 RNA (siRNA), 소형 헤어핀 RNA (shRNA), 마이크로RNA (miR) 모사체 (또는 모방체), 항-miR/안타고(antago)miR/miR 억제제, 및 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)를 포함하는데, 이들은 각각 본 개시내용에서 사용되는 핵산이라는 용어에 포함된다. 핵산 기반 요법의 임상적 번역은 그의 실행에서 수개의 장애물에 직면하게 된다. 핵산은 상대적으로 불안정하고, 혈청 및 세포 뉴클레아제에 의해 쉽게 분해되기 때문에, 핵산을 그의 세포내 표적으로 수송하는 것이 특히 큰 도전과제가 된다. 추가로, 핵산은 고도로 음전하를 띠기 때문에, 이는 세포막을 통과하여 수송될 수 없고, 이로써 유용성은 한정된다. 이러한 문제점을 해소시키기 위해 바이러스 벡터가 개발되었지만, 생체내 면역 반응의 활성화 및 숙주 게놈내 원치않는 돌연변이 유도라는 이유로 대개는 실패하였다. 비-바이러스 벡터 또한 광범위하게 조사되어 왔지만, 거의는 성공적인 임상적 결과를 얻지 못했고, 추가의 개선이 요구되고 있다.
전통적으로, 양이온성 LN이 유전자 전달을 위한 비-바이러스 벡터로서 사용되어 왔다. 일부 경우에서, 양이온성 지질은 음이온성 지질로 대체되거나 또는 그와 함께 조합하여 사용된다. 양이온성 LN의 양전하가 음으로 하전된 핵산과의 정전기적 상호작용을 촉진시킨다. 음이온성 지질은 양이온성 지질과 또는 양이온 중합체와 함께 조합될 수 있고, 이는 결국 핵산과의 상호작용을 매개할 것이다. 이는 당업계에 공지되어 있는 다양한 기법, 예컨대 에탄올 희석, 냉동-해동, 정용여과 및 박막 수화에 의해 제조될 수 있다. 양이온 성분 이외에도, LN은 전형적으로, 이중층 형성 인지질 성분, 예컨대 포스파티딜콜린 뿐만 아니라 콜레스테롤을 비롯한 헬퍼 지질로 구성된다. 헬퍼 지질, 예컨대 디올레오일포스파티딜에탄올아민 (DOPE)은 이중층 상을 지원하는 것이 아니라, 대신 표적 부위에서 지질 이중층을 파괴시켜 치료제를 방출하는 데 도움을 줄 수 있다. 안정화 성분, 예컨대 PEG화제인 D-알파 토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트 (TPGS), 또는 mPEG-DSPE가 제제를 안정화시키고, LN을 RES-매개 흡수로부터 보호하기 위해 첨가될 수 있다.
효과적인 전달 비히클을 개발하는 것이 올리고뉴클레오티드 (ON) 치료제의 임상적 번역에 대한 해결 방안이 된다. 이상적으로, 지질 나노입자 제제는 (1) 약물을 효소적 분해로부터 보호할 수 있어야 하고; (2) 모세혈관 내피를 횡단할 수 있어야 하며; (3) 면역원성 또는 탈-표적(off-target) 세포 독성을 유발하지 않으면서 표적 세포에 특이적으로 도달할 수 있어야 하고; (4) 세포내이입 및 엔도솜 방출을 촉진시킬 수 있어야 하며; (5) 콜로이드 안정성 및 장기간의 저장 수명을 갖는 안정한 제제를 형성할 수 있어야 한다.
본 발명의 개요
본원에서는 치료학적 올리고뉴클레오티드를 고효율로 캡슐화할 수 있고, 효과적인 전달을 위한 물리적 및 생물학적 기준을 충족시킬 수 있는 지질 나노입자를 제공한다. 본 발명에서, 특정 실시양태는 Akt-1에 대한, 5' gctgcatgatctccttggcg 3' (서열 1)을 포함하는 서열을 갖는 20-mer 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오티드인 RX-0201(알켁신(Archexin)®) 및/또는 "저산소증 유도 인자-1 알파" (HIF-1α)의 강력한 억제제인, 5' aatgagccaccagtgtccaa 3' (서열 2)을 포함하는 서열을 갖는 20-mer 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오티드인 RX-0047을 함유하는 지질 나노입자를 포함한다.
특정 실시양태에서, 지질 나노입자는 과양이온화된 및/또는 pH-반응성 HSA-중합체 접합체를 포함한다. 특정 실시양태에서, HSA-중합체 접합체는 HSA-PEHA를 포함한다. 특정 실시양태에서, 지질 나노입자는 지질 나노입자 제제의 형질감염 효율을 증가시키기 위해 과양이온화된 알부민-중합체 접합체 (APC)를 포함한다.
본원에서는 제약 조성물, 지질 코팅된 알부민 나노입자를 제조하는 방법, 및 암 또는 다른 질환을 치료하는 방법을 추가로 제공한다.
실시양태에서, 본 발명은 중합체에 접합된 거대분자 및 표적화제를 포함하는 지질 나노입자 조성물이다. 실시양태에서, 지질 나노입자 조성물은 또한 치료제, 예컨대 핵산, 단백질, 폴리사카라이드, 지질, 방사성 물질, 치료제, 전구약물 및 이들의 조합을 포함한다. 실시양태에서, 치료제는 핵산이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 pDNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드, miR, 항miR, shRNA, siRNA 또는 이들의 조합이다. 실시양태에서, 치료제는, Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO); 또는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO일 수 있는 ASO이다.
본 발명의 실시양태는 또한 중합체에 접합된 거대분자 및 ASO, 예컨대 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 ASO 또는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO인 치료제를 포함하는 지질 나노입자 조성물을 포함한다.
본 발명의 실시양태 중 임의의 것에서, 중합체는 하전된 것일 수 있고, 예를 들어 중합체는 양으로 하전된 것일 수 있다. 본 발명의 실시양태에서, 거대분자는 알부민을 포함한다. 예시적인 실시양태에서, 중합체에 접합된 거대분자는 알부민-다가양이온 접합체이다. 접합은, 예를 들어 가교제를 통해 이루어질 수 있다. 거대분자 또는 양으로 하전된 중합체는, 예를 들어 펜타에틸렌헥사민 (PEHA), 테트라에틸렌헥사민 및 테트라에틸렌펜타민 (TEPA)일 수 있다. 실시양태에서, 거대분자는 펜타에틸렌헥사민 (PEHA)을 포함하고, 중합체는 인간 혈청 알부민 (HSA)을 포함한다. PEHA 분자 대 HSA 분자의 비는 약 11:1일 수 있다. 본 발명의 지질 나노입자는 2종 이상의 저분자량 중합체의 혼합물을 포함할 수 있다. 지질 나노입자는 DOTAP, SPC 및 TPGS를, 예를 들어 DOTAP:SPC:TPGS = 약 25:70:5인 몰비로 포함할 수 있다.
ASO를 포함하는 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 인간 Akt-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는, 5' gctgcatgatctccttggcg 3' (서열 1)을 포함하는 서열을 갖는 화합물이다. 다른 실시양태에서, 안티센스 올리고뉴클레오티드는, 인간 HIF-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는, 5' aatgagccaccagtgtccaa 3'(서열 2)를 포함하는 서열을 갖는 화합물이다. 지질 나노입자 조성물은 또한 융합생성 펩티드를 포함할 수 있다. 실시양태에서, 지질 나노입자의 입자 크기는 약 300 nm 미만 또는 약 150 nm 미만이다.
표적화제는 직접 연결을 통해 또는 가교제를 통해 지질 나노입자의 외부 표면에만 오직 결합될 수 있다. 표적화제는 항체 또는 항체 단편일 수 있다. 표적화제는 또한 cRGD 펩티드, 갈락토스-함유 모이어티, 트랜스페린, 폴레이트, 저밀도 지단백질 및 표피 성장 인자일 수 있다. 예시적인 실시양태에서, 표적화제는 cRGDfC 또는 폴레이트이다. 표적화제는 접합체, 예컨대 폴레이트-PEG-CHEMS (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-콜레스테릴 헤미숙시네이트), 폴레이트-PEG-DSPE (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민) 또는 cRGDfC-PEG-DSPE (시클로(RGDfC)-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민)일 수 있다.
실시양태에서, 본 발명은 상기 기술된 지질 나노입자 조성물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물이다. 제약 조성물은 멸균 용액 또는 현탁액으로서 제조될 수 있다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 HSA-PEHA 접합체를 합성하는 단계; 지질 혼합물을 제조하는 단계; 지질 혼합물을 HSA-PEHA 접합체에 첨가하는 단계; 및 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)를 지질 및 HSA-PEHA 접합체의 혼합물에 첨가하여 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN) 전구체를 수득하는 단계를 포함하며, 여기서 ASO는 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 ASO; 또는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, LCAN을 제조하는 방법이다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 HSA-PEHA 접합체를 합성하는 단계; 지질 혼합물을 제조하는 단계; 및 표적화제 및 지질 혼합물을 HSA-PEHA 접합체에 첨가하는 단계를 포함하는, 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN)를 제조하는 방법이다. 표적화제는 상기 기술된 표적화제 중 임의의 것일 수 있다. 실시양태에서, 지질 혼합물은 포함하고, 표적화제는 DOTAP, 대두PC, TPGS 및 cRGDfC-PEG-DSPE를 포함하며, 예를 들어 DOTAP:대두PC:TPGS:cRGD-PEG-DSPE의 몰비는 약 25:70:4:1이다. 다른 실시양태에서, 지질 혼합물은 DOTAP, SPC 및 TPGS를, 예를 들어 약 25:70:5의 몰비로 포함한다.
본 발명은 또한 암 또는 감염성 질환의 진단 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 본원에 기술된 제약 조성물을 투여함으로써 암 또는 감염성 질환을 진단 또는 치료하는 방법이다. 치료되는 암은, 예를 들어 뇌암, 방광암, 폐암, 유방암, 흑색종, 피부암, 표피 암종, 결장 및 직장암, 비-호지킨 림프종, 자궁내막암, 췌장암, 신장암 (신세포암), 전립선암, 백혈병, 갑상선암, 두경부암, 난소암, 간세포성암, 자궁경부암, 육종, 위암, 다발성 골수종, 림프종, 위장암 및 자궁암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 유방암, 표피 암종 또는 췌장암이다.
추가의 목적 및 이점 뿐만 아니라, 바람직한 실시양태의 구조 및 기능은 하기 상세한 설명, 도면, 및 비제한적인 실시예의 고찰로부터 자명해질 것이다.
도 1은 L-RX-0047 및 cRGD-L-RX-0047로 처리하였을 때, MDA-MB-435 세포에서의 HIF-1α mRNA 하향조절을 도시한 것이다.
도 2는 유리 RX-0047, L-RX-0047 및 LCAN-RX-0047로 처리하였을 때, KB 세포에서의 HIF-1α mRNA 발현을 도시한 것이다.
도 3은 LCAN-RX-0201로 처리하였을 때, KB 세포에서의 Akt-1 mRNA 하향조절을 도시한 것이다.
도 4는 LCAN-RX-0201로 처리하였을 때, Panc-1 세포에서의 Akt-1 mRNA 하향조절을 도시한 것이다.
도 5는 KB 이종이식 종양 모델에서의 생체내 종양 억제를 도시한 것이다. 마우스 (1군당 마우스 5마리)에 3 mg/kg의 PBS, 유리 RX-0047, L-RX-0047 또는 LCAN-RX-0047을 매 3일마다 4회에 걸쳐 (Q3Dx4) 정맥내로 주사하였다. 매 3-4일마다 캘리퍼를 이용하여 측정함으로써 종양 크기를 측정하였다.
도 6은 KB 이종이식 종양 모델에서의 생체내 HIF-1α mRNA 발현을 도시한 것이다. 마우스 (1군당 마우스 5마리)에 3 mg/kg의 PBS, 유리 RX-0047, L-RX-0047 또는 LCAN-RX-0047을 매 3일마다 4회에 걸쳐 (Q3Dx4) 정맥내로 주사하였다. 실시간 RT-PCR에 의해 HIF-1α mRNA의 종양내 발현을 측정하였다.
도 7은 KB 이종이식 종양 모델에서의 LCAN-RX-0047로 처리했을 때의 동물 생존을 도시한 것이다. 마우스 (1군당 마우스 10마리)에 3 mg/kg의 PBS, 유리 RX-0047 또는 LCAN-RX-0047을 매 3일마다 4회에 걸쳐 (Q3Dx4) 정맥내로 주사하였다.
본원에서는 지질 나노입자와 관련하여 다양한 실시양태를 기술한다. 당업자는 실시양태에 관한 하기의 상세한 설명은 단지 예시적인 것이며, 어느 방식으로든 제한하고자 하지 않음을 이해할 것이다. 본 개시내용의 이점을 갖는 다른 실시양태 그 자체도 쉽게 당업자에게 제안될 것이다. 본원에서 "실시양태," "측면," 또는 "예"라고 언급되는 것은 그렇게 기술된 본 발명의 실시양태가 특정의 특성, 구조, 특징을 포함할 수 있지만, 모든 실시양태가 반드시 상기와 같은 특정의 특성, 구조, 특징을 포함하여야 할 필요는 없음을 나타낸다. 추가로, "한 실시양태에서"라는 어구를 반복 사용하는 것은, 비록 동일의 실시양태를 지칭하는 것일 수도 있지만, 반드시 그러할 필요는 없다.
명확하게 하기 위해, 본원에 기술된 실행 또는 공정의 통상의 특징들 모두가 제시되고 기술된 것은 아니다. 물론, 임의의 상기와 같은 실제 실행을 개발하는 데 있어서, 예컨대 적용, 요법 및 대상체 관련 제약을 따르는 것과 같은 다수의 실행-구체적인 결정이 이루어진다는 것, 및 이러한 구체적인 목적은 실행시마다 및 사용자마다 달라지게 된다는 것을 이해할 것이다. 또한, 그러한 개발 노력은 복잡하고, 많은 시간이 소요될 수 있지만, 그럼에도 불구하고, 본 개시내용의 이점을 가진 당업자에게는 통상의 작업이 될 것이라는 것을 이해할 것이다.
본원에서는 형질감염 활성이 개선된 지질 나노입자 (LN)를 제공한다. 지질 나노입자는 소수성 분자를 지질 막 내에 분배할 수 있고/거나, 수용성 입자를 수성 코어 내에 캡슐화시킬 수 있다. LN 제제는, 일반적으로 하전된 지질 및 중성 지질을 포함하는, 및 임의로 PEG화 지질 및/또는 콜레스테롤을 포함하는, 단일 지질 또는 지질 혼합물을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 LN 제제는 알부민-중합체 접합체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 지질 나노입자는 과양이온화된 알부민-다가양이온 접합체 (APC)를 포함한다. LN의 직경은 300 nm 미만일 수 있거나, 전형적으로 약 50 nm 내지 약 200 nm일 수 있다. 본 발명에 따른 LN은 특히, 전신 투여 동안에 발견되는 고혈청 조건하에서 예컨대, 형질감염 증진 및 세포독성 감소와 같은 하나 이상의 이점을 보일 수 있다. LN은 매우 다양한 현 치료제 및 시스템에 적용될 수 있고, 혈청 안정성, 표적화된 전달, 및/또는 높은 형질감염 효율을 보일 수 있다.
