KR20130121702A

KR20130121702A - 건성의 안정된 지혈 조성물의 제조 방법

Info

Publication number: KR20130121702A
Application number: KR1020127034269A
Authority: KR
Inventors: 안드레아스 고에슬; 아추시 에드워드 오사와; 캐리 제이 라이치
Original assignee: 백스터 인터내셔널 인코포레이티드; 박스터 헬쓰케어 에스에이
Priority date: 2010-06-01
Filing date: 2011-06-01
Publication date: 2013-11-06
Also published as: CO6660509A2; EP2575776B1; CA2801120C; AU2011260274A1; BR112012030457B1; ES2682302T3; JP2016135808A; JP6289096B2; JP2018016656A; JP2013530955A; MX2012013999A; CN102917691A; BR112012030457A2; WO2011151400A1; US9408945B2; US20120128653A1; CA2801120A1; EP2575776A1; AU2011260274B2; KR101865427B1

Abstract

a) 응고 유도제의 건성 제제를 포함하는 제1 성분을 제공하고, b) 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체의 건성 제제를 포함하는 제2 성분을 제공하고, c) 최종 용기에서 상기 제1 성분에 의한 제2 성분의 분해를 본질적으로 방지하면서 습윤 페이스트를 형성하도록 효과적인 조건 하에 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 혼합하거나 또는 상기 습윤 페이스트를 최종 용기로 옮기고, d) 상기 페이스트를 상기 용기에서 냉동시키고 동결건조시킴으로써 상기 제1 및 상기 제2 성분을 동결건조된 형태로 포함하는 건성의 안정된 지혈 조성물을 수득하고, e) 상기 최종 용기 내의 상기 건성의 안정된 지혈 조성물을, 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 건성의 안정된 지혈 조성물로서 조합된 형태로 함유한 저장가능한 제약 장치로 마무리처리하는 것을 포함하는, 건성의 안정된 지혈 조성물의 제조 방법을 서술한다.

Description

건성의 안정된 지혈 조성물의 제조 방법{PROCESS FOR MAKING DRY AND STABLE HEMOSTATIC COMPOSITIONS}

본 발명은 지혈 조성물을 저장-안정형 형태로 제조하는 방법에 관한 것이다.

생체적합성, 생분해성, 건성의 안정된 과립 물질을 포함하는 건성의 저장-안정형 지혈 조성물은 예를 들어 WO 98/008550 A 또는 WO 2003/007845 A로부터 알려져 있다. 이들 제품은 지혈에 관한 기술 분야에서 성공적으로 적용되어 왔다. 플로실(Floseal)®은 유동성 페이스트를 형성하도록 트롬빈-함유 용액 중에 팽윤된 과립 젤라틴 매트릭스로 이루어진 강력한 다기능 지혈제의 예이다.

이러한 제품들은 인간에게 적용해야 하기 때문에, 최종 제품 및 그의 성분의 품질, 저장-안정성 및 살균율에 대해 가장 높은 안전성 기준을 마련할 필요가 있다. 한편, 제조 및 취급이 가능한 편리하고 효율적으로 이루어져야 한다. 지혈 조성물이 사용을 위해 트롬빈 성분을 요하는 경우, 최종 제품 중에 이러한 트롬빈 성분의 제공은 도전적인 것이다. 트롬빈 및 매트릭스 물질은 대체로 제조 요건과 관련해서 상이한 성질을 갖기 때문에, 그들을 개별적으로 제조하고 제공해야 한다. 예를 들어, 살균 요건은 비교적 안정된 과립 (종종 또한 가교결합된) 매트릭스 물질과 단백질 성분, 예컨대 트롬빈 사이에서 상당히 다를 수 있다. 이러한 매트릭스 물질이 대체로 강력한 살균 방법 (예컨대 고압살균, 감마선-조사 등)에 의해 살균될 수 있는 한편, 트롬빈 (효소로서)은 더 많은 주의를 가지고 처리해야 한다. 상기 강력한 살균 방법은, 이러한 강한 처리에 의해 야기되는 효소 활성 저하로 인해, 대체로 트롬빈의 경우에는 가능하지 않다. 안정성 이유로, (본 발명에 따른 제품 뿐만 아니라) 이러한 제품은 대체로, 습윤화 또는 용매화 (현탁) 제제의 첨가 및 트롬빈 성분과 매트릭스 물질 성분의 혼합을 필요로 하는 건성 형태로 제공되고, 사용 직전에 (보통 (하이드로-)겔, 현탁물 또는 용액의 형태인) "즉시 사용가능한(ready-to-use)" 형태가 된다. 트롬빈 재구성 또는 과립 매트릭스 물질과 트롬빈 용액의 혼합 단계는 대체로 약간의 시간과 처리를 요하고 특히 집중 건강 관리에서 문제를 일으킬 수 있는 단계이다.

본 발명의 목적은 이러한 문제를 극복하고 편리하게 제공가능하고 사용가능한 건성의 저장-안정형 지혈 조성물의 적합한 제조 방법을 제공하는 것이다. 이들 방법은, 특히 처리 단계의 수가 가능한 적게 유지되어야 하는 집중 치료 의학에서 "즉시 사용가능한" 지혈 조성물의 편리한 제공을 가능하게 하는 제품 포맷을 제공해야 한다.

<발명의 요약>

따라서, 본 발명은

a) 건성 트롬빈 제제와 같은, 응고 유도제의 건성 제제를 포함하는 제1 성분을 제공하고,

b) 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체의 건성 제제를 포함하는 제2 성분을 제공하고,

c) 최종 용기에서 상기 제1 성분에 의한 제2 성분의 분해를 본질적으로 방지하면서 습윤 페이스트를 형성하도록 효과적인 조건 하에 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 혼합하거나 또는 상기 습윤 페이스트를 최종 용기로 옮기고,

d) 상기 페이스트를 상기 용기에서 냉동시키고 동결건조시킴으로써 상기 제1 및 상기 제2 성분을 동결건조된 형태로 포함하는 건성의 안정된 지혈 조성물을 수득하고,

e) 상기 최종 용기 내의 상기 건성의 안정된 지혈 조성물을, 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 건성의 안정된 지혈 조성물로서 조합된 형태로 함유한 저장가능한 제약 장치로 마무리처리(finish)하는 것을 포함하는, 건성의 안정된 지혈 조성물의 제조 방법을 제공한다.

상기 방법은 본 발명에 따른 건성의 안정된 조성물을 조성물이 의학적 용도로 용이하게 재구성될 수 있게 하는 편리한 방식으로 제공한다. 본 발명은 또한 본 발명의 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 표적 부위로 전달하는 것을 포함하는, 지혈 조성물을 환자 신체의 표적 부위로 전달하는 방법에 관한 것이다. 또 다른 측면에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 의해 수득된 마무리처리된 최종 용기에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 제약상 허용되는 희석제와 접촉시키는 것을 포함하는 즉시 사용가능한 지혈 조성물을 제공하는 방법 뿐만 아니라 마무리처리된 최종 용기 및 조성물을 적용하기 위한 다른 수단 (예를 들어, 희석제 용기)을 포함하는 키트에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 수술 출혈 부위, 외상적 출혈 부위 등을 비롯한 출혈 부위에서 지혈을 제공하는데 특히 유용하다. 조성물의 예시적인 용도는 혈관 카테터 삽입을 위해 만들어진 혈관 관통된 곳 위의 조직 관을 봉합하는 데 있을 수 있다.