본원에서 사용되는 "지질 나노입자"라는 용어는 하나 이상의 지질 성분에 의해 형성된 임의의 소포체를 의미한다. 본원에 기술된 LN 제제는 양이온성 지질을 포함할 수 있다. 양이온성 지질은 임의의 생리학적 pH에서 순 양전하를 운반하는 지질이다. 양전하는 정전기적 상호작용을 통해 음으로 하전된 치료제, 예컨대 ASO와의 회합을 위해 사용된다. 적합한 양이온성 지질로는 3β-[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)-카르바모일]콜레스테롤 히드로클로라이드 (DC-Chol); 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판 (DOTAP); 1,2-디올레오일-3-디메틸암모늄-프로판 (DODAP); 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드 염 (DDAB); 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-에틸포스포콜린 클로라이드 (DL-EPC); N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-N-N-N-트리메틸 암모늄 클로라이드 (DOTMA); N-[1-(2,3-디올레일옥시)프로필]-N-N-N-디메틸 암모늄 클로라이드 (DODMA); 1,2-디라우로일-sn-글리세로-3-에틸포스포콜린 클로라이드 (DOTMA); N,N-디옥타데실-N,N-디메틸암모늄 클로라이드 (DODAC); N-(1-(2,3-디올레일옥시)프로필)-N-2-(스페르민카르복스아미도)에틸)-N,N-디메틸 암모늄 트리플루오르아세테이트 (DOSPA); 1,2-디미리스틸옥시프로필-3-디메틸히드록시에틸 암모늄 브로마이드 (DMRIE); 디옥타데실아미도글리실스페르민 (DOGS); 양이온성 개질기에 접합된 중성 지질; 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 추가로, 예컨대 리포펙틴(LIPOFECTIN) (깁코(GIBCO)/BRL로부터 입수), 리포펙타민(LIPOFECTAMINE) (깁코/MRL로부터 입수), siPORT NEOFX (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems)로부터 입수), 트랜스펙탐(TRANSFECTAM) (프로메가(Promega)로부터 입수), 및 트랜스펙틴(TRANSFECTIN) (바이오-래드 래보러토리즈, 인코퍼레이티드(Bio-Rad Laboratories, Inc.)로부터 입수)과 같이, 상업적으로 이용가능한 제제에서 다수의 양이온성 지질이 사용될 수 있다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 양이온성 지질 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 다수의 더 많은 양이온성 지질이 본 발명의 LN 제제에 포함되는 데 적합하다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 본 개시내용의 양이온성 지질은 제제 중 지질의 약 0 내지 약 60.0 몰 퍼센트, 또는 제제 중 지질의 약 5.0 내지 약 50.0 몰 퍼센트 범위의 농도로 존재할 수 있다. 본원에서 사용되는 "제제"란, 지질 나노입자 및 핵산을 함유하는, 본원에서 확인된 양이온화된 알부민-중합체 접합체를 포함하는 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN)를 의미한다. 제제는 또한 존재할 경우, 표적화제도 포함한다.
본 개시된 LN 제제는 음이온성 지질을 포함할 수 있다. 음이온성 지질은 생리학적 pH에서 순 음전하를 운반하는 지질이다. 상기 지질은 양이온성 지질과 함께 결합하였을 때, LN의 전체 표면 전하를 감소시켜 LN 이중층 구조의 pH 의존성 파괴를 도입함으로써 산 pH에서 비라멜라 상을 유도하여 뉴클레오티드 방출을 촉진시키거나, 세포막과의 융합을 유도하는 데 사용된다. 적합한 음이온성 지질의 예로는 지방산, 예컨대 올레산, 리놀레산, 및 리놀렌산; 콜레스테릴 헤미숙시네이트 (CHEMS); 1,2-디-O-테트라데실-sn-글리세로-3-포스포-(1'-rac-글리세롤) (디에테르 PG); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포-(1'-rac-글리세롤) (나트륨 염); 1,2-디미리스토일-sn-글리세로-3-포스포-L-세린 (나트륨 염); 1-헥사데카노일,2-(9Z,12Z)-옥타데카디에노일-sn-글리세로-3-포스페이트; 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-[포스포-rac-(1-글리세롤)] (DOPG); 디올레오일포스파티드산 (DOPA); 및 1,2-디올레오일-sn-글리세로-3-포스포-L-세린 (DOPS); 음이온성 개질기가 접합된 중성 지질; 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 음이온성 지질 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 본 개시내용의 음이온성 지질은 제제의 약 0 내지 약 60.0 몰 퍼센트, 또는 제제의 약 5.0 내지 약 25.0 몰 퍼센트의 농도로 존재한다.
하전된 LN이 형질감염에 유리하지만, 탈-표적 효과, 예컨대 세포독성 및 RES-매개 흡수가 발생할 수 있다. 세포독성 및/또는 RES-매개 흡수를 약화시키기 위해, 친수성 분자, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)이 지질 앵커에 접합될 수 있고, 본원에 기술된 LN에 포함됨으로써 LN 응집 또는 막과의 상호작용을 방해할 수 있다. 친수성 중합체는 지질 성분에 공유적으로 결합될 수 있거나, 가교제를 사용하여 관능기, 예컨대 아민에 접합될 수 있다. 접합에 적합한 친수성 중합체 및 친수성 중합체 접합체로는 폴리비닐 알콜 (PVA); 폴리소르베이트 80; 1,2-디스테아로일-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민-N-PEG2000 (DSPE-PEG2000); D-알파-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트 (TPGS); 디미리스토일포스파티딜에탄올아민-PEG2000 (DMPE-PEG2000); 및 디팔미토일포스파티딜에탄올아민-PEG2000 (DPPE-PEG2000)을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 친수성 중합체 및 접합체 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 친수성 중합체는 제제의 약 0 내지 약 15.0 몰 퍼센트, 또는 제제의 약 5.0 내지 약 10.0 몰 퍼센트 범위의 농도로 존재할 수 있다. 사용되는 친수성 중합체, 예컨대 PEG의 분자량은 약 100 내지 약 10,000 Da, 약 100 내지 약 5,000 Da 또는 약 100 내지 약 2,000 Da일 수 있다.
본원에 기술된 LN은 헬퍼 지질로서 중성 및/또는 양친매성 지질을 추가로 포함할 수 있다. 상기 지질은 제제를 안정화시키거나, 생체내 제거를 감소시키거나, 또는 형질감염 효율을 증가시키기 위해 사용된다. LN은 분산 안정성(lyostability) 및 저온 안전성(cryostability)을 촉진시키기 위해 사카라이드, 예컨대 제한하는 것은 아니지만, 글루코스, 소르비톨, 수크로스, 말토스, 트레할로스, 락토스, 셀루비오스, 라피노스, 말토트리오스, 덱스트란 또는 이들의 조합의 용액으로 제제화될 수 있다.
중성 지질의 생리학적 pH에서의 순 전하는 0이다. 수개의 중성 지질 중 하나 또는 그의 조합이 본원에 개시된 임의의 LN 제제 중에 포함될 수 있다. 적합한 중성 지질로는 포스파티딜콜린 (PC), 포스파티딜에탄올아민, 세라미드, 세레브로시드, 프로스타글란딘, 스핑고미엘린, 세팔린, 콜레스테롤, 디아실글리세롤, 글리코실화 디아실글리세롤, 프레놀, 리소솜성 PLA2 기질, N-아실글리신 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
다른 적합한 지질로는 포스파티딜콜린, 포스파티드산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜콜린, 및 리소포스파티딜에탄올아민; 스테롤, 예컨대 콜레스테롤, 데모스테롤, 시토스테롤, 지모스테롤, 디오스게닌, 라노스테롤, 스티그마스테롤, 라토스테롤, 및 데히드로에피안드로스테론; 및 스핑고지질, 예컨대 스핑고신, 세라미드, 스핑고미엘린, 강글리오시드, 글리코스핑고지질, 포스포스핑고지질, 피토스핑고신; 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본원에 기술된 LN 제제는 막 융합을 촉진시키기 위해 융합생성 지질 또는 융합생성 코팅제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 융합생성 지질의 예로는 글리세릴 모노-올레이트, 올레산, 팔미톨레산, 포스파티드산, 포스포이노시톨 4,5-비스포스페이트 (PIP2) 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 융합생성 지질 또한 본 발명에 사용될 수 있다.
본원에 기술된 LN 제제는 양이온 중합체 또는 양이온 중합체의 접합체를 추가로 포함할 수 있다. 양이온 중합체 또는 그의 접합체는 단독으로, 또는 지질 나노담체와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 적합한 양이온 중합체로는 폴리에틸렌이민 (PEI); 펜타에틸렌헥사민 (PEHA); 스페르민; 스페르미딘; 폴리(L-리신); 폴리(아미도 아민) (PAMAM) 덴드리머; 폴리프로필렌이민 덴드리머; 폴리(2-디메틸아미노 에틸)-메타크릴레이트 (pDMAEMA); 키토산; 트리스(2-아미노에틸)아민 및 그의 메틸화된 유도체; 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 양이온 중합체 또는 접합체 또한 본 발명에 사용될 수 있다. 중합체 전달 시스템의 실행을 위해 쇄 길이 및 분지화가 고려된다. 고분자량 중합체, 예컨대 분자량이 약 25,000인 PEI가 형질감염제로서 사용되지만, 세포독성에 관한 문제가 발생할 수 있다. 저분자량 중합체, 예컨대 분자량이 약 600인 PEI는 세포독성을 유발하지 않을 수 있지만, 핵산과의 안정적인 축합을 촉진시킬 수 있는 능력이 없기 때문에 제한적으로 사용될 수 있다. 따라서, 저분자량 중합체를 보다 큰 입자, 예컨대 알부민에 접합시키는 것이 제제 중의 세포독성은 저하시키면서, 핵산 축합 활성을 증가시키는 유용한 방법이다.
음이온 중합체 또한 본 개시된 LN 제제 내로 혼입될 수 있다. 적합한 음이온 중합체로는 폴리(프로필아크릴산) (PPAA); 폴리(글루탐산) (PGA); 알기네이트; 덱스트란; 크산탄; 유도체화된 중합체; 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 당업계에 공지되어 있거나, 또는 후속하여 개발되는 다른 음이온 중합체 또한 본 발명에 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, LN 제제는 중합체의 접합체를 포함한다. 접합체는 표적화제, 친지성 모이어티, 펩티드, 단백질, 또는 전반적인 치료 효능을 증가시키는 다른 분자에 가교될 수 있다. 적합한 가교제로는 N-숙신이미딜 3-[2-피리딜디티오]-프로피오네이트 (SPDP); 디메틸 3,3'-디티오비스프로피온이미데이트 (DTBP); 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC); 디이소프로필 카르보디이미드 (DIC); 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 (EDC); N-히드록시술포숙신이미드 (술포-NHS); N'-N'-카르보닐디이미다졸 (CDI); N-에틸-5-페닐이속사졸리움-3' 술포네이트 (우드워드(Woodward) 시약 K); 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
당업계에 공지된 방법을 비롯한, 다양한 LN 제조 방법이 본 개시내용의 LN을 합성하는 데 적합할 수 있다. 예를 들어, 에탄올 희석, 냉동-해동, 박막 수화, 초음파처리, 압출, 고압 균질화, 계면활성제 투석, 마이크로유동화, 접선 유동 정용여과, 멸균 여과, 및/또는 동결건조가 사용될 수 있다. 추가로, LN의 크기를 축소시키는 데 수개의 방법들이 사용될 수 있다. 예를 들어, 지질 균질화에 적합한 임의의 장치, 예컨대 아베스틴 에멀시플렉스 C5(Avestin Emulsiflex C5)에서 균질화를 수행할 수 있다. 균질화 연장을 위해 균질화된 LN을 순환으로 다시 재순환시킬 수 있다. 적절한 세공 크기 (0.05 내지 0.2 ㎛)를 갖는 폴리카르보네이트 막을 사용하여 리펙스 바이오멤브레인(Lipex Biomembrane) 압출기 상에서 압출을 수행할 수 있다. 샘플내 크기 격차를 최소화하고, 원하는 크기를 달성하기 위해 다중의 입자 크기 축소 사이클을 수행할 수 있다. 이어서, 생성된 LN을 세파로스(Sepharose) CL4B를 통과시켜 과량의 시약을 제거하거나, 또는 접선 유동 정용여과에 의해 프로세싱할 수 있다.
본원에 기술된 LN의 임의의 실시양태는 LN 현탁액 중 에탄올을 추가로 포함할 수 있다. LN 제제 중 약 10-40% 에탄올을 혼입하게 되면, 지질 이중층을 투과할 수 있게 된다. 지질 이중층 파괴가 하전된 모이어티, 예컨대 ASO 및 siRNA와의 축합에 도움이 된다. 에탄올 존재에 기인하여 세포 막 용해 효과를 감소시키기 위해, 상기와 같은 방식으로 제조된 LN을 투여 이전에 희석시킨다. 대안적으로, 에탄올은 투석 및 정용여과에 의해 제거될 수 있고, 이를 통해서는 비-캡슐화된 핵산 또한 제거된다.
LN을 멸균시킬 수 있다. 이는 예를 들어, LN를 사전 여과 후, 또는 사전 여과 없이 0.2 또는 0.22 ㎛ 멸균 필터를 통과시킴으로써 달성될 수 있다.
다수의 방법을 통해 LN의 물리적 특징이 규명될 수 있다. 동적 광산란 (DLS) 또는 원자력 현미경검사 (AFM)를 사용하여 평균 직경 및 그의 표준 편차를 측정할 수 있다. 이상적으로는, LN의 직경은 200 nm 미만이어야 한다. 제타 전위차계를 통해 제타 전위를 측정하는 것이 입자의 상대적인 안정성을 측정하는 데 유용하다. 동적 광산란 분석 및 제타 전위 분석 둘 모두 탈이온수 또는 적절한 완충제 용액 중에 희석된 샘플을 이용하여 수행될 수 있다. 극저온 투과 전자 현미경검사 (Cryo-TEM) 및 주사 전자 현미경검사 (SEM)를 사용하여 LN의 세부 형태를 측정할 수 있다.
본원에 기술된 LN은 냉동 보관하에서 수개월 동안 안정하다. 합성에서부터 투여 시점까지 장시간이 소요되는 LN은 표준 방법을 사용하여 동결건조될 수 있다. 제제의 완전성을 유지시키기 위해 동결시키기 전에, 동결보호제, 예컨대 10% 수크로스를 LN 현탁액에 첨가할 수 있다. 장기간의 안정성을 위해 동결건조 로딩된 LN 제제가 권고된다.
APC
양이온성 지질 이외에도, 양이온 중합체가 핵산 전달 시스템에 유용하다. 양이온 중합체를 형질감염제로서 단독으로, 및 LN과 함께 사용하는 것이 흔히 형질감염 효율에 도움을 준다. 특징이 가장 잘 규명되어 있는 중합체 형질감염제는 본원에서 PEI25K로 지칭되는, 분자량이 약 25 kDa인 큰 중합체인 고분자량 폴리에틸렌이민이다. PEI25는 pDNA를 세포로 전달하는 데 큰 성공을 거두어왔다; 그러나, 세포독성으로 인해 그의 사용은 제한되었다. 독성이 더 적은, 분자량이 약 600 kDa인 저분자량의 PEI 또한 연구되었지만, 핵산을 축합시키고, 그를 전달할 수 있는 능력이 감소된 것으로 나타났다. 이에 따라, 본원에서는 과양이온화된 알부민-중합체 접합체 (APC)를 제공한다. APC는 작용제, 예컨대 pDNA를 전달하는 데 단독으로 사용될 수 있거나, 또는 작용제, 예컨대 siRNA 또는 ASO를 전달하는 지질 기반 제제와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 알부민은 또한, 입체형태적 변화시 노출될 수 있고, 이중층 파괴 또는 막 융합을 유도할 수 있는 그의 소수성 코어에 기인하여 엔도솜 용해 활성도 가진다. 알부민-PEI600 접합체는 pH 변화에 대하여 반응성인 이온화 프로파일을 가진다. 전하 밀도는 엔도솜 pH에서 증가된다.