본 발명은, 주로 2-성분 제품을 편리한 단일-조성 포맷으로 제공함으로써, 지혈 조성물의 전달 및 취급을 위한 개선책을 제공한다. 본 발명에 따른 지혈 조성물은 건성 트롬빈 제제와 같은, 응고 유도제의 건성 제제를 포함하는 제1 성분 ("응고 유도제 성분" 또는 "트롬빈 성분") 및 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체의 건성 제제를 포함하는 제2 성분 ("지혈 생체적합성 중합체 성분")을 함유한다. 추가 성분들이 존재할 수 있다. 이러한 종류의 제품은 다른 포맷이지만 기본적으로 종래 기술분야에 알려져 있다: 대체로, 성분들은 별개의 개체로서 건성 형태로 제공된다. 환자에게 투여하기 위해 성분들을 혼합하기 전에, 건성 성분들은 대체로 적합한 희석제와 개별적으로 접촉시킨다. 그리고 나서, 개별적으로 재구성된 성분들을 혼합함으로써 성분들의 혼합을 수행한다. 예를 들어, 제약상 허용되는 (수성) 희석제에 의해 재구성되는, 예를 들어 트롬빈 성분과 같은 응고 유도제의 건성 제제를 제공할 수 있다. 그리고 나서, 재구성 후 수득된 트롬빈 용액과 같은 응고 유도제 용액은, 대체로 이어서 환자에게 적용되는 하이드로겔의 형성 하에 중합체의 습윤화 또는 가용화를 위해 사용된다. 이는 제품이 "즉시 사용가능하게" 되기 전에 적어도 2-단계 공정이기 때문에, 제품이 사용할 준비가 되기 전에 오직 한 단계만을 필요로 한다면 더 편리할 것이다. 그러나, 상기 언급된 바와 같이, 두 성분의 특성은 주로 안정도 및 활성도 손실로 인해 제조 방법의 과정에서 성분의 단순 혼합을 저해한다.

본 발명에 의해, 두 성분이 이미 함께 재구성될 준비가 된 조합된 건성 형태로 제공될 수 있게 하는 제조 방법이 제공된다. 본 발명에 따른 방법은 과학적 벤치 실험에 용이할 뿐만 아니라 산업적 제약상 대량 생산에도 적합하다. 본 발명에 의해, 이러한 이미 혼합된 지혈 조성물을 원치 않는 분해 또는 효소 활성 손실의 위험 없이 제공할 수 있었다. 얻은 조성물은 앞서 공지된 제품에 상응하는 저장-안정성을 가질 뿐만 아니라 의학적 투여 전에 개별적 재구성 및 혼합이 본 발명에 의해 수득되는 제품에서는 필요하지 않기 때문에 취급이 더 편리하다. 지혈 조성물의 즉시 사용가능한 하이드로겔, 현탁물 또는 용액의 제공은, 단순히 적합한 제약상 허용되는 희석제를 최종 용기에서 조성물에 첨가함으로써, 일 단계 공정으로 가능하다. 최종 용기는 바람직하게는 희석제와의 접촉 후 재구성된 지혈 조성물을 바로 투여하도록 설계된 주사기이다.

응고 유도제는 트롬빈, 사독, 혈소판 활성화제, 트롬빈 수용체 활성화 펩티드 및 피브리노겐 침전제로 이루어진 군으로부터 선택된 물질이고, 트롬빈이 바람직하다.

"트롬빈 용액"은 인간에서 사용하기 적합한 (즉, 제약상 허용되는) 임의의 트롬빈 제제로부터 만들 수 있다. 적합한 트롬빈 공급원에는 인간 또는 소 혈액, 혈장 또는 혈청 (어떠한 역 면역 반응도 예측되지 않는다면 다른 동물 공급원의 트롬빈을 적용할 수 있음) 및 재조합 기원의 트롬빈 (예를 들어, 인간 재조합 트롬빈)이 포함되고; 일부 용도의 경우에는 자가 인간 트롬빈이 바람직할 수 있다. 제1 성분으로 제공된 트롬빈 용액의 농도는 대체로 재구성 지혈 조성물 중 계획한 트롬빈 농도로 조절한다. 바람직하게, 지혈 조성물은 10 내지 100,000 국제 단위 (I.U.), 더욱 바람직하게는 100 내지 10,000 I.U., 특히 500 내지 5,000 I.U.의 트롬빈을 함유한다. "즉시 사용가능한" 조성물 중 트롬빈 농도는 바람직하게는 10 내지 10,000 I.U., 더욱 바람직하게는 50 내지 5,000 I.U., 특히 100 내지 1,000 I.U.의 범위이다. 희석제는 "즉시 사용가능한" 조성물 중 원하는 최종-농도를 달성하게 하는 양으로 사용된다.

본 발명에 따른 "생체적합성 중합체의 건성 제제"는 예를 들어 WO 98/08550 A에 공지되어 있다. 바람직하게, 중합체는 생체적합성, 생분해성 건성의 안정된 과립 물질이다. 본 발명에 따른 "건성" 중합체는 대체로 0.1 내지 5,000 ㎛의 입자 크기를 갖는 것으로 제공된다. 대체로, 중합체 입자는 10 내지 1000 ㎛, 특히 50 내지 500 ㎛의 평균 입자 직경 (중앙값 크기) ("평균 입자 직경"은 레이저 회절분석에 의해 측정된 바와 같은 중앙값 크기이고; "중앙값 크기" (또는 질량 중앙값 입자 직경)는 도수 분포를 반으로 나눈 입자 직경이고; 주어진 제제 입자의 50%는 더 큰 직경을 갖고, 나머지 입자의 50%는 더 작은 직경을 가짐)을 갖는다. 더 큰 입자의 적용은 주로 의학적 필요에 의존하고; 더 작은 평균 입자 직경을 가진 입자는 종종 제조 과정에서 취급하기에 더 어렵다. 따라서 건성 중합체는 과립 형태로 제공된다. 분말 및 과립 (또는 과립화)란 용어는 때때로 각각의 물질 부류를 구별하는데 사용하지만, 분말은 과립 물질의 특별한 하위-부류로서 본원에서 정의한다. 구체적으로, 분말은 더 미세한 낟알 크기를 갖는 과립 물질을 지칭하고, 따라서 흐를 때 덩어리를 형성하는 경향이 더 크다. 과립에는 젖었을 때를 제외하고는 덩어리를 형성하는 경향이 없는 더 굵은 과립 물질이 포함된다.

본 발명에 따른 "건성" 지혈 조성물은 비교할 만한 시판 제품, 예컨대 플로실®의 수분 함량에 대략적으로 상응할 수 있는 잔류 수분 함량만을 갖는다 (플로실은, 예를 들어 건성 제품으로서 약 12% 수분을 갖는다). 대체로, 본 발명에 따른 건성 조성물은 이들 제품보다 낮은 잔류 수분 함량, 바람직하게는 10% 미만의 수분, 더욱 바람직하게는 5% 미만의 수분, 특히 1% 미만의 수분을 갖는다. 또한, 본 발명에 따른 지혈 조성물은 더 낮은 수분 함량, 예를 들어 0.1% 또는 심지어 그보다 낮게 가질 수도 있다. 본 발명에 따른 건성 지혈 조성물의 바람직한 수분 함량은 0.1 내지 10%, 특히 0.5 내지 5%이다.