한 실시양태에서, APC는 양이온성 지질 조합물과 함께 조합되어 양이온성 지질-APC-핵산 나노입자로 조립된다. 또 다른 실시양태에서, APC는 음이온성 지질 조합물과 함께 조합되어 지질-APC-핵산 나노입자로 조립된다. 특정 실시양태에서, 지질 나노입자는 과양이온화된 알부민-다가양이온 접합체를 포함한다. 이러한 지질 나노입자는 추가의 세포독성 없이 높은 형질감염 효율을 가진다. 또 다른 실시양태에서, 저분자량 펜타에틸렌헥사민 (PEHA)이 가교제를 통해 인간 혈청 알부민에 접합체됨으로써 본원에서 HSA-PEHA로도 지칭되는 과양이온화된 pH-반응성 APC가 생성된다. HSA-PEHA의 경우, HSA에 대한 PEHA의 비는 1 내지 30, 바람직하게 5-20, 더욱더 바람직하게 8-15, 더욱더 바람직하게 10-12이다. 나노입자 내로 혼입될 때, 지질 나노입자 및 혼입된 과양이온화된 pH-반응성 접합체, 예컨대 HSA-PEHA를 포함하는 생성된 제제는 본원에서 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN)로 지칭된다. 예시적인 LCAN은 DOTAP/sPC/TPGS/HSA-PEHA로 구성된, 지질 코팅된 알부민 나노입자이다.
LCAN는 특히 NA, 예컨대 안티센스 올리고뉴클레오티드, pDNA, siRNA, shRNA, miR 및 항-miR을 전달하는 데 유용하다. 이론으로 제한하고자 하지 않으면서, HSA-PEHA가 나노입자의 안정성 및 생물학적 활성을 개선시키는 것으로 여겨진다. 특정 실시양태에서, 상기 제제 중 지질은 DOTAP, SPC 및 TPGS이다. 일부 실시양태에서, DOTAP:SPC:TPGS의 비는 약 25:70:5 (m/m)이다. 예시적인 실시양태에서, HSA-PEHA에 대한 전체 지질의 중량비는 20 내지 1, 예를 들어 15 내지 2, 또는 12.5 내지 2.5이다.
표적화제
표적화제를 LN에 첨가하면, 수동적 표적화 접근법에 비하여 효능은 증가될 수 있다. 표적화는 특이 표적화 모이어티, 예컨대 제한하는 것은 아니지만, 리간드 또는 항체, 세포 표면 수용체, 펩티드, 지단백질, 당단백질, 호르몬, 비타민, 항체, 항체 단편, 전구약물, 및 접합체 또는 상기 모이어티의 조합을 혼입시키는 것을 포함한다. 표적화제의 일부 비제한적인 예로는 폴레이트, cRGD (예컨대, 시클로(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys) (RGDfC)) 펩티드, 갈락토스-함유 모이어티, 트랜스페린, EPPT1 펩티드, 저밀도 지단백질, 표피 성장 인자 및 항체를 포함한다. cRGD는 cRGD 펩티드의 임의의 유도체 또는 관련된 cRGD 펩티드, 예를 들어 cRGDfC, cRGDfK, cRGDfE 등을 지칭할 수 있다. 예시적인 실시양태에서, cRGD 펩티드는 cRGDfC (시클로(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys))이다. 일부 실시양태에서, 표적화제를 캡슐화하기 보다는 LN을 적절한 표적화 모이어티로 표면 코팅시킴으로써 표적화 효율을 최대화시킬 수 있다. 상기 방법은 LN과 세포 표면 수용체 사이의 상호작용을 최적화시킬 수 있다. 표적화제는 합성 동안 LN 내로 직접 혼입될 수 있거나, 또는 후속 단계에서 첨가될 수 있다. 표적화 모이어티 상의 관능기 뿐만 아니라, 치료학적 적용시 세부 사항 (예컨대, 분해가능한 결합)이 LN 내로의 혼입에 적절한 수단을 결정하는 데 도움을 줄 수 있다. 친지성 영역이 없는 표적화 모이어티는 LN의 지질 이중층 내로 직접 쉽게 삽입되지 못하고, 삽입 이전에 지질에의 사전 접합을 필요로 할 수 있거나, 또는 LN과 정전기적 복합체를 형성할 수 있다. 특정 환경하에서, 표적화 리간드는 친지성 앵커에 직접 결합하지 못할 수도 있다. 이러한 경우에, 상호작용을 촉진시키기 위해 가교제 형태의 분자 브릿지가 사용될 수 있다. 가교제는, 부착된 표적화 모이어티의 입체 제한이 의도되는 생리학적 표적과의 충분한 상호작용을 방해하는 경우에 유용할 수 있다. 추가로, 표적화 모이어티가 오직 특정 배향하에서만 작용성인 경우 (예컨대, 모노클로날 항체), 가교제를 통한 지질 앵거에의 연결이 유익할 수 있다. 표적화제를 LN에 연결시키는 데 전통적인 생체접합(bioconjugation) 방법이 사용될 수 있다. 제제의 생체내 축적 및 후속되는 세포독성을 막기 위해 환원가능하거나 가수분해가능한 결합이 적용될 수 있다.
본 출원의 예시적인 실시양태에서, RGD (또는 cRGD) 또는 폴레이트 표적화제가 표적화 접합체, 예를 들어 폴레이트-PEG-CHEMS (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-콜레스테릴 헤미숙시네이트) 또는 폴레이트-PEG-DSPE (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민) 또는 cRGDfC-PEG-DSPE (시클로(RGDfC)-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민)로서 혼입된다. 일부 표적화 접합체에서, 접합체의 최소 5 몰%가 표적화제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 접합체는 약 50 몰% 이상, 약 80 몰% 이상, 약 90 몰% 이상, 또는 약 95 몰% 이상의 표적화제를 포함한다. 다른 실시양태에서, 접합체는 약 50 몰%, 약 80 몰%, 약 90 몰%, 또는 약 95 몰%의 표적화제를 포함한다. 예시적인 실시양태에서, 전체 지질 중 표적화 접합체의 몰 퍼센트는 약 0.05 내지 20 몰%, 예를 들어 약 0.5 내지 5 몰%이다.
치료제
매우 광범위한 치료제 또는 진단제가 본원에 기술된 LN에 함께 사용될 수 있다. 상기 치료제 및 진단제의 비제한적인 예로는 핵산, 단백질, 폴리사카라이드, 지질, 방사성 물질, 치료제, 전구약물 및 이들의 조합을 포함한다. 치료제로는 항신생물제, 항감염제, 국소 마취제, 항알레르기제, 항빈혈제, 항혈관신생제, 억제제, 베타-아드레날린성 차단제, 칼슘 채널 길항제, 항고혈압제, 항우울제, 항경련제, 항박테리아제, 항진균제, 항바이러스, 항류머티스제, 구충제, 항기생충제, 코르티코스테로이드제, 호르몬제, 호르몬 길항제, 면역조절제, 신경전달물질 길항제, 항당뇨병제, 항간질제, 항출혈제, 항고장제, 항녹내장제, 면역자극성 시토카인, 진정제, 케모카인, 비타민제, 독소, 마취제, 영상화제 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
핵산 기반 치료제는 본 개시내용의 LN 제제에 고도로 적용될 수 있다. 상기 핵산 기반 치료제의 예로는 pDNA, siRNA, miRNA, 항-miRNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO) 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 혈청 뉴클레아제로부터 보호하고, 치료제를 안정화시키기 위해서, 치환기 핵산 및/또는 포스포디에스테르 링커에 대해 변형일 이루어질 수 있다. 그러한 변형으로는 골격 변형 (예컨대, 포스포티오에이트 연결); 2' 변형 (예컨대, 2'-O-메틸 치환된 염기); 쯔비터이온 변형 (6'-아미노헥시 변형된 ODN); 친지성 모이어티 부가 (예컨대, 지방산, 콜레스테롤, 또는 콜레스테롤 유도체); 및 이들의 조합을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 예시적인 실시양태에서, 치료제는 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 ASO이다. 올리고뉴클레오티드 화합물은 Akt-1을 코딩하는 하나 이상의 핵산과 특이적으로 혼성화할 수 있도록 디자인된다. 상기 ASO는 미국 특허 7,122,527 (상기 특허는 그 전문이 본원에서 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. 한 예시적인 ASO로서, 20-mer 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오티드인 RX-0201 (알켁신®)은 Akt-1 유전자의 코딩 영역 중, Akt-1 유전자의 부위 1,478에 서열 5' cgccaaggagatcatgcagc 3' (서열 3)을 갖는 부위로 표적화된다. RX-0201의 골격에 대한 서열은 상기 부위에 상보적이다.
또 다른 ASO인 RX-0194는 Akt-1 유전자 상의, Akt-1 유전자의 부위 1,271에 서열 5' agtggactggtgggggctgg 3' (서열 4)를 갖는 부위로 표적화된다. RX-0194의 골격에 대한 서열은 상기 부위에 상보적이다. 20-mer의 RX-0194의 유래 기점이 된 서열로부터 상류 및 하류쪽 5 또는 10개의 뉴클레오티드를 포함하는 올리고머는 Akt-1 mRNA 발현의 측정가능한 억제를 보였다. RX-0194 및 RX-0201의 말단절단된 버전 또한 암 세포 증식의 억제를 보였다. 상기 두 ASO 이외에도, Akt-1 mRNA 발현을 하향조절하고 암 세포주에서 세포독성 효과를 유발하는 추가의 5개 안티센스 올리고뉴클레오티드 화합물은 하기를 포함한다:
서열 5' ctgtctgtcaccagctatct 3' (서열 6)을 가지며, Akt-1 유전자의 2101번 위치에서 시작되는 부위에 혼성화할 수 있는 5' agatagctggtgacagacag 3' (서열 5)을 포함하는 RX-0616;
서열 5' cctcagatgatctctccacg 3' (서열 8)을 가지며, Akt-1 유전자의 2473번 위치에서 시작되는 부위에 혼성화할 수 있는 5' cgtggagagatcatctgagg 3' (서열 7)을 포함하는 RX-0627;
서열 5' gtagcacttgaccttttcga 3' (서열 10)을 가지며, Akt-1 유전자의 2493번 위치에서 시작되는 부위에 혼성화할 수 있는 5' tcgaaaaggtcaagtgctac 3' (서열 9)을 포함하는 RX-0628;
서열 5' ctgccgctgccgctgcacca 3' (서열 12)를 가지며, Akt-1 유전자의 2603번 위치에서 시작되는 부위에 혼성화할 수 있는 5' tggtgcagcggcagcggcag 3' (서열 11)을 포함하는 RX-0632; 및
서열 5' gctaggcccgcgctcgcgcc 3' (서열 13)을 가지며, Akt-1 유전자의 170번 위치에서 시작되는 부위에 혼성화할 수 있는 5' ggcgcgagcgcgggcctagc 3' (서열 2)을 포함하는 RX-0638.
다른 실시양태에서, 치료제는 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO이다. 올리고뉴클레오티드 화합물은 HIF-1을 코딩하는 하나 이상의 핵산과 특이적으로 혼성화할 수 있도록 디자인된다. 상기 ASO는 미국 특허 7,205,283 (상기 특허는 그 전문이 본원에서 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. 한 예시적인 ASO로서, 5' aatgagccaccagtgtccaa 3' (서열 2)를 포함하는 20-mer 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오티드인 RX-0047은 "저산소증 유도 인자-1 알파" (HIF-1α)의 강력한 억제제이고, HIF-1 유전자 상의, HIF-1 유전자의 부위 2,772에 서열 5' ttggacactggtggctcatt 3' (서열 14)를 갖는 부위로 표적화된다. RX-0047의 골격에 대한 서열은 상기 부위에 상보적이다. 본 실시양태에 따른 또 다른 예시적인 ASO인, 5' ggagctaacatctccaagtc 3' (서열 15)를 포함하는 RX-0149는 HIF-1 유전자의 코딩 영역 중, HIF-1 유전자의 부위 1,936에 서열 5' gacttggagatgttagctcc 3' (서열 16)을 갖는 부위로 표적화된다. RX-0149의 골격에 대한 서열은 상기 부위에 상보적이다. 20-mer의 RX-0047 및 RX-0149의 유래 기점이 된 서열로부터 상류 및 하류쪽 5 또는 10개의 뉴클레오티드를 포함하는 올리고머는 HIF-1 mRNA 발현의 측정가능한 억제 및 암 세포 증식의 억제를 보였다. HIF-1 mRNA 발현의 일부 억제를 나타낸, RX-0047 및 RX-0149의 말단절단된 버전은 또한 암 세포 증식의 억제를 보였다.
본 발명은 올리고뉴클레오티드 모방체를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 다른 올리고머 안티센스 화합물을 포함한다. 안티센스 화합물은 약 10 내지 약 30개의 뉴클레오염기, 예를 들어 약 20개의 뉴클레오염기를 갖는 올리고뉴클레오티드 (즉, 약 20개의 연결된 뉴클레오시드)를 포함할 수 있다. 당업계에 공지되어 있는 바와 같이, 뉴클레오시드는 염기-당 조합물이다. 뉴클레오시드의 염기 부위는 보통 헤테로시클릭 염기이다. 상기 헤테로시클릭 염기의 가장 일반적인 부류는 퓨린 및 피리미딘이다. 뉴클레오티드는 뉴클레오시드의 당 부위에 공유적으로 연결된 포스페이트 기를 추가로 포함하는 뉴클레오시드이다. 펜토푸라노실 당을 포함하는 상기와 같은 뉴클레오시드의 경우, 포스페이트 기는 당의 2,' 3' 또는 5' 히드록실 모이어티 중 하나에 연결될 수 있다. 올리고뉴클레오티드를 형성할 때, 포스페이트는 인접한 뉴클레오시드와 서로 공유적으로 연결함으로써 선형 중합체 화합물을 형성한다. 최종적으로, 상기 선형 중합체 구조의 각각의 말단부가 추가로 연결됨으로써 고리형 구조를 형성할 수 있지만, 일반적으로 개방형 선형 구조가 바람직하다. 올리고뉴클레오티드 구조 내에서, 포스페이트 기는 보통 올리고뉴클레오티드의 뉴클레오시드간 골격을 형성하는 것으로 언급된다. RNA 및 DNA의 일반의 결합 또는 골격은 3'→ 5' 포스포디에스테르 연결이다.
본 발명의 안티센스 화합물은 임의의 제약상 허용되는 염, 에스테르, 또는 상기 에스테르의 염, 또는 인간을 비롯한 동물에게 투여되었을 때 생물학상 활성인 대사산물 또는 그의 잔류물을 (직접 또는 간접적으로) 제공할 수 있는 임의의 다른 화합물을 포함한다. 따라서, 예를 들어 본 개시내용은 본 발명의 화합물의 전구약물 및 제약상 허용되는 염, 상기 전구약물의 제약상 허용되는 염, 및 다른 생물학적 등가물까지 관심의 대상이 된다.