본 발명에 따라, 지혈 조성물은 최종 용기에서 건성 형태로 제공된다. 건성 형태에서는, 성분의 분해 또는 불활성화 과정이 상당히 그리고 적절하게 감소되어 저장 안정성을 갖게 할 수 있다. 적합한 저장 안정성은 트롬빈 활성을 기준으로 결정될 수 있다. 따라서, 본 종류의 건성 지혈 조성물은, 실온 (25℃)에서 건성 형태로 24 개월 저장 후 재구성 후 무려 400 I.U./㎖ (500 I.U./㎖ 제품의 경우)가 여전히 있다면 (즉, 동결건조 전 초기 활성에 비해 80% 트롬빈 활성 또는 그보다 많이 남아 있다면) 저장 안정성이다. 바람직하게, 본 발명에 따른 조성물은 더 높은 저장 안정성을 갖는다, 즉 이러한 24 개월 저장 후 90% 이상의 트롬빈 활성, 특히 95% 이상의 트롬빈 활성이 남아 있다.

그러나, 응고 유도제 용액, 예컨대, 예를 들어 트롬빈 용액 및 생체적합성 중합체를 습윤 페이스트가 되도록 혼합함으로써 제조된 습윤 페이스트 및 그의 동결건조물의 제공은 사소한 일이 아닌데, 혼합 및 동결건조를 중합체 및/또는 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈의 관련 분해를 막아주는 방식으로 수행해야 하기 때문이다. 이는 최종 용기 내의 혼합 과정으로부터 생성된 습윤 페이스트의 분해를 본질적으로 방지하고 이를 냉동시키는 조건 하에 혼합 단계를 수행함으로써 본 발명에 의해 지켜진다. 그리고 나서 조성물을 추가 분해 과정의 위험 없이 적절하게 동결건조시킬 수 있다. 본 발명의 경우, 심지어 페이스트의 동결 건조 전 그리고 혼합 동안 습윤 상태에서의 (응고 유도제 용액, 예를 들어 트롬빈 용액과 중합체 사이의) 접촉 시간도 가능한 짧게 유지하는 것이 중요하다. 본 발명에 따른 습윤 상태 동안의 최대 접촉 시간은, 본 방법에 적절한 접촉 시간을 본원에 개시된 정보에 기초하여 당업자에 의해 용이하게 조절할 수 있다는 사실에 기초한 여러 파라미터에 좌우된다. 적절한 접촉 시간을 정의하는데 가장 중요한 파라미터는 온도, 물 함량 및 트롬빈 농도이다. 예를 들어, 4 ㎖ 트롬빈 용액 및 0.8g 중합체 (예를 들어, 물과 섞여 있고 0.704g의 건성 젤라틴 분말에 상응하는 젤라틴 과립)를 포함한 페이스트 중 500 I.E./㎖을 갖는 트롬빈 용액의 경우, 습윤 상태 (즉, 페이스트 형태)에서의 중합체와의 최대 접촉 시간은 -약 4℃, 15℃ 및 실온 (25℃)의 경우- 25 h, 6 h 및 2 h이다. 특히 본 발명에서 사용된 온도는 약 2℃ 내지 약 25℃, 바람직하게는 약 2℃ 내지 15℃, 특히 바람직하게는 약 4℃이다. 더 높은 농도의 응고 유도제, 예컨대 트롬빈, 또는 더 높은 물 함량은 습윤 상태 동안에 더 짧은 최대 접촉 시간에 이르게 한다. 따라서, 습윤 상태에서의 바람직한 접촉 시간은 5 min 내지 6 h, 더욱 더 바람직하게는 5 min 내지 2 h, 특히 5 내지 30 min의 범위이다. 바람직하게, 혼합 단계는 저온, 예를 들어 1 내지 10℃, 특히 2 내지 6℃에서 수행한다.

본 발명에 따른 혼합 단계가 상당한 액체 상을 함유하지 않는 습윤 페이스트를 생성하는 것, 즉 본 발명에 따른 페이스트에 유리 액체가 거의 없는 것이 또한 중요하다. 본 발명에 따른 습윤 페이스트는 유동성이지만 (어느 정도의 유동성을 갖지만), 페이스트로서 취급하기에 충분한 점성 (예를 들어 약 10 내지 100 Pa.s 및 그 초과의 바람직한 점도)이 또한 있다. 이는 동결건조 전 혼합 동안 분해 과정을 막는데 중요하다. 성분들을 (본 발명에 따른 페이스트 형태가 아닌) 가용성 (현탁화) 형태로 혼합하고 이어서 건조 과정을 시작하면 물질의 견딜 수 없는 분해를 야기하게 된다. 예를 들어, 트롬빈 및 젤라틴을 4℃로 유지하더라도, 24 h 후에 확실한 분해가 나타난다.

이와 관련해서 또 다른 중요한 파라미터는 혼합 단계에서의 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈 성분의 양이다. 그것은 습윤 페이스트를 생성할 만큼 충분히 많아야 하지만 상당한 액체 상을 생성할 만큼 많아서는 안 된다. 따라서, 85% w/w 초과의 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈 용액의 첨가는 습윤 페이스트 중 미미한 과량을 초과하는 액체 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈을 야기할 수 있으므로, 바람직하게는 85 % w/w 초과를 피해야 한다. 바람직한 혼합 비는 약 80 % w/w 하향 (즉, 80 ㎖ 트롬빈 용액/20 g 건성 중합체)에서 출발한다. 더 낮은 함량의 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈 함량은 얻은 습윤 페이스트의 취급 성능을 시험함으로써 특정 중합체를 위해 용이하게 조절할 수 있다. 대체로, 응고 유도제의 60 내지 80% 용액, 예를 들어 트롬빈 용액 함량에 근접한 페이스트가 취급하는데 더 용이하고; 압출 혼합물의 경우 또한 더 낮은 함량의 응고 유도제, 예를 들어 트롬빈 함량이 취급시 중대한 어려움을 만들지 않는다. 50% 미만의 응고 유도제 용액, 예를 들어 트롬빈 용액으로 형성된 습윤 페이스트는 취급시 (예를 들어 주사기에서) 문제를 일으킬 수 있는 유동성의 손실 가능성으로 인해 문제가 될 수 있었다.

따라서, 본 발명은 이 목표에 도달하기 위해 원칙적으로 두 실시양태를 이용한다. 첫 번째 원칙은 두 성분을 최종 용기에서 혼합하고, 이어서 혼합물을 동결건조시키는 것을 포함하고; 대안적으로는, 성분들을 용기 밖에서 혼합하여 습윤 페이스트를 형성하고, 이어서 예를 들어 압출을 통해 최종 용기로 옮길 수 있다. 혼합은, 예를 들어 두 개의 연결된 용기 (예를 들어, 주사기) 사이에서 스우싱(swooshing)하거나 두 성분들을 압출기로 가져와 압출 생성물을 최종 용기로 압출시킴으로써 달성될 수 있다. 바람직하게, 수득된 혼합물 (즉, 습윤 슬러리)을 냉동시키고 동결건조시킨다.

바람직하게, 본 발명에 따른 방법은 무균 환경에서 수행하고, 특히 혼합 단계는 무균성으로 수행해야 한다. 이미 적절하게 살균된 성분들에 의해 과정을 시작하고 이어서 모든 추가 단계들을 무균성으로 수행하는 것이 또한 바람직하다.

방법의 최종 단계는 마무리처리 단계이다. 이 단계 동안, 최종 용기를 적절하게 밀봉하고 저장 및/또는 판매할 준비가 되도록 만든다. 마무리처리 단계는 최종 용기에 라벨 붙이기, 포장 및 (추가) 살균 과정의 수행 (예를 들어 최종 용기 또는 포장된 제품 또는 최종 용기를 포함한 키트 상에서 수행됨)을 포함할 수 있다.