적용
적용에 따라, 본원에 개시된 지질 나노입자는 특징, 예컨대 핵산과의 상호작용 증가, 혈정 안정성 증가, RES-매개 흡수 저하, 표적화된 전달, 또는 엔도솜 내에서의 pH 감수성 방출에 유리하도록 디자인될 수 있다. LN 제제의 성질은 다양하기 때문에, 본원에서 제공된 수개의 방법들 중 어느 한 방법이 특정의 치료학적 목적을 달성하는 데 적용될 수 있다. 양이온성 지질, 음이온성 지질, PEG-지질, 중성 지질, 융합생성 지질, 양이온 중합체, 음이온 중합체, 중합체 접합체, 펩티드, 표적화 모이어티 및 이들의 조합이 구체적인 목적을 달성하는 데 적용될 수 있다.
본원에 기술된 지질 나노입자는 올리고뉴클레오티드 (ON) 치료제, 예컨대 cDNA, siRNA, shRNA, miRNA, 항-miR 및 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)의 치료학적 전달을 위한 플랫폼으로서 사용될 수 있다. 상기 치료제는 매우 다양한 질환, 예컨대 각종 유형의 암, 백혈병, 바이러스 감염 및 다른 질환을 관리하는 데 사용될 수 있다. 본 발명에 따라 치료가능한 특정 질환은 물론 본 발명의 LN 내로 혼입되는 치료제에 따라 달라진다. 본 발명은 특히 핵산, 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오티드, 핵산을 캡슐화하는 데 적합하고, 특히, 안티센스 뉴클레오티드는 본질적으로 종양 및 암을 치료하는 데 유용하다. 본 발명에 따라 치료가능한 종양 및 암의 예로는 예를 들어 뇌암, 방광암, 폐암, 유방암, 흑색종, 피부암, 표피 암종, 결장 및 직장암, 비-호지킨 림프종, 자궁내막암, 췌장암, 신장암 (신세포암), 전립선암, 백혈병, 갑상선암, 두경부암, 난소암, 간세포성암, 자궁경부암, 육종, 위암, 다발성 골수종, 림프종, 위장암 및 자궁암을 포함한다. 구체적인 예로는 표피 암종, 췌장암 및 유방암을 포함한다.
다수의 종양은 그의 세포 표면 상에 수용체를 과다발현한다. 표적화 모이어티, 예컨대 cRGD 펩티드, 폴레이트, 트랜스페린 (Tf), 항체 저밀도 지단백질 (LDL) 및 표피 성장 인자는 표적화된 약물 전달을 가능하게 함으로써 활성을 크게 증진시킬 수 있다. 다중-표적화된 시스템은 또 다른 가능성을 지니며, 이는 특정 표적 세포 하위유형을 추가로 지정하는 데 적용될 수 있다.
본원에 기술된 LN 제제의 실시양태를 단독으로 또는 서로 조합하여 실행하는 것은 지질 나노입자 디자인의 현 패러다임과 상승작용을 한다.
치료학적 적용에 따라, 본원에 기술된 LN은 하기 방법: 경구, 비경구, 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 경피, 종양내, 동맥내, 전신, 또는 대류 증강식 전달에 의해 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, LN은 정맥내로, 근육내로, 피하로, 또는 종양내로 전달된다. 상이한 또는 유사한 LN을 이용하여 순차적으로 투여하는 경우, 대체 투여 경로를 사용하여 투여할 수 있다.
본 개시내용의 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체 중에 용해되어 있거나 분산되어 있는, 유효량의 본원에 개시된 지질 나노입자 제제 및/또는 추가의 작용제를 포함한다. "제약" 또는 "약리학상 허용되는"이라는 어구는 분자 엔티티 및 조성물이 동물, 예컨대 인간에게 투여되었을 때, 어떤 부작용도, 알레르기 반응도 또는 다른 유해반응도 유발하지 않는다는 것을 의미한다. 1종 이상의 화합물 또는 추가의 활성 성분을 함유하는 제약 조성물 제제는 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 2003] (상기 문헌은 본원에 참조로 포함됨)에 예시되어 있는 바와 같이, 본 개시내용에 비추어 당업자에게 공지될 것이다. 또한, 동물 (예컨대, 인간) 투여를 위해서는, 제제는 FDA 사무국의 생물 표준(FDA Office of Biological Standards)에 의해 요구되는 바와 같이, 멸균성, 발열원성, 일반 안전성 및 순도 표준을 충족시켜야 한다.
본원에 개시된 조성물은, 본 조성물이 고체, 액체 또는 에어로졸 형태로 투여되는지 여부, 및 주사액과 같이 상기 투여 경로를 위해 멸균되어야 하는지 여부에 따라 상이한 유형의 담체를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 조성물은 당업자에게 공지되어 있는 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 2003] (상기 문헌은 본원에 참조로 포함됨) 참조), 정맥내로, 진피내로, 경피로, 경막내로, 동맥내로, 복강내로, 비내로, 질내로, 직장내로, 국소적으로, 근육내로, 피하로, 점막으로, 자궁내로, 경구로, 국소적으로, 국부적으로, 흡입을 통해 (예컨대, 에어로졸 흡입을 통해), 주사에 의해, 주입에 의해, 연속 주입에 의해, 표적 세포를 직접적으로 국소적 관류욕시킴으로써(localized perfusion bathing target cell directly), 카테터를 통해, 세척을 통해, 크림으로, 지질 조성물 (예컨대, 리포솜)로, 또는 다른 방법에 의해, 또는 상기 방법들 중 임의의 조합에 의해 투여될 수 있다.
동물 또는 인간 환자에게 투여되는 본원에 개시된 조성물의 실제 투여량은 신체적 및 생리학적 인자, 예컨대 체중, 병증 중증도, 치료되는 질환의 유형, 기존 또는 현재 치료학적 개입, 환자의 특발성 질환 및 투여 경로에 따라 결정될 수 있다. 투여량 및 투여 경로에 의존하여, 바람직한 투여량 및/또는 유효량의 투여 횟수는 대상체의 반응에 따라 달라질 수 있다. 어느 경우에서든 투여를 담당하는 전문의가 개별 대상체에 적절한 용량(들) 및 조성물 중 활성 성분(들)의 농도를 결정하게 될 것이다.
특정 실시양태에서, 제약 조성물은 예를 들어, 약 0.1% 이상의 활성 화합물을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 활성 화합물은 약 2중량% 내지 약 75중량%, 또는 약 25중량% 내지 약 60중량%, 및 예를 들어, 상기 범위 내에서 추론가능한 임의의 범위로 포함할 수 있다. 물론, 각 치료학상 유용한 조성물 중 활성 화합물(들)의 양은 적합한 투여량이 화합물의 임의로 제공되는 단위 용량으로 수득될 수 있도록 하는 방식으로 제조될 수 있다. 제약 제제 제조 분야의 당업자에 의해 인자, 예컨대 가용성, 생체이용성, 생물학적 반감기, 투여 경로, 생성물 저장 수명 뿐만 아니라, 다른 약리학적 고려 사항이 고려될 것이며, 따라서, 다양한 투여량 및 치료 요법이 바람직할 수 있다.
다른 비제한적인 일례로, 용량은 또한 1회 투여당 약 1 ㎍/kg/체중, 약 5 ㎍/kg/체중, 약 10 ㎍/kg/체중, 약 50 ㎍/kg/체중, 약 100 ㎍/kg/체중, 약 200 ㎍/kg/체중, 약 350 ㎍/kg/체중, 약 500 ㎍/kg/체중, 약 1 mg/kg/체중, 약 5 mg/kg/체중, 약 10 mg/kg/체중, 약 50 mg/kg/체중, 약 100 mg/kg/체중, 약 200 mg/kg/체중, 약 350 mg/kg/체중, 약 500 mg/kg/체중 내지 약 1,000 mg/kg/체중 이상, 및 상기 범위 내에서 추론가능한 임의의 범위를 포함할 수 있다. 본원에 열거된 수치로부터 추론가능한 범위의 비제한적인 일례로, 상기 기술된 수치에 기초하여 약 5 mg/kg/체중 내지 약 100 mg/kg/체중, 약 5 ㎍/kg/체중 내지 약 500 mg/kg/체중 등의 범위로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원의 조성물 및/또는 추가의 작용제는 소화 경로를 통해 투여되도록 제제화된다. 소화 경로로는, 조성물이 소화관과 직접 접촉하게 되는 모든 가능한 투여 경로를 포함한다. 구체적으로, 본원에 개시된 제약 조성물은 경구로, 협측으로, 직장으로, 또는 설하로 투여될 수 있다. 따라서, 본 조성물은 불활성 희석제를 이용하여, 또는 동화가능한 식용 담체를 이용하여 제제화될 수 있다.
추가의 실시양태에서, 본원에 기술된 조성물은 비경구 경로를 통해 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 "비경구"라는 용어는 소화관을 우회하는 경로를 포함한다. 구체적으로, 본원에 개시된 조성물은 예를 들어, 제한하는 것은 아니지만, 정맥내로, 진피내로, 근육내로, 동맥내로, 경막내로, 피하로, 또는 복강내로 투여될 수 있다 (미국 특허 6,753,514, 6,613,308, 5,466,468, 5,543,158; 5,641,515; 및 5,399,363 (상기 특허들은 각각 구체적으로 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)).
유리 염기로서 또는 약리학상 허용되는 염으로서 본원에 개시된 조성물의 용액이, 적합하게는 계면활성제, 예컨대 히드록시프로필셀룰로스와 함께 혼합된 물 중에서 제조될 수 있다. 분산액이 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 이들의 혼합물 중 및 오일 중에서 제조될 수 있다. 일반 보관 및 사용 조건하에서 상기 제제는 미생물의 성장을 막기 위해 보존제를 함유한다. 주사용으로 적합한 제약 형태는 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다 (미국 특허 5,466,468 (상기 특허는 구체적으로 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)). 모든 경우에서, 상기 형태는 멸균 상태여야 하고, 쉽게 주사될 수 있도록 하는 정도로 유동성을 띠어야 한다. 제조 및 보관 조건하에서 안정적이어야 하고, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용으로부터 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올 (즉, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 적합한 혼합물, 및/또는 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 예를 들어, 코팅제, 예컨대 레시틴을 사용함으로써, 분산액인 경우에는 필요한 입자 크기로 유지시키면서, 및 계면활성제를 사용함으로써 적절한 유도성을 유지시킬 수 있다. 각종 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 미생물의 작용을 막을 수 있다. 많은 경우에 있어서, 등장화제, 예를 들어 당 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 조성물 중에 흡수 지연제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴을 사용함으로써 주사가능한 조성물의 흡수를 장기화시킬 수 있다.
수용액 형태를 비경구로 투여하는 경우, 예를 들어 상기 용액은 필요할 경우, 적합하게 완충처리될 수 있고, 액체 희석제가 먼저 충분한 염수 또는 글루코스로 등장화된다. 상기의 특정 수용액은 특히 정맥내, 근육내, 피하, 및 복강내 투여에 적합하다. 이와 연계하여, 사용될 수 있는 멸균 수성 배지는 본 개시내용에 비추어 당업자에게 공지될 것이다. 예를 들어, 한 투여량을 1 ml NaCl 등장액 중에 용해시키고, 1,000 ml의 피하주입액에 첨가되거나, 또는 제안된 주입 부위에 주사될 수 있다 (예를 들어, 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences" 15th Edition, pages 1035-1038 and 1570-1580] 참조). 치료받는 대상체의 상태에 따라 투여량은 반드시 일부 변동될 것이다. 어느 경우에서든 투여 담당자가 개별 대상체에 적절한 용량을 결정하게 될 것이다. 또한, 인간 투여를 위해서는, 제제는 FDA 사무국의 생물 표준에 의해 요구되는 바와 같이, 멸균성, 발열원성, 일반 안전성 및 순도 표준을 충족시켜야 한다.
멸균 주사액은 필요한 양의 조성물을 필요할 경우, 상기 열거된 각종의 다른 성분들과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후, 여과 멸균시킴으로써 제조된다. 일반적으로, 분산액은 멸균된 각종 조성물을, 기초 분산 매질 및 상기 열거된 것으로부터 필요한 다른 성분들을 함유하는 멸균 비히클 내로 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사액 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 일부 제조 방법은 진공 건조법 및 냉동 건조 기법이며, 이를 통해 앞서 멸균 여과된 그의 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 추가의 바람직한 성분의 분말을 수득할 수 있다. 분말형 조성물을, 안정화제를 포함하거나 포함하지 않는 액체 담체, 예컨대 물 또는 식염수와 함께 조합한다.
다른 실시양태에서, 조성물은 다양한 기타 경로를 통한 투여, 예를 들어 국소 (즉, 경피) 투여, 점막 투여 (비내, 질 등) 및/또는 흡입을 통한 투여용으로 제제화될 수 있다.
국소 투여용 제약 조성물로는 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 분말과 같이, 약용으로 제제화된 조성물을 포함할 수 있다. 연고는 국소 적용을 위해 모든 유지성, 흡수, 에멀젼 및 수용성 기반 조성물을 포함하는 반면, 크림 및 로션은 오직 에멀젼 기재만을 포함하는 조성물이다. 국소적으로 투여되는 약제는 활성 성분이 피부를 통해 용이하게 흡수될 수 있도록 하기 위해 투과 증진제를 함유할 수 있다. 적합한 투과 증진제로는 글리세린, 알콜, 알킬 메틸 술폭시드, 피롤리돈 및 라우로카프람을 포함한다. 국소용 조성물에 가능한 기제로는 폴리에틸렌 글리콜, 라놀린, 콜드 크림 및 페트롤라툼 뿐만 아니라, 임의의 다른 적합한 흡수, 에멀젼 또는 수용성 연고 기재를 포함한다. 국소용 제제는 또한 조성물 보존 및 균질한 혼합물 제공을 위해 필요할 경우, 유화제, 겔화제 및 항미생물성 보존제를 포함할 수 있다. 조성물의 경피 투여는 또한 "패치" 사용을 사용할 수 있다. 예를 들어, 패치는 하나 이상의 조성물을 고정된 기간 동안에 걸쳐 사전 결정된 속도로 및 연속 방식으로 공급할 수 있다.
특정 실시양태에서, 조성물은 점안제, 비내 스프레이, 흡입 및/또는 다른 에어로졸 전달 비히클에 의해 전달될 수 있다. 비강 에어로졸 스프레이를 통해 조성물을 폐로 직접 전달하는 방법은 미국 특허 5,756,353 및 5,804,212 (상기 특허들은 각각 구체적으로 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있다. 유사하게, 비내 마이크로입자 수지 (문헌 [Takenaga et al., 1998]) 및 리소포스파티딜-글리세롤 화합물 (미국 특허 5,725, 871 (상기 특허는 구체적으로 그 전문이 본원에 참조로 포함됨))을 사용하여 약물을 전달하는 것 또한 제약 분야에 주지되어 있으며, 이를 사용하여 본원에 기술된 조성물을 전달할 수 있다. 유사하게, 폴리테트라플루오로에틸렌 지지체 매트릭스 형태로 경점막으로 약물을 전달하는 것은 미국 특허 5,780,045 (상기 특허는 구체적으로 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있고, 이를 사용하여 본원에 기술된 조성물을 전달할 수 있다.
본원에 개시된 조성물을 에어로졸을 통해 전달할 수 있다는 것도 추가로 구상된다. 에어로졸이라는 용어는 액화된 또는 가압 가스 추진제 중에 분산되어 있는 미분된 고체 또는 액체 입자의 콜로이드성 시스템을 의미한다. 흡입용으로 전형적인 에어로졸은 액체 추진제, 또는 액체 추진제 및 적합한 용매의 혼합물 중 활성 성분의 현탁액으로 구성된다. 적합한 추진제로는 탄화수소 및 탄화수소 에테르를 포함한다. 적합한 용기는 추진제의 가압 요건에 따라 달라질 것이다. 에어로졸 투여는 대상체의 연령, 체중, 및 증상의 중증도 및 반응에 따라 달라질 것이다.
실시예
실시예 1. 리포솜 제제 및 LCAN 제제 제조
1. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 리포솜 제제의 제조 및 특징규명
에탄올 확산 방법에 의해 RX-0047에 대한 리포솜 제제 (L-RX-0047)를 제조하였다. 지질 조성물은 45:50:5 몰비의 DOTAP/DOPE/TPGS 또는 DOTAP/대두PC/TPGS였다. 간략하면, PEI2K, 즉, 분자량이 약 2,000인 PEI를 포함하거나 포함하지 않는 에탄올 중에 지질을 용해시켰다. 지질-대-PEI2K의 비는 12.5:1이었다. RX-0047를 시트레이트 완충제 (20 mM, pH 4) 중에 용해시킨 후, 볼텍싱시키면서 지질 용액 또는 지질/PEI2K 용액에 첨가하자, 에탄올 농도 40% (v/v)에서 예비-리포솜이 자발적으로 생성되었다. RX-0047 대 지질의 중량비는 12.5:1이었다. 이어서, MWCO 10,000 달톤 스펙트라/포르 플로트-A-라이저(Spectra/Por Float-A-Lyzer) 기구 (스펙트럼 래보러토리즈(Spectrum Laboratories: 미국 캘리포니아주 란초 도밍게즈))를 사용하여 복합체를 실온에서 2 h 동안 시트레이트 완충제 (20 mM, pH 4)에 대해 투석시킨 후, 실온에서 밤새도록 HEPES 완충처리된 염수 (HBS, 20 mM HEPES, 145 mM NaCl, pH 7.4)에 대해 투석시킴으로써 유리 RX-0047을 제거하였다.
RX-0047에 대한 폴레이트 표적화된 리포솜 제제 (F-L-RX-0047)를 상기 기술된 것과 동일한 방법으로 제조하였다. 리포솜은 45/50/4.5/0.5 또는 45/50/4/1의 몰비의 DOTAP/sPC/TPGS/F-PEG-CHEMS로 구성되었다.
RX-0047에 대한 RGD 표적화된 리포솜 제제 (cRGD-L-RX-0047)를 상기 기술된 것과 동일한 방법으로 제조하였다. 리포솜은 45/50/4.5/0.5 또는 45/50/4/1의 몰비의 DOTAP/sPC/TPGS/cRGD-PEG-DSPE로 구성되었다.
2. HSA-PEHA 접합체 합성
EDC로 HSA 상의 카르복실을 활성화시키고, PEHA 상의 아민과의 아미드 결합을 형성함으로써 HSA-PEHA 접합체를 합성하였다. 합성 동안 사용된 HSA:PEHA:EDC 몰비는 1:1,500:200 (mol/mol)이었다. 50 mM 보레이트 완충제 또는 물 (pH 8.0) 중 1-에틸-3-(3-디메틸아미노)-프로필카르보디이미드 (EDC) 및 술포-N-히드록시숙신이미드의 존재하에서 HSA (25%, 옥타팜(Octapharma)으로부터 구입)를 큰 과량의 펜타에틸렌헥사민 (PEHA, 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터 구입)과 반응시킴으로써 HSA를 PEHA에 접합시켰다. 간략하면, 5 g의 PEHA (MW 232.37, 기술 등급)를 80 mL의 ddH2O 중에 용해시킨 후, 1 M HCl을 이용하여 pH 8.0으로 조정하였다. 1 g (4 mL)의 HSA 및 이어서 562.5 mg의 1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카르보디이미드 (EDC, DMSO 중 용해)를 교반시키면서 PEHA 용액에 첨가하였다. 실온에서 3-4 h 동안 계속해서 반응시켰다. PD-10 탈염 칼럼 상에서 겔 막 크로마토그래피하거나, 또는 4℃에서 MWCO 10,000 스펙트럼 막을 사용하여 ddH2O (이중 증류수)에 대해 투석시킴으로써 HSA-PEHA 생성물을 정제하여 비반응 PEHA 및 부산물을 제거하였다. 투석 주기 종료시의 3 h 시점에 표준 닌히드린 또는 트리니트로벤젠술폰산 (TNBS) 아민 검정에 의해 외부 완충제 중 PEHA로부터의 아민이 검출되지 않을 때까지, 매 3-4 h마다 투석용 완충제를 교체해 주었다. 규모 확장 합성을 위해서는 투석 방법은 예컨대, 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 카세트 시스템 또는 스펙트로포르(Spectropor) 중공사 시스템을 이용하는 접선 유동 정용여과로 교체하여야 한다. 또한 상기 방법을 사용하여 생성물을 원하는 농도로 농축시킬 수 있었다. 생성물을 0.22 ㎛ 멸균 필터를 통해 통과시켜 멸균 용기 안으로 넣고, 4℃에서 보관하였다. 장기 보관을 위해서는 생성물을 -20℃에서 보관할 수 있었다. 생성물을 또한 동결건조시킬 수 있었다.
BCA 단백질 검정에 의해 생성물 단백질 농도를 측정하고, PEHA 기반 표준 곡선을 사용하여 TNBS 아민 함량 검정에 의해 생성물 중 PEHA 함량을 측정하였다. 매트릭스 보조된 레이저 탈착 이온화 비행 시간 질량 분광측정법 (MADLI TOF MS)에 의해 HSA-PEHA 접합체의 분자량을 측정하였다. 66405.756 (m/z)인 것으로 나타난 결과에 기초해 보면, 평균적으로, 각 HSA마다 11개의 PEHA가 연결되어 있다. SDS-PAGE 분석 결과, 접합체는 단일 밴드로서 이동한 것으로 나타났는데, 이는 HSA-PEHA 생성물 중에서 분자간 가교가 존재하지 않는다는 것을 시사하는 것이다.
3. cRGDfC-PEG-DSPE 접합체 합성
티오에테르 결합을 형성하는 -SH 및 -말레이미드 반응을 통해 cRGDfC (시클로(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys)) 및 PEG-DSPE-말레이미드를 접합시켰다. 반응 동안 사용된 cRGDfC 및 PEG-PSPE-말레이미드 몰비는 1.5:1이었다. 각각 5 mM EDTA를 함유하는 PBS 완충제 (pH = 7.0) 중에 용해된 cRGDfC 및 PEG-DSPE 용액을 조합하고, 실온에서 6 h 동안 교반하면서 반응시켰다. 생성물을 PD-10 칼럼 상에서 겔 여과하여 정제함으로써 생성물로부터 비반응/과량의 cRGDfC를 제거하였다. 규모 확장 반응을 위해, 겔 여과를 GPC, MWCO 2000 막을 사용하여 투석, 또는 접선 유동 정용여과로 교체할 수 있었다. 장기간의 안정화를 위해 생성물을 냉동시키거나, 동결건조시킬 수 있었다. HPLC 및 LC-MS에 의해 생성물의 순도를 측정하였다. 최소 cRGDfC 접합 수준 (예컨대, 80%) 및 유리 펩티드 함량 (예컨대, < 1 %)을 명세서에서와 같이 확립할 수 있었다. 생성물 중 cRGDfC의 함량은 BCA 단백질 검정으로 측정할 수 있었다.
4. 폴레이트-PEG-DSPE 접합체 합성
10 mg의 엽산을 실온에서 3 hr 동안 폴레이트/DCC/NHS=1/1.5/1.1의 몰비로 소량의 트리에틸아민 (20 ㎕)을 포함하는 DMSO (0.5 ml) 중 7 mg의 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드 (DCC) 및 2.87 mg의 N-히드록시숙신이미드 (NHS)와 반응시켰다. 반응 혼합물을 원심분리하여 부산물 디시클로헥실우레아를 제거하였다. 77 mg의 DSPE-PEG-아민을 소량의 트리에틸아민 (20 ㎕)을 포함하는 DMSO (0.5 ml) 중에 용해시킨 후, 실온에서 3 hr 상기 합성된 폴레이트-NHS와 함께 1:1의 몰비로 반응시켰다. 10x 부피 아세톤으로 침전시켜 폴레이트-PEG-DSPE를 정제시켰다. 침전물을 원심분리에 의해 수집한 후, 진공하에서 건조시켰다. 생성물을 추가로 MWCO 2000 막을 사용하여 ddH2O에 대해 투석한 후, 동결건조시켰다. HPLC에 의해 생성물의 순도를 확인하였다. 모든 PEG화된 지질 및 검출불가능한 유리 폴레이트 함량에 대해 상대적인 최소 폴레이트 접합 수준 (예컨대, 80%)을 명세서에서와 같이 확립할 수 있었다. 371 nm에서의 UV 분광측정법 또는 HPLC에 의해 생성물 중 폴레이트 함량을 측정하였다.
5. 폴레이트-PEG-DSPE 접합체 합성
폴레이트-PEG-아민을 CHEMS-NHS와 반응시켜 폴레이트-PEG-CHEMS 합성을 수행하였다. 폴레이트-PEG-아민 및 CHEMS-NHS 둘 모두 앞서 기술된 바와 같이 합성하였다 (문헌 [Xiang et al., Int J Pharm., 356 (2008) 29-36]). 간략하면, 폴레이트-PEG-비스-아민 합성을 위해 엽산 (26.5 mg) 및 PEG-비스-아민 (167.5 mg)을 1 mL DMSO 중에 용해시켰다. 이어서, 8.6 mg의 NHS 및 15.5 mg의 DCC를 용액에 첨가하고, 반응을 실온에서 밤새도록 진행시켰다. 이어서 생성물인 폴레이트-PEG-아민을 세파덱스(Sephadex) G-25 결과 크로마토그래피에 의해 정제하였다. CHEMS-NHS 합성을 위해, CHEMS (1 g)를 실온에서 밤새도록 테트라히드로푸란 중에서 475 mg NHS 및 1.25 g DCC와 반응시켰다. 재결정화에 의해 생성물 CHEMS-NHS를 정제하였다. 최종적으로, F-PEG-CHEMS 합성을 위해, 폴레이트-PEG-아민 (137 mg, 40 μmol) 및 CHEMS-NHS (29.2 mg, 50 μmol)를 CHCl3 (50 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 밤새도록 반응시켰다. 회전식 증발에 의해 용매 (CHCl3)를 제거하고, 잔류물을 50 mM Na2CO3(10 mL) 중에서 수화시켜 F-PEG-CHEMS 미셀을 수득하였다. 이어서, 14 kDa의 분자량 컷오프 (MWCO)를 사용하여 스펙트럼 투석 막을 이용하여 탈이온수에 대해 투석시킴으로써 저분자량 부산물을 제거하였다. 이어서, 생성물 F-PEG-CHEMS를 동결건조에 의해 건조시켜 76.5% 수율로 황색 분말 생성물 (130 mg)을 수득하였다. 박층 크로마토그래피 (TLC) 및 DMSO-d6 중에서의 1H NMR에 의해 생성물의 신원을 확인하였다.
6. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 LCAN 제제의 제조 및 특징규명
에탄올 희석 방법에 의해 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN)를 제조하였다. 지질 1,2-디올레오일-3-트리메틸암모늄-프로판 (DOTAP) (아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids)), 대두로부터 유래된 L-α-포스파티딜콜린 (SPC) (아반티 폴라 리피즈), 및 d-알파-토코페릴 폴리에틸렌 글리콜 1000 숙시네이트 (TPGS) (이스트맨 케미칼(Eastman Chemical))를 에탄올 중에 용해시켰다. 지질을 25:70:5 (mol/mol)로 조합하였다. HSA-PEHA를 12.5:3의 중량비로 지질 용액과 함께 혼합하였다. 안티센스/전체 지질/HSA-PEHA 조성물의 중량비는 1:10:3이었다. 간략하면, Hepes 완충제 (20 mM, pH 7.4) 중 HSA-PEHA 및 EtOH 중에 용해되어 있는 지질을 볼텍싱시키면서 혼합하였고, 생성된 EtOH 농도는 60%였다. RX-0047 또는 RX-0201을 Hepes 완충제 (20 mM, pH 7.4) 중에 용해시킨 후, 볼텍싱시키면서 지질 및 HSA-PEHA 용액에 첨가하자, 에탄올 농도 40% (v/v)에서 예비-LCAN이 자발적으로 생성되었다. 이어서, MWCO 10 000 달톤 스네이크스킨(Snakeskin) 투석용 배관을 사용하여 복합체를 실온에서 2 h 동안 Hepes 완충제 (20 mM, pH 7.4)에 대해 투석시킨 후, 실온에서 밤새도록 HEPES 완충처리된 염수 (HBS, 20 mM HEPES, 145 mM NaCl, pH 7.4)에 대해 투석시켜 유리 ASO를 제거하였다.
LCAN 제제를 20배로 농축시킨 후, Hepes 완충제 (5 mM, pH 7.4)를 사용하여 세척함으로써 NaCl을 제거하였다. 생성물을 원하는 농도로 희석시키고, 10% 수크로스를 첨가하였다. 이어서, 최종 생성물을 0.45 ㎛ 필터를 통해 여과시킨 후, -70℃에서 보관하였다.