바람직하게, 마무리처리 단계는 EO (에틸렌 옥시드) 살균 단계를 포함한다. EO 살균은 현 기술 분야에서 통상적이다. 에틸렌 옥시드 가스는 세균 (및 그의 내생포자), 곰팡이, 및 균류를 죽인다. EO 살균은 저온살균 또는 고압살균과 같은 고온 기법에 의해 손상 받을 수 있는 물질을 살균하는데 사용된다.

살균에 바람직한 다른 실시양태는 β 또는 γ-선 조사와 같은 이온화 방사선 조사의 적용 또는 증발된 과산화수소의 사용이다.

바람직한 실시양태에 따라, 최종 용기는 살균 방사선에 노출된 경우 중합체의 개질을 억제하는데 효과적인 안정화제, 바람직하게는 아스코르브산, 아스코르브산 나트륨, 아스코르브산의 기타 염, 또는 산화방지제를 소정량 추가로 포함한다.

최종 용기는 제약상 투여되는 화합물을 수용 (및 저장)하는데 적합한 임의의 용기일 수 있다. 주사기, 바이얼, 튜브 등을 사용할 수 있다; 그러나, 본 발명에 따른 지혈 조성물을 주사기로 제공하는 것이 특히 바람직하다. 주사기는 또한 의료 행위시 주사기의 취급 이점으로 인해 선행 기술분야에 개시된 바와 같이 지혈 조성물을 위한 바람직한 투여 수단이 되어 왔다. 이어서 조성물은 바람직하게 주사기의 특정 니들을 통해 또는 적합한 카테터를 통해 (재구성 후) 적용될 수 있다. 재구성된 지혈 조성물 (바람직하게 재구성되어 하이드로겔을 형성함)은 또한 여러 다른 수단, 예를 들어 스패튤라, 브러시, 스프레이에 의해, 수동으로는 압력에 의해, 또는 임의의 다른 종래 기법에 의해 적용될 수 있다. 대체로, 본 발명에 따른 재구성된 지혈 조성물은, 주사기나, 또는 오리피스, 구멍, 니들, 튜브, 또는 다른 통로를 통해 재구성된 조성물을 압출시킬 수 있는 유사 적용기를 사용하여 물질의 비드, 층, 또는 유사 일부분을 형성하도록 적용될 것이다. 조성물의 기계적 파괴는, 통상적으로 0.01 ㎜ 내지 5.0 ㎜, 바람직하게는 0.5 ㎜ 내지 2.5 ㎜ 범위의 크기를 갖는, 주사기 또는 기타 적용기 내 오리피스를 통한 압출에 의해 수행될 수 있다. 그러나, 바람직하게, 지혈 조성물은 (재구성에 따라, 특히 수화에 의해, 필요한 크기의 서브유닛 (예를 들어, 하이드로겔 서브유닛)을 생산하는) 원하는 입자 크기를 갖는 건성 형태로 처음에 제조될 것이거나, 또는 최종 압출 또는 다른 적용 단계 이전에 필요한 크기로 부분적으로 또는 전체적으로 기계적으로 파괴될 것이다. 물론, 인간에게 사용하기 위해 안전성 요건을 충족하도록 이들 기계 요소들을 살균 형태 (내부 및 외부)로 제공해야 함은 자명하다.

최종 용기의 설계는 최종 용기에서의 동결건조 과정에 맞게 바람직하게 이루어질 수 있다.

본 발명에 따른 건성 지혈 조성물은 대체로 건성 조성물을 적합한 희석제와 접촉시킴으로써 사용 전에 재구성(재-수화)된다. 본 발명에 따른 희석제는 건성 지혈 조성물의 적합한 습윤을 허용하는 건성 조성물에 적합한 임의의 재구성 매질일 수 있다. 바람직하게, 건성 지혈 조성물은 "즉시 사용가능한" 포맷으로서 하이드로겔로 재구성된다.

적합한 희석제는 제약상 허용되는 수성 유체, 예를 들어 제약상 등급의 탈이온수 (모든 이온성 또는 완충 성분이 이미 건성 조성물에 제공된 경우; "주사용 물") 또는 특정 이온 및/또는 완충제를 함유한 제약상 등급의 수용액이다. 이들 수용액은 다른 성분, 예컨대 부형제를 추가로 함유할 수 있다. "부형제"는 예를 들어 트롬빈이 저장시 (또는 (예를 들어, 조사에 의한) 살균시) 그의 화학적 안정성 및 생물학적 활성을 유지하는 것을 보장하도록 또는 심미적 이유, 예를 들어 색상을 위해 용액에 첨가되는 비활성 물질이다. 바람직한 부형제에는 인간 알부민, 만니톨 및 아세트산 나트륨이 포함된다. 재구성 제품 중 인간 알부민의 바람직한 농도는 0.1 내지 100 ㎎/㎖, 바람직하게는 1 내지 10 ㎎/㎖이다. 바람직한 만니톨 농도는 0.5 내지 500 ㎎/㎖, 특히 10 내지 50 ㎎/㎖의 농도 범위에 있을 수 있다. 바람직한 아세트산 나트륨 농도는 1 내지 10 ㎎/㎖, 특히 2 내지 5 ㎎/㎖의 범위이다.

예를 들어, 적합한 희석제는 주사용 물; 및 -서로 독립적으로- NaCl (바람직하게는 50 내지 150 mM, 특히 110 mM), CaCl₂ (바람직하게는 10 내지 80 mM, 특히 40 mM), 인간 알부민 (바람직하게는 2 % w/w 이하, 특히 0.5 % w/w), 아세트산 나트륨 (바람직하게는 0 내지 50 mM, 특히 20 mM) 및 만니톨 (바람직하게는 10 % w/w 이하, 특히 2 % w/w)을 포함한다. 바람직하게, 희석제는 또한 재구성된 건성 조성물의 pH를 바람직하게는 6.4 내지 7.5의 pH, 특히 6.9 내지 7.1의 pH로 완충하도록 완충제 또는 완충 시스템을 포함할 수 있다.

바람직한 실시양태에서, 희석제는 개별 용기로 제공된다. 이는 바람직하게는 주사기일 수 있다. 이어서 본 발명에 따른 건성 지혈 조성물의 재구성을 위해 주사기 내 희석제를 쉽게 최종 용기에 적용할 수 있다. 최종 용기 또한 주사기인 경우, 두 주사기를 함께 팩으로 마무리처리할 수 있다. 따라서 본 발명에 따른 건성 지혈 조성물을, 상기 건성의 안정된 지혈 조성물의 재구성을 위해 제약상 허용되는 희석제를 포함한 희석제 주사기로 마무리처리된 주사기로 제공하는 것이 바람직하다.

본 발명의 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체의 건성 제제 ("건성 지혈 중합체")는 생물학적 및 비생물학적 중합체로부터 형성될 수 있다. 적합한 생물학적 중합체에는, 단백질, 예컨대 젤라틴, 가용성 콜라겐, 알부민, 헤모글로빈, 카제인, 피브리노겐, 피브린, 피브로넥틴, 엘라스틴, 케라틴, 및 라미닌; 또는 그의 유도체 또는 조합이 포함된다. 젤라틴 또는 가용성 비-미소섬유 콜라겐, 더욱 바람직하게는 젤라틴의 사용이 특히 바람직하고, 전형적인 젤라틴 제형은 하기에 기술되어 있다. 다른 적합한 생물학적 중합체에는 다당류, 예컨대 글리코사미노글리칸, 전분 유도체, 자일란, 셀룰로스 유도체, 헤미셀룰로스 유도체, 아가로스, 알기네이트, 및 키토산; 또는 그의 유도체 또는 조합이 포함된다. 적합한 비-생물학적 중합체는 두 메커니즘, 즉 (1) 중합체 골격의 파괴 또는 (2) 수성 가용성을 야기하는 측쇄의 분해 중 하나에 의해 분해가능하도록 선택될 것이다. 전형적인 비생물학적 하이드로겔-형성 중합체에는 합성물, 예컨대 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐 수지, 폴리락티드-글리콜리드, 폴리카프로락톤, 및 폴리옥시에틸렌; 또는 그의 유도체 또는 조합이 포함된다. 또한 다른 종류의 중합체의 조합 (예를 들어, 다당류와 단백질, 비 생물학적 하이드로겔-형성 중합체와 단백질 등)도 가능하다.