7. 안티센스 올리고뉴클레오티드에 대한 표적화된 LCAN 제제의 제조 및 특징규명
RGD 표적화된 LCAN 제제를 실시예 5에 기술된 것과 유사한 방법에 의해 제조하였다. RGD 표적화된 LCAN 제제의 경우, 지질은 25:70:4:1의 몰비의 DOTAP/대두PC/TPGS/cRGDfC-PEG-DSPE로 구성되었고, 안티센스/전체 지질/HSA-PEHA 조성물의 중량비는 1:10:3이었다. DOTAP, 대두PC, TPGS 및 cRGDfC-PEG-DSPE를 25:70.4:1의 비로 혼합함으로써 표적화제를 함유하는 지질 혼합물을 제조하였다. 60% 에탄올 중 지질 혼합물 성분 (용액 A)을 2-펌프 및 Y자 연결 장치에 의해 동일한 부피의 20% 에탄올 중 HSA-PEHA (용액 B)와 조합하여 40% 에탄올의 용액 (용액 C)을 수득하였다. RX-0201 (알켁신®)을 40% 에탄올과 함께 HEPES 완충제 (20 mM, pH 7.4) 중에 용해시켜 용액 D를 수득하였다. 동일한 부피의 용액 C 및 용액 D를 2-펌프 및 Y자 연결 장치에 의해 조합하여 40% 에탄올의 용액 (용액 E)을 수득하고, 용액 E를 교반시키면서 ddH2O로 4배 희석시켜 10% 에탄올을 수득하였다. 용액 E에, 동일한 부피의 0.5 M NaCl을 첨가하여 용액 중 250 mM NaCl 및 5% 에탄올 농도를 수득하였다 (용액 F). 5 mM 포스페이트 완충제 (pH 7.4)에 대한 제1 정용여과로서 용액 F의 농도를 RX-0201 농도 0.5 mg/mL로, 제2 단계로서 투과물 용액 중 RX-0201 농도가 10 ㎍/mL 아래로 하락할 때까지, 및 최종 단계로서 생성물의 농도를 RX-0201 농도 2.5 mg/mL로 하는 것을 포함하는, 접선 유동 정용여과, MWCO 30 kDa 막에 의해 RGD 표적화된 LCAN 생성물 용액 F를 정제하였다. 생성물에 1/4 부피의 50% 수크로스를 첨가하여 10% 수크로스 용액을 수득하고, 0.22 ㎛ 멸균 필터를 통해 여과하였고; 필요할 경우, 사전 여과를 사용하였다. 동결건조를 위해 멸균 조건하에서 여과된 생성물 (10 mL)을 50 mL 바이알로 옮겨 놓고, 냉동시키고, 0℃까지 선반 냉각, -40℃까지 0.5℃/min으로 냉각인 2-단계 프로그램을 사용하여 동결건조시키고, 압력을 0.12-0.16 atm으로 감압시키고, -25℃에서 30 h 동안 1차 건조시켰다. 25℃까지 5℃/min으로 가열하고, 최대 6 h 동안 진공 건조시켰다. 최종 cRGD 표적화된 LCAN 생성물을 4℃에서 보관하고, 사용시 주사용수로 재구성하였다.
다른 표적화된 LCAN 생성물, 예컨대 폴레이트-LCAN-RX-0201, cRGD-LCAN-RX-0047 및 폴레이트-LCAN-RX-0047도 상기 기술된 것과 동일한 방법으로 제조하였다.
실시예 2: 리포솜 제제 및 LCAN 제제의 특징규명
RGD 표적화된 리포솜 제제는 45/50/4.5/0.5 또는 45/50/4/1의 몰비의 DOTAP/sPC/TPGS/cRGDfC-PEG-DSPE로 구성되었다. 입자 크기 및 제타 전위는 하기 표 1에 제시되었다. cRGDfC-PEG-DSPE 농도가 리포솜 입자 크기 및 제타 전위에 변화를 주지는 않았다.
Figure pct00001
하기 표 2에 제시되어 있는 바와 같이 올리그린(OliGreen) ssDNA 정량화 시약 (인비트로젠(Invitrogen))에 의해 측정된 바, LCAN 생성물 중 약물 로딩률은 2 mg/mL로 올리고뉴클레오티드 농도와 같았다. 생성물 중 올리고뉴클레오티드의 회수율(%)은 60 내지 76%였다. NICOMP 파티클 사이저 모델 370(NICOMP Particle Sizer Model 370) (파티클 사이징 시스템즈(Particle Sizing Systems: 미국 캘리포니아주 산타 바바라)) 상에서 LCAN 생성물의 입자 크기를 분석한 결과, 그 범위는 92.7 내지 124 nm였다. 부피 가중화 가우스 분포(Gaussian distribution) 분석을 이용하여 평균 입자 직경 및 크기 분포를 측정하였다. 제타PALS(ZetaPALS) (브루크하벤 인스트루먼츠 코포레이션(Brookhaven Instruments Corp.: 미국 뉴욕주 우스터셔)) 상에서 제타 전위 (ζ)를 측정하였다. 모든 측정은 3중으로 수행하였다. 제타 전위는 14.5 내지 29.4 mV였다.
Figure pct00002
실시예 3: 냉동 및 해동 안정성 및 동결건조
2개의 상이한 리포솜 제제 배치를 합성하였다. 냉동-해동 사이클 전후로 입자 크기, 제타 전위 및 RX-0047 함량을 측정하였다. 동결건조를 위해, 5 ml LCAN 제제를 함유하는 각각의 바이알을 LABCONCO 동결건조 장치에서 동결건조시켰다. 완전한 건조 과정으로 3단계: 냉동, 1차 건조, 및 2차 건조로 진행되었다. 2차 건조 후, 바이알을 4℃에서 보관하거나, 생성물을 ddH2O로 현탁시켜 입자 크기, 제타 전위 및 약물 함량을 체크하였다.
4℃에서의 안정성 및 냉동-해동 안정성을 평가하였다. 하기 표 3에 제시되어 있는 바와 같이, 4℃에서 2주간의 보관 후, 입자 크기 및 제타 전위가 약간 증가하였지만, 유의적인 것은 아니었다. 3회의 냉동-해동 과정 반복한 후, 입자 크기 및 제타 전위에는 냉동-해동 전후로 어떤 유의적인 변화도 없었다 (표 3).
Figure pct00003
실시예 4: 생물학적 시험
1. 암 세포에서 리포솜 제제 및 LCAN 제제에 의한 mRNA 및 단백질 하향조절
KB (인간 표피 암종), PANC-1 (인간 췌장) 및 MDA-MB-435 (인간 유방) 세포를 사용하여 유전자 하향조절 연구를 수행하였다. 10% 열-불활성화된 우태아 혈청 (FBS), 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린 및 100 mg/ml 스트렙토마이신을 함유하는 RPMI1640 배지 중에서 KB 세포를 성장시켰다. 10% 열-불활성화된 우태아 혈청 (FBS), 2 mM L-글루타민, 100 U/ml 페니실린 및 100 mg/ml 스트렙토마이신을 함유하는 DMEM 배지 중에서 PANC-1 및 MDA-MB-435 세포를 성장시켰다. 세포를 37℃, 5% CO2의 가습 인큐베이터에서 유지시켰다.
세포를 2x105개의 세포/웰의 밀도로 6-웰 플레이트에 플레이팅시키고, 밤새도록 배양하였다. 세포를 37℃에서 4 h 동안 L-RX-0047 또는 F-L-RX-0047 또는 cRGDfC-L-RX-0047로 형질감염시켰다. 수용체 차단 연구를 위해, F-L-RX-0047 또는 cRGDfC-L-RX-0047 노출 동안 100 uM의 엽산 또는 cRGDfC를 배지에 첨가하였다. 형질감염 후, 배지를 새로운 성장 배지로 교체하고, 세포를 5% CO2 분위기하에 37℃에서 48 h 동안 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포를 수집하고, 실시간 qRT-PCR에 의해 HIF-1α mRNA 수준에 대하여 분석하고, 웨스턴 블롯 분석에 의해 HIF-1α 단백질 (핵 단백질)에 대해 분석하였다.
0.25 μM의 RX-0047 농도로 L-RX-0047 또는 cRGDfC-L-RX-0047 처리에 의해 HIF-1α mRNA 하향조절을 실시간 RT-PCR에 의해 측정하였다 (도 1). 그 결과, cRGDfC-L-RX-0047은 MDA-MB-435 세포에서 HIF-1α mRNA 발현을 감소시킨 것으로 나타났다. 1.0%의 cRGDfC를 포함하는 cRGDfC-L-RX-0047은 0.5% cRGDfC를 포함하는 cRGDfC-L-RX-0047과 비교하였을 때, HIF-1α mRNA를 더 크게 하향조절시킨 것으로 나타났다. 두 cRGDfC 표적화된 RX-0047 제제는 모두 또한 비-표적화된 L-RX-0047과 비교하였을 때에도 HIF-1α mRNA 발현을 더 크게 감소시켰다. 또한, HIF-1α 하향조절 효과는 1 mM의 cRDGfC 첨가에 의해 차단되었다 (도 1). 상기 결과는 cRGDfC-L-RX-0047이 ανβ3 인테그린 수용체를 통해 종양 세포를 선택적으로 표적화한다는 것을 시사하는 것이었다.
실시간 RT-PCR에 의해 LCAN 제제의 시험관내 유전자 표적화 효율을 측정하였다. KB 세포에서, LCAN-RX-0047은 0.5 μM의 RX-0047 농도로 RX-0047을 함유하는 리포솜 제제 (L-RX-0047)와 비교하여 HIF-1α mRNA 발현을 유의적으로 감소시켰다 (도 2). 또한, L-RX-0047은 유리 RX-0047 또는 대조군에 비하여 유의적인 HIF-1α mRNA 하향조절을 보였다.
RX-0201을 함유하는 LCAN 제제 (LCAN-RX-0201)의 시험관내 유전자 표적화 효율을 KB 및 Panc-1 세포에서 평가하였다. KB 세포에서, LCAN-RX-0201은 1 μM RX-0201 농도에서 LCAN-대조군에 비하여 Akt-1 mRNA 발현을 유의적으로 감소시켰다 (도 3). 동일한 방식으로, LCAN-RX-0201로 처리된 Panc-1 세포는 1 μM의 RX-0201 농도에서 LCAN-대조군 또는 유리 RX-0201에 비하여 유의적인 Akt-1 mRNA 발현 감소를 보였다 (도 4).
2. KB 이종이식 종양 모델에서 L-RX-0047 및 LCAN-RX-0047의 생체내 치료학적 효능
KB 종양 이종이식물을 보유하는 흉선이 없는 누드 마우스에서 유리 RX-0047, L-RX-0047, 및 LCAN-RX-0047의 치료학적 효능을 평가하였다. 암컷 마우스 (18-22 g)에 4x106개의 KB 세포를 피하로 접종하였다. 종양 부피가 50-100 ㎣에 도달하였을 때, 마우스를 무작위로 4개의 군 (각 군당 마우스 5마리씩)으로 배정하고, 매 3일마다 4회에 걸쳐 (Q3Dx4) 3 mg/kg의 상이한 제제를 정맥내로 주사하였다. 캘리퍼를 이용하여 측정함으로써 종양 크기를 측정하고, 부피 = 0.5 x (길이 x 너비 x 높이)에 의해 종양 부피 (㎣)를 계산하였다. HIF-1α 하향조절 분석을 위해, 최종 처리 후 24시간 경과하였을 때 마우스를 희생시켰다. 이어서, HIF-1α 유전자 발현 분석을 위해 종양을 수집하였다. 카플란 마이어(Kaplan-Meier) 분석에 의해 동물 생존을 평가하였다.
LCAN-RX-0047의 생체내 유전자 표적화 효율을 KB 이종이식 종양 모델에서 평가하였다. 도 5에 제시되어 있는 바와 같이, 비록 그 차이는 유의적이지는 않지만, 유리 RX-0047은 3 mg/kg 용량에서 PBS 대조군에 비하여 종양 부피를 단지 약간 감소시켰다. L-RX-0047은 3 mg/kg 용량에서 PBS 대조군 또는 유리 RX-0047에 비하여 종양 성장을 유의적으로 감소시켰다. 그에 반해, LCAN-RX-0047은 L-RX-0047보다 종양 성장을 더욱 유의적으로 감소시켰다.
상기 데이터와 일관되게, KB 이종이식 마우스에서 종양 조직 중 HIF-1α의 발현 수준은 3 mg/kg 용량에서 L-RX-0047 및 LCAN-RX-0047에 의해 유의적으로 하향조절되었고 (도 6), LCAN 제제가 훨씬 더 큰 활성을 띠었다.
한편, 카플란 마이어 분석에 의해 동물 생존을 평가하고, 수명 연장률 (ILS(%))을 ILS = (처리된 마우스의 평균 생존 기간/대조군 마우스의 평균 생존 기간 - 1) x 100%에 의해 계산하였다. 마우스 (1군당 마우스 10마리씩)에 3 mg/kg의 PBS, 유리 RX-0047 또는 LCAN-RX-0047을 매 3일마다 4회에 걸쳐 (Q3Dx4) 정맥내로 주사하였다. PBS, 유리 RX-0047, 또는 LCAN-RX-0047 군에 대한 생존 기간 중앙값 (MeST)은 각각 19, 26, 및 37일이었다 (도 7). ILS(%) 값은 LCAN-RX-0047의 경우, 94.7%였다. 또한 10마리의 마우스 중 2마리가 LCAN-RX-0047를 이용한 처리 후 완전하게 치유되었다. 이러한 결과는 LCAN-RX-0047이 단독요법으로서 강력한 항암 활성을 가진다는 것을 시사한다.
본원에 개시된 제제 및 방법에 관한 특정 실시양태는 상기 실시예에서 정의되어 있다. 본 발명의 특정 실시양태를 나타냄과 동시에 상기 실시예는 단시 예시적인 목적으로만 제공된다는 것을 이해하여야 한다. 상기 논의 및 이들 실시예로부터 당업자는 본 개시내용의 본질적인 특징을 확인할 수 있고, 본원에 기술된 조성물 및 방법을 다양한 용법 및 조건에 맞게 적합화시키기 위해 그의 취지 및 범주로부터 벗어남 없이 다양하게 변형 및 수정시킬 수 있다. 본 개시내용의 본질적인 범주로부터 벗어남 없이 다양하게 변형될 수 있고, 등가물이 그의 요소를 대신하여 치환될 수 있다. 추가로, 본 개시내용의 본질적인 범주로부터 벗어남 없이 특정의 상황 또는 물질을 본 개시내용의 교시에 맞게 적합시키기 위해서 다수 변형될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> THE OHIO STATE UNIVERSITY <120> LIPID NANOPARTICLE COMPOSITIONS FOR ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES DELIVERY <130> 41890-349711 <140> <141> <150> 61/784,892 <151> 2013-03-14 <150> 61/650,729 <151> 2012-05-23 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 1 gctgcatgat ctccttggcg 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 2 aatgagccac cagtgtccaa 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 cgccaaggag atcatgcagc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 agtggactgg tgggggctgg 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 5 agatagctgg tgacagacag 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 ctgtctgtca ccagctatct 20 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 7 cgtggagaga tcatctgagg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 cctcagatga tctctccacg 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 9 tcgaaaaggt caagtgctac 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 gtagcacttg accttttcga 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 11 tggtgcagcg gcagcggcag 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 ctgccgctgc cgctgcacca 20 <210> 13 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 gctaggcccg cgctcgcgcc 20 <210> 14 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 ttggacactg gtggctcatt 20 <210> 15 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide" <400> 15 ggagctaaca tctccaagtc 20 <210> 16 <211> 20 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 gacttggaga tgttagctcc 20

Claims (46)

  1. 중합체에 접합된 거대분자 및 표적화제를 포함하는 지질 나노입자 조성물.
  2. 중합체에 접합된 거대분자 및 치료제를 포함하고,
    상기 치료제는
    Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO); 및
    HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO
    로 이루어진 군으로부터 선택된 ASO를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO); 및
    HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO
    로 이루어진 군으로부터 선택된 ASO를 포함하는 치료제를 추가로 포함하는 지질 나노입자 조성물.
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 중합체가 하전된 것인 지질 나노입자 조성물.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 중합체가 양으로 하전된 것인 지질 나노입자 조성물.
  6. 제1항 또는 제2항에 있어서, 거대분자가 알부민을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  7. 제1항 또는 제2항에 있어서, 중합체에 접합된 거대분자가 알부민-다가양이온 접합체를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  8. 제1항 또는 제2항에 있어서, 접합이 가교제를 통해 이루어지는 것인 지질 나노입자 조성물.
  9. 제1항 또는 제2항에 있어서, 거대분자가 펜타에틸렌헥사민 (PEHA)을 포함하고, 중합체가 인간 혈청 알부민 (HSA)을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  10. 제5항에 있어서, PEHA 분자 대 HSA 분자의 비가 약 11 대 1인 지질 나노입자 조성물.