적합한 재-수화 보조제와 함께 비-가교-결합된 중합체를, 예를 들어 적합한 하이드로겔 염기를 형성하도록 재구성하는데 적합한 임의의 방식으로 가교-결합할 수 있다. 예를 들어, 중합체 분자는 둘 이상의 중합체 분자 사슬에 공유결합으로 부착시키는 이- 또는 다-관능성 가교-결합제를 사용하여 가교-결합할 수 있다. 전형적인 이관능성 가교-결합제에는 알데히드, 에폭시드, 숙신이미드, 카르보디이미드, 말레이미드, 아지드, 카르보네이트, 이소시아네이트, 디비닐 술폰, 알콜, 아민, 이미데이트, 앤하이드라이드, 할라이드, 실란, 디아조아세테이트, 아지리딘 등이 포함된다. 대안적으로, 가교-결합은, 다른 측쇄 또는 잔기와 반응하여 가교-결합을 형성할 수 있도록 중합체 상의 측쇄 또는 잔기를 활성화하는, 산화제 및 기타 제제, 예컨대 페리오데이트를 사용하여 달성될 수 있다. 추가 가교-결합 방법은, 중합체 사슬을 활성화하여 가교-결합 반응을 허용하도록, 중합체를 감마 방사선과 같은 방사선에 노출시키는 것을 포함한다. 탈열수(dehydrothermal) 가교-결합 방법이 또한 적합할 수 있다. 젤라틴 분자를 가교-결합하는 바람직한 방법을 하기에서 서술한다.

따라서, 바람직한 실시양태에 따르면, 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체에는 가교결합 다당류, 가교결합 단백질, 또는 가교결합 비-생물학적 중합체; 또는 그의 혼합물이 포함된다.

바람직하게, 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체는 과립 물질이다. 이 과립 물질은 유체 (즉, 희석제)에 노출된 경우 신속하게 팽윤될 수 있고, 이 팽윤된 형태에서는 출혈 부위에 적용될 수 있는 유동성 페이스트에 기여할 수 있다. 생체적합성 중합체, 예를 들어 젤라틴은 이어서 과립 물질을 형성하도록 분쇄될 수 있는 필름으로서 제공될 수 있다. 이 과립 물질에 포함된 대부분의 입자는 바람직하게는 100 내지 1,000 ㎛, 특히 300 내지 500 ㎛의 입자 크기를 갖는다.

바람직한 실시양태에 따라, 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체는 가교-결합 젤라틴이다. 건성 가교-결합 젤라틴 분말은 적합한 희석제와 접촉한 경우 신속하게 재수화하도록 제조될 수 있다. 젤라틴 분말은, WO 98/08550 A 및 WO 2003/007845 A에 서술된 바와 같이, 조각 또는 서브-유닛으로 또한 지칭되는 비교적 큰 입자를 바람직하게 포함한다. 바람직한 (중앙값) 입자 크기는 20 내지 1,000 ㎛, 바람직하게는 100 내지 750 ㎛, 특히 150 내지 500 ㎛의 범위일 것이지만, 이 바람직한 범위 밖의 입자 크기도 수많은 상황에서 용도를 찾을 수 있다. 건성 조성물은 또한 수성 재-수화 매질 (= 희석제)에 노출된 경우 상당한 "평형 팽윤율"을 나타낼 것이다. 바람직하게, 팽윤율은 400% 내지 1000%의 범위일 것이다. "평형 팽윤율"은 완전히 수화되어 완전히 팽윤된 경우 젤라틴 하이드로겔 분말의 중량으로부터 그의 건조 중량을 뺌으로써 결정될 수 있다. 그리고 나서 차를 건조 중량으로 나누고 100을 곱해 팽윤율 측정치를 제공한다. 건성 중량은 실질적으로 모든 잔류 수분을 제거하는데 충분한 시간 동안 승온으로, 예를 들어 2 시간 동안 120℃로 물질을 노출시킨 후 측정되어야 한다. 물질의 평형 수화는, 건성 물질을 적합한 희석제, 예컨대 수성 염수 중에 물 함량이 일정하게 되기에 충분한 시간 기간 동안, 통상적으로는 실온에서 18 내지 24 시간 동안 함침시킴으로써 달성될 수 있다.

재-수화 보조제와 함께 비-가교-결합 젤라틴은, 적합한 하이드로겔 염기를 형성하는데 적합한 임의의 방식으로 가교-결합할 수 있다. 이 바람직한 실시양태에 따른 건성 가교-결합 젤라틴 분말은 바람직하게는 분말을 특정 재-수화 보조제의 존재 하에 제조함으로써 수득된다. 이러한 재-수화 보조제는 분말의 제조 동안에 존재할 것이지만, 대체로 최종 제품으로부터 제거될 것이다. 예를 들어, 전체 고체 함량의 약 20%로 존재하는 재-수화 보조제는 통상적으로 최종 제품에서 1 중량% 미만으로, 종종 0.5 중량% 미만으로 줄어들 것이다. 전형적인 재-수화 보조제에는, 바람직하게는 약 1000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 바람직하게는 약 50,000의 평균 분자량을 갖는 폴리비닐피롤리돈 (PVP); 및 통상적으로 약 40,000의 평균 분자량을 갖는 덱스트란이 포함된다. 본 발명의 조성물을 제조하는 경우 둘 이상의 이들 재-수화 보조제를 사용하는 것이 바람직하고, 모두 세 개를 사용하는 것이 더욱 특히 바람직하다.

가교-결합 젤라틴을 생성하는 전형적인 방법은 다음과 같다. 통상적으로 1 중량% 내지 70 중량%, 대체로 3 중량% 내지 10 중량%의 고체 함량을 갖는 비-가교-결합 하이드로겔을 형성하도록 젤라틴을 수득하여 수용액 중에 현탁시킨다. 젤라틴은, 통상적으로는 글루타르알데히드 (예를 들어, 0.01% 내지 0.05% w/w, 수성 완충제 중 0℃ 내지 15℃에서 하룻밤 동안), 나트륨 페리오데이트, (예를 들어, 0.05 M, 0℃ 내지 15℃에서 48 시간 동안 유지됨) 또는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 ("EDC") (예를 들어, 0.5% 내지 1.5% w/w 실온에서 하룻밤 동안)에의 노출에 의해, 또는 약 0.3 내지 3 메가래드의 감마선 또는 전자 빔 방사선에의 노출에 의해 가교-결합된다. 대안적으로, 젤라틴 입자를 알콜, 바람직하게는 메틸 알콜 또는 에틸 알콜 중에 1 중량% 내지 70 중량%, 대체로 3 중량% 내지 10 중량%의 고체 함량으로 현탁시키고, 가교-결합제, 통상적으로는 글루타르알데히드 (예를 들어, 0.01% 내지 0.1% w/w, 실온에서 하룻밤 동안)에의 노출에 의해 가교-결합할 수 있다. 알데히드의 경우, pH는 약 6 내지 11, 바람직하게는 7 내지 10으로 유지되어야 한다. 글루타르알데히드와 가교-결합하는 경우, 가교-결합은 후속적 환원에 의해, 예를 들어 나트륨 보로하이드라이드를 사용한 처리에 의해 안정화될 수 있는 쉬프(Schiff) 염기를 통해 형성된다. 가교-결합 후, 생성된 과립을 물에서 세척하고, 임의로는 알콜 중에 헹구고, 건조시킬 수 있다. 이어서 얻은 건성 분말을 본원에서 서술된 바와 같이 최종 용기로 제공할 수 있다.

가교-결합 후, 50% (w/w) 이상의 재-수화 보조제는 생성된 하이드로겔로부터 제거될 것이다. 대체로, 재-수화 보조제는 하이드로겔의 여과, 이어서 얻은 여과 케이크의 세척에 의해 제거된다. 이러한 여과/세척 단계는 생성물을 원하는 수준까지 세정하여 재-수화 보조제의 50% 이상 제거하도록, 바람직하게는 본래 존재하는 재-수화 보조제의 90% (w/w) 이상 제거하도록, 추가 한 번 이상 반복할 수 있다. 여과 후, 통상적으로는 생성된 최종 여과 케이크를 건조시킴으로써 젤라틴은 건조된다. 이어서 건조시킨 여과 케이크를 부수거나 분쇄하여 상기 서술된 바람직한 범위의 입자 크기를 갖는 가교-결합 분말을 생성할 수 있다.

또 다른 측면에 따라, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 표적 부위로 전달하는 것을 포함하는, 지혈 조성물을 환자 신체의 표적 부위로 전달하는 방법을 제공한다. 특정 실시양태에서는, 또한 건성 조성물을 표적 부위에 직접 적용할 수 있지만 (그리고, 임의로는, 필요한 경우 표적 부위에서 희석제와 접촉시킬 수 있음), 지혈 조성물을 습윤된 형태, 특히 하이드로겔 형태로 수득하도록, 표적 부위에 투여하기 전에 건성 지혈 조성물을 제약상 허용되는 희석제와 접촉시키는 것이 바람직하다.

본 발명에서는 또한 본 발명에 따른 방법에 의해 수득되는 마무리처리된 최종 용기를 언급한다. 이 마무리처리된 용기는 조합된 성분을 살균한 저장-안정형 시판가능한 형태로 함유한다.

본 발명의 또 다른 측면은, 본 발명에 따른 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 제약상 허용되는 희석제와 접촉시키는 것을 포함하는, 즉시 사용가능한 지혈 조성물의 제공 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 마무리처리된 형태로 본 발명에 따른 건성의 안정된 지혈 조성물과 적합한 희석제를 포함한 용기를 포함하는 키트에 관한 것이다. 키트의 추가 요소는 사용상 주의사항, 투여 수단, 예컨대 주사기, 카테터, 브러시 등 (조성물이 이미 투여 수단으로 제공되지 않은 경우) 또는 의료 (수술) 행위에서 사용하는데 필요한 기타 요소, 예컨대 대체 니들, 카테터, 엑스트라 바이얼 또는 추가 상처 덮개 수단일 수 있다. 바람직하게, 본 발명에 따른 키트는 건성의 안정된 지혈 조성물을 수용하는 주사기 및 희석제를 함유한 주사기를 포함한다 (또는 또 다른 희석제 용기로부터 희석제를 받기 위해 마련된다). 바람직하게, 이들 두 주사기는 재구성된 조성물을 투여하기 위한 유출 수단이기보다는 또 다른 유입 수단에 의해 희석제를 건성 지혈 조성물로 전달할 수 있도록 서로 맞추어진 형태로 제공되어 있다.

본 발명은 하기 실시예에서 추가 서술되며, 그러나 이들로 제한되지는 않는다.

<실시예>

1. 본 발명에 따른 건성 지혈 조성물의 제조

물질 및 방법

모든 변형은 플로실 젤라틴 매트릭스 및 트롬빈 둘 다를 안정된 형태로 함유한 한 주사기, 및 적합한 액체 재구성 매질 (예를 들어, 0.9% NaCl, 또는 40 mM CaCl₂)을 함유한 한 주사기를 포함한 키트를 제시하는데 동일한 계획을 이용한다. 두 주사기 모두 내부와 외부가 살균되고, 따라서 전체 재구성은 작업 현장의 소독 간호사 측에서 수행할 수 있다. 재구성은 두 주사기를 익숙한 방식으로 결합시키고 두 주사기의 내용물을 "스우싱" (즉, 두 주사기 사이에서 내용물을 왔다갔다 반복해서 이동시킴)에 의해 혼합함으로써 달성된다.

"주사기내 동결건조(In Syringe Lyo)"

본 발명에 따른 조성물은 젤라틴 및 트롬빈 용액을 습윤 페이스트로 혼합하고 상기 페이스트를 단일 주사기 내부에서 동결건조시킴으로써 제조된다. 젤라틴 매트릭스는 먼저 조사에 의해 대량-살균될 수 있다. 감마선 또는 베타선 조사가 젤라틴을 살균하는데 적합하다. 살균된 젤라틴은 대부분 살균된 트롬빈 용액으로 수화된다. 이는 습윤 페이스트, 즉 유리 액체 상 없이 페이스트를 생성한다. 바람직하게, 이 단계는, 젤라틴 과립을 일정하게 교반되는 트롬빈 용액으로 서서히 적하하여 균일한 페이스트가 형성될 때까지 블렌딩함으로써, 또는 과립과 트롬빈 용액을, 두 성분이 이어서 바로 추가 가공처리를 위한 주사기로 분배될 수 있는 유동성 페이스트로 긴밀하게 블렌딩되는 적절하게 구성된 압출 기기로 동시에 공급함으로써 대량으로 수행된다.

이어서 페이스트를 주사기로 충전하여 주사기 내에서 동결건조하게 할 수 있다.

충전된 주사기를 냉동시키고, 이어서 슬러리를 적합한 동결건조 프로그램을 사용하여 동결건조시킨다. 처음에 주사기에 설정된 플런저를 누름으로써 주사기는 동결건조기 내에서 폐쇄된다. 동일한 단계에서 동결건조된 매트릭스를 젤라틴 과립이 단독으로 차지할 부피로 근접하게 압축시켜, 재구성 시 제품으로 혼합되는 공기의 양을 최소화한다. 이제 제품은 희석제 주사기와의 포장, 파우치의 EO 살균, 및 저장을 위한 준비가 되어 있다.

희석제 주사기

희석제 주사기는 제품을 수화하기 위한 적절한 재구성 매질을 함유한다. 이는 플로실 주사기에 바로 연결되거나, 또는 연결 장치에 의해 플로실 주사기와 연결될 수 있다. 희석제가 플로실 주사기로 이동되어, 수화된 제품이 연결된 주사기 사이에서 반복해서 왔다갔다 이동되어 유동성 페이스트를 형성한다. 예를 들어, 다음과 같은 방법에 의해 희석제 주사기를 제조할 수 있다: 매질을 살균 여과하고 적합한 주사기(타이크 탑팩(tike Toppac) 주사기, 클리어쇼트(Clearshot), ...)에 충전시키고; 그리고, 필요한 경우, 조사에 의해 최종-살균시킨다.