  11. 제5항에 있어서, 양으로 하전된 중합체가 테트라에틸렌헥사민을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  12. 제5항에 있어서, 양으로 하전된 중합체가 테트라에틸렌펜타민을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  13. 제1항 또는 제2항에 있어서, 지질 나노입자가 2종 이상의 저분자량 중합체의 혼합물을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서, 지질 나노입자가 DOTAP, SPC 및 TPGS를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  15. 제14항에 있어서, DOTAP:SPC:TPGS의 몰비가 약 25:70:5인 지질 나노입자 조성물.
  16. 제1항에 있어서, 나노입자가 핵산, 단백질, 폴리사카라이드, 지질, 방사성 물질, 치료제, 전구약물 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 치료제를 추가로 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  17. 제14항에 있어서, 치료제가 핵산인 지질 나노입자 조성물.
  18. 제17항에 있어서, 핵산이 pDNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드, miR, 항miR, shRNA, siRNA 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 지질 나노입자 조성물.
  19. 제2항 또는 제18항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가, 인간 Akt-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는, 5' gctgcatgatctccttggcg 3' (서열 1)을 포함하는 서열을 갖는 화합물인 지질 나노입자 조성물.
  20. 제2항 또는 제18항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가, 인간 HIF-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는, 5' aatgagccaccagtgtccaa 3' (서열 2)를 포함하는 서열을 갖는 화합물인 지질 나노입자 조성물.
  21. 제1항 또는 제2항에 있어서, 융합생성 펩티드를 추가로 포함하는 지질 나노입자 조성물.
  22. 제1항 또는 제2항에 있어서, 지질 나노입자의 입자 크기가 약 300 nm 미만인 지질 나노입자 조성물.
  23. 제1항 또는 제2항에 있어서, 지질 나노입자의 입자 크기가 약 150 nm 미만인 지질 나노입자 조성물.
  24. 제1항에 있어서, 표적화제가 직접 연결을 통해 또는 가교제를 통해 지질 나노입자의 외부 표면에 결합되는 것인 지질 나노입자 조성물.
  25. 제1항에 있어서, 표적화제가 항체 또는 항체 단편을 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  26. 제1항에 있어서, 표적화제가 cRGD 펩티드, 갈락토스-함유 모이어티, 트랜스페린, 폴레이트, 저밀도 지단백질, 표피 성장 인자 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 표적화제가 cRGDfC 또는 폴레이트를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  28. 제27항에 있어서, 표적화제가 폴레이트-PEG-CHEMS (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-콜레스테릴 헤미숙시네이트), 폴레이트-PEG-DSPE (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민) 및 cRGDfC-PEG-DSPE (시클로(RGDfC)-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민)로 이루어진 군으로부터 선택된 접합체를 포함하는 것인 지질 나노입자 조성물.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 따른 지질 나노입자 조성물 및 제약상 허용되는 부형제를 포함하는 제약 조성물.
  30. 제29항에 있어서, 멸균 용액 또는 현탁액인 제약 조성물.
  31. HSA-PEHA 접합체를 합성하는 단계;
    지질 혼합물을 제조하는 단계;
    지질 혼합물을 HSA-PEHA 접합체에 첨가하는 단계; 및
    안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO)를 지질 및 HSA-PEHA 접합체의 혼합물에 첨가하여 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN) 전구체를 수득하는 단계
    를 포함하며, 여기서 ASO는 Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 ASO; 및 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인, LCAN을 제조하는 방법.
  32. HSA-PEHA 접합체를 합성하는 단계;
    지질 혼합물을 제조하는 단계; 및
    표적화제 및 지질 혼합물을 HSA-PEHA 접합체에 첨가하는 단계
    를 포함하는, 지질 코팅된 알부민 나노입자 (LCAN)를 제조하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 표적화제가 cRGD 펩티드, 갈락토스-함유 모이어티, 트랜스페린, 폴레이트, 저밀도 지단백질, 표피 성장 인자 및 항체로 이루어진 군으로부터 선택된 모이어티를 포함하는 것인 방법.
  34. 제33항에 있어서, 표적화제가 cRGDfC 또는 폴레이트를 포함하는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, 표적화제가 폴레이트-PEG-CHEMS (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-콜레스테릴 헤미숙시네이트), 폴레이트-PEG-DSPE (폴레이트-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민) 및 cRGDfC-PEG-DSPE (시클로(RGDfC)-폴리에틸렌 글리콜-디스테아로일 포스파티딜에탄올아민)로 이루어진 군으로부터 선택된 접합체를 포함하는 것인 방법.
  36. 제32항에 있어서, 지질 혼합물이 DOTAP, 대두PC, TPGS 및 cRGDfC-PEG-DSPE를 포함하는 것인 방법.
  37. 제36항에 있어서, DOTAP:대두PC:TPGS:cRGDfC-PEG-DSPE의 몰비가 약 25:70:4:1인 방법.
  38. 제31항 또는 제32항에 있어서, 지질 혼합물이 DOTAP, SPC 및 TPGS를 포함하는 것인 방법.
  39. 제38항에 있어서, DOTAP:SPC:TPGS의 몰비가 약 25:70:5인 방법.
  40. 제32항에 있어서, 치료제를 지질 및 표적화제의 혼합물에 첨가하는 단계를 추가로 포함하며, 여기서 치료제는 pDNA, 안티센스 올리고뉴클레오티드, miR, 항miR, shRNA, siRNA 또는 이들의 조합으로부터 선택된 핵산인 방법.
  41. 제40항에 있어서, 치료제가, Akt-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는 안티센스 올리고뉴클레오티드 (ASO); 및 HIF-1을 코딩하는 핵산의 일부에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는 ASO로 이루어진 군으로부터 선택된 ASO를 포함하는 것인 방법.
  42. 제31항 또는 제41항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가, 인간 Akt-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 Akt-1의 발현을 조절하는, 5' gctgcatgatctccttggcg 3' (서열 1)을 포함하는 서열을 갖는 화합물인 방법.
  43. 제31항 또는 제41항에 있어서, 안티센스 올리고뉴클레오티드가, 인간 HIF-1을 코딩하는 핵산 분자에 표적화되고 HIF-1의 발현을 조절하는, 5' aatgagccaccagtgtccaa 3' (서열 2)를 포함하는 서열을 갖는 화합물인 방법.
  44. 암 또는 감염성 질환의 진단 또는 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제29항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 암 또는 감염성 질환을 진단 또는 치료하는 방법.
  45. 제44항에 있어서, 암이 뇌암, 방광암, 폐암, 유방암, 흑색종, 피부암, 표피 암종, 결장 및 직장암, 비-호지킨 림프종, 자궁내막암, 췌장암, 신장암 (신세포암), 전립선암, 백혈병, 갑상선암, 두경부암, 난소암, 간세포성암, 자궁경부암, 육종, 위암, 다발성 골수종, 림프종, 위장암 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  46. 제44항에 있어서, 암이 유방암, 표피 암종 및 췌장암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021145595A1 (ko) * 2020-01-15 2021-07-22 (주)인핸스드바이오 생체 내 약물 전달을 위한 지질 나노입자 및 이의 용도

Families Citing this family (83)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8986702B2 (en) 2008-05-16 2015-03-24 Taiga Biotechnologies, Inc. Antibodies and processes for preparing the same
EP2318435B1 (en) 2008-08-28 2015-12-23 Taiga Biotechnologies, Inc. Modulators of myc, methods of using the same, and methods of identifying agents that modulate myc
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CN104531812A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
WO2012135805A2 (en) 2011-03-31 2012-10-04 modeRNA Therapeutics Delivery and formulation of engineered nucleic acids
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
RU2707251C2 (ru) 2011-10-03 2019-11-25 Модерна Терапьютикс, Инк. Модифицированные нуклеозиды, нуклеотиды и нуклеиновые кислоты и их применение
KR20140102759A (ko) 2011-12-16 2014-08-22 모더나 세라퓨틱스, 인코포레이티드 변형된 뉴클레오사이드, 뉴클레오타이드 및 핵산 조성물
US9878056B2 (en) 2012-04-02 2018-01-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cosmetic proteins and peptides
EP2833892A4 (en) 2012-04-02 2016-07-20 Moderna Therapeutics Inc MODIFIED POLYNUCLEOTIDES FOR THE PRODUCTION OF PROTEINS AND PEPTIDES ASSOCIATED WITH ONCOLOGY
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
BR112014029247A2 (pt) 2012-05-23 2017-06-27 Univ Ohio State nanopartícula de lipídio, composição farmacêutica, método para fazer uma nanopartícula de lipído, produto, método de tratamento de um distúrbio, e sistema de entrega
EP2877189B1 (en) 2012-07-20 2021-01-06 Taiga Biotechnologies, Inc. Enhanced reconstitution and autoreconstitution of the hematopoietic compartment
JP6144355B2 (ja) 2012-11-26 2017-06-07 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 化学修飾ｍＲＮＡ
US10272115B2 (en) 2013-03-11 2019-04-30 Taiga Biotechnologies, Inc. Production and use of red blood cells
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
DK2992874T3 (en) 2013-04-30 2018-11-12 Delta Fly Pharma Inc LIPOSOM FOR TOPIC SUBMISSION AND USE THEREOF
US9802967B2 (en) * 2013-06-17 2017-10-31 The University Of North Carolina At Chapel Hill Polymer coated particles and methods thereof
CN105579582A (zh) 2013-07-25 2016-05-11 埃克西奎雷股份有限公司 用于预防和治疗用途的作为免疫刺激剂的基于球形核酸的构建体
WO2015048744A2 (en) 2013-09-30 2015-04-02 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding immune modulating polypeptides
US10323076B2 (en) 2013-10-03 2019-06-18 Modernatx, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
WO2015130584A2 (en) * 2014-02-25 2015-09-03 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
WO2015154002A1 (en) * 2014-04-04 2015-10-08 Ohio State Innovation Foundation Oligonucleotide lipid nanoparticle compositions, methods of making and methods of using the same
WO2015175965A1 (en) * 2014-05-15 2015-11-19 The Research Foundation For Suny Compositions targeting the interaction domain between p27kip1 and brk and methods of use thereof
EP3164113B1 (en) 2014-06-04 2019-03-27 Exicure, Inc. Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
US9855345B2 (en) 2014-10-30 2018-01-02 Delta-Fly Pharma, Inc. Method for producing lipoplex for topical administration and antitumor agent using such lipoplex
JP2017537619A (ja) 2014-11-21 2017-12-21 ノースウェスタン ユニバーシティ 球状核酸ナノ粒子複合体の配列特異的細胞内取込
US10704043B2 (en) 2015-01-14 2020-07-07 Exicure, Inc. Nucleic acid nanostructures with core motifs
US20160287152A1 (en) * 2015-03-30 2016-10-06 Verily Life Sciences Llc Functionalized Nanoparticles, Methods and In Vivo Diagnostic System
EP4353257A2 (en) 2015-04-13 2024-04-17 CureVac Manufacturing GmbH Method for producing rna compositions
RU2718534C2 (ru) * 2015-06-05 2020-04-08 Мираджен Терапьютикс, Инк. Ингибиторы mir-155 для лечения кожной t-клеточной лимфомы (ctcl)
HRP20220156T1 (hr) 2015-09-17 2022-04-15 Modernatx, Inc. Spojevi i pripravci za unutarstaničnu isporuku terapeutskih sredstava
CN105288647B (zh) * 2015-10-10 2018-05-25 中国药科大学 功能化白蛋白及其纳米制剂的制备方法
JP7080172B2 (ja) * 2015-12-10 2022-06-03 モデルナティエックス インコーポレイテッド 治療薬の送達のための組成物及び方法
DK3394030T3 (da) 2015-12-22 2022-03-28 Modernatx Inc Forbindelser og sammensætninger til intracellulær afgivelse af midler
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
CN112587504B (zh) * 2016-10-17 2022-10-18 南京绿叶制药有限公司 一种抑制bcl-2的反义寡聚核酸的脂质纳米粒及其制备方法
US11583504B2 (en) 2016-11-08 2023-02-21 Modernatx, Inc. Stabilized formulations of lipid nanoparticles
CA3045017A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Taiga Biotechnologies, Inc. Nanoparticle formulations
WO2018107061A1 (en) * 2016-12-09 2018-06-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Hybrid exosomal-polymeric (hexpo) nano-platform for delivery of rnai therapeutics
EP3554561B1 (en) 2016-12-14 2023-06-28 Janssen Biotech, Inc. Cd137 binding fibronectin type iii domains
JP7104703B2 (ja) 2016-12-14 2022-07-21 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド Ｃｄ８ａ結合フィブロネクチンｉｉｉ型ドメイン
WO2018111976A1 (en) 2016-12-14 2018-06-21 Janssen Biotech, Inc. Pd-l1 binding fibronectin type iii domains
US20180179577A1 (en) * 2016-12-22 2018-06-28 Jiaming HU Lipid-polymer Hybrid Nanoparticle Biochip and Application Thereof
EP3558407B1 (en) * 2016-12-22 2023-03-15 Biotronik AG Drug releasing coatings for medical devices and methods of making same
US20190328903A1 (en) * 2016-12-30 2019-10-31 Samyang Biopharmaceuticals Corporation Polymer nanoparticle composition for plasmid dna delivery, and preparation method therefor
KR20190132405A (ko) 2017-03-15 2019-11-27 모더나티엑스, 인크. 치료제의 세포내 전달을 위한 화합물 및 조성물
AU2018234828A1 (en) 2017-03-15 2019-09-19 Modernatx, Inc. Lipid nanoparticle formulation
AU2018234814B2 (en) 2017-03-15 2022-06-30 Modernatx, Inc. Crystal forms of amino lipids
WO2018187590A1 (en) 2017-04-05 2018-10-11 Modernatx, Inc. Reduction or elimination of immune responses to non-intravenous, e.g., subcutaneously administered therapeutic proteins
US11696954B2 (en) 2017-04-28 2023-07-11 Exicure Operating Company Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties
WO2018209270A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas)
CN107184552B (zh) * 2017-06-07 2021-03-30 东华大学 一种半乳糖化聚乙烯亚胺修饰的载药醇质体的制备方法
MA49421A (fr) 2017-06-15 2020-04-22 Modernatx Inc Formulations d'arn
JP7231147B2 (ja) * 2017-06-29 2023-03-01 国立大学法人東海国立大学機構 Ｒｎａ導入試薬及びその利用
EP3655776A2 (en) * 2017-07-18 2020-05-27 Avectas Limited Payload delivery across cell membranes using continuous flow fluidic system
US10149898B2 (en) 2017-08-03 2018-12-11 Taiga Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for the treatment of melanoma
US20190062788A1 (en) * 2017-08-22 2019-02-28 Rubius Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticle methods and compositions for producing engineered erythroid cells
WO2019046809A1 (en) 2017-08-31 2019-03-07 Modernatx, Inc. METHODS OF MANUFACTURING LIPID NANOPARTICLES
CN107982537A (zh) * 2017-11-17 2018-05-04 厦门大学 针对microRNA-155的治疗性药物及其应用
KR102245539B1 (ko) * 2018-02-12 2021-04-29 주식회사 지앤피바이오사이언스 코어-쉘 구조의 마이크로 입자를 유효성분으로 포함하는 성장인자 유전자 발현 증가용 조성물
US20210113641A1 (en) * 2018-03-29 2021-04-22 Institute Of Basic Medical Sciences Chinese Academy Of Medical Sciences Extraction of plant source "medicinal soup" and manual preparation of "herbal medicine" and related products
US11603543B2 (en) * 2018-04-18 2023-03-14 Oisin Biotechnologies, Inc. Fusogenic lipid nanoparticles for target cell-specific production of a therapeutic protein