젤라틴 과립화

젤라틴 과립 대규모 제조는 확립된 방법 (WO 98/08550 A; WO 2003/00785 A; 등)에 따라 수행한다. 과립 ("플로실" 과립; "플로실" 매트릭스)은 감마선 조사에 의해 살균된다. 임상 전 살균을 위해 플로실 매트릭스를 적절한 크기의 쇼트(Schott) 유리병에 채운다.

최종 용기 내 제품에 대해 현행 최대 바이오버든 수준 (1000 cfu/샘플)에서 요구되는 조사 선량은 25 내지 40 k㏉이다. 이어서 대량 재료를 추가 제조를 위해 -20℃에서 저장한다.

"주사기내 동결건조" 플로실

0.81g의 플로실 젤라틴 (물과 섞여 있고 0.704g의 건성 젤라틴 분말에 상응함)을 칭량하여 동결건조 주사기에 넣었다. 그리고 나서 주사기 플런저를 뒤에서부터 젤라틴 과립 바로 위까지 설정했다. 다른 편에서 플로실 트롬빈 주사기를 4.0㎖ 트롬빈 500IE/㎖로 채웠다. 이어서 적어도 21회 통과를 위해 주사기를 연결하고 스우싱했다. 마지막 통과 후 제품은 동결건조 주사기 내부에 있어야 한다. 이 주사기의 루어를 플로실 루어 캡을 사용하여 폐쇄했다. 이 주사기 내부에서 제품을 동결건조시켰다. 동결건조를 위해 트롬빈 STIM5 500 IU/㎖용 동결건조 프로그램을 이용했다. 주사기를 스테인레스 강철로 만든 주문 제작된 선반에 두었다. 선반은, 주사기의 루어 캡이 선반의 아래 층에 놓이고, 한편 주사기의 핑거 나머지 부분이 윗 층에 놓이도록 제작되었다. 이는 동결건조 케이크 압축 단계 동안 주사기의 최대 안정성을 보장해 주었다.

동결건조기의 유압식 "자동밀봉(stoppering)" 플레이트를 낮추고 이로써 플런저를 동결건조 홀을 지나 주사기까지 누름으로써 건조시킨 제품을 진공 하에 압축시켰다. 이는 동결건조 단계 후 가능한 낮은 부피를 차지하도록 주사기를 폐쇄하고 동결건조 케이크를 압축시켰다. 자동밀봉 플레이트가 낮아지는 수준은, 제품/장치에 과도한 압력을 가하는 것 없이 주사기가 정확한 수준까지 압축되는 것을 보장하는 금속 스페이서에 의해 제한되었다.

2. 돼지 간 찰과상 모델에서의 유효성

이 연구의 목적은 돼지 간 찰과상 모델에서 확립된 표준 제품 (플로실 VH S/D; 백스터 헬스케어(Baxter Healthcare))과 본 발명에 따른 건성 지혈 조성물의 유효성을 비교하려는 것이다. 플로실 VH S/D는 적용 2 분 이내에 두드러진 출혈을 멈추도록 트롬빈을 전달하는 젤라틴 매트릭스이다. 이 제품은 2-단계 제조, (1) 트롬빈의 재구성 및 (2) 재구성된 트롬빈을 사용한 젤라틴 입자의 수화를 필요로 한다. 본 발명에 따른 제품은 1 단계로 건성 지혈 조성물을 재구성하도록 설계되고, 제품이 신속하게 또는 대량으로 필요한 경우 불리한 2-단계 제조에 대한 주요 개선책이 된다.

돼지 간 찰과상 모델

평균 55.0 ㎏ (범위 52.4 내지 58.4 ㎏) 중량의 6마리 암컷 가축용 돼지를 오크 힐 제네틱스(Oak Hill Genetics) (일리노이주 유잉 소재)로부터 얻어 수술시 중량을 달았다. 도착하자 마자, 동물을 6일간 격리시켰다. 수술시, 6마리 돼지 모두 임상 질병의 징후를 전혀 나타내지 않았다. 동물을 확인하는데 귀 표를 사용하고 할당된 확인 번호에 대한 교차-참조가 이루어졌다. 동물은 우리에 수용된 그룹이었다. 돼지에게 물은 임의로 그리고 표준 돼지 규정식은 매일 한 번 제공하였다.

스와인(Swine)은 널리-용인된 심혈관 모델이고 이러한 유형의 연구에 적합하였다. 다수의 큰 간엽은 다른 시험 항목의 직접 비교를 위해 다수의 병소를 허용하였다.

마취제 및 수액

돼지에게 미다졸람 (0.3 ㎎/㎏, IM)을 투여하고 2:1 질소 대 산소 담체 중 이소플루란으로 마스크를 씌워-유도하였다. 돼지에게 관을 삽입하고 분 당 10 내지 15 회 호흡 속도로 호흡하게 하였다. 산소 담체 중 이소플루란으로 마취를 유지하였다. 돼지는 따뜻한 락테이티드 링거(Lactated Ringer) 용액을 연속적인 속도로 주입받았다.

간 찰과상 절차

이 연구를 위해 돼지 간 찰과상 모델을 이용하였다. 120 개의 병소 (치료군 당 40 개)를 평가하려는 목표를 가지고 6마리 돼지를 준비하였고 이것은 α=0.05 및 파워=90%를 갖고 80 퍼센트 대 40 퍼센트의 비율에서의 차이를 발견하는데 충분하였다. 각각의 시리즈를 내엽, 좌측엽 또는 우측엽으로 한정하였다.

각 병소 시리즈는 샌드페이퍼로 고정된 핸드 드릴을 사용하여 만들어진 세 개의 1 ㎝ 직경, 3-4 ㎜ 깊이 간 찰과상을 포함한다. 출혈을 평가하고 병소를 무작위로 그리고 맹검으로 참조 또는 시험 제품으로 치료하였다. 참조 및 시험 제품은 난수 발생기를 사용하여 무작위화하였다. 각 제품을 병소 위에 두고, 제자리에서 축축한 거즈를 사용하여 2 분 동안 유지하고 치료 이후에 지혈 2, 5 및 10 분 동안 맹검으로 평가하였다. 5 분 평가 후에 과량의 참조 또는 시험 제품을 세정하였다.

헤파린화 프로토콜

기준치 활성 혈액 응고 시간 (ACT)을 이용하고, 각각의 돼지는 헤파린, 200 IU/㎏의 부하 용량을 제공받았다. ACT가 적어도 2배 기준치일 때까지 10 분마다 ACT를 평가하였다. ACT가 2배 기준치 미만이거나 거의 2배 기준치와 같게 측정되는 경우, 돼지를 환약 헤파린 용량, 75 IU/㎏으로 치료하였다.

일단 2배 기준치를 초과하면, 20 분마다 ACT를 측정하였다. ACT가 목표 2배 기준치 미만이거나 거의 2배 기준치와 같게 측정되는 경우, 돼지에게 환약 헤파린 용량, 40 IU/㎏을 주었다. ACT가 목표 2배 기준치를 초과하게 측정되는 경우, 돼지를 치료하지 않거나, 2,000 IU/시간 이내로 제한된 헤파린 환약 용량 유지를 제공받았다.

모든 헤파린을 말초 정맥 카테터를 통해 제공하였다. 모든 혈액 샘플을 경정맥 카테터로부터 얻었다. ACT의 측정시 혈압 및 심박수 참고치를 기록하였다.

지혈 평가

병소 시리즈를 만들고 치료한 후 0, 2, 5 및 10 분 (여기서, 0 분은 치료-전을 의미함)에 지혈을 평가하였다. 0, 1, 2, 3, 4, 및 5의 점수를 각각 무 출혈, 흐르는, 매우 약간, 약간, 중간, 및 심각한 것으로 할당하였다. 각각 독립적으로 치료함으로써 야기될 수 있는 위치 및 응고의 구별을 방지함과 동시에 모두 세 개의 병소를 적절하게 치료하였다. 필요에 따라 각 평가를 수행한 후 병소로부터의 혈액을 닦아냈다.

측정 및 기록

ACT, 지혈, 혈압 및 심박수를 표준 방법에 따라 평가하였다.

통계 분석

이 연구를 위한 샘플링 유닛은 간 병소 부위이며 전체 120 개의 병소를 위해 치료군 당 40 개의 병소를 갖는다.

치료 후 2, 5, 및 10 분에 출혈 점수 (0=무, 1=흐름, 2=매우 약간, 3=약간, 4=중간, 및 5=심각)에 미치는 치료 효과를 평가하기 위해 다중 로지스틱 회귀 분석을 사용하였다. 독립 변수에는 치료군, 돼지, 간 엽 (내엽, 우엽 또는 좌엽) 및 초기 출혈 점수가 포함된다. FB/FS, Lyo/FS, FB/Lyo의 효과에 대한 오즈비(odds ratio) 및 그의 신뢰 구간을 각각의 치료 후 시점에서 계산하였다.

병소의 위치는 세 가지 엽과 돼지 전체에 걸쳐 고르게 분포되어 있지 않았다. 엽 영향은 중요하지 않은 것으로 밝혀졌고, 따라서 이러한 영향 없이 분석을 재-수행하였다. 결론은 상기 모델에서의 엽 영향 없이 분석에 근거하였다.

결과:

본 발명에 따른 건성 지혈 조성물의 성능은 모든 시점에서 플로실 VH S/D와 상당히 다르지 않았다. 이는 본 발명에 따른 제조 방법 및 1 단계 재구성 모드가 조성물의 성능에 부정적인 영향을 미치지 않았지만 실제 취급하는데 있어서 목적하는 이점을 제공하였음을 보여준 것으로, 이로써 본 발명의 목적이 해결되었음을 입증해 주었다.

추가 동물 실험

매우 엄격한 (높은 항-응고화) 모델에서 "주사기내 동결건조" 플로실의 생체내 효능을 플로실 VH와 비교하기 위해 임상전 평가를 수행하였다. 이 모델은 4 개의 추가 절개가 십자가 모양으로 천자 결함으로부터 뻗어 있는 5 ㎜ 전체-두께 간 천자로 구성된다. 연구 그룹 당 6마리 동물을 사용하였고, 이들 동물을 4,000 I.U./㎏로 헤파린화하였다. 병소의 위치를 파악한 후, 재구성 플로실을 적용하고 2분 동안 축축한 거즈로 약한 압력을 가했다. 이 시점 후에 일차 지혈 후를 평가하였다. 일차 지혈이 달성되지 않은 경우, 지혈이 달성되거나, 또는 제품 (5㎖)/시간 (15 분)이 소진될 때까지 제품을 재-적용하였다. 일차 평가 지표는 일차 지혈의 달성 (예/아니오) 및 지혈까지의 시간 (min)이었다.

일차 지혈이 달성된 경우, 동물을 수술 봉합하고, 24 후 재-출혈에 대해 동물을 평가하였다.

본 조성물은 이 특별한 임상전 실험실 활동에서 지혈까지의 시간 면에서 표준 플로실과 동등하거나 이보다 우수한 결과를 제공하였다.

Claims

a) 응고 유도제의 건성 제제를 포함하는 제1 성분을 제공하고,
b) 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체의 건성 제제를 포함하는 제2 성분을 제공하고,
c) 최종 용기에서 상기 제1 성분에 의한 제2 성분의 분해를 본질적으로 방지하면서 습윤 페이스트를 형성하도록 효과적인 조건 하에 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 혼합하거나 또는 상기 습윤 페이스트를 최종 용기로 옮기고,
d) 상기 페이스트를 상기 용기에서 냉동시키고 동결건조시킴으로써 상기 제1 및 상기 제2 성분을 동결건조된 형태로 포함하는 건성의 안정된 지혈 조성물을 수득하고,
e) 상기 최종 용기 내의 상기 건성의 안정된 지혈 조성물을, 상기 제1 성분 및 상기 제2 성분을 건성의 안정된 지혈 조성물로서 조합된 형태로 함유한 저장가능한 제약 장치로 마무리처리하는 것을 포함하는, 건성의 안정된 지혈 조성물의 제조 방법.
제1항에 있어서, 단계 c)를 무균 조건 하에 수행하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 단계 c)를 압출에 의해 수행하는 방법.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 d)가 에틸렌 옥시드 살균 단계 또는 이온화 방사선 조사를 포함하는 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 성분이 CaCl₂ 용액 중 트롬빈을 함유하는 방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 성분이 트롬빈을 10 내지 10,000 I.U./㎖, 더욱 바람직하게는 50 내지 5,000 I.U./㎖, 특히 100 내지 1,000 I.U./㎖의 농도로 함유하는 방법.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 페이스트를 단계 c)의 수행 후 상기 최종 용기에서 냉동시키는 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 주사기를 상기 최종 용기로서 사용하는 방법.
제8항에 있어서, 상기 주사기가 상기 건성의 안정된 지혈 조성물의 재구성을 위해 제약상 허용되는 희석제를 포함한 희석제 주사기와 함께 마무리처리된 주사기인 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 성분이 인간 트롬빈을 포함하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 성분이 재조합 인간 트롬빈을 포함하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 젤라틴, 가용성 콜라겐, 알부민, 헤모글로빈, 피브리노겐, 피브린, 카제인, 피브로넥틴, 엘라스틴, 케라틴, 및 라미닌; 또는 그의 유도체 또는 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질을 포함하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 글리코사미노글리칸, 전분 유도체, 셀룰로스 유도체, 헤미셀룰로스 유도체, 자일란, 아가로스, 알기네이트, 및 키토산; 또는 그의 유도체 또는 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 다당류를 포함하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 폴리아크릴아미드, 폴리비닐 수지, 폴리락티드-글리콜리드, 폴리카프로락톤, 및 폴리옥시에틸렌; 및 그의 유도체 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 중합체를 포함하는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 가교결합 다당류, 가교결합 단백질, 또는 가교결합 비-생물학적 중합체; 또는 그의 혼합물을 포함하는 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 과립 물질인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 지혈에 사용하기 적합한 생체적합성 중합체가 가교-결합 젤라틴인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 최종 용기가 살균 방사선에 노출된 경우 중합체의 개질을 억제하는데 효과적인 안정화제, 바람직하게는 아스코르브산, 아스코르브산 나트륨, 아스코르브산의 기타 염, 또는 산화방지제를 소정량 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 표적 부위로 전달하는 것을 포함하는, 지혈 조성물을 환자 신체의 표적 부위로 전달하는 방법.
제19항에 있어서, 지혈 조성물을 하이드로겔 형태로 수득하도록 상기 지혈 조성물을 제약상 허용되는 희석제와 접촉시키는 단계를 추가로 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 수득되는 마무리처리된 최종 용기.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 방법에 의해 생성된 지혈 조성물을 제약상 허용되는 희석제와 접촉시키는 것을 포함하는, 즉시 사용가능한 지혈 조성물의 제공 방법.
제21항에 따른 마무리처리된 용기 및 제약상 허용되는 희석제를 포함한 용기를 포함하는 지혈 조성물을 투여하기 위한 키트.