JP2021523944A (ja) * 2018-05-15 2021-09-09 フラッグシップ パイオニアリング イノベーションズ シックス，エルエルシー 有害生物防除組成物及びその使用
EP3808344A4 (en) * 2018-06-01 2022-03-30 Sogang University Research Foundation NANOPARTICLE COMPOSITE HAVING IMPROVED ENDOCYTOSIS EFFICIENCY BY SURFACE MODIFICATION USING A LIPID AND METHOD FOR MAKING THE SAME
US10987428B2 (en) * 2018-06-01 2021-04-27 City Of Hope Phosphorothioate-conjugated miRNAs and methods of using the same
CN108743962B (zh) * 2018-06-19 2021-07-02 东华大学 一种基于荧光碳点修饰的树状大分子的双载药靶向纳米平台的制备方法
WO2020051223A1 (en) * 2018-09-04 2020-03-12 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
GB2600800B (en) * 2018-09-04 2023-08-16 Univ Texas Compositions and methods for organ specific delivery of nucleic acids
TW202028222A (zh) 2018-11-14 2020-08-01 美商Ionis製藥公司 Foxp3表現之調節劑
KR20210113260A (ko) * 2019-01-04 2021-09-15 온코루스, 인크. 캡슐화된 rna 폴리뉴클레오타이드 및 사용 방법
EP4031524A1 (en) 2019-09-19 2022-07-27 ModernaTX, Inc. Branched tail lipid compounds and compositions for intracellular delivery of therapeutic agents
JP2022551204A (ja) 2019-10-14 2022-12-07 アロ・バイオセラピューティクス・カンパニー Ｃｄ７１結合フィブロネクチンｉｉｉ型ドメイン
US11781138B2 (en) 2019-10-14 2023-10-10 Aro Biotherapeutics Company FN3 domain-siRNA conjugates and uses thereof
CN110638759A (zh) * 2019-10-29 2020-01-03 珠海丽凡达生物技术有限公司 一种用于体外转染和体内递送mRNA的制剂
WO2022036170A1 (en) * 2020-08-14 2022-02-17 Arcturus Therapeutics, Inc. Method of lyophilizing lipid nanoparticles
WO2022192674A1 (en) * 2021-03-11 2022-09-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeted therapeutic lipid nanoparticles and methods of use
WO2023070132A1 (en) * 2021-10-22 2023-04-27 Ohio State Innovation Foundation Immunotherapies for the treatment of cancer
CN114306369B (zh) * 2021-12-23 2023-12-26 北京悦康科创医药科技股份有限公司 一种硫代寡核苷酸注射液及其制备方法
WO2023192503A1 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 The Johns Hopkins University Compositions of lipid nanoparticles for plasmid dna delivery to the liver and methods for preparing the same
WO2024044370A1 (en) * 2022-08-25 2024-02-29 Ohio State Innovation Foundation Compositions and methods for the delivery of active agents including nucleic acids
WO2024050310A1 (en) * 2022-08-29 2024-03-07 Sorrento Therapeutics, Inc. Lipid-coated nanoparticles

Family Cites Families (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US590877A (en) * 1897-09-28 Danger-signal for railway-crossings
US2003203A (en) * 1933-05-15 1935-05-28 Kim Young Wo Game
US5725871A (en) 1989-08-18 1998-03-10 Danbiosyst Uk Limited Drug delivery compositions comprising lysophosphoglycerolipid
US5707644A (en) 1989-11-04 1998-01-13 Danbiosyst Uk Limited Small particle compositions for intranasal drug delivery
US5466468A (en) 1990-04-03 1995-11-14 Ciba-Geigy Corporation Parenterally administrable liposome formulation comprising synthetic lipids
US5399363A (en) 1991-01-25 1995-03-21 Eastman Kodak Company Surface modified anticancer nanoparticles
US5756353A (en) 1991-12-17 1998-05-26 The Regents Of The University Of California Expression of cloned genes in the lung by aerosol-and liposome-based delivery
WO1993023011A1 (en) 1992-05-18 1993-11-25 Minnesota Mining And Manufacturing Company Transmucosal drug delivery device
US5543158A (en) 1993-07-23 1996-08-06 Massachusetts Institute Of Technology Biodegradable injectable nanoparticles
IE80468B1 (en) 1995-04-04 1998-07-29 Elan Corp Plc Controlled release biodegradable nanoparticles containing insulin
US20020022264A1 (en) * 1995-05-26 2002-02-21 Sullivan Sean M. Delivery vehicles comprising stable lipid/nucleic acid complexes
US5908777A (en) * 1995-06-23 1999-06-01 University Of Pittsburgh Lipidic vector for nucleic acid delivery
US6248720B1 (en) * 1996-07-03 2001-06-19 Brown University Research Foundation Method for gene therapy using nucleic acid loaded polymeric microparticles
US6056973A (en) * 1996-10-11 2000-05-02 Sequus Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic liposome composition and method of preparation
TWI225412B (en) 1997-06-23 2004-12-21 Sequus Pharm Inc Liposome-entrapped polynucleotide composition and method
US6395253B2 (en) * 1998-04-23 2002-05-28 The Regents Of The University Of Michigan Microspheres containing condensed polyanionic bioactive agents and methods for their production
JP4638098B2 (ja) * 1999-06-14 2011-02-23 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド 癌治療
MXPA02002107A (es) * 1999-08-27 2003-08-20 Inex Pharmaceuticals Corp Composiciones para estimular la secrecion de citoquina e inducir una respuesta inmune.
US7060291B1 (en) * 1999-11-24 2006-06-13 Transave, Inc. Modular targeted liposomal delivery system
US6821955B2 (en) * 2000-04-07 2004-11-23 Baylor College Of Medicine Macroaggregated protein conjugates as oral genetic immunization delivery agents
US6613308B2 (en) 2000-09-19 2003-09-02 Advanced Inhalation Research, Inc. Pulmonary delivery in treating disorders of the central nervous system
CA2445947A1 (en) * 2001-04-30 2002-11-07 Targeted Genetics Corporation Lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
CA2449054C (en) 2001-05-30 2011-01-04 The Scripps Research Institute Integrin targeting liposome for nucleic acid delivery
JP2003088371A (ja) * 2001-09-04 2003-03-25 Mitsubishi Pharma Corp 遺伝子導入用組成物
KR100484371B1 (ko) 2001-10-25 2005-04-20 가부시키가이샤 아텍스 히터선부착 시트체의 제조방법
AU2002340662B2 (en) * 2001-11-07 2008-07-03 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Mucosal adjuvants comprising an oligonucleotide and a cationic lipid
US7678386B2 (en) 2002-07-15 2010-03-16 Board Of Regents The University Of Texas Liposomes coated with selected antibodies that bind to aminophospholipids
CN100558740C (zh) * 2002-08-16 2009-11-11 雷克珊公司 反义寡核苷酸用于抑制Akt-1表达的用途
US20040208921A1 (en) 2003-01-14 2004-10-21 Ho Rodney J. Y. Lipid-drug formulations and methods for targeted delivery of lipid-drug complexes to lymphoid tissues
WO2004066949A2 (en) 2003-01-28 2004-08-12 Rexahn Corporation Antisense oligonucleotides that inhibit expression of hif-1
ATE441710T1 (de) * 2003-01-31 2009-09-15 Rexahn Corp Antisense oligonukleotide, die die ausprägungsstufe von hif-1 hemmen
AU2004272646B2 (en) * 2003-09-15 2011-11-24 Arbutus Biopharma Corporation Polyethyleneglycol-modified lipid compounds and uses thereof
KR100638041B1 (ko) 2003-12-24 2006-10-23 주식회사 삼양사 수용성 약물의 경구투여용 나노입자 조성물 및 그의제조방법
JP2006111591A (ja) * 2004-10-15 2006-04-27 Anges Mg Inc 核酸医薬を標的特異的に細胞内送達するための製剤
JP2006298780A (ja) * 2005-04-15 2006-11-02 Tohoku Univ Ｈｇｆ遺伝子と粗大凝集アルブミン−ポリエチレンイミン（ｍａａ−ｐｅｉ）との複合体
US20070087045A1 (en) * 2005-10-14 2007-04-19 Industrial Technology Research Institute Lipid carrier and method of preparing the same
TW200800235A (en) * 2005-10-18 2008-01-01 Otsuka Pharma Co Ltd Carrier composition for nucleic acid transport
WO2007051303A1 (en) * 2005-11-02 2007-05-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF
US8067380B2 (en) 2005-12-19 2011-11-29 Industrial Technology Research Institute Glutathione-based delivery system
GB2450475A (en) * 2007-06-12 2008-12-31 Univ Nottingham Trent Antimicrobial polymer nanocomposite
US20110177155A1 (en) * 2007-08-21 2011-07-21 Immune Disease Institute, Inc. Methods of delivery of agents to leukocytes and endothelial cells
PL208054B1 (pl) * 2007-09-06 2011-03-31 Akademia Medyczna Im Piastow Śląskich We Wrocławiu Kompozycja lipidowa do wytwarzania lipidowego nośnika dla leków genetycznych i jej zastosowanie
EP2217221B1 (en) * 2007-10-17 2018-06-27 Korea Advanced Institute of Science and Technology Ldl-like cationic nanoparticles for deliverying nucleic acid gene, method for preparing thereof and method for deliverying nucleic acid gene using the same
BRPI0820302A2 (pt) * 2007-11-09 2015-05-19 Univ Northeastern Nanopartículas semelhantes a micelas de automontagem para liberação sistêmica de gene
WO2009067243A2 (en) * 2007-11-20 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of cd40 expression
US20110038941A1 (en) 2007-12-27 2011-02-17 The Ohio State University Research Foundation Lipid Nanoparticle Compositions and Methods of Making and Using the Same
WO2009123734A1 (en) 2008-04-04 2009-10-08 The Regents Of The University Of California Functionalized magnetic nanoparticles and methods of use thereof
US8222220B2 (en) 2008-05-13 2012-07-17 George Mason Intellectual Properties, Inc. Nanogenomics for medicine: siRNA engineering
AU2009249403A1 (en) * 2008-05-19 2009-11-26 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions comprising novel cationic lipids
US20090312402A1 (en) * 2008-05-20 2009-12-17 Contag Christopher H Encapsulated nanoparticles for drug delivery
JP2011528910A (ja) * 2008-07-25 2011-12-01 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド センス鎖中の一般塩基またはミスマッチを使用したｓｉＲＮＡサイレンシング活性の亢進
WO2010014595A2 (en) 2008-07-31 2010-02-04 The Ohio State University Research Foundation Methods and compositions for delivering therapeutic agents in the treatment of b-cell related disorders
WO2010049562A1 (es) * 2008-10-28 2010-05-06 Universidade De Santiago De Compostela Sistemas nanoparticulares elaborados a base de polímeros aniónicos.
WO2010054384A1 (en) 2008-11-10 2010-05-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipids and compositions for the delivery of therapeutics
EP2601934A1 (en) 2009-01-22 2013-06-12 Ludwig-Maximilians-Universität München Vesicular phospholipid gels comprising proteinaceous substances
ES2351756B1 (es) * 2009-07-28 2011-10-05 Universidad Del Pais Vasco Nanopartículas lipídicas para terapia génica.
CN102803511A (zh) * 2009-11-23 2012-11-28 俄亥俄州立大学 用于影响肿瘤细胞生长、迁移和侵袭的材料和方法
JP2013528665A (ja) * 2010-03-26 2013-07-11 メルサナ セラピューティックス， インコーポレイテッド ポリヌクレオチドの送達のための修飾ポリマー、その製造方法、およびその使用方法
CN103025384B (zh) * 2010-03-26 2016-04-20 俄亥俄州立大学 涉及miR-155对于错配修复和基因组稳定性的调节的材料和方法
US10081542B2 (en) 2010-04-20 2018-09-25 University of Florida Research Foundation, lnc. Nanozymes, methods of making nanozymes, and methods of using nanozymes
US20130260460A1 (en) * 2010-04-22 2013-10-03 Isis Pharmaceuticals Inc Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
US20110319473A1 (en) * 2010-06-29 2011-12-29 Surmodics, Inc. Compositions and methods for enhancement of nucleic acid delivery
US8691750B2 (en) * 2011-05-17 2014-04-08 Axolabs Gmbh Lipids and compositions for intracellular delivery of biologically active compounds
CN102552105B (zh) * 2011-10-17 2014-04-02 复旦大学 一种级联脑部靶向药物递送***及其制备方法和用途
BR112014029247A2 (pt) * 2012-05-23 2017-06-27 Univ Ohio State nanopartícula de lipídio, composição farmacêutica, método para fazer uma nanopartícula de lipído, produto, método de tratamento de um distúrbio, e sistema de entrega

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021145595A1 (ko) * 2020-01-15 2021-07-22 (주)인핸스드바이오 생체 내 약물 전달을 위한 지질 나노입자 및 이의 용도
US11464870B2 (en) 2020-01-15 2022-10-11 EnhancedBio Inc. Lipid nanoparticles for in-vivo drug delivery, and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
MX2014014251A (es) 2015-06-17
US20180021447A1 (en) 2018-01-25
BR112014027834A2 (pt) 2017-08-08
JP2015519346A (ja) 2015-07-09
AU2017245294A1 (en) 2017-11-02
AU2013266238A1 (en) 2014-12-18
JP2015525209A (ja) 2015-09-03
AU2013266232B2 (en) 2017-08-03
US20160015824A1 (en) 2016-01-21
WO2013177421A3 (en) 2014-02-27
JP2015523969A (ja) 2015-08-20
AU2013266238B2 (en) 2017-07-27
KR20150032945A (ko) 2015-03-31
WO2013177419A2 (en) 2013-11-28
US9750819B2 (en) 2017-09-05
EP2852415A1 (en) 2015-04-01
BR112014029247A2 (pt) 2017-06-27
CN105163721A (zh) 2015-12-16
AU2017245294B2 (en) 2019-09-12
WO2013177421A2 (en) 2013-11-28
EP2852381A2 (en) 2015-04-01
AU2013266232A1 (en) 2014-11-20
CN104582691A (zh) 2015-04-29
US20150118288A1 (en) 2015-04-30
MX353567B (es) 2018-01-18
EP2852380A4 (en) 2016-01-20
JP6220389B2 (ja) 2017-10-25
CN104428005A (zh) 2015-03-18
US20130315937A1 (en) 2013-11-28
CA2874490A1 (en) 2013-11-28
CN105163721B (zh) 2018-05-22
CA2874495A1 (en) 2013-11-28
CA2874490C (en) 2021-11-16
CA2871477A1 (en) 2013-11-28
EP2852380A2 (en) 2015-04-01
EP2852381B1 (en) 2020-10-07
KR102169891B1 (ko) 2020-10-26
US10307490B2 (en) 2019-06-04
WO2013177415A1 (en) 2013-11-28
MX2014014196A (es) 2015-08-14
JP2018002727A (ja) 2018-01-11
JP6228191B2 (ja) 2017-11-08
WO2013177419A3 (en) 2014-02-20
